Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микробиологическое обоснование радиационной стерилизации и "пастеризации" лекарственных средств

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Щеглова, Светлана Григорьевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Радиационная чувствительность микроорганизмов

1.2. Влияние различных факторов на радиационную чувствительность микроорганизмов

1.2.1. Вода и радиопротекторы; температура среды.

1.2.2. Виды излучения и режим облучения.'.

1.3. Радиационная стерилизация лекарственных средств

1.4. Выбор стерилизующих доз ионизирующих излучений

1.5. Использование ионизирующих излучений для снижения об-семененностж.лшзнеспособными микроорганизмами нестерильных. лекарственных средств и вспомогательных веществ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЕ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ '.

2.1. Определение Д-д для водных взвесей микроорганизмов

2.2. Определение Д^ для высушенных культур микроорганизмов.

2.3. Определение бактерицидных доз ионизирующих излучений .3?

2.4. Контроль стерильности препаратов

2.5. Определение микробной загрязненности лекарственного сырья

2.6. Определение факторов радиационной инактивации микроорганизмов, обсеменяющих лекарственное сырье

ГЛАЗА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Влияние воды, сульфитов, а также кордиамина и 20% раствора кофеина-бензоата натрия на радиационную чувствительность микроорганизмов

3.2. Влияние температуры среды на бактерицидное действие гамма-излучения и радиационную чувствительность микроорганизмов в стабилизированных препаратах кордиамина и 20р раствора кофеина-бензоата натрия.

3.3. Особенности бактерицидного действия гамма-излучения н ускоренных электронов при различных режимах облучения микроорганизмов .■.

3.4. Выбор и оценка стерилизующих доз гамма-излучения для инъекционных препаратов кордиамина и 20/з раствора кофеинабензоата натрия.

3.5. Выбор "пастеризующих" доз гамма-излучения для лекарственного сырья.■

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ..

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Микробиологическое обоснование радиационной стерилизации и "пастеризации" лекарственных средств"

Первые попытки применения радиационного метода для стерилизации изделий медицинского назначения, в том числе, лекарственного сырья, были сделаны ещё в 40-х годах. Однако несмотря .на выявившиеся принципиальные возможности промышленного использования ионизирующих излучений для стерилизации, этот метод получил реализацию лишь в конце 50-х годов после создания мощных радиационных установок.

Среди изделий, стерилизуемых радиационным способом, ставшим для них промышленной технологией, значительное место занимают инструментарий и перевязочные средства, а также изделия из полимерных и комбинированных материалов (системы службы крови, шприцы однократного использования, пласшатные мешки для заготовки и хранения крови, сердечные клапана, шовный материал, катетеры и пр.). Кроме того, радиационный метод оказался пригодным для стерилизации .ряда лекарственных средств, в том числе, антибиотиков, вакцин и ампулированных лекарственных средств (физиологический раствор, дистиллированная вода, раствор глюкозы и т.д.).

Радиационный метод стерилизации обладает рядом преимуществ перед обычным способом тепловой или химической стерилизации. Главные из них состоят в том, что он применим для обработки термолабильных веществ, а также веществ, упакованных в тару из бумаги, стекла и пластмасс. Это позволит осуществлять технологически непрерывный выпуск расфасованной медицинской продукции.

В отличие от изделий медицинского назначения, радиационная стерилизация лекарственных средств находится в основном на стадии опытных работ. В настоящее время промышленность выпускает лишь несколько радиационно стерилизованных средств, в том числе, радиофармацевтические препараты, глазные мази и полимерные пленки, содержащие неомицин, сульфаниламиды и пилокарпин. Ограничения при использовании метода радиационной стерилизации для лекарственных препаратов связаны с радиолизом,.вызывающим их изменение и разрушение .(Ф. Антоне, Г.Козинец, Г.Котелеш, 1966). Отсюда вытекают две задачи, одна из которых состоит в снижении процессов радиолиза, другая - в поиске условий, позволяющих снизить стерилизующие дозы излучений.

Препараты кордиамин и 20% раствор кофеина-бензоата натрия, рассматриваемые нами в плане их возможной радиационной стерилизации, служат для оказания неотложной помощи и стерилизуются в настоящее время термическим способом. Радиационный метод стерилизации позволил бы выпускать эти препараты в удобных для применения шприц-ампулах и шприц-тюбиках из полимерных материалов.

В отсутствие стабилизирующих добавок препараты после облучения становились некондиционными. В Институте биофизики Минздрава СССР в 9-10 пятилетках был проведен комплекс физико-химических, фармакологических и других исследований, в результате которых впервые были получены препараты кордиамина, стабилизированного 0,67% раствором сульфита и метабисульфита натрия, и 20% раствора кофеина-бензоата натрия,' стабилизированного 0,45% раствором метабисульфита натрия. Используемые для "защиты" и стабилизации сульфитные добавки дали возможность получить препараты, выдерживающие облучение до 25 кГр и удовлетворяюще при этом по своим физико-химическим характеристикам требования, предъявляемые к препаратам Государственной фармакопеей 10-го издания. Проверка препаратов на специфическую фармакологическую активность и безвредность '(изучение токсичности, аллергизирутощих свойств, местного раздражающего действия и т.д.) показала возможность применения стерилизованных растворов кордиамина и кофеина-бензоата натрия в медицине (0*'Л.Григорьева и соавт., 1978, 1978а). Поскольку указанные препараты стерилизовались радиационным способом впервые, потребовалось микробиологическое обосно-„ вание стерилизующих доз, которые позволили бы, с одной стороны, получить надежный стеришзующий эффект, с другой, были бы минимальными-по величине и максимально "щадящими" для препаратов.

Помимо радиационной стерилизации инъекционных лекарственных средств, в настоящее время большое внимание уделяется микробной чистоте лекарственных средств, выпускаемых в нестерильном виде. По данным ряда советских и зарубежных авторов, в последние годы -увеличилось количество заболеваний, вызываемых условно-патогенной микрофлорой. Возросла частота стафилококкового сепсиса, участились заболевания, возбудителями которых являются кишечная палочка, грибы и другие микроорганизмы (И,8. Березовская, 1976). В 1963 г. в Швеции имела место эпидемическая вспышка сальмонеллеза, возникшая в-результате использования загрязненного препарата ( АгаЬгия% , 1975). Там же описан случай с глазными мазями, контшлинированными большим количеством микробов, которые вызвали массовые глазные инфекции. В связи с этим, Всемирная организация здравоохранения приняла рекомендации о введении максимально допустимого уровня микробной загрязненности лекарств, выпускаемых в нестерильнов виде, а Министерство здравоохранения СССР и Министерство медицинской промышленности издали приказ №378/168. от 15 апреля 1976 г. о проведении работ по радиационной "пастеризации".

Настоящая работа, была проведена с целью получения сведений о радиационной чувствительности микроорганизмов, обсеменяющих лекарственные препараты и сырье, и подготовки на основании этих сведений рекомендаций по дозам излучений, необходимых для стерилизации и "пастеризации" этих средств'.

Задачи исследования сводились к следующему:

1. Определить качественный состав и радиационную чувствительность микрофлоры, выделенной на производстве лекарственных средств.

2. Изучить влияние интересующих нас факторов среды (препараты, стабилизаторы, вода, температура) на радиационную чувствительность микроорганизмов.

3. Исследовать злишпе вида излучения и режимов облучения на бактерхщидное действие стерилизующего агента;

Осуществить выбор стерилизующих доз для стабилизированных препаратов кордиамина и кофеина-бекзоата натрия;

0. Установить влияние факторов среди и режимов облучения на величины стерилизующих доз;

С. Обосновать выбор "пастеризующих"; доз для лекарственного сырья; 7. Провести апробацыо выбранных стерилизующих и "пастеризующих15 доз на естественно контаминированных лекарственных препаратах и сырье.

Научная новизна исследования состоит в том, что на основании изучения радиационной чувствительности мпкроорганизмов, обсеменяющих лекарственные средства на производстве, и факторов, модифицирующих эту чувствительность, впервые научно обоснованы стерилизующие дозы гаша-излучения для стабилизированных лекарственных препа ратов, которые оказались значительно ниже доз, принятых в практике радиационной стерилизации. Также впервые* однотипных экспериментальны]! условия:с изучена зависимость бактерщидного действия ускоренных электронов от мощности дозы, среды облучения, вида микроорганизмов и способов формирования пучка электронов. Это позволит выбрать наиболее эффективный решал при проведении радиационной стерилизации на ускорителях электронов. Кроме того,на основании изучения радиочувствительности "диких" штаммов микро-организмов в "сухой" среде впервые научно обоснованы ."пастеризующие" дозмдля лекарственного сырья, которые позволят выбирать наиболее эффективные режимы "пастеризации" в зависимости от инициальной контаминации и количества радиоустойчивых штаммов в препаратах. На защиту выносятся следующие положения:

1.Возможно использование гамма-излучения в' дозах 10-15 кГр для стерилизации стабпжзцрованных препаратов кордиамина и 20% растворе кофеина-бензоата натрия.

2. Для стерилизации лекарственных средств и сырья, представляющих собой "сухие" объекты, возможно пршленение^ускоренных электронов с низкой импульсной мощностью дозы (10'*-10°Гр/с), близких по эффективности к гамма-излучению.

3. Возможно использование небольших доз гамма-излучения (2,5-10 кГ]: для радиационной "пастеризации" лекарственного сырья.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Щеглова, Светлана Григорьевна

Заключение

Как уже отмечалось, в настоящее время нет единого подхода к выбору стерилизующих доз. Имеющиеся в литературе сведения по этому вопросу разноречивы, однако, нам представляется наиболее правильным выбор доз на основе естественной контаминации продукции с учетом как факторов среды, так и режимов облучения (т.е. тех факторов, которые будут иметь место при проведении радиационной стерилизации в промышленных условиях).

Успешно развивается промышленная стерилизация лекарственных средств. Расширяется номенклатура медицинских препаратов, которые из-за чувствительности к излучениям подчас требуют более низких стерилизующих доз. Как следует из данных литературы, на радиационную чувствительность микроорганизимов оказывает большое влияние как факторы среды (вода, химические вещества, температура и т.д.), так и режим облучения (мощность дозы и вид излучения). Однако, д<?сих пор не изучалось влияние указанных факторов в связи с выбором стерилизующих доз вообще, и в частности, для стабилизированных препаратов кордиамина и кофеина-бензоата натрия. Поэтому изучение их будет представлять определенный интерес, главным образок с точки зрения возможности снижения стерилизующих доз для растворов препаратов.

В связи с расширением использования ускоренных электронов для радиационной стерилизации, представляется важным получение сведений о сравнительном бактерицидном действии ускоренных электронов и гамма-излучения. В литературе этот вопрос освещен недостаточно полно, к тому же? данные по сравнительной эффективности бактерицидного действия ускоренных электронов и гамма-излучения противоречивы, поскольку результаты получены в различных экспериментальных условиях. Поэтому получение сведений о факторах, влияющих на эффективность бактерицидного действия ускоренных электронов, будет представлять большой практический интерес при проведении радиационной стерилизации.

Вопрос об эффективности использования небольших доз излучения для "пастеризации" лекарственных средств изучен5мало. Единичные работы в этой области говорят о пригодности небольших доз ионивирующих излучений для деконтаминации лекарственных средств. Однако до сих пор не было микробиологического обоснования выбора этих доз. Получение данных по факторам инактивации различных микроорганизмов позволит установить эффективные резкими радиационной "пастеризации" в зависимости от инициальной контаминации и содержания радиоустойчивых микроорганизмов. о п

-оо—

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ

2.1. Определение Д^-д для водных взвесей микроорганизмов

Взвесь микроорганизмов плотностью примерно 10^ клеток в I мл жидкости (состав ее определяется составом жидкости стерилизуемых

I) образцов) в количестве 0,1 мл облучали в дозе 0,5 кГр. Облучение проводили Со на установках "ЭГО-4" (мощность дозы-0,3 Гр/с) и "Исследователь" (мощность дозы-2,4 Гр/с). Для определения численности исходной популяции проводили высев необлученной взвеси по

-2 -4

0,1 мл из разведения 10 и 10 на агар Хоттингера. Предварительный учет результатов проводили через 24-48 часов инкубации при температуре 35°, а икончательный - через 14 дней.

Показатели Д^ определяли по формуле БсЬийай и Наак (1960)* тг Д , где (2.1.1.)

Д - доза излучения с- численность популяции микробов до облучения численность популяции микробов после облучения

2.2. Определение Д^ для высушенных культур микроорганизмов

Относительная влажность тест-культур соответствовала относительной "влажности стерилизуемых объектов (10-13$). С целью ее определения испытуемые образцы высушивали в сушильном шкафу до достижения шли постоянного веса и затем определяли относительную влажность образцов.Высушивание микроорганизмов проводили следующим образом. Готовили взвесь в дистиллированной воде суточной (для грибов 4872-часовой) культуры, выращенной на плотной среде Хоттингера или на среде Сабуро (грибы). Плотность суспензии доводили по эталону I) I Гр=100 рад. Здесь и везде далее поглощенная доза излучения дается в единицах СИ, установленных стандартом СЭВ 1052-78. мутности 10 ед. (концентрация). Добавляли по 0,1 мл этой взвеси в пробирки и помещали их в эксикаторе под вакуумом в 10"^ мм рт.ст. над прокаленным хлористым кальцием. Выдерживали взвесь микроорганизмов- общим объемом 1мл (т.е., 10 пробирок по 0,1 мл) в течение I часа. Высушенные культуры облучали в дозах 0,1-0,2 кГр. Затем их эмульгировали стерилшшм 1%-шш раствором твина-80 и высевали по ОД мл

9 - —'3 в разведениях 10 и 10 на агар Хоттингера.

Численность исходной популяции определяли высевам по 0,1 мл

-Д смыва из разведений 10 и 10 , предварительный учет результатов проводили через 24-48 часов инкубации при температуре 35°, а окончательный - через 14 дней. Показатели Дд^ определяли по указанной выше формуле.

2.3. Определение бактерицидных доз ионизирующих излучений

Взвеси лабораторных штаммов ЕвсЬед&еМа еоИ М-17, Б-ЪарЬШ соссиэ ачигеШ £09Р, Вае.виМШв 83, вегетативные клетки , о) и споры ' Вас.ажШгасо1аев 96, полученных из коллекции Государственного контрольного института игл. Л.А.Тарасевича, плотностью 10^ клеток в I мл облучали гамма-излучением и ускоренными электронами в дозах от 0,5 до 15 кГр в растворах, которые подвергаются радиационной стерилизации (растворы кордиамина и кбфеина-бензоата натрия), или на мишенях из алюминиевой фольги с нанесенной на нее

6 8 т в количестве примерно 10-10 клеток и высушенной в вакууме (10 мм рт.ст.) над прокаленным хлористым кальцием. Облучение ускоренными электронами проводили на ускорителе электронов ЛУЭ-8-5М. Из растворов производили высев на агар Хоттингера необлученной взвеси по 0,1 мл из разведения 10"^, а облученной - Мз 10"^, Высушенную культуру на алюминиевой фольге смывали 1% раствором твина-80

3 -А и высевали необлученную культуру по 0,1 мл из разведений 10 , 10 , Споры готовили по методике, описанной в Государственной фармакопее 10-го издания. оо— а облученную - из 10 , 10 . Предварительный учет результатов проводили через 24-48 часов инкубации при температуре 35°, а окончательный - через 14 дней.

Полученные экспериментальные данные статистически обрабатывали в соответствии с руководством И.П.Ашарина и А.А.Воробьева (1962).

Для оценки эффективности действия ускоренных электронов по сравнению с гамма-излучением получали кривые выживаемости культур. Облучение проводили ускорннными электронами с энергией 8 МэВ и имл гу пульсной мощностью дозы 10-10 Гр/с при частоте посылок 31 и 500 Гц гу и длительностью импульса 3 мкс. Облучение с мощностью дозы 10 Гр/с проводилось с длительностью импульса 0,5 мкс. Воспроизводимость условий облучения контролировали, используя цилиндр Фарадея.

Величину поглощенной дозы при каждом облучении измеряли с помощью полимерного пленочного дозиметра, имеющего метрологически установленную погрешность -9% и воспроизводимость показаний при неизменности условий облучения При определении дозы, поглощенной в водной взвеси, в показания дозиметра вносили поправку, учитывающую геометрию детектор-объект, а также поглощение и рассеяние пучка электронов материалом объекта. Величину поправки определяли путем моделирования водной взвеси жидкостным химическим дозиметром. Бактерицидные дозы определялись по> кривым выживаемости. Нагревание облучаемых культур проводили электронагревательным прибором. Температуру контролировали с помощью термопары, помещенной внутрь рабочей камеры. При изолированном нагревании время воздействия совпадало со временем облучения соответствующими дозами. Прогревание осуществляли в ультрамикротермостате МЗ-ОЗ.

Величину ДТд определяли графическим методом ВигЪаж и йгеег (1959).

2.4. Контроль стерильности препаратов

Контроль стерильности препаратов проводили в соответствии с о ь —

Государственной фармакопеей 10-го издания и действующей на хим-фармзаводах производственной шструкции.

Проведен контроль стерильности5тьк образцов от 100 промышленных партий растворов какого препарата с защитными добавками. Поскольку препараты кордиамин, и 20% раствор кофеина-бензоата натрия, особенно с добавками, обладали бактериостатнческими свойствами (как это было определено предварительно), проводили'разведение препаратов питательной средой до концентрации, при которой бактериоста-тическое действие препарата нейтрализовалось.

Препараты высевали на тиогликолевую среду, сахарный бульон (на основе бульона Хоттингера), среду Сабуро, скошенный агар с 0,5% глюкозы (на основе бульона Хоттингера).

Учет результатов проводили не ранее, чем через 14 суток инкубирования при соответствующей температуре.

Стабилизированные кордиамин и 20% раствор кофеина-бензоата натрия оценивались как стерильные, если не наблюдался пророст питательных сред в течение всего срока инкубирования.

2.5. Определение микробной загрязненности лекарственного сырья

Качественный и количественный состав микрофлоры, загрязняющей тальк, крахмал и муку, определяли по действующей на химико-фармацевтических заводах методике, разработанной ГОСНИИ по стандартизации и контролю лекарственных средств (Г.Я.Кивман и соавт., 1975). Проводились посевы на наличие сапрофитов, кишечной палочки,, сальмонелл, шигелл, синегнойной палочки, патогенных стафилококков, патогенных анаэробов, дрожжевых и плесневых грибов. Для определения ■ сапрофитных бактерий делали посев на мясо-пептонный агар. Подсчет колоний проводили через 48 часов инкубирования при 37°.

Для определения кишечной палочки, сальмонелл и шигелл сначала делали высев на лактозный бульон и среду Киллиана. После 24 часов инкубации при температуре 37° бульонные культуры высевали по 0,1 мл на чашки с дифференцированными- средами Эндо,»Плоскирева и Левина.' Инкубировали 24 часа при температуре 37°. Характерные культуры пересевали для идентификации на пестрый ряд с глюкозой, лактозой, мочевиной, маннитом и на бульон для обнаружения индолообразования.

Для определения протея пользовались средой следующего состава: дрожжевой экстракт - 0,1 г, КН^РО^ - 9,1 г, Ма^НРО^' - 9,5 г, мочевина - 20 г, феноловый красный - 0,01 г, вода дистиллированная до 1000 мл. При наличии протея красный цвет среды изменется в желтый.

Среда для определения синегнойной палочки имеет следующий состав: пептон - 20 г, глицерин - 10 г, К^О^ - 1,5 г, агар-агар - 15-20г, вода дистиллированная - до 1000 мл. В присутствии синегнойной палочки среда окрашивается в светло-зеленый цвет.

Для выявления патогенных стафилококков использовали среду Г.Н.Чи-стовича. При наличии патогенных стафилококков вокруг колонии образуется зона опалесценции.

Для определение? дрожжевых и плесневых грибов использовали агари-зованную среду Сабуро.

Рост анаэробов определяли на среде Китт-Тароцци.

2.6. Определение факторов радиационной инактивации микроорганизмов, обсеменяющих лекарственное сырье.

Образцы 9 партий каждого вещества (тальк, крахмал, мука) облучаи ли дозами 1-2,5 кГр и находили фактор инактивации "естественной микрофлоры для каждой дозы. С этой целью брали навески веществ по 10 г и с помощью фосфатного буферного раствора рН=7,0 делали разведения -1:10 и 1:1000. Взвесь высевали в этих разведениях на агар Хоттингера. Колонии подсчитывали через 48 часов инкубации при 37°. Другие навески облучали и затем делали высевы аналогичным образом. Посевы инкубировали в течение 2-х недель. Фактор инактивации микроорганизмов находили по частному от деления численности исходной и вызшвшеи после облучения популяций.Оценку вероятных отклонений от действительного значения величин частного проводили в соответствии с руководством И.П.Ашмарина и А.А.Воробьева.

В опытах с искусственным обсеменением крахмала брали навески по 250 мг и стерилизовали их с помощью гамма-излучения. К навескам добавляли по 0,5 мл взвеси лабораторных штаммов Bac.cereus 8035, Bac«subtilis 83, Escherichia coli 1,1-17, Staphilococcus aureus 209P, а также выделенных на производстве штаммов стафилококка и спорообразующей палочки в количестве примерно Ю^клеток.

Полученные суспензии тщательно перемешивали и высушивали в эксикаторе в вакууме (10 мм рт.ст.) над прокаленным хлористым кальцием в течение 10 часов. Высушенные культуры облучали гамма-излучением Со в дозах 5-10 кГр. Затем образцы суспендировали в 2-х мл 1% раствора твина-80 , и взвесь высевали на агар Хоттингера. Численность исходной популяции определяли из необлученных навесок обсемененного крахмала. Результаты посевов учитывали через 14 дней инкубации при 35°.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

В соответствии с поставленными задачами был изучен качественный состав, а также радиочувствительность микроорганизмов, выделенных на химико-фармацевтическом производстве, Кроме того, изучалось влияние среды и условий облучения на показатели Д^ этих микроорганизмов. На основании полученных данных был проведен выбор и анализ стерилизующих доз излучения для стабилизированных препаратов кордиамина и 20$ раствора кофеина-бензоата натрия и "пастеризующих" доз для отечественного лекарственного сырья.

3.1. Влияние воды, сульфитов, а также кордиамина и 20$ раствора кофеина-бензоата натрия на радиационную чувствительность микроорганизмов

Исследования были начаты с изучения.качественного состава 500 штаммов микроорганизмов, выделенных на производстве из лекарственных средств (препаратов и сырья), и определения их радиационной чувствительности. Изученная микрофлора состояла из грамположи-тельных бактерий (59,5%), включавших сенную палочку, стафилококков (13,3$), стрептококков (1$), а таете грамотрицательных неспорообра-зующих микроорганизмов (15,4$), в том числе, кишечной палочки. Гри-быАврегбШив арр. составляли 6,5$, РелАсШиж врр. - 4,3$.

Радиационная чувствительность микроорганизмов определялась по показателям Д^. 80$ изученных штаммов представляли собой радиочувствительные микроорганизмы, и показатели Д-^д для них составляли в среднем 0,2-0,6 кГр. Для остальных показатели Д^ не превышали 2,5й,р

Для определения влияния воды на радиационную чувствительность (Дэд) были отобраны методом случайной выборки 100 штаммов микроорганизмов и проведен сравнительный анализ их радиационной чувствительности в дистиллированной воде и в высушенном состоянии (табл.3.1).

При этом использовались микроорганизмы одной и той же популяции.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Щеглова, Светлана Григорьевна, Москва

1. Апт Ф.С., Мазохина H.H., Найденова Л.П., Рогачев В.И. Микрофлора продуктов, облученных гамма-лучами.- Микробиология, 1964, 33,. I, с.67.

2. Александер П. Ядерные излучения и жизнь. Атфмиздат, М., 1959, с.207.

3. Антоне Ф., Козинец Г., Котелеш Г. Современные возможности и перспективы использования ионизирующего излучения для стерилизации в медицине. IAEA, Viemma, Atomic Energy Review, 1966, v.4, p.5.

4. Ашмарин ИЛ., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Медгиз, Л., 1962, с.80.

5. Бак 3., Александер П. Основы радиобиологии. Изд. иностр. лит., М., 1963, с.289.

6. Бочкарев В.В., Харламов В.Т., Пикаев А.К. и др. Радиационная стерилизация радиофармацевтических препаратов. В кн.: Radiosterilizatiom of Medical Products, 1974. Vieaaa, 1975t P«365.

7. Бочкарев B.B., Вашков В.И., Павлов Е.П. и др. Радиационная стерилизация в медицине.- Ж.микробиол., эпидемиол. и иммунолог., 1973, 8, с.56.

8. Бочкарев В.В., Павлов Е.П., Хрущев В.Г. и др. Радиационная стерилизация лекарственных средств.- Хим.-фармацевт. ж., 1972, 7, с.31.

9. Бочкарев В.В., Павлов Е.П., Хрущев В.Г. и др. Радиационная чувствительность микроорганизмов, выделенных на предприятиях медицинской промышленности.- Хим.-фармацевт, ж., 1978, 2, с.145

10. Бочкарев В.В., Павлов Е.П., Седов В.В.'и др. Выбор дозы облучения для стерилизации медицинской продукции. В кн.: Radiosterilizatiom of Medical Products, 1974. Viemma, 1975*, p.61.1.. Бабакина Г.С., Березовская И.В., Дмитриева Н.В. и др.

11. Применение ионизирующих излучении для повышения микробной чистоты твердых лекарственных средств.- Хим.-фармацевт, ж., 1981, 2Л с.97.

12. Березовская И.В. О микробной загрязненности некоторых неинъекционных лекарственных средств.- Фармация, 1976, 2, с.74.

13. Гродзенский Д.Е. Радиобиология. Биологическое действие ионизирующих излучений. Атомиздат, М., 1966, с<.69.

14. Григорьева О.Л., Седов В.В., Сафаров С.А., Щеглова С.Г. Биологические и физико-химические свойства радиационно стерилизованных стабилизированных растворов кордиамина. Там же, 1978а, с.35.

15. Даренская Н.Г., Кознова Л.Б., Акоев И.Г., Невская Г.Ф. Относительная биологическая эффективность излучений. Фактор времени облучения. Атомиздат, М., 1968, с.60.

16. Ермольева З.В., Почапинский В.И. Использование ионизирующих излучений для стерилизации лечебных препаратов.- Мед.пром-цшь СССР, 1961, I, с.33.

17. Жестяшиков В.Д. Восстановление и радиорезистентностьклетки. Л., 1968, с.285.

18. Зотиков A.A. Действие ионизирующего излучения на светящиеся бактерии iseatebeako Биофизика, i960, 5, 2, с.170.

19. Иоффе Б.М. Действие полония на бактерии.- В кн.: Труды центрального института рентгенологии и радиологии. 1941, 5, с.210.

20. Кузин А.М., Каушанский Д.А. Прикладная радиобиология. Энергоиздат, М., 1981, с.48.ка,

21. Кивман Г.Я., Саложнйкова Г.А., Каграманова К.А. и др. Методика определения микробной загрязненности неинъекционных лекарственных средств.-Хим.-фармацевт, ж., 1975, 2, с.59.

22. Калошин П.М., Форчинская Н.Д., Туманян М.А. Изучение зависимости доза-эффект от количества микроорганизмов и их радиорезистентности.- Радиобиология, 1976, 16, 3, с.407.

23. Корогодин В.И. Проблемы пострадиационного восстановления. Атомиздат, ГЛ., 1966, с.266.

24. Лебединский A.B., Нефедов Ю.Г., Домшлаг М.П. и др. Биологическое действие протонов с энергией 510 МэВ при дробном облучении собак.- Радиобиология, 1965, 5, с.72.

25. Лакоза Г.Н., Сафаров С.А., Извеков В.Н. Влияние ионизирующих излучений на физико-химические и биологические свойства фармацевтических препаратов.- В Кн.: Новости медицины и медицинской техники. М., 1973, №29-30, с.38.

26. Мануева Г.Н., Мартынова В.А., Копиленко Т.Е. Изучение комбинированного метода лучевой и тепловой стерилизации пластикат-ных мешков с консервантами крови.- В сб.: Вопр.радиационной иммунологии и микробиол. Тезисы 8-й конфер., М., 1972, с.92.

27. Надсон Г.А. 0 действии радия на дрожжевые грибки в связис общей проблемой влияния радия на живое вещество.- Вестн. рентгеноя. И', радиол., 1920, 1, 1-2, с. 45.

28. Надсон Г.А., Рохлина Э.Я. 0 поле действия, поле смерти и биологической дозиметрии радия.- Вестн. рентгенол. и радиол., 1934,13, 1-2, с.23. .

29. Комбинированное действие.радиации и тепла наиикрсогсмч

30. Першина З.Г., Самойленко Й.КУБопр. радиационной иммунологии и микробиол. Материалы 7-й конференции, 1969, с.67.

31. Перпшна З.Г.,"Кознова Л.Б., Соболев С.М., Хрущев В.Г. Влияние мощности дозы и длительности воздействия на бактерицидный эффект излучения.- В сб.: Вопросы общей радиобиологии. 1966, с.273.

32. Почапинский В.И., Ермольева З.В., Брегер А.Х. Радиационная стерилизация препаратов антибиотиков.- Мед. пром-сть,СССР, 1961, 2, с.28.

33. Ремезова.Т.С. Действие гамма-нейтронного излучения на микроорганизмы.- В сб.: Радиобиология, АН СССР, М., 1958, с.90.

34. Романцев Е.Ф., Блохина В.Д., Жуланова З.И. и др. Биохимические основы действия радиопротекторов. Атомиздат, М., 1980, с.90.

35. Торчинская Н.Д. О терморадиационном действии на микроорганизмы и возможности использования его для стерилизации в медицине. Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук, М., 1977, с.49.

36. Туманян М.А., Каушанский Д.А. Радиационная стерилизация. Медицина, М., 1974, с.7-64.

37. Туманян М.А., Дуплшцева А.II., Седова Т.С. О влиянии массивных доз гамма-лучей на .иммуногенные свойства бактерий кишечной группы.- 1. микробиол., 1958, 4, с.З.

38. Association of British Pharmaceutical Industry. The use of gamma-radiation sourses for the sterilization of pharmaceutical products. London, 1960, p.3*

39. Antoni P., Pamigl W., Schwarz 0. et al. The effect of 68o gamma irradiation on various fractions of human blood-plasma proteins. In: Radiosterilization of Medical Products. Vienna, 1967, p.107.

40. Axmbrust R.F., Laren N.H. Radiopasteurization in the processing of non-sterile pharmaceutical and basic materials.- In: Radiosterilizatiom of Medical Products, 1974. Vienna, 1975, p.379.

41. BridgeiB.A. Microbiological aspects of radiation sterilization. -Progress in Industrial Microbiology, 1964, 5, p.283.

42. BridgesB.A. The chemical protection of Pseudomonas species against ionizing radiation.- Radiat.Res., 1962, v.17, p.801.

43. BridgesB.A., Olivo J.P., Chandler V.J. Relative resistances of microorganisms to cathode rays. leasts and moulds.- Appl. Microbiol., 1936, v.4, 3, p.147.

44. B elf amy W.D., Lawton E.J. Problems in using high voltage electrons for sterilization.-Nucleonics, 1954, v.12, 4, p.54.

45. Bhttacharjee S.B. Action of X-irradiation on E.coli.-Radiat.Res., 1961, v.14, p.50.

46. Blackburn R., Iddon B., Moor J.S. et al. Radiation sterilization of pharmaceuticals and biomedical products.-In: Radiosterilization of Medical Products, 1974. Vienna, 1975» p.351.

47. Brasch A., Huber W., Waly A. Effect of processing condition of organoleptic change in food-stuffs sterilized with high intestii electrons.- Pood Technol., 19531 v.7» p.109.

48. Burns V.W. Studyes of relative biological effects of 30-and 70-MeV electrons and the production of color mutants in adenine deficient yeast.-Radiat. Res., 1958, 9» 96, abstract 33.

49. Christensen E.A., Sehested K. Radiation resistans of dried bacteria and bacterial spores by means of ionizing radiation.-Acta pathol. et microbiol. scand., 1964-,/6&, p.44$„

50. Christensen I.A., Holm N.W. Total counts on medical products prior to sterilization.- Technical Reports Series, n° 149, IAEA, Vienna, 1973, p.141.

51. Christemsen E.A«, Holm N.W., Juul P.A. Radiosterilization of medical device and supplies.- In: Radiosterilization of Medical Products. Vienna, 1967, p.265.

52. Christensen E.A. Hygienic requirments, sterility criteria and quality and sterility control.- Technical Reports Series,n° 149, IAEA, Vienna, 1973, p.131.

53. Christensen E.A. Comments on th® microbiological efficiency of various sterilization metods.- In: Radiosterilization of Medical Products. Vienna, 1967, p.334.

54. Christensen E.A. Radiation resistance of bacteria and microbiological control of irradiated medical products, sterilization and preservation of biological tissues by ionizing radiation.-Proc. Panel Budapest, 1969. IAEA., Vienna, 1970, p.13.

55. Christensen E.A. Radiation resistance of enterococci dried in air.- Acta pathol. et microbiol. scand., 1964, 61, p.483.

56. Cliristensen E.A. Review of microbiological aspects of the code of practice for radiatio.- Technical Reports Series, n° 159» IAEA, Vienna, 1974, p.211.

57. Code of practice for radiosterilization of medical products.- In: Radiosterilization of Medical Products. Vienna, 19^7» p.423.

58. Czerniawski E., Stolarzik L. Attempt to establish the ionizing radiation dose to be used in the sterilisation of one-use medical equipment units. Acta microbiol. pol., 1974, ser.B, v.6, 4, p.177.

59. Claude H. Short-lived free radicals in aqueous solution of purines.- Rev. roum. cnim., 1972, v.17, 1-2, p.41'1.

60. Dunn C.G., Cambell W.L., Fram H., Hutchins A. Biological and photochemical effects of high energy, electrostaticaly produced roentgen ray and cathode ray.- J. Appl. Phys., 1948, v.19, p.605.

61. Dupuy P., Tremeau 0. Resistance aux radiation ionisantes de quelques souches de Lactobacillus.- Int. J. Appl. Radiat. and Isotop., 1961, v.11, p.145.

62. Dieckmann C., Dittrich W. Die tötung von Coli-bacterien durch schnelle elektronen eines 6 MeY-betatrons.- Strahlentherapie, 1950, 81, s.215.

63. Dewey D.L., Boag I.W. Modification of oxygen effect when bacteria are given large pulses of radiation.- Nature, 1959, v.183, p.1450.

64. Durban E., Greez N. Resistance of spores of Clostridium botulinum 33A to combination of ultraviolet and gamma rays.-Appl. Microbiol., 1969, 18, p.44.

65. Erdman I.E., Thatcher P.S., MacQueen K.P. Studies ofthe irradiation of microorganisms in relation to food preservation. 1. The comparative sensitivities of specific bacteria of public health significance.- Can. J. Microbiol., 1961, v.7, p.199.

66. Emborg C. The influence of preparation technique, humidity and irradiation conditions on radiation inactivation of Streptococcus faecium, strain Acta pathol. et microbiol. scand., 1972, v.80, p.567.

67. Parkas J., Kiss J., Andrassy E.- Reduction of heat and radiation resistance of Bacillus cereus spores by initiating germination.- Acta microbiol. Acad. sci. hung., 1966, v.13» P-35

68. Pazakerley A. Gamma irradiation of some unsaturated steroids.- Int. J. Appl. Radiât, and Isotop., 1960, v.9, p.130.

69. Frady J., Clark J.B. Induced radiation sensitivity with four radiation protective chemicals.- Experientia, i960, v.16, 4-, p.150.

70. Goldblith S.A. General principles of radiosterilization.-In: Radiosterilization of Medical Products, Vienna, 19&7» P*3*

71. Grainger H.S., Hutchinson W.P. Letters to the editor. Irradiation of penicillin.- J. Pharm. and Pharmacol., 1957» v.9, p.343.

72. Horn T., Turner G.C., Willis A.T. Inactivation of sporerof Bacillus anthracis by gamma-radiation.- Nature, 1959» v.183» p.475.

73. Hansen P.I.E. A consumer surwey for acceptance evaluation of eurredham treated by combination of heat and irradiation.- Pood Technol., 1966, v.20, p.197

74. Hansen P.I.E. Radiation treatment of meat products and animal by products.- Proc. Int. Symp. of Pood Irradiation, STI/Pub/127, IAEA, Vienna, 1966, p.411.

75. Iefferies D.I., Cornwell P.B. Lethal and sterilizing effects of single and fractionated doses of gamma radiation on Calandra granaria L.- Nature, 1958. v.182, p.402.$1. Iefferson S.- Ia: Massive Radiation Techniques. London, 1964, p.5.

76. Juul F., Christens em E.A., Hoim N.W. The use of IAEA's recommended code of practice for radiation sterilization of medical products in Denmark.- Technical Reports Series. IAEA, Vienna, 1974, p.159.

77. Jacobs G.P. The sterilization of five mew anti-pseudomo-nal semi-sinthetic penicillins bj gamma rays.- Drug. Develop, and Ind. Pharm., 1980, v.6, 6, p.547.

78. Jacobs G.P. The radiation-sterilization hidrochloride.-J. Pharm. and Pharmacol., 1976, v.28, p.?.

79. Jacobs G.P. Cephalosporin powders sterilized by gamma rays.-J. Phar». and Pharmacol., 1979» v.51, p.56.

80. Jacobs G.P. The radiation-sterilization of semi-sinthetic penicillin.- Int. J. Appl. Radiat. and Isotop., 1979> v.39, p.417.

81. Kumta V.S., Levis N.F. Microbiological aspects of radiation sterilization.- In: Radiation sterilization of Medical Products. Bombey, 1974-, p.57.

82. Koh W.J., Morehous C.T., Chiidler V.L. Incidence and characteristics of beta radiation survivors.- Appl. Microbiol., 1956, v.4, p.153.

83. Keape L.L. Combined effect of heat and radiation in food sterilization.- Appl.Microbiol., 1955, v.3, p.346.

84. Sailings L.O. Revies of code of practice for radiosterili-zation of medical products.- Radiosterilization of Medical Products. Vienna, 1967, p.433.

85. Licciardello I.I., Nickerson I.T.R. Effect of radiation environment on thermal resistance of irradiated spores of Clostridium sporogenes P.A. 3679.- J. Pood Sci., 1962, v.27, p.211.

86. Licciardello I.I. Effect on temperature on radi©sensitivity of Salmonella typhimurium v J. Food Sci., v.24, 4-, p.469.

87. Licciardello I.I., Nickerson I.T.R., Goldblith S.A. et al. Effect of repeated irradiation on various characteristics of Salmonella.- Appl. Microbiol., 1969, v.18, 4, p.636.

88. Leskowitz I., Van Dyke I.G., Laughlia I.S., Nickson I.I. The relative biological efficiency of 20-MeV electrons and 180-KVP X-rays in Escherichia coli inactivation. Radiat. Res., 1960, v.13, p.443.

89. Leskowitz I., Van Dyke I.G., Laughlin I.S., Nickson I.I. The relative biological efficiency of 20-MeV electrons and 180-KVP X-rays in the inactivation of Escherichia coli. Radiat. Res., 1959, v.11, p.451.

90. Ley P., Tallentire A. Sterilization by radiation or heat-some microbiological consideration.- Pharm. J., 1964, v.193, P»59.

91. Ley P. The effect of ionizing radiation on bacteria.-Technical Reports Series. IAEA, Vienna, n° 149, P«37.

92. Lea D.E. Action of Radiation on Living cell. Cambridge University Press., 1946, p.10.

93. Moseley B.E.B., Mattingly A. Repair of irradiated transforming deoxyribonucleic acid in wild type and radiation sensiti¥e mutant of Micrococcus radioduranse. J. Bacterid., 1971, v.105, p.976.

94. Moos W.S. Variation of irradiation effects on microorganisms in relation to phisical changes of their enviroment.

95. J. Bacterid., 1952, v.53, p.688.

96. Molla M.A.R., Latif M.A., Haque M. Radiosterilization of medical appliances using 5000-Ci cobalt-60 source.- In: Radiosterilization of Medical Products, 1974. Vienna, 1975, p.4-93.

97. Morgan B.H., Reed I.M. Resistance of bacterial spores togamma irradiation. Food Res., 1954, v.19, p.557.

98. Mooterjee A., Van Dyke I.G., Laughlin I.S. The relative biological efficiency of 20-MeV electrons and 250-KVP X-rays in Saccharomyces cerevisiae inactivation.- Radiat. ftes., 1964, v.22, p.431.

99. Nablo S.V., Uglum I. Impulsive electrical techniquesfor the destruction of micro-organisms. Simposium Physical methods for the destruction of microorganisms. Seventieth national meeting, Atlantic City, Ney Jersey, 1971, 1, p-3.

100. Papper R.E., Buffa N.T., Chandler V.L. Relative resistances of microorganisms to cathode rays. Bacterial spores.- Appl, Microbiol., 1956, v.4, p.149.

101. Pandula E.L., Parkas E., Racz I. Effect of radiosterili-zation on sealed aqueous solution.- Radiosterilization of Medical Products, Vienna, 1967, p.83.

102. Purdie I.W., Ebert M., Tallentire A. Increased response of anoxic Bacillus megaterium spores to radiation an high dose-rate. Int. J. Radiat. Biol., 1974, v. 26, p.435.

103. Phillips T.L., Worsnop B.R. Ultra-high dose-rate effects in radiosensitive bacteria.- Int. J. Biol., 1969» v.14, 6, p.573.

104. Polley I.R. Factors influencing inactivation of infecti-vity and hemagglutinin of influenza virus by gamma radiation.-Can. J. Microbiol., 1961, v.7, p.535.

105. Powell D.B. Radiation sterilisation of pharmaceuticals.-Manuf.Chem., 1959, v.30, 11, p.435.

106. Powell D.B., ¿¿ridges B.A. Processing by irradiation 1. Sterilization of medical and pliarmaceutical products.-Res. Appl. in industry. 1960, v.13, 1, p.151.

107. Quina. D.I., Anderson A.W., Dyer I.P. In: Microbiological Problems in Food Preservation by Irradiation,, Vienna, 1967, p.1.

108. Rowley D.B., El-Bisi H.M., Annelis A. et al. Resistanse of Clostridium botulinum spores to ionizing radiation as related to radappertization of food£- Proc. Int. us-Japan Conference on Toxic microorganisms.--1968, p.459.

109. Riley E.F., Richards R.D., Evans T.C., Leineelder P.I. The effect of fractionating cataractogenic doses of neutron and X-radiations.- Radiat. Res., 1957, v.7, 4, p.446.

110. Ravetto D.I. Inactivation of Distyospores of Alteraaria tenius by heat and irradiation.- Thesis Univ. California. Davis, 1968.

111. Schmidt C.F., Nank W.E. Radiation sterilization of food. 1. Proceedures for the evaluation of the radiation resistance of spores of Clostridium botulinum in food products.- Food Res., 1960, v.25, p.321.

112. Sommer N.F. The effect of ionizing radiation on fungi.-In: Manual on Radiation Sterilization of Medical and Biological Materials. IAEA, 1973, p.73.

113. Stapleton.G.E., Edington C.W. Temperature dependence of bacterial inactivation by X-rays.- Radiat. Res., 1956, v.5, 1, p.39»

114. Stapleton G.E. Factors»nodifying sensitivity of bacteria to ionizing radiation.- Bacteriol. Rev£, 1955, v.19, 1, p.26.

115. Sparrow A.H., Miksch I.P. Correlation of nuclear volume and DNA content with higher plant tolerance to chronic radiation.

116. Science, 1961, v.134, p.282.

117. Sparrow A.H., Schairer L.A., Sparrow R.S. Relationship "between nuclear, volume, chromosome numbers, and relative radio-sensitivities.- Science, 1963» v.141, p.163.

118. Saint-Lebe., Berger G., Mucekielli A. Influence d'une irradiation gamma sur la salubrité et les propietes technologiques de l'amidon de mais.- Improv. Food Qulity Irradiat., Vienna, 1974, p.51.

119. Tanooka H., Hutchinson F. Modification on the inactivation by ionizing radiation of transforming activity of DNA in spores and dry cells.- Radiat.Res., 1963, v.24, p.43.

120. Transy M.I., Fleurette I. La sterilisation par les rayonnements ionisants.- Rev. épidémiol., méd.soc. et santé publiques. 1976, v.24, 2, p.165.

121. Trauth C.A., Sivinski H.D. Sinergistic effects of heat and irradiation treatment (thermoradiation) in the sterilization of medical products.- In: Radiosterilization of Medical Products, 1974. Vienna, 1975, p.25.

122. Tattersall K. Problems microbial contamination in prepacked preparations.- In: Ionising Radiation and Sterilization of Medical Products. London, 1965» P*15*

123. Tallentire A. Aspects of radiation microbiology fundamental to the sterilization process.- In: Radiosterilization of Medical Products, Pharmaceuticals and Bioproducts.- Technical Reports Series, n° 72, IAEA, Vienna, 1967, p.1.

124. Tallentire A., Dwyer I., Ley F.I. Microbiological quality control of sterilized products: evaluation of model relating frequency of contaminated items with increasing radiation treatment.- J. Appl. Bacteriol. 1971» v.34, 3, p.521.

125. Vogel H.H., Iordan D.L. Fractionated, low dose-rate60irradiation of mice with fission neutron and Co gamma-rays.-Ann. N. I. Acad. Sei. 1964, v.114, 1, p.185.

126. Vogel H.H., Jordan D.L. Fractionated irradiation of60mice with fission neutrons and Co gamma rays.- In: Biological effect -3 neutron and proton irradiation. Vienna, 1964, v.2, p.275.

127. Webb R.B. Glicerol and water effects on X-ray sensitivity im Staphilococcus aureus.- Radiat. Res., 1963, v.18, p.607.

128. Webb R.B., Powers E.L. Water, glicerol and oxygen as factors in radiation sensitivity of bacterial spores.-Radiat. Res. 1961, v.14, p.515.

129. Witte E. Experimentelle Untersuchungen über die Wirkung intermittierend verabfolgter ionisierender strahlen.- Strahlentherapie, 1953, 89, s.586.

130. Witte E., Sigmund E. Ultrafrakti onierung.- Strahlentherapie, 1952, 88, s.384.

131. Whittet T.D., Hutchinson W.P. The inactivation of pyrogens by gamma radiation.- J. Pharm, and Pharmacol., 1957» v.9,p.950.