Молекулярно-клеточные механизмы регуляции костного ремоделирования при иммобилизации

Трифонова, Елена Борисовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Молекулярно-клеточные механизмы регуляции костного ремоделирования при иммобилизации
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Молекулярно-клеточные механизмы регуляции костного ремоделирования при иммобилизации"

На правах рукописи

ТРИФОНОВА Елена Борисовна

МОЛЕКУЛЯРНО-КЛЕТОЧНЫЕ МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ КОСТНОГО РЕМОДЕЛИРОВАНИЯ ПРИ ИММОБИЛИЗАЦИИ (экспериментально-клиническое исследование)

03.03.01- физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук

1 3 ОКТ 2011

Челябинск, 2011

4857288

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении Уральский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии им. В. Д. Чаклина Министерства здравоохранешш и социального развития Российской Федерации

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Осипенко Артур Васильевич

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор Лунева Светлана Николаевна Доктор биологических наук Толстых Евгения Игоревна

Доктор медицинских наук Камскова Юлиана Германовна

Ведущая организация - Учреждение Российской академии наук

Институт иммунологии и физиологии Уро РАН

Защита состоится «27» октября 2011 г в 10.00 часов на заседании диссертационного Совета Д 212.295.03 при ГОУ ВПО «Челябинский государственный педагогический университет» по адресу: 454080, г.Челябинск, проспект им. В.И. Ленина, 69, конференц-зал (ауд. 116).

С диссертацией можно ознакомиться в читальном зале библиотеки ГОУ ВПО «Челябинский государственный педагогический университет»

Автореферат разослан «_» 2011 года

Ученый секретарь диссертационного Совета Кандидат биологических наук

Байгужин П.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Механизмы снижения минеральной плотности костной ткани (МПК) связаны с балансом процессов ее ремоделирования, которые во многом зависят от функционального состояния обменных процессов остеогенных клеток. Разнообразие механизмов, регулирующих костное ремоделирование, предполагает существование многочисленных путей, вызывающих конкретные изменения структуры костной ткани.

Длительная иммобилизация изменяет костное ремоделирование, что приводит к снижению МПК и развитию остеопении и остеопороза (В. С. Оганов, 2003, 2009; С. В. Гюльназарова, 2010). Показана корреляция уровня снижения МПК и периода иммобилизации (С. В. Гюльназарова, 2006,2010; О. А. Кузнецова, 2010).

Целесообразность исследования механизмов снижения МПК при иммобилизации обоснована длительными сроками сращения, трудностью выбора оперативного вмешательства, частыми неудовлетворительными исходами, отсутствием эффективных методов мониторинга динамики МПК (Н. А. Корж и др., 2001, 2002; С. П. Миронов, С. С. Родионова, 2003; В. С. Зубиков и др., 2006; Г. П. Котельников и др., 2008; H. Н. Кораблева, 2009; Е. А. Назаров и др., 2009; С. В. Гюльназарова, 2010; К. Ertem, Е. Kekilli, 2007; С. С. Wu, 2007; J. К. Oh et al., 2008; S. R. Rozbruch et al., 2008).

Снижение МПК выявляют в разных возрастных группах, в том числе у молодых, что в современном социуме связано с низкой физической нагрузкой (JL А. Щеплягина, 2005; В. Н. Меркулов и др., 2008), кроме того, на фоне роста общего травматизма отмечают большую долю высокоэнергетических травм у молодых людей, лечение которых в условиях иммобилизации сопровождается существенным снижением МПК.

Основным предиктором снижения МПК при первичном системном остеопорозе считают кальций костной ткани (А. С. Аврунин и др., 2000; О. И. Орлов, 2007; Т. Sato et al., 2006), а основной причиной нарушения минерализации матрикса кости - изменения функций и гистогенеза остеобластов (Е.И. Марова, 1998; В. С. Оганов, 1998; В. К. Казимирко, В. И. Мальцев, 2005; M. Lafage-Proust, 2000; В. С. Chen et al., 2006). В последнее десятилетие все большее значение в регуляции остеогенеза приобретает комплекс остеотропных цитокинов (RANKL/RANK/OPG) (R. G. Russell et al, 2006; С. N. Bernstein, 2006; L. Lingxi, Y. Hiroki, 2009; G. P. Thomas et al., 2010).

При иммобилизации инициирующим фактором снижения МПК выступает гипокинезия, оказывающая влияние на все системы организма (В. С. Оганов, 2008, 2009). Ряд авторов, в первую очередь, рассматривает иммобилизацию как стресс, вызывающий каскад адаптивных реакций со стороны различных систем и органов

(В. И. Швец и др., 1988; Н. Н. Васильева и др., 2002; Ю. Г. Камскова, 2004; Д. 3. Шибкова и др., 2006; И. И. Григорьев, 2007; О. Л. Гребнева и др., 2009; Д. Г. Иванов, В. Г. Подковкин, 2009; Я. В. Латюшин, 2010; Р. Patterson-Buckendahl et al„ 2001; S. Kido et al., 2009). Определённое влияние на остеогенез при гипокинезии имеет реакция скелетных мышц (Т. И. Долганова и др., 2008; Р. J. Kosteniuk et al., 1997; J. M. Cousins et al., 2010). Потеря костной массы при иммобилизации сопровождается снижением костного кровообращения (В. В. Фролькис и др., 2002; J. Hayashi, 2001). Микроокружение остеогенных клеток несет потенциал, регулирующий их дифференцировку через различные молекулярные механизмы, в том числе Wnt (А. G. Robling et al., 2006; Е. J. Arnsdorf et al., 2009; I. Kramer et al., 2010).

Несмотря на определенные достижения в понимании молекулярных основ остеогенеза и регуляции костного ремоделирования отсутствуют сведения о комплексном исследовании системного ответа на иммобилизацию, не определена роль метаболических механизмов в реализации стадийности снижения МПК (нормальная МПК-остеопения-остеопороз), не исследованы и не обоснованы биохимические аспекты фармакологической и нефармакологической коррекции, поэтому раскрытие иерархии клеточно-молекулярного взаимодействия при снижении МПК в условиях иммобилизации и поиск рациональных путей регресса иммобилизационного остеопороза (ИОП) - актуальное и перспективное направление исследований.

Цель исследования-оценить системный ответ организма в динамике иммобилизации, раскрыть закономерности костного ремоделирования и разработать критерии его мониторинга в условиях иммобилизации при разном уровне минеральной плотности костной ткани.

Задачи исследования

1. Изучить в эксперименте адаптивные реакции тканей опорно-двигательного аппарата и системы крови в динамике иммобилизации, ведущей к снижению минеральной плотности костной ткани

2. Построить математическую модель иммобилизационного остеопороза.

3. Выявить особенности минерального, энергетического, пептидного обменов

и системных регуляторов метаболизма кальция у пациентов с разным уровнем минеральной плотности костной ткани (нормальная минеральная плотность -остеопения - остеопороз) при иммобилизации.

4. Сравнить метаболические особенности репаративного остеогенеза после различных оперативных вмешательств у пациентов при сниженной минеральной плотности костной ткани вследствие иммобилизации

5. Обосновать эффективность применения различной терапии (остеогенона,

кальция с витамином Б3, оксигеиобаротерапии) у пациентов со сниженной минеральной плотностью костной ткани при иммобилизации

6. Разработать критерии и алгоритм мониторинга состояния костного ремоделирования при разном уровне минеральной плотности костной ткани в условиях иммобилизации.

Научная новизна. Впервые сформулирована метаболическая концепция регуляции минеральной плотности костной ткани в условиях иммобилизации, раскрывающая молекулярно-клеточные механизмы костного ремоделирования при разной степени снижения МПК (остеопения-остеопороз).

Впервые разработана математическая модель регуляции минеральной плотности костной ткани в условиях иммобилизации, раскрывшая патогенетические особенности иммобилизационного остеопороза. Показана взаимосвязь сопряжения процессов костного ремоделирования при сниженной МПК вследствие иммобилизации не только с дефицитом кальция в костной ткани, но и с низким уровнем неорганического фосфата и магния, а также с состоянием гемопоэза и биоэнергетических процессов в тканях опорно-двигательного аппарата (Патент № 2416366).

Впервые обнаружено, что при иммобилизации развивается различный дефицит макроэлементов костной ткани: дефицит кальция - 45 %, неорганического фосфата - 80%, магния - 82% по сравнению с физиологическими значениями. Основными предикторами разобщения процессов остеолизиса и костеобразования является низкий уровень магния и неорганического фосфата костной ткани.

Впервые на основе комплексного исследования адаптивных реакций тканей опорно-двигательного аппарата и системы крови на иммобилизацию в эксперименте выявлены закономерности костного ремоделирования и определены основные метаболические факторы развития иммобилизационного остеопороза. Показана активация метаболических маркеров остеогенных клеток, свидетельствующая об ускорении костного ремоделирования; рост активности энергетических процессов с превалированием аэробного окисления; выраженный дефицит неорганического фосфата и магния в костной ткани; увеличение цитоза костного мозга.

Раскрыты особенности репаративного остеогенеза у пациентов со сниженной МПК вследствие иммобилизации в динамике в течение года после различных операций чрескостного остеосинтеза.

Обоснована эффективность_пртлеиенш препаратов кальция с витамином 03, остеогенона и оксигеиобаротерапии и показаны преимущества оксигеиобаротерапии в оптимизации костного ремоделирования у пациентов со сниженной МПК в условиях иммобилизации.

Новизна мониторинга пациентов со сниженной МПК при иммобилизации защищена Патентами (№№ 2177619, 2194994, 2311644, 2346680, 2358655). Получено Положительное решение о выдаче Патента на изобретение «Способ оценки течения костеобразования при лечении пациентов с несращениями костей».

Теоретическая значимость. В работе показано, что при иммобилизации существенный вклад в регуляцию костного ремоделирования, изменение которого приводит к снижению минеральной плотности костной ткани, вносят метаболические и клеточные факторы, а именно: дисбаланс биоэнергетических процессов в тканях опорно-двигательного аппарата, активация гемопоэза, дисцитокинемия остеотропных и провоспалительных цитокинов, выраженный дефицит магния и неорганического фосфата на фоне умеренного дефицита кальция в костной ткани. На основе полученных данных сформулирована метаболическая концепция регуляции минеральной плотности костной ткани при иммобилизации.

Практическая значимость. Определены критерии снижения МПК при иммобилизации, особенности репаративного остеогенеза после различных оперативных вмешательств. Обоснована целесообразность мониторинга пациентов со сниженной МПК вследствие иммобилизации, что позволяет своевременно и корректно назначать терапию для оптимизации сроков сращения и предотвращения прогресса остеопороза.

Разработаны способ диагностики иммобилизационного остеопороза (Патент РФ № 2358655) и способ прогнозирования сроков сращения (Патент РФ № 2177619), способ диагностики степени формирования остеопоротических изменений (Патент РФ №2194994), способы диагностики качества репаративного остеогенеза у пациентов с несращениями костей и сниженной минеральной плотностью костной ткани (Патент РФ № 2311644), способ коррекции нарушенного ремоделирования костной ткани при иммобилизационном остеопорозе (Патент РФ № 2346680).

Предложен алгоритм мониторинга пациентов со сниженной МПК, что повышает эффективность диагностики иммобилизационного остеопороза, позволяет оценить его выраженность, качество репаративного остеогенеза в ранний послеоперационный период и прогнозировать сроки лечения.

Показана целесообразность применения у пациентов с разным уровнем МПК терапии, влияющей на ремоделирование костной ткани (оксигенобаротерапии, остеогенона, кальция с витамином Б3).

Реализация результатов работы

тологии, ортопедии и военно-полевой хирургии Тюменской государственной медицинской академии. Разработанный алгоритм лабораторного мониторинга успешно применяется в травматолого-ортопедическом отделении ФГУ «УНИИТО им. В. Д. Чаклина», ФГУ «ЦИТО им Н.Н. Приорова», ФГУ «РНЦ ВТО им. акад. Г. А. Илизарова», в травматологических отделениях МУ «Ревдинская городская больница», окружного военного клинического госпиталя № 354, ОКБ№ 1 (г.Екатеринбург), ГКБ № 1 (г. Первоуральск), ОКБ № 2 (г. Тюмень), ГКБ № 21 (г. Уфа), в ГБ № 3 (г.Каменск-Уральский), в Свердловском областном клиническом психоневрологическом госпитале ветеранов войн.

Апробация работы и публикации

Основные положения и результаты диссертационного исследования доложены на конференциях «Диагностика, лечение и профилактика остеопороза», «Остеопороз с позиций доказательной медицины» (Екатеринбург, 2002, 2004), Национальных Днях лабораторной медицины (Москва, 2002), семинаре «Новые технологии в травматологии и ортопедии» (Екатеринбург, 2002), I Всероссийской конференции «Физиология иммунной системы» (Сочи, 2003), конференции изобретателей и рационализаторов, поев. 85-летию засл. деятеля науки РСФСР, профессора З.П. Лубегиной (Екатеринбург, 2004), IX Российском национальном Конгрессе «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2004), первом и втором съездах травматологов-ортопедов УрФО (Екатеринбург, 2005; Курган, 2008), научно-практ. конференциях «Новые медицинские технологии», «Актуальные вопросы диагностики и лечения иммобилизационного (посттравматического) остеопороза», «Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохранения России до 2020 года» (Екатеринбург, 2006,2008, Москва, 2010), на международном симпозиуме «Биология клетки» (Санкт-Петербург, 2006), 5th Meeting of the ASAMI International (Санкт-Петербург, 2008), III Всероссийском Конгрессе по остеопорозу (Екатеринбург, 2008), молодежной региональной конференции «Проблемы теоретической и прикладной математики» (Кунгурка, 2009), IV Конференции с международным участием «Проблема остеопороза в травматологии и ортопедии» (Москва, 2009), X Международном Конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии, посвящ. 100-летию со дня рожд. академика АМН А. Адо» (Казань, 2009), «Днях иммунологии в Санкт-Петербурге (2009), научно-практ. семинарах «Новое в диагностике и лечении остеопороза», «Актуальные вопросы диагностики и лечения посттравматического остеопороза» (Нижний Тагил, 2009; Ревда, 2010), IV Съезде физиологов Урала (с межд. участием) (Екатеринбург, 2009), международной научно-практ. конференции «Остеопороз и остеоартроз - проблема XXI века: морфофункциональные аспекты диагностики, лечения и профилактики»

(Курган, 2009), Российском Конгрессе ASAMI (Курган, 2009), научно-практ. конференции «Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохранения России до 2020 года» (Москва, 2010), конференции травматологов-ортопедов республики Башкортостан (2010); IOF World Congress on Osteoporosis and 10th European Congress on Clinical and Economic Aspects of Osteoporosis and Osteoarthritis (Италия, 2010), научно-практ. конференции с межд.участием «Илизаровские чтения» (Курган, 2011).

По теме диссертации опубликовано 65 печатных работ, из них 11, в изданиях, рекомендованных ВАК, пособие для врачей, 3 медицинские технологии, методические рекомендации; получено 6 патентов РФ, положительное Решение о выдаче Патента (заявка 2010129871 «Способ оценки течения костеобразования при лечении больных с несращениями костей»).

Положения, выносимые на защиту

1. Степень снижения минеральной плотности костной ткани (остеопения-остеопороз) в условиях иммобилизации детерминирована особенностями костного ремоделирования, что дает основание для формулирования метаболической концепции развития иммобилизационного остеопороза, основу которой составляет дисбаланс энергетических реакций тканей опорно-двигательного аппарата и изменения гемопоэза, проиллюстрированные на математической модели иммобилизационного остеопороза.

2. Нарушение костного ремоделирования в условиях иммобилизации связано с различным дефицитом макроэлементов костной ткани: уровень кальция по сравнению с физиологическими значениями снижен на 45%, неорганического фосфата -на 80%, магния - на 82%.

3. Репаративный остеогенез после открытого стабильного остеосинтеза и закрытого дистракционного остеосинтеза при сниженной минеральной плотности костной ткани, а также при применении остеогенона, кальция с витамином D3, оксигенобаротерапии сопровождается разной метаболической адаптацией. Оптимальный способ коррекции сниженной минеральной плотности костной ткани вследствие иммобилизации - оксигенобаротерапия.

4. Алгоритм мониторинга костного ремоделирования при иммобилизации является дополнительным объективным критерием повышения эффективности коррекции сниженной минеральной плотности костной ткани.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 5 глав собственных результатов, заключения, списка литературы, приложений; изложена на 349 страницах машинописного текста, иллюстрирована 89

рисунками, 74 таблицами. Библиографический указатель включает 271 отечественный и 306 иностранных источников.

Диссертация выполнена по плану научно-исследовательских работ ГФУН «Уральский НИИ травматологии и ортопедии им. В.Д. Чаклина Минздрава России», номер государственной регистрации 01200711146.

Личное участие автора

Автором проведен сбор экспериментального и клинического материала, лично выполнены все лабораторные исследования, обработка, анализ полученных данных, разработана математическая модель ИОП, создана метаболическая концепция регуляции МПК при иммобилизации, разработаны критерии и алгоритм мониторинга пациентов со сниженной МПК при иммобилизации.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В главе Материалы и методы дана характеристика экспериментального и клинического материала, описана методика моделирования экспериментального ИОП, методы исследования, лабораторное оборудование, методы статистической обработки данных.

Эксперимент проведен на 140 крысах-самцах Вистар (возраст 3-4 месяца, вес 120-140 г). Моделировали ИОП (100 крыс) резекцией костей голени правой задней конечности на уровне проксимального отдела, формируя неопороспособное бедро (операции выполнены канд.мед.наук А.Ю. Кучиевым). 50 крыс получали 10 сеансов оксигенобаротерапии (ГБО) в барокамере «Ока-МТ» после формирования остеопоротических сдвигов в костной ткани (на 100-105 сутки после операции), что подтверждено морфометрически и рентгенологически. У всех крыс в течение года после операции (интервал 30 суток) исследовали кровь, костный мозг, костную (бедро) и скелетную мышечную ткани оперированной и контрлатеральной конечностей. Группа сравнения - 40 интактных крыс. Животных содержали и выводили из опыта в соответствующие сроки эксперимента с учетом положений международной конвенции о «Правилах работ с экспериментальными животными» (European Communities Council Directives of 24 November 1986, 86/609/EEC).

Дизайн эксперимента:

1-я серия (50 животных) - моделирование ИОП; 2-я серия (25 животных) -ГБО 1,5 АТА; 3-я серия (25 животных) - ГБО 2 АТА; 4-я серия (40 животных) -интактные крысы (группа сравнения)

Костные гомогенаты готовили поэтапно: быстрая заморозка в жидком азоте, измельчение в механическом микроразмельчителе тканей, дифференциальное

центрифугирование в режиме 0/+4°С на рефрижераторной высокоскоростной центрифуге Sorval. Среды выделения: 0,25 M раствор сахарозы с 10 мМ триэтаноламином и 2 мМ ЭДТА (рН 7,4); 0,145 M раствор KCI с 3,3 мМ КНС03 (рН 7,4).

В костных гомогенатах определяли: маркеры метаболизма костной_ткани: активность общей и тартратрезистентной кислой фосфатазы (КФобщ, КФтарт), общей и термолабильной щелочной фосфатазы (ЩФобщ, ЩФтерм); маркеры биоэнергетического обмена: общую активность лактат- и малатдегидрогеназы (ЛДГ, МДГ), концентрацию лактата, пирувата, белка; маркеры перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантной системы (АОС): концентрацию малонового диальдегида (МДА), активность каталазы, пероксидазы. Для определения кальция (Са), неорганического фосфата (Рп), магния (Mg) применяли влажное озоление.

В мышечных гомогенатах изучали общую активность креатинфосфокиназы (КФК), ЛДГ, МДГ, концентрацию лактата, пирувата, белка, глюкозы и Са.

В сыворотке крови определяли маркеры метаболизма костной ткани, биоэнергетического обмена, ПОЛ и АОС, концентрацию макроэлементов.

Для подсчета миелокариоцитов пунктат костного мозга разводили 200-кратно 5% уксусной кислотой и подсчитывали в камере Горяева.

Клинический раздел работы составили 133 пациента с разным уровнем МПК (нормальная МПК, остеопения, остеопороз) вследствие иммобилизации на фоне несращения костей конечностей, давность травмы от 4,5 месяцев до 7 лет. Все пациенты прооперированы методом чрескостного остеосинтеза по Г.А. Илизарову (открытый стабильный остеосинтез - ОСО или закрытый дистракционный остеосинтез - ЗДО) в травматолого-ортопедическом отделении под руководством профессора C.B. Гюльназаровой. Критерии включения в исследование: пациенты, не имеющие в анамнезе заболеваний, ведущих к развитию вторичного остеопороза, не принимавшие терапию, влияющую на обмен костной ткани (глюкокортикоиды, антиконвульсанты, гормоны щитовидной железы, антикоагулянты).

Снижение МПК до уровня остеопении выявлено у 35 пациентов (возраст 38,9±10,6 лет, мужчин 20, женщин 15, Т-критерий травмированной конечности: -1,87±0,37 SD).

Снижение МПК до уровня остеопороза диагностировано у 79 пациентов (возраст 39,8±10,4 лет, мужчин 56, женщин 23, Т-критерий травмированной конечности: -3,55±0,71 SD).

Группа сравнения - 19 пациентов с аналогичным диагнозом и нормальной МПК (возраст 39,1±10,9 лет, мужчин 9, женщин 10, Т-критерий травмированной конечности: - 0,23±0,65 SD)._

Также проведено открытое контролируемое исследование пациентов со сниженной МПК в условиях иммобилизации, которым после операции назначали остеотропную терапию или ГБО; рандомизацию проводили по патологии, Т-критерию, методу лечения, полу и возрасту.

Группу пациентов, принимавших остеогенонL составили 14 пациентов (9 мужчин, 5 женщин, возраст 40,1±12,0 лет, Т-критерий повреждённой конечности от -2,5SD до -5,9 SD), всем выполнен ОСО. Препарат назначали с 21 дня после операции в дозе 6 таблеток в сутки в течение первых 3 месяцев и 3 таблетки в сутки в течение следующих трёх месяцев.

В группу пациентов, принимавших кальций с витамином D}, вошли 14 пациентов (8 мужчин, 6 женщин, возраст 39,8±10,7 лет, Т-критерий травмированной конечности от -1,5SD до -4,6SD), все пролечены методом ОСО. Препарат назначали с 21 суток после операции. В течение первых трёх месяцев суточная доза составляла 1000 мг кальция и 400 ME витамина D3, в последующие три месяца доза препарата была снижена в два раза.

Сеансы ГБО проведены у 22 пациентов (3 женщины, 19 мужчин, возраст 37,1±8,3 лет, Т-критерий травмированной конечности от -2,6SD до -3,7 SD), всем выполнен ЗДО, с 7 суток проведено 10 сеансов ГБО (барокамера «Ока-МТ», изопрессия 30 минут, давление 1,5АТА (ГБО выполнено врачом В.Е.Журавлёвой).

Сроки обследования пациентов: до операции, через 1, 3, 6, 9, и 12 месяцев после неё.

Рентгенография поврежденных конечностей пациентов выполнена на рентгеновском комплексе Philips Compact Diagnost в стандартных проекциях. Оценку МПК поясничного отдела позвоночника (L2-L4) и проксимальных отделов обеих бедренных костей (шейка бедра, большой вертел, зона Варда, общий показатель МПК бедра-Total hip) проводили методом двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии на денситометре DPX-A (Lunar, USA) в динамике до операции, через 6,12 месяцев после неё в отделении лучевой диагностики УНИИТО под руководством канд.мед.наук И.А. Зельского. МПК выражали в г/см2 (BMD), в величинах стандартного отклонения (SD) от пика костной массы (Т-критерий), и относительно средних значений для данного возраста и пола (Z-критерий).

У пациентов в сыворотке крови и суточной моче определяли маркеры метаболизма костной ткани, биоэнергетического обмена, ПОЛ, АОС стандартными методами, концентрацию остеокальцина, кальцитонина, паратгормона, CrossLaps, CICP (пропептиды коллагена 1 типа), RANKL, OPG, активность супероксиддисмута-зы (СОД), ЩФтерм методом твердофазного иммуноферментного анализа. Проведено стандартное биохимическое исследование (уровень глюкозы, фракции билирубина,

мочевины, креатинина, белка, альбумина, активность аминотрансфераз), общий анализ крови. Исследования выполнены на высокотехнологичном оборудовании: биохимическом анализаторе Specific basic (Konelab), ион-селективном анализаторе Microlyte 3+2 (Konelab), иммуноферментном анализаторе Stat Fax 2100 (Medica), гематологическом анализаторе Cell Dyn 1700 (Abbott), фотометре с проточной кюветой Stat Fax 1904 (Medica), спектрофотометре СФ-26 (ЛОМО) унифицированными методами (В.Н. Орехович, 1977; Н.Д. Ещенко, 1982; В.В. Меньшиков, 1987; О.Г. Архипова, 1988; С.Е. Северин, 1989; К.С. Десятниченко, 1992; Н. Тиц, 1997; H.J. Hohorst, 1970) с использованием фирменных тест-систем (Konelab, Siemens, Abbott, Medica, Bio Rad, Biomedica, Biosource, Diagnostic Syst. Labor, inc., Imm. systems L., METRA, Bender Med. Systems).

Иммунный статус оценивали по фагоцитарной активности нейтрофилов (ФАН) с расчетом фагоцитарного индекса и числа; функциональной активности фагоцитов (НСТ-тест), уровню иммуноглобулинов (IgG, IgA, IgM), ИЛ-lß, ИЛ-2 и их растворимых рецепторов, уровню С-реактивного белка (Г. Фримель, 1987; RM. Хаитов, 1995, 2001; Я.М. Станишевский и др., 2003).

Полученные данные обработаны с использованием пакета программ «Статистика 6.1»: дисперсионный, дискриминантный параметрический и непараметрический (критерии Манна-Уитни, Краскла-Уоллиса, медианный тест, тест Ньюмена-Кейлса, Вальда-Вольфовица), регрессионный, корреляционный анализы (О.Ю. Реброва, 2003). Для построения модели ИОП применяли математическое моделирование, выполненное под руководством канд..ф.-м. наук К.С. Кобылкина (Институт математики и механики Уро РАН).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Особенности метаболизма костной, скелетной мышечной тканей и реакции системы крови при снижении минеральной плотности костной ткани в условиях иммобилизации в эксперименте

Эксперимент показал, что иммобилизация вызывала существенные изменения метаболизма тканей опорно-двигательного аппарата, которые приобретали системный характер, поскольку адаптивные реакции выявлены в тканях оперированной и контрлатеральной конечностей, а также по реакции системы крови. Метаболический ответ формировался уже к 30 суткам, что гораздо раньше, чем по данным гистоморфометрии (90-105 сутки). Изменения метаболических систем зависели от степени формирования остеопоротических изменений, верифицированных гистоморфометрически.

Полученные данные позволили выделить метаболические особенности костной ткани при снижении МПК: синхронизированный рост активностей щелочной и кислой фосфатаз, соответственно рост фосфатазного индекса с 30 суток иммобилизации, что свидетельствовало об ускорении костного ремоделирования. Максимумы активности ЩФтерм- 120 сутки эксперимента (в 10,8 раза выше, чем в группе сравнения, р<0,01), КФтарт - 90 сутки эксперимента (в 2,2 раза выше, р<0,05, чем в группе сравнения).

Одновременно с ускорением костного ремоделирования наблюдали активацию аэробных реакций костной ткани. Вклад аэробных процессов в её энергообеспечение при иммобилизации возрастал в десятки раз по сравнению с интактными крысами. Пик активности МДГ - 60-120 сутки (в 14,6-17,7 раза выше, чем в группе сравнения, р<0,05). Через 1 месяц иммобилизации общая активность ЛДГ в 2 раза ниже, чем у интактных крыс (р<0,05), однако после окончательного формирования ИОП (90-105 сутки) активность ЛДГ возрастала. Динамика индекса лактат/пируват положительно коррелировала с динамикой индекса ЛДГ/МДГ. Такую адаптацию биоэнергетических процессов считаем одним из механизмов регуляции уровня МПК, так как известно, что, костное ремоделирование в норме обеспечивается макроэргами за счет гликолиза.

Анализ динамики накопления макроэлементов в костной ткани показал различный по продолжительности и абсолютной величине дефицит Са, Рп и Mg. Обнаружены значительные нарушения минерализации внеклеточного матрикса: дефицит Са составил 45 % (90-150 сутки), Рп - до 80 % (30-180 сутки), Mg - до 82 % (30-240 сутки). В литературе отмечают снижение уровня Са костной ткани при первичном остеопорозе, в то время как при иммобилизации мы выявили умеренный его дефицит при выраженных дефицитах Рп и Mg, что способствовало дестабилизации кристаллов гидроксиапатита, росту активности лизосом, соответственно костной резорбции, негативно влияло на анаболические процессы в костной ткани (рис.1).

Рис. 1 Дефицит макроэлементов костной ткани при снижении её минеральной ' плотности до уровня остеопороза в условиях иммобилизации, (%)

В скелетной мышечной ткани снижена активность основных механизмов, снабжающих её АТФ (гликолиз, цикл Кребса, КФК-реакция) на фоне накопления глюкозы и снижения белка. Также как и в костной ткани, через месяц иммобилизации, активность ЛДГ значимо ниже в 4,2 раза, в середине эксперимента в 9,6 раза, чем у интактных крыс. На фоне многократного роста активности МДГ костной ткани, I в скелетной мышце её активность снижена к 90-150 суткам. На протяжении всего эксперимента общая активность КФК скелетной мышечной ткани также существенно снижена, напротив, в интактной группе наблюдали её рост в 2,9 раза (р < 0,05) по сравнению с исходным уровнем.

Анализ содержания глюкозы в мышце показал значительное ее накопление при иммобилизации в течение восьми месяцев после операции, что выше в 12,5 раз (р<0,05), чем у интактных крыс. Корреляция уровня глюкозы и активности I ферментов биоэнергетического обмена отрицательная, то есть, вероятно окисление | других субстратов или дефицит коферментов. Концентрация белка в 2 раза ниже, | чем у интактных крыс.

В сыворотке крови существенно снижен фосфатазный индекс за счет низкой активности ЩФтерм и КФтарт. Динамика уровня Са, Рп у интактных и опытных крыс аналогична, однако уровень Mg отличался: значимо ниже на 60 и 150 сутки иммобилизации, далее - значимо выше, чем у интактных крыс. После формирования ИОП смещен индекс ЛДГ/МДГ крови в сторону аэробных реакций, а динамика активности КФК сыворотки крови и скелетной мышечной ткани аналогична: снижение с начала эксперимента.

Системный ответ организма на иммобилизацию сопровождался комплексом изменений не только в костной ткани, но и в системе крови, которые затрагивали периферическую кровь и костный мозг. Снижение МПК сопровождалось

моноцитозом, нейтрофилёзом, эозинофилией в периферической крови и в костном мозге, что способствовало экспрессии провоспалительных цитокинов, активирующих остеокласты. Рост клеточности костного мозга связываем с экспрессией ИЛ-1 р моноцитами, что стимулировало пролиферацию нейтрофилов и эозинофилов, также активированный моноцит инициировал пролиферацию и дифференцировку полипотентных стволовых кроветворных клеток.

Влияние гипербарической окспгенации на костное ремоделирование на фоне остеоиоротических изменений в костной ткани в условиях иммобилизации в эксперименте

Для коррекции нарушенного костного ремоделирования при сниженной МПК в условиях иммобилизации в эксперименте мы применили курс ГБО с режимами 1,5 ATA и 2 ATA.

Анализ динамики метаболических маркеров костной ткани показал оптимизацию костного ремоделирования после курса ГБО за счёт увеличения сопряжения резорбции и костеобразования. Фосфатазный индекс костной ткани в течение трех месяцев после курса ГБО значимо ниже в 2,5 раза, в сыворотке крови при режиме 1,5 ATA он значимо выше в 17,2 раза, чем у не леченых крыс и в 8,6 раз выше, чем в режиме 2 ATA. На метаболизм остеогенных клеток ГБО в режиме 1,5 ATA оказывала стойкое положительное влияние: в костной ткани значимо вырос в 2,3 раза уровень Са, в 5,1 раза Рп и в 4,8 раза Mg.

Известно, что ГБО активирует свободно-радикальное окисление и индукцию защитных систем клеток, поэтому интерес представляла активность пероксидазы в костной ткани крыс: после окончания курса ГБО при 1,5 ATA она возросла в 7,7 раза, при 2 ATA - в 10,9 раза к 240 суткам, по сравнению с периодом до ГБО (р<0,05). Активность пероксидазы в сыворотке крови значимо выросла: при 1,5 ATA в 3,8 раза к 210 суткам, при 2 ATA в 4,2 раза к 240 суткам.

В костной ткани и в сыворотке крови крыс после разных режимов ГБО снижен индекс ЛДГ/МДГ. При 2 ATA активность КФК в сыворотке крови после 120 суток выросла в 4,5 раза (р<0,05), что, связываем с дестабилизацией клеточных мембран и ростом деструктивных процессов в скелетной мышечной ткани. Снижение индексов ЛДГ/МДГ и лактат/пируват в скелетной мышечной ткани после ГБО обусловлено многократным снижением активности ЛДГ и уровня лактата, что отражало превалирование аэробного окисления. На восстановление трофики скелетных мышц после ГБО указывал рост уровня белка (в 2 раза, р<0,05) на фоне снижения содержания глюкозы (в 11 раз, р<0,05). Об усилении анаболической фазы

остеогенеза под влиянием ГБО (1,5 ATA) судили по росту количества эритроидных клеток, полихроматофильных нормоцитов, сегментоядерных нейтрофилов при сокращении метамиелоцитов в костном мозге, а общее число миелокариоцитов выше, чем без ГБО.

Таким образом, ГБО оптимизировала костное ремоделирование за счет стимуляции кислородзависимых функций остеобластов, в то время как метаболическая активность остеокластов практически не менялась, а минеральный матрикс кости в течение шести месяцев восстановился до физиологической нормы.

Математическая модель иммобилизационного остеопороза

Построена математическая модель иммобилизационного остеопороза, которая представляет собой модель дискриминантного анализа в виде пары канонических дискриминантных функций Y, и Yr Для её создания использовано 136 образцов конечностей крыс интактных (32), опытных (64) и пролеченных ГБО (40), у которых 80 лабораторных показателей различного биологического материала (костная и скелетная мышечная ткани, костный мозг, сыворотка крови, периферическая кровь) сформированы в 44 фактора. Из всего массива данных посредством дисперсионного, дискриминантного, регрессионного, корреляционного анализов детерминированы пять переменных - классификационных функций (интегральных факторов), образующих систему из двух уравнений (1 и 2):

Y=0,06531Fr 1,09987F4 + 0,73434F5 + 0,55673Fr 0,47905F/2 (1) Y = 2,187187F1 + 0J18737F0,209791F} + 0,180613F2- 0,136332F¡2 (2)

где Y Y2 - дискриминантные функции, F, F4, F5, F2, F]2 - интегральные факторы

Первое уравнение моделирует зависимость дискретизованной переменной Y (МПК) от комбинаций исходных переменных (факторов-Fj...F^, в которых содержатся 80 лабораторных параметров с разными коэффициентами вклада). Под дискретизованностью Гпонимается диапазон значений МПК, разделенный на два непересекающихся интервала; один из которых соответствует интактным, а второй - опытным крысам. Значениям МПК в первом интервале соответствует значение Y=l, а во втором интервале: Y=-l, при этом Y~sign(Y,+0.2), где sign означает знак числа. Во втором уравнении Y'=l соответствует леченым ГБО крысам, a Y'= -1 -есем остальным. Уравнение Y'-sign (Y2-l) дает приближенное описание отклика Y'. Как следует из уравнений 1 и 2 имеют значение пять интегральных факторов, по данным корреляционного анализа следует: основа Y, F4, а основа Y2 - F, (табл. 1).

Таблица 1

Корреляционные связи дискриминантных функций и факторов математической модели иммобилизационного остеопороза, (р<0,05)

Фактор/Дискриминантная функция

Р, 0.050334 0.949257

- 0.570777 0.028855

Р5 0.343277 - 0.045925

0.251762 0.038248

Р12 -0.214058 - 0.028526

Биологическая интерпретация информативных факторов модели представлена в таблице 2.

Таблица 2

Биологическое значение факторов математической модели __иммобилизационного остеопороза_

Фактор Интерпретация фактора

высокая корреляционная связь (модуль Ксш,рет> 0.80, р<0,05) значимая корреляционная связь (модуль КСшрмсна >0.30, р<0,05)

Р, -кальций костной ткани -антиоксидантная система костной ткани -биоэнергетический обмен костной и скелетной мышечной тканей

-магний костной ткани -биоэнергетический обмен костной и скелетной мышечной тканей -клеточность костного мозга

-гомеостаз кальция -биоэнергетический обмен костной ткани -гемопоэз

-неорганический фосфат костной ткани -магний костной ткани - анаэробный обмен мышц -созревание красного ростка -популяции лейкоцитов периферической крови

-гемопоэз -глюкоза крови

Значение \Vilks-)., характеризующее значимость модели, равно 0,08657 со значением Р(10,258)=61,889 (р<0,0000). Результат правильного распознавания обучающей выборки составил 94,8%, а проверочной - 93,3%, что свидетельствует о высокой эффективности модели, так как для распознавания считается положительным результат более 80% (рис.2).

0 Интактные ° Опытные ° Леченые

Рис. 2 Проекция математической модели иммобилизационного остеопороза I на плоскости дискриминантных функций

Дискриминантные функции (У! и У,) иллюстрируют биологические процессы, лежащие в основе регуляции костного ремоделирования, соответственно | уровня МПК, при иммобилизации и эффект ГБО на сниженную МПК. Основа У|5 ! детерминирующей крыс с ИОП, - Б , биологический смысл которого - динамика М^ в костной ткани (рис. 3).

I I

4.5

) 4,0

3.6

"I 3,0

1,0 0.5 0.0 -0.5

Рис. 3 Динамика уровня магния в костной ткани крыс Основа У , детерминирующей крыс с ИОП, пролеченных ГБО - Б,, биологический смысл которого - динамика Са костной ткани после ГБО.

Мультипликативная модель динамики концентрации Mg костной ткани при иммобилизации (уравнения 3 и 4, соответственно группам сравнения и опытной)

О °

п О ° О О О оо о о о о 0

/ □ 0°0° О ° 8 ЧейВ% о □□ во о«* о >Л о 00 о о о

•8 -6 -4 -2 0 2 4 6 8

динамика концентрации магния в кости

выявляет разные факторы регуляции костного ремоделирования:

ЬпУ=2 - 0.64Х, - 0.66Х2 (3)

где X, - 1п [пируват в костной ткани], Х2 - 1п КФтарт в крови Ьп У=2.34+0.07Х, -0.22 Х2 - 0.23Х3 - 0.76Х4 (4)

где X, - [Рп в костной ткани], Х2 - Кфтарт костной ткани, Х3 - 1п [ЩФтерм/ КФтарт] костной ткани, Х4 - 1п [пируват мышечной ткани]

Согласно разработанной математической модели, иммобилизация по-разному влияет на содержание костных минералов, вызывая снижение уровня и Рп, затем -Са. Математическое моделирование развития остеопоротических изменений в костной ткани крыс при иммобилизации показало участие разных метаболических факторов в механизме костного ремоделирования в норме, при сниженной МПК и при её коррекции ГБО. Наряду с динамикой содержания основных макроэлементов костной ткани, в регуляции костного ремоделирования имеет значение состояние энергетического обмена и системы крови.

Метаболические особенности пациентов при иммобилизации в динамике снижения минеральной плотности костной ткани (нормальная МПК-остеопения-остеопороз)

При обследовании пациентов с разным уровнем МПК вследствие иммобилизации (нормальная МПК, остеопения, остеопороз) обнаружены значимые различия метаболических маркеров до операции (табл. 3).

При нормальной МПК показатели практически аналогичны референсным, что свидетельствовало о сохранении физиологических механизмов регуляции костного ремоделирования. Исключение - сниженный уровень Mg в крови и индекс стимуляции нейтрофилов.

При остеопении в сравнении с нормальной МПК в сыворотке крови обнаружены различия по уровню СгозвЬарз, паратгормона и индекса стимуляции нейтрофилов.

Таблица 3

Биохимические показатели пациентов с различной минеральной плотностью костной ткани в условиях иммобилизации, (М±т)_

Показатель/ Группа Остеопороз, п=79 Остеопения, п=35 Нормальная МПК, п=19 Референсные (внутрилабор.) значения

ЩФтерм, Ед/л 37,1±21,2* ** 51,6±32,9 *" 52,4±28,0 52,1±28,9

ЩФобщ, Ед/л 157,5±69,4 ** • • 227,7±85,2 ** 203,б±58,7 177,9±46,7

Гидроксипролии мочи, мг/г Сг 39,9±19,9* 25,9±11,9 ** 25,7±6,8 18±6

ЗегитСгоззЬаря, нг/мл 1,092±0,280* 1,410±0,480* 0,512±0,019 0,461±0,123

Паратгормон, пг/мл 30,4±23,5* 30,4±28,4** * 55,8±36,0 64,8±40,2

Остеокальцин нг/мл 28,3±10,3** 28,5±13,6 ** 19,3±5,9 22,0±9,5

1ШЖЦ пмоль/л 0,038±0,077** 0,064±0,070** 0,355±0,125 0,27±0,27

Магний, ммоль/л 0,80±0,10* 0,68±0,14 ** 0,69±0,14 1.7±0,4

Спонтанный фагоцитоз, % 69,1±16,7 * 77,5±13,2 ** 86,4±6,2 71,5±1б,5

Индекс НСТ-теста 0,652±0,181** 0,704±0,195 • * 0,499±0,197 0,619±0,402

Индекс стимуляции нейтрофилов, ед. 1,28±0,50* 1,41±0,42*** 0,56±0,13 более 1,0

Примечание.* - р<0,05 - уровень значимости по отношению к группе сравнения, * * -р<0,01 -уровень значимости по отношению к группе сравнения, *- р<0,05 - уровень значимости по отношению к пациентам с остеопенией, ** - р<0,01 - уровень значимости по отношению к пациентам с остеопенией

При ИОП выявили значимо ниже активность ЩФтерм, ЩФобщ, спонтанного фагоцитоза, уровень RANKL при более высокой магниемии и росте экскреции НОР/ Cr, чем при остеопении и нормальной МПК. Изменения маркеров костеобразования (снижение ЩФтерм и рост остеокальцина) и костной резорбции (рост SerumCross Laps и экскреции НОР/Cr при снижении RANKL и паратгормона) разнонаправлены, что отражало нарушения костного ремоделирования. Выявленные до операции метаболические особенности у пациентов разных групп сохранились в динамике в течение года после ОСО и ЗДО.

После ОСО при ИОП в сравнении с остеопенией и нормальной МПК наблюдали снижение фосфатазного индекса, активности спонтанного фагоцитоза, маркеров воспаления и аэробного окисления при росте в крови уровня остеокальцина, паратгормона, Mg и росте экскреции Ca/Cr и НОР/Cr. При остеопении роста концентрации паратгормона, экскреции Ca и НОР, снижения активности ФАНсп и маркеров воспаления не найдено, что отражает разный вклад системных и локальных регуляторов костного ремоделирования при разном уровне МПК. При остеопении обнаружена преимущественная реакция со стороны остеобластов, а при ИОП изменилась активность всех остеогенных клеток.

После ЗДО при остеопении происходила активация маркеров остеобластов на фоне превалирования аэробного окисления, а при ИОП повышена активность остеокластов при физиологическом балансе аэробных и анаэробных реакций. Влияние ИОП на остеобласты различно - нет роста активности ЩФтерм, но высок уровень остеокальцина.

В целом при комплексном анализе метаболических показателей у пациентов с разным уровнем МПК на фоне несращений костей в динамике до операции и в течение года после неё выявлены информативные критерии оценки прогрессивного снижения МПК до уровня ИОП, степени «тяжести» ИОП, качества репаративного остеогенеза и прогноза сроков сращения.

Влияние терапии на костное ремоделирование при сниженной минеральной плотности костной ткани в условиях иммобилизации

Для коррекции сниженной МПК и нормализации костного метаболизма в послеоперационном периоде применяли различную терапию: остеогенон, кальций с витамином Б3, курс ГБО.

Полученные результаты свидетельствовали об ускорении костного ремоделирования при терапии остеогеноном, что коррелировало с данными денситометрии о росте уровня МПК через полгода после ОСО на 5,5% (р <0,05), а через 1,5 года после сращения на 9,7% (р <0,05). (табл. 4).

Таблица 4

Влияние остеогенона на метаболизм у пациентов со сниженной _минеральной плотностью костной ткани при иммобилизации, (М±т)_

Срок/группа Биохимические показатели

МДГ, Ед/л ЛДГ/МДГ ЯАЖЬ, пмоль/л Паратгормон, пг/мл

до операции п=61 60±27 2,90±2,35 0,076±0,141 30,4±23,3

1-3 мес. группа сравнения п=24 59±22 2,69±2,61 0,008±0,011 71.3±31.1

остеогенон п=26 52±23 4,65±3,64* 0,068±0,01* 18.2±8.3**

5-7 мес. группа сравнения п=22 49±23 5,52±5,02 0,054±0,001 51.1±27.2

остеогенон п=24 85±26*** 1,53±0,74* 0,024±0,032 41±12.7*

9-12 мес. группа сравнения п=19 73±22 1,85±0,9* 0,039±0,024 52.9±20.6

остеогенон п=26 156±93** 1,18±0,2* 0,048±0,042* 37,0±18.8

Примечание. * - р<0,05 - уровень значимости по отношению к группе сравнения,

**-р<0,01 -уровень значимости по отношению к группе сравнения, *-р<0,05 -уровень значимости

по сравнению с фоном до операции

Активация костного ремоделирования подтверждена ростом экскреции Рп и Са в 1-3 месяцы после ОСО (в 1,6 раза и 1,2 раза соответственно), уровня СгохзЬарэ в 3,3 раза (р < 0,01) в моче и в 3,7 раза в крови (р < 0,01) через полгода после ОСО, что коррелировало с динамикой МПК.

Уровень паратгормона при терапии остеогеноном снижен, что способствовало анаболическому эффекту его малых концентраций. В регуляции репаративного остеогенеза при снижении МПК значима роль остеотропных цитокинов (ИАМКЬ и ОРО): уровень которых высок через полгода после ОСО. Ремоделирование костной ткани - энергозависимый процесс, поэтому актуальна значимая активация ЛДГ в течение 3 месяцев после ОСО, что влияло на рост индекса ЛДГ/МДГ; а затем -активация МДГ. Обнаружено, что рост общей активности МДГ в сыворотке крови положительно коррелировал с ростом МПК (К„ =0,487 и 0,700 соответственно

г г г г \ Спирмсна 7

через 6 и 9 месяцев после ОСО, р<0,05).

Таким образом, остеогенон изменял скорость кальций-фосфатного обмена и метаболизма коллагена у пациентов со сниженной МПК при иммобилизации, что способствовало ликвидации несращений костей без повторных операций, и сокращению сроков консолидации ложных суставов бедра на 2 месяца, а костей голени - на 3 месяца.

Кальций с витамином положительно влиял на костное ремоделирование при сниженной МПК. Выявлены значимые различия между группами в 1-3 месяцы после ОСО: выше активность КФтарт, уровень КА№СЬ, ниже уровень паратгормона. Разнонаправленная динамика системных и локальных регуляторов костного обмена (паратгормона и КАЫКЬ) в разных группах свидетельствовала о превалировании локальной регуляции костного ремоделирования при данной терапии, что подтверждено значимой корреляцией маркеров костной резорбции и уровня ЯЛККЬ ([КСпир„еиа]=1) и низкой корреляцией с уровнем паратгормона ([КСпирмена]=0,28). В группе сравнения выше корреляция с уровнем паратгормона. Динамика ЛДГ/МДГ отражала превалирование аэробных процессов. Через 6 месяцев в 3 раза (р < 0,05) выше экскреция СгоззЬарв, что аналогично динамике других маркеров костной резорбции (табл.5).

Таблица 5

Влияние кальция с витамином О, на метаболизм у пациентов со сниженной минеральной плотностью костной ткани при иммобилизации, (М±щ)

Срок/группа Лабораторные показатели

КФтарт, Ед/л Паратгормон, пг/мл Рп, ммоль/л ЛАИКЬ, пмоль/л лдг, Ед/л МДГ, Ед/л

до операции группа сравнения п=17 2,48± 1,31 48,7± 0,3 1,19± 0,29 0,083± 0,118 183,8± 83,7 66,2± 15,6

кальций с витамином о3 п= 15 4,19± 1,67 37,2± 23,9 1,10± 0,25 - 248,3± 101,2 220,5± 107,4

1-3 мес. группа сравнения п=17 3,33± 1,59 65,1± 39,9 1,12± 0,18 0,032± 0,033 204,4± 99,1 59,4± 22,8

кальций с витамином п3 п= 14 4,15± 1,44* 48,2± 30,4* 1,13± 0,28 0,063± 0,047* 281,1± 65,8 239,3± 102,1**

5-7 мес. группа сравнения п=17 2,68± 0,95 51,1± 27,2 1,07± 0,18 0,051± 0,045 59,8± 28,3 49,5± 23,6

кальций с витамином о3 п= 14 3,80± 1,26** 53,4± 36,7 1,29± 0,27* 0,015± 0,011 348,2± 107,7* 158,03± 95,7

9-12 мес. группа сравнения п=15 2,59± 0,84 49,7± 22,1 1,06± 0,16 0,03 9± 0,025 155,4± 60,0 70,4± 25,8

кальций с витамином о3 п= 11 3,76± 1,64 23,5± 15,5 1,02± 0,24 0,0069± 0,0041* 212,9± 96,4 162,7± 113,5**

Примечание. *-р<0,05 - уровень значимости по отношению к группе сравнения, **-р<0,01 -уровень значимости по отношению к группе сравнения

Уровень ИЛ-1Р в крови в 1,3-1,5 раза выше в течение года, что связываем с активацией лимфоцитов, имеющих рецепторы к витамину ГЭГ В сыворотке крови выросла активность ЩФтерм, уровень остеокальцина, отметили ускорение обмена коллагена. Показателями активации иммунной системы явился значимый рост фагоцитарного числа при стимуляции в 1,8 раза через полгода, в 1,2 раза катионных белков и индекса НСТ-теста (НСТсп/НСТст).

Итак, кальций с витамином изменял костное ремоделирование через активацию иммунокомпетентных клеток, что положительно влияло на баланс системных и локальных регуляторов остеогенеза. В результате - сроки сращения

костей бедра меньше на 15 %, костей голени - на 30 %, В отношении прироста МПК отметили тенденцию роста на 1,8 % через 1,5 года после сращения, в то время как в группе сравнения - снижение МПК.

Об оптимизации костного ремоделирования после курса ГБО свидетельствовала положительная динамика фосфатазного индекса, уровня остеокальцина, ОРв на фоне снижения концентрации ИАИКЬ (табл. 6).

Таблица 6

Влияние оксигенобаротерапии на метаболизм у пациентов со

сниженной минеральной плотностью костной ткани при иммобилизации, (М±ш)

Срок/группа Биохимические показатели

Фосфатазный индекс СОД, нг/мл остео-кальцин, нг/мл RANKL, пмоль/л OPG, пмоль/л ЛДГ/ МДГ

ДО операции группа сравнения п=17 13,5± 5,9 0,438± 0,339 26,3± 9,2 0,063± 0,060 2,49± 0,22 1,88± 1,09

ГБО п = 23 15,0± 7,3 0,461± 0,195 31,5± 11,9 0,046± 0,068 3,16± 1,08 1,40± 0,31

1-3 мес. группа сравнения п=17 10,5± 5,1 0,292± 0,101 20,4± 7,1 0,235± 0,107 2,67± 0,73 4,10± 3,45

ГБО п=23 8,5± 4 9*** 0,354± 0,168 31,7± 12,6* 0,013± 0,038** 4,5± 0,6** 1,36± 0,27*

5-7 мес. группа сравнения п=17 11,4± 5,7 0,261± 0,048 33,2± 10,5 0,207± 0,012 3,0± 0,13 3,88± 3,36

ГБО п=22 20,6± 5,5 1,373± 0,370** 24,0± 15,8 0,043± 0,068** 5,29± 1,04* 1,34± 0,17

9-12 мес. группа сравнения п=17 9,9± 4,5 0,260± 0,053 27,6± 8,2 0,001± 0,001 2,01± 0,19 3,04± 2,13

ГБО п=22 13,5± 7,5 0,832± 0,370 45,3± 10,6** 0,011± 0,012 4,57± 0,82** 1,3± 0,31

Примечание. * - р<0,05 - уровень значимости по отношению к группе сравнения, ** - р<0,01 - уровень значимости по отношению к группе сравнения, * - р<0,05 - уровень значимости по отношению к фону до операции

Низкий фосфатазный индекс сыворотки крови обусловлен снижением активности КФтарт после ЗДО в 1,3-2,8 раза (р<0,01), что коррелировало с экскрецией Ca/Cr и Рп/Сг. Экскреция CrossLaps менялась волнообразно - пик отметили в 1-3 месяц после ЗДО, а через полгода, напротив, в 1,8 раза ниже, чем в группе сравнения.

В течение года после курса ГБО снижены значения ЛДГ/МДГ, что обусловлено ростом активности МДГ в 1,6-1,3 раза и снижением активности ЛДГ сыворотки крови в 2,1-2,5-2,2 раза в динамике в течение года, это способствовала активации

анаболических реакций в тканях.

Иммобилизация является стрессом и, как следствие, сопровождается активацией свободно-радикального окисления, поэтому значимый рост активности СОД считаем положительной адаптивной реакцией.

ГБО способствовала активации фагоцитоза, росту моноцитоза, индекса НСТ-теста, снижению уровня ИЛ-lß в крови, а к концу года наблюдения - сохранению незначительного лимфоцитоза, на что указывало не только увеличение числа фагоцитов, но и рост их функциональной активности.

Итак, исследование эффекта ГБО у пациентов со сниженной МПК при иммобилизации подтвердило данные эксперимента о положительном влиянии гипероксии на костное ремоделирование. Полученные результаты свидетельствовали об оптимизации костного ремоделирования, росте сопряжения остео-лизиса и костеобразования, что привело к росту МПК через 6 и 12 месяцев после ЗДО на 7,8% и 12,6% соответственно (р<0,05) и сокращению сроков сращения костей голени на 31% (р<0,05).

Заключение

Анализ данных эксперимента раскрыл закономерности костного ремоделирования в условиях снижения МПК при иммобилизации: ускорение костной резорбции и костеобразования, что обеспечивалось активацией биоэнергетических реакций, преимущественно аэробных, и гемопоэза. Однако сопряжение процессов костного ремоделирования детерминировано дефицитом Mg и Рп в костной ткани, что также отрицательно влияло и на минерализацию костного матрикса, поскольку изменения соотношений Са/Pn и Ca/Mg вызывают дестабилизацию кристаллов гидроксиапатита. Кроме того, их дефицит активировал лизосомы, соответственно костную резорбцию; явился причиной «неэффективного» костеобразования и дестабилизации рибосом. В большинстве реакций, в которых АТФ играет роль донора фосфата, участвуют комплексы MgATP2" и РпАТР2, поэтому при дефиците Рп и Mg снижена активность анаболических процессов, ингибирована система аденилатциклаза-цАМФ, несмотря на активацию окислительного обмена. Остеобласты содержат полифосфатзависимые ферменты, поэтому вероятно состояние их «незрелости» на фоне их достаточного количества.

Активацию аэробных реакций костной ткани при низкой активности гликолиза считаем особенностью развития ИОП. Интенсивность метаболического ответа тканей и крови в условиях иммобилизации разная. Одна из причин этого - потеря неколлагеновых белков в костной ткани - локальных регуляторов остеогенеза.

Разный метаболический ответ организма на разную степень снижения МПК при иммобилизации позволяет оптимизировать выбор способа оперативного лечения, и играет важную роль при определении показаний к коррекции МПК.

Комплексный анализ данных выявил критерии оценки степени снижения МПК, состояния репаративного остеогенеза, прогнозирования сроков лечения, представленные в виде алгоритма мониторинга пациентов в условиях иммобилизации (актуально при отсутствии возможности рентгеновской денситометрии) (рис. 4). Д до ОПЕРАЦИИ

Определение состояния МПК

(уровень СгоззЬарз в сыворотке крови)

Рис. 4 - Алгоритм мониторинга пациентов в условиях иммобилизации

Таким образом, снижение МПК детерминировано метаболической адаптацией гомеостаза на иммобилизацию, что позволяло дифференцировать стадии её снижения, считать метаболические нарушения одним из механизмов развития ИОП. На основе этих данных сформулирована метаболическая теория регуляции костного ремоделирования при иммобилизации как самостоятельная концепция развития ИОП. Иммобилизация вызывает изменения биоэнергетических процессов в тканях опорно-двигательного аппарата и влияет на состояние гемопоэза, что, приводит к реакциям иммунокомпетентных клеток, экспрессирующих остеотроп-ные цитокины, таким образом, меняется баланс системных и локальных регуляторов остеогенеза, влияющих на функциональную активность, пролиферацию и апоптоз остеогенных клеток (рис.5).

ИММОБИЛИЗАЦИЯ

Рис. 5 Метаболическая концепция регуляции уровня минеральной плотности костной ткани при иммобилизации (концепция развития иммобилизационного остеопороза) 27

Выводы

1. При иммобилизации, приводящей к снижению минеральной плотности костной ткани, формируется системная ответная реакция организма, характеризующаяся метаболическими изменениями тканей опорно-двигательного аппарата, системы крови и гомеостаза в целом.

2. Закономерностями костного ремоделирования в динамике иммобилизации в эксперименте являются ускорение и остеолизиса, и костеобразования с относительным снижением метаболической активности остеобластов при развитии дефицита макроэлементов костной ткани (кальция до 45%, неорганического фосфата до 80%, магния до 82%); активацией биоэнергетических реакций с превалированием аэробного окисления.

3. Адаптивная реакция скелетной мышечной ткани на иммобилизацию и формирование иммобилизационного остеопороза в эксперименте состоит в снижении активности всех биоэнергетических процессов (гликолиза, аэробного окисления. КФК-реакции) на фоне накопления глюкозы и снижения количества белка.

4. Математическая модель иммобилизационного остеопороза выявляет основные метаболические факторы регуляции уровня минеральной плотности костной ткани в условиях иммобилизации, к которым относим изменение баланса биоэнергетических реакций в тканях опорно-двигательного аппарата, активацию гемопоэза, дефицит магния и неорганического фосфата.

5. В динамике снижения минеральной плотности костной ткани у пациентов при иммобилизации формируется последовательная реакция: снижение активности метаболических маркеров остеобластов (стадия остеопении) постепенно перерастает в разнонаправленную динамику метаболических маркеров как остеобластов, так и остеокластов (стадия остеопороза).

6. Регуляция костного ремоделирования при репаративном остео-генезе на фоне сниженной минеральной плотности костной ткани зависит от вида оперативного вмешательства: после стабильного открытого остеосинтеза сохраняется разнонаправленная динамика костных маркеров с превалированием аэробного окисления, в то время как после закрытого дистракционного остеосинтеза повышена метаболическая активность остеокластов при сохранении физиологического баланса реакций анаэробного и аэробного обмена

7. Эффект остеогенона на метаболизм костной ткани при сниженной минеральной плотности костной ткани в условиях иммобилизации обусловлен ускорением костного ремоделирования за счет активации и костной резорбции,

и костеобразования, ростом потенциала биоэнергетических реакций (преимущественно аэробных), превалированием локальной регуляции остеогенеза через RANKL и остеопротегерин, что сопровождалось сокращением сроков лечения.

8. Применение кальция с витамином D3 у пациентов со сниженной минеральной плотностью костной ткани в условиях иммобилизации способствует активации иммунной и антиоксидантной систем, аэробизации окислительного метаболизма и ускорению обмена кальция, что приводит к сокращению сроков лечения.

9. Оптимизация костного ремоделирования при оксигенобаротерапии обусловлена активацией биоэнергетических и антиоксидантных процессов в костной ткани, изменением количественных и функциональных характеристик гемопоэтических, остеогенных и иммунокомпетентных клеток, что способствует росту сопряжения остеолизиса и костеобразования, восстановлению минеральной плотности костной ткани и сокращению сроков лечения.

10. Динамика снижения минеральной плотности костной ткани при иммобилизации (формирования иммобилизационного остеопороза) характеризуется разной метаболической адаптацией, что позволяет дифференцировать стадии этого процесса (нормальная минеральная плотность костной ткани -остеопения - остеопороз), считать метаболические реакции одним из механизмов регуляции уровняминеральнойплотностикостнойтканииобосноватьметаболическую теорию иммобилизационного остеопороза.

Список научных трудов, опубликованных по теме диссертации

Публикации в изданиях, включенных в реестр ВАК РФ

1. Гюльназарова C.B., Трифонова Е.Б., Мамаев В.И. Диагностика посттравматического остеопороза при несращениях костей конечностей // Остеопороз и остеопатии. 2001.№ 2.С. 13-16.

2. Трифонова Е.Б. и др. Влияние остеогенона на биохимические маркеры метаболизма костной ткани при хирургическом лечении псевдоартрозов, осложненных иммобилизационным остеопорозом // Вестн.травматологии и ортопедии им.Н.Н. Приорова. 2008. № .С.43-46.

3. Трифонова Е.Б., Осипенко A.B. Биохимическая диагностика иммобилизационного остеопороза // Клин, лабораторная диагностика. 2009. № 1.С.З-5.

4. Трифонова Е.Б., Осипенко A.B. К вопросу о значении минеральных компонентов костной ткани в механизме формирования иммобилизационного

остеопороза в эксперименте // Вестн. Уральской мед. академической науки. 2009. № 1 (23). С.85-87.

5. Трифонова Е.Б. и др. Роль остеотропных цитокинов в формировании остеопоротических изменений при иммобилизации // Вест. Уральской мед. академической науки. 2009. № 2 (25). С.68-69.

6. Осипенко О.В., Вахлова И.В., Трифонова Е.Б. Клинические и лабораторные признаки дефицита кальция у подростков // Вопросы современной педиатрии.

2009. Т.8, № 4. С.56-62.

7. Трифонова Е.Б. и др. Система прогнозирования течения травматической болезни и развития осложнений при травме таза // Медицинская наука и образование Урала. 2010. № 3. С.155-157.

8. Трифонова Е.Б. Значение биоэнергетического метаболизма в регуляции костного ремоделирования в условиях иммобилизации // Вестн. челябинского гос.пед.университета. 2011. № 4. С.307-320.

9. Трифонова Е.Б. Роль метаболических процессов в формировании иммобилизационного остеопороза // Фундаментальные исследования. 2011. №6. С.177-181.

10. Трифонова Е.Б. Системный ответ организма на формирование иммобилизационного остеопороза //Вестн. Уральской мед. академической науки, 2011. № 2(34). С.64-66.

11. Трифонова Е.Б. Особенности костного ремоделирования после закрытого дистракционного остеосинтеза в условиях сниженной минеральной плотности костной ткани // Медицинская наука и образование Урала. 2011. № 2(66). С. 101 -104.

Коллективные монографии

12. Трифонова Е.Б., Макарова Э.Б., Антропова И.П. Лабораторные исследования // В кн.: Диагностика при травмах таза и вертлужной впадины / И.Л. Шлыков, Н.Л. Кузнецова. Екатеринбург, 2010. С.26-30.

13. Трифонова Е.Б., Макарова Э.Б., Антропова И.П. Лабораторный метод оценки тяжести состояния пациента с травмой таза // В кн.: Диагностика при травмах таза и вертлужной впадины / И.Л. Шлыков, Н.Л. Кузнецова. Екатеринбург,

2010. С.42-61

Публикации в журналах и сборниках трудов

14.Ггольназарова C.B., Мамаев В.И., Трифонова Е.Б. Посттравматический оетеопороз у больных с ложными суставами костей конечностей // Материалы Рос.нац.конгр. «Человек и его здоровье», 23-26 ноября 1999 года. СПб., 1999. С.8-9.

15. Ггольназарова C.B., Мамаев В.И., Трифонова Е.Б. Об особенностях лечения ложных суставов, осложненных остеопорозом // Проблеми остеологш: Науково-практичний журнал. 1999. Том 2, № 3. С.121-122

16. Трифонова Е.Б. и др. Динамическое прогнозирование течения костеобразо-вания при стабильном остеосинтезе последствий переломов костей конечностей II Травматология и ортопедия России. 2000. № 1. С.40-44.

П.Трифонова Е.Б., Ггольназарова C.B., Мамаев В.И. Прогнозирование течения костеобразования у больных с ложными суставами, осложненными остеопорозом // Клиническая лабораторная диагностика. 2001. № U.C. 11-12.

18.Ггольназарова C.B., Кудрявцева И.П., Трифонова Е.Б. О структурных и биохимических изменениях костной ткани при моделировании иммобилизационного остеопороза // Лечение повреждений и заболеваний костей таза. Новые технологии в лечении повреждений и заболеваний опорно-двигательной системы: материалы гоб. межд. науч.-практ. конф. травматологов-ортопедов, 12-13 сентября 2001 года. Екатеринбург-Ревда. С.103-104.

19.Мамаев В.И., Ггольназарова C.B., Трифонова Е.Б. Некоторые показатели метаболизма костной ткани при лечении больных с несращениями костей конечностей и постгравматичееким остеопорозом // Гений ортопедии. 2002. № 1. С.163-164.

20.Трифонова Е.Б., Ггольназарова C.B., Кучиев А.Ю. Влияние гипербарической оксигенации на метаболизм кости при экспериментальном остеопорозе // Гипербарическая физиология и медицина. 2002. № 1. С.50.

И.Трифонова Е.Б., Ггольназарова C.B., Мамаев В.И. Костные маркеры в оценке течения костеобразования у больных с ложными суставами и сопутствующим остеопорозом //Гений ортопедии. 2002.№ 1.С.166-167.

22.Трифонова Е.Б., Ггольназарова C.B. Способ диагностики тяжести остеопороза // Клиническая лабораторная диагностика. 2002. № 9. С.45.

23.Трифонова Е.Б. и др. Показатели неспецифического иммунитета и гормональный фон у пациентов с несращениями длинных трубчатых костей и нарушением минеральной плотности костной ткани // Физиология и патология иммунной системы: Материалы 1 Всерос. конф. «Физиология иммунной

системы» и 1 Всерос.конф.по иммунотерапии, Сочи-Дагомыс, 11-14 октября 2003. Int.J. limmunorehabilitation. Vol.5, № 2. October. C.283.

24.Трифонова Е.Б. и др. Динамика некоторых показателей неспецифического иммунитета и остеогенезрегулируюгцих гормонов у пациентов с ложными суставами, осложненными остеопорозом // Физиология и патология иммунной системы: Материалы 1 Всерос. конф. «Физиология иммунной системы» и 1 Всерос. Конф. по иммунотерапии, Сочи-Дагомыс, 11-14 октября 2003. Int. J. Immunorehabilitation. Vol.5, № 2. October. C.283.

25.Трифонова Е.Б., Мамаев В.И. Метаболические особенности больных с последствиями переломов трубчатых костей // Морфофункциональные аспекты регенерации и адаптационной дифференцировки структурных компонентов опорно-двигательного аппарата в условиях механических воздействий: материалы межд. науч.-практ. конф., 20-21 октября 2004 года. Курган, 2004. С.312-314.

26.Трифонова Е.Б., Гюльназарова C.B., Кучиев А.Ю. Влияние гипербарической оксигенации на ремоделирование кости при экспериментальном иммобилизационном остеопорозе // Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты: материалы Всерос. конф. 5-7 октября 3004 г. / под ред.член-кор. РАМН Шкурупия В.А. Новосибирск: Сибвузиздат, 2004. С.296-297.

27.Трифонова Е.Б. Участие остеотропных гормонов в регенерации кости при посттравматическом остеопорозе // Клин.лабораторная диагностика. 2005. № 10. С.36.

28.Реутов А.И., Осипенко A.B., Трифонова Е.Б. Достижения и перспективы развития лабораторной службы Уральского НИИ травматологии и ортопедии им.В.Д. Чаклина // Высокие технологии в травматологии и ортопедии: организация, диагностика, лечение, реабилитация, образование: материалы Первого съезда травм.-орт. Урал.фед.округа, Екатеринбург, 1-3 июня 2005 г.: Издат.дом «Автограф», 2005. С.53-55.

29.Трифонова Е.Б., Кучиев А.Ю. Воздействие различных режимов гипербарической оксигенации на ремоделирование кости при экспериментальном иммобилизационном остеопорозе // Вятский мед. вестн.: спец. выпуск: материалы IX итоговой науч.-практ. конф. студентов и молодых ученых с межд. участием «Молодежь и медицинская наука в XXI веке». 2005. № 1.С.22.

30.Трифонова Е.Б., Кучиев А.Ю. Эффект гипербарической оксигенации при иммобилизационном остеопорозе в эксперименте // Высокие технологии в

травматологии и ортопедии: организация, диагностика, лечение, реабилитация, образование: материалы Первого съезда травм.-орт. Урал.фед.округа, Екатеринбург, 1-3 июня 2005 г: «Автограф», 2005. С.282-283.

31.Трифонова Е.Б., Осипенко A.B., Гюльназарова C.B. Содержание остео-тропных гормонов в сыворотке крови при посттравматическом остеопорозе // Высокие технологии в травматологии и ортопедии: организация, диагностика, лечение, реабилитация, образование: материалы Первого съезда травм.-орт. Урал. фед. округа, Екатеринбург, 1-3 июня 2005 г.: «Автограф», 2005. С.283-284.

32.Гюльназарова C.B., Трифонова Е.Б., Кучиев А.Ю. Ремоделирование кости при экспериментальном остеопорозе под воздействием различных режимов гипербарической оксигенации // Гипербарическая физиология и медицина.

2005. № 2. С.7.

33.Трифонова Е.Б. и др. Адгезивная и секреторная функции нейтрофилов и мононуклеаров крови при системном остеопорозе у мужчин // Цитология.

2006. № 9. С.778-779.

34.Реутов А.И., Осипенко A.B., Трифонова Е.Б. Современные технологии и направления лабораторной диагностики в Уральском НИИ травматологии и ортопедии им.В.Д. Чаклина // Науч.-иссл. работа Урал. НИИ травматологии и ортопедии им.В.Д.Чаклина, 2001-2005: сб. статей.-Екатеринбург: «Автограф», 2006. - С.88-99.

35.Трифонова Е.Б. и др. Метаболические особенности костной ткани при иммобилизационном остеопорозе в эксперименте // Медико-биологические аспекты мультифакгориальной патологии: материалы Росс. науч. конф. с межд. участием: в 2 т. Курск: КГМУ, 2006. Т.1. С.374-377.

36.Трифонова Е.Б. и др. Метаболические аспекты оксигенобаротерапии при иммобилизационном остеопорозе в эксперименте // Вопросы гипербарической медицины. 2007. № 1-2. С.55.

37.Трифонова Е.Б., Осипенко A.B. Использование интегральных лабораторных тестов в диагностике и лечении повреждений и заболеваний опорно-двигательного аппарата // Материалы межд. науч-практ. конф. «Актуальные вопросы травматологии и ортопедии на современном этапе»., 1-2 ноября 2007 года, г. Алматы: Травматология жэне ортопедия. 2007. Том 1, № 2 (12). С.84.

38.Трифонова Е.Б. Маркеры метаболизма костной ткани у больных с псевдоартрозами и иммобилизационной остеопенией // Материалы межд. Пироговская науч.-практ. конф. «Остеосинтез и эндопротезирование», 15-16 мая 2008 года: М.:Межд.информационно-выставочный центр

«ИнфоПространство», 2008. - С. 175.

39.Trifonova Е.В., Gulnazarova S.V., Osipenko A.V. The influence of reparative osteogenesis in patients with bone non-unions and immobilization osteoporosis, treated by the method of transosseous osteosynthesis // 5th Meeting of the A.S.A.M.I. International: Program and Abstract Book, 28-30 May 2008. S. Pt. P.291-292.

40.Трифонова Е.Б. и др. Экспериментальное обоснование использования оксигенобаротерапии при иммобилизационном остеопорозе // Материалы II съезда травм.-орт. Урал. фед. округа. Курган, 2008. С.272-273.

41.Трифонова Е.Б., Гюльназарова C.B., Осипенко A.B. К вопросу о роли минеральных компонентов костной ткани при формировании иммобилизационного остеопороза в эксперименте // Материалы И съезда травм.-орт. Урал. фед. округа. Курган, 2008. С.307-308.

42.Кобылкин К.С., Трифонова Е.Б. Моделирование иммобилизационного остеопороза в эксперименте // Проблемы теоретической и прикладной математики: труды 40 Всерос. Молодежной школы-конф., г.Екатеринбург, 26.01-30.01.2009. С.306-312.

43.Макарова Э.Б., Трифонова Е.Б., Гюльназарова C.B. Динамика остеотропных цитокинов у пациентов с несращениями костей голени и иммобилизационным остеопорозом // Дни иммунологии в Санкт-Петербурге, 8-11 июня 2009 года: материалы XIII Всерос. науч. Форума с межд. уч. им. акад. В.И. Иоффе. Мед. иммунология. Том 11, № 4-5. 2009. С.460-461.

44.Трифонова Е.Б. и др. Динамика некоторых цитокинов у больных с ложными суставами костей голени и иммобилизационным остеопорозом под влиянием гипербарической оксигенации (ГБО) // Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии: сборник трудов X межд. конгресса, посвящ. 100-летию со дня рожд. акад. АМН А.Д. Адо, 20-23 мая 2009 года. Казань, 2009. С.468.

45.Трифонова Е.Б. и др. Клиническая значимость лабораторных тестов при иммобилизационном остеопорозе // Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохранения России до 2020 года: труды науч.-практ. конф. Москва, 28-30 сентября 2009 г. М.: Лабора, 2009. С.379-380.

46.Трифонова Е.Б. и др. Динамика некоторых остеотропных цитокинов при формировании иммобилизационного остеопороз // Остеопороз и остеоартроз -проблема XXI века: морфофункциональные аспекты диагностики, лечения и профилактики: материалы научно-практ. конф. с межд. участием, 7-8 октября 2009 года. Курган, 2009. С.136-138.

47.Трифонова Е.Б. и др. Особенности метаболизма костной ткани у детей и

взрослых: механизмы коррегирующего действия кальций-Д3 Никомеда // Остеопороз и остеоартроз - проблема XXI века: морфофункциональные аспекты диагностики, лечения и профилактики: материалы научно-практ. конф. с межд. участием, 7-8 октября 2009 года. Курган, 2009. С. 175-176.

48.Трифонова Е.Б. и др. Некоторые особенности минерального обмена при иммобилизационном остеопорозе в эксперименте // Остеопороз и остеоартроз - проблема XXI века: морфофункциональные аспекты диагностики, лечения и профилактики: материалы научно-практ. конф. с межд. участием, 7-8 октября 2009 года. Курган, 2009. С.248-250.

49.Трифонова Е.Б., Гюльназарова C.B., Кузнецова O.A. Метаболические реакции как критерий течения репаративных процессов у больных с иммобилизационным остеопорозом // Материалы Росс, конгресса AS AMI, 1617 декабря 2009. Курган, 2009. С.135-136.

50.Трифонова Е.Б. Лабораторный мониторинг пациентов с пониженной минеральной плотностью костной ткани // Клин.лабораторная диагностика. 2010. № 10. С.12-13.

51.Трифонова Е.Б. К вопросу о патогенезе иммобилизационного остеопороза // Вестн. травматологии и ортопедии им.В.Д. Чаклина. 2010. № 2..С.12-17.

52.Трифонова Е.Б. и др. Новый метод коррекции посттравматического остеопороза - гипербарическая оксигенация // Вестн. травматологии и ортопедии им.В.Д. Чаклина. 2010. № 2. С.24-26.

53.Трифонова Е.Б. и др. Метаболические особенности пациентов с иммобилизационным остеопорозом при терапии Кальций D3 Никомед // Вестн. травматологии и ортопедии им.В.Д. Чаклина.2010.№ 2.С.29-31.

54.Трифонова Е.Б. и др. Влияние гипербарической оксигенации на ремоделирование костной ткани при иммобилизационном остеопорозе (экспериментальное исследование) // Вопросы гипербарической медицины. 2010. №3. С.8-17.

55.Трифонова Е.Б. Метаболическая концепция иммобилизационного остеопороза // Вестн. травматологии и ортопедии им.В.Д. Чаклина. 2010. № 3. С.75-80

56. Трифонова Е.Б., Гюльназарова C.B., Кузнецова O.A. Обоснование антиостеопоротической терапии у пациентов с несращениями костей, пролеченных методом чрескостного остеосинтеза // Материалы межд. юбил. научно-практ. конф. «Современные повреждения и их лечение», поев. 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова, 11-12 ноября 2010 года. М., 2010. С. 405

57.Трпфонова Е.Б. Роль оксигенобаротерапии в оптимизации костного ремоделирования у пациентов с несращениями костей, осложненными иммобилизационным остеопорозом // Вопросы гипербарической медицины. - 2010. -№ 4. - С.18-23.

58.Trifonova Е.В., Kobylkin K.S. Modeling of the immobilized osteoporosis // Osteoporosis international. 2010. Vol.21 (1). S.305.

59.Трифонова Е.Б., Кобылкин K.C. Регуляция костного ремоделирования в условиях иммобилизации // Материалы II всерос. конф. с межд. уч. «Медико-биологические аспекты мультифакторной патологии» 17-19 мая 2011, Курск, С.364-366.

60.Трифонова Е.Б. и др. Закономерности костного ремоделирования в условиях иммобилизации // Материалы научно-практ. конф. с межд. уч. «Илизаровские чтения», поев. 90-летию со дня рожд. акад. Г.А. Илизарова, 60-летию метода Илизарова, 40-летию РНЦ «ВТО», 8-10 июня 2011 года. Курган, 2011. С.508-509.

Методические рекомендации

61.Прогнозирование течения репаративного процесса костной ткани на этапах лечения последствий переломов трубчатых костей: метод. рекомендации.№ 99/46/МЗРФ, УНИИТО; сост.: С.В. Гюльназарова, В.И. Мамаев, В.В. Базарный, Е.Б. Трифонова. Екатеринбург, 1999.16с.

62.Лабораторные исследования при остеопорозе: пособие для врачей / МЗ РФ ГФУН УНИИТО им.В.Д. Чаклина; сост.: С.В. Гюльназарова, Е.Б. Трифонова, В.И. Мамаев, А.В. Осипенко. Екатеринбург, 2003. 18 с.

63 .Лечение чрескостным методом ложных суставов длинных костей осложненных остеопорозом: мед. технология / сост.: С.В. Гюльназарова, О.А. Кузнецова, Е.Б. Трифонова, И.А. Зельский; Росздрав; ФГУ «УНИИТО им.В.Д. Чаклина». Екатеринбург, 2007. 16 с.

64.Способ коррекции иммобилизационного остеопороза у больных с последствиями переломов костей: мед. технология / сост.: С.В. Гюльназарова, А.Ю. Кучиев, Е.Б. Трифонова, И.П. Кудрявцева, В.Е. Журавлева; ФГУ «УНИИТО им. В.Д. Чаклина Росмедтехнологий». Екатеринбург, 2010. 19 с.

65.Лабораторный мониторинг при лечении пациентов с несращениями костей на фоне остеопороза: мед .технология / сост.: Е.Б. Трифонова, С.В. Гюльназарова, О.А. Кузнецова, А.Ю. Кучиев; ФГУ «УНИИТО им. В.Д. Чаклина Росмедтехнологий». - Екатеринбург, 2010. - 16 с.

Патенты РФ

1. Пат.2177619 РФ, МКИ 7 G01N33/70, 33/84, 33/68. Способ прогнозирования течения костеобразования при лечении ложных суставов / Е.Б. Трифонова, C.B. Гюльназарова, В.И. Мамаев; заяв. и патентообл. ФГУ УНИИТО. №2000120497; заявл.31.07.2000; опубл.27.12.2001, Бюл.№36. Зс.

2. Пат.2194994 РФ, МКИ 7G 01 N 33/68. Способ диагностики тяжести остео-пороза / Е.Б. Трифонова, C.B. Гюльназарова; заяв. и патентообл. ФГУ УНИИТО. № 2001120188/14; заявл.18.07.2001; опубл.20.12.2002, Бюл. № 35. 3 с.

3. Пат.2311644 РФ МПКО 01N 3/573. Способ оценки течения костеобразования при хирургическом лечении несращений костей / Е.Б. Трифонова, В.И. Мамаев, C.B. Гюльназарова, A.B. Осипенко; заяв. и патентообл. ФГУ «УНИИТО им.

В.Д. Чаклина Фед. агентства по здрав, и соц. развитию». № 2006113103/15; заявл. 18.04.2006; опубл.27.11.2007, Бюл. № 33. 4 с.

4.Пат.2346680 РФ, МПК A61G10/02. Способ коррекции нарушенного ремоделирования костной ткани при иммобилизационном остеопорозе / C.B. Гюльназарова, А.Ю. Кучиев, Е.Б. Трифонова, В.Е. Журавлева; заяв. и патентообл. ФГУ «УНИИТО им.В.Д. Чаклина Фед. агентства по высокотех. мед. помощи». № 2007134628/14; заявл. 17.09.2007; опубл. 20.02.2009, Бюл. № 5. 5 с.

5.Пат.2358655 РФ, МПК А61В10/00, G01N33/68. Способ диагностики иммобилизационного остеопороза / Е.Б. Трифонова, C.B. Гюльназарова, A.B. Осипенко, И.А. Зельский; заяв. и патентообл. ФГУ «УНИИТО им.В. Д. Чаклина Фед. агентства по высокотех. мед. помощи». № 2007131607/14; заявл.20.08.2007;оп убл.20.06.2009, Бюл.№ 17.5 с.

6. Пат. 2416366 ПФ, MnKA61B10/00,G01N 33/50. Способ оценки состояния костной ткани при иммобилизационном остеопорозе / Е. Б. Трифонова, К. С. Кобылкин, А. 10. Кучиев; заяв. и патентообл. ФГУ «УНИИТО им. В. Д. Чаклина Фед. агентства по высокотех. мед. помощи». № 2009137915/14; заявл.13.10.2009; опубл.20.04.2011, Бюл.№11. 11 с.

Сокращения

АОС - антиоксидантная система

ГБО - оксигснобаротерапия

ЗДО - закрытый дистракционный остеосинтез

ИЛ - интерлейкин

ИОП - иммобилизационный остеопороз

КФК - креатинфосфокиназа

КФобщ - кислая фосфатаза

КФтарт - тартратрезистентная кислая фосфатаза

ЛДГ- лактатдегидрогеназа

МДГ - малатдегидрогеназа

МПК - минеральная плотность костной ткани

НСТ - нитросиний-тетразолиевый тест

ОС О - открытый стабильный остеосинтез

ПОЛ - перекисное окисление липидов

СОД - супероксиддисмутаза

ФАН - фагоцитарная активность нейтрофилов

ЩФобщ - щелочная фосфатаза

ЩФтерм - термолабильная щелочная фосфатаза

СЮР - пропептиды коллагена 1 типа

Сг -креатинин

^ - иммуноглобулин

ОРй - остеопротегерин

СгозэЬарз - поперечно-связанные телопептиды коллагена 1 типа

Подписано в печать 21.09.2011 г.

Отпечатано в типографии

ООО «Рекламная группа «Артес» 620048, г. Екатеринбург, ул. Ясная,33, Тел./факс: (343) 231-12-62

Заказ № 881, тираж 120 экз.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Трифонова, Елена Борисовна

Оглавление.

Перечень сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Метаболизм костной ткани, регуляция остеогенеза и проблема снижения минеральной плотности костной ткани.

1.1 Гомеостаз костной ткани и его регуляция.

1.1.1*. Роль остеобластов в регуляции остеогенеза.

1.1.2. Роль остеокластов в регуляции остеогенеза.

1.1.3. Роль остеоцитов в регуляции остеогенеза.23'

1.1.4 Механизмы минерализации костного матрикса.231.2. Механизмы ремоделирования костной ткани.

1.2.1 Клеточные механизмы ремоделирования костной ткани.

1.2.2 Ремоделирование костной ткани при сниженной минеральной плотности.

1.3 Метаболизм костной ткани в физиологических условиях и при сниженной минеральной'плотности.

1.3.1 Динамика маркеров костеобразования при снижении минеральной плотности костной ткани.

1.3.2 Маркеры костной резорбции при снижении минеральной плотности костной ткани.

1.3.3 Роль минеральных компонентов костной ткани в регуляции минеральной плотности.

1.3.4 Гуморальная регуляция метаболизма костной ткани при разном уровне минеральной плотности.

1.3.5 Участие иммунной системы в регуляции костного ремоделирования.

1.3.6 Лабораторная оценка минеральной плотности костной ткани.

1.4 Особенности метаболизма при иммобилизации.

1.5 Механизмы снижения минеральной плотности костной ткани.

1.5.1 Механизмы снижения минеральной плотности костной ткани при первичном системном остеопорозе.

1.5.2 Влияние иммобилизации на гомеостаз костной ткани.

1.6 Принципы коррекции сниженной минеральной плотности костной* ткани.

ГЛАВА 2. Материал и методы исследования.

2.1Дизайн экспериментальногоисследования.

2.2. Моделирование иммобилизационного стеопороза.

2.3. Методика проведения сеансов оксигенобаротерапии.

2.4. Лабораторные и инструментальные методы исследования.

2.4.1. Лабораторные методы.61;

2.4.2 Рентгенологические исследования.

2.4.3.Денситометрические исследования.

2.5. Дизайн клинического исследования.

2.6. Статистические методы исследования.

ГЛАВА 3. Особенности метаболизма костной, скелетной мышечной тканей и реакции системы крови при снижении минеральной' плотности костной ткани в условиях иммобилизации в эксперименте.

3.1 Динамика метаболических маркеров остеогенных клеток.

3.2 Особенности динамики содержания минеральных компонентов костной ткани.

3.3 Особенности биоэнергетического обмена костной ткани.

3.4 Особенности биоэнергетического обмена скелетной мышечной ткани.

3.50собенности креатинфосфокйназной реакции.

3.6 Динамика маркеров метаболизма костной ткани в сыворотке крови.

3.7 Динамика показателей минерального обмена в сыворотке крови.

3.8.Динамика маркеров энергетического обмена в сыворотке крови.

3.9 Особенности кроветворения при иммобилизации.

Резюме.

ГЛАВА 4. Влияние гипербарической оксигенации на костное ремоделиро-вание на фоне остеопоротических изменений в костной ткани в условиях иммобилизации в эксперименте.

ГЛАВА 5. Математическая модель иммобилизационного остеопороза.

ГЛАВА 6. Метаболические особенности пациентов при иммобилизации в динамике снижения,минеральной плотности костной ткани (нормальная минеральная плотность - остеопения - остеопороз).

6. Г. Метаболические особенности пациентов до оперативного вмешательства.

6.2. Метаболические особенности репаративного остеогенеза на фоне низкой минеральной плотности костной ткани вследствие иммобилизации у пациентов в динамике после операции открытого стабильного остеосинте-за.

6.3. Метаболические особенности репаративного остеогенеза на фоне низкой минеральной плотности костной ткани вследствие иммобилизации у пациентов в динамике-после операции закрытого дистракционного остеосин-теза.

Резюме.

ГЛАВА 7. Влияние терапии на костное ремоделирование при сниженной минеральной плотности костной ткани в условиях иммобилизации.

7.1 Влияние остеогенона на метаболизм при. хирургическом лечении пациентов со сниженной минеральной плотностью костной ткани при иммобилизации.

7.2 Влияние кальция с витамином D3 на метаболизм при хирургическом лечении пациентов со сниженной минеральной плотностью костной ткани при иммобилизации.

7.3 Влияние гипербарической оксигенации на метаболизм при хирургическом лечении пациентов со сниженной минеральной плотностью костной ткани при иммобилизации.

Резюме.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-клеточные механизмы регуляции костного ремоделирования при иммобилизации"

Актуальность исследования. Механизмы снижения минеральной плотности костной ткани (МПК) связаны с балансом процессов ее ремодели-рования, которые во многом зависят от функционального состояния обменных процессов остеогенных клеток (N.B. Kavukcuoglu et al., 2009; L. Lieben, 2009). Разнообразие механизмов, регулирующих костное ремоделирование, предполагает существование многочисленных путей, вызывающих конкретные изменения структуры костной ткани.

Длительная иммобилизация изменяет костное ремоделирование, что приводит к снижению МПК и развитию остеопении и иммобилизационного остеопороза (ИОП) (B.C. Оганов, 2003, 2009; C.B. Гюльназарова, 2010). Показана корреляция степени снижения« МПК и периода иммобилизации (C.B. Гюльназарова, 2006, 2010; O.A. Кузнецова, 2010).

Целесообразность исследования механизмов снижения МПК при! иммобилизации обоснована длительными сроками сращения; трудностью выбора оперативного вмешательства, частыми неудовлетворительными исходами, отсутствием эффективных методов мониторинга динамики МПК (О.И. Рыбачук, A.Bi Калашников, 2000; Н. А. Корж и др., 2001, 2002; С.С. Родионова и др., 2002; Г.П. Котельников и др., 2003; С.П. Миронов, С.С. Родионова, 2003; C.B. Гюльназарова, 2006, 2010; С.Н.Леонова и др.,2006; B.C. Зубиков и др., 2006; H.H. Кораблева, 2009; Е.А. Назаров и др., 2009; P. Mingxing et al., 2000; G. P. Lyritis, P. J. Boscanios, 2001; K. Ertem, E. Kekilli, 2007; C.C. Wu, 2007; J.K. Oh et al., 2008; S.R. Rozbruch et al., 2008).

Снижение МПК выявляют в разных возрастных группах, в том числе у молодых, что в современном социуме связано с низкой'физической нагрузкой (JI.A. Щеплягина, 2005; В.Н. Меркулов и др., 2008), кроме того, на фоне роста общего травматизма отмечают большую долю высокоэнергетических травм у молодых людей, лечение которых в условиях иммобилизации сопровождается существенным снижением МПК. Встречаемость переломов на

80% зависит от величины сниженной МПК, которую считают основным предиктором риска переломов (Д.С. Астапенков, A.A. Свешников, 2009). При гипокинезии костная масса и МПК в среднем снижается на 14-26%, а частота остеопоротических переломов длинных костей составляет 70-90%, позвоночника - 25%, так что МПК считают «главной детерминантой механических свойств костной ткани, на 75-80% определяющей её прочность» (Д.С. Астапенков, A.A. Свешников, 2009). Также к уменьшению'прочности кости приводит нарушение её трабекулярной микроструктуры, избыточное количество • локусов ремоделирования, понижение репаративной способности костной ткани и, как следствие, накопление множественных микроструктурных дефектов (JI.A. Марченкова, 2000).

Прогноз роста остеопоротических переломов в мире неутешительный: до 6,3 млн. в 2050 году (Б.Л. Риггз, Л.Д. Мелтон, 2000). В странах Западной Европы из 4 млн. переломов за год остеопоротические составляют около-9001 тысяч, а на лечение остеопоротических переломов проксимального отдела бедра в Западной Европе к 2020 году ожидают рост затрат до 50 млрд. € в год (С.П. Миронов, 2006). Переломы такой этиологии существенно влияют на заболеваемость и смертность (В.А. Неверов и др., 2009). В 2009 году ежегодный прирост населения со сниженной МПК составил 30%, а остеопороз и ос-теопения различной этиологии являются самыми распространенными заболеваниями костной системы^ (В.'И. Шевцов, A.A. Свешников, 2009): Малоподвижный образ, жизни способствует росту социально-экономических последствий этой патологии, что позволяет считать раскрытие механизмов снижения МПК, ведущих к формированию остеопороза, актуальной медико-социальной проблемой (С.П. Миронов и др., 2009; 2010; J.A. Kanis et al., 2008).

Кальций костной ткани считают основным предиктором снижения МПК при первичном системном остеопорозе (A.C. Аврунин и др., 2000; О.И. Орлов, 2007; Т. Sato et al., 2006), а одной из причин нарушения минерализации костного матрикса — изменения функций и гистогенеза остеобластов (Е.И. Марова, 1998; B.C. Оганов, 1998; В.К. Казимирко, В.И. Мальцев, 2005; М. Lafage-Proust, 2000; J.S. Chen et al., 2006). В последнее десятилетие все большее значение в регуляции остеогенеза приобретает комплекс остеотроп-ных цитокинов - RANKL/RANK/OPG (R.G. Russell et al., 2006; C.N. Bernstein, 2006; A. Leinbrandt, J.M. Penniger, 2008; J.C. Lee et al., 2011).

При иммобилизации инициирующим фактором снижения МПК выступает гипокинезия, оказывающая влияние на все системы организма (B.C. Оганов, 2009). Ряд авторов, в первую очередь, рассматривает иммобилизацию как стресс, вызывающий каскад адаптивных реакций со стороны различных систем и органов (Ф.З. Меерсон, М.Г. Пшенникова, 1988; В.И. Швец и др., 1988; H.H. Васильева и др., 2002; Ю.Г. Камскова, 2004; Я.В. Латюшин, и др. 2006; Д.З. Шибкова и др., 2006; И.И. Григорьев, 2007; В.И. Павлова и др., 2007; О.Л. Еребнева и др., 2009; Д.Г. Иванов, B.F. Подковкин, 2009; Р: Patterson-Buckendahl et al., 2001; S. Kido et al., 2009). Определённое влияние на остеогенез при гипокинезии имеет реакция скелетных мышц (Т.И. Долга-нова и др., 2008; P.J. Kosteniuk et al., 1997; J.M. Cousins et al., 2010). Потеря костной массы при иммобилизации сопровождается снижением костного кровообращения (В.В. Фролькис и др., 2002; J. Hayashi, 2001). Микроокружение остеогенных клеток несет потенциал, регулирующий их дифференци-ровку через различные молекулярные механизмы, в том числе Wnt (A.G. Robling et al., 2006; E.J. Arnsdorf et al., 2009).

В течение двух последних десятилетий в изучении проблемы снижения МПК и развития остеопороза достигнуты определенные успехи: предложена классификация, накоплены данные о факторах риска, изучены социально-экономические аспекты, показана эффективность» различных лекарственных препаратов и т.д. (Ю. Франге, Г. Рунге, 1995; Е.И. Марова, 1998; Л .Я. Ро-жинская, 1998; В.П. Сметник, 1998; Э.И. Солод и др., 1999; С.С. Родионова и др., 2001, 2002; Л.И. Беневоленская, 2003; Е.Б. Мищенко, С.М. Котова, 2006;

Г.ГТ. Котельников и др., 2010; O.A. Кузнецова, 2010; С.П. Миронов и др., 2010; P. Werner, 2005; Е. Baum, P.M. Klaus, 2008). Однако особый интерес по-прежнему вызывает раскрытие молекулярных механизмов костного* ремоде-лирования при снижении МПК (A.M. Игнатьев, Т.А. Ермоленко, 2001; О. Gurevitch, S: Slavin, 2006; A.G. Robling et al., 2006; T.M. Post et al., 2010). Несмотря на определенные достижения в понимании молекулярных основ ос-теогенеза и регуляции костного ремоделирования отсутствуют сведения': о комплексном исследовании системного ответа на иммобилизацию; не определены метаболические механизмы в реализации стадийности' снижения МПК (нормальная МПК-остеопения-остеопороз), не исследованы и не обоснованы биохимические аспекты её фармакологической- и нефармакологической коррекции. Всвязи, с этим, раскрытие иерархии клеточно-субклеточно-молекулярного взаимодействия при снижении МПК в условиях иммобилизации и: поиск рациональных путей регресса ИОП — актуальное и перспективное направление исследований.

Цель исследования - оценить системный ответ организма в динамике иммобилизации, раскрыть закономерности костного ремоделирования гш разработать критерии его мониторинга в условиях иммобилизации пршразном уровне минеральной плотности костной тканин

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить в эксперименте адаптивные реакции; тканей опорно-двигательного аппарата и системы» крови; в динамике иммобилизации, ведущей к снижению минеральной плотности костной ткани

2. Построить математическую модель иммобилизационного остеопороза.

3; Выявить особенности минерального, энергетического, пептидного обменов и системных регуляторов метаболизма кальция у пациентов с разным уровнем минеральной плотности костной ткани (нормальная минеральная плотность - остеопения — остеопороз) при иммобилизации.

5. Обосновать эффективность применения различной терапии (остеоге-нона, кальция» с витамином Б3, оксигенобаротерапии) у пациентов со> сниженной минеральной плотностью костной ткани при иммобилизации

6. Разработать критерии и алгоритм мониторинга? состояния костного ремоделирования при?разном уровне: минеральной, плотности костной ткани в условиях иммобилизации.

Научная новизна

Впервые сформупировтшметаболическая концепция регуляции минеральной плотности костной ткани в условиях иммобилизации, раскрывающая молекулярно-клеточные механизмы костного ремоделирования: при разной степени снижения МПК (остеопения-остеопороз).

Впервые разработана математическая модель рєщлящтминеральной плотности костной ткани в условиях иммобилизации, раскрывшая патогенетические особенности иммобилизационного остеопороза. Показана взаимосвязь сопряжения процессов; костного ремоделирования при сниженной МІЖ вследствие иммобилизации не только с дефицитом кальция в костной ткани, но и с низким уровнем неорганического фосфата и магния, а .также с состоянием, гемопоэза и биоэнергетических процессов в тканях опорно-двигательного аппарата (Патент № 2416366).

Впервые обнаружено, что при иммобилизации развивается различный дефицит макроэлементов костной ткани:: дефицит кальцияі- 45 %, неорганического фосфата - 80%, магния — 82%) по сравнению с физиологическими значениями. Основными предикторами разобщения процессов остеолизиса и: костеобразования является низкий уровень магния и неорганического фосфата костной ткани. . '

Впервые на основе комплексного исследования адаптивных реакций тканей опорно-двигательного аппарата и системы крови на иммобилизацию в эксперименте выявлены закономерности костного ремоделирования и определены основные метаболические факторы развития иммобилизационного остеопороза. Показана активация метаболических маркеров остеогенных клеток, свидетельствующая об ускорении костного ремоделирования; рост активности энергетических процессов с превалированием, аэробного окисления; выраженный дефицит неорганического фосфата и магния в костной ткани; увеличение цитоза^ костного мозга.

Раскрыты особенности репаративного остеогенеза у пациентов со сниженной1 МПК вследствие иммобилизации в динамике в течение года после различных операций чрескостного остеосинтеза.

Обоснована эффективность применения препаратов кальция с витамином Бз, остеогенона и оксигенобаротерапии и показаны преимущества оксигенобаротерапии в оптимизации костного ремоделирования»у пациентов со сниженной МПК в условиях иммобилизации.

Новизна мониторинга пациентов со сниженной МПК при^ иммобилизации защищена Патентами (№№ 2177619, 2194994, 2311644, 2346680, 2358655). Получено Положительное решение о выдаче Патента на изобретение «Способ оценки течения костеобразования при лечении пациентов с несращениями костей».

Теоретическая значимость

В работе показано, что при иммобилизации существенный вклад в регуляцию костного ремоделирования, изменение которого приводит к снижению'минеральной плотности костной ткани, вносят метаболические и клеточные факторы, а именно: дисбаланс биоэнергетических процессов в тканях опорно-двигательного аппарата, активация гемопоэза, дисцитокинемия ос-теотропных и провоспалительных цитокинов, выраженный дефицит магния и неорганического фосфата на фоне умеренного дефицита кальция в костной ткани. На основе полученных данных сформулирована метаболическая концепция регуляции минеральной плотности костной ткани при иммобилизации.

Практическая значимость

Определены критерии снижения МПК при иммобилизации, особенности репаративного остеогенеза после различных оперативных вмешательств. Обоснована целесообразность мониторинга пациентов- со сниженной МПК вследствие иммобилизации, что позволяет своевременно и корректно назначать терапию для; оптимизации сроков сращения и предотвращения прогресса остеопороза:

Разработаны .способ диагностики иммобилизационного остеопороза (Патент РФ № 2358655) и способ прогнозирования сроков ¡сращения (Патент РФ № 2177619), способ; диагностики степени формирования остеопоротиче-ских изменений (Патент РФ №2194994), способы диагностики качества репаративного остеогенеза у пациентов с несращениями костей и сниженной минеральной плотностью костной ткани (Патент РФ № 2311644), способ коррекции нарушенного ремоделирования костной ткани при иммобилизацион-ном остеопорозе (Патент РФ № 2346680).

Показана целесообразность применения у пациентов с разным уровнем МПК терапии, влияющей на ремоделирование костной ткани (оксигенобаро-тсрании, остеогенона, кальция с витамином Эз).

Реализация результатов работы

Материалы диссертации используются в лекционном курсе усовершенствования врачей кафедр клинической лабораторной и микробиологической диагностики, травматологии и ортопедии ФПКиПП УрГМА', кафедры травматологии, ортопедии и военно-полевой хирургии Тюменской государственной медицинской академии. Разработанный алгоритм лабораторного мониторинга успешно применяется в травматолого-ортопедическом отделении ФГУ «УНИИТО им. В.Д. Чаклина», ФГУ «ЦИТО им H.H. Приорова», ФГУ «РНЦ ВТО им. акад. Г.А. Илизарова», в травматологических отделениях МУ «Ревдинская городская.больница», окружного военного клинического госпиталя №354, ОКБ№1 (г. Екатеринбург), ГКБ № 1 (г. Первоуральск), ОКБ № 2 (г. Тюмень), ГКБ № 21 (г. Уфа), в ГБ № 3 (г. Каменск-Уральский), в Свердловском областном клиническомпсихоневрологическом*госпитале ветеранов, войн (г. Екатеринбург).

Положения, выносимые на защиту

1. Степень снижения минеральной плотности костной* ткани (остеопе-ния-остеопороз) в условиях иммобилизации детерминирована особенностями костного ремоделирования, что дает основание для-формулирования метаболической концепции развития иммобилизационного остеопороза, основу которой составляет дисбаланс энергетических реакций тканей опорно-двигательного аппарата и изменения гемопоэза, проиллюстрированные на математической модели иммобилизационного остеопороза.

2. Нарушение костного ремоделирования- в условиях иммобилизации связано с различным- дефицитом макроэлементов костной ткани: уровень кальция по'сравнению* с физиологическими значениями снижен на 45%, неорганического фосфата - на 80%, магния - на 82%.

3. Репаративный остеогенез после открытого стабильного остеосинтеза и закрытого дистракционного остеосинтеза при сниженной^ минеральной плотности костной ткани, а также при применении' остеогенона; кальция с витамином D3, оксигенобаротерапии сопровождается разной метаболической адаптацией. Оптимальный способ коррекции сниженной минеральной плотности костной ткани вследствие иммобилизации — оксигенобаротерапия.

Апробация работы и публикации

Основные положения и результаты диссертационного исследования доложены и обсуждены на Уральской региональной конференции «Диагностика,, лечение и профилактика остеопороза» (Екатеринбург, 2002), Национальных Днях лабораторной медицины (Москва, 2002);. семинаре «Новые технологии в травматологии и ортопедии» в. рамках специализированной!, Уральской выставки (Екатеринбург, 2002), I Всероссийской конференция «Физиология иммунной системы» (Сочи, 2003), III Уральской региональной конференции «Остеопороз с позиций доказательной; медицины» (Екатеринбург, 2004), конференции изобретателей и рационализаторов, посвященной 85-летию Засл. деятеля науки РСФСР, д. м.н;, профессора Зі Ш! Лубегинош (Екатеринбург, 2004), IX Российском национальном Конгрессе «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2004), первомі съезде травматологов-ортопедов Уральского Федерального округа (Екатеринбург, 2005); научно-практической конференции «Новые медицинские технологии» (Екатеринбург,. 2006), на международном симпозиуме «Биология клетки» (Санкт-Петербург, 2006), на научно-практическом семинаре «Актуальные вопросы . диагностики и лечения? иммобилизационного (посттравматического) остеопороза (Екатеринбург, 2008), 5th Meeting of the ASAMI International (Санкт-Петербург, 2008), III Всероссийском Конгрессе по остеопорозу (Екатеринбург, 2008), II Съезде травматологов-ортопедов УрФО (Курган, 2008); молодежной региональной конференции «Проблемы теоретической и прикладной математики» (Кунгурка, 2009), IV Конференции с международным участием «Проблема остеопороза в травматологии и ортопедии» (Москва, 2009), X Международном Конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии, посвященном 100-летию со дня рождения акаакадемика АМН А.Адо» (Казань, 2009), «Днях иммунологии в Санкт-Петербурге (2009), Научно-практическом семинаре «Новое в диагностике и лечении остеопороза» (Нижний Тагил, 2009), IV Съезде физиологов Урала (с международным участием) (Екатеринбург, 2009), научно-практической конференции «Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохранения России до 2020 года» (Москва, 2009), международной научно-практической конференции «Остеопороз и остеоартроз — проблема XXI века: морфофункциональные аспекты диагностики, лечения и профилактики» (Курган, 2009), Российском Конгрессе ASAMI совместно с Днями школы профессора В.И.Шевцова (Курган, 2009), научно-практическом семинаре «Актуальные вопросы диагностики и лечения посттравматического остеопороза» (Ревда, 2010), научно-практической конференции «Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохранения« России до 2020 года» (Москва, 2010), конференции травматологов-ортопедов республики Башкортостан (2010); IOF Wordl Congress on Osteoporosis and 10th European Congress on Clinical and Economic Aspects of Osteoporosis and Osteoarthritis (Италия, 2010), научно-практической конференции с международным участием «Или-заровские чтения» (Курган, 2011).

По теме диссертации опубликовано 65 печатных работ, из них 11, в изданиях, рекомендованных ВАК, пособие для врачей, 3 медицинские технологии, методические рекомендации; получено 6 патентов РФ, положительное Решение о выдаче Патента (заявка 2010129871) «Способ оценки течения костеобразования при лечении больных с несращениями костей».

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 349 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 5

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Трифонова, Елена Борисовна

Выводы

2. Закономерностями костного ремоделирования в динамике иммобилизаI ции в эксперименте являются ускорение и остеолизиса, и» костеобразова-ния с относительным' снижением метаболической*активности остеобластов при развитии дефицита макроэлементов? костной- ткани* (кальция до 45%, неорганического фосфата до 80%, магния-до 82); активацией биоэнергетических реакций с превалированием аэробного окисления.

3. Адаптивная реакция скелетной мышечной ткани на иммобилизацию и формирование иммобилизационного остеопороза в эксперименте состоит в-снижении активности всех биоэнергетических процессов* (гликолиза, аэробного окисления. КФК-реакции) на фоне накопления глюкозы и снижения количества белка.

4. Математическая^ модель иммобилизационного остеопороза выявляет основные метаболические факторы, регуляции уровня минеральной плотности костной ткани в условиях иммобилизации, к которым относим изменение баланса биоэнергетических реакций в тканях опорно-двигательного аппарата, активацию гемопоэза, дефицит магния и неорганического фосфата.

5. В динамике снижения минеральной плотности костной ткани-у пациентов при иммобилизации формируется последовательная реакция: снижение активности метаболических маркеров остеобластов (стадия остеопении) постепенно перерастает в разнонаправленную динамику метаболических маркеров как остеобластов, так и остеокластов (стадия остеопороза).

6. Регуляция костного ремоделирования при репаративном остеогенезе на фоне сниженной минеральной плотности костной ткани зависит от вида оперативного вмешательства: после стабильного открытого остеосинтеза сохраняется разнонаправленная динамика костных маркеров с превалированием аэробного окисления, в то время как после закрытого дистракци-онного остеосинтеза повышена метаболическая активность остеокластов при сохранении физиологического-баланса реакций анаэробного и аэробного обмена

7. Эффект остеогенона на метаболизм'костной-ткани при сниженной минеральной плотности костной ткани в условиях- иммобилизации обусловлен ускорением костного ремоделирования за счет активации.и костной резорбции, и костеобразования, ростом потенциала* биоэнергетических реакций, (преимущественно аэробных), превалированием локальной регуляции остеогенеза через КАЫКЬ и остеопротегерин, что.сопровождалось сокращением сроков лечения.

8. Применение кальция с витаминому пациентов со сниженной минеральной плотностью костной ткани- в условиях иммобилизации способствует активации иммунной и антиоксидантной систем, аэробизации окислительного метаболизма и ускорению обмена.кальция, что приводит к сокращению сроков лечения;

9. Оптимизация-костного ремоделирования при оксигенобаротерапии обусловлена активацией биоэнергетических и антиоксидантных процессов- в костной ткани, изменением- количественных и функциональных характеристик гемопоэтических, остеогенных и-. иммунокомпетентных клеток, что способствует росту сопряжения остеолизиса и костеобразования; восстановлению минеральной^ плотности костной' ткани и сокращению сроков лечения.

10. Динамика снижения минеральной плотности костной ткани при иммобилизации (формирования иммобилизационного остеопороза) характеризуется разной метаболической адаптацией, что позволяет дифференцировать стадии этого процесса (нормальная минеральная плотность костной ткани - остеопения — остеопороз), считать метаболические реакции одним из механизмов регуляции уровня минеральной плотности костной ткани и обосновать метаболическую теорию иммобилизационного остеопороза.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Перспективы исследований регуляции костного ремоделирования в зависимости от уровня минеральной плотности костной ткани связаны с дальнейшим изучением молекулярно-клеточных механизмов взаимодействия различных процессов в костной ткани, а также клинической необходимостью выбора оптимального метода коррекции сниженной МПК.

В условиях иммобилизации происходит динамическое снижение МПК до уровня остеопении, затем до уровня^ остеопороза. Это приводит к существенному увеличению сроков сращения, переломов (Т.П. Котельников и др., 2003; С.Н. Леонова и др., 2006; C.B. Гюльназарова, 1010;);-не всегда достигаются удовлетворительные исходы лечения и стабильность имплантов (B.C. Зубиков-и др.,2006; С.С. Wu, 2007; JiK. Oh et al., 2008; S:R. Rozbruch et al., 2008); затруднён выбор оптимального оперативного вмешательства (H.A. Корж и др., 1995; С.П. Миронов, С.С. Родионова, 2003); способа фармакологической^ коррекции, а также мало эффективна ранняя'диагностика снижения МПК (С.С. Родионова, А.Ф. Колондаев, 2003; В.Н. Меркулов и др., 2008; С.П. Миронов, 2006; H.H. Кораблева, 2009; G. Lyritis, Р: Boscanios, 2001). Для решения-этих проблем за последние десятилетия конкретизированы факторы риска снижения МПК, изучены многие социальные и экономические аспекты этой проблемы, показана эффективность некоторых лекарственных препаратов для успешной коррекции сниженной МПК и т.д. (Ю. Франке, F. Рунге, 1995; Е.И. Марова, 1998; Л .Я. Рожинская и др., 1998; Е.Г. Зоткин, 2002; Л.И. Беневоленская, 2003; Г.Я.' Шварц, 2004; С.С. Родионова, 2006; H.A. Корж, Н.В. Дедух, 2007; В1И. Коненоков и др., 2008; А.Ю. Власов, 2009; P.P. Зул-карнеев, 2009; O.A. Кузнецова, C.B. Гюльназарова, 2009; Э.И. Солод и др., 2009; Ш.1П. Шотурсунов, P.C. Мусаев, 2009; С. Roux et al., 2005; R. Werner, 2005; С R. Bürge, 2007;). Тем не менее, ряд вопросов остаётся открытым, в первую очередь, это касается именно конкретных механизмов снижения

МПК и, соответственно, регуляции костного ремоделирования и участия метаболических процессов.

В связи с этим, целью настоящей работы явилась оценка системного ответа организмам динамике иммобилизации, раскрытие закономерностей костного ремоделирования и разработка критериев его мониторинга в условиях иммобилизации при разном уровне минеральной плотно-сти.костной ткани.

В • результате выполненной экспериментальной части исследования показано, что» иммобилизация вызывала существенные изменения- метаболизма- тканей опорно-двигательного аппарата и системы крови. Локальные остеопоротические изменения приобретают системный характер, поскольку адаптивные изменения- затрагивают костную, скелетную* мышечную* ткани оперированной-и контрлатеральной конечностей. Метаболический ответ на иммобилизацию развивается уже к 30* суткам* эксперимента, что гораздо раньше, чем по- данным гистоморфометрии. В" дальнейшем метаболический ответ костной и скелетной- мышечной тканей зависит от степени формирования остеопоротических изменений, верифицированных гистоморфометриче-скими исследованиями в течение года после ампутации голени.

Полученные данные позволили выделить следующие метаболические особенности костной ткани в динамике иммобилизации: возрастание активностей костных изоферментов щелочной и кислой фосфатаз, начиная с 30 суток иммобилизации, свидетельствующее об* ускорении КОСТНОГО' ремоделирования; существенный дефицит макроэлементов костной ткани: кальция - 45% (90-150' сутки иммобилизации, р < 0,05), неорганического фосфата - 80% (30-210 сутки иммобилизации, р < 0^05), магния - 82% (30210 сутки иммобилизации, р < 0,05), по сравнению с физиологической возрастной нормой (группа интактных животных). Ответная реакция систем энергообеспечения сопровождается постепенным превалированием аэробных реакций, обеспечивающих оптимизацию баланса костеобразования и костной резорбции как за счёт изменения скорости этих процессов, так и увеличения ции как за счёт изменения скорости этих процессов, так и увеличения их сопряжения.

Поскольку активность ЩФтерм, являющейся ранним маркерам диффе-ренцировки остеобластов в матричной фазе созревания клеток (X. Kim et al, 2006) изменялась незначительно, мы предположили, что популяция остеобластов, участвующих в ремоделировании костной ткани в условиях иммобилизации и снижении МПК, достаточна. Известно, что гипокинезия негативно влияет на остеобласты: их популяция- более однообразна по структуре и функции, содержит большое количество «неактивных» клеток, с признаками переходных форм к фибробластам (N.W. Rodionova et al., 2000). Вероятно, что в условиях иммобилизации дефект связан не с пролиферативной активностью предшественников,остеобластов, а с процессом их дальнейшего созревания, поскольку к 90-105-м суткам эксперимента гистоморфометриче-ские признаки снижения МПК окончательно сформированы. Так, увеличено количество остеонов с неравномерно расширенными гаверсовыми каналами, эндостальная и периостальная поверхности компактного слоя имели неровный волнистый рисунок, в диафизе контрлатеральной конечности спонгиза-ция кортикального слоя бедренной кости неравномерна, максимальные изменения отмечены в компактной пластинке костномозгового канала, диаметр которого достиг максимального значения, а кортикальный индекс снизился до минимума (С.В'. Гюльназарова и др., 2003; А.Ю. Кучиев, 2008).

Фосфатазный индекс костной ткани при иммобилизации также отражал высокую скорость костного ремоделирования. Вместе с тем, характеризовать остеопоротически изменённую кость при иммобилизации как «ленивую», в наших опытах не представлялось возможным. Согласно концепции «ленивой» кости в условиях дефицита механической нагрузки, связанной с изменением вектора гравитации, наблюдают замедление и костеобразования и костной резорбции (B.C. Оганов, 1998, 2003). Синхронный рост маркеров костеобразования и резорбции, выявленный нами в костной ткани в динамике иммобилизации до 90-х суток, расценивается как ускорение костного ремо-делирования, сопровождающееся потерей костной массы (В.В. Долгов, И.П. Ермакова, 2000). Динамика значений фосфатазного индекса костной ткани после формирования в ней остеопоротических изменений (после 90 суток, глава 3) подтверждала данное предположение.

Анализ содержания минеральных компонентов костной ткани в динамике иммобилизации показал различный по продолжительности и абсолютной величине дефицит кальция, неорганического фосфата и магния. Отмечаемое в литературе значительное снижение концентрации кальция в костной ткани при низкой МПК различного генеза (Ю. Франке, Г. Рунге, 1995, А. С. Аврунин и др., 1998, Л, Я. Рожинская, 2000; Л.С. Кузнецова и соавт., 2003; Н.Б. Варецкая-Чивилихина, 2006), при иммобилизации мы не обнаружили. Выявленная динамика уровня- кальция в костной ткани сопоставима с изменениями её фосфатазного индекса.

В-костной ткани опытных крыс обнаружен более выраженный дефицит магния и неорганического фосфата, по сравнению с кальцием. Низкая концентрация-неорганического фосфата отмечена на протяжении пяти месяцев после ампутации голени, в 4,7 раза меньше, чем у интактных крыс (р< 0,05). Считаем, что это негативно влияет не только на образование кристаллов гид-роксиапатита, но и на фосфорилирование ряда ферментов различных метаболических циклов. Известно, что остеобласты содержат большое количество^ полифосфатзависимых ферментов; поэтому эта популяция клеток при дефиците неорганического фосфата может быть метаболически «инертна» (Х.С. Шредер и др., 2000). Дефицит неорганического фосфата, по-видимому, служит причиной функциональной «незрелости» остеобластов на фоне их достаточного количества (предположение, основанное на высокой активности ЩФтерм), и как следствие - нарушение синтеза остеокальцина («поздний» маркер зрелых остеобластов), необходимого для минерализации костного матрикса, что нами обнаружено у пациентов со сниженной МПК вследствие иммобилизации. Поскольку необходимым условием образования кристаллов гидроксиапатита является оптимальная концентрация в костной ткани аморфного кальция и неорганического фосфата, то дефицит последнего может лимитировать её непосредственно, так как длительного дефицита кальция при иммобилизации мы не обнаружили.

Существенный дефицит магния при иммобилизации наблюдали на протяжении восьми месяцев: концентрация магния в костной ткани в 4,0 раза ниже, чем у интактных крыс (р < 0,05), что способствует росту активности лизосомальной АТФ-азы и соответственно активации лизосом, стимулирующей процесс костной резорбции. С другой стороны, данный факт можно рассмотреть как компенсаторный механизм в ответ на ускоренное костное ремо-делирование. Есть сведения об участии лизосом в процессе кальцификации, поскольку для гидролиза протеогликанов (пластификаторов коллагеновой структуры) необходимы лизосомальные протеиназы (А. Уайт и др., 1981). Росту лизосомальной активности способствует незначительный ацидоз костной ткани, за счет увеличения концентрации лактата и пирувата. Это вызывает задержку образования кристаллов гидроксиапатита из аморфной фракции кальций-фосфата вследствие возможного накопления кислых фосфоли-пидов.

Поскольку облигатным кофактором щелочной-фосфатазы и аденилат-циклазы является магний, то длительное снижение его концентрации может являться- одной из причин «неэффективного» костеобразования. С' другой стороны, аналогичный эффект возникает при дефиците магния в качестве регулятора накопления пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов, и соответственно пептидного синтеза в клетке. Не исключена вероятность снижения белкового синтеза при иммобилизации в связи с диссоциацией рибосом, для которых стабилизатором является магний (А. Ленинджер, 1976). Низкая концентрация магния коррелировала с активностью гликолиза, исходя из того, что данный макроэлемент связывает гексокиназы. Уменьшение концентрации магния и неорганического фосфата взаимосвязаны и обусловлены различной диссоциацией АТФ (регулируемой рН) и образованием комплексов магний-АТФ2" и магний-фосфат. В большинстве ферментативных реакций, в которых АТФ играет роль донора фосфата, участвует именно комплекс

2 ■ . • ■ MgATP " , поэтому дефицит магния*негативно влияет на анаболические реакции костной ткани в целом. Гипокинезия может сопровождаться истощением запасов магния в скелетных мышцах (Y.G. Zorbas, 2002). По нашему мнению, снижение содержания магния*является. одной из. важных причин нарушения? баланса костного ремоделирования, при этом: происходит ингибиро-вание системы аденилатциклаза-сАМР; которую считают основным регулятором процесса кальцификации (А.С. Аврунин и др., 2000; J.B: Chek, A.I. Laniko., 2002). . ^ . '

Рост индекса минераловгкостноШтканин развивается со1120-х суток после ампутации голени-.что сопровождается усилением отложения нового>костного вещества и компактизацией костных структур, что подтверждается данными гистологии. Такая динамика индекса минералов костной ткани связана с состоянием; и губчатой кости. Известно, что формообразовательные процессы* в ней-протекают значительно быстрее, чем в компактной (С.С. Родионова и др., 2001;: А.II. Накоскин, 2004). Максимальное значение данный индекс достигает на 210 суткам, однако составляет всего 70% от величины, индекса у интактных крыс (р < 0,05). После восьмимесячной иммобилизации динамика макроэлементов в костной' ткани у опытных и интактных крыс аналогична^.что связано с высокой способностью адаптации метаболических систем (J.Bi Ghek, AT. Laniko, 2002).

Итак, исследования костной, ткани бедра экспериментальных крыс обнаружили значительные нарушения минерализации внеклеточного матрикса: дефицит кальция составил 45 % в течение двух месяцев (90-150 сутки), неорганического фосфата —до 80 % (30-90 сутки и 150-180 сутки), магния —до 82 % в течение восьми месяцев эксперимента (рис. 1).

Магний

Фосфат і Кальций

Рис. 1 Дефицит макроэлементов костной ткани при снижении её минеральной плотности до уровня остеопороза в условиях иммобилизации, (%)

При существенном дефиците макроэлементов ремоделирование костной ткани может значительно изменяться, поскольку известно, что допустимый его предел, не влияющий на гомеостаз костной ткани составляет 20% (Н.В. Офицерова, 1988). Таким образом, сопряжение процессов костного ре-моделирования при иммобилизации детерминировано дефицитом магния и неорганического фосфата в костной ткани, что также оказывало влияние на минерализацию костного матрикса, поскольку магний необходим для включения кальция в костную ткань, а изменения соотношений Са/Pn и Ca/Mg вызывают дестабилизацию кристаллов гидроксиапатита. Среди ряда факторов, обеспечивающих прочность кости, центральное место занимает соотношение кальция и магния, оптимальное их соотношение 1 : 0,7. Ряд авторов считает неорганический фосфат ключевым фактором костеобразования, поскольку рост его содержания активирует экспрессию генов, регулирующих создание органического матрикса и его последующую минерализацию (G.R. Beck et al., 2003), а также опосредованно влияет на дифференцировку остеобластов

Т. Fujita et al., 2001).

Одновременно с ускорением костного ремоделирования наблюдали активацию энергетического обмена костной ткани с постепенным превалированием аэробного окисления. Вклад аэробных процессов в энергообеспечение костного ремоделирования при иммобилизации возрастает в десятки раз по сравнению с интактными крысами.

Наряду с физической нагрузкой, реализация адаптивных реакций происходит и в скелетных мышцах (РЛ. Кх^епшк е1 а\, 1997). Их метаболическая адаптация к иммобилизации на ранних сроках эксперимента выражается в снижении активности основных механизмов, обеспечивающих мышечную ткань АТФ (гликолиз, цикл Кребса, креатинфосфокиназная реакция), накоплением глюкозы, снижением содержания белка. Значимый рост концентрации глюкозы, возможно, связан со сменой субстратов окисления (глюкоза-аминокислоты-липиды); а ферментные системы гликолиза инактивированы. Показана их связь с сократительными мышечными белками (Н.П. Ларионов; Н.М. Кротенко, 1978), поэтому при отсутствии' нагрузки возможна смена субстратов окисления, снижение активности КФК-реакции, поскольку креа-тинфосфат обеспечивает мышечное сокращение. Также известно, что КФК-реакция сопряжена с анаэробным окислением и КФК-реакцией (А.А. Чарые-ва и др., 1986; Т. Опкиууа et а1., 1984). Мы отметили положительную корреляцию активности КФК, общей активности ЛДГ и содержанием метаболитов гликолиза в скелетной мышечной ткани при иммобилизации.

Накопление глюкозы в мышце при иммобилизации в определенной мере свидетельствует об инактивации ферментных систем синтеза гликогена. В первую очередь, это возможно связано с дефицитом АТФ, так как в покоящейся мышце гликогенсинтетаза находится в нефосфорилированной неактивной форме. Поскольку при низкой активности ферментов основных биоэнергетических циклов скелетной мышцы в ней изменён и пластический обмен. Известно, что 53% АТФ образуются в результате гликолиза и 47% АТФ — при расщеплении креатинфосфата, а значительная часть энергии АТФ —

43% расходуется именно на пластические, а не на сократительные реакции (A.J. Baker A.J. et al., 1994). В литературе встречается описание аналогичных процессов в скелетной мышечной ткани при тяжелой травме, сепсисе, сопровождающиеся снижением содержания АТФ, креатинфосфата, белка, и смены субстратов окисления на аминокислотный метаболизм (AJ. Wagenmakers, 1992; L. Gamrin et al., 1996; P.O. Hasselgren, J.E. Fischer, 1997).

Обнаруженные метаболические изменения скелетной мышечной ткани негативно влияют на костное ремоделирование при иммобилизации за счёт ингибирования пролиферации и дифференцировки предшественников костных клеток. Так, в сыворотке крови опытных крыс снижается индекс фосфа-таз за счет низкой активности ЩФтерм, увеличивается содержания кальция на фоне падения концентрации неорганического фосфата и магния; а также снижается индекс активности ЛДГ и МДГ и их соотношения.

Со стороны системы крови- наблюдали увеличение клеток миелоидного ростка костного мозга, количества нейтрофилов костного мозга и периферической крови, развита^ моноцитоза и эозинофилии. Это способствовало активации экспрессии провоспалительных цитокинов, которые, в свою очередь, активировали резорбцию костной ткани.

Существенные изменения развиваются на 210-240 сутки после операции, когда обнаружили несколько «критических» состояний различных исследованных метаболических параметров. Так, в костной ткани существенно возрос фосфатазный индекс на фоне увеличения активности ЛДГ и снижения МДГ, что свидетельствует о восстановлении физиологического соотношения биоэнергетических реакций. Содержание макроэлементов у опытных и ин-тактных крыс практически аналогично. В скелетной мышечной ткани активирована ЛДГ при снижении общей активности МДГ и резко возросла общая активность КФК. Также было повышено содержание миелокариоцитов костного мозга, увеличено число нейтрофилов, моноцитов и эозинофилов периферической крови. Именно в этот период по данным гистоморфометрии наблюдается максимальный размер костномозгового канала, значительно увеличивается толщина кортикальной пластинки и кортикального индекса, что является признаками активации костеобразовательных процессов (А.Ю. Ку-чиев, 2008). Возможно, что иммобилизация изменяет иерархию «информационных» молекул, так как интенсивность метаболического ответа ткани и крови при этом существенно отличается, что можно связать с потерей части не-коллагеновых белков, являющихся локальными регуляторами остеогенеза (G.H. Лунева и др., 2009; D. Couchourel et al., 1999).

При иммобилизации запускаются и механизмы стрессорного ответа, однако даже длительная адаптивная реакция может считаться обратимой, что весьма важно для разработки и внедрения разных методов коррекции сниженной МГЖ и, в первую очередь, нефармакологических путей, к которым относится^ оксигенобаротерапия. Для коррекции дисбаланса костного- ремо-делирования и метаболических нарушений костной ткани у крыс мы применили курс гипербарической оксигенации с режимами в 1,5 ATA и 2 ATA.

Анализ ее воздействия на костное ремоделирование и метаболизм тканей опорно-двигательного аппарата крыс показал, что эффект гипероксии обеспечивается стимуляцией анаболических процессов костной ткани, глав-, ным образом, за счет избирательной активации метаболического потенциала остеобластов. Это способствовало длительному превалированию костеобразовательных реакций и, следовательно, восстановлению содержания макроэлементов в костной ткани. Оксигенобаротерапия- способствует росту энергетического обеспечения анаболических реакций, преимущественно аэробных, что снижает выраженность деструктивных изменений и приводит к активации синтеза полноценного костного матрикса. Из двух режимов ГБО наиболее эффективным по нашим данным оказался 1,5 ATA, при котором отметили избирательную активацию остеобластов на фоне роста активности ферментов биоэнергетического обмена (преимущественно аэробных), а также системы антиоксидантной защиты, что положительно влияло на костное ремоделирование и способствовало восстановлению минерального матрикса костной ткани к 150 суткам опыта. При режиме 2АТА возможно резко возрастает проницаемость мембран за счёт чрезмерной активации свободно-радикального окисления и, соответственного изменения транспорта метаболитов.

Таким образом, есть основания считать режим 1,5 ATA наиболее оптимальным для коррекции процессов костного ремоделирования и нормализации метаболизма костной ткани в условиях иммобилизации.

Следующей задачей работы было создание математической модели метаболических состояний в динамике снижения МПК при иммобилизации. В результате решения данной задачи определены две дискриминантные функции Yi и Y2, каждая- из которых представляла собой' линейный многочлен из информативных факторов (Fj, F2, F4, F5, Fi2). Определение комплекса информативных факторов позволило охарактеризовать биологические процессы, лежащие в основе изменения костного ремоделирования при иммобилизации, снижения МПК и формирования иммобилизационного остеопороза и одновременно продемонстрировать эффект оксигенобаротерапии.

Дискриминантная функция» Yj детерминирует группу животных с ИОП, её основу составляет фактор F4, биологическое значение которого заключено в изменении концентрации магния в костной ткани. Определенный вклад в Yi вносит фактор F5, связанный в .основном с гомеостазом кальция, также значение имеют факторы F2 и F12, определяемые динамикой'уровня неорганического фосфата в костной ткани, состоянием гемопоэза и биоэнергетического обмена скелетной мышечной ткани. В соответствии с разработанной математической моделью следует, что основным макроэлементом, детерминирующим сопряжение процессов костного ремоделирования в условиях иммобилизации, является магний, второй по значению элемент — неорганический фосфат, и затем кальций. Состояние кроветворения значимо, главным образом, в качестве индуктора остеогенезрегулирующих факторов — RANKL и OPG.

Дискриминантная функция У2 детерминирует группу животных, получавших оксигенобаротерапию. Её основу составляет фактор Рь биологическое значение которого определяется динамикой уровня кальция в костной ткани. В группе животных с остеопорозом, которым провели 10 сеансов ГБО, отмечается значимый рост концентрации макроэлементов в костной ткани.

Математическая модель на основе комплекса первой и второй дискри-минантных функций с высокой чувствительностью (94%) классифицирует три группы животных: У\ распознаёт группу животных с ИОП, при помощи У2 детерминируется группа животных, у которых проведена коррекция сниженной МПК при помощи ГБО, а оставшиеся животные относятся к интакт-ным, что графически показано на рисунке 2.

Коо11 Ув. Ясю! 2

6 5 4 3 2 см § 1 о: о -1 -2 -3 -4

-8 о о"

О О О о оо ° о о о оОо о 8 оо° п •.»«. о О о о о

О Си «Л &

О*** о о

О« о» о сьа

-6

-2 о

КооМ о Интактные □ Опытные 8 о Леченые

Рис. 2 Проекция математической модели иммобилизационного остеопороза на плоскости дискриминантных функций

Для решения следующей задачи исследования, связанной с выявлением особенностей метаболических реакций в динамике формирования иммобилизационного остеопороза (стадии нормальной МПК - остеопении и остеопороза) выполнена клиническая часть работы. Целесообразность ее проведения обусловлена, во-первых, верификацией лабораторных данных с результатами денситометрии, являющейся "золотым стандартом" диагностики уровня МГЖ; во-вторых, на основании полученных лабораторных данных разработкой методов диагностики состояния МПК у пациентов в условиях иммобилизации. С этой целью обследовано 133 пациента с несращениями костей: и разным уровнем МПК. Методом БЕХА (Ьипаг, те А) остеопороз диагностирован у 79 пациентов, остеопения-выявлена у 35 пациентов; а группу сравнения; составили! 9 пациентов с нормагтьной-МПК.

При дооперационном;обследовании пациентов выявлены лабораторные тесты, значимо отличающиеся при нормальной МПК, остеопении и остеопо-розе.

У пациентов с нормальной МПК метаболические показатели близки по значению соответствующим референсным лабораторным значениям. Это свидетельствовало о сохранении основных физиологических; механизмов; обеспечивающих регуляцию костного•ремоделирования; Исключение-составили двапоказателя: снижение магнияш сыворотке кровиш снижение индекс стимуляции нейтрофилов. Гипомагниемию • связываем с возможным: перераспределением пула магния: в ¿тканях, чего не отметили; у пациентов с остеопо-розом;

В группе с остеопенией значимо?выше экскреция: СгОББЕарБ и. существенно ниже уровень паратгормона в сыворотке крови; Необходимо отметить, что? в этой' группе,. как и при нормальной МПК, снижается содержание магния;

При сформированном • ИОП у пациентов отличались как биохимические,. так-: и иммунологические показатели сыворотки крови: существенно ниже, активность, щелочной- фосфатазы и её костного изофермента, снижена концентрация КАЫКЬ и активность спонтанного фагоцитоза на, фоне более высокой концентрации» магния« и повышенной экскреции НОР/Сг, чем: у пациентов с нормальной МПК и остеопенией. Следует отметить разнонаправленные изменения и маркеров костеобразования, и показателей костной резорбции: снижение активности ЩФтерм в сыворотке крови при увеличении сывороточного уровня остеокальцина; повышенная экскреция НОР/Сг и СгоББЬарз, но снижение концентрации КА№СЬ в сыворотке крови. Именно разнонаправленная динамика отражала нарушения костного ремоделирова-ния прихнижении МПК, в условиях иммобилизации;

При остеопении; не отмечается разнонаправленной: динамики показателей; метаболизма; костной« тканин в», сыворотке крови:. Адаптивный* ответ на^ иммобилизацию заключается: в снижении концентрации паратгормона; что? можно' положительно;: оценить, поскольку сохраняется достаточный; уровень «костного» кальция и позитивный эффект малых концентраций паратгормона. на остеобласты (МЖ.ЯиЫп е*а1., 2002; Н.Ы- МаИисЬе е! а1., 2006).

Обследование: пациентов» в« динамике т течение? года после операций ОСО и; ЗДО выявило* различный метаболический^ ответ при нормальной; МПК, остеопении и остеопорозе ( таблица 1).

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Трифонова, Елена Борисовна, Екатеринбург

1. Аврунин A.C., Корнилов Н.В., Марин Ю:В. Гипотеза о роли клеток остеоцитарного ряда в формировании стабильной морфологической структуры минералов костного матрикса // Морфология. — 2002. — Т. V22, № 6. — С.74-77.

2. Астапенков Д.С. Роль мононуклеарных клеток в-патогенезе ОП у больных с переломами тел позвонков и. значение кальцитонина лосося в комплексном лечении: автореф.дис. канд.мед.наук. Курган, 2005. - 29с.

3. Базарный В.В. Механизмы участия клеток иммунной системы в регуляции регенерации костной ткани при дистракционном остсосинтезе: авто-рсф.дис. .д-ра мед.наук. Челябинск, 1995. — 33с.

4. Базарный В.В: Клеточные механизмы реализации эффектов физических факторов на ремоделирование костной ткани / В®-Базарный; А.И.Исайкин, Н.Б.Крохина и др.; //. Всстн. травматологии и ортопедии* им; В-Д.Чаклина. -2010:-№ 2.-С. 18-20.- ' ■

5. Батенсва Е. И. Использование количественной;, полимеразной цепной реакциш для оценки цитокинового профиля человека / Е.И.Батенева, Д;Ю .Трофимов; Р:МХаитови^др:. 7/Иммунология; 2006; -№4;-C.9-12V

6. Белая. Ж.Е.,Рожинская+Л(Я1 Возможностипримененияшаратиреоидного гормона для-лечения остеонороза. Обзор литературы //. Остеопороз и остеопатии. 2004. - № 3. - С.26-34.

7. Беневоленская Л.И., Финогенова А. Генетика остеопороза: L Исследование значимости генетических факторов в детерминации заболевания (обзор литературы) // Остеопороз и остеопатии. 1999. — № 2. - С.23-25/

8. Бережнова И.А., Коршунов Г.В. Биохимические маркеры резорбции» и. формирования костной-ткани у геронтологических больных с ишемической* болезнью сердца и остеопорозом //Клиническая лабораторная.диагностика. — 2009.-№7.-С. 3-6

9. Березовский В.А. Гипоксия как способ коррекции нарушения-потребления кислорода костной тканью прифазличных статокинетических условиях / В:А.Березовский и др. // Авиакосмическая и экологическая медицина. -2001. Т.35, № 5. - G.37-40.

10. Биохимические исследования зрелой костной ткани и дистракционного регенерата кости: информационное письмо / ВКНЦ «ВТО»; сост.: К.С.Десятниченко. Курган; 1992. - 13 с.

11. Биохимические маркеры костного метаболизма / С.Симеонов, Е.Кумчев, Е.Енчев, С.Цветкова // Эндокринология. 1998. - № 4. - С. 16-24.

12. Быкова М.Ю., Мухлынина Е.А. Реакция соединительной ткани, различных локализаций на*.действие иммобилизационного стресса //Вестник уральской медицинской академической науки. — 2010. — № 4. — С.56-57.

13. Васильева Т.Г. Функционально-метаболические особенности ремодели-рования костной ткани при ювенильных артритах: автореф.дис.д-ра. мед.наук. — Иркутск, 2006. — 40с.

14. Варецкая-Чивилихина Н.Б. Диагностика и профилактика остеопороза у лиц старших возрастных групп, проживающих в социальных учреждениях: автореф.дис. .канд.мед.наук. Mi, 2006. - 21с.

15. Взаимодействие провоспалительных и противовоспалительных цитоки-нов, в процессе адаптации организма к 30-суточной гипокинезии / Ю.Г. Кам-скова, Я'В.Латюшин, Н.В. Мамылина, Л.П.Щетинкина //Вестник Уральской мед. академ. Науки. 2008. — № 1. — С. 53-54

16. ВласовА.Ю. Хирургическое лечение переломов'диафиза и дистального отдела бедренной кости на фоне остеопороза (клиническое и экспериментальное исследование): автореф.дис. канд.мед.наук. -М., 2009. 20 с.

17. Власов Б.Я. Посттравматическая регенерация костной ткани в биоэнергетическом аспекте и перспективы ее оптимизации: автореф. дис. . д-ра мед.наук. М., 1987. - 44 с.

18. Власов М.Ю., Писарева Е.В. Биохимические маркеры метаболизма костной ткани у крыс при стероидиндуцированной остеорезорбции // Вестн.уральской медицинской академической науки—2009.-№ 2 — С.272-273.

19. Влияние гипербарической оксигенации на состояние биоэнергетических процессов при; удлинении конечностей^ / А.В.Попков, Н.В.Сазонова, Л.С.Кузнецова, Д.А.Попков // Гений ортопедии. 2001. -№ 4. - С.49-52.

20. Влияние гипербарической- оксигенации на состояние больных пылевыми заболеваниями- легких / О.ВЛСорж, О.Г.Ладар1я, О.В.Мирна, Е.О.Гладчук // Одеськ. мед. ж. 1999. - № 4. - С.67—69.

21. Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б;, Уколова М.А. Адаптационные реакции! И: резистентность организма. Ростов-на Дону: Изд-во РГУ, 1990:-224 с:

22. Гершович Ю.Г. Влияние клиностатирования на культивируемые мезен-химальные стромальные клетки» костного мозга* человека / Ю.Г.Гершович, П.М.Гершович, Т.Б.Буравкова и др. // Технологии' живых систем. 20091 — № 2. - С.3-9.

23. Гипербарическая-оксигенация в комплексном лечении больных методом чрескостного остеосинтеза в клинике травматологии и ортопедии /

24. B.И.Шевцов, Е.В.Николайчук, Н.В.Сазонова, В.А.Щуров // Вопр.гипербарической медицины. 2007. - № 1-2. - С. 10-11.

25. Глебова Л.Ю. Влияние гипербарической оксигенации на' процессы ми-тохондриального дыхания и фосфорилирования в печени белых крыс при острой интоксикации нитратом натри я II Пробл. екол. та мед-1997. № 1-2.1. C.64-67.

26. Гольдберг Е.Д., Дыгай- A.M., Шерстобоев1 Е.Ю. Механизмы* локальной, регуляции кроветворения. — Томск: STT, 2000:— 1*48'с.

27. Горидова Л.Д., Романенко К.К. Тактика лечения больных с переломами длинных костей на фоне остеопороза // Проблеми остеологи: науково-практичный журнал. 2001. - Т.4; № 1-2. - С.49-50.

28. Григорьев И. И., Иммунотропные эффекты хронического стресса и чувствительность лейкоцитарного звена системы крови к действию интерлейкина Г b : автореф. дис. канд. мед.наук. Тюмень, 2007. - 21 с.

29. Гюльназарова C.B. Иммобилизационный остеопороз: патогенез и принципы лечения несращений костей, на этом фоне. Обзор литературы и собственные данные // Вестн.травматологии и ортопедии им. В.Д.Чаклина. 2010. — № 2. — С.5-12.

30. Гюльназарова C.B., Надыршина< И.К. Варианты костеобразования. при лечении болтающихся ложных суставов компрессионно-дистракционным методом // Ортопедия, травмат. и протезирование. — 1985; -№ 5. — С.20-23.

31. Давыдкин Н.Ф. Клинико-экспериментальные аспекты применения гипербарической оксигенации при лечении переломов костей: автореф.дис. д-ра мед.наук. — Куйбышев, 1982. 37 с.

32. Дамбахер М.А., Шахт Е. Остеопороз и активные метаболиты витамина D.: пер. с англ. Basle, Switzerland: Eular Publishers, 1996. — 140 с.

33. Данилова О.В. Обмен коллагена костной ткани крыс при воздействии преднизолоном.в условиях экспериментального диабета: автореф.дис.канд' мед.наук. Уфа, 2010. — 23 с.

34. Десятниченко К. С. Неколлагеновые белки-костной ткани в-регуляции • скелетного гомеостаза, минерализации* и репаративного остеогенеза: автореф.дис.д-ра^ мед.наук. — Челябинск, 1997. — 35 с.

35. Долганова Т.И. Функциональное состояние и обмен? основных электролитов у человека при гипокинезии (обзор литературы) / Т.И.Долганова, С.Н.Лунева, В.В.Колчерина и.'др. // Современные наукоемкие технологии* РАЕ. — 2008. — № 11. — 5 с.

36. Долгов В.В., Ермакова И: П. Лабораторная диагностика обмена минералов* ^заболеваний костей //Остеопороз и остеопатии. — 20001 — № 3. С. 4148.

37. Долгов В.В., Ермакова И.П. Лабораторная диагностика обмена костной ткани // Остеопороз и остеопатии. — 2000. — № 4. — С.29-39.

38. Древаль А.В. Диагностическое значение* окислительно-восстановительных ферментов лейкоцитов при постменопаузальной остеопении / А.В.Древаль, Л.А.Марченкова, О.П.Кузнецова и др. // Проблемы эндокринологии. 1999. - Т.45, № 2. - С.31-36.

39. Дурнова Г.Н. Возрастные особенности развития остеопений у крыс при дефиците опорных нагрузок на задние конечности / Г.Н.Дурнова и др. // Авиакосмическая и экологическая медицина. — 2001. — Т. 35, № 1. — С.24-28.

40. Дурнова Г.Н. Гистоморфометрия подвздошных костей обезьян после антиортостатической гипокинезии и «сухой» иммерсии //Авиакосмическая и> экологическая медицина. 2004. - Т.38, № 5. - С.33-37.

41. Дыгай А.М'. Роль гуморальных факторов! в регуляции гемопоэза при' иммобилизационном* стрессе / А.М.Дыгай, В.ВЖданов, О.И.Эпштейн и др. // Бюл.эксперим.биологии и медицины. 2004. - Т. 137, № 3. - С.244-248.

42. Ермакова И:П. Гормональная и клеточная регуляция ремоделирования и потерь костной ткани*у мужчин после ортотопической трансплантации сердца* / И.'П.Ермакова, М:Ш.Хубутия, И.А.Пронченко и др., // Остеопороз и остеопатии. 2006. - № 1. - С.2-5.

43. Ершов К.И. Гликозаминогликаны костного матрикса при развитии остеопороза у преждевременно стареющих крыс ОхуБ / К.И. Ершов, Т.В. Руссо-ва, О.В. Фаламеева и др. // Успехи геронтологии. — 2009. Т.22, № 2. — С.285-291.

44. Зоткин Е. Г. Остеопороз при некоторых ревматических заболеваниях: автореф.дис. .д-ра мед.наук. СПб, 2002. - 31 с.

45. Иванов Д.Г., Подковкин В:Г. Изменение показателей метаболизма коллагена и фосфорно-кальциевого обмена у крыс при остром стрессе // Вестн.уральской медицинской академической науки —2009—№21 — С.229-230.

46. Игнатьев A.MI, Ермоленко Т.А. К вопросу патогенеза остеопороза // Вестн.морской медицины. 2001. — № 1 (13). - С. 17-20.

47. Идиопатическая форма ювенильного остеопороза. Клиника, диагностика, профилактика, лечение: пособие для врачей- / сост.: С.С.Родионова, А.Ф.Колондаев, В.Н.Меркулов и др.. -М.: ЦИТО, 2002. 12 с.

48. Изменение обмена коллагена при сочетании иммобилизационного стресса с электрической стимуляцией стресс-лимитирующих структур / Н.Н.Васильева, Е.В.Елисеева, Л.С.Исакова, А.Ю.Овечкин // Вестн.новых медицинских технологий. — 2002. — № 1. — С.27-29.

49. Иммунологические методы / под ред. Г. Фримеля. — М.: «Медицина», 1987.-472 с.

50. ИсайкишА.И. особенности, ремоделирования костной ткани при. стимуляции фагоцитов: автореф. дис.канд.мед.наук. — Екатеринбург, 2008. — 21с.

51. Использование интегральных показателей в травматологии и ортопедии / Л.С.Кузнецова, С.Н.Лунева, М.А.Ковинька, М.В.Стогов // Клин, лабораторная диагностика. 2002. - № 10. - С. 18.

52. Казимирко В.К., Мальцев В.И., Остеопороз как биологическая проблема // Здоров'я Украши. 2005. - № 21 (130). - С.27-29:

53. Камскова Ю;Г. Изменение антиокисдантного статуса и уровня »ПОЛ* в крови и печени» в динамике'301суточной гипокинезии. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 200h-N 10.-С.387-389

54. Картамышева H.H. Костное ремоделирование при хроническом гломерулонефрите у детей: автореф. дис. д-ра. мед.наук. — Москва, 2007. 47 с.

55. Кашкин К.П. Цитокины иммунной системы : основные свойства и иммунобиологическая активность // Клин.лабораторная,диагностика.' 1998. — № 11.-0.21-32.

56. Кирюхина C.B. Некоторые аспекты фармакодинамики диазепама, окси-лидина; натрия бромида и тимогена в условиях гипербарической оксигена-ции: экспериментально-клиническое исследование: автореф. дис. канд.мед.наук. Саранск, 1999. - 18»с.

57. Киселева Е.П., Полевщиков A.B. Метод автоматизированного учета НСТ-теста // Клин.лабораторная диагностика. 1994. - №4: - С.27-29.

58. Коваленко А.Н., Коваленко^ В.В. Синдром энергетического дефицита как причина развития остеопении и остеопороза /в кн.: Системные радиационные синдромы. — Николаев: Изд-во НГГУ им. Петра Могилы, 2008. — С.193-299

59. Коваленко Е.А. Гипокинезия / Е.А.Коваленко, Н.Н.Гуровский. М.: Медицина, 1980. - 320 с.

60. Ковинька М.А., Кузнецова Л.С., Накоскин А.Н. Индекс гидроксипроли-на как способ оценки состояния костной ткани при дистракционном остеосин-тезе // Клин.лабораторная диагностика. 2002. - № 10. - С. 17.

61. Коровина H.A. Остеопороз у детей / Н.А.Коровина, Т.М.Творогова, Л.П. Гаврюшова и др.. М.: РАМПО, 2002. - 40 с.

62. Кретович В.Л. Введение в энзимологию. — М.: «Наука», 1986. 336 с.

63. Кузнецов С.Л:, Горячкина В.Л., Лебедева Н.Б. Особенности реакции исчерченного волокна скелетной мышцы человека при гипокинезии в сочетании с физической нагрузкой // Арх. анатомии, гистологии и эмбриологии. — 1987. — Т.92, Вып. 2. С.32-35.

64. Кузнецов С.Л., Папас Е.А., Гутова Ф. Механизмы адаптации энергетического метаболизма волокон скелетной мышечной-ткани // VI международный Конгресс морфологов: тезисы докладов. Морфология. — 2002. — Т.121, № 2-3. - С.84.

65. Кузнецова O.A. Лечение ложных суставов длинных костей нижних конечностей на фоне регионарного остеопороза: автореф.дис. . канд.мед.наук. -М., 2010.-24 с.

66. Лабораторные исследования при остеопорозе: пособие для врачей / МЗ РФ ГФУН УНИИТО им. В.Д:Чаклина; сост.: С.В .Гюльназарова, Е.Б.Трифонова, В.И.Мамаев, А.В.Осипенко. -Екатеринбург, 2003: — 18'с.

67. Лабораторные методы'исследования в клинике: справочник / под ред: проф. В.В. Меньшикова. М.': «Медицина», 1987. - 368 с.

68. Ларионов Н.П., Кротенко Н.М. Сравнительное исследование изменений АТФ-азной активности актомиозина и активности' гликолитических ферментов скелетных мышц в раннем постнатальном'периоде развития // Вопр. мед. химии. 1978. - Т.24, Вып. 2. - С.202-205.

69. Леонов А. Н. Эволюционная стратегия адаптации биологических систем к гипероксии // Вопр.гипербарич.медицины. 2007. - № 1-2. - С.24-25.

70. Леонова С.Н. Остеопороз при лечении переломов // Проблема остеопо-роза в травматологии и ортопедии: 3 конференция с международным участием, 14-15 февраля 2006 года: тезисы. М., 2006. - С.52-53.

71. Лисков A.B. механизмы регуляции остеогенеза (обзор литературы) // Анналы травматологии и ортопедии. — 2001. — № 2. — С.70-76.

72. Лосев И.И., Фотеева Н.К., Орлова Л.А. Применение оксигенобаротера-пии в' реабилитации больных с паралитическими деформациями стоп // Бюл.гипербарической биологии и медицины. -2002. Т. 10, № 1-4. - С.35-36.

73. Лунева С.Н; Перекисное окисление липидов при лечении закрытых диафизарных переломов с использованием^ гипербарической оксигенации / С.Н.Лунева; Т.Н.Ерофеева, М.В.Стогов и др. // Гений ортопедии! 2004. -№ 4. - С.37-40:

74. Лунева С. Н., Накоскин А. Н. Содержание коллагена и нуклеиновых кислот в-костной ткани человекам различные возрастные периоды //Гений ортопедии. 2004. - № 3. - С. 12-16.

75. Мамаев В.И., їїюльназарова Є.В., Трифонова Е.Б. Некоторые показатели метаболизма костной ткани; при лечении; больных. с иесращениями костей конечностей и посттравматическим остеопорозом // Генишортопедии; 2002. -№ 1. - С.163-164.

76. Марова Е.И; Классификация;остеопороза /7 Остеопороз жостеопатии: — 1998;1.-С.8-13.

77. Марушко; Ю.В., Марушко: Т.В., Грищак Т.В. Роль, дефицита; магния- в педиатрической практике // Современная »педиатрия; — 2009. — № 5(23). С.41-45 .

78. Марченкова Л.А. Остеопороз: достижения и перспективы (материалы Всемирного конгресса по остеогюрозу, 15-18 июня 2000 г., Чикаго. СІІІА) // Остеопороз и остеопатии. 2000. — № 3. — С.2-5.

79. Матвеенко В.Hi Костный и минеральный метаболизм при удлинении конечности по Илизарову II Теоретические и клинические аспекты дистракци-онного остеосинтеза: сборник науч. трудов. Курган, 1982. — С.170-173.

80. Медицинская лабораторная диагностика (программы, и алгоритмы): справочник / под ред. проф. А.И:Карпищенко; СПб.: «Интермедика», 2001. -544 с.141% Меерсон Ф.З. Пшенникова M.F. Адаптация.к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам. М., 1988. — 256 с.

81. Методы исследований в профпатологии (биохимические): руководство для врачей / под ред. O.F.Архиповой. — MI: «Медицина», 19881 — 208 с.I

82. Механизмы гравитационной чувствительности остеогенных клеток-предшественников / Л.Б.Буравкова, П.М.Гершович, Ю.Г.Гершович, А.ИТригорьев // Acta Naturale. 2010. - Vol:2, № 194. - Р.30-39.

83. Миронов С.П., Родионова С.С. Современное состояние проблемы ос-теопороза // Проблемы остеопороза в травматологии и ортопедии: тезисы II научно-практической конференции с международным участием, Москва, 1213 февраля 2003 г. М.: ЦИТО, 2003. - С.3-5.

84. Миронов С.П., Родионова С.С., Андреева Т.М. Организационные аспекты проблемы остеопороза в травматологии и ортопедии // Вестн. травматологии и ортопедии им. Н:Н. Приорова: 2009: - № 1. - С.3-6.

85. Морфофункциональные изменения в надпочечниках экспериментальных животных при хроническом иммобилизационном стрессе /И.Е.Голуб, В.Ю.Лебединский, А.В.Изатулин, О.Н.Шашкова //Ж.Совр.наукоёмкие технологии. 2009.- № 9. - С.82-84

86. Мякоткин В.А., Беневоленская Л.И. Генетика остеопороза // Вестн.РАМН. 2008. - № 6. - С.37-40.

87. Назаренко Г. И., Кишкун А. А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. М.: Медицина, 2002. — 568 с.

88. Накоскин А.Н. Возрастные'изменения и половые различия биохимического? состава-костной ткани человека: автореф.дис. канд.мед.наук. — Тюмень, 2004. 23 с.

89. Насонов Е.Л: Вторичный остеопороз: патогенез и,клиническое значение при воспалительных заболеваниях суставов // Остеопороз- и остеопатии. — 1998. -№ 1.-е. 18-20.

90. Насонов Е.Л.', Самсонова М.Ю. Новые направления исследования воспаления^ при-ревматических заболеваниях // Избранные лекции по клинической ревматологии / под ред. В. А. Насоновой,и.Н'. В. Бунчука. М;: Медицина, 2001.-207 с.

91. Новикова В.М. Координация систем регуляции в антигенстимулирован-ных Т-клетках // Иммунология. 1995. - № 1. -С.7-10.

92. Новосёлова O.A., Львовская Е.И. Изучение влияния различных физических нагрузок на состояние процессов перекисного окисления липидов и уровня1 антиоксидантной активности у детей 7-8 лет // Спортивная медицина. 2008 — № 2. — С.66-70

93. Оганов B.C. Возможные механизма развития* остеопении при гипокинезии// Остеопороз и остеопатии. 1998'. - № 2. - С.7-9.

94. Оганов B.C. Анализ ассоциации костной массы у спортсменов с биохимическими и молекулярно-генетическими маркерами ремоделирования костной ткани /B.C. Оганов, О.Л. Виноградова, Н:С. Дудов и др.>// Физиология человека-2008. Том 34, №2. - С. 56-65.

95. Оноприенко F.A. Рентгенометрическая и микрорентгенографическая оценка регионарного остеопороза неопорной конечности / Г.А.Оноприенко, О.Ш.Буачидзе, А.Н.Поляков // Вестник рентгенологии-и радиологии — 1985: — № 3. С.41-45.

96. Орлов О.И. Профилактика нарушений обмена кальция шсистем его регуляции при длительной гипокинезии //Остеопороз и остеопатии. 2007. — № 3i-e.21-23 . ^ ' '

97. Остеопороз:. эпидемиология; клиника, диагностика; vпрофилактика и лечение / АМН Украины; под ред. Н.А. Коржа; В В. Поворознюка, Н.В; Дедух, №А. Зупанца;.— Харьков: Золотые страницы, 2002: — 648<с.

98. Остеопороз: этиология* и патогенез / Л.А.Свешников, Л.А.Омотрова, Н.Ф.Обанина, Т.А.Ларионова // Гений ортопедии. 2001. - № 4. - С.136-143.

99. Офицерова Н.В. Изменение:содержания минеральных;компонентов кости и остеотропных гормонов в крови при заживлении закрытых переломов костей голени, леченных по методу Г.А.Илизарова: авто-реф.дис:.канд.биолшаук. -Фрунзе,Л988i-20 с.

100. Попков»Д!А., Сазонова Н.В;, Кузнецова-Л.С. Влияние гипербарической* оксигенации на окислительно-восстановительные процессы при удлинении голени // Клин.лабораторная диагностика. 2002. - № 10. - С. 19.

101. Практикум по биохимии / под ред. Северина С. Е. и Соловьевой Г.А. — М.: Изд-во МГУ, 1989: 279 с.

102. Принципы патогенетического обоснованного лечения первичного ос-теопороза: пособие для врачей / сост.: С.С.Родионова, А.В.Балберкин, А.Ф.Колондаев, В.Н.Швец. М.: ЦИТО, 2002. - 27 с.

103. Пронченко И.А. Состояние обмена костной ткани и его регуляции у потенциальных реципиентов донорского сердца / И.А. Пронченко, Т.К. Колиа-швили, В.П. Бузулина и др. // Вестник трансп. и исск. органов. 2009. - Том 11, №-1. - С. 34-39.

104. Реброва О.Ю. Статистический- анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTIC А. — М.: МедиаСфера, 2003. — 312 с.

105. Риггз Б. Л., Мелтон III Л. Д. Остеопороз. Этиология; диагностика, лечение / пер. с англ. -М.: СПб.: Невский диалект, 2000. 558 с.

106. Родионова С.С. Метаболические остеопатии: системный остеопороз и остеомаляция у взрослых: автореф.дис.д-ра мед.наук. — М., 1992. 27 с;

107. Родионова G.G., Кривова A.B. Остеогенон при. комбинированном лечении переломов // Трудный пациент. — 2007. — Т.5; №15-16. — С.3-6.

108. Родионова, С.С. Качество костной такни как фактор- риска переломов при. остеопорозе // Проблема остеопороза в травматологии: и ортопедии: 3 конференция с международным участием, 14-15 февраля 2006 года: тезисы. — М:, 2006. 0.4. ;

109. Рожинская Л.Я; Остеопороз: диагностика нарушений метаболизма костной ткани и кальций-фосфорного обмена // Клин.лабораторная диагностика. -1998; №5.-0.25-32:205; Рожинская Л;Я: Системный?остеопороз; — М!: Издатель Мокеев, 2000. -196 с.

110. РожинскаяШ1Я;, Беляева А.В:, Белая¡Ж.Е.Ранелат:стронция«(бивалос) -препарат двойного действия на костную ткань; новые подходы к лечению остеопороза// Остеопороз и остеопатии. - 2007. - № 1. -- С.34-43.

111. Руководство по остеопорозу / под*,ред;.Л: И; Беневоленской. М.: БИНОМ, Лаборатория знаний; 2003. — 524 с.

112. Рыбачук. ОЩ, Калашников!AB: Остеопороз у больных: с нарушением сращения переломов костей // Конференция с международным. участием «Проблема остеопороза в травматологии и; ортопедии», г.Москва, 16-17 февраля 2000 года: тезисы. М., 2000. - С.122.

113. Савилов П.Н. Постгипероксическое состояние // Вопр.гипербарической медицины. 2007. - № 1-2. - С.26-27.

114. Сазонова Н. В. Эффективность гипербарической оксигенации при удлинении конечностей методом чрескостного дистракционного остеосинтеза у детей и подростков: автореф.дис. .канд.мед.наук. Курган, 2002. - 27 с.

115. Сакс В.А. Механизмы энергообеспечения мышечного сокращения / В.А.Сакс, Э.К.Сеппет, В.В.Куприянов и др. // Структурные основы и регуляция биологической подвижности. М.: «Наука», 1980. - С.304.

116. Свешников A.A., Зюзюкина О.В., Обанина Н.Ф. Влияние остеохина на состояние костного регенерата при лечении переломов и удлинении костей // Остеопороз и остеопатии. 1998. — № 1. - С.41-42.

117. Свешников A.A., Смотрова1 Л. А., Овчинникова E.H. Механизмы деминерализации костной ткани // Гений ортопедии. — 2005. № 2. - С.95-99.

118. Свешников A.A., Смотрова Л.А., Ларионова Т.А. Наиболее существенные причины деминерализации скелета У/ Остеопороз. Диагностика, профилактика и лечение // Сб.статей Казанского гос. Мед. университета Казань, 2002.- С.31-35.

119. Свободнорадикальные процессы в норме и при патологических состояниях: пособие для врачей / сост.: В.З.Ланкин, А.К.Тихазе, Ю.Н.Беленков. М., 2001.-78 с.

120. Сенников C.B., Силков А.Н., Козлов В.А. Аллельные варианты и изо-формы цитокинов в диагностике и патогенезе иммунопатологических состояний // Иммунология. 2002. - Т.23, № 4. - С.243-250.

121. Скрипникова И.А. Остеопороз, индуцированный глюкокортикоидами: материалы всемирного конгресса по остеопорозу, 19-21 апреля 2001 г., Мон-това, Италия // Остеопороз и остеопатии. 2001. - № 12. - С.34-38.

122. Состояние минерального обмена и костной регенерации в условиях гипербарической оксигенации при удлинении конечностей" / А.В.Попков, Н.В.Сазонова, Л.С.Кузнецова, Д.А.Попков7/ Гений ортопедии. 2001. - № 4.- С.53-55.

123. Титов В.Н., Лисицын Д.М. Регуляция перекисного окисления in vivo как этапа воспаления. Олеиновая кислота, захватчики активных форм кислорода и антиоксиданты // Клин.лабораторная диагностика. — 2005. — № 6. С.3-12.

124. Тишенина P.C. Биохимические маркеры метаболизма костной ткани и остеоденситометрия при первичном гиперпаратиреозе / Р.С.Тишенина, И.В.Котова, О.П.Богатырев и др. // Клин.лабораторная диагностика. 2004. -№ 1. - С.9-12.

125. Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в педиатрии: — София: «Медицина и физкультура, 1963. С.431-433.230: Торбенко В.П., Касавина Б.С. Функциональная биохимия костной ткани. М.: «Медицина», 1977. - 272 с.

126. Трифонова Е.Б., Осипенко A.B. Некоторые биоэнергетические аспекты регенерации мышечной, и костной тканей при удлинении конечности // Травматология и ортопедия Россииі — 2000:¡ — №-1. — С.49-53.

127. Уайт А; Основы биохимии: в 3 т. / А.Уайт, Ф.Хендлер, Э.Смит и др.. — М.: Мир; 1981. С.1467-1498.

128. Уилкинсон Д. Принципы и методы диагностической энзимологии. М.: Мир, 198 Г.-223 с.

129. Умнова М.М., Краснов. И.Б. Ультраструктура- мышечных волокон и нервно-мышечных соединений m.soleus крысы после отсутствия опорной нагрузки// Биологические мембраны. 2003. — Т.20, № 3. - С.87-89.

130. Физическая нагрузка в адаптации спортсменов и профилактике психофизического переутомления /В.И. Павлова, Я.В.Латюшин, Н.В.Мамылина, М.С.Терзи // Теория и практика физической культуры. 2007.-№10.- С. 12-15.

131. Формирование и перестройка минерального матрикса костной ткани; (обзор литературы и собственные данные) / А.С.Аврунин, Н.В.Корнилов, И.Д.Иоффе, Н.Н.Корнилов // Остеопороз и остеопатии. 2000. - № 3. - С.6-9.

132. Франке Ю., Рунге Г. Остеопороз. М.: Медицина, 1995. — 299 с.

133. Фрост Н.М. Эволюция взглядов на остеопороз // Остеопороз и остеопатии. 2000. - № 1. - С.2-8.

134. Функциональные биохимические исследования в клинике ортопедии и травматологии: методические рекомендации под ред. К.С.Десятниченко / сост.: Л.й Грачевой, Л.С.Кузнецовой. Курган, 1990. - 28 с.

135. Хаитов Р:М-., Пинегин B.Bt Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии // Иммунология. — 2001. — № 4. — С.4-6.

136. Хит Д., Маркс Дж.С. Нарушения обмена кальция: пер. с анг. М:: Медицина, 1985. — 334 с.

137. Хэм А., Кормак Д. Костная ткань //Гистология. —Т.3.-М.,1983.-С.19-135.

138. Чарыева A.A. Универсальная энерготранспортирующая роль креатин-фосфатного механизма и значимость его в энергетике мышечной деятельности // Биохимические критерии развития физических качеств. — М.: ВНИИФК, 1986.-С.4.

139. Черешнев В.А. Новое направление физиологии — иммунопатофизиологи /В.А. Черешнев, Б.Г. Юшков, Т.В. Гаврилова, М.В. Черешнева // Вестник уральской медицинской академической науки. 2009: — № 2. — С.41-42

140. Шакиров Д.Ф. Свободнорадикальное окисление липидов у работников нефтеперерабатывающей промышленности // Клин.лабораторная диагностика. -2001. -№ 6. С.14-16.

141. Шарова A.A., Волеводз H.H. Значение состава»кальцийсодержащих препаратов в лечении и профилактике остеопенических состояний // Остеопороз и остеопатии. 2001. - № 1. - С.44-48.

142. Шахматов И.И. Влияние различной продолжительности однократной физической нагрузки и иммобилизации на реакции системы гемостаза //Ж.Фунд. исследования. 2010. - № 3. - С. 144-150.

143. Шварц Г.Я. Остеотропные цитокины семейства TNF и создание нового поколения лекарственных средств для лечения1, остеопороза // Цитокины и воспаление. 2004. -Т.З, № 3. - С.З-9.

144. Швец, B.Hf Динамика иммобилизационного остеопороза у крыс / В.Н.Швец и др. // Космическая биология и авиакосмическая медицина. — 1988. Том 22, № 5. - С.51-55.

145. Шейбак П.П. Дефицит магния и его значение в патологии детского возраста // Рос. вестник перинатологии и педиатрии. 2003. — № 1. — С.45-48.

146. Шестаков Д.А-. Сократительные и несократительные элементы, скелетной мышцы человека в условиях разгрузки / Д.А.Шестаков и др. // 21й съезд биофизиков: тезисы докладов. Т.1. -М., 1999; - С.372-373г

147. Щеплягина JliA., Моисеева Т.Ю. Костная минеральная плотность у детей» в зависимости? от физического* развития? // Рос.педиатрический журн. -2005'. -№ 5. С. 17-21.

148. Клиническое руководство по лабораторным-тестам / Под ред. Н.У.Тица М.: «Юнимед-пресс», 2003*. - 942 с.

149. Юренева С.В. Новая концепция в лечении постменопаузального остео-порощза (обзор литературы) //Лечащий врач: 2010.- - № 5. - С.88-91

150. Ярилин A.A. Интерлейкин 7 и другие лимфопоэтины // Иммунология. — 2004. -№ 1. — С.4-13.

151. Ястребов А.П., Мещанинов В.Н. Старение, перекисное окисление липи-дов и биовозраст. Екатеринбург: ООО «Уральский следопыт», 2005. - 220 с.

152. Arnett R, Dempster D. W. A comparative stady of disaggregated chick and rat osteoclasts in vitro effects of calcitonin1 and prostaglandin //Endocrinology, 1987. — 120.-P. 602-608.

153. Alpha(9) beta(l): A Novel Osteoclast Integrin That Regulates. Osteoclastі

154. Formation- and Function / H.Rao, G.Lu, HiKajiya, V.Garcia-Palaciosf // J.Bone Miner.Res. 2006: -Vol.21, №*Ю. - P.1657-1665.

155. Andelkovic Z. Osteoprotegerin-a neutralizing receptor, protector of bones and a potential antiresorptive agent / Z.Andelkovic, V.Katic, D.Mihajlovic et al. // Med.Pregl. 2005. - Vol:58 (7-8).- - P362-367.

156. Anderson-C., Ek-Rylander В., Minkin C. Acid'phosphatases // Biology and physiology of the osteoclast; in B.R.Riflin, C.V.Cay, eds.; Boca Raton/ FL, CRC Press, 1992: —P.55-81.

157. Antioxidant pyruvate inhibits cardiac formation of "reactive oxygen- species through changes in redox state / E.Bassange, O.Sommer, M.Schwemmer, R.Bunger //Am.J.Physiol.Heart.Circ.Physiol. 2000: - Vol 279. - P.2431-2438.

158. Apoptosis of osteoblasts mediated by NO-cyclic GMP pathway / A.Inaba, A.Tomomura, K.Fujimotto, S.Katoh // Abstr. 70th Ann.Meet.Zool. Soc.Jap., Yama-gata, Sept.27-29, 1999, Zool. Sci. -P.53.

159. Ardelean D., Weizani H., Eyquem A. Les marqueurs biologiques du remodelage osseu // Eurobiologiste. 1999. - № 242. - P. 15-21.

160. Arnaund C.D. Effect of parathyroid hormone (1-34) on. fractures and bone mineral density in postmenopausal women with' osteoporosis. /C.D.Arnaund, J.R.Zanchetta et al.<// Medicine. New England L., 2001. - Vol.344: - P. 14341441.

161. Arnsdorf E.J., Tummala P., Jacobs C.R. Non-canonical Wnt signaling and'N-cadherin related beta-catenin signaling play a role in. mechanically^ induced osteogenic cell fate // Plos One. 2009. - Vol.4 (4). - e5388.

162. Asagiri M., Takayanagi H: The molecular understanding of osteoclast differentiation// Bone. 2007. -Voll40(2). - P1251-2641

163. Atkins G.T., Kostakis P., Pan B. RANKL expression is related to the differentiation state of human osteoblasts // J.Bone Miner Res. 2003. - Vol.18. -P.1088-1098.

164. В. P: Ayati A mathematical model of bone remodeling dynamics for normal bone cell populations and myeloma bone disease / B. P. Ayati, C.M. Edwards, G.F. Webb // Biology Direct. 2010 . - V.5. - P.28

165. Baker A.J. Energy use by contractile and«non contractile processes in skeletal muscle-esimated by 31P- NMR / A.J.Baker, R.Brandes, T.M.Schendel et al. // Am.J.Physiol. 1994. - Vol:266, №-3, Pt.l. -P.825-831.

166. Baron*R., Rowadi G., Roman-Roman S. Wnt signaling: a key regulator of bone mass // Curr.Top;Dev.Biol. 2006. - № 76. - P.l03-127.

167. Baron R. Mécanismes moléculaires de la resorption osseuse: Implications thérapeutiques // Congr.fr.rhumatol. — CNIT, Paris-La Defense, 12-14 nov. 1996: Rev.rhum. Ed.fr. 1996. - № 10. - P.743-749.

168. Bar-Shavit Z. The osteoclast: A multinucleated, hematopoietic-origin, bone-resorbing osteoimmune cell // J.Cell Biochem. 2007. - Vol.22.- P.l 130-1139

169. Baum E., Klaus P.M. Primare Osteoporose — leitlinieng erachte Diagnostik und Therapie // Dtsch.Arztebl. 2008. - Vol.105, № 33. - S; 573-582:

170. Bodine P.V., Komm B.S. Wnt signaling and teoblastogenesis // Rev.Endocr.Metab.Dis. 2006. - № 1-2.-P.33-39.

171. Bodine P.V.N. The role of Wnt signaling in bone and mineral metabolism / P.V.N.Bodine, J.A.Robinson, Ramesh A. Bhat et al. // Clin.Rev.Bone and Mineral Metabolism. 2006. - Vol.4, № 2. - P.73-96.

172. Bone physiology, disease and treatment: towards disease system analysis in osteoporosis. /T. M. Post , S. CLM Gremers , T. Kerbusch., M. Danhof// Clin-Pharmacokinet. 2010: - V.49 (2). - P: 89-118

173. Bonewald L.F., Johnson MlL. Osteocytes, mechanosensing and Wnt signaling // Bone. 2008. - V.42 (4). - P.606-615

174. Bonucci E. The osteocyte: the underestimated conductor of the bone orchestra // Rendiconti Lincei. 2009. - Vol:20 (3). - P. 237-254

175. Brazier M., Kamel S. Les marqueurs biologiques dans l'exploration du remodelage osseux: Une nouvelle approche de l'osteoporose // Rev.rhum. ed. Fr. -1997. — № 3. — P.52-54.

176. Brown E.N. Is the calcium Receptor a molecular Target For The Actions of Strontium in bone? // Osteoporosis Int. 2003. - Vol.14. - Suppl.3. - P:25-34.

177. Burge R. Incidence and economic burden of osteoporosis-related ^fractures in the United States, 2005-2025 / R.Burge, B.Dawson-Hughes, D.H.Slomon et al. // J.Bone Min.Res. 2007. - Vol.22, № 3. - P.465-475.

178. Burkhardt R'., Frisch B!, Bartl R. Bone biopsy in haemotological disordes // J.Clin.Pathol. 1982'. - Vol'.35. - P.257-284.

179. Butler J., Foex B. Best evidence topic report. Hyperbaric oxygen therapy in acute fracture management // Emerg.Med.J. 2006. -Vol.23, № 7. - P.571-572.

180. Caillot-Augusseau A. Done formation and resorption biological markers in cosmonauts during' and. after a 180-day space flight (Euromir 95 / A.Gaillot-Augusseau, M.-H.Lafage-Proust, C.Soler et al:. // Clin.Ghem. 1998. - № 3. -P.573-585.

181. Chan A., van Bexooijen R.L., Lowik C.W. A new paradigm in the treatment of osteoporosis: Wnt pathway proteins and their antagonists // Gurr.Opin. Investig. Drags. 2007. -Vol.8, № 4. - P.293-298'.

182. Chan> T. Y., Ali Z. Syed Significance of psammoma bodies in body cavity fluids: A cytopathologic study: Abstr. 45th Annu. Sci. Meet. Amer. Soc. Cytopa-thol., Boston<Mass., Nov. 4-8, 1997 // Acta cytol. 1997. - №5. -P.1581.

183. Chang W. Expression and signal transduction of calcium-sensing receptors in cartilage and'bone / W*. Chang, Tu Chialing, Chen Tsui-Hua et al. // Endocrinology. 1999. - № 12. - P.5883-5893.

184. Chechurin R.Y., Vlasova O.M., Bessonov D.M. «Elementary Correction», a new analytical system for metabolic disorders // Information technologies in the modernization of medicine, Moscow, 15-18 March 2005. — P:31-33.

185. Chek J:B., Laniko A.I. Effects of hypokinesia on, cyclic nucleotides and hormonal regulation of calcium-metabolism in rats // East.Afr.MedJ. 2002. -Vol.79, № 4. -P.210-213.

186. Chen J.S. Effect of age-related chronic immobility on markers of bone turnover / J.S.Chen, I.D.Cameron, R.G.Cumming et al. // J.Bone Miner. Res. 2006. - Feb. - Vol.21, № 2. - P.324-331.

187. Chen T, Feng X. Cell-based assay strategy for identification of motif-specific RANK signaling pathway inhibitors // Assay Drug.Dev.Technol. 2006. -Vol.4, №4. -P.473-482.

188. Chen W. Влияние жидкостного стресса на пролиферацию первичных ос-теобластоподобных клеток крыс / Chen W., Qiao Ju, Luo Songliao et al. // Huaxi yike daxue xuebao. 2001. -№2. -P:232-239.

189. Cheung J. InterFeukin-6 (IL-6), IL-1, receptor, activator of nuclear factor kap-paB ligand (RANKL) and osteoprotegerin production-by human, osteoblastic cells: comparison of the effects of 17-beta oestradioLand'raloxifene / J.Cheung, Y.T.Mak,

190. Clowes J.A., Riggs B:L., Khosla S. The role of the immune system in the pathophysiology of osteoporosis // Immunol.Rev. 2005. -Vol.208. - P.207-227.

191. Cohen M.M: Jr. The new bone biology: pathologic, molecular, and- clinical correlates // Am.J'.Med.Genet.A. 2006: -T.k - Volt 140, № 23. - P.2646-2706.

192. Contractile and metabolic effects of increased creatinekinase activity in mouse- skeletal: muscle / B.B.Roman, J.MlFoley, R.A.Meyer, A'.P:Koretsky // AmJ.Physiol.' 1996. - Vol.270 (4Ptl). -P: 1236-1245.

193. Cormier C., Kindermans C., Souberbielle JlC. Place de l'exploration du metabolisme phosphocalcique dans l'osteoporose-// Eurobiologiste. — 1999. № 242. -P.l 1-13:

194. Cortet B. Diagnosing osteoporosis: laboratory tests // Presse Med. 2006. -Vol.35 (10-C2). — P.1540-1542.

195. Couchourel D. Effects of fibronectin on hydroxyapatite formation / D.Couchourel, C.E.Escoffier, R.Rohanizadeh et al. // J.Inorg.Biochem. 1999. -№ 3. -P.129-136.

196. D'Amelio P: Estrogen-deficiency increases osteoclastogenesis up-regulating T cells activity: a key mechanism-in osteoporosis./ P. D'Amelio, A. Grimaldi, S. Di Bella, etal.//Bone.-2008. Voli43(l).-P.92-100.

197. Daci E., van Cromphaut S:, Bouillon« R. Mechanisms influencing bone metabolism in chronic illness // Horm.Res. 2002. - Vol.58. - Suppl 1. - P.44-51.

198. Deal G. Future therapeutic targets in osteoporosis // Curr Opin Rheumatol. -2009.-V. 21.-P. 380-385

199. Delany A.M. Osteonectin-null mutation compromises osteoblast formation, maturation, and survival / A.M.Delany, I.Kalajzic, A.D.Bradshaw et al. // Endocrinology. 2003. - Vol.144, № 6. -P.2588-2596.

200. Dengshun Miao. Osteoblast-derived PTHrP is a potent endogenous bone anatbolic agent that modifies, the therapeutic efficacy of administered PTH' 1—34 / Deng-shun Miao, Bin He, Yebin-Jiang et al. // J.Clin.Invest. 2005. - Vol.115, № 9. -P.2402-2411.

201. Dewar A.L. Imatinib as a potential antiresorptive therapy for bone disease / A.L.Dewar, A.N.Farrugia; M;R.Condina et ah. // Blood. 2006. -Vol.107, № 11. -P.4334-4337.

202. Eastell R., Blumsohn A. The value of biochemical markers of bone turnover in osteoporosis // J.Rheumatol: 1997. -№ 6. -P.1215-1217.

203. Effect of long-term hypokinesia on monoamine system and antioxidant status of the brain / Y.G.Kamskova, V.I.Pavlova, E.V.Popkova, I.V.Loktionova // Bull.Exp.Biol.Med. 2003. -Vol.135, № 6. - P.556-558;

204. Effects of dissociated glucocorticoids on OPG and RANKL in osteoblastic cells / E.L.Humphrey, J.H.Williams, M.W.Davie, M.J.Marshall // Bone. 2006. -Vol.38, № 5.-P:652-661.

205. Einborn T. Local therapie for the enhancement of fracture healing // Cal-cif.Tissu Int. 2006. - Vol.78. - Suppl.l. - P.520.

206. Energy metabolism in single human muscle fibers during contraction without and with epinephrine infusion / P.L.Greenhalf, J.M.Ren, K.Soderlung, E.Hultman // Am.J.Physiol. 1991. - Vol.260, № 5. -Pt.l. -P.713-718.

207. Eriksen E.F., Kassem M., Langdahl B. Growth hormone, insulin-like growth factors and bone remodelling // Braz.J.Med.Biol.Res. 1996. - № 6. - P.525-534.

208. Ertem-K., Kekilli E. The effects of immobilization subsequent'to the repair of clean-cut tendon injuries on distal radius-bone mineral content // Ulus Travma Acil Cerrahi Derg. -2007. -Vol.13, № 3. -P!l 86-191.

209. Essential* role of nuclear factor of activated'T cells (NFAT)-mediated-Wnt signaling in osteoblast differentiation induced by strontium-ranelate / O. Fromigue, E. Hay, A.Barbara, P.J.MarieJ // J. Biol. Chem. 2010 - Vol. 285(33). - P. 2525125258

210. Evans B.A. Human osteoblast precursors produce extracellular adenosine, which modulates their secretion of IL-6 and osteoprotegerin / BiA.Evans, C.Elford; A.Pexa et al. // J:Bone Miner.Res. 2006. -Vol.21, № 21 - P.228-236.

211. Evans D.M., Raiston S.H. Nitric oxide and bone // J.Bone Miner.Res. 1996. -№ 11.-P.300-305.

212. Fahrleither A. Serum osteoprotegerin is a major determinant of bone density development and prevalent vertebral fracture status following cardiac transplantation / A.Fahrleither, G.Prenner, G.Leb et al. // Bone. 2003. - Vol.32, № 1. -P.96-106:

213. Fahrleitner-Pammer A. Changes in the RANK ligand/osteoprotegerin system are correlated to changes in bone mineral density in bisphosphonate-treated osteoporotic patients // Osteoporos Int. 2006. - Vol.17, № 5. - P.693-703.

214. FujitaT., Izumo N., Fukuyama R. Phosphate provides an extracelluar signal that drives nuclear export of Runx2/Cbfal in bone cells // Bio-chem.Biophys.Res.Com. 2001b. - № 280. - P.348-352.

215. Gallagher J.C. The pathogenesis of osteoporosis // Bone Miner. 1990. -Vol.9, №3.-P.215-227.

216. Gallagher J.C., Sai A.J. Molecular bilogy of bone remodeling: Implications for new therapeutic targers for osteoporosis // Maturitas. 2010. - Vol.65 (4). — P.301-307.

217. Gao Y., Wu X., Terauchi M. Pacifici R. T cells potentiate PTH-induced,cortical bone loss through CD40L signaling // Cell Metab. 2008. -Vol.8, № 2. -P.132-145.

218. Garnero P. Nouveaux marqueurs* biochemiques de remodelage osseux et perte osseuse tardive // Presse therm.clim. 1996. - № 1. — P.21-25.

219. General analysis of mathematical models for bone remodeling./ M. Zumsande, D. Stiefs, S. Siegmund* T. Gross // Bone* 2011. - V. 48(4). - P. 910917

220. Gertner J.M. Disorders of bone and mineral metabolism // Chemical Pathology- and the Sick Child / Ed. by B.E. Clayton, J.M. Round. Oxford: Blackwell, 1984.-367 p.

221. Giardino R. Experimental surgical model in osteoporosis study / R.Giardino, M.Fini, G.Giavaresi et al. // Boll.Soc.Ital.Biol.Sper. 1993. - Vol.69, № 7-8. -S.453-460:

222. Gideon A. R. Bone homeostasis // Proc. Nat. Acad: Sci. 1998. - № 23. -P.13361-13362.369? Glass D.A. 2nd; Karsenty G. Canonical' Wnt signaling in osteoblasts is required for osteoclast differentiation // Ann.N.Y.Acad.Sci. 2006. - Vol.1068. -P.117-130.

223. Gooi J.H. Calcitonin impairs the anabolic effect of PTH in young rats and stimulates expression of sclerostin by osteocytes /J.H.Gooi, S.Pompolo, M.A. Kars-dal et al. //Bone. 2010. - Vol.46 (6). - P.1486-1497.

224. Greensmith J.E. Hyperbaric oxygen therapy in extremity trauma // J.Am.Acad.Orthop.Surg. 2004. - Nov-Dec. - Vol. 12, № 6. - P.376-384.

225. Gurevitch O., Slavin S. The hematological etiology of osteoporosis // Med.Hypotheses. 2006. - Vol.67, № 4. - P.729-735.

226. Halleen J.M. Tartrate-resistant acid phosphatase 5b (TRACP 5b) as a marker of bone resorption / J.M.Halleen, S.L.Tiitinen, H.Ylipahkala et al. // Clin.Lab. — 2006. Vol.52, № 9-10. - P:499-509:

227. Hamdy N.A. Osteoprotegerin as a potential therapy for osteoporosis // Curr RheumatoliRep. 2006: -Vol.8, № 1. - P.50-54.

228. Hasselgren P.O., Fischer J.E. The ubiguitin proteasome pathway: review of a novel intracellular mechanism of muscle protein breakdown1 during sepsis and other catabolic conditions // Ann.Surg. - 1997. - Vol.225, № 3. - P.307-316.

229. Hauschka P.V., Damoulis P.D. Functions of nitric oxide* in bone // Bio-chem.Soc.Trans. 1998. - №1. - P.5-7.

230. Hayashi J: Factors inducing severe osteoporosis // Clin.Calcium: — 2001. — Vol.11, № 12. — P.1544-1548.

231. Hazenberg J.G, Taylor D., Lee T.C. The role of osteocytes and bone microstructure in preventing osteoporotic fractures // Osteoporos Int. — 2007. —Vol. 18, № -1. — P.l-8.

232. Hein G.E. Glycation endproducts in osteoporosis—is there a pathophysiologic importance? // Clin.Chim.Acta. 2006: -Vol:371, № 1-21 - P.32-36:

233. Herman B.C. Activation of bone remodeling after fatigue: differential response to linear microcracks and diffuse damage: /B.C. Herman-, L. Cardoso , R.J. Majeska et all. // Bone. 2010. - V.47 (4). - P.766-772

234. Hock J.M. Anabolic action of PTH in the skeleton of animals // J.Musculoscelal Neuron*Interaction. 2001. - Vol.2. - P.33-47.

235. Hoffbauer L.G., Heufeloter A.E. The Role of osteoprotegerin and receptor activator of nuclear factor kB ligand in the pathogenesis and treatment of rheumatoid arthritis // Arthritis Rheum. 2001. - Vol.44. - P:253-259:

236. Hohorst H.J. L-(+)-Lactat Bestimmung mit Lactat- Dehydrogenase und NAD // Methoden der enzymatischen Analyse. Berlin: Academie-Verlag, 1970.- — Bd.II1. S.1425-1429.

237. Huang J.C. PTH differentially regulates expression of RANKL and OPG / J.C.Huang, T.Sakata, L.L.Pfleger et al. // J.Bone Miner Res. 2004. -Vol.19, № 2. -P.235-244.

238. Identification of a human peripheral blood monocyte subset that differentiates into osteoclasts / Y.Komano, T.Nanki, K.Hayashida, K.Taniguchi // Arthritis Res.Ther. 2006. -T.21. - Vol.8, № 5. -P. 152.

239. Induction of< osteoblast aggregation, detachment, and altered integrin expression-by bear serunr/ M.Overstreet, T.Floyd, A.Polotsky, D.S.Hungerford // Osteo-poros Int. 2004'. - Vol.15, № 6.- P.423-433.

240. Interaction of Fas ligand and Fas expressed on osteoclast precursors increases osteoclastogenesis / H.Park, Y.K.Jung, O.'J.Park, Y.J:Lee // J.Immunol. 2005: -T. 1. - Vol. 175, № 11. - P.7193-7201.

241. Interplay between interferon and other cytokine systems in bone metabolism / H.Takayanagi, K.Sato, A.Takaoka, T.Taniguchi // Immunol.Rev. — 2005. -№ 208. -P.181-193.

242. Iqbal J., Zaidi M. Extracellular NAD+ metabolism modulates osteoclastogenesis // Biochem.Biophys.Res.Commun. 2006. -T.20? - Vol.349, № 2. - P.533-539.

243. Jamal S.A. Clinical utility of laboratory testing in women with osteoporosis / S.A.Jamal, R.E.Leiter, A.M.Bayoumi et al. // J.Osteoporosis Int. 2005. -№ 16.1. P.534-540.

244. Jevremovic M. Znacaj merenja kostane gustine i odredivanja biohemijskih: Ref. 10 Kongr. med. biohem. Jugosl., Budva, 13-16 okt., 1996 // Jugosloven. med. Biohem. 1996. - № 4. - P.216.

245. Jones D. Some aspects of mechanosensing in osteoblasts: Abstr. 1 Oth Int. Congr. Biorheol. and 3rd Int. Conf. Clin.Hemorheol., Pesc, July 18-22 1999 // Biorheology. 1999. - № 1-2. - P.29.

246. Kapanen A. Biocompatibility of orthopaedic implants on bone forming cells. Chapter 2'. Review of the literature. Department of Anatomy and" Cell* Biology: University of Oulu, 2000 // World J.Surg. - 2000. - Vol.24. - P.874-877.

247. Karsenty G., Oury F. The Central Regulation of Bone Mass, The First Link between Bone Remodeling and Energy Metabolism // J.Clin. Endocrinology & Metabolism. 2010. - Vol: 95, No. 11. - P. 4795-4801

248. Kavukcuoglu N.B. Effect of osteocalcin deficiency on the nanomechanics and chemistry of mouse bones. /N.B. Kavukcuoglu, P. Patterson-Buckendahl, A.B. Mann // J. Mech Behav Biomed'Mater. 2009. - V.2 (4). - P.348-354

249. Keams A.E., Khosla S., Kosteniuk Pi J. Receptor activator of nuclear Factor kB Ligand and Osteoprotegerin Regulation of Bone Remodeling in Health and Disease // Endocr.Rev. 2008. - Vol.29; № 2. - P.155-192.

250. Kessler C.B., Delany A.M. Increased Notch 1 Expression and Attenuated Stimulatory G Protein Coupling to Adenylyl Cyclase in Osteonectin-null Osteoblasts // Endocrinology. 2007. -Vol.148. - P. 1666-1674.

251. Kim'J.G. Relationship of osteocalcin and matrix Glaprotein gene polymorphisms to serum osteocalcin levels and bone mineral density in postmenopausal Korean women / J.G.Kim, S.Y.Ku, D.O.Lee et al. // Menopause. 2006. -Vol.13, № 3. -P.467-473.

252. Klein-Nulent J., Nijweide P.J. Osteocyte и структура кости // Osteoporosis. -2003.-№ 1. — P.5-10.

253. Юein-Nulend7.,Bakker A. Osteocytes: Mechanosensors of Bone and Orches-trators of Mechanical Adaptation // Clinical Reviews in Bone and Mineral Metabolism. 2007. - V. 5 (4). - P. 195-209.

254. Knapen M.H.J., Eisenwiener H.-G., Vermeer C. Osteocalcimdetection in aging serum and- whole blood: Stability of different osteocalcin fractions // Clin.Chim.Acta: 1996. -№ 2. -P:151-164.

255. Kobayashi Y., Udagawa N. Mechanisms of alveolar bone remodeling // Clin.Calcium. 2007. -Vol.17, № 2. - P.209-216.

256. Komarova SV. Mathematical model of paracrine interactions between osteoclasts and osteoblasts predicts anabolic action of parathyroid hormone on bone// Endocrinology.-2005.-Voll46 (8).-P.3589-3595

257. Komarova S.V. Mathematical model predicts a critical- role for osteoclast autocrine regulation in the control of bone remodeling. / S.V. Komarova; R.J. Smith, S.J. Dixon et al. // Bone.- 2003.-Vol.33. P.:206-215.

258. Komatsubara S., Mashiba Т., Mori S. Bone: fracture: and the healing mechanisms. The effect of; humans parathyroid; hormone oni fracture healing // Clin.Calcium. 2009; -Vol. 19, № 5. - P.660-666.

259. Kostenuik P;J) Osteoprotegerin and RANKL regulate bone resorption, density, geometry and strength// Curr Opin.Pharmacol. 2005. —Vol:5, № 6. - P.618-625;

260. Kostenuik P.J., Shalhoub V. Osteoprotegerin:: a physiological and phamia-cologicalnnhibitor of bone resorption // Gurr.Pharm.Des. — 2001. -Vol.7, № 8. -P.613-635.

261. Kotake: S. Human osteoclastogenic T cells and.human osteoclastology / S. Kotakc, Y.,T. Yago et al. //Arthritis Rheum. -2009. Vol.60 (11). P.3158-3163

262. KramerT; Osteocyte:Wnt/beta-catenimsignaling-is required'for riormal'bone homeostasis / IiKramer, C.Halleux, H'.Kcller et ah. // Mol. Cell. Biol. 2010: -Vol.30(12). -P.3071-3085

263. Kwan T.S. The differential expression of osteoprotegerin (OPG) and receptor activator of nuclear factor kappaB ligand (RANKL) in: human osteoarthritic subchondral bone osteoblasts is an indicator of the metabolic state of these disease cells

264. T.S.Kwan, J.P.Pelletier, D.Lajeunesse et al. // Clin.Exp.Rheumatol. 2008. — Vol.26, № 2.-P.295-304.

265. Kyd P. A. Clinical usefulness of biochemical resorption markers in osteoporosis / P.A.Kyd, K. De Vooght, F.Kerkhoff et al. // Ann.Clin. Biochem. 1999. - № 36. -P.483-491.

266. Lafage-ProustM. Metabolisme phosphocalcique, tissue osseux et contraintes mecaniques // Rev.Rhum. 2000. - № 3. - Р.64-7Г.

267. Leinbrandt A., Penniger J.M. RANK/RANKL: regulators of immune responses and bone physiology // Ann. N.Y.Acad.Sci. 2008. -Vol.1143. - P.123-150

268. Lerner U.H. Bone remodeling in post-menopausal osteoporosis // J.Dent Res. 2006. -Vol.85, № 7. - P.584-595.

269. Lewiecki E.M. RANK ligand inhibition with denosumab for the management of osteoporosis // Expert Opin.Biol.Ther. 2006.- Vol.6, № 10. - P.1041-1050.

270. Li L., Yokota H. Application of Petri Nets in Bone Remodeling //Gene Regulation and Systems Biology.- 2009.-V.3. -P. 105-114'

271. Li A., Xiao J., Xue Y. Остеопороз и оксид азота // Zhongguo bingli shengli' zazhi. 2001. - № 2. - P.174-179.

272. Li Y. B cells and T cells are critical for the preservation of bone homeostasis and attainment of peak bone mass in vivo / Y.Li, G.Toraldo, A.Li et al. // Blood. -2007. -T.l. Vol.109, № 9. - P.3839-3848.

273. Lieben L. Bone and Metabolism: A Complex Crosstalk /L. Lieben, F. Calle-waert, R. Bouillon // Horm. Res. 2009. - Vol.1 (Suppl. 1). - P. 134-138

274. Little D.C. Therapeutic manipulation of the anabolic and catabolic responses in fracture repair // Calcif.Tiss.Int. 2006. - Vol.2, № 2. - P.137-142.

275. Liu C. Effects of cyclic hydraulic pressure on osteocytes / C. Liu, Y. Zhao, W.Y. Cheung, et al. // Bone. 2010. - V.46. - P.1449-1456.

276. Lorenzo J., Choi Y. Osteoimmunology // Immunol. 2005. - Rev. - Vol.208. — P.5-6.

277. Lorenzo J., Horowitz M., Choi Y. Osteoimmunology: interactions ofthe bone and immune system // Endocr.Rev. 2008. -Vol.29, № 4. -P.403-440.

278. Lorenzo'J.A. Mice lacking the type I interleukin-1' receptor do not lose bone mass after ovariectomy / J.A.Lorenzo, A.Naprta, Y.Rao et al. // Endocrinology. -1998. № 6. - P.3022-3025.

279. Lyritis G.P., Boscainos P.J. Calcitonin effects on cartilage and fracture healing // J.Muskuloskelet.Neur.ini. 2001. - Vol.2, № 2. - P. 137-142.

280. Manolagas S.C.; Weisntein R. S.; Jilka R. L.;Parfitt A.M. Parathyroid hormone and corticosteroid-induced osteoporosis //Lancet. 1998., № 9144 - P. 19401

281. Manolagas S.C., Bellido T., Jilka R:L. New insights into the cellular, biochemical, and molecular basis of postmenopausal and senile osteoporosis: roles of IL-6 and gpl30 // Int.J.Immunopharmacol. 1995- Vol.17, № 2. -P.109-116.

282. Manolagos S.C. Immunomodulating properties of 125 dihydroxyvitamin D3 / S.C.Manolagos et al. // Kidney Int. 1995. - Vol.38. - Supph.29. - P.9-16.

283. Martin T.J., Seeman E. New mechanisms and targets in the treatment of bone fragility // Clin.Sci.(Lond). 2007.- Vol.112, № 2. - P.77-91.

284. Martin T.J., Seeman E. Bone remodelling: its local regulation and the emergence of bone fragility // Best Pract.Res.Clin.Endocrinol.Metab. 2008. -Vol.22, № 5. — P.701-722.

285. Mathematical!model forbone remodeling / S.J:.Hazelwood, J.J. Rodrigo, R. B.Martin, M.M. Rashid // American Society of Mechanical Engineers Bioengineering Division Publication BED; 1999 . - Vol. 43.- P 169

286. Mensenkamp A.R.,. I-Ioenderop J.G., Bindels R.J. TRJRV5; the gateway to Ca2+ homeostasis // Handb.Exp.Pharmacol; 2007. - № 179.- P.207-220.

287. Metabolic and histologic changes in the ischemic muscles of replanted dog legs / I.Muramatsu, N.Takahata, M.Usui, S.Ishii // Clin.Orthopead. 1985. -Vol: 196. — P.292-299.

288. Miki Т., Naka H. Metabolic markers of bone-post-guideline // Nippon Rin-sho. 2006. - Vol.64, № 9. - P. 1625-1631.

289. Mingxing Peng. Иммобилизационные остеопорозы и переломы у детей / Mingxing Peng, Liu Lijun, Sun Ke et al. // Huaxi yike daxue xuebao. 2000. - № 3.-P.411-426.

290. Morrison M.S. ATP is a potent stimulator of the activation and formation of rodent osteoclasts / M.S.Morrison, L.Turin, B.F.King et al. // J.Physiol. 1998. -№ 2. — P.495-500.

291. Munzenberg K.J., Nienhaus K., Reischauer H. Die innere Architektur des proximalen Femurendes als Mab des altersabhangigen Knochen-substanzverlustes // Z.Orthop. 1973. -№111.- S.874-880.

292. Murray T.M-: Mechanisms of bone loss: Pap.Symp: "Options Manag. Osteoporosis", Toronto, May 27, 1996 // J.Rheumatol. 1996. - P.6-10.

293. Muson D.J. Глутаматная, передача сигналов и ее потенциальное заявле-ние{применение} к разработке ткани кости // J.GelltEur. 2004. - Vol*.7. - P. 1225.

294. Nakahama К. Cellular communications in bone homeostasis and repair // Cell Moll Life Sci. 2010. - Vob 67 (23). - P.4001-4009.

295. NakamichiY., Udagawa N. Role of OPG in regulation of bone remodeling // Clin.Calciurm 2006. - VoLl6, № 9. - P.1463-1468.

296. Nakatsuka K., Nishizawa Y. Biochemical markers for bone metabolism in severe osteoporosis // Clin.Calcium. 2001. - Vobl 1, № 12. - P. 1572-1577.

297. Negative regulation of osteoclastogenesis by ectodomain shedding of receptor activator of NF-kappaB ligand / A.Hikita; LYana, H.Wakeyama, M.Nakamura // J.Biol.Chem. -2006. Т. 1. - Vol.281, № 48. -P.36846-36855.

298. Nishimurab Y. Bone turnover and calcium metabolism during 20 days bed red rest in young healthy males and females / Y.Nishimurab, H.Fukuoka, M.Kiriyama et al. // Acta Physiol.Scand. 1994. - Vol.616. - Suppl. - P.27-35.

299. Nuntapornsak A. Changes in the mRNA expression of osteoblast-related genes in response to beta(3)-adrenergic agonist in UMR106 cells / A.Nuntapornsak, K.Wongdee, J.Thongbunchoo et al. // Cell.Biochem. Funct. 2010. - Vol.28, № 1. -P.45-51.

300. O'Gradaigh D., Compston J.E. T-cell involvement in osteoclast'biology: implications for rheumatoid bone erosion // Rheumatology. 2004. - Vol.43. - P.T22-130.

301. Obermayer-Pietsch B. Genetic background of osteoporosis / BlObermayer-Pietsch, C.Chararas, S.Kotschan et at. J/ Acta Med.Austr. 2000. - № 1. - P.18-22.

302. Oh J.K. Treatment of femoral and- tibial diaphyseal nonunions using reamed intramedullary-nailingfwithout bone graft / J:K.Oh, J:H.Bae, C.W.Oh et al. // Injury. 2008. - Vol.39, № 8. - P.952-959.

303. Okada V. Impaired osteoclast-formation in bone'marrow cultures of Fgf2 null mice in response to parathyroid*hormone / Y.Okada, A.Montero, X.Zhang et al. // J:Biol.Chem. 2003. - T.6. - Vol.278; № 23. - PI21258-21266.

304. Parathyroid hormone and corticosteroid-induced" osteoporosis / S.C.Manolagas, R.S:Weisntein, R.L.Jilka et al. // Lancet. 1998. - №.352 (9144). -P.1940:

305. Parathyroid hormone assays-evolutions in the care of dialysis patients / H.H.Malluche, H.W.Mawat, D.Trueba, M.C.Monier-Faugere // Clin.Nevrology. -2006. Vol.59, № 5. - P.313-318.

306. Parathyroid hormone induces sequential c-fos expression in bone cells in vivo: A model for intercellular communication in bone / K.Lee, J.D.Deeds, S.Chiba, G.V.Segre // Miner.Electrolyte Metab. 1995. - № 1-3. - P.120-122.

307. Parfitt A.M. Bone remodeling in type 1 osteoporosis (letter) // J.Bone Miner. Res. 1991. - Vol.6. - P.95-97.

308. Parhami F., Garfinkel A., Demer L.L. Role of lipids in osteoporosis // Arteriosclerosis, Thrombosis and Vasc.Biol. 2000. -№'11.- P.2346-2348.

309. Pastoris O. Modifications by chronic intermittent hypoxia and drug treatment onf skeletal muscle metabolism / O.Pastoris, Mr.Dossena, P. Foppa et al. //Neuro-chem. Res. 1995. - Vol. 20, № 2. - P. 143-150.

310. P. Patterson-Buckendahl. Osteocalcin is a stress-responsive neuropeptide-//Endocr Regull Endocr Regul. 2011. - V. 45 (2). - P. 99-110

311. Phosphate deposition during and after hypokinesia in phosphate supplemented and unsupplemented rats / V.J.Kakuris, C.B.Tsiamis, V.A.Deogenov,

312. J.G.Peskaratos // Physiol.Chem.Phys.Med.NMR. 2004. - Vol.36, № 2. - P. 109i121.

313. Pierre: Mv, de: Vernejoull M.-Ch. Biologie cellulaire del'osteoporose // Med;Ther. 2000. - № 3. - P.204-211.

314. Pommer. G. Uber. Osteoporose, ihren Ursprung und ihre differentiäldiagnostische Bedeutung // Arch.KlimGhirurgie. 1925. - № 136; -P.l-68.

315. Price P.A. Vitamin K-dependent bone proteins: in D:V.Cohn, TJ.Martin, P.J.Meunier (eds.). Gälciüm regulatibn and'bbnermetabolism: basic:andlclinicaltas-: pects: — Amsterdam: Elsevier Science, 1987. P!419-426;

316. Pronchenko I.A. Biochemical markers of bone metabolism and bone- tissue losses: after allotransplantation of the cadaveric kidney: a cross-sectional / I.A.Pronchenko, V.P.Buzulina, N.A.Tomolina. et al. // Klin.Lab.Diagn. 2005. -№ 11.-P.3-8.

317. Raisz L. Pathogenesis ofi osteoporosis: concepts, conflicts, and prospects // J.Clin.Invest. - 2005. - Vol.115, № 12. - P.3318-3325.

318. Raisz E.G. The hunting of. the snark: the elusive calcium receptors // J.Clin.Invest. 2003. -№111.- P.945-947.

319. Raistoni S ;H:, de Grombrugghe^B; Genetic regulation of bone mass and susceptibility to osteoporosis // Genes Dev. 2006. - Vol:20^ № 18. - P.2492-2506.

320. RANKL-RANK signaling in osteoclästogenesis and; bone disease / T.Wada, T.Nakäshima, N.Hiroshi, J.M.Penninger // Trends Mol.Med; 2006. - Vol.12, № 1. -P. 17-25.

321. Reddy S.V. Interleukin antisence deoxyoligonucleotides inhibit bone re-sorbtion by giant cells from human giant cell tumors of bone / S.V.Reddy et al. // J. Bone Miner.Res. - 1994. - № 9. - P.753-757.

322. Repeated immobilization stress reduces rat vertebral bone growth and osteocalcin. / P. Patterson-Buckendahl, M. Rusnak, K. Fukuhara, R. Kvetnansky //Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2001. - V.280 (1). - R.79-86

323. Repair of tibial nonunions and bone defects with the Taylor Spatial Frame / S.RlRozbruch, J.S.Pugsley, A.T.Fragomen, S.Ilizarov // J.Orthop. Trauma. 2008. — Vol.22, № 2.-P.88-95.

324. Rhee Y. PTH receptor signaling in osteocytes governs periosteal bone formation and intracortical remodeling / Y. Rhee, M.R. Allen, K. Condon et al. //J. Bone Miner Res.- 2011. V. 26 (5). - P. 1035-1046.

325. Rifas L., Weitzmann M.N. A novel T cell cytokine, secreted osteoclastogenic factor of activated T cells, induces osteoclast formation in a RANKL-independent manner // Arthritis Rheum. 2009. - Vol.60 (11). - P.3324-3335.

326. Riggs B.L., Khosla S., Melton LJ3rd. Sex steroids and.the construction and conservation of the adult skeleton // Endocr.Rev. 2002. - Vol.23(3). - P.279-302.

327. Riis B.J. The role of bone turnover in the pathophysiology of osteoporosis: 6th Novo Nordisk Int. Symp. "Postmenopausal Women: HRT today and into future", Copenhagen, 29-30 Sept., 1995 //Brit J.Obstet. Gynaecol. 1996. -P.9-14.

328. Robling A.G. Mechanical stimulation of bone in vivo reduces osteocyte expression of Sost/sclerostin / A.C. Robling, P J. Niziolek, L.A. Baldridge et al. // J. Biol. Chem. 2008. - V. 283. - P.5866-5875

329. Robling A.G., Castillo A.B., Turner C.H. Biomechanical and molecular regulation of bone remodeling // Annual Review of Biomedical Engineering 2006 -Vol.8.-P. 455-498.

330. Rochefort G.Y. Osteocyte: the unrecognized side of bone tissue /G. Y. Rochefort, S. Pallu, C.L. Benhamou // Osteoporosis Int. 2010. - V. 21 (9). - P. 1457-1469.

331. Rude R. R., Gruber H.E. Magnesium deficiency and'osteoporosis: animal and . humen observation // J. Nutr. Biochem.- 2004. Vol. 15, № 12. - P.710-716.

332. Rude R.R. Magnesium deficience: a possible risk factor for osteoporosis // Nutritional aspects of Osteoporosis. Eds. Pi Burckhard. B-Dowson-Hughcs, R.P.Heaney. - Academic Press San Diego, San Francisco, New York, Boston, London,-2001.-P.263-271.

333. Saotome K., Hoshino T., Harada T. Bone resorption under the: influence of parathyroid? hormone in vitro- II. Nippon; Seikeigeka Gakkai Zasshi. — 1982. -Vol;56. P.777-789.

334. Sato T. Immobilizations decreases duodenal! calcium absorption through a 1,25-dihydroxyvitamin D-dependent pathway / T.Sato, H. Yamamoto;.N;Sawada et al.; // JiBone Miner.Metab. 2006: - Vol:24, №4. - P1291-2991

335. Schwab P., Scalapino K. Exercise for Bone Health: Rationale and Prescription: Bone Adaptation to Mechanical Load // Curr Opin Rheumatol-2011. -V.23(2). P.137-141

336. Scutt A., Williamson E.M. Cannabinoids Stimulate Fibroblastic Colony Formation by Bone Marrow Cells Indirectly via CB2 Receptors // Calcif.Tissue Int.2007. Vol.80, № 1. - P.50-59.

337. Seeman E. Physiology of aging. Invited Review: Pathogenesis of osteoporosis // J.Appl.Physiol. 2003. -Vol.95, № 5. - P.2142-21'51.

338. Seibel M.J. Approche du laboratoire face a l'osteoporose et aux pathologies osseuses metaboliques // Feuill.bioll 1996. - № 210. - P.31 -34.

339. Shearer M.J. The roles of vitamins D and K in bone health and osteoporosis prevention: Pap.Symp. "Nutr.Aspects Bone" during Annu. Meet.Scott.Sec.Nutr.Soc., Glasgow, 7-8<Apr., 1997 // Proc.Nutr.Soc. 1997. - № 3. — P.915-937.

340. Shinohara M., Takayanagi Hi Novel osteoclast signaling mechanisms // Curr.Osteoporos Rep. 2007. - Vol.5, № 2. - P.67-72.

341. Shoji S. Creatine kinase //Nippon Rinsho. 1995. -Vol.53(5).-P.l 136-1140.

342. Sims N.A., Gooi J.H. Bone remodeling: Multiple cellular interactions required for coupling of bone formation and resorption // Semin.Cell.Dev.Biol.2008. Vol. 19, № 5. - P.444-451.

343. Sitara D., Aliprantis A.O. Transcriptional regulation of bone and joint remodeling by NFAT // Immunol Rev.- 2010. Vol. 233(1). - P.286-300

344. Skeletal unloading inhibits the in vitro proliferation and differentiation of rat osteoprogenitor cells / P.J.Kosteniuk, B.P.Halloran, E.R.Morey-Holton, D.D.Bikle // Am.J.Physiol. 1997. — № 6. -P.E1133-E1139:

345. Sorva A. Serum ionized calcium, intact PTH and novel markers of boneturn-over in bedridden elderly patients / A.Sorva, M.Valimaki, J.Risteli et al. // EurJ.Clin.Invest. 1994. -№ 12. -P.806-812.

346. Spatial distribution of Bax and Bcl-2 in osteocytes after bone fatigue: complementary roles in bone remodeling regulation / O.Verborgt, N.A.Tatton, RJ.Majeska, M.B.Schaffler // J.Bone Miner.Res. 2002. -Vol.l7( 5). -P.907-914.

347. Spencer G.J., Genever P:G. Long-term potentiation in. bone—a role for glutamate in strain-induced cellular memory?'// Cell Biol; 2003. -T.3 r.-Vol:4(l).- P:9:

348. Spohn G. Protection- against osteoporosis by active immunization' with TRANGE/RANKL displayed on virus-like particles- / G.Spohn, K.Schwarz, P!Maurer et al. // J.Immunol. 2005. -T.l. - Vol.175, № 9. -P.6211-6218.

349. Stejskal D: Osteoprotegerin, RANK, RANKL / D.Stejskal, J.Bartek, R.Pastorkova et al. // Biomed.Pap.Med.Fac.Univ.: Palacky Olomouc. Gzech.Repub. 2001. -Vol.145, № 2. - P.61-64.

350. Sugawara Y. Necessity of enzymatic activity of alkaline phosphatase for mineralization of osteoblastic cells / Y.Sugawara, K.Suzuki, M.Koshikawa et al. // Japan J.Pharmacol. 2002. - Vol.88, № 3. - P.262-269.

351. Sugiuma T. Involvement of interleukin-6 and prostaglandin E2 in periarticular osteoporosis of postmenopausal women with rheumatoid arthritis // J.Bone Min-•eral.Metab. -2001. Vol.19. -P.89-96.

352. Takayanagi H: Mechanistic insight into osteoclast differentiation in osteoim-munology // J.Mol.Med; -2005. — Vol.83, № 3. -P. 170-179.

353. Tashjian A.IL, Chabner B.A. Commentary on clinical safety of recombinant human parathyreoid hormone 1-34 in the treatment of osteoporosis in men and postmenopausal womenr// JIBone Miner.Res. 2002. - Vol. 17. -P. 1151-1161.

354. Teitelbaum S.L. Cellular and molecular mechanisms of bone resorption / S.L.Teitelbaum, Cao Xu, Mimura Hirohide et al. // Miner.Electrol.Metab. 1995. — № 1-3. — P.193-196:

355. The anabolic effects of parathyreoid hormone / M.R.Rubin, F.Gosman, R.Lindsay, J.P.Bilezikian // J.Osteoporosis Int. 2002. - Vol.13. - P.267-277.

356. Thomas G.P., Baker S.U.K., Eisman J.A. Changing RANKL/OPG mRNA expression in differentiating murine osteoclasts // J.Endocrinol. — 2001. — Vol.170. -P.451-460.

357. Uno J.K. The role of tumor necrosis factor alpha in down-regulation of osteoblast Phex gene expression in experimental murine colitis / J.K.Uno, O.I.Kolek, E.R.Hines et al. // Gastroenterology. 2006. -Vol.131 (2). - P.497-509.

358. Wagenmakers A.J. Aminoacid metabolism muscularfatigue and muscle wasting speculations on4 adaptations at high altitude // Int.J.Sports.Med.r 1992. -Vol.13.-Suppl.l.-S.l 10-113.

359. Wagner E.F., Eferl R.Fos. AP-1 proteins in bone and the immune system // Immunol .Rev. 2005. - № 208. - P.126-140.

360. Walsh G.A. Cytokine expression by cultured osteoblasts from-patients with-osteoporotic fractures / C.A.Walsh, M.A.Birch, W.D.Fraser et al. // Int.J.Exp.Pathol. 2000. - № 2. - P. 159-163.

361. Wang Y., Qing-Hua Qin. Parametric study of control mechanism of cortical bone remodeling under mechanical stimulus //Acta'Mechanica Sinica . 2010. - V. 36. -P.37-44

362. Wang C. Bone remodelling modelf including mechanism of damage and repair / C.Wang, G.Zhang; H.Wu et al. // J.Bone Miner.Res. 2009:- Vol.26 (4). -P.771-779.

363. Wang Y. Role of IGF-I signaling in regulating osteoclastogenesis / Y.Wang, S.Nishida, H.Z.Elalieh et al. // J.Bone Miner.Res. 2006. - Vol.21 (9). - P.1350-1358.

364. Wang Y.H. Polymorphonuclear leukocyte-mediated bone degradation and influence of blood mononuclear cells on the mouse calvarialmodel / Y.H;Wang; R.A.Allardyce, G.RlRogers et al. // Chin.Med.J. 1996.- № 9. - P.711-719:

365. Weber S.U. Hyperbaric bxygem induces- apoptosis via a mitochondrial mechanism / S.U.Weber, A.Koch, J.Kankeleit ct ali.l// Apoptosis.-2009.-Vol. 14 (1). -P.97-107.

366. Webster D;, MiillerR. In silico models of bone remodeling from macro to nano-from organ to cell // Wiley Interdiscip Rev SystiBioKMedl-20BET-YolB(2): -P; 241-251.

367. Wei S., Dai X.M., Stanley E.R. Transgenic expression of CSF-1 in CSF-1 receptor-expressing cells leads, to macrophage activation, osteoporosis,, and early death // J;Leukoc.Biol. 2006. -Vol.80, № 6. -P. 1445-1453:

368. S. J. Wimalawansa Nitric oxide and bone // Annals of the New York Academy of Sciences; 2010: -Vol. 1192.-P: 391-403

369. Wimalawansa S. J. Prevention of corticosteroid-induced bone loss with nitric oxide donor nitroglycerin in male rats / Wimalawansa S. J., Chapa M. T., Yallam-palli et al: // Bone. 1997. - Vol. 21. - P. 275-280.

370. Wink C. S., Felts, W. J. (1980). Effects of castration on the bone structure of male rats: A model of osteoporosis // Galcif. Tissue Int. 1980:- № 32. - P. 77-82.

371. Woitge H.W., Seibel M.J!, Ziegler R. Comparison of total' and bone-specific alkaline phosphatase in patients with nonskeletal disorders or metabolic bone diseases // Clin.Chem. 1996. - № 11. - P. 1796-1804:

372. Wronski T.J., YemC-F. The ovariectomized rat as. an animal model for postmenopausal bone loss // Cells-Mater. 1992. - Suppl. 1. - P.69-74

373. Wu C.C. Exchange nailing for aseptic nonunion of femoral shaft:.a retrospective cohort study- for effect of reaming size // J.Trauma. 2007. - Vol.63, № 4. — P.859-865.

374. Wu F., Orr- Walker B., ReidT.R: Clinical limitation of bone-specific alkaline phosphatase assays // Ann.Clin.Biochem. — 2001. № 5. - P.572.

375. Zdzisinska B, Kandefer-Szerszen M. The role of RANK/RANKL and OPG in multiple myeloma // Postepy Hig Med Dosw . 2006. - Vol.60. - P.471-482.

376. Zerath E. Effects of bion 11 14-day space flight on monkey iliac bone J. / E.Zerath, H.Xavier, C.Andre et al.: Pap.Int.Symposium on Nonhuman Primate Res.Space, Moscow, June 22-26, 1998 // J.Grav.Physiol. 2000: -№ 1.- P.155-156.

377. Zhao W. The role of T cells in osteoporosis, an update / W.Zhao, Y.Liu, C.M.Cahill et al. // Int J.Clin.Exp.Pathol. 2009. - T.20: - Vol.2, (6).- P.544-552.

378. Zorbas Y.G. Phosphate determination during hypokinesia and ambulation in establishing phosphate changes in trained and untrained* subjects / Y.G.Zorbas, V.L.Yarullin, S.D.Denogradov et al. // Biol.Trace Elenr.Res. 2002. - Vol.88 (2). -P.125-138.

379. Zwolf histobioptische these zur pathogeneses der primary und sekun daren OsteoporosesV R.Burkhardt, R.Bartl, K.Demmler, G.Kettner // Klein.Wechenschr. -1989. -Vol.59.-P.5-18.

380. Показатели статистики факторов, не вошедших в модель

381. Фактор/ показатель ШПкэ X Рагйаі Б Ш еггіег р-іеуеі Тоїег 1-Тоїегстатистики « (Я-Эдг.)

382. Фактор 3 0,084523' 0,976389 1,54763 0,216705 0,984419 0,015581

383. Фактор 6 0,081790 0,944812 3,73835 0,026430 0,958787 0,041213

384. Фактор 7 0,082794 0,956413 2,91668 0,057719 0,971364 0,028636

385. Фактор8 0,081860 0,945620 3,68049 . 0,027916 0,966974 . 0,033026;

386. Фактор 9 0,083879 0,968953 2,05067 0,132855: . 0,981657 0,018344

387. Фактор 10 0,085490 0,987559 0,80626 0,448781 0,992323 0,007677

388. Фактор 11 0,074509 0,860704 10,35770 0,000068 0,898590 0,101410

389. Фактор 1-3; 0,083026 0,959092 2,72977 0,069034 0,976257 0,023743,

390. Фактор14 0,085516: 0,987857 0,78670 0,457533: 0,990573 0,009427

391. Фактор 15 0,081492 0,941374 3,98572 0,020931 . 0,958991 0,041009

392. Фактор 16 0,082745 0,955846 2,95643 0,055566 0,967297 0,032703

393. Фактор 17 0,079771 0,921494 5,45245 0,005340. 0,949418: 0,050582

394. Фактор 18 0,085790 0,991019 0,57998 • 0,561376 0,994347 0,005653

395. Фактор 19 0,082575 0,953880 3;09440 0,048708: 0,964166: 0,035834

396. Фактор 20 0,085916 0,992475 0,48522 0,616690 . 0,995305 0,004696

397. Фактор21 0,082375 0,951573 3,25709 0,041714' 0,971173 0,028827

398. Фактор 22 0,078543 0,907306г 6,53852 0,001978 0,934398 0,065602

399. Фактор 23 0,084277 0,973549: 1,73888 0,179842 0,981217 0,018783

400. Фактор 24 0,086488; 0,999091 0,05824' 0,943450! 0,999453; 0,000547

401. Фактор 25 0,080901 0,934551. 4,48208 0,013140 0,957959 0,042041

402. Фактор 26 0,082429 0,95219* 3,21317 0,043495г 0,961771 0,038229

403. Фактор 27 0,083750 0,967459 2,15264 0,120364 0,974858. 0,025142

404. Фактор 28 0,084172 0,972329- 1,82136 0,165973 0,977786? 0,022214:

405. Фактор 29 0,084695. 0,978371 1,41486: 0,2467331 0,982820 0,017180

406. Фактор 30 0,084039- 0,970796- 1,92532 0,150030 0,982808~ 0,017192

407. Фактор 31 0,082705 0,955385 2,98868 0,053880 0,966287 0,033713

408. Фактор 32 0,083548 0,965126 2,31257 0,103130 0,973271 0,026729

409. Фактор 33 0,086207 0,995834 0,26771 0,765555: 0,996743: 0,003257

410. Фактор 34 0,085142 0,983533; 1,07155: 0,345529 0,986891 0,013109:

411. Фактор 35 0,082834 0,956875 2,88436 0,059531 ' 0,965375 0,034625

412. Фактор 36> 0,086175: 0,995475 0,29095. 0,748045 0,997415 0,002585

413. Фактор 37 0,083969 0,969990 1,98007. .0,142267 0,982235 0,017765

414. Фактор 38 0,083099 0,959940 2,67082 0,073051 0,970832 0,029168

415. Фактор 39 0,080766 0,932991 4,59661 0,011807 0,959230 0,040770

416. Фактор 40 0,086434 0,998459. 0,09877 0,906024 0,998771 0,001229

417. Фактор 41 0,085402 0,986542 0,87304 0,420154 0,990116 0І009884

418. Фактор 42" 0,081679 0,943530 ■3,83041 0,024230 0,956956 0,043044

419. Фактор 43 0,082388 ' 0,951726 3,24623 0,042147 0,966316 0,033684

420. Фактор 44 0,085253 0,984819 0,98660 0,375661 0,988253 0,011747

Информация о работе

Трифонова, Елена Борисовна
доктора биологических наук
Екатеринбург, 2010
ВАК 03.03.01

Диссертация

Молекулярно-клеточные механизмы регуляции костного ремоделирования при иммобилизации - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы