Оценка биологического возраста человека на основе анализа динамики содержания биополимеров в коже и сыворотке крови

Петренко, Елена Геннадьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Оценка биологического возраста человека на основе анализа динамики содержания биополимеров в коже и сыворотке крови
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Оценка биологического возраста человека на основе анализа динамики содержания биополимеров в коже и сыворотке крови"

На правах рукописи

003058378

Петренко Елена Геннадьевна

ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОГО ВОЗРАСТА ЧЕЛОВЕКА НА ОСНОВЕ АНАЛИЗА ДИНАМИКИ СОДЕРЖАНИЯ БИОПОЛИМЕРОВ В КОЖЕ И

СЫВОРОТКЕ КРОВИ

03.00.04 - биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2007

003058378

Работа выполнена в лаборатории биологически активных веществ Института нефтехимии и катализа Российской академии наук

Научный руководитель: доктор биологических наук

Зимницкий Александр Николаевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Егорова Татьяна Алексеевна

кандидат биологических наук, профессор Ушакова Галина Ивановна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Ижевская государственная

медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Защита диссертации состоится 21 мая 2007 года в _ часов на

заседании диссертационного совета Д 21215417 при Московском педагогическом государственном университете по адресу 129164, Москва, ул Кибальчича, д 6, корп 5, ауд 506

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МПГУ по адресу 119992, Москва, ул М Пироговская д 1

Автореферат разослан_2007 г

Ученый секретарь Диссертационного совета

Н В Холмогорова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. На сегодняшний день не существует однозначного мнения о биохимических механизмах старения и их регуляции [Анисимов В II,

2003, Bohr V А, 2002, Киселев JT.JI, 2000] Многочисленные литературные данные лишь констатируют наличие возрастных изменений концентраций низко-и высокомолекулярных эндогенных соединений в органах и тканях организма человека и животных, при этом наблюдения авторов фрагментарны и часто противоречат друг другу В этом отношении недостаточно изучена возрастная динамика основных биополимеров межклеточного матрикса - белков и гетереполисахаридов (гликозаминогликанов) [Зимницкий А Н, Башкатов С А

2004, Кольман Я, Рем К Г , 2000] По данным физиологических и биохимических исследований, скорость старения организма обратно пропорциональна эффективности функционирования его печени [Рашидов Н Р, 2002] С состоянием печени напрямую связан и обмен других биополимеров -липопротеинов, регулирующих биосинтез стероидных гормонов, модулирующих, в свою очередь, интенсивность биосинтеза нуклеиновых кислот (НК) [Королевская ЛИ, Серова ЛД, Лукьянчиков ВС и др, 2003, Кустаров ВII, Черниченко И И , 2003, Коркуиасо О В , Чеботарев Д Ф , Калиновская Е Г , 1993, Конопля Е Ф., Лукша Г М , 1991] На сегодняшний день традиционно считается, что гетерополисахаридные фрагменты протеогликанов межклеточного матрикса синтезируются нематрично в эндоплазматическом ретикулуме клетки, однако эта теория объясняет далеко не все известные из научной литературы феномены [Зимницкий А Н , Башкатов С А , 2005, Зимина Н П , Рыкова В И , Архипов И А , 1992] Общепризнанная рациональность природных процессов, их универсальность неизбежно наводит на мысль об универсальности и биосинтеза всех биополимеров с участием НК Таким образом, получается своеобразное диалектическое единство матрично-зависимого обмена белков, липопротеинов, протеогликанов и НК, имеющее место в организме человека и дестабилизирующееся с возрастом Не вызывает сомнений, что ключевую роль в этих событиях играет печень, являясь крупнейшим синтетическим органом, а

потому главной ареной, на которой развертывается патофизиологическая трагедия старения человека В связи со сказанным, основной гипотезой настоящей работы являлось предположение о том, что существуют многочисленные функциональные связи между показателями обмена белков, липопротеинов, гликозаминогликанов, состоянием печени, кожи и возрастом человека, что биосинтез всех биополимеров происходит с участием нуклеиновых кислот В качестве одного из объектов исследования мы намеренно выбрали женскую популяцию, так как, на наш взгляд, характеристика «практически здоровые лица» в старческом возрасте больше соответствует женщинам

Целью настоящей работы является экспериментальное обоснование сопряженности обмена биополимеров с процессами старения и разработка патогенетически обоснованных подходов к их коррекции с позиций биохимии Для достижения поставленной цели представлялось необходимым решить следующие задачи

1 Изучить фракционный состав белков, липопротеинов и гликозаминогликанов в сыворотке крови женщин различного возраста

2 Определить количество белка, ПК и фракционный состав гликозаминогликанов в коже женщин различного возраста

3 Оценить состояние печени женщин различного возраста по активности ферментов аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, уровню билирубина и показателю тимоловой пробы в сыворотке крови

4 Изучить профили элюции полисахаридов печени крыс и маркерных полисахаридов (амилозы и полиуронидов) на ВЕАЕ-целлюлозе в градиенте ионной силы КаС1

5 Уточнить внутриклеточную локализацию биосинтеза ГАГ с использованием в качестве радиоактивного маркера иС-глюкозы, меченной по С]

6 Рассчитать уравнения регрессии, описывающие зависимость между возрастом и изученными биохимическими показателями

7 Оценить на экспериментальных моделях репаративную активность плацентарных гликозаминогликанов

8 Разработать новую лабораторную методику совместного электрофоретического определения фракционного состава белков и липопротеинов сыворотки крови Научная новизна. Проведенные исследования позволили существенно расширить представления о биохимических механизмах, лежащих в основе старения, выявить в коже обследованных женщин закономерности возраст-зависимого снижения концентрации гликозаминогликанов (ГАГ) при стабильном содержании белка и НК При этом с возрастом отрицательно коррелировали как суммарные ГАГ, так и их сульфатированная и несульфатированная фракции В сыворотке крови испытуемых были выявлены линейные корреляционные связи между показателями обмена белков, липопротеинов, гликозаминогликанов, биохимических показателей, характеризующих физиологическое состояние печени и возрастом обследованных женщин Наиболее сильные корреляции из выявленных были- между возрастом и уровнем альбуминов, Р-глобулинов, а1-липопротеинов, гепарансульфатов, аланинаминотрансферазы в сыворотке крови Представляется важным, что коррелирующие показатели, по своей сути, характеризуют фактор старения организма, включающий в себя нарушение обмена стероидов, очевидно модулирующий транскрипционную активность ДНК, следствием которой является нарушение обмена гликозаминогликанов Также на основании полученных экспериментальных данных уточнена внутриклеточная локализация биосинтеза гликозаминогликанов, доказана его связь с ядерным аппаратом клетки Проведена оценка репаративной активности плацентарных гликозаминогликанов Предложено их использование в качестве биохимических корректоров старения

белков и липопротеинов сыворотки крови, которая внедрена в производственный процесс предприятия «Астра» (г Уфа), выпускающего приборы для медицинской диагностики Обоснована возможность разработки новых подходов к созданию препаратов-геропротекторов на основе гетерополисахаридов из класса гликозаминогликанов

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Уфа, 2006), на III Международном форуме по эстетической медицине (Москва, 2004), на IV Международной конференции по профилактике старения (Санкт- Петербург, 2003), на II Международном конгрессе по косметологии и эстетической медицине (Москва, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ Структура и объем работы. Диссертация изложена на 181 странице, содержит 79 таблиц, 40 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов, предметов и методов исследования, 4 глав результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 260 источников, из которых 132 отечественных и 128 иностранных авторов, приложения

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследовали кожу женщин (кадаверные ткани) различного возраста Образцы кожи, весом 0,5-1,0 г консервировали в системе этиловый спирт глицерин в соотношении 1 1, хранили при +4° С Перед проведением исследований, образцы подвергали щелочному гидролизу 2М NaOH в течение 1 часа при 60°С, нейтрализовали и определяли общий белок по Лоури [Lowry О Н et al, 1951], далее проводили гель-фильтрацию на сефадексе G-25 для отделения биополимеров, которые затем подвергали анионообменной хроматографии на DEAE-целлюлозе В водной и 0Д5М фракции спектрофотометрически определяли НК [Мешкова НП, Северин С Е, 1979], в 0,5М и 2,ОМ фракциях -гликозаминогликаны (ГАГ) по реакции Дише [Зимницкий А Н, Башкатов С А , 2004] В образцах сыворотки крови женщин различного возраста определяли

общий белок по Лоури, белковые фракции альбумин, а1-, а2-, Р- и у- глобулины, липопротеиновые фракции а-, а1-, пре(3-, Р- липопротеины методом электрофореза на АДП [Петренко Е Г , Башкатов С А , Зимницкий А Н , 2006] Активность АлАТ, АсАТ, тимоловые пробы, билирубин (общ) определяли стандартными методиками с применением тест-систем В печени белых неинбредных крыс исследовали фракционный состав ГАГ, динамику включения |4С-глюкозы, меченной по С| и проводили цитологические исследования с целью определения интенсивности транскрипционных процессов Для оценки ранозаживляющего действия субстанции ГАГ проводилось цитологическое исследование ран методом раневых отпечатков

В работе впервые предложена электрофоретическая методика совместного определения белковых и липопротеиновых фракций, поэтому мы приводим ее описание На ацетатцеллюлозные пленки (АЦП) наносили по 3 образца сыворотки крови в повторности Далее вели электрофорез на АЦП в 0,1М трис-гиппуратном буфере рН 8,6 при напряжении 160 В, ограничении по току 0,5 мА, напряженности поля 3,2 В/см2 в течение 60 мин После этого АЦП разрезали продольно, так чтобы каждая половина содержала все три образца Одну из половин окрашивали на белки, а другую - на липопротеины Образцы денситометрировали, обрабатывали полученную информацию с помощью программного обеспечения фирмы «Астра» (г Уфа), спектры совмещали, расставляли легко дифференцируемые границы белковых фракций, которые становились границами и липопротеиновых фракций (рис 1)

Статистическую обработку полученных данных производили с вычислением параметрических и непараметрических критериев различий, проведением корреляционного, дисперсионного и регрессионного анализов

• ■ .. ' н

V а

Рис. 1. Выделение зон лнпопротеянов согласно белковым зонам- маркерам

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ I. Возрастные изменения фракционного состава белков, лнпопротеннов, гликозаминогликанов и биохимических показателей печени в сыворотке крови женщин. В соответствии с классификациями, принятыми в геронтологии и возрастной психологии, мы распределили данные обследованных яиц по следующим возрастным градациям: ] группа (16- 30 лет), 2группа (31-45 лет), Згруппа (46-55 лет), 4группа (свыше 56 лет). В результате статистической обработки средних значений белковых фракций по месту Стьюдента выявлено, что в 4 группе по сравнению с 1 группой уровень альбуминов достоверно снижается на 14,14% (р < 0,001). Концентрация альбумина в 4 группе по сравнению со 2 группой понижается на 11,21% <р < 0,001), а по сравнению с 3 группой уменьшается на 9,84% {р < 0,001). Уровень р - глобулинов в 4 группе по сравнению с 1 группой достоверно возрастает на 13,0% (р = 0,021). Содержание

у— глобулинов в 4 группе по сравнению с 1 группой достоверно повышается на 11,89% (р = 0,011) и по сравнению с 3 группой - на 12,23% (р = 0,045), во 2 группе по сравнению с 1 группой концентрация у- глобулинов возрастает на 9,14% (р = 0,017) Достоверных различий между возрастными группами в средних значениях концентраций а1- и а2- глобулинов не выявлено

В результате статистической обработки значимые различия выявлены в концентрации ос- липопротеинов, которая в 3 группе увеличена по сравнению со 2 группой на 41,96% (р = 0,039) Также обнаружено, что уровень а1-липопротеинов в 3 группе возрастает по сравнению с 1 группой на 36,53% (р = 0,040), а в 4 группе по сравнению с 1 группой повышается на 51,77%(р= 0,024) Между средними значениями концентраций пре^- и [3- липопротеинов в разных возрастных группах статистически значимых различий не выявлено, как и статистически значимых различий средних значений показателей ГК, ХС, ГС, ГАГ, тимоловых проб, билирубина, АлАТ, АсАТ

Для изучения связей между исследуемыми показателями нами был рассчитан коэффициент эмпирической корреляции Пирсона (табл 1 1-13) Таблица 1.1. Коэффициенты эмпирической корреляции Пирсона между

показателями фракционного состава белков сыворотки крови н возрастом

Возр.,г Альбум а1 -глоб а2-глоб р- глоб у- глоб коэф а1/р

Возраст,г 1,00 -0,25 0,03 0,08 0,21 0,15 -0,07

Альбум -0,25 1,00 0,07 0,34 0,34 0,12 -0,13

а1 -глоб 0,03 0,07 1,00 0,36 0,21 -0,10 0,84

а2 -глоб 0,08 0,34 0,36 1,00 0,53 0,20 0,03

Р- глоб 0,21 034 0,21 0,53 1,00 0,07 -0,28

7-глоб 0,15 0,12 -0,10 0,20 0,07 1,00 -0,19

коэф а 1/(3 -0,07 -0,13 0,84 0,03 -0,28 -0,19 1,00

Таблица 1.2. Коэффициенты эмпирической корреляции Пирсона между показателями фракционного состава липопротеинов сыворотки крови и

Возраст,г а- лп а1-лп пре р- лп Р- лп

Возраст,г 1,00 -0,08 0,30 0,08 -0,03

а- лп -0,08 1,00 0,16 -0,46 -0,71

а1-лп 0,30 0,16 1,00 0,04 -0,20

пре Р- лп 0,08 -0,46 0,04 1,00 -0,25

р- лп -0,03 -0,71 -0,20 -0,25 | 1,00

Таблица 1.3. Коэффициенты эмпирической корреляции Пирсона между показателями фракционного состава гликозаминогликанов сыворотки

крови и воз растом

Возраст,г ГК ХС ГС ГАГ

Возраст,г 1,00 0,18 -0,22 -0,30 -0,15

ГК 0,18 1,00 0,00 0,04 0,26

хс -0,22 0,00 1,00 0,82 0,91

ГС -0,30 0,04 0,82 1,00 0,84

ГАГ -0,15 0,26 0,91 0,84 1,00

Были выявлены слабая отрицательная корреляция между возрастом и альбуминами (г=-0,25), слабая положительная корреляция между возрастом и р -глобулинами (г=0,21) (табл 1 1), умеренная положительная корреляция между возрастом и а1 -липопротеинами (г=0,3) (табл 1 2), слабая отрицательная корреляция между возрастом и ГС (г=-0,3) (табл 1 3) Для повышения статистической надежности сделанных нами выводов мы рассчитали также непараметрические коэффициенты ранговой корреляции Спирмена, не предъявляющие требований к соответствию распределения данных нормальному закону Были обнаружены отрицательная умеренная корреляция между возрастом и альбуминами (г=-0,31) и положительная слабая корреляция между возрастом и (3- глобулинами (г=0,27) (табл 1 4)

Таблица 1.4. Ранговые коэффициенты корреляции Спирмена между показателями фракционного состава белков сыворотки крови и возрастом

Возр.г Альбу м а1 -глоб сс2-глоб Р- глоб у- глоб коэф а1/р

Воз р. г 1,00 -0,31 0,13 0,14 0,27 0,11 -0,06

Альбум -0,31 1,00 -0,19 -0,21 -0,13 -0,24 -0,16

а1 -глоб 0,13 -0,19 1,00 0,42 0,39 0,01 0,62

а2 -глоб 0,14 -0,21 0,42 1,00 0,41 0,05 0,02

р- глоб 0,27 -0,13 0,39 0,41 1,00 -0,13 -037

у-глоб 0,11 -0,24 0,01 0,05 -0,13 1,00 0,04

Коэф а1/р -0,06 -0,16 0,62 0,02 -0,37 0,04 1,00

Коэффициенты ранговой корреляции Спирмена, вычисленные для

липопротеиновых фракций, показали слабую положительную корреляцию между возрастом и концентрацией а1- липопротеинов (г=0,26) (табл 1 5), а также

положительную корреляцию средней силы между возрастом и АлАТ (г=0,53) (табл 1 6)

Таблица 1.5. Ранговые коэффициенты корреляции Спирмена между показателями фракционного состава липопротеинов сыворотки крови и

Возраст,г а- лп а1-лп пре Р- лп Р- лп

Возраст,г 1,00 -0,09 0,26 0,17 -0,01

а- лп -0,09 1,00 0,23 -0,43 -0,75

а1-лп 0,26 0,23 1,00 0,05 -0,22

пре р- лп 0,17 -0,43 0,05 1,00 -0,08

р- лп -0,01 -0,75 -0,22 -0,08 1,00

Таблица 1.6. Ранговые коэффициенты корреляции Спирмена между показателями «печеночных проб» сыворотки крови и возрастом

Возраст,г Тимол АсАТ АлАТ Билир (общ)

Возраст,г 1,00 0,25 0,31 0,53 0,17

Тимол 0,25 1,00 0,54 0,42 0,70

АсАТ 0,31 0,54 1,00 0,78 0,76

АлАТ 0,53 0,42 0,78 1,00 0,59

Билир (общ) 0,17 0,70 0,76 0,59 1,00

Для математического описания статистически значимых линейных корреляционных зависимостей были рассчитаны уравнения линейной регрессии

1)[Альбумины] = 51,6015 - 0,1052*возраст

2)[Бета- глобулины] = 12,1817 + 0,0411*возраст

3)[Альфа1-липопротеины] = 4,5483 + 0,0859*возраст

4)[ГС] = 4,4198 - 0,0413*возраст

5) [АлАТ] =-0,0783 + 0,0044*возраст

Влияние возраста на уровень альбуминов, (3- глобулинов, сс1-липопротеинов, АлАТ в сыворотке крови женщин также было доказано с помощью однофакторного дисперсионного анализа (Р - критерий Фишера, р -вероятность нулевой гипотезы) Были получены следующие результаты

1 Возраст уменьшал уровень альбуминов Р (52,113)= 1,6082, р=0,01882

2 Возраст увеличивал концентрацию Р- глобулинов Р (52,113)=1,3716, р=0,08349 (тенденция влияния)

3 Возраст увеличивал концентрацию а1- лп Р (38,39)=! ,7412, р=0,04438

4 Возраст увеличивал активность АлАТ F (23,6)=3,6009, р=0,05832 (тенденция влияния)

Многие авторы, изучавшие в разные периоды белковый состав сыворотки крови [Маршалл В Дж , 2002, Пименов ЮС, 1993, Нагорный ЛВ, Никитин В И , Буланкин И И, 1963, Коркушко О В , 1963, Кипшидзе Н Н , Ткешелашвили Л К, Салуквадзе НС, 1963, Агапова ЕН, Крутовская OB, Михалев ИД, Ткаченко А М , Фаунова В И , Денисова Т П , 1973; Ангелова-Гатева П , Стойнев Г, Иванова Е, 1972, Rosenthal Р, Pincus М, Fink D ,1982], признают, что с возрастом содержание альбумина снижается, и, вероятнее всего, это связано с уменьшением его синтеза в печени Большинство авторов отмечают также как относительное, так и абсолютное увеличение уровня глобулинов Сведения относительно содержания сывороточного билирубина тоже противоречивы Так, Bitar MS и Shapiro В Н [1987] сообщают о повышении концентрации билирубина у старых крыс Ряд авторов указывают на неизменность его содержания в крови при старении [Gergely J , Kulcsar А , 1992, Chan-Yeng М, Ferreira Р , Fröhlich J , Schulzer M , Tan F , 1981, Kampmann J P , Sinding J , MollerJorgensen I, 1975, Пименов ЮС, 1993] Мы дополняем эти данные новыми сведениями, касающимися биохимических механизмов старения, и, анализируя полученные результаты, констатируем, что существует связь между возрастом и такими биохимическими показателями, как содержание альбуминов, ß-глобулинов, al-липопротеинов, ГС и активности АлАТ в сыворотке крови женщин Предлагаем новый подход к прогнозированию интенсивности процессов старения по показателям белкового, липопротеинового и гликозаминогликанового обменов путем определения их фракционного состава в сыворотке крови с последующей подстановкой результатов в соответствующие уравнения линейной регрессии

2. Возрастные изменения содержания глнкозаминоглнканов, белка и нуклеиновых кислот в коже женщин. Исследовали 49 образцов кожи женщин (кадаверные ткани) в возрасте от 15 до 90 лет Средние значения и стандартные отклонения биохимических показателей, а также количество исследованных образцов представлены в таблице 2 1

Таблица 2.1. Средние значения показателей определяемых в коже и количество обследованных женщин (п) различного возраста_

Показатель п Среднее значение Стандартное отклонение

Возраст, г 49 61,04 18,69

Белок мг/г тк 49 70,51 22,98

ГК мкг/г тк 48 59,98 42,40

СГАГ мкг/г тк 48 40,81 40,94

ГАГ мкг/г тк 47 96,81 66,28

ДНК мкг/г тк 21 429,24 170,92

Мы достаточно условно распределили данные по возрастным градациям до 50 , 50-60 лет , 60-70 лет , 70-80 лет и св 80 лет Было установлено что уровень ГК в коже в возрастной группе 70-80 лет по сравнению с возрастной группой 50-60 лет уменьшался на 159,2% (р=0,001) и по сравнению с возрастной группой до 50 лет снизился на 171,5% (р=0,013) Концентрация ГК понижалась в возрастной группе 60-70 лет по сравнению с возрастной группой 50-60 лет на 77,14% (р=0,015) и уровень ГК уменьшался в возрастной группе св 80 лет по сравнению с возрастной группой 60-70 лет на 68,03% (р=0,023) Для СГАГ достоверные различия средних значений выявлены между возрастными группами до 50 лет и 70-80 лет -концентрация СГАГ уменьшалась на 187,1% (р=0,004) Уровень СГАГ в возрастной группе 70-80 лет падал по сравнению с возрастной группой 50-60 лет на 226,4% (р=0,031) Концентрация ГАГ в возрастной группе 70-80 лет уменьшалась на 147,6% (р=0,002) по сравнению с возрастной группой до 50 лет В возрастной группе 70-80 лет уровень ГАГ снижался на 184,67% (р=0,002) по сравнению с возрастной группой 50-60 лет В группе 70-80 лет концентрация ГАГ уменьшалась на 67,82% (р=0,036) по сравнению с возрастной группой 60-70 лет Достоверные различия в содержании белка имелись только между группами 50-60 лет и 70-80 лет (р=0,011) Его уровень понижался с возрастом на 26,96% В средних значениях ДНК, в разных возрастных группах, достоверных различий не выявлено

Для изучения связей между изученными показателями нами были рассчитаны коэффициенты эмпирической корреляции Пирсона (табл 2 2)

Таблица 2.2. Коэффициенты эмпирической корреляции Пирсона между

Возраст, г Белок ГК СГАГ ГАГ ДНК

Возраст, г 1,00 -0,41 -0,58 -0,53 -0,66 0,04

Белок -0,41 1,00 0,36 0,33 0,37 -0,07

ГК -0,58 0,36 1,00 0,48 0,91 0,33

СГАГ -0,53 0,33 0,48 1,00 0,79 0,13

ГАГ -0,66 0,37 0,91 0,79 1,00 0,29

ДНК 0,04 -0,07 0,33 0,13 0,29 1,00

Вычисление коэффициентов корреляции Пирсона выявило отрицательную корреляцию средней силы между возрастом и ГК (г=-0,58), возрастом и СГАГ (г=-0,53), возрастом и ГАГ (г=-0,66) Для повышения статистической надежности сделанных нами выводов мы рассчитали также непараметрические коэффициенты ранговой корреляции Вычисление коэффициентов ранговой корреляции Спирмена подтвердило наличие отрицательной умеренной корреляции между возрастом и ГК (г=-0,33), отрицательной корреляции средней силы между возрастом и СГАГ (г=-0,57), отрицательной умеренной корреляции между возрастом и ГАГ (г=-0,43)(табл 2 3)

Таблица 2.3. Ранговые коэффициенты корреляции Спирмена между

Возраст, г Белок ГК СГАГ ГАГ ДНК

Возраст, г 1,00 -0,19 _, -0,33 -0,57 -0,43 0,03

Белок -0,19 1,00 0,34 0,24 0,32 0,26

ГК -0,33 0,34 1,00 0,73 0,93 0,23

СГАГ -0,57 0,24 0,73 1,00 0,89 0,09

ГАГ -0,43 0,32 0,93 0,89 1,00 0,16

ДНК 0,03 0,26 0,23 0,09 0,16 1,00

Для математического описания выявленных статистически значимых линейных корреляционных зависимостей между изученными показателями были рассчитаны регрессионные уравнения

1)[ГК]= 109,5264 - 0,8078*возраст

2)[СГАГ] = 85,9514 - 0,7253*возраст

3)[ГАГ] = 172,2122 - 1,2166*возраст

Влияние возраста на уровень ГК в коже женщин также было доказано однофакторным дисперсионным анализом (Р - критерий Фишера, р — вероятность

нулевой гипотезы) с возрастом уровень ГК в коже снижается (тенденция влияния) F (28,18)= 1,9878, р = 0,06582

Рядом авторов в стареющей коже био- и гистохимически описывалось уменьшение концентрации гиалуроновой кислоты [Juhlin L, 1997, Ghersetich I, Lotti Т, Campanile G, Grappone С, Dini G, 1994] и увеличение уровня сульфатированных ГАГ [Слуцкий ЛИ, 1969] Согласно же Meyer LJ, Stern R (1994), с возрастом не изменяется ни количество, ни размер этого полимера, однако усиливается связь гиалуроновой кислоты с белками По данным Willen M D, SorreJ JM, Lekan CC, Davis BR, Caplan AI (1991), содержание некоторых гликозаминогликанов в ходе старения независимо варьирует в каждом из слоев кожи Linder J , Schonrock Р , Nassgen А , Schmiegelow Р (1986) показали значительное возрастзависимое снижение концентрации ДНК, а также активности Р-глюкуронидазы, p-N-ацетилглюкозаминидазы в коже крыс Такое снижение активности ферментов, деградирующих ГАГ является, вероятно, условием замедления общего метаболизма этих биополимеров

Проведенные нами исследования позволили заключить, что показатели содержания в коже белка и ДНК достаточно стабильны и не изменяются с возрастом В то же время можно с высоким уровнем достоверности констатировать, что с возрастом в коже женщин уменьшается уровень ГК, СГАГ и ГАГ в соответствии с приведенными уравнениями линейной регрессии Эти биохимические показатели, по-видимому, можно использовать в качестве маркеров для определения биологического возраста

3. Внутриклеточная локализация биосинтеза гликозаминогликанов Поскольку ГАГ, по данным ряда авторов, непосредственно причастны к процессу возрастных изменений в тканях [Зимницкий А H , Башкатов С А , 2005, Bohr V А , 2002, Bernstein Е F , Lee J , Brown D В , 2001, Bromarczyk-Dyla G , Joss-Wichman EJ, 2001, Ghersetich I, Lotti T, Campanile G, 1994] представлялось важным исследовать механизм инициации их синтеза в клеточных структурах, поскольку в данном вопросе нет ясности и по сегодняшний день На рисунке 3 1. представлен профиль элюции полисахаридов печени крыс и маркерных полисахаридов (амилозы картофеля и полиуронидов овса) на DEAE-целлюлозе в

градиенте ионной силы №С1 Маркер гомогликана амилозы, состоящий из остатков глюкозы, снимался с колонки 0,01М ЫаС1 Первый пик гликанов печени

мкг/мл го

3020 10

-полисахарида! печени

папиуронеды

ЧГ-JW Л

'l l'H'1 t tT Г 1-Т Т-Т"ГТ-Т-Г1Т| 1111 I'ftVl I iS^rrVr-r^TTl1 гч

^ ^ ** & & £ & О J M ***

Рисунок 3.1. Профиль элюции полисахаридов печени крыс и полисаха-ридных маркеров на DEAE-целлюлозе в градиенте ионной силы NaCl

детектировался при ионной силе 0,02-0,03M NaCL. Далее до 0,15М NaCL детектировались полисахариды с большим отрицательным зарядом, чем полисахариды нейтральных Сахаров (НС), но меньшим, чем фракция 0,2 5М NaCL, представленная ГК В 0,7М NaCL вымывались ХС, а в 1,5М NaCL вымывались ГС Высоко заряженные полиурониды овса снимались с хроматографической колонки при максимальной ионной силе 1,2М NaCL Результаты количественного определения уроновых кислот, гексозаминов и НС в хроматографических фракциях представлены в таблице 3 1 В 0,25М, 0,7М и 1,5М фракциях соотношение уроновые кислоты гексозамины составляло примерно 1 1, что характерно для ГК, ХС и ГС и согласуется с литературными данными 0Д5М фракция имеет три составные части (0,02М, 0,06М, 0,15М) и представляет собой гликаны, обогащенные НС (табл 3 2)

Таблица 3.1. Содержание уроновых кислот, гексозаминов и нейтральных Сахаров во фракциях полисахаридов печени интактных крыс (мкг/мл)

Фракция

Уроновые кислоты

Гексозамины

нейтральные сахара

0,15М

34,1±0,3

2,0±0,1

48,5±0,3

0,25М 8,3±0,1 7,1 ±0,9 -

0,7М 61,5±0,7 63,7±0,6 2,1±0,2

1,5М 64,2±0,5 57,9±6,4 2 2±0 2

Таблица 3 2 Содержание нейтральных Сахаров и уроновых кислот в различных хроматографических фракциях интактных крыс (мк|/г ткани) (НС/УК) _'___

Молярность элюента Ядерная фракция Микросомальная фракция Гомогенат печени

0,02М 265±18/67±7 108± 12/52±7 128±15/67±8

0,06М 36±5/7±2 24±3 /40+6 34±6 /22±3

0,15М 20 ±3/6±2 18 ±2/5 0±6 33±5 /81±11

Ядерные олигосахариды имеют соотношение НС УК близкое к 3 1 В микросомах, как и в гомогенате печени, детектируются нейтральные олигосахариды, содержащие более одною остатка УК на трисахарид, причем количество уроновых кислот возрастает от 0,02М фракции до 0,15М в 6 раз Эти результаты свидетельствуют, что присоединение уроновой кислоты к трисахариду осуществляется, в основном, в микросомах клетки В ядрах идет присоединение только первого остатка уроновой кислоты к трисахариду

Для изучения биосинтеза полисахаридных фрагментов были проведены исследования динамики включения радиоактивно меченой глюкозы в состав цепи полисахаридов Мы пометили глюкозу как предшественник синтеза самой почисахаридной цепи ГАГ, которая является слабой, но единственно возможной меткой Следует также учитывать, что образующийся из глюкозо-6-фосфата рибозо-5-фосфат включается в состав нуклеиновых кислот (НК) Известно, что в пснтозофосфатном цикле остаток глюкозы, превращаясь в рибозу, теряет yi лерод в первом положении, который уходит в составе углекислого газа, поэтому для исключения образования радиоактивных НК в экспериментах мы применили 14С-глюкозу, меченную по Ci Максимум радиоактивности в образцах фракции 0,15М детектировался в интервале 60-75 минут после введения глюкозы крысам, в то время как «зрелые» ГАГ (фракция 0,25-1,5М) обнаруживали максимум радиоактивности к 120 минутам эксперимента (рис 3 2) Таким образом, инициация синтеза гликанов, видимо, связана с фракцией 0,15М, которая

обогащена нейтральными олигосахаридами, что согласуется с общепризнанным представлением о биосинтезе протеогликанов.

и к £

О. и

120 100 80 60 40 20 0

□ фр. 0,15М

15мин 30 мин 60 мин 120 мин 360 мин

Рисунок 3.2. Динамика достижения максимума удельной радиоактивности полисахаридов, в зависимости от времени инкубации метки в животных. За 100% принят показатель максимальной радиоактивности фракции.

Результаты проведенного корреляционное анализа (коэффициенты эмпирической корреляции Пирсона и ранговой корреляции Спирмена) также показали наличие сильных линейных связей, между структурами клеточного ядра (ДНК) и 0,15М ядерной фракцией полисахаридов печени крыс. Причем, подобных корреляций не обнаружено между показателями тотальной ДНК и фракцией олигосахаридОВ 0,15М гомогената. Фракция 0,15М олигосахаридов гомогената имела сильную корреляционную связь с количественными показателями «зрелых» поте о гл и капо в (ХС и ГС) как а гомогенате, так и в ядре. Результаты изучения включения радиоактивной глюкозы во фракции ядер и микросом клетки (рис.3.3) показывают, что процесс накопления глюкозы на старте эксперимента (к концу первого часа) идет интенсивнее в ядерных структурах. Ко второму часу микросомы удерживали высокие показатели присутствия радиоактивной глюкозы, видимо, за счет оттока из ядра радиоактивных олигосахаров и формирования цепи ГАГ. Результат трехчасовой инкубации метки в организме животных свидетельствовал об увеличении

содержания радиоактивных сахаридов в структурах клеточного ядра, скорее всего, за счет поступления «зрелых» ГАГ из эндоплазматического ретикулума. Таким образом, представляется вероятным, что синтез гликозидной час ти г 70 ■

ё 60 (U

| 50 о

о 40 $

(Ú

s 30 х

2 20 а

■е

с ю

- Р Ядерная ■ МиШосомальная

т rh 1

i -

У 1

15мин 30 мин 60 мин 120 мин 360 мин Рис. 3.3. Динамика накопления радиоактивной глюкозы в ядерной и микросома лыфЙ фракций печени крыс (ерш) в %. За 100% принят показатель суммы радиоактивности отдельных фракции по четырем временным точкам эксперимента

протеогликанов в клетке носит ступенчатый характер: фрагменты ГАГ, представляющие собой связующий тетрасахарид, синтезируются в структурах, ассоциированных с клеточным ядром, на что указывают и результаты корреляционного анализа. Затем они поступают в эндоплазматический ретикулум клетки, где после формирования основной цепи гликана и цикла биохимических модификаций из них формируются протеогликаны Синтез собственно цепи ГЛГ осуществляется структурами Э11Р. Далее «зрелые» ГАГ частично поступают в ядро, но, в основном, экспортируются из ЭПР в межклеточное пространство для формирования межклеточного матрикса, Эти результаты согласуются с данными многих исследований, которые констатируют факт поступления в ЭПР и аппарат Г'ольджи корового белка уже с фрагментом связующего тетрасахарида (ксилоза-галактоз а-гал актоза-уроновая кислота) и могут служить косвенным подтверждением предположения причастности ядерной НК к процессу синтеза универсального тетрасахарида протеогликанов.

4. Влияние плацентарных гликозамнногликанов на процессы репаративной регенерации

4.1. Качественная оценка влияния плацентарных ГАГ на репаратнвную регенерацию кожи. У крыс - самок, разделенных на 3 группы (1-ая группа (п=15) - нелеченые животные, 2-ая группа (п=15)- ежедневно получала плацебо, 3-я группа (п=15)- ежедневно получала субстанцию гликозамнногликанов в виде 0,1% мази), на освобожденном от шерсти участке кожи спины межлопаточной области вырезали лоскут кожи размером 1x1 см Материалы для гистологического исследования забирали на 3, 7, 14, 21 и 30 сутки эксперимента в каждой группе у 3 крыс, которые в указанные сроки забивались декапитацией В ходе опыта проводилось цитологическое исследование ран методом раневых отпечатков Полученные в эксперименте данные свидетельствуют, что нанесение на кожную рану крысам субстанции ГАГ стимулирует процессы репаративной регенерации, ускоряя образование многослойного плоского эпителия, коллагеновых волокон, пролиферацию волосяных фолликулов, полностью восстанавливая нормальную структуру поврежденной кожи

4.2. Количественная оценка влияния плацентарных ГАГ на репаративную регенерацию кожи. На модели резаных кожных ран (регистрируя в динамике уменьшение их площади) нами проводилась оценка терапевтической эффективности 0,1% мази ГАГ на вазелин- ланолиновой основе и препарата сравнения «солкосерил» Препараты наносили ежедневно в течение 21 суток Полученные результаты приведены в таблице 4 2 1

Таблица 4.2.1 Репаративная регенерация кожных ран у крыс при лечении ГАГ и солкосерилом

Препарат Исходная площадь ран, мм2 Процент заживления ран на 3-21 сутки эксперимента

3 сутки 7 сутки 10 сутки 14 сутки 21 сутки

Контроль (п=8) 18,7±1,3 26,2±2,7 32,4±2,0 # 53,5±4,5 # 79,0±4,9 # 100

Солкосер ил (п=8) 20,4±0,9 34,3±3,1 50,1±3,8* 79,2±5,1* 92,4±5,9* 100

ГАГ (п=8) 21,0± 1,1 46,5±2,9*# 87,0±2,8*# 93,7±4,5*# 100*

Примечание: * - различия с группой «контроль» статистически достоверны, # -различия с группой «солкосерил» статистически достоверны

С целью определения интенсивности транскрипционных процессов НК в ядрах клеток, окрашенных красителем «акридиновый оранжевый» (по спектру флуоресценции), при проведении эксперимента шел забор материала для цитологических исследований Рассчитанные коэффициенты а, представляющие собой отношение концентрации РНК к ДНК (а = [РНК]/[ДНК]), приведены в таблице 4 2 2

Таблица 4.2.2. Транскрипционная активность ДНК (коэффициенты а) ядер базальных эпидермоцитов

Препарат Значение коэффициента а на 3-21 сутки эксперимента

3 сутки 7 сутки 10 сутки 14 сутки 21 сутки

Норма (интактные) 0,50+0,06 0,50+0,04 ♦ 0,49±0,04* 0,52+0,04 # 0,51+0,04 #

Контроль (нелеченные) 0,47±0,04 0,51±0,05 ♦ 0,5110,04* 0,69+0,05 *♦ 0,71+0,05 *

Солкосерил 0,54±0,05 0,87±0,06 0,91+0,08 *# 0,90+0,08 *# 0,6710,05 *

ГАГ 0,59+0,06 0,8610,07 0,8010,07 *# 0,54+0,07 #♦ 0,5310,04* #

Примечание: * - различия с группой «норма» статистически достоверны, # -различия с группой «контроль» статистически достоверны, ♦ - различия с группой «солкосерил» статистически достоверны

Результаты, полученные нами, показывают, что повышенная транскрипционная активность в клетках базальных эпидермоцитов в период завершения эпителизации раневой поверхности у животных групп «контроль» и «солкосерил» может, благодаря усиленной продукции коллагена, привести к образованию грубой рубцовой ткани Этого недостатка лишено фармакологическое действие препарата ГАГ, стимулирующего транскрипционные процессы только на ранних этапах рспаративной регенерации и обеспечивающего нормальные значения коэффициента а к моменту завершения процесса эпителизации

4 3. Влияние плацентарных ГАГ на транскрипционную активность фибробластов, лимфоцитов и моноцитов в экспериментах in vitro. Нами также

изучалось влияние плацентарных ГАГ в концентрациях 0,05, 0,10 и 0,20 мг/мл на транскрипционную активность фибробластов, лимфоцитов и моноцитов человека Время инкубации составляло 24 часа Результаты исследования приведены в таблице 4 3 1

Таблица 4.3 /.Транскрипционная активность (коэффициент а) ДНК ядер

Концентрация ГАГ Значение коэффициента а

Фибробласты Лимфоциты Моноциты

Интактные клетки (п=15) 0,64±0,07 0,61±0,05 0,60+0,06

0,05 мг/мл (п-15) 0,77±0,08 0,97±0,08* 0,87±0,09*

0,10 мг/мл (п=15) 1,05±0,09* 1,27+0,10* 1,09±0 10*

0,02 мг/мл (п=15) 1,03+0,08* 1,31+0,11* 1,05+0,12*

Примечание: * - различия с группой «интактные клетки» статистически достоверно

Г АГ в концентрации 0,05 мг/мл увеличивал транскрипционную активность фибробластов, лимфоцитов и моноцитов соответственно в 1,20, 1,59 и 1,45 раза ГАГ в концентрации 0,10 мг/мл повышал транскрипционную активность указанных клеток соответственно в 1,64, 2,08 и 1,82 раза Дальнейшее увеличение концентрации ГАГ до 0,20 мг/мл в клеточных культурах не обеспечивало последующего повышения транскрипционной активности Таким образом, наибольшее увеличение синтеза РНК обеспечивалось ГАГ в концентрации 0,10 мг/мл

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Основной задачей нашей работы являлось уточнение функциональных связей между показателями основных классов биополимеров, присутствующих в организме человека, и его возрастом Для решения этой задачи мы выбрали в качестве объекта исследования следующие биополимеры нуклеиновые кислоты, белки, липопротеины и гликозаминогликаны, являющиеся функционально важными фрагментами протеогликанов При определении липопротеинов, электрофоретические методики, применяемые в настоящее время, дают достаточно большое стандартное отклонение получаемых значений из-за отсутствия четких границ между фракциями этих биополимеров [Ларский ЭГ., 1971, Галь Э , Медьеши Г , Верецкеи Л , 1982, Титов В Н , Амелюшкина В А.,

1994] Для решения этой проблемы мы впервые разработали электрофоретическую методику для совместного определения белковых и липопротеиновых фракций в сыворотке крови [Пефенко ЕГ, Башкатов С А, Зимницкий А Н ,2006] Основной идеей, реализованной в этом методе, было использование пробега стандартных белковых фракций в качестве маркеров положения основных классов липопротеинов

Также нужно отметить, что полученные результаты, связанные со снижением с возрастом в органах и тканях организма концентрации гликозаминогликанов и, в частности, гиалуроновой кислоты, позволяют обосновать целесообразность дальнейших исследований, направленных на изучение этого соединения в качестве геропротектора, что имеет существенное значение для геронтологии и фармакологии В пользу такого заключения свидетельствуют полученные нами данные по изучению фармакологических эффектов нанесения на кожную рану крысам субстанции гликозаминогликанов Отмечалась стимуляция процессов репаративной регенерации ускорялось образование многослойного плоского эпителия, коллагеновых волокон, пролиферация волосяных фолликулов, в итоге полностью восстанавливалась нормальная структура поврежденной кожи Параллельные цитологические исследования продемонстрировали увеличение транскрипционной активности клеточных ядер фибробластов, лимфоцитов и моноцитов под воздействием плацентарных гликозаминогликанов В этой связи можно указать на то, что если рассматривать процесс старения с позиций патофизиологии, то представляется вероятным, что плацентарные ГАГ будут стимулировать репаративные процессы и при этой патологии, то есть проявлять антагонизм в отношении старения органов и тканей

ВЫВОДЫ

1 Установлено, что с возрастом в организме человека неизбежно возникают нарушения обмена биополимеров, которые выражаются в изменении фракционного состава гликозаминогликанов в коже и сыворотке крови, в изменении фракционного состава белков и липопротеинов в сыворотке

крови, что сопровождается отклонением от нормы биохимических показателей, характеризующих физиологическое состояние печени

2 Разработан новый подход к оценке биологического возраста человека путем применения в качестве дополнительного критерия результатов расчетов по уравнениям линейной регрессии между показателями фракционного состава биополимеров сыворотки крови и паспортным возрастом испытуемого

3 При уточнении локализации биосинтеза гликозаминогликанов с применением С14-глюкозы, меченной по С|, установлено, что биосинтез гликозаминогликанов сопряжен с ядерным аппаратом клетки

4 Предложена схема накожного применения гликозаминогликанов, позволяющая эффективно стимулировать репаративную регенерацию

5 Разработана новая электрофоретическая методика совместного определения белковых и липопротеиновых фракций в сыворотке крови

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Рекомендуется внедрение в практику научно-исследовательских и

клинических лабораторий новой электрофоретической методики совместного определения белковых и липопротеиновых фракций в сыворотке крови

2. Рекомендуется проведение фармакологических исследований, направленных на внедрение в клиническую практику препаратов содержащих плацентарные ГАГ в концентрации 0,10 мг/мл

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Зимницкий А Н, Башкатов С А, Петренко Е.Г., Хуснутдинова С Б

Возрастные изменения содержания гликозаминогликанов в коже у женщин

(Сообщение I) // Биомедицинская химня.-2004.-Т.50.-Вып. 3.-С.309-313.

(объем - 0,3 п л , доля авторского участия 60%)

2 Зимницкий А Н, Башкатов С А, Петренко Е.Г., Хуснутдинова С Б

Возрастные изменения содержания гликозаминогликанов в коже у женщин

(Сообщение II) II Биомедицннская химия.-2004.-Т.50.-Вып. З.-С. 493-497.

(объем - 0,3 п л , доля авторского участия 60%)

3 Зимницкий А Н, Башкатов С А, Петренко Е.Г., Хуснутдинова С Б Сопоставление возрастной динамики фракционного состава белков сыворотки крови у женщин с аналогичными показателями при беременности // Биомедицннская химия.-2004.-Т.50.-Вып. 5.-С.440-445. (объем - 0,3 п л, доля авторского участия 60%)

4 Зимницкий А Н , Башкатов С А , Хуснутдинова С Б , Петренко Е.Г., Ерофеева О.Е Содержание и метаболизм гликозаминогликанов в органах и тканях белых крыс различного возраста // Биомедицинская химия.-2004.-Т.50.-Вып.6. С.592-599 (объем - 0,5 п л , доля авторского участия 60%)

5 Петренко Е.Г, Башкатов С А, Зимницкий А Н, Шаехмулина А Р Использование белковых фракций в качестве маркеров при совместном электрофоретическом определении белков и липопротеинов сыворотки крови /Тезисы всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины»- Уфа, 2006 -С84-86 (объем - 0,2 п л , доля авторского участия 60%)

6 Зимницкий А Н, Башкатов С А, Петренко Е.Г., Хуснутдинова С Б Возрастные изменения фракционного состава белков в сыворотке крови женщин // Парафармацевтика -М ,2004 -Т 16 -№1 -С 25-26 (объем - 0,15 п л , доля авторского участия 50%)

7 Зимницкий А Н, Башкатов С А, Петренко Е.Г., Колмакова Е Ф Роль плацентарной косметики «Плазан» в anti-age терапии / III Международный форум по эстетической медицине Сб науч тр Актуальные вопросы дерматокосметологии -М , 2004 -С 94 (объем - 0,08 п л , доля авторского участия 50%)

8 Зимницкий А Н, Башкатов С А, Петренко Е.Г. Плацентарные гликозаминогликаны в anti-age терапии / Тезисы II международного конгресса по косметологии и эстетической медицине -М ,2003 -С28 (объем - 0,08 п л , доля авторского участия 50%)

Автор глубоко благодарен доктору биологических наук, профессору

Башкатову Сергею Александровичу за неоценимый вклад, внесенный на

всех этапах выполнения работы.

Подп к печ 13 04 2007 Объем 1.5 п л Заказ № 96 Тир 100 экз

Типография МПГУ

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Петренко, Елена Геннадьевна

Список принятых сокращении.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Современные теории старения организма.

1.1.1. Генетическая теория старения.

1.1.2. Свободнораднкальная теория старения.

1.1.3. Элевационная теория старения.

1.1.4. Иммунологическая теория старения.

1.2. Биохимические изменения при старении в органах и тканях.

1.2.1. Возрастная динамика биохимических показателей сыворотки крови.

1.2.2. Возрастная динамика биохимических показателей кожи.

1.2.3. Возрастная динамика биохимических показателей печени.

1.3. Профилактика старения фармакологическими средствами.

1.3.1. Современные представления о геропротекторах.

1.3.2. Современные представления о биохимических механизмах синтеза гликозамииогликанов и протеогликанов.

1.3.3.Протеогликаны и ГАГ как потенциальные геропротекторы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Оценка биологического возраста человека на основе анализа динамики содержания биополимеров в коже и сыворотке крови"

Актуальность работы. На сегодняшний день не существует однозначного мнения о биохимических механизмах старения и их регуляции [Анисимов В.Н., 2000, 2003; Киселев Л.Л.,2000; Bohr V.A., 2002]. Многочисленные литературные данные лишь констатируют наличие возрастных изменений концентраций низко- и высокомолекулярных эндогенных соединений в органах и тканях организма человека и животных, при этом наблюдения авторов фрагментарны и часто противоречат друг другу. В этом отношении недостаточно изучена возрастная динамика основных биополимеров межклеточного матрикса - белков и гетереполисахаридов (гликозаминогликанов) [Зимницкий А.Н., Башкатов С.А. 2004; Кольман Я., Рем К.Г. , 2000]. По данным физиологических и биохимических исследований [Рашидов Н.Р., 2002], скорость старения организма обратно пропорциональна эффективности функционирования его печени. В свою очередь с состоянием печени напрямую связан обмен других биополимеров - липопротеинов [Королевская Л.И., Серова Л.Д., Лукьянчиков B.C. и др., 2003; Кустаров В.Н., Черниченко И.И., 2003Конопля Е.Ф., Лукша Г.М., 1991;Коркуиасо О. В. и др., 1993;], регулирующих биосинтез стероидных гормонов, модулирующих в свою очередь интенсивность биосинтеза нуклеиновых кислот (НК). [Сергеев П.В., 1987].

На сегодняшний день традиционно считается, что гетерополисахаридные фрагменты протеогликанов межклеточного матрикса синтезируются нематрично в эндоплазматическом ретикулуме клетки, однако эта теория объясняет далеко не все известные из научной литературы феномены [Зимина Н.П., Рыкова В.И., Архипов И.А., 1992; Зимницкий А.Н., Башкатов С.А., 2005]. Общепризнанная «рациональность» природных процессов, их универсальность неизбежно наводит на мысль об универсальности и биосинтеза всех биополимеров с участием нуклеиновых кислот.

Таким образом, получается своеобразное диалектическое единство матрично-зависимого обмена белков, липопротеинов, протеогликанов и ДНК, имеющее место в организме человека и дестабилизирующееся с возрастом. Не вызывает сомнений, что ключевую роль в этих событиях играет печень, являясь крупнейшим синтетическим органом, а потому главной ареной, на которой развертывается патофизиологическая трагедия старения человека.

В связи со сказанным основной гипотезой нашей работы являлось предположении о том, что существуют многочисленные функциональные связи между показателями обмена белков, липопротеинов, гликозаминогликанов, состояния печени, кожи и возрастом человека, что биосинтез всех биополимеров происходит с участием дезоксирибонуклеиновых кислот. В качестве одного из объектов исследования мы намеренно выбрали женскую популяцию, так как, на наш взгляд, характеристика «практически здоровые лица» в старческом возрасте больше соответствует женщинам.

Целью настоящей работы является экспериментальное обоснование сопряженности обмена биополимеров с процессами старения и разработка патогенетически обоснованных биохимических подходов к их коррекции.

Для достижения поставленной цели представлялось необходимым решить следующие задачи:

1. Изучить фракционный состав белков, липопротеинов и гликозаминогликанов в сыворотке крови женщин различного возраста.

2. Определить количество белка, ДНК и фракционный состав гликозаминогликанов в коже женщин различного возраста.

3. Оценить состояние печени женщин различного возраста по активности ферментов аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, уровню билирубина и показателю тимоловой пробы в сыворотке крови.

4. Изучить профили элюции и фракционный состав полисахаридов печени крыс и маркерных полисахаридов (амилозы и полиуронидов) на DEAE-целлюлозе в градиенте ионной силы NaCl.

5. Уточнить внутриклеточную локализацию биосинтеза ГАГ с использованием в качестве радиоактивного маркера 14С-глюкозы, меченной по С].

6. Рассчитать уравнения регрессии, описывающие зависимость между возрастом и изученными биохимическими показателями.

7. Оценить на экспериментальных моделях репаративную активность плацентарных гликозаминогликанов.

8. Разработать новую лабораторную методику совместного электрофоретического определения фракционного состава белков и липопротеинов сыворотки крови.

Научная новнзиа. Проведенные исследования позволили существенно расширить представления о биохимических механизмах, лежащих в основе старения, выявить в коже обследованных женщин закономерности возраст-зависимого снижения концентрации гликозаминогликанов (ГАГ) при стабильном содержании белка и ДНК. При этом установлено, что с возрастом отрицательно коррелировали как суммарные ГАГ, так и их сульфатированная и несульфатированная фракции. В сыворотке крови испытуемых были выявлены линейные корреляционные связи между показателями обмена белков, липопротеинов, гликозаминогликанов, печеночных проб и возрастом обследованных женщин. Наиболее сильные корреляции из выявленных были: между возрастом и уровнем альбуминов, Р-глобулинов, al-липопротеинов, гепарансульфатов, аланинаминтрансферазы в сыворотке крови. Представляется важным, что коррелирующие показатели, по своей сути, характеризуют фактор старения организма, включающий в себя нарушение обмена стероидов, очевидно модулирующий транскрипционную активность ДНК, следствием которой является нарушение обмена гликозаминогликанов. На основании полученных экспериментальных данных уточнена внутриклеточная локализация биосинтеза гликозаминогликанов, доказана его связь с ядерным аппаратом клетки.

Практическая значимость выполненного исследования заключается в том, что показана возможность принципиально нового подхода к оценке биологического возраста человека по показателям содержания в сыворотке крови альбумина, глобулинов, al-липопротеинов, гепарансульфатов и активности аланинаминотрансферазы путем подстановки значений этих показателей в рассчитанные регрессионные уравнения. Выявление расхождений, в значениях хронологического и биологического возраста испытуемых позволит получить объективные результаты для повышенного внимания со стороны специалистов-геронтологов. Разработана новая лабораторная методика совместного электрофоретического определения фракционного состава белков и липопротеинов сыворотки крови, которая внедрена в производственный процесс ООО НПЦ «Астра». Обоснована возможность разработки новых подходов к созданию препаратов-геропротекторов на основе гетерополисахаридов из класса гликозаминогликанов.

На защиту выносятся следующие научные положения:

1. Существуют корреляционные взаимосвязи между показателями возраста человека и содержанием биополимеров в сыворотке крови и коже, а также физиологического состояния его печени.

2. Существует принципиальная возможность оценки биологического возраста человека по биохимическим показателям содержания биополимеров в сыворотке крови и физиологического состояния печени.

3. Существует связь между биосинтезом гликозаминогликанов и ядерным аппаратом клетки.

4. Гетерополисахариды из класса гликозаминогликанов стимулируют процессы репаративной регенерации.

5. Существует возможность совместного эффективного электрофоретического определения белковых и липопротеиновых фракций в сыворотке крови.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 181 странице, содержит 79 таблиц, 40 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов, предметов и методов исследования, 4 глав результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 260 источников, из которых 132 отечественных и 128 иностранных авторов, приложения.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Петренко, Елена Геннадьевна

ГЛАВА VIII. ВЫВОДЫ

1. С возрастом в организме человека неизбежно возникают нарушения обмена биополимеров, которые выражаются в изменении фракционного состава белков и липопротеинов в сыворотке крови, фракционного состава гликозаминогликанов в коже и сыворотке крови, что сопровождается отклонением от нормы биохимических показателей, характеризующих физиологическое состояние печени.

2. Разработан новый подход к оценке биологического возраста человека путем применения в качестве дополнительного критерия результатов расчетов по уравнениям линейной регрессии между показателями фракционного состава биополимеров сыворотки крови и паспортным возрастом испытуемого.

3. При уточнении локализации биосинтеза гликозаминогликанов с применением 14С-глюкозы, меченной по С\, установлено, что биосинтез гликозаминогликанов сопряжен с ядерным аппаратом клетки.

4. Предложена схема накожного применения гликозаминогликанов, позволяющая эффективно стимулировать репаративную регенерацию.

5. Разработана новая электрофоретическая методика совместного определения белковых и липопротеиновых фракций в сыворотке крови.

ГЛАВА IX. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендовано внедрение в практику научно-исследовательских и клинических лабораторий новой электрофоретической методики совместного определения белковых и липопротеиновых фракций в сыворотке крови.

Автор глубоко благодарен доктору биологических наук, профессору Башкатову Сергею Александровичу за неоценимый вклад, внесенный на всех этапах выполнения работы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Петренко, Елена Геннадьевна, Уфа

1. Абрамов Ю.В., Володина Т.В., Маркина Л.Г., Ребров Л.Б. Гликозаминогликаны кожи при эмоциональном стрессе // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1999-Т.127.-№2-С.134-136.

2. Агапова Е.Н., Крутовская О.В., Михалев И.Д., Ткаченко A.M., Фаунова В.И., Денисова Т.П. Белково-липидный состав, свертывающая и антисвертывающая системы крови у долгожителей.// Геронтология и гериатрия. Ежегодник. Долгожители. Киев,1973. - С.213-215.

3. Александрова М.Д. Очерки психофизиологии старения. Ленинград: Изд. Ленинградского университета, 1965. С.112.

4. Алехин Е.К., Богданова А.Ш., Плечев В.В., Фархутдинов P.P. Влияние лекарственных средств на процессы свободнорадикального окисления: Справочник. Уфа: БГМУ, 2002.- С.288.

5. Ангелова-Гатева П., Стойнев Г., Иванова Е. Некоторые биохимические показатели кровяной плазмы долгожителей. Геронтология и гериатрия. Ежегодник. Долгожители. Киев,1973. - С.203-205.

6. Анисимов В.Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения. С-Петербург: Наука, 2003. С.468.

7. Анисимов В.Н., Соловьев М.В. Эволюция концепций в геронтологии. С-Петербург.: Эскулап, 1999. С.130.

8. Анисимов В. Н. Современные представления о природе старения // Успехи современной биологии. 2000. Т. 120 - С. 146-164.

9. Анисимов В.Н., Морозов В.Г., Хавинсон В.Н. Влияние пептидных факторов тимуса, костного мозга, эпифиза и сосудов напродолжительность жизни и развитие опухолей у мышей // ДАН СССР. 1987 Т.293. - С. 1000-1004.

10. Анисимов В.Н. Физиологические функции эпифиза (геронтологический аспект) // Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. 1998. -Т.83,№8-С.1-10.

11. Анисимов, В. Н. Средства профилактики преждевременного старения (геропротекторы) // Успехи геронтологии. 2000. Вып. 4. - С.58-123.

12. Ата-Мурадова Ф.А., Донцов В.И. Пересадка эмбрионального гипоталамуса: путь восстановления истощенных с возрастом регуляторных программ // Профилактика старения. 1998 Вып.1. - С.77-79.

13. Бабаева А.Г. Традиционные и нетрадиционные представления о роли системы иммуногенеза в организме // Вестник АМН СССР. 1986. № 1. -С.22.

14. Баклаш В., Йорханова А., Кветнянски Р. Катехоламины и их синтез в процессе старения // Геронтология и гериатрия. Киев, 1976. С.163- 166.

15. Башкатов С.А. Гликозаминогликаны в механизмах адаптации организма. -Уфа: БашГУ, 1996.-С.144.

16. Башкатов С.А. Плацентарные гликозаминогликаны перспективные средства метаболической терапии и лечебно-профилактической косметики // Актуальные вопросы пластической хирургии и дерматокосметологии.- М.: Майер Джей, 2003.- С.93.

17. Берштейн JI.M. Эстрогены, старение и возрастная патология //Успехи геронтологии. 1998. №2. - С.90-97.

18. Богацкая JI.H. Особенности липидного обмена и его регуляция у долгожителей. Геронтология и гериатрия. Ежегодник. Долгожители. Киев, 1973.- С. 196-203.

19. Богацкая JI.H., Коркушко О.В., Киряков О.А. Особенности содержания липидов в крови лиц пожилого и старческого возраста с хроническойишемической болезнью сердца. Вопросы геронтологии. Киев, 1978. -С.65-74.

20. Богацкая JI.H. Коркушко О.В., Киряков О.А. Состояние липидного обмена у больных хронической ишемической болезнью сердца различного возраста. Вопросы геронтологии. Киев, 1982. -С.51-58.

21. Болдырев А.А. Карнозин. Биологическое значение и возможности применения в медицине.- М.: Изд-во МГУ, 1998. С.320 .

22. Брехман И.И. Человек и биологически активные вещества, 2-е изд. М.: Наука, 1980.-С. 120.

23. Бурчинский С.Г., Дупленко Ю.К. Анализ современного состояния и перспектив развития геронтологических исследований (по результатам международной экспертизы) // Проблемы старения и долголетия. 1994. -Вып.4, № 3-4. С.275-278 .

24. Ваганов Ф.В. О роли лимфоцит-фибробластных контактов в заживлении ран // Архив патологии. 1984.- № 6.- С.47.

25. Ванюшин Б.Ф., Бердышев Г.Д. Молекулярно-генетические механизмы старения.- М.: Наука, 1977.- С.ЗОО.

26. Вержиковская Н.В., Валуева Г.В., Сабольч И. Возрастные особенности дейодирования тироксина и экстратиреоидного образования прямого и обратного трийодтиронина // Вопросы геронтологии.- Киев, 1978. С.43-48.

27. Войтенко В.П. Значение наследственности и факторов среды в продолжительности жизни человека. Геронтология и гериатрия.- Киев, 1970. С.390-400.

28. Войтенко В.П., Полюхов A.M. Системные механизмы развития и старения.-Л.: Наука, 1986.-С. 184.

29. Галь Э., Медьеши Г., Верецкеи JI. Электрофорез в разделении биологических макромолекул. М.: Мир, 1982. - С.446.

30. Гацко Г.Г., Гулько В.В. Гликогенная функция печени и мышц в зависимости от возраста. // Обмен и функции стареющего организма. Минск, 1969. С.38-44.

31. Гацко Г.Г, Жукова А.С., Чайка Л.Д. Жировая ткань при старении. Минск: Наука и техника, 1985. С.184.

32. Гулько В.В. Взаимоотношение цинка и кадмия в печени и почках человека в зависимости от возраста // Обмен и функции стареющего организма. Минск, 1969. С.11-15.

33. Гусев В.А., Панченко Л.Ф. Современные концепции свободнорадикальной теории старения // Нейрохимия. 1997. Т. 14.- С. 1429.

34. Дейл 3. Влияние 17-бета-эстрадиола на метаболизм коллагена I и III типов у лабораторных животных разного возраста // Вопросы геронтологии. Эндокринные механизмы старения и возрастной патологии. Вып. X. Киев, 1988. -С.27-34.

35. Дейл 3, Сохорова Л., Михль Дж., Фролькис В.В. Анализ возрастных изменений содержания и интенсивности синтеза белков плазматических мембран /Вопросы геронтологии, Киев ,1982. - С.3-13.

36. Дильман В. М. Четыре модели медицины. М.: Медицина, 1987. - С.288.

37. Дильман В.М. Старение, климакс и рак. Л.: Медицина, 1968. - С.378.

38. Дильман В. М. Эндокринологическая онкология. Л.: Медицина, 1983.

39. Донцов В.И. Иммунобиология постнатального развития. М.:РАН, МОИП. Наука., 1990. - С.260.

40. Донцов В.И., В.Е. Чернилевский. Пересадка эмбриональных клеток: новые возможности в биологии и медицине. //Профилактика старения. Вып.4. 2001 -С.87-93.

41. Донцов В.И. Регуляция лимфоцитами клеточного роста соматических тканей и новая иммунная теория старения. Обзор // Профилактика старения. 1998. Вып.1.- С.40-63.

42. Дубина Т.JT. О биохимических методах оценки биологического возраста экспериментальных животных. // Обмен и функции стареющего организма.-Минск, 1969.-С.97-109.

43. Дубина Т.Л., Разумович А.Н. Введение в экспериментальную геронтологию.- Минск: Наука и техника, 1975.- С. 168.

44. Дубинская В.А., Виноградова Е.В. Кожа человека: влагообмен и старение //Клиническая геронтология. 2000. №7-8. - С.22-26.

45. Ермолаев 0.10. Математическая статистика для психологов. М.:Флинта, 2002.-С.336.

46. Жижина Г.П. Роль апоптоза в нормальном онтогенезе, патогенезе и старении // Клиническая геронтология. 2002. Т.8. №4. - С.3-9.

47. Зайдиева Я.З. Гормональная терапия в перименопаузе. // Акушерство и гинекология. 1995. №3 - С.28-30.

48. Захариева С., Кирянов А., Златарев.О., Наврькова Ю. Базальный уровень пролактина плазмы крови у старых людей и больных гиперпролактинемией различных типов //Вопросы геронтологии. Киев, 1980. -С.40-42.

49. Зелезинская Г.А. Возрастная характеристика некоторых реакций аминокислотного обмена /Обмен и функции стареющего организма. Минск,1969.-С.51-58.

50. Зимина Н.П., Рыкова В.И., Архипов И.А. Протеогликаны животных тканей как нерегулярные биополимеры: информативность структуры и контроль биосинтеза // Успехи современной биологии. 1992. Т.112. Вып. 4. - С.571-588.

51. Зимина Н.П., Дмитриев И.П., Рыкова В.И. Состав и степень сульфатирования гликозаминогликанов из тканей животных различных видов: гетерогенность и тканевая специфичность гепарансульфатов. // Биохимия. 1987. Т.52. Вып.6. - С.984-990.

52. Зимницкий А.Н. Плацентарная косметика, ее свойства и перспективы применения // Актуальные вопросы пластической хирургии и дерматокосметологии. М.: Майер Джей, 2003. - С.94.

53. Зимницкий А.Н., Башкатов С.А. Гликозаминогликаны в биохимических механизмах адаптации организма к некоторым физиологическим и патологическим состояниям. М.:Фармацевтический Бюллетень, 2004.-С.208.

54. Зимницкий А.Н., Башкатов С.А. Сопряженность биосинтеза гликозаминогликанов с ядерным и микросомальным аппаратом клетки. Молекулярная биология, 2006.- Т. 40 № 2 С. 1-11.

55. Ивантер Э.В., Коросов А.В. Основы биометрии: введение в статистический анализ биологических явлений и процессов. -Петрозаводск: ПГУ, 1992.-С.163.

56. Измайлов Д.М., Обухова J1.K. Мелатонин как геропротектор: эксперименты. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1999. Том 127. №2. - С.205-206.

57. Инструкция по применению: Аминотрансфераза АлАТ, Био-Ла-Тест, Pliva-Lachema, Брно,- 2004.

58. Инструкция по применению: Аминотрансфераза АсАТ, Био-Ла-Тест, Pliva-Lachema, Брно,- 2004.

59. Инструкция по применению: Билирубин С, Био-Ла-Тест, Pliva-Lachema, Брно,- 2004.

60. Инструкция по применению: Тимоловая проба, Био-Ла-Тест, Pliva-Lachema, Брно,- 2004.

61. Кательницкая Л.И. Тезисы конференции. Возрастные аспекты патологии внутренних органов. Ростов-на-Дону, 1998. С.46.

62. Киселев Л.Л. Геном человека и биология XXI века.// Вестник Российской Академии Наук. 2000. Т.70. - С.414- 424.

63. Кожура И.М. Содержание фракций белков и липопротеидов в сыворотке крови кроликов разного возраста при экспериментальном атеросклерозе // Механизмы старения. Киев: Государственное медицинское издательство УССР, 1963. - С. 121 -126.

64. Кольтовер В.К. Свободнорадикальная теория старения: современное состояние и перспективы // Успехи геронтологии. 1998. №2. - С.37-42.

65. Кононский А.И. Гистохимия.-Киев:Издательское объединение «Вища школа», 1976.-С.280.

66. Конопля Е.Ф., Лукша Г.М. Гормоны и старение. Цитоплазматическая рецепция стероидных гормонов. Минск.: Наука и техника, 1991. - С. 173.

67. Коркушко О.В. Возрастная характеристика белкового спектра сыворотки крови у практически здоровых людей пожилого и старческого возраста. // Сборник Механизмы старения Киев: Государственное медицинское издательство УССР, 1963.-С.84-95.

68. Коркуиасо О. В., Чеботарев Д. Ф., Калиновская Е. Г. Гериатрия в терапевтической практике. Киев: Здоровье, 1993. - С.840.

69. Королевская Л.И., Серова Л.Д., Лукьянчиков B.C., Чеботарева Е.В, Климакс и постменопаузный остеопороз. // Клиническая геронтология. 2003. -Т.9. №9. С.55-61.

70. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. М.: Высш. шк.,-1980-272с.

71. Кустаров В.Н., Черниченко И.И. Перименопауза и ее осложнения. // Клиническая геронтология. 2003. -Т.9. №1. С.45-49.

72. Курашвили Р.Б., Мегрелишвили Г.Н., Думбадзе Э.Г Зарандия J1.T., Шатиришвили Э.Г. Некоторые показатели липидного обмена и системы свертывания крови у долгожителей. // Геронтология и гериатрия. Ежегодник. Долгожители. Киев, 1973. С.205-208.

73. Кухта В.К., Олецкий Э.И., Стожаров А.Н. Белки плазмы крови: Патохимия и клиническое значение. Справочник. Минск: Беларусь. 1986.-С.79.

74. Лабори Г. Регуляция обменных процессов (теоретический, экспериментальный, фармакологический и терапевтический аспекты). -М. :Медицина, 1970. С.384.

75. Лабори Г. Метаболические и фармакологические основы нейрофизиологии. М.: Медицина, 1974. - С.168.

76. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. - С.352.

77. Ластовская Т.Г. Содержание сульфгидрильных групп в некоторых тканях и митохондриях крыс различного возраста /Обмен и функции стареющего организма. Минск, 1969. С.45-50.

78. Ларский Э.Г.Методы зонального электрофореза. Москва, 1971. С. 110.

79. Лабораторное измерение липидов, липопротеинов и аполипопротеинов. / Под редакцией Н.Рифаи, Г.Варника. М.: Фармарус принт, 1997. - С.430.

80. Литошенко А.Я. Некоторые стороны системы биосинтеза белка митохондрий печени в старости // Геронтология и гериатрия. Ежегодник. Продление жизни: прогнозы, механизмы, контроль. Киев, 1979. С.87-91.

81. Маршалл В.Дж. Клиническая биохимия -2-ое изд. пер с англ. СПб.: Невский диалект, 2002. - С.784.

82. Мартин Р., Мартин Г., Мурадян Х.К. Возрастные особенности влияния гидрокортизона на активность РНК-полимераз и транскрипцию разных классов РНК в печени крыс. / Сборник статей Вопросы геронтологии. Под. Ред. Чеботарева Д.Д. 1978. С.49-56.

83. Матковская Т.А., Юрьева Э.А., Сухоруков B.C., Столяров IO.IO. О профилактике возрастных изменений кожи // Военно-медицинский журнал. 2000. №8. - С. 16-20.

84. Макинодан Т., Юнис Э.Иммунология и старение. М.: Мир, 1980. - С. 277.

85. Меньшиков В.В. Руководство по клинической лабораторной диагностике. М.: Медицина, 1982. - С.576.

86. Мешкова Н.П., Северин С.Е. Практикум по биохимии.-М.:Изд-во МГУ, 1979.-430с.

87. Морозов В. Г., Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы (25-летний опыт экспериментального и клинического изучения).- СПб.: Наука, 1996.-С.74.

88. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. // Успехи геронтологии. 1997. T.l. - С.74.

89. Нагорный J1.B., Никитин В.И., Буланкин И.И. Проблема старения и долголетия. М.:Медгиз, 1963. - С.740.

90. Никитин Ю П. Бондарева З.Г., Отева Э.А. с соавт. Образ жизни и показатели липидного состава крови у людей старческого возраста. //Терапевтический архив. 1989. №12 - С. 109-112.

91. Никитин Ю.П., Бондарева З.Г. Отева Э.А., Филимонова Т.А. Липидный состав сыворотки крови у здоровых и больных старческого возраста и долгожителей. // Клиническая медицийа 1991. - №6 - С.32-35.

92. Обухова Л.К. Химические геропротекторы и проблема увеличения продолжительности жизни. // Успехи химии. 1975. Т.44. - С.1914-1925.

93. Обухова Л. К., Эмануэль Н. М. Роль свободнорадикальных реакций окисления в молекулярных механизмах старения живых организмов. // Успехи химии. 1983. Т.52. - С.353-372.

94. Оловников A.M. Принцип маргинотомии в матричном синтезе полинуклеотидов. //Докл. Акад. Наук. 1971. Т.201. - С. 1496-1499.

95. Оловников А. М, Внутриядерные ионные фонтаны как регуляторы деятельности генома: фонтанная гипотеза доминанты и некоторые эпигенетические эффекты //Мол. Биол. 2000. Т.35. - С.163-176.

96. Оловников А. М. Редусомная гипотеза старения и контроля биологического времени в индивидуальном развитии //Биохимия. 2003. -Т. 68.-С.7-41.

97. Орехович В.Н. Современные методы в биохимии.- М.:Медицина, 1968.-372с.

98. Пименов Ю.С. Кровь здоровых людей при старении. //Гематология и трансфузиология. 1993. №3 - С.43-45.

99. Пристром М. С. Особенности клиники и диагностики ишемической болезни сердца и гипертонической болезни у лиц старших возрастов // Диагностика кардиологических заболеваний / Под ред. В. В. Горбачева. -М.: Высшая школа, 1990. С. 246-257.

100. Пушкарев В.Ф. Изменение активности флавиновых окислительных ферменов и содержание негеминного железа в зависимости от возраста и пол / Обмен и функции стареющего организма. Минск, 1969. С.59-69.

101. Разумович А.Н. Энергообразующие системы при старении организма. // Обмен и функции стареющего организма. Минск, 1969. С.25-30.

102. Разумович А.Н., Коробенкова М.М., Иткина Э.А. Возрастные изменения активности аденозин-трифосфатазы и глкжозо-6-фосфатазы // Обмен и функции стареющего организма. Минск, 1969. С. 32-37.

103. Рашидов Н.Р. Человек в мире и его печень // Медицинская кафедра. 2002. №2.-С.116-129.

104. Рихтер В., Богацкая JI.H. Возрастные изменения липопротеидлипазы. Вопросы геронтологии. Киев, 1978. С.75-80.

105. Ружье А. УФ А-лучи, насколько они опасны? // 2001. №3. - С.21-24.

106. Саркисов К.Г., Ступина А.С., Коркушко О.В., Шапошников В.Н., Тарасенко О. Б. Ультраструктурные особенности кровеносныхкапилляров кожи человека при старении // Вопросы геронтологии и гериатрии. Каранда, 1978.-Вып. II-С. 166-167.

107. Сергеев П.В. и со авт. Биохимическая фармакология. М.: Высшая школа, 1982.-С.343.

108. Серов В.В., Шехтер В.Б. Соединительная ткань М.: Медицина, 1981. -С.312.

109. Слуцкий Л.И. Биохимия нормальной и патологически измененной соединительной ткани. Л.: Медицина, 1969.- С.376.

110. Соболич И. Изменение уровня тиреоидных гормонов в крови людей старческого возраста под влиянием тиреотропного гормона // Вопросы геронтологии. Киев, 1980. С. 19-22.

111. Стейси М., Баркер С. Углеводы живых тканей. М.:Мир,1965. - С.324.

112. Страйер Л. Биохимия: в 3-х т. Пер. с англ. М.: Мир,1985. - Том 3. -С.400.

113. Султанов М.Н. Содержание холестерина, белковых фракций и ацетил-нейраминовой кислоты у долгожителей Нахичеванской АССР // Геронтология и гериатрия. Ежегодник. Киев, 1973. С.208-213.

114. Титов В.Н., Амелюшкина В.А. Электрофорез белков сыворотки крови: методические основы и диагностическое значение. М.: Оптимум пресс, 1994.-С.50.

115. Торховская Т.И., Халилов Э.М. Липидпереносящие белки плазмы крови (обзор) // Вопросы медицинской химии. 1988. №4. - С.2-11.

116. Уайт. Дж. Основы биохимии. М.: Мир, 1982. - Т.З. - С.232.

117. Устройство электрофореза белков сыворотки крови на пленках из ацетата целлюлозы с регулируемыми параметрами напряжения и тока УЭФ-01 «Астра» (1999) АСТР.054954.001ПС, ТУ 944163-001-54312116-99.

118. Фролькис В.В. Нейрогормональные соотношения в старости // Вопросы геронтологии. Эндокринные механизмы старения и возрастной патологии. Вып.Х. Киев, 1988. -С.4-15.

119. Фролькис В.В. Синдромы старения // Вестник АМН СССР. 1990. №1 -С.8-12.

120. Фролькис В.В. Старение и биологические возможности организма. М.: Наука, 1975.-С.273.

121. Хавинсон В.Х. Пептидная регуляция старения. //Вестник РАМН. 2001 -№12.-С.16-20.

122. Хавинсон В.Х., Баринов В.А., Арутюнян А.В., Малинин В.В. Свободнорадикальное окисление и старение. СПб.: Наука, 2003. -С.327.

123. Хмелевский Ю.В., Усатенко O.K. Основные биохимические константы человека в норме и при патологии. Киев: Здоровье, 1987. - С160.

124. Хьюз Р. Гликопротеины. М.: Мир, 1985. - С.130.

125. Чеботарев Д.Ф., Маньковский Н.В., Фролькис В.В. Руководство по геронтологии М.: Медицина, 1978. - С.503.

126. Чеботарев Д.Ф., Коркушко О.В., Коваленко А.И. Некоторые гемостатические показатели крови и сосудистой стенки у пожилых и старых людей. // Здравоохранение. Кишинев, 1985. №2 - С.22-26.

127. Шелюженко А.А., Браиловский А.Я. Кожные болезни у лиц пожилого и старческого возраста. Киев: Здоровье, 1982. - С.200.

128. Эмануэль Н.М. Ингибиторы радикальных процессов (антиоксиданты) и возможности продления жизни. Геронтология и гериатрия. Киев, 1979. -С.118-127.

129. Эмануэль Н.М. Свободные радикалы и старение // Геронтология и гериатрия. Ежегодник. Киев, 1975. С. 103.

130. Affinito P., Palomba S., Sorrentino C., Di Carlo C., Bifulco G., Arienzo M.P., Nappi C. Effects of postmenopausal hypoestrogenism on skin collagen //Maturitas. 1999. - V.33. - N3. - P.239-247.

131. Altschuler C.H. Kinsman G., Bareta J. Connective tissue metabolism. I. Hyaluronic acid synthesis by cell-free extracts of human tissues. Arch Pathol. -1963. V.75. - P.206-211.

132. Anisimov V.N., Mylnikov S.V., Khavinson V.Kh. Pineal peptide preparation epithalamin increases the lifespan of fruit flies, mice and rats // Mech. Ageing Dev.-1998. Vol.103. - C.123-132.

133. Aron-Brunetiere R. The menopause and the skin (author's transl) //Sem. Hop. -1980. V.56. - N33-36. - P.l368-1373.

134. Asian A.Specification regarding the technique and action of Gerovital H3 treatment after 34 years of usage//Rom.J.Geront. Geriatr.-1985.- V.6.- P.2-11.

135. Barbo D.M. The physiology of the menopause // Med. Clin. North. Am. -1987. V.71. -Nl. -P.l 1-22.

136. Barnadas M.A., Colomo L., Cureii R., Moragas J.M. Expression of the p53 protein in sun-damaged skin //Acta Der. Venereol. 1996. - V.76. - N3. -P.203-204.

137. Bernus I., Dickinson R.G., Hooper W.D., Eadie MJ. Anticonvulsant therapy in aged patients. Clinical pharmacokinetic considerations //Drugs. Aging. 1997. -V. 10. - N4. - P.278-289.

138. Bernstein E.F., Lee J., Brown D.B., Yu R, Van Scott E. Glycolic acid treatment increases type I collagen mRNA and hyaluronic acid content of human skin //Dermatol. Surg. -2001. V.27. - N5. -P.429-433.

139. Bernstein E.F., Underhill C.B., Hahn P.J., Brown D.B., Uitto J. Chronic sun exposure alters both the content and distribution of dermal glycosaminoglycan //Br. J. Dermatol. 1996. -V. 135. - N2 -P.255-262.

140. Biasco M. A., Gottlieb G. J, etai. Essential role of mouse telomerase in highly proliferative organs // Nature. 1998. - V.392. - P.569-574.

141. Bitar M.S., Shapiro B.H. Abberation of heme and hemoprotein in age female rats //Mech. Ageing. Dev. 1987. - V.38. - N2. - P. 189-197.

142. Bolognia J.L. Dermatologic and cosmetic concerns of the older woman //Clin . Geriatr. Med. 1993. - V.9. - N1. - P.209-229.

143. Bolognia J.L., Braverman I.M., Rousseau M.E., Sarrel P.M. Skin changes in menopause //Maturitas. 1989. -V.l 1. - N4. - P.295-304.

144. Bohr V.A. Human premature aging syndromes and genomic instability // Mech.Ageing Dev. 2002. - V.123. - P.987-993.

145. Bonte F., Dumas M., Chaudagne C., Meybeck A. Comparative activity of asiaticoside and madecassoside on type I and III collagen syntesis by cultured human fibroblasts. //Ann. Pharm.Fr. 1995. - V.53. - N1 - P.38-42

146. Boyd A.S., Naylor M., Cameron G.S. Pearse A.D., Gaskell S.A., Neldner K.H. The effects of chronic sunscreen use on the histologic changes of dermatoheliosis //J.Am.Acad.Dermatol. 1995. - V.33. - N6. - P.941-946.

147. Brincat M., Moniz C.F., Studd J.W., Darby A.J., Magos A., Cooper D. Sex hormones and skin collagen content in postmenopausal women //Br. Med. J. (Clin Res Ed). 1983. - V.5. - P.1337-1338.

148. Broniarczyk-Dyla G., Joss-Wichman E.J. Ageing of the skin during menopause//Eu.r Acad. Dermatol. Venereol.-2001. V.l5. -N5. -P.494-495.

149. Castelo-Branco C., Duran M., Gonzalez-Merlo J. Skin collagen changes related to age and hormone replacement therapy // Maturitas. 1992. - V.l5. -N2.-P.113-119.

150. Castelo-Branco C., Figueras F., Martinez de Osaba M.J., Vanrell J.A., Maturitas. Facial wrinkling in postmenopausal women. Effects of smoking status and hormone replacement therapy //1998. V.29. - N1. -P.75-86.

151. Chan-Yeung M., Ferreira P., Frohlich J., Schulzer M., Tan F. The effects of age, smoking, and alcohol on routine laboratory tests // Am. J. Clin. Pathol. -1981. -V.75. N3. - P.320-326.

152. Chen S., Beehler В., Sugimoto G., Tramposch KM. Effects of all-trans retinoic acid on glycosaminoglycan synthesis in photodamaged hairless mouse skin // J. Invest. Dermatol. 1993. - V.101. - N2. -P.237-239.

153. Chung J.H., Yano K., Lee M.K., Uoun C.S. at al. Differential effects of photoaging vs intrinsic aging on the vascularization of human skin //Arch Dermatol 2002. -V. 138. N11. - P. 1437-1442.

154. Cifonelli J.A., Dorfman A. J. The biosynthesis of hyaluronic acid by group A streptococcus. V. The uridine nucleotides of group A streptococcus // J Biol. Chem. 1957. - V.228. - N2. - P.547-557.

155. Cortes-Gallegos V. Villanueva G.L., Sojo-Aranda I, Santa Cruz F.J. Inverted skin changes induced by estrogen and estrogen/glucocorticoid on aging dermis //Gynecol. Endocrinol. 1996. -V.10. - N2.- P.125-128.

156. Cotzias G.C., Miller S.T., Nicholson A.R. et al. Prolongation of the life-span in mice adated to large amounts of L-Dopa // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1974.- V. 71. P.2466-2469.

157. Cutler R. Oxidative stress: its popential relevance to human disease and longevity determinants // Age. 1995. - V. 18. - P. 91-96.

158. Curri S. Histochemical aspects of the aging of connective tissue //Phlebologie.- 1986.-V.39. N4.-P.791-4.

159. De Lignieres B. Ovarian hormones and cutaneous aging //Rev. Fr. Gynecol. Obstet. 1991. - V.86. - N6. - P.451-454.

160. Dilman V.M. Development, Aging and Disease. A New Rationale for an Intervention Strategy. Chur: Harwood Academic Publ., 1994. -P.387.

161. Dini L., Rossi L., Marchese E., Ruzittu M.T., Rotilio G. Age-related changes in the binding and uptake of Cu, Zn superoxide dismutase in rat liver cells // Mech . Ageing. Dev. 1996. -V.90. - N1. - P.21-33.

162. Dogru-Abbasoglu S., Tanger-Toptani S., Ugernal B. etc. // Mech.Ageing.Devel. 1997. - V.98. - P. 177-180.

163. Dorfman A. Studies on the biochemistry of connective tissue. Pediatrics. -1958. V.22. - P.576-589.

164. Dorfman A. Metabolism of acid mucopolysaccharides. Biophys J. 1964. -V.71 - P.155-165.

165. Dorfman A. In: Structure and Function of Connective and Skeletal Tissue. London, 1965-P. 178, 297.

166. Fisher G.J., Kang S., Varani J., Bata-Csorgo Z. Mechanisms of photoaging and chronological skin aging//Arch. Dermatol. 2002. - V. 138. - N11. - P. 14621470.

167. Fuchs K.O., Solis 0., Tapawan R., Paranjpe. The effects of an estrogen and glycolic acid cream on the facial skin of postmenopausal women: a randomized histologic study. //J.Cutis. 2003. - V.71. - N6. -P.481-488.

168. Ghersetich I., Lotti Т., Campanile G., Grappone C., Dini G. Hyaluronic acid in cutaneous intrinsic aging // Int. J. Dermatol. 1994. - V.33. - N2. - P.l 19-122.

169. Glaser L., Brown D.H. Purification and properties of d-glucose-6-phosphate dehydrogenase. Proc. Natl. Acad. Sci. US. 1955. - V.41 - P. 253.

170. Glaser L, Brown D.H. Purification and properties of d-glucose-6-phosphate dehydrogenase. J Biol Chem. 1955. - V.216. - P.67-79.

171. Gow S.M., Turner T.I., Glasier A. The clinical biochemistry of the menopause and hormone replacement therapy. //Ann. Clin. Biochem. 1994. - V.31. - N6 -P.509-528.

172. Greider С W., Blackburn H., Identification of a specific telomer terminal transferase enzyme with two kinds of primer secificily // Cell. 1985. - V.51. -P.405-413.

173. Griffiths C.E. Drug treatment of photoaged skin //Drugs Aging. 1999. - V.14. - N4. -P.289-301.

174. Gruber С.J., Wieser F., Gruber I.M., Ferlitsch K., Gruber D.M., Huber J.C. Current concepts in aesthetic endocrinology. //Gynecol Endocrinol. 2002. -V.16. - N6. -P.431-441.

175. Hall D.M., Xu L., Drake V.J., Oberley L.W., Oberley T.D., Moseley P.L., Kregel K.C. Aging reduces adaptive capacity and stress protein expression in the liver after heat stress // J. Appl. Physiol. 2000. -V.89. - N2. - P.749-759.

176. Harman D., Aging: a theory based on free radical and radiation chemistry.// J.gerontology. 1956. - V.l 1. - P.298-300.

177. Harman D. Extending functional life span // Exp. Gerontol. 1998. - V.33. - P. 95-112.

178. Hayflick L., Moorhead P. S., The serial cultivation of human diploid cell strains // Exp. Cell Res. -1961. V.25. - P.585-621.

179. Hayftick L., New approaches to old age // Nature. 2000. - V.403. - P.365.

180. Higami Y., Shimokawa I., Tomita M., Okimoto Т., Koji Т., Kobayashi N., Ikeda T. Aging accelerates but life-long dietary restriction suppresses apoptosis-related Fas expression on hepatocytes // Am. J. Pathol. 1997. -V.l51. - N3. -P.659-663.

181. Hilmer S.N., Warren A., Cogger V.C., Fraser R., McLean A.J., Sullivan D., Le Couteur D.G. The effect of aging on the immunohistochemistry of apolipoprotein E in the liver //Exp. Gerontol. 2004. - V.39. - N1 - P.53-57.

182. Hook M., Kjellen L., Jahansson S., Robinson J. Cell-surface glycosaminoglycans. Annual Rev. Biochem. 1984. - V.53. - P.847-869.

183. Ibbotson S.H., Moran M.N., Nash J.F., Kochevar I.E. The effects of radicals compared with UVB as initiating species for the induction of chronic cutaneous photodamage // J. Invest. Dermatol. 1999. - V.l 12. - N 6. - P.933-938.

184. Jeffrey D., Zhang L. Influence of core protein sequence on glycosaminoglycan assembly. Current Opinion in Structural Biology. 1996. - V.5. - P.663-670.

185. Juhlin L. Hyaluronan in skin //J. Intern. Med. 1997. - V.242 - N 1 - P.61-66.

186. Kampmann J.P., Sinding J., Moller-Jorgensen I. Effect of age on liver function //Geriatrics. 1975. - V.30. - N 8. - P.91-95.

187. Kligman L.H., Schwartz E., Sapadin A.N., Kligman A.M. Collagen loss in photoaged human skin is overestimated by histochemistry //Photodermatol Photoimmunol Photomed. 2000. - V.16. - N 5 - P.224-228.

188. Limoli C.L., Kaplan M.I., Corcoran J. et al. Chromosomal instability and its relationship to other end points of genomic instability // Cancer Res.- 1997.- V. 57. N24. - P.5557-5563.

189. Limoli C.L., Kaplan M.I., Phillips J.W. et al. Differential induction of chromosomal instability by DNA strand-breaking agents // Cancer Res. 1997. - V.57.-N18.-P.4048-4056.

190. Limoli C.L., Hartmann A., Shephard L. et al. Apoptosis, reproductive failure, and oxidativ stress in Chinese hamster ovary cells with compromised genomic integrity // Cancer Res. 1998. - V.58. - N16. - P.3712-3718.

191. Longas M.O., Russel C.S. Chemiclal alteration of hyaluronic acid and dermatan sulfate detected in aging human skin by infrared spectroscopy //Biochim. Biophys. Acta. 1986. - V.884. - N 2. - P.265-269.

192. Lorenzel I. Epinephrine-induced alterations in connective tissue of aortic wall in rabbits.Proc Soc Exp Biol Med. 1959. - V.102. - P.440-502.

193. Lowry O.H., Rosebrough N.I., Fan A.L. et al. Protein measurement with the Folin phenol reagent //J. of Biol. Chem. 1951. - V.193. - P.265-275.

194. Lyon M., Nieduszynski I. A. A study of equilibrium binding of link protein to hyaluronate //Biochem. J. 1983. - V.213. - P.445-450.

195. Maley F., Maley G.F. The enzymic conversion of glucosamine to galactosamine. Biochim Biophys Acta. 1959. - V.31. - P.577-608.

196. Margelin D., Fourtanier A., Thevenin Т., Medaisko C., Breton M., Picard J. Alteration of proteoglycans in ultraviolet-irradiated skin //Photochem. Photobiol. 1993 - V.58. - N 2. - P.211-218.

197. Markovic O., Huttl S. Contribution to a methodical approach to determination of protein and glycoprotein components in synovial fluid. Cas Lek Cesk. -1964. V.103. - P.522-605.

198. Markovitz A., Cifonelli J.A., Dorfman A.Biosynthesis of hyaluronic acid by cell-free extracts of group-A streptococci. Biochim Biophys Acta. 1958. -V.28. -P.453-505.

199. Massie H.R. etc. Dietary vitamin С improves the survival of mice.//Gerontology. 1984. - V.30. - P.371-375.

200. Meyer L.J., Stern R. Age-dependent changes of hyaluronan in human skin // J. Invest. Dermatol. 1994. - V. 102. - N 3. - P.385-389.

201. Miyachi Y., Ishikawa O. Dermal connective tissue metabolis in photoagein //Australas J. Dermatol. 1998. - V.39. - N 1. - P. 19-23.

202. Miyamoto I., Nagase S. Age-related changes in the molecular weight of hyaluronic acid from rat skin //Jikken. Dobutsu. 1984. - V. 33. - N 4 - P.481-485.

203. MorleyA.A. The somatic mutation theory of ageing // Mutat. Res. 1995. - V. 338.- P. 19-23.

204. Muskhelishvili L., Hart R. W., Turturro A., James S.J. Age-related changes in the intrinsic rate of apoptosis in livers of diet-restricted and ad libitum-fed B6C3F1 mice // Am. J. Pathol. 1995. - V. 147. - N 1. - P.20-24.

205. Onarheim H., Missavage A.E., Gunther R.A. et al. //Marked increase of plasma hyaluronan after major thermal injury and infusion therapy //J.Surg.Res. -1991. V.50. - N 3. - P.259-265.

206. Orentreich N., Brind J.L., Rizer R.L., Vogelman J.H. Age changes and sex differences in serum dehydroepiandrosterone sulfate concentration throughout adulthood //J.Clin. Endocrinol. Metab. 1984. - V.59. - P.551-555.

207. Palacios S. Current perspectives on the benefits of HRT in menopausal women //Maturitas. 1999. - V.33. - N 1. - P. 1-13.

208. Petropoulos I., Mary J., Perichon M., Friguet B. Rat peptide methionine sulphoxide reductase: cloning of the cDNA, and down-regulation of gene expression and enzyme activity during aging //Biochem. J. 2001. - V.355. -N3.-P.819-825.

209. Phillips T.J., Demircay Z., Sahu M. Hormonal effects on skin aging //Clin. Geriatr .Med. 2001. - V. 17. - N 4. - P.661-672.

210. Pierard G.E., Henry F., Pierard-Franchimont C. Comparative effect of short-term topical tretinoin and glycolic acid on mechanical properties of photodamaged facial skin in HRT-treated menopausal women //Maturitas. -1996.- V.23. N 3. - P.273-277.

211. Pierard G.E., Letawe C., Dowlati A., Pierard-Franchimont C. Effect of hormone replacement therapy for menopause on the mechanical properties of skin //J. Am. Geriatr. Soc. 1995. -V.43. - N 6. - P.662-665.

212. Pierard-Franchimont C., Pierard G.E. Postmenopausal aging of the sebaceous follicle: a comparison between women receiving hormone replacement therapy or not.Dermatology. 2002. - V.204. - N 1. - P. 17-22.

213. Plewka A , Kaminski M , Plewka D , Nowaczyk G . Glucose-6-phosphatase and age: biochemical and histochemical studies // Mech. Ageing. Dev. 2000. -V. 24. -N 1.-P.49-59.

214. Raine-Fenning N.J., Brincat M.P., Muscat-Baron Y .Skin aging and menopause: implications for treatment. //Am. J. Clin. Dermatol. 2003. - V.4. - N 6. - P.371-378.

215. Reiter R.J. The pineal gland and melatonin in relation to aging A summary of the theories and of the data //Exp. Gerontol. 1995. - V.30. - P.199-212.

216. Reiter R.J., Tan D.-X., Kim S.J. et al. Augmentation of indiced of oxidative damage in life-long melatonin-deficient rats // Mech. Ageing Dev. 1999. - V. 110. - P.157-173.

217. Roden L., Dorfman A. The metabolism of mucopolysaccharides in mammalian tissues. V. The origin of L-iduronic acid. J Biol Chem. 1958 -V.233. - P.1030.

218. Rondle C.J.M., Morgan W.T.The determination of glucosamine and galactosamine.Bioch.J. 1955. - V.61. - P.586.

219. Romero F.J., Bosch-Morell F., Romero M.J. etc.//Environ.Health Perspect. -1998. V.106. - P.1229-1234.

220. Rosenberg L., Hellmann W., Kleinschmidt A.K. Electron microscopic studies of proteoglycan aggregates from bovine articular cartilages //J. Biol. Chem. -1975. V.250. - P.1877-1883.

221. Rosenthal P., Pincus M., Fink D. Sex- and age-related differences in bilirubin concentrations in serum //Clin. Chem. 1984. -V.30. - N 8. - P. 1380-1382.

222. Roseman S., Ludowieg J, Moses F., Dorfman A. The biosynthesis of the glucuronic acid moiety of hyaluronic acid.Arch Biochem Biophys. 1953 -V.42.-P.472.

223. Roseman S., Moses F.E, Ludowieg J, Dorfman A. The biosynthesis of hyaluronic acid by group A Streptococcus. I. Utilization of l-C14-glucose. J Biol Chem. 1953. - V.203. - P.213-225.

224. Roseman S., Moses F.E, Ludowieg J, Dorfman A. The biosynthesis of hyaluronic acid by group A Streptococcus. II. Origin of the glucuronic acid. J Biol Chem. 1954. - V.206. -P.665.

225. Sator P.G., Schmidt J.B., Sator M.O., Huber J.C., Honigsmann H. The influence of hormone replacement therapy on skin ageing: a pilot study //Maturitas. 2001. - V.25. - N 1. - P.43-55.

226. Schidt J.B., Binder M., Demschik G., Bieglmaer C., Reiner. Treatment of aging topical estrogens. // Int. J. Dermatol. 1996. - V.35. - N 9. - P.669-674.

227. Schiller S. Synthesis of hyaluronic acid by a soluble enzyme system from mammalian tissue.Biochem Biophys Res Commun. 1964. - V.15. - P.250.

228. Schiler S. Structure and Function of Connective and Skeletal Tissue. London. 1965.-P.302.

229. Schwartz E. Connective tissue alterations in the skin of ultraviolet irradiated hairless mice //J. Invest. Dermatol. 1988. - V.91. - N 2. - P.l58-161.

230. Shigenaga M.K., Hogen T.M., Ames. B.N. // Proc. Natl Acad. Sci. 1994. -V.91. - P.10771.

231. Silbert J.E., Sugumaran G. Intracellular membranes in synthesis, transport, and metabolism of proteoglycans Biochim. Biophys. Acta. 1995. - V.1241. - N 3. -P.371-384.

232. Silbert J. J. Incorporation of 14C and 3H from nucleotide sugars into a polysaccharide in the presence of a cell-free preparation from mous mast cell tumors.J Biol Chem. 1963. - V.238. -P.3542.

233. Silbert J.E. Structure and metabolism of proteoglycans and glycosaminoglycans J. Invest. Dermatol. 1982. - V.79.-N 1.-P.31-37.

234. Strominger J.L. Nucleotide intermediates in the biosyntesis of heteropolimeric polysaccharides. Biophys J. 1964. - V.71. - P. 139-153.

235. Struck H. Possible causes of change in collagen metabolism in aging // Z. Gerontol. 1984. - V. 17. - N 2. - P.85-88.

236. Sugahara K., Kitagava H. Recent advances in the study of the biosynthesis and functions of sulfated glycosaminoglycans .Current Opinion in Structural Biology. 2000. - V. 10. - N 5. - P.518-527.

237. Takahashi Y., Ishikawa O., Okada K., Kojima Y., Igarashi Y., Miyachi Y. Disaccharide analysis of human skin glycosaminoglycans in sun-exposed and sun-protected skin of aged people // J. Dermatol. Sci. 1996. - V. 11. - N 2. -P.129-133.

238. Takahashi Y., Ishikawa O., Okada K., Ohnishi K., Miyachi Y. Disaccharide analysis of the skin glycosaminoglycans in chronically ultraviolet light-irradiated hairless mice //J. Dermatol. Sci. 1995. - V.l0. - N 2. - P. 139-144.

239. Takatori A., Akahori M., Kawamura S., Itagaki S., Yoshikawa Y. Localization and age-related changes in cytochrome P450 expression in АРА hamster livers //Exp. Anim. 2000. -V.49. - N 3. - P.197-203.

240. Thornton M.J. The biological actions of estrogens on skin. //Exp. Dermatol. -2002. V. 11. - N 6. - P.487-502.

241. Vaillant L., Callens A. Hormone replacement treatment and skin aging //Therapie. 1996. - V.51. - N 1. - P.67-70.

242. White B.N., Shetlar M.R., Shurley H.M., Shilling J.A. Incorporation of (1-14C) Glucosamine into mucopolysaccarides of rat connective tissue. Biochim Biophys Acta. -1965. V.101. - P.97-105.

243. Willen M.D., Sorrel J.M., Lekan C.C., Davis B.R., Caplan A.I. Pattern of glycosaminoglycan immunostaining in human skin during aging // J. Invest. Dermatol. 1991. - V.96 - N 6. - P.968-974.

244. Zoller D.P. The physiology of aging //Am Fam Physician. 1987. - V.36. - N 1.-P.112-116.

245. Zouboulis C.C., Boschnakow A. Chronological ageing and photoageing of the human sebaceous gland //Clin. Exp. Dermatol. 2001. - V.26. - N 7. - P.600-607.

246. Zouboulis Ch.C. Intrinsic skin aging. A critical appraisal of the role of hormones //Hautarzt. 2003. - V.54. - N9. - P.825-832.

Информация о работе

Петренко, Елена Геннадьевна
кандидата биологических наук
Уфа, 2007
ВАК 03.00.04

Диссертация

Оценка биологического возраста человека на основе анализа динамики содержания биополимеров в коже и сыворотке крови - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы