Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Опиоидэргическая модуляция функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Опиоидэргическая модуляция функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов"

КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

Балачевский Борис Владимирович

ОПИОИДЭРГИЧЕСКАЯ модуляция ФУНК1ЩОНАЛБНО-МЕТАБОЛИЧЕСЖОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙ1ТОФИЛЬНЬ1х1[ЕЙКОЦИТОВ

03.00.13 - физиология, 14.00.15 - патологическая анатомия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

003058914

Краснодар - 2007

003058914

Работа выполнена в Кубанском государственном медицинском университете (КГМУ) Росздрава.

Научные руководители: доктор медицинских наук

Курзанов Анатолий Николаевич,

доктор биологических наук профессор Славинский Александр Александрович.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук профессор

Каде Азамат Халидович;

доктор медицинских наук профессор Зайченко Светлана Ильинична.

Ведущая организация. Гематологический научный центр РАМН.

Защита состоится «_» мая 2007 г. в 10:00 часов на заседании

диссертационного совета Д208.038.01 при КГМУ по адресу: 350063, Краснодар, ул. Седина, 4, КГМУ, тел. (861) 262-73-75.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке КГМУ.

Автореферат разослан «_» апреля 2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета

профессор Ю.Р Шейх-Заде

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. Функционально-метаболический

потенциал нейтрофильных лейкоцитов определяет выраженность

воспалительной реакции как асептического характера, так и развивающейся

в ответ на проникновение в организм инфекционных возбудителей (Козлов

И.Г. и соавт, 2002) Нарушение целостности тканей вызывает активацию

нейтрофильных лейкоцитов, которая сопровождается перестройкой

метаболизма, выработкой активных форм кислорода, стимуляцией

хемокинеза и фагоцитоза (ЗсЬ^гЬег^ег Р. et а1, 1996, Клебанов ГИ,

Владимиров Ю А, 1999). Эти процессы направлены на уничтожение

возбудителей и патологически измененных клеток (Та1ап£а А, а1., 2000)

Однако в состоянии гиперактивации нейтрофилы способны повреждать не

затронутую патологическим процессом ткань (НоШпеуег М Л а1, 2000,

1кес1а У. е1 а1., 2001, АвзшгакороиЬз Б Б, & а1,2004, Бепег в й а1,2004)

Существует мнение, что иммунная система связана с нервной системой

(Бахов Н И. и соавт., 1988, Б^ег М Е ег а1, 2003) посредством продукции и

секреции биологически активных веществ (Кветной И.М, Кветная Т В и

соавт, 2005), к которым относятся опиоидные пептиды (Акоев Г.Н и соавт.,

1989) Широкая распространенность в центральной и периферической

нервной системе, нервных окончаниях, эндокринных клетках и клетках

иммунной системы обусловливает универсальную роль этих веществ как

регуляторов физиологических и патологических процессов в организме

(Кветной И М и соавт, 2005, Королева С В , Ашмарин И П, 2005)

Огаюидный пептид даларгин является синтетическим аналогом

регуляторного нейропептида лейцин-энкефалина (Виноградов В А, Буглак

НП, 1988) Нейропептиды синтезируются в нервной системе из

высокомолекулярных предшественников, они способны влиять на воспаление,

контролировать болевую чувствительность, секрецию эндокринных и

экзокринных желез, кровоснабжение, заживление и многие другие процессы (Rogers Т J. et al, 2000, Аллазов С., 2001; Zhao D., Pothoulakis С., 2003)

Даларгин обладает широким спектром биологической активности оказывает иммуномодулирующее действие, ингибирует перекисное окисление липидов, ограничивает гормонально-метаболические и энергетические нарушения, улучшает микроциркуляцию, ускоряет физиологическую и репаративную регенерацию (Панькова Т.М, Тимошин С.С., 1990, Бажанов H.H. и соавт, 1991; Курганов А Н., 2001).

Имеющаяся информация о влиянии опиоидных пептидов на нейтрофилы, а также об их роли в развитии патологических состояний носит противоречивый характер В связи с этим представляет интерес изучение воздействия опиоидного пептида даларгина как препарата, способного оказывать корригирующее влияние на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов в физиологических условиях и при различных патологических состояниях.

Цель исследования. Выявить способность даларгина оказывать корригирующее влияние на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови в норме и при наличии патологических процессов, сопровождающихся деструкцией ткани с ответной воспалительной реакцией

Задачи исследования

1 Выявить воздействие даларгина на способность нейтрофилов крови здоровых людей к активации m vitro

2 Установить характер воздействия даларгина in vitro на функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови больных с обширным повреждением тканей (ожоговая травма)

3 Оценить функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови крыс при остром экспериментальном панкреатите (ОЭП)

4 Выявить влияние даларгина на состояние ткани поджелудочной железы крыс с ОЭП

5. Установить воздействие даларгина на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов крыс с ОЭП в зависимости от динамики развития заболевания Научная новизна работы:

1. Представлены новые данные о стимулирующем влиянии даларгина in vitro на способность к активации нейтрофильных лейкоцитов периферической крови здоровых людей в зависимости от концентрации пептида и лиганд-рецепторного взаимодействия

2. Выявлена способность даларгина оказывать ингабирующее действие ш vitro на повышенную функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови больных с обширным повреждением мягких тканей (ожоговая травма)

3. Найдены новые особенности изменения функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов (активность ядерного хроматина, NADPH-оксидазы, миелопероксидазы, щелочной фосфатазы, содержание катионных белков) при развитии ОЭП у крыс

4. Получены сведения о протекторном действии даларгина на ткань поджелудочной железы и ингибирующем — на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов крови крыс с ОЭП

5 Выявлены новые особенности модулирующего влияния даларгина in vitro и in vivo на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови в норме и при повреждении тканей различной этиологии у людей и экспериментальных животных

Теоретическая значимость исследования. Выявлено модулирующее действие даларгина на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов в норме и при повреждении тканей Это

расширяет современные представления о взаимодействии нейроэндокринной и иммунной системы организма

Результаты проведенной работы могут применяться в учебном процессе со студентами медицинских и биологических специальностей, а также использоваться для прикладных исследований

Практическая значимость исследования. Обнаруженное ингибирующее влияние даларгина на повышенную функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов in vitro у людей с обширным повреждением мягких тканей (ожоговая травма) и in vivo у крыс с ОЭП может быть использовано для иммунокоррекции состояний, сопровождающихся избыточной активацией нейтрофилов.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 142 машинописных страницах и состоит из введения, обзора литературы, 5 глав с описанием методики и результатов исследования, заключения, выводов, библиографии (267 источников, из них 98 на русском языке и 169

- на иностранных языках) и приложений. Работа содержит 20 рисунков (гистограммы, изображение нейтрофильных лейкоцитов и ткани поджелудочной железы)

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объект исследования - венозная кровь 27 здоровых людей, 15 больных с ожоговой травмой и капиллярная кровь 28 крыс Экспериментальная часть работы выполнена на 28 стандартизированных аутбредных крысах-самцах породы Sprague Dawley 4-5 месячного возраста массой 420-500 граммов, которые были разделены на 5 групп Ин гактньге

- здоровые животные (28 крыс), 1 группа (контрольная) - животные, которым производили лапаротомию (5 крыс), 2 группа - животные с лапаротомией, получавшие инъекции даларгина (5 крыс), 3 группа -животные с ОЭП (9 крыс), 4 группа - животные с ОЭП, получавшие инъекции даларгина (9 крыс)

Моделировали ОЭП путем глубокого охлаждения обеих поверхностей поджелудочной железы хлорэтилом (Малхасян В.А, Симоворян ПР, 1972) Для подтверждения развития ОЭП проводили морфологическое исследование состояния поджелудочной железы крыс в динамике эксперимента

Функционально-метаболическую активность нейтрофилов исследовали на первые (до манипуляций), третьи (после операции) и седьмые сутки эксперимента В нейтрофильных лейкоцитах определяли активность КАОРН-оксидазы с помощью НСТ-теста (Нестерова ИВ., 1980), активность миелопероксидазы оценивали по методу Шафран М Г и соавт (1979), щелочной фосфатазы - по методике МГ. Шубина (1965) Содержание катионных белков выявляли по методике А А Славинского и Г В Никитиной (1999) Активапионный потенциал ядерного хроматина оценивали поляризаиионно-оптическим методом А.А. Евглевского (2000)

Компьютерную морфометрию изображения нейтрофильных лейкоцитов выполняли при помощи цветной телевизионной системы для микроскопических исследований «Сйо\У» (Москва). Изображение нейтрофилов вводили через аналоговую видеокамеру в память компьютера, вычисляли суммарную оптическую плотность и площадь продукта цитохимической реакции в клетке Для оценки результатов компьютерной морфометрии изображения использовали вычисляемый критерий - интегральный цитохимический показатель (ИЦП) -произведение суммарной площади продукта цитохимической реакции клетки и его оптической плотности (Славинский А А., 2000)

Оценку значимости различий между средними значениями двух сравниваемых исследуемых показателей выполняли с помощью дисперсионного анализа, вычисляли критерий Стьюдента (0 и доверительную вероятность различий (р) (Гланц С., 1999) Диапазон, ограниченный ±2 Б (стандартное отклонение от средней величины)

использовали при характеристике границ нормы как наиболее приемлемый для гематологических показателей (Воробьев А И, 2002) РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ При инкубации с физиологическим раствором (контроль) содержание активированных нейтрофильных лейкоцитов в крови здоровых людей составило 12,2±0,5%, а активность КАБРН-оксидазы — 0,98±0,01 относительных единиц (отн ед.).

В результате воздействия даларгина в диапазоне концентраций от 5-10"5 М до 5-10"15 М наибольшее значение активности 1ЧАВРН-оксидазы и содержание активированных нейтрофилов получено при использовании пептида в концентрации 5-10"8 М При этом содержание активированных клеток возросло до 48,5±1,3%, что выше в 4 раза по сравнению с контролем (р<0,01) Активность КАБРН-оксидазы увеличилась в 1,6 раза (р<0,01), и ее значение достигло 1,58±0,03 отн.ед.

При инкубации крови с даларгином в течение 120 минут в установленной эффективно действующей концентрации (5-10"8 М) максимальные показатели активности нейтрофилов были получены через 60 минут от начала инкубации (рис.1). При этом содержание активированных нейтрофилов составило 48,5±1,3%, а активность ЫАОРН-оксидазы достигла 1,58±0,03 отн.ед

Налоксониндуцированное изменение эффектов даларгина. После предварительной инкубации крови с неселективным блокатором опиатных рецепторов налоксоном с последующим внесением в инкубационную смесь даларгина содержание активированных нейтрофилов составило 16,1 ±0,9%, а активность КАБРН-оксидазы - 0,98±0,02 отнед., что ниже в 3 раза (р<0,01) и в 1,6 раза (р<0,01) соответственно значений, полученных при использовании только даларгина

отн.ед

1,5

1

0.5 О

6 10 15 25 40 60 90 120

время инкубации

Рис.1. Динамическое изменение способности нейтрофилов здоровых людей к активации в зависимости от времени инкубации с даларгином 5-ДОМ: А - содержание активированных нейтрофилов (%); Б - активность 1\1АОРН-оксидазы (отн.ед.)

При инкубации крови только с налоксоном содержание активированных нейтрофилов было ниже в 3 раза (р<0,01) показателей, полученных после воздействия даларгина, и составило 15,9+0,3%. Активность N А [) Р Н - о кс и дазы также уменьшилась в 1,6 (р<0,01) раза до значения 0,99+0,01 отн.ед. (рис. 2).

Ожоговая травма вызывает повышение содержании в крови активированных нейтрофилов до значения 65,8+3,3% (рнс.З), что превышает аналогичный показатель -здоровых людей более чем в 5 раз (р<0,01). Активность "ЧАОРН-оксидазы увеличилась в 2 раза (р<0,01) и составила 1,97+0,07 отн.ед.

- к 'Щ г * -- Ь Р д - 'Р. г г Я А 1 )* - £ — Й;

5 10 15 25 40 во 80 120

аремя инкубами

и

0

Рис.2. Влияние налоксона и даларгина на способность к активации нейтрофилов

здоровых людей.

... %

во

20

□

2,$ г 1.61 0,5

0

Рис.3. Влияние даларгина на способность к активации нейтрофилов больных с ожоговой травмой:

А - содержание активированных нейтрофилов (%); Б - активность |\1АОРН-оксидазы (отн.ед);

□ - здоровые люди (контроль); Ш - даларгин 5-10й М; налоксон 10-в М;

б - налоксон Ю"6 М с даларгином 5 10& М;Е5- больные с ожоговой травмой; Е- больные с ожоговой травмой с дапартном 5-10-8 М.

После инкубации крови больных с раствором даларгина и концентрации 5- Ю"5 М содержание активированных нейтрофилов составило 35,¡±1,7 %, а активность NАОРН-оксидазы - 1,40±0.02 отн.ед. Это ниже показателей, полученных при ожоговой травме без воздействия

пептида, в 2 раза (р<0,01) ив 1,4 раза (р<0,01) соответственно ЭФФЕКТЫ ДАЛ \РГШ1А ПРИ ОСТРОМ ЭКСПГРНМЕН ГАЛЬНОМ ПАНКРЕАТИТЕ МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ В группах крыс с лапаротомиеи, получавших инъекции физиологического раствора, а также инъекции даларгина, состояние поджелудочной железы соответствовало нормальному

При развитии ОЭП без лечения на третьи сутки заболевания наблюдались крупные масштабы незавершенного некроза ацинарной ткани, дольки с неполноценной протоковой регенерацией, жировые некрозы с нагноением На седьмые сутки от начала эксперимента наблюдалось склерозирование поврежденных долек поджелудочной железы с сохраняющимся воспалением На фоне незавершенной регенерации жировых интерстициальных некрозов сформировались крупные лейкоцитарные инфильтраты

Введение даларгина крысам с ОЭП предотвращало увеличение масштаба некроза в ацинарной паренхиме поджелудочной железы Отмечено усиление рапаративных процессов, регенерация некротизированной ацинарной ткани осуществлялась в виде протоковой трансформации без нагноения Жировые некрозы к седьмым суткам эксперимента подвергались полноценной регенерации

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ NADPH-oкcIIдaзa. В 1ц (контрольной) группе животных активность фермента достоверно не отличается от показателей других групп животных до проведения лапаротомии (рис 4)

На третьи сутки эксперимента во 2" группе ложнооперированных животных введение даларгина привело к увеличению активности МАПРН-оксидазы в 1,2 раза по сравнению с контрольной (р<0,05) группой В 3й группе животных с ОЭП реакцией на повреждение поджелудочной железы стало повышение активности ЫЛОР( {-оксидазы в 4 раза по сравнению с

показателями контрольной группы (р<0,01) Инъекции даларгина животным 4" группы с ОЭП привели к снижению активности ЫАОРН-оксидазы в 2 раза (р<0,01), по сравнению с 3й группой животных с острым экспериментальным панкреатитом, не получавших лечение

На седьмые сутки эксперимента активность NADPH-oкcидaзы во 2" группе ложнооперированных животных с введением даларгина была выше в 1,2 раза по сравнению с контрольной группой (р<0,02) В 3й группе животных с ОЭП активность ЫАБРН-оксидазы превышала в 3 раза активность фермента в контрольной группе (р<0,01) При сравнивании со значением За группы, но полученным на третьи сутки эксперимента выявлено снижение в 1,4 раза (р<0,01) В 4" группе животных с ОЭП, которым производились инъекции даларгина, активность ЫАОРН-оксидазы снизилась в 2,4 раза (р<0,01) по сравнению со значением 3" группы животных (без лечения)

Миелопероксидаза. Колебания активности фермента в Iй (контрольной) группе на третьи и седьмые сутки эксперимента были статистически не достоверны (рис 5)

На третьи сутки эксперимента во Т группе ложнооперированных животных без моделирования панкреатита введение даларгина привело к увеличению активности миелопероксидазы в 1,2 раза по сравнению с контрольной группой (р<0,05) В 3й группе животных при развитии ОЭП наблюдалось снижение активности миелопероксидазы в 5 раз по сравнению со значением контрольной группы животных (р<0,01) Инъекции даларгина животным с ОЭП в 4~ группе привели к повышению активности миелопероксидазы в 2,7 раза (р<0,01) относительно группы животных с ОЭП без введения пептида

На седьмые сутки эксперимента во 2й группе ложнооперированных животных с введением даларгина активность миелопероксидазы возросла в 1,2 раза по отношению к показателям контрольной группы (р<0,02)

о; м .

1 суки 3 с/геу,

Рис.4. Влияние даларгина на динамику активности МАРРН-оксидазы нейтрофилов крыс при моделировании острого экспериментального панкреатита.

отн.ед.

1 сутки 3 сутки 7С/ГКИ

Рис.5. Влияние даларгина на динамику активности миелопероксидазы нейтрофилов крыс при моделировании острого экспериментального панкреатита. □ - интактные животные; И - лапаротомия; ЕШ - лапаротомия с введением даларгина; □ - ОЗП; П - ОЭП с введением даларгина.

У животных с ОЭП 3" группы активность миелопероксидазы увеличилась в Зт) раза (р<0,01) относительно значения, полученного на третьи сутки эксперимента. Однако по сравнению С показателями Iв (контрольной) группы активность миелопероксидазы оставалась ниже в !,6

раза (р<0,01). В 4м группе животиых с ОЭП, леченных даларгином, наблюдалось увеличение активности миелопероксидазы в 1,3 раза (р<0,01) по сравнению с группой животных, не получавших лечения.

Щелочная фосфатаза. На третьи сутки эксперимента в !" группе (после лапаротомии) активность щелочной фосфатазы увеличилась в 1,2 (р<0,05) (рис,6). У ложнооперированнШ животных 2" группы введение даларгина не вызвало достоверных изменений активности щелочной фосфатазы но сравнению с контрольной группой.

э <гхи,еДд-...

1 сутки 3 сутки 7сутки

Рис.6. Влияние даларгина на динамику активности щелочной фосфатазы нейтрофилсв крыс при моделировании острого экспериментального панкреатита: □ - интактные животные; 0 - лапаротомия; Ш - папаротомия с введением даларгина; □ - ОЭП; □ - ОЭП с введением даларгина.

В 3" группе животных при развитии ОЭГ1 активность щелочной фосфатазы в 2 раза Превышала показатели контрольной группы (р<0,01). В 4" группе подопытных крыс с ОЭП лечение даларгином привело к снижению активности щелочной фосфатазы в 1,3 раза (р<0.01), по сравнению с животными 3" группы.

На седьмые сутки эксперимента в !11 группе (контрольной) активность щелочной фосфатазы была выше в 1,2 раза значения.

полученного в первые сутки эксперимента (р<0,05) Во 2й группе ложнооперированных животных, получавших инъекции пептида активность фермента увеличилась в 1,1 раза по сравнению с контрольным значением (р<0,05). У крыс с ОЭП 3й группы активность щелочной фосфатазы понизилась в 1,2 раза (р<0,01) по сравнению со значением, полученным на третьи сутки эксперимента, но было выше показателей контрольной группы в 1,8 раза (р<0,01) В 4" группе крыс на фоне ОЭП и лечения даларгином наблюдалось снижение активности щелочной фосфатазы в 1,2 раза (р<0,01) по сравнению с 3" группой животных (не получавших лечения)

Неферментные катнонные белки. Содержание неферментных катионных белков в Iй и 2" группе (ложнооперированных) крыс не имеет статистически достоверных изменений (рис 7)

На третьи сутки эксперимента при развитии ОЭП в 3й группе животных содержание катионных белков в нейтрофилах было выше в 3,4 раза значения контрольной группы (р<0,01) Выполнение инъекций раствора даларгина животным 4" группы с ОЭП привело к снижению содержания катионных белков в 1,6 раза (р<0,01), по сравнению с 3й группой животных (с ОЭП без введения пептида)

На седьмые сутки эксперимента у крыс 3й группы с ОЭП содержание катионных белков в нейтрофильных лейкоцитах было в 2,3 раза больше чем в контрольной группе (р<0,01) Содержание катионных белков нейтрофилов 3й группы животных было ниже по сравнению с результатом, полученным на третьи сутки эксперимента в 1,4 раза (р<0,01) В 4" группе животных с ОЭП, леченных даларгином, наблюдалось снижение содержания катионных белков в 2,2 раза по сравнению с 3й группой животных (р<0,01)

Ядерный хроматин. В Iй группе (ложнооперированных) животных и во 2" группе крыс получавших инъекции даларгина статистически

достоверных изменений показателя активности ядерного хроматина нейтрофнлов во время эксперимента не выявлено (рис.8.).

3,50 3.00 2,50 2.00 1.50 1.00 0.50 0,00

1 сутки 3 сутки 7суткн

Рис.7. Влияние даларгина на динамику содержания катионных белков в нейтрофилах крыс при моделировании острого экспериментального панкреатита.

01II-СЛ.

1 сутуи 3 сутки /сутки

Рис.8. Влияние даларгина на динамику показателя аюпвности ядерного хроматина нейтрофилов крыс при моделировании острого экспериментального панкреатита, □ - интактные животные: Ш - лапаротомия; ШЗ - лапаротомия с введением даларгина; О- ОЭП. О- ОЭП с введением даларгина.

На третьи сутки эксперимента моделирование ОЭП в 3 группе животных вызвало повышение показателя активации хроматина нейтрофилов в 1,8 раза по сравнению с показателем контрольной группы

(р<0,01) Инъекции даларгина животным 4а группы с ОЭП снизили активность ядерного хроматина нейтрофильных лейкоцитов в 1,4 раза (р<0,01), по сравнению с группой животных с ОЭП без лечения.

