Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфо-биологические особенности мермитид Romanomermis Tyengari Welch, 1964 - потенциального агента борьбы с кровососущими комарами во Вьетнаме

ВАК РФ 03.00.20, Гельминтология

Автореферат диссертации по теме "Морфо-биологические особенности мермитид Romanomermis Tyengari Welch, 1964 - потенциального агента борьбы с кровососущими комарами во Вьетнаме"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ • ИНСТИТУТ ГЕЛЬМИНТОЛОГИИ имени К.И.СКРЯБИНА

ЫаВДШЮЛОГИЧЕСШ • ОСОБЕННОСТИ МЕРДОТИД нотноквшаз ЕСИТОАШ *ВЬСН,Ч964 - ПОТЕНЦИАЛЬНОГО АГЕНТА БОРЬБЫ С КРОВОСОСУЩШ ШЛА РА №1 ВО ВЬЕТНАМЕ

Специальность 03.00.20 - Гельминтология

Автореферат диссертации на соисканк ученой степени кандидата биологических наук

На правах рукописи

-ШШН 1ВА11 ДИК

Москйч - 1993

Работа выполнена в Институте паразитологии Российской Академии наук.

Научный руководитель -канди-ат биологических наук Спиридонов С.Э.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Тихонова Л.Р.

кандидат биологических наук Блинова С.Л.

Ведущая организация - Московская^ сельскохозяйственная^ академия им. К.А.Тимирязева

Зшдита диссертации состоится "" 5 "' /Ц/г^Аг ПЪСсу 1993 г.

в —* часов на заседании специализированного совета

Д 020.04.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени К.И.Скрябина (ВИГИС).,

Адрес: II72I8, Москва,, Б.Черемушкинская ул.д. 28

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС.

Автореферат разослан

Учений секретарь специализированного совета к.чндид.г." 5иологических наук

Вертинская М.К.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Исследования по нематодам, паразитирующих в беспозвоночных животных, представляют собой особую область современной науки о нематодах. Существенным фактором, влияющий на развитие эт^й области нематодологии, является практическая направленность большей.части исследований, состоящая в постоянных попытках применить нематод как агентов борьбы с вредными насекомыми. Давая всему направлению стимул к развитию, практическая направленность в то же время воздействует на тематику р^бот, и часто наиболее изученные в практической отношении нематоды оказываются довольно слабо изученным в общенематодологическом отношении. Возможность культивирования многих неиатод беспозвоночных в лаборатории дает редкую возможность изучения их различными современными методами.

В настоящее время две группы неиатод исследуются наиболее активно как потенциальные агенты биоиетода: почвенные энтомопа-тогенныерабдмтцда сеиейств Steinernematidae И Eöterorbabditidae в всдныо нематоды семейства Mennithidae, паразитирующие в личинках кровососущих комаров. Эти последние показали себя хорови-ма регуляторами численности личинок кровососущих коиаров, особенно в районах о теплый климатом: пкных штатах США (Vetßrsen, »illis, 197^; Petersen, 1985), в Азербайджане (Владииирова и др,, 1987), Таджикистане (Владимирова, Гафуров, 1986; Гафуров и др., 1987). Анализ попыток применения мермитид против кровососущих коиаров показывает, что оно иоает оказаться (¿Соснованныц при двух различных общественно-экономических ситуациях. В развитых странах при высокой стоимости ручного труда, необходимого для выращивания нематод, и сравнительно деиевых химических средст-B8v борьбы, использование мермитид возможно лишь там, где полностью запрещены к использованию химические реагенты. Заметим,что в настоящее время инсектициды общего действия полностьп запреае-ны в СНА, и ах применение значительно ограничено в Западной Европе. В равваввдахся странах при девевои ручном труде я высокой стоимости хнмическжх средств применение таких баодогяческкх агентов, как мермятиды, стан чится рент-бельиии а ара саободцоа

выбора средств борьбы. Многие вредные насекомые в последние годы стали устойчивыми к обычному набору химических средств борьбы. Сообщается даже о появлении форм, устойчивых к важнейшему средству бактериальной борьбы - токсину Bacillus thuriagiensia (Anderson, 1992), что указывает на ограниченные возможности приме иения бактериальных токсинов в подавлении переносчиков. В такой ситуации интерес к паразитам и паразитоидам возникает вполне естественно, ведь устойчивость к этил организмам вырабатывается у жертв значительно реке, а иногда и вообще невозможна.

Задача борьбы с трансмиссивными заболеваниями, передаваемыми кровососущими комарами, лежит тяжелым бременем на экономике Вьетнама. Постоянный рост цен на средства химической борьбы заставляет при разработке антималярийных мер прибегать иногда к средствам ,весьма опасным для окружающей среды. При этом в некоторых плотнонаселенных областях химическое загрязнение среды и так уже превышает все допустимые нормы (районы дельт, большие города), в таких условиях дальнейшее применение химии очевидным образом противоречит цели - оздоровлению людей, приводит к длительный отрицательным последствиям для всех компонентов биоты и, как следствие, понижает эффективность экономики страны. Исследование возможностей применения биологических средств борьбы с кровососущими комарами во Вьетнаме является задачей большой экономической и гуманитарной важности.

Цели и -задачи исследования. Возможность культивирования мермитид кровососущих комаров в лаборатории представляет возможность изучения морфологии всех стадий их жизненного цикла раз- • личными методами. Такая возможность редко представляется при полевых исследованиях, поскольку оказывается затруднительным отыскать некоторые стадии: препаразитических личинок или взрослых особей. Поэтому основной целью нашей работы было всестороннее изучение строения и биологии перспективного в отношении развития биоивгода вида мермитид кровососущих номаров Komanomenais iyегц'аг! Welch. 19СЧ. При этом мы ставили сабе целью также прв-влечоние различных методов биологического исследования для того, чтобы оценить возможность продолжения-таких исследований во Вьетнаме и разработки методов применения мермитид против комаров в ня-е*1. страна.

В соответствии с поставленной далью били определены следующие задачи работы:

1. Достоверно определить видовой статус Н.1уепеаг1.

'2. Провести оценку пригодности мермитид В.1уепеаг1 как агентов биологической борьбы с Помарами во Вьетнаме.

3. Исследовать морфологические особенности стадий казненного цикла 1?.1уеп.£&г1.

4. Исследовать особенности развития яиц Е.1уепеаг1.

5. Проанализировать биологические особенности И.Хуепеаг!, важные при использовании этих мермитид в био"етоде.

Научная новизна. С использование)! различных методов впервые изучены особенности морфологии Е.1уепйах1: при помощи витальной окраски выявлено распределение ядер в теле инвазионной (препаразитической) личинки, методой импрегнации границ гиподер-мальных клеток - особенности организации паразитических личинок. Метод импрегнации границ гиподермальных клеток предлагается в качестве дополнительного метода при определении систематической принадлежности мермигид, а также для раннего определения половой принадлежности паразитических личинок по присутствию описанных нами характерных зачатков вульвы и клоаки. Впервые получены для 1и1уепеах1 данные по ультраструктуре: дано описание тонкой мор-фол, гни кутикулы, гиподермы, мышечных клеток и трофосомы. впервые получены данные по тонкой морфологии поверхности головного конца мермигид Н.ХуепвагА. Определен характер распределения паразитических личинок по зараженным особям хозяев при различных дозах заражения н для различных возрастных групп хозяев. Проанализированы возможности применения мериитид в.1уеп^ап как агентов биометода во Вьетнаме: проведены заражения некоторых видов комаров Вьетнама, опре;;елены наиболее удобные для культивирования виды хозяев.

Теоретическая а практическая значимость работы. Проведенное исследование позволяет использовать сравнительно простой ые-то- импрегнации клеточных границ гиподермы у паразитической стадии развития мериитид для выявления различных этапов формирования паразитической личинки. Возможность раннего определения пола паразитической личинки при помощи импрегнации клеточных границ гиподермы позволяет использовать этот метод в исследованиях по определению пола у мермитид. Иолученяые данные по цорфозогия

- б -

Е.1уеп£агг могут быть использованы для дальнейшей разработки систематики группы, в настоящее время недостаточно развитой. Получение данные по развитию яиц в.1уеп5аг1, а также ыермитид 1лпге1пега1а эр. позволяют впервые оценить возможность использования сравнительно-эмбриологических признаков в таксонг-ии мермк-ид. Проведенная оценка характера распределения паразитических личинок мермитвд по особям комаров дает дополнительную информацию по вопросу о заражении ыермитидаыи хозяев и паразито-хозаинных отношениях между этими организмами. Полученные данные по восприимчивости комаров Вьетнама к мермитидам ЯДуеп£аг1 являются необходимый начальный этапом для работ по применению ывр-китид'в Юго-Восточной Азии.

Апробация работы. Работа докладывалась на научном коллоквиум Института паразитологии РАЯ, на семинарах группы паразитологии Национального центра научных исследований "Нгиадо" в Ханое, в 1-ом Ханойской педагогическом институте, на семинара в Институте Цастера в г.йячанг. По материалам диссертации сдана в т. • чать одна статья, две депонированы в ВИНИТИ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, пяти глав и завершается выводами. Список цитированной литературы включает 176 названий, из них 36 на русской языке. Текст излонен на 116 страницах машинописи, сопровожден 37 рисув-каш, 13 таблицаш и 59 фотографиями, выполненными в световп, электронно« сканирующей и просвечивающей микроскопах.

П. ИСТОРИЧЕСКИЙ ОЧЕРК: ИЗУЧЕНИЯ МЕРМИТЙД РОДА номашшвшз И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В БИОЛОГИЧЕСКОЙ БОРЬБЕ С КРОВОСОСУЩИМИ ШАРАМИ

В главе рассматриваются современные представления о таксо-Н01'»и ы^рыитид, паразитирующих в комарах. Кратко дается очерк о .развитии взглядов на систему мермитид вообае, а также отражается история обоснования родов мериитад, паразитирующих в комарах, их диагностики к синонимии. Приводится обзор литературы по ако-хого-'капологическим особенностям иериитид рода 1?отапотета1а, сг.ос.-Зам их культивирования, транспортировки и внесения в биоце-ьогш. Лается терсчскь работ по применению романомерш'.сов в био-ш-садб, стопела успс-вности и осншных встреченных трудностей.

Ш. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Культуры мермитид, обозначенные как "Romanomermis lyengeri1* а "B.culicivorü*", были получены из ШШТЦ и поддерживались в ИПаРАН на хозяевах - кровосо^-дих комарах Culex pipiens. в процессе работы в световой микроскопе было исследовано 210 особей иериитид, отобранных из 1200 этих неиатод, извлеченных прв вскрытии около 600 хозяев. Для изготовления препаратов паразитических личкаок о импрегнированными границами гиподермальных клеток было использовано около 1000 особей, из ' ix информативные препараты были получены на 436 особях паразитических личинок. В СЭМ было изучено 10 самцов и 5 самок, в ТЗМ - 5 особей R.iyen-gtri. Для изучения особенностей распределения личинок .:омаров по степени их инвазированности мермитид^и было вскрыто всего 5366 личинок и извлечено более 10 тысяч личинок мермитид.

Для морфологического изучения использовали витальное окрашивание нильским голубым, импрегнацию клеточных границ гиподермы азотнокислым серебром (Малахов, Спиридонов, 1982). Подготовка к изучению в сканирующем и просвечивающем электронном микроскопах проводилась по обычный методикам (фиксация глютаральдеги-дом и четырехокхсью осг*я). Спектры общего белка получали электрофорезом в вертикальных пластинах 11ААГ.

П. ЗПИДЕШШОГИЧЕСКИЕ St ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕДПОСЫЛКИ ПРИМЕНЕНИЯ ИЕРИИТИД РОДА EOIiAKOUERUXS BÖ. ВЬЕТНАМЕ

Кровососущие комары представляют собой существенную медико-социальаую проблему во Вьетнаме, являясь переносчиками трех опасных инфекций: малярии, лихорадки де~те и японского энцефалита, а также передавая возбудителей филяриатозов. Заметно также беспокоящее воздействие комаров в быту. Важным отягощающим факто- -рои в распространении малярии является тот факт, что на территории Вьетнама она, как правило, вызывается наиболее опасным плазмодием - Plasaodiun falciparum. Эпидемиология лихорадки деиго усугубляется в пооледнее время широким распространеаием ее геморрагической формы о чрезвычайно неблагоприятным прогнозом.

Случаев японского энцефалита отмечается лишь 50-80 в год, но при высоком уровне смертности (до 80%), и это заболевание оказывается важным эпидемическим фактором. Во Вьетнаме отмечают случаи как вухерериоза, вызываемого Wuchereria bancrofti var.pacifica на Юге и w.bancrofti таг.nocturna на Севере, так и бругиоза.

' нализируются литературные данные по экологическим особенностям кровососущих комаров Вьетнама, принимающих участие в пег' редаче опасных заболеваний. Большая часть этих комаров имее® строгую яриуроченность к определенным типам водоемов,:где происходит их выплод. Имеющиеся данные по местам выплода анализируются о точки зрения пригодности их для применения романомермисов, Изучение восприимчивости комаров, обитающих во Вьетнаме, к заражению проводили в г.Нячанг (пров. Кхащ>хоа на юге страны) в в Ханое. В Нячайге било проведено вирокое обследование районов города с целью выявления мест вьллода кровососущих комаров» Для сезона проведения работ характерным оказалось лишь активно® размножение комаров Aedes aegypti. Их выплод происходил в основши в мелких емкостях с водой в хилых домах, в баках для хранена!-; питьевой воды и в декоративных водоемах в парках и храмах. Ре~ зультаты заражения коиаров A.aegypti Нячангской популяции приведены в табл.1.

В Ханое в зимний период было возможным собрать только коиаров вида Culex tгitаеniorhyncbus, часто размножающихся в ямах С загрязненной водой. В отстоянной Зодопроводной воде эти комары также легко заражаются романомермисами (табл.2). Комары вида A.aegypti обнаруживались вами в Ханое в тех же типах водоемов, что и в Нячанге, однако большое количество их личинок для заражений мы получили из Института маляриологая в Ханое, так же кая в личинок комаров Anopheles hyuanua. Результаты заражения комаров этих видов мермитидами приведены в табл.3 и 4. Вое виды кровососущих комаров,использованных нами в данной работе, легко заражаются романомермисами. В то же время перспективы примене-ияя мермитид Hoaanomermis, как агента биометода, определяются не только восприимчивостью потенциальных хозяев, во и некоторыми условиями окружающей среды. Так,кровососущие комары видов Cilex tritaenlarhynchim И Anopheles byrcanus развиваются В сильно загрязненной воде, а активность рома»омермисо»и кик известно, значительно подавляется, содержащимися в'воде мияерййшыми1

Таблица 1

Результаты заражения ыериитидами Homanomermis iyengari . комаров вида Aedes aegypti в г.Нячанг, яров. Кхань Хоа "(3-й-личиночный возраст , 19-30 декабря 1988 г.)

Число зараженных хозяев, соотношение числа хозяев и инвазионных личинок Процент зараженных хозяев Средняя интенсивность заражения (пределы)

. 600 экз., 12:1 97% 1,3 (1-4)

300 экз., 6:1 95 % 2,2 (1-5)

200 экз*, 4:1 . 15% 1,3 (1-2)

Таблица 2

Результаты заражения цермитидаки Homanamermis iyengari ЛИЧИНОК комаров £.-3 возрастов Culex tritaeniorhynchus в Г.Ханой (1-2б февраля 1991 г., соотношение хозяева : инвазионные личинки - 1:3)

Число зараженных. - личйнок коиаров Процент зараженных ЛИЧИНОК Средняя интенсивность заражения Общий вес полученных мермитид (мг) В той числе самок W

1000 64% 1,5 71 43

1000 64J6 1,6 62 43

900 76% 1,3 78 38

Таблица 3 -

Результаты заражения иериитидаии Homanomexmla iyengari личинок коиаров 2-3 возрастов Aedes aegypti в г.Ханой (1-26 февраля 1991 г., соотношения хозяева:инвазиошше личинки — 1:3)

Число зараженных личинок коиаров Процент зараженных личинок Средняя интенсивность заражения ' Общий вес полученных мермитид (иг) В той числе сау

. 1000 46% 1.2 55 35

2000 43% 1.1 75 48

1500 93% 1,5 64 32

Таблица 4

Результаты заражения иермитидаин НотаиотеипХв 1уепеаг1 личинок коиаров 2-3 возрастов АпорЬе1ев Ьугсашш в г.Ханой (1-26 февраля 1991 г., соотношение хозяева:инвазионные личинки -1:3)

Число зараженных личинок коиаров Процент зараиенных ЛИЧИНОК . Средняя интенсивность заражения Общий вес полученных ие^ии^ид В той числе Ж

1000 53% 1.5 65 42

1500 69* 1,8 89 30

1400 6056 1,4 70 45

солями и бытовыми загрязнениями (Petersen, Willis, 19?0). Вероятным представляется использование мермитид рода Romanomemis против A.aegypti. Этот вид комаров развивается обычно в довольно чистой воде, причем почти всегда места выплода представляют собой небольшие емкости воды. Значительный интерес представляет возможность использования романомермисов для борьбы с комарами на рисовых полях,' особенно в связи с распространением так называемых "высокопродуктивных разновидностей" риса. Известно, что распространение этих сортов риса и сопутствующих им новых технологий возделывания вызывает повышение обилия кровососущих комаров ^Washino, 1980t Service, 1989).

У. ОСОБЕННОСТИ МОРФОЛОГИИ ROMAHCMERMIS IYEHGAEI

Для изучзния особенностей строения R.iyengari существенным было точное установление вида изучаемой культуры. Культуры,обозначенные как "R.iyengari" и "R.cuXicivoraiT, сравнивались нами по морфологическим признакам (как качественным, так и мерным) и по различию в спектре общего белка. Хотя были выявлены определенные различия, мы посчитали более наденным получить культуру R.iyengari непосредственно из института в Индии, где она была переведена в лабораторную культуру.

На основании исследования в световом микроскопе было выполнено морфологическое описание полученных мермитид. Необходимость такой работы определялась неравноценностью описаний видов рода RomanomBraiB, имеющихся в литературе, а также тем, что в последней ревизии рода именно описание"вида R.iyengari было приведено по литературным данным (Ross, smith, 1975)• С помощью сканирующего микроскопа изучены амфиды, поверхность кутикулы и ге-нитальные папиллы R.iyengari.

Строение инвазионных личинок исследовано на препаратах после витального окрашивания нильским голубым. Сильно окрашивается клетка, расположенная вентра^ьно кзади от нервного кольца и имеющая пору на среднебрюшной линии, »о нашему мнению, эта клетка соответствует ренетте. Половой зачаток инвазионной личинки состоит из 4 клеток.

Паразитическая ц.аза развития мермитид R.iyengari занимает от 8 до 10 дней в зависимости от температуры. В это время форми-

Г/втся закладки всех основных органов мермитид, определяется пол развивающейся особи. Морфологические процессы, идущие во время паразитической фазы развития, представляют большой интерес. Но в это вреия тело паразитической личинки заполнено жировыми гранулами, сильно затрудняющими изучение в световом микроскопе. Значительный объем морфологической информации удается получить, изучая препараты паразитических личинок с импрегнированными границами гиподермальных клеток, С первого по третий день развития паразитической личг'нки но удается получить препаратов с импрег-нированной кутикулой. В эти дни личинки еще мало изменяются по сравнению со стадией инвазионной личинки. Наблюдается лишь слабое отслоение кутикулы, указывающее ва начало второй линьки. На 4-а день' после заражения личинки комара, могут быть получены первые результаты серебрения границ гиподериальных клеток. Вдоль боковых сторон тела личинки мзриитиды тянутся поля из мелких округлых гиподермальных клеток. На 5-6 деаь паразитического развития происходит разительное изменение картины строения гиподермы - в средней части тела гщюдерма образована только 8-ю рядами клеток (Рис,А - .представлен вид гиподермальных границ на одном , из препаратов на верхней и нижней по отношению к наблюдателю ■ сторонах объекта). Вентральный валик гиподермы составлен из двух рядов клеток (1 и 8 аа Рис,А). Латеральные валивд образованы тремя рядами клеток (2,3,4 г 5,6,7), прияем централь^ со-?, ставлен из узких клеток. Тодеая часть ЭДвод^альных стилающая мышечную ткань (субкутикула), контактирует по срщю-спинной и субвевтральаык линиям. Картина строения гиподермы изменяется на головном ковце Центральный ряд в латеральных валиках исчезает, н# доходя около 150-200 мкм до передней'оконечности тела (РисД).

Интерес представляет, возможность определения до аа"6-7-й день паразитического развития пола развдеаоч&йря личинку. У ли- . чинок - будущих самок в середина тела становится хорошо заметный зачаток вульвы, образованный многочисленными' целками клетками .(Рис.Б). У будущих самцов такой зачаток^отсутствует, но имеется зачаток клоаки на хвостовом конце (Рис.В). Такая многоклеточ-ность зачатков вульвы и клоаки, так же как и обилие-мблких клеток на боковых сторожах паразитической личинки . на 4-5-й дни развития указывает на своеобразную особенность мермитид. У них

Рис. 1 Организация гиподермы паразитической личинки

Лотапотегт1э 1уеп£аг1

i лкие клетки, формирующиеся в результате дробления на поверхности тела и погружающиеся затем вг/трь его, участвуют в течение некоторого времени в формировании поверхности гиподермы. В связи с этим интерес представляет и изучение типичных для R.iyen-g*ri нарушений правильности картины гиподермальных границ. Часто на месте,обычно занимаемом двумя клетками^располагается лишь одна крупная клетка. Так,нередко можно видеть, что не произошло разделения между центральной клеткой латерального ряда и субдорсальной клеткой. Тг::сие нарушения указывают на порядок формирования клеток гиподермы, относящихся к различным рядам.

Изучение тонкого строения кутикулы взрослых особей R.lyen-gari выявило поразительное ее сходство с ультраструктурой Мег-mis nierescens (Lee, 1974). Эти мермитиды относятся к различным подсемействам мермитид. Кроме того их экологические особенности весьма разнятся: нермисы - это почвенные мермитиды с высокой двигательной активностью, вползающие на верхушки травянистых растений. Романомермисы же сравнительно мало движутся, лишь опускаясь медленно вглубь песка. Сходство в ультраструктуре кутикулы указывает на определенный консерватизм в строении кутикулы среди мермитид. Описывается также строение кутикулярной выстилки и окружающих ее клеток пищевода B.iyengari. По улыраструк-туре мышечных клеток R.iyeagari должны быть определены как пер-вично-целомиарные формы, хотя изгиб зоны расположения миофибрилл у них оказывается незначительным, и по этому.признаку они уже не далеко отстоят от платимиарных форм.

Анализ морфологии R.iyengari, приведенный в диссертации, направлен в основном на оценку значимости выявленных признаков. Уетодическую ценность представляет дальнейшее применение метода импрегнации клеточных границ гиподермы паразитических личинок мермитид. Паразитические личинки являются стадиями развития мермитид, наиболее часто выявляемыми при полевых исследованиях, и как раз их. изучение может дать очень мало для определения таксономической принадлежности мермитид. Данные по строению гиподермы Jíornaacraermio вместе с полученвыми в процессе работы данными по гиподерме мермитид By&ronermie ер., паразитирующих в хироно-мидах и имеющимся в литературе описанием гиподермы, паразитирующих в мошках к.«ватах .iв melueliiae (Малахов, Спиридонов, 1982), наглядно демонстрируют разнообразие мермитид по этому признаку

Тогда как у Homanomermis гиподерма образована 8-й рядами, у двух других родов мераитид она 10-рядная. Однако, у HydroExenols имеются четырехрядные латеральные валики, а дорсальные клетки отсутствуют. У uesomerais десятирядность дос№а-ется наличием парного дорсального валика при трехрядных латеральных валиках.

JI. ЭМБРИОНАЛЬНОЕ РАЗВИТИЕ ROMANOMEHHIS 1ГЕИЫШ

Эмбриональное развитие R.iyengari продолжается около 14 дней, и по этому признаку они должны быть отнесены к медленно развивающимся формам. 3 сравнении с ранее изученным в эмбриологическом отношении видом Gastronenais hibernalis (Малахов, Спиридонов, 1981) романомермисы характеризуются невысокой правильностью расположения бластомеров. Хотя порядок отделения основных зачатков у этих мермитид полностью совпадает, не образуется таких правильных геометрических фигур расположения бластомеров, как это описано для гастромермисов. Нами было изучено эмбриональное развитие мермитид рода Lanzeimemis, которые как и гаст-ромермисы паразитируют в личинках хирономид. Была выявлена почти полная идентичность как по порядку отделения зачатков, гак и по конфигурациям эмбрионального развития. Отметим, что роды Gaatro-nenais и Lanzeimermis относятся к одному подсемейству Рагоиег-Qithlnae (Артюховскай, 1930), тогда как Roatanomermis к подсемейству Eurymemith.inne. Сходство конфигураций эмбрионального развития у близких форм при существенных различиях с неродственными формами позволяет надеяться на-возможность использования эмбриологических признаков при ревизии систематики родов и подсемейств мермитид.

УП. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И ШЬТУРАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ROMANOMERHIS IYEHGARI

Процесс заражения личинок комаров изучали под микроскопом в небольших камерах,закрытых покровным стеклом. Личинкам R.iyengari свойственен положительный тигмотаксис, однако отсутствует реакция на свет. В первые часы после проникновенна в личинку комара частой является локализация личинок мермитид в отстал-

к" сифонального выроста хозяина. Продолжительность жизни инвазионных личинок н.1уепбаг1 в воде че превышает 3 суток.

При заражении личинок коиаров мериитидами мы разделяли имеющихся у нас особей хозяев на 4 возрастные группы: личинки 1-го возраста, личинки позднего первого и раннего второго возраста (момент первой линьки), личинки 2-го возраста, личинки 2-го возраста в момент линьки на 3-й возраст и, собственно, личинки 3-го чозраста. Заражения проводили при различных соотношениях числа особей личинок номеров и инвазионных личинок мермитид (1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:10). Данные по интенсивности и экстенсивности заражения определяли вскрытием личинок коиаров на 3-Й день после заражения. Полученные данные подвергали статистической обработке. Было проведено сравнение характера распределения зараженных личинок комков по интенсивности их поражения при использовании в эксперименте различных возрастных групп хозяев. Различия были выявлены в характере заражения 'при сравнении всех возрастных групп за исключением сравнения между группами личинок 3-го возраста и личинок позднего 2-го и раннего 3-го (линяющих на 3-й) возраст. Эти две группы личинок не выказывают никаких различий в характере заражения. Анализ выборочной дисперсии при изучении интенсивности поражения комаров мермитидами указывает на значительную степень агрегироваьности распределения мермитид по хозяевам. Такое наблюдение подтверждается и. проведением сравнения по критерию "хи-квадрат" между эмпирическими .данными и теоретически вычисленными для распределения Пуассона. Результаты заражений различных возрастов хозяина при различных соотношениях числа личинок комаров и мермитид представлены в виде регрессионных прямых, что облегчает использование полученных результатов при оценке результатов планируемого экспериментального заражения.

Исследовались особенности определения пола у мермитид в.1уеп£аг1. Как и другим представителям этой группы им свойственно т.н. "вторичное определение пола", происходящее не в момент оплодотворения яйца, а позже, при развитии паразитической личинки. При массированном заражении одного хозяина формируются почти исключительно самцы, тогда как при слабом заражении формируются самки. Сравнение соотношения полов при одинаковых интен-сивностях заражения : чинок комаров, относящихся к различным возрастам, показывает, что большая доля самок формируется при

заражении комаров 2-го и 3-го возрастов, Тогда как при заражении личинок комаров 1-го и 4-го возрастов она оказывается несколько заниженной. Мы объясняем такое понижение доли самок недостатком доступных к усвоению питательных веществ в мелких личинках 1-го возраста и возрастающим эффектом подавления со зторони хозяина у крупных личинок 4-го возраста. Любопытным является формирование интерсексуальных особей R.iyengari - самок с разви-тй вульвой и женской половой трубкоГ но имеющих также присущую лишь самцам форму хвостового конца и даже генитальные папиллы. Такие интерсексуальные особи часто формируются при заражении личинок 1-го возраста.

Наблюдения за количеством инвазионных личинок R.iyengari, ■ получаемых при периодических заполнениях дистиллированной водой сосудов с песком,, содержащих взрослых особей, показывает, что истощение этих культур происходит обычно за 4-5 месяцев, хотя уже после 2-го месяца хранения начинается резкое падения выхода инвазионных личинок. Можно также отметить наблюдающееся повышение продуктивности таких культур в первые недели хранения. Это, ророятно, отражает существующую для постпаразитических личинок мермитид необходимость уйти вглубь песка, перелинять на взрослых особей, а также затраты времени на копуляцию и эмбриональное развитие.

ВЫВОДЫ

1. В рамках программы по разработке во Вьетнаме биологических средств борьбы с вредными членистоногими проведено изучение и оценка перспективности использования в качестве агента биометода мермитид Bomanomermis iyengari, паразитирующих в личинках кровососущих комаров.

2. Для видовой дифференциации K.iyengari от близкого вида R.cuiicivorax можно использовать различия в форме оконечности спикул, размеры сперматоцитов в половой трубке самцов. Обнаруживаются различия в спектре общего белка этих двух видов.

3. Первоописанио вида R.iyenSari должно быть дополнено особенностями морфологии инвазионных личинок, деталями организации головного и хвостового конца по данным сканирующей электронной микроскопии, а также данными по ультраструктуре стенки тала и трофосомы.

4» йо строению гиподермы выделены два этапа в развитии паразитической стадии: 1-5 день по ле заражения (соответствует концу 2-й и началу 3-й личиночной стадии) - гиподермальные клетки мелкие, круглые, расположены без определенного порядка; 6-9 день после заражения (поздние личинки 3-й стадии) - упорядоченная восьмирядная гиподерма. На 6-7 день паразитического развития выявляются комплексы гиподермальных клеток,соответствующие зачаткам вульвы или клоаки, что позволяет дифференцировать пол личинок. •

5. Значительное сходство в ультраструктуре кутикулы КДуеп-каг! и почвенных мермитид меетйв п1егеБсепз» относящихся к другому подсемейству, указывает на консервативность строения покровов В семействе МегтЛЛМйае.

6. Г1 общим особенностям эмбрионального развития й.1увпеа-г1 сходен с изученным ранее Оаз<;готега1а Ы-ЬегпаИв, отличаясь однако конфигурацией расположения клеток на ранних стадиях' развития. Развитию Е.1уепкаг1 свойственна меньшая геометрическая правильность расположения бластомер. Развитие исследованных нами мермитид хирономид - ЬапгеЗтеиаз ер. оказалось идентичным развитию ц.ЫЪегпаИв. Поскольку мермитиды этих двух родов относятся к одному подсемейству, можно предположить, что наблюдающиеся межродовые различия имеют таксономическую значимость и могут использоваться в систематике группы.

7. Анализ распределения паразитических .личинок мермитид в личинках зараженных комаров указывает на его агрегированный характер, определяющийся, по-видимому, действием факторов,' способствующих множественному заражению хозяина. Одним из таких факторов может быть временное обездвиживание личинки комара после проникновения первой инвазионной личинки мермитиды.

8. Продуцирование культурами взрослых особей мермитид н,1у-епеаг1 яиц и выход из яиц инвазионных личинок продолжаются в среднем 4-4,5 месяца (максимально до 6,5 месяцев). Уже после

2 месяцев хранения выход инвазионных личинок начинает резко •снижаться. ,

9. Детерминадия пола у паразитических личинок в.1уепЕах1, как и у других мермитид, происходит на стадии паразитической личинки. Существенным ,.ри этом оказывается личиночная стадия хозяина: доля самок мермитид, формирующихся при одинаковой интен-

сивности заражения, отличается у личинок комаров разных возрастов. Оптимальные соотношения самцов и самок при наименьших соотношениях числа заражаемых хозяев и инвазионных личинок мермитид достигаются при использовании личинок комаров 2-го и 3-го возраста.

10. Мермитиды R.iyengari успешно заражают-личинок трех широко распространенных во Вьетнаме видов комаров: Aedea aegypti, Anopheles hyrCanus И Culex tritaeniarhynchus. Прк-.зненив H,iyengari представляется обоснованным для борьбы с Aedea aegypti,-поскольку этот вид обитает в нёболыиих водоемах и емкостях с чистой водой в населенных пунктах.

Основные положения диссертации отражены в следующих работах:

.1. Нгуен Ван Дык, Спиридонов С.З. Эмбриональное развитие-Hooanonmrais iyengari (Mermithidae, Nenatoda) //' Институт пара зитологии РАН. - М., 1992. Рукоп.деп. в ВИНИТИ 16.11.92,. Ш 3258-В92,. 8 с.

2. Нгуен1Бак Дык, Спиридонов С.З. Восприимчивость трех видов кровососущих комаров, обычных на территории Вьетнама, к заражению мермитидами" Roœanomarmis iyengari // Институт паразитологии-РАН. - М.„ 1992-Рукоп.деп. в ВИНИТИ-16.IT.92, !й 3259-В92, 6 с.

3. Nguen Van Duc», Spiridonov S. Mot so dac diem h iah thai va sinh hoc cua Поаапоае irais iyengari - doi tuong dau tranh sinh hri vol cac loai nuoi hut mau.. "Sinh vat hoc" (Некоторые особенности морфологии и биологии- Ronanomermis iyengari агента биологической борьбы с кровососущими комарами // Биология / На Вьетнам.яз. (в печати).

' ЩёА