Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Научное обоснование и методика разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Научное обоснование и методика разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов"

На правах рукописи

НЕЖУТА Александр Александрович

НАУЧНОЕ ОБОСНОВАНИЕ И МЕТОДИКА РАЗРАБОТКИ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ПРОМЫШЛЕННОЙ ТЕХНОЛОГИИ СУБЛИМАЦИОННОГО ВЫСУШИВАНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ

03.00.23 - биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Щелково - 2003 г.

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук

Научный консультант:

Доктор ветеринарных наук,

профессор, академик РАСХН Самуйленко АЛ.

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ

Доктор ветеринарных наук,

профессор, заслуженный деятель науки РФ

Сергеев В.А. Кириллов JI.B.

Доктор биологических наук Кузнецов Д.П.

Ведущая организация:

Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии (г. Покров)

Защита состоится^ октября 2003г. в Ю00 на заседании диссертационного совета Д 006.069.01 во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности (141142, п/о Кашинцево Московская область, Щелковский р-н, пос. Биокомбинат, ВНИТИБП)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан А августа 2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Ю.Д.Фролов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1.Актуальность проблемы. Проблема стабилизации биологических материалов ввиду их лабильности возникла одновременно с развитием биологической науки. История развития методов консервирования биологических структур берет свое начало от открытия W.Preyer,1873 явления оживления замороженных и сухих животных и микроскопических существ. Работы Т.ЫеесШат, 1743; М.Эоуеге, 1842; С.ЗсЬикге, 1915; Л. Лоза-Лозинского, 1935; М.Покрсвской,1960 и др. по выявлению необходимых условий замораживания, восстановления, хранения на последующее «оживление» живых существ и микроорганизмов явились первыми этапами в разработке техники и технологии высушивания биоструктур. Применение в ветеринарной практике препаратов биологической природы - вакцин, лечебных сывороток, диагностических, гормональных и других препаратов связано с необходимостью сохранения их активности до момента реализации. Одним из традиционных методов, используемых для этих целей, является охлаждение и высушивание. В обоих случаях создаются условия, при которых обменные реакции и процессы жизнедеятельности замедляются или полностью прекращаются. Метод консервирования биоматериалов, сочетающий в себе замораживание и высушивание в вакууме является в настоящее время наиболее перспективным и удобным для практических целей. Этот метод получил название сублимационного высушивания. Успешное применение сублимационного высушивания в биологической промышленности стало возможным благодаря теоретическим и экспериментальным разработкам А.Лыкова, А.Гинсбурга, Э.Каухчешвили, С.Колесова, Г.Филоненко, М.Гришина, Б.Чижова, Е.Никитина, Э.Гуйго, М.Вербы, Е.Р1о8(1ог£ Ь.Яеу, Л.Нагш, и многих других. Выполненные

ими исследования позволили получить данные о механизмах внешнего и внутреннего тепло - и массообмена при сублимационной сушке, описать процессы, происходящие при сублимации влаги и ее конденсации в условиях вакуума, определить предпосылки для выбора рациональных схем холодильных установок и сублиматоров. Определены основные этапы метода сублимационного высушивания, их значимые режимные и технологические параметры, влияющие на качественные, количественные и экономические показатели сухих биопрепаратов.

Со времени организации в 1956 году на Щелковском биокомбинате первого в стране специализированного цеха по производству сухих биопрепаратов по 1975 год было внедрено более 50 различных- сухих биопрепаратов. Процессы их изготовления разрабатывались различными авторами, имевшими свои взгляды и подходы на решение проблем создания сухогЪ биопрепарата, а также методы и средства их реализации. Данная ситуация приводила к значительному разнообразию режимов сублимационного высушивания биопрепаратов даже одного вида, которому способствовали различия в описании содержательной части рекомендуемых режимов, в большинстве своем не корректных, не информативных для однозначного их прочтения и воспроизводства в промышленных условиях.

Существовавшая в те годы недостаточная теоретическая и экспериментальная база по проблемам производства сухих биопрепаратов, несовершенство холодильного и сублимационного оборудования и их весьма ограниченные технологические возможности, а также отсутствие простых, доступных в широкой практике методик оценки режимных параметров предопределили основу концепции методологических и методических подходов к разработке и внедрению режимов сублимационного высушивания биопрепаратов - это опытная разработка режимных параметров путем простого подбора температур материала и длительностей этапов. Безусловно, это не могло не отразится на степени научной обоснованности режимов сублимационного высушивания биопрепаратов, качественных, количественных и экономических показателях готовой продукции, их стандартности.

Исторически сложившаяся невалидированная методическая схема разработки процессов сублимационного высушивания биопрепаратов, существующая до сих пор, имеет ряд существенных недостатков и не соответствует современным требованиям, предъявляемым к производству качественной и стандартной продукции согласно правилам вМР.

В 70-80х годах качественные изменения претерпела техническая оснащенность научно-исследовательских лабораторий и биопредприятий. Произошло техническое перевооружение биологической промышленности в области замораживания и высушивания биопрепаратов. Благодаря успехам в области создания холодильной и вакуумной техники расширены технические и технологические возможности промышленного холодильного и сублимационного оборудования.

Был накоплен опыт сублимационной сушки биоматериапов, основанный на данных новых фундаментальных наук, таких как криобиология, криохимия, учитывающий результаты исследований роли воды в биологических системах. Данные этих наук дали новые сведения о природе повреждений, происходящих в биологических системах в условиях гипотермии, низких температур и при обезвоживании; позволили определить основные параметры технологии консервирования биоматериалов замораживанием и обезвоживанием, лимитирующие качественные показатели сухих биопрепаратов. Это позволило более обоснованно подходить к вопросам разработки и реализации в промышленных условиях режимов замораживания и сушки биоматериалов.

Значительно расширилась номенклатура выпускаемых в сухом виде биопрепаратов, обладавших различными физико-химическими, технологическими и биологическими' характеристиками, что требовало пересмотра суще'-ствовавших технологий и разработки новых видов сухих препаратов с позиций единых научно обоснованных методических подходов и требований к разработке процессов сублимационного высушивания биопрепаратов.

Актуальность решения данной проблемы была признана на официальном уровне и нашла свое отражение в формулировке Государственного задания 11.04 темы 09 «Разработать научные основы стабилизации биологических препаратов и усовершенствовать существующие способы их консервирования», и, в частности, в разделе 09.01. «Разработать научно обоснованную тех-

нологическую схему высушивания .биопрепаратов», к выполнению которого мы приступили в 1976 году. (Р.к. №76061937 от 7.07.76г.; Ин. № Б 972827 от 11.08.81).

Кроме того, актуальность выполнения данной работы определена новыми отношениями и взглядами на качество продукции, определенными в законе о техническом регулировании; обязательным внедрением на предприятиях биологической промышленности правил вМР и обеспечением конкурентоспособности продукции, в связи с предстоящим вступлением в ВТО.

Весь комплекс научных и экспериментальных работ по данной теме проводился нами в течение 1976 -К2002 годов согласно тематическим планам НИР института, утвержденным вышестоящими организациями (1990 -96гг. Рк № 01.9.60001525 Ин.№ 02.960.07220; 1996 - 2000гг. Рк№ 01.6.960010217 Ин.№ 02.2.01.02998; 2000 - 2001гг. Рк№ 01.200.1126885 Ин.№ 02.200200861).

1.2.Цель и задачи исследований. Цель исследований - научное обоснование и методика разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

• исследовать:

- физические характеристики жидких биоматериалов как объектов сушки;

- влияние условий первичной кристаллизации жидких биоматериалов на формирование макроструктуры (макровида) сухих биопрепаратов;

- кинетику сушки биоматериалов с основными промышленными защитными средами на основе пептона, лактозы, сахарозы, желатины и обезжиренного молока;

- влияние температурно-временных режимов этапов сублимационного высушивания на качество сухих биопрепаратов;

• разработать:

- методики и расчетные зависимости для оценки длительности этапов замораживания, сублимации и досушивания при различных режимных и технологических параметрах сублимационного высушивания биопрепаратов;

- методику и расчетные зависимости для оценки величины остаточной влажности биопрепаратов при различных режимных и техно погических параметрах досушивания;

• на базе анализа теоретических и экспериментальных работ, а так же собственных исследований разработать принципиальную структурно-функциональную методологическую схему разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов.

1.3. Научная новизна.

Впервые в практике производства сухих биопрепаратов:

-определены физические характеристики жидких биоматериалов, как объектов сушки - температура полного замораживания, эвтектические температуры биоматериалов;

-определены условия первичной кристаллизации биоматериалов, формирующие основные виды макроструктур сухих биопрепаратов, получаемые в условиях их промышленного производства;

-изучена кинетика процесса сублимационной сушки биоматериалов с основными промышленными защитными средами и получено уравнение для расчета обшей продолжительности процесса сублимационной сушки биопрепаратов;

-показано комплексное влияние температурно-временных параметров этапа досушивания на биологические показатели сухих биопрепаратов как непосредственно после сушки, так и в процессе хранения;

-разработаны методики и расчетные зависимости оценки длительности этапов замораживания, сублимации и досушивания биоматериалов в условиях их промышленного производства;

-разработаны методика и расчетные зависимости оценки величины остаточной влажности биопрепаратов при различных режимных и технологических параметрах досушивания;

-предложена принципиальная структурно-функциональная методологическая схема разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов.

1.4. Практическая значимость

1.4.1. Определены значения температур полного замораживания и эвтектические температуры биоматериалов, позволяющие обосновать и рассчитать температурно-временные режимы этапов замораживания и сублимации биоматериалов в промышленных условиях и определить пути их совершенствования.

1.4.2. Определены условия первичной кристаллизации биоматериалов, при которых формируются основные виды макроструктур (макровида) сухих биопрепаратов, позволяющие сделать предварительную оценку режимов досушивания для достижения требуемого уровня остаточной влажности в серии готового продукта.

1.4.3. Разработаны методики, позволяющие получить расчетные зависимости для оценки длительности этапов сублимационного высушивания биопрепаратов при различных режимных и технологических параметрах.

1.4.4. Разработаны расчетные зависимости, позволяющие оценить длительность этапов замораживания, сублимации и высушивания биоматериалов при различных температурах материала и технологических параметрах при разработке новых биопрепаратов и совершенствовании существующих промышленных режимов производства сухих биопрепратов.

1.4.5. Разработана методика, позволяющая получить расчетные зависимости для оценки величины остаточной влажности сухих биопрепаратов.

1.4.6. Разработана расчетная зависимость для оценки величины остаточной влажности для биопрепаратов с традиционными защитными средами, с

помощью которой можно не только оценить интервал значений влажности сухого материала, который будет получен при досушивании с заданной температурой материала и определенной длительностью ее поддержания, но и оценивать величину остаточной влажности в течение процесса досушивания.

1.4.7. Разработаны температурно-временные параметры этапа досушивания, которые включены в разделы «Замораживание и высушивание» в действующие НТД по изготовлению противобактериальных вакцин против: сальмо-неллеза (паратифа) свиней из шт. ТС-177; сапьмонеллеза водоплавающей птицы; листериоза с/х животных из шт. «АУФ».

1.4.8. Разработаны и внедрены в промышленное производство научно обоснованные режимы замораживания и высушивания, включенные в состав регламентирующих документов на изготовление сухой вакцины против нью-каслской болезни птиц из шт. «Ла-Сота» с защитной средой на основе пептона, сухой культуральной вакцины против болезни Марека из шт. ФС - 126 вируса герпеса индеек.

1.5. Апробация. Основные материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены:

-на заседании ветеринарной секции научно-технического совета мини-стерства'сельского хозяйства СССР 17 октября 1984г.;

-на заседании секции «Ветеринарная биотехнология» Отделения ветеринарной медицины РАСХН 7 июля 2001 г.;

-на 24 Международных, Всесоюзных, Республиканских и Всероссийских симпозиумах, конференциях, посвященных научным и практическим проблемам технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов, проводившихся в городах Софии, Москве, Киеве, Харькове, Тамбове, Грозном, Риге, Покрове, Щелкове в 1977 - 2003 гг. •

1.6. Публикации. Основные положения диссертационной работы освещены в итоговых отчетах НИР ВНИТИБП за 1976 -2002гг., в 10 утвержденных в установленном порядке комплектах ТД и «Изменений и дополнений» к разделам «Замораживание - высушивание» регламентирующих документов на изготовление ряда противобактериа пьных и противовирусных вакцин, а также в 58 научных статьях и сообщениях, в т.ч. 2 патентах и 5 авторских свидетельствах, 8 статьях в ведущих научных изданиях и одной монографии.

1.7. Основные положения диссертационной работы, которые выносятся на защиту.

1. Температура полного замораживания и эвтектические температуры, являются основными физическими характеристиками жидких биоматериалов, как объектов сушки, подлежащие обязательному исследованию с целью разработки научно-обоснованных режимов сублимационного высушивания биопрепаратов их совершенствования и стандартизации.

2. Определение условий первичной кристаллизации биоматериалов при замораживании позволяет оценить вид макроструктуры, который будет получен после последующего высушивания, что позволит предварительно разработать режимные параметры досушивания, необходимые для обеспечения требуемой величины остаточной влажности сухого биопрепарата.

3. Температурно-временные режимы этапа досушивания оказывают сложное комплексное влияние на биологические и количественные характеристики сухого биопрепарата, имеющее свою специфику для каждого препарата и являются предметом исследований для научного обоснования режимов досушивания биоматериалов.

4. Методики оценки длительности этапов сублимационного высушивания биопреператов позволяют разработать эмпирические зависимости для расчета длительности этапов замораживания, сублимации, досушивания при различных режимных л технологических параметрах. Расчетные зависимости позволяют научно обосновать и усовершенствовать существующие промышленные режимы сублимационного высушивания биопрепаратов с минимальными материальными, трудовыми и финансовыми затратами.

5. Методика оценки величины остаточной влажности позволяет разработать эмпирические зависимости для расчета режимов досушивания. Расчетные зависимости дают возможность оценить как текущее значение остаточной влажности препарата в процессе досушивания, так и прогнозировать влажность готового продукта при различных режимных и технологических параметрах.

* 6. Методические рекомендации по разработке процессов сублимационного высушивания являются необходимыми и достаточными для разработки научно-обоснованных режимов сублимационной сушки биопрепаратов.

7. Предложенная структурно-функциональная методологическая схема разработки и совершенствования промышленных режимов сублимационного высушивания биопрепаратов позволяет: определить основные объекты, структуру и последовательность исследований, предметы анализа при разработке процессов сублимационного высушивания биопрепаратов и их совершенствовании; систематизировать и стандартизировать подходы к разработке режимов сублимационного высушивания биопрепаратов.

1.8. Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 28% страницах машинописного текста, иллюстрированы^ рисунками, ,5*0таблицами. Диссертация содержит следующие разделы: «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Собственные исследования», «Обсуждение результатов исследований», «Выводы», «Практические предложения», «Список литературы», состоящий нз329источников, «Приложение».

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа проводилась в 1976-2002 годах во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности (ВНИТИБП) под руководством доктора биологических наук, проф. Э.Ф. Токарик и автора настоящей работы. Значительная часть экспериментов, касающихся практической реализации научно-исследовательских разработок осуществлялась совместно с сотрудниками Щелковской, Курской, Сумской, Краснодарской, Алма-Атинской и др. биофабрик.

Большая научно-методическая помощь в исследованиях по кинетике сушки была оказана доктором технических наук, проф. М.А.Гришиным и доктором физико-математических наук, проф. В.Д.Зинченко.

2.1. Оборудование

При проведении научно исследовательских и внедренческих работ были использованы: основное лабораторное и промышленное холодильно-сублимационное оборудование: LZ - 9, S.M.J. «USIFROID», ТГ - 5.2, ТГ -50.5, ТГ -50.4, LZ - 30.2, «REVCO», НС - 700/50; NZ - 280/75; ZA - 650/40; дифференциальный датчик тепловых потоков (ДДТП), разработанный совместно с Харьковским институтом проблем криобиологии и криомедицины АН УССР для определения интенсивности удаления влаги и оценки длительности этапа сублимации; датчики «Удельное сопротивление», смонтированные на установках LZ - 30.2 и S.M.J. «USIFROID» для определения температур полного замораживания и эвтектических температур биоматериалов;

2.2. Объекты исследований

2.2.1. Объектами для анализа отечественной промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов явились регламентирующая документация по производству сухих биопрепаратов, данные о производственных режимах замораживания, сублимации и досушйвания.

2.2.2. Материалом для исследования температур полного замораживания и эвтектических температур служили жидкие полуфабрикаты биопрепаратов производства различных биопредприятий страны.

2.2.3. В качестве основных моделей для изучения кинетики сушки, режимных параметров замораживания и высушивания были использованы: ви-русвакцина против НБ птиц из шт. «Ла-Сота», как характерный представитель живых противовирусных вакцин, а также живые бактериальные вакцины против бруцеллеза с/х животных из шт. 82 и 19; против сальмонеллеза водоплавающей птицы, листериоза с/х животных из шт. «АУФ», паратифа свиней из шт. ТС - 177, как наиболее чувствительные к травматическим воздействиям процессов сублимационного высушивания.

В качестве защитных сред (стабилизаторов) использовались среды (ЗС), в основном применяемые в практике отечественного производства ветеринарных сухих биопрепаратов: ПЛ - на основе пептона (5%) и лактозы (5%); СЖ -на основе сахарозы (10%) и желатины (1,5%); ОМ - обезжиренное молоко (50%).

2.3.Методы

Определение температур полного замораживания и эвтектических температур биоматериалов осуществляли, используя датчик «Удельное сопротивление» по общепринятой методике (L.Rey, 1960).

Длительность этапа замораживания и условия первичной кристаллизации (ПК) определяли по кривой замораживания биоматериалов с использованием самопишущих приборов холодильных установок, регистрирующих температуру материала в течение процесса замораживания.

Уравнение общей продолжительности сушки определяли по результатам исследования кинетики сушки биоматериалов с привлечением метода «приве-

денной скорости сушки», разработанного проф. Г.К.Филоненко и дополненного проф. М.А. Гришиным.

Длительность этапа сублимации определяли «весовым» методом по количеству удаленной влаги в ходе процесса и с помощью ДДТП, используя графики зависимости уровня электрического сигнала ДДТП при соответствующей температуре материала от продолжительности сублимации. Момент снижения величины сигнала ДДТП до значения 4 шУ соответствовал удалению около 90 % всей влаги из образца.

Математический метод «линеаризации кривых» (Л.Батунер, 1971) использовали при разработке расчетных зависимостей для оценки длительности этапа сублимации при различных режимных и технологических параметрах сушки. Метод математического планирования эксперимента применяли при разработке расчетных зависимостей по оценке величины остаточной влажности (ОВ) от температурно-временных и технологических параметров этапа досушивания. Статистическая обработка результатов экспериментов была проведена с помощью метода наименьших квадратов.

Значение величины ОВ сухого продукта определяли весовым методом согласно ГОСТ 24061-89 «Препараты биологические сухие».

Досушивание проводили при различных температурах материала (от +15 до +35 °С) в течение определенного времени: 0 часов (съем продукта производили при достижении заданной температуры), 10 часов, 20 часов, варьируя комбинации этих параметров.

Влияние температурно-временных режимов этапов сублимационного высушивания на биологическую активность вакцин, используемых в качестве биологических моделей, оценивали по проценту выживания микробных клеток (ВМК) или снижению титра инфекционности ЭИД 50/мл) после высушивания, а также после хранения сухих образцов.

Определение биологической активности вакцин проводили общепринятыми методами согласно «Инструкциям по изготовлению...».

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Основным методическим принципом научно-исследовательских и экспериментальных работ, проведенных нами для достижения поставленной цели, было конкретное наполнение и практическая реализация принципиальной схемы (рис.1), отражающей концепцию общепринятого понятия «Методология» как учения о структуре, логической организации, методах и средствах деятельности посредством:

- анализа теоретических, экспериментальных работ отечественных и зарубежных ученых и исследователей в области замораживания и высушивания материалов различного происхождения, полноты и достаточности их применения в практике производства сухих биопрепаратов;

- научного обоснования и разработки методических основ создания промышленных режимов сублимационного высушивания биопрепаратов.

Объектами исследований являлись жидкие биоматериалы - многокомпонентные водные системы коллоидной природы, включающие в себя биообъек-

ты (вирусы, бактерии), и защитную среду (стабилизатор) - вещество (или смесь веществ), предупреждающее повреждения биообъекта в процессе его консервирования методом сублимационного высушивания, а также структурирующее биопрепарат.

Рис. 1. Принципиальная схема построения методологии

В качестве основных характеристик жидкого полупродукта, являющихся входными критериями контроля стандартности поступающих на сублимационное высушивание биоматериалов, мы выделили: физические - температура полного замораживания (Тп.з.), нижняя (Тэ.н.) и верхняя (Тэ.в.) эвтектические температуры биоматериала; биологические - исходная активность биообъекта в жидком материале; технологические - состав ЗС, объем фасовки, вид посуды, от которых прямо или косвенно зависит возможность разработки научно обоснованных режимов сублимационного высушивания и оценки их оптимальности по качественным, количественным и экономическим показателям готового продукта. В качестве основных характеристик готового продукта, являющихся выходными критериями контроля качества сухого биопрепарата, мы приняли: биологические - активность, выживаемость микробных клеток, иммуногенность; количественные - величина остаточной влажности, растворимость; качественные - макроструктура; экономические - энергозатраты, материальные затраты.

3.1. Исследования эвтектических температур промышленных биопрепаратов. Основополагающий принцип метода сублимационного высушивания - переход воды из твердого состояния непосредственно в пар, минуя жидкую фазу.

Р.Гибсом были четко определены физические условия осуществления сублимации влаги из твердого состояния - это температура материала ниже 0,0098°С и парциальное давление влаги над поверхностью испарения ниже 611 Па. Следовательно, прежде чем осуществлять разработку режимов этапов замораживания и сублимации, надо знать, до какой температуры необходимо заморозить материал и при какой температуре и соответствующем ей давлении проводить удаление влаги из материала, чтобы осуществить сублимационное высушивание. Для этого необходимо определить исходные физические характеристики бивматериала как объекта сублимационной сушки.

Замораживание в широком физическом смысле может быть определено как затвердевание жидкости. Как показано в работах Н. Пушкарь, В.ЬиуеЪ У.Яара1г при понижении температуры вода вымораживается из раствора, а растворенное вещество концентрируется, и точка плавления оставшегося раствора снижается. При этом кристаллизуется вся «чистая» вода и остается лишь некоторая часть растворенной жидкости. Дальнейшее понижение температуры ведет к затвердеванию и этого оставшегося раствора. Самая низкая температура, при которой раствор ещё остается частично в жидком состоянии, называется эвтектической температурой. Концентрация растворенного вещества, необходимая для получения такой низкой температуры, представляет собой эвтектический раствор. Эвтектические растворы —это, прежде всего, растворы электролитов.

При снижении температуры растворенных веществ ниже эвтектической температуры происходит полная кристаллизация материала. Температуру материала, соответствующую полной кристаллизации, называют температурой полного замораживания растворов (Тп.з.).

Ь.Яеу, Р.Магиг и др. установили, что в силу того, что жидкости биологических систем представляют собой весьма сложные растворы, содержащие значительное количество солей с разными эвтектическими точками, у биоматериалов обычно присутствует эвтектическая зона в пределах десяти градусов, ограниченная нижней и верхней эвтектическими температурами. В интервале этой зоны происходит замерзание гипертонических растворов солей.

По состоянию на 1976 год ни у одного выпускаемого промышленностью в сухом виде биопрепарата не были определены исходные физические характеристики биообъектов - Тп.з., Тэ.н., Тэ.в.

С использованием метода Ь.Яеу, основанного на параллельном замере величины удельного сопротивления и температуры материала при его замораживании - оттаивании, нами определены у большинства промышленных биоматериалов, выпускаемых в сухом виде, Тп.з., Тэ.н., Тэ.в., значения которых для ряда биоматериалов приведены в табл.1.

Знание этих величии необходимо при разработке научно обоснованной технологии сублимационного консервирования как вновь создаваемых в сухом виде биопрепаратов, так и при усовершенствовании существующих промышленных технологий.

Так например, только определение температуры полного замораживания биоматериалов, позволили нам разработать и усовершенствовать промышленные режимы сублимационного высушивания туберкулинов (ППД) для птиц и

млекопитающих, сократив длительность этапа замораживания в 4 раза и вирус-вакцины против ньюкаслской болезни птиц из штамма «Ла-Сота» с защитной средой на основе обезжиренного молока - в 1,5 раза. Кроме того, знание Тп.з., Тэ.н., Тэ.в. позволит специалистам по разработке и производству сухих биоматериалов: предъявить требования к техническим характеристикам холодильного и сублимационного оборудования, вплоть до разработки технических заданий на установки; оценить возможность корректного проведения этапов замораживания и непосредственно сублимации на имеющемся у производителя холодильном и сублимационном оборудовании; при приобретении установок из имеющегося на мировом рынке ассортимента сориентировать производителя сухого препарата в выборе оборудования, необходимого для изготовления определенного вида биоматериала.

Таблица 1

Температура полного замораживания и эвтектические температуры биопрепаратов

Наимененование биопрепарата ЗС Т п.з.,°С Т э.н.,°С Тэ.в.,°С

Антирабическая вакцина (мозговая) СЖ -25 -20 -15

Антирабическая культу-ральная инактивирован-ная вакцина ПСЖ -52 -38 -34

Вакцина против:

-пастереллеза птиц СЖ -38 -30. -26

-болезни Марека СФГ А -45 -34 -30

-сибирской язвы СЖ -45 -35 -30

-листериоза СЖ -48 -36 -28

-ньюкаслской болезни ПЛ -45 -37 -32

-ларинготрахеита птиц СЖ . -50 -36 -32

-паратифа свиней из штамма ТС-177- СЖ -48 -39 -34

-бруцеллеза из штамма №82- СЖ -52 -42 -37

-бруцеллеза из штамма №19 СЖ -54 -44 -39

Комплемент для РСК — - -65 -56 -48

Температура полного замораживания и эвтектические температуры должны являться для технолога цеха сушки характеристиками стандартности поступающего на высушивание материала, как объекта сушки.

Эти параметры наряду с биологическими показателями могут и должны служить входными критериями контроля жидкого материала, поступающего на консервирование. Проверка стандартности входных параметров является практическим исполнением правил постадийного контроля, предъявляемых правилами вМР к производству качественного продукта.

Контроль температуры полного замораживания, эвтектических температур конкретной серии позволит вести технологический процесс производства сухого биопрепарата, обеспечивая его качество и стандартность путем внесения корректив в режимные параметры этапов замораживания и сублимации при возможных колебаниях значений входных параметров.

3.2.Этап замораживания биоматериалов. Замораживание является необходимым и важнейшим этапом сублимационного высушивания биопрепаратов, от успеха проведения которого во многом зависит качество готового сухого продукта.

Широкому применению холода в биологии во многом способствовали успехи, достигнутые в выявлении основных механизмов естественной и искусственной защиты живых систем от повреждающего действия замораживания, протекающих в биологических объектах при отрицательных температурах.

Основными факторами, повреждающими биообъект при замораживании определены: температурный шок, механическое повреждение клетки при образовании и росте кристаллов внутри клетки, денатурация белков при длительном пребывании клетки при температурах выше эвтектической зоны. Теоретическими и экспериментальными работами Г.Чижова, Г.Козлова, Н.Пушкарь, Ю Субботиной, Э.Гуйго, П.Мазур, А.Льюис и др. было показано, что степень повреждения биоструктур зависит от температуры и длительности замораживания, скорости охлаждения.

Большинство исследователей считает, что медленное замораживание в практических случаях предпочтительнее быстрого. Однако в некоторых работах есть сведения о лучшей сохраняемости специфических свойств ряда биообъектов при быстром замораживании. Противоречивость данных можно объяснить различной чувствительностью биообъектов к замораживанию, различием методов исследований и изучаемого уровня скоростей замораживания. Тем не менее, этот факт определяет необходимость дифференцированного подхода к разработке оптимальных условий охлаждения биоматериалов.

Общепризнанным является тот факт, что замораживание как физико-химический процесс снижает количество жизнеспособных организмов, но при этом степень их выживаемости при применении эффективных защитных сред практически мало зависит от скорости замораживания, особенно в области «очень медленного» (менее 0,5°/мин) и «медленного» (менее 10°/мин) замораживания.

Как показывает практика промышленного производства сухих биопрепаратов и проведенный нами анализ технологических возможностей современного холодильного оборудования, скорости охлаждения материала в камерах холодильных установок колеблются в пределах от 0,1 до 2°/мин, т.е. этап замораживания биоматериалов проходит в условиях «медленного» и «очень медленного» замораживания (О.Смит).

Анализ литературных данных по криобиологии, экспериментальных данных по производству сухих биопрепаратов показал, что данная область скоростей охлаждения наиболее приемлема с позиций наименьших потерь исходной активности у большинства биоматериалов различного происхождения.

3.2.1. Исследование глубины замораживания на качественные и количественные характеристики сухих биопрепаратов.

В процессе замораживания и последующей сублимации биоматериалов одним из главных факторов, снижающих их качество, является наличие жидкой незамороженной влаги.

Н.Пушкарь и др. отмечают, что наличие незамерзшей влаги в биоматериале в той или иной мере вызывает денатурацию биоструктур за счет действия концентрированных растворов электролитов, как в процессе замораживания, так и выдерживания при температурах выше эвтектических, кроме того, может приводить к вспениванию и выбросу части сухого препарата при последующей сушке, ухудшению макроструктуры сухого препарата и его повышенной влажности. Присутствие жидких фракций и их количество зависит от глубины замораживания и от соответствия конечной температуры биоматериала на этапе замораживания температуре полного замораживания биоматериала. Разработка режима замораживания при создании новых видов сухих биопрепаратов сводится в основном к определению Тп.з., т.к. скорость и условия охлаждения материалов предопределены технологическими возможностями современного холодильного оборудования.

В практической технологии производства сухих биопрепаратов охлаждение жидкого биоматериала до температур ниже Тп.з. ве чет к неоправданному увеличению длительности процесса, и тем самым, к повышенным экономическим затратам. Замораживание биоматериала до температур выше Тп.з. может привести к подтайке материала и к вспениванию (кипению) жидких переохлажденных фракций и подъему ледяного блока уже при вакууммировании камеры сублиматора; что вызовет нарушение условий теплообмена и увеличение длительности последующих этапов сублимационного высушивания биопрепаратов, а порой и снижение биологических характеристик готового продукта.

Так например, замораживание биоматериалов с ЗС - ПЛ, СЖ, ОМ до температуры выше Тп.з. и последующем их высушивании приводит к потере исходных биологических характеристик, увеличению длительности этапа сублимации и повышенным значениям величин ОВ сухих биопрепаратов (табл.2, табл.3).

Сублимационное высушивание вакцин, расфасованных по 4 мл в пени-циллиновые флаконы емкостью 20 см3 проводили при одинаковых темпера-

турных режимах этапа сублимации и одинаковых температурно-временных режимах этапа досушивания.

Нами проведены исследования по изучению влияния глубины замораживания биоматериалов при использовании ЗС - ПЛ, СЖ, ОМ на макровид биоматериала и количественные характеристики готового продукта при его последующем высушивании.

Таблица 2

Биологическая активность, остаточная влажность вакцин против НБ птиц из шт. «Ла-Сота» и длительность этапа сублимации гри различных условиях

Конечная температура материала при замораживании, °С Титр инфекционное™ после сушки, ^ ЭИД50/мл Длительность этапа сублимации, ч Величина ОВ, %

-50° (ЗС - ПЛ) 9,4 ± 0,4 20 ± 1 3,0 ± 0,2

-35° (ЗС - ПЛ) 9,3 ± 0,4 27 ±2 3,8 ± 0,4

-45° (ЗС - ОМ) 9,3-±0,4 16 ±1 1,5 ±0,1

-35°(ЗС-ОМ) 9,4 ± 0,4 18 ± 2 2,0 ± 0,2

Таблица 3

Выживаемость бруцелл, остаточная влажность и длительность этапа сублимации при различных условиях замораживания (ЗС - СЖ; Тп.з. = -52°С)

Конечная температура материала при замораживании, °С Выживаемость бактерий после сушки. % Длительность этапа сублимации, ч Величина ОВ, %

-52 85 ±5 17 ± 1 2,5 ±0,2

-35 62 ±5 20 ±2 3,1 ±0,3

Чем меньше глубина замораживания по сравнению с Тп.з., тем больше жидких переохлажденных фракций остается в материале при замораживании и выше вероятность вспенивания материала и подъема ледяного блока. У различных материалов она различна. Вспенивание придонных участков в материале и значительный подъем ледяного блока наблюдается у материала с ЗС -ПЛ; незначительный подъем блока и небольшое вспенивание наблюдается у материала с ЗС - СЖ; малозаметное вспенивание наблюдается у материала с ЗС - ОМ. Однако, у материалов с ЗС - СЖ при незначительном вспенивании и подъеме блока после сублимационного высушивания наблюдаются зоны значительной контракции материала - объемное нарушение макроструктуры.

Таким образом, конечная температура биоматериалов с ЗС - ПЛ, СЖ, ОМ по всему объему серии охлаждаемого материала должна соответствовать значению Тп.з., достижение которой должно служить критерием оценки качества и стандартности этапа замораживания.

3.2.2. Исследование условий охлаждения на формирование макроструктуры биоматериалов. Изучение скоростей охлаждения и условий ПК в практике промышленного производства сухих биопрепаратов представляет интерес в основном в плане формирования той или иной макроструктуры.

Условия охлаждения биоматериала, в частности на стадии первичной кристаллизации раствора, формируют его макроструктуру, которая определяет внешний вид сухого биопрепарата.

Термодинамические условия охлаждения в промышленных холодильных установках можно охарактеризовать следующим образом: конвективный теплообмен с принудительной и естественной циркуляцией воздуха, что уже само по себе способствует различию в условиях формирования макроструктуры.

Как показывает практика в условиях промышленного производства сухих биопрепаратов с ЗС - ПЛ, ОМ, СЖ при замораживании биоматериала даже в камере одной и той же холодильной установки, но при различных объемах серии, фасовки, условиях размещения материала, и работы вентилятора камеры после высушивания при одинаковых условиях получают различный макровид сухого продукта:

1.- таблетка плотной однородной «мелкозернистой» структуры, однородной окраски и в большинстве своем легко отстающая от стенок посуды; 2 -пластинчатая «усоподобная» структура, таблетка не отстает от стенок посуды; 3 - промежуточная структура.

Нами проведены эксперименты по определению условий охлаждения и длительности ПК, формирующие определенный вид макроструктуры сухого биопрепарата. Исследования проводились с ЗС - ПЛ, СЖ, ОМ, составляющих основу биоматериалов как физических объектов замораживания - высушивания.

Замораживание проводили в холодильных установках NZ-280/75 и «Reveo» при различных температурах воздуха в камере с отключенным и включенным вентилятором, создавая тем самым различную интенсивность охлаждения материалов. ■

Материал, замороженный до Т п.х, высушивали в сублиматоре S.M.J. «Юзифруа» в эвтектической зоне.

Контроль температуры материала и длительность процесса осуществляли по кривым замораживания самописца, приданного к холодильной установке NZ-280/75. Характерные кривые приведены на рис. (2).

По графикам охлаждения материалов для каждого опыта определяли длительность стадии ПК - т"", на которой формируется макроструктура материала.

Так как на стадии ПК температура материала практически не изменяется, т.е. скорость охлаждения равна нулю, то, на наш взгляд, корректнее характеризовать условия формирования макроструктуры интенсивностью отвода тепла, выделяющегося при кристаллизации воды из раствора.

Рис.2. Кривые замораживания биоматериала

1 - материал, расположен в центре кассет и максимально «защищен» от воздействия вентилятора камеры; 2 - материал, расположен у края кассет и максимально подвержен воздействию вентилятора камеры; ПК - плато первичной кристаллизации

Интенсивность отвода тепла, обозначенную нами как.р и выраженную в кал/г, можно определить по формуле 1:

0пк

где: С}"" - тепло, выделяемое материалом при кристаллизации воды, и отводимое охлаждающим воздухом камеры холодильной установки, кал; т™ - длительность стадии ПК, определяемая по кривым замораживания материала, идентичным кривым рис.2.

Тепло <3"" можно определить по формуле: (Г =т„ г,

где: г - удельная теплота кристаллизации воды равна 330,7 кал/г (М. Подольский); т„ - масса кристаллизирующейся воды на стадии ПК, в граммах.

Так как на стадии ПК, кристаллизуется из раствора в среднем до 80% всей воды (Н. Пушкарь), то для практических расчетов можно использовать формулу:

т„ = 0,8 Рр,

где:Р - объем фасовки жидкого материала, расфасованного в единицу посуды (флакон, ампула), см3; р - плотность воды, г/см3.

Результаты экспериментов приведены в таблице 4.

Таблица 4

Макроструктура сухих материалов при различных условиях ПК (ЗС - ПЛ)

Объем фасовки, мл Длительность ПК, мин Среднее значение JnK, кал /мин Макроструктура сухого материала после высушивания

2 5 ± 2 105,8 Пластинчатая с незначительными зонами рыхлой структуры

10 ±2 52,9' Промежуточная (рыхлая)

20±5 26,5 * Плотная с незначительными зонами рыхлой структуры

60±5 8,8 Плотная

4 10±2 105,8 Пластинчатая с незначительными зонами рыхлой структуры

20±5 52,9 Промежуточная (рыхлая)

40±5 26,5 Плотная с незначительными зонами рыхлой структуры

60±5 17,6 Плотная

6 10+2 158,8 Пластинчатая

20+5 79,4 Промежуточная с зонами пластинчатой структуры

30±5 • 52,9 Промежуточная

60±5 '26,5 Плотная с незначительными зонами рыхлой структуры

120±5 13,2 • Плотная

Аналогичные результаты получены и для ЗС - СЖ и ОМ. Анализ результатов показал, что при интенсивности отвода тепла от материала на стадии ПК Дпк <25 кал/мин формируется плотная мелкозернистая макроструктура; при Гк> 110 кал/мин формируется пластинчатая, ребристая макроструктура; в диапазоне 25<УПК<110 - промежуточная структура.

Оценивая при замораживании значения -Г", можно прогнозировать какая макроструктура (макровид) будет преобладать в серии сухого препарата. Так например, при проведении замораживания производственной серии вакцины против НБ птиц из шт. «Бор 74» с ЗС - ГШ объемом 3000 флаконов при фасовке по 4 мл во флаконы емкостью 20см3 в промышленной холодильной установке N2-280/75 при начальной температуре в камере минус 50°-52°С нами были рассчитаны (по формуле 1) значения:

1 мин 1 мин

Был сделан предварительный прогноз о том, что у сухого биопрепарата при выполнении требований услЬвий сублимации (проведение сублимации в эвтектической зоне) будет преобладать плотная и промежуточно-плотная макроструктура.

Этот прогноз был подтвержден результатами последующего сублимационного высушивания - до 90% всего сухого препарата имело плотную и промежуточную (близкую к плотной) макроструктуру.

Большое значение имеет возможность предварительного прогноза макроструктуры сухого продукта, который будет сформирован на этапе замораживания по объему всей серии, для разработки температурно-временных режимов этапа досушивания биоматериала. Это связано с тем обстоятельством, что в практике производства сухих биопрепаратов замечено, что произведенные при одних и тех же режимах сублимационного высушивания биопрепараты с различной макроструктурой имеют различную величину ОВ. Нами были проведены эксперименты по исследованию влияния макроструктуры сухих биопрепаратов с ЗС на основе ПЛ, СЖ, ОМ на величину ОВ при различных температурно-временных и технологических параметрах (объем фасовки, вид посуды) этапа досушивания. Результаты экспериментов приведены в таблице5. Как видно из таблицы, значения величины ОВ различны в образцах, полученных при одинаковых технологических и режимных параметрах высушивания, но имеющих разную структуру. Образцы с плотной однородной структурой имеют более низкие значения ОВ, чем образцы той же серии с пластинчатой и промежуточной структурой. Величина разброса по влажности для различных макроструктур в серии определяется, в основном, составом ЗС.

По результатам анализа данных, представленных в таблице 5, нами предложены оценочные соотношения для определения максимальной величины ОВ в серии сухого препар.ата для ЗС: ПЛ - ОВтах ~ ОВ + 1,5%; СЖ - ОВтах ® ОВ +1,2%; ОМ - ОВ тах ~ ОВ +0,5%, где: ОВтах - максимальная величина влажности сухого биоматериапа в серии (для «пластинчатой» структуры); ОВ - величина влажности для плотной макроструктуры.

Знание условий ПК, формирующих определенный вид макроструктуры сухого препарата, возможного интервала значений величин ОВ в серии, позволит более обоснованно и рационально подходить к разработке температурно-временных режимов этапа досушивания биоматериалов, а также скорректировать температурно-временные режимы этапа досушивания с целью гарактиро-

ванного получения ОВтах не выше значения ОВ, заданного в Технических Условиях для биопрепарата.

Таблица 5

Значения ОВ для биопрепаратов с ЗС на основе ПЛ, СЖ,ОМ _в зависимости от макроструктуры

№ п\п Фасовка, мл Объем флаконов, см3 Температура досушивания,°С Длительность досушивания, ч 'ОВ, % для таблетки со структурой

Плотная Промежуточная «Пластинчатая»

ЗС-ПЛ

4 2 20 22 7 2,5 3,4 3,9

5 2 20 25 12 1,9 2,7 3,4

6 4 20 23 6 3,7 4,3 5,2

7 4 • 20 30 10 2,2 2,7 3,8

8 6 20 25 8 3,4 4,0 4,8

9 6 20 35 8 2,2 2,8 3,7

ЗС - СЖ

1 2 10 30 10 1,8 2,6 2,9

2 2 20 24 6 2,3 2,8 3,5

4 4 20 22 11 2,6 3,3 3,8

5 4 20 35 10 1,3 1,9 2,5

8 6 20 35 5 2,4 2,7 3,6

9 6 20 35 15 1,0 1,4 2,1

ЗС-ОМ

1 2 20 21 5 1,8 2,0 2,3

3 2 20 35 5 1,1 1,3 1,5

4 4 20 22 7 1,9 2,1 2,4

6 6 20 23 10 1,8 2,1 2,3

7 • 6 20 35 5 1,4 1,6 1,8

* Разброс значений ОВ в каждом опыте в среднем не превышал - 0,2%.

3.2.3. Разработка методики и расчетной зависимости для оценки длительности этапа замораживания. В условиях промышленного производства сухих биопрепаратов для технолога цеха сушки важное значение имеет возможность оценки длительности этапа замораживания материала до Тп.з. с учетом реальной загрузки камеры холодильной установки материалом, условий размещения кассет с материалом внутри камеры, технических характеристик установки.

До настоящего времени методик расчета длительности этапа замораживания в практике производства сухих биопрепаратов разработано не было.

В результате проведенных нами исследований разработана методика и получена эмпирическая зависимость для оценки длительности этапа замораживания:

т(з4) «-2-^-,час (2)

3,6 х КуСТ х кп>т,м>

где: - количество тепла, отводимое от материалов, размещенных в холодильной камере при замораживании до требуемой температуры материала (I), [кдж]; Ыуст. - потребляемая номинальная мощность холодильной установки,

ватт; к^тм - эмпирический коэффициент полезной тепловой мощности, принятый нами как коэффициент пропорциональности между мощностью установки, идущей непосредственно на отвод тепла при охлаждении" материалов, размещенных в холодильной камере, до заданной температуры (Ч), и номинальной потребляемой мощностью установки.

Тепло, отводимое от материалов, размещенных в холодильной камере, можно оценить по формуле:

=шж(СжТн +СЛТК +г)+(С„тп +Сктк +Сэтэ)х(Тн +ТК)> (3)

где: шж- масса замораживаемого жидкого материала, кг; С - удельная теплоемкость, ( кдж ): С' - жидкости; С, - льда; С„ - материала посуды (на-кг х град

пример, стекло), Ск - материала кассет, в которых размещена посуда; Сэ -материала, из которого сделаны устройства (этажерки) для размещения кассет с посудой; шп,шк,шэ - масса посуды, кассет, устройств (этажерок) соответственно, кг; Т„,ТК - начальная и конечная температура биоматериала при замораживании (берутся по модулю), °С; г - удельная теплота кристаллизации жидкого материала, кдж; (для воды г = 330,7

кг

Коэффициент к^т м зависит от многих факторов, среди которых, в первую очередь, следует выделить условия нестационарного теплообмена в холодильной камере, обусловленного изменением в процессе замораживания цикличности работы холодильно-компрессорного агрегата (ХКА), его холодопро-изводительности и т.д.

В силу вышеназванных причин в реальных условиях производства сухих

биопрепаратов к^т м можно определить только опытным путем. Нами определены значения к„}пм в зависимости от температуры биоматериала, до которой проводится замораживание (1), при различных условиях замораживания,

22

охватывающих основной спектр производства сухих биопрепаратов по типам применяемого холодильного оборудования, объемам серий материала (рис.3).

Зависимости (2, 3) и значения, которые можно определить по рис. 3, с

достаточной точностью позволяют рассчитать значения т^при выполнении следующих условий: наличие в холодильной камере устройства принудительной циркуляции воздуха, работающего синхронно с ХКА; используемая посуда - пенициллиновые флаконы емкостью 20 см3с объемами фасовки от 2 до 6 мл; флаконы емкостью 10 см3 с фасовкой от 1 до 4 мл, ампулы ШП - 5, ШПВ -6 с объемами фасовки до 2 мл; предварительное охлаждение холодильной камеры перед постановкой материала до заданной температуры в холодильной камере - 50 + -55°С; емкость холодильной камеры от 200 до 700 литров; объем загрузки холодильной камеры по количеству размещенной посуды, в пределах (0,3 - 0,9) И,, - максимальной загрузки камеры тем или иным видом посуды. Эти условия характерны для промышленного производства сухих биопрепаратов.

* 0,09

н с

0,08 0,07 0,06 0,05 0,04

-30° -35° -40° -45° -50°

Рис.3. Зависимость кптм от температуры замораживания материала (1)

В таблице 6 приведены расчетные (т^) и опытные (т„,)) значения длительности замораживания биоматериалов.

Значения т^ получены в реальных условиях производства сухих биопрепаратов по температурно-временным кривым замораживания биоматериалов, регистрируемым самопишущими устройствами холодильных установок.

Для оценки к^п м при других условиях замораживания, отличных от описанных выше, можно использовать зависимость (2) в виде:

,4 Л 1Чуст л

где: "^опыт -длительность замораживания до требуемой температуры материала (1) в часах, определяемая опытным путем по графику замораживания (рис.4).

Таблица 6

Опытная (ТдЦ) и расчетная (г ^ Длительность замораживания биоматериала

Тип холодильной уста новки Мощность установки, ватт Температура в холодильной камере, °С Объем холодильной камеры, литр Количество (штук) и вид посуды Фасовка, мл Длительность замораживания до температуры (1), час

т(,) 1оп г('> ' 3

-30° -40° -50° -30° -40° •50°

280/75 2300 -50 280 6000 ампул 1,0 4,0 5,5 9,5 5,2 6,4 10,4

280/75 2300 -50 280 2800 флакон. 10 см3 4,0 7,5 10,0 18,0 8,9 10,4 17,6

НС-700/50 4500 -50 700 1250 флакон. 20см3 4,0 3,3 4,6 8,2 3,5 4,4 7,5

Датчики контроля температуры материала размещают в тех флаконах или ампулах, которые находятся в центре кассет (лотков) и максимально закрыты от воздействия вентилятора. Как правило, это срединная часть всей сборки, установленной в холодильной камере.

По результатам опытов строится график зависимости м = ЯД), подобный графику рис. 3. Используя вновь полученные значения для соответствующих условий замораживания и формулу (2), можно оценивать т^и при применении других объемов серии, фасовок, видов посуды отличных от тех, которые использовались нами при определении значений м .

Рис.4. График замораживания материала

Тм, Ткам - температура материала, воздуха холодильной камеры, соответственно; 11,- текущие значения температуры материала; ть х2, Тз, - длительности замораживания до соответствующей температуры (I,) материала; Т„, Тк - начальная и конечная температура материала.

На практике возможность предварительного расчета т^ позволит: контролировать процесс замораживания при отказе контрольно-измерительной аппаратуры, регистрирующей температуру материала в течение процесса охлаждения;

- прогнозировать длительность этапа замораживания при различных технологических и технических условиях;

- планировать и организовывать оптимальные варианты технологического цикла сублимационного высушивания с учетом условий работы прои^водст-венного подразделения.

3.3. Этап сублимации биоматериалов. При высушивании биопрепаратов методом сублимации создаются условия, при которых вещество претерпевает минимальные химические изменения. К этим условиям относятся низкая температура, отсутствие растворителя в жидкой фазе и незначительная концентрация кислорода в окружающей газовой среде.

Отличительной особенностью метода сублимационного высушивания является переход воды из твердого состояния непосредственно в пар, минуя жидкую фазу.

В течение сублимационного периода удаляется до 90% всей воды, в основном это свободная и часть слабосвязанной воды, что определяет сущность метода.

Теорией и практикой сублимационного высушивания биопрепаратов определены основные режимные параметры этапа сублимации, влияющие на качественные (макроструктура), количественные (остаточная влажность, растворимость) и биологические (активность, иммуногенность) характеристики сухого биопрепарата. Это температура материала и длительность ее поддержания. Наиболее полное сохранение исходных свойств биоматериалов в процессе сублимации теоретически может быть достигнуто при температурах высушивания на уровне нижней эвтектической температуры материала. Однако это связано, во-первых, со значительной длительностью процесса сублимации при низких (ниже минус 40°С) температурах и значительными энергозатратами, во-вторых, невозможностью осуществления управляемого процесса сублимации для ряда биоматериалов с низкими эвтектическими температурами (ниже минус 40° +50°С) на современном промышленном сублимационном оборудовании. Многочисленными исследованиями (Э.Гуйго, Э.Каухчешвили, М.Подольский и др.) показана возможность осуществления процесса сублимации большинства биоматериалов на уровне верхних эвтектических температур без значительного ухудшения качественных, количественных и биологических характеристик сухого биопрепарата, а это дает в свою очередь снижение энергозатрат и возможность проведения сублимации на промышленном оборудовании.

Однако температура в материале на этапе сублимации не должна подниматься выше верхней эвтектической (В.Кравченко и др.), поскольку денатурирующее действие гипертонических растворов на биообъект может сказаться только при температурах выше верхней эвтектической температуры. Это происходит потому, что если при Тэ.н. только появляются первые следы микрозон переохлажденной жидкости,, то при температурах выше Тэ.в. начинается процесс эффективного плавления заморожечного материала, его низкотемпературных фракций. Кроме того, при нагревании материала выше верхней эвтектической температуры, возможно вспенивание ввиду значительного количества микрозон переохлажденной жидкости. Испарение переохлажденной жидкости приводит к локальному повышению давления внутри материала, бурному испарению, нарушению структуры подсохших слоев и в некоторых случаях к подъему ледяного блока материала, что ухудшает условия сушки и снижает в конечном итоге качество сухого продукта.

Корректное и качественное проведение сублимации возможно только в том случае, если режимные параметры сублимации будут полностью согласованы с исходными физическими характеристиками высушиваемых материалов.

3.3.1. Исследование влияния температуры материала на биологические и качественные характеристики сухих биопрепаратов.

Температура биоматериалов с ЗС - ПЛ, СЖ, ОМ на этапе сублимации имеет важное значение.

Так, например, проведенные нами исследования влияния температуры материала на качество вакцин против бруцеллеза из шт. 82 и 19 с ЗС - «СЖ» показали, что результаты по выживаемости бактерий при удалении до 90% всей влаги при сублимации в пределах эвтектической зоны лучше, чем при сублимации выше верхней эвтектической температуры (табл.7).

В то же время потери титра инфекционности вакцины против ньюкасл-ской болезни птиц из штамма «Ла-Сота» с ЗС - «ГШ» при сублимации в зоне эвтектики и выше нее были практически одинаковы (табл.8).

Однако, при сублимации обеих вакцин выше зоны эвтектики значительно ухудшился внешний вид (макроструктура), что видно на рис. 5-6.

Подобная картина наблюдалась и при недостаточной длительности этапа сублимации материала в зоне эвтектики.

Таблица 7

Выживаемость клеток бруцелл в образцах сухих вакцин после сушки и после хранения

Исследуемый материал Выживаемость, %

После сушки После хранения 7 суток +37°С

В зоне эвтектики Выше зоны эвтектики В зоне эвтектики Выше зоны эвтектики

Вакцина из шт.82 80 60 65 40

Вакцина из шт. 19 85 70 72 45

Таблица 8

Активность вакцины против ньюкаслской болезни птиц_

Серия вакцины Исходная активность (в 18ЭИД50/МЛ) Активность после сушки

в зоне эвтектики выше зоны эвтектики

1 10,4 ± 0,4 10,1 ±0,4 9,9 ± 0,4

2 9,5 ± 0,4 9,2 ± 0,4 9,1 ±0,4

3 9,7 ± 0,4 9,5 ± 0,4 9,3 ± 0,4

а) б)

Рис.5. Макровид сухих вакцин, сублимированных

в зоне эвтектики [Тс = Т" Т®]

а) внешний вид; б) продольный скол

а) . б)

Рис.6. Макровид сухих вакцин, сублимированных при температуре выше зоны эвтектики [Тс > Т®]

а) внешний вид; б) продольный скол

3.3.2. Исследование кине1ики сушки биоматериалов. Разработка методики »1 расчетной зависимости для оценки длительности этапа сублимации. Определение длительности этапа сублимации (тс) биоматериалов осуществлялось ранее опытным путем, в силу отсутствия доступных в промышленном производстве биопрепаратов методик оценки - тс, что приводило к значительным материальным, трудовым и финансовым затратам при разработке режимов сублимационного высушивания биопрепаратов и внедрении их в промышленности.

Существуют различные методы получения количественных зависимостей процесса сушки и сублимации в частности, основанные на изучении кинетики сушки материалов, например, метод приведенной скорости сушки»,

разработанный Г.Фнлоненко и дополненный М.Гришиным; «метод позонного разбиения кривой сушки», разработанный В.Араповым.

Нами, впервые в практике производства сухих биопрепаратов, была исследована кинетика сушки биоматериалов с основными промышленными защитными средами ПЛ, СЖ, ОМ и с использованием метода Г.Филоненко получено аналитическое уравнение для расчета длительности периодов сушки биоматериалов:

где: т - длительность сушки; N - скорость сушки, зависящая от температуры материала, давления в камере, состава ЗС; ю^а^.к^ш^ - начальное, текущее, равновесное и критическое влагосодержание материала, соответственно; А и Р - постоянные коэффициенты, зависящие от режимных и технологических параметров сушки.

Определены значения коэффициентов А и Р, величин юк и N при различных температурах материала при сублимации, давлениях в камере сублиматора и фасовке по 6 мл в пенициллиновые флаконы емкостью 20 см3 для защитных сред на основе пептона, сахарозы, желатины, обезжиренного молока.

Для определения тс при других видах посуды и объемах фасовки, требуется проводить дополнительные, весьма трудоемкие эксперименты по нахождению коэффициентов А и р.

Сложность практического применения уравнения (4) состоит и в том, что в уравнении подобного вида отсутствуют температура материала, непосредственно контролируемая при проведении процесса сублимации, а также один из основных технологических параметров - объем фасовки, в тот или иной вид посуды, определяющие толщину слоя материала, напрямую влияющую на длительность процесса сушки.

Дальнейшие исследования кинетики сушки биоматериалов с помощью дифференциального датчика тепловых потоков, а также уравнения (4), позволили нам установить, что зависимость длительности этапа сублимации от температуры материала при использовании ЗС - ПЛ, СЖ, ОМ, различных объемов фасовок и видов посуды имеет вид (рис. 7):

/

\

+ Р(юк-со2) ,(4)

--о-ПЛ -л-ОМ —СЖ

Тс, °с

Рис.7. Зависимость длительности сублимации (тс) биоматериалов с различными ЗС от температуры в материале (Тс)

С помощью метода «линеаризации кривых» (Л.Батунер, 1971 г.) нами был получен общий вид уравнения для оценки тс от режимных и технологических параметров сублимации:

. тс = аеЬТс , (5)

где: тс - длительность этапа сублимации, час; «а» - коэффициент, зависящий от состава защитной среды и толщины слоя высушиваемого материала, пропорциональной объему фасовки в определенный вид посуды; «Ь» - коэффициент, зависящий от состава защитной среды; Тс - температура материала при сублимации, °С, (взятая по модулю - т.е. со знаком плюс); е - основание натурального логарифма (е 2,72)

Экспериментально нами установлены значения коэффициентов «а» и «Ь» для биоматериалов, высушиваемых с основными промышленными защитными средами - ПЛ, СЖ, ОМ в пенициллиновых флаконах емкостью 20 см3 при объеме фасовки 6 мл (табл. 9).

Таблица 9

Значения коэффициентов «а» и «Ь»

Защитная среда Коэффициент «а» Коэффициент «Ь»

ПЛ 4,5 0,055

СЖ 3,8 0,053

ОМ 3,5 0,054

Следует отметить, что значения коэффициентов «а» и «Ь» получены при Рк = Рн.п.(Тс)±10% давлении в камере 2 ? соответствующем температуре ма-

териала при сублимации - Тс, и при температуре конденсатора Тк 5 -60° С.

Для проверки адекватности базовой модели (5) нами проведены дополнительные эксперименты для каждой ЗС. Статистическая обработка экспериментальных данных по методу наименьших квадратов показала, что базовые модели адекватны с 95% надежностью при Ркр = 6,94.

При использовании других объемов фасовок и другого вида посуды, согласно теории процесса сублимации, приняли допущение о пропорциональности длительности сублимации высоте столба жидкости:

(6)

т2 ь2

р.

Высота столба наливаемой жидкости определяется из соотношения: Ь; = — ,

где: И, - высота столба жидкости; И, - объем фасовки в единицу используемой посуды; 8, - площадь поверхности испарения влаги.

Зависимость(б) можно представить в виде:

(7)

тс "С -Рс ^ Рс

где: Т\ - длительность этапа сублимации при объеме фасовки материала И,

го1?

и площади испарения Б,; для флаконов или ампул: 8; = (8)

где: с!, - внутренний диаметр флакона или ампулы; Р, - объем фасовки материала в единицу посуды; т0 - длительность этапа сублимации, рассчитанная по зависимости (5), определенная для конкретной защитной среды, фасовки - Рс и вида посуды с площадью испарения - 8С.

Используя зависимости (5, 7, 8) и данные таблицы 9 нами были получены эмпирические уравнения для оценки длительности этапа сублимации (тс) от температуры (Тс) при различных объемах установки в единицу посуды (Р) и видах посуды с поверхностью испарения единицы посуды - й:

р4 О АСС^

-для биоматериалов с защитной средой ПЛ: тс = 3,4— • е ' с, час (9)

8

^ 0 053Т

-для биоматериалов с защитной средой СЖ: тс = 2,9— ■ е ' с , час (10)

8

К о 054Т

-для биоматериалов с защитной средой ОМ: тс = 2,6— • е ' с . час (11)

8

Значения Р и 8 берутся в см3 и см2, соответственно; Тс -,°С (по модулю, т.е. со знаком плюс).

Граничные условия: температура материала (Тс) - от минус 25°С до ми-нус40°С (основной промышленный диапазон температуры биоматериалов на этапе сублимации); Р - объем фасовки жидкого биоматериала в пенициллино-вые флаконы емкостью 20 см3 - от 2 до 6 см3; флаконы емкостью 10 см3 - от 1 до 4 см3; в ампулы ШПВ-6, ШП -5 от 0,5 до 2 см3.

Для практических целей, в силу незначительного различия коэффициентов «Ь» для ЗС на основе ПЛ, СЖ, ОМ можно использовать общую для ЗС

расчетную зависимость вида: тс = к — • е°'054Тс, час

8

(12)

где: к = 3,4; 2,9; 2,6 для ЗС на основе ПЛ, СЖ, ОМ соответственно.

Сравнение экспериментально полученных данных - т^ и расчетных значений т§ , полученных по зависимости 12 показало, что расхождение между опытными и расчетными значениями длительности составило 10 - 15%, что является вполне приемлемым для оценки тс в практике производства сухих биопрепаратов. В качестве примера, в таблице 10 приведены опытные и расчетные длительности этапа сублимации для различных защитных сред.

При применении защитных сред другого компонентного состава можно в первом лриближении оценить значения тс по формулам (9,10,11 или 12) и провести дополнительные эксперименты по уточнению значений тс и расчету коэффициентов «а» и «Ь» для данной защитной среды по приведенной ниже методике.

Таблица 10

Опытная (тI) и расчетная (Г£С) длительность сублимации при сушке

Тс,°С ПЛ СЖ ОМ

Тр -гР 1с тР 1с

-25 11 11,7 9 9,9 8 9,0

-30 15 15,4 13 13,1 11 11,7

-35 22 20,1 18 17,1 16 15,4

-40 28 26,3 23 22,5 22 20,1

Жидкий материал расфасовывают во флаконы, ампулы или другой вид посуды. Желательно, чтобы объем фасовки был равен половине максимального объема фасовки, рекомендованного для используемого в опытах вида посуды.

По результатам экспериментов по определению длительности этапа сублимации тс в зависимости от температуры материала - Тс , проверки адекват-

ности выбора модели, составляется таблица средних значений - тс1, при соответствующих значениях Т^ и составляется система уравнений вида: ^т^ =ш + пТ1 ^т2 = т+пТ2 • ^т3=ш+пТ3 ■ , ^т4 = ш + пТ4 15x5 =ш + пТ5

Решив систему уравнений (13), находят коэффициенты «ш» и «п», которые входят в уравнение, описывающее кривую зависимости тс от Тс вида, подобного кривой рис.7:

1цтс = ш + пТс или в экспоненциальной форме:

тс = а • еЬТс, где: а = 10ш , Ь = « —2— ;(е-основание натурально-

^е 0,43429

го логарифма, равное 2,72).

Следует отметить, что найденное значение коэффициента «а» соответствует только той фасовке и виду посуды, при которых проводятся эксперименты, а значение коэффициента «Ь» - составу конкретной защитной среды.

Проведение подобного рода экспериментов вполне приемлемо и практически целесообразно на чистых защитных средах, процентное содержание веществ которых в растворах соответствует их содержанию в биоматериале.

Разработанная нами методика оценки длительности этапа сублимации позволила разработать и внедрить в промышленную практику научно-обоснованные температурно-временные режимы сублимации для ряда биопрепаратов с минимальными материальными, трудовыми и финансовыми затратами.

Исследования, проведенные нами, по оценке длительности этапов сублимации биоматериалов при использовании различных ЗС, видов посуды и объемов фасовки легли в основу раздела «Сублимация» «Методики расчета режимных параметров сублимационной сушки биопрепаратов», утвержденной Академиком - секретарем отделения ветеринарной медицины РАСХН и опубликованной в монографии «Теоретические и практические основы технологии сублимационного высушивания биопрепаратов».

3.4.Этап досушивания биоматериалов. По окончании этапа сублимации температуру в материале повышают до положительных значений, переходя к этапу досушивания, который является последней стадией сублимационного высушивания. Этот этап также называют десорбцией или вторичной сушкой. В этот период из материала удаляется оставшаяся вода др определенных

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА С. Петербург ОЭ ТОО акт {

(13) где: взяты по модулю.

значений. В практической технологии сублимационной сушки под досушиванием следует понимать поддержание положительных температур материала в оптимальном для биоматериала интервале в течение определенного времени, обеспечивающих остаточную влажность (ОВ) сухого биопрепарата не выше максимально допустимого значения и минимальные потери исходной активности биопрепаратов после сушки и в процессе хранения.

Величина остаточной влажности в значительной степени влияет на стабильность сухого биопрепрата лишь в процессе хранения. Рядом отечественных и зарубежных исследователей показано, что падение биологической активности биопрепаратов в процессе хранения наиболее заметно происходит с определенных, максимально допустимых для каждого биообъекта значений ОВ. Вопрос о верхней границе остаточной влажности в сухом продукте должен решаться конкретно для каждого биопрепарата, с учетом максимального сохранения его стабильности при тех или иных условиях хранения биопрепарата, что в достаточной степени показано в работах Э.Токарик, Т.Скотниковой, В.Панферова.

3.4.1.Исследование влияния температурно-временных режимов этапа досушивания на качественные и количественные характеристики сухих биопрепаратов. Достичь определенных значений ОВ в сухом биопрепарате можно различными сочетаниями температуры и длительности досушивания, или, иначе, различными температурно-временными режимами. Вопрос о комплексном влиянии температурно-временных режимов досушивания на биологические показатели в практике производства сухих биопрепаратов изучен не был. Нами установлено, что сухие биопрепараты с ЗС - ПЛ, СЖ, ОМ при одинаковой величине ОВ могут иметь различную биологическую активность уже непосредственно после высушивания, вследствие различных температурно-временных воздействий в процессе досушивания при одинаковых условиях этапов замораживания и сублимации. Так, например, при одинаковых значениях ОВ, величина выживаемости микробных клеток в досушиваемых разными режимами вакцинах против паратифа свиней из шт. ТС-177, против листериоза с/х животных из шт. «АУФ», против сальмонеллеза водоплавающих птиц в большинстве случаев различна (табл.11).

Поскольку биопрепараты с одинаковой величиной ОВ могут иметь различную биологическую активность, вследствие различных температурно-временных воздействий' в процессе досушивания, проблема получения качественного биопрепарата требует исследований, направленных не только на изучение влияния остаточной" влажности в течение хранения, но и на выявление' температурно-временных воздействий на биообъект в процессе досушивания.

Повышение температуры в материале ведет к сокращению времени сушки, возможному уменьшению энергозатрат на производство биопрепарата. С другой стороны, величина максимального нагрева должна определяться способностью биоообъекта выдерживать те или иные температуры досушивания в течение определенного времени без значительного снижения активности.

Таблица 11

Биологические (ВМК, %) и физические (ОВ,%) показатели качества вакцин

ОВ, % Тд,°С т, ч ВМК*, %

Вакцина против паратифа свиней из шт. ТС-177

2,6 +15 10 50

2,6 +35 0 31

1,9 +15 20 45

2,0 +25 10 40

1,3 +25 20 30

1,3 +35 10 22

Вакцина против сальмонеллёза водоплавающих птиц

1,2 +25 10 18

1,3 +35 10 2,6

3,0 +15 20 20,0

2,9 +25 0 17,0

Вакцина против листериоза с/х животных

2,5 +15°С 20 ч 48

2,6 +35 "С 0ч 27

Примечание: ВМК* - выживаемость микробных клеток по отношению к исходному количеству микробных клеток (до сушки); фасовка по 2 мл во флаконы емкостью 20 см

✓

Выбор оптимальных режимов досушивания необходимо проводить с учетом изменений в биологической активности сухого препарата как непосредственно после сушки, так и в процессе хранения, а также экономичности I) процесса. Так, например, после досушивания вакцины против листериоза

сельскохозяйственных животных из штамма Listeria monocitogenes «АУФ» при значениях максимальной температуры в материале + 15°С и +25°С не выявлено существенных различий в активности биопрепарата от величины нагрева и длительности в пределах от 0 до 20 часов. Заметное снижение выживаемости микробных клеток происходит при повышении максимальной температуры досушивания до +35°С (табл.12).

1 I

Таблица 12

Влияние режимов досушивания на активность вакцины __из шт. «АУФ» после сушки (ЗС - СЖ)

Длительность нагрева, час ВМК,% при температуре в материале

15°С 25°С 35°С

0ч 52 51 27

10 ч 47 50 28

20 ч 48 46 23

В свою очередь, в процессе хранения потери активности вакцины, высушенной при температуре +35°С, независимо от длительности досушивания, существенно больше, чем при +15++25°С (рис.8).

Следовательно, температурный оптимум находится в пределах температур от+15 до+25°С.

90 £ «ОН

I

60 -50 -40 30 ^ 20

10

15

20

25 30 35 40 Температура досушивания, °С

Ф 0 часов.........0........10 часов " А - 20 часов

Рис.8. Потери активности вакцины из шт. «АУФ» через три месяца хранения.

С другой стороны, недостаточная температура материала и длительность ее поддержания могут привести к высоким показателям ОВ. Так, при достижении в материале величины максимальной температуры, равной +15 °С (0 часов досушивания) в серии сухого препарата наблюдаются образцы с максимальным значением ОВ = 4,8%, что превышает критическую величину равную 4,5 % для данной вакцины (Е.Сербис). Увеличение температуры и длительности нагрева снижает показатель максимальной влажности в серии (табл.13).

Длительность нагрева, час ОВ,% при максимальной температуре в материале

15°С 25°С 35°С

0ч 4,8 4,0 3,2

10 ч 4,0 3,2 2,4

20 ч 3,2 2,4 1,6

Досушивание при +15°С в течение 10 часов дает результаты по показателю ОВ, равные полученным при достижении в материале максимальной температуры +25 °С, но близкие к критическому значению ОВ. Очевидно, что с учетом потерь активности вакцины после сушки и в процессе хранения (табл.12; рис.8) наиболее предпочтительным является нагрев материала до температуры +25°С и поддержание ее в течение 5 часов из соображений меньшей длительности процесса сушки и гарантированного получения значения ОВ в серии, не превышающих максимально допустимую влажность.

Аналогичные эксперименты были проведены и с вакцинами против паратифа свиней из шт. ТС-177 и против сальмонеллеза водоплавающей птицы (СВП), которые позволили определить оптимальные температурно-временные режимы этапа досушивания вакцин и включить их в «Изменения и дополнения...» к действующим НТД на производство вакцин. Проведенные нами НИР по изучению комплексного влияния температурно-временных параметров этапа досушивания на качество сухих биопрепаратов показали его сложный характер, имеющий свои особенности для каждого биопрепарата. Поэтому, при разработке обоснованных режимов досушивания необходимы исследования по определению критической влажности, изучению влияния температурно-временных параметров этапа досушивания на показатель ОВ, на биологическую активность биопрепаратов после сушки и при хранении с учетом экономичности процесса досушивания. Проведение всего комплекса подобных исследований является необходимым как при разработке, так и усовершенствовании промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов.

3.4.2. Разработка методики и расчетной зависимости для оценки величины ОВ сухих биОпрепаратор. Как для разработчика новых видов сухих биопрепаратов, так и для технолога цеха сушки важно знать на какие уровни остаточной влажности может выйти процесс десорбции при тех или иных тем-пературно-временных параметрах досушивания.

Известно, что величина ОВ сухого препарата, в первую очередь зависит от температурно-временных режимов досушивания, и чем выше максимальная температура в материале и длительность ее поддержания, тем ниже значение ОВ при прочих равных условиях. Кроме того, величина ОВ биопрепарата зависит от состава защитной среды, и, как показали наши собственные исследования, от макроструктуры сухого препарата при одинаковых температурно-временных режимах досушивания.

Для получения расчетных зависимостей для оценки величины ОВ в зависимости от температурно-временных режимов досушивания, состава ЗС, объема фасовки в определенный вид посуды, мы применили математические методы планирования экспериментов. Исследования проводили с ЗС- ПЛ, СЖ, ОМ, расфасованными в основные виды посуды, применяемые в промышленном производстве сухих биопрепаратов: пенициллиновые флаконы емкостью 20 см3,10 см3 и ампулы ШП - 5;ШПВ 6.

В качестве контролируемых независимых переменных (факторов) принимали основные технологические и режимные параметры досушивания:

Тд - максимальная температура в материале, °С (фактор Х[);

тд - длительность поддержания максимальной температуры в материале при досушивании (фактор Х2);

Р - величина фасовки материала во флакон, мл (фактор Х3).

Значения факторов брали в интервалах, характерных для промышленного производства сухих биопрепаратов:

Тд = +15 + +35°С; тд = 5 •?• 20 часов; Р - 1 + б мл.

В качестве базовой была принята математическая модель, содержащая линейные члены и их взаимодействия различного порядка вида:

п п п п п

у(а,х) = а0 + £а;х! + £а!кх;хк + £ I £а!к1х;

хкх1 + а1,2...пх1х2...-хп

¡=1 ¡=1 ¡=1 к=Ы1=к+1

В наших исследованиях общий вид базовой модели принял вид:

у = а0 + а1Х, + а2х3 + азх3 + а4х,х2 + а5х,х3 + а^ХзХ, + +а7х,х2х3

Так, например, при использовании пенициллиновых флаконов емкостью 20 см3 реализован дважды для каждой защитной среды полный план экспериментов вида 2".

С помощью метода наименьших квадратов были определены коэффициенты «а,» выбранной модели, при переменных Хь Х2, Х3 и их взаимодействиях, а также точностные характеристики, определяющие значимость коэффициентов «я,» и адекватность модели (табл.14).

Получены расчетные зависимости для оценки величины ОВ с 95 % надежностью значимости коэффициентов «а,» при I кр = 2,31 и адекватностью моделей при Ркр=3,84:

Для ПЛ: ОВ =У, = 2,47 - 0,88Х, - 0,59Х2 + 0,47Х3 - 0,31Х,Х3 - 0,22Х2Х3,.% (14) Для СЖ: ОВ =У2 =2,27 - 0,83Х, - 0,55Х2 + 0,48Х3 - 0,23Х,Х3 - 0,15Х2Х3,% (15) Для ОМ: ОВ =У3 = 1,35 - 0,45Х| - 0,ЗХ2 + 0,1Х3 %. (16)

Результаты статистической обработки экспериментальных данных

— ло .1.........„ ~.............~

ЗС ао а2 а3 34 а5 Эб а7 8е

ПЛ 2,47 -0,88 -0,59 0,47 0,03 -0,31 -0,22 0,03 0,115 0,032 0,069

сж 2,27 -0,83 -0,55 0,48 0 -0,23 -0,15 0 0,160 0,02 0,082

ОМ 1,35 -0,45 -0,30 0,10 0 0 0 0 0,160 0,160 0,082

Аналогичные исследования были проведены и для ЗС при использовании пенициллиновых флаконов емкостью 10см3. Получены адекватные экспериментальные данным расчетные зависимости вида, подобного зависимостям (14-16).

При досушивании различных объемов материала в разной посуде влажность сухого биопрепарата практически одинакова при равенстве высоты столба высушиваемого материала при прочих равных условиях.

На рис. 9 показаны результаты сравнения экспериментальных данных по высушиванию «эквивалентных» фасовок (т. е. имеющих одинаковую высоту столба) материалов с ЗС - ПЛ в ампулах ШП-5 и флаконах объемом 20см3. Значения ОВ в ампулах близки не только к опытным величинам ОВ, полученным при досушивании материалов во флаконах, но и к значениям ОВ, рассчитанным по зависимости (14).

Таким образом, значения ОВ для биопрепаратов, высушенных в ампулах ШП - 5 или ШПВ - 6, можно рассчитывать, введя поправку на величину фасовки, по зависимостям (14 -16), определяющим влажность во флаконах емко-

з f-4

стью 20см . Фактор Х3 при этом рассчитывается как Х3 = ^ , при этом «

ЗР, где: Р - величина используемой фасовки в ампулы; Г - величина «эквивалентной» фасовки' во флаконы гмкостью 20 см3.

Например, при оценке ОВ для фасовки по 1 мл в ампулы ШП - 5,.необходимо вести расчет по формулам (14 - 16), увеличив значение фасовки в три раза, т.е. рассчитав «эквивалентную» фасовку во флаконы емкостью 20 см3. Результаты подтверждающих экспериментов приведены в табл.15.

При расчетах необходимо учитывать тот факт, что рассчитанные по формулам (14- 16) значения ОВ характерны для плотной структуры сухого продукта, поэтому для определения ОВ, до которой необходимо вести досушивание, следует учитывать разброс значений ОВ в серии из-за различий в макроструктуре, приведенный выше.

Рис 9. Сравнение результатов высушивания ЗС - ПЛ во флаконах емкостью 20 см3 и ампулах ШП - 5.

Таблица 15

_Экспериментальные и расчетные значения ОВ

Фасовка, мл ОВ, % Режим досушивания

ЗС во флаконы емкостью 20см3 в ампулы ШП - 5 во флаконах расчетная В ампулах опытная Температура, °с Время, ч

2,0 0,7 2,4 2,3 20 10

сж 4,0 1,3 2,5 2,6 30 5

6,0 2,0 1,0 1,0 35 15

2,0 0,7 1,7 1,8 20 10

ом 4,0 1,3 1,5 1,6 30 5

6,0 2,0 0,7 1,0 35 15

Используя разработанные нами эмпирические зависимости (14 - 16), можно оценивать текущее значение величин OB биоматериала в процессе досушивания, что весьма важно при разработке и минимизации затрат при внедрении режимов досушивания вновь создаваемых сухих биопрепаратов, корректировке регламентированных промышленных режимов при изменении фасовки, вида посуды, условий ПК.

Так, например, в опытно-промышленном производстве вакцины против НБ птиц из шт. «Ла-Сота» с ЗС - ПЛ по требованию заказчика были изменены объем фасовки с 6 мл до 2,6 мл и вид посуды - флаконы емкостью 20 см3 на флаконы емкостью 10 см3. При сохранении осьЪвного режимного параметра этапа досушивания Тд = +30°С и выполнении требования ТУ - ОВ,шх не более 4%, нами была проведена оценка необходимой длительности этапа досушивания для данных условий, (формула 14 и f ~ 1,4 F) которая составила

^расчет- 5 часов (дЛЯ ов = OBmax - ДОВ= 4 - 1,5 = 2,5%). Высушивание вакцины показало, что при длительности этапа досушивания ТдПЫТ = 7 часов

разброс величин остаточной влажности сухого биопрепарата в серии составил от 2,5% для плотной макроструктуры и 3,6% для промежуточной и пластинчатой структуры (макроструктура препарата в серии в основном промежуточная), что не более 4,0%.

Ранее для определения необходимой длительности досушивания потребовалось бы проведение опытных сушек и значительные материальные затраты.

Итак, разработанные нами эмпирические зависимости позволяют:

-разрабатывать режимы этапа досушивания вновь создаваемых сухих биопрепаратов с ЗС - ПЛ, СЖ, ОМ, а также совершенствовать существующие промышленные режимы с минимальными материальными, трудовыми и финансовыми затратами;

-оперативно вносить изменения в производственные режимы этапа досушивания при изменении требований заказчика по объему фасовки и виду посуды.

Исследования, проведенные нами по проблеме досушивания биоматериалов легли в основу раздела «Досушивание» разработанной нами «Методики расчета режимных параметров сублимационного высушивания биопрепара-I) тов».

3.5. Требования к технологической документации. Методологическая схема разработки промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов.

Признание Госстандартом России международных стандартов ИСО серии 9000 для менеджмента и обеспечения качества в виде национальных стандартов системы ГОСТ Р, а затем принятие Федеральных законов «О ветеринарии» и «О лекарственных средствах», введение в действие отраслевого стандарта (ОСТ) 42-510-98 «Правила организации производства и контроля качества лекарственных средств (GMP)» требует от отечественных

предприятий фактически полного пересмотра ранее действовавшей производственной документации и разработки принципиально новой, имеющей строгую, детально проработанную систему. Одним из главных документов этой системы является технологический регламент производства и прилагаемые к нему процедуры (инструкции, методики, спецификации и другие документы), полностью описывающие все мероприятия, выполняемые по производству готовой продукции и обеспечению ее качества с момента поставки исходного сырья до отгрузки продукции потребителю. Оценить качество проведения всего процесса консервирования биопрепарата методом сублимационной сушки, можно только определив корректность проведения каждой стадии. Для этого регламентирующая документация должна содержать в описательном или графическом виде необходимую информацию, позволяющую однозначно понять и воспроизвести рекомендованные режимы. Графическое представление режима сублимационной сушки показано на рис. 10.

Рис. 10. Контрольный график сублимационной сушки биоматериала

Для обеспечения входного и выходного контроля за качественными и количественными показателями жидкого биоматериала и сухого биопрепарата, оценки стандартности проведения каждого этапа необходима, согласно правил вМР, разработка и заполнение спецификаций на биоматериал поступающий на сушку и готовый продукт. В них должны быть отражены: основные исходные физические, биологические, технологические характеристики биоматериала, на основании которых будут рассчитываться режимные параметры этапов сублимационного высушивания, оцениваться оптимальность и правильность их осуществления по реально реализованным режимным параметрам, которые отражены в спецификации на готовый продукт; максимально допус-

т

Д

тимые значения режимных параметров, качественных и количественных характеристик готового продукта.

Разработка спецификаций будет обязывать: разработчика новых видов сухих биопрепаратов проводить необходимый комплекс исследований по разработке научно обоснованной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов; технолога цеха сушки контролировать стандартность поступающего в цех жидкого полуфабриката и качественно реализовывать рекомендуемые режимы.

Существующие до сих пор методические подходы к технологии сублимационного высушивания биопрепаратов позволяют произвести выбор приемлемых режимов только после непосредственного проведения значительного числа экспериментов и не позволяют оценить степень оптимальности темпера-турно-временных параметров этапов высушивания.

На основании проведенных в настоящей работе исследований нами предложена структурно-функциональная методологическая схема разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов, в которой отражены основные объекты, структура и критерии анализа, логика построения исследований в процессе разработки научно-обоснованных режимов сублимационного высушивания биопрепаратов и пути их совершенствования (рис.11). Разработанная схема посредством проведения научных исследований, фактически подверглась вапидации, являющейся важным разделом правил ОМР. Основными преимуществами методологической схемы и разработанных нами методик, обеспечивающих ее функционирование, является возможность предварительного расчета режимных параметров этапов сублимационного высушивания при различных технологических параметрах и прогноза ряда качественных и количественных характеристик сухих биопрепаратов до проведения процесса их изготовления. Предварительный расчет и выбор требуемого режима, обеспечивающего заданные характеристики сухого биопрепарата, позволяют значительно уменьшить трудовые, материальные и финансовые затраты при разработке режимов и их внедрении в промышленное производство.

По результатам исследований нами были разработаны и внедрены в практику производства сухих биопрепаратов: оптимальные режимы сублимационной сушки ряда противовирусных, противобактериальных и диагностических препаратов; «Методические рекомендации по разработке режимов замораживания - высушивания биологических препаратов», «Методика расчета режимных параметров сублимационной сушки биопрепаратов», монография «Теоретические и практические основы технологии сублимационного высушивания биопрепаратов». Применение в лабораторной и промышленной практике разработанных нами методических рекомендаций, методик должно способствовать: систематизации и стандартизации подходов к разработке технологии сублимационного высушивания биопрепаратов; созданию унифицированных режимов консервирования биоматериалов методом сублимации, что позволит повысить качественные, количественные и экономические показатели сухих биопрепаратов, стандартность готового продукта.

Рис.11. Принципиальная структурно-функциональная методологическая схема разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов.

Жидкий биоматериал (биообъект + защитная среда)

Основные входные критерии контроля биоматериалов

Биологические:

активность, количество живых клеток (оп-тическая.конц. и т.д.)

Физические:

температура полного замораживания, эвтектическая зона

Критерии качества технологических этапов

Технологические:

состав защитной среди, объем фасовки, вид посуды

Предметы исследований:

I этап ЗАМОРАЖИВАНИЕ

8 I

04 Р §|

и 5

Г) )Я

о

X

>> 5

Температура матеоиала

II этап СУБЛИМАЦИЯ

ж §

¡3 °

с «

5 о

¿Г

Температура материала

III этап

ДОСУШИВАНИЕ

Температура матеоиала

Остаточная влажность

Сухой биопрепарат

Основные выходные критерии контроля

I

Б|1ологические:активность,

количество живых микробных клеток, иммуногенность и др

Физические:

влажность, растворимость

Скорость за-мооаживания

Длительность этапа

Длительность этапа

Длительность этапа

Качественные

макроструктура

Средства исследований:

ш к а

0

<и ег к ч

1

К 3 Г, я

ч> Я и 5

и о> ? 1

г 1 1 •я

Экономические:

энергозатраты и ДР

4. ВЫВОДЫ

1. Определены температуры полного замораживания и эвтектические температуры большинства промышленных биопрепаратов, выпускаемых в сухом виде. Уровни температур варьируют от минус 7°С до минус 65°С, что определяет дифференцированный подход к построению режимов сублимационного высушивания биопрепаратов. Вышеназванные температуры являются исходными физическими характеристиками жидкого биоматериала как объекта последующего сублимационного высушивания, подлежащие обязательному определению для разработки научно-обоснованных режимов этапов замораживания и сублимации, а так же совершенствования существующих промышленных режимов сублимационного высушивания биопрепаратов. Определение температур полного замораживания и эвтектических температур должно служить валидационным методом оценки стандартности полупродукта, согласно закону о техническом регулировании и правилам вМР.

2. Исследованы и определены условия первичной кристаллизации жидких биоматериалов, формирующие основные виды макроструктур (макровид) сухих биопрепаратов. При значениях интенсивности теплоотвода менее 25 кап/мин формируется плотная, «мелкозернистая структура», при значениях более 11 Окап/мин - пластинчатая «ребристая» структура, при значениях от 25 до 11 Окал/мин - промежуточная макроструктура. Оценка макроструктуры сухого биопрепарата, которая будет получена в серии после сушки по результатам замораживания, позволяет предварительно оценить температур-но-временные параметры досушивания.

3. Исследована кинетика сушки биоматериалов с основными промышленными защитными средами на основе пептона, лактозы, сахарозы, желатина, обезжиренного молока. Получено уравнение общей продолжительности сушки биопрепаратов, позволяющее рассчитать временные параметры периодов сушки при различных режимных параметрах и фасовке по 6 мл во флаконы емкостью 20 см3.

4. Исследовано влияние температурно-временных режимов этапов сублимационного высушивания биопрепаратов на качество и стандартность сухих биопрепаратов при их промышленном производстве. Эти параметры должны подлежать обязательному исследованию при разработке научно обоснованной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов.

5. Показано комплексное влияние температурно-временных режимов этапа досушивания на биологические и физические показатели сухих биопрепаратов. Предложены методические подходы проведения научно-исследовательских работ по изучению вышеназванного влияния с целью разработки научно-обоснованных режимов этапа досушивания.

6. Показано, что критериями оценки качества проведения этапов сублимационного высушивания могут служить: на этапе замораживания - достижение конечной температуры материала значения температуры полного замораживания; на этапе сублимации - удаление до 90% всей влаги в зоне эвтектических температур; на этапе досушивания - достижение величины остаточной

влажности сухого биопрепарата в серии не выше заданного значения в Технических Условиях на его производство.

7. Разработаны расчетные зависимости для оценки длительности этапов замораживания, сублимации и досушивания биопрепаратов с основными промышленными защитными средами, позволяющие научно обосновать временные параметры этапов сублимационного высушивания при различных режимных и технологических параметрах, а также усовершенствовать существующие промышленные режимы сублимационного высушивания биопрепаратов с минимальными трудовыми, материальными и финансовыми затратами.

8. Предложены методики, позволяющие получить расчетные зависимости для оценки длительности этапов замораживания и сублимации при сублимационном высушивании биопрепаратов.

9. Разработаны расчетные зависимости для оценки величины остаточной влажности сухих биопрепаратов с основными промышленными защитными

. средами, позволяющие прогнозировать интервал величин остаточной влажности сухих биопрепаратов при различных режимных, технологических параметрах этапа досушивания и различной макроструктуре сухого биопрепарата, а так же оценивать текущие значения величин остаточной влажности в процессе досушивания.

10. Предложена методика получения расчетной зависимости для оценки величины остаточной влажности сухих биопрепаратов.

11. Разработаны методические рекомендации по разработке промышленных режимов сублимационного высушивания биопрепаратов, позволяющие научно обосновывать режимы этапов сублимационного высушивания биопрепаратов, что способствует повышению качественных, количественных и экономических характеристик сухих биопрепаратов, стандартности готового продукта по сериям одного, а также различных производств.

12. Предложена принципиальная структурно-функциональная методологическая схема разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов, определяющая основные объекты, структуру, предметы и критерии анализа, логику построения научных исследований в процессе разработки научно-обоснованных режимов сублимационного высушивания биопрепаратов и пути их совершенствования: способствующая систематизации и стандартизации подходов к разработке процессов сублимационного высушивания биопрепаратов.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработаны и внедрены в промышленное производство изменения и дополнения к инструкции по изготовлению и контролю вакцины против нью-каслской болезни птиц из шт. «Ла-Сота» (утверждено ГУ В Госагропромом СССР 16.04.1986).

2. Разработана и внедрена «Временная .инструкция по изготовлению и контролю сухой культурапьной вакцины против болезни Марека из шт. ФС -126 вируса герпеса индеек», (утверждено ГУВ Минсельхоза СССР 1.06.1984).

3. Разработаны:

-«Методика сушки вирусных вакцин с защитной средой на основе пептона» (утверждена директором ВНИТИБП 13.05.1987г.);

-«Методика промышленного замораживания и высушивания туберкулинов для птиц и млекопитающих» (утверждено директором ВНИТИБП 6.04.1980).

4. Разработаны и внедрены:

-«Методические рекомендации по разработке режимов замораживания-высушивания биологических препаратов» (утверждено Главбиопромом Минсельхоза СССР 1.10. 1980г., опубликованы в качестве пособия в 1981г, Профиздат, 34с.;

-«Методика расчета режимных параметров сублимационной сушки биопрепаратов» (утверждено Академик-секретарем отделения ветеринарной медицины РАСХН 28.12.2001г.).

5. Разработаны изменения и дополнения (раздел «Замораживание-высушивание») к инструкциям по * изготовлению вакцин против:-сальмонеллеза (паратифа) свиней из шт.ТС-177 (утверждено 14.12.1989 директором ВНИТИБП); сальмонеллеза водоплавающей птицы (утверждено 14.12.1989 директором ВНИТИБП);*листериоза с/х животных из шт. «АУФ» (утверждено 14.12.1989 директором ВНИТИБП).

6. Опубликована монография «Теоретические и практические основы технологии сублимационного высушивания биопрепаратов». Курск: КГСХА, 2002-239с. (Личный вклад А.А.Нежуты в научное содержание монографии составляет 60%).

6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Токарик Э.Ф., Нежута A.A., Авдеева Т.А., Ковальская Л.А. Эвтектические температуры биопрепаратов (первое сообщение) // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация,- 1976- № 4 - С. 19-22.

2. Нежута A.A., Ковальская Л.А., Авдеева Т.А. Исследование эвтектических температур и анализ режимов высушивания некоторых биопрепаратов (второе сообщение) // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация- 1977- № 1-2 - С.21-25.

3. Нежута A.A., Токарик Э.Ф., Авдеева Т.А., Скотникова Т.А., Ковальская Л.А. Исследование эвтектических температур для обоснования режимов замораживания и высушивания биологических препаратов // Сб. тезисов докладов Всесоюзного симпозиума - Киев, 1977 - С.103-104.

4. Нежута A.A., Егорова В.Н. Условия предварительного замораживания биопрепаратов // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация - 1978 - № 1.- С.8-10.

5. Нежута A.A., Токарик Э.Ф. Исследование эвтектических температур и анализ режимов высушивания биопрепаратов (третье сообщение) // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация.- 1978.-№3- С.3-6.

6. Нежута A.A., Токарик Э.Ф., Салажова В.В., Дорохин H.H. Определение условчй и интенсификация процесса замораживания туберкулинов для птиц и млекопитающих // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация.- 1979,- № 7-С.3-5.

7. Нежута A.A., Токарик Э.Ф., Фролов Ю.Д., Гринев A.A. и др. Интенсификация процесса высушивания туберкулинов для птиц и млекопитающих // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация,- 1979.-№ 8 - С.6-9.

8. Нежута A.A. Анализ технологических возможностей современного промышленного холодильного и сублимационного оборудования // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация - 1980 - № 6 - С.23 - 27.

9. Звягин И.В., Токарик Э.Ф., Нежута A.A. Вопросы унификации и экспериментальное обоснование режимов сублимационного высушивания биопрепаратов // Микробиологическая промышленность. РЖ - 1981,- № 78-Q.21.

10. Звягин И.В., Токарик Э.Ф., А Нежута A.A., Гришин М.А. Методические подходы к разработке типовой технологии сублимационного высушивания биологических препаратов // Сб. тезисов докладов Всесоюзной научно-технической конференции, Киев, 10-12 июня, 1981,- Чернигов, 1981-С.157-158.

11. Звягин И.В., Хорьков И.А., Токарик Э.Ф., Нежута A.A., Скотникова Т.А., Ковальская JI.A.. Методические рекомендации по разработке режимов замораживания-высушивания биологических препаратов- М.: Профиздат, 1981.-34с.

12. Звягин И.В., Токарик Э.Ф., Нежута A.A. Основные этапы разработки типовой технологии сублимационного высушивания биологических препаратов // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов: Сб. тезисов второй Всесоюзной конференции, Москва, 19-21 ноября, 1981-М., 1981,-С.112-114.

13. Пушкарь Н.С., Моисеев В.А., Зинченко А.В.,Зинченко В.Д., Токарик Э.Ф., Нежута A.A. Устройство для контроля теплового потока. Авторское свидетельство №1018485 (СССР) приор, от 22.10.1980. ДСП.

14. Нежута A.A., Гришин М.А. Исследование кинетики сушки биопрепаратов // Сушка и грануляция продуктов микробиологического синтеза: Тезисы докладов республиканской научной конференции, Тамбов, 25-26 июня, 1981,-Тамбов, 1981.-С.55-56.

15. Нежута A.A. Экспериментальное обоснование и совершенствование промышленных режимов сублимационной сушки биопрепаратов: Автореф. дисс. канд. технических наук - М, 1981- 21 с.

16. Ковальская Л.А., Токарик Э.Ф., Скотникова Т.А., Нежута A.A. Эффективность новой защитной среды для сухой вирус-вакцины против болезни Ньюкасла // Разработка, апробация и государственный контроль ветеринарных препаратов: Тезисы докл. Всесоюзной конференции - М.: ВГНКИ, 1982.

17. Токарик Э.Ф., Звягин И.В., Скотникова Т.А., Нежута A.A. Повышение стабильности биологической активности и иммуногенности сухой вирус -вакцины против Ньюкаслской болезни птиц из лентогенных штаммов // Тезисы докладов на Всесоюзной конференции, Москва, 20 ноября, 1982 - М.: ВИЭВ, 1982.

18. Слепенко Т.Б., Нежута A.A. и др. Изучение термостабильности различных вариантов вируса герпеса индеек // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация.- 1983-№ 2,- С.12-15.

19. Нежута A.A., Гришин М.А., Маслак A.A. Исследование кинетики сублимационной сушки биоматериалов (первое сообщение) // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация.- 1983.-№ 4 - С.10-15.

20. Нежута A.A., Павлов В.А. Исследование кинетики сублимационной сушки биоматериалов (второе сообщение) // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация - 1983-№ 5 - С.17-20.

21. Алкеев Н.В., Рубан Е.А. Нежута A.A. Емкостной датчик влажности биологических препаратов в процессе сублимационной сушки. Авторское свидетельство № 1137892 приор, от 28.10.1983.

22. Нежута A.A., Егорова В.Н., Токарик Э.Ф., Маслак A.A. Исследование процесса распылительного высушивания защитной среды на основе пептона // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация - 1984.-№ 3-4.-С.20-23.

23. Гришин М.А., Рубан Е.А., Токарик Э.Ф., Алкеев Н.В., Нежута A.A. Влияние влажности на диэлектрические параметры пищевых сред // Известия вузов. Пищевая технология - 1984-№ 5-С.88-90.

24. Токарик Э.Ф., Ковальская Л.А., Скотникова Т.А., Нежута A.A., Кузнецова C.B. «Защитная среда для приготовления сухой вирусной вакцины. Авторское свидетельство № 1212045(СССР) приор, от 24.01.1984, ДСП.

25. Нежута A.A., Токарик Э.Ф., Маслак A.A., Гришин М.А. Некоторые вопросы кинетики сублимационной сушки биоматериалов // Механизмы крио-повреждений и криозащиты биологических объектов: Сборник тезисов 2-й Всесоюзной конференции.-Т.2, Харьков, 9-11 октября, 1984- Харьков, 1984.-С.208.

26. Пушкарь Н.С., Моисеев В.А., Зинченко A.B., Зинченко В.Д., Токарик Э.Ф., Фролов Ю.Д., Нежута A.A. Измеритель теплового потока. A.c. № 1204007 (СССР), 1984.

27. Алкеев Н.В., Рубан Е.А., Нежута A.A., Соловей A.B. Исследование возможности определения количества жидкой фазы в замороженных биопрепаратах // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация,- 1985.-№ 4,- С.6-9.

28. Алкеев Н.В., Адамович И.И., Нежута A.A., Соловей A.B. Емкостной датчик для контроля процесса сублимационной сушки биологических препаратов. A.c. № 3990745/25 от 17 июня 1986.

29. Нежута A.A., Токарик Э.Ф., Маслак A.A., Маслов Г.Ю. Исследование процесса сублимационной сушки биоматериалов с защитной средой на основе пептона // Процессы и аппараты для микробиологических производств-4.2: Тезисы докладов Всесоюзной конференции «Биотехника - 86», Грозный, 1-3 июля, 1986-Грозный, 1986.-С.50-51.

30. Токарик Э.Ф., Звягин И.В., Скотникова Т.А., Ковальская J1.A., Фролов Ю.Д, Нежута A.A., Скичко Н.Д. Повышение стабильности биологической активности и иммуногенности сухой вирусвакцины против ньюкаслской болезни птиц из лентогенных штаммов // Проблемы ветеринарной иммунологии: Сб. трудов ВИЭВ.-М., 1986.-С.172-174.

31. Нежута A.A., Егорова В.Н. Некоторые аспекты развития техники сушки // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация - 1986-№ 5.- С.4-8.

32. Нежута A.A., Маслов Г.Ю., Зинченко В.Д. Применение датчика тепловых потоков в технике сублимационной сушки // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация.- 1987- № 5 - С.3-6.

33. Нежута A.A., Маслов Г.Ю., Егорова В.Н. Методические подходы к разработке типовых режимов сублимационной сушки биопрепаратов // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация - 1987.-№ 6 - С. 1-6.

34. Маслак A.A., Ковальская J1.A., Александрова М.А. Нежута A.A., и др. Учет неоднородности экспериментального материала при исследовании влияния состава защитной среды на жизнеспособность пастерелл после сушки // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация - 1987.-№ 7,- С.1-5.

35. Фогель В.Р., Котельников А.И., Лихтенштейн Г.И., Панферов В.В., Нежута A.A. Способ определения влажности биологических веществ и устройство для его реализации. A.c. № 4122392,1987.

36. Нежута A.A., Маслов Г.Ю. Использование датчика тепловых потоков для сравнительной оценки интенсивности удаления влаги из материалов при сублимации // Тезисы 3-ей Всесоюзной конференции, Москва, 21-23 октября, 1987-М.,1987 - С.264.

37. Нежута A.A., Маслов Г.Ю., Зинченко В.Д. Определение момента форсированного перехода на фазу досушивания при сублимационнй сушке биопре-

паратов с помощью датчика тепловых потоков: Тезисы 3-ей Всесоюзной конференции, Москва, 21-23 октября, 1987 - М., 1987 - С.263.

38.Нежута A.A., Панферов В.В., Сербис Е.С. Определение вакуума во флаконах // Тезисы докладов III Всесоюзной конференции, Москва, 21-23 октября, 1987.-М., 1997.-С.265.

39.Токарик Э.Ф., Скотникова Т.А., Нежута A.A., Ковальская JI.A., Панферов В.В., Блехерман Б.Е., Константинов В.М., Лихтенштейн Г.И., Кочетков

B.В., Зинченко В.Д. Теоретические предпосылки и методические подходы к стабилизации активности биологических препаратов // Тезисы 3-ей Всесоюзной конференции, Москва, 21-23 октября, 1987.-М., 1987-С. 165-167.

40.Панферов В.В., Кочетков И.В., Фогель В.Р., Ковальская Л.А., Токарик Э.Ф., Нежута A.A. Использование физических меток в разработке технологии производства биопрепаратов // Методы получения и анализа биологических препаратов: Сб. тезисов 5-й Всесоюзной конференции, Рига, 26-28 октября, 1987.-Рига, 1987.

41.Токарик Э.Ф., Ковальская Л.А., Скотникова Т.А., Нежута A.A., Константинов В.М. Принципы методического подхода к конструированию защитных сред для вирусных вакцин // Свободные радикалы и биостабилизаторы: Сб. тезисов Г-го Болгаро-Советского симпозиума, София, 23-26 ноября, 1987.-София, 1987.-С.138.

42.Ярцев М.Я., Токарик Э.Ф., Скотникова Т.А., Нежута A.A. и др. Способ изготовления вакцины против пастереллеза птиц. A.c. № 156533, 1989.

43.Сербис Е.С., Нежута A.A., Анисимова Л.В., Абабков С.М. Исследование влияния режимов досушивания на биологические свойства биоматериалов (1 сообщение) // Разработка технологических процессов изготовления биопрепаратов для профилактики и диагностики болезней сельскохозяйственных животных: Сб. научных трудов ВНИиТИБП.- М., 1991.- С.82-92.

44.Нежута A.A., Маслов Г.Ю., Белякова О.С. Влияние режимных параметров сушки на интенсивность удаления свободной влаги при сублимационном высушивании биопрепаратов // Разработка технологических процессов изготовления биопрепаратов для профилактики и диагностики болезней сельско-хозяйственных животных: Сб. трудов ВНИиТИБП,- М., 1991-

C.92-98.

45.Сербис Е.С., Нежута A.A., Измайлова Н.К. Исследование влияния режимов досушивания на биологические свойства биоматериалов (II сообщение) // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов: Тезисы докладов 5-ой Всероссийской конференции, Щелково, 14-17 мая, 1996-Щёлково, 1996.-С.229-230.

46.Сербис Е.С., Нежута A.A. Некоторые аспекты использования ампул и флаконов при сублимационной сушке // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов: Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции,

»

посвященной 70-летию со дня рождения профессора - В.А. Першина, Щёлково, 14 июля, 1997.-Щелково, 1998,-С.44.

47.Раевский A.A., Ярцев М.Я., Анисимова JI.B., Нежута A.A., Сербис Е.С., Ситьков В.И., Заерко В.П., Калменский И.И., Жаренко Л.Ю. Получение сухих вакцин против пастереллеза птиц непрерывным способом // Ветеринария -№ 3,- М.: Колос, 1999- С.24-25.

48.Нежута A.A., Сербис Е.С., Ярцев М.Я. Перспективы разработки и усовершенствования технологии сублимационной сушки биопрепаратов // Аграрная наука.- №4 - 1999 - С.26.

49.Нежута A.A., Сербис Е.С. Оптимизация этапа досушивания вакцины против листериоза сельскохозяйственных животных из шт. АУФ // Листериоз на рубеже тысячелетий: Материалы междунар. симп., Покров, 18-20 мая,

1999,- Покров, 1999.- С.114-115.

50.Нежута A.A., Сербис Е.С. Расчет длительности этапов сушки при разработке и усовершенствовании режимов сублимационного высушивания биопрепаратов (1 сообщение) // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов: Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 30-летию ВНИТИБП, Щёлково, 8-9 июня, 2000.- Щелково, 2000,- С.320.

51.Соловьев Б.В., Слепенко Т.Б., Нежута A.A., Гетман Е.В, Сербис Е.С. Влияние состава защитной среды на активность вируса ИББ (шт. БИ-92) после лиофилизации и в процессе хранения при различных температурных режимах // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов: Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 30-летию ВНИТИБП, Щёлково, 8-9 июня,

2000,- Щелково, 2000,- С.26.

52.Сербис Е.С., Нежута A.A. Определение величины остаточной влажности вакцины против листериоза сельскохозяйственных животных при различных температурно-временных параметрах досушивания // Нейроинфекции: бешенство, губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота, Крейтцфелдта-якоба и другие прионные болезни; листериоз, болезнь Ауэски, болезнь Тешена: Материалы Международной научно-практической конференции, Покров, 30-31 мая, 2001,- Покров, 2001- С.150-151.

53.Нежута A.A., Сербис Е.С. Разработка научно-обоснованных режимов сублимационной сушки биопрепаратов // Биотехнология — 2001- № 6-С. 12-22.

54.Сербис Е.С., Нежута A.A., Самуйленко А.Я., Еремец В.И., Скотникова Т.А. Взаимосвязь некоторых показателей качества биопрепаратов, высушенных методом сублимационной сушки // Вестник Академии сельскохозяйственных наук - 2002 - №4 - С.65 -66.

55.Нежута A.A. Разработка расчетной зависимости для оценки длительности этапа замораживания биоматериалов // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук- 2003-№2.-С.80 -83.

56.Нежута A.A., Токарик Э.Ф., Самуйленко А.Я., Безгин В.М., Сербис Е.С. Теоретические и практические основы технологии сублимационного высушивания биопрепаратов - Курск: КГСХА, 2002 - 239с.

57.Нежута A.A., Сербис Е.С. Методологические подходы к разработке и совершенствованию промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов// Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов // Материалы международной научно-практической конференции. - 2003. Щелково - С.156 - 159.

58.Нежута A.A., Сербис Е.С. Методические основы разработки промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов// Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов // Материалы международной научно-практической конференции. - 2003. Щелково - С. 159 - 162.

1 126 9 0

2 ооЗ-Д

Огпечатано в ООО «Мещера» г Щелково. М О , Пролетарский пр-т. 11 Лиц № 000972 от 31 01 2000г Формат 60x80/16 Уел печ л 3.2 Тираж ЮОэкз Заказ №757

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Нежута, Александр Александрович

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1. Замораживание биоматериалов.

2.2. Сублимация биоматериапов.

2.3. Досушивание биоматериалов.

2.4. Кинетика сушки.

2.5. Практика разработки режимов сублимационного высушивания и анализ промышленных процессов производства сухих биопрепаратов.

3. Материалы и методы.

4. Собственные исследования.

4.1. Исследования эвтектических температур промышленных биоматериалов.

4.2. Этап замораживания биоматериалов.

4.2.1. Влияние глубины замораживания на качественные характеристики сухих биопрепаратов.

4.2.2. Исследование влияния условий охлаждения на формирование макроструктуры биоматериалов.

4.3. Этап сублимации биоматериалов.

4.3.1. Исследование влияния температуры материала при сублимации на биологические и качественные характеристики сухих биопрепаратов.

4.3.2. Исследование кинетики сушки биоматериалов. Разработка методики и расчетной зависимости для оценки длительности этапа сублимации.

4.4. Этап досушивания биоматериалов.

4.4.1. Исследование влияния температурно-временных режимов досушивания на качественные и количественные характеристики сухих биопрепаратов.

4.4.2. Разработка методики и расчетной зависимости для оценки величины остаточной влажности сухих биопрепаратов.

4.5. Требования к технологической документации. Методологическая схема разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов.

5. Обсуждение.

6. Выводы.

7. Практические'предложения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Научное обоснование и методика разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов"

1.1.Актуальность темы. Проблема стабилизации биологических материалов ввиду их лабильности возникла одновременно с развитием биологической науки. История развития методов консервирования биологических структур берет свое начало от открытия W.Preyer,1873 явления оживления замороженных и сухих животных и микроскопических существ. Работы T.Needham, 1743; M.Doyere, 1842; C.Schultze, 1915; JT. Лоза-Лозинского, 1935; М.Покровской,I960 и др. по выявлению необходимых условий замораживания, восстановления, хранения на последующее «оживление» живых существ и микроорганизмов явились первыми этапами в разработке техники и технологии высушивания биоструктур. Применение в ветеринарной практике препаратов биологической природы - вакцин, лечебных сывороток, диагностических, гормональных и других препаратов связано с необходимостью сохранения их активности до момента реализации. Одним из традиционных методов, используемых для этих целей, является охлаждение и высушивание. В обоих случаях создаются условия, при которых обменные реакции и процессы жизнедеятельности замедляются или полностью прекращаются. Метод консервирования биоматериалов, сочетающий в себе замораживание и высушивание в вакууме является в настоящее время наиболее перспективным и удобным для практических целей. Этот метод получил название сублимационного высушивания. Успешное применение сублимационного высушивания в биологической промышленности стало возможным благодаря теоретическим и экспериментальным разработкам А.Лыкова, А.Гинсбурга, Э.Каухчешвили, С.Колесова, Г.Филоненко, М.Гришина, Б.Чижова, Е.Никитина, Э.Гуйго, М.Вербы, E.Flosdorf, L.Rey, R.Harris, R.Greif и многих других. Выполненные ими исследования позволили получить данные о механизмах внешнего и внутреннего тепло - и массообмена при сублимационной сушке, описать процессы, происходящие при сублимации влаги и ее конденсации в условиях вакуума, определить предпосылки для выбора рациональных схем холодильных установок и сублиматоров. Определены основные этапы метода сублимационного высушивания, их значимые режимные и технологические параметры, влияющие на качественные, количественные и экономические показатели сухих биопрепаратов.

Со времени организации в 1956 году на Щелковском биокомбинате первого в стране специализированного цеха по производству сухих биопрепаратов по 1975 год было внедрено более 50 различных сухих биопрепаратов. Процессы их изготовления разрабатывались различными авторами, имевшими свои взгляды и подходы на решение проблем создания сухого биопрепарата, а также методы и средства их реализации. Данная ситуация приводила к значительному разнообразию режимов сублимационного высушивания биопрепаратов даже одного вида, которому способствовали различия в описании содержательной части рекомендуемых режимов, в большинстве своем не корректных, не информативных для однозначного их прочтения и воспроизводства в промышленных условиях.

Существовавшая в те годы недостаточная теоретическая и экспериментальная база по проблемам производства сухих биопрепаратов, несовершенство холодильного и сублимационного оборудования и их весьма ' ограниченные технологические возможности, а также отсутствие простых, доступных в широкой практике методик оценки режимных параметров предопределили основу концепции методологических и методических подходов к разработке и внедрению режимов сублимационного высушивания биопрепаратов - это опытная разработка режимных параметров путем простого подбора температур материала и длительностей этапов. Безусловно, это не могло не отразится на степени научной обоснованности режимов сублимационного высушивания биопрепаратов, качественных, количественных и экономических показателях готовой продукции, их стандартности.

Исторически сложившаяся невалидированная методическая схема разработки процессов сублимационного высушивания биопрепаратов, существующая до сих пор, имеет ряд существенных недостатков и не соответствует современным требованиям, предъявляемым к производству качественной и стандартной продукции согласно правилам GMP.

В 70-80х годах качественные изменения претерпела техническая оснащенность научно-исследовательских лабораторий и биопредприятий. Произошло техническое перевооружение биологической промышленности в области замораживания и высушивания биопрепаратов. Благодаря успехам в области создания холодильной и вакуумной техники расширены технические и технологические возможности промышленного холодильного и сублимационного оборудования.

Был накоплен опыт сублимационной сушки биоматериалов, основанный на данных новых фундаментальных наук, таких как криобиология, криохимия, учитывающий результаты исследований роли воды в биологических системах. Данные этих наук дали новые сведения о природе повреждений, происходящих в биологических системах в условиях гипотермии, низких температур и при обезвоживании; позволили определить основные параметры технологии консервирования биоматериалов замораживанием и обезвоживанием, лимитирующие качественные показатели сухих биопрепаратов. Это позволило более обоснованно подходить к вопросам разработки и реализации в промышленных условиях режимов замораживания и сушки биоматериалов.

Значительно расширилась номенклатура выпускаемых в сухом виде биопрепаратов, обладавших различными физико-химическими, технологическими и биологическими характеристиками, что требовало пересмотра существовавших технологий и разработки новых видов сухих препаратов с позиций единых научно обоснованных методических подходов и требований к разработке процессов сублимационного высушивания биопрепаратов.

• s

Актуальность решения данной проблемы была признана на официальном уровне и нашла свое отражение в формулировке Государственного задания 11.04 темы 09 «Разработать научные основы стабилизации биологических препаратов и усовершенствовать существующие способы их консервирования», и, в частности, в разделе 09.01. «Разработать научно обоснованную технологическую схему высушивания биопрепаратов», к выполнению которого мы приступили в 1976 году. (Р.к. №76061937 от 7.07.76г.; Ин.№ Б 972827 от 11.08.81).

Кроме того, актуальность выполнения данной работы определена новыми отношениями и взглядами на качество продукции, определенными в законе о техническом регулировании; обязательным внедрением на предприятиях биологической промышленности правил GMP и обеспечением конкурентоспособности продукции, в связи с предстоящим вступлением в ВТО.

Весь комплекс научных и экспериментальных работ по данной теме проводился нами в течение 1976 -^2002 годов согласно тематическим планам НИР института, утвержденным вышестоящими организациями (1990 — 96гг. Рк №01.9.60001525 Ин.№ 02.960.07220; 1996 - 2000гг. Рк№ 01.6.960010217 Ин.№ 02.2.01.02998; 2000 - 2001гг. Рк№ 01.200.1126885 Ин.№ 02.200200861).

1.2.Цель и задачи исследований. Цель исследований — научное обоснование и методика разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

• исследовать:

• физические характеристики жидких биоматериалов как объектов сушки;

- влияние условий первичной кристаллизации жидких биоматериалов на формирование макроструктуры (макровида) сухих биопрепаратов;

- кинетику сушки биоматериалов с основными промышленными защитными средами на основе пептона, лактозы, сахарозы, желатины и обезжиренного молока;

- влияние температурно-временных режимов этапов сублимационного высушивания на качество сухих биопрепаратов;

• разработать:

- методики и расчетные зависимости для оценки длительности этапов замораживания, сублимации и досушивания при различных режимных и технологических параметрах сублимационного высушивания биопрепаратов;

- методику и расчетные зависимости для оценки величины остаточной влажности биопрепаратов при различных режимных и технологических параметрах досушивания;

• на базе анализа теоретических и экспериментальных работ, а так же собственных исследований разработать принципиальную структурно-функциональную методологическую схему разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов.

1.3. Научная новизна.

Впервые в практике производства сухих биопрепаратов:

-определены физические характеристики жидких биоматериалов, как объектов сушки - температура полного замораживания, эвтектические температуры биоматериалов;

-определены условия первичной кристаллизации биоматериалов, формирующие основные виды макроструктур сухих биопрепаратов, получаемые в условиях их промышленного производства;

-изучена кинетика процесса сублимационной сушки биоматериалов с основными промышленными защитными средами и получено уравнение для расчета общей продолжительности процесса сублимационной сушки биопрепаратов;

-показано комплексное влияние температурно-временных параметров этапа досушивания на биологические показатели сухих биопрепаратов как непосредственно после сушки, так и в процессе хранения;

-разработаны методики и расчетные зависимости оценки длительности этапов замораживания, сублимации и досушивания биоматериалов в условиях их промышленного производства;

-разработаны методика и расчетные зависимости оценки величины остаточной влажности биопрепаратов при различных режимных и технологических параметрах досушивания;

-предложена принципиальная структурно-функциональная методологическая схема разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов. 1.4. Практическая значимость

1.4.1. Определены значения температур полного замораживания и эвтектические температуры биоматериалов, позволяющие обосновать и рассчитать температурно-временные режимы этапов замораживания и сублимации биоматериалов в промышленных условиях и определить пути их совершенствования.

1.4.2. Определены условия первичной кристаллизации биоматериалов, при которых формируются основные виды макроструктур (макровида) сухих биопрепаратов, позволяющие сделать предварительную оценку режимов досушивания для достижения требуемого уровня остаточной влажности в серии готового продукта.

1.4.3. Разработаны методики, позволяющие получить расчетные зависимости для оценки длительности этапов сублимационного высушивания биопрепаратов при различных режимных и технологических параметрах.

1.4.4. Разработаны расчетные зависимости, позволяющие оценить длительность этапов замораживания, сублимации и высушивания биоматериалов при различных температурах материала и технологических параметрах при разработке новых биопрепаратов и совершенствовании существующих промышленных режимов производства сухих биопрепратов.

1.4.5. Разработана методика, позволяющая получить расчетные зависимости для оценки величины остаточной влажности сухих биопрепаратов.

1.4.6. Разработана расчетная зависимость для оценки величины остаточной влажности для биопрепаратов с традиционными защитными средами, с помощью которой можно не только оценить интервал значений влажности сухого материала, который будет получен при досушивании с заданной температурой материала и определенной длительностью ее поддержания, но и оценивать величину остаточной влажности в течение процесса досушивания.

1.4.7. Разработаны температурно-временные параметры этапа досушивания, которые включены в разделы «Замораживание и высушивание» в действующие НТД по изготовлению противобактериальных вакцин против: сальмонеллеза (паратифа) свиней из шт. ТС-177; сальмонеллеза водоплавающей птицы; листериоза с/х животных из шт. «АУФ».

1.4.8. Разработаны и внедрены в промышленное производство научно обоснованные режимы замораживания и высушивания, включенные в состав регламентирующих документов на изготовление сухой вакцины против ньюкаслской болезни птиц из шт. «Ла-Сота» с защитной средой на основе пептона, сухой культуральной вакцины против болезни Марека из шт. ФС — 126 вируса герпеса индеек.

1.5. Основные положения диссертационной работы, которые выносятся на защиту.

1. Температура полного замораживания и эвтектические температуры, являются основными физическими характеристиками жидких биоматериалов, как объектов сушки, подлежащие обязательному исследованию с целью разработки научно-обоснованных режимов сублимационного высушивания биопрепаратов их совершенствования и стандартизации.

2. Определение условий первичной кристаллизации биоматериалов при замораживании позволяет оценить вид макроструктуры, который будет получен после последующего высушивания, что позволит предварительно разработать режимные параметры досушивания, необходимые для обеспечения требуемой величины остаточной влажности сухого биопрепарата.

3. Температурно-временные режимы этапа досушивания оказывают сложное комплексное влияние на биологические и количественные характеристики сухого биопрепарата, имеющее свою специфику для каждого препарата и являются предметом исследований для научного обоснования режимов досушивания биоматериалов.

4. Методики оценки длительности этапов сублимационного высушивания биопреператов позволяют разработать эмпирические зависимости для расчета длительности этапов замораживания, сублимации, досушивания при различных режимных и технологических параметрах. Расчетные зависимости позволяют научно обосновать и усовершенствовать существующие промышленные режимы сублимационного высушивания биопрепаратов с минимальными материальными, трудовыми и финансовыми затратами.

5. Методика оценки величины остаточной влажности позволяет разработать эмпирические зависимости для расчета режимов досушивания.

Расчетные зависимости дают возможность оценить как текущее значение остаточной влажности препарата в процессе досушивания, так и прогнозировать влажность готового продукта при различных режимных и технологических параметрах.

6. Методические рекомендации по разработке процессов сублимационного высушивания являются необходимыми и достаточными для разра ботки научно-обоснованных режимов сублимационной сушки биопрепаратов.

7. Предложенная структурно-функциональная методологическая схема разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов позволяет: определить основные объекты, структуру и последовательность исследований, предметы анализа при разработке процессов сублимационного высушивания биопрепаратов и их совершенствовании; систематизировать и стандартизировать подходы к разработке режимов сублимационного высушивания биопрепаратов.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Нежута, Александр Александрович

6. ВЫВОДЫ

1. Определены температуры полного замораживания и эвтектические температуры большинства промышленных биопрепаратов, выпускаемых в сухом виде. Уровни температур варьируют от минус 7°С до минус 65°С, что определяет дифференцированный подход к построению режимов сублимационного высушивания биопрепаратов. Вышеназванные температуры являются исходными физическими характеристиками жидкого биоматериала как объекта последующего сублимационного высушивания, подлежащие обязательному определению для разработки научно-обоснованных режимов этапов замораживания и сублимации, а так же совершенствования существующих промышленных режимов сублимационного высушивания биопрепаратов. Определение температур полного замораживания и эвтектических температур должно служить валида-ционным методом оценки стандартности полупродукта, согласно закону о техническом регулировании и правилам GMP.

2. Исследованы и определены условия первичной кристаллизации жидких биоматериалов, формирующие основные виды макроструктур (макро-вид) сухих биопрепаратов. При значениях интенсивности теплоотвода менее 25 кал/мин формируется плотная, «мелкозернистая структура», при значениях более 11 Окал/мин - пластинчатая «ребристая» структура, при значениях от 25 до 11 Окал/мин - промежуточная макроструктура. Оценка макроструктуры сухого биопрепарата, которая будет получена в серии после сушки по результатам замораживания, позволяет предварительно оценить температурно-временные параметры досушивания.

3. Исследована кинетика сушки биоматериалов с основными промышленными защитными средами на основе пептона, лактозы, сахарозы, желатина, обезжиренного молока. Получено уравнение общей продолжительности сушки биопрепаратов, позволяющее рассчитать временные параметры периодов сушки при различных режимных параметрах и фасовке по 6 мл во флаконы емкостью 20 см3.

4. Исследовано влияние температурно-временных режимов этапов сублимационного высушивания биопрепаратов на качество и стандартность сухих биопрепаратов при их промышленном производстве. Эти параметры должны подлежать обязательному исследованию при разработке научно обоснованной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов.

5. Показано комплексное влияние температурно-временных режимов этапа досушивания на биологические и физические показатели сухих биопрепаратов. Предложены методические подходы проведения научно-исследовательских работ по изучению вышеназванного влияния с целью разработки научно-обоснованных режимов этапа досушивания.

6. Показано, что критериями оценки качества проведения этапов сублимационного высушивания могут служить: на этапе замораживания - достижение конечной температуры материала значения температуры полного замораживания; на этапе сублимации - удаление до 90% всей влаги в зоне эвтектических температур; на этапе досушивания - достижение величины остаточной влажности сухого биопрепарата в серии не выше заданного значения в Технических Условиях на его производство.

7. Разработаны расчетные зависимости для оценки длительности этапов замораживания, сублимации и досушивания биопрепаратов с основными промышленными защитными средами, позволяющие научно обосновать временные параметры этапов сублимационного высушивания при различных режимных и технологических параметрах, а также усовершенствовать существующие промышленные режимы сублимационного высушивания биопрепаратов с минимальными трудовыми, материальными и финансовыми затратами.

8. Предложены методики, позволяющие получить расчетные зависимости для оценки длительности этапов замораживания и сублимации при сублимационном высушивании биопрепаратов.

9. Разработаны расчетные зависимости для оценки величины остаточной влажности сухих биопрепаратов с основными промышленными защитными средами, позволяющие прогнозировать интервал величин остаточной влажности сухих биопрепаратов при различных режимных, технологических параметрах этапа досушивания и различной макроструктуре сухого биопрепарата, а так же оценивать текущие значения величин остаточной влажности в процессе досушивания.

10. Предложена методика получения расчетной зависимости для оценки величины остаточной влажности сухих биопрепаратов.

11. Разработаны методические рекомендации по разработке промышленных режимов сублимационного высушивания биопрепаратов, позволяющие научно обосновывать режимы этапов сублимационного высушивания биопрепаратов, что способствует повышению качественных, количественных и экономических характеристик сухих биопрепаратов, стандартности готового продукта по сериям одного, а также различных производств.

12. Предложена принципиальная структурно-функциональная методологическая схема разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов, определяющая основные объекты, структуру, предметы и критерии анализа, логику построения научных исследований в процессе разработки научно-обоснованных режимов сублимационного высушивания биопрепаратов и пути их совершенствования; способствующая систематизации и стандартизации подходов к разработке процессов сублимационного высушивания биопрепаратов.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработаны и внедрены в промышленное производство изменения и дополнения к инструкции по изготовлению и контролю вакцины против ньюкаслской болезни птиц из шт. «Ла-Сота» (утверждено ГУВ Госагро-промом СССР 16.04.1986).

2. Разработана и внедрена «Временная инструкция по изготовлению и контролю сухой культуральной вакцины против болезни Марека из шт. ФС -126 вируса герпеса индеек», (утверждено ГУВ Минсельхоза СССР 1.06.1984).

3. Разработаны: «Методика сушки вирусных вакцин с защитной средой на основе пептона» (утверждено директором ВНИТИБП 13.05.1987г.); «Методика промышленного замораживания и высушивания туберкулинов для птиц и млекопитающих» (утверждено директором ВНИТИБП 6.04.1980).

4. Разработаны и внедрены: «Методические рекомендации по разработке режимов замораживания-высушивания биологических препаратов» (утверждено Главбиопромом Минсельхоза СССР 1.10. 1980г.), опубликованы в качестве пособия в 1981 г, Профиздат, 34с.; «Методика расчета режимных параметров сублимационной сушки биопрепаратов» (утверждено Академик-секретарем отделения ветеринарной медицины РАСХН 28.12.2001г.).

5. Разработаны изменения и дополнения (раздел «Замораживание-высушивание») к инструкциям по изготовлению вакцин против:-сальмонеллеза (паратифа) свиней из шт.ТС-177 (утверждено 14.12.1989 директором ВНИТИБП); сальмонеллеза водоплавающей птицы (утверждено 14.12.1989 директором ВНИТИБП); листериоза с/х животных из шт. «АУФ» (утверждено 14.12.1989 директором ВНИТИБП).

6. Опубликована монография «Теоретические и практические основы технологии сублимационного высушивания биопрепаратов». Курск: КГСХА, 2002.-239с.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Нежута, Александр Александрович, Щелково

1. Абатуров JI.B., Лебедев Ю.О., Носова Н.Г. Динамическая структура глобулярных белков: конформационная жесткость и глобулярная подвижность// Молекулярная биология.— 1983-Т.17, Вып.З — с.543-568.

2. Абатуров Л.В., Молчанова Т.П. Динамическая структура белков по данным водородного обмена и протеолитической деградации // Равновесная динамика нативной структуры белка. — Пущино, 1977. С. 5-25.

3. Адлер Ю.П., Маркова Е.В., Грановский Ю.В. Планирование эксперимента при поиске оптимальных условий. Наука, 1976. — С.280.

4. Аксенов С.И. Влияние низкой влажности на биологичекие структуры. В кн.: «Экспериментальный анабиоз». Тезисы II Всесоюзной конференции по анабиозу — Рига, 1984 — с.6.

5. Аксенов С.И. Состояние воды в биологических объектах. Связанная вода в дисперсных системах. — М.: МГУ, 1980. С.46-74

6. Аксенов С.И. Состояние воды и ее роль в динамике биологических структур: Автореф. Дис.д-ра физ.-мат.наук. М.,1979.- С.38. - Шифр 01.04.14.

7. Александров В .Я. Клетки, макромолекулы и температура. — Л.: Наука, 1975.-С.239.

8. Андроникашвили Э.В., Мревлишвили Г.М., Привалов П.Л. Калориметрическое исследование состояния тканевой воды // Состояние и роль воды в биологических объектах. — М.: Наука, 1967. С.92-95.

9. Ю.Арапов В.М. Методика расчета продолжительности сушильного процесса // Материалы XXXV отчетной научной конференции за 1996 год, Ч.2.-Воронеж, 1997.-с.35.

10. Мослакова B.C. Сроки иммуногенной активности сухой культуральной ви-русвакцины ВГНКИ против болезни Ауэски // Сб. Научн.трудов/ ВГНКИ вет. препаратов, М. 1975. - Т.22.-С.26-29.

11. Балинер Л. М. Разработка биолюминесцентного метода определения количества живых бактерий в лиофилизированных вакцинах; авторе

12. Ф ферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологическихнаук, Москва — 2003,24с.

13. Батунер Л.М., Позин М.Е. Математические методы в химической технике. Изд. 6-еиспр-Л.: Химия, 1971.-с. 153-206.

14. Безгин В.М. В.М., Козлов В.Е., Шевырев Н.С., Ничвеева Л.Д. «Влияние солевого состава очищенного (ТТГТД) туберкулина для млекопитающих на растворимость белков после сублимации» Тезисы докладовтнаучно-производственной конференции.-Курск.-1996.

15. Безгин В.М. Промышленная технология производства биологических препаратов для диагностики туберкулеза и лейкоза круп. ного рогатого скота. — Дисс. . .докт. биол. наук. Курск, 1999.- 280с.

16. Белоус A.M., Бондаренко В.А. Структурные изменения био-ф мембран при охлаждении. Киев: Наукова Думка, 1982. - С.400.

17. Белоус A.M., Бондаренко В.А., Бондаренко Т.П. Молекулярные механизмы криоповреждений мембран// Итоги науки и техн. ВИНИТИ АН СССР. Сер. Биофиз. 1979. - вып. 9. - С. 80-114.

18. Белоус A.M., Шраго М.И., Пушкарь Н.С. Криоконсерванты. -щ Киев: Наукова Думка, 1979. С. 198.

19. Бичурина М.А., Разаева Н.Р., Ишкильдин Н.Н., Дейярев А.А. Поливинилпирролидон как стимулятор иммуногенной автивностиинактивированной гриппозной вакцины// Сб научн.трудов Ленингр. НИИ эпид. имикробиол.- 1982.-Т.59.-С. 109-112.

20. Бланков Б. И., Литвак Р.В., Казьмина Ю.Г. Влияние замораживания на микробы тифо-паратифозной и дизентерийной групп. — Труды Мос-ковс. Науч.-исслед.инст. эпидемиол., микробиол. и гигиены, М., 1960, вып.7, с.96-109.

21. Бланков Б.И. Сохранение жизни микроорганизмов// Анабиоз и преданабиоз микроорганизмов. Рига: Зинатне, 1973. — С. 31-40.

22. Бланков Б.И., Клебанов Д.И. Некоторые критерии при исследовании процесса лиофилизации биологических материалов. — Труды Московс. Науч.-исслед.инст. эпидемиол., микробиол. и гигиены, М., 1960, вып.7, с.5 —12.

23. Бланков Б.И., Клебанов Д.Л. Применение лиофилизации в микробиологии- М.: Медгиз., 1961.- 263с.

24. Борг Д. Применение электронного парамагнитного резонанса в биологии // Свободные радикалы в биологии/ Под ред. У. Прайора. — М.: Мир, 1979. — 4.1/ С.88-177.

25. Борисова Л.И. Лиофилизация вакцинных штаммов возбудителей трихофитии лошадей. Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук М., 1986 - 24с.

26. Вазина А.А., Леднев В.В. О гидрофобных связях в пепсине // Состояние и роль воды в биологических объектах. — М.: Наука, 1967. — С.95- 100.

27. Валаханович А.И., Витковская Л.А., Зарецкая Р.В., Болотникова Ф.И. и др. Использование метода лиофилизации для сохранения производственного штамма Leuconostos mesenteroides СФ 4. — Хим.-фарм. Журнал, 1975, №3, с.39-43.

28. Василева М., Василев В., Йорданов Н., Донев Т. Опыт лиофилизации вакцины против сальмонеллеза свиней с применениемпротективных сред.- Селскостоп (Болгария), Наука Производство, 1994.-Г.Э2, бр.3/6.- с.83-85.

29. Верба М.И. Исследование процесса сушки материалов методомсублимации: Автореферат диссертации на соискание кандидата технических наук. М., 1955.- 16 с.

30. Вио П. Вторичные эффекты, связанные с замораживанием биологических тканей. Холодильная техника, 1976, №1, с.46-50.

31. Витанов Т.И., Петухов В.Г. Действие низких температур на бактерии и защитный эффект поливинилпирролидона различного молекулярного веса// Микробиология. 1973. - Т.42, №4. - С.647-649.

32. Гинсбург А.С. Основы теории и техники сушки пищевых продуктов. М.: Пищевая промышленность. 1973.- 528 с.

33. Горошковский Я. Техника высокого вакуума. Перевод с польского. М.: Мир, 1975. — 622с.

34. Ш 37. ГОСТ 24061 — 80. Препараты биологические сухие. Методопределения влажности. — М., 1980.

35. Грейфф Д. Факторы, влияющие на устойчивость биологических материалов// Аннотации зарубежн. докл./ 14 межд. конгресс по холоду. -М., 1975.-С. 177.

36. Я) 39. Гуйго Э.И., Журавская Н.К., Каухчешвили Э.Ю. Сублимационнаясушка в пищевой промышленности. М.: Пищевая промышленность, 1975.- 433с.

37. Гухман. А.А., Ермакова Е.А. Об особенностях теплообмена при сублимации льда в вакууме. Инж.-физич. Журнал, 1953, №8, с.114-129.

38. Данилова М.В., Надирова И.М., Емцева Т.В. Зависимость жизнеспособности бактерий после лиофилизации и при длительном хранении от величины остаточной влажности// Изв.АН СССР. Сер. Биол. 1980. -№3.-С 449-451.

39. Дузу П. Криобиохимия. М.: Мир, 1980 - С.283.

40. Заерко В.И. Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельско-хозяйственных животных — Ставрополь: Ставроп. гос. с.-х. акад., 1996-с.27-31.

41. Звягин И.В. Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов // Экспресс-информация ВНИиТИБП — 1978 Вып.7 - с.3-16.

42. Звягин И.В., Токарик Э.Ф., Нежута А.А. «Вопросы унификации и экспериментальное обоснование режимов сублимационного высушивания биопрепаратов» Рукопись депонированная. РЖ. Микробиологическая

43. Я) промышленность. 1981, №78 от 13.02.1981, с. 27.

44. Звягин И.В., Хорьков И.А., Токарик Э.Ф., Нежута А.А. и др. Методические рекомендации по разработке режимов замораживаниявысушивания биологических препаратов. -М.: Профиздат, 1981 -34с.

45. Измайлова В.Н., Ребиндер П.А. Структурообразование в белковых системах. М.: Наука, 1974. - С.268.

46. Инструкция по изготовлению и контролю туберкулина для диагностики сельскохозяйственных животных. Утвержд. ГУВ МСХ СССР 10.09.73г.

47. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма Brucella abortus 82 живой, сухой, утверждено 8.08.92г.

48. Инструкция по изготовлению и контролю сухой живой вакцины против сальмонеллеза водоплавающей птицы. Утвержд. ГУВ МСХ СССР 09.03.1983г.

49. Временная инструкция по изготовлению и контролю сухой живой вакцины против листериоза с/х животных из шт. «АУФ». Утвержд.

50. Директором ВНИТИБП 16.10.92г.

51. Инструкция по изготовлению и контролю сухой живой вакцины против сальмонеллеза (паратифа) свиней из шт.ТС-177. Утвержд. ГУВ МСХ СССР 04.02.80г.

52. Калоус В., Павличек 3. Биофизическая химия. М.: Мир, 1985. — С.446.

53. Карпов A.M., Жуков В.К., Улумиев А.А. Сублимационная сушка в биологической промышленности // Обзор иформ. ОНТИТЭИ микробиопром. Сер.6, 1975.-75с.

54. Каухчешвили Э.И. Исследование процессов и научные основы разработки оборудования для сублимационного консервирования пищевых продуктов и биоматериалов. Дисс. докт. М., 1969.

55. Кашнер Д. Жизнь микроорганизмов при высоких концентрациях солей и растворенных веществ: галофильные бактерии// Жизнь микробов в экстремальных условиях. М.: Мир, 1981. - С. 365-425.

56. Квапинский Е. Молекулярная организация и ассоциация// Молекулярная микробиология. М.: Мир, 1977. — С.12 —53.

57. Керил М. Физико-химическая модификация воды в пищевых продуктах // Вода в пищевых продуктах.- М.:Пищевая промышленность, 1980.-С.352-368.

58. Кикоин А.К., Кикоин И.К. Молекулярная физика. А.: Наука, 1976.-480 с.

59. Кириллин В.А., Сычев В.В. Шейндин А.Е. Техническая термодинамика М.: Наука, 1979. - 512 с.

60. Кобатов А.И., Никонов Б.А., Свентицкий Е.Н., Афанасьева О.В. Способы повышения биологической активности дрожжей Saccharomycec cerevisiae // Биотехнология 1991.- №1.— с.45-46.

61. Ковальская JI.X. Защитная среда для вирусвакцины против ньюкаслской болезни птиц (штамм Ла-Сота): Дис. . канд. биол.наук: 03.00.06.-М., 1986.-С.216.

62. Козлов К.А., Теодорович В.И. Оптимизация условий консервирования биологических объектов при низких температурах. — Проблемы гематологии и переливания крови, 1974, №9, с.29-34.

63. Коллир Л.Х. Соответствующая технология изготовления лиофи-лизированной оспенной вакцины// Хроника ВОЗ. — 1909. — Т.34, №9. — С.434-435.

64. Колокольцев А.А., Фролов В.Г., Гурьев В.П., Ковригина М.А. Способ получения лиофилизированного препарата на основерекомбинантного а-2-интерферона против вирусных болезней плотоядных:

65. Пат. №2121364, Россия, МПК6 А61К 38.21, А61К 39.395 . Гос. науч. центр вирусол. и биотехнол. Вектор- А.С. № 95118843.14; Заявл. 03.11.95; Опубл. 10.11.98. Бюл. №31.

66. Котиков С.В., Богданов С.И., Щеглова Н.А. Определение и ф) прогнозирование стабильноссти сублимированного препарата аинтерферона // Биотехнология 1991.- № 1с.42-44.

67. Кочетков В.В., Лихтенштейн К.И., Панферов В.В., Токарик Э.Ф.

68. Способ определения остаточной влажности в сухих лиофилизированных биологических продуктах // А.С. № 1150538 (СССР).- 1983.

69. Кравченко В.М., Онищенко P.M., Коренной И.Г., -Жоков Н.П. Влияние эвтектических явлений на сохраняемость препаратов при высушивании // Актуальные проблемы ветеринарной, вирусологии — ' Владимир, 1977 с. 107-110.

70. Кретов И.Т., Антипов С.Т., Шахов С.В., Эйхаб Хасан. Изучение кинетики сублимационной сушки молочных заквасок с деструкцией высохшего слоя // Физ.-хим. основы пищ. и хим. пр-в Воронеж, 1996.

71. Кретов И.Т., Антипов С.Т.; Шахов С.В.; Эйхаб Хасан. Исследование процесса сублимационной сушки молочных заквасок // Хранение и переработка сельскохозяйственного сырья 1996.—№ 4.— с.15-16.

72. Кретов И.Т., Шевцов А.А.; Шахов С.В.; Николаенко С.В. Реализация оптимальных режимов процесса сублимационной сушки в установках непрерывного действия (Ферментного препарата кератиназы) // Изв. вузов. Пищ. технология 1997 —№ 6 — с.51-53.

73. Кудряшова С.Н. Особенности кристаллизации в суспензиях эритроцитов, замороженных при различных умеренно низких температурах с применением высоких концентраций глицерина. — Проблемы гематологии и переливания крови, 1973, №9, с.26-28.

74. Кунев Ж., Ионова И. Механизм термоинактивации и факторы, обусловливающие термоустойчивость бактерий// Вет. Сбирка. 1980. - №8. - С.20-24.

75. Кунтц И.Д. Физические свойства воды, связанной с биомакромолекулами// Вода в пищевых продуктах. М.: Пищевая промышленность, 1980. — С. 94-109.

76. Кушнер В.П. Конформационная изменчивость и денатурация биополимеров. Л.: Наука, 1977. - С. 274.

77. Лабуза Т.П. Интерпретация сорбционных данных в связи с состоянием воды в пищевых продуктах // Вода в пищевых продуктах — М.: Пищевая промышленность. 1980. — С. 123-140.

78. Лаковская И.А. Определение параметров сублимационного консервирования и исследование их влияния на сохранение исходных биологических свойств объектов: Автореферат диссертации на соискание степени кандидата технических наук. — М., 1971, 22с.

79. Ламри Р., Билтонен Р. Термодинамические и кинетические аспекты конформаций белков в связи с физиологическими функциями//•fc Структура и стабильность биологических макромолекул. М.: Мир, 1973. —1. С. 7-173.

80. Леонтович В.А., Абезгауз Н.Н., Перфильев В.Я., Мгебришвили Н.Н., Трошина В.М. Разработка оптимальных программ охлаждения для замораживания гранулоцитов и лимфоцитов человека. — Проблемы гематологии и переливания крови, 1973, №9, с.44 47.

81. Линденбаум Г.М., Миргородская О.А., Москвичев Б.В. Химическая модификация водорастворимых декстранов// Хим. — фарм. журн. — 1977. №6. — С.80-83.

82. Лихтенштейн Г.И. Многоядерные окислительно-восстановительные металлоферменты. — М.: Наука, 1979. — С.52-92.

83. Лихтенштейн Г.И., Авилова Т.В. Кинетические особенности • биологического катализа и динамическая структура ферментов// Успехисовр. Биологии. 1973. -Т.75, вып.1. -С.26-45.

84. Лозина Лозинский Л.К. Очерки по криобиологии - Л.: Наука, 1972.— с.234-235.

85. Лозина-Лозинский Л.К. Очерки по криобиологии. Адаптация и ф) устойчивасть организмов и клеток к низким и сверхнизким температурам. —

86. Л.: Наука, Ленинград, отд-ние, 1972.- 288с.

87. Лыков А.В. Теория сушки. М.: Энергия, 1968. - 471 с.

88. Манк В.В., Лебовка Н.И. ЯМР- спектроскопия воды и водных растворов. Киев, 1980. - С.22.

89. Маркина Е.В.; Тутов И.К. Сохраняемость возбудителя псевдоак-тиномикоза (актинобациллеза) после сублимационной сушки // Диагностика, лечение, профилактика паразитар. и инфекц. болезней с.-х. животных-Ставрополь, 1990.-С.36-38.

90. Мартинек К. Стабилизация ферментов — один из ключевых факторов при внедрении биокатализа в практику// Успехи биоорганического катализа/ Под ред. И.В. Березина, К.Мартинека. М.: Изд-воfc МГУ, 1979.-С.105-157.

91. Мартинек К., Торчилин В.П. Основные принципы стабилизации ферментов// Итоги науки и техники. Сер. Биологическая химия/ Под ред. В.Л.Кретовича, И.В. Березина. М.: Изд-во ВИНИТИ, 1978.- Т. 12. - С.-17-48.

92. ВНИиТИБП, Москва, 1991 г, с. 92 98.

93. Маснянкина Е.Н., Генералова М.В., Митрофанов В.Г.// Гене-• тика.- 1983.-Т.19, №4.-с.616.

94. Медведев П.М., Бабенко Н.И., Недельский Г.Т. Исследование замораживания биологических объектов в аппарате с программным управлением. Холодильная техника, 1972, №9, с.30-33.

95. Медведев П.М., Фисанович Т.И. Исследования хладозащитного Щ< действия желатины и желатинолей// Пробл. Гематол. 1973. - №12. -С.2729.

96. Медведев П.М., Фисанович Т.И. Роль криопротекторов какстабилизаторов воды в биологических средах// Успехи совр. Биологии. — 1973. -Т.75, вып. 1.-С.46-60.

97. Международный стандарт ISO/DIS13408-1. Асептическое производство медицинской продукции. Часть I: Общие требования. Перевод

98. АСИНКОМ (Ассоциация инженеров по контролю микрозагрязнений), 42 с. « •

99. Мешковский А.П. Испытания стабильности и установление сроков годности лекарственных препаратов. Фарматека. — 2000, №2. — с.25-38.

100. Ш, 106. Мешковский А.П. Надлежащая практика хранения медикаментов. Фарматека. 2000, №3. — с.27-30.

101. Морити Т. Обезвоживание живых клеток замораживанием// Рэй-то рефриджерэйшн. 1973. - Т.48, №549. - С.723-730 (яп.).

102. Морити Т. Повреждение микроорганизмов в резульате замораживания// Кагаку то Сэйбуцу/ Биохимия. — 1969. — Т.7, №7. С.400-406 (ЯП.).

103. Морозова Т.Н., Морозов В.Н. О механизме стабилизирующего влияния глюкозы на лизоцим в кристаллическом состоянии // Биофизика. — 1983. Т.28, вып. 6. -С.952-957.

104. Мревлишвили Г.М., Привалов П.Л. Исследование гидратации макромолекул калориметрическим методом// Состояние и роль воды вбиологичских объектах. — М.: Наука, 1967. — С.87-92.

105. Мул ер В.М. О механизме влияния желатины на кинетику гете-рокоагуляции лиофобных золей// Коллоидн. Журнал. 1975. — Т.37, №5. — С. 894-899.

106. Мултон Дж. Л., Жильбо А. Связь активности воды с тепловой ф инактивацией ферментных белков // Вода в пищевых продуктах. — М.:

107. Пищевая промышленнность, 1980. С.232-246.

108. Мышлякова Н.В., Клуша В.Е., Чипенс Г.И. Биологическиесвойства низкомолекулярных пептидов// Хим.-фарм. Журнал. — 1981. — Т.25,№1, с. 10-20.

109. Нежута А.А. «Анализ технологических возможностей современного промышленного холодильного и сублимационного оборудования» «Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности», Экспресс-информация, 1980, № 6, с.23 27.

110. Нежута А.А. «Экспериментальное обоснование и совершенствование промышленных режимов сублимационной сушки биопрепаратов». Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук -М., 1981.-254с.

111. Нежута А.А., Гришин М.А. «Исследование кинетики сушки биопрепаратов» В кн. « Сушка и грануляция продуктов микробиологического синтеза» Тезисы доклада на республиканской научной конференции 25-26 июня 1981г., Тамбов,с.55 -56.

112. Нежута А.А., Гришин М.А., Маслак А.А. «Исследование кинетики сублимационной сушки биоматериалов (первое сообщение)» «Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности», Экспресс-информация, 1983г., № 4, с. 10 — 15.

113. Нежута А.А., Егорова В.Н. «Условия предварительного замораживания биопрепаратов» «Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности», Экспресс-информация, 1978г.,№ 1, 0,2 п.л„ с.8- 10.

114. Нежута А.А., Маслов Г.Ю. «Использование датчика тепловых потоков для сравнительной оценки интенсивности удаления влаги изматериалов при сублимации» Тезисы 3-ей Всесоюзной конференции 21-23 октября, М. 1987г., с.264.

115. Нежута А.А., Маслов Г.Ю., Егорова В.Н. «Методические подходы к разработке типовых режимов сублимационной сушки биопрепаратов» «Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности», Экспресс-информация, 1987г., № 6, с.1 6.

116. Нежута А.А., Маслов Г.Ю., Зинченко В.Д. «Определение момента форсированного перехода на фазу досушивания при сублимационнй сушке биопрепаратов с помощью датчика тепловых потоков» Тезисы 3-ей Всесоюзной конференции 21-23 октября, М. 1987г, с.263.

117. Нежута А.А., Маслов Г.Ю., Зинченко В.Д. «Применение датчика тепловых потоков в технике сублимационной сушки» «Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности», Экспресс-информация, 1987г., № 5, с.З — 6.

118. Нежута А.А., Павлов В.А. «Исследование кинетики сублимационной сушки биоматериалов (второе сообщение)» «Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности», Экспресс-информация, 1983г., № 5, с. 17 20.

119. Нежута А.А., Панферов В.В., Сербис Е.С. «Определение вакуума во флаконах». Тезисы докладов Ш Всесоюзной конференции 21-23 окт. 1987г. Москва, 1997г., стр. 265.

120. Нежута А.А., Сербис Е.С. «Оптимизация этапа досушивания вакцины против листериоза сельскохозяйственных животных из шт. «АУФ», материалы междунар. симп. «Листериоз на рубеже тысячелетий» 18-20 мая 1999г., Покров, стр. 114-115.

121. Нежута А.А., Сербис Е.С. / Разработка научно обоснованных режимов сублимационной сушки биопрепаратов. // Биотехнология.-2001-№6, с. 12-19.

122. Нежута А.А., Сербис Е.С., Ярцев М.Я. «Перспективы разработки и усовершенствования технологии сублимационной сушки биопрепаратов», «Аграрная наука», №4, 1999г., стр.26.

123. Нежута А.А., Токарик Э.Ф. «Исследование эвтектических температур' и анализ режимов высушивания биопрепаратов (третье сообщение)», «Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности», Экспресс-информация, 1978г., №3, с.З —6.

124. Нежута А.А., Токарик Э.Ф., Фролов Ю.Д., Гринев А.А. и др. «Интенсификация процесса высушивания туберкулинов для птиц и млекопитающих» «Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности», Экспресс-информация, 1979г., № 8, с. 6 -9.

125. Никитин Е.Е., Владимиров А.Г. Сохраняемость вирусов в сухом молоке и пищевом альбумине. Ветеринария, 1965, №5, с.99.

126. Никитин Е.Е., Звягин И.В. Замораживание и высушивание биологических препаратов. — М., Колос, 1971. — 343с.

127. Никитин Е.Е., Камалов Г.Х., Свиридов А.А., Кучмасов И.С., Узюмова Н.И. Защитные среды при высушивании штамма вируса ящуратипа А. Ветеринария, М., Колос, 1966, №9, с. 18-20.

128. Новиков П.А., Вагнер Е.А. Исследование механизма тепло- и массообмена при сублимации льда в вакууме. инж.-физич.журнал, 1968, т. 15, №5, с.788-793.

129. Новикова О.С., Шевченко Ю.Е., Чернов Н.Е. Эвтектические температуры некоторых растворов термолабильных препаратов. Хим. -фарм.журнал, 1977, №11, с. 100-102.

130. Новый порядок установления сроков годности лекарственных средств. Проект отраслевого стандарта. Ремедиум. 1999, №12. - с.66-67.

131. Обозная Э.И., Маркова О.П., Панков Е.Я. Общие механизмы клеточных реакций на повреждающие воздействия // Тр. ин-та цитологии АН СССР 1977.- Вып. 17.Х.- с.201.

132. Опарин Ю.Г. Разработка и совершенствование инструментальных методов контроля для изготовления лиофилизированных биопрепаратов. Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук.-М., 1998

133. Осин Н.С., Петухов В.Г., Осипова Н.В., Воронцова Г.В. // Тр. Моск. науч.-иссл. ин-та вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова— 1978.— Вып.4 с.213-214.

134. Отраслевой стандарт10083-95. «Продукция агробиологической промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, построения, согласования и утверждения». 110с.

135. Павленко И.В. Разработка основных технологических процессов промышленного производства сухой вакцины против листериоза сельскохозяйственных животных, автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук, Щелково 2003, 24с.

136. Панферов В.В. Оценка стабильности сухих биопрепаратов методом физических меток. Автореферат диссертации на соискание ученойстепени кандидата биологических наук М., 1989. — 157с.

137. Пассет В.Б., Воробьева В.Я. Технология химико-фармацевтических препаратов и антибиотиков- М.: Медицина, 1977 — 430с.

138. Подольский М.В. Высушивание препаратов крови и кровезаменителей. М.: Медицина, 1973. - 192 с.

139. Подольский М.В. Лаковская И.А. Исследование эвтектических зон замороженных биологических объектов. Холодильная техника, 1971, №5, с.23-27.

140. Похиленко В.Д., Нахабин И.М., Зинченко В.Б. Исследование приемов интенсификации условий сублимационного высушивания микробных суспензий // Науч.основы технологии пром. пр-ва вет.биол.препаратов Щелково, 1996 — с.224-225.

141. Привалов П.В. Проявление структуры воды в процессах тепловой денатурации макромолекул// Состояние и роль воды в биологических объектах. М.: Наука, 1967. - С. 54-59.

142. Пушкарь Н.С., Белоус A.M. Введение в криобиологию. Киев: Наукова думка, 1975. - 343с.

143. Пушкарь Н.С., Белоус A.M., Иткин Ю.А. и др.Низкотемпературная кристаллизация в биологических системах. Киев: Наукова думка, 1977.-242с.

144. Пушкарь Н.С., Белоус A.M., Цветков Ц.Д. Теория и практика криогенного и сублимационного консервирования Киев: Наукова Думка, 1984.-264с.

145. Пушкарь Н.С., Моисеев В.А., Зинченко А.В., Зинченко В.Д., Токарик Э.Ф., Фролов Ю.Г., Нежута А.А., «Измеритель теплового потока» № 1204007 (СССР), 1984г., (ДСП).

146. Пушкарь Н.С., Розанов Л.Ф., Гордиенко Е.А., Иткин Ю.А. Некоторые аспекты повреждения клеток при замораживании. Проблемы гематологии и переливания крови, 1974, №4, с.44-47.

147. Пчелин В.А. Поверхностные свойства белковых веществ (двумерное состояние белков). М., 1951. —С. 127- 146.

148. Раппопорт А.И., Бирюзова В.И., Бекерт М.Е. Влияние процесса обезвоживания на структуру поверхности клеточной стенки дрожжей // Микробиология.- 1983 Т.52, Вып.2.- с.254-262.

149. Рахманин П.П., Самуйленко, А.Я., Ломакина Т.А. Основные направления развития агробиологической промышленности России// В кн: «Курская биофабрика. К 100-летию биологической промышленности России-Курск, 1996- с.287-290.

150. Ре Луи. Консервация жизни холодом. — М.: Издательство ино-стран. литерат., 1962, 176с.

151. Ребиндер П.А. Поверхностные явления в дисперсных системах/ Избр. труды. М., 1978. - С.368.

152. Рождественская М.А., Недельский Г.Т., Гуйго Э.И., Малков Л.С. Быстрое замораживание эритроцитов при использовании низких концентраций глицерина. — Проблемы гематологии и переливания крови, 1973, №9, с. 19-21.

153. Розанов Л.Ф. Микроскопическое исследование процессовзамораживания и отогрева клеточных суспензий. — Проблемы гематологии и переливания крови, 1977, №2, с.22 27.

154. Розенфельд E.JI. Декстран, его особенности и значение как заменителя плазмы крови// Успехи биол. химии. 1958. - Т.З, №2. - С.366-387.

155. Рукова В.Ф., Гавриленкова В.Ю., Максимова Г.А. и др. Методические указания по применению физ.-хим. методов контроля медицинских биологических препаратов-М., 1982.

156. Саджет А. Взаимодействие воды с углеводами// Вода в пищевых продуктах. М.: Пищевая промышленность, 1980. - С. 32-44.

157. Селезнева А.Ю. Влияние условий лиофилизации и длительного хранения на инфекционную активность вирусов различных групп. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук М., 1979.

158. Сербис Е.С. Оценка температурно-временных параметров сублимационной сушки и их влияния на показатели качества биопрепаратов (на моделях живых противобактерийных вакцин) Дисс. .канд.биол.наук, Щелково, 2001, 109с.

159. ВНИиТИБП., Москва, 1991г., с. 82-92.

160. Сергеев Г.Б., Батюк В.А. Криохимия М.: Химия, 1978. - С.295.

161. Сидоров М.Н. Совершенствование процесса вакуум-сублимационного обезвоживания жидких термолабильных продуктов: Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата технических наук-Воронеж, 1997.

162. Синцов Н.А. Лаковская И.А. Исследование фазовых переходов при замораживании и размораживании модельных растворов и биологических материалов. — Холодильная техника, 1981, №3, с.14 18.

163. Скотникова Т.А. Определение и прогнозирование стабильности сухой вирусвакцины против ньюкаслской болезни (штамм Ла-Сота): Дис. . канд. биол. наук: 03.00.06- М., 1980. С. 174.

164. Слепенко Т.Б., Нежута А.А. и др. «Изучение термостабильности различных вариантов вируса герпеса индеек» «Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности», Экспресс-информация, 1983г., № 2, с. 12 —15.

165. Смит О. Биологическое действие замораживания и переохлаждения.- М.: ИЛ, 1963.-503с.

166. Субботина Ю.Л. Влияние замораживания на выживаемость БЦЖ.:Материал по обмену опытом. М., Бюро научн.информации, 1958, т.1\53, с.256-262.

167. Токарик Э.Ф. Стабилизация биологической активности живых вирусных вакцин: Дис. .доктор, биол. наук: 03.00.06. М., 1988. - 513с.

168. Токарик Э.Ф., Ковальская JI.A., Скотникова Т.А., Нежута А.А., Кузнецова С.В. «Защитная среда для приготовления сухой вирусной вакцины» Авторское свидетельство № 1212045(СССР) приор.от 24.01.1984г., ДСП.

169. Токарик Э.Ф., Нежута А.А., Авдеева Т.А., Ковальская JI.A. «Эвтектические температуры биопрепаратов (первое сообщение)», «Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности», Экспресс-информация, 1976г., № 4, с. 19 — 22.

170. Томори О. Влияние температуры хранения на стабильностькомплементсвязываяющего антигена вируса JIacca// Бюллетень ВОЗ. — 1980.-Т. 58, №2.-С. 218-221.

171. Трошин В.М., Абезгауз Н.Н., Леонтович В.А. -Применение ДМАЦ в качестве криопротектора при замораживании гранулоцитов// Проблемы гематол. 1977.- №5. — С.50-54.

172. Тутова Э.Г., Куц Э.И. Сушка продуктов микробиологического производства.— М.: Агропромиздат, 1987 с Л 55.

173. Угарова Н.Н. Стабилизация ферментов// Введение в прикладную энзимологию. М.: МГУ. - 1982. - С. 156 - 179.

174. УильямсВ., Уильяме X. Физическая химия для биологов. — М.: Мир 1976.-С.600.

175. Ураков Н.Н., Волков В.Я., Боровик Р.В. Функциональное состояние микроорганизмов в процессе приготовления бактериальных препаратов // Биотехнология 1988 - Т.4, №4 - с.420-432.

176. Усачева В.А., Гуськова Л.Д. Пути увеличения сроков годности сублимированных молочных продуктов // Науч. наследие проф., д-ра техн. наук Э.И. Каухчешвили —М., 1997 —с.63.

177. Ушатинская Р.С. Скрытая жизнь и анабиоз.- М.: Наука, 1990.—180с.

178. Файбич М.М. Стабилизация вакцинных препаратов в процессе высушивания и хранения //Ж. микробиологии — 1968.-№2 —с.59-66.

179. Фаррант Д. Пересмотр некоторых криобиологических концепций// Криобиология и криомедицина. — Киев, 1977, Вып.З. — С. 12-20.

180. Федеральный закон «О лекарственных средствах». Нормативные материалы/ Центр информации комитета фармации. 1998, №7. - с.6-38.

181. Филоненко Г.К. Гришин М.А., Гольденберг Я.М., Косик В.К. Сушка пищевых растительных материалов. М.: Пищевая промышленность, 1971.-439с.

182. Флауменбаум Б.Л., Танчев С.С., Гришин М.А. Основы консервирования пищевых продуктов. М.: Агропромиздат, 1986. - 493 с.

183. Френке Ф. Вода, лед и растворы простых молекул// Вода в пищевых продуктах. М.: Пищевая промышленность, 1980. - С.14-32.

184. Фролов Е.Н., Белоногова О.В., Лихтенштейн Г.И. Исследование подвижности спиновых и мессбауэровских меток, связанных с макромолекулами// Равновесная динамика нативной структуры белка. — Пущино, 1977.-С. 99-142.

185. Хартман К. Планирование эксперимента в исследовании тех-• нологических процессов — М: Мир, 1977.- 552с.

186. ХевеЧ. Структура воды в полимерах// Вода в полимерах. — М.: Мир, 1984.-С. 137-149.

187. Хекли Р. Свободные радикалы в высушенных биологических препаратах// Свободные радикалы в биологии/ Под ред. У. Прайора. — М.: Мир, 1979. — 4.2. -С.151-177.

188. Хексли Р. Свободные радикалы в высушенных биологических препаратах // Свободные радикалы в биологии / Под ред. У Прайора М., 1979.- Ч.2.—с.151-177.

189. Хиппель П., Шлойх Т. Влияние нейтральных солей на структуру ' и конформационную стабильность макромолекул в растворе// Структура истабильность биологических макромолекул. М.: Мир, 1973. — С.320-480.

190. Чанг Р. Физическая химия с приложениями к биологическим системам. М.: Мир, 1980. - С.662.

191. Чернецкий Ю.П. Исследовние процесса сублимационной сушки микроорганизмов и биопрепаратов. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук М., 1971.

192. Шахов С.В. Исследование и совершенствование процесса обезвоживания препаратов с использованием ультрафильтрации и сублимационной сушки. Автореферат на соискание степени кандидататехнических наук.—Воронеж, 1995 — c.l 1

193. Эйхаб Хасан Изучение кинетики сублимационной сушки молочных заквасок с деструкцией высохшего слоя // Физ.-хим. основы пищ. и хим. пр-в-Воронеж, 1996 —с.128.

194. Эйхаб Хассан Н.С. Совершенствование вакуум-сублимационной сушки молочных заквасок. Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата технических наук / Воронеж, гос. технол. акад.— Воронеж, 1997-с.21.

195. Эльпинер И.Е. Поверхностные явления и их значение в биологии// Успехи совр. биол. — 1953. Т.36, вып. 1(4). - С.2 — 24.

196. Alexander D.I., Allan W.H. Newcastle Disease. The nature of the virus strains// Bull. Off. int. Epiz. 1973. - V.79, №1-2. - P.l5-26.

197. Allan W.H., Lancaster I.E. Toth B. The production and use of Newcastle disease vaccines// FAO. — Rome, 193. — 115p.

198. Allison Z.M.C., Mann G.F., Perkins F.T., Zuckerman A.I. An accelerated stability test procedure for lyophilized measles vaccines//. G.Biol.Stand. — 1981. V. 9, №2.-P.185-194.

199. Anderson J.O., Nath J., Harner E.G. Effects of Freeze-Preservation on Some Pollen Enzymes. II. Freezing and Freeze-Drying Stresses// Cryobiol. — 1978. V. 15, №4. - P.469-477.

200. Angus R.D., Zove E.Z., Pietz D.E. Evaluation of five mediums for the stabilization of Br. Abortus strain 19 dessicated by lyophilization// Develop. Biol. Stand. 1977. - V. 36. - P. 307-312.

201. Asachina E. In.: Cryobiology, Ac. Pres. N. Y. - London, 1966.

202. Asachina E. Nature (London), 1962, V.196, P. 445.

203. Astadi G., Verga L. // Acta haematol 1957.- V.17, № 3.- p.129.

204. Bank H., Mazur P. Relation between ultra structure and viability of frozen-thawed Chinese hamster tissue-culture cells. — Exp. Cell Research, 1972, v.71, p. 441-454.

205. Bergmann D.E., Halleck F. E., Vechales B.Y., Tenney R.J. Characteristics of a factor protecting the viability of lyophilized Brucella abortus cells// G. Bacterid, 1957.-V.74, №1. — p. 101-105.

206. Blake C.C., Koenig D.F. et al. Nature (London), 1965, V. 206,p.757.

207. Bull H.B. Determination of molecular weights of proteins in spread monolayers// J. Biol. Chem. 1950. - V. 185, №1. - P. 27-31.

208. Calnek B.W., Hitchner S.B. and Alkdinger H.K. Liophilization of cell-free Marek's disease herpesvirus and a herpesvirus from turkeys// Appl. Microbiol. 1970. V.20. - P.723-726.

209. Chambeos R., Hale H.P. Proc. R. Soc (London), 1932, V. 110,

210. Condery S., Frey M., Orlowski S., Gray A. Stability characteristics of freeze-dried human live virus vaccines// Develop. Biol. Stand. — 1977. V.76. -P.297-301.

211. Corvazier R. Quelques aspects pratiques de la congeation prealable a la lyophilisation de produits bioligiques. Le revue generale lu froid, 1969, №2, p.170-185.

212. Decowski M. Zuzytkowane liofilizacyi microbiologii// Folia Mor-phologica. — 1961. V. 12(20). №2-3. - P.89-96.

213. Dorsey N, E, Trans. Amer, Phil. Soc., 1948, V. 38, P.247.

214. Drost-Hansen W. The structural and functional aspects of interfase water and their effect on membrane and cell systems// Collog. Int., CNRS. -1976.-№246.-P. 177-186.

215. Ergun A., Girgin H., Eren D. Marek asisanda kullanilan cesitli su-landirma sivilarinin lagisiklik uzerinde in vivo ve in vitro atkilerinin arastiril-masi// Etlik Met. Vikrob. Enst. Derg. 1982/1983. - V. 4-5. - P. 39-49.

216. Fan-ant I. Is there a comment mechanism of protection cells by polyvinylpyrrolidone and glycerol during freezing? Nature, 1969, v. 222, p. 1175• 1176.

217. Farrant I., Morris G.I. Thermal shock and dilution shock as the causes of freezing injury. Cryobiology, 1973, v. 10,p. 134 - 140/

218. Fernandez H., Polanco R., Redondo Y. Efecto dela congelacion у la liofilizacion en diferentes cepas del virus de la encefalomielitis equina deleste// Cienc. Y.tecn. gu. Vet. 1982. - V.4, №2. - P. 41-47.

219. Finter N.B., Burfoot c., Young P.A., Ferris R. Long term storage studies with a new stabilized formulation of yellow fever virus vaccine// Develop. Biol. Stand. 1977. - V.36. - P.279-282.

220. Frank H.S., Evans M. V. J. Chem, Phys.,1945, V. 13, P.507

221. Frank H.S., Wen J.W. Disc. Faraday Soc., 1957, V. 24, P. 133

222. Frankland V., Wynn C.H, Biochem. J., 1962, V. 84, P.20.

223. Franks F, Biological freezing and cryofixation// J. Microsc. — Gr. Brit, 1977.-V. 111,№1. —P.3-16.

224. Fry R.M. Freezing and drying of bacteria//Cryobiology/ Ed. By P. Meryman. N.Y. bnd London: acad. Press., 1966. - P.676-695.

225. Gangemi J.S., Cole F.E. Jr. Venezuelan equine encephalomyelitis virus aggregation and immunogenicity following freeze-drying. J. biok Stan-dardiz., 1978, v.6,№2,p. 117-120.

226. Gorska C., Gorski Y. Nieszkodliwosc crazwlasciwosci immunogenne dla lisow szczepionek przecowko nosowce i chorobie Rubartha liofilizowanych z dekstranem, sacharoza i glutaminianem potasu// Med. Veter. 1983. - V.39, №3.- P. 158-162.

227. Greiff D. Applications of vacuum techniques to the freeze-drying of biological materials// AlCh E. Sym. Ser. 1972. - V. 68, №125. - P. 5-7.

228. Greiff D. Freeze-drying cicles. Develop.boil.Standard., 1976,v. 36. p.105 -115.

229. Greiff D., Rightsel W. Stabilities of suspensions of viruses after freezing or drying by vacuum sublimation and storage// Cryobiol. 1967. - V.3, №6. - P. 432-444.

230. Hanafusa N. In.: Proc. Ont. Conf. Low Temp. Sci., 11. Sapporo, Japan, 1967, p. 33.

231. Hanafusa N. Low Temp Sci., 1962, В, V. 20, P.52.

232. Hanafusa N. Low Temp Sci., 1964, В, V. 22, P.81.

233. Heber U. Ciyobiolodgy. 1965, №5. P. 188.

234. Hechter O. Ann. N.Y. Acad. Sci., 1965, P.625.

235. Jameson P., Greiff D., Grossberg S.E. Thermal stability of freeze-drying mammalian interferons. Analysis of freeze-drying conditions and accelerated storage tests for murine interferon// Cryobiol. 1970. - V.16, №4. - P.301

236. Just О., Finke J. Ein Beitrag zur Stabilisierung des MVA-Impfstoffs// Zbl. Bakteriol., Parasitenk., Infectioskrankh. Und Hyg. 1979. - Abt. 1. Orig., A 245, №3. - P.276-282.

237. Kempler В., Gail M., Ray Bibek. The effect of freezing on the lipopolysaccharide of Escherichia coli Cryobiology, 1977, v. 14, № 6, p.706-707.

238. Korber C., Scheiwe M.W. Effect of hydroxyethyl starch on NaCl-H20 phase- diagram and its influence on freezing process of cells// Giyobiol. —4 1977.-V.-14, №6.-P. 705-708.

239. Kuntz J.D. Hydration of macromolecules// j. Amer. Chem. Soc. — 1971. V.93,№2.- P. 514-516.

240. Kuntz J.D. Water in biological systems// N. Engl. J.Med. 1977. — V. 297, № 5. - P. 262-266.

241. Kuntz J.D., Brassfield T.S., Law G.D., Purcell G.V. Hydration of macromolecules//Science.- 1969, V. 163, № 3873.-P. 1328-1331.

242. Kuntz J.D., Kauzmann W. Hydration of proteins and polypeptides// Adv. Protien Chem. 1974. - V. 28. - P. 239-347.

243. Lee J.C., Timasher S.N. The stabilization on proteins by sucrose// G.

244. Biol. Chem.-1981.-V. 130.-P. 103-106.

245. Leibo S.P., Farrant I., Mazur P., Hanna M.G., Smith L.H. Effects offreezing on marrow stem cell suspensions: interactions of cooling and warming rates in the presents of PVP, sucrose or glycerol. Cryobiology? 1970, v. 6, p. 315-332.

246. Levitt J. Cryobiology .Acad. Press. N.Y. - London. - 1966, P. 495.

247. Levitt J. Cryochemistry of plant tissue// Cryobiol, 1966. - V. 3, №3,- P.243-251.

248. Levy G.A., Fieldsteel A.H. Freeze-drying is an effective method for preserving infections type С retrovi uses// J. verol. Method. 1982. - V. 5, № 34. — Р.165-171.

249. Liebermann Ht. Gefriertrockung von Viren, Veterinar-medizin, 1794, v. 28, №19, p.949-954.m

250. Love R, M, In.: Cryobiology, Acad. Press, N. Y., 1966, p. 398.

251. Lueckel Barbara, Bodmer David, Helk Bernhard, Leuenberger H. Influence of concentration the properties of the freeze-Concentrate and the lyoh-pilizate // Pharm. Dev. and Technol.- 1998.- Vol.3, № 3,- p.325-336.

252. Layet B. The vitrification theory and the preservation of living matter in the frozen and in the freeze-dried state. Comptes rendus du Xl-eme Congres International du froid. 1963.v.11, p. 1601 - 1606.

253. Luyet B.H. On the mechanism of growth of ice crystals in aqueous solutions and on the effect of rapid cooling in hindering crystallization// Recent research in freezing and drying. — Oxford, 1960. — V. 3. P. 3-22.

254. Luyet B.I., Rapatz G.L., Gehenio P.M. On the mode of action of rapid cooling in the preservation of erythrocytes in frozen blood. — Biodynamica, 1963, v.9№ 178, p. 95-124.m

255. Matsumoto Toshisada. Assembly of paramyxo-viruses// Microbiol.

256. And Immunol. 1982. - V. 26, № 4. - P. 285- 320.

257. Mazur P. In.: Culture Collections. Perspective and Problems. Univ. Press, Toronto, 1963, p.59.

258. Mazur P. Science, 1970, V. 168, P.939.

259. Mazur P. Biophys. J., 1963, V. 3, P.325.

260. Mazur P. Cryobiology: The freezing of biological systems. Science,1970, v. 168, № 393, p. 939-949.

261. Mazur P. Fundamental aspects of freezing injury in living cells// I Internat. Congres of the internat. Associationof microbial. Cocieties. Tokyo, 1974. -P. 172.

262. Mazur P. Limits to life at low temperatures and Reduced water contents and water activities // Orig Life.- 1980 Vol.10, № 2.-p.l37-159.

263. Mazur P., Miller R.H., Leibo S.P. Survival of frozen thowed bovine red cells as fuction of the permeation of Glycerol and Sucrose// J. Membr. Biol. 1976. -V. 15, №2.-P. 137-158.

264. Meryman H.T., Douglas M. Colligative cryoprotection: The only artificial protective mechanism at slow cooling rates. Cryobiology, 1977,v. 14.№ 6. p. 684.

265. Meriman H.T., Williams R.J., Douglas M.S. Freezing injury from solution effects and prevention by natural and artificial crioprotection // Criobiol-ogy.— 1977.-Vol.14.-p.287-312.

266. Meryman H. T. Red cell membrane chages produced by extracellular cryoprotectants and allied compounds// Cryobiol. 1971.- V.85, №1. - P. 401404.

267. Meryman H.T. Cryobiology, Acad. Press. N.Y. - London 1966,1. P.55.

268. Meryman H.T. Cryobiology, 1971. V. 8. P.382

269. Meryman H.T. Cryoprotective agents// Cryobiol. — 1971. V. 8, №5. P. 173-180.

270. Meryman H.T. Freezing and drying of biological materials. Harold T. Meryman, H. Fernandez- Voran, Greaves I.N., a.o. Consulting ed. Harold T. Meriman. New Jork, 1960. 234 p.

271. Meryman H.T., Douglas M. Colligative ciy protection: The only artificial Protective mechanism at slow cooling rates. Cryobiology, 1977, v. 14, №6, p.684 688.

272. Miller J.S., Cornwtll D.G. Role of cryoprotective agets as hydroxyl radical scavengers// Cryobiol. 1978. - V. 15, №5. - P.585-588.

273. Mogann, Locksley. Differing action of penetrating and nonpenetrating creyoprotictive agents// Ciyobiol. 1978. - V. 15, №4. - P. 382-390.

274. Morris G.I., Farrant I. Effects of cooling rate on thermal hemolysis. Cryobiology, 1973, v. 10, p.l 19-125.

275. Morichi Т., Irie K., Yano N.K., Kembo H. Protective effects of DL-threonine on bacterial cells during freeze-drying and ineffectiveness of its optically active forms// Ag. Biol. Chem. 1966. V.29, №1. - P.66-75.

276. Nicholslon A.E. Predicting stability of lyophilized products// Develop. Biol. Standard. 1977. - V.36. - P.69-75.

277. Obayashi Y., Ota S., Arai S. Some factors affecting preservability of freeze-dried bacteria// G. Hyg. Cambridge, 1961. - V. 59, №1. - P. 77-91.

278. Orii I., Morita M. Measurement of the pH of frozen Buffer solutions by using pH indicators// G. Biochem. 1977. - V. 81, № 1. - P. 163-168.

279. Pace C.N., McGrath T. Substrale stabilization of lysozyme to thermal and quanidine hydrochloride denaturation// J. Biol. Chem. 1980. — V. 255, №9. -P. 3862-3865.

280. Peetermans I., Colinet G., Bonillet A., D'Hondt S., Stephenna I. Stability of live, freeze-dried virus vaccines// Develop. Biol. Standard. 1977. — V.36.-P. 291-296.

281. Popescu C., Jonecsu C, Ofiteru A. Freeze-drying of some strains of biotechnological interest (Aureobasidium pullulans)// Rom. Arch. Microbiol, and Immunol.- 1997.- Vol.56, №1-2.-p. 113-118.

282. Rapatz G., Luyet B. Effects of cooling rates on the preservation of erythrocytes in frozen blood containing various protective agents. Biody-namica, 1964, v. 9, № 197, p. 333-349.

283. Rapatz G., Luyet B. On the mechanism of ice formation and propagation in muscle. Biodynamic, 1959, v.8, № 162, p.121-144.

284. Redwey R.F., Lapage S.P. Effects of carbohydrates and related compounds on the long-term preservation of freeze-dried bacteria// Cryobiol. 1974.-V. 11, №1. — Р.73-79.

285. Reid D.S., Hemming R.B. Nature of aqueous sugar solutions at low temperatures// Ciyobiol. 1977. V.14 №6. - P. 707-716.

286. Rempler В., Gail V., Ray Bibek. The effect of freezing on the lipopolysaccharide of Escherichia coli. Cryobiology, 1977, v. 14, № 6, p. 706707.

287. Rey L. Fundamental aspects of lyophilysation. In: Aspects theore-ques et industriels de la lyophilisation. Horman. Paris, 1959, p. 23-43.

288. Rey L. Glimpses in to the fundamental aspects of freeze-drying \\ Deve lop. Biol, stand. 1977 - vol. 36 - P. 19-27.

289. Rey L. Aspects theoriques et industriels de la lyophilisation. — Paris, Hermann, 1964. 653 p.

290. Rey L. Automatic regulation of the freeze-drying of complex sys-tems//Biodynamica, 1961, V.8, №167 P.241-260.

291. Rey L. Conservation de la vie par le froid. Pref. Le Jean Rostand. Paris, Hermann, 1960, p. 107-119.

292. Rey L. R. In.: Ann. N. Y. Acad. Sci., 1960, V. 32, P.269.

293. Rey L. Thermal analysis of eutectics in freezing solutions — Am. N.J. Acad. Sci., 1960, v. 8.-167 p.

294. Sakai A., Yoshida S. Role of sugar and related compounds in variations of freezing resistance// Cryobiol. 1968.- V.5, №3. - P. 160-165.

295. Sandine W.E., Vedamuthu E.R. Lyopilization of bacteria: USA, Патент, заявл. 17.07.78, опубл. 27.05.80. № 4205132.

296. Scherman J.K Anat. Rec., 1964, V. 149, P.591.

297. Scherman J.K. Cell. Comp.Phyaiol.,1964, V. 61, P. 154.

298. Sedmak J., Gameson P., Grossberg S.E. Procedurs for stabilization of interferons// Meth. Enzym. 1981. - V. 78.- P.591-595.

299. Serwer Ph., Masker W.E., Allen J.L. Stability and in vitro DNA packaging of bacteriophages: effects of dextrans, sugars and polyons//J. Virol.1983. V. 45, №2. Р.665-671.

300. Siegmann О., Kaleta E.F. and Schindler P. Short-and-long-term stability studies on four lyophilized and one cellassociated turkey herpesvirus vaccines against Marek's disease of chickens// Avian. Pathol. — 1980,- V.9.- P.21

301. Smith G.W., Hightower L.E. Biological consequences of neuraminidase'deficiency in Newcastle disease virus// J.Virol. — 1983. V. 43, №3. — p. 385-591.

302. Stephenson J.L. J. Biohhys. Biochem. Cytol., 1956, Suppl. V.2. - P.45.

303. Suzuki M. Stability and residual moisture content of dried vaccina virus// Cryobiol. 1973. - V. 10, №5. - P. 432-434.

304. Takano Т., Kusakobe S., Mukai T.// Genetics.- 1987.- Vol.117, №2.-p.245.

305. Tenchini M.L., Bolognani L., De Carli. Effect Of hypertonicity on survival of unprotected human cultured cells following freezing and thowing// Cryobiol. 1980. - V. 17, № 2. - P. 120-124.

306. Thimada K. Effects of cryoprotective additives on intracellular ice formation and survival in very Rapidly cooled Ye La cells// Contribs. Inst. Low Temperat. Sci. 1977. - V. 13, №19. - P.49-69.

307. Todd J.D. Freeze-drying of viruses and bacteria/ Rapporteur's reports// Develop. Biol. Stand. 1977. - V. 36. - P. 370-372.

308. Valder G.F., de Giory G.S. Protective effect of adonitol on lactic acid bacteria subjected to freeze-drying// Appl. And Environ Microbiol. 1983. -V.45, №1. -P.302-304.

309. Vilitz E, Hahn J., Conrad C., Voss M. Weitere Erfarungen beider Anwendung vor Salmonella// Inf.programmen Lohman Inform — 1995 №3-s.3-5.

310. Williams R.J., Harris D. The distribution of cryoprotective agents into lipid interfaces// Cryobiol. 1977. - V.14, №6. - P.670-680.

311. КУРСКАЯ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ БИОЛОГИЧЕСКАЯ ФАБРИКА1. УТВЕРЖДАЮ»

312. Директор Курской биофабрики,кандидат ветеринарных наук1. ПодписьЛ.Н.Демидов1. Печать6» июня 1979г.1. АКТ

313. По биологической активности туберкулины, замороженные и высушенные по экспериментальному режиму, не уступали препаратам промышленных серий.

314. Результаты лабораторных и производственных опытов по разработке режимов замораживания и высушивания явились основой для составления «дополнения к инструкции по производству сухих туберкулинов типа ППД для птиц и млекопитающих».1. Подписи: Гринев А.А

315. Сорокина А.А. Салажова В.В. Васютнин В.М Токарик Э.Ф. Нежута А.А. Фролов Ю.Д.1. Копия верна: Заверяю

316. Ученый секретарь ВНИТИБП , к.б.н. Ю.Д.Фролов» июня 2003 г

317. На заседании методической комиссии 11 октября 1979 г. Протокол № 6

318. Зам. председателя методической комиссии ВНИиТИБП Подпись докт. вет.наук .А.Бойко Печать11» октября 1979 г.

319. Директор ВНИиТИБП, Кандидат ветеринарных наук Подпись1. Печать И.А.Хорьков11» октября 1979г. •

320. МЕТОДИКА Промышленного замораживания и высушивания туберкулинов (1111Д) для птиц и млекопитающих1. Щелково 1879г.1. Копия верна: Заверяю1. Ученый секретарь ВНИТИБП,

321. Канд. биологических наук Ю.Д.Фролов» июня 2003 г

322. Российская академия сельскохозяйственных наук Отделение ветеринарной медицины

323. УТВЕРЖДАЮ Академик-секретарь Отделения ветеринарной медицины РАСХН жадемик РАСХН1. А.М.Смирнов 200/г.1. Методикарасчета режимных параметров сублимационной сушки биопрепаратов1. Копия верна: Заверяю

324. Ученый секретарь ВНИТИБП, к.б.н. Ю.Д.Фролов» июня 2003г1. СОГЛАСОВАНО

325. Начальник Главного управлениябиологической промышленности1. Госагропрома СССР1. Подпись Н.Е.Бондаренко1. Печать10» апреля 1986г

326. УТВЕРЖДАЮ Начальник Главного управления ветеринарии Госагропрома СССР -Подпись А.Д. Третьяков1. Печать16» апреля 1986г

327. ИЗМЕНЕНИЯ И ДОПОЛНЕНИЯ к действующей инструкции по изготовлению и контролю сухой вирусвакцины против псевдочумы птиц из штамма «Ла-Сота», утвержденной ГУВ

328. Минсельхоза СССР 10 сентября

329. По разделу IY пункты 18,19,20,21,22,23,24,25 (стр.10 12) изложить в следующей редакции:

330. Замораживание и высушивание вакцины

331. Замораживание вакцины проводят по следующему режиму:

332. Примечание: При необходимости, в силу производственных условий время замораживания может быть увеличено до 18 — 20 часов.

333. Высушивание вакцины проводят по следующему режиму:

334. После загрузки камеры подключают датчики контроля температуры материала, камеру герметизируют и вакуумируют до остаточного давления 80 90 мкм.рт.ст.

335. После достижения вакуума в камере 80 -90 мкм.рт.ст. включают циркуляционный насос и в течение первых десяти часов сушки нагрев полок проводится за счет естественного нагрева.

336. С 11 часа сушки включают нагрев полок +25°С и поддерживают в течение двенадцати часов.

337. С 20 часа включают нагрев полок +30°С и поддерживают в течение двенадцати часов.

338. На 32 часу сушки включают нагрев полок +35°С и поддерживают до окончания процесса сушки.

339. Температура материала в течение первых 30 43 часов сушки не должна превышать -30°С.

340. Длительность фазы сублимации (до 0°С в материала) должна быть не более 45 часов.

341. Досушивание вакцины проводят при температуре материала +30+35°С в течение 20 -24 часов. Давление в камере не должно быть выше 90 мкм.рт.ст.

342. Общее время сушки 72-80 часов. Контрольный график сушки представлен на рисунке 2 (временные параметры режима сушки вакцины рассчитаны на фасовку по 8 мл в 20 мл флаконы).

343. После окончания сушки камеру сублиматора заполняют очищенным азотом (ГОСТ 9293-74 изм. №1) или воздухом. Азот или воздух в ка

344. Продолжение приложения 4 меру сублиматора подают через силикагелевый (для обезвоживания) и через ватный (стерилизующий) фильтры.

345. Флаконы с вакциной, предварительно укупоренной пробкой УЛ-I, окончательно укупоривают в камере сублиматора с помощью прижимных плит.

346. Директор ВНИиТИБП, Подпись кандидат вет.наук Печать1. И.А.Хорьков

347. Директор ВГНКИ, доктор Подпись биол. наук, профессор Печать1. Д.Ф.Осидзе1. Копия верна: Заверяю

348. Ученый секретарь ВНИТИБП Ю.Д.Фролов» июня 2003 г1. УТВЕРЖДАЮ

349. Начальник Главного управления ветеринарии МСХ СССР Подпись А.Д. Третьяков1. Печать1»июня 1984г

350. Начальник Главного управления биологической промышленности МСХ СССР1. Подпись1. Печать И.В.Звягин25» мая 1984г.

351. Директор Всесоюзного научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности МСХ СССР

352. Подпись Печать И.А.Хорьков «29» декабря 1983 г.

353. Директор Всесоюзного государственного научно-контрольного института вет.препаратов МСХ СССР

354. Подпись Печать Д.Ф.Осидзе «31» января 1984 г.

355. Директор Всесоюзного научно-исследовательского вереринаргого института птицеводства МСХ СССР

356. Подпись Печать р.Н.Коровин «6» февраля 1984 г.1. Временную инструкцию

357. Директор ВНИиТИБП Подпись И.А.Хорьков29» декабря 1983 г.•

358. Зав. лабораторией культуры тканей Подпись А.А.Поздняков29» декабря 1983 г.

359. Старший научный сотрудник лаборатории культуры тканей Подпись Т.Б.Слепенко29» декабря 1983 г.

360. Старший научный сотрудник лаборатории иммунологии Подпись В.А.Лукина29» декабря 1983г.

361. Зав.лабораторией консервирования биопрепаратов1. Подпись Э.Ф.Токарик29» декабря 1983г.

362. Зав.сектором лаборатории консервирования биопрепаратов Подпись А.А.Нежута29» декабря 1983 г.

363. Зав.сектором электронной микроскопии1. Подпись Б.Е.Блехерман29» декабря 1983г.

364. Продолжение приложения 5 разработали:от ВНИВИП

365. Директор ВНИВИП Подпись Р.Н.Коровин »6» февраля 1984г.от ВГНКИ

366. Зав. лабораторией контроля и стандартизации препаров, применяемых в птицеводстве Подпись Р.А.Зубцова «25» января 1984г.от Государственного Щелковского биокомбината

367. Зам. директора по производству1. Подпись1. Н.Д.Скичко29» декабря 1983г.ф Копия верна:1. Заверяю

368. Ученый секретарь ВНИТИБП Ю.Д.Фролов» июня 2003г

369. ГЛАВНОЕ УПРАВЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ

370. ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИИ И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ БИОЛОГИЧЕКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ

371. УТВЕРЖДАЮ: Начальник Главного управления биологической промышленности

372. МСХ СССР Подпись И.В. Звягин1. Печать1» октября 1980г

373. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО РАЗРАБОТКЕ РЕЖИМОВ ЗАМОРАЖИВАНИЯ-ВЫСУШИВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ1. Москва, 1981г.1. Продолжение приложения 6

374. Министерство сельского хозяйства СССР

375. ГЛАВНОЕ УПРАВЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ

376. ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ БИОЛОГИЧЕКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ

377. И.В. Звягин, И.А. Хорьков, Э.Ф. Токарик, А.А. Нежута, Т.А. Скотникова, Л.А.Ковальская, Ю.Д.Фролов, Р.А.Никитина

378. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО РАЗРАБОТКЕ РЕЖИМОВ ЗАМОРАЖИВАНИЯ-ВЫСУШИВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ1. Москва, 1981г.

379. А.А. НЕЖУТА, Э.Ф. ТОКАРИК, А.Я. САМУЙЛЕНКО, В.М. БЕЗГИН, Е.С. СЕРВИС

380. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ

381. ОСНОВЫ ТЕХНОЛОГИИ СУБЛИМАЦИОННОГО ВЫСУШИВАНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ1. Курск

382. Издательство Курской государственной сельскохозяйственной академик 20021. НАУЧНОЕ ИЗДАНИЕ

383. Александр Александрович НЕЖУТА,

384. Элеонора Федоровна ТОКАРИК, Анатолий Яковлевич САМУЙЛЕНКО; Вячеслав Михайлович БЕЗГИН, Елена Сергеевна СЕРБИС

385. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ТЕХНОЛОГИИ СУБЛИМАЦИОННОГО ВЫСУШИВАНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ1. Монография ***

386. Редактор В.М. Солошенко Корректор Р.П. Ломакина

387. Компьютерный набор и верстка Л.В. Арбузовой, Р.В. Солошенко

388. Лицензия ЛР №020736 от 11 нарта 1998 г.

389. Сдано в набор 10.09.2002. Подписано в печать 23.10Л002. Формат 60x84 1/1£. Гарнитура Times New Roman. Бумага газетная. Печать офсетная. Усл. печ.л. 15,0. Уч.-изд.л. 14,5. Тираж 300 экз. Заказ Лз 146.

390. Издательство Курской государственной сельскохозяйственной академии 305021, г. Курск, ул. К. Маркса, д.70

391. Типография издательства Курской государственной сельскохозяйственной академии

392. СОГЛАСОВАНО Директор Алма-Атинского биокомбината Подпись В.П.Потапов Печать 27.11.1989 г.1. Директор ВНИиТИБП,1. Подпись.АЛ.Самуйленко1. Печать14» декабря 1989г.

393. ИЗМЕНЕНИЯ И ДОПОЛНЕНИЯ К Временной инструкции по изготовлению и контролю сухой живой вакцины против сальмонеллеза водоплавающей птицы (утвержденной 9.03.83г. Главным управлением ветеринарии МСХ СССР)

394. Раздел 5 пункт 5.5. (стр.7) дополнить строку 2 сверху следующим текстом:•> лили по 10 см во флаконы объемом 20 см . Флаконы с вакциной размещают в кассетах и накрывают стерильной двухслойной салфеткой.

395. Ш Ученый секретарь ВНИТИБП,канд. биологических наук Ю.Д.Фролов» июля 2003г.

396. СОГЛАСОВАНО Директор Алма-Атинского биокомбината Подпись В.П. Потапов Печать 27.11.1989 г.1. Директор ВНИиТИБП,1. Подпись.А.Я.Самуйленко1. Печать14» декабря 1989г.

397. ИЗМЕНЕНИЯ И ДОПОЛНЕНИЯ К Временной инструкции по изготовлению и контролю сухой живой вакцины против паратифа свиней из штамма ТС-177 (утвержденной 4.02.80г. Главным управлением ветеринарии МСХ СССР)

398. По разделу 5 пункт 5.2. (стр.7) строку 11 сверху дополнить следующим текстом:или в двадцатимиллилитровые флаконы по 10 мл.

399. По разделу 6 пункт 6.8.(стр.9) строка 8 дополнить:- или пенициллиновые флаконы по 10мл.

400. Раздел 7 (стр.9.) дополнить пунктами:

401. СОГЛАСОВАНО Директор Алма-Атинского биокомбината Подпись В.П.Потапов Печать • 27.11.1989 г.1. Директор ВНИиТИБП,1. Подпись.АЛ.Самуйленко1. Печать14» декабря 1989г.

402. ИЗМЕНЕНИЯ И ДОПОЛНЕНИЯ К Инструкции по изготовлению и контролю сухой живой вакцины против листериоза с/х животных из штамма «АУФ» (утвержденной 8.04.88г. Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР)

403. ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ ЩЕЛКОВСКИЙ БИОКОМБИНАТ

404. УТВЕРЖДАЮ» Директор ВНИиТИБП, кандидат ветеринарных наук Подпись1. Печать И.А.Хорьков16» ноября 1980г.1. АКТ

405. По результатам апробации в производственных условиях интенсифицированных режимов замораживания и высушивания вакцины против ньюкасл-ской болезни (штамм Ла-Сота) с защитной средой — обезжиренное молоко

406. По биологической активности после высушивания, макровиду, величине остаточной влажности, опытные серии вакцины не* отличались от препаратов промышленных серий.

407. Подпись Подпись Подпись Подпись Подпись Подпись1. Э.Ф.Токарик1. А.А. Нежута1. Ю.Д.Фролов1. Л.А.Ковальская1. А.В.Соловей1. Л.А.Скичко1. Копия верна: Заверяю

408. Ученый секретарь ВНИТИБП, к.б.н. Ю.Д.Фролов» июня 2003г0520001600:120028 32 36 40 Длительность сушкр, час.

409. Кривые кинетики сушки вирусвакцины против НБ птиц из штамма «Ла-Сота» при различной температуресублимации. (Давление в камере сублиматора 8 Па;ЗС ОМ). 1,2.3,4- температура сублимации - 20°; - 25°; -30°; -35°С - соответственно.эчэ S ia1. О *m х 5m