Иммуномодулирующее действие пектиновых полисахаридов

Попов, Сергей Владимирович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Иммуномодулирующее действие пектиновых полисахаридов
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Иммуномодулирующее действие пектиновых полисахаридов"

На правах рукописи

ПОПОВ Сергей Владимирович

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ПЕКТИНОВЫХ ПОЛИСАХАРИДОВ

03.01.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

~ 2 СЕН 2010

Сыктывкар - 2010

004607767

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте физиологии Коми научного центра Уральского отделения РАН

Научный консультант

академик РАН, профессор Оводов Юрий Семенович

Официальные оппоненты

академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Беседнова Наталья Николаевна

доктор биологических наук, профессор Анисимов Михаил Михайлович

доктор биологических наук, профессор Игнатов Владимир Владимирович

Ведущая организация: Учреждение Российской академии

наук Институт физиологии природных адаптаций Уральского отделения РАН

Защита состоится «U> рЩслИ^Л 2010 г. в 10°° ч. на заседании диссертационного совета Д 005.005.01 в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН по адресу: 690022, г. Владивосток, проспект 100 лет Владивостоку, 159, ТИБОХ ДВО РАН.

Факс: (4232) 314-050; e-mail: science@piboc.dvo.ru

С диссертацией можно ознакомиться в филиале Центральной научной библиотеки ДВО РАН (г.Владивосток, проспект 100 лет Владивостоку, 159, ТИБОХ ДВО РАН)

Автореферат разослан « / S » [I QQtdl_ 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор химических наук, Лм/ЛО *

старший научный сотрудник ирР*^ Авилов С.А

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Пектины представляют собой сложные гетерополисахариды, относящиеся к классу пгиканогалактуронаноз, кислых растительных полисахаридов (Оводов, 2009). Пектиновые вещества инкрустируют стенки растительных клеток и вход ят в состав межклеточного пространства высших наземных растений, морских трав и ряда пресноводных водорослей (Popper, 2008). Пектины образуют матрикс, связующий микрофибриллы целлюлозы; обеспечивают ионный транспорт и водный режим, влияют на прорастание семян, рост и развитие растения, выполняют защитную роль во взаимоотношениях растения с фитопатогенами (Cabrera et al., 2008). В этой связи, структура пектиновых веществ зависит от многих параметров и может существенно изменяться в процессе роста и развития растения. Динамичность структуры пектинов обеспечивается нерегулярным блочным характером строения углеводной цепи, которая содержит различные макромолекулярные фрагменты линейной и разветвленной областей (Voragen et al., 2009).

Широкое распространение, относительная легкость выделения и высокая физиологическая активность сделали привлекательным практическое применение пектинов. Поэтому, в настоящее время проводится интенсивное изучение связи между структурой и активностью пектиновых полисахаридов. Исследование действия пектинов на иммунитет заслуживает особого внимания в связи с чрезвычайно важной ролью, которую играет иммунная система в жизнеобеспечении организма. Пектины являются перспективными кандидатами для разработки средств иммуномодулирующей терапии. Представляется актуальным выяснение изменений иммунной реактивности при пероральном введении пехтинов в зависимости от их строения, что является ключевым подходом в выяснении молекулярных основ регуляции резистентности организма посредством влияния на иммунную систему желудочно-кишечного тракта.

Составляющими компонентами пектинов являются следующие структурные элементы: гомогалактуронан, рамногалактуронан-5 (RG-I), ксилогалактуронан и апиогалактуронан (Round et al., 2010). Очевидно, что данные полисахариды; существенно отличающиеся своим строением, могут оказывать различное физиологическое действие. Поэтому, итоговый результат действия на иммунитет определяется, в первую очередь, соотношением пектиновых полисахаридов. Однако особенности иммуномодулирующего действия фрагментов пектиновых макромолекул ранее не изучались. Кроме того, сами пектиновые полисахариды отличаются у различных растений: гомогалактуронан - степенью метилэтерифицирования и молекулярным весом; фрагмент RG-I - тоихим

строением боковых цепей, состоящих из остатков арабинозы, галактозы и ряда других нейтральных моносахаридов; ксило- и апиогалактуронаны -степенью разветвленное™ и.т.д. В зависимости от сырья, метода выделения и полноты очистки в составе пектинов могут присутствовать различные примеси, которые могут сами по себе оказывать действие на иммунную систему. В настоящее время нет достаточных сведений для анализа зависимости иммуномодулирующего действия пектинов от особенностей их строения и наличия сопутствующих примесей.

Сравнение активности пектинов с различным типом построения углеводной цепи представляется целесообразным подходом для решения указанной проблемы. Однако исследования физиологической активности проводятся с использованием коммерческих пектинов, главным образом, цитрусового и яблочного, при этом не учитывается структурное разнообразие пектинов, встречающихся в природе. В этой связи представляют интерес пектины растений европейского Севера России, среди которых обнаружены пектины, имеющие строение, характерное для всех пектинов, а также пектины с уникальными чертами строения (Оводов и др., 2009). Всестороннее изучение пектинов растений европейского Севера России предоставляет возможность выявления структурных особенностей пектиновой макромолекулы, важных для проявления иммуномодулирующей активности. Большое прикладное значение этих исследований заключается в том, что они открывают перспективу создания новых подходов в иммунотерапии и в создании лечебных и профилактических препаратов.

Цель исследования - установить вклад структурных элементов макромолекулы в иммуномодулирующее действие пектинов. Задачи исследования:

1. Выявить пектины, обладающие иммуномодулирующим действием.

2. Определить зависимость иммуномодулирующего действия от содержания остатков галактуроновой кислоты в пектине.

3. Исследовать влияние пектинов с различной степенью метилэтерифицирования на активность фагоцитов.

4. Установить особенности иммуномодулирующего действия пектинов, содержащих участки разветвленного галактуронана.

5. Сравнить иммуностимулирующее действие пектинов, отличающихся строением разветвленной области макромолекулы.

6. Определить зависимость иммуномодулирующего действия от молекулярной массы пектинов.

7. Установить влияние примесей на иммуномодулирующее действие пектинов.

8. Изучить способность пектинов снижать гиперактивацию лейкоцитов.

9. Выявить область макромолекулы, обуславливающую иммуноадъювантное действие, и определить механизм усиления иммунного ответа лемнаном.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Пектины при пероральном введении оказывают иммуномодулкрукзщее действие, характер и направленность которого зависят от строения линейных и разветвленных областей макромолекулы.

2. Способность снижать иммунную реактивность более распространена среди пектинов, чем иммуностимулирующее действие, так как обусловлена областью галактуронана, образующего пивную углеводную цепь всех пектинов.

3. Иммуностимулирующая активность проявляется только при определенном строении боковых цепей в разветвленной области пектиновой макромолекулы.

4. Существует несколько механизмов взаимодействия пектикоБ с иммунной системой. Часть из них приводит к усилению, а часть к снижению функциональной активности лейкоцитов.

5. В результате перорального введения пектинов происходит как системное, так и локальное изменение функциональной активности лейкоцитов.

Научная новизна. Впервые выявлены области пектиновой макромолекулы, обуславливающие стимулирующее или подавляющее действие на иммунную реактивность. Теоретически обоснован и впервые применен оригинальный методологический подход к изучению зависимости физиологической активности от строения пектиновых веществ. Он ьклютаег в себя сочетание сравнительного анализа физиологической активности пектинов с установленным строением и изучение активности фрагментов пектиновой макромолекулы, полученных с помощью кислотного и ферментативного гидролиза.

Впервые проведено сравнительное комплексное изучение иммуномодулирующей активности пектинов всех видов, с которыми может взаимодействовать иммунная система человека. А именно, изучено действие на иммунитет пектинов, выделенных из растений, не употребляемых в пишу, пектинов из клеточных культур, из ряда съедобных растений, а также коммерческих пектинов, применяемых в пищевой промышленности. При этом в качестве мишени воздействия пектинов определена функциональная активность основных звеньев иммунитета - фагоцитоза, антиген-специфического клеточного и гуморального иммунного ответа. В результате скрининговых исследований выявлены растения европейского Севера России, содержащие физиологически активные пектины. Установлены

особенности действия на иммунитет пектинов, имеющих необычное химическое строение.

Впервые охарактеризовано иммуномодулирующее действие пектинов при их пероральном введении. Найдены новые виды физиологической активности пектинов: ингибирование токсического действия липополисахарида (ЛПС), защитное действие на стенку толстой кишки и усиление иммунного ответа на перорально введенный антиген. Выявлены особенности противовоспалительного действия пектинов, в частности, его превентивный характер. Обнаружено, что механизм иммуностимулирующего действия связан с увеличением проницаемости кишечной стенки под действием пектинов. На основании множественности и разнонаправленности иммуномодулирующего действия сформулирована концепция о регуляции иммунитета млекопитающих пектинами, поступающими в составе растительной пищи.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследования вносят вклад в понимание общебиологических принципов регуляции иммунной устойчивости млекопитающих. Расширены представления о механизме противовоспалительного и противовопухолевош действия пищевых волокон. Выявленные особенности позволяют отличить иммуномодулирующее действие пектинов от эффекта других биологически активных соединений в составе многокомпонентных средств фитотерапии и растительной пищи.

На основе выявленной зависимости активности от строения разработаны рекомендации по усовершенствованию методов выделения пектинов с заданными свойствами. Приоритет конкретных технологических решений подтвержден двумя патентами РФ на изобретения. Получено экспериментальное обоснование применения биотехнологических подходов для получения физиологически активных полисахаридов. Высокомолекулярные галактуронаны можно рассматривать в качестве нового класса биомаркеров, определение содержания которых в продуктах питания, перспективно для оценки рациона питания.

Предложено новое направление в иммуномодулирующей терапии, основанное на многофункциональности пектиновых полисахаридов. Результаты исследования открывают перспективу создания новых лекарственных препаратов, биологически активных добавок к пище и функциональных продуктов питания для лечения и профилактики воспалительных заболеваний и эндотоксинемий. Пектины, стимулирующие иммунный ответ на совместно вводимый с ними белковый антиген, могут представлять интерес в качестве иммуноадъювантов для пероральных вакцин.

Данные о нарушении нормальной иммунной толерантности цитрусовым пектином должны учитываться при медико-биологической оценке безопасности пищевых продуктов. Использование в пищевой промышленности пектинов, содержащих примеси глюкозы, должно получить оценку с точки зрения доктрины о продовольственной безопасности России.

Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе в Сыктывкарском государственном университете.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены лично в виде устных и стендовых докладов на 20-ом Международном симпозиуме по углеводам (г. Гамбург, Германия, 2000 г.), Международной конференции «Иммунофармакология и иммунотерапия» (г.Флоренция, Италия, 2000 г.), 11-ом Европейском симпозиуме по углеводам (г.Лиссабон, Португалия. 2001 г.), Международном симпозиуме «Функциональные продукты питания. Научные и глобальные перспективы» (г. Париж, Франция, 2001 г.), Второй международной школе по мукозальной иммунологии (г.Неаполь, Италия, 2002 г.), 10-ом Братиславском симпозиуме по углеводам (г.Смоленице, Словакия, 2002 г.), Международной конференции по новым функциональным ингредиентам и продуктам питания (пКопенгагек, Дания, 2003 г.). 5-ом и 7-ом Международных симпозиумах по химии природных соединений (г.Ташкент, Узбекистан, 2003 и 2007 гг.), Международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (г. Алматы, Казахстан, 2003 г.), Международной летней школе по шикологии (г. Вагенинген, Нидерланды, 2004 г.), 3-ей и 4-ой Международных конференциях общества по изучению природных веществ (г.Нанкин, Китай, 2004 г.; г. Лейзин, Швейцария, 2006 г.), Международной конференции «Иммуностимуляторы в современных вакцинах» (г.Малага, Испания, 2005 г.), Международных конгрессах общества по изучению лекарственных растений (г. Хельсинки, Финляндия, 2006 г.; г. Грац, Австрия, 2008 г.), Международном симпозиуме по фармакологии природных веществ «Фапронатура 2006» (г.Варадеро, Куба, 2006 г.), 1У-ой Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ» (г.Сыктывкар, 2006 г.), 1У-ом Съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (г.Новосибирск, 2008 г.), Научной конференции «Иммуномодуляторы природного происхождения» (г.Владивосток, 2009 г.), Всероссийской научной конференции «Химия и медицина» (г.Уфа, 2010 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 68 научных работ, в том числе две монографии, два патента Российской Федерации, 11 статей в зарубежных и 11 статей в Российских рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура работы. Диссертация состоит из введения, четырёх глав (обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования, обсуждение результатов), выводов и списка литературы. Работа изложена на 247 страницах машинописного текста, содержит 37 таблиц и 44 рисунка. Список литературы включает 380 источников, в том числе 318 зарубежных авторов.

Работа выполнена в лаборатории молекулярной физиологии и иммунологии Отдела молекулярной иммунологии и биотехнологии УРАН Института физиологии Коми НЦ УрО РАН в рамках плановых тем НИР «Физиологическая активность полисахаридов в зависимости от структуры (ГР № 01.200 107401) и «Физиологическая активность пектиновых полисахаридов,, модифицированных в условиях искусственной гастроэнтеральной среды» (ГР № 0120.0 602858).

Частично работа получила финансовую поддержку Министерства науки и образования в рамках ФЦП "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 годы" (госконтракты №№ 02.512.11.2190 и 02.512.12.0014), Российского фонда фундаментальных исследований (№№ 00-04-48063,03-04-48136,06-04-48079), Программ фундаментальных исследований Президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология» и «Фундаментальные науки медицине», Программы интеграционных проектов фундаментальных научных исследований, выполняемых в УрО РАН совместно с ДВО РАН.

Сокращения и условные обозначения. ГЗТ -гиперчувствительность замедленного типа, Ил-ip - интерлейкин-ip, Ил-10 - интерлейкин-10, ИФА - иммуноферментный анализ, ЛПС -липополисахарид, МПО - миелопероксидаза, ПОЛ - перекисное окисление липидов, СМ- степень метилэтерифицирования, ФБР - фосфатно-буферный раствор, ФНО-а - фактор некроза опухолей- а, ХТ - холерный энтеротоксин, АР - яблочный пектин, OVA - овальбумин, PC - цитрусовый пектин, РМА - форболовый эфир миристиновой кислоты, RG-I - рамногалактуронан-1.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика пектинов и их фрагментов, использованных в работе. В работе использовали 23 пектина, выделенные из растений европейского Севера России и их каллусных культур, 13 пектинов растений, употребляемых в пищу в свежем виде, и семь коммерческих пектинов. Выделение пектиновых полисахаридов и установление их химической структуры проведено в лаборатории гликологии и лаборатории биотехнологии Отдела молекулярной иммунологии и биотехнологии

Института физиологии Коми НЦ УрО РАН. Общая химическая характеристика исследованных пектинов приведена в таблице 1.

Таблица 1. Общая химическая характеристика полисахаридов, использованных в работе*

Название пектина Источник вьщеления GalA, % Нейт ральные моносахариды, %

Gal Ara Rha Api Glc Xyl Man

Апиуман AG Сельдерей пахучий Apium graveolens 81 3.6 2.5 2.6 - - -

Бергенан ВС Бадан толстолистный Bergenia crassifolia 84 3.1 2.8 1.3 - 2.0 0.2 i.l

Бутомосан BU Сусак зонтичный Butomus umbellatus L. 75 2.3 3.2 0.8 - 0.9 0.5 1.0

Гераклеуман HS Борщевик сибирский Heracleum sibiricum 84 2.8 2.6 1.9 - - - -

Комаруман СР Сабельник болотный Comarum palustre L. 64 13.0 6.0 12.0 - - - -

Лемнан LM Ряска малая Lemna minor 64 4.9 3.9 3.2 19.6 - 3.7 -

Оксикоккусан ОР Клюква четырехлистная Vacciniwn oxycoccos L. 82 3.4 8.0 1.3 - 4.7 0.4 0.5

Потамогетонан PN Рдест плавающий Potamogeton natans L. 80 5.7 2.2 1.3 - 1.6 - -

Раувольфиан RS Каллус раувольфии змеевидной Rauwolßa serpeniina 82 5.0 4.1 2.1 - 5.0 1.8 -

Силенан SV Смолевка обыкновенная Silene vulgaris L. 63 3.2 4.2 2.2 - 2.7 1.9 1.1

Танацетан TV Пижма обыкновенная Tcmacetum vulgare 64 8.5 8.4 5.5 - 1.2 0.9 0.5

Танацетан TVC Каллус пижмы обыкновенной Т. vulgare 68 4.4 5.2 1.5 - 1.4 1.1 0.4

Примечания: * - в таблице представлена часть использованных пектинов; GalA - галактуроновая кислота, Gal - галактоза, Ara - арабиноза, Rha -рамноза, Api - апиоза, Glc - глюкоза, Ху1 - ксилоза, Man - манноза.

Выделенные пектины имеют общие черты химического строения. Все они содержат ЬЮ-1 в качестве основного фрагмента разветвленной области макромолекулы. Главная углеводная цепь исследованных пектинов состоит из 1,4- связанных остатков а-О- галактопиранозилуроновой кислоты.

Основные отличия в строении изученных пектинов заключаются в содержании остатков галактуроновой кислоты (от 50 до 90 %) и тонком строении боковых углеводных цепей разветвленной области. Ряд пектинов имеет необычное химическое строение. Лемнан, пектин ряски малой, содержит в своем составе апиогалактуронан в качестве главного компонента разветвленной области макромолекулы. Комаруман, пектин сабельника болотного, имеет разветвление главной галактуронановой цепи. Схема строения разветвленных областей некоторых пектинов, использованных в работе, приводится ниже.

(1)

(3)

(2)

(4)

(5)

| Ц :|, ^ЦаЦИ I ^ -У Ц "] 1"1 I I ЫП

и О •

(б)__

2 а

и □

Са1А Шш

О • А

Сз1 Ага Ар!

Схема строения фрагментов углеводной цепи пектинов, использованных в работе:

1 - линейный галактуронан; 2 - разветвленный галактуронан (комаруман); 3 - слаборазветвленная область 1Ш-1 (бергенан); 4 и 5 -сильноразветвленные области ШЗ-1 (силенан и танацетан соответственно); 6 - апиогалактуронан (лемнан).

В работе также использованы фрагменты главной углеводной цепи (галактуронаны) и фрагменты разветвленной области макромолекулы, полученные с помощью частичного кислотного и ферментативного гидролиза соответственно.

Лабораторные животные. В экспериментах использовали 4200 белых лабораторных мышей обоего пола массой 20+25 г., полученных из питомника экспериментальных животных Института биологии Коми НЦ УрО РАН (Сыктывкар) и питомника лабораторных животных РАМН (п. Рапполово). Работа выполнена в соответствии международными правилами обращения с экспериментальными животными и одобрена локальным этическим комитетом Института физиологии Коми НЦ УрО РАН.

Скрининг иммуномодулирующей активности. Мыши получали 0.5 % водные растворы пектиновых полисахаридов в качестве питья; контрольные животные пили воду. Через 15-30 дней у группы мышей под эфирным наркозом забирали кровь с помощью кардиопункции и делали смыв из брюшной полости с помощью 5 мл охлажденного фосфатно-буферного раствора (ФБР). Определяли количество и клеточный состав лейкоцитов крови и перитонеального смыва с помощью световой микроскопии.

Суспензию перитонеальных лейкоцитов получали с помощью центрифугирования смыва при 400 g в течение 10 мин (Хант, 1990).

Другой группе мышей внутрибрюшинно вводили 0.5 мл раствора зимозана (Sigma, США), приготовленного на стерильном физрастворе (2 мг/мл). Мышей умерщвляли через 24 часа после введения зимозана и получали смыв из брюшной полости (Kolaczkowska et al., 2001).

Адгезию, миелопероксидазную активность и генерацию активных форм кислорода клетками определяли спектрофотометрическим методом (Пинегин и др., 1995).

Определение ингибирующего действия на лейкоциты. Пектины и их фрагменты растворяли в стерильном физиологическом растворе непосредственно перед проведением эксперимента и вводили лабораторным мышам перорально с помощью полиэтиленового зонда (200 мкл). Контрольные животные получали эквивалентный объем стерильного физраствора. Через 24 часа определяли функциональную активность лейкоцитов по способности секретировать цитокины, мигрировать к месту воспаления, адгезироваться на пластик и генерировать свободные радикалы.

Продукцию цитокинов определяли после стимуляции образцов цельной крови с помощью ЛПС (£. coli 0111 :В4) (10 мкг/мл) ex vivo (Ishihara et al, 2002). Концентрацию фактора некроза опухолей (ФНО-а) и интерлейкина-10 (Ил-10) в плазме измеряли с помощью иммуноферментного

анализа (ИФА), используя реагенты и протоколы фирмы eBioscience. Подвижность клеток определяли в модели подкожного воздушного пузыря, в который вводили раствор каррагинана для индукции воспаления.

Определение иммуностимулирующего действия. Мышам пероралъно вводили I мг овальбумина (OVA) или смесь OVA с пектином (1 мг) трижды с интервалом 7 дней. Спустя 7 дней после последней иммунизации у животных регистрировали интенсивность иммунного ответа на OVA: измеряли реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и концентрацию антиген-специфичных антител. ГЗТ вызывали с помощью инъекции агрегированного нагреванием OVA (25 мкл раствора 1 мг/мл) в левую лапку. В правую лапку вводили 25 мкл ФБР. Через 24 часа измеряли толщину лапок с помощью плетизмометра (Ugo Basil, Italy). Интенсивность ГЗТ определяли, как разность толщины между левой и правой лапкой (утолщение) и выражали в микролитрах. После измерения ГЗТ животных умерщвляли, забирали кровь и в сыворотке определяли титр анти-ОVA-антител класса IgG с помощью непрямого ИФА (Kato et al., 2001).

При изучении иммуноадъювантного действия лемнана определяли дополнительно концентрацию анти-0VA антител IgGl, IgG2a, IgE в сыворотке крови, а также концентрацию анти-0VA антител IgA в слизистой кишечника (Кэтти, Райкундалиа, 1991).

Концентрацию OVA в сыворотке определяли через 60 мин после последней иммунизации с помощью конкурентного ИФА, используя поликлональные анти-0 VA-антитела фирмы Acris Antibodies (Кэтти, Райкундалиа, 1991).

Интенсивность перекиснош окисления липидов (ПОЛ) оценивали по содержанию в стенке тонкой кишки мышей малонового диальдегида (МДА), определенного спектрофотометрическим методом по реакции с тиобарбтуровой кислотой (Mabley et al., 2003).

Эндотоксиновый шок. Мышам внутрибрюшинно вводили раствор ЛПС (Е. coli Olli :В4) (1 мл, 25 мг/ кг) и регистрировали количество выживших и погибших мышей в течение трех суток. Часть мышей умерщвляли через 2 часа после введения ЛПС, получали смыв из брюшной полости, в котором определяли концентрацию цитокинов (Ил-lß, ФНО, Ил-10) с помощью ИФА.

Воспаление толстой кишки у мышей индуцировали разовым ректальным введением 5% уксусной кислоты (Itoh et al., 2000). Изучали степень поражения толстой кишки, для чего изолировали и исследовали 5 см фрагмент кишки проксимальней ануса. Степень поражения толстой кишки оценивали по шкале: 0 — нет признаков воспаления, 1 — гиперемия, без язв и эрозий, 2 - поверхностные язвы, без разрушения слизистой, 3 -язвы с разрушением слизистой. Площадь поражения выражали в процентах от площади фрагмента кишки (Mahgoub et al., 2003).

Отек лапки вызывали у мышей подкожной инъекцией 2 %-го водного раствора каррагинана. Утолщение лапки по сравнению с первоначальным уровнем измеряли с помощью плетизмометра.

Статистистическая обработка результатов. При обработке данных вычисляли среднее арифметическое значение, среднее квадратичное отклонение. При оценке различий между группами применяли непараметрические критерии Манна-Уитни с использованием программного обеспечения "Statistica 6.0" (Stat Soft. Inc).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Зависимость иммуномодулирующего действия от строения главной углеводной цепи пектинов

Влияние пектинов с различным содержанием остатков галактуроновой кислоты на иммунитет. Скрининг пектиновых полисахаридов растений европейского Севера России выявил пектины, способные как стимулировать, так и подавлять функциональную активность перитонеальных макрофагов. Характер действия на активность макрофагов зависит в первую очередь от содержания остатков галактуроновой кислоты в пектине. Обнаружено, что пектины с содержанием остатков галактуроновой кислоты более 80 % уменьшают накопление макрофагов в брюшной полости, вызванное инъекцией зимозана. К таким пектинам относятся: гераклеуман, пектин борщевика сибирского; потамогетонан, пектин рдеста плавающего; оксикоккусан, пектин ягод клюквы обыкновенной и раувольфиан, пектин каллуса раувольфии змеиной. Пектины с содержанием остатков галактуроновой кислоты менее 75 % такой способностью не обладают, а напротив, некоторые из них, такие как лемнан, пектин ряски малой, бутомосан, пектин сусака зонтичного, и силенан, пектин смолевки обыкновенной, стимулируют активность клеток (Рис. 1а).

Усиливающее и ослабляющее действие пектинов на макрофаги приводит к соответствующему изменению антиген-специфичного иммунного ответа, который измеряли как реакцию ГЗТ. Введение OVA в лапку мышам, предварительно сенсибилизированным подкожной инъекцией этого же антигена в полном адъюванте Фрейнда, приводит к образованию отека. Интенсивность отека лапки увеличивается у мышей, которые получили лемнан, силенан, бергенан и бутомосан. В то же время пектины, подавляющие активность макрофагов, ингибируют реакцию ГЗТ на OVA (Рис. 16).

m 200

§ «O

1 100

o z m

s <

50 O

ü ш — £ Ü

HS PN OP RS ВС BU SV TV CP ZM LM

(6)

HS PN OP RS ВС BU SV TV CP ZM LM

Рис. 1. Накопление макрофагов в брюшной полости в ответ на введение зимозана (а) и реакция ГЗТ (б) у мышей, получавших пектины перорально в течение 28 дней. Обозначения пектинов даны в таблице 1. ZM - зостеран, пектин зостеры морской Zostera marina.

Данные представлены в процентах по отношению к контролю, принятому за 100 %. * -р < 0.05, п - 8.

Исключением являются бергенан и комаруман, пектины бадана толстолистного и сабельника болотного соответственно. Бергенан, имеющий в своем составе 85 % остатков галактуроновой кислоты, не снижает, а увеличивает иммунную реактивность. Комаруман уменьшает подвижность макрофагов и реакцию ГЗТ, хотя содержит лишь около 60 % остатков галактуроновой кислоты. Данные пектины имеют особенности строения, отличающие их от других изученных пектинов. Бергенан характеризуется высокой степенью метилэтерифицирования остатков галактуроновой кислоты. В макромолекуле комарумана наряду с линейным галактуронаном имеются области разветвленного галактуронана.

Фрагменты пектинов, состоящие только из остатков галактуроновой кислоты (98-И 00 %), были получены с помощью частичного кислотного гидролиза пектинов. Обнаружено, что все галактуронаны снижают реактивность макрофагов и ингибируют реакцию ГЗТ независимо от того, обладают такой способностью исходные пектины или нет. В частности, галакгуронановые фрагменты апиумана, потамогетонана, оксикоккусана и раувольфиана также как исходные пектины, уменьшают активность клеток. Способность ингибировать активность лейкоцитов выявлена у галактуронановых фрагментов пектинов как не действующих (пектины хвоща, мать-и мачехи и др.), так и стимулирующих деятельность лейкоцитов (бергенан, бутомосан, силенан, лемнан, зостеран).

Таким образом, способность ингибировать лейкоциты характерна для пектинов, состоящих в основном из остатков галактуроновой кислоты, боковые углеводные цепи препятствуют проявлению такой способности.

Влияние на активность фагоцитов пектинов с различной степенью метилэтерифицирования. Галактуронановая цепь отличается у различных пектинов степенью метилэтерифицирования карбоксильных групп (СМ). Все пектины, за исключением бергенана, полученные с помощью экстракции растительного сырья оксалатом аммония, являются низкометоксилированными (СМ < 20%). Высокометоксилированный бергенан (СМ - 57 %) не снижает активность макрофагов, несмотря на высокое содержание остатков галактуроновой кислоты, что указывает на зависимость ингибирующего эффекта от СМ пектина. Поэтому нами было исследовано влияние на активность фагоцитов пектинов с различной СМ, которые были получены с помощью экстракции пищевых растений раствором соляной кислоты. Обнаружено, что капсикуман СА, пектин перца болгарского, СМ которого составляет 25 %, уменьшает накопление макрофагов в брюшной полости, индуцированное зимозаном, а также ингибирует секрецию ФНО-а лейкоцитами крови в ответ на стимуляцию ЛПС. Пектины моркови посевной (ББ), лука репчатого (АС) и капусты белокачанной (ВО), имеющие СМ 51,60 и 67 % соответственно, не влияют на лейкоциты (Рис.2).

Способностью ингибировать активность лейкоцитов обладают цитрусовый и яблочный пектины со степенью метилэтерифицирования 34-=-38 %, тогда как аналогичные высокометоксилированные пектины (СМ - 68+76 %) таким действием не обладают (Рис.2).

Пектин СА DS АС ВО CU701 CU201 AU701 AU202

СМ, % 25 50 60 67 36 72 36 72

Рис. 2. Влияние пектинов с различной СМ на способность лейкоцитов крови секретироватъ ФНО-а. CU701 и CU201 - цитрусовые, AU701 и AU202 - яблочные пектины фирмы Herbstreith&Fox KG.

Данные представлены в процентах по отношению к контролю, принятому за 100 %. *-р < 0.05, п- 8.

Полученные данные свидетельствуют о том, что свободные карбоксильные группы остатков галактуроновой кислоты необходимы для реализации ингибирующего действия пектинов и галактуронанов на лейкоциты. Данное заключение подтверждается тем, что амидированный пектин СМ020 не влияет на активность клеток. В пектине СМ020 (СМ - 25 %, степень амидирования—25 %) значительная часть карбоксильных групп замещена. Известно, что низкометилэтерифицированный пектин проникает в толщу муцинового слоя, выстилающего стенку кишечника, тогда как высокоэтерифицированный пектин образует гель на его поверхности. Это связано с тем, что благодаря отрицательному заряду свободных карбоксильных групп молекулы низкометилэтерифицированного пектина отталкиваются от одноименно заряженных молекул муцина, тем самым препятствуя образованию водородных связей. Очевидно, что проникновение в толщу муцинового слоя способствует взаимодействию низкометилэтерифицированных пектинов с эпителием кишечника.

Таким образом, высокая (> 50 %) СМ остатков галактуроновой кислоты главной углеводной цепи препятствует ингибирующему действию пектинов на активность лейкоцитов. Для получения пектинов, снижающих иммунную реактивность, целесообразно, по-видимому, использовать методы экстракции, способствующие удалению боковых углеводных цепей и деэтерификации полигалактуроновой кислоты.

Особенности иммуномодулирующего действия пектина сабельника болотного ("комарумана). содержащего участки разветвленного галакгуронана. В результате скрининга иммуномодулирующей активности пектинов, выделенных из растений европейского Севера России, установлено, что комаруман ингибирует активность лейкоцитов, что не характерно для пектинов с содержанием остатков галактуроновой кислоты менее 75 % (см. Рис.1). Детальное структурное исследование выявило наличие в составе главной углеводной цепи комарумана области разветвленного галакгуронана (Оводова и др., 2006):

->4-а-Са1рА(1 ->4)-а-6а1рА(1 ->4)-а-Са1рА1 ->

В соответствии с данными атомно-силовой микроскопии разветвленные молекулы составляют не менее 50 % общего числа макромолекул в полидисперсном растворе пектина сабельника (Рис.3).

Рис. 3. Атомно-силовое изображение галактуронана комарумана. Размеры области изображения - 200x300 нм. (Оводова и др., 2006).

Обнаружено, что действие комарумана на активность нейтрофилов имеет двухфазный характер. В течение первых суток после перорального введения комарумана количество нейтрофилов в очаге воспаления существенно снижается. Однако затем количество нейтрофилов у мышей, получивших комаруман, выше, чем у контрольных животных. Данная реакция иммунной системы на комаруман вполне закономерна, поскольку меньшему числу фагоцитов требуется больше времени для элиминации чужеродных объектов.

Действие комарумаиа на количество нейтрофилов обусловлено снижением продукции цитокинов резидентными клетками воспалительного очага. Установлено, что комаруман снижает концентрацию Ил-1руже через два часа после индукции воспаления, то есть задолго до инфильтрации очага воспаления нейтрофилами. Через сутки после индукции воспаления концентрация противовоспалительного цитокина Ил-10 у мышей, получивших комаруман, выше, чем у контрольных животных, что отражает компенсаторную реакцию иммунной системы на увеличенное число клеток в очаге воспаления.

Сравнение противовоспалительного действия галактуронанов, полученных из комарумана и бергенана, позволило выявить особенности эффекта разветвленной области галактуронана в составе комарумана. Галактуронан бергенана, который не содержит разветвлений углеводной цепи, сдвигает баланс цитокинов в противовоспалительную сторону, а именно снижает концентрацию Ил-1р и увеличивает концентрацию Ил-10 (Рис. 4).

200 150 100 50 0

Ил-1Ь

Ил-10

ВС-Н

шш

■ Ип-1Ь С* >-Н

Ил-10

Рис. 4. Влияние галаюуронановых фрагментов бергенана (ВС-Н) и комарумана (СР-Н) на продукцию цитокинов.

Данные представлены в процентах по отношению к контролю, принятому за 100 %.' —р< 0.05, п — 7.

В результате количество нейтрофилов, привлеченных в очаг воспаления, уменьшается (Рис. 5). Галактуронан комарумана, который состоит как из линейных, так и разветвленных молекул, уменьшает содержание Ил-10, что приводит увеличению накопления клеток (Рис. 4 и 5). Полученные данные указывают на то, что действие исходного комарумана в первые и вторые сутки развития воспаления отражает влияние на продукцию цитокинов линейной и разветвленной области его галактуронана соответственно.

lili 2 12 24 48 72 ч

Рис. 5. Влияние галактуронановых фрагментов бергенана (ВС-Н) и комарумана (СР-Н) на количество нейтрофилов в очаге воспаления.

Данные представлены в процентах по отношению к контролю, принятому за 100 %. * -р < 0.05, п - 7.

Таким образом, наличие блоков разветвленного галактуронана вызывает двухфазный характер иммуномодулирующего действия пектина - снижение лейкоцитарной активности сменяется ее увеличением.

2. Зависимость иммуномодулирующего действия от строения разветвленной области пектиновой макромолекулы

В результате скрининга выявлено, что ряд пектинов, содержащих менее 75 % остатков уроновых кислот, стимулирует активность фагоцитов (см. Рис.1). Данные пектины характеризуются развитой разветвленной областью, которая представлена апиогалактуронаном в макромолекуле лемнана и RG-I в макромолекуле бергенана, силенана и бутомосана.

Обнаружено, что тонкое строение боковых углеводных цепей пектинов определяет способность стимулировать активность клеток. Силенан, пектин смолевки обыкновенной, и танацетан, пектин пижмы обыкновенной, имеют схожее строение, однако силенан стимулирует фагоциты, тогда как танацетан не обладает такой способностью. Разветвленная область силенана представлена в основном линейными 1,4 связанными р-галактановыми и 1,5 а-арабинановыми цепями (1), тогда как боковые углеводные цепи танацетана содержат в большом количестве разветвленные блоки арабинана (2) и галактана. Макромолекула бергенана также, как силенана, содержит в составе рамногалактуронановой области в основном неразветвленные участки, представленные 1,5-связанной а-арабинофуранозой и 1,4 и 1,6- связанной р-галактопиранозой.

О)

P-Gal/>-(l-»4)-p-GaIp-(l->- oc-Ara/-(l->5)-a-Ara/-(l->-

ф X

(2) -*5)-а-Ага/-(1-»5)-а-Ага/-(1-»5)-а-Ага/-(1-»5)-

a-Ara/-(l->5)-a-Ara/-l 2-a-Ara/-(l

a-Ara/-(l-»5)-a-Ara/-l ^

Стимулирующее действие лемнана имеет ряд отличий от действия пектинов с разветвленной областью типа RG-I. Во-первых, лемнан вызывает перераспределение лейкоцитов между тканями и кровью. Количество нейтрофилов в крови мышей повышается, а в смыве из брюшной полости снижается при пероральном введении лемнана, тогда как силенан не влияет на количество клеток (Рис. 6а). Во-вторых, лемнан стимулирует покоящиеся фагоциты и повышает их ответ на форболовый эфир миристиновой кислоты (РМА). Силенан усиливает активность клеток, вызванную как зимозаном, так и РМА (Рис. 66). Следовательно, пероральное введение лемнана приводит к изменению физико-химических свойств плазматической мембраны фагоцитов и увеличению ее проницаемости для низкомолекулярных активаторов, таких как РМА. Силенан влияет на функциональную активность клеточных рецепторов.

Отличия в строении разветвленной области пектиновой макромолекулы определяют также действие пектинов на антиген-специфический иммунный ответ. Лемнан, силенан и бергенан увеличивают интенсивность реакции ГЗТ на белковый антиген, введенный перорально. Отек лапки, вызванный инъекцией «разрешающей» дозы антигена, больше в 1,7*2 раза у животных, сенсибилизированных смесью OVA и пектинов. Лемнан, кроме того, стимулирует продукцию антител - содержание OVA-специфического иммуноглобулина IgG выше в 1,8 раза у мышей, иммунизированных OVA совместно с лемнаном, по сравнению с мышами, получившими только OVA (Рис. 7). Следует отметить, что пектины с высоким содержанием остатков галактуроновой кислоты (потамогетонан), а также комаруман снижают интенсивность реакции ГЗТ, что согласуется с ингибирующим действием данных пектинов на активность фагоцитов.

Полученные данные указывают на возможность, по крайней мере, двух способов стимуляции иммунитета пектинами. Первый из них обеспечивает усиление только клеточных реакций (силенан, бергенан), а второй дополнительно приводит к стимуляции антителообразования, как это происходит в случае с лемнаном. В обоих случаях боковые углеводные цепи пектина участвуют в реализации стимулирующего эффекта. Однако гликозидные связи между остатками нейтральных моносахаридов, входящих в состав боковых цепей, являются более лабильными, чем 1,4- связанные остатки a-D-галактуроновой кислоты. Поэтому вероятность сохранения нативной структуры пектиновой макромолекулы и возможность проявления

иммуностимулирующего действия уменьшается при нахождении пектина в желудочно-кишечном тракте, по сравнению с ингибирующим действием, которое опосредуется более устойчивым линейным галактуронаном.

(а) Количество лейкоцитов

180 150 120 90 60 30 0

ш —ш-

кровь

6р. полость

кровь

6р. полость

1.М

(б) Генерация кислородных радикалов

Рис. 6. Действие пектинов, содержащих 110-1 (силенан БУ) и апиогалактуронан (лемнан ЬМ) в качестве разветвленной области, на количество (а) и функциональную активность лейкоцитов (б).

Данные представлены в процентах по отношению к контролю, принятому за 100 %. *-р < 0.05, п - 7.

200 <

Рис. 7. Действие пектинов, содержащих 1Ш-1 (силенан БУ) и апиогалактуронан (лемнан ЬМ) в качестве разветвленной области, на иммунный ответ.

Данные представлены в процентах по отношению к контролю, принятому за 100 %. *-р < 0.05, п - 7.

3. Зависимость иммуномодулирующего действия от молекулярной массы пектинов

Исследованные пектины состоят из полимергомологов, молекулярная масса которых варьирует в широком диапазоне от 20 до 700 кДа. С помощью ультрафильтрации на мембранах и полых волокнах были получены фракции пектинов и галактуронанов с различной молекулярной массой. Исследование физиологической активности полученных макромолекул выявило зависимость их иммуномодулирующего действия от молекулярной массы.

Установлено, что галактуронаны с молекулярной массой свыше 300 кДа ингибируют активность лейкоцитов, тогда как фракции галактуронанов с молекулярной массой 100+300 кДа и 50+100 кДа такой способностью не обладают (Табл. 2).

Таблица 2. Влияние галактуронановых фракций на активность лейкоцитов

Фракция М, кДа Активность,

галактуронана" % от контроля

СР-Н1 свыше 300 51±20*

СР-Н2 100+300 82±22

СР-НЗ 50+100 78±10

ВС-Н1 свыше 300 65±28*

ВС-Н2 100+300 86±24

ВС-НЗ 50+100 86±10

ЬМ-Н1 свыше 300 51 ±30*

Ш-Н2 100+300 102±20

Ш-НЗ 50+100 89±22

гм-ш свыше 300 55±14*

Ш-Н2 100+300 84±34

СА-Н1 свыше 300 56±12*

СА-Н2 50+100 99±9

ТУС-Н1 свыше 300 68±15*

ТУС-Н2 50+100 96±17

Примечание. *—фракции получены последовательной ультрафильтрацией галактуронанов через мембраны с пределом пропускания пор 300 (Н1), 100 (Н2) и 50 кДа (НЗ).

Данные представлены в процентах по отношению к контролю, принятому за 100 %.*-/>< 0.05, п-7.

Иммуностимулирующее действие, напротив, вызывается полисахаридными цепями с молекулярной массой 20+100 кДа С помощью ультрафильтрации силенана, бергенана и бутомосана на полых волокнах были получены фракции пектинов, не содержащие полисахаридные цепи с

молекулярной массой менее 100 кДа. Установлено, что полученные фракции, в отличие от исходных пектинов, не проявляют иммуностимулирующего действия (Рис. 8). Полученные данные согласуются с представлением о том, что разветвленная область пектиновой макромолекулы обуславливает стимуляцию лейкоцитов. л

I ¥ Г!

1 |2

ВС

1 | 2

ви

Рис. 8. Иммуностимулирующее действие пектинов, содержащих полисахаридные цепи с 20*100 кДа (1) и 100*300 кДа (2).

Данные представлены в процентах по отношению к контролю, принятому за 100 %. '-р< 0.05, п - 7.

4. Влияние примесей на иммуномодулирующее действие пектинов

В зависимости от сырья, метода выделения и полноты очистки в составе пектинов могут присутствовать различные примеси, которые могут сами по себе оказывать действие на иммунную систему.

Пектины, используемые в пищевой промышленности, характеризуются высоким содержанием примеси глюкозы, которая добавляется в них для повышения вязкости и улучшения желирующих свойств. С помощью ионообменной хроматографии на DEAE-целлюлозе показано, что глюкоза, содержащаяся в большом количестве в цитрусовом пектине, не входит в состав его разветвленных цепей.

Нормальное реагирование иммунной системы на белки, попадающие в кишечник, это толерантность («oral tolerance»), которая регистрируется, как снижение клеточного и гуморального иммунного ответа. В частности, пероральное введение мышам OVA (20 мг) за 7 дней до парентеральной сенсибилизации этим же белком вызывает существенное снижение реакции ГЗТ и продукции IgG. У животных, получивших OVAb смеси с цитрусовым пектином (PC), интенсивность ГЗТ и концентрация антител в сыворотке выше, чем у толерантных мышей. В то же время гиперчувствительность и

содержание у мышей, получавших глюкозу или РС, не содержащий

примесей глюкозы (РС-1), не отличаются от контрольных значений

(Рис. 9). Ингибирование пищевой толерантности может привести к

нежелательным последствиям, так как под действием цитрусового пектина

активируется продукция иммуноглобулина ^Е, играющего ключевую роль

в аллергических реакциях (Табл. 3).

(а)ТЗТ (б) анти-СП/А 1дС

Рис. 9. Влияние цитрусового пектина на реакцию ГЗТ (а) и концентрацию анти-OVA иммуноглобулина IgG.

Животных иммунизировали OVA (К), смесью OVA с РС-1 или смесью OVA с глюкозой (Glc). '-р< 0.05, п - 8.

Таблица 3. Влияние РС на содержание иммуноглобулина IgE в крови у мышей

Пероральное введение Общий IgE, мкг/мл Ahth-OVA IgE, мкг/мл

Физ.раствор 930±159 6.5±1.0

OVA (контроль) 590±48 4.4±0.5

OVA + PC 780±59* 6.1±0.8*

OVA + AP 630±150 4.8±1.5

Примечания: АР—яблочный пектин. Данные представлены в виде среднего арифметического значения ± стандартное отклонение. * — р < 0.05, п — 7.

Кроме того, изменяется соотношение между подклассами иммуноглобулина 1§0. В сыворотке толерантных мышей концентрация антител существенно ниже, чем в контроле. Концентрация анти-0УА-^01 у мышей, получавших РС, в два раза выше по сравнению с толерантными животными, тогда как концентрация существенно не меняется (Табл. 4). Присутствие глюкозы изменяет физико-химические свойства цитрусового пектина и влияет на конформационные характеристики пектиновой макромолекулы, что, возможно, и обуславливает иммуностимулирующий эффект цитрусового пектина.

Таблица 4. Влияние РС на содержание подклассов иммуноглобулина в крови у мышей

Пероральное введение IgGl, IgG2a,

обратный log2 обратный log2

Физ.раствор 13.1±1.3 8.5±2.0

OVA (контроль) 5.7±2.0 4.8±2.1

OVA + PC 13.4±1.7* 7.Ш.8

OVA + АР 3.6±2.4 3.0±2.4

Примечание. Данные представлены в виде среднего арифметического значения ± стандартное отклонение." -р < 0.05, п - 7.

Интерес вызывает присутствие в составе пектинов примесей ЛПС. ЛПС - структурный компонент наружной мембраны грамотрицательных бактерий, который обладает мощным действием на иммунную систему. Примесь ЛПС в пектинах, обладающих иммуностимулирующей активностью, составляет от 30 до 13000 нг/мг. Таким образом, при введении пектина мышам в количестве, при котором наблюдается усиление иммунного ответа, животные получают ЛПС в дозе 1,5+650 мкг/кг. Установлено, что ЛПС E.coli при пероральном введении в дозе 1000 мкг/кг не влияет на активность макрофагов брюшной полости мышей. Пектины и галактуронановые фракции, обладающие противовоспалительным действием, содержат в своем составе значительно меньше примесей ЛПС (от 1 до 1000 нг/мг).

5. Защитное действие пектинов при гиперактивации иммунной системы

Нейтрофилы и макрофаги - ключевые участники воспалительного процесса. Высокая активность нейтрофилов и макрофагов может вызывать повреждение тканей собственного организма. Изучено действие пектинов и галактуронанов на развитие у мышей эндотоксинового шока, который обусловлен чрезмерной реакцией макрофагов на ЛПС.

Внутрибрюшинное введение мышам ЛПС в дозе 20+25 мг/кг приводит к гибели 100 % животных в течение 24 часов. Обнаружено, что смертность снижается в 1,5+2 раза в группах мышей, получивших перорально потамогетонан, оксикоккусан ОР, апиуман AG, а также раувольфиан RS (Рис. 10). Пектины, обладающие иммуностимулирующим действием (силенан, бергенан, лемнаны), не влияют на гибель мышей в результате эндотоксинового шока.

Врямя после инъекции ЛПС, часы

Рис. 10. Влияние пектинов (доза 50 мг/кг) на гибель мышей, вызванную внутрибрюшинным введением ЛПС.

Количество животных в каждой точке времени - 10*16.

В результате предварительного введения потамогетонана, оксикоккусана, апиумана и раувольфиана существенно снижается накопление в брюшной полости провоспалягельных цигокинов. В то же время под действием пектинов увеличивается продукция противовоспалительного цитокина Ил-10 (Табл. 5). Вследствие сдвига баланса цитокинов в противовоспалительную сторону пектины уменьшают инфильтрацию брюшной полости нейтрофилами. Поскольку про- и противовоспалительные цитокины контррегулируют синтез друг друга, возможны три пути модуляции цитокинового баланса пектинами. Во-первых, первичное подавление продукции провоспалительных цитокинов; во-вторых, первоочередная стимуляция синтеза Ил-10 и, в-третьих, одновременное противоположное действие на клетки-продуценты как тех, так и других цитокинов.

Таблица 5. Влияние пектинов (50 мг/кг) на концентрацию цитокинов и содержание полиморфноядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) в перитонеальном смыве у мышей, получивших инъекцию ЛПС

Пероральное введение Ил-1р, пг/мл Ил-10, пг/мл • ПМЯЛ, тыс.клеток /мышь

Физраствор (Контроль) Потамогетонан Апиуман 4905±1464 2729±872* 2677±1776* 2521±206 3004±165* 3100±150* 13500±3500 7500±1500* 10260±2100*

Физраствор (Контроль) Раувольфиан Оксикоккусан 6430±1811 4550±960* 4260±1120* 2810±206 3614±365* 3981±350* 10500±2500 55001:980* 6100±1300*

Примечание. Данные представлены в виде среднего арифметического значения ± стандартное отклонение. * — р < 0.05, п - 8.

Известно, что механизм патогенетического действия ЛПС включает в себя нарушение барьерной функции кишечной стенки, что приводит к резкому усилению проникновения токсинов и микроорганизмов из просвета кишки в кровь. Поэтому, способность пектинов защищать кишечную стенку от повреждения была изучена с помощью модели острого язвенного колита.

Воспаление и повреждение слизистой оболочки дистальной части толстой кишки развивается через 24 часа после ректального введения уксусной кислоты лабораторным мышам (Рис. 116). Показано, что раувольфиан, оксикоккусан, а также комаруман предотвращают повреждение кишечной стенки (Рис. 11с-е).

Действие пектинов характеризуется снижением площади поражения более чем в два раза и уменьшением степени повреждения на 40 % (Рис. 12). Пектины, обладающие иммуностимулирующим действием: лемнан и силенан, - способствуют увеличению площади поражения стенки толстой кишки. Однако степень повреждения остается на уровне, характерном для мышей, получивших воду до индукции колита воспаления. Раувольфиан КБ содержит в своем составе полисахаридные цепи двух типов: пектина ПЭР и глюкана ИБв. Установлено, что защитным действием при колите обладает пектин Л8Р, тогда как глюкан не влияет на воспаление толстой кишки.

Рис 11. Образцы стенки толстой кишки мышей до (а) и 24 часа после ректального введения уксусной кислоты (Ь-с1). Ь - без лечения; с, <1 и е -мыши получали комаруман СР, оксикоккусан ОР, раувольфиан И8 дважды (за 2 и 1 день) перед введением кислоты соответственно.

RS RSP RSG OP CP LM

50 40 30 20 • 10 0

"ПлощадьГпоражения, %

__*___*

К RS RSP RSG OP CP LM SV

Рис.12. Повреждение стенки толстой кишки у мышей, вызванное ректальным введением уксусной кислоты. Мыши получили воду (К -контроль) или пектины за 48 часов до введения уксусной кислоты. '-р< 0.05, п-7.

Таким образом, противовоспалительное действие пектинов проявляется как локально в стенке кишечника, так и на удалении от него. Полученные данные указывают на системное снижение иммунной реактивности после перорального введения пектинов. Возможно, пектины активируют в организме регуляторные механизмы, направленные на снижение нежелательной гиперактивации иммунной системы. Способность пектинов снижать функциональную активность лейкоцитов может быть использована для предотвращения развития нежелательных воспалительных реакций в организме.

6. Иммуноадъювантное действие лемнана

Влияние лемнана на иммунный ответ сравнимо с действием наиболее эффективного из известных в настоящее время пероральных адъювантов — холерного энтеротоксина и поэтому было изучено более детально.

В соответствии с ранее полученными данными установлено, что пероральная иммунизация с помощью OVA инициирует синтез иммуноглобулинов IgG, и IgG2a примерно в равной степени. Лемнан стимулирует продукцию антител IgG, и IgG2a в 2 и 1,7 раза соответственно

(Рис. 13), тогда как холерный энтеротоксин усиливает продукцию

преимущественно антител подкласса ДО,

LM ХТ К LM ХТ

Рис. 13. Содержание подклассов OVA-специфического иммуноглобулина IgG в крови мышей, иммунизированных OVA (контроль, К) или OVA совместно с лемнаном (LM) или холерным энтеротоксином (ХТ). * ~р < 0.05, п - 7.

Пероральная иммунизация мышей OVA вызывает незначительное появление антиген-специфического иммуноглобулина IgA на поверхности слизистой оболочки тонкой кишки. Концентрация анти-OVA IgA антител увеличивается более чем в 7 раз у животных, иммунизированных смесью О VA и лемнана. Кроме того, лемнан увеличивает в два раза общее количество иммуноглобулина IgA, что свидетельствует об усилении неспецифической резистентности слизистой желудочно-кишечного тракта (Рис. 14).

общий IgA, нг/мл

анти-OVA IgA, нг/мп

200 160 120 80 40 0

ХТ

12 9 б 3 0

ХТ

Рис. 14. Содержание иммуноглобулина IgA в кишечной слизи мышей, иммунизированных OVA (контроль, К) или OVA совместно с лемнаном (LM) и холерным энтеротоксином (ХТ). * -р < 0.05, п - 6.

По-видимому, в иммунный ответ, вызванный совместным введением белкового антигена и лемнана, вовлечены Т-лимфоциты-хелперы как 1-ого, так и 2-ого класса (Thl и Th2). Хорошо известно, что лимфоциты ТЪ2 через цитокины (интерлейкин-4 и др.) способствуют продукции антител IgG, и IgA, тогда как лимфоциты Thl опосредуют реакцию ГЗТ и синтез IgG2a. Адьювантная активность лемнана имеет сходство с действием на иммунный ответ тритерпенового гликозида - квилайа сапонина QS-21 из Quillaia saponaria, нуклеотидных олигомеров, содержащих мотив CpG, микрочастиц на основе полиакрилового крахмала.

Исследование зависимости иммуностимулирующего действия лемнана от дозы выявило, что лемнан стимулирует как специфический, так и неспецифический иммунный ответ в дозах 40-5-100 мг/кг. Пероральное введение лемнана в количестве менее чем 1 мг/мышь не влияет на иммунитет, тогда как введение более 3 мг/мышь затруднено вследствие высокой вязкости раствора пектина. Известно, что эффективность в узком диапазоне доз характерна для веществ, иммуностимулирующее действие которых обусловлено увеличением проницаемости кишечной стенки для антигена. Поэтому, влияние на проникновение в кровь сопутствующего белка было изучено с целью выяснения механизма иммуностимулирующего действия лемнана.

Установлено, что концентрация OVA в крови мышей через три часа после введения OVA в смеси с лемнаном в 2,5 раза выше, чем у животных получивших только белок (Рис. 15). Совместное введение OVA с комаруманом CP, пектином, который уменьшает иммунный ответ, приводит к снижению концентрации белка в крови. Проникновение в кровь OVA не изменяется в присутствии яблочного пектина (АР). Холерный энтеротоксин увеличивает проницаемость кишечной стенки в восемь раз.

3000 2500 2000

■I 1500

1 1000 500 0

Рис. 15. Концентрация OVA в крови мышей, получивших OVA (К -контроль) или OVA совместно с лемнаном (LM), комаруманом (CP) и яблочным пектином (АР). *-р < 0.05, п - 8.

К LM CP ЯП

Увеличение проницаемости кишечного барьера, по крайней мере, частично обусловлено свободно-радикальным повреждением кишечной стенки. Обнаружено, что концентрация МДА, отражающего интенсивность процессов ПОЛ, в стенке тонкой кишки выше у мышей, иммунизированных смесью OVA с лемнаном, чем у животных, иммунизированных только белком (Рис. 16а). Лемнан увеличивает в кишечной стенке содержание МПО, что указывает на накопление гранулоцитов, а также вызывает продукцию воспалительных цитокинов (Рис. 166 и в). Действие лемнана на кишечную стешу можно охарактеризовать как раздражающее. Для нейтрализации действия лемнана увеличивается продукция слизи, выстилающей поверхность кишечника (110±28 и 62±11 мкг связанного красителя альцианового синего).

(а)

(б)

(в)

кмопь/л

10 ед/мг

U-

0 1000 пг/мл/мг

Рис. 16. Концентрация МДА (а), МПО (б) в стенке и содержание ФНО-а (в) в слизистой тонкой кишки у мышей, получивших OVA (К - контроль) или OVA совместно с лемнаном (LM) перорально. * -р < 0.05, п - 8.

Таким образом, механизм иммуностимулирующего действия лемнана можно представить следующим образом. Взаимодействуя с лемнаном, энтероциты и гранулоциты стенки тонкой кишки активируются и начинают продуцировать воспалительные цитокины и кислородные радикалы соответственно. Под действием цитокинов увеличиваются межэпителиальные просветы, а кислородные радикалы инициируют перекисное окисление мембран кишечного эпителия, что приводит к существенному снижению барьерной функции кишечной стенки. В результате белковый антиген, введенный совместно с лемнаном, проникает в кровоток в большей степени, что приводит в конечном итоге к усилению иммунного ответа на него. Кроме того, воспалительные цитокины и клеточный дебрис, образовавшийся в результате частичного разрушения эпителия, активируют фагоцитарную систему.

Минимальной областью лемнана, обладающей иммуностимулирующей активностью, является фрагмент LMP, представляющий собой апиогалактуронан, устойчивый к действию

1,4-а-0-галактопиранозилуроназы. Установлено, что апиогалактуронан LMP составляет 45 % от молекулы лемнана, содержание галактуроновой кислоты в нем составляет 76 %, апиозы - 18 %. Апиогалактуронановый фрагмент LMP при совместном введении с OVA увеличивает образование антигенспецифических IgG антител и усиливает реакцию ГЗТ, а также стимулирует продукцию секреторного иммуноглобулина IgA в слизистой кишечника. Усиление иммунного ответа фрагментом LMP сравнимо с влиянием исходного лемнана LM, а также с действием холерного энтеротоксина. Частичное удаление боковых углеводных цепей фрагмента LMP с помощью кислотного гидролиза приводит к образованию фрагмента, который не обладает иммуностимулирующим действием. Следовательно, иммуностимулирующее действие лемнана обусловлено разветвленной областью пектиновой макромолекулы. Остатки апиозы в составе лемнана способствуют образованию внутри- и межмолекулярной сети (в последнем случае в присутствии иона металла). В результате увеличивается площадь поверхности молекулы, и создаются условия для неспецифического связывания полисахарида с другими биополимерами (антигеном) и плазматической мембраной клеток-мишеней. Кроме того, благодаря наличию апиогалактуронановой области лемнан менее подвергается пектинолизу, что вероятно, обеспечивает более высокую устойчивость лемнана в условиях желудочно-кишечного тракта в сравнении с другими исследованными пектинами.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные исследования выявили вклад структурных элементов макромолекулы в действие пектинов на иммунную реактивность. Установлено, что макромолекула пектинов содержит фрагменты, способные снижать или увеличивать активность лейкоцитов. Поэтому пектины, находящиеся в клеточной стенке растений, имеют потенциальную возможность как к иммуностимулирующему, так и к иммуносупрессорному действию. Таким образом, пектины обладают уникальным свойством -полипотентностыо структуры в отношении действия на иммунную систему.

Изолированный пектин проявляет иммуносупрессорную активность, если при выделении пектина образуются преимущественно высокомолекулярные фрагменты галактуронана со свободными карбоксильными группами. Фрагменты разветвленной галактуронановой цепи частично препятствуют линейному галактуронану стимулировать продукцию противовоспалительных цитокинов, в результате чего эффект пектинов, содержащих такие фрагменты, изменяется со временем. Для

проявления иммуностимулирующего действия необходимо наличие в изолированном пектине фрагментов разветвленной области. Однако стимулирующий эффект разветвленной области проявится только в том случае, если ему не препятствует ингибирующий эффект области галактуронана. Значительное присутствие в пектине устойчивых к пектинолизу фрагментов, таких как апиогалактуронан, обуславливает способность пектинов взаимодействовать с белковыми антигенами и стимулировать на них гуморальный иммунный ответ.

Пектиновые фрагменты экстрагируются из растительной пищи при ее переваривании. Соотношение образующихся углеводных цепей галактуронана, рамногалактуронана, апиогалактуронана и других фрагментов определяет функциональную активность лейкоцитов, модулируя тем самым иммунную устойчивость организма. Полученные данные, таким образом, позволяют предложить концепцию регуляции иммунитета млекопитающих пектиновыми полисахаридами. В основе данного представления лежит обусловленная полипотентностью структуры пектиновой макромолекулы возможность реализации различных сценариев влияния растительной пищи на иммунную систему.

Манипулирование составом пектиновых фрагментов в желудочно-кишечном тракте открывает новое направление в иммуномодулирующей терапии. Можно выделить три основных преимущества применения пектиновых полисахаридов в иммунотерапии. Во-первых, возможность сочетанного влияния на различные иммунные реакции, что позволяет учесть сложность организации и регуляции иммунной системы. Во-вторых, пектиновые полисахариды модулируют иммунную реактивность, воздействуя на стенку кишечника, то есть не нарушая внутренней среды организма. И, в-третьих, использование пектинов безопасно, так как в основе их иммуномодулирующего действия лежат молекулярные механизмы, сложившиеся в ходе эволюции млекопитающих. Выяснение этих механизмов представляется перспективной задачей будущих исследований..

ВЫВОДЫ

1. Пектиновые полисахариды обладают широким спектром иммуномодулирующей активности, обусловленной строением главной углеводной цепи и разветвленных областей макромолекулы. Выявлено уникальное свойство пектинов - полипотентность структуры в отношении действия на иммунную систему, которое основано на наличии в пектиновой макромолекуле фрагментов, способных снижать или увеличивать иммунную реактивность.

2. Обнаружена высокая противовоспалительная активность галактуронана, представляющего собой фрагмент главной углеводной цепи всех пектинов.

3. Высокая степень метилэтерифицирования остатков галаюуроновой кислоты (более 50 %) препятствует ингибирующему действию пектинов на активность лейкоцитов.

4. Наличие блоков разветвленного галактуронана вызывает двухфазный характер иммунсмодулирующего действия пектина—снижение лейкоцитарной активности сменяется ее увеличением.

5. Пектины, имеющие развитую разветвленную область, стимулируют неспецифические (фагоцитоз) и антиген-специфические клеточные иммунные реакции, в частности реакцию гиперчувствительности замедленного типа. Тонкое строение боковых углеводных цепей пектинов определяет способность стимулировать активность лейкоцитов.

6. Иммуномодулирующее действие зависит от молекулярной массы пектинов. Способностью снижать иммунную реактивность обладают пектины и галактуронаны с молекулярной массой свыше 300 кДа. Иммуностимулирующее действие исследованных пектинов вызывается макромолекулами с молекулярной массой 20-100 кДа.

7. Установлено, что примесь глюкозы в коммерческих пектинах нарушает нормальную толерантность организма к пищевым антигенам.

8. Показано, что пектины и галактуронаны, снижающие активность нейтрофилов, повышают резистентность лабораторных мышей при ЛПС-индуцированной эндотоксинемии, а также защищают стенку толстой кишки от химически индуцированного воспаления.

9. Фрагмент апиогалактуронана обуславливает иммуноадъювантное действие лемнана. Стимуляция гуморального иммунного ответа лемнаном происходит в результате увеличения проницаемости кишечной стенки для антигена.

10. Предложена концепция регуляции иммунитета млекопитающих пектиновыми полисахаридами: усиление или ослабление иммунного ответа происходит при образовании различных фрагментов пектиновой макромолекулы в ходе биотрансформации растительной пищи в желудочно-кишечном тракте.

ОСНОВНЫЕ ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Монографии

1. Попов C.B. Взаимодействие фагоцитов млекопитающих с полисахаридами растений // Сыктывкар, 2002. -100 с. (Коми научный центр УрО Российской АН).

2. Оводов Ю.С., Головченко В.В., Гюнтер Е.А., Попов C.B. Пектиновые вещества растений европейского Севера России. - Екатеринбург: УрО РАН, 2009 - 105 с.

Статьи в рецензируемых журналах

1. Оводова Р.Г., Головченко В.В., Попов C.B. Выделение и химическая характеристика полисахаридов (вибурнанов) из шрота ягод калины обыкновенной Viburnum opulus И Химия раст. сырья. 1999. №1. С.53-57.

2. Полле А.Я., Оводова Р.Г., Попов C.B. Выделение и общая характеристика полисахаридов из пижмы обыкновенной, мать-и-мачехи и лопуха войлочного // Химия раст. сырья, 1999. №1. С.ЗЗ-38.

3. Popov S.V., Popova G.Yu., Ovodova R.G., Bushneva O.A., Ovodov Yu. S. Effects of polysaccharides from Silene vulgaris on phagocytes // International J. Immunopharmacol. 1999. Vol.216, №3. P.617-624,

4. Оводова Р.Г, Головченко B.B., Попов C.B., Шашков A.C., Оводов Ю.С. Выделение и предварительное исследование строения и физиологической активности водорастворимых полисахаридов из шрота ягод калины обыкновенной Viburnum opulus II Биоорган, химия. 2000. Т.26,№1.С.б 1-67.

5. Оводова Р.Г, Головченко В.В., Шашков A.C., Попов C.B., Оводов Ю.С. Структурное исследование и физиологическая активность лемнана, пектина из Lemna minor П Биоорган, химия. 2000. Т.26, №10. С.743-751.

6. Злобин A.A., Оводова Р.Г., Попов C.B. Общая химическая характеристика водорастворимых полисахаридов плодов шиповника морщинистого Rosa rugosa Н Химия раст. сырья. 2003. №2. С.39-44.

7. Попов C.B., Оводова Р.Г., Попова Г.Ю., Никитина И.Р., Оводов Ю.С. Ингибирующее действие комарумана - пектина сабельника болотного Comarum palustre L. и его фрагментов на адгезию нейтрофилов человека к фибронектину // Биохимия. 2005. Т.70, №1. С.133-138.

8. Popov S.V., Popova G.Yu., Ovodova R.G., Ovodov Yu.S. Antiinflammatory activity of the pectic polysaccharide from Comarum palustre L. // Fitoterapia. 2005. Vol.76, №3-4. P. 281-287.

9. Popov S. V., Popova G.Yu., Nikolaeva S.Yu., Golovchenko V.V., Ovodova R.G. Immunostimulating activity of pectic polysaccharide from Bergenia crassifolia (L.) Fritsch. // Phytotherapy Res. 2005. Vol.19, №12. P.1052-1056.

10. Оводова Р.Г., Попов C.B., Бушнева O.A., Головченко В.В., Чижов А.О., Клинов Д.В., Оводов Ю.С. Разветвление галактуронанового кора макромолекулы комарумана, пектина сабельника болотного Comarum palustre L. // Биохимия. 2006. Т.71, №5. С.666-671.

11. Popov S.V., Golovchenko V.V., Ovodova R.G., Smirnov V.V., Popova G.Yu., Ovodov Yu.S. Characterisation of the oral adjuvant effect of lemnan, a pectic polysaccharide oi Lemna minor L. I I Vaccine. 2006. Vol.24, №26. P.5413-5419.

12. Popov S.V., Markov P.A, Nikitina I.R., Petrishev S., Smirnov V., Ovodov Yu.S. Preventive effect of a pectic polysaccharide of the common cranberry Vaccinium oxycoccos L. on acetic acid-induced colitis in mice // World J. Gastroenterol. 2006. Vol.12, №41. P.6646-6651.

13. Popov S.V., Ovodova R.G., Ovodov Yu.S. Effect of lemnan, pectin from Lemna minor L., and its fragments on inflammatory reaction // Phytotherapy Res. 2006. Vol.20, №5. P.403-407.

14. Popov S.V., Gunter E.A., Markov P.A., Smirnov V.V., Khramova D.S., Ovodov Yu.S. Adjuvant effect of lemnan, pectic polysaccharide of callus culture of Lemna minor L. at oral administration // Immunopharmacol. Immunotoxicol. 2006. Vol.28. P.141-152.

15. Popov S.V., Ovodova R.G., Markov P.A, Nikitina I.R., Ovodov Yu.S. Protective effect of comaruman, pectin of cinquefoil Comarum palustre L. on acetic acid-induced colitis in mice // Digest. Dis. Sci. 2006. Vol.51, №9. P.1532-1537.

16. Попов C.B., Оводова Р.Г., Попова Г.Ю., Никитина И.Р., Оводов Ю.С. Ингибирующее действие пектиновых галактуронанов на адгезию нейтрофилов // Биоорган, химия. 2007. Т.ЗЗ, №1. С.187-192.

17. Злобин А.А., Жуков Н.А., Оводова Р.Г., Попов С.В. Состав и свойства пектиновых полисахаридов шрота шиповника // Химия раст. сырья. 2007. №4. С.91-94.

18. Попов С.В., Винтер В.Г., Патова О.А., Марков П.А., Никитина И.Р., Оводова Р.Г., Попова Г.Ю., Шашков А.С., Оводов Ю.С. Химическая характеристика и противовоспалительное действие раувольфиана,

пектинового полисахарида каллуса раувольфии змеиной // Биохимия. 2007. Т.72, №7. С.955-962.

19. Popov S.V., Popova G.Yu., Koval О.A., Paderin N.M., Ovodova R.G, Ovodov Yu.S. Preventive anti-inflammatory effect of potamogetonan, pectin of common pondweed Potamogeton natans L. I I Phytotherapy Res. 2007. Vol.21. P.609-614.

20. Khramova D.S., Popov S.V., Golovchenko V.V., Vityazev F.V., Paderin N.M., Ovodov Yu.S. Abrogation of the oral tolerance to ovalbumin in mice by citrus pectin // Nutrition. 2009. Vol.25. P.226-232.

21. Ovodova, R.G., Golovchenko V.V., Popov S.V., Popova G.Yu., Paderin N.M., Shashkov A.S., Ovodov Yu.S. Chemical composition and antiinflammatory activity of pectic polysaccharide isolated from celery stalks // Food Chem. 2009. Vol.114. P.610-615.

22. Марков П.А., Попов C.B., Никитина И.Р., Оводова Р.Г., Оводов Ю.С. Противовоспалительная активность пектинов и их галактуронанового кора // Химия раст. сырья. 2010 - №1. С.21-26.

Патенты

1. Пат.2149642 Российская Федерация. Способ получения из растительного сырья полисахаридов, обладающих иммуностимулирующим действием /Оводова Р.Г., Бушнева О.А., Головченко В.В., Попов С.В., Оводов Ю.С., заявитель и патентообладатель Ин-т физиологии Коми НЦ УрО РАН. -№ 99117565; заявл. 09.08.1999; опубл. 27.05.2000; Бюл. №15.

2. Пат.2344829 Российская Федерация. Способ получения из растительного сырья галактуронанов, обладающих противовоспалительным действием /Головченко В.В., Витязев Ф.В., Оводов Ю.С., Оводова Р.Г., Попов С.В., Попова Г.Ю., заявитель и патентообладатель Ин-т физиологии Коми НЦ УрО РАН. -№ 2007147162/15; заявл. 18.12.2007; опубл 27.01.2009; Бюл. № 3.

Соискатель - V А Попов С.В.

Автор выражает свою искреннюю благодарность научному консультанту академику Юрию Семеновичу Оводову за предложенную идею, мудрое руководство и отеческую поддержку инициатив, к.х.н., ст.н.с. Оводовой Р.Г., к.х.н., доц. Головченко В.В. и к.б.н., доц. Гюнтер Е.А. за любезно предоставленные охарактеризованные образцы пектинов и за ценные советы и консультации. Автор благодарит за помощь в выполнении работы сотрудников лаборатории молекулярной физиологии и иммунологии Отдела молекулярной иммунологии и биотехнологии Института физиологии Коми НЦ УрО РАН К.6.Н. Маркова П.А., к.б.н. Храмову Д.С., Никитину И.Р., Попову Г.Ю., Смирнова В.В., Падерина Н.М.

Лицензия № 0025 от 20.06.96

Компьютерный набор. Формат 60x90 1\16 Бум. БтаПЬюе. Отпечатано на ризографе. Усл.печ.л. 2.03

Тираж 100 Заказ № 103

Информационно-издательский отдел Учреждения Российской академии наук Института физиологии Коми научного центра Уральского отделения РАН

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Попов, Сергей Владимирович

Введение

Глава I Обзор литературы

1. Общие сведения о пектиновых веществах X

Роль пектинов в растительной клеточной стенке

Общая схема строения пектинов \

Физиологическая активность пектинов 19 Методологические подходы к изучению связи между строением и физиологической активностью пектинов

2. Структурно-химическая характеристика пектинов европейского

Севера России 30 Пектиновые вещества, продуцируемые культурами клеток растений

3. Иммуномодулирующее действие пектинов 36 Действие растительных полисахаридов на иммунную систему 39 Иммунная система кишечника и феномен оральной толерантности

Глава II . Материалы и методы исследования

1. Характеристика пектинов и их фрагментов, использованных в работе 5 j

2. Объект исследования

3. Растворы и реактивы

4. Скрининг иммуномодулирующей активности

5. Определение способности лейкоцитов крови секретировать цитокины ex vivo

6. Оценка подвижности лейкоцитов

7. Определение антиген-специфичного иммунного ответа

8. Измерение проницаемости кишечной стенки для белка

9. Индукция пищевой толерантности 70 1О Модель эндотоксинового шока

11. Модель воспаления толстой кишки

12. Определение противовоспалительного действия

13. Определение примеси ЛПС

14. Статистическая обработка результатов

Глава III Результаты исследования

1. Выявление пектинов, обладающих иммуномодулирующим действием

2. Ингибирующее действие галактуронанов на активность лейкоцитов ^

3. Действие на активность фагоцитов пектинов с различной степенью метилэтерифицирования

4. Иммуномодулирующее действие пектина сабельника болотного

5. Сравнение иммуностимулирующей активности пектинов с различным типом строения разветвленной области

6. Зависимость иммуномодулирующего действия от молекулярной массы пектинов

7. Влияние примесей на иммуномодулирующее действие пектинов

8. Защитное действие пектинов при гиперактивации иммунной системы

9. Иммуноадъювантное действие лемнана 137 10 Масса тела и внутренних органов у мышей, получивших пектины

Глава IV Обсуждение результатов

1. Зависимость иммуномодулирующего действия от строения главной углеводной цепи пектинов

Медико-биологическое значение способности галактуронана снижать иммунную реактивность

2. Зависимость иммуномодулирующего действия от строения разветвленной области пектиновой макромолекулы

3. Полипотентность структуры - уникальное свойство пектиновой макромолекулы

Концепция регуляции иммунитета пектиновыми полисахаридами

4. Новые виды физиологической активности пектинов

Защитное действие пектинов при гиперактивации иммунной 184 системы

Усиление иммунного ответа на пероральный антиген

Ингибирование пищевой толерантности

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммуномодулирующее действие пектиновых полисахаридов"

Актуальность проблемы. Пектины представляют собой сложные гетерополисахариды, относящиеся к классу гликаногалактуронанов, кислых растительных полисахаридов (Оводов, 2009). Пектиновые вещества инкрустируют стенки растительных клеток и входят в состав межклеточного пространства высших наземных растений, морских трав и ряда пресноводных водорослей (Popper, 2008). Пектины образуют матрикс, связующий микрофибриллы целлюлозы; обеспечивают ионный транспорт и водный режим, влияют на прорастание семян, рост и развитие растения, выполняют защитную роль во взаимоотношениях растения с фитопатогенами (Cabrera et al., 2008). В этой связи, структура пектиновых веществ зависит от многих параметров и может существенно изменяться в процессе роста и развития растения. Динамичность структуры пектинов обеспечивается нерегулярным блочным характером строения углеводной цепи, которая содержит различные макромолекулярные фрагменты линейной и разветвленной областей (Voragen et al., 2009).

Широкое распространение, относительная легкость выделения и высокая физиологическая активность сделали привлекательным практическое применение пектинов. Поэтому в настоящее время проводится интенсивное изучение связи между структурой и активностью пектиновых полисахаридов. Исследование действия пектинов на иммунитет заслуживает особого внимания в связи с чрезвычайно важной ролью, которую играет иммунная система в жизнеобеспечении организма. Пектины являются перспективными кандидатами для разработки средств иммуномодулирующей терапии. Представляется актуальным выяснение изменений иммунной реактивности при пероральном введении пектинов в зависимости от их строения, что является ключевым подходом в выяснении молекулярных основ регуляции резистентности организма посредством влияния на иммунную систему желудочно-кишечного тракта.

Составляющими компонентами пектинов являются следующие структурные элементы: гомогалактуронан, рамногалактуронан-I (RG-I), ксилогалактуронан и апиогалактуронан (Round et al., 2010). Очевидно, что данные полисахариды, существенно отличающиеся своим строением, могут оказывать различное физиологическое действие. Поэтому итоговый результат действия на иммунитет определяется, в первую очередь, соотношением пектиновых полисахаридов. Однако особенности иммуномодулирующего действия фрагментов пектиновых макромолекул ранее не изучались. Кроме того, сами пектиновые полисахариды отличаются у различных растений: гомогалактуронан - степенью метилэтерифицирования и молекулярным весом; фрагмент RG-I - тонким строением боковых цепей, состоящих из остатков арабинозы, галактозы и ряда других нейтральных моносахаридов; ксило- и апиогалактуронаны -степенью разветвленности и.т.д. В зависимости от сырья, метода выделения и полноты очистки в составе пектинов могут присутствовать различные примеси, которые могут сами по себе оказывать действие на иммунную систему. В настоящее время нет достаточных сведений для анализа зависимости иммуномодулирующего действия пектинов от особенностей их строения и наличия сопутствующих примесей.

Цель исследования — установить вклад структурных элементов макромолекулы в иммуномодулирующее действие пектинов.

Задачи исследования:

1 .Выявить пектины, обладающие иммуномодулирующим действием.

2.Определить зависимость иммуномодулирующего действия от содержания остатков галактуроновой кислоты в пектине.

3.Исследовать влияние пектинов с различной степенью метилэтерифицирования на активность фагоцитов.

4.Установить особенности иммуномодулирующего действия пектинов, содержащих участки разветвленного галактуронана.

5.Сравнить иммуностимулирующее действие пектинов, отличающихся строением разветвленной области макромолекулы.

6.Определить зависимость иммуномодулирующего действия от молекулярной массы пектинов.

7.Установить влияние примесей на иммуномодулирующее действие пектинов.

8.Изучить способность пектинов снижать гиперактивацию лейкоцитов.

9.Выявить область макромолекулы, обуславливающую иммуноадъювантное действие, и определить механизм усиления иммунного ответа лемнаном.

Основные положения, выносимые на защиту:

1.Пектины при пероральном введении оказывают иммуномодулирующее действие, характер и направленность которого зависят от строения линейных и разветвленных областей макромолекулы.

2.Способность снижать иммунную реактивность более распространена среди пектинов, чём иммуностимулирующее действие, так как обусловлена областью галактуронана, образующего главную углеводную цепь всех пектинов.

3.Иммуностимулирующая активность проявляется только при определенном строении боковых цепей в разветвленной области пектиновой макромолекулы.

4.Существует несколько механизмов взаимодействия пектинов с иммунной системой. Часть из них приводит к усилению, а часть к снижению функциональной активности лейкоцитов.

5.В результате перорального введения пектинов происходит как системное, так и локальное изменение функциональной активности лейкоцитов.

Научная новизна. Впервые выявлены области пектиновой макромолекулы, обуславливающие стимулирующее или подавляющее действие на иммунную реактивность. Теоретически обоснован и впервые применен оригинальный методологический подход к изучению зависимости физиологической активности от строения пектиновых веществ. Он включает в себя сочетание сравнительного анализа физиологической активности пектинов с установленным строением и изучение активности фрагментов пектиновой макромолекулы, полученных с помощью кислотного и ферментативного гидролиза.

Впервые проведено сравнительное комплексное изучение иммуномодулирующей активности пектинов всех видов, с которыми может взаимодействовать иммунная система человека. А именно, изучено действие на иммунитет пектинов, выделенных из растений, не употребляемых в пищу, пектинов из клеточных культур, из ряда съедобных растений, а также коммерческих пектинов, применяемых в пищевой промышленности. При этом в качестве мишени воздействия пектинов определена функциональная активность основных звеньев иммунитета - фагоцитоза, антиген-специфического клеточного и гуморального иммунного ответа. В результате скрининговых исследований выявлены растения европейского Севера^ России, содержащие физиологически активные пектины: Установлены особенности действия на иммунитет пектинов, имеющих необычное химическое строение.

Впервые охарактеризовано иммуномодулирующее действие^ пектинов при их пероральном введении; Найдены новые виды физиологической активности пектинов: ингибирование токсического действия липополисахарида (ЛПС), защитное действие на стенку толстой- кишки и усиление иммунного ответа на перорально введенный; антиген. Выявлены особенности противовоспалительного действия пектинов, в частности, его превентивный характер. Обнаружено, что механизм иммуностимулирующего действия связан с увеличением проницаемости кишечной^ стенки под действием пектинов. На основании, множественности и разнонаправленное™ иммуномодулирующего. действия сформулирована концепция о регуляции иммунитета млекопитающих пектинами, поступающими* в составе растительной пищи.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследования вносят вклад в понимание общебиологических принципов регуляции иммунной устойчивости, млекопитающих. Расширены представления о механизме противовоспалительного и противовопухолевого действия пищевых волокон. Выявленные особенности позволяют отличить иммуномодулирующее действие пектинов от эффекта других биологически активных соединений в составе многокомпонентных средств фитотерапии и растительной пищи.

На основе выявленной зависимости активности от строения разработаны рекомендации по усовершенствованию методов выделения пектинов с заданными свойствами. Приоритет конкретных технологических решений подтвержден двумя патентами РФ на изобретения. Получено экспериментальное обоснование применения биотехнологических подходов для получения физиологически активных полисахаридов. Высокомолекулярные галактуронаньь можно рассматривать в качестве нового класса биомаркеров, определение содержания которых в продуктах питания, перспективно для оценки рациона питания.

2002 г.), 10-ом. Братиславском симпозиуме по углеводам5 (г.Смоленице,. Словакия; 2002 г.), . Международной конференции по новым функциональным ингредиентам и продуктам питания (г.Копенгаген, Дания,

2003 г.). 5-ом и 7-ом Международных симпозиумах по химии природных соединений (г.Ташкент, Узбекистан, 2003 и 2007 гг.), Международной-научной конференции; «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (г. Алматы, Казахстан, 2003 г.), Международной летней школе по гликологии (г. Вагенинген, Нидерланды, 2004 г.), 31ей и 4-ой! Международных конференциях общества по изучению природных веществ (г.Нанкин, Китай, 2004 г.; г. Лейзин, Швейцария, 2006 г.), Международной конференции «Иммуностимуляторы в современных вакцинах» (г.Малага, Испания, 2005 г.), Международных конгрессах общества по изучению лекарственных растений (г. Хельсинки, Финляндия, 2006 г.; г. Грац, Австрия, 2008 г.), Международном симпозиуме по фармакологии природных веществ «Фапронатура 2006» (г.Варадеро, Куба, 2006 г.), 1¥-ой Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ» (г.Сыктывкар, 2006 г.), 1У-ом Съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (г.Новосибирск, 2008- г.), Научной конференции «Иммуномодуляторы природного происхождения» (г.Владивосток, 2009 г.), Всероссийской научной конференции «Химия и медицина» (г.Уфа, 2010 г.).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Попов, Сергей Владимирович

ВЫВОДЫ

1.Пектиновые полисахариды обладают широким спектром иммуномодулирующей активности, обусловленной строением главной углеводной цепи и разветвленных областей макромолекулы. Выявлено уникальное свойство пектинов — полипотентность структуры в отношении действия на иммунную систему, которое основано на наличии в пектиновой макромолекуле фрагментов, способных снижать или увеличивать иммунную реактивность.

2.Обнаружена высокая противовоспалительная активность галактуронана, представляющего собой фрагмент главной углеводной цепи всех пектинов.

3.Высокая степень метилэтерифицирования остатков галактуроновой кислоты (более 50 %) препятствует ингибирующему действию пектинов на активность лейкоцитов.

4.Наличие блоков разветвленного галактуронана вызывает двухфазный характер иммуномодулирующего действия пектина - снижение лейкоцитарной активности сменяется ее увеличением.

5.Пектины, имеющие развитую разветвленную область, которая представлена RG-I или апиогалактуронаном, стимулируют неспецифические (фагоцитоз) и антиген-специфические клеточные иммунные реакции, в частности реакцию гиперчувствительности замедленного типа. Тонкое строение боковых углеводных цепей пектинов определяет способность стимулировать активность лейкоцитов.

Иммуностимулирующее действие исследованных пектинов вызывается полисахаридными цепями с молекулярной массой 20-100 кДа.

7.Установлено, что примесь глюкозы в коммерческих пектинах нарушает нормальную толерантность организма к пищевым антигенам.

8.Показано, что пектины и галактуронаны, снижающие активность нейтрофилов, повышают резистентность лабораторных мышей при ЛПС-индуцированной эндотоксинемии, а также защищают стенку толстой кишки от химически индуцированного воспаления.

9.Фрагмент апиогалактуронана обуславливает иммуноадъювантное действие лемнана. Стимуляция гуморального иммунного ответа лемнаном происходит в результате увеличения проницаемости кишечной стенки для антигена.

Ю.Предложена концепция регуляции иммунитета млекопитающих пектиновыми полисахаридами: усиление или ослабление иммунного ответа происходит при образовании различных фрагментов пектиновой макромолекулы в ходе биотрансформации растительной пищи в желудочно-кишечном тракте.

207

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные исследования выявили вклад структурных элементов макромолекулы в действие пектинов на иммунную реактивность. Установлено, что макромолекула всех пектинов содержит фрагменты, способные снижать или увеличивать активность лейкоцитов. Поэтому пектины, находящиеся в клеточной стенке растений, имеют потенциальную возможность, как к иммуностимулирующему, так и к иммуносупрессорному действию. Таким образом, пектины обладают уникальным свойством -полипотентностью структуры в отношении действия на иммунную систему.

Характер и направленность иммуномодулирующего действия в целом определяется условиями экстракции пектинов из растительного сырья. Изолированный пектин проявляет иммуносупрессорную активность, если при выделении пектина образуются преимущественно высокомолекулярные фрагменты галактуронана со свободными карбоксильными группами. Фрагменты разветвленной галактуронановой цепи частично препятствуют линейному галактуронану стимулировать продукцию противовоспалительных цитокинов, в результате чего эффект пектинов, содержащих такие фрагменты, изменяется со временем. Для проявления иммуностимулирующего действия необходимо наличие в изолированном пектине фрагментов разветвленной области. Однако стимулирующий эффект разветвленной области проявится только в том случае, если ему не препятствует ингибирующий эффект области галактуронана. Возможно, что в некоторых неактивных пектинах разветвленная и линейная области нивелируют действие друг друга. По нашим данным, разделение полисахаридных цепей по молекулярному весу может быть использовано для получения пектинов с заданными свойствами. Значительное присутствие в пектине устойчивых к пектинолизу фрагментов, таких как апиогалактуронан, обуславливает способность пектинов взаимодействовать с белковыми антигенами и стимулировать на них гуморальный иммунный ответ.

Зависимость иммуномодулирующего эффекта от особенностей строения была установлена при пероральном введении пектинов. Следовательно, полученные данные отражают эволюционно закрепленные закономерности реакции иммунной системы на присутствие пектиновых полисахаридов в ЖКТ. Пектиновые фрагменты экстрагируются из растительной пищи при ее переваривании. Соотношение образующихся углеводных цепей галактуронана, рамногалактуронана, апиогалактуронана и других фрагментов определяет функциональную активность лейкоцитов, модулируя тем самым иммунную устойчивость организма. Полученные данные, таким образом, позволяют предложить концепцию регуляции иммунитета млекопитающих пектиновыми полисахаридами. В основе данного представления лежит возможность реализации различных сценариев влияния растительной пищи на иммунную систему, обусловленная полипотентностью структуры пектиновой макромолекулы. Предполагается, что млекопитающие используют полипотентность пектинов путем избирательного поедания растений и изменения свойств гастроэнтеральной среды.

Манипулирование составом пектиновых фрагментов в ЖКТ открывает новое направление в иммуномодулирующей терапии. Можно выделить три основных преимущества применения пектиновых полисахаридов в иммунотерапии. Первое заключается в возможности сочетанного влияния на различные иммунные реакции, что позволяет учесть сложность организации и регуляции иммунной системы. Во-вторых, пектиновые полисахариды модулируют иммунную реактивность воздействуя на стенку кишечника, то есть, не нарушая внутренней среды организма. И, в-третьих, использование пектинов безопасно, так как в основе их иммуномодулирующего действия лежат молекулярные механизмы, сложившиеся в ходе эволюции млекопитающих. Выяснение этих механизмов представляется перспективной задачей будущих исследований.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Попов, Сергей Владимирович, Сыктывкар

1. Бурмистрова A.JL Иммунный гомеостаз и микросимбиоценоз. Метаморфозы и пути развития воспалительных заболеваний кишечника — Челябинск: Челябинский дом печати, 1997 216 с.

2. Бушнева OA., Оводова Р.Г., Шашков A.C., Чижов А.О., Гюнтер Е.А., Оводов Ю.С. Структурное исследование арабиногалактана и пектина из каллуса Silene vulgaris II Биохимия. 2006. Т.71. С.798-807.

3. Вислобоков А.И., Прошева В.И., Гюнтер Е.А., Мельников К.Н. Влияние арабиногалактана и пектина из каллуса смолевки обыкновенной Silene vulgaris на калиевые токи нейрональной мембраны // Альм. клин. мед. 2008. Т.27. С.41-43.

4. Вислобоков А.И., Прошева В.И., Полле А .Я. Эффекты пектинового полисахарида из пижмы обыкновенной на ионные каналы нейрональной мембраны // Бюлл. эксп. биол. мед. 2004. №10. С.439-441.

5. Витязев Ф.В., Головченко В.В., Патова O.A., Дрозд H.H., Макаров В.А., Шашков A.C., Оводов Ю.С. Синтез сульфатированных пектинов и их антикоагулянтная активность // Биохимия. 2010. №6. С.857-867.

6. Голубев В.Н., Шелухина Н.П. Пектин: химия, технология, применение. М.: Издательство АТН РФ, 1995 387с.

7. Головко В.А., Бушнева O.A. Стабилизирующее влияние пектинового полисахарида смолевки на электрическую активность синусно-предсердной области сердца у лягушки // Бюлл. эксп. биол. мед. 2007. №3. С.251-253.

8. Гюнтер Е.А., Оводов Ю.С. Полисахариды клеточных культур Silene vulgaris II Прикл. биохим. микробиол. 2007а. Т.43, № 1. С.94-101.

9. Гюнтер Е.А., Оводов Ю.С. Действие ультрафиолетового излучения на рост и полисахаридный состав каллусной культуры Silene vulgaris II Прикл. биохим. микробиол. 2007b. Т.43, №4. С.518-526.

10. Гюнтер Е.А., Попейко О.В., Оводов Ю.С. Продуцирование полисахаридов каллусными культурами ряски малой // Прикл. биохим. микробиол. 2008. Т.44, №1. С. 117-122.

11. Гюнтер Е.А., Борисенков М.Ф., Оводов Ю.С. Действие ультрафиолета на строение и антиоксидантную активность силенана каллуса смолевки обыкновенной //Прикл. биохим. микробиол. 2009. №4. С.470-475.

12. Ермолов A.C., Лазарева Е.Б. Эффективность пектинов в комплексном лечении гнойно-воспалительных инфекций у больных с неотложной хирургической патологией // Эпидемиол. инфекц. болезни. 2006. №3. С.47-51.

13. Закенфельд Г.К. Иммунологический механизм действия полисахаридов дрожжевых клеток. Рига: Зинатне, 1990. - 152 с.

14. Злобин A.A., Жуков H.A., Оводова Р.Г. Химическая характеристика водорастворимых полисахаридов каллусной ткани шиповника морщинистого Rosa rugosa Thumb // Химия растит. Сырья. 2008. №1. С.51-55.

15. Истомин A.B., Пилат Т.Л. Гигиенические аспекты использования пектина и пектиновых веществ в лечебно-профилактическом питании: пособие для врачей. М. 2009. 44 с.

16. Кэтти Д., Райкундалиа Ч. Иммуноферментный анализ // Антитела Методы. В 2-х кн. Кн.2: Пер с англ / под ред. Д. Кэтти, М.: Мир. 1991.-384 с.

17. Комисаренко С.Н., Спиридонов В.Н. Пектины их свойства и применение //Раст. ресурсы. 1998. Т.34., №.1. СЛ11-119.

18. Кузнецов В.Ф., Черешнев В. А. Патофизиология дисфункций нейтрофилов // Киров., 1998. 119 с.

19. Кукес В.Г. Клиническая фармакокинетика основа лабораторного мониторинга лекарственных средств (лекция) // Клин. лаб. диагн. 1998. №3. С.25-32.

20. Ласкова И. Л., Утешев Б. С. Иммуномодулирующее действие гетерополисахаридов, выделенных из соцветий ромашки // Антибиотики и химиотерапия. 1992. Т.37, №6. С. 15-18.

21. Лейн Т.Е. Состояние рынка пектинов в России. // Пищевые ингредиенты. 2004. №1. С.9-10.

22. Лоенко Ю.Н., Оводова Р.Г., Ковалев В.В., Артюков A.A. Противоопухолевая активность зостерина пектина из морской травы Zostera marina II Химиотерапия опухолей в СССР. 1975. №19. С. 141-144.

23. Лоенко Ю.Н., Артюков A.A., Козловская Э.П., Мирошниченко В.А., Еляков Г.Б. Зостерин // Владивосток: Дальнаука., 1997. 211 с.

24. Новосельская И.Л., Воропаева Н.Л., Семенова Л.Н., Рашидова С.Ш. Пектин. Тенденции научных и прикладных исследований // Химия природн. соедин. 2000. С.3-11.

25. Оводов Ю.С. Полисахариды цветковых растений: структура и физиологическая активность // Биоорган, химия. 1998а. Т.24. С.483-501.

26. Оводов Ю.С. Избранные главы биоорганической химии. Сыктывкар: Из-ство СГУ., 1998b. 222 с.

27. Оводов Ю.С Биологически активные пектиновые полисахариды растений Республики Коми. // Север: наука и перспективы инновационного развития / Под ред. В.Н.Лаженцева. Сыктывкар: Из-ство Коми НЦ УрО РАН, 2006. С. 236-255.

28. Оводов Ю.С. K-антигены бактерий. Строение K-антигенов бактерий . Биохимия. 2006. Т.71. С.1155-1174.

29. Оводов Ю.С. Современные представления о пектиновых веществах // Биоорган, химия. 2009. Т.35. С.293-310.

30. Оводов Ю.С., Головченко В.В., Гюнтер Е.А., Попов C.B. Пектиновые вещества растений европейского Севера' России.- Екатеринбург: УрО РАН., 2009. 105 с.

31. Оводова Р.Г., Бушнева O.A., Головченко В.В., Попов C.B., Оводов Ю.С. Способ получения из растительного сырья полисахаридов, обладающих иммуномодулирующим действием // Патент РФ №2149642, 2000а. Бюлл. №15.

32. Оводова Р.Г., Бушнева O.A., Шашков А.С, Оводов Ю.С. Выделение и исследование строения полисахаридов из смолевки обыкновенной Silene vulgaris II Биоорган, химия. 2000b. Т.26, №9. С.686-692.

33. Оводова Р. Г., Головченко В.В., Попов C.B. Выделение и химическая характеристика полисахаридов (вибурнанов) из шрота ягод калины обыкновенной Viburnum opulus II Химия раст. сырья. 1999. №1. С.53-57.

34. Оводова Р. Г., Головченко В.В., Шашков A.C., Попов C.B., Оводов Ю.С. Структурное исследование- и физиологическая активность лемнана, пектина из Lemna minor LII Биоорган, химия. 2000с. Т.26, №10. С.743-751.

35. Оводова Р.Г., Бушнева O.A., Шашков A.C., Чижов А.О., Оводов Ю.С. Структурное изучение пектина сабельника болотного Comarum palustre L // Биохимия. 2005. Т.70, №8. С.1051-1062.

36. Оводова Р.Г., Попов C.B., Бушнева O.A., Головченко В.В., Чижов А.О., Клинов Д.В., Оводов Ю.С. Разветвление галактуронанового кора макромолекулы пектина сабельника болотного Comarum palustre L II Биохимия. 2006. T.71, №5. C.666-671.

37. Пинегин Б.В., Бутаков A.A., Щельцына Т.Д. Комплекс методов оценки функциональной активности фагоцитирующих клеток для выяснения повышенной чувствительности к инфекционным агентам // Хаитов P.M.,

38. Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. М.:ВНИРО, 1995. Гл.6. С.106-162.

39. Полле А .Я., Оводова Р.Г., Попов C.B. Выделение и общая характеристика полисахаридов из пижмы обыкновенной, мать-и-мачехи и лопуха войлочного // Химия раст. сырья. 1999. №1. С.33-38.

40. Полле А.Я., Оводова Р.Г., Оводов Ю.С. Способ получения из растительного сырья суммы полисахаридов // Патент РФ №2176515, 2001а. Бюлл. № 34.

41. Полле А.Я., Оводова Р.Г., Шашков А.С, Оводов Ю.С. Выделение и общая характеристика полисахаридов пижмы обыкновенной Tanacetum vulgare LII Биоорган, химия. 2001b. Т.27, №1. С.52-56.

42. Попов C.B. Взаимодействие фагоцитов млекопитающих с полисахаридами растений // Сыктывкар: Изд-ство Коми НЦ УрО РАН, 2002. 100с.

43. Потиевский Э.Г., Новиков А.И. Медицинские аспекты применения пектина. М.: Мед. книга, 2002. 96 с.

44. Прозоровский В., Прозоровская М., Демченко В. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки // Фармакол. токсил. 1978. №4. С.497-502.

45. Радченко В.Г., Сафроненкова И.Г., Селиверстов Н.Г., Ситкин С.И., Тетерина JI.A. Пищевые волокна в клинической практике // Клин, персп. гастроэнтерол. гепатол. 2010. № 1. С.21-28.

46. Сведенцов Е.П., Туманова Т.В., Оводова Р.Г., Головченко В.В., Зайцева О.О., Соломина О.Н., Степанова Е.С., Оводов Ю.С. Криозащитное действие лемнана, пектина ряски малой // Докл. акад. наук. 2008. №4. С.559-561.

47. Соломина О.Н., Сведенцов Е.П., Зайцева О.О., Полежаева Т.В., Оводова Р.Г., Головченко В.В., Лаптев Д.С., Худяков А.Н., Степанова Е.С., Оводов Ю.С. Криопротекторные свойства ряда пектинов // Докл. АН. 2010. №4. С.559-561.

48. Сычев И.А. Механизм повышения резистентности организма животных под действием растительных полисахаридов в норме' и при патологии: Автореф. дисс. .доктора биол.наук. М., 2008.

49. Сычев И. А., Смирнов В. М. Фагоцитозстимулирующее действие полисахаридов донника желтого // Росс, мед.-биол.' вестник им. акад. И. П. Павлова. Рязань: РГМУ, 2003. № 1-2. С. 58-63.

50. Сычев И. А., Порядин Г. В., Смирнов В. М. Действие полисахаридов на систему крови крыс // Бюлл. эксп. биол. мед. 2006«. № 5. С.530-533.

51. Сычев И. А., Порядин Г. В., Смирнов В: М. Механизм повышения неспецифической резистентности организма под действием полисахаридов Донника желтого Ряз. обл. ин-т развития образования. - Рязань, 20066. 144 с.

52. Турахожаев М.Т., Ходжаева М.А. Растительные пектиновые вещества. Способы выделения пектиновых веществ // Химия природн. соедин. 1993. С.653-643.

53. Уголев A.M. Эволюция пищеварения и принципы эволюции функций: Элементы современного функционализма. Л.: Наука, 1985. 544 с.

54. Утешев Б.С., Ласкова И.Л., Афанасьев В.А. Иммуномодулирующая активность гетерополисахаридов ромашки аптечной при воздушном и иммерсионном охлаждении // Эксп. клин, фармакол. 1999. Т.62, №6. С.52-55.

55. Флуер Ф.С., Кузнецова Г.Г., Батищева С.Ю. Влияние обогащенных пектином пищевых продуктов на свойства потенциально патогенных представителей микрофлоры толстой кишки // Вопр. питания. 2006. №4. С.46-49.

56. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология // Москва: ВНИРО. 1995. 219 с.

57. Хант С. Выделение лимфоцитов и вспомогательных клеток //Лимфоциты. Методы. /Ред.Дж.Клаус. М.:Мир. 1990. Гл.1. С. 15-65.

58. Хасина Э.И., Бездетко Г.Н., Янькова В.И. Протективное действие зостерина при экспериментальном токсическом поражении печени // Бюлл. СО РАМН 1998. №1. С.51-55.

59. Хотимченко Ю.С., Хасина Э.И., Ковалев В.В., Шевцова О.И., Шестакова С.В. Эффективность пищевых некрахмальных полисахаридов при экспериментальном токсическом гепатите // Вопр. питания 2000. №1-2. С.22-26.

60. ХотимченкоЮ.С., Одинцова М.В., Ковалев В.В. Полисорбовит. -Томск: Изд-во НТЛ, 2001. 132 с.

61. Цапаева О.В. Выделение, структурная идентификация и химическая модификация пектиновых веществ растения амарант и некоторых модельных соединений: Автореферат дисс. канд. хим. наук. Казань, 2000. 20 с.

62. Abbott D.W., Boraston A.V. Structural biology of pectin degradation by Enterobacteriaceae И Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2008. Vol.72. P.301-316.

63. Ajani U.A., Ford E.S., Mokdad A.H. Dietary fiber and C-reactive protein: findings from national health and nutrition examination survey data // J. Nutr. 2004. Vol.134. P.l 181-1185.

64. Allen A.A., Flemstrom G., Garner A.S. Gastroduodenal mucosal protection //Physiol. Rev. 1993. Vol.73. P.823-826.

65. Anderson J.W., Baird P., Davis R.H., Ferreri A., Knudtson M., Koraym A., Waters V., Williams C.L. Health benefits of dietary fiber // Nutr. Bull. 2009. Vol.67. P.188-205.

66. Andoh A., Bamba Т., Sasaki M. Physiological and anti-inflammatory roles of dietary fiber and butyrate in intestinal functions // J. Parenter. Enteral. Nutr. 1999. Vol.23. P.70-73.

67. Arslan N., Kar F. Filtration of sugar-beet pulp pectin extract and flow properties of pectin solutions // J. Fd. Eng. 1998. Vol.36. P. 113-122.

68. Aspinall G.O. The polysaccharides. -Vol.1. -London.: Acad. Press Inc. -1982a. 340 p.

69. Banic M., Brkic T., Anic B., Ljubicic N. Effect of cyclosporine in a murine model of experimental colitis//Dig. Dis. Sei. 2002. Vol.47. P.1362-1368.

70. Barbeau, E. Interactions between dietary proteins and the immune system: implications for oral tolerance and food- related diseases // Fd. Proteins and Lipids. 1997. Vol.156. P.183-193.

71. Barbier M., Thibault J.-F. Pectic substances of cherry fruits // Phytochemistry. 1982. Vol.21. P.l 11-115.

72. Bashir M.E.H., Andersen P., Fuss I.J., Shi H.N., Nagler-Anderson C. An enteric helminth infection protects against an allergic response to dietary antigen // J. Immunol. 2002. Vol. 169. P.3284-3292.

73. Bergman M., Djaldetti M., Salman H., Bessler H. Effect of citrus pectin on malignant cell proliferation // Biomol. Pharmacother. 2010. Vol.64. P.44-47.

74. Bergstedt-Lindqvist, S., Moon H.B., Persson U., Moller G., Heusser C, Severinson E. Interleukin 4 instructs uncommitted B lymphocytes to switch to IgGl and IgE // Eur. J. Immunol. 1988. Vol.18. P. 1073-1077.

75. Blandizzi C., Natale G., Gherardi G., Lazzeri G., Marveggio C., Colucci R., Carignani D., Del Tacca M. Acid-independent gastroprotective effects of lansoprazole in experimental mucosal injury // Dig. Dis. Sci. 1999. Vol.44. P.2039-2050.

76. Bloom P.D., Boedeker E.C. Mucosal immune responses to intestinal bacterial pathogens // Semin. Gastrointest. Dis. 1996. Vol.7. P.151-166.

77. Borovikova, L.V. Vagus nerve stimulation attenuates the systemic inflammatory response to endotoxin. Nature. 2000. Vol.405. P.458-462.

78. Boyaka P.N., Marinaro M., Jackson R.J., van Ginkel F.W., Cormet-Boyaka E., Kirk E., Kensil C.R., McGhee J.R. Oral QS-21 requires early IL-4 help for induction of mucosal and systemic immunity // J. Immunol. 2001. Vol.166. P.2283-2290.

79. Bruneau N., Bendayan M., Gingras D., Ghitescu L., Levy E., Lombardo D. Circulating bile salt-dependent lipase originates from the pancreas via intestinal transcytosis // Gastroenterology. 2003. Vol.124. P.470-480.

80. Buisseret P. Drug treatment of allergic gastroenteritis // Am. J. Clin. Nutr. 1980. Vol.33. P.865-871.

81. Burks A.W., Laubach S., Jones S.M. Oral tolerance, food allergy, and immunotherapy: implication for future treatment // J. Allerg. Clin. Immunol. 2008. Vol.121. P.1344-1350.

82. Bushneva O.A., Ovodova R.G., Shashkov A.S., Ovodov Yu.S. Structural studies on hairy region of pectic polysaccharide from campion Silene vulgaris (iOberna behen L.) // Carbohydr. Polym. 2002. Vol.49. P.471-478.

83. Cabrera J.C., Boland A., Messiaen J., Cambier P., Cutsen P.V. Egg box conformation of oligogalacturonides: the time-dependent stabilization of the elicitor-active conformation increases its biological activity // Glycobiology. 2008. Vol.18. P.473-482.

84. Caffall K.H., Mohnen D. The structure, function, and biosynthesis of plant cell wall pectic polysaccharides // Carbohydr. Res. 2009. Vol.344. P. 1879-1900.

85. Cammisotto P.G., Gingras D., Bendayan M. Transcytosis of gastric leptin through the rat duodenal mucosa // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2007. Vol.293. P.G773-G779.

86. Carpita N.C., Gideaut D.M. Structural models of primary cell walls in flowering plants: consistency of molecular structure with the physical properties of the walls during growth // Plant J. 1993. Vol.3. P. 1-30.

87. Carpita N.C., McCann M. The cell wall // Biochemistry and molecular biology of plants. / Eds. B. Bushman, W. Gruissem, R. Jones. Am. Soc. Plant Physiol. 2000. P.52-108.

88. Chen Y. Peripheral deletion of antigen-reactive T-cells in oral tolerance // Nature. 1995. Vol.376. P.177-180.

89. Chen Y., Kuchroo V.K., Inobe J. Regulatory T cell clones induced by oral tolerance: suppression of autoimmune encephalomyelitis // Science. 1994. Vol.265. P.1237-1240.

90. Chen C.H, Sheu M.T., Chen T.F., Wang Y.C., Hon W.C., Liu D.Z., Chung T.C., Liang Y.C. Suppression of endotoxin-induced proinflammatory responsesd by citrus pectin through blocking LPS signaling pathways // Biochem. Pharmacol. 2006. Vol.72. P.1001-1009.

91. Chihara G., Maeda Y., Hamuro J. Inhibition of mouse sarcoma 180 by polysaccharides from Lentinus edodes (Berk.) sing // Nature. 1969. Vol.222. P.687-692.

92. Christensen S.H. Pectins // Fd Hydrocoll. 1986. Vol.3. P.205-230.

93. Chung Y., Chang S.Y., Chang Y.K. Kinetic analysis of oral tolerance: memory lymphocytes refractory to oral tolerance // J. Immunol. 1999. Vol.163. P.3692-3698.

94. Chung Y., Lee S.H., Kim D.H., Kang Ch.Y. Complementary role of CD4+CD25+ regulatory T cells and TGF -a in oral tolerance // J. Leukoc: Biol. 2005.Vol.77. P.906-916.

95. Cloutier M., Gingras D., Bendayan M. Internalization and transcytosis of pancreatic enzymes by the intestinal mucosa // J. Histochem. Cytochem. 2006. Vol.54. P.781-794.

96. Coenen G.J., Bakx E.J., Verhoef R.P., Schols H.A., Voragen A.G.J. Identification of the connecting linkage between homo- or xylogalacturonan and rhamnogalacturonan type III Carbohydr. Polym. 2007. Vol.70. P.224-235.

97. Compton R., Williams D., Browder W. The beneficial effect of enhanced macrophage function on the healing of bowel anastomoses // Amer. Surg. 1996. Vol.62. P.14-18.

98. Czop J.K., Kay J. Isolation and characterization of P-glucan receptors on human mononuclear phagocytes// J. Exp. Med. 1991. Vol.173. P. 1511-1520.

99. Dandona P., Aljada A., Chaudhuri A., Mohanty P., Garg R. Metabolic syndrome: a comprehensive perspective based on interactions between obesity, diabetes, and inflammation // Circulation. 2005. Vol.111. P. 1448-1454.

100. Ditter B., Urbaschek R., Urbaschek B. Ability of various adsorbents to bind endotoxins in vitro and to prevent orally induced endotoxemia in mice // Gastroenterology. 1983. Vol.84. P. 1547-1552.

101. Duan X., Cheng G., Yang E., Ruenroengklin N., Lu W., Luo Y., Jiang Y. Modification of pectin polysaccharides during ripening of postharvest banana fruit //Fd. Chem. 2008. Vol.111. P. 144-149.

102. Dubois B., Chapat L., Goubier A., Papiernik M., Nicolas J.F., Kaiserlian D. Innate CD4+CD25+ regulatory T cells are required for oral tolerance and inhibition of CD8+ T cells mediating skin inflammation // Blood. 2003. Vol.102. P.3295-3301.

103. Eastwood M., Kritchevsky D. Dietary fiber: how did we get where we are ? // Annu. Rev. Nutr. 2005. Vol.25. P. 1-8.

104. Eftimiadi C., Buzzi E., Tonetti M., Buffa P. Short-chain fatty acids produced by anaerobic bacteria alter the physiological responses of human neutrophils to chemotactic peptide // J. Infect. 1987. Vol.14. P.43-53.

105. Elson C.O., Beagley K.W., Sharmanov A.T., Fujihashi K. Hapten-induced model of murine inflammatory bowel disease: mucosa immune responses and protection by tolerance // J. Immunol. 1996. Vol.157. P.2174-2185.

106. El-Tinue A.H., El-Safic A.S., Nour • A.A. A chemical study of pumpkin pectins substances//Trop. Sci. 1983. Vol.24. P.173-183.

107. Elwell W.E., Dehn W.M. Pectic content of plant materials // Plant Physiol. 1939. Vol.14. P.809-816.

108. Eriksson I., Andersson R., Aman P. Extraction of pectic substances from dehulled rapeseed // Carbohydr. Res. 1997. Vol.301. P. 177-185.

109. Espevik T., Otterlei M., Skjak-Braek G. The involvement of CD14 in stimulation of cytokine production by uronic acid polymers // Eur. J. Immunol. 1993. Vol.23. P.255-261.

110. Fisher H., Griminger P., Sestman E.R., Brush M.K. Dietary pectin and blood cholesterol // J. Nutr. 1965. Vol.86. P.l 13.

111. Foitzik T., Kruscheweski M. Does microcirculation play a role in the pathogenesis of inflammatory bowel diseases // Int. J. Colorect. Dis. 1999. Vol.14. P.29-34.

112. Friedman A., Weiner H.L. Induction of anergy or active suppression following oral tolerance is determined by antigen dosage // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. Vol.9. P.6688-6692.

113. Fujihashi K., Dohi T., Kweon M.N., McGhee J.R., Koga T., Cooper M.D., Tonegawa S., Kiyono H. y8 T cells regulate mucosally induced tolerance in a dose dependent fashion // Int. Immunol. 1999. Vol.11. P. 1907-1916.

114. Fukunaga T., Araki Y., Yasuoka T., Sasaki M., Fujiyama Y. Effects of the soluble fibre pectin on intestinal cell proliferation fecal short chain fatty acid production and microbial population // Digestion. 2003. Vol.67. P.42-49.

115. Fuse K., Bamba T., Hosoda S. Effects, of pectin on fatty acid and glucose absorption and on thickness of unstirred water layer in rat and human intestine // Dig. Dis. Sci. 1989. Vol.34. P.l 109-1116.

116. Gaboriau-Routhiau V., Moreau M.C. Gut flora allows recovery of oral tolerance to ovalbumin in mice after transient breakdown mediated by cholera toxin or Escherichia coli heat-labile enterotoxin // Pediatr. Res. 1996. Vol.39. P.625-629.

117. Galvez J., Cruz T., Crespo E., Ocete M., Zarzuelo F. Rutoside as mucosal protective in acetic acid-induced rat colitis // Planta. Med. 1997. Vol.63. P.409-414.

118. Garna H., Mabon N., Robert C., Cornet C., Nott K., Legros H., Wathelet B., Paquot M. Effect of extraction conditions on the yield and purity of apple pomace pectin precipitated but not washed by alcohol // J. Fd. Sci. 2007. Vol.72. P.C1-C9.

119. Garcia-Ramallo E., Marques T., Prats N., Beleta ., Kunkel S.L., Goddesart N. Resident cell chemokine expression serves as the major mechanism for leukocyte recruitment during local inflammation // J. Immunol. 2002. Vol.169. P.6267-6473.

120. Garside P., Mowat A.M., Khoruts A. Oral tolerance in disease // Gut. 1999. Vol.44. P.137-142.

121. Gerhauser C. Cancer chemopreventative potential of apples, apple juice, and apple components // Planta Med. 2008. Vol.74. P. 1608-1624.

122. Gilsenan P.M., Richardson R.K., Morris E.R. Thermally reversible acid-induced gelation of low-methoxy pectin // Carbohydr. Polym. 2000. Vol.41. P.339-349.

123. Girard M., Turgeon S.L., Gauthier S.F. Quantification of the interactions between /?- lactoglobulin and pectin through capillary electrophoresis analysis // J. Agric. Fd. Chem. 2003. Vol.51. P.6043-6049.

124. Giugliano D., Ceriello A., Esposito K. The effect of diet on inflammation. Emphasis on the metabolic syndrome // J. Amer. Coll. Cardiol. 2006. Vol.48. P.677-685.

125. Glinsky V.V., Raz A. Modified citrus pectin anti-metastatic properties: one bullet, multiple targets // Carbohydr. Res. 2009. Vol.344. P.1788-1791.

126. Golovchenko V.V., Ovodova R.G., Shashkov A.S., Ovodov Yu.S. Structural studies of the pectic polysaccharide from duckweed Lemna minor L. // Phytochemistry. 2002. Vol.60. P.89-97.

127. Golubowska G. Changes of polysaccharide content and texture of potato during French fries production II Fd. Chem. 2005. Vol.90. P.847-851.

128. Gonda R., Tomoda M., Ohara N., Takada K. Arabinogalactan core structure and immunological activities of ukonan C, an acidic polysaccharide from the rhizome of Curcuma longa //Biol. Pharm. Bull. 1993. Vol.16. P.235-238.

129. Gonda R., Tomoda M., Shimizu N. Characterization of an acidic polysaccharide with immunological activities from tuber of Pinellia ternata II Biol. Pharm. Bull. 1994. Vol.17. P.1549-1553.

130. Gonzalez-Molina E., Dominguez-Perles R., Moreno D.A., Garcia-Viguera C. Natural bioactive compounds of citrus limon for food and health // J. Pharm. Biomed. Anal. 2010. Vol.51. P.327-345.

131. Gulfi M., Arrigoni E., Amado R. In vitro fermentability of a pectin fraction rich in hairy regions // Carbohydr. Polym. 2007. Vol.67. P.410-416.

132. Gunal O., Oktar B.K., Sungur M., Arbak S. Estradiol treatment ameliorates acetic acid-induced//Inflammation. 2003. Vol.27. P.351-359.

133. Giinter E.A., Ovodov Yu.S. Changes in cell wall polysaccharides of Silene vulgaris callus during culture // Phytochemistry. 2002. Vol.59. P.703-708.

134. Harang M., Szodorag P., Paragh G. Atherosclerosis: a complex interplay of inflammatory processes // Clin. Lipidol. 2009. Vol.4. P. 167-187.

135. Harris P.J., Ferguson L.R. Dietary fibers may protect or enhance carcinogenesis // Mutat. Res. 1999. Vol.443. P.95-110.

136. Hartman F.W., Schelling V., Harkins H.N., Brush B. Pectin solution as a blood substitute // Ann. Surg. 1941. Vol.114. P.212-224.

137. Haworth R., Piatt N., Keshav S. The macrophage scavenger receptor type A is expressed by activated macrophages and protects the host against lethal endotoxic shock//J. Exp. Med. 1997. Vol.186. P.1431-1439.

138. Hayashi A., Gillen A.C., Lott J.R. Effects of daily oral administration of quercetin chalcone and modified citrus pectin on implanted colon-25 tumor growth in Balb-c mice // Alternative Med. Rev. 2000. Vol.5. P.546-552.

139. Hirano M., Matsumoto T., Kiohara H., Yamada H. Lipopolysaccharide-independent limulus amebocyte lysate activating, mitogenic and anticomplementary activities of pectic polysaccharides from Chinese herbs' // Planta Med. 1994. Vol.60. P.248-252.

140. Hogles L., Vulevic L. Diet, immunity and functional foods // in Gastrointestinal microbiota and regulation of the immune system. Chapter 7. / Eds. G.B.Huffuagle, M.C.Noverr, 2008. Landes Biosc. and Springer Science. — P.24-54.

141. Holloway W.D., Tasman-Jones C., Maher K. Pectin digestion in humans // Am. J. Clin. Nutr. 1983. Vol.37. P.253-255.

142. Inase N., Schreck R.E., Lazarus S.C. Heparin inhibits histamine release from canine mast cells // Am. J. Physiol. 1993. Vol.264. P.387-390.

143. Ishihara K., Komatsu W., Saito H., Shinohara K. Comparison of the effects of dietary a-linolenic, stearidonic, and eicosapentaenoic acids on production of inflammatory mediators in mice. // Lipids. 2002. Vol.37. P.481-486.

144. Ishii T., Matsunaga T. Pectic polysaccharide rhamnogalacturonan II is covalently linked to homogalacturonan // Phytochemistry 2001. Vol.57. P.969-974.

145. Itoh H., Kataoka H., Tomita M., Hamasuna R., Nawa Y., Kitamura N., Koono M. Upregulation of HGF activator inhibitor type 1 but not type 2 along with regeneration of intestinal mucosa // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver. Physiol. 2000. Vol.278-635.

146. Jarvis M.C. Plant cell wall: supramolecular assemblies // Fd. Hydrocoll. 2009. Vol.20. P.245-253.

147. Johnston G.R., Webster N.R. Cytokines and the immunomodulatory function of the vagus nerve // Brit. J. Anaesth. 2009. Vol.102. P.452-462.

148. Joslyn M.A. The chemistry of protopectin // Adv. Fd. Res. 1962. Vol.11. P.1-25.

149. Kalergis A.M., Ravetch J.V. Inducing tumor immunity through the selective engagement of activating Fey receptors on dendritic cells // J. Exp. Med. 2002. Vol.195. P.1653-1659.

150. Kang B.K., Schlesinger L.S. Characterization of mannose receptor-dependent phagocytosis mediated by Mycobacterium tuberculosis lipoarabinomannan//Infect. Immunol. 1998. Vol.66. P.2769-2777.

151. Kardosova A., Capek P. Chemical and C13 NMR of a arabinogalactan from the leaves of Plantago lanceolata L. var. Libor. // Col. Czech. Chem. Commun. 1994. Vol.59. P.2714-2719.

152. Karpus W.J., Kennedy K.J., Kunkel S.L., Lukacs N. Monocyte chemotactic protein 1 regulates oral tolerance induction by inhibition of T helper cell 1-related cytokines // Exp. Med. 1998. Vol.187. P.733-741.

153. Kato H., Fujihashi K., Kato R., Yuki Y., MeGhee I. Oral tolerance revisited: prior oral tolerization abrogates Cholera toxin induced mucosal IgA responses // Immunology. 2001. Vol.166. P.3114-3121.

154. Kendall C.W.C., Esfahani A., Jenkins D.J.A. The link between dietary fibre and human health // Fd. Hydrocoll. 2010. Vol.24. P.42-48.

155. Kertesz Z.I. The pectic substances // New York, London: Acad. Press. -1951.-629 p. "

156. Khotimchenko M.Y., Kolenchenko E.A., Khotimchenko Y.S. Zinc-binding activity of different pectin compounds in aqueous solutions // J. Coll. Interface Sci. 2008. Vol.323. P.216-222.

157. Khotimchenko M.Y., Kolenchenko E.A., Khotimchenko Y.S., Khozhaenko

158. E.V., Kovalev V.V. Cerium binding activity of different pectin compounds in aqueous solutions // Coll. Surf. B: Biointerfaces. 2010. Vol.77. P. 104-110.

159. Kiechl S., Egger G., Mayr M., Wiedermann C.J., Bonora E., Oberhollenzer

160. F., Muggeo M., Xu Q., Wick G., Poewe W., Willeit J. Chronic infections and the risk of carotid atherosclerosis: prospective results from a large population study // Circulation. 2001. Vol.103. P.1064-1070.

161. Kilpatrick D.C. Immunological aspects of the potential role of dietary carbohydrates and lectins in human health // Eur. J. Nutr. 1999. Vol.38. P.107-117.

162. Kim J-H., Kang T-W., Ahn Y-K. The effect of plantago-mucilage A from the seeds of Plantago asiatica on the immune responses in ICR mice // Arch. Pharm. Res. 1996. Vol.19. P.137-142.

163. Kim P.-H., Eckmann L., Lee W.J., Han W., Kagnoff M.F. Cholera toxin and cholera toxin B subunit induce IgA switching through the action of TGF-bll // J. Immunol. 1998. Vol.160. P.l 198-1203.

164. King D.E., Egan B.M., Woolson R.F., Mainous A.G., Al-Solaiman Y., Jesri A. Effect of a high-fiber diet vs a fiber-supplemented diet on C-reactive protein level // Arch. Intern. Med. 2007. Vol.167. P.502-506.

165. Kiyohara H., Matsumoto T., Nagai T., Kim S.J., Yamada H. The presence of natural human antibodies reactive against pharmacologically active pectic•jpolysaccharides from herbal medicines // Phytomedicine. 2006. Vol.13. P.494-500.

166. Kiyohara H., Matsumoto T., Takemoto N. Effect of oral administration of a pectic polysaccharide fraction from a Kampo (Japanese herbal) medicine 'Juzen-taiho-to' on antibody response of mice // Planta Med. 1995. Vol.61. P.429-434.

167. Kjaer T.M., Frokiaer H. Modulation of ovomucoid-specific oral tolerance in mice fed plant extracts containing lectins // Br. J. Nutr. 2002. Vol.88. P.671-680.

168. Knaup B., Kempf M., Fuchs A., Valotis A., Kahle K., Oehme A., Richling E., Schreier P. Model experiments mimicking the human intestinal transport and metabolism of D-galacturonic acid and amidated pectin // Mol. Nutr. Fd. Res. 2008. Vol.52. P.840-848.

169. Ko J.K., Lam F.Y., Cheung A.P. Amelioration of experimental colitis by Astragalus membranaceus through anti-oxidation and inhibition of adhesion molecule synthesis // World J. Gastroenterol. 2005. Vol.11. P.5787-5794.

170. Kobayashi M., Matsushita H., Yoshida K., Tsukiyama R., Sugimura T.5 Yamamoto K. In vitro and in vivo anti-allergic activity of soy sauce // Int. J. Mol. Med. 2004. Vol.14. P.879-884.

171. Kolaczkowska E., Seljelid R., Plytycz B. Role of mast cells in zymosan-induced peritoneal inflammation in Balb/c and mast cell-deficient WBB6F1 mice // J. Leukoc. Biol. 2001. Vol.69. P.33-42.

172. Kong F., Singh R.P. Digestion of raw and roasted almonds in simulated gastric enviroment//Fd. Biophys. 2009. Vol.4 P.365-377.

173. Korotkova M., Telemo C., Hanson L., Strandvik B. Modulation of neonatal immunological tolerance to ovalbumin by maternal essential fatty acid intake // Pediatr. Allerg. Immunol'. 2004. Vol.15. P.l 12-122.

174. Koruda M.J., Rolandelli R.H., Settle R.G., Saul S.H., Rombeau J.L. The effect of a pectin-supplemented elemental diet on intestinal adaptation to massive small bowel resection // J. Parenter. Enteral. Nutr. 1986. Vol.10. P.343-350.

175. Koubala B.B., Kansci G., Mbome L.I., Crepeau M.J., Thibault J.F., Ralet M.C. Effect of extraction condition on some physicochemical characteristics of pectin from Ameloiree and Mango mango peels // Fd. Hydrocoll. 2008. Vol.22. P.1345-1351.

176. Krack A. The importance of the gastrointestinal system in the pathogenesis of heart failure // Eur. Heart J. 2005. Vol.26. P.2368-2374.

177. Kraus J., Franz G. Immunomodulating effects of polysaccharides from medicinal plants. In Microbial Infections, Ed. Friedman H. Plenum Press, New York, 1992. P.299-308.

178. Kurup P.A., Jayakumari N., Indira M. Diet, nutrition intake, and metabolism in populations at high and low risk for colon cancer. Comparison, intake, and excretion of fiber constituents // Am. J. Clin. Nutr. 1984. Vol.40. P.942-946.

179. Kweon M.N., Fujihashi K., Wakatsuki Y., Koga T. Mucosally induced systemic T cell unresponsiveness to ovalbumin requires CD40 ligand-CD40 interactions // J. Immunol. 1999. Vol.162. P. 1904-1909.

180. Larsen J.L. Effect of pectin on secretion in pig jejunal loops challenged to enteropathogenic E.coli or enterotoxin (LT). A preliminary report // Nord. Vet. Med. 1981. Vol.33. P.218-223.

181. Lee S.H., Starkey P.M., Gordon- S. Quantitative analysis of total macrophage content in adult mouse tissues. Immunochemical studies with monoclonal antibody F4/80 // J. Exp. Med. 1985. Vol.61. P.475-489.

182. Lee J.C., Pak S.C., Lee S.H. Asian pear pectin administration during presentation inhibits allergic response to ovalbumin in BALB/c mice // J. Altern. Compl. Med. 2004. Vol.10. P.527-534.

183. Lee J.H., Shim J.S., Chung M.S., Lim S.T., Kim K.H. Inhibition of pathogen adhesion to host cells by polysaccharides from Panax ginseng II Biosci. Biotechnol. Biochem. 2009. Vol.73. P.209-212.

184. Lee J.H., Shim J.S., Lee J.S., Kim M.K., Chung M.S., Kim K.H. Pectin-like acidic polysaccharide from Panax ginseng with selective anti-adhesive against pathogenic bacteria // Carbohydr. Res. 2006. Vol.341. P. 1154-1163.

185. Leishman A., Garside P., Mowat A. Induction of oral tolerance in the primed immune system: influence of antigen persistence and adjuvant form // Cell Immunol. 2000. Vol.202. P.71-78.

186. Leouxel O., Cavalier D.M., Liepman A.H. Keegstra K. Biosynthesis of plant cell wall polysaccharides a complex process // Curr. Op. Plant Biol. 2006. Vol.9. P.621-630.

187. Levy L. Carrageenan paw edema in the mouse // Life Sci. 1969. Vol.8. P.601-606.

188. Lichtenstein G.R., Deren J., Kennedy S., Ware J.H, The Bowman Birk protease inhibitor: a novel therapy for patients with active ulcerative colitis // Gastroenterology. 2002. Vol.122. P.60-69.

189. Lindberg R.L., Johansen M.V., Nilsson C., Nansen P. An immunohistological study of phenotypic characteristics of cells of the inflammatory response in the intestine of Schistosoma bovis- infected goats // Parasitology. 1999. Vol.118. P.91-99.

190. Linseisen J., Schulze M.B., Saadatian-Elahi M., Kroke A., Miller A.B., Boeing H. Quantity and quality of dietary fat, carbohydrate, and fiber intake in the German EPIC cohorts // Ann. Nutr. Metab. 2003. Vol.47. P.37-46.

191. Lipkin M., Reddy B., Newmark H., Lamprecht S.A. Dietary factors in human colorectal cancer // Annu. Rev. Nutr. 1999. Vol.19. P.545-586.

192. Lis H., Sharon N. Lectins: Carbohydrate-specific proteins that mediate cellular recognition // Chem. Rev. 1998. Vol.98. P.637-674.

193. Liu L.S., Fishman M.L., Hicks K.B. Pectin in controlled drug delivery a review // Cellulose. 2007. Vol.14. P. 15-24.

194. Liu L., Fishman M.L., Hicks K.B, Kende M. Interaction of various pectin formulations with porcine colonic tissue // Biomaterials. 2005. Vol.26. P.5907-5916.

195. Liu H.Y., Huang Z.L., Yang G.H., Lu W.Q., Yu N.R. Inhibitory effect of modified citrus pectin on liver metastases in a mouse colon cancer model // World J. Gastrenterol. 2008. Vol.14. P.7386-7391.

196. Liu L., Wang Z., Pan B., Zhou S. Effect of Rheum tanguticum polysaccharide on TNBS-induced colitis and CD4+T cells in rats // Word. J. Gastoenterol. 2003. Vol.9. P.2284-2288.

197. Liu S.P., Dong W.G., Wu- D.F., Luo H.S. Protective effect' of angelica sinensis polysaccharide on experimental immunological colon injury in rats.// Word. J. Gastoenterol. 2003. Vol.9. P.2786-2790.

198. Long E.M., Millen B., Kubes P., Robbins S.M. Lipoteichoic acid induces unique inflammatory responses when compared to other toll-like receptor 2 ligands // PLoS One. 2009. Vol.4 P.e5601.

199. Lunn J., Buttriss J.L. Carbohydrates and dietary fibre // Nutr. Bull. 2007. Vol.32. P.21-64.

200. Luyer M.D. Nutritional stimulation of cholecystokinin receptors inhibits inflammation via the vagus nerve. // J. Exp. Med. 2005. Vol.202. P. 1023-1029.

201. Ma Y., Griffith J., Chasan-Taber L., Olendzki B.C., Jackson E., Stanek E.J., Li W., Pagoto S.L., Hafner A.R., Ockene I.S. Association between fiber andserum C-reactive protein // Am. J. Clin. Nutr. 2006. Vol.83. P.760-766.

202. Mabley J.G., Pacher P., Liaudet L., Soriano F.G., Hasko G., Marton A., Scabo C., Salzman A.L. Inosine reduces inflammation and impoves survival in a murine model of colitis // Am. J. Physiol. 2003. Vol.284. P.G138-G144.

203. MacClure R.D., Warren K.W., Fallis L.S. Intravenous pectin solution in the prophylaxis and treatment of shock // Can. Med. Ass. J. 1944. Vol.51. P.206-210.

204. Mahgoub A. Evaluating the prophylactic potential of zafirlukast against the toxic effects of acetic acid on the rat colon // Toxicol. Lett. 2003. Vol.145. P.79-87.

205. Mantovani A., Allavena P., Sica A., Balkwill F. Cancer-related inflammation //Nature. 2008. Vol.454. P.436-444.

206. Mao Y., Kasravi B., Nobaek S., Wang D., Jeppsson B. Pectin-supplemented enteral diet reduces the severity of methotrexate induced enterocolitis in rats // Scand. J. Gastroenterol. 1996. Vol.31. P.558-567.

207. Matsumoto N., Cyong L.C., Kiyohara H., Matsui H., Abe A., Hirano M., Danbara H., Yamada H. // Int. J. Immunopharmacol. 1993. Vol.15. P.683-693.

208. Mayer L. Mucosal immunity and gastrointestinal antigen processing // Pediatr. Gastroenterol. Nutrit. 2000. Vol.30. P.4-12.

209. Mayer L. Mucosal immunity // Pediatrics. 2003. Vol.111. P.1595-1600.

210. Mesbahi G., Jamalian J., Farahnaky A. A comparative study on functional properties of beet and citrus pectins in food systems. // Fd Hydrocoll. 2005. Vol.19. P.731-738.

211. Michel C.C., Curry F.E. Microvascular Permeability // Physiol. Rev. 1999. Vol.79. P.212-234.

212. Mohammad A., Ota F., Kassu A., Sorayya K., Sakai T. Modulation of oral tolerance to ovalbumin by dietary protein in mice // J. Nutr. Sci. Vitaminol. (Tokyo). 2006. Vol.52. P.l 13-120.

213. Morris V.J., Gromer A., Kirby A.R., Bongaerts R.J.M., Gunning A.P. Using AFM and force spectroscopy to determine pectin structure and (bio)fimctionality // Fd. Hydrocoll. 2010. doi:1Q.1016/i.foodhvd.20Q9.11.015

214. Myint A.M., Leonard B.E., Steinbusch H.W., Kim Y.K. Thl, Th2, and Th3 cytokine alterations in major depression // J. Affect. Disord. 2005. Vol.88. P.167-173.

215. Nangia-Makker P., Conclin I., Hogan V., Raz A. Inhibition of human cancer cell growth and metastasis in nude mice by oral intake of modified citrus pectin // J. Natl. Cancer Inst. 2002. Vol.94. P. 1854-1862.

216. Newberry R.D., Stenson W. F., Lorenz R.G. Cyclooxygenase-2-dependent arachidonic acid metabolites are essential modulators of the intestinal immune response to dietary antigen //Nat. Med. 1999. Vol.5. P.900-906.

217. Nie Y., Li Y., Wu H. Colloidal bismuth pectin: an alternative to bismuth substrate for a treatment of Helicobacter pylori -positive duodenal ulcer // Helicobacter. 1999. Vol.4. P.128-134.

218. Nusrat A., Parkos C.A., Liang T.W., Carnes D.K., Madara J.L. Neutrophil migration across model intestinal epithelia: monolayer disruption and subsequent events in epithelial repair // Gastroenterol. 1997. Vol.113. P. 1489-500.

219. Ohara N., Tomoda M., Shimizu N., Gonda R. Characterization of a novel acidic polysaccharide with immunological activities from the rhizome of the Cnidium officinale.!I Chem. Pharm. Bull. 1994. Vol.42. P. 1886-1889.

220. Ohsumi Y., Lee Y. Mannose-receptor ligands stimulate secretion of lysosomal enzymes from rabbit alveolar macrophages // J. Biol. Chem. 1987. Vol.262. P.7955-7962.

221. Olano-Martin E., Williams M.R., Gibson G.R., Rastall R.A. Pectins and pectic oligosaccharides inhibit Escherichia coli 0157:H7 shiga toxin as directed towards the human colonic cell line HT29 // FEMS Microbiol. Lett. 2003. Vol.218. P.101-105.

222. O'Neill M.A., Ishii T., Albersheim P., Darvill A.G. RhamnogalacturonanTI: Structure and function of a borate cross-linked cell wall pectic polysaccharide // Ann. Rev. Plant Biol. 2004. Vol.55. P.109-139.

223. O'Neil M.A., York W.S. The composition and structure of plant primary cell walls // The Plant cell wall / Ed. J. K.C. Rose. Oxford: Blackwall Publ. Ltd, Ann. Plant Reviews. 2003. Vol.8. Chapt.l. P.l-54.

224. Paiva L.A., Gurgel L.A., Silva R.M., Tome A.R. Anti-inflammatory effect of kaurenoic acid a diterpene from Copaifera langsdorffii on acetic acid-induced colitis in rats I I Vascular Pharmacol. 2002. Vol. P.39303-39307.

225. Paulsen B.S., Barsett H. Bioactive pectic polysaccharides// Adv. Polym. Sci. 2005. Vol.186. P.69-101.

226. Pedersen B., Hoffman-Goetz L. Exercise and the immune system: regulation, integration, and adaptation // Br. J. Sports Med. 2000. Vol.34. P.246-251.

227. Pereyra R., Schmidt K.A., Wicker L. Interaction and stabilization of acidified casein dispersions with low and high metoxyl pectins // J. Agric. Fd. Chem. 1997. Vol.45. P.3448-3451.

228. Pereira B.M., Silva B.P., Pereira N.A. Anti-inflammatory and immunologically active polysaccharides of Periandra mediterranea II Phytochemistry. 2000. Vol.54. P.409-413.

229. Phatak L, Chang KC, Brown G. Isolation and characterization of pectin in sugar-beet pulp. //J. Fd. Sci. 1988. Vol.53. P.830-833.

230. Pickup J.C. Inflammation and activated innate immunity in the,pathogenesis of type 2 diabetes //Diabetes Care. 2004. Vol.27. P.813-823.

231. Pienta K.I., Nailk H., Anhtar A. et al. Inhibition of spontaneous metastasis in a rat prostate cancer model by oral administration of modified citrus pectin // J. Natl. Cancer. Inst. 1995. Vol.87. P.348-353.

232. Pierre P., Denis O., Bazin H., Mbongolo E., Vaerman J.E. Modulation of oral tolerance to ovalbumin by cholera toxin and its B subunit // Eur J. Immunol. 1992. Vol.22. P.3179-3182.

233. Pirman T., Ribeyre M.C., Mosoni L., remond D., Vrecl M., Salobir J., Agr E. Dietary pectin stimulates protein metabolism in the digestive tract // Nutrition. 2007. Vol.23. P.69-75.

234. Polle A.Ya., Ovodova R.G., Shashkov A.S., and Ovodov Yu.S. Some structural features of pectic polysaccharide from tansy Tanacetum vulgare L // Carbohydr. Polym. 2002. Vol.49. P.337-344.

235. Popov S.V., Popova G.Yu., Ovodova R.G., and Ovodov Yu.S. Antiinflammatory activity of the pectic polysaccharide from Comarum palustre II Fitoterapia. 2005b. Vol.76. P.281-287.

236. Popper Z.A. Evolution and diversity of green plant cell walls // Curr. Op. Plant Biol. 2008. Vol.11. P.286-292.

237. Pravda J. Radical induction theory of ulcerative colitis // World J. Gastroenterol. 2005. Vol.11. P.2371-2384.

238. Ptichkina N.M., Markina O.A., Rumyantseva G.N. Pectin extraction from pumpkin with the aid of microbial enzymes. // Fd. Hydrocoll. 2008. Vol.22 P.192-195.

239. Puhlmann J., Knaus U., Tubaro L. Immunologically active metallic ion-containing polysaccharides of Achyrocline satureoides II Phytochemistry. 1992. Vol.31. P.2617-2621.

240. Rabbani G.H., Tera T., Zaman B. A rice based diet with green banana or pectin reduced diarrhoea in infants better than a rice alone diet //Gastroenterology. 2001. Vol.21. P.554-560.

241. Rani B., Kawatra A. Fibre constituents of some foods // Plant Fds. Human Nutr. 1994. Vol.45. P.343-347.

242. Rao C.V., Chou D., Simi B., Ku H., Reddy B. Prevention of colonic aberrant crypt foci and modulation of large bowel microbial activity by dietary coffee fiber, inulin and pectin//Carcinogenesis. 1998. Vol.19. P.1815-1819.

243. Ravetch J.V., Bolland S. IgG Fc receptors. // Annu Rev. Immunol. 2001. Vol.19. P.275-279.

244. Renard C.M., Thibault J.-F., Voragen A.G.J., van den Broek L.A.M., Pilnik W. Studies on apple protopectin. VI: Extraction of pectins from apple cell walls with rhamnogalacturonase // Carbohydr. Polym. 1993. Vol.22. P.203-210.

245. Reeves P.G., Nielsen F.H., Fahey G.C. AIN-93 purified diets for laboratory rodents: final report of the American Institute of Nutrition adhoc writing committee on the reformulation of the AIN-76A rodent diet. // J. Nutr. 1993. Vol.123. P.1939-1951.

246. Ridker P.M., Rifai N., Stampfer M.J., Hennekens C.H. Plasma concentration of interleukin-6 and the risk of future myocardial infarction among apparently healthy men // Circulation. 2000. Vol.101. P. 1767-1772.

247. Roeck A.D., Mels J., Duvetta T., Love A.V., Hendrickx M. Carrot texture degradation kinetiks and pectin changes during thermal versus high-pressure/hogh-temperature proccessing: a comparative study // Fd. Chem. 2010. Vol.120. P.l 104-1112.

248. Rolandelli H.R., Saul S.H., Settle R.G., Jacobs D.O. Comparison of parenteral nutrition and enteral feeding with pectin in experimental colitis in the rat //Am. J. Clin. Nutr. 1988. Vol.47. P.715-721.

249. Round A.N., Rigby N.M., MacDougall A.J., Morris V.J. A new view of pectin structure revealed by acid hydrolysis and atomic force microscopy // Carbohydr. Res. 2010. Vol.345. P.487-497.

250. Rosen H., Gordon S. Monoclonal antibody to the murine type 3 complement receptor inhibits adhesion of myelomonocytic cells in vitro and inflammatory cell recruitment in vivo //J. Exp. Med. 1987. Vol.166. P.1685-1701.

251. Round A.N., Rigby N.M., MacDougall A.J., Ring S.G., Moriss V.J. // Carbohydr. Res. 2001. Vol.331. P.337-342.

252. Rowley J.L. Raw apple diet in treatment of diarrhea // Am. J. Nurs. 1934. Vol.34. P.682-684.

253. Qiu N., Tian Y., Qiao S., Deng H. Apple pectin behavior separated by ultrafiltration // Agric. Sei. Chin. 2009. Vol.8. P. 1193-1202.

254. Sakurai M.H., Matsumoto T., Kiyohara H., Yamada H. // Immunology. 1999. Vol.97. P.540-547.

255. Samsom J., van Berkel N., van Helvoort J., Unger W., Jansen W., Thepen T., Mebius R.E., Verbeek S.S., Kraal G. FcRIIB regulates nasal and oral tolerance: a role for dendritic cells. // J. Immunol. 2005. Vol.174. P.5279-5287.

256. Sanchez D., Muguerza B., Moulay L., Hernandes R., Mignel M., Aleixandre A. Highly methoxylated pectin improves insulin resistance and other cardiometabolic risk factors in Zucker fatty rats // J. Agric. Fd. Chem. 2008. Vol.56. P.3574-3581.

257. Sande S.A. Pectin-based oral drug delivery to the colon // Expert Opin. Drug Deliv. 2005. Vol.2. P.441-450.

258. Sanders L.M., Henderson C.E., Hong M.Y. An increase in reactive oxygen species by dietary fish oil coupled with the attenuation of antioxidant defenses by dietary pectin enhances rat colonocyte apoptosis // J. Nutr. 2004., Vol.134. P.3233-3238.

259. Satoh H., Hara T., Murakawa D., Matsura M., takata K. Soluble dietary fiber protects against nonsteroidal anti-inflammatory drug-indiced damage to the small intestine in cats //Dig. Dis. Sci. 2010. Vol.55. P. 1264-1271.

260. Sawabe Y.Y., Nakagomi K., Iwagami S., Suzuki S., Nakazawa H. Inhibitory effects of pectic substances on activated hyaluronidase and histamine release from mast cells // Biochim. Biophys. Acta. 1992. Vol.1137. P.274-278.

261. Shepherd V.L., Hoidal J.R. Clearance of neutrophil-derived myeloperoxidase by the macrophage mannose receptor // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1990. Vol.2. P.335-340.

262. Shi H.N., Liu H.Y., Nagler-Anderson C. Enteric infection acts as an adjuvant for the response to a model food antigen. // J. Immunol. 2000. Vol.165. P.6174-6182.

263. Schley P.D., Field C.J. The immune enhancing effects of dietary fibers and prebiotics // Br. J. Nutr. 2002. Vol.87. P.S221-S230.

264. Schmidgall J., Hensel A. Bioadhesive properties of polysaccharides against colonic epithelial membranes // Int. J. Biol. Macromol. 2002. Vol.30. P.217-225.

265. Schols H.A., Bakx E.J., Shipper D., Voragen A.G.J. A xylogalacturonan subunit present in the modified hairy regions of apple pectin // Carbohydr. Res. 1995. Vol.279. P.265-279.

266. Schols H.A., Voragen A.G.J. The Chemical structure of pectins // Pectins and their Manipulation / Ed G.B.Seymour and J.P.Knox Oxford: Blackwell Publ., 2002. P. 1-29.

267. Sendl A., Mulinacci N., Vincieri F., Wagner H. Anti-inflammatory and immunologically active polysaccharides of Sedum telephium II Phytochemistry. 1993. Vol.34. P.1357-1362.

268. Sengelov H., Kjeldsen L., Kroeze W., Berger M., Borregaard N. Secretory vesicles are the intracellular reservoir of complement receptor in human neutrophils // J. Immunol. 1994. Vol.153. P. 804-810.

269. Sepehri H., Roghani M., Houdebine M.L. Oral administration of pectin-rich plant exract enchances C3 and C4 complement concentration in woman colostrums //Reprod. Nutr. Dev. 1998. Vol.38. P.255-260.

270. Sharma R., Van Damme E.J.M., Peumans W.J. Lectin binding reveals divergent carbohydrate expression in human and mouse Peyer's patches // Histochem. Cell Biol. 1996. Vol.105. P.459-465.

271. Shepetkin I.A., Quinn M.T. Botanical polysacchrides: macrophage immunomodulation and therapeutic potential // Intern. Immunopharmacol. 2006. Vol.6. P.317-333.

272. Shi H.N., Liu H.Y., Nagler-Anderson C. Enteric infection acts as an adjuvant for the response to a model food antigen // J. Immunol. 2000. Vol.165. P.6174-6182.

273. Shimizu N., Tomoda M., Takada K., Gonda R. The core structure and immunological activities of glycyrrhizan UA, the main polysaccharide from the root of Glycyrrhiza uralensis II Chem. Pharm. Bull. 1992. Vol.40. P.2125-2128.

274. Sila D.N., Smout C., Elliot F., Loev A.V., Hendrickx M. Non-enzymatic depolymerization of carrot pectin:; toward a better understanding of carrot texture during thermal processing // J. Fd. Sci. 2006. Vol:71. P.E1-E9.

275. Smith P.D., Meng G., Shaw G.M., Li L. Infections of gastrointestinal tract macrophages by HIV-1' // J- Leuk. Biol. 1997. Vol;62. P:72-77.

276. Sriamornsak P., Wattanakorn N., Takeuchi H. Study on the mucoadhesion mechanism of pectin by atomic force microscopy and mucin-particle method // Carbohydr. Pol. 2010. Vol.79. P.54-59.

277. Srikanta B:M., Siddaraju M.N., Dharmesh S.M. A novel phenol-bound pectic polysaccharide from Decalepis hamiltonii with multi-step ulcer preventive activity // World J. Gastroenterol. 2007. Vol.13. P.5196-5207.

278. Steege J., Buurman W., Arends J., Forget P. Presence of inducible, nitric oxide synthase, nitrotyrosine, CD68, and GDI4 in the small intestine in celiac disease // Lab. Invest. 1997. Vol.77. P.29-36.

279. Stein G.M., Edlund U., Pfuller U., Bussing A., Schietzel M. Influence of polysaccharides from Viscum album L. on human lymphocytes, monocytes and granulocytes in vitro II Anticancer Res. 1999. Vol.19. P.3907-3914.

280. Strasser G.R., Amado R. Pectic substances from red beet {Beta vulgaris L. var. conditiva). Part II. Structural characterization of rhamnogalacturonan II // Carbohydr. Polym. 2002. Vol.48. P.263-269.

281. Strobel S., Mowat A. Immune responses to dietary antigens: oral tolerance // Immunol. Today. 1998. Vol.19. P.173-177.

282. Su S.-B., Silver P.B., Wang P., Chan C.C., Caspi R.R. Cholera toxin prevents Thl-mediated autoimmune disease by inducing immune deviation // J. Immunol. 2004. Vol.173. P.755-761.

283. Suzuki K., Totsuka M., Nakaji S., Yamada M. Endurance exercise causes interaction among stress hormones, cytokines, neutrophil dynamics, and muscle damage // J. Appl. Physiol. 1999. Vol.87. P. 1360-1367.

284. Szabo G. Moderate drinking, inflammation, and liver disease // Ann. Epidemiol. 2007. Vol.17. P.S49-S54.

285. Takai T. Roles of Fc receptor in autoimmunity. // Nat. Rev. Immunol. 2002. Vol.2. P.580-585.

286. Tammariello A.E., Milner J.A. Mouse models for unraveling the importance of diet in colon cancer prevention // J. Nutr. Biochem. 2010. Vol.21. P.77-88.

287. Thibault J.F., Renard C.M.G.C., Axelos M.A.V., Roger P. Crepeau, M.J. Studies of the length of homogalacturonic regions in pectins by acid hydrolysis // Carbohydr. Res. 1993. Vol.238. P.271-286.

288. Thimm J.C., Barritt D.J., Ducker W.A., Melton L.D. Pectins influence microfibril aggregation in celery cell walls: an atomic force microscopy study // J. Struct. Biol. 2009. Vol.168. P.337-344.

289. Titus R.G., Chiller J.M. Orally induced tolerance. Definition at cellular level //Int. Archs. Allerg. Immunol. 1981. Vol.65. P.323-338.

290. Thornton B.P., Vetvicka V., Pitman M. Analysis of the sugar specificity and molecular location of the (3-glucan-binding lectin site of complement receptor type 3 (CDlib/CD 18) // J. Immunol. 1996. Vol.156. P. 1235-1246.

291. Togawa J., Nagase H., Tanaka K., Inamori M., Sekihara H., Lactoferrin reduces colitis in rats via modulation of the immune system and correction of cytokine imbalance // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2002. Vol.283. P: 187-195.

292. Tolstoguzov V. Some thermodynamic considerations in food-formulation // Fd. Hydrocoll. 2003. Vol.17. P. 1-23.

293. Tomoda M., Gonda R., ShimizuN., Ohara N. Characterization of an acidic polysaccharide having immunological activities from the tuber of Alisma orientale //Biol. Pharm. Bull. 1994a. Vol.17. P.572-576.

294. Tomoda M., Hirabayashi K., Shimizu N. The core structure of ginsenan PA, a phagocytosis-activating polysaccharide from the root of Panax ginseng II Biol. Pharm. Bull. 1994b. Vol.17. P:1287-1291.

295. Tomoda M., Matsumoto K., Shimizu N. An acidic polysaccharide with immunological activities from the root of Paeonia lactiflora II Biol. Pharm. Bull. -1994c. Vol.17. P.l 161-1164.

296. Tomoda M., Miyamoto H., Shimizu N. Characterization of two polysaccharides having activity on the reticuloendothelial system from the root of Rehmannia glutinosa II Chem. Pharm. Bull. 1994d. Vol.42. P.625-629.

297. Tompkins C.A. Food product for treatment of infantile diarrhea. US patent 2.139.139-1938.

298. Topping D.L., Clifton P.M. Short-chain fatty acids and human colonic function: roles of resistant starch and nonstarch polysaccharides // Physiol. Rev. 2001. Vol.8l.P. 1031-1054.

299. Tracey. K. Physiology and immunology of the cholinergic antiinflammatory pathway // J. Clin. Invest. 2007. Vol.117. P.289-296.

300. Truswell A.S., Beynen A.C. II Dietary Fiber / Ed T.E. Schweizer, C.A. Edwards. Lnd.: Springer Verl., 1992. P.295-348.

301. Udall J.N., Pang K., Fritze L., Kleinman R., Walker W.A. Development of gastrointestinal mucosal barrier. I. The effect of age on intestinal permeability to macromolecules // Pediatr. Res. 1981. Vol.15. P.241-244.

302. Ulevitch R.J., Tobias P.S. Receptor-dependent mechanisms of cell stimulation by bacterial endotoxin // Annu. Rev. Immunol. 1995. Vol.13. P.437-457.

303. Umar S., Morris A.P., Kourouma F., Sellin J.H. Dietary pectin and calcium inhibit colonic proliferation in vivo by differing mechanisms // Cell Prolif. 2003. Vol.36. P.361-375.

304. Vazques-Torres A., Jones-Carson J., Baumler A. Extraintestinal dissemination of Salmonella by CD18-expressing phagocytes // Nature. 1999. Vol.401. P.804-807.

305. Verdu E.A., Deng Y., Bercik P., Collins S.M. Modulatory effects of estrogen in two murine models of experimental colitis // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2002. Vol.283. P.G27-G36.

306. Voragen A.G.J., Coenen G.J., Verhoef R.P., Schols H.A. Pectin, a versatile polysaccharide present in plant cell walls // Struct. Chem. 2009. Vol.20. P.263-275.

307. Vos A.P., M'Rabet L., Stahl B., Boehm G., Garssen J. Immune-modulatory effects and potential- working mechanisms of orally applied nondigestible carbohydrates // Clin. Rew. Immunol. 2004. Vol.27. P.97-140.

308. Wagner H. Immunostimulants of plant origin // Croatica Chem. Acta. 1995. Vol.68. P.615-626.

309. Wagner H., Stuppner H., Wolfram S., Zenlc M. Immunologically active polysaccharides of Echinacea purpurea cell cultures // Phytochemistry. 1988. Vol.27. P.l 19-126.

310. Wai W., Alkarkhi A.F.M., Easa A.M. Effect of extraction conditions on yield and degree of esterification of durian rind pectin: an experimental design // Fd. Bioprod. Proc. 2010. Vol.88. P.209-214.

311. Wang L., Brown J.R., Varki A., Esko J.D. Heparin's anti-inflammatory effects require glucosamine // J. Clin. Invest. 2002. Vol.110. P.127-136.

312. Wang X.S., Dong Q., Zuo J.P., Fang J.N. Structure and potential immunological activity of a pectin from Centella asiatica (L.) Urban // Carbohydr. Res. 2003. Vol.338. P.2393-2402.

313. Wang H. Nicotinic acetylcholine receptor alpha7 subunit is an essential regulator of inflammation//Nature. 2003. Vol.421. P.384-388.

314. Wang J.H., Luo J.P., Zha X.Q. Structural feature of a pectic polysaccharide from the stems of Dendrobium nobile Lindl. // Carbohydr. Polym. 2010. Vol.81.P. 1-7.

315. Wang T.J., Gona P., Larson M.G., Levy D., Benjamin E.J., Vasan R.S. Multiple biomarkers and the risk of incident hypertension // Hypertension. 2007. Vol.49. P.432-438.

316. Walter R.H., Sherman R.M., Lee C.Y. A comparison of methods for polyuronide methoxyl determination // J. Fd. Sci., 1983. Vol.48. P. 1006-1007.

317. Ware J.H., Wan X.S., Newberne P., Kennedy A.R. Bowman-birk inhibitor concentrate reduces colon inflammation in mice with dextran sulfate sodium-induced ulcerative colitis // Dig. Dis. Sci. 1999. Vol.44. P.986-990.

318. Weickert M.O., Pfeiffer A.F.N. Metabolic effects of dietary fiber consumption and prevention of diabetes // J. Nutr. 2008. Vol.138. P.439-442.

319. Weiner H.L. Oral tolerance: immune mechanisms and treatment of outoimmune diseases // Immunol. Today. 19971 Vol.18. P.335-343.

320. Wellen K., Hotamisligi G.S. Inflammation, stress, and diabetes. // J. Clin. Invest. 2005. Vol.115. P.l 111-1119.

321. Westerng B., Yousif O., Michaelsen T.E., Knutsen S.H., Samuelsen A.B. Pectin isolated from white cabbage structure and complement-fixing activity // Mol. Nutr. Fd. Res. 2006. Vol.50.746-755.

322. Will F., Dietrich H. Characterization of residual pectins from raspberry juices II Carbohydr. Polym. 1994. Vol.25. P. 155-160.

323. Wu H., Dwyer K.M., Fan Z., Shircore A., Fan J., Dwyer J.H. Dietary fiber and progression of atherosclerosis: the Los Angeles atherosclerosis study // Am. J. Clin. Nutr. 2003. Vol.78. P. 1085-1091.

324. Wu L., Zaborina O., Zaborin A., Chang E.B., et al. High molecular-weight polyethylene glycol prevents lethal sepsis due to intestinal Pseudomonas aeruginosa II Gastroenterology. 2004. Vol.126. P.488-498.

325. Yamada K., Tokunaga Y., Ikeda A. et al. Effect of dietary fiber on the lipid metabolism and immune function of aged Sprague-Dawley rats // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2003. Vol.67. P.429-433.

326. Yamaoka Y., Kawakita T., Kishihara T., Nomoto K. Effect of a traditional Chinese medicine Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang on the protection against an oral infection with Listeria monocytogenes II Immunopharmacology. 1998. Vol.39. P.215-223.

327. Yang L., Zhang L.M. Chemical structutal and chain cinformational characteristic of some bioactive polysaccharides isolated from natural sources // Carbohydr. Polym. 2009. Vol.76. P.349-361.

328. Yapo B.M. Pectin quantity, composition and physicochemical behavior as influenced by the purification process // Fd. Res. Intern. 2009a. Vol.42. P. 1197-1202.

329. Yapo B.M. Biochemical characteristics and gelling capacity of pectin from yellow passion fruit rind as affected by acid extractant nature // J. Agric. Fd. Chem. 2009b. Vol.57. P.1572-1578.

330. Yeoh S., Shi J., Langrish T.A.G. Comparisons between different techniques for water based extraction of pectin from orange peels // Desalination. 2008. Vol.218. P.229-237.

331. Yoo S.-H., Fishman M.L., Hotchkiss A.T. Jr., Lee H.G. Viscometric behavior of high-methoxy and low-methoxy pectin solutions // Fd. Hydrocoll. 2006. Vol.20. P.62-67.

332. York W.S., Darvill A.G., McNeil M.A., Stevenson T.T., Albersheim P. Isolation and characterization of plant cell walls and cell-wall components // Meth. Enzymol. 1986. Vol.118. P.3-40.

333. Yu K.W., Kiyohara H., Matsumoto T., Yang H.C., Yamada H. Characterization of pectic polysaccharides having intestinal immune system modulating activity from rhizomes of Atractylodes lancea DC // Carbohydr. Polym. 2001. Vol.46. P.125-134.

334. Zablackis E., Huang J., Miiller B. Characterization of the cell-wall polysaccharides of Arabidopsis thaliana leaves // Plant Physiol. 1995. Vol.107. P.265-267.

335. Zhao Z., li J., Wu X., Dai H., Gao X., Liu M., Tu P. Structures and immunological activities of two pectic polysaccharides from fruits of Ziziphus jujube Mill. Cv jinsixiaozao Hort. // Fd. Res. Intern. 2006. Vol.39. P.917-923.

336. Ziv E., Bendayan M. Intestinal absorption of peptides through the enterocytes // Microsc. Res. Technol. 2000. Vol.49. P.346-352.

Информация о работе

Попов, Сергей Владимирович
доктора биологических наук
Сыктывкар, 2010
ВАК 03.01.04

Диссертация

Иммуномодулирующее действие пектиновых полисахаридов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы