Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки полости рта при введении цитостатиков.

Леонтьева, Ирина Валерьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки полости рта при введении цитостатиков.
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки полости рта при введении цитостатиков."

На правах рукописи

ЛЕОНТЬЕВА Ирина Валерьевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА ПРИ ВВЕДЕНИИ ЦИТОСТАТИКОВ

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 2011

2 НЮН 2011

4848473

Работа выполнена на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Быков Владимир Лазаревич Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Верин Владимир Константинович кандидат медицинских наук, доцент Кожухарь Владимир Гарибальдиевич

Ведущее учреждение - Учреждение Российской академии медицинских наук «Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины Северо-западного отделения РАМН».

Защита диссертации состоится « » 2011 г. в '/О часов

на заседании диссертационного совета Д 208. 087. 01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (194100, Санкт-Петербург, Литовская ул., д. 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России (194100, Санкт-Петербург, Кантемировская ул., д. 16.)

Автореферат разослан «

.ШЦ 2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Цитостатическая терапия, широко применяемая для лечения злокачественных новообразований, аутоиммунных заболеваний и в трансплантологии [Colvin О.М., 2003; Eisen HJ. et ai., 2005], сопряжена с развитием осложнений, связанных с повреждающим действием цитостатиков на различные ткани и органы, в частности, на слизистые оболочки [Волкова М.А. и др., 1988; Bcnsadoun R.J. et al., 2006; Bültzingslöwen I., Jonteil M., 1999; Chen T.et al., 2000]. Из последних наиболее часто поражается слизистая оболочка полости рта (СОПР), в которой развивается особый воспалительный процесс — мукозит, нередко сопровождающийся выраженными клиническими проявлениями (эритемой, болезненностью, отечностью, кровоточивостью, сухостью во рту, атрофией, потерей вкусовых ощущений и нарушением питания) и тяжелыми повреждениями тканей вплоть до обширных изъязвлений и возникновения диссеминированных инвазивных инфекционных поражений. Распространению микроорганизмов, способствуют сопутствующие цитостатической терапии лейкопения и иммуносупрессия [Акопян О.Г., 1997; Иванова О.В., 2001; Рыбаков А.И., Банченко Г.В., 1978; Blijlevens N. et al., 2004; Lalla R.V. et al., 2008; Naidu M. et al., 2004; Peterson D.E., Schubert M.M., 2001; Sonis S.T. et al., 2004; Squier C.A., 1990]. Среди ци-тостатических препаратов наиболее выраженное стоматотоксическое действие оказывают алкилирующие агенты, алкалоиды, антиметаболиты и противоопухолевые антибиотики [Cancer Chemotherapy, 2010].

Хотя вопросам клинической диагностики, лечения и профилактики му-козита полости рта посвящена обширная литература, тканевые и клеточные механизмы повреждения и регенерации СОПР остаются недостаточно изученными. Имеющиеся представления основаны на результатах разрозненных патоморфологических исследований клинического материала и единичных экспериментальных исследований [Dörr W., Hönig М., 1994; Gibson R.J. et al., 2006; Lockhart P.B, Sonis S.T., 1981; Logan R.M. et al., 2007; Sonis S.T., 1997]. Отсутствуют сравнительные сведения о характере и динамике изменений в покровном и железистом эпителиях, собственной пластинке слизистой оболочки и подслизистой основе, особенностях повреждения и регенерации тканей СОПР с учетом их топографии. Также нет единого мнения об обратимости наблюдаемых изменений после отмены цитостатиков. Между тем, такие сведения необходимы для поиска оптимальных путей профилактики осложнений химиотерапии, защиты СОПР от воздействия повреждающих факторов и лечения возникающих поражений. Эти данные могут представлять и теоретический интерес для биологии тканей, поскольку позволяют оценить развитие процессов повреждения и регенерации структурных компонентов СОПР в уникальных условиях введения цитостатиков, вызывающих цитоток-сический эффект, подавляющих пролиферативную активность тканей, индуцирующих лейкопению, угнетение реакций клеточного и гуморального иммунитета, обусловливающих усиленную микробную колонизацию.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. На экспериментальных моделях провести комплексное изучение структурно-функциональных изменений тканей СОПР при воздействии цитостатиков и оценить их топографические особенности и обратимость.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. С использованием гистологических, морфометрических, гистохимических и иммуношстохимических методов провести морфофункциональную оценку состояния СОПР при кратковременном введении высоких доз цито-статика алкилирующего ряда циклофосфана (ЦФ);

2. Изучить морфофункционалыше изменения СОПР в различные сроки после отмены ЦФ, кратковременно вводимого в высоких дозах;

3. Дать морфофункциональную оценку состояния СОПР в динамике длительного введения умеренных доз ЦФ;

4. Провести сравнительный морфофункциональный анализ особенностей повреждения и регенерации покровного и железистого эпителиев, соединительнотканного компонента и сосудов СОПР с учетом топографических особенностей и режима введения ЦФ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ. Впервые анализ морфофункци-ональных изменений СОПР выполнен на моделях, дающих возможность со-четанной оценки состояния покровного и железистого эпителиев, собственной пластинки слизистой оболочки, подслизистой основы и сосудов. Впервые проведено комплексное экспериментальное гистологическое, морфомет-рическое, гистохимическое и иммуногистохимическое исследование состояния СОПР при введении цитостатика алкилирующего ряда ЦФ. Получены новые данные о динамике изменений покровного и железистого эпителиев в условиях экспериментальной цитостатической терапии, а также об особенностях повреждения и регенерации покровного эпителия в различных топографических зонах. Впервые проведен анализ структурных и гистохимических изменений малых слюнных желез различных типов при воздействии цитостатика. Получены новые сведения об особенностях тканевых и клеточных механизмов повреждения и регенерации СОПР в зависимости от дозы и длительности введения цитостатика. Впервые прослежена динамика сочетанных изменений эпителия, соединительной ткани собственной пластинки и подслизистой основы СОПР, а также сосудистого компонента под воздействием цитостатика. Получены новые сведения о дифференциальной чувствительности и устойчивости компонентов СОПР в условиях острого и хронического введения цитостатика. Впервые оценена степень обратимости изменений СОПР в различные сроки после отмены цитостатика.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Научное значение проведенного исследования состоит в расширении и дополнении имеющихся теоретических представлений о влиянии цитостатиков на морфофункционалыше состояние СОПР. Полученные данные уточняют природу и характер ведущих клеточных и тканевых механизмов развития осложнений цитостатической терапии, связанных с нарушением целостности эпителиаль-

ного тканевого барьера СОПР, его регенерации, метаболизма, деятельности железистого эпителия, подавлением специфических и неспецифических тканевых и клеточных защитных реакций, нарушением васкуляризации и взаимодействия различных клеток слизистой оболочки.

Практическое значение исследования состоит в получении данных о динамике морфофункциональных изменений отдельных структурных компонентов СОПР и их дифференциальной чувствительности к действию цитостатика, которые необходимы для правильной оценки клинических проявлений осложнений цитостатической терапии, проведения их эффективного лечения и профилактики.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Введение цитостатика анкетирующего ряда циклофосфана вызывает обратимые изменения в покровном и железистом эпителиях, которые по характеру и направленности сходны при кратковременном введении высоких доз и длительном введении умеренных доз препарата. При обеих схемах введения цитостатика в покровном эпителии нарушаются процессы пролиферации, дифференцировки, ороговения и десквамации. В железистом эпителии отмечены структурные изменения, сочетающиеся с угнетением метаболизма и синтетической активности его клеток. Указанные изменения менее выражены при длительном введении умеренных доз циклофосфана, что обусловлено меньшим повреждающим действием препарата на ткани и более активными процессами адаптации на тканевом и клеточном уровнях.

2. Изменения в соединительной ткани собственной пластинки и под-слизистой основы в условиях острого и хронического введения циклофосфана также протекают однотипно и проявляются развитием отека, снижением числа фибробластов, гранулоцитов, агранулоцитов, макрофагов и тучных клеток. При длительном введении препарата эти изменения менее выражены, но имеют более устойчивый характер.

3. Сопоставление показателей, характеризующих состояние покровного эпителия и соединительной ткани собственной пластинки и подслизистой основы, показало, что процессы повреждения и регенерации протекают в этих компонентах сочетанно в одни и те же сроки и имеют примерно одинаковую общую выраженность, независимо от схемы введения циклофосфана.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: 7-й Всероссийской научной конференции (Бабухинские чтения), г. Орел, 2009; 6-м Всероссийском съезде анатомов, гистологов, эмбриологов, г. Саратов, 2009; 8-й Всероссийской конференции по патологии клетки, М, 2010; X конгрессе Международной ассоциации морфологов, г. Ярославль, 2010; Научной конференции учёных-морфологов Санкт-Петербурга, посвященной 200-летию со дня рождения проф. Н.И. Пирогова, СПб, 2010.

ПУБЛИКАЦИИ И ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, включая 7 — в журналах, рекомендованных ВАК. Основные положения диссертации внедрены в учебный процесс кафедр гистологии, цитологии и эмбриологии,

патологической анатомии, терапевтической стоматологии ГОУ ВПО СПбГМУ им. И.П. Павлова Росздрава.

ОБЪЁМ и СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 100 стр. (текст) и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, результатов собственных исследований, их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Список литературы содержит 150 источников, из них — 118 зарубеж-_ ных. В работе 86 иллюстраций (43 микрофотографии, 43 графика) и 33 таблицы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В экспериментах использовали 160 самок белых беспородных мышей с массой тела 23-25 г (питомник «Рапполово»), которым внутрибрюшинно вводили ЦФ (ЛЭНС-Фарм, Россия): животным группы А (п=75) каждые 48 ч кратковременно в высоких дозах (400 мг/кг массы тела в течение 1-5 сут), мышам группы Б (п=45) — с тем же интервалом длительно в умеренных дозах (40 мг/кг в течение 1-70 сут). В качестве объекта исследования был выбран язык, так как при его изучении можно одновременно оценить состояние различных компонентов СОПР — покровного и железистого эпителиев (образующего белковые и смешанные железы языка), собственной пластинки и подслизистой основы, сосудов. Изучение этого органа позволяет также проследить особенности изменений в различных топографических зонах — на вентральной (ВП) и дорсальной (ДП) поверхности, а в пределах последней — в области нитевидных сосочков языка и в участках между ними.

Материал от животных группы А получали через 1 сут после 1 и 3 инъекций (на 2-е и 6-е сутки эксперимента соответственно). Для изучения обратимости изменений, вызванных ЦФ, взятие материала осуществляли через 10,15 и 20 сут после трех инъекций препарата (15-е, 20-ё и 25-е сутки эксперимента соответственно). Материал от животных группы Б получали после 8, 24 и 35 инъекций (на 16-е, 48-е и 70-е сутки эксперимента соответственно). Животным контрольных групп (Kj для группы А и К2 для группы Б) с той же периодичностью, что и ЦФ, вводили изотонический раствор хлорида натрия. Мышей декапитировали под лёгким эфирным наркозом через 24 ч после очередной инъекции, материал помещали в фиксатор Лилли (спирт, уксусная кислота и формалин), забуференный 10% формалин (рН=7,0) или в жидкий азот. При осуществлении эксперимента соблюдали «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ № 755 от 12.08.1977 г. МЗ СССР). Для выполнения эксперимента получено решение Этического комитета СПбГМУ им. И.П. Павлова от 19.11.09.

Общегистологические и морфометрические исследования проводили на поперечных и продольных парафиновых срезах языка толщиной 5-6 мкм, окрашенных гематоксилином-эозином, а также азур Ii-эозином по Ро-

мановскому. При визуальной оценке изучали не менее 5 срезов от каждого животного, учитывая признаки, характеризующие морфофункциональное состояние покровного и железистого эпителиев и соединительнотканного компонента (собственной пластинки на ДП и собственной пластинки совместно с подслизистой основой на ВП). Морфометрические исследования покровного эпителия включали определение толщины его пласта и отдельных слоев на обеих поверхностях языка. Измерения проводили с помощью линейного окулярного микрометра при увеличении х280, а также микровизора проходящего света nVizo-102 (ОАО J10M0, Санкт-Петербург, Россия) при увеличении х400, выполняя по 100 измерений на 5 срезах от каждого животного. В базальтом слое оценивали митотическую активность, просматривая не менее 3000 клеток у каждой мыши при увеличении х900.

При морфометрической оценке соединительнотканного компонента определяли его толщину (окулярным микрометром и микровизором) и плотность расположения фибробластов, агранулоцитов, гранулоцитов и тучных клеток (с помощью тест-сетки площадью 25600 мкм2при увеличении хбЗО). Оценивали степень дегрануляции тучных клеток по полуколичественной 4-балльной шкале [Виноградов В.В., Воробьёва Н.Ф., 1973], одновременно учитывая их топографию. Относительный объём сосудов микроциркулятор-ного русла определяли стереологическим методом точечного счёта с использованием тест-сетки окулярного микрометра, учитывая данные регистрации 1000 точек [Автандилов Г.Г., 1990].

Гистохимические и цитофотометрические исследования * проводили на парафиновых и криостатных срезах. На парафиновых срезах аль-циановым синим (рН=2,7) выявляли гликозаминогликаны, ШИК-реакцией — гликопротеины [Пирс Э., 1962], тетразолиевой реакцией на гистидин, тирозин и триптофан по Берстону — суммарные белки [Берстон М., 1965]. На криостатных срезах толщиной 10 мкм тетразолиевым методом выявляли активность фермента сукцинатдегидрогеназы (СДГ) — индикатора состояния митохондрий [Лойда 3. и др., 1982], отражающего энергообеспечение клеток и интенсивность обменных процессов в них. Активность СДГ, содержание суммарных белков в покровном эпителии и сероцитах, гликозаминоглика-нов и гликопротеинов в мукоцитах оценивали на спектроцитофотометре плаг-методом при увеличении х280, площади зонда 0,785 мкм2, длинах волн 467 нм (реакция выявления суммарных белков), 545 нм (реакция выявления СДГ), 595 нм (ШИК-реакция) и 645 нм (альциановый синий) [Агроскин JI.C., Папаян Г.В., 1977; Журавлёва Т.Е., 1978]. Активность СДГ измеряли в цитоплазме клеток базального и шиповатого слоев эпителия на обеих поверхностях языка и в эпителиоцитах концевых отделов малых слюнных желез языка (сероцитах белковых и смешанных концевых отделов и мукоцитах

♦Гистохимические и цитофотометрические исследования выполнены на базе Отдела патологии НИЦ ГОУ ВПО СПбГМУ им. И.П. Павлова. Приносим свою искреннюю благодарность руководителю Отдела проф. В.В.Томсону и сотрудникам лаборатории.

слизистых и смешанных концевых отделов). Концентрацию суммарных белков определяли в базальном, шиповатом и роговом слоях эпителия на обеих поверхностях языка, а также в сероцитах концевых отделов белковых и смешанных слюнных желез.

Иммуногистохимические исследования*включали выявление бром-дезоксиуридина (BrdU) как маркера пролиферативной активности [Thompson P.J. et al., 1999] и белка Ibal — маркера макрофагов. Для выявления BrdU животным внутрибрюпшнно вводили 1 мг раствора BrdU (BD Phar-' mingen, США) за 1 сут до взятия материала. Срезы толщиной 5 мкм обрабатывали биотипилированными мышиными моноклональными антителами к BrdU (BD Pharmingen, США), затем стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой хрена — HRP (BD Pharmingen, США), конъюгатом тирамида с флюоресцеином и антифлюоресцеином-HRP из амплифицирующего набора CSA II (Dako, Дания). Далее срезы инкубировали с раствором хромогена — диаминобензидина (Dako, Дания) и докрашивали астровым синим. Подсчитывали количество клеток с маркированными ядрами (ЕМЦ^клетки) на 1000 клеток базального слоя эпителия при увеличении *900.

Для выявления макрофагов срезы инкубировали с 3% перекисью водорода и в блокировочном протеиновом растворе (Spring Bioscience, США). Препараты последовательно обрабатывали козьими поликлональными антителами к Iba-1 (AbCam, Великобритания), далее — вторичными биотинили-рованными антителами (Link из набора LSAB + System-AP, Dako, Дания) и затем стрептавидином, конъюгированным с HRP (BD Pharmingen, США). В дальнейшем срезы инкубировали с раствором хромогена — диаминобензи-дином из набора DAB+ (Dako, Дания) и докрашивали гематоксилином. С помощью окулярной сетки при увеличении *630 подсчитывали количество макрофагов на стандартной площади среза.

Статистическую обработку количественных данных проводили с использованием программного пакета Statistica for Windows V6.0 на персональном компьютере Pentium III. Для каждого показателя определяли среднее значение и ошибку средней арифметической; значимость различий средних величин показателей оценивали с помощью критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Экспериментальная группа А. Покровный эпителий. При кратковременном введении ЦФ изменения наблюдались на обеих поверхностях языка. На ВП отмечалось выраженное неравномерное истончение эпителиального

*Иммунохимическое исследование выполнено в лаборатории центральной и периферической нервной системы Отдела общей и частной морфологии НИИ экспериментальной медицины РАМН. Приносим свою искреннюю благодарность проф. Д.Э. Коржевскому, сотрудникам лаборатории и лично Е.Г. Сухоруковой за помощь в исследованиях.

пласта за счет уменьшения толщины шиповатого слоя, которое сочеталось с утолщением и разрыхлением рогового слоя. Морфом етрически на ВП по сравнению с группой Ki определялось уменьшение толщины пласта эпителия на 40%, шиповатого слоя — на 58% с одновременным утолщением рогового слоя на 20%. Утолщение рогового слоя (на 35%) и его расслоение максимальны на ДП в области сосочков языка, где толщина всего эпителиального пласта увеличивалась на 33% после 3 инъекций препарата. Шиповатый слой истончался, но в меньшей степени, чем на ВП (на 10%). Истончение шиповатого слоя, по-видимому, связано с воздействием ЦФ на стволовые клетки ба-зального слоя эпителия, что подтверждается данными о снижении митотиче-ской активности (на 38% и 67%) и числа ВгсИГ-клеток (на 50% и 59%) — на ДП и ВП соответственно. Отмеченные изменения свидетельствуют о нарушении процессов пролиферации, дифференцировки (включая ороговение), десквамации и сходны с описанными в многослойных эпителиях при введении цитостатиков [Исеева Е.А., Быков B.JL, 2006; Logan R.M., 2008; Morvan F.O. et al., 2004; O'Morchoe P.J. et al., 1983].

Структурные изменения покровного эпителия при введении ЦФ сочетались с функциональными. Так, на 6-е сутки происходило снижение активности СДГ в цитоплазме эпителиоцитов базального и шиповатого слоев на обеих поверхностях языка (максимально на 30% в клетках шиповатого слоя на ДП в области сосочков языка, минимально — на 15% в клетках шиповатого слоя на ВП). Полученные результаты согласуются со сведениями об угнетении цитостатиками активности митохондриальных ферментов в сходном по строении эпителии пищевода [Исеева Е.А., Быков В.Л., 2006]. При введении ЦФ отмечено уменьшение содержания белка в шиповатом и роговом слоях на ДП (на 40% и 30,5% соответственно) и на ВП языка (на 28% и 16,5% соответственно) по сравнению с величиной показателей в группе К[.

В целом, истончение эпителиального пласта, угнетение пролиферации, нарушение дифференцировки и ороговения его клеток, замедление процесса десквамации с разрыхлением рогового слоя, в сочетании с торможением белкового синтеза и подавлением активности митохондрий указывают на существенное повреждение эпителия цитостатиками. Эти изменения, вероятно, лежат в основе нарушения барьерных свойств эпителия СОПР при цитоста-тической химиотерапии [Bültzingslöwen I. et al., 2001; Dörr W., Honig M., 1994; Gibson R.J. et al., 2006], способствующего попаданию в подлежащие ткани чужеродных антигенов, микробов и их продуктов.

Железистый эпителий. Гистологически определялось уменьшение объема концевых отделов белковых и смешанных желез языка и размеров образующих их сероцитов и мукоцитов. Гистохимическое исследование выявило снижение концентрации белков в сероцитах на 40% уже после 1-й инъекции ЦФ. Активность СДГ под действием ЦФ снижалась в сероцитах на 35% и в мукоцитах на 15% по сравненшо с таковой в контроле. Угнетение синтеза гликопротеинов и гликозаминогликанов в мукоцитах (на 20% и 27% соответственно) происходило только после 3 инъекций препарата.

Выявленные структурные изменения эпителия малых слюнных желез в сочетании с отмеченным угнетением в нем метаболических и синтетических процессов согласуются со сведениями о повреждении больших слюнных желез при цитостатической терапии, приводящем к развитию ксеросто-мии [Jensen S.B. et al., 2003]. Сероциты изученных малых слюнных желез обладали большей чувствительностью к повреждающему действию ЦФ, чем мукоциты, что ранее было показано при изучении больших слюнных желез. [Epstein J.B. et al., 2002; Schubert M.M. et al., 1998].

Собственная пластинка и подслизистая основа в условиях острого опыта утолщались на 6-е сутки на 69-80%, преимущественно за счет развития отека, который является характерным клиническим и морфологическим признаком мукозита [Sonis S.T.et al., 1990; Squier C.A., 1990], связанным с увеличением проницаемости стенки сосудов микроциркуляторного русла.

Плотность расположения фибробластов в соединительнотканном компоненте снижалась на 6-е сутки опыта по сравнению с таковой в группе Ki на 40-43%, гранулоцитов — на 41-43% на обеих поверхностях языка. Плотность расположения агранулоцитов уменьшалась уже на 2-е сутки эксперимента на 40%, на 6-е сутки — на 49-52%. Это свидетельствует о том, что специфические иммунные механизмы страдают не в меньшей степени, чем неспецифические (представленные, главным образом, нейтрофилами), нарушению которых традиционно приписывали ведущую роль в развитии инфекционных осложнений цитостатической терапии [Peterson D.E., Cariello А., 2004; Sonis S.T. et al., 2004]. Уменьшение числа макрофагов в соединительной ткани слизистой оболочки языка на 50-56%, отмеченное уже после 1 инъекции ЦФ, в сочетании с ранее выявленным угнетением фагоцитарной и микробоцидной акгивности этих клеток при введении цитостатиков [Быков В.Л., 1990; Пахомова E.H., Быков B.JL, 1994], указывают на количественную и качественную недостаточность системы макрофагов как важный элемент нарушения защитных механизмов СОПР.

Содержание тучных клеток в собственной пластинке СОПР и подсли-зистой основе снижалось при введении ЦФ на 36 и 45% на ДП и на 22,4 и 36,5% на ВП языка (после 1 и 3 инъекций соответственно), что сочеталось с изменениями их топографии и степени дегрануляции. Происходило увеличение доли тучных клеток, расположенных вблизи базальной мембраны (в 1,5 раза на ВП и более, чем в 3 раза на ДП языка после 3 инъекций ЦФ), что, вероятно, отражает усиление взаимодействий между эпителием и соединительной тканью. Одновременно в 2,5 раза возрастало относительное содержание тучных клеток с сильной дегрануляцией, которая, по-видимому (вследствие массивного высвобождения вазоактивных медиаторов) обусловливала отмеченный отёк СОПР. Относительный объем сосудистого русла уменьшался на обеих поверхностях языка после 3 инъекций ЦФ, в большей степени на ВП (на 26%), чем на ДП (16%), что может быть связано с токсическим действием ЦФ на сосудистую стенку.

Период после отмены ЦФ характеризуется нормализацией большей части морфофункциональных показателей состояния СОПР.

Покровный эпителий. Толщина эпителиального пласта на ДП между сосочками языка и на ВП возвращалась к контрольным значениям к 20-м суткам после завершения введения препарата, что согласуется с данными изучения эпителия пищевода после отмены цитостатической терапии [Исее-ва Е.А., Быков В.Л., 2006; Albertsson М. et al., 1990] и указывает на значительные компенсаторные резервы покровного эпителия, высокую активность его регенерации. Лишь в области сосочков на ДП языка к концу опыта сохранялось увеличение толщины эпителиального пласта на 13% за счет разрыхления и утолщения рогового слоя эпителия.

Митотическая активность эпителиоцитов и количество ВгсИГ-клеток возрастали после отмены цитостатика. На 20-е сутки эксперимента на ВП эти показатели превышали контрольные значения на 33 и 52% соответственно, а на ДП показатель митотической активности нормализовался, тогда как число BrdLT-клеток увеличивалось на 27% между сосочками языка и на 24% — между ними. На 25-е сутки опыта митотическая активность не отличалась от контрольных значений, а количество ВгсИАклеток оставалось повышенным. Эти изменения, вероятно, являются компенсаторной реакцией камбиальных клеток эпителия, активирующихся после прекращения подавления их пролиферации [Loe Н. et al., 1972J. На восстановление морфофункциональных свойств эпителия указывают и гистохимические характеристики эпителиоцитов. Активность СДГ в базальном и шиповатом слоях эпителия возвращалась к исходному уровню к 20-м суткам эксперимента на ДП и ВП языка. Содержание белков в шиповатом и роговом слоях эпителия нормализовалось к 15-м суткам опыта во всех топографических зонах.

Железистый эпителий. Гистохимические характеристики мукоцитов (активность СДГ, содержание гликопротеинов и гликозаминогликанов) нормализовались уже на 15-е сутки эксперимента, а ссроцитов (активность СДГ, содержание белков) — лишь к 25-м суткам. Сравнительно быстрое восстановление структуры и функции клеток желез, по-видимому, обусловлено кратковременным введением ЦФ, не приводящим к их необратимым изменениям. Между тем, при современной длительной химиотерапии высокими дозами цитостатиков у пациентов описаны тяжелые повреждения слюнных желез [Jensen S.B. et al., 2003; Schubert M.M. et al., 1998], при которых их функция восстанавливается лишь спустя многие месяцы.

Собственная пластинка и подслизистая основа длительное время оставались утолщенными: на ДП и ВП их толщина возвращалась к контрольным значениям только на 20-е сутки после отмены ЦФ, что связано с увеличением объема межклеточного вещества соединительной ткани, по-видимому, вследствие стойкого отека СОПР. Плотность расположения фиброб-ластов после отмены ЦФ возвращалась к норме на обеих поверхностях только к 25-м суткам эксперимента. Этот показатель у гранулоцитов на 15-е сутки после отмены ЦФ превышал величину в контроле на 90% на ДП и на 81% на ВП, оставаясь повышенным (на 35-37%) к концу эксперимента.

Плотность расположения агранулоцитов превышала контрольные значения на 15-е сутки после отмены препарата (на 17% на ДП и на14% на ВП), нормализуясь к 20-м суткам. Близкие результаты были получены при изучении клеток дермы после воздействия высоких доз ЦФ [Albertsson М. et al., 1990].

После прекращения введения ЦФ содержание макрофагов в соединительной ткани на обеих поверхностях языка увеличивалось и превышало их количество у животных контрольной группы как на ДП, так и на ВП, максимально (на 24%) — на 15-е сутки. В этот же срок наблюдалось проникновение ма1фофагов в эпителий, что может быть связано с их привлечением ци-токинами, выделяемыми поврежденными клетками эпителия, и микробными продуктами [Wymenga A.N. et al, 1999].

Количество тучных клеток после отмены ЦФ к 20-м суткам эксперимента возрастало на ДП языка до уровня контрольных значений. На ВП в этот срок оно превышало контрольный уровень на 14%, что, вероятно, связано с развитием компенсаторной реакции — усиленной миграции зрелых ТК и дифференцировки их предшественников. После отмены ЦФ содержание тучных клеток в глубоких отделах собственной пластинки на ДП и в подслизи-стой основе на ВП вернулось к исходному уровню, стали преобладать клетки со слабой дегрануляцией. Относительный объем сосудов на ДП восстанавливался ужена10-е сутки после отмены препарата, анаВП — на 15-е сутки.

Экспериментальная группа Б. При длительном введении умеренных доз ЦФ в тканях СОПР происходили изменения, сходные, но, в целом, менее выраженные, чем в условиях острого опыта, что может быть связано с меньшим токсическим действием препарата, а также с реализацией тканевых и клеточных компенсаторно-приспособительных реакций. При этом, наряду с аналогичными изменениями, отмечены некоторые особенности.

Покровный эпителий СОПР при длительном введении умеренных доз ЦФ характеризуется, как и при введении высоких доз ЦФ, нарушениями процессов пролиферации, дифференцировки эпителиоцитов и десквамации, причем различия выраженности данных изменений на ДП и ВП нивелировались. Так, на ДП языка утолщение рогового слоя и всего эпителиального пласта (на 18% и на 17% соответственно) наблюдалось только на 16-е сутки опыта. На 48-е сутки введения цитостатика толщина эпителиального пласта статистически значимо уменьшалась во всех топографических зонах: на 21% — между сосочками и на сосочках языка на ДП, на 28% — на ВП за счет истончения шиповатого слоя. Уменьшение толщины эпителиального пласта на обеих поверхностях сохранялось к 70-м суткам эксперимента, что согласуется с данными об атрофии эпителия, как типичном проявлении химиотерапии [Dörr W., Hönig М., 1994; Lockhart P.B, Sonis S.T., 1981; Logan R.M. et al., 2008]. Эти изменения в указанные сроки наблюдений сопровождаются снижением митотической активности в базалыюм слое эпителия, более выраженным (на 26%) на ВП языка. На ДП языка к концу эксперимента митоти-ческая активность возвращалась к контрольным значениям, возможно, за счет развития компенсаторной реакции. Описанные явления свидетельству-

ют об умеренно выраженном нарушении процесса пролиферации, дифферен-цировки и кератинизации на фоне введения умеренных доз цитостатика.

Содержание суммарных белков в шиповатом слое эпителия уменьшалось на ДП в области сосочков языка (на 34%) и между сосочками (на 25%) уже на 16-е сутки опыта, тогда как на ВП языка данный показатель снижался только на 48-е сутки (на 22%). Наблюдалось уменьшение содержания белков в роговом слое эпителия, но в меньшей степени, чем в шиповатом слое во всех топографических зонах. Эти сдвиги указывают на изменения процессов дифференцировки эпителиоцитов и ороговения при длительном введении ЦФ, одновременно свидетельствуя о высоких адаптивно-компенсаторных способностях эпителия.

Железистый эпителий характеризуется снижением концентрации белков в сероцитах на 24, 38 и 21% на 16-е, 48-е и 70-е сутки соответственно. Степень выраженности данных изменений несколько превышает таковую в эпителиоцитах покровного эпителия и сопоставима с их уровнем в сероцитах слюнных желез при введении высоких доз ЦФ. Эти результаты подтверждают данные о высокой чувствительности сероцитов к повреждающему действию цитостатиков, полученные ранее при изучении больших слюнных желез [Dörr W., Kummer-mehr J., 1991]. Снижение синтеза гликозаминогликанов (на 22%) в мукоцитах малых слюнных желез наблюдалось на 48-е сутки опыта и сохранялось на 70-е сутки (на 16%). Концентрация гликопротеинов уменьшалась на 19% на 48-е сутки и возвращалась к норме на 70-е сутки опыта. Выраженность этих изменений была меньшей, чем при введении высоких доз цитостатика (см. выше), и более слабой, чем подавление синтеза белка в сероцитах в те же сроки, что подтверждает сведения о меньшей чувствительности мукоцитов к цитостатической терапии по сравнению с сероцитами [Dörr W., Kummermehr J., 1991; Epstein J.B. et al., 2002].

Собственная пластинка и подслизистая основа. Утолщение собственной пластинки на ДП языка происходило только в области сосочков на 48-е сутки эксперимента (на 24%), на ВП языка наблюдалось утолщение собственной пластинки и подслизистой основы (на 19-27%) во все сроки наблюдения. Данные изменения, по-видимому, связаны с отеком соединительной ткани на фоне расширения кровеносных сосудов и увеличения проницаемости сосудистой стенки. Эти явления аналогичны тем, что наблюдались при кратковременном введении высоких доз ЦФ и многократно описаны при изучении клинического материала [Adrian R.M. et al., 1980; Baker D.G., 1982].

При длительном введении ЦФ плотность расположения фибробластов, гранулоцитов и агранулоцитов в собственной пластинке и подслизистой основе снижалась в меньшей степени, чем при кратковременном введении высоких доз ЦФ. Так, содержание фибробластов снижалось на 48-е и 70-е сутки на 23-28% и 16-21% на ДП и ВП языка соответственно, что согласуется с данными о сравнительной устойчивости популяции фибробластов к действию цитостатиков в умеренных дозах [Chen Т. et al., 2006].

В условиях хронического эксперимента, так же, как и при кратковременном введении высоких доз ЦФ, агранулоциты обладали большей чувст-

вительностью к повреждающему действию цитостатика, чем гранулоциты. Плотность расположения агранулоцитов снижалась на 16-е сутки (на 15% и 16%) и на 48-е сутки (на 32% и 36%) на ДП и ВП соответственно, тогда как уменьшение числа гранулоцитов (на 29-34%) происходило только на 48-е сутки. Полученные данные согласуются с представлениями о том, что основным механизмом иммунодепрессивного действия ЦФ является подавление реакций клеточного иммунитета [Быков В.Л., 1990], они указывают также на существование механизма, поддерживающего некоторое количество нейтро-филов в тканях даже при их низком содержании в крови [Lieschke G.J. et al., 1992; Wright D.G. et al., 1986]. На 70-е сутки уменьшение плотности расположения агранулоцитов (29-34%) и гранулоцитов (27-31%) сохранялось, однако, несмотря на лейкопению, в отдельных участках наблюдалась лейкоцитарная инфильтрация соединительной ткани и эпителия, что может быть реакцией на поступление микробных продуктов и веществ, выделяемых гибнущими клетками [Graham G.J. et al, 1992; Wymenga A.N. et al., 1999].

Динамика количества, топографии и функциональной активности тучных клеток при длительном введении ЦФ в целом аналогична таковой при кратковременном введении препарата. Количество тучных клеток на 16-70-е сутки опыта стойко снижалось на обеих поверхностях языка по сравнению с показателями в группе К2 (максимально на 42% на ДП языка на 48-е сутки эксперимента). Эти результаты согласуются со сведениями об уменьшении плотности расположения тучных клеток в СОПР пациентов при длительном введении цитостатиков [Nurmenniemi P.K. et al., 2004]. Одновременно происходило увеличение доли этих клеток с сильной дегрануляцией (с 11-14% до 22-24% на 48-е сутки опыта) на обеих поверхностях языка, что может приводить к высвобождению большого количества гистамина с развитием вазоди-лятации и увеличением проницаемости сосудистой стенки при длительном введении ЦФ. В эти же сроки наблюдалось увеличение в 1,5 раза по сравнению с уровнем в группе Кг доли тучных клеток в непосредственной близости к базальной мембране покровного эпителия на обеих поверхностях. Одновременно почти в 2 раза снижалось число тучных клеток в глубоких отделах собственной пластинки на ДП и в подслизистой основе на ВП языка. Данные изменения могут указывать на усиление взаимодействия этих клеток с эпителием слизистой оболочки [Быков В.Л., 1999].

На 48-е сутки опыта гистологически и морфометрически определялось выраженное расширение кровеносных сосудов, особенно на ВП, приводящее к увеличению относительного объема сосудистого русла на 26%. На 70-е сутки данный показатель оставался повышенным на 18%. На ДП относительный объем кровеносных сосудов увеличивался на 19% (к 48-м суткам), нормализуясь к 70-м суткам. Расширение кровеносных сосудов на фоне длительного введения ЦФ (в отличие от их сужения при кратковременном введении высоких доз препарата), может быть связано с менее выраженным токсическим воздействием на сосудистую стенку умеренных доз ЦФ.

Таким образом, на представленных экспериментальных моделях прослежен ход морфофункциональных изменений отдельных компонентов

СОПР под воздействием цитостатика, оценена их выраженность и динамика в зависимости от режима введения препарата и топографии в пределах слизистой оболочки. Сопоставлены изменения в покровном и железистом эпите-лиях, а также в эпителиальном и соединительнотканном компонентах. В отличие от традиционного представления, о том, что в СОПР главной мишенью цитостатиков является эпителий, получешые в настоящей работе данные сравнительного анализа указывают на сочетаиные и выраженные примерно в равной степени изменения в эпителиальном и соединительнотканном компонентах как при повреждении, так и в ходе регенерации. Эти данные позволяют рассматривать СОПР как единую интегрированную систему взаимосвязанных и взаимозависимых тканевых и клеточных компонентов, обеспечивающих поддержание ее тканевого гомеостаза в норме, при повреждении, регенерации и адаптации в условиях воздействия цитостатика и после прекращения его введения.

ВЫВОДЫ

1. По данным гистологического, морфометрического, гистохимического и иммуногистохимического анализа, в слизистой оболочке языка при введении цитостатика цикпофосфана происходят сочетанные морфофункцио-нальные изменения покровного и железистого эпителия, собственной пластинки и подслизистой основы, приводящие к нарушению целостности барьерных систем и угнетению специфических и неспецифических тканевых и клеточных защитных механизмов. Характер и выраженность этих изменений зависят от дозы, режима введения цитостатика и обладают рядом особенностей в различных топографических зонах.

2. При кратковременном (1-5 сут) введении высоких доз циклофосфана (400 мг/кг массы тела) в покровном эпителии слизистой оболочки языка нарушаются процессы пролиферации, дифференцировки, кератинизации и де-сквамации: наблюдается утолщение эпителиального пласта за счет гиперкератоза и разрыхления рогового слоя, истончение шиповатого слоя, снижение митотической активности клеток базального слоя и содержания ВгсШ+-клеток. Нарушения метаболических и синтетических процессов проявляются угнетением активности СДГ, снижением содержания белков в цитоплазме эпителиоцитов.

3. Кратковременное введение высоких доз циклофосфана приводит к уменьшению объема концевых отделов малых слюнных желез и образующих их железистых клеток. Гистохимические изменения проявляются снижением активности СДГ в эпителиоцитах желез, уменьшением концентрации белков в сероцитах (белковых концевых отделов и белковых полулуний смешанных отделов), гликопротеинов и гликозаминогликанов в мукоцитах (слизистых и смешанных концевых отделов). Описанные изменения более выражены (развиваются раньше и проявляются сильнее) в сероцитах, чем в мукоцитах.

4. При кратковременном введении высоких доз циклофосфана выявляются выраженный отек и утолщение собственной пластинки слизистой обо-

лочки и подслизистой основы языка, уменьшение относительного объема сосудов и плотности расположения фибробластов, агранулоцитов, гранулоци-тов, макрофагов и тучных клеток с увеличением доли дегранулирующих клеток, расположенных вблизи базальной мембраны эпителия.

5. После отмены циклофосфана в течение 15-20 сут большая часть морфофункциональных характеристик покровного эпителия (толщина пласта, митотическая активность эпителиоцитов, концентрация белков в различных слоях, активность СДГ) возвращаются к контрольным значениям при одновременной нормализации состояния железистого эпителия. Восстановление структуры и функциональной активности мукоцитов происходит в более ранние сроки, чем сероцитов.

6. В собственной пластинке слизистой оболочки языка к концу восстановительного периода частично сохраняются явления отёка. Плотность расположения фибробластов постепенно возвращается к норме, а количество гранулоцитов, агранулоцитов, макрофагов и тучных клеток, повышается в середине восстановительного периода (по-видимому, в результате компенсаторной реакции), нормализуясь к его концу (за исключением содержания гранулоцитов). В отдельных участках макрофаги внедряются в эпителий.

7. При длительном (до 70 сут) введении умеренных доз циклофосфана (40 мг/кг массы тела) в покровном эпителии слизистой оболочки языка отмечаются нарушения процессов пролиферации, дифференцировки, кератиниза-ции и десквамации эпителиоцитов, выраженные в меньшей степени, чем при введении высоких доз препарата. В железистом эпителии изменения синтетической активности имеют ту же направленность, но меньшую выраженность, чем при введении высоких доз циклофосфана.

8. Длительное введение умеренных доз циклофосфана обусловливает отек соединительной ткани и утолщение собственной пластинки, расширение кровеносных сосудов. Наблюдается стойкое уменьшение количества гранулоцитов, агранулоцитов, фибробластов, тучных клеток, среди которых преобладают клетки с сильной и умеренной дегрануляцией, расположенные вблизи базальной мембраны эпителия.

9. Особенности наблюдаемых изменений в различных топографических зонах при обеих схемах введения циклофосфана проявляются преобладанием нарушений процессов ороговения и десквамации эпителия на дорсальной поверхности языка и пролиферативной активность эпителиоцитов — на вентральной. Изменения в соединительной ткани собственной пластинки и подслизистой основы имеют сходный характер и выраженность на обеих поверхностях языка. Сопоставление показателей метаболической и синтетической активности эпителиоцитов покровного и железистого эпителиев в обеих экспериментальных группах показывает, что повреждения последнего развиваются раньше, имеют большую выраженность и устойчивость.

-17-

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Комплексный подход к изучению покровного и железистого эпителия, а также собственной пластинки и подслизистой основы языка, включающий общую характеристику структурной организации и архитектоники тканей, анализ процессов пролиферации, дифференцировки, десквамации, метаболической и синтетической активности эпителиоцитов, численности, распределения и функциональной активности различных популяций клеток соединительной ткани с учетом их топографии и компонентов сосудистого русла, позволяет дать объективную оценку тканевым и клеточным механизмам повреждения и регенерации слизистой оболочки полости рта в динамике введения цитостатиков и после их отмены.

2. Охарактеризованные экспериментальные модели воспроизводят основные явления, описанные при введении цитостатиков в клинических условиях, поэтому полученные при их исследовании данные могут быть использованы в качестве основы для анализа механизмов развития и течения муко-зита полости рта у человека.

3. Описанные экспериментальные модели могут быть рекомендованы для комплексного анализа влияния различных факторов (тип цитостатиче-ского препарата, дозировка, режим, путь и длительность его введения, возраст и пол пациентов, особенности микробного фактора и др.) на течение му-козита полости рта при цитостатической терапии.

4. Полученные в проведенной работе данные о морфофункциональных изменениях слизистой оболочки полости рта при введении цитостатиков с учетом топографии ее конкретных участков, дозы, длительности и режима введения препарата, могут быть использованы для уточнения интерпретации клинических данных, повышения эффективности морфологической диагностики, оптимизации способов лечения и профилактики мукозита полости рта.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кулаева В.В., Быков В.Л., Леонтьева И.В. Морфофункциональные отличия эпителия языка в различных топографических зонах // Бабухинские чтения. М: Издательство ЗАО «Ретиноиды», Альманах «Ретиноиды». - 2009. -вып. 29.-С. 165-166.

2. Кулаева В.В., Быков В.Л., Леонтьева И.В. Функциональная гетеромор-фия эпителия слизистой оболочки ротовой полости // Морфология. — 2009. — Т. 135,№4.-С. 24.

3. Леонтьева И.В. Гистологическое, морфометрическое и гистохимическое исследование реакций эпителия и соединительнотканного компонента слизистой оболочки полости рта на введение циклофосфана // Материалы конф. «Наследие Пирогова: прошлое, настоящее, будущее» - СПб.: ВМедА, 2010.-С. 120.

-184. Леонтьева И.В. Тучные клетки слизистой оболочки полости рта при введении цитостатика и после его отмены // Там же, С. 121.

5. Быков B.JL, Леонтьева И.В., Исеева Е.А. Морфофункциональные изменения эпителиев слизистой оболочки полости рта и пищевода при воздействии цитостатика // Морфология. - 2010. - Т. 137, №4. - С. 42.

6. Леонтьева И.В. Реакция тучных клеток и сосудистого русла слизистой оболочки полости рта на введение цитостатика // Морфология. - 2010. Т. 137,, №4.-С. 113.

7. Леонтьева И.В., Быков В.Л. Реакция системы тучных клеток слизистой оболочки полости рта на введение цитостатиков // Ученые записки СПбГМУ им. И.П. Павлова. -2010. - Т. 17, №4. - С. 34-38.

8. Леонтьева И.В. Морфометрическая и гистохимическая характеристика слизистой оболочки полости рта при введении цитостатиков // Сборник научных трудов 8 Всероссийской конференции по патологии клетки. - М.: МДВ.-2010.-С. 133-135.

9. Леонтьева И.В. Плотность распределения, топография и секреторная активность тучных клеток в слизистой оболочке полости рта при введении цитостатиков // Там же, С. 135-137.

10. Леонтьева И.В., Быков В.Л. Морфофункциональная характеристика эпителия слизистой оболочки полости рта при введении цитостатика // Морфология. - 2011. - Т. 138, № 1. - С. 52-60.

11. Быков В.Л., Леонтьева И.В. Повреждения и репаративная регенерация эпителия слизистой оболочки полости рта при воздействии цитостатиков (тканевые, клеточные и молекулярные механизмы) // Морфология. - 2011. -Т. 138,№2.-С. 7-17.

12. Быков В.Л., Леонтьева И.В. Тканевые и клеточные взаимодействия в слизистой оболочке полости рта при введении цитостатиков // Морфология. -2011.-Т. 138,№ 3 .-С. 7-14.

Формат 60x84 1/16. Объёмл'сл. печ. л.1,0 Тираж 100 экз. Заказ <ШГ Бесплатно. Подписано в печать 12.05.11 Отпечатано с готового оригинал-макета. Издательство «Система».

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Леонтьева, Ирина Валерьевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Краткая морфофункциональная характеристика слизистой оболочки полости рта.

1.2. Мукозит полости рта как осложнение цитостатической химиотерапии.

1.3.Морфофункциональная характеристика эпителия слизистой оболочки полости рта при действии цитостатиков.

1.4. Морфофункциональная характеристика собственной пластинки слизистой оболочки полости рта и подслизистой основы при введении цитостатиков.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки полости рта при введении цитостатиков."

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Цитостатическая терапия, широко применяемая для лечения злокачественных новообразований, аутоиммунных заболеваний и в трансплантологии [58, 66], сопряжена с развитием осложнений, связанных с повреждающим действием цитостатиков на различные ткани и органы, в частности, на слизистые оболочки [18, 39, 48, 56]. Из последних наиболее часто поражается слизистая оболочка полости рта (СОПР), в которой развивается особый воспалительный процесс — мукозит, нередко сопровождающийся выраженными клиническими проявлениями (эритемой, болезненностью, отечностью, кровоточивостью, сухостью во рту, атрофией, потерей вкусовых ощущений и нарушением питания) и тяжелыми повреждениями тканей вплоть до обширных изъязвлений и возникновения диссеминированных инвазивных инфекционных поражений. Распространению микроорганизмов, способствуют сопутствующие цитостатической терапии лейкопения и иммуносупрессия [4, 20, 29, 44, 85, 86, 106, 114, 130, 133]. Среди цитостатических препаратов наиболее выраженное стоматотоксическое действие оказывают алкилирующие агенты, алкалоиды, антиметаболиты и противоопухолевые антибиотики [54].

Хотя вопросам клинической диагностики, лечения и профилактики мукозита полости рта посвящена обширная литература, тканевые и клеточные механизмы повреждения и регенерации СОПР остаются недостаточно изученными. Имеющиеся представления основаны на результатах разрозненных патоморфологических исследований клинического материала и единичных экспериментальных исследований [64, 72, 91, 95, 111, 126, 141]. Отсутствуют сравнительные сведения о характере и динамике изменений в покровном и железистом эпителиях, собственной пластинке слизистой оболочки и подслизистой основе, особенностях повреждения и регенерации тканей СОПР с учетом их топографии. Также нет единого мнения об обратимости наблюдаемых изменений после отмены цитостатиков. Между тем, такие сведения необходимы для поиска оптимальных путей профилактики осложнений химиотерапии, защиты СОПР от воздействия повреждающих факторов и лечения возникающих поражений. Эти данные могут представлять и теоретический интерес для биологии тканей, поскольку позволяют оценить развитие процессов повреждения и регенерации структурных компонентов СОПР в уникальных условиях введения цитостатиков, вызывающих цитотоксический эффект, подавляющих пролиферативную активность тканей, индуцирующих лейкопению, угнетение реакций клеточного и гуморального иммунитета, обусловливающих усиленную микробную колонизацию.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: На экспериментальных моделях провести комплексное изучение структурно-функциональных изменений тканей СОПР при воздействии цитостатиков и оценить их топографические особенности и обратимость.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. С использованием гистологических, морфометрических, гистохимических и иммуногистохимических методов провести морфофункциональную оценку состояния СОПР при кратковременном введении высоких доз цитостатика алкилирующего ряда циклофосфана (ЦФ);

2. Изучить морфофункциональные изменения СОПР в различные сроки после отмены ЦФ, кратковременно вводимого в высоких дозах;

3. Дать морфофункциональную оценку состояния СОПР в динамике длительного введения умеренных доз ЦФ;

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ. Впервые анализ морфофункциональных изменений слизистой оболочки полости рта проведен на моделях, дающих возможность одновременной комплексной оценки состояния покровного и железистого эпителиев, собственной пластинки слизистой оболочки, подслизистой основы и сосудов. Впервые на экспериментальных моделях проведено комплексное гистологическое, морфометрическое, гистохимическое и иммуногистохимическое исследование состояния СОПР при введении цитостатика алкилирующего ряда ЦФ. Получены новые данные о динамике изменений покровного и железистого эпителиев в условиях экспериментальной цитостатической терапии, а также об особенностях повреждения и регенерации покровного эпителия в различных топографических зонах. Впервые проведен анализ структурных и гистохимических изменений малых слюнных желез различных типов при воздействии цитостатика. Получены новые сведения об особенностях тканевых и клеточных механизмов повреждения и регенерации СОПР в зависимости от дозы и длительности введения цитостатика. Впервые прослежена динамика сочетанных изменений эпителия, соединительной ткани собственной пластинки и подслизистой основы СОПР, а также сосудистого компонента под воздействием цитостатика. Получены новые сведения о дифференциальной чувствительности и устойчивости морфофункциональных показателей состояния СОПР в условиях острого и хронического введения цитостатика. Впервые оценена степень обратимости изменений СОПР в различные сроки после отмены цитостатика.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Научное значение проведенного исследования состоит в расширении и дополнении имеющихся теоретических представлений о влиянии цитостатиков на морфофункциональное состояние СОПР. Полученные данные уточняют природу и характер ведущих клеточных и тканевых механизмов развития осложнений цитостатической терапии, связанных с нарушением целостности эпителиального тканевого барьера

СОПР, его регенерации, метаболизма, деятельности железистого эпителия, подавлением специфических и неспецифических тканевых и клеточных защитных реакций, нарушением васкуляризации и взаимодействия различных клеток слизистой оболочки.

Основные положения диссертации внедрены в учебный процесс кафедр гистологии, цитологии и эмбриологии, патологической анатомии, терапевтической стоматологии ГОУ ВПО СПбГМУ им. И.П. Павлова Росздрава.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Введение цитостатика алкилирующего ряда циклофосфана вызывает обратимые изменения в покровном и железистом эпителиях, которые по характеру и направленности сходны при кратковременном введении высоких доз и длительном введении умеренных доз препарата. При обеих схемах введения цитостатика в покровном эпителии нарушаются процессы пролиферации, дифференцировки, ороговения и десквамации. В железистом эпителии отмечены структурные изменения, сочетающиеся с угнетением метаболизма и синтетической активности его клеток. Указанные изменения менее выражены при длительном введении умеренных доз циклофосфана, что обусловлено меньшим повреждающим действием препарата на ткани и более активными процессами адаптации на тканевом и клеточном уровнях.

2. Изменения в соединительной ткани собственной пластинки и подслизистой основы в условиях острого и хронического введения циклофосфана также протекают однотипно и проявляются развитием отека, снижением числа фибробластов, гранулоцитов, агранулоцитов, макрофагов и тучных клеток. При длительном введении препарата эти изменения менее выражены, но имеют более устойчивый характер.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: 7-й Всероссийской научной конференции (Бабухинские чтения), г. Орел, 2009; 6-м Всероссийском съезде анатомов, гистологов, эмбриологов, г. Саратов, 2009; 8-й Всероссийской конференции по патологии клетки, Москва, 2010; 10-м конгрессе Международной ассоциации морфологов, г. Ярославль, 2010; Научной конференции учёных-морфологов г. Санкт-Петербурга, посвященной 200-летию со дня рождения проф. Н.И. Пирогова, СПб, 2010.

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликованы 12 научных работ, из них 7 - в журналах, рекомендованных ВАК: 3 статьи и 3 материалов конференций в журнале «Морфология», 1 статья - в журнале «Ученые записки СПбГМУ им. И.П. Павлова».

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Леонтьева, Ирина Валерьевна

выводы

1. По данным гистологического, морфометрического, гистохимического и иммуногистохимического анализа, в слизистой оболочке языка при введении цитостатика циклофосфана происходят сочетанные морфофункциональные изменения покровного и железистого эпителия, собственной пластинки и подслизистой основы, приводящие к нарушению целостности барьерных систем и угнетению специфических и неспецифических тканевых и клеточных защитных механизмов. Характер и выраженность этих изменений зависят от дозы, режима введения цитостатика и обладают рядом особенностей в различных топографических зонах.

2. При кратковременном (1—5 сут) введении высоких доз циклофосфана (400 мг/кг массы тела) в покровном эпителии слизистой оболочки языка нарушаются процессы пролиферации, дифференцировки, кератинизации и десквамации: наблюдается утолщение эпителиального пласта за счет гиперкератоза и разрыхления рогового слоя, истончение шиповатого слоя, снижение митотической активности клеток базального слоя и содержания ВгсШ^-клеток. Нарушения метаболических и синтетических процессов проявляются угнетением активности СДГ, снижением содержания белков в цитоплазме эпителиоцитов.

4. При кратковременном введении высоких доз циклофосфана выявляются выраженный отек и утолщение собственной пластинки слизистой оболочки и подслизистой основы языка, уменьшение относительного объема сосудов и плотности расположения фибробластов, агранулоцитов, гранулоцитов, макрофагов и тучных клеток с увеличением доли дегранулирующих клеток, расположенных вблизи базальной мембраны эпителия.

6. В собственной пластинке слизистой оболочки языка к концу восстановительного периода частично сохраняются явления отёка. Плотность расположения фибробластов постепенно возвращается к норме, а количество гранулоцитов, агранулоцитов, макрофагов и тучных клеток, повышается в середине восстановительного периода (по-видимому, в результате компенсаторной реакции), нормализуясь к его концу (за исключением содержания гранулоцитов). В отдельных участках группы макрофагов внедряются в эпителий.

7. При длительном (до 70 сут) введении умеренных доз циклофосфана (40 мг/кг массы тела) в покровном эпителии слизистой оболочки языка отмечаются нарушения процессов пролиферации, дифференцировки, кератинизации и десквамации эпителиоцитов, выраженные в меньшей степени, чем при введении высоких доз препарата. В железистом эпителии изменения синтетической активности имеют ту же направленность, но меньшую выраженность, чем при введении высоких доз циклофосфана.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

3. Описанные экспериментальные модели могут быть рекомендованы для комплексного анализа влияния различных факторов (тип цитостатического препарата, дозировка, режим, путь и длительность его введения, возраст и пол пациентов, особенности микробного фактора и др.) на течение мукозита полости рта при цитостатической терапии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Леонтьева, Ирина Валерьевна, Санкт-Петербург

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. — М.: Медицина, 1990.

2. Агеенко А.И., Гордиенко С.П., Саканделидзе О.Г. Иммунитет и терапия экспериментальных опухолей. Кишинёв, 1982.

3. Агроскин JI.C., Папаян Г.В. Цитофотометрия. Л.: Наука, 1977.

4. Акопян О.Г. Влияние высокодозной химиотерапии на слизистую оболочку полости рта у больных гемобластозами: Автореф. дис. канд. мед. наук. — М., 1997.

5. Бобров А.П., Ткаченко Т.Б. Изменения слизистой оболочки полости рта у онкологических больных на фоне проводимой химиотерапии (обзор литературы) // Стоматология. — 2006. № 6. - С. 70-73.

6. Боровский Е.В., Леонтьев В.К. Биология полости рта. М.: Медицина, 1991.

7. Быков В.Л. Динамика инвазивного роста Candida albicans в тканях хозяина // Вестн. дерматол. венерол. 1990. - №4 - С. 25-28.

8. Быков В.Л. Патогенез и морфогенез кандидоза при иммунодепрессии // Арх. патол. 1990. - Т. 52., №11.- С. 67-70.

9. Быков В.Л. Тканевые и клеточные защитные механизмы слизистой оболочки полости рта // Морфология. 1996. — вып. 6. - С. 14-24.

10. Быков В.Л. Дендритные антигенпредставляющие клетки слизистой оболочки полости рта в норме и при патологических состояниях // Арх. пат. — 1997. -№2.~ С. 71-75.

11. Быков В.Л. Функциональная морфология эпителиального барьера слизистой оболочки полости рта // Стоматология. — 1997. №2. — С. 15-20.

12. Быков В.Л. Секреторные механизмы и секреторные продукты тучных клеток // Морфология. 1999. - Т. 115, вып. 2. - С. 64-72.

13. Быков В.Л. Иммунекомпетентные клетки десны человека в норме и при воспалительных заболеваниях пародонта // Арх. пат. 2005. - Т. 67, №2. -С. 51-55.

14. Быков В.Л. Гистология и эмбриология органов полости рта. СПб: Сотис, 2008.

15. Быков В.Л., Пахомова E.H. Морфогенез кандидоза слизистых оболочек при выведении иммунодепрессантов // Арх. патол. 1990. - Т. 52, №1.- С. 28-31.

16. Введение в количественную гистохимию ферментов. Под ред. Т.Б. Журавлевой. Д.: Медицина, 1978.

17. Виноградов В.В., Воробьёва Н.Ф. Тучные клетки (генез, структура, функции). Новосибирск: Наука, 1973.

18. Волкова М.А., Перилов A.A., Османов Д.Ш. и др. Грибковые осложнения при острых лейкозах (собственные наблюдения и обзор литературы) // Тер.архив. 1988. - Т.60, № 8. - С. 103 - 109.

19. Гемонов В.В., Лаврова Э.Н., Фалин Л.И. Развитие и строение органов ротовой полости и зубов. М.: ГОУВУНМЦ МЗ РФ, 2002.

20. Иванова О.В. Прогнозирование, профилактика и лечение осложнений в полости рта у больных, получающих цитостатики и лучевую терапию: Автореф. дис. канд. мед. наук. — Астрахань, 2001.

21. Исеева Е.А., Быков В. Л. Морфофункциональные изменения пищевода при воздействии цитостатика // Морфология. 2006. - Т. 130, № 6. -С. 62-67.

22. Исеева Е.А., Быков В.Л., Степанова Е.О. Динамика популяции тучных клеток в слизистой оболочке пищевода под действием циклофосфана // Морфология. 2008- Т. 133, вып.2 - С. 53-54.

23. Красноженов Е.П. Морфофункциональное состояние тканевых базофилов при цитостатической болезни // Патол. физиол. и экспер. терапия. 1994. -№ 1. -С.12-13.

24. Лойда 3., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов: Пер. с англ. -М.: Мир, 1982. *

25. Пахомова E.H., Быков В.Л., Караев Э.О. Кандидоносительство и развитие инвазивного кандидоза органов пищеварительного тракта при экспериментальной иммунодепрессии // Журн. микробиол- 1990. №6.1. С. 7-10.

26. Пахомова E.H., Быков В.Л. Взаимодействие макрофагов с Candida albicans при иммунодепрессии // Журн. микробиол. — 1994. №1. - С. 14-16.

27. Пахомова Е.Н., Полякова М.И., Быков B.JL, Караев З.О. Влияние цитостатиков и кортикостероидов на фагоцитарную и фунгицидную активность нейтрофильных гранулоцитов // Журн. микробиол. 1991. - №2. -С. 66-68.

28. Руководство по использованию лабораторных животных для научных и учебных целей в СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова: Под ред. Э.Э. Звартау. Спб.: Изд-во СпбГМУ, 2003.

29. Рыбаков А.И., Банченко Г.В. Заболевания слизистой оболочки рта. — М.: Медицина, 1978.

30. Рыбаков В. Р. Клеточно-популяционные взаимоотношения в механизмах суточного ритма пролиферативной активности в эпителии языка мышей, содержавшихся при постоянном освещении // Бюл. экспер. биол. мед. -1984. Т.97, № 3. - С. 340-342.

31. Фалин Л.И. Гистология и эмбриология полости рта и зубов. М.: Гос. изд-во мед. лит., 1963.

32. Юкина Г.Ю., Неворотин А.И., Быков В.Л. Ультраструктурные и метаболические характеристики тироцитов при действии циклофосфана // Морфология. 2004. - Т.125, №1. - С. 66-71.

33. Adrian R.M., Hood A.F., Skarin А.Т. Mucocutaneous reactions to antineoplastic agents // CA Cancer J. Clin. 1980. - Vol. 30. - P. 143-157.

34. Ailor S.K., Miles S.C. Dermatologic toxicity (Chapter 15). In: The Chemotherapy Source Book. 4th ed. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins., 2008. - P. 136-147.

35. Albertsson M., Hakansson C.H., Palmegren M. Changes in the esophageal epithelium in rabbits treated by cis-dichlorodiammineplatinum as studied by electron microscopy // Scanning Microsc. 1990. - Vol. 4, № 1. - P. 143-149.

36. Allam J.P., Stojanovski G., Friedrichs N. et al. Distribution of Langerhans cells and mast cells within the human oral mucosa: new application sites of allergens in sublingual immunotherapy? // Allergy. 2008. - Vol. 63, № 6. - P. 720-727.

37. Baker D.G. The radiobiological basis for tissue reactions in the oral cavity following therapeutic x-irradiation. A review // Arch. Otolaryngol. — 1982. Vol. 108.-P. 21-24.

38. Balsari A., Rumio C., Morelli D. et al. Topical administration of a doxorubicin-specific monoclonal antibody prevents drug-induced mouth apoptosis in mice //Brit. J. Cancer. 2001. - Vol. 85, №12. - P. 1964-1967.

39. Bensadoun R.J., Shubert M.M., Lalla R.V., Keefe D. Amifostine in the management of radiation-induced and chemo- induced mucositis // Support. Care Cancer. 2006. -Vol. 14, № 6. - P. 566-572.

40. Bergmann O.J. Oral infections and septicemia in immunocompromised patients with hematologic malignancies // J. Clin. Microbiol. 1988. - Vol. 26. -P. 2105-2109.

41. Bernhardson B.M., Tishelman C., Rutqvist L.E. Chemosensory changes experienced by patients undergoing cancer chemotherapy: a qualitative interview study // J. Pain Symptom Manag. 2007. - Vol. 34, № 4. - P. 403-412.

42. Bessler H., Straussberg R., Alexandrova S. et al. Effects of oral chemotherapy on the mitochondrial size of mouse intestinal cells // Cancer Chemother. Pharmacol. 1996. - Vol. 38, № 1. - P. 35-38.

43. Blijlevens N.M.A., Donnelly J.P., De Pauw B.E. Mucosal barrier injury: biology, pathology, clinical counterparts and consequences of intensive treatment for haematological malignancy: an overview // Bone Marrow Transplant. 2000. -№25.-P. 1269-1278.

44. Blijlevens N.M.A., van't Land B., Donnelly J.P. et al. Measuring mucosal damage induced by cytotoxic therapy // Support. Care Cancer. -2004. Vol. 12, №4.-P. 227-233.

45. Blomgren J, Jansson S, Rodjer S, Birkhed D. Secretion rate from minor salivary glands in patients with malignant haematological diseases receiving chemotherapy—a pilot study // Swed. Dent. J. 2002. - Vol. 26, № 2. - P. 75 - 80.

46. Bronson R.E., Treat J.A., Bertolami C.N. Fibroblastic subpopulations in uninjured and wounded rabbit oral mucosa // J. Dent. Res. 1989. - Vol. 68, № 1. -P. 51-58.

47. Bultzingslowen I., Carlsson G., Gustavsson B., Jontell M. Effects of 5-fluorouracil on mitogen-induced costimulatory capacity of accessory cells from rat oral mucosa and dental pulp // J. Oral Pathol. Med. 2001. - Vol. 30, № 6. - P. 362-367.

48. Bültzingslöwen I., Jonteil M. Macrophages, dendritic cells and T lymphocytes in rat buccal mucosa and dental pulp following 5-fluorouracil treatment // Eur. J. Oral Sei. 1999. - Vol. 107, № 3. - P. 194-201.

49. Bültzingslöwen I., Jonteil M., Hurst P. et al. 5-Fluorouracil induces autophagic degeneration in rat oral keratinocytes // Oral Oncol. 2001. - Vol. 37, №6. - P. 537-544.

50. Bulut S., Alaaddinoglu E.E., Bilezikci B., et al. Immunohistochemical analysis of lymphocyte subpopulations in cyclosporin A-induced gingival overgrowth // J. Periodontol. 2002. - Vol.73, № 8. - P. 892-899.

51. Bykov V.L. Velocity of Candida albicans invasion into host tissues // Mycoses.-1991.-Vol. 34.-P. 293-296.

52. Cameron I.L. Cell proliferation, migranion and specialization in the epithelium of the mouse tongue // J. Exper. Zool. 1966. - Vol.163. - P. 271-284.

53. Canady J.W., Johnson G.K., Squier C.A. Measurement of blood flow in the skin and oral mucosa of the rhesus monkey (Macaca mulatta using laser doppler flowmetry // Comp. Biochem. Physiol. (Part A: Physiology). — 1993. — Vol. 106, № l.-p. 61-63.

54. Cancer Chemotherapy and Biotherapy: Principles and Practice. 5th ed., Eds. Chabner B.A., Longo D.L. Philadelphia-Baltimore-New York et al.: Wolters Kluwer Lippincott Williams & Wilkins, 2010.

55. Chen T., Kunnavatana S.S., Kosh R.S. Effects of mitomycin-C on normal dermal fibroblasts // Laryngoscope. 2006. - Vol. 116, № 4. - P. 514-517.

56. Chen T., Perng R.P., Yang K.Y., et al. Phase II study of tamoxifen, isofamide, epirubicin and cisplatin combination chemotherapy in patients with non-small cell lund cancer failing previous chemotherapy // Lung Cancer. 2000. -Vol. 29, №2.-P. 139-146.

57. Chiang C.P., Wu H.Y., Liu B.Y. et al. Quantitative analysis of immunocompetent cells in oral submucous fibrosis in Taiwan // Oral Oncol. -2002. Vol. 38, № 1. -P. 56-63.

58. Colvin O.M. Alkylating agents. In: Encyclopedia of Cancer, 2nd ed. -Acad. Press, 2003. P. 35 - 42.

59. Cutright D.E., Bauer H. Cell renewal in the oral mucosa and skin of the rat. 1. Turnover time // Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. 1967. - Vol. 23. - P. 249-257.

60. Dorr W., Hirler E., Honig M. Response of mouse tongue epithelium to single doses of bleomycin and radiation // Radiother. Oncol. 1993. - Vol. 27. — P. 36^15.

61. Dorr W., Honig M. Response of mouse oral mucosa to repeated doses of bleomycin // Eur. J. Cancer. B. Oral Oncol. 1994. - Vol. ЗОВ, №5. - P. 312-318.

62. Dorr W., Kummermehr J. Proliferation kinetics of mouse tongue epithelium under normal conditions and following single dose irradiation // Virchows Arch. B. 1991. - Vol. 60. - P. 287-294.

63. Eisen H.J., Kobashigava J., Keogh A. et al. Three-year results of a randomized, double-blind, controlled trial of mycophenolate mofetil versus azahioprine in cardiac transplant recipients // J. Heart Lung Transplant. 2005. -Vol. 24, №5.-P. 517-525.

64. Elting L.S., Cooksley C., Chambers M. et al. The burdens of cancer therapy. Clinical and economic outcomes of chemotherapy-induced mucositis // Cancer.-2003.-Vol. 98, №7.-P. 1531-1539.

65. Enoch S., Peake M.A., Wall I. et al. 'Young' oral fibroblasts are geno/phenotypically distinct // J. Dent. Res. 2010. - Vol. 89, № 12. - P. 14071413.

66. Figdor C.G. Molecular characterization of dendritic cells operating at the interface of innate of acquired immunity // Pathol. Biol. 2003. - Vol.51. - P. 6163.

67. Garfunkel AA, Tager N, Chausu S et al. Oral complications in bone marrow transplantation patients: recent advances // Isr J. Med. Sci. 1994. — Vol. 30.-P. 120-124.

68. Gibson R.J., Cummins A.G., Bowen J.M. et al. Apoptosis occurs early in the basal layer of the oral mucosa following cancer chemotherapy // Asia-Pac. J. Clin. Oncol. 2006. - Vol. 2. - P. 39-49.

69. Graham G.J., Ramenghi U., O'Connor M.P. et al. Studies of oral neutrophil levels in patients receiving G-CSF after autologous marrow transplantation // Br. J. Haematol. 1992. - Vol. 82. - P. 589-595.

70. Guggenheimer J., Verbin R.S., Appel B.N., Schmutz J. Clinicopathologic effects of cancer chemotherapeutic agents on human buccal mucosa // Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. 1977. -Vol. 44, №1. - P. 58-63.

71. Guillot B., Bessis D., Dereure O. Mucocutaneous side effects of antineoplastic chemotherapy // Expert Opin. Drug Saf. 2004. - Vol. 3, № 6. - P. 579-587.

72. Hand A.R., Pathmanathan D., Field R.B. Morphological features of the minor salivary glands // Arch. Oral Biol. 1999. - Vol. 44, Suppl. 1. - P. S3-S10.

73. Hill M.W. Influence of age on the morphology and transit time of murine stratified squamous epithelia // Arch. Oral Biol. 1988. - Vol.33, № 4. - P. 221229.

74. Hill M.W., Berg J.H., Mackenzie I.C. Quantitative evaluation of regional differences between epithelia in the adult mouse // Arch. Oral Biol. 1981. - Vol. 26, № 12.-P. 1063-1067.

75. Igarashi T., Shimmura S., Yoshida S. et al. Isolation of oral epithelial progenitors using collagen IV // Oral Dis. 2008. - Vol. 14. - P. 413^118.

76. Jensen SB, Mouridsen HT, Reibel J, et al. Adjuvant chemotherapy in breast cancer patients induces temporary salivary gland hypofunction // Oral Oncol. -2008. Vol. 44, № 2. - P. 162-73.

77. Jensen S.B., Pedersen A.M., Reibel J., Nauntofte B. Xerostomia and hypofunction of the salivary glands in cancer therapy // Support Care Cancer. -2003. Vol.11, № 4. - P. 207-225.

78. Jotwani R., Cutler C.W. Multiple dendritic cell (DC) subpopulations in human gingiva and association of mature dendritic cells with CD4+T-cells in situ // J. Dent. Res. 2003. - Vol.82. - P. 736-741.

79. Kamil N., Kamil S, Ahmed S.P. et al. Toxic effects of multiple anticancer drugs on skin // Pak. J. Pharm. Sci. 2010. - Vol. 23, №1. - P. 7-14.

80. Klein-Szanto A.J., Schroeder H.E. Architecture and density of the connective tissue papillae of the human oral mucosa // J. Anat. 1977. — Vol. 123, Pt. l.-P. 93-109.

81. Lalla R.V., Peterson D.E., Brennan M.T., Schubert M.M. Oral Toxicity. In: The Chemotherapy Source Book. 4th ed. Philadelphia: Lippincott Williams and Wilkins, 2008. - P. 115-135.

82. Lalla R.V., Sonis S.T., Peterson DE. Management of oral mucositis in patients who have cancer // Dent. Clin. North Am. 2008. - Vol. 52, №1. - P. 6177.

83. Lebendiger M., Lehner T. Characterization of mononuclear cells in the human oral mucosa // Arch Oral Biol. 1981. - Vol. 26, № 12. - P. 1041-1049.

84. Leitao R.F.C., Ribeiro R.A., Bellaguarda E.A.L. et al. Role of nitric oxide on pathogenesis of 5-fluorouracil induced experimental oral mucositis in hamster // Cancer Chemother. Pharmacol. 2007. - Vol. 59. - P. 603-612.

85. Lieschke G.J., Ramenghi U., O'Connor M.P. et al. Studies of oral neutrophil levels in patients receiving G-CSF after autologous marrow transplantation // Br. J. Haematol. 1992. - Vol. 82. - P. 589-595.

86. Lockhart P.B., Sonis S.T. Relationship of oral complications to peripheral blood leukocyte and platelet counts in patients receiving cancer chemotherapy // Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. 1979. - Vol. 48, № 1. - P. 21-28.

87. Lockhart P.B, Sonis S.T. Alterations in the oral mucosa caused by chemotherapeutic agents. A histologic study // J. Dermatol. Surg. Oncol. 1981. -Vol. 7, № 12.-P. 1019-1025.

88. Logan R.M. The role of pro-inflammatory cytokines in cancer treatment-induced alimentary tract mucositis: pathobiology, animal models and cytotoxic drugs: PhD Thesis, The University of Adelaide, Australia. 2008.

89. Logan R.M., Gibson R.J., Bowen J.M. et al. Characterisation of mucosal changes in the alimentary tract following administration of irinotecan: implicationsfor the pathobiology of mucositis // Cancer Chemother. Pharmacol. 2008. — Vol. 62.-P. 33-41.

90. Logan R.M., Gibson R.J., Sonis S.T., Keefe D.M.K. Nuclear factor-kappaB (NFkB and cyclooxygenase-2 (COX-2 expression in the oral mucosa following cancer chemotherapy // Oral Oncol. 2007. - Vol. 43. - P. 395-401.

91. Logan R.M., Stringer A.M., Bowen J.M. et al. The role of proinflammatory cytokines in cancer treatment-induced alimentary tract mucositis: pathobiology, animal models and cytotoxic drugs // Cancer Treat. Rev. 2007. -Vol. 33, №5.-P. 448-460.

92. Logan R., Stringer A., Bowen J.M et al. Is the pathobiology of chemotherapy-induced alimentary tract mucositis influenced by the type of mucotoxic drug administered? // Cancer Chemother. Pharmacol. 2009. - Vol. 63. -P. 239-251.

93. Loe H., Karring T., Hara K. The site of mitotic activity in rat and human oral epithelium // Scand. J. Dent. Res. 1972. - Vol. 80. - P. 111-119.

94. Lundqvist C., Baranov S., Teglung S. et al. Cytokine profile and ultrastructure of intraepithelium gamma delta T cells in chronically inflamed human gingiva suggest a cytotoxic effector function // J. Immunol. — 1994. — Vol. 153.-P. 2302-2312.

95. Mackal C.L. T-cell immunodeficiency following cytotoxic antineoplastic therapy: a review // The Oncologist 1999. Vol. 4. - P. 370-378.

96. Mackintosh JA. The antimicrobial properties of melanocytes, melanosomes and melanin and the evolution of black skin // J. Theor. Biol. 2001. -Vol. 211, №2.-P. 101-113.

97. Maier H., Weidauer H., Zoller J., et al. Effect of chronic alcohol consumption on the morphology of the oral mucosa // Alcohol. Clin. Exp. Res. — 1994.-Vol. 18, №2.-P. 387-391.

98. Majeed S.K. Mast cell distribution in mice // Arzneimittelforschung. — 1994. Vol. 44, № 10. - P. 1170-1173.

99. Manakova S., Puttonen K.A., Raasmaja A. et al. Ara-C induces apoptosis in monkey fibroblast cells // Toxicol. In Vitro. 2003. - Vol. 17. - P. 367-673.

100. Morelli J.G., Norris D.A. Influence of inflammatory mediators and cytokines on human melanocyte function // J. Invest. Dermatol. — 1993. Vol. 100, 2 Suppl. - P. 191S-195S.

101. Morvan F.O., Baroukh B., Ledoux D. et al. An engineered biopolymer prevents mucositis induced by 5-fluorouracil in hamsters // Am. J. Pathol. — 2004. -Vol. 164.-P. 739-774.

102. Naidu M.U.R., Ramana G.V., Rani P.U. et al. Chemotherapy-induced and/or radiation therapy-induced oral mucositis — complicating the treatment of cancer // Neoplasia 2004. - Vol. 6. - P. 423-^-31.

103. Nurmenniemi P.K., Pernu H.E., Knuuttila M.L. Mast cell subpopulations in gingival overgrowth induced by immunosuppressive and nifedipine medication // J. Periodontol. 2004. - Vol. 75, № 7. - P. 933-938.

104. O'Brien S.N., Blijlevens N.M.A., Mahfouz T.H., Anaissie E.J. Infections in patients with hematological cancer: recent developments. In: Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program. 2003. - P. 438^172.

105. O'Morchoe P.J., Lee D.C., Kozak C.A. Esophageal cytology in patients receiving cytotoxic drug therapy // Acta Cytol. 1983. - Vol. 27, № 6. - P. 630634.

106. Paris F., Fuks Z., Kang A. et al. Endothelial apoptosis as the primary lesion initiating intestinal radiation damage in mice // Science. —2001— Vol. 293, №5528.-P. 293-297.

107. Peterson D.E. Pretreatment strategies for infection prevention in chemotherapy patients // NCI Monogr. -1990. № 9. - P. 61-71.

108. Peterson D.E., Cariello A. Mucosal damage: a major risk factor for severe complications after cytotoxic therapy // Semin. Oncol. 2004- Vol.31 (Suppl. 8). -P. 35^14.

109. Peterson D.E., Schubert M.M. Oral toxicity. In: The Chemotherapy Source Book. Ed. Perry M.C., 3rd edit. Philadelphia, Lippincott, Williams and Wilkins. 2001. -P. 406-424.

110. Pico J-L., Avila-Garavito A., Naccache P. Mucositis: its occurrence, consequences and treatment in oncology settings // Oncologist. — 1998. Vol. 3. -P. 446-451.

111. Puxeddu A, Piliponsky M, Bachelet I, Levi-Schaffer F. Mast cells in allergy and beyond // Int. J. Biochem. Cell Biol. 2003- Vol. 35, № 12. - P. 1601-1607.

112. Rao S.P., PotnisA.V., SobrinhoT.C. et al. Pigmentation of the tongue after treatment with adriamycin // Cancer Treat Rep. 1976. - Vol. 60. - P. 14021404.

113. Schenk P. Melanocyten, Langerhanssche und Merkelsche Zellen in oralen Epithelien // Acta Otolaryngol. 1975. - Bd. 80, № 3-4. -S. 301-311.

114. Schiott C.R. and Loe H. The origin and variation in number of leukocytes in the human saliva // J. Periodontal Res. 1970. - Vol. 5. - P. 36-41.

115. Schroeder H.E. Differentiation of human oral stratified epithelium-Basel: Karger, 1981.

116. Schubert M.M., Epstein J.B., Peterson D.E. Oral complications of cancer therapy. In: Pharmacology and Therapeutics for Dentistry. 4th ed. St. Louis: Mosby-Year Book Inc., 1998. - P. 644-655.

117. Sonis S.T. Oral complications of cancer therapy. In: Cancer: Principles and Practice of Oncology.- Philadelphia: Lippincott, 1989. P. 2144-2152.

118. Sonis S.T. Oral complications. In: Cancer Medicine. Baltimore, Lippincott. -1997. P. 3255-3264.

119. Sonis S.T. Mucositis as a biological process—a new hypothesis for the development of chemotherapy induced stomatotoxicity // Oral Oncol. 1998- Vol. 34.-P. 39-43.

120. Sonis S.T. The biologic role for nuclear factor-kappaB in disease and its potential involvement in mucosal injury associated with anti-neoplastic therapy // Crit. Rev. Oral Biol. Med. 2002. - Vol. 13, № 5. - P. 380-389.

121. Sonis S.T. New thoughts on the initiation of mucositis // Oral Dis. — 2010. -Vol. 16, №7. -P. 597-600.

122. Sonis S.T., Elting L.S., Keefe D. et al. Perspectives on cancer therapy-induced mucosal injury. Pathogenesis, measurement, epidemiology, and consequences for patients // Cancer. 2004. - Vol. 100, № 9. - P. 1995-2025.

123. Sonis S.T., Peterson R.L., Edwards L.J. et al. Defining mechanisms of action of interleukin-11 on the progression of radiation-induced oral mucositis in hamsters // Oral Oncol. 2000. - Vol. 36, № 4. - P. 373-381.

124. Sonis S.T., Tracey C., Shklar G. et al. An animal model for mucositis induced by cancer chemotherapy // Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. 1990. — Vol. 69.-P. 437-443.

125. Squier C.A. Oral complications of cancer therapies. Mucosal alterations // NCI Monogr. 1990. - № 9 - P. 169-172.

126. Squier C.A., Hill M.W. Oral Mucosa. In: Oral Histology: Development, Structure and Function. 4th ed. St. Louis: Mosby-Year Book Inc., 1994. - P. 389—431.

127. Squier C.A., Nanny D. Measurement of blood flow in the oral mucosa and skin of the rhesus monkey using radiolabeled microspheres // Arch. Oral Biol. -1985-Vol. 30, №4.-P. 313-318.

128. Stefanelli C., Tantini B., Fattori M. et al. Caspase activation in etoposide-treated fibroblasts is correlated to ERK phosphorylation and both events are blocked by polyamine depletion // FEBS Lett. 2002. - Vol. 527. - P. 223-228.

129. Susser W.S., Whitaker-Worth D.L., Grant-Kels J.M. Mucocutaneous reactions to chemotherapy // J. Am. Acad. Dermatol. 1999. - Vol. 40, № 3. - P. 367-398.

130. Tardeu C., Co wen D., Thirion X., Franquin JC. Quantitative scale of oral mucositis associated with autologous bone marrow transplantation // Eur. J. Cancer B. Oral. Oncol. 1996. - Vol.32B, № 6. - P. 381-387.

131. Thompson P.J., McGurk M., Potten C.S. et al. Tritiated thymidine and bromodeoxyuridine double-labelling studies on growth factors and oral epithelial proliferation in the mouse // Arch. Oral Biol. 1999. - Vol. 44, № 9. - P. 721734.

132. Vera-Llonch M., Oster G., Ford C.M., Lu J., Sonis S. Oral mucositis and outcomes of allogeneic hematopoietic stem-cell transplantation in patients with hematologic malignancies // Support Care Cancer. 2007. - Vol. 15, №5. - P. 491-496.

133. Verdi C.J. Cancer therapy and oral mucositis // Drug Saf. 1993. - Vol. 9.-P. 185-195.

134. Wahlin Y.B.and Matsson L. Oral mucosal lesions in patients with acute leukemia and related disorders during cytotoxic therapy // Scand. J. Dent. Res. — 1988. Vol. 96, №2. - P. 128-136.

135. Walker D.M. Oral mucosal immunology: an overview // Ann. Acad. Med. (Singapore). 2004. - Vol. 33 (Suppl.). - P. 27S-30S.

136. Walsh L.J. Mast cells and oral inflammation // Crit. Rev. Oral Biol. Med. 2003. - Vol.14, №3.-P. 188-198.

137. Weisman S.J., Scoopo F.J., Johnson G.M. et al. Septicemia in pediatric oncology patients: the significance of viridans streptococcal infections // J. Clin. Oncol. 1990. - Vol. 8, № 3. - P. 453^59.

138. Wright D.G., Meierovics A.I., Foxley J.M. Assessing the delivery of neutrophils to tissues in neutropenia // Blood. 1986. - Vol. 67. - P. 1023-1030.

139. Wymenga A.N., van der Graaf W.T., Hofstra L.S. et al. Phase I study of transforming growth factor-beta 3 mouthwashes for prevention of chemotherapy induced mucositis // Clin. Cancer Res. 1999. - Vol. 5. - P. 1363-1368.

140. Wymenga A.N., van der Graaf W.T., Spijkervet F.L. et al. A new in vitro assay of quantitation of chemotherapy induced mucositis // Br. J. Cancer. 1997. -Vol. 8.-P. 1062-1066.

Информация о работе

Леонтьева, Ирина Валерьевна
кандидата медицинских наук
Санкт-Петербург, 2011
ВАК 03.03.04

Диссертация

Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки полости рта при введении цитостатиков. - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы