Оптимизация процесса ризогенеза подвоев и сортов яблони и груши in vitro

Пронина, Ирина Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Оптимизация процесса ризогенеза подвоев и сортов яблони и груши in vitro
ВАК РФ 06.01.07, Плодоводство, виноградарство

Автореферат диссертации по теме "Оптимизация процесса ризогенеза подвоев и сортов яблони и груши in vitro"

На правах рукописи

ПРОНИНА Ирина Николаевна

ОПТИМИЗАЦИЯ ПРОЦЕССА РИЗОГЕНЕЗА ПОДВОЕВ И СОРТОВ ЯБЛОНИ И ГРУШИ IN VITRO

Специальность 06 01 07 - плодоводство, виноградарство

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

0031B64G9

Мичуринск-2008

Работа выполнена в ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт садоводства им И В Мичурина» Россельхозакадемии

Научный руководитель

кандидат сельскохозяйственных наук 1 Туровская Нина Ивановна!

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук,

профессор

Деменко Василий Иванович

кандидат сельскохозяйственных наук Минаев Вадим Александрович

Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и селекции плодовых культур» им И В Мичурина Россельхозакадемии

Защита диссертации состоится 24 апреля 2008 г в 1330 на заседании диссертационного совета Д 220 041 01 при Мичуринском государственном аграрном университете по адресу 393760, Тамбовская область, г Мичуринск, ул Интернациональная, 101

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Мичуринского государственного аграрного университета, а с авторефератом на сайте университета http // mgau ru /

Автореферат разослан «Л^ъМ^/уги2- 2008 г

7'-

Отзывы на автореферат в двух экземплярах, заверенные и скрепленные гербовой печатью, просим направлять ученому секретарю диссертационного совета

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 220 041 01, кандидат сельскохозяйственных наук ^ у Соломатин Н М

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Интенсификация отрасли садоводства определяет необходимость разработки новых эффективных технологий производства оздоровленного высококачественного посадочного материала Маточные и промышленные насаждения плодовых и ягодных культур, заложенные сертифицированным посадочным материалом, максимально реализуют свой генетический потенциал и дают в 1,5-4 раза больше продукции, чем при использовании рядового материала От качества посадочного материала во многом зависит дальнейшее состояние плодовых деревьев и продуктивность заклады 5аемых садов, а, следовательно, и эффективность отрасли Особое место в современной технологии производства высококачественного посадочного материала плодовых культур занимает метод клонального микроразмножения

И ряде стран, таких как США, Франция, Германия, Япония, Италия, Великобритания и других, этот метод прочно вошел в практику садоводства и наряд}' с термотерапией используется для промышленного получения оздоровленного посадочного материала

Ведущими промышленными культурами из семечковых пород во многих регионах мира, в т ч нашей стране, являются яблоня и груша К настоящему времени достигнуты определенные результаты по клональному микроразмножению данных культур Однако этап ризогенеза, особенно для древесных плодовых культур, до сих пор является главной проблемой в технологии клонального микроразмножения Это связано с тем, что воспроизводимость результатов in vitro низкая, большинство подвоев и сортов имеют ярко выра-женнь й индивидуальный характер при культивировании, и они не могут быть перене сены с одних объектов на другие К тому же в последние годы в нашей стране получены новые подвои и сорта, размножение которых культурой изолированных меристем мало изучено или вообще не изучено

Следовательно, разработка и усовершенствование этапа ризогенеза в техно! огической цепочке клонального микроразмножения яблони и груши является актуальной проблемой и определяет направленность наших исследований

Цель исследований. Оптимизация основных элементов технологического процесса ризогенеза клоновых подвоев и сортов яблони и груши in vitro

В связи с этим решались следующие задачи:

- определить тип ауксина, оптимальную концентрацию и способ его воздействия на микропобег,

- рассмотреть возможность укоренения микропобегов непосредственно в почвенном субстрате,

- установить оптимальный состав и консистенцию питательной среды,

- оценить последействие факторов этапа собственно микроразмножения на индукцию ризогенеза,

- изучить влияние этиоляции, длительности культивирования и длины микропобегов на процесс корнеобразования,

- выявить родовые и сортовые особенности ризогенеза яблони и груши,

- рассчитать экономическую эффективность выращивания клоновых подвоев груши с использованием метода in vitro

Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые изучены особенности ризогенеза in vitro клоновых подвоев груши селекции ВНИИСим ИВ Мичурина

Изучено влияние основных факторов на ризогенез клоновых подвоев и сортов яблони и груши in vitro

Подобраны оптимальные концентрации, способы и время воздействия индуктора ризогенеза на микропобег в зависимости от генотипа

Разработан новый способ обработки микропобегов ауксином (патент РФ № 2060646)

Определено влияние антиоксидантов на этапе ризогенеза Показана возможность ризогенеза микропобегов в субстрате, минуя укоренение в пробирке, совмещая два этапа микроразмножения ризогенез и адаптацию

Предложенные приемы оптимизации ризогенеза in vitro могут быть использованы в промышленной технологии производства оздоровленного высококачественного посадочного материала подвоев и сортов яблони и груши

Апробация работы. Результаты исследований докладывались на заседаниях Ученого совета ВНИИС им И В Мичурина (1991-2007 гг) и были представлены на международных конференциях «Биология клеток растений m vitro и биотехнология» (Алма-Ата, 1993, Саратов, 2003), научно-методической конференции «Совершенствование сортимента и технологии возделывания груши» (Орел, 1997), VIII International Pear Symposium (Италия, 2000), международной научно-практической конференции «Мобилизация адаптационного потенциала садовых растений в динамичных условиях внешней среды» (Москва, 2004), Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения биотехнологии в виноградарстве и других отраслях сельского хозяйства» (Новочеркасск, 2005), международных научно-практических конференциях «Современные проблемы технологии производства, хранения, переработки и экспертизы качества сельскохозяйственной продукции» (Мичуринск, 2007) и «Инновационные направления в питомни-ководстве плодовых культур», (Москва, 2007)

Публикация результатов исследований. Всего опубликовано 27 научно-методических работ, из них по материалам диссертации 19

Реализация результатов исследований. Результаты исследований внедрены в лаборатории биотехнологии ВНИИС им И В Мичурина, полученные in vitro растения высажены в маточники клоновых подвоев яблони и груши в ОПО ВНИИС Разработаны (в соавторстве) учебное пособие «Кло-нальное микроразмножение плодовых и ягодных культур» (Воронеж, 1998, 2003), предназначенное для студентов агрономических специальностей, и «Методика регенерации яблони и груши из пазушных меристем и вегетатив-

ных органов» (Мичуринск, 2006), рекомендованная для научно-исследовательских и промышленных лабораторий in vitro, получен патент «Способ укоренения побегов плодовых культур, полученных in vitro» (1996)

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 164 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, выводов, рекомендаций для использования в науке и производстве, приложения, содержит 35 таблиц и 47 рисунков Список использованной литературы включает 245 источьиков, в том числе 156 на иностранных языках

Объекты, условия и методика исследований. Работа проводилась в течение 1991-2007 гг в лаборатории биотехнологии ГНУ ВНИИС им ИВ Мичурина Россельхозакадемии и на экспериментальных участках ОПО ВНИИС им И В Мичурина в 2000-2007 гг

Объектами исследований служили клоновые подвои яблони - 54-118, 62-396, 57-491, 57-545 (селекции МичГАУ), 3-3-3, 3-5-44, 3-17-38 (селекции ВНИИС им ИВ Мичурина), Р60, Р59, Р22, Р16, Р2 (польской селекции), ММ106, М26 (английской селекции), клоновые подвои груши — груша №10, груша №12, 17-16, 218-2-2, 218-4-4, 217-24-4, 55-3 (селекции ВНИИС им И В Мичурина), сорта яблони - Мелба, Лобо, сорта груши - Осенняя Яковлева, Бессемянка, Елена На этапе ризогенеза использовали питательную среду на основе прописи Мурасиге-Скуга (Murashige Т, Ckoog F , 1962), разбавленную вдвое то минеральному составу с добавками аскорбиновая кислота - 1,5мг/л, тиамин HCl, пиридоксин HCl, никотиновая кислота - по 0,5 мг/л, мезоино-зит- 100 мг/л, сахароза - 20 г/л, агар - 7-8 г/л В качестве индуктора ризогенеза применяли индолилмасляную (ИМК) и индолилуксусную (ИУК) кислоты, а также 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту (2,4-Д)

При укоренении микропобегов в субстрате использовали смесь из торфа, речного песка и дерновой земли в соотношении 1 1 1

Микропобеги культивировали при температуре 24±2°С, освещенности 2000-3000 лк, длительности фотопериода 16 часов и относительной влажности во щуха 65-95%

Оценку процесса ризогенеза проводили в динамике путем подсчета количества микропобегов с корнями В конце опыта (при переносе в нестерильные условия) анализировали количество корней и их длину

Опыты проводили в трех- или четырехкратной повторности по 10-15 микро юбегов

Статистическая обработка экспериментальных данных осуществлялась методом дисперсионного анализа по Доспехову Б А (1985) с оценкой наименьшей существенной разницы (HCP0s) и с помощью t-критерия Дункана (при э гом наличие одинаковых букв при цифровых показателях указывает на отсутствие различий при Р=0,05) Индикатор укореняемости рассчитывали по методике Suzuki Т et al (1988)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Оптимизация химического состава питательной среды и его влияние на процесс ризогенеза клоповых подвоев и сортов яблони и груши

Индукторы ризогенеза in vitro. Влияние различных типов и концентраций ауксинов на корнеобразование Наиболее важными компонентами питательной среды на этапе ризогенеза являются ауксины индолилуксусная (ИУК) и индолилмасляная (ИМК) кислоты, которые обладают различной ри-зогенной активностью Применение того или иного ауксина и его концентраций, необходимых для оптимального корнеобразования побегов зависит от многих факторов, и в первую очередь от генотипа

На подвоях яблони отечественной селекции 54-118, 62-396 и 3-3-3 наилучшая укореняемость микропобегов (100%) отмечена при введении в среду 0,5 мг/л ИМК, а у сорта Мелба - 1,0 мг/л ИМК Увеличение концентрации ауксина до 2,0 мг/л способствовало каллусообразованию и ослаблению процесса ризогенеза у данных подвоев, так например, у 54-118 на 11,1-44,5% (рис 1) Применение ИУК на подвоях яблони 3-3-3 и 54-118 было не эффективным Однако количество корней на средах с ИУК увеличивалось в 1,5-2,0 раза и варьировало от 2,3 до 6,4 штук в среднем на 1 побег Хорошие результаты получены по укореняемости подвоя 62-396 Уже через 2 недели культивирования на среде с содержанием 3,0 мг/л ИУК укоренились все побеги, а в остальных вариантах только лишь через 4 недели

У подвоя яблони 57-491 максимальная укореняемость наблюдалась на среде с концентрацией ИУК 5,0 мг/л и достигала всего лишь 46,7%, а для 3-5-44 наиболее эффективным стимулятором ризогенеза явилась ИМК в концентрации 1,0 мг/л (66,7%) Интенсивнее процесс корнеобразования протекал у подвоя 57-545, который через 3 недели культивирования на среде с ИУК 3,0-5,0 мг/л имел 100% укореняемость побегов Применение в качестве стимулятора ИМК способствовало образованию каллуса и ингибировало процесс ризогенеза, что отразилось как на укореняемости побегов, так и на качестве корневой системы

Стимулирующее действие ИМК в концентрации 2,0 мг/л было отмечено на подвоях яблони Р60 и Р59, у которых через 3 недели культивирования укоренилось 83,3% и 100% микропобегов при индикаторе укореняемости 2,5 и 3,0, соответственно У подвоя Р59 процессы ризогенеза активно протекали и при введении в среду ИУК в концентрации 4,0 мг/л Использование ИМК для укоренения подвоев Р2, Р16 и Р22 оказалось не эффективным Лучше процессы корнеобразования протекали в присутствии более слабого ауксина - ИУК в концентрации 3,0-4,0 мг/л Так, у Р2 начало корнеобразования было отмечено на 8-ой день культивирования и уже через 2 недели наблюдалась наивысшая укореняемость микропобегов (100%), а у Р22 несколько позже - через 3 недели У подвоя Р16 корнеобразование было затруднено, и укореняемость составила всего лишь 41,7-58,3%

через 3 недели через 5 недель

сроки учета

через 2 недели через 4 недели

сроки учета

через 2 недели через 4 недели

сроки учета

без гормонов

ИМК 0,5 мг/л ИУК 3,0 мг/л

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

Р60

ООО

через 2 недели

%Ш

через 3 недели сроки учета

ь ь

ИМК 1,0 мг/л ИУК 4,0 мг/л

I ИМК 1,5 мг/л Ц ИУК 5,0мг/л

через 5 недель

ИМК 2,0 мг/л ИУК 6,0 мг/л

Рисунок 1 - Влияние типа и концентрации ауксина на корнеобразование клоновых подвоев яблони и груши.

Аналогичное действие ИМК выявлено и на подвоях груши, и только лишь у сорта Осенняя Яковлева повышение концентрации ИМК, наоборот, стимулировало ризогенез на 12,7% Более интенсивной ризогенной активностью отличался подвой груши №12, у которого первые корни появились уже через 10 дней культивирования, а у сорта Осенняя Яковлева - только через 4 недели

В присутствии ИУК корнеобразование груши проходило более активно, чем у яблони Так, через 2 недели культивирования подвоя 55-3 на средах с 5,0 и 6,0 мг/л ИУК укореняемость была уже наивысшей и составила 100% У груши №12 лучшие результаты были с ИУК в концентрациях 3,0 и 5,0 мг/л через 2 недели укоренилось 88,9% побегов, а через 4 недели — 100% В отмеченных вариантах наблюдались не только высокая укореняемость и наилучшая скорость корнеобразования, но и количество корней было в 2 раза больше, чем в вариантах с ИМК

Согласно литературным источникам, 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-Д) в малых концентрациях оказывает действие, аналогичное ауксину Однако полученные нами результаты исследований свидетельствуют о нецелесообразности применения 2,4-Д (0,01-0,2 мг/л) для ризогенеза яблони и груши in vitro укореняемость в зависимости от генотипа на 10 (3-3-3) - 70% (62-396) ниже, чем в контроле (ИУК 5,0 мг/л)

Оптимизация способа воздействия ауксина на микропобег Известны два способа воздействия индуктора ризогенеза на микропобег - введение в среду и замачивание Замачивание микропобегов подвоев яблони ММ 106, 3-5-44 и груши 17-16 в водном растворе ИМК в концентрации 100 мг/л в течение 30 минут способствовало не только повышению укореняемости, но и ускоряло процесс ризогенеза, по сравнению с введением ауксина в питательную среду - первые корни появлялись через 10 дней (табл 1) Уже через две недели культивирования наблюдался стимулирующий эффект замачивания, особенно у подвоя яблони 3-5-44, где укореняемость превышала контрольный вариант (введение ИМК в среду) на 59,4%, а через 4 недели на 34,3%

Аналогичные результаты были получены на подвоях груши №12, 218-4-4, 217-24-4, 55-3 и сортах - Осенняя Яковлева, Бессемянка Через 2 недели культивирования количество укорененных побегов при замачивании было на 4,3 (Бессемянка) - 38,9% (217-24-4) выше, чем при введении ИМК в среду Однако через 6 недель только у подвоя 217-24-4 и сорта Осенняя Яковлева укореняемость при кратковременной обработке значительно превышала контроль - на 38,9 и 17,8%, соответственно, у остальных исследуемых подвоев и сортов различия были не существенны Постоянное присутствие ауксина в питательной среде способствовало сильному каллусообразованию (до 50%) как у яблони, так и у груше, чего не отмечалось при кратковременной обработке микропобегов регулятором корнеобразования

Обработка побегов регуляторами корнеобразования может быть как в течение нескольких минут, так и нескольких часов, но при более низкой концентрации ауксина (табл 2)

Таблица 1 - Укореняемость и качество корневой системы подвоев яблони и груши в зависимости от способа введения ИМК ___

Подвой Способ введения, концентрация (мг/л) и экспозиция (мин) Укореняемость через недель, % Растений с каллусом, % Количество корней, шт/ раст Средняя длина 1-го корня, см Индикатор укоре-

2 3 4 няе-мости

17-16 вереду, 1,5 28,1 34,4 34,4 Г 50,0 6,8 2,8 1,53

замачивание, 100/30 54,8 64,5 67,7 Ьсс1 0,0 3,9 5,6 1,34

ММ 106 в среду, 1,5 25,8 77,4 77,4 аЬ 32,3 8,5 2,9 3,16

замачивание, 100/30 46,9 75,0 75,0 аЬс 0,0 5,5 2,7 2,19

3-5-44 в среду, 1,5 6,2 59,4 59,4 Ьсёе 31,2 6,2 4,1 2,66

замачивание, 100/30 65,6 93,7 93,7 а 0,0 10,4 5,2 3,52

НСР05 1,5 0,8

Таблица 2 - Влияние концентрации и способа воздействия ИМК на ризогенез

Подвой Концентрация ИМК (мг/л) / экспозиция Укореняемость через недель, % Количество корней, шт /раст Средняя длина 1-го корня, см Индикатор укореняемо-сти

2 3 5

Р60 1,0* 0,0 33,3 66,7 с! 4,0 2,5 1,7

30/18 ч 0,0 66,7 66,7 а 2,5 2,2 1,0

100/30 мин 0,0 0,0 33,3 в 1,0 3,0 0,3

Р59 1,0* 0,0 0,0 25,0 й 1,0 1,2 0,2

30/18ч 16,7 16,7 66,7(1 4,2 5,0 1,7

100/30 мин 50,0 58,3 58,3 с1еГ 5,3 4,2 1,5

Р22 1,0* 28,6 50,0 78,6 Ьс 3,1 1,3 1,7

30/18ч 84,6 84,6 84,6 Ь 3,5 1,7 1,9

100/30 мин 100,0 100,0 100,0 а 5,0 4,5 2,3

Р2 1,0* 40,0 60,0 60,0 с!е 1,8 2,1 1,8

30/18ч 100,0 100,0 100,0 а 6,6 3,1 3,0

100/30 мин 100,0 100,0 100,0 а 6,7 4,0 2,8

НСР05 1,0 0,2

* - контроль

Наилучшая активность процессов корнеобразования отмечена у подвоев яблони Р22 и Р2, которые уже через 2 недели культивирования имели наивысшие показатели по укореняемости (84,6 и 100%), как при экспозиции 18 часов, так и 30 минут. Несколько хуже укоренились микропобеги подвоев Р60 и Р59 Замачивание микропобегов положительно влияло на качество корневой системы всех исследуемых подвоев, за исключением подвоя Р60

Нами было проведено совершенствование способа обработки основания микропобегов Замачивание микропобегов яблони и груши проводили в том же культуральном сосуде, что и последующее укоренение (патент РФ №2060646, 1996 г) В качестве индуктора ризогенеза использовали ИМК в концентрации 3,0 мг/л, размещенную над агаризованной средой, при длительности обработки 5 дней, после чего раствор ИМК сливали Такой способ обработки оснований микропобегов не только ускорял процессы корнеобразования, но и повышал укореняемость и в 1,1-2,7 раза увеличивал количество корней, а также полностью исключал образование каллуса (табл 3)

Таблица 3 - Укореняемость яблони и груши в зависимости от способа введения ИМК_

Подвой сорт Способ введения ауксина Кон-центра-ция, мг/л Укореняемость через недель, % Растений с каллусом, % Количество корней, шт / раст Средняя длина 1-го корня, см Индикатор укореняемости

2 4 6

Груша № 12 в среду* 0,5 58,1 76,4 81,4 ab 20,0 5,1 3,6 2,0

над средой 3,0 61,1 83,3 83,3 ab 0,0 5,6 2,7 2,2

ММ 106 в среду'" 0,5 8,3 50,0 55,6 с 33,3 2,1 3,9 0,8

над средой 3,0 45,8 95,6 95,6 а 0,0 4,2 2,1 2,0

НСР05 1,0 1,2

54-118 в среду* 1,5 11,1 55,6 88,9 а 100,0 3,3 0,7 1,8

над средой 3,0 50,0 87,5 87,5 а 0,0 9,0 2,4 2,3

Бессемянка в среду* 1,5 77,8 77,8 77,8 а 33,3 8,0 0,7 2,3

над средой 3,0 75,0 87,5 87,5 а 0,0 6,8 2,6 1,4

НСР05 F(j>aKT< FTeop 0,4

* - контроль

Изучение продолжительности воздействия ИМК в агаризованной среде показало, что оптимальным является 4 дня (табл 4) Начало корнеобразования отмечалось уже через 1,5 недели Увеличение длительности культивиро-

вания микропобегов на среде с ауксином до 10 дней снижало не только укореняемость, но и количество корней, а также, как и постоянное присутствие ауксина в среде, способствовало каллусообразованию, что вероятно и повлияло на снижение укореняемости (на 6,4-50,0%)

Таблица 4 - Влияние концентрации ИМК и длительности экспозиции на укореняемость подвоя яблони 54-118___

Длитель- Концен- Укореняемость через Коли- Средняя! Инди-

но :ть воз- трация недель, % чество длина катор

действия ИМК, корней, 1-го укоре-

-1МК мг/л 1,5 2,5 4 шт/ корня, няемо-

раст см сти

1,0 0,0 75,0 83,3 Ьсс! 4,0 3,4 1,7

постоянно -контроль 2,0 0,0 66,7 83,3 Ьсс! 3,7 3,7 1,8

2,5 0,0 54,6 75,0 с1е 4,7 2,0 2,1

3,0 0,0 18,2 50,0 й 2,7 2,2 0,9

4 дня 2,0 22,2 100,0 100,0 а 4,1 2,9 2,6

2,5 33,3 88,9 100,0 а 6,5 2,5 2,9

3,0 37,5 83,3 100,0 а 4,5 1,7 2,5

7 дней 2,0 0,0 100,0 100,0 а 6,0 2,3 3,0

2,5 0,0 72,7 90,9 аЬс 6,7 3,0 2,8

3,0 0,0 50,0 91,7 аЬ 7,4 1,9 2,8

10 дней 2,0 0,0 58,3 75,0 ае 1,9 2,9 1,9

2,5 0,0 41,7 66,7 ef 4,3 1,2 1,5

3,0 0,0 58,3 75,0 ёе 5,4 1,6 2,1

НСР05 1,5 Рфакт < Ртеор

Таким образом, кратковременное воздействие ауксина на микропобег в ряде случаев предпочтительнее в связи с ускорением процесса ризогенеза, увели «нием процента укореняемости, слабым каллусообразованием или его отсутс твием, чем постоянное присутствие ауксинов в среде

влияние состава питательной среды на ризогенез микропобегов Минеральный состав Полученные нами результаты исследований свидетельствуют о возможности использования для укоренения подвоев и сортов яблони и груши как питательной среды Мурасиге-Скуга (МС), так и Кворина-Лепуавра ((}Ь) различия по укореняемости и качеству корневой системы не существенны

Культивирование микропобегов непосредственно перед укоренением на среде Мурасиге-Скуга с пониженным содержанием аммонийного азота в 2

раза оказывало стимулирующее влияние на процессы корнеобразования подвоев яблони 54-118 и 3-17-38. Снижение же концентрации аммонийного азота в питательной среде до 1/4 или его отсутствие сдерживало ризогенез. Однако следует отметить, что уменьшение содержания ЫН4Ы03 в 2 и 4 раза ускоряло процесс ризогенеза на 2 недели, по сравнению с его полным содержанием по прописи Мурасиге-Скуга. Через 3 недели культивирования в данных вариантах у подвоя 3-17-38 отмечалась наивысшая укореняемость (93,7 и 87,5%), в то время как в контроле только через 5 недель (92,3%).

Уменьшение концентрации аммонийного и нитратного азота (в среде МС) в 8 раз, на фоне 1,0 мг/л ИМК, увеличивало укореняемость микропобегов подвоя яблони 54-118 на 21,7% (рис. 2), по сравнению с контролем, но не улучшало качественные показатели корневой системы. Полное отсутствие азота или только аммонийной формы оказывало существенное влияние на развитие корневой системы: в 3,8 и 2,0 раза, соответственно, снижалось количество корней, в то время как различий по укореняемости не наблюдалось.

через 3 недели через 4 недели через 5 недель сроки учета

[]0;0 Ц 0:1/8 Д 1/8 : 1/8 Ц 1/2 : 1/2-контроль

Рисунок 2 - Влияние соотношения 1ЧН4+ : N03" на укореняемость подвоя яблони 54-118.

Немаловажное значение на этапе ризогенеза имеет и содержание в среде микроэлементов: их отсутствие приводило не только к снижению укореняемости на 6,3 (54-118) - 31,3% (3-17-38), но и сдерживало процессы корнеобразования и ухудшало качество корневой системы.

Углеводы. При отсутствии в питательной среде сахарозы - основного источника углевода, как показали результаты исследования, корни не закладываются. Введение в питательную среду минимальной концентрации сахарозы (10 г/л), на фоне 5,0 мг/л ИУК, сдерживало укореняемость микропобегов у подвоя яблони 62-396 на 22,2%, а у 54-118 полностью ингибировало про-

цессы корнеобразования. Повышение содержания сахарозы до 20-30 г/л способствовало образованию корней у 66,7-75,0% и 100% микропобегов, соответственно у подвоев 54-118 и 62-396. Существенных различий по развитию корневой системы не наблюдалось. Наряду с сахарозой на этапе ризогенеза в качестве источника углевода возможно использование и глюкозы в тех же концентрациях, но с учетом генотипа. Так, например, введение в питательную среду глюкозы в концентрации 20 г/л стимулировало корнеобразование подвоя 54-118 на 19,7%, по сравнению с сахарозой в той же концентрации, а у подвом 62-396 100% укоренение микропобегов наблюдалось при концентрации глюкозы 30 г/л.

Совместное введение в питательную среду активированного угля (2,0г/л) и ауксина оказывало положительное воздействие только на качество корнег.ой системы: количество корней увеличилось в 1,6-3,0 раза, а их длина-в 3,9 раза, также отмечалось наличие корней II порядка.

Лнтиоксиданты. При введении в питательную среду на этапе укоренения (2,0 мг/л ИМК) различных антиоксидантов (аскорбиновой и лимонной кислот - 20 мг/л, поливинилпирролидона - 30 мг/л) прослеживалась геноти-пичесгая реакция: если для одних форм (Р59, 218-2-2) стимуляция ризогенеза наблюдалась в присутствии поливинилпирролидона (ПВП), то у других (Осенняя Яковлева) он сдерживал укоренение, и лучшие результаты дало введение лимонной кислоты (ЛК) (рис. 3).

юо

90 80 70

во

50 40

зо 20 10

ь ь ь-В!

-аЬ-

Р59

57-545

Лобо

218-2-2

] контроль

подвой, сорт

[У ЛК Н АК

ь ь

Осенняя Яковлева

ПВП

Рисунок 3 - Влияние антиоксидантов (на фоне 2,0 мг/л ИМК) на укореняемость яблони и груши (через 5 недель).

