Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Патоморфогенез эзофагостомоза овец, вызываемого Oesophagostomum columbianum

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Патоморфогенез эзофагостомоза овец, вызываемого Oesophagostomum columbianum"

РГ5

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННА НАУК

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕЛЬМИНТОЛОГИИ ИМЕНИ АКАДЕМИКА К.И.СКРЯБИНА

На правах рукописи Давыденко Ирина Федоровна

ПАТОМОРФОГЕНЕЗ ЭЗОФАГОСТОМОЗА ОВЕЦ, ВЫЗЫВАЕМОГО ОЕЗОРНАСЗОЗТОМШ СОШМШАНШ

Специальность 03.00.19 - паразитология, гельминтология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

ЫОСКВА - 1996

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени К.И. СКРЯБИНА (ВИГИС)

Научные руководители: доктор ветеринарных наук.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Шубин В.А. кандидат ветеринарных наук, доцент Степанов A.B.

Ведущая организация - Московская государственная академия прикладной биотехнологии

Защита диссертации состоится " 1995 г.

в часов на заседании диссертационного совета Д-020.04.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени К.И. Скрябина.

Адрес: 117218, Москва, Б-Черемушкинская ул., 28. С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ВИГИС.

Бузмакова P.A. и кандидат ветеринарных наук, Любавин B.C.

Автореферат разослан

1995 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук В.К.Бережко

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы.

Эзофагостомозы - довольно широко распространенные гельминтоза животных. У овец возбудителями ззофагостомоза являются нематоды Oesophagostomum venulosim (Rudolphl, 1809) Rallllet et Henry, 1913 и Oesop"hagostomum columblanum (Curtice, 1B90) Stosslch, 1899, семейства Trlchonematidae, подотряда Strongylata.

Авторы,. изучавшие эзофагостомоз, вызываемый 0.columblanum (P.J.J.Fourle,1936; Veglla, 1923; Dhar D.N.& Singh K.S., 1968, 1979; C.Dobson, 1966, 1974; Bawden R., 1.969), отмечали у овец образование в кишечнике поракений, так называемых "узелков" на стадии личиночной миграции.

Впервые это явление Сило описано Куртисом (Curtice) в 1898 году у овец в Америке, в узелковых поражениях кишечника Куртис обнаружил наличие мелких гельминтов и доказал, что они являются неполовозрелыми стадиями нематоды, паразитирующей в имагиналь-ной стадии в просвете толстого кишечника, которую он назвал Hypostomum columblana. В 1899 году Stosslch перевел эту нематоду в род Oesophagostcmun и она стала называться Oesophagostomum columblanum.

В регионах, эндемичных по лярвальному эгофагостомозу овец, данное заболевание наносит болыгой экономический ущерб: снижается настриг персти, ухудшается её качество, возрастают потери средней дивой массы ягнят и снижается качество мяса; на мясокомбинатах выбраковывается до 50% кишечного сырья (Н.Х.Григорьев, 1969). В начале XX столетия описаны случаи массового падежа животных-от вышеуказанного гельминта (G.Marotel, 1908). На территории бывшего СССР эзофагостомоз, вызываемый 0.columblanum, регистрировали в Приморье (Опарин, 1958, 1959), Ставрополье (Зуев,1968), Чечено-Ингупетии (Григорьев Н.X., 1969).

Несмотря на то, что эзофагостомоз овец, вызываемый 0.columblanum довольно детально изучался многими авторами (Veglla, 1923; Fourle, 1935; Dhar & Singh, 1968), сведении о патоморфогенезе очень лаконичны. Кроме того, Dhar & Singh (1968) образование узелковых поражений кипечника при эзофагос-томозе трактовали как проявление приобретенного иммунитета. Но

- 4 - - •

это недостаточное объяснение, так как эти поражения -выявлены при первичной встрече животных с инвазией.

Большая часть отечественных работ по изучению эзофагостомоза овец, вызываемого O.columblanum выполнена Н.Х.Григорьевым. Автор дал описание патоморфологичееких изменений у ягнят, однократно зараженных инвазионными личинками эзофагостом в осенний период, при этом он использовал в своих исследованиях только общепринятую методику окрашивания гистологических срезов (гематоксилином и эозином).

Следует добавить, что анализ полученных данных проводился авторши без учета современных знаний о роли и функциях клеток. В литературе не освещены гистохимические и электронномикроско-пические аспекты проблемы.

Вышесказанное обусловливает актуальность выбранной теш для исследований.

Цель и задачи исследования.

В цели и задачи исследования входило изучить в условиях экспериментального и спонтанного заражения овец нематодой O.columblanum, динамику патологоанатомических, патоморфологичееких, аллергических, иммуноморфологических и эндокринных изменений, а также изучить роль клеток АПУД-системы в патоморфо-генезе эзофагостомоза.

Научная новизна.

Впервые изучена роль клеток APUD-системы (amine precursor uptake and decarboxylation) в патоморфогенезе эзофагостомоза овец, вызываемого Oesophagostomum columblanum и проведены мор-фометрические исследования этих клеток.

Установлено, что ведущим фактором патоморфогенеза является аллергическое воспаление, возникающее наряду с эндокринными изменениями, происходящими в клетках APUD-системы.

Научную новизну представляет комплексное изучение динамики патологоанатомических, патоморфологичееких, аллергических, иммуноморфологических и эндокринных изменений при параэитировании нематоды O.columblanum в условиях экспериментального заражения.

Выявлено повышение активности щелочной фосфатазы, гиперсекреция слизи в толстом кишечнике, отражающие защитные, компенсаторно-приспособительные реакции в данной хозяино-паразитной системе.

Научно -практическая ценность работы .

Полученные данные могут быть использованы п качестве тестов для дифференциальной диагностики кишечных гельминтозов при ветсанэкспертизе кишечного сырья на мясокомбинатах.

Результаты наших исследований по вопросам патологической анатомии, патоморфологии эзофагостомоаа могут быть включены в учебники, справочники, а также в лекционный и практический кур-си по патологической анатомии и паразитологии для студентов ветеринарных вузов и техникумов.

На зациту выносятся следующие п о л о я е н и я .

1. В основе патологоадатомического диагноза эзофагостомоза овец, вызываемого 0.со1итЫапит, установлено два типа изменений в гаапечнике: цисты тонкого кишечника и паразитарные гранулемы толстого гаплечника. На фоне катарального энтерита они являются патогномоничными признаками, имеющей важное диагностическое значение.

2. Цисты формировались вокруг личинок в первые сутки инвазии и к 7 суткам мы находили их в основном в состоянии деструкции и чагце без личинок. В развитии гранулем наблюдалась стадийность. Инфильтрация зоаинофилами и клетками лимфоцитарного ряда постепенно сменялась пролпферативными изменениями на 7 сутки инваз1ш. Начиная с 20 суток появлялись эпителиоидные ¡слетки, СиОробласты, иногда гигантские клетки. Позднее подключались гакрофагн, которые фагоцитировали продукты метаболизма личинок ззофагоото.ч и служили основанием для формирования соединительнотканной капсулы.

3. В патоморфогенезе эзофагостсмозп овец, вызываемого О.соХитЫапшп, выявлена активная роль клеток АПУД-систеггы.

4. Аллергическое воспаление в гаглечной стенке, возникающее наряду с зндокриннкги изменениями, происходящий в клетках ЛРШ-снстсмы, проявлялось сосудистой, тучноклеточной, зозино-фалыюй реакциями, отеком, гиперплазией эпителия ккгечной стен-га! и последующи;п! некрсбиотичесютш изменениями. Есе эти реактивные процессы коррелировали с продолжительностью хозяино-па-разитпых отнесений и зависели от индивидуальной реактивности

ГЗПЗОТ1ШХ.

5. "",о'!!о,<ор'*'олоп!чес1с::е изменения проявлялись лимфоцитпр-

но-плазмоцитарной и макрофагальной реакциями в стецке кишечника, в мезентериальных лимфатических узлах, селезенке и образованием гранулем вокруг личинок.

6. Компенсаторно-приспособительные реакции хозяина во время миграции паразита в кишечной стенке, сопровождались гиперсекрецией слизи бокаловидными клетками, их гиперплазией, а также повышением активности щелочной фосфатазы энтероцитов.

Апробация.

Материалы диссертации доложены на заседаниях Ученого Совета ВИГИС (1991, 1993, 1094 гг.), научных конференциях: "Легочные и желудочно-кишечные нематодозы человека и животных и меры борьбы с ними" (к 90-летию со дня рождения проф. Т.Е.Бурделёва) (Москва, 1993), "Гельминтоаоонозы - меры борьбы и профилактика" (Москва, 1994).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 3 работы.

Объем и структура работы .

Диссертация изложена на \{>0 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, списания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, списка использованной литературы. Список литературы включает 18£Ь источников, 95 из них зарубежных. Работа иллюстрирована фотографиями, 7 таблицами, ^ графиками.

2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ .

2.1. Материалы и методы

Для сбора патологического материала гельминтологические вскрытия проводили на мясокомбинатах различных клиыато-географических зон. Были обследованы Смоленский, Джамбульский, Ивановский и Ставропольский мясокомбинаты. Кишечное содержимое для приготовления матриксов собирали в капроновые мешки, промывали.

ОезорЬаеозЬотиш со1итЫапшп обнаруживали только при гельминтологическом вскрытии кишечников на Грозненском мясокомбинате. Животные поступали из Шелковского и Надтеречного районов.

Опыты по изучению патоморфогенеза лярвального эзофагосто-моза овец проводились в Подольском отделе ВИГИС "Курилово" и на базе Грозненского мясокомбината, в эндемичной зоне эзофагосто-моза.

На мясокомбинате проводили гельминтологическое вскрытие кишечников от убойных овец, спонтанно инвазированных Oesophagostoman columblanum. Из кишечного содержимого от 977 овец приготовлены матриксы. При разборке матриксов собирали половозрелых самок O.columblanum, из гонад которых выделяли яйца. Выделенные яйца культивировали несколькими методами.

1). На фекалиях невыпасавшихся ягнят в чашках Петри в течение 14 дней при температуре 26 С в условиях термостата.

2). Яйца, выделенные при разрушении гонад самок, помещали на 0,75%-ную фекально-агаровую среду, которую готовили по методу Григорьева Н.Х. (1969).

3). Также бил апробирован оригинальный метод культивирования инвазионных личинок, который заключался в том, что фекалии ягнят смешивали с измельченным и высушенным сфагнумовым мхом в равных количествах.

Сфагнумовый мох, обладая бактерицидными свойствами, препятствовал развитию плесневых грибов. Кроме того, благодаря своей гигроскопичности, мох поддерживал влажность фекальной культуры на постоянной величине длительное время, и обеспечивал достаточный доступ кислорода. Это позволяло личинкам нормально развиваться до инвазионной стадии в условиях, максимально приб-ликешшых к естественным.

Личинок выделяли по методу Бермана или с помоп^ью устройства Нгааггина В.Ф. "Звездочка" и подсчитывали по методу Мигачевой Л.Д., предварительно обездвижив.

В Э1сспериненте использовали 15 ягнят романовской породы 6-месячного возраста. Было сформировано пять групп .животных, одного возраста, веса и породы. Ягнят заралали суспензией инвазионных личинок. Два квотных служили контролем.

1-ая группа - три ягненка NN 7080, 1948, 1943 получали 2800 личгаюк и убивались на 7 сутки после заражения.

2-ая группа - три ягненка NN 1942, 1946, 1947 получали по 2800 личинок и вскрывались на 20-но сутки после заражения.

3-ая группа - три ягненка NN 2321, 5942, 5789 получали по 25000 личинок. Патологоанатомическое вскрытие проводилось на 42 сутю1 после заражения.

В 4-ой группе было три ягненка NN 23-10, 5663, 2328 получали по 25000 инвазионных личинок. Патологоанатомическое вскрытие проводилось на 65 сутга с момента трагедия.

В 5-ой группе бьшо два ягненка NN 2380 и 551/§15, • которых вскрывали на 116 сутки после заражения, также получали по 25000 личинок.

Убой и патологоанатомическое вскрытие проводили в сроки, соответствующие различным периодам развития Oesophagostomum columblanum в организме хозяина.

Патологический материал от спонтанно зараженных животных собирали на Грозненском мясокомбинате, от экспериментально зараженных - в Подольском отделе ВИГИС "Курилово". Участки кишечника, заселенные эзофагостомами на разных стадиях развития, регионарные мезентериальные лимфатические узлы и селезенку фиксировали в 10%-ном нейтральном растворе формалина, жидкости Карлу а, фиксаторе Sevkl.

Парафиновую проводку и заливку в парафин проводили по об-щбпринятой мэтСДгнСе (Пирс 3., 1Q52; Меркулов г.A., 1S6S). С целью поиска инвазионного материала с блоков получали серийные срезы.

Депарафинированные гистосрезы окрашивали общими, специальными и гистохимическими методами: гематоксилином и эозином (обзорный метод), толуидиновым синим - на тучные клетки (метахро-мазия), по Унна-Паппенгейму - на плазматические клетки, по Ыал-лори - на соединительную ткань и коллаген, по Sevkl и Массо-ну-Фонтану - на биогенные амины, по Гомори - на щелочную фосфа-тазу.

При изучении морфометрических характеристик тучных клеток в срезах кишечника подсчитывали количество мастоцитов в поле зрения микроскопа (увеличение х350), измеряли средний диаметр тучных клеток с помощью окуляра микрометра. Средний диаметр выводили при подсчете диаметра 50 клеток. Суммарную гистаминсвя-вывающую способность тучных клеток определяли по методу В.В.Виноградова (1973). Гистаминсвязываицую способность совокупности тучных клеток выражали в виде произведения числа тучных клеток в 10 полях зрения на средний диаметр этих клеток. Количество энтерохромаффинных клеток подсчитывали не менее чем в 100 ворсинках и криптах (Райхлин Н.Т., Кветной И.Ы., 1975). Полученные данные обработаны статистически (Углов Б.А., 1986).

В качестве материала для электронномикроскопических исследований служили участки кишечников заселенные 0.columblanum от экспериментально инвазированных ягнят; личинки, выделенные из

пораженной Ticaim и половозрелые эзофагостомы. Ткани кишечника фиксировали в 4Х-нсм, а личинок и половозрелых гельминтов - в 2,5%-ном растворе глютарового альдегида.

После фиксации промывали в фосфатном буфере в течение суток, затем проводили через серию спиртов возрастающей концентрации и ацетона. Проводил высушивание методом перехода критической точки жидкой углекислоты и напыление объектов слоем платины. Исследовали и фотографировали в сканирующем электронном микроскопе марки "Tesla" BS-301 при ускоряющем напряжении 25 квт. Микрофотографии и слайды изготовлены автором.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ 2.2.1. Ре зультаты лееледования патологоанатомичес ких измэ не ний

Впервые кизненный цикл O.columblanum был описан Vefjlla (1923). Он был сходен с кизненными циклами. которые описаны для других эзофагостом (Splndlor L.A. 1932,1933; Roberts F.H.S., Elek P. ft Ко 1th R.K. , 1962; Kotlan A., 1948; Goldberg: A., 1951; Andrews J.S. & Maldonado J.F..1941).

FouriS (1936). Dobson (1966), She1ton 4 Griffiths (1967, 1968,1969) предположили, что у овец, которые не подвергались предварительному заражения, личинки 4-й стадии находились длительный период в стенке толстого отдела кишечника, т.к. "проникнув" в более глубокие слои кишечной стенки личинки могут развиваться медленнее в толстом кишечнике, чем в тонком, и тагам образом поддерживали чувствительность ткани хозяина и способствовали личиночной инкапсуляции. ' '

Альтернативное мнение Dash (1973) состояло в том, что жизненный цикл паразита O.columblanum мог включать две самостоятельные гистотропные фазы.

При патологоанатомическом вскрытии на 7 день после заражения изменения были обнаружены в основном в тонком кишечнике. Почти по всей длине кишки, начиная с тощей и заканчивая подвздошной, располагались множественные образования - цисты (Fourlo, 1936) - желтоватого цвета, диаметром около 1 ем, выс- * тупалщиэ на 1 им над поверхностью слизистой. Со стороны серозной оболочки они были в виде едва зачетных точек. Отмечали отек слизистой оболочки, наложение слиэи, призншен сосудистой реак-

цш вокруг цист, иногда встречались довольно обширные кровоиз-лшшя. Это признаки катарального энтероколита, которые типичны и для других кишечных гельминтозов• (Rowland D.T., Probert A.J.,1972; Цветаева Н.П., 1970; Бузмакова Р.А., 1987; Шапошникова Л.М., 1990 и др.). Выявлена незначительная сосудистая реакция сосудов брыжейки и серозной оболочки тонкого кишечника. Единичные узелковые образования были обнаружены в ободочной и в слепой кишках (5 и 3, соответственно). Эти образования отличались от цист тонкого кишечника. Они были крупнее, около 4 мы в диаметре, выступали над поверхностью слизистой оболочки на 3-4 мм. Эти образования были хорошо заметны и со стороны серозной оболочки в виде беловатых пятен.

Большинство личинок O.columblanum к этому времени, завершив третью линьку в стенке тонкого кишечника, покинули цисты. При патологоанатомическом вскрытии мы обнаруживали личинок только в 5Х цист. Количество цист постепенно уменьшалось и почти полностью исчезало к 65 суткам после заражения. Число же "узелковых поражений" в толстом кишечнике, наоборот, возрастало по мере увеличения срока после инвазирования. Это являлось доказательством того, что дичинки O.columblanum после инцистиро-вания в стенке тонкого кишечника и завершения 4-й линьки, попав в ободочную кишку, вновь внедрялись в кишечную стенку. Они совершали вторую гис.тотропную фазу в своем развитии. Наличие "узелковых поражений" в слепой кишке может быть объяснено тем, что илео-цекальный клапан имеет сужение, и личинки, проходя че-реэ него вместе с фекальными массами, скорость прохождения которых замедляется в этом участке, могли попасть в слепую кишку.

На 20 сутки макроскопические изменения обнаруживали на всем протяжении кишечника. В тонком кишечнике цисты были аналогичны описанным выше, довольно плотные на оиупь. Слизистая слегка набухшая. Количество цис!1 колебалось от 53 до 199 . Цисты не содержали личинок. В толстом кишечнике количество узелков составило у ягненка N 1946 - 89, у ягненка N 1947 - 94, у ягненка N 1942 - 524. Личинок обнаруживали в 52,8Z; 23,42; и в 9.35Z, соответственно. Узелки были сходны с таковыми на 7 сутки после заражения. Содержимое этих узелковых образований было зеленоватого цвета, что характерно для распада лейкоцитов. Пато-логоанатомические изменения имели характер катарального колита: слизистая набухшая, вблизи узелковых поражений гиперемирована,

на поверхности слизистой и в килечном содержимом обилие слизи. Аналогичные изменения отмечали и в слепой кишке. У ягненка N 1942 некоторые узелки были окружены четко выраженной зоной кровоизлияний, что свидетельствовало о воспалительном процессе, возникающем в участке локализации личинок, либо о разрыве стенок кровеносных сосудов при внедрении личинок.

Ыакроскопические изменения на 42 сутки.

В тонком кишечнике цисты были единичными (5-6 цист, не более) и патологоанатомические изменения аналогичны описанным на 20-е сутки после заражения. В толстом кишечнике узелки были около 5 мм в диаметре, содержимое их имело вид зеленоватой гнойной массы. Слизистая оболочка отекшая, с точечными и полосчатыми кровоизлияниями. Кишечная стенка гипертрофирована. Ме-аентериальные лимфатические узлы были значительно увеличены, на разрезе сочные и тянулись сплошным толстым жгутом по брыжейке. Увеличение паховых, поверхностно-паховых и подвздошных лимфатических узлов было незначительным.

На 65 сутки макроскопические изменения были обнаружены в толстом кишечнике и на брыжейке. Узелки, встречавшиеся в толстом отделе кишечника, не отличались по размерам и форме от узелков, обнаруженных у ягнят предыдущей группы, но характер их содержимого несколько изменился. А именно, среди узеЛКОВ й зеленым содержимым появились поражения с оливковым и коричневым содержимым, что могло свидетельствовать об окончании процесса интенсивной гибели лейкоцитов при воспалительной реакции и начале организационных процессов. В количественном отношении узелковых поражений кишечной стенки было значительно больше, в результате чего петли кишечника в местах наибольшего скопления узелков были спаяны. У ягненка N 2340 был обнаружен 371 узелок, в 63 из которых выявили личинок. В просвете кишечника паразитировало 120 саыок и 122 самца O.columbianum, некоторые особи еще оставались ювенильными. У ягненка N 5663 насчитывалось 370 узелков, но методом переваривания было выявлено всего лишь 6 экземпляров личинок. В просвете кишечника паразитировало 88 садов и 79 самок эзофагостом. У ягненка N 2328 в просвете кишечника паразитировало 49 самок и 27 самцов. Из 147 узелков методом переваривания было выделено 51 личинка O.colimblanum. На брыжейке обнаружено 5 узелков с коричневым содержимым, личинок в шгх пе выявили. Регионарные мезентериальные лимфатические уз-

- 12 - .

лы били отечны, сочные на равреве, образовывали толстые жгуты на брыжейке.

Патологоанатомическое вскрытие на 116 сутки после заражения показало, что среди узелков появилось больше с оливковым и коричневым содержимым. Было зарегистрировано 4 узелка на брыжейке. Узелки в слепой и ободочной кишках были хорошо видны с поверхности серозной оболочки. Размер некоторых узелков достийл 6 мм, а местами выявляли "конгломераты" узелковых поражений размером до 1,5 см, сильно выступающие как над поверхностью се-розы, так и со стороны слизистой оболочки. Кишечная стенка утолщена. У ягненка N 2380 фекальные массы были несколько разжижены, с пузырьками газа; в просвете кишечника паразитировало 107 самцов и 129 самок эзофагостом; в слепой кишке насчитывалось 47, в ободочной 176 узелков, в 63 из них выявлены личинки 0.оо1ишЫапит. У ягненка N 551/815 в просвете кишечника обнаружено 67 самцов и 116 самок 0.со1ишЫапит, увелков - 173, в 23 обнаружены личинки. Кишечное содержимое было в меру ослизнен-ное. Мезентериальные лимфатические углы отечны.

В генезе данного инвазионного процесса отмечали некоторую реактивность селезенки, которая проявлялась кровенаполненностью и утолщением краев. Наиболее выраженные изменения в селезенке были выявлены на 20 сутки и в последующие сроки инвазии.

Характер содержимого "узелковых поражений" изменялся по мере увеличения срока после инвазирования. Так> на 7 и 20 сутки после заражения содержимое "узелковых образований" в толстом кишечнике имело зеленоватый цвет, соответствующий распаду лейкоцитов. К 42 суткам среди "узелковых поражений" с зеленым содержимым появлялись оливковые, а к 65 суткам еще и коричневатые, что могло свидетельствовать об ослаблении воспалительной реакции и начале'процессов организации очагов. К 116 дня "узелковых поражений" с оливково-коричневым содержимым насчитывалось до 50%. В "узелковых поратениях" с коричневым содержимым личинок не обнаруживали.

Размер "узелковых поражений" к 116 дню увеличивался, выявляли целые "конгломераты" до 1,5 см, причем часто неправильной формы, сильно выступающие как над поверхностью слизистой, так и со стороны серозной оболочки. Здентичные образования наблюдали у естественно инвазированных животных на Грозненском мясокомбинате, особенно много регистрировали их к концу пастбищного се-

зона в октябре.

Была отмечена возраставшая плотность "узелковых поражений" по- мере увеличения срока после инвазии. Это было обусловлено формированием соединительнотканной капсулы, которая начинала по нашим наблюдениям формироваться с 20 суток после инвазирования, а также отложением солей кальция и петрификацией центров "узелковых поражений". В некоторых узелках отложение солей кальция наблюдали утке на 20 сутки (ягненок N 1942).

Из вышеизложенного следует, что крупные "узелковые пораже-иия" в толстом кишечнике формировались вокруг личинок 4-й стадии во время их второй гистотропной фазы.

Число личинок, которые вступали во вторую гистотропную фазу, довольно широко варьировало между овцами в группах. Это наводит на мысль, что в хозяино-паразитной системе взаимоотношения и процессы развивались по одному типу, но зависели от индивидуальной реактивности хозяина.

В период с мая по июнь 1989-1990 годов при патологоанато-мическом вскрытии животных на Грозненском мясокомбинате изменения отмечали в основном в толстом отделе кишечника. Поражения представляли собой узелки с коричневым содержимым, хорошо видимые как со стороны слизистых йокровов, так и со стороны серозной оболочки, с трудом разрезались скальпелем. В размере они достигали 4-5 мм, часто были неправильной формы, в них практически не регистрировали личинок, а диагноз ставили по выявлению эзо-фагостом в просвете кишечника. Иезентериальные лимфатические узлы были в той или иной степени увеличены.

Вскрывая животных в октябре-ноябре 1989-1990, наряду с вышеуказанными изменениями, мы обнаруживали целые конгломераты "узелковых поражений"' неправильной формы, коричневатого цвета, размером до 1,5 см. Эти поражения регистрировали не только в в ободочной кишке, но на всем протяжении толстого кишечника, включая и прямую кишку. У некоторых животных аналогичные поражения наблюдали также в сальнике, на брыжейке, а иногда и в других внутренних органах, таких как легкие и печень.

Количество "узелковых поражений" у животных довольно широко варьировало от десяти и более до трудно подсчитываемого . количества (досчитывали до 1000). У таких животных прижизненная диагностика, очевидно, не составляла труда, так как прямая кишка была сплошь усеяна такими поражениям1.!. Было отмечено, что

чем больше регистрировали "узелковых поражений", тем меньше эзофагостом находили в просвете кишечника, и наоборот, чем меньше "узелковых поражений" в кишечнике, тем больше эаофагос-TOM паразитировало Б ПрбсЕетё КИшеЧника.

Мезентериальные лимфатические узлы были также увеличены в той или иной степени.

Все эти изменения соответствовали выявленным нами при экспериментальном заражении ягнят на поздних сроках инвазии (65 и 116 сутки).

Завершив, таким образом, почти полностью к 7 суткам линьку в слизистом слое тонкого кишечника, личинки мигрировали в толстый кишечник, где опять внедрялись в кишечную стенку. На сей раз они локализовались в более глубоких слоях, постепенно проникая через мышечный слой в серозу. Первоначальное инцистирова-ние личинок в тонком кишечнике не затрагивало глубоких слоев кишечной стенки и ограничивалось слизистой и подслизистой оболочками. Личинки благополучно выходили в просвет кишечника и исход, сопровождающего данный этап развития O.columblanum, продуктивного воспаления, restitutio ad Integrum, т.е. с полным восстановлением. Об этом судили по убывающему количеству цист в тонком кишечнике к 116 дню после заражения и возрастающему количеству "узелковых поражений" в толстом кишечнике. Одна личинка вызывала на разных стадиях своего развития 2 типа изменений, которые встречались в различных отделах пищеварительного, тракта.

2.2.2. Морфологические, гистохимические и эндокринные исследования

При анализе гистологических изменений установили, что на ранних сроках инвазии (7 и 20 сутки) развивалась ответная реакция слизистой оболочки хозяина на внедрение личинок. Она проявлялась глубоким и обширным некрозом, охватывающим до 4-х ворсинок, диффузной эозинофилией в зоне некроза, гиперемией и диапе-дезом эритроцитов в близлежащие ткани, инфильтрацией собственно слизистой оболочки эозинофилами, лимфоцитами, плазмобластами и ДР.

Локализация личинок в тонком отделе кишечника не затрагивал ала глубоких слоев, и ограничивалась слизистым и подслизис-

тым слоями кишечной стенки.

Тучноклеточная реакция на 7 сутки возрастала в 2,8 раза, по сравнению с контрольными значениями (соответственно, 8,47±1,18 и 3,0±1,3б). Активное участие в тучноклеточной реакции принимали тучные клетки подслизистого слоя, созревание которых контролируется Т-лимфоцитами и которые в первую очередь участвуют в защитных реакциях (Горышина, 1990). Наряду с масто-цитами подслизистого слоя регистрировали и оседлые тучные-клетки соединительной ткани. Особенно много тучных клеток отмечали в тонком отделе кишечника, где на данном этапе и паразитировали личинки эзофагостом.

Численность тучных клеток в известной мере отражает уровень гистаминобразующей способности в данном органе (В.В.Виноградов, 1972; и Могг, 1985). Нами тучные клетки были обнаружены во всех слоях кишечной стенки: в собственно слизистом, подсли-зястсм, з соеДпНКТеЛЬкоткаккыл прослойках мышечного и серозном. Клетки находились в разной степени дегрануляции, часто полностью распадались. Дегрануляции в большей степени были подвержены тучные клеткй в собственно слизистой пластинке. Очевидно, в ткани накапливалось большое количество свободного гистамина, т.к. при такой высокой степени дегрануляции показатель гиста-минсвязывающей способности был ниже, чем у животных в контрольной группе, 248,02±142 у.е. и 256,65*140,9 у.е., соответственно.

На 20-е сутки количество тучных клеток почти в 2,5 раза превышало контрольные значения (7,39±0,7 и 3,0±1,36, соответственно). По-прежнему тучные клетки продолжали проявлять свою активность в слизистой тонкого кишечника, но достоверное увеличение численности популяции этих клеток отмечали и в ободочной, и в слепой кишках, главным образом в слизистом слое.

Средний диаметр тучных клеток по сравнению с 7 сутками после заражения возрастал в 1,7 раза, но оставался в 1,5 раза меньше контрольного значения . Уровень гистаминсвязывающей способности значительно увеличивался по сравнению с контролы™ значением, и составляв 394,53±117,4 у.е. и 256,65±140,9у.е., соответственно. Хотя мы и регистрировали большое количество клеток в разной степени дегрануляции, совершенно очевидно из выше приведенных данных, что накопление свободного гистамина в ткани было снижено.

К 42-м суткам количество тучных клеток уменьшалось, но было выше контрольного значения в 1,8 раза (5,6±1,34, по сравнению с 3,0±1,36 в контроле). Несколько увеличивался средний диаметр мастоцитов по сравнению. с контрольными значениями (6,17^,6 и 8,08±0,7, соответственно). Гистаминсвязывающая способность оставалась на довольно высоком уровне, хотя и была немного ниже, чем в предыдущей группе.

На 65 сутки, когда в просвете кишечника паразитировали половозрелые ззофагостомы, количество тучных клеток начинало вновь возрастать и составляло 6,02±1,01. Регистрировали тучные клетки в состоянии дегрануляции, уменьшался их средний диаметр 5,7±0,2, по сравнению с 6,17±0,6 в предыдущей группе и 8,08±0,7 в контроле. Но накопление свободных аминов в ткани, по-видимому, не происходило, так как уровень гистаминсвязываю-щей способности был достаточно высок и превышал контрольные значения в 1,5 раза.

Численность тучных клеток к 116 суткам после начала инвазии равнялась 8,03±0,15, что превышало контрольные значения в 2,7 раза и приближалось к таковому на 7 сутки. Объяснить этот факт можно тем, что к этому сроку в просвете кишечника все особи бьши половозрелыми, а, как известно из литературных данных (Ершов,1974, Солоницына,1973 и др.), паразитирование имаго вызывает новый пик возрастания общего числа тучных клеток. Средний диаметр приближался к контрольным значениям и несколько превышал их, а уровень гистаминсвязывающей способности возрастал в 3 раза.

В наших опытах значительно усиливалась тканевая зозинофи-лия. носящая как диффузный, так и локальный характер. Она достаточно ярко была выражена у всех животных на 7 и 20 сутки после заражения, но степень ее проявления зависела от стадии развития паразита в кишечной стенке. На 7 и 20 сутки наблюдалась инфильтрация . тканей эозинофилами всех слоёв кишечной стенки, особенно интенсивно в местах инцистирования личинок в тонком кишечнике, ободочной и слепой кишках, когда их локализация затрагивала более глубокие слои кишечной стенки.

На 20 сутки структура эозинофилов в слизистой оболочке и вне очагов была полностью сохранена. На границе очагов и внутри их большинство эозинофильных лейкоцитов были дегранулированы. Ядра эозинофилов находились в состоянии пикноза, рексиса или

лиаиса. При окрашивании гистосрезов по методу Зеук1 выявлено ослабление реакции в цитоплазматических гранулах эозинофилов, свидетельствующей о наличии гистамина и серотонина (Райхлин Н.Т. Кветной И.М., 1983)..

Ослабление интенсивности окрашивания гранул и вакуолизация, возможно, являлись результатом выхода биогенных аминов из клеток. В центре очагов, в клеточном детрите, этим методом выявлено также окрашивание детрита эозинофилов в красный цвет. Личинки находилмись в детрите из дегранулированных и распавшихся полностью или частично эозинофилов. Но только гистохимическими методами невозможно установить являются ли эозинофилы местом синтеза этих аминов, или же только транспортируют их от эн-терохромаффинных и тучных клеток к месту локализации личинок или аллергена.

Эозинофильная реакция снижалась к 42 суткам (5-10 клеток в поле зрения микроскопа, об. 40) и оставалась таковой на протяжении Бсего периода наблюдений, с небольшими колебаниями у ЖИВОТНЫХ в каждой группе. Однако у ягненка N2380. вскрытого на 116 сутки после заражения, мощная эозинофильная реакция выявлялась вокруг морфологически неизмененных личинок, локализованных в серозном слое кишечной стенки. Очевидно, хроническое течение лярвального ззофагостомоза может быть результатом подъема активности личинок, "убежавших" от тканевой защитной реакции организма хозяина в поздние сроки инвазии.

Антагонизм является универсальным механизмом поддержания равновесия в природе (Саркисов Д.). И деятельность любой системы ливого организма представляет собой результат соотношений двух или нескольких взаимно противоположных процессов. Особенно наглядно проявляется роль принципа антагонистической регуляции функций в эндокринных механизмах поддержания гомеостаза. Именно метки АПУД-системы, продуцируя высокоактивные пептиды и биогенные амины, обеспечивают тонкую "игру" антагонистической регуляции,- благодаря которой организм постоянно "ливет в согласии" с внешним миром.

При изучении патокорфогенеза лярвального ззофагостомоза мы отмечали гиперплазию энтерохромаффинных клеток, относящихся к ЛРШ-снетеме, в перЕые дни инвазии по сравнению с контрольными животными. Возросшее число этих клеток, интенсивное окрашивание гранул в красно-оранжевый цвет (по Беук!) и последующий выброс

гранул служили индексом их функциональной активности, поскольку красно-оранжевое окрашивание свидетельствует о секреции и накоплении важного биологического амина - серотонина.

Активность энтерохромаффинных клеток в толстом кишечнике возрастала почти в 6 раз, а в тонком кишечнике в 30 раз, по сравнению с контролем (5,1±0,1 и 0,17, соответственно) на 7 сутки после инвазирования.

На 20-е сутки в слизистой оболочке тонкого отдела кишечника активность этих клеток значительно снижалась и превышала контрольный уровень в 6 раз, а в ободочной и слепой кишках оставалась на прежнем уровне, т.е. в 6 раз выше , чем в контроле. Клетки дегранулировали, выделяя в просвет крипт серотонин. Продукты же окисления серотонина, по данным Пухальской Е.Ч. (1960,1966), стимулируют пролиферацию клеток, обладают выраженными антиокислительными свойствами, способны подавлять процессы дыхания и фосфорилирования.

К 48 оуткам выявлялось очень малое количество энтерохро-МвффШШХ Ш-ТОК, ПО все-таки оно оставалось несколько больше, чем в контроле. Так, в тонком отделе кишечника в среднем обнаруживали 0,67±0,1 клеток; в ободочной 0.23±0,04 клеток; Б Слепой 3,06±0,4 клеток, по сравнению с контролем 0,17±0,08; О,76±0,09 и 1,23±0,08 клеток, соответственно. Эти данные регистрировали в момент активных пролиферативяых процессов в ткани.

На 65 сутки почти не выявляли энтерохромаффинных клеток в тонкой и ободочной кишках, а в слепой их количество приближалось к контрольному уровню (1,7±0,6 и 1,23±0,08 клеток, соответственно) .

К 116 суткам количество этих клеток почти полностью соответствовало контрольному значению.

По данным Кветного И.М. (1983) тучные клетки являются одними из основных источников синтеза мелатонина при различных патологических процессах. В наших исследованиях методом Массо-на-Фонтана на 65-е сутки инвазирования было выявлено накопление гранул мелатонина в центре узелкового образования. Небольшое восстановление серебра из его нитрата отмечали в цитоплазма тучных клеток на 7-е сутки после заражения. Однако, трудно предположить, что в данном случае они играли важную роль в накоплении мелатонина в гранулемах, т.к. на данном и двух преды-

дущгх сроках инвазии мы не обнаруживали этот амин ни в тучных клетках, ни в гранулемах. Вероятнее всего, что его генез имеет внеклеточную природу, а накопление происходит при метаболизме серотошша, который откладьшался здесь в результате дегрануля-ции эозинофилов на более ганних сроках инвазии. Серотонин же является предшественником мелатонина при его метабо/зме (Райх-лин Н.Т., Кветной И.М., 1993).

Накопление серотонина усиливало пролиферацию бокаловидных клеток, усиливалась перистальтика кишечника. Не случайно при патологоанатомическом вскрытии в полости кишки на данном этапе паразитирования личинок эзофагостом регистрировали большое количество слизи.

Аллергическая реакция тесно связана с гиперпродукцией 1гЕ плазматическими клетками, вызываемой антигенами. В стимулировании синтеза 1(?Е значительную роль играют медиаторы иммунных реакций (Ьаиепег, 1991; РгеШаги М., УаггаГНпе, 1991). Количество плазмацитов умеренно возрастало по мере увеличения срока после инвазии и максимального значения достигало к 116 суткам (от 10-15 клеток на 7 сутки к 25 и более на 116 сутки). К 20-м суткам пиронинофильность цитоплазмы плазматических клеток резко возрастала, что может служить доказательством усиления синтеза белка (га,2.(уноглобулинов). Высокая пиронинофильность оставалась вплоть до 42 суток. На 65 сутки пиронинофильность цитоплазмы больспшстЕа плазматических клеток была лишь слегка заметной, что свидетельствовало об угасании синтеза антител. Численность ~е этих клеток, хотя и снижалась по сравнению с 42-ми сутками с момента инвазии, но оставалась несколько выше, чем в контроле.

Синтез антител не ограничивался локальной реакцией, активное участие в этом процессе принимали периферические лимфоидные органы. На ранних сроках инвазии возрастало количество вторичных фолликулов и увеличивалась площадь первичных фолликулов, гак в лго.'-фатических узлах, так и в селезенке. Цитоплазма плазмацитов была пирошшофильной в обоих органах. К 20-м суткам пиронинофильность плазматических клеток з лимфоидных фолликулах лимфоузлов уменьшалась, а в мякотных шнурах резко возрастала и оставалась достаточно высокой на всех последующих сроках инвазии. 3 селезенке интенсивное окрашивание пиронином сохранялось и на 20-е сутки, а в последующие сроки дозревание плазмацитов происходило з красной пульпе. Известно, что плазматические

клетки, являющиеся основными продуцентами антител, преимущественно накапливаются в мозговых шнурах лимфатических узлов и красной пульпе селезенки (Солоницына В.Ф., 1973 и др.; Петров Р.В., 1987). Многие исследователи при гельминтозах отмечали гиперплазию регионарных лимфатических узлов, и, в частности, усиление плазмоцитарной реакции (Тиунов В.И., Молев А.И., 1964; Гиновкер А.Г., 1971; Степанов A.B., 1973; Бузмакова P.A., 1973,1987; Шапошникова Л.М., 1990 и др.).

Важную роль в специфическом иммунном ответе отводят макрофагам Cordler et al. (1991). Они способны фагоцитировать патогенные антигены, регулировать активность лимфоцитов в ответ на различные медиаторы и цитокины, которые после активации приобретают гуморалитическую активность.

Saxena К.С. et al (1991) полагают, что индекс миграционной активности макрофагов может использоваться как показатель напряженности клеточного иммунитета животных.

В наших опытах впервые свою функциональную активность макрофаги начинали проявлять в кишечной стенке на 20-е сутки вокруг лимфатических фолликулов и "узелковых поражений", располагаясь концентрически группами. К этому же сроку отмечали резкое • возрастание макрофагальной реакции в мякотних тяжах лимфатических узлов. По мере увеличения срока с момента инвазирования количество этих клеток возрастало как в кишечной стенке, так и в лимфоузлах. Максимальное количество пигментированных, нагруженных гранулами черного цвета макрофагов, регистрировали к 116 суткам в мозговом веществе лимфатических узлов и вокруг гранулем.

Немаловажную роль в ферментативных процессах в кишечнике играют фосфатазы. Биологическое значение фоефатаз связано с обменом нуклеиновых кислот и нуклеотидов, углеводным обменом. Foldbush T.L., Lafrens D. (1991) утверждают, что щелочная фос-фатаза является маркером активации B-клеток. Нами было отмечено усиление активности щелочной фосфатазы в каемчатом эпителии на 7 и 20 сутки, также в эти сроки были выявлены Солее выраженные некробиотические изменения эпителия в связи с усиленной аллергической реакцией. По-видимому, увеличение активности щелочной фосфатазы на тех стадиях развития , когда личинки внедрялись сначала в стенку тонкого кишечника (7 сутки) и затем в стенку толстого кишечника (20 сутки), ыокет свидетельствовать о кои-

пенсаторно-приспособительных реакциях функционирующих энтероци-тов с целью восстановления обменных процессов в кишечнике.

При окрашивании гистосрезов по Маллори на 20-е сутки вокруг "узелковых поражений" выявляли коллагеновые и ретикулярные волокна, окружающие некротизированные центры. Это свидетельствовало о начале формирования соединительнотканной капсулы. Иногда там находили личинок. К 42 суткам соединительнотканная капсула была полностью сформирована вокруг "узелковых поражений", в основном с оливковым содержимым, что также подтверждалось и исследованиями с помощью сканирующего электронного микроскопа.

При гистологическом изучении "узелковых образований" на 7 сутки выявляли экссудацию эовинофильных лейкоцитов и лимфоцитов к месту локализации личинок. К 20-м суткам отмечали, что центр "узелкового поражения" был представлен эозинофильной детритной массой с эозинофклами в различных стадиях дегрануляции или распада, и был окружен эпителиоидными клетками, расположенными в виде "палисада". Многоядерные гигантские клетки округлой формы встречались реже. Концентрически по периферии располагались фнбробласты, макрофаги и плазматические клетки. Иногда в таких поражениях отмечали отложения солей кальция. На более поздних сроках инвазии (65, 116 сутки) соединительнотканная капсула была уже сформирована, а центральная часть постепенно некротизи-ровалась и плохо пропитывалась парафином, вследствие чего при резке на микротоме выкрашивалась. В порат-ениях, описанных как "узелки с коричневы!-« содержимым", находили погибших личинок, т.к. целостность наружных покровов была нарушена.

Таким образом нами было выявлено стадийное развитие "узелковых образований" при эзофагостомозе овец, которые отражали динамику хозяино-паразитных взаимоотношений в данной хозяи-но-паразитной системе.

В литературе появление такового состава клеток в результате пролиферативного воспаления принято называть гранулемой (Всеволодов Б.П., 1981; Бузмакова Р.А., 1987; Струков А.И., 1979; Ершов B.C., Наум-/чева М.И., Сосипатрова Л. А., 1986; Green W.F., Colley D.G., 1981; Шапошникова Л.Ы., 1990).

Немаловажную роль в формировании паразитарных гранулем играют и эозинсфилы.

Нашими исследованиями мы показали, что з образовании гра-

нулем при ззофагостомозе наряду с иммунными клеточными процессами, описанными в литературе, немаловажную роль играет функциональное состояние клеток АРШ-системы.

ВЫВОДЫ

1. При экспериментальном заражении ягнят 3-6 месячного возраста 0.со1шЫапит подтверждено наличие двух гистотропных фаз в жизненном цикле нематоды.

2. Тип и распространение повреждений в пищеварительном тракте при однократном заражении ягнят являются проявлениями локальных тканевых реакций различных стадий развития ззофагос-том. На фоне катарального энтерита имело место два типа повреждений кишечника (цисты в тонком и паразитарные гранулемы в толстом отделах кишечника), эти патогномоничные признаки имеют диагностическое значение. Цисты тонкого кишечника, образуются в слизистом и подслизистом слоях кишечной стенки, где личинки эзофагостом завершают 4-ю линьку и затем выходят в просвет кишечника. Паразитарные гранулемы толстого кишечника на разных этапах своего развития, формируются в ответ на внедрение личинок, в мышечный и серозный слои кишечной стенки, в них гельминты погибают.

3. Впервые экспериментально показано, что в развитии пато-морфологических, аллергических и иммуномор^ологических изменений при внедрении личинок паразита в стенку кишечника ведущая роль принадлежит клеткам МВД-системы и в первую очередь энте-рохроиаффинным клеткам. На 7 сутки инвазии их функциональная активность возрастала в тонком отделе кишечнике в 30 раз по сравнению с контрольными значениями, которая проявлялась гиперплазией этих клеток и выбросом гранул, содержащих серотонин и др. биогенные амины и пептидные гормоны, и направлена на поддержание внутренней среды организма.

4. Выявлено, что функциональная активность тучных клеток повышается за счет:

- увеличения их среднего количества приблизительно в 2,6 рааа в первые дни инвазии (7-20 сутки) и в период паразитирова-пия половозрелых особей, начиная с 65 суток после заражения;

- дегрануляции иастоцитов, наиболее выраженной в первые дни инвазии и сопровождающейся уменьсешш среднего диаметра

клеток;

- накопления свободного гистамина в тканях только на 7 сутки инвазии.

- уменьшения гистаминсвязывающей способности на 7 сутки и её возрастания в последующие сроки инвазии по сравнен™ с контрольным значением.

5. Тканевая аллергическая реакция была выражена гиперемией, диапедезными кровоизлияниями, отеком кишечной стенки, некрозом и некробиозом ворсинок и крипт, эозинофильной и тучнокле-точной инфильтрацией слизистой оболочки кишечника, которая имела диффузный и очаговый характер.

6. На фоне аллергической реакции, сопровождавшейся эндокринными изменениями развивалась иммуноморфологическая реакция: инфильтрация слизистой оболочки кишечника клетками лимфоцитар-но-плазмоцитарного ряда и образованием паразитарных гранулем. В мезентериальных лимфатических узлах расширялись кортикальная и паракортикальная зоны, утолщались мякотные тяжы; возрастало число лимфатических фолликуллов в регионарных лимфоузлах и селезенке; усиление плазмоцитарной и тучноклеточной реакции в первые дни инвазии и макрофагальной реакции на более отдаленных сроках инвазии связанных с началом достижения эзофагостомами половозрелой стадии.

7. При однократном заражении паразитарные грануле»,<ы формировались только в толстом кишечнике и имели условно-зональную клеточную структуру. Цорфология гранулем зависела от срока, проведшего с момента инвазии.

8. Ксмлепсаторно-приспособительные реакции хозяина в ответ на внедрение личинок 0.со1итЫапиш на фоне эндокринной перестройки сопровождались повышением активности щелочной фосфатазы энтероцитов, гиперсекрецией слизи бокаловидными клетками.

СПИСОК РАБОТ, опубл1!кованных по материалам диссертации

1. Давыденко И.Ф.- Патологоанатомические изменения у овец, зараженных ОезорЬагозЬоталп со1итЫапит // Тезисы докл. Вс. науч. конф. "Легочные и желудочно-кишечные нематодозы человека и животных и меры борьбы с ними (к 90-летию со дня рождения проф. Т.Е.Бурделёва) - М., 1993 - С. .

2. Давыденко И.Ф. Патоморфологические изменения в гашечни-ке ягнят при экспериментальном заражении СЮБорЬагозЬапат! со1итЫапиш// Тез. докл. Вс. науч. конф. "Гельминтозоонозы -меры борьбы и профилактика" - Ы., 1994 - С. 61-63.

3. Давыденко И.Ф. Тучноклеточная реакция в кишечнике овец, экспериментально зараженных ОеэорЬаеоз^ит со1ишЫапит// Тез. докл. Вс. науч. конф. "Ассоциативные паразитарные болезни, проблемы экологии и терапии" - М., 1995 (в печати).