Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфологические особенности хрусталика гидробионтов и их применение в водной токсикологии

ВАК РФ 03.00.18, Гидробиология

Автореферат диссертации по теме "Морфологические особенности хрусталика гидробионтов и их применение в водной токсикологии"

«

I

На правах рукописи

Никифоров-Никишин Алексей Львович

Морфологические особенности хрусталика гидробионтов и их применение в водной токсикологии

Специальность 03.00.18 - Гидробиология АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

< »

Москва, 2005

Работа выполнена в Московском государственном университете технологий и управления (МГУТУ)

Научный консультант:

доктор биологических наук, профессор

Ю.Г. Симаков

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

Е.В. Микодина С.Е. Плеханов

доктор биологических наук

доктор биологических наук, профессор

Н.А. Абросимова

Ведущая организация - ФГУП "Всероссийский научно-исследовательский институт пресноводного рыбного хозяйства" (ВНИИПРХ)

диссертационного совета ДР 211.122.05 при Московском государственном университете технологий и управления, по адресу: 117149, г. Москва, ул. Болотниковская, дом 15, кафедра «Биоэкологии и ихтиологии» МГУТУ

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского государственного университета технологий и управления (МГУ ТУ)

Защита состоится

2005 г., в 14 часов на заседании

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

М.Г. Фельдман

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы Современное загрязнение природной среды не есть лишь простое следствие плохо контролируемых выбросов антропогенных загрязнителей. Оно также обусловлено всей совокупностью перестроек природы, производимых человеческим обществом. Именно поэтому в гидробиологических исследованиях нельзя ограничиваться только биоиндикацией загрязнения, а необходимо всестороннее изучение антропогенного воздействия на водные экосистемы в целом (Захаров, Кларк, 1993).

Для оценки антропогенного воздействия вредных веществ на гидробионтов необходимо найти тест-объект, с помощью которого можно было бы интегрально оценивать изменение жизненных функций под влиянием ксенобиотиков Вполне понятно, что найти универсальный интегральный тест-объект невозможно. Однако можно приблизиться к этому, если адекватно подобрать тест-объект и метод оценки токсического воздействия загрязнителей водной среды.

Общеизвестно, что рост гидробионтов нарушается при действии токсических веществ, но для проведения подобных экспериментов требуется продолжительное время и значительное число подопытных организмов, чтобы провести биометрические измерения. Рост гидробионтов непосредственно связан с митотической активностью в тканях организма Поэтому мы предлагаем оценивать токсическое воздействие загрязнителей на гидробионтов по митотической активности Это даст возможность также выявить цитотоксическое действие загрязнителей водной среды.

По нашему мнению всем перечисленным выше условиям отвечает хрусталик глаза рыб и амфибий, так как на его монослойном эпителии можно определять митотическую активность, а по нарушению прозрачности под влиянием токсикантов судить о перестройках биологических структур на молекулярном уровне

Предлагаемый в качестве интегрального тест-объекта хрусталик низших позвоночных для оценки токсичности веществ антропогенного происхождения, может быть использован в том случае, если его биологические показатели окажутся сопоставимы по чувствительности с общепринятыми тест-объектами, используемыми в водной токсикологии. В силу этого необходимо провести сравнительный анализ чувствительности биологических показателей хрусталика и классических тест-объектов, используемых для оценки токсичности вредных веществ, попадающих в рыбохозяйственные водоемы.

Цель и задачи исследований: Выявить наиболее чувствительные к действию токсикантов морфологические и цитологические показатели хрусталика у ряда гидробионтов и дать сравнительную характеристику чувствительности биологических показателей хрусталика и классических тест-объектов, используемых в водной токсикологии.

В соответствии с намеченной целью были поставлены следующие основные задачи.

- Провести сравнительные гистологические и цитогенетические исследования хрусталика моллюсков, рыб и амфибий, содержащихся в лабораторных условиях, и выявить наиболее перспрйивн^И 11x1 иОыан', для токсикологических исследований. | ЬИБЛИвТСКл " I

з

- Исследовать воздействие травмы и токсикантов на митотическую активность эпителия хрусталика рыб

- Вскрыть закономерности пространственного распределения митозов в эпителии хрусталика рыб при травматизации

- Провести исследования широкого спектра токсикантов различной степени токсичности и механизма токсического воздействия на митотическую активность хрусталика радужной форели

- Исследовать комплексное воздействие тяжелых металлов на митотическую активность хрусталика радужной форели.

- Провести сравнительный анализ воздействия ряда загрязнителей рыбохозяйственных водоемов на классические тест-объекты, применяемые в водной токсикологии (коловратки, дафнии, моллюски, рыбы) и на цитогенетические показатели хрусталика рыб.

- Дать сравнительную характеристику чувствительности к токсикантам ряда биологических показателей классических тест-объектов и цитогенетических показателей эпителия хрусталика рыб.

Основные положения, выносимые на защиту.

- Хрусталик гидробионтов один из наиболее чувствительных тест-объект для оценки токсичности веществ, попадающих в рыбохозяйственные водоемы;

- Выявлены закономерности реагирования эпителия хрусталика на токсические факторы при дополнительном воздействии травматизации, теплового загрязнения, метациркарий диплостом Показано, что экспериментальное травмирование эпителия хрусталика приводит к появлению синхронизированных митозов;

- Митотическую активность эпителия хрусталика и количество абберативных митозов можно рассматривать как интегральные показатели при оценке токсичности веществ, попадающих в рыбохозяйственные водоемы. Это положение подтверждается сравнительными исследованиями токсичности веществ на классических тест-объектах, используемых в водной токсикологии.

Научная новизна исследований.

~ Впервые установлено, что экспериментальная травматизация хрусталика рыб и амфибий вызывает синхронизацию митозов эпителия хрусталика, что приводит к значительному увеличению митотического индекса;

- Впервые выявлен новый механизм цитодифференцировки хрусталиковых волокон у ротана-головешки, отличающийся от такового в хрусталике низших и высших позвоночных;

- Установлено, что митотическая активность в эпителии хрусталика радужной форели поддерживается на значительном уровне в течение всего года и не испытывает значительных колебаний под действием сезонных факторов в отличие от карповых и амфибий;

- Впервые показана высокая чувствительность эпителия хрусталика радужной форели к токсическому воздействию;

- Проведен сравнительный анализ чувствительности к токсикантам эпителия радужной форели (митотическая активность, увеличение количества хромосомных аберраций) с чувствительностью биологических показателей

у ряда классических объектов, используемых для оценки токсичности веществ в водной токсикологии;

- Показано, что митотический индекс эпителия хрусталика и количество хромосомных аберраций являются репрезентативными показателями оценки токсичности веществ, загрязняющих рыбохозяйственные водоемы.

Практическая значимость работы. На основе проведенных исследований установлено, что метод учета митотической активности и количества хромосомных аберраций в эпителии хрусталика рыб и амфибий можно использовать для оценки токсичности загрязнителей рыбохозяйственных водоемов. Цитогенетические исследования эпителия хрусталика рыб и амфибий позволяют дать оценку генотоксичности загрязняющих веществ, попадающих в рыбохозяйственные водоемы. Указанные биологические показатели уже используются при установлении рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ), а также при биотестировании. По разработанным методикам установлено более 40 ПДК вредных веществ в воде рыбохозяйственных водоемов.

Материалы проведенных исследований и разработанные положения были использованы при написании учебника "Аквакультура", учебных пособий "Системная экология", "Прикладная экология", "Методы рыбохозяйственных исследований", а также при чтении соответствующих лекционных курсов на кафедре "Биоэкологии и ихтиологии" МГУТУ.

Апробация работы. Основные положения и материалы диссертационной работы представлены и опубликованы в материалах Всесоюзной конференции по водной токсикологии (Рига, 1991), 2-й Всесоюзной конференции по рыбохозяйственной токсикологии (Санкт-Петербург, 1993), У1-ой Международной научно-практической конференции "Пищевая промышленность на рубеже третьего тысячелетия" (Москва, 2000), Межрегиональной научно-практической конференции "Морфологические и физиологические особенности гидробионтов" (Москва, 2001), УН-ой Международной научно-практической конференции "Инновационные технологии в пищевой промышленности третьего тысячелетия" (Москва. 2001), 1Х-ой Международной научно-практической конференции "Стратегия развития пищевой промышленности" (Москва, 2003), Всероссийской научно-практической конференции "Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб" (Борок, 2003), Международной научно-практической конференции "Водные экосистемы и организмы" (Москва, 2004), Международной научно-практической конференции "Проблемы воспроизводства аборигенных видов рыб" (Киев, 2005), на научных коллоквиумах кафедры "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА (1990-2005)

Публикации По материалам диссертации опубликовано 56 работ, в том числе 5 монографий.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 6 глав, заключения, выводов, изложена на 256 страницах машинописного текста и включает 73 таблицы и 44 рисунка. Список литературы включает 542 источника, в том числе 297 работы на иностранных языках.

Основное содержание работы

В аналитическом обзоре обобщены литературные данные по морфологии, цитологии, биохимии хрусталика низших позвоночных животных Рассмотрены особенности биохимических изменений, происходящих в хрусталике в процессе онтогенеза и при катарактах различной этиологии.

Основное внимание исследователей уделено вопросам молекулярной и клеточной биологии хрусталика, механизмам, обеспечивающим прозрачность хрусталика, механизмам аккомодации; биохимическим изменениям в хрусталике в процессе эмбрионального и постэмбрионального развития, старения хрусталика, катарактогенеза, при дифференцировке клеточных волокон, регенерации хрусталика, механизмам контактного торможения и клеточной адгезии (Bloemendal, 1981, Koretz, Handelman, 1988; Wan-Cheng et al., 1995; Нефедова, Тойвонен, 1997; Lang, 1999, Burd et al. 1999; Glassser, Kaufman, 1999; Kawashima et al, 2000; Shirai et al ,2001, Phillips, 2002; Saikaet et al, 2002, Nauen, Lauder 2002; Lovicu et al., 2002; Straub et al, 2003, Sivak, 2004; Katzir, Howland, 2003; Masai et al. 2003; Kiss et al. 2004; Meyer, Sekundo, 2005; Douglas et al., 2005). Вместе с тем, вопросы влияния токсикантов на пролиферационную активность хрусталика низших позвоночных гидробионтов изучены недостаточно полно.

Проведен анализ материалов, касающихся влияния загрязнителей водной среды на различные биологические показатели у гидробионтов. Проанализировано влияние видовых, возрастных и индивидуальных особенностей, сезонных и ряда других факторов на токсикорезистентность гидробионтов. Рассмотрены методы комплексных исследований отравлений и токсичности водной среды, методы оценки качества вод при наличии разнородных загрязнителей, влияние токсикантов на морфологию гидробионтов.

Глава 2. Объекты и методы исследований

Основным материалом для написания работы послужили результаты многолетних исследований влияния загрязнителей водной среды на различные тест-объекты с целью выявления наиболее чувствительных к действию токсикантов тест-объектов Нами был предложен метод оценки токсичности и мутагенной активности веществ, основанный на учете митотической активности эпителия хрусталика низших позвоночных гидробионтов За последнее время данный метод, был существенно модифицирован и широко используется в водной токсикологии. Метод основывается на количественном учете индекса митотической активности эпителия, или митотического индекса (МИ), и количества хромосомных аберраций (ХА). Митотическая активность клеток тканей характеризуется митотическим индексом -безразмерной величиной, равной числу клеток в состоянии митоза, приходящихся на 1000 клеток Количество хромосомных аберраций представляет собой число клеток в состоянии митоза, имеющих аберрации хромосом (таких, как фрагментация хромосом, наличие одиночных и двойных мостов, нарушение аппарата деления, в т ч ацентрические митозы, отставание хромосом и др.), приходящихся на 100 клегок в состоянии митоза.

Для исследования отбирались глаза рыб и амфибий без видимых оптических и иных отклонений, с тем, чтобы исключить из опыта материал, в котором различные поражения хрусталика могли бы влиять на клеточную пролиферацию (Симаков, 1987). Для исследований митотической активности эпителия хрусталика рыб и

амфибий нами была использована следующая методика приготовления тотальных плоскостных препаратов эпителия хрусталика Энуклеированные глаза фиксировались в смеси абсолютного спирта и ледяной уксусной кислоты в соотношении 31 (Ромейс, 1954. Лилли, 1969; Милованова, Лысенко, 1996) Банка с фиксатором на 1/4 ее объема заполнялась обезвоженным медным купоросом. Продолжительность фиксации составляла 24 часа По истечении этого срока хрусталик изымался из глаза и от него отделялась капсула с эпителием (Симаков, 1998). Для окраски препарата эпителия использовался гемаляум Майера (Howard, 1952) (для гемаляума Майера процесс окрашивания длится 5-8 мин.) и в некоторых случаях ацеторсеин (Макгрегор, Варли, 1986) После окраски препарат проводился через спирты до ксилола и заключался в канадский бальзам.

При приготовлении препаратов для электронно-микроскопических исследований хрусталики рыб фиксировались раствором глутарового альдегида, который характеризуется быстрым проникновением в ткани и ровной стабилизацией мембран в клетках (Втюрин, Пальцын, 1985) Продолжительность фиксации составляла 4 часа при комнатной температуре Затем препарат проводился через спирты. Для заливки материала использовались полиакриламидные смолы. Исследование полученных препаратов проводили с помощью сканирующего электронного микроскопа Philips XL-30 Препараты хрусталиков брюхоногих моллюсков готовили сходным образом

В наших исследованиях подсчет митотического индекса на тотальных плоскостных препаратах эпителия хрусталика осуществлялся как по всему эпителию в целом, так и в отдельных зонах цитодифференцировки эпителия хрусталика (центральной, герминативной и предэкваториапьной зонах). Для этой цели использовалась окулярная сеточка микроскопа

В исследованиях по изучению изменения митотической активности в различных зонах цитодифференцировки эпителия хрусталика рыб при травматизации вычислялись площади травмы и площади участков эпителия хрусталика, ограниченных полосой посттравматических митозов.

Подсчет хромосомных аберраций проводился на стадиях ана-телофазы в клетках эпителия как для всего хрусталика, так и для отдельных зон цитодифференцировки эпителия: центральной, герминативной и предэкваториальной.

Для получения гистологических препаратов фиксация глаз моллюсков, рыб и амфибий осуществлялась в смеси Карнуа (этанол и уксусная кислота в соотношение 3/1), затем хрусталики заливались в парафин и резались на микротоме (Лилли, 1969) Для морфологического исследования хрусталиков рыб использовалась окраска * гематоксилин эозином, а хрусталики брюхоногих моллюсков, после получения

полутонких срезов, окрашивались толуидиновым синим (Саркисов и др., 1996).

Исследование совместного действия травмы и токсикантов на митотическую . активность эпителия хрусталика рыб проводилось для трех веществ'

дибутилсебацината ДБС, политерпенов (ПТП) и аминопропилтриэтоксисилана АГМ-9. Для ДБС и ПТП были взяты концентрации 10,0; 1,0; 0,1; 0,01; 0,001 мг/л, а для менее токсичного АГМ-9 - 10,0, 1,0. 0,1; 0,01 мг/л Указанные концентрации были выбраны ниже границы, определяемой органолептическими исследованиями по образованию пленки на поверхности воды и запаху.

За два дня до окончания опыта сеголеткам радужной форели в правый глаз наносили укол под контролем микроскопа МБС-10 с учетом, чтобы игла проникала в передний полюс хрусталика на глубину не более 1/5 его диаметра. Время травматизации выбрано таким образом, чтобы к моменту фиксации в герминативной

зоне эпителия был наиболее высокий МИ от воздействия травмы Рыбы, находящиеся в контрольном аквариуме с чистой водой, также получали укол в передний полюс правого глаза Левый глаз всегда служил в качестве контроля

На 30 день опыта сеголеток форели забивали Оба глаза фиксировали в смеси абсолютного этанола ледяной уксусной кислоты в соотношении 3'1 (Лилли, 1969) Тотальные препараты эпителия готовились по описанной выше методике

Сравнительный анализ чувствительности ряда биологических показателей гидробионтов к токсическому воздействию проводился с использованием:

- высокотоксичных веществ - хлорбензола, трихлорбензола;

- сильнотоксичных веществ, обладающих выраженным генотоксичным и мутагенным действием - 2-нафтола и эпихлоргидрина (алкилирующее а хлорорганическое соединение);

- умеренно токсичного вещества - флокулянта "Праестол" (токсичное акриловое соединение, широко используемое в промышленности в качестве ускорителя процессов осаждения, флотации и др.),

- слаботоксичного вещества 4-го класса опасности - органоминерального материала "Прекан", которое представляет собой известковые гранулы с закапсулированной нефтью (данный материал, попадая в водоемы, оседает на дно, оказывая токсическое воздействие на бентосные организмы).

Влияние токсикантов на выживаемость, эмбриональное развитие, размножение, овогенез и некоторые онтогенетические показатели исследовалось на представительных гидробионтах различного систематического уровня: зоопланктоне, зообентосе, а также на рыбах. Один из основных принципов отбора тест-объектов заключался в том, чтобы у них был явно выражен в онтогенезе период эмбрионального и постларвального развития.

Исследования генотоксичности загрязняющих веществ традиционно ведутся на основе анализа аберративных хромосом в клетках тканей и органов гидробионтов на стадиях ана-телофазы и иногда профазы В качестве объектов исследования генотоксичности веществ чаще всего используются политенные хромосомы личинок хирономид (Симаков, Никифоров-Никишин, 1991), клетки костного мозга амфибий (Макгрегор и др., 1989), клетки жаберного эпителия рыб (Симаков, 1998), клетки эпителия хрусталика рыб.

Таким образом, сравнительный анализ чувствительности различных биологических показателей представительных гидробионтов и показателя митотической активности эпителия хрусталика рыб к действию токсикантов ь

приводился для веществ, обладающих разной степенью токсичности (от слаботоксичных до высокотоксичных) а также веществ, обладающих выраженным генотоксичным и мутагенным действием

2.1. Подбор гидробионтов для проведения экспериментов по сравнительной

оценке чувствительности биологических показателей к действию

токсикантов

Зоопланктон в исследованиях представлен коловратками (Philodina roseola) отряд Bdelloidea и дафниями (Daphnia magna) Характерной особенностью коловраток филодин является короткая продолжительность их жизни (около 30 дней) (Beauchamp, 1965; Кутикова, 1970, Бакаева, 2000) Во взрослом состоянии у коловраток отсутствует клеточная пролиферация Для филодин характерен партеногенез Однако не исключается и факультативный гермафродитизм, которым

может обладать часть самцов (Симаков, 1989) Коловраток культивировали в кристаллизаторах емкостью 5 л, кормление осуществлялось хлореллой (Максимова. 1968) За 2 месяца культуру доводили до стационарной фазы роста В такой культуре размножение филодин ингибируется. Для опытов отбиралось 10 особей, которые помещались в бюксы с водой объемом 10 мл В бюксы с отобранными коловратками из стабилизированной культуры вносились исследуемые токсиканты На второй день у коловраток в бюксах наблюдался быстрый рост ооцитов Через 3 дня после выклева молодь становится практически неотличимыми от дефинитивных особей

Коловратки по показателю выживаемости очень устойчивы к токсическому воздействию Под действием токсикантов у коловраток в первую очередь нарушаются процессы размножения, в то время как другие системы организма функционируют удовлетворительно (Симаков, 1974; Сотников, 2004)

Наибольшее внимание при культивировании дафний уделялось стандартизации кормления и освещения (Крайшокова и др., 1991; Филенко и др, 1998) Все токсикологические исследования с дафниями проводились на синхронизированной культуре. В опыте использовали 1-2-х дневных дафний, что позволяет исключить естественную гибель дафний, так как длительность краткосрочных опытов составляла 48 и 96 часов, длительность хронических - 30 суток.

Зообентос в исследованиях представлен прудовиком большим (Ытпаеа зШ^'паПя Ь). Наблюдение за эмбриональным развитием прудовиков не требует специального оборудования, кроме микроскопа Животных отлавливали в водоемах Московской области. Высота раковины исследованных моллюсков составляла 38^12 мм Адаптация к лабораторным условиям у прудовиков проводилась в течение трех недель в аквариумах по 10 литров. Затем прудовики помещались в 5-ти литровые аквариумы по 10 шт (Данильченко, 1982). Прудовики содержались при температуре воды 20-23 °С Кормление прудовиков осуществлялось листьями одуванчиков. Длительность подострого опыта составляла 15 дней, а хронического - 45 дней Кладки моллюсков отбирались, помещались в чашки Петри с отстоянной водой и в растворы исследуемых токсикантов различных концентраций. Изучение кладок и эмбрионального развития моллюсков проводили под контролем микроскопа МБС-10

В качестве представителя инфауны бентоса были исследованы личинки комара СЫгопотиэ р1итон15 В опыт брались одновозрастные личинки, находящиеся на 4-й стадии роста в процессе метаморфоза (Симаков и др., 1996). Личинок по 20 штук помещали в чашки Петри, на половину наполненные прудовым илом, в которые добавляли такое же количество воды Наблюдение за метаморфозом личинок осуществлялось на 7, 8, и 9-й фазах 4-й стадии роста. Личинки содержались при температуре 20 °С. После завершения метаморфоза личинок, отбиралось 5 особей, у которых исследовались политенные хромосомы для выявления возможной генотоксичности веществ.

Токсичность исследуемых соединений изучалась также на различных стадиях онтогенеза ВгасЬусЗапю гепо. Данио культивировались в лабораторных условиях в соответствии с методическими указаниями по установлению эколого-рыбохозяйственных нормативов ПДК и ОБУВ (Симаков, 1998) Взрослых рыб содержали в 10-литровых аквариумах по 5 особей в каждом при температуре 20-22 °С. Применялась принудительная аэрация. Кормление рыб осуществлялось мелким мотылём. Икру данио получали от 2-х гнезд производителей и сразу же после нереста помещали в чашки Петри по 10 икринок Изучался эмбриогенез, время прохождения отдельных стадий развития, а также выклев предличинок.

Исследования изменений митотической активности эпителия хрусталика проводились на сеголетках радужной форели средней массой 14 г и длиной 10,5 см Рыбы содержались в 100-литровых рыбоводных емкостях по 10 особей в каждой Температура воды в аквариумах поддерживалась в пределах 16-17 °С. Воду непрерывно аэрировали и смену ее производили через день Кормление осуществлялось мелким мотылем. Приготовление препаратов эпителия хрусталика осуществлялось по методикам, описанным выше На препаратах эпителия хрусталика подсчитывался митотический индекс (МИ)

Изучение влияния тяжелых металлов на цитогенетические характеристики клеток эпителия хрусталика рыб проводилось в два этапа В первой серии экспериментов исследовалась цито- и генотоксичность воды хвостового водохранилища Костомушского горно-обогатительного комбината, содержащая в своем составе цинк, кадмий, медь, свинец, а также ряд других ТМ в концентрациях, превышающих ПДК для рыбохозяйственных водоемов в 5-120 раз. Концентрации ТМ в воде хвостового водохранилища, Кимасозера, а также расчетные концентрации, соответствующие определенным степеням разведения представлены в таблице 1.

Таблица 1

Содержание тяжелых металлов в воде хвостового водохранилища Костомушского горно-обогатительного комбината, Кимасозере и концентрации катионов металлов при различных степенях разведения,

мг/л

Кимасозеро Хвостовое Разведение

водохранилище х5 х10 Х25 х50

Си 0,0040 0,0120 0,0053 0,0047 0,0043 0,0042

200,0 % 32,5 % 17,5 % 7,5 % 5,0 %

гп 0,0050 0,0230 0,0080 0,0066 0,0057 0,0054

360,0 % 60,0 % 32,0 % 14,0 % 8,0 %

са 0,0010 0,0050 0,0017 0,0014 0,0012 0,0011

400,0 % 70,0 % 40,0 % 20,0 % 10,0 %

РЬ 0,0030 0,0430 0,0097 0,0066 0,0045 0,0038

1333,3 % 223,3 %1 120,0% 50,0 % 26,7 %

Сеголетки радужной форели были привезены из форелевого хозяйства на Кимасозере, окунь взят также из Кимасозера. Рыб содержали в 100-литровых емкостях (с аэрацией) в течение 25 суток (длительность эксперимента с окунем составила 13 дней), смену воды производили один раз в неделю. Опыт поставлен в 4-кратной повторности. Для исследований использовалась не разведенная вода из водохранилища, а также вода, разведенная в 5, 10, 25, 50 раз (для окуня степени разведения составили 0, 5, 25, 50 раз) Для разведения использовалась вода из Кимасозера, в которой также содержались контрольные особи. Концентрация тяжелых металлов в воде хвостового водохранилища Костомушского горнообогатительного комбината и Кимасозера определялась методом атомноабсорбционной спектрометрии на спектрометре 5ресй АА 220-Р8 (методики выполнения измерений массовых концентраций металлов ПНД Ф 14 1:2:4.139-98, ПНДФ 14.1:2:4.140-98).

Подсчет митозов, их анализ и подсчет клеток, находящихся в интерфазе, проводился с помощью окулярной сеточки (Симаков, 1982, 1987)

Во второй серии экспериментов исследовалось влияние на митотическую активность эпителия хрусталика сеголеток радужной форели четырех тяжелых металлов меди, кадмия, свинца и цинка Данные металлы наиболее токсичны из присутствующих в воде хвостового водохранилища Костомушского горнообогатительного комбината в количествах, заметно превышающих нормативные значения ПДК Опыты ставились на сеголетках радужной форели из форелевого хозяйства "Гжелка". Опыты проводились по плану полного факторного эксперимента З4 (четыре фактора на трех уровнях). Нулевой уровень концентраций катионов металлов соответствовал отсутствию металлов (отсутствию воздействия), первый уровень примерно соответствовал содержанию металлов в воде хвостового водохранилища, 2-й - максимальный уровень в 25 раз превышал значения концентраций на 1-м уровне, что приближается к сублетальным концентрациям для смеси исследуемых металлов (табл. 2). Рыб содержали в 100-литровых емкостях (с аэрацией) в течение 30 дней, смену воды производили один раз в неделю

Таблица 2

Концентрации катионов металлов, соответствующие уровням факторов полного факторного эксперимента, мг/л

Соли металлов Коэффициент пересчета молярных масс соль-катион металла Концентрации катионов металлов, соответствующие уровням факторов, мг/л

Уровень фактора

0 1 2

Сульфат меди CuS04 2,52 0 0,01 0,25

Сульфат цинка ZnS04 2,48 0 0,02 0,5

Хлористый кадмий CdCl2 1,63 0 0,005 0,125

Нитрат свинца Pb(N03)2 1,60 0 0,04 1,0

По окончании опыта из эпителия хрусталика рыб готовились постоянные тотальные препараты и проводился их анализ в соответствии с описанными выше методиками.

Статистическая обработка экспериментального материала осуществлялась с использованием MS Excel (вычисление первичных статистик), пакета STATISTIC А 5 5 (регрессионный анализ, корреляционный анализ) Многофакторный дисперсионный анализ проводился на основе самостоятельно разработанной программы (Бородин, Никифоров-Никишин, 2004).

Глава 3. Морфология хрусталика гидробионтов

Морфологические исследования хрусталика гидробионтов, как мало изученного объекта, проведены для выявления особенностей его строения и их использования в водной токсикологии.

3.1. Морфология хрусталика рыб и брюхоногих моллюсков

Толщина капсулы хрусталика большинства рыб составляет примерно 1/40 диаметра хрусталика (у головешки ротана Percottus glehni толщина капсулы достигает 1/15 диаметра хрусталика) (Никифоров-Никишин, 2001) Капсула неоднородна по толщине' на задней полусфере хрусталика капсула значительно тоньше, чем на передней В экваториальной области толщина капсулы примерно в 1,5 раза больше,

чем на передней полусфере хрусталика Однако, у некоторых видов рыб (в частности у головешки ротана) капсула имеет значительно более сложное строение На препарате РегсоИив glehni, окрашенном на гематоксилином-эозином отчетливо видна тонкая структура капсулы (рис 1)

Рис 1 Препарат хрусталика головешки ротана, окрашенный на гликопротеиды. Увеличение 400х.

Электронная микроскопия показывает, что капсула содержит зонулярные пластинки с прикрепленной к ним аморфной тканью, секретируемой эпителием хрусталика (Cohen, 1965). Нами были проведены исследования хрусталика золотой рыбки (Carassius auratus gibelio) с помощью растровой электронной микроскопии в личиночном и мальковом периоде (Симаков, Никифоров-Никишин, 2001) Глаза рыб энуклеировались и из них изымался хрусталик (диаметр хрусталиков составлял 100 - 400 мкм) Хрусталики подсушивались в течение 2 ч при комнатной температуре и помещались на кварцевую подложку для исследования на растровом электронном микроскопе JSM-840. Поверхностное разрешение составляло при этом около 0,01 мкм. Растровая электронная микроскопия позволила выявить в капсуле наличие пор, диаметром менее микрона, через которые, по всей видимости, происходит обмен веществ между растущими тканями хрусталика и камерной влагой глаза (рис 2)

Рис 2 Вид хрусталика двухнедельного малька золотой рыбки в растровый электронный микроскоп (видны поры пронизывающие капсулу хрусталика). Увеличение 159 х

В световой микроскоп эти поры видны как радиальная исчерченность, ранее принимаемая за соединительнотканные структуры При увеличении участка капсулы хрусталика в 2,5 тыс раз на электронограммах хорошо просматриваются не только поры в капсуле хрусталика, но и зонулярные пластинки, из которых построена капсула хрусталика. Поры в капсуле хрусталика имеют различный диаметр (от 0,1 до 1,0 мкм) В расположении пор не отмечается строгой упорядоченности, однако мелких пор в несколько раз больше, чем крупных

Сложная по своей структуре, многослойная капсула ротана головешки по результатам электронной микроскопии имеет следующую структуру Наружный слой представлен зонулярными пластинами, под которыми располагается слой однородного строения, далее опять следуют типичные зонулярные пластины. Сразу под капсулой начинаются хрусталиковые волокна - симпласты, которые в наружных слоях имеют нечеткое геометрическое строение Типичная геометрическая структура волокон проявляется только в более глубоких слоях хрусталика

Под капсулой хрусталика располагается эпителий, за счет дифференцировки которого происходит образование хрусталиковых волокон и рост хрусталика Эпителий хрусталика позвоночных животных представляет собой монослой клеток с различной степенью дифференцировки Эпителиальные клетки в хрусталике взрослого животного располагаются только под передней полусферой капсулы хрусталика от переднего полюса вплоть до экватора При окраске поперечных срезов гематоксилин-эозином, эпителий в передней части хрусталика виден, как однослойный ряд ядер, име!

Рис. 3 Препарат хрусталика пескаря окрашенный гематоксилин эозином.

Увеличение 400 х.

Основная масса хрусталика состоит из удлиненных волокон, имеющих в сечении шестигранную форму, образовавшихся в результате цитодифференцировки эпителия. Толщина волокон уменьшается от периферии к центру хрусталика в результате сдавливания новыми слоями клеток Между собой хрусталиковые волокна связаны бесструктурным цементирующим веществом, в состав которого входят кислые мукополисахариды. Одной из особенностей хрусталиковых волокон является постепенная потеря ядер, поэтому процессы регенерации волокон в случае повреждения практически невозможны Следует отметить, что такой тип строения является основным в ряду позвоночных животных, хотя в различных классах происходят незначительные изменения, которые не затрагивают общего плана строения хрусталика (Угепвеп е1 а1., 1991) (рис. 4)

Рис. 4. Схема строения хрусталика рыб по данным электронной и оптической микроскопии а - капсула хрусталика; б - волоконная часть хрусталика; 1 - зонулярные пластины; 2 - эпителиальные клетки; 3 -хрусталиковые волокна.

В результате наших исследований было найдено, что строение хрусталика головешки ротана значительно отличается от типичного строения хрусталика рыб Снаружи хрусталик головешки ротана покрыт многослойной капсулой Между слоями зонулярных пластин располагается слой аморфной массы (Симаков, Никифоров-Никишин, 2001) По всей видимости, капсула играет решающую роль в защите хрусталика от повреждений. Известно, что головешка ротан может выдерживать обмерзание наружных покровов тела, при этом повреждения оптической системы глаза не возникают. Скорее всего, этому способствует высокая эластичность капсулы хрусталика и повышенное содержание гликопротеидов, которые выполняют роль своеобразного антифриза. Основная масса коры хрусталика ротана представлена многоядерными симпластическими волокнами (рис. 5)

электронной и оптической микроскопии, а - капсула хрусталика; б -основная масса хрусталика; 1,3- зонулярные пластины, 2 - аморфное вещество капсулы, 4 - симпластические волокна; 5 - типичные волокна хрусталика

Наличие живых активных клеток-еимпластов, по-видимому, обуславливает более лабильную реакцию хрусталика головешки ротана на изменения условий среды и дает более широкие возможности регенерации клеток в случае их повреждения Следует отметить, что ядро хрусталика ротана, как и у большинства рыб представлено типичными хрусталиковыми волокнами.

Для сравнительного анализа строения хрусталика низших позвоночных и беспозвоночных животных было проведено исследование строения хрусталиков моллюсков: прудовика и ампулярии. При изучении структуры хрусталиков использовались полутонкие срезы, окрашенные толуидиновым синим На гистологических препаратах видно, что морфология хрусталика брюхоногих моллюсков значительно отличается от строения хрусталиков низших позвоночных Все части глаза располагаются значительно компактнее, хрусталик практически не отделен от стекловидного тела задней камерой газа. Передней камеры глаза также нет.

Капсула хрусталика моллюсков также как и у рыб имеет неклеточное строение и по толщине сопоставима с капсулой некоторых видов рыб (например, пескаря) Основное вещество хрусталика представляет собой бесклеточную аморфную массу, без каких либо структур, напоминающих волоконное строение позвоночных Вещество хрусталика брюхоногих моллюсков оптически неоднородно, что можно видеть на препаратах (рис 6)

Рис. 6. Препарат хрусталика прудовика, окрашенный толуидиновым-синим. Увеличение 400х

У моллюсков, по данным электронно-микроскопического анализа, капсула также имеет неклеточное строение, хотя зонулярные пластины более тонкие и едва различимы. Основная масса хрусталика брюхоногих моллюсков гомогенна, но имеет некоторую исчерченость в глубоких слоях Хрусталиковые волокна у моллюсков не образуются У прудовика наружный слой капсулы представлен более четкими структурами, чем у ампулярии.

Таким образом, особенностью строения хрусталиков брюхоногих моллюсков является то, что вся масса хрусталика обладает неклеточным строением. Как и у

других гидробионтов хрусталик снаружи ограничен капсулой, состоящей из зонулярных пластин Наличие этой структуры у всех изученных гидробионтов скоре всего указывает на то, что зонулярные пластины капсулы являются важным функциональным элементом хрусталика Следует отметить, что именно капсула ограничивает хрусталик от стекловидного тела и через нее идет обмен веществ хрусталика со средами глаза.

Основная масса хрусталика брюхоногих моллюсков откладывается не однородно, на электронно-микроскопических снимках видно, что она образует сферические полосы, что, по-видимому, является результатом цикличности роста хрусталика (рис. 7).

оптической микроскопии а - капсула хрусталика; б - основная масса хрусталика; 1 - зонулярные пластины, 2 - бесклеточное вещество.

3.2. Морфологические изменения в хрусталике рыб при паразитарных

катарактах

Паразитарным катарактам подвержены многие виды рыб (более 100 видов). Среди растительноядных рыб особенно восприимчивы белый амур, белые и пестрые толстолобики (Бауэри др., 1981). Поражение хрусталика метацеркариями диплостом чаще всего приводит к необратимым помутнениям. На поздних стадиях развития паразитарной катаракты отмечается общее уменьшение белка и мукополисахаридов, а также гидратация волокон и капсулы хрусталика (Симаков, Никифоров-Никишин, 1993).

Наши исследования позволили установить различные типы реакции хрусталика у различных видов рыб на поражения паразитами Наибольшая чувствительность к инвазии метацеркариями наблюдается у карпа (Cyprinus carpió) Даже незначительное количество диплостом приводит к потере прозрачности хрусталика. При 2-4 паразитах наблюдаются воспаление роговицы глаза, гидратация коры и волокон хрусталика, развитие ядерной катаракты (табл 3).

Таблица 3

Характер поражения хрусталика карпа и пескаря обыкновенного в зависимости от количества паразитов

Количество паразитов Характер поражения хрусталика

Карп (Cyprinus carpió)

2 Нарушение капсулы хрусталика Гидратация коры и волокон

2—4 Отслоение ядра Начальная катаракта

4-8 Помутнение всей массы хрусталика Пигментные пятна на радужной оболочке, отслоение коры от ядра, со сдвигом ядра вверх

Более 10 Необратимые изменения хрусталика, воспаление роговицы глаза

Пескарь обыкновенный (Gobio gobio)

2 -

2-4 -

4-8 -

10-15 -

15-20 У отдельных особей отмечено нарушение капсулы хрусталика

Более 20 Незначительное нарушение прозрачности хрусталика

Наличие более 10 паразитов приводит к полной потери прозрачности хрусталика, что приводит к нарушению ориентации рыбы и ее гибели Паразитарное поражение хрусталика сопровождается процессами повреждения роговицы и других частей глаза

Проведенный анализ данных биомикроскопии хрусталика карпа показывает, что оптические отклонения чаще наблюдаются при наличии паразита в левом глазу, чем в правом Наиболее часто встречающийся тип нарушений при единичных метацеркариях в глазу отслоение ядра хрусталика, при этом волокна ядра и коры хрусталика остаются прозрачными Визуальное наблюдение хрусталиков рыб с этим типом поражениями не позволяет выявить отмеченной аномалии, она проявляется только при исследовании с помощью щелевой лампы.

Исследования динамики патологических процессов в хрусталике рыб в течение 30 дней показывают, что помутнение развивается медленно и, видимо, занимает несколько месяцев, прежде чем появляются новые оптические отклонения в хрусталике Проведенньге исследования показали, что присутствие метацеркарий диплостом может приводить к тотальному поражению хрусталика, даже если паразиты встречаются в единичных экземплярах. В тоже время, у некоторых особей оптические свойства хрусталика при наличии паразитов не меняются (24,3 % обследованных хрусталиков).

Полученные результаты заставляют обратить внимание на частые случаи поражения метацеркариями хрусталиков подопытных рыб. При использовании хрусталика рыб в качестве тест-объекта в токсикологических исследованиях необходимо проводить тщательный предварительный отбор подопытного материала, с тем, чтобы исключить из эксперимента особей, имеющих различные нарушения прозрачности хрусталика, в частности вызванные паразитарной катарактой

Глава 4. Изменение митотической активности эпителия хрусталика под влиянием различных факторов

4.1. Изменение митотической активности в различных зонах цитодифференцировки эпителия хрусталика рыь при травматизации

При нанесении травмы иглой в центральную зону эпителия хрусталика отмечается резкое кратковременное уменьшение митотической активности во всех зонах эпителия хрусталика Через сутки после нанесения травмы митозы в центральной зоне практически не регистрируются, а в герминативной и предэкваториальной зонах существенно уменьшается их количество. Однако уже на вторые сутки после нанесения травмы в герминативной зоне эпителия возникают множественные посттравматические митозы. Посттравматические митозы распределяются, как правило, в виде замкнутых кольцеподобных структур, форма которых в целом повторяет форму травмированного участка.

При относительно малых размерах травмы (площадь травмы 5 <0,15 мм2, периметр травмы Р < 1,5 мм) МИ герминативной зоны линейно растет с увеличением размеров травмы (рис. 8, рис. 9) (на указанных рисунках приводится отношение МИ к среднему значению МИ для герминативной зоны в контроле, среднее значение МИ в герминативной зоне в контроле составило 6,21).

площадь нравны и/

Рис 8. Зависимость митотического индекса герминативной зоны эпителия от площади травмы Пунктирная линия - график уравнения регрессии (1)

периметр травмы мм

Рис 9. Зависимость митотического индекса герминативной зоны эпителия от периметра травмы. Пунктирная линия - график уравнения регрессии (2).

При дальнейшем увеличении размеров травмы наблюдается эффект "насыщения": увеличение размеров травмы не приводит к значительному увеличению МИ герминативной зоны эпителия. Результаты корреляционного анализа приводятся в таблице (табл. 4).

Таблица 4

Результаты корреляционного анализа экспериментальных данных по травмированию хрусталика радужной форели

Выборочный коэффициент корреляции, г Эмпирическое корреляционное отношение*, щ

(-статистика ^"-статистика

а = 0,01 а = 0,01

Площадь травмы 5' 0,809 12,678 ' 0,99 85 2,63 5 0,991 25,549 р 0.01.59.27 2,297

Периметр травмы Р 0,894 18,357 0,999 216,050 ^0.01.53.33 2,164

* при вычислении эмпирического корреляционного отношения данные группировались в классовые интервалы размером 0,01 мм2 для площади травмы и 0,05 мм для периметра травмы

Так как парный коэффициент корреляции г является полноценным показателем тесноты связи лишь в случае линейной зависимости между исследуемыми переменными (Вентцель, Овчаров, 1973), в таблице также приводятся значения эмпирического корреляционного отношения г], позволяющего оценить степень тесноты связи при любой форме зависимости между исследуемыми переменными (Кремер, 2003).

Из результатов, представленных в таблице видно, что существует значимая тесная корреляционная связь между размерами травмы и величиной МИ Более тесная связь с МИ имеет место для периметра травмы Р (г = 0,894, значимо на уровне а = 0,01). Различия в значениях коэффициентов корреляции г и эмпирического корреляционного отношения г\ указывает на нелинейный характер данной связи.

Исходя из характера зависимости МИ от размеров травмы, регрессионные уравнения, связывающие значения МИ с периметром и площадью травмы отыскивались в форме логистической кривой. Были найдены уравнения регрессии, описывающие зависимость МИ от периметра травмы и ее площади (табл. 5). В таблице приведены результаты регрессионного анализа для полученных уравнений регрессии.

Таблица 5

Результаты регрессионного анализа экспериментальных данных по травмированию хрусталика радужной форели

Уравнение регрессии I 2,227 1 2,230

I 1 X _-4.Ю7-Д-0,176 к 1 "Г С /, 1 + е-"7"'-0212

Общая сумма квадратов отклонений 2,772

Остаточная сумма квадратов отклонений 0,081 0,017

Значение ^-статистики 1402,913 6733,071

Критическое значение /•'-критерия ^о 01,2 84 4,867

Множественный коэффициент детерминации Я2 0,976 0,988

где /- митотический индекс герминативной зоны эпителия; /к - среднее значение МИ герминативной зоны в контроле; Р - периметр травмы; 5 - площадь травмы

Множественный коэффициент детерминации Я2 в обоих случаях мало отличается от единицы (табл 5), что дает основание полагать, что полученные регрессионные уравнения вполне удовлетворительно описывают экспериментальные данные для одиночной травмы.

Следует отметить также, что интенсивность посттравматических митозов в герминативной зоне эпителия в случае одиночной травмы практически не зависит от пространственного положения травмы в центральной зоне.

4.2. Пространственное распределение митозов при травматизации эпителия

хрусталика

При нанесении травмы в центральную зону эпителия (в районе передне! о полюса хрусталика) возникающие на вторые сутки постгравматические митозы локализуются полностью в герминативной зоне эпителия. При этом исходный уровень митотической активности восстанавливается в предэкваториальной зоне, а в центральной зоне митозы ингибируются Указанное распределение митотической

активности по зонам эпителия хрусталика наблюдается вне зависимости от площади травмированного участка Следует отметить, что площадь, охватываемая полосой митозов, практически не зависит от площади травмированного участка. Различия заключаются лишь в интенсивности посттравматических митозов в герминативной зоне' с увеличением площади пораженного участка центральной зоны, количество постгравматических митозов в герминативной зоне возрастает. Как уже отмечалось, форма полосы посттравматических митозов повторяет форму травмированного участка.

Травмирование герминативной зоны эпителия приводит к появлению посттравматических митозов, локализованных главным образом в предэкваториальной зоне эпителия и лить частично захватывающих герминативную зону (в герминативной зоне митозы располагаются по границе с предэкваториальной зоной). После нанесения травмы исходный уровень митотической активности полностью восстанавливается лишь в предэкваториальной зоне. Как и при травмировании центральной зоны, площадь, охватываемая полосой митозов, практически не зависит от площади травмированного участка, интенсивность посттравматических митозов с увеличением площади пораженного участка возрастает, а форма полосы посттравматических митозов в целом повторяет форму травмированного участка

Нанесение травмы в предэкваториальную зону не приводит к ингибированию митозов в центральной и герминативной зонах В этом случае посттравматические митозы, возникающие непосредственно вокруг травмы, локализованы главным образом в предэкваториальной зоне) Следует отметить, что в данном случае скорость регенерации травмы существенно выше, чем в случаях травмирования герминативной зоны (в 3-4 раза) и центральной зоны эпителия (как минимум на порядок).

Выше были рассмотрены случаи травм различных зон эпителия хрусталика, возникающих вследствие укола иглой в эпителиальный слой. При нанесении обширной травмы путем надреза эпителиального слоя или срыва участка эпителия за счет резкого движения иглы в сторону, после укола в передний полюс хрусталика травма затрагивает все три зоны эпителия хрусталика' от центральной до предэкваториальной В этом случае наблюдается следующая картина распределения постгравматических митозов В предэкваториальной зоне посттравматические митозы возникают в непосредственной близости от края травмы, в герминативной зоне митозы равномерно распределены по дуге, лежащей внутри зоны. Следует отметить, что на противоположном от травмы участке эпителия полоса посттравматических митозов частично проникает из герминативной зоны в предэкваториальную В центральной зоне постгравматические митозы не регистрируются.

Площадь, охватываемая полосой митозов, в слабой степени меняется при изменении площади травмы По-видимому, это связано, прежде всего, с тем, что большая часть посттравматических митозов локализована в герминативной зоне эпителия.

Проведенные исследования на интактном хрусталике радужной форели и обыкновенного окуня показывают, что митотический индекс в эпителии хрусталика радужной форели значительно выше, чем у окуня. В наиболее активной герминативной зоне у радужной форели МИ составил 6,21, а у обыкновенного окуня 2,8 (Симаков и др., 1991)

Более подробно регуляция митотической активности при травматизации исследована на эпителии хрусталика радужной форели Удалось показать, что наименьшие значения МИ отмечается в центральной и предэкваториальной зонах эпителия. По всей видимости, пониженное значение МИ в центральной зоне связано с наличием кейлонов в этой области эпителия хрусталика (Балаж, Блажек, 1982) В тоже время, низкая митотическая активность предэкваториальной зоны связана, по-видимому, с процессами цитодифференцировки Ранее было показано, что клеточная цитодифференцировка приводит к резкому понижению митотического индекса в тканях, в том числе и в эпителии хрусталика (Симаков, 1987).

По сравнению с бесхвостыми амфибиями регуляция митотической активности в эпителии хрусталика рыб происходит с высокой степенью пространственной корреляции.

Сравнение морфоло(ии ядер в эпителии хрусталика радужной форели и окуня показывает, что у обоих видов ядра клеток в центральной зоне имеют округлую форму. Однако в герминативной и предэкваториальной зонах дифференцировки округлая форма клеточных ядер сохраняется лишь у форели, в то время как у окуня ядра клеток эпителия становится вытянутым. Это указывает на более раннюю дифференцировку клеток эпителия окуня Возможно, этим можно объяснить отличия в уровне МИ в эпителии хрусталика окуня по сравнению с эпителием хрусталика радужной форели.

Травмирование иглой центральной зоны эпителия хрусталика в районе переднего полюса, приводит примерно к 48-часовому ингибированию митозов хрусталика (у окуня посттравматические митозы возникают уже через 24 часа) Подобное ингибирование митозов после травмы центральной зоны характерно не только для рыб, но и для других позвоночных, например мышей (Симаков, 1974). Это указывает на однотипный механизм регуляции митотической активности в эпителии хрусталика различных классов позвоночных животных.

Проведенные исследования показали также, что у исследованных видов рыб (радужная форель и окунь обыкновенный) высокий уровень митотической активности сохраняется в течение всего года, это дает возможность использовать эти виды рыб как тест-объекты в токсикологических экспериментах.

4.3. Совместное действие травмы и токсикантов на цитодифферинцировку

хрусталика рыб

Изучение пространственного распределения митозов, а также совместного влияния травмы и токсикантов на эпителий хрусталика радужной форели проводилось в ноябре, в период, когда митотическая активность у многих видов животных снижена, а, например, у амфибий практически полностью подавленна Нами показано, что у форели в течение всего года митотическая активность эпителия хрусталика достаточно высока. Посттравматические митозы в эпителии хрусталика форели появляются через 48 часов после нанесения травмы в течение всего года, в то время как у травяной лягушки в летнее время - через 48 часов, осенью и зимой на 7-й день после нанесения травмы (Сахарова, Голиченков, 1968).

Митотический индекс герминативной зоны эпителия интактного хрусталика левого глаза радужной форели составил 6,21 При нанесении укола иглой в передний полюс хрусталика правого глаза МИ за двое суток в герминативной зоне поднялся до 9,29, в то время как в периферических частях эпителия произошло даже снижение этого показателя Следует отметить, что митозы в эпителии хрусталика рыб в норме

встречались как в малодифференцированных зонах - центральной (МИ =1.39) и герминативной (МИ = 6,21), так и предэкваториальной зоне (МИ = 2,71) В дальнейшем исследовании мы рассматривали митотическую активность только в герминативной зоне как наиболее активной

При добавлении в водную среду токсикантов и их хроническом воздействии состояние клеточной пролиферации изменяется. Кремнеорганические соединения. ДБС и ПТП в случае отсутствия травмы подавляют митотическую активность эпителия, причем наиболее выраженный ингибирующий эффект наблюдается при действии политерпенов (ПТП) При концентрации ПТП 10 мг/л МИ падает до 1,75, в то время как ДБС снижает МИ до 0,37. При концентрациях 0,01 мг/л ДБС и при 0,001 для ПТП МИ близок к норме Можно считать, что эти концентрации не действуют на митотическую активность хрусталика

Экспериментальное травмирование переднего полюса хрусталика при совместном действии с ПТП и ДБС приводит к стимуляции митозов. Однако стимуляция митозов травмой при совместном действии с высокими дозами токсикантов незначительна, а при действие малых доз близка к норме.

В противоположность ДБС и ПТП, АГМ-9 в концентрации выше, чем 0,01 мг/л приводит к стимуляции митозов в эпителии герминативной зоны хрусталика даже без нанесения травмы Концентрация 0,01 мг/л уже не влияет на МИ, поэтому ее можно считать не действующей При совместном действие АГМ-9 и травмы, особенно при концентрации этого токсиканта 10,0 мг/л МИ достигает максимального значения. Суммарный стимулирующий эффект от двух рассматриваемых факторов в этом случае наиболее выражен МИ в эпителии герминативной зоны увеличивается в 2-3 раза. Результаты исследований приведены в таблице (табл. 6).

Таблица 6

Величина МИ в герминативной зоне эпителия хрусталика радужной форели при воздействии токсикантов и травматизации

Величина МИ герминативной зоны эпителия хрусталика

мг/л ДБС ПТП АГМ-9

без травмы с травмой без травмы с травмой без травмы с травмой

10,0 1,0 0,1 0,01 0,001 0,37 ± 0,22 3,73 ± 0,53 6,33 ± 0,68* 6,64 ± 0,75* 1,55 ±0,27 5,02 ± 0,67 8,05 ± 0,86 8,98 ± 1,05* 1,75 ±0,21 2,06 ±0,14 3,47 ± 0,28 6,38 ± 0,19* 1,93 ± И 3,17 ±0,27 7,24 ± 0,07 9,26 ± 0,22* 10,74 ± 1,15 9,38 ± 1,08 7,64 ±0,71 5,90 ± 0,39* 16,66 ± 1,77 12,70 ± 1,18 9,79 ± 1,13* 8,61 ± 1,02*

Контроль 6,21 ±0,74 9,29 ± 1,13 6,21 ±0,18 9,29 ±0,31 6,21 ±0,7 9,29 ± 1,16

различия с контролем не значимы на уровне а = 0,05

Таким образом, исследованные концентрации токсикантов проявляют различные воздействия на МИ в эпителии хрусталика форели, как без нанесения травмы, так и при травмировании хрусталика в районе переднего полюса Экспериментальное травмирование эпителия хрусталика перед окончанием опытов во всех случаях приводит к стимуляции митозов в герминативной зоне Однако наиболее отчетливо эффект стимуляции проявляется при совместном действии токсиканта и травмы если они оба увеличивают митотическую активность эпителия. В тоже время вещества, ингибирующие митозы, резко снижают стимулирующий эффект травмы

Таким образом, эпителий хрусталика сеголеток форели очень чувствителен к действию малых доз токсикантов При этом длительное воздействие токсикантов может вызывать как увеличение, так и уменьшение значения МИ. Нанесение укола в передний полюс хрусталика за два дня до окончания опыта выступает как стимулирующий фактор. Следует отметить, что при воздействии веществ, подавляющих митотическую активность, стимулирующий эффект от травмы не значителен, как это видно из проведенных экспериментов Однако совместное действие травматизации и веществ, стимулирующих митозы, увеличивает МИ в герминативной зоне более чем в 2 раза по сравнению с контролем Особенно отчетливо это проявляется при действии АГМ-9 в концентрациях 10,0 и 1,0 мг/л Следует отметить также, что исследованные токсиканты не обладают мутагенным действием, т. к. случаи аномальных митозов зафиксированы не были. Проведенные исследования позволяют сделать вывод о том, что травма при совместном воздействии с токсикантами выступает как регулирующий фактор, и, по-видимому, большинство митозов при этом можно рассматривать как постгравматические, так как их расположение повторяет конфигурацию травмы.

Как показали наши исследования, наличие постгравматических митозов в эпителии хрусталика рыб может существенно исказить результаты токсикологических исследований с использованием МИ эпителия хрусталика рыб в качестве чувствительного биологического показателя В связи с этим принципиально важным на наш взгляд является тщательный отбор подопытного материала, с тем, чтобы исключить из эксперимента особей, имеющих различные нарушения целостности капсулы и эпителия хрусталика

4.4. Влияние теплового загрязнения на митотическую активность в эпителии хрусталика рыб и амфибий в зимний период

Исследования митотической активности эпителия хрусталика позвоночных гидробионтов в условиях теплового загрязнения проводились на рыбах и амфибиях р Пехорка (Московская область), температура воды в которой в зимний период не опускается ниже 16 °С. Рыбы и амфибии в этих условиях не впадают в спячку, продолжая активно питаться в зимний период Например, в феврале у лягушек отмечены случаи брачного поведения Можно было бы предположить, что в данных условиях, при постоянно высокой температуре водной среды процессы клеточной пролиферации эпителия хрусталика не будут ингибироваться и в зимний период.

Исследования на представителях ихтиофауны р Пехорка показали полное отсутствие митозов во всех зонах цитодифференцировки в зимний период У травяной лягушки в летнее время отмечается высокая митотическая активность эпителия хрусталика Митотической индекс герминативной зоны может достигать 7 В зимний период у амфибий, так же как и у рыб наблюдается полное отсутствие пролиферационной активности эпителия хрусталика

Следует отметить, что аналогичные результаты были получены и в лабораторных условиях Проведенные исследования показывают, что регуляция митотической активности эпителия хрусталика рыб и амфибий происходит под влиянием целого ряда факторов, и температура водной среды не является ведущим По-видимому, ведущим фактором является длина светового дня (Гирса, 1968, Черняев, Довгий, 1969, Рощупкин, Потапенко, 1977; Никифоров-Никишин, 2001)

В тоже время митотическая активности эпителия хрусталика молоди радужной форели и окуня остается на значительном уровне и в осенне-зимний период Выше

обсуждалась структура эпителия хрусталика низших позвоночных животных и указывалось на наличие трех зон цитодифференцировки - центральной, герминативной и предэкваториальной Митотическая активность этих зон различна" максимальная в герминативной зоне и минимальная в центральной Так. например, у контрольных особей молоди радужной форели в январе в лабораторных условиях митотический индекс в целом для всего хрусталика составил 3,2; для центральной зоны - 1,2; для герминативной зоны - 5,7; для предэкваториальной зоны - 2,1 Митотический индекс герминативной зоны эпителии интактного хрусталика окуня составил 2,8 Следует отметить, что митотическая активность эпителия молоди существенно выше, чем у взрослых рыб (митотический индекс герминативной зоны эпителия сеголеток радужной форели примерно в 3 раза выше, чем у взрослых особей). Таким образом, высокая митотическая активности эпителия хрусталика молоди радужной форели и окуня в зимний период делает возможным их использование в качестве тест-организмов Однако более высокие значения митотического индекса и более крупные клетки эпителия хрусталика делают молодь радужной форели оптимальным объектом токсикологических исследований с использованием МИ эпителия хрусталика в качестве чувствительного биологического показателя.

Глава 5. Сравнительный анализ чувствительности показателя

митотической активности эпителия хрусталика рыб с

чувствительностью существующих методов оценки токсичности

веществ

5.1. Хлорбензол Анализ влияния различных концентраций хлорбензола на выживаемость, размножение и изменения в репродуктивной системе у коловраток филодин (Philodina roseola) показывает, что наиболее чувствительным показателем к действию хлорбензола является количество отложенных яиц. При воздействии хлорбензола в концентрации 0,02 мг/л количество отложенных яиц уменьшилось на 80 % по отношению к контролю, в то время как выживаемость значимо (на уровне а = 0,05) не отличалась от контроля.

Анализ гистологических препаратов показал, что при высоких концентрациях хлорбензола у коловраток (Philodina roseola) отмечается нарушение в морфологии репродуктивной системы Через 24 часа наблюдается подавление роста ооцитов. Сходные данные получены и при гистохимических исследованиях. Следует отметить, что степень окраски желточников у коловраток незначительно меняется при изменениях концентрации токсиканта, и по интенсивности близка к контролю. Уменьшение объема желточников при действии хлорбензола в концентрации 0,02 мг/л составило 64 %, что демонстрирует достаточно высокую чувствительность данного показателя. Однако, микрометрия желточников на гистологических постоянных препаратах значительно более трудоемкий процесс, чем подсчет количества отложенных яиц, что в совокупности с высокой чувствительностью второго показателя делает его более предпочтительным для подобных исследований.

В острых опытах на дафниях через 96 часов после начала опыта отмечалась гибель 40 % особей в растворах хлорбензола концентрации 0,1 мг/л Особенностью воздействия хлорбензола является его влияние на поведение дафний За несколько часов до гибели дафнии начинают терять ориентацию, переворачиваются через голову, затем опускаются на дно сосуда.

Выживаемость за 30 суток в исходном поколении в растворах хлорбензола концентрации 0,02 мг/л составила 67 %, а в 3-м поколении - 75 %, что указывает на отдаленное токсическое воздействие хлорбензола При концентрациях, меньших или равных 0,001 мг/л, отдаленного токсического воздействия хлорбензола не отмечено

Линька дафний зависит от интенсивности белкового обмена, и ее нарушение можно рассматривать как онтогенетический показатель, связанный с ростом рачков При температуре 18-20 °С дафнии до периода созревания линяют 4-5 раз Заметные изменения количества сброшенных карапаксов отмечаются только в растворах хлорбензола концентраций 0,01 мг/л и выше В целом данный показатель менее чувствительный, чем выживаемость и плодовитость дафний

Сравнение показателей выживаемости и плодовитости взрослых особей прудовика большого показывает, что число кладок и число яиц в целом более чувствительный показатель, чем выживаемость моллюсков (существенное изменение выживаемость наблюдается в растворах хлорбензола максимальной из исследованных концентраций - 0,1 мг/л). Исследования показали, что действию хлорбензола меньше всего подвержен такой показатель, как число яиц на кладку Основное уменьшение плодовитости идет за счет снижения количества кладок

Эмбриологические исследования показали, что в растворах хлорбензола концентрации 0,01 мг/л и выше наблюдались аномалии развития задерживалось дробление бластомеров, на стадии поздней трохофоры париентальные ганглии отставали в развитии от педиальных ганглиев, презумптивные участки нервной системы в растворах токсиканта дифференцировались с задержкой. По характеристике всего органогенеза высокие концентрации хлорбензола задерживали развитие по сравнению с контролем на 5-6 стадий.

В низких концентрациях (0,001 мг/л и ниже) хлорбензол не оказывал влияния на эмбриогенез и в тоже время действовал как стимулятор размножения моллюсков. Развитие зародышей прудовика (Ытпаеа а!а^па11з) проходило нормально и соответствовало стадиям развития в контроле Интегральным показателем эмбрионального развития является выклев молоди и ее выживание в течение 10 дней после вьгхода из яйцевых оболочек. Время инкубационного периода у зародышей также зависело от концентрации хлорбензола. В контроле развитие завершалось за 16-22 дней, а при концентрации хлорбензола 0,01 мг/л период инкубации увеличивался в два раза. При максимальной из исследованных концентраций (0,1 мг/л) период инкубации увеличивался на 40 дней

Высокие дозы бензольных соединений выступают как стимуляторы митотической активности эпителия хрусталика радужной форели П'агаяа1то тук^) (Долгов, Дрогичева, 1968). Проведенные исследования показали, что под воздействием хлорбензола наибольшие изменения наблюдаются в маподифференцированных зонах эпителия хрусталика (прежде всего в герминативной) За время опыта в герминативной зоне произошло существенное увеличение пролиферационной активности и МИ к 21-му дню опыта почти в 3 раза (при концентрации токсиканта 0,1 мг/л) Меньшие концентрации хлорбензола также приводили к увеличению МИ в герминативной зоне эпителия хрусталика, хотя и менее значительному В то же время в дифференцированных участках эпителия хрусталика (предэкваториальной зоне) заметного повышения митотической активности не наблюдалось Таким образом, во всех исследованных концентрациях хлорбензол оказывал стимулирующее воздействие на клеточную пролиферацию эпителия, причем наиболее выраженное -для герминативной зоны.

Полученные результаты позволяют провести сравнительный анализ чувствительности различных показателей исследованных гидробионтов к действию хлорбензола Одними из наиболее чувствительных показателей к действию хлорбензола являются изменение числа отложенных яиц у коловраток (Philodina roseola), изменение числа кладок и числа яиц на одну синкапсулу у прудовика большого (Limnaea stagnalis), изменение митотического индекса герминативной зоны эпителия хрусталика у молоди радужной форели, а также выживаемость дафний за 30 суток в исходном поколении (рис. 10).

200

с

Р 160

) " *

> 3 к 120

0 5

1 | 80

х х

г g 40

> S 6

I 0

О

-80

0,0001 0,001 0,01 0,02 0 05 0 1

концентрация, мг/л

В Коловратхи (Philodina roseola) Число отложенныхяиц В Дафнии (Daphma magna) Выживаемость по поколениям (F0) И Прудовик большой (Limnaea stagnalis) Взрослые особи Число кладок □ Прудовик большой (Limnaea stagnalis) Взрослые особи Число яиц на одну синкапсулу И Радужная форель (Parasalmo mykiss) МИ герминативной зоны эпителия хрусталика

Рис 10 Изменение некоторых биологических показателей исследуемых гидробионтов под действием хлорбензола. Приведены абсолютные величины отклонений показателей от контроля, достоверно (на уровне а = 0,05) отличающихся от соответствующих контрольных значений

5.2. Трихлорбензол. Наиболее чувствительным показателем к действию трихлорбензола у коловраток филодин (Philodina roseola) оказалось количество отложенных яиц При воздействии трихлорбензола в концентрации 0,03 мг/л количество отложенных яиц составило 27 % по отношению к контролю ^ (выживаемость - 88 %). Также как и в случае хлорбензола, объем желточников у

коловраток при действии трихлорбензола в концентрациях, вызывающих значительное подавление созревания яйцеклеток, уменьшаются в 2-3 раза, по ^ сравнению с контролем. Объем желточников при действии трихлорбензола в

концентрации 0,03 мг/л составил 35 %.

В отличие от хлорбензола, трихлорбензол демонстрирует меньшую токсичность в острых опытах на дафниях. При концентрации 0,1 мг/л гибель дафний составила 30 % особей за 96 часов В хроническом опыте при концентрациях 0,01 мг/л и выше, гибель дафний составляет около 30% особей. Остальные показатели изменяются сходным образом Как и в случае с хлорбензолом, последующие три поколения оказались более устойчивыми к воздействию трихлорбензола. Наиболее подвержены влиянию токсиканта исходные особи. В последующих трех поколениях, в отличие от действия хлорбензола, не наблюдается статистически достоверных различий между контролем

и опытом Все это указывает на адаптацию дафний в процессе развития к действию трихлорбензола.

Трихлорбензол при концентрациях 0,01 мг/л и выше оказывает заметное влияние на количество линек лишь у исходных особей При концентрации трихлорбензола 0,001 мг/л, в среднем на одну дафнию приходится 0,2 эфиппия, поэтому указанную концентрацию следует считать допустимой

Токсическое действие трихлорбензола на моллюсков сравнимо с действием хлорбензола. Выживаемость прудовика большого в растворах трихлорбензола концентрации 0,1 мг/л составила 21 %. При концентрациях 0,01 и 0,03 мг/л выживаемость существенно выше (около 90 %), однако при концентрации 0,03 мг/л наблюдаются выраженные нарушения процессов размножения (число кладок снизилось до 48 %).

Эмбриологические исследования показали, что при концентрациях 0,01 мг/л и выше наблюдается нарушение эмбриогенеза на ранних стадиях развития. Эмбриотоксический эффект проявляется в неправильном дроблении бластомеров и в задержке дробления У некоторых зародышей отмечается нарушение гаструляции с последующей гибелью на ранних стадиях Выживаемость молоди в растворах трихлорбензола концентрации 0,1 мг/л составила 57 %

Помимо таких интегральных показателей как выклев и выживаемость молоди было исследовано действие трихлорбензола на эмбриональное развитие. В норме развитие эмбрионов у прудовиков длилось не более 26 дней, а под влиянием трихлорбензола в концентрациях 0,01 и 0,1 мг/л инкубационный период увеличивался соответственно на 18 и на 20 дней.

Под воздействием трихлорбензола (как и в случае хлорбензола) наибольшие изменения митотической активности у молоди радужной форели отмечались в i ерминативной зоне эпителия. Митотический индекс к 21-му дню опыта составил 11,4 (при концен фации токсиканта 0,1 мг/л) Меньшие концентрации трихлорбензола гакже приводили к увеличению МИ в герминативной зоне эпителия хрусталика, хотя и менее значительному. В предэкваториальной и центральной зонах заметного повышения митотической активности не наблюдалось Во всех исследованных концентрациях трихлорбензол оказывал стимулирующее воздействие на клеточную пролиферацию эпителия. Наиболее выраженным данное воздействие было для герминативной зоны.

Сравнительный анализ чувствительности различных показателей исследованных гидробионтов к действию грихлорбензола позволяет сделать вывод о том, что, как и в случае хлорбензола, одними из наиболее чувствительных показателей к действию трихлорбензола являются изменение числа кладок и числа яиц на одну синкапсулу у прудовика большого (Limnaea stagnalis), выживаемость дафний (Daphnia magna) за 30 суток в исходном поколении, изменение митотическо1 о индекса герминативной зоны эпителия хрусталика у молоди радужной форели, а также количество сброшенных карапаксов у дафний в первом поколении (рис 11)

-80

1 Ш ш

сяЛ 1 ш

ш ■ (р 1-

I

0 0001

0 001

0 05

0 01 0 03

концентрация, мг/л

■ Дафнии (Daphnia magna) Выживаемость по поколениям (F0)

ЕЭ Дафнии (Daphnia magna) Количество сброшенных карапаксов по поколениям (F1)

Q Прудовик большой (Limnaea stagnalis) Взрослые особи Число кладок

□ Прудовик большой (Limnaea stagnalis) Взрослые особи Число яиц на одну синкапсулу

□ Радужная форель (Parasalmo mykiss) МИ герминативной зоны эпителия хрусталика

Рис 11 Изменение некоторых биологических показателей исследуемых гидробионтов под действием трихлорбензола Приведены абсолютные величины отклонений показателей от контроля, достоверно (на уровне а = 0,05) отличающихся от соответствующих контрольных значений.

5.3. 2-нафтол Наиболее чувствительным показателем к действию 2-нафтола у коловраток оказалось количество отложенных яиц При воздействии 2-нафтола в концентрации 0,2 мг/л количество отложенных яиц составило 42 % по отношению к контролю, выживаемость взрослых особей - 68 % Объем желточников при действии 2-нафтола в концентрации 0,2 мг/л составил 71 %.

2-нафтол существенно менее токсичен по сравнению с рассмотренными выше бензольными соединениями. В хроническом опыте на дафниях только при концентрации 0,2 мг/л отмечаются заметные изменения по таким показателям как выживаемость и плодовитость.

Сравнение показателей выживаемости и плодовитости взрослых особей прудовика большого показывает, что заметные изменения наблюдаются лишь при высоких концентрациях токсиканта (0,2 мг/л и выше) При этом число отложенных яиц в целом более чувствительный показатель, чем выживаемость моллюсков Уменьшение числа отложенных яиц происходит в основном за счет уменьшения числа кладок ^ (синкапсул) В синкапсулах число яиц сохраняется на заметном уровне вплоть до

максимальной из исследованных концентраций (0,8 мг/л) (Сотников, 2004).

Влияние растворов 2-нафтола на эмбриональное развитие прудовиков » исследовалось в течение 45 дней Степень токсичности 2-нафтола определялась как

по интегральным показателям эмбриогенеза (т е по выклеву), так и по прохождению стадий эмбриогенеза Помимо этого изучалась выживаемость молоди после выклева из яйцевых оболочек в течение 10 дней Критерием токсичности служили такие показатели как нарушение дробления, отклонения в органогенезе, либо нарушения индукционных воздействий при дифференцировке осевых структур у эмбрионов прудовика

Изучение влияния 2-нафтола на митотическую активность эпителия хрусталика показало, что малые концентрации токсиканта (по опытным данным концентрации до 0,5 мг/л, по результатам экстраполяции - до 0.6 мг/л) оказывают ингибирующее

действие на клеточную пролиферацию Наименьшая митотическая активность герминативной зоны эпителия хрусталика в опыте наблюдалась при концентрации 0,1 мг/л При этом митотический индекс по герминативной зоне составил около 31 % от контроля Начиная с концентрации 0,5 мг/л наблюдался стимулирующий эффект 2-нафтола на пролиферационную активность эпителия (митотический индекс для герминативной зоны при концентрации токсиканта 0,8 мг/л составил на 21-й день опыта 11,8) Так же. как и при действии других бензольных соединений, наибольшее влияние 2-нафтол оказывал на пролиферационную активность герминативной зоны эпителия Следует отметить, что при концентрациях 2-нафтола порядка 0,6 мг/л чувствительность рассматриваемого показателя будет низкой, т к при этой концентрации митотическая активность эпителия хрусталика близка к контрольной

Сравнение чувствительности различных показателей исследованных гидробионтов к действию 2-нафтола показывает, что наиболее чувствительными показателями является выживаемость, изменение числа кладок и числа яиц на одну синкапсулу, средний выклев за 45 дней у прудовика большого (Limnaea stagnai is), а также изменение митотического индекса герминативной зоны эпителия хрусталика у молоди радужная форели (рис. 12).

120

С

S* 80

3 Î

Ё § 40

S -40 -80

0,001 0,01 0,1 0,2 0 5 0,8

концентрация, мг/л

В Прудовик большой (Limnaea stagnalis) Взрослые особи Выживаемость

И Прудовик большой (Limnaea stagnalis) Взрослые особи Число кладок

□ Прудовик большой (Limnaea stagnalis) Взрослые особи Число яиц на одну синкапсулу

□ Прудовик большой (Limnaea stagnalis) Молодь Средний выклев за 45 дней

S Радужная форель (Parasafmo mykiss) МИ пзрминативной зоны эпителия хрусталика

Рис 12 Изменение некоторых биологических показателей исследуемых гидробионтов под действием 2-нафтола. Приведены абсолютные величины отклонений показателей от контроля, достоверно (на уровне а = 0,05) отличающихся от соответствующих контрольных значений.

5.4. Эпихлоргидрин Анализ влияния различных концентраций эпихлоргидрина на выживаемость, размножение и изменения в репродуктивной системе у коловраток филодин (Philodina roseola) показал, что наиболее чувствительным показателем к действию эпихлоргидрина является количество отложенных яиц При воздействии эпихлоргидрина в концентрации 0,5 мг/л количество отложенных яиц уменьшилось на 55 % по отношению к контролю Уменьшение объема желточников при действии эпихлоргидрина в концентрации 0,5 мг/л составило 40 %.

В острых опытах на Daphnia magna было найдено, что при концентрации 30 мг/л гибнет около 50 % дафний в течение первых 48 часов. Таким образом, данную концентрацию можно считать медиальной летальной концентрацией (LC50) в

рассматриваемом случае Хронические опыты проводились на синхронизированной культуре Daphnia magna В первую очередь была исследована выживаемость исходных особей и последующих трех поколений. При концентрации эпихлоргидрина 1,0 мг/л гибель у исходных дафний и в последующих трех поколениях составляет 43-54 % При концентрации растворов эпихлоргидрина 0,5 и 0,1 мг/л отмечается достоверная разница между контролем и опытом, что не позволяет рассматривать указанные концентрации как допустимые.

Анализ полученных результатов показывает, что заметное уменьшение плодовитости у дафний происходит при действии растворов эпихлоргидрина с концентрациями 0,1 мг/л и выше При концентрации 0,05 мг/л показатели близки к контролю, поэтому эта концентрация может быть принята как максимально допустимая по данному показателю Воздействие высоких концентраций эпихлоргидрина (0,5 мг/л и выше) приводит к образованию эфиппиев у дафний В среднем образуется 3,5 эфиппия в пересчете на 10 дафний. Количество сброшенных карапаксов заметно меняется только при воздействии эпихлоргидрина с концентрациями 1,0 мг/л как у исходных дафний, так и в последующих трех поколениях. При концентрации 0,01 мг/л и ниже не отмечено нарушения биологических показателей у дафний по сравнению с контролем.

Анализ токсического действия эпихлоргидрина на выживаемость и некоторые показатели размножения большого прудовика (Limnaea stagnalis) показал, что заметные отклонения в показателях наблюдаются при концентрациях токсиканта 0,1 мг/л и выше Выживаемость прудовика большого в растворах эпихлоргидрина концентрации 1 мг/л составила 24% При концентрации 0,1 мг/л выживаемость существенно выше (около 90 %), однако при этом наблюдаются заметные нарушения процессов размножения (число яиц снизилось до 60 %). Наименее чувствительным показателем оказалось количество яиц в синкапсуле (заметные изменения наблюдаются только при максимальной из исследованных концентраций).

Эмбриональное развитие прудовиков изучалось в тех же концентрациях, что и при изучении влияния токсиканта на выживаемость и число отложенных яиц Концентрация 0,1 мг/л вызывала десинхронизацию в дроблении бластомеров, а также отклонения в гаструляции и при образовании велигера и великонха. Исследования выклева и последующего развития молоди в растворах эпихлоргидрина в течение 10 дней показали, что сохраняется следующая общая закономерность- выклев более чувствительный показатель к токсическому воздействию, чем выживаемость молоди прудовика.

Исследования выживаемости и метаморфоза личинок хирономид (Chironomus plumosus) в растворах эпихлоргидрина показали, что наиболее заметные изменения выживаемости личинок и куколок наблюдаются лишь при максимальной из исследованных концентраций токсиканта (1,0 мг/л) (выживаемость личинок и куколок при этом составляет 50-60 % от контроля). Генотоксичность эпихлоргидрина, по-видимому, приводит к перестройкам хромосом у хирономид в процессе метаморфоза и нарушению морфогенеза Это выражается, в частности в том, что метаморфоз при концентрации эпихлоргидрина 1,0 мг/л завершается не полностью.

Нами были проведены исследования воздействия токсикантов на икру, личиночные стадии и на мальков данио (Brachydanio rerio). Анализ полученных результатов показывает, что эпихлоргидрин оказывают заметное влияние на эмбриональное развитие рыб только при высоких концентрациях (1,0 мг/л). При

концентрациях 0,1 мг/л и ниже исследуемые показатели выклева личинок и эмбрионального развития близки к контролю

После выклева предличинки помещались в растворы токсиканта по 10 штук и содержались в чашках Петри Продолжительность опыта составила 48 часов Как и для эмбрионального развития, эпихлоргидрин оказывают заметное влияние на предличинок рыб только при максимальной из исследованных концентраций (1,0 мг/л).

Анализ полученных данных говорит о том, что токсичность исследуемых растворов эпихлоргидрина для мальков Brachydanio rerio заметно проявляется лишь при концентрации 0,5 мг/л За допустимую концентрацию, при которой растворы эпихлоргидрина не оказывают влияния на выживаемость мальков рыб можно принять 0,1 мг/л. Помимо мальков действие растворов эпихлоргидрина изучалось на взрослых особях Brachydanio rerio, и была показана их устойчивость к действию исследуемых концентраций.

Эпихлоргидрин в малых концентрациях (до 0,1 мг/л включительно) оказывает небольшое (значимое на уровне а = 0,05) стимулирующее влияния на митотическую активность эпителия хрусталика у молоди радужной форели. При дальнейшем росте концентраций эпихлоргидрин оказывает заметное ингибирующее действие Митотический индекс герминативной зоне эпителия хрусталика к концу опыта уменьшился на 82 % (при концентрации токсиканта 1,0 мг/л).

Сравнительный анализ чувствительности различных показателей исследованных гидробионтов к действию эпихлоргидрина показывает, что одними из наиболее чувствительных показателей являются изменение объема желточника у коловраток филодин (Philodina roseola), изменение числа отложенных яиц у прудовика большого (Limnaea stagnalis), изменение митотического индекса герминативной зоны эпителия хрусталика у молоди радужная форели Также высокую чувствительность имеют такие показатели, как выживаемость исходных особей и плодовитость во втором

концентрация, мг/л

Ш Коловратхи (Philodina roseola) Объем желточника И Дафнии (Daphnia magna) Выживаемость по поколениям (F0) Е Дафнии (Daphnia magna) Плодовитость по поколениям (F2)

□ Прудовик большой (Limnaea stagnalis) Взрослые особи Число отложенныхяиц

□ Радужная форель (Parasalmo mykiss) МИ герминативной зоны эпителия >русталика

Рис. 13 Изменение некоторых биологических показателей исследуемых гидробионтов под действием эпихлоргидрина Приведены абсолютные величины отклонений показателей от контроля, достоверно (на уровне а = 0,05) отличающихся от соответствующих контрольных значений.

5.5. "Праестол" Проведенные исследования показали, что наиболее чувствительным показателем к действию "Праестола" у коловраток является (как и в рассмотренных ранее случаях) количество отложенных яиц При воздействии "Праестола" в концентрации 0,5 мг/л количество отложенных яиц составило 60 % по отношению к контролю, выживаемость взрослых особей - 72 %. Объем желточников при действии "Праестола" в концентрации 0,5 мг/л составил 63 % от контроля

В острых опытах было найдено, что при концентрации "Праестола" 10 мг/л гибнет около 50 % дафний в течение первых 24 часов (медиальная летальная концентрация LC5o). В хронических опытах на исходных дафниях и последующих трех поколениях, заметное изменение выживаемости наблюдалось в растворах "Праестола" концентрации 0,5 мг/л (выживаемость исходных особей составила 53 %) При меньших концентрациях значимых отдаленных последствий действия "Праестола" на выживаемость и плодовитость дафний не отмечалось.

Анализ токсического действия "Праестола" на выживаемость и некоторые показатели размножения большого прудовика (Limnaea stagnahs) показал, что заметные отклонения в показателях наблюдаются при концентрациях токсиканта 0,1 мг/л и выше. Статистически значимых изменений ни в одной из исследованных концентраций "Праестола" не наблюдается лишь по такому показателю, как количество яйцеклеток в синкапсуле. В то же время резкое уменьшение числа отложенных яиц и числа кладок отмечается уже при концентрации флокулянта 0,1 мг/л. Это наиболее чувствительные биологические показатели у прудовиков

Изучение влияния растворов "Праестола" на выклев прудовиков и выживаемость молоди после выклева показало, что "Праестол" действует на данные показатели аналогично другими исследованными токсикантами. Выклев является более чувствительным показателем по сравнению с выживаемостью молоди в первые 10 дней.

Исследования выживаемости и метаморфоза личинок хирономид (Chironomus plumosus) в растворах "Праестола" показали, что заметные изменения выживаемости личинок наблюдаются начиная с концентрации токсиканта 0,05 мг/л. При этом выживаемость куколок даже при максимальных концентрациях (0,5 мг/л) не имеет значимых отличий от контроля Метаморфоз для всех концентраций, кроме максимальной заканчивался полностью и все выжившие личинки уродств не несли. Личинки хирономид токсикорезистентны к большинству соединений находящихся в воде. Уменьшение выживаемости личинок на 4-й стадии роста косвенно указывает на то, что полиакриламид, входящий в состав флокулянта "Праестол", осаждается и вступает в соединение с грунтом.

Проведенный анализ влияния "Праестола" на показатели эмбриогенеза данио (Brachydanio reno), темпы развития, выклев предличинок и их выживаемость, показал, что при концентрациях 0,1 мг/л и выше наблюдаются нарушение выклева предличинок При этом гибель составляет 30-40 %. Токсичность "Праестола" для мальков Brachydanio reno проявляется при концентрациях, превышающих 0,05 мг/л. Исследования, проведенные на взрослых рыбах показали, что растворы "Праестола" в хронических опытах не оказывают заметного влияния на их выживаемость

"Праестол" во всех исследованных концентрациях оказывал ингибирующее действие на митотическую активность эпителия хрусталика радужной форели. Митотический индекс герминативной зоне эпителия хрусталика к концу опыта уменьшился на 75 % (при Mi

I библиотека ая

I (¿.Петербург I

Р» »0 «kr I 33

"--- té

Анализ чувствительности к действию "Праесгола" различных биологических показателей исследованных гидробионтов позволяет сделать вывод о том, что одними из наиболее чувствительных являются изменение числа отложенных яиц, изменение числа кладок у прудовика большого (Ытпаеа эХа^аЬч), количество сброшенных карапаксов во втором и третьем поколениях у дафний, а также показатель митотической активности герминативной зоны эпителия хрусталика молоди радужной форели (рис. 14). Также высокую чувствительность имеет показатель изменения выживаемости личинок хирономид (СЫгопотиэ рЬтовив).

40 -

0,01

концентрация, w/л

■ Дафнии (Daphnia magna) Количество сброшенных карапаксов по поколениям (F2)

□ Дафнии (Daphnia magna) Количество сброшенных карапаксов по поколениям (F3)

□ Прудовик большой (Limnaea stagnalis) Взрослые особи Число отложенныхяиц

□ Прудовик большой (Limnaea stagnalis) Взрослые особи Число кладок

□ Радужная форель (Parasalmo mykiss) ми герминативной зоны эпителия хрусталика

Рис. 14. Изменение некоторых биологических показателей исследуемых гидробионтов под действием "Праестола" Приведены абсолютные величины отклонений показателей от контроля, достоверно (на уровне а = 0,05) отличающихся от соответствующих контрольных значений.

5.6. "Прекан". При исследовании токсичности "Прекана" некорректно говорить о растворах токсиканта, так как "Прекан" - гранулированный материал. В данном случае речь идет об удельном весовом отношении рассматриваемого материала и воды. Токсическое воздействие органоминерального материала "Прекан" обусловлено главным образом наличием нефти, капсулированной в гранулах материала.

Проведенные исследования показали, что наиболее чувствительным показателем к действию "Прекана" у коловраток является количество отложенных яиц. При воздействии "Прекана" в концентрации 5,0 мг/л количество отложенных яиц составило 56 % по отношению к контролю, в тоже время выживаемость взрослых особей при всех исследованных концентрациях значимо не отличалась от контроля. Объем желточников при действии "Праестола" в концентрации 5,0 мг/л составил 33 % от контроля.

Ранее было показано, что медиальная летальная концентрация (LCS0) "Перкана" для дафний (Daphnia magna) составляет 25 мг/л (Никифоров-Никишин, Бородин, 2004) В хронических опытах гибель у исходных дафний и в последующих трех поколениях при концентрации "Прекана" 10,0 мг/л составляет 42-56%. Заметное влияние на плодовитость дафний во всех поколениях "Прекан" оказывает при концентрациях 5,0 мг/л и выше. ^ .

Исследование динамики количества сброшенных карапаксов в хроническом опыте на дафниях показало, что значимые отклонения от контроля наблюдаются при концентрациях, превышающих 0,5 мг/л

Изучение воздействия органоминерального материала "Прекан" на выживаемость взрослых моллюсков 1лтпаеа 51а§паИ5 и на их общую плодовитость позволяет сделать вывод о том, что "Прекан" в концентрациях 5,0 и 10,0 мг/л оказывает заметное влияние на оба показателя исследованных моллюсков Как для других исследованных токсикантов, наименее чувствительным оказался показатель количества яиц в одной синкапсуле (достоверные отличия от контроля наблюдались только при концентрации "Прекана" 10,0 мг/л). Анализ действия "Прекана" на выклев и выживаемость молоди прудовика показывает, что существенное влияние на данные показатели "Прекан" оказывает лишь при концентрации 5,0 мг/л

Исследования выживаемости и метаморфоза личинок и куколок хирономид (СЫгопотиз рШтоБиэ) показали, что при концентрации материала 10,0 мг/л отмечается заметное увеличение гибели личинок по отношению к контролю (примерно на 40 %) Несмотря на вероятную генотоксичность нефтяных углеводородов, эвакуировавшихся в воду из капсул "Прекана", при концентрациях меньших 10,0 мг/л, заметных морфологических перестроек хромосом и изменений пуфинга у хирономид в процессе метаморфоза отмечено не было При этом метаморфоз завершился полностью и все выжившие личинки не несли морфологических отклонений.

Эксперименты по изучению влияние "Прекана" на эмбриональное развитие и выклев предличинок данио (ВгасЬуёапю гегю) ставились без смены "растворов", что давало возможность определить степень токсичности нефтяных углеводородов, которые попадали в воду из исследуемого материала за период проведения эксперимента. Температура во время проведения опыта составила 25 °С. Длительность опыта 48 часов. Анализ полученных результатов показывает, что исследуемые концентрации "Прекана" оказывают свое действие на эмбриональное развитие рыб и выклев только при концентрации 10,0 мг/л При меньших концентрациях статистически значимых изменений по сравнению с контролем не отмечалось Анализ выживаемости предличинок показал, что только максимальная из исследованных концентраций "Прекана" оказывает влияние на данный показатель.

Продолжительность опытов по выявлению токсического воздействия "Прекана" на выживаемость мальков и взрослых особей данио составила 30 суток За этот период ни в одной из исследованных концентраций значимых изменений по сравнению с контролем отмечено не было.

Исследования изменения митотической активности эпителия хрусталика молоди радужной форели под воздействием материала "Прекан" показали, что при малых и средних концентрациях концентраций "Прекан" оказывает стимулирующее воздействие Ингибируюшее воздействие "Прекана" проявляется (по данным интерполяции), начиная с концентрации 6 мг/л. Митотический индекс герминативной зоны эпителия хрусталика при концентрации 10,0 мг/л уменьшился на 65 % Аналогичные (но менее выраженные) изменения наблюдались в предэкваториальной и центральной зонах эпителия.

Сравнение чувствительности различных биологических показателей исследованных гидробионтов к действию "Прекана" показывает, что одними из наиболее чувствительных показателей являются изменение числа отложенных яиц и средний выклев за 45 дней у прудовика большого (Ытпаеа 51а§паП5), изменение

митотического индекса герминативной зоны эпителия хрусталика у молоди радужная форели, а также количество сброшенных карапаксов у исходных особей и в третьем поколении у дафний (Daphnia magna) (рис 15) Помимо этого высокую чувствительность демонстрируют показатели выживаемости мальков и личинок Brachydanio rerio.

и

6 -40

0,5 1 5

концентрация, мг/л

В Дафнии (Daphnia magna) Количество сброшенныхкарапаксов по поколениям (F0)

□ Дафнии (Daphnia magna) Количество сброшенныхкарапаксов по поколениям (F3) Е Прудовик большой (Limnaea stagnalis) Взрослые особи Число отложенныхяиц

□ Прдоовик большой (Limnaea stagnalis) Молодь Средний выклев за 45 дней

□ Радужная форель (Parasalmo mykiss) МИ герминативной зоны эпителия хрусталика

Рис 15 Изменение некоторых биологических показателей исследуемых гидробионтов под действием "Прекана" Приведены абсолютные величины отклонений показателей от контроля, достоверно (на уровне а = 0,05) отличающихся от соответствующих контрольных значений

Гаким образом, проведенный сравнительный анализ чувствительности биологических показателей исследованных гидробионтов дает основание утверждать, что показатель митотической активности эпителия хрусталика наряду с такими показателями как плодовитость коловраток (Philodina roseola), дафний (Daphnia magna) и прудовика большого (Limnaea stagnalis), а также некоторых других показателей является одним из наиболее чувствительных Это дает возможность широко использовать показатель митотической активности эпителия хрусталика и метод, основанный на его учете для определения степени токсичности загрязнителей, попадающих в рыбохозяйственные водоемы

Глава 6. Влияние тяжелых металлов на цитогенетические

характеристики клеток эпителия хрусталика рыб

В первой серии экспериментов по исследованию цито- и генотоксичность воды хвостового водохранилища Костомушского горно-обогатительного комбината, в контроле, где рыбы содержались в воде взятой из Кимасозера, митотический индекс герминативной зоны эпителия хрусталика радужной форели после 25-дневного пребывания в эксперименте оказался равным 5,81 (в целом по хрусталику МИ составил 2,20).

Сходная картина получена и при 50-кратном разведении МИ при этом значимо (на уровне значимости а = 0,05) не отличался от соответствующего значения в

контроле Однако при 25-кратном разведении отмечалось резкое (почти двукратное) повышение МИ При 10-кратном разведении величина митогического индекса была на 33% ниже контрольного, но при этом значительно возрастало количество митозов с хромосомными аберрациями. После 25-суточной экспозиции в не разведенной воде из хвостового водохранилища митозы в эпителии хрусталика у подопытных рыб практически полностью отсутствовали Изменение митотического индекса по отношению к контролю в зависимости от степени разведения представлено на графике (рис. 16).

х50 х25 х 10 х5

степени разведения

£ - различия с контролем значимы на уровне а = 0,05 £ - различия с контролем не значимы на уровне а = 0,05

Рис 16. Изменение митотического индекса герминативной зоны эпителия хрусталика радужной форели по отношению к контролю в зависимости от степени разведения после 25-дневной экспозиции.

Одновременно с изменением МИ отмечались случаи поражения ядерного аппарата. Наиболее характерными нарушениями были: фрагментация ядер эпителиальных клеток на стадии интерфазы, образование вакуолей и амитотические деления В экваториальной зоне эпителия хрусталика были отмечены нарушения процессов цитодифференцировки. Наблюдались пикнотические ядра.

Все это указывает на цитогенетический токсический эффект неразбавленной воды из хвостового водохранилища. При 5-, 10-, и 25-кратном разведении значительно возрастало количество митозов, несущих хромосомные аберрации (на 95 %, 45 % и 78 % соответственно) (рис. 17).

При 25-кратном разведении в ана-телофазе в клетках эпителия хрусталика сеголетков радужной форели отмечалось появление трехполюсных митозов (около 18 % от всех отмеченных аномалий), остальные отклонения сводились к нарушению оси веретена деления, что приводило к асимметричному расхождению хромосом в анафазе.

При 10-кратном разведении отмечались следующие типы хромосомных аберраций: мосты, отставание одиночных хроматид, асимметричные митозы, фрагментация хромосом При 5-кратном разведении в эпителии хрусталика радужной форели отмечались такие типы хромосомных аберраций, как мосты, множественное

отставание хромосомных фрагментов, образование точечных фрагментов, что также указывает на генотоксическое действие комплекса загрязнителей, содержащихся в воде.

о -,-1-1-1-—.—-

х50 х25 хЮ х5 хО

степени разведения

I - различия с контролем значимы на уровне а = 0,05 J - различия с контролем не значимы на уровне а = 0,05

Рис 17 Хромосомные аберрации в клетках эпителия хрусталика радужной форели по отношению к контролю в зависимости от степени разведения после 25-дневной экспозиции.

Не разведенная вода из хвостового водохранилища проявляет общее токсическое действие на цитокинез Митозы в эпителии хрусталика рыб после 25-дневного воздействия полностью отсутствуют При этом наблюдались множественные нарушения цитодифференцировки и поражение интерфазных ядер в центральной и предэкваториалыюй зонах эпителия хрусталика.

Исследование цито- и генотоксичности воды из Костомушского водохранилища, проведенные на окуне (Perca fluviatilis L ) дали следующие результаты

После 13-дневной экспозиции МИ в контроле у окуня в герминативной зоне эпителия хрусталика в среднем составил 1,30, что значительно ниже соответствующего значения МИ в контроле у сеголетков радужной форели В варианте опыта с не разведенной водой из водохранилища МИ значимо не отличался от контроля (на уровне значимости а = 0,05) При 5-кратном разведении значение МИ составило 0,41 При дальнейшем разведении воды водохранилища контрольной водой из Кимасозера (в 25 и 50 раз) МИ значимо не отличался от контроля (на уровне значимости а = 0,05) (рис. 18).

Наибольшее количество аберративных митозов в эпителии хрусталика окуня после 13-дневной экспозиции было отмечено в варианте опыта с не разведенной водой из водохранилища. При этом наблюдались как нарушения митотического аппарата, так и хромосомные аномалии Количество митозов с патологическими отклонениями составило 8,7 % от общего количества подсчитанных митозов Основными аберрациями были- одиночные мосты, трехгрупповые метафазы, асимметричные митозы

2,5

о

П

х50 х25 х5 хО

Ъ степени разведения

<[ - различия с контролем значимы на уровне а = 0,05 £ - различия с контролем не значимы на уровне а = 0,05

Рис. 18. Изменение митотического индекса герминативной зоны эпителия хрусталика окуня по отношению к контролю в зависимости от степени разведения после 13-дневной экспозиции.

Помимо этого отмечены митозы с фрагментацией хромосом, что указывает на генотокеичность соединений, содержащихся в воде водохранилища. При больших степенях разведениях хромосомных аберраций в эпителии хрусталика окуня не отмечено.

Проведенные исследования позволяют утверждать следующее: вода хвостового водохранилища Костомушского горно-обогатительного комбината оказывает цито- и генотоксическое воздействие на исследованные виды рыб, вызывая подавление митотической активности у сеголетков радужной форели и появление большого числа хромосомных аберраций в клетках эпителия хрусталика окуня. Окунь менее чувствителен к исследованным воздействиям, по-видимому, в силу следующих причин: во-первых, форель, использованная в опытах находилась на более ранних стадиях онтогенеза, чем окунь, во-вторых, форель более чувствительна к воздействию Л токсикантов чем окунь (Симаков, Никифоров-Никишин, Кулаев, 1991). Наконец,

продолжительность эксперимента с сеголетками форели была почти в два больше, чем с окунем.

С увеличением степени разведения исследуемой воды водохранилища цито- и генотоксическое воздействие на исследованные виды рыб в целом снижается, однако при 25-кратном разведении у радужной форели наблюдается существенная стимуляция митотической активности в эпителии хрусталика. В этом же случае, а также при 5-кратном разведении у радужной форели отмечено наиболее выраженное увеличение количества аберративных митозов.

Следует отметить также, что при больших степенях разведения ведущими факторами, влияющими на митотическую активность, и количество хромосомных аберраций, по-видимому, являются те загрязнители, концентрация которых в воде хвостового водохранилища наиболее сильно отличается от концентрации в Кимасозере, являющейся в данном случае фоновой Так, например, при 50-кратном

разведении концентрация меди на 5 % превышает фоновое значение, в то время как концентрация свинца превышает фоновое значение почти на 30 % (табл 7)

Во второй серии экспериментов исследовалось влияние на митотическую активность эпителия хрусталика сеголеток радужной форели четырех тяжелых металлов меди, кадмия, свинца и цинка Данные металлы наиболее токсичны из присутствующих в воде хвостового водохранилища Костомушского горнообогатительного комбината в количествах, заметно превышающих нормативные значения ПДК.

В опытах, проведенных по плану полного факторного эксперимента З4 (четыре фактора на трех уровнях) функцией отклика являлось приведенное значение митотического индекса (отношение МИ к среднему значению в контроле) герминативной зоны эпителия хрусталика

Результаты корреляционного анализа, проведенного для полученных экспериментальных данных, показывают, что медь, цинк и кадмий оказывают значимое влияние на МИ эпителия хрусталика (на уровне а = 0,01) (табл. 7).

Таблица 7

Результаты корреляционного анализа экспериментальных данных по комплексному влиянию тяжелых металлов на митотическую активность эпителия хрусталика радужной форели В таблице приведены коэффициенты корреляции рассматриваемых факторов и функции отклика (МИ герминативной зоны эпителия хрусталика радужной форели по отношению к контролю)

Факторы и взаимодействия Выборочный коэффициент корреляции Эмпирическое корреляционное отношение ц Выборочный частный коэффициент корреляции

1 (-статистика | /•'-статистика | | /-статистика |

а-0,01 а = 0,05 п-001 а - 0,05 о-0.01 а-0 05

1 Си -0,425 4,173 1 Ч9УП 2,639 1 ои ту 1 990 0,471 11 140 2 78 4,888 F00527* 3,114 -0,714 8,225 'о »65 2,654 'о 95 65 1,997

2 1п -0,419 4,098 0419 8 291 -0,711 8,161

3 С Л -0,339 3,198 0,339 5 052 -0,638 6,675

4 РЬ 0,972 0.11*1 0 467 -0.» 2,639

5~! _| Си2п •0.232 2,123 0,434 5,972 о| 3 77 4 047 05 3 77 2,723 0,507 4,743

6 сиса 2,117 0418 5,435 0,430 3,845

7 1пСЛ ■ Ч 2,095 0,424 5 639 ¡0,432 3,865

8 СиРЬ '02м| 1,948 231] 0194 1,633

9 Ьп1 Ь*} 1 652 кшВ 1,622

10 СЙРЬ ¡98 ¡¡¡¡¡у 1 767 Вщ 0,789

11 сигпса 0,136 11.223 0.35' 2,680 ^пш47й 3 577 Рооз 4 76 2,492 -0,270 | -0.122 ] 2,261

12 СигпРь -0,131 ! 178 —* 1 964 0,994

13 СиС<№Ь 1,163 | 0,474

14 гпсарь - . >| 1,189 Ш ''533 ЙИ 0,530

15 Си/р( .РН-0,07О 0,701 /-„„1Л5 т /*"оо5 5 75 2,337 |0041 | 0,331

| Примечание: |

- влияние значимо на уровне а = 0,01 1 - влияние значимо та уровне а ~ 0,05 - влияние не значимо на уровне а = 0,05

Выборочный частный коэффициент корреляции (позволяющий оценить взаимодействие между переменными при элиминировании влияния остальных факторов) для РЬ оказался значим на уровне а = 0,05. Если рассматривать главные эффекты факторов (при нулевых уровнях остальных факторов), то исследуемые металлы можно расположить по степени влияния на МИ в порядке убывания в последовательности Си > гп > РЬ > Сс1 (рис 19).

Из приведенного графика видно, что цинк на первом уровне приводит к значимому увеличению МИ по отношению к контролю. Дальнейшее повышение концентрации 7.п приводит к уменьшению МИ. Остальные исследованные ТМ на рассматриваемых уровнях уменьшают МИ, причем наименьшее влияние на величину

уровень фактора

Рис 19. Изменение митотического индекса (МИ) герминативной зоны эпителия хрусталика радужной форели по отношению к контролю иод воздействием тяжелых металлов после 30-дневной экспозиции

Значимое влияние на МИ оказывают парные взаимодействия (взаимодействия 1-го порядка) Си2п. СиС'с! и 7п(М (на уровне а = 0,01), а также взаимодействие 2-го порядка Си7пСс1 (на уровне а = 0,05) Сравнение величин коэффициента корреляции и эмпирического корреляционного отношения для Си, 2п и Сс1 показывает почти полное их совпадение, что свидетельствует о линейном характере корреляции данных факторов с величиной МИ

В тоже время, сравнение аналогичных показателей для взаимодействий 1-го порядка Си2п, СиСс) и 7пСс1 и взаимодействия 2-го порядка Си/пСс1 позволяет сделать вывод о том. что рассматриваемые комбинации факторов влияют на величину МИ не линейно Парные и множественные взаимодействия с участием свинца не оказывают заметного влияния на МИ

Как известно (Шеффе. 1980) в полной 4-факторной модели дисперсионного анализа количество главных эффектов и взаимодействий до третьего порядка включительно равно'

У, С4 = 2 ~ 1 = 15 где _ биномиальные коэффициенты. *=1

Результаты проведенного 4-факторного дисперсионного анализа показывают, что все включенные в линейную модель главные эффекты и взаимодействия первого-третьего порядка значимы (на уровне а = 0,01) (табл 8).

Таблица 8

Результаты дисперсионного анализа экспериментальных данных по комплексному влиянию тяжелых металлов на митотическую активность эпителия хрусталика радужной форели

Главные эффекты и взаимодействия Значение F-статистики Критическое значение /-"-критерия для соответствующих уровней значимости

а = 0,01 а = 0,05

Си 6 551,44 01 2 729 4,63 ^0,05,2,729 3,01

Zn 5 170,04

Cd 2 422,44

Pb 3 381,96

CuZn 851,99 ^0 014 729 3,34 F0 05,4,729 2,38

CuCd 864,16

ZnCd 640,29

CuPb 348,82

ZnPb 376,58

CdPb 376,16

CuZnCd 349,63 F 0 018 729 2,54 F 0,05,8,729 1,95

CuZnPb 14,68

CuCdPb 17,18

ZnCdPb 19,35

CuZnCdPb 14,75 F0 01 16 729 2,02 f0.05.16.729 1,66

Это обстоятельство дает основание полагать, что соответствующая линейная регрессионная модель потребует включения 15 факторов и, по-видимому, не является оптимальной. Рассмотрим в качестве регрессионной модели модель общего вида:

j = f[P{Fx,F2,F3,F<)\ (3)

к

1де /-митотический индекс; /к- среднее значение МИ в контроле,/- неизвестная (модельная) функция; Р - линейный предиктор - линейная функция объясняющих переменных (факторов и взаимодействий); F, - факторы

Для отыскания наиболее оптимальной модельной функции и исходя из специфики полученных данных, рассмотрим несколько типов моделей' линейную (I), гиперболическую (II), обратную параболическую (III) и логистическую (IV) В линейный предиктор для всех моделей включено 19 аргументов' 15 факторов и взаимодействий, а также 4 квадратичных члена (CuCu, ZnZn, CdCd и PbPb)

Как видно из результатов регрессионного анализа, проведенного для рассмотренных моделей, наилучшие результаты при включении всех факторов и их комбинаций дают модели I и IV (табл. 9). Регрессия, построенная по модели II, оказалась не значимой, и данную модель следует исключить из дальнейшего анализа.

Последовательно исключая объясняющие переменные (компоненты линейного предиктора), дающие наименьший вклад в регрессию, получим "редуцированные" регрессионные уравнения для моделей I, III и IV, параметры которых приведены в (табл. 9).

Таблица 9

Результаты регрессионного анализа экспериментальных данных по комплексному влиянию тяжелых металлов на митотическую активность эпителия хрусталика радужной форели

__Модель__

I I II Т Ш I fv

Параметры уравнения регрессии при включении всех факторов и взаимодействий

Значение /•"-статистики 10,720 5,677 10,649

Критическое значение F-критерия Fo,f>\ 19,61 2,218 F 0 05 19 61 1,760 F 001 1961 2,218 Fool 19 61 2,218

Множественный коэффициент детерминации R2 0,7695 0,2917 0,6388 0,7684

Параметры редуцированного уравнения регрессии

Значение /•'-статистики 21,653 - 7,899 17,286

Критическое значение Р-критерия F 0 01,10,70 2,585 ^0 01 14 66 2,365 F 0,01,12,68 2,458

Множественный коэффициент детерминации Л2 0,7557 - 0,6263 0,7531

Факторы и взаимодействия Вклад фактора в уравнение регрессии по отношению к свободному члену

1 Си -24,23 - - -69,96

2 Zn -1,58 - -6,63 -5,38

3 Cd -5,44 - 31,65 -17,12

4 Pb -0,15 - 1,53 -0,74

5 СиСи 81,78 - 91,96 232,19

6 ZnZn - - 38,78 -

7 CuZn 6,29 - -41,39 18,85

8 CuCd 21,61 - -94,13 63,46

9 ZnCd 10,77 - -35,10 31,36

10 CuPb 0,66 - -8,38 2,56

11 ZnPb - - -4,79 0,99

12 CdPb - - 0,56 1,44

13 CuZnCd -43,32 - 264,73 -132,57

14 CuZnPb - - 25,19 -

15 CuCdPb - - -59,26 -

Число включенных факторов и взаимодействий 10 14 12

Примечание

I - уравнение регрессии значимо на уровне а = 0,01 ИИИ - уравнение регрессии не значимо на уровне а = 0,05

Во всех рассмотренных случаях множественный коэффициент детерминации К2 полного и редуцированного уравнения регрессии различаются менее чем на 2 % При этом количество объясняющих переменных в модели I сократилось почти вдвое Следует отметить, что однозначный выбор в пользу какой либо из оставшихся в рассмотрении моделей сделать сложно: обе модели I и IV дают вполне удовлетворительные результаты Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что, по-видимому, искомая теоретическая зависимость МИ от уровней рассматриваемых факторов отличается от рассмотренных моделей

Таким образом, все 4 рассмотренных ТМ оказывают значимое влияние на изменение МИ эпителия хрусталика. Наиболее выраженное влияние на МИ оказывают физиологически значимые элементы Си и Ъп На среднем уровне фактора /п оказывает стимулирующее воздействие. Свинец, оказывая существенное влияние на МИ практически не взаимодействует другими металлами Наименее выраженное воздействие при нулевых уровнях остальных факторов оказывает С<3 В тоже время парные взаимодействия Си, Хп и Сё значимы и существенно уменьшают МИ

Основные выводы

1 Установлены особенности гистологического строения хрусталика у моллюсков, рыб и амфибий, которые заключаются в том, что у амфибий и многих видов рыб основная масса хрусталика образуется за счет дифференцировки эпителия в хрусталиковые волокна; у брюхоногих моллюсков хрусталик образуется за счет бесклеточного вещества У головешки ротана обнаружен новый неизвестный ранее тип строения хрусталика - кора хрусталика состоит из многоядерных симпластических волокон за счет гипертрофии которых происходит рост хрусталика, при этом ядро хрусталика сохраняет типичное для большинства рыб и амфибий волоконное строение.

2 Выявлены особенности сезонной митотической активности в эпителии хрусталика рыб и амфибий. При тепловом загрязнении водоема у рыб (кроме форели) и амфибий сохраняется сезонная цикличность митотической активности В осенний и зимний периоды, как при наличие теплового загрязнения, так и в его отсутствие, митотическая активность эпителия хрусталика падает до нуля.

3 У пескаря обыкновенного выявлен новый тип реагирования хрусталиковых волокон на инвазию паразитами. Поврежденное волокно не теряет прозрачности по всей длине, а фрагментируется в зоне контакта с метацеркарием. Установлено, что у ряда рыб (в частности, у карповых) паразитические катаракты образуются за счет проникновения единичных метацеркариев диплостом в кору хрусталика, в тоже время у пескаря даже при большой инвазии паразитами катаракта не развивается Не отмечено проникновение паразитов в хрусталик головешки-ротана, что видимо связанно с наличием толстой, многослойной капсулы хрусталика

4 Показано, что под влиянием токсикантов как в острых, так и в хронических опытах наряду с изменением пролиферационной активности в эпителии хрусталика рыб увеличивается количество хромосомных аберраций

5 Выявлена синхронизация посттравматических митозов в эпителии хрусталика рыб после нанесения микротравмы в передний полюс хрусталика

6 Показана высокая чувствительность хрусталика рыб к антропогенным воздействиям (травматизация. токсическое воздействие, совместное воздействие травматизации и токсикантов)

7 Сравнительный анализ воздействия токсикантов на биологические показатели таких классических объектов в водной токсикологии как коловратки (Philodina roseola), дафнии (Daphnia magna), пресноводные моллюски (Limnaea stagnalis) и рыбы (Brachydanio rerio) показал, что наиболее чувствительными являются показатели, связанные с размножением и развитием К таким показателям можно отнести: гаметогенез, количество отложенных яиц, критические стадии эмбрионального развития, выклев эмбрионов из икры

> 8. Токсикологические эксперименты с использованием эпителия хрусталика

радужной форели (как без травматизации, так и с травматизацией) показали высокую чувствительность митотической активности эпителия хрусталика к токсикантам, сопоставимую с наиболее чувствительными биологическими показателями классических тест-объектов, используемых в водной токсикологии.

9. Показано, что по степени влияния на митотический индекс эпителия хрусталика радужной форели тяжелые металлы можно расположить в ряду Cu>Zn>Pb>Cd Наиболее выраженное влияние на величину митотического индекса оказывают физиологически значимые элементы Си и Zn. Свинец, оказывая существенное влияние на митотический индекс, практически не взаимодействует другими металлами Наименее выраженное воздействие при отсутствии других металлов оказывает кадмий В тоже время парные взаимодействия меди и цинка с кадмием значимы и существенно уменьшают митотический индекс.

10. Проведенные экспериментальные исследования и их теоретическое обобщение позволили создать новые методы биотестирования, оценки мутагенной активности загрязняющих веществ поступающих в рыбохозяйственные водоемы и определения степени их генотоксичности и цитотоксичности при установлении рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ).

список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Никифоров-Никишин A.JI Влияние некоторых токсикантов на предличинок кеты // Тез. докл. на конф. МПО по рыбоводству ВЗИПП, секция "Экология гидробионтов". - М.: ВНИПРХ, 1989, С. 95-96

2 Никифоров-Никишин А.Л. Влияние некоторых токсикантов на годовиков 1 окуня // В сб. "Вопросы экологии гидробионтов". - М.: ВНИПРХ, 1991, С. 126127

3 Никифоров-Никишин A J1, Кулаев С Н Воздействие токсикантов на динамику вещества у рыб // Тез. докл 2-й Всесоюзной конференции по рыбохозяйственной токсикологии - Санкт-Петербург: ГОСНИОРХ, 1991, С. 71-74.

4 Симаков Ю.Г., Никифоров-Никишин А Л. Кулаев С Н Митотическая активность в эпителии хрусталика окуня в норме и при травматизации // В сб "Вопросы экологии гидробионтов" -М.. ВНИПРХ, 1991, С 127-130

5. Симаков ЮГ, Никифоров-Никишин АЛ., Стебельков ВА, Архипов СЮ Изменения содержания элементов в хрусталике данио и окуня под влиянием загрязнения водной среды // В сб "Водные биоресурсы, воспроизводство и экология гидробионтов", Вып 66 - М. ВНИПРХ, 1992, С 92-96.

6. Симаков Ю.Г, Никифоров-Никишин А Л., Кулаев С.Н Исследования хромосомных клеточных структур гидробионтов методами оптоэлектроники // В сб. "Водные биоресурсы, воспроизводство и экология гидробионтов", Вып 67-М.. ВНИПРХ, 1993, С. 120-123

7. Симаков Ю Г, Никифоров-Никишин А Л Биомикроскопия хрусталика карпа при наличие метацеркарий диплостом // В сб. "Водные биоресурсы, воспроизводство и экология гидробионтов". - М.: ВНИПРХ, 1993, С 153-155

8. Бородин А.Л , Никифоров-Никишин А.Л , Пространственное распределение показателя преломления в хрусталике рыб и головоногих моллюсков // Сб трудов молодых ученых МГЗИПП -М. МГЗИПП, 1997, С. 14-19

9 Никифоров-Никишин А Л , Бородин А.Л Изучение совместного воздействия травмы и токсикантов на митотическую активность эпителия хрусталика рыб // Сб. трудов молодых ученых МГЗИПП - М : МГЗИПП, 1997, С. 45-46

Ю.Симаков Ю.Г , Никифоров-Никишин А Л , Бородин А Л. Влияние теплового загрязнения на митотическую активность эпителия хрусталика гидробионтов // Сб. трудов молодых ученых МГЗИПП -М.: МГЗИПП, 1997, С 20-23

П.Бородин АЛ, Никифоров-Никишин АЛ Особенности оптического строения хрусталика рыб // Морфологические и физиологические особенности гидробионтов - М ВНИРО, 2001, С. 24-27.

12.Никифоров-Никишин АЛ, Бородин А.Л. Оптическая плотность хрусталиков некоторых гидробионтов // Инновационные технологии в пищ. пром третьего тысячелетия, Т I, Вып. 6 - М • МГТА, 2001, С. 23-24.

13. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л. Рефракционные свойства хрусталика брюхоногих моллюсков // Морфологические и физиологические особенности гидробионтов - М. ВНИРО, 2001, С. 27-30.

14.Никифоров-Никишин АЛ, Горбунов АВ, Бородин АЛ Перспективы развития малых водоемов Центральной части России // Морфологические и физиологические особенности гидробионтов - М.: ВНИРО, 2001. - С. 52-56

15.Бородин АЛ, Никифоров-Никишин А.Л., Горбунов А В Изменение элементного состава хрусталика радужной форели под влиянием тяжелых металлов // Научн -¡ехн. бюлл каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА Вып 17, - М.: МГТА, 2002, С. 26-34.

16. Бородин АЛ, Никифоров-Никишин А.Л. Изменения в хрусталике гидробионтов под воздействием когерентного излучения // Сб. научных трудов молодых ученых МГТА. Вып. II - М МГТА, 2002, С. 68-72.

17. Бородин АЛ, Никифоров-Никишин АЛ. К вопросу о соотношении митотической активности и митотического индекса эпителия хрусталика рыб // Научн.-техн бюлл каф "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА Вып 17, - М ■ МГТА, 2002, С. 9-25.

18.Никифоров-Никишин А.Л, Бородин АЛ Некоторые аспекты биохимии хрусталика // Сб научных трудов молодых ученых МГТА. Вып II - М ■ МГТА, 2002, С. 57-68

19.Никифоров-Никишин АЛ., Бородин А.Л Электронно-микроскопические исследования строения хрусталика гидробионтов // Научн.-техн. бюлл. каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА. Вып. 17, - М.: МГТА, 2002, С. 53-61.

20. Никифоров-Никишин А.Л, Бородин А.Л. Влияние умеренно- и слаботоксичных веществ на чувствительные биологические показатели некоторых гидробионтов // Научн.-техн бюлл. каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА Вып 17, - М . МГТА, 2002, С. 62-77.

21. Симаков Ю.Г., Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Изменение некоторых биологических показателей гидробионтов под влиянием мутагенных соединений // Научн -техн. бюлл каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА Вып. 17, - М.: МГТА, 2002, С 35-52.

22. Бородин А.Л, Никифоров-Никишин А.Л. Влияние аномалий в распределении показателя преломления хрусталика гидробионтов на качество формируемого изображения // Стратегия развития пищ. промышленности - М.: МГТА, 2003, С. 210-214.

23. Бородин А.Л, Никифоров-Никишин А.Л Статистические закономерности митотической активности эпителия хрусталика рыб // Научн.-техн. бюлл каф "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА Вып. 18, - М : МГТА, 2003, С. 19-32

24. Никифоров-Никишин А Л, Бородин А.Л. Воздействие инфракрасного лазерного излучения на хрусталик гидробионтов // Стратегия развития пищ промышленности - М МГТА, 2003, С. 203-207.

25.Бородин АЛ., Никифоров-Никишин А.Л. Пространственное распределение некоторых химических элементов в хрусталике кальмара // Научн.-техн. бюлл каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА. Вып 18, - М.: МГТА, 2003, С. 46-52.

26. Никифоров-Никишин А Л., Бородин А.Л., Сотников Ф.И. Анализ чувствительности некоторых биологических показателей гидробионтов к действию трихлорбензола // Научн.-техн. бюлл. каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА Вып 18,-М.: МГТА, 2003, С. 5-15.

27. Никифоров-Никишин АЛ , Бородин АЛ. Количественная оценка оптических характеристик хрусталика гидробионтов при катарактах различной этиологии // Стратегия развития пищ промышленности - М.: МГТА, 2003, С. 207-210.

28. Никифоров-Никишин А.Л, Бородин А.Л. Оценка комплексного воздействия тяжелых металлов на хрусталик радужной форели (Parasalmo mykiss) // Научн -техн. бюлл. каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА. Вып. 18, - М. МГТА,

2003, С. 33-45.

29. Симаков Ю.Г., Бородин А Л, Никифоров-Никишин А.Л. Экспериментальные лучевые и травматические катаракты - М.: МГТА, 2003, 168 с.

30. Симаков Ю.Г., Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А Л Цитодифференцировка хрусталика и катарактогенные факторы - М МГТА, 2003,214 с.

31.Nikiforov-Nikishin A L , Borodin A L. Accumulation of heavy metals by fish's lens // Fresh Water Ecosystems Health and Management, Vol. 2, - Tel-Avive. Hargol,

2004, P. 16-24.

32. Borodin A.L., Nikiforov-Nikishin A.L. Influence Cu, Zn, Cd and Pb on mithotic activity of fishes lens epithelium (on example Parasalmo mykiss) // Fresh Water Ecosystems Health and Management, Vol. 2, - Tel-Avive: Hargol, 2004, P 25-33.

33.Бородин А.Л., Никифоров-Никишин АЛ., Сотников Ф.И. Сравнительный анализ чувствительности различных биологических показателей гидробионтов

к действию эпихлоргидрина // Вестник Московского Государственного Университета Технологий и Управления, Сер "Биология", Вып 1 - М,-МГУТУ, 2004, С. 14-29.

34 Бородин A.J1, Никифоров-Никишин A J1 Системная экология. - M • МГУТУ, 2004, 372с.

35 Бородин A.J1., Никифоров-Никишин А Л Построение таблиц многофакторного дисперсионного анализа // Вестник Московского Государственного Университета Технологий и Управления, Сер "Биология", Вып. 1 - М.. МГУТУ, 2004, С. 38-52.

36. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А Л. Методы рыбохозяйственных исследований. - М.: МГУТУ, 2004, 348с.

37.Borodin A.L., Nikiforov-Nikishin A.L. Fishes lens growth // Fresh Water Ecosystems Health and Management, Vol 2, - Tel-Avive: Hargol, 2004, P. 57-63.

38. Козлов В.A., Никифоров-Никишин A Л , Бородин А.Л Аквакультура. - M ■ МГУТУ, 2004, 433 с.

39 Никифоров-Никишин А.Л , Никифоров-Никишин Д Л., Симаков Ю.Г., Бородин А.Л. Гистологические и гистохимические особенности строения хрусталика пескаря (Gobio gobio, gobio L ) // Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб. Расширенные материалы Всероссийской научно-практической конференции, Борок, 16-18 июля 2003 года - M . 2004, С. 316-322.

40. Никифоров-Никишин А.Л., Никифоров-Никишин Д.Л., Симаков Ю.Г., Бородин А Л Особенности строения хрусталика ротана-головешки, Percottus glehni, Dybowski, 1877 // Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб. Расширенные материалы Всероссийской научно-практической конференции, Борок, 16-18 июля 2003 года - М.- 2004, С 322-331.

41 Nikiforov-Nikishin A L , Borodin A L The analysis of sensitivity some biological parameters hidrobionts to influence of pollutants // Fresh Water Ecosystems Health and Management, Vol. 2,-Tel-Avive Hargol, 2004, P 34-56

42. Никифоров-Никишин A Л., Симаков Ю Г', Бородин A Л Морфологические и гистологические изменения в хрусталике рыб при диплостомозе // Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб Расширенные материалы Всероссийской научно-практической конференции, Борок, 16-18 июля 2003 года.-М.: 2004, С. 331-338

43 Никифоров-Никишин А Л , Бородин А Л Изменение митотической активности в различных зонах цитодифференцировки эпителия хрусталика рыб при травматизации // Вестник Московского Государственного Университета Технологий и Управления, Сер "Биология", Вып 1 - M • МГУТУ, 2004, С. 413.

44 Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А Л. Хрусталик гидробионтов как тест-объект в водной токсикологии - M МГУТУ, 2004, 145 с.

45 Никифоров-Никишин А Л., Бородин А Л Прикладная экология - М.: МГУТУ, 2004, 92 с.

46 Симаков Ю.Г., Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А Л. Ингибиторы клеточной пролиферации в хрусталиках рыб и амфибий // Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб. Расширенные материалы Всероссийской научно-практической конференции, Борок, 16-18 июля 2003 года. -М.: 2004, С. 358-369.

47 Симаков Ю Г , Никифоров-Никишин A JI. Особенности зрения гидробионтов // Водные экосистемы и организмы. (Труды научной конференции МГУ) - М • Макс-Пресс, 2004, С 68-69.

48 Бородин А Л , Никифоров-Никишин A.J1, Горбунов А В Связь градиента показателя преломления в хрусталике некоторых гидробионтов с пространственным распределением химических элементов // Вестник Московского Государственного Университета Технологий и Управления, Сер "Биология", Вып 5 - М.: МГУТУ, 2005, С. 49-58.

49. Бородин А Л , Никифоров-Никишин А.Л., Симаков Ю Г Моделирование оптических характеристик хрусталика гидробионтов // Вестник Московского Государственного Университета Технологий и Управления, Сер "Биология", Вып. 5-М. МГУТУ, 2005, С. 7-16.

50 Бородин А Л, Никифоров-Никишин А.Л., Стебельков В.А, Горбунов A.B. Пространственное распределение химических элементов в хрусталике рыб // Вестник Московского Государственного Университета Технологий и Управления, Сер. "Биология", Вып. 5 - М.: МГУТУ, 2005, С 30-38

51.Бородин АЛ, Никифоров-Никишин А.Л. Морфология хрусталика низших позвоночных животных (на примере рыб) // В сб "Проблемы воспроизводства аборигенных видов рыб" - Киев- 2005, С. 59-65.

52 Бородин А Л , Никифоров-Никишин А.Л. Модель роста хрусталика рыб // Вестник Московского Государственного Университета Технологий и Управления, Сер "Биология", Вып. 5-М.: МГУТУ, 2005, С 39-48

53 Бородин А Л, Никифоров-Никишин А.Л. Морфология и оптические характеристики хрусталика гидробионтов. -М.: МГУТУ, 2005, 138 с

54 Никифоров-Никишин А Л., Горбунов A.B., Бородин А Л. Анализ чувствительности метода митотической активности эпителия хрусталика рыб (на примере монохлорбензола) // В сб. "Проблемы воспроизводства аборигенных видов рыб" - Киев, 2005, С. 123-137.

55.Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л., Фельдман М.Г, Горбунов AB. Изменение митотической активности хрусталика рыб и амфибий под влиянием биотических и абиотических факторов // Вестник Московского Государственного Университета Технологий и Управления, Сер "Биология", Вып. 5 - М . МГУТУ, 2005, С. 17-29.

56.Симаков Ю Г, Никифоров-Никишин А Л, Бородин А Л Хрусталик гидробионтов морфология, биохимия, цитогенетика - Ростов н/Д Изд Рост.ун-та, 2005, 160 с.

«

МГУТУ Заказ 2754 Тираж 100

»14519

РНБ Русский фонд

2006-4 8972

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Никифоров-Никишин, Алексей Львович

Введение.

Глава 1. Хрусталик гидробионтов как тест-объект в водной токсикологии

1.1. Морфология хрусталика низших позвоночных животных.

1.2. Морфогенез хрусталика во время эмбрионального развития.

1.3. Цитология и биология митозов.

1.4. Биохимия хрусталика позвоночных животных.

1.5. Классификация и характеристика сточных вод и их компонентов.

1.6. Симптомы отравления рыб.

1.7. Обратимость процессов интоксикации, адаптация к токсикантам, кумуляция.

1.8. Влияние экологических факторов водной среды на токсикорезистентность.

1.9. Влияние видовых, возрастных и индивидуальных особенностей, сезонных и некоторых других факторов на токсикорезистентность.

1.10. Методы комплексных исследований отравлений и токсичности водной среды.

1.11. Методы оценки качества вод при наличии разнородных загрязнителей.

1.12. Влияние загрязнений на морфологию рыб.

1.13. Недостатки принятой системы установления ПДК токсических веществ в водной среде.

1.14. Воздействие тяжелых металлов на гидробионтов.

Глава 2. Объекты и методы исследований.

2.1. Приготовление плоскостных препаратов эпителия хрусталика.

2.2. Схема подсчета митотического индекса.

2.3. Гистологические и гистохимические методы исследования хрусталика гидробионтов и амфибий.

2.4. Электронно-микроскопическое исследование хрусталиков гидробионтов.

2.5. Изучение влияние травмы на митотическую активность эпителия хрусталика рыб.

2.6. Методы исследования совместного действия травмы и токсикантов на митотическую активность эпителия хрусталика рыб.

2.7. Биомикроскопия хрусталика карпа при наличии метацеркарий диплостом.

2.8. Методы исследования влияния растворимых фракций хрусталика рыб на митотическую активность в эпителии хрусталика рыб и амфибий.

2.9. Экспериментальная пересадка хрусталика рыб амфибиям.

2.10. Оценка чувствительности митотической активности эпителия хрусталика рыб.

2.10.1. Краткая характеристика исследованных веществ и соединений.

2.10.2. Подбор гидробионтов для проведения экспериментов по сравнительной оценке чувствительности биологических показателей к действию токсикантов.

2.11. Изучения влияния тяжелых металлов на цитогенетические характеристики клеток эпителия хрусталика рыб.

2.12. Изучение элементного состава хрусталика.

2.13. Статистическая обработка экспериментального материала.

Глава 3. Морфология хрусталика гидробионтов.

3.1. Морфология хрусталика рыб и брюхоногих моллюсков.

3.2. Морфологические изменения в хрусталике рыб при паразитарных катарактах.

Глава 4. Изменение митотической активности эпителия хрусталика под влиянием различных факторов.

4.1. Изменение митотической активности в различных зонах цитодифференцировки эпителия хрусталика рыб при травматизации.

4.2. Пространственное распределение митозов при травматизации эпителия хрусталика.

4.3. Совместное действие травмы и токсикантов на цитодифферинцировку хрусталика рыб.

4.4. Влияние теплового загрязнения на митотическую активность в эпителии хрусталика рыб и амфибий в зимний период.

4.5. Влияние растворимых фракций хрусталика рыб на митотическую активность в эпителии хрусталика рыб и амфибий.

4.6. Экспериментальная пересадка хрусталика рыб амфибиям: влияние на клеточную пролиферацию.

Глава 5. Сравнительный анализ чувствительности показателя митотической активности эпителия хрусталика рыб с чувствительностью существующих методов оценки токсичности веществ.

Глава 6. Влияние тяжелых металлов на цитогенетические характеристики клеток эпителия хрусталика рыб.

6.1. Влияние тяжелых металлов на эпителий хрусталика рыб.

6.2. Изменение элементного состава хрусталика под влиянием тяжелых металлов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфологические особенности хрусталика гидробионтов и их применение в водной токсикологии"

Усиливающееся антропогенное воздействие на природные и искусственные водоемы в значительной степени нарушает естественные гидробиоценозы. Анализируя процессы антропогенного влияния на биосферу Земли, академик H.H. Моисеев приходит к выводу: "Если человек не найдет нужного ключа к своим взаимоотношениям с природой, то он обречен на погибель, каким бы ни были политика и государственное устройство.", поскольку ".человечество обрело возможность мирного самоуничтожения". "Человек подошел к пределу, который нельзя переступить ни при каких обстоятельствах. Дело в том, что антропогенная нагрузка на биосферу стремительно возрастает и она близка к критической. Биота может потерять стабильность. В новом состоянии биосферы человеку может не найтись места" (Моисеев, 1999).

Функционирование природных биологических систем с каждым днем все больше и больше зависит от деятельности человека. В последнее время все труднее найти реки или водоемы, естественный режим которых так или иначе не изменился. "Даже в том случае если промышленные предприятия будут свято выполнять все меры охраны среды, развивающееся общество будет оказывать на природу прогрессирующее воздействие" (Шварц, 1973).

Контроль загрязнения рек регулярно проводиться подразделениями Природоохранных органов, службами санитарного надзора, управлениями Главрыбвода. Данный контроль позволяет систематически оценивать содержание в воде не более 45-50 основных токсикантов и сравнивать полученные данные с соответствующими показателями ПДК, но этой работы не всегда достаточно для оценки комплексного, суммарного воздействия токсикантов на гидробионтов. По данным института системного анализа Российской Академии Наук многие нетоксичные или малотоксичные компоненты, попадающие в реки со сточными водами, вступая во взаимодействие между собой, образуют столь высокотоксичные соединения, что негативное влияние на природу возрастает многократно, а сами токсиканты остаются вне контроля.

Современное загрязнение природной среды не есть лишь простое следствие плохо контролируемых выбросов антропогенных загрязнителей. Оно также обусловлено всей совокупностью перестроек природы, производимых человеческим обществом. Именно поэтому в гидробиологических исследованиях нельзя ограничиваться только биоиндикацией загрязнения, а необходимо всестороннее изучение антропогенного воздействия на водные экосистемы в целом (Захаров, Кларк, 1993).

Для оценки антропогенного воздействия вредных веществ на гидробионтов необходимо найти тест-объект, с помощью которого можно было бы интегрально оценивать изменение жизненных функций под влиянием ксенобиотиков. Вполне понятно, что найти универсальный интегральный тест-объект невозможно. Однако можно приблизиться к этому, если адекватно подобрать тест-объект и метод оценки токсического воздействия загрязнителей водной среды.

Общеизвестно, что рост гидробионтов нарушается при действии токсических веществ, но для проведения подобных экспериментов требуется продолжительное время и значительное число подопытных организмов, чтобы провести биометрические измерения. Рост гидробионтов непосредственно связан с митотической активностью в тканях организма. Поэтому мы предлагаем оценивать токсическое воздействие загрязнителей на гидробионтов по митотической активности. Это даст возможность также выявить цитотоксическое действие загрязнителей водной среды.

По нашему мнению всем перечисленным выше условиям отвечает хрусталик глаза рыб и амфибий, так как на его монослойном эпителии можно определять митотическую активность, а по нарушению прозрачности под влиянием токсикантов судить о перестройках биологических структур на молекулярном уровне.

Предлагаемый в качестве интегрального тест-объекта хрусталик низших позвоночных для оценки токсичности веществ антропогенного происхождения, может быть использован в том случае, если его биологические показатели окажутся сопоставимы по чувствительности с общепринятыми тест-объектами, используемыми в водной токсикологии. В силу этого необходимо провести сравнительный анализ чувствительности биологических показателей хрусталика и классических тест-объектов, используемых для оценки токсичности вредных веществ, попадающих в рыбохозяйственные водоемы.

Цель и задачи исследований: Выявить наиболее чувствительные к действию токсикантов морфологические и цитологические показатели хрусталика у ряда гидробионтов и дать сравнительную характеристику чувствительности биологических показателей хрусталика и классических тест-объектов, используемых в водной токсикологии.

В соответствии с намеченной целью были поставлены следующие основные задачи:

- Провести сравнительные гистологические и цитогенетические исследования хрусталика моллюсков, рыб и амфибий, содержащихся в лабораторных условиях, и выявить наиболее перспективный тест-объект для токсикологических исследований.

- Исследовать воздействие травмы и токсикантов на митотическую активность эпителия хрусталика рыб.

- Вскрыть закономерности пространственного распределения митозов в эпителии хрусталика рыб при травматизации.

- Провести исследования широкого спектра токсикантов различной степени токсичности и механизма токсического воздействия на митотическую активность хрусталика радужной форели.

- Исследовать комплексное воздействие тяжелых металлов на митотическую активность хрусталика радужной форели.

Провести сравнительный анализ воздействия ряда загрязнителей рыбохозяйственных водоемов на классические тест-объекты, применяемые в водной токсикологии (коловратки, дафнии, моллюски, рыбы) и на цитогенетические показатели хрусталика рыб. Дать сравнительную характеристику чувствительности к токсикантам ряда биологических показателей классических тест-объектов и цитогенетических показателей эпителия хрусталика рыб.

Заключение Диссертация по теме "Гидробиология", Никифоров-Никишин, Алексей Львович

Основные выводы

1. Установлены особенности гистологического строения хрусталика у моллюсков, рыб и амфибий, которые заключаются в том, что у амфибий и многих видов рыб основная масса хрусталика образуется за счет дифференцировки эпителия в хрусталиковые волокна; у брюхоногих моллюсков хрусталик образуется за счет бесклеточного вещества. У головешки ротана обнаружен новый неизвестный ранее тип строения хрусталика - кора хрусталика состоит из многоядерных симпластических волокон за счет гипертрофии которых происходит рост хрусталика, при этом ядро хрусталика сохраняет типичное для большинства рыб и амфибий волоконное строение.

2. Выявлены особенности сезонной митотической активности в эпителии хрусталика рыби амфибий. При тепловом загрязнении водоема у рыб (кроме форели) и амфибий сохраняется сезонная цикличность митотической активности. В осенний и зимний периоды, как при наличие теплового загрязнения, так и в его отсутствие, митотическая активность эпителия хрусталика падает до нуля.

3. У пескаря обыкновенного выявлен новый тип реагирования хрусталиковых волокон на инвазию паразитами. Поврежденное волокно не теряет прозрачности по всей длине, а фрагментируется в зоне контакта с метацеркарием. Установлено, что у ряда рыб (в частности, у карповых) паразитические катаракты образуются за счет проникновения единичных метацеркариев диплостом в кору хрусталика, в тоже время у пескаря даже при большой инвазии паразитами катаракта не развивается. Не отмечено проникновение паразитов в хрусталик головешки-ротана, что видимо связанно с наличием толстой, многослойной капсулы хрусталика.

Показано, что под влиянием токсикантов как в острых, так и в хронических опытах наряду с изменением пролиферационной активности в эпителии хрусталика рыб увеличивается количество хромосомных аберраций.

Выявлена синхронизация посттравматических митозов в эпителии хрусталика рыб после нанесения микротравмы в передний полюс хрусталика.

Показана высокая чувствительность хрусталика рыб к антропогенным воздействиям (травматизация, токсическое воздействие, совместное воздействие травматизации и токсикантов).

Сравнительный анализ воздействия токсикантов на биологические показатели таких классических объектов в водной токсикологии как коловратки (Philodina roseola), дафнии (Daphnia magna), пресноводные моллюски (Limnaea stagnalis) и рыбы (Brachydanio rerio) показал, что наиболее чувствительными являются показатели, связанные с размножением и развитием. К таким показателям можно отнести: гаметогенез, количество отложенных яиц, критические стадии эмбрионального развития, выклев эмбрионов из икры. Токсикологические эксперименты с использованием эпителия хрусталика радужной форели (как без травматизации, так и с травматизацией) показали высокую чувствительность митотической активности эпителия хрусталика к токсикантам, сопоставимую с наиболее чувствительными биологическими показателями классических тест-объектов, используемых в водной токсикологии. Показано, что по степени влияния на митотический индекс эпителия хрусталика радужной форели тяжелые металлы можно расположить в ряду Cu>Zn>Pb>Cd. Наиболее выраженное влияние на величину митотического индекса оказывают физиологически значимые элементы: Си и Zn. Свинец, оказывая существенное влияние на митотический индекс, практически не взаимодействует другими металлами. Наименее выраженное воздействие при отсутствии других металлов оказывает кадмий. В тоже время парные взаимодействия меди и цинка с кадмием значимы и существенно уменьшают митотический индекс.

10. Проведенные экспериментальные исследования и их теоретическое обобщение позволили создать новые методы биотестирования, оценки мутагенной активности загрязняющих веществ поступающих в рыбохозяйственные водоемы и определения степени их генотоксичности и цитотоксичности при установлении рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ).

Заключение

Проведенная работа позволила установить особенности строения хрусталика рыб, амфибий и брюхоногих моллюсков. В перечисленных систематических группах строение хрусталика глаза значительно различается на морфологическом и гистохимическом уровне. Морфология хрусталика низших позвоночных животных (рыб и амфибий) имеет ряд типичных особенностей таких как: волоконное строение хрусталика, наличие хрусталикового эпителия, за счет которого происходит образование волокон и рост хрусталика, капсулы, которая состоит из отдельных зонулярных пластин. У головешки ротана, в результате нашей работы, был открыт новый тип строения хрусталика, значительно отличающийся от морфологии линзы глаза других рыб. Рост хрусталика у головешки ротана происходит за счет гипертрофии многоядерных симпластических клеток. Значительно отличается по строению и капсула хрусталика. Ее толщина в существенно больше, чем у рыб с типичным строением хрусталика. Возникший в процессе эволюции данный тип строения предохраняет зрительную систему ротана от повреждений. Морфологическое строение хрусталика брюхоногих моллюсков значительно отличается от такового у низших позвоночных животных. Основная его масса представлена бесклеточным веществом, а капсула также состоит из зонулярных пластин. Проведенные исследования позволяют предположить, что зонулярные пластины капсулы хрусталика играют важную функция в механизме защиты хрусталика от поступления в него вредных веществ.

Изучение влияния теплового загрязнения на митотическую активность эпителия хрусталика рыб и амфибий указывает на то, что этот орган обладает широкой нормой реакции и даже значительное изменение условий среды не вызывает изменения биоритмики митотической активности.

Использование методов оценки генотоксичности водной среды в зимнее время не даст достоверных результатов для гидробионтов, у которых отсутствует естественная митотическая активность.

Выявлена видовая чувствительность хрусталиков различных видов рыб к поражению диплостомами. В основе механизма устойчивости к инвазии метацеркариями диплостом у разных видов рыб могут выступать как механизмы фрагментации волокон, так и развитая капсула хрусталика. Установлен новый тип реагирования хрусталика на инвазию метацеркариями диплостом у пескаря обыкновенного. При нарушении целостности хрусталикового волокна не происходит необратимого помутнения всего волокна, а инактивация паразита осуществляется за счет локальной фрагментации хрусталиковых волокон. Результаты, полученные в работе, помогут понять механизмы катарактогенеза гидробионтов и разработать методику борьбы с помутнениями хрусталиков.

В результате исследований удалось показать, что травматизация хрусталика вызывает кратковременное ингибирование митозов. Однако уже через сутки после нанесения травмы в эпителии хрусталика появляются обширные посттравматические митозы, большая часть которых локализована в герминативной зоне эпителия.

В данной работе впервые комплексно исследованы закономерности размножения и развития гидробионтов, которые в лабораторных условиях традиционно используются для биотестирования природных и сточных вод и для установления рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ). Работа проведена с объектами, у которых отчетливо выражен эмбриональный период развития. В качестве модельных загрязнителей использованы химические соединения, которые с промышленными сточными водами попадают в рыбохозяйственные водоемы, нанося реальный ущерб водным биоценозам.

В результате исследования показано, что и у планктонных организмов (дафнии и коловратки), и у бентосных животных (хирономиды и моллюски), а также у рыб, при размножении и в эмбриональном периоде имеются критические периоды, наиболее чувствительны к действию токсических веществ.

У коловраток-филодин таким показателем является число отложенных яиц и изменение объема желточника в репродуктивном периоде. У дафний под влиянием токсикантов нарушается процесс размножения, падает плодовитость, как в исходном поколении, так и в последующих нескольких поколениях. Под влиянием исследованных загрязнителей у большого пудовика уменьшается количество отложенных яиц, нарушается эмбриональное развитие и выклев молоди. У личинок хирономид самым чувствительным периодом оказался метаморфоз. Выклев предличинок у рыб также является одним из наиболее чувствительных показателей. Все перечисленные выше биологические показатели, связанные с размножением и развитием оказываются более чувствительными, чем выживаемость особей в растворах токсикантов.

Проведен сравнительный анализ чувствительности к токсикантам таких интегральных показателей хрусталика рыб, как изменение митотического индекса и количества хромосомных аберраций, с чувствительностью биологических показателей у классических тест-объектов, применяемых в водной токсикологии, связанных с размножением и развитием. Показано, что митотический индекс и увеличение количества хромосомных аберраций под влиянием токсикантов по чувствительности сравнимы с наиболее чувствительными показателями, связанными с размножением и развитием коловраток, дафний, хирономид, моллюсков и рыб.

Выявленная высокая чувствительность хрусталика гидробионтов к токсическому воздействию веществ, попадающих в рыбохозяйственные водоемы, делают его незаменимым тест-объектом, который с успехом можно использовать в водной токсикологии.

В проведенном исследовании получены данные, которые позволяют использовать их в гидробиологии, ихтиологии, водной и санитарной токсикологии, так как открывается возможность создания экспресс-методов биотестирования и новых методов эколого-рыбохозяйственного нормирования.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Никифоров-Никишин, Алексей Львович, Москва

1.Аверкина Р.Ф. Специфические антигены в тканевых зачатках глаза куриных эмбрионов // Бюлл. экспер. биол. и мед., 1964, Т. 58, вып. 11, с. 111-115.

2. Авилова Г.А., Карпухина Е.А. Бензол. М., Центр ГКНТ, 1985, 45 с.

3. Алабастер Д., Ллойд Р. Критерии качества воды для пресноводных рыб // М., Легкая промышленность, 1984, 334 с.

4. Алабастер Дж., Ллойд Р. Критерии качества воды для пресноводных рыб. М., Легкая и пищевая промышленность, 1984, 343 с.

5. Алданазаров А.Т. Кроветворение при свинцовой интоксикации // I

6. Съезд гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов Казахстана, Алма-Ата, 1970, Т. 1, С. 301-306.

7. Алексеенко И.Р., Конычев А.А, Панченко H.A. Экстремальныефакторы и биообъекты //Киев, Наук, думка, 1989, 152 с.

8. Алимов А.Ф. Закономерности роста пресноводных двустворчатых моллюсков // Журнал общей биологии, 1974, т. XXXV, № 4, с. 576588.

9. Алимов А.Ф., Бульон В.В., Гутельмахер Б.Л., Иванова М.Б. Применение биологических и экологических показателей для определения степени загрязнения природных вод // Водные ресурсы, 1979, №5, с. 137-150.

10. Алтуфьев Ю.В. Печень каспийских осетровых в условиях антропогенного загрязнения среды // Экологические и морфофункциональные основы адаптации гидробионтов. Л., 1990, с. 3-5.

11. Альберт Э.А. Избирательная токсичность. М.: Мир, 1971, 432 с. И. Амбарцумян М.А. Влияние различной концентрации бора натемп размножения P. Caudatum в зависимости от температуры среды //Цитология, 1975, т. 17, № 9, с. 1094-1096.

12. Андронников С.Б., Иванов Э.В., Лукина Т.М., Шестерин И.С. Оценка экологических условий водной среды по жаберному аппарату рыб // Тез. докл. 4 Всесоюз. конф. по экол. физиологии и биохимии рыб, 1985, С. 8-9.

13. Аникин A.B. Морфологическое обоснование индукции хрусталика глазной чашей // Труды 6-го Всесоюз. Съезда анатомов, гистологов и эмбриологов, Харьков, 1961, т. 1, с. 511-513.

14. Артюхова В.И., Дмитриева А.Г., Исакова Е.Ф., Ларин В.Е., Путинцев А.И., Филенко О.Ф. Мониторинг вод рек Подмосковья методами биотестирования // Водные ресурсы, 1991, № 1, с. 115-121.

15. Архангельский В.Н. Практическое руководство по патологистологической технике для офтальмологов, М.: Медгиз, 1957, 110 с.

16. Бабин Я.А. Биотические концентрации микроэлементов и их значение в процессе обмена веществ // В кн.: Микроэлементы, витамины и ферменты и их применение в медицине и животноводстве, Саратов, 1967, С. 3-5.

17. Балаж А., Блажек К. Эндогенные ингибиторы клеточной пролиферации, М.: Мир, 1982, 302 с.

18. Бауер О.Н., Мусселиус В.А., Стрелков Ю.А. Болезни прудовых рыб, 2-е изд., перераб. и доп, М.: Легкая и Пищевая промышленность, 1981,320с.

19. Бауэр О.Н., Мусселиус В.А., Стрелков Ю.А.Болезни прудовых рыб, 2-е изд., перераб. и доп, М.: Легкая и Пищевая промышленность, 1981,320с.

20. Беренштейн Ф.Я. Микроэлементы в физиологии и патологии животных //Минск, Урожай, 1966, 46 с.

21. Беспамятнов Г.П., Богушевская К.К., Беспамятнов A.B. и др. Предельно допустимые концентрации вредных веществ в воздухе и воде, Л.: Химия, 1975, 455 с.

22. Бигон М., Харпер Дж., Таунсенд К. Экология: Особи, популяция и сообщества. М.: Мир, 1989, т. 1, 667 е.; т. 2, 477 с.

23. Богданова Е.А. Реакция гидробионтов разных таксонов на антропогенный прессинг гидросферы. // Эколого-ихтиотоксикологические аспекты мониторинга пресноводных водоемов. Сб. научн. трудов, Вып. 326, Изд. ГОСНИОРХ, С.-Пб., 2000, С. 46-61.

24. Бодемер Ч. Современная эмбриология, М.: Мир, 1971,446 с.

25. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л. Влияние аномалий в распределении показателя преломления хрусталика гидробионтов на качество формируемого изображения // Стратегия развития пищ. промышленности-М.: МГТА, 2003 а, С. 210-214.

26. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л. Изменения в хрусталике гидробионтов под воздействием когерентного излучения // Сб. научных трудов молодых ученых МГТА. Вып. II М.: МГТА, 2002 а, С. 68-72.

27. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л. К вопросу о соотношении митотической активности и митотического индекса эпителия хрусталика рыб // Научн.-техн. бюлл. каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА. Вып. 17, -М.: МГТА, 2002 б, С. 9-25.

28. Бородин А. Л., Никифоров-Никишин А.Л. Методы рыбохозяйственных исследований. М.: МГУТУ, 2004 в, 348 с.

29. Бородин А. Л., Никифоров-Никишин А.Л. Модель роста хрусталика рыб // Вестник Московского Государственного Университета Технологий и Управления, Сер. "Биология", Вып. 5 -М.: МГУТУ, 2005 б, С. 39-48.

30. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л. Морфология и оптические характеристики хрусталика гидробионтов. М.: МГУТУ, 2005 в, 138 с.

31. Бородин А. Л., Никифоров-Никишин А.Л. Морфология хрусталика низших позвоночных животных (на примере рыб) // В сб. "Проблемы воспроизводства аборигенных видов рыб" Киев: 2005 а, С. 59-65.

32. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л. Особенности оптического строения хрусталика рыб // Морфологические и физиологические особенности гидробионтов М.: ВНИРО, 2001 а, С. 24-27.

33. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л. Построение таблиц многофакторного дисперсионного анализа // Вестник Московского Государственного Университета Технологий и Управления, Сер. "Биология", Вып. 1 -М.: МГУТУ, 2004 а, С. 38-52.

34. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л. Пространственное распределение некоторых химических элементов в хрусталике кальмара // Научн.-техн. бюлл. каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА. Вып. 18, М.: МГТА, 2003 в, С. 46-52.

35. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л. Рефракционные свойства хрусталика брюхоногих моллюсков // Морфологические и физиологические особенности гидробионтов М.: ВНИРО, 2001 б, С. 27-30.

36. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л. Системная экология. -М.: МГУТУ, 2004 б, 372 с.

37. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л. Статистические закономерности митотической активности эпителия хрусталика рыб // Научн.-техн. бюлл. каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА. Вып. 18, М.: МГТА, 2003 б, С. 19-32.

38. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л., Пространственное распределение показателя преломления в хрусталике рыб и головоногих моллюсков // Сб. трудов молодых ученых МГЗИПП. — М.: МГЗИПП, 1997, С. 14-19.

39. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л., Горбунов A.B. Изменение элементного состава хрусталика радужной форели под влиянием тяжелых металлов // Научн.-техн. бюлл. каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА. Вып. 17, М.: МГТА, 2002, С. 26-34.

40. Бородин А.Л., Никифоров-Никишин А.Л., Симаков Ю.Г. Моделирование оптических характеристик хрусталика гидробионтов // Вестник Московского Государственного Университета Технологий и Управления, Сер. "Биология", Вып. 5 М.: МГУТУ, 2005 б, С. 7-16.

41. Брагинский Л.П. Биологические тесты как метод индикации токсичности водной среды // В кн.: Проблемы аналитической химии. М.: Наука, т. 5, 1979, с. 27-38.

42. Вентцель Е.С., Овчаров Л.А. Теория вероятностей, М.: Наука, 1973, 368 с.

43. Венчиков А.И. Дозировки микроэлемента и уровень энергетических процессов животного организма // Тез. докл. V Всесоюз. совещ. «Биол. роль микроэлементов и их применение в сельском хозяйстве и медицине», т. 2, 1970, 119 с.

44. Венчиков А.И. К применению микроэлементов в медицине в качестве биотических факторов // Тез. докл. IV Всесоюз. международ, совещ. по проблеме: «Микроэлементы и естественная радиоактивность», Петрозаводск, 1965, С. 51-52.

45. Веселов Е.А. Жизнь пресных вод СССР, M.-JL, 1959, 320 с.

46. Веселов Е.А. Критерий токсичности и принципы методик по водной токсикологии. М.: Изд. МГУ, 1971, с. 43-78.

47. Виноградов Г.А. Процессы ионной регуляции у пресноводных животных в условиях антропогенного загрязнения водоемов // Инф. бюл. "Биология внутренних вод", №51, 1981, С. 53-56.

48. Войнар А.И. Биологическая роль микроэлементов в жизни человека и животных. М.: Советская наука, 1960. - 494 с.

49. Войнар А.И. Биологическая роль микроэлементов в организме животных и человека // М., Высшая школа, 1960, С. 5-11.

50. Волков И.В., Заличева И.Н., Каймина Н.В. и др. Региональные особенности токсикорезистентности гидробионтов к металлам // Первая Всесоюз. конф. по рыбох. токсикологии: Тез. докл. Ч. 1, Рига, 1989, С. 75-76.

51. Воробьев В.И. Значение микроэлементов для растущих овец в условиях южностепных регионов Красноярского края // В кн.: Биол. роль микроэлементов и их применение в сельском хозяйстве и медицине, т. 2, Л., Наука, 1970, С. 354-355.

52. Воробьев В.И. Микроэлементы в рыбоводстве Астраханской области // В кн.: Биол. роль и практическое применение микроэлементов, т. 2. Рига, 1975, С. 13-15.

53. Воробьев В.И. Проблемы биогеохимии микроэлементов в рыбоводстве // Тез. докл. VIII Всесоюз. конф. "Биол. роль микроэлементов и их применение в сельском хозяйстве и медицине", т. 1. Иваново-Франковск, 1978, С. 13-14.

54. Воронова Л.Д., Денисова A.B., Пушкарь И.Г., Борисова Т.А. Оценка загрязнения ртутью фауны природных экосистем (по мировым данным) // Мониторинг фонового загрязнения природных сред, вып. 4, 1987, С. 109-121.

55. Втюрин Б.В., Пальцын A.A. Современные методы и приемы электронно-микроскопических исследований биологических объектов (электронно-микроскопическая радиоавтогравия и растровая электронная микроскопия). М.: Радио и связь, 1985, 48 с.

56. Гамбарян С.П., Лаврова Е.А. Нефротоксическое действие соединений платины, хрома и кадмия на морских костистых рыб. // Ж. эволюц. биохимии и физиол,1989, 25,№ 6, С. 729-735.

57. Гирберт С. Биология развития, М.: Мир, 1993, 228 с.

58. Гирса И.И. Влияние фотопериодизма и температуры воды на фотореакцию некоторых рыб. // Вопросы ихтиологии, 1972, т. 12, вып.3(74), с 554-560.

59. Глушко Я.М. Вредные органические соединения в промышленных сточных водах. Л., Химия, 1976, 77 с.

60. Гнездилова С.М., Липина И. Г., Дуркина В.Б., Буровина И.В., Уханов К.Ю. Содержание кадмия в гонаде морского ежа Strongylocentrotus Intermedius и его действие на гаметы и потомство // Биология моря, 1988, № 2, С. 46-51.

61. Гузь О.В., Писько Г.Т. Молекулярные аспекты действия поверхностно-активных веществ на микроорганизмы. // Фармакология и токсикология. Вып. 18, 1983, С. 106-111.

62. Гусев А.Г. Критерий токсичности и принципы методик по водной токсикологии. М.: Изд. МГУ, 1971, с. 29-42.

63. Гярулайтис А.Б., Валушене В.Т., Баршене Я.В. Влияние антропогенного фактора на физиологическое состояние, хромосомный аппарат, численность и запасы рыб Куршского залива // Экспериментальная водная токсикология. Рига, 1990, вып. 14, с. 145149.

64. Данильченко О.П. Сравнительные реакции эмбрионов и предличинок рыб на некоторые природные факторы и синтезированные соединения // Вопр. ихтиологии, 1982, т. 22, вып. 1, с. 128-138.

65. Данильченко О.П. Чувствительность эмбрионов рыб к действию токсических веществ // Вопр. ихтиологии, 1977, т. 13, вып. 3, с. 518527.

66. Дашевский А.И. Новые пути изучения рефракции глаза // В сб. Проблемы физиологической оптики. М. -Л.: изд. АН СССР, 1952.-Т. 10.-С. 97-105.

67. Дементьева М.А. Состояние жаберных лепестков форели при бассейновом выращивании на сбросных теплых водах. // Эколого-ихтиотоксикологические аспекты мониторинга пресноводных водоемов. Сб. научн. трудов, Вып. 326, Изд. ГОСНИОРХ, С.-Пб., 2000, С. 196-202.

68. Дорофеева Л.С., Молина Л.П. Влияние условий внешней среды на биохимические показатели белков крови. // Региональные проблемы экологической генетики и пути их решения. Изд-во Мордов. ун-та, 1996, 11 с.

69. Дре Ф. Экология, М.: Атомиздат, 1976, 125 с.

70. Евтушенко З.С., Христофорова Н.К., Лукьянова О.Н. Металлсвязывающие цитоплазматические белки брюхоногого моллюска Collisella Cassis. // Биология моря, 1984, № 2, С. 59-63

71. Евтушенко З.С., Христофорова Н.К., Лукьянова О.Н. Металлсвязывающие белки и активность щелочной фосфатазы в гигантской устрице, обитающей в условиях антропогенного загрязнения. // Биология моря, 1984, № 3, С. 66-71.

72. Зайцев В.Ф. Федорова H.H., Курникова Н.П., Шипулин С.В., Абдуллаев М.Ш., Ложниченко О.В. Сравнительное накопление тяжелых металлов у самцов и самок стерляди. // Материалы международной научно-технической конференции. Калининград, 2000, С. 142-143.

73. Захаров В.М., Кларк Д.М. (ред.) Биотест. Интегральная оценка здоровья экосистем и отдельных видов. М.: Моск. Отд. Междунар. Фонда "Биотест", 1993, 68 с.

74. Зигель X. Некоторые вопросы токсичности ионов металлов // М., 1993.

75. Израэль Ю.А. Об оценке состояния биосферы и обоснованности мониторинга // ДАН СССР, 1976, т. 226, № 4, с. 955-957.

76. Калинина М.Б. Изучение влияния меди и цинка на картину крови молоди кеты (Oncorhynchus keta). // Первый конгресс ихтиологов России: Тезисы докладов // М.,: Изд-во ВНИРО, 1997, С. 219-220.

77. Карасева Е.М. Накопление тяжелых металлов в половых железах и соматических органах двустворчатых моллюсков // Биология моря, № 2, 1993, С. 66 76.

78. Карасева Е.М. Накопление цинка в гонадах и соматических органах двух видов двустворчатых моллюсков. // Биология моря, № 6, 1987, С. 34-37.

79. Кауфман З.С. Эмбриология рыб, М.: Агропромиздат, 1990, 270

80. Козлов В.А., Никифоров-Никишин A.JL, Бородин A.JI. Аквакультура. М.: МГУТУ, 2004, 433 с.

81. Косицин Н.В., Шнейдман С.А., Щур Ю.Б. Фотографирование угла передней камеры и переднего отдела глаза с помощью щелевой лампы // Вестник офтальмологии. 1965. - № 6. - С. 81-84.

82. Крайнюкова А.Н., Ульянова И.П., Хорунжая Т.А. Методическое руководство по биотестированию воды РД-118-02-90. М., Госкомприрода, 1991, 48 с.

83. Кремер Н.Ш. Теория вероятностей и математическая статистика, М.: Юнити-Дана, 2003, 543 с.

84. Кривандин A.B., Муратов К.О. Сравнительное исследование надмолекулярной структуры кристаллинов в хрусталиках карпа, лягушки и крысы методом малоуглового рассеяния рентгеновских лучей. // Биофизика 1999, т. 44, № 6, с. 1088-1093.

85. Крылов О.Н. О некоторых чувствительных показателях и измерениях в системе организма рыб при отравлении // Методики биологических исследований в водной токсикологии. М., Наука, 1971, с. 119-127.

86. Кутикова Л.А. Коловратки фауны СССР. Л., Наука, 1970, 742 с.

87. Лакин Г.Ф. Биометрия, М.: Высшая школа, 1980, 293 с.

88. Лапин H.A., Красюков В.Н. Влияние гуминовых кислот на поведение тяжелых металлов в эстуарных водах. // Океанология. 26, вып. 4.- 1986, С. 621-627.

89. Лесников Л.А. Методические указания по установлению предельно допустимых концентраций вредных веществ в воде рыбохозяйственных водоемов, Л.: ГОСНИОРХ, 1973, 22 с.

90. Лесников Л.А. Разработка нормативов допустимого содержания вредных веществ в воде рыбохозяйственных водоемов, Л.: ГОСНИОРХ, 1979, т. 144, с. 3-41.

91. Лесников Л.А. Сравнение различных методик проведения водно-токсикологических экспериментов. // Известия НИОРХ, 1976, с. 3-7.

92. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. М., Мир, 1969, 645 с.

93. Липина И.Г., Гнездилова С.М. Распределение кадмия в гонадах морских ежей Strongylocentrotus nudus и S. Intermedius. // Биология моря, № 4, 1985, С. 50-53.

94. Лукин A.A. Устойчивость сиговых рыб к воздействию антропогенных факторов (на примере Кольского Севера) // Биология и биотехника разведения сиговых рыб. СПб., 1994, с. 93.

95. Лукьяненко В.И. Общая ихтиотоксикология, М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983, 320 с.

96. Лукьянова О.Н., Евтушенко З.С. Металлотионеины морских беспозвоночных // Биол. моря, № 4, 1982. С. 3-12.

97. Лукьянова О.Н., Евтушенко З.С. Связывание цинка и кадмия с цитоплазматическими белками приморского гребешка при повышенной концентрации цинка в воде // Биология моря, № 5, 1989, С. 18-24.

98. Макаров В.К., Жданова Т.Г., Исиханова И.И. и др. Распределение свинца в органах и тканях белых крыс при хронической затравке. // Гигиена труда и проф. Заболеваний, 1976, № 4, С. 40-43.

99. Макгрегор Г., Варли Дж. Методы работы с хромосомами животных. М., Мир, 1986,272 с.

100. Макеева А.П. Эмбриология рыб, М.: изд. МГУ, 1992, 216 с.

101. Максимов В.Н. Специфические проблемы изучения комбинированного действия загрязнителей на биологические системы // Гидробиологический журнал, 1977, т. 13, № 4, с. 34-45.

102. Максимов В.Н., Булгаков Н.Г., Милованова Г.Ф., Левич А.П. Детерминационный анализ в экосистемах: сопряженности для биотических и абиотических компонентов // Изв. РАН. Сер. биол. 2000. №4. С, 482-491.

103. Максимова Л.П. Биология моин и коловраток и их разведение в качестве корма для сиговых рыб // Л., ГОСНИОРХ, 1968, вып. 67, с. 107-135.

104. Малаян C.B. Анатомия глаза и физиологическая оптика, Ереван: Айастан, 1969, 267 с.

105. Маляревская А.Я. О специфических и не специфических изменениях при воздействии на рыб различных токсикантов // Норма и патология в водной токсикологии. Байкальск, 1977, с. 70-72.

106. Мамонтова Е.А., Мамонтов А.Л., Тарасова E.H. Загрязнение диоксинами и родственными соединениями окружающей среды Иркутской области. Иркутск, СО РАН, 2000, 48 с.

107. Мартин Р. Введение в биофизическую химию, М.: Мир, 1966, 383 с.

108. Метелев В.В., Канаев А.И., Дзасохова Н.Г. Водная токсикология. М.: "Колос", 1971, 247 с.

109. Мещеряков В.Н. Прудовик Limnaea stagnalis // Объекты биологии развития. М., Наука, 1975, с. 53-92.

110. Милейковский С.А. Объем нефтяного загрязнения мирового океана (обзор литературы) // Океанология, 1979, XIX, № 5, С. 828-834.

111. Милованова З.П., Лысенко Л.В. Приготовление гистологических срезов // Микроскопическая техника. М., Медицина, 1996, с. 14-35.

112. Мироновский А.Н. Морфологическая дивергенция популяций плотвы Rutilus rutilus (Cyprinidae) из малых водоемов Москвы: к вопросу о формировании " индустриальных рас" // Вопросы ихтиологии, 1994, т. 34, № 4, с. 486-493.

113. Моисеев H.H. Быть или не быть человечеству. Москва: Изд. Вагриус, 1999, с. 45-46.

114. Моисеенко Т.И. Адаптивный ответ популяций сига на антропогенный стресс // Биология и биотехника разведения сиговых рыб: Материалы V Всерос. совещ. СПб., 1994, с. 100-101.

115. Моисеенко Т.И. Влияние сточных вод на водные экосистемы Севера и их рыбные запасы // Ихтиология, гидробиология, гидрохимия, энтомология и паразитология: Тез. Докл. XI Всесоюз. Симпоз. "Биологические проблемы Севера". Якутск, 1986, вып. 4, с. 47-48.

116. Моисеенко Т.И. Изменение экологии сиговых рыб в условиях промышленного загрязнения водоемов Субарктики // Соременные проблемы сиговых рыб. Владивосток, 1991, ч. 2, с. 199-213.

117. Моисеенко Т.И. Состояние популяций лососовых и сиговых рыб в условиях загрязнения субарктического водоема (на примере озера Имандра) // III Всесоюзное совещание по лососевидным рыбам. Тольяти, 1988, с. 206-207.

118. Моисеенко Т.И. Теоретические основы нормирования антропогенных нагрузок на водоемы Субарктики. Апатиты, 1997, 261 с.

119. Моисеенко Т.И., Лукин A.A., Кашулин H.A. Сиг как тест-объект для биоиндикации качества вод озер Крайнего Севера // Современные проблемы сиговых рыб. Владивосток, 1991, ч. 2, с. 213-224.

120. Моисеенко Т.И., Яковлев В.А. Антропогенные преобразования водных экосистем Кольского Севера. Л.: Наука, 1990, 112 с.

121. Мотузова Г.В., Чичева Т.Б. О мониторинге подвижных форм тяжелых металлов в почвах фоновых районов // Мониторинг фонового загрязнения природных сред, вып.4, 1987, С. 265-270.

122. Мур Д., Рамамурти С. Тяжелые металлы в природных водах. Контроль и оценка влияния. М., Мир. 1987.

123. Мэгерран Р. Экологическое разнообразие и его измерение. М.: Мир, 1992, 182 с.

124. Нефедова З.А., Тайвонен Л.В. Биохимические особенности катарактогенеза у молоди семги. Липидный состав хрусталика рыб // Конгресс ихтиологов России Астрахань, 1997, с. 232-233.

125. Никифоров-Никишин А.Л. Влияние некоторых токсикантов на годовиков окуня // В сб. "Вопросы экологии гидробионтов". М.: ВНИПРХ, 1991, С. 126-127.

126. Никифоров-Никишин А.Л. Влияние некоторых токсикантов на предличинок кеты // Тез. докл. на Конф. МПО по рыбоводству ВЗИПП секция- экология гидробионтов. М.: ВНИПРХ, 1989, С. 9596.

127. Никифоров-Никишин А. Л., Бородин А. Л. Изучение совместного воздействия травмы и токсикантов на митотическую активность эпителия хрусталика рыб // Сб. трудов молодых ученых МГЗИПП. -М.: МГЗИПП, 1997, С. 45-46.

128. Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Влияние умеренно- и слаботоксичных веществ на чувствительные биологические показатели некоторых гидробионтов // Научн.-техн. бюлл. каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА. Вып. 17, М.: МГТА, 2002 в, С. 62-77.

129. Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Воздействие инфракрасного лазерного излучения на хрусталик гидробионтов // Стратегия развития пищ. промышленности — М.: МГТА, 2003 а, С. 203-207.

130. Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Количественная оценка оптических характеристик хрусталика гидробионтов при катарактах различной этиологии // Стратегия развития пищ. промышленности -М.: МГТА, 2003 б, С. 207-210.

131. Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Некоторые аспекты биохимии хрусталика // Сб. научных трудов молодых ученых МГТА. Вып. II М.: МГТА, 2002 а, С. 57-68.

132. Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Оптическая плотность хрусталиков некоторых гидробионтов // Инновационные технологии в пищ. пром. третьего тысячелетия, Т. I, Вып. 6. — М.: МГТА, 2001, С. 23-24.

133. Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Оценка комплексного воздействия тяжелых металлов на хрусталик радужной форели (Рагаза1шо туклБз) // Научн.-техн. бюлл. каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА. Вып. 18, -М.: МГТА, 2003 в, С. 33-45.

134. Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Прикладная экология. М.: МГУТУ, 2004 в, 92 с.

135. Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Хрусталик гидробионтов как тест-объект в водной токсикологии. — М.: МГУТУ, 2004 б, 145 с.

136. Никифоров-Никишин А. Д., Бородин А. Л. Электронно-микроскопические исследования строения хрусталика гидробионтов // Научн.-техн. бюлл. каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА. Вып. 17, -М.: МГТА, 2002 б, С. 53-61.

137. Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л., Сотников Ф.И. Анализ чувствительности некоторых биологических показателей гидробионтов к действию трихлорбензола // Научн.-техн. бюлл. каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА. Вып. 18, М.: МГТА, 2003, С. 515.

138. Никифоров-Никишин А.Л., Горбунов A.B., Бородин А.Л. Анализ чувствительности метода митотической активности эпителия хрусталика рыб (на примере монохлорбензола) // В сб. "Проблемы воспроизводства аборигенных видов рыб" — Киев, 2005 а, С. 123-137.

139. Никифоров-Никишин А.Л., Горбунов A.B., Бородин А.Л. Перспективы развития малых водоемов Центральной части России // Морфологические и физиологические особенности гидробионтов -М.: ВНИРО, 2001. С. 52-56.

140. Никифоров-Никишин А.Л., Кулаев С.Н. Воздействие токсикантов на динамику вещества у рыб // Тез. докл. 2-й Всесоюзной конференции по рыбохозяйственной токсикологии. Санкт-Петербург: ГОСНИОРХ, 1991, С. 71-74.

141. Никифоров-Никишин Д.Л. Гистохимия хрусталика некоторых видов рыб // Мат. VII науч.-практ. конф. "Инновационные технологии в пищевой промышленности третьего тысячелетия", М.: МГТА, 2001, вып. 6, том I, с. 22.

142. Никольский Г.В. Экология рыб. М.: Высш. шк., 1974, 367 с.

143. Новикова О.И. Оценка мутационной активности бурового раствора и его компонентов, Санкт-Петербург: ГОСНИОРХ, 1993, вып. 335, с. 78-81.

144. Одум Э. Общая экология, М.: Мир, 1975, 740 с.

145. Остромогильский А.Х., Петрухин В.А., Кокорин А.О., Виженский В.А., Лапенко Л.А. Свинец, кадмий, мышьяк и ртуть в окружающей среде: моделирование глобального круговорота // Мониторинг фонового загрязнения природных сред, вып. 4, 1987, С. 122-147.

146. Павлов С.Д., Савваитова К.А., Максимов В.А. О взаимоотношениях симпатрических группировок арктических гольцов в озере Собачье (Норило-Пясинская водная система) // Систематика, биология и биотехника разведения лососевых рыб. Л., 1994, с. 148-151.

147. Патин С.Ф., Морозов Н.П. Некоторые аспекты проблемы загрязнения морской среды тяжелыми металлами // Труды ВНИРО, т. 100, Экологические аспекты химического и радиоактивного загрязнения водной среды. М., 1974, С. 7-12.

148. Паттерсон К. Загрязнение внешней среды свинцом // Гигиена и санитария, № 11, 1971, С.89-94.

149. Пашин Ю.В., Козаченко В.И. и др. Химические мутагены окружающей среды. М., Наука, 1983, 138 с.

150. Пейве Я.В. Микроэлементы и ферменты, Рига: изд. АН ЛАТ. СССР, 1960, 286 с.

151. Перевозников М.А., Богданова Е.А. Тяжелые металлы в пресноводных экосистемах. С-Пб., 1999,228 с.

152. Перевозников М.А., Лащевская Т.И. Рыбы биоиндикаторы ионов тяжелых металлов. // Эколого-ихтиотоксикологические аспекты мониторинга пресноводных водоемов. Сб. научн. трудов, Вып. 326, Изд. ГОСНИОРХ, С.-Пб., 2000, С. 41-45.

153. Пири А., ван Гейнинген Р. Биохимия глаза, М.: Медицина, 1968, 400 с.

154. Пирс Э. Гистохимия, М.: Иностранная литература, 1962, 962 с.

155. Райхенбах-Клинке Х.Х. Рыба как тест-объект // В сб. Методы исследований токсичности на рыбах, М.: Агропромиздат, 1985, с. 7-9.

156. Решетников Ю.С. Биологическое разнообразие и изменение экосистем // Биоразнообразие: Степень таксономической изученности. М.: Наука, 1994, с. 77-85.

157. Решетников Ю.С. Современное состояние и перспективы изменения запасов сиговых рыб // Биология сиговых рыб. М.: Наука, 1988, с. 5-17.

158. Решетников Ю.С., Амундсен П.А. Сиговые рыбы системы р. Пасвик // Биология и биотехника разведения сиговых рыб: Материалы V Всерос. совещ. СПб., 1994, с. 112-115.

159. Робертис Э., Новицкий В., Саэс Ф. Биология клетки, М.: Мир, 1967, 473 с.

160. Романов A.A., Алтуфьев Ю.В. Новообразования в половых железах и печени осетровых рыб (Asipenseridae) Каспийского моря // Вопросы ихтиологии, 1990, т. 30, вып. 6, с. 1040-1044.

161. Ромейс Б. Микроскопическая техника, М.: Иностранная литература, 1954, 718 с.

162. Ромер А., Парсонс Т. Анатомия позвоночных, М.: Мир, 1992, 358 с.

163. Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника // М., "Наука", 1957, 245 с.

164. Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника, М.: Наука, 1957, 245 с.

165. Рощупкин Д.И., Потапенко А.Я. -Биологическое действие ультрафиолетового и видимого излучения. В кн. Внешняя среда и развивающийся организм м.: 1977, с. 53-90.

166. Савенко B.C. О фоновом содержании селена в атмосфере и значении антропогенного загрязнения // Мониторинг фонового загрязнения природных сред, 1987, вып. 4, С. 97-108.

167. Саркисов Д.С., Перов Ю.Л. Микроскопическая техника: Руководство. М.: Медицина, 1996 - 544с.

168. Сахарова Н.Ю., Голиченков В. А. Сезонные изменения регенерационной способности эпителия хрусталика лягушки // Цитология, 1968, т. 10, № 7, с. 896-899.

169. Серпунин Г.Г. Гематологические показатели адаптации молоди карпа к воздействию ионов тяжелых металлов // Аквакультура и биомониторинг водоемов: Сб. научн. тр. КГТУ, Калининград, 2001, С. 84-89.

170. Серпунин Г.Г., Коробейникова Е.Г. Реакция системы крови карпа (Cyprinus carpió L.) на воздействие тяжелых металлов. // Первый конгресс ихтиологов России: Тезисы докладов. М.: Изд-во ВНИРО, 1997, С. 237-238.

171. Симаков Ю.Г. Влияние бензольных соединений на митотическую активность эпителия хрусталика радужной форели Salmo gardineri Rich // "Вопросы ихтиологии", 1982, т. 22, вып. 1, с. 139-144.

172. Симаков Ю.Г. Выявление хромосомных мутаций // Метологические указания по установлению рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ) загрязняющих веществ для воды водных объектов имеющих рыбохозяйственное значение, М.: изд. ВНИРО, 1998, с. 96-102.

173. Симаков Ю.Г. Гидробиология и борьба с загрязнением рыбохозяйственных водоемов // М., МТИПП, 1982, 102 с.

174. Симаков Ю.Г. Методы оценки мутагенной активности веществ в подострых опытах на эпителии хрусталика глаза рыб // Методы ихтиологических исследований. JL, ГОСНИОРХ, 1987, с. 121-122.

175. Симаков Ю.Г. Накопление некоторых макро- и микроэлементов в развивающемся хрусталике травяной лягушки // Вестник Московского университета, 1969, № 5, с. 22-26.

176. Симаков Ю.Г. Новый метод фиксации коловраток для морфологических и гистохимических исследований // Зоологический журнал, 1974, вып. 4, с. 623-625.

177. Симаков Ю.Г. О некоторых макроэлементах и микроэлементах в развивающемся хрусталике // Симпозиум "Регуляция процессов роста и дифференцировки". Автореф. Бюлл. МОИП, 1969, с. 28-31.

178. Симаков Ю.Г. Оценка генотоксичности загрязняющих веществ // Методические указания по установлению эколого-рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ). М., ВНИРО, 1998, с. 91-102.

179. Симаков Ю.Г. Размножение коловраток Philodina roseola и новые концепции обмена генетической информации" // Доклады по экологии гидробионтов; М., ВНИИПРХ, 1989, с. 85-86.

180. Симаков Ю.Г. Регенерация различных зон эпителия хрусталика после травматизации // Изв. АН СССР, серия биологическая, 1974, № 2, с. 295-298.

181. Симаков Ю.Г. Эмбрионы и личинки рыб // Методические указания по установлению ПДК и ОБУВ загрязняющих веществ для воды водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение. М., ВНИРО, 1998, с. 77-79.

182. Симаков Ю.Г., Бородин A.JL, Никифоров-Никишин A.JI. Экспериментальные лучевые и травматические катаракты. — М.: МГТА, 2003 а, 168 с.

183. Симаков Ю.Г., Кулаев С.Н. Морфологические перестройки у гидробионтов под влиянием широкополостного электромагнитного облучения // Состояние и перспективы научно-практических разработок в области марикультуры России. М., ВНИРО, 1996, с. 295303.

184. Симаков Ю.Г., Никифоров-Никишин A.JI. Биомикроскопия хрусталика карпа при наличие метацеркарий диплостом // В сб. "Водные биоресурсы, воспроизводство и экология гидробионтов". — М.: ВНИПРХ, 1993, С. 153-155.

185. Симаков Ю.Г., Никифоров-Никишин A.JI. Особенности зрения гидробионтов // Водные экосистемы и организмы. (Труды научной конференции МГУ) М.: Макс-Пресс, 2004, С. 68 - 69.

186. Симаков Ю.Г., Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Влияние теплового загрязнения на митотическую активность эпителия хрусталика гидробионтов // Сб. трудов молодых ученых МГЗИПП. М.: МГЗИПП, 1997, С. 20-23.

187. Симаков Ю.Г., Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Изменение некоторых биологических показателей гидробионтов под влиянием мутагенных соединений // Научн.-техн. бюлл. каф. "Биоэкологии и ихтиологии" МГТА. Вып. 17, М.: МГТА, 2002, С. 35-52.

188. Симаков Ю.Г., Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Хрусталик гидробионтов: морфология, биохимия, цитогенетика. -Ростов н/Д: Изд. Рост.ун-та, 2005, 160 с.

189. Симаков Ю.Г., Никифоров-Никишин А.Л., Бородин А.Л. Цитодифференцировка хрусталика и катарактогенные факторы. М.: МГТА, 2003 б, 214 с.

190. Симаков Ю.Г., Никифоров-Никишин А.Л., Кулаев С.Н. Исследования хромосомных клеточных структур гидробионтов методами оптоэлектроники // В сб. "Водные биоресурсы, воспроизводство и экология гидробионтов", Вып. 67 — М.: ВНИПРХ, 1993, С. 120-123.

191. Симаков Ю.Г., Никифоров-Никишин А.Л., Кулаев С.Н. Митотическая активность в эпителии хрусталика окуня в норме и при травматизации // В сб. "Вопросы экологии гидробионтов". М.: ВНИПРХ, 1991, С. 127-130.

192. Симаков Ю.Г., Попов В.В. Миграция кальция из сетчатки в хрусталик в развивающемся глазу травяной лягушки // Вестник Московского университета, 1969, №4, с. 17-19.

193. Симонавичене Б.И. Чувствительность серебряного карася к сублетальным концентрациям меди. // Биол. ресурсы водоемов бассейна Балт. моря. Матер. 22 Науч. конф. по изуч. водоемов Прибалтики, Вильнюс, 1987, 847.

194. Смит Л.Л. Критерии биотестов // В кн. Влияние загрязняющих веществ на гидробионтов и экосистемы водоемов, Л., 1979, с. 39-49.

195. Соколов JI.И. Рыбы в условиях мегаполиса (г. Москва) // Соросовский образовательный журнал, 1998, № 5, с. 30-35.

196. Соколов Л.И., Соколова Е.Л., Пегасов В.А., Шатуновский М.И., Кистинев А.Н. Ихтиофауна реки Москвы в черте г. Москвы и некоторые данные о ее состоянии // Вопросы ихтиологии, 1994, т. 34, №5, с. 634 641.

197. Солнцев В.Н. Процессы естественного и антропогенного загрязнения природных комплексов. // Известия Всесоюз. Географ, общества, 1974, т. 106, вып 3, с. 345-365.

198. Строганов Л.М. Содержание микроэлементов в тканях нормального глаза // Матер, к научной конф. по теме "Спектральные методы исследований в биологии и медицине", 1967, с. 70-71.

199. Строганов Н.С. Критерий токсичности и принципы методик по водной токсикологии. М.: Изд. МГУ, 1971, с. 14-28.

200. Строганов Н.С. Научные основы установления ПДК токсических веществ в открытых водоемах (Биологические аспекты) //Водные ресурсы, 1974, № 1, с. 110-121.

201. Строганов Н.С. Токсическое загрязнение водоемов и деградация водных экосистем // В кн. Общая экология. Биоценология. Гидробиология. Сер. Водная токсикология, 1976, т. 3, с.35-46.

202. Ташкэ К. Введение в количественную цитологическую морфологию. Бухарест; Акад. СРР, 1980, 191 с.

203. Тимофеева А.И. Влияние сублетальных концентраций CuS04 на показатели роста сеголеток радужной форели. // Эколого-ихтиотоксикологические аспекты мониторинга пресноводных водоемов. Сб. научн. трудов, Вып. 326, Изд. ГОСНИОРХ, С.-Пб., 2000, С. 257-265.

204. Тишинова-Нанова В. Влияние на кадмия върху активността на пероксидазата в кръвта на шарана. // Год. Софийск. унив. Биол. фак., 1984(1987), 78, № 1, С. 50-54.

205. Трумен Д. Биохимия клеточной дифференцирован, М.: Мир, 1976,168 с.

206. Федоров В.Д. Новый показатель неоднородности структуры сообщества // Вестн. МГУ. Сер. биол. 1973. №2. С, 94-96.

207. Филенко О.Ф. Водная токсикология // М.: Изд. Моск. ун-та, 1988, 154 с.

208. Филенко О.Ф., Хоботьев В.Г. Загрязнение металлами // В. сб.: Итоги науки и техники. Общая экология. Биоценология. Гидробиология, Т. 3. Водная токсикология, 1976, с. 110-150.

209. Флеров Б.А., Комов В.Т. Оценка экологического состояния водоемов при антропогенном воздействии // Гидробиологический журнал, Киев, 1991, т. 27, № 3, с. 8-13.

210. Фомин Г.С. Вода. Контроль химической, бактериальной и радиационной безопасности по международным стандартам. // Энциклопедический справочник, 3-е изд., перераб. и доп. М.: Издательство "Протектор", 2000, 848 с.

211. Фридман Ф.Е. Станок для фиксации экспериментальных животных при биомикроскопии глаз // Физ. журн. СССР им. Сеченова. -1960. Т. 46. - № 5. - С. 633-634.

212. Христофорова Н.К. Содержание тяжелых металлов в мягких тканях трех видов двустворчатых моллюсков острова Багаман (Меланезия) // Биология моря, № 6, 1980, С. 51 -55.

213. Черняев Ж.А., Довгий Т.Н. О воздействии световой радиации на развитие икры сиговых рыб. В кн. Вопросы рыбного хозяйства Восточной Сибири. Иркутск, 1969, с. 50-51.

214. Чуйков Ю.С. Задачи и принципы биологического анализа степени загрязнения водоемов // Гидробиологический журнал, 1975, т. 11,№5, с. 111-118.

215. Шварц С.С. Экологические основы охраны биосферы. "Вестник АН СССР", 1973 с. 9.

216. Шерстнева Л.А., Казакова И.С., Третьякова С.А. Токсичность бромбензола для гидробионтов // Сб. научных трудов ГосНИОРХ и речного рыбного хозяйства, 1993, № 335, с. 93-98.

217. Шеффе Г. Дисперсионный анализ, М.: Наука, 1980, 680 с.

218. Шлопак Т.В. Микроэлементы в офтальмологии // Труды 4-го съезда офтальмологов Укр. ССР, Киев, 1964, с. 408-411.

219. Шлопак Т.В. Некоторые особенности химизма хрусталика в норме и патологии // Офтальмологический журнал, 1962, т. 5, с. 273276.

220. Шлопак Т.В. Химизм хрусталика (в норме и патологии). Послесловие к книге Пири и Гейнингена "Биохимия глаза", М.: Медицина, 1968, с. 5-6.

221. Шустов В .Я. Микроэлементы в гематологии // Л., Наука: 1967, С.5-116.

222. Adler F.H. Physiology of the Eye-Clinical Applications. Mosby. St. Luis, Missouri, 1959. 320 p.

223. Aggett P.J., Comerford J.G. Zinc and human health // Nutr Rev, 53, 1995, p. 16-22.

224. Ahrend M.H.J., Breck O., Wegener A., Midtlyng S., Breipohl W. Age-related changes in cristallin patterns of normal and cataracts lenses of fermed Atlantic Salmon. // 9-th conf. Rhodes, 19-21 Sep. 1999, p. 25.

225. Akaba S. Distribution of glutathione in the pathologic eye. // Nippon Ika. Daig. Z. 1966, v. 33, p. 86-93.

226. Allshire R.C., Javerzat J.P., Redhead N.J., Cranston G. Position effect variegation at fission yeast centromeres. Cell 76, 1994, p. 157-169.

227. Amer S.M., Ali E.M. Cytological effects of pesticides. Meiotic effects of some phenol // Cytologia, 1968, v. 33, p. 21-33.

228. Arey L.B. Developmental Anatomy. Philadelphia: W.B. Saunders and Co., 1974, 674 p.

229. Baldo G.J., Gong X., Martinez-Wittinghan F.J., Kumar N.M., Gilula N.B., Mathias R.T. Gap junctional coupling in lenses from alpha(8) connexin knockout mice. J. Gen. Physiol. 118, 2001, p. 447-456.

230. Balinsky B.J. An Introduction to Embryology (3-rh edd). Philadelphia, London and Toronto: W.B. Saunders and Co., 1970, 345 p.

231. Bassnett S. Lens organelle degradation. Exp. Eye Res. 74, 2002, p. 1-6.

232. Bassnett S., Missey H., Vucemilo I. Molecular architecture of the lens fiber cell basal membrane complex. J. Cell Sci. 112, 1999, p. 21552165.

233. Beauchamp P. De Classe des Rotifer // Traite de Zoologie, Anatomie, Systematique, Biologie. Paris, 1965, v. 4, № 3, p. 283-394.

234. Behl C., Skutella T., Lezoualc'h F., Post A., Widmann M., Newton C.J., Holsboer F. Neuroprotection against oxidative stress by estrogens, p. structure-activity relationship. Mol Pharmacol. 1997, 51, p. 535-541.

235. Belding D.L. Trans. Amer. Fish. Soc., 57, 1927, p. 403-409.

236. Bellows J.G. Cataract and anomalies of the lens. London: Kimpton, 1944.

237. Bengeri K.V., Patil H.S. Lead induced histological changes in the liver of Puntius arulius // J. Anim. Morphol. and Physiol., 1986, 33, № 1-2, p. 147-150.

238. Bentley P. J., Grubb B.R. Effects of zinc deficient diet on tissue zinc concentrations in rabbits //J. Anim. Sci, 69, 1991, p. 4876^1882.

239. Berardinis E., Tieri O., Juglio N. at all. The concentration of lactic acid in the human aqueous humor is not determined by the metabolism of the lens. // Experientia, 1965, v. 21, p. 589-590.

240. Berg J.M., Shi Y. The galvanization of biology: a growing appreciation for the roles of zinc // Science, 271, 1996, p. 1081-1085.

241. Bettger W.J., O'Dell B.L. Physiological roles of zinc in the plasma membrane of mammalian cells // J. Nutr. Biochem, 1993, 4, p. 194-207.

242. Bigsby R.M., Cardenas H., Caperell-Grant A., Grubbs C.J. Protective effects of estrogen in a rat model of age-related cataracts. Proc Natl Acad Sci USA. 1999,96, p. 9328-9332.

243. Bloemendal H. The Vertebrate eye lens // Science, 1977, v. 197, p. 127-138.

244. Boersma M.G., Solyanikova I., Van Berkel W.J., et al. 19F NMR metabolomics for the elucidation of microbial degradation pathways of fluorophenols. J Ind Microbiol Biotechnol. 2001, 26, p. 22-34.

245. Bonting S.L. Na-K activated adenosinetriphosphatase and acetivecation transport in the lens. // Invest. Ophthal., 1965, v. 4, p. 723744.

246. Borchman D., Yappert M.C. Age-related lipid oxidation in human lenses. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1998, 39, p. 1053-1058.

247. Borodin A.L., Nikiforov-Nikishin A.L. Fishes lens growth // Fresh Water Ecosystems Health and Management, Vol. 2, Tel-Avive: Hargol, 2004 b, P. 57-63.

248. Borodin A.L., Nikiforov-Nikishin A.L. Influence Cu, Zn, Cd and Pb on mithotic activity of fishes lens epithelium (on example Parasalmo mykiss) // Fresh Water Ecosystems Health and Management, Vol. 2, Tel-Avive: Hargol, 2004 a, P. 25-33.

249. Bose A., Medda J. A study on the lens inducing process in the chick. // Folia Biol, Krakow, 1965. v. 13, p. 289-295.

250. Bowness T.M., Morton R.A., Shakir M.H., Stubbs A.L. Distribution of copper and zinc in mammalian eyes. Occurrence of metals in melanin fractions from eye tissues //Biochem. J., 1952, 51, p.530-535.

251. Bradley R.W., DuQuesnay C., Sprague J.B. Acclimation of rainbow trout, Salmo gairdneri Richardson, to zinc: kinetics and mechanism of enhanced tolerance induction // J. Fish Biol., vol. 27, № 4, 1985, p. 367379.

252. Braverman N., Cohen C., Korton A. Cytotoxicity of lens antisera to dissociated chik neural retina cell in tissue culture // J. Embryol. exp. Morph., 1969, v. 21, p. 391-406.

253. Bremner I. Heavy metal toxicities // Quart. Rev. Biophys., vol. 7, 1974, p. 75-124.

254. Brinton R.D. Cellular and molecular mechanisms of estrogen regulation of memory function and neuroprotection against Alzheimer's disease, p. recent insights and remaining challenges. Learn Mem. 2001, 8, p. 121-133.

255. Brown B.E. Uptake of copper and lead by a metal tolerant isopod Asellum meridianus Rac. // Freshwater Biol., 1977, vol. 7, № 3, p. 235

256. Brown B.E. Observations on the tolerans of the isopod Asellum meridianus Rac to copper and lead // Water Res., 1976, № 5, p. 10.

257. Bryan G.W. Adaptation of on estuarine polychaete to sediments containing high concentrations of heavy metals // Pollution and physiology of marine organisms, New York; London, Acad, press., 1974, p. 123.

258. Calabria G.A. Attivita giucose-6-fosfato e 6-fosfogluconato deidrogenasica del cristallino di vitello. // Boll. Soc. Ital. Biol. Sper, 1964, v. 40, p. 269-272.

259. Canton J.H., Sloof W. The usefulness of Lymnaea stagnalis L. as a biological indicator in toxicological bio-assays (model Substance a-HCH) //Water Res., 1977, v. 11,№ l,p. 117-121.

260. Carmichael N.G., Sguiff K.S., Engel. D.W., Fowler B.A. Metals in the mol-luscan kidney: uptake and subcellular distribution of 109Cd, 54Mn, and 65Zn by the clam Mercenaria mercenaria // Comp. Biochem. and physiol., v. 65A, 1980. p. 203-206.

261. Carr J.F., Hiltunen J.K. Changes in the bottom of Western lake Erie from 1939-1961 // Limnol. and Oceanogr., 1965, v. 10, № 1, p. 286-293.

262. Chalfie M., Tu Y., Euskirchen G., Ward W.W., Prasher D.C. Green fluorescent protein as a marker for gene expression. Science 263, 1994, p. 802-805.

263. Chander I.H., Marcing L.L. Toxicity of fishery chemical to the Asiatic clam Corbicula manilensis // Program Fish-Cult., 1979, 41, № 3, p. 148-151.

264. Chang B., Wang X., Hawes N.L., Ojakian R., Davisson M.T., Lo W.K., Gong X. A Gja8 (Cx50) point mutation causes an alteration of alpha 3 connexin (Cx46) in semi-dominant cataracts of Lop 10 mice. Hum. Mol. Genet. 11, 2002, p. 507-513.

265. Cherian M.G., Goyer R.A. Metallothioneins and their role in the metabolism and toxicity of metals // Life Sci., v. 23, 1978, p. 1-10.

266. Chiang C.F., Okou D.T., Griffin T.B., Verret C.R., Williams M.N. Green fluorescent protein rendered susceptible to proteolysis, p. positions for protease-sensitive insertions. Arch. Biochem. Biophys. 394, 2001, p. 229-235.

267. Cohen A.I. The electron microscopy of the normal human lens. // Invest. Ophthal., 1965, v. 4, p. 433-446.

268. Coombs T.L., George S.G. Mechanism of immobilization and detoxica-tion of metals in marine organisms // Physiology and behaviour of marine organisms, Oxford, New York, Pergamon press, 1978, p. 179-187.

269. Cotlier E., Beaty C. The role of Na-ions in the transport of alpha-aminoisobutiric acid and other amino acid into the lens. // Invest. Ophthal., 1967, v. 6, p. 64-75.

270. Coughlan D.J., Closs S.P., Kubota J. Acute and sub-shronic toxicity of lead to the early life stages of smallmouth bass (Micropterus dolomieui) // Water, Air, and Soil Pollut., 1986, 28, № 3-4, 265-275.

271. Cubitt A.B., Heim R., Adams S.R., Boyd A.E., Gross L.A., Tsien R.Y. Understanding, improving and using green fluorescent proteins. Trends Biochem. Sci. 20, 1995, p. 448-455.

272. Cumming R.G., Mitchell P. Hormone replacement therapy, reproductive factors, and cataract. The Blue Mountains Eye Study. Am J Epidemiol. 1997, 145, p. 242-249.

273. Daemers-Lambert C., Noel-Lambot F., Bouquegneau J.M. Le canal calcique: Une voie d'entree des metaux lourds dans les cellules des organismes marins // Oceanis., 1988, 14, № 4, p. 513-518.

274. Dahm R., van Marie J., Prescott A.R., Quinlan R.A. Gap junctions containing alpha8-connexin (MP70) in the adult mammalian lens epithelium suggests a re-evaluation of its role in the lens. Exp. Eye Res. 69, 1999, p. 45-56.

275. Davies M.J., Truscott R.J. Photo-oxidation of proteins and its role in cataractogenesis. J Photochem Photobiol B. 2001, 63, p. 114-125.

276. Davis V.L., Chan C.C., Schoen T.J., Couse J.F., Chader G.J., Korach K.S. An estrogen receptor repressor induces cataract formation in transgenic mice. Proc Natl Acad Sci USA. 2002, 99, p. 9427-9732.

277. Deysson G. Antimitotic substances- Intern // Rev. Cytol, 1968, v. 24, p. 99-148.

278. Dische Z., Zelmenis G. The content and structural characteristics of the collagenous protein of rabbit lens capsules at differen ages. // Invest. Ophthal., 1965, v. 4, p. 774-780.

279. Doudoroff P. Int. to the physiology of fishes. Academic Press, 1957, №4, 215 p.

280. Dov S.C. Ontogenical changes in the cristallin compositions of the eye lenses of the territorial damselfish Parma microlepis and their possibleeffects on trance-metal accumulation. // Mar. Biol, 1999, v. 134, № 4, p. 653-663.

281. Dryl S. Response of ciliate protozoa to experimental stimuli // Mosquito News, 1970, 37, № 2, p. 151-155.

282. Dupree A.L., Little J., Langman J. Human lens proteins examined by immunochemical and ultracentrifugal techniques. // Arch. Ophthalmol, Chicago, 1964, v. 72, p. 660-666.

283. Durkina V.B., Evtushenko Z.S. Changes in activity of certain enzymes in sea urchin embryos and larvae after exposure of adult organisms to heavy metals // Mar. Ecol. Progr. Ser., 1991, 72, № 1-2, p. 111-115.

284. Dykens J.A. Free radicals and mitochondrial dysfunction in excitotoxicity and neurodegenerative diseases. Koliatos VE, Ratan VV. Cell Death and Diseases of the Nervous System. Clifton, NJ, p. Humana Press, 1999, p. 45-68.

285. Dykens J.A. Mitochondrial radical production and mechanisms of oxidative excitotoxicity. In, p. Davies KJA, Ursini F., eds. The Oxygen Paradox. Cleup Press, University of Padova, 1995, p. 453-467.

286. Dykens J.A., Fleck B., Ghosh S., Lewis M., Velicelebi G., Ward M. A novel FRET-based assay of mitochondrial membrane potential in situ. Mitochondrion. 2002, 1, p. 461-473.

287. Dykens J.A., Stout A.K. Fluorescent dyes and assessment of mitochondrial membrane potential in FRET modes. Methods Cell Biol. 2001, 65, p. 285-309.

288. Eckhert C.D. Elemental concentrations in ocular tissues of various species // Exp Eye Res., 37, 1983, p. 639-647.

289. Eichler G.I. Journ. Wildlife Management, 1946, 10, p. 217-225.

290. Ellis M.M. Bull. Bur. of Fish., 1940, 18, p. 32-38.

291. Ely L.O. Cytocrom-C content of bovine crystallin Lens // Arch. Ophthalmol, Chicago, 1952. v. 47, № 5, p. 717-719.

292. Enesco H.E., Pisanti F.A., Aloj T.E. The effect of copper on the ultrastructure of Torpedo marmorata neurons // Mar. Pollut. Bull., 1989, 20, № 5, p. 232-235.

293. Fabe J., Grahn B.H., Paterson P.G. Zinc concentrations of selected ocular tissues in zinc-deficient rats // Biol Trace Elem Res, 75, 2000, p. 43-52.

294. Festenstein R., Tolaini M., Corbella P., Mamalaki C., Parrington J., Fox M., Miliou A., Jones M., Kioussis D. (Locus control region functionand heterochromatin-induced position effect variegation. Science 271, 1996). p. 1123-1125.

295. Fischer-Lougheed J., Liu J.H., Espinos E., Mordasini D., Bader C.R., Belin D., Bernheim L. Human myoblast fusion requires expression of functional inward rectifier Kir2.1 channels. J. Cell Biol. 153, 2001, p. 677686.

296. Flannagan J.F. Fields and laboratory studies of the effect of exposure to fenitrothion on freshwater aquatic invertebrates // Manitoba Entomol., №7, 1973, p. 15-25.

297. Francois I., Rabaey M., Stockmans L. Gel filtration of the soluble proteins from normal and cataractous human lenses. // Exp. Eye Res., 1965, v. 4, p. 312-318.

298. Freeman E.E., Munoz B., Schein O.D., West S.K. Hormone replacement therapy and lens opacities, p. the Salisbury Eye Evaluation project. Arch Ophthalmol. 2001, 119, p. 1687-1692.

299. Fruton J.S., Simmonds S. General biochemistry, London: Chapman Hall, 1953.

300. Fu M.X., Requena J.R., Jenkins A.J., et al. The advanced glycation end product, Ne-(carboxymethyl)lysine, is a product of both lipid peroxidation and glycoxidation reactions. J Biol Chem. 1996, 271, p. 9982-9986.

301. Fulhorst H.W., Young R.W. Conversion of soluble lens protein to albuminoid. // Invest. Ophthal., 1966, v. 5, p. 298-303.

302. Galin M.A., Nano H.D., Hall T. Ocular zinc concentration // Invest Ophthalmol.,Vis Sci, № 1, 1962, p. 142-148.

303. Gill T.S., Pant J.C. Chromatin condensation in the erythrocytes of fish following exposure to cadmium // Bull. Environ. Contam. and Toxicol., 1986, 36, № 2, p. 199-203.

304. Ginge R.W.H., Elsbury R.M., Steingraeber M.T. Effects of cadmium on hatching success, growth, and osteological development of larval brook trout (Salvelinus fontinallis) in soft, acidic waters // Aquat. Toxicol., 1988, 11, №3-4, p. 404-405.

305. Godmann I.R. California Fishes, 37, 1951, 68 p.

306. Goldsmitt L.A. Carlson I.P. Divergent toxicity of parathion in two freshwater invertebrates Orconectes rustics and Viviparus malleatus. // J. Environ. Sci. And Health, 1979, 14, № 6, p. 579-588.

307. Gong X., Baldo G.J., Kumar N.M., Gilula N.B., Mathias R.T. Gap junctional coupling in lenses lacking alpha3 connexin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 1998, p. 15303-15308.

308. Gong X., Li E., Klier G., Huang Q., Wu Y., Lei H., Kumar N.M., Horwitz J., Gilula N.B. Disruption of alpha3 connexin gene leads to proteolysis and cataractogenesis in mice. Cell 91, 1997, p. 833-843.

309. Goodnigcht C.J., Witley L.S. Oligochaetes as indicators of pollution. Proc. 15-th Ind. Waste, Conf., Pardue. Univ. Ext. Ser., 1961, v. 106, p. 139-142.

310. Goyer R.A., Leonard D.L., Moore J.F., Rhyme B., Krigman M.R. Lead dosage and role of the intranuclear inclusion body // Arch. Environ. Health, v. 30, 1970. p. 705-711.

311. Grahn B.H., Paterson P.G., Gottschall-Pass K.T., Zhang Z. Zinc and the Eye. // Journal of the American College of Nutrition, Vol. 20, № 2, 2001 p. 106-118.

312. Green P.S., Gordon K., Simpkins J.W. Phenolic A ring requirement for the neuroprotective effects of steroids. J Steroid Biochem Mol Biol. 1997, 63, p. 229-235.

313. Green P.S., Gridley K.E., Simpkins J.W. Estradiol protects against beta-amyloid (25-35)-induced toxicity in SK-N-SH human neuroblastoma cells. Neurosci Lett. 1996, 218, p. 165-168.

314. Green P.S., Perez E.J., Calloway T., Simpkins J.W. Estradiol attenuation of beta-amyloid-induced toxicity, p. a comparison of MTT and calcein AM assays. J Neurocytol. 2000, 29, p. 419^23.

315. Green P.S., Simpkins J.W. Role of estrogens and estrogen-like nonfeminizing compounds in the prevention and treatment of Alzheimer's disease. Ann NY Acad Sci. 2000, 924, p. 93-98.

316. Green P.S., Yang S.H., Nilsson K.R., Kumar A.S., Covey D.F., Simpkins J.W. The nonfeminizing enantiomer of 17beta-estradiol exerts protective effects in neuronal cultures and a rat model of cerebral ischemia. Endocrinology. 2001, 142, p. 400-406.

317. Gridley K.E., Green P.S., Simpkins J.W. A novel, synergistic interaction between 17 beta-estradiol and glutathione in the protection of neurons against beta-amyloid 25-35-induced toxicity in vitro. Mol Pharmacol. 1998, 54, p. 874-880.

318. Gridley K.E., Green P.S., Simpkins J.W. Low concentrations of estradiol reduce beta-amyloid (25-35)-induced toxicity, lipid peroxidation and glucose utilization in human SK-N-SH neuroblastoma cells. Brain Res. 1997, 778, p. 158-165.

319. Griffiths M.H. The components of an a-glycerophosphate cycle and their relation to oxidative metabolism in the lens. // Biochem. J., 1966, v. 99, p. 12-21.

320. Groff J.L., Gropper S.S. Advanced Nutrition and Human Metabolism. Belmont: Wadsworth/Thompson Learning, 2000, p. 419—430.

321. Gysels H. Immunoelectrophoresis of avian lens proteins. // Experientia, 1964, v. 20, p. 145-146.

322. Hadjantonakis A.K., Gertsenstein M., Ikawa M., Okabe M., Nagy A. Generating green fluorescent mice by germline transmission of green fluorescent ES cells. Mech. Dev. 76, 1998, p. 79-90.

323. Hales A.M., Chamberlain C.G., Murphy C.R., McAvoy J.W. Estrogen protects lenses against cataract induced by transforming growth factor-beta (TGFbeta). J Exp Med. 1997, 185, p. 273-280.

324. Halliwell B., Gutteridge J.M.C. Free Radicals in Biology and Medicine. 3rd ed. Oxford, UK, p. Oxford University Press, 1999, p. 381385.

325. Hamilton R.D. Man's impact on the global environment. // Report of the study of critical environment problem, 1970.

326. Han H.J., Park S.H., Park H.J., et al. Effect of various oestrogens on cell injury and alteration of apical transporters induced by tert-butyl hydroperoxide in renal proximal tubule cells. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2002, 29, p. 60-67.

327. Harding C.A., Thayer M.N. DNA synthesis and cell division in the cultured ocular lens // Invest. Ophthalmol., 1964, v. 3, № 3, p. 302-313.

328. Harris J.E., Becker B. Cation transport of the lens. // Invest. Ophthal., 1965, v. 4, p. 709-722.

329. Heyningen R. Some glycolytic enzymes and intermediates in the rabbit lens. // Exp. Eye Res., 1965. v. 4, p. 298-301.

330. Heyningen R. The metabolism of glucose by the rabbit lens in the presensce and absence of oxygen. // Biochem. J., 1965, v. 96, p. 419- 431.

331. Hilmy A.M., Domiaty N.A.E., Daabees A.Y., Abder Latife H.A. Some physiological and biochemical indices of zinc toxicity in two freshwater fishes, Clarias lazera and Tilapia zilli. // Comp. Biochem. and Physiol., 1987, C87, № 2, p. 297-301.

332. Hilmy A.M., El Domiaty N.A., Daabees A.Y., Alsarha A. The toxicity to Clarias lazera of copper and zinc applied jointly. // Comp. Biochem. and Physiol., 1987, C87, № 2, p. 309-314.

333. Hodson P.V. Why inorganic metals do not increase in concentration up the food chain // Thalassia jugosl., 1980, vol. 16, № 2-4, p. 327.

334. Holwerda D.A., de Knecht J.A., Hemelraad J., Veenhof P.R. Cadmium kinetics in freshwater clams. Uptake of cadmium by the excised gill of Anodonta anatina. // Bull. Environ. Contam. and Toxicol.-1989.-42, №3, p. 382-388.

335. Howard A. Whole mounts of rabbit lens for cytological study // Stain technol., 1952, v. 27, p. 313-317.

336. Howard A.G., Nickless G. Heavy metals complexation in polluted molluscs. 1. Limpets (Patella vulgata and Patella intermedia). Chem. Biol. Inter., v. 16, 1977, p. 107-114.

337. Howard A.G., Nickless G. Protein-binding of cadmium, zinc and copper in environmentally insulted limpets Patella vulgata. J. Chomatogr., v. 104, 1975. p. 457-459.

338. Hsu F.S., Brook L., Shively J.N., Duncan J.R., Pond W.G. Lead inclusion bodies in osteo-clasts. Science, v. 181, 1973, p. 447-448.

339. Hughes G.M., Tort L. Cardio-respiratory responses of rainbow trout during recovery from zinc treatment. / /Environ. Pollut., 1985, A37, № 3, p. 255-266.

340. Hunn J.B. Role of calcium in gill function in freshwater fishes 11 Comp. Biochem. and physiol., 1985, vol. 82 A, № 3, p. 543-547.

341. Ikeda A., Zwaan J. Immunofluorecence studies on induction and differentiation of the chicken eye lens. // Invest. Ophthal., 1966, v. 5, p. 402-412.

342. Ireland M.P. Distribution of metals in the digestive gland-gonad complex of the marine gastropod Nucella lapillus.-J. Mollusc. Stud., v. 45, 1979, p. 322-327.

343. Izumi K. Immunochemical studies on the soluble protein of the lens (on homologous immunity). // Acta Soc. Ophthal. Jap., 1964, v. 68, p. 1121-1125.

344. Jaiswal S.K., Waghray S. Influence of copper and zinc sulphates on chemoorientation of climbing perch, Anabas scandens (Cuv.). // J. Curr. Biosci., 1989, 6, № 3, p. 107-112.

345. Jones I. Fish and River Pollutions, London, Butterworths, 1964, 218 P

346. Kannan R., Stolz A., Ji Q., et al. Vitamin C transport in human lens epithelial cells, p. evidence for the presence of SVCT2. Exp Eye Res. 2001,73, p. 159-165.

347. Karcioglu Z.A. Zinc in the eye // Surv Ophthalmol., 1982, 27, p. 114-122.

348. Karlsson-Norrgren L. Cadmium and aluminium in fish; body distribution and morphological effects // Uppsala, 1985, 27 p.

349. Katz M., Chadwick G. Trans. Amer. Fish. Soc., 1962, v. 91, p. 318324.

350. Ketchum B.H., Zitko V., Saward D. Aspects of heavy metal and organohalogen pollution in aquatio ecosystems // Ecol. Toxicol. Res Eff. heavy metal and organohalogen compounds, N.-Y.-L., 1975, p. 75-90.

351. Ketola H.G. Influence of dietary zinc on cataracts in rainbow trout (Salmo gairdneri) //JNutr, 1979, 109, p. 965-969.

352. King D.L., Ball R.C. A quantitative biological measure stream pollution. // JWPCF, 1970, v. 36, p. 650-653.

353. Kinoshita J.H. Pathways of glucose metabolism in the lens. // Invest. Ophthal., 1965, v. 4, p. 619-628.

354. Klaverkamp J.F., Duncan D.A. Acclimation to cadmium toxicity by white suckers: cadmium binding capacity and metal distribution in gill and liver cytosol. // Environ. Toxicol, and Chem., 1987, 6, № 4, p. 275- 289.

355. Klein B.E., Klein R., Lee K.E. Incidence of age-related cataract, p. the Beaver Dam Eye Study. Arch Ophthalmol. 1998, 116, p. 219-225.

356. Kneffel S., Desi I., Sarosi E. Nfchweis der geringfügigen Pestizigen Wasserverschimutzung mit Hilfe einer auf der Veränderung der physiologischen Funktion beruchenden Methoden // Gesundh Ing. 1976, v. 97, № 5, p. 106-108.

357. Knerr I., Beinder E., Rascher W. Syncytin, a novel human endogenous retroviral gene in human placenta, p. evidence for its dysregulation in preeclampsia and HELLP syndrome. Am. J. Obstet. Gynecol. 186,2002, p. 210-213.

358. Korhonen E., Korhonen L. Histochemical demonstration of cytochrome oxidase activity in the lens. // Acta Ophthal, Kobenhavn, 1966, v. 44, p. 577-580.

359. Koumantakis E., Alexiou D., Grimanis A., Kaskarelis D., Bouzas A. Zinc, cobalt and selenium concentrations in the premature and full term newborn eye // Ophthalmologica, Basel, 1983, 186, p 41-46.

360. Krause A.C. Chemistry of the Lens Lipids // Arch. Ophthalmol., 1935, v. 13, p. 187-190.

361. Krause A.C. Inositol in ocular tissues // Arch. Ophthalmol., 1938, № 20, p. 299-303.

362. Krause A.C. The biochemistry of eye, Baltimore: John Hopkins Press, 1934, 245 p.

363. Kumari K., Banerjee V. Effect of sublethal toxicity of zinc, mercury and cadmium on peripheral haemogram in Anabas festudineus (Bloch) // Uttar Pradesh J. Zool., 1986, 6, № 2, p.241-250.

364. Lake P.S. Accumulation of cadmium in aquatic animals // Chem., Austral., 1979, vol. 46, № 1, p. 26-29.

365. Lang T., Dethlefsen V. Cadmium in skelettdeformierten und normal entwickelten Kabeljau (Gadus morhua L.) in der Ostsee // Inf. Fischwirt., 1987, 34, №3, p. 113-117.

366. Lanno R.P., Slinger S.J., Hilton J.W. Maximum tolerable and toxicity levels of dietary copper in rainbow trout (Salmo gairdneri Richardson) // Aquaculture, 1985, 49, № 3-4, p. 257- 268.

367. Lee K.W., Mossine V., Ortwerth B.J. The relative ability of glucose and ascorbate to glycate and crosslink lens proteins in vitro. Exp Eye Res. 1998, 67, p. 95-104.

368. Lerman S., Zigman S. The metabolism of the lens as related to aging and experimental cataractogenesis. // Invest. Ophthal., 1965, v. 4, p. 643660.

369. Lerman S., Zigman S., Saat Y.A. Further studies on nucleic acid metabolism in the lens. // Amer. J. Ophthalmol., 1965, v. 59, p. 243-247.

370. Lessler M.A., Walters M.L. Erythrocyte osmotic fragility in the presence of lead or mercury // Proc. Soc. Exp. Biol. Med., v. 142, 1973. p. 548-553.

371. Levari R., Wertheimer E., Kornblueth E. Interrelation between the various pathways of glucose metabolism in the rat lens. // Exp. Eye Res., 1964, v. 3, p. 115-117.

372. Liebmann H. Die Notwendigkeit einer Rewision des Saprobiosistem und deren Bedeutung fur die Wasserbeurteilung. Gesundheits Ingeniur, 2, 1960, 105 p.

373. Lin J.S., Eckert R., Kistler J., Donaldson P. Spatial differences in gap junction gating in the lens are a consequence of connexin cleavage. Eur. J. Cell Biol. 76, 1998, p. 246-250.

374. Lin J.S., Fitzgerald S., Dong Y., Knight C., Donaldson P., Kistler J. Processing of the gap junction protein connexin50 in the ocular- lens is accomplished by calpain. Eur. J. Cell Biol. 73, 1997, p. 141-149.

375. Lowell V.S., Fair P.H. The role of small molecular weight proteins and primary amines in the assimilation of trace metals // Estuaries, 1981, vol. 4, № 3, p. 283.

376. Mackay D., Ionides A., Kibar Z., Rouleau G., Berry V., Moore A., Shiels A., Bhattacharya S. Connexin46 mutations in autosomal dominant congenital cataract. Am. J. Hum. Genet. 64, 1999, p. 1357-1364.

377. Madaj J., Nishikawa Y., Reddy V.P., et al. 6-Deoxy-6-fluoro-L-ascorbic acid, p. crystal structure and oxidative degradation. Carbohydr Res. 2000, 329, p. 477-485.

378. Maisel H. Analysis of cortical and nuclear lens proteins by a combination of paper and starch gel electrophoresis. // Anat. Rec., 1965, v. 151, p. 209-215.

379. Maisel H., Goodman M. Comparative electrophoretic study of vertebrate lens proteins. // Amer. J. Ophthalmol., 1965, v. 59, p. 697-699.

380. Maisel H., Goodman M. The ontogeny and specificity of human lens proteins. // Invest. Ophthal, 1965, v. 4, p. 129-137.

381. Manski W., Halbert S.P. Immunochemistry of the lens with special reference to phylogeny. // Invest. Ophthal., 1965, v. 4, p. 539-545.

382. Mason C.V., Hines M.C. Alpha, beta and gamma crystallins in the ocular lens of rabbits: preparation and partial characterization. // Invest. Ophthal., 1966, v. 5, p. 601-609.

383. McCarty C.A., Mukesh B.N., Fu C.L., Taylor H.R. The epidemiology of cataract in Australia. Am J Ophthalmol. 1999, 128, p. 446-465.

384. McDevitt D., Brahma S., Courtois Y., Jeanny J.C. Fibroblast growth factor receptors and rageneration of the eye lens // Dev. Dyn., 1997, v. 208 2, p. 220-226.

385. McEwen B.S. Estrogens effects on the brain, p. multiple sites and molecular mechanisms. J Appl Physiol. 2001, 91, p. 2785-2801.

386. McMahon R.J., Cousins R.J. Mammalian zinc transporters. J Nutr, v.128, 1998, p. 667-670.

387. Mege R.M., Goudou D., Giaume C., Nicolet M., Rieger F. Is intercellular communication via gap junctions required for myoblast fusion? Cell Adhes. Commun. 2, 1994, p. 329-343.

388. Meisner J.D., Hum W. Acute toxicity of zinc to juvenile and subadult rainbow trout, Salmo gairdneri // Bull. Environ. Contam. and Toxicol., 1987, 39, № 5, p. 898-902.

389. Metz H.S., Livingston A.W., Zigman S. Studies on the metabolism of the regenerating rabbit lens. // Arch. Ophthalmol., 1965, v. 74, p. 244247.

390. Michibata H., Nojima Y., Kojima M.K. Stage sensitivity of eggs of the teleost Oiyzias latipes to cadmium exposure // Environ. Res., 1987, 42, № 2, 321-327.

391. Milot E., Strouboulis J., Trimborn T., Wijgerde M., de Boer E., Langeveld A., Tan-Un K., Vergeer W., Yannoutsos N., Grosveld F. et al. Heterochromatin effects on the frequency and duration of LCRmediated gene transcription. Cell 87, 1996, p. 105-114.

392. Miyake N., Otsuka Y., Kurata T. Autoxidation reaction mechanism for L-ascorbic acid in methanol without metal ion catalyst. Biosci Biotech Biochem. 1997, 61, p. 2069-2075.

393. Murphy A.N., Fiskum G., Beal M.F. Mitochondria in neurodegeneration, p. bioenergetic function in cell life and death. J Cereb Blood Flow Metab. 1999, 19, p. 231-245.

394. Nagaraj R.H., Shamsi F.A., Huber B., Pischetsrieder M. Immunochemical detection of oxalate monoalkylamide, an ascorbate-derived Maillard reaction product in the human lens. FEBS Lett. 1999, 453, p. 327-330.

395. Nagasaki T., Zhao J. Centripetal movement of corneal epithelial cells in the normal adult mouse. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 2003, p. 558-566.

396. Naik V.V., Saha N., Banerjee B. Electrophoretograms of soluble proteins of lens in different species. // J. Exp. Med. Sci., 1966. v. 10, p. 14.

397. Nakatani J. Effects of various chemicals on the behavior of Paramecium caudatum // J. Fac. Sci. Hokkaido Univ., 1970, ser. 6, 17, № 3, p. 401-410.

398. Newson W.A., Hockwin O. Chromatographic separation of lens proteins with DEAE-cellulose. // Ophthalmologica Basel, 1966, v. 151, p. 505-511.

399. Nikiforov-Nikishin A.L., Borodin A.L. Accumulation of heavy metals by fishes lens // Fresh Water Ecosystems Health and Management, Vol. 2, Tel-Avive: Hargol, 2004 a, P. 16-24.

400. Nikiforov-Nikishin A.L., Borodin A.L. The analysis of sensitivity some biological parameters hidrobionts to influence of pollutants // Fresh Water Ecosystems Health and Management, Vol. 2, Tel-Avive: Hargol, 2004 b, P. 34-56.

401. Noel-Lambot F., Bouquegneau J.M., Frankenne F., Disteche A. Cadmium, zinc and copper accumulation in limpets (Patella vulgata) from the Bristol Channel with special reference to metallothioneins // Mar. Ecol. Prog. Ser., v. 2, 1980, p. 81-89.

402. Nordberg M., Elinder C., Rannster B. Cd, Zn, Cu in horse kidney metallothioneins // Environ. Res., v. 20, 1979, p. 341-350.

403. Nordmann J. Biologiue du cristallin. paris: Masson, 1954, 425 p.

404. O'Dell B.L. Personal reflections on a galvanizing trail. Ann Rev Nutr, № 18, 1998, p. 1-18.

405. Oertzen J.A. Die Meeresvereschmutsune -ein Problem der Meeresbiology, Biol. Rdsch., vol. 10, № 1, 1972, p. 1-18.

406. Oettingen W.P. The toxicity and potential dangers of nitrous fumes, Washington: Acad. Press, 1941, 120 p.

407. Olsson P.E., Haux C. Alterations in hepatic metallothionein content in perch, Perca fluviatilis, Environmentally exposed to cadmium. // Mar. Environ. Res., 1985, 17, № 2-4, p. 181-183.

408. Ono S., Obara K. Effect on the calcium ion on the protein metabolism in the lens // Med. Bull, Yokohama, 1965, № 16, p. 147-150.

409. Padayatti P.S., Ng A.S., Uchida K., et al. Argpyrimidine, a blue fluorophore in human lens proteins, p. high levels in brunescent cataractous lenses. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2001, 42, p. 1299-1304.

410. Pagano G., Esposito A., Giordano G. Fertilization and larval development in sea urchins following exposure of gametes and embryos to cadmium // Arch. Environ. Contam. Toxicol., v. 11, 1982. p. 47-55.

411. Pal J.D., Liu X., Mackay D., Shiels A., Berthoud V.M., Beyer E.C., Ebihara L. Connexin46 mutations linked to congenital cataract show lossof gap junction channel function. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 279, 2000, p. 596-602.

412. Paraconstantinou J. Molecular aspects of lens cell differention, Science, 1967, v. 156, p. 338-342.

413. Paterson P.G., Grahn B.H., Fabe J.S. Retinal and lens zinc concentration in the zinc-deficient rat // FASEB J., 1998, № 12,A, p.521.

414. Patherson J.W. A review of glucose transport in the lens. // Invest. Ophthal. 1965, v. 4, p. 667-679.

415. Paui R.M. Scient. monthly, 1952, 74, p. 58-63.

416. Pickering Q. The Ohio Journal of Science, 1966, 66(5), p. 153-159.

417. Pietrowicz-Kosmynska D. Chemotaxic effects of cation and pH on Stentor coeruleus // Acta protozool., 1971, 9, № 9-14, p. 235-244.

418. Pietrowicz-Kosmynska D. The influence of definite ionic medium on the negative chemotaxic in Stentor ceruleans //Acta protozool., 1971, 9, № 15-21, p. 305-322.

419. Pragatheeswaran V., Loganathan B., Natarajan R., Venugopalan V.K. Cadmium induced vertebral deformities in an estuarine fish, Ambassis commersoni Cuvier // Proc. Indian Acad. Sci. Anim. Sci., 1987, 96, №4, p. 389-393.

420. Prokai L., Oon S.M., Prokai-Tatrai K., Abboud K.A., Simpkins J.W. Synthesis and biological evaluation of 17 b-alkoxyestra-1, 3, 5(10)- trienes, p. potential neuroprotectants against oxidative stress. J Med Chem. 2001, 44, p. 110-114.

421. Rabaey M. Lens proteins during embryonic development of different vertebrates. // Invest. Ophthal., 1965, v. 4, p. 560-578.

422. Rajan D.P., Huang W., Dutta B., et al. Human placental sodiumdependent vitamin C transporter (SVCT2), p. molecular cloning and transport function. Biochem Biophys Res Commun. 1999, 262, p. 762768.

423. Rao S.S., Mehta P.D., Cooper S.N. Antigenic relationship between insoluble and soluble lens proteins. // Exp. Eye Res., 1965, v. 4, p. 36-41.

424. Rao S.S., Mehta P.D., Cooper S.N. Conversion of alpha-crystallin of bovine lens into insoluble protein in vitro. // Exp. Eye Res., 1965, v. 4, p. 104-107.

425. Rasi V., Costantini S., Moramarco A., Giordano R., Giustolisi R., Gabrieli C.B. Inorganic element concentrations in cataractous human lenses. Ann Ophthalmol., 1992, №24, p. 459^64.

426. Reddy D.V. Distribution of free amino acids and related compounds in ocular fluids, lens and plasma of various mammalian species. // Invest. Ophthal., 1967, v. 6, p. 478-483.

427. Relexans J.C., Lerat L., Etcheber H. Une strategic d'etude des effets de quelques polluants (Cd, Zn, BaP) sur la respiration de communautés benthiques maintenues in vitro // Oceanis., 1988, 14, № 4, p. 411-421.

428. Ringwood A.H. Isognomon califor-nicum. The accumulation of cadmium and its effects on growth of larvae of an Hawaiian bivalve, Isognomon californicum // Pacif. Sci.,1988, 42, № 1-2, p. 130.

429. Robertson G., Garrick D., Wilson M., Martin D.I., Whitelaw E. Age-dependent silencing of globin transgenes in the mouse. Nucleic Acids Res. 24, 1996, p. 1465-1471.465. Robertson G., Garrick D., Wu W., Kearns M., Martin D., Whitelaw

430. E. Position-dependent variegation of globin transgene expression in mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, 1995, p. 5371-5375.

431. Rosenthal A.R., Eckhert C. Copper and zinc in ophthalmology. In Karcioglu Z.A., Sarper R.M. (eds): Zinc and Copper in Medicine // Springfield: Charles C. Thomas, 1980, p. 579-633.

432. Rosner L., Farmer C., Bellows J.G. Biochemistry of lens, studies on glutathione in crystallin lens // Arch. Ophthalmol., 1938, v. 20, p. 417-426.

433. Rothstein H., Reddan J., Weinsieder A. Response to injury in the lens epithelium of the bullfrog (R. catesbeana). Spatiotemporal patterns of DNA synthesis and mitosis. //Exp. Cell Res., 1965, v. 37, p. 440-451.

434. Rumsey S.C., Daruwala R., Al-Hasani H., et al. Dehydroascorbic acid transport by GLUT4 in Xenopus oocytes and isolated rat adipocytes. J Biol Chem. 2000, 275, p. 28246-28253.

435. Rumsey S.C., Kwon O., Xu G.W., et al. Glucose transporter isoforms GLUT1 and GLUT3 transport dehydroascorbic acid. J Biol Chem. 1997,272, p. 18982-18989.

436. Ruttenberg G. The insoluble proteins of bovine crystalline lens. // Exp. Eye Res., 1965, v. 4, p. 18-23.

437. Saksena D.N., Agarwal A. Effect of cadmium chloride on the ovarian activity in fresh water catfish Clarias batrachus (Linn) // Uttar Pradesh J. Zool., 1986, 6, № 1, p. 108-114.

438. Salanki J. Bihavioural studies on mussel under changing environmental conditions // In: Human Impacts Life in Fresh Water. Budapest, Akad. kiado, 1979, p. 169-176.

439. Salit P.W. Total lipids of human cataractous and sclerosed lenses // Arch. Ophthalmol., 1937, v. 25, p. 32-35.

440. Salit P.W. Total Lipids of Human Cataractous and Sclerosed Lenses // Arch. Ophthalmol.,1937, № 25, p. 32-35.

441. Saxena P., Saxena A.K., Monnier V.M. High galactose levels in vitro and in vivo impair ascorbate regeneration and increase ascorbatemediated glycation in cultured rat lens. Exp Eye Res. 1996, 63, p. 535-545.

442. Schober U., Lampert W. Effects of subletal concentration of the herbicide atrazin on growth and reproduction of Dafnia pulex // Bull. Environ. Contam. and Toxicol., 1977, 17, № 3, p. 269-277.

443. Scorsia H.R., Cooke A.S. Effects of transit herbicidae cyanatrin on aquatic animals // Bull. Environ. Contam. and Toxicol, 1979, 22, № 1-2, p. 135-142.

444. Sehgal R., Saxena A.B. Toxicity of zinc to a viviparous fish, Lebistes reticulatus (Peters) // Bull. Environ. Contam. and toxicol., 1986, 36, № 6, p. 888-894.

445. Shamsi F.A., Nagaraj R.H. Immunochemical detection of dicarbonylderived imidazolium protein crosslinks in human lenses. Curr Eye Res. 1999, 19, p. 276-284.

446. Sharifi M., Connell D.W. Growth rate reduction of goldfish (Carassius auratus) exposed chlorobenzones in diets with differing lipid contents // Bull. Environ. Contam. And Toxicil., 1997, v. 59, № 4, p. 665670.

447. Shestopalov V.I., Bassnett S. Expression of autofluorescent proteins reveals a novel protein permeable pathway between cells in the lens core. J. Cell Sci. 113,2000, p. 1913-1921.

448. Shiels A., Bassnett S., Varadaraj K., Mathias R., Al-Ghoul K., Kuszak J., Donoviel D., Lilleberg S., Friedrich G., Zambrowicz B. Optical dysfunction of the crystalline lens in aquaporin-0-deficient mice. Physiol. Genomics 7,2001, p. 179-186.

449. Shridas P., Sharma Y., Balasubramanian D. Transglutaminase-mediated cross-linking of alpha-crystallin, p. structural and functional consequences. FEBS Lett. 2001, 499, p. 245-250.

450. Shukla J.P., Pandey K. Zinc induced changes in the nucleic acids and protein metabolism in the fingerlings of a Freshwater Murrel, Channa punctatus. // Acta hydrochim. et hydrobiol., 1986, 14, № 2, p. 195-197.

451. Simpkins J.W., Green P.S., Gridley K.E. Fundamental role for estrogens in cognition and neuroprotection. Brioni J.D., Decker M.W. Pharmacological Treatment of Alzheimer's Disease. New York, p. Wiley-Liss, 1997, p. 503-524.

452. Simpson G.L., Ortwerth B.J. The non-oxidative degradation of ascorbic acid at physiological conditions. Biochim Biophys Acta. 2000, 1501, p. 12-24.

453. Singh O., Agarwal R.A. Effects of certain carbamate and organosphosphoruspesticides on isolated organs of Pila globosa (Gastropoda) // Toxicol. And Appl. Pharmacol., 1979, 50, № 3, p. 485-492.

454. Sinha D.P., Sinha K.P. Observations on glutathione and ascorbic acid content in human cataractous lens. // J. Indian Med. Ass., 1966, v. 46, p. 646-649.

455. Sippel T.O. Changes in the water, protein, and glutathione contents of the lens in the course of galactose cataract development in rats. // Invest. Ophthal., 1966, v. 5, p. 568-575.

456. Sippel T.O. Energy metabolism in the lens during aging. // Invest. Ophthal., 1965, v. 4, p. 502-515.

457. Skul'sky I.A., Burovina- I.V., Vasilyeva V.F., Lukyanova O.N., Nikiforov V.A., Syasina I.G. Uptake and microlocalization of cadmium in marine bivalve mollusc tissues // Comp. Biochem. and physiol., 1989, 92, №2, p. 349-353.

458. Sladecek V. System of water quality from biological point of view // Ergebnisse der Limnologie, H. 7. Arch. Hydrobiol. 1973, № 7, p. 32-45.

459. Sordyi H. Influence of exposure time and H+ concentration of the water on the effects of sublethal Pb2+ loads on blood parameters of the rainbow trout (Salmo gairdneri) // Zool. Jahrb: Abt. allg. Zool. und Physiol. Tiere., 1990, 94, № 2, p. 141-152.

460. Spector A. Oxidative stress-induced cataract, p. mechanism of action. FASEB J. 1995, 9, p. 1173-1182.

461. Spector A. The soluble protein of the lens. // Invest. Ophthal., 1965, v. 4, p. 579-591.

462. Spector A., Kinoshita J.H. The incorporation of labeled amino acids into lens protein. // Invest. Ophthal., 1964, v. 3, p. 517-522.

463. Srivastava V.K., Varshney N., Pandey D.C. Role of trace elements in senile cataract. Acta Ophthalmologica, 1992, 70, p. 839-841.

464. Stanojevic-Paovic A., Hristic V., Cuperlovic M., Jovanovic S., Krsmanovic J. Macro- and microelements in the cataractous eye lens // Ophthalmic. Res, 1987, 19, p. 230-234.

465. Steele C.W. Latent behavioural toxicity of copper to sea catfish, Arius felis, and sheepshead, Archosargus probatocephalus // J. Fish Biol., 1985, 27, №5, p. 643-654.

466. Steele E.C., Jr, Lyon M.F., Favor J., Guillot P.V., Boyd Y., Church R.L. A mutation in the connexin 50 (Cx50) gene is a candidate for the No2 mouse cataract. Curr. Eye Res. 17,1998, p. 883-889.

467. Steinmann P. Toxikologie der Fish, 1928, 216 p.

468. Stout A.K., Raphael H.M., Kanterewicz B.I., Klann E., Reynolds I.J. Glutamate-induced neuron death requires mitochondrial calcium uptake. NatNeurosci. 1998, 1, p. 366-373.

469. Swan K.C., Salit P.W. Lence opacities associated with experimental calcium dificiency. Preliminary report // Amer. J. Ophthalmol., 1941, v. 24, p. 611-614.

470. Takata C., Albright J.F., Yamada T. Lens fiber differentiation and gamma crystalins: immunofluorescent study of wolffian regeneration. // Science, 1965, v. 147, p. 1299-1301.

471. Tallandini L., Turchetto M., Coppellotti O., Marcassa C. Assunzione e distribuzione del Cd nei pesci. Effetti sul metabolismo. // Boll. zool.,1988, 55, suppl., p. 91.

472. Tessier F., Birlouez-Aragon I., Tjani C., Guilland J.C. Validation of a micromethod for determining oxidized and reduced vitamin C in plasma by HPLC-fluorescence. Int J Vitam Nutr Res.1996, 66, p. 166-170.

473. Thomas P., Juedes M.J. Altered glutathione status in atlantic croaker (Micropogonias undulatus) tissues exposed to lead // Mar. Environ. Res., 1985, 17, №2-4, p. 192-195.

474. Torres P., Flos R. Effects of dogfish haematology and liver composition after acute copper exposure. Tort Lluis // Comp. Biochem. and physiol., 1987, C 87, № 2, p. 349-353.

475. Tsien R.Y. The green fluorescent protein. Annu. Rev. Biochem. 67, 1998, p. 509-544.

476. Tulasi S.J., Rao J.V.R. Effects of lead on copper content of fresh water crab Barytelphusa guerini (H. Miline Edwards) // Indian J. Exp. Biol., 1988, 26, № 4, p. 323-324.

477. Varanka I. Effect of some pesticides on the rhythmic adductor muscle activity of freshwater mussel larvae // Acta biol. Acad. Sci. Hung., 1978, v. 29, № l,p. 43-55.

478. Vazquez S., Aquilina J.A., Jamie J.F., et al. Novel protein modification by kynurenine in human lenses. J Biol Chem. 2002, 277 p. 4867-4873.

479. Verbost P.M., Flik G., Lock R.A.C., Bonga S.E. Wendelaar. Cadmium inhibition of Ca2+ uptake in rainbow trout gills // Amer. J. Physiol., 1987, 253, № 2, PT2, p. 216-221.

480. Vermorken A.J., Hilderink J.M., van de Ven W.J., Bloemendal H. Lens differentiation // J. of Cell Biology, 9 Vol. 76, 1979 p. 175-183.

481. Versteeg D.J., Giesy J.P. The histological and biochemical effects of cadmium exposure in the bluegill sunfish (Lepomis macrochirus) // Ecotoxicol. and Environ. Safety, 1986, 11, № 1, p. 31-43.

482. Vignery A. Osteoclasts and giant cells, p. macrophage-macrophage fusion mechanism. Int. J. Exp. Pathol. 81, 2000, p. 291-304.

483. Vrensen I., Graw J., DeWolf A. Nuclear breakdown during terminal differentiation of primary lens fibers in mice: a transmission electron microscopic study // Exp. Eye Res., 1991, № 52, p. 647-659.

484. Waagbo R., Bjerkas E., Sveier H., Breck O., Bjornestad E., Maage A. Nutritional status assessed in groups of smolting Atlantic salmon (Salmo salar L.), developing cataracts // J Fish Dis, 1996, 19, p. 365-373.

485. Waley S.G. Metabolism of amino acids in the lens. // Biochem. J., 1964, v. 91, p. 576-583.

486. Walsh C.T., Sandstead H.H., Prasad A.S., Newberne P.M., Fraker P.J. Zinc: Health effects and research priorities for the 1990s // Environ Health Perspect, 1994, 102, p. 5-46.

487. Wang Y., Mackenzie B., Tsukaguchi H., et al. Human vitamin C (L-ascorbic acid) transporter SVCT1. Biochem Biophys Res Commun. 2000, 267, p. 4S8-494.

488. Weintraub J.M., Taylor A., Jacques P., et al. Postmenopausal hormone use and lens opacities. Ophthalmic Epidemiol. 2002, 9, p. 179— 190.

489. Wen G.Y., Sturman J.A., Wisniewski H.M., McDonald A., Niemann W.H. Chemical and ultrastructural changes in the tapetum of beagles with a hereditary abnormality // Invest Ophthalmol Vis Sci, 1982, 23, p. 733742.

490. White T.W., Goodenough D.A., Paul D.L. Targeted ablation of connexin50 in mice results in microphthalmia and zonular pulverulent cataracts. J. Cell Biol. 143, 1998, p. 815-825.

491. Willoughby R.A., MacDonald E., McSherry B.J., Brown G. The interaction of toxic amounts of lead and zinc fed to young growing horses // Vet. Rec., v. 91, 1972, p. 382.

492. Wise P.M., Dubai D.B., Wilson M.E., Rau S.W., Bottner M. Neuroprotective effects of estrogen-new insights into mechanisms of action. Endocrinology. 2001, 142, p. 969-973.

493. Wisk I.D., Cooper K.R. Comparison of the toxicity of several polychlormated dibenzo-p-dioxins in embryos of the Japanese medaka (Orizius latipes) // Chemosphere, 1990, v. 20, № 3-4, p. 361-377.

494. Wisse J.H., Zweers A., Jongkin J.F. Further studies on the sub-units of alpha-crystallin. // Biochem. J., 1966, v. 99, p. 179-188.

495. Wright D.A. Cadmium and calcium interactions in the freshwater amphipod Gammarus pulex // Freshwater Biol., 1980, vol. 10, № 2, p. 123133.

496. Wuhrmann K., Woker H. Verhandl. Int. Ver. Theor. Ang. Limnol., 1955, 12, p. 461-467.

497. Yamawaki K., Hashimoto W., Fujii K.i, Koyama J., Ikeda Y., Ozaki H. Hemochemical changes in carp exposed to low cadmium concentrations // Bull. Jap. Soc. Sei. Fish., 1986, 52, № 3, p. 459-466.

498. Yin X., Gu S., Jiang J.X. Regulation of lens connexin 45.6 by apoptotic protease, caspase-3. Cell Commun. Adhes. 8, 2001, p. 373-376.

499. Yoshikawa T. Studies on lens protein. // Acta Soc. Ophthal. Jap., 1964, v. 68, p. 1115-1120.

500. Zacher P. Beziehungen zwischen dem Auftreten von Tubificidae und der Zufuhr organischer Stoffe im Bodensee // Intern. Rev. ges. Hydrobiol., vol. 49, №3, 1964, p. 1124-1128.

501. Zahner R. Organicmen als Indicatoren fur den Gewasserzustand // Arch. Hygiene fom Bacteriologie. Bd 149, № 3/4, 1965, p. 145-152.

502. Zarina S., Zhao H.R., Abraham E.C. Advanced glycation end products in human senile and diabetic cataractous lenses. Mol Cell Biochem. 2000, 210, p. 29-34.

503. Zaroogian G. Crassostrea virginica as an indicator of cadmium pollution // Mar. Biol., v. 58, 1980, p. 275-284.