У подвоя 57-545 введение любого антиоксиданта обеспечивало через 5 недель культивирования 100% укореняемость микропобегов с хорошим качеством корневой системы: количество корней варьировало от 5,5 до 7,0 штук, а длина от 6,8 до 8,2 см. При укоренении подвоя яблони 57-491 количество укорененных микропобегов возрастало на 30-40% не только в присутствии

поливинилпирролидона, но и лимонной кислоты Однако введение последней способствовало повышению укореняемости, но не влияло на качественные показатели корневой системы

Укореняемость микропобегов подвоя яблони 62-396 повышалась (на 50,0%) при введении как поливинилпирролидона, так и аскорбиновой кислоты (АК), но присутствие ПВП увеличивало количество корней в 1,9 раза При укоренении сорта яблони Лобо ингибирующее действие фенолов снижалось в присутствии аскорбиновой кислоты, которая способствовала как повышению укореняемости на 16,7%, так и количества корней (в 2,8 раза)

При изучении влияния последействия антиоксидантов, применяемых непосредственно перед укоренением, также наблюдалась генотипическая реакция подвоев и сортов яблони и груши Культивирование эксплантов на питательной среде с ПВП стимулировало последующее корнеобразование у подвоев груши №12 и яблони 57-195, 62-396, в сравнении с контролем (без антиоксидантов), на 16,6-25,0% У подвоя 54-118 лучше укоренялись микропобеги со среды с ацетилсалициловой кислотой (20 мг/л) - 69,2% побегов, а в контроле - 40,0% Для сорта груши Осенняя Яковлева наиболее эффективным оказалось культивирование побегов перед укоренением на среде с лимонной кислотой (20 мг/л) через 3 недели культивирования укоренилось 77,8% микропобегов При укоренении подвоя груши №10 было отмечено ингибирующее действие антиоксидантов, которое выражалось в снижении укореняемости на 16,7-58,3% и скорости ризогенеза, в сравнении с контролем, где через 3 недели укоренились все микропобеги

Консистенция среды Для укоренения микропобегов in vitro используют агаризованную или жидкую питательные среды Однако для поддержания побегов в жидкой среде необходимо использовать подложки (табл 5)

Таблица 5 - Влияние подложки на укореняемость подвоев яблони

Подвой Консистенция Подложка Укореняемость через недель, % Количество Средняя Индии-катор

среды корней, длина укоре-

шт/ 1-го няе-

2 3 6 раст корня, см мости

агаризованная (контроль) - 4,3 45,8 65,2d 7,2 3,4 2,0

54-118 фильтровальный 31,2 81,2 81,2 bed 19,5 5,8 3,1

жидкая мостик

парафиновый диск 0,0 5,3 68,4 bed 17,4 5,4 2,9

агаризованная (контроль) - 0,0 25,0 83,3 b 5,7 5,7 2,3

3-17-38 жидкая фильтровальный мостик 83,3 100,0 100,0а 18,8 6,4 3,8

парафиновый диск 9,1 54,5 81,8 be 6,8 4,2 2,5

НСР05 6,7 0,7

3 наших исследованиях использование в качестве подложки фильтровальных мостиков стимулировало процессы ризогенеза у подвоев яблони 54-118 и 3-17-38, которые выражались в повышении укореняемости, раннем начале корнеобразования и лучшем развитии корневой системы.

Использование парафинового диска с отверстием оказывало отрицательное воздействие на процесс ризогенеза и качество корневой системы, как подвогв яблони, так и груши. Это можно объяснить тем, что парафиновый диск, очевидно, ухудшал аэрацию корневой системы микропобегов, вследствие чего ингибировапись процессы корнеобразования.

Укоренение подвоев и сортов яблони и груши в почвенном субстрате

Перспективным направлением является разработка элементов технологии укоренения микропобегов непосредственно в субстрате, миную стадию укоренения в пробирке. Полученные нами результаты исследований показали возмо «ность укоренения подвоев и сортов яблони и груши в почвенном субстрате с предварительной обработкой базальной части микропобега водным раствором ИМК в концентрации 80 и 30 мг/л в экспозиции 30 мин и 18 ч, соответственно (рис. 4).

100 90

3« 80

Í 70 О

0 60

а>

S 50

1 «

* 30 20 10 0

Р 16 Р 59 54-118 57-195 62-396 57-545 груша 17-16 Елена

№12

подвой,сорт

П ИМК 80 мг/л, 30 мин Ш ИМК 30 мг/л, 18 ч

Рисунэк 4 - Укоренение микропобегов клоновых подвоев яблони в субстрате.

Самый высокий выход укоренившихся микропобегов - 87,0% (80 мг/л ИМК, 30 мин), был отмечен у подвоя груши №12, который по многим результатам исследований можно отнести к легкоукореняющимся формам. Из подвоев яблони лучше укоренился подвой 57-195 (40,0%). Концентрация ИМК и длительность экспозиции не оказывали существенного влияния на укореняе-мость микропобегов данного подвоя яблони. Остальные исследуемые подвои

яблони и груши имели более низкие показатели ризогенеза Полученные результаты не являются оптимальными для исследуемых форм, однако, учитывая суммарные потери на этапах ризогенеза и адаптации показатели приживаемости укорененных m vitro растений значительно ниже (в 2,9-12,7 раза), чем при укоренении непосредственно в почвенном субстрате

Таким образом, укоренение микропобегов непосредственно в субстрате можно рассматривать как способ одновременного укоренения и адаптации

Изучение последействия факторов этапа собственно микроразмножения на корнеобразование

На эффективность процесса ризогенеза оказывают влияние концентрации цитокининов, присутствующие на этапе предшествующему укоренению Оптимальной концентрацией БАП, непосредственно перед укоренением, является 1,0 мг/л Указанная концентрация БАП способствовала не только увеличению количества укорененных микропобегов, но и ускоряла процессы корнеобразования и улучшала качество корневой системы, в сравнении с концентрацией оптимальной для размножения (БАП 2,0 мг/л)

Изучение последействия аденин-сульфата (АС), совместно с 2,0 мг/л БАП, на процесс ризогенеза клоновых подвоев яблони показало, что процессы корнеобразования лучше протекали у микропобегов со среды с добавлением АС в концентрации 50 мг/л (табл 6) Введение АС способствовало не только повышению укореняемости, но и значительно сокращало период образования корней высокий процент (81,6 и 91,7) укорененных побегов наблюдался уже через 2 недели культивирования

Таблица 6 - Последействие аденин-сульфата на ризогенез подвоев яблони

Подвой Регуляторы роста, мг/л Укореняемость через недель, % Количество корней, шт/ раст Средняя длина 1-го корня, см Индикатор укоре-няе-мости

2 4 5

54-118 БАП 2,0 (контроль) 33,3 66,7 66,7 d 4,0 3,8 1,0

БАП 2,0+АС50 81,6 90,3 90,3 ab 3,6 2,7 1,9

БАП 2,0+АС 100 66,7 83,3 87,5 abc 5,3 3,4 2,3

62-396 БАП 2,0 (контроль) 57,2 62,8 68,3 d 4,8 2,9 1,4

БАП 2,0 +АС 50 91,7 91,7 91,7 a 6,9 3,2 2,2

БАП 2,0+АС 100 56,7 76,7 76,7 bed 5,0 4,2 1,6

НСР05 1,8 Рфакт < Гтеор

Добавление к БАП аденин-еульфата, также как и низкие концентрации БАП, способствовало лучшему развитию побегов на этапе пролиферации и увели1 ивало процент их пригодности для следующего этапа - ризогенеза Возмо «но, это и явилось причиной стимуляции корнеобразования

Влияние фотопериода на ризогенную активность микропобегов

Немаловажное значение на этапе укоренения плодовых культур in vitro оказьпает и такой физический фактор, как свет Существует два противоположных мнения о влиянии света на ризогенез необходима высокая интенсивность (.вета и инициация корней должна проходить в темноте

Исследования, проведенные нами на подвоях и сортах груши, показали, что этиоляция микропобегов в начальный период укоренения в течение 5, 10 и 15 дней (в зависимости от генотипа), с последующим культивированием на свету, оказывала стимулирующее воздействие на корнеобразовательные процессы (табл 7)

Таблица 7 - Влияние этиоляции на укореняемость груши

Продол- Укореняемость через Коли- Средняя Инди-

житель- недель, % че- длина 1-го корня, катор

Подвой, сорт ность этиоля- ство кор- укоре няемо

ции, дней 2 3 4 ней, шт / раст см сти

0 (контроль) 27,3 72,7 72,7 cd 3,3 5,2 2,0

55-3 5 0,0 66,7 83,3 be 3,6 3,6 2,2

10 0,0 83,3 83,3 be 5,8 4,0 2,3

15 0,0 66,7 66,7 d 5,3 3,1 1,9

Груша №12 0 (контроль) 83,3 91,7 100,0 a 6,4 1Д 3,0

5 33,3 100,0 100,0 a 8,0 1,4 3,6

10 0,0 100,0 100,0 a 7,5 1,1 3,3

15 0,0 66,7 75,0 cd 6,9 1,5 2,8

Осенняя Яковлева 0 (контроль) 41,7 83,3 83,3 be 3,4 1,3 1,3

5 0,0 83,3 91,7 ab 2,9 1,2 1,7

10 0,0 75,0 100,0 a 4,8 1,3 2,5

15 0,0 100,0 100,0 a 4,9 0,7 2,7

НСР 05 1,5 0,6

Обработка оснований микропобегов подвоев яблони регулятором ризогенеза в темноте с последующим культивированием на безгормональной среде и сзету также способствовала не только повышению укореняемости (на

12,5-37,5%), но и ускоряла процесс корнеобразования на 1-2 недели, и улучшала качество корневой системы

Этиоляция микропобегов подвоев яблони и груши на этапе пролиферации непосредственно перед укоренением желаемого эффекта не дала Влияние длительности культивирования на ризогенез Также нет единого мнения о влиянии длительности субкультивирования на процессы ризогенеза В наших исследованиях наблюдалась генотипи-ческая реакция подвоев яблони и груши на увеличение количества субкультивирований у одних форм (груша №12, 54-118) укореняемость микропобегов увеличилась на 48,3 и 18,7%, а у других (груша №10, 62-396) - снижалась на 26,7 и 15,9%, соответственно

Изучение влияния некоторых морфологических и механических факторов на процесс формирования корней

Длина микропобега При укоренении подвоев яблони и груши хорошо прослеживалась зависимость укореняемости от длины микропобегов Так, с увеличением длины повышался процент укорененных побегов, который варьировал от 11,1% (при длине 0,5 см) до 100% (3,0 см), а также улучшалось качество корневой системы Такая зависимость объясняется тем, что микропобеги длиной более 1,0 см, имеют лучшее развитие, а, следовательно, и обладают хорошей корнеобразующей способностью

Поранения, нанесенные на базапьной части побегов при разборе конгломератов, а также увеличение площади среза вызывают образование раневого каллуса, который уже в свою очередь ингибирует процессы корнеобразования

Экономическая эффективность выращивания подвоев груши с использованием метода клонального микроразмножения

Использование клонального микроразмножения для успешного размножения ценных форм плодовых и ягодных культур является перспективным способом, так как он значительно превосходит все остальные по скорости размножения Основываясь на результатах наших исследований, от 1-ой меристемы за 6 пассажей можно получить, в зависимости от формы, от 64 до 10135 штук адаптированных растений подвоев груши

Полученные нами результаты исследования показали, что продуктивность маточных растений подвоя груши №10, размноженных in vitro, в 1,9 раза выше (в среднем за 3 года), чем полученных через зеленое черенкование- традиционный способ размножения (табл 8)

Таблица 8 - Влияние способа размножения на регенерационную способность подвоя груши №10 (2004-2006 гг ) ___

Способ размножения Количество побегов, шт /раст Укореняемость зеленых черенков, % Количество корней, шт /раст Длина корней, см

традиционный 13,0 38,2 b 3,4 11,0

in vitro 24,5 69,1 а 8,4 10,8

НСР05 6,0 - 1Д Рфакт<Ртабл

Способ размножения маточных растений оказывает существенное влияние и на процессы корнеобразования зеленых черенков укореняемость зеленых черенков, взятых с растений из in vitro, была на 30,9% выше, чем с обычных растений Также улучшалось и качество укорененных черенков Возможно, повышение регенерационной способности, как маточных растений мгристемного происхождения, так и зеленых черенков, нарезанных с них, связано с их оздоровлением и реювенильностью

Включение метода клонального микроразмножения в технологию производила высококачественного оздоровленного посадочного материала груши (при размножении зелеными черенками) позволяет получать значительную прибыль и повысить уровень рентабельности в 1,9 раза, по сравнению с обычг ой технологией (табл 9)

Таблица 9 - Экономическая эффективность производства подвойного матер 4ала груши №10 при размножении зелеными черенками (в ценах 2007г)

Показатели Традиционный способ С использованием метода in vitro

Выход укорененных зеленых черенков, тыс шт с 1 га маточника 287 1036

Все! о затрат, тыс руб /га 1291,5 3874,6

Себестоимость, руб /шт 4,50 3,74

Средняя цена реализации, руб /шт 6,61 7,00

Выручка, тыс руб/га 1897,1 7252,0

Прибыль, тыс руб /га 605,6 3377,4

Уровень рентабельности, % 46,9 87,2

Товышению рентабельности способствуют увеличение продуктивности маточ шка, укореняемости зеленых черенков, а также улучшение их качества, которое влияет на цену реализации

ВЫВОДЫ

I Оптимизированы основные элементы технологического процесса ри-зогенеза клоновых подвоев и сортов яблони и груши и выявлена их генотипи-ческая реакция, как на воздействие различных стимуляторов корнеобразования, так и всех исследуемых нами факторов, влияющих на ризогенез

I Клоновые подвои яблони 54-118, 3-3-3, 3-5-44 и Р60 можно отнести к трудноукореняемым in vitro, и для их укоренения, при введении индуктора ризогенеза непосредственно в среду, следует использовать сильнодействующий а/ксин - ИМК в концентрации 1,0-2,0 мг/л Для укоренения остальных изученных нами подвоев яблони и груши, как легкоукореняющихся, предпочтительнее ИУК - 3,0-5,0 мг/л

i Кратковременное воздействие ИМК на микропобеги оказывает большее стимулирующее влияние, чем постоянное ее присутствие в среде Замачивание микропобегов клоновых подвоев яблони и груши в водном рас-

творе ИМК в концентрациях 30, 50 и 100 мг/л в течение 18 ч и 30 мин способствует более раннему началу корнеобразования (на 4-5 дней), повышению укореняемости на 10-39%, лучшему развитию корневой системы, а также снижению или отсутствию каллусообразования

4 Стимулирующий эффект (на 15,9-50,0%) на процессы корнеобразования клоновых подвоев яблони и груши оказывает культивирование микропобегов в течение 4-7 дней на агаризованной питательной среде с 2,0-3,0 мг/л ИМК и последующей пересадкой на среду свободную от гормонов

5 Разработанный нами способ обработки микропобегов яблони и груши индуктором ризогенеза (патент РФ №2060646) позволяет не только ускорить на 1-2 недели процесс корнеобразования, но и увеличить укореняемость на 10-40%, улучшить качество корневой системы и исключить образование каллуса

6 Уменьшение содержания аммонийной формы азота в 2 раза непосредственно перед укоренением ускоряет процесс ризогенеза клоновых подвоев яблони 54-118 и 3-17-38 на 2 недели, но не оказывает влияния на качественные показатели корневой системы На этапе ризогенеза целесообразно концентрацию аммонийного и нитратного азота снижать в 8 раз

7 Источником углевода на этапе ризогенеза может служить как сахароза, так и глюкоза, в концентрациях 20-30 г/л

8 Укоренение микропобегов в жидкой питательной среде с использованием фильтровальных мостаков стимулирует процессы ризогенеза отмечается раннее и интенсивное корнеобразование, укореняемость повышается на 16,0-16,7%, количество корней увеличивается в 2,7-3,3 раза, а их длина в 1,7 раза

9 Установлена возможность укоренения клоновых подвоев яблони и груши непосредственно в субстрате, минуя укоренение в пробирке, с предварительной обработкой оснований микропобегов ауксином, совмещая этапы ризогенеза и адаптации

10 Совместное применение ауксина и антиоксиданта (лимонная и аскорбиновая кислоты, поливинилпирролидон) стимулирует ризогенез подвоев и сортов яблони и груши на 13,4-40,0% и носит генотипический характер у сорта груши Осенняя Яковлева показатели ризогенеза лучше в присутствии лимонной кислоты, у Р59 - ПВП, а у подвоев 57-491 и 57-545 - и лимонной кислоты, и ПВП

11 Микропобеги подвоев яблони, культивируемые перед укоренением на средах с пониженной концентрацией БАП (1,0 мг/л), а также с БАП 2,0мг/л, но дополненные аденин-сульфатом в концентрации 50 мг/л, обладают повышенной ризогенной активностью ускоряется корнеобразование, повышается укореняемость и улучшается качество корневой системы

12 Насыщение микропобегов индуктором ризогенеза в течение 7-10 дней в темноте, с последующим переносом на свет и среду, свободную от гормонов, способствует не только повышению укореняемости на 12,5-37,5%, но и ускорению процесса корнеобразования на 1-2 недели

13 Включение метода клонального микроразмножения в технологию проишодства высококачественного посадочного материала груши (при размножении зеленым черенкованием) позволяет повысить уровень рентабельности в 1,9 раза, по сравнению с обычной технологией, и получать значительную прибыль

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ НАУКИ И ПРОИЗВОДСТВА

1 Для увеличения количества микропобегов, пригодных для укоренения и улучшения их качества, последнее субкультивирование на этапе собственно! микроразмножения проводить на питательных средах с пониженным содержанием БАП - 1,0 мг/л Лучшему развитию побегов и последующему ризогенезу также способствует дополнительное введение, совместно с БАП 2,0 mi/л, аденин-сульфата в концентрации 50 мг/л

2 Непосредственно перед укоренением содержание нитрата аммония (NH4NO3) уменьшать в 2 раза.

3 Для ризогенеза легкоукореняющихся форм клоновых подвоев яблони и груди использовать ИУК в концентрации 3,0-5,0 мг/л, а для трудноукоре-няюшихся - ИМК в концентрации 1,0-2,0 мг/л

4 Предпочтительнее проводить предварительное замачивание микропобегов с последующей их посадкой на питательную среду свободную от гормснов Для этого используют ИМК в различной концентрации и экспозиции 00 мг/л в течение 30 мин, 30 мг/л - 18 часов, 2,0-3,0 мг/л - 4-7 дней в темноте Также можно применять и следующий способ обработки микропобеги :амачивают в течение 5 дней в водном растворе ИМК (3,0 мг/л), размещенном над агаризованной средой в сосудах для укоренения (патент РФ №2063646)

5 При закладке маточных насаждений клоновых подвоев яблони и груши использовать растения, полученные методом клонального микроразмножения, которые позволяют не только увеличить продуктивность, но и повысить качество посадочного материала

6 При микроразмножении растений предложено пользоваться разработанными нами в соавторстве учебным пособием «Клональное микроразмножение плодовых и ягодных культур» (1998, 2003), предназначенным для студентов агрономических специальностей, и «Методикой регенерации яблони и грушр из пазушных меристем и вегетативных органов» (2006), которая рекомендована для научно-исследовательских и промышленных лабораторий

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Т /ровская, Н И Влияние аденин-сульфата на регенерацию подвоев яблони in vitro /НИ Туровская, И Н Пронина // Биология клеток растений in vitro и биотехнология Тез докл Международ конф - Алма-Ата, 1993 -С 249

2 Пронина, И Н Влияние ИМК и ИУК на ризогенез плодовых и ягодных культур in vitro / И.Н. Пронина // Методы эффективного ведения садоводства Сб науч трудов - Мичуринск, ВНИИС - 1996 -С 137-147

3 Туровская, НИ Способ укоренения побегов плодовых культур, полученных m vitro /НИ Туровская, И Н Пронина, О В Матушкина // Патент №2060646 РФ МКП6 А01 Н4/00 - БИ №15 - 27 05 96

4 Матушкина, О В Особенности микроразмножения груши / О В Матушкина, И Н Пронина // Совершенствование сортимента и технологии возделывания груши Тез докл науч метод конф - Орел, ВНИИСПК -1997 - С 55-57

5 Матушкина, О В Размножение новых перспективных клоновых подвоев яблони in vitro / О В Матушкина, И Н Пронина // Пути повышения устойчивости садоводства Сб науч трудов - Мичуринск, ВНИИС - 1998 -С 78-83

6 Пронина, И Н Влияние способов воздействия ИМК на укоренение клоновых подвоев яблони и груши в условиях in vitro / И Н Пронина // Пути повышения устойчивости садоводства Сб науч трудов - Мичуринск, ВНИИС - 1998 - С 87-89

7 Клональное микроразмножение плодовых и ягодных культур Учебное пособие / Н М Круглов, О В Матушкина, И Н Пронина, Р Г Ноздраче-ва, Н И Туровская - Воронеж, ВГАУ - 1998 - 72 с

8 Promna, IN Promotion of rhizogenesis in pear cultivars and clonal rootstocks in vitro /1N Promna // VIII International Pear Symposium - Italy - 2000

9 Матушкина, OB Клональное микроразмножение плодовых и ягодных культур и перспективы его использования / О В Матушкина, И Н Пронина // Основные итоги и перспективы научных исследований ВНИИС им ИВ Мичурина Сб науч трудов -Тамбов -2001,Т 2 - С 103-115

10 Клональное микроразмножение плодовых и ягодных культур Учебное пособие / Н М Круглов, О В Матушкина, И Н Пронина, Р Г Ноздраче-ва, Н И Туровская - 2-е изд доп , Воронеж, ВГАУ - 2003 - 80 с

11 Матушкина, О В Регенерация груши in vitro / О В Матушкина, И Н Пронина // Биология клеток растений m vitro и биотехнология Тез докл VIII Междунар конфер - Саратов -2003 - С 197

12 Матушкина, О В Особенности размножения клоновых подвоев яблони m vitro / О В Матушкина, И Н Пронина // Достижения науки и техники АПК -2003 -№11 -С 14-16

13 Матушкина, О В Влияние антиоксидантов на регенерацию микрочеренков яблони и груши m vitro / О В Матушкина, И Н Пронина // Мобилизация адаптационного потенциала садовых растений в динамичных условиях внешней среды Сб статей Междун конф - Москва, ВСТИСП -2004-С 230-233

14 Матушкина, О В Будущее садов за клональным микроразмножением / О В Матушкина, И Н Пронина // Главный агроном. - 2004 -№9. - С 27-29

15 Пронина, И Н Регенерационная способность яблони и груши в зависимости от длительности культивирования in vitro / И Н Пронина, О В Матушкина // Современные достижения биотехнологии в виноградарстве и других отраслях сельского хозяйства Матер конфер ГНУ ВНИИВиВ им Я И Потапенко - Новочеркасск Изд-во ЮРГТУ (НПИ) - 2005 - С 183-187

16 Матушкина, О В Особенности клонального микроразмножения яблони и груши / О В Матушкина, И Н Пронина // Труды ВНИИС им И В Мичурина Научные основы садоводства Сб. науч трудов - Воронеж Кварта -2005 - С 141-154

17Матушкина, OB Методика регенерации яблони и груши из пазушных меэистем и вегетативных органов / О В Матушкина, И Н Пронина // ГНУ ВНИИС им. И В Мичурина - Мичуринск-наукоград РФ - 2006 -21с

18 Матушкина, О.В. Клональное микроразмножение плодовых и ягодных культур в системе производства высококачественного посадочного мате-ри.ша / О В Матушкина, И Н Пронина // Труды ВНИИС им. И В Мичурина- Научные основы эффективного садоводства — Воронеж Кварта, 2006 - С 327-342

19 Мгтушкина, О В Влияние углеводов на морфогенез подвоев яблони и гр) ши in vitro /ОВ Матушкина, И Н. Пронина // Современные проблемы технологии производства, хранения, переработки и экспертизы качества сельскохозяйственной продукции Материалы между нар науч -пр<истич конференции 26-28 февраля 2007г - Мичуринск Изд-во ФГОУ ВПОМичГАУ, 2007 -Т 1 -С 309-313

Отпечатано в издательско-полиграфическом центре МичГАУ

Подписано в печать 19 03 08г Формат 60x84 '/ [6, Бумага офсетная № 1 Услпечл 1,0 Тираж 100 экз Ризограф Заказ № 13276

Издательско-полиграфический центр Мичуринского государственного аграрного университета 393760, Тамбовская обл , г Мичуринск, ул Интернациональная, 101, тел +7(47545) 5-55-12 E-mail wdem@mgauru

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Пронина, Ирина Николаевна

Введение.

1. Основные факторы, влияющие на процесс ризогенеза клоповых подвоев и сортов яблони и груши in vitro

Обзор литературы).

1.1. Роль регуляторов роста в корнеобразовании микропобеj I ! 1 '

1.2. Роль минерального состава и консистенции питательной среды в формировании корней.

1.3. Влияние углеводов и биологически активных веществ на ризогенез плодовых культур.

1.4. Воздействие физических факторов и длительности культивирования на корнеобразование микропобегов.

1.5. Влияние морфологических и механических факторов на процесс ризогенеза.

1.6. Генотипические особенности плодовых растений на этапе ризогенеза in vitro.

2. Цель, задачи, объекты, условия и методика проведения исследований.

2.1. Цель и задачи исследований.

2.2. Объекты исследований.

2.3. Условия и методика исследований.

3. Результаты исследований.

3.1. Оптимизация химического состава питательной среды и его влияние на процесс ризогенеза клоновых подвоев и сортов яблони и груши.

3.1.1. Индукторы ризогенеза in vitro.

3.1.1.1. Влияние различных типов и концентраций ауксинов на корнеобразование.

3.1.1.2. Оптимизация способов воздействия ауксина на микропобег.

3.1.2. Влияние состава питательной среды на ризогенез микропобегов.

3.2. Укоренение подвоев и сортов яблони и груши в почвенном субстрате.

3.3. Изучение последействия факторов этапа собственно микроразмножения на корнеобразование.

3.4. Влияние фотопериода на ризогенную активность микропобегов.

3.5. Влияние длительности культивирования на ризогенез.

3.6. Изучение влияния некоторых морфологических и механических факторов на процесс формирования корней.

4. Экономическая эффективность выращивания подвоев груши с использованием метода клонального микроразмножения.

Выводы.

Рекомендации для науки и производства.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Оптимизация процесса ризогенеза подвоев и сортов яблони и груши in vitro"

Освоение современных технологий производства плодов и ягод невозможно без развития питомниководства, которое обеспечивает стабильность и конкурентоспособность отрасли садоводства в целом. В связи с этим, интенсификация садоводства определяет необходимость разработки новых эффективных технологий производства оздоровленного высококачественного посадочного материала. Маточные и промышленные насаждения плодовых и ягодных культур, заложенные сертифицированным посадочным материалом, максимально реализуют свой генетический потенциал и дают в 1,5-4 раза больше продукции, чем при использовании, рядового материала (Головин С.Е., 2001). Многочисленные исследования, проведенные за рубежом и в России, свидетельствуют, что от качества посадочного материала во многом^ зависит дальнейшее состояние плодовых деревьев и продуктивность закладываемых маточников и садов, а, следовательно, и эффективность отрасли. Важное место1 в современной технологии производства высококачественного посадочного материала плодовых культур занимает метод клонального микроразмножения.

Возможности вегетативного размножения растений значительно расширились в связи с разработкой метода культуры органов и тканей, в основу которого положена индукция развития пазушных меристем. В настоящее время этот метод используется при разработке широкого круга научных и практических проблем, в глубоких теоретических исследованиях и при решении конкретных задач сельскохозяйственного производства. Высокий коэффициент размножения (1:1000000), возможность освобождения-растений от вирусной и микоплазменной инфекции; малая вероятность повторного-заражения, выполнение многих операций в контролируемых условиях в течение круглого года, наиболее полная реализация генетического потенциала при размножении, возможность воспроизводства трудноразмножающихся форм, экономное использование площадей закрытого грунта, получение растений к определенному сроку, длительное хранение их и легкость обмена между научными учреждениями позволяют рассматривать этот метод надежной альтернативой традиционным технологиям размножения и стимулируют работу по его совершенствованию. Все это дает возможность включить метод культуры in vitro в технологию производства оздоровленного высококачественного посадочного материала плодовых и ягодных культур.

Использование методов культуры изолированных тканей непосредственно в питомниководстве обычно преследует две основные цели - оздоровление и размножение (Высоцкий В.А., 2000).

В ряде стран, таких как США, Франция, Германия, Япония, Италия, Великобритания и других, несмотря на присущие методу микроразмножения организационные и технические трудности, а также проблемы, связанные с биологическими свойствами растений, этот метод прочно вошел в практику садоводства и наряду с термотерапией используется для промышленного получения оздоровленного посадочного материала.

Научно обоснованный прогноз свидетельствует о том, что в XXI веке биотехнологическая продукция составит не менее 20% всего объема товаров, поступающих на мировой рынок (Шевелуха B.C. и др., 1998).

Однако в нашей стране, несмотря на теоретические предположения об успешной регенерации в условиях in vitro многих растений, пока что этот способ используется только для размножения ограниченного количества видов. Следует отметить, что микроразмножение плодовых культур сопряжено со многими трудностями, огранивающими сферу его применения, поэтому разработка и усовершенствование промышленной технологии их размножения in vitro продолжается как в нашей стране, так и за рубежом.

Ведущими промышленными культурами из семечковых пород во многих регионах мира, в т. ч. нашей стране, являются яблоня и груша. К настоящему времени достигнуты определенные результаты по клональному микроразмножению данных культур. Однако воспроизводимость результатов in vitro низкая, большинство подвоев и сортов имеют ярко выраженный индивидуальный характер при культивировании, и они не могут быть перенесены с одних объектов на другие. К тому же в последние годы в нашей стране получены новые подвои и сорта, размножение которых культурой изолированных меристем мало изучено или вообще не изучено.

Для успешного размножения in vitro в крупных масштабах необходимо решить следующие проблемы:

-введение первичных эксплантов в культуру; -размножение побегов;

-укоренение размноженных побегов и адаптация в нестерильных условиях (Катаева Н.В., Бутенко Р.Г., 1983; Высоцкий В.А., 1989; Fiorino P., Lo-reti F., 1987; Nemeth G., 1987; Kuhne U. et al., 1988 и др.).

В решении этих вопросов достигнуты определенные успехи. Однако этап ризогенеза, особенно для древесных плодовых культур, до сих пор является главной проблемой в технологии клонального микроразмножения из-за трудности и нестабильности укоренения (Бутенко Р.Г., 1990; Верзилин А.В. и др., 2007; Высоцкий В.А., 2000; Долгих С.Г., 2004; Zimmerman R., 1978; Nemeth G., 1986).

Следовательно, разработка и усовершенствование этапа ризогенеза в технологической цепочке клонального микроразмножения яблони и груши является актуальной проблемой и определяет направленность наших исследований.

Заключение Диссертация по теме "Плодоводство, виноградарство", Пронина, Ирина Николаевна

ВЫВОДЫ

1. Оптимизированы основные элементы технологического процесса ризогенеза клоновых подвоев и сортов яблони и груши и выявлена их геноти-пическая реакция, как на воздействие различных стимуляторов корнеобразо-вания, так и всех исследуемых нами факторов, влияющих на ризогенез.

2. Клоновые подвои яблони 54-118, 3-3-3, 3-5-44 и Р60 можно отнести к трудноукореняемым in vitro, и для их укоренения, при введении индуктора ризогенеза непосредственно в среду, следует использовать сильнодействующий ауксин - ИМК в концентрации 1,0-2,0 мг/л. Для укоренения остальных изученных нами подвоев яблони и груши, как легкоукореняющихся, предпочтительнее ИУК - 3,0-5,0 мг/л.

3. Кратковременное воздействие ИМК на микропобеги оказывает большее стимулирующее влияние, чем постоянное ее присутствие в среде. Замачивание микропобегов клоновых подвоев яблони и груши в водном растворе ИМК в концентрациях 30, 50 и 100 мг/л в течение 18 ч и 30 мин способствует более раннему началу корнеобразования (на 4-5 дней), повышению укореняемости на 10-39%, лучшему развитию корневой системы, а также снижению или отсутствию каллусообразования.

4. Стимулирующий эффект (на 15,9-50,0%) на процессы корнеобразования клоновых подвоев яблони и груши оказывает культивирование микропобегов в течение 4-7 дней на агаризованной питательной среде с 2,0-3,0 мг/л ИМК и последующей пересадкой на среду свободную от гормонов.

5. Разработанный нами способ обработки микропобегов яблони и груши индуктором ризогенеза (патент РФ №2060646) позволяет не только ускорить на 1-2 недели процесс корнеобразования, но и увеличить укореняемость на 10-40%, улучшить качество корневой системы и исключить образование каллуса.

6. Уменьшение содержания аммонийной формы азота в 2 раза непосредственно перед укоренением ускоряет процесс ризогенеза клоновых подвоев яблони 54-118 и 3-17-38 на 2 недели, но не оказывает влияния на качественные показатели корневой системы. На этапе ризогенеза целесообразно концентрацию аммонийного и нитратного азота снижать в 8 раз.

7. Источником углевода на этапе ризогенеза может служить как сахароза, так и глюкоза, в концентрациях 20-30 г/л.

8. Укоренение микропобегов «в жидкой питательной среде с использованием фильтровальных мостиков стимулирует процессы ризогенеза: отмечается раннее и интенсивное корнеобразование, укореняемость повышается на 16,0-16,7%, количество корней увеличивается в 2,7-3,3 раза, а их длина в 1,7 раза.

9. Установлена возможность укоренения клоновых подвоев яблони и груши непосредственно в субстрате, минуя укоренение в пробирке, с предварительной обработкой оснований микропобегов ауксином, совмещая этапы ризогенеза и адаптации.

10. Совместное применение ауксина и антиоксиданта (лимонная и аскорбиновая кислоты, поливинилпирролидон) стимулирует ризогенез подвоев-' и сортов яблони и груши на 13,4-40,0% и носит генотипический характер: у сорта груши Осенняя Яковлева показатели ризогенеза лучше в присутствии лимонной кислоты, у Р59 - ПВП, а у подвоев 57-491 и 57-545 - и лимонной кислоты, и ПВП.

11. Микропобеги подвоев яблони, культивируемые перед укоренением на средах с пониженной концентрацией БАП (1,0 мг/л), а также с БАП 2,0 мг/л, но дополненные аденин-сульфатом в концентрации 50 мг/л, обладают повышенной ризогенной' активностью: ускоряется корнеобразование, повышается укореняемость и улучшается качество корневой системы.

12: Насыщение микропобегов индуктором ризогенеза в течение 7-10 дней в темноте, с последующим переносом на свет и среду, свободную от гормонов, способствует не только повышению укореняемости на 12,5-37,5%, но и ускорению процесса корнеобразования на 1-2 недели.

13. Включение метода клонального микроразмножения в технологию производства высококачественного посадочного материала груши (при размножении зеленым черенкованием) позволяет повысить уровень рентабельности в 1,9 раза, по сравнению с обычной технологией, и получать значительную прибыль.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ НАУКИ И ПРОИЗВОДСТВА

1. Для увеличения количества микропобегов, пригодных для укоренения и улучшения их качества, а также повышения ризогенной активности последнее субкультивирование на этапе собственно микроразмножения проводить на питательных средах с пониженным содержанием БАП— 1,0 мг/л, либо совместно с 2,0 мг/л БАП вводить- аденин-сульфат в концентрации 50 мг/л.

2. Непосредственно перед укоренением содержание нитрата аммония (NH4NO3) уменьшать в 2 раза.

3. Для ризогенеза легкоукореняющихся форм клоновых подвоевгябло-ни и груши использовать ИУК в концентрации 3,0-5,0-мг/л, а для-трудноуко-реняющихся - ИМК в концентрации 1,0-2,0 мг/л.

4. Предпочтительнее проводить предварительное замачивание микропобегов с последующей их посадкой на питательную среду свободную от гормонов. Для этого используют ИМК в различной концентрации и экспозиV ции: 100 мг/л в течение 30 мин, 30!мг/л - 18 часов, 2,0-3,0 мг/л - 4-7 дней в темноте. Также можно применять и следующий способ обработки: микропобеги замачивают в течение 5 дней в водном растворе ИМК (3,0 мг/л), размещенном над агаризованной средой в сосудах для укоренения (патент №2060646).

5. При закладке маточных насаждений клоновых подвоев яблони и груши использовать растения, полученные методом клонального микроразмножения, которые позволяют не только увеличить продуктивность, но и повысить качество посадочного материала.

6. При микроразмножении растений предложено пользоваться разработанными нами в соавторстве:

- учебным пособием «Клональное микроразмножение плодовых и ягодных культур» (1998, 2003), предназначенным для студентов агрономических специальностей;

- «Методикой регенерации яблони и груши из пазушных меристем и вегетативных органов» (2006), которая рекомендована для научно-исследовательских и промышленных лабораторий по биотехнологии;

- технологическими картами по клональному микроразмножению клоновых подвоев яблони и груши (приложение 1).

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Пронина, Ирина Николаевна, Мичуринск

1. Бартиш, И.В. Микроклональное размножение груши (Pyrus communis L.) in vitro / И.В. Бартиш, C.M. Меркулов, В.И. Корховой, В.П. Копань // Физиология и биохимия культурных растений.- 1994. Т. 26, № 1С. 84-90.

2. Бойсен-Иенсен, И. Ростовые гормоны растений / П. Бойсен-Иенсен.-M.-JL: Биомедгиз, 1938.

3. Бутенко, Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений / Р.Г. Бутенко.- М.: Наука, 1964. 272 с.

4. Верзилин, А.В. Оздоровление и клональное микроразмножение слаборослых подвоев яблони: монография / А.В. Верзилин, В.А. Минаев, A.M. Тарасов. Мичуринск: МГПИ, 2007. - 146 с.

5. Бутенко, Р.Г. Клеточные технологии в сельскохозяйственной науке и практике / Р.Г. Бутенко // Основы сельскохозяйственной биотехнологии.- М.: Агропромиздат, 1990. С. 154-235.

6. Волгина, М.А. Микроклональное размножение подвоев яблони и груши / М.А. Волгина, К.Г. Карычев, И.Ю. Ковальчук // Научные достижения в биотехнологии, виноградарстве и ягодоводстве: Сб. науч. трудов.- Алматы: Изд-во, «Бастау», 1997.- Т. 13.- С. 11-15.

7. Высоцкий, В.А. Культура изолированных тканей и органов плодовых растений: оздоровление и микроклональное размножение / В.А. Высоцкий // Сельскохозяйственная биология.-1983. № 7. - С. 42-47.

8. Высоцкий, В.А. Клональное микроразмножение растений / В.А. Высоцкий // Культура клеток растений и биотехнология: Сб. науч. трудов.- М.: Наука, 1986.-С. 91-102.

9. Высоцкий, В.А. Клональное микроразмножение некоторых форм груши / В.А. Высоцкий // Биология культивируемых клеток и биотехнология: Тез. докл.- Новосибирск, 1988. С. 318-319.

10. Высоцкий, В.А. Клональное микроразмножение плодовых растений и декоративных кустарников / В.А. Высоцкий // Микроразмножение и оздоровление растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве: Сб. науч. трудов.- Мичуринск: ВНИИС, 1989. С. 3-8.

11. Высоцкий, В.А. Биотехнологические методы в системе производства оздоровленного посадочного материала и селекции плодовых и ягодных растений: Автореф. дис. доктора с.-х. наук. М.: ВСТИСП, 19981 - 44 с.

12. Высоцкий, В.А. Микроклональное размножение подвоев'яблони /

13. B.А. Высоцкий, О.А. Леонтьев-Орлов // Садоводство. 1983. - № У. - С. 2021.

14. Гамбург, К.З. Биохимия ауксина и его действие на клетки растений / К.З. Гамбург. Новосибирск: Изд-во «Наука», 1976. — 271 с.

15. Гамбург, К.З. Обеспечение ауксином культур клеток и тканей растений / К.З. Гамбург // Биология культивируемых клеток растений и биотехнология: Тез. докл.- Алматы: КазНИИЗ, 1993. С. 8.

16. Геринг, X. Преодоление витрификации и улучшение акклиматизации растений при клональном микроразмножении / X. Геринг // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991.1. C. 197-200.

17. Гудвин, Т. Введение в биохимию растений / Т.Гудвин, Э. Мерсер.-Пер. с англ. М.: Мир, 1986. - Т. 2. - 312 с.

18. Деменко, В.И. 5-ый международный симпозиум по применению регуляторов роста в садоводстве / В.И. Деменко, И.А. Зленко // Агрохимия.-1986.-№7. -С. 139-141.

19. Деменко, В.И. Роль этиоляции при микроклональном размножении растений / В.И. Деменко, В.А. Крючкова // Докл. ТСХА. 2001. - № 273, ч. 2. -С. 298-301.

20. Дерфлинг, К. Гормоны растений / К.Дерфлинг. Иер. с анг. - М.: Мир, 1985.-305 с.

21. Джигадло, М.И. Некоторые вопросы микроклонального размножения плодовых и ягодных культур / М.И. Джигадло // Пути интенсификации5, садоводства и селекции плодовых и ягодных культур: Сб. Тула: Приок. кн. изд-во, 1989.-С. 129-134.

22. Долгих, С.Г. Размножение и выращивание яблони в корнесобствен-ной культуре / С.Г. Долгих // Садоводство и виноградарство. 2004. - № 5. -С. 14-17.

23. Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта (с основами статистической обработки результатов исследований) / Б.А. Доспехов.- 5-е изд., пере-раб. и доп. М.: Колос, 1985. - 416 с.

24. Дубовицкий, Н.В. Меристемные методы размножения плодовых и ягодных культур / Н.В. Дубовицкий, Н.И. Туровская, A.M. Чернец // Садоводство и виноградарство. 1988. - №1-. - С. 27-29.

25. Еремин, Г.В. Продуктивность суперэлитного черенкового маточника подвоев косточковых культур / Г.В. Еремин // Садоводство и виноградарство. 1995. - №4. - С. 14-15.

26. Калашников, Д.В. Фитогормоны и синтетические регуляторы роста и развития растений в биотехнологии и растениеводстве / Д.В. Калашников // Сельскохозяйственная биотехнология: Под ред. B.C. Шевелухи. М.: Высш. шк., 1998. - С. 309-377.

27. Калашникова, Е.А. Клональное микроразмножение растений / Е.А. Калашникова // Сельскохозяйственная биотехнология: Под ред. B.C. Шевелухи. М.: Высш. шк., 1998. - С. 36-66.

28. Калинин, Ф.Л. Технология микроклонального размножения растений / Ф.Л. Калинин, Г.П. Кушнир, В.В. Сарнацкая. Киев: Наукова думка, 1992.-232 с.

29. Калинин, Ф.Л. Методы культуры тканей в биологии и биохимии растений / Ф.Л. Калинин, В.В. Сарнацкая, В.Е. Полищук. Киев: Наукова думка, 1980. - 488 с.

30. Катаева, Н.В. Особенности микроразмножения трудноукореняемых сортов яблони / Н.В. Катаева // Сельскохозяйственная биология. 1986. -№4.-С. 18-22.

31. Катаева, Н.В. Клональное микроразмножение растений / Н.В. Катаева, Р.Г. Бутенко. М.: Наука, 1983. - 96 с.

32. Ковальчук, И.Ю. Размножение косточковых культур in vitro / И.Ю. Ковальчук // Ускорение научно-технического прогресса в плодоводстве и виноградарстве и задачи молодых ученых: Сб. науч. трудов. Алма-Ата, 1987. -С. 23-25.

33. Корнацкий, С.А. Особенности клонального микроразмножения сливы в системе производства оздоровленного посадочного материала: Автореф. дис. .канд. с.-х. наук. М.: НИЗИСНП, 1991. - 24 с.

34. Корнацкий, G.A. Физиологические и фенотипические аспекты-развития регенерантов вишни и сливы при клонольном, при- клональном микроразмножении / С.А. Корнацкий; И.А. Бьядовский // Сб.: Сад1вництво. Киев; 2005. - № 57. - С.223-227.

35. Корнацкий, С.А. Проблемы клонального микроразмножения косточковых культур / С.А. Корнацкий, В.А. Высоцкий, В.Г. Трушечкин // Достижения в плодоводстве в Нечерноземной зоне РСФСР: Сб. науч. трудов. -М.: НИЗИСНП, 1991. С. 104-116.

36. Куликов, И.М: Биотехнологические приемы в садоводстве: экономические аспекты / И.М. Куликов, В.А. Высоцкий, А.А. Шипунова// Садоводство и виноградарство. 2005. - № 5. - С. 24-27.

37. Леонтьев-Орлов, О.А. Разработка клонального микроразмножения яблони: Автореф. дис. . канд. с.-х. наук.- М.: НИЗИСНП, 1986. 24 с.

38. Леонтьев-Орлов, О.А. Особенности культивирования изолированных апексов, яблони in vitrcn/ О.А. Леонтьев-Орлов, В.Г. Трушечкин, В.А. Высоцкий // Плодоводство в .Нечерноземной полосе: Сб. науч. трудов. М.: НИЗИСНП, 1988. - С. 21-30.

39. Леонтьева-Орлова, Л.А. Особенности развития и размножения растений смородины, полученных методом культуры изолированных меристем /

40. JI.A. Леонтьева-Орлова // Проблемы, современного садоводства: Тез. докл. республ. науч.-произв. конф. Киев; 1989. - С. 35-36.45". Лихолат, Т.В. Регуляторы роста древесных растений / Т.В; Лихолат. М.: Лесная промыш., 1983. - 240 с.

41. Меженская, Л.А. Микроклональное размножение вишни и черешни / Л.А. Меженская // Проблемы интенсификации современного садоводства: Тез. докл. Мичуринск: ВНИИС, 1990. - С.163.

42. Минаев, В.А. Клональное микроразмножение слаборослых клоно-вых подвоев яблони селекции МГАУ / В.А. Минаев, А.В. Верзилин, В.А. Высоцкий // Садоводство и виноградарство. 2003. - № 5. - С. 12-13.

43. Михальчик, Л.С. Ускоренное выращивание посадочного материала яблони для интенсивных насаждений.Нечерноземной зоны РСФСР: Автореф. дис. . канд. с.-х. наук.- М., 1990. 25 с.

44. Муромцев, Г.С. Регуляторы роста растений / Г.С. Муромцев // Основы сельскохозяйственной биотехнологии. М.: Агропромиздат, 1990. -С. 360-376.

45. Никелл, Л.Д. Регуляторы роста растений. Применение в сельском хозяйстве / Л.Д. Никелл. Пер. с англ. - М.: Колос, 1984. - 192 с.

46. Огольцева, Т.П. Апробация сортов> земляники при микроклональ-ном размножении / Т.П. Огольцева, М.И. Джигадло // Садоводство и виноградарство. 1988. - №11. - С. 26-29.

47. Основы химической регуляции роста и продуктивности растений // Г.С. Муромцев, Д.И. Чкаников, О.Н. Кулаева, К.З. Гамбург. М.: Агропромиздат, 1987.-383 с.

48. Острейко, С.А. Физиологически активные соединения и покой плодовых растений-/ С.А. Острейко // Плодоводство и ягодоводство Нечерноземной полосы: Сб. науч. трудов. М.: НИЗИСНП. 1971. - Т. 3. - С. 278-286.

49. Петрова, А.Д. Оздоровление и размножение садовых культур in vitro/ А.Д. Петрова, М.Т. Упадышев // Садоводство и виноградарство. 2000.-№4.-С. 12-13.

50. Полевой, В.В. Фитогормоны: Учебное пособие / В.В. Полевой. JL: Изд-во Ленинград, ун-та, 1982 .- 248с.

51. Полевой, В.В. Роль ауксина в регуляции роста и развития растений /

52. B.В. Полевой // Гормональная регуляция растений. М.: Наука, 1984. - С. 87100.

53. Поликарпова, Ф.Я. Влияние интенсивности освещенности на микроразмножение сливы / Ф.Я. Поликарпова, О.А. Леонтьев-Орлов, Р. Кансиан и др. // Плодоводство и ягодоводство России. 2003. - Т. X. - С. 145-149.

54. Попов, Ю.Г. Культура in vitro меристематических верхушек стебля как метод оздоровления и размножения растений / Ю.Г. Попов // Биологические науки. 1976. - № 6. - С. 13-24.

55. Попов, Ю.Г. Оздоровление и размножение плодовых и ягодных растений методом меристематических верхушек: Методич. указания / Ю.Г. Попов. -М.: 1979.-30 с.

56. Попов, Ю.Г. Культура изолированных стеблевых верхушек вишни / Ю.Г. Попов, В.А. Высоцкий, В.Г. Трушечкин // Физиология растений. 1976. -Т. 23, вып. 3.-С. 513-518.

57. Радилова, Л.Д. Видовые и сортовые особенности ризогенеза плодовых и ягодных растений в культуре тканей/ Л.Д. Радилова, В.Ф. Бленда // Проблемы интенсификации современного садоводства: Тез. докл.- Мичуринск: ВНИИС, 1990. С. 159-160.

58. Самусь, В.А. Методика микроразмножения подвоев яблони in vitro /

59. B.А. Самусь, С.Э. Семенас, Н.В. Кухарчик, А.А. Змушко // Методическое; обеспечение устойчивого развития современного- плодоводства: Матер, меж-дун. науч. конф. Самохваловичи, 2006. - Т. 18, ч. 2. - С. 146-156:

60. Свитайло, A.M. Микроразмножение безвирусных клоновых подвоев яблони / A.M. Свитайло, П.Е. Бондаренко, В.Г. Ануфриева // Садцвництво. -Киев: Урожай, 1990:39: С: 56-58.

61. Свитайло, A.M. Клональное микроразмножение подвоев и сортов плодовых культур / A.M. Свитайло, П.Е. Бондаренко, Н.С. Шевчук // Биология культивируемых клеток и биотехнология: Тез. докл. Новосибирск, 1988: - С. 346.

62. Сельскохозяйственная биотехнология: Учебник / B.C. Шевелуха, Е.А; Калашникова, С.В. Дегтярев и др.: Под.ред. B.C. Шевелухи. М.: Высшая школа, 1998.-416 с.

63. Семенас, С.Э: Клональное микроразмножение подвоя яблони ПБ-4 /

64. C.Э. Семенас // Сб.: Плодоводство. Самохваловичи, 2005. - Т. 17, ч. 1. -С. 67-70. .

65. Созинов, А.А. Генетика и урожай / А.А; Созинов,.Ю.П. Лаптев. -М.: Наука, 1986.-167 с.

66. Стаканова, Р.В. Ускоренное размножение подвоев яблони в асептических условиях / Р.В: Стаканова, Н.М. Абраменко // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. 1984. - №6.-С. 29-31.

67. Тананыкина, Г.В. Опыт клонального микроразмножения черной смородины / Г.В1; Тананыкина // Ускорение научно-технического прогресса в плодоводстве и виноградарстве .и задачи молодых ученых: Сб. науч. трудов: -Алма-Ата, 1987. С. 23-25:

68. Трушечкин, В.Г. Клональное микроразмножение плодовых И! ягодг пых культур / В.Г. Трушечкин, В.А. Высоцкий // Плодоовощное хозяйство. -1985. №1. - С. 43-46.

69. Трушечкин, В.Г. Размножение клоновых подвоев яблони методом, культуры ткани / В.Г. Трушечкин, В.Л. Высоцкий // Сельскохозяйственная биология.- 1982. Т. 17, № 4.-С. 455-457.

70. Турецкая, P.X. Физиология корнеобразования у черенков и стимуляторы роста/ Р.Х. Турецкая. М.: Изд-во АН СССР, 1961. - 318 с. .

71. Турецкая, Р:Х. Роль природных ауксинов и ингибиторов роста в ор-ганообразовании корней у стеблевых черенков / Р.Х. Турецкая // Новое в размножении садовых растений. М.: Наука,. 1969. - С. 38-44.

72. Турецкая, Р.Х. Эндогенные факторы корнеобразования растений / Р.Х. Турецкая // Биология развития растений: М.: Наука, 1975. - С. 126-145.

73. Туровская Н.И; Микроразмножение груши/ Н.И. Туровская// Садоводство. 1987. - №6. - С. 22-24.

74. Туровская, Н.И. Стимуляция процесса ризогенеза у клоновых подвоев яблони in vitro / Н.И. Туровская // Биология культивируемых клеток и биотехнология: Сб; науч. трудов. Новосибирск, 1988;- С. 148.

75. Туровская, Н.И; Регулирование процесса ризогенеза при микроразмножении яблони / Н.И. Туровская // Микроразмножение и оздоровление растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве: Сб. науч. трудов. -Мичуринск: ВНИИС, 1989.-С. 8-13.

76. Туровская, Н.И. Урожайность растений-регенерантов пяти сортов черной смородины / Н.И; Туровская, Т.С. Звягина, Л.И. Архипова // Методы эффективного ведения садоводства: Сб. науч. тр: ВНИИС им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1996.-С. 48-54.

77. Тюленев,- В.М. Индукция морфогенеза из изолированных соматических тканей яблони и груши / В.М. Тюленев // Индукция морфогенеза и тканевая селекция! плодовых и ягодных культур: Методич: указания. Мичуринск: ВНИИГиСПР, 1996. - С. 4-23.

78. Упадышев, М.Т. Регенерационная способность эксплантов рода Ru-bus в зависимости от длительности культивирования in vitro / М.Т. Упадышев, В.А. Высоцкий // Сельскохозяйственная биология. 1995. - № 1. - С. 8589.

79. Упадышев, М.Т. Об использовании флоридзина при микроразмножении садовых растений / М.Т. Упадышев, Э.М. Дроздовский // Сельскохозяйственная биология. 2003. - № 1. - С. 87-92.

80. Упадышев, М.Т. Аспекты оздоровления и > размножения ягодных и плодовых культур с использованием фенольных соединений / М.Т. Упадышев, А.Д. Петрова // Плодоводство и ягодоводство: Сб. науч. трудов. М.: ВСТИСП, 1998. - Т. 5. - С. 50-54.

81. Фаустов, В.В. Гормональная регуляция ксилемной дифференциации в процессе укоренения зеленых черенков плодовых культур/ В.В. Фаустов, П.Н. Орлов, З.М. Асадулаев// Удобрения и регуляторы роста в садоводстве: Сб. науч. трудов. М.: ТСХА, 1985. - С. 50-58.

82. Фаустов, В.В. Микроклональное размножение вишни / В.В. Фау- -стов, Е.В. Олешко, И.В: Жаркова и др. // Известия ТСХА. 1988. - В. 5. -С. 131-148.

83. Холодный, Н.Г. Фитогормоны. Очерки по физиологии гормональных явлений в растительном организме / Н.Г. Холодный. Киев: Изд-во АН УССР, 1939.-265 с.

84. Холодный, Н.Г. Ростовые гормоны и тропизмы у растений: Избр. труды / Н.Г. Холодный.- Киев: Изд-во АН УССР, 1956. Т. 1. - С. 200-215.

85. Чайлахян, М.Х. Регуляторы роста в жизни растений и в практике сельского хозяйства / М.Х. Чайлахян // Вестник АН СССР. 1982. - № 1. -С. 11-26.

86. Allderman, L. Micropropagation of BP pear rootstocks / L. Allderman, G. Jacobs // Abstracts of contributed;papers. 1 Oral: XXIII Inter. Hort. Congress. -Firenxi (Italy). 1990. - P. 184.

87. Alvarez, R. In vitro performance of dwarfing apple rootstocks and ils relationship to endogenous IAA concentrations / R. Alvarez, S. Nissen, E. Sutter // Hortscience. 1987. - Vol. 22, № 5. - P. 1064.

88. Alvarez, R. Relationship of 1BA and adventitions rooting in M26 apple (Malus pumila Mill) shoots cultured in vitro / R. Alvarez, S. Nissen, E. Sutter // Jonrn. Plant Growth Regulation. 1989. - Vol. 28, №4. - P. 263-272.

89. Amitrani, A. Influe el momento di applicazione dell' acido indol-3-butirrico e dell' oscuramento nella radicazione di germogli di M27 micropropagati/ A. Amitrani, F. Romani, A. Standardi //Agr. Meditcrr. 1989. - Vol. 119, № 4. -P; 417-423.

90. Anderson, W.C. Mass propagation by tissue culture: principles and practice / W.G. Anderson // Proceeding of the Gonverence on-Nursery Production of Iniit plants through tissue culture Applications and Feasibility. 1980; - P. 27-35.

91. Anderson, W.C. Etiolation as an aid to tooting / W.C. Anderson // Comb. Proc.: Intern: Plant Propagators Soc; 1982; - Voli 31. - P: 138-141.

92. Ancora, G. Propagatione di fruttifere mediante la coltura in vitro di apici; vegetative / G. Ancora et al. // Riv. Ortoflorofruttic ital. 1985. - Vol. 65, № 1. -P. 59-66.

93. Aijona^ C. Enraizamiento in vitro del portainjerto colt / C. Aijona, E. Welkerling de Tacchini, G. Rosell // Turrialba.- 1990. Vol; 40; № 1. - P. 82-87.

94. Bassuk, N.L. The apparent involvement of polyphenol oxidase and phloridzin in the production of apple rooting cofactors / N.L. Bassuk, L.D: Hunter, B.H. Howard // Horticultural Science. 1981. - Vol. 56, № Ф. - P: 313-322:

95. Berrardi, G. In vitro rooting of Pyrus calleryana / G. Berrardi, D. Neri, A. Macorino, R. Adversi // Abstracts of contributed papers: XXIII Inter. Hort. Congress. 1990.-P. 123.

96. Bertazza, G. Light effects on in vitro rooting of pear cultivars of different rhisogenic ability / G. Bertazza, R. Baraldi, S. Predieri// Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 1995. - Vol. 41, № 2. - P. 139-143.

97. Bhojwani, S. In vitro propagation of Pyrus purifolia / S. Bhojwani, K. Mullins, D. Cohen // Scientia Horticultural. 1984. - Vol. 23. - P. 247-254'.

98. Blazich, F.A. Mineral nutrition and adventitions rooting / F.A. Blazich/ Adventitious root formation-in cuttings. 1988. - P. 61-69.

99. Caboni, E. Effect of phenols, gibberellic acid and carbohydrates on the rooting of the apple rootstock M9 Jork / E. Caboni, G. Boumis, C. Damiano // Agronomie.- 1992.- Vol. 12, № 10.- P. 789-794.

100. Caboni, E. Effect of phenols on peroxidase activity and in vitro rooting* of M9 Jork / E. Caboni, C. Domiano, S. Tonnarini // Adv. in Horticultural Science. 1994.-Vol. 8, № 1. - P. 49-51.

101. Cherubmi, S. Radiazion diretta di microtalle "ex vitro" di mandarlo Atti./ S. Cherubini, D. Avanzato, M. Liberali // Soc. orticola ital. Giornato Sci. -1992.-S. l.-P. 350-351.

102. Chong, C. Carbon nutrition of Ottawa-3 apple rootstock during stades of in vitro propagation / C. Chong, E. Pua // Horticultural Science. 1985. - Vol. 60,№3.-P. 285-290.

103. Collet, G.F. Comparison of the easy-to-root Jork 9 and Cepiland and the difficult-to-root EMLA 9 and Lancep'Malus M9 rootstocks in vitro / G.F. Collet, L. Nowbuth, C.L. Le // Adv. in Horticultural Science. 1994. - Vol. 8, № 1. -P.45-48.

104. Collet, G.F. Enracinement in vitro de Pyrus malus L. (M25, M26, Mil, MM 106, M9, type Jork et de Cyconia ablonga Mill.(A) / G.F. Collet, L.C. Le // Rev. Suisse Vitic. Arboric. Horticultural. 1988. - Vol. 20, № 2. - P. 131-138.

105. Czynzyk, A. Influence of micropropagation on the perfomance and gualty of P 22 rootstock in mother plantion / A. Czynzyk, J. Hodun, P. Beilicki // Joum. Fruit omamenntal Plant Res. 1994. - Vol. 2, № 3. - P. 91-100.

106. De Klerk, GJ. Factors affecting adventitions root formation in micro-cultings of Malus / G J. De Klerk, J. Ter Brucce // COST congr. Micropropagot and Endomycorrhizat, Dijon, 21-23 May, 1992. Agronomie. - 1992. - Vol. 12, № 10.-P. 747-755.

107. Druart, P. Plum (Prunus domestica) / P. Druart, R. Grusella // Biotechnology in Agriculture and Forestry: Ed. Y.P.S. Bajaj.- Springer-Verlag. 1986. -Vol. l.-P. 130-154.

108. Druart, P. In vitro promotion of root formation by apple shoots through darkness effect on endogenous phenols and peroxidases / P. Druart, C. Kevers, P. Boxus, T. Gaspar// Z. Pflanzenphysiol. - 1982. - Bd. 108, № 5. - S. 429-436.

109. Dodds, J.H. Experiments in plant tissue culture (2d edition / J.H. Dodds, L.W. Roberts. Cambrige University Press. - 1985. - 232 p.

110. Dongall, D.K. Media factors affecting growth / D.K. Dongall // Envir Exp. Bot. -1981. Vol. 21, № 3/4. - P. 277-280.

111. Dunlap, J.R. The effect of salt concentration on auxin stability in culture media / J.R. Dunlap, S. Kresovich, R.E. McGee // Plant Physiol. 1986. -Vol. 81.-P. 934-936.

112. Dunstan, D.I. Transplantation and post-transplantation of micro-propagated tree-fruit rootstocks / D.I. Dunstan // Intern Plant Prop. Soc. Combined Proc. 1981. - Vol. 31. - P. 85-89.

113. Dunstan, D.I. Propagation in vitro of the apple rootstock M4: effect of phytohormones on stoot quality / D.I. Dunstan, K.E. Turner, W.R. Lazaroff // Plant Cell, Tissue Organ Culture. 1985. - Vol. 4. - P. 55-60.

114. Eriksen, E.N. Root formation in pea cuttings. The influence of cyto-kinin at different developmental stage / E.N. Eriksen // Physiologia Plantarum. -1974. Vol. 30, № 2. - P. 163-167.

115. Feng, G.H. The effects of KNO3 concentration in, callus induction medium for wheat anther culture / G.H. Fend, J.W. Onyang // Plant Cell, Tussue and Organ Culture. 1987. - Vol. 12, № 1. - P. 3-12.

116. Fiorino, P. Propagation of apple cultivars/ P. Fiorino, A.Lava// Acta Horticultural. 1983. - Vol; 131. - P. 95-100.

117. Fiorino, P. Propagation of Trees by Tissue Culture in Italy / P. Fiorino, F. Loreti //Hortscince. 1987. - Vol. 22, № 3. - P. 353-358.

118. Fridborg, G. The effect of activated charcoal on tissue cultures: adsorption of metabolites inhibiting morphogenesis / G. Fridborg, M. Pedersen, L.-E. Landstron, T. Eriksson // Physiologia Plantarum. 1978. - Vol. 43, № 2. - P. 104106.

119. Gang, S.J. Rim Jong Soli / S.J. Gang // Biology.- 1987. № 4. - P. 7-11.

120. Guan, D. Guoshu xuebao / D. Guan, Q. Yang, W. Liu, P. Xiao, J. Yang // Fruit Sci. 2006. - Vol. 23, № 6.- P. 899-902.

121. Hammatt, N. Promation by phloroglucinol of adventitions root formation in micropropagated shoots of adult wild cherry (Prunus avium L.) / N. Ham-matt // Plant Crowth Regul. 1994. - Vol. 14, № 2. - P. 127-132.

122. Hammatt, N. Apparent rejuvenation of mature wild cherry (Prumus avium L.) during micropropagation / N. Hammatt, N.J. Grant // Plant. Physiol. -1993. Vol. 141, № 3. - P. 341-346.

123. Hammerschlag, F.A. Factors affecting establischment and growth of peach shoots in vitro / F.A. Hammerschlag // Hortscience. 1982 a. - Vol. 17. -P. 85-86.

124. Hammerschlag, F.A. Factors influencing in vitro multiplication and rooting of the plum rootstock Myrobalon (Prunus cerasifera Ehrtl.) / F.A. Hammerschlag // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1982 b. - Vol. 107, № 1. - P. 44-47.

125. Hammerschlag, F.A. Factors influencing in vitro multiplication and rooting of peach cultivas / F.A. Hammerschlag, G. Bauchan, R. Scorza // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 1987. - Vol. 8, № 3. - P. 235-242.

126. Harbage, J.F. Anatomy of adventitions root formation in microcuttings of Malus domestica Borkh / J.F. Harbage, D.P. Stimart, R.F. Evert // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1993. - Vol. 118, № 5. - P. 680-688.

127. Henning, B. Einfluss der Faktoren Licht und Temperatur auf die In vitro- Vermehrung von Appelunferlagen / B. Hennig, K. Gliemeroth // Gartenbau. -1989.-H. 36, №3.-S. 53-81.

128. Hirabayshi, T. In vitro propagation of Pyrus shoot tips / T. Hirabayshi, T. Moriguchi, I. Kozaki // Bull. Fruit. Tree Res. Stat. (Min. Agr. Forestry Fish.) Ser. A. Ydtabe, Ibaraki. 1987. - T. 14. - P. 9-16.

129. Hundman, S.E. Stimulation of root initiation from cultured rose shoots through the use of reduced concentrations of mineral salts / S.E. Hundman, P.M. Hasegawa, R.A. Bressan // Hortscience. 1982. - Vol. 17. - P. 82-83.

130. Hutchinson, J.F. In vitro propagation of apple using organ culture / J.F. Hutchinson // Plant Tissue culture. 1982. - P. 729-730.

131. Hutchinson, J.F. Factors affecting shoot proliferation and root initiation in organ culture of apple "Northern Spy" / J.F. Hutchinson // Scientia Horticultural. 1984. - VoL 22. - P: 347-358.

132. Hutchinson, J.F. Micropropagation of "Northern Spy" apple rootstock / J.F. Hutchinson // The international plant propagators society. 1985. - P. 38-48.

133. James, D.J. Adventitious root formation in vitro in apple rootstocke (Malus pumila) / D.J. James // Physiologia Plantarum. 1983. - Vol. 57, № 1. -P. 149-158.

134. James, D.J. Rapid in vitro rooting of the apple rootstock M9 / D.J. James, I.J. Thurbon// Horticultural Science. 1979. - Vol. 5, № 4. - P. 309-311.

135. James, DlJ. Phenolic compounds and other factors controlling rhizogenesis in vitro in the apple rootstocks M9' and M26 / D.J. James, I.J. Thurbon // Z. Pflanzenphysiol. 1981a. - Vol. 105. - P. 11-21.

136. James, D.J. Stoot and root initiation in vitro in the apple rootstock M9 and,the promotive effects of phloroglucinol / D.J. James, I.J. Thurbon // Horticultural Science. 1981b. - Vol.56, № 1. - P. 309-311. . 1i

137. Jones, O.P. Effect of phloridazin and phloroglucinol on apple shoots / O.P. Jones // Nature. London. - 1976. - Vol. XXX. - P. 392-393.

138. Jones, O.P. Root initiation in apple shoots cultured in vitro with auxins and phenolic compounds / O.P. Jones, S.G. Hatfield // Horticultural Science. -1976. Vol. 51, № 4. - P. 495-499.

139. Karhu, S.T. The effect of different carbohydrates on the rooting of mi-cropropagated apple shoots and their adaptation after transplantation / S.T. Karhu,

140. S.K. Ulvinen // Bull. Rech. Agron. Gembloux . 1995. - Vol. 30, № 1/2. - P. 87101.

141. Karhu, S.T. Effect of light and coumarin during root initiation on rooting apple cultivars in vitro / S.T. Karhu, R.H. Zimmerman // Adv. in Horticultural Science. 1993. - Vol. 7, № 1. - P. 33-36.

142. Klinguer, S. Orinige des raciness adventives de Veleppees sur les bou-tures de pommier (Var. Royal Gala) cultivus in vitro / S. Klinguer //.Ann. S-ci. Univ Besancon. Biol. Veg. 1983-1984. - № 4-5. - P. 1-5.

143. Krieken, W.M. Effect of light and riboflavin on indolebutyric acil-induced root formation on apple in vitro / W.M. Krieken, H. Breteler, M.H.M. Vis-ser, W. Jordi // Physiologia. Plantarum. 1992. - Vol. 85, № 4. - P. 589-594.

144. Kuhne, U. Moglichkeiten der Verbesserung der Bewurzelung in der in vitro- Plase bei Kern-und Steinobs / U. Kuhne, S. Gennerich, B. Herrig, V. Hanke// Gartenbau. 1988. - H. 35, № 6. - S. 180-182.

145. Lane, W.D. Regeneration of apple plants from shoot meristem-tips / W.D. Lane // Plant Sci. Lett. 1978. - Vol. 13. - P. 281-285.

146. Lane, W.D. Meristem-tip culture of pear-breding prospects/ W.D. Lane// Proceedings of Eucarpici fruit section symposium "Tree fruit breeding", Angers. 1979a.-P. 181-188.

147. Lane, W.D. Regeneration of pear plants from shoot meristem-tips / W.D. Lane // Plant Sci. Lett. 1979b.- Vol. 16. - P. 337-342.

148. Lane, W.D. Shoot tissue culture of apple: comparative response of-five cultivars to cytokinin and auxin / W.D. Lane, J.M. McDaugald // Con. J. Plant Sci. 1982. - Vol. 62, №3. - P. 689-694.

149. Le, C.L. Influence of temperature on in vitro root initiation and development of apple rootstock М26/ C.L. Le// Hortscience. 1985a. - Vol. 20, № 3 . -P. 451-452.

150. Le, C.L. Multiplication clonale in vitro du pommier (Malus domestica Borkh., var. Gravenstein) / C.L. Le// Rev. Suisse Vatic. Arborin. Hortic. 1985b. -Vol. 17, №5. - P. 311-315.

151. Leshem, В. Cytokinin as an inducer of vitrification in menol / B. Leshem, D.P. Shaley, S. Izhar // Ann. Bot. 1988. - Vol. 61. - P. 255-260.

152. Linsmaier, E.M'. Organic growth factor reguirements of tobacco tissue cultures / E.M. Linsmaier, F. Skoog // Physiologia Plantarum. 1965. - Vol. 18. -P. 100-127.

153. Lloyd, G.B. Commercially feasible micropropagation of mountain laurel (Kalmia latifolia) by use of shoot tip culture / G.B: Lloyd, B.Hr McCown // Comb. Proc. Intl. Plant. Propagators Soc. 1980. - Vol. 30. - P. 421-427.

154. Loreti, F. Mass propagation of fruit trees in Italy by tissue culture: Present status and perspectives / F. Loreti, S. Morini // Intern. Plant Propagators Soc. -1983.-Vol. 32.-P. 283-291.

155. Machnik, B. In vitro propagation of P22 Malus clonal rootstock / B. Machnik, T. Orlikowska // Fruit Sci. Repts. 1981. - Vol. 8, № 4. - P. 173-177.

156. Marin, J.A. Acclimatization, of the micropropagated cherry rootstock "Masto- de Montana" (Prunus cerasus L.) / J.A. Marin, R. Gella // Acta Horticultural. 1987. - № 212. - P: 603-606.

157. Marino, G. Moltiplicazione e radicazione in vitro del pero cv. "William" / G. Marino // Rev. Ortoflorefruttic. Ital. 1984. - Vol. 68, № 2. - p. 95-106.

158. McComb, J. Clonal propagation-of woody plants ising tissue culture with special reference to apples / J. McComb // Plant Propagators Soc.: Comb. Proc. 1980. - Vol. 28. - P. 413-426.

159. McCown, B.H. Adventitious rooting of tissue cultured plant / B.H. McCown // In: T.D. Davis, B.E. Haissig, N. Sankhla (Eds). Adventitious root formation in cuttings. 1988. - P. 289-302.

160. Mielke, K.A. Rapid in vitro rooting of apple / K.A. Mielke // Horticultural1 Science. 1987. - Vol. 22, № 5. - P: 1139.

161. Modgil. M. Micropropagation of apple cv. Tydema Farly Worcester / M. Modgil, D.H. Shama, S.V. Bhadwaj // Scientia Horticultural (Neth). 1999. -Vol. 81,№2.-P. 179-188.

162. Мое, R. Stock plant environment and subsequent adventitious rooting / R. Мое, S. Andersen // In: T.D. Davis, B.E. Haissig, N. Sankhla (Eds). Adventitious root formation in cuttings. 1988. - P. 214-234.

163. Mohammed, G. Root production and plantlet development in tissue-cultured conifers / G. Mohammed, W.E. Vidaver // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 1988. - Vol. 14, № 3. - P. 137-160.

164. Morini, S. Effect of photoperiod applied of different intervals in vitro propagation / S. Morini, P. Fortuna, R. Sciutti, R. Muleo // Abstracts of contributed papers. 1 Oral: XXIII Inter. Hort. Congress. 1990. - P. 170.

165. Mullins, M.G. Some physiological and genetic aspects of plant propagation / M:G. Mullins // N.Z. Agr. Sci. 1984. - Vol. 18, № 14. - P. 176-180.

166. Murashige, T. A revised medium for rapid growht and bioassays with tobacco tissue cultures / T. Murashige, F. Skoog // Physiologia Plantarum. 1962. -Vol. 15, №95. - P. 473-497.

167. Неделчева, С. Вкореняване на размножены in vitro леторасли на круша / С. Неделчева // Растениевъдни науки. 1990. - Т. 27, № 9. - С. 75-78.

168. Неделчева, С. Проучване влиянието на минералния състав на хра-нителната среда вързу развитието на микроразмножени култури от Prunus armeniaca /С. Неделчева // Почвозн. агрохим. и екол. 1999. - Т. 34, № 2-3. -С. 78-82.

169. Неделчева, С. Размножение in vitro на три вегетативни подложка от род Prunus / С. Неделчева, Р. Ганева // Растениевъдни науки. 1985. - Т. 22, №8.-С. 98-104.

170. Nemeth, G. Benzyladinine-stimulated rooting in fruit-tree rootstocks cultured in vitro / G. Nemeth // Z. Pflantenphysiol. 1979. - Vol. 95, № 5. - P. 389396.

171. Nemeth, G. Induction of rooting / G. Nemeth // Biotechnology in Agriculture and Forestry.- Sprigen-Verlag-Berlin-Heidelberg, 1986. Vol. 1, № 1.-Chapter IV. - P. 49-64.

172. Ochatt, SJ. In vitro meristem culture of M4 apple (Malus pumila Mill). 1. Optimal nutrient medium / S J. Ochatt, O.H. Caso // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 1982. - Vol. 2, № 1. - P. 39-48.

173. Oppenoorth, I.M. The influence of colchicines on initiation and early development of adventitions roots/ I.M. Oppenoorth// Physiologia Plantarum. -1978. Vol. 42, № 4. - P. 375-378.

174. Orlikowska, T. Propagation of quince SI in vitro / T. Orlikowska // Fruit Sc. Rep. Skiernilwice. 1988. - Vol. 5, № 4. - P. 157-165.

175. Orlikowska, T. Propagation in vitro of P60-new Polisk clonal apple rootstock / T. Orlikowska // Fruit Sc. Rep. Skiernilwice. 1991. - Vol. 18, № 1. -P. 1-5.

176. Orlikowska, T. Effect of mineral composition and Acidity of media, saccharose level, brand and agar on rooting of fruit rootstocks in vitro / T. Orlikowska //Biol. Plant. 1992a. - Vol. 34, № 1-2. - P. 45-52.

177. Orlikowska, T. Effect of amino acids on rooting of apple dwart root-stocks in vitro / T. Orlikowska // Biol. Plant. 1992b. - Vol. 34, № 1-2. - P. 39-44.

178. Pasqualetto, P. L. Gelling agent and growth regulator effects on stoot vitrification of "Gala" apple in vitro / P.L. Pasqualetto, R.H. Zimmerman // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1986. - Vol. 111, № 6. - P. 976-980.

179. Pennell, D. Micropropagation in Horticulture. 3. Essentials of Micro-progation / D. Pennell // Grower Guide.- London, 1987. № 29. - P. 14-24.

180. Pua, E.-C. Requirement for sorbitol (D-glucitol) as carbon source for in vitro propagation of Malus robusta No 5 / E.-C. Pua, C. Chong // Can. J. Bot. -1984. Vol. 62. - P. 1545-1549.

181. Pua, E.-C. Regulation of in vitro shoot and root regeneration in Mac-spur apple by sorbitol (D-glucitol) and related carbon sources / E.-C. Pua, C. Chong // J. Am. Soc. Hortic. Sci. 1985. - Vol. 110, № 5. - P. 705-709.

182. Reed, B.M. Screen Pyrus germplasm for in vitro rooting response / B.M. Reed// Hortscience. 1995. - Vol. 30, № 6. - P. 1292-1294.

183. Ripetti, V. Two successive media for the rooting of walnut shoots in vitro. Changes in peroxidase activity and in ethylene production / V. Ripetti, C. Kevers, T. Gaspar // Adv. in Hortic. Sci. 1994. - Vol. 8, № 1. - P. 29-32.

184. Rosati, P. In vitro propagation of Japanese plum (Prunus salicina Lind. cv. Calita) / P. Rosati, G. Marino // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1980. - Vol. 105, № l.P. 126-129.

185. Ruzic, D. Uticaj razlicitih izvora i koncentracije ugljenika na mi-crohropagaciju tresnje (Prunus avium L.) cv Lapins / D. Ruzic, T. Lazic, M. Kuzmanovic // Vocarstvo. 2005«. - Vol. 39, № 4. - C. 441-451.

186. Satsu, Т. Кобэ дайгаку ногакубу кэнкю хококу / T.Satsu, Т. Ichii, Т. Nakaniski, Y. Kawai // Sci. Repts Fac. Agr. Kobe Univ. 1988. - Vol. 18, № 1. -P. 1-7.

187. Simmonds, J. Direct rooting of micropropagated M26 apple rootstocks / J. Simmonds // Scientia Horticulturae. 1983. - Vol. 21. - P. 233-241.

188. Singh, J.P. Effect of nitrogen sources on shoot bud differentiation of Dioscorea deltoidea Wall, callus cultures / J.P. Singh // Biol. Plant. 1978. - Vol. 20, №6.-P. 436-439.

189. Singha, S. In vitro propagation of "Seckel" Pear / S. Singha // In: Proc. Conf. On nursery production of fruit plants through tissue culture-applications and feasibility. Beltsville (Md). 1980. - P. 59-63.

190. Singha, S. Influense of agar concentration on in vitro shoot proliferation of Malus sp "Almey" and Pyrus communis "Seckel" / S. Singha // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1982. - Vol. 107. - P. 657-660.

191. Singha, S. Mineral nutrient status of crabapple and.pear shoots cultured in vitro on varying concentrations of three commercial agars / S. Singha, S.G. Townsend, G. H. Oberly // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1985. - Vol. 110. - P. 407411.

192. Skirvin, R.M. Apple (Malus domestica Borkh.) / R.M. Skirvin, M. Kouider, H. Joung, S.S. Korban // In: Biotechnology in agriculture and forestry. 1. Trees (Bajaj, Y.P.S. Ed.). Springer-Verlag, Berlin, 1986. - P. 183-198.

193. Snir, I. Micropropagation of Sweet cherry cultivars / I. Snir // Hortscience. 1982. - Vol. 12, № 2. - P. 192-193.

194. Snir, I. Micropropagation sustem for Sour cherry/ I. Snir// Scientia Hortcultural Netherlands. 1983. - № 19: - P. 85-90.'

195. Snir I. In vitro propagation of "Ganino" Apricot/ I. Snir// Hortscience. -1984. Vol-. 19, №2. - P. 229-230.

196. Snir, I. In vitro propagation of Mailing Merton apple rootstocks / I. Snir, A. Eriz // Hortcultural Science. 1980. - Vol. 15, № 5. - P. 597-598.

197. Sriskandrajah, S. Micropropagation of Granny Smith apple: factors affecting root formation in vitro / S. Sriskandrajah, M.G. Mullins // J. Horticultural Science. 1981. - Vol. 56, № 1. - P. 71-76.

198. Sriskandrajah, S. Induction of adventitious rooting in vitro in difficult-to-propagate cultivars of apple / S. Sriskandrajah, M.G. Mullins, Y. Nair // Plant Sci: Lett. 1982. - № 24. - P. 1-9.

199. Sriskandrajah, S. The effect of come macronutrients on adventitious root development on scion*apple cultuvars in vitro / S. Sriskandrajah. R.M. Skirvin // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 1990. - Vol. 21, № 2. - P. 185-189.

200. Standardi, A. Effetto della luce del carbone attivo e dell IBA sulla radi-cazione in vitro di germogli di melo/ A. Standardi // Ann. Fac. Agr.- Univ. Studi Perujia. 1985. - Vol. 39. - P. 109-120.

201. Standardi. A. Effetti del GA3 net substrato di proliferazione sulla, radi-cazione di germogli di melo micropropagation / A. Standardi // Ann. Fac. Agr. -Univ. Studi Perugia. 1986. - Vol. 38. - P. 73-80.

202. Standardi, A. Effects of some antioxdants on in vitro rooting of apple shoots / A. Standardi, F. Romani // Hortscience. 1990. - Vol: 25, № I k - P. 14351436.

203. Starbuck, C.J. Effect of root applied IBA on root and shoot growth of dwarf peach trees / C.J. Starbuck, J.L. Preczewski // J. environm Hortic. 1986. -Vol. 4, № 3. - P. 80-82.

204. Stonier, T. Studies on auxin protechtors / T. Stonier, K. MacGladrie, G. Show // Plant Cell Environ. 1979. - Vol. 2. - P. 79-82.

205. Suzuki, T. Basic studies on the vegetative propagation of Horticulture plants. VII. In vitro multiplication and rooting of blueberry shoots / T. Suzuki, H. Kanda, T. Yakuma, S. Imakowa // Met. Fac. Agr. Hokkaido Univ. 1988. -Vol. 16, №2. - P. 221-229.

206. Srecsko, V. Influence of Physiological factors on-rooting-ability of plum rootstocks harwood cuttings / V. Srecsko, K. Hrotko, E. Stefanovits-Banyai // Hortscience. 2007. - Vol. 72, № 4. - P. 186-192.

207. Tang, H. Guoshu xuebao / H. Tang, C. Liu, Y. Luo, X. Wang // Fruit Sci. 2006. - Vol. 23, № 2. - P. 283-286.

208. Thibault, B. Comportement agronomique de poiries "Williams" cul-tives sur leurs propres racines / B. Thibault, L. Hermann // Arboric. Fruit: 1982. -Vol. 29. - P. 35-36.

209. Thorpe, Т.A. Physiological and biochemical aspecks of organogenesis in vitro / T.A. Thorpe // Frontiers of Plant Tissue Culture. Proc. 4th Intern. Cong. Plant Tissue and Cell Culture. 1978. - P. 49-58.

210. Titel, C. Extrahiertes pflanzliches Parenchym als Medienverfestigen for die In-vitro-Kultur pflanzlicher Gewebe / C. Titel, R. Ehwald // Potsdam. Forsch.1. B. 1988.-№57.-S. 165-167.

211. Travers, J.N. Effects of culture medium on in vitro rooting of An-tonovka 313 apple / J.N. Travers, C.J. Starbuck. N.J. Natarella // Hortscience. -1985. Vol. 20, № 6. - P: 1051-1052.

212. Tricoli, D.M. Tissue culture of propagation of mature trees of Prunus serotina Ehrh. I. Establishment, multiplication and rooting in vitro / D.M. Tricoli,

213. C.A. Maynard, A.P. Drew // Forest. Sci. 1985. - Vol. 31, № 1. - P. 201-208.

214. Tripathi, B.K. Nutzition minerale et rhizogenese des tissue de Topi-nambour cultures in vitro / B.K. Tripathi // Rev. Cytol. Et Biol. 1974. - Vol. 37. -P. 1-106.

215. Uosukainen, M. Rooting and waning of apple rootstock YP / M. Uosu-kainen // Agronomie. 1992. - Vol. 12, № 10. - P. 803-806.

216. Viseur, J. Micropropagation of pear Pyrus communis L. in double-phase culture medium / J. Viseur // Acta Horticulturae. 1987. - Vol. 212. -P. 1117-1124.

217. Webster, C.A. Micropropagation of the apple rootstock M9: effect of sustained subculture on apparent rejuvenation in vitro / C.A. Webster, O.P. Jones // Horticultural Science. 1989. - Vol. 64, № 4. - P. 421-428.

218. Welander, T. Influence of nitrogen and sucrose in the medium and of irradionce of the stock plant on root formation on Pelargonium petioles grown in vitro / T. Welander // Physiologia Plantarum. 1978. - Vol. 43. - P. 136-141.

219. Welander, M. In vitro rooting of apple shoots and acclimatization of the plantlets / M. Welander // Plant Tissue Culture. 1982. - P. 731-732.

220. Welander, M. In vitro rooting of the apple rootstock M 26 in adult juvenile growth plases and acclimatization of the plantlets / M. Welander // Physi-ologia Plantarum. 1983. - Vol.58. - P. 231-238.

221. Went, F.W. Wuchsstoff und Wachstum / F.W. Went // Rec. Trav. Bot. Neerl. 1928. - Vol. 25. - P. 1-116.

222. Werner, E.M. In vitro propagation? of Mailing 7 apple rootstock / Ё.М. Werner, A.A;.Boe // Hortscience: 1980: - Vol: 15, № 4. - PI 509-510:

223. Zimmerman, R.H. Factors affecting in vitro propagation of apple culti-vars / R.H. Zimmerman // Acta Horticulturae. 1983;- Vol. 131. - P. 171-178.

224. Zimmerman, R.H. Apple cultivar micropropagation / R.H; Zimmerman; O.C. Broome // Proceedings of the: Conference on Nursery Production of fruit plants through tissue culture-Applications and Feasibility. 1980. - P. 54-58.

Информация о работе

Пронина, Ирина Николаевна
кандидата сельскохозяйственных наук
Мичуринск, 2008
ВАК 06.01.07

Диссертация

Оптимизация процесса ризогенеза подвоев и сортов яблони и груши in vitro - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы