Морфологическая характеристика яичников морских свинок в экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса

Шевлягина, Наталья Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфологическая характеристика яичников морских свинок в экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфологическая характеристика яичников морских свинок в экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса"

На правах рукописи

ШЕВЛЯГИНА Наталья Владимировна

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЯИЧНИКОВ МОРСКИХ СВИНОК В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ РЕЦИДИВИРУЮЩЕГО ГЕНИТАЛЬНОГО ГЕРПЕСА

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

00344Э5ЭЭ

003449599

Работа выполнена в Государственном Учреждении Научно-Исследовательском Институте Эпидемиологии и Микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи

Российской Академии Медицинских Наук

Научный руководитель: доктор медицинских наук, член-корр.РАМН, профессор Боровая Татьяна Геннадьевна

Научный консультант: доктор медицинских наук

Диденко Любовь Васильевна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Автандилов Георгий Герасимович

доктор медицинских наук, профессор Яглов Валентин Васильевич

Ведущая организация:

Военно-медицинская академия им С.М. Кирова

Защита диссертации состоится 2008 г. в часов

на заседании диссертационного совета Д 212 203.08 при ГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г Москва, ул. Миклухо-Маклая, 8

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу 117198, г Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6

Автореферат разослан "

/ 200 / г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

Саврова Ольга Борисовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

В настоящее время в России возросла частота встречаемости женского бесплодия, патологии и невынашивания беременности (Кулаков В.А 2004, Кузьменко Е.Т., 2008) Современные темпы прироста населения России по определенным причинам настолько снизились, что задача повышения рождаемости выросла в ранг актуальной медико-социальной проблемы

Факторами, способными оказать негативное влияние на женскую репродуктивную функцию, являются: алкоголизм, курение, наркомания, стрессы, снижение иммунитета (Айламазян Э К. 1996,2000, Сухих Г.Т, Вакько Л В, 1997, Серов В.Н., Пауков СВ. 1998, Малышева 3 В. 2000) Роль вирусных инфекций на этапах онтогенетического развития яичников, в том числе внутриутробном, когда происходит становление овогенеза и его первый ответственный этап - профаза 1-го деления мейоза, у человека не изучена.

Современные научные исследования сосредоточены в основном на изучении внутриовариальных и интрафолликулярных механизмов регуляции фолликулогенеза, поскольку данные механизмы играют ведущую роль в селекции половых клеток для овуляции, модулируя центральные нейро-гуморальные сигналы, воздействующие на яичники (Вихляева Е.М 1997) Исследований, посвященных изучению роли вирусных инфекций (в том числе - герпес-вирусной инфекции) в развитии женского бесплодия, сравнительно немного, и такие важные вопросы как структурно-функциональное состояние яичников, качество фолликулогенеза и селекции половых клеток для овуляции, состояние центральной и внутрияичниковой регуляции фолликулогенеза при герпес-вирусной инфекции практически не решены.

Вирус простого герпеса 2-го типа (ВПГ-2), входящий в семейство НегреБУтйае, является нейро- и эпителиотропным (Исаков В А. Рыбалкин С.Б. Романцов М Г. 2006), в связи с чем вполне возможно его направленное негативное влияние на гистофизиологию яичников, в осуществлении которой эпителиальные тканевые производные играют ведущую роль.

ВПГ-2 является этиологическим фактором генитального герпеса, занимающего по данным ВОЗ третье место среди инфекций, передающихся половым путем (Тарасова Л А., Сорокина Н.С, Лагутина Г.Н 1999). В России генитальным герпесом страдает 6-10% населения (Исаков В А. Рыбалкин С.Б. Романцов М.Г. 2006). Помимо риска

инфицирования плода во время беременности и родов, ВПГ-2 может поражать органы малого таза, в том числе - яичники, матку и маточные трубы (Молочков В. А . 2005), однако персистенция ВПГ-2 в клетках этих органов остается недоказанной

Все вышеизложенное определяет актуальность изучения герпес-вирусной инфекции в проблеме репродукции и является основой выбора цели и задач настоящего исследования.

Цель исследования - изучить морфо-функциональное состояние яичников морских свинок в экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса

Задачи:

1. Провести сравнительный морфологический и количественный анализ процессов фолликулогенеза и атрезии в яичниках интакгных морских свинок и животных в периоды ремиссии и обострения генитального герпеса;

2. Выявить особенности атрезии фолликулов в условиях генитального герпеса;

3. Дать оценку ультраструктурной организации овоцитов и соматических клеток фолликулов на разных стадиях развития (и атрезии) в норме и эксперименте;

4. Оценить состояние стромального компонента яичников в условиях влияния вируса простого герпеса 2-го типа;

5. Выявить характер реактивных изменений внутриовариальной сети в модели генитального герпеса,

6. Произвести иммуноцитохимическую детекцию антигенов вируса простого герпеса 2-го типа в фолликулах и строме яичников животных с рецидивирующим генитальным герпесом.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса в яичниках морских свинок возникают нарушения фолликулогенеза и селекции доминантных фолликулов;

2. Наиболее выраженные изменения фолликулогенеза происходят при обострении генитального герпеса по сравнению с периодом ремиссии;

3. Атретический процесс в условиях действия ВПГ-2 имеет специфические проявления, отличающие его от физиологической атрезии,

4. ВПГ-2 персистируег в соматических клетках атретических фолликулов, эпителии внутриовариальной сети, фибробластах;

5. Выявленные реактивные изменения яичников в виде активации атрезии и кистообразования фолликулов, структурно-функциональных изменений стромы и внутриовариальной сети являются следствием действия ВПГ-2 и лежат в основе ановуляции в экспериментальной модели генитального герпеса.

Научная новизна

Впервые проведено исследование гистофизиологических особенностей яичников половозрелых морских свинок в экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса.

Получена новая информация о состоянии фсшликулогенеза, структурном статусе стромы яичников и изменениях интраовариальной сети у инфицированных морских свинок в периоды ремиссии и обострения герпетической инфекции. Получены свидетельства активации гибели овариальных фолликулов на всех стадиях развития и выявлены существенные отличия атретического процесса у инфицированных животных от гистологических и ультраструктурных параметров физиологической атрезии.

Полученные результаты иммуноцитохимической детекции антигенов ВПГ-2 позволили впервые определить его клеточные и субклеточные мишени в яичнике и подтвердить причинно-следственную связь между ВПГ-2 и результатами гистологического исследования гонад.

Практическая значимость

Использованная в диссертационной работе экспериментальная модель рецидивирующей генитальной герпес-вирусной инфекции у морских свинок может применяться в исследованиях системы репродукции при ВПГ-2-инфекции, а также при проведении доклинических испытаний фармакологических препаратов, предназначенных для лечения и профилактики герпес-вирусных инфекций.

Выявленные изменения тканевых и клеточных систем яичников у подопытных морских свинок могут служить базисом для дальнейших научных исследований герпес-вирусных инфекций в этио-патогенезе женского бесплодия

Апробация и внедрение результатов

Результаты исследования доложены на 2-м Международном молодежном медицинском конгрессе "Санкт-Петербургские научные чтения-2007'; 2-й Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2008); 14-й

конференции "Актуальные проблемы патофизиологии" (С-Пегербург, 2008), 22-й конференции по электронной микроскопии (Черноголовка, 2008); 50-м Международном Симпозиуме по гистохимии (Швейцария, Интерлейкен, 2008).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, из них 4 - в центральной печати.

Объем диссертации

Диссертация состоит из введения, 4-х глав: обзор литературы, материалы и методы, результаты исследования, обсуждение и выводов; изложена на И1 страницах машинописного текста. Материалы иллюстрированы 5 таблицами и 43 рисунками. Библиографический указатель содержит 234 источников; из них 86 отечественных и 148 зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Для создания экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса в качестве лабораторных животных были использованы морские свинки, весом 450-500г, которые были получены из центрального вивария ГУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН. Экспериментальная модель рецидивирующего генитального герпеса (81апЬеггу Ь.И. 1982) создана сотрудником лаборатории цитокинов к.б.н. А М. Ивановой под руководством зав лаб. цитокинов д б н. А.Н. Наровлянского

Все исследования на животных выполнены в соответствии с "Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных" (Приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.1977), а также с "Международными правилами использования животных в экспериментах" (1991).

Работа с животными и их интравагинальное инфицирование ВПГ-2 проводились с соблюдением правил противовирусной безопасности.

Для инфицирования животных использовали штамм МБ вируса простого герпеса 2-го типа в концентрации 10 РРи, в дозе 0,1 мл (81апЬепу Ь.Я. 1989).

Обострение рецидивирующего генитального герпеса у морских свинок достигалось путем общего однократного 10-минутного ультрафиолетового облучения морских свинок (51алЬеггу Ь.И 1989) с использованием ультрафиолетовой лампы (60 Вт)

Взятие материала производили от животных, получивших передозировку паров хлороформа

Объектом исследования служили ISO яичников морских свинок. Экспериментальные группы Для изучения изменений в яичниках под влиянием ВПГ-2 типа в условиях in vivo нами использована модель рецидивирующего гениального герпеса как экспериментальный эквивалент хронического инфекционного процесса у человека

Свидетельством того, что генитальный герпес у морских свинок приобрел хроническую рецидивирующую форму было периодическое появление у животных характерных мелковезикулярных высыпаний на гиперемированных и отечных наружных гениталиях

Морские свинки были распределены на 3 группы 1-я группа (контроль) состояла из интакгных половозрелых самок морских свинок (пЗО), которые содержались изолированно от инфицированных животных,

во 2-ю группу входили половозрелые самки (пЗО), инфицированные ВПГ-2, и находящиеся в стадии ремиссии рецидивирующего генитального герпеса;

3-ю группу составили инфицированные ВПГ-2 типа половозрелые самки морских свинок (пЗО) в стадии обострения рецидивирующего генитального герпеса

У всех морских свинок забирались вагинальные мазки для определения фазы эстрального цикла. Мазки окрашивали 1% раствором метиленовой сини и микроскопировали.

Методы исследования

Для решения поставленных задач использованы методы'

- световой микроскопии серийных гистологических срезов яичников;

- трансмиссионной электронной микроскопии ультратонких срезов яичников;

- метод морфометрии;

- иммуноцитохимический метод

Для светооптического исследования яичники морских свинок фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, дегидратировали в батарее спиртов восходящей концентрации и ксилоле, заливали в парафиновые блоки. Готовили серийные срезы толщиной 5 мкм, окрашивали гематоксилином и эозином.

Морфометрический анализ основывался на фундаментальных работах Автандилова Г.Г. (1969, 1973, 1989, 2000), Стефанова С.Б. (1974) и заключался в маркировании и подсчете фолликулов на компьютерных изображениях серийных

срезов яичников. Определялось общее содержание фолликулов в яичниках, процентное соотношение здоровых и агретических фолликулов по стадиям развития В качестве критериев инициации атрезии применялся критерий численности пикнотичесхих ядер фолликулярных эпителиоцитов в срезах фолликула (A.Hiershfield,1973).

Для оценки степени активности атретического процесса нами предложен индекс атрезии фолликулов, который вычислялся как отношение количества всех атретических форм фолликулов к общему числу фолликулов, присутствующих в яичнике

Морфометрировапся каждый пятый срез яичников; увеличения микроскопа варьировали в зависимости от величины измеряемого объекта. При подсчете примордиальных и первичных однослойных фолликулов общее увеличение микроскопа составляло - х400; первичных многослойных фолликулов - х200; вторичных фолликулов - х100.

Подсчитывали» также общая площадь яичников и площадь кистозного комплекса яичников (совокупности фолликулярных кист и кист из канальцев внутриовариальной сети), определялось их соотношение. Измерения производили с помощью микрометрической сетки с шагом 1,25 мм. Площадь одного малого квадрата сетки при общем увеличении микроскопа х 32 была равна 0,0488 кв.мм. Общая площадь яичника и кистозного комплекса вычислялась как произведение количества малых квадратов, приходившихся, соответственно, на весь яичник и кистозный комплекс на известную площадь.

Светооптический анализ и фотосъемку гистологических препаратов производили с помощью микроскопа "Axiostai plus" (фирма "ZEISS") с набором объективов 3,2х, Юх, 20х, 4 Ох, ЮОх

Для ультраструктурного анализа использован метод трансмиссионной электронной микроскопии

Яичники морских свинок префиксировали по методу Ито-Карновски (Уикли Б С. 1975), отмывали в какодилатном буфере, дофиксировали в 1% растворе 0s04 в течение 1 часа с последующей отмывкой в какодилатном и малеатном буферах и дальнейшей обработкой 1% раствором уранилацетата. После дегидратации в спиртах восходящей концентрации материал заливали в метакрилатную смолу LR White. На ультрагоме LKB-I11 готовили полутонкие срезы, которые окрашивали 1% раствором метиленовой сини и буры. На полутонких срезах определяли участки для прицельной заточки Ультратонкие срезы (300-500А) контрастировали 1% раствором уранилацетата и цитрата свинца по методу Рейнольдса (Уикли Б.С. 1975).

Детекция вируса простого герпеса 2-го типа в клетках яичников производилась с помощью непрямой иммуноцитохимической реакции с использованием поликлональных кроличьих антител к ВПГ-2 (НПФ "ЛабДиагностика"). Готовые неконграстированные ультратонкие срезы на медных сетках промывали 10 в дистиллированной воде и 30 ' инкубировали в 5% растворе нормальной сыворотки (бычий сывороточный альбумин). В течение последующих 2-х часов сетки инкубировали с антителами к ВПГ-2 в термостате при температуре 37 "С. Для контроля неспецифического связывания антител отдельные сетки были оставлены в 5% растворе нормальной сыворотки на 2 часа при комнатной температуре. Далее сетки промывались в фосфатном буфере 2 раза по 15*, после чего ультратонкие срезы инкубировали с кроличьими антителами, коньюгированными золотом (10нм) в течение 1 часа с последующей промывкой в фосфатном буфере (2 раза по 15 ). Ультрагонкие срезы в течение 10 ' фиксировали в растворе Ито-Карновски, промывали в дистиллированной воде 5 и контрастировали 15 в 1% спиртовом растворе уранилацетата и 4 - в растворе цитрата свинца. После проведения иммуноцитохимической реакции ультратонкие срезы анализировали с помощью трансмиссионного электронного микроскопа JEM-100B при инструментальном увеличении в диапазоне от 15000 до 40000.

Все полученные данные подвергались статистической обработке с помощью IBM PC и компьютерной программы "Statistica 6,0". Учитывались и анализировались следующие основные параметры: среднее арифметическое значение (М), ошибка среднего арифметического значения (±ш) и среднее квадратичное отклонение (±с) Оценка достоверности различий сравниваемых показателей проводилась с использованием t - критерия Сгьюдента, когда распределение подчинялось нормальному закону, и непараметрических критериев (Вилкоксона, Манна-Уитни) - в случаях выборки п < 30.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Проведенный морфометрический анализ яичников контрольных и подопытных животных выявил существенное уменьшение общего числа овариальных фолликулов во 2-й и 3-й группах по сравнению с контролем (табл. 1).

Тк. уменьшение численности фолликулов было достоверно большим в 3-й группе (период активации генитального герпеса) по сравнению со 2-й группой (период ремиссии генитального герпеса), это указывало на связь между присутствием и

активностью ВПГ-2 в организме животных и зарегистрированным сокращением популяции фолликулов в их яичниках.

Таблица /. Содержание фолликулов разных стадий развития и индекс атрезии фалли/рлое « яичниках морских свинок 1-й, 2-й и 3-й групп__

Стадии развития фолликулов 1-я группа (контроль) п^ЗО 2-я группа (ремиссия ИТ) п-30 3-я группа (обострение ИТ) п-30

М + т а М+т а М + ш о

Примордиальные Здоровые 107,22 + 0,51 2,83 33,04+0,54 ¡<0,001 3,09 0,06+0,06 Р2,Э<),05 0.25

Атретические 985,5 + 2,42 13,26 354,21+0,9 >,.¡<0,001 5,14 243,34+0,68 Р2,30,05 2,64

Первичные однослойные Здоровые 68,07 + 0,30 1,65 13Д4+0.12 р,.2<0,001 0,70 0,00

Атрегические 118,38 + 0,54 2,95 53 Д0+0,11 1, ,<0,001 0,67 56,03+ 0,25 Р2,3<0,01 0,99

Первичные многослойные Здоровые 121,08+0,41 2,26 12,11+0,10 >,.¡<0,001 0,60 0,00

Атретические 78,76+0,35 1,94 26,05+0,17 >,.¡<0,001 0,99 30,03+ 0,21 Р2.30.05 0,84

Вторичные Здоровые 7,25 ± 0,5 2,93 4± 1,4 >,.,<0.001 5,65 0,00

Атретические 27,5 ± 0,6 2,98 19, 75 ±0,95 >,.¡<0,001 5,5 7,25+ 1,25 Р2,3<0,05 5.4

Третичные Здоровые 4,01 ± 0,6 2,96 0,00 0,00

Атретаческие 0,00 0,00 0,00

Индекс атрезии фолликулов: 0,7»± 0,04 0,87*0,02 0,99±0,01

Примечание р - достоверность различий между группами по 1- критерию

При обзорном микроскопическом анализе гистологических препаратов яичников морских свинок, инфицированных ВПГ-2, как во 2-й, так и в 3-й группах, было обнаружено присутствие фолликулов всех стадий развития за исключением преовуляторных Это позволило сделать заключение, что фолликулогенез при герпес-вирусной инфекции сохраняется, но является незавершенным (ановулягорным) как в период обострения, так и в период ремиссии.

Сокращение общей численности фолликулов в яичниках инфицированных морских свинок происходило по причине активации гибели (атрезии) фолликулов Индексы атрезии во 2-й и 3-й группах оказались значительно более высокими, чем в контроле. Максимальный индекс атрезии отмечен в группе животных в период обострения гениталыюго герпеса - 0,99 (контроль - 0,79, 2-я группа - 0,87)

По данным литературы [Китаев Э М 1995, Abir К , Fisch В 2004, Arraztoa J А, Zhou J , Marcu D 2005] физиологической атрезии чаще подвергаются фолликулы гонадотропин-зависимых стадий развития, из числа которых происходит селекция преовуляторных (доминантных) фолликулов В яичниках инфицированных морских свинок одинаково часто встречались атретические формы фолликулов как гонадотропин-зависимых, так и гонадотропин-независимых стадий развития Поскольку основной причиной инициации атрезии (Rosenfield R L. 1997) считается недостаток фоллитропина в гистионе фолликула (а фолликулы гонадотропин-независимых стадий от влияния этого гормона, как полагают, свободны), зарегистрированные нами высокие показатели атрезии ранних форм фолликулов свидетельствуют в негативном влиянии на них ВПГ-2

Более обоснованное заключение о возможности непосредственного влияния ВПГ-2 на фолликулогенез нам позволили сделать результаты проведенной непрямой иммуноцитохимической реакции на выявление антигенов ВПГ-2 Включение специфической иммунохимической метки на антигены вируса было обнаружено в фолликулярных эпителиоцитах и текапьных клетках атретических фолликулов разных стадий развития.

Проведенный подсчет среднего содержания здоровых фолликулов по стадиям развития показал, что в яичниках 2-й группы (ремиссия генитального герпеса) содержание здоровых примордиальных фолликулов снижено по сравнению с контролем, приблизительно, в 3 раза и составляет 33,04 на яичник (контроль - 107,22), первичных однослойных - в 5 раз и составляет 13,24 на яичник (контроль - 68,07), первичных многослойных - в 10 раз (12,11 на яичник, контроль - 121,08), вторичных, приблизительно, в 2 раза (4 на яичник, контроль — 7,25) (см табл.1, рис 1, 2, 3)

В яичниках морских свинок 3-й группы (обострение герпес-вирусной инфекции) практически все фолликулы имели в разной степени выраженные признаки атрезии (от единичных пикнотических ядер в фолликулярном эпителии до глубоких деструктивных изменений оболочек фолликулов и овоцитов) Здоровыми по свегооптическим и ультраструктурным признакам в этой группе были единичные примордиальные фолликулы

Рис. I. Общее количество, соотношение содержания здоровых и атретических примордиальных фолликулов в яичниках животных контрольной и экспериментальных групп

Рис. 2. Общее количество, соотношение содержания здоровых и атретических первичных (однослойных и многослойных) фолликулов в яичниках морских свинок контрольной и экспериментальных групп

ш 450 о

5, 400 г

с 350 с

4 300 а>

| 250

| 200 8

5 150

8 юо

I 50

1-я группа 2-я группа 3-я группа

0 атретические

фолликулы □ здоровые фолликулы_

Рис. .?. Общее количество, соотношение содержания здоровых и атретических вторичных фолликулов в яичниках животных контрольной и экспериментальных групп

□ атретические фолликулы

□ здоровые фолликулы

1-я группа 2-я группа 3-я группа

При светооптическом и ультраструктурном анализе атретических фолликулов животных контрольной и экспериментальных групп обнаружены следующие качественные отличия атретического процесса в условиях действия ВПГ-2 от физиологической агрезии.

В структуре примордиальных атретических фолликулов животных 2-3-й групп регистрировались следующие изменения: набухание (отек) цитоплазмы

фолликулярных клеток, маргинация хроматина на фоне просветления (хроматолиза) центральных частей ядер. Эти изменения не типичны для физиологической дегенерационной атрезии примордиальных фолликулов, когда происходят пикноз ядер и редукция цитоплазмы фолликулярных клеток (Byskov A.G 1974, Bredesen N. 1994).

На ультраструктурном уровне фолликулярные клетки примордиальных фолликулов подопытных морских свинок имели электронносветлый (отечный) цитозоль с небольшим содержанием разрушенных мембранных органелл и атипичными включениями, указывающими на присутствие вируса (Соловьев В.Д. Хесин Я.Е.. Быковский А.Ф. 1979. Browne Н.. Bruun В.. Minson Т. 2001). В деструктивно измененных митохондриях, а также в ядрах фолликулярных эпителиоцитов определялась иммуноцитохимическая метка на антигены ВПГ-2. Обнаруженная интрамитохондриальная локализация метки указывает на тропность ВПГ-2 не только к ДИК ядер, но и к ДНК митохондрий фолликулоцитов и возможное использование вирусами митохондриальной ДНК для поддержания собственных жизненных процессов. В ядрах эпителиоцитов атретических примордиальных фолликулов наблюдались расширения поровых комплексов и признаки хроматолиза на фоне

? 35 I 30

•в- „„

маргинашш хроматина у внутренней поверхности нуклеолеммы. Обнаруженные нами ультраструктурные признаки соответствуют описываемым в литературе внутриклеточным проявлениям цитопатического эффекта вирусов (Соловьев В.Д, Хесин Я Е , Быковский А Ф 1979, Herold В С., Gerber S. 1, 1996, Lee G Е„ Murray J W„ 2006).

В овоцитах примордиальных атретических фолликулов выявлены деструкция органелл, пикноз ядер, нарушение целостности ядерных оболочек.

Светооптические и ультраструктурные признаки атрезии первичных однослойных фолликулов у животных 2-й и 3-й групп были практически идентичны таковым в примордиальных фолликулах - резко вакуолизированные (отечные) фолликулярные эпителиоциты с признаками маргинации хроматина, хроматолиза и атипичными включениями. Овоциты этих фолликулов, хотя и увеличивались в объеме по сравнению с овоцитами примордиальных фолликулов (т.е. вступили в стадию большого роста), но были деформированными, значительно более оксифильными, чем в контроле и содержали деструктивно измененные органеллы Специфическая иммуноцитохимическая метка на антигены ВПГ-2 обнаруживалась в эпителиальных клетках фолликулов

Отличительными светооптическими признаками атрезии первичных многослойных фолликулов явились, выраженная диссоциация клеток фолликулярного эпителия и раннее прекращение митозов фолликулярных эпителиоцитов. Митозы эпителиоцитов отсутствовали уже на ранних стадиях атрезии, в то время как в норме на ранних стадиях атрезии митозы еще происходят. Регистрировались отек цитоплазмы фолликулярных эпителиоцитов, хроматолиз и маргинация хроматина эпителиоцитов и текацитов, атипичные включения в цитоплазме указанных типов клеток

Перечисленные признаки не характерны для физиологической атрезии и практически полностью соответствуют описываемым в литературе характеристикам цитопатического действия вирусов (Соловьев В Д, Хесин Я.Е., Быковский А Ф. 1979, Lee G. Е„ Murray J. W„ 2006).

Ключевой особенностью атретических форм вторичных (пометных) фолликулов являлась ранняя дезорганизация фолликулярного эпителия и его массовая инфильтрация лейкоцитами. Одновременно с деструкцией фолликулярных эпителиоцитов наблюдалась гипертрофия клеток внутренней теки с маргинацией хроматина и просветлением цитозоля текацитов, а также расширение кровеносных сосудов в текальной области и прилежащих к фолликулам участках стромы яичника. Вокруг атретических вторичных фолликулов формировались широкие слои

коллагеновых волокон. В большинстве вторичных атретических фолликулов (особенно при обострении гениталыюго герпеса) фолликулярный эпителий полностью исчезал, и фолликулы превращались в полости (кисты), содержащие остатки клеточного детрита и массы лейкоцитов. От стромальной части яичника полости кист были отграничены базалыюй мембраной и гипертрофированной текой Цитоплазма текацитов кист выглядела резко просветленной, набухшей (отек), ядра имели вид часовых стекол из-за маргинации хроматина. На ультраструктурном уровне в клетках фолликулярного эпителия и теки вторичных атретических фолликулов присутствовали разные количества деструктивно измененных органелл, атипичные включения, описываемые в литературе как характерные для присутствия вирусных антигенов (Соловьев В Д, Хесин Я Е , Быковский А Ф. 1979, Lee G Е, Murray J W, 2006), а также позитивная иммуноцитохимическая реакция на антигены ВПГ-2.

В норме атрезия первичных многослойных и вторичных фолликулов протекает по пути апоптоза фолликулярных эпителиоцитов и гипертрофии теки Физиологическая атрезия вторичных фолликулов не сопровождается массовой лейкоцитарной инфильтрацией фолликулярного эпителия, как это имеет место при атрезии вторичных фолликулов в условиях действия ВПГ-2. В норме деструкция фолликулярного эпителия происходит достаточно постепенно и разрушающиеся клетки эпителия утилизируются макрофагами, проникающими в фолликул из окружающей интерстициальной ткани и крови, а также отдельными фолликулоцитами, приобретающими способность к микрофагоцитозу (Боровая Т.Г, Волкова О В. 1995).

В фолликулярном эпителии вторичных фолликулов 2-й и 3-й групп одновременно были представлены два процесса - разрушение эпителиального пласта и выраженная инфильтрация стенок фолликулов лейкоцитами. Последнее, очевидно, можно расценивать как проявление местной иммунной реакции органа в ответ на инфицирование Лейкоцитарная реакция проявляется на стадии вторичных фолликулов, очевидно, потому, что фолликулы этой стадии развития имеют хорошую региональную систему кровоснабжения и характеризуются достаточно высокой степенью проницаемости сосудов и оболочек Отмеченное утолщение парафолликулярного слоя коллагеновых волокон в регионах атретических вторичных фолликулов животных обеих экспериментальных групп мы также связываем с реактивным ответом фибробластов наружной теки и прилегающей к фолликулу стромы, направленным на изоляцию фолликулов, "пораженных вирусом"

Овоциты вторичных фолликулов животных 2-й и 3-й групп значительно чаще, чем в контроле, спонтанно реинициировали мейоз и вступали в процесс псевдодробления В норме в яичниках морских свинок преждевременная спонтанная реинициация мейоза встречается достаточно редко (Byskov A.G 1974, Курилло Л.Ф 1980). Причиной начала псевдодробления овоцитов вторичных фолликулов у подопытных морских свинок могло стать влияние ВПГ-2, т.к. специфическая метка на его антигены была нами обнаружена в ядрах и митохондриях фолликулярных клеток, прилегающих к овоциту. Внедрение чужеродного агента (вируса) в ядерный аппарат этих клеток могло спровоцировать досрочную реинициацию мейоза и начало псевдодробления овоцитов В норме блок мейоза половых клеток (вплоть до овуляции) поддерживается биологически активными факторами, синтезируемыми фолликулярными клетками, окружающими овоцит и, частично, - самим овоцитом (Byskov AG 1974, Курилло ЛФ 1980, Nelson LR, Bulun S.E 2001, Lan ZJ„ Gu P, 2003)

В яичниках контрольных морских свинок присутствовали два типа кист -фолликулярные и серозные, отличающиеся по строению стенки, локализации в яичнике и происхождению В стенках немногочисленных фолликулярных кист (производных вторичных фолликулов) эпителиоциты формировали один или несколько слоев, снаружи к ним прилежала истонченная текальная оболочка с вакуолизированными. клетками Хотя в составе таких кист редко обнаруживались остатки овоцитов, указанных признаков достаточно, чтобы говорить о их фолликулярном происхождении. Для строения стенок серозных кист было характерным присутствие двух видов клеток - цилиндрических реснитчатых и мелких малодифференцированных эпителиоцитов с крупными ядрами, расположенных, как и реснитчатые клетки, на базальной мембране Реснитчатые клетки являются главным "индикатором" принадлежности данных кист к системе интраовариальной сети (Byskov A. G, Skakkebaek N. Е., 1973, Byskov AG., Lintern-Moore S 1977). После согласования полученных результатов с данными литературы (Campion С.Е, Trewin А, 1987, Keller L S , Gnffith J W, 1996) мы убедились, что присутствие единичных фолликулярных и серозных кист в яичниках интактных морских свинок является физиологическим.

Однако в отличие от контроля фолликулярные и серозные кисты в яичниках инфицированных животных 2-й и 3-й групп были множественными, занимали значительную площадь, и часто, (особенно серозные кисты), имели истонченную напряженную стенку. В серозных кистах эпителиальную выстилку образовывали уплощенные клетки, и лишь в отдельных эпителиоцитах сохранялись реснички. При

ультраструктурном анализе в эпителиальных клетках фолликулярных и серозных кист обнаруживалась иммуноцитохимическая метка на антигены ВПГ-2

Некоторые фолликулярные и серозные кисты полностью утрачивали эпителиальную выстилку - их отграничивали только базальные мембраны.

Вокруг более мелких серозных кист у инфицированных свинок часто формировались широкие слои коллагеновых волокон, что можно расценить как реакцию фибробластов, направленную на изоляцию кистозно-измененных канальцев сети от овариальных тканей. В окружении крупных кистозных многокамерных полостей инфицированных животных практически не было соединительнотканных прослоек, и тонкие стенки кист располагались вплотную к сосудам В эпителии серозных кист подопытных животных присутствовали округлые клетки со светлой набухшей цитоплазмой и плотными ядрами Они имели вид "глазков", по всей вероятности, из-за внутриклеточного отека и/или активного трансцеллюлярного транспорта жидкости Нередко к стенкам серозных кист вплотную прилежали расширенные и переполненные кровью сосуды, отмечался диапедез эритроцитов и лейкоцитов в паравазальные пространства.

Проведенный морфометрический анализ суммарной площади фолликулярных и серозных кистозных образований (кистозного комплекса яичника - ККЯ) и общей площади яичников показал, что относительная площадь ККЯ в яичниках свинок 2-й группы (22%) значительно превышает таковую в контроле (6%), а в группе активированной герпес-вирусной инфекции ее показатели наивысшие - 35% (табл.2, рис 4)

Таблица 2. Показатели общих площадей яичников и ККЯ

Группы Площадь 1-я группа М + ш (мм2) 2-я группа М±гп (мм2) 3-я группа М + т (ммг)

Общая площадь яичника 4,78 + 0,3 7,57 ± 0,4 8,22 + 0,2

Площадь ККЯ 0,31+0,07 1,69 + 0,09 2,89 + 0,1

Примечание р<0,05 (р - достоверность различий между группами по I- критерию)

Рис. 4. Относительные площади яичников и ККЯ у морских свинок контрольной и экспериментальных групп

□ общая площадь яичников

□ площадь ККЯ

1-я группа 2-я группа 3-я группа

Трактовка механизмов кистообразования в яичниках всегда представлялась сложной. В экспериментах показано, что пассивная иммунизация животных к а-субъединице ингибина приводит к увеличению концентрации ФСГ в плазме крови и инициации кистообразования (Keller L.S., Griffith J.W., 1987. Reed K.E., Westphale E.M., 1993, Kaneko H„ Nakanishi Y„ 1993, Arai K„ Watanabe G„ 1996). He исключено, что в нашей модели действие ВПГ-2, активирующее кистообразование из числа вторичных фолликулов, реализуется с участием именно этого механизма, поскольку снижение общей популяции фолликулов в яичниках подразумевает и падение уровня продукции ими ингибина. что в свою очередь способно спровоцировать активацию секреции фоллитропина аденоцитами гипофиза и далее - формирование кист.

При сравнении гистологической картины интерстициальной части яичников контрольной и экспериментальных групп животных были обнаружены множественные отличия, особенно демонстративные - в мозговом веществе. Интерстиций в зоне мозгового вещества выглядел отечным и рыхлым: сосуды (преимущественно венозные) расширенными, кровенаполненными, с истонченными стенками. В паравазальных пространствах находились множественные лейкоциты, плазматические и тучные клетки. Совокупность данных признаков свидетельствуют о развитии реактивного интерстициального отека и воспалительной реакции в яичниках при инфицировании вирусом (Сметник В.П., Тумилович Л.Г. 1995. Ozawa М., Shi F.X., 2001, Nielsen Т. D., Holt S. 2003). Разряженное состояние рыхлой соединительной ткани мозгового вещества свидетельствует о выходе части плазмы крови за пределы

сосудов, а отмеченное выше расширение канальцев шпраовариальной сети и превращение их в напряженные кисты при герпес-вирусной инфекции может быть связано с "дренированием отечного интерстициального пространства яичника".

В корковом веществе яичников экспериментальных свинок признаки отека стромы были не столь заметны из-за расположенных фолликулов и большого количества клеток и волокон соединительной ткани. Однако обращала на себя внимание выраженная реакция фибробластов. В яичниках животных 2-й и 3-й групп фибробласты располагались в виде тяжей н имели светооптические признаки высокой функциональной активности - крупные тела с множественными эозкнофильными включениями (вероятно, предшественниками коллагена), светлые ядра с многочисленными ядрышками Мультипликация ядрышек в соматических клетках описывается в литературе как специфическое проявление присутствия вируса в ядре (Соловьев ВД, Хесин Я.Е., Быковский А Ф. 1979, Lee G. Е., Murray i. W, 2006) На ультраструктурном уровне в ядрах фибробластов обнаруживалась

иммуноцитохимическая метка на антигены ВПГ-2.

Пучки фибробластов были направлены к поверхности яичников, в сторону белочной оболочки Белочная оболочка в яичниках животных 2-й и 3-й групп по сравнению с контролем выглядела значительно утолщенной (в среднем - в 1,5 раза). Утолщение белочной оболочки мы связываем с активацией деятельности фибробластов в условиях герпес-вирусной. Из немногочисленных литературных источников известно, чгго изменения белочной оболочки яичников в виде ее утолщения наблюдаются при синдроме поликистозных яичников, в этио-патогенезе которого нельзя исключить участие ВПГ-2 (Вихляева Е М. 1997, Чернуха Г.Е 2002).

Покровный эпителий над белочной оболочкой яичников подопытных животных не был изменен; его клетки (в отличие от эпителиоцигов сети) не содержали специфическую метку на антигены ВПГ-2.

В заключение, следует отметить, что на ультраструктурном уровне зрелых форм вируса простого герпеса 2-го типа в клетках яичников инфицированных морских свинок обнаружено не было. Это связано, вероятно, с тем, что ВПГ-2 относится к группе á-герпесвирусов, отличающихся быстротой репликации и выхода зрелых вирусов из клетки. Поэтому зрелые формы ВПГ-2 достаточно сложно обнаружить в клетках яичников даже в период обострения генитального герпеса. Вероятно, ВПГ-2 персистирует в клетках яичников в форме провирусов и незрелых вирусных частиц, или детекция антигенов которых оказалась положительной. Обнаруженные нами атипичные включения в фолликулярных эпителиоцитах и текацитах атретических

фолликулов яичников животных 2-й и 3-й групп обладают известным сходством с описываемыми в литературе незрелыми формами ВПГ-2 (Соловьев В.Д, Хесин Я.Е., Быковский А.Ф. 1979, Lee G. Е., Murray J. W, 2006).

Положительная иммуноцитохим ическая реакция на антигены ВПГ-2 в фолликулоцитах, текацитах, фибробластах и эпителиоцитах кист яичников инфицированных животных (в отличие от контроля, в котором реакция была отрицательной) совместно с присутствием в клетках атипичных включений свидетельствует о том, что выявленные морфофункциональные изменения фолликулогенеза и структурно-функционального статуса яичников в целом являются следствием влияния герпес-вирусной инфекции.

ВЫВОДЫ

1. В экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса в яичниках морских свинок возникают нарушения фолликулогенеза, заключающиеся в уменьшении общей численности фолликулов и числа фолликулов по стадиям развития, отсутствии формирования преовуляторных фолликулов, активации атрезии и кистообразования.

2. В период обострения генитального герпеса отмечаются наиболее выраженные нарушения фолликулогенеза по сравнению с таковыми в период ремиссии.

3. Атрезия фолликулов в яичниках инфицированных животных имеет специфические проявления, отличающие ее от физиологической атрезии-

- на тканевом уровне - отечно-деструктивные изменения эпителиальных оболочек примордиальных и первичных однослойных фолликулов, раннее прекращение митозов и диссоциация фолликулярного эпителия первичных многослойных фолликулов, массовая лейкоцитарная инфильтрация фолликулярного эпителия вторичных фолликулов;

- на клеточном уровне - отек цитоплазмы, хроматолиз и маргинация хроматина в эпителиальных клетках и текацитах, присутствие в их цитоплазме атипичных включений

4. Структурными изменениями овоцитов атретических фолликулов у инфицированных животных являются: деформация овоцитов, появление в их цитоплазме эозинофильных включений и вакуолей на фоне деструкции органелл, пикнотические изменения ядер, реинициация мейоза (на стадии вторичных фолликулов).

5. Изменения стромальной части яичников у инфицированных животных наиболее выражены в период обострения генитального герпеса и заключаются в утолщении белочной оболочки яичников, отеке мозгового вещества с явлениями лейкопедеза, гипертрофии волокнистого компонента межклеточного матрнкса, активации кистообразования из канальцев внутрияичниковой сети. 6 Присутствие антигенов ВПГ-2 методом электронной иммуноцитохимии доказано в ядрах и митохондриях клеток атретических фолликулов всех стадий развития, фибробластов и эпителиоцитов кист - производных шпраовариальной сети. 7. Выявленные изменения тканевых и клеточных компонентов яичников у инфицированных животных свидетельствуют о выраженных структурно-функциональных нарушениях, индуцированных ВПГ-2, и могут служить морфологическими критериями цитопатического действия вируса на яичник Практические рекомендации

Результаты проведенного исследования представляют научный и практический интерес для ученых, разрабатывающих проблему влияния герпес-вирусной инфекции на систему воспроизводства человека

Полученные данные и использованная в исследовании экспериментальная модель могут быть внедрены в практику лабораторий, занимающихся созданием новых противовирусных препаратов

Результаты и выводы исследования рекомендуется использовать в соответствующих курсах лекций по гистологии, акушерству и гинекологии, дерматовенерологии, вирусологии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Н.В.Шевлягина, Т Г Боровая, Л.В.Диденко, Наровлянский А.Н, Иванова АМ. Реактивные изменения фолликулярных гистонов яичников морских свинок в условиях экспериментального моделирования генитальной формы хронической герпес-вирусной инфекции.// Ж. Фундаментальные исследования - 2007. - № 12.-с 293-294.

2. А М Иванова, Н В.Шевлягина, Л К.Березина, Т Г Боровая, Л.ВДиденко, А Н.Наровлянский. Особенности реактивных изменений фолликулогенеза в экспериментальной модели генитального герпеса при введении препарата

интерферона // Юбилейный сборник "Интерферону - 50 лет". - Москва, 2007. -с.303-304.

3 Шевлягина Н.В. Реактивные изменения яичника морских свинок при экспериментальной модели герпес-вирусной инфекции.//Сборник тезисов докладов Международного молодежного медицинского конгресса - Санкт-Петербург. - 2007 - с.76-77

4. Шевлягина Н В, Иванова A.M., Боровая Т.Г., Диденко Л.В, Березина Л.К., Наровлянский А.Н. Изменения овариального фолликулогенеза при экспериментальной модели герпес-вирусной инфекции у морских свинок. //Успехи современного естествознания. - 2008 - № 2. - с. 122.

5. Н.В Шевлягина, А.М.Иванова, Т.Г.Боровая, Л.В. Диденко, Л.К. Березина, А.Н Наровлянский, Ф И. Ершов. Морфо-функциональные изменения яичников морских свинок в экспериментальной модели хронической герпес-вирусной инфекции //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 2008. - № 8. -с 221-226

6 Шевлягина Н В. Структурные изменения в яичниках морских свинок при воздействии вируса простого герпеса 2-го типа.//Электронный вариант материалов Международной научной конференции молодых ученых-медиков. -Курск. - 2008.

7. Шевлягина Н.В., Иванова А.М., Боровая Т.Г, Диденко Л.В, Березина Л.К., Наровлянский А Н. Структурные особенности яичников в условиях действия вируса простого герпеса 2-го типа (экспериментальное исследование). //Сборник материалов конференции "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины",- 2008-с 97-98

8 Н В.Шевлягина, Т.Г Боровая, A.M. Иванова, Л.К. Березина, Н П. Косякова, А.Н. Наровлянский. Ультраструктурные изменения в клетках овариальных фолликулов морских свинок в экспериментальной модели рецидивирующего гениального герпеса. //Сборник материалов конференции по электронной микроскопии. - 2008. - с 330.

9. Шевлягина Н. В, Иванова А.М, Боровая Т.Г., Диденко Л.В., Березина Л К., Наровлянский А Н. Морфологические особенности яичников в условиях действия вируса простого герпеса 2-го типа // Ж.Фундаментальные исследования. - 2008 4. - с.75-76.

10. Шевлягина Н.В. Атретический процесс в яичниках при экспериментальной герпес-вирусной инфекции // Сборник материалов межгородской конференции молодых ученых. - СПб. - 2008. - с. 116-117 И. Шевлягина Н.В. Роль герпес-вирусной инфекции в овариальном кистообразовании.// Сборник материалов конференции молодых ученых и специалистов - 2008 - с. 59-60.

Шевлягина Наталья Владимировна (Россия) "Морфологическая характеристика яичников морских свинок в экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса" В работе проведено комплексное исследование структурно-функциональных особенностей яичников морских свинок в условиях рецидивирующего геннтального герпеса, выявлена локализация антигенов вируса простого герпеса 2-го типа в структурах яичников на клеточном и субклеточном уровнях. Обнаруженные специфические изменения яичников инфицированных морских свинок могут служить морфологическими критериями цитопатического эффекта вируса простого герпеса 2-го типа на яичники.

Natalia V. Shevlyagina (Russia) «Morphological characteristic of guinea pigs ovaries in experimental model of recurrent genital herpes» Complex examination was carried out to investigative the structural and functional changes of guinea pigs ovaries in experimental model of recurrent genital herpes Localization of antigens of herpes simplex virus 2 was detected in ovaries on cellular and subcellular levels. The specific changes in ovaries are morphological criterions of cytopathological effects of herpes simplex virus 2.

БЛАГОДАРНОСТЬ

Выражаю глубокую благодарность и признательность моему научному руководителю д м н. член-корр. РАМН профессору Т.Г. Боровой и научному консультанту зав лаб. анатомии микроорганизмов, д м н. Л В.Диденко, сотрудникам лаборатории цитокинов - зав лаб., д.6 н. А.Н Наровлянскому и к.б.н A.M. Ивановой за предоставленный материал и помощь в работе, Березиной Л К - за организаторскую помощь, дб.н. Косяковой Н.П. за предоставленные антитела к ВПГ-2, и всем сотрудникам лаборатории анатомии микроорганизмов ГУ НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи РАМН.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 02.10.08. Тираж 100 экз. Усл. п.л 1,5 Печать авторефератов: 730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Шевлягина, Наталья Владимировна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1. Стадии развития фолликулов

1.2. Регуляция фолликулогенеза

1.3. Атрезия фолликулов

1.4. Регуляция атрезии фолликулов

1.5. Герпес-вирусная инфекция

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования

2.1. Экспериментальные группы

2.2. Методы исследования

ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований

3.1. Морфологическая характеристика яичников морских свинок контрольной и экспериментальных групп светооптический уровень анализа)

-3.1.1. Морфологическая характеристика яичников интактных морских свинок (1-я группа)

- 3.1.2. Морфологическая характеристика яичников морских свинок в стадии ремиссии рецидивирующего генитального герпеса (2-я группа)

- 3.1.3. Морфологическая характеристика яичников морских свинок в стадии обострения рецидивирующего генитального герпеса

3-я группа)

3.2. Ультраструктурная характеристика яичников морских свинок 1-й, 2-й, 3-й групп

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфологическая характеристика яичников морских свинок в экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса"

В настоящее время в России возросла частота встречаемости женского бесплодия, патологии и невынашивания беременности [41, 42]. Современные темпы прироста населения России по определенным причинам настолько снизились, что задача повышения рождаемости выросла в ранг актуальной медико-социальной проблемы.

Факторами, способными оказать негативное влияние на женскую репродуктивную функцию, являются: алкоголизм, курение, наркомания, стрессы, снижение иммунитета и др. [6, 7, 54, 74, 80]. Роль вирусных инфекций на этапах онтогенетического развития яичников, в том числе внутриутробном, когда происходит становление овогенеза и его первый ответственный этап — профаза 1-го деления мейоза у человека не изучена.

Современные научные исследования в основном сосредоточены на изучении внутриовариальных и интрафолликулярных механизмов регуляции фолликулогенеза, поскольку данные механизмы играют ведущую роль в селекции половых клеток для овуляции, модулируя центральные нейро-гуморальные сигналы, воздействующие на яичники [20]. Исследований, посвященных изучению роли вирусных инфекций (в том числе - герпес-вирусной инфекции) в развитии женского бесплодия, сравнительно немного, и такие важные вопросы как структурно-функциональное состояние яичников, качество фолликулогенеза и селекции половых клеток для овуляции, состояние центральной и внутрияичниковой регуляции фолликулогенеза при герпес-вирусной инфекции практически не решены.

Вирус простого герпеса 2-го типа (ВПГ-2), входящий в семейство Herpesviridae, является нейро- и эпителиотропным [34], в связи с чем вполне возможно его направленное негативное влияние на гистофизиологию яичников, в осуществлении которой эпителиальные тканевые производные играют ведущую роль.

ВПГ-2 является этиологическим фактором генитального герпеса, занимающего по данным ВОЗ, третье место среди инфекций, передающихся половым путем [82]. В России генитальным герпесом страдает 6-10% населения [34].

Помимо риска инфицирования плода во время беременности и родов ВПГ-2 может поражать органы малого таза, в том числе — яичники, матку и маточные трубы [26], однако персистенция ВПГ-2 в клетках этих органов остается недоказанной.

Цель исследования — изучить морфофункциональное состояние яичников морских свинок в экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса.

Задачи:

1. Провести сравнительный морфологический и количественный анализ процессов фолликулогенеза и атрезии в яичниках интактных морских свинок и животных в периоды ремиссии и обострения генитального герпеса;

2. Выявить особенности атрезии фолликулов в условиях генитального герпеса;

4. Оценить состояние стромального компонента яичников в условиях влияния вируса простого герпеса 2-го типа;

5. Выявить характер реактивных изменений внутриовариальной сети в модели генитального герпеса;

Основные положения, выносимые на защиту

1. В экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса в яичниках морских свинок возникают нарушения фолликулогенеза и селекции доминантных фолликулов.

2. Наиболее выраженные нарушения фолликулогенеза происходят при обострении генитального герпеса по сравнению с периодом ремиссии;

3. Атретический процесс в условиях действия ВПГ-2 имеет специфические проявления, отличающие его от физиологической атрезии.

4. ВПГ-2 персистирует в соматических клетках атретических фолликулов, внутриовариальной сети, фибробластах.

Научная новизна

Получена новая информация о состоянии фолликулогенеза, структурном статусе стромы яичников и изменениях интраовариальной сети у инфицированных морских свинок в периоды ремиссии и обострения герпетической инфекции. Получены свидетельства активации гибели овариальных фолликулов на всех стадиях развития и выявлены существенные отличия атретического процесса у инфицированных животных от гистологических и ультраструктурных характеристик физиологической атрезии у интактных морских свинок.

Практическая значимость

Выявленные изменения тканевых и клеточных систем яичников у подопытных морских свинок MOiyr служить базисом для дальнейших научных исследований герпес-вирусных инфекций в этио-патогенезе женского бесплодия.

Рекомендации по внедрению материалов диссертации

Полученные данные и использованная в исследовании экспериментальная модель MOiyr быть внедрены в практику лабораторий, занимающихся созданием новых противовирусных препаратов.

Апробация и внедрение результатов

Результаты исследования доложены на 2-м Международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения-2007»; 2-й Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2008); 14-й конференции «Актуальные проблемы патофизиологии» (С-Петербург, 2008), 22-й конференции по электронной микроскопии (Черноголовка, 2008); 50-м Международном Симпозиуме по гистохимии (Швейцария, Интерлейкен, 2008).

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Шевлягина, Наталья Владимировна

ВЫВОДЫ

3. Атрезия фолликулов в яичниках инфицированных животных имеет специфические проявления, отличающие ее от физиологической атрезии: на тканевом уровне - отечно-деструктивные изменения эпителиальных оболочек примордиальных и первичных однослойных фолликулов, раннее прекращение митозов и диссоциация фолликулярного эпителия первичных многослойных фолликулов, массовая лейкоцитарная инфильтрация фолликулярного эпителия вторичных фолликулов;

- на клеточном уровне — отек цитоплазмы, хроматолиз и маргинация хроматина в эпителиальных клетках и текацитах, присутствие в их цитоплазме атипичных включений.

4. Структурными изменениями овоцитов атретических фолликулов, у инфицированных животных являются: деформация овоцитов, появление в их цитоплазме эозинофильных включений и вакуолей на фоне деструкции органелл, пикнотические изменения ядер, реинициация мейоза (на стадии вторичных фолликулов).

6. Присутствие антигенов ВПГ-2 методом электронной иммуноцитохимии доказано в ядрах и митохондриях клеток атретических фолликулов всех стадий развития, фибробластов и эпителиоцитов кист — производных интраовариальной сети.

7. Выявленные изменения тканевых и клеточных компонентов яичников у инфицированных животных свидетельствуют о выраженных структурно-функциональных нарушениях, индуцированных ВПГ-2, и могут служить морфологическими критериями цитопатического действия вируса на жганик.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Шевлягина, Наталья Владимировна, Москва

1. Автандилов Г.Г. Микроспектрофотометрические исследования в работе клинического цитолога и патологоанатома/ЛДитологическая диагностика новообразований. — М., 1969. — с.71-73.

2. Автандилов Г.Г. Морфометрия в патологии. — М.: Медицина, 1973. — 248с.

3. Автандилов Г.Г. Ведение в количественную патологическую морфологию. М.: Медицина, 1980. — 216с.

4. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. М.: Медицина, 1990. -384с.

5. Адаскевич В.П. Инфекции, передаваемые половым путем (руководство для врачей). Ниж. Новгород: Издательство НГМА. Москва: Медицинская книга. 2004. - 416с.

6. Айламазян Э.К., Беляева Т.В. Теория и практика общей экологической репродуктологии. // Журнал акушерства и женских болезней. 2000. -№ 3. - С.8-10.

7. Айламазян Э.К., Беляева Т.В., Виноградова Е.Г. Влияние экологической обстановки на репродуктивное здоровье женщины. Новый взгляд на проблему. // Вестник Российской ассоциации акушеров-гинекологов. — 1996. -№2. С. 13-16.

8. Алкадарская И.М. Морфология процесса овуляции в норме и при изменении уровня простагландинов в организме. Автореф. дис. канд.мед.наук. М., 1982. - 20с.

9. Ашкрафт К.У., Холдер Т.М. Детская хирургия. Т. 3. - СПб.: Раритет-М.- 1999.-212с.

10. Ю.Баринский И.Ф. Герпес.//М.: Медицина. 1986. - 206с.11 .Бикбулатов P.M. Цитопатология экспериментального герпеса// Уфа: Башкирское книжное издательство. 1970 - 154с.

11. Богданова Е.А. Гинекология детей и подростков. М.: Медицинское информационное агентство. - 2000. - 30с.

12. Боровая Т.Г. Фолликулогенез и факторы его модуляции. Автореф. дис. докт.мед.наук. М. 1993. - 47с.

13. Боровая Т.Г., Волкова О.В. Морфологическая характеристика гистионов развивающихся и атретических фолликулов яичника человека.// Бюл.эксп.мед. 1995. - №.8. - с. 188-191.

14. Бохман Я.В., Вишневская Е.Е. Ошибки в онкогинекологической практике. Минск: Вышейшая школа, 1994. —287с.

15. Боярский К.Ю. Молекулярные основы формирования фетального яичника и получение гамет из стволовых клеток (обзор литературы)// Пробл. Репрод. 2004. - Т. 10, №5. - с.15- 21.

16. Боярский К.Ю. Старение репродуктивной системы и результативность вспомогательных репродуктивных технологий/ / Пробл. репрод. — 1966. -Т.2, № 4. с.457-62.

17. Бронштейн М.Э. Гистологические и гистохимические изменения в яичниках при синдроме Штейна-Левенталя. Автореф. дис. канд. мед. наук. М. 1968. 20с.

18. Бурлев В.А., Гаспаров А.С., Аванесян Н.С. Факторы роста и их роль в регуляции репродуктивной функции у больных с синдромом поликистозных яичников.// Пробл репрод. — 1998. — Т.З. — с. 17-25.

19. Вихляева Е.М. Руководство по эндокринной гинекологии. М: Медицинское информационное издательство, 1997. с.406.

20. Волкова О.В. Структура и регуляция функции яичника. М.: Медицина. -1970.-50с.

21. Волкова О.В. Функциональная морфология женской репродуктивной системы. М.: Медицина. - 1983. — 116с.

22. Волкова О.В., Мельникова JI.M., Пекарский М.М., Повалий Т.М. Динамика структурных преобразований микроциркуляторного русла растущих и атретических фолликулов яичника.// Бюл. эксп. мед. 1980. - №2. - с.229-232.

23. Волкова О.В., Миловидова Н.С. Становление фолликулогенеза в неонатальном периоде развития яичника.//Арх.анат. — 1987. т.92. -с.34-39.

24. Гальперин Э. К., Констайн JI. С., Тарбел Н. Дж. и др. Лучевая терапия в детской онкологии: Пер. с англ. — М.: Медицина, 1999. 752с.

25. Генитальный герпес (клиника, диагностика, лечение, профилактика). Уч. пособие для врачей под ред. Молочкова В.А.// Москва. - 2005. — 70с.

26. Гуркин Ю.А. Гинекология подростков: руководство для врачей. — СПб.: Фолиант. 2000. - 189с.

27. Данилов Р.К. Раневой процесс: гистогенетические основы. СПб.: ВмедА.-2008. - 283 с.

28. Дурнов Л.А., Голдобенко Г.В. Детская онкология: Учебник. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2002. - 608с.

29. Дыбан А.П., Баранов B.C. Оогенез млекопитающих.// Наука. 1977. -с. 200-223.

30. Жданов В.М. Эволюция вирусов. М.: Медицина. 1990. - 376с.

31. Ивашкин В.Т., Васильев В.Ю., Северин Е.С. Уровни регуляции функциональной активности органов и тканей. //Наука. 1987. - №3. — с.15-19.

32. Исаков В.А. Рыбалкин С.Б. Романцов М.Г. Герпесвирусная инфекция: Рекомендации для врачей.// СПб., 2006. - 96с.

33. Китаев Э.М., Никитин А.И. Закономерности фолликулогенеза в яичниках млекопитающих животных и человека. //Пробл репрод. -1995.-Т.З.-С. 11-15.

34. Кнорре А.Г. Эмбриональный гистогенез. М.: Медицина. 1971. — 240с.

35. Кобозева Н.В., Кузнецова М.Н., Гуркин Ю.А. Гинекология детей и подростков: JL: Медицина. 1988. — 296с.

36. Кожухарь В.Г. Дифференцировка эпителия зачатков гонад у ранних эмбрионов человека. //Арх.анат. 1978. - №10. — с.56-60.

37. Коколина В.Ф., Алексеева И.Н. Опухоли и опухолевидные образования яичников у девочек. М.: Манускрипт. - 2001. - 56с.

38. Коршунов А. М., Преображенская И. С. Программированная смерть клеток Апоптоз (Обзор). // Неврологический журнал. — 1998. - №1. — с.40-46.

39. Кузьменко Е.Т. Клинико-эпидемиологические аспекты женского бесплодия (на примере Иркутской области). Автореф. дис. канд.мед.наук. Иркутск. — 2008. 20с.

40. Кулаков В.А., Фролова О.Н. Репродуктивное здоровье в Российской ФедерацииУ/Народонаселецие. 2004.- №3.- с.15-19.

41. Курилло Л.Ф. Динамика преобразований хромосом в профазе мейоза в оогенезе человека. //Цитология. 1980. - № 5. - с 27-31.

42. Курилло Л.Ф. Морфофункццональные характеристики оогенеза у человека и млекопитающих. Дисс. Докт.мед.наук. 1985.

43. Курилло Л.Ф. Развитие яичника человека в пренатальный период. //Арх.анат. № 7. - с.73-79.

44. Курило Л.Ф. Динамика лреобразований хромосом в профазе мейоза в оогенезе человека.// Цитология. 1980. — Т. 22(2). — с. 154-160.

45. Курило Л.Ф. Морфофункциональные характеристики оогенеза млекопитающих и человека. Дис. док. биол. наук. М. 1985; 470.

46. Курило Л.Ф. Фолликулогенез в пренатальный период развитиячеловека. //Архив анат. 1980. - Т. 79(7). - с.73-79.

47. Кутушева Г.Ф., Немилова Т.К., Караваева С.А. //Журнал акушерства и женских болезней. 1999. - № 4. - с.82-85.

48. Кутушева Г.Ф.,' Урманчеева А.Ф. Опухоли вульвы и влагалища у девочек. // Практическая онкология. — 2006. Т.7, №4. - с.246-251.

49. Кутушева Г.Ф., Урманчеева А.Ф. Опухоли и опухолевидные образования половых органов у девочек: СПб.: ГИПП Искусство России, 2001.- 143 с.

50. Кушлинский Н.Е. Исследование механизмов передачи митогенных сигналов факторов роста основа для создания новых противоопухолевых препаратов. М.: Медицина,- 2000. - 50с.

51. Лесной С.К. Частичная резекция яичников при олигоменорее и аменорее.// Акуш. и гинекол. — 1928. № 2. - с.184-191.

52. Малышева З.В., Тютюнник И.Ф., Алексеева Н.Д. Медико-экологические аспекты охраны репродуктивного здоровья женщин. // Журнал акушерства и женских болезней. — 2000. — № 3. — С.20—22.

53. Мальцева М.Ф. Стромальный текоматоз (клиника, диагностика, отдаленные результаты хирургического лечения). Дис. канд. мед. наук. М. 1997.

54. Манухин И.Б, Геворкян М.А., Чагай Н.Б. Ановуляция и инсулинорезистентность. ГЭОТ АР-Медиа. — 2006. — 416с.

55. Марухно Н.И., Шапкин А.А. Кисты яичников у новорожденных// Pacific Medical Journal.- 2005. № 3. - р.85-88.

56. Медведев Б.И., Зайнетдинова^Д.Ф., Романенко О.А., Андреева Н.Н. Вирус простого герпеса при трубно-перитонеальном бесплодии. // Известия Челябинского научного центра. — 2005. № 4(30). - с.216-219.

57. Международные правила использования животных в экспериментах.-Бюллетень МОИП. Отд. биолог. 1991. — Т. 103, № 3. — с. 64-65.

58. Мерабишвили В.М. Злокачественные новообразования в Санкт-Петербурге в 1996 году: Статистический ежегодник ПРР, СПб., 1999. с.14-17.

59. Методы нейровизуализции при герпетическом энцефалите у детей. -Пособие для врачей под ред. Скрипченко Н.В. СПб. - 2005. - 24с.

60. Митьков В.В., Медведев М.В. Клиническое руководство по ультразвуковой диагностике. — Т. 2. — М.: Видар. 1996. - 200с.

61. Петропавловская М.С. Морфологические аспекты формирования и инициации роста овариальных фолликулов. Автореф. дис. канд. мед. наук. М. 1989.-20с.

62. Пинегин Б. В., Коршунов В. М., Шкарупета М. М., Мальцева Н. Н. Эндогенные микроорганизмы как иммуномодуляторы // В сборнике "Иммуномодуляторы". Москва. - 1987. - С. 149-156.

63. Пищулин А.А., Бутов А.В., Удовиченко О.В. Синдром овариальной гиперандрогении неопухолевого генеза.//Пробл. репрод. — 1999. № 3 с.6-16.

64. Пищулин А.А. Диагностика и лечение овариальной гиперандрогении Дис. канд. мед. наук. М. 1964.

65. Потин В.В., Воробьева О.А. Современные представления о роли факторов роста в системе внутритканевых регуляторов репродукции. //Пробл эндокринол. 1993. - Т.39(4). - с.58-62.

66. Программированная клеточная гибель. Под ред. B.C. Новикова. С-Петербург: Наука. 1996. — 77с.

67. Резюме конференции НИИ детской онкологии и гематологии ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН, ТАСС, 15.02.2006.

68. Самгин М.А., Халдин А.А. Простой герпес (дерматологические аспекты). М.: МЕДйресс-информ. 2002. - 160с.

69. Сельков С.А. Ярмолинская М.И. Использование «Циклоферона» вкомплексной терапии наружного генитального эндометриоза:1методические рекомендации. // СПб., 2004. - 38с.

70. Семенова-Тянь-Шанская А.Г. Кнорре А.Г. Половой зачаток, его происхождение и эволюция. //Арх.анат. 1972. - Т.8. — 56-62с.

71. Семенова-Тянь-Шанская А.Г. Первичные половые клетки зародыша человека в период миграции к зачаткам гонад. //Арх.анат. 1969. - № 7. — с.78-85.

72. Серов В.Н., Пауков С.В. Значение генитальных инфекций в формировании распространенных гинекологических заболеваний и их современное лечение. // Москва. 1998. - 18с.

73. Сивочалова О.В., Денисов Э.И., Родионова Г.К. От гигиены труда женщин к охране репродуктивного здоровья работающих. Принципы и перспективы. // Мед. труда. — 1998. — № 7. — С. 19—22.

74. Скулачев В.П. Явления запрограммированной смерти. Митохондрии, клетки и органы: роль активных форм кислорода. //Соросовский образовательный журнал. Т.7, № 6. — 2001. — с. 4-10.

75. Сметник В.П., Тумилович Л.Г. Поликистозные яичники. Неоперативная гинекология. С.-Петербург: Сотис. 1995. - с.149-150.

76. Соловьев В.Д, Хесин Я.Е., Быковский А.Ф. Очерки по вирусной цитопатологии// М.: Медицина. 1979. - 323с.

77. Соловьева Н.И. Матриксные металлопротеиназы и биологические функции.// Ж. Биоорганической химии. -1998. № 24. - с. 217—226.

78. Сухих Г.Т, Ванько Л.В, Кулаков В.И. Иммунитет и генитальный герпес// Н.-Новгород. М. - 1997. - 221с.

79. Такева Ц.В., Десподова Н.В. Акуш. и гинек. (НРБ). - 1974.- № 1. -с.38-43.

80. Тарасова JI.A., Сорокина Н.С., Лагутина Г.Н. Факторы производственной среды и патология репродукции. // Мед.труда. — 1999.—№3. —С.13—15.

81. Фалин Л.И. эмбриология человека. Атлас. М.: Медицина . - 1976. — 356с.

82. Хахалин Л.Н. Этиопатогенетическое обоснование современной терапии генитального герпеса// 3111111. 1995. - № 3. - с. 18-22.

83. Чернуха Г.Е. Современные представления о синдроме поликистозных яичников // Электронный журнал «Consilium-medicumtf, приложение. — 2002. Т. 4, № 8.

84. Шубладзе А.К., Маевская Т.М. Герпес// М.: Медицина. 1971. - 240с.

85. Abir R., Fisch В., Jin S. et al. Expression of stem cell and its receptor in human fetal and adult ovaries// Fertil. Steril. 2004 - Vol. 82 (Suppl. 3). -P. 1235-43.

86. Adashi E.Y., Resnick C.E., Swiboda M.E. Somatomedin-C synergizes with follicle-stimulating hormone in the acquisition of progestin biosynthetic capacity by cultured rat granulosa cells // Endocrinology. 1985. - Vol.116. -P. 2135-2142.

87. Ali M.A., Butcher M., Gbosh H.P. Expression and nuclear envelop localization of biologically active fusion glycoprotein gB of herpes simple virus in mammalian cells using cloned DNA.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1987. Vol.84. - P.5675-5679.

88. Arai K., Watanabe G., Taya K., Sasamoto S. Roles of inhibin and estradiol in the regulation of the folliple-stimulating hormone and luteinizing hormone secretion during the estrous cycle of the rat.//Biol. Reprod. 1996. -Vol.55.-P.127-133.

89. Arraztoa J. A., Zhoi^ J„ lytarcu D., Cheng C., Bonner R., Chen M., Xiang C., Brownstein M., Maisey K., Imarai ^ondy C. Identification of genesexpressed in primate primordial oocytes //Hum. Reprod. 2005 - Vol.20. -P.469-475.

90. Baker D.B. The study of stress at work. // Ann Rev Pub Health. 1985. -Vol.6.-P.367-81.

91. Baker T.G. Radiosensitivity of Oogonia and Oocytes in the Foetal and Neonatal Monkey .//Nature. 1967. - Vol.214. - P. 981 - 983.

92. Basseti S.G., Winters S.J., Keeping H.S., Zelezni K.A.J. Serum immunoreactive inhibin levels before and after lutectomy in the cynomolgus monkey (Macaca fasci cularis)// J. Clin. Endocr. Metab. -1990. Vol.7. — P. 590-4.

93. Block E. A quantitative morphological investigation of the follicular system in newborn female infants.// Acta Anat. 1953. - Vol.17. - P.201-206.

94. Block E. Quantitative morphological investigations of the follicular system in women. Variations at different ages.// Acta Anat. 1952. - Vol.14. -P.108-123.

95. Bredesen N. Neuronal apoptosis: genetic and biochemical modulation // Apoptosis II: The Molecular Basis of Apoptosis in Disease. 1994. - P. 397421.

96. Browne H., Bruun В., Minson T. Plasma membrane requirements for cell fusion induced by herpes simplex virus type 1 glycoproteins gB, gD, gH and gL. J. Gen. Virol. -2001.-Vol.82.-P. 1419-1422.

97. Byskov A. G., SkakkebaekN. E., Stafanger G., Peters H. Influence of ovarian surface epithelium and rete ovarii on follicle formation.// J Anat. -1977. Vol.123 (1). - P. 77-86.

98. Byskov A.G. Cell kinetic studies of follicular atresia in the mouse ovary.//J Reprod Fertil. 1974. - Vol.37. - P.277-285.

99. Byskov A.G., Lintern-Moore S. Follicle formation in the immature mouse ovaiy: the role of the rete ovarii// J.Anat. 1973. - Vol.116. - P.207-217.

100. Campion C.E., Trewin A., Hutz R.J. Effects of follicle-stimulating hormone (FSH) administration on estradiol-induced cystic ovaries in guinea pigs. Zool. Sci. 1996. - Vol.13. - P.137-143.

101. Canarelli J.P., Plancq M.C., Bob'Oyono J.M., Ricard J. Voluminous ovarian cysts in children.//Therapeutic strategy.J.Chir (Paris). — Vol.130. -P.525-528.

102. Carroll R.S., Corigan A.Z., Vale W., Chin W.W. Inhibin, activin, follistatin: regulation of FSH messenger ribonucleic acid levels.//Mol.Endocrinol. 1989. - Vol.3. - P. 1969-1976.

103. Cate R.L., Donahoe P.K., McLaughlin D.T. Mullerian inhibiting substance.//Hand book Exp Pharmacol. 1990. - Vol. 95. - P. 179-210.

104. CentolaG.M. Zavos, P.M.: Comparison of pregnancy rates following intrauterine insemination of sperm processed in Ham's F-10 medium versus synthetic human tubal fluid. // Infertility. -1993. Vol.15 (4). - P.84-96.

105. Chang H., Brown C., Matzuk M. Genetic analysis of the mammalian transforming growth factor superfamily.// Endocrine Reviews. — 2002. — Vol. 23.-P. 787-823.

106. Cheng S., Cheng Y., Gartler S. A cytological evaluation of the production line hypothesis in human oogenis using chromosome painting.// Am Jour Hum Genet. 1995. - Vol.57 (1). - Abs 264.

107. Childs G.V. Functional ultrastructure of gonadotropes: a review/ZMorphology of hypothalamus and its connections. -Ganten D., Pfaff D. (Eds.). Berlin: Springer. -1986. p.49-98.

108. Couse J.F., Hewitt S.C., Bunch D.O., Sar M., Walker V.R., Davis B.J, Korach K.S. Postnatal sex reversal of the ovaries in mice lacking estrogen receptors alpha and beta. //Science 1999. - Vol.286. - P. 2328-31.

109. Couse J.F., Hewitt S.C., Bunch D.O., Sar M., Walker V.R., Davis B.J., Korach K.S. Postnatal sex reversal of the ovaries in mice lacking estrogen receptors alpha and beta. // Science. 1999. — Vol.286. - P.2328-31.

110. Deanesly R. Early embryonic growth and progestagen function in ovariectomized guinea pigs. // J of reproduction and Fertility. 1963. -Vol.6.-P. 143-152.

111. DeChiara T.M., Robertson E.J. Parental imprinting of the mouse insulin-like growth factor II gene.//Cell. 1991. - Vol. 64(4). - P.849-59.

112. Deffieux X., Antoine J. M. Inhibins, activins and anti-Mullerian hormone: structure, signalling pathways, actions and clinical relevance in assisted reproductive therapy.//Gynecologie Obstetrique & Fertilite. 2003. -Vol. 31.-P. - 900-911

113. Dissen A., Paredes A., Romero C. et al. // Ovary. 2004. - Ch. 1. -p. 3-4.

114. DiZerega G.G., Hodgen G.D. Folliculogenesis in the primate ovarian cycle.// Endocrine review. 1981. - Vol. 2, N 1. - bP.27-49.

115. Dube J.L., Wang P., Elvin J., Lyons K.M., Celeste A J., Matzuk M.M. The bone morphogenetic protein 15 gene is X-linked and expressed in oocytes// Mol. Endocrinol. 1998. - Vol.12. - P. 1809-17.

116. Duff R., Rapp F. Oncogenic transformation of hamster cells after exposure to herpes simplex virus type 2. // Nat. New Biol. 1971. - Vol.233. -P.48-50.

117. Durlinger A.L., Kramer P., Karels В., de Jong F.H., Uilenbroek J.T., Grootegoed J.A., Themmen A.P. Control of primordial follicle recruitment by anti-Mullerian hormone in the mouse ovary.// Endocrinology. 1999. — Vol. 140.-P. 5789-96.

118. Eden J.A., Warren P. A review of 1019 consecutive cases of polycystic ovary syndrome demonstrated by ultrasound. //Australas Radiol. -1999.- Vol.43. -P.41-46.

119. Edwards R.G., Fowler R.E, Core-Langton R.B. Normal and abnormal follicular growth in mouse rat and human ovaries// J.Reprod.Fert. 1977. -Vol.51. -P.237-263.

120. Everett J.W. Central neural control of reproductive functions of the adenohypophysis. //Physiology review. 1964. - Vol. 44. - P.373-431.

121. Faddy M., Gosden R. A mathematical model of follicle dynamics in the human ovary. // Hum Reprod. 1995. - Vol.10. - P.770-5.

122. Falck B. Site of production of estrogens in rat ovary as studied by microtransplants. //Acta physiological Scandinavica. — 1959. Vol.163, Vol. 1. -p.l.

123. Fan Q.R., Hendrickson W.A. Structure of human follicle-stimulating hormone in complex with its receptor. //Nature. — 2005. — Vol. 433. P.269-77.

124. Ffockenbery H. Bcl-2 is an inner mitochondrial membrane protein that blocks programmed cell death // Nature. 1990. - Vol. 348 (3). - P. 334336.

125. Fiddes J.C., Goodman H.M. The cDNA for the beta-subunit of human chorionic gonadotropin suggests evolution of a gene by readthrough into the З'-untranslated region.// Nature. 1980. - Vol. 14, N. 286(5774). - P. 684687.

126. Franchi L.L., Mandl A.M. The ultrastructure of oogonia and oocytes in the foetal and neonatal rat. // Proc. R. Soc. 1962. - Vol. 157. - P. 99114.

127. Fujinaga H., Yamoto M., Nakano R., Shima K. Epidermal growth factor binding sites in porcine granulosa cells and their regulation by follicle-stimulating hormone.// Biology of Reproduction. 1992. - Vol .46. - P. 705-709.

128. Gallagher J.T., Turnbull J.E. Heparan sulphate in the binding and activation of basic fibroblast growth factor.// Glycobiology. 1992. - Vol. 2(6).-P. 523-528.

129. Ginther O.J., Gastal EX., Follicle Deviation and Intrafollicular and Systemic Estradiol Concentrations in Mares. // Biology of Reproduction. -1999.-Vol. 61.-P. 31-39.

130. Gougeon L. //Ovary. 2004. - Ch. 2. - P.25-29.

131. Grome N., O'Brien M. Measurement of dimeric inhibin В thoughout menstrual cycle// J. Clin. Endocr. Metab. 1996. - Vol. 81. - P.1400-5.

132. GulyasB. J., Donald R. Degeneration of mouse oocytes in response to polycyclic aromatic hydrocarbons.// The Anatomical Record. 1977. —Vol. 193(4). - P. 863 -881.

133. Hatanaka Y., Suwkl K., Kawasaki Y. et al. A role of peroxides in Ca2+ ionophore-induced apoptosis in cultured rat cortical neurons // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. - Vol. 227, N 2. - P. 513-518.

134. Henderson S., Edwards R. Chiasma frequency and maternal age in mammals.//Nature. 1968.-Vol.218. - P.22-8.

135. Henderson S.R., Bonnar J., Moore R.A., MacKinnon P.C. Lutenising hormone releasing hormone for induction of follicular maturation and ovulation in women with infertility and amenorrhoea.// Fertility and Sterility. 1976. - Vol. 6. -P. 621-627.

136. Hoffmann F. Untersuchunden iiber die hormonale Regulation der Follikelreifung im Zyklus der Frau. //Geburtshilfe und Frauerheilkunde. — 1961.-Bd. 21.- S. 554-560.

137. Hubbard G.M., Rojas F. J. Stimulation of ovarian adenylyl cyclase activity by gonadotrophins during tj^ natural and gonadotrophin-induced cycles in the hamster.// Human Reproduction. 1994. - Vol. 9 (12). - P. 2247-2254.

138. Hutto С., Parks W., Lai S. A hospital-based prospective study of prenatal infection with human immunodeficiency virus type 1. // J Pediatr. -1991.- Vol.118. -P.347-353.

139. Hutton, R. D., D. L. Ewert, and G. R. French. Differentiation of types 1 and 2 of herpes simplex virus by plaque inhibition with sulfated polyanions//. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1973. - Vol. 142. -P.27-29.

140. Johnston N. V. Neuronal death in development, aging and disease // Neurobiol. Aging. 1994. - Vol. 15, N 2. - P. 235-236.

141. Josso N., Lamarre I., Picard J.Y., Berta P., Davies N., Monchon N., Peschanski M., Jeny R. Anti-Mullerian hormone in early human development.// Early Hum Dev. 1993. - Vol. 33. - P. 91-99.

142. Josso N., Picard J.Y., Tran D. The anti-Mullerian hormone.// Rec ProgrHormRes. 1977,-Vol. 33. - P. 117-160.

143. Kaneko H., Nakanishi Y., Kishi H., Watanabe G., Sasamoto S., Hasegawa Y. Evidence that inhibin is an important factor in the regulation of FSH secretion during the micj-luteal phase in cows.//J.Endocrinol. 1993. - Vol.136.-P.35-41.

144. Keller L.S., Griffith J.W., Lang C.M. Reproductive failure associated with cystic rete ovarii in guinea pigs.//Veterinary Pathology. — 1987. Vol. 24 (4).-P. 335-339.

145. Kishi H., Okada Т., Otsuka M., Watanabe G., Sasamoto S. Induction of superovulation by immunoneutralisation of endogenous inhibin through the secretion of FSH in cyclic golden hamster.//J.Endocrinol. 1996. — Vol.155.-P.65-75.

146. Koi H. Zhang., IV^akrigiann^kis A., Getsios S., MacCalman C. D., Strauss, J. F. Parry, S. Syncytiotropbp^st Is a Barrier to Maternal-Fetal

147. Transmission of Herpes Simplex Virus. // Biol. Reprod. 2002. - Vol. 67. -P. 1572-1579.

148. Lakoski J.M. Cellular electrophysiological approaches to the central regulation of female reproductive aging. //Neural control of reproductive function. -J.M. Lakoski, J.R. Perez-Polo, D.K.Rassin (Eds.). -New York: Liss. 1989. - p.209-220.

149. Lan Z.J., Gu P., Xu X., Jackson K.J., DeMayo F.J., O'Malley B.W., Cooney A.J. GCNF-dependent repression of BMP-15 and GDF-9 mediates gamete regulation of female fertility// EMBO J. 2003. - Vol. 22. -P.4070-81.

150. Lawson K.A., Dunn N.R., Roelen B.A., Zeinstra L.M., Davis A.M., Wright C.V., Korving J.P., Hogan B.L. Bmp4 is required for the generation of primordial germ cells in the mouse embryo// Genes Dev. 1999. -Vol.13. - P.424-36.

151. Lee G. E., Murray J. W., Wolkoff A. W„ Wilson D. W. Reconstitution of Herpes Simplex Virus Microtubule-Dependent Trafficking In Vitro. // J. Virol. 2006. - Vol. 80. - P. 4264-4275.

152. Lobo R.A. Polycystic ovary syndrome. //Infertility, contraception and reproductive endocrinology. Ed. by D.R. Mishell and V. Davajan, 2-nd edition. Oradell: Medical Economics Books. — 1986. - p. 319-336.

153. Lycke E.B., Johanson M., Schon K., Ward M. Studies in knockout mice reveal that anti-chlamydial prQtection requires TH1 cells producing

154. N-gamma: is this true for humans?//Scand J Immunol. 1997. - Vol.46 (6). P.546-52.

155. Macchiarelli G., Nottola S.A., Vizza E., Familiari G., Kikuta A., Murakami Т., Motta P.M. Microvasculature of Growing and Atretic Follicles in the Rabbit Ovary: a SEM Study of Corrosion Casts.// Arch. Histol. Cytol. 1993. - Vol. 56. - P. 1-12.

156. Makabe S., Iwaki A., Hafez E.S.E., Motta P.M. Physiomorphology of fertile and infertile human ovaries. In: Motta P.M., Hafez E.S.E (Eds) Biology of the ovary. - 1980. - Martinus Nijhoff New York. - P. 280-290.

157. McCohen I.A., McCalion D.I. A study of the primordial germ cells during their migratory phase in steel mutant mice// Experiential. — 1975. -Vol.31.-P.589-590.

158. Mettenleiter T.C. Herpesvirus Assembly and Egress.// J. Virol. — 2002.-Vol.76.-P. 1537-1547.

159. Mignatti P., Morimoto Т., Rifkin D. B. Basic fibroblast growth factor released by single, isolated cells stimulates their migration in an autocrine manner.// Proc Natl Acad Sci U S A. 1991. - Vol. 88(24). - P. 1100711011.

160. Mosselman S.,'PoJn>an J., Dijkema R. ER beta: identification and characterization of a novel human estrogen receptor.// FEBS Lett. 1996. -Vol.19.-P.49-53.

161. Muller К. Gpl20 of HIV-1 induces apoptosis in rat cortical cell cultures: prevention by memantine // Eur. J. Pharmacol. 1992. - Vol. 226, N 6. - P. 209-214.

162. Nef S., Verma-Kurvari S., Merenmies J., Vassalli J.D., Efstratiadis A., Accili D., Parada L.F. Testis determination requires insulin receptor family function in mice. //Nature. 2003. - Vol. 426. - P. 291-5.

163. Nelson L.R, Bulun S.E. Estrogen production and action// J. Am. Acad. Dermatol. 2001 - Vol.45 (3 Suppl). - P. 116-24.

164. Nielsen T. D., Holt S., Ruelokke M. L., McEvoy F. J. Ovarian cysts in guinea pigs: influence of age and reproductive status on prevalence and size.// Journal of Small Animal Practice. 2003. - Vol. 44 (6). - P. 257260.

165. Nilsson E.E, Skinner M.K. Bone morphogenetic protein-4 acts as an ovarian follicle survival factor and promotes primordial follicle development// Biol Reprod. 2003. - Vol.69. - P.l265-72.

166. NottolaS. A., HeynR., Camboni A., CorrerS., MacchiarelliG. Ultrastructural characteristics of human granulosa cells in a coculture system for in vitro fertilization.// Microscopy Research and Technique. 2006. -Vol. 69 (6).-P.508 -516.

167. Odor D.L. Election microscopic studies on ovarian oocytes and unfertilized tubal ova in the rat. // J. Biophys. Biochem. Cytol. 1960. -Vol. 7. — P.567-574.

168. Oiney J. W. Excitatory transmitter neurotoxicity // Neurobiol. Aging. -1994. Vol. 15, N 2. - P. 259-260.

169. Oktay K, Briggs D, Gosden R.G. Ontogeny of follicle-stimulating hormone receptor gene expression in isolated human ovarian follicles.// J Clin Endocrinol Metab. 1997. - Vol. 82. - P. 3748-51.

170. Oropeza A., Wrenzycki C., Herrmann D., Hadeler K.G., Niemann H. Improvement of the developmental capacity of oocytes from prepubertal cattle by intraovarian insulin-like growth factor-I application.// Biol Reprod.- 2004.-Vol.70.-P. 1634-43.

171. Otsuka F., Shimasaki S. A negative feedback system between oocyte BMP 15 and granulose cell kit ligand: its role in regulating granulose cell mitosis// PNASU. 2002. - Vol. 99. - P.8060-5.

172. Ozawa M., Shi F.X., Watanabe G., Susuki A., Taya K. Regulatory role of the inhibin in follicle-stimulation hormone secretion and folliculogenesis in the guinea pig.//J.Vet.Med.Sci. — 2001. — Vol.63(10). — P.1091-1095.

173. Paradis E., Douillard H., Koutroumanis M. Amyloid beta peptide of Alzheimer's disease downregulates Bcl-2 and upregulates bax expression in human neurons // J. Neurosci. 1996. - Vol. 16, N 23. - P. 7533-7539.

174. Paus R., Menrad A., Czameizki B. Neurobiologie der Haut: Apoptose // Hautarzt. -1995. Bd 46, N 3. - S. 285-303.

175. Pedersen T. Follicle growth in mouse ovary// Oogenesis ed. I.D. Bigger., A.W. Shuetz. Baltim. Univ.Press. 1972. -P.361-376.

176. Peters H., Himelstein-Braw R., Faber M. The normal development of the ovary in childhood.// Acta Endocrinol. 1976. - Vol.82. - P.617-630.

177. Philpott K. L., Me Carthy M. J., Backer D. Morphological and biochemical changes in neurons: apoptosis versus mitosis // Eur. J. Neurosci.- 1996. Vol. 8, N 9. - P. 19Q6-1915.

178. Pierce J. G., Parsons T.F. Glycoprotein hormones: structure and function.//Annu Rev Biochem. 1981. - Vol.50. -P.465-95.

179. Pinkerton J.H., McKay D J, Adams E.C. Development of the human Ovary. // ObsetGynec. 1961. Vol.18. - P.152-157.

180. Qin Z. H., Wang K, Chase T. N. Stimulation of N-methyl-D-aspartate receptors induces apoptosis in rat brain // Brain Res. 1996. - Vol. 725, N 2. -P. 166-176.

181. Quandt L.M., Hutz R.H. Induction by estradiol-17|3 of polycystic ovaries in the guinea pig. //Biol. Reprod. 1993. - Vol.48. - P.l088-1094.

182. Quanttropani S.L. Serous cysts of the aging guinea pig ovary.//Anat.Rec. 1977. - Vol.l88. -P.351-360.

183. Rawson, R. E., Duke G. E., Brown D. R. Effect of neurotensin on motility of chicken lower gut in vivo and in vitro.// Peptides. 1990. — Vol. 11. -P.641-645.

184. Reed K.E., Westpfyile E.M., Larson D.M., Wang H.Z., Veenstra R.D., Beyer E.C. Molecular cloning and functional expression of human connexin37, an endothelial cell gap junction protein// J Clin Invest. — 1993. -Vol.91. P. 997-1004.

185. Richardson S., Sennas V., Nelson J. Follicular depletion during the menopausal transition: evidence for accelerated loss and ultimate' exhaustition. //Jour Clin Endocr Metab. 1987. - Vol.65. - P. 1231-7.

186. Rivier C., Vale W. Immunization of endogenous inhibin modifies hormone secretion and ovulation in the rat.//pndocrinol. — 1989. Vol.125. -P.152-157.

187. Robker R.L., Richards J.S. Hormone-induced proliferation and differentiation of granulosa cells: a ppprdinated balance of the cell cycleregulators cyclin D2 and p27Kipl// Mol Endocrinol. 1998. - Vol.12. -P. 924-40.

188. Rosenfeld C.S., Murray A.A., Simmer G., Hufford M.G., Smith M.F., Spears N., Lubahn D.B. Gonadotropin induction of ovulation and corpus luteum formation in young estrogen receptor-alpha knockout mice// Biol. Reprod. 2000. - Vol. 62. - P.599-605.

189. Rosenfield R.L. //Baillieres Clin Obstet Gynaecol. 1997. - Vol. 11. - P. 307-33.

190. Ross G.T, Lipsett MB. Hormonal correlates of normal and abnormal follicle growth after puberty in humans and other primates. //Clin Endocrinol Metab. 1978. - Vol.7 (3). - P.561-575.

191. Sancar A. DNA repair in humans // Ann. Rev. Genet. 1995. - Vol. 29 (2).-P. 69-105.

192. Sanfeliu N. Exposure to NMDA increases release of arachidonic acid in primary cultures of rat hippocampal neurons and not in astrocytes // Brain Res. 1990. - Vol. 259, N 2. - P. 241-248.

193. Satoh K. Reality pf P-680 chlorophyll protein Identification of the site of primary photochemistry in oxygenic photosynthesis.// Physiologia Plantarum. - 1988. - Vol. 72 (1). -P. 209-212.

194. Saunders K.B., D'Amore P.A., Thompson R.W., Whalen G.F., Hores T. Heparin-mediated release pf fibroblast growth factor-like activity into the circulation of rabbits.//Growth Factors. 1990. - Vol.3. - P.221-229.

195. Savio G. Neurotoxity of HIV coat protein gpl20, NMDA-receptors and protein kinase C: a study with cerebellar granule cell cultures // J. Neurosci. Res. 1993. - Vol. 34, N 4. - P. 265-272.

196. Shi F.X., Petroff B.K., Herath C.B., Ozawa M., Watanabe G., Taya K. Serous cysts are a benign component of the cyclic ovary in the guinea pig with an incidence dependent upon inhibin bioactivity.//J.Vet.Med.Sci. — 2002. Vol.64(2). —P.129-135.

197. Shieh M.T., Dunn D. W., Montgomery R.I., Esko J.D., Spear P.G. Cell surface receptors for herpes simplex virus are heparan sulfate proteoglycans.// The Journal of Cell Biology. 1992. - Vol. 116. - P. 12731281.

198. Sieczkarski S.B., Whittaker G.B. Influenza Virus Can Enter and Infect Cells in the Absence of Clathrin-Mediated Endocytosis. //J. Virol. 2002. -Vol.76.-P. 10455-10464.

199. Siman R., Scott R. W. Strategies to alter the progression of Alzheimer's disease // Curr. Opin. Biotechnol. 1996. - Vol. 7, N 6. - P. 601607.

200. Sodeik В., Ebersold M.W., Helenius A. Microtubule-mediated transport of incoming herpes simplex virus 1 capsids to the nucleus.// J. Cell Biol.-1997.-Vol. 136. -P. 1007-1021.

201. Spicer L.J., Alvarez P., Prado T.M., Morgan G.L., Hamilton T.D. Effects of intraovarian infusion of insulin-like growth factor-I on ovarian follicular function in cattle.// Domest Anim Endocrinol. 2000. - Vol.18. -P. 265-78.

202. Stanberry L.R. Animal model of ultraviolet-radiation induced recurrent herpes simplex virus infection// Journal of Medical Virology. — 1989-Vol.28.-P.125-128.

203. Stark К., Vainio S., Vassileva G., McMahon A.P. Epithelial transformation of metanephric mesenchyme in the developing kidney regulated by Wnt-4.//Nature. 1994. - Vol. 372. - P.679-683.

204. Tapia A. NMDA-receptor activation stimulates phospholipase A2 and somatostatin release from rat cortical neurons in primary cultures // Eur. J. Pharmacol. 1992. - Vol. 225, N 2. - P. 253-262.

205. Tweedy A. Polycystic ovary syndrome.//J.Am.Acad.Nurse Pract. — 2000.-Vol.26.-P.101-105.

206. Upadhyay S., Luciani J.M., Zambony L. The role of the mesonephros in the development of indifferent gonads and ovaries of the mouse// Ann.Biol.Anim.Biochem.Biophys. -1979.-Vol.19 (4B).-P. 1179-1196.

207. Ushijima H. HIV 1 gpl20 and NMDA differentially induce protein kinase С translocation in rat primary neuronal cultures / / J. Acq. Immun. Defic. Syndrome. 1993. - Vol. 6, N 3. -P. 339-343.

208. Vainio S., Heikkila M., Kispert A., Chin N., McMahon A.P. Female development in mammals is regulated by Wnt-4 signalling.//Nature. 1999. - Vol.397.-P.405-409.

209. Vigier В., Piqard J.-Y., Bezard J., Josso N. Anti-Mullerian hormone: A local or long-distance morphogenetic factor?// Hum Genet. 1981. - Vol. 58.-P. 85-90.

210. Walsh L.S.N. The growth of the ovarian follicle of the guinea pig under normal and pathological conditions.// J. Exp. Med. 1917. Vol. 26 -P.245-261

211. Wartenberg H. Development of the early human ovary and the role of the mesonephros in the differentiation of cortex// Anat.Embr. — 1982. -Vol.165, Vol.2. — P.259-280.

212. Waters С. M. Mechanisms of neuronal cell death. An overview I I Mol. Chem. Neuropathol. 1996. - Vol. 28, N 1-3. -P. 145-151.

213. Whitley R.G., Hutto C. Neonatal herpes simplex virus infections.// Pediatr Rev. 1985. - Vol. 7. - P. 119-126.

214. Whitly R. Diagnosis and Treatment of Herpes Simplex Encephalitis.// Annual Review of Medicine. 1980. - Vol. 32. - P. 335-340.

215. Wheaton J., Carson K., Kusina N. Active and passive immunoneutralisation of inhibin increases follicle stimulating hormone levels and ovulation rate in ewes.//Biol.Reprod. 1992. - Vol.47. - P.361-367.

216. Wildt L. Die endokrine Kontrolle der Ovarialfunktion und die Pathologie endokriner Ovarialfimktionsstorungen. // Neue Wege in Diagnostik und Therapie der weiblichen Sterilitat. -Hrsg. von K. Diedrich. -Stuttgart: Enke. -1987. P. 1-25.

217. Witschi E. Genetique et phsiologie de la differentiation du sexe. // Archs Anat Microsc Morph Exp. 1950. - Vol. 39. - P. 216-246.

218. Wrenzycki С D., Hiemann H., Oropeza A. Timing of Blastocyst Expansion Affects Spatial Messenger RNA Expression Patterns of Genes in Bovine. Blastocysts Produced in Vitro// Biol Reprod. 2000. - Vol. 3.1. P. 1095-1099.

219. Xavier F., Alland^S. Anti-Mullerian hormone, catenin and Mullerian duct regression.// Molecular and Cellular Endocrinology. 2003. — Vol. 211. P. 115-121.

220. Xiong Y., Menninger J., Beach D., Ward D.C. Molecular cloning and chromosomal mapping of CCND genes encoding human D-type cyclins.// Genomics 1992. - Vol. 13. - P. 575-84.

221. Zamboni L., Upadhyay S. Germ cells differentiation in mouse adrenal glands// J.Exp.Zool. 1983. - Vol.228. -P.173-193.

222. Zambony L., Bezard J., Mauleron R. The role of the mesonephros in the development of the sheep fetal ovary//

223. Ann.Biol.Anim.Biochem.Biophys. -1979. Vol.19 (4B). - P. 1153-1178.

224. Zambony L., Merchant H. The fine morphology of mouse primordial germ cell in extragonadal locations// Am.J.Anat. — 1973. Vol.137. — P.299-335.

225. Zuckerman S. The number of oocytes in the mouse ovary.// Recent Prog Horm Res. 1951. - Vol6.-P.63 - 108.

Информация о работе

Шевлягина, Наталья Владимировна
кандидата медицинских наук
Москва, 2008
ВАК 03.00.25

Диссертация

Морфологическая характеристика яичников морских свинок в экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Морфологическая характеристика яичников морских свинок в экспериментальной модели рецидивирующего генитального герпеса - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы