Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярный механизм транспорта парааминогиппурата через апикальную мембрану почечных канальцев

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Молекулярный механизм транспорта парааминогиппурата через апикальную мембрану почечных канальцев"

РГ8 ОД

; САНКТ-ПЕТЕРБЗГРГСЮЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рутсописи

Яэребцова Марина Алексеевна

УДК 577.3:577.4

МОЛЕКУЛЯРНЫЙ МЕХАНИЗМ ТРАНСПОРТА ^ ПАРААШНОШШУРАТА ЧЕРЕЗ АГЖКАЛЬНУЮ МЕМБРАНУ ПОЧЕЧНЫХ КАНАЛЬЦЕВ

(03.00.02 - биофизика)

Автореферат диссертации па соискание ученой степени кандидата физико-математических наук

Санкт-Петербург 1Э93

Работе выполнена в лаборатории биополимеров Отделения молекулярной и радиационной биофизики Петербургского института ядерьой 4кзакя им.Б.П.Константинова РАН.

Научний руководитель: кандидат физико-математических наук D.H. Орлов.

Официальные оллсненты: доктор фззико-метематичэгсшх наук,

профессор

С.Я.Френкель,

кандидат биологических неук А. А .Еиккфзроа.

Ведущая организация: Фазическиа факультет

Санкт-Петербургского государственного университета.

Защита диссертации состоится " " ¿с^ЫЖЯ-УдЪ^ у. в

/7 ^ часов на заседании спевдагайироЕанного совета Д 063.38.23 при Санкт-Петербургском государственном техническом университете но адресу: 195261, С-Петербург, ул.Политехническая, 29.

С диссертацией мокно ознакомиться в библиотеке СПбГТУ. Автореферат разослан 1Э93 г.

Ученый секретарь специализированного совета Власова О.Л.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актусльность темы. Одним из важнейших факторов приспособляемости многоклаточных организмов к условиям существования, особенно с ростом антропогенного загрязнения окружающей среда, является способность эффективно выводить чужеродные вещество (ксенобиотики) и продукты их детоксинации (Альберт, 1971: Парк. 1973; Барбьв, 1978, Бреслер, 1981; Бреслер, Никифоров, 1981). Одним из наиболее мощных путей выведения их из организма служи? система активного транспорта органических кислот (САТОК), локализованная в клетках проксимальных канальцев почки. Она обеспечивает секрецию большого числа эндогенных метаболитов, лекарственных веществ и природных токсинов (Наточин.1972; Wllner,1973; Бреслэр, Никифоров,1981, Pritchard, 1981; Moller, Sheikh, 1983).

Процесс экскреции веществ при помощи САТОК включает е себя три этапа: активный транспорт через базолатеральную мембрану (БЛ1.1) в цитоплазму, распространенно по цитоплазме до апикальной мембраны (AM) и перенос через AM в просвет канальца (Бреслер,Никифоров; 1981, Rüssel et al, 1988, Pritchard, 1987).

Физико-химические основы функционирования САТОК в настоящее время широко изучаются. Существенные успехи в изучении механизма транспорта были достигнуты благодаря использованию везикулярных мембранных препаратов. Было установлено, что транспорт органических кислот через базолатеральную и апикальную мембраны осуществляется при помощи специальных систем транспорта, причем кинетика транспорта удовлетворительно описывается уравнением Ккхвэлисэ-Ыентен (Kinaella et al, 1979; ffcisael et al, 19S8; Вгел1ег et al. 1989). Вместе с тем, хорошо известно, что как модель исс.-юдсвания направленных потоков везикулярные препараты имеют ряд нодостатков. Один из них связан с большим, по сравнению с икгактннми клетками, отношением их поверхности к внутреннему объему (Китег et al, 1984, Berteloot, Semenza, 1990). Кроме того, до сих пер среди исследователей нет согласия по вопросам, касающимся механизмов и движущих сил транспорта. В последнее время, например, активно сбсуждаэтся вопрос о существовании нескольких путей

транспорта органических кислот с перекрывающейся субстратной специфичностью или имеющих энергетическую зависимость от общего ионного градиента (Guggino et al, 1983; Kahn, Welraan, 1985; 'Jiigglno, Агопяоп, 1985; Pritcbard, 1987; Rüssel et al, 1588). Такая точка зрения неизбежно ставит вопрос о том, осуществляются .та различные пути транспорта ПАГ через различные белки- переносчики или через один и тот яе, механизм действия которого меняется в зависимости от физиологических условий? Эффективным подходом для рзшепия • поставленных вопросов является использование необрати/ых ингибиторов транспорта, которые для почечной системы транспорта органических анионов до сих пор не использовались.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является изучение механизма транспорта органических кислот через апикальную мембрану проксимальных канальцев почки и идентификация белков-переносчиков этой системы.

В качество маркерной кислоты была использована п-аюшогиппуровая кислота (ПАГ).

Успешно решить поставленные задачи позволил выбор необратимого ингибитора (бромацетилированного-п-ашногшпурата - ВгАсПАГ) и использование целого ряда оовремошых биофизических и биохимических методов.

Таким образом, перед нами стояли следующие конкретные задачи.

1. Изучить возможность использования ВгАсПАГ в качестве необратимого ингибитора транспорта органических кислот.

2. Используя необратимый ингибитор транспорта, изучить неспоцифи-ческую компоненту общего уровня накопления ПАГ в везикулах AM для определения кинетических параметров транспорта.

3. Используя ВгАс[^ШПАГ, идентифицировать белки-переносчики почечной системы транспорта органических кислот.

Научная новизна работы. В данной работе впервые был использован необратимый ингибитор системы транспорта органических анионов клеток почки, что определило научную новизну большинства полученных нами данных. •

Впервые всесторонне исследована неспецифичоская составляющая общего уровня накопления Г1АГ везикулами АМ к показано, что основной Еялад в неэ бносит сорбция ПАТ на поверхности мембран;! и его распределение в двойном электрическом слое, обусловленные зарядом мембраны. Количественный учет неспецифической составляющей позволил осуществить прямые измерения кинетических пирометров (Ку и Уц^у) транспорта ПАТ.

Использование радиоактивно-меченного ВгАсПАГ в качество аффинной реагента впервые позволило идентифицировать белки о молекулярным весом 28 нД и 98 кД , осуществляющие транспорт ПАГ в АМ.

Научно-практическая значимость. Идентификация бепков-переносчийов системы транспорта ПАГ является прямым подтверждением гипотезы о механизма опосредованного транспорта органических кислот через АМ и дает возможность выделить эти белки и исследовать механизм их действия в искусственных липидшх бислопх. Кроме того, понимание механизмов функционирования переносчиков послужит основой разработки методов коррекции системы выведения чужеродных веществ из организмов животных и человека.-

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 статьи и тезисы.

Апробация работы. Основные положения работы долоя;еяы на Всесоюзном совещании "Еиотэстирозание в рэшэнш экологических проблем", г. Ленинград, 1889 г. и на X Всесоюзном совещании по эволюционной физиологии, г.Ленинград, 1990 г.

Структура я объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, обсуждения результатов, выводов и списка литературы (171 ссылка, из них на руском языке 30). Работа изложена на 126 страницах мапшноппспого текста, включает 5 таблиц и 20 рисунков.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. Материалы и метода исследования. Работа выполнена ка везикулярных препаратах апикальной мембраны коры почки крысы. AM выделялась методом катионной преципитации (Booth,Kenny, 1974; Орлов и др., 1987). Чистота мембранной фракции контролировалась биохимически (по активности соответствующих маркерных ферментов), а морфологически- с помощью электронной микроскопии. Ультратонкие .срезы препаратов везикул фиксировали глютаровым альдегидом и контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца. Просмотр вели на электронном микроскопе TESLA-6I3 (ЧССР).

Для исследования САТОК в качестве маркерного аниона использовали парааминогшгаурат (ПАГ), в качества ингибиторов анионного транспорта использовали SITS (4-ацетамидо-4'- изотиоцаанатостал-Овн-2,2'дизульфоноввя кислота, Serva) и пробенецвд (Serva). С^ШПАГ (Amersham) имел удельную активность 9,4 ГБк/мМоль. Внутренний объем везикул AM измэряли ранее описанным методом (Бреслер и др., 1987) при помощи ["^Шинулкне (Amersham), удельная активность 68,8 ГВк/мМсль. В качестве необратимого ингибитора использовали синтезированный нами бромацетилирован-ный-п-аминогиппурат (ВгАсПАГ). Уровень накопления меченного ПАГ в везикулах определяли методом фильтрации на нитроцеллюло&ннх фильтрах "СЫШОР" (ЧССР) на специально сконструированной для в тих целой полуавтоматической установке (рис Л). Она позволила поддерживать с высокой точностью давление фильтрации, температуру раствора инкубации и раствора остановки реакции, скорость фильтрации и использовать времена инкубации менее 15 с. Величина радиоактивности измерялась жидкосцинтилляционным методом на счетчике SL-30 (Франция). Для одного выделения использовали кору почки от 10-15 крыс, каждую точку снимали 3-5 раз. Статистическая обработка результатов измерений проводилась по стандартному методу. На графиках приведены средние значения и границы доверительного интервала при 90S уровне значимости.

Для идентгфикации белков-переносчиков САТОК использовали радиоактивную форту ВгАсЕ^ЗПАГ (II ГВк/мМоль) с последующим

I.Фильтрационная ячейка, 2.форвакуумный насос, З.ресявер, 4.мано-натр, 5.термостатированный дозатор, в.насос, 7.холодильник, 8.791ЛЮСТ9Т, 9.магнитная мешалка с термостатированной ячейкой, .ТО.таймер, II.баллон со скатым воздухом, 12.вентиль.

разделением белков методом БЮ-электрофореза в полиакриламидном гело по методу Леммли (ЬаегапИ, 1970). Фосфолипида разделяли методом двумерной тонкослойной хроматографии, как описано в работе Хиза с соавторами (Н1зе е1 а1, 1984).

2. Тонкое строение и биохимическая характеристика фракции АМ.

Электронно-микроскопическое исследование фракции АМ показало, что она практически полностью состоит из интактных или несколько набухших микроворсинок АМ; фрагменты мембран шероховатой эндо-плазматической сети, митохондрий и лизосом не обнаруживаются.

Расчет фактора обогащения и выхода маркерных ферментов проводился по формулам:

П=УАф/УАг ,

где п - фактор обогащения, относительные единицы; УА - удельная активность фермента, мкМоль/час на I мг белка; индексы фиг относятся к конечной мембранной фракции и гомогенату, соответственно;

выход=-^^ (%), где

С- концентрация белка, мг/мл; "V - объем фракции, мл.

Как видно из данных таблицы, биохимические метода также показывают, что загрязнение препаратов АМ другими клеточными мембранами весьма незначительно. Фактор обогащения по маркерному ферменту АМ щелочной фосфатазе 10,5-1,0 (с выходом 13±25&), а по остальным изученным маркерным ферментам не превышает единицы (о выходом порядка 1%).

Внутривезикулярный объем, измеренный с помощью радиоактивно-меченного инулина, равен 0,5 мкл на I мг мембранного белка.

Таблица

Рлогг-счэектгЯ анализ чистоты фракций апгаальноЗ и базслатвральной мембран, полученных методом катаояноЗ преципитация из клеток корн почки крысы

1рЧКСС!Я Суабаин-чуьстзитель яаяЛа-Х-А?5зза Щелочная фосфатаза * ... г .. — ... . Глюкозо-б-фосфатазд 1 геназз

УА п. выход Л а- выход УА п. зыход 7к п- выход

Гсмсгенат 1,4*0,5 - 100 4,2*1,0 100 5,410,9 „ 100 У.УУ _ 100

¿•.••-ЙЯ.? йаэолате-рзльноЗ мемвраяи И, 5 0^7 8,5 9,0 гТо 4 Л 0,"7 1,0 о7з 1.9 * о,"з 8,6 17о 1.4 + 0Г5 1,2 077 не опр. - 1 ~ 1С

Фрагсгая алокально2 м&.Зралн нз опр, - - 44,0 + 5;о 10,5 1,0 13,0 + 2,0 1.0 + о7б 0.20 > 0,05 0.5 + 0,3 не опр. - -

У А - удвлькат активность фермэнтоз, мк<Моль/час на мг белка, г*, - ргхтор обогащения, относительные единицы} витсд, %

3. Необратимое ингибировение транспорта НАГ бромацетшшрованным

ПАГ и определение кинетических параметров транспорта Г1АГ.

Iii рис. 2А,Б (кривея Г) представлены зависимости общего уровня накопления ["^НШАГ везикулами АЫ от концентрации (Б) и времени обработки (А) мембранной фракции ВгАсПАГ с последующим удалением его из среды инкубации.Для определения неспэцифической составляющей общего уровня накопления был использован метод "начального скачка", т.е. значение уровня накопления ПАГ везикулами при 3 с. инкубации (рис.ЗА.Б, кривая 2), которое отражает быструю сорбцию субстрата на поверхности (Murer et al, 1984). Разностная кривая (рис. 2 А,Б, кривая 3) отражает накопление субстрата внутри возикул, т.о. собственно транспорт ПАГ. Видно, что ЗгАсШГ ип'ибкруот транспорт ПАГ е везикулах AM, причем степень ингибкрования зависит как от времени обработки, так и от концентрации ингибитора. При концентрации ВгАсПАГ разной I мЫоль и времени обработки 90 мин . транспорт ПАГ полностью подавляется.

Эти условия были использованы для изучения неспецифической составляющей общего уровня накопления ПАГ. Известно (Heinz,1978; Klnsella et al, 1979; Murer et al, 1984), что в общем случае неспецифическая составляющая накопления вещества в везикулах складывается из сорбции на поверхности мембршш, распределения вещества в двойном электрическом слое, диффузии через деффекты липидного бислоя и доннановского перераспределения, В наших исследованиях определение неспецифической составляющей было проведено при низких концентрациях субстрата на начальных временах накопления и при достижении равновесия (условия изучения механизмов транспорта) и при высоких концентрациях субстрата на начальных временах накопления (условия изучения кинетики транспорта). Измеренное в условиях равновесия, когда диффузионный поток равен нулю, значение общего уровня накопления [®КШАГ, равное 100 пМсль на I мг белка, отракает сумму следующих компонент: свободную концентрацию субстрата внутри везикул, сорбцию, распределение субстрата в двойном электрическом слое я доннановское перераспределение ПАГ, которое

может быть вызвано наличием цитоскелета внутри везикул.

Расчет показывает, что при концентрации ПАТ в сродэ инкубации, равной 150 мкМ, и внутреннем объеме везикул, равном 0,5 мкл на I мг белка, вклад свободного внутривэ-таулярного субстрата в общий уровень накопления составляет 75 пМоль на I № белка, что на 25% меньше, чем измеренное значение. 'Го есть, ори равновесии 25% от общего уровня накопления приходится на неспецифическую составляющую.

Для учета вклада доннановского распределения мы уделили цитоскелет при помощи процедуры осмотического шока. При добавлении 5 мМ пробенецида в среду инкубации равновесный уровень во фракциях при наличии цитоскелэта и после его удаления понижается на о,дну и ту же величину, примерно на 25%. Поскольку высокая концентрация органического аниона одинаково изменяет общий уровень накопления [^НШАГ в везикулах до и после осмотического шока, то можо заключить, что доннановское перераспределение не вносит существенного вклада в общий уровень накопления.

При малых врэмонах инкубации в не специфическую составляющую общего уровня накопления может вносит вклад диффузия через дефекты бислоя, однако при добавлении в среду инкубации ингибитора транспорта органических анионов (SITS) при временах менее 15 с, общий уровень накопления нэ изменяется и совпадает с уровнем трехсекундного накопления. Этот результат свидетельствует о том, что диффузионная составляющая общего уровня накопления ПАТ везикулами при малых временах инкубации практически отсугст-пуот, и правомерна оценка величины неспецифической составляющей методом "начального скачка".

Таким образом, основной вклад в неспецифическую составляющую вносит сорбция ПАТ и его распределение в двойном электрическом слое. Величина неспецифической составляющей при низких концентрациях субстрата достигает 25% от общего уровня накопления.

При высоких концентрациях субстрата величина неспецифической составляющей изучалась в условиях полного необратимого ингибиро-

Рис.2.Зависимость общего уровня накопления ПАТ везикулами АЫ ог времени обработки <А) и от концентрации ВгАсПАГ (Б). I - 10 о накопления ПАТ; 2 - 3 о накопления; 3 - разностная кривая.

№0.3. (А)Зависимость уровня накопления ПАТ везикулами АЫ от его концентрации. I - немодифицировашше везикулы; 2 - везикулы, модифицированные I мМ ВгАсПАГ в течение 1,5 часа; 3- разностная кривая. Время инкубеции 10 с.

(Б) График Лайнуиввра-Берка для разностной кр1шой (3).

епния транспорта при помощи ВгАсПАГ, и было показано, что она зависит от концентрации субстрата нелинейно и стремится к насыщению (рис.ЗА, кривая 2).

Прямое измерение неспецифической составляющей общего уровня накопления позволило определить истинные кинетические параметры транспорта ПАТ. На рис.ЗА приведены концентрационные зависимости общего уровня накопления ПАТ везикулами АМ и уровня накопления в условиях полного необратимого икгибирования :ренспортв. Разностная кривая (рио.ЗА, кривая 3) отражает транспорт ПАТ в везикулы АМ. Анализ кинетических параметров транспорта был сделан на основе модели "подвижного переносчика" (Котык, Яначек, 1980).

Со. ^ ^ л. С30

1 2

с

ч

и

(^-концентрация переносчика, Эконцентрация субстрата, индексы г I и 2 относятся к разным сторонам мембраны.

ас1

а1,-кас2-к181с1-1ьг01+к2с81

йс2

31 ="кб32С2+1сГС1 -1с8С2+к5С32 ¿СБ,

йСБ, \MuCS, -k.es-.

ЗГ =-к5С32-к4С32+к652С24кЗС51

2С»С1-гС2+С31+С32

Решение приведенной системы уравнений для начальных скоростей транспорта определяется выражением, совпадающим по форме с уравнением Михаэлисв-Ментен:

где 7^=0-^7---.

Км + 51 к5(к3+к7).К7(к3+ к4)

<

(к^+кд) ^кд* кок5+ Цк5)

Км" к, [к5(к3+к7.)+к7(к3+к4") ] '

Использование кривой 3 (рис.ЗА) для построения зависимости начальной скорости тршссорта от концентрации субстрата в обратных координатах Лайнуивара-Берка (рис.ЗБ) дало возможность определить кинетические константы транспорта ПАГ. Кажущаяся константа Михаэлиса (Км) равна 8-2 мМ, а максимальная скорость V,. =20-3 нМоль/мин ка I мг белка.

4. Идентификация белков-переносчиков САТОК . Для идентификации белков, участвующих в транспорте ПАГ, использовали радиоактивную форму необратимого ингибитора ВгАс[3Н]ПАГ в качестве аффинной метки. В работе были использованы 4 критерия: I) абсолютная величина пика радиоактивности ва SDS-электрофорвграмме после обработки мембранной фракции ВгАс^ЗПАГ, 2) изменение величины втих пиков при обработке в присутствии SITS (ингибитора анионного транспорта), 3) изменение величины пиков радиоактивности белков мембраны, предварительно защищенной нерадиоактивным ВгАсПАГ в присутствии пробенецида, 4) частота обнаружения пиков.

На рис.4 вида о, что в AM существуют 4 основных пика радиоактивности, соответствующие белкам с молекулярным весом >1Б0 кД, 98 кД, 63 кД и 28 кД. Наличие SITS в среде инкубации ведет к исчезновению пиков радиоактивности белков 98 кД, 63 кД, 28 кД. При исключении неспецифического связывания аффинной метки путем предварительной обработки мембранной фракции нерадиоактивным ВгАсПАг в присутствии конкурентного ингибитора пробенецидана алектрофореграмме остается только один осноеной пик радиоактивности (28 кД). Совокупность имеющихся данных позволяет гфедноло-жить, что белки с молекулярным весом 28 кД, 63 кД и 98 кД относятся к системе транспорта ПАГ. Однако, разная частота встречаемости пиков радиоактивности может отражать разное содержание базолатеральной мембраны как примесной компоненты во фракции везикул AM. Эксперименты по аффинной идентификации белков САТСК в БЛМ (которые были выполнены в тех же условиях, что и для AM) не позволяют сделать такого вывода (рис.5) - в обоих случаях величина пиков радиоактивности практически одинакова. В случаэ

ш ЧИН мкн

,гос

имп мин

15 30 15 30

Номэр зоны Номер зош

Рис.4. Диаграмма ковалантного связывания BrAct^HlIIAl' с белками AM. А - в присутствии (о) и в отсутствии (•) 2 мМ SITS в среде обработки; Б - после предварительной защиты керадиоактявныи ВгАсПАГ в присутствии 5 мМ пробенецида.

имп.

мин 600-

300-

имп мин

600-

300-

б

28*3

/

20

<0 20 М

Номер зоны Номер зоны

Рис.5. Диаграмма ковалентного связывания ЕгАсГ^ШЛАГ с белками АМ. А - в присутствии (о) и в отсутствии (•) 2 мМ ЭГРЭ в среде обработки; Б -- после предварительной защиты нерадиоактивным ВгАсПАГ в присутствии 5 мМ пробонецида.

ЕЛМ наблюдается два основных пика, соответствующие белкам 98 кД и 28 кД. SITS полностью ингибирует ковалентное связывание ВгАсПАГ; использование прэбанецида в качестве протектора дает результат, совпадающий с тем, который был получен на АМ. В литературе существует только одна работа, посвященная идентификации белков-переносчиков почечной системы транспорта органических кислот (Goldlnger et al., 1984). Используя фотоаффинную метку NAP-таурин, Голдингер с соавторами идентифицировал. 4 белка в БЛМ с молекулярными весами 108 кД, 64 кД, 52 кД и 26 кД и не смог выявить белки, ответственные за транспорт ПАТ в АЫ. Сравнивая наши данные с данными Голдингера с соавторами, можно отметить соответствие результатов по крайней мере по трем белкам: 98 (108) кД, 63 (64) кД и 28 (26) кД. Возможно, что небольшие отличия в молекулярных весах связаны о разной точностью их определения методом SDS-элактрофорезв.

Таким образом, при помощи аффинной метки ВгАс£3ШПАГ нам удалось идентифицировать в АМ белок о молекулярным весом 28 кД, относящийся к системе пробенецид-чувствительного транспорта ПАТ.

ВЫВОДЫ

1. Показано, что бромацетилированный-п-аминсгиппурэт является необратимым ингибитором транспорта ПАТ через АМ проксимальных канальцев почки крысы. При концентрации I мМ и времени обработки 90 мин транспорт ПАГ подавляется полностью.

2. Проведена количественная оценка отдельных компонентов неспецифической, составляющей общего уровня накопления ПАГ и показано, что диффузия и доннановское перераспределение отсутствуют, а основной вклад вносит сорбция ПАР и его распределение в двойном электрическом слое, обусловленные зарядом мембраны. Использование полного необратимого ингибированья транспорта позволило провести количественное измерение неспецифической составляющей.

3. Нз основе прямого измерения неспецифической составляющей общего уровня накопления ПАГ везикулами АМ клеток ночки были

определены кинетические параметры транспорта. Кажущаяся константа Михаэлиса Км=8±2 мМ, а максшальная скорость транспорта V_„,-2Q-3 нМоль/мин на I мг белка.

ШЯА

4. В AM проксимальных канальцев п^чки впервые идентифицирован белок с молекулярным весом 28 кД, принадлежащий к системе транспорта ПАТ, что подтверждает гипотезу о механизме опосредованного транспорта органических кислот через апикальную мембрану.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТИЛЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. V.M.Brasler, S.H.Valter, M.A.Jerebteova, 'V.V.Ipayev-Ivanov, E.H.Kasbekcv, A.R,Kleiner, Yu.II.Orlov, I .A .Ostapenko, A.T.Suchodolova, Y.N.Pomlchev. The iniluenca oi the lipid bllayer phase state on the p-aminohlppurate (PAH) transport and the activity oi the alkaline phosphatase In brush- border membrane vesicles Irom nonnal and mutant rata. Blochlm.Blophys. Acta, (1989), v.987, pp.288-294.

2. Е.В.Беляева, В.М.Бреслер, М.А.Жзребцова, З.Н.Казбеков, " Ю.Н.Орлов. Системы экскреции ксенобиотиков как способ тестирования в экологическом мониторинге. // Биотестирование в решении экологических проблем. Изд. РАН, Ленинград, 1Э9.1,

с.51-45.

3. Ю.Н.Орлов, М.А.Жэребцова, З.Н.Казбеков.Аффинная идентификация переносчиков системы транспорта органических анионов проксимальных канальцев. - Препринт ПИЯФ РАН, W ISOO, 1993.

4. Ю.Н.Орлов, М.А.ЗКеребцова, З.Н.Казбеков. Необратимое ингибиро-вание транспорта п-аминогиппуровой ютелоты в везикулах апикальной мембраны проксимальных канальцев почки крысы и определение кинетических параметров транспорта. - Препринт ПИЯФ РАН, ЖГ922, 1993.

Б. М.А.Жеребцова . Кинетические параметры транспорта параамино-гшшуровой кислоты в везикулы апикальной мембраны коры почки у нормальных и мутантных крыс. - Тезисы. Ленинград, 1990.

РТП ПИЯФ, зак.792, тир.100, уч.-изд.л.0,8;20/ХП-1993г.

Бесплатно