Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Механизмы интеграции клеток в альвеолярном отделе молочной железы

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Механизмы интеграции клеток в альвеолярном отделе молочной железы"

РГБ ОД .

САШТ-Ш7ЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕН! Ьй УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

СКОГМЧЕВ ВАЛЕРИЙ ГРИГОРЬЕВИЧ

МЕХАНИЗМЫ ИНТЕГРАЦИИ КЛЕТОК В АЛЬВЕОЛЯРНОМ ОТДЕЛЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

( 03.00.13 - физиология человзка и животных )

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Санкт- Петербург 1994

Работа выполнена в Физиологическом научно-исследовательсном институте им, А.А.Ухтомского при Санкт-Петербургском государственном университете Научные консультанты: доктор биологических наук.

профессор И.И.Грачев

доктор биологических наук, профессор Н.П.Алексеев.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор И.А.Баранникова доктор биологических наук, профессор, чл.-корр, МСА Б.И.Протасов.

доктор биологических неук, профессор В.П.Пушкарев

Ведущее учреждение - Санитарно-гигиенический

Медицинский институт МЗ РФ.

Зшцита состоится «/£> «LU-CWt 1994 г. в ld/ч. . на заседании Специализированного совета Д.063,57.19 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук при Санкт-Петербургском государственном университете по адресу; 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., 7/9.

С диссертацией можно ознакомиться в,' библиотеке им. A.M. Горького Санкт-Петербургского государственного университета

Автореферат разослан '^-^^1994

г.

Ученый секретарь Специализированного совета доктор биологических наук Ещенко Наталья Дмитриевна.

\

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы: Особое место в исследованиях физиологии свреции занимает анализ функциональны* особенностей деятельности железистых органов, обусловленных юс специфической цитоархи-тектоникой. Представление о структурно-функциональной единице органа находит наиболее удачное приложение для альвеолярного отдела молочной железы, в котором демонстративно проявляются принципы межклеточных взаимоотношений, определяющие своеобразие реакций клеточного ансамбля на регулирующие влияния ( Грачев, Галанцев,1974; Грачев и др.,1976 ).

Выявление закономерностей в организации секреторных органов непосредственно связано с анализом механизмов, обеспечивающих связи между клеточными элементами, образукрми структурно-функциональную единицу - альвеолу молочной железы.

Наряду с исследованием способов межклеточной кооперации, призванной обеспечить синхронизацию деятельности клеток, исключительный интерес представляет межклеточные взаимоотношения, обусловленные определенной иерархией, диктующей подчинения одних клеток другим. Виделение в рамках функционального комплекса" командных" клеток и анализ реакций всего клеточного ансамбля с учетом межклеточных взаимоотнопений представляется одним из наиболее перспективных путей изучения физиологических реакций секреторных органов.

Цель и задачи исследования. Выдвинуто представление, согласно которому конечный результат системных регулирующих влияний в молочной железе определяется характером межклеточных взаимоотношений, склвдавагзаркся в ходе фэрлирования альвеол молочной железы. Эспериментальнат проверка этого представления явилась целью настоящего исследования. При выполнении работы решались следующие задачи:

1.Анализ пигоархитектоники альвеол молочной железы, предполагающий выяснение способов функционального взаимодействия между секреторными и миоэпителиальными клетками и определения' иерархии их взаимоотношений в пределах альвеолы.

2.Выявление особенностей построения альяеол молочной железы

в ходе лактогенеза. При становлении лактации необходима конкретизация процессов морфогенеза, обеспячивакщих формирование альвеол в период развития специфической секреторной активности - 3 -

клеточного сообщества и в случаях нарушения предлактационной подготовки молочной железы, вызывающего гипогалактию.

3.Исследование характерных клеточных реакций, существование которых непосредственно связано с включением клеточных элементов в общий функциональный комплекс альвеолы молочной железы.

Основные положения,выносимые на защиту. I.Функциональная активация миоэгштелиальных клеток в ходе выведения ранее синтезированного секрета из альвеолы молочной железы обеспечивает инициацию нового секреторного цикла в эпителиальных клетках альвеолы поло чной железы. Для процессов данной миоэпителиально-секретор-ной передачи регулирующего влияния, помимо механического воздействия характеры« холинергические межклеточные взаимоотношения ~ показано наличие системы синтеза, ферментативного гидролиза аце-тилхолина, выявлены прогнозируемые изменения клеток секреторного эпителия в условиях блокада синтеза и рецепции холинергичес-кого медиатора. В развитие реакций на окситоцин вовлекаются клетки,непосредственно контактирующие с миоэпителием, дальнейшее распространение сигнала по клеткам альвеоли обеспечивается за счет высокопроницаемых контактов.

2.Нормирование альвеолярной структуры молочной келезы в ходе предлактационной подготовки происходит с участием аутоиммунных процессов, обеспечиввхцих "очистку" просвета альвеол и протоков в молозивный период. Нарушения этого процесса при иммунодефицит-них состояниях , сопровождающие поздние токсикозы беременности, у женщин приводят к наруаенип предлактационной подготовки молоч-железы и развитии гилогал&ктии..

3.Наруионие в структурной организации альвеол молочной железы и других органов-миаеней в ходе гормонэависимого морфогенеза обусловлены дефектами процесс рецепции половых стероидных гормонов .

4.Начальные этапы секреторного цикла, иницированного сократительной реакцией миоэпителия^ характеризуются функциональным набуханием секреторного эпителия молочной «елезы, связанным с прохождением через клетку осмотически активных веществ. Интенсивность транспортных процессов определяется активностью щелочной фосфатаэк и реакцией цитоскелета, меняющего форму клеточной поверхности. Активация белоксинтетической активности обеспечивает-

ся усилением матричной активности хроматина, увеличением синтеза и перемещения РНК в цитоплазму и функциональным набуханием ограниченных мембранами клеточных компоненговСаппарата Гольджи эндоплазматического ретикулума ).

Научная новизна.I.Впервые установлено, что в альвеоле молочной «елеэы происходит сопряжение процессов выведения молока и инициации нового секреторного цикла за счет взаимодействия мевду миоэпитллиалъкыми и секреторными клетками. Обнаружено, что в альвеолах молочной железы передача влияний с миозпителиальных на секреторные клетки наряду с механическим воздействие!.! может осупествляться с участием.физиологически активных веществ холин гргической природы.

2.Реакция секреторных клеток, непосредственно контактирующих с миоэпителиальными.передаётся остальным клеткам альвеолы за счет функционирования высо;сопроницаемьк целевых контактов.

3.Набухание клеток секреторного эпителия в альвеолах молочной келезы на начальных этапах секреторного цикла обусловлено транспортом осмотически активных веществ в клетку. Уменьшение объема клетки происходит в результате вгасода из клетки секреторного продукта, содержащего осмотически активные компоненты.

4.Наряду с интенсификацией трансмембраннзго и трансэпителиального транспорта выявлены' активация щелочной фосфатазн, увеличение содержания цитоплазматеческ'й РНК и возрастание белок-синтетической активности. Синтез и перемещение РНК в цитоплазму обеспечена усилением матричной активности хроматина.

5.Показана сопоставимость оценки рецепции эстрадиола биохимическими я авторадиографкческим методами. Обнаружено связывание меченного эстрадиола клетками нормальных и патологически измененных тканей органов ьмвеней ( секреторными клетками, миоцитами и лейкоцитами )

6.Предложена модель формирования альвеолярной структура в ходе горыонзависимого морфогенеза мллочноЕ «елеэы. С учетом участия мор$онекротических аутоиммунных процессов выявлены механизмы образования полости альвеол и просвета протоков молочной железы за счет.участия гидролитических ферментов и лим-¿оидных клеток. С позиций предложенной модели находит адекватное объяснение своеобразие молозивного периода и раскрываются причины нарушений предлакгационной подготовки молочной железы при гипогалактии

Научно-практическая значимость работы. Материал настоящего исследования имеет первостепенное значение для понимания механизмов функциональной организации секреторного процесса в молочной железе и необходим для развития физиологии лактации, размножения и нейрозндокринологии. Предложенная нами модель формирование альвеолярной структуры молочной железы явилась основой для разработки методов ранней диагностики гипогалак-тии у кормящих женщин ( А.С.№1432377 ). Данные, полученные при изучении взаимодействия миоэпителиальных и секреторных клеток необходимы для понимания механизмов регуляции секреторных процессов и разработки мероприятий, направленных на ликвидацию таких патологических состояний молочной железы как гипогалак-тия.Предложен способ профилактики гипогалактии ( А.С.,',"»1745254) и способ лечения гипогалактии ( А.С..'?1724257 ). Разработана и внедряется в лечебно-профилактических учреждениях г. Санкт-Петербурга программа "Грудное вскармливание".позволяющая восстановить полноценную лактацию у женщин, страдающих гипогалакти-еЯ. Результаты работы включены в цикл лекций по физиологии сек-реторньас процессов ("Эволюция секреторного процесса" "Основы эндокринологии" ).читаемых для студентов биолого-почвенного факультета СПбГУ.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 43 работы. Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на 4 Международном биофизическом конгрессе (1972),на Всесоюзных симпозиумах по физиологии и биохимии лактации (1974,1978,1982, 1990).на съездах Всесоюзного физиологического общества им.И.П. Павлова (1979,1983 ), на конференции"Про5ле>.а1 эндокринологии селискохозяйственных животных'Ч Ленинград-Пушкин,1975),на 8-й Всесоозной конференции по биохимии нервной системы ( Минск, 1980 ), на II и 12 Всесоюзных конференциях по физиологии и патологии кортика-висцеральных взаимоотношений ( Ленинград,1981, 1986 ),на 6-м Всесоюзном симпозиуме "Центральная регуляция кровообращения" ( Тернополь,1981 ),на конференции "Структурная и функциональная организация нейроэндокринной системы"( Иваново, 1982 ),на Всесоюзном симпозиуме "Физиология медиаторов, периферический синапс" (Казань,1984 ), на Международном сиппозиуме по нейроэндокринологии ( Ленинград,1985 ), на Всесоюзной конференции "Механизмы действия медиаторов и гормонов'Ч Суздаль,

1989 ), на Всесоюзных лколах: по нейрозндокринологии ( Пуцино, 1984), по гормональной регулчцмм репродуктивной функции (Минск, 1985 ), на заседаниях общества физиологов, биохимиков, фармакологов им.И.М.Сеченова ( неоднократно ) и заседании ленинград-кого отделения ВНОАГЭ.

Структура и сбгем диссертации. Диссертация изложена на 252 страницах машинописного текста и состоит из "Введения",5 разделов, "Заключения","Выводов" и указателя литературы. Работа проиллюстрирована 50 рисунками. Список литературы состоит из 484 источников, в том числе 237 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОта Материал и методн исследования. Эксперимента проведены на лабораторных животных: белта мылах и крысах из питомника "Рапполово АМН СССР. Биопсийный материал получен при оперативном лечении-мастэктомии • по поводу злокачественного перерождения молочной железы ( Институт онкологии им.Петрова АМН СССР). Образцы молока и молозива полученн в Клинике акушерства и гинекологии Педиатрического мединститута.

Для анализа функциональных изменений нуклеиновых кислот в секреторных клетках молочной железы проведения.цитохимия нуклеиновых кислот по Унна и Эйнарсону, цитохимия ДНК по Фельгену, люминесцентная цитохимия РНК ( Хачатуров, Смирнова,1967); 2. анализ состояния хроматина по оценке связывания акридинового оранжевого ( Зеленин,1979); 3. изучение локализации холинэсге-раэ проведено с применением гистохимического метода Карновского и Руте ( 1964 ); 4. при анализе ультр&структурмх изменений использована электронная микроскопия с фиксацией по Колфилду, заливкой в смесь Эпона и аралдита й контрастированием по Рей-нольдсу; 5. для анализа состояния поверхности клеток применяли сканирующую микроскопия образцов, фиксированно 1,5? глутараль-дегидои и выеулентгх после дегидратации в спиртах переходом критической точки СО,; б. для выявления а'теокопроницаемюс контактов проведен внутриклеточный ионофореэ флуорохромзв ( флуо-росцеина и процнонового шелтого ) с последующим флуоресцентно-мчкроскопкческим выявлением распределения метки; 7. оценка прижизненных реакций секреторных клеток и кровеносных сосудов осуществлена при телевиэионномикроскопическом исследовании и видеомагнигнрй регистрации; 8. для обнаружения синтеза ицетил-

холина•применялась гистохимическая реакция выявления ацетилхо-линтрасферазы ( -<*.га ^ »1.1971); 9. проницаемость эпителиального слоя в альвеоле исследована при введении и выявлении маркеров: а - пероксидазы хрена бензединовым методом, б - флуоро-сцеина флуоресцентномикроскопически; 10. выявление включения Н3- эстрадиола проводилось аЕТорадиографичсским методом ; И. определение сухого веса клеток проведено с использованием интерференционного микроскопа ( Бродский, Кузнецова,1961 ). В работе использован аппарат математической статистики ( Плохинский, 1990; Ашмарин.и др.,1975).

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ I.Формы и распространение межклеточных связей в альвеолах _мод°ч-. ной железы. Для сохранения секреторной функции в железистых органах необходимо сохранение целостности клеточного комплекса, являющегося функциональной единицей органа. Для большинства эк-зокринных желез и в тон числе молочной железы такой"неделимой" единит,эй является альвеола или ацинус. При анализе межклеточного взаимодействия нас интересовали возможные пути кооперации между клетками и последовательность развития реакций в функционально).; комплексе клеток.

Взаимодействие между секреторными клетками. Основные принципы локального взаимодействия клеток обеспечиваются функционированием высокопроницаемых межклеточных контактов, расположенных на ,сопредельных поверхностях клеток. Нами проведено флуоресцентно микроскопическое исследование с применением метода внутриклеточных меток ( Грачев,Скопичев,Толкунов,1975), которое показало наличие высокопроницаемых контактов. Исследование проникновения флуорохрома показало, что в течение 10-15 мин после введения они способны распространяться в две - три рядом лежащие клети:. Регистрация реакций секреторных клеток с помощью отведения мембранного потенциала позволила установить, что характерная для инициации секреции гиперполяризация мембраны развивается сначала только в 2Ь% клеток.

Увеличение количества клеток с уровнем мембранного потенциала в пределах 31-40 мВ, происходящее не сразу, а спустя некоторое время, повидимому указывает на наличие межклеточных взаимодействий между секреторными клетками альвеол молочной железы.

Система высокопроницаемых контактов, объединяя клетки в функциональный синцитий, позволяет сохранить их клеточную обособленность и при нарушении клеточного пласта клетки изолируются за счет блокады проницаемости каналов ¡целевого контакта. Одним из сигналов повревдения клетки является повышение внутриклеточной концентрации ионов .\"а+или Са^+. В наших опытах ( Грачев, Скопичеэ, Филимонцеса, 1980 Лимитировали повреждение клеток и оценивали биосинтетическую активность при действии уа-баина( 1"10~^М), увеличивающего содержание в цитоплазме. Характерное для инициирующего воздействия окситоцина увеличение содержания РНК в клетке и функциональное набухание секреторного эпителия не развивается, что свидетельствует о необходимости межклеточных коммуникаций для развития реакций альвеол. Барьерние свойства секреторного эпителия. Монослой клеток секреторного эпителия непосредственно участвует а формировании специфического ионного и осмотического состава секрета. Сохранение барьерных свойств альвеолы в ходе реакций молочной железы на окситоцин решался нами методом внутрипротоковой иньекции маркеров - пероксидазы хрена и флуорохрома (. флуоресцеина .V а ). Эти вещества вводили в проток молочной железы белой мьгаи в ус-лочиях прижизненной микроскопии. Взятие образцов до и после действия окситоцина показало, что в лактационный период железистый эпктеяий молочной железы непроницаем для пероксидазы хрена и флуоресцеина Я я - веществ разной молекулярной массы. По данным электронной микроскопии проникновение пероксидазы хрена ограничивается зоной плотного контакта. Действие окситоцина приводит к характерному изменений объема альвеолы и формы клеток, однако, выхода маркера при этом не происходит.

Данное экспериментального исследования, отмечающего наличие разности потенциалов между полостью альвеолы и межклеточным пространством ( Грачев,Скопичев,Толкунов,1971; Толкунов, 1993 ), непроницаемость секреторного эпителия для маркеров внеклеточного пространства позволяет убедиться в том, что для паренхимы молочной железы характерен трансцеллулярный путь транспорта веществ в альвеолярное пространство. Взаимодействие между миозпителиальными и секреторными клетками. При анализе зависимости секреции от выведения секрета на-

«и была выдвинута гипотеза ( Грачев,Скопичев,1972; Скопичев, 1973 ) о взаимодействии миозпителиальных и секреторных клеток, опосредованном холинергическим звеном. Медиаторная природа этого взаимодействия исследовалась при соблюдении'общепринятых критериев ( Plorey , 1967; v.'emaa . ,1971; Нбздрачев, Пушцарев1980; Ноздрачев, 1978,1985 ). Способность малых количеств предполагаемого медиатора воспроизводить эффект.преси-наптической стимуляции выявлена в надшх опытах, отмечающих изменения мембранного потенциала, выделение секреторного белт ка и иэменоние $ормы и объема.клеток железистого эпителия С Грачев и др., 1972;1976; Скопичев, 1981 ). В большинстве случаев воздействие ацетилхолина приводит к развитию реакций, аналогичных аффекту окситоцина.

При всей однонаправленности изменений секреторных клеток в ответ на воздействие ацетилхолина и окситоцина в секреторных клетках можно отметить заметные различия в реакции структур--ных компонентов клетки, что может говорить и о наличии холин-ергического медиаторного звена, и о возможности самостоятельной реакции секреторных клеток на окситоцин. Именно слагаемым этих процессов можно представить процесс инициации нового секреторного цикла. Заметим, что через 10 мин после начала секреторного цикла^вызванного воздействием окситоцина,клетки приобретают цилиндрическую ¿орму и значительно ( почти в 2 раза ) увеличивают объём и возвращаются к исходному состоянию к 50 мин ( Грачев,Скопичев,Камардина, 1978 ). Обращает внимания, что при аппликации • атропина < в концентрации 1'КГ^г/мл ) за 10 мин до иньекции развитие изменений формы клеток значительно уменьшается. При воздействии атропина, не сопровождавшегося воздействием окситоцина, форма и объем клеток не меняется.

Реакции секреторных клеток, выявленные с помощью различных методик ( Грачев.Скопичев,Балакина и др.,1985 ) - электронно^ микроскопии, цитоспектрофотометрии, планиметрии - достаточно убедительно говорят об активации секреторного процесса, наступающего при освобождении просвета альвеолы от ранее синтезированного молока. В процессе функционирования молочной железы выведение кояока воспроизводится многократно и, очевидно, является одним из факторов, определяющих начало нового секреторного цикла. В опытах с применением атропина сокращения мио-

эпителиальных клеток не нарушалось, однако изменения, харантерк ные для начала секреторного цикла,не развивались. В рамках рассматриваемой нами гипотезы об опосредованном холкнергическими веществами влиянии миоэпителия на состояние, клетки секреторного эпителия результаты атропинизации оргаиможно интерпретировать как функциональное разобщение сократительной и секреторной функций альвеолярного комплекса гиеток. Весьма вероятно, что в данном случае блокада холинорецепторов секреторных клеток обусловила их невосприимчивость к влияниям, связанным с сократительной деятельностью миоэпителия.

Смена этапов секреторного цикла сопровождается отчетливыми изменениями содержания нуклеиновых кислот, в частности РНК в ядрьгаке, ядерном хроматине и баэофильном веществе цитоплазмы. Запуск нового секреторного цикла, осуществляемый при воздействии окситоцина на молочную железу мояно охарактеризовать переходом РНК из ядра в цитоплазму в связи с интенсификацией синтетических процессов. Действие атропина, предотвратило возникновение секретообраэовагельного процесса в клетках железистого эпителия и связанные с этим изменения в деятельности ядерного аппарата клетки. Применение атропина перед воздействием окситоцина вызывает заметное нарушение реакций секреторных клеток ( амплитудном и частотном распределении значений кембранного потенциала ) по сравнеию с опытами, в которых применялся только окситоцин. При этом изменения мембранного потенциала происходят на более низком уровне, сокращаится во времени и имеют менее выраженный характер. При использовании сукцинилбисхолина ( 2-10"^г/мл ) - холинолитика, не проникающего через клеточную мембрану, выявлена аналогичная блйквда миоопителиально-секретор-ной передачи - и даже выявлено некоторое уменьшение высоты клеток на 13,5+4,1% ( р4),01 ).

О наличии предполагаемого медиатора в миоэпителиальшх клетках можно судить на основании гистохимического исследования фермента синтеза ацетилхолина - холин9цетилтрас{еразы (Ско-пичев, .Налакина, 1985). Наряду с миоэпителиальныш клетками фермент синтеза ацетилхолина обнаружен в некоторых секреторных клетках и в волокнах подвздошно-подчревного нерва молочной железы, для которого в физиологических экспериментах нами доказана холинергическая природа. Кроме того, роль синтеза

ацетилхолина рассматривали в условиях прижизненной микроскопии, На фоне действия ингибитора синтеза ацетилхолина - мощна, в концентрации,существенно снижающей его синтез ( 3'ЮМ ) после развития сокращений ыиоэпителиальных клеток в ответ на действие окситоцина не наблюдается характерной реакции набухания секреторного эпителия, В этих условиях только введение экзогенного ацетилхолина приводило к восстановлению реакций железистых клеток. Данные прижизненной микроскопии находятся в полном соответствии с результатами морфэметрии клеток альвеол ( Скопичев и др., 1983 ).

Систека инактивации ацетилхолина представлена в молочной железе холинэстеразами, локализация которых показана нашими гистохимическими исследованиями ( Балакина,Грачев,Скопичев,1978; Скопичев и др.,1986,1988 }. Наряду с перииаскулярными нервными волокнами высокая активность фермента обнаружена в миоэлители-альных клетках и на базальноЯ мембране секреторной клетки. Использование ингибиторов, преимущественно блокирующих ацетил-холинэстеразу ( 302 та ) и ацилгидролаэу ( 306 1а), а также инкубация срезов в среде, содержащей различные субстраты { ацетил-тиохолчн и бутирилтиохолин ), позволяет уточнить химическую при роду фермента: в миоэпителии и сопредельных с ним областях происходит преимущественный гидролиз ацетилхолина, а в эндотелии кровеносных сосудов и в цитоплазме секреторных кла-гок в основном представлены неспе^ифические холинэстераэы. Действие анти-хоинэстеразны* препаратов вызывает потенциирупщий эффект, причем, только в случаях применения ингибиторов фермента, не проникающего через клеточную мембрану ( Скопичев и др., 1988 ). При выполнении основных критериев, предъявляемых к медиаторной передаче, можно говорить о наличии своеобразного механизма передачи регулируют'« влияний с сократительной структуры альвеолы ( миоэпителия ) на секреторные клетки в ходе функционального сопряжения двух процессов: сжатия альвеолы ( выведения секрета из полости) и инициации нового секреторного цикле в железистом эпителии.

2.Функционирование шопителиальных клеток альвеолы молочной железы. Сокращения ыиоэпителиальных клеток исследовали с помощью разработанной наш методики ( Грачев,Скопичев,Камардина,1976 ).

Оценивали светорассеирздие светового пучка, проходящего через изучаемую альвеолу. Условия прижизненной микроскопии обеспечивали сохранность иннервации и кровоснабжения органа и воспроизводимость сократительной реакции.

Применяемый нами М-холинолитик - атропин - не вызывал существенных изменений в реакции миоэпителия на окситоцин, обнаружена лишь незначительная тенденция к снижению амплитуды сокращений. Напротив прозерин - ингибитор холинэстераз - подавляя ферментативный гидролиз ацетилхолина и увеличивая его уровень • в ткани органа, обеспечил увеличение реакции альвеол на окситоцин. Амплитуда сокращений возросла на -4%, а время от начала аппликации окситоцина до начала сокращений уменьшилось на 6,3^, что свидетельствует об измекечии функционального состояния миоэпителиальных клеток и усилении их сокращений. Мы исследовали сокращения альвеол при аппликации окситоцина в условиях действия на молочную железу ацетилхолина в концетрациях, которые не вызывали сократительной реакции миоэпителия ( 1'10"®г/мл ). Эффект ацетихолина оказался весьма сходным с действием прозерина и этот результат позволяет предположить следующую последовательность событий: ацетилхолин способен диффундировать из расположенных рядом"периваскулярнкх сплетений к эффекторным структурам альвеолы, меняя при этом функциональное состояние миоэпителия. Снижение активности холинэстераз сохраняет от гидролиза ацетилхолин и тем садам увеличивает уро-' вень "ократительной реакции при воздействии окситоцина.

Существенное изменение сократительной активности миоэпителия наблюдается при действчи катехолачиноп, блокирующих сокращения альвеол в ответ на действие окситоцина. Известно ( Толкунов,1993 ), что подавление сокращений миоэпителиальной клерки связано с реакцией..5-адренорецепторов, предотвращающих последующую сократительную активность. Серия, проведенных нами экспериментов ( Грачев,Скопичев,Камардина,1978 ) рассматривала сокращения альвеол в условиях торможения Д?+Д+-АТ5 азы уабаином. Деполяризация плазматической мембраны миоэпителиальных клеток при катехоламиной блокаде сокращений альвеолы позволила значительно снизить, промежуток времени, необходимого для восстановления реакций на окситоцин.

Применение электрической стимуляц™ ( деполяризующие импуль-

сы тока, с длительностью не менее 350 мсек ) позволило получить полноценные сокращения миоэпителиальных клеток при действии адреналина в концентрациях ( ПО"^ I' Ю'^г/мл ) .заведомо блокирующих сократительную реакцию на окситоцин. Возможность побуждения миоэпителиальных клеток к сокращению в условиях торможения выведения молока имеет решающее значение для определения путей ликвидации патологических последствий эмоционального стресса и связанной с ним гипогалактией.

Данное положение было использовано для стимуляции выведения молока и увеличения молочной продуктивности у кормящих женщин. На поверхность молочной железы в области соска и ареолы наносили электрические импульсы отрицательной полярности, причем длительность импульса должна быть не менее 350 мсек, а частота следования импульсов должна быть не более 2 гц. Сила тока при площади активного дискового электрода в 20 см^ подбиралась по ощущениям пациентки и не превышала 4 мкА. Длительность ежедневной процедуры составляет 15 мин. Для получения положительного эффекта требовалось не менее трех процедур. Следует отметить, что воздействие электрическими импульсами приводит к возбуждению главным образом сократительной активности миоэпителиальных клеток, Об этом можно было судить на основании наблюдаемого нами выведения молока во время проведения процедуры.

Наряду со стимуляцией сокращений миоэпителиальных клеток, что предупреждает лактост&з, отмечается развитие гиперемии и стимуляция деятельности секреторных клеток. В исследуемой группе суточная секреция молока составила на 7-е сутки после родов 200+79,5 ыл. После применения электростимуляции молочной железы уровень секреции молока повысился и достиг 503^84 мл { р^0,02 к 9 суткам послеродового периода. В контрольной группе на 9 сутки секреция молока увеличилась незначительно и составила 300+88 мл ( р>0,5 ), то есть статистически значимого увеличения лактации не было.

Роль ионов кальция в сокращении миоэпителиальных клеток. Выявление внутриклеточного кальция проводили по широко применяемой методике {1982), в сответствии с которой осуществляли осаждение пироантимокатом калия ( Галанцев.Камардина, Скопичев, 19В7 ). Входе взятия биопси^ного материала из молоч-

ной железы лактирующих белых мышей мы контролировали с помощью прижизненной микроскопии состояние расслабленности альвеол или наличие вызнанных окситоцином сокращений миоэпителиаль-■ пых клеток.

Рассматривая распределение продукта реакции осаждения Са2+ в покоящейся миоэпителиальнсй клетке, мы прежде всего отмечаем практически полное отсутствие электронноплотных гранул в зоне расположения миофибрилл. Примечательно, что в цитоплазме миоэ-гтителиальной клетки отмечается два внутриклеточных компарта-мента, в которых обнаруживается электронноплотный продукт реакции. свидетельствующий об аккумуляции Са^+- это каналы эндо-гтлазматического ретикулуча и примембранние везикулярные структуры.

Воздействие окситоцина, обеспечивающего сокращение миоэпите-ЛиальнэП клетки обнаруживает характерную для контрактуры карти ну - увеличение электронной плотности в зоне шофибрилл, формирование глубоких кладок' на наружной поверхности плаэмалеммы ^^эпителиальной клетки. Нужно отметить, что при развитии кон-трактурымиээпителиальной клетки в примембранной зоне практически полностью отсутствуют везикулярные структуры. Принципиально важно подчеркнуть, что сокращению миоэпителиальной клетки соответствует увеличение миэплазматического содержания и локализация продукта реакции з пространстве 1'ежду миофябриллами. Обращает внимание и наличие мелкодисперсного продукта реакции в примем5ранной зоне у основания глубоких складок.

Очевидно, что данная морфологическая картина является свидетельством фунздиональнюс изменений, сопровоадакцих сократительную реакцию чиоэпителиальных клеток: депонированный в структурах эндоплазматического регикулума и примембраняых везикулах Са^+ при воздействии окситоцина освобождается и перемещается в цитоплазму, где и вэаимодейстзует с элементами сократительного аппарата ( Скопичеп.Камардина 1984 ).

3.Особенности гемодинамики. связаннге с деятельностью адьвеол молочной железу. Проведеннгй камн фармакологический анализ (Га-ланцев, Скзпичев, Ермолаева, 1982 ) дает основание считать, что . г.ри развитии реакция альвеолы и возникновении сократительной реакции жюэтпелия в межклеточном пространстве, окружающем альвеолу, увеличивается содержание ацетнлхолина, который в

сбою очередь мотет изменять кровонапоянение в капиллярах и ве-нулах и обеспечивать развитие рабочей гиперемии органа, Важно подчеркнуть, что при воздействии окситоцина гиперемия развивается только в молочной железе л актирующие животных, при отсутствии лактации для сосудов молочной железы характерна реакция ва^оконстрикции.

Выявляя активность холинэстераз на тотальных препаратах молочной железы мм смогли наблюдать положительную реакцию форменных элементов крови и плаз и; в просвете кровеносных сосудов. Однако и после перфузии сосудистого русла раствором Хенк-са в стенке сосудов обнаруживается активность холинестерази ( Балакина,Грачев, Скопичев и др., 1978 ). Электронноцитохи-ыический вариант методики позволил детально рассмотреть распределение холинзетеразной акгиеносги и выягить наличие фермента в полости микропиноцитозных везикул. Наряду с морфологическими данными о существовании трансэндотелиального переноса холинэстеразы могут говорить и данные о наличии артерис-венозной разности холинестераэ.

Очевидна, на уровне капилляров возможно изменение уровня микрогемодинамики ( Балакина.Галанцев, Скопичев и др., 1976), которое согласуется с деятельность» артериальной и венозной системы органа. Такое согласование работы различных клеточных компонентов альвеолярного отдела позволяет учитывать роль местных реакций структурно-функциональных единиц ( альвеол ) в общем функциональном ответе органа. Данное положение было использовано наш при оценке особенностей гемодинамики в молочной железе кормящих женщин.

В наией работе ( Скопичев,Гайдуков, 1991) мы, используя атравматичные методы - термометрия и реографш молочных желез, изучали физиологические реакции кровеносной системы на начальных стадиях лактационного периода в норме и при гипегалактии. Б период лактогенеэа четко прослеживается тенденция к нарастанию температуры кожи молочных желез: на 2-е сутки послэ родов максимальная температура у женщин с достаточной лактацией составила 36,6+0,15°, на 3-й 36,29+0,17°, на 5-е 36,56+0,33°, в то время как при гипогалактии она равнялась на 2-е сутки -35,78+0,11°, на 3-й - 35,93+0,14°, на 5-е - 36,04+0,14°С. При

измерении температуры поверхности молочных желез в период между кормлениями также были получены данные, указывающие на повышение температуры по мере становления лакчации. Важно отметить, что при гипогалактии выявлены более низкие температурные показатели, нежели у женщин с достаточной лактацией. Данные реогра-фического исследования подтверждают результата термометрического исследования и однозначно говорят о нарушении регионарного кровотока у женщин, страдающих гипогалактией.

Исходя из этого достаточно обоснованными и целесобразныади являются попытки применения таких методов воздействия, которые могут нормализовать микроциркуляцию в молочной железе. Нами разработан, апробирован и введен в клиническую практику способ лечения гипогалактии, основанный на применении постоянного отрицательного давления ( Скопичев, Гайдуков, А.С.."» 1724257 ), которое создается в специальной камере, накладываемой на молочную железу на 3 минуты. Устранение секреторной недостаточности молочной железы с помощью локального отрицательного давления проведено у 80 родильниц. Положи!ельниЯ эф^кг от проведенной терапии отечен у 08,7^5 женщин, у 11,3% родильниц усиления лактации не наблюдалось. Важуо подчеркнуть, что в отличие от известных способов предупреждения гипогалактии в организм матери не вводлтея фармакологические препараты, которые с молоком способны поглощаться ребенком и нарушать развитие его нервной системы .

4.Анализ процессов станопленит организации функциональных комплексов.

Развитие альвеолярной структуры паренхимы молочной железы - модель формирования функционального комплекса клеток. Изменение цитоархитектоники молочной железы в период предлактационного развития обусловлено присутствием в крови лактогенных гормонов. Из недифференцированного скопления клеток, накапливающихся в результате интенсивной пролиферации в ампулообразных утолщениях протоков начинают формироваться альвеолы. На основании исследования развития молочной железы на различных сроках беременности, мы ( Чекиров,Скопичев,1988 ) предложили модель, описывающую процесс образования сферического полого комплекса клеток. Учитывая миграционные возможности клеток зачатка альвеол, ш наблюдали "сортировку'1 и пространственную ориентацию клекочите

элементов будучщей альвеолы, в которой наружные клетки сказываются в преимущественном положении по отноиенич к индуцирующим влилничм мезенхимы. Создание целого комплекса мембранных образований способствует объединению клеток наружного слоя в сферический монослой, для которого характерна метаболическая и регуляторная кооперация. Оставттпеся вне влияний центрально расположенные клетки, отслаиваются и в последующем подвергаются дегенеративным изменениям и деструкции с участием лимфоидных клеток и протеолитич«ских ферментов, "очищающих" просвет альвеолы и выводного протока для выведения секрета. Представленная модель формирования сферической поверхности альвеолы находит экспериментальное подтверждение при анализе картины развивающегося органа в период беременности.

Особенности течения нолозивного периода у лактирущих женщ;м. связанные с формированием альвеол. Анализ клеточного состава молозива позволил выявить существенные различич, тесно связаннее с характером и интенсивностью лактации ( Скопичев. Гайдуков, 1991 ). При достаточной лактации клеточный состав молозива характеризуется выраженной агрегацией лейкоцитов. Кроме того, для полноценной лактации были свойстсенны высокие темпы прохождения молозивного периода, когда уже на вторые сутки после родов значительно снижалось и число клеток молозива и количество агрегатов. При вялом течении процесса подготовки железы к лактации, низкой агрегации лейкоцитов, сдвиге пика выделения клеток в молозиво на 2 - 3 сутки после родов ч высоком содержании в секрете сометических клеток, как правиле, отмечалась ги-погалактия. Цитологический состав молозива и молока безусловно зависит от особенностей течения молозивного периода и предшествующему течения беременности и родов. Прл нарушении этих процессов,что определялось по цитологическое составу секрета, гипо-галактия наблюдалась значительно чаще и этим отклонениям в ходе предлзкгационной подготовки особенно часто предшествовали токсикоз второй половины беременности и слабость родовой деятельности. Участие лимфоадных клеток в в развитии цитотоксической активности является одним из демонстративных показателей, позволяющих прогнозировать течение лактации у женщин .( Скопичев. Гайдуков,А.С.Ш32377 ). . ' .■

Примечательно, что большинство г.енщин с пару пениями молозив-ного периода закончили лактировать значительно рань'ле, чем пациентки с полноценным составом молозива. Можно думать, что при определенных гормональных нарушениях происходи, подавление иммунной системы организма и процесс становление лактации растягивается во времени, что приводит к повцшениичастоты ги-погалактии ( Скопичев, Гайдуков, Абрамова, 1993 ).

При изучении уровней циркулирующих имгиунных комплексов в сыворотке крови и молозиве были получены следующие результаты В сыворотне составили 0,07+0,004 и в молозиве 0,08+0,003 (рс 0,0Ь ) и таким образом,концентрация циркулирующих комплексов достоверно выше в молозиве по сравнении с сывороткой крови, что исключает путь их пассивного переноса в молочную железу и может свидетельствовать в пользу образования этих коытонентов непосредственно в'альвеоле молочной железы.

Исследование уровней М и 1« А показало, что они существенно не отличаются у женщин с различными уровнями лактации. Так, ур1>эеиь15М и еыворотке крови и молозиве составил у .женщин с достаточной лактацией 1,2+0,2 и 1,04^0,6, а у женщин о гипогалактией 1,1+0,3 и 0,97+0,4 соответственно. Анализ концентрации А показал, что у женщин контрольной группы в сыворотке крови и молозиве е?» уровень составил 1,740,2 и 3,6+0,8, против 1,6+0,1 и 3,2+0,6 в обследуемой группе. Обращает на себя внимание более высокий уровень иммуноглобулина А в молозиве по сражению с сывороткой крови, что обеспечивает передачу иммунитета от матери к новорожденное. При изучении уровня иммуноглобулина 0 было установлено, что в группе г.енщин с достаточной лактацией в сыворотке1крови и в молозиве он был выше и составил 1С,1+2,1 и 7,6+1,3 против 7,4+1,3 и 1,4+0,1, соответственно. Отмечена статистически достоверная разница мзвду уровнями 1в0 в молозиве у нормально лактирующих женщин и яен-щин, страдаящих гипогалактией.

Из всех цитохимических реакций, которые апробированы на фагоцитах, в нает&ящее время наиболее широко применим НСТ-тест ( Малнский,1989 ), позволяющий раздельно оценить метаболическую и фагоцитарную активность моноцитов, которая по данным нашего исследования оказалась вьгае у векщин с достаточной лактацией

по сравнению с гипогвлактией. Более низкая активность моноцитов, установленная в нанем исследовании у части пациенток, существенно снижает темпы морфогенеза в молочной железе, что в конечнсм результате приводит к гипогалактии ( Скопичев и др., 1991,1993 ).

Анализ рецепции эстрадисла в функциональна ансамблях репро-дуктипшх органов. Проведенный нами авторедиографическиИ анализ рецег.ции эстрадиола клеткам!! различных органов-мишеней позволил отметить существенные различив в сЕ-тзипании меченного гормона ( Орлов, Савченко, Скопичев, 1983 ). При авторлдясграфическом исследовании образцов ткаии грудной железы, удаленной при оперативном лечении злокачественных новообразований выявлено определенное сходство в данных,полученных биохимическим и аБторадиографическим методами ( Арутюнян', Скопичев, Эп-штейн, 1987 ). При низких уровнях связывания меченного эстрадиола { 0 * 3 фМ/мг белка ) специфическое: связывание авторадиографическим методом не проявлялось. При средних уровнях рецепции ( 70 -f 120 фМ/мг белка ) авторадиография показала 122 -175 . зерен восстановленного серебра в поле зрения. При более высоком содержании рецепторов ( 200 и более £М/мг белка ) по данным авгорадиографического исследования получены наигыс'лие значения этого показателя. Таким образом, авторадиографический анализ рецепции эстрадиола, проведенный на образцах гормонза-висимых тканей, показал сопоставимость с даннпми, полученными другими методами, что говорит о перспективности работы по внедрению этого метода в практику диагностики гормональной чувствительности опухолей. В лактационный период авторадиографическое исследование, проведенное на молочных железах белых мшс?., показало высокую степень связывания меченного гормона клетками эпителия и лимфоидными клетками, расположенными и полости альвеолы. Интенсивно связывая эстрогены, лейкоциты принимает участие в снижении уровня стероидных гормонов и удалении их из организма. При подавлении продукции эстрадиола и нарушении гормонального влияния на молочную железу не развивается и реакция лимфоидных клеток. Возможно, чго удаление излилнего эстрадиола в ходе лактация является одни!.: из факторов снижения риска онкологических заболеваний при условии полноценного грудного вскармливания.

б. Особенности реактивных изменений.секреторных клеток. Траспортные процессы в секреторном эпителии ыолочпсй железы

Данные нашего исследования ( Грачев,Скогмчев.Камардина и др., 1978,1980,1983 ) показали, что на начальных стадиях секреторного цикла происходит значительное увеличение объема секреторных клеток, сопрово»дающееся изменением их формы ( переходом от уплощенной к цилиндрической ). Одновременно с этим обнаруживает ся интенсификация транспортных и синтетических процессов, сопровождающихся изменением биоэлектрической активности клетки.

Учитывая активное участие структур аппарата Гольдти в синтезе и выведении из клетки осмотически активного секрета ( лактозы ), можно предположить, что формирование состава молока обязательно включает первичную интенсификацию транспортных прцессов, за счет которых происходит поступление в клетку осмотически активных веществ - глюкозы и ионов. Сократительная реакция элементов цитоскелета. наряду с обеспечение« экструзии воспроизводит центростремительное сближение латеральных поверхностей клетки. Ото выражается в изменении отношения высоты «лето с к их лирине от 0,5 до 1,7. Вместе с этим несомненно участие сократительных элементов секреторной клетки в формировании глубоких инвагинаций в базальной части цитоплазмы.

Нами проведена оценка'г.орфометркческиу параметров секреторных клеток в условиях г.оврездения колхицином клеточного микро-тубулярного аппарата, чт<о привело к нарушения развития реакции клеток на окситоцин.- объем клеток уменьшаеся, а сами клетки уплоща-отся. Результаты этих опытов выявили роль микротрубочек не только при экструзии секрета, но и на начальной стадии секреторного цикла - в ходе развити реакции клетки на индуцирующее воздействие.

При развитии секреторного цикла, необходимо отметить внимание на активность ферментов, с деятельностью которых свлэаны трсспортные процессы/Наличие функциональных изменений активности щелочной фосфатазы было исследовано нами ( Скопичев, Ба-лакина, 1986 ) в условиях сохранения естестьенной асинхронности в работе различных альвеол, причем отчетливо отличались альвеолы, приналекащие разным долькам. Оценивая интенсивность образования продукта реакции и учитывая форму клетки, мы смогли выявить изменения активности фермента на разных стадиях, секретир-

ного цикла. Секреторные клетки с низкой активностью фермента имеют уплощенную форму ( 582 клеток ). При нарастании активности щелочной фосфатазы возрастает число клеток, имеющих цилиндрическую форму, а доля уплощенных клеток снижается до 24,7?5. При наибольшей интенсивности образования продукта реакции подавляющее большинство.клеток имеет цилиедрическую,форму. Группы клеток г минимальной и максимальной активностью фермента существенно ( р-=-0,001) отличаются по величине индекса клеточной высоты ( отношения высоты к иирине клетки ). Состояние структурных компонентов секреторных клеток в ходе ■реактивных изменений. Исходя из наличия определенной периодичности при смене этапов секреторного цикла, мы провели исследование деятельности клеточного ядра в ходе физиологических реакций Сгопичев, Камардина, 1988 ). Флуоресцентномикрофотометри-ческий анализ выявил рост количествр РНК е клетке, совпадаю- . щий с изменениями объема „цитоплазмы. Анализ электроннограмм показал,'что при набухании каналов эндоплазматического рети-кулума и, следовательно, увеличении поверхности мембран, расстояния между рибосомами практически не меняется, т.е. с увеличением объема цитоплазмы значительно возрастает число частиц, содержащих рибонуклеопротеид. Увеличение содержания нуклеиновых кислот в цитоплазме совпадает со снижением их концентрации в ядре, что является показателем интенсификации транспорта РНК в цитоплазму. Активация генетического глпарата клетки, в частности, гормональная ицдукция синтеза определенных видов белкового продукта тесно связана с интенсификацией траскрипци-онной активности хроматина, которая сопровождается существенным изменением его физико-химических свойств.

Флуоресцетномикроскопическое исследование секреторных клеток по методу Риглера в модификации Колесникова и сотр.( 1978) позволило обнаружить, что на 10 мин после воздействия окситоцина связывание акридинового оранжевого увеличивается на 35% по сравнению с контролем ( р-^0,01).

Анализ концетрации ДНК при шкрофотометриро'вании продукта реакции Фельгена показал снижение оптической плотности в периферической зоне хроматина. Изменения концентрации ДНК соответствуют данным электронном»кроскопическсго исследования,

рассматривающего содержание конденсированного хроматина в исходный период опыта и спустя 5-Юм после воздействия окситоци-на. Так. отношение площади ядра, занятой кондесированным хроматином, к площади деконденсированного хроматина составило 1,3+0.12, а после воздействия окситоцина уменьшилось до 0,27+ 0,14 ( р«г^0,01). Таким образом, в ядре интенсивно функционирующей секреторной клетки происходит интенсивная эксплуатация генетического матери ал а,ропревождающаяся сдвигами физико-химических свойств хроматина, изменением транскрипционной активности, увеличением синтеза РНК и транспорта еч за пределы ядра. . .

По данным цитохимического исследования ( Галанцев, Скопи-чев, Камардина, 1978 ), в состоянии покся низкая концентрация Са^+ в цитоплазме секреторной клетки поддерживается, вероятно, за счет его непрерывного откачивания в результате функционирования системы активного траспорта. Кроме того, часть цитоплаз-матического Се?+ удаляется во внутриклеточные структуры. Многочисленные гранулы осадка пироантиионатной реакция размером 2030 нм располагаются в матриксе митохоццрий. При инкубации био-псийных образцов молочной железы в растворе ЭГТА перед фиксацией гранулы осадка не наблодаптся. Участие в синтезе и экструзии секреторного продукта проявляется' в том, что в зоне комплекса Гольджи осадок продукта пироантимонатной реакции локализован в ламеллярных структурах и полостях пузырьков. Осадок встречается не только в секреторных пузырьках со сформировавшейся мицеллой казеина, но и без нее, причем, он' может быть локализован как на казеиновой мицелле, так ив полости пузырька вне видимой связи с белком.' Сферические формы осадка представлены глы^ками диаметром от 40 до 100 нм. Перистый осадок имеет сложную форму и состоит из отдельныхсферических гранул, не более 40 нм в диаметре.

Известно, что процесс формирования казеиновых мицелл идет с участием ионов Са^+, причем величина мицеллы прямо пропорциональна концентрации Са^+. Увеличение размера гранул связано с возрастанием диаметра секреторного пузырька. При воздействии окситоцина в секреторных клетках молочной железы наблюдается комплекс ультраструктурных изменений ( Грачев,Попов, Скопичев,

1976). Прежде всего это касается митохондрия, в которых отмечаются характерные признаки набухания, частичная деструкция крист, значительное просветление матрикса и уменьшение в них продукта цитохимической реакции,выявляющей Са^+. Зна'штельные ипмечения претерпевают при действии окситоцина структуры шероховатого эндоплазматичгского ретпкулума, каналы которого расширяются и содержат больное количество осадка. Каналы гладкой эндоплалатической сети, депонирующие Са^ во время стимуляции секреции обеспечивают повышение его цитоплазматического и внутриядерного содержания. Продукт пироантимонртной реакции представлен. плотными конгломератами в зоне деконденсированного хроматина, а также отдельными гранулами-в цистерне картотеки. Большая часть внутриклеточного кальция включается в секреторный продукт и выводится с ним из клетки. При действии окситоцина идет интенсивная экструзия секрета, С;Л+ выявляется в цистернах и ■ пузырьках хорошо развитого комплекса Гольджи. Пузырьки укрупняются, сливаясь друг с другом. В отам процессе немаловажную роль играют ионы кальция, повидимому, способствуя взаимодействию мембран контактирующих пузырьков. Са^+ выявляется таке з месте контакта секреторного пузырька с -провой каплей, что. свидетельстгует о возможном его участии в процессах совместной экструзии жира и белка.

Таким образом, в ходе физиологического ответа секреторной клетки индуцированного окситоцином, наблюдайтся существенные перстройки в состоянии аккумулирующих и транспортирующих Са*"+ систем. Основная тенденция заключается в обеспечении процессов экструзии за счет мобилизации внутриклеточных запасов Са^+ из митохондрий, гладкой ондоплазматической сети и примембранкых зон.Возможно, этот процесс сопровождается увеличением Ехода кальции по. селективным каналам.

вывода

I.Межклеточная кооперация в секреторном эпителии молочной железы обеспечивается наличием высокопроницаемнх контактов, присутствие которых установлено элекгронномикросггопически и по перемещению из клетки в клетку инъецированного флуорохрема. При.экспериментальном нарушении межклеточных коммуникаций блокируется распространение физиологических реакций секреторных

клеток, выражающееся в подавлении изменений объема клеток и содержания РЖ, что приводит к прекращению секретообразования.

2. Объединение клеток в пласт секреторного эпителия обеспечивает надёжную изоляцию полости альвеол и просвета протоков от межклеточного пространства. Исследование проницаемости секреторного эпителия с помощью флуоросцеина и пероксидазы хрена показало сохранение барьерных свойств при деформации стенки альвеолы, вызванной действием физиологически активных веществ.

3. Выявлено взаимодействие между миоэпителиальными и секреторными клетками альвеолы молочной железы, опосредованное медиатором холинергической природы. Обнаружены синтез, выделение и ферментативный гидролиз ацетилхолина и ему подобных веществ в структурах альвеолярного отдела. Реакции эффекторш'х клеток эпителия альвеол при блокаде холинорецепторов и нарушении синтеза ацетилхолина прекращаются.

4. Гемодинамика в альвеолярном отделе мелочной железы в период рабочей гиперемии органа, вызванной рефлекторним воздействи* эм окситоцина, обеспечивается вазодиллятационной реакцией микрососудов паренхимы молочной железы, воаникающей за счет хэлин-ергических влияний с миоэпителиальивх клеток.

5. Снижение секреции молока у кормящих женщин тесно связано с нарушением гемодинамики в альвеолярном отделе, обусловленном стойким спазмом микрпсос./дов. Нормализация регионарного кровообращения молочной железы приводит к восстановлению полноценного секретосбразования.

6. Сократительная реакция миоэпителиальных клеток альвеол молочной железы стимулируется при действии ацетилхолина и тормозится катехоламинами. Восстановление сокращений при катехол-аминовой блокаде обеспечивается за счет деполяризации мембраны миоэпителиальных клеток. Развитие сокращений миоэпителия связано с освобождением внутриклеточного кальция из каналов эндоплазматического ретикулума, митохондрий и примембранных везикул.

7. В формировании альвеол молочной железы участвуют протео-литические ферменты и иммункомпетентные клетки крови. Интенсивная миграния лейкоцитов и лимфоцитов в молозиво свидетельству-

ет о полноценном формировании альвеол, что позволяет по данным цитологического анализа секрета ( выявляя степень агрегации лимфоцитов, оценивая уровень активности щелочной фосфатазы и миолоперексидазы лейкоцитов ) провестираннгаю диагностику гяпо-гглактии и обнаружить наруиения предлактационной подготовки молочной железы.

8. Обнаружены обусловленные транспортом осмотически активных веществ колебания объема секреторных клеток в ходе развития эффекторных реакций. Функциональное набухание клеток секреторного эпителия сопровождается активацией хроматина ядер железистых клеток, увеличением активности щелочной фосфатазы и освобождением кальция из внутриклеточных депо.

СПИСОК РАБОТ, ОПУШКОВАНШХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ультраструктуриые изменения секреторной клетки молочной железы при действии ацетилхолина и окситоцина// Тез. секцион. докл. У1 Мездунар. биофиз. конгреса. 1972. Т.4.С.485 486.

2. О влиянии ацетилхолина и окситоцина на ультраструктуру секреторной клетки молочной железы// ДАН СССР, 1972,Т.206,М,

С.975-977. ( В соавт. с И.И.Грачевым, Ю.А.Селиверстовым ).

3. Об иннервации молочной железы белой мыши. В кн.:"Нервная система"»13, 1973, С.61-Б6. ( В соавт. с В.П.Гапанцевым, С.М. Поповым).

4. Исследование эффектов действия окситоцина в молочной железе// В кн.: Матер. 4-го Всесозн. сиппоз. по физиол. и биохим. лактации. Баку,"Элм",1974,С.55-57. ( в соавт. с И.И.Грачевым, С.М.Поповым, Ю.А.ТолкуноЕнм).

5. Исследование локализации холинэстераз в молочной железе овец и коз// Вестник ЛГУ,1975, Вып.З, Мб,С.52-60. ( В соавт. с С.А.Аминовым, И.И.Грачевым, Г.Б.Валакиноп ).

6. Изменения мембранного потенциала секреторных клеток молочной железы при действии окситоцина и медиаторов // Вестник ЛГУ, 1975, #3,С.79-87. ( В соавт. с И.И.Грачевым и Ю.Л.Толкуновым ).

7. Исследования сократительной активности миоэпитслиальных клеток молочной железы // Физиологии, жури. СССР. 1976,Т.62,

С .1707-ГШ. ( В со авт. с И.И.Грачешм, Т.Л.Камардиной ). Цитофизиологил секреции молока.Л."Наука",1976,242 с. ( В соавт. с И.И.Грачевым, С.М.Поповым ).

9. Изменение формы и обгеиа секреторных клеток молочной железы при развитии секреторного цикла // Цитология, 1978. Т. 20. $ I, С.21-26. ( В соавт, с И.И.Грачевым, Т.А.Камардиной, Г.С.Фили-монцевой ). •

1С. Локализация холинэстераз в структурах альвеолярного отдела молочной железы // Цитология, 1978, Т.2С, >.» 5,С.502-506. ( В соавт. с Г.Б.Балакиной, И.И.Грачевым, В.С.Даринской ).

11. Морфофизиологическая характеристика кровеносной системы молочной железы белой мыши// Вестник ЛГУ, 1978,» 3, С.58-66. ( В соавт. с Г.Б.Балакиной, В.П.Галанцевым, Л.П.Кисляковой ).

12. Роль ионов в развитии сокращения миоэпителиальной клетки молочной железы // Вестник ЛГУ, 1978, № 21, С.76-03. ( В соавт. с И.И.Грачевым, Т.Л.Камардиной ).

13. Роль транспортных процессор в функционировании секреторных клеток молочной железы// В кн.: 13 съезд Всесоюзн. физиол. общ. им.И.П.Павлова. 1979, Т.I.С.385-386.

14.Изменение реакций секреторного эпителия молочной железы на действие окситоцина под влиянием уабаина // Цитология, 1900, Т.22,№ 12, С. 1432-1437. ( В соавт. с И'.И. Грачевым, Г.С.Филимон-цевой)

15.Ионный гомеостаз в деятельности секреторных и миоэпителиаль ннх клеток молочной желеоы // В кн.: Современные достижения физиологии и биохимии лактации. 1981, Л."Наука",С.190-194.

16. Исследование реакций микроциркуляторного русла молочной железы лактиручщих белых мьглей // Вестник ЛГУ, - 1983, 9, С,103-106. ( В соавт. с В.П.Галачцевым, В.Н.Ермолаевой ).

17. Морфофункциональная организация межклеточного взаиомодейст-вия в альвеолах молочной железы // В кн.: Вопросы нейроэндокри-нологии ( Нервная система № 24 ), Изд. ЛГУ, 1983, С.59-65. ( В соавт. с Г.Б.Балакиной, О.И.Турбаевой

18. Авторадиографический анализ связывания меченного эстрадио-ла рецепторами ткани матки в условиях гормонального подавления репродуктивной функции // В кн.: Вопросы нейроондокринологии

( Нервная система № 24 ), Над.ЛГУ, 1983. С.П5-120. '( В соавт.

с М.Н.Орловым, О.Н.Савченко, U.A.Степановой ). 19. Анализ специфического связывании Н3- эстрадиола маткой ан-дрогенстерильных крыс биохимическим и авторадиографическим методами и Проблемы эндокринологии, 1983, Т.29. !"• 3, С.76-82. ( 3 соавт. с U.M.Орловым, О.Н.Савченко, Ф.И.Пройминой ). £0. Активность щелочной фосфатази при различных функциональных состояниях клеток альвеолярного эпителия молочной железы белой мыши // Архив анат.,гистол.,и эмбриол. IS83, № 6, С.76-80. ( В соавт. с Г.Б.Балэкиной ).

21. Взаимодействие миоэпителиальных и секреторных клэток в альвеоле молочной железы как аналог синаптической передачи// В сб. Физиология медиаторов, периферический синапс, Тез докл. Всс о-взн. симпоз. Казань. 1984.'С.25-27. ( В соавт. с Г.Б.Балакиной)

22. Изменение сокращений миоопителия молочной железы при экспериментальном воздействии на транспорт Са2+// В кн.: Развитие фундаментальных и прикладных исследований. Деп.ВИНИТИ от 11.06. 04. !3 3843-84, С.47-52.( В соавт. с Т.А.Камардиной ).

23. Роль межклеточных взаимоотношений в развитии реакций альвеол молочной железы на окситоцин // В кн.: Пептиды и моноамины

в нейроэедэхринной регуляции. ИБРО. Междунар. симпоз. 1985, С.51.( В соавт. с И.И.Грачевым, Г.Б.Балакиной, Т.А.Камардиной). ■24. Локализация холинацетилтрасферазм в альвеолярном отделе молочной железы белой мыши // Архив анат,. гистол. и эмбриол, 1986, Т.ХС, ff 4, Г..73-77.( В соавт. с Г.Б.Балакиной ).

25. Роль лизосомального аппарата клегки в осуществлении морфо-генетических Процессов // Тр. Iii Мекдунар. симпоз." Структура

и функция лизосоу" Тбилиси, 1986, С.183-184.С В соавт. с В.И. Скопичевой ).

26. Анализ морфометрических процессов альвеол молочной железы // Тез. докл.УП Всесовзн. симпоз. по физиол. и биохим. лактации. Алма-Ата, 1985, чП, С.63-65,( В соавт. с С.Н.ГаДдуковым ).

27. Изменение свойств хроматина при развитии.секреторного цикла в клетках железистого эпителия молочной железы // Тез. докл. УП Всесоюэн. симпоз. по фиэЯол. и биохим. лактации. Алма-ата, I9Ö6, ti.il* С.65-66. ( В соаггт. с Т.А.Камардиной ).'

28. Роль внутриклеточной системы пщрс«лиза ацетилхолина в деятельности гладкомыйечных .образований молочной железы и репродуктивных органов // Тез. докладов УП Всесотзн. симпоз. по фи-

зиолог. и Яиох. лактации. Алма-Ата, Г986.- ч. I. С.24 25. ( В соавт. с Н.А.Арутпнян, Г.Б.Балакиной ).

29. Диагностическое значение цитологического состава молока родильниц // Вопр. охраны материнсгва и детства. 1986,Т.31,

12, С.53.( В соавт. с С.Н.Гайдуковым ).

30. Локализация'кальция в секреторных клетках молочной железы при воздействии окситоцина // Архив анат.,гистол, и эмбриол.

1987, Т.62Л I, С.69-74. ( В соавт. с В.П.Галанцевым, Т.А.Ка-мардиной ).

31. Определение рецепторов эстрадиола в органах миленях с помощью авторадиографии // Архив анат..гистол.и эмбриол. 1987, Т. 62, 5, С.68-7С. ( В соавт. с Н.А.Аруткмян,Н,З.Эпггейн, Е.В.Цырлиной ).

32. Изменения ядер железистых клеток молочной железы в секреторном цикле.// Цитология; 1988, Т. 30, ;» 1,СЛ63-187. ( В соавт, с Т.А.Камардиной.).

33. Развитие альвеолярной структуры молочной келезк овец в различные периоды сулгности // Журн. Сельхоз, биол. 1988. !' 2, С.98-102, ( В соавт. с Т.Ч.Чекировым ).

34. Локализация ферментов гидролиза ацетилхолина в гладких мио-цитах молочной железы и матки // Архив анат., гист.и эмбриол.

1988. Т. 63, » 4, С.64-6С. ( В соавт. с Г.Б.Балакиной, Н.А.Ару-тюнян).

35. Особенности реакция сосудистого русла молочной железы л&к-тирующих женщин // Физиол. журн. 1990, Т."б, $ 7, С.656-664. ( В соавт. с С.Н.Гайдуковым ).

36. Активация хроматина ядер клеток молочной железы в ходе секреторного цикла // Тез. докл. конф." Доминантные механизмы поведенчески;: адаптация" Ленинград 1990. С.48-49. С В соавт с Т.А.Камардиной )

37. Гипогалактия у женщин - ранняя диагностика и анализ патогенеза // Тез. докл. Всесоюзн. симоз. по физиол. и биохим. лактации, Баку, 1990, С.76-77. ( В соавт. С.II.Гайдуковым ).

38. Физиологическое обоснование ранней диагностики гипогалактии у яешцин // Физиол журн. 1991, Т.77, р 5, С.92- 96. ( В соант. с.С.Н.Гайдуковым ).

39. 0 терапии лактиционного мастита // Вестник хирургии им. И.

И.Грекова. 1990, T.I45, JP II, C.I4I-I42.( В соавт. с С.Н.Гайдуковым ).

40. Микро- и ультраструктура клетск молочной железы-овец и коров в процессе маммогенеэа и лакточоэза // Атлас, Бишкек, "Нлим" 1991, 6,3 Неч. лкст.( В соавт. с Т.Ч.Чекировым, Б.И. Чумаковым ).

41. Экспресс-диагностика в лабораторных исследованиях при патологических состояниях молочной железы в период лактации // . Иод 1Ш "Альтернативная наука" СПб. 1991, 24 с. ( В соавт. с С.Н.Гайдуковым, Ю.A.I'.neсивцевым, В.Н.Кокряковым ).

42. Особенности регионарного кровотока в молочной железе при гипогалактии // В кн.: Состояние репродуктивной функции женщин в различные ворвстные периоды. С5. научн. тр. Изд. ШИ. СПб. 1992, С.86-89. ( В соавт. с С.Н.Гайдуковым, Н.Д.Гогошдзе ).

43. К характеристике иммунногопроцесса при становлении лактационной функции у женщин // Вестник СП5ГУ. 1993, В. 3,( !."' 17 ) С.59-72. ( В соавт. с С.Н.Гайдуковым, Т.В.Абрамовой ).

44. Некоторые факторы неспецифической резистентности при мико-плазмозе у женщин в период лактогенеэа // Вестник СПбГУ. 1993, В. 3. ( JS 17 ), C.IL5-II.7. ( В соавт. с В.В.Теркиным, С.Н.Гайдуковым. )