Изучение ассоциации полиморфных маркеров генов CRP, IL6, IL10, TNF и LTA с развитием неблагоприятного исхода у больных, перенесших острый коронарный синдром

Благодатских, Константин Александрович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изучение ассоциации полиморфных маркеров генов CRP, IL6, IL10, TNF и LTA с развитием неблагоприятного исхода у больных, перенесших острый коронарный синдром
ВАК РФ 03.01.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Изучение ассоциации полиморфных маркеров генов CRP, IL6, IL10, TNF и LTA с развитием неблагоприятного исхода у больных, перенесших острый коронарный синдром"

4845889

БЛАГОДАТСКИХ КОНСТАНТИН АЛЕКСАНДРОВИЧ

ИЗУЧЕНИЕ АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФНЫХ МАРКЕРОВ ГЕНОВ CRP, IL6, ILIO, TNFULTA С РАЗВИТИЕМ НЕБЛАГОПРИЯТНОГО ИСХОДА У БОЛЬНЫХ, ПЕРЕНЁСШИХ ОСТРЫЙ КОРОНАРНЫЙ СИНДРОМ

03.01.03 - молекулярная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной стспсни кандидата биологических наук

1 2 МАЙ 2011

Москва-2011

4845889

Работа выполнена в лаборатории молекулярной диагностики и геномной дактилоскопии ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов» (ФГУП «ГосНИИ генетика»).

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор, ФГУП «ГосНИИ генетика», г. Москва

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова, г. Москва

доктор биологических наук, профессор, Кафедра медицинской генетики ГОУ ДПО РМАПО, г. Москва.

Ведущая организация:

Носиков Валерий Вячеславович

Лсапов Алий Юрьевич

Немцова Марина Вячеславовна

Институт молекулярной биологии им. В. А. Энгельгардга РАН, г.Москва

Защита состоится «2з» мая 2011г. в 14 часов на заседании Диссертационного совета Д.217.013.01 при ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов» по адресу: 117545, Москва, 1-й Дорожный проезд, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУП «ГосНИИ генетика». Реферат разослан « Т./» апреля 2011 г.

Учёпый секретарь Диссертационного совета, кандидат химических наук

Воюшина Т. Л.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) являются лидирующей причиной смертности во всём мире: ни по какой другой причине ежегодно не умирает столько людей, сколько от ССЗ. По данным Всемирной организации здравоохранения, в 2004 году от ССЗ умерло 17,1 миллиона человек, что составило 29% всех случаев смерти в мире. Согласно прогнозам, в 2030 году около 23,6 миллионов человек умрбт от ССЗ, главным образом, от болезней сердца и инсульта, которые останутся наиболее вероятными причинами смерти. Россия, к сожалению, по этому показателю не является исключением (Оганов и Масленникова, 2007).

Известно, что сердечно-сосудистые патологии - многофакторные заболевания с многочисленными звеньями патогенеза. Для таких заболеваний характерен сложный механизм формирования фенотипа, в основе которого лежит взаимодействие генетических факторов с факторами внешней среды. При этом для каждого конкретного заболевания можно выделить группу, так называемых, генов-кандидатов, продукты которых могут быть прямо или косвенно вовлечены в развитие данной патологии (ОоМЬош! е1 а1., 1994).

Исследование молекулярно-генетических основ многофакгорных заболеваний относится к одной из наиболее серьезных задач современной генетики. Знание генетических факторов, предрасполагающих к развитию заболевания и его осложнений, имеет важное прогностическое значение и может использоваться при досимптоматической диагностике, то есть до появления каких-либо клинических или биохимических симптомов болезни. В нашей стране подобные исследования проводятся на протяжении многих лет (Сидоренко и др. 2009).

Обычно, для изучения генетической предрасположенности к тому или иному заболеванию используют подход «случай-контроль», однако для больных с различными формами атеросклероза крайне сложно подобрать правильную контрольную группу, поскольку нет возможности выявить доклинические формы атеросклероза, с одной стороны, и учесть умерших к моменту обследования, с другой. Другой подход - проведение длительного проспективного наблюдения за группой больных повышенного риска, с регистрацией, так называемых, «конечных точек» более сложен и трудоёмок, однако в этом случае возможен последующий анализ факторов, ассоциированных с неблагоприятными исходами.

развитием воспалительного ответа в пораженной области сосудистой стенки. Роль воспаления, по-видимому, наиболее значима в развитии острых коронарных синдромов, в основе которых лежит формирование уязвимой атеросклеротической бляшки (Титов, 1999; Paoletti et al., 2004). При этом нарушения в системах воспалительного ответа могут усугубляться генетическими особенностями, влияющими на структуру и скорость формирования этих процессов. Гены, кодирующие эти факторы, можно рассматривать в качестве кандидатов для изучения наследственной предрасположенности к неблагоприятному течению ишемической болезни сердца (ИБС) у больных, перенёсших острый коронарный синдром (ОКС).

Установление ассоциации гена с заболеванием и последующая оценка индивидуального генетического риска имеют большое значение для разработки дифференцированного подхода к профилактике и лечению данной патологии и её осложнений. Подобные исследования позволяют точнее и надёжнее оценивать генетический риск развития заболевания и прогнозировать его течение (Pratt and Drau, 1999).

Цели н задачи работы. Целью данной работы было изучение ассоциации полиморфных маркеров ряда генов-кандидатов, продукты которых определяют развитие воспалительных процессов, с неблагоприятным исходом у больных, перенёсших острый коронарный синдром.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Создать компьютерную программу для подбора оптимальных условий проведения анализа однонуклеотидных полиморфизмов методом полиморфизма длины рестрикгазных фрагментов.

2. Определить аллели и генотипы полиморфных маркеров генов, кодирующих С-реактивный белок (CRP), шггерлсйкин 6 (1L6), интерлейкин 10 (ILIO), фактор некроза опухоли (TNF) и лимфотоксин альфа (LTA).

3. Провести сравнительный анализ времени дожития до конечных точек у больных, перенёсших острый коронарный синдром, - носителей различных генотипов полиморфных маркеров выбранных генов-кандидатов в исследованной выборке больных для выявления вклада генетических факторов в развитие неблагоприятных исходов.

Научная новизна работы. Создана компьютерная программа для подбора оптимальных условий проведения анализа однонуклеотидных полиморфизмов методом полиморфизма длины ресгриктазных фрагментов.

• Впервые исследована ассоциация полиморфных маркеров G2667C, G3014Ä, С3872Т и A5237G гена CRP, G(-174)C гена IL6, G(-1082)A гена ILIO, G(-308)A гена TNF, и Thr26Asn гена LTA с развитием острого коронарного синдрома.

• Обнаружена ассоциация полиморфного маркера A5237G и комбинации генотипов полиморфных маркеров G3014A, С3872Т, A5237G гена CRP с повышенным риском развития неблагоприятного исхода в группе больных, перенёсших острый коронарный синдром.

• Обнаружена ассоциация полиморфного маркера G(-I082)A гена ILIO и комбинации генотипов полиморфных маркеров G(-174)C гена/¿6 и G(-1082)A гена ILIO с повышенным риском развития неблагоприятного исхода в группе больных, перенёсших острый коронарный синдром при краткосрочном прогнозе (18 мес.).

• Обнаружена выраженная ассоциация полиморфного маркера G(-308)A гена TNF с повышенным риском развития неблагоприятного исхода в группе больных, перенёсших острый коронарный синдром.

Практическая ценность работы. Выявление ассоциации полиморфных маркеров генов с развитием острого коронарного синдрома (ОКС) открывает новые перспективы в выделении групп пациентов с высоким риском развития патологии. Полученные данные об ассоциации полиморфных маркеров G3014A, С3872Т и A5237G гена CRP, G(-174)C гена IL6, G(-1082)A гена ILIO и G(-308)A гена TNF с развитием неблагоприятного исхода в группе больных, перенёсших ОКС, позволяют внедрить генетическое тестирование больных ИБС для выделения лиц, имеющих максимальную предрасположенность к развитию неблагоприятных исходов.

Апробация работы. Диссертационная работа была апробирована на заседании Секции молекулярной биологии Учёного Совета ФГУП «ГосНИИ генетика» 7 апреля 2011г. Материалы работы были представлены на VI съезде Российского Общества медицинских генетиков (Росгов-на-Дону, Россия, 14 - 19 мая 2010 г.); 78-ом съезде Европейского атеросклеротического Общества (г. Гамбург, Германия, 20 - 23 июня 2010 г.); X ежегодной международной молодёжной конференции ИБХФ РАН-ВУЗы «Биохимическая физика» (г. Москва, Россия, 8-10 ноября 2010 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ, включая 3 статьи, а также материалы конференций.

Структура диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, описание использованных материалов и методов, результаты и их обсуждение, выводы и список литературы. Материалы диссертации изложены на 129 страницах машинописного текста и содержат 11 таблиц и 18 рисунков. В работе процитированы зарубежные (294) и отечественные (21) литературные источники.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Создание программы для подбора оптимальных условий проведения анализа однонуклеотидных полиморфизмов (ОНП) методом полиморфизма длины рестриктазных фрагментов (ПДРФ)

Несмотря на то, что метод ПДРФ является достаточно простой в понимании и реализации процедурой, ручной подбор условий для его успешного проведения может вызывать определенные трудности. Часто, для выбора рестриктазы, имеющей подходящий участок узнавания и приемлемую цену, требуется использование праймеров с заменами в области З'-конца. Качество подобранных праймеров должно отвечать определённому набору характеристик: соответствие температур отжига, отсутствие димеров, шпилек и других вторичных структур, определённая длина получаемого продукта. Все эти условия можно учитывать и при ручном подборе, однако он требует больших затрат времени и значительного опыта в проведении анализа методом ПДРФ. Для упрощения такого подбора было разработано множество алгоритмов и программ, но большинство из них неудобны в использовании или позволяют проводить только часть операций: подбор праймеров или поиск рестрикгаз для заданного участка узнавания.

Основной из используемых программ является РпшсгЗ (Rozen and Skaletsky, 2000), для которой был создан расширенный веб-интерфейс Primer3Plus (Untergasser et al., 2007). Primer Design Assistant (Chen et al., 2003) - программа с веб-интерфейсом, использующая термодинамическую теорию для оценки пригодности праймеров; WASP (Wangkumhang et al., 2007)- веб-интерфейс создания аллель-специфической ПЦР для анализа ОНП и мутаций; Primer Z (Tsai et al., 2007) - создание праймеров для промоторов, экзонов и ОНП человека; SNPbox (Weckx et al., 2005) - программа для широкомасштабных исследований ОНП; и, наконец, Prim-SNPing (Chang et al., 2009) - программа с веб-интерфейсом для создания мутагенных праймеров.

Только одна из этих программ - Prim-SNPing - предоставляет возможность поиска рестрикгаз для ПДРФ-анализа, но и она ограничена по своим возможностям (отсутствие критериев для оценки вносимых в последовательность замен оснований и возможность только одной такой замены; отсутствие выбора используемых при анализе рестрикгаз по производителям и цене; довольно низкая информативность получаемых результатов).

SNPicker (Niu and Ни, 2004) - ещё одна из программ для подбора условий генотипирования ОНП методом ПДРФ с возможностью создания мутагенных праймеров. Но, к сожалению, она не имеет веб-интерфейса и её развитие, по-видимому, давно приостановлено. Недостаток функциональности всех этих отдельных приложений привел нас к идее создания собственной интегрированной программы для подбора условий

генотипирования ОНП с использованием одного из самых распространенных и проверенных методов - Г1ДРФ.

Первоначально, при создании программы «FastRFLP» основной нашей целью была автоматизация создания замен оснований в нуклеотидной последовательности рядом с ОНП для применения более эффективных и/или дешёвых рестриктаз. Данный подход широко применяется в практике, но требует значительных затрат времени при «ручном» исполнении. Однако после проверки ряда созданных таким образом систем идентификации аллелей ОНП оказалось, что часть замен значительно затрудняет прохождение ПЦР или даже делает его полностью невозможным. Поэтому было решено разработать систему оценки замен на основе подхода, предложенного в работе Литгла (Little, 2001).

Для оценки затрат на покупку выбранной ресгриктазы в нашей разработке используется фильтр по цене. Дополнительно приводится стоимость рестриктазы для генотипирования конкретного полиморфного маркера, что позволяет более точно оценивать затраты на проведение генотипирования больших выборок исследуемых образцов.

После выбора рестриктазы требуется подобрать праймеры, поэтому был разработан модуль для связи нашей программы с РпшегЗ (Rozen and Skaletsky, 2000). Параметры подбора праймеров и формат вывода результатов соответствуют используемым в программе РпшегЗ. Отличием является отображение участков узнавания для выбранной рестриктазы на нуклеотидной последовательности. Это сделано для того, чтобы сразу же увидеть дополнительно появившиеся нежелательные участки узнавания.

Таким образом, нами была разработана программа, веб-интерфейс которой позволяет подбирать праймеры и рестриктазы для идентификации аллелей ОНП методом ПДРФ. Существенными преимуществами программы являются возможность подбирать праймеры с заменами на З'-конце и рассчитывать ориентировочную стоимость анализа с использованием выбранной рестриктазы.

2. Исследование ассоциации полиморфных маркеров ряда генов-кандидатов с острым коронарным синдромом (ОКС)

Исследование, в котором участвовало !6 медицинских центров из семи городов России (Москва, Казань, Пермь, Челябинск, Ставрополь, Ростов-на-Дону, Санкт-Петербург), проводилось с декабря 2004 г. по август 2010 г.

В исследование включены больные (всего 1 145 человек, Табл. 1), поступившие в стационар в связи с развитием ОКС. Больные, у которых в результате ОКС не сформировался инфаркт миокарда (ИМ) с зубцом Q, должны были поступить в стационар не позднее 72 часов от момента начала заболевания и иметь, по крайней мере, один из следующих дополнительных критериев:

• депрессия сегмента ST, по крайней мере, на 1 мм в двух соседних отведениях

• инверсия зубца Т не менее 3 мм

• транзиторный подъем сегмента 8Т

• повышение уровня кардиоспецифических ферментов в крови (сердечная креатининфосфокиназа, тропонины)

Срок наблюдения за больными составил 62,5 мес.

Анализ генотипов полиморфных маркеров проводился методом ПДРФ и

гибрвдизационно-флуоресцентным анализом (^Мап® анализ).

Таблица 1.

Характеристика группы больных, перенёсших острый коронарный синдром.

Показатель Группа больных

Пол (МУЖ) 717/428

Конечные точки 452

Возраст, лет* 61,36 ±11,70

Курящие 467

Нестабильная стенокардия/инфаркт миокарда без зубца (} 663

Инфаркт миокарда с зубцом С2 550

Рецидив инфаркта во время госпитализации 21

Эпизоды тяжелой ишемии во время госпитализации 158

Новые ишемические изменения на электрокардиограмме во время госпитализации 46

* Средний возраст ± стандартное отклонение.

2.1. Исследование ассоциации полиморфных маркеров G2667C, G3014A, C3S72T и A5237G гена CRP с ОКС

Частоты генотипов полиморфных маркеров G2667C, G3014A, С3872Т, A5237G гена CRP были определены у всех пациентов (Табл.2). Только у носителей аллеля G полиморфного маркера A5237G достоверно чаще наблюдался неблагоприятный исход - по сравнению с носителями генотипа АА (Рис. 1). Время дожития до конечной точки у носителей генотипов GA и GG составило 45,7 месяцев (95% CI 42,71^48,68) против 49,8 месяцев (95% CI 47,44-52,15) у носителей генотипа АА (х2 = 4,0; р = 0,046). В случае полиморфных маркеров G2667C, G3014A, С3872Т у больных - носителей разных генотипов - частоты развития неблагоприятного исхода значимо не отличались.

Несмотря на то, что не для всех изученных полиморфных маркеров была обнаружена значимая ассоциация с неблагоприятными исходами, нами была выявлена тенденция: носительство редких аллелей других полиморфных маркеров гена CRP увеличивает частоту неблагоприятных исходов. Поэтому для обнаружения совместного влияния полиморфных маркеров гена CRP нами была выделена группа больных - носителей редких аллелей полиморфных маркеров G3014A, С3872Т, A5237G (комбинация генотипов AG и АА маркера

йЗОЫА, генотипов ТС и ТТ маркера С3872Т и генотипов Ай и вй маркера А5237С), представленная 41 человеком.

Таблица 2.

Частоты генотипов полиморфных маркеров 02667С, С3014Т, С3872А и А5237й гена СЯР у больных, перенёсших острый коронарный синдром.

Полиморфный маркер Генотип Число пациентов Частота, %

G2667C (rsl 800947) GG 954 83

GC 183 16

CC 8 <1

G3014A (rsl 130 864) GG 550 48

GA 481 42

AA 1)4 10

G3872A (rs 1205) GG 344 30

GA 595 52

AA 206 18

A5237G (rs280S630) AA 676 59

AG 401 35

GG 68 6

Полиморфный маркер G2667C был исключён из рассмотрения, так как больных -носителей комбинации редких аллелей по всем четырём полиморфным маркерам обнаружено не было, что возможно связано с низкой встречаемостью редкого аллеля данного полиморфного маркера или меньшей выживаемостью таких больных ещё на стадии первого случая инфаркта миокарда. На рис. 2 видно, что зремя дожития до конечной точки у пациентов из группы носителей редких аллелей полиморфных маркеров G3014A, С3872Т, A5237G составило 33,5 месяцев (95% CI 23,98-43,02), тогда как у остальных пациентов -47,0 месяцев (95% CI 45,26-48,73) (х2 = 7,4; р = 0,00S4). Это указывает на аддитивный эффект полиморфных маркеров и необходимость учитывать взаимное влияние маркеров в подобных исследованиях. Несмотря на половой диморфизм подверженности ИБС, при разделении исследуемой выборки на мужчин и: женщин зависимости частоты неблагоприятных исходов от пола больного для полиморфных маркеров G2667C, G3014A, С3872Т, A5237G гена CRP обнаружено не было. Возможно, это связано с уменьшением числа конечных точек в результате разделения на группы.

Повышение уровня С-реактивного белка (СРБ) достоверно связано с риском развития ССЗ. Значимость этого параметра в прогнозе течения заболевания не уступает более традиционным факторам риска (повышение уровней общего холестерина, ЛПНП, липопротеина А, гомоиистеина и др.), а в ряде случаев превосходит их (Danesh et al., 2000; Ridker et al., 2000; Ridker et al., 2002; Buckley et al., 2009). Уровень СРБ повышается прямо

пропорционально тяжести коронарного стеноза (Метоп е1а1., 2006), а риск ИМ, в свою очередь, повышается при увеличении СРБ.

Время наблюдения, месяцы

Рис. 1. График Каплана-Майера. Доля неблагоприятных исходов у носителей генотипов АА и AG+GG полиморфного маркера A5237G гена CRP в зависимости от времени, прошедшего после ОКС.

В настоящее время интенсивно изучается связь полиморфных маркеров гена CRP с уровнем СРБ. Ассоциация полиморфных маркеров с уровнем экспрессии генов может быть объяснена прямой или непрямой связью, например, сцеплением с иной, непосредственно влияющей на экспрессию белка, областью гена. Выбранные нами полиморфные маркеры G3014A, С3872Т и A5237G расположены в З'-нетранслируемой области гена CRP. Эти полиморфные маркеры не находятся в эволюционно консервативной области, таким образом, их функциональная значимость остается неясной.

Одно из возможных объяснений влияния этих полиморфных маркеров на экспрессию гена CRP - это изменение стабильности мРНК, подобно описанному влиянию функционально важного маркера в З'-нетранслируемой области гена протромбина (Gehring et al., 2001). Регуляция стабильности мРНК - потенциально важный этап в биосинтезе СРБ, так как известно, что мРНК гена CRP имеет достаточно короткое время полураспада -приблизительно 2,5 часа (Lozanski et al., 1996). В противоположность описанным выше полиморфным маркерам, маркер G2667C находится в эволюционно консервативной области экзона 2 гена CRP. Полиморфизму G/C в кодоне 184 соответствует два синонимичных

кодона СТС и CTG, которые кодируют одну аминокислоту - лейцин. Однако наличие разных нуклеотидов в этом положении может изменять уровень экспрессии гена в связи с разным количеством соответствующих кодону тРНК (Post et al., 1979), а также влиять на вторичную структуру мРНК (Shen et al., 1999) и, как следствие, на количество белка. К сожалению, в рамках нашего исследования отсутствие достоверной ассоциации полиморфного маркера G2667C с неблагоприятными исходами не позволяет подтвердить или опровергнуть такие предположения.

ш о

X о s к л

н к

а с о

га Ц

ю о X о о ю

л §

к §

'"V

Гч р = 0,0064

Носители §

комбинации

редких аллелей

— Остальные

больные |

10 20 30 40 50 Время наблюдения, месяцы

Рис. 2. График Каплана-Майера. Доля неблагоприятных исходов у носителей редких аллелей полиморфных маркеров й3014А, С3872Т, А5237С (комбинация генотипов АО и АА маркера йЗОИА, генотипов ТС и ТГ маркера С3872Т, и генотипов АС и Сй маркера А5237С) гена СИР и остальных пациентов в зависимости от времени, прошедшего после обострения ИБС.

Таким образом, носигельсгво генотипов АС и АА маркера 03014А, генотипов ТС и 7Т маркера С3872Т, и генотипов Ай и СО маркера А52376, вероятно, связано с повышенным уровнем СРБ и, следовательно, риском неблагоприятных исходов у больных, перенёсших ОКС.

2.2. Исследование ассоциации полиморфного маркера С(-174)С гена 1Ь6 с ОКС

Частоты генотипов полиморфного маркера С(-174)С гена 1Ь6 были определены у всех пациентов (Табл. 3). Ассоциации с развитием неблагоприятных исходов у больных, перенёсших ОКС, обнаружено не было. Однако оказалось, что при рассмотрении данного

полиморфного маркера совместно с полиморфным маркером G(-I0S2)A гена 1Ы0 у носителей генотипа GG полиморфного маркера G(-I74)C риск неблагоприятного течения ИБС повышен (см. раздел 2.3.). Такой результат можно объяснить, принимая во внимание данные проведённых ранее исследований. В ранее проведённых исследованиях ассоциации полиморфного маркера G(-174)C гена IL6 с ССЗ обнаружено, что носители генотипа GG имеют повышенный риск развития ССЗ (Basso et al., 2002; Antonicelli et al., 2005; Mysliwska et al., 2006). В условиях in vitro секреция шгтерлейкина 6 значимо более высокая у носителей генотипа GG, чем у носителей генотипов GC или СС (Mysliwska et al., 2006). Повышение уровня интерлейкина б приводит к гиперреактивности у носителей генотипа GG. Показано, что для экспрессии гена 1L6 необходимо формирование комплекса совместно действующих транскрипционных факторов, в состав которого входят факторы NF-кВ, NF-IL6, C-JUN/AP-1. Наличие в положении -174 промоторной области гена остатка G формирует участок связывания фактора NF-1 (Fishman et al., 1998; Тепу et al., 2000; Rivera-Chavez et al., 2003). При исследовании трансфицированных геном 1L6 клеток (Fishman et al., 1998) и при исследовании культур клеток крови (Rivera-Chavez et al., 2003) было обнаружено, что при наличии аллеля G уровень экспрессии гена 116 выше, чем при наличии аллеля С в положении -174.

Таблица 3.

Частоты генотипов полиморфного маркера С(-174)С гена /16 у больных, перенёсших острый

коронарный синдром.

Полиморфный маркер Генотип Число пациентов Частота, %

IL6 G(-174)C (rs1800795) СС 196 17,1

CG 592 51,7

GG 357 31,2

Ингерлейкин 6 , являясь важным звеном воспалительной реакции, может вызывать как новые повреждения тканей, так и расширять повреждение существующих областей. Этот эффект может быть опосредован активированными моноцитами (Adams and Shaw, 1994) и за счёт ускоренного размножения Т-хелперов (Zhou et al., 1996). Такое допущение можно сделать, отталкиваясь от экспериментов на животных. У мышей, предрасположенных к атеросклерозу, инъекция интерлейкина 6 вызывает более сильные повреждения тканей (Huber et al., 1999). Ингерлейкин 6 может усаливать коагуляцию и тромбоз из-за стимуляции агрегации тромбоцитов, экспрессии тканевых факторов и синтеза фибриногена (Paoletti et а!., 2004). Считается, что переход атеросклеротической бляшки из стабильной формы в нестабильную, также как и дальнейшее развитие ОКС, зависят от наличия интерлейкина 6 (Fishman et al., 1998). Одна из его функций - это повышение уровня белков острой фазы,

таких как СРБ (Heinisch et а!., 2005), что, в свою очередь, увеличивает риск развития ССЗ (Pai et al., 2008).

Все описанное выше позволяет сделать вывод: у носителей генотипа GG полиморфного маркера G(-174)C гена IL6 имеет место повышенная экспрессия гена IL6, что может приводить к большей интенсивности воспалительного процесса и последующему неблагоприятному течению ИБС.

2.3. Исследование ассоциации полиморфного маркера G(-1082)A гена ILIO с ОКС

Частоты генотипов полиморфного маркера G(-174)C гена ILIO были определены у всех пациентов (Табл. 4). При наблюдении за больными в течение 62,5 мес. ассоциации с развитием неблагоприятных исходов у больных, перенесших ОКС, обнаружено не было. Однако при определении краткосрочного прогноза (срок наблюдения за больными - 18 мес.) носители генотипов А А и AG полиморфного маркера G(-1082)A гена ILIO чаще имели неблагоприятный исход, по сравнению с носителями генотипа GG (Рис. 3). Время дожития до конечной точки составило 11,70 месяцев (95% С1 10,99-12,41) против 12,60 месяцев (95% CI 11,94-13,26) у носителей генотипа GG (х2 = 4,13; р = 0,042), что говорит об ассоциации генотипов АА и AG с повышенным риском развития ИБС.

Таблица 4.

Частоты генотипов полиморфного маркера G(-1082)A гена ILIO у больных, перенесших острый коронарный синдром.

Полиморфный маркер Генотип Число пациентов Частота встречаемости, %

ILIO G(-I082)A (rs 1800896) GG 608 53,1

GA 429 | 37,5

AA 108 1 9,4

На основании литературных и полученных нами данных, для дальнейшего исследования совместного влияния полиморфных маркеров гена IL6 и гена ILIO больных разделили на четыре группы (Табл. 5). Минимальное время дожития до конечной точки оказалось у пациентов из группы Г4 (Рис. 4) и составило 11,09 месяцев (95% CI 9,81-12,37),

максимальное - у пациентов из группы Г1 и составило 13,10 месяцев (95% CI 12,30-13,90) (X2 = 10,23; р = 0,017).

Интерлейкин 10 выполняет множество противовоспалительных функций, в том числе, подавляет действие предшественника воспалительного транскрипционного фактора NF-kB. При этом снижается уровень синтеза цитокинов (Wang et al., 1995), экспрессируются гены тканевых факторов, а также угнетается апоптоз макрофагов и моноцитов после инфекции. Множество исследований показало, что системное или локальное изменение уровня интерлейкина 10 не только смягчает развитие атеросклероза (Mallat et al, 1999; Pinderski et al., 1999; Von Der Thllsen etal., 2001), но и снижает повреждение тканей (Pinderski et al., 2002).

г?

Время наблюдения, месяцы

Рис. 3. График Каплана-Майера. Доля неблагоприятных исходов у носителей генотипов GG и GA+AA полиморфного маркера G(-1082)A гена ILIO в зависимости от времени, прошедшего после ОКС.

Полиморфный маркер G(-1082)A гена ILIO, по-видимому, ассоциирован с регуляцией экспрессии гена ILIO, так как нуклеотид в положении -1082 входит в состав участка связывания фактора PU.1, который является репрессором транскрипции гена ILIO. При этом у носителей аллеля А уровень связывания фактора PU.1 выше, чем у носителей аллеля G (Smith et al., 2001).

Таблица 5.

Характеристика групп больных, перенёсших острый коронарный синдром, при исследовании

совместного влияния полиморфных маркеров генов IL6 и ILIO 0(2 = 10,23, р = 0,017).

Название группы Генотипы полиморфных маркеров Число пациентов (%) Время дожития, месяцы (95% CI)

G(-174)C гена IL6 G(-1082)A гена ILIO

Г1 СС и CG GG 437 (38,2) 13,10(12,30-13,90)

Г2 ССиСО GA и АА 347 (30,3) 11,80(10,84-12,76)

гз GG GG 200(17,5) 12,10(10,83-13,37)

Г4 GG GA и А А 161 (14,0) 11,09(9,81-12,37)

Таким образом, у носителей аллеля А синтез шггерлейкина 10, возможно, понижен. Это приводит к более выраженной воспалительной реакции, которая, в свою очередь, повышает риск неблагоприятного течения ИБС (МЫаге^ е1 а!., 2008).

Время наблюдения, месяцы

Рис.4. График Каплана-Майера. Доля неблагоприятных исходов в группах носителей генотипов Г1, Г2, ГЗ и Г4 (Табл. 5) в зависимости от времени, прошедшего после ОКС.

2.4. Исследование ассоциации полиморфного маркера G(-308)A гена TNF с ОКС

Частоты генотипов полиморфного маркера G(-308)A гена TNF были определены у всех пациентов (Табл. 6). У носителей аллеля А полиморфного маркера G(-308)A чаще наблюдался неблагоприятный исход - по сравнению с носителями генотипа GG. Время дожития до конечной точки у носителей генотипов GAaAA составило 43,30 месяцев (95% CI 40,04-46,56) против 49,6 месяцев (95% CI 47,38-51,82) у носителей генотипа GG (х2 = 15,4; р < 0,001) (Рис. 5).

Полученные нами данные соответствуют результатам проведенного в 2011 году мета-анализа, в котором европеоиды - носители аллеля А имели в 1,5 раза больший риск развития ССЗ, по сравнению с носителями генотипа GG (AG+AA против GG, OR=1,50, 95% CI: 1,231,77) (Zhang et al., 2011).

Уровень фактора некроза опухоли (ФИО) в плазме крови повышен у пациентов с ССЗ и может увеличивать риск сердечных патологий через воздействие на эндотелий сосудов (Plutzky, 2001). У носителей аллеля А выше уровень транскрипции гена TNF (Wilson et al., 1997; Allen, 1999).

Таблица 6.

Частоты генотипов полиморфного маркера С(-308)А гена ГЛУ у больных, перенёсших острый коронарный синдром.

Полиморфный маркер Генотип Число пациентов Частота, %

TNF G(-308)A (rs 1800629) GG 721 63,1

GA 412 35,8

AA 12 1,1

Молекулярный механизм такого изменения не до конца ясен, так как различий в силе взаимодействия факторов транскрипции с двумя аллельными вариантами полиморфного маркера G(-308)A гена TNF обнаружено не было, по крайней мере, для клеточной линии Raji. Возможно в результате различий в укладке ДНК в полиморфной области, взаимодействие транскрипционных факторов с этим участком различается у носителей разных аллелей, что приводит к усилению трансактивации гена TNF. Несмотря на то, что полиморфный маркер лежит в последовательности связывания транскрипционного фактора АР2, повышения уровня связывания АР2 в условиях in vitro с полиморфной областью обнаружено не было (Wilson et al., 1997).

«Э о к

Q Г-Г~-Т---1-1-1-—1-

§ 0 10 20 30 40 50 60 Время наблюдения, месяцы

Рис. 5. График Каплана-Майера. Доля неблагоприятных исходов у носителей генотипов GG и GA+AA полиморфного маркера G(-308)A гена TNF в зависимости от времени, прошедшего после ОКС.

Таким образом, нами показан высокий уровень ассоциации полиморфного маркера G(-3(18)А гена TNF с частотой неблагоприятных исходов у больных, перенёсших ОКС, однако молекулярный механизм, приводящий к такому результата, не до конца ясен.

2.5. Исследование ассоциации полиморфного маркера Thr26Asn гена LTA с ОКС

Частоты генотипов полиморфного маркера Thr26Asn гена LT А были определены у всех пациентов (Табл. 7). Ассоциации с развитием неблагоприятных исходов у больных, перенёсших ОКС (Рис. 6), обнаружено не было (р > 0,05). При разделении исследуемой выборки на мужчин и женщин значимая ассоциация также не была обнаружена.

Таблица 7.

Частоты генотипов полиморфного маркера Thr26Asn rem LTA у больных, перенёсших

острый коронарный синдром.

Полиморфный маркер Генотип Число пациентов Частота, %

LTA Thr26Asn (rsl041981) ThrThr 557 53,3

ThrAsn 407 38,9

AsnAsn 81 7,8

Наши результаты совпадают с рядом исследований. Так при изучении связи полиморфных маркеров гена LT А с ИМ в нескольких работах значимой ассоциации получено не было (Koch etal., 2001; Yamada etal., 2004). Также при проведении мета-анализа, учитывающего результаты нескольких независимых исследований, ассоциации с ССЗ получено не было (Clarke et al., 2006).

Возможно с развитием неблагоприятных исходов у больных, перенёсших ОКС, ассоциированы другие полиморфные маркеры гена UTA, например, такие маркеры, как Cys804AIa или GlylOAla. Поэтому для окончательных выводов об отсутствии связи гена LTA с частотой неблагоприятных исходов требуется проведение дополнительных исследований.

3. Заключение

В настоящее время, представления об атеросклерозе (основной причине ИБС и ОКС), как о процессе накопления липидных частиц в сосудистой стенке в течение всей жизни, претерпели значительные изменения. Современные наблюдения выводят на первый план воспалительный процесс во всех фазах развития атеросклероза; раннем атерогенезе, прогрессировании повреждений и, наконец, формировании тромботических осложнений. Клинические исследования подтверждают корреляцию циркулирующих маркеров воспаления с предрасположенностью к ишемическим нарушениям и прогнозом течения ОКС.

Воспаление внутри атеросклеротического повреждения или вне его может ускорить развитие атеромы и привести к состоянию острого течения заболевания. Циркулирующие

реактанты острой фазы, привлечённые во время воспалительного процесса, могут являться не только маркерами повышенного риска сосудистых нарушений, но и в некоторых случаях участвовать в их патогенезе.

\ Генотипы

- ТЪгТЬг+ТЬгАзп

р = 0,371

их о

X о

н к 5

О. о

§ та

и го Ц.

ю „ в) о

X I» «

о ю

4 °

Л СО X

X Ц

в о к ю

ц О 10 20 30 40 50 60 Время наблюдения, месяцы

Рис. 6. График Каплана-Майера. Доля неблагоприятных исходов у носителей генотипов 7ЪгТ1гг+ТЪгАзп и АзпАт полиморфного маркера ТИг26Азп гена ЬТА в зависимости от времени, прошедшего после ОКС.

Большинство случаев ССЗ возникает при взаимодействии различных условий среды и генетических факторов, однако ни одно из этих условий не может вызвать заболевание само по себе. Факторы внешней среды для данной группы заболеваний известны давно и довольно хорошо исследованы, тогда как в изучении генетических основ ССЗ мы находимся только в начале пути. Проведено множество исследований по типу «случай-контроль», в которых получены данные об ассоции ряда генов с возникновением или течением ССЗ.

К сожалению, невозможность подобрать адекватную группу контроля и отсутствие возможности рассматривать процесс в динамике при проведении таких исследований резко снижает практическую значимость полученных результатов. Недостатков исследований по типу «случай-контроль» лишены, так называемые, «проспективные» исследования, примером которого и является данная работа. При этом изучаются не две группы больных: с наличием заболевания и «условно здоровые» (отсутствие заболевания тяжело подтвердить вследствие латентное™ атеросклеротического повреждения, смазанности клинической картины, широких границ возраста возникновения заболевания), а только достоверно больные люди. В таком случае изучается не наличие или отсутствие заболевания, а скорость

его развития и тяжесть процесса, то есть дожитие до выбранных исследователем «конечных точек».

Для проспективных исследований требуется большой объем выборок больных, длительный процесс наблюдения за течением заболевания (в течение нескольких лет), точное и своевременное фиксирование изменения состояния и лечения больных, что затрудняет возможность проведения таких работ. К счастью, в нашем случае, все эти трудности, с помощью коллег из «клинической» группы (врачей из 16 медицинских центров семи городов России), удалось преодолеть.

Таким образом, нами получены данные об ассоциации ряда генов, вовлечённых в процесс воспаления, с неблагоприятными исходами в группе больных, перенёсших острый коронарный синдром. Непосредственно эти данные невозможно использовать для «предсказания» заболеваний, требуется привлечение большего количество не только генетических (работы в данном направлении активно продолжаются в нашей лаборатории), но и биохимических, эпидемиологических, а также других факторов. После привлечения максимально возможного спектра данных такие оценки могут быть получены при использовании специализированных вероятностных моделей - «байесовских сетей доверия», которые позволяют вычислять условных вероятности развития неблагоприятных исходов без выделения отдельных компонентов. Однако даже на данном этапе, полученные нами результаты свидетельствуют в пользу необходимости внедрения генетического тестирования больных ИБС для выделения лиц, имеющих максимальную предрасположенность к развитию неблагоприятных исходов.

выводы

1. Создана компьютерная программа для подбора оптимальных условий проведения анализа однонуклеотидных полиморфизмов методом полиморфизм длины рестриктазных фрагментов.

2. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера A5237G и комбинации генотипов полиморфных маркеров G3014A, С3872Т, A5237G гена CRP с неблагоприятными исходами (нефатальный и фатальный инфаркт миокарда, нефатальный и фатальный инсульт) в группе больных, перенёсших острый коронарный синдром. В случае полиморфного маркера A5237G носители генотипов GG и AG имеют повышенный риск - по сравнению с носителями генотипа АА. При рассмотрении комбинаций генотипов полиморфных маркеров гена CRP было обнаружено, что в случае группы больных - носителей генотипов AG и АЛ маркера G3014A, генотипов ТС и TT маркера С3872Т, и генотипов AG и GG маркера A5237G, чаще наблюдался неблагоприятный исход - по сравнению с группой носителей других комбинаций генотипов.

3. При определении краткосрочного прогноза (18 мес.) носители генотипов АА и AG полиморфного маркера G(-1082)A гена ILIO чаще имели неблагоприятный исход - по сравнению с носителями генотипа GG. При исследования совместного влияния полиморфных маркеров G(-174)C гена 116 и G(-1082)A гена ILIO неблагоприятные исходы наблюдались чаще в группе носителей генотипов GG маркера G(-174)С гена IL6 и генотипов АА и AG маркера G(-1082)A гена ILIO - по сравнению с другими больными.

4. Обнаружена выраженная ассоциация полиморфного маркера G(-308)A гена TNF с неблагоприятными исходами в группе больных, перенёсших острый коронарный синдром. У носителей генотипов АА и AG данного полиморфного маркера чаще наблюдался неблагоприятный исход по сравнению с носителями генотипа GG.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ 110 ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. К.А. Благодатских, MA. Евдокимова, Ю.В. Агапкина, А.Г. Никитин, А.Н. Бровкин,

A.A. Пушков, Е.Г. Благодатских, О.Ю. Кудряшова, B.C. Осмоловская, JI.0. Минушкина, М.С. Кочкина, Н.Д. Селезнева, E.H. Данковцева, О.С. Чумакова, Т.Н. Бакланова, П.А. Талызин, Н.Е. Резниченко, О.П. Донецкая, С.Н. Терещенко, Е.С. Красилышкова, H.A. Джаиани, Е.В. Акатова, М.Г. Глезер, A.C. Галявич, В.Б. Закирова, H.A. Казиолова, И.В. Тимофеева, М.А. Ягода, О.И. Боева, Л.И. Кателышцкая, Е.В. Хоролец, C.B. Шлык, Э.Г. Волкова, М.П. Маргарян, И.О. Гузь, В О. Константинов, А.Н. Тимофеев, Б.А. Сидоренко, Д. А. Затейщиков, В.В. Носиков. Полиморфные маркеры G(-l 74)С гена IL6 и G(-I082)A гена ILIO и генетическая предрасположенность к неблагоприятному течению ишемической болезни сердца у больных, перенесших острый коронарный синдром. Молекулярная биология. - 2010. - том 44, №5. - стр. 839-846.

2. К.А. Благодатских, А.Г. Никитин, Е.Г. Благодатских, В.В. Носиков. FastRFLP: сетевая программа для подбора условий проведения анализа однонуклеотидных полиморфизмов методом полиморфизма длины рестрикционных фрагментов. Биотехнология. - 2011. - №1. - стр. 60-66.

3. К.А. Благодатских, А.Г. Никитин, A.A. Пушков, Е.Г. Благодатских,

B.C. Осмоловская, О.Ю. Асейчева, Т.Н. Бакланова, П.А. Талызин, С.Н. Терещенко, H.A. Джаиани, Е.В. Акатова, МГ. Глезер, A.C. Галявич, В.Б. Закирова, H.A. Козиолова, Е.А. Полянская, A.B. Ягода, О.И. Боева, Е.В. Хоролец, C.B. Шлык, Э.Г. Волкова, М.П. Маргарян, И.О. Гузь, В.О. Константинов, Н.Б. Калишевич, Д.А. Затейщиков, В.В. Носиков. Полиморфные маркеры G2667C, G3014A, С3872Т, A5237G гена CRP и генетическая предрасположенность к неблагоприятному течению ишемической болезни сердца у больных, перенесших обострение ишемической болезни сердца. Медицинская генетика - 2011. - №4. - стр. 3-9.

4. К.А. Благодатских. Ю.В. Агапкина, А.Г. Никитин, А.Н. Бровкин, М.А. Евдокимова, B.C. Осмоловская, ДА. Затейщиков, В.В. Носиков. Полиморфные маркеры G(-174)C гена IL6 и G(-1082)A гена ILIO и генетическая предрасположенность к неблагоприятному течению ишемической болезни сердца у больных, перенесших острый коронарный синдром. Материалы VI съезда Российского Общества Медицинских Генетиков. - 2010. - стр. 25, г. Ростов-на-Дону, Россия (14 - 19 мая 2010 г.)

5. К. Blagodatskikh, J. Agapkina, A. Nikitin, M. Evdokimova, V. Osmolovskaya, V. Nosikov, D. Zateyshchikov. IL6 and ILIO genes are associated with unfavourable outcomes in patients with acute coronary syndrome. 78th EAS Congress. Atherosclerosis Supplements. - 2010. - Vol.11, №2. - P. 153, Hamburg, Germany (20 - 23 июня 2010 г.)

6. K.A. Благодатских. А.Г. Никитин, A.A. Пушков, М.А. Евдокимова, B.C. Осмоловская, ДА. Затейщиков, В.В. Носиков. Полиморфные маркеры G2667C, G3014A, G3872A и AS237G гена CRP и генетическая предрасположенность к неблагоприятному течению ишемической болезни сердца у больных, перенесших острый коронарный синдром. Материалы Х-ой ежегодной международной молодёжной конференции ИБХФ РАН - ВУЗы «Биохимическая физика», стр. 32, г. Москва, Россия (8 - 10 ноября 2010 г.).

Подписано в печать: 15.04.2011

Заказ № 5341 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ni

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Благодатских, Константин Александрович

Введение.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Полиморфные маркеры.

1.1.1. Типы полиморфизмов и методы их исследования.

1.1.2. Программы, применяемые для подбора условий анализа однонуклеотидных полиморфизмов методом ПДРФ.

1.1.3. Использование полиморфных маркеров в исследовании генетики многофакторных заболеваний.

1.2. Ишемическая болезнь сердца и острый коронарный синдром.

1.2.1. Основные аспекты этиологии и патогенеза ишемической болезни сердца.

1.2.2 Атеросклероз и воспаление.

1.2.3. Острый коронарный синдром.

1.2.4. Генетические факторы риска развития ишемической болезни сердца.

1.5. Характеристика генов и полиморфных маркеров генов, использованных в работе.

1.5.1. С-реактивный белок. Ген CRP. Полиморфные маркеры гена и их ассоциация с ИБС.

1.5.2. Интерлейкин 6. Ген IL6. Полиморфные маркеры гена и их ассоциация с ИБС.

1.5.3. Интерлейкин 10. Ген ILIO. Полиморфные маркеры гена и их ассоциация с ИБС.

1.5.4. Фактор некроза опухоли. Ген TNF. Полиморфные маркеры гена и их ассоциация с ИБС.

1.5.5. Лимфотоксин альфа. Ген LTA. Полиморфные маркеры гена и их ассоциация с ИБС.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Объект исследования. Критерии включения пациентов в исследование

2.2. Реактивы и ферменты.

2.3. Буферные растворы.

2.4. Выделение геномной ДНК.

2.5 Анализ генотипов полиморфных маркеров методом ПДРФ.

2.5.1 Амплификация ДНК.

2.5.2 Расщепление продуктов амплификации рестриктазами.

2.5.3 Электрофоретическое разделение ДНК и идентификация генотипов

2.6 Анализ генотипов полиморфных маркеров методом ТадМап®.

2.7. Статистическая обработка результатов.

2.7.1. Анализ выживаемости.

2.8 Характеристика разработанной программы РаБ111ЕЬР.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Создание программы «Раз1КТЪР».

3.2. Исследование ассоциации полиморфных маркеров с ОКС.

3.2.1. Исследование ассоциации полиморфных маркеров 02667С, вЗОМА, С3872Ти А52370 гена СЯР с ОКС.

3.2.2. Исследование ассоциации полиморфного маркера С(-174)С гена 1Ь6 с ОКС.

3.2.3. Исследование ассоциации полиморфного маркера 0(-1082)А гена 1Ы0 с ОКС.

3.2.4. Исследование ассоциации полиморфного маркера 0(-308)А гена ШЕ с ОКС.

3.2.5. Исследование ассоциации полиморфного маркера Ткг26Азп гена ЬТА с ОКС.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение ассоциации полиморфных маркеров генов CRP, IL6, IL10, TNF и LTA с развитием неблагоприятного исхода у больных, перенесших острый коронарный синдром"

Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) являются лидирующей причиной смертности во всём мире: ни по какой другой причине ежегодно не умирает столько людей, сколько от ССЗ. По данным Всемирной организации здравоохранения, в 2004 году от ССЗ умерло 17,1 миллиона человек, что составило 29% всех случаев смерти в мире. Согласно прогнозам, в 2030 году около 23,6 миллионов человек умрёт от ССЗ, главным образом, от болезней сердца и инсульта, которые останутся наиболее вероятными причинами смерти [1]. Россия, к сожалению, по этому показателю не является исключением [2, 3].

Известно, что сердечно-сосудистые патологии — многофакторные заболевания с многочисленными звеньями патогенеза. Для таких заболеваний характерен сложный механизм формирования фенотипа, в основе которого лежит взаимодействие генетических факторов с факторами внешней среды. При этом для каждого конкретного заболевания можно выделить группу, так называемых, генов-кандидатов, продукты которых могут быть прямо или косвенно вовлечены в развитие данной патологии [4].

Исследование молекулярно-генетических основ многофакторных заболеваний относится к одной из наиболее серьёзных задач современной генетики. Знание генетических факторов, предрасполагающих к развитию заболевания и его осложнений, имеет важное прогностическое значение и может использоваться при досимптоматической диагностике, то есть до появления каких-либо клинических или биохимических симптомов болезни. В нашей стране подобные исследования проводятся на протяжении многих лет [5].

Ранее преобладавшие представления об атеросклерозе как о заболевании, обусловленном преимущественно нарушением метаболизма отдельных фракций холестерина, в настоящее время претерпели существенные изменения. Прогрессирование атеросклероза, особенно патогенез его осложнённых форм, сегодня связывают не только с воздействием на сосудистый эндотелий липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), но и с развитием воспалительного ответа в поражённой области сосудистой стенки. Роль воспаления, по-видимому, наиболее значима в развитии острых коронарных синдромов, в основе которых лежит формирование уязвимой атеросклеротической бляшки [6-9]. При этом нарушения в системах воспалительного ответа могут усугубляться генетическими особенностями, влияющими на структуру и скорость формирования этих процессов. Гены, кодирующие эти факторы, можно рассматривать в качестве кандидатов для изучения наследственной предрасположенности к неблагоприятному течению ишемической болезни сердца (ИБС) у больных, перенёсших острый коронарный синдром (ОКС).

Цели и задачи работы

Целью данной работы было изучение ассоциации полиморфных маркеров ряда генов-кандидатов, продукты которых определяют развитие воспалительных процессов, с неблагоприятным исходом у больных, перенёсших острый коронарный синдром.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Создать компьютерную программу для подбора оптимальных условий проведения анализа однонуклеотидных полиморфизмов методом полиморфизма длины рестриктазных фрагментов.

2. Определить аллели и генотипы полиморфных маркеров генов, кодирующих С-реактивный белок (CRP), интерлейкин 6 (IL6), интерлейкин 10 (ILIO), фактор некроза опухоли (TNF) и лимфотоксин альфа (LTÄ).

3. Провести сравнительный анализ времени дожития до конечных точек у больных, перенёсших острый коронарный синдром, — носителей различных генотипов полиморфных маркеров выбранных генов-кандидатов в исследованной выборке больных для выявления вклада генетических факторов в развитие неблагоприятных исходов.

Научная новизна работы

• Создана компьютерная программа для подбора оптимальных условий проведения анализа однонуклеотидных полиморфизмов методом полиморфизма длины рестриктазных фрагментов.

• Впервые исследована ассоциация полиморфных маркеров G2667C, G3014A, С3872Т и A5237G гена CRP, G(-174)C гена IL6, G(-1082)A гена ILIO, G(-308)A гена TNF, и Thr26Asn гена LT А с развитием острого коронарного синдрома.

• Обнаружена ассоциация полиморфного маркера A5237G и комбинации генотипов полиморфных маркеров G3014A, С3872Т, 8

A5237G гена CRP с повышенным риском развития неблагоприятного исхода в группе больных, перенёсших острый коронарный синдром.

• Обнаружена ассоциация полиморфного маркера G(-1082)A гена ILIO и комбинации генотипов полиморфных маркеров G(-174)C гена IL6 и G(-1082)A гена ILIO с повышенным риском развития неблагоприятного исхода в группе больных, перенёсших острый коронарный синдром при краткосрочном прогнозе (18 мес.).

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Благодатских, Константин Александрович

4. ВЫВОДЫ

2. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера A5237G и комбиниции генотипов полиморфных маркеров G30I4A, С3872Т, A5237G гена CRP с неблагоприятными исходами (нефатальный и фатальный инфаркт миокарда, нефатальный и фатальный инсульт) в группе больных, перенёсших острый коронарный синдром. В случае полиморфного маркера A5237G носители генотипов GG и AG имеют повышенный риск - по сравнению с носителями генотипа АА. При рассмотрении комбинаций генотипов полиморфных маркеров гена CRP было обнаружено, что в случае группы больных - носителей генотипов AG и АА маркера G3014A, генотипов ТС и TT маркера С3872Т, и генотипов AG и GG маркера A5237G, чаще наблюдался неблагоприятный исход - по сравнению с группой носителей других комбинаций генотипов.

3. При определении краткосрочного прогноза (18 мес.) носители генотипов АА и AG полиморфного маркера G(-1082)A гена ILIO чаще имели неблагоприятный исход - по сравнению с носителями генотипа GG. При исследования совместного влияния полиморфных маркеров G(-174)C гена IL6 и G(~1082)A гена ILIO неблагоприятные исходы наблюдались чаще в группе носителей генотипов GG маркера G(-174)C гена IL6 и генотипов АА и AG маркера G(-1082)A гена ILIO — по сравнению с другими больными.

3.3. Заключение

В настоящее время, представления об атеросклерозе (основной причине ИБС и ОКС), как о процессе накопления липидных частиц в сосудистой стенке в течение всей жизни, претерпели значительные изменения. Современные наблюдения выводят на первый план воспалительный процесс во всех фазах развития атеросклероза: раннем атерогенезе, прогрессировании повреждений и, наконец, формировании тромботических осложнений. Клинические исследования подтверждают корреляцию циркулирующих маркеров воспаления с предрасположенностью к ишемическим нарушениям и прогнозом течения ОКС.

Воспаление внутри атеросклеротического повреждения или вне его может ускорить развитие атеромы и привести к состоянию острого течения заболевания. Циркулирующие реактанты острой фазы, привлечённые во время воспалительного процесса, могут являться не только маркерами повышенного риска сосудистых нарушений, но и в некоторых случаях участвовать в их патогенезе.

94 группы больных: с наличием заболевания и «условно здоровые» (отсутствие заболевания тяжело подтвердить вследствие латентности атеросклеротического повреждения, смазанности клинической картины, широких границ возраста возникновения заболевания), а только достоверно больные люди. В таком случае изучается не наличие или отсутствие заболевания, а скорость его развития и тяжесть процесса, то есть дожитие до выбранных исследователем «конечных точек».

Для проспективных исследований требуется большой объём выборок больных, длительный процесс наблюдения за течением заболевания (в течение нескольких лет), точное и своевременное фиксирование изменения состояния и лечения больных, что затрудняет возможность проведения таких работ. К счастью, в нашем случае, все эти трудности, с помощью коллег из «клинической» группы (врачей из 16 медицинских центров семи городов России), удалось преодолеть.

Таким образом, нами получены данные об ассоциации ряда генов, вовлечённых в процесс воспаления, с неблагоприятными исходами в группе больных, перенёсших острый коронарный синдром. Непосредственно эти данные невозможно использовать для «предсказания» заболеваний, требуется привлечение большего количество не только генетических (работы в данном направлении активно продолжаются в нашей лаборатории), но и биохимических, эпидемиологических, а также других факторов. После привлечения максимально возможного спектра данных такие оценки могут быть получены при использовании специализированных вероятностных моделей — «байесовских сетей доверия», которые позволяют вычислять условных вероятности развития неблагоприятных исходов без выделения отдельных компонентов. Однако даже на данном этапе, полученные нами результаты свидетельствуют в пользу необходимости внедрения генетического тестирования больных ИБС для выделения лиц, имеющих максимальную предрасположенность к развитию неблагоприятных исходов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Благодатских, Константин Александрович, Москва

1. ВОЗ | Сердечно-сосудистые заболевания (http://www.who.int/mediacentre /factsheets/fs317/ru/index.html).

2. Оганов Р.Г., Масленникова Г.Я. 2007. Демографическая ситуация и сердечно-сосудистые заболевания в России: пути решения проблем. Кардиоеаскулярная терапия и профилактика. 6 (8), 7-14.

3. Оганов Р., Масленникова Г. 2003. Вклад сердечно-сосудистых и других неинфекционных заболеваний в здоровье населения России. Сердце. 2 (2), 58-61.

4. Goldbourt U., Faire U.D., Berg К. 1994. Genetic Factors in Coronary Heart Disease. 1й издание. Springer; .

5. Сидоренко Б.А., Затейщиков Д.А., Минушкина JI.O. 2009. Кафедра кардиологии и общей терапии: исследования генетики сердечнососудистых заболеваний. Кремлевская медиг^ина. Клинический вестник. (2).

6. Закирова Н.Э., Хафизов Н.Х., Карамова И.М., Закирова А.Н., Оганов Р.Г. 2007. Иммуновоспалительные реакции при ишемической болезни сердца. Рациональная фармакотерапия в кардиологии. 3 (2), 16-19.

7. Титов В.Н. 1999. Общность атеросклероза и воспаления: специфичность атеросклероза как воспалительного процесса. Росс, кардиол. журн. (5), 24-29.

8. Затейщиков Д.А., Королёва О.С. 2007. Биомаркеры в кардиологии: регистрация внутрисосудистого воспаления. Фарматека. (8), 30-36.

9. Paoletti R., Gotto A.M., Hajjar D.P. 2004. Inflammation in Atherosclerosis and Implications for Therapy. Circulation. 109 (23suppll), 111-20-26.

10. Pratt R.E., Dzau V.J. 1999. Genomics and hypertension: concepts, potentials, and opportunities. Hypertension. 33 (1 Pt 2), 238-247.

11. Алтухов Ю.П., Салменкова E.A. 2002. Полиморфизм ДНК в популяционной генетике. Генетика. 38 (2), 1173-1195.

12. Свердлов Е.Д. 2009. Очерки структурной молекулярной генетики. Москва: Наука; 1.

13. Jeffreys A.J., Allen M.J., Armour J.A., et al. 1995. Mutation processes at human minisatellites. Electrophoresis. 16(9), 1577-1585.

14. Pennisi Е. 1998. A closer look at SNPs suggests difficulties. Science. 281 (5384), 1787-1789.

15. Crawford D.C., Akey D.T., Nickerson D.A. 2005. The patterns of natural variation in human genes. Annu Rev Genomics Hum Genet. 6, 287-312.

16. Sherry S.T., Ward M.H., Kholodov M., et al. 2001. dbSNP: the NCBI database of genetic variation. Nucleic Acids Res. 29 (1), 308-311.

17. Ребриков Д.В., Саматов Г.А., Трофимов Д.Ю., Семёнов П.А. 2009. ПЦР в реальном времени. Москва: БИНОМ; .

18. Kleppe К., Ohtsuka Е., Kleppe R., Molineux I., Khorana H.G. 1971. Studies on polynucleotides. XCVI. Repair replications of short synthetic DNA's as catalyzed by DNA polymerases. J. Mol. Biol. 56 (2), 341-361.

19. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F., et al. 1985. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science. 230 (4732), 1350-1354.

20. Higuchi R., Dollinger G., Walsh P.S., Griffith R. 1992. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. Biotechnology (N.Y.). 10(4), 413-417.

21. Higuchi R., Fockler C., Dollinger G., Watson R. 1993. Kinetic PCR analysis: real-time monitoring of DNA amplification reactions. Biotechnology (N.Y.). 11 (9), 1026-1030.

22. VanGuilder H.D., Vrana K.E., Freeman W.M. 2008. Twenty-five years of quantitative PCR for gene expression analysis. BioTechniques. 44 (5), 619626.

23. Nolan T., Hands R.E., Bustin S.A. 2006. Quantification of mRNA using realtime RT-PCR. Nat Protoc. 1 (3), 1559-1582.

24. Holland P.M., Abramson R.D., Watson R., Gelfand D.H. 1991. Detection of specific polymerase chain reaction product by utilizing the 5'—3' exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA polymerase. Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A. 88 (16), 7276-7280.

25. Rozen S., Skaletsky H. 2000. Primer3 on the WWW for general users and for biologist programmers. Methods Mol. Biol. 132, 365-386.

26. Untergasser A., Nijveen H., Rao X., et al. 2007. Primer3Plus, an enhanced web interface to Primer3. Nucleic Acids Res. 35, W71-74.

27. Chen S.H., Lin C.Y., Cho C.S., Lo C.Z., Hsiung C.A. 2003. Primer Design Assistant (PDA): A web-based primer design tool. Nucleic Acids Res. 31 (13), 3751-3754.

28. Wangkumhang P., Chaichoompu K., Ngamphiw C., et al. 2007. WASP: a Web-based Allele-Specific PCR assay designing tool for detecting SNPs and mutations. BMC Genomics. 8, 275.

29. Tsai M.-F., Lin Y.-J., Cheng Y.-C., et al. 2007. PrimerZ: streamlined primer design for promoters, exons and human SNPs. Nucleic Acids Res. 35, W63-65.

30. Weckx S., De Rijk P., Van Broeckhoven C., Del-Favero J. 2005. SNPbox: a modular software package for large-scale primer design. Bioinformatics. 21 (3), 385-387.

31. Chang H.-W., Chuang L.-Y., Cheng Y.-H., et al. 2009. Prim-SNPing: a primer designer for cost-effective SNP genotyping. BioTechniques. 46 (6), 421-431.

32. Niu Т., Hu Z. 2004. SNPicker: a graphical tool for primer picking in designing mutagenic endonuclease restriction assays. Bioinformatics. 20 (17), 3263-3265.

33. Little S. 2001. Amplification-refractory mutation system (ARMS) analysis of point mutations. Curr Protoc Hum Genet. Chapter 9, Unit 9.8.

34. Иванов В.И. 2009. Геномика — медицине. Москва: Академкнига; .

35. Brown D.L., Gorin М.В., Weeks D.E. 1994. Efficient strategies for genomic searching using the affected-pedigree-member method of linkage analysis. Am. J. Hum. Genet. 54 (3), 544-552.

36. Ghosh S., Collins F.S. 1996. The geneticist's approach to complex disease. Annu. Rev. Med. 47, 333-353.

37. Hall J.M., Lee M.K., Newman В., et al. 1990. Linkage of early-onset familial breast cancer to chromosome 17q21. Science. 250 (4988), 1684-1689.

38. Thomson G. 1995. Mapping disease genes: family-based association studies. Am. J. Hum. Genet. 57 (2), 487-498.

39. Пузырёв В.П., Степанов В.A. 1997. Патологическая анатомия генома человека. Новосибирск: Наука; .

40. Горбунова В.Н. 1999. Молекулярные основы медицинской генетики. Санкт-Петербург: Интермедика; .

41. Сох N.J., Bell G.I. 1989. Disease associations. Chance, artifact, or susceptibility genes? Diabetes. 38 (8), 947 -950.

42. Карпов P.C., Дудко B.A. 1998. Атеросклероз: патогенез, клиника, функциональная диагностика, лечение. Томск: STT; .

43. Hamsten A., Wiman В., de Faire U., Blomback M. 1985. Increased plasma levels of a rapid inhibitor of tissue plasminogen activator in young survivors of myocardial infarction. N. Engl. J. Med. 313 (25), 1557-1563.

44. Li H., Cybulsky M., Gimbrone M., Libby P. 1993. An atherogenic diet rapidly induces VCAM-1, a cytokine-regulatable mononuclear leukocyte adhesion molecule, in rabbit aortic endothelium. Arterioscler Thromb Vase Biol. .

45. Hansson G.K. 2005. Inflammation, atherosclerosis, and coronary artery disease. N. Engl. J. Med. 352 (16), 1685-1695.

46. Gu L., Okada Y., Clinton S.K., et al. 1998. Absence of monocytechemoattractant protein-1 reduces atherosclerosis in low density lipoproteinireceptor-deficient mice. Mol. Cell. 2 (2), 275-281.

47. Boring L., Gosling J., Cleary M., Charo I.F. 1998. Decreased lesion formation in CCR2-/- mice reveals a role for chemoldnes in the initiation of atherosclerosis. Nature. 394 (6696), 894-897.

48. Mach F., Sauty A., Iarossi A.S., et al. 1999. Differential expression of three T lymphocyte-activating CXC chemokines by human atheroma-associated cells. J. Clin. Invest. 104 (8), 1041-1050.

49. Smith J.D., Trogan E., Ginsberg ML, et al. 1995. Decreased atherosclerosis in mice deficient in both macrophage colony-stimulating factor (op) and apolipoprotein E. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92 (18), 8264-8268.

50. Qiao J.H., Tripathi J., Mishra N.K., et al. 1997. Role of macrophage colony-stimulating factor in atherosclerosis: studies of osteopetrotic mice. Am. J. Pathol. 150(5), 1687-1699.

51. Hansson G., Libby P. 1996. The role of the lymphocyte. In: Fuster V, Ross R, Topol E, eds. B Atherosclerosis and Coronary Artery Disease. New York, NY: Lippincott-Raven;, 557-568.

52. Ross R. 1999. Atherosclerosis—an inflammatory disease. N. Engl. J. Med. 340 (2), 115-126.

53. Libby P., Geng Y.J., Aikawa M., et al. 1996. Macrophages and atherosclerotic plaque stability. Curr. Opin. Lipidol. 1 (5), 330-335.

54. Libby P. 2001. Current concepts of the pathogenesis of the acute coronary3syndromes. Circulation. 104 (3), 365-372.

55. Libby P., Simon D.I. 2001. Inflammation and thrombosis: the clot thickens. Circulation. 103 (13), 1718-1720.

56. Berliner J., Leitinger N., Watson A., et al. 1997. Oxidized lipids in atherogenesis: formation, destruction and action. Thromb. Haemost. 78 (1), 195-199.

57. Williams K.J., Tabas I. 1998. The response-to-retention hypothesis of atherogenesis reinforced. Curr. Opin. Lipidol. 9 (5), 471-474.

58. Witztum J.L., Berliner J.A. 1998. Oxidized phospholipids and isoprostanes in atherosclerosis. Curr. Opin. Lipidol. 9 (5), 441-448.

59. Stemme S., Faber B., Holm J., et al. 1995. T lymphocytes from human atherosclerotic plaques recognize oxidized low density lipoprotein. Proc. Natl. Acad Sei. U.S.A. 92 (9), 3893-3897.

60. Hazen S.L., Hsu F.F., Gaut J.P., Crowley J.R., Heinecke J.W. 1999. Modification of proteins and lipids by myeloperoxidase. Meth. Enzymol. 300, 88-105.

61. Sugiyama S., Okada Y., Sukhova G.K., et al. 2001. Macrophage myeloperoxidase regulation by granulocyte macrophage colony-stimulating factor in human atherosclerosis and implications in acute coronary syndromes. Am. J. Pathol. 158 (3), 879-891.

62. Dichtl W., Nilsson L., Goncalves I., et al. 1999. Very Low-Density Lipoprotein Activates Nuclear Factor-{kappa}B in Endothelial Cells. Circ Res. 84 (9), 1085-1094.

63. Mackness M.I., Mackness B., Durrington P.N., et al. 1998. Paraoxonase and coronary heart disease. Curr. Opin. Lipidol. 9 (4), 319-324.

64. Lee J.M.S., Choudhury R.P. 2010. Atherosclerosis regression and high-density lipoproteins. Expert Rev Cardiovasc Ther. 8 (9), 1325-1334.

65. Griendling K.K., Ushio-Fukai M., Lasségue B., Alexander R.W. 1997. Angiotensin II signaling in vascular smooth muscle. New concepts. Hypertension. 29 (1 Pt 2), 366-373.

66. Kranzhofer R., Schmidt J., Pfeiffer C.A., et al. 1999. Angiotensin induces inflammatory activation of human vascular smooth muscle cells. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 19 (7), 1623-1629.

67. Tummala P.E., Chen X.L., Sundell C.L., et al. 1999. Angiotensin II induces vascular cell adhesion molecule-1 expression in rat vasculature: A potential link between the renin-angiotensin system and atherosclerosis. Circulation. 100(11), 1223-1229.

68. Schmidt A.M., Yan S.D., Wautier J.L., Stern D. 1999. Activation of receptor for advanced glycation end products: a mechanism for chronic vascular dysfunction in diabetic vasculopathy and atherosclerosis. Circ. Res. 84 (5), 489-497.

69. Baynes J.W., Thorpe S.R. 1999. Role of oxidative stress in diabetic complications: a new perspective on an old paradigm. Diabetes. 48 (1), 1-9.

70. Libby P., Egan D., Skarlatos S. 1997. Roles of infectious agents in atherosclerosis and restenosis: an assessment of the evidence and need for future research. Circulation. 96 (11), 4095-4103.

71. Danesh J., Collins R., Peto R. 1997. Chronic infections and coronary heart disease: is there a link? Lancet. 350 (9075), 430-436.

72. Kol A., Bourcier Т., Lichtman A.H., Libby P. 1999. Chlamydial and human heat shock protein 60s activate human vascular endothelium, smooth muscle cells, and macrophages. J. Clin. Invest. 103 (4), 571-577.

73. Оганов Р.Г., Мамедов M.H. 2009. Национальные клинические рекомендации Всероссийского научного общества кардиологов. Москва: «МЕДИ Экспо»; .

74. Hersi A., Fu Y., Wong В., et al. 2003. Does the discharge ECG provide additional prognostic insight(s) in non-ST elevation ACS patients from that acquired on admission? Eur. Heart J. 24 (6), 522-531.

75. Kofoed S.C., Wittrup H.H., Sillesen H., Nordestgaard B.G. 2003. Fibrinogen predicts ischaemic stroke and advanced atherosclerosis but not echolucent, rupture-prone carotid plaques: the Copenhagen City Heart Study. Eur. Heart J. 24 (6), 567-576.

76. Heras M., Marrugat J., Aros F., et al. 2006. Reduction in acute myocardial infarction mortality over a five-year period. Rev Esp Cardiol. 59 (3), 200208.

77. Шевченко О., Мишнев О., Шевченко О., others. 2005. Ишемическая болезнь сердца. М, Реафарм. .

78. Furberg C.D. 1987. Secondary prevention trials after acute myocardial infarction. The American Journal of Cardiology. 60 (2), 28-32.

79. Keavney B. 2002. Genetic epidemiological studies of coronary heart disease. Int J Epidemiol. 31 (4), 730-736.

80. Galvani M., Ferrini D., Ottani F., Eisenberg P.R. 1999. Early risk stratification of unstable angina/non-Q myocardial infarction: biochemical markers of coronary thrombosis. Int. J. Cardiol. 68 Suppl 1, S55-61.

81. Hamm C.W. 2004. Paradigms in treatment of myocardial infarction. Anaesthesist. 53 (5), 409-410.

82. Van de Werf F., Bax J., Betriu A., et al., Societâ Europea di Cardiologia. 2009. Management of acute myocardial infarction in patients presenting with persistent ST-segment elevation. G Ital Cardiol (Rome). 10 (7), 450-489.

83. Andersen H.R., Nielsen T.T., Rasmussen K., et al. 2003. A comparison of coronary angioplasty with fibrinolytic therapy in acute myocardial infarction. N. Engl. J. Med. 349 (8), 733-742.

84. Keeley E.C., Boura J.A., Grines C.L. 2003. Primary angioplasty versus intravenous thrombolytic therapy for acute myocardial infarction: a quantitative review of 23 randomised trials. Lancet. 361 (9351), 13-20.

85. Zeymer U., Gitt A., Senges J. 2005. Akuter ST-Strecken-Hebungs-Myokardinfarkt, Aktuelle Versorgungssituation der Patienten in Deutschland. Herz. 30 (3), 241-248.

86. Pitsavos C., Kourlaba G., Panagiotakos D.B., Stefanadis C. 2006. Factors associated with delay in seeking health care for hospitalized patients with105acute coronary syndromes: the GREECS study. Hellenic J Cardiol. 47 (6), 329-336.

87. Faire U.D., Pedersen N. 1994. Studies of twins and adoptees in coronary artery disease. In: Genetic factors in coronary heart disease. Kluver Acad. Pub. , 55-68.

88. Tillett W.S., Francis T. 1930. Serological reactions in pneumonia with a nonprotein somatic fraction of pneumococcus. J. Exp. Med. 52 (4), 561-571.

89. Pepys M.B., Baltz M.L. 1983. Acute phase proteins with special reference to C-reactive protein and related proteins (pentaxins) and serum amyloid A protein. Adv. Immunol. 34, 141-212.

90. Bassuk S.S., Rifai N., Ridker P.M. 2004. High-sensitivity C-reactive protein: clinical importance. Curr Probl Cardiol. 29 (8), 439-493.

91. Ridker P.M., Danielson E., Rifai N., Glynn R.J. 2006. Valsarían, blood pressure reduction, and C-reactive protein: primary report of the Val-MARC trial. Hypertension. 48 (1), 73-79.

92. Danesh J., Whincup P., Walker M., et al. 2000. Low grade inflammation and coronary heart disease: prospective study and updated meta-analyses. BMJ. 321 (7255), 199-204.

93. Ridker P.M., Hennekens C.H., Buring J.E., Rifai N. 2000. C-reactive protein and other markers of inflammation in the prediction of cardiovascular disease in women. N. Engl. J. Med. 342 (12), 836-843.

94. Ridker P.M., Rifai N., Rose L., Buring J.E., Cook N.R. 2002. Comparison of C-reactive protein and low-density lipoprotein cholesterol levels in the prediction of first cardiovascular events. N. Engl. J. Med. 347 (20), 15571565.

95. Buckley D.I., Fu R., Freeman M., Rogers K., Helfand M. 2009. C-reactive protein as a risk factor for coronary heart disease: a systematic review and meta-analyses for the U.S. Preventive Services Task Force. Ann. Intern. Med. 151 (7), 483-495.

96. Memon L., Spasojevic-Kalimanovska V., Bogavac-Stanojevic N., et al. 2006. Association of C-reactive protein with the presence and extent of angiographically verified coronary artery disease. Tohoku J. Exp. Med. 209 (3), 197-206.

97. Floyd-Smith G., Whitehead A.S., Colten H.R., Francke U. 1986. The human C-reactive protein gene (CRP) and serum amyloid P component gene (APCS) are located on the proximal long arm of chromosome 1. Immunogenetics. 24 (3), 171-176.

98. Walsh M.T., Divane A., Whitehead A.S. 1996. Fine mapping of the human pentraxin gene region on chromosome lq23. Immunogenetics. 44 (1), 62-69.

99. Woo P., Korenberg J.R., Whitehead A.S. 1985. Characterization of genomic and complementary DNA sequence of human C-reactive protein, and comparison with the complementary DNA sequence of serum amyloid P component. J. Biol. Chem. 260 (24), 13384-13388.

100. Lei K.J., Liu T., Zon G., et al. 1985. Genomic DNA sequence for human C-reactive protein. J. Biol. Chem. 260 (24), 13377-13383.

101. Goldman N.D., Liu T., Lei K.J. 1987. Structural analysis of the locus containing the human C-reactive protein gene and its related pseudogene. J. Biol. Chem. 262 (15), 7001-7005.

102. Kushner I., Jiang S.L., Zhang D., Lozanski G., Samols D. 1995. Do post-transcriptional mechanisms participate in induction of C-reactive protein and serum amyloid A by IL6 and IL-1? Ann. N. Y. Acad. Sei. 762, 102-107.

103. Berger P., McConnell J.P., Nunn M., et al. 2002. C-reactive protein levels are influenced by common IL-1 gene variations. Cytokine. 17 (4), 171-174.

104. Latkovskis G., Licis N., Kalnins U. 2004. C-reactive protein levels and common polymorphisms of the interleukin-1 gene cluster and interleukin-6 gene in patients with coronary heart disease. Eur. J. Immunogenet. 31 (5), 207-213.

105. Vickers M.A., Green F.R., Terry C., et al. 2002. Genotype at a promoter polymorphism of the interleukin-6 gene is associated with baseline levels of plasma C-reactive protein. Cardiovasc. Res. 53 (4), 1029-1034.

106. Crawford D.C., Sanders C.L., Qin X., et al. 2006. Genetic variation is associated with C-reactive protein levels in the Third National Health and Nutrition Examination Survey. Circulation. 114 (23), 2458-2465.

107. Balistreri C.R., Vasto S., Listi F., et al. 2006. Association between +1059G/C CRP polymorphism and acute myocardial infarction in a cohort of patients from Sicily: a pilot study. Ann. N. Y. Acad. Sei. 1067, 276-281.

108. Davey Smith G., Lawlor D.A., Harbord R., et al. 2005. Association of C-reactive protein with blood pressure and hypertension: life course confounding and mendelian randomization tests of causality. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 25 (5), 1051-1056.

109. Miller D.T., Zee R.Y.L., Suk Danik J., et al. 2005. Association of Common CRP Gene Variants with CRP Levels and Cardiovascular Events. Annals of Human Genetics. 69 (6), 623-638.

110. Russell A.I., Cunninghame Graham D.S., Shepherd C., et al. 2004. Polymorphism at the C-reactive protein locus influences gene expression and predisposes to systemic lupus erythematosus. Hum. Mol. Genet. 13 (1), 137147.

111. Suk Danik J., Chasman D.I., Cannon C.P., et al. 2006. Influence of Genetic Variation in the C-Reactive Protein Gene on the Inflammatory Response During and After Acute Coronary Ischemia. Ann Human Genet. 70 (6), 705716.

112. Suk H.J., Ridker P.M., Cook N.R., Zee R.Y.L. 2005. Relation of polymorphism within the C-reactive protein gene and plasma CRP levels. Atherosclerosis. 178 (1), 139-45.

113. Zee R.Y.L., Ridker P.M. 2002. Polymorphism in the human C-reactive protein (CRP) gene, plasma concentrations of CRP, and the risk of future arterial thrombosis. Atherosclerosis. 162 (1), 217-219.

114. Brüll D.J., Serrano N., Zito F., et al. 2003. Human CRP Gene Polymorphism Influences CRP Levels: Implications for the Prediction and Pathogenesis of Coronary Heart Disease. Arterioscler Thromb Vase Biol. 23 (11), 2063-2069.

115. Kovacs A., Green F., Hansson L.-O., et al. 2005. A novel common single nucleotide polymorphism in the promoter region of the C-reactive protein gene associated with the plasma concentration of C-reactive protein. Atherosclerosis. 178 (1), 193-198.

116. Kardys I., de Maat M.P.M., Uitterlinden A.G., Hofman A., Witteman J.C.M. 2006. C-reactive protein gene haplotypes and risk of coronary heart disease: the Rotterdam Study. European Heart Journal. 27 (11), 1331 -1337.

117. Casas J.P., Shah Т., Cooper J., et al. 2006. Insight into the nature of the CRP-coronary event association using Mendelian randomization. Int J Epidemiol. 35 (4), 922-931.

118. Шахнович P.M., Сухинина T.C., Барсова P.M., et al. 2010. Полиморфизм C1444T гена CRP и концентрация С-реактивного белка в сыворотке крови при инфаркте миокарда. Кардиология. (8), 4-12.

119. Wörns М.А., Victor А., Galle P.R., Höhler Т. 2006. Genetic and environmental contributions to plasma C-reactive protein and interleukin-6 levels—a study in twins. Genes Immun. 7 (7), 600-605.

120. MacGregor A. J., Gallimore J.R., Spector T.D., Pepys M.B. 2004. Genetic effects on baseline values of C-reactive protein and serum amyloid a protein: a comparison of monozygotic and dizygotic twins. Clin. Chem. 50 (1), 130134.

121. Retterstol L., Eikvar L., Berg K. 2003. A twin study of C-Reactive Protein compared to other risk factors for coronary heart disease. Atherosclerosis. 169 (2), 279-282.

122. Weber J.L., Kwitek A.E., May P.E. 1990. Dinucleotide repeat polymorphism at the CRP locus. Nucleic Acids Res. 18 (15), 4635.

123. Cao H., Hegele R.A. 2000. Human C-reactive protein (CRP) 1059G/C polymorphism. J. Hum. Genet. 45 (2), 100-101.

124. Hegele R.A., Ban M.R., Young T.K. 2001. Serum C-reactive protein in Canadian Inuit and its association with genetic variation on chromosome lq21. Clin. Chem. 47 (9), 1707-1709.

125. Crawford D.C., Yi Q., Smith J.D., et al. 2006. Allelic spectrum of the natural variation in CRP. Hum. Genet. 119 (5), 496-504.

126. Chen J., Zhao J., Huang J., et al. 2005. -717A>G polymorphism of human C-reactive protein gene associated with coronary heart disease in ethnic Han Chinese: the Beijing atherosclerosis study. J. Mol. Med. 83 (1), 72-78.

127. Wang Q., Hunt S.C., Xu Q., et al. 2006. Association study of CRP gene polymorphisms with serum CRP level and cardiovascular risk in the NHLBI Family Heart Study. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 291 (6), H2752-2757.

128. Morita A., Nakayama T., Doba N., Hinohara S., Soma M. 2006. Polymorphism of the C-reactive protein (CRP) gene is related to serum CRP Level and arterial pulse wave velocity in healthy elderly Japanese. Hypertens. Res. 29 (5), 323-331.

129. Lange L.A., Carlson C.S., Hindorff L.A., et al. <£006. Association of polymorphisms in the CRP gene with circulating C-reactive protein levels and cardiovascular events. JAMA. 296 (22), 2703-2711.

130. Heinrich P.C., Castell J.V., Andus T. 1990. Interleukin-6 and the acute phase response. Biochem J. 265 (3), 621-636.

131. Bataille Reg., Klein B. 1992. C-reactive protein levels as a direct indicator of interleukin-6 levels in humans in vivo. Arthritis & Rheumatism. 35 (8), 982983.

132. Pinkney J.H., Coppack S.W., Mohamed-Ali. 1998. Adipose tissue as an endocrine and paracrine organ. Int J Obesity. 22 (12), 1145-1158.

133. Vallance P., Collier J., Bhagat K. 1997. Infection, inflammation, and infarction: does acute endothelial dysfunction provide a link? Lancet. 349 (9062), 1391-1392.

134. Harris T.B., Ferrucci L., Tracy R.P., et al. 1999. Associations of elevated Interleukin-6 and C-Reactive protein levels with mortality in the elderly. The American Journal of Medicine. 106 (5), 506-512.

135. Tappia P.S., Troughton K.L., Langley-Evans S.C., Grimble R.F. 1995. Cigarette smoking influences cytokine production and antioxidant defences. Clin. Sci. 88 (4), 485-489.

136. Fantuzzi G., Zheng H., Faggioni R., et al. 1996. Effect of endotoxin in IL-1 beta-deficient mice. J. Immunol. 157 (1), 291-296.

137. Marino M.W., Dunn A., Grail D., et al. 1997. Characterization of tumor necrosis factor-deficient□ mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 94 (15), 8093 -8098.

138. Dan K., Gomi S., Inokuchi K., et al. 1995. Effects of interleukin-1 and tumor necrosis factor on megakaryocytopoiesis: mechanism of reactive thrombocytosis. Acta Haematol. 93 (2-4), 67-72.

139. Van Snick J. 1990. Interleukin-6: an overview. Annu. Rev. Immunol. 8, 253278.

140. Hardardottir I., Griinfeld C., Feingold K.R. 1994. Effects of endotoxin and cytokines on lipid metabolism. Curr. Opin. Lipidol. 5 (3), 207-215.

141. Greenberg A.S., Nordan R.P., Mcintosh J., et al. 1992. Interleukin 6 reduces lipoprotein lipase activity in adipose tissue of mice in vivo and in 3T3-L1 adipocytes: a possible role for interleukin 6 in cancer cachexia. Cancer Res. 52(15), 4113-4116.

142. Kanemaki T., Kitade H., Kaibori M., et al. 1998. Interleukin lbeta and interleukin 6, but not tumor necrosis factor alpha, inhibit insulin-stimulated glycogen synthesis in rat hepatocytes. Hepatology. 27 (5), 1296-1303.

143. Bhagat K., Vallance P. 1997. Inflammatory cytokines impair endothelium-dependent dilatation in human veins in vivo. Circulation. 96 (9), 3042-3047.

144. Romano M., Sironi M., Toniatti C., et al. 1997. Role of IL6 and its soluble receptor in induction of chemokines and leukocyte recruitment. Immunity. 6 (3), 315-325.

145. Robinson L.J., Busconi L., Michel T. 1995. Agonist-modulated palmitoylation of endothelial nitric oxide synthase. J. Biol. Chem. 270 (3), 995-998.

146. Castell J.V., Geiger Т., Gross V., et al. 1988. Plasma clearance, organ distribution and target cells of interleukin-6/hepatocyte-stimulating factor in the rat. Eur. J. Biochem. 177 (2), 357-361.

147. Ray A., Tatter S.B., May L.T., Sehgal P.B. 1988. Activation of the human «beta 2-interferon/hepatocyte-stimulating factor/interleukin 6» promoter by cytokines, viruses, and second messenger agonists. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (18), 6701-6705.

148. Isshiki H., Akira S., Tanabe O., et al. 1990. Constitutive and interleukin-1 (IL-l)-inducible factors interact with the IL-1 -responsive element in the IL6 gene. Mol. Cell. Biol. 10 (6), 2757-2764.

149. Matsusaka Т., Fujikawa K., Nishio Y., et al. 1993. Transcription factors NF-IL6 • and NF-kappa В synergistically activate transcription of the inflammatory cytokines, interleukin 6 and interleukin 8. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90(21), 10193-10197.

150. Ray A., Prefontaine K.E. 1994. Physical association and functional antagonism between the p65 subunit of transcription factor NF-kappa В and the glucocorticoid receptor. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91 (2), 752-756.

151. Ray A., Prefontaine K.E., Ray P. 1994. Down-modulation of interleukin-6 gene expression by 17 beta-estradiol in the absence of high affinity DNA binding by the estrogen receptor. J. Biol. Chem. 269 (17), 12940-12946.

152. Шевченко A.B., Голованова O.B., Коненков В.И., et al. 2009. Анализ взаимосвязи полиморфизма гена IL6 (-174 G/C) и классических факторов риска у пациентов с острым инфарктом миокарда в анамнезе. Медицинская иммунология. 11 (6), 557-566.

153. Jones K.G., Brull D.J., Brown L.C., et al. 2001. Interleukin-6 (IL6) and the prognosis of abdominal aortic aneurysms. Circulation. 103 (18), 2260-2265.

154. Rauramaa R., Vaisanen S.B., Luong L.A., et al. 2000. Stromelysin-1 and interleukin-6 gene promoter polymorphisms are determinants of asymptomatic carotid artery atherosclerosis. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 20 (12), 2657-2662.

155. Rundek T., Elkind M.S., Pittman J., et al. 2002. Carotid intima-media thickness is associated with allelic variants of stromelysin-1, interleukin-6, and hepatic lipase genes: the Northern Manhattan Prospective Cohort Study. Stroke. 33 (5), 1420-1423.

156. Basso F., Lowe G.D.O., Rumley A., McMahon A.D., Humphries S.E. 2002. Interleukin-6 -174G>C Polymorphism and Risk of Coronary Heart Disease in West of Scotland Coronary Prevention Study (WOSCOPS). Arterioscler Thromb Vase Biol. 22 (4), 599-604.

157. Flex A., Gaetani E., Pola R., et al. 2002. The -174 G/C polymorphism of the interleukin-6 gene promoter is associated with peripheral artery occlusive disease. Eur J Vase Endovasc Surg. 24 (3), 264-268.

158. Pola R., Gaetani E., Flex A., et al. 2002. -174 G/C interleukin-6 gene polymorphism and increased risk of multi-infarct dementia: a case-control study. Exp. Gerontol. 37 (7), 949-955.

159. Chapman C.M.L., Beilby J.P., Humphries S.E., et al. 2003. Association of an allelic variant of interleukin-6 with subclinical carotid atherosclerosis in an Australian community population. Eur. Heart J. 24 (16), 1494-1499.

160. Manginas A., Tsiavou A., Chaidaroglou A., et al. 2008. Inflammatory cytokine gene variants in coronary artery disease patients in Greece. Coron. Artery Dis. 19 (8), 575-582.

161. Sie M.P.S., Mattace-Raso F.U.S., Uitterlinden A.G., et al. 2008. The interleukin-6-174 G/C promoter polymorphism and arterial stiffness; the Rotterdam Study. Vase Health Risk Manag. 4 (4), 863-9.

162. Aker S., Bantis C., Reis P., et al. 2009. Influence of interleukin-6 G-174C gene polymorphism on coronary artery disease, cardiovascular complications and mortality in dialysis patients. Nephrol. Dial. Transplant. 24 (9), 28472851.

163. Fiorentino D.F., Zlotnik A., Mosmann T.R., Howard M., O'Garra A. 1991. ILIO inhibits cytokine production by activated macrophages. J. Immunol. 147 (11), 3815-3822.

164. Fiorentino D.F., Zlotnik A., Vieira P., et al. 1991. ILIO acts on the antigen-presenting cell to inhibit cytokine production by Thl cells. J. Immunol. 146 (10), 3444-3451.

165. Moore K.W., de Waal Malefyt R., Coffman R.L., O'Garra A. 2001. Iterleukin-10 and the Interleukin-10 receptor. Annu. Rev. Immunol. 19 (1), 683-765.

166. Wang P., Wu P., Siegel M.I., Egan R.W., Billah M.M. 1995. Interleukin (IL)-10 Inhibits Nuclear Factor B (NFB) Activation in Human Monocytes. Journal of Biological Chemistry. 270 (16), 9558-9563.

167. Levens J.M., Gordon J., Gregory C.D. 2000. Micro-environmental factors in the survival of human B-lymphoma cells. Cell Death Differ. 1 (1), 59-69.

168. Moore K., Vieira P., Fiorentino D., et al. 1990. Homology of cytokine synthesis inhibitory factor (IL10) to the Epstein-Barr virus gene BCRFI. Science. 248 (4960), 1230 -1234.

169. Howard M., O'Garra A. 1992. Biological properties of interleukin 10. Immunology Today. 13 (6), 198-200.

170. Platzer C., Volk H.D., Platzer M. 1994. 5' noncoding sequence of human IL10 gene obtained by oligo-cassette PCR walking. DNA Seq. 4 (6), 399-401.

171. Platzer C., Docke W.-D., Volk H.-D., Prosch S. 2000. Catecholamines trigger IL10 release in acute systemic stress reaction by direct stimulation of its promoter/enhancer activity in monocytic cells. Journal ofNeuroimmunology. 105 (1), 31-38.

172. Walter M.R. 2002. Structure of Interleukin-10/Interleukin-10R1 Complex: A Paradigm for Class 2 Cytokine Activation. IR. 26 (1-3), 303-308.

173. Standiford T.J., Strieter R.M., Lukacs N.W., ICunkel S.L. 1995. Neutralization of IL10 increases lethality in endotoxemia. Cooperative effects of macrophage inflammatory protein-2 and tumor necrosis factor. J. Immunol. 155 (4), 2222-2229.

174. Lang R., Rutschman R.L., Greaves D.R., Murray P.J. 2002. Autocrine deactivation of macrophages in transgenic mice constitutively overexpressing IL10 under control of the human CD68 promoter. J. Immunol. 168 (7), 34023411.

175. Clarke C.J., Hales A., Hunt A., Foxwell B.M. 1998. ILlO-mediated suppression of TNF-alpha production is independent of its ability to inhibit NF kappa B activity. Eur. J. Immunol. 28 (5), 1719-1726.

176. Schottelius A.J.G., Mayo M.W., Sartor R.B., Baldwin A.S. 1999. Interleukin-10 Signaling Blocks Inhibitor of kB Kinase Activity and Nuclear Factor kB DNA Binding. Journal of Biological Chemistry. 21A (45), 31868 -31874.

177. Ito S., Ansari P., Sakatsume M., et al. 1999. Interleukin-10 inhibits expression of both interferon alpha- and interferon gamma- induced genes by suppressing tyrosine phosphorylation of STAT1. Blood. 93 (5), 1456-1463.

178. Donnelly R.P., Dickensheets H., Finbloom D.S. 1999. The Interleukin-10 Signal Transduction Pathway and Regulation of Gene Expression in Mononuclear Phagocytes. / interferon cytokine res. 19 (6), 563-573.

179. Berlato C., Cassatella M.A., Kinjyo I., et al. 2002. Involvement of suppressor of cytokine signaling-3 as a mediator of the inhibitory effects of IL10 on lipopolysaccharide-induced macrophage activation. J. Immunol. 168 (12), 6404-6411.

180. Lee T.-S., Chau L.-Y. 2002. Heme oxygenase-1 mediates the antiinflammatory effect of interleukin-10 in mice. Nat Med. 8 (3), 240-246.

181. Bogdan C., Vodovotz Y., Nathan C. 1991. Macrophage deactivation by interleukin 10. The Journal of Experimental Medicine. VIA (6), 1549 -1555.

182. Kwon O.J. 1997. The role of nitric oxide in the immune response of tuberculosis. J. Korean Med. Sci. 12 (6), 481-487.

183. Dandona P., Mohanty P., Hamouda W., et al. 1999. Effect of dexamethasone on reactive oxygen species generation by leukocytes and plasma interleukin-10 concentrations: a pharmacodynamic study. Clin. Pharmacol. Ther. 66 (1), 58-65.

184. Gunnett C.A., Heistad D.D., Berg D.J., Faraci F.M. 2000. IL10 deficiency increases superoxide and endothelial dysfunction during inflammation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 279 (4), HI555-1562.

185. Keel M., Ungethum U., Steckholzer U., et al. 1997. Interleukin-10 counterregulates proinflammatory cytokine-induced inhibition of neutrophil apoptosis during severe sepsis. Blood. 90 (9), 3356-3363.

186. Lacraz S., Nicod L.P., Chicheportiche R., Welgus H.G., Dayer J.M. 1995. IL10 inhibits metalloproteinase and stimulates TIMP-1 production in human mononuclear phagocytes. J. Clin. Invest. 96 (5), 2304-2310.

187. Anguera I., Miranda-Guardiola F., Bosch X., et al. 2002. Elevation of serum ' levels of the anti-inflammatory cytokine interleukin-10 and decreased risk of coronary events in patients with unstable angina. Am. Heart J. 144 (5), 811817.

188. Smith D.A., Irving S.D., Sheldon J., Cole D., Kaski J.C. 2001. Serum Levels of the Antiinflammatory Cytokine Interleukin-10 Are Decreased in Patients With Unstable Angina. Circulation. 104 (7), 746-749.

189. Mizia-Stec K., Gasior Z., Zahorska-Markiewicz B., et al. 2003. Serum tumour necrosis factor-alpha, interleukin-2 and interleukin-10 activation in stable angina and acute coronary syndromes. Coron. Artery Dis. 14 (6), 431438.

190. Kube D., Rieth H., Eskdale J., Kremsner P.G., Gallagher G. 2001. Structural characterisation of the distal 5' flanking region of the human interleukin-10 gene. Genes Immun. 2 (4), 181-190.

191. Gibson A.W., Edberg J.C., Wu J., et al. 2001. Novel single nucleotide polymorphisms in the distal ILIO promoter affect ILIO production and enhance the risk of systemic lupus erythematosus. J. Immunol. 166 (6), 39153922.

192. Eskdale J., Gallagher G., Verweij C.L., et al. 1998. Interleukin 10 secretion in relation to human ILIO locus haplotypes. Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 95 (16), 9465-9470.

193. Heiskanen M., Kähönen M., Hurme M., et al. 2010. Polymorphism in the ILIO promoter region and early markers of atherosclerosis: the Cardiovascular Risk in Young Finns Study. Atherosclerosis. 208 (1), 190196.

194. Fei G.-Z., Svenungsson E., Frostegärd J., Padyukov L. 2004. The A-1087IL10 allele is associated with cardiovascular disease in SLE. Atherosclerosis. 177 (2), 409-414.

195. Kahraman S., Yilmaz R., Arid M., et al. 2006. ILIO genotype predicts serum levels of adhesion molecules, inflammation and atherosclerosis in hemodialysis patients. J. Nephrol. 19 (1), 50-56.

196. Donger C., Georges J.L., Nicaud V., et al. 2001. New polymorphisms in the interleukin-10 gene—relationships to myocardial infarction. Eur. J. Clin. Invest. 31 (1), 9-14.

197. Koch W., Tiroch K., von Beckerath N., Schomig A., Kastrati A. 2003. Tumor necrosis factor-alpha, lymphotoxin-alpha, and interleukin-10 gene polymorphisms and restenosis after coronary artery stenting. Cytokine. 24 (4), 161-171.

198. Oda K., Tanaka N., Arai T., et al. 2007. Polymorphisms in pro- and antiinflammatory cytokine genes and susceptibility to atherosclerosis: a pathological study of 1503 consecutive autopsy cases. Hum. Mol. Genet. 16 (6), 592-599.

199. Spiegelman B.M., Hotamisligil G.S. 1993. Through thick and thin: Wasting, obesity, and TNFalpha. Cell. 73 (4), 625-627.

200. Fiers W., Beyaert R., Brouckaert P., et al. 1987. Tumor necrosis factor: a potential antitumor agent? J. Interferon Res. 7 (5), 627-634.

201. Loetscher H., Pan Y.-C.E., Lahm H.-W., et al. 1990. Molecular cloning and expression of the human 55 kd tumor necrosis factor receptor. Cell. 61 (2), 351-359.

202. Smith C., Davis T., Anderson D., et al. 1990. A receptor for tumor necrosis factor defines an unusual family of cellular and viral proteins. Science. 248 (4958), 1019-1023.

203. Vandenabeele P., Declercq W., Beyaert R., Fiers W. 1995. Two tumour necrosis factor receptors: structure and function. Trends in Cell Biology. 5 (10), 392-399.

204. Grell M., Douni E., Wajant H., et al. 1995. The transmembrane form of tumor necrosis factor is the prime activating ligand of the 80 kDa tumor necrosis factor receptor. Cell. 83 (5), 793-802.

205. Grell M., Wajant H., Zimmermann G., Scheurich P. 1998. The type 1 receptor (CD 120a) is the high-affinity receptor for soluble tumor □ necrosis □ factor. Proc Natl Acad Sci US A. 95 (2), 570-575.1. OimeoK ■mTe3X!7yp>;!

206. Torre-Amione G., Kapadia S., Lee J., et al. 1995. Expression and functional significance of tumor necrosis factor receptors in human myocardium. Circulation. 92 (6), 1487-1493.

207. Vassalli P. 1992. The Pathophysiology of Tumor Necrosis Factors. Annu. Rev. Immunol. 10 (1), 411-452.

208. Kapadia S., Dibbs Z., Kurrelmeyer K., et al. 1998. The role of cytokines in the failing human heart. Cardiology Clinics. 16 (4), 645-656.

209. Rauchhaus M., Coats A.J., Anker S.D. 2000. The endotoxin-lipoprotein hypothesis. The Lancet. 356 (9233), 930-933.

210. Blick M., Sherwin S.A., Rosenblum M., Gutterman J. 1987. Phase I study of recombinant tumor necrosis factor in cancer patients. Cancer Res. 47 (11), 2986-2989.

211. Satoh M., Nakamura M., Tamura M., et al. 1997. Inducible Nitric Oxide Synthase and Tumor Necrosis Factor-Alpha in Myocardium in Human Dilated Cardiomyopathy. Journal of the American College of Cardiology. 29 (4), 716-724.

212. Torre-Amione G., Kapadia S., Lee J., et al. 1996. Tumor necrosis factor-alpha and tumor necrosis factor receptors in the failing human heart. Circulation. 93 (4), 704-711.

213. Giroir B.P., Johnson J.H., Brown T., Allen G.L., Beutler B. 1992. The tissue distribution of tumor necrosis factor biosynthesis during endotoxemia. J. Clin. Invest. 90 (3), 693-698.

214. Kapadia S., Lee J., Torre-Amione G., et al. 1995. Tumor necrosis factor-alpha gene and protein expression in adult feline myocardium after endotoxin administration. J. Clin. Invest. 96 (2), 1042-1052.

215. Kapadia S.R., Oral H., Lee J., et al. 1997. Hemodynamic regulation of tumor necrosis factor-alpha gene and protein expression in adult feline myocardium. Circ. Res. 81 (2), 187-195.

216. Yue P., Massie B.M., Simpson P.C., Long C.S. 1998. Cytokine expression increases in nonmyocytes from rats with postinfarction heart failure. Am. J. Physiol. 275 (1 Pt 2), H250-258.

217. Meldrum MD D.R., Cleveland Jr M., Cain MD B.S., Meng MD P., Harken MD A.H. 1998. Increased Myocardial Tumor Necrosis Factor-alpha. in a Crystalloid-Perfused Model of Cardiac Ischemia-Reperfusion Injury. The Annals of Thoracic Surgery. 65 (2), 439-443.

218. Ferrari R. 1998. Tumor necrosis factor in CHF: a double facet cytokine. Cardiovascular Research. 37 (3), 554 -559.

219. MacGowan M., Mann M., Kormos M., Feldman M., Murali M. 1997. Circulating Interleukin-6 in Severe Heart Failure. The American Journal of Cardiology. 79 (8), 1128-1131.

220. Bozkurt B.5 Kribbs S.B., Clubb F.J. Jr, et al. 1998. Pathophysiologically relevant concentrations of tumor necrosis factor-alpha promote progressive left ventricular dysfunction and remodeling in rats. Circulation. 97 (14), 1382-1391.

221. Shen J., O'Brien D., Xu Y. 2006. Matrix metalloproteinase-2 contributes to tumor necrosis factor alpha induced apoptosis in cultured rat cardiac122myocytes. Biochemical and Biophysical Research Communications. 347 (4), 1011-1020.

222. Krown K.A., Page M.T., Nguyen C., et al. 1996. Tumor necrosis factor alpha-induced apoptosis in cardiac myocytes. Involvement of the sphingolipid signaling cascade in cardiac cell death. J. Clin. Invest. 98 (12), 2854-2865.

223. Cleutjens J.P.M., Kandala J.C., Guarda E., Guntaka R.V., Weber K.T. 1995. Regulation of collagen degradation in the rat myocardium after infarction. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 27 (6), 1281-1292.

224. Natanson C., Eichenholz P.W., Danner R.L., et al. 1989. Endotoxin and tumor necrosis factor challenges in dogs simulate the cardiovascular profile of human septic shock. The Journal of Experimental Medicine. 169 (3), 823 -832.

225. Castagnoli C., Stella M., Berthod C., Magliacani G., Richiardi P.M. 1993. TNF Production and Hypertrophic Scarring. Cellular Immunology. 147 (1), 51-63.

226. Pagani F.D., Baker L.S., Hsi C., et al. 1992. Left ventricular systolic and diastolic dysfunction after infusion of tumor necrosis factor-alpha in conscious dogs. J. Clin. Invest. 90 (2), 389-398.

227. Gottschall P.E., Yu X. 1995. Cytokines regulate gelatinase A and B (matrix metalloproteinase 2 and 9) activity in cultured rat astrocytes. J. Neurochem. 64(4), 1513-1520.

228. Wilson A.G., de Vries N., Pociot F., et al. 1993. An allelic polymorphism within the human tumor necrosis factor alpha promoter region is stronglyassociated with HLA Al, B8, and DIG alleles. J. Exp. Med. Ill (2), 557560.

229. Kroeger K.M., Carville K.S., Abraham L.J. 1997. The -308 tumor necrosis factor-alpha promoter polymorphism effects transcription. Mol. Immunol. 34 (5), 391-399.

230. Sallakci N., Akcurin G., Koksoy S., et al. 2005. TNF-alpha G-308A polymorphism is associated with rheumatic fever and correlates with increased TNF-alpha production. Journal of Autoimmunity. 25 (2), 150-154.

231. Wilson A.G., Symons J.A., McDowell T.L., McDevitt H.O., Duff G.W. 1997. Effects of a polymorphism in the human tumor necrosis factor alpha promoter on transcriptional activation. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94 (1), 3195-3199.

232. Allen R.D. 1999. Polymorphism of the human TNF-alpha promoter—random variation or functional diversity? Mol. Immunol. 36 (15-16), 1017-1027.

233. Cox A., Gonzalez A.M., Wilson A.G., et al. 1994. Comparative analysis of the genetic associations of HLA-DR3 and tumour necrosis factor alpha with human IDDM. Diabetologia. 37 (5), 500-503.

234. Peng J., Liu C., Zhu K., et al. 2003. The TNF2 allele is a risk factor to severe aplastic anemia independent of HLA-DR. Hum. Immunol. 64 (9), 896-901.

235. Zou Y.-F., Feng X.-L., Tao J.-H., et al. 2010. Meta-analysis of TNF-alpha promoter -308A/G polymorphism and SLE susceptibility in Asian populations. Rheumatol. Int. .

236. Никитин Ю.П., Рымар О.Д., Максимов B.H., et al. 2009. Полиморфизм G(-308)A гена TNF, связь с аутоимунными заболеваниями щитовидной железы в популяции Новосибирска. Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. (1), 69-73.

237. McGuire W., Hill A.V., Allsopp С.Е., Greenwood B.M., Kwiatkowski D. 1994. Variation in the TNF-alpha promoter region associated with susceptibility to cerebral malaria. Nature. 371 (6497), 508-510.

238. Cabrera M., Shaw M.A., Sharpies C., et al. 1995. Polymorphism in tumor necrosis factor genes associated with mucocutaneous leishmaniasis. J. Exp. Med. 182 (5), 1259-1264.

239. Herrmann S.M., Ricard S., Nicaud V., et al. 1998. Polymorphisms of the tumour necrosis factor-alpha gene, coronary heart disease and obesity. Eur. J. Clin. Invest. 28 (1), 59-66.

240. Zhang H.-F., Xie S.-L., Wang J.-F., et al. 2011. Tumor necrosis factor-alpha G-308A gene polymorphism and coronary heart disease susceptibility: An updated meta-analysis. Thromb Res. .

241. Schneider K., Potter K.G., Ware C.F. 2004. Lymphotoxin and LIGHT signaling pathways and target genes. Immunol. Rev. 202, 49-66.

242. Ware C.F. 2005. Network communications: lymphotoxins, LIGHT, and TNF. Annu. Rev. Immunol. 23, 787-819.

243. Ozaki K., Ohnishi Y., Iida A., et al. 2002. Functional SNPs in the lymphotoxin-alpha gene that are associated with susceptibility to myocardial infarction. Nat Genet. 32 (4), 650-4.

244. Laxton R., Pearce E., Kyriakou T., Ye S. 2005. Association of the lymphotoxin-alpha gene Thr26Asn polymorphism with severity of coronary atherosclerosis. Genes Immun. 6 (6), 539-41.

245. Keso T., Perola M., Laippala P., et al. 2001. Polymorphisms within the tumor necrosis factor locus and prevalence of coronary artery disease in middle-aged men. Atherosclerosis. 154 (3), 691-697.

246. Yamada A., Ichihara S., Murase Y., et al. 2004. Lack of association of polymorphisms of the lymphotoxin alpha gene with myocardial infarction in Japanese. J. Mol. Med. 82 (7), 477-483.

247. Koch W., Kastrati A., Bottiger C., et al. 2001. Interleukin-10 and tumor necrosis factor gene polymorphisms and risk of coronary artery disease and myocardial infarction. Atherosclerosis. 159 (1), 137-144.

248. Suzuki G., Izumi S., Hakoda M., Takahashi N. 2004. LTA 252G allele containing haplotype block is associated with high serum C-reactive protein levels. Atherosclerosis. 176 (1), 91-94.

249. R Development Core Team. 2010. R: A Language and Environment for Statistical Computing. Vienna, Austria: .

250. Hald A. 1949. Maximum likelihood estimation of the parameters of a normal distribution which is truncated at a known point. Skandinavisk Aktuarietidskrift., 119-134.

251. Berkson J., Gage R.R. 1950. The calculation of survival rates for cancer. Proceedings of Staff Meetings, Mayo Clinic. 25, 250.

252. Cutler S.J., Ederer F. 1958. Maximum utilization of the life table method in analyzing survival. Journal of Chronic Diseases. (8), 699-712.

253. Gehan E.A., Thomas D.G. 1969. The performance of some two sample tests in small samples with and without censoring. Biometrika. 56, 127-132.

254. Barlow RE. 1963. Properties of Probability Distributions with Monotone Hazard Rate. Ann. Math. Statist. 34 (2), 375-389.

255. Kaplan E.L., Meier P. 1958. Nonparametric Estimation from Incomplete Observations. Journal of the American Statistical Association. 53 (282), 457481.

256. Lee E.T., Desu M.M. 1972. A computer program for comparing К samples with right-censored data. Computer Programs in Biomedicine. 2 (4), 315321.

257. Mantel N. 1967. Ranking procedures for arbitrarily restricted observation. Biometrics. 23 (1), 65-78.

258. Анализ выживаемости http://www.statsoft.ru/home/textbook/default.htm.

259. The Official Microsoft ASP.NET Site http://www.asp.net/.

260. Roberts R.J., Vincze Т., Posfai J., Macelis D. 2010. REBASE—a database for DNA restriction and modification: enzymes, genes and genomes. Nucleic Acids Res. 38, D234-D236.

261. SibEnzyme http://russia.sibenzyme.com/.

262. Компания Helicon: Ферменты и белки Fermentas http://helicon.ru/catalog/section.php?IBLOCKID=6&SECTIONID=278.

263. Gehring N.H., Frede U., Neu-Yilik G., et al. 2001. Increased efficiency of mRNA 3' end formation: a new genetic mechanism contributing to hereditary thrombophilia. Nat. Genet. 28 (4), 389-392.

264. Lozanski G., Jiang S.L., Samols D., Kushner I. 1996. C-reactive protein and serum amyloid A mRNA stability following induction by cytokines. Cytokine. 8 (7), 534-540.

265. Post L.E., Strycharz G.D., Nomura M., Lewis H., Dennis P.P. 1979. Nucleotide sequence of the ribosomal protein gene cluster adjacent to the gene for RNA polymerase subunit beta in Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 76 (4), 1697-1701.

266. Shen L.X., Basilion J.P., Stanton V.P. Jr. 1999. Single-nucleotide polymorphisms can cause different structural folds of mRNA. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (14), 7871-7876.

267. Mysliwska J., Wieckiewicz J., Hak L., et al. 2006. Interleukin 6 polymorphism corresponds to the number of severely stenosed coronary arteries. Eur. Cytokine Netw. 17 (3), 181-8.

268. Antonicelli R., Olivieri F., Bonafé M., et al. 2005. The interleukin-6 -174 G>C promoter polymorphism is associated with a higher risk of death after an acute coronary syndrome in male elderly patients. Int J Cardiol. 103 (3), 266-71.

269. Terry C.F., Loukaci V., Green F.R. 2000. Cooperative Influence of Genetic Polymorphisms on Interleukin 6 Transcriptional Regulation. Journal of Biological Chemistry. 275 (24), 18138-18144.

270. Rivera-Chavez F.A., Peters-Hybki D.L., Barber R.C., O'Keefe G.E. 2003. Interleukin-6 promoter haplotypes and interleukin-6 cytokine responses. Shock. 20 (3), 218-223.

271. Adams D.H., Shaw S. 1994. Leucocyte-endothelial interactions and regulation of leucocyte migration. The Lancet. 343 (8901), 831-836.

272. Zhou X., Stemme S., Hansson G.K. 1996. Evidence for a local immune response in atherosclerosis. CD4+ T cells infiltrate lesions of apolipoprotein-E-deficient mice. Am. J. Pathol. 149 (2), 359-366.

273. Huber S.A., Sakkinen P., Conze D., Hardin N., Tracy R. 1999. Inteiieukin-6 Exacerbates Early Atherosclerosis in Mice. Arterioscler Thromb Vase Biol. 19 (10), 2364-2367.

274. Heinisch R.H., Zanetti C.R., Comin F., et al. 2005. Serial changes in plasma levels of cytokines in patients with coronary artery disease. Vascular Health and Risk Management. 1 (3), 245-50.

275. Pai J.K., Mukamal K.J., Rexrode K.M., Rimm E.B. 2008. C-Reactive Protein (CRP) Gene Polymorphisms, CRP Levels, and Risk of Incident Coronary Heart Disease in Two Nested Case-Control Studies. PLoS ONE. 3 (1), el395.

276. Mallat Z., Besnard S., Duriez M., et al. 1999. Protective Role of Interleukin-10 in Atherosclerosis. Circ Res. 85 (8), el7-24.

277. Pinderski Oslund L.J., Hedrick C.C., Olvera T., et al. 1999. Interleukin-10 Blocks Atherosclerotic Events In Vitro and In Vivo. Arterioscler Thromb VascBiol. 19 (12), 2847-2853.

278. Von Der Thüsen J.H., Kuiper J., Fekkes M.L., et al. 2001. Attenuation of atherogenesis by systemic and local adenovirus-mediated gene transfer of interleukin-10 in LDLr-/- mice. FASEB J. 15 (14), 2730-2732.

279. Malarstig A., Eriksson P., Hamsten A., et al. 2008. Raised interleukin-10 is an indicator of poor outcome and enhanced systemic inflammation in patients with acute coronary syndrome. Heart. 94 (6), 724-729.

280. Plutzky J. 2001. Inflammatory pathways in atherosclerosis and acute coronary syndromes. The American Journal of Cardiology. 88 (8, Supplement 1), 10-15.

281. Clarke R., Xu P., Bennett D., et al. 2006. Lymphotoxin-alpha gene and risk of myocardial infarction in 6,928 cases and 2,712 controls in the ISIS case-control study. PLoS Genet. 2 (7), el07.

Информация о работе

Благодатских, Константин Александрович
кандидата биологических наук
Москва, 2011
ВАК 03.01.03

Диссертация

Изучение ассоциации полиморфных маркеров генов CRP, IL6, IL10, TNF и LTA с развитием неблагоприятного исхода у больных, перенесших острый коронарный синдром - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы