Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфологические изменения неокортекса и таламуса в постишимическом периоде на фоне хронического стресса и их коррекции церепро (эксмериментальное исследование)

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфологические изменения неокортекса и таламуса в постишимическом периоде на фоне хронического стресса и их коррекции церепро (эксмериментальное исследование)"

На правах рухописи

Грицаенко Ольга Семеновна

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ НЕОКОРТЕКСА И ТАЛАМУСА В ПОСТИШЕМИЧЕСКОМ ПЕРИОДЕ НА ФОНЕ ХРОНИЧЕСКОГО СТРЕССА И ИХ КОРРЕКЦИЯ ЦЕРЕПРО (экспериментальное иследование)

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

1 9 КОй 2ииЭ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск-2009

003484071

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Валерий Васильевич Семченко

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Потапов Алексей Валерьевич доктор медицинских наук Солонский Анатолий Владимирович

Ведущее учреждение:

ГОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита диссертации состоится 2009 года в-^^часов на

заседании диссертационного совета Д >/¿08.096.03 при Сибирском государственном медицинском университете Росздрава по адресу: 634050, г. Томск, Московский тракт, 2.

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке Сибирского государственного медицинского университета (634050, г. Томск, пр. Ленина, 107).

Автореферат разослан « У » 2009 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Изучение закономерностей реализации деструктивных и компенсаторно-восстановительных процессов головного мозга после острой ишемии является одним из ведущих направлений современной нейроморфологии (Ярыгин Н.Е., Ярыгин В.Н., 1973; Сотников О.С. и др., 1994; Аврущенко М.Ш. и др., 2000; Боголепов H.H. и др., 2001; Martone М.Е. et al. 1999; Leker R.R., Shohami E„ 2002).

Несмотря на большое количество работ по изучению патофизиологических аспектов развития хронической церебральной ишемии, недостаточно полно освещены вопросы структурно-функционального изменения головного мозга в отдаленном периоде после перенесенного ишемического инсульта в эксперименте (Семченко В.В. и др., 1999, 2008). Имеются единичные работы по отдаленному постреанимационному периоду (Десятниченко А.К., 1998). Слабо изучено влияние внешних стрессовых воздействий на функциональную активность поврежденного головного мозга и целенаправленная коррекция последствий этого влияния. Особенно это касается одновременного изучения нескольких отделов головного мозга, объединенных в единую систему.

Широко обсуждаются вопросы защиты головного мозга в отдаленном постишемическом периоде (Фишер М., Шебитц В., 2001; Бабаян Е. и др., 2005; Пирадов М.А., 2007; Клигуненко E.H., Емельянова Е.А., 2008; Виничук С.М., 2009). В этом плане перспективным может быть использование церепро, препарата из группы ноотропов, который обеспечивает синтез ацетилхолина и фосфатидилхолина в нейрональных мембранах, оказывая нейропротективное действие.

Таким образом, выявление в отдаленном постишемическом периоде закономерностей реорганизации цито- и синаптоархитектоники сенсомоторной коры и таламуса в эксперименте, выделение этапов восстановления структурно-функционального состояния мозга и определение потенциальных возможностей репаративной нейропластичности на уровне "неокортекс-таламус", расширят наши представления о возможностях нейропротективной коррекции и послужат обоснованием для разработки методов нейрореабилитации с учетом компенсаторно-приспособительных механизмов и структурно-функциональной реорганизации мозга в восстановительном периоде после перенесенных ишемических эпизодов.

Необходимость проведения подобных работ связана с увеличением частоты ишемических инсультов, особенно в молодом возрасте, высокой степенью инвалидизации (Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001). Поэтому изучение теоретического обоснования использования различных методов восстановительного лечения в отдаленном постишемическом периоде является не только важной нейробиологической, но и медико-социальной проблемой.

Цель работы. Выявить структурно-функциональные изменения сенсомоторной коры и вентробазального комплекса таламуса головного мозга белых крыс в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического аудиогенного стрессового воздействия и обосновать возможность их целенаправленной коррекции с помощью препарата церепро.

Задачи исследования:

1. Провести морфометрический анализ изменений цито- и синаптоархитектоники сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса белых крыс в отдаленном постишемическом периоде (через 1,3,5 и 9 месяцев).

2. Осуществить морфометрический анализ изменений цито- и синаптоархитектоники сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса белых крыс в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического аудиогенного стрессового воздействия.

3. Изучить психоневрологический статус белых крыс в отдаленном постишемическом периоде и его изменения на фоне хронического аудиогенного стрессового воздействия.

4. Выявить структурно-функциональные изменения цито- и синаптоархитектоники сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса и психоневрологического статуса белых крыс в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического аудиогенного стрессового воздействия при использовании препарата церепро.

Новизна исследования. Впервые в эксперименте на белых крысах изучены изменения цито- и синаптоархитектоники сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса в течение 9 месяцев после 20-минутной окклюзии общих сонных артерий и хроническом аудиогенном раздражении.

Доказано, что через 9 месяцев после ишемии на фоне хронического стресса общая численная плотность нейронов в слоях Ш-1У, V сенсомоторной коры большого мозга и вентробазальном комплексе таламуса меньше на 6,5, 9,4 и 12,4% соответственно. При хроническом стрессе в большей степени страдают нервные клетки слоев Ш-Г/ сенсомоторной коры (дефицит 51,4% нейронов) и вентробазального комплекса таламуса (дефицит 36,9% нейронов). Выявлено, что хронический стресс приводит к более значительному увеличению содержания деструктивно измененных нейронов (на 16%), синапсов (на 34%) через 3 и 5 месяцев постишемического периода и сопровождается реорганизацией нейроглиальных и межнейронных отношений.

Установлено наличие положительных корреляционных связей между выраженностью психоневрологических изменений и степенью реорганизации цито- и синаптоархитектоники сенсомоторной коры большого мозга и таламуса животных, подвергнутых стрессовому

воздействию. Показано, что увеличение содержания нейроглиальных комплексов в таламусе положительно коррелирует с судорожной готовностью головного мозга.

Выявлено, что использование препарата церепро при хроническом аудиогенном стрессовом воздействии в отдаленном постишемическом периоде приводит к более быстрому и полному восстановлению ориентировочно-исследовательской деятельности и структурно-функционального состояния сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса экспериментальных животных.

Теоретическое и практическое значение работы. Полученные новые данные о структурно-функциональном состоянии сенсомоторной коры и вентробазального комплекса таламуса позволяют расширить представление о пластичности нервной ткани и выявить изменения таламокортикальных взаимоотношений в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического стресса.

В отдаленном постишемическом периоде при хроническом стрессе усиливаются механизмы повреждения нейронов и межнейронных синапсов, активируются компенсаторно-восстановительные процессы, существенно перестраиваются кортико-кортикальные и таламокортикальные взаимоотношения. Межнейронные синапсы гипертрофируются, затем в результате структурной рекомбинации их компонентов существенно усложняется пространственная организация синаптических устройств и увеличивается их эффективность. Чрезмерная интенсификация компенсаторных процессов может быть причиной появления гиперактивных неконтролируемых нейронных сетей, из которых впоследствии формируются патологические системы головного мозга. В специфических ядрах таламуса, кроме усложнения синаптоархитектоники в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического стресса, увеличивается содержание специфических нейрон-глиальных комплексов.

Результаты исследования позволяют установить, что церепро, действуя как нейрометаболический стимулятор, предотвращает повреждение и гибель значительного количества нейронов, межнейронных синаптических контактов, стимулирует компенсаторно-восстановительные процессы, улучшает психоневрологический статус экспериментальных животных в отдаленном постишемическом периоде. Результаты проведенного исследования доказывают высокую эффективность нейропротекгивной терапии препаратом церепро в восстановительном периоде ишемического инсульта и служат обоснованием для его клинического внедрения в стандарты лечения постинсультных больных в неврологических и нейрореабилитационных отделениях.

Полученные данные послужат фундаментальной базой для дальнейших исследований в изыскании способов восстановления и защиты головного мозга в отдаленном постишемическом периоде с помощью нейропротекции и стимуляции репаративных процессов.

Внедрение полученных результатов. Результаты исследования структурно-функционального состояния сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса в отдаленном постишемическом периоде внедрены в курс лекций и практических занятий по темам: "Нервная ткань", "Гистофизиология органов центральной нервной системы"; в научно-исследовательскую работу кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии, кафедры медицинской биологии с основами генетики и экологии Омской государственной медицинской академии; использованы при изложении материалов в разделе «Пластичность синапсов при острой ишемии головного мозга и в постишемическом периоде» монографии: В.В. Семченко, С.С. Степанов, H.H. Боголепов «Синаптическая пластичность головного мозга» (Омск: Омская областная типография, 2008 - 408 е.), рекомендованной НИИ неврологии РАМН РФ нейрогистологам, нейробиологам, нейрофизиологам, патологоанатомам, патофизиологам, фармакологам, невропатологам, нейрохирургам, терапевтам, анестезиологам-реаниматологам и студентам медицинских вузов (www. neurology, ru).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В отдаленном постишемическом периоде происходит уменьшение общей численной плотности нейронов и компенсаторная реорганизация межнейронных взаимоотношений в сенсомоторной коре большого мозга и в вентробазальном комплексе таламуса белых крыс. Хроническое аудиогенное стрессовое воздействие в отдаленном постишемическом периоде усиливает повреждение популяции нейронов, препятствует восстановлению синаптоархитектоники этих отделов головного мозга и ориентировочно-исследовательской деятельности животных.

2. Использование церепро в отдаленном постишемическом периоде приводит к активации компенсаторно-восстановительных процессов, уменьшению количества деструктивно измененных нейронов и синапсов, способствует сохранению общей численной плотности нейронов и восстановлению межнейронных связей в сенсомоторной коре большого мозга и вентробазальном комплексе таламуса белых крыс, обеспечивает более полную нормализацию психоневрологического статуса.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на Всероссийской конференции «Структурно-функциональные и нейрохимические закономерности асимметрии и пластичности мозга» (Москва, 2006), VIII-ом конгрессе международной ассоциации морфологов (Орел, 2006), 6-й Всероссийской конференции «Бабухинские чтения в Орле» (Орел, 2007), Всероссийской конференции «Структурно-функциональные и нейрохимические закономерности асимметрии и пластичности мозга» (Москва, 2007), П-ой научно-практической конференции «Клинические и фундаментальные аспекты критических состояний» (Омск, 2007), Всероссийском научном конгрессе с международным участием «В.М. Бехтерев - основоположник нейронаук» (Казань, 2007), международной научной конференции (Астрахань, 2007),

Всероссийской конференции с международным участием (Москва, 2007), 1Х-ом конгрессе Международной ассоциации морфологов «Медико-экологические проблемы возрастной морфологии. Адаптационные процессы органов и систем» (Бухара, 2008), международной гистологической конференции «Морфогенезы в эволюции, индивидуальном развитии и эксперименте» (Тюмень, 2008), научной конференции морфологов (Москва, 2008), научно-практической конференции «Клинические и фундаментальные аспекты критических состояний» (Омск, 2008), региональной научно-практической конференции «Инновационные медицинские технологии в многопрофильной клинике» (Омск, 2008), всероссийской научной конференции «Нейробиологические аспекты морфогенеза и регенерации» (Оренбург, 2008), Российском симпозиуме с международным участием «Патофизиология и клиника экстремальных и терминальных состояний» (Уфа, 2009), Российской научно-практической конференции «Нарушение мозгового кровообращения. Патофизиология, клиника, диагностика, лечение» (Барнаул, 2009), 7-й Всероссийской научной конференции «Бабухинские чтения в Орле» (Орел, 2009), VI-ом съезде анатомов, гистологов и эмбриологов России (Саратов, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 научных работ, из них в изданиях перечня ВАК - 9.

Объем и структура диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания методик исследования, 2 глав собственных исследований, заключения и выводов. Общий объем диссертации составляет 162 страницы, фактические данные иллюстрированы 38 рисунками, 22 таблицами. Указатель литературы включает 146 источников, из них иностранных - 96. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Основу работы составили результаты хронических экспериментов, выполненных на половозрелых белых крысах-самцах. Использованные в эксперименте животные содержались в условиях вивария ЦНИЛ ОмГМА, регламентируемых приказом МЗ СССР № 1179 от 10.10.1983 г. Опыты проводили в соответствии с приказами МЗ СССР № 755 от 12.08.77 и № 701 от 27.07.78 об обеспечении принципов гуманного обращения с животными.

Моделирование острой 20-минутной ишемии головного мозга путем пережатия общих сонных артерий проведено на беспородных крысах самцах массой 250-300 г после внутрибрюшинного введения тиопентала-натрия в дозе 7,5 мг/кг и дополнения эфиром (при необходимости) при достижении хирургической стадии наркоза (Губенко A.B.. и др., 2007). Выживших и пронумерованных животных с помощью рандомизации

(использование генератора случайных чисел) делили на три группы: 1) животные группы I (п=20) два раза в неделю подвергались прерывистому аудиогенному воздействию (70-80 децибел) (по две минуты) в течение 2-го и 3-го месяца после острой ишемии; 2) животные группы II (п=20) содержались в тех же условиях, но без стрессового воздействия; 3) животным группы III (п=20) на фоне аудиогенного воздействия проводилось лечение с помощью препарата церепро, который вводили внутрибрюшинно через день в течение второго и третьего месяца после острой ишемии до звукового воздействия (в дозе 20 мг/кг). Животные группы IV (п=20, без ишемии), как и животные группы I, два раза в неделю подвергались аудиогенному воздействию в течение 3 месяцев. Контролем (группа V) служили ложнооперированные животные (наркоз, рассечение кожи, п=20, без ишемии и стрессового воздействия).

Для морфологического исследования головной мозг животных забирали через 1, 3, 5 и 9 месяцев после острой ишемии и фиксировали путем транскардиальной перфузии смесью 4% раствора параформальдегида, 1% раствора глютарового альдегида, 5% раствора сахарозы на 0,1 М фосфатном буфере (рН=7,4). Материал заключали в парафин (светооптические препараты) или смесь эпона и арапдита (элекгронномикроскопические препараты). Для светооптического исследования готовили фронтальные серийные срезы толщиной 5-7 мкм на уровне сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса, окрашивали по Нисслю (Семченко В.В. и др., 2006). В ходе морфометрического анализа определяли общую численную плотность нейронов, абсолютное и относительное (%) содержание нормохромных, гиперхромных несморщенных, гиперхромных сморщенных, гипохромных нейронов и клеток-теней (Semchenko V.V. et al., 1996; Miller M.W., Potempa G., 1990). На цифровых изображениях исследуемых областей с помощью встроенных инструментов "Photoshop CS" при увеличении xlOOO измеряли площадь тел нейронов (нейроны, в которых дифференцировалось ядрышко), рассчитывали ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО).

Ультратонкие срезы сенсомоторной коры и вентробазального комплекса таламуса готовили на ультрамикротоме «Ultracut-E» (фирма Reichert-Jung), помещали на сетки без подложки и контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца. Просмотр и фотографирование ультратонких срезов производили на электронном микроскопе «Hitachi-600Н». Анализировали динамику общей численной плотности синапсов (на 100 мкм" нейропиля), содержания деструктивно измененных синапсов, синапсов с митохондриями, синапсов с различной формой и размерами активной зоны контакта, толщиной постсинаптического уплотнения, различной плотностью синаптических пузырьков, перфорированных синапсов (Семченко В.В. и др., 2008).

Для оценки общего состояния животных использовали 100-балльную систему С.ПЛысенкова с соавт. (1982), для оценки судорожной

готовности - 5-балльную систему Л.В.Крушинского (1960). Ориентировочно-исследовательское поведение и эмоционально-психические реакции крыс изучали в тесте открытое поле (Буреш Я. и др., 1991).

Полученные количественные данные обработаны с помощью общепринятых в медико-биологических исследованиях методов системного анализа (Лакин Г.Ф., 1980; Славин М.Б., 1989) с привлечением программ "EXCEL" и "Statistica-5" (Боровиков В., 2001; Реброва О.Ю., 2002), согласно современным требованиям к проведению анализа медицинских данных (Гланц С., 1998). Различия между независимыми выборками количественных признаков определяли с помощью рангового дисперсионного анализа Краскела-Уоллиса, критериев Манна-Уитни и Колмогорова-Смирнова. Для категориальных переменных (% от числа) применяли Хи-квадрат (х~) и точный критерий Фишера двусторонний.

Все эксперименты и исследования выполнены на базе Омской государственной медицинской академии (ЦНИЛ, кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии) и частично в лаборатории ультраструктуры и патоморфологии института молекулярной биологии научного центра "Вектор" МЗ РФ (зав. лабораторией доктор биологических наук Е.И.Рябчикова). Эксперимент выполнен совместно с канд. мед. наук С.В. Максимишиным, А .А. Бутиным, Д.Д. Поташевым. Статистический анализ проведен при консультативной помощи д-ра мед. наук С.С. Степанова.

Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Структурно-функциональные изменения сенсомоторной коры большого мозга и венгробазального комплекса таламуса в отдаленном посгишемическом периоде без и на фоне хронического стресса

Нейроны сенсомоторной коры. По данным дисперсионного анализа (ANOVA Краскела-Уоллиса), у контрольных животных (группа V) в течение 9 месяцев наблюдения не выявлено статистически значимых изменений морфометрических параметров (критерий Н<4,0, р>0,05).

У животных I, II и IV групп обнаружены статистически значимые изменения всех показателей цитоархитектоники слоев I13-IV (критерий Н>6,0, /к0,05). В слое V общая численная плотность нейронов статистически значимо уменьшалась только у животных группы I.

Через 1 и 3 месяца после ишемии статистически значимые различия между группами (ANOVA Краскела-Уоллиса) выявлялись по всем изученным показателям цитоархитектоники. Через 5 месяцев в слоях III-IV различия между группами отсутствовали только по показателю содержания клеток-теней. В слое V не отличалось содержание нормохромных, гиперхромных, гипохромных нейронов и клеток-теней. Через 9 месяцев в слоях Ш-IV различия между группами не выявлены по показателю содержания гиперхромных нейронов и клеток-теней. В слое V различалась только общая численная плотность нейронов (Н=8,6; р=0,03).

Общая численная плотность нейронов через 9 месяцев после ишемии в слоях Ш-1У сенсомоторной коры у животных группы I уменьшилась на 50,7%, группы II - на 44,0% по сравнению с соответствующим контролем, в слое V - на 33,1 и 23,9% соответственно, а у животных группы IV статистически значимых изменений этого показателя выявлено не было (табл. 1).

У животных группы I в отдаленном постишемическом периоде в слоях Ш-ГУ и V сенсомоторной коры, по данным дисперсионного анализа, статистически значимо изменялось содержание нормохромных, гиперхромных несморщенных, гиперхромных сморщенных, гипохромных нейронов и клеток-теней. Кривая, отражающая изменение содержания вышеназванных типов нейронов, по форме приближалась к параболической: минимальное содержание нормохромных нейронов -через 3 месяца после ишемии, а максимальное содержание остальных типов нейронов - через 3 месяца постишемического периода.

Таблица 1

Общая численная плотность нейронов (на 1 мм5) в слоях Ш-1У и V сенсомоторной коры большого мозга белых крыс в отдаленном постишемическом периоде и при аудиогенном воздействии, М1у

Группа Постишемический период, мес.

1 3 5 9

Слои ИМУ

I 4416012890** 4264013580 *** 4051012500 *** 3544013170

II 4745014550 4650015500 4784013580 **л 4022012880

IV 73150+3520 ЛЛЛ 7340014850 ЛЛЛ 6465014280 *лл# 6186015160 *лл##

V (контроль) 7295012750 72600+2660 72860+4840 71840+3450

Слой V

I 3415512550 * 32110+4120 ** 3029013310 ** 2917013230 **#

II 3685012550 * 36380+4350 ** 3209013200 ** 33190+2880 **

IV 4356013430 л 44560+2880 л 4385015250 лл 4127016030 лл

V (контроль) 4236013280 4245013150 41890+2950 4363013330

Примечание. * - статистически значимые различия в сравнении с группой IV (контроль) при р<0,05, ** - при р<0,01 и *** - при /х0,001; Л - статистически значимые различия в сравнении с группой I при /х0,05, ЛЛ - при /х0,01; # -статистически значимые различия в сравнении с 1 месяцем при р<0,05, ## - при р<0,01 (критерий Манна-Уитни и Колмогорова-Смирнова).

У животных группы II в отдаленном постишемическом периоде в слоях Ш-ГУ сенсомоторной коры статистически значимо изменялось содержание нормохромных, гиперхромных несморщенных и гиперхромных сморщенных нейронов, а в слое V - содержание нормохромных и гиперхромных несморщенных нейронов. Кривая, отражающая изменение содержания вышеназванных типов нейронов, по форме приближалась к синусоиде: минимальное содержание нормохромных нейронов - через I и 5 месяцев, максимальное - через 3 и 9 месяцев после ишемии; минимальное содержание гиперхромных нейронов - через 3 и 9 месяцев, максимальное - через 1 и 5 месяцев постишемического периода. Наиболее четко подобная динамика содержания нейронов проявлялась в слоях Ш-1У сенсомоторной коры.

У животных группы IV в слоях Ш-ГУ сенсомоторной коры на фоне хронического стрессового воздействия статистически значимо изменялось содержание нормохромных, гипохромных, гиперхромных несморщенных и гиперхромных сморщенных нейронов, а в слое V - содержание нормохромных и гиперхромных несморщенных нейронов. Кривая, отражающая изменение содержания различных типов нейронов, по форме, как и в группе I, приближалась к параболе.

Аудиогенное воздействие приводило к увеличению количества необратимо измененных нейронов (клетки-тени, гиперхромные сморщенные нейроны) и более выраженной редукции общей численной плотности нейронов, оказывало существенно меньшее влияние на структурно-функциональное состояние нейронов сенсомоторной коры.

Таким образом, в отдаленном постишемическом периоде в сенсомоторной коре наибольшее изменение содержания реактивно измененных нейронов и уменьшение общей численной плотности нейронов, по сравнению с соответствующим контролем и первым месяцем, было характерно для животных группы I через 3 месяца после ишемии и 2 месяца аудиогенного воздействия. При этом в большей степени страдали мелкие нейроны слоев Ш-Г/ - вторичный проекционно-ассоциативный комплекс, специализированный на восприятии, переработке и распределении по коре специфической афферентной таламической импульсации.

Межнейронные синапсы сенсомоторной коры. В отдаленном постишемическом периоде на фоне аудиогенного стресса (группа I) в молекулярном слое сенсомоторной коры появлялись участки нейропиля с высоким содержанием синаптических терминалей, измененных по светлому типу деструкции (до 27%). По всем показателям (кроме общей численной плотности через 1 месяц) имелись статистически значимые различия (АКОУА Краскела-Уоллиса). Наибольшие различия в сравнении с соответствующим контролем характерны для животных группы I (табл. 2).

I - Таблица 2

Синаптоархитекгоника молекулярного слоя сенсомоторной коры большого

мозга белых крыс в отдаленном постишемическом периоде, Шз

Группа Постишемический период, мес.

1 3 5 9

Общая численная плотность синапсов

(сенсомоторная кора, молекулярный слой)

I 32,2±2,1 19,5+3,2 **## 27,2±2,8**# 34,5±2,5#

II 31,8±2,5 25,3+2,1*л# 32,5+3,1# 34,6±3,8

IV 34,8±2,7 36,6+4,5ЛЛ 32,4±2,7 31,3±3,8

V (контроль) 36,0±3,5 35,7±4,5 34,2±2,8 33,6+3,2

Содержание деструктивно измененных синапсов (сенсомоторная кора, молекулярный слой)

I 10,0±2,1** 22,5±4,4***## 16,7±3,2***# 4,8±1,2*##

II 9,8±1,1** 11,1±2,2*л 5,1±2,2*л 2,2±1,0*л

IV 3,8±1,1 8,5±2,1*л 7,8+1,4*л 7,2+1,5*л

V (контроль) 3,0+1,0 2,5±2,0 1 3,2±1,6 2,6+1,8

Пространственная организация синаптических устройств, баллы

I 21+4* 29±4*# 28±7* 3019*

II 19±3* 22±4*л 16±5ЛЛ# 15±3ЛЛ

IV 15±4Л 19+4*л 18±3*л 19±3*лл

V (контроль) 14±2 1313 12±2 14±3

Примечание. * - статистически значимые различия в сравнении с контролем при /х0,05, ** - при /х0,01 и *** - при р<0,001; Л - статистически значимые различия в сравнении с группой I при р<0,05 и ЛЛ - при /х0,01; # - статистически значимые различия в сравнении с предыдущим сроком при /х0,05 и ## - при р<0,01 (критерий Мшша-Уитни и Колмогорова-Смирнова).

В группе I через 3 месяца после ишемии дефицит общей численной плотности синапсов составил 45,4, через 5 месяцев - 20,5%. В группе II -29,1 и 5% соответственно. В группе IV общая численная плотность синапсов статистически значимо не изменялась. В группе I происходило более значительное усложнение пространственной организации синаптических устройств (табл. 2).

Все вышеизложенное свидетельствует о существенной роли хронического стрессового раздражения для реорганизации межнейронных отношений в отдаленном постишемическом периоде.

Нейроны вентробазалъного комплекса таламуса. Дефицит общей численной плотности нейронов в вентробазальном комплексе таламуса увеличивался только на фоне хронического аудиогенного стрессового раздражения (группа I) (АЖ)УА Краскела-Уоллиса). При сравнении с контролем различия статистически значимы в группе I и II через 1, 3, 5 и 9 месяцев. За 9 месяцев наблюдения в группе I общая численная плотность

нейронов в вентробазальном комплексе таламуса уменьшилась, в сравнении с контролем, на 32, 7%, а в группе II - только на 19,6% (табл. 3).

Таблица 3

Общая численная плотность нейронов (на 1 мм3) вентробазального комплекса таламуса белых крыс в отдаленном постишемическом периоде,

М±5

Группа Постишемический период, мес.

1 3 5 9

I &(Н=7,3; р=0,04) 8140±1120 * 8270±1240 ** 7140±1120 **# 6850±1090 **#

II 832511010 * 8290±1155 ** 8240±1110 **Л 819011270 **л

IV 10120±1230 10085+1480 11010+1940 10895+2150

V (контроль) 10850±1550 11630+1990 10090+1850 1018012540

Примечание. * - статистически значимые различия в сравнении с группой IV (контроль) при /х0,05, ** - при р<0,01 и *** - при р<0,001; л - статистически значимые различия в сравнении с группой I при р<0,05; # - статистически значимые различия в сравнении с предыдущим сроком при р<0,05 (критерий Манна-Уитни и Колмогорова-Смирнова). & - статистически значимые изменения показателя в течение 9 месяцев (АЫОУА Краскела-Уоллиса, Н - соответствующий критерий).

На фоне стресса выявлено изменение содержания всех типов реактивно измененных нейронов вентробазального комплекса таламуса. Число нормохромных нейронов через 3 месяца уменьшалось до 41% и сохранялось на этом уровне после его прекращения (5 месяцев). Через 9 месяцев содержание нормохромных нейронов увеличивалось до контрольного уровня.

Установлено, что статистически значимые различия между группой I и II, I и IV по содержанию нормо- и гипохромных нейронов имелись через 3 и 5 месяцев, а по количеству гиперхромных нейронов - только через 5 месяцев отдаленного постишемического периода. Между группой II и IV значимых различий не обнаружено.

В отдаленном постишемическом периоде на фоне аудиогенного раздражения, очень часто, кроме сателлитоза, выявлялись особые комплексы глиоцита и нейрона, которые характеризовались следующими особенностями: I) глиоцит, лежащий на поверхности тела нейрона, определялся всегда один в отличие от сателлитоза, когда на поверхности нейрона наблюдалось несколько глиоцитов, расположенных в различных частях перикариона и на крупных, проксимальных частях дендритов; 2) глиоцит всегда располагался над центральными зонами тела нейрона -напротив клеточного ядра нейрона; 3) формирование комплекса нейрона с глиоцитом изменяло конфигурацию тела и ядра нейрона; 4) клеточные ядра укрупнялись, вокруг них оставалась только узкая полоска перикариона.

Увеличение двигательной активности и судорожной готовности головного мозга животных в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронических аудиогенных раздражений, возможно, обусловлено накоплением описанных выше комплексов нейрон-глиоцит в вентробазальном комплексе таламуса.

Межнейронные синапсы вентробазальнаго комплекса таламуса. В течение отдаленного постишемического периода общая численная плотность синапсов статистически значимо изменялась только в группе I (АЛОУА Краскела-Уоллиса).

Через 3 месяца после ишемии в группе I дефицит синапсов в вентробазальном комплексе таламуса составил 36,4%, через 5 месяцев -44,6 и через 9 месяцев - 29,9%. В группе II различия с контролем отсутствовали, а в группе IV только через 3 месяца дефицит синапсов составил 21,9% (табл. 4).

Содержание деструктивно измененных синапсов в течение всего отдаленного постишемического периода (1-9 месяцев) изменялось в группе I, II и IV. Максимальное число синапсов, измененных по светлому типу деструкции, отмечалось в группе I через 3 и 5 месяцев эксперимента (табл. 4).

В группе I и IV через 3 месяца наблюдения существенно увеличивался показатель суммарной балльной оценки пространственной организации синаптических устройств. Однако в группе I этот показатель сохранялся на высоком уровне через 5 и 9 месяцев (табл. 4).

Таблица 4

Синаптоархитектоника вентробазального комплекса таламуса белых крыс

в отдаленном постишемическом периоде, М±л

Группа Постишемический период, мес.

1 3 5 9

Общая численная плотность синапсов

I 37,6±3,5 25,3±2,8 **## 22,513,6** 26,5+2,5**

II 34,3±2,8 36,8+3,5™ 31,8±2,9ЛЛ 32,6±3,1л

IV 32,715,2 31,1±3,5*л 37,214,8™ 35,7+5,5Л

V (контроль) 38,8±4,6 39,8±4,2 40,6±5,8 37,8±4,2

Содержание деструктивно измененных синапсов

I 9,5±1,8** 15,6+3, !***# 12,7±2,8*** 11,5±1,2*

И 10,0+2,1*** 4,5±0,6ЛЛЛ## 3,8+0,5ЛЛЛ 3,2+0,8ЛЛЛ

IV 9,0+1,5** 14,4±2,2***# 6,911,1*лл# 4,2±1,3ЛЛ

V (контроль) 3,0+1,0 2,5±2,0 3,2±1,6 2,6±1,8

Пространственная организация синаптических устройств, баллы

I 15±3* 21±4**# 23±5*** 20+4**

II 14±2* 15±3*л 14±3*лл 12±4ЛЛ

Г/ 11±3 19±4 *## 12±3Л# 9±3ЛЛЛ

V (контроль) 10±2 11+3 912 1013

Примечание. * - статистически значимые различия в сравнении с группой V (контроль) при р<0,05, ** - при /х0,01 и *** - при /х0,001; Л - статистически значимые различия в сравнении с группой I при /х0,05, ЛЛ - при р<0,01 и ллл - при /х0,001; # - статистически значимые различия в сравнении с предыдущим сроком при р<0,05 и ## - при р<0,01 (критерий Манна-Уитни и Колмогорова-Смирнова).

Таким образом, в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического аудиогенного раздражения деструктивные и компенсаторно-восстановительные изменения нейронов и межнейронных синапсов сенсомоторной коры и вентробазального комплекса таламуса существенно изменяют структурную основу таламокортикальных взаимоотношений. Уменьшение общей численной плотности нейронов и синапсов сопровождается компенсаторной реорганизацией межнейронных отношений по пути увеличения эффективности активных синаптических устройств, а также усложнением нейроглиальных отношений.

3.2. Психоневрологический статус белых крыс в отдаленном постишемическом периоде без и на фоне хронического стресса

В отдаленном постишемическом периоде при дисперсионном (сравнение трех групп или более двух сроков) и парном (сравнение двух групп или сроков) анализе групп I, II и IV выявлены статистически значимые различия по всем изученным показателям между группами и внутри групп по всем срокам исследования.

Через 1 мес. после острой ишемии головного мозга различия выявлялись только в сравнении с группой IV (в данном случае - исходный контроль). Между группами I и II различий не было.

Через 3 месяца после ишемии в группе I и IV у животных, подвергнутых аудиогенному воздействию, психоневрологические нарушения усилились и затрагивали эмоциональную сферу и ориентировочно-исследовательскую деятельность. У животных группы II сохранялись признаки, свидетельствовавшие лишь о нарушениях в эмоциональной сфере без выраженной динамики в отдаленном периоде наблюдения.

Максимальные изменения параметров, характеризующих эмоциональную сферу и ориентировочно-исследовательскую деятельность, характерны для группы I. У этой группы животных, по сравнению с животными через 1 месяц после ишемии, статистически значимо увеличивалась общая двигательная активность (в 1,58 раза, /><0,01), а также, соответственно, горизонтальная и вертикальная активность. При этом снижалось количество норок (в 2,29 раза, р<0,01), увеличивалась продолжительность латентного периода (в 1,53 раза (р<0,05), возрастало количество грумингов (в 1,82 раза (р<0,01), снижалось количество дефекаций (в 2,17 раза (р<0,01).

У животных группы IV аудиогенные раздражения также приводили к увеличению двигательной активности, однако другие показатели ориентировочно-исследовательской деятельности и эмоциональной сферы

оставались в рамках контрольных значений. У животных группы IV не выявлены признаки снижения судорожной готовности головного мозга.

В отличие от группы IV, у 3 из 20 животных группы I после инициированного звуковым воздействием двигательного возбуждения, появлялись кратковременные судорожные пароксизмы и признаки адинамии. Кроме того, у животных группы I, в структуре двигательной активности чаще отмечались агрессивность, повышенная возбудимость, защитные движения, принятие позы беспокойства - негативные эмоциональные проявления. Животные этой группы во время сеанса звукового воздействия вздрагивали, забивались в угол клетки, принимали защитную позу, у них появлялась пугливость и агрессивность с повышенной чувствительностью к прикосновениям.

Установлено, что у животных группы I ответная двигательная реакция на сильный звук варьировала от 1 до 3 баллов (2,35±1,20 балла), а у животных группы IV - от 0 до 1 балла (0,85+0,70 балла, р<0,01).

Таким образом, сочетание острой ишемии в анамнезе и последующего хронического стресса приводило к патологическому изменению психоневрологического статуса белых крыс с нарушением ориентировочно-исследовательской деятельности, эмоциональной сферы и снижением порога судорожной готовности мозга.

3.3. Корреляционные связи между основными показателями структурно-функционального состояния сенсомоторной коры большого мозга, вентробазального комплекса таламуса и ориентировочно-исследовательской деятельностью в отдаленном постишемическом периоде

Корреляционный анализ морфологических и психоневрологических изменений проведен в группе I за 1-9 месяцев после начала эксперимента. Вариационные ряды формировали из бинарных показателей («есть - нет» различия в сравнении с контролем) для сенсомоторной коры и вентробазального комплекса таламуса.

В отдаленном постишемическом периоде для животных, перенесших ишемию и стрессовое аудиогенное воздействие, установлено наличие большого количества средних и сильных корреляционных связей между показателями психоневрологического статуса и изученных морфометрических показателей структурно-функционального состояния нейронов и синапсов сенсомоторной коры большого мозга.

В сенсомоторной коре в основе выявленных в отдаленном постишемическом периоде изменений ориентировочно-исследовательской деятельности и эмоционального статуса лежат реактивные изменения нейронов, приводящие к их чрезмерной активации (например, гипохромия без ультраструктурных нарушений) и реорганизация межнейронных отношений по типу увеличения эффективности синаптических устройств за счет компенсаторно-восстановительной активации механизмов синаптической пластичности.

В сенсомоторной коре в отдаленном периоде после ишемии и аудиогенного стресса, общая численная плотность эффекторных (пирамидных) нейронов уменьшается, а их активность и функционирование системы межнейронной коммуникации усиливается. Это требует соответствующей реорганизации взаимоотношений возбуждающей и тормозной систем сенсомоторной коры, что на фоне аудиогенного стресса (дополнительный источник возбуждающих импульсов) и деструкции части нейронов не всегда возможно в полной мере. В вентробазальном комплексе таламуса характер корреляционных отношений между изученными признаками во многом схож с таковыми в сенсомоторной коре.

Особо следует отметить то, что в вентробазальном комплексе таламуса, в отличие от сенсомоторной коры, выявляется статистически значимая средняя коореляционная зависимость между количеством комплексов нейрон-глиоцит и высоким баллом по шкале Л.В.Крушинского (1960). Это может свидетельствовать о том, что в вентробазальном комплексе таламуса данные комплексы участвуют в повышении судорожной готовности головного мозга на фоне аудиогенного стрессового раздражения.

3.4. Коррекция структурно-функциональных изменений сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического аудиогенного стресса с помощью препарата церепро

Нейроны. В слоях Ш-ГУ и V сенсомоторной коры статистически значимые различия между группой I и III (лечение) отмечались только через 9 месяцев (на 14,7 и 15,6% соответственно), а в вентробазальном комплексе таламуса - через 5 (на 12,2%) и 9 (на 17,2%) месяцев после перенесенной острой ишемии.

Церепро нивелирует последствия воздействия стресса на поврежденный при острой ишемии головной мозг, обеспечивая условия для сохранения нейронов и, как следствие, более полноценное восстановление корково-подкорковых взаимоотношений в отдаленном постишемическом периоде.

Межнейронные синапсы. Использование препарата церепро способствовало сохранению общей численной плотности синапсов и снижало содержание поврежденных контактов. В молекулярном слое сенсомоторной коры общая численная плотность синапсов в группе III превышала таковую в группе I через 3 месяца на 46,7%. В вентробазальном комплексе таламуса статистически значимые различия между группами выявлялись через 3 и 5 месяцев. В группе III общая численная плотность синапсов была больше, чем в группе I, на 32,5 и 30,6% соответственно. Деструктивно измененных синапсов в сенсомоторной коре животных группы III было меньше, чем у животных группы I через 3 и 5 месяцев

после острой ишемии (на 75,9 и 62,8% соответственно). В нейропиле вентробазального комплекса таламуса животных группы III деструктивно измененных синапсов меньше, чем у животных группы I через 3, 5 и 9 месяцев после острой ишемии на 71,8, 70,1 и 80,7% соответственно.

Следовательно, церепро, снижая дефицит синапсов и активируя механизмы компенсаторной синагггической пластичности, влияет и на межнейронные взаимоотношения.

Таким образом, препарат церепро оказывает положительное действие на структурно-функциональное состояние сенсомоторной коры большого мозга и вентробазальных ядер таламуса экспериментальных животных в отдаленном постишемическом периоде. Очевидно, что при длительном применении препарата церепро исчезают структурные предпосылки нарушения таламокортикальных взаимоотношений, что, в свою очередь, препятствует формированию патологических изменений головного мозга в отдаленном постишемическом периоде.

Психоневрологический статус. При использовании церепро (группа III) после инициированного звуковым воздействием двигательного возбуждения не выявлялись судорожные пароксизмы и признаки адинамии. Кроме того, у животных группы III в структуре двигательной активности существенно реже отмечались негативные эмоциональные проявления. Если у животных группы I (без лечения) ответная двигательная реакция на сильный звук варьировала от 1 до 3 баллов (2,35±1,20 балла), то у животных группы III (лечение церепро) - от 0 до 2 баллов (1,23+0,45 балла, р<0,01).

Таким образом, использование церепро в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического аудиогенного воздействия снижало степень выраженности повреждения нейронов и межнейронных синапсов, а также психоневрологических нарушений.

ВЫВОДЫ

1. Через 9 месяцев постишемического периода после 20-минугной окклюзии общих сонных артерий общая численная плотность нейронов в слое III-IV сенсомоторной коры большого мозга белых крыс уменьшается на 44,9%, в слое V - на 21,7%, в вентробазальном комплексе таламуса - на 24,5%. На фоне хронического аудиогенного раздражения у животных, перенесших острую ишемию, происходит увеличение дефицита общей численной плотности нейронов соответственно до 51,4, 31,1 и 36,9%. Аудиогенное раздражение у контрольных животных приводит к уменьшению общей численной плотности нейронов на 15,2% только в слое III-IV.

2. Максимальное уменьшение содержания нормохромных нейронов в сенсомоторной коре большого мозга (до 35%) и вентробазальном комплексе таламуса (41%) наблюдалось у животных, перенесших острую ишемию головного мозга, при аудиогенном раздражении через 3 месяца отдаленного постишемического периода.

3. В вентробазальном комплексе таламуса при аудиогенном раздражении в отдаленном постишемическом периоде происходит усложнение нейроглиальных взаимоотношений, возрастает содержание комплексов нейрон-глия (5-15% в популяции нейронов). Имеется прямая корреляционная связь между увеличением содержания комплексов нейрон-глия и уровнем судорожной готовности мозга животных.

4. На фоне хронического аудиогенного раздражения в отдаленном постишемическом периоде значительно уменьшается общая численная плотность синапсов. Через 3 месяца после ишемии в молекулярном слое сенсомоторной коры большого мозга общая численная плотность синапсов снижается на 39,4% по сравнению с контролем, а содержание деструктивно измененных синапсов увеличивается до 63,0%. В вентробазальном комплексе - на 36,4 и 39,2% соответственно.

5. При хроническом аудиогенном воздействии в отдаленном постишемическом периоде в сенсомоторной коре большого мозга и вентробазальном комплексе таламуса происходит более выраженная, чем без стресса, активация механизмов компенсаторной синаптической пластичности, в результате чего увеличивается содержание гипертрофированных, перфорированных и более сложных синапсов. Выявлена прямая корреляционная связь между степенью усложнения межнейронных синапсов и уровнем судорожной готовности мозга.

6. Использование церепро в отдаленном постишемическом периоде снижает степень повреждения нейронов и синапсов сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса, способствует более полноценному восстановлению таламокортикальных взаимоотношений, нормализации ориентировочно-исследовательского поведения, эмоционально-психических реакций и повышает порог судорожной готовности головного мозга.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Грицаенко О.С. Циклические патологические и компенсаторно-восстановительные процессы в коре большого мозга в отдаленном постишемическом периоде: материалы конф. / О.С. Грицаенко, H.A. Новицкий, В.В. Семченко // Морфология. - 2006. - № 5. - С. 38.

2. Грицаенко О.С. Структурно-функциональные основы циклических постишемических патологических процессов в головном мозгу белых крыс: материалы VIII конгр. между нар. ассоц. морфологов, Орел, 2006 / О.С. Грицаенко, H.A. Новицкий // Морфология. - 2006. - № 4. - С.41.

3. Пато-саногенетические изменения нейронов и синапсов как структурно-функциональная основа цикличности процесса реорганизации межнейронных отношений и асимметрии коры большого мозга белых крыс в отдаленном постишемическом периоде / В.В. Семченко, О.С. Грицаенко, H.A. Новицкий, С.С. Степанов // Структурно-функциональные и нейрохимические закономерности

асимметрии и пластичности мозга: материалы всерос. конф. с междунар. участием. - М., 2006. - С. 299-301.

4. Закономерности развития быстрых и медленных морфофункциональных перестроек коры большого мозга в постишемическом периоде / О.С. Грицаенко, H.A. Новицкий, А.Р. Черба, В.В. Семченко // Бабухинские чтения: материалы 6-й всерос. научн. конф., Орел, 2007. - М„ 2007. - С. 21-23. - (Альманах «Ретиноиды; вып. 25).

5. Реорганизация межнейронных отношений в коре большого мозга в отдаленном постишемическом периоде и прикладные аспекты регуляции механизмов синаптической пластичности / О.С. Грицаенко, H.A. Новицкий, С.С. Степанов, В.В. Семченко // Клинические и фундаментальные аспекты критических состояний: материалы науч. конф. - Омск, 2007. - С. 216-219.

6. Различные типы реорганизации нейропиля коры большого мозга белых крыс в отдаленном постишемическом периоде: материалы междунар. науч. конгр., Казань, 2007 / О.С. Грицаенко, В.В. Семченко, H.A. Новицкий, С.С. Степанов // Неврол. веста. - 2007. - №1. - С. 98.

7. Репаративная и адаптивная реорганизация межнейронных отношений в коре большого мозга в отдаленном постишемическом периоде как основа усиления межполушарной асимметрии / О.С. Грицаенко, В.В. Семченко, А.Р. Черба, H.A. Новицкий, С.С. Степанов // Структурно-функциональные, нейрохимические и иммунохимические закономерности асимметрии и пластичности мозга: материалы всерос. конф. с мевдунар. участием. - М., 2007. - С. 202-206.

8. Роль ультраструетурных изменений дистальных и проксимальных отделов дендритного дерева в морфо-функциональной перестройке афферентного входа пирамидных нейронов сенсомоторной коры большого мозга в постишемическом периоде : материалы междунар. науч. конф., Астрахань, 2007 / В.В. Семченко, О.С. Грицаенко, С.С. Степанов, H.A. Новицкий // Астраханский мед. журн. - 2009. - № 2. -С. 168.

9. Грицаенко О.С. Реорганизация кортико-тапамических отношений как основа усиления функциональной асимметрии мозга в отдаленном постишемическом периоде: материалы IX конгр. МАМ / О.С. Грицаенко, С.С. Степанов, В.В. Семченко // Морфология. - 2008. -№ 2.-С. 36.

10. Грицаенко О.С. Клинико-статистические характеристики ишемического инсульта / О.С. Грицаенко, H.A. Новицкий И Инновационные медицинские технологии в многопрофильной клинике : материалы регион, науч.-практ. конф. - Омск, 2008. - С. 219-220. - (прил. к журн. «Омский науч. веста.»; № 1 (65)).

11. Грицаенко О.С. Структурно-функциональная реорганизация вентробазального ядра таламуса в отдаленном постишемическом

периоде: материалы международ, гистол. конф. / О.С. Грицаенко II Морфология. - 2008. - № 3. - С. 36.

12. Грицаенко О.С. Очаговая активация неосинаптогенеза в сенсомоторной коре большого мозга белых крыс в отдаленном постишемическом периоде: материалы конф. / О.С. Грицаенко // Морфология. - 2008. - № 4. - С. 63-64.

13. Грицаенко О.С. Влияние глиатилина на изменение синаптоархитектоники неокортекса белых крыс в отдаленном постишемическом периоде: материалы всерос. науч. конф. / О.С. Грицаенко, С.С. Степанов II Морфология. - 2008. - № 5. - С. 64.

14. Пластичность синапсов при острой ишемии головного мозга и в постишемическом периоде / C.B. Максимишин, H.A. Новицкий, О.С. Грицаенко, З.М. Золотарева, С.С. Степанов, В.В. Семченко // Синаптическая пластичность головного мозга (фундаментальные и прикладные аспекты) / В.В. Семченко, С.С. Степанов, H.H. Боголепов.

- Омск, 2008. - Гл. 4, п. 4.6. - С. 207-217.

15. Грицаенко О.С. Мелко- и крупноклеточные популяции нейронов сенсомоторной коры большого мозга белых крыс в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического стресса : материалы рос. симп. с междунар. участием, Уфа, 2009 / О.С. Грицаенко, В.В. Семченко, С.С. Степанов // Мед. вестн. Башкортостана. - 2009. - № 2. -С. 77-79.

16. Грицаенко О.С. Клинико-патогенетическое обоснование этапного лечения больных с острым нарушением мозгового кровообращения : материалы рос. науч.-практ. конф., Барнаул, 2009 / О.С. Грицаенко, H.A. Новицкий, В.В. Семченко // Рос. клинико-фармацевт. вестн. -2009.-№1.-С. 54.

17. Грицаенко О.С. Циклическая активация синаптической пластичности как структурная основа реорганизации межнейронных отношений в отдаленном постишемическом периоде у белых крыс / О.С. Грицаенко, С.С. Степанов, В.В. Семченко И Бабухинские чтения: материалы 7-й всерос. науч. конф., Орел, 2009. - М., 2009. - С. 41-45.

- (Альманах «Ретиноиды»; вып. 29).

18. Грицаенко О.С. Роль стресса в развитии структурно-функциональных перестроек межнейронных отношений сенсомоторной коры большого мозга и таламуса в отдаленном постишемическом периоде: материалы VI всерос. съезда анатомов, гистологов и эмбриологов, Саратов, 2009 / О.С. Грицаенко // Морфология. - 2009. - №4. - С. 43.

19. Грицаенко О.С. Экспериментальное обоснование использования препарата церепро в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического стресса / О.С Грицаенко, В.В. Семченко // Мед. наука и образование Урала. - 2009. - № 3 (59). - С. 7-9.

Подписано в печать 06.11.2009. Формат 60 х 84 1/16. Усл. печ. л. 1,22. Тираж 100 экз. Заказ 1034. Отпечатано в Томском государственном университете систем управления и радиоэлектроники. 634050, Томск, пр. Ленина, 40. Тел. (3822) 533018.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Грицаенко, Ольга Семеновна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

СТРУКТУРНО-ФУНЬСЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ГОЛОВНОГО МОЗГА В ПОСТИШЕМИЧЕСКОМ ПЕРИОДЕ современное состояние проблемы).

1.1. Структурно-функциональные изменения, механизмы повреждения и восстановления головного мозга после острой ишемии.

1.2. Общий адаптационный синдром и ишемия головного мозга.

1.3. Коррекция ишемических изменений головного мозга.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Дизайн исследования.

2.2. Экспериментальная модель.

2.3. Методы исследования.

2.3.1. Оценка интегративной деятельности головного мозга.

2.3.2. Морфологическое исследование.

2.4. Статистический анализ.

Глава 3. СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ СЕНСОМОТОРНОЙ КОРЫ БОЛЬШОГО МОЗГА И ВЕНТРОБАЗАЛЬНОГО КОМПЛЕКСА ТАЛАМУСА В ОТДАЛЕННОМ ПОСТИШЕМИЧЕСКОМ ПЕРИОДЕ БЕЗ И НА ФОНЕ ХРОНИЧЕСКОГО СТРЕССА.

3.1. Сенсомоторная кора.

3.1.1. Нейроны.

3.1.2. Межнейронные синапсы.

3.2. Вентробазальный комплекс таламуса.

3.2.1. Нейроны.

3.2.2. Межнейронные синапсы.

3.3. Психоневрологический статус.

3.4. Корреляционные зависимости между основными показателями структурно-функционального состояния сенсомоторной коры большого мозга, вентробазального комплекса таламуса и ориентировочно-исследовательской деятельностью в отдаленном постишемическом периоде.

Глава 4. КОРРЕКЦИЯ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ СЕНСОМОТОРНОЙ КОРЫ БОЛЬШОГО МОЗГА И ВЕНТРОБАЗАЛЬНОГО КОМПЛЕКСА ТАЛАМУСА В ОТДАЛЕННОМ ПОСТИШЕМИЧЕСКОМ ПЕРИОДЕ НА ФОНЕ ХРОНИЧЕСКОГО АУДИОГЕННОГО СТРЕССА С ПОМОЩЬЮ

ПРЕПАРАТА ЦЕРЕПРО.

4.1. Нейроны.

4.2. Межнейронные синапсы.

4.3. Психоневрологический статус.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфологические изменения неокортекса и таламуса в постишимическом периоде на фоне хронического стресса и их коррекции церепро (эксмериментальное исследование)"

Актуальность проблемы. Изучение закономерностей реализации деструктивных и компенсаторно-восстановительных процессов головного мозга после острой ишемии является одним из ведущих направлений современной нейроморфологии (Ярыгин Н.Е., Ярыгин В.Н., 1973; Сотников О.С. и др., 1994; Аврущенко М.Ш. и др., 2000; Боголепов Н.Н. и др., 2001; Martone М.Е. et al. 1999; Leker R.R., Shohami E., 2002).

Несмотря на большое количество работ по изучению патофизиологических аспектов развития хронической церебральной ишемии, недостаточно полно освещены вопросы структурно-функционального изменения головного мозга в отдаленном периоде после перенесенного ишемического инсульта в эксперименте (Семченко В.В. и др., 1999, 2008). Имеются единичные работы по отдаленному постреанимационному периоду (Десятниченко А.К., 1998). Слабо изучено влияние внешних стрессовых воздействий на функциональную активность поврежденного головного мозга и целенаправленная коррекция последствий этого влияния. Особенно это касается одновременного изучения нескольких отделов головного мозга, объединенных в единую систему.

Широко обсуждаются вопросы защиты головного мозга в отдаленном постишемическом периоде (Фишер М., Шебитц В., 2001; Бабаян Е. и др., 2005; Пирадов М.А., 2007; Клигуненко Е.Н., Емельянова Е.А., 2008; Виничук С.М., 2009). В этом плане перспективным может быть использование церепро, препарата из группы ноотропов, который обеспечивает синтез ацетилхолина и фосфатидилхолина в нейрональных мембранах, оказывая нейропротективное действие.

Таким образом, выявление в отдаленном постишемическом периоде закономерностей реорганизации цито- и синаптоархитектоники сенсомоторной коры и таламуса в эксперименте, выделение этапов восстановления структурно-функционального состояния мозга и определение потенциальных возможностей репаративной нейропластичности на уровне "неокортекс-таламус", расширят наши представления о возможностях нейропротективной коррекции и послужат обоснованием для разработки методов нейрореабилитации с учетом компенсаторно-приспособительных механизмов и структурно-функциональной реорганизации мозга в восстановительном периоде после перенесенных ишемических эпизодов.

Необходимость проведения подобных работ связана с увеличением частоты ишемических инсультов, особенно в молодом возрасте, высокой степенью инвалидизации (Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001). Поэтому изучение теоретического обоснования использования различных методов восстановительного лечения в отдаленном постишемическом периоде является не только важной нейробиологической, но и медико-социальной проблемой.

Цель работы. Выявление структурно-функциональных изменений сенсомоторной коры и вентробазального комплекса таламуса головного мозга белых крыс в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического аудиогенного стрессового воздействия и обоснование возможности их целенаправленной коррекции с помощью препарата церепро.

Задачи исследования:

1. Провести морфометрический анализ изменений цито- и синаптоархитектоники сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса белых крыс в отдаленном постишемическом периоде (через 1, 3, 5 и 9 месяцев).

2. Осуществить морфометрический анализ изменений цито- и синаптоархитектоники сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса белых крыс в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического аудиогенного стрессового воздействия.

3. Изучить психоневрологический статус белых крыс в отдаленном постишемическом периоде и его изменения на фоне хронического аудиогенного стрессового воздействия.

4. Выявить структурно-функциональные изменения цито- и синаптоархитектоники сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса и психоневрологического статуса белых крыс в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического аудиогенного стрессового воздействия при использовании препарата церепро.

Новизна исследования. Впервые в эксперименте на белых крысах изучены морфологические изменения (цито- и синаптоархигектоника) сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса в течение 9 месяцев после 20-минутной окклюзии общих сонных артерий и хроническом аудиогенном воздействии.

Доказано, что через 9 месяцев после ишемии на фоне хронического стресса общая численная плотность нейронов в слоях III-IV, V сенсомоторной коры большого мозга и вентробазальном комплексе таламуса меньше на 6,5, 9,4 и 12,4% соответственно. При хроническом стрессе в большей степени страдают нервные клетки слоев III-IV сенсомоторной коры (дефицит 51,4% нейронов) и вентробазального комплекса таламуса (дефицит 36,9% нейронов). Выявлено, что хронический стресс приводит к более значительному увеличению содержания деструктивно измененных нейронов (на 16%), синапсов (на 34%) через 3 и 5 месяцев постишемического периода и сопровождается реорганизацией нейроглиальных и межнейронных отношений.

Установлено наличие положительных корреляционных связей между выраженностью психоневрологических изменений и степенью реорганизации цито- и синаптоархитектоники сенсомоторной коры большого мозга и таламуса животных, подвергнутых стрессовому воздействию. Показано, что увеличение содержания нейроглиальных комплексов в таламусе положительно коррелирует с судорожной готовностью головного мозга.

Выявлено, что использование препарата церепро при хроническом аудиогенном стрессовом воздействии в отдаленном постишемическом периоде приводит к более быстрому и полному восстановлению ориентировочно-исследовательской деятельности и структурно-функционального состояния сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса экспериментальных животных.

Теоретическое и практическое значение работы. Полученные новые данные о структурно-функциональном состоянии сенсомоторной коры и вентробазального комплекса таламуса позволяют расширить представление о пластичности нервной ткани и выявить изменения таламокортикальных взаимоотношений в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического стресса.

В отдаленном постишемическом периоде при хроническом стрессе усиливаются механизмы повреждения нейронов и межнейронных синапсов, активируются компенсаторно-восстановительные процессы, существенно перестраиваются кортико-кортикальные и таламокортикальные взаимоотношения. Межнейронные синапсы гипертрофируются, затем в результате структурной рекомбинации их компонентов существенно усложняется пространственная организация синаптических устройств и увеличивается их эффективность. Чрезмерная интенсификация компенсаторных процессов может быть причиной появления гиперактивных неконтролируемых нейронных сетей, из которых впоследствии формируются патологические системы головного мозга. В специфических ядрах таламуса, кроме усложнения синаптоархитектоники в отдаленном постишемическом периоде на фоне хронического стресса, увеличивается содержание специфических нейрон-глиальных комплексов.

Результаты исследования позволяют установить, что церепро, действуя как нейрометаболический стимулятор, предотвращает повреждение и гибель значительного количества нейронов, межнейронных синаптических контактов, стимулирует компенсаторно-восстановительные процессы, улучшает психоневрологический статус экспериментальных животных в отдаленном постишемическом периоде." Результаты проведенного исследования доказывают высокую эффективность нейропротективной терапии препаратом церепро в восстановительном периоде ишемического инсульта и служат обоснованием для его клинического внедрения в стандарты лечения постинсультных больных в неврологических и нейрореабилитационных отделениях.

Полученные данные послужат фундаментальной базой для дальнейших исследований в изыскании способов восстановления и защиты головного мозга в отдаленном постишемическом периоде с помощью нейропротекции и стимуляции репаративных процессов.

Внедрение полученных результатов. Результаты исследования структурно-функционального состояния сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса в отдаленном постишемическом периоде внедрены в курс лекций и практических занятий по темам: "Нервная ткань", "Гистофизиология органов центральной нервной системы"; в научно-исследовательскую работу кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии, кафедры медицинской биологии с основами генетики и экологии Омской государственной медицинской академии; использованы при изложении материалов в разделе «Пластичность синапсов при острой ишемии головного мозга и в постишемическом периоде» монографии: В.В. Семченко, С.С. Степанов, Н.Н. Боголепов «Синаптическая пластичность головного мозга» (Омск: Омская областная типография, 2008 — 408 е.), рекомендованной НИИ неврологии РАМН РФ нейрогистологам, нейробиологам, нейрофизиологам, патологоанатомам, патофизиологам, фармакологам, невропатологам, нейрохирургам, терапевтам, анестезиологам-реаниматологам и студентам медицинских вузов (www. neurology, ru).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В отдаленном постишемическом периоде происходит уменьшение общей численной плотности нейронов и компенсаторная реорганизация межнейронных взаимоотношений в сенсомоторной коре большого мозга и в вентробазальном комплексе таламуса белых крыс. Хроническое аудиогенное стрессовое воздействие в отдаленном постишемическом периоде усиливает повреждение популяции нейронов, препятствует восстановлению синаптоархитектоники этих отделов головного мозга и ориентировочно-исследовательской деятельности животных.

2. Использование церепро в отдаленном постишемическом периоде приводит к активации компенсаторно-восстановительных процессов, уменьшению количества деструктивно измененных нейронов и синапсов, способствует сохранению общей численной плотности нейронов и восстановлению межнейронных связей в сенсомоторной коре большого мозга и вентробазальном комплексе таламуса белых крыс, обеспечивает более полную нормализацию психоневрологического статуса.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на Всероссийской конференции «Структурно-функциональные и нейрохимические закономерности асимметрии и пластичности мозга» (Москва, 2006), VIII-ом конгрессе международной ассоциации морфологов (Орел, 2006), 6-й Всероссийской конференции «Бабухинские чтения в Орле» (Орел, 2007), Всероссийской конференции «Структурно-функциональные и нейрохимические закономерности асимметрии и пластичности мозга» (Москва, 2007), П-ой научно-практической конференции «Клинические и фундаментальные аспекты критических состояний» (Омск, 2007), Всероссийском научном конгрессе с международным участием «В.М. Бехтерев - основоположник нейронаук» (Казань, 2007), международной научной конференции (Астрахань, 2007), Всероссийской конференции с международным участием (Москва, 2007), 1Х-ом конгрессе Международной ассоциации морфологов «Медико-экологические проблемы возрастной морфологии. Адаптационные процессы органов и систем» (Бухара, 2008), международной гистологической конференции «Морфогенезы в эволюции, индивидуальном развитии и эксперименте» (Тюмень, 2008), научной конференции морфологов (Москва, 2008), научно-практической конференции «Клинические и фундаментальные аспекты критических состояний» (Омск, 2008), региональной научно-практической конференции «Инновационные медицинские технологии в многопрофильной клинике» (Омск, 2008), Всероссийской научной конференции «Нейробиологические аспекты морфогенеза и регенерации» (Оренбург, 2008), Российском симпозиуме с международным участием «Патофизиология и клиника экстремальных и терминальных состояний» (Уфа, 2009), Российской научно-практической конференции «Нарушение мозгового кровообращения. Патофизиология, клиника, диагностика, лечение» (Барнаул, 2009), 7-й Всероссийской научной конференции «Бабухинские чтения в Орле» (Орел, 2009), VI-ом съезде анатомов, гистологов и эмбриологов России (Саратов, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 научных работ, из них в изданиях перечня ВАК - 9.

Объем и структура диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания методик исследования, 2 глав собственных исследований, заключения и выводов. Общий объем диссертации составляет 162 страницы, фактические данные иллюстрированы 38 рисунками, 22 таблицами. Указатель литературы включает 146 источников, из них иностранных - 96. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Грицаенко, Ольга Семеновна

ВЫВОДЫ

1. Через 9 месяцев постишемического периода после 20-минутной окклюзии общих сонных артерий общая численная плотность нейронов в слое III-IV сенсомоторной коры большого мозга белых крыс уменьшается на 44,9%, в слое V - на 21,7%, в вентробазальном комплексе таламуса - на 24,5%. На фоне хронического аудиогенного воздействия у животных, перенесших острую ишемию, происходит увеличение дефицита общей численной плотности нейронов соответственно до 51,4, 31,1 и 36,9%. Аудиогенное воздействие у контрольных животных приводит к уменьшению общей численной плотности нейронов на 15,2% только в слое III-IV.

2. Максимальное уменьшение содержания нормохромных нейронов в сенсомоторной коре большого мозга (до 35%) и вентробазальном комплексе таламуса (41%) наблюдалось у животных, перенесших острую ишемию головного мозга, при аудиогенном воздействии через 3 месяца отдаленного постишемического периода.

3. В вентробазальном комплексе таламуса при аудиогенном воздействии в отдаленном постишемическом периоде происходит усложнение нейроглиальных взаимоотношений, возрастает содержание комплексов нейрон-глия (5-15% в популяции нейронов). Имеется прямая корреляционная связь между увеличением содержания комплексов нейрон-глия и уровнем судорожной готовности мозга животных.

4. На фоне хронического аудиогенного воздействия в отдаленном постишемическом периоде значительно уменьшается общая численная плотность синапсов. Через 3 месяца после ишемии в молекулярном слое сенсомоторной коры большого мозга общая численная плотность синапсов снижается на 39,4% по сравнению с контролем, а содержание деструктивно измененных синапсов увеличивается до 63,0%. В вентробазальном комплексе - на 36,4 и 39,2% соответственно.

5. При хроническом аудиогенном воздействии в отдаленном постишемическом периоде в сенсомоторной коре большого мозга и вентробазальном комплексе таламуса происходит более выраженная, чем без стресса, активация механизмов компенсаторной синаптической пластичности, в результате чего увеличивается содержание гипертрофированных, перфорированных и более сложных синапсов. Выявлена прямая корреляционная связь между степенью усложнения межнейронных синапсов и уровнем судорожной готовности мозга.

6. Использование церепро в отдаленном постишемическом периоде снижает степень повреждения нейронов и синапсов сенсомоторной коры большого мозга и вентробазального комплекса таламуса, способствует более полноценному восстановлению таламокортикальных взаимоотношений, нормализации ориентировочно-исследовательского поведения, эмоционально-психических реакций и повышает порог судорожной готовности головного мозга.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Грицаенко, Ольга Семеновна, Томск

1. Акифьев А.П. Мутагенез и генетический гомеостаз у высших организмов / А.П. Акифьев, Г.А. Худолий // Вестн. РАМН. 1993. - № 1.-С. 3-9.

2. Акулинин В.А. Структурно-функциональная реорганизация нейронов головного мозга в отдаленном постреанимационном периоде : автореф. дис. . д-ра мед. наук / В.А. Акулинин. — Омск, 2004. — 42 с.

3. Александровский Ю.А. Клиническая иммунология пограничных психических расстройств / Ю.А. Александровский, В.П. Чехонин. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. 256 с.

4. Ахмадеев А.В. Участие комплексов нейрон-астроцит в процессе эпилептизации мозга / А.В. Ахмадеев, Д.В. Нагаева // Успехи соврем, естествознания. — 2006. — № 7. С. 13-16.

5. Ашмарин И.П. Нейрохимия / И.П. Ашмарин, П.В. Стукалов. М. : Инт биомед. химии РАМН, 1996. - 469 с.

6. Ашмарин И.П. Регуляторные пептиды функционально-непрерывная совокупность / И.П. Ашмарин, М.Ф. Обухова // Биохимия. - 1986. - Т. 51,№4.-С. 531-545.

7. Блум Ф. Мозг, разум и поведение / Ф. Блум, А. Лейзерсон, JI. Хофстедтер. М. : Мир, 1988. - 248 с.

8. Боголепов Н.Н. • Ультраструктура мозга при гипоксии / Н.Н. Боголепов. — М. : Медицина, 1979. — 167 с.

9. Боголепов Н.Н. Ультраструктура синапсов в норме и патологии / Н.Н. Боголепов. — М.: Медицина, 1975. 96 с.

10. Виничук С.М. Новые возможности патогенетической коррекции ишемических повреждений ткани головного мозга: взгляд на проблему / С.М. Виничук // Украин. мед. журн. — 2009. — № 2 (70). — С. 5-9.

11. Возианов А.Ф. Цитокины. Биологические и противоопухолевые свойства / А.Ф. Возианов, А.К. Бутенко, К.П. Зак. Киев: Наукова думка, 1988.-317 с.

12. Гемостаз и сосудистый эндотелий при черепно-мозговой травме / В.В. Семченко и др.. Омск: Ом. обл. тип. - 2003. — 168 с.

13. Гуляев Д.В. Нейрозащитное лечение при инсульте: реалии и перспективы / Д.В. Гуляев // Therapia. 2007. - № 2. - С. 47-51.

14. Десятниченко А.К. Синаптоархитектоника сенсомоторной коры большого мозга в позднем постишемическом периоде : автореф. дис. . канд. мед. наук / А.К. Десятниченко. — Омск, 1998. 22 с.

15. Евсеев В.А. Нейроиммунопатологическая общность заболеваний центральной нервной системы / В.А. Евсеев // Патогенез. 2006. - Т. 4, № 1. — С. 16-20.

16. Евсеев В.А. Нейроиммунопатология: иммуноагрессия, дизрегуляция, перспективы адоптивной иммунотерапии / В.А. Евсеев, О.И. Миковская // Журн. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. — 2002.-№5. с. 60-64.

17. Ерениев С.И. Структурно-функциональные механизмы повышения судорожной готовности мозга и ее корекция с помощью трансплантации эмбриональной нервной ткани : автореф. дис. . д-ра мед. наук / С.И. Ерениев. Омск, 1997. - 42 с.

18. Захарова М.Н. Клинические аспекты патологии астроглии / М.Н. Захарова, И.А. Завалишин // Журн. невропатологии и психиатрии. -1997. Т. 97, № 12. - С. 100-103.

19. Защита мозга от ишемии: состояние проблемы / Е. Бабаян и др. // Анестезиология и реаниматология. — 2005. № 4. — С. 4-14.

20. Клигуненко Е.Н. Нейропротекция: настоящее и будущее / Е.Н. Клигуненко, Е.А. Емельянова//Нейронауки: теория и клин, аспекты. -2008.-Т. 4, № 1. — С. 75-81.

21. Ковалев Г.В. Ноотропные средства / Г.В. Ковалев. Волгоград, 1990. -368 с.

22. Корзун А.И. Лечение инсульта: ноотропы или доказательная медицина?! Электронный ресурс. / А.И. Корзун. 2002. - Режим доступа: http: www.cardiosite.ru /clinical-lectures/article.asp?id=857.

23. Крушинский Л.В. Формирование поведения животных в норме и патологии / Л.В. Крушинский. М. : Изд-во МГУ, 1960. - 270 с.

24. Крыжановский Г.Н. Дизрегуляционная патология / Г.Н. Крыжановский // Патол. физиология и эксперим. терапия. 2002. - № З.-С. 2-19.

25. Крыжановский Г.Н. Общая патофизиология нервной системы : руководство / Г.Н. Крыжановский. М. : Медицина, 1997. - 352 с.

26. Крыжановский Г.Н. Патологические интеграции в центральной нервной системе / Г.Н. Крыжановский // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1999. - Т. 127, № 3. - С. 244-247.

27. Крылов А.А. Психология / А.А. Крылов, В.М. Аллахвердов, С.И. Богданова. — М. : Велби ; Проспект, 2007. — 743 с.

28. Милнер П. Физиологическая психология / П. Милнер. М. : Мир, 1973.-647 с.

29. Одинак М.М. Ишемия мозга. Нейропротекторная терапия. Дифференцированный подход / М.М. Одинак, И.А. Вознюк, С.Н. Янишевский. СПб. : ВМедА, 2002. - 77 с.

30. Оленев С.Н. Конструкция мозга / С.Н. Оленев. — Л.: Медицина, 1987. -208 с.

31. Опыт амбулаторного применения препарата церепро при ишемическом инсульте в раннем восстановительном периоде / А.Н. Бойко и др. // Журн. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. — 2007. Т. 107, № 10. - С. 34-40.

32. Пальцев М.А. Межклеточные взаимодействия / М.А. Пальцев, А.А. Иванов. М.: Медицина, 1995. - 224 с.

33. Пирадов М.А. Интенсивная терапия инсульта: взгляд на проблему / М.А. Пирадов // Анналы клин, и эксперим. неврологии. — 2007. — Т. 1, № 1.-С. 17-22.

34. Поляков Г.И. Основы систематики нейронов новой коры большого мозга человека / Г.И. Поляков. — М.: Медицина, 1973. — 309 с.

35. Поташов Д.Д. Структурно-функциональное обоснование применения кратковременного шунтирования брахиоцефальных артерий для профилактики постишемического повреждения головного мозга: автореф. дис.канд. мед. наук / Д.Д. Поташов. Омск, 2006. - 22с.

36. Применение глиатилина для лечения деменций альцгеймеровского типа / Н.Д. Селезнева и др. // Соц. и клин, психиатрия. 1998. - № 4. -С. 93-100.

37. Программированная клеточная гибель / под ред. B.C. Новикова. — СПб., 1996.-276 с.

38. Пшенникова М.Г. Феномен стресса, эмоциональный стресс и его роль в патологии / М.Г. Пшенникова // Патол. физиология и эксперим. терапия. 2000. - № 2. - С. 24-31.

39. Рыбаков B.JI. Ультраструктура двигательной коры головного мозга кошки : дис. . канд. биол. наук / B.JL Рыбаков. JL, 1973. — 216 с.

40. Самойлов М.О. Мозг и адаптация: молекулярно-клеточные механизмы / М.О. Самойлов. СПб.: Ин-т физиологии им. И.П.Павлова РАН, 1999. - 272 с.

41. Саркисов С.А. Очерки по структуре и функции мозга / С.А. Саркисов. М. : Медицина, 1964. - 300 с.

42. Саркисов С.А. Структурные основы деятельности мозга / С.А. Саркисов. М.: Медицина, 1980. - 296 с.

43. Семченко В.В. Гипертрофия синапсов как фактор формирования устойчивых патологических систем мозга в позднем постреанимационном периоде / В.В. Семченко, С.С. Степанов, А.К.

44. Десятниченко // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 2000. Т. 129, №5. -С. 532-535.

45. Семченко В.В. Гистологическая техника / В.В. Семченко, С.А. Барашкова, В.Н. Артемьев — 3-е изд. Омск: Омская медицинская академия, 2006. - 152 с.

46. Семченко В.В. Постаноксическая энцефалопатия / В.В. Семченко, С.С. Степанов, Г.В. Алексеева. — Омск: Ом. обл. тип., 1999. 448 с.

47. Семченко В.В. Синаптическая пластичность головного мозга (фундаментальные и прикладные аспекты) / В.В. Семченко, С.С. Степанов, Н.Н. Боголепов. Омск, 2008. - 400 с.

48. Семченко В.В. Синаптоархитектоника коры большого мозга / В.В. Семченко, Н.Н. Боголепов, С.С. Степанов. — Омск: ИПК Омск, 1995. — 168 с.

49. Семченко В.В. Структурная организация синапсов как детерминирующий фактор избирательной чувствительности и пластичности нейронов мозга в постаноксическом периоде / В.В. Семченко, С.С. Степанов // Вестн. РАМН. 1999. - № 7. - С. 36-40.

50. Середенин С.Б. Фармакологическая защита генома / С.Б. Середенин А.Д. Дурнев. -М.: ВИНИТИ, 1992. 162 с.

51. Синаптическая пластичность неокортекса белых крыс при диффузно-очаговых повреждениях головного мозга / В.В. Семченко и др. // Морфология. 2005. - Т. 128, № 4. - С. 76-81.

52. Скоромец А.А. Медикаментозная реабилитация пациентов после инсульта / А.А. Скоромец, В.В. Ковальчук // Журн. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2007. - Т. 107, № 2. — С. 21-24.

53. Соколова Т.Ф. Взаимодействие иммунной, нервной и эндокринной систем при травматической болезни : автореф. дис. . д-ра мед. наук / Т.Ф. Соколова. Томск, 2004. - 40 с.

54. Сомьен Дж. Кодирование сенсорной информации / Дж. Сомьен. М. : Мир, 1975.-414 с.

55. Судаков К.В. Приоритетные фундаментальные исследования интегративной деятельности нервной системы / К.В. Судаков // Вестн. РАМН. 2003. - № 9. - С. 3-6.

56. Судаков К.В. Рефлексы и функциональная система / К.В. Судаков ; НовГУ им. Ярослава Мудрого. Новгород, 1997. — 399 с.

57. Судаков К.В. Функциональные системы организма / К.В. Судаков. — М.: Медицина, 1987. 432 с.

58. Фишер М. Обзор подходов к терапии острого инсульта: прошлое, настоящее и будущее / М. Фишер, В. Шебитц // Инсульт. 2001. - № 1. - С. 21-33. — (Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова»).

59. Шмидт Р.Ф. Физиология человека. Т. 1. Нервная система : пер. с англ. / Р.Ф. Шмидт, Г. Тевс. М. : Мир, 1985. - 272 с.

60. Adibhatla R.M. Citicoline: neuroprotective mechanisms in cerebral ischemia / R.M. Adibhatla, J.F. Hatcher, R.'J. Dempsey // J. Neurochem. -2002.-Vol. 80.-P. 12-23.

61. Antioxidants attenuate acute toxicity of tumor necrosis factor-alpha induced by brain injury in rat / V. Trembovler et al. // Interferon Cytokine Res. -1999. Vol. 19, № 7. - P. 791-795.

62. Aoki T. Blood-brain barrier disruption and matrix metalloproteinase-9 expression during reperfusion injury / T. Aoki, T. Sumii, T. Mori // Stroke. 2002. - Vol. 33. - P. 2711-2717.

63. Arakawa S. Neuroprotection in stroke / S. Arakawa, N. Perera, G.A. Donnan // ACNR. 2005. - Vol. 5, № 5. - P. 10-11.

64. Arundine M. Molecular mechanisms of glutamate-dependent neurodegeneration in ischemia and traumatic brain injury / M. Arundine, M. Tymianski // Cell Mol. Life Sci. 2004. - Vol. 61, № 6. - P. 657-668.

65. Atherosclerotic occlusive extracranial vertebral artery disease: indications for intervention, endovascular techniques, short-term and long-term results

66. J.C. Wehman et al. // J. Interv. Cardiol. 2004. - Vol. 17, N 4. - P. 219232.

67. Ayata C. Ischaemic brain oedema / C. Ayat№, A.H. Ropper // J. Clin. Neurosci. -2002. Vol. 9, № 2. - P. 113-124.

68. Baltan S. Ischemic injury to white matter: an age-dependent process / S. Baltan // Neuroscientist. 2009. - Vol. 15, № 2. - P.l26-133.

69. Bickler P.E. Cause of calcium accumulation in rat cortical brain slices during hypoxia and ischemia: role of ion channels and membrane damage / P.E. Bickler, B.M. Hansen // Brain Res. 1994. - Vol. 665, № 2. - P. 269276.

70. Bilateral monitoring of CBF and tissue oxygen pressure in the penumbra of a focal mass lesion in rats / R. Burger et al. //Acta Neurochir. 1998. -Vol. 71, suppl. (Wien). - P. 157-161.

71. Block F. Inflammation in areas of remote changes following focal brain lesion / F. Block, M. Dihne, M. Loos // Prog. Neurobiol. 2005. - Vol. 75, №5.-P. 342-365.

72. Bond R. Systematic review of the risks of carotid endarterectomy in relation to the clinical indication for and timing of surgery / R. Bond, K. Rerkasem, PM. Rothwell // Stroke. 2003. - Vol. 34, № 9. - P.2290-2301.

73. Candelario-Jalil E. Injury and repair mechanisms in ischemic stroke: considerations for the development of novel neurotherapeutics / E. Candelario-Jalil // Curr. Opin. Investig. Drugs. 2009. - Vol.10, № 7. - P. 644-654.

74. Carlisle H.J. Spine architecture and synaptic plasticity / H.J. Carlisle, M.B. Kennedy // Trends Neurosci. 2005. - Vol. 28, № 4. - P. 182-187.

75. Cellular and molecular events underlying ischemia-induced neuronal apoptosis / Z. Zheng et al. // Drug News Perspect. 2003. - Vol. 16, № 8. -P. 497-503.

76. Chamorro A. Role of inflammation in stroke and atherothrombosis / A. Chamorro // Cerebrovasc. Dis. 2004. - Vol. 17, № 3. - P. 1-5.

77. Chan P.H. Mitochondria and neuronal death/survival signaling pathways in cerebral ischemia / P.H. Chan // Neurochem. Res. 2004. - Vol. 29, №11. -P. 1943-1949.

78. Clark W.M. A randomized efficacy trial of citicoline in patients with acute ischemic stroke / W.M. Clark, B.J. Williams, K.A. Selzer // Stroke. 2001. -Vol. 30.-P. 2592-2597.

79. Cormier R.J. Bidirectional synaptic plasticity correlated with the magnitude of dendritic calcium transients above a threshold / R.J. Cormier, A.C. Greenwood, J.A. Connor // J. Neurophysiol. 2001. - Vol. 85, № 1. - P. 399-406.

80. Czogalla A. Spectrin and calpain: a 'target' and a 'sniper' in the pathology of neuronal cells / A. Czogalla, A.F. Sikorski // Cell Mol. Life Sci. 2005. -Vol. 62, № 17. - P. 1913-1924.

81. Distribution territories and causative mechanisms of ischemic stroke / A. Rovira et al. // Eur. Radiol. 2005. - Vol. 15, № 3. - P. 416-426.

82. Effect of citicoline on ischemic lesions as measured by diffusion-weighted magnetic resonance imaging / S. Warach et al. // Ann. Neurol. 2000. — Vol. 8.-P. 713-722.

83. Einarson L. Variations in the basophilia of nerve cells associated with increased cell activity and functional stress / L. Einarson, E. Krogh // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 1955. - Vol. 18, № 1. - P. 1-12.

84. Ekshyyan O. Apoptosis in acute and chronic neurological disorders / O. Ekshyyan, T.Y. Aw // Front Biosci. 2004. - Vol. 1, № 9. - P. 1567-1576.

85. Evans P. Stress and the immune system / P. Evans, A. Clow, F. Hucklebridge // Psychologest. 1997. - Vol. 10, № 7. - P. 303-307.

86. Evolution of the neurochemical profile after transient focal cerebral ischemia in the mouse brain / H. Lei et al. // J. Cereb. Blood Flow Metab. 2009. - Vol. 29, № 4. - P. 811 -819.

87. Excitotoxic and post-ischemic neurodegeneration. Involvement of transglutaminases / D. Caccamo et al. // Amino Acids. 2004. - Vol. 27, №3-4.-P. 373-379.

88. Fisher M. The ischemic penumbra: identification, evolution and treatment concepts / M. Fisher // Cerebrovasc. Dis. 2004. - Vol. 17, № 1. - P. 1-6.

89. Foran E. Glutamate transporters and the excitotoxic path to motor neuron degeneration in amyotrophic lateral sclerosis / E. Foran, D. Trotti // Antioxid. Redox. Signal. 2009. - Vol. 11, № 7. - P. 1587-1602.

90. Forder J.P. Postsynaptic mechanisms of excitotoxicity. Involvement of postsynaptic density proteins, radicals, and oxidant molecules / J.P. Forder, M. Tymianski // Neuroscience. 2009. - Vol. 12, № 158 (1). - P. 293-300.

91. Gibson R.M. CNS injury: the role of the cytokine IL-1 / R.M. Gibson, N.J. Rothwell, R.A. Le Feuvre // Vet. J. 2004. - Vol. 168, № 3. - P. 230-237.

92. Giffard R.G. Ischemia-induced programmed cell death in astrocytes / R.G. Giffard, R.A. Swanson // Glia. 2005. - Vol. 50, № 4. - P. 299-306.

93. Giurgea C. Pharmacology of integrative activity of the brain. Attempt at nootropic concept in psychopharmacology / C. Giurgea // Actual Pharmacol. (Paris). 1972. - Vol. 25. - P. 115-156.

94. Grace P.A. Fifty years of carotid surgery-hail and farewell? / P.A. Grace // Ir. J. Med. Sci. 2004. - Vol. 173, № 2. - P. 75-77.

95. Guidelines for management of ischaemic stroke and transient ischaemic attack 2008 // Cerebrovasc. Dis. 2008. - Vol. 25, № 5. - P. 457-507.

96. Hausmann R. The time course of the vascular response to human brain injury — an immunohistochemical study / R. Hausmann, P. Betz // Int. J. Legal Med. 2000. - Vol. 113, № 5. - P. 288-292.

97. Huang Y. Ischemic stroke: "acidotoxicity" is a perpetrator / Y. Huang, J.O. McNamara // Cell. 2004. - Vol. 118, N 6. - P. 665-666.

98. Incomplete Infarct and delayed neuronal death after transient middle cerebral artery occlusion in rats / J.H. Garcia et al. // Stroke. 1997. -Vol. 28.-P. 2303-2310.

99. Irwin M. Immune correlates of depression / M. Irwin // Adv. Exp. Med. Biol. 1999.-Vol. 461.-P. 1-24.

100. Janardhan V. Mechanisms of ischemic brain injury / V. Janardhan, A.I. Qureshi // Curr. Cardiol. Rep. 2004. - Vol. 6, № 2. - P. 117-123.

101. Lipton p Ischemic cell death in brain neurons / p L,Plon // Physiol. Rev. 1999. — Vol. 79, №4.-P. 1431-1568.

102. Lyte M. Examination of the neuroendocrine basis for the social conflict-induced enhancement of immunity in mice / M. Lyte, S.G. Nelson, B. Baissa//Physiol. Behav. 1990. - Vol. 48, № 5. - P. 685-691.

103. Lyte M. Innate and adaptive immune responses in a social conflict paradigm / M. Lyte, S.G. Nelson, M.L. Thompson // Clin. Immunol. Immunopathol. 1990. - Vol. 57, № 1. - P. 137-147.

104. Magnetic resonance imaging of the ischaemic penumbra / K.O. Lovblad et al. // Swiss Med. Wkly. 2003. - Vol. 133, № 41-42. - P. 551-559.

105. Marmarou A. Contribution of edema and cerebral blood volume to traumatic brain swelling in head-injured patients / A. Marmarou, P.P. Fatouros, P. Barzo // J. Neurosurg. 2000. - Vol. 93, № 2. - P. 183- 193.

106. Morales M.L Cottrell Handbook of neuroanesthesia / M.I. Morales, J. Pittman, E. James. Lippinkott Williams & Wilkins, 2007. - 256 p.

107. Muir K.W. Why have neuroprotectants failed?: Lessons learned from stroke trials / K.W. Muir, P.A. Teal // J. Neurol. 2005. - Vol. 252, № 9. - P. 1011-1020.

108. Nedergaard M. Role of glial cells in cerebral ischemia / M. Nedergaard, U. Dirnagl // Glia. -2005. Vol. 50, № 4. - P. 281-286.

109. Nedergaard M. Role of glial cells in cerebral ischemia / M. Nedergaard, U. Dirnagl // Glia. -2005. Vol. 50, № 4. - P. 281-286.

110. New goals in ischemic stroke therapy. The experimental approach — harmonizing science with practice / M. Alonso de Lecinana et al. // Cerebrovasc. Dis. 2005. - Vol. 20, (suppl. 2). - P. 159-168.

111. Nguyen-Huynh M.N. Transient ischemic attack: a neurologic emergency / M.N. Nguyen-Huynh, S.C. Johnston // Curr. Neurol. Neurosci. Rep. — 2005.-Vol. 5, № 1. P. 13-20.

112. Non-pharmacological neuroprotection: Role of emergency Stroke Management / R. Leira et al. // Cerebrovasc. Dieases. 2006. — Vol. 21, (suppl. 2).-P. 89-99.

113. Oral citicoline in acute ischemic stroke: an individual patient data pooling analysis of clinical trials / A. Davalos et al. // Stroke. 2002. - Vol. 33. -P. 2850-2857.

114. Owen N. Natural killer cell and proinflammatory cytokine responses to mental stress: associations with heart rate and heart rate variability / N. Owen, A. Steptoe // Biol. Psychol. 2003. - Vol. 63, № 2. - P. 101-115.

115. Oxyhemoglobin produces necrosis, not apoptosis, in astrocytes / S. Rollins et al. // Brain Res. 2002. - Vol. 945, № 1. - P. 41-49.

116. Pang Z. Mechanisms of cell death induced by the mitochondrial toxin 3-nitropropionic acid: acute excitotoxic necrosis and delayed apoptosis / Z. Pang, J.W. Geddes // J. Neurosci. 1997. - Vol. 17, № 9. - P. 3064-3073.

117. Panickar K.S. Astrocytes in cerebral ischemic injury: morphological and general considerations /K.S. Panickar, M.D. Norenberg // Glia. 2005. -Vol. 50, № 4. - P. 287-298.

118. Panickar K.S. Astrocytes in cerebral ischemic injury: morphological and general considerations / K.S. Panickar, M.D. Norenberg // Glia. — 2005. -Vol. 50, № 4. P. 287-298.

119. Paxinos G. The rat brain in stereotaxic coordinates / G. Paxinos, Ch.A. Watson. Toronto : Acad. Press, 1982. - 90 p.

120. A phase III randomized efficacy trial of 2000 mg citicoline in acute ischemic stroke patients / W.M. Clark et al. // Neurology. 2001. - Vol. 57.-P. 1595-1602.

121. Phillis J.W. A potentially critical role of phospholipases in central nervous system ischemic, traumatic, and neurodegenerative disorders / J.W. Phillis, M.H. O'Regan // Brain Res. Brain Res. Rev. 2004. - Vol. 44, № 1. - P. 13-47.

122. Phillis J.W. The role of phospholipases, cyclooxygenases, and lipoxygenases in cerebral ischemic/traumatic injuries / J.W. Phillis, M.H. O'Regan // Crit. Rev. Neurobiol. 2003. - Vol. 15, № 1. - P. 61-90.

123. Phospholipase A2 in the central nervous system: implications for neurodegenerative diseases / G.Y. Sun et al. // J. Lipid Res. 2004. - Vol. 45, №2.-P. 205-213.

124. Piracetam for acute ischaemic stroke / S. Ricci et al. // Cochrane Database Syst Rev. 2006. - Vol. 19, № 2. - CD000419.

125. Pisani A. Calcium signaling and neuronal vulnerability to ischemia in the striatum / A. Pisani, P. Bonsi, P. Calabresi // Cell Calcium. 2004. - Vol. 36, №3-4.-P. 277-284.

126. Plesnila N. Role of mitochondrial proteins for neuronal cell death after focal cerebral ischemia / N. Plesnila // Acta Neurochir. Suppl. 2004. — Vol. 89.-P. 15-19.1. Л I

127. Pringle A.K. In, out, shake it all about: elevation of Ca .i during acute cerebral ischaemia / A.K. Pringle // Pringle // Cell Calcium. 2004. - Vol. 36,№3-4.-P. 235-245.

128. Protection against ischemic brain injury by inhibition of mitochondrial oxidative stress / G. Fiskum et al. // J. Bioenerg. Biomembr. 2004. -Vol. 36, № 4. - P. 347-352.

129. Protection with lubeluzole against delayed ischemic brain damage in rats. (A quantitative histopathologic study) / M. Haseldonckx et al. // Stroke. — 1997. Vol. 28. - P. 428-432.

130. Rao A.M. CDP-choline: neuroprotection in transient forebrain ischemia of gerbils / A.M. Rao, J.F. Hatcher, RJ. Dempsey // J. Neurosci. Res. 1999. -Vol. 58.-P. 697-705.

131. Rosenberg G.A. Ichemie brain edema / G.A. Rosenberg // Prog. Cardiovasc. Dis. 1999. - Vol. 42, № 33. - P. 209-216.

132. Saver J. Choline precursors in acute and subacute stroke: a meta-analysis / J. Saver, J. Wilterdink // Stroke. 2002. - Vol. 33. - P.353.

133. Selim M.H. The role of iron neurotoxicity in ischemic stroke / M.H. Selim, R.R. Ratan // Ageing Res Rev. 2004. - Vol. 3, № 3. - P. 345-353.

134. Semchenko V.V., Stepanov S.S., Akulinin V.A. Structural basis of information capacity changes of sensory-motor cerebral cortex of rat brain during postresuscitation period // Resuscitation. — 1996 V.31. - P. 151158.

135. Serial MRI after transient focal cerebral ischemia in rats / T. Neumann-Haefelin et al. // Stroke. 2000. - Vol. 31. - P. 1965-1970.

136. Synaptic plasticity in the ischaemic brain / P. Calabresi et al. // Lancet Neurol. 2003. - Vol. 2, № 10. - P. 622-629.

137. A systematic review of the associations between age and sex and the operative risks of carotid endarterectomy / R. Bond et al. // Cerebrovasc. Dis. 2005. - Vol. 20, № 2. - P. 69-77.

138. Taoufik E. Ischemic neuronal damage / E. Taoufik, L. Probert // Curr. Pharm. Des. 2008. - Vol.14, № 33. - P. 3565-3573.0.4138. Tauskela J.S. On the role of Ca in cerebral ischemic preconditioning / J.S.

139. Tauskela, P. Morley // Cell Calcium. 2004. - Vol. 36, № 3-4. - P. 313322.

140. Time trends in the published risks of stroke and death due to endarterectomy for symptomatic carotid stenosis / Bond R. et al. // Cerebrovasc. Dis. 2004. - Vol. 18, № 1. - P. 37-46.1. J62

141. Treatment of acute cerebral infarction with a choline precursor in a multicenter double-blind placebo-controlled study / Y. Tazaki et al. // Stroke. 1988. - Vol. 19, № 2. - P. 211-216.

142. Trendelenburg G. Neuroprotective role of astrocytes in cerebral ischemia: focus on ischemic preconditioning / G. Trendelenburg, U. Dirnagl // Glia. -2005. Vol. 50, № 4. - P. 307-320.

143. Turley K.R. Molecular mechanisms in the pathogenesis and treatment of acute ischemic stroke / K.R. Turley, L.H. Toledo-Pereyra, R.U. Kothari // J. Invest. Surg. 2005. - Vol. 18, № 4. - P. 207-218.

144. Weinstein P.R. Molecular identification of the ischemic penumbra / P.R. Weinstein, S. Hong, F.R. Sharp // Stroke. 2004. - Vol. 35. - P. 26662670.

145. Zhang F. Apoptosis in cerebral ischemia: executional and regulatory signaling mechanisms / F. Zhang, W. Yin, J. Chen // Neurol. Res. — 2004. — Vol. 26, №8.-P. 835-845.

146. Zheng Z. Post-ischemic inflammation: molecular mechanisms and therapeutic implications / Z. Zheng, M.A. Yenari // Neurol. Res. 2004. -Vol. 26, № 8. - P. 884-892.

147. Zweiflern R.M. Membrane stabilizer. Citicoline / R.M. Zweiflern // Cur. Med. Res. Op. -2002. Vol.18, (suppl. 2). - P. 14-17.