Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Клинико-морфологическое обоснование фотодинамической терапии у собак и кошек

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Клинико-морфологическое обоснование фотодинамической терапии у собак и кошек"

На правах рукописи

Кулешова Оксана Александровна

КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ У СОБАК И КОШЕК

Специальность 06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 о и-: ";

Москва-2012

005016895

005016895

Работа выполнена на кафедре анатомии, физиологии и хирургии животных РУДН.

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор Ягников Сергей Александрович,

РУДН

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Никптченко Владимир Ефимович,

профессор кафедры стандартизации, сертификации и ветсанэкспертизы РУДН

кандидат ветеринарных наук Шавырин Дмитрий Иванович,

ассистент кафедры незаразных болезней

Московского государственного университета пищевых производств

Ведущая организация: Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины

Защита состоится 31 мая 2012 г. в 12-00 часов

на заседании диссертационного совета Д 212.203.32 при РУДН

по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8/2, зал № 2.

С диссертацией можно ознакомиться в Учебно-научном информационно-библиографическом центре Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

Автореферат размещен на сайте РУДН \vwvv. rudn.ru Автореферат диссертации разослан 28 апреля 2012 года.

Ученый секретарь диссертационного совет

кандидат биологических наук

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. В условиях современного мегаполиса с каждым годом возрастает процент онкологически больных пациентов как в гуманной, так и в ветеринарной медицине. Опухоли в структуре всех заболеваний собак и кошек составляют 8-18%, в числе которых на долю опухолей молочной железы приходится 25-30%, опухолей кожи - 25%, опухолей скелета - 3,9 - 5,8 %, лимфомы - 3%, опухолей репродуктивной системы самцов - 5 - 15 % (Космачева Е.П., 2002; Митин В.Н., 2002); опухолей спинного мозга - 1,5% (Ягников С.А., Лукоянова М.Л., 2005); опухолей носовой полости - 1-2% (Кулешова Я.А., 2007), опухолей печени - менее 1% (Withrow S., 2007), опухолей головного мозга у собак 1,5 - 3% и у кошек - 1-2% (Adamo P. Filippo, Forrest Lisa, Dubielzig Richard, 2004). Лечение, увеличение продолжительности и качества жизни онкологически больных животных является одной из важнейших задач современной ветеринарной медицины.

Внедрение в ветеринарную практику новых методов визуальной диагностики, таких как: компьютерная и магнитно-резонансная томография, эндоскопия, составили основу для ранней диагностики опухолей различных тканей и органов. Выбор тактики лечения онкопациентов зависит от вида опухоли, ее локализации и стадии процесса. Основными методами лечения являются хирургический метод, химиотерапия, лучевая терапия. В основе хирургического метода лечения опухолей различной локализации лежит два принципа — принцип абластики и антибластики (Henderson Ralph, 2012).

В онкохирургии принято иссекать опухоли широко в пределах здоровой ткани, однако при опухолях сложной анатомической локализации (головной и спинной мозг, ротовая и носовая полость) и при тотальном опухолевом поражении жизненно важных органов (печень, легкие) выполнить радикальную операцию не всегда возможно. Основным ограничением для выполнения нейрохирургической операции является локализация и отсутствие четких визуальных границ опухоли. Радикальная резекция опухоли головного мозга в большинстве случаев невозможна, т.к. иссечение здоровой ткани мозга с инфильтрирующими ее опухолевыми клетками недопустимо, из-за высокой вероятности развития тяжелых неврологических осложнений вплоть до гибели животного (Ермакова К.В., 2010).

Таким образом, необходимо проводить комбинированное лечение, включающее в себя хирургическое иссечение опухоли, с последующим проведением лечебных мероприятий, направленных на повреждение и гибель оставшихся опухолевых клеток в области операционной раны различными методами. Для соблюдения принципа антибластики с целью удлинения безрецидивного периода в настоящее время в ветеринарной практике активно используют неадъювантную и адъювантную химио - и лучевую терапию. Данные методы не обладают выраженным таргентным действием на опухолевые клетки, так как химиопрепараты обладают системным токсическим действием на весь организм, что проявляется диспепсическими расстройствами (рвота, анорексия, диарея), анемией, миелосупрессией. Иногда такое токсическое действие может привести к гибели животного (Якунина М.Н., Шимширт A.A., Трещалина Е.М., 2010, Henderson Ralph, 2012). Лучевая терапия также не отличается селективностью, поскольку излучение воздействует не только на опухоль, но и на прилежащие здоровые ткани, что вызывает их повреждение и способствует развитию таких осложнений, как постлучевые дерматиты, лучевые кератиты (Брюшковский К. IO., Клявин А. Г., 2008).

Успех хирургического вмешательства при опухолях любой локализации у животных определяется сроком безрецидивного послеоперационного периода и качеством жизни после хирургического вмешательства. Для достижения этого необходим поиск новых методов лечения, которые бы способствовали соблюдению в полной мере принципов «абластики» и «антибластики» хирургического вмешательства, большей селективностью к опухолевой ткани, отсутствием системного воздействия на организм.

1.2. Цель и задачи исследования.

Цель настоящего исследования — изучить лечебно-диагностическую эффективность метода диагностической флуоресценции (ДФ) и фотодинамической терапии (ФДТ) на основе клинических и патоморфологических изменений в спонтанных новообразованиях у собак и кошек.

Для выполнения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Определить накопление и особенности распределения фотосенсибилизатора (ФС) в различных тканях и органах у собак и кошек без и со спонтанными новообразованиями методом ДФ. Оценить возможности ДФ для диагностики локализации опухолевых клеток, не определяемых при визуальном осмотре.

2. Определить терапевтическую дозу и временной промежуток («коридор») максимального накопления ФС в спонтанных новообразованиях различных тканей и органов.

3. Изучить оптимальные параметры (плотность световой энергии, Дж/см2) для проведения лечебного сеанса ФДТ.

4. Выявить морфологические изменения в патологическом очаге после проведения сеанса ФДТ в различные промежутки времени.

5. Выявить побочные эффекты и возможные осложнения при проведении ФДТ, их частоту и характер, разработать меры защиты.

1.3. Научная новизна.

Впервые изучено накопление и особенности распределения ФС в опухолевой, предопухолевой, воспалительной и здоровой ткани различной локализации у собак и кошек.

Впервые показана возможность ДФ у животных со спонтанными опухолями органов брюшной полости, легких, головного мозга с диагностической целью для определения более точных границ опухоли.

Впервые апробирован метод ФДТ с отечественным ФС хлоринового ряда «Фотодитазин» в лечебных целях при спонтанных новообразованиях различного гистогенеза слизистой оболочки ротовой полости у собак и кошек. На основании полученных патоморфологических изменений в спонтанных новообразованиях слизистой оболочки ротовой полости после лечебного сеанса ФДТ впервые сформулированы основные стадии лечебного действия данного метода у собак и кошек. Впервые установлены побочные эффекты и возможные осложнения после проведения ФДТ у собак и кошек и разработаны меры их предупреждения.

1.4. Теоретическая и практическая значимость работы.

В процессе данной работы определены оптимальная терапевтическая доза ФС, время максимального накопления ФС, параметры воздействия, необходимые для проведения лечебного сеанса ФДТ и ДФ. Установлены основные стадии патоморфологических изменений в патологическом очаге после проведения ФДТ. В ходе данной работы определена клиническая эффективность ФДТ при спонтанных новообразованиях слизистой ротовой полости различного гистогенеза у собак и кошек. Разработана профилактика возможных осложнений после проведения

лечебного сеанса ФДТ. Апробирована возможность определения границ опухолевого роста методом ДФ. В ходе работы испытаны и внедрены в ветеринарную клиническую практику лазерные установки для проведения ДФ (Спектр-Кластер) и ФДТ (Актус-2).

Основной материал диссертационной работы используется на базе Клиники «Центр биологии и ветеринарии» РУДН, ветеринарных клиник г. Серпухов и г. Чехов и в учебном процессе на кафедре анатомии, физиологии и хирургии животных РУДН.

1.5. Основные положения, выносимые па защиту:

1. Особенности накопления ФС в патологической и здоровой ткани у собак и кошек

2. Доза и время максимального накопления ФС в воспалительной, предопухолевой и опухолевой ткани после внутривенного введения препарата. Оптимальные параметры, необходимые для проведения лечебного сеанса ФДТ при плотности мощности в 0,8 Вт/см2;

3. Характеристика патоморфологических стадий в спонтанном новообразовании после проведения лечебного сеанса ФДТ;

4. Клиническая и гематологическая токсичность у собак и кошек после проведения ФДТ.

1.6. Апробация.

Результаты работы представлены и обсуждены на V Всероссийской конференции по вопросам онкологии и анестезиологии мелких домашних животных (24-25 января 2009 г., Москва), VIII Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» (21-22 апреля 2009 г., Москва), XVII Московском международном ветеринарном конгрессе (2009 г., Москва), I Всероссийской межвузовской конференции по ветеринарной хирургии (2728 февраля 2010 г., Москва), II Всероссийской межвузовской конференции по ветеринарной хирургии (19-20 марта 2011 г., Москва).

1.7. Публикации.

По материалам диссертации опубликовано И печатных работ, в том числе статьи в журналах - 6 (из них 4 в журналах перечня ВАК), тезисы в материалах международных и российских конференций -5.

1.8. Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 147 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список литературы включает 128 источников, из них 86 иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 15 таблицами, 3 схемами, 19 графиками и 33 рисунками.

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы н методы исследования

Работа выполнена на кафедре анатомии, физиологии и хирургии животных Российского университета дружбы народов. Клиническая часть работы выполнена на базе клиники «Центр Биологии и Ветеринарии» РУДН и Клиники экспериментальной терапии РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН.

Объектом исследования стали 113 животных (27 собак и 86 кошек), поступившие в вышеперечисленные лечебные учреждения за период с 2008 по 2012 год. Экспериментальная часть работы (экспериментальная группа) выполнена на 36 собаках и кошках, что составило 32% от общего числа животных. Клиническая часть работы (клиническая группа) выполнена на 77 животных (68%). I. Экспериментальная группа

1.1. Общая характеристика группы

Целью формирования экспериментальной группы животных явилось изучение накопления и особенностей распространения ФС, определение терапевтической дозы и времени накопления ФС, необходимого для проведения ДФ у животных.

В экспериментальную группу включены 36 животных (24 собаки и 12 кошек), из них 8 (4 собаки и 4 кошки) - клинически здоровые животных и 28 (20 собак и 8 кошек) - животные с опухолевым поражением органов брюшной полости, легких и головного мозга.

1.2. Оперативный доступ и методика проведения ДФ

На первом этапе исследования животным выполняли хирургический доступ к патологическому очагу (диагностическая лапаротомия, торакотомия, краниотомия). Далее измеряли спектры флуоресценции. Для определения уровня и времени накопления ФС в опухоли и здоровой ткани в работе использована методика измерений нормированных спектров флуоресценции биологических тканей in vivo, разработанная для непигментированных мягких тканей при терапевтических концентрациях экзогенного флуоресцентного маркера (ФС). В данном исследовании использовали ФС хлоринового ряда «Фотодитазин» в дозах 0,5 - 1,0 - 1,5 мг/кг МТ. Измерения спектров проводили с помощью компьютеризированной спектрально-флуоресцентной установки «Спектр-Кластер» (ООО «Кластер»).

Исследование проводили по следующей схеме:

1. До введения ФС у всех животных проводили замеры фоновой (собственной) аутофлуоресценции в центре опухоли (п=10), по периферии опухоли (п=10) и здоровой ткани (п=10). У клинически здоровых животных измеряли по 20 спектров по каждому органу (печень, селезенка, поджелудочная железа, почка, мочевой пузырь);

2. Введение ФС внутривенно и измерение экзогенной флуоресценции в центре опухоли (п=10), по периферии опухоли (п=10) и здоровой ткани (п=10) через 30, 60, 90, 120 и 150 мин после введения ФС.

Закончив измерения, выполняли хирургическое удаление опухолевого очага, после чего ушивали послеоперационную рану простыми узловыми швами капроном № 3, 4, 5. Патологический материал, полученный в ходе хирургического вмешательства, отправляли на гистологическое исследование. По полученным данным рассчитывали усредненную величину нормированной флуоресценции FN и стандартную ошибку с помощью статистического анализа в программном обеспечении MS EXCEL.

II. Клиническая группа

2.1. Общая характеристика группы

Клиническая группа включала 77 животных (74 кошки и 3 собаки) с предопухолевыми и воспалительными процессами ротовой полости. Объектами для данного исследовании послужили животные, у которых не была получена стойкая положительная ремиссия на медикаментозной терапии.

Все кошки (п=74) были поделены на 3 группы. Первая группа включала 30 кошек и внутри была поделена на две подгруппы: 1) 8 кошек с диагнозом палатоглоссит, которым на первом этапе исследования выполняли только экстракцию премоляров и моляров верхней и нижней челюсти; 2) 22 кошки с патологическим поражением слизистой ротовой полости, которым выполняли введение ФС «Фотодитазин» в дозе 0,5 мг/кг МТ. Вторая и третья группа состояли из 22 кошек, которым в исследовании вводили ФС в дозе 1,0 и 1,5 мг/кг МТ, соответственно. После введения ФС животным проводили ДФ и ФДТ. Среди собак группы не были сформированы вследствие малого числа особей.

2.2. Методика проведения ДФ и ФДТ

До проведения ДФ и ФДТ животным с зубным налетом и камнями выполняли санацию ротовой полости ультразвуковым скайлером. При выявлении у кошек патологически измененных больных зубов выполняли их экстракцию. Кошкам с диагнозом палатоглоссит (N=8) выполняли экстракцию зубов (премоляров и моляров) с помощью эливатора Байна. На первом этапе животным данной подгруппы первой группы не проводили сеанс ФДТ, с целью определения эффективности лечения стоматита методом экстракции зубов. Остальным животным до проведения сеанса ДФ и ФДТ выполняли постановку внутривенного периферического катетера в латеральную подкожную вену грудной конечности (v. cephalica lateralis).

В ходе спектрально-флуоресцентных исследований измеряли спектры ауто- (до введения ФС - 00 мин) и экзогенной флуоресценции (через 30, 60, 90,120, 150 и 180 мин после введения ФС) патологической и здоровой ткани слизистой ротовой полости в диапазоне 655-750 нм. Измерения проводили при сканировании пятна возбуждающего лазерного излучения в центре (10 точек), по периферии (10 точек) и здоровой ткани (10 точек). Далее рассчитывали усредненную величину нормированной флуоресценции FN и высчитывали стандартную ошибку с использованием программы Microsoft Excel 2007.

Далее животным проводили сеанс ФДТ. В качестве источника лазерного излучения применяли аппарат Актус-2 (ЗАО «Полупроводниковые приборы», Санкт-Петербург). Длина волны излучения аппарата 661 ± 1 нм. Воздействие световым излучением производилось методом кругового поля. Световая доза подводилась перпендикулярно поверхности патологического очага с помощью кварцевых моноволоконных световодов (ООО «Биоспек»). При облучении экзофитных, обширных очагов использовали дополнительные (тангенциальные) поля облучения. У собак вводимая доза ФС составляла 1-1,5 мг/кг МТ. К очагам подводилось лазерное излучение с плотностью энергии 200-300400 Дж/см2 с плотностью световой энергии 0,8 Вт/см2.

2.3. Исследование крови

У всех животных до и на 3, 7, 14 сутки после сеанса ФДТ выполняли забор крови с целью контроля основных гематологических и биохимических показателей крови. По результатам гематологического исследования определяли содержание эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов. По результатам биохимического исследования определяли состояние внутренних органов (печень - общий билирубин, АЛТ, ACT; почек - мочевина, креатинин).

2.4. Морфологические методы исследования

У животных выполняли инцизионную биопсию из патологического очага до ФДТ, через 2 часа и на 7, 14 сутки после ФДТ. Патологический материал, взятый в виде клина на границе здоровой и патологической ткани, помещали в 10% раствор формалина. Применяли гистологические методы исследования (окраска гематоксилином и эозином, окраска срезов по Ван-Гизону). Приготовление срезов производили на микротомах (для световой микроскопии).

2.5. Критерии оценки результатов лечения спонтанных новообразований слизистой оболочки ротовой полости у собаки кошек

Полученные результаты от лечебных сеансов ФДТ у кошек и собак с предопухолевыми и воспалительными процессами в ротовой полости оценивали согласно Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ): полная регрессия, частичная регрессия, стабилизация процесса, прогрессирование процесса.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Экспериментальная группа

Объектами для экспериментального исследования послужили 36 животных, из них 8 (22,2%) клинически здоровые животные и 28 (77,8%) животных с опухолевыми поражениями органов брюшной полости, грудной полости и головного мозга. Гистологическая верификация опухолей экспериментальной группы представлена в таблице 1.

Таблица 1.

Гистологическая верш ) и каші я опухолей моделей экспериментальной группы

Гистологический диагноз Локализация II %

Гепатоцелпюлярный рак Печень 8 22,2 77,8%

Лимфома Селезенка 6 16,7

Почечно-клеточный рак Почка 3 8,3

Аденокарцинома Поджелудочная железа 2 5,6

Переходно-клеточный рак Мочевой пузырь 2 5,6

Мелкоклеточный анаплазированный рак Легкое 3 8,3

Менингиома Головной мозг 4 11,1

Клинически здоровые животные 8 22,2%

3.1.1. Результаты ДФу клинически здоровых животных.

В исследовании, заключающемся в измерении спектров флуоресценции при дозе введенного ФС 1,0 и 1,5 мг/кг МТ через равные временные промежутки (30 мин) у клинически здоровых животных, были получены результаты, указывающие, что ФС имеет различную величину накопления. Через 60 минут после внутривенного введения ФС в дозе 1 мг/кг МТ величина показателя нормированной флуоресценции составила в ткани селезенки (Рм6о=6,4±0,06), поджелудочной железы (Рм60=3,4±0,04), почки (Рмбо=6,9±0,07), мочевого пузыря (Рмбо=2,4±0,07), что ничтожно мало, по сравнению с величиной показателя нормированной флуоресценции в ткани печени (Ркм)=130,7±0,12) (Р< 0,05). Аналогичная тенденция распределения ФС отмечается и при дозе ФС 1,5 мг/кг МТ. В данном исследовании, по полученным результатам, можно отметить тенденцию, что показатели аутофлуоресценции органов брюшной полости (кроме печени) незначительно отличались от показателей экзогенной флуоресценции, измеренной через 30 мин после внутривенного введения ФС при дозе ФС 1,0 и 1,5 мг/кг МТ (Таблица 2).

Таблица 2.

Величины нормированной флуоресценции органов брюшной полости у клинически здоровых животных при дозах ФС 1,0 и __1,5 мг/кг МТ_

Орган Время, мин

00 30 60 90 120 150

0 мг/кг 1,0 мг/кг 1,5 мг/кг 1,0 мг/кг 1,5 мг/кг и мг/кг 1^5 мг/кг 1,0 мг/кг 1,5 мг/кг 1,0 мг/кг 1,5 мг/кг

Печень 6,6± 0,06 76,7± 0,08 70,1± 0,53 130,7± 0,12 157,8± 0,63 129,9± 0,15 163,4± 0,27 88,2± 0,11 159,3± 0,38 86,2± 0,19 154,3± 0,09

Селезенка 4,2± 0,05 6,3± 0,05 5,4± 0,07 6,4± 0,06 5,6± 0,07 6,3± 0,06 5,7± 0,11 6,3± 0,03 6,2± 0,09 6,1± 0,04 6,3± 0,07

Поджелудочная железа 2,8± 0,06 3,5± 0,05 5,5± 0,10 3,4± 0,04 5,8± 0,12 3,8± 0,06 5,4± 0,09 3,5± 0,05 5,5± 0,08 3,2± 0,04 5,5± 0,12

Почка 5,1± 0,02 6,0± 0,06 5,9± 0,09 6,9± 0,07 6,4± 0,07 6,7± 0,14 6,2± 0,09 6,7± 0,10 5,9± 0,07 6,3± 0,03 6,4± 0,04

Мочевой пузырь 1,9± 0,07 2,2± 0,03 4,5± 0,06 2,4± 0,07 4,99± 0,160 2,5± 0,04 5,5± 0,06 2,5± 0,04 5,5± 0,05 2,3± 0,05 5,3± 0,11

Примечание: Р<0,05; 00 - показатель аутофлуоресценцнн (показатель флуоресценции ткани до введения ФС).

3.1.2. Результаты ДФ у животных с опухолевыми поражениями.

Исследование было проведено на животных с опухолевыми поражениями различных органов и тканей, которые для данной работы послужили как экспериментальные модели.

По результатам собственных исследований было установлено, что показатели нормированной флуоресценции отн. ед.) практически не

различаются при дозах ФС 1,0 и 1,5 мг/кг МТ. Но эти показатели гораздо выше, чем при дозе ФС, составляющей 0,5 мг/кг МТ. ФС накапливается больше в опухолевой ткани. В здоровой ткани препарат регистрируется в следовых количествах.

По результатам собственных исследований были рассчитаны показатели контрастности тканей (отношение накопления ФС в здоровой и опухолевой ткани) при опухолях различных органов (Р<0,05) (Таблица 3).

Таблица 3.

Показатели контрастности тканей различных органов у собак и кошек

Гистологический диагноз Показатель контрастности Мах время накопления, мин

Гепатоцеллюлярный рак 1:3 90

Лимфома селезенки 1:3 90

Аденокарцинома поджелудочной железы 1:2 90

Почечно-клеточный рак 1:4 90

Переходно-клеточный рак мочевого пузыря 1:5 90

Менингиома головного мозга 1:5 90

Мелкоклеточный анаплазированный рак легкого 1:3 90

3.2. Клиническая группа.

3.2.1. Общая характеристика группы.

Исследование проведено на 77 животных, из них 74 кошек и 3 собаки. Среди кошек самцы составляли 56 особей (76%), а самки - 18 особей (24%). Среди собак все были самцы (100%). Средний возраст кошек в исследовании составил 2-4 года. Среди собак возраст колебался от 1 года до 9 лет. В данной работе у кошек предопухолевый очаг был представлен единичным новообразованием, для которого была характерна экзофитная форма роста размером от 3 до 10 мм или массовые разрастания в виде гиперплазии слизистой десен на протяжении всей зубной аркады различной локализации. Для воспалительного процесса была характерная инфильтрирующая форма роста размером от 1 до 3 см в виде палатоглоссита и буккостоматита. У кошек с диагнозом эозинофильная гранулема язвы локализовались на слизистой верхней губы и имели двустороннее поражение. Основные локализации спонтанных новообразований слизистой ротовой полости у кошек представлены в таблице 4. У 2 собак патологический процесс был локализован в области слизистой языка в виде очага, для которого была характерна инфильтрирующая форма роста, размером от 3 см до тотального поражения

дорсальной поверхности языка. У 1 собаки была отмечена гиперплазия десны в проекции резца.

Таблица 4.

Локализация пред опухолевых и воспалительных спонтанных новообразований _слизистой ротовой полости у кошек__

Локализация Число наблюдений %

Слизистая щеки 10 13,5 Предопухолевый

В проекции моляра нижней челюсти 15 20,3 процесс - 66%

Подъязычная область 9 12,2 (49/74)

В проекции резцового края 7 9,4

Слизистая верхней и нижней челюсти 8 10,8

Палатоглоссит 8 10,8 Воспалительный

Буккостоматит 11 14,9 процесс -34%

Слизистая верхней губы 6 8,1 (25/74)

3.2.2. Результаты ДФ и ФДТу клинической группы.

У 8 животных с диагнозом палатоглоссит после экстракции зубов положительная динамика отмечалась в 37,5% (у 3 из 8). В 62,5% случаев (у 5 кошек из 8) результат был сомнительным. Эти животные были переведены во вторую группу для проведения ФДТ.

В ходе клинического исследования были получены результаты, указывающие, что максимальные величины показателей нормированной флуоресценции при введении ФС в дозах 1,0 и 1,5 мг/кг МТ, отмечаются через 150 мин после внутривенного введения препарата. При данных дозах не выявлена значительная вариабельность диагностического показателя. Через 180 мин после введения ФС отмечается снижение диагностического показателя (Рис. 1). Показатели экзогенной флуоресценции превышали показатели аутофлуоресценции в центре новообразования в 5 раз (Рис. 2):_ ____

10.5 мг кг з 1.0 мг кг 1.5 МГ К!

Рис. 1. Показатель нормированной флуоресценции (К^ в центре новообразования слизистой ротовой полости при дозах ФС 0.5 ,1.0 ,1.5 мг/кг МТ.

Рис. 2. Показатель нормированной флуоресценции (Fn) в центре новообразования и здоровой слизистой ротовой полости через 150 минут после внутривенного введения ФС в дозе 1 мг/кг МТ у кота.

3.3. Результаты лечения спонтанных новообразований слизистой ротовой полости у собак и кошек методом ФДТ.

Результаты гистологического исследования спонтанных новообразований слизистой ротовой полости у кошек представлены в таблице 5.

Таблица 5.

Гистологическая верификация предопухолевых и воспалительных спонтанных _новообразований слизистой ротовой полости у собак и кошек_

Гистологический диагноз Число наблюдений (%)

Кошки (N=74)

Эозинофильная гранулема 6(8,1%)

Плоскоклеточная гиперплазия 13 (17,5%)

Грануляционная ткань. Хроническое воспаление. 31 (42%)

Хроническое неспецифическое воспаление. 23 (31,1%)

Ангиофиброма 1 (1,3%)

Собаки (N=3)

Хроническое неспецифическое воспаление 2 (67%)

Плоскоклеточная гиперплазия 1 (33%)

При воздействии на патологическую ткань при плотности световой энергии 200 Дж/см2 не были зарегистрированы макроскопические изменения в патологической ткани. При плотности световой энергии, равной 300-400 Дж/см2, отмечали местную гиперемию в зоне облучения, геморрагии, отек облученных тканей.

У животных на 20 сутки после 1 сеанса ФДТ при плотности световой энергии 300-400 Дж/см2 отмечали полную регрессию - 41% (у 24 из 59) и частичную регрессию - 59% (у 35 из 59) новообразования. Полная регрессия после 1 сеанса ФДТ отмечалась при новообразованиях экзофитной формы роста до

1 см у кошек с верификацией гистологических диагнозов, как плоскоклеточная гиперплазия, грануляционная ткань. У 18 животных на 20 дн после ФДТ при плотности световой энергии 200 Дж/см2 отмечали стабилизацию процесса (23%). После 3-х сеансов ФДТ при плотности световой энергии 300-400 Дж/см2 у животных отмечали полную регрессию - 87% (у 46 из 53) и частичную регрессию -13% (у 7 из 53) новообразования. Полную регрессию после 3-х курсов ФДТ отмечали при хроническом неспецифическом воспалении языка у собак, эозинофильной гранулеме кошек, ангиофиброме, палатоглоссите. Частичную регрессию после трех сеансов ФДТ отмечали при гиперплазии слизистой верхней и нижней челюсти тотального характера у кошек.

3.4. Продолжительность безрецндивпого периода.

Продолжительность безрецидивного периода рассчитана к моменту написания данной диссертационной работы.

Продолжительность безрецидивного периода при хроническом неспецифическом воспалении слизистой ротовой полости у кошек составила 16 — 18 месяцев, у собак - 22 - 32 мес. У кошек продолжительность безрецидивного периода составила при плоскоклеточной гиперплазии - 12-16 мес., грануляционной ткани - 6 - 21 мес., ангиофибромы - 4 мес., при эозинофильной гранулеме - 12-23 мес.

3.5. Побочные эффекты.

У двух голых кошек породы сфинкс при проведении сеанса ФДТ в летнее время на контрольном осмотре на 7 сутки в области спины и бедра были выявлены участки гиперемии кожи правильной округлой формы диаметром до 1,0-1,5 см. Со слов владельцев, животных это не беспокоило.

3.6. Результаты дополнительных методов исследования.

3.6.1. Показатели крови.

По гематологическому анализу крови эритроциты, гемоглобин, лимфоциты, моноциты, эозинофилы до проведения сеанса ФДТ и на 3, 7, 14 сутки находились в пределах показателей физиологической нормы. До проведения сеанса ФДТ лейкоциты находились в пределах верхней границы нормы 19,6±0,54 (при норме 5,5-19,5 тыс/мкл), на 3, 7 и 14 сутки после ФДТ составили 19,2±0,47, 13,8±0,66 и 11,0±0,61, соответственно (Таблица 6).

Таблица б.

Динамика показателен гемограмм после введення ФС_

ФС «Фотодитазнн», 0,5-1*5 мг/кг

Показатели нормы Эритроциты Гемоглобин Лейкоциты Лимфоциты Моноциты Эозинофилы

5-10 мліі/МКЛ 80-150 г/л 5,5-19,5 тыс/мкл 0,2-0,5 0,01-0,04 0,02-0,12

До (контроль) 7,5±0,38 144,8±4,07 19,6±0,54 0,37±0,017 0,03±0,002 0,04±0,005

На 1 сутки 7,8±0,34 124,7±4,18 19,2±0,47 0,37±0,021 0,03±0,002 0,037±0,004

На 7 сутки 8,0±0,31 117,4±4,21 13,8±0,6б 0,37±0,016 0,02±0,002 0,038±0,004

На 14 сутки 7,7±0,27 83,2±9,92 11,0±0,61 0,37±0,016 0,02±0,002 0,03±0,002

Примечание: Р<0,05.

По биохимическому анализу показатели: билирубин общий, АЛТ, ACT, мочевина, креатинин находились в пределах физиологической нормы до ФДТ и на 3, 7, 14 сутки после ФДТ (Таблица 7).

Таблица 7.

Динамика биохимических показателей крови на фоне проведения сеанса ФДТ

ФС «Фотодитазин», 0,5-1,5 мг/кг МТ

Показатели нормы Билирубин общ, мкмоль/л АЛТ, U/L ACT, U/L Мочевина, ммоль/л Креатинин, мкмоль/л

1,2-7,9 8-52 9-40 5,2-11 48,6-165,0

До (контроль) 4,55±0,449 27,4±2,43 27,3±1,82 7,8±0,34 105,4±6,26

На 3 сутки 4,бЗ±0,440 27,8±2,56 29,3±1,86 7,8±0,31 109,3±6,31

На 7 сутки 4,7±0,467 28,7±2,57 23,7±1,84 7,8±0,28 111,0±6,5

На 14 сутки 4,63±0,43 29,6±2,77 34,8± 1,88 7,9±0,29 107,7±4,16

Примечание: Р<0,05.

3.6.2. Патоморфологические изменения после ФДТ.

В гистологических срезах до ФДТ и через 2 часа после сеанса при плотности световой энергии в 200 Дж/см2 микроскопические картины препаратов не отличались.

В гистосрезах через 2 часа после проведения ФДТ при плотности световой энергии в 300-400 Дж/см2 отмечали изменения в микрососудистом русле новообразования в виде деструктивных изменений стенки сосуда, гиперемии и стаза с агглютинацией эритроцитов в просвете капилляров. В гистосрезах на 7 сутки отмечали микрокартину некробиоза, некроза. Основные изменения затрагивали ядра. Ядра находились в состоянии кариопикноза, кариорексиса и кариолизиса. Цитоплазма клеток становилась гомогенной и выражено ацидофильной. В гистосрезах на 18-20 сутки отмечали репаративные процессы, проявляющиеся разростом соединительной ткани на месте новообразования с размножением фибробластов.

IV. выводы

1. Фотосенсибилизатор накапливается в патологической ткани (опухолевой, предопухолевой и воспалительной) в большей концентрации, чем в здоровой ткани (в ткани поджелудочной железы - 1:2; в ткани печени, селезенки, легкого - 1:3; в почечной ткани - 1:4; в слизистой оболочке мочевого пузыря, ткани головного мозга, слизистой оболочке ротовой полости — 1:5), что может быть использовано для диагностики локализации опухолевой ткани методом диагностической флуоресценции;

2. Терапевтическая доза фотосенсибилизатора, необходимая для проведения диагностической флуоресценции и лечебного сеанса фотодинамической терапии у собак и кошек, составляет 1 мг/кг МТ. Время максимального накопления фотосенсибилизатора при опухолях брюшной полости, грудной полости и головного мозга составляет 90 минут у собак и кошек. Время максимального накопления фотосенсибилизатора в спонтанных новообразованиях слизистой ротовой полости -150 минут;

3. У собак и кошек при постоянной плотности мощности в 0,8 Вт/см2 плотность световой энергии в 200 Дж/см2 носит противовоспалительный характер; при плотности световой энергии в 300-400 Дж/см2 фотодинамическая терапия носит лечебный характер;

4. После проведения сеанса фотодинамической терапии в патологическом очаге у животных отмечаются сосудистые, деструктивные и репаративные процессы, которые постепенно сменяют друг друга и завершаются формированием рубцовой ткани с хорошим косметическим эффектом;

5. У голых пород собак и кошек при несоблюдении светового режима одним из побочных явлений после проведения фотодинамической терапии может быть возникновение кожной фототоксичности.

6. Метод фотодинамической терапии в комбинации с фотосенсибилизатором хлоринового ряда может являться методом выбора при лечении спонтанных новообразований слизистой ротовой полости различного генеза у кошек и собак.

V. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРАКТИЧЕСКОМУ ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Метод ФДТ - метод лечения с глубиной проникающего действия в ткань новообразования около 1 см и является методом выбора при спонтанных предопухолевых и воспалительных новообразованиях слизистой ротовой полости с экзофитной или инфильтрирующей формами роста без глубокой инвазии в подлежащие ткани, а также является методом выбора при стоматитах невирусного генеза;

2. Перед проведением сеанса ФДТ необходимо провести санацию ротовой полости с удалением зубного налета, зубного камня и экстракцией патологических зубов;

3. Увеличение дозы до 1,5 мг/кг МТ не приводит к увеличению диагностического показателя, а лишь способствует более длительному периоду элиминации препарата из организма, что может вызывать развитие нежелательного побочного эффекта - кожной фототоксичности, что особенно нежелательно для голых пород собак и кошек;

4. Метод диагностической флуоресценции может быть использован для более точного определения границ иссечения новообразования в тех органах и тканях, в которых существует дефицит здоровой ткани (головной мозг);

5. Метод ФДТ может быть использован в комбинации с хирургическим методом лечения для соблюдения принципов антибластики во время онкологических операций.

VI. Сппсок работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ягников С.А., Кулешова O.A., Кулешова Я.А., Коршошенков Е.А. Фотодинамцческая терапия в ветеринарной практике // Российский биотерапевтпческнй журнал, №4, Т.7, 2008, с. 67-71.

2. Кулешова O.A., Ягников С.А. Фотодпнамическая терапия при спонтанных новообразованиях слизистой ротовой полости у кошек н собак // Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние и дикие животные, №4,

2009, с. 33—37;

3. Кулешова O.A., Ягников С.А., Кемельман Е.Л. и др. Клинический случай оперативного лечения внутричерепной мепнпгиомы у кошки // Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние и дикие животные, №3,

2010, с. 29-36;

4. Кулешова O.A., Ягников С.А. Применение фотодинамической терапии при воспалительных и опухолевых процессах органов ротовой полости //Ветеринарный доктор. Научно-практический журнал, №2, 2010, с. 11-13;

5. Кулешова O.A., Ягников С.А., Митрохина Н.В. Первый опыт применения метода фотодинамическон терапии при хроническом гингнво-стоматите у кошек // Российский ветерннарнын журнал. Мелкие домашние и дикие животные, №3, 2011, с. 33-37;

6. Кулешова O.A., Ягников С.А. Результаты применения метода фотодинамической терапии при новообразованиях слизистой ротовой полости у собак и кошек // Мир ветеринарии. Научно-практический журнал (Украина), №3,

2011, с. 36-40;

7. Кулешова ОА., Ягников С.А. Фотодинамическая терапия новообразований различной локализации у собак и кошек // Материалы V Всероссийской конференции по вопросам онкологии и анестезиологии мелких домашних животных. - М., 2009, с. 44-46;

8. Кулешова O.A., Ягников С.А. Возможности применения метода фотодинамической терапии при спонтанных новообразованиях различной локализации у собак и кошек // Материалы XVII Московского международного ветеринарного конгресса. — М., 2009, с. 61-63;

9. Ягников С.А., Кулешова O.A. Фотодинамическая терапия при новообразованиях различной локализации у собак и кошек // Материалы VIII Всероссийской научно-практической конференции. - М., 2009, с. 46-47;

10. Кулешова O.A., Ягников С.А. Применение метода фотодинамической терапии при опухолевых и воспалительных новообразованиях слизистой ротовой полости и кожи у мелких домашних животных // Тезисы I Всероссийской межвузовской конференции по ветеринарной хирургии. - М., 2010, с. 102-104;

11. Кулешова O.A., Ягников С.А. Применение метода фотодинамической терапии при опухолевых и воспалительных процессах различной локализации у мелких домашних животных // Тезисы II Всероссийской межвузовской конференции по ветеринарной хирургии. - М., 2011, с. 99- 101.

Кулешова Оксана Александровна (Россия) Клнинко-морфологнческое обоснование фотодннамической терапии у собак и кошек.

Впервые определены возможности и особенности накопления фотосенсибилизатора хлоринового ряда в здоровой, воспалительной, предопухолевой и опухолевой ткани. Определена терапевтическая доза (мг/кг МТ) и время максимального накопления (мин) фотосенсибилизатора в патологической ткани. В ходе исследования установлено, что у кошек в возрасте от 2 до 4 лет спонтанные новообразования слизистой ротовой полости носят доброкачественный характер. Установлены патоморфологические стадии, протекающие в патологическом очаге после проведения лечебного сеанса фотодинамической терапии. Описан и апробирован в клинической практике метод диагностической флуоресценции для определения четких границ иссечения новообразований сложной локализации. Разработана и описана методология проведения лечебного сеанса фотодинамической терапии у собак и кошек.

Kuleshova Oxana Alexandrovna (Russia) Cliniko-morfologichesky justification of photodynamic therapy in dogs and cats.

For the first time possibilities and features of accumulation of a photosensitizer of a chlorine row in a healthy, inflammatory, pretumoral and tumoral fabric are defined. The therapeutic dose (MT mg/kg) and time of the maximum accumulation (mines) of a photosensitizer in a pathological fabric is defined. During research it is established that at cats at the age from 2 till 4 years spontaneous new growths of a mucous mouth have good-quality character. It is established the patomorfologichesky stages proceeding in the pathological center after carrying out a medical session of photodynamic therapy. The method of diagnostic fluorescence for definition of a clear boundary of an issecheniye of new growths of difficult localization is described and approved in clinical practice. The methodology of carrying out a medical session of photodynamic therapy at dogs and cats is developed and described.

Подписано в печать:

26.04.2012

Заказ № 7293 Тираж - 100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Кулешова, Оксана Александровна

Список сокращений и обозначений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Определение метода ФДТ и ЛФС.

1.2. История развития метода ФДТ и ДФ.

1.3. Фотохимические аспекты метода ФДТ.

1.4. Роль синглетного кислорода в ФДТ.

1.5. Структурно-метаболические аспекты метода ФДТ.

1.6. ФС.

1.7. Селективность накопления ФС в патологической ткани.

1.8. Классификация ФС.

1.9. Источники света для ФДТ.

1.10. Доза световой энергии и расчет времени облучения.

1.11. Показания к проведению ФДТ в гуманной медицине.

1.12. Метод ЛФС (ДФ).

1.13. Спонтанные новообразования слизистой ротовой полости.

1.14. Клиническая картина спонтанных новообразований слизистой ротовой полости.

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Общая характеристика групп.

2.2. Характеристика экспериментальной группы.

2.2.1. Хирургический доступ и методика проведения ЛФС.

2.3. Характеристика клинической группы.

2.3.1. Алгоритм обследования животных с патологией ротовой полости.

2.3.2. Методика проведения ЛФС и ФДТ.

2.3.3. Критерии оценки результатов лечения спонтанных новообразований слизистой оболочки ротовой полости.

2.3.4. Морфологические методы исследования.

2.4. Анестезиологическое пособие для проведения ДФ и ФДТ.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Экспериментальная группа.

3.1.1. Результаты ДФ у клинически здоровых животных.

3.1.2. Результаты ЛФС у животных с опухолевыми поражениями.

3.2. Клиническая группа.

3.2.2. Результаты дополнительных методов лечения.

3.3. Патоморфологические изменения после ФДТ.

3.4. Побочные эффекты после ФДТ.

3.5. Результаты лечения.

3.6. Продолжительность безрецидивного периода.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Клинико-морфологическое обоснование фотодинамической терапии у собак и кошек"

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

В условиях современного мегаполиса с каждым годом возрастает процент онкологически больных пациентов как в гуманной, так и в ветеринарной медицине. Так в 2010 г. в России было выявлено 516 874 случаев злокачественных новообразований у людей. Абсолютное число заболевших в 2010 г на 15,2% больше, чем в 2000 г (448 602) [Чиссов В.И., Москва, 2012 г.]. Аналогичная тенденция отмечается и в ветеринарной медицине. Опухоли в структуре всех заболеваний собак и кошек составляют 8-18%, в числе которых на долю опухолей молочной железы приходится 25-30%, опухолей кожи - 25%, опухолей скелета - 3,9-5,8 %, лимфомы - 3%, опухолей репродуктивной системы самцов - 5-15 % [Космачева Е.П., 2002; Митин В.Н., 2002]; опухолей спинного мозга -1,5% [Ягников С.А., Лукоянова M.JL, 2005]; опухолей носовой полости -1-2% [Кулешова Я.А., 2007], опухолей печени - менее 1% [Withrow S., 2007], опухолей головного мозга у собак 1,5-3% и у кошек - 1-2% [Adamo P. Filippo, Forrest Lisa, Dubielzig Richard, 2004].

По данным «National Pet Owners' Survey» и «American Pet Products Manufacturers Association» за 2005/2006 гг. в США зарегистрировано всего 74 млн собак и 90 млн кошек. Процент гибели собак и кошек от онкологических заболеваний за 10 лет в среднем составил - 47% и 32%, соответственно («Animal Health Survey», «Morris Animal Foundation») [45,49,61].

Лечения, увеличение продолжительности и качества жизни онкологически больных животных является одной из важнейших задач современной ветеринарной медицине. Об этом свидетельствует тот факт, что за последние 10 лет вопросу онкологии у собак и кошек посвящено более десятка сотен диссертационных и научно-практических работ как в нашей стране, так и за рубежом.

Внедрение в ветеринарную практику новых методов визуальной диагностики, таких как: компьютерная и магнитно-резонансная томография, эндоскопия составили основу для ранней диагностики опухолей различных тканей и органов. Выбор тактики лечения онкопациентов зависит от вида опухоли, ее локализации и стадии процесса. Основными методами лечения являются хирургический метод, химиотерапия, лучевая терапия. В основе хирургического метода лечения опухолей различной локализации лежит два принципа - принцип абластики и антибластики [Henderson Ralph, 2012].

В онкохирургии принято иссекать опухоли широко в пределах здоровой ткани, однако при опухолях сложной анатомической локализации (головной и спинной мозг, ротовая и носовая полость) и при тотальном опухолевом поражении жизненно важных органов (печень, легкие) выполнить радикальную операцию не всегда возможно. Основным ограничением для выполнения нейрохирургической операции является локализация и отсутствие четких визуальных границ опухоли. Радикальная резекция опухоли головного мозга в большинстве случаев невозможна, так как иссечение здоровой ткани мозга с инфильтрирующими ее опухолевыми клетками не допустимо, из-за высокой вероятности развития тяжелых неврологических осложнений вплоть до гибели животного [Ермакова К.В., 2010].

Таким образом, необходимо проводить комбинированное лечение, включающее в себя хирургическое иссечение опухоли, с последующим проведением лечебных мероприятий, направленных на повреждение и гибель оставшихся опухолевых клеток в области операционной раны различными методами. Для соблюдения принципа антибластики с целью удлинения безрецидивного периода в настоящее время в ветеринарной практике активно используют неадъювантную и адъювантную химио- и лучевую терапию.

Данные методы не обладают выраженным таргентным действием на опухолевые клетки, так как химиопрепараты обладают системным токсическим действием на весь организм, что проявляется диспепсическими расстройствами (рвота, анорексия, диарея), анемией, миелосупрессией. Иногда такое токсическое действие может привести к гибели животного [Якунина М.Н., Шимширт А.А., Трещалина Е.М., 2010, Henderson Ralph, 2012]. Лучевая терапия также не отличается селективностью, поскольку излучение воздействует не только на опухоль, но и на прилежащие здоровые ткани, что вызывает их повреждение и способствует развитию таких осложнений, как постлучевые дерматиты, лучевые кератиты [Брюшковский К. Ю., Клявин А. Г., 2008].

Успех хирургического вмешательства при опухолях любой локализации у животных определяется сроком безрецидивного послеоперационного периода и качеством жизни после хирургического вмешательства. Для достижения этого необходим поиск новых методов лечения, которые бы способствовали соблюдению в полной мере принципов «абластики» и «антибластики» хирургического вмешательства, большей селективностью к опухолевой ткани, отсутствием системного воздействия на организм.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Цель настоящего исследования - изучить лечебно-диагностическую эффективность метода ДФ и ФДТ на основе клинических и патоморфологических изменений в спонтанных новообразованиях у собак и кошек.

ЗАДАЧИ

Для выполнения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Определить накопление и особенности распределения ФС в различных тканях и органах у собак и кошек без и со спонтанными новообразованиями методом ДФ. Оценить возможности ДФ для диагностики локализации опухолевых клеток, не определяемых при визуальном осмотре;

2. Определить терапевтическую дозу и временной промежуток («коридор») максимального накопления ФС в спонтанных новообразованиях различных тканей и органов;

3. Установить оптимальные параметры (плотность световой энергии, Дж/см ) для проведения лечебного сеанса ФДТ;

4. Выявить морфологические изменения в патологическом очаге после проведения сеанса ФДТ в различные промежутки времени;

5. Выявить побочные эффекты и возможные осложнения при проведении ФДТ, их частоту и характер, разработать меры защиты.

НА УЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые изучено накопление и особенности распределения ФС в опухолевой, предопухолевой, воспалительной и здоровой ткани различной локализации у собак и кошек.

Впервые показана возможность ДФ у животных со спонтанными опухолями органов брюшной полости, легких, головного мозга с диагностической целью для определения более точных границ опухоли.

Впервые апробирован метод ФДТ с отечественным ФС хлоринового ряда «Фотодитазин» в лечебных целях при спонтанных новообразованиях различного гистогенеза слизистой оболочки ротовой полости у собак и кошек. На основании полученных патоморфологических изменений в спонтанных новообразованиях слизистой оболочки ротовой полости после лечебного сеанса ФДТ впервые сформулированы основные стадии лечебного действия данного метода у собак и кошек. Впервые установлены побочные эффекты и возможные осложнения после проведения ФДТ у собак и кошек и разработаны меры их предупреждения.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

В процессе данной работы определены оптимальная терапевтическая доза ФС, время максимального накопления ФС, параметры воздействия, необходимые для проведения лечебного сеанса ФДТ и ДФ. Установлены основные стадии патоморфологических изменений в патологическом очаге после проведения ФДТ. В ходе данной работы определена клиническая эффективность ФДТ при спонтанных новообразованиях слизистой ротовой полости различного гистогенеза у собак и кошек. Разработана профилактика возможных осложнений после проведения лечебного сеанса ФДТ. Апробирована возможность определения границ опухолевого роста методом ДФ. В ходе работы испытаны и внедрены в ветеринарную клиническую практику лазерные установки для проведения ДФ (Спектр-Кластер) и ФДТ (Актус-2).

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Особенности накопления ФС в патологической и здоровой ткани у собак и кошек;

2. Доза и время максимального накопления ФС в воспалительной, предопухолевой и опухолевой ткани после внутривенного введения препарата. Оптимальные параметры, необходимые для проведения лечебного сеанса ФДТ при плотности мощности в 0,8 Вт/см ;

3. Характеристика патоморфологических стадий в спонтанном новообразовании после проведения лечебного сеанса ФДТ;

4. Клиническая и гематологическая токсичность у собак и кошек после проведения ФДТ.

АПРОБАЦИЯ РЕЗУЛЬ ТА TOB ИССЛЕДОВАНИЯ

Метод ФДТ в комбинации с ФС «Фотодитазин» используется в практической работе ветеринарной клиники «Центр биологии и ветеринарии» при Российском университете дружбы народов при фоновых и предопухолевых поражениях ротовой полости у собак и кошек. Метод ЛФС используется в клинической практике для определения границ иссечения опухолей с целью соблюдения основного принципа онкооперации - принципа абластики.

Метод ФДТ применяется в комбинации с хирургическим лечением животных с опухолевыми поражениями различной локализации с целью соблюдения принципа антибластики и удлинения сроков безрецидивного периода.

Основные результаты данного исследования доложены на V Всероссийской конференции по вопросам онкологии и анестезиологии мелких домашних животных (24-25 января 2009 г Москва), VIII

Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» (21-22 апреля 2009 г Москва), XVII Московском международном ветеринарном конгрессе (2009г Москва), I Всероссийской межвузовской конференции по ветеринарной хирургии (2728 февраля 2010 г Москва), II Всероссийской межвузовской конференции по ветеринарной хирургии (19-20 марта 2011 г Москва).

По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе статьи в журналах - 6 (из них 4 в журналах перечня ВАК), тезисы в материалах международных и российских конференций -5.

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Кулешова, Оксана Александровна

выводы

1. Фотосенсибилизатор накапливается в патологической ткани (опухолевой, предопухолевой и воспалительной) в большей концентрации, чем в здоровой ткани (в ткани поджелудочной железы - 1:2; в ткани печени, селезенки, легкого - 1:3; в почечной ткани -1:4; в слизистой оболочке мочевого пузыря, ткани головного мозга, слизистой оболочке ротовой полости - 1:5), что может быть использовано для диагностики локализации опухолевой ткани методом диагностической флуоресценции;

2. Терапевтическая доза фотосенсибилизатора, необходимая для проведения диагностической флуоресценции и лечебного сеанса фотодинамической терапии у собак и кошек, составляет 1 мг/кг МТ. Время максимального накопления фотосенсибилизатора при опухолях брюшной полости, грудной полости и головного мозга составляет 90 минут у собак и кошек. Время максимального накопления фотосенсибилизатора в спонтанных новообразованиях слизистой ротовой полости -150 минут;

3. У собак и кошек при постоянной плотности мощности в 0,8 Вт/см плотность световой энергии в 200 Дж/см носит противовоспалительный характер; при плотности световой энергии в 300-400 Дж/см фотодинамическая терапия носит лечебный характер;

4. После проведения сеанса ФДТ в патологическом очаге у животных отмечаются сосудистые, деструктивные и репаративные процессы, которые постепенно сменяют друг друга и завершаются формированием рубцовой ткани с хорошим косметическим эффектом;

5. У голых пород собак и кошек при несоблюдении светового режима одним из побочных явлений после проведения ФДТ может быть возникновение кожной фототоксичности.

6. Метод ФДТ в комбинации с ФС хлоринового ряда может являться методом выбора при лечении спонтанных новообразований слизистой ротовой полости различного генеза у кошек и собак.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРАКТИЧЕСКОМУ ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Метод ФДТ - метод лечения с глубиной проникающего действия в ткань новообразования около 1 см и является методом выбора при спонтанных предопухолевых и воспалительных новообразованиях слизистой ротовой полости с экзофитной или инфильтрирующей формами роста без глубокой инвазии в подлежащие ткани, а также является методом выбора при стоматитах невирусного генеза;

2. Перед проведением сеанса ФДТ необходимо провести санацию ротовой полости с удалением зубного налета, зубного камня и экстракцией патологических зубов;

3. Терапевтическая доза ФС для проведения лечебного сеанса ФДТ - 1 мг/кг МТ. Увеличение дозы до 1,5 мг/кг МТ не приводит к увеличению диагностического показателя, а лишь способствует более длительному периоду элиминации препарата из организма, что может вызывать развитие нежелательного побочного эффекта -кожной фототоксичности, что особенно нежелательно для голых пород собак и кошек;

4. Метод диагностической флуоресценции может быть использован для более точного определения границ иссечения новообразования, в тех органах и тканях, в которых существует дефицит здоровой ткани (головной мозг);

5. Метод ФДТ может быть использован в комбинации с хирургическим методом лечения для соблюдения принципов антибластики во время онкологических операций.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Кулешова, Оксана Александровна, Москва

1. Алексеев Ю., Гладких С., Иванова И. и др. // Фотодинамическая терапия злокачественных новообразований. Материалы 2-го Всеросс. Симпозиума. -М., 1997.-С. 142-144;

2. Бобров, А. П. Применение фотодитазина при лечении воспалительных заболеваний пародонта, вызванных зубными протезами // РБЖ. 2008, Т.7, №4. С. 44-46;

3. Бойко В.В. Экспериментальная и клиническая апробация метода фотодинамической терапии опухолей // Экспериментальная онкология. 2000, Т.22. С. 351-352;

4. Булгакова Н. Н. Изучение накопления фотосенсибилизатора Фотодитазин в гиперплазированной ткани предстательной железы человека // Физическая Медицина. 2005. Т. 2, № 15. - С. 15-21;

5. Вакуловская Е.Г., Шенталь В.В. Флюоресцентная диагностика у больных раком кожи с использованием Аласенса // Лазерная медицина,—2002,— Т.6, №1,— С. 28-29;

6. Вакуловская Е.Г., Стратонников A.A., Таболиновская Т.Д., Кондратьева Т.Т. Фотодинамическая терапия у больных раком слизистой оболочки полости рта, ротоглотки и нижней губы // Сибирский онкологический журнал. 2005. - С. 13-17;

7. Васильев Д.В. Повышение эффективности фотодинамической терапии опухолей с применением Фотодитазина // Российский биотерапевтический журнал. 2003. Т.2, №4. - С.61-66;

8. Деркачева В.М., Лукьянец Е.А. Фталоцианины и родственные соединения. Фенокси- и фенилтиозамещенные фталоцианины // Журнал общей химии. —1980. —Т.50, №10. — С. 2313-2318;

9. Загайнова Е. В. Мониторинг накопления фотосенсибилизаторов в опухоли методом диффузионной флуоресцентной томографии // РБЖ. 2008,- Т.7, №4. С. 30-33;

10. Каплан М.А. Возможности и перспективы фотодинамической терапии // Российские медицинские вести. 2002. Т.7, №2. - С. 1925;

11. Красновский A.A. Фото динамическое действие и сингл етный кислород // Биофизика,—2004,—Т.49, №2. — С. 305-321;

12. Кулешова O.A., Ягников С. А. Фото динамическая терапия при спонтанных новообразованиях слизистой ротовой полости у кошек и собак // Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние и дикие животные, №4, 2009. С. 33—37;

13. Кулешова O.A., Ягников С.А., Митрохина Н.В. Первый опыт применения метода фотодинамической терапии при хроническом гингиво-стоматите у кошек // Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние и дикие животные, №3, 2011. С. 33 - 37;

14. Лощеный В.Б., Стратоников А.А Физические основы флуоресцентной диагностики и фотодинамической терапии // В кн.: Сборник трудов МИФИ. —2000. —Т. 4. — С. 53-54;

15. Лукьянец Е. А. Новые сенсибилизаторы для фотодинамической терапии // Росс. хим. журнал. 1998. Т. 42, №5. - С. 9-16;

16. Меерович И.Г., Стратонников A.A., Рябова A.B., и др. Исследование оптического поглощения сенсибилизаторов в биологических тканях // Российский Биотерапевтический Журнал. —2004. —Т.З, №3. — С. 37-42;

17. Миронов А.Ф. Разработка сенсибилизаторов второго поколения на основе природных хлорофиллов // Российский химический журнал,— 1998,— T.XLII, №5.— С. 23-28;

18. Миронов А. Ф. Фотодинамическая терапия рака новый эффективный метод диагностики и лечения злокачественных опухолей // Соросовский образовательный журнал. - 1996. - №8. - С. 32-40;

19. Михайлова И.А., Папаян Г.В., Золотова Н.Б. Основные принципы применения лазерных систем в медицине. //Под ред. Петрищева H.H. Спб, 2007. - С. 44;

20. Морозова Н. Б. Биораспределение препарата фталосенса у интактных животных и животных с опухолями различного гистогенеза // Российский онкологический журнал. —2007. — № 1. — С. 37-43;

21. Огиренко А., Денисов А., Васильев Н. и др. Фото динамическая терапия. Материалы 3-го Всеросс. симпозиума М., 1999. - С. 53-54;

22. Русаков И. Г. Флюоресцентные методы диагностики и поверхностный рак мочевого пузыря // Урология. 2008. № 3. - С. 67-72;

23. Соколов В.В., Русаков И.Г., Булгакова H.H., Ульянов Р.В., А.А.Теплов A.A. Флюоресцентные методы в диагностике поверхностного рака мочевого пузыря (обзор литературы), Сибирский онкологический журнал, 2007. №4 (24). С. 117-126;

24. Странадко Е., Толстых П., Корабоев У. // Фотодинамическая терапия. Материалы 3-го Всеросс. симпозиума. М., 1999. - С. 8391;

25. Странадко Е.Ф. Механизм действия фотодинамической терапии // Российский онкологический журнал. 2000. №4. - С. 52 - 56;

26. Странадко Е.Ф. Исторический очерк развития фотодинамической терапии: Обзор // Лазерная медицина 2002. Т.6. Вып. 1. - С. 4-8;

27. Ступак В.В. Экспериментальное обоснование нового метода лазерной фотодинамической терапии в нейроонкологии / / Лазерная медицина. 2004. Т.8, №3. - С. 151;

28. Тиглиев Г.С. Фотодинамическая терапия в нейроонкологии первый опыт проведения и краткий обзор литературы // Российский биотерапевтический журнал. 2004. ТЗ, №1. - С. 83-89;

29. Толстых П., Корабоев У., Шехтер А. и др. // Лазерная медицина. -2001. -№ 5 (2).-С. 8-13;

30. Толстых П.И. Теоретические и практические аспекты лазерной фотохимии для лечения гнойных ран // РБЖ. 2008. Т.7, №4. - С. 2024;

31. Цыб А. Ф. Возможности и перспективы применения фотодинамической терапии (экспериментальные и клинические исследования) // Росс. Мед. Вести. 2002. №2. - С. 19-24;

32. Чиссов В.И., Старинский В.В., Петровой Г.В. Злокачественные новообразования в России в 2010 году (заболеваемость и смертность) // М.: ФГБУ «МНИОИ им. П. А. Герцена» Минздравсоцразвития России, 2012. С. 260;

33. Чиссов В.П., Соколов В.В., Булгакова H.H., Филоненко Е.В. Флуоресцентная эндоскопия, дермаскопия и спектрофотометрия в диагностике злокачественных опухолей основных локализаций // Российский биотерапевтический журнал. 2003. Т.2, №4. С. 45-56;

34. Чиссов В.И., Соколов В.В., Филоненко Е.В. Фотодинамическая терапия злокачественных опухолей. Краткий очерк развития и опыт клинического применения в России // Российский химический журнал,—1998,—T.XLII, №5.— С. 5-9;

35. Ягников С.А., Кулешова O.A. Фотодинамическая терапия при новообразованиях различной локализации у собак и кошек // Российский биотерапевтический журнал, №2, Т. 8, 2009. С. 46-47;

36. Ягников С.А., Кулешова O.A., Кулешова Я.А., Корнюшенков Е.А. Фотодинамическая терапия в ветеринарной практике // Российский биотерапевтический журнал, №4, Т.7, 2008. С. 67-71;

37. Якубовская Р.И., Казачкина H.H., Кармакова Т.А. и др. Скрининг и медико-биологическое изучение отечественных фотосенсибилизаторов // Росс. Хим. Журн. 1998. - 5, XLII. - С. 1723;

38. Якубовская Р.И., Кармакова Т.А., Морозова Н.Б. Возможности управления эффектами ФДТ // РБЖ. 2004. - 3(2). - С. 60;

39. Abels С., Goetz А.Е. A clinical protocol for photodynamic therapy // H. Honigsmann, G.Jori, A.R.Young (eds): The Fundamental Bases of Phototherapy / OEMF spa Milano, 1996. p. 265-284;

40. Addie D.D., Radford A., Yam P.S., Taylor D.J. Cessation of feline calicivirus shedding coincident with resolution of chronicgingivostomatitis in a cat // Journal of Small Animal Practice, 2003; p. 172—176;

41. Alam M., Ratner D. Cutaneous squamous-cell carcinoma. The New England Journal of Medicine, 2001, p. 975-983;

42. Alexiades-Armenakas M. Laser-mediated photodynamic therapy. Clin Dermatol 2006, p. 16-25;

43. Allison RR, Downie GH, Cuenca R, Hu XH, Childs CJH, Sibata CH. Photosensitizers in clinical PDT. Photodiagnos Photodynamic Therapy 2004, p. 27-42;

44. Beatty JA, Charles JA, Malik R, et al. Feline inductive odontogenic tumour in a Burmese cat. Aust Vet J 2000; 78 (7), p. 452-455;

45. Beckman B. Lymphocytic Plasmacytic Gingivostomatitis, The team, volume 5, 2001, p. 6—7;

46. Bertone ER, Snyder LA, Moore AS. Environmental and lifestyle risk factors for oral squamous cell carcinoma in domestic cats. J Vet Intern Med 2003, p. 557-562;

47. Bilski P., Ehrenshaft M., Daub M. et al. Photochemistry and Photobiology. 2000. - Vol. 71 (2). - p. 129-134;

48. Birchard S., Carothers M. Aggressive surgery in the management of oral neoplasia. Vet Clin North Am Small Anim Pract 1990, p. 1117-1140$

49. Bonnett R., Berenbaum M., Porphyrins as photosensitizers. // Ciba Found Symp 1989, p. 53-59;

50. Buchholz J., Wergin M., Walt H. et al. Photodynamic therapy of feline cutaneous squamous cell carcinoma using a newly developed liposomal photosensitizer: Preliminary results concerning drug safety and efficacy. // J Vet Intern Med, 2007, p. 770-775;

51. Bums A. A. Fluorescent silica nanoparticles with efficient urinary excretion for nanomedicine // Nano Lett. 2009. Vol. 9, No. 1.- p. 442448;

52. Calin M.A. and S.V. Parasca. Photodynamic therapy in oncology // J. Optoel. Adv. Mat. vol. 8 (3), 2006, p. 1173-1179;

53. Campbell G.A., Bartels K.E., Arnold C. et al. Tissue levels, histologic changes and plasma pharmacokinetics of meta-tetra (hydroxyphenyl) chlorine (mTHPC) in the cat. // Lasers Med Sci, 2002, p. 79-85;

54. Castano A.P., Demidova T.N., Hamblin M.R. Mechanisms in photodynamic therapy: part one-photosensitizers, photochemistry and cellular localization // Photodiagn Photodynamic Therapy, 2004. Vol. 1. p. 279-93;

55. Caw D.L., Pope, E.R., Payne, J.T., West, M.K., Tompson, R.V., Tate, D. Treatment of canine oral squamous cell carcinomas with photodynamic therapy. // Br. J. Cancer, 2000, p. 1297-1299;

56. Cheung R., Solonenko M., Busch T.M., Del Piero F., Putt M.E., Hahn S.M., Yodh A.G. Correlation of in vivo photosensitizer fluorescence and photodynamic-therapy-induced depth of necrosis in a murine tumor model. // J Biomed Opt 2003, p. 248-252;

57. Colgin L.M., Schulman F.Y., Dubielzig R.R. Multiple epulides in 13 cats. // Vet Pathol 2001, p. 227-229;

58. Drabkin D.L. Selected landmarks in the history of porphyrins and their biologically functional derivatives. In: Dolphin D. ed. The porphyrins. Academic Press, 1978, p. 31-84;

59. Dougherty T.J., Gomer C.J., Henderson B.W., Jori G., Kessel D., Korbelik M., Moan J., Peng Q. Photodynamic therapy. // J Natl Cancer Inst, 1998, p. 889-905;

60. Dysart J.S., Patterson M.S., Farrell T.J., Singh G. Relationship between mTHPC fluorescence photobleaching and cell viability during in vitro photodynamic treatment of DPI 6 cells. // Photochem Photobiol 2002, p. 289-295;

61. El-Mofy A.M. Vitiligo and Psoralens. Oxford: Pergamon Press, 1968, p. 147;

62. Fan K.F., Hopper C., Speight P.M., Buonaccorsi G.A., Bown S.G. Photodynamic therapy using mTHPC for malignant disease in the oral cavity. // Int J Cancer 1997, p. 25-32;

63. Figge F.H.J., Weiland G.S., Manganiello O.J. Cancer detection and therapy. Affinity of neoplastic, embryonic, and traumatized tissues for porphyrins and metalloporphyrins // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1948. -Vol. 68. - p. 640-641;

64. Fondati A, Fondevila D, Ferrer L. Histopathological study of feline eosinophilic dermatoses. // Vet Dermatol, 2001, p. 333-338;

65. Gelberg H.B., Lewis R.M., Felsburg P.J., Smith C.A. Antiepithelial autoantibodies associated with the feline eosinophilic granuloma complex. II Am J Vet Res, 1985, p. 263-265;

66. Geiger P.G., Korytowski W., Girotti A.W. Photodynamically generated 3b-hydroxy-5acholest- 6-ene-5-hydroperoxide: toxic reactivity in membranes and susceptibility to enzymatic detoxification. // Photochem Photobiol, 1995, p. 580-587;

67. Gillenwater A., Jacob R., Richards-Kortum R. Fluorescence spectroscopy: a technique with potentialto improve the early detection of aerodigestive tract neoplasia. // Head Neck 1998, p. 556-562;

68. Gloi A.M., Beck E. Biodistribution of three photosensitizers in dogs with spontaneous tumors. // Vet. The., 2003, p. 115-165;

69. Gloi A.M., Beck E. Evaluation of porfimer sodium in dogs and cats with spontaneous tumors. // Vet Ther 2004, p. 26-33;

70. Godfrey D.R. How I approach: chronic gingivitis/stomatitis/pharyngitis in the cat // WALTHAM Focus, 2000; 10 (4), p. 1—3;

71. Grant W.E., Hopper C., Macrobert A.J. Photodynamic therapy of oral cancer: photosensitization with systemic aminolevulinic acid. // Lancet, 1993, p. 147-148;

72. Harada M., Woodhams J., MacRobert A.J., Feneley M.R., Kato H., Bown S.G. The vascular response to photodynamic therapy with ATX-SlONa(II) in the normal rat colon. // J Photochem Photobiol, 2005, p. 223-230;

73. Hausmann W.H. Die sensibilisierende Wirkung des Hamatoporphyrins // Biochem Z. 1910. - Vol. 30. - p. 276-316;

74. Hayes A, Scase T, Miller J, et al. COX-1 and COX-2 expression in feline oral squamous cell carcinoma. // J Comp Pathol 2006, p. 93-99;

75. Healey K.A., et al. Prevalence of feline chronic gingivo-stomatitis in first opinion veterinary practice. // J Feline Med Surg, 2007, p. 373-381;

76. Homs M.Y., Kuipers E.J., Siersema P.D. Palliative therapy. // J Surg Oncol 2005, p. 246-256;

77. Hutson C.A., Willauer C.C., Walder E.J. et al. Treatment of mandibular squamous cell carcinoma in cats by use of mandibulectomy andradiotherapy: seven cases (1987-1989). // J Am Vet Med Assoc, 1992, p. 777-781;

78. Jacobs, T.M., Rosen, G.M. Photodynamic therapy as a treatment for esophageal squamous cell carcinoma in a dog. // Journal of the American Animal Hospital Association, 2000, p. 257-261;

79. Jakus J., Farkas O. Photosensitizers and antioxidants: a way to new drugs? // Review. Photochem. Photobiol. Sci., 2005, p. 694-698;

80. Jesionek A., Von Tappeiner H. On the treatment of skin cancers with fluorescent substances. // Arch Klin Med, 1905, p. 223-227;

81. Kalka K., Merk H., Mukhtar H. Photodynamic therapy in dermatology. // J. Am. Acad. Dermatol., 2000, p. 389-413;

82. Kapatkin A.S., Marretta S.M., Patnaik A.K. et al. Mandibular Swellings in Cats: Prospective Study of 24 Cats. //J Am Anim Hosp Assoc 1991, p. 575-580;

83. Kelty C., Brown N., Reed M. et al The use of 5-aminolaevulinic acid as a photosensitiser in photodynamic therapy and photodiagnosis // Photochem. Photobiol. Sci. —2002,—V.I.—p. 158-168;

84. Knowles J.O. et al. Prevalence of feline calicivirus, feline leukaemia virus and antibodies to FIV in cats with chronic stomatitis. // Vet Rec, 1989, p. 336-338;

85. Langenbach A., McManus P.M., Hendrick M.J. et al. Sensitivity and specificity of methods of assessing the regional lymph nodes for evidence of metastasis in dogs and cats with solid tumors. // J Am Vet Med Assoc 2001, p. 1424-1428;

86. Lucroy M.D. Photodynamic therapy for companion animals with cancer. Vet. Clin. Small Anim., 2002, p. 693;

87. Luksiene Z., de Witte P. Hypericin-based photodynamic therapy: antitumor activity, accumulation potential and induced cell death pathway. //Medicina, 2003, p. 677-682;

88. Luo Y., Kessel D. Initiation of apoptosis versus necrosis by photodynamic therapy with chloroaluminum phthalocyanine. // Photochem Photobiol, 1997, p. 479-483;

89. McCaughan J.S. Photodynamic therapy: a review. // Drugs Aging 1999, p. 49-68;

90. Meyer-Betz F. Untersuchung über die biologische (photodynamische) Wirkung des Hamatoporphyrins und anderer Derivate des Blut- und Gallenfarbstoffs // Dtsch. Arch. Klin. Med. 1913. - Vol. 112. - p. 476503;

91. Minnock A., Vernon D.I. et al. // J. Photochem. Photobiol. B: Biology. 1996. - № 32 (3). - p. 159-164;

92. Moser J.G. 2nd and 3rd generation photosensitizers. Amsterdam: Harwood Academic Publishers, 1998;

93. Nelson J.S., Liaw L.H., Orenstein A. Mechanism of tumor destruction following photodynamic therapy with hematoporphyrin derivative, chlorin and phthalocyanine // J. Nat. Cancer Inst. 1988. -Vol.80.-p.1599-1605;

94. Niedre M., Patterson M.S., Wilson B.C. Direct near-infrared luminescence detection of singlet oxygen generated by photodynamic therapy in cells in vitro and tissues in vivo. // Photochem Photobiol, 2002, p. 382-391;

95. Ogata M. Clinical applications of laser therapy in dogs and cats. // Journal of Veterinary Medicine, 1990, p. 239-242;

96. Ochsner M. Photophysical and photobiological processes in the photodynamic therapy of tumours. 11 J Photochem Photobiol B, 1997, p. 1-18;

97. Pass H.I. Photodynamic therapy in oncology: mechanisms and clinical use. // J Natl Cancer Inst 1993, p. 443-456;

98. Penwick RC, Nunamaker DM: Rostral mandibulectomy: A treatment for oral neoplasia in the dog and cat. // JAAHA, 1987, p. 1925;

99. Petermann, U. Lasertherapie in der Veterinärmedizin. // Vet. Impulse, 1998, p. 12-13;

100. Policard A. Etudes sur les aspects offerts par des tumeurs experimentales examines a la lumiere de Wood // CR Soc. Biol. 1924. -Vol. 91. - p. 1423-1424;

101. Postorino N.C., Turrel J.M., Withrow S.J. Oral Squamous Cell Carcinoma in the Cat. // J Am Anim Hosp Assoc 1993, p. 438-441;

102. Raab O. On the effect of fluorescent substances on infusoria (in German). // Z Biol 1900, p. 524;

103. Rest J.R., Gumbrell R.C., Heim P. et al. Oral fibropapillomas in young cats. // Vet Rec 1997, p. 528;

104. Salisbury S.K., Richardson D.C., Lantz G.C. Partial maxillectomy and premaxillectomy in the treatment of oral neoplasia in the dog and cat. //Vet Surg, 1986, p. 16-26;

105. Schunck N., Poulet P. Oxygen consumption through metabolism and photodynamic reactions in cells cultured on microbeads // Phys. Med. Biol. —2000. — V.45. — p. 103-119;

106. Sibata C.H., Colussi V.C., Oleinick N.L., Kinsella T.J. Photodynamic therapy in oncology. // Expert Opin Pharmacother, 2001, p. l-ll;

107. Stell A.J., Dobson J.M., Langmack K. Photodynamic therapy of feline superficial squamous cell carcinoma using topic 5-aminolaevulinic acid. // J Small Anim Pract, 2001, p. 164-169;

108. Svanberg K., Klinteberg C., Nilsson A., Wang I., Andersson-Engels S., Svanberg S. Laser-based spectroscopic methods in tissue characterization. // Ann N Y Acad Sci 1998, p. 123-129;

109. Tsutsui H., MacRobert A.J., Curnow A., Rogowska A., Buonaccorsi G., Kato H., Bown S.G. Optimisation of illumination for photodynamic therapy with mTHPC on normal colon and a transplantable tumour in rats. // Lasers Med Sci 2002, p. 101-109;

110. Watanabe M. Laser treatment in small animals. Lasers, wounds and inflammation. Part 1. // Journal of Veterinary Medicine, 1996, p. 417419;

111. Watanabe, M. Laser treatment in small animals. Lasers, wounds and inflammation. Part 2. // Journal of Veterinary Medicine, 1996, p. 513516;

112. Wilson B.C. Photodynamic therapy for cancer: principles. // J Gastroenterol 2002, p. 393-396;

113. Withrow S.J., Holmberg D.L. Mandibulectomy in the treatment of oral cancer. // JAAHA, 1983, p. 273-286;

114. Wolfsen H. et al. Photodynamic therapy and biomedical lasers. Ed.: P. Spinelli. M/Dal Fante dc Marchellini. - Amsterdam, 1992. - p. 281-285;