Использование перфторорганических соединений при глубинном культивировании микроорганизмов

Плетнёва, Анна Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Использование перфторорганических соединений при глубинном культивировании микроорганизмов
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Использование перфторорганических соединений при глубинном культивировании микроорганизмов"

003053739

На правах рукописи

Плетнёва Анна Юрьевна

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПЕРФТОРОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ ПРИ ГЛУБИННОМ КУЛЬТИВИРОВАНИИ МИКРООРГАНИЗМОВ

03.00.23 - Биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2007

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Вятский государственный университет» (ГОУ ВПО ВятГУ)

Научный руководитель: доктор медицинских наук

Бондарев Владимир Петрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Мирзаев Микаиль Нурбагандович;

доктор биологических наук Малик Нина Ивановна

Ведущая организация: государственное научное учреждение

«Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко» (ГНУ ВИЭВ)

Защита состоится «15» марта 2007 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д.220.042.01 в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВМиБ) по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23, тел. (495) 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО МГАВМиБ. Автореферат разослан « $ » февраля 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Т.Н. Грязнева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Большинство микроорганизмов, используемых чело-векэм в биотехнологии, в процессе развития нуждаются в молекулярном кислороде. Общепризнанно, что брлее высокий выход целевого продукта обеспечивает глубинное культивирование в жидкой питательной среде. Для нормального роста аэрэбов в глубоких слоях среды требуется аэрация и улучшение условий переноса газов в клетки микроорганизмов [Перт С.Дж., 1978; Егоров Н.С., 1989; Блинов Н.П., 1995; Воронин Е.С., 2005].

Конец XX века ознаменовался внедрением в медицинскую практику нового класса эффективных и безопасных препаратов с газотранспортной функцией на основе перфторорганических соединений (ПФОС). В результате многочисленных исследований был создан целый ряд новых препаратов, в т.ч. Oxygent, Therox, Оху-fluor (США); Fluosol-DA (Япония); Emulsion II (Китай), Перфторан (Россия). ПФОС обладают комплексом практически полезных свойств: высокой химической и биологической устойчивостью, отсутствием токсичности для живых организмов, способностью растворять газы (до 50 об.% 02, до 200 об.% С02, до 300 об.% С2Н6 и др.'| и изменять проницаемость клеточных мембран, облегчая при этом транспорт веществ [Иваницкий Г.Р., 2001].

В настоящее время ПФОС находят применение в технике, медицине, косметологии, но применение этого класса соединений в других областях биологической науки и, в первую очередь, в биотехнологии пока не нашло соответствующего обсуждения и реализации. Поэтому большой интерес представляет изучение возможности использования жидких ПФОС в составе питательных сред для улучшения процесса газотранспорта глубинных культур микроорганизмов.

Цель и задачи исследований. Цель исследований - оценка возможности использования перфторорганических соединений при глубинном культивировании микроорганизмов разных таксономических групп.

Для достижения цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Экспериментально обосновать возможность применения перфторорганиче-ских соединений при глубинном культивировании бактерий родов Pseudomonas, Rhodococcus, Bacillus, Streptomyces, Escherichia, Azotobacter и микромицетов родов Saccharomyces, Pénicillium и Fusarium;

2. Оценить возможность стерилизации перфторорганических соединений при условиях, применяемых для стерилизации питательных сред, и стабильность сохранения эксплуатационных свойств перфторорганических соединений после многократной стерилизации насыщенным паром под давлением;

3. Оценить возможность использования перфторорганических соединений при глубинном культивировании микроорганизмов - биодеструкторов родов Pseudomonas и Rhodococcus в синтетической среде при использовании в качестве источника углерода углеводородов нефти и мазута;

4. Оценить эффективность применения перфторорганических соединений при глубинном культивировании в безазотистой синтетической среде азотфиксирую-щих бактерий рода Azotobacter при использовании молекулярного азота воздуха в качестве единственного источника азота;

5. Оценить влияние перфторорганических соединений на рост глубинных культур Streptomyces parpurogemscleroticiis и биосинтез противоопухолевого антибиотика даунорубицина.

Научная новизна работы заключается в том, что впервые:

1. Проведена комплексная теоретическая и экспериментальная оценка возможности использования перфторорганических соединений с газотранспортной функцией при глубинном культивировании бактерий родов Pseudomonas, Rhodococcus, Bacillus, Streptomyces, Escherichia, Azotobacter и микромицетов родов Saccharomyces, Pénicillium и Fusarium;

2. Экспериментально обоснована возможность стерилизации автоклавирова-нием перфторметилдекалина и перфтордекалина при многократном использовании для глубинного культивирования микроорганизмов;

3. Установлен положительный эффект от использования перфторорганических ^соединений при глубинном культивировании бактерий - биодеструкторов в синтетической среде с нефтью и мазутом;

4. Показана возможность использования перфторорганических соединений при глубинном культивировании азотфиксирующих бактерий рода Azotobacter в безазотистой синтетической среде;

5. Показана возможность использования перфторорганических соединений в биотехнологических процессах культивирования микроорганизмов разных таксономических групп для получения их биомассы и биологически активных веществ на примере стрептомицетов - продуцентов антибиотика даунорубицина.

Научная новизна работы подтверждена положительным решением ФГУ ФИПС о выдаче патента по заявке №2005139779/13 «Способ биологической очистки воды от нефтяных загрязнений» (приоритет от 19.12.05).

дики, руководство и инструкция по применению перфторорганических соединение в составе питательных сред при глубинном культивировании микроорганизмов, которые используются в учебном процессе в ВятГУ, а также в научной работе , ГУ ЗНИИСХ Северо-Востока им. Н.В. Рудницкого, 48 ЦНИИ Минобороны России (НИИ микробиологии МО РФ).

Апробация результатов диссертации. Основные результаты исследований доложены и обсуждены на: II Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2003); научной сессии Кировского филиала РАЕ, Кировского областного отделения РАЕН (Киров, 2004); Всероссийских ежегодных конференциях «Наука-производство-технология-экология» (Киров, 2003-2006); Всероссийском конкурсном отборе инновационных проектов аспирантов и студентов по приоритетному направлению «Живые системы» (Киров, 2005, 2006); Международной конференции «Проблемы биологии, экологии и образования: история и современность» (С.-Петербург, 2006).

Публикации. По результатам диссертации опубликовано 29 научных работ, в т.ч. 7 статей в научных журналах, 22 - в сборниках научных конференций.

Объём и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 164 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных вынодов, список использованной литературы (242 источника, из которых 199 отечественных и 43 зарубежных авторов). Работа содержит 18 таблиц, 20 рисунков и 8 страниц приложений.

На защиту выносятся положение и результаты:

1. Карбогал, перфторметилдекалин и ' перфтордекалин в концентрации 0,2:5-25,0 об.% в составе жидких питательных сред при глубинном культивировании бактерий родов Pseudomonas, Rhodococcus, Bacillus, Streptomyces, Escherichia, Azctobacter и микромицетов родов Saccharomyces, Pénicillium и Fusarium обеспечивают интенсификацию процессов биосинтеза, в т.ч. бактерий - биодеструкторов в синтетической среде с нефтью и мазутом, бактерий - азотфиксаторов в безазотистой среде и продуцентов даунорубицина.

2. Стерилизация перфторметилдекалина и перфтордекалина отдельно и в составе питательных сред автоклавированием при избыточном давлении 152 и 251 кПа и температуре 111°С и 128°С соответственно не сказывается на их способности интенсифицировать рост микроорганизмов разных таксономических групп.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Работа выполнена в период с 2002 по 2006 гг на кафедре микробиологии ГОУ ВПО ВятГУ.

В работе использовали бактерии и микромицеты из коллекции ВятГУ и ГУ ЗНИИСХ Северо-Востока им. Н.В. Рудницкого.

В экспериментальных исследованиях использовали: три вида ПФОС (карбогал (КГ), перфторметилдекалин (ПФМД), перфтордекалин (ПФД)) и готовый препарат «Перфторан» (ПФ), жидкие и плотные питательные среды Чапека, Сабуро, Эшби, Гаузе и другие. В качестве ксенобиотиков использовали товарную нефть и мазут.

Количество живых бактерий в среде определяли чашечным методом [Нетрусов А.И. и др., 2005]. Биодеструктивную активность культур оценивали с учетом прироста количества микроорганизмов в культуральной среде и степени биологической утилизации нефтепродуктов [Андреева И.С. и др., 2006]. Количественное определение нефтепродуктов в среде после культивирования проводили гравиметрическим методом [Барышникова J1.M. и др., 2001]. Нитрогеназную активность определяли ацетиленовым методом на газовом хроматографе, общий азот - микрометодом Къельдаля [Калининская Т.А. и др., 1973]. Концентрацию антибиотика определяли методом газо-жидкостной хроматографии [Бакулин М.К. и др., 2004].

Культивирование микроорганизмов проводили в колбах Эрленмейера и в ферментере «MD-400 L.E. Marubishi Co., Ltd.».

Статистический анализ результатов исследований осуществляли с использованием общепринятых в биометрии методов [Гланц С., 1998; Ашмарин И.П., Воробьев А.А., 1962], результаты обрабатывали с помощью статистической программы Microsoft Excel.

Автором лично проведены следующие исследования: экспериментальная оценка динамики концентрации живых микроорганизмов и (или) весового содержания получаемой биомассы при глубинном культивировании микроорганизмов Pseudomonas, Rhodococcus, Bacillus, Streptomyces, Escherichia, Saccharomyces, Pénicillium и Fusarium в разных питательных средах с ПФОС; отработка условий стерилизации и изучение свойств стерилизованных ПФОС; оценка биодеструктивной активности нефтедеструкторов гравиметрическим методом; выращивание бактерий рода Azotobacter в безазотистых средах в условиях изменённой газовой среды.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Оценка чувствительности микроорганизмов разных групп к ПФОС

На первом этапе исследований была проведена оценка чувствительности 6 штаммов бактерий (P. patida ВУ 186, R erythropolis ВУ 321, В subtilis ВУ 367, S. purpurogeniscleroticus ВБМ 158, Е coli M 17, A. chroococcum ACB 47) и 5 штам-мон микромицетов (S. cerevisiae 5, P. chrysogenum MB 21, Pénicillium ssp, F. sporo-trichiella Bilai, F. oxysporum 534) к ПФОС в разных жидких питательных средах. Прл этом был использован диапазон концентраций от 0,25 до 16,0 об.% ПФОС в среде. Результаты экспериментов свидетельствовали, что ПФД, КГ, ПФМД и ПФ, вносимые в среды в указанном диапазоне концентраций, не только не приводили к подавлению роста культур бактерий и микромицетов, а наоборот, способствовали интенсификации их роста в 1,1-7,8 раз в сравнении с контролем.

Изучение стабильности сохранения свойств ПФОС при различных режимах тепловой стерилизации

Автоклавирование ПФОС проводили при избыточном давлении 152 и 251 кПа (температуре 111°С и 128°С соответственно) в течение 0,5 и 1,5 ч. Дл i стерилизации ПФОС разливали в мерные цилиндры по 10 см3, закрывали ват-но-марлевыми пробками и помещали в автоклав. Одновременно оценивали возможность стерилизации ПФОС совместно с жидкими питательными средами, для чего вносили по 10 см3 ПФОС во флаконы объемом 100 см3, содержащие 40 см3 одной из жидких сред.

Таблица 1 - Влияние стерилизованных ПФОС на содержание биомассы S. purpurogeniscleroticus ВБМ 158 через 72 ч роста в среде с соевой мукой

Режим автоклавиро-вания ПФОС Содержание биомассы (мгхсм"3) в среде с... (ХЫ95, п=5)

Продолжительность, ч Температура, С Стерилизованными отдельно... ПФД, стерилизованным со средой Без ПФОС

ПФМД ПФ ПФД

0,5 111 24,8±1,5 14,9±1,6 25,6±1,2 23,1±1,6 6,8±0,5

128 24,1±1,6 8,3±1,0 26,7±1,4 27,5±1,1 5,9±0,5

1,5 111 23,9±2,4 7,5±0,8 25,5±1,9 24,6±2,2 6,1±0,4

128 24,7±1,5 6,1 ±0,4 24,9±2,2 25,3±2,3 6.5±0,7

1,5x5* 128 - - 26,3±2,2 25,0±2,9 5,2±0,2

Без стерилизации 24,3±1,8 29,1±1,5 25,2±2,8 -

•Примечания 1 (1,5*5) -ПФД подвергнут пяти циклам по 1,5 ч автоклавирования при 128 С, 2 И :ходное содержание биомассы 0,5 мг 1 см"\ 3 (-1 - исследований не проводилось

Результаты исследований, проведенные с использованием культур S. purpuro-geniseleroticus ВВМ 158 (таблица 1 ), Р. pulida ВУ 186 И F. sporolrícfnella Bikri, убедительно показали возможность автоклав и рования ПФД и ПФМД отдельно и в составе питательных сред. Кроме того, четырехкратное исполню ванне ПФД после отаспеиик его от культуралыюй среды и автоклавирования с новой средой так же не привело к изменению интенсивности их роста в сравнении с контролем. При этом потери его в каждом цикле «культивирования - стерилизации» не превышали 10%.

Рост биодеструкторов в синтетической среде с нефтью и мазутом в присутствии ПФОС

При изучении возможности выращивания микроорганизмов с ПФОС в первую очередь была проведена оценка возможности интенсификации развития микроорганизмов с препаратом «Перфторан». Была использована жидкая синтетическая среда состава (г^дм1): НН4НгР04 - 9,0; NaH3PQ, - 1,0; К2Н:ТО,- 10,0; СаСЬ - 0,04; fWgS04x7H20 - 0,7; FeS04x7H20 - 05013; ZnS04x7H20 - 0,012; МпС12х7Н20 - 0,012; в качестве биодеструкторов использовали бактерии Р. pulida ВУ ! 86 н II erythropo-iû ВУ 321. В колбы Эрленмейера объемом 250 см' со средой вносили: навеску нефти ( 1 г); 2.5-40,0 об.% ПФ; микробную культуру до концентрации - 1 х 10й бак-терий*см"'. Общий объем рабочей смеси - 50 см\ Колбы инкубировали на шуттеле с частотой вращения 220 об.хмин"1 в течение 5 суток при температуре (27-29)°С,

Внесение в среду с нефтью 2,5-40,0 об.% ПФ сопровождалось увеличением степени утилизации нефти и ускорением роста бактерий, при тгом естественный прирост отмечался в средах, содержащих 10,0-20,0 об,% ПФ. а максимум количества микроорганизмов достигался на 3-4 сутки роста (рисунок I а).

Vo! а * 6

т.

1.5 В.8

0 2,5 S 10 20 40

КОИЦЁНТрЛЦИП ПФ, Об,%

94,2 91 .в

О 24 4Э 12 96 120

Время, Ч

Рисунок 1 - Влияние ПФ на накопление биомассы /'. pulida ВУ 186 (а) н степень утилизации нефти (б)

Добавление в среду 5,0 и 40,0 об.% ПФ приводило к менее выраженному повышению содержания бактерий в среде. В первом случае, вероятно, сказывалась малая концентрация ПФОС в составе ПФ, во втором - ингибирующий эффект больших концентраций других компонентов ПФ и создаваемый дисбаланс синтетической среды. Следует отметить, что через 3 суток роста количество бактерий Р. puíida ВУ 186 в 1 см3 культуральной среды с 10 об.% ПФ превышало их исходное количество в 77,5 раз и в 6,7 раз аналогичный показатель для данного микроорганизма на среде без ПФ. Степень утилизации нефти в среде с содержанием 10,0 об.% ПФ у этого микроорганизма после 120 ч культивирования достигала 94,2 %, что в 12,6 раз превышает аналогичный показатель для бактерий Р. putida ВУ 186 на среде без ПФ (рисунок 16).

В экспериментах по изучению влияния КГ, ПФМД и ПФД на накопление биомассы нефтедеструкторов и разложения ими нефти и мазута в синтетической среце с углеводородами были использованы те же условия культивирования, что и при изучении ПФ.

Внесение в среду 1,0-25,0 об.% ПФОС сопровождалось значительным ускорением роста бактерий и существенным приростом абсолютного их количества, начиная с 1 суток культивирования, с максимумом на 3 сутки роста. Так, концентрация R erythropolis ВУ 321 в культуральной среде с 5 об.% ПФД через 3 суток роста достигала 4,6><109 бакте-рийхсм"3 (рисунок 2), превышая их

Ъ во

Рисунок 2 - Накопление биомассы R. erythropolis ВУ 321 в среде с нефтью и ПФД

ис> одную концентрацию в 46 раз, более чем в 6,7 раз аналогичный показатель для данного микроорганизма на среде без ПФОС и в 1,4 раза максимальный прирост биомассы бактерий при культивировании на среде с КГ. Аналогичная ситуация наблюдалась и для среды, содержащей мазут. По результатам данного эксперимента, можно сделать вывод, что экономически выгодной и технологически оправданной из трех концентраций ПФОС в культуральной среде является концентрация 5 об.%. Степень утилизации нефти и мазута с добавлением 1,0-25,0 об.% ПФОС за 4 суток находилась в следующем диапазоне: при добавлении ПФД - 23,594,5%; при использовании ПФМД - 15,6-92,2 % и 9,5-69,5 % - при использовании

КГ, что в 2,2-11,9 раз превышает степень утилизации нефти и мазута на среде без ПФОС.

Данные, полученные при анализе результатов выращивания культуры R erythropolis ВУ 321 в течение 4 суток при температуре (27-29)°С в ферментере «MD-400 L.E. Marubishi Co., Ltd.» объемом 5 дм3 (рН среды - (6,8-7,0) ед. рН; обороты мешалки - 300 об.хмин"1; расход воздуха - 1 об.х(об.хмин)'1, исходная концентрация клеток - 1 х 10s бактерийхсм"3) подтвердили возможность масштабирования процесса глубинного культивирования бактерий в минеральной среде с нефтью и общую тенденцию к росту и утилизации ксенобиотика, отмеченную при анализе результатов выращивания родококков в колбах. Так, внесение в среду выращивания 5 об.% ПФД обеспечило увеличение выхода биомассы в 7,7 раз на 3 сутки роста, степень утилизации нефти возросла в 7,1 раза в сравнении с контролем.

Изучение влияния ПФОС на интенсивность роста, нитрогеназную активность и накопление общего азота бактериями рода Azotobacter

В экспериментах, в которых использовали 2 штамма азотобактера A. chroo-соссит АСВ 47 и АСВ 121, выделенных из почвы Кировской области (время выращивания - 60 ч; температура - (28-30)°С, частота вращения колб - 200 об.хмин"1, общий объем рабочей смеси - 50 см3, исходная концентрация клеток - 1*108 бактерийхсм"3), было показано, что внесение в жидкую синтетическую среду Эшби 1,0-25,0 об.% ПФОС привело к увеличению концентрации живых бактерий.

Максимум концентрации клеток азотобактера (штамм АСВ 121) в среде с 1,0^25,0 об.% ПФД превышал максимальные показатели, достигаемые в контроле, в 1,3-5,9 раз (рисунок 3). Следует отметить, что при концентрации 5 об.% ПФД обеспечил прирост биомассы в 1,4-1,9 раз выше, чем 25,0 об.%, и более чем в

Время, ч Время, ч

Рисунок 3 - Влияние ПФД на накопление биомассы А. с/иоососсит АСВ 121: а - в газовой среде №1, б - в газовой среде №2

Можно предположить, что повышенные концентрации ПФОС приводят к увеличению снабжения культуры не только N3, но и 02, избыток которого подавляет процесс азотфиксации, что косвенно подтверждается более выраженным ин-гибирующим действием на рост культуры повышенной концентрации ПФОС в обычной воздушной среде (газовая среда№1) и более выраженными положительными результатами в газовой среде №2 с более высокой концентрацией N2 (88,5%) ип2 раза сниженной концентрацией 02 (10,5%).

Было установлено, что внесение ПФОС оказывает существенное влияние на накопление общего азота & культуральной жидкости, Так, внесение в среду ПФД привело к увеличению накопления общего азота на 60 ч роста в 1,2-4,5 раз по Сравнению с контролем. Концентрацией ПФД, обеспечившей максимальные показатели, также была 5,0 об.% (прирост накопления общего азота в 3,0-4,5 раз).

Определенный интерес представляют результаты изучения влияния 5,0 об.% ПФОС па нитрогеназную активность культуры А. сИгопсоссит АС В 121 в газовой среде №2 (рисунок 4), Внесение в среду культивирования ПФД способствовало достижению максимального ее значения уже на 36 ч роста, тогда как в контроле только на 60 ч. При этом увеличение нитрогеназной активности составило 3,4 раза.

II М 36 48 60

В]№МН, Ч

Рисунок 4 - Влияние ПФОС на нитрогеназную активность культуры

А. сИгоососсит ЛСВ 121 при росте в газовой среде № 2: ! - без ПФОС, 2 - с 5 об.% ПФД, 3 - с 5 об.% КГ, 4 - с 5 об.% ПФМД

Внесение КГ и в данном случае не привело к существенному росту нитрогеназной активности (всего в 1,1 раза на 60 ч роста). Эффект от добавления в среду культивирования 5 об.% ПФМД сравним с действием ПФД. максимальная нитро-геназная активность при этом возросла в 2,6 раз.

Выращивание смешанных культур азотобактера и биодеструкторов в жидких средах с ПФОС

На следующем этапе были проведены эксперименты по изучению влияния

ПФД и КГ на процессы азотфиксации и биодеградации нефти при совместном выращивании A. chroococcum АСВ 121 и Р. pulida ВУ 186, В subtilis ВУ 367 в синтетической среде состава (гхдм"3): маннит - 1,0; NH4H2P04 - 0,45; NaH2P04 - 1,0; K2HP04 - 2,0; MgS04x7H20 - 0,7; NaCl - 0,2; K2S04 - 0,1; CaC03 - 5,0; смесь микроэлементов - 1 см3. В колбы Эрленмейера объемом 250 см3 со средой вносили навеску нефти (1 г); 5,0 об.% ПФОС; микробную культуру до концентрации - 1хЮ8 бактерийхсм"3. Общий объем рабочей смеси - 50 см3. Колбы инкубировали на шут-теле с частотой вращения 200 об.хмин"1 в течение 5 суток при температуре (28-30)°С.

В смешанной культуре наблюдали интенсификацию роста каждого из симбионтов. Увеличение концентрации бактерий на максимуме роста в смешанной культуре, по сравнению с таковыми у монокультур, для азотобактера составило в 1,7 раз, биодеструкторов - в 1,5-1,6 раз. Степень утилизации нефти бактериями Р. pulida ВУ 186 в монокультуре за 5 суток не превышала 4,8 % (таблица 2).

Таблица 2 - Влияние добавления ПФД в среду на свойства бактерий _ в смешанной культуре через 120 ч роста _^__

Харак тер роста бактерий ПФОС в среде, об. % Контролируемая смешанная или монокультура Нитрогеназная активность культуры после ...ч роста, мкг азота х (млхч)"' (Xtl95), п=5 Содержание общего азота, МГ*Г"' (XÜ95), 11=6 Степень утилизации нефти, % (Я±1„), п=5

24 72 120

Смешанная культура ПФД, 5 об % A chroococcum АСВ 121 P. putida ВУ 186 0,164± 0,010 0,378± 0,042 0,260± 0,071 37,90± 5,86 55,24± 3,89

Контроль (без ПФОС) A. chroococcum АСВ 121 Р pulida ВУ 186 0,080± 0,008 0,080± 0,008 0,080± 0,008 7,38± 0,86 15,12± 2,16

Моно культура ПФД, 5 об. % A. chroococcum АСВ 121 0,079± 0,012 0,116± 0,055 0,102± 0,041 5,78± 1,32 <2

Р. pulida ВУ 186 0 0 0 1,98± 0,09 10,56± 1,29

Контроль (без ПФОС) A. chroococcum АСВ 121 0,020± 0,007 0,058± 0,016 0,044± 0,008 3,62± 0,48 <2

Р pulida ВУ 186 0 0 0 1,79± 0,18 4,80± 0,27

Наибольшей биодеструктивной активностью в отношении нефти обладала культура Р pulida ВУ 186, наименьшей - культура В subtilis ВУ 367. Внесение 5 об.% ПФД в культуру A chroococcum АСВ 121 и Р. pulida ВУ 186 привело к одновременному увеличению концентрации живых клеток азотобактера в 2,8 раз, а псевдомонад - в 2,1 раза. Аналогичные показатели были получены и при использо-

вании [1Ф0С в смешанной культуре А. chroococcum AGB 121 с В. subiilis ВУ 367.

Нтрогеназная активность азотобактера (таблица 2) при выращивании в смешанной культуре с Р. pulida ВУ 186 возросла в сравнении с монокультурой в 1,3-4,0 раза, а при внесении в эту смешанную культуру I ¡ФД - в 6,3-8,0 раз, аналогично содержание общего азота - в 2,1 раза, а при внесении в эту смешанную культуру ПФД - В 10,5 раз. Кроме того, ассоциации микроорганизмов интенсивно разлагали и утилизировали нефть. Утилизация нефти была в ! 1,5 раз более эффективна, чем у монокультуры - 11 с фте деструктора, и в 3,7 раз - в сравнении с таковой у смешанной культуры без ПФОС.

У всех использованных в экспериментах культур бактерий - нефтедеструкто-ров из-за их более высокой скорости роста на синтетической средс в сравнении с азотобактером наблюдалось явление двухфазового роста в смешанной культуре, что, по-видимому, можег быть обусловлено низкой концентрацией связанного азота в среде, и тем, что культура азотобактера только на 2-3 сутки начинает проявлять максимальную нитрогеназную активность. Исходя из этого, использовали временной сдвиг в 24 ч посева А. chroococcum АСВ 121 и Р. pulida ВУ 186. Это позволило интенсифицировать рост культуры азотобактера, повысить накопление общего азота в с реле в 1,4 раза и увеличить степень утилизации нефти на 16,4 % s сравнении с аналогичный показателем для смешанной культуры без 11ФОС.

Изучение влияния ПФОС на интенсивность роста и продукцию даунорубицина при глубинном культивировании стрсптомицетов

Культивирование S. purptirogemsclerot'tcus (ВБМ 81 и ВБМ 158) проводили в колбах ЭрленмеЙера объемом 750 см '. В колбы со средой на основе соевой муки вносили ПФД (0,2 и 2,0 об.%); микробную культуру до концентрации - 0,5 МГ*СМ"\ Колбы инкубировали на шуттеле с частотой вращения 230 об,* мин"' в течение 10 суток при температуре (27-29)°С.

Рисунок 5 - Влияние ПФД на биосинтез даунорубицина культурой S. purpuro-geniscleroticus ВБМ 81: 1 - без 11ФД, 2 - с 0,2 об.%ПФД, 3 - с 2,0 об!% ПФД

Внесение в среду ПФД существенно сказывалось на ускорении процесса накопления и увеличения содержания антибиотика в среде. Так, максимум концентрации даунорубицина в среде при культивировании с 2,0 об.% ПФД достигался через 6 суток, в контроле - только через 8 (рисунок 5). Увеличение выхода биомассы стрептомицетов в среде с 2,0 об.% ПФД составило в 3,1-3,6 раз по сравнению с контролем, а выход даунорубицина - в 9,0-11,8 раз, что свидетельствует о положительном влиянии внесения ПФОС в культуральную среду на продуктивность исследуемых штаммов бактерий.

ВЫВОДЫ

1. Внесение в жидкие питательные среды карбогала, перфторметилдекалина и перфтордекалина в концентрации 0,25-16,0 об.% при глубинном культивировании бактерий родов Pseudomonas, Rhodococcus, Bacillus, Streptomyces, Escherichia, Azotobacter и микромицетов родов Saccharomyces, Pénicillium и Fusarium обеспечивает прирост биомассы микроорганизмов в 1,1-7,8 раз.

2. Стерилизация перфторметилдекалина и перфтордекалина автоклавирова-нием при избыточном давлении 152 и 251 кПа и температуре 111°С и 128°С, соответственно, не приводит к появлению токсических свойств данных соединений и не снижает их способность интенсифицировать рост микроорганизмов разных таксономических групп.

»• 3. Внесение перфторметилдекалина и перфтордекалина в синтетическую среду с нефтью или мазутом в концентрации 1,0-25,0 об.% обеспечивает интенсификацию роста микроорганизмов-биодеструкторов в 3,9-8,2 раза и утилизацию ими ксенобиотиков в 3,4-11,9 раз.

4. Внесение перфторметилдекалина и перфтордекалина в синтетическую безазотистую среду в концентрации 1,0-25,0 об.% приводит к увеличению накопления биомассы азотфиксаторов в 1,3-5,9 раз, накоплению общего азота в 1,1-4,5 раз и увеличению их нитрогеназной активности в 2,6-3,4 раза.

5. Внесение 2,0 об.% перфтордекалина в жидкую питательную среду при выращивании стрептомицетов-продуцентов даунорубицина обеспечивает повышение выхода целевого продукта в 9,0-11,8 раз.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

кутьтур микроорганизмов с добавлением в среду культивирования перфторуглеродов», утвержденного директором ГУ ЗНИИСХ Северо-Востока им. Н.В. Рудницкого 28.12.2004; «Сборника методик по изучению влияния перфторуглеродов на культуры микроорганизмов», утвержденного директором ГУ ЗНИИСХ Северо-Востока им. Н.В. Рудницкого 28.12.2004; «Руководства по использованию перфторорганических соединений в биотехнологии», утвержденного ректором ВятГУ 26.09.2006; «Сборника методик по приготовлению питательных сред с добавлением в среду культивирования перфторуглеродов», утвержденного ректором ВятГУ 26.09.2006.

Исследования в данном направлении в 2006 г. поддержаны Российским фондом фундаментальных исследований (грант № 06-04-96338-а).

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

Полученные результаты работы и выводы могут найти свое практическое пр 1менение в биотехнологии, ветеринарной медицине, фармацевтике, здравоохранении, экологии, в частности при решении задач по совершенствованию и разработке новых технологий микробиологического синтеза с использованием ПФОС с газотранспортной функцией.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бакулин М.К. Интенсификация скорости роста бактерий и микромицетов в глубинных культурах под влиянием перфторорганических соединений /Бакулин М.К., Дармов И.В., Кучеренко A.C., Грудцына A.C., Плетнёва А.Ю.//С6. науч. тр.: «Б яотехнология: состояние и перспективы развития».- М.: ГУ «Российский фонд технологического развития» Минпромнауки России, 2003. - 4.1. - С. 317-318.

2. Бакулин М.К. Использование перфторорганических соединений для интенсификации процессов микробной деградации нефти и нефтепродуктов / Бакулин М.К., Чеботарёв Е.В., Кучеренко A.C., Плетнёва А.Ю., Грудцына A.C. //Сб. науч. тр.: «Биотехнология: состояние и перспективы развития».- М.: ГУ «Российский фонд технологического развития» Минпромнауки России, 2003. - 4.1. - С. 50.

3. Бакулин М.К. Использование перфторуглеродов для интенсификации процессов микробной деградации нефти и нефтепродуктов / Бакулин М.К., Кучеренко A.C., Кривошеина H.A., Шведов Д.В., Плетнёва А.Ю. // Всероссийская науч.-техн. конф. «Наука-производство-технология-экология»: Сб. материалов: В 5 т. - Киров: ВягГУ, 2003. - Т.З. - С. 80-82.

4. Бакулин М.К. Биологическая безопасность использования перфторорганических соединений в биотехнологии/Бакулин М.К., Кривошеина H.A., Бакулина JI.B., Пегрушин Д.М., Плетнёва А.Ю. // Всероссийская науч.-техн. конф. «Наука-

производство-технология-экология»: Сб.,материалов: В 5 т. - Киров: ВятГУ, 2003. -Т.З.-С. 84-86.

5. Бакулин М.К. Оптимизация биотехнологического процесса выращивания актином ид ето,в, с использованием перфторуглеродов / Бакулин М.К., Кучеренко А.С., Кривошеина Н.А., Бакулина JI.B., Грудцына А.С., Плетнёва А.Ю. // Всероссийская науч.-техн. конф. «Наука-производство-технология-экология»: Сб. материалов: В 5 т. - Киров: ВятГУ, 2003. - Т.З. - С. 90-92.

6. Дармов И.В. Сравнительное изучение штаммов Fusarium sporotrichiella / Дармов И.В., Алпашкин Р.И., Бакулин М.К., Грудцына А.С., Плетнёва А.Ю. // Всероссийская науч.-техн конф. «Наука-производство-технология-экология»: Сб. материалов: В 5 т. - Киров: ВятГУ, 2003. - Т.З. - С. 92-94.

7. Бакулин М.К. Интенсификация роста микромицетов рода Pénicillium и синтеза ими пенициллина в жидкой среде под влиянием карбогала и перфтордекалина / Бакулин М.К., Грудцына А.С., Плетнёва А.Ю. // Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии: Сб. науч. работ. - Томск: Сибирский гос. мед. ун-т, 2004. -Т.З. -№2.-С. 309-310.

8. Бакулин М.К. Влияние перфторорганических соединений на рост стрепто-мицетов и биосинтез ими рубомицина / Бакулин М.К., Плетнёва А.Ю., Грудцына А .С.// Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии: Сб. науч. работ. -Томск: Сибирский гос. мед. ун-т, 2004. - Т.З. - №2. - С. 310-311.

9. Грудцына А.С. Влияние перфторорганических соединений на рост микромицетов в жидких 'средах / Грудцына А.С., Плетнёва А.Ю., Бакулин М.К., Дармов И.В., Захаров Ю.В., Сысуев В.А., Алпашкин Р.И., Кривошеина Н.А. //Сб.: «Материалы научной сессии». - Киров: Киров, филиал РАЕ, Киров, обл. отделение РАЕН, 2004. - С. 174-175.

10. Плетнёва А.Ю. Глубинное культивирование бактерий с использованием пер-фторуглеродов/Плетнёва А.Ю., Грудцына А.С., Бакулин М.К., Дармов И.В., Захаров Ю.В., Сысуев В.А., Алпашкин Р.И., Кривошеина Н.А.//С6.: «Материалы научной сессии»,- Киров: Киров, филиал РАЕ, Киров, обл. отделение РАЕН, 2004. - С. 202-203.

11. Грудцына А.С. Изучение воздействия перфторорганических соединений на рост глубинных культур микромицетов / Грудцына А.С., Плетнёва А.Ю., Алпашкин Р.И., Кривошеина Н.А., Бакулин М.К., Нарсеева Е.С. // Всероссийская науч.-техн. конф. «Наука-производство-технология-экология»: Сб. материалов: В 5 т.-Киров: ВятГУ, 2004. - Т.З. - С. 48-49.

12. Плетнёва А.Ю. Экспериментальная оценка перспектив использования перфторуглеродов в микробиологии бактерий / Плетнёва А.Ю., Грудцына А.С., Кривошеина Н.А., Алпашкин Р.И., Бакулин М.К., Нарсеева Е.С. // Всероссийская науч.-техн. конф. «Наука-производство-технология-экология»: Сб. материалов: В 5 т. - Киров: ВятГУ, 2004. - Т.З. - С. 50-51.

13. Грудцына A.C. Оценка возможности использования различных питательных ос-юв для выращивания грибов рода Fusarium / Грудцына A.C., Плетнёва А.Ю., Алпашкин Р.И., Кривошеина H.A., Бакулин М.К. // Всероссийская науч.-техн. конф. «Наука-производство-технология-экология»: Сб. материалов: В 5 т. - Киров: ВятГУ, 2004. - Т.З. - С. 52.

14. Плетнёва А.Ю. Поиск чувствительных тест - штаммов Bacillus subtilis, пер-спгктивных для определения антибиотической активности грибов рода Fusarium / Плетнёва А.Ю., Грудцына A.C., Кривошеина H.A., Алпашкин Р.И., Бакулин М.К. // Всероссийская науч.-техн. конф. «Наука-производство-технология-экология»: Сб. материалов: В 5 т. - Киров: ВятГУ, 2004. - Т.З. - С. 53.

15. Грудцына A.C. Изучение возможности использования перфторуглеродов для интенсификации роста бактерий рода AzotobacterI Грудцына A.C., Плетнёва А.Ю., Бакулин М.К. // Всероссийская науч.- техн. конф. «Наука-производство - техноло-пн - экология»: Сб. материалов: В 6 т. - Киров: ВятГУ, 2005. - Т.З. - С. 244-245.

16. Плетнёва А.Ю. Культивирование бактерий-продуцентов белков, инициирующих льдообразование в жидкой питательной среде с добавлением перфторде-каиина /Плетнёва А.Ю., Грудцына A.C., Ворожцова Е.М. // Всероссийская науч.-техн. конф. «Наука-производство-технология-экология»: Сб. материалов: В 6 т. -Киров: ВятГУ, 2005. - Т.З. - С. 246-248.

17. Плетнёва А.Ю. Изучение действия перфтордекалина на рост и развитие глубинных культур псевдомонад / Плетнёва А.Ю., Грудцына A.C., Бакулин М.К. // Всероссийская науч.- техн. конф. «Наука-производство-технология-экология»: G6. материалов: В 6 т. - Киров: ВятГУ, 2005. - Т.З. - С. 249-250.

18. Грудцына A.C. Интенсификация процессов синтеза биологически активных ве неств при глубинном культивировании микроорганизмов в среде с добавлением перфторуглеродов / Грудцына A.C., Плетнёва А.Ю. // Всероссийский конкурс инновационных проектов «Живые системы»: Тезисы докладов. - Киров: ВятГУ, 2005.

- С. 76-78.

19. Бакулин М.К. Перфторуглероды - новый этап развития биотехнологии микроорганизмов / Бакулин М.К., Грудцына A.C., Плетнёва А.Ю. // Всероссийская науч.-техн. конф. «Наука-производство-технология-экология»: Сб. материалов: В 8 т.

- Киров: ВятГУ, 2006. - Т.З. - С. 225-228.

20. Бакулин М.К. Биологическая фиксация азота в присутствии перфторуглеродов / Бакулин М.К., Грудцына A.C., Плетнёва А.Ю., Петухова Е.В. // Всероссийская науч.-техн. конф. «Наука-производство-технология-экология»: Сб. материалов: В 8 т. - Киров: ВятГУ, 2006. - Т.З. - С. 229-232.

21. Бакулин М.К. Интенсификация активности нефтедеструкторов в ассоциации с азотобактером при использовании перфторуглеродов / Бакулин М.К., Плетнёва А.Ю., Грудцына A.C. // Всероссийская науч.-техн. конф. «Наука-производство-

технолбгия-экология»: Сб. материалов: В 8т.-Киров: ВятГУ, 2006. - Т.З. - С. 233-236.

22. Грудцына A.C. Интенсификация перфторорганическими соединениями азот-фиксации у глубинных культур азотобактера / Грудцына A.C., Плетнёва А.Ю., Ба-кулин М.К. // Проблемы биологии, экологии и образования: история и современность: Материалы международной науч. конф. - С,- Петербург: ЛГУ им. A.C. Пушкина, 2006. - С. 44-46.

23. Плетнёва А.Ю. Роль компонента «голубой крови» в снабжении азотом и кислородом ассоциации микроорганизмов нефтедеструкторов с азотобактером / Плетнёва А.Ю., Грудцына A.C., Бакулин М.К. // Проблемы биологии, экологии и образования: история и современность: Материалы международной науч. конф. -С,- Петербург: ЛГУ им. A.C. Пушкина, 2006. - С. 197-199.

24. Петухова Е.В. Рост бактерий рода Azotobacter в жидких питательных средах в присутствии перфторуглеродов/ Петухова Е.В., Грудцына A.C., Плетнёва А.Ю. // Всероссийская конференция в рамках конкурсного отбора инновационных проектов аспирантов и студентов по приоритетному направлению «Живые системы»: Сб. докладов. - Киров: ВятГУ, 2006. - С. 117-119.

25. Бакулин М.К. Влияние перфтордекалина, карбогала и перфторметилдекалина на рост и льдообразующую активность бактерий / Бакулин М.К., Грудцына A.C., Плетнёва А.Ю., Кучеренко A.C., Ляпустин A.B., Малахов И.Г. // Микробиология. -2006.-№3,-С. 371-376.

26. Бакулин М.К. «Голубая кровь» в биотехнологии / Бакулин М.К., Грудцына A.C., Плетнёва А'.Ю., Бакулина Л.В,, Тихонов И.В.// Ветеринарная медицина. - М.:

^ «Агровет». - 2006. - №2-3. - С. 4-6.

27. Бакулин М.К. Медико-биологические аспекты использования перфторуглеродов с газотранспортной функцией в медицине и ветеринарии / Бакулин М.К., Грудцына A.C., Плетнёва А.Ю., Бакулина Л.В., Тихонов И.В. // Ветеринарная медицина.- М.: «Агровет». - 2006. - №2-3. - С. 25-27.

28. Бакулин М.К. Характеристика антибиотической продуктивности бактерий рода Streptomyces при культивировании в среде с добавлением карбогала и перфторметилдекалина / Бакулин М.К., Грудцына A.C., Плетнёва А.Ю., Кучеренко A.C., Бакулина Л.В , Шведов В.В. // Биотехнология. - 2006. - №5. - С. 39-44.

29. Бакулин М.К. Влияние перфтордекалина и карбогала на рост микроорганиз-мов-нефтедеструкторов в ассоциации с азотобактером на жидкой синтетической среде с нефтью / Бакулин М.К., Плетнёва А.Ю., Грудцына A.C., Бакулина Л.В. // Биотехнология. - 2006. - №6. - С.44-50.

Подписано в печать 01 02.07 г. Усл. печ. л. 1,0

Бумага офсетная. Печать матричная.

Зги аз № 121. Тираж 100

Текст напечатан с электронной версии, предоставленной заказчиком.

610000, г. Киров, ул. Дрелевского, 55. Изютовление - ООО «Фирма «Полекс».

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Плетнёва, Анна Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Предпосылки к использованию перфтороргапических соединений при глубинном культивировании микроорганизмов.

1.2. Биофизические основы и история создания препаратов па основе перфтороргапических соединений.

1.3. Свойства и применение перфтороргапических соединений.

1.4. Особенности отдельных групп микроорганизмов, используемых в биотехнологии и рассматриваемых в работе.

1.4.1. Биодеструкторы.

1.4.2. Азотфиксаторы.

1.4.3. Актиномицеты - продуценты противоопухолевых антибиотиков.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы.

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Оценка чувствительности микроорганизмов разных групп к перфторорганическим соединениям.

2.2.2. Изучение стабильности сохранения свойств перфторорганических соединений при различных режимах тепловой стерилизации.

2.2.3. Рост биодеструкторов в синтетической среде с нефтью и мазутом в присутствии перфторорганических соединений.

2.2.3.1. Изучение влияния перфторана на накопление биомассы нефтедеструкторов и разложения ими нефти.

2.2.3.2. Изучение влияния перфтордекалина, карбогала и перфторметилдекалина на накопление биомассы нефтедеструкторов и разложения ими нефти и мазута.

2.2.3.3. Разложение нефти в присутствии перфтордекалина при глубинном культивировании в ферментере.

2.2.4. Изучение влияния перфторорганических соединений на интенсивность роста, нитрогеназную активность и накопление общего азота бактериями рода АгоШЬаМег.

2.2.5. Выращивание смешанных культур азотобактера и биодеструкторов в жидких средах с перфторорганическими соединениями.

2.2.6. Изучение влияния перфторорганических соединений на интенсивность роста и продукцию даунорубицина при глубинном культивировании стрептомицетов.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

4. ВЫВОДЫ.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Использование перфторорганических соединений при глубинном культивировании микроорганизмов"

Актуальность работы. В последние годы биотехнология приобретает все большее значение в хозяйственной деятельности экономически развитых государств. Она базируется, прежде всего, па использовании микроорганизмов, биосинтетические возможности и метаболизм которых обеспечивают эффективное получение самых разнообразных жизненно важных для нужд человека материалов: альтернативных источников энергии, медицинских препаратов, продуктов питания, химических веществ и др. Кроме того, ученые разрабатывают технологии применения микроорганизмов в различных областях промышленности и сельского хозяйства, создают системы микробиологической деградации ксенобиотиков и отходов производств [15,41,54].

Абсолютное большинство микроорганизмов, используемых в биотехнологических процессах при глубинном культивировании, нуждаются для роста, развития, продукции биологически активных веществ в снабжении различными газами (в первую очередь кислородом) и удалении газообразных продуктов метаболизма. В то время как минеральные соли и органические вещества можно добавлять в среду в концентрациях, обеспечивающих рост микроорганизмов на протяжении нескольких часов и даже дней, с молекулярным кислородом этого сделать нельзя из-за малой растворимости в воде. Потребность же аэробных микроорганизмов в кислороде может составлять десятки кг кислорода на м3 культуральной среды в час, что заставляет биотехнологов прибегать к разнообразным дорогостоящим ухищрениям, которые, однако, далеко не всегда обеспечивают равномерное и полноценное снабжение микробной клетки газами и удаление газообразных продуктов метаболизма [15,16,34,54,132].

Вторая половина XX века ознаменовалась многочисленными техногенными катастрофами, локальными и крупными военными конфликтами, что потребовало большого количества донорской крови, а необходимость тестирования ее на иммунологическую совместимость и отсутствие вирусов гепатитов, СПИДа и других, ранее неизвестных заболеваний, повысили цену порции крови для одной трансфузии до 400 долларов [67]. Огромные количества переливаемой крови (только для России ежегодно требуется более 3 млн трансфузий, а в целом потребность мирового рынка крови оценивается более чем в 2,9х109 долларов в год) и существующая всегда опасность внесения чужеродной инфекции реципиенту в качестве насущного поставили вопрос о создании эффективного кровезаменителя [68,70]. Перспективным направлением стала его разработка на основе перфторорганических соединений с газотранспортной функцией. В результате работ ученых разных стран был создан целый ряд принципиально новых кровезаменителей: Oxygent, Liqui Vent, Therox, Oxyfluor (США); Fluosol-DA (Япония); Emulsion II (Китай) [67,68,70]. Однако наиболее перспективным по комплексу свойств и результатам длительных клинических испытаний стал российский перфторан (или «голубая кровь» - название, которое дали журналисты перфторану в прессе) [5,179,186,232].

Исследования, проведенные с перфтораиом, и практические результаты, достигнутые при изучеиии перфторорганических соединений свидетельствуют о перспективности их использования в биологии и медицине [66,67]. Это объясняется тем, что перфторорганические соединения обладают комплексом практически полезных свойств: высокой химической и биологической устойчивостью, отсутствием токсичности для живых организмов, способностью растворять газы (до 50 об.% 02, до 200 об.% С02, до 300 об.% С2Н6 и др.) и изменять проницаемость клеточных мембран, облегчая при этом транспорт веществ [67].

В настоящее время перфторорганические соединения находят свое применение не только в медицине, но в и технике и косметологии [101], однако применение этого класса соединений в других областях биологической науки и, в первую очередь, в биотехнологии пока не нашло соответствующего обсуждения и реализации. Поэтому большой интерес представляет изучение возможности использования жидких перфторорганических соединений как для улучшения снабжения глубинных культур микроорганизмов газообразными источниками питания (кислородом, азотом), так и для удаления газообразных продуктов метаболизма.

Для достижения цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Экспериментально обосновать возможность применения перфторорганических соединений при глубинном культивировании бактерий родов Pseudomonas, Rhodococcus, Bacillus, Streptomyces, Escherichia, Azotobacter и микромицетов родов Saccharomyces, Pénicillium и Fusarium;

4. Оценить эффективность применения перфторорганических соединений при глубинном культивировании в безазотистой синтетической среде азотфиксирующих бактерий рода Azotobacter при использовании молекулярного азота воздуха в качестве единственного источника азота;

5. Оценить влияние перфторорганических соединений па рост глубинных культур Streptomyces piirpiirogeniscleroticus и биосинтез противоопухолевого антибиотика даунорубицина.

Научная новизна работы заключается в том, что впервые:

1. Проведена комплексная теоретическая и экспериментальная оценка возможности использования перфторорганических соединений с газотранспортпой функцией при глубинном культивировании бактерий родов Pseudomonas, Rhodococcus, Bacillus, Streptomyces, Escherichia, Azotobacter и микро-мицетов родов Saccharomyces, Pénicillium и Fusarium;

2. Экспериментально обоснована возможность стерилизации автокла-вированием перфторметилдекалина и перфтордекалина при многократном использовании для глубинного культивирования микроорганизмов;

3. Установлен положительный эффект от использования перфторорга-нических соединений при глубинном культивировании бактерий - биодеструкторов в синтетической среде с нефтыо и мазутом;

Кроме того, 2 заявки проходят завершающую стадию рассмотрения в ФГУ ФИПС: №2005139679/13 «Способ культивирования клеток микроорганизмов» (приоритет от 19.12.2005); №2006100517/13 «Способ глубинного культивирования льдообразующих бактерий» (приоритет от 10.01.2006).

Практическая значимость. Экспериментально обосновано применение перфторорганических соединений с газотранспортной функцией при глубинном культивировании микроорганизмов разных таксономических групп для интенсификации процессов биосинтеза. Ma основании полученных данных разработаны методики, руководство и инструкция по применению перфторорганических соединений в составе питательных сред при глубинном культивировании микроорганизмов, которые используются в учебном процессе в ВятГУ, а также в научной работе ГУ ЗНИИСХ Северо-Востока им. Н.В. Рудницкого, 48 ЦНИИ Минобороны России (НИИ микробиологии МО РФ).

Апробации результатов диссертации. Основные результаты исследований доложены и обсуждены на: II Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2003); научной сессии Кировского филиала РАЕ, Кировского областного отделения РАЕН (Киров, 2004); Всероссийских ежегодных конференциях «Наука-производство - технология-экология» (Киров, 2003-2006); Всероссийском конкурсном отборе инновационных проектов аспирантов и студентов по приоритетному направлению «Живые системы» (Киров, 2005, 2006); Международной конференции «Проблемы биологии, экологии и образования: история и современность» (С.-Петербург, 2006).

Объём и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 164 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (242 источника, из которых 199 отечественных и 43 зарубежных авторов). Работа содержит 18 таблиц, 20 рисунков и 8 страниц приложений.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Плетнёва, Анна Юрьевна

4. ВЫВОДЫ

1. Внесение в жидкие питательные среды карбогала, перфторметилде-калина и перфтордекалина в концентрации 0,25-16,0 об.% при глубинном культивировании бактерий родов Pseudomonas, Rhodococcus, Bacillus, Streptomyces, Escherichia, Azotobacter и микромицетов родов Saccharomyces, Pénicillium и Fusarium обеспечивает прирост биомассы микроорганизмов в 1,1-7,8 раз.

2. Стерилизация перфторметилдекалина и перфтордекалина автоклави-рованием при избыточном давлении 152 и 251 кПа и температуре 111 °С и 128°С, соответственно, не приводит к появлению токсических свойств данных соединений и не снижает их способность интенсифицировать рост микроорганизмов разных таксономических групп.

3. Внесение перфторметилдекалина и перфтордекалина в синтетическую среду с нефтью или мазутом в концентрации 1,0-25,0 об.% обеспечивает интенсификацию роста микроорганизмов-биодеструкторов в 3,9-8,2 раза и утилизацию ими ксенобиотиков в 3,4-11,9 раз.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Разработанные в ходе выполнения исследований новые методы получения микробных препаратов с использованием ПФОС реализованы составлением следующих документов: «Инструкции по применению перфторуглеро-дов при культивировании микромицетов рода Fusarium», утвержденной начальником НИИ микробиологии МО РФ 31.12.2003; «Сборника методик по выращиванию культур микроорганизмов с добавлением в среду культивирования перфторуглеродов», утвержденного директором ГУ ЗНИИСХ Северо-Востока им. Н.В. Рудницкого 28.12.2004; «Сборника методик по изучению влияния перфторуглеродов на культуры микроорганизмов», утвержденного директором ГУ ЗНИИСХ Северо-Востока им. Н.В. Рудницкого 28.12.2004; «Руководства по использованию перфторорганических соединений в биотехнологии», утвержденного ректором ВятГУ 26.09.2006; «Сборника методик по приготовлению питательных сред с добавлением в среду культивирования перфторуглеродов», утвержденного ректором ВятГУ 26.09.2006.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

Полученные результаты работы и выводы могут найти свое практическое применение в биотехнологии, ветерииарной медицине, фармацевтике, здравоохранении, экологии, в частности при решении задач по совершенствованию и разработке новых технологий микробиологического синтеза с использованием ПФОС с газотранспортной функцией.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Плетнёва, Анна Юрьевна, Москва

1. Аиба Ш. Биохимическая технология и аппаратура / Ш. Аиба, А. Хемфри, Н. Миллис. М.: Пищепром, 1975. - 285 с.

2. Алещенкова З.М. Использование микроорганизмов деструкторов для очистки почвы, загрязненной выбросами лавсана / Алещенкова З.М., Самсо-нова A.C., Байкова C.B. // Новые направления биотехнологии: Тезисы докл. 6 Рос. конф., г. Пущино, 1994. - С. 44.

3. Андреева И.С. Психротолераптные штаммы-нефтедеструкторы для био-ремедиации почв и водной среды / Андреева И.С., Емельянова Е.К., Загре-бельный С.Н. и др. // Биотехнология. 2006. - №1. - С.43-52.

4. Арапов Г.М. Черное золото останется в цене / Арапов Г.М. // Валовый внутренний продукт. 2006. - №18. - С. 122-125.

5. Артамонова В. Эпоха перфторуглеродов / Артамонова В.// Химия и жизнь XXI век. - 1998. - №7. - С.14-19.

6. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследо-ваниях/И.П. Ашмарин, A.A. Воробьев. Л.: Гос. изд-во мед. лит-ры, 1962. -181 с.

7. Барышникова Л.М. Биодеградация нефтепродуктов штаммами- деструкторами и их ассоциациями в жидкой среде / Барышникова Л.М., Грищенков В.Г., Аринбасаров М.У. и др.// Прикл. биохимия и микробиология. 2001. -№5. - С.542-548.

8. Баснакьян И.А. Культивирование микроорганизмов с заданными свойствами / И.А. Баснакьян. М.: Медицина, 1992. - 191 с.

9. Баумштейн В.Е. Фармакологическое исследование рубомицинов В и С / В.Е. Баумштейн //Антибиотики, 1969. 845 с.

10. Бейли Дж. Основы биохимической инженерии / Дж. Бейли, Д. Оллис. -М.: Мир, 1989.-692 с.

11. Беккер A.A. Охрана и контроль загрязнения природной среды / A.A. Бек-кер, Т.Б. Агаев. Ленинград: Гидрометеоиздат, 1989. - 288 с.

12. Билай В.И. Рост грибов на углеводородах нефти / В.И. Билай, Э.З. Коваль. Киев: Наукова думка, 1980. - 254 с.

13. Биопрепарат «Родер» для очистки почв, почвогруитов, пресных и минерализованных вод от нефти и нефтепродуктов: Патент 2174496 RU / В.П. Мурыгина, Н.Е. Войшвилло, С.В. Калюжный. № 99110890/13; За-явл.31.05.1999. Опубл. 10.10.2001.

14. Биопрепарат для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов: Патент 2191752 RU / В.П. Холоденко, В.А. Чугунов, З.М Ермоленко и др. № 99120413/13; Заявл.27.09.1999. Опубл. 27.10.2002.

15. Биотехнология. Принципы и применение / Под ред. И. Хиггинса, Д. Бес-та, Д. Джонса. М.: Мир,1988. - 480 с.

16. Биотехнология: Учеб./ И.В. Тихонов, Е.А. Рубан, Т.Н. Грязнева и др.-Спб.: Гиорд, 2005. 792 с.

17. Бирюков В.В. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза / В.В. Бирюков, В.М. Кантере. М.: Наука, 1985. - 292 с.

18. Богданова JLA. Краткий обзор применения перфторана в клинике/ JI.A. Богданова, Е.И. Маевский, Г.Р. Иваницкий и др. // Перфторуглеродные соединения в биологии и медицине. Пущино, 2004. - С. 18-31.

19. Богомолов А.И. Современные методы исследования нефтей / А.И. Богомолов. Д.: Недра, 1984. - 431 с.

20. Большая медицинская энциклопедия. М.: Советская энциклопедия. -1980. - Т.12 - С. 261.

21. Брагинский JI.H. Перемешивание в жидких средах / JI.H. Брагинский, В.И. Богачев, В.М. Барабаш. JL: Химия, 1984. - 336 с.

22. Бражникова М.Г. Изучение состава рубомицинов А, В и С/ М.Г. Бражни-кова, Г.Б. Федорова, A.C. Мезенцев и др. //Антибиотики. 1970. - №7. - С. 243-247.

23. Буткевич B.C. Об образовании аммиака при фиксации молекулярного азота азотобактером/ B.C. Буткевич, H.A. Колесникова // ДАН. 1941. -Вып.1.- С.66-69.

24. Васильева Т.П. Применение эмульсий ПФОС в онкологии / Васильева Т.П. //Физиологически активные вещества на основе перфторуглеродов в экспериментальной и клинической медицине. С.-Петербург: BMA, 1999. -С. 10-12.

25. Васильченко В.Ф. Персистентность и токсичность метаболитов трефлана / Васильченко В.Ф., Акименко Л.И., Дубровская A.A. и др.// Бюллетень Всесоюзного НИИ с.-х. микробиологии. Л. 1987. - №46. - С. 25-26.

26. Вельков В.В. Биоремедиация: принципы, проблемы, подходы /Бельков В.В. // Биотехнология. 1995. - № 3-4. - С. 20-27.

27. Виестур У.Э. Культивирование микроорганизмов /У.Э. Виестур, М.Ж. Кристапсонс, Е.С. Былинкина. М.: Пищ. пром., 1980. - 231 с.

28. Воробьев С.И. Модификация мембран клеток перфторуглеродами как возможный механизм уменьшения степени ишемического повреждения миокарда/ Воробьев С.И., Иваницкий Г.Р., Ладилов Ю.В. и др.// ДАН. 1988. -№ 1. - С. 228-230.

29. Воробьева Г.И. Микробиологическая деструкция нефтезагрязнений / Воробьева Г.И., Гурба A.B., Винаров А.Ю. и др. // Мед. промышленность и биотехнология. 1992. - вып. 5-6. - С. 12-16.

30. Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем: Сб. науч. тр./ Под ред. Глазовской М.А. М.: Наука, 1988. - 312 с.

31. Гаврилюк Б.К. Рост перевиваемых и первичных клеток на жидкой поверхности / Гаврилюк Б.К., Панкратов C.B., Будницкий A.A. и др. // Цитология. -1981.-№ 11. С.1326-1329.

32. Гаврилюк Б.К. Культивирование клеток ВНК-21 на эмульсии жидкого фторуглерода / Гаврилюк Б.К., Лежнев Э.И., Макарова О.П. и др. // Цитология. 1981.-№ 3. - С.389-392.

33. Гапонов К.П. Процессы и аппараты микробиологических производств /

34. К.ГТ. Гапонов. М: Легкая и пищевая промышленность, 1981.- 239 с.

35. Гаузе Г.Ф. Синтез противоопухолевого антибиотика рубомицина / Гаузе Г.Ф. //Антибиотики. -1961. -№3. С.345-348.

36. Гаузе Г.Ф. Противоопухолевые антибиотики / Г.Ф. Гаузе, Ю.В. Дудник. -М.: Медицина, 1987. 176 с.

37. Гаузе Г.Ф. Вопросы классификации актиномицетов-антагонистов / Г.Ф. Гаузе, Т.П. Преображенская. М.: Медицина, 1957. - 321 с.

38. Гаузе Г.Ф. Определитель актипомицетов / Г.Ф. Гаузе, Т.П. Преображенская, М.А. Свешникова и др. М.: Наука, 1983. - 246 с.

39. Гитарский М.Л. Эмиссия закиси азота при использовании минеральных удобрений в России / Гитарский М.Л., Романовская A.A., Карабань Р.Т. и др.// Почвоведение. 2000. - № 8. - С.943-950.

40. Гланц С. Медико-биологическая статистика /С. Глапц. М.: Практика, 1998.-459 с.

41. Глик Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение / Б. Глик, Д. Пастернак М.: Мир, 2002. - 589 с.

42. Градова Н.Б. Использование бактерий рода Azotobacter при биоремедиа-ции нефтезагрязненных почв / Градова Н.Б., Горнова И.Б., Эддауди Р. и др. // Прикл. биохимия и микробиология. 2003. - №3. - С. 318-321.

43. Грищенков В.Г. Бактериальные штаммы деструкторы топочного мазута: характер деградации в лабораторных условиях / Грищенков В.Г., Гаязов P.P., Токарев В.Г. и др. // Прикл. биохимия и микробиология. - 1997. - №4. -С. 423-427.

44. Гусев М.В. Микробиология / М.В. Гусев, Л.А. Минеева. М.: Академия, 2003. - 464 с.

45. Димитриева Г.Ю. Детоксикация фенола микроорганизмами прибрежной зоны моря / Димитриева Г.Ю., Христофорова Н.К., Дроздовская O.A. и др.// Микробиология. 1999.-№1.-С. 107-113.

46. Добровольская Т.Г. Структура бактериальных сообществ почв/ Т.Г. Добровольская. М.:ИКЦ «Академкнига», 2002. - 282 с.

47. Доценко Г.Н. Использование микромицетов для удаления загрязнений с деталей авиационной техники / Доценко Г.Н., Феофилова Е.П., Терешина

48. B.М. и др. // Прикл. биохимия и микробиология. 2001. - №1. - С. 73-76.

49. Драчук C.B. Микрофлора почв, загрязненных нефтепродуктами/ Драчук

50. C.B., Кокшарова Н.В., Фирсов H.H. // Экология. 2002. - №2. - С. 148-150.

51. Дреймане М.А. Получение ферментных препаратов при непрерывном культивировании микроорганизмов/ М.А. Дреймане, Г.Р. Межиня. М.: Мир, 1984.-246 с.

52. Дымшиц В.А. Двухфазное культивирование Streptomyces levons. 3. Влияние парафина на массопередачу кислорода, дисперсионные и поверхностные характеристики среды /Дымшиц В.А., Гильманов В.Г., Древецкая B.J1. // Биотехнология. 1994. - №5. - С. 25-27.

53. Дымшиц В.А. Двухфазное культивирование Streptomyces levons. 1. Выбор органической фазы и ее влияние на жизнедеятельность культуры / Дымшиц В.А., Гильманов В.Г., Древецкая B.J1. и др. // Биотехнология. 1994. -№5. - С. 20-22.

54. Дымшиц В.А. Двухфазное культивирование Streptomyces levons. 2. Накопление биомассы и протеолитическая активность /Дымшиц В.А., Древецкая B.JL, Иванова И.А. // Биотехнология. 1994. - №5. - С. 23-24.

55. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках/ Н.С. Егоров. М.: Наука, 2004. - 528 с.

56. Блинов Н.П. Основы биотехнологии / Н.П. Блинов. С.-Петербург: Наука, 1995.-600 с.

57. Емцев В.Т. О регулировании микробиологической деградации пестицидов в почвах / Емцев В.Т. // Бюллетень Всесоюзного НИИ с.-х. микробиологии.-Л., 1987.-№46.-С. 41-42.

58. Ершов Ю.А. Общая химия. Биофизическая химия. Химия биогенных элементов/ Ю.А. Ершов. М.: Высш. шк., 2000. - 560 с.

59. Желнова Г.С. Азотобактер в условиях минеральных и торфяных почв, его активность и влияние на урожай: Автореф. дис. канд. биол. наук/ Г.С. Желнова. Томск, 1967. - 23 с.

60. Жемчужин С.Г. Биодеградация пестицидов и родственных контаминан-тов окружающей среды / Жемчужин С.Г. //Агрохимия. 2002. - №9. - С.76-91.

61. Жукаускас Г.Ю. Многофункциональное применение перфторуглеродов/ Жукаускас Г.Ю., Дапшис K.JI. //Физиологически активные вещества на основе перфторуглеродов в экспериментальной и клинической медицине. С.Петербург: BMA, 2001. - С. 18-20.

62. Жуков Д.В. Механизмы деградации углеводородов нефти микроорганизмами / Жуков Д.В., Мурыгина В.П., Калюжный C.B.// Успехи соврем, биологии. 2006. - №3. - С.285-296.

63. Зайцева Г.Н. Биохимия азотобактера /Т.Н. Зайцева.-М.:Наука, 1965-100 с.

64. Звягинцев Д.Г. Методы почвенной микробиологии и биохимии / Д.Г. Звягинцев. М.: Изд-во МГУ, 1991. - 231с.

65. Золышкова Н.В. Интенсификация активности почвенных микроорганиз-мов-нефтедеструкторов биоудобрением Бамил: Тез. докл. Рос. академии с.-х. наук/ Зольникова Н.В., Кхарив М., Рыбальченко О.В. и др.-1998. №6. - С. 22-24.

66. Иваницкий Г.Р. Биофизика на пороге нового тысячелетия: перфторугле-родные среды и газотранспортные кровезаменители / Иваницкий Г.Р. // Биофизика.-2001.-№ 1. С. 5-33.

67. Иваницкий Г.Р. Биофизические основы создания перфторуглеродных сред и газотранспортных кровезаменителей (обзор) / Иваницкий Г.Р. // Перфторорганические соединения в биологии и медицине.-Пущино,2001.-С.4-48.

68. Иваницкий Г.Р. Дар жизни или поцелуй смерти / Иваницкий Г.Р.// Вестник РАН. 1999. - №3. - С. 273-276.

69. Иваницкий Г.Р. Донорская кровь и ее альтернативы/ Иваницкий Г.Р. // Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино, 1999. -С. 5-20.

70. Иваницкий Г.Р. Переливание крови: против, за и альтернатива / Иваницкий Г.Р. // Наука и жизнь. 1999. - №2. - С. 14-19.

71. Иваницкий Г.Р. Культивирование животных клеток на жидких перфто-руглеродах/ Иваницкий Г.Р., Архипов В.В., Белоярцев Ф.Ф. и др.// ДАН. -1981.-№1.-С. 225-228.

72. Иваницкий Г.Р. Организация подвижных структур в кровотоке основа функционирования перфторуглеродной «искусственной крови»/ Иваницкий Г.Р., Воробьев С.И.//Биофизика. - 1996.-№1,-С. 178-190.

73. Иваницкий Г.Р. Самопроизвольная подвижность липидного слоя в системе из трех несмешиваемых жидкостей/ Иваницкий Г.Р., Крестьева И.Б., Хижняк Е.П. и др.// ДАН. 2000. - С. 374-376.

74. Илларионов Э.Ф. Повышение надежности количественного определения в биологических жидкостях блок-сополимеров типа проксанола и плюрони-ка/ Илларионов Э.Ф., Маевский Е.И.// Хим. Фарм. журнал. 1987. - №8. - С. 1008-1012.

75. Иноятов Ф.Ш. Влияние перфторана на параметры биохимической деток-сикации у крыс с острым токсическим поражением печени / Иноятов Ф.Ш.// Эксперим. и клин, фармакология. 2000. - №2. - С. 67-70.

76. Исикаве Н. Фтор. Химия и применение/ Н. Исикаве, Е. Кобаяси; Под ред. A.B. Фокина. М.: Мир, 1982. - 276 с.

77. Калининская Т.А. Определение азотфиксирующей активности почвы, занятой под посевами риса, при помощи ацетиленового метода / Калининская Т.А., Pao В.Р., Волкова Т.Н. и др. // Микробиология.- 1973.-№3.-С.481 -485.

78. Калининская Т.А. Применение ацетиленового метода для количественного учета разных групп азотфнксаторов методом предельных разведений/ Калининская Т.А., Редькина Т.В., Белов Ю.М.// Микробиология. 1981. -вып.5. - С.924-928.

79. Каневская И.Г. Биологическое повреждение промышленных материалов/ И.Г. Каневская. Ленинград, 1984. - 232 с.

80. Карасева Э.В. Биоремедиация черноземной почвы, загрязненной нефтью / Карасева Э.В., Гирич И.Е., Худокормов A.A. и др. // Биотехнология. 2005. -№2. - С. 67-72.

81. Карпов A.B. Микробиологическая деградация мазута: оценка изменений фракционного состава путем анализа ИК Фурье - спектров / Карпов A.B., Селезнев С.Г., Аринбасаров М.У. и др.// Прикл. биохимия и микробиология. - 1998.-№6.-С. 609-616.

82. Каро К. Механика кровообращения / К. Каро, Т. Педли, Р. Шротер и др. -М.: Мир, 1981.-452 с.

83. Кафаров В.В. Основы массопередачи / В.В. Кафаров. М.: Высш. шк., 1979.-439 с.

84. Квасников Е.И. Влияние факторов внешней среды на деструкцию нефтепродуктов ассоциативными бактериями / Квасников Е.И., Смирнова Г.Ф., Клюшникова Т.М. // Микробиол. журнал. 1987. - №3. - С. 33-38.

85. Ким A.A. Микроорганизмы деструкторы полихлорированных бифени-лов /Ким A.A., Песцов Г.В., Ядгаров Х.Т. и др.// Прикл. биохимия и микробиология. - 2004. - №1. - С. 70-73.

86. Киреева H.A. Микробиологические процессы в нефтезагрязненных почвах / H.A. Киреева. Уфа: БашГУ,1994. - 172 с.

87. Киреева H.A. Влияние загрязнения почв нефтью и нефтепродуктами на численность и видовой состав микромицетов/Киреева H.A., Галимзянова

88. Н.Ф.// Почвоведение. 1995. - №2. - С. 211-216.

89. Киреева H.A. Влияние загрязнения почв нефтью на структуру комплекса микромицетов в прикорневой зоне люцерны / Киреева H.A., Бакаева М.Д., Галимзянова Н.Ф. // Микология и фитопатология. 2005. - вып.2. - С. 49-55.

90. Кнунянц И.Л. Покорение неприступного элемента/ И.Л. Кнунянц, A.B. Фокин. М.: Изд - во Акад. наук СССР, 1963. - 192 с.

91. Ковальская НЛО. Формирование искусственного азотфиксирующего симбиоза у растений рапса (Brassica napus var. парт) в нестерильной почве / Ковальская НЛО., Лобакова Е.С., Умаров М.М.// Микробиология. 2001. -№5.-С. 701-708.

92. Ковеленков АЛО. Перспективы лечебного применения перфторуглерод-ных соединений при ВИЧ инфекции/ Ковеленков АЛО., Войтенков Б.О., Маевский Е.И. и др. // Перфторуглеродные соединения в биологии и медицине. - Пущино, 2004. - С. 147-154.

93. Козловский А.Г. Изучение биодеградации поли ß- гидроксибутирата микроскопическими грибами/ Козловский А.Г., Желифонова В.П., Винокурова Н.Г. и др. // Микробиология. - 1999. - №3. - С. 340-346.

94. Кокоз Ю.М. Действие газопереносящей эмульсии перфторуглеродов на миокард (ионный транспорт, сократительная чувствительность к медиаторам) / Кокоз Ю.М., Кобринский Е.М., Фрейдин Е.М. и др. // ДАН. 1983. - №2. -С.459-462.

95. Коронелли Т.В. Принципы и методы интенсификации биологического разрушения углеводородов в окружающей среде / Коронелли Т.В.// Прикл. биохимия и микробиология. 1996. - №6, - С.579-585.

96. Коронелли Т.В. Видовая структура углеводородсодержащих бактериоценозов водных экосистем различных климатических зон / Коронелли Т.В., Дермичева С.Г. // Микробиология. 1994. - вып.5. - С.917-923.

97. Коронелли Т.В. Интродукция бактерий рода Rhodococcus в тундровую почву, загрязненную нефтью / Коронелли Т.В., Комарова Т.И., Ильинский В.В. //Прикл. биохимия и микробиология. 1997. -№2. - С. 198-201.

98. Коронелли Т.В. Мукоровые грибы деструкторы жировых веществ / Коронелли Т.В., Юферова С.Г., Комарова Т.И. и др. // Прикл. биохимия и микробиология. - 1994. - №2. - С.255-259.

99. Кочетков В.В. Выделение и характеристика бактерий деструкторов пестицидов / Кочетков В.В., Балакшина В.В., Наумов A.B. и др. // Прикл. биохимия и микробиология. - 1997. - №3. - С.310-313.

100. Краснова В. Российская компания решила создать косметический брэнд мирового класса/ Краснова В. // Эксперт. 2002. - №20. - С.26-34.

101. Кретович B.JI. Биохимия усвоения азота воздуха растениями / B.JI. Кретович. М.: Наука, 1994. - 167 с.

102. Кретович B.JI. Молекулярные механизмы усвоения азота растениями/ B.JI. Кретович. М.: Наука, 1980. - 29 с.

103. Кретович B.JI. Обмен усвоения азота в растениях / B.JI. Кретович. -М.:Наука, 1972.-527 с.

104. Кретович B.JI. Усвоение и метаболизм азота у растений / B.JI. Кретович. М.: Наука, 1987.- 485 с.

105. Кристапсонс М.Ж. Малые ферментационные установки / М.Ж. Кри-стапсонс. М.: ОНТИТЭИ-микробиопром, 1981. - 53 с.

106. Крылов H.JI. О путях и сроках выведения ПФОС из организма животных и человека / Крылов H.JL, Мороз В.В., Иваницкий Г.Р. и т.д.// Перфто-рорганические соединения в биологии и медицине. -Пущино,2001.-С. 100-111.

107. Кудеяров В.Н. Оценка современного вклада удобрений в агрохимический цикл азота, фосфора и калия / Кудеяров В.Н., Семенов В.М.// Почвоведение. 2004. - № 12. - С.1440-1446.

108. Кузнецова И.Н. О механизмах биологической активности эмульсий перфторуглеродов/ Кузнецова И.Н.//Физиологически активные вещества на основе перфторуглеродов в экспериментальной и клинической медицине.-С.-Петербург: ВМА, 2001. С. 29-31.

109. Курдиш И.К. Гранулированные препараты азотобактера на основе глинистых минералов / Курдиш И.К., Титова JI.B.// Прикл. биохимия и микробиология. 2000. - № 4. - С.484-487.

110. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований / А.С. Лабинская. М.: Медицина, 1978. - 394 с.

111. Лазарева И.С. Нефти новых месторождений Удмуртии и Самарской области / Лазарева И.С., Ильин П.П. // Химия и технология топлив и масел. -1993.-№7. с. 26-30.

112. Логинов А.Н. Оценка эффективности нового биопрепарата Ленойл для ремедиации нефтезагрязненных почв / Логинов А.Н,, Нуртдинова Л.А., Бойко Т.Ф. и др. // Биотехнология. 2004. - №1. - С. 77-82.

113. Максимов Б.Н. Промышленные фторорганические продукты / Б.Н. Максимов, В.Г. Барабанов, И.Л. Серушкин и др. СПб: Химия, 1996. - 544 с.

114. Мальцева Н.Н. Активность азотфиксации и азотфиксирующие микроорганизмы ризосферы озимой ржи / Н.Н. Мальцева, Е.В. Надкерничная, В.В. Волкогон и др. // Микробиол. журн. 1992. - № 6.- С. 10-16.

115. Манафова Н.А. Условия образования антибиотика рубомицина культурой Actinomyces coeruleorubidusl Манафова Н.А. //Антибиотики. 1965. - №3. -С. 145-148.

116. Матуашвили С.И. О влиянии бора и молибдена на морфологические и физиологические свойства Azotobacter chroococcum /Матуашвили С.И. //Микробиология. 1947. - № 1. - С. 19-31.

117. Мацуо М. Соединения фтора /М. Мацуо, С. Омоси. М.: Мир, 1990. - 232 с.

118. Медико-биологические аспекты применения эмульсий перфторуглеро-дов/ Под ред. Белоярцева Ф.Ф. Пущино, 1983. - 186 с.

119. Межиня Г.Р. Управляемое получение инокулята при глубинном культивировании микроорганизмов / Г.Р. Межиня, М.Ж. Кристапсонс,- М., 1977. -43 с.

120. Мицевич Е.В. Микробные деструкторы некоторых хлоорганических соединений / Мицевич Е.В., Мицевич И.П., Перелыгин В.В. // Прикл. биохимия и микробиология. 2000. - №6. - С. 642-646.

121. Мишустин E.H. Микрофлора почв северной и средней части СССР / E.H. Мишустин. М.: Наука, 1966. - С. 3-24.

122. Мишустин E.H. Почвенные азотфиксирующие бактерии рода Clostridium / E.H. Мишустин, В.Т. Емцев. М.: Наука, 1974. - 250 с.

123. Мишустин E.H. Потребность в молибдене свободноживущих азотфик-сирующих бактерий / E.H. Мишустин, Н.Б. Крылова // Микробиология. -1965.-№4.-С. 683-688.

124. Мишустин E.H. Биологическая фиксация атмосферного азота / E.H. Мишустин, В.К. Шильникова. М.: Наука, 1968. - 117 с.

125. Непрерывное культивирование микроорганизмов/ Под ред. И. Малека. -М., 1968.-546 с.

126. Омелянский B.JI. Связывание атмосферного азота почвенными микробами / B.JI. Омелянский. Петроград, 1923. - 186 с.

127. Орлов A.A. Клиническое исследование воздествия перфторана на кровоток/ Орлов A.A., Кармен Н.Б., Мариничева И.Г. и др. // Перфторуглеродные соединения в биологии и медицине. Пущино, 2004. - С. 113-115.

128. Останина JI.H. Влияние адаптации микробных и опухолевых клеток к рубомицину на поступление в них рубомицина и карминомицина/ Останина

129. JT.H., Авербух Л.А., Карпов В.Л. и др. // Антибиотики. -1978.-№11. С.368-372.

130. Перт С.Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток/ С.Дж. Перт. -М, 1978.-431 с.

131. Перфторированные углероды в биологии и медицине/ Под ред. Белоярцева Ф.Ф. Пущино, 1980. - 182 с.

132. Перфторорганические соединения в биологии и медицине/ Под ред. Г.Р.Иваницкого и В.В.Мороза. Пущино, 1999. - 286 с.

133. Перфторорганические соединения в медицине и биологии// Сб. материалов XII Международной конференции. Пущино, 2003. - 206 с.

134. Перфторорганические соединения в медицине и биологии// Сб. материалов XIII Международной конференции. Пущино, 2004. - 206 с.

135. Питательная среда для выделения и выращивания микобактерий. Патент 2233876 RU / P.A. Нуратинов, З.А. Казиахмедов, Э.А. Вердиева и др. №2002113140/13; Заявл. 18.05.2002. Опубл. 10.08.2004.

136. Практикум по микробиологии / Под ред. А.И. Нетрусова. М.: Академия, 2005.- 608 с.

137. Препарат для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов: Патент 2191753 RU/ В.М. Кондрашенко, В.П. Холоденко, И.А. Дунайцев и др. № 99120415/13; Заявл.27.09.1999. Опубл. 27.10.2002.

138. Промышленная микробиология / Под ред. Н.С. Егорова. М.: Высш. школа, 1989. - 688 с.

139. Рабинович М.Л. Разложение природных ароматических структур и ксенобиотиков грибами / Рабинович М.Л., Болобова A.B., Васильченко Л.Г. // Прикл. биохимия и микробиология. 2004. - №1. - С. 5-23.

140. Рубенчик Л.И. Азотобактер и его применение в сельском хозяйстве / Л.И. Рубенчик. Киев: Изд-во АН УССР, 1960. - 328 с.

141. Самсонов К.К. Использование микроорганизмов для защиты окружающей среды / Самсонов К.К.// С.-х. биология. 1990. - №1. - С. 193-198.

142. Сассон А. Биотехнология. Свершения и надежды / А. Сассон. М.: Мир, 1987.-416 с.

143. Серебрякова E.B. Двухфазное культивирование Serratia marcescens как способ повышения аэрации глубинных культур / Серебрякова Е.В., Калининский В.Б., Медведев Н.П. // Биотехнология. 1999. - №3. - С.63-66.

144. Сидоров В.Г. Полевой эксперимент по очистке почвы от нефтяного загрязнения с использованием углеводородокисляющих микроорганизмов / Сидоров В.Г., Борзенков И.А., Ибатуллин P.P. и др. // Прикл. биохимия и микробиология. 1997. - №5. - С.497-502.

145. Сингирцев И.Н. Микробная деградация компонентов сточных вод производства фенола / Сингирцев И.Н., Волченко Е.В., Корженевич В.И. и др. // Прикл. биохимия и микробиология. 2000. - №2. - С. 178-188.

146. Склифас A.B. Исследование механизмов аккумуляции и выведения перфторорганических соединений в организме животных: Автореф. дис.канд. биол. наук/ A.B. Склифас.- Институт биофизики клетки РАН. -Пущино, 2000.

147. Склифас А.Н. Механизмы распределения и выведения перфторуглеро-дов при многократных введениях/ Склифас А.Н., Шехтман Д.Г., Образцов В.В. и др. // Биофизика. 1998. - №1. - С.171-176.

148. Смирнов В.В. Бактерии рода Pseudomonas / B.B. Смирнов, Е.А. Ки-прианова. Киев: Наук, думка, 1990. - 263 с.

149. Способ контактной сушки микроорганизмов: Патент РФ № 2008589 /

150. С.Н.Вирясов, Н.Б. Голуб № 5042104/13; Заявл. 14.05.1992. Опубл. 28.02.1994.

151. Способ культивирования азотфиксирующих бактерий: Патент RU №2237048/ А.Ф. Блинохватов, А.И. Иванов, Д.Ю. Ильин и др. №2003122531/12; Заявл. 18.07.2003. Опубл. 18.07.2003.

152. Способ культивирования клеток биообъектов. Патент 1643061 SU /

153. B.М. Емельянов, H.A. Еремина, С.В. Кисилев и др. № 4621505/26; Заявл.19.12.88. Опубл. 23.04.91.

154. Способ получения бактерий, таких, как Azotobacter и их применение для обработки загрязненных минеральных масел: A.c. 674210 / Швейцария. Опубл. 15.05.90.

155. Способ получения биомассы бацилл. Патент 2053293 RU / A.A. Сте-пин, В.М. Самыгин, В.П. Кухтин и др. № 5036470/13; Заявл.09.01.1992. Опубл. 27.01.1996.

156. Способ получения биомассы и протеолитических ферментов патогенных псевдомонад. Патент 2116345 RU / В.М. Самыгин, И.В. Владимцева, A.A. Стенин и др. № 96113619/13; Заявл.26.06.1996. Опубл. 27.07.1998.

157. Способ получения препаративной формы для хранения энтомопатоген-ных нематод семейств Steinernematidae и Heterorhabditidae: Патент РФ № 2225107 / Л.Г. Данилов, В.Г. Айрапетян и др. № 2001127068/13; За-явл.04.10.2001. Опубл. 10.03.2004.

158. Способы очистки воды и почвы от нефтяных загрязнений: A.c. СССР №1428809/ В.Н. Дядечко, И.И. Нестеров, J1.E. Толстокорова и др. № 3938201/24-26; 3аявл.23.08.1985. Опубл. 07.10.1988.

159. Сравнительная физиология животных/ Под ред. Т.М. Турпаева. М.: Мир, 1976.-С. 350-429

160. Стабникова Е.В. Выбор активного микроорганизма деструктора углеводородов для очистки нефтезагрязненных почв // Прикл. биохимия и микробиология / Стабникова Е.В., Селезнева М.В., Рева О.Н. и др. - 1995. - №5.1. C. 534-539.

161. Теория и практика непрерывного культивирования микроорганизмов/

162. Под ред. И.Л. Работновой. М.: Наука, 1980. - 220 с.

163. Терещенко H.H. Биологическая азотфиксация как фактор ускорения микробной деструкции нефтяных углеводородов в почве и способы ее стимулирования / Терещенко H.H., Лушников C.B., Пышьева Е.В. // Биотехнология." 2004. № 5.- С 69-79.

164. Требин Г.Ф. Нефти месторождений Советского Союза/ Г.Ф. Требин, Н.В. Чарыгин, Т.М. Обухова. М.: Недра, 1980. - 583 с.

165. Турковская О.В. Изучение динамики роста и деструктивной активности штамма Pseudomonas putida / Турковская О.В., Панченко Л.В. // Прикл. биохимия и микробиология. 1995. - №3. - С.334-340.

166. Удод В.М. Микробное разрушение стеарокса-6 и изучение генетического детерминирования природы деструктивной активности / Удод В.М., Турковская О.В., Шуб Г.М. и др. // Микробиол. журнал.-1987.-№3. С.30-32.

167. Умаров М.М. Влияние инокуляции бактериями рода Pseudomonas на процессы азотного цикла в ризосфере небобовых растений/Умаров М.М., Бурлуцкая Г.Р., Давидович О.Г. и др. // Микробиология. -1994. №2. - С.326-333.

168. Федоров АЛО. Защитное действие агара при иммобилизации штаммов -деструкторов ароматических соединений /Федоров АЛО., Волченко Е.В., Сингирцев И.Н. // Прикл. биохимия и микробиология. -1999.-№2.-С. 165-172.

169. Федоров А.Ю. Утилизация гидропероксида изопропилбензола штаммами псевдомонад / Федоров АЛО., Сингирцев И.Н., Волченко Е.В. и др. // Прикл. биохимия и микробиология.-1998. №2. - С. 148-152.

170. Федосеев К.Г. Физические основы и аппаратура микробного синтеза биологически активных соединений / К.Г. Федосеев. М., 1977. - 304 с.

171. Ферментация и технология ферментов / Пер. с англ. под ред. К.А. Ка-лунянца. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983. - 336 с.

172. Фторуглеродные газопереносящие среды/ Под ред. Ф.Ф. Белоярцева. -Пущино, 1984.- 182 с.

173. Хазиев Ф.Х. Влияние нефтяного загрязнения на некоторые компоненты агроэкосистемы/ Хазиев Ф.Х.Дишкина Е.И, Киреева H.A. //Агрохимия.1988.- №2,-С. 56-62.

174. Хмель И.А. Влияние аэрации на жизнедеятельность микроорганизмов / Хмель И.А., Коршунов И.С. // Прикл. биохимия и микробиология. 1966. -№6.-С. 714-724.

175. Хотянович A.B. Методы культивирования азотфиксирующих бактерий, способы получения и применения препаратов на их основе / A.B. Хотянович. -Л., 1991.-251 с.

176. Чистякова И.К. Фиксация азота в такыровидных почвах под рисом / Чистякова И.К., Калининская Т.А. // Микробиология. -1984.-№1.-С. 123-128.

177. Чугунов В.А. Создание и применение жидкого препарата па основе нефтеокисляющих бактерий / Чугунов В.А., Ермоленко З.М., Жиглецова С.К. и др. // Прикл. биохимия и микробиология. 2000. - №6. - С. 666-671.

178. Шапова H.A. Рукотворный эритроцит / Шапова H.A. // Техника молодежи. 1984. - №12. - С. 25-34.

179. Швирст Э.М. Роль окситаксиса в возникновении диссипативных структур в культуре тетрахимен/ Швирст Э.М., Крипский В.И., Иваницкий Г.Р.// Биофизика. 1984. - Вып. 4. - С. 649-653.

180. Шевлякова Н.В. Влияние перфтордекалина на эмбриогенез и выживаемость молоди осетровых рыб при моделировании гипоксии / Шевлякова Н.В., Лозовский А.Р. // Перфторуглеродиые соединения в биологии и медицине. Пущино, 2003. - С.154-156.

181. Шевлякова Н.В. Химически инертные перфторуглероды повышают выживаемость и ускоряют развитие гидробионтов/ Шевлякова Н.В., Чижов А.Я., Маевский Е.И. и др. // Перфторуглеродиые соединения в биологии и медицине. Пущино, 2004. - С.222-227.

182. Шерстобоева Е.В. Биопрепараты азотфиксирующих бактерий: проблемы и перспективы применения / Шерстобоева Е.В., Дудинова И.А., Крама-ренко С.Н. и др. // Микробиологический журнал. 1997. - №4. - С. 109 -116.

183. Шилов В.В. Детоксикационная терапия острых отравлений липофиль-ными ксенобиотиками с помощью перфторуглеродных соединений: Автореф.дис. докт. мед. наук. Военно-медицинская академия / В.В. Шилов Санкт-Петербург, 1999.

184. Шкидченко А.Н. Изучение нефтедеструктивной активности микрофлоры прибрежной зоны Каспийского моря / Шкидченко А.Н., Аринбасаров М.У.// Прикл. биохимия и микробиология. 2002. - №5. - С. 509-512.

185. Шноль С.Э. Голубая кровь / С.Э. Шноль // Знание-сила. 1997. - №10. -С. 65-72.

186. Штамм Azotobacter chroococciun для получения бактериального удобрения под томаты: A.c. №1359272 / Н.А.Троицкий, М.А. Новицкая, Т.М. Троицкая и др. №3939753/31-13; Заявл.26.07.85. Опубл. 15.12.87

187. Штамм Azotobacter chroococcum для получения препарата, применяемого в растениеводстве: A.c. №1703634 / Е.В.Чекасина, Е.Д. Новогрудская, Г.М. Булгакова и др. №4617496/13; Заявл. 08.12.88. Опубл. 07.01.92.

188. Штамм Pseudomonas putida деструктор ароматических соединений и окиси метизила: Патент 1792925 RU/ АЛО. Федоров, И.Н. Сингирцев, В.И Корженевич и др. №4908727/13; Заявл.08.02.1991. Опубл. 07.02.1993.

189. Штамм Pseudomonas sp. деструктор углеводородов и ксенобиотиков: A.c. СССР №1395667/ В.П. Тульчипская, A.B. Цыбань, Н.Г. Астрова. № 4123359/31-13; Заявл.25.07.1986. Опубл. 15.05.1988.

190. Штамм Pseudomonas species 78 Г, предназначенный для деградации продуктов деструкции фосфороорганических отравляющих веществ: Патент 2154103 RU/ А.Т. Харечко, В.И. Мягких, И.О. Колесников и др. № 99100570/13; Заявл. 10.01.1999. Опубл. 10.08.2000.

191. Штамм бактерий Bradyrhizobium lupini для получения бактериального препарата под люпин: A.c. №1565831 / Н.И. Мильто, М.Е Кобзырева., Н.В. Шнейдер и др. №4357183/31-13; Заявл.04.01.86. Опубл. 23.05.90.

192. Штамм бактерий Corynebacterium species деструктор ароматических соединений: Патент 2061752 RU/ И.Н. Сингирцев, В.Ю. Крестьянинов, В.И. Корженевич. № 93021733/13; 3аявл.26.04.1993. Опубл. 10.06.1996.

193. Штамм гриба Penicillium citrinum, используемый для очистки высокоминерализованных сточных вод, содержащих галогенированные ароматические соединения: А.с. 1557161 СССР /Н.Н. Жданова, Л.Т. Наконечная, С.Р. Резник и др. №43153/31 -13; Заявл. 14.09.87.

194. Юрин В.М. Основы ксенобиологии / В.М. Юрин. Минск: БГУ, 2001. -234 с.

195. Ягафарова Г.Г. Биотехнологический способ очистки отходов бурения от нефти и полимерных реагентов / Ягафарова Г.Г., Гатауллина Э.М., Барах-нина В.Б.// Прикл. биохимия и микробиология. 1999. - №2. - С. 178-181.

196. Яковлев В.П. Антибактериальные препараты: современное состояние и перспективы / Яковлев В.П., Яковлев С.В. // Антибиотики и химиотерапия. -2001.-№11.-С.19-22.

197. Abudullah F. Effect of liposome encapsulated hemoglobin on serum triglyceride, total cholesterol, LDL and HDL cholesterol measurements / Abudullah F., Whiteford M., Ovadia P. et al. // Lipids. 1997. - V. 32. - P. 377-382.

198. Chang T.M.S. Modified hemoglobin-based blood substitutes: crosslinked, recombinant and encapsulated hemoglobin / Chang T.M.S. // Vox Sang. 1998. -V.74, Suppl.2. - P.233-241.

199. Chu D. Isovolemic hemodilution with purified and polymerised bovine hemoglobin in a rabbit model of focal cerebral ischemia / Chu D., Oglivy C.S. // Chinese J. Physiol. 1997.-V.40. - P.63-69.

200. Clark L. Survival of mammals breathing organic liquids equilibrated withoxygen at atmospheric pressure / Clark L.C., Gollan F. // Science. 1966. - V.152. -№3730. -P. 1755-1756.

201. Collman J.P. Aza-crowncapped porphyrin modelled of myoglobin: steadies of the steric interactions of gas binding / Collman J.P., Herrmann P.C., Fu L. et al. // J. Am. Chem. Soc. 1997. - V.l 19. - P.3481-3489.

202. Ellsworth M.L. The erythrocyte as a regulator of vascular tone / Ellsworth M.L., Forrester T., Ellis C.G. et al. //Am. J. Physiol. 1995. - V.269 (Heart. Circ. Physiol. 38): H2155-2161.

203. Fagrell B. Microcirculation: its significance in clinical and molecular medicine / Fagrell B., Intaglietta M. // J. Intern. Med. 1997. - V.241. - P.349-362.

204. Fenger-Gron J. Intestinal Blood flow is controlled by both feed arteries and microcirculatory resistance vessels in freely moving rats / Fenger-Gron J., Mul-vany M.J., Christensen K.L.// J. Physiol. Lond. 1997. - V. 498. - P. 215-224.

205. Fluorin Chemistry / Ed. J.H.Simons. V.5. // Academic Press. New York, London. 1964.

206. Geyer R.P. Fluorocarbon artificial blood substitutes / Geyer R.P.// New Engl. J. Med. 1973. - V. 289. - P. 1077 - 1082.

207. Harder D.R. Identification of a putative microvascular oxygen sensor/ Harder D.R., Narayaran J., Birks E.K. et al. // Circ. Res. 1996. - V.79. - P.54-61.

208. Intaglietta M. Whitaker Lecture 1996: microcirculation, biomedical engineering, and artificial blood / Intaglietta M. // Ann. Biomed. Eng. 1997. - V.25. -P.593-603.

209. Intaglietta M. Microvascular and tissue oxygen distribution / Intaglietta M., Johnson P.C., Winslow R.M. // Cardiovasc. Res. 1996. - V.32. - P.632-643.

210. Kabalnov A.S. Stability of perfluoroalkyl halide emulsions/ Kabalnov A.S., Makarov K.N., Shchukin E.D. // Colloid and Surface. 1992. - V.62. - P. 101-104.

211. Kasa W. Activation of complement by human hemoglobin and by mixtures of hemoglobin and endotoxin / Kasa W., Roth R. // Biochem. Biophys. 1995. -V.1245. - P.49-56.

212. Kerger H. Systemic and subcutaneous microvascular oxygen tension in conscious Syrian golden hamsters / Kerger H., Torres Filho I.P., Rivas M. et al. // Am. J. Physiol. 1995. - 2671. (Heart. Circ. Physiol. 37): P.H.802-810.

213. Kunert M.P. Low-affinity hemoglobin increases tissue P02 and decreases arteriolar Diameter and flow in the rat cremaster muscle / Kunert M.P., Liard J.F., Abraham D.J. et al. // Microvasc. Res. 1996. - V.52. - P.58-68.

214. Kylstra J. A., Tissing M. O., Van der Maen A. // Trans. Am. Soc. Artificial Internal Organs. 1962, V.8. - P. 378.

215. Laing R.B.S. Anaphylactic reactions to liposomal amphotericin / Laing R.B.S., Milne L.J.R., Leen C.L.S. et al. // Lanset. 1994.- V.344. - P.682.

216. Lee R. Limitations of the efficacy of hemoglobin-baased oxygen carrying solutions / Lee R., Neya K., Svizzero A., Vlahakes G.J. // J. Appl. Physiol. 1995. V.79. - P.236-242.

217. Sprung J. Oxygen transport and cardiovascular effect of resuscitation from severe hemorrhagic shock using hemoglobin solution/ Sprung J., Mackenzie C.F., Barnas G.M. et al. //Crit Care Med. 1995. - V.23. - P. 1540-1553.

218. Leech C.J. Differential sensitivity of venular and arteriolar alpha-adrenergic receptor constriction to inhibition by hypoxia: role of receptor subtype and coupling heterogeneity/ Leech C.J., Faber J.E. // Circ. Res. -1996,- V.78.-P. 1064-1074.

219. Margalith P. Mycopathologia. 1960. - V.12. - P. 189.

220. McGown E.L. Reduction of extracellular methemoglobin by erythrocytes / McGown E.L., Lyons M.F., Marini M.A. et al. // Biochem. Biophys. Acta. 1990. - V.1036. - P.202-206.

221. Naito R. On the perfluorodecalin phospholipid emulsion as the red cell substitute/ Naito R., Yokoyama K. // Proc. X-th Int. Congr. Nutz-Symp. PFC Artif. Blood. - Kyoto. 1975.-P. 55-72

222. Obraztsov V.V. On the interactions of perfluorochemical emulsions with liver microsomal membranes/ Obraztsov V.V., Kabalnov A.S., Makarov K.N. et al. //J. Fluor. Chem.- 1993. V.63. - P.101- 111.

223. Ogata Y. The development of neo red cells (NRC) with enzymatic reduction system of the methemoglobin / Ogata Y., Okamoto T., Suzuki K., Kamitani T. // Artif. Blood.- 1994. V.2. - P.62-66.

224. Phillips W.T. Platelet reactivity with liposome- encapsulated hemoglobin in rat /Phillips W.T., Klipper R., Frense D. et al. // Exp. Hematol. 1997. - V.25. -P.1347-1356.

225. Pries A.A. Effect of oxygen tension on regulation of arteriolar diameter in skeletal muscle in situ / Pries A.A., Heide J., Ley K. et al. // Microvasc. Rec. -1995.- V.49. P.289-299.

226. Rabinovici R. Lyophylized liposome encapsulated hemoglobin: evaluation of hemodynamic, biochemical, and hematologic responses / Rabinovici R., Rudolph A.S., Vernick J., Feuerstein G. // Crit. Care. Med. 1994. - V.222. - P.480-485.

227. Rich V. Scandal over Soviet artificial blood research project / Rich V. // Nature. 1988. - V.335. - № 6186. - P.107.

228. Riess J.G. Fluorocarbon based in vivo Oxygen Transport and Delivery Sysetms / Riess J.G. // Vox Sang; Invited Review. - Amsterdam. - 1991. - V. 14. -P.225-239.

229. Rudolph A.S. Liposome encapsulation attenuates hemoglobin-induced vasoconstriction in rabbit arterial segments / Rudolph A.S., Sulpizio A., Hieble P. et al. //J. Appl. Physiol. 1997. - V.82. - P. 1826-1835.

230. Sakai H. Physiological roles of messenger molecules (NO, CO) / Sakai H., Tsuchida E. // Chemistry. 1996. - V.51. - P.62-63.

231. Sklifas A. Acute toxicity of perfluorodecalin emulsion for rabbits / Sklifas A., Obraztov V., Shekhtman D. et al. // J. Fluorine Chemictry. -1991. V.54. - P.373.

232. Suematsu M. Carbonmonoxide as an endogenous modulator of hepatic vascular perfusion / Suematsu M., Kashiwagi S., Sano T. et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994. - V.205. - P.1333-1337.

233. Tsai A.G. Increased viscosity during extreme isovolemic hemodilution lowers vascular resistance / Tsai A.G., Friesenecker B., McCarthy M. et al. // Ann. Biomed. End. 1997. - V.25. - P. 8-14.

234. Waksman S.A. The actinomycis and their importance in the treatment in animals and man/ Waksman S.A. New York, 1960. - P.334.

Информация о работе

Плетнёва, Анна Юрьевна
кандидата биологических наук
Москва, 2007
ВАК 03.00.23

Диссертация

Использование перфторорганических соединений при глубинном культивировании микроорганизмов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы