Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Кинетика метаболической активности обонятельной выстилки травяной лягушки (Rana temporaria) под действием одорантов

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Кинетика метаболической активности обонятельной выстилки травяной лягушки (Rana temporaria) под действием одорантов"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ им И.П

UUJU693 1G

На правах рукописи

0 'V-fl /007

htí

■ о

руденко /тйь-'-]^

Яков Николаевич

У

КИНЕТИКА МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ОБОНЯТЕЛЬНОЙ ВЫСТИЛКИ ТРАВЯНОЙ ЛЯГУШКИ (Rana temporaria) ПОД ДЕЙСТВИЕМ ОДОРАНТОВ

03 00 13 - физиология 03 00 02 - биофизика

автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

) '

Санкт-Петербург Q ^

2007 )

003069316

Работа выполнена в лаборатории физиологии и биофизики клетки Института физиологии им И П Павлова РАН

Научные руководители член-корреспондент РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Самойлов Владимир Олегович

доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник, доцент Бигдай Елена Владимировна

Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор

Лебедев Олег Евгеньевич

доктор медицинских наук, профессор Голубев Виктор Николаевич

Ведущая организация Институт цитологии РАН

Защита диссертации состоится «ZÍ» мая 2007 года в 21 час 00 мин на заседании Диссертационного Совета по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук (Д 002 020 01) при Институте физиологии им ИП Павлова РАН (199034, Санкт-Петербург, наб Макарова, 6)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института физиологии им ИП Павлова РАН

Автореферат разослан апреля 2007 г

Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор биологических наук

Н Э Ордян

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Для обонятельной рецепции так же, как для вкусовой, каротидной и медуллярной (Самойлов, 1983), доказано наличие гетерогенных механизмов трансдукции пахучих веществ, обладающих различными запахами (Бигдай, 2004, Бигдай, Самойлов, 2004) Можно предположить, что эта гетерогенность будет проявляться и в разной кинетике рецепторных процессов, но данный вопрос совершенно не разработан

Обоняние ухудшается с возрастом (Murphy et al , 2002, Rawson, 2006), a также при нейроде1 енеративных заболеваниях, таких как болезни Паркинсона и Альцгеймера (Mesholam et al, 1998, Devanand et al, 2000, Hawkes et al, 2003) При болезни Паркинсона (Muzino et al, 1989, Schapira et al, 1989) и старении (Lenaz et al , 1998) наблюдается дефицит первого комплекса дыхательной цепи (ДЦ) митохондрий, что приводит к нарушению митохондриального дыхания и снижению синтеза АТФ (Yagi et al, 2001), а, следовательно, к ухудшению энергетического обеспечения процессов обонятельной рецепции Это в конечном итоге может приводить к притуплению обоняния, вследствие чего ухудшается качество жизни пациентов (Hummel, Nordin, 2005) Ослабление способности ощущать запахи у человека, страдающего болезнью Альцгеймера, также сопровождается нарушением функционирования митохондрий (Perry et al, 2003) Вместе с тем на сегодняшний день мало исследований, посвященных изучению митохондриального дыхания в обонятельных клетках Недавно было показано (Бигдай, 2004), что в обонятельных клетках под действием одорантов происходит активация ДЦ митохондрий, Которая проявляется в изменении интенсивности собственной флуоресценции НАДН (восстановленного никотинамидадениндинуклеотида) и ФП (флавопротеидов)

Установлено, что человек воспринимает около 10000 различных запахов (Keller, Vosshall, 2004), а животные макроосматики, вероятно, еще больше Возможно, различия в восприятии веществ, обладающих разными запахами, связаны не только с наличием специфических мембранных рецепторов (Malnic et al, 1999), но и с различными скоростями развития метаболических реакций в обонятельных клетках Однако кинетические параметры метаболических

процессов в обонятельных клетках, включая их флуориметрические проявления, до сих пор не исследованы

Поэтому настоящая работа посвящена изучению кинетики метаболических процессов в рецепторных клетках обонятельного эпителия лягушки под действием одорантов, вовлекающих в обонятельную трансдукцию различные механизмы Детальная разработка этой проблемы может оказаться полезной для создания искусственных обонятельных сенсоров, а также для медикаментозной коррекции некоторых нарушений обоняния Исследование механизмов действия аммиака и сероводорода на обонятельный эпителий поможет установить предельно допустимые концентрации данных ирритантов в производственных помещениях (Карпов, 1972, Михайлуц, Суглобова, 1989) Поэтому настоящее исследование имеет не только фундаментальное, но и прикладное значение для профилактической и клинической медицины ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Цепью работы было изучение кинетики флуоресценции НАДН и флавопротеидов, а также Са~*~ аккумупирующей способности клеточных мембран в обонятельной выстшке лягушки под действием одорантов

Для достижения цели были поставлены следующие задачи

1 Изучить кинетику собственной флуоресценции НАДН и флавопротеидов, а также Са2+-аккумулирующей способности клеточных мембран в обонятельной выстилке лягушки при стимуляции обонятельных клеток амиловым спиртом, цинеолом, камфорой, ванилином, аммиаком и [3-меркаптоэтанолом

2 Проанализировать взаимосвязь скорости нарастания и продолжительности реакций мембраносвязанного кальция с аналогичными показателями НАДН и флавопротеидов

3 Сравнить полученные показатели кинетики флуоресценции мембраносвязанного кальция, НАДН и флавопротеидов под действием одорантов, трансдукция которых обеспечивается различными молекулярными механизмами

4 Провести фармакологический анализ действия одорантов на активность дыхательной цепи митохондрий

5 Установить зависимость двигательной активности обонятельных жгутиков от ее энергетического обеспечения

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1 Одоранты, в обонятельную трансдукцию которых вовлечены системы вторичных мессенджеров (амиловый спирт, цинеол, камфора и ванилин), активируют сукцинатдегидрогеназу (СДГ)

2 Кинетические параметры изменений Са2+-аккумулирующей способности клеточных мембран обонятельной выстилки, происходящих под действием амилового спирта, цинеола, камфоры и ванилина, коррелируют с аналогичными показателями динамики флуоресценции НАДН

3 Кинетика флуоресценции НАДН и мембраносвязанного кальция различна для амилового спирта, цинеола, камфоры и ванилина, чю обусловлено участием разных внутриклеточных сигнальных систем в трансдукции этих одорантов

4 Кинетика реакций мембраносвязанного кальция, а также НАДН и ФП на стимуляцию обонятельной выстилки аммиаком и (З-меркаптоэтанолом отличается от кинетики реакций на амиловый спирт, цинеол, камфору и ванилин, что объясняется разными механизмами трансдукции э гих одорантов

5 Неодинаковая кинетика собственной флуоресценции НАДН, ФП и Са2+-аккумулиругощей способности клеточных мембран обонятельной выстилки на различные одоранты подтверждает основные положения теории гетерогенности хемосенсорных систем

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые исследована кинетика флуоресценции НАДН и ФП в рецепторных клетках обонятельного эпителия лягушки в ответ на стимуляцию амиловым спиртом, цинеолом, камфорой и ванилином, а также аммиаком и р-меркаптоэтанолом

При изучении реакций на амиловыи спирт, цинеол, камфору и ванилин впервые выявлена взаимосвязь кинетики флуоресценции НАДН с кинетикой Са2+-аккумулирующей способности клеточных мембран в обонятельной выстилке Кинетические показатели для разных одорантов оказались

различными, что обусловлено гетерогенностью молекулярных механизмов их трансдукции

Впервые показано, что скорость нарастания интенсивности вторичной флуоресценции комплекса Са2+-хлортетрациклин-клеточная мембрана (Са2*-ХТЦ-КМ) под действием амилового спирта, цинеола, камфоры и ванилина примерно в три раза превосходит аналогичный показатель собственной флуоресценции НАДН Аммиак в сравнении с другими одорантами вызывает наиболее длительные реакции усиления флуоресценции мембраносвязанного кальция

При сопоставлении скорости усиления собственной флуоресценции НАДН и ФП в обонятельной выстилке лягушки под действием амилового спирта, цинеола, камфоры и ванилина с аналогичным показателем в гепатоцитах крысы, стимулированных гормонами (Наросгку ег а1, 1995), впервые ус гановлено, что кинетика метаболических процессов в обонятельных клетках пойкилотермного животного в 4-5 раз выше, чем в гепатоцитах гомойотермного

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Работа имеет важное теоретическое значение для развития физиологии и биофизики хемосенсорных систем, так как расширяет представление о гетерогенности хеморецепции Гетерогенность обоняния проявляется в том, что одоранты, вовлекающие в трансдукцию разные биофизические и биохимические механизмы, обладают различной кинетикой развития метаболических процессов в обонятельных клетках. Научно-теоретические положения и выводы из работы могут быть использованы в учебном процессе на кафедрах физиологии в высших учебных заведениях медицинского и биологического профиля

На основе полученных в нашей работе данных по кинетике метаболических процессов в обонятельных клетках под действием одорантов могут быть разработаны новые медицинские технологии для диагностики и лечения тех форм патологии обоняния, которые связаны с нарушением функционирования митохондрий в рецепторных клетках обонятельного эпителия, а также установлены предельно допустимые концентрации аммиака

и сероводорода в воздухе рабочих помещений для некоторых отраслей промышленности

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты исследования докладывались на IV Всероссийской конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2005), Международном симпозиуме, посвященном 80-летию организации Института физиологии им И П Павлова РАН «Механизмы адаптивного поведения» (Санкт-Петербург. 2005), XIII международном совещании и VI школе по эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2006), XIX Всероссийском научном совещании «Актуальные проблемы учения о тканях» (Санкт-Петербург, 2006), IV международном конгрессе «Слабые и сверхслабые поля и излучения в биологии и медицине» (Санкт-Петербург, 2006), Международной конференции Atlanta 2006 Mastering the Mitochondrial Maze (Атланта, США, 2006), 14-th European Bioenergetic Conference (Москва, 2006), Международной конференции Chinese Mit' 2006 Mitochondria and Health (Вэнжоу, Китай, 2006), Международной конференции «МЕТРОМЕД 2007» (Санкт-Петербург, 2007)

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, из которых 3 статьи в рецензируемых журналах и 10 тезисов докладов СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, изложения результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка литературы Работа содержит 134 страницы машинописною текста, иллюстрирована 4 таблицами и 14 рисунками Список литературы включает 271 литературный источник, из которых 47 на русском языке и 224 — на иностранном

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Опыты проводили на изолированной обонятельной выстилке лягушки Rana temporana Для исследования флуоресценции комплекса Са2+-ХТЦ-КМ, а также НАДН и ФП обонятельную выстилку стимулировали струей увлажненного воздуха, содержащей насыщенные пары природной тертой d-камфоры (Реахим), цинеола (МР, США), амилового спирта (Реахим), ванилина

(MP, США) Кроме того, изучали реакции обонятельной выстилки на 1 % раствор аммиака (Реахим) в дистиллированной воде и водный раствор (5-меркаптоэтанола (Fluka, Германия) в разведении 1 1000, выделяющего сероводород

Интенсивность собственной флуоресценции НАДН и ФП в обонятельных клетках измеряли на установке для флуориметрического анализа, изготовпенной на основе двулучевого люминесцентного микроскопа ШОМАМ-Р8 Флуоресценцию возбуждали на длине волны 365 нм, а регистрировали - на длине волны 465 нм (НАДН) и в области 520 - 530 нм (ФП) (Карнаухов, 1978) Одновременно записывали электроольфактограмму Амплитуду реакций на одоранты оценивали по отношению изменения флуоресценции в ответ на подачу стимула {АR) к уровню флуоресценции до воздействия одорантом (Ro)

Динамику вторичной флуоресценции комплекса Са2+-ХТЦ-КМ изучали с помощью люминесцентного микроскопа ЛЮМАМ-МП Флуоресценцию возбуждали ртутной лампой ДРШ-250М (Ятал = 390 нм), свечение препарата регистрировали на 520 нм (Владимиров, Добрецов, 1980) Скорость нарастания начального линейного участка реакций комплекса Са2+-ХТЦ-КМ, а также НАДН и ФП считали как долго реакции (в %) от ее максимальной величины, достигаемую за 1 с (Hajnoczky et al, 1995)

При прижизненной телевизионной микроскопии одоранты добавляли непосредственно в раствор Рингера, омывающий обонятельную выстилку, в следующих концентрациях ванилин 10'4 М, цинеол и камфора 10 * М, амиловый спирт и аммиак 1 1000, p-меркаптоэтанол 1 10000

Фармакологический анализ проводили с использованием ротенона (MP, США) и малоната натрия (Sigma, США) Ротеноном (5 мкМ) ингибировали первый комплекс ДЦ митохондрий, а малонатом (50 мМ) — СДГ

Достоверность различий оценивали с помощью программы Origin 7 5, применяя парный или независимый двухвыборочный i-тест (р = 0,05)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Все использованные в работе одоранты были разделены на две группы (Бигдай, 2004, Бигдай, Самойлов, 2004) В первую группу входили амиловый

спирт, цииеол, камфора и ванилин, вовлекающие в рецепцию внутриклеточные сигнальные системы Вторую группу составляли аммиак и ß-меркаптоэтанол, проникающие внутрь рецепторных клеток и действующие непосредственно на митохондрии

Изучение кинетики флуоресценции комплекса Са2+-ХТЦ-КМ показало, что под действием амилового спирта, цинеола, камфоры и ванилина интенсивность флуоресценции возрастает В результате исследования собственной флуоресценции НАДН и ФП было установлено, что интенсивность флуоресценции НАДН также увеличивалась под действием всех одорантов первой группы, тогда как свечение ФП усиливалось только под действием амилового спирта Можно предположить, что увеличение интенсивности флуоресценции НАДН происходит в результате повышения снабжения ДЦ митохондрий восстановленными эквивалентами за счет активации Са2+-зависимых дегидрогеназ цикла Кребса и СДГ

При стимуляции одорантами первой группы скорость нарастания флуоресценции комплекса Са2+-ХТЦ-КМ была примерно в 3 раза выше, чем аналогичный показатель свечения НАДН и ФП (рис 1 А, В) В наших экспериментах при стимуляции обонятельного эпителия веществами с прогорклым, эвкалиптовым, камфорным и цвет очным запахами за 1 с реакция мембраносвязанного Са2+ достигала 55-75% своей амплитуды, а НАДН и ФП -20-30% Вместе с тем показано, что содержание вторичных мессенджеров (цАМФ и 1Р3) в обонятельных жгутиках достигает максимума через 25-50 мс (Breer et al, 1990, Restrepo et al, 1993, Jaworsky et al, 1995) Таким образом, при передаче сигнала от рецептора к митохондриям происходит поэтапное замедление кинетики образование вторичных мессенджеров происходит быстрее темпов усиления флуоресценции комплекса что, в

свою очередь, развивается быстрее флуоресцентных реакций НАДН

Скорость нарастания собственной флуоресценции НАДН была наибольшей при стимуляции обонятельной выстилки цинеолом и ванилином, причем различия с реакциями на амиловый спирт были достоверны (рис 1 В) Можно предположить, что различия в скорости нарастания интенсивности флуоресценции НАДН для разных одорантов первой группы свидетельствуют о

неодинаковой степени активации ими Са2+-зависимых дегидрогеназ (Nichols et al, 1994, Hajnoczky et al, 1995, Rutter et al, 1996), которая больше зависит от

Рис 1 Сравнение скорости нарастания интенсивности флуоресценции (А, В, С) и продолжительности (Б, Е, Е) реакций на различные одоранты А, Б - комплекса Са2+-ХТЦ-КМ, В, Е - НАДН, С, Р - ФП По оси абсцисс - сратшпаемыс одоранты, по оси ординат А - скорость нарастания реакций комплекса Са +-ХТЦ-КМ, %/с, В - скорость нарастания реакций НАДН, %/с, С - скорость нарастания реакций ФП, %/с, И -продолжительность реакций комплекса Са2+-ХТЦ-КМ, с, Е - продолжительность реакций НАДН, с, Р - продолжительность реакций ФП, с Столбики на гистограммах В, С, Е, И отсутствуют в тех случаях, когда реакций на одораот не было Данные приведены как хср ± тх„ где хср - средние арифметические значение, а тХТ - стандартная ошибка

скорости нарастания концентрации цитозольного Са2+, нежели от максимума его содержания и времени возвращения к исходному уровню (На^осгку й а1, 1995) Может быть, поэтому тенденция к появлению различий в скорости нарастания флуоресценции комплекса Са2+-ХТЦ-КМ при стимуляции обонятельной выстилки одорантами первой группы переходит в закономерность в скорости нарастания флуоресценции НАДН По крайней мере, для одорантов первой группы существует зависимость между различиями в скорости усиления флуоресценции НАДН и комплекса Са2+-ХТЦ-КМ (рис 1 А, В)

Неодинаковые темпы активации метаболизма одорантами первой группы, вероятно, обусловлены различной скоростью передачи сигнала от рецепторов к одорантам до ДЦ митохондрий обонятельных клеток вследствие гетерогенности их молекулярных механизмов трансдукции Трансдукцию сигнала от рецептора до аденилатциклазы (АЦ) при восприятии амилового спирта или до фосфолипазы (ФЛС) в ответ на стимуляцию ванилином осуществляет О-белок, а при рецепции цинеола и камфоры, относящихся к группе терпеновых углеводородов, трансдукция сигнала от цинеола до АЦ или от камфоры до ФЛС осуществляется за счет рецепторной тирозинкиназы (Бигдай, 2004, Бигдай, Самойлов, 2004) Гетерогенность может проявляться, например, в том, что аденилатциклазная и фосфоинозитидная системы активируют различные кальциевые каналы Предполагаемые нами механизмы действия одорантов первой группы на ДЦ обобщены в рис 2

При стимуляции обонятельных клеток веществами с прогорклым, эвкалиптовым, камфорным и цветочным запахами продолжительность реакций НАДН и ФП была в несколько раз больше, чем реакций комплекса Са2+-ХТЦ-КМ, причем длительность ответов НАДН на амиловый спирт была достоверно больше, чем на ванилин, камфору и цинеол, и коррелировала с более продолжительным усилением свечения комплекса Са2+-ХТЦ-КМ (рис 1 В, Е, Р) Более продолжительные реакции НАДН на амиловый спирт, по-видимому, указывают на перегрузку ДЦ митохондрий восстановленными эквивалентами, что, вероятно, является следствием более длительной активации Са2+-

зависимы* дегидрогелаз (Nichols et а)., ) 994; Hajnoczky et al„ 1995; Ruttcr et at, 1996).

При блокаде первого комплекса ДЦ ротеноном реакции НАДН на одоранты первой группы сохранялись. Однако после обработки обонятельной выстилки малонатом они исчезали. Следовательно, вещества с прогорклым, эвкалиптовым, камфорным и цветочным запахами активируют ротенон-резистентный путь, переключая ДЦ митохондрий на окисление сукцинагга, что способствует увеличению скорости синтеза АТФ митохондриями (Кондрашова,

Са'-

Амнловый спирт R

gf Ж

V* е 0X4 *

\ __ ■ __ • \

•П '

1ШКЛ .. . __ Kpefica , #

Са'

Л г ( ,ч \дп

(V -:

ШОШЖЯС V солиле*«1 JV вцмп,*!«: JJJ »«»»щек I)

Камфора

ч

1«

1 Са- А

4 I

ПКС

IP. Г у Са"

j Ц\

«.О ^^

ti

НИКЛ • 'J1'41

Kpefci j #

Са1'

N

СуВВНТ

I НАДН

Цинеол

R,

ли

|Г

ш

Tl i W

Цшч^-f- hi-о ж

Л

ГЦ

АЛ® • О, |

цикл

Kpcfcl _ 1

Са

■I

НА/Ш

лег«л(ки cii*iu

Са-'

- Щ ч

Щ

( 1

с V nHHUMciy

Рис. 2. Предполагаемый механизм активации ЛИ митохондрий обонятельных клеток амиловым спиртом, цииеолом, камфорой и ванилином.

1989)

Скорость нарастания флуоресценции комплекса Са2+-ХТЦ-КМ, НАДН и ФП в обонятельных клетках под действием одорантов первой группы, установленная в наших опытах, выше аналогичных показателей кинетики длягепатоцитов крысы, стимулированных вазопрессином и ангиотензином II (Па]ПОС?.ку й а1, 1995) Так, средняя скорость нарастания флуоресценции НАДН и ФП обонятельной выстилки была в 4-5 раз выше аналогичных показателей для гепатоцитов Заметим, что исследования действия гормонов проводились на клетках печени млекопитающего, которые обладают очень активным метаболизмом, тогда как наши эксперименты были выполнены на обонятельных клетках амфибий при температуре 22 — 25°С Тем не менее, скорость развития метаболических реакций в органе обоняния пойкилотермной лягушки была выше, чем в гепатоцитах гомойотермной крысы

Обдувание обонятельного эпителия аммиаком и сероводородом также усиливало флуоресценцию комплекса причем

продолжительность реакций на аммиак была в несколько раз больше, чем на одоранты первой группы (рис 1 О) Вместе с тем при стимуляции обонятельной выстилки аммиаком интенсивность флуоресценции НАДН усиливалась в 100% случаев, а свечение ФП становилось сильнее в 56% опытов На фоне ротенона (5 мкМ) амплитуда реакций НАДН на аммиак снижалась, и отмечалась выраженная тенденция к уменьшению их продолжительности Конкурентный характер взаимодействия аммиака и ротенона подтверждает предположение об их сходном действий на ДЦ митохондрий Обдувание обонятельной выстилки Р-меркаптоэтанолом не вызывало изменений интенсивности флуоресценции НАДН и ФП, что может быть обусловлено блокированием железосодержащих центров на всем протяжении ДЦ митохондрий

Предположения относительно механизмов действия одорантов первой и второй групп на метаболизм обонятельных клеток мы проверяли в экспериментах по исследованию подвижности обонятельных жгутиков На фоне ротенона (5 мкМ) или малоната (50 мМ) неупорядоченные движения жгутиков прекращались Последующая стимуляция амиловым спиртом,

ванилином, камфорой и цинеолом на фоне действия ротенона (5 мкМ) всегда восстанавливала цилиарную подвижность, тогда как после обработки малонатом (50 мМ) этого не происходило Аммиак и (3-меркаптоэтанол угнетали двигательную активность обонятельных жгутиков

Таким образом, в данной работе впервые изучена кинетика флуоресценции НАДН и ФП в обонятельных рецепторных клетках и ее связь с кинетикой флуоресценции комплекса Са2+-ХТЦ-КМ Можно предположить, что в основе различной кинетики реакций НАДН и комплекса Са2+-ХТЦ-КМ, а также различий в изменениях двигательной активности обонятельных жгутиков под действием различных одорантов лежит гетерогенность молекулярных механизмов их обонятельной трансдукции Результаты нашей работы подтверждают теорию гетерогенности хемосенсорных систем (Самойлов, 1983), которая получила дальнейшее развитие благодаря фактам о гетерогенности обонятельной трансдукции (Бигдай, 2004)

ВЫВОДЫ

1 Вещества, обладающие прогорклым, эвкалиптовым, камфорным, цветочным и острым запахом, усиливают в обонятельных клетках вторичную флуоресценцию комплекса Са2+-хлортетрациклин-клеточная мембрана, а также собственную флуоресценцию НАДН, причем скорость усиления флуоресценции комплекса Са2+ -хлортетрациклин-клеточная мембрана примерно в 3 раза выше, чем НАДН

2 Одоранты первой группы (амиловый спирт, цинеол, камфора и ванилин) активируют дыхательную цепь митохондрий посредством стимуляции внутриклеточных сигнальных систем и сопряженной с этим активацией сукцинагдегидрогеназы

3 Скорость нарастания флуоресценции НАДН в органе обоняния под действием цинеола и ванилина достоверно превышает аналогичный кинетический показатель для амилового спирта, в чем, а также в неодинаковой продолжительности реакций на эти одоранты проявляется неоднородность молекулярных механизмов обонятельной трансдукции различных одорантов первой группы

4 Реакции НАДН и флавопротеидов обонятельной выстилки на аммиак развиваются с меньшей скоростью, чем на одоранты первой группы Разная кинетика может быть обусловлена тем, что диффузия аммиака в обонятельные клетки и их митохондрии происходит медленнее, чем активация метаболизма одорантами первой группы благодаря стимуляции ими мембранных рецепторов, включающих внутриклеточные сигнальные системы Это свидетельствует о гетерогенности механизмов обонятельной трансдукции одорантов первой и второй групп

5 Механизмы обонятельной трансдукции разных одорантов второй группы также гетерогенны, поскольку аммиак обладает ротенон-подобным действием на первый комплекс электрон-транспортной цепи, тогда как сероводород блокирует межмолекулярный перенос электронов на всем протяжении дыхательной цепи митохондрий

6 Флуориметрические кинетические показатели функционирования органа обоняния коррелируют с динамикой двигательной активности обонятельных жгутиков и изменениями электроольфактограммы

7 Двигательная активность обонятельных жгутиков лягушки демонстрирует сильную зависимость от энергетического обеспечения, проявляя высокую чувствительность к действию ингибиторов дыхательной цепи митохондрий, а также одорантов с острым и гнилостным запахами

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Бигдаи Е В , Самойлов В О , Руденко Я Н , Комаров А Н Влияние одорантов на митохондриальное дыхание обонятельных клеток // Вестник Российской Военно-медицинской академии 2004 Т 11 N 1 - С 29-35

2 Руденко Я Н , Бигдай Е В , Самойлов В О Кинетика Са2\ НАДН и окисленных флавопротеидов в обонятельной выстилке лягушки под действием одорантов // Биофизика 2007 Т 52 N 1 - С 88-94

3 Rudenko J N . Bigdai Е V , Samoilov V О Odorant-Induced Kmetics of Са2н, NADH, and Oxidized Flavoproteins in Frog Olfactory Mucosa // Biophysics 2007 Vol 52 N 1 -P 46-51

4 Руденко Я H, Бигдай Е В, Самойлов В О Особенности кинетики митохондриального дыхания в обонятельных клетках // Материалы IV

Всероссийской конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем» СПб 2005 -С 207-208

5 Руденко Я Н , Бигдай Е В , Самойлов В О Изменения клеточного дыхания обонятельной выстилки под действием одорантов // Тезисы докладов Международного симпозиума «Механизмы адаптивного поведения» СПб 2005 -С 66-67

6 Бигдай Е В , Самойлов В О , Руденко Я Н Рецепция различных одорантов обеспечивается гетерогенными биофизическими механизмами // Тезисы докладов и лекций XIII международного совещания и VI школы по эволюционной физиологии СПб 2006 - С 31

7 Руденко Я Н . Бигдай Е В , Самойлов В О Цитофизиологические аспекты кинетики митохондриального дыхания в обонятельной выстилке // Материалы XIX Всероссийского научного совещания «Актуальные проблемы учения о тканях» СПб 2006 - С 85-87

8 Самойлов В О , Бигдай Е В , Руденко ЯН. Механизмы хемосенсорной чувствительности самого тонкого анализатора химических агентов // Тезисы докладов IV международного конгресса «Слабые и сверхслабые поля и излучения в биологии и медицине» СПб 2006 - С 76

9 Rudenko J N . Bigdai Е V , Samoilov V О Kinetics of reactions of the mitochondrial respiratory chain m the frog olfactory epithelial lining under effect of odorants / Abstracts of the conference Atlanta 2006 Mastering the Mitochondrial Maze, Atlanta, USA // Mitochondrion 2006 Vol. 6 - P 273

10 Rudenko J N. Bigdai EV, Samoilov VO Changes in the respiratory chain activity of mitochondria of frog olfactory epithelium under an exposure to odorants / Abstracts of the 14-th European Bioenergetic Conference, Moscow, Russia //Biochim Biophys Acta Bioenergetics 2006 Vol 14.-P 226

11 Bigdai E V, Rudenko J N. Samoilov V О Kinetics of reactions of the mitochondrial respiratory chain m the frog olfactory epithelial lining under the effect of camphor and vanillin // Abstracts of the 14-th European Bioenergetic Conference, Moscow 2006 - P 11

12 Rudenko J N . Bigdai E V , Samoilov V О Kinetics of cytosol Ca2+, NADH, and oxidized flavoprotems of mitochondrial respiratory chain in the frog olfactory lining under effects of odorants // Abstracts of the conference Chinese Mit' 2006 Mitochondria and Health, Wenzhou, Zhejiang Province, China 2006 -P 140

13 Руденко Я H, Бигдай Е В , Самойлов В О Кинетика клеточного дыхания и кальциевого обмена в органе обоняния под действием одорантов // Материалы Международной конференции «МЕТРОМЕД 2007» СПб 2007 -С 123-124

Подписано в печать 16 04.2007 Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная Печать офсетная Уел печ. л 1,0 Тираж 100 экз. Заказ №491

Отпечатано в ООО «Издательство "ЛЕМА"»

199004, Россия, Санкт-Петербург, В О , Средний пр , д 24, тел /факс 323-67-74 e-mail izd_lema@mail ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Руденко, Яков Николаевич

Список сокращений

Введение.

1. Обзор литературы

1.1. Структурные основы обонятельной рецепции земноводных.

1.2. Молекулярные механизмы и кинетика обонятельной рецепции.

1.2.1. Мембранные рецепторы одорантов.

1.2.2. Структура и функции G-белков, участвующих в обонятельной трансдукции веществ, обладающих прогорклым и цветочным запахами.

1.2.3. Участие тирозинкиназной системы в обонятельной трансдукции веществ, обладающих камфорным и эвкалиптовым запахами.

1.2.4. Участие аденилатциклазной системы в обонятельной трансдукции веществ с прогорклым и эвкалиптовым запахами.

1.2.5. Участие фосфоинозитидной системы в обонятельной трансдукции одорантов с камфорным и цветочным запахами.

1.2.6. Механизмы обонятельной трансдукции веществ, обладающих острым и гнилостным запахами.

1.3. Энергетическое обеспечение обонятельной рецепции.

2. Материалы и методы исследования

2.1. Объект исследования.

2.2. Флуоресцентный анализ кинетики мембраносвязанного кальция в обонятельной выстилке.

2.3. Флуоресцентный анализ кинетики НАДН и флавопротеидов в обонятельной выстилке.

2.4. Электроольфактография.

2.5. Прижизненная телевизионная микроскопия двигательной активности обонятельных жгутиков.

2.6. Методика стимуляции обонятельной выстилки и фармакологический анализ кинетики реакций на одоранты.

3. Результаты исследования

3.1. Исследование кинетики флуоресценции мембраносвязанного кальция в обонятельной выстилке лягушки под действием одорантов.

3.1.1. Исследование кинетики флуоресценции мембраносвязанного кальция под действием амилового спирта, цинеола, камфоры и ванилина.

3.1.2. Исследование кинетики флуоресценции мембраносвязанного кальция под действием аммиака и |3-меркаптоэтанола.

3.2. Исследование кинетики флуоресценции НАДН и флавопротеидов в обонятельной выстилке лягушки под действием одорантов.

3.2.1. Исследование кинетики флуоресценции НАДН и флавопротеидов под действием амилового спирта.

3.2.2. Исследование кинетики флуоресценции НАДН и флавопротеидов под действием цинеола.:

3.2.3. Исследование кинетики флуоресценции НАДН и флавопротеидов под действием камфоры.

3.2.4. Исследование кинетики флуоресценции НАДН и флавопротеидов под действием ванилина.

3.2.5. Исследование кинетики флуоресценции НАДН и флавопротеидов под действием аммиака.

3.2.6. Исследование кинетики флуоресценции НАДН и флавопротеидов под действием |3-меркаптоэтанола.

3.3. Изучение энергозависимости двигательной активности обонятельных жгутиков.

4. Обсуяедение результатов.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Кинетика метаболической активности обонятельной выстилки травяной лягушки (Rana temporaria) под действием одорантов"

Актуальность проблемы

Для обонятельной рецепции так же, как для вкусовой, каротидной и медуллярной (Самойлов, 1983), доказано наличие гетерогенных механизмов трансдукции пахучих веществ, обладающих различными запахами (Бигдай, 2004 а, б; Бигдай, Самойлов, 2004). Можно предположить, что эта гетерогенность будет проявляться и в разной кинетике рецепторных процессов, но данный вопрос совершенно не разработан.

Обоняние ухудшается с возрастом (Murphy et al., 2002; Rawson, 2006), a также при нейродегенеративных заболеваниях, таких как болезни Паркинсона и Альцгеймера (Mesholam et al., 1998; Devanand et al., 2000; Hawkes et al., 2003). При болезни Паркинсона (Muzino et al., 1989; Schapira et al., 1989) и старении (Lenaz et al., 1998) наблюдается дефицит первого комплекса дыхательной цепи митохондрий, что приводит к нарушению митохондриального дыхания и снижению синтеза АТФ (Yagi et al., 2001), а, следовательно, к ухудшению энергетического обеспечения процессов обонятельной рецепции. Это в конечном итоге может приводить к притуплению обоняния, вследствие чего ухудшается качество жизни пациентов (Hummel and Nordin, 2005). Ослабление способности ощущать запахи у человека, страдающего болезнью Альцгеймера, также сопровождается нарушением функционирования митохондрий. (Perry et al., 2003). Вместе с тем на сегодняшний день мало исследований, посвященных изучению митохондриального дыхания в обонятельных клетках. Недавно было показано (Бигдай, 2004 а), что в обонятельных клетках под действием одорантов происходит активация дыхательной цепи митохондрий, которая проявляется в изменении интенсивности собственной флуоресценции НАДН и флавопротеидов.

Установлено, что человек воспринимает около 10000 различных запахов (Keller and Vosshall, 2004), а животные макроосматики, вероятно, еще больше. Возможно, различия в восприятии веществ, обладающих разными запахами, связаны не только с наличием специфических мембранных рецепторов '(Malnic et al., 1999), но и с различными скоростями развития метаболических реакций в обонятельных клетках. Однако кинетические параметры метаболических процессов в обонятельных клетках, включая их флуориметрические проявления, до сих пор не исследованы.

Поэтому настоящая работа посвящена изучению кинетики метаболических процессов в рецепторных клетках обонятельного эпителия лягушки под действием одорантов, вовлекающих в обонятельную трансдукцию различные механизмы. Детальная разработка этой проблемы может оказаться полезной для создания искусственных обонятельных сенсоров, а также для медикаментозной коррекции некоторых нарушений обоняния. Исследование механизмов действия аммиака и сероводорода на обонятельный эпителий поможет установить предельно допустимые концентрации данных ирритантов в производственных помещениях (Карпов, 1972; Михайлуц, Суглобова, 1989). Поэтому настоящее исследование имеет не только фундаментальноё, но и прикладное значение для профилактической и клинической медицины.

Цели и задачи исследования

Целью работы было изучение кинетики флуоресценции НАДН и флавопротеидов, а также Са2+ -аккумулирующей способности клеточных мембран в обонятельной выстилке лягушки под действием одорантов.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить кинетику собственной флуоресценции НАДН и л | флавопротеидов, а также Са -аккумулирующей способности клеточных мембран в обонятельной выстилке лягушки при стимуляции обонятельных клеток амиловым спиртом, цинеолом, камфорой, ванилином, аммиаком и р-меркаптоэтанолом.

2. Проанализировать взаимосвязь скорости нарастания и продолжительности реакций мембраносвязанного кальция с аналогичными показателями НАДН и флавопротеидов.

3. Сравнить полученные показатели кинетики флуоресценции мембраносвязанного кальция, НАДН и флавопротеидов под действием одорантов, трансдукция которых обеспечивается различными молекулярными механизмами.

4. Провести фармакологический анализ действия одорантов на активность дыхательной цепи митохондрий.

5. Установить зависимость двигательной активности обонятельных жгутиков от ее энергетического обеспечения.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Одоранты, в обонятельную трансдукцию которых вовлечены системы вторичных мессенджеров (амиловый спирт, цинеол, камфора и ванилин), активируют сукцинатдегидрогеназу.

2. Кинетические параметры изменений Са -аккумулирующей способности клеточных мембран обонятельной выстилки, происходящих под действием амилового спирта, цинеола, камфоры и ванилина, коррелируют с аналогичными показателями динамики флуоресценции НАДН.

3. Кинетика флуоресценции НАДН и мембраносвязанного кальция различна для амилового спирта, цинеола, камфоры и ванилин'а, что обусловлено участием разных внутриклеточных сигнальных систем в трансдукции этих одорантов.

4. Кинетика реакций мембраносвязанного кальция, а также НАДН и флавопротеидов в ответ на стимуляцию обонятельной выстилки аммиаком и (3-меркаптоэтанолом отличается от кинетики реакций на амиловый спирт, цинеол, камфору и ванилин, что объясняется разными механизмами трансдукции этих одорантов.

5. Неодинаковая кинетика собственной флуоресценции НАДН, флавопротеидов и Са2+-аккумулирующей способности клеточных мембран обонятельной выстилки на различные одоранты подтверждает основные положения теории гетерогенности хемосенсорных систем.

Научная новизна

Впервые исследована кинетика флуоресценции НАДН и флавопротеидов в рецепторных клетках обонятельного эпителия лягушки в ответ на

8 } стимуляцию амиловым спиртом, цинеолом, камфорой и ванилином, а также аммиаком и Р-меркаптоэтанолом.

При изучении реакций на амиловый спирт, цинеол, камфору и ванилин впервые выявлена взаимосвязь кинетики флуоресценции НАДН с кинетикой Са2+-аккумулирующей способности клеточных мембран в обонятельной выстилке. Кинетические показатели для разных одорантов оказались различными, что обусловлено гетерогенностью молекулярных механизмов их трансдукции.

Впервые показано, что скорость нарастания интенсивности вторичной

Л I флуоресценции комплекса: Са-ХТЦ-КМ под действием амилового спирта, цинеола, камфоры и ванилина примерно в три раза превосходит аналогичный показатель собственной флуоресценции НАДН. Аммиак в сравнении с другими одорантами вызывает наиболее длительные реакции усиления флуоресценции мембраносвязанного кальция.

При сопоставлении скорости усиления собственной флуоресценции НАДН и флавопротеидов в обонятельной выстилке лягушки под действием амилового спирта, цинеола, камфоры и ванилина с аналогичным показателем в гепатоцитах крысы, стимулированных гормонами (Hajnoczky et al.,* 1995), впервые установлено, что кинетика метаболических процессов в обонятельных клетках пойкилотермного животного в 4-5 раз выше, чем в гепатоцитах гомойотермного.

Теоретическая и практическая значимость

Работа имеет важное теоретическое значение для развития физиологии и биофизики хемосенсорных систем, так как расширяет представление о гетерогенности хеморецепции. Гетерогенность обоняния проявляется в том, что одоранты, вовлекающие в трансдукцию разные биофизические и биохимические механизмы, обладают различной кинетикой развития метаболических процессов в обонятельных клетках. Научно-теоретические положения и выводы из работы могут быть использованы в учебном процессе на кафедрах физиологии в высших учебных заведениях медицинского и биологического профиля. '

На основе полученных в нашей работе данных по кинетике метаболических процессов в обонятельных клетках под действием одорантов могут быть разработаны новые медицинские технологии для диагностики и лечения тех форм патологии обоняния, которые связаны с нарушением функционирования митохондрий в рецепторных клетках обонятельного эпителия, а также установлены предельно допустимые концентрации аммиака и сероводорода в воздухе рабочих помещений для некоторых отраслей промышленности.

Апробация работы

Результаты исследования докладывались на IV Всероссийской конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2005), Международном симпозиуме, посвященном 80-летию организации Института физиологии им. И.П. Павлова РАН «Механизмы адаптивного поведения» (Санкт-Петербург, 2005); XIII международном совещании и VI школе по эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2006); XIX Всероссийском научном совещании «Актуальные проблемы учения о тканях» (Санкт-Петербург, 2006); IV международном конгрессе «Слабые и сверхслабые поля и излучения в биологии и медицине» (Санкт-Петербург, 2006); Международной конференции Atlanta 2006: Mastering the Mitochondrial Maze (Атланта, США, 2006); 14-th European Bioenergetic Conference (Москва, 2006); Международной конференции Chinese Mit' 2006: Mitochondria and Health (Вэнжоу, Китай, 2006); Международной конференции «МЕТРОМЕД 2007» (Санкт-Петербург, 2007).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, из которых 3 статьи в рецензируемых журналах и 10 тезисов докладов.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, изложения результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка литературы. Работа содержит 134 страницы машинописного текста, иллюстрирована 4 таблицами и 14 рисунками. Список литературы включает 271 литературный источник, из которых 47 на русском языке и 224 - на иностранном.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Руденко, Яков Николаевич

ВЫВОДЫ

1. Вещества, обладающие прогорклым, эвкалиптовым, камфорным, цветочным и острым запахом, усиливают в обонятельных клетках вторичную флуоресценцию комплекса: Са -хлортетрациклин-клеточная мембрана, а также собственную флуоресценцию НАДН, причем скорость усиления

Л I флуоресценции комплекса: Са -хлортетрациклин-клеточная мембрана примерно в 3 раза выше, чем НАДН.

2. Одоранты первой группы (амиловый спирт, цинеол, камфора и ванилин) активируют дыхательную цепь митохондрий посредством стимуляции внутриклеточных сигнальных систем и сопряженной с этим активацией сукцинатдегидрогеназы.

3. Скорость нарастания флуоресценции НАДН в органе обоняния под действием цинеола и ванилина достоверно превышает аналогичный кинетический показатель для амилового спирта, в чем, а также в неодинаковой продолжительности реакций на эти одоранты проявляется неоднородность молекулярных механизмов обонятельной трансдукции различных одорантов первой группы.

4. Реакции НАДН и флавопротеидов обонятельной выстилки на аммиак развиваются с меньшей скоростью, чем на одоранты первой группы. Разная кинетика может быть обусловлена тем, что диффузия аммиака в обонятельные клетки и их митохондрии происходит медленнее, чем активация метаболизма одорантами первой группы благодаря стимуляции ими мембранных рецепторов, включающих внутриклеточные сигнальные системы. Это свидетельствует о гетерогенности механизмов обонятельной трансдукции одорантов первой и второй групп. I

5. Механизмы обонятельной трансдукции разных одорантов второй группы также гетерогенны, поскольку аммиак обладает ротенон-подобным действием на первый комплекс электрон-транспортной цепи, тогда как сероводород блокирует межмолекулярный перенос электронов на всем протяжении дыхательной цепи митохондрий.

6. Флуориметрические кинетические показатели функционирования органа обоняния коррелируют с динамикой двигательной активности обонятельных жгутиков и изменениями электроольфактограммы.

7. Двигательная активность обонятельных жгутиков лягушки демонстрирует сильную зависимость от энергетического обеспечения, проявляя высокую чувствительность к действию ингибиторов дыхательной цепи митохондрий, а также одорантов с острым и гнилостным запахами.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Руденко, Яков Николаевич, Санкт-Петербург

1. Бигдай Е.В. Гетерогенность обонятельной рецепции // Дисс'ерт. на соиск. уч. степ. докт. биол. наук СПб. 2004 а. 264 с.

2. Бигдай Е.В. Гетерогенность молекулярных механизмов обонятельной рецепции // Рос. Физиол. Журн. им. И.М. Сеченова. 2004 б. Т. 90. N. 6. С. 790-800.

3. Бигдай Е.В. Обонятельная рецепция камфоры опосредуется фосфоинозитидной и тирозинкиназной сигнальными системами // Сенсорные системы. 2005. Т. 19. N. 1. С. 44-48.

4. Бигдай Е.В., Самойлов В.О. Гетерогенность механизмов обонятельной трансдукции у лягушки Rana temporaria II Журн. Эвол. Биохим. ФизиоЛ. 2004. Т. 40. N. 2.-С. 112-117.

5. Бигдай Е.В., Самойлов В.О. Исследование сигнальных систем обонятельных клеток, участвующих в рецепции амилового спирта и камфоры // News of Biomedical Sciences 2002. Vol. 3. P. 125-129.

6. Бигдай E.B., Самойлов В.О. Компоненты внутриклеточной системы цАМФ, обеспечивающие обонятельную рецепцию амилового спирта // Рос. Физиол. Журн. им. И.М. Сеченова. 2001. Т. 87. N. 6. С. 821-828.

7. Бигдай Е.В., Самойлов В.О., Бекусова В.В. Влияние одорантов на цитоскелет ресничек обонятельных клеток // Морфология. 2006. Т. 129. N. 2. — С. 21.

8. Бигдай Е.В., Самойлов В.О., Комаров А.Н. Исследование участия внутриклеточной системы цАМФ в обонятельной трансдукции камфары и амилового спирта // Рос. Физиол. Журн. им. И.М. Сеченова. 1999. Т. 85. N. 3. -С. 412-418.

9. Бронштейн А.А. Локализация дегидраз в обонятельных клетках позвоночных животных // Докл. АН СССР. 1962. Т. 142. N. 3. С. 936-939.

10. Бронштейн А.А. Прижизненные наблюдения над движением волосков обонятельных клеток // Докл. АН СССР. 1964. Т. 156. N. 3. С. 715-718.

11. Бронштейн А.А. Некоторые данные о тонкой структуре и цитохимии обонятельных рецепторов // Первичные процессы в рецепторных элементах органов чувств. JL: Наука, 1966. С. 65-83.

12. Бронштейн А.А. Обонятельные рецепторы позвоночных. Л.; ;Наука, 1977.- 160 с.

13. Бронштейн А.А., Леонтьев В.Г. О содержании натрия и калия в слизи обонятельной выстилки позвоночных // Журн. Эвол. Биохим. Физиол. 1972. Т. 8.-С. 580-585.

14. Брумберг Е.М., Крылова Г.Н. Применение интерференционных делительных зеркал в флуоресцентной микроскопии // Журн. Общей биол. 1953. Т. 14. N. 16. С. 461-464.

15. Бенедиктова Н.И., Каминский Ю.А., Лопата О.В., Каминский Ю.Г., Косенко Е.А. Действие солей аммония на некоторые энергетические функции митохондрий мозга крысы // Митохондрии в патологии. Пущино, 2001. С. 147-150.

16. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.: Наука, 1980. 320 с.

17. Елисеев В.В., Огнева И.В., Самойлов В.О. Математическое моделирование движения жгутиков обонятельных клеток // Биофизика. 2003. Т. 48. N. 5.-С. 884-890.

18. Карнаухов В.Н. Люминесцентный спектральный анализ клетки. М.: Наука, 1978.-209 с.

19. Карпов А.П. Электрофизиологический анализ действия некоторых химических веществ на нервные структуры обонятельного анализатора при гигиеническом нормировании атмосферных загрязнений // Гиг. Санит. 1972. Т. 37. N. 2.-С. 4-10.

20. Кондрашова М.Н. Регуляция дыхания митохондрий при усиливающемся воздействии на клетку // Биофизика. 1970. Т. 15. N. 2. С. 312323.

21. Кондрашова M.H. Структурно-кинетическая организация цикла трикарбоновых кислот при активном функционировании митохондрий // Биофизика. 1989. Т. 34. N. 3. С. 450-458.

22. Косенко Е.А., Ставровский И .Г., Бенедиктова Н.И., Каминский Ю.Г. Транспорт Са и ферменты-антиоксиданты в митохондриях мозга крысы при гипераммониемии. Роль NMDA-рецепторов // Митохондрии в патологии. Пущино, 2001. С. 99-101.

23. Косолапов А.В., Колесников С.С. цАМФ/ цГМФ-активируемые каналы обонятельных клеток // Сенсорные системы. 1992. Т. 6. С. 120-123.

24. Крутецкая З.И., Лебедев О.Е. Структурно-функциональная организация G-белков и связанных с ними рецепторов // Цитология. 1992. Т. 34. N. 11/12.-С. 24-^45.

25. Лебедев О.Е., Научитель М.М. Люминесцентные исследования двух пулов митохондрий в одиночном нейроне // Цитология. 1984. Т. 26. N. ,1. С. 91-96.

26. Ленинджер А. Основы биохимии: В 3-х т. М.: Мир, 1985. - Т. 2. 1985.-368 с.

27. Лукьянова Л.Д., Балмуханова Б.С., Уголев А.Т. Кислородзависимые процессы в клетке и ее функциональное состояние. М.: Наука, 1982. 301 с.

28. Люминесцентный анализ в гастроэнтерологии. Л.: Наука, 1984. 236с.

29. Минор А.В. О механизме генерации обонятельного рецепторного потенциала // Механизмы работы рецепторных элементов органов чувств. Л.: Наука, 1973.-С. 121-126.

30. Минор А.В. Физиологические механизмы работы обонятельных рецепторных клеток // Сенсорные системы. Л.: Наука, 1980. С. 3-18.

31. Минор А.В., Быков К.А., Дмитриев А.В., Скачков С.Н. Измерение концентрации ионов калия, кальция, натрия и хлора в обонятельной слизи с помощью ионселективных микроэлектродов // Сенсорные системы. 1990. Т. 4. N. 3.- С. 220-227.

32. Михайлуц А.П., Суглобова Е.М. Гигиеническая оценка сочетанного действия аммиака и низких температур на работающих в химических производствах // Гиг. Тр. Проф. Забол. 1989. N. 4. С. 31-34.

33. Накамура Т., Сато Т.-О., Миямото С. Лиганд-зависимая ионная проводимость в обонятельных жгутиках // Биофизика. 1995. Т. 40. N. 1. С. 185-192.

34. Николе Д.Д. Биоэнергетика: введение в хемиосмотическую теорию. -М.: Мир, 1985.-190 с.

35. Новоселов П.И., Пещенко В.И., Евдокимов В.Е., Николаев Ю.В., Попов В.О., Матвеев Е.А., Фесенко Е.Е. Некоторые свойства специфического ГТФ-связывающего белка из обонятельного эпителия крысы // Сенсорные системы. 1995. Т. 9. N. 4. С. 85-95.

36. Орлов С.Н., Шевченко А.С. О возможном механизме действия мембраносвязанного кальция на активность аденозинтрифосфатазы и проницаемость эритроцитов для одновалентных катионов // Биохимия. 1978. Т. 43. N. 2.-С. 208-215.

37. Поглазов А.Ф., Шубин М.В., Скоцеляс Ю.Г. и др. Флуориметрическое изучение вывода Са из липосом, индуцированного воздействием фосфолипазы // Биофизика. 1975. Т. 20. N. 1. С. 69-72.

38. Савина М.В. Механизмы адаптации тканевого дыхания в эволюции позвоночных. СПб.: Наука, 1992. - 200 с.

39. Самойлов В.О. Гетерогенность хемосенсорных систем. Л.: Наука, 1983.-224 с.

40. Самойлов В.О. Электронная схема жизни (Этюды квантовой биофизики). СПб.: изд-во Института физиологии им. И.П. Павлова, 2001. - 44 с.

41. Смирнова Е.Г., Ягужинский Л.С., Азаренкова Н.М. Гидрофобные ингибиторы дыхательной цепи митохондрий // Митохондрии. Молекулярные механизмы ферментативных реакций. М.: Наука, 1972. С. 75-77.

42. Соловьев В.Н., Самойлов В.О. Исследования люминесценции пиридиннуклеотидов и флавопротеинов в зоне рецепторного эпителия языка лягушки // Физиол. журн. СССР. 1977а. N. 10. С. 1476-1478.

43. Соловьев В.Н., Самойлов В.О. Изменение спектров люминесценции рецепторного эпителия языка лягушки под действием уксусной кислоты // Физиол. журн. СССР. 19776. Т. 63. N. 12. С. 1740-1742.

44. Соловьев В.Н., Самойлов В.О. Изменения тканевого дыхания рецепторного эпителия языка лягушки при действии вкусовых раздражителей // Физиол. журн. СССР. 1978. Т. 64. N. 8. -С.1174-1176.

45. Терентьев П.В., Лягушка М.: Сов. наука, 1950. 345 с.

46. Фелипо В., Косенко Е.А., Бенедиктова Н.И., Каминский Ю.Г. Гипераммониемия новая митохондриальная болезнь // Митохондрии в патологии. Пущино, 2001. - С. 150-152.

47. Якушенков Ю.Г. Теория и расчет оптико-электронных приборов: учебник для студентов приборостроительных специальностей ВУЗов. 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Машиностроение, 1989 - 360 с.

48. Abogadie F.C., Bruch R.C., Farbman A.I. G-protein subunits expressed in catfish olfactory receptor neurons // Chem. Senses 1995. Vol. 20. P. 199-206.

49. Abrahim D., Braguini W.L., Kelmer-Bracht A.M., Ishii-Iwamoto E.L. Effects of four monoterpenes on germination, primary root growth, and mitochondrial respiration on maize // J. Chem. Ecology. 2000. V.26. N. 3. P. 611624.

50. Afzelius B.A. Cilia-related diseases // J. Pathol. 2004. Vol. 204. P. 470477.

51. Aiba Т., Mori J., Nakai Y. Nerve growth factor (NGF) and its receptor in rat olfactory epithelium // Acta oto-laryngol. 1993. Suppl 5. P. 37-40.

52. Amoore J.E. Stereochemical theory of olfaction // Nature. 1963. Vol. 199. -P. 912-913.

53. Bakalyar H.A., Reed R.R. Identification of a specialized adenylyl. cyclasejthat may mediate odorant detection // Science. 1990. Vol. 250. N. 4986. P. 14031406.

54. Balaban R.S., Blum J.J. Hormone-induced changes in NADH fluorescence and 02 consumption of rat hepatocytes // Am. J. Physiol. 1982. Vol. 242. P. C172-C177.

55. Bannai H., Yoshimura M., Takahashi K., Shingyoji C. Calcium regulation of microtubule sliding in reactivated sea urchin sperm flagella // J. Cell Sci. 2000. Vol. 113.-P. 831-839.

56. Belluscio L., Gold G.H., Nemes A., Axel R. Mice deficient in G0if are anosmic // Neuron. 1998. Vol. 20. P. 69-81.

57. Bernardi P. Mitochondrial transport of cations: channels, exchangers, and permeability transition // Physiol. Rev. 1999. Vol. 79. N. 4. P. 1127-1155.

58. Bianchet M.A., Bains G., Pelosi P. Pevsner J., Snyder S.H. The three-dimensional structure of bovine odorant binding protein and its mechanism of odor recognition // Nat. Struct. Biol. 1996. Vol. 3. P. 934-939.

59. Bigdai E.V., Samoilov V.O. Components of the intracellular cAMP system supporting the olfactory reception of amyl alcohol // Neurosci. Behavioral Physiol. 2003. Vol. 33. N. 1. P. 89-94.

60. Boccaccio A., Lagostena L., Hagen V., Menini A. Fast adaptation in mouse olfactory sensory neurons does not require the activity of phosphodiesterase // J. Gen. Physiol. 2006. Vol. 128. P. 171-184.

61. Bodeker D., Winkler A., Holler H. Ammonia absorption from the isolated reticulo-rumen of sheep // Exp. Physiol. 1990. Vol. 75. N. 4. P. 587-595.

62. Boekhoff I., Breer H. Termination of second messenger signaling in olfaction // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1992. Vol. 89. P. 471^74.

63. Boekhoff I., Michel W.C., Breer H., Ache B.W. Single odors differentially stimulate dual second messenger pathways in lobster olfactory receptor cells // J. Neurosci. 1994. Vol. 14. N. 5. P. 3304-3309.

64. Boekhoff I., Tareilus E., Strotmann J., Breer H. Rapid activation of alternative second messenger pathways in olfactory cilia from rats by different odorants // The EMBO Journal 1990. Vol. 9. N. 8. P. 2453-2458. 1

65. Bonigk W., Bradley J., Muller F., Sesti F., Boekhoff I., Ronnett G.V., Kaupp U.B., Frings S. The native rat olfactory cyclic nucleotide-gated channel is composed of three distinct subunits // J. Neurosci. 1999. Vol. 19. P. 5332-5347.

66. Borisy F.F., Hwang P.M., Ronnett G.V., Snyder S.H. High affinity cyclic AMP phosphodiesterase and adenosine localized in sensory organs // Brain Res. 1993. Vol. 610.-P. 199-207.

67. Bradley J., Li J., Davidson N., Lester H.A., Zinn K. Heteromeric olfactory cyclic nucleotide-gated channels: a subunit that confers increased sensitivity to cAMP // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994. Vol. 91. P. 8890-8894.

68. Bradley J., Reisert J., Frings S. Regulation of cyclic nucleotide-gated channels // Curr. Opin. Neurobiol. 2005. Vol. 15. P. 343 - 349.

69. Bradley J., Reuter D., Frings S. Facilitation of calmodulin-mediated odor adaptation by cAMP-gated channel subunits // Science. 2001. Vol. 294. P. 21762178.

70. Breer H., Boekhoff I., Tareilus E. Rapid kinetics of second messenger formation in olfactory transduction // Nature 1990. Vol. 345. P. 65-68.

71. Breer H., Klemm Т., Boekhoff I., Nitric oxide mediated formation of cyclic GMP in the olfactory system // Neuroreport 1992. Vol. 3. P. 1030-1031.

72. Bruch R.C. Phosphoinositide second messengers in olfaction // Сотр. Biochem. Physiol. 1996. Vol. ИЗВ. N 3. P. 451-459. /

73. Bruch R.C., Abogadie F.C., Farbman A.I. Identification of three phospholipase С isotypes expressed in rat olfactory epithelium // Neuroreport. 1995. Vol. 6.-P. 233-237.

74. Brunet L.J., Gold G.H., Ngai J. General anosmia caused by targeted disruption of the mouse olfactory cyclic nucleotide-gated cation channel // Neuron. 1996. Vol. 17.-P. 681-693.

75. Buck L.B. Olfactory receptors and odor coding in mammals // Nutrition Rev. 2004. Vol. 62. N. 11. P. 184-188.

76. Buck L.B., Axel R. A novel multigene family may encode odorant receptors: a molecular basis for odor recognition // Cell 1991. Vol. 65. P. 175-187.

77. Buntinas L., Gunter K.K., Sparagna G.C., Gunter Т.Е. The rapid mode of calcium uptake into heart mitochondria (RaM): comparison to RaM in liver mitochondria // Biochim. Biophys. Acta. 2001. Vol. 1504. P. 248-261.

78. Burton P.R. Ultrastructural studies of microtubules and microtubule organizing centers of the vertebrate olfactory neuron // Microsc. Res. Tech. 1992. Vol. 23.-P. 142-156.

79. Campbell J.W. Mitochondrial ammonia metabolism and the proton-neutral theory of hepatic ammonia detoxication // J. Exp. Zool. 1997. Vol. 278. P. 308-321.

80. Carvalho C.A.M. Chlorotetracyclic as an indicator of the interaction of calcium with brain membrane fractions // J. Neurochem. 1978. Vol. 30. N. 5. P. 1149-1155.

81. Cecchini G. Function and structure of complex II of the respiratory chain // Annu. Rev. Biochem. 2003. Vol. 72. P. 77-109.

82. Chance В., Connely С. A method for the estimation of the increase in concentration of adenosine diphosphate in muscle sareosomes following a contraction //Nature. 1957. Vol. 179.-P. 1235-1237.

83. Chance В., Schoener В., Krejci R., Russmann W., Wesemann W., Schnitger H., Bucher Th. Kinetics of fluoroscence and metabolite changes in rat liver during a cycle of ischemia // Biochem. Zeitschr. 1965. Vol. 341. P. 325-333L.1. Л I

84. Chen T.-Y., Yau K.-W. Direct modulation by Ca -calmodulin of cyclic nucleotide activated channel of rat olfactory receptor neurons // Nature 1994. Vol. 368. P. 545-548.

85. Chess A., Simon I., Cedar H., Axel R. Allelic inactivation regulates olfactory receptor gene expression // Cell 1994. Vol. 78. P. 823-834.

86. Cooper A.J.L., Plum F. Biochemistry and physiology of brain ammonia // Physiol. Rev. 1987. Vol. 67. N. 2. P. 440-519.

87. Cunningham A.M., Ryugo D.K., Sharp A.H., Reed R.R., Snyder S.H.,

88. Ronnett G.V. Neuronal inositol 1,4,5-trisphosphate receptor localized to the plasma membrane of olfactory cilia // J. Neurosci. 1993. Vol. 57. P. 339-352.

89. Dahl A.R. The cyanide-metabolizing enzyme rhodanese in rat nasal respiratory and olfactory mucosa // Toxicol. Lett. 1989. Vol. 45. P. 199-205.

90. Dear T.N., Boehm Т., Keverne E.B., Rabbitts Т.Н. Novel genes for potential ligand-binding proteins in subregions of the olfactory mucosa // EMBO J. 1991. Vol. 10.-P. 2813-2819.

91. Dellacorte C., Restrepo D., Menco B.P.M., Andreini I., Kalinoski D.L. Gaq/Gall: immunolocalization in the olfactory epithelium of the rat (Rattus rattus) and the channel catfish (Ictalurus punctatus) // J. Neurosci. 1996. Vol. 74. N. 1. P. 261-273.

92. Doane M.J. Fluorometric measurements of pyridine nucleotide reduction in the giant axon of the squid // J. Gen. Physiol. 1967. Vol. 50. P. 2603-2632.

93. Dryer L. Evolution of odorant receptors // BioEssays 2000. Vol. 22. P. 803-810.

94. Dubin A.E., Dionne V.E. Modulation of CI, К and nonselective cation conductances by taurine in olfactory receptor neurons of the mudpuppy Necturus maculosus // J. Gen. Physiol. 1993. Vol. 101. N. 4. P. 469-485.

95. Duchen M.R. Mitochondria and calcium: from cell signalling to cell death // J. Physiol. 2000. Vol. 529. N 1. P. 57-68.

96. Duchen M.R., Biscoe T.J. Mitochondrial function in type I cells isolated from rabbit arterial chemoreceptors // J. Physiol. 1992. Vol. 450. P. 13-31.

97. Dzeja C., Hagen V., Kaupp U.P., Frings S. Ca permeation in cyclic nucleotide-gated channels//EMBO. 1999. Vol. 18.-P. 131-144.

98. Exton J.H. Phosphoinositide phospholipases and G proteins in hormone action // Annu. Rev. Physiol. 1994. Vol. 56. P. 349-369.

99. Fadool D.A., Ache B.W. Plasma membrane inositol-1,4,5-trisphosphate-activated channels mediate signal transduction in lobster olfactory receptor neurons // Neuron 1992. Vol. 9. P. 907-918.

100. Fadool D.A., Estey S.J., Ache B.W. Evidence that a Gq-protein mediates excitatory odor transduction in lobster olfactory receptor neurons // Chem. Senses 1995. Vol. 20. P. 489—498.

101. Farbman A.I., Margolis F.L. Olfactory marker protein during ontogeny: immunohistochemical localization // Dev. Biol. 1980. Vol. 74. P. 205-215.

102. Ferguson S.S.G., Caron M.G. G-coupled receptor adaptation mechanisms //Semin. Cell Dev. Biol. 1998. Vol. 9.-P. 119-127.119 Л

103. Fesenko Е.Е., Kolesnikov S.S., Lyubarsky A.L. Induction by cyclic GMP of cationic conductance in plasma membrane of retinal rod outer segment // Nature. 1985. Vol. 313.-P. 310-313.

104. Firestein S. A code in the nose // Sci. STKE 2004. Vol. 227. pe 15.

105. Firestein S. A Nobel nose: the 2004 Nobel Prize in physiology and medicine //Neuron. 2005. Vol. 45. P. 333-338.

106. Firestein S., Zufall F., Shepherd G.M. Single odor-sensitive channels in olfactory receptor neurons are also gated by cyclic nucleotides // J. Neurosci. 1991. Vol. 11. N. 11.-P. 3565-3572.

107. Freitag J., Krieger J., Strotman J., Breer H. Two classes of olfactory receptors inXenopus laevis IINeuron. 1995. Vol. 15.-P. 1383-1392.

108. Frings S., Benz S., Lindemann B. Current recording from sensory cilia of olfactory receptor cells in situ. II. Role of mucosal Na, К and Ca ions // J. Gen. Physiol. 1991. Vol. 97. N. 4. P. 725-747.

109. Fulle H.-J., Vassar R., Foster D.C., Yang R.-B., Axel R., Garbers D.L. A receptor guanylyl cyclase expressed specifically in olfactory sensory neurons // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. Vol. 92. P. 3571-3575.

110. Garibotti M., Navarrini A., Pisanelli A.M., Pelosi P. Three odorant-binding proteins from rabbit nasal mucosa // Chem. Senses 1997. Vol. 22. P. 383390.

111. Glusman G., Yanai I., Rubin I., Lancet D. The complete human olfactory subgenome // Genome Res. 2001. Vol. 11. P. 685-702.

112. Gunter Т.Е., Buntinas L., Sparagna G., Eliseev R., Gunter K. Mitochondrial calcium transport: mechanisms and functions // Cell Calcium 2000. Vol. 28.-P. 285-296.

113. Gunter Т.Е., Gunter K.K. Uptake of calcium by mitochondria: transport and possible function // IUBMB Life. 2001. Vol. 52. P. 197-204.

114. Gunter Т.Е., Yule D.I., Gunter K.K., Eliseev R.A., Salter J.D. Calcium and mitochondria // FEBS Lett. 2004. Vol. 567. P. 96-102.

115. Haas М., Forbush В. The Na-K-Cl cotransporter of secretory epithelia //

116. Annu. Rev. Physiol. 2000. Vol. 62. P. 515-534.

117. Hagerhall C. Succinate:quinine oxidoreductases Variations on a conserve theme//Biochim. Biophys. Acta. 1997. Vol. 1320.-P. 107-141.

118. Hajnoczky G., Csordas G., Modesh M., Pacher P. The machinery of local Ca signaling between sarcoendoplasmic reticulum and mitochondria // J. Physiol. 2000. Vol. 529. N. 1. P. 69-81.

119. Hajnoczky G., Robb-Gaspers L.D., Seitz M.B., Thomas A.P. Decoding of cytosolic calcium oscillations in the mitochondria // Cell 1995. Vol. 82. P. 415— 424. t

120. Halestrap A.P. Regulation of mitochondrial metabolism through changes in matrix volume // Biochem. Soc. Trans. 1994. Vol. 22. P. 522-529.

121. Halestrap A.P. The regulation of matrix volume of mammalian mitochondria in vivo and in vitro and its role in the control of mitochondrial metabolism // Biochim. Biophys. Acta. 1989. Vol. 973. P. 355-382.

122. Halestrap A.P., McStay G.P., Clarke S.J. The permeability transition pore complex: another view // Biochimie 2002. Vol. 84. P. 153-166.

123. Hansel D.E., Eipper B.A., Ronnett G.V. Neuropeptide Y: functions as a neuroproliferative factor // Nature 2001. Vol. 410. P. 940-944.

124. Hawkes C. Olfaction in neurodegenerative disorder // Mov. Disord. 2003. Vol. 18. N. 4.-P. 364-372.

125. Hildebrand J.G., Shepherd G.M. Mechanisms of olfactory discrimination: converging evidence for common principles across phyla // Annu. Rev. Neurosci. 1997. Vol. 20.-P. 595-631.

126. Hubbard K.B., Hepler J.R. Cell signaling diversity of the Gqa family of heterotrimeric G proteins // Cell. Signal. 2006. Vol. 18. P. 135-150.

127. Hummel Т., Nordin S. Olfactory disorders and their consequences for quality of life // Acta Oto-Laryngol. 2005. Vol. 125. P. 116-121. *

128. Huque Т., Bruch R.C. Odorant- and guanine nucleotide-stimulated phosphoinositide turnover in olfactory cilia // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1986. Vol. 137. N. 1.-P. 36-42. V

129. Ihrig A., Hoffman J., Triebiq G. Examination of the influence of personal traits and habituation on the reporting of complaints et experimental exposure to ammonia // Int. Arch. Occup. Environ. Health. 2006. Vol. 79. N. 4. P. 332-338.

130. Jacquin-Joly E., Francois M.C., Burnet M., Lucas P., Bourrat F., Maida R. Expression pattern in the antennae of a newly isolated lepidopteran Gq protein a subunit с DNA // Eur. J. Biochem. 2002. Vol. 269. P. 2133-2142.

131. Jaworsky D.E., Matsuzaki O., Borisy F.F., Ronnet G.V. Calcium modulates the rapid kinetics of the odorant-induced cyclic AMP signal in rat olfactory cilia // J. Neurosci. 1995. Vol. 15. N. 1. P. 310-318.

132. Jayakumar A.R., Sujatha R., Paul V. Effect of ammonia of motor function of adult rats // Brain Res. Bull. 1997. Vol. 43. N. 3. P. 275-278.

133. Jensen-Smith H.C., Luduena R.F., Hallworth R. Requirement for the Pj and Piv tubulin isotypes in mammalian cilia // Cell. Motil. Cytoskeleton. 2003. Vol. 55.-P. 213-220.

134. Jobsis F.F., Duffield J.C. Oxidative and glycolitic recovery metabolism in muscle. Fluorimetric observations on their relative contributions // J. Gen. Physiol. 1967. Vol. 50. P. 1009-1047.

135. Jones D.T., Reed R.R. G0if: an olfactory neuron-specific G-protein involved in odorant signal transduction // Science 1989. Vol. 244. P. 790-795.

136. Joshi H., Getchell M.L., Zielinski В., Getchell T.V. Spectrophotometric determination of cation concentrations in olfactory mucus // Neurosci. Lett. 1987. Vol. 82.-P. 321-326.

137. Jouaville L.S., Pinton P., Bastianutto C., Rutter G.A., Rizzuto R. Regulation of the mitochondrial ATP synthesis by calcium: Evidence for a long-term metabolic priming // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1999. Vol. 96. P. 13807-13812.

138. Jung A., Lischka F.W., Engel J., Schild D. Sodium/calcium exchanger inolfactory receptor neurons of Xenopus laevis //Neuroreport 1994. Vol. 5. P. 1741—41744.

139. Kaupp B.U., Seifert R. Cyclic nucleotide-gated ion channels // Physiol. Rev. 2002. Vol. 82. P. 769-824.

140. Kaur R., Zhu X.O., Moorhouse A.J., Barry P.H. IP3-gated channels and their occurrence relative to CNG channels in the soma and dendritic knob of rat olfactory receptor neurons //J. Membrane Biol. 2001. Vol. 181. -P. 91-105.

141. Keller A., Vosshall L.B. Human olfactory psychophysics // Curr. Biol. 2004. Vol. 14. N. 20. P. R875-R878.

142. Kerjaschki D. The central tubuli in distal segments of olfactory cilia lack dynein arms // Experientia. 1976. Vol. 32. P. 1459-1460.

143. Kern R.C., Kerr T.P., Getchell T.V. Ultrastructural localization ofNa+/K+-ATPase in rodent olfactory epithelium // Brain Res. 1991. Vol. 546. P. 8-17.

144. Khana N.C., Tokuda M., Waisman D.M. The role of calcium binding proteins in signal transduction // Hormones and their action. 1988. Part II. P. 63-92.

145. Kleene S.J. Both external and internal calcium reduce the sensitivity of the olfactory cyclic nucleotide-gated channel to cAMP // J. Neurophysiol. 1999. Vol. 81. -P. 2675-2682.

146. Kleene S.J., Gesteland R.C. Calcium-activated chloride conductance in frog olfactory cilia // J. Neurosci. 1991 a. Vol. 11. N. 11. P. 3624-3629.

147. Kleene S.J., Gesteland R.C. Transmembrane currents in frog olfactory cilia//J. Membrane Biol. 1991 6. Vol. 120.-P. 75-81.

148. Klopping H.L. Olfactory theories and the odors of small molecules // J. Agr. Food Chem. 1971. Vol. 19. N. 5. P. 999-1004.

149. Kondrashova M.N., Gogvadze V.G., Medvedev B.I., Babsky A.M. Succinic acid oxidation as the only energy support of intensive Ca2+ uptake by mitochondria // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1982. Vol. 109. N. 2. P. 376-381.

150. Kopsidas G., Kovalenko S.A., Heffernan D.R., Yarovaya N., Kramarova L., Stojanovsky D., Borg J., Islam M.M., Caragounis A., Linnane A. Tissue mitochondrial DNA changes. A stochastic system // Ann. NY. Acad. Sci. 2000. Vol. 908.-P. 226-243.

151. Kosterin P., Kim G.H., Muschol M., Obaid A.L., Salzberg B.M. Changes in FAD and NADH fluorescence in neurosecretory terminals are triggered bypalcium entry and by ADP production // J. Membrane Biol. 2005. Vol. 208. P. 113-124.

152. Krishna N.S., Getchell T.V., Dhooper N., Awasti Y.C., Getchell M.L. Age- and gender-related trends in the expression of glutathione S-transferases in human nasal mucosa II Ann. Otol. Rhinol. Laryngol. 1995. Vol. 104. P. 812-822.

153. Kurahashi Т., Menini A. Mechanism of odorant adaptation in the olfactory receptor cell // Nature 1997. Vol. 385. P. 725-729.

154. Kurahashi Т., Yau K.-W. Co-existence of cationic and chloride components in odorant-induced current of vertebrate olfactory receptor cells // Nature 1993. Vol. 363.-P. 71-74. t ,

155. Lamb T.D., Pugh E.N., Jr. G-protein cascades: gain and kinetics // Trends Neurosci. 1992. Vol. 15. N. 8. P. 291-298.

156. Lang W., Block T.M. Zander R. Solubility of NH3 and apparent pK of NH/ in human plasma, isotonic salt solutions and water at 37 degrees С // Clin. Chim. Acta 1998. Vol. 273. N. 1. P. 43-58.

157. Lee R., Childress J., Desaulniers N. The effect of exposure to ammonia on ammonia and taurine pools of the symbiotic clam // J. Exp. Biol. 1997. Vol. 200. P. 2797-2805.

158. Leinders-Zufall Т., Greer G.M., Shepherd G.M., Zufall F. Imaging odor-induced calcium transients in single olfactory cilia: specificity of activation and role in transduction // J. Neurosci. 1998. Vol. 18. P. 5630-5639.

159. Leinders-Zufall Т., Shepherd G.M., Zufall F. Modulation by cyclic GMP of the odour sensitivity of vertebrate olfactory receptor cells // Proc. R. Soc. Biol. 1996. Vol. 263.-P. 803-811.

160. Lenaz G., Cavazzoni M., Genova M.L., D'Aurelio M., Pich M.M., Pallotti F., Formiggini G., Marchetti M., Castelli G.P., Bovina C. Oxidative stress, antioxidant defences and aging // Biofactors. 1998. Vol. 8. P. 195-204.

161. Lischka F.W., Zviman M.M., Teeter J.H., Restrepo D. Characterization of inositol-1,4,5-triphosphate-gated channels in the plasma membrane of rat olfactory neurons // Biophys. J. 1999. Vol. 76. P. 1410-1422.

162. Liu В., Wu D. Analysis of G protein-mediated activation of phospholipase С in cultured cells // Methods Mol. Biol. 2004. Vol. 237. P. 99-102. *

163. Liu M., Chen T.-Y., Ahamed В., Li J., Yau K.-W. Calcium-calmodulin modulation of the olfactory cyclic nucleotide-gated cation channel // Science 1994. Vol. 266.-P. 1348-1354.

164. Lo Y.H., Bradley T.M., Rhoads D.E. High-affinity Ca2+,Mg2+-ATPase in plasma membrane-rich preparations from olfactory epithelium of Atlantic salmon // Biochim. Biophys. Acta 1994. Vol. 1192. P. 153-158.

165. Lobel D., Marchese S., Krieger J., Pelosi P., Breer H. Subtypes of odorant-binding proteins heterologous expression and ligand binding // Eur. J. Biochem. 1998. Vol. 254. - P. 318-324. !

166. Lowe G., Gold G.H. The spatial distributions of odorant sensitivity and odorant-induced currents in salamander olfactory receptor cells // J. Physiol. 1991. Vol. 442.-P. 147-168.

167. Lowry O.H., Roberts H.R., Kapphahn J.I. The fluorometric measurement of pyridine nucleotides // J. Biol. Chem. 1957. Vol. 224. P. 1047-1064.

168. Ludwig J., Margalit Т., Eismann E., Lancet D., Kaupp U.P. Primary structure of cAMP-gated channel from bovine olfactory epithelium // FEBS Lett. 1990. Vol. 270.-P. 24-29.

169. Malnic В., Hirono J., Sato Т., Buck L.B. Combinatorial receptor codes for odors // Cell 1999. Vol. 96. P. 713-723.

170. McCormack J.G., Halestrap A.P., Denton R.M. The role of calcium ions in the regulation of mammalian intramitochondrial metabolism // Physiol. Rev. 1990. Vol. 70.-P. 391-425.125 Л

171. Menco В.Р.М., Bruch R.C., Dau В., Danho W. Ultrastructural localization of olfactory transduction components: the G protein subunit G0if and type III adenylyl cyclase //Neuron. 1992. Vol. 8. P. 441^53.

172. Menco B.P.M., Farbman A.I. Ultrastructural evidence for multiple mucus domains in frog olfactory epithelium // Cell Tissue Res. 1992. Vol. 270. P. 47-56.

173. Mesholam R.I., Moberg P.J., Mahr R.N., Doty R.L. Olfaction in neurodegenerative disease: a meta-analysis of olfactory functioning in Alzheimer's and Parkinson's diseases // Arch. Neurol. 1998. Vol. 55. P. 84-90.

174. Mikami A., Tynan S.H., Hama Т., Luby-Phelps K., Saito Т., Crandall J.E., Besharse J.C. Molecular structure of cytoplasmic dynein 2 and its distribution in neuronal and ciliated cells // J. Cell Science 2002. Vol. 115. P. 4801^1808.

175. Minor A.V., Bykov K.A., Dmitriev A.V., Skachkov S.N. Extracellular ion concentrations in the olfactory epithelium: steady state and changes during excitation (Abstract) // Chem. Senses 1992. Vol. 17. P. 864.

176. Mironov S.L., Richter D.W. Oscillations and hypoxic changes of mitochondrial variables in neurons of the brainstem respiratory centre of mice // J. Physiol. 2001. Vol. 533. N. 1. P. 227-236.

177. Miura N., Atsumi S., Tabunoki H., Sato R. Expression and localization of three G protein a subunits, G0, Gq, and Gs, in adult antennae of the silkmoth (Bombyx mori) II J. Сотр. Neurol. 2005. Vol. 485. P. 143-152.

178. Miwa Т., Furukawa M., Tsukatani Т., Costanzo R.M., DiNardo L.J., Reiter E.R. Impact of olfactory impairment on quality of life and disability // Arch. Otolaryngol. Head Neck 2001. Vol. 127. P. 497-503. 1

179. Mombaerts P. Odorant receptor genes in humans // Curr. Opin. Gen. Dev. 1999 a. Vol. 9.-P. 315-320.

180. Mombaerts P. Seven-transmembrane proteins as odorant and chemosensory receptors // Science. 1999 6. Vol. 286. P. 707-711. ^

181. Mombaerts P. Genes and ligands for odorant, vomeronasal and taste receptors //Nat. Rev. Neurosci. 2004. Vol. 5. P. 263-278.

182. Moon C., Jaberi P., Otto-Bruc A., Baehr W., Palczewski K., Ronnett G. Calcium-sensitive particulate guanylyl cyclase as a modulator of cAMP in olfactory neurons // J. Neurosci. 1998. Vol. 18. P. 3195-3205.

183. Muller F., Bonigk W., Sesti F., Frings S. Phosphorylation of mammalian olfactory cyclic nucleotide-gated channels increases ligand sensitivity // J. Neurosci. 1998. Vol. 18.-P. 164—173.

184. Murphy C., Schubert C.R., Cruickshanks K.J., Klein B.E., Klein R., Nondahl D.M. Prevalence of olfactory impairment in older adults // JAMA. 2002. Vol. 288.-P. 2307-2312.

185. Muzino Y., Ohta S., Tanaka M., Takamiya S., Suzuki K., Sato Т., Oya H., Ozawa Т., Kagawa Y. Deficiencies in complex I subunits of the respiratory chain in Parkinson's disease // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1989. Vol. 163 P. 14501455.

186. Nakano I., Kobayashi Т., Yoshimura M., Shingyoji C. Central-pair-linked regulation of microtubule sliding by calcium in flagellar axonemes // J. Cell Sci. 2002. Vol. 116.-P. 1627-1636.

187. Nakamura Т., Gold G.H. A cyclic nucleotide-gated conductance in olfactory receptor cilia // Nature. 1987. Vol. 325. P. 442-444.

188. Neves S.R., Ram P.T., Iyengar R. G protein pathways // Science 2002. Vol. 296.-P. 1636-1639.

189. Niimura Y., Nei M. Evolutionary dynamics of olfactory receptor genes in fishes and tetrapods // PNAS 2005. Vol. 102. N. 17. P. 6039-6044.

190. Nurnberg В., Gudermann Т., Schultz G. Receptors and G protein as primary components of transmembrane signal transduction. Part 2. G proteins: structure and function // J. Mol. Med. 1995. Vol. 73. P. 123-132. ^

191. Ohsawa I., Nishimaki K., Yasuda C., Kamino K. Ohta S. Deficiency in a mitochondrial aldehyde dehydrogenase increases vulnerability to oxidative stress in PC 12 cells // J. Neurochem. 2003. Vol. 84. P. 1110-1117.

192. Ott P., Larsen F.S. Blood-brain barrier permeability to ammonia in liver failure: a critical reappraisal //Neurochem. Int. 2004. Vol. 44. N. 4. P. 185-.98.

193. Pace U., Hanski E., Salomon Y., Lancet D. Odorant-sensitive adenylate cyclase may mediate olfactory reception // Nature 1985. Vol. 316. P. 255-258.

194. Papa S., Scacco S., Sardanelli A.M., Petruzella V., Vergari R., Signorile A., Technikova-Dobrova Z. Complex I and cAMP cascade in human physiopathology // Biosci. Rep. 2002 6. Vol. 22. N. 1. P. 3-16.

195. Patel T.B. Single transmembrane spanning heterotrimeric G protein-coupled receptors and their signaling cascades // Pharmacol. Rev. 2004. Vol. 56. N. 3.-P. 371-385.

196. Perry G., Castellani R.J., Smith M.A., Harris P.L.R., Kubat Z., Ghanbari K., Jones P.K., Cordone G., Tabaton M., Wolozin В., Ghanbari H. Oxidative damage in the olfactory system in Alzheimer's disease // Acta Neuropathol. 2003. Vol. 106. -P. 552-556.

197. Persaud K.C., Desimone J.A., Getchell M.L., Heck G.L., Getchell T.V. Ion transport across olfactory mucosa: the basal and odorant-stimulated states // Biochim. Biophys. Acta 1987. Vol. 902. P. 69-79.

198. Pes D., Pelosi P. Odorant-binding proteins of the mouse // Сотр. Biochem. Physiol. B. 1995. Vol. 112. P. 471^179. '

199. Pevsner J., Hou V.X., Snyder S.H. Odorant-binding protein: characterization of ligand binding // J. Biol. Chem. 1990. Vol. 265. P. 6118-6125.

200. Pilpel Y., Lancet D. The variable and conserved interfaces of modeled olfactory receptor proteins // Protein Science 1999. Vol. 8. P. 969-977.

201. Poppleton H., Sun H., Fulgham D., Bertics P., Patel T.B. Activation of Gsalpha by the epidermal growth factor receptor involves phosphorylation // J. Biol. Chem. 1996. Vol. 271.-P. 6947-6951.

202. Poppleton H.M., Sun H., Mullennix J.B., Wiepz G.J., Bertics P., Patel T.B. The juxtamembrane region of the epidermal growth factor receptor is required for phosphorylation of Gsalpha(s) // Arch. Biochem. Biophys. 2000. Vol. 383. P. 309-317.

203. Prudhomme J.C., Shusterman D.J., Blanc P.D. Acute-onset persistent olfactory deficit resulting from multiple overexposures to ammonia vapor at work // J. Am. Board. Fam. Pract. 1998. Vol. 11. N. 1. P. 66-69.

204. Rastogi R.P., Srivastava R.C., Agrawal Y.K. Dynamic instability at liquid/vapor interface far from equilibrium // J. Colloid. Interface Sci. 2006. Vol. 297. N. 2.-P. 711-714.

205. Rawson N.E. Olfactory loss in aging // Sci. Aging Knowledge Environ.2006. Vol. 5. -реб.

206. Reese T.S. Olfactory cilia in the frog // J. Cell Biol. 1965. Vol. 26. P. 209-230.

207. Reisert J., Bauer P.J., Yau K.W., Frings S. The Ca-activated CI channel and its control in rat olfactory receptor neurons // J. Gen. Physiol. 2003. Vol. 122. -P. 349-363.

208. Reisert J., Matthews H.R. Na-dependent Ca extrusion governs response recovery in frog olfactory receptor cells // J. Gen. Physiol. 1998. Vol. 112. N. 5. P. 529-535.j»

209. Reisert J., Lai J., Yau K.-W., Bradley J. Mechanism of excitatory Cl-response in mouse olfactory receptor neuron // Neuron. 2005. Vol. 45. P. 553-561.

210. Ressler К J., Sullivan S.L., Buck L.B. Information coding in the olfactory system: evidence for a stereotyped and highly organized epitope map in the olfactory bulb // Cell 1994. Vol. 79. P. 1245-1255.

211. Restrepo D., Boekhoff I., Breer H. Rapid kinetic measurements of second messenger formation in olfactory cilia from channel catfish // Am. J. Physiol. 1993. Vol. 264.-P. C906-C911.

212. Restrepo D., Teeter J.H., Schild D. Second messenger signaling in olfactory transduction // J. Neurochem. 1996. Vol. 30. N. 1. P. 37-48.

213. Reynafarje В., Ferreira J. Cytochrome с oxidase: the mechastic significance of structural H in energy transduction // J. Bioenerg. Biomembr. 2002. Vol. 34. N. 4.-P. 259-267.

214. Rizzuto R., Bernardi P., Pozzan T. Mitochondria as all round player of the calcium game // J. Physiol. 2000. Vol. 529. N. 1. P. 37-47.

215. Robb-Gaspers L.D., Burnett P., Rutter G.A., Denton R.M., Rizzuto R., Thomas A.P. Integrating cytosolic calcium signals into mitochondrial metabolic responses // The EMBO Journal 1998. Vol. 17. P. 4987-5000.

216. Roberts E.S., Wong V.A., McManus B.E., Marshall M.W., Lancianese S., Dorman D.C. Changes in intracellular pH play a secondary role in hydrogen sulflde-induced nasal cytotoxicity // Inhal. Toxicol. 2006. Vol. 18. N. 3. P. 159-167.

217. Ronnett G.V., Moon C. G proteins and olfactory signal transduction // Annu. Rev. Physiol. 2002. Vol. 264. P. 189-222.

218. Roskams AJl, Cai X., Ronnett G.V., Expression of neuron-specific beta-Ill tubulin during olfactory neurogenesis in the embryonic and adult rat // Neurosci. 1998. Vol. 83.-P. 191-200.

219. Rutter G.A., Burnett P., Rizzuto R., Brini M., Murgia M., Pozzan Т.,л I

220. Tavare J.M., Denton R.M. Subcellular imaging of intramitochondrial Ca with recombinant targeted aequorin: Significance for the regulation of pyruvate dehydrogenase activity // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1996. Vol. 93. P. 5489-5494.

221. Salathe M. Regulation of mammalian ciliary beating // Annu. Rev. Physiol. 2007. Vol. 69. P. 401-422. r

222. Satir P., Christensen S.T. Overview of structure and function of mammalian cilia // Annu. Rev. Physiol. 2007. Vol. 69. P. 377^100. *

223. Schandar M., Laugwitz K.L., Boekhoff I., Kroner C., Gudermann Т., Schultz G., Breer H. Odorant selectively activate distinct G protein subtypes in olfactory cilia // J. Biol. Chem. 1998. Vol. 273. N. 27. P. 16669-16677.

224. Schapira A.H., Cooper J.M., Dexter D., Jenner P., Clark J.B., Marsden S.D. Mitochondrial complex I deficiency in Parkinson's disease // Lancet 1989. Vol. 333. N. 8649.-P. 1269.

225. Schild D., Lischka F.W., Restrepo D. InsP3 causes an increase in apicaly I

226. Ca .j by activating two distinct current components in vertebrate olfactory receptor cells // J. Neurophysiol. 1995. Vol. 73 N.2 P. 862-866.

227. Schild D., Restrepo D. Transduction mechanism in vertebrate olfactory receptor cells // Physiol. Rev. 1998. Vol. 78. N. 2. P. 429-466.

228. Schultz B.E., Chan S.I. Structures and proton-pumping strategies of mitochondrial respiratory enzymes // Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 2001. Vol. 30.-P. 23-65.

229. Serizawa S., Miyamichi K., Sakano H. One neuron one receptor rule in the mouse olfactory system // Trends Gen. 2004. Vol. 20. N. 12. - P. 648-653.

230. Shenoy S.K., Lefkowitz R.J. Seven-transmembrane receptor signaling through p-arrestin // Sci. STKE. 2005. cm 10.

231. Sherer T.B., Betarbet R., Testa C.M., Seo B.B., Richardson J.R., Kim J.H., Miller G.W., Yagi Т., Matsuno-Yagi A., Greenamyre J.T. Mechanism of toxicity in rotenone models of Parkinson's disease // J. Neurosci. 2003. Vol. 23. N. 34.-P. 10756-10764.

232. Shusterman D. Environmental nonallergic rhinitis // Clin. Allergy Immunol. 2007. Vol. 19. P. 249-266.

233. Shykind B.M. Regulation of odorant receptors: one allele at a time // Human Mol. Gen. 2005. Vol. 14. P. R33-R39.

234. Sklar P.B., Anholt R.R., Snyder S.H. The odorant-sensitive adenylate cyclase of olfactory receptor cells. Differential stimulation by distinct classes of odorants // J. Biol. Chem. 1986. Vol. 261. P. 15538-15543.

235. Spehr M., Leinders-Zufall T. One neuron multiple receptors: increased complexity in olfactory coding // Sci. STKE 2005. Vol. 285. - pe 25.

236. Szebr J.C., Butterworth R.F. Effect of ammonium ions on synaptic transmission in the mammalian central nervous system // Prog. Neurobiol. 1992. Vol. 39. N. 2.-P. 135-153.

237. Takeuchi H., Kurahashi T. Identification of second messenger mediating signal transduction in the olfactory receptor cells // J. Gen. Physiol. 2003. Vol. 122. N. 5. P. 557-567.

238. Takeuchi H., Kurahashi T. Mechanism of signal amplification in the olfactory sensory cilia // J. Neurosci. 2005. Vol. 25. P. 11084-11091.

239. Territo P.R., French S.A., Dunleavy M.C., Evans F.J., Balaban R.S. Calcium activation of heart mitochondrial oxidative phosphorylation // J. Biol. Chem. 2001. Vol. 276. P. 2586-2599.

240. Territo P.R., Mootha V.K., French S.A., Balaban R.S. Ca2+ activation of heart mitochondrial oxidative phosphorylation: role of the Fi/F0-ATPase // Am. J. Physiol. 2000. Vol. 278. P. C423-C435.

241. Touhara K. Odor discrimination by G-protein-coupled olfactory receptors // Microsc. Res. Tech. 2002. Vol. 58. P. 135-141.

242. Varnum M.D., Zagotta W.N. Interdomain interactions underlying activation of cyclic nucleotide-gated channels // Science. 1997. Vol. 278. P. 110— 113.

243. Vassar R., Ngai J., Axel R. Spatial segregation of OR expression in the mammalian olfactory epithelium // Cell. 1993. Vol. 74. P. 309-318.

244. Venedikotova N.I., Kosenko E., Kaminsky Y., Montoliu C., F^lipo V. Acute ammonia neurotoxicity in vivo involves the increase in cytoplasmic protein P53 without alterations in other markers of apoptosis // Mitochondrion 2006. Vol. 539. N.5.-P. 263-264.

245. Verma A., Hirsch D.J., Glatt C.E., Ronnett G.V., Snyder S-H. Carbon monoxide: a putative neural messenger // Science. 1993. Vol. 259. P. 381-384.

246. Visek W.J. Ammonia: its effects on biological systems, metabolic hormones and reproduction // J. Dairy Sci. 1984. Vol. 67. N. 3. P. 481^98.

247. Vogl A., Noe J., Breer H., Boekhoff I. Cross-talk between olfactory second messenger pathways // Eur. J. Biochem. 2000. Vol. 267. P. 4529-4535.

248. Vogt R.G., Prestwich G.D., Lerner M.R. Odorant-binding-protein subfamilies associate with distinct classes of olfactory receptor neurons in insects // J. Neurobiol. 1990. Vol. 22. P. 74-84.

249. Voronina S., Suchomlin Т., Johnson P.R., Erdeli G., Petersen O.H.,1. Л I

250. Tepikin A. Correlation of NADH and Ca signals in mouse pancreatic acinar cells // J. Physiol. 2002. Vol. 539.1. P. 41-52.

251. Watt W.C., Storm D.R. Odorants stimulate the ERK/mitogen-activated protein kinase pathway and activate cAMP-response element-mediated transcription in olfactory sensory neurons // J. Biol. Chem. 2001. Vol. 276. N. 1. P. 2047-2052.

252. Westlake A.C., Harford-Cross C.F., Donovan J., Wong L. Mutations of glutamat-84 at the putative potassium-binding site affect camphor binding and oxidation by cytochrome p450cam // Eur. J. Biochem. 1999. Vol. 265. P. 929-935.

253. Williams S.K., Franklin R.J.M., Barnett S.C. Response of olfactory ensheathing cells to the degeneration and regeneration of the peripheral olfactory system and the involvement to the neuregulins // J. Сотр. Neurol. 2004. Vol. 470. -P. 50-62.

254. Wolfrum U., Liu X., Schmitt A., Udovichenko I.P., Williams D.S. Myosin Vila as a common of cilia and microvilli // Cell. Motil. Cytoskeleton. 1998. Vol. 40. -P. 261-271. .? *

255. Wong S.T., Trinh K., Hacker В., Chan G.C.K., Lowe G., Gagger A., Xia Z., Gold G.H., Storm D.R. Disruption of the type III adenylyl cyclase gene leads to peripheral and behavioral anosmia in transgenic mice // Neuron. 2000. Vol. 27. P. 487-497.

256. Woo K., Jensen-Smith H.C., Luduena R.F., Hallworth R. Differential synthesis of P-tubulin isotypes in gerbil nasal epithelia // Cell Tissue Res. 2002. Vol. 309.-P. 331-335.

257. Xu F., McClintock T.S. A lobster phospholipase C-P that associates with G-proteins in response to odorants // J. Neurosci. 1999. Vol. 19. N. 12. P. 4881-4888.

258. Yagi Т., Byoung B.S., Bernardo S.D., Nakamaru-Ogiso E., Kao M.-C., Matsuno-Yagi A. NADH dehydrogenases: from basic science to biomedicine // J. Bioenerg. Biomembr. 2001. Vol. 33. N. 3. P. 233-242.

259. Zhang C., Finger Т.Е., Restrepo D. Mature olfactory receptor neurons express connexin 43 // J. Сотр. Neurol. 2000. Vol. 426. N. 1. P. 1-12.

260. Zheng J., Zagotta W.N. Stoichiometry and assembly of olfactory cyclic nucleotide-gated channels // Neuron 2004. Vol. 42. P. 411^121.

261. Zou Z., Horowitz L.F., Montmayeur J.P., Snapper S., Buck L.B. Genetic tracing reveals a stereotyped sensory map in the olfactory cortex // Nature 2091. Vol. 414.-P. 173-179.

262. Zufall F., Leinders-Zufall T. Identification of a long-lasting form of odor adaptation that depends on the carbon monoxide/cGMP second-messenger system // J. Neurosci. 1997. Vol. 17. P. 2703-2712.