На седьмые сутки эксперимента у крыс 3~ группы с ОЭП показатель активности хроматина нейтрофильных лейкоцитов был выше значения контрольной группы в 1,1 раза (р<0,01) Однако это значение было ниже, чем показатель, полученный на третьи сутки эксперимента, в 1,2 раза (р<0,01) В 4- группе животных с ОЭП, на фоне лечения даларгииом, наблюдалось снижение показателя активности ядерного хроматина нешрофшюв в 1,3 раза по сравнению с Зв группой животных (р<0,01)

В результате проведенных исследований установлено, что даларпш ш vitro стимулирует изначально низкую активность нейтрофилов периферической крови здоровых людей и ингибирует повышенную (у больных с ожоговой травмой) Это свидетельствует о том, что пептид влияет на процессы активации нейтрофильных лейкоцитов разнонаправлено, в зависимости от их исходного состояния

Введение даларгина крысам с ОЭП оказывает протекторное действие на ткань поджелудочной железы с повышением регенераторной способности органа В отношении функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов пептид проявил ингибирующее действие со снижением активности NADPH-оксидазы, щелочной фосфатазы, ядерного хроматина и уменьшением содержания неферментных катионных белков Сниженную активность миелопероксидазы даларгин повышал. Таким образом, влияние пептида на функционально-метаболическую активность нейтрофилов можно расценивать как "нормализующее".

Опиоидный пептид даларпш, кроме протекторного действия на поджелудочную железу, проявляет модулирующее свойство, которое заключается в избирательной направленности воздействия на

функционально-метаболическую активность нейтрофилов in vivo и in vitro, что характерно для регуляторных пептидов.

ВЫВОДЫ

1. Синтетический аналог лейцин-энкефалина опиоидный гексапептид даларгин у здоровых людей дозозависимо стимулирует способность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови к активации in vitro, о чем свидетельствует увеличение количества активированных клеток и повышение активности NADPH-оксидазы Наиболее выраженное действие пептид проявляет в концентрации 5 10'8М. Влияние даларгина на способность нейтрофилов к активации опосредовано через опиатные рецепторы, блокада которых налоксоном устраняет стимулирующий эффект

2, У больных людей с обширным повреждением тканей (ожоговая травма) даларгин ингибирует повышенную активность нейтрофильных лейкоцитов венозной крови m vitro Это проявляется уменьшением количества активированных клеток со снижением в них активности NADPH-оксидазы и свидетельствует о нормализации уровня кислородзависимого метаболизма нейтрофилов.

3 Острый экспериментальный панкреатит у крыс сопровождается резким повышением функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов Воспалительно-деструктивным изменениям в поджелудочной железе сопутствует увеличение в нейтрофилах крови активности ядерного хроматина, NADPH-оксидазы, щелочной фосфатазы и содержания катионных белков со снижением активности миелопероксидазы

4 Репаративные изменения в поджелудочной железе крыс при остром экспериментальном панкреатите сопровождаются спонтанным снижением активности ядерного хроматина, НАДФН-оксидазы и щелочной фосфатазы, уменьшением содержания неферментных катионных белков и увеличением активности миелопероксидазы в нейтрофилах

5. Введение даларгина животным с острым экспериментальным панкреатитом оказывает протективное действие на поджелудочную железу При воспалительно-деструктивных изменениях в органе пептид снижает в нейтрофилах активность ядерного хроматина, NADPH-оксидазы, щелочной фосфатазы и содержание катионных белков, повышая активность миелопероксидазы. При репаративных изменениях в поджелудочной железе под действием даларгина показатели функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов периферической крови нормализуются.

6. Даларгин проявляет модулирующее действие на функционально-метаболическую активность нейтрофилов, которое зависит от их исходного состояния Пептид повышает изначально низкую функциональную активность нейтрофилов и снижает высокую. Даларгининдуцированные эффекты проявляются in vitro и m vivo, как в норме, так и при повреждении тканей различной этиологии у людей и экспериментальных животных

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Балачевский Б В. Влияние даларгина на изменение показателей НСТ-теста нейтрофильных лейкоцитов in vitro // Тез докл 32-й научно-практической конф студентов и молодых ученых вузов южного федерального округа - Краснодар, 2005.- С. 37-38.

2. Балачевский Б В. Дозозависимый эффект даларгина на показатели НСТ-теста нейтрофильных лейкоцитов m vitro // Тез докл юбилейной конф молодых ученых и студентов «Актуальные вопросы медицинской науки и здравоохранения» - Краснодар, 2005 - С 44-46

3. Балачевский Б В Стимуляция кислородзависимого метаболизма нейтрофильных лейкоцитов даларгином m vitro // Тез докл 10-й всероссийской научно-пракг конф «Молодые ученые в медицине» -Казань, 2005 - С 212

4 Балачевский Б В Модулирующее воздействие даларгина на функциональную активность нейтрофилов крови при ожоговой травме // Тез докл 33-й научно-практической конф студентов и молодых ученых вузов ЮФО,- Краснодар, 2006 - С 65-66

5. Балачевский Б.В , Курзанов А Н, Славянский А.А Цитохимические признаки пептидергической активации нейтрофильных лейкоцитов in vitro // Успехи современного естествознания - 2005 - № 10.- С. 31-35

6. Балачевский Б В., Курзанов А.Н, Славинский А А Динамика патоморфологических изменений ткани поджелудочной железы крыс при лечении экспериментального панкреатита даларгином // Вестник хирургической гастроэнтерологии - 2006.- №1.- С 96.

7 Балачевский Б В., Курзанов А.Н, Славинский А А Воздействие даларгина на функционально-метаболическую активность нейтрофилов крови при остром экспериментальном панкреатите // Кубанский научный медицинский вестник.- 2006 - Т 91, № 10 - С 15-17

Типография ООО «редакция газеты «Всякая Всячина» Краснодар, ул Рашпилевская, 181, тел 259-41-59 Подписано в печать 26 04 07 Объем 1,5 п т Тираж 100 экз Заказ № 50

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Балачевский, Борис Владимирович

Список сокращений.

Введение.

ГЛАВА 1. Обзор литературы. Нейтрофильные лейкоциты в патогенезе повреждения тканей и развития острого панкреатита.

1.1.1. Морфо-функциональная характеристика нейтрофильных лейкоцитов.

1.2. Опиоидные пептиды.

1.2.1. Взаимосвязь иммунной и нейроэндокринной систем.

1.2.2. Синтетический аналог лейцин-энкефалина даларгин.

1.3. Роль нейтрофильных лейкоцитов в развитии острого панкреатита.

1.3.1. Лечебный эффект даларгина при остром панкреатите.

ГЛАВА 2. Материалы и методы.

2.1. Характеристика экспериментального материала in vivo.

2.2. Моделирование холодового панкреатита.

2.3. Методы патогистологического исследования ткани поджелудочной железы.

2.4. Характеристика исследуемого материала in vitro.

2.5. Методы определения оптимальных условий инкубации крови in vitro.

2.6. Цитохимические методы исследования.

2.7. Метод определения активности ядерного хроматина.

2.8. Компьютерная морфометрия изображения нейтрофильных лейкоцитов.

2.9. Статистические методы.

ГЛАВА 3. Влияние даларгина на активацию нейтрофилов периферической крови in vitro.

3.1. Оптимальные условия инкубации.

3.2. Влияние даларгина на функциональную активность нейтрофилов периферической крови больных с ожоговой травмой.

3.3. Резюме.

ГЛАВА 4. Влияние даларгина на состояние поджелудочной железы и функционально-метаболическую активность нейтрофилов при остром экспериментальном панкреатите.

4.1. Морфологические изменения поджелудочной железы.

4.2. Функциональная активность нейтрофильных лейкоцитов

4.2.1. NADPH-оксидаза.

4.2.2. Миелопероксидаза.

4.2.3. Щелочная фосфатаза.

4.2.4. Неферментные катионные белки.

4.2.5. Ядерный хроматин.

4.3. Резюме.

ГЛАВА 5. Обсуждение результатов исследования.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Опиоидэргическая модуляция функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов"

Функционально-метаболический потенциал нейтрофильных лейкоцитов определяет выраженность воспалительной реакции как асептического характера, так и развивающейся в ответ па проникновение в организм инфекционных возбудителей (Козлов И.Г. и соавт., 2002). Нарушение целостности тканей вызывает активацию нейтрофильных лейкоцитов, которая сопровождается перестройкой метаболизма, выработкой активных форм кислорода, стимуляцией хемокинеза и фагоцитоза (Schratzberger P. et al., 1996; Клебанов Г.И., Владимиров Ю.А., 1999; Герасимов И.Г., 2006). Эти процессы направлены на уничтожение возбудителей и патологически измененных клеток (Falanga A., et al., 2000; Мальцева В.II. и соавт., 2006; Нестерова И.В. и соавт., 2006). Однако в состоянии гиперактивации нейтрофилы способны повреждать не затронутую патологическим процессом ткань (Hoffmeyer M.R. et al., 2000; Ikeda Y. et al., 2001; Assimakopoulos S.F., et al., 2004; Chiriac M. et al., 2007).

Существует мнение, что иммунная система связана с нервной системой (Бахов Н.И. и соавт., 1988; Fiset М.Е. et al, 2003) посредством продукции и секреции биологически активных веществ (Кветной И.М., Кветная Т.В. и соавт., 2005), к которым относятся ониоидные пептиды (Акоев Г.Н. и соавт., 1989). Широкая распространенность в центральной и периферической нервной системе, нервных окончаниях, эндокринных клетках и клетках иммунной системы обусловливает универсальную роль этих веществ как регуляторов физиологических и патологических процессов в организме (Кветной И.М. и соавт., 2005; Королева С.В., Ашмарин И.П., 2005).

Опиоидный пептид даларгин является синтетическим аналогом регулятор!юго нейропептида лейцин-эикефалина (Виноградов В.А., Буглак

Н.П., 1988). Нейропептиды синтезируются в нервной системе из высокомолекулярных предшественников, они способны влиять на воспаление, контролировать болевую чувствительность, секрецию эндокринных и экзокринных желез, кровоснабжение, заживление и многие другие процессы (Rogers Т.J. et al., 2000; Аллазов С., 2001; Zhao D., Pothoulakis С., 2003).

Даларгин обладает широким спектром биологической активности: оказывает иммуномодулирующее действие, ипгибирует перекисное окисление липидов, ограничивает гормонально-метаболические и энергетические нарушения, улучшает микроциркуляцию, ускоряет физиологическую и репаративную регенерацию (Панькова Т.М., Тимошин С.С., 1990; Бажапов МЛ I. и соавт., 1991; Курзанов A.M., 2001).

Имеющаяся информация о влиянии опиоидпых пептидов на нейтрофилы, а также об их роли в развитии патологических состояний носит противоречивый характер. В связи с этим представляет интерес изучение воздействия опиоидного пептида даларгина как препарата, способного оказывать корригирующее влияние на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов в физиологических условиях и при различных патологических состояниях.

Цель исследования

Выявить способность даларгина оказывать корригирующее влияние на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови в норме и при наличии патологических процессов, сопровождающихся деструкцией ткани с ответной воспалительной реакцией.

Задачи исследовании

1. Выявить воздействие даларгина на способность нейтрофилов крови здоровых людей к активации in vitro.

2. Установить характер воздействия даларгина in vitro на функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови больных с обширным повреждением тканей (ожоговая травма).

3. Оценить функциональную активность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови при остром экспериментальном панкреатите.

4. Выявить влияние даларгина на состояние поджелудочной железы крыс с острым экспериментальным панкреатитом.

5. Установить воздействие даларгина на функциональную активность нейтрофильных лейкоцитов крыс с острым экспериментальным панкреатитом в зависимости от динамики развития заболевания.

Новизна результатов исследования

1. Представлены новые данные о стимулирующем влиянии даларгина in vitro на способность к активации нейтрофильных лейкоцитов периферической крови здоровых людей в зависимости от концентрации пептида и лиганд-рецепторного взаимодействия.

2. Выявлена способность даларгина оказывать ингибирующее действие in vitro на повышенную функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови больных с обширным повреждением мягких тканей (ожоговая травма).

3. Найдены новые особенности изменения функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов (активность ядерного хроматина, NADPH-оксидазы, миелопероксидазы, щелочной фосфатазы, содержание катионных белков) при развитии острого экспериментального панкреатита у крыс.

4. Получены сведения о протекторном действии даларгина на ткань поджелудочной железы и ингибирующем - на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов крови крыс с острым экспериментальным панкреатитом.

5. Выявлены новые особенности модулирующего влияния даларгина in vitro и in vivo на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови в норме и при повреждении тканей различной этиологии у людей и экспериментальных животных.

Основные положения, выносимые на защиту

1. У здоровых людей даларгин дозозависимо повышает уровень активации нейтрофильных лейкоцитов периферической крови in vitro. Наиболее выраженное действие пептид проявляет в концентрации 10"7М. Влияние даларгина на способность нейтрофилов к активации опосредовано через опиатные рецепторы. Повышенную активность

VJ 1 1 К /• W о неитрофилов периферической крови больных людей с ожоговой травмой даларгин снижает in vitro.

2. Острый экспериментальный панкреатит у крыс сопровождается резким повышением функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов периферической крови. Репаративные изменения в поджелудочной железе сопровождаются снижением активности нейтрофилов.

3. Даларгин оказывает протективное действие на поджелудочную железу, предотвращает деструктивные и способствует развитию репаративных процессов у животных с острым экспериментальным панкреатитом. При этом пептид снижает повышенную активность нейтрофильных лейкоцитов. При репаративных изменениях в поджелудочной железе ингибирующее влияние пептида на высокую функциональную активность нейтрофилов крови носит наиболее выраженный характер.

Научная значимость исследования

Выявлено модулирующее действие даларгина на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов в норме и при повреждении тканей. Это расширяет современные представления о взаимодействии нейроэндокринной и иммунной системы организма.

Результаты проведенной работы могут применяться в учебном процессе со студентами медицинских и биологических специальностей, а также использоваться для прикладных исследований.

Практическая значимость исследования

Обнаруженное ингибирующее влияние даларгина на повышенную функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов in vitro у людей с обширным повреждением мягких тканей (ожоговая травма) и in vivo у крыс с острым экспериментальным панкреатитом может быть использовано для иммунокоррекции состояний, сопровождающихся избыточной активацией нейтрофилов.

Сведения о практическом использовании результатов исследования

На основании полученных фактов предложены практические рекомендации по дальнейшему использованию результатов исследования (см. приложение 2), которые внедрены в учебный процесс кафедр патологической анатомии, клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики Кубанского государственного медицинского университета (КГМУ), а также используются в работе отдела клинической и экспериментальной иммунологии Центральной научно-исследовательской лаборатории Кубанского государственного медицинского университета, хирургического отделения РЦХФГ Краснодарской краевой клинической больницы № 1 им. Проф. Очаповского (см. приложения 3.1-3.4). По результатам исследования опубликовано 7 печатных работ (см. приложение 1).

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста, содержит 20 рисунков (гистограммы, изображение нейтрофильных лейкоцитов и ткани поджелудочной железы). Работа состоит из введения, 5 глав, выводов, указателя использованной литературы. Библиография включает 267 источников, из них 98 на русском языке и 169 - на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Балачевский, Борис Владимирович

ВЫВОДЫ

1. Синтетический аналог лейцин-энкефалина опиоидный гексапептид даларгин у здоровых людей дозозависимо стимулирует способность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови к активации in vitro, о чем свидетельствует увеличение количества активированных клеток и повышение активности NADPH-оксидазы. Наиболее выраженное действие пептид проявляет в концентрации 5-10"8М. Влияние даларгина на способность нейтрофилов к активации опосредовано через опиатные рецепторы, блокада которых налоксоном устраняет стимулирующий эффект.

2. У больных людей с обширным повреждением тканей (ожоговая травма) даларгин ингибирует повышенную активность нейтрофильных лейкоцитов венозной крови in vitro. Это проявляется уменьшением количества активированных клеток со снижением в них активности NADPH-оксидазы и свидетельствует о нормализации уровня кислородзависимого метаболизма нейтрофилов.

3. Острый экспериментальный панкреатит у крыс сопровождается резким повышением функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов. Воспалительно-деструктивным изменениям в поджелудочной железе сопутствует увеличение в нейтрофилах крови активности ядерного хроматина, NADPH-оксидазы, щелочной фосфатазы и содержания неферментных катионных белков со снижением активности миелопероксидазы.

4. Репаративные изменения в поджелудочной железе крыс при остром экспериментальном панкреатите сопровождаются спонтанным снижением активности ядерного хроматина, NADPH-оксидазы и щелочной фосфатазы, уменьшением содержания неферментных катионных белков и увеличением активности миелопероксидазы в нейтрофилах.

5. Введение даларгина животным с острым экспериментальным панкреатитом оказывает протективное действие на поджелудочную железу. При воспалительно-деструктивных изменениях в органе пептид снижает в нейтрофилах активность ядерного хроматина, NADPH-оксидазы, щелочной фосфатазы и содержание катионных белков, повышая активность миелопероксидазы. При репаративных изменениях в поджелудочной железе под действием даларгина показатели функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов периферической крови нормализуются.

6. Даларгин проявляет модулирующее действие на функционально-метаболическую активность нейтрофилов, которое зависит от их исходного состояния. Пептид повышает изначально низкую функциональную активность нейтрофилов и снижает высокую. Даларгининдуцированные эффекты проявляются in vitro и in vivo, как в норме, так и при повреждении тканей различной этиологии у людей и экспериментальных животных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Балачевский, Борис Владимирович,

1. Авдеева М.Г., Евглевский А.А., Мойсова Д.Д., Шубин М.Г. Анизотропия хроматина лейкоцитов у больных лептоспирозом. // Клин. даб. диагностика.-1997.-№11. С. 36-40.

2. Аверкиев B.JI., Тарасенко B.C., Латышева Т.В., Проскуряков В.Е., Аверкиева JI.B. Изменения некоторых иммунологических показателей при панкреонекрозе и их коррекция // Хирургия.- 2003.- №5.- С. 31-34.

3. Акоев Г.Н., Ильинский О.Б., Колосова Л.И., Титов М.И., Трофимова О.Г. Влияние опиоидного пептида даларгина на регенерацию седалищного нерва крысы // Физиологический журнал СССР им И.М. Сеченова.- 1989.-LXXV,-№1.- С. 33-37.

4. Александрова Е.Н., Насонов Е.Л., Виноградов В.А., Титов М.И. Влияние синтетического аналога эндогенных опиоидов даларгина на естественную цитотоксичность лимфоцитов человека // Бюл. эксп. биол. и мед.- 1988.- №4.-С. 442-445.

5. Аллазов С. Регуляторные пептиды в урологии // Урология.- 2001.- №5.-С. 47-54.

6. Бажанов Н.Н., Ганина С.С., Пашутин С.Б., Рагимов Ч.Р. Клинико-лабораторная оценка эффективности даларгина при лечении острых гнойно-воспалительных процессов челюстно-лицевой области // Советская медицина.- 1991.- №7.- С. 29-31.

7. Бахов Н.И., Александрова Л.З., Титов В.Н. Роль нейтрофилов в регуляции метаболизма тканей (обзор литературы) // Лаб. Дело.- 1988.- №6.- С. 3-12.

8. Бобков А.И. Защитно-приспособительные и патологические механизмы стресса при острых воспалительных заболеваниях брюшной полости: автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., -1989. 31с.

9. Воробьев А.И. Руководство по гематологии / Под ред. Академика А.И.Воробьева. М.: Издательство «Ньюдиамед», 2002. - Т. 1. — 280 с.

10. Виноградов В.А., Буглак Н.П. Опиоидный гексапептид даларгин в патогенетической терапии заболеваний органов пищеварения // Советская медицина.- 1988.- №10.- С. 59-63.

11. П.Виноградов В.А., Васильева Е.В., Насонов Е.Н., Титов М.И., Мазнева JI.M. Модуляция пролиферативного ответа лимфоцитов новым аналогом энкефалинов даларгином // Терапевтический архив.- 1984.- №1.- С. 114-116.

12. Виноградов В.А., Полонский В.М. Даларгин первый аналог энкефалинов, применяемый в гастроэнтерологии // Терапевтический архив,- 1988.- Том LX, №8.- С. 147-151.

13. Виноградов В.А., Эгамов Ю.С., Полонский В.М., Джумбаев С.У. Влияние опиодоподобных пептидов на лимфатический дренаж поджелудочной железы крыс и собак // Бюл. эксп. биол. и мед.- 1988.-№3.- С. 259-261.

14. Галкин А.А., Тимин Е.Н., Карелин А.А. Методы исследования подвижности нейтрофилов (обзор литературы) // Клин. лаб. диагностика.-2003.- №1.- С. 22-34.

15. Галкин А.А., Туманов Е.А., Тимин Е.Н., Карелин А.А. Действие активаторов на подвижность нейтрофилов // Бгалл. эксп. биол. и мед.-1997.- Т. 124, №10.- С. 409-412.

16. Гамалей И. А., Клюбин И. В. Перекись водорода как сигнальная молекула // Цитология.- 1996.- Т. 38, №12.- С. 1233-1247. П.Герасимов И.Г. Функциональная неоднородность нейтрофилов // Клин, лаб. диагностика.- 2006.- №2.- С. 34-36.

17. Герасимов И. Г., Калуцкая О. А. Кинетика реакции восстановления нитросинего тетразолия нейтрофилами крови человека // Цитология.- 2000.Т. 42, №2.- С. 160-165.

18. Гланц С. Медико-биологическая статистика / Пер. с англ.- М.: Практика, 1999.-459 с.

19. Григоревский В.П., Короткина Р.Н., Помелов B.C., Шлозников Б.М., Карелин А.А. Даларгин в профилактике острого послеоперационного панкреатита // Клиническая хирургия.- 1989.- №1,- С. 9-12.

20. Долгушин И.И. Роль псйрофилов в регуляции антимикробной резистентности // Вестник росс, академии мед. наук.- 2002.- №3.- С. 16-20.

21. Долгушин И. И., Бухарин О. В. Нейтрофилы и гомеостаз.-Екатеринбург: Медицина, 2001.- 234 с.

22. Евглевский А.А., Пейливанян Э.Г., Алифанова Г.Ф. Особенности структурной организации хроматина ядер вагинальных эпителиоцитов. // Кубанский научный мед. вестник.- 1999.- Т. 48, №12.- С. 12-13.

23. Зербино Д.Д., Лукасевич Л.Л. Диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови.- М.: Медицина, 1989.- С. 237-242.

24. Зурочка А. В. Иммунобиологические свойства секреторных продуктов нейтрофилов (нейтрофилокинов): дис. . д-ра мед. наук. (14.00.36).- СПб.-1991,- 356 с.

25. Ильинский О.Б., Спевак С.Е., Шехтер А.Б., Соловьева А.И., Титов М.И., Беспалова Ж. Д., Пекелис Б.В. Новый пептидный активатор репаративной регенерации тканей // Фармакология и токсикология.- 1987.-№4.- С. 64-66.

26. Клебанов Г.И., Владимиров Ю.А. Клеточные механизмы прайминга и активации фагоцитов // Успехи современной биологии.- 1999.- Т 119, №5.-С. 462-475.

27. Климов П.К. Пептиды и пищеварительная система. Гормональная регуляция функций органов пищеварительной системы.- Ленинград: Наука, 1983.- 272 с.

28. Ковальская К.С., Емельянов С.И. Профилактика панкреатогенных нарушений посредством инфузии мономерно-электролитных растворов в комплексе с даларгином // Бюл. эксп. биол. и мед.- 1998.- №10.- С. 401-404.

29. Ковальчук Л.В., Сайгитов Р.Т. Хемокины новое семейство цитокинов, регулирующих миграцию лейкоцитов // Журн. Микробиол.-2000.-№1.- С. 90-94.

30. Козлов И.Г., Сайгитов Р.Т., Митясева С.А., Чередеев А.Н., Ковальчук Л.В. Миграционная активность in vitro нейтрофилов периферической крови человека в норме и при иммунопатологии // Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол.- 2002.- №4.- С. 43-47.

31. Кокряков В.Н. Биология антибиотиков животного происхождения.-СПб.: Наука, 1999.- 342 с.

32. Корнева Е.А. Регуляторные пептиды как модуляторы защитных функций организма // Физиол. журн. СССР им. И.М. Сеченова.-1989.- Т. 75, №5.-С. 656-663.

33. Коробов H.B. Даларгин опиоидный пептид периферического действия // Фармакология и токсикология.- 1988.- №4.- С. 35-38.

34. Королева С.В., Ашмарин И.П. биоинформационная система анализа функционального континиума регуляторных пептидов // II российский симпозиум по химии и биологии пептидов тезисы докладов и стендовых сообщений,- СПб, 2005.- С. 72.

35. Кулаков В.В., Симбирцева А.С., Котов А.Ю., Черноусов А.Д., Пинегин Б.В. Влияние моноклональных антител против интерлейкина-1а на цитостатические свойства нейтрофилов периферической крови человека // Иммунология.- 1998.- №4,- С. 39-40.

36. Курзанов А.Н. Роль энкефалипов в пептидэргической и холинэргической регуляции гастродуодено-панкреатического комплекса: автореф. дис. . д-ра. мед. наук. (03.00.13).- Краснодар: Кубанская гос. мед. академия, 2001.- 42 с.

37. Курзанов А.Н., Титова Г.П., Виноградов В.А., Алейник В.А., Герасимов Н.Ф. Морфофункциональные изменения поджелудочной железы под влиянием даларгина в норме и при экспериментальном панкреатите // Бюл. эксп. биол. и мед.- 1988.- №4.- С. 445-447.

38. Легеза В.П., Кошеев А.Г., Коновалова Л.Н. Влияние даларгина на заживление огнестрельной раны мягких тканей у кроликов // Пат. физиол. и эксп. тер.- 1995.- №4.- С. 45-49.

39. Лишманов Ю.Б., Маслов Л.Н. Опиатергическая регуляция состояния центральной гемодинамики // Пат. физиол. и эксп. тер.- 2003.- №1.- С. 2-11.

40. Лищенко О.В., Никитина Г.В., Славинский А.А. Активность щелочной фосфатазы и ее распределение в нейтрофилах крови при инфаркте миокарда // Клин. лаб. диагн.- 2002.- №10.- С. 12-13.

41. Макарова О.П., Клец Е.В., Маянский Д.Н. Чувствительность фагоцитов крови и бронхоальвеолярного тракта к гидрокортизону при остром повреждении органов дыхания // Пат. физиол.- 1990.- №6.- С. 34-36.

42. Малхасян В.А., Симаворян П.С. Новый способ получения эксперментальной модели острого панкреатита // Экспер. хир. и анестезиол.- 1972.- №3.- С. 30-32.

43. Мальцева В.Н., Ахачева Н.В., Санталов Б.Ф., Сафронова В.Г. Наблюдение в динамике модификации функциональной активности периферических нейтрофилов и ее регуляции при росте опухоли in vivo // Цитология.- 2006.- Т. 48, №12.- С. 1000-1009.

44. Мари Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека.- М.: Мир, 2004.- 360 с.

45. Маслов JT.H., Лишманов Ю.Б., Терашвили М., Малкова Н.В. Эндорфиновое звено эндогенной опиоидной системы: локализация, рецепция, функция // Пат. физиол. и эксп. тер.- 2005.- №3.- С. 15-23.

46. Маслов Л.Н., Нарыжная Н.В., Крылатов А.В., Гросс Г.Дж. Эндогенные опиоидные пептиды и антиаритмический эффект адаптации к стрессу // Пат. физиол. и эксп. тер.- 2004.- №4.- С. 11-14.

47. Маянский А.II., Галиулин А.Н. Реактивность нейтрофила.- Казань, 1984.- 324 с.

48. Маянский А.Н., Маянский Н.А., Заславская М.И., Поздеев Н.М., Плескова С.Н. Апотоз нейтрофилов // Иммунология.- 1999.- №6.- С. 11-20.

49. Маянский А.Н., Невмятуллин А.Л. функциональное зондирование нейтрофилов: проблемы и перспективы // Клин. лаб. диагн.- 1997.- №5.- С. 24.

50. Мисуно Н.И., Колесникова Т.С., Лерер Р.И., Ганц Т., Войтенок Н.Н. Влияние дефензина HNP-1 на продукцию факторов некроза опухолей-амоноцитами крови человека in vitro // Бюл. эксп. биол. и мед.- 1992,- №5.-С. 524-527.

51. Нестерова И. В. Клинико-диагностическое значение NBT-теста при стафилококковых пневмониях у детей. // Педиатрия.- 1980.- №5.- С. 50.

52. Нестерова И.В., Евглевский А.А, Фомичева Е.В., Парфенов В.В. Особенности активационного потенциала ядер нейтрофильных гранулоцитов в норме и патологии. // Цитокины и воспаление.- 2004.- Т. 3, №2.- С. 52-55.

53. Нестерова И.В., Колесникова Н.В., Чудилова Г.А. Методы оценки функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов // Методические рекомендации.- Краснодар, 1992.- 20 с.

54. Нестерова И.В., Синельникова Е.Ю., Швыдченко И.Н. Пептидная регуляция продукции интерлейкина-8 нейтрофильными гранулоцитами в эксперименте in vitro // Иммунология.- 2006.- №5.- С. 274-278.

55. Пальцев М.А., Аничков Н.М. Патологическая анатомия.- М.: Медицина, 2001.- 736 с.

56. Панькова Т.М., Тимошин С.С. Доказательства реализации стимулирующего эффекта даларгина на процессы клеточного деления через опиатные рецепторы // Бюл. эксп. биол. и мед.- 1990.- №7,- С. 96-98.

57. Полевщиков А.В., Назаров П.Г., Козлов С.В., Галкина Е.В., Берестовая JI.K. Регуляция функций нейтрофилов крови С-реактивным белком и сывороточным амилоидом Р // Физиол. журн. им. И.М. Сеченова.- 1996.- Т. 82, №8-9.- С. 67-72.

58. Потапнев М.П., Печковский Д.В. Иммунорегуляция антимикробной активности нейтрофилов человека // Иммунология.- 1994.- №5.- С. 4-6.

59. Поцелуева М.М., Пустовидко А.В., Ковалева Е.В., Шаталин Ю.В., Евтодиенко Ю.В. Цитотоксическое действие полиморфноядерных лейкоцитов на опухолевые и нормальные клетки in vitro и in vivo // Цитология.- 2005.- Т. 47, №1.- С. 57-63.

60. Реутов М.И. Динамика репаративного ангиогенеза и реакции новообразованного микроциркуляторного русла на ишемию и лекарственные вещества: автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1990.- 22 с.

61. Романов В.А., Кратнов А.Е., Романова Н.В., Хрусталев О.А. Особенности кислородзависимого метаболизма нейтрофилов и моноцитов у больных нестабильной стенокардией и его коррекция предукталом // Пат. физиол. и эксп. тер,- 2003.- №3.- С. 14-17.

62. Сапрыкин В.П., Кузнецов C.J1. Морфологические варианты нейтрофильных гранулоцитов крови практически здоровых людей // Морфология.- 2001.- Т. 120, №6.- с. 37-41.

63. Саркисов Д.С. Об антагонистической регуляции функций как важнейшем механизме поддержания гомеостаза // Клин, мед.- 1990.- №8.-С. 7-12.

64. Светлова Н.В., Литвицкий П.Ф., Коган А.Х. Динамика генерации супероксидпого анион-радикала фагоцитирующими и другими клетками атеросклеротических бляшек на разных стадиях атерогенеза у человека // Пат. физиол. эксп. тер,- 2003.-№2,- С. 8-11.

65. Сейфулла Р.Д., Белоус М.В., Ким Е.К. Нейрорегуляторные пептиды в медицине // Казанский медицинский журнал.- 1989.- №3.- С. 207-212.

66. Сепиашвили Р.И. Основы физиологии иммунной системы.- М.: Медицина-Здоровье, 2003.- 240 с.

67. Славинский А.А. Критерии функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов, основанные не компьютерном анализе изображения и люминесценции: автореф. дис. . д-ра биол. наук. (14.00.29).- Москва, 2000.- 38 с.

68. Славинский А.А. Цитоплазматическая зернистость нейтрофильных лейкоцитов (обзор литературы) // Клин. лаб. диагн.- 2002.- №3.- С. 39-43.

69. Славинский А.А., Никитина Г.В. Цитохимическое выявление катионных белков в грапулоцитах крови амидо чёрным 10 Б для визуальной оценки и компьютерного анализа изображения // Клин. лаб. диагн,- 1999.- №2.- С. 35-37.

70. Славинский А.А., Никитина Г.В. Компьютерный анализ изображения нейтрофильных лейкоцитов: миелопероксидаза // Клин. лаб. диагн.- 2000.-№1.-С. 21-24.

71. Славинский А.А., Никитина Г.В. Содержание катионных белков в нейтрофилах при гнойном перитоните // Клин. лаб. диагн.- 2001.- №10.- С. 9-10.

72. Славинский А.А., Никитина Г.В. Компьютерный анализ изображения нейтрофильных лейкоцитов: щелочная фосфатаза // Клин. лаб. диагн.-2002.-№1.-С. 40-43.

73. Славинский А.А., Никитина Г.В., Лищенко О.В. Цитохимические признаки активации нейтрофилов крови в начальном периоде инфаркта миокарда // Проблемы гематологии и переливания крови.- 2002.- №1.- С. 81.

74. Тимошенко А.В., Бовин Н.В, Шиян С.Д., Вахрушев С.Ю., Андре С, Габиус Г.-И. Модификация функциональной активности нейтрофилов под действием белков острой фазы воспалительного ответа // Биохимия.- 1998.Т. 63, №5.-С. 646-651.

75. Тимошин С.С., Швец С.И., Радивоз М.И., Александрович А.Г., Мельник Е.И. Влияние даларгина на пролиферативные процессы эпителияжелудка при повторных воздействиях различных стрессов // Бюл. эксп. биол. и мед.- 1991,-№8.- С. 130-132.

76. Тотолян А.А, Фредлин И. С. Клетки иммунной системы 1-Й.- СПб., 1999.- 568 с.

77. Топорова С.Г. Реакции лимфатических сосудов брыжейки крыс на действие тималина // Здравоохранение Таджикистана.- 1988.- №5.- С. 93-94.

78. Третьякова И.Е., Долгушин И.И. Состояние секреторной функции нейтрофилов в норме и в условиях гнойного раневого процесса // Иммунология.- 2004.- №5.- С. 260-263.

79. Федорова М.З., Левин В.Н. Спонтанная миграция нейтрофилов крови в смешанной популяции лейкоцитов и ее изменения под влиянием веществ аутоплазмы при различных функциональных состояниях организма // Клин, лаб. диагн.- 2001.- №5.- С. 16-19.

80. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Современные подходы к оценке основных этапов фагоцитарного процесса II Иммунология.- 1995.- №4.- С. 3-8.

81. Хомерики С.Г., Кубатиев А.А., Шляпников В.Н. Лектининдуцированная агрегация нейтрофильных гранулоцитов до и после облучения крови гелий-неоновым лазером // Гемат. Трансф.- 1993.-Т. 38, №7.- С. 26-28.

82. Хомерики С.Г., Хомерики М.Н. Новые аспекты патогенетического лечения панкреатитов // Р.М.Ж.- 2000.- Т. 8, №7.- С. 43-45.

83. Хугаева В.К. Опиоидергическая регуляция микролимфоциркуляции в норме и при ишемии: автореф. дис. . д-ра. мед. наук.- Москва, 1993.- 48 с.

84. Чейдо М.А., Идова Г.В. Участие опиатных 5-рецепторов в иммуномодуляции // Физиол. журн. им. И.М. Сеченова.- 1993.- Т. 79, №12.-С. 18-22.

85. Шафран М.Г., Пигаревский В.Е., Блинкова Э.Н. К цитохимическому определению пероксидазной активности в клетках крови и костного мозга // Цитология.- 1979.- Т. 21, №10.- С. 1206-1208.

86. Шубич М. Г. Нагоев Б.С. Щелочная фосфатаза лейкоцитов в норме и патологии.- М.: Медицина, 1980.- 92 с.

87. Шевченко IO.JI. Частная хирургия.- СПб: СпецЛит, 2000,- 496 с.

88. Шехтер А.Б., Соловьева А.И., Спивак С.Е., Титов М.И. Влияние опиоидного пептида даларгина на репаративные процессы в рубцующейся ране // Бюл. экспер. биол.- 1988.- Т. 106, №10.- С. 487-490.

89. Akahoshi Т, Namai R, Sekiyama N, Tanaka S, Hosaka S, Kondo H. Rapid induction of neutrophil apoptosis by sulfasalazine: implications of reactive oxygen species in the apoptotic process // J. Leukocyte Biol.- 1997.- Vol. 62.- P. 817-826.

90. Attix E., Strombeck D.R., Wheeldon E.B., Stern J.S. Effects of an anticholinergic and a corticosteroid on acute pancreatitis in experimental dogs // Am. J. Vet. Res.- 1981.- Vol. 42, №10.- P. 1668-1674.

91. Bainton D.F., Farquhar M.G. Differences in enzyme content of azurophil and specific granules of polymorphonuclear leukocytes. II. Cytochemistry and electron microscopy of bone marrow cells//J. Cell. Biol.- 1968.- Vol. 39.- P. 299-317.

92. Bainton D.F. Distinct granule populations in human neutrophils and lysosomal organelles identified by immuno-electron microscopy // J. Immunol. Meth.- 1999.-Vol. 232, N1-2.-P. 153-168.

93. Bastian A., Schafer H. Human alpha-defensin 1 (HNP-1) inhibits adenoviral infection in vitro//Regul. Pept.-2001.- Vol. 101, №1-3.-p. 157-161.

94. Belokrylov G.A., Molchanova I.V., Popova Ola. Stimulation of immunogenesis by neurotensin, pentagastrin and thymopentin and ways of its realization//Biull. Eksp. Biol. Med.- 1989- Vol. 108, №11.- P. 584-587.

95. Bhalla D.K., Gupta S.K., Reinhart P.G. Alteration of epithelial integrity, alkaline phosphatase activity, and fibronectin expression in lungs of rats exposed to ozone // J. Toxicol. Environ. Health A.- 1999.- Vol. 57, №5.- P. 329-343.

96. Bloechle C., Kusterer K., Kuehn R.M., Schneider C., Knoefel W.T., Izbicki J.R. Inhibition of bradykinin B2 receptor preserves microcirculation in experimental pancreatitis in rats //Am. J. Physiol.- 1998.- №274 (1 Pt 1).- P. G42-51.

97. Bloom S.R., Polak J.M. The new peptide hormones of the gut and their clinical significance // Acta. Gastroenterol. Belg.- 1978.- 41, №7-8.- p. 371-393.

98. Bogomolski-Yahalom V., Matzner Y. Disorders of neutrophil function. // Blood Rev.- 1995.- №9.- P. 183-190.

99. Borregaard N., Theilgaard-Monch K., Sorensen O.E., Cowland J.B. Regulation of human neutrophil granule protein expression // Curr. Opin. Hematol.- 2001.- Vol. 8, №1.- P. 23-27.

100. Brown S.L., Van Epps D.E. Suppression of T lymphocyte chemotactic factor production by the opioid peptides beta-endorphin and met-enkephalin // J. Immunol.- 1985.- Vol. 134.- P. 3384-3390.

101. Calabrese E.J. Opiates: biphasic dose responses // Crit. Rev. Toxicol.-2001- Vol. 31, №4-5,- P.585-604.

102. Casale L., Cardozo C., Kalb Т., Lesser M. Quantitation of endopeptidase 24.11 and endopeptidase 24.15 in human blood leukocytes // Enzyme Protein.-1995.-№48(3).-P. 143-148.

103. Chen H.M., Shyr M.H., Lau Y.T., Hwang T.L., Chen M.F. Leukocyte-endothelial adherence correlates with pancreatic nitric oxide production in early cerulein-induced pancreatitis in rats // Shock.- 1998.- Vol. 10, №3.- P. 218-222.

104. Chiriac M., Roesler J., Sindrilaru A., Scharffetter-Kochanek K., Zillikens D., Sitaru C. NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage // J. Pathol.- 2007.- Vol. 212, №1.- P. 56-65.

105. Cowland J.B., Sorensen O.E., Sehested M., Borregaard N. Neutrophil gelatinase-associated lipocalin is up-regulated in human epithelial cells by IL-1 beta, but not by TNF-alpha //J. Immunol.- 2003.- Vol. 171, №12.- P. 6630-6639.

106. Dhawan B.N., Cesselin F., Raghubir R., Reisine Т., Bradley P.B., Portoghese P.S., Hamon M. International Union of Pharmacology. XII. Classification of opioid receptors // Pharmacol. Rev.- 1996.- Vol. 48, №4.- P. 567-592.

107. Dominguez-Munoz J.E., Malfertheiner P. Management of severe acute pancreatitis // Gastroenterologist.- 1993.- Vol. 1, №4.- P. 248-256.

108. Eckman L. Defence molecules in intestinal innate immunity against bacterial infections // Current opinion gastroenterology.- 2002.- №2.- P. 147.

109. Emmerson P.J., Lin M.-R., Woods J.H., Medsihradsky F. Binding affinity and selectivity of opioids at mu, delta and kappa receptors in monkey brain membranes //J. Pharmacol. Exp. Ther.- 1994.- Vol. 271, №3.- P. 1630-1637.

110. Farkas G. Inflammatory mediators in acute pancreatitis (theoretical considerations)//Orv. Hetil.- 1995.- Vol. 136, №34.- P. 1819-1822.

111. Farkas G., Nagy Z., Marton J., Mandi Y. Relevance of cytokine production to infected pancreatic necrosis // Acta. Chir. Hung.- 1997.- Vol. 36, №1-4.- p. 86-88.

112. Faurschou M., Borregaard N. Neutrophil granules and secretory vesicles in inflammation//Microbes Infect.- 2003.- Vol. 5, №14.- P. 1317-1327.

113. Faurschou M., Kamp S., Cowland J.B., Udby L., Johnsen A.H., Calafat J., Winther H., Borregaard N. Prodefensins are matrix proteins of specific granules in human neutrophils // J. Leukoc. Biol.- 2005.- Vol. 78, №3.- P. 785-793.

114. Faurschou M., Sorensen O.E., Johnsen A.H., Askaa J., Borregaard N. Defensin-rich granules of human neutrophils: characterization of secretory properties // Biochemica et biophysica acta.- 2002.- №1591.- P. 29-35.

115. Fiset M.E., Gilbert C., Poubelle P.E., Pouliot M. Human neutrophils as a source of nociceptin: a novel link between pain and inflammation // Biochemistry.-2003.- Vol. 42, №35.- P. 10498-10505.

116. Fink G., Yang J., Carter G., Norman J. Acute pancreatitis-induced enzyme release and necrosis are attenuated by IL-1 antagonism through an indirect mechanism // J. Surg. Res.- 1997,- Vol. 67, №1.- P. 94-97.

117. Fiocca F., Santagati A., Ceci V., Donatelli G., Pasqualini M.J., Moretti M.G., Speranza V., Di Giuli M., Minervini S., Sportelli G., Giri S. ERCP and acute pancreatitis // Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci.- 2002.- Vol. 6, №1.- P. 13-17.

118. Fujimoto K., Hosotani R., Doi R., Wada M., Lee J.U., Koshiba Т., Miyamoto Y., .Imamura M. Role of neutrophils in cerulein-induced pancreatitis in rats: possible involvement of apoptosis // Digestion.- 1997.- Vol. 58, №5.- P. 421-430.

119. Goldman R., Bar-Shavit Z., Romeo D. Neurotensin modulates human neutrophil locomotion and phagocytic capability // FEBS Lett.- 1983.- Vol. 159, №1-2.- P. 63-67.

120. Grigorevskii V.P., Korotkina R.N., Karelin A.A. Effects of several regulatory peptides on the functional activity of the pancreas in acute experimental pancreatitis // Biull. eksp. biol. med.- 1989.- Vol. 108, №10.- P. 428-430.

121. Gross V., Leser H.G., Heinisch A., Scholmerich J. Inflammatory mediators and cytokines-new aspects of the pathophysiology and assessment of severity of acute pancreatitis? // Hepatogastroenterology.- 1993.- Vol. 40, №6.- P. 522-530,

122. Нас S., Dobosz M., Kaczor J., Rzepko R. Influence of molecule CD lib blockade on the course of acute ceruleine pancreatitis in rats // Exp. Mol. Pathol.-2004.- Vol. 77, № 1.- P. 57-65.

123. Harler M.B., Wakshull E., Filardo E.J., Albina J.E., Reichner J.S. Promotion of neutrophil chemotaxis through differential regulation of beta 1 and beta 2 integrins // J. Immunol.- 1999.- Vol. 162, № 11.- P. 6792-6799.

124. Hashimoto J, Yamamoto Y, Kurosawa H, Nishimura K, Hazato T. Identification of dipeptidyl peptidase III in human neutrophils // Biochem Biophys Res Commun.- 2000.- Vol. 5, №273(2).- P. 393-397.

125. Henderson L.M., Chappel J.B. NADPII oxidase of neutrophils // Biochim. Biophys. Acta.- 1996,- Vol. 1273.- P. 87-107.

126. Hoffmann T.F., Leiderer R., Harris A.G., Messmer K. Ischemia and reperfusion in pancreas //Microsc. Res. Tech.- 1997.- Vol. 37, №5-6.- P.557-571.

127. Hoffmeyer M.R., Scalia R., Ross C.R., Jones S.P., Lefer D.J. PR-39, a potent neutrophil inhibitor, attenuates myocardial ischemia-reperfusion injury in mice // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol.- 2000.- Vol. 279, №6.- P. 2824-2828.

128. Hughes J., Smith T.W., Kosterlitz H.W, Forthergill L.A., Morris H.R. Identification of two related pentapeptides from the brain with potent opiate agonist activity // Nature.- 1975.- Vol. 258,- P. 577-579.

129. Ikeda Y, Young L.H., Scalia R., Ross C.R., Lefer A.M. PR-39, a proline/arginine-rich antimicrobial peptide, exerts cardioprotective effects in myocardial ischemia-reperfusion // Cardiovasc. Res.- 2001.- Vol. 49, №1.- P. 69-77.

130. Inagaki H., Nakao A., Kurokawa Т., Nonami Т., Harada A., Takagi H. Neutrophil behavior in pancreas and liver and the role of nitric oxide in rat acute pancreatitis // Pancreas.- 1997.- Vol. 15, №3.- P. 304-309.

131. Ionescu CV, Cepinskas G, Savickiene J, Sandig M, Kvietys PR. Neutrophils induce sequential focal changes in endothelial adherens junction components: role of elastase //Microcirculation.- 2003.- Vol. 10, №2.- P. 205-220.

132. Jablonska E., Marcinczyk M. Role of interleukin-15 and interleukin-18 in the secretion of sIL-6R and sgpl30 by human neutrophils // Mediators Inflamm.-2003.-Vol. 12, №3.- P. 179-183.

133. Jenkins S.A. Emerging differences in the therapeutic efficacy of somatostatin and octreotide in gastroenterology and surgery // MediMedia Asia.-1996.- P. 97-116.

134. Kaneider N.C., Dunzendorfer S., Wiedermann C.J. Heparan sulfate proteoglycans are involved in opiate receptor-mediated cell migration // Biochemistry.- 2004,- Vol. 43, №1.- P. 237-244.

135. Kettritz R., Gaido M.L., Haller H., Luft F.C., Jennette C.J., Falk R.J. // Kidney Int.- 1998.- Vol. 53.- P. 84-91.

136. Kjcldsen L., Cowl and J.B., Borregaard N. Human neutrophil gelatinase-associated lipocalin and homologous proteins in rat and mouse // Biochim. Biophys. Acta.- 2000,- Vol. 1482, №1-2.- P. 272-283.

137. Klausen P., Niemann C.U., Cowland J.В., Krabbe K., Borregaard N. On mouse and man: neutrophil gelatinase associated lipocalin is not involved in apoptosis or acute response // Eur. J. Haematol.- 2005.- Vol. 75, №4.- P. 332-340.

138. Klut M.E., Whalen B.A., Hogg J.C. Flow cytometric analysis of defensins in blood and marrow neutrophils // Eur. J. Haematol.- 2000.- Vol. 64, №2.- P. 114-120.

139. Kulkarni-Narla A., Walcheck В., Brown D.R. Opioid receptors on bone marrow neutrophils modulate chemotaxis and CDllb/CD18 expression // Eur. J. Pharmacol.- 2001.- Vol. 2, №414 (2-3).- P. 289-294.

140. Kyriakides C., Jasleen J., Wang Y., Moore F.D. Jr., Ashley S.W., Hechtman H.B. Neutrophils, not complement, mediate the mortality of experimental hemorrhagic pancreatitis//Pancreas.- 2001.- Vol. 22, №1.- P. 40-46.

141. Lee D.M., Friend D.S., Gurish M.F., Benoist C., Mathis D., Brenner M.B. Mast cells: a cellular link between autoantibodies and inflamatory arthritis // Science.- 2002.- Vol. 297.- P. 1689-1692.

142. Legeza VP, Koshcheev AG, Konovalova LN. Effect of dalargin on healing of a bullet wound of the soft tissues in rabbits // Patol. fiziol. eksp. ter.- 1995.-№4.- P. 45-48.

143. Leindler L., Morschl E., Laszlo F., Mandi Y., Takacs Т., Jarmai K., Farkas G. Importance of cytokines, nitric oxide, and apoptosis in the pathological process of necrotizing pancreatitis in rats // Pancreas.- 2004.- Vol. 29, №2,- P. 157-161.

144. Lollike K., Lindau M., Calafat J., Borregaard N. Compound exocytosis of granules in human neutrophils // J. Leukoc. Biol.- 2002.- Vol. 71, №6.- P. 973-980.

145. Li C.H. 3-Endorphin: aspect of structure-activity relationship // In. Endorphins.- 1978.-P. 15-31.

146. Liu Y., Buhring H.J., Zen K., Burst S.L., Schnell F.J., Williams I.R., Parkos C.A. Signal regulatory protein (SIRPalpha), a cellular ligand for CD47, regulates neutrophil transmigration // J. Biol. Chem.- 2002.- Vol. 277, №12.- P. 10028-10036.

147. Markert R., Modzelewski B. Inflammatory mediators in the acute pancreatitis //Pol. Merkuriusz. Lek.- 1999,- Vol. 6, №32.- P. 100-103.

148. Marotti Т., Balog Т., Munic V., Sobocanec S., Abramic M. The link between met-enkephalin-induced down-regulation of APN activity and the release of superoxide anion//Neuropeptides.- 2000.- Vol. 34, №2.- P. 121-128.

149. Marubashi K., Hirano S., Suzuki K.T. Effects of intratracheal pretreatment with yttrium chloride (YC13) on inflammatory responses of the rat lung following intratracheal instillation of YC13 // Toxicol. Lett.- 1998.- Vol. 99, №1.- P. 43-51.

150. McKay C., Imrie C.W., Baxter J.N. Mononuclear phagocyte activation and acute pancreatitis // Scand. J. Gastroenterol. Suppl.- 1996,- №219.- P.32-36.

151. Mendes F.D., Jorgensen R., Keach J., Katzmann J.A., Smyrk Т., Donlinger J., Chari S., Lindor K.D. Elevated Serum IgG4 Concentration in Patients with Primaiy Sclerosing Cholangitis // Am. J. Gastroenterol.- 2006.- Vol. 101, №9.- P. 2070-2075.

152. Menzebach A., Hirsch J., Hempelmann G., Welters I.D. Effects of endogenous and synthetic opioid peptides on neutrophil function in vitro // Br. J. Anaesth.- 2003.- Vol. 91, №4.- P. 546-550.

153. Moeller I., Chai S.Y., Smith I., Lew R., Mendelsohn F.A. Haemorphin peptides may be endogenous ligands for brain angiotensin AT4 receptors // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. Suppl.- 1998.-№25.- P. 68-71

154. Morgil J.S., Pasternak G.W. The molecular and behavioral pharmacology of the orphanin FQ/nociceptin peptide and receptor family // pharmacol. Rev.-2001.-Vol. 53.- P. 381-415.

155. Muhs B.E., Patel S., Yee H., Marcus S., Shamamian P. Inhibition of matrix metalloproteinases reduces local and distant organ injury following experimental acute pancreatitis // J. Surg Res.- 2003.- Vol. 109, №2.- P. 110-117.

156. Muller W.A. Leukocyte-endotelial cell interactions in the inflammatory response // Lab. Invest.- 2002.- Vol. 82, №5.- P. 521-533.

157. Muller F.M., Lyman C.A., Walsh T.J. Antimicrobial peptides as potential new antifungals // Mycoses.- 1999.- Vol. 42, №2.- P. 77-82.

158. Muller C., Uhl W., Gloor В., Worni M., Roggo A., Borgstrom A., Buchler M.W. Acute pancreatitis—clinical and technical laboratory diagnostic and prognostic assessment // Swiss. Surg.- 2000.- Vol. 6, №5.- P. 235-240.

159. Nabokina S., Egea G., Blasi J., Mollinedo F. Intracellular location of SNAP-25 in human neutrophils // Biochcm. Biophys. Res. Commun.- 1997.- Vol. 239, №2.- P. 592-597.

160. Nakamuta M., Ohashi M., Fukutomi Т., Tanabe Y., Hiroshige K., Nawata H. Rise of plasma myeloperoxidase during interferon therapy // J. Gastroenterol. Hepatol.- 1995.- Vol. 10, №3,- P. 277-280.

161. Nathan С., Xie Q., Halbwachs-Mecarelli L., Jin W.W. Albumin inhibits neutrophil spreading and hydrogen peroxide release by blocking the shedding of CD43 (sialophorin, leukosialin)//J. cell. Biol.- 1993.-Vol. 122, №1.- P. 243-256.

162. Noda K., Aoki M., Akiyoshi H., Asaki H., Shimada Т., Ohashi F. Evaluation of the polymorphonuclear cell functions of bottlenose dolphins // J. Vet. Med. Sci.2003.- Vol 65, №6.- P.727-729.

163. Osman M.O., Jensen S.L. Acute pancreatitis: the pathophysiological role of cytokines and integrins. New trends for treatment? // Dig. Surg.- 1999.- Vol. 16, №5,- P. 347-362.

164. Parreira J.G., Rego R.E., Campos Т., Moreno C.H., Pacheco A.M. Jr., Rasslan S. Predictors of choledocholithiasis in patients sustaining acute biliary pancreatitis // Rev. Assoc. Med. Bras.- 2004.- Vol. 50, №4.- P. 391-395.

165. Pobuts'kyi O.O. Application of synthetic neuropeptides in complex of surgical treatment of acute pancreatitis and its complication // Klin. Khir.- 2002.- №1.- P. 26-29.

166. Robbins R.A., Nelson К.J., Gossman G.L., Rubinstein I. Neurotensin stimulates neutrophil adherence to bronchial epithelial cells in vitro // Life Sci.1995.- Vol. 56, №16.- P. 1353-1359.

167. Rogers TJ, Steele AD, Howard OM, Oppenheim JJ. Bidirectional heterologous desensitization of opioid and chemokine receptors // Ann. N. Y. Acad. Sci.- 2000.- №917.- P. 19-28.

168. Rollet-Labelle E., Grange M. J., Elbim C. Marquetty C., Gougerot-Pocidalo M.A., Pasquier C. Hydroxyl radical as a potential intracellular mediator of polymorphonuclear neutrophil apoptosis // Free Radic. Biol. Med.-1998.- Vol. 24.- P. 563-572.

169. Rosen H., Michel B.R. Redundant contribution of myeloperoxidase-dependent systems to neutrophil-mediated killing of Escherichia coli // Infect. And Immun.-1997.- Vol. 65, №10.- P. 4173-4178.

170. Ruan X., Chodosh J., Callegan M.C., Booth M.C., Lee T.D., Kumar P., Gilmore M.S., Pereira H.A. Corneal expression of the inflammatory mediator CAP37 // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.- 2002.- Vol. 43, №5.- P. 1414-1421.

171. Rudman D., Berry C.J., Riedeburg C.H., Hollins B.M, Kutner M.H., Lynn M.J., Chawla R.K. Effects of opioid peptides and opiate alkaloids on insulin secretion in the rabbit // Endocrinology.- 1983.- Vol. 112, №5.- P.1702-1710.

172. Sahoo G., More Т., Singh V.K. A comparative study on certain enzymes of the granulocyte from different ruminant species // Сотр. Immunol. Microbiol. Infect. Dis.- 1998.- Vol. 21, №4.- P. 319-325.

173. Saito N., Sato F., Asaka M., Takemori N., Kohgo Y. Morphological heterogeneity of myeloperoxidase-positive granules in normal circulating neutrophils: an ultrastructural study by cryosection // Histol. Histopathol.- 1998.-Vol. 13, №2.-P. 405-414,

174. Satake К., Ha S.S., Hiura A. Effects of bradykinin receptor antagonist on the release of beta-endorphin and bradykinin and on hemodynamic changes in a canine model of experimental acute pancreatitis // Pancreas.- 1996.- Vol. 12, №1.- P. 92-97.

175. Satoru Т., Norihiro K., Susumu O. Regulation by Endogenous Interleukin-1 of mRNA Expression of Healing-Related Factors in Gastric Ulcers in Rats // the J. of Pharm. and Exp. Ther.- 1999.- Vol. 291, №2.- P. 634-641.

176. Sengelov H., Borregaard N. Free-flow electrophoresis in subcellular fractionation of human neutrophil // Immunol. Meth.- 1999.- Vol. 232, №1-2.- P. 145-152. .

177. Serhan C.N., Fierro I.M., Chiang N., Pouliot M. Cutting edge: nociceptin stimulates neutrophil chemotaxis and recruitment: inhibition by aspirin-triggered-15-epi-lipoxin A4 //J. Immunol.- 2001.- Vol. 15, №166(6).- P. 3650-3654.

178. Schratzberger P., Reinisch N., Kahler C.M., Wiedermann C.J. Deactivation of chemotaxis of human neutrophils by priming with secretogranin II-derived secretoneurin // Regul. Pept.- 1996.- Vol. 63, №2-3.- P.65-71.

179. Schultz J.J., Hsu A.K., Gross G.J. Ischemic preconditioning and morphine-induced cardioprotection involve the delta (delta)-opioid receptor in the intact rat heart // J. Mol. Cell. Cardiol.- 1997,- Vol. 29, №8.- P. 2187-2195.

180. Sharp В. M., Keane W.F., Sun H. J., Gekker G., Tsukayama D., Peterson P.K. Opioid peptides rapidly stimulate superoxide production by human polymorphonuclear leukocytes and macrophages // Endocrinology.- 1985.- Vol. 117, №2.- P. 793-795.

181. Song M., Zaninovic V., Kim D., Gukovsky I., Gukovskaya A., Kang K., Pandol S. Amelioration of rat cerulein pancreatitis by guamerin-derived peptide, a novel elastase inhibitor // Pancreas.- 1999.- Vol. 18, №3.- P.231-239.

182. Sorensen O.E., Borregaard N. Cathelicidins-nature's attempt at combinatorial chemistry // Comb. Chem. High. Throughput Screen.- 2005.- Vol. 8, №3.- P. 273-280.

183. Spector N.H. Neuroimmunomodulation takes off // Immunol. Today- 1990.-№11.- P. 381-383.

184. Stefano G.B., Hartman A., Bitfinger T.V. et all. Presence of the mu3 opiate receptor in endothelial cells. Coupling to nitric oxide production and vasodilation // J. Biol. Chem.- 1995.- Vol. 270, №51.- P. 30290-30293.

185. Su W.H., Chen H.I., Jen C.J. Differential movements of VE-cadherin and PECAM-1 during transmigration of polymorphonuclear leukocytes through human umbilical vein endothelium // Blood.- 2002,- Vol. 100, № 10.- P. 3597-3603.

186. Sulowska Z., Majewska E., Krawczyk K., Klink M., Tchorzewski H. .Influence of opioid peptides on human neutrophil apoptosis and activation in vitro // Mediators Inflamm.- 2002.- Vol. 11, №4.- P. 245-250.

187. Sulowska Z., Majewska E., Tchorzewski H., Klink M. Effect of exogenous opioid peptides on TNF-alpha-induced human neutrophil apoptosis in vitro // Arch. Immunol. Ther. Exp.- 2003,- Vol. 51, №4.- P. 267-272.

188. Takacs Т., Czako L., Morschl E., Laszlo F., Tiszlavicz L., Rakonczay Z. Jr., Lonovics J. The role of nitric oxide in edema formation in L-arginine-induced acute pancreatitis // Pancreas.- 2002.- Vol. 25, №3.- P. 277-282.

189. Tal Т., Aviram I. Defensin interferes with the activation of neutrophil NADPH oxidase in a cell-free system // Biochem Biophys Res Commun.- 1993.-Vol. 196, №2.-P. 636-641.

190. Theilgaard-Monch K., Porse B.T., Borregaard N. Systems biology of neutrophil differentiation and immune response // Curr. Opin. Immunol.- 2006.-Vol. 18, №1.-P. 54-60.

191. Tojo K., Kato Y., Ohta H., Matsushita N., Shimatsu A., Kabayama Y., Inoue Т., Yanaihara N., Imura H. Stimulation by leumorphin of prolactin secretion from the pituitary in rats // Endocrinology.- 1985.- Vol. 117, №3.- P. 1169-1174.

192. Tsikitis VL, Albina JE, Reichner JS. Beta-glucan affects leukocyte navigation in a complex chemotactic gradient// Surgery.- 2004.- Vol. 136, №2.- P. 384-389.

193. Tsvirkun V.V., Grigorevskii V.P., Botsmanov K.V., Bocharova V.S. The effect of regulator peptides on pancreatic endocrine function in experimental acute pancreatitis // Biull. Eksp. Biol. Med.- 1989.- Vol. 108, №12.- P. 748-751.

194. Tu W., Li J., Zhu W. Influences of BN50739 on neutrophil elastase and phospholipase A2 in lung and tracheal mucosa of pigs with acute severe pancreatitis // Zhonghua Jie He He Hu Xi Za Zhi.- 2000.- Vol. 23, № 10.- P. 595-598.

195. Turkall R.M., Denison R.C., Tsan M.F. Degradation and oxidation of methionine enkephalin by human neutrophils // J. Lab. Clin. Med.- 1982.- Vol. 99, №3.- P. 418-427.

196. Uhl W., Muller C., Buchler M.W. Definition of predictors of a complicated course in acute pancreatitis // Langenbecks. Arch. Chir. Suppl. Kongressbd.-1998.-№ 115.- P. 427-433.

197. Valore E.V., Martin E., Ilarwig S.S., Ganz T. Intramolecular inhibition of human defensin HNP-1 by its propiece //J. Clin. Invest.- 1996.- Vol. 97, №7.- P. 1624-1629.

198. Vaissiere C., Le Cabec V., Maridonneau-Parini I. NADPH oxidase is functionally assembled in specific granules during activation of human neutrophils //J. Leukocyte Biol.- 1999.- Vol. 65, №5.- P. 629-634.

199. Wang X.P., Wu L.Y., Wu K., Zhang R.L., Dong Y.W. The role of lipopolysacchride-binding protein in the pathogenesis of animal model of acute necrotizing pancreatitis // Zhonghua Yi Xue Za Zhi.- 2003.- Vol. 83, №18.- P. 1619-1623.

200. Wereszczynska-Siemiatkowska U., Mroczko В., Siemiatkowski A. Serum profiles of interleukin-18 in different severity forms of human acute pancreatitis // Scand. J. Gastroenterol.- 2002- Vol. 37, №9.- P. 1097-1102.

201. Werner J., Rivera J., Fernandez-del Castillo C., Lewandrowski K., Adrie C., Rattner D.W., Warshaw A.L. Differing roles of nitric oxide in the pathogenesis of acute edematous versus necrotizing pancreatitis // Surgery.- 1997.- Vol. 121, №1.- P. 23-30.

202. Wessely-Szponder J., Urban-Chmiel R., Wernicki A., Bobowiec R. Effect of leukotoxin of Mannheimia haemolytica and LPS of E. coli on secretory response of bovine neutrophils in vitro // Pol. J. Vet. Sci.- 2005.- Vol. 8, №2.- P. 99-105.

203. Yamamoto Y., Ono H., Ueda A., Shimamura M., Nishimura K., Hazato T. Spinorphin as an endogenous inhibitor of enkephalin-degrading enzymes: roles in pain and inflammation // Curr. Protein Pept. Sci.- 2002. Vol 3, №6.- P. 587-599.

204. Yamomoto Y., Hotta K., Matsuda T. Effect of methionine-enkephalin on the spontaneous electrical and mechanical activity of the smooth muscle of the rat portal vein // Life Sci.- 1984.- Vol. 34, №10.- P. 993-999.

205. Yu-Qing Zhao, Xiao-Hong Liu, Tetsuhide Ito, Jia-Ming Qian. Protective effects of rhubarb on experimental severe acute pancreatitis // World J. Gastroenterol.- 2004,- Vol. 10, №7.- P. 1005-1009.

206. Zang G., Ross C.R., Blecha F. Porcine antimicrobial peptides: New prospect for ancient molecules of host defense // Vet. Res.- 2000.- №31.- P. 277.

207. Zhao D., Pothoulakis C. Rho GTPases as therapeutic targets for the treatment of inflammatory diseases // Expert Opin. Ther. Targets.- 2003.- Vol. 7, №5,- P. 583-592.

208. Zen K., Utech M., Liu Y., Soto I., Nusrat A., Parkos C.A. Association of BAP31 with CD1 lb/CD18. Potential role in intracellular trafficking of CDllb/CD18 in neutrophils //J. Biol. Chem.- 2004.- Vol. 279, №43.- P. 44924-44930.