Характеристика пшенично-ржаных замещенных линий с использованием микросателлитных маркеров и изучение влияния отдельных хромосом ржи на показатели андрогенеза in vitro

Добровольская, Оксана Борисовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Характеристика пшенично-ржаных замещенных линий с использованием микросателлитных маркеров и изучение влияния отдельных хромосом ржи на показатели андрогенеза in vitro
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Характеристика пшенично-ржаных замещенных линий с использованием микросателлитных маркеров и изучение влияния отдельных хромосом ржи на показатели андрогенеза in vitro"

на правах рукописи

ДОБРОВОЛЬСКАЯ Оксана Борисовна

ХАРАКТЕРИСТИКА ГППЕНИЧНО-РЖАНЫХ ЗАМЕЩЕННЫХ ЛИНИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МИКРОСАТЕЛЛИТНЫХ МАРКЕРОВ И ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ОТДЕЛЬНЫХ ХРОМОСОМ РЖИ НА ПОКАЗАТЕЛИ АНДРОГЕНЕЗА IN VITRO

Генетика-03.00.15

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск 2003

Работа выполнена в секторе молекулярной генетики злаков и лаборатории хромосомной инженерии злаков Института цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

Научные руководители: д.б.н. Першина Л.А.

Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

Официальные оппоненты: д.б.н. Агафонова О.В.

Центральный ботанический сад СО РАН, г. Новосибирск

Защита состоится 10 декабря 2003 г. на утреннем заседании диссертационного совета Д - 003.011.01 в Институте цитологии и генетики СО РАН в конференц-зале института по адресу: 630090, проспект акад. Лаврентьева, 10, тел/факс: (3832)331278, e-mail: dissov@bionet.nsc.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН

к.б.н. Салина Е.А.

Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

к.б.н. Степочкин П.И.

Сибирский НИИ растениеводства и селекции СО РАСХН, г. Новосибирск

Ведущее учреждение: Сибирский институт физиологии и биохимии

растений СО РАН, г. Иркутск

13 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

^¿505" ' П

iéi Ц

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Метод культивирования пыльников in vitro находит широкое применение в генетике и селекции растений при получении гаплоидов с целью создания гомозиготных рекомбинантных линий (Bajaj, 1990; Barnabas, 2001). С помощью этого метода ускоряется селекционный процесс, что показано при получении новых сортов и перспективных линий мягкой пшеницы (De Buyser et al., 1987; Pauk et al., 1995; Hu, 1996).

При культивировании изолированных пыльников на питательной средс в микроспорах происходит переключение с гаметофитной программы развития на спорофитную, в результате чего формируются не пыльцевые зерна, как в условиях in vivo, а эмбриоиды, и получают развитие гаплоидные растения. Этот процесс получил название андрогенеза in vitro (Guha, Maheshvari, 1964). Установлено, что среди факторов, определяющих особенности андрогенеза, основным является генотип растения-донора (Foroughi-Wehr, Zeller, 1990). Получение у мягкой пшеницы анеуплоидных и замещенных линий позволило . использовать их для определения роли отдельных хромосом пшеницы в

контроле признаков андрогенеза in vitro (Szakacs et al., 1989; De Buyser et al., 1992).

Что касается ржи посевной S. cere ale L., то в настоящее время влияние отдельных хромосом на андрогенез in vitro изучено недостаточно. В первую очередь это связано с использованием для этой цели ограниченного числа генетических моделей, в основном сортов пшеницы с пшенично-ржаной транслокацией 1RS.1BL и пшенично-ржаных дополненных линий (Luckett et al., 1991; Martinez et al., 1994). Кроме того, существующие на настоящий момент генетические модели не позволяют четко отделить эффект хромосом ржи в контроле признаков андрогенеза in vitro от влияния генотипической среды пшеницы, а так же выявить зависимость этих признаков от сортового происхождения хромосом ржи. В связи с этим представляется целесообразным привлечение к данным исследования новых генетических моделей.

Пшенично-ржаные замещенные линии являются удобными модельными » объектами в генетических и молекулярных исследованиях, в том числе для

определения хромосомной локализации генов и молекулярных маркеров на хромосомах ржи (Cakmak et al., 1997; Vershinin et al., 2002). Замещенные линии, , полученные сотрудниками ИЦиГ СО РАН JI.A. Кравцовой и А.И. Щаповой на

основе гибридизации пшеницы сорта Саратовская 29 и ржи сортов Онохойская, Вятка и Вьетнамская (Кравцова, Щапова, 1980), представляют интерес и как генетические модели (Силкова и др., 1999), и как перспективный материал для селекции (Щапова, Кравцова, 1999).

Для точной интерпретации результатов экспериментов при использовании новых генотипов в качестве генетических моделей необходима надежная информация об их геномном составе. Применение наряду с цитогенетическими подходами современных молекулярных методов значительно расширяет возможности геномного анализа и позволяет более полно охарактеризовать исходный материал (Devos et al., 2000; Salina et al., 2003).

Микросателлиты или SSR (simple sequence repeats), - сравнительно новый тип ДНК-маркеров, который широко используют в исследованиях геномов

] РОС. НАЦИОНАЛЬНА» i

БИБЛИОТЕКА ]

¡ngUní

пшеницы (Röder et al., 1998) и других злаков (Becker, Heun, 1995; Panaud et al, 1996; Saal, Wricke, 1999), представляют интерес и для изучения гибридных пшенично-ржаных геномов, в том числе замещенных линий.

Проведение SSR-анализа серии пшенично-ржаных замещенных линий позволит уточнить типы замещения, определить геномный состав, что необходимо для широкого использования данных линий в качестве генетических моделей, в том числе и при изучении влияния отдельных хромосом ржи на особенности андрогенеза in vitro. Цель и задачи исследования

Цель настоящей работы - охарактеризовать пшенично-ржаные линии по типам замещения и геномному составу с применением микросателлитного анализа и изучить на примере данных линий влияние отдельных хромосом ржи на особенности андрогенеза in vitro. Задачи:

1) провести анализ пшенично-ржаных замещенных линий с применением микросателлитных маркеров пшеницы и ржи для уточнения типов замещения и определения геномного состава;

2) выявить особенности влияния отдельных хромосом ржи и целого генома ржи на отдельные этапы андрогенеза: индукцию андрогенных эмбриоидов, регенерацию проростков, спонтанную дигаплоидизацию;

3) изучить особенности андрогенеза у замещенных линий в зависимости от сортового происхождения хромосом ржи и типов замещения;

4) изучить реакцию пыльников по показателям андрогенеза in vitro на варьирование концентрации 2,4-Д, экзогенного индуктора эмбриоидогенеза in vitro, в культуральной среде и выявить для каждого генотипа его оптимальные концентрации;

5) провести сравнительный анализ влияния отдельных хромосом ржи на признаки андрогенного и соматического эмбриоидогенеза и регенерации in vitro;

6) охарактеризовать растения, регенерировавшие в культуре пыльников с применением микросателлитного анализа.

Научная новизна и практическая ценность полученных результатов

В настоящей работе впервые показано, что микросателлитный анализ является надежным методом для идентификации хромосом ржи и выявления генетической гетерогенности у генотипов, полученных на основе гибридизации мягкой пшеницы и ржи посевной. С применением SSR-маркеров пшеницы и ржи проведено генотипирование пшенично-ржаных замещенных линий, что дает основание для использования данных линий в качестве адекватных генетических моделей для локализации на отдельных хромосомах ржи генов и маркеров. Впервые определена локализация на хромосомах ржи трех микросателлитных маркеров пшеницы, что позволяет интегрировать данные маркеры в молекулярно-генетическую карту ржи и использовать их наряду с другими маркерами в геномном анализе.

Впервые для изучения особенностей андрогенеза in vitro использована генетическая модель, позволяющая определить эффект отдельных хромосом ржи, функционирующих в одинаковой генотипической среде пшеницы, на отдельные этапы андрогенеза in vitro. Установлено что, функционируя в

Ii' и-

генотипической среде сорта Саратовская 29, хромосомы ржи 1R и 3R оказывают стимулирующее, а хромосома 5R - супрессирующее влияние на показатели андрогенного эмбриоидогенеза. Показано, что на степень проявления эффекта хромосом ржи 1R и 5R на показатели эмбриоидогенеза влияет сортовое происхождение хромосом ржи. Выявлено, что положительное влияние хромосомы ржи 2R на частоту регенерации зеленых проростков при культивировании пыльников in vitro зависит от концентрации 2,4-Д в инициальной среде. Показано, что наличие отдельных хромосом ржи в геноме пшеницы не подавляет спонтанное образование андрогенных дигаплоидов.

Установлено, что индукция эмбриоидогенеза in vitro в соматических и гаметических клетках пшенично-ржаных замещенных линий находится под влиянием разных хромосом ржи. Впервые показано, что гены, контролирующие образование эмбриоидогенного каллуса в щитковой ткани незрелых зародышей, локализованы в хромосоме ржи 2R. Впервые обнаружено стимулирующее влияние хромосомы ржи 2R на регенерационную способность и андрогенных, и соматических эмбриоидов. Установлено, что изменение концентрации 2,4-Д в инициальной среде при культивировании пыльников in vitro позволяет оптимизировать условия для регенерации зеленых растений. Апробация работы

Результаты работы были представлены на II Съезде ВОГиС, Санкт-Петербург, 2000; 11ой конференции EWAC, Новосибирск, 2000; Международных конференциях молодых ученых, Харьков, 2001, 2003гг; II Конференции МОГиС, Москва, 2003 и обсуждались на отчетной сессии ИЦиГ СО РАН (2001). Публикации

По результатам исследования опубликовано 9 работ, в том числе 3 статьи в рецензируемых журналах. Объем и структура работы

Диссертация состоит из двух основных частей, выводов, списка литературы и приложения. Каждая часть содержит введение, обзор литературы, описание материалов и методов, изложение результатов и их обсуждения. Материал диссертации изложен на 201 странице печатного текста, включая 23 таблицы и 8 рисунков. Список цитированной литературы содержит 377 работ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Материалом исследования послужили дисомные пшенично-ржаные замещенные линии (2и=42), полученные на основе гибридизации мягкой пшеницы сорта Саратовская 29 (71 aestivum L., 2п=42) и ржи сортов Онохойская, Вятка, Вьетнамская (S. cereale L., 2п= 14), октоплоидное тритикале (Саратовская 29 х Онохойская, AABBDDRR, 2п-56), линия пшеницы сорта Саратовская 29 (AABBDD\ 2л=42) и сорт ржи Онохойская (RR, 2п=\4). Пшенично-ржаные замещенные линии и тритикале получены сотрудниками ИЦиГ СО РАН JI.A. Кравцовой и А.И. Щаповой (Кравцова, Щапова, 1980). Замещенные линии по результатам дифференциального С-окрашивания хроматина ржи и телоцентрического анализа были идентифицированы авторами следующим образом: ni-lRo(lD), Л2-2Ro(2D), ЛЗ-^, Л4-5Ro(5D), Л5-6Ro(6A), JI6-7Ro, Л7-Шо(1А), Л8-1ЯП(1А), Л9-511о(5А), Л10^У(5А). Индекс "0" обозначает

принадлежность хромосом ржи сорту Онохойская, "в" - Вятка и "у" -Вьетнамская (Кравцова, Щапова, 1980; Кравцова, 1985).

SSR-анализ. Выделение суммарной ДНК из растений замещенных линий, линии пшеницы сорта Саратовская 29 и ржи сорта Онохойская осуществляли с применением протеиназы "К" (Дрейпер и др., 1991, с модификациями). ДНК выделяли из 2-6 индивидуальных растений каждой замещенной линии, линии пшеницы сорта Саратовская 29 и ржи сорта Онохойская, а так же из 35 растений-гаметоклонов, полученных в результате культивирования in vitro пыльников замещенных линий JI1, JI2, JI3, JÏ5, JI6 и линии пшеницы сорта Саратовская 29. SSR-анализ проводили с использованием 92 SSR-маркеров пшеницы, Xgwm и Xgdm (Röder et al., 1998; Pestsova et al., 2000), в среднем по 4 маркера на каждую хромосому пшеницы, а так же 10 S SR- маркеров ржи, Xscm и Xrms, (Saal, Wricke, 1999; Korzun, Röder, неопубликованные данные), от одного до трех маркеров на каждую хромосому ржи. ПЦР проводили в реакционной смеси объемом 25 мкл, содержащей 50-100 нг ДНК-матрицы, по 0,2 мМ каждого дНТФ, 1.5мМ MgCl2, по 0.25 мкМ прямого и обратного SSR-праймеров, 1 ед. Tag-полимеразы, в следующих условиях: денатурация - 1 минута при 94°С, отжиг матрицы с праймером - 1 минута при 50°С, 55°С, или 60°С (в зависимости от праймера), полимеризация - 2 минуты при 72°С; всего 45 циклов; достраивание ПЦР-фрагментов - 10 минут при 72°С один цикл. Электрофоретическое разделение продуктов амплификации проводили в 6% денатурирующем полиакриамидном геле толщиной 0.35 мм в автоматическом лазерном флуоресцентном секвенаторе (ALF-sequencer, Pharmacia). Размер амплифицированных фрагментов рассчитывали при помощи компьютерной программы "Fragment Manager 1.2" (Pharmacia). Анализ проводили с индивидуальными растениями каждой замещенной линии, а так же контрольной линией пшеницы сорта Саратовская 29 и ржи сорта Онохойская. Андрогенные регенераты Rj и R] поколений анализировали параллельно с растениями донорами, от которых брали пыльники для культивирования in vitro.

Культура пыльников in vitro. Растения выращивали в условиях гидропонной теплицы. По достижении микроспорами одноядерной стадии колосья срезали и хранили при t=5°C в течение 5-9 суток. Пыльники вычленяли в асептических условиях и помещали на агаризованную картофельную среду PII (Chuang et al., 1978) без регуляторов роста или с содержанием 2,4-Д (0.25, 0.75 и 1.0 мг/л). В качестве источника углеводов использовали сахарозу (90 г/л). Пыльники культивировали при ¿=29 С в темноте. Развившиеся из микроспор эмбриоиды пассировали на безгормональную среду Гамборга (В5) (Gamborg, Eveleigh, 1968) и культивировали при /=25 С и непрерывном освещении. Зеленые регенераты (Ro) на стадии трех листьев высаживали в вегетационные сосуды с вермикулитно-керамзитной смесью. Зерновки, завязавшиеся от самоопыления у растений Ro, проращивали в тех же условиях. Число хромосом растений Ro определяли на давленых препаратах кончиков корешков растений. Особенности андрогенеза оценивали по следующим показателям: 1) частоте продуктивных пыльников (частоте пыльников, образовавших эмбриоиды); 2) частоте образования эмбриоидов к 100 пыльникам; 3) частоте регенерации всех проростков к 100 эмбриоидам; 4) частоте регенерации зеленых проростков к

общему числу регенерировавших проростков; 5) эффективности регенерации зеленых растений, оцененной по соотношению числа зеленых проростков к 100 пыльникам; 6) соотношению развития тригаплоидов (и=21) и гексаплоидов (2и=42).

Каллусная культура незрелых зародышей in vitro. Для культивирования in vitro незрелые зародыши диаметром от 0.5 до 2 мм вычленяли из зерновок, развивавшихся после самоопыления в течение 12-14 дней, и помещали вверх щитком на агаризованную среду Мурасиге и Скуга (Murashige, Skoog 1962), содержащую 2 мг/л 2,4-Д, 100 мг/л мезоинозита и 30 г/л мальтозы. В течение первых 15 суток культивирование проводили в темноте при t=25°C, затем при непрерывном освещении. Через два месяца от начала культивирования зародышей каллусы пассировали на среду того же состава, но не содержащую ростовых регуляторов. Частоту образования каллусов оценивали по их отношению к числу культивированных зародышей, а частоту каллусов с регенерацией проростков - к общему числу каллусов.

Полученные данные обрабатывали статистически, в том числе методом дисперсионного анализа по однофакгорной схеме (Лакин, 1980).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Характеристика пшенично-ржаных замещенных линий с применением SSR-анализа. При выполнении SSR-анализа отсутствие продуктов амплификации всех SSR-маркеров, локализованных на определенной хромосоме пшеницы, и наличие маркеров гомеологичной хромосомы ржи оценивали как замещение соответствующей хромосомы пшеницы хромосомой ржи. Оценка степени гетерогенности генотипической среды пшеницы и ржи проводилась на основании сравнения длины микросателлитов, картированных на хромосомах пшеницы и ржи, замещенных линий и контрольных линий пшеницы и ржи.

Результаты SSR-анализа восьми из десяти замещенных линий: JIl-lRo(lD), JI2-2Ro(2D), JI4-5Ro(5D), Л5^0(6А), Л7-^(1А), Л8-^В(1А), Л9-^(5А), Л10-5Rv(5A) продемонстрировали соответствие типов замещений, установленных ранее на основании дифференциального С-окрашивания и телоцентрического анализа (Кравцова, Щапова, 1980). В отношении линий ЛЗ и Л6 применение SSR-маркеров позволило впервые определить тип замещения и уточнить идентификацию хромосом ржи. Так, у всех анализируемых растений линии ЛЗ показано наличие маркера хромосомы ржи 2R и отсутствие всех пяти маркеров, локализованных на хромосоме пшеницы 2D, что указывает на замещение 2R(2D). На Рис. 1 приведено схематическое изображение хромосом данной линии. Замещенная линия Л6 по результатам SSR-анализа была определена как 3R(3B).

Оценка гетерогенности генотипической среды пшеницы пшенично-ржаных замещенных линий Саратовская 29/Онохойская показала, что линии Л1, Л4, Л5 и Л7 незначительно отличаются от контрольной линии пшеницы аллельным составом SSR-локусов пшеницы (0-2.1% анализируемых локусов). В то же время для линий Л2 и ЛЗ процент локусов с аллелями отличными от контрольных составил 13.7% и 26.0%, соответственно. Между собой данные линии с однотипным замещением, 2R(2D), отличаются аллельным составом 24.7% исследуемых SSR-локусов, что позволяет различать их на молекулярном уровне

ХодтДЗб

. Хтат691

Хсшпдо

ХЩП750

1А

. Хв\ут304

. Хеш)293

Хешп1078

■

4 !даш1$48

Хиш! 24

. _Х8ШП1012

. Хшв793

1В

Хвып995

. &£ып234

. 2£вй!т544

. Хе&щШб

Хаыц1252 Хшт)90

. Хент174

5А

5В

5Б

. &кт296Ь . Х8ЖШ372

ХешйН

^ ХуцяпЗ!?

. Хвипбзо . ¡¡^ит)29Ь|

2А 2В

,_ . КиШЙЯ!_______

. Хвдщ334а

. ¡£шв570

. ¡¡£шп508

. Хявт219

« Ууццп469

. Хоцп)241

. ¡ЙШШ760

( Хиый732

6А

6В

. Хо$ш369

I Хвшш$66

. Сват155 . Хрут480

. ХВ$Ш193

_ . Х^улт[456 ^

. Хрипи299

. ХрцтЫб!

_ г¿gишЗl4

ХщутЯ

, Х8КШ}093

ЗА

Х£шв250 Хаш1258с

ЗВ ЗБ

I ¡¿шш5Ю

4А 4В

. ХвшпВВв

. ХуЛт129

. Кщип165Ь |Ху<утП02

[ХрмпЯЗ Хешш165с

. ХезипбЗ!

. Хтип282

. ¡£8ат.7б7 . &ешп£8ь

„ &шт)002 Хрцпт1б7Л ___

7А

7В

. ¡¡¿ЩП428

ТО

Хкш43

Хе*га299

2Я ЗЯ

Рис. 1. Схематическое изображение хромосом линии ЛЗ. С - центромера; /л - аллели микросателлитных локусов, отличные от контроля пшеницы; | - отсутствие продукта амплификации

и обозначить как 2R(2D)' и 2R(2D)2. Наличие у замещенных линий отличий в аллельном составе микросателлитных локусов, по-видимому, отражает высокий уровень полиморфизма внутри исходного сорта пшеницы Саратовская 29. Уровень полиморфизма SSR-локусов замещенных линий и контрольной линии пшеницы, обнаруженный в нашей работе, соответствует внутрисортовому и не препятствует использованию данных линий для определения роли отдельных хромосом ржи в контроле признаков.

Суммируя данные цитогенетического (Кравцова, Щапова, 1980) и молекулярного SSR-анализа (Добровольская и др., 2003), замещенные линии были окончательно идентифицированы следующим образом: JIl -IRo(ID), JI2 -2Rn(2D)', ЛЗ -2Rg(2D)2. Л4- 5Ro(5D), Л5 - 6Rq(6A), Л6 -3Rq(3B). Л7 - IRo(IA), Л8 - 1RB (1А), Л9 - 5Ro(5A), Л10 - 5RV(5A). Эта номенклатура использовалась нами для обозначения линий при изучении влияния отдельных хромосом ржи на особенности андрогенеза in vitro на примере данных линий.

Микросателлитный анализ замещенных линий позволил впервые определить локализацию на хромосомах ржи SSR-маркеров пшеницы Xgwm 960 (5В), Xgwm 334 (6AS) и Xgwm 1016 (5BL). Показано, что Xgwm 334 и Xgwm 1016 являются маркерами хромосомы ржи 6R, a Xgwm 960 - хромосомы 5R. Маркеры Xgwm 334 и Xgwm 960 локализованы на гомеологичных хромосомах пшеницы и ржи, шестой и пятой групп соответственно, а маркер Xgwm 1016 - на негомеологичных хромосомах (6R и 5В). На Рис. 2 приведены результаты амплификации локуса Xgwm 334 у пшенично-ржаных замещенных линий Саратовская 29/Онохойская, контрольных линий пшеницы и ржи. Рис. 2. Результат амплификации локуса Xgwm 334 у пшенично-ржаных замещенных линий Саратовская 29/ Онохойская, контрольных линий пшеницы и ржи.

Стрелками обозначены маркирующие фрагменты. Слева и справа в каждой дорожке расположены фрагменты ДНК-стандартов длины (73 пн и 196 пн).

Влияние отдельных хромосом ржи на показатели андрогенеза in vitro Андрогенный эмбриоидогенез. При культивировании пыльников замещенных линий, тритикале и контрольной линии пшеницы на индукционной среде с разной концентрацией 2,4-Д обнаружили, что время появления первых автономных эмбриогенных структур, или эмбриоидов в соответствии с классификацией Т.Б. Батыгиной (Батыгина, 1974), не зависит от генотипа растений-доноров пыльников. Изучая ответ пыльников замещенных линий, тритикале и линии пшеницы сорта Саратовская 29 на условия культивирования

in vitro при разных концентрациях 2,4-Д в инициальной среде, обнаружили неодинаковую реакцию различных генотипов по способности к андрогенному эмбриоидогенезу. Так, у линии 5R(5D) на среде с 1 мг/л 2,4-Д (Табл. 1) и среде без 2,4-Д (Табл. 4) развития эмбриоидов не происходило. На средах с 0.75 мг/л 2,4-Д (Табл. 2), 0.25 мг/л 2,4-Д (Табл. 3) и частота продуктивных пыльников, и частота образования эмбриоидов у этой линии по сравнению с линией сорта пшеницы Саратовская 29 были достоверно ниже.

Линии 1R(1D) и 3R(3B), напротив, отличались высокой способностью к андрогенному эмбриоидогенезу: и по частоте продуктивных пыльников, и по частоте образования эмбриоидов они достоверно превышали контрольную линию пшеницы практически во всех экспериментах (Табл. 1-4).

У линий 2R(2D)', 2R(2D)2 и 6R(6A) частота продуктивных пыльников во всех экспериментах была на уровне контроля. Что касается частоты образования 1

эмбриоидов, то этот показатель андрогенного эмбриоидогенеза у линии 2R(2D)2 при культивировании пыльников на всех средах, содержащих 2,4-Д, был достоверно выше, чем у линии сорта Саратовская 29. Значения частоты S,

образования эмбриоидов у линии 2R(2D)' на среде без 2,4-Д (Табл. 4) и среде с 0.75 мг/л 2,4-Д (Табл. 2), а у линии 6R(6A) на среде с 1 мг/л 2,4-Д (Табл. 1) были достоверно выше, чем у контроля.

Изучая способность пыльников тритикале к андрогенному эмбриоидогенезу, обнаружили, что по частоте продуктивных пыльников на средах с 0.75мг/л и 0.25 мг/л 2,4-Д и безгормональной среде тритикале не отличается от контроля. По показателям частоты образования эмбриоидов эта линия была достоверно выше линии пшеницы сорта Саратовская 29 на среде без 2,4-Д (Табл. 4) и среде с 0,75 мг/л 2,4-Д. При максимальной в данной работе концентрации 2,4-Д (1 мг/л) тритикале достоверно уступала контролю и по частоте продуктивных пыльников, и по частоте образования эмбриоидов (Табл. 1). Регенерационная способность андрогенных эмбриоидов. Эмбриоиды, сформировавшиеся на инициальной среде с разным содержанием 2,4-Д, затем переносили на безгормональную среду и культивировали в одинаковых условиях, изучая их способность к регенерации проростков. i

Установлено, что по способности к регенерации всех проростков эмбриоиды замещенных линий и тритикале либо достоверно уступали контролю (Табл. 1, 2), либо были на уровне контрольной линии пшеницы (Табл. 3, 4). Сопоставляя экспериментальные данные по регенерационной способности эмбриоидов *

замещенных линий, сформировавшихся на среде с различной концентрацией 2,4-Д (Табл. 1-4), установили, что наличие и определенная концентрация фитогормонов в индукционной среде оказывает воздействие не только на уровень индукции эмбриоидогенеза, но и на регенерационную способность сформировавшихся эмбриоидов. Эмбриоиды всех замещенных линий и тритикале обнаружили тенденцию к уменьшению регенерационной способности по сравнению с контрольной линией пшеницы при повышении от 0 до 1 мг/л концентрации 2,4-Д в индукционной среде.

По величине показателей частоты зеленых проростков, регенерировавших из эмбриоидов, развившихся на среде с 1 мг/л 2,4-Д, все замещенные линии были достоверно ниже контроля (Табл. 1). На средах с более низким содержанием

Таблица 1. Результаты культивирования пыльников замещенных линий Саратовская 29 / Онохойская, линии сорта Саратовская 29 (Сар. 29) и тритикале

(Трит.) на среде PII с 1мг/л 2,4-Д

Линии Культивировано пыльников Частота, % Частота зеленых проростков к 100 пыльникам, %

продуктивных пыльников1 эмбриоидов1 всех проростков2 зеленых проростков2

1R(1D) 504 25.0 74.6'" 30.1(,"J 2.4(""> 1.8(*">

2R(2D)' 447 5.4 15.9 42.2<*"> 33.8("» 5.3<*>

2R(2D)2 444 6.6 24.9"* зо.о("*> 21.8<"*> 5.4(,)

3R(3B) 633 8.2 16.3 42.8<"*) 21.4(*"> 3.4("*>

5R(5D) 415 ОС») 0 0 0 0

6R(6A) 515 6.6 24.1"' 19.3("*> 17.7<*"> 4.2<")

Cap. 29 354 6.8 15.3 77.8 61.1 9.3

Трит. 524 0.8<*"> 1Ле») 0е») 0 0

Примечание для таблиц 1-4. Разница по сравнению с линией сорта пшеницы Саратовская 29 (Сар.29) достоверно больше^ при *Р<0.05, **Р<0.01 "*Р<0.001, достоверно меньше при ( )Р<0.05, **>Р<0.01 и '"'^сО.ОО 1. 1К 100 культивированным пыльникам. 2 К 100 культивированным эмбриоидам.

Таблица 2. Результаты культивирования пыльников замещенных линий Саратовская 29 / Онохойская, линии сорта Саратовская 29 (Сар. 29) и тритикале (Трит.) на среде PII с 0.75 мг/л 2,4-Д__

Линии Культивировано пыльников Частота, % Частота зеленых проростков к 100 пыльникам, %

продуктивных пыльников1 эмбриоидов1 всех проростков2 зеленых проростков2

1R(1D) 1524 9.2 32.3- 31.8(,,) 3.7 1.2

2R(2D)' 1262 3.1 6.6" 33.7<"> 12.0 0.8

2R(2D)2 318 3.1 7.6* 29.2("> 0 0

3R(3B) 1454 11.0*" 52.4"* 24.5(***) 7.2 3.8

5R(5D) 851 0.1<"*> 0.7<т> 0 0 0

6R(6A) 1141 1.7 4.2 25.0е"') 18.8 0.8

Cap. 29 580 2.2 3.6 66.7 9.5 0.3

Трит. 420 2.1 12.1"* 31.4(**' 21.6 2.6**

Примечание как в Табл. 1

2,4-Д у замещенных линий сформировались эмбриоиды, которые достоверно не отличались от контроля по величине этого признака (Табл. 2-4). Только одна из замещенных линий, 2Щ2Л)2, по способности эмбриоидов к регенерации зеленых проростков достоверно превысила контроль пшеницы и остальные генотипы, что наблюдалось при культивировании пыльников на среде с 0,25 мг/л 2,4-Д (Табл. 3).

Таблица 3. Результаты культивирования пыльников замещенных линий Саратовская 29 / Онохойская, линии сорта Саратовская 29 (Сар. 29) и тритикале (Трит.) на среде PII с 0.25 мг/л 2,4-Д __

Линии Культивировано пыльников Частота, % Частота зеленых проростков к 100 пыльникам, %

продуктивных пыльников1 эмбрио-идов1 всех проростков2 зеленых проростков2

1R(1D) 383 14.1"" 35.8'" 24.8 6.6 2.3

2R(2D)' 300 5.0 17.7"* 18.9 9.4 1.7

2R(2D)2 305 4.9 28.9"* 45.5 40.9 11.8'**

3R(3B) 353 13.0**' 42.5*** 13.3 6.0 2.5**

5R(5D) 283 0.35<"> 0.35(*"> о("*> 0 0

6R(6A) 300 3.0 3.0 22.2 0 0

Cap.29 320 3.4 9.4 26.7 10.0 0.9

Трит. 387 4.7 10.6 4.8<*) 4.8 0.5

Примечание как в Табл. 1

Таблица 4. Результаты культивирования пыльников замещенных линий Саратовская 29 / Онохойская, линии сорта Саратовская 29 (Сар.29) и тритикале (Трит.) на среде PII без 2,4-Д___

Куль- Частота, % Частота зе-

Линии тивировано пыльников леных проростков к 100 пыльникам, %

продуктивных пыльников1 эмбрио-идов1 всех проростков2 зеленых проростков2

1R(1D) 186 11.8"" 29.6"* 5.5 5.5 1.6

2R(2D)' 200 6.0 21.0*" 7.1 4.8 1.0

2R(2D)2 90 0 0 0 0 0

3R(3B) 166 14.5"* 46.4"* 6.5 5.2 2.4*

5R(5D) 250 0 0 0 0 0

6R(6A) 116 0.9 0.9 0 0 0

Cap.29 134 2.2 5.2 0 0 0

Трит. 225 3.1 18.2*" 0 0 0

Примечание как в Табл. 1

Оценка эффективности андрогенеза in vitro, как частоты зеленых регенератов по отношению к 100 пыльникам, показала, что при культивировании пыльников на инициальной среде с 0.25 мг/л 2,4-Д линии 3R(3B) и 2R(2D)2 достоверно превышают контрольную линию пшеницы (Табл. 3). Аналогичные результаты получены в отношении линии 3R(3B) при культивировании пыльников на среде без 2,4-Д (Табл. 4) и тритикале - на среде с 0.75 мг/л 2,4-Д (Табл. 2). Значения эффективности андрогенеза при культивировании пыльников на среде с 1 мг/л 2,4-Д у всех замещенных линий были достоверно ниже контрольной линии пшеницы.

В целом для изученных генотипов показана возможность увеличения конечного выхода зеленых проростков за счет изменения в инициальной среде концентрации 2,4-Д, индуктора эмбриоидогенеза. Так, в наших экспериментах для линий Саратовская 29, 2Я(2Б) и 6Щ6А) оптимальной оказалась концентрация 2,4-Д 1.0 мг/л, для тритикале - 0.75мг/л и для линии 2Щ2Б)2 -0.25 мг/л.

Таким образом, варьирование концентрации синтетического ауксина, 2,4-Д, в индукционной среде приводит к изменению способности микроспор пыльников замещенных линий к эмбриоидогенезу и позволяет полнее выявить эмбриоидогенный потенциал каждой линии, а так же оказывает влияние на регенерационную способность сформировавшихся эмбриоидов каждого генотипа. Тем не менее, дисперсионный анализ, выполненный по однофакторной схеме, продемонстрировал, что в меняющихся условиях культивирования основной вклад в определение способности микроспор пыльников формировать эмбриоиды и их регенерационную способность вносит генотип растения-донора (Табл. 5).

Таблица 5. Влияние генотипического разнообразия пшенично-ржаных замещенных линий Саратовская 29/Онохойская, линии сорта пшеницы Саратовская 29 и тритикале

Источник Показатели d.f. SS mS Доля

варьирования андрогенеза in vitro вклада

Генотипы замещенных линий 1 7 731.24 78.20 6.81** 0.66

2 7 7969.05 774.68 4.87** 0.56

3 7 5732.20 818.89 4.81** 0.56

4 7 5231.66 234.84 1.96 -

Примечание. 1 - частота продуктивных пыльников; 2 - частота образования эмбриоидов; 3 - частота регенерации всех проростков; 4 - частота регенерации зеленых проростков

У замещенных линий можно выделить генотипы со значительно выраженным эффектом хромосом ржи на проявление признаков эмбриоидогенеза при любом уровне 2,4-Д в индукционной среде. Так, на частоту образования андрогенных эмбриоидов положительное влияние оказывают хромосомы ржи сорта Онохойская 1R и 3R, функционирующие в генотипической среде мягкой пшеницы сорта Саратовская 29. Супрессирующее действие на андрогенный эмбриоидогенез оказывает хромосома ржи 5R сорта Онохойская. Следует отметить, что стимулирующее влияние хромосомы ржи 2R у линии 2R(2D)2 на регенерационную способность эмбриоидов определяется генотипической средой пшеницы, в которой она функционирует, что видно из сравнения показателей регенерационной способности двух линий с однотипным замещением, но отличной генотипической средой пшеницы (Табл. 3). На других генетических модельных объектах подобного влияния данной хромосомы ржи обнаружено не было, но было показано, что гомеологичная хромосома пшеницы 2D так же положительно влияет на формирование зеленых проростков в культуре пыльников in vitro (Szrakacs et al., 1988).

Изучение влияния типов замещения и сортового происхождения хромосом ржи на показатели андрогеиеза in vitro пшенично-ржаных замещенных линий.

Изучение особенностей андрогенеза in vitro у серии замещенных линий Саратовская 29/Онохойская позволило показать влияние отдельных хромосом ржи одинакового сортового происхождения в единой генотипической среде пшеницы на отдельные этапы андрогенеза in vitro. Вместе с тем, можно предположить, что на способность микроспор пыльников развиваться по спорофитному пути при культивировании in vitro пыльников замещенных линий может оказывать влияние не только наличие хромосом ржи, но и отсутствие вследствие замещения хромосом пшеницы.

Для того чтобы учесть влияние типа замещения и роли сортового происхождения хромосом ржи в определении признаков андрогенеза in vitro, в работу были дополнительно вовлечены линии с замещением по первой и пятой группам хромосом: с одинаковым сортовым происхождением, но различными типами замещения - lRo(lD) и IRo(lA), 5Ro(5D) и 5Rq(5A), а так же с одинаковым типом замещения, но отличающиеся сортовым происхождением хромосом ржи - 1Rq(1 А) и 1RB(1 A), 5Ro(5A) и 5RV(5A).

Рис. 3. Влияния типов замещения и сортового происхождения хромосом ржи на показатели андрогенного эмбриоидогенеза in vitro пшенично-ржаных замещенных

линий.

ИВ - частота продуктивных пыльников; И -частота образования эмбриоидов

Примечание. За ноль приняты показатели контрольной линии пшеницы сорта Саратовская 29. Разница по сравнению с контрольной линией: достоверно больше при *** р< 0.001, ** Р< 0.01; достоверно меньше при (*)/>< 0.05, (***) Р< 0.001

Установлено, что на признаки эмбриоидогенеза у линий с замещением по 1 группе хромосом тип замещения не оказывает влияния, но степень выраженности этих признаков зависит от сортового происхождения хромосом ржи. Аналогичные результаты были получены и в отношении влияния сортового происхождения хромосом ржи 5R (Рис. 3). Основываясь на полученных нами данных (Добровольская и др., 2003) и учитывая результаты проведенных ранее исследований (Foroughi-Wehr, Zeller, 1990; Martinez et al., 1994), можно заключить, что гены, контролирующие индукцию и супрессию формирования эмбриоидов, локализованы на хромосомах ржи 1R и 5R, соответственно.

Сравнительный анализ влияния отдельных хромосом ржи на проявление признаков андрогенеза и соматического эмбриоидогенеза in vitro

Таким образом, определены хромосомы ржи, влияющие на индукцию эмбриоидогенеза в гаметических клетках. Возникает вопрос, оказывают ли данные хромосомы ржи влияние на индукцию эмбриоидогенеза в соматических клетках.

Рис. 4. Влияние хромосом ржи на показатели соматического эмбриоидогенеза (а) и регенерации (б) в каллусной культуре незрелых зародышей пшенично-ржаных замещенных линий Саратовская 29/ Онохойская

б) частота регенерации зеленых проростков (%)

а) частота образования эмбриоидогенных каллусов(%)

Примечание. 1-ЩЮ), 2-211(20)', 3- 2Щ20)2,4-ЗЯ(ЗВ), 5-511(50), 6- бЩбА). Показатели контрольной линии пшеницы сорта Саратовская 29 (К) приняты за ноль. Разница по сравнению с линией Саратовская 29: достоверно больше при *** Р< 0.001, ** Р< 0.01; достоверно меньше при (**) Р< 0.01

С начала культивирования незрелых зародышей наблюдались различия по способность линий к типу и динамике образования эмбриоидогенного каллуса (Першина, Добровольская и др., 2003). Так, по частоте образования эмбриоидогенных каллусов достоверно превысили контроль замещенные линии с 2R и 3R хромосомой, достоверно ниже контроля была линия 1R(1D) (Рис. 4).

Сравнивая эти данные с показателями андрогенного эмбриоидогенеза, мы обнаружили, что у линии 1R(1D) с высоким потенциалом к образованию эмбриоидов из микроспор при культивировании пыльников, показатели соматического эмбриоидогенеза были очень низки. Наличие хромосомы ржи 5R, супрессирующей частоту андрогенного эмбриоидогенеза, не оказывает такого влияния на частоту соматического эмбриоидогенеза in vitro. Линия 3R(3B) продемонстрировала высокий эмбриоидогенный потенциал и при культивировании пыльников, и при культивировании незрелых зародышей. На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что на индукцию эмбриоидогенеза in vitro в гаметических и соматических клетках растения оказывают влияние разные хромосомы ржи, и, вероятно, процессы индукции эмбриоидогенеза in vitro в гаметических и соматических клетках находится под контролем различных генетических систем.

Рассматривая показатели регенерации соматических эмбриоидов, обнаружено, что наличие хромосом ржи 2R и 3R у замещенных линий вызывает

достоверное увеличение частоты регенерации проростков (Рис. 4). При этом наиболее выраженным было влияние хромосомы ржи 2R.

Стимулирующий эффект хромосомы ржи 2R на показатели регенерации из соматических эмбриоидов в культуре незрелых зародышей in vitro показан впервые (Першина, Добровольская и др., 2003). Полученные результаты согласуется с имеющимися в литературе данными об аналогичном влиянии гомеологичной хромосомы ячменя 2Н (Mano et al., 1997) и хромосом 2"й группы пшеницы: 2А, 2В и 2D (Kaleikau, Sears, 1989; Henry et al., 1994; Ben Amer et al., 1997).

Характеристика андрогенных регенерантов

Растения, регенерировавшие в культуре пыльников in vitro, изучали с применением микросателлитных маркеров и цитологического анализа чисел хромосом на митотических препаратах кончиков корней.

Цитологический анализ обнаружил, что все андрогенные регенеранты были эуплоидными растениями: либо тригаплоидам («=21), либо гексаплоидами (2п=42). Доля гексаплоидов среди регенерантов замещенных линий варьировала от 13.6% до 25.8% в зависимости от генотипа (Табл. 6). Уровень образования спонтанных дигаплоидов у линии пшеницы сорта Саратовская 29 и замещенных линий достоверно не отличался, следовательно, наличие отдельных хромосом ржи в геноме замещенных линий не супрессирует спонтанное образование андрогенных дигаплоидов.

Таблица 6. Частота гаплоидных (п=21) и гексаплоидных (2п=42) андрогенных расте-

Линии Изучено андрогенных растений и=21 2«=42

число частота, % число частота, %

1R(1D) 67 55 82.1 12 17.9±4.6

2R(2D)' 24 19 79.2 5 20.8±8.3

2R(2D/ 31 23 74.2 8 25.8±7.8

3R(3B) 68 59 86.8 9 13.2±4.1

6R(6A) 13 13 100 0

Cap 29 16 12 75.5 4 25.0±10.8

Микросателлитный анализ растений-гаметоклонов был выполнен с тем же набором маркеров, который использовали для характеристики замещенных линий. Обнаружили, что амплификационные спектры всех 104 маркеров у всех анализируемых растений-регенерантов, соответствовали спектрам доноров пыльников. Следовательно, условия культуры пыльников in vitro не привели к изменениям анализируемых микросателлитных последовательностей генома, которые считают гипервариабельными (Brown et al., 1996). Кроме того, наличие на хромосомах всех SSR-маркеров, исключает возможность существования у гаметокпонов крупных делеций и транслокаций.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенного SSR-анализа были впервые установлены типы замещения и уточнена идентификация хромосом ржи у двух замещенных линий и, таким образом, все десять замещенных линий были однозначно

идентифицированы. Определение геномного состава замещенных линий Саратовская 29/Онохойская позволило на молекулярном уровне отличить две линии с однотипным замещением, 2R(2D), но различным аллельным составом ряда микросателллитных локусов, и рассматривать их как отдельные, 2R(2D)' и 2R(2D)2. Полученные нами результаты показали, что пшенично-ржаные замещенные линии являются адекватной генетической моделью для локализации на отдельных хромосомах ржи генов и маркеров. При помощи замещенных линий серии Саратовская 29/Онохойская впервые определена локализация на хромосомах ржи трех SSR-маркеров пшеницы. Использованная генетическая модель позволила определить эффект хромосом ржи, функционирующих в единой генотипической среде пшеницы, на отдельные этапы андрогенеза in vitro. Так, было выявлено положительное влияние хромосом ржи 1R и 3R и отрицательное - хромосомы 5R на показатели андрогенного эмбриоидогенеза. Установлено, что степень выраженности признака "частота образования андрогенных эмбриоидов" определяется сортовым происхождением хромосом ржи 1R и 5R. Показан стимулирующий эффект хромосомы ржи 2R на регенерационную способность андрогенных эмбриоидов. При сравнении показателей андрогенного и соматического эмбриоидогенеза in vitro у замещенных линий показано, что процессы эмбриоидогенеза в гаметических и соматических клетках находятся под контролем различных генетических систем. Обнаружили одинаковый стимулирующий эффект хромосомы ржи 2R на регенерационную способность и андрогенных, и соматических эмбриоидов. Результаты SSR-анализа гаметоклонов показали, что условия культивирования пыльников in vitro не вызывают заметной нестабильности генома получивших развитие растений-регенерантов, использованный протокол культивирования может применяться в дальнейшем для массового получения дигаплоидов пшенично-ржаных замещенных линий.

ВЫВОДЫ

1. С применением микросателлитных маркеров впервые определен тип замещения и идентифицированы хромосомы ржи у двух пшенично-ржаных замещенных линий Саратовская 29/Онохойская. Подтверждены ранее полученные данные телоцентрического анализа и дифференциального С-окрашивания хромосом ржи в определении типов замещения у восьми из десяти изученных замещенных линий. Установлен полный геномный состав и дана оценка степени гетерогенности генотипической среды пшеницы у серии замещенных линий Саратовская 29/Онохойская. По степени выявленных различий аллельного состава SSR-локусов пшеницы выделены как независимые две замещенные линии с однотипным замещением 2R(2D)' и 2R(2D)2.

2. При изучении замещенных линий Саратовская 29/Онохойская впервые определена хромосомная локализация на хромосомах ржи SSR-маркеров пшеницы Xgwm 960, Xgwm 334, Xgwm 1016.

3. Показаны достоверные различия по влиянию отдельных хромосом ржи на реакцию пыльников в условиях культивирования in vitro.

3.1. Хромосомы ржи 1R и 3R оказывают стимулирующее, а хромосома 5R - супрессирующее влияние на частоту продуктивных пыльников и частоту образования эмбриоидов.

3.2. При определенной концентрации 2,4-Д в инициальной среде хромосома ржи 2R может оказывать положительное влияние на способность эмбриоидов к регенерации зеленых проростков.

3.3. Геном ржи при функционировании в составе октоплоидного тритикале не оказывает супрессирующего влияния на показатели частоты эмбриоидогенеза и регенерации проростков в культуре пыльников in vitro.

3.4. Наличие отдельных хромосом ржи в геноме замещенных линий не

супрессирует спонтанное образование андрогенных дигаплоидов.

4. Особенности андрогенеза in vitro у замещенных линий зависят от

сортового происхождения хромосом ржи и влияния генотипической среды пшеницы. Установлено, что степень выраженности признака - образование андрогенных эмбриоидов, определяется сортовым происхождением хромосом ржи 1R и 5R. Показано, что у замещенных линий с однотипным замещением 2R(2D), но различающихся аллельным составом микросателлитных локусов пшеницы, эффект хромосомы ржи 2R на регенерацию зеленых проростков в культуре пыльников неодинаков.

5. Экспериментально показана возможность увеличения конечного выхода зеленых проростков при культивировании пыльников за счет изменения в инициальной среде концентрации индуктора эмбриоидогенеза, синтетического ауксина - 2.4-дихлорфеноксиуксусной кислоты.

6. Проведен сравнительный анализ влияния отдельных хромосом ржи на проявление признаков андрогенного и соматического эмбриоидогенеза и регенерацию зеленых проростков в культуре изолированных пыльников и незрелых зародышей. Показано, что индукция андрогенного и соматического эмбриоидогенеза находятся под влиянием разных хромосом ржи. Выявлено, что на процессы регенерации зеленых проростков и в культуре пыльников, и в каллусной культуре незрелых зародышей стимулирующее влияние оказывает хромосома ржи 2R. Впервые установлено, что гены, контролирующие образование эмбриоидогенного каллуса в щитковой ткани незрелых зародышей, локализованы на хромосоме ржи 2R.

7. Показано, что условия культивирования in vitro не вызвали нестабильности микросателлитных последовательностей ДНК у растений, регенерировавших в культуре пыльников пшенично-ржаных замещенных линий.

Список публикаций по теме диссертации

1. Першина JI.A., Белова Л.И., Девяткина Э.П., Добровольская О.Б. 2000. Особенности создания гомозиготных линий у генотипов пшеницы с реконструированными геномами. Тезисы II съезда ВОГИС, Санкт-Петербург, с.221.

2. Dobrovolskaya О.В., Pershina L.A., Kravtsova L.A, Shchapova A.I. 2000. The peculiarities of androgenesis in wheat-rye substitution lines. Abstr. 11th of EWAC Conf. Novosibirsk, p.l 15.

3. Добровольская О.Б., Першина JI.A., Кравцова JI.A., Силкова О.Г., Щапова А.И. 2001. Влияние хромосом ржи на особенности андрогенеза у пшенично-ржаных замещенных линий Triticum aestivum L. сорта Саратовская 29/ Seeale cereale L. сорта Онохойская и Тритикале. Генетика 37: 624-630.

4. Dobrovoskava О.В., Pershina L.A., Kravtsova L.A., Shchapova A.I. 2001. The peculiarities of androgenesis in wheat-rye substitution lines. EWAC Newsletter 11: 105-108.

5. Добровольская О.Б.. Першина JI.A., Кравцова JI.A., Силкова О.Г., Щапова А.И. 2001. Андрогенез in vitro у пшенично-ржаных замещенных линий. Тезисы междунар. конф. " Современные проблемы генетики, биотехнологии и селекции растений", Харьков, С. 18-19.

6. Добровольская О.Б., Першина Л.А., Кравцова JI.A., Щапова А.И. 2003. Сравнение эффекта 1R и 5R хромосом ржи на особенности андрогенеза при культивировании пыльников пшенично-ржаных замещенных линий в зависимости от происхождения линий. Генетика 39: 570-574.

7. Першина Л.А., Добровольская О.Б.. Раковцева Т.С., Кравцова Л.А., Щапова А.И., Шумный В.К. 2003. Влияние хромосом ржи на особенности каллусогенеза и регенерации в каллусной культуре незрелых зародышей пшенично-ржаных замещенных линий Triticum aestivum L. сорта Саратовская 29/ Seeale cereale L. сорта Онохойская. Генетика 39: 1073-1080.

8. Добровольская О.Б.. Першина. Л.А., Родер М. Салина Е.А. 2003. Молекулярная идентификация серии пшенично-ржаных замещенных линий и изучение эффекта хромосом ржи и генотипической среды пшеницы на показатели андрогенеза in vitro. Тезисы 2й конф. МОГиС "Актуальные проблемы генетики", Москва. Т.2. С. 120-121.

9. Добровольская О.Б.. Салина Е.А., Кравцова Л.А., Щапова А.И., Першина Л.А. 2003. Идентификация при помощи SSR-анализа серии пшенично-ржаных замещенных линий Саратовская 29/Онохойская и гомозиготных дигаплоидных линий, полученных на их основе. Тезисы междунар. конф. "Современные проблемы генетики, биотехнологии и селекции растений", Харьков, 2003г.

Подписано к печати 26.09.03

Формат бумаги 60x90 1/16 Печ.л.1. Уч.изд.л.0,7

Тираж 100 экз. Заказ 91

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, пр.акад. Лаврентьева, 10

#>16164

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Добровольская, Оксана Борисовна

ВВЕДЕНИЕ.

ЧАСТЬ I. ХАРАКТЕРИСТИКА ПШЕНИЧНО-РЖАНЫХ ЗАМЕЩЕННЫХ ЛИНИЙ С

ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МИКРОСАТЕЛЛИТНЫХ МАРКЕРОВ.

Глава 1. Гибридизация мягкой пшеницы Thticum aestivum L. и ржи посевной Secale cereale L. для создания новых форм растений и методы геномного анализа растений гибридного происхождения (Обзор литературы).

1.1. Значение отдаленной гибридизации.

1.2. Генетический контроль скрещиваемости мягкой пшеницы с рожью посевной

1.3. Основные типы реконструкции ядерных геномов при отдаленной гибридизации.

1.3.1. Пшенично-ржаные амфиплоиды.

1.3.2. Пшенично-ржаные дополненные линии.

1.3.3. Пшенично-ржаные замещенные линии.

1.3.4. Пшенично-ржаные линии с транслокациями и рекомбинантные линии.

1.4. Методы анализа геномов растений, полученных на основе отдаленной гибридизации.

1.4.1. Цитогенетические методы геномного анализа.

1.4.2. Методы дифференциальной окраски хромосом.

1.4.3. Флуоресцентная in situ гибридизация.

1.4.4. Биохимический методы геномного анализа.

1.4.5. Молекулярные маркеры.

1.4.5.1. RFLP-маркеры.

1.4.5.2. STS-маркеры.

1.4.5.3. RAPD-маркеры.

1.4.5.4. AFLP-маркеры.

1.4.5.5. SSR-маркеры.

1.4.5.6. ISSR-маркеры.

Глава 2. Материалы и методы.

Глава 3. Результаты.

3.1 Молекулярный SSR-анализ пшенично-ржаных замещенных линий.

3.1.1. Определение типа замещений у пшенично-ржаных замещенных линий.

3.1.2. Изучение генотипической среды пшенично-ржаных замещенных линий.

3.1.3. Локализация SSR-маркеров пшеницы на хромосомах ржи замещенных линий.

Глава 4. Характеристика пшенично-ржаных замещенных линий с использованием микросателлитных маркеров (Обсуждение).

ЧАСТЬ II. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ОТДЕЛЬНЫХ ХРОМОСОМ РЖИ НА ПОКАЗАТЕЛИ АНДРОГЕНЕЗА IN VITRO НА ПРИМЕРЕ ПШЕНИЧНО-РЖАНЫХ ЗАМЕЩЕННЫХ

ЛИНИЙ.

Глава 1. Андрогенез in vitro (Обзор литературы).

1.1. Значение гаплоидов в генетике и селекции растений.

1.2. Метод гаплопродюсеров.

1.3. Метод культивирования пыльников in vitro.

1.3.1. Последовательность этапов культивирования пыльников in vitro.

1.3.2. Андрогенез in vitro.

1.3.3. Факторы, влияющие на показатели андрогенеза in vitro.

1.3.3.1. Стадия развития микроспор.

1.3.3.2. Методы температурной предобработки пыльников.

1.3.3.3. Условия культивирования. Температурный режим.

1.3.3.4. Особенности минерального и органического состава искусственных питательных сред для культивирования пыльников in vitro.

1.3.4. Генетические факторы, влияющие на признаки андрогенеза in vitro.

1.3.4.1. Влияние генетических факторов на эффективность андрогенного эмбриоидогенеза мягкой пшеницы.

1.3.4.2. Влияние генетических факторов на общую регенерационную способность андрогенных эмбриоидов и регенерацию зеленых и хлорофилл-дефектных проростков у мягкой пшеницы.

1.3.4.3. Влияние генетических факторов на признаки андрогенеза in vitro ржи посевной (Seca/e cereale L.).

1.4. Гаметоклональная изменчивость и методы ее изучения.

Глава 2. Материалы и методы.

Глава 3. Результаты.

3.1. Изучение особенностей андрогенеза in vitro у пшенично-ржаных замещенных линий.

3.1.1. Показатели частоты продуктивных пыльников.

3.1.2. Показатели частоты образования эмбриоидов.

3.1.3. Показатели частоты регенерации всех проростков.

3.1.4. Показатели частоты регенерации зеленых проростков.

3.1.5. Влияние концентрации 2,4-Д в инициальной среде на эффективность андрогенеза in vitro.

3.1.6. Влияние генотипического разнообразия на показатели андрогенеза in vitro у пшенично-ржаных замещенных линий Саратовская 29/ Онохойская, тритикале и линии пшеницы сорта Саратовская 29.

3.2. Сравнение эффекта хромосом ржи 1R и 5R на особенности андрогенеза при культивировании пыльников пшенично-ржаных замещенных линий в зависимости от происхождения линий.

3.3. Изучение особенностей каллусогенеза и регенерации в каллусной культуре незрелых зародышей пшенично-ржаных замещенных линий Саратовская 29/ Онохойская.

3.4. Характеристика растений-гаметоклонов, полученных при культивировании пыльников замещенных пшенично-ржаных линий Саратовская 29/ Онохойская и линии пшеницы сорта Саратовская 29.

Глава 4. Обсуждение.

4.1. Особенности андрогенеза in vitro пшенично-ржаных замещенных линий.

4.1.1. Влияние хромосом ржи на процесс андрогенного эмбриоидогенеза in vitro у пшенично-ржаных замещенных линий.

4.1.2. Влияние сортового происхождения хромосом ржи 1R и 5R и типа замещения на показатели андрогенного эмбриоидогенеза у пшенично-ржаных замещенных линий.

4.1.3. Влияние хромосом ржи на процесс регенерации проростков in vitro у пшенично-ржаных замещенных линий.

4.2. Независимый генетический контроль признаков андрогенеза и саматического эмбриоидогенеза при культивировании пыльников и незрелых зародышей in vitro.

4.3 Оценка стабильности гаплоидных и дигаплоидных растений-регенерантов, полученных при культивировании пыльников замещенных пшенично-ржаных линий in vitro.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика пшенично-ржаных замещенных линий с использованием микросателлитных маркеров и изучение влияния отдельных хромосом ржи на показатели андрогенеза in vitro"

Актуальность проблемы. Метод культуры пыльников находит широкое применение в генетике и селекции растений с целью ускоренного создания гомозиготных рекомбинантных линий (Bajaj, 1990; Barnabas, 2001). С помощью этого метода получены новые сорта и перспективные линии мягкой пшеницы (De Buyser et al., 1987; Bajaj, 1990; Pauk et al., 1995; Han, 1996).

При культивировании изолированных пыльников на питательной среде в микроспорах происходит переключение с гаметофитной программы развития на спорофитную, в результате чего формируются не пыльцевые зерна, как в условиях in vivo, а эмбриоиды, и получают развитие гаплоидные растения. Этот процесс получил название андрогенеза in vitro (Guha, Maheshvari, 1964).

Андрогенез in vitro разделяют на три основных этапа, контролируемых независимыми генетическими системами: образование эмбриоидов; регенерация проростков; развитие или зеленых растений, или альбиносов (Agache et al., 1988; Charmet, Bernard, 1984). Эффективность получения гомозиготных линий при использовании метода культивирования пыльников определяется частотой регенерации зеленых растений и развитием спонтанных дигаплоидов, что зависит от особенностей каждого из этих этапов андрогенеза in vitro (Першина и др.,1999; Holm et al., 1999).

Установлено, что среди факторов, определяющих особенности андрогенеза, основным является генотип растения-донора (Foroughi-Wehr, Zeller, 1990).

Среди злаков влияние генотипа и отдельных хромосом наиболее полно изучено у риса, ячменя, а так же пшеницы на примере большого разнообразия сортов (Foroughi-Wehr, Zeller, 1990; Holm et al., 1999), анеуплоидных (Zang, Li, 1984; Agache et al.f 1989; De Buyser et al., 1992) и замещенных линий (Szakacs et al., 1989; Ghaemi et al., 1994).

Что касается ржи посевной S. cereale L, то в культуре пыльников in vitro большинство генотипов этого вида либо имеют низкие андрогенетические показатели, либо совсем не образуют растений-регенерантов (Wenzel et al., 1977; Rakoczy-Trojanowska et al., 1997; Immonen, Anttila, 1999). Изучение генетического контроля признаков андрогенеза на материале различных генотипов данного вида затруднено.

Работы по изучению влияния хромосом ржи на андрогенез проведены в основном на материале пшенично-ржаных дополненных линий и сортов пшеницы с транслокацией 1BL/1RS (Henry, De Buyser, 1985; Agache et al., 1989; Lückert et al., 1991; Martinez et al., 1994). Наиболее подробно в этом отношении изучено влияние хромосомы 1R. Что касается данных о вкладе других хромосом ржи, то они немногочисленны и неоднозначны. Кроме того, существующие на настоящий момент генетические модели не позволяют четко отделить эффект хромосом ржи на проявление признаков андрогенеза in vitro от влияния генотипической среды пшеницы, а так же выявить зависимость этих признаков от сортового происхождения хромосом ржи. В связи с этим представляется целесообразным привлечение к данным исследования новых генетических моделей, позволяющих адекватно оценить влияние хромосом ржи на проявление признаков андрогенеза и определить хромосомную локализацию генетических факторов, контролирующих этот процесс.

Пшенично-ржаные дополненные и замещенные линии являются удобными модельными объектами в генетических и молекулярных исследованиях, в том числе для определения хромосомной локализации генов и молекулярных маркеров на хромосомах ржи (Sharp at al., 1989; Delaney et al., 1995; Cakmak et al., 1997).

Пшенично-ржаные замещенные линии, полученные сотрудниками ИЦиГ СО РАН Л.А. Кравцовой и А.И. Щаповой на основе гибридизации пшеницы сорта Саратовская 29 и ржи сортов Онохойская, Вятка и Вьетнамская (Кравцова, Щапова, 1980), представляют интерес и как генетические модели (Силкова и др., 1999; Silkova, Shchapova, 2003), и как перспективный материал для селекции (Щапова, Кравцова 1999). При использовании данных линий в качестве генетических моделей для точной интерпретации результатов экспериментов необходима надежная информация об их геномном составе, что позволит избежать ошибок в определении эффекта определенных хромосом ржи в контроле изучаемых признаков.

Необходимость проведения геномного анализа генотипов, используемых в качестве модельных объектов, была продемонстрирована многими исследователями на примере анеуплоидных линий пшеницы, полученных Сирсом (Devos et al., 2000), линий пшеницы с межсортовыми замещениями (Pestsova et al., 2000; Salina et al., 2003) и пшенично-ржаных дополненных линий (Martinez et al., 1994; Alkhimova et al., 1999). Было обнаружено, что многие линии несут хромосомные аберрации, некоторые из них неверно идентифицированы (Martinez et al., 1994; Alkhimova et al., 1999; Devos et al., 2000).

В настоящее время для анализа геномов гибридного происхождения доступны различные методы, в том числе основанные на цитогенетических и молекулярных подходах. Микросателлиты, так же называемые SSR, от английского simple sequence repeats, - сравнительно новый тип ДНК-маркеров, обладающих большим потенциалом в исследованиях генома пшеницы (Röder et al., 1998), ржи (Saal, Wricke, 1999) и других злаков (Becker, Heun, 1995; Panaud et al., 1996), представляют интерес и для изучения пшенично-ржаных геномов гибридного происхождения, в том числе дополненных и замещенных линий.

Проведение SSR-анализа серии замещенных пшенично-ржаных линий позволит уточнить типы замещения, определить геномный состав, что необходимо для широкого использования данных линий как генетических моделей, в том числе при изучении влияния отдельных хромосом ржи на показатели андрогенеза in vitro.

Цель и задачи исследования. Цель работы - охарактеризовать пшенично-ржаные линии по типам замещения и геномному составу с применением микросателлитного анализа и изучить на примере данных линий влияние отдельных хромосом ржи на особенности андрогенеза in vitro.

Объект исследования - дисомные пшенично-ржаные замещенные линии, полученные на основе гибридизации пшеницы сорта Саратовская 29 и ржи сортов Онохойская, Вятка и Вьетнамская. Задачи:

2) выявить особенности влияния отдельных хромосом ржи и всего ядерного генома ржи на отдельные этапы андрогенеза: индукцию андрогенных эмбриоидов, регенерацию проростков, спонтанную дигаплоидизацию;

Научная новизна и практическая ценность. В настоящей работе впервые показано, что микросателлитный анализ является надежным методом для идентификации хромосом ржи и выявления генетической гетерогенности у генотипов, полученных на основе гибридизации мягкой пшеницы и ржи посевной. С применением SSR-маркеров пшеницы и ржи проведено генотипирование пшенично-ржаных замещенных линий, что позволяет использовать данные линии в дальнейших исследованиях в качестве адекватных генетических моделей для локализации на отдельных хромосомах ржи генов и маркеров, а так же важно для дальнейшего применения их в селекционных работах. Впервые определена локализация на хромосомах ржи трех микросателлитных маркеров пшеницы, что позволяет интегрировать данные маркеры в молекулярно-генетическую карту ржи и использовать их наряду с другими маркерами в геномном анализе.

Впервые для изучения особенностей андрогенеза in vitro использована генетическая модель, позволяющая определить эффект отдельных хромосом ржи, функционирующих в единой генотипической среде пшеницы, на отдельные этапы андрогенеза in vitro. Показано, что в генотипической среде сорта Саратовская 29 хромосомы ржи 1R и 3R оказывают стимулирующий, а хромосома 5R -супрессирующий эффект на показатели андрогенного эмбриоидогенеза. Впервые показано положительное влияние хромосомы ржи 2R на частоту регенерации зеленых проростков при культивировании пыльников in vitro. Определено влияние хромосом ржи 1R и 5R на показатели эмбриоидогенеза и регенерации с учетом влияния сортового происхождения и типов замещения. Впервые показано, что наличие отдельных хромосом ржи в геноме пшеницы не подавляет спонтанное образование андрогенных дигаплоидов. Установлено, что влияние хромосом ржи пшенично-ржаных замещенных линий на индукцию андрогенного эмбриоидогенеза in vitro не сопряжено с их влиянием на индукцию соматического эмбриоидогенеза у каллусной культуры незрелых зародышей in vitro.

Впервые определена хромосомная локализация в хромосоме ржи 2R генов, контролирующих образование эмбриоидогенного каллуса в щитковой ткани незрелых зародышей.

Установлено, что изменение концентрации 2,4-Д в инициальной среде позволяет оптимизировать условия для регенерации зеленых растений при культивировании пыльников в условиях in vitro.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на II Съезде ВОГиС, Санкт-Петербург, 2000, 11ой конференции БЛ/АС, Новосибирск, 2000; Международных конференциях молодых ученых, Харьков, 2001, 2003гг; II конференции МОГиС, Москва, 2003 и обсуждались на отчетной сессии ИЦиГ СО РАН (2001).

Публикации. По результатам исследования опубликовано 9 работ, в том числе 3 статьи в рецензируемых журналах.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Добровольская, Оксана Борисовна

143 ВЫВОДЫ

3.1. Хромосомы ржи 1R и 3R оказывают стимулирующее, а хромосома 5R -супрессирующее влияние на частоту продуктивных пыльников и частоту образования эмбриоидов.

3.4. Наличие отдельных хромосом ржи в геноме замещенных линий не супрессирует спонтанное образование андрогенных дигаплоидов.

4. Особенности андрогенеза in vitro у замещенных линий зависят от сортового происхождения хромосом ржи и влияния генотипической среды пшеницы. Установлено, что степень выраженности признака - образование андрогенных эмбриоидов, определяется сортовым происхождением хромосом ржи 1R и 5R. Показано, что у замещенных линий с однотипным замещением 2R(2D), но различающихся аллельным составом микросателлитных локусов пшеницы, эффект хромосомы ржи 2R на регенерацию зеленых проростков в культуре пыльников неодинаков.

145

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Пшенично-ржаные замещенные линии представляют собой удобные модельные объекты в генетических и молекулярных исследованиях. Однако их использование в качестве моделей без точного определения геномного состава может привести к неверной интерпретации результатов экспериментов. Применение наряду с цитогенетическими подходами современных молекулярных методов значительно расширяет возможности геномного анализа, позволяет более полно охарактеризовать исходный материал (Devos et al., 2000; Pestsova et al., 2000).

В настоящей работе привлечение к геномному анализу серии пшенично-ржаных замещенных линий микросателлитных ДНК-маркеров позволило впервые установить типы замещения и уточнить идентификацию хромосом ржи у двух замещенных линий. Таким образом, все десять изучаемых замещенных линий были однозначно идентифицированы. Определение геномного состава замещенных линий Саратовская 29/ Онохойская позволило на молекулярном уровне отличить две линии с однотипным замещением, 2R(2D), но различным аллельным составом ряда микросателллитных локусов, и рассматривать их как отдельные, 2R(2D)1 2R(2D)2. Полученные нами результаты показали, что пшенично-ржаные замещенные линии являются адекватной генетической моделью для локализации на отдельных хромосомах ржи генов и маркеров.

Использованная генетическая модель позволила определить эффект хромосом ржи, функционирующих в единой генотипической среде пшеницы, на отдельные этапы андрогенеза in vitro.

Как известно, пыльники большинства сортов ржи S. cereale не проявляют способности к андрогенезу (Wenzel et al., 1977; Rakoczy-Trojanowska et al., 1997; Immonen, Anttila, 1999). В тоже время в составе октоплоидного тритикале, наличие генома ржи не только не подавляло процессы эмбриоидогенеза и регенерации, но и при определенных условиях даже оказывало на них стимулирующее влияние. Таким образом, следует отметить, что, несмотря на низкую способность генотипов S. cereale к андрогенезу in vitro в целом, геном ржи содержит генетические факторы, которые могут оказывать положительное влияние на признаки андрогенеза в генотипической среде пшеницы. Так, хромосомы ржи 1R и 3R оказывают стимулирующий эффект на образование эмбриоидов, а хромосома 2R - на регенерацию проростков, в том числе зеленых. Возможно, этим и объясняется высокий андрогенетический потенциал некоторых генотипов тритикале по сравнению с генотипами пшеницы (Bernard et al., 1993). В то же время обнаружен супрессирующий эффект хромосомы 5R на частоту андрогенного эмбриоидогенеза. Установлено, что степень выраженности признака "частота образование андрогенных эмбриоидов" определяется сортовым происхождением хромосом ржи 1R и 5R, и не зависит от типа замещения.

Сравнение показателей андрогенного и соматического эмбриоидогенеза in vitro у замещенных линий, показало, что процессы эмбриоидогенеза в гаметических и соматических клетках находятся под контролем различных генетических систем. Обнаружен стимулирующий эффект хромосомы ржи 2R на способность к регенерации зеленых проростков и андрогенных, и соматических эмбриоидов.

Исследования генетической детерминации процессов андрогенеза у ржи на настоящем этапе остаются на уровне определения хромосомной локализации генетических факторов. В то же время у кукурузы (Wan et al., 1992), риса (Не et al., 1998), ячменя (Manninen, 2000) и мягкой пшеницы (Torp et al., 2001) уже картированы локусы количественных признаков андрогенеза in vitro. Из-за низкой способности генотипов ржи к андрогенезу in vitro, затруднен выбор контрастных по изучаемому признаку родительских генотипов для скрещивания при создании картирующей популяции. С другой стороны, у пшенично-ржаных дополненных, замещенных линий и сортов с пшенично-ржаными транслокациями, обладающими высоким андрогенетическим потенциалом, не учтено влияние генотипической среды пшеницы в контроле изучаемых признаков.

В данной работе мы показали, что две пшенично-ржаные линии с замещением 1R(1A), содержащие хромосомы ржи сортов Онохойская и Вятка в единой генотипической среде сорта Саратовская 29 достоверно отличаются по частоте образования эмбриоидов. Эти две линии могут быть использованы в дальнейшем в работах по картированию признаков андрогенного эмбриоидогенеза на хромосоме ржи 1R в качестве родителей при создании картирующей популяции.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Добровольская, Оксана Борисовна, Новосибирск

1. Атанасов А. 1993. Биотехнология в растениеводстве. Новосибирск: ИЦиГ СО РАН 46 с.

2. Батыгина Т.Б. 1974. Эмбриология пшеницы. Л.: Колос. 206 с.

3. Бильданова Л.Л., Салина Е.А., Першина Л.А. 2003. Изучение особенностей рекомбинации ядерного генома у беккроссных потомков ячменно-пшеничных гибридов. Генетика Т. 39. (принято к печати).

4. Бутенко Р.Г. 1964. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Наука. 272 с.

5. Вавилов Н.И. 1960. Значение межвидовой и межродовой гибридизации в селекции и эволюции. Избр. труды в 5 томах. М., Л.: АН СССР Т.2: 444-460.

6. Васильев C.B. 1996. Изучение закономерностей получения дигаплоидных растений пшеницы для создания нового селекционного материала. Автореферат Дис. на соиск. уч. ст. К. с.-х. н. 16 с.

7. Геращенков Г.А., Горбунова В.Ю., Зарянова Л.Д., Рожнова Н.А, Вахитов В.А. 2000. RAP D-ПЦР-анализ изменчивости генома сортов яровой мягкой пшеницы и их андроклинных дигаплоидных форм. Генетика. 36:1081-1087.

8. Геращенков Г.А., Горбунова В.Ю., Зарянова Л.Д., Рожнова Н.А, Вахитов В.А. 2000. Молекулярно-генетические особенности организации генома при эмбриоидогенезе in vitro у яровой мягкой пшеницы. Генетика 36. (Цит. по Горбунова, 2000).

9. Гершкович И. 1968. Генетика. М., "Наука". 697 с.

10. Голубовская И.Н. 1971. Цитология отдаленных гибридов пшеницы и перспективы их использования в селекции. В кн.: Цитогенетика пшеницы и ее гибридов. М.: Наука. С.243-286.

11. Горбунова В.Ю. 2000. Андрогенез in vitro у яровой мягкой пшеницы. Автореф. дисс. на соиск. учен, степени доктора биол. наук. Санкт-Петербург С. 16-23.

12. Гордей И.А. 1992. Тритикале: генетические основы создания. Минск: "Навука i тэхника" 285 с.

13. Дрейпер Д., Скотт Р., Армитидж Ф., Уолден Р. 1991. Генная инженерия растений. М., "Мир", С. 245-248.

14. Игнатова С.А. 1993. Биотехнологические приемы как инструмент клеточной инженерии сельскохозяйственных растений. В сб.: Новые методы биотехнологии растений. Пущино. 197 с.

15. Игнатова С.А., Лукьянюк С.Ф. 1980. Исследования диплоидизации гаплоидов ячменя и тритикале. Цитология и генетика 14: 60-63.

16. Картель H.A., Макеева E.H., Мезенко А.М. 1999. Генетика: энциклопедический словарь. Минск: "Тэхнололя" 156 с.

17. Кокаева и З.Г., Боброва В.К., Вальехо-Роман K.M., Гостимский С.А., Троицкий A.B. 1997. RAPD-анализ сомаклональной изменчивости гороха. Докл. Акад. Наук 355: 134-136.

18. Корлюк С.С., Крайнов O.A., Пыльнев В.М., Герасименко В.Ф. 2003. Путевой анализ зерновой продуктивности у гексаплоидных тритикале разного типа использования. Тез. докл. 2-й конференции МОГиС "Актуальные проблемы генетики" Т.1. С.104-105.

19. Кравцова Л.А. 1985. Создание пшенично-ржаных замещенных форм с использованием С-метода окраски хромосом. Диссертация канд. биол. наук. Новосибирск: СО РАН СССР 104 с.

20. Кравцова Л.А., Щапова А.И. 1990. Пшенично-ржаные замещенные линии. Мейотическая стабильность и фертильность. В сб. Генетика хазяйственно-ценных признаков высших растений. Новосибирск. С. 117-134.

21. Кравцова Л.А., Щапова А.И. 1991. Хромосомный состав жизнеспособных гамет пшенично-ржаных гибридов Fi. В сб. Цитогенетические аспекты генетики и селекции растений. Новосибирск. С. 11-20.

22. Лакин Г.Ф. 1980. Биометрия. М.: Высш. шк., 1980. 294 с.

23. Лукьянюк С.Ф., Шерер H.B. 1992. Влияние генотипа донорных растений мягкой пшеницы на гаплопродукцию при культивировании пыльников. В сб.: Методы биотехнологии в селекции сельскохозяйственных растений. Одесса: СГИ. С. 7-11.

24. Мартыненко В.И., Промонков В.К., Кукаленко С.С. 1992. Пестициды. Справочник. М.: Атомиздат. С. 211-212.

25. Махалин М.А. 1986. Проблемы и перспективы отдаленной гибридизации зерновых культур. В кн.: Теоретические и практические аспекты отдаленной гибридизации. М. Наука. С. 5-15.

26. Махалин М.А. 1992. Межродовая гибридизация зерновых колосовых культур. М.: Наука. 5 с.

27. Мошкович A.M., Чеботарь A.A. 1976. Рожь. Кишинев: "Штиинца". С.14-27.

28. Нумерова О.М., Першина Л.А. 1989. Цитологическая характеристика Н. geniculatum All., его дигаплоидов и межсортовых гибридов. В сб.: Цитогенетика сельскохозяйственных растений. Новосибирск: ИЦиГ. С. 85-97.

29. Першина Л.А., Белова Л.И., Девяткина Э.П., Нумерова О.М., Шумный В.К. 1999. Эффективность получения гаплоидных растений в культуре пыльников и при отдаленных скрещиваниях злаков. Физиология и биохимия культ, растений 31: 196-202.

30. Першина Л.А., Нумерова О.М., Белова Л.И., Девяткина Э.П., Шумный В.К. 1993. Особенности андрогенеза у мягкой пшеницы, межвидовых и межродовых гибридов. Сиб. Биол. Журнал 3: 3-8.

31. Песцова Е. Г. 2000. Микро- и макросателлиты генома мягкой пшеницы и ее сородичей. Диссертация канд. биол. наук Новосибирск: ИЦИГ СО РАН,, 138 с.

32. Рахимбаев И.Р., Тивари 111., Бишимбаева Н. К., Кушнаренко С.В., Азимова Е.Д. 1992. Биотехнология зерновых культур. Алма-Аты: Талым" С. 32-45.

33. Ригин Б.В., Орлов И.П. 1977. Пшенично-ржаные амфидиплоиды. Л.: Колос. 277 с.

34. Салина Е.А., Леонова И.Н., Родер М.С. Будашкина Е.Б. Майстренко О.И., Шумный В.К. 2001. Микросателлиты пшеницы: перспективы использования для картирования генов и анализа реконструированных геномов. Физиология раст. 48:441-446.

35. Силкова О.Г., Щапова А.И., Потапова Т.А., Кравцова Л.А. 1999. Причины, обуславливающие различия в частоте передачи через гаметы двух гомеологичных унивалентных хромосом пшенично-ржаного ди-моносомика. Генетика 35: 784-790.

36. Смирнов В.Г., Соснихина С.П. 1984. Генетика ржи. Ленинград: Изд. ленинградского университета. С. 23-54.

37. Цвелев Н.Н. 1976. В кн. Злаки СССР. Наука, 787 с.

38. Цицин Н.В. 1976. Пути создания новых видов и форм растений. Генетика и селекция отдаленных гибридов. М. Наука. С. 5-18.

39. Цицин Н.В., Любимова В.Ф., Романова З.В. 1979. Зернокормовая пшеница как новаякормовая культура. М. Наука С. 21-39.

40. Хвостова В.В., Шкутина Ф.М. 1975. Причины нарушения плодовитости тритикале. В кн. Тритикале: Изучение и селекция. Л. 1975. С. 186-189.

41. Хлесткина Е.К., Салина Е. А., Леонова И.Н., Лайкова Л.И., Коваль С.Ф. 1999. Использование RAPD- и SSR-анализа для маркирования генов 5 гомеологической группы хромосом мягкой пшеницы. Генетика 35:1349-1357.

42. Шкутина Ф.М. 1971.Влияние геномов ржи и пырея на цитогенетическую стабильность пшенично-ржаных и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов. В сб. Цитогенетика пшеницы и ее гибридов. М. Наука. С. 222-242.

43. Щапова А.И. 1971. Кариотипы пшеницы. В сб. Цитогенетика пшеницы и ее гибридов. М. Наука. С. 30-56.

44. Щапова А.И., Баутина Т.А. 1974. Дифференциальная окраска хромосом ржи и пшенично-ржаного амфиплоида. Изв.СО АН СССР. Сер. Биол. Наук 2:134-136.

45. Щапова А.И., Кравцова Л.А. 1990. Цитогенетика пшенично-ржаных гибридов. Новосибирск: "Наука" Сибирское отделение. 38 с.

46. Щапова А.И., Кравцова Л.А. 1999. К вопросу о генетическом контроле признака солеустойчивости пшеницы. Сельскохозяйственная биология. 5: 1-3.

47. Agache S., Bachelier В., De Buyser J., Henry Y., Snape J. 1989. Genetic analysis of anther culture response in wheat using aneuploid, chromosome substitution and translocation lines. Theor. Appl. Genet. 77: 7-11.

48. Agache S., De Buyser J., Henry Y., Snape J. 1988. Studies of the genetic relationship between anther culture and somatic tissue culture ability in wheat. Plant Breed. 100: 26-33.

49. Albani M.C., Wilkinson M.J. 1998. Inter simple sequence repeat polymerase chain reaction for detection of somaclonal variation. Plant Breed. 117: 573-575.

50. Alkhimova A.G., Heslop-Harrison J.S., Shchapova A.I., Vershinin A.V. 1999. Rye chromosome variability in wheat- rye addition and substitution lines. Chromosome Res. 7: 205-212.

51. Al-Zahim M.A., Ford-Lloyd B.V., Newbury H.J. 1999. Detection of somaclonal variation in garlic (Allium Sativum L.) using RAPD and cytological analysis. Plant Cell Rep. 18: 473-477.

52. Anamthawat-Jonsson, 2001. Molecular cytogenetics of introgressive hybridization in plants. Methods in Cell Sci. 23:139-148.

53. Anamthawat-Jonsson K., Schwarzacher T., Leitch A.R. 1990. Discrimination between closely related Triticeae spies using genomic DNA as a probe. Theor. Appl. Genet. 79: 721-728.

54. Andersen S., Due I.K., Olesen A. 1987. The response of anther culture in a genetically wide material of winter wheat. Plant. Breed. 99:181-186.

55. Anonymous. 1976. A sharp increase of the frequency of pollen plant induction in wheat with potato medium. Acta Genet. Sin. 3: 25-31.

56. Armstrong K.C. 1982. N-banding in Triticum aestivum following Feulgen hydrolysis. Theor. Appl. Genet. 61: 337-339.

57. Badaeva E.D., Budashkina E.B., Badaev N.S., Kalinina N.P. Shkutina F.M. 1991. General features of chromosome substitution in Triticum aestivum x T. timopheevii hybrids. Theor. Appl. Genet. 82: 227-232.

58. Baenziger P.S., Keppenne V.D., Morris M.R., Peterson C.J., Mattern P.J. 1991. Quantifying gametoclonal variation in wheat doubled haploids. Cereal. Res. Comm. 19: 33-42.

59. Bajaj Y.P.S. 1990. In vitro production of haploids. In: Biotechnology in agriculture and forestry. 12. Haploids in crop improvement I. (Ed. Bajaj Y.P.S.) Berlin, Heildefberg, New York, Tokyo: Springer. 12: 3-30.

60. Bajaj Y.P.S., Gosal S.S. 1986. Biotechnology of wheat improvement. In: Biotechnology in agriculture and forestry. 2. Crops I. (Ed. Bajaj Y.P.S.) Berlin, Heildelberg, New York, Tokyo: Springer. P. 3-38.

61. Barnab£s B., Szak£cs E., Karsai I., Bed6 Z. 2000. In vitro androgenesis of wheat: from fundamentals to practical application. Euphytica 119: 211-216.

62. Barnabäs B., Szakäcs E.t Liszt K. 1988. Cytological aspects of in vitro androgenesis in cereals. In: Sexual reproduction in higher plants. (Eds Gori P., Pacini E.), Berlin Hiedelberg: Springer. P. 113-118.

63. Becker J., Heun M. 1995. Barley microsatellites: allele variation and mapping. Plant Mol. Biol. 27: 835-845.

64. Becker J., Vos P., Kuiper M., Salamini F., Heun M. 1995. Combined mapping of AFLP and FFLP markers in barley. Mol. Gen. Genet. 249: 65-73.

65. Ben Amer I.M. 1997. Study of callus growth, differentiation and shoot regeneration in wheat (Triticum aestivum L.) somatic cultures. Dissertation zur Erlangung des akademischen Grades Dr. agr., Halle/Saale. Germany. 85 p.

66. Ben Amer I.M., Korzun V., Worland A.J., Börner A. 1997. Genetic mapping of QTL controlling tissue-culture response on chromosome 2B of wheat (Triticum aestivum L.) in relation to major genes and RFLP markers. Theor. Appl. Genet. 94:1047-1052.

67. Benito C., Figueiras A.M., Gonzalez-Jaen M.T., Salinas J. 1985. Biochemical evidence of Homoeology between wheat and barley chromosomes. Z. Pflanzenzüchtg. 94: 307-320

68. Bennett M.D. 1977. Heterochromatin, aberrant endosperm nuclei and grain shriveling in wheat-rye genotypes. Heredity 39: 411-419.

69. Bennett M.D., Smith J.B. 1975. Confirmation of the identification of the rye chromosome in 1B/1R wheat-rye chromosome substitution and translocation lines. Can. J. Genet. Cytol. 17: 117-120.

70. Berzonsry W., Francki M.G. 1999. Biochemical, molecular, and cytogenetic technologies for characterizing 1RS in wheat: A review. Euphytica 108: 1-19.

71. Binarova P., Straatman K., Hause G., Van Lammeren A.A.M. 1993. Nuclear DNA synthesis during the induction of embryogenesis in cultured microspores and pollen of Brassica napus L. Theor. Appl. Genet. 87: 9-16.

72. Bishnoi U.S., Jain R.K., Gupta K.R., Chowdhury V.K., Chowdhury J.B. 2000. High frequency androgenesis in indica x basmanti rice hybrids using liquid culture media. Plant Cell, Tiss. Org. Cult. 61:153-159.

73. Blake T.K., Kadirzhanova D., Shepherd K.W., Islam A.K.M.R., Langridge P.L., McDonald C.L., Erpedling J., Larson S.f Blake N.K., Talbert L.E. 1996. STS-PCR markers appropriate for wheat-barley introgression. Theor.Appl.Genet. 93: 826-832.

74. Bogani P., Simoni A., Bettini A., Mugani M., Pellegriny M.G., Buiatti M.1995. Genome flux in tomato auto- auxotrohpic cell clones cultured in different auxin/cytokinin equilibria. I. DNA multiplicity and methylation levels. Genome 38: 902-912.

75. Bogani P., Simoni A., Lio P., Germinario A., Buiatti M. 2001. Molecular variation in plant cell populations evolving in vitro in different physiological contexts. Genome 44: 549558.

76. Bothmer R.p Salomon B., Linde-Laursen I. 1991. Cytogenetics in hybrids of Hordeum jubatum and H. tetraploidum with cultivated barley (H.vulgare). Hereditas 114:41-46.

77. Brown S.M., Szewc-McFadden A.K., Kresovich S. 1996. Development and application of m simple sequence repeat (SSR) loci for plant genome analysis. In: Methods of plantgenome analysis of plants (Ed. Jauhar P.P.), New York: CRC, 147-162.

78. Brunell M.S., Lukaszewsky A.I., Whitkus R. 1999. Development of arm-specific RAPD marker for rye chromosome 2R in wheat. Crop. Sci. 39: 1702-1706.

79. Bryan G., Collins A., Stephenson P., Orry A., Smith J., Gale M. 1997. Isolation and characterization of microsatellites from hexaploid bread wheat. Theor. Appl. Genet. 94: 557-563.

80. Bullock W.P., Baenziger P.S., Schaeffer G.W., Bottino P.J. 1987. Anther culture of wheat (Triticum aestivum L.) Fi's and their reciprocal crosses. Theor. Appl. Genet. 62: 155159.

81. Cakmak I., Derici R., Torun B., Tolay I., Braun H.J., Schlegel R. 1997. Role of ryechromosome in improvement of zinc efficiency in wheat and triticale. Plant and Soil. 196: 249-253.

82. Caspersson T., Farber S., Foley G.E., Kudynowski., Modest E.J., Simonsson E., Wagh U.p Zech J. 1969. Chemical differentiation along metaphase chromosomes. Exp. Cell Res. 49: 219-222.

83. Charmet G., Bernard S. 1984. Diallel analysis of androgenetic plant production in hexaploid Triticale (x Triticosecale Wittmack.) Theor. Appl. Genet. 69: 55-61.

84. Charmet G., Bernard S., Bernard M. 1986. Origin of aneuloid plants obtained by anther culture in Triticale. Can. J. Genet. Cytol. 28: 444-452.

85. Chase S.S. 1969. Monoploid and monoploid derivatives of maize (Zea mays L.) Bot. Rev. 35:117-167.

86. Chen C.C., Howarth M.J., Peterson R.L., Kasha K.J. 1984. Ultrastructure of androgenic microspores of barley during the early stages of anther culture. Can. J. Cytol. 26: 484491.

87. Chen L.J., Lai P.C., Liao Q.H., Tsay H.S. 1982. Investigation of callus formation medium in rice anther culture. China Agric. Res. 31. 283 p.

88. Chen W.H., Chen T.M., Fu Y.M., Hsieh R.M., Chen W.S. 1998. Studies on somaclonal variation in Phalaenopsis. Plant Cell Rep. 18: 7-13.

89. Chen Q., Jahier J., Cauderon Y. 1992. Production and cytogenetic analysis of BCi, BC2, BC3 progenies of an intergeneric hybrid between Triticum aestivum L. and tetraploid Agropyron cristatum L. Theor. Appl. Genet. 84: 698-703.

90. Chen Q.F., Wang C.L., Lu Y.M., Shen M., Afza R., Durel M.V., Brunner H. 2001. Anther culture in connection with induction mutations for rice improvement. Euphytica 120: 401-408.

91. Chen Z.Z., Snyder S., Fan Z.G., Loh W.H. 1994. efficient production of doubled haploid plants through chromosome doubled haploid plants chromosome doubling of isolated microspores in Brassica napus. Plant Breed. 113: 217-221.

92. Chen X., Temnykh S., Xu Y., Cho Y.G., McCouch S.R. 1997. Development of a microsatellite framework map providing genome-wide coverage in rice (Oryza sativa L.). Theor. Appl. Genet. 95: 553-567.

93. Cho M.S., Zapata F.J. 1988. Callus formation and plant regeneration in isolated pollen culture of rice (Oryza sativa L., cv. Taipei 309). Plant Sci. 58: 239-244.

94. Chojecki A.J.S., Gale M.D. 1982. Genetic control of glucose phosphate isomerase in wheat and related species. Heredity 49: 337-347.

95. Chu C.C. 1978. The N6 medium and its applications to anther culture of cereal crops. Proc. Symp. Plant Tiss. Cult. Peking: Science Press. P. 45-50.

96. Chuang C.C., Ouyang J.W., Chia H. 1978. A set of potato media for wheat anther culture. Proc. Symp. Plant Tiss. Cult. Peking: Sci. Press, P. 51-56.

97. Crawford D.J. 1989. Enzyme electrophoresis and plant systematics. In: Soltis.D.E. and Soltis P.S.(Eds.), Isozymes in plant biology. Portland: Dioscorides Press, P. 146-164.

98. Crouch M.L. 1982. Non-zygotic embryos of B. napus L. contain embryo-specific storage proteins. Planta 156: 520-524.

99. Cuadrado A., Vitellozzi F., Jouve N. Ceoloni C. 1997. Fluorescence in situ hybridization with multiple repeated DNA probes applied to the analysis of wheat-rye chromosome pairing. Theor. Appl. Genet. 94: 347-355.

100. Custers J.B.M., Gordewener J.H.G., Nolen Y., Dons J.J.M., Van Lookeren-Campagne M.M. 1994. temperature controls both gametophytic and sporophytic development in microspore cultures of Brassica napus. Plant Cell Rep. 13: 267-271.

101. Devos K.M., Sorrels M.E., Anderson J.A., Miller T.E., Reader S.M., Lukashewski A.J., Dubkowski J., Sharp P.J., Faris J., Gale M.D. 2000. Chromosome aberration in wheat nullisomic-tetrasomic lines. Cereal Res. Comm. 27: 231-239.

102. De Buyser J., Bachelier B., Henry Y. 1988. Gametic selection during wheat anther culture. Genome. 32: 54-56.

103. De Buyser J., Hachemi-Rachedi S., Lemee M.L., Sejoume S., Marcotte J.L. Henry Y. 1992. Aneuploid analysis of anther culture response in wheat. Plant Breed. 109: 339342.

104. De Buyser J., Henry Y. 1980. Induction of hapoid plants through anther culture of haploid wheat. Theor. Appl. Genet. 57: 57-58.

105. De Buyser J., Henry Y., Lonnet P.1987. "Florin ": a double haploid wheat variety developed by the anther culture method. Plant Breed. 98: 53-56.

106. De Buyser J., Henry Y., Taleb G. 1985. Wheat androgenesis: cytogenetical analysis of and agronomic performance of doubled haploids. Z.Pflanzenzucht. 95: 23-34.

107. Delaney E.D., Friebe B.R., Hatchett J.H., Gill B.S., Hulbert S.H. 1995. Targeted mapping of rye chromatin in wheat by representational difference analysis. Genome 38: 458-466

108. Devaux P. 1986. Yield of haploid production through the bulbosum method in a winter barley breeding program. Cereal Res. Comm. 14: 273-279.

109. Devos K.M., Atkinson M.D., Chinoy C.N., Liu C.J., Gale M.D. 1992. RFLP-based genetic map of homologous group 3 chromosomes of wheat, rye and barley. Theor. Appl. Genet. 83: 931-939.

110. Devos K.M., Atkinson M.D., Chinoy C.N., Francis H.A., Harcourt R.L., Koebner R.M.D., Masojc P., Xie D.X., Gale M.D. 1993. Chromosomal rearrangements in the rye genome relative to that of wheat. Theor. Appl. Genet. 85: 673-680.

111. Devos K.M., Gale M.D. 1993. The genetic maps of wheat and their potential in plant breeding. Outlook Agric. 22: 93-99.

112. Day A., Ellis T.H.N. 1984. Chloroplast DNA detection associated with wheat plants regenerated from pollen: possible basis for maternal inheritance of chloroplasts. Cell 39: 359-386.

113. Dunwell J.M. 1985. Anther and ovary culture. In: Cereal tissue and cell culture. (Ed. M.Nijhoff) Jink. Pabl. P. 1-44.

114. Endo T.R. 1986. Complete identification of common wheat chromosomes by means of the C-banding technique. Japen J. Genet. 61: 89-93.

115. Endo T.R. 1988. Chromosome mutation induced by gametocidal chromosomes in common wheat. Proc. 7th Int. Wheat Genet. Symp. Cambridge, England P. 259-265.

116. Endo T.R., Gill B.S. 1996. The detection stocks of common wheat. J. of Heredity 87: 295307.

117. Evans D.A., Sharp W.R, Medina-Fiho H.p. 1984. Somaclonal and gametoclonal variation. Am. J. Bot. 71: 759-774.

118. Fedak G. 2000. Molecular aids for integration of alien chromatin through wide crosses. Genome 42: 584-591.

119. Foroughi-Wehr B., Zeller F.J. 1990. In vitro microspore reaction of different German wheat cultivars. Theor. Appl. Genet. 79: 77-80.

120. Friebe B. 1976. Beobachtungen zur differetiellen Giemsa-FSrbung mitotischer Metahpase-Chromosomen in einigen 1B/1R. Weizen-Roggen-Substitutions und Translokationslinien. Z. Pflanzenziichtg. 77: 304-308.

121. Friebe B. 1990. Transfer of Hessian fly resistance from 'Chaupon' rye to hexaploid wheat via a 2RS/2BL wheat-rye chromosome translocation. Theor. Appl. Genet. 79: 385-389.

122. Fribe B., Gill B.S., 1996. Chromosome banding and genome analysis in diploid and cultivated polyploid wheat. In: Methods of plant genome analysis of plants (ed. Jauhar P.P.), New York: CRC. P. 39-55.

123. Friebe B., Gill B.S., Tullen N.A., Cox T.S. 1995. Registration of KS93WGRC28 powder y mildew resistant T6BS 6RL wheat germiplasm. Crop Sci. 35: 1237.

124. Friebe B., Kynast R.G., Hatchett J.H., Sears R.G., Wilson D.L., Gill B.S. 1999. Transfer of wheat-rye translocation chromosomes conferring resistance to Hesian fly rfom bread « wheat into durum wheat. Crop. Sci. 39:1692-1696.

125. Friedt W., Bickert C., Schaub H. 1995. In vitro breeding of high-Iinolenic, doubled-haploid lines of linseed (Linum usitatissimum L.) via androgenesis. Plant Breed 114: 322-326.

126. Friedt W., Lind W„ Walther H., Forouhge-Wehr B., Zuchner S., Wenzel G. 1983. The value of inbred lines derived from Secale cereale x Secale vavilovii via classical imbreeding and androgonetic haploids. Z. Pflanzenziichtg. 91: 89-103.

127. Fukuyama T. 1987. Studies of chromosome elimination in the hybrids between Hordeum bulbosum (4x) and H. vulgare (4x). In: Berichte des Ohara Instituts fur Landwirtschaftliche Biologie. Okayama Univ. 19:101-129.

128. Gaillard A., Vergne P., Beckert M.1991. Optimization of maize isolation and conditions forreliable plant regeneration. Plant Cell. Rep. 10: 55-58.

129. Galiba G., Kovaks G., Sutka J. Substitution analysis of plant regeneration from callus culture in wheat. Plant Breed. 1986. 97: 261-263.

130. Gallero F.J., Lopez-Solanilla E., Figueiras A. M., Benito. 1998. Chromosomal location of PCR fragments as a source of DNA markers linked to aluminium tolerance genes in rye. Theor. Appl. Genet. 96: 426-434.

131. Gamborg O.L., Eveligh D.E. 1968. Culture methods and detection of gluconases in suspension in culture of wheat and barley. Can. J. Bot. 46: 417-421.

132. Genovesi A.D. 1990. Maize (Zea mays L.): In vitro production of haploids. In:

133. Biotechnology in agriculture and forestry. 12. Haploids in crop improvement I. (Ed. Bajaj Y.P.S.) Berlin, Heildelberg, New York, Tokyo: Springer. P. 176-197.

134. Genovesi A.D., Collins G.B. 1982. In vitro production of haploid plants of corn via anther culture. Crop Sci. 22:1137-1144.

135. Ghaemi M., Sarrafi A. 1994. The effect of D-genome from synthetic wheat lines in anther culture responses. Plant Breed. 112: 76-79.

136. Ghaemi M., Sarrafi A., Morris R. 1995. Reciprocal substitution analysis of embryo induction and plant regeneration from anther culture in wheat (Triticum aestivum L.). Genome. 38: 158-165.

137. Gill B.S., Kimber G. 1974. A Giemsa C-banding technique for cereal chromosomes. Cereal Res. Commun. 2: 87-94.

138. Godwin I.D., Aitken E.A., Smith L. W. 1997. Application of inter simple sequence repeat (ISSR) markers to plant genetics. Electrophoresis 18:1524-1528.

139. Gonzalez J.M., Jouve N. 2000. Improvement of anther culture media for haploid production in triticale. Cereal Res. Comm. 28: 65-72.

140. Guha S.p Mageshwari S.C. 1964. In vitro production of embryos from anther of Datura. Nature 204.497 p.

141. Gupta P.K. 1969. Studies on transmission of rye substitutier gametes in common wheat. Ind. J. Genet Plant. Br. 29:163-172.

142. Gupta P.K. 1971. Homoeologous relationship between wheat and rye chromosomes. Present status. Genetica 42:199-213.

143. Gupta P.K., Varshney R.K., Sharma P.C., Ramesh B. 1999. Molecular markers and their applications in wheat breeding. Plant Breed. 118: 369-407.

144. Gustafson J.P., Qualset