Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование влияния всасывания антидиуретического гормона в кишечнике у крыс на функции почки

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Исследование влияния всасывания антидиуретического гормона в кишечнике у крыс на функции почки"

На правах рукописи

Гао Цзе

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ВСАСЫВАНИЯ АНТИДИУРЕТИЧЕСКОГО ГОРМОНА В КИШЕЧНИКЕ У КРЫС НА ФУНКЦИИ ПОЧКИ

03.00.13 -Физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 2004

Работа выполнена на кафедре физиологии медицинского факультета Санкт-Петербургского государственного университета и в лаборатории физиологии почки и водно-солевого обмена Института эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук, академик РАН Л.Н. Иванова доктор биологических наук, чл.-корр. РАН Л Г. Магазаник Ведущее учреждение ГУ НИИ экспериментальной медицины РАМН Защита диссертации состоится 9 ноября 2004 г. в 11 часов на заседании диссертационного совета Д 002. 127.01 по защите диссертаций

на соискание ученой степени кандидата медицинских наук в Институте эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН по адресу: Санкт-Петербург, пр. М.Тореза, д. 44, конференц-зал.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Института эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН (Санкт-Петербург, пр. М.Тореза, д. 44). Автореферат разослан октября 2004 г.

Научный руководитель

академик РАН Ю.В. Наточин

доктор биологических наук

Ученый секретарь диссертационного сс

4SW

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Согласно существующим представлениям белки и полипептиды в желудочно-кишечном тракте разрушаются пептидазами в процессе пищеварения до аминокислот, ди- и трипептидов, которые при участии переносчиков всасываются клетками тонкой кишки в кровь (Adibi, 1997; Тимофеева и др., 2000). В условиях патологии при дефиците пептидных гормонов нейрогипофиза обычно их вводят внутримышечно или интраназально. В то же время имеются некоторые данные, которые противоречат этому утверждению, к ним относятся факты о всасывании белков (Мазо и др., 1989), использование минирина, лекарственной формы десмопрессина (DDAVP), для применения per os. Недавно было показано, что антидиуретический эффект аргинин-вазопрессина (АВП) может быть воспроизведен не только при инъекции гормона крысе, но и при его введении зондом в изолированную по методу Тири-Велла петлю кишки (Наточин и др., 2003). Очевидно, что изучение возможности всасывания в кишке естественных гормонов, являющихся циклическими нонапептидами, представляет физиологический интерес и может качественно изменить представление о всасывании пептидов в тонкой кишке. В экспериментах существенно было проанализировать условия всасывания естественных гормонов нейрогипофиза в желудочно-кишечном тракте здоровых животных.

Цель исследования. Проверка в прямом эксперименте возможности всасывания в кишечнике АВП и его естественных аналогов и изучение их влияния на функции почки у крыс.

Задачи исследования.

1. Исследование влияния АВП, аргинин-вазотоцина (АВТ), лизин-вазопрессина (ЛВП),

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

СПемрвт у Л/

о»

Vmt;

Ш

окситоцина и нзотоцина на осморегулирующую функцию почки крыс при их введении парентерально и per os

2 Исследование влияния пищевого режима на всасывание АВП в желудочно-кишечном тракте у крыс

3 Исследование влияния глюкозы на всасывание АВП в желудочно-кишечном тракте крыс

4 Исследование влияния апротинина на всасывание АВП при введении в желудочно-кишечный тракт у крыс

5 Исследование роли простагландинов, V1- и ^-рецепторов в реализации у крыс натрийуретического эффекта АВТ

Научная новизна

1 В опытах на крысах впервые показано, что при введении per os зондом в желудок аналоги АВП (АВТ, ЛВП) всасываются и оказывают антидиуретическое действие

2 Впервые показано, что при внутримышечной инъекции АВТ в отличие от АВП оказывает у крыс не только антидиуретическое, но и натрийуретическое действие

3 Впервые показано, что в условиях обычного пищевого режима реакция почки крыс на введение водной нагрузки в объеме 5% к массе тела носит характер волюморегулирующего ответа, а натощак - осморегулирующей реакции

4 Глюкоза не влияет на всасывания АВП в кровь из желудочно-кишечного тракта у крыс

5 Впервые показано, что введение в желудочно-кишечный тракт вместе с АВП ингибитора протеаз апротинина усиливает антидиуретическую реакцию

6 Впервые показано, что натрийуретический ответ почки крыс на инъекцию АВТ не

связан с активацией У г и Уз-рецепторов

Научно-практическая значимость работы Результаты диссертации используются в курсах лекций по физиологии, читаемых на медицинском факультете Санкт-Петербургского государственного университета.

Положения, выносимые на защиту.

1. При введении крысам зондом в желудок гормоны нейрогипофиза (АВП, АВТ, ЛВП) всасываются и оказывают антидиуретическое действие.

2. При внутримышечной инъекции АВТ в отличие от АВП оказывает у крыс не только антидиуретическое, но и натрийуретическое действие.

3 В условиях обычного пищевого режима реакция почки крыс на водную нагрузку носит характер волюморегулирующего ответа, а натощак - осморегулируюшего.

4. При введении 1%-го раствора глюкозы в желудок в сочетании с введением АВП или инъекции глюкоза не влияет на реакцию почки на АВП.

5. Введение в желудочно-кишечный тракт вместе с АВП ингибитора протеаз апротинина усиливается антидиуретическая реакция у крыс.

6. Увеличение экскреции натрия с мочой, вызванное внутримышечным введением крысам 0,05 нмоль АВТ, не связано с активацией Ур и Уг-рецепторов

Апробация работы. Результаты исследования доложены и обсуждены на 6-й и 7-й Всероссийских медико-биологических конференциях молодых исследователей «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2003 г и 2004 г.), на Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 175-летию со дня рождения Ф.В.Овсянникова <«Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2003 г.), на XIX Съезде Физиологического общества им И.П Павлова (Екатеринбург, Россия, 2004 г).

Публикации По теме диссертации опубликованы 2 статьи в реферируемых журналах и 5 тезисов докладов.

Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 177 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, характеристики материала и методов исследования, 5 глав результатов исследования, обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 160 источников. Диссертация иллюстрирована 34 таблицами и 109 рисунками.

Материалы и методы исследования

Эксперименты на крысах. Эксперименты проводили на ненаркотизированных белых крысах-самках линии Вистар, возраст 4-6 месяцев, масса тела 150 - 200 г Опыты выполнены в соответствии с международными стандартами по работе с экспериментальными животными. В работе была использована физиологическая модель практически полного подавления секреции эндогенного антидиуретического гормона (АДГ), для этого зондом в желудок ненаркотизированных крыс вводили водную нагрузку в объеме 5% от массы тела. В качестве экзогенного гормона были применены АВП (ICN Biomedicals Inc, USA Sigma Chemical Co, USA); ABT (Sigma Chemical Co, USA); ЛВП (ICN Biomedicals Inc, USA), окситошш (Sigma Chemical Co, USA); DDAVP (Ferring Pharmaceuticals, Czech, republic), изотоцин (ICN Biomedicals Inc, USA); антагонист ^-рецепторов (Sigma Chemical Co, USA); антагонист У2-рецепторов (Sigma Chemical Co, USA). В качестве ингибитора протеаз использован апротинин (Sigma Chemical Co, USA); ингибитора циклооксигеназы -диклофенак натрия (Hemofarm, Югославия).

Опыты проводили на крысах натощак и на накормленных животных. В первом варианте опыта животные утром предыдущего дня получали корм и в течение последующего времени им не давали пищи при свободном доступе к воде. Опыт начинали утром следующего дня, т.е. исследование проводили у животных натощак. Во втором варианте опытов крысы (сытые) имели свободный доступ к корму и воде утром за 2 часа до эксперимента им давали обычную утреннюю порцию корма, а затем приносили из вивария в лабораторию

Методы исследования. В каждой порции мочи и в сыворотке крови определяли осмоляльность, концентрацию креатинина, концентрацию ионов натрия, калия Осмоляльность оценивалась криоскопическим методом на миллиосмометре МТ-4 ("Буревестник", Санкт-Петербург). Исследование концентрации креатинина производилось методом Поппера и соавт (Popper et al., 1937) в модификации Ю.В. Наточина и Е.И. Шахматовой (1973). Исследование концентрации ионов натрия и калия производилось на пламенном фотометре Corning-410 (Англия) в воздушно-пропановом пламени с использованием стандартов фирмы Aldiich Chemical Company Inc. (США).

Результаты исследования

Исследование реакции почки на водную нагрузку, инъекции гормонов или введение в желудок АВП и его аналогов у крыс натощак.

Выведение водной нагрузки у крыс натощак. В опытах на крысах натощак для подавления секреции эндогенного АВП в желудок вводили водную нагрузку в объеме 5% к массе тела, что вызывало у ненаркотизированных крыс максимальное увеличение диуреза, экскреции осмотически свободной воды (Сто)- В течение 120 мин после введения водной нагрузки почки крыс выводили 92 9 ± 2.16% введенной в желудок воды. Объем выделенной мочи после введения воды составлял 4.62 ± 0.11мл на 100 г массы тела за 120 мин (р < 0.0001), у контрольной группы, которой воду не вводили, он был равен 0.76 ±0.11 мл/120 мин на 100 г массы тела. У этих крыс в течение 120 мин происходила реабсорбция осмотически свободной воды (0.95 ± 0.35 мл/120 мин на 100 г массы тела), а после водной нагрузки - экскреция осмотически свободной воды (2.61 ± 0.28 мл на 100 г массы тела за 120 мин, р<0.0001).

Реакция почки на внутримышечную инъекцию АВПи его аналогов после введения водной нагрузки у крыс натощак. При инъекции в мышцу АВП в дозах от 0.001 до 0.05 нмоль на 100 г массы тела на фоне водной нагрузки выделение воды уменьшается. Имеется зависимость между дозой инъецируемого в мышцу АВП и его антидиуретическим действием. После инъекции этого гормона практически не меняется выделение почкой ионов натрия и всех осмотически активных веществ (рис. 1). Инъекция АВП этим животным приводила к уменьшению мочеотделения за счет повышения реабсорбции осмотически свободной воды.

о

3 5 1 ■ КОНТРОЛЬ

>5

5 О -I-.--1-.-1

I О 0001 О 001 0 01 0 1 1

о

Гормон, нмоль

Рис. 1. Зависимость очищения от осмотически активных веществ от дозы инъецированного АВП или АВТ на фоне водной нагрузки.

Абсцисса - доза гормона в нмоль на 100 г массы тела, ордината - очищение от осмотически активных веществ почкой в мл за 120 мин в расчете на 100 г массы тела.

После инъекции в мышцу АВТ в дозах от 0.001 до 0.1 нмольА 00 г массы тела на фоне водной нагрузки величина пика мочеотделения была меньше, чем после водной нагрузки Особенность реакции почки крыс на инъекцию АВТ состоит в том, что рост мочеотделения происходит параллельно с повышением реабсорбции осмотически свободной воды Чем больше доза инъецированного АВТ, тем больше всасывание осмотически свободной воды. Требовалось объяснение этого парадоксального факта - одновременно нарастает мочеотделение и реабсорбция осмотически свободной воды. Анализ экскреции с мочой ионов показал, что возрастает выведение почкой ионов натрия. Сравнение салуретического и гидроосмотического эффекта введения различных доз АВП и АВТ крысам выявило качественно разную картину Имеется прямая зависимость между дозой инъецируемого в мышцу АВП и реабсорбцией воды в почке. Нет зависимости между дозой АВП и очищением от осмотически активных веществ (рис. 1), в то же время имеется прямая зависимость салуреза и реабсорбции осмотически свободной воды (Тн2о) от дозы АВТ.

После инъекции в мышцу ЛВП в дозах 0 005, 0.05 нмоль на 100 г массы тела на фоне водной нагрузки уменьшается выделение воды. При инъекции в мышцу 0 005 нмоль изотоцина на 100 г массы тела на фоне водной нагрузки антидиуретического эффекта не было, и почки экскретировали столько же мочи и осмотически свободной воды, как и после введения того же объема воды в виде водной нагрузки. Введение этих гормонов в различных дозах не вызывало выраженного натрийуреза, который наблюдался после инъекции АВТ. Нарастание мочеотделения после водной нагрузки было связано с созданием водонепроницаемости стенки канальца почки и реабсорбции ионов натрия, что способствовало экскреции, очищению от свободной от натрия воды.

Реакция почки на водную нагрузку и введение в желудок АВПу крыс натаьцак. При введении водной нагрузки в сочетании с введением в желудок АВП в дозах от 0.2 до 10 нмоль на 100 г массы тела выделение воды уменьшается. Возрастание мочеотделения наблюдается позже, чем при водной нагрузке, а величина пика мочеотделения становится меньше, чем во время водного диуреза в результате только введения воды в объеме 5% к массе тела (рис 2). Результаты опытов показали, что при введении водной нагрузки в сочетании с введением в желудок 5 нмоль АВП мочеотделение за первые 120 мин составляло 2.47+0.30 мл (р<0.001) на 100 г массы тела животного экскреция введенной водной нагрузки составляла 49.215.96% (р<0 001). Уменьшение диуреза происходило за счет снижения экскреции осмотически свободной воды с2 61±0.28 до 1.26±0.22(р<0.001)(табл. 1) Имеется прямая зависимость между дозой введенного в желудок АВП и временем наступления максимального диуреза. Величина экскреции осмотически свободной воды (Сто) зависит от дозы введенного в желудок АВП. Клиренс осмотически свободной воды снижается при увеличении дозы АВП. Найдена прямая зависимость между дозой введенного в желудок

АВП и экскрецией воды почками в % от объема введенной в желудок воды (рис. 3). а также

экскрецией почками осмотически свободной воды (рис. 4) Таблица 1.

Показатели деятельности почек крыс после введения водной нагрузки в сочетании с введением в желудок различных доз АВП.

Контроль, НзО АВП

Параметры + 0.2 нмоль 5.0 нмоль 10 нмоль

п=14 п=5 п=20 п=8

% выведения Н:0 92.9 + 2.16 89.5 ±2.14 49.2 ±5.96* 13.9 ±2.70***

V, мл 4.62 ±0.11 4.47 + 0.11 2.47 ±0.30* 0.70 ±0.14 ***

Сшо, мл 2.61 + 0.28 3.02 ±0.13 1.26 ±0.22* -0.087 + 0.12***

Соот, мл 1.97 + 0 28 1.40 + 0 06 1.21 ±0.12 0.78 ± 0.09 **

Ск», мл 0.55 ±0.13 0.37 ±0.08 0.27 + 0.05 0.099 ± 0.02*

МКМОЛЬ 80.9 ± 19.1 55.2+12.5 40.1 ±7.08 14.6 ±3.46*

МКМОЛЬ 52.7 ±11.2 31.1 ±4.79 32.2 ± 5.06 12.1 ±2.82*

Ссг, мл 30.4 ±3.49 28.2 ± 1.60 31.6 ±2.06 26.5 ±4.0

ио_У, мкосм 562 ± 79.3 425 ± 17.6 353 ±35.1 229 + 26.2

Примечание. Достоверность отличий по сравнению с введением водной нагрузки: * р<0.05; ** р<0.001; ***р<0.0001.

+ Все данные представлены из расчета на 100 г массы тела за 120 мин. % выведения - экскреция мочи в % от объема введенной в желудок воды.

При введении водной нагрузки в сочетании с введением в желудок АВТ в дозе 3 нмоль на 100 г массы тела мочеотделение уменьшается (рис. 2), в тех же условиях 5 нмоль ЛВП на 100 г массы тела на фоне водной нагрузки так же снижает выделение воды (рис. 2)

Рис 2 Влияние на мочеотделение (V) введения в желудок 5 мл воды на 100 г массы тела в сочетании с введением нейропепгида

Абсцисса - время опыта в мин, ордината - диурез (V) в мл/мин на 100 г массы тела Стрелка - введение в желуцок, воды и гормона

Рис 3 Зависимость экскреции введенной в желудок воды от дозы введенного в желудок АВП или АВТ на фоне водной нагрузки

Абсцисса - доза введенного в желудок гормона в нмоль на 100 г массы тела, ордината -экскреция мочи в % от введенной в желудок воды в мл за 120 мин в расчете на 100 г массы

тела

О -3 -1

О--1-1—

0001 001

-2 -

Т-1-

Гормон, нмсшь

01 1 10 100

■ контроль о АВП ДАВТ

Рис 4 Зависимость выведения осмотически свободной воды почкой от дозы введенного в желудок АВП или АВТ на фоне водной нагрузки

Абсцисса - доза введенного в желудок гормона в нмоль на 100 г массы тела, ордината -очищение от осмотически свободной воды в мл за 120 мин в расчете на 100 г массы тела

При введении в желудок 5 нмоль изотоцина или окситоцина в дозах 1 нмоль и 10 нмоль на 100 г массы тела на фоне водной нагрузки антидиуретического эффекта не было, и почки экскретировали столько же мочи и осмотически свободной воды, как и после введения того же объема воды в виде водной нагрузки При введении в желудок 0 01 нмоль ББАУР на 100 г массы тела на фоне водной нагрузки выделение воды уменьшается Полученные результаты свидетельствуют о возможности всасывания неизмененной молекулы нонапептидав кровь

Исследование реакции почки крыс на фоне водной нагрузки на инъекцию или введение

в желудок АВП и его аналогов при стандартном режиме кормления

Исследование реакции почки крыс на фоне водной нагрузки на инъекцию АВП и его

аналогов при стандартном режиме корм кипя После введения зондом в желудок воды в объеме 5 мл на 100 г массы тела крысам натощак у них в течение первых 30 мин развивался водный диурез, в 100 - 160 раз увеличивалось мочеотделение, затем оно снижалось к концу 2-го ч У голодных крыс рост мочеотделения определялся снижением проницаемости стенки канальцев для воды и повышением экскреции осмотически свободной воды Осмоляльность мочи снижалась до 56 ± 5 мосм/кг Н2О, экскреция осмотически свободной воды достигала

0 13 ± 0 02 мл/мин на 100 г массы тела У сытых животных пик диуреза был в то же время, как у голодных, но величина пика была меньше, иным был физиологический механизм возросшего диуреза У сытых животных после введения той же по объем)' водной нагрузки прирост мочеотделения зависел от повышения осмоляльного очищения и в меньшей степени от увеличения очищения от осмотически свободной воды Доля экскреции воды, связанной с осмотически активными веществами, у этой группы животных на максимуме диуреза была в

1 56 раза выше, чем у голодных крыс. Скорость клубочковой фильтрации на максимуме диуреза не отличалась у голодных и сытых животных - 0 46 ± 0 08 и 0 50 ± 0 04 мл/мин на 100 г массы тела, соответственно. Очищение свободной от натрия воды и выведение осмотически активных веществ и осмотически связанной с ними воды имели определяющее значение в возрастании экскреции жидкости почкой у получивших водную нагрузку накормленных животных (рис. 5, 6)

Рис. 5. Динамика выведения осмотически свободной воды почкой после введения в желудок 5 мл воды на 100 г массы тела крысам натощак и сытым

Абсцисса - время опыта в мин, ордината - выведение осмотически свободной воды почкой (Сн20) в мл/мин на 100 г массы тела. Стрелка — введение в желудок воды

Рис. 6 Влияние на осмоляльное очищение введения в желудок 5 мл воды на 100 г массы тела крысам натощак и сытым.

Абсцисса - время опыта в мин, ордината - осмоляльное очищение (Сояп) в мл/мин на 100 г массы тела.

Стрелка - введение в желудок воды.

Таким образом, введение воды зондом в желудок голодным и сытым животным сопровождалось выведением избытка введенной жидкости, однако у голодных животных реакция была специфической, осморегулирующей, направленной на удаление избытка

введенной воды и восстановление нормальных значений осмоляльности крови В то же время у накормленных животных реакция почки носила характер волюморегулируюшего ответа- выводились вода и ионы, выделение осмотически свободной воды было снижено по сравнению с животными, которым вода вводилась в желудок натощак.

В опытах на крысах натощак и у сытых животных внутримышечно инъецировали 0.005 нмоль АВП на 100 г массы тела В этой дозе гормон уменьшает выделение водной нагрузки у крыс натощак приблизительно на 50 %. В проведенных экспериментах у крыс натощак общий объем выделенной мочи составил за первые 60 мин около 65 % от водной нагрузки, а собственно выведение осмотически свободной воды достигло 40 % от введенного объема воды После инъекции АВП выделение мочи за 120 мин снизилось до 52%, по сравнению с 93% у крыс натощак в опытах с введением воды без инъекции гормона (р<0.0001). У голодных крыс диурез и выведение осмотически свободной воды после инъекции гормона на фоне водной нагрузки смещались на второй час. Накормленные животные слабо реагировали на эту дозу АВП. Это утверждение основано на сопоставлении данных опытов до введения гормона и после его инъекции. Основной параметр действия АВП, экскреция осмотически свободной воды, уменьшался после инъекции АВП по сравнению с введением в желудок водной нагрузкой. Экскреция ионов, осмотически активных веществ, выведение натрия, калия, очищение свободной от натрия воды, выведение осмотически активных веществ и осмотически связанной с ними воды имели определяющее значение в возрастании экскреции жидкости почкой у получивших водную нагрузку накормленных животных. При инъекции в мышцу АВТ в дозе 0.005 нмоль на 100 г массы тела на фоне водной нагрузки натощак и у сытых животных оказывал антидиуретическое действие. Этот эффект влияет на функцию почки натощак и у сытых животных так же, как при инъекции в мышцу АВП в

дозе 0.005 нмоль на 100 г массы тела на фоне водной нагрузки натощак и у сытых животных Исстедованиереакции почки крыс на фоне водной нагрузки на введение в желудок АВП и его аналогов при стандартном режиме кормления. При введении в желудок 5 нмоль АВП, 0 01 нмоль DDAVP на 100 г массы тела на фоне водной нагрузки натощак и у сытых животных наступало антидиуретическое действие, этот эффект на функцию почки натощак и у сытых крыс сопоставим с влиянием инъекции в мышцу АВП в дозе 0 005 нмоль на 100 г массы тела на фоне водной нагрузки натощак и у сытых животных.

Влияние одновременного введения АВП и глюкозы в желудочно-кишечный тракт на антидиуретическую реакцию почки крыс Опыты с введением 5 мл 1%-го раствора глюкозы крысам натощак показали, что происходит снижение выведения водной нагрузки (р < 0.05), уменьшение выведенной за 2 часа мочи, ионов натрия и калия (р < 0 05), экскреция осмотически свободной воды за 2 часа статистически значимо не изменялась по сравнению с введением водной нагрузки.

При введении в желудок 5 мл на 100 г массы тела 1%-го раствора глюкозы и инъекции 0 005 нмоль АВП у крыс натощак экскреция мочи и экскреция осмотически свободной воды снижались по сравнению с введением только 1%-го раствора глюкозы (р < 0.05) Объем выведенной за 2 часа жидкости, выведение натрия и осмотически активных веществ у животных при инъекции АВП на фоне введения глюкозы и без нее были практически одинаковы. При введении в желудок 5 имоль АВП вместе с 1%-ым раствором глюкозы животным натощак снижалась экскреция осмотически свободной воды по сравнению с введением только 1%-го раствора глюкозы (р < 0.05), но не наблюдалось никаких статистически значимых изменений по сравнению с введением в желудок воды и 5 нмоль АВП. При введении 5 мл 1%-го раствора маннита крысам натошак не найдено изменения

выведения водной нагрузки, объема выведенной за 2 часа мочи, ионов натрия и калия, экскреции осмотически свободной воды по сравнению с введением водной нагрузки Таким образом, наличие глюкозы в желудочно-кишечном тракте не влияет на реакцию почки на АВП. Образование осмотически свободной воды не изменялось при введении 5 мл 1%-го раствора глюкозы по сравнению с введением водной нагрузки ни у крыс натощак, ни у сытых животных.

Влияние апротинина на функцию почки крыс при введении АВП в желудок В экспериментах на белых крысах в условиях водного диуреза изучена осморегулирующая функция почки при применении АВП вместе с апротинином Введение крысам 5 нмоль АВП на 100 г массы тела через зонд в желудочно-кишечный тракт вместе с водной нагрузкой вызывало выраженную антидиуретическую реакцию почек. Введение апротинина вместе с АВП приводило к усилению действия АВП, клиренс осмотически свободной воды (Сн20) становится отрицательным, что указывает на реабсорбцию воды в почечных канальцах Полученные данные свидетельствуют о том, что апротинин, вызывая замедление гидролиза нонапептидов в кишке, улучшает возможность их всасывания и, тем самым, усиливает антидиуретическую реакцию почки

Влияние диклофенака натрия и антагонистов Vt- и У2-рецепторов на действие АВТ на функции почки крыс В опытах на крысах исследован ответ почки на инъекцию АВТ при неселективной блокаде синтеза простаноидов диклофенаком натрия и при введении антагонистов Vt- и У2-рецепторов Применение диклофенака натрия не изменило диурез, скорость клубочковой фильтрации, экскрецию осмотически свободной воды и осмотически активных веществ, в том числе, ионов натрия

Одновременное введение антагониста Угрецепторов и АВТ на фоне водной нагрузки не

привело к статистически значимым изменениям диуреза и скорости клубочковой фильтрации Однако, блокада ^-рецепторов повысила реабсорбцию осмотически свободной воды и вызвала увеличение экскреции осмотически активных веществ, в частности, ионов натрия и калия (табл. 2). Блокада ^-рецепторов способствует увеличению эффекта стимуляции V1-рецепторов АВТ (Gonchaгevskaya et эй., 1995), что объясняет полученные нами результаты. Применение антагониста ^-рецепторов не отразилось на уровне диуреза, скорости

Таблица 2.

Показатели деятельности почек крыс после введения в желудок водной нагрузки (Н2О) в сочетании с внутримышечной инъекцией АВТ, АВТ с антагонистами V]- и Уг-рецепторов.

Параметры* ьуэ + 0.05 нмоль АВТ п=10 НгО +0.05 нмоль АВТ + V, п=10 НгО + 0.05 нмоль АВТ + v2 пЧО

% выведения Н20 23.1 ± 1.7 ■ 34.2+4.5 28.0 ±5.8

V. мл 1.16 + 0.31 1.71 ±022 1.40 ±0.29

Сто, мл -0.77 ±0.38 -1.74 ±0.24* -1.75 ±0.27*

Ссвт, мл 1.93 ±0.41 3.45 ±0.40* 3.15 ±0.54

См. мл 107 ±0.34 2.18 ±0.25* 2.0 ± 0 49

Uj,«V, мкмоль 159 ±50.5 324+37.1* 264 ±65

UkV, МКМОЛЬ 55.6 ±13 98.0 ±12* 71.2 ± 14.5

Со. мл 28.0 ±4.7 27.8 ±3.3 22.3 ±1.4

Цэ«тЧ MHDCM 563 ±119 1006 ±118* 776 ±154

Примечание. Достоверность отличий после водной нагрузки в сочетании с внутримышечной инъекцией АВТ с антагонистами У)-, Уг-рецепторов дана по сравнению с группой инъекции АВТ: * р<0.05.

* Все данные представлены из расчета на 100 г массы тела за 120 мин % выведения НгО - экскреция мочи в % от объема введенной в желудок воды.

клубочковой фильтрации, экскреции осмотически активных веществ и отдельных ионов Введение АВТ на фоне блокады У2-рецепторов привело к увеличению реабсорбции осмотически свободной воды (табл. 2). Такой парадоксальный эффект объясним тем, что на фоне увеличения проницаемости собирательных трубок отмечается нарастание потока по канальцу жидкости (Кшпе^оуа й а1., 2000)

Проведенное исследование не выявило участие простагпандинов в натрийуретической реакции почки крысы на введение АВТ. Введение АВТ на фоне неселективной блокады синтеза простаноидов диклофенаком натрия приводит к уменьшению натрийуреза и реабсорбции осмотически свободной воды, связанных с действием АВТ. Это влияние отсутствует на максимуме реакции на введение АВТ на фоне водной нагрузки Полученные результаты позволяют предположить, что в повышении экскреции натрия в ответ на введение АВТ не участвуют простагландины, но после прекращения действия АВТ продуцируемые под действием циклооксигеназ простаноиды участвуют в регуляции выведения натрия с мочой

Заключение

Полученные результаты свидетельствуют о том, что естественные гормоны нейрогипофиза позвоночных (АВП, АВТ, ЛВП) могут всасываться в желудочно-кишечном тракте и оказывать специфическое антидиуретическое действие на почку. При введении водной нагрузки в сочетании с введением в желудок АВП, ЛВП или АВТ оказывают выраженное антидиуретическое действие. После инъекции в мышцу АВТ на фоне водной нагрузки оказывал выраженное антидиуретическое и натрийуретическое действие. Этот эффект имеет критическое значение и вероятно эволюционно он оказался неприемлемым для некоторых групп животных Для млекопитающих сохранение ионов натрия в организме

имеет исключительное значение. Сохранение в организме этих ионов с сопровождающими анионами обеспечивает удержание необходимого объема внеклеточной жидкости и плазмы крови. Вероятно этот факт оказался столь значимым, что у млекопитающих сменился АВТ на АВП (или ЛВП). В условиях обычного пищевого режима реакция почки на водную нагрузку носит характер волюморегулирующего ответа, а у крыс натощак - специфического, осморегулирующего. При введении 1%-го раствора глюкозы в желудок в сочетании с введением АВП, или инъекцией АВП показано, что глюкоза не влияет на всасывание АВП Введение в желудочно-кишечный тракт АВП вместе с ингибитором протеаз апротинином усиливает антидиуретическую реакцию. Одновременное введение антагониста V -рецепторов и АВТ, или антагониста ^-рецепторов и АВТ на фоне водной нагрузки показало, что блокада Vi-рецепторов повысила реабсорбцию осмотически свободной воды и вызвала увеличение экскреции осмотически активных веществ, в частности, ионов натрия и калия, что может найти объяснение в усилении эффекта иных типов рецепторов.

Выводы

1. Изучение антидиуретической активности нонапептидов нейрогипофиза позвоночных показало, что после парентерального введения крысам линии Вистар АВП, АВТ, ЛВП, но не изотоцин, увеличивают реабсорбцию осмотически свободной воды в почке.

2. После введения АВП, АВТ и ЛВП зондом в желудок крыс они оказывают антидиуретическое действие и усиливают реабсорбцию осмотически свободной воды в почке.

3. При парентеральном введении крысе АВТ, но не АВП, оказывает не только антидиуретическое, но и выраженное натрийуретическое действие.

4. Установлены отличия ответа почки крыс на введение в желудок воды в объеме 5% к массе тела в зависимости от пищевого режима: в условиях обычного кормления реакция на водную нагрузку носит характер волюморегулирующей, а натощак -осморегулируюшей.

5 Введение глюкозы или маннита вместе с АВП в желудочно-кишечный тракт не влияет на всасывание нонапептида в кровь крыс.

6. Введение d желудочно-кишечный тракт вместе с АВП ингибитора протеаз апротинина усиливает антидиуретическую реакцию.

7. Внутримышечное введение крысам 0.05 нмоль АВТ на фоне блокады Vt- или. Vj-рецепторов показано, что увеличение экскреции натрия с мочой не связано с участием Уг иУ2-рецепторов.

8. Натрийуретический ответ почки крысы на инъекцию АВТ не связан с изменением секреции простаноидов.

9. Полученные результаты свидетельствуют о возможности всасывания в кишечнике крыс кольцевых нонапептидов с сохранением антидиуретической гормональной активности

Список работ, опубликованных по теме диссертации I. Статьи в реферируемых журналах

1. Гао Цзе, Шахматова Е.И., Наточин Ю В. "Исследование реакции почки крыс на водную нагрузку и вазопрессин при нормальном кормлении и натощак". Рос. физиол. журн им И

М. Сеченова, 2004, т. 90, № 2, с. 202-211.

2. Гао Цзе, Наточин Ю В. "Эволюционные преимущества участия вазопрессина вместо вазотоцина в регуляции водно-солевого обмена у млекопитающих". Журн. эволюц. биох. и физиол. 2004, т. 40, № 2, с. 168-172. 1Ь Тезисы докладов

1. Гао Цзе "Изучение возможного влияния аргинин-вазотоцина на функции почки у крыс ". Шестая Всероссийская медико-биологическая конференция молодых ученых "Человек и его здоровье" (Санкт-Петербург, 2003 г.), с. 94.

2. Гао Цзе "Исследование осморегулирующей функции почки крыс после введения в желудок аргинин-вазопрессина и водной нагрузки". Всероссийская конференция с международным участием, посвященная 175-летию со дня рождения Ф.В.Овсянникова «Механизмы функционирования висцеральных систем » (Санкт-Петербург, 2003 г.), с. 64.

3. Гао Цзе "Исследование влияния всасывания антидиуретического гормона в кишечнике на функции почки у крыс". Седьмая Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей "Человек и его здоровье" (Санкт-Петербург, 2004 г.), с. 312.

4. Канашкина Т.А., Гао Цзе, Боголепова А.Е. "Изучение участия циклооксигназы в натрийуретической реакции почки крысы на введение аргинин-вазотоцина''. Седьмая Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей "Человек и его здоровье" (Санкт-Петербург, 2004 г.), с. 113.

5. Гао Цзе " Исследование влияния на функции почки всасывания антидиуретического гормона в кишечнике у крыс". XIX Съезд Физиологического общества им. И.П. Павлова (Екатеринбург, Россия, 2004 г.), Рос. Физиол журн. им. И.М. Сеченова, 2004 г., т. 90, № 8. ч 2. с. 61.

РНБ Русский фонд

2005-4 15424

Тиражирование и брошюровка выполнены в Центре "Университетские Телекоммуникации". Санкт-Петербург, Саблинская ул., 14 Тел. (812) 233-46-69. Лицензия ПДЛ № 69-182 от 26.11.96 Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Гао, Цзе

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Механизм действия вазопрессина в почке

1.2. Источники поступления в кровь вазопрессина и механизмы регуляции его секреции

Глава 2. Материал и методы

Глава 3. Результаты

3.1. Исследование реакции почки крыс на водную нагрузку и инъекцию 43 аргинин-вазопрессина и его аналогов

3.1.1. Выведение водной нагрузки у крыс натощак

3.1.2. Реакция почки на внутримышечную инъекцию аргинин-вазопрессина и его 47 аналогов после введения водной нагрузки у крыс натощак

3.1.3. Исследование реакции почки крыс на водную нагрузку и инъекцию аргинин-вазопрессина и аргинин-вазотоцина при стандартном режиме кормления

3.2. Исследование реакции почки крыс на водную нагрузку и введение в желудок аргинин-вазопрессина и его аналога

3.2.1. Реакция почки на водную нагрузку и введение в желудок 92 аргинин-вазопрессина у крыс натощак

3.2.2. Реакция почки на водную нагрузку и введение в желудок 100 аргинин-вазотоцина у крыс натощак

3.2.3. Реакция почки на водную нагрузку и введение в желудок 107 лизин - вазопрессин, десмопрессин, изотоцин и окситоцин у крыс натощак

3.2.4. Исследование реакции почки крыс на водную нагрузку и введение 114 в желудок аргинин-вазопрессина и десмопрессина при стандартном режиме кормления

3.3. Влияние одновременного введения аргинин-вазопрессина и глюкозы в желудочно-кишечный тракт на антидиуретическую реакцию почки крыс 3. 4. Влияние апротинина на функцию почки крыс при введении в желудок аргинин-вазопрессина

3.5. Влияние церебрекса, диклофенака и антагонистов Vi-, и Уг-рецепторов на действие аргинин-вазотоцина на функции почки крыс

Глава 4. Обсуждение

Глава 5. Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование влияния всасывания антидиуретического гормона в кишечнике у крыс на функции почки"

Актуальность проблемы. Согласно существующим представлениям белки и полипептиды в желудочно-кишечном тракте разрушаются пептидазами в процессе пищеварения до аминокислот, ди- и трипептидов которые при участии переносчиков всасываются клетками тонкой кишки в кровь (Adibi, 1997; Тимофеева и др., 2000). В условиях патологии при дефиците пептидных гормонов нейрогипофиза обычно их вводят внутримышечно или интраназально. В то же время имеются некоторые данные, которые противоречат этому утверждению, к ним относятся факты о всасывании белков (Мазо и др., 1989), использование минирина, лекарственной формы DDAVP, для применения per os. Недавно было показано, что антидиуретический эффект АВП может быть воспроизведен не только при инъекции гормона крысе, но и при его введении зондом в изолированную по методу Тири-Велла петлю кишки (Наточин и др., 2003). Очевидно, что изучение возможности всасывания в кишке естественных гормонов, являющихся циклическими нонапептидами, представляет физиологический интерес и может качественно изменить представление о всасывании пептидов в тонкой кишке. В экспериментах существенно было проанализировать условия всасывания естественных гормонов нейрогипофиза в желудочно-кишечном тракте здоровых животных.

Цель исследования. Проверка в прямом эксперименте возможности всасывания в кишечнике АВП и его естественных аналогов и изучение их влияния на функции почки у крыс.

Задачи исследования.

1) Исследование влияния АВП, АВТ, ЛВП, окситоцина и изотоцина на осморегулирующую функцию почки крыс при их введении парентерально и per os.

2) Исследование влияния пищевого режима на всасывание АВП в желудочно-кишечном тракте у крыс.

3) Исследование влияния глюкозы на всасывание АВП в желудочно-кишечном тракте крыс.

4) Исследование влияния апротинина на всасывание АВП при введении в желудочно-кишечный тракт у крыс.

5) Исследование роли простагландинов, Vi- и Уг-рецепторов в реализации у крыс натрийуретического эффекта АВТ.

Научная новизна.

1) В опытах на крысах впервые показано, что при введении per os зондом в желудок аналоги АВП (АВТ, ЛВП) всасываются и оказывают антидиуретическое действие.

2) Впервые показано, что при внутримышечной инъекции АВТ в отличие от АВП оказывает у крыс не только антидиуретическое, но и натрийуретическое действие.

3) Впервые показано, что в условиях обычного пищевого режима реакция почки крыс на введение водной нагрузки в объеме 5% к массе тела носит характер волюморегулирующего ответа, а натощак - осморегулирующей реакции.

4) Глюкоза не влияет на всасывания АВП в кровь из желудочно-кишечного тракта у крыс.

5) Впервые показано, что введение в желудочно-кишечный тракт вместе с АВП ингибитора протеаз апротинина усиливает антидиуретическую реакцию.

6) Впервые показано, что натрийуретический ответ почки крыс на инъекцию АВТ не связан с активацией Vi- и У2-рецепторов.

Научно-практическая значимость работы. Результаты диссертации используются в курсах лекций по физиологии, читаемых на медицинском факультете Санкт-Петербургского государственного университета. Положения, выносимые на защиту.

1) При введении крысам per os зондом в желудок гормоны нейрогипофиза (АВП, АВТ, ЛВП) всасываются и оказывают антидиуретическое действие.

2) При внутримышечной инъекции АВТ в отличие от АВП оказывает у крыс не только антидиуретическое, но и натрийуретическое действие.

3) В условиях обычного пищевого режима реакция почки крыс на водную нагрузку носит характер волюморегулирующего ответа, а натощак -осморегулируюшего.

4) При введении 1%-го раствора глюкозы в желудок в сочетании с введением АВП или инъекции АВП глюкоза не влияет на реакцию почки на АВП.

5) Введение в желудочно-кишечный тракт вместе с АВП ингибитора протеаз апротинина усиливает антидиуретическую реакцию у крыс.

6) Увеличение экскреции натрия с мочой, вызванное внутримышечным введением крысам 0,05 нмоль АВТ, не связано с активацией Vi- и Уг-рецепторов. Апробация работы. Результаты исследования доложены и обсуждены на 6-й и 7-й Всероссийских медико-биологических конференциях молодых исследователей «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2003 г. и 2004 г.), на Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 175-летию со дня рождения Ф.В.Овсянникова «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2003 г.), на XIX Съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова (Екатеринбург, Россия, 2004 г).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 2 статьи в реферируемых журналах и 5 тезисов докладов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 177 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, характеристики материала и методов исследования, 5 глав результатов исследования, обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 160 источников. Диссертация иллюстрирована 34 таблицами и 109 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Гао, Цзе

1. Изучение антидиуретической активности нонапептидов нейрогипофиза позвоночных показало, что после парентерального введения крысам линии Вистар АВП, АВТ, ЛВП, но не изотоцина, увеличивают реабсорбцию осмотически свободной воды в почке.2. После введения АВП, АВТ и ЛВП зондом в желудок крыс они оказывают антидиуретическое действие и усиливают реабсорбцию осмотически свободной воды в почке.3. При парентеральном введении крысе АВТ, но не АВП, оказывает не только антидиуретическое, но и выраженное натрийуретическое действие.4. Установлены отличия ответа почки крыс на введение в желудок воды в объеме 5% к массе тела в зависимости от пищевого режима: в условиях обычного кормления реакция на водную нагрузку носит характер волюморегулирующей, а натощак - осморегулирующей.5. Введение глюкозы или маннита вместе с АВП в желудочно-кишечный тракт не влияет на всасывание нонапептида в кровь крыс.6. Введение в желудочно-кишечный тракт вместе с АВП ингибитора протеаз апротинина усиливает антидиуретическую реакцию.7. Внутримышечное введение крысам 0,05 нмоль АВТ на фоне блокады Vi-

или Уг-рецепторов показано, что увеличение экскреции натрия с мочой не связано с участием Vi- и Уг-рецепторов.8. Натрийуретический ответ почки крысы на инъекцию АВТ не связан с изменением секреции простаноидов.9. Полученные результаты свидетельствуют о возможности всасывания в кишечнике крыс кольцевых нонапептидов с сохранением антидиуретической гормональной активности.Приношу искреннюю и глубокую благодарность Юрию Викторовичу НАТОЧИНУ, которому я обязана за повседневное научное руководство и помощь, оказанную при выполнении этой работы

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Гао, Цзе, Санкт-Петербург

1. Боголепова А.Е., Кузнецова А.А., Лукичев Б.Г., Наточин Ю.В., Папаян А.В., Пруцкова недостаточности. Н.П., Рябов СИ., Шахматова Е.И. Исследование роли простагландина Е 2 в регуляции мочеотделения при хронической почечной недостаточности и ночном энурезе. Нефрология. 2001. Т.5. №4. 15-

2. Вандер .„Физиология почек: Пер. с англ. СПб. Питер. 2

3. Великанова Л.К. Осморецепторы. Новосибирск. Наука. 1985. 88С. Гинецинскгш А.Г. Физиологические механизмы водно-солевого равновесия. М. Л. Изд-во АН СССР. 1963. 426С. Дани М.Днс. Почечные простагландины. Почечная эндокринология. Ред. М.Дж.Данн. М. Медицина. 1987. 11-

4. Дедов И.И., Мельниченко Г.А., Фадеев В.В. Эндокринология. М. Медицина. 2000. 632С. Иванова Л.Н. Антидиуретический гормон. В кн.: Физиология почки и водно-солевого обмена. В сер. Основы современной физиологии. СПб. Наука. 1993. 46-

5. Кеттайл В.М., Арки Р.А. Патофизиология эндокринной системы. Пер. с англ. М. Бином. СПб. Невский диалект. 2001. 336С. Кокосов А.Н. (ред.) Основы пульмонологии. Руководство для врачей. М. Медицина. 1

6. Константинова М.С., Наточин Ю.В. Гормоны нейрогипофиза вазопрессин и окситоцин. В кн. Физиология эндокринной системы. (Руководство по физиологии.) Л. Наука. 1979. 90-

7. Кузнецова А.А., Наточин Ю.В., Папаян А.В. Клиническая эффективность коррекции функции почки десмопрессином в лечении ночного энуреза у детей. Рос. вестник перинатол. и педиатр. 1999. №2. 50-

8. Мазо В.К., Морозов И.А., Ширина Л.К Всасывание белковых макромолекул в желудочно-кишечном тракте млекопитающих. Усп. физиол. наук. 1989. Т.20. №3. 65

9. Москалев Ю.И. Минеральный обмен. М. Медицина. 1985. 288С. 166

10. Наточин Ю.В. Основы физиологии почки. Л. Медицина. 1982. 208С. Наточин Ю.В. Эволюция водно-солевого обмена и почки. Эволюционная физиология. Ч. 2. Л., Наука, 1983. 371-

11. Наточин Ю.В. Вазопрессин. В кн.: Физиология почки и водно-солевого обмена. В сер. Основы современной физиологии. СПб. Наука. 1993. 449-

12. Наточин Ю.В. Почка. Справочник врача. СПб: Изд-во СПбГУ, 1997. 208С. Наточин Ю.В. Новое о природе регуляций в организме человека. Вестник РАН. 2000. Т.70. №1. 21-

13. Наточин Ю.В. Архитектура физиологических функций: тот же фундамент, новые грани. Рос. физиолог, журн. им. И.М.Сеченова. 2002. 88(2). 129-

14. Наточин Ю.В., Кузнецова А.А. Ночной энурез как проявление аутакоидоза. Тер. арх. 1997. №12. 67-

15. Наточин Ю.В., НемцовВ.К, Эмануэль B.JI. Биохимия крови и диагностика. СПб. 1

16. Наточин Ю.В., Пруцкова Н.П. Всасывание функционально активного аргинин вазопрессина в тонкой кишке лягушки. ДАН. 2004. Т.394. №5. 700-

17. Наточин Ю.В., Пруцкова НИ, Шахматова Е.И. Динамика увеличения осмотической проницаемости и восстановления водонепроницаемости мочевого пузыря лягушки. Рос. Физиол. журн. 2001. Т.87. №.8. 1095-1

18. Наточин Ю.В., Пруцкова НИ, Шахматова ЕЙ., Груздков А.А., Громова Л.В. Исследование возможности всасывания интактных нонапептидов в изолированной тонкой кишке крыс in vivo. ДАН. 2003. Т.388. №.4. 558-

19. Наточин Ю.В., Рябое СИ., Каюков И.Г., Лаврова Е.А., Шахматова Е.И., Эммануэль В.И. Показатели водно-солевого гомеостаза и их вариабельность. Физиология человека. 1980. Т.60. №4. 647-

20. Наточин Ю.В., Григорьев А.И., Буравкова Л.Б., Ларина ИМ., Лруг/кова Н.П, Шахматова Е.И. Антидиуретическая реакция почек человека и крысы при пероральном введении аргинии-вазопрессина и десмопрессина всасывания интактных нанопептидов в изолированной тонкой кишке крыс. Рос. физиол. журн. им. И.М.Сеченова. 2003. Т. 89. №2. 184-

21. Наточин Ю.В., Шахматова Е.И. Исследование возможности всасывания антидиуретического гормона в изолированной тонкой кишке крысы. Бюлл. экспер. биол. и мед. 2004. Т. 137. №1. 4-7. 167

22. Поленов А.Л. Гипоталамическая нейросекреция. Л. Наука. 1968. 159С. Пруткова Н.П. Анализ роли аутакоидов в регуляции проницаемости для воды эпителия мочевого пузыря лягушки. Нефрология и диализ. 2003. Т.5. №3. 239-

23. Пруцкова Н.П., Шахматова Е.И., Наточин Ю.В. Изучение функциональной роли Vi- и Уг-рецепторов апикальной и базолатеральной мембран клеток эпителия мочевого пузыря лягушки. Рос. физиол. журн. им. И.М.Сеченова. 2000. Т.86. №1. 76-

24. Родионова Е.А., Наточин Ю.В. Влияние вазотоцина и простагландина Ег на всасывание воды и ионов в толстой кишке травяной лягушки. Рос. физиол. журн. им. И.М.Сеченова. 2002. Т.88. №5. 634-

25. Селиверстова Е.В., Шахматова Е.И., Комиссарчик Я.Ю., Пруг/кова Н.П., Снигиревская Е.С., Наточин Ю.В. Иммуноцитохимическая локализация вазопрессина при его всасывании клетками эпителия тонкой кишки крысы. Цитология. 2004. №11. 953 -

26. Aikawa Т., Kasahara Т., Uchiyama M. Circadian variation of plasma arginine vasopressin concentration, or arginine vasopressin in enuresis. Scand. J. Urol. Nephrol. Suppl. 1999. N.202. P.47-49. 168 mechanisms and metabolic

27. Ando Y., Tabei K., Ascmo Y. Luminal vasopressin modulates transport in the rabbit cortical collecting duct. J. Clin. Invest. 1991. Vol.88. К З P.952-

28. Antiines-Rodrigues J., de CaElias L.L., Valenca MM., Mc Cann S.M. Neuroendocrine control of body fluid metabolism. Physiol. Rev. 2004. Vol.84. N.l. P. 169-

29. Balduini C.L., Noris P., Belletti S., Spedini P., Gamba G. In vitro and in vivo effects of desmopressin on platelet function. Haematologica. 1999. Vol.84. N.10. P. 891-

30. BaylisC, BIcmtzRC. Glomerular hemodynamics. News Physiol. Sci. 1986. Vol.1. P. 86-

31. Bentley P.J. In: Endocrines and osmoregulation. A comparative account of the regulation of water and salt in vertebrates. Berlin, Heidelberg, New. York. Springer. 1

32. Bondy C.A., Gainer H., Russel J.T. Effects of stimulus frequency and potassium channel blockade on the secretion of vasopressin Neuroendocrinology. 1987. Vol.46. P. 258-

33. Borges E.L., de Fatima Leite M., Barbosa A.J., Alves J.B. Route of jejunal absorption of trypsin demonstrated by immunofluorescence. Histochem. J. 2002. Vol.34. N.l 1-12. P.525-

34. Bourque C.W. Intraterminal recordings from the rat neurohypophysis in vitro. J. Physiol. 1990. Vol.421. P.247-

35. Bourque C.W., Oliet S.H. Osmoreceptors in the central nervous system. Annu. Rev. Physiol. 1997. Vol.59. P.601-

36. Bradford A.D., TerrisJM., Ecelbarger C.A., Klein J.D., Sands J.M., Chou C.L., Knepper M.A. 97- and 117-kDa forms of collecting duct urea transporter UT-Al are due to different states of glycosylation. Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 2001. Vol.281. N.l. F133-

37. Breyer M Jacobson H., Hebert R. Cellular mechanisms of prostaglandin E 2 and vasopressin interactions in the collecting duct. Kidney. Int. 1990. Vol.38. P.618-

38. Burgess W.J., Balment R.J., BeckJ.S. Effects of luminal vasopressin on intracellular calcium in microperfused rat medullary thick ascending limb. Renal Physiol. Biochem. 1994. N.17. P.l-

39. Carlson S.H., Beitz A., Osborn J.W. Intragastric hypertonic saline increases vasopressin and central Fos immunoreactivity in conscious rats. Am. J. Physiol. 1997. 272(3Pt 2): R750-

40. Carlson S.H., Wess J.M. Hepatic denervation does not affect plasma vasopressin response to intragastric hypertonic saline in conscious rats. Am. J. Physiol. 1999. 277(lPt 1): E161-167. and oxytocin from the neurohypophysis. 169

41. Cherney D.Z., Zevallos G., Oreopoulos D., Halperin M.L. A physiological analysis of hyponatremia: implications for patients on peritoneal dialysis. Perit. Dial. Int. 2001. Vol.21. N.l.P.7-

42. Conigrave A.D., Young J.A. Function of intestine. In: Greger R, Windhorst U (eds). Comprehensive human physiology: from cellular mechanisms to integration. Vol.

43. Springer, Berlin. 1996. P.1259-1287 Correia A.G., Denton KM., Evans KG. Effects of activation of vasopressin-Vi-receptors on regional kidney blood flow and glomerular arteriole diameters. J. Hypertens. 2001. Vol.19 (3 Pt 2). P.649-

44. Dantzler W.H. Comparative physiology of the vertebrate kidney. Berlin etc.: Springer Verlag, 1989. 198P. De Rouffignac C, Roinel N.. ElaloufJ.M. Comparative effects of peptide hormones on water and electrolyte transport along the proximal and distal tubules of the mammalian nephron. New insights in vertebrate kidney function. Brown J.A., Balment R.J., Rankin. J. С (eds.). Cambrige Univ. Press, NY. 1993. P.281-

45. Djelidi S., Fay M Cluzeaud F., Thomas-Soumarmon A., Bonvalet J.P., Farman K, BlotChabaudM. Vasopressin stimulates long-term net chloride secretion in cortical collecting duct cells. FEBS. Lett. 1999. Vol.460. N.3. P. 533-

46. Douglas W.W. Mechanism of release of neurohypophysial hormones: stimulus-secretion coupling. Handbook of physiology. Sect.

47. Endocrinololy. Washington: Amer. Physiol. Soc, 1974. Vol.4. part.l. P. 191-

48. Djurhuus J.C, Rittig S. Current trends, diagnosis, and treatment of enuresis. Eur. Urol. 1998.

50. Fernandez N., Martinez M.A., Garcia Villalon A.L., Monge L., Dieguez G. Cerebral vasoconstriction produced by vasopressin in conscious goats: role of vasopressin V(l) and V(2) receptors and nitric oxide. Br. J. Pharmacol. 2001. Vol.132. N.8. P. 1837-1

51. Fjellestad-Paidsen A., dAgay Abensour L., Hoglund P., Rambaud J.C. Bioavailability of 1deamino-8-D-arginine vasopressin with an enzyme inhibitor (aprotinin) from the small intestine in healthy volunteers. Eur. J. Clin. Pharmacol. 1996. Vol.50. P. 491-495. 170

52. Ganapathy V., LeibachF.H. Peptide transporters. Curr. Opin. Nephro. Hypertens. 1996. N.5. P. 395-

53. Goncharevskaya O.A., Shakhmatova E.I., Natochin Y.V. Modulation of the effect of argininevasopressin on water and ion transport in the newt early distal tubule and frog urinary bladder by Vantagonists. Eur. J. Physiol. 1995. N.430. P. 1004-1

54. Gondim E.L., Liu J.H., Costa V.P., Weinreb R.N. Exogenous vasopressin influences intraocular pressure via the V(l) receptors. Curr. Eye. Res. 2001. Vol.22. N.4. P. 295-

55. Goodson J.L., Bass A.H Forebrain peptides modulate sexually polymorphic vocal circuitry. Nature. 2000. N403(6771). P.769-

56. Greger R. Renal handling of the individual solutes of glomerular filtrate. Windhorst U (eds). Comprehensive human physiology. Springer: Berlin, Heidelberg. 1996. Vol.2. P.1517-1

57. Greger R. Comprehensive human physiology. Windhorst U (eds). Berlin. Heidelberg: Springer. 1996. Vol.1. N.2.2528P. Gross P. Correction of hyponatremia. Semin. Nephrol. 2001. Vol.21. N.3. P.269-

58. Gross P., RichterD., Robertson G.L. Vasopressin. Ed. John Libbey Eurotext. 1

59. Paris. Guillette L.J.Jr., Gross T.S., Matter J.M., Palmer B.D. Arginine vasotocin-induced prostaglandin synthesis in vitro by the reproductive tract of the viviparous lizard Sceloporus jarrovi. Prostaglandins. 1990. V. 39. T. 1. P. 39-

60. HansellP., Goransson V., OdlindC., GerdinB., HallgrenR. Hyaluronan content in the kidney in different states of body hydration. Kidney Int. 2000. Vol.58. P.2061-2

61. Hansell P., Marie C, Alcorn D., Goransson V., Johnsson C, Hallgren R. Renomedullary interstitial cells regulate hyaluronan turnover depending on growth media osmolality suggesting arole in renal water handling. Acta Physiol. Scand. 1999. Vol.165. P.115-

62. Hatton G.I. Some well-kept hypothalamic secrets disclosed. Fed. Proc. 1983. Vol.42. P.28692

63. Hayashi H, Suzuki Y. Regulation of intracellular pH during H-coupled oligopeptide absorbtion in enterocytes from guinea pig ileum. J. Physiol. (Lond). 1998. Vol.511. P.573-

64. Hebert R,, Jacobson H. and Breyer M. PGE2 inhibits AVP-induced water flow in cortical collecting ducts by protein kinase activation. Am. J. Renal Fluid Electrolyte Physiol. 1990. N.259.P.F318-F

65. Honda K. Mechanisms controlling neurohypophysial hormone release in the rat. J. Reprod. Dev. 2003. Vol.49. N.l.P.1-11. 171

66. Ivanova L.N., Melidi NN. Effects of vasopressin on hyaluronate hydrolase activities and water permeability in the frog urinary bladder. Eur. J. Physiol. 2001. Vol.443. N.l. P.72-

67. Jackson E.K. Vasopressin and other agents affecting the renal conservation of water. The pharmacological basis of therapeutics. New York 1996. P. 715-

68. Jung J.S., Bhat R.V., Preston G.M., Guggino W.B., Baraban J.M., Agre P. Molecular characterization of an aquaporin cDNA from brain: candidate osmoreceptor and regulator of water balance. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. Vol.91. N.26. P. 13052-13

69. Kamoi K., Kurokawa I., Kasai N. et al. Asymptomatic hyponatremia due to inappropriate secretion of antidiuretic hormone as the first sign of a small cell lung cancer in an elderly man. Intern. Med. 1998. Vol.37. N l l P. 950-

70. Kobashi M., Adachi A. Effect of hepatic portal infusion of water on water intake by waterdeprived rats. Physiol. Behav. 1992. Vol.52. N.5. P. 885-

71. Klussmann K, Tamma G., Lorenz D., Wiesner В., Marie K., Hofinann F., Aktories K., Valenti G, Rosenthal W. An inhibitory role of Rho in the vasopressin-mediated translocation of aquaporin-2 into cell membranes of renal principal cells. J. Biol. Chem. 2001. Vol.276. N.23. P.20451-20

72. Komissarchik Y.Y., Snigirevskaya E.S., Shakhmatova E.I., Natochin Yn.V. Ultrastructural correlates of the antidiuretic hormone-dependent and antidiuretic hormone-independendent increase in osmotic in the frog urinary bladder epithelium. Cell. Tissue. Res. 1998. Vol.293. P.517-

73. Koushanpour E., Kriz W. Renal physiology. New York: Springer. 1986. 390P. Kovdch L, Lichardus B. Vasopressin: disturbed secretion and its effects. Dordrecht. Kluwer. 1

74. Kwvahara M Shinbo I., Sato K., Terada Y, Marumo E, Sasaki S. Transmembrane helix 5 is critical for the high water permeability of aquaporin. Biochemistry. 1999. Vol.38. N.49. P. 16340-16

75. Kuznetsova A.A., Shakhmatova Е.1., Pnttskova N.P., Natochin Y.V. Possible role of prostaglandins in pathogenesis of nocturnal enuresis in children. Scand. J. Urol. Nephrol. 2000. Vol.34. N.l. P. 27-

76. Kwon Т.Н., Hager H., Nejsum L.N., Andersen M.L., Frokiaer J., Nielsen S. Physiology and pathophysiology of renal aquaporins. Semin. Nephrol. 2001. Vol.21. N.3. P. 231-

77. Laski M.E., Pressley T.A. Aquaporin mediated water flux as a target for diuretic development. Semin. Nephrol. 1999. Vol.19. N.6. P. 533-550. 172

78. Leng G., Mason W.T., Dyer R.G. The supraoptic nucleus as for osmoreceptor. Neuroendocrinololy. 1982. Vol. 34. P. 75-81. Li J., Hidalgo I.J. Molecular modeling study of structural requirements for the oligopeptide transporter. J. Drug Target. 1996. N.4. P. 9-

79. Lind R W., Johnson A.K. Central and peripheral mechanisms mediating angiotensin-induced thirst. Exp. Brain Res. Berlin, Heidelberg: Springer Verlag. 1982. P.353-364. Liu H., TangR., Pan W.S., Zhang Y, Liu H. Potential utility of various protease inhibitors for improving the intestinal absorption of insulin in rats. J. Pharm Pharmacol. 2003. Vol.55. N l l P. 1523-1

80. Loichot C, Krieger J.P., Be Jong W., NisatoD., ImbsJ.L., BarthelmebsM. High concentrations of oxytocin cause vasoconstriction by activating vasopressin VIA receptors in the isolated perfused rat kidney. Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 2001. Vol.363. N.4. P. 369-

81. LudwigM., Horn Т., Callahan M.F., Grosche A., Morris M., LandgrqfR. Osmotic stimulation of the supraoptic nucleus: central and peripheral vasopressin release and blood pressure. Am. J. Physiol. 1994. 266(3 Pt 1). P. 351-

82. Mackenzie В., Loo D.D., Fei Y., Liu W.J., Ganapathy V., Leibach F.H., Wright E.M. Mechanisms of the human intestinal FT-coupled oligopeptide transporter hPEPTl. J. Biol. Chem. 1996. Vol. 271. P.5430-5

83. Matthews D.M. Mechanisms of peptide transport. Beirt Infusionther Klin Ernahr. 1987. N. 17. P. 6-

84. MorathR, Klein Т., Seyberth H.W., Nusing RM. Immunolocalization of the four prostaglandin E2 receptor proteins EP1, EP2, EP3, and EP4 in human kidney. J. Am. Soc. Nephrol. 1999. Vol.10. N.9. P.1851-1

85. Morimoto B.H., Chuang C.C., Koshland D.E.Jr. Molecular cloning of a member of a new class of low-molecular-weight GTP-binding proteins. Genes Dev. 1991. 5(12B). P. 2386-2

86. Natochin Yu. V. Vasopressin: A search for the mechanism of increased water permeability. In: Sov. Sci. Rev. F. Physiol. Gen. Biol. Harwood Acad. Publ. 1994. Vol.7. P. 85 -

87. Natochin Yu. V., Bogolepova A.E., Kuznetsova A.A., Shakhmatova EI Vol.34. P. 327-

88. Study of the role of prostaglandin E 2 in urine flow regulation in chronic renal failure. Scand. J. Urol. Nephrol. 2000, 173

89. Natochm Y.V., Parnova R.G., Shakhmatova EJ. et al AVP-independent high osmotic water permeability of frog urinary bladder and autacoids. Eur. J. Physiol. 1996. Vol.433. P. 136-

90. Natochin Y.V., Shakhmatova E.L Vasopressin Vl-antagonist increases the hydroosmotic response to arginine vasopressin in frog urinary bladder. Eur. J. Physiol. 1992. Vol.421. P. 406

91. Natochin Yn.V., Shakhmatova E.L, Komissarchik Ya.Yn. et al. Prostaglandin-dependent osmotic water permeability of the frog and trout urinary bladder. Сотр. Biochem. Physiol. 1998. 121 A. P. 59-

92. Nielsen S., Chou C.L., Marples D., Christensen E.L, Kishore B.K., and Knepper M.A. Vasopressin increases water permeability of kidney collecting duct by including translocation of aquaporin-CD water channels to plasma membrane. Proc.Natl. Acad. Sci. USA. 1995. Vol.92. P. 1013-1

93. Nielsen S, FrokiaerJ, Marples D, Kwon Т.Н., Agre P., Knepper MA. Aquaporins in the kidney: from molecules to medicine. Physiol. Rev. 2002. V. 82. N. 1. P. 205-

94. Nordmann J.J. Stimulus secretion coupling. Progr. Brain Res. 1983. Vol.60. P. 283-

95. Nordmann J.J., Stuenkel E.L. Electrical properties of axons and neurohypophesial nerve terminals and their relationship to secretion in the rat. J. Physiol. 1986. Vol.380. P. 521-

96. Orlqff J., Handler JS. The similarity of effects of vasopressin, adenosine-3,5-phosphate (cyclic AMP) and theophelline on the toad bladder. J. Clin. Invest. 1962. Vol.41. P. 702-

97. Osborn J.W., Collister J.P., Carlson S.H. Angiotensin and osmoreceptor inputs to the area postrema: role in long-term control of fluid homeostasis and arterial pressure. Clin Exp. Pharmacol Physiol. 2000. Vol.27. N.(5-6). P. 443-

98. OzawaT., Tanaka H, Nakano R, Sato M., Lnuzuka Т., Soma Y., Yoshimura N.. Fnkuhara N, Tsuji S. Nocturnal decrease in vasopressin secretion into plasma in patients with multiple system atrophy. J. Neurol. Neurosurg Psychiatry. 1999. Vol.67. N.4. P. 542-

99. Palm C, Gross P. Vrvasopressin receptor antagonists-mechanism of effect and clinical implications in hyponatraemia. Nephrol. Dial. Transplant. 1999. Vol.14. N l l P. 2559-2

100. Pantzar N., Limdin S., Westrom B.R. Different properties of paracellular pathway account for the regional small intestinal permeability to the peptide desmopressin. J. Pharm. Sci. 1995. Vol.84. P. 1245-1

101. Parker K.J., Lee T.M. Central vasopressin administration regulates the onset of facultative paternal behavior in microtus pennsylvanicus. Horm. Behav. 2001. Vol.39. N.4. P.285-294. 174

102. Parrott R.F., Vellncci S.V., Goode J.A. Intravenous lysine vasopressin lowers body temperature in normal and febrile pigs. Peptides. 1999. Vol.20. N.6. P. 753-

103. Pavel S. Presence of relatively high concentration of arginine vasotocin in the cerebrospinal fluid of newborn and infants. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1980. Vol.50. P. 271-

104. Polenov A.L., Chetverukhin V.K. Ultrastructural radioautographic analysis of neurogenesis in the hypothalamus of the adult frog, Rana temporaria L., with special reference to physiological regeneration of the preoptic nucleus. П. Types of neuronal cell produced. Cell Tiss. Res. 1993. Vol.271. P. 351-

105. Poulain D.A., Wakerley J.B. Electrophysiology of hypothalamic magnocellular neurons secreting oxytocin and vasopressin. Neuroscience. 1982. Vol.7. N.4. P. 773-

106. Pouzet В., Serradeil-Le Gal C, Bonby N., Maffrand J.P., Le Fur G., Bankir L. Selective blockade of vasopressin V2 receptors reveals significant V2-mediated water reabsorption in Brattleboro rats with diabetes insipidus. Nephrol. Dial. Transplant. 2001. Vol.16. N.4. P. 725

107. Ramwell P. W., Shaw J.E. Biological significance of the prostaglandins. Recent Prog. Horm. Res. 1970. N.26. P. 139-

108. Richard D., Bourque C.W. Atrial natriuretic peptide modulates synaptic transmission from osmoreceptor afferents to the supraoptic nucleus. J. Neurosci. 1996. Vol.16. N.23. P. 75267

109. Risvanis J., Naitoh M, Johnston C.I., Burrell L.M. In vivo and in vitro characterisation of a nonpeptide vasopressin V(1A) and V(2) receptor antagonist (YM087) in the rat. Eur J. Pharmacol. 1999. Vol.381. N.l. P. 23-

110. Robertson G.L., Athar S., Shelton R.L. Osmotic control of vasopressin function. Disturbances in body fluid osmolality. Bethesda. Amer. Physiol. Soc. 1977. P. 125-

111. Roberts P.R., Bumey J.D., Black K.W., Zaloga G.P. Effect of chain length on absorption of biologically active peptides from the gastrointestinal tract. Digestion. 1999. Vol.60. N.4. P. 332

112. Rodrigues R.A., Humphreys M.H. Control of sodium excretion. Textbook of Nephrology. 1995. Vol.1. P. 266-

113. Schlondorff D., Satriano J. Interactions of vasopressin, cAMP and prostaglandins in toad urinary bladder. Amer. J. Physiol. 1985. N.248 (3 Pt 2). P. F454-F

114. SharrerE, Sharrer B. Neuroendocronology. N.Y. L. Columbia Univ. Press. 1963. 289P. 175

115. ShinboL, FiishimiK., KasaharaM., YamanchiK., SasakiS., ManimoF. Functional analysis of aquaporin-2 mutants associated with nephrogenic diabetes insipidus by yeast expression. Am. J. Physiol. 1999. Nov. 277(5 Pt2). F734-

116. Smith H.W. The kidney. Structure and function in health and disease. New York: Oxford University Press. 1951. 1050P. Smith H. W. Principles of renal physiology. Oxford univ. Press, New York. 1956. 237P. Stribley JM., Carter C.S. Developmental exposure to vasopressin increases aggression in adult prairie voles. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. Vol.96. N.22. P.l 2601-12

117. Sutherland E. W. Studies on the mechanism of hormon action. In: Lindstein J. (Ed.) Nobel lectures in physiology and medicine. Nobel Foundation, World Scientific. Singapore. 1992. P. 5-

118. Szalai C, Triga D., Conner A. C112R, W323S, N317K mutations in the vasopressin V2 receptor gene in patients with nephrogenic diabetes insipidus. Mutations in brief no. Hum. Mutat. 1998. Vol.12. N. 2. P. 137-

119. Tozaki H, Odoriba Т., Iseki Т., Taniguchi Т., Fujita Т., Murakami M Muranishi S., Yamamoto A. Use of protease inhibitors to improve calcitonin absorption from the small and large intestine in rats. J. Pharm. Pharmacol. 1998. Vol.50. N.8. P.913-

120. Thibonnier M, Kilani A., Rahman M„ DiBlasi T.P., Warner K., Smith M.C., Leenhardt A.F., Broiiard R. Effects of the nonapeptide V(l) vasopressin receptor antagonist SR49059 in hypertensive patients. Hypertension. 1999. Vol.34. N.6. P. 1293-1

121. Trinh Trang Tan M.M., Bouby K, Doute M., Bankir L. Effect of long-and short-term antidiuretic hormone availability on internephron heterogeneity in the adult rat. Am. J. Physiol. 1984. 246(6 Pt 2). P. F879-

122. ValeM.R. The role of calcium and cyclic nucleotides in the vasopressin release from the neural lobe: a mode. Rev. med. Univ. fed. Ceara. 1984. Vol.24. N.2. P.45-

123. Verney E.B. The antidiuretic hormone and factors which determine its release. Proc. Roy. Soc. Ser. B. Biol. Sci. 1947. Vol.135. P. 25-

124. Voisin D.L., Chakfe Y., Bourque С W. Coincident detection of CSF Na and osmotic pressure in osmoregulatory neurons of the supraoptic nucleus. Neuron. 1999. Vol.24. N.2. P. 453-

125. Wakerley J.B. Electrophysiology of the central vasopressin system. Vasopressin. Principles and properties. N.Y. Lond. Plenum press. 1987. Ch.5. P.211-

126. Walker R.M., Brown R.S., StqffJ.S. Role of renal prostaglandins during antidiuresis and water diuresis in man. Kidney Int. 1982. N 2 1 P.365-370. 176

127. Wells T. Vesicular osmometers, vasopression secretion and aquaporin-4: a new mechanism for osmoreception. Mol. Cell Endocrinol. 1998. Vol.136. N.2. P. 103-

128. Wells Т., ForslingM.L. Kappa-opioid modulation of vasopressin secretion in conscious rats. J. Endocrinol. 1991. Vol.129. N.3. P. 411-

129. Welner J. Biochemistry of serine protease inhibitors and their mechanisms of action: a review. J. Extra Corpor. Technol. 2003. Vol.35. N.4. P. 326-

130. Wheeler S., Mc Ginn B.J., Lucas M.L., Morrison J.D. Absorption of biologically active peptide hormones from the small intestine of rat. Acta Physiol. Scand. 2002. N.176. P. 203-

131. Yamaguchi K., HamaH., Watanabe K. Possibe roles of prostaglandins in the anteroventral third ventricular region in the hyperosmolality-evoked vasopressin secretion of conscious rats. Exp. Brain Res. 1997. Vol.113. N.2. P. 265-

132. Yarkov A., Montero S., Lemus M., Races de Alvarez Buylla E., Alvarez Buylla R. Arginine vasopressin in nucleus of the tractus solitarius induces hyperglycemia and brain glucose retention. Brain Res. 2001. Vol.902. N.2. P. 212-

133. Yatsu Т., Tomura Y., Tahara A., Wada K., Kusayama Т., Tsukada J., Tanaka A., Iizumi Y., Honda 1С Pharmacology of conivaptan hydrochloride (YM087), a novel vasopressin V1A/V2 receptor antagonist. Nippon Yakurigaku Zasshi. 1999. 114 Suppl. N. 1. P. 113-

134. Yoshitomi K., Kurokawa K. Basolateral and luminal action of vasopressin in the distal nephron segments. In: P. Gross, D. Richter, G.L. Robertson (eds.). Vasopressin. John Libbey Eurotext. Paris. 1993. P.301-310.