Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Нозематоз медоносных пчел в условиях закрытого грунта Северного Зауралья и разработка средств для борьбы с его возбудителем

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Нозематоз медоносных пчел в условиях закрытого грунта Северного Зауралья и разработка средств для борьбы с его возбудителем"

На правах рукописи

ЗИНАТУЛЛИНА Зимфира Якубовна

НОЗЕМАТОЗ МЕДОНОСНЫХ ПЧЕЛ В УСЛОВИЯХ ЗАКРЫТОГО ГРУНТА СЕВЕРНОГО ЗАУРАЛЬЯ И РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ДЛЯ БОРЬБЫ С ЕГО ВОЗБУДИТЕЛЕМ

Специальность 03.00.19 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Тюмень 2004

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Тюменская государственная сельскохозяйственная академия» и ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной энтомологии и арахнологии» Сибирского отделения Российской академии сельскохозяйственных наук

Научный руководитель: кандидат биологических наук, доцент

Столбов Николай Максимович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Домацкий Владимир Николаевич

кандидат биологических наук, доцент Пашаян Сусанна Арестовна

Ведущая организация: Институт ветеринарной медицины

Омского Госагроуниверситета

Защита диссертации состоится « » декабря 2004 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д.006.009.01 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной энтомологии и арахнологии» (625041, г. Тюмень, ул. Институтская 2, ВНИИВЭА).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной энтомологии и арахнологии.

Автореферат разослан «¿У » ноября 200$ года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор

Н. В. Солопов

*¿u¿>7$

3

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Россия является одной из стран развитого пчеловодства Она занимает второе место в мире по количеству пчелиных семей и пятое место по производству меда (Кривцова, 2001). Пчелы широко используются для опыления сельскохозяйственных культур как в открытом, так и закрытом грунте В условиях закрытого грунта выращивают огурцы, дыни, томаты, землянику и другие культуры. Среди них лидирующее место занимают огурцы. Большая часть их сортов, пользующаяся спросом на рынке, нуждается в перекрестном опылении Стоимость дополнительного урожая огурцов при опылении цветков пчелами в 10-15 раз превышает затраты Замена опылительной работы пчел «ручным опылением» или механическими приспособлениями в пять-шесть раз дороже стоимости пчелоопыления и приводит к значительному уменьшению урожая плодов (Мельниченко, 1975) Пчелоопыпение в теплицах при правильной организации зооветеринарной и агрономической служб является рентабельным (Мурашко, Млявый, Казакевич, 2002). Однако в теплицах невозможно создать оптимальные условия для развития пчелиных семей. На них действуют такие неблагоприятные факторы, как

- повышенная температура и влажность;

- недостаточность летного пространства внутри теплиц, ограниченного большей частью стеклами, которых пчелы не видят;

- слабая нектаро- и пыльцепродуктивность растений;

- при посещении растений после их обработок происходит контактирование пчел с остатками средств защиты растений и удобрений,

- недостаток свежей, качественной пыльцы,

- необходимость проведения подкормок семей искусственными углеводными кормами, при переработке которых насекомые расходуют резервные вещества своего организма;

- искусственно укороченный период зимовки (в пределах 2 месяцев)

Особенностью содержания пчел в условиях закрытого фунта является ранняя выставка пчелиных семей для опыления (январь-февраль). После выставки пчелы активно начинают выращивал» расплод, который необходимо кормить, перерабатывая корма. Это ведет к дополнительной нагрузке на пищеварительную систему насекомых и организма в целом, к повышению температуры в пчелиных гнездах Химические обработки растений, повышенная температура и влажность, угнетенная летно-опылительная деятельность в ограниченном пространстве теплицы, воздействие возбудителей других болезней (варроатоз, аскосфероз) понижает иммунитет у пчел В таких условиях продолжительность жизни насекомых сокращается, физиологически раньше стареют пчелы, а семьи их "изнашиваются". Пчелы не отстраивают вощину и не выводят маток Эти факторы вызывают ослабление пчелиных семей, что благоприятствует развитию нозематоза. Технология использования пчел для опыления огурцов в теплицах, за исключением некоторых деталей, однотипна (Зарецкий, 1985; Теребов, 1990; Мурашко, Млявый, Казакевич, 2002)

Значительные исследования в изучении эпизоотологии нозематоза в условиях Северного Зауралья и разработке мер борьбы с его возбудителем проведены учеными ВНИИВЭА (Сидоров, 1974; Бобов, 1991; Кузьмина, 1999; Неверов, 2000) Однако недостаточно изучено течение этого заболевания в условиях закрытого грунта и нет полного представления о средствах для лечения пчел и методах их применения

Возбудитель нозематоза пчел Nosema apis Zander относится к типу Микроспоридий (Microsporidia) и является одноклеточным паразитом медоносных и среднеиндийских пчел (Крылов,1996; Алимов,2000). Паразит впервые описан в 1909г Е Цандером Для своего развития он требователен к условиям среды обитания. Размножается внутри эпителиальных клеток среднего отдела кишечника (Полтев, 1950; Гробов, 1971, Жданов, 1971, Мельник, 1979)

При нозематозе у насекомых нарушается процесс пищеварения Установлено, что если число пораженных клеток больше, чем естественно заменяющихся, то у пчелы

начинают проявляться признаки болезни (Гробов, 1974, 2003) Также наблюдается ослабление функций слюнных желез, участвующих в кормлении личинок и переработке сахарного сиропа При поражении маток и трутней ноземой нарушается функция репродуктивных органов (Штехе. 1962)

Система мер борьбы с нозематозом в естественных условиях включает в себя обеспечение семей доброкачественными кормами в достаточном количестве, создание оптимальных условий для зимовки, улучшение санитарного состояния ульев и пасеки, своевременное проведение лечебно-профилактических мероприятий (Полтев, 1950. Соловьева, Годяцкий,1988, 1989, 1990; Мельник,1979, Гробов, Лихогин, 2003 и другие) Вместе с тем, практически отсутствуют данные, касающиеся эффективности протоцидных препаратов в условиях закрытого грунта при нозематозе пчел

Цель работы Изучить течение нозематоза, разработать средства для борьбы с его возбудителем в условиях закрытого грунта.

Задачи исследований:

1 Изучить характер течения нозематоза пчел в условиях закрытого грунта, используемых для опыления огурцов;

2 Изучить влияние паразита на средний отдел кишечника пчел;

3 Установить паразитологическую эффективность протоцидов при нозематозе в условиях закрытого грунта;

4 Внедрить протоцидную обработку пчелиных семей, пораженных нозематозом, в технологию их содержания и опыления огурцов в условиях закрытого грунта в хозяйствах Северного Зауралья.

Научная новизна:

- впервые в условиях закрытого грунта изучена эффективность протоцидных препаратов;

- усовершенствована технология содержания пчел с протоциднычи обработками в теплицах, совмещённая с технологией опыления огурцов;

- усовершенствован метод определения жизнеспособности спор Nosema apis,

- разработан способ сбора пчел без ущерба для пчелиной семьи

Теоретическая и практическая ценность работы.

Результаты исследований использованы при

- разработке методических рекомендаций «Эпизоотология нозематоза медоносных пчел на пасеках Сибири, диагностика и система мер борьбы с его возбудителем», утвержденных для практического применения Управлением ветеринарии с госветинспекцией Администрации Тюменской области 21 сентября 2004 г, руководителями ФГОУ ВПО «Тюменской государственной сельскохозяйственной академии» 9 сентября 2004 г и ГНУ «ВНИИ ветеринарной энтомологии и арахнологии» 10 сентября 2004 г ;

- внедрении протоцидных средств в практику борьбы с нозематозом пчел в тепличном хозяйстве г Тюмени,

- внедрении в практику работы Тюменской областной ветеринарной лаборатории способа окраски спор для выявления их жизнеспособности;

- подготовке лекционных и практических занятий по дисциплинам «Биология с основами экологии» и «Паразитология» для студентов факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «ТГСХА».

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены

- на Ученых советах ГНУ «ВНИИВЭА» и заседаниях кафедры паразитологии и инвазионных болезней факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «ТГСХА» (20022004 гг ),

- на координационном совещании «Теоретически обосновать, разработать новые и усовершенствовать существующие средства профилактики и терапии медоносных пчел при смешанном течении инвазий и инфекций» (Тюмень ГНУ «ВНИИВЭА», 10 декабря 2003 г )

- на практическом семинаре для ветеринарных специалистов, организованном Тюменской областной ветеринарной лабораторией (2001 г);

- на практическом семинаре ('Профилактика и меры борьбы с заразными болезнями и вредителями пчел» для пчеловодов и зооветспециалистов Исетского района Тюменской области (2003,2004 гг.)

- на научно-практических конференциях молодых ученых по актуальным вопросам АПК (Тюмень ФГОУ ВПО «ТГСХА», 2001, 2003 и 2004 гг.);

- на научно-практической конференции «Актуальные вопросы биологии, экологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Тюмень: ГНУ «ВНИИВЭА», 2002

г);

- на Всероссийском семинаре и выставке микроскопической техники в Тюменском государственном университете с участием фирмы «Карл Цейсс» "Микроскопические исследования в биологии и медицине со времен Лйвенгука до технологии XXI века" (26-27 апреля 2004 г)

Положения, выносимые на защиту:

1. Эпизоотологическая характеристика течения нозематоза пчел в условиях закрытого грунта и патоморфологические изменения кишечника насекомых;

2 Использование протоцидных препаратов для регуляции степени поражения пчел возбудителем нозематоза на пасеках тепличного хозяйства;

3 Технология борьбы с нозематозом пчел в условиях закрытого грунта, совмещенная с технологией опыления огурцов.

Публикации. К печати подготовлено 10 статей, из них 6 опубликованы в трудах научно-исследовательских учреждений и в материалах конференций (все 10 по теме диссертации) В ГНУ «ВНИИВЭА» проняты ко внедрению 3 рационализаторских предложения

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, четырех глав и выводов Список литературы включает 145 отечественных и 15 зарубежных источников. Работа изложена на 125 страницах, иллюстрирована четырьмя фотографиями, пятью таблицами, двумя графиками и шестью гистограммами.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в гечение 2002-2004 гг. на кафедре паразитологии и инвазионных болезней факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «ТГСХА», в лаборатории арахноэнтомозов пчел ГНУ «ВНИИВЭА», а также на базе тепличного хозяйства ЗАО СП «Пригородный» г Тюмени и хозяйств открытого грунта южной зоны Тюменской области Объектом исследований служили пчелиные семьи тепличного комбината и хозяйств различных форм собственности юга Тюменской области За указанный период произведено свыше 2400 осмотров пчелиных семей. Поставлены пасечные и лабораторные опыты, в которых использовано более 130 семей, индивидуальным способом исследовано более 60 тысяч пчел, 400 трутней, 7 маток Приготовлено и проанализирован™ 48 гистопрепаратов Проведено испытание 4 препаратов.

Для выяснения эпизоотической обстановки по нозематозу были обследованы 72 пасеки, расположенные на территории 15 районов юга Тюменской области. Для этого в лабораторных условиях 246 проб исследовали групповым способом. В пробах присутствовали помесные пчелы.

При групповом способе от тела каждой пчелы отделяли брюшко, помешали в фарфоровую чашку, заливали дистиллированной водой (из расчета 1 мл на одну исследованную пчелу), тщательно растирали и помешивали пестиком, приготовляя

суспензию Каплю суспензии микроскопировапи на предметном стекле под покровным при увеличении 400" Исследовали не менее 20 полей зрения микроскопа (рис 3) Степень поражения оценивали по четырехбальной шкале в соответствии с «Методическими указаниями по лабораторным исследованиям на нозематоз медоносных пчел» (Утв 25 апреля 1985 г ГУВ МСХСССР).

Для изучения динамики нозематоза ежемесячно проводили отбор проб пчел в течение трех лег

Для изучения патогенного воздействия Nosema apis на медоносных пчел провели сравнительное паразитологическое и гистохимическое исследование кишечника здоровых и больных пчел С этой целью отобрали пробы живых пчел в период пика инвазии из семьи с высокой степенью поражения. Для сравнения взяли пробы пчел от семей, благополучных по этому заболеванию Пчел умерщвляли эфиром Захватывая последний сегмент брюшка, пинцетом извлекали кишечник и фиксировали в жидкости Карнуа или спирт-формалине Затем материал обезвоживали, проводили через спирт-эфир, пропитывали 2% раствором целлоидина и заключали в целлоидин-парафин (Меркулов, 1964) Полученные срезы окрашивали гематоксилин-эозином, железным гематоксилином по методу Гейденгайна в модификации А Г Гуревича, полисахариды выявляли реактивом Шифф - перйодная кислота. Споры и гистологические препараты окрашивали в соответствии с «Методическими указаниями по исследованию вирусов медоносных пчел» (М ВАСХНИЛ, 1989) Гистологические исследования проводили на кафедре патологической анатомии, патологической физиологии и хирургии ФГОУ ВПО «Тюменская государственная сельскохозяйственная академия» под руководством кандидата ветеринарных наук, доцента В И Игнатьева Микропрепараты были фотодокументированы на исследовательском микроскопе Axioskop 2 plus фирмы Carl Zeiss

С целью изучения эффективности протоцидных препаратов при терапии нозематоза на пасеках закрытого грунта провели опыты на пчелиных семьях. В пасечных опытах изучали как утвержденные Департаментом ветеринарии МХС РФ нозедин и аскоцин, а также новые препараты (висгин и эвкалиптовое масло)

Исследования проводили на пасеке ЗАО «Пригородное» в соответствии с «Методическими указаниями к постановке экспериментов в пчеловодстве» (М НИИП, 2000) Пчел исследовали индивидуально для определения индекса обилия (ИО) и экстенсивности инвазии (ЭИ). Подсчет количества спор в пчеле проводили, используя камеру Горяева (Сидоров, 1972) и разработанный нами способ.

Эффективность протоцидов изучали в трех опытах В первом опыте определяли оптимальные дозы эвкалиптового масла По данным В И Полтева (1957) в лабораторных условиях эвкалиптовое масло в 0,025% концентрации обладает протоцидной активностью Для определения эффективной дозы на семьях пчел сформировали четыре группы по три пчелиные семьи по принципу аналогов. Препарат смешивали с 20% сахарным сиропом и испытывали в следующих дозировках 0,0025% и 0,025% по 10 мл на улочку, 0,025% по 5 мл на улочку Обработки проводили методом поливания в межрамочное пространство двукратно с интервалом 5 дней.

Во втором опыте определяли эффективность нозедина и аскоцина и для подтверждения результатов первого опыта - эвкалиптового масла Пчелиные семьи обрабатывали нозедином и аскоцином в соответствии с наставлением по их применению Эвкалиптовое масло использовали вышеописанным методом Подбирали группы пчелиных семей по принципу пар-аналогов с учетом степени поражения паразитом, происхождения и возраста маток, количеству расплода, силе семьи и других зоотехнических показателей Группы пчелиных семей разделили по силе семей на две подгруппы слабые (3-4 улочки) и сильные (6-7 улочек) Во время опыта учитывали развитие семей (в улочках), количество расплода (в сотнях ячеек), гибель маток и семей, изменение урожайности огурцов в опытных теплицах (в кг)

В третьем опыте изучали эффективность вистина и эвкалиптового масла Вистин использовали в соответствии с методикой производственных испытаний утвержденной Управлением ветеринарии Администрации Тюменской области, а эвкалиптовое масло -по вышеописанной методике Для того подобрали четыре группы по 5 пчелиных семей по принципу пар-аналогов

Определение эффективности применения препаратов провели по двум критериям' по индексу обилия и по экстенсивности инвазии Для учета эффективности препаратов отбор проб пчел из семей проводили до начала обработок и через неделю после последней Протоцидаую активность определяли по формуле С Д Павлова (1982).

Э= 100-В-а/А'в- 100(%), где

А, В - пораженность спорами ноземы пчел в опытных семьях перед внесением препарата и после окончания опыта,

а, в - пораженность спорами ноземы пчел в контрольных семьях (не обрабатываемых препаратом) до опыта и после окончания опыта

Экономическую эффективность определяли согласно методике «Определение ущерба от болезней пчел и экономической эффективности проводимых мероприятий» (Воскобойников, Лихотин, Титов, Медведев, 1991). Математико-статистическую обработку научного материала проводили по общепринятым методам (Плохинский, 1961, Урбах, 1964, Садовский, 1975, Павлов,1982)

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Методические разработки

К возбудителю нозематоза пчел чувствительны насекомые старше 15 дней (Мельник, 1979), то есть летные пчелы В' связи с этим мы разработали способ отбора проб через леток, который изложен в принятом ко внедрению во ВНИИВЭА рационализаторском предложении № 4 от 10 марта 2003 г Сущность метода заключается в следующем У прозрачной пластиковой бутылки отрезают горловую часть. Для сбора пчел срез бутылки плотно приставляют к верхнему летку Пчелы, выходя из летка, попадают в бутылку. При наполнении ёмкости нужным количеством пчел, ев резко убирают и плотно соединяют с пронумерованным полиэтиленовым пакетом При встряхивании бутылки происходит перемещение пчел в пакет, который завязывают и помещают в морозильную камеру бытового холодильника.

При определении количества спор в пчеле используют счетную камеру Горяева. Для ускорения лабораторного определения количества спор в кишечнике пчелы нами предложен следующий способ При микроскопировании суспензии из кишечника пчел подсчитывают общее количество спор ноземы в 5 полях зрения микроскопа (400х), расположенных на разных участках предметного стекла, и умножают на 50000. В результате получают количество спор паразита в 1 мл суспензии, то есть в кишечнике одной пчелы.

Наличие спор ноземы не всегда свидетельствует о развитии болезни. Под воздействием различных факторов среды обитания часть спор становится нежизнеспособной Для выявления их жизнеспособности окрашивают суспензию из спор флуорохромом (в частности, акридином оранжевым в разведении 1 20000 - 1 2500 при рН 7,0-7,5) в течение 30-60 мин Затем суспензию отмывали от флуорохрома и исследовали под люминесцентным микроскопом, учитывая цвета свечения (Бубнов, Смирнов, 1970) Нами этот метод модифицирован На предметное стекло, мы предлагаем наносить каплю исследуемой суспензии и равномерно распределять по поверхности

стекла размером 2 х 2 см После подсушивания на воздухе мазок необходимо накрывать фильтровальной бумагой и наносить акридин оранжевый на цитратно-фосфатном буфере при рН 7,0-7,5 в разведении 1 25000 По истечении 30-60 мин фильтровальную бумагу удалить, мазок промыть дистиллированной водой и высушить В дальнейшем мазок микроскопируют, используя люминесцентный микроскол ЛОМО Микмед-2 со светофильтрами зеленый - 2, БС 8-3, СЗС - 24 объектив М-Флюар 100*/1,30 л ми да/1,17 К 10*/18 Оболочка живых спор люминесцирует желто-зеленым или красным, а содержимое споры - тусклым темно-серым цветом В то время как у погибших спор возбудителя кроме оболочки также ярко светится и внутреннее содержимое споры Цвета определяют по шкале цветов, предложенной АС Бондарцевым (1954). Этот способ использован нами для определения спороцидного действия лечебных препаратов

Распространение и уровень поражения пчел возбудителем нозематоза на пасеках юга Тюменской области

Юг Тюменской области, согласно В.И.Орловой (1963) и Н М Ступиной (1963) разделен на три природно-климатической подзоны южной тайги, осиново-березовых лесов, северной лесостепи Наименьшую площадь занимает подзона южной тайги В неё входят Нижне-Тавдинский и Ярковский административные районы Самая обширная зона, с богатым флористическим составом - осиново-березовых лесов Она в себя включает Упоровский, Голышмановский, Сорокинский, Исетский, Ялуторовский, Омутинский, Заводоуковский, Тюменский, Ишимский районы Самая южная зона, богатые степной растительностью, в основном злаками, - северная лесостепь В ее состав входят Армизонский, Бердюжский, Казанский и Сладковский районы

При анализе результатов обследования 72 пасек юга Тюменской области в 20012004 гг мы выявили 42 неблагополучные по нозематозу При этом установили следующую закономерность С севера на юг идет снижение поражения пчел нозематозом. Так, в подзоне южной тайги 72,4% пчелиных семей поражено нозематозом (с сильной и средней степени поражения), в осиново-березовых лесов 50,3% (со средней и слабой степенью поражения) и северной лесостепи - 7,7% (со слабой степенью поражения) На наш взгляд это связано с природно-климатическими условиями Эти подзоны отличаются между собой суммой положительных температур за период вегетации, количеством осадков в год и другими показателями.

Динамика течения нозематоза в условиях закрытого грунта

При изучении течения нозематоза в условиях закрытого грунт а нами выявлен ряд специфических факторов, которые оказывают влияние на возникновение и развитие инвазии В технологии содержания пчел в условиях закрытого грунта предусмотрена короткая зимовка (2-3 месяца), в то время как у пчел с пасек открытого грунта она длится 5-6 месяцев. При выставке пчелиных семей из зимовника в теплицы происходит резкая смена температур (с 0±2°С до 17±3°С). Дня выращивания расплода пчелам необходим полноценный углеводный и белковый корм (мед, перга) В связи с отсутствием естественных кормов в конце февраля - начале марта для поддержания пчелиных семей используют сахарный сироп, сухое молоко, заводскую молотую пыльцу, на переработку которых пчелы-кормилицы расходуют резервные вещества своего организма, что отрицательно сказывается на развитии семьи Периодическое использование средств

защиты растений и удобрений, необходимых для выращивания огурцов, вызывает хроническое отравление и как следствие ослабление семей

У больных пчелиных семей, содержащихся в теплицах, отсутствуют ярко выраженные клинические признаки нозематоза (опоношенность гнезда, улья, рамок), так как у пчел есть возможность беспрепятственно опорожнять кишечник Вместе с тем, при очистительных облетах, выходят споровые формы паразита, а вегетативные продолжают свое развитие в эпителиальных клетках среднего отдела кишечника

Как показали наши исследования при выставке пчелиных семей из зимовника в теплицы в конце января ЭИ существенно не изменяется по сравнению со степенью поражения перед постановкой в зимовник (рис. 1).

С первой декады марта степень поражения пчелиных семей возбудителем инвазии увеличивается и в апреле-мае наблюдается пик инвазии. Период максимального развития нозематоза начинается в апреле (ЭИ в семьях составляет в среднем 69,8±10,8%) и продолжается до середины мая (ЭИ в среднем 74,6±8,9%) В мае на территории между теплицами начинают цвести первые нетепличные медоносные растения (мать-и-мачеха, одуванчик, ива и др ) Естественные полноценные корма способствуют развитию семей, их оздоровлению, смене старых пчел на молодых, в гнездах увеличивается количество расплода В этот период нозематозный процесс идет на убыль, а в июле степень поражения насекомых спорами снижается до минимума (ЭИ в среднем 20,2±4,2%) К этому времени, все пчелиные семьи пересаживают в чистые продезинфицированные ульи, производят смену маток и происходит обновление пчел

Во второй половине августа начинается снижение температуры, повышение влажности воздуха, наступает безвзяточный период, в осенних медах присутствует примесь пади Эти факторы способствуют развитию нозематоза и в сентябре наблюдается второй пик инвазии - с 35,4±4.4% пораженных пчел в неблагополучных семьях.

Таким образом, к особенностям течения нозематоза в условиях закрытого грунта относится отсутствие естественного перезаражения всей пасеки (что возможно только на территории одной теплицы), возникновение и развитие заболевания в более ранние сроки (чем в открытом грунте), отсутствие характерных клинических признаков

[—♦— 2002 2003 слабы» ——2003 сильные 2004 ]

Рис 1. Изменение степени поражения пчел возбудетелем нозематоза в течение года

Патогенное воздействие Nosema apis на медоносных пчел

Нами установлено, что в период пика инвазии в семье с экстенсивностью инвазии 96,4% наблюдается вялая летная деятельность пчел, дрожание крьпьев, шаткое ползанье по прилетной доске, на сотах насекомые держатся некрепко, часто срываются В одной пчеле в среднем обнаружено по 50 млн спор со степенью поражения -t++ У этих пчел брюшко увеличено, кишечник извлекается с трудом, рвется Средний отдел кишечника грязно-белого цвета с отсутствием или менее выраженной сегментацией

Для гистологического исследования эпителиальных клеток среднего отдепа кишечника, пораженного ноземой, нами впервые использована окраска препаратов железным гематоксилином по Гейденгайну в модификации А Г Гуревича (Т980Х которая применяется для определения телец-включений вирусного хронического паралича пчел Этот способ позволяет наиболее контрастно окрашивать и выявлять споры в гистологических срезах При исследовании гистологических препаратов обнаружили, что большинство эпителиальных клеток бы пи целостными, но в их цитоплазме локализовалось большое количество спор, окрашенных в черный цвет По мере увеличения объема клеток, нагруженных спорами, наблюдали лизис эпителия и выбрасывание спор в просвет кишечника (рис. 2)

Нами проведено гистохимическое изучение распределения гликогена в эпителиальных клетках среднего отдела кишечника, пораженного возбудителем нозематоза пчел При исследовании гистологических препаратов выявили, что эпителиальные клетки не имели четких границ и в них не выражена определенная локализация гликогена Все структуры средней кишки равномерно слабо окрашены Споры, локализованные в эпителиальных клетках средней кишки и в ее содержимом, давали Шифф-отрицательную реакцию и были плохо видимы не только в срезах, но и в мазках содержимого кишечника

Таким образом, гликоген в эпителии средней кишки у больных нозематозом пчел не имеет четкой локализации ввиду разрушения их клеток и лизиса вследствие наличия в них большого количества спор

Вместе с тем у здоровых пчел брюшко обычных объемов, кишечник hí него легко извлекается Средний отдел кишечника коричневатого цвета с выраженной сегментацией При гистологическом исследовании среднего отдела кишечника у здоровых пчел выявили, что эпителиальная выстилка имеет хорошо выраженную цитоплазму и ядро (рис 4) и выделяет значительное количество секреторных гранул (рис.5)

Гистохимическое исследование эпителиальной выстилки средней кишки у здоровых пчел показали наличие у них значительного количества полисахарида гликогена Последний преимущественно расположен по апикальным концам эпителия в виде крупнозернистых глыбок, а базальный конец клеток и перигрофическая мембрана давали еле заметную реакцию на полисахариды Наиболее интенсивную Шифф-реакцию наблюдали в содержимом кишечника

Таким образом, наши исследования дополнили данные В И Полтева ( 1950), О Ф Гробова (1971), C.B. Жданова (1971), В H Мельника (1979), ТС Ждановой (1989), касающиеся основных изменений в эпителиальной выстилке средней кишки пчел, связанных с внутриклеточным размножением паразита и последующим уменьшением количества гликогена и секреторных гранул.

Рис 2 Споры Nosema apis в эпителиальных клетках средней кишки пчел Гематоксилин Гейденгайна в модификации А Г Гуревича х 140 (по Зинатуллиной, Игнатьеву, 2004)

Рис 3 Споры Nosema apis в суспензии из содержимого средней кишки пчел х 400 (по Зинатуллиной, 2004)

Рис 4 Эпителиальная выстилка средней кишки у здоровых пчел Гематоксилин-эозин х 280 (по Зинатуллиной, Игнатьеву, 2004)

Рис 5 Секреторные гранулы эпителиальных клеток средней кишки у здоровых пчел Гематоксилин-эозин. х180. (по Зинатуллиной, Игнатьеву, 2004)

Эффективность протоцидов при терапии нозематоза на пасеках закрытого грунта

В результате первого пасечного опыта, проведенного в феврале, установлено, что наиболее эффективным является двукратное (с интервалом 5 дней) применение эвкалиптового масла в 0,025% концентрации в объеме 10 мл на улочку пчел

Во второй декаде марта 2003 г провели второй пасечный опыт по выявлению протоцидной эффективности трех препаратов Нозедин применяли в дозе 10 мл рабочего раствора на улочку методом поливания пчел в межрамочном пространстве, двукратно с интервалом 5 дней (в соответствии с наставлением) Аскоцин скармливали в сахарном сиропе (11) по 60-70 мл на улочку, двукратно с интервалом 5 дней (согласно наставления)

Таблица 1

Паразитологическая эффективность протоцидных препаратов во втором опыте (2003 г )

Препарат Сила семьи, ул. Дооб| эаботок После обработок Эффективность (%)

ИО, млн. спор ЭИ, % ИО, млн. спор ЭИ, % по ИО по ЭИ

Нозедин 3^ 54,0± 4,3 90,3±4,4 10,8± 1,2 46,8±2,9 89,3±0,3 74,2±6,8

6-7 22,4± 6,2 84,7±18,8 3,5± 0,7 38,5±3,0 94,0±1,7 89,6±0,3

Аскоцин 3-4 43,0± 4,1 77,3±5,6 30,2±2,3 52,7±10,2 62,6±2,9 57,1±4,1

6-7 20,4±4,8 57,0±7,3 15,8±1,4 44,7±4,4 70,1 ±5,7 64,7±3,3

Эвкалиптовое масло 3-4 39,6±3,0 82,7±2,1 18,0±1,4 56,8±2,9 76,6±5,8 62,1±4,3

6-7 16,1±3,2 53,3±5,4 5,5±1,3 38,5±3,0 89,6±2,4 83,4±3,7

Контроль 3-4 47,9±3,0 68,0±11,1 79,8±6,8 98,0±8,2 -

6-7 6,0±1,9 30,0±6,7 15,8±2,7 61,0±3,0 -

По данным таблицы 1 видно, что все препараты обладают протоцидной активностью В результате применения препаратов отмечено снижение количества спор в кишечнике пчел во всех опытных группах Протоцидная эффективность нозедина (в счабых семьях по ИО -89,3±0,3%, в сильных - 94,0±1,7%; по ЭИ в слабых семьях - 74,2±6,8%, в сильных -89,6±0,3%) и эвкалиптового масла (по ИО в слабых семьях - 76,6±5,8%, а в сильных семьях -89,6±2,4%; по ЭИ в слабых семьях - 62,1±4,3, в сильных - 83,4±3,7) статистически достоверно не отличается Эффективность нозедина статистически достоверно выше, чем у аскоцина (по ИО в слабых семья - 62,6±2,9%, в сильных - 70,1±5,7%; по ЭИ в слабых семьях - 57,1*4,1% и в сильных - 64,7±3,3%).

После проведения обработок степень поражения в опытных группах снижается, а в контрольной группе наблюдается увеличение степени инвазии

Для изучения эффективности новых препаратов провели третий опыт, в котором испытывали нозедин, эвкалиптовое масло, вистин Вистин скармливали в сахарном сиропе (1:1) по одному литру на семью трехкратно с интервалом 3 дня.

Таблица 2

Препарат До обработок После обработок Эффективность, (%)

ИО, млн. спор ЭИ, % ИО, млн. спор ЭИ, % по ИО по ЭИ

Нозедин 65,7±5,8 53,7±4,4 21,0±1,5 19,7±1,7 89,7±1,3 76,9±1,9

Вистин 66,7±8,5 57,0±5,2 28,3±4,4 30,3±2,1 85,9±2,1 73,3±1,7

Эвкалиптовое масло 73,3±4,4 55,3±3,4 37,7±2,7 35,3±2, 78,3±2,7 67,3±3,1

Контроль 64,3±7,3 51,0±4,6 129,7±8,9 84,7±6,8 - -

Как видно из таблицы 2 по эффективности вистин (85,9±2,1% по ИО и по ЭИ - 73.3±1,7%) и эвкалиптовое масло (по ИО - 78,3±2,7%, по ЭИ - 67,3±3.1%) не уступают нозедину (по ИО - 89,7±1,3%, по ЭИ - 76,9±1,9%).

При определении жизнеспособности спор у пчел опытных групп обнаружено 87,6± 11,2% живых спор, а у контрольной - 90,3±9,4%. Достоверность разницы показателей жизнеспособности спор между этими группами пчел нет. Это свидетельствует об отсутствии губительного действия лечебных препаратов на споры возбудителя.

Изучение влияния препаратов на физиологическое состояние пчелиных семей

До обработки в опыте семьи в слабых подгруппах имели среднюю силу 3,36±0,4 улочки, среднее количество спор ноземы в одной исследованной пчеле было 14,9±1,0 млн. и среднее количество пораженных насекомых в семье - 20±1,1%-Сильные семьи состояли в среднем из 6,43±0,9 улочек с ИО 9,7±0,92 млн. спор и ЭИ 12,8±0,8%. Во всех семьях были однолетние матки Через месяц после начала опыта количество расплода увеличилось по сравнению с контролем у групп семей, обработанной нозедином, на 28%, а эвкалиптовым маслом- на 23%.

К началу второй декады июля у пчел опытной группы обнаружено минимальное количество спор (в поле зрения микроскопа от 8 до 38 спор) с ЭИ от 4 до 13,2% пчел в семье. В контрольной группе выявлено до 168 спор в поле зрения с 34,9% инвазированных пчел.

Обработки пчел вышеуказанными препаратами не оказывают отрицательного влияния на опылительную деятельность пчел. Для этого мы определили общую урожайность огурцов за сезон из разных экспериментальных групп. В теплицах, где находились пчелы из группы, обработанной нозедином, урожайность огурцов составила 23,49 кг/м2, эвкалиптовым маслом - 23,49 кг/м2, аскоцином - 22,96 кг/м2, у контрольной группы - 22,76 кг/м2.

При учете выживаемости семей установили, что к 10 мая 2003 г. погибла одна семья из контрольной группы (подгруппа слабых семей). Во время зимовки 2003-2004 гг. погибло 3 семьи из контрольной группы: две - из подгруппы слабых семей и одна -из подгруппы сильных семей. Установлена гибель одной матки в контрольной подгруппе сильных семей. В опытных и контрольной группах пчел не делали отводки и не допускали выхода роев.

В результате проведенных исследований выявлено, что лечебно-профилактические мероприятия, проведенные весной, не оказывают отрицательного влияния на состояние пчелиных семей. Лучшее развитие из опытных семей наблюдали в группе, где применяли нозедин. Семьи этой группы имели на 28% больше запечатанного расплода, чем контрольные группы. Также выраженный стимулирующий эффект на развитие пчелиных семей оказало эвкалиптовое масло (на 23% больше запечатанного расплода по сравнению с контролем).

Технология проведения лечебно-профилактических мероприятий при нозематозе пчел, совмещенная с технологией опыления огурцов

На пасеках Северного Зауралья используют пчел для опыления огурцов в теплицах. Технология содержания пчел в условиях закрытого грунта тесно увязана с технологией выращивания огурцов, которая однотипна, несколько отлична в деталях в конкретных хозяйствах. Нами она изучена на примере ЗАО СП «Пригородное», расположенное в окрестностях г. Тюмени.

В начале года почву в теплицах после предыдущего оборота заменяют свежей и завозят солому. Почву и солому дезинфицируют и вносят удобрения. В третьей декаде января высаживают рассаду огурцов на стадии 5 листа в горшках, помещая их в солому. В теплицах постоянно выдерживали температуру в пределах от 18° до 22°С. Растения подвязывают шпагатом к шпалерам. Через неделю (в конце января - начале февраля) в теплицы выставляют из зимовника пчелиные семьи. Заносят по 2-3 улья на специально подготовленные площадки в юго-западном углу теплиц с направлением летка к опыляемым растениям, открывают летки для облета пчел.

На 2-3 день после внесения ульев проводят первый осмотр пчелиных семей. При этом очищают донья ульев от подмора. Подмор собирают в ведро, а затем сжигают. Из гнезд вынимают заплесневевшие соты. При осмотре гнезда обращают внимание на наличие матки и качество засева Учитывают наличие кормовых запасов, недостаток которых пополняют медоперговыми рамками со склада Сокращают гнезда по силе семьи и утепляют сухими подушками. В это время обращают внимание на клинические признаки заболеваний, в частности нозематоза (опоношенность внутренних стенок улья, рамок, диафрагмы). При подозрении на заболевания проводят отбор проб. Осмотры повторяют с интервалом 10 дней. В виду того, что в период выставки в пчелиных семьях наблюдается слабая степень поражения нозематозом, то массовый отбор проб пчел для исследования проводят на 2-3 недели позже (И - III декада февраля)

Пчелиные семьи развиваются разными темпами и для равномерного увеличения их летной активности, необходимой для опыления огурцов, производят выравнивание силы слабых семей за счет сильных Подсиливание осуществляют печатным расплодом. Расширение гнезд сильных семей производят светлой или светло-коричневой сушью. Вощину не используют, так как редкие семьи ее хорошо отстраивают. Черные соты для обсушки выставляют за диафрагму, а затем удаляют из улья на переработку.

Через 3-4 недели после посадки рассады огурцов проводят профилактический осмотр растений на наличие паутинного клеща, трипсов, тлей и других паразитов и болезней растений. Растения вырастают до шпалеры, начинается массовое их цветение и завязывание плодов При наличии паразитов или заболеваний растения обрабатывают средствами защиты. Рано утром перед обработкой растений закрывают летки и ульи полиэтиленовыми чехлами. Через 3-4 часа после обработок снимают чехлы с ульев и открывают летки. С января по июль проводят неоднократные обработки растений. Для защиты растений используют фитоверм, агровертин, фундазол.

В результате воздействия неблагоприятных условий на пчел, вместе с развитием нозематоза проявляются клинические признаки других заболеваний, в частности аскосфероза, варроатоза По необходимости проводят фунгицидные и акарицадные обработки пчелиных семей.

При поступлении результатов лабораторного исследования пчел на нозематоз (1-2 декада марта) проводят лечебно-профилактические мероприятия на пасеке, которые заключаются в следующем. Учитывают больные семьи и следят за их

развитием; проводят выбраковку старых сотов, тщательную очистку опоношенных, пригодных к использованию рамок Плановые осмотры начинают проводить со здоровых и сильных семей, а заканчивают больными и слабыми, подсиливают слабые семьи расплодом из здоровых семей, не допускают объединения здоровых семей с больными, проводят протоцидные обработки рекомендованными нами препаратами. После обработок наблюдают за уровнем инвазии. При необходимости проводят повторные обработки.

Во время плановых осмотров с марта пчелиным семьям задают молотую пыльцу с сухим молоком в пропорции 5:1 и сахарный сироп (0,5-1,0 л). Корм равномерно распределяют по пустому соту и ставят в улей.

Для обеспечения пчел водой в поилки наливают чистую воду ежедневно. Также один раз в неделю выдают 1,5-2,0 л сахарного сиропа (1:1) на теплицу, который разливают в поилки рядом с ульем. В этот сироп помещают цветки огурцов для дрессировки пчел. В апреле-мае в межтепличном пространстве зацветают первые естественные пыльцеиосы (мать-и-мачеха, одуванчик, ива и др.). Температура в теплице значительно повышается, вследствие этого открывают форточки. Пчелы вылетают за естественным взятком за пределы теплицы Для профилактики блуждания насекомых при возвращении в улей стекла вокруг форточки окрашивают известью.

В апреле при потеплении до плюсовых температур лишние семьи выносят на притепличную пасеку. В теплице оставляют по 1-2 улья (в зависимости от силы семьи) Остальные семьи выносят по мере окончания продуктивного вегетационного периода огурцов (3-я декада июня - 1-я декада июля). За 2-3 дня до прополки огурцов выносят ульи с пчелами, для этого рано утром закрывают летки и по мере возможности вывозят ульи с пчелами на притепличную пасеку. После установки ульев на новое место у них открывают летки.

После вывоза пчелиных семей делают профилактическую обработку теплиц с растениями БИ-58. Затем помещение провегривают и огурцы выпалывают. На этом первый оборот, при котором выращивают огурцы, заканчивается и теплицы готовят под второй оборот для выращивания помидор.

На притепличной пасеке в теплую погоду пересаживают пчелиные семь в чистые продезинфицированные ульи. Ульи механически очищают, моют, сушат и обжигают паяльной лампой Производят дезинфекцию соторамок уксусной кислотой. Пчелоинвентарь, спецодежду дезинфицируем кипячением или обработкой дезосредствами

В мае-июне хозяйство закупает пакеты пчел для заготовки кормов, подготовке к следующему опылительному сезону

С момента вывоза пчел на притепличную пасеку происходит наращивание силы пчелиных семей и их оздоровление за счет поступления в улей качественного естественного корма (нектара, пыльцы). В июне-июле производят смену маток во всех семьях без исключения. Двулетние матки плохо работают в следующем опылительном сезоне и семьи слабо развиваются.

За предыдущий год большинство сот приходит в негодность, и необходимо их восполнение. Так как пасека не является товарной, то мед не откачивают из сотов и стараются пополнить запасы суши Это объясняется тем. что в теплицах не наблюдается какой либо активности пчел по отстраиванию сотов. Как правило, это происходит ближе к лету, когда есть поддерживающий взяток и сила семьи

достаточна для его использования Мед оставляют в гнездовых рамках, которые хранят на складе. Выбракованные соты перетапливают

Летом зимовник белят, проветривают и просушивают. В сентябре собирают гнезда в ульях для зимовки пчел, обеспечивая доброкачественными кормами. За неделю до постановки пчелиных семей в зимовник раскладывали ротоцидные приманки Постановку пчел в зимовник производят во второй декаде ноября. После установки летковых заградителей ульи размещают на трехъярусных стеллажах. Слабые семьи ставят на верхние стеллажи в середине помещения. Температуру в зимовнике поддерживают в пределах от -2 до +2°С, а относительную влажность воздуха - 75-85%.

ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ОБРАБОТОК ПЧЕЛИНЫХ СЕМЕЙ ХИМИЧЕСКИМИ ПРЕПАРАТАМИ В УСЛОВИЯХ ЗАКРЫТОГО ГРУНТА

Экономическая эффективность на 1 рубль затрат от применения нозедина составила 42,9 руб., а эвкалиптового масла - 34,59 руб.

У аскоцина определили процент окупаемости затрат. Если учесть, что ущерб от группы больных семей составляет 76691 руб., а обработки аскоцином сократили ущерб до 33900 руб., то затраты от обработки аскоцином окупились на 55,8%.

Таким образом, применение нозедина и эвкалиптового масла с протоцидной целью при нозематозе пчел экономически оправдано.

ВЫВОДЫ

1. На пасеках Северного Зауралья широко распространен нозематоз, возбудителем которого является Nosema apis Zander, 1909 (Microsporidia, Nosematidae). В хозяйствах, использующих пчел на опылении огурцов, она снижает урожайность на 6 %. На пасеках открытого грунта степень поражения пчел спорами ноземы зависит от климатических условий среды обитания. Так, в Тюменской области на пасеках подзоны южно-таежных лесов поражены пчелы в 72,4% семей (уровень от + до +++), осиново-березовых лесов - 50,3% семей (уровень от + до +++), а в северной лесостепи - 7,7% семей (уровень от + до ++).

2. В семьях, используемых в тепличных хозяйствах, выявлено два пика поражения пчел возбудителем нозематоза. Первый пик инвазии начинается с начала апреля и продолжается до начала третьей декады мая, а второй - в сентябре Отмечено, что второй пик поражения пчел менее выражен у слабых семей, чем у сильных.

3. При изучении патогенеза нозематоза у пчел установили, что основные изменения происходят в эпителиальной выстилке средней кишки, характеризующиеся внутриклеточным размножением возбудителя с последующим уменьшением количества гликогена и секреторных гранул.

4. Усовершенствован люминесцентный метод выявления жизнеспособности спор ноземы. Высушенный мазок из суспензии спор паразита окрашивают флюорохромом. В дальнейшем мазок микроскопируем, используя люминесцентный микроскоп. Оболочка живых спор люминесцирует желто-зеленым или красным, а

» содержимое споры - тусклым темно-серым цветом. У погибших спор ноземы

оболочка и их внутреннее содержимое ярко светится.

5. В условиях теплиц при нозематозе пчёл наибольшая протоцидная эффективность выявлена у нозедина (эффективность по критерию ИО - 89,7±1,3%, по ЭИ - 76,9±1,9%), у находящегося в производственных испытаниях вистина (по ИО -85,9±2,1% и по ЭИ - 73,3±1,7%) и у вновь испытуемого эвкалиптового масла (по ИО 78,3±2,7% и по ЭИ - 67,3±3,1%). Аскоцин показал меньшую протоцидную активность (по ИО в слабых семья - 62,6±2,9%, в сильных - 70,1±5,7%; по ЭИ в слабых семьях -57,1±4,1% и в сильных - 64,7±3,3%). Проведенные обработки способствуют усилению развития семей и летно-опыпительной деятельности пчел, их сохранению в период зимовки и отсутствию гибели маток.

6. Проведение протоцидных обработок по разработанной методике в условиях закрытого грунта способствует повышению урожайности огурцов в среднем на 6%. Экономическая эффективность на 1 рубль затрат от применения нозедина составила 42,9 руб., а эвкалиптового масла - 34,59 руб.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1) Зинатуллина З.Я, Столбов Н.М. Эколого-биологическая характеристика Nosema apis Zander - возбудителя нозематоза // Актуальные вопросы в АПК: Сб. науч тр. ФГОУ ВПО «ТГСХА» Тюмень: ИПК ТГСХА, 2002. - С. 87-89.

2) Зинатуллина З.Я. Применение фумагиллина для лечения нозематоза медоносных пчел // Актуальные вопросы биологии, экологии и ветеринарной медицины домашних животных: Сб. статей. ВНИИВЭА, Тюмень: ИПК ТГСХА, 2002. - С. 52-54.

3) Зинатуллина З.Я., Столбов Н.М Нозематоз пчел на пасеках Северного Зауралья. // Новый взгляд на проблемы АПК: Сб. науч. тр. Тюмень: ООО «Стэн», 2002. - С. 84-85.

4) Зинатуллина З.Я., Столбов Н.М. Выявление жизнеспособности спор Nosema apis Zander методом люминесцентной микроскопии // Пробл. энтомологии и арахнологии: Сб. науч. тр. Тюмень: «Ризограф», 1997 вып. 45. - С. 67-69.

5) Зинатуллина З.Я., Столбов Н.М. Применение химических препаратов при нозематозе пчел в тепличных хозяйствах, 2004. В печати (г. Уфа).

6) Зинатуллина З.Я., Игнатьев В И. Патоморфологические изменения среднего отдела кишечника при нозематозе пчел // Научные труды Международной конференции молодых ученых, посвященная 35-ти летию СО РАСХН. Новосибирск, 2004. - С. 32. (в печати).

7) Домацкая Т.Ф., Столбов Н.М., Васькова H.H., Зинатуллина З.Я., Модин O.A. Эпизоотологическое обследование пасек юга Тюменской области // Научные труды Международной конференции молодых ученых, посвященная 35-ти летию СО РАСХН. Новосибирск, 2004. - с.30 (в печати).

8) Зинатуллина З.Я., Столбов Н.М., Неверов В.Ю., Домацкая Т.Ф., Сивков Г С., Игнатьев В.И. Эпизоотология нозематоза медоносных пчел на пасеках Сибири, диагностика и система мер борьбы с его возбудителем: Рекомендации. Тюмень: ФГОУ ВПО «ТГСХА», 2004. - 43 с.

9) Васькова Н Н , Домацкая Т Ф , Зинатуллина 3 Я, Модин О А., Столбов Н М , Шнайдер А.А Болезни пчел на пасеках Тюменской области II 14-е Ершовские

чтения, посвященные 60-ти летию образования Тюменской области и 50-ти летию Ишимского государственного университета им. П.Е.Ершова. Ишим, 2004. - С.36 (в печати).

10) Зинатуллина З.Я., Игнатьев В.И., Столбов Н.М Патогенное воздействие Nosema apis на медоносных пчел в зависимости от сезонов года // Актуальные вопросы в АПК: Сб. науч. тр. ФГОУ ВПО «ТГСХА». Тюмень: ООО «Восход», 2004. -С. 78 - 80.

Список рационализаторских предложений, принятых ко внедрению

- Зинатуллина З.Я. Способ сбора пчел для исследования их на пораженность спорами ноземы: Удостоверение № 4 от 10 марта 2003 г.

- Зинатуллина З.Я. Модифицированный метод количественной диагностики нозематоза пчел: Удостоверение № 337 от 10 сентября 2003 г.

- Зинатуллина З.Я. Модификация окраски спор Nosema apis Zander при люминесцентной микроскопии: Удостоверение № 318 от 05 февраля 2004 г.

в ГНУ «ВНИИ ветеринарной энтомологии и арахнологии»

Соискатель

3 Я. Зинатуллина

На правах рукописи

ЭИНАТУДЛИНА Зимфнра Якубовна

НОЗЕМАТОЗ МЕДОНОСНЫХ ПЧЕЛ В УСЛОВИЯХ ЗАКРЫТОГО ГРУНТА СЕВЕРНОГО ЗАУРАЛЬЯ И РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ДЛЯ БОРЬБЫ С ЕГО ВОЗБУДИТЕЛЕМ

Специальность 03.00.19 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Тюмень 2004

Подписано в печать 18.11. 2004 г Тираж 100 экз Печать трафаретная Заказ 1898 Отпечатано в печатном цехе "Ризограф" Тюменского Аграрного Академического Союза 625003, г Тюмень, ул. Республики, 7

РНБ Русский фонд

2006-4 22056

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Зинатуллина, Зимфира Якубовна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Изучение эпизоотологии нозематоза пчел на пасеках закрытого грунта и медово-опылительного направления.

1.2. Анализ отечественных и зарубежных материалов по средствам и методам борьбы с нозематозом.

1.3. Мероприятия по ликвидации заболевания.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы исследований.

2.1.1. Размещение хозяйств закрытого грунта в Северном Зауралье, использующих пчел для опыления огурцов и их экономические показатели.

2.1.2. Особенности технологии разведения медоносных пчел в условиях закрытого грунта и использовании их для опыления растений.

2.1.3. Методика проведения экспериментальных работ и их количественная характеристика.

2.2. Эколого-биологическая характеристика Nosema apis Zander возбудителя нозематоза пчел.

2.3. Распространение и уровень поражения пчел возбудителем нозематоза на пасеках Тюменской области.

2.4. Динамика течения нозематоза в условиях закрытого грунта.

2.5. Патогенное воздействие Nosema apis на пчел.

2.6. Использование протоцидных препаратов при терапии нозематоза на пасеках закрытого грунта.

2.6.1. Паразитологическая эффективность и изменение уровня поражения пчел в течение года.

2.6.2. Изучение влияния препаратов на физиологическое состояние пчелиных семей.

2.6.3. Технология проведения лечебно-профилактических мероприятий при нозематозе пчел, совмещенная с технологией опыления огурцов.

2.6.4. Экономическая эффективность обработок пчелиных семей химическими препаратами в условиях закрытого грунта.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Нозематоз медоносных пчел в условиях закрытого грунта Северного Зауралья и разработка средств для борьбы с его возбудителем"

Актуальность темы. Россия является одной из стран развитого пчеловодства. Она занимает второе место в мире по количеству пчелиных семей и пятое место по производству меда (Кривцова, 2001). Пчелы широко используются для опыления сельскохозяйственных культур как в открытом, так и закрытом грунте. В условиях закрытого грунта выращивают огурцы, дыни, томаты, землянику и другие культуры. Среди них лидирующее место занимают огурцы. Большая часть их сортов, пользующаяся спросом на рынке, нуждается в перекрестном опылении. Стоимость дополнительного урожая огурцов при опылении цветков пчелами в 10-15 раз превышает затраты. Замена опылительной работы пчел «ручным опылением» или механическими приспособлениями в пять-шесть раз дороже стоимости пчелоопыления и приводит к значительному уменьшению урожая плодов (Мельниченко, 1975). Пчелоопыление в теплицах при правильной организации зооветеринарной и агрономической служб является рентабельным (Мурашко, Млявый, Казакевич, 2002). Однако в теплицах невозможно создать оптимальные условия для развития пчелиных семей. На них действуют такие неблагоприятные факторы, как

- повышенная температура и влажность;

- недостаточность летного пространства внутри теплиц, ограниченного большей частью стеклами, которых пчелы не видят;

- слабая нектаро- и пыльцепродуктивность растений;

- при посещении растений после их обработок происходит контактирование пчел с остатками средств защиты растений и удобрений;

- недостаток свежей, качественной пыльцы;

- необходимость проведения подкормок семей искусственными углеводными кормами, при переработке которых насекомые расходуют резервные вещества своего организма;

- искусственно укороченный период зимовки (в пределах 2 месяцев).

Особенностью содержания пчел в условиях закрытого грунта является ранняя выставка пчелиных семей для опыления (январь-февраль). После выставки пчелы активно начинают выращивать расплод, который необходимо кормить, перерабатывая корма. Это ведет к дополнительной нагрузке на пищеварительную систему насекомых и организма в целом, к повышению температуры в пчелиных гнездах. Химические обработки растений, повышенная температура и влажность, угнетенная летно-опылительная деятельность в ограниченном пространстве теплицы, воздействие возбудителей других болезней (варроатоз, аскосфероз) понижает иммунитет у пчел. В таких условиях продолжительность жизни насекомых сокращается, физиологически раньше стареют пчелы, а семьи их "изнашиваются". Пчелы не отстраивают вощину и не выводят маток. Эти факторы вызывают ослабление пчелиных семей, что благоприятствует развитию нозематоза. Технология использования пчел для опыления огурцов в теплицах, за исключением некоторых деталей, однотипна (Зарецкий, 1985; Теребов, 1990; Мурашко, Млявый, Казакевич, 2002).

Значительные исследования в изучении эпизоотологии нозематоза в условиях Северного Зауралья и разработке мер борьбы с его возбудителем проведены учеными ВНИИВЭА (Сидоров, 1974; Бобов, 1991; Кузьмина, 1999; Неверов, 2000). Однако недостаточно изучено течение этого заболевания в условиях закрытого грунта и нет полного представления о средствах для лечения пчел и методах их применения.

Возбудитель нозематоза пчел Nosema apis Zander относится к типу Микроспоридий (Microsporidia) и является одноклеточным паразитом медоносных и среднеиндийских пчел (Крылов, 1996; Алимов, 2000). Паразит впервые описан в 1909 г. Е. Цандером. Для своего развития он требователен к условиям среды обитания. Размножается внутри эпителиальных клеток среднего отдела кишечника (Полтев, 1950; Гробов, 1971, Жданов, 1971; Мельник, 1979).

При нозематозе у насекомых нарушается процесс пищеварения. Установлено, что если число пораженных клеток больше, чем естественно заменяющихся, то у пчелы начинают проявляться признаки болезни (Гробов, 1974, 2003). Также наблюдается ослабление функций слюнных желез, участвующих в кормлении личинок и переработке сахарного сиропа. При поражении маток и трутней ноземой нарушается функция репродуктивных органов (Штехе, 1962).

Система мер борьбы с нозематозом в естественных условиях включает в себя: обеспечение семей доброкачественными кормами в достаточном количестве, создание оптимальных условий для зимовки, улучшение санитарного состояния ульев и пасеки, своевременное проведение лечебно-профилактических мероприятий (Полтев, 1950; Соловьева, Годяцкий,1988, 1989, 1990; Мельник, 1979; Гробов, Лихотин, 2003 и другие). Вместе с тем, практически отсутствуют данные, касающиеся эффективности протоцидных препаратов в условиях закрытого грунта при нозематозе пчел.

Цель работы. Изучить течение нозематоза, разработать средства для борьбы с его возбудителем в условиях закрытого грунта.

Задачи исследований:

1. Изучить характер течения нозематоза пчел в условиях закрытого грунта, используемых для опыления огурцов;

2. Изучить влияние паразита на средний отдел кишечника пчел;

3. Установить паразитологическую эффективность протоцидов при нозематозе в условиях закрытого грунта;

4. Внедрить протоцидную обработку пчелиных семей, пораженных нозематозом, в технологию их содержания и опыления огурцов в условиях закрытого грунта в хозяйствах Северного Зауралья.

Научная новизна:

- впервые в условиях закрытого грунта изучена эффективность протоцидных препаратов;

- усовершенствована технология содержания пчел с протоцидными обработками в теплицах, совмещённая с технологией опыления огурцов;

- усовершенствован метод определения жизнеспособности спор Nosema apis;

- разработан способ сбора пчел без ущерба для пчелиной семьи.

Теоретическая и практическая ценность работы.

Результаты исследований использованы при: с

- разработке методических рекомендаций «Эпизоотология нозематоза медоносных пчел на пасеках Сибири, диагностика и система мер борьбы с его возбудителем», утвержденных для практического применения Управлением ветеринарии с госветинспекцией Администрации Тюменской области 21 сентября 2004 г., руководителями ФГОУ ВПО «Тюменской государственной сельскохозяйственной академии» 9 сентября 2004 г. и ГНУ «ВНИИ ветеринарной энтомологии и арахнологии» 10 сентября 2004 г.;

- внедрении протоцидных средств в практику борьбы с нозематозом пчел в тепличном хозяйстве г. Тюмени;

- внедрении в практику работы Тюменской областной ветеринарной лаборатории способа окраски спор для выявления их жизнеспособности;

- подготовке лекционных и практических занятий по дисциплинам «Биология с основами экологии» и «Паразитология» для студентов факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «ТГСХА».

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены:

- на Ученых советах ГНУ «ВНИИВЭА» и заседаниях кафедры паразитологии и инвазионных болезней факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «ТГСХА» (2002-2004 гг.);

- на координационном совещании «Теоретически обосновать, разработать новые и усовершенствовать существующие средства профилактики и терапии медоносных пчел при смешанном течении инвазий и инфекций» (Тюмень: ГНУ «ВНИИВЭА», 10 декабря 2003 г.);

-на практическом семинаре для ветеринарных специалистов, организованном Тюменской областной ветеринарной лабораторией (2001 г.);

-на практическом семинаре «Профилактика и меры борьбы с заразными болезнями и вредителями пчел» для пчеловодов и зооветспециалистов Исетского района Тюменской области (2003,2004 гг.);

-на научно-практических конференциях молодых ученых по актуальным вопросам АПК (Тюмень: ФГОУ ВПО «ТГСХА», 2001,2003 и 2004 гг.);

-на научно-практической конференции «Актуальные вопросы биологии, экологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Тюмень: ГНУ «ВНИИВЭА», 2002 г.);

-на Всероссийском семинаре и выставке микроскопической техники в Тюменском государственном университете с участием фирмы «Карл Цейсс» "Микроскопические исследования в биологии и медицине со времен Лёвенгука до технологии XXI века" (26-27 апреля 2004 г.).

Положения, выносимые на защиту:

1. Эпизоотологическая характеристика течения нозематоза пчел в условиях закрытого грунта и патоморфологические изменения кишечника насекомых;

2. Использование протоцидных препаратов для регуляции степени поражения пчел возбудителем нозематоза на пасеках тепличного хозяйства;

3. Технология борьбы -с нозематозом пчел в условиях закрытого грунта, совмещенная с технологией опыления огурцов.

Публикации. К печати подготовлено 10 статей, из них 6 опубликованы в трудах научно-исследовательских учреждений и в материалах конференций (все 10 по теме диссертации). В ГНУ «ВНИИВЭА» проняты ко внедрению 3 рационализаторских предложения.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, четырех глав и выводов. Список литературы включает 145 отечественных и 15 зарубежных источников. Работа изложена на 125 страницах, иллюстрирована четырьмя фотографиями, пятью таблицами, двумя графиками и шестью гистограммами.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Зинатуллина, Зимфира Якубовна

выводы

1. На пасеках Северного Зауралья широко распространен нозематоз, возбудителем которого является Nosema apis Zander, 1909 (Microsporidia, Nosematidae). В хозяйствах, использующих пчел на опылении огурцов, она снижает урожайность на 6 %. На пасеках открытого грунта степень поражения пчел спорами ноземы зависит от климатических условий среды обитания. Так, в Тюменской области на пасеках подзоны южно-таежных лесов поражены пчелы в 72,4% семей (уровень от ++ до +++), осиново-березовых лесов - 50,3% семей (уровень от + до ++), а в северной лесостепи - 7,7% семей (уровень +).

2. В семьях, используемых в тепличных хозяйствах, выявлено два пика поражения пчел возбудителем нозематоза. Первый пик инвазии начинается с начала апреля и продолжается до начала третьей декады мая, а второй - в сентябре. Отмечено, что второй пик поражения пчел менее выражен у слабых семей, чем у сильных.

3. При изучении патогенеза нозематоза у пчел установили, что основные изменения происходят в эпителиальной выстилке средней кишки, характеризующиеся внутриклеточным размножением возбудителя с последующим уменьшением количества гликогена и секреторных гранул.

4. Усовершенствован люминесцентный метод выявления жизнеспособности спор ноземы. Высушенный мазок из суспензии спор паразита окрашивают флюорохромом. В дальнейшем мазок микроскопируем, используя люминесцентный микроскоп. Оболочка живых спор люминесцирует желто-зеленым или красным, а содержимое споры - тусклым темно-серым цветом. У погибших спор ноземы оболочка и их внутреннее содержимое ярко светится.

5. В условиях теплиц при нозематозе пчёл наибольшая протоцидная эффективность выявлена у нозедина (эффективность по критерию ИО -89,7±1,3%, по ЭИ - 76,9±1,9%), у находящегося в производственных испытаниях вистина (по ИО - 85,9±2,1% и по ЭИ - 73,3±1,7%) и у вновь испытуемого эвкалиптового масла (по ИО 78,3±2,7% и по ЭИ - 67,3±3,1%). Аскоцин показал меньшую протоцидную активность (по ИО в слабых семья -62,6±2,9%, в сильных - 70,1±5,7%;'по ЭИ в слабых семьях - 57,1±4,1% и в сильных - 64,7±3,3%). Проведенные обработки способствуют усилению развития семей и летно-опылительной деятельности пчел, их сохранению в период зимовки и отсутствию гибели маток.

6. Проведение протоцидных обработок по разработанной методике в условиях закрытого грунта способствует повышению урожайности огурцов в среднем на 6%. Экономическая эффективность на 1 рубль затрат от применения нозедина составила 42,9 руб., а эвкалиптового масла - 34,59 руб.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработаны и опубликованы методические рекомендации «Эпизоотология нозематоза медоносных пчел на пасеках Сибири, диагностика и система мер борьбы с его возбудителем», утвержденные для практического применения Управлением ветеринарии с госветинспекцией Администрации Тюменской области 21 сентября 2004 г., руководителями ФГОУ ВПО «Тюменской государственной сельскохозяйственной академии» 9 сентября 2004 г. и ГНУ «ВНИИ ветеринарной энтомологии и арахнологии» 10 сентября 2004 г.;

2. Приняты ко внедрению в ГНУ «ВНИИ ветеринарной энтомологии и арахнологии рационализаторские предложения:

- Зинатуллина З.Я. Способ сбора пчел для исследования их на пораженность спорами ноземы: Удостоверение № 4 от 10 марта 2003 г.

Зинатуллина З.Я. Модифицированный метод количественной диагностики нозематоза пчел: Удостоверение № 337 от 10 сентября 2003 г.

- Зинатуллина З.Я. Модификация, окраски спор Nosema apis Zander при люминесцентной микроскопии: Удостоверение № 318 от 05 февраля 2004 г.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Зинатуллина, Зимфира Якубовна, Тюмень

1. Алексеенко Ф.М., Вовк Н.М. Изучение эпизоотологии и разработка методов профилактики и терапии нозематоза пчел // Труды Украинского института экспериментальной ветеринарии. 1962. Т. 28 - С. 132-137.

2. Алексеенк Ф.М., Ревенок В.А., Чепурко М.А. Справочник по болезням и вредителям пчел. Киев: Уроджай, 1991. - 205 с.

3. Алимов А.Ф. Протисты: Руководство по зоологии. СПб.: Наука. -2000. 4.1.-619 с.

4. Алпатов В.В. Химиотерапия медоносной пчелы // Успехи современной биологии.- 1946. т.21 С. 21.

5. Алпатов В.В., Губин А.Ф. Действие химических веществ на микроспоридию.// Зоологический журнал 1942. № 4 - С.24.

6. Алпатов В.В., Кирьякова В.А. Антибиотики и борьба с нозематозом пчел.// Пчеловодство. 1953. № 11 - С.31.

7. Ахременко Н.С. Применение грамицидина при нозематозе пчел.// Пчеловодство. 1948. № 7 - С. 27.

8. Бойко А.К. К вопросу о лечении нозематоза пчел. // Пчеловодство. -1937. №9 С.17.

9. Бондарцев А.С. Шкала цветов: пособие для биологов в научно-прикладных исследованиях. М.-Л.: АН СССР, 1954. С.27.

10. Бубнов В.Д., Смирнов A.M. Применение метода вторичной люминесцентной микроскопии для определения жизнеспособности возбудителя нозематоза пчел // Проблемы ветеринарной санитарии. Труды ВНИИВС. 1970. т. XXXVII -С.137.

11. Василиади' Г.К. Пчелы: естественная устойчивость к нозематозу //Пчеловодство. 1991. № 11 - С. 19-20.

12. Верещака И.Ю. Препарат ноземат // Пчеловодство. 1998. № 1. - С.

13. Воскобойников В.Ф., Лихотин А.К., Титов В.Ф., Медведев М.Н. Определение ущерба от болезней пчел и экономической эффективности проводимых мероприятий . Методика. - Тюмень, 1991.- С. 16.

14. Виноградова Т.В. Испытание метода пароформалиновой дезинфекции при нозематозе // Пчеловодство. 1948. № 2 - С. 31.

15. Виноградова Т.В. Химиотерапия и дезинфекция при нозематозе. Труды 27 пленума ветсекции ВАСХНИЛ. М.: ВАСХНИЛ, 1949 - С. 16.

16. Войтенко И. Лечение растительными препаратами // Пчеловодство. -1998. №5-С. 30.

17. Гаврилов Б.Н., Антонов B.C., Грачев Б.Н. Окись этилена убивает споры ноземы // Пчеловодство. 1968. №7 - С. 40-41.

18. Гапонова B.C., Мельник В.Н. Профилактика нозематоза пчел // Пчеловодство. 1975. № 9 - С.80-83.

19. Годяцкий С.Я. Гигиена кормления пчел // Пчеловодство. 1975. №7 -С. 30-32.

20. Годяцкий С.Я. Гигиена содержания пчел // Пчеловодство. 1978. № 1 - С. 36-37.

21. Годяцкий С.Я. Лечебно-профилактическое тесто для пчел // Пчеловодство. 1973. № 8 - С.15-16.

22. Горбунов П.С. Гемолимфа при нозематозе // Сб. науч. Трудов Ленинградского педагогического института. Л., 1978. - С. 37-41.

23. Гробов О.Ф. Патогенез нозематоза пчел // Международный симпозиум по микробиологии и патологии пчел. М.: ВИЭВ, 1966. - С. 54-76.

24. Гробов О.Ф. Роль микрофлоры в патогенезе нозематоза пчел // Пчеловодство. 1971. №8 - С. 57.

25. Гробов О.Ф. Особенности борьбы с нозематозом // Пчеловодство. -1974. №4-С. 18-19.

26. Гробов О.Ф. Ликвидация болезней пчел комплексный подход // Пчеловодство." - 1979. №6 -С.15-16.

27. Гробов О.Ф., Гузеева J1.H., Родионова З.Э и др. Опасные болезни и вредители пчел. М.: Нива России, 1992. - С. 100-121.

28. Гробов О.Ф., Зюман Б.В. Роль Nosema apis Zander при вирусном параличе пчел. XXIV международный конгресс по пчеловодству. Буэнос-Айрес. Апимондии. 1973. - С. 381.

29. Гробов О.Ф., Лихотин А.К. Болезни и вредители пчел. М.: Агропромиздат, 1989. - С. 237.

30. Гробов О.Ф., Лихотин А.К. Болезни и вредители пчел. М.:Мир, Колос, 2003.-С. 145-146.

31. Гробов О.Ф., Мигалюк Е.М., Сычев М.М., Гусейнов И.И. Тирозан при заболеваниях пчел // Пчеловодство. 1997. № 4 - С. 27.

32. Губина Т. Международный симпозиум в Финляндии // Пчеловодство. 1975. №1-С. 17.

33. Губина Т. К столетию профессора Э. Цандера // Пчеловодство. 1973. №11-С. 26.

34. Елфимов И.Г. Пчеловодство // Отчетные труды НИИСХ Северного Зауралья. Тюмень, 1990. - С. 94-95.

35. Ефименко Т.М., Алексеницер М.Л. Бензойная кислота при нозематозе // Пчеловодство. 1992. № 2 - С. 26.

36. Ефимов "В. По страницам зарубежных журналов // Пчеловодство. -2000. №6-С. 37.

37. Жданов С.В. Морфологические изменения кишечника пчел при нозематозе // Tp.XXVII пленума ветсекции ВАСХНИЛ. М.: ВАСХНИЛ, 1949. -С. 221-222.'

38. Жданов С.В. Нозема и морфологические изменения пчел // Тр. Общества естествоиспытателей. Казань, 1960. т. 120, кн. 6 - С. 269-270.

39. Жданов С.В. Профилактика нозематоза пчел // Ветеринария. 1971. № 8 - С. 61-62.

40. Жданова Т.С. Изучение -распределения нуклеиновых кислот в клеточных элементах стенки кишки пчел // Отчет института им. Н.Э. Баумана. — Казань, 1989.-С. 14.

41. Жеребкин М.В. Физиологическая характеристика осенних пчел и результаты зимовки пчелиных семей // XXIV международный конгресс по пчеловодству. Буэнос-Айрес. Апимондия. 1973. - С.293.

42. Жеребкин М.В. Зимовка пчел. М.: Россельхозиздат, 1979. - 114 с.

43. Жеребкин М.В., Яковлева И.Н. Физиологические изменения у пчел // Пчеловодство. 1971. № 5 - С. 18-19.

44. Зарецкий Н.Н. Использование пчел в теплицах. М.: Россельхозиздат, 1985.-180 с.

45. Зарецкий Н.Н., Пужевич М.С. Советы тепличникам // Пчеловодство -1996. №6 С.6-9.

46. Зубченков В.И. Нозематоз пчел и меры борьбы с ним // Приемы повышения продкутивности пчеловодства М.: ТСХИ, 1958. - С. 263-271.

47. Зубченков В.И. Химиотерапия нозематоза пчел // Болезни иотравления пчел. Рыбное: НИИП, 1959. - С. 8.t

48. Карбаскова В.Б. Некоторые показатели азотистого обмена у здоровых и больных нозематозом пчел // Болезни пчел и токсикология. Бюллетень

49. ВНИИЭВ. 1969. вып. 6-С. 85-87.•

50. Катцнельсон Г., Джемисон С. Антибиотики и другиефхимиотерапевтические вещества в борьбе с болезнями пчел // Антибиотики в сельскохозяйственной и пищевой промышленности М.: ИЛ, 1954. - С. 26.

51. Клочко Р.Т. Амебиаз пчел // Пчеловодство. 2003. № 2 - С. 29-30.

52. Клочко Р.Т. Лекарственные растения для лечения пчел // Пчеловодство. 1997. № 4 - С. 60-65.

53. Клочко Р.Т. Падевый мед для человека это прекрасно! Падевый мед для пчел - это опасно // Пчеловодство. - 1999. №6 - С.25.

54. Клочко Р.Т., Луганский С.Н. Фумагиллин при нозематозе // Пчеловодство. 2000. № 1 - С. 25.

55. Клочко Р.Т., Сохликов. А.Б. Нозематоз пчел // Пчеловодство. 1992. № 2 - С. 25-26.

56. Клочко Р.Т., Сохликов А.Б. Нозематоз на фоне аскосфероза // Пчеловодство. 1995. № 2 - С. 31-33.

57. Клочко Р.Т., Сохликов А.Б., Луганский С.Н. Нозематоз пчел // Пчеловодство. 1994. № 1 - С. 46.

58. Кочетов А.С. Опыление карпатскими пчелами огурцов в теплицах // Пчеловодство. 2004. №3. - С. 22-23.

59. Кочетов А.С., Черевко Ю.А. В теплицах Крайнего Севера //Пчеловодство. 1986. №1 - С. 11-12.

60. Кривцова Л.С Динамика нозематоза в процессе селекции пчел. -Сборник статей по конференции «Интермед 2001». - Рыбное: НИИП, 2001. -С. 96-99.

61. Криков В.В., Мостовой Е.М. Болезни пчел: Современные методы лечения. Ростов-на-Дону: Феникс, 2003. - 128 с.

62. Крылов М.В. Определитель паразитических простейших. СПб.: ЗИН РАН.,1996. - 604 с.

63. Крюков Н., Крюкова Б. Лечение европейского гнильца травами // Пчеловодство. 1998. № 4 - С. 27-28.

64. Кузнецова Н.Ф. Состояние гипофарингиальных желез и их инвертирующая способность при нозематозе // Труды НИИП. М.: Россельхозиздат, 1973.-С. 113-117.

65. Кузьмина Э.В. Нозематоз пчел // Пчеловодство. 1997. № 2 - С. 2629.

66. Кузьмина Э;В., Мальцев B.C. Устройство для раннего весеннего облета пчел // Пчеловодство. 1992. № 1 - С. 36.

67. Кузьмина Э.В., Столбов Н.М. Нозематоз пчел в Южном Зауралье и способы его лечения // Аграрная наука на рубеже веков. Тюмень: ТГСХА., , 1999. т. 2-С. 101-102.

68. Кучинскас С.А. Это волнует пчеловодов теплиц // Пчеловодство1978, №1 С. 19-20.

69. Лавренова Г.В. Фитотерапия. СПб.: ООО «СМИО Пресс», ТОО « Диамант», 1996. т.2 - С. 278.

70. Лю Т.П. Воздействие Фумидила Б на споры Nosema apis и на липиды клеток-хозяев // Апиакта. 1976. №1 - С. 10.

71. Мадатов Р.И. Сульфаперидазин против нозематоза // Пчеловодство. -1971. № 12 С. 31.

72. Мадатов Р.И., Мерщиев В.М. Опыт борьбы с нозематозом пчел // Пчеловодство. 1977. № 3 - С. 32.

73. Марков В.И. Нозематоз при варроатозной инвазии // Пчеловодство. -1985. №4-С. 11-12.

74. Мартынов А.Г. Осеннее кормление пчел сахаром и их состояние зимой // Пчеловодство. 1977. №10 - С. 22-23.

75. Маурицио А. Кормление пыльцой и жизненные процессы у медоносной пчелы. / В кн. «Новое в пчеловодстве». М.: ГИСХЛ, 1958. - С.372.

76. Мельник В.Н. Корма и нозематоз // Пчеловодство. 1975. № 4 - С. 19.

77. Мельник В.Н. Лечебно-профилактическая подкормка при нозематозе // Пчеловодство. 1976. № 4 - С. 18-19.

78. Мельник В.Н. Роль алиментарных факторов в устойчивости основных рас (пород) медоносных пчел (Apis mellifera L.) к нозематозу: Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1979. с. 19.

79. Мельник В.Н. Фумагиллин при нозематозе пчел // Пчеловодство.1979. №3 С. 15.

80. Мельник В.Н. Противонозематозный комплекс // Пчеловодство. -1984. №8-С. 18-19.

81. Мельник В.Н. Безвредные препараты чистые продукты // Пчеловодство. - 1993. № 7 - С. 18-20.

82. Мельник В.И., Муравская А.И. Лечебные средства и их применение // Пчеловодство. 1996. № 6 - С. 35-37.

83. Мельник В.Н., Касьянов А.И. Температурный режим в зимовнике и нозематоз // Пчеловодство. 1974. № 10 - С. 26-27.

84. Мельник В.Н., Попов Е.Т. Комплекс мероприятий по борьбе с нозематозом пчел. Рекомендации. М.: Колос, 1982. - 4 с.

85. Мельниченко А.Н. Пчелоопыление, урожай и медосбор // Пчеловодство. 1975. № . 6 - С. 1-3. Меркулов Г.А. Основы патогистологичесокй техники. - М.: Высшая школа, 1964. - С. 88.

86. Методические указания к постановке экспериментов в пчеловодстве. -М.: РАСХН, 2000. 8 с.

87. Методическим указаниям по лабораторным исследованиям на нозематоз медоносных пчел. // Утв. Отделением ветеринарии ВАСХНИЛ 25 апреля 1985г.

88. Методические рекомендации по исследованию вирусов медоносных пчел М.: ВАСХНИЛ, 1984. - 43 с.

89. Михайленко Г.П. Устойчивость пчел против ноземы в семьях разной силы // Республиканский межведомственный сборник. 1973а. вып. 9 - С. 7576.

90. Михайленко Г.П. Стшюсть бgжiil проти ноземи ( Nosema apis Zander)у бджолиних сппях pi3Hoi сили // Бджшьництво. респ. м1жвид.темат. наук зб. -19736. вып. 9 С.75-76.

91. Михайленко Г.П. Зимостойкость пчелиных семей и устойчивость к нозематозу // Пчеловодство. 1974. № 9 - С. 30-31.

92. Михайленко Г.П. Медовая продуктивность и нозематоз // Пчеловодство. 1975. № 5 - С.28-29.

93. Неверов В.Ю. Нозематоз медоносных пчел, протекающий на фоневарроатоза в западной Сибири, и меры борьбы с ним: Дис. . .канд. биол. наук.1. Тюмень, 2000. 108 с.

94. Неверов В.Ю., Кузьмина Э.В., Столбов Н.М. Выявление терапевтической активность растительных препаратов при смешанныхинвазиях медоносных пчел в Южном Зауралье // Проблемы ветеринарной энтомологии и арахнологии. 1999. вып. 42 - С. 45.

95. Орлова В.И. Зона лесов // В кн. «Западная Сибирь», (ред. Г.Д. Рихтер). М.: АН СССР, 1963.-С. 331-376.

96. Ормоцадзе К.Е. Распространение нозематоза в некоторых районах Грузинской ССР и опыт его лечения // Болезни и отравления пчел. НИИ Пчеловодства. Рыбное, 1959. - С. 23-28.

97. Островский Н.И. Химиотерапия нозематоза пчел / Бюлл. Научно-техн. Информации НИИП. 1958. №3-4 - С.32.

98. Павлов С. Д. Методические рекомендации по изучению эффективности репеллентов и инсектицидов в ветеринарии. М.: ВАСХНИЛ, 1982.- 13 с.

99. Плохинркий Н.А. Биометрия. Новосибирск: СО АН СССР, 1961. - С.227.

100. Полтев В.И. Болезни пчел. М.: Сельхозгиз, 1950. - 320 с.

101. Полтев В.И. Болезни пчел. Л.: Колос, 1964. - 288 с.

102. Полтев В.Н. Поиски лечебных средств против нозематоза // Пчеловодство. 1957. № 4 - С. 38.

103. Полтев В.И., Цивилев И.В. Профилактика и терапия нозематоза // Пчеловодство 1975. №4 - С. 18.

104. Попа Ал., Марин М., Щербан М, Кришан И. Изоникотиновый гидрозид в пчеловодной терапии // Апиакта. 1967. № 4 - С. 14-15.

105. Попов Е.Т., Мельник В.Н. Профилактика нозематоза осенью // Пчеловодство 1982. № 8 - с. 26-27.

106. Рихтер Г.Д. Западная Сибирь. М.: Академия наук СССР, 1963. - 425с.

107. Садовский Н.В. Константные методы математической обработки количественных показателей // Ветеринария. 1975. №11. - С. 42-46.

108. Самышкина B.C., Мельник В.Н. Фумагиллин ДЦГ и Фумидил при нозематозе пчел // Пчеловодство. 1973. № 7 - С. 28.

109. Сергеева P.B. Профилактика нозематоза пчел в условиях закрытого грунта // Пчеловодство. 1973. № 2 - С. 13.

110. Серебренников Г.И. Из опыта борьбы с нозематозом // Пчеловодство.- 1983. №11 С.19.

111. Сидоров Н.Г. Опыт количественной диагностики нозематоза методом средней пробы // Научные пчеловодные сведения. Варшава: Наука. - 1972. т.16. — с. 189-196.

112. Сидоров Н.Г. Зимний корм и нозематоз // Пчеловодство. 1973. № 11- С.20-21.

113. Сидоров Н.Г., Столбов Н.М. Экспериментальная смешанная инвазия возбудителя нозематоза и варровтоза пчел. // Вопросы ветеринарной арахноэнтомологии. Тюмень: ВНИИВЭА, 1975. - С. 154-160.

114. Сидоров Н.Г., Коптев B.C., Мугалимов Я.М. Устойчивость пчел к нозематозу и генетический метод борьбы // Ветеринария. 1972. № 7 - С. 6365.

115. Сидоров Н.Г., Михайленко Г.П. Устойчивость разных пород пчел к экспериментальному заражению ноземой // Пчеловодство. 1969. № 11 - С.14-15.

116. Сидоров Н.Г., Черкасова A.M. Восприимчивость различных пород пчел к нозематозу // Ветеринария. 1971. № 7 - С. 58-59.

117. Сидоров Н.Г., Черкасова A.M. Реакция среды в кишечнике медоносных пчел при спонтанном нозематозе // Воприсы ветеринарной энтомологии и арахнологии. Тюмень, 1974. вып. 5 - С. 100-103.

118. Синицкий Н.Н., Манджул В.И., Левченко И.В, Витетнев И.В. О причинах гибели пчел в условиях закрытого грунта // Науч.тр. Укр. с.-х. Акад. -1977. вып. 200-С.54-56.

119. Смирнов A.M. Эффективность обеззараживания воска // Пчеловодство. 1973. № 7 - С. 25-27.

120. Смирнов A.M. Дезинфекция сотов // Пчеловодство. 1975. № 9 - С. 28-30.

121. Смирнов A.M. Ветеринарная санитария на пасеках // Пчеловодство. -1979. №2-С.11-12.

122. Смирнов A.M. Оздоровление пчел: система мер // Пчеловодство. -1991. № Ю-С. 23-26.

123. Смирнов A.M., Волковский Г.Д. Дезинфекция газом «ОКЭБМ» под полиамидной пленкой // Пчеловодство 1973. № 7 - С. 25-27.

124. Смирнов A.M., Попов. Е.Т. Дезинфекция основа профилактики // Пчеловодство. - 1983. № 2 - С. 14-18.

125. Смирнов A.M., Сохликов А.Б. Лечение нозематоза // Пчеловодство. -2002. №4-С. 28-29.

126. Смирнов Н.И., Перегуд О.Н. Энтеросептол при лечении нозематоза // Пчеловодство. 1971. №9 - С. 22-23.

127. Соколов В.П., Гробов О.Ф. Споры ноземы в гемолимфе пчел // Пчеловодство. 1963. № 7 - С. 39-40.

128. Соловьева Л.Ф., Годяцкий С.Я Профилактика и меры борьбы с нозематозом. Рекомендации. Рыбное, 1988. - 13 с.

129. Соловьева Л.Ф., Годяцкий С.Я. Мероприятия против нозематоза // Пчеловодство. 1989. № 2 - С. 19-22.

130. Соловьева Л.Ф., Годяцкий С.Я. Дезинфекция сотовых рамок // Пчеловодство. 1990. №8 - с.42-45.

131. Сохликов А.Б. Препарат Ноземат // Пчеловодство. 1997. № 1 - С. 21.

132. Сохликов А.Б., Игнатьева Г.И. Нозематоз пчел // Пчеловодство. -1998. №1- С. 26-28.

133. Сташенко В.И. Подготовка пчел к зимовке и подкормке // Пчеловодство. 1996. № 4 - С. 54-56.

134. Столбов Н.М. Дезинфекция при нозематозе и аскосферозе // Пчеловодство. 2001. № 1 - С. 24-25.

135. Ступина Н.М. Зона лесостепи // В кн. «Западная Сибирь», под ред. Г.Д. Рихтер. М.: АН СССР,1963. С. 376-393.

136. Таранов Г.Ф. О подготовке пчел к зимовке // Пчеловодство. 1979. № 7 - С.27-28.

137. Теребов А.С. Пчеловодство Тюменской области // Пчеловодство. -1993. № 11-12-С. 5-7.

138. Титов В.Ф., Бобов В.Д., Горбунова В.Д., Муринов Ю.И. Аскоцин при лечении нозематоза // Пчеловодство. 1991. №4 - С. 20-21.

139. Угрюмова B.C., Шишко А.А., Равилов P.P., Ишемгулов A.M. Эпизоотологический мониторинг болезней пчел // Пчеловодство. 2004. №3 -С.26-27.

140. Урбах В.Ю. Биометрические методы (статистическая обработка опытных данных в биологии, сельском хозяйстве и медицине). М.: Наука, 1964. -С. 120.

141. Филоненко О.Г. Рекомендации по опылению растений пчелами в теплицах // Гавриш. 2002. №5. - С. 5-7.

142. Хаханов А.И., Кашкаров Л.Ф. Опасен ли нозематоз тутового шелкопряда // Пчеловодство. 1984. № 2 - С. 21.

143. Чупахин В.И., Кустря Д.Н. ЗАО «Агробиопром». Препараты для лечения распространенных болезней // Пчеловодство. 2004. № 2 - С. 26-28.

144. Чупахин В.И., Лебедева Л.В. ЗАО «Агробиопром» 5 лет на российском рынке ветеринарных препаратов // Пчеловодство. 2003. №2 - С. 26-28.

145. Шакарян Г.А., Акопян З.Л., Даниелян С.Г. Сохраняемость антибиотиков в пчелах и меде // Пчеловодство. 1978. № 4 - С. 16.

146. Шеметков М.Ф. Пчеловодство на службе тепличного овощеводства // Пчеловодство. 1979. №2 - С.2-4.

147. Assil HI., Sporns P. ELISA and HPLC Methods for Analysis of Fumagillin and its Decomposition Products in Honey // Journal of agricultural and food chemistry. 1961.Vol 39, Iss 12 - P. 2206-2213.

148. Bailey L. The epidemiology and control of Nosema disease of the honeybee // Ann. Appl. Biol. 1955. V.43 - P. 3.

149. Bailey L. Two viruces from adult honey bees // Virology. 1963. v.21 №3.-P. 390-395.

150. Files Ingemar. Comb replasiment and Nosema disease (Nosema apis Z) in honey bee colonies // Apidologie. 1988. №4 - P. 343-354.

151. Fries I. Nosema Apis en parasit I bifamilien // Tiddsskrift Biaul. 1989. № 11 . p. 367-372.

152. Gianffret A. Etude virologique de quelques cas de Maladie Noire de laleille en France // Rec. med. vet. 1966. t. 142, № 9 - P. 819-829.

153. Hartwing A. Nucleic acids in intestine of Apis mellifera infected with Nosema apis and treated with Fumagillin GCH: Cytochemical and autoradiographic stidies // J. Invertebr. Pathol. 1971. № 18 - C. 331-336.

154. Kryspian Pajor. Plastry gniazolowe a choroby pszczol // Pszelarstwo. -1970. №7 C.7-8.

155. Popa Al., Serban Minaela, Marini M. Resultate obtinute in combat'erea bolilor la alkine cn formule noi terapetice // Apicultura. 1968. № 5 - C. 5-10.

156. Popa Al., Serban Minaela, Marini M., Grisan I. L'hydrazide iso-nicotinique daus la therapetique apicole // Bull. apic. docum. Scient et technet inform. 1967. № 2-C. 157-162.

157. Shabanov M.M., Kovachev K. The role of cerfain vermins and parasites or bees in spreading nosematosis // Докл. Бюл. A.H. 1972. №4 - C.573.

158. Shemy El, Piccard R.S. Nosema apis Zander infection levels in honeybees of known age // J. Apicult. Res. 1972. № 2 - C. 101-106.

159. Stanimirovic Z'., Stevanovic J., Mladenovic M. Effects of fumagillin to human and honeybee health. // Материалы 2-й международной научно-практической конференции «Интермед 2001». - Рыбное, 2001. - С. 200.

160. White J. Nosema disease. U.S.D.A. Bull. 1919. - P. 780.

161. Wilson William T. The viability and infectivity of frozen Nosema spores // Amer. Bee J. -1971. №2 C.55-70.