Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров

Пасько, Надежда Валериевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров"

003467054

На правах рукописи

ПАСЬКО НАДЕЖДА ВАЛЕРИЕВНА

ПЕРОКСИДНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ, АНТИОКСИДАНТНАЯ СИСТЕМА И ОКСИД АЗОТА ПРИ ПОСЛЕРОДОВЫХ НАРУШЕНИЯХ СОКРАТИТЕЛЬНОЙ ФУНКЦИИ МАТКИ У КОРОВ

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

! 6 ¡...7 .....

Воронеж-2009

003467054

Работа выполнена в отделе клинической биохимии ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН.

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Редкий Михаил Исаакович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Беляев Василий Иванович

кандидат биологических наук Венцова Инна Юрьевна

Ведущая организация: ФГОУ ВПО Курская государственная

сельскохозяйственная академия им. И.И. Иванова

Защита состоитсяХ^ Осм^цаЛ 2009 года в Ю_ часов на заседании диссертационного совета_ДМ 006.004.02 в ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН (394087, г.Воронеж, ул.Ломоносова 114-6)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИВИПФиТ.

Автореферат разослан ^имЛилС? 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета .

канд.биол.наук (1Ул)г-(У~~~ Г.Н. Близнецова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Противоречивые сведения о характере течения инволюционных процессов, этиологии, патогенезе и клиническом проявлении функциональных расстройств в половых органах после родов сдерживают разработку эффективных методов ранней диагностики, лечения и профилактики патологии послеродового периода.

Среди всех акушерских заболеваний, регистрируемых у животных в послеродовый период, одним из наиболее распространенных является субинволюция матки. В основе данного заболевания матки лежат нарушение тонуса и ослабление её сократительной функции (Нежданов А.Г., Мисайлов В.Д., 1996). На фоне субинволюции могут развиваться гнойно-катаральный и гнойный септический эндометриты, различные функциональные расстройства яичников и матки, приводящие к длительному бесплодию животных (Нежданов А.Г., 1982; Шахов А.Г. с соавт., 2006).

Согласно современным представлениям универсальными регуляторами функций любых физиологических систем организма являются процессы сво-боднорадикального окисления и система оксида азота (L-aprHHUH-NO*) и существует тесная взаимосвязь между процессами свободнорадикального окисления (СРО), инициаторами которого являются активные формы кислорода (АФК), антиоксидантной системой и системой оксида азота (Зенков Н.К. с соавт., 2001).

Свободнорадикальная природа NO" (Halliwell В. et al, 1997) позволяет ему, как активировать цепные свободнорадикальные реакции, так и ингиби-ровать их (Laskin J.D. et al., 2001). При этом защитные эффекты NO* связаны с его способностью увеличивать активность антиоксидантных ферментов и экспрессию кодирующих их генов (Gromadzinska J., Zachara В., 1992) и замедлять свободнорадикальное окисление липидов (Wu S. et al, 2000). Оксид азота может быть вовлечен и в механизмы повреждения наряду с процессами свободнорадикалыюй модификации белков и нуклеиновых кислот активными формами кислорода (Laskin J.D. et al., 2001). В зависимости от природы действующего фактора эти повреждающие эффекты возможно могут быть обусловлены либо гипо-, либо гиперпродукцией АФК, а избыточный или недостаточный синтез NO* в организме является одним из факторов патогенеза различных заболеваний (Зенков Н.К. с соавт., 2001).

Дисбаланс прооксидантных и антиоксидантных процессов в организме приводит к формированию оксидативного стресса (Осипов А.Н. с соавт., 1990; Naziroglu М. et al., 2000), который является основным метаболическим синдромом, способствующим развитию многочисленных морфофункцио-нальных нарушений в организме (Меныцикова Е.Б. с соавт., 1994).

Имеются данные о том, что оксид азота участвует в расслаблении гладких мышц матки, тормозит сокращения матки при беременности и играет роль релаксанта цервикалыюго канала в родах (Garfield R.E. et al., 2001).

Все это позволяют предполагать важную роль процессов свободнорадикального окисления, состояния антиоксидантной системы, а также систе-

мы Ь-аргинин-ЫО' в патогенезе послеродовых нарушений сократительной функции матки у коров. Выяснение этой стороны патогенетических механизмов может быть перспективно и в плане поиска и разработки фармакологических средств снижающих проявление нарушений сократительной функции матки в послеродовый период.

К сожалению работ, посвященных изучению роли процессов пероксид-ного окисления липидов, системы антиоксидантной защиты и интенсивности образования оксида азота в период беременности и после родов у коров, а также их связи с развитием послеродовой патологии и, в частности, с нарушением сократительной функции матки крайне мало. Это и определило общую направленность работы, выбор методологических подходов и экспериментальных моделей.

Цели н задачи. Основной целью исследования является изучение роли свободнорадикального окисления липидов и антиоксидантной системы, а также оксида азота в развитии послеродовых нарушений сократительной функции матки у коров.

В соответствии с указанной целью на разрешение ставятся следующие задачи:

1.Изучить показатели, характеризующие интенсивность свободнорадикального окисления липидов в разные периоды до и после отела у здоровых коров и коров с субинволюцией матки.

2.Изучить показатели, характеризующие состояние ферментативного звена антиоксидантной системы в разные периоды до и после отела у здоровых коров и коров с субинволюцией матки.

3.Изучить динамику уровня стабильных метаболитов оксида азота в предродовый и послеродовый период у здоровых коров и коров с субинволюцией матки.

4.Выявить характер взаимосвязи динамики половых гормонов и оксида азота у коров с нормальным и патологическим течение послеродового периода.

5.Определить биохимические критерии риска развития у коров нарушений сократительной функции матки в послеродовый период.

Научная новизна. Впервые комплексно изучены процессы пероксидно-го окисления липидов, состояние антиоксидантной системы и генерации оксида азота в течение беременности и в послеродовый период у здоровых коров и животных с послеродовым нарушением сократительной функции матки. Установлено, что по мере приближения родов различия в уровне функционального состояния ферментативного звена системы антиоксидантной защиты и интенсивности течения процессов пероксидного окисления липидов между животными с нормальным и патологическим течением послеродового периода усиливаются. Впервые изучено влияние уровня генерации в организме оксида азота во время беременности и после родов на сократительную активность миометрия у клинически здоровых коров и коров с субинволюцией матки. Выявлена взаимосвязь сократительной функции матки и интенсивности образования оксида азота в организме у коров. Установленные взаимосвязи между оксидантно-антиоксидантным гомеостазом, оксидом азота, половыми гормо-

нами и сократительной функцией матки позволяют расширить современные представления о молекулярно-биохимических механизмах развития её субинволюции у коров. Получен патент РФ №2296507 «Способ прогнозирования патологии послеродового периода у коров».

Практическая значимость. Даны биохимические критерии повышенного риска развития субинволюции матки у коров. Полученные данные можно использовать для оценки устойчивости к заболеваниям, прогнозирования возникновения патологических состояний и разработки научно обоснованных методов управления и комплексной профилактики субинволюции матки у коров.

Материалы диссертации вошли в Методические рекомендации по диагностике, терапии и профилактике субинволюции матки у коров рассмотренные, одобренные и рекомендованные к изданию секцией «Патология, фармакология и терапия» (протокол № 1 от 24.03.2005).

Апробация работы. Основные результаты исследований были представлены на Международных научно-практических конференциях «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях (Воронеж, 2002); «Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных» (Воронеж, 2004); «Актуальные проблемы болезней органов размножения и молочной железы у животных» (Воронеж, 2005); «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Курск, 2008) и на 1 съезде фармакологов России (Воронеж, 2007).

Публикации. Основные материалы диссертации изложены в 15 научных статьях, опубликованных в различных изданиях, в том числе 4 в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ и 1 патенте.

На защиту выносятся следующие положения:

1. У коров с субинволюцией матки до и после отела повышена интенсивность процессов свободнорадикалыюго окисления липидов и имеются нарушения в ферментативном звене системы антиоксидантной защиты организма по сравнению с коровами с нормальным течением послеродового периода.

2. Изменению синтеза оксида азота принадлежит важная роль в регуляции сократительной активности миометрия. У коров с субинволюцией матки в послеродовой период интенсивность образования оксида выше, чем у коров с нормальным течением послеродового периода.

3. Оксиду азота принадлежит важная роль регуляции сократительной функции матки у коров. У коров с нормальным течением послеродового периода инволюция матки происходит на фоне снижения образования оксида азота, а отсутствие такой закономерности является одной из причин развития послеродовой субинволюцией матки.

Структура н объём работы. Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, объектов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Список использованной литературы

содержит 255 источников, из них 138 отечественных и 117 иностранных. Иллюстративный материал включает 17 рисунков и 7 таблиц.

2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования выполнены в 2001-2008 г.г. в отделе клинической биохимии в соответствии с планом научно-исследовательских работ Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии по заданиям 04.01.03. «Изучение этиологии и патогенеза субклинического мастита у супоросных свиноматок и сухостойных коров, субинволюции матки у коров и разработка методов их диагностики, терапии и профилактики» (№ гос. регистрации 01.200.117018) и 08.04.02. «Разработать новые экспресс-тесты и терапевтические препараты для эффективной системы мероприятий по диагностике, профилактике и терапии болезней органов размножения и молочной железы у коров и свиней, обеспечивающей снижение бесплодия маточного поголовья, получение жизнеспособного приплода и производство продукции высокого санитарного качества (№ гос. регистрации 15070.3666026906.06.8.002.3).

Опыты проведены в зимне-стойловый период (октябрь-апрель) на 120 коровах в возрасте 2-8 лет, средней упитанности, массой тела 500-700 кг в ОАО "Воронежпищепродукт" Новоусманского района Воронежской области. Кормление коров проводилось по общепринятым в хозяйстве рационам. В соответствии с анамнестическими данными коровы были распределены на следующие группы: клинически здоровые, с острой и хронической субинволюцией матки. Учитывали общее клиническое состояние, характер течения родов, послеродовых инволюционных процессов в половых органах и сроки их завершения. Субинволюция матки подтверждалась клиническими и лабораторными исследованиями. Исследования крови у подопытных животных проводили в разные периоды до и после отела в зависимости от задач опыта.

Работа была выполнена совместно с д-ром. вет. наук В.И. Михалевым, канд. биол. наук Г.Н. Близнецовой, в связи с чем, автор выражает им свою благодарность.

Для изучении in vitro влияния состояния системы L-apinnnn-NO на сократительную активность миометрия опыты проведены на беременных белых крысах с массой тела 200-250 г на 20-й день беременности (п=5) и сразу после родов (п=5). Рога матки иссекали и тщательно очищали от окружающей соединительной ткани. У беременных крыс после удаления плодов миомет-рий рассекали на продольные полоски размером приблизительно 5x1x1 мм и помещали в специальную ванночку объемом 10 мл, заполненную раствором, содержащим (в мМ/л): хлорид натрия 125, хлорид калия 2,4, хлорид кальция 1,8, хлорид магния 0,5, бикарбонат натрия 23,9 и глюкозу 11,0. Температура раствора 37°С, рН = 7,4. Регистрирацию сокращения в изометрическом режиме проводили через 30 минут после прикрепления к кусочкам миометрия груза в 1 г с использованием специального тензометрического датчика Grass FT 03 на полиграфе Grass 79Е фирмы Grass, Quincy, Mass. (США). Регистрирующее устройство было откалибровано так, чтобы напряженность мышцы соответствующая силе в 1 г соответствовало вертикальному смещению пера

самописца на 1 см. Анализировали 10-минутные периоды до и после добавления следующих вещест: L-аргинин, метиловый эфир питро-Ь-аргинина (L-NAME) и карбохолин фирмы Sigma (США), которые растворяли в 0,9 % NaCl и добавляли в ванночки с инкубационной средой в объеме 50 мкл.

Для оценки интенсивности процессов пероксидного окисления липи-дов, состояния ферментативного звена системы антиоксидантной защиты и интенсивности синтеза оксида азота у коров определяли: содержание в крови коныогированных диенов и кетодиенов (ед.оп.пл/мл), малонового диальдеги-да (мкМ/л), в сыворотке крови - содержание флуоресцирующих оснований Шиффа (усл. ед./мл), в крови - активность каталазы, глутатионпероксидазы с использованием в качестве субстрата перекиси водорода и глутатионредукта-зы (Бузлама B.C. с соавт., 1997), супероксиддисмутазы (Сирота Т.В., 1999); показатели биохемилюминесценции плазмы крови (Владимиров Ю.А., Шер-стнев М.П., 1989); содержание стабильных метаболитов оксида азота в сыворотке крови (Близнецова Г.Н. с соавт., 2002). Определение оптической плотности растворов проводили на спектроколориметре «Spekol 210» (Германия) или спектрофотометре СФ-16 (Россия), параметры биохемилюминесценции -на биохемилюминометре БХЛ-06.

Статистическую обработку результатов исследований проводили с использованием прикладной программы «Statistica 5.0». Достоверность отличий оценивали методом парных сравнений, используя t-критерий Стыодента (Лакин Г.Ф., 1990).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Дннамика показателей свободнораднкалыюго окисления липидов и состояния антиоксидантной системы в крови клинически здоровых коров в последний месяц беременности и ранний послеродовый период

Установлено, что в предродовый и в послеродовый периоды у коров происходят заметные изменения содержания в крови первичных, промежуточных (вторичных) и конечных продуктов ПОЛ.

За 25-30 дней до отела концентрация диеновых конъюгатов (ДК) в крови глубокостельных коров составила 0,49±0,ОН ед.оп.пл/мл крови.

В дальнейшем за 15-20 и 2-3 дня до отела концентрация ДК повышается по сравнению с исходным уровнем на 8,0 и 18,0% соответственно. Наивысшей концентрации в крови ДК достигают в ранний послеродовый период. На 2-3 день после отела их уровень превосходит исходный (за 25-30 дней до отела) на 38,0%. На 5-10 и 15-20 сутки послеродового периода происходит снижение уровня ДК и их концентрация в крови животных ниже, чем на 2-Здень после родов на 10 и 19% соответственно.

Изменение содержания в крови коров кетодиенов (КД) полностью соответствует динамике диеновых конъюгатов.

За 25-30 дней до отела уровень малонового диальдегида (вторичного продукта ПОЛ) у коров составлял 0,92±0,019 мкМ/л крови. За 15-20 дней до родов его уровень достоверно возрастает на 15%, по сравнению с исходным

уровнем. За 2-3 дня до отела концентрация МДА в крови еще более возрастает. В ранний послеродовый период (2-3 дни после отела) в крови животных достоверно наиболее существенно (на 48%) увеличивается уровень МДА, по сравнению с его уровнем в крови за 1 месяц до отела. Начиная с 5-10 дня после отела, уровень МДА начинает постепенно снижается и к 15-20 суткам послеродового периода составляет 113,3% от исходного за месяц до родов.

Динамика содержания в крови флуоресцирующих оснований Шиффа также свидетельствует о тенденции к повышению их концентрации по мере приближения и сразу после родов с последующим снижением до исходного уровня за 1 месяц до отела.

Таким образом, у клинически здоровых коров завершающий период беременности и ранний послеродовый период протекают на фоне интенсификации процессов свободнорадикального окисления липидов, которая наиболее выражена за 2-3 дня до и 2-3 дня после отела. К 20-му дню после родов уровень всех типов продуктов ПОЛ заметно снижается и статистически достоверно не отличается от их уровня за 25-30 дней до отела.

Изменение интенсивности протекания процессов ПОЛ у коров в пред-родовый и послеродовый периоды тесно связано с функционированием системы антиоксидантНой защиты, состояние ферментативного звена которой изменяется в зависимости от физиологического состояния животных.

По мере приближения родов (за 15-20 дней до отела) активность катала-зы в крови возрастает, а за 2-3 дня до родов становится выше исходного уровня на 21,0 и 24,5% соответственно (рис.1).

В раннем послеродовом периоде (2-3 дни после отела) происходит достаточно резкое снижение активности каталазы по сравнению с её активностью за несколько дней до родов, а к 15-20 дню послеродового периода происходит некоторое повышение активности каталазы по сравнению со 2-3 днем послеродового периода. Также при приближении родов наблюдается тенденция к повышению активности ГПО относительно исходного уровня на 7,8% и 14% соответственно (рис.2).

310

315

30.0

71.1

TÍO

35 30 дк 15Ждк. ЭЗан.до ЗЗдх 15Э5дк.

пр [tikjih яп отита пчига тпглр тпг'гр

стела сггепа Рис. 1. Динамика активности каталазы (мМ НгО/лхмин) в крови клинически здоровых коров в предродовый и послеродовый период.

23-ЭЭдк дорсваа

13-М т-

ГО ОТ5Ш

2-3 т. во отела

2-3 ик. 13-33 дн. после после о ТЕла отела

Рис. 2. Динамика активности глутати-онпероксидазы (мМ С-ЗН/л*мин) в крови клинически здоровых коров в предродовый и послеродовый период.

На 2-3-и сутки послеродового периода происходит резкое увеличение активности ГТЮ на 25,2% по сравнению со 2-3 днем до родов. К 15-20 суткам послеродового периода активность ГПО несколько снижается по сравнению с ранним послеродовым периодом, но все еще остается на достаточно высоком

За 15-20 дней до отела отмечена тенденция к повышению активности глутатионредуктазы в крови, а за 2-3 дня её активность еще более возрастает (рис.3). В ранний послеродовый период активность глутатионредуктазы в крови снижается до 174,0±13,2 но уже к 15-20 суткам послеродового периода активность фермента практически восстанавливается до уровня, определенного за

дукпнаы (мкМ окисленного глутапшона/ месяц ДО отела. лхмин) в крови клинически ■¡боровых коров в различные периоды до и после отела.

3.2. Свободнорадикалыюе окисление липидов и состояние антиоксидантной системы у коров с субинволюцнеи матки

За 1-1,5 месяца до отела у коров с последующим развитием после отела субинволюции матки, по сравнению с коровами с нормальным течением послеродового периода, установлена пониженная мощность ферментативного звена системы антиоксидантной защиты (табл.1).

Таблица 1

Активность ферментов системы антиоксидантной защиты в крови

у здоровых и заболевших коров в разные периоды до и после отела

Группа животных Периоды исследования

За 1-1,5 месяца до отела За 10-14 дней до отела Через 1-2 суток после отела Через 15 суток после отела

Супероксиддисмутаза, усл. ед. акт./мг НЬ

Здоровые 6,7±0,7! 7.2±0,88 5,6±0,74 6,8±0,65

Заболевшие 5,3±0,39 5,6+0,62 2,0±0,36* 2,9+0,42*

Глутатионпероксидаза, мМ восстановленного глутатиона/л*мин

Здоровые 20,4+2.22 21,2+2,34 29,3±2,32 24,2±2,11

Заболевшие 13,6+1,98 14,1+2,17 18,1+2,18» 16,2+1,59*

Глутатионредуктаза, мкМ окисленного глутатиона/л*мин

Здоровые 217,7±17,4 256,4±18,6 200,4±21,6 275,2±31,4

Заболевшие 130,6+14,9* 158,0±15,9* 120,6+17,8* 178,6+20,4*

Примечания: * - Р < 0,05-0,001

Об этом свидетельствует более низкая активность в крови у заболевших после отела коров глутатионредуктазы (на 40%), фермента поддерживающего

230 220 -210 200 190 -180 -170 -160 -130

25-30 15-20 2-3 да. 2-3 да. 15-20 дн. до дн. до до отела после дн. отвпа отела отела после

отела

Рис. 3. Динамика активности глутатионре-

общий пул восстановленного глутатиона в организме. Помимо этого у коров снижена активность СОД на 20,8 % , ГПО на 33,3 % и каталазы на 6,5%, что в целом свидетельствует о более низком уровне функционального состояния ферментативного звена антиоксидантной системы у коров, предрасположенных к субинволюции матки.

Различия в активности ферментативного звена системы антиоксидантной защиты сохраняются и после родов. В этот период активность СОД у них ниже более чем в 2 раза, каталазы — на 27,6 %, глутатионпероксидазы - на 38,2% и глутатионредуктазы - на 39,8 % (табл. 1). Это не позволяет адекватно контролировать и удерживать в физиологических пределах чрезмерную активацию процессов ПОЛ и накопление в организме его токсических продуктов. Поэтому уровень конъюгированных диенов повышен на 25,9 %, малонового диальдегида - на 40,0 %, а содержание в сыворотке крови флуоресцирующих оснований Шиффа- на 38,5 % (табл.2).

Таблица 2

Содержание продуктов ПОЛ в крови у здоровых и заболевших коров

в разные периоды до и после отела

Группа животных Периоды исследования

В начале сухостойного периода За 10-14 дней до отела Через 1-2 суток после отела Через 15 суток после отела

Конъюгированные диены

Здоровые 0,108+0,018 0,124+0,016 0,144±0,025 0,138+0,014

Заболевшие 0,136±0,021 0,156+0,034 0,266+0,035* 0,265+0,029*

Малоновый диальдегид

Здоровые 0.45±0,051 0,56±0,051 0,98+0,055 0,55+0.048

Заболевшие 0,63±0,056* 0,88±0,064* 2,29+0,109* 1,32+0,102*

Основания Шиффа

Здоровые 0,13+0,010 0,16+0,012 0,27+0.029 0,18+0,011

Заболевшие 0,18±0,014* 0,24+0,019* 0,79+0,062* 0,72+0,059*

Примечания: *- Р < 0,05-0,001 по сравнению со здоровыми

Таким образом, у коров с субинволюцией матки имеется существенный дисбаланс в системе ПОЛ-АОЗ. В этом может заключаться одна из причин метаболических нарушений в организме коров в ранний послеродовый период, на фоне чего возрастает риск развития субинволюции матки.

З.З.'Хемилюминесцентный анализ плазмы крови коров в пред- и послеродовый период

По характеру параметров хемилюминесценции (ХЛ) плазмы крови между оксидантно-антиоксидантными процессами у коров за 30 суток до отела существует определенный баланс.

По мере приближения к родам показатели интенсивности ХЛ увеличиваются и достигают своего максимума непосредственно перед родами, что свидетельствует о повышении интенсивности процессов свободнорадикаль-ного окисления и развитии дисбаланса в системе СРО-АОЗ (табл.3).

Однако к 10-му дню после родов дисбаланс между образованием и утилизацией свободных радикалов смещается в сторону нарастания мощности системы антирадикальной защиты. В дальнейшем (на 30-е сутки после отела) изменения интенсивности процессов пероксидации за счет активизации системы АОЗ приводят к нормализации течения СРО и переходу этих процессов на более низкий стационарный уровень, обеспечивающий нормальное течение метаболических процессов в организме.

Таблица 3

Интенсивность хемилюминесценции плазмы крови клинически здоровых и

с субинволюцией матки коров

Показатели ХЛ Период исследования

Л о отела, сутки После отела, сутки

30 7-10 1-3 1-3 7-10 30

1шах, шУ 9.2±0.4 9,8±0,5 11.5±0.8 12.5±0,8 18.9±0.9 19,5±0,9 21.1±1.1 23,5±1,6 15.7±0.7 18,3±1,2 10.8±0,5 11,7±0,8

Б, тУхсек 20,2±1.3 23,2±1,5 25.7±1.8 26,7±1,4 32,2±2.1 33,1±2,0 34.6±2.0 36,6±2,1 26,8±2,2 29,8±1,7 21.3±1.2 24,2±1,5

tga|,mVxceк 2.0±0.10 2,0±0,12 2.1 ±0.10 2,8±0,17* 2.5±0.15 3,1±0,10* 2.9±0.21 3,4±0,19 2.4±0.17 3,2±0,17* 2.1 ±0.12 3,1±0,24*

tga2,mVxceк -2,2±0.12 -2,1±0,15 -1.9±0.20 -1,7±0,09 -1.4±0.08 -1,3±0,07 -1,2±0.08 -0,8±0,07* -1,8±0.12 -1,2±0,11* -2.1±0.12 -1,8±0,12

К|(1тах/5) 0.46±0.04 0,42±0,01 0.45±0.03 0,47±0,04 0,59±0,06 0,59±0,06 0.61 ±0.06 0,64±0,06 0.59±0.06 0,61 ±0.03 0.48*0,03 0,48±0,01

К2 №а2/5) 0.11±0.013 0,09±0,012 0,07±0.003 0,06±0,006 0.04±0.003 0,04±0,001 0.03±0.001 0,02±0,001 0.07±0,004 0,04±0,002* 0.10±0,004 0,07±0,003*

Примечание: числитель - здоровые, знаменатель- еубинволюцня матки. * - Р< 0,05 по сравнению со здоровыми

Иная картина наблюдалась у коров, после отела, у которых развилась субинволюция матки. За 30 суток до отела у них установлена пониженная мощность системы антиоксидантной защиты и более интенсивное течение свободнорадикальных процессов, о чем свидетельствуют показатели свето-суммы (Б) и величины максимальной вспышки (1тах) хемилюминесценции. Эта тенденция сохраняется на протяжении всего предродового периода.

В первые сутки после отела отмечается наиболее высокая интенсивность свободнорадикальных процессов, что характеризует в определенной мере функциональную недостаточность неферментативного звена АОС крови. Об этом же свидетельствует низкая антиокислительная активность плазмы крови в тот же период, оцениваемая по тангенсу угла наклона кинетической кривой ^ а2), который на 33,4% больше по сравнению с таковым у оставшихся здоровыми коров.

Следствием сниженного функционального состояния систем, контролирующих на разных стадиях интенсивность течения процессов свободнора-дикального окисления, являются и более высокие показатели 8 и 1тах у заболевших коров, по сравнению со здоровыми: через 1-3 суток - на 5,0% и

10,2%, через 7-10 суток - на 10,1% и 14,2%, через 30 суток - на 7,9% и 7,7% соответственно.

О сбалансированности оксидантно-антиоксидангных процессов можно судить по значению коэффициента Кь рассчитанного как отношение 1тах/8 и отражающего степень интенсивности процессов пероксидации (рис.4).

Согласно полученным данным у коров с нормальным течением послеродового периода за 1-3 суток до отела значение данного коэффициента возрастало на 28,3%, а на 1-3 сутки после отела - 32,6%, одновременно со снижением АОА(^ а2) крови в эти же сроки. У коров с субинволюцией матки характер изменения коэффициента К] был такой же, но дисбаланс в системе СРО-АОЗ был более выражен. У них за 1-3 суток до отела коэффициента К) возрастал на 40,5%, а через 1-3 суток после отела коэф-

О гу»1ИК О.ПНЧО 1Я

Л - • К2 губпньолмция

Рис.4. Динамика сбалансированности окси-дантно-антиоксидантных процессов у здоровых коров и коров с субинволюцией матки в предродовый и послеродовый периоды. фициент К1 был выше, чем за 30 дней до родов на 52,4 %. Для оценки сбалансированности оксидантно-антиоксидантного статуса и своевременного обнаружения явления "оксидативного стресса" у крупного рогатого скота предложено также использовать отношение показателя АОА крови к интенсивности пероксидации в качестве коэффициента сбалансированности К2 (^сх2/8), но в отличие от коэффициента Кь он отражает вклад внеклеточных антиок-сидантов в становление антирадикального гомеостаза организма (Степанова И.П., 2004).

Значение коэффициента сбалансированности К2 у коров за 1-3 суток до отела и на 1-3 сутки после отела по сравнению с его значением за 30 суток до родов снижается в 2,75 и в 3,78 раза соответственно. Это снижение указывает на состояние "окислительного стресса" в этот период у коров.

У животных с послеродовой субинволюцией матки снижение коэффициента сбалансированности К2 было более существенно (в 4,5 раза). При этом и за месяц до и после родов у таких животных система СРО-АОЗ менее сбалансирована, о чем свидетельствовал более низкий (на 22,2 и 30,0% соответственно) коэффициент сбалансированности К2 у них, по сравнению с коровами с нормальным течением послеродового периода.

Таким образом, хемилюминесцентный анализ СРО в плазме крови у коров в поздний предродовый и ранний послеродовый периоды свидетельствует об интенсификации окислительных реакций, протекающих по свободноради-кальному механизму. Снижение интенсивности реакций подобного класса, начиная с 7-10-х суток у оставшихся здоровыми коров после родов, обусловлено

включением адаптационно-компенсаторных механизмов, направленных на подавление избыточного процесса окислительной деструкции биополимеров.

У коров с послеродовой субинволюцией матки дисбаланс в системе СРО-АОЗ на фоне имеющейся у них недостаточной мощности антиокси-дантной системы создает предпосылки неадекватного восстановления окси-дантно-антиоксидантного статуса коров в критические периоды (непосредственно до и после родов), возникновению у них явления "окислительного стресса" и на его фоне развитию острой субинволюции матки. Это является основанием рассматривать необходимость применения антиоксидантов животным в последний месяц беременности и ранний послеродовый период в условиях риска развития послеродовой субинволюции матки как важный фактор профилактики этой патологии.

3.4. Динамика содержания стабильных метаболитов оксида азота у клинически здоровых и коров с субинволюцней матки

Установлено, что за 1,5-1 месяц до родов уровень стабильных метаболитов оксида азота у коров не заболевших субинволюцией матки, составил 39,0±4,77 мкМ/л (табл. 4).

Таблица 4

Содержание стабильных метаболитов оксида азота (МОх) в сыворотке крови у здоровых коров и коров с острым и хроническим течением субинволюции

матки, мкМ/л

Периоды Здоровые Субинволюция

исследования острая | хроническая

До родов

За 45-30 суток 39,0 ±4,77 42,0 ± 1,92 40.5 ± 1,53

За 14-7 суток 77,4 ± 7,56* 66,6 ±5,43* 75,3 ± 1,32*

За 3-1 суток 152,7 ±7,08* 145,5± 4,77* 147,2±4,98*

После родов

Через 1 сутки 94,8 ± 7,2* 140,7 ±3,9* 105,9 ±4,53*

Через 2 суток 53.4 ± 12,6 132,3± 3,78* 90,6 ±8.55*

Через 3-5 суток 51.9 ±2,85 117,8±4.26* 88,2 ±4,95*

Через 30 суток 47,1 ±4,14 66,0 ± 8,04* 77,1 ±2,37*

*- Р < 0,05-0,001 по сравнению с периодом за 45-30 суток до родов

К концу последнего триместра беременности и приближения родов суммарный уровень метаболитов оксида азота в сыворотке крови коров постепенно возрастает и за 1-3 сутки до родов превышает уровень N0* за 1,5-1 месяцев почти в 4 раза. Через 1 сутки после отела уровень метаболитов оксида азота у здоровых коров составляет 94,8±7,2 мкМ/л, а уже на 2-е сутки после отела суммарное содержание 1МОх снижается до 53,4±12,6 мкМ/л. Далее происходит еще большее снижение их уровня до величин, установленных за 2-4 недели до родов, что, вероятно, является одним из факторов способствующих сокращению матки после родов и развитию инволюционных процессов. Возможно, что именно эти механизмы лежат в основе послеродовый инволюции матки.

Интенсивность продукции оксида азота у коров с нарушением сократительной функции матки в период клинического проявления этой патологии существенно отличается как от оставшихся здоровыми животных, так и в зависимости от характера её проявления (см. табл. 4). Уровень ЫОх в крови коров с острым течением субинволюции матки на следующий день после родов превышает таковой у коров с нормальным течением инволюционных процессов на 48,4%, через 2 суток - в 2,5 раза, через 3 суток - в 2,3 раза и через 1 месяц на 40% соответственно.

До родов у животных с разным характером течения субинволюции матки уровень МОх существенно не различается. Через сутки после родов у животных с острой субинволюцией уровень стабильных метаболитов оксида азота превышает уровень у коров с хронической субинволюцией на 24,0%. Далее у коров всех групп характер динамики уровня >Юх в сыворотке крови является аналогичным.

На 30-е сутки после отела содержание >Юх у коров с острой формой субинволюции (к этому времени состояние матки у них нормализуется) становится таким же, как и у здоровых животных, а у коров с хронической субинволюцией матки уровень ЫОх в крови почти в 1,5 раза превышает их уровень у здоровых коров и на 16,8% - уровень у коров, у которых регистрировалась острая субинволюция матки, что может быть одной из предрасполагающих причин развития хронического нарушения сократительной функции матки у коров после отела.

3.5. Взаимосвязь сократительной функции матки и уровня стабильных метаболитов оксида азота в крови у коров

I При детальном изучении динамики содержания в сыворотке крови стабильных метаболитов оксида азота и сократительной функции матки у коров во время и в течение суток после родов в норме установлена достаточно четкая взаимосвязь между интегральным показателем сократительной функции матки (контракционным индек-Рис.5. Взаимосвязь сократительной функции сом ~ КИ) И интенсивностью матки) с уровнем стабильных метаболитов генерации оксида азота (рис. 5). оксида азота в сыворотке крови здоровых ко- У коров С нормальным тече-ров и коров с субинволюцией матки пием послеродового периода за-

кономерное снижение КИ происходит на фоне снижения уровня стабильных метаболитов оксида азота, который отражает его синтез в организме коров (г=+0,92, Р<0,001), а у коров с послеродовой субинволюцией матки такая закономерность отсутствует (г= +0,12, Р>0,1).

СубННЕОЛЮЦИЯНО*

После рождения

После отделтня поел еда чера

После опнчанияродов,че{ ез

3.6. Сократительная функция миометрия при модуляции синтеза оксида

азота

Цель этой серии опытов состояла в изучении in vitro влияния состояния системы Ь-аргинин-NO на сократительную активность миометрия в середине беременности и в период родов.

Установлено, что спонтанная сократительная активность гладкой мускулатуры матки при добавлении в инкубационную среду (в концентрациях Ю'МСГ4 М) L -аргинина уменьшалась, а при добавлении L-NAME увеличивалась (рис. 6). При этом для миометрия, взятого на 20-й день беременности (рис.6.1) статистически достоверное снижение L-аргинином и повышение L-NAME амплитуды и частоты спонтанных сокращений происходило при концентрации 10"5 М (Р<0,05), а для миометрия, взятого в период родоразреше-ния чтобы достигнуть подобных статистически достоверных (Р<0,05) изменений требовались более высокие концентрации (Ю-4 М) L-аргинина и L-NAME (рис. 6.2).

ЬНлШ

1 2 Рис. 6. Влияние Ь-аргинина (А) и Ь-ЫАМЕ (Б) на спонтанную сократительную активность миометрия крысы на 20-й день беременности (1) и в период

родов (2)

Таким образом, из результатов проведенного исследования следует, что система генерации оксида азота Ь-аргинина-МО присутствует в матке и реактивность миометрия является более высокой в середине беременности и уменьшается в период родоразрешении. Это заключение базируются на том, что тормозящее действие Ь-аргинина (субстрата 1ЧО-синтаз), значительно изменяется в зависимости от концентрации (от 10"5 М до 10"4 М) на миомет-рий в период родоразрешения, по сравнению с миометрием, изолированном в середине беременности.

Карбохолин в концентрации 10"" М вызывал контракцию миометрия изолированного как на 20-й день беременности, так и в период родоразрешения. Амплитуда сокращений миометрия, изолированного на 20-й день беременности, вызванных карбохолином статистически достоверно уменьшалась в ответ на добавление Ь-аргинина и увеличивалась в ответ на добавление в среду Ь-КАМЕ уже в концентрации 10"5 М и еще значительнее - в концен-

трации 10"4 М (рис. 7.1), а миометрия, изолированного в период родоразре-шения только в концентрации 10"4 М (рис. 7.2.). При этом как Ь-аргинин, так и Е-ЫАМЕ существенно не изменяли частоту сокращений (Р> 0,05).

К^йоспм

1 2 Рис. 7. Влияние Ь-аргинина (А) и Ь-ЫАМЕ (Б) на сократительную активность миометрия, изолированного в середине беременности (1) и в период родов (2), на фоне действия карбохолина. Карбохолин добавляли в среду за 10 минут перед добавлением Ь-аргинина и Ь-ЫАМЕ.

Таким образом, система Ь-аргинин-МО* участвует и в спонтанной и в стимулируемой сократительной активности миометрия. При этом активация этой системы расслабляет гладкую мускулатуру миометрия, а ингибирование - повышает сократитетельную активность миометрия. Причем реакция на Ь-аргинин и Ь-ЫАМЕ увеличена в середине беременности и уменьшена в период родов. Это указывает на то, что система Ь-аргинин-ЬЮ играет роль в поддержании низкой сократительной активности матки в течение беременности, а также в инициировании и обеспечении родов. Увеличение активности ЫО-синтазы и образования N0" в системе Ь-аргинин-ЫО при беременности, вероятно, связано с действием половых гормонов, в частности, эстрогенов (ВиИтвсЫ I. et а1. 1995).

3.7. Половые гормоны и оксид азота у коров в период беременности и

после отёла

Установлено, что концентрация прогестерона в крови коров, заболевших субинволюцией матки, за 30 дней до отёла выше в 1,47 раза в сравнении с животными, у которых послеродовый период протекал без осложнений, а содержание эстрадиола-17р у них, наоборот, ниже в 1,84 раза. Соотношение прогес-терон/эстрадиол у коров, заболевших после родов субинволюцией матки, выше чем у здоровых в 2,58 раза. При этом не установлено существенных различий между животными этих двух групп в интенсивности синтеза оксида азота, которая находилась на относительно низком уровне.

За 1-3 суток до отела содержание прогестерона у коров, заболевших субинволюцией матки, снижается на 12,4%, а у животных, оставшихся клинически здоровыми - на 35,5%. Концентрация эстрадиола-17(3 в это же время

у животных, у которых после родов зарегистрирована субинволюция матки, была в 2,65 раза ниже, чем у коров, у которых послеродовый период протекал без осложнений и соответственно прогестерон-эстрадиоловое отношение -выше в 3,27 раза.

Через 1-3 суток после отёла в крови коров, заболевших субинволюцией матки, содержание прогестерона выше в 2,29 раза, чем у животных с физиологическим течением послеродового периода, концентрация эстрадиола-17р -ниже в 1,97 раза, а прогестерон-эстрадиоловое отношение у этих животных выше в 4,65 раза. В этот период установлены и существенные различия в об-

У животных с субинволюцией матки уровень его стабильных метаболитов был в 2,48 раза выше, чем у оставшихся здоровыми коров (рис. 8). При этом различия в интенсивности синтеза оксида азота до отела у здоровых и заболевших коров отсутствуют. И только через 1-3 суток после родов на фоне существенно более высокого (в 4,65 раза) соотношения прогес-терон/эстрадиол-17Р у коров, заболевших субинволюцией матки, интенсивность синтеза оксида азота существенно превышает его образование у здоровых животных.

Таким образом, у коров с субинволюцией матки за месяц до и 1-3 дня до отёла имеется высокое содержание в крови прогестерона и низкое-эстрадиола-17р. Прогестерон-эстрадиоловое отношение у них выше, чем у оставшихся здоровыми животных соответственно в 2,58 и 3,27 раза, но существенные различия в интенсивности синтеза оксида азота в организме в эти сроки отсутствуют. И только через 1-3 суток после родов на фоне более высокого соотношения прогестерон/эстрадиол-17р (в 4,65 раза) у коров, заболевших субинволюцией матки, интенсивность синтеза оксида азота существенно превышает его образование в организме у здоровых животных.

ВЫВОДЫ

1. У клинически здоровых коров заключительный этап беременности и ранний послеродовый период протекают на фоне интенсификации процессов свободнорадикалыюго окисления липидов. Это наиболее выражено за 2-3 дня до и 2-3 дня после тела. В эти сроки концентрация малонового диальдегида в крови коров соответственно выше по сравнению с исходными показателями за 25-30 дней до отела на 26% и 48%, диеновых конъюгатов - на 18% и 38%, оснований Шиффа на - 11% и 28%. К 20-му дню после отела уровень началь-

разовании оксида азота в организме коров.

СубннБодюция

Рис.8. Сравнительная динамика прогестерон-эстрадиолового отношения и уровня оксида азота у здоровых и заболевших субинволюцией матки коров

ных, промежуточных и конечных продуктов ПОЛ заметно снижается и статистически достоверно не отличается от их уровня за 25-30 дней до отела.

2. У коров с субинволюцией матки, развившейся после отела, уже за 1-1,5 месяца до отела уровень конъюгированных диенов повышен на 25,9 %, малонового диальдегида - на 40,0 %, а содержание в сыворотке крови флуоресцирующих оснований Шиффа - на 38,5 %, по сравнению с животными оставшимися здоровыми. На 2-3 день после отела у заболевших после родов коров, уровень конъюгированных диенов возрастает на 70,5 %, малонового диальдегида - в 2,6 раза, а оснований Шиффа - в 3,3 раза по сравнению с исходными данными.

3. У клинически здоровых коров интенсификация процессов пероксид-ного окисления липидов в указанные сроки сопровождается повышением функциональной активности ферментативного звена системы антиоксидант-ной защиты, направленного на ограничение чрезмерной интенсификации ПОЛ и поддержание их на более низком стационарном уровне, обеспечивающим оптимальное течение метаболических процессов в организме.

4. В сухостойный период у коров с последующим развитием субинволюции матки, по сравненшо с коровами с нормальным течением послеродового периода, мощность ферментативного звена системы антиоксидантной защиты снижена. Активность глутатионредуктазы в крови у заболевших после отела коров ниже на 40%, СОД - на 20,8 % , ГПО - на 33,3 % и каталазы -на 6,5%. На 2-й день после отела активность СОД у таких коров ниже, чем у оставшихся здоровыми более чем в 2 раза, каталазы - на 27,6 %, глутатион-пероксидазы - на 38,2% и глутатионредуктазы - на 39,8 %.

5. У коров с субинволюцией матки в ранний послеродовой периоды более существенно выражен дисбаланс в системе ПОЛ-АОЗ. Если у коров с нормальным течением послеродового периода коэффициент сбалансированности в системе ПОЛ-АОЗ (К2), как отношение АОА плазмы крови (^сь) к светосумме хемилгоминисценции (Э), отражающий вклад внеклеточных ан-тиоксидантов в становление антирадикалыюго гомеостаза организма, на 1-3 сутки после отела снижается в 3,78 раза по сравнению с периодом за 30 дней до отела, то у коров с послеродовой субинволюцией матки - в 4,5 раза. У таких животных и за месяц до родов коэффициент сбалансированности К2 также на 22,2% ниже по сравнению с коровами с нормальным течением послеродового периода.

6. Изменению синтеза оксида азота принадлежит важная роль в регуляции сократительной активности миометрия. Система генерации оксида азота Ь-аргинин-ЫО" участвует в обеспечении низкой сократительной активности матки в течение беременности, а также в инициировании и обеспечении родового акта. Активация этой системы расслабляет гладкую мускулатуру миометрия, а ингибирование - повышает сократительную активность миометрия.

7. В крови коров с нормальным течением послеродового периода по мере приближения к родам суммарный уровень стабильных метаболитов оксида азота (ЫОх) существенно возрастает и за 1-3 суток до родов превышает

уровень ]ЧОх за 1,5-1 месяцев до родов почти в 4 раза. В первые сутки после родов их уровень снижается в 1,6 раза и к 3-5 суткам после родов статистически достоверно не отличается от величии, установленных за 1-1,5 месяца до отела. Это способствует сокращению матки и развитию инволюционных процессов после родов.

8. До отела интенсивность образования оксида азота у коров с субинволюцией матки в послеродовый период существенно не различается от животных с нормальным течением послеродового периода, однако у таких животных в течение первых 5 суток после родов уровень стабильных метаболитов оксида азота в крови примерно в 1,5 раза выше, чем у коров с нормальным течением послеродового периода.

9. Сумма стабильных метаболитов оксида азота в крови коров с острой формой течения субинволюции матки на следующий день после родов превышает таковой у коров с нормальным течением инволюционных процессов в 1,48 раза, через 2 суток - в 2,5 раза, через 3 суток - в 2,3 раза и через 1 месяц - в 1,4 раза.

10. У коров с нормальным течением послеродового периода снижение контрактационного индекса, как интегрального показателя сократительной функции матки происходит на фоне снижения образования оксида азота (г=+0,92, Р<0,001), а у коров с послеродовой субинволюцией матки такая закономерность отсутствует (г=+0,12, Р>0,1).

11. У коров с патологическим течением послеродового периода через 13 дня после отела, повышенный в 2,3 раза уровень прогестерона и сниженное в 4,65 соотношение прогестерон/эстрадиол-17р, по сравнению со здоровыми животными, коррелирует с более высоким в 2,5 раза содержанием в крови коров суммы стабильных метаболитов оксида азота.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В качестве биохимических критериев повышенного риска развития у коров послеродовой субинволюции матки предлагается использовать следующие показатели: содержание в крови коров за месяц до отела малонового диальдегида выше 0,80 мкМ/л, оснований Шцффа - более 0,20 отн. ед./мл сыворотки, активность в крови глутатионпероксидазы - ниже 14,0 мМ восстановленного глутатиона/лх мин, глутатионредуктазы - ниже 145,0 мкМ окисленного глутатиона/л*мин, содержание стабильных метаболитов в сыворотке крови коров выше 140,0 мкМ/л через 2-е суток после отела.

2. При диагностике, терапии и профилактике субинволюции матки у коров руководствоваться Методическими рекомендациями по диагностике, терапии и профилактике субинволюции матки.- Воронеж, 2005.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

*1. Близнецова Г.Н. Спектрофотометрический метод определения метаболитов оксида азота / Г.Н. Близнецова, Н.В. Ермакова, З.Д. Мухаммед, М.И. Рецкий// Вестник ВГУ. Проблемы химии и биологии.- 2002.- №1,- С.56-60.

2. Самохин В.Т. Применение витаминно-минерального премикса для профилактики субинволюции матки у коров / В.Т. Самохин, В.И. Шушлебин, В.Н. Коцарев, В.И. Михалев, A.A. Сотников, Н.В. Ермакова, М.Н.Кочура// Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Материалы международной научно-практической конференции.- 2002.- С.534-535.

*3. Рецкий М.И. Динамика стабильных метаболитов оксида азота у коров с субинволюцией матки / М.И. Рецкий, Н.В. Ермакова, Г.Н. Близнецова и др. // Ветеринарная патология.-2003.-№ 2.-С.89-90.

*4. Рецкий М.И. Возрастная динамика образования оксида азота в организме крупного рогатого скота / М.И. Рецкий, А.Г. Шахов, Г.Н. Близнецова, С.С. Артемьева, H.H. Каверин, Н.В. Ермакова, H.A. Косматых// Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук.- 2004,- №4,- С.58-60.

5. Пасько Н.В. Интенсивность процессов перекисного окисления липи-дов у коров с субинволюцией матки / Н.В. Пасько // Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных. Материалы международной научно-практической конференции.- Воронеж: Воронежский государственный университет.-2004.-С. 127-130.

6. Мисайлов В.Д. Субинволюция матки у коров / В.Д. Мисайлов, В.И. Михалев, Ю.Н. Бригадиров, Н.В. Пасько, Ю.В. Сергеев, М.Н. Кочура, В.И. Шушлебин // Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных. Материалы международной научно-практической конференции,- Воронеж: Воронежский государственный университет.- 2004,- С. 391-396.

7. Михалев В.И. Профилактика послеродовой субинволюции матки у коров / В. И. Михалев, В.Д. Мисайлов, Н.В. Притыкин, В.И. Шушлебин, Н.В. Пасько// Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных. Материалы международной научно-практической конференции,- Воронеж: Воронежский государственный университет,- 2004,- С. 396-399.

8. Михалев В.И. Методы лечения острой субинволюции матки у коров / В. И. Михалев, В.Д. Мисайлов, С.М. Сулейманов, Н.В.Пасько // Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных. Материалы международной научно-практической конференции,- Воронеж: Воронежский государственный университет,- 2004,- С. 399-403.

9. Заливанский Э.Б. Роль оксида азота в патогенезе гестоза / Э.Б. Зали-ванский, М.И. Рецкий, Г.Н. Близнецова, С.С. Артемьева, Н.В. Пасько// Актуальные проблемы болезней органов размножения и молочной железы у животных. Материалы международной научно-практической конференции. Воронеж, 5-7 октября 2005 г.- Воронеж: Европолиграфия,- 2005.- С.292-299.

10. Рецкий М.И. Роль оксида азота в патогенезе субинволюции матки у коров / М.И. Рецкий, В.И. Михалев, Г.Н. Близнецова, Н.В. Пасько// Актуальные проблемы болезней органов размножения и молочной железы у жи-

вотных. Материалы международной научно-практической конференции. Воронеж, 5-7 октября 2005г.- Воронеж: Европолиграфия,- 2005.- С.382-385.

11. Рецкий М.И. Роль метаболических нарушений в развитии послеродовой субинволюции матки у коров / М.И. Рецкий, В.Д. Мисайлов, А.И. Золотарев, Г.Н. Близнецова, Н.В. Пасько, В.И. Михалев // Научные основы профилактики и лечения болезней животных: Сборник научных трудов ведущих ученых России, СНГ и др. стран.- Уральское издательство, Екатеринбург,- 2005,- С.547-551.

12. Мисайлов В.Д. Методические рекомендации по диагностики, терапии и профилактике субинволюции матки у коров /В.Д. Мисайлов, А.Г. Нежданов, А.Г. Михалев, Н.В. Пасько и др.- Воронеж, 2005,- 20 с.

*13. Шахов А.Г. Значение оксида азота и половых стероидов в развитии субинволюции матки коров / А.Г. Шахов. В.И. Михалев, М.И. Рецкий, В.Д. Мисайлов, Г.Н. Близнецова, Н.В. Пасько// Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук.- 2006,- №6.- С.49-51.

14. Близнецова Г.Н. Роль оксида азота в регуляции сократительной активности миометрия в период беременности и родов / Г.Н. Близнецова, Н.В. Пасько, М.И. Рецкий // Материалы 1-го съезда фармакологов России.-Воронеж, 2007.-С.126-131.

15. Пасько Н.В. Хемилюминесцентный анализ плазмы крови коров при субинволюции матки / Н.В. Пасько // Актуальные проблемы ветеринарной медицины. Материалы международной начно-практической конференции.-Курск, 2008.-С.283-287.

16. Патент 2296507 Российской Федерации, С1 Способ прогнозирования патологии послеродового периода у коров/А.И. Золотарев, М.И. Рецкий, В.Д. Мисайлов, В.И. Михалев, Н.В. Притыкин, Г.Г. Чусова, Н.В. Пасько, H.A. Ильина,-№2005133941; Заявлено 02.11.2005; Опубл. 10.04.2007., Бюлл. №10.

*- издания из Перечня ведущих рецензируемых научных журналов и изданий ВАК РФ.

Подписано в печать 19.03.2009 г. Формат 60x84/16. Гарнитура «Times New Roman». Бумага офсетная. Усл. печ. л. 2,00. Тираж 100. Заказ 143.

Цифровая типография «Скоропечатня» 394000, Воронеж, пер. Солдатский 18, тел.:616-228.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Пасько, Надежда Валериевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.'.

1.1. Пероксидное окисление липидов и системы его регуляции.

1.1.1. Пероксидное окисление липидов.:.

1.1.2. Система антиоксидантной защиты организма.

1.2. Оксид азота и его биологическая роль в организме млекопитающих.

1.2.1. Образование и цикл оксида азота.

1.2.2. Взаимосвязь активных форм кислорода и азота.

1.2.3. Роль оксида азота в репродукции животных.

1.2.4. Роль оксида азота в регуляции гладкой мускулатуры.

1.2.5. Взаимосвязь оксида азота и синтеза эстрогенов и прогестерона. 45 1.3. Этиология и патогенез субинволюции матки.

2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объекты исследования.:.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Определение продуктов пероксидного окисления липидов.

2.2.2. Определение активности супероксиддисмутазы в крови.

2.2.3. Определение активности каталазы в крови.

2.2.4. Определение активности глутатионпероксидазы в крови.

2.2.5. Определение активности глутатионредуктазы в крови.

2.2.6. Определение показателей биохемилюминесценции плазмы крови.

2.2.7. Определение стабильных метаболитов оксида азота в сыворотке (плазме) крови.

2.2.8. Статистическая обработка данных.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Динамика показателей свободнорадикального окисления липидов и состояния антиоксидантной системы в крови клинически здоровых коров в последний месяц беременности и ранний послеродовый период.

3.2. Свободнорадикальное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы у коров с субинволюцией матки.

3.3. Хемилюминесцентный анализ плазмы крови коров в пред- и послеродовой период.

3.4. Динамика содержания стабильных метаболитов оксида азота у клинически здоровых и коров с субинволюцией матки.

3.5. Взаимосвязь.сократительной функции матки и уровня стабильных метаболитов оксида азота в крови у коров.

3.6. Сократительная функция миометрия при модуляции синтеза оксида азота.

3.7. Половые гормоны и оксид азота у коров в период беременности и после отёла.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров"

Согласно современным представлениям универсальными регуляторами функций любых физиологических систем организма являются процессы сво-боднорадикального окисления и система оксида азота (Ь-аргинин-ИО") и существует тесная взаимосвязь между процессами свободнорадикального окисления (СРО), инициаторами которого являются активные формы кислорода (АФК), антиоксидантной системой и системой оксида азота (Зенков Н.К. с соавт., 2001).

Свободнорадикальная природа NO* (Halliwell В. el al, 1997) позволяет ему, как активировать цепные свободнорадикальные реакции, так и ингиби-ровать их (Laskin J.D. et al., 2001). При этом защитные эффекты NO* связаны с его способностью увеличивать активность антиоксидантных ферментов и экспрессию кодирующих их генов (Gromadzinska J., Zachara В., 1992) и замедлять свободнорадикальное окисление липидов (Wu S. et al, 2000). Оксид азота может быть вовлечен и в механизмы повреждения наряду с процессами свободнорадикальной модификации белков и нуклеиновых кислот активными формами кислорода (Laskin J.D. et al., 2001). В зависимости от природы действующего фактора эти повреждающие эффекты возможно могут быть обусловлены либо гипо-, либо гиперпродукцией АФК, а избыточный или недостаточный синтез N0* в организме является одним из факторов патогенеза различных заболеваний (Зенков Н.К. с соавт., 2001).

Имеются данные о том, что оксид азота участвует в расслаблении гладких мышц матки, тормозит сокращения матки при беременности и играет роль релаксанта цервикального канала в родах (Garfield R.E. et al., 2001).

Все это позволяют предполагать важную роль процессов свободнора-дикального окисления, состояния антиоксидантной системы, а также системы Ь-аргинин-ЫО* в патогенезе послеродовых нарушений сократительной функции матки у коров. Выяснение этой стороны патогенетических механизмов может быть перспективно и в плане поиска и разработки фармакологических средств снижающих проявление нарушений сократительной функции матки в послеродовый период.

К сожалению работ, посвященных изучению роли процессов пероксид-ного окисления липидов, системы антиоксидантной защиты и интенсивностью образования оксида азота в период беременности и после родов у коров, а также их связи с развитием послеродовой патологии и, в частности, с нарушением сократительной функции матки крайне мало. Это и определило общую направленность работы, выбор методологических подходов и экспериментальных моделей.

Цели и задачи. Основной целью исследования является изучение роли свободнорадикального окисления липидов и антиоксидантной системы, а также оксида азота в развитии послеродовых нарушений сократительной функции матки у коров.

В соответствии с указанной целью на разрешение ставятся следующие задачи:

1.Изучить показатели, характеризующие интенсивность свободноради-кального окисления липидов в разные периоды до и после отела у здоровых коров и коров с субинволюцией матки.

Получен патент РФ на способ прогнозирования патологии послеродового периода у коров (№2296507, Бюлл. №10, 10.04.2007).

На защиту выносятся следующие положения:

1. У коров с субинволюцией матки до и после отела повышена интенсивность процессов свободнорадикального окисления липидов и имеются нарушения в ферментативном звене системы антиоксидантной защиты организма по сравнению с коровами с нормальным течением послеродового периода.

Структура и объём работы. Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, объектов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Список использованной литературы содержит 255 источников, из них 138 отечественных и 117 иностранных. Иллюстративный материал включает 17 рисунков и 7 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Пасько, Надежда Валериевна

5. ВЫВОДЫ

1. У клинически здоровых коров заключительный этап беременности и ранний послеродовый период протекают на фоне интенсификации процессов свободнорадикального окисления липидов. Это наиболее выражено за 2-3 дня до и 2-3 дня после тела. В эти сроки концентрация малонового диальдегида в крови коров соответственно выше по сравнению с исходными показателями за

25-30 дней до отела на 26% и 48%, диеновых конъюгатов - на 18% и 38%, оснований Шиффа на - 11% и 28%. К 20-му дню после отела уровень начальных, промежуточных и конечных продуктов ПОЛ заметно снижается и статистически достоверно не отличается от их уровня за 25-30 дней до отела.

2. У коров с субинволюцией матки, развившейся после отела, уже за 1-1,5 месяца до отела уровень конъюгированных диенов повышен на 25,9 %, малонового диальдегида - на 40,0 %, а содержание в сыворотке крови флуоресцирующих оснований Шиффа - на 38,5 %, по сравнению с животными оставшимися здоровыми. На 2-3 день после отела у заболевших после родов коров, уровень конъюгированных диенов возрастает на 70,5 %, малонового диальдегида - в 2,6 раза, а оснований Шиффа — в 3,3 раза по сравнению с исходными данными.

3. У клинически здоровых коров интенсификация процессов пероксидного окисления липидов в указанные сроки сопровождается повышением функциональной активности ферментативного звена системы антиоксидантной защиты, направленного на ограничение чрезмерной интенсификации ПОЛ и поддержание их на более низком стационарном уровне, обеспечивающим оптимальное течение метаболических процессов в организме.

4. В сухостойный период у коров с последующим развитием субинволюции матки, по сравнению с коровами с нормальным течением послеродового периода, мощность ферментативного звена системы антиоксидантной защиты снижена. Активность глутатионредуктазы в крови у заболевших после отела коров ниже на 40%, СОД - на 20,8 % , ГПО - на 33,3 % и каталазы -на 6,5%. На 2-й день после отела активность СОД у таких коров ниже, чем у оставшихся здоровыми более, чем в 2 раза, каталазы - на 27,6 %, глутатион-пероксидазы - на 38,2% и глутатионредуктазы - на 39,8 %.

5. У коров с субинволюцией матки в ранний послеродовой периоды более существенно выражен дисбаланс в системе ПОЛ-АОЗ. Если у коров с нормальным течением послеродового периода коэффициент сбалансированности в системе ПОЛ-АОЗ (К2), как отношение АОА плазмы крови (-tga2) к светосумме хемшпоминисценции (S), отражающий вклад внеклеточных ан-тиоксидантов в становление антирадикального гомеостаза организма, на 1-3 сутки после отела снижается в 3,78 раза по сравнению с периодом за 30 дней до отела, то у коров с послеродовой субинволюцией матки - в 4,5 раза. У таких животных и за месяц до родов коэффициент сбалансированности К2 также на 22,2% ниже по сравнению с коровами с нормальным течением послеродового периода.

6. Изменению синтеза оксида азота принадлежит важная роль в регуляции сократительной активности миометрия. Система генерации оксида азота L-aprHHHH-NO* участвует в обеспечении низкой сократительной активности матки в течение беременности, а также в инициировании и обеспечении родового акта. Активация этой системы расслабляет гладкую мускулатуру миометрия, а ингибирование — повышает сократительную активность миометрия.

7. В крови коров с нормальным течением послеродового периода по мере приближения к родам суммарный уровень стабильных метаболитов оксида азота (NOx) существенно возрастает и за 1-3 суток до родов превышает уровень NOx за 1,5-1 месяцев до родов почти в 4 раза. В первые сутки после родов их уровень снижается в 1,6 раза и к 3-5 суткам после родов статистически достоверно не отличается от величин, установленных за 1-1,5 месяца до отела. Это способствует сокращению матки и развитию инволюционных процессов после родов.

8. До отела интенсивность образования оксида азота у коров с субинволюцией матки в послеродовой период существенно не различается от животных с нормальным течением послеродового периода, однако у таких животных в течение первых 5 суток после родов уровень стабильных метаболитов оксида азота в крови примерно в 1,5 раза выше, чем у коров с нормальным течением послеродового периода.

• 10. У коров с нормальным течением послеродового периода снижение контракционного индекса, как" интегрального показателя сократительной функции матки происходит на фоне снижения образования оксида азота .(г=+0,92, Р<0,001), а у коров с послеродовой субинволюцией матки такая закономерность отсутствует (г=+0,12, Р>0,1).

11. У коров с патологическим течением послеродового периода через 13 дня после отела, повышенный в 2,3 раза уровень прогестерона и сниженное в 4,65 соотношение прогестерон/эстрадиол-17(3, по сравнению со здоровыми животными, коррелирует с более высоким в 2,5 раза содержанием в крови коров суммы стабильных метаболитов оксида азота.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В качестве биохимических критериев повышенного риска развития у коров субинволюции матки предлагается использовать: содержание в крови коров в начале сухостойного периода малонового диальдегида выше 0,80 мкМ/л, оснований Шиффа более 0,20 отн. ед./мл сыворотки, активность в крови глутатионпероксидазы ниже 14,0 мМ восстановленного глутатиона/лх мин, глутатионредуктазы ниже 145,0 мкМ окисленного глутатиона/лхмин, содержание стабильных метаболитов в плазме крови коров через 2 суток после отела выше 140,0 мкМ/л.

2. При диагностике, терапии и профилактике субипволюции матки у коров руководствоваться Методическими рекомендациями по диагностике, терапии и профилактике субинволюции матки.- Воронеж, 2005.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пасько, Надежда Валериевна, Воронеж

1. Абрамова Ж.И. Человек и противоокислительные вещества/ Ж.И.Абрамова, Г.И Оксенгендлер. Л.: Наука, 1985.- 230 с.

2. Абрамченко В.В. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве. / В.В. Абрамченко, Е.В. Костюшов, Л.А. Щербина. СПб., 2001. - 400 с.

3. Айдарханов Б.Б. Молекулярные аспекты механизма антиокис-лительной активности витамина Е : особенности действия а- и у- токоферолов/ Б.Б. Айдарханов Э.А. Локшина, Е.Г. Ленская // Вопр. мед.химии.- 1989.-T.35,N 3.- С.2 9.

4. Албертс А. Молекулярная биология клетки: В 3 т. Пер. с англ. / А. Ал-бертс, Д. Брей, Р. Льюис 2- е изд.- М.: Мир, 1994.-348 с.

5. Алесенко А.В. Роль липидов в функциональной активности и биосинтезе ДНК в нормальных и опухолевых клетках/ А.В. Алесенко, Н.П. Пальми-на // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии // Труды МОИП.- 1982.- T.LVII.- С.84 99.

6. Арчаков А.И. Микросомальное окисление/ А.И. Арчаков.-М.: Наука, 1975,- 326 с.

7. Арчаков А.И. Перенос электронов между мембранами микросом и митохондрий/ А.И. Арчаков, А.В. Корякин, В.П. Скулачев // Доклады АН СССР,-1973.- Т.209, №1.- С.221 223.

8. Афанасьев И.Б. Свободно-радикальные ингибиторы и промоторы в биологических процессах/ И.Б. Афанасьев // Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине.- Рижский мед. ин-т.- Рига, 1988.- С.9 24.

9. Бабак И. Лечение и профилактика задержания последа у коров / И. Бабак, Л. Нестеренко // Пути увеличения производства и улучшения качества продукции земляделия и животноводства: Сб. науч. раб. Белоцер. Вет. ин-та.-Белая Церковь, 1980.-С.18-19.

10. Близнецова Г.Н. Спектрофотометрический метод определения метаболитов оксид азота / Г.Н. Близнецова, Н.В. Ермакова, З.Д. Мохаммед, М.И. Рецкий // Вестник ВГУ. Серия химия, биология. 2002. - № 1. - С. 1-5.

11. Бузлама B.C. Методическое пособие по изучению процессов перекисно-го окисления липидов и системы антиоксидантной защиты организма у животных. / B.C. Бузлама, М.И. Рецкий, Н.П. Мещеряков и др. Воронеж, 1997.-35 с.

12. Бурлакова Е.Б. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты / Е.Б. Бурлакова, Н.Г. Храпова // Успехи химии. 1985. - Т.54. - № 9.- С. 1540-1546.

13. Бурлакова Е.Б., Роль токоферолов в пероксидном окислении липидов биомембран / Е.Б. Бурлакова, С.А. Крашаков, Н.Г. Храпова // Биол. Мембраны.- Т. 15, №2 1998.- С. 119 -137.

14. Бурмистров С.О. Роль свободнорадикальных реакций в действии этанола на центральную нервную систему / С.О. Бурмистров // Вопр. мед. химии.-1993.- T.39,N6.- С.2 5.

15. Ванин А.Ф. Оксид азота в биологии: история, состояние и перспективы исследований / А.Ф. Ванин // Биохимии.- 1998. Т. 63, вып. 7. - С. 867-869.

16. Ванин А.Ф. Оксид азота: регуляция клеточного метаболизма без участия системы клеточных рецепторов / А.Ф. Ванин // Биофизика. 2001. -Т. 46, №4. с. 631-641.

17. Владимиров Ю.А. Активированная хемилюминесценция и биолюминесценция как инструмент в медико-биологических исследовани-ях/Ю.А. Владимиров // Соросовский образовательный журнал.-2001.-T.7,No. 1-С. 16-23.

18. Владимиров Ю.А. Лазерная терапия: Настоящее и будущее /Ю.А. Владимиров // Соросовский образовательный журнал.-1999.- No. 12.-С.2-8.

19. Владимиров Ю.А. Сверхслабые свечения при биохимических реакциях / Ю.А. Владимиров // М., Наука, 1966.

20. Владимиров Ю.А. Свечение сопровождающее биохимические реак-ции/Ю.А. Владимиров // Соросовский образовательный журнал.-1999.-No.6.-C.25-32.

21. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран / Ю.А. Владимиров // Биофизика. 1987. - Т. 32, вып. 5. - С. 830-844.

22. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров, О.А. Азизова, А.И. Деев и др. // Итоги науки и техники Сер. Биофизика.-1991.-Т. 29.-С. 1-249.

23. Владимиров Ю.А. Физико-химические основы фотобиологических процессов/ Ю.А. Владимиров, А.Я. Потапенко.- М. Высшая школа, 1989.-198.С.

24. Владимиров Ю.А. Хемилюминесценция клеток животных / Ю.А. Владимиров, М.П. Шерстнев // Итоги науки и техники. Сер. Иммунология. М., 1989. - Т. 24. - С. 1 - 176.с.

25. Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах/ Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков.- М.:Наука,1972.- 252 с.

26. Воскресенский О.Н. Антиоксидантная система, онтогенез и старение (Обзор)/ О.Н. Воскресенский, И.А.Жутаев, В.Н.Бобырев, и. др. // Вопр. Мед. Химии. 1982. - Т.28, №1. - С. 14-26.

27. Воскресенский О.Н. Биоантиоксиданты-облигатные факторы питания/ О.Н.Воскресенский, В.Н. Бобырев // Вопр. мед. химии.- 1992,- T.38,N4.-С.21 -26.

28. Воскресенский О.Н. Перекиси липидов в живом организме/ О.Н.Воскресенский, А.П. Левицкий // Вопр. мед. химии.- 1970.-T.16,N6.-C.563 583.

29. Григорьева Т.Е. Обмен веществ у коров больных эндометритом/ Т.Е.Григорьева, Л.Е. Леонтьев // Ветеринария. 1987. - № 9. - С. 47.

30. Губский Ю.И. Перекисная модификация мембран и изоферментный состав цитохрома Р-450 микросом печени крыс в условиях антиоксидантной недостаточности/ Ю.И.Губский, Г.И. Парамонова, А.Е. Болдескул // Укр.биохим.журн,- 1992.- T.64,N4.- С.98 105.

31. Губский Ю.П. АТР-зависимый транспорт кальция в саркоплазматиче-ском ретикулуме миокарда при недостатке витамина Е в рационе крыс/ Ю.П.Губский, М.И. Калинский, Н.Д. Рудницкая // Укр. биохим. журн.- 1988.- T.60,N3.~ С.46 51.

32. Гуляева Е.П. Принципы формирования адаптивных признаков у гидро- и амфибионтных млекопитающих/ Е.П.Гуляева, В.П. Галанцев // Морские млекопитающие: Тез. докл. X Всесоюз.совещ.- М.,1990.- С.70 71.

33. Гурвич А.Г. Митогенетическое излучение /А.Г. Гурвич.- М., Госмедиздат, 1934.

34. Гуткин B.C. Бактерицидная активность и хемилюминесценция мононукле-арных фагоцитов животных (Обзор)/ В.С.Гуткин, В.А.Горбатов, А.П.Востряков, В.И. Кадошников // Сельскохозяйственная биология.-1986., №6.- С.78-86.

35. Давлетшина JI.H. Динамика процессов перекисного окисления липидов у рожениц страдающих железодефицитной анамией / JI.H. Давлетшина, Н.М. Мазгумова //Актуальные вопросы акушерства и гинекологии .Труды 1 Ташк. гос.мед. ин-та. Ташкент, 1991.- С.25 - 29.

36. Дашукаева К.Г. Эндокринные аспекты фетоплацентарной недостаточности у коров в связи с гипофункцией половых желез и ее профилактика: Дисс. . докт. вет. наук/ К.Г. Дашукаева. — Воронеж, 1997. 291 с.

37. Двинская Л.М. Определение переокисления липидов тканей с помощью теста 2-тиобарбитуровой кислотой / JT.M. Двинская, Л.Н. Никифорова // Изучение липидного обмена у сельскохозяйственных животных / Методические указания. Боровск, 1980. - С. 37 - 40.

38. Демчук М.Л. Процессы перекисного окисления липидов и активность сукцинатдегидрогеназы мозга при черепно мозговой трвме в эксперименте/ М.Л. Демчук, А.Е. Медведев, М.И. Промыслов, В.З. Горкин // Вопр. ме. химии.- 1993.- T.39,N2.- С.23 - 25.

39. Денисов А.И. Лечение субинволюции матки и эндометритов у коров / А.И. Денисов, Е.М. Авдеев // Ветеринария.-1971.- №10.-С.108-109.

40. Диксон М. Ферменты/ М. Диксон , Э. Уэбб М.:Мир,1982.- Т.1.- С. 392 , Т.2.- 515 С.,Т.З.- 1120 С.

41. Дубинина Е.Е. Ферме?ггы антиоксидантной защиты крови у женщин с поздним токсикозом беременных и их новорожденных детей/

42. Е.Е.Дубинина, Н.Н.Софронова, Л.Ф. Ефимова // Вопр. мед. химии.-1990.-Т.36, №1.- С.51 55.

43. Евстигнеева Р.П. Витамин Е как универсальный антиоксидант и стабилизатор биологических мембран / Р.П. Евстигнеева, И.М. Волков, В.В. Чудинова//Биол. Мембраны.- Т. 15, №2.- 1998.- С.119-137.

44. Ерин А.И. Витамин Е: молекулярные механизмы действия в биологических мембранах/ А.И. Ерин, В.И. Скрыпин, Л.Л. Прилипко, В.Е. Каган // Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине.- Рига: Изд-во Рижск. мед. ин-та,1988.- С. 109 129.

45. Жданов Г.Г. Свободно-радикальные процессы, гипоксия и применение антиоксидантов в реаниматологии/ Г.Г. Жданов, В.Н. Нечаев, М.Л. Но-дель // Анестезиология и реаниматология.- 1989.- №4.- С.63 68.

46. Жмуров В.А. Влияние антиоксидантов и мисклерона на процессы дестабилизации клеточных мембран при нефритах у детей/ В.А. Жмуров, В.И. Крылов, А.Д. Петрушина//Вопр. мед. химии.- 1987.- T.33,N1.- С.40 43.

47. Журавлев А.И. Свободнорадикальная патология и методы ее профилактики / А.И. Журавлев, В.Т. Пантюшенко // Сельхоз. биология. 1989. -№2.-С. 17-24.

48. Журавлев А.И. Развитие идей И.Н. Тарусова о роли цепных процессов в биологии/ А.И. Журавлев // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии: Труды МОИП.- М.,1982.- T.LVII.- С.З 36.

49. Заянчковский И.Ф. Задержание последа и послеродовые заболевания у коров / И.Ф. Заянчковский.-М. «Колос», 1964.-460с.

50. Зеленин К.Н. Оксид азота (2): Новые возможности давно известной молекулы/ К.Н. Зеленин // Соросовский образовательный журнал.- 1997.-№ 10.- С.105-110.

51. Зенков В.З. Индуцированная Н202 биохемилюминесценция сыворотки крови / В.З. Зенков, Е.Б. Меньщикова // Лаб. дело. 1991. -№ 8. - С. 30.

52. Зенков Н.К. Оксидативный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меныцикова // М.: МАИК "Наука / Интерпериодика", 2001. 343 с.

53. Иванова О.М. К вопросу изучения неспецифической резистентности организма при применении антиоксидантов/ О.М. Иванова // Международный симпозиум "Биоантиоксидант": Тез.докл. Тюмень, 1997. - С. 89.

54. Ивашкевич О.П. Нарушение обмена веществ при субинволюции матки у коров/ О.П. Ивашкевич. Таллин, 1988. - С. 93-94.

55. Ильина Е.А. Показатели липидного обмена и их изменения у коров черно-пестрой породы в период стельности: Автореф. дисс. . канд. биол. наук/Е.А.Ильина -Москва, 1992. — 16 с.

56. Каган В.Е. Взаимосвязь структурных и функциональных перестроек в мембранах саркопламатического ретикулума при перекисном окислении липидов/ В.Е. Каган, О.А. Азизова, Ю.В. Архипенко // Биофизика.-1977.-Т.22,№4,- С.625 630.

57. Каган В.Е. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов/ В.Е. Каган, О.Н. Орлов, Л.Л. Прилипко // Итоги науки и техники.Сер.Биофизика.-ВИНИТИ АН СССР,- М.,1986.- Т. 18,- 136 с.

58. Карамышев В.А. Профилактика родовой и послеродовой патологии природным аксидантом / В.А.Карамышев // По Колчиной А.Ф., 1996. С. 43.

59. Кахновер Н.Б. Глутатион-Б-трансферазы,ферменты детоксикации / Н.Б. Кахновер, Ю.В. Хмелевский // Укр.биохим.журн.- 1983.- Т.55, №1.- С.86 -92.

60. Кириченко А.А. Влияние терапии ливиалом на сердечнососудистую систему и липидный спектр крови в постменопаузе./ А.А. Кириченко, Ю.Н. Новичкова // Русский медицинский журнал.- 2001.- том 9, № 9 .-С.37-42.

61. Кожевников Ю.Н. О перекисном окислении липидов в норме и патологии (обзор)/ Ю.Н. Кожевников // Вопр. мед. химии.- 1985.- Т.31, №5.-С.2 7.

62. Козлов А.В. Антиоксидантная система трансферрин-церулоплазмин при экспериментальной гиперхолестеринемии/ А.В. Козлов, В.Н. Сергиенко, Ю.А. Владимиров //Бюлл. экспер. биол. и мед.-1984.-Т.98,№12.-С.668 -670.

63. Колесниченко О.Ю. Эндотелиальная дисфункция и метаболические эффекты оксида азота у человека / О.Ю. Колесниченко, JT.M. Филатова, З.А. Кривицинаи и др. // Физиология человека.- 2003.-Т.29, №5.-С.74-81.

64. Коломоец М.Ю. Роль а-токоферола и ретинола в антира-дикальной защите организма при язвенной болезни/ М.Ю. Коломоец, И.В. Кузмен-ко, Л.А. Чернухина и др. // Укр.биохим.журн.- 1992.-Т.64, №2.-С.79 -84.

65. Колчина А.Ф. Фетоплацентарная недостаточность и токсикозы беременных коров в техногенно-загрязненных регионах Урала и методы их профилактики: Дисс. . д-ра вет. наук/ А.Ф. Колчина. Воронеж, 2000.-23ic. ;

66. Королюк М.А. Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк, А.И. Иванова, И.Т. Майорова, В.Е. Токарев // Лаб. дело. 1988. - № 1. - С. 16-19.

67. Корчагин В.П. Олигомеризация интегральных мембранных белков при перекисном окислении липидов/ В.П. Корчагин, Л.Б. Братковская, А.А. Шведова//Биохимия.- 1980.- Т.45, № 10.- С. 1767 1772.

68. Круглякова К.Е. Общие представления о механизме действия антиоксидантов/ К.Е. Круглякова, JI.H. Шишкина //Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vitro М: Наука. 1992. - С. 5-8.

69. Кузьмич В.П. Влияние сократительной функции матки на послеродовой эндометрит у коров/ В.П. Кузьмич // Ветеринария. 2000. - № 2. - С. 37-38.

70. Куликов В.Ю. Перекисное окисление липидов и холодовой фактор/ В.Ю. Куликов, А.В. Семенюк, Л.И. Колесникова.- Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние,1988.- 192 с.

71. Кулинский В.И. Структура, свойства, биологическая регуляция глутатиопе-роксидазы / В.И. Кулинский, Л.С. Колесниченко // Усп. Совр. Биологии.-1993.- Т. 113, № 1.- С. 107 122.

72. Кушнир И.Ю. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная защита организма у высокопродуктивных молочных коров в предродовой и послеродовой периоды: Дисс. . канд. вет. наук./ И.Ю. Кушнир.- Воронеж, 2002.-180 с.

73. Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М.: Высш. шк., 1990. - 352 с.

74. Лебедев А.В. Кислород как индуктор переноса ионов кальция через бис-лойные липидные мембраны / А.В. Лебедев, Д.О. Левицкий, В.А. Логинов //Доклады АН СССР.- 1989.- Т.252,№6.-С.1494 1497.

75. Лебеденко B.C. Перекисное окисление липидов при плацентарной недостаточности и гипотрофии плода/B.C. Лебеденко // Матер. 9 съезда акушеров-гинекологов УССР: Тез.докл.- Киев, 1991.- С.246 247.

76. Лукьянова Л.Д. Кислородзависимые процессы в клетках и ее функциональное состояние/ Л.Д. Лукьянова, Б.С Балмуханов, А.Т. Уголев.-М.:Наука,1982.-301 с.

77. Малышев И.Ю. Стресс, адаптация и оксид азота/ И.Ю Малышев, Е.Б Манухина//Биохимия.- 1998.-Т.63, № 7.-С.992-1006:

78. Манухина Е.Б. Стресс-лимитирующая система оксида азота / Е.Б. Манухина, И.Ю. Малышев // Росс, физиол. Журнал. 2000. - Т. 86, № 10. - С. 1283-1292.

79. Матюшин Б.Н. Активные формы кислорода: цитотоксическое действие и методические подходы к лабораторному контролю при поражении печени (обзор литературы)/ Б.Н. Матюшин, А.С. Логинов // Клинич. Ла-бор.диагностика.- 1996.- №4.- С.51 53.

80. Меерсон Ф.З. Стресс-лимитирующие системы организма и новые принципы профилактической кардиологии / Ф.З. Меерсон, М.Г. Пшенникова // М.: НПО "Союзмединформ", 1989,- 198 с.

81. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс, профилактика / Ф.З. Меерсон.-М.:Наука, 1981.-278 с.

82. Меныцикова Е.Б. Биохимия окислительного стресса. Оксиданты и анти-оксиданты / Е.Б. Меныцикова, Н.К. Зенков, С.М. Шергин // Новосибирск: Изд. СО РАМН.- 1994. 203 с.

83. Меныцикова Е.Б. Оксид азота и NO-синтазы в организме млекопитающих при различных функцирнальных состояниях / Е.Б. Меныцикова, Н.К. Зенков, В.П. Реутов // Биохимия,- 2000.- Т.65, № 4.- С.485-503.

84. Милютина Н.П. Антирадикальный и антиоксидантный эффект аргинина и его влияние на активность перекисного окисления липидов при гипокинезии/Н.П. Милютина, А.А. Ананян, B.C. Шугалей // Бюлл. эксперим.биол. и мед.- 1990.- Т.119, №9- С.1263 1265.

85. Мирошниченко О.С. Биогенез, физиологическая роль и свойства каталазы/ О.С.Мирошниченко //Биополимеры и клетка.- 1992.- Т.8,№6.- С.З -25.

86. Мисайлов В.Д. Меры борьбы с бесплодием и яловостью коров/ В.Д. Ми-сайлов.-Улан-Удэ: Бурятское кн. изд-во, 1976.-75 с.

87. Мисайлов В.Д. Прогестерон и послеродовая патология животных / В.Д. Мисайлов, Н.И. Шумский, В.Н. Коцарев // Интенсификация воспроизводства и профилактика бесплодия сельскохозяйственных животных: Межвуз. Сб. науч. тр.-Казань,1989.-С.31-34.

88. Мищишен И.Ф. Глутатион: обмен и функции/ Мищишен И.Ф.Черновцы: Изд-во Черновиц.мед.ин-та.-1988.- 34 с.

89. Нежданов А.Г. Биохимические изменения в организме коров в предродовой, родовой и послеродовой периоды в норме и при акушерской патологии/ А.Г. Нежданов // Сельскохозяйственная биология. 1985. - № 12.-С. 74-78.

90. Нежданов А.Г. Биохимический контроль за воспроизводительной функцией коров/ А.Г. Нежданов // Ветеринария. 1982. - № 11. - С. 50.

91. Нежданов А.Г. Обмен веществ у коров при беременности, родах и в послеродовой период/ А.Г. Нежданов, Н.И. Кузнецов // Ветеринария. -1978.- №4.-С. 79-83.

92. Нежданов А.Г. Послеродовая инволюция матки у коров / А.Г. Нежданов, В.Д. Мисайлов// Ветеринария,- 1996.-№12.-С.З7-43.

93. Нежданов А.Г. Послеродовая инволюция половых органов у коров/ А.Г. Нежданов // Ветеринария. 1983. - № 2. - С. 48-51.

94. Нежданов А.Г. Стероидные гормоны в крови и послеродовые болезни у коров / А.Г. Нежданов // Ветеринария. 1983. - № 5. - С. 49-51.

95. Нежданов А.Г. Фетоплацентрарная недостаточность и ее профилактика у коров/ А.Г. Нежданов, К.Г. Дашукаева // Ветеринария. 1999. - № 7.-С. 71-72.

96. Нежданов А.Г. Физиология и патология родов и послеродового периода у сельскохозяйственных животных/ А.Г. Нежданов Воронеж: Изд-во Воронежского госагроуниверситета,1991.- 59 с.

97. Обухова J1.K. Токсические продукты метаболизма кислорода и возрастная утрата функциональной активности/ JI.K. Обухова // Надежность и элементарн. события процессов старения биол. объектов.- Киев, 1986,- С. 89-96.

98. Осипов А.Н. Активные формы кислорода и их роль в организме/ А.Н. Осипов, О.А. Азизова, Ю.А. Владимиров // Успехи биол. химии.-1990.-Т.31, №2.- С.180 208.

99. Петренко Ю.М. Новые источники окиси азота, их возможная физиологическая роль и значение/ Ю.М. Петренко, Д.А. Шашурин, В.Ю. Титов // Экспериментальная и клиническая фармакология.- 2001.-Т.-64, № 2,-С.72-80.

100. Петрович Ю.А. Селеноэнзимы и другие селенопротеиды, их биологическое значение / Ю.А. Петрович, Р.П. Подорожная // Успехи соврем, био-логии.-1981.- Т.91,№1.- С. 127- 144.

101. Петрович Ю.А., Глутатионпероксидазы в системе антиоксидан-тной защиты мембран / Ю.А. Петрович, Д.В. Гуткин // Патол. физиология и экпе-рим.терапия.-1981.- №5.- С.76 78.

102. Прайор У. (ред) Свободные радикалы в биологии: Пер. с англ. / У Прайор. -М.: Мир,1979,- Т.1.- 318 С.; Т.2.- 328 С.

103. Проскуряков С.Я. Оксид азота в механизмах патогенеза внутриклеточных инфекций / С.Я. Проскуряков, С.И. Бикетов, А.И. Иванников, В.Г. Скворцов // Иммунология. 2000. - № 4. - С. 9-20.

104. Реутов В.П. Цикл окиси азота в организме млекопитающих/ В.П. Реутов // Успехи биологической химии.-1995.-Т.35.-С. 189-228.

105. ИЗ. Реутов В.П. Циклические превращения оксида азота в организме млекопитающих / В.П. Реутов, Е.Г. Сорокина, В.Е. Охотин, и др. // М.: Наука, 1998.- 156 с.

106. Рецкий М.И. Система антиоксидантной защиты у животных при стрессе и его фармакологической регуляции: Дисс. . докт. биол. наук./ М.И.Рецкий — Воронеж, 1997. 396 с.

107. Сауля А.И. Постстрессорные нарушения функции миокарда/А.И. Сау-ля, Ф.З. Меерсон Кишинев: Штиинца,1990.- 162 С.

108. Серая И.П. Современные представления о биологической роли оксида азота / И.П. Серая, Я.Р. Нарциссов // Успехи совр. биологии. 2002. -Т. 122, №3,-С. 249-258.

109. Сирота Т.В. Новый подход в исследовании процесса аутоокисления адреналина и использование его для измерения активности супероксиддисмутазы / Т.В.Сирота // Вопр. мед. химии.-1999.-Т.45, № 3.- С. 263272.

110. Скулачев В.П. Трансформация энергии' в клетке/ В.П. Скулачев.-М.:Наука, 1972.- 203 с.

111. Соколовский В.В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярных механизмах неспецифической реакции организма на экстремальные воздействия (обзор) / В.В. Соколовский // Вопр. мед. химии.- 1988.- Т.34, №6.-С.2- 11.

112. Сосунов А.А. Оксид азота как межклеточный посредник / А.А. Сосунов // Соросовский образовательный журнал. 2000. - Т. 6, № 12. - С. 27-34.

113. Стальная И.Д. Метод определения диеновой конъюгации ненасыщенных высших жирных кислот / И.Д. Стальная // Современные методы в биохимии. М., 1977, С. 63 - 64.

114. Стальная И.Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью 2-тиобарбитуровой кислоты / И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии. — М., 1977, С. 66-68.

115. Степанова И.П. Показатели биохемилюминесценции крови крупного рогатого скота / И.П. Степанова // Вестник РАСХН. 2004. - № 5. - С. 46-48.

116. Степуро И.И. Восстановление рибофлавина органическими свободными радикалами/ И.И. Степуро, Д.А. Опарин, И.И. Силиневич // Биоан-тиоксидант: Тез. докл. IV конф.- 1993.-Т. 1. С. 116.

117. Сутковой Д.А. Окислительное фосфорилирова-ние в митохондриях печени крыс при активации перекисного окисления липидов/ Д.А. Сутковой, В.А. Барабой // Укр. биохим. журн,- 1985.- Т.55,№2.- С.79 81.

118. Уайт А. Основы биохимии: Пер. с англ / А. Уайт, Ф. Хендлер, Э. Смит М.: Мир, 1981.- Т.1.- С.426 — 429.

119. Хлебовская О.И. Состояние перекисного окисления липидов при железо-дефицитной анемии и пиелонефрите беременных/ О.И. Хлебовская,

120. В.А. Кумпаненко, В.Г. Рыбалко // Материалы 9 съезда акушеров-гинекологов УССР: Тез.докл.- Киев, 1991.- С. 119 120.

121. Хочачка П. Биохимическая адаптация: Пер с англ. / П. Хочачка, Дж. Сомеро М.: Мир, 1988. - 568 с.

122. ХраповаН.Г. Перекисное окисление липидов и системы, регулирующие его интенсивность / Н.Г. Храпова // Биохимия липидов и их роль в обмене веществ.- М., 1981.- С. 147 155.

123. ХраповаН.Г. О взаимозаменяемости природных и синтетичес-ких антиоксидантов/ Н.Г.Храпова // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии: Труды МОИП.-М., 1982.-T.LVII.-С.59 -73.

124. Черемисинов Г.А. Биохимические показатели и воспроиз-водительная функция коров/ Г.А. Черемисинов, А.Г. Нежданов, С.А. Власов // Ветеринария. 1981. -№ 4. - С. 53-55.

125. ШалинаР.И. Особенности структуры эритроцитарных мембран у беременных с поздним токсикозом/ Р.И. Шалина, Г.Д. Дживелегова, И.Б. Кущ // Акуш. и гинекол.- 1986,- №4.- С.28 32.

126. Шаронов Б.П. Окислительная модификация и инактивация суперок-сиддисмутазы гипохлоритом / Б.П. Шаронов, И.В. Чурилова // Биохимия.- 1992.-Т.57, №5.- С.719-727.

127. Шафран М.Г. Миелопероксидаза нейтрофильных лейкоцитов / М.Г. Шафран //Успехи совр. биологии.- 1981.- Т.92,№3.- С.365 379.

128. Шахов А.Г. Значение оксида азота и половых стероидов в развитии субинволюции матки коров / А.Г. Шахов. В.И. Михалев, М.И. Рецкий и др. // Доклады Российской акдемии сельскохозяйственных наук.- 2006.-№6.- С.49-51.

129. Шилина Н.К. Количественное определение продуктов пере-кисного окисления липидов сыворотки крови практически здоровых лиц методом УФ-спектроскопии / Н.К. Шилина, Г.В. Чернавина, JI.A. Маслова // Лаб. дело. 1978.-№3.-С. 140- 142.

130. Al-Hijji J. Effect of ovarian steroids on nitric oxide synthase in the rat uterus, cervix and vagina/ J. Al-Hijji, I. Larsson, S. Batra // Life Sci.-2001.- V. 69, № 10.- P. 1133-1142.

131. Al-Hijji J. Nitric oxide synthase in the rabbit uterus and vagina: hormonal regulation and functional significance/ J. Al-Hijji, B. Larsson, S. Batra // Biol.Reprod.-2000.- V. 62, № 5.- P. 1387-1392.

132. Arnal J. F. Estrogens and the arterial wall / J. F. Arnal, R. Elhage, L. Brouchet et al. //Ann. Endocrinol. (Paris).-2000.- V. 61, № 1.- P. 80-84.

133. Batra S. Caracterization of nitric oxide synthase activity in rabbit uterus and vagina: downregulation by estrogen / S. Batra, Al-Hijji // Life Sci.-1998.- V. 62, №23, P. 2093-2100.

134. Batra S. Important differences in nitric oxide synthase activity and predominant isoform in reproductive tissues from human and rat/ S. Batra, C. Iosif, J. Al-Hijji et al. // Reprod.Biol.Endocrinol.-2003.- V. 1.- P. 10.

135. Bidlack W.R. Fluorescent products of phospholipids during lipid peroxidation / W.R. Bidlack, A.L. Tapell // Lipids 1973. - V. 8, № 4. - P. 203 -207.

136. Bloj B. Membrane fluidity,cholesterol and allosteric transitions of membrane-bound Mg+2 -ATPase, ( Na+,K+ )- ATPase and acetylcholinesterase from rat erythrocytes/ B. Bloj , R.D. Morero, R.N Farias . // FEBS Lett.-1973,- V.38, №1.- P.101 105.

137. Bors W. The involvement of oxygen radicals during the auto-oxidation of adrenalin/ W. Bors, C. Michel, M. Seran et al. // Biochim. Biophys. Acta.-1978.-V.540.-P.162- 172.

138. Borutaite V. Nitric oxide donors, nitrosothiols and mitochondrial respiration inhibitors induce caspase activation by different mechanisms / V. Borutatite, R. Morkuniene, G.C. Brown // FEBS Lett. 2000. - V. 467, № 2-3. - P. 155-159.

139. Boujedaini N. In vivo regulation of vasomotricity by nitric oxide and prostanoids during gestation/ N. Boujedaini, J. Liu, T. Chuillez et al. // Eur.J.Pharmacol.-2001.- V. 427, № 2.-P. 143-149.

140. Boveris A. The cellular production of hydrogen peroxide/ A. Boveris, N. Oshino, B. Chance // Biochem. J.- 1982.- V.128.- P.617 630.

141. Buhimschi I.A. Distinct regulation of nitric oxide and cyclic guanosine monophosphate production by steroid hormones in the rat uterus/ I.A. Buhimschi, C. Yallampalli, S.B. Catalin et al. // Molecular Human Reproduction-2000.-V.6, №5.-P.404-414.

142. Bulbul A. The role of nitric oxide in the effects of ovarian steroids on spontaneous myometrial contractility in rats/ A. Bulbul, A.Yagci, K. Altunbas et al. //Theriogenology-2007.- V. 68,№ 8.- P. 1156-1168.

143. Buxton I. L. NO-induced relaxation of labouring and non-labouring human myometrium is not mediated by cyclic GMP/1. L.Buxton,, R. A. Kaiser, N. A. Malmquist et al. //BrJ.Pharmacol.-2001.- V. 134, № l.-P. 206-214.

144. Buxton I.L. NO-induced relaxation of labouring and non-labouring human miometrium is not mediated by cyclic GMP / I.L. Buxton, R.A. Kaiser, N.A. Malmquist et al. // Br. J. Pharmacol.-2001.-V.134.- №1.-P.206-214.

145. Carballo L.R.S. Peroxidos lipidicos,colesterol/fosfolipios у vitamina E en eritrocitos de diabeticos conmacroangiopatia/ L.R.S. Carballo , M.L.M.E Triana .//Rev. Cub. Invest. Biomed.- 1991.- V.10, №2.-P.l 13 119.

146. Chance B. Hydroperoxide metabolism in mammalian organs/ B. Chance , A. Boveris // Physiol. Revs.- 1979.- V.59, №3.- P.527 605.

147. Chew B.P. A comparison of the anticancer of dietary beta-carotine, canthax-anthin and astaxanthin in mice in vivo/ B.P. Chew, J.S. Park, M.W. Wong et al.//Anticancer Results.-1999.-V. 19,№3 A-C. 1849-1853.

148. Comporti M. Biology of disease lipid peroxidation and cellular damage in toxic liver injury/ M. Comporti// Lab. Invest.- 1996,- V. 63, №3.-P.599 -623.

149. Cornwell T.L. Reorganization of myofilament proteins and decreased cGMP-dependent protein kinase in the human uterus during pregnancy/ T. L. Cornwell, J. Li, H. Sellak et al. // J.Clin.Endocrinol.Metab.-2001.- V. 86, № 8.-P. 3981-3988.

150. Coughlan T. Modulatory effects of progesterone on inducible nitric oxide synthase expression in vivo and in vivo / T. Coughlan, C. Gibson, S. Murphy// J.Neurochem.-2005.-V.93, №4.-P.932-942.

151. Curtis M.T. Lipid peroxidation increases the molecular order of microsomal membranes/ M.T. Curtis, D. Gilfor, J. Farber// Arch.Biochem. and Bio-phys.- 1994.- V.245, №2.- P.644 649.

152. Davies K.J.A. Protein damage and degradation by oxygen radicals. II. Modification of aminoacid/ K.J.A. Davies , M.E. Delsignore , S.W. Zin // J. Biol. Chem.- 1987.- V.262, №20,- P.9902 9907.

153. Dawson T.M. Nitric oxide synthase and neuronal NADPH diaphorase are identical in brain and peripheral tissues / T.M. Dawson, D.S. Bredt, M. Fo-tuhi et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. -V. 88, № 17. - P. 77977801.

154. Dean R.T. Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation / R.T. Dean, S.Fu R. Stacker, M.J. Davies // Biochem. J. 1997. - V. 324, № l.-P. 1-18.

155. Dilberto E.J. Mechanism b-hydroxylation semidehydroascorbate as the en-zymic oxidation product of ascorbate/ E.J. Dilberto , P.L. Allen // J. Biol. Chem.- 1981.- V.256, №7.- P.3385 3387.

156. Diplock A.T. Vitamin E, selenium and free radicals/ DiplockA.T. // Med.Biol.- 1984.-V.62, №2,- P.78 80.

157. EklundE.A. Inactivation of subcellular NADPH oxidase and its relationship to the respiratori burst/ E.A. Eklund , T.G. Gabig // Biochem. Soc. Trans.- 1996.- V.24, №1.- P.51 -54.

158. Faddah L.M. Oxidative stress, lipid profile and liver functions in average Egyptian long term depo medroxy progesterone acetate (DMPA) users/ L. M. Faddah, M.A. Rehany, N.M. Abdel-Hamid et al. // J.Obstet.Gynaecol.Res.- 2005.-V.10, №9.-P.l 145-1152.

159. Figueroa J. P. Estrogen increases nitric oxide synthase activity in the uterus of nonpregnant sheep/ J. P. Figueroa, G. A Massmann // Am.J.Obstet.Gynecol.-1995.-V. 173, №5, P. 1539-1545.

160. Fukuzawa K. Singlet oxygen scavenguing by alpha-tocopherol and beta-carotine: kinetic studies in phospholipid membranes and ethanol solution/ K. Fukuzawa, Y. Inokami, A. Tokumura et al./ // Biofactors.- 1998.-T.7, №12. C.31-40.

161. Gangula P.R. Rat myometrial smooth muscle cells express endothelial nitric oxide synthase/ G P. R.angula, Y. L. Dong, C. Yallampall // Hum.Reprod.-1997.-V. 12, №3.- P. 561-568.

162. Garfield R.E. Methods and devices for the management of term and preterm labor/ R. E. Garfield, H. Maul, L. Shi et al. // Ann.N.Y.Acad.Sci.-2001.- V. 943.-P. 203-224.

163. Garner W. Peroxidation of free and esterifid fatty acids by horseradish peroxidase/ W. Garner //Lipids.- 1984,-V.19, №11.-P.863 868.

164. Garthwaite J. Neural Nitric Oxide Signalling/ J. Garthwaite // Trends Neu-rosci.-1995.- V.18.- P.51-56.

165. Gibson D.D. GSH-dependent inhibition of lipid peroxidation: properties of a potent cytosolic system which protects cell membranes/ D.D. Gibson, J. Hawrylko , P.B. McCay //Lipids.- 1985.-V.20, №10.-P.704 711.

166. Gorodeski G. I. Calcium regulates estrogen increase in permeability of cultured Caski epithelium by eNOS-dependent mechanism/ G. I Gorodeski //Am.J.Physiol Cell Physiol.-2000.- V. 279, № 5.-P. C1495-C1505.

167. Griffiths H.R. Antioxidant and protein oxidation / H.R. Griffiths // Free Radic. Res. 2000. - V. 33. - P. 47-58.

168. Gromadzinska J. A selenoenzyme, glutathione peroxidase from human placenta: purification and some properties/ J. Gromadzinska , B. Zachara // ActaUd. Jolia Biochim. et Biophys.- 1992, № 9.-P. 101 108.

169. Groves J.T. Peroxynitrite: reactive, invasive and enigmatic / J.T. Groves // Curr. Opin. Chem. Biol. 1999. - V. 3, № 2. - P. 226-235.

170. HafemanD.S. Effect of dietary selenium on erythrocyte and liver glutathione peroxidase in the rat/ D.S. Hafeman, R.A. Sunde, W.G. Hoekstra // Nutrition.-1974.- V.104, № 5.- P.580 587.

171. Halliwell B. Oxygen radicals: a commonsense look at their nature and medical importance/ B. Iialliwell // Med.Biol.-1984.- V.62, № 2.- P.71 77.

172. Halliwell B. The antioxidants of human extracellular fluids/ B. Halliwell, J.M.C. Gutteridge // Arch. Biochem. et Biophys.- 1990.- V.280, № 1.- P.l -8.

173. Hayashi T. Estrogen increases endothelial nitric oxide by a receptor-mediated system/ T. Hayashi, K. Yamada, T. Esaki et al. // Bio-chem.Biophys.Res.Commun.-1995V. 214, №3, P. 847-855.

174. Henry J.P. Biological basis of the stress response / J.P. Henry //News Physiol. Sci. 1993.- V.8.-P.69-73.

175. Hertelendy F. Regulation of myometrial smooth muscle functions/ F. Hertelendy, T. Zakar // Curr.Pharm.Des.-2004.- V. 10, № 20.-P. 2499-25.

176. Hirai Т. Effects of NO synthase inhibition on the muscular blood flow response to treadmill exercise in rats / T. Hirai, M.D. Visneslci, K.J. Kearns et al. //J. Appl. Physiol. 1994. - V. 77, № 3. - P. 1288 - 1293.

177. Huang J. Cellular localization and hormonal regulation of inducible nitric oxide synthase in cycling mouse uterus/ J. Huan, , K. F. Roby, J. L. Pace et al. //J.Leukoc.Biol.-1995.-V. 57, № 1.- P. 27-35.

178. Huie R.E. The reaction of NO with superoxide / R.E. Huie, S. Padmaja // Free Radic. Res. Commun. 1993. - V. 18, № 4. - P. 195-199.

179. Ignarro L.J. Biological actions and properties of endothelium-derived nitric oxide formed and released from artery and vein / L.J. Ignarro // Circ. Res. -1989,- V. 65.-P.1-21.

180. Kimelberg H.K. Alterations in phospholipid-dependent (Na+,K+)-ATPase activity due lipid fluidity. Effect of cholesterol and Mg+/ H.K. Kimelberg // Biochim. and Biophys. acta.- 1975.- V.413, № 2.- P.143-156. •

181. KollerL.D. Comparison of selenium levels and glutathione peroxidase activity in bovine wohlo blood/ L.D. Koller, P.J. South, J.H. Exon et al.// Ca-nad. J. Сотр. Med.- 1994.- V.58, № 4.- P.431-433.

182. Krinsky N.I. The antioxidant and biological properties of the carotinoids/ N.I. Krinsky // Ann. N. Y. Academy Science.- 1998.- № 854.- P. 443-447.

183. Kroncke K.-D. Inducible nitric oxide synthase and its product nitric oxide, a small molecule with complex biological activities / K.-D. Kroncke, K. Fehsel, V. Kolb-Bachofen // Biol Chem Hoppe Seyler. 1995. - V. 376, № 6. - P. 327-43.

184. Laskin J.D. Prooxidant and antioxidant functions of nitric oxide in liver toxicity / J.D. Laskin, D.E. Heck, C.R. Gardner et al. // Antioxid. Redox. Signal. 2001. - V. 3, № 2. - P. 261-271.

185. LensfelderE. Can anti-inflammatory drugs act as scavengers of radicals/ E.Lensfelder // Agents and Action.- 1984.- V.15, № 1/2.- P.56-59.

186. Leszczynska-Gorzelak В. Nitric oxide for treatment of threatened preterm labor/ B. Leszczynska-Gorzelak, M. Laskowska, B. Marciniak et al. //Int.J.Gynaecol.Obstet.-2001,- V. 73, № 3.-P. 201-206.

187. Loverro J. Enzimi antijcsidanti e diabeti gestacionaly/ J. Loverro, D. Carone, C. Jormio et al. // J. Hal. Ostet e ginecol. 1992. - V.14, № 8.-P.89-103.

188. Malshet V.G. Fluorescent products of lipid peroxidation. Structural requirement for fluorescence in conjugated Schiff bases / V.G. Malshet, A.L. Tapell //Lipids 1973,-V. 8, №4.-P. 194- 198.

189. Marklund S.L. Extracellular superoxide dismutase in human tissues and human cell lines/ S.L. Marklund // J. Clin. Chem.- 1984.- V.74, №4.-P.1399 -1403.

190. Marklund S.L. Location and regulation of exstracellular superoxide dismutase synthesis/ S.L. Marklund. // Free Radic. Biol, and Med.-1990.-Suppl.l.- P. 127.

191. Mastars C. Peroxisomes: New aspects of cell physiology and biochemistry/ C. Mastars, R. Holmes // Physiol.Rev.- 1977.- V.57.- P.816-882.

192. Mates M. Effects of Antioxidant Enzymes in the Molecular Control of Reactive Oxygen Species/ M. Mates // Toxicology.- 2000.- V.153, № l.-P. 83104.

193. Medina-Navarro R. Pro-oxidating properties of melatonin in the in vitro interaction with the singlet oxygen/ R . Medina-Navarro, G. Duran-Reyes, J.J. Hicks // Endocr. Res.- 1999.- T 25, № 4-3.-P . 263-280.

194. Meister A. Glutathione/ A. Meister, M.E. Anderson // Annu. Rev. Bio-chem.- 1983,- V.52.- P. 711-760.

195. MillanF. Cambios observados en la albumina de suero bovino al interac-cionar con hidroperoxidos del acido linolenico/ F. Millan, E. Vioque // Grasas у aceites.- 1995.- V.46, №2.- P. 109- 114.

196. Mirabile C.P. Physiologic role of nitric oxide in the maintenance of uterine quiescence in nonpregnant and pregnant sheep/ C. P. Mirabile, G. A. Massmann, J.P. Figueroa // Am.J.Obstet.Gynecol.-2000.- V. 183, № 3.-P.191-198.

197. Miranda K.M. A rapid, simple spectrophotometric method for simultaneous detection of nitrate and nitrite/ K.M. Miranda, M.G. Espey, D.A. Wink // Nitric oxid.-2001.- V.5, № 1.- P.62-71.

198. Mirsa H.P. The role of superoxide anion in the autooxidation of epinephrine and sampl assey for superoxide dismutase/ H.P. Mirsa, I. Fridovich // J. Biol. Chem.- 1972.- V.247, № 10.- P. 3170-3175.

199. Moncada S. Nitric Oxide: Physiology, Pathophysiology, and Pharmacology/ S. Moncada, R.M.J. , E.A. Higgs // Pharmacol. Rev.-1991.- V. 43,- P. 109141.

200. Monteiro H.P. The superoxidepedent transfer of iron ferritin to transferrin and lactoferrin/ H.P. Monteiro, C.C.Winterboum // Biochem. J. 1988. - V. 256, №3. - P. 923-928.

201. Moreno A.S. Estrogen modulates the action of nitric oxide in the medial preoptic area on luteinizing hormone and prolactin secretion/ A.S. Moreno, C.R. Franci //Life Sci.-2004.-V.74, №16.-P.2049-2059.

202. Motta A. B. Regulation of prostaglandin production by nitric oxide in rat smooth muscle myometrial cells/ A. B.Motta, G. E. Tonzalez, I. Rudolph et al. // Prostaglandins Leukot.Essent.Fatty Acids-1999.- V. 60, № 1.- P. 73-76.

203. Мифу M.G. Membrane fatty acids, lipid peroxidatin and adenylate cyclase activity in cultured neural cells/ M.G. Мифу // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1985. - V. 132, № 2. - P. 757-763.

204. Naziroglu M. Antioxidants and lipid peroxidation levels of blood and cervical mucus in cows in relation to pregnancy/ M. Naziroglu, S. Gur // Dtsch.Tierarztl.Wochenschr.- 2000. V. 107, № 9. - P. 374-376.

205. Nickenig G. Differential effects of estrogen and progesterone on AT(1) receptor gene expression in vascular smooth muscle cells / G. Nickenig, K. Strehlow, S. Wassmann et al.//Circulation.-2000.- V. 102, № 15.-P. 18281833.

206. Nohl H. Generation of activated oxygen species as side products of cell respiration/ H. Nohl // Free Radic. Biol, and Med.-1990.-Suppl. № 1.- P. 141.

207. Ohlci K. Effect of a-tocopherol on lipid peroxidation and acyl chain mobility of liver microsomes vitamin E dificient rat/ K. Ohki, T. Akamura, Y. No-zawa // J. Nutr. Sci. and Vitaminol.-1994.-V.40, №8.- P.221-231.

208. Okano T. Superoxide generation in leukocytes and vitamin Е/ Т. Okano , T. Hamai, M. Mino // J. Vitam. and Nutr. Res.- 1991.- V.61, №1.- P.20-26.

209. Olsen R.L. Molecular forms of myeloperoxidase in human plasma/ R.L. Ol-sen, Т.К. Steigen , T. Holm et al. // Biochem. J.- 1986.- V.237, №2.- P.559-565.

210. Parks D.A. Uric acid: Physiologic antioxidant and xantine oxidase inhibitor/ D.A. Parks, S. Tan, J.K. Wheat // Free Radic. Biol, and Med.- 1990.- V.9, Suppl.l.- P.99.

211. Penghai Wang P. Measurement of Nitric Oxide and Peroxynitrite Generation in the Postischemic Heart. Evidence for peroxynitrite-mediated reperfusion injury / P. Penghai Wang, J.L. Zweier // J. Biol. Chem. 1996. - V. 271, № 46.-P. 29223-29230.

212. Popov I.N. Photochemiluminescent detection of antiradical activity;4: testing of lipid-soluble antioxidants / I.N. Popov, G. Lewwin // J.Biochem. Bio-phys. Methods.-1996.-V.3l.-P.l-B.

213. Prabha P.S. Free radical generation, lipid peroxidation and essential fatty acids in patients with septicemia / P.S. Prabha, U.N. Das, G. Ramesh et al. //

214. Prostagland.Leukotrienes and Essent. Fatty Acids.- 1994.-V.45, №1.-P.61-65.

215. Prilipko L. The passible role of lipid peroxidation in the pathophysiology of mental disorders / L. Prilipko // Free radicals in the brain: dging, neurological and Mental disorders.- Berlin ect.-1992.- P. 146-152.

216. Ruiz R. J. Relationships of Cortisol, perceived stress, genitourinary infections, and fetal fibronectin to gestational age at birth/ R.J. Ruiz, J. Fullerton, С. E. Brown et al. // Biol.Res.Nurs.-2001,V.3, №l,P.39-48.

217. Rupnow H.L. Endothelial vasodilator production by uterine and systemic arteries. Estrogen and progesterone effects on eNOS/ H. L. Rupnow, Т. M. Phernetton, С. E. Shaw et al. // Am.J.Physiol Heart Circ.Physiol.-2001 .-V. 280, № 4,- P. H1699-H1705.

218. Santiago E. Correlation between losses of mitochondria. ATPase activity and cardiolipin degradation/ E. Santiago, N. Lopez-Waratalla, J.L. Segovia //Biochem. and Biophys.Res.Commun.- 1993,- V.53, №2.-P.439-446.

219. Saxena D. Increased appearance of inducible nitric oxide synthase in the uterus and embryo at implantation/ D. Saxena, S. B. Purohit, G. Kumer et al.//Nitric.C)xide.-2007.- V. 4, № 4.-P. 384-391.

220. Serykh M.M. Age-associated chandes of membrane protein, mitochondrial ATPase and lipid peroxide oxidation in the rat liver/ M.M. Serykh, L.P. Dnyaglina, I.F. Vasilyeva et al. // Rejuvenation.-1992.- V.20, №2.-P.34-36.

221. Sharma S.P. Existence of bluish-with fluorescing age-pidment «prelipofus-cin»/ S.P. Sharma, T.J. James // Free Radic. Biol, and Med.-1991.-V.10, №6.- P.443-444.

222. Sharonov B.P. Ability of serum protein to inhibite MPO-dependent oxidation of red cells/ B.P. Sharonov, N. Govorova // Free Rad. Biol, and Med.- 1990.- V.9, Suppl.l.- P.24.

223. Sherwood O. D. Inhibition of nitric oxide synthase activity diminishes the acute effects of relaxin on growth, but not softening, of the cervix in the rat/ O. D. Sherwood, L. M. Olson, Z. Shao et al. // Endocrinology.-2000.- V. 141, № 7,-P. 2458-2464.

224. Spencer F. Hydroxyurea inhibition of cellular and developmental activities in the decidualized and pregnant uteri of rats/ F. Spencer, L. Chi, M. X. Zhu // J.Appl.Toxicol.-2000.-V. 20, № 5.- P. 407-412.

225. Stadtman E.R. Metal catalyzed oxidation of proteins/ E.R. Stadtman , C.N . Oliver// J. Biol. Chem.- 1991.-V.266, №4.- P.2005-2008.

226. Stelmaszynska T. Possible involvement of myeloperoxidase in lipid peroxidation/ T. Stelmaszynska, E. Kukovetz , G. Egger et al.// Int.J. Biochem.-1992.- V.24, №1.- P.121-128.

227. Stone W.L. Selenium and non-selenium glutathione peroxidase activity in selected ocular and non-ocular rat tissues/ W.L. Stone, E.A. Drats // Exp. Clin. Res.- 1992.- V.35, № 5.- P.405-412.

228. Storment J. M. Estrogen augments the vasodilatory effects of vascular endothelial growth factor in the uterine circulation of the ratJ J. M. Storment, M. Meyer, G.Osol, //Am.J.Obstet.Gynecol.-2000.- V. 183, № 2.-P. 449-453.

229. Sunder S. Endocrinology of the peri-implantation period/ S. Sunder, E. Len-ton //Baillieres Best.Pract.Res.Clin.Obstet.Gynaecol.-2000.-V. 14, № 5.-P. 789-800.

230. Sutherland G. Global elevation of brain superoxide dismutase activity following forebrain ischemia in ratJ G. Sutherland , R. Bose , D. Louw et al. // Neurosci. Lett.- 1991.-V.128, №2.- P.169-172.

231. Tamura K. 17Beta-estradiol inhibits ovariectomy-induced expression of inducible nitric oxide synthase in rat aorta in vivo/ K. Tamura, Y. Kamaguchi, H. Kogo // Life Sci.-2000.-V. 66, № I7.p. L-64.

232. Tappel A.L. Damage to DNA, enzymes and proteins by lipid peroxidation and other oxidant reactions/ A.L. Tappel // J. Amer. Oil. Chem. Soc.-1986.- V.63, №4.-P.406.

233. Tappel A.L. Vitamin E and free radical peroxidation of lipids/ A.L. Tappel //Annu. N.Y. Acad. Sci.- 1972.-V.203, №1.- P. 12-28.

234. TretterL. Alteration of mitochondrial proteins during NADPH-dependent lipid peroxidation/ L. Tretter, G. Szabados, A. Ando et al.// Acta Biochim. et Biophys. Acad. Sci. Hungary.- 1994.- V.19, №1-2.- P. 146.

235. Veille J. C. Effects of estrogen on nitric oxide biosynthesis and vasorelaxant activity in sheep uterine and renal arteries in vitro/ J. C. Veille, P. Li, J. C. Eisenach et al.// Am.J.Obstet.Gynecol.-1996.- V. 174, № 3, P. 1043-1049.

236. Weeks A.D. Decreasing estrogen in nonpregnant women lowers uterine myometriai type I nitric oxide synthase protein expression/ A.D. Weeks., A. G. Massmann, J. M. Monaghan et al. //Am.J.Obstet.Gynecol.-1999.- V. 181, № 1.- P. 25-30.

237. Weiss W.P. Relationships among selenium, vitamin E and mammary gland health in commercial dairy herds/ W.P. Weiss, J.S. Hogan, K.L. Smith, K.H. Hoblet //J. Diary Sci.- 1990.- V.73, №2.-P.381-390.

238. Werringloer J. The formation of hydrogen peroxide during hepatic microsomal electron transport reaction // Microsomes and drug oxidations / J. Werringloer Ed. V. Ulrich et al. —Oxford: Pergamon Press.-1977.- P.261-268.

239. Wills E.D. Effect of lipid peroxidation on membrane-bound enzymes oren-doplasmic reticulum/ E.D. Wills // Biochem. J.- 1971.-V. 123, №4.-P.983-991.

240. Wu S. Estrogen receptors and the activity of nitric oxide synthase in the artery of female rats receiving hormone replacement therapy/ S. Wu, Y. Ruan, X. Zhu et al.// Horm.Res.-2000.- V. 53, № 3,- P. 144-147.

Информация о работе

Пасько, Надежда Валериевна
кандидата биологических наук
Воронеж, 2009
ВАК 03.00.04

Диссертация

Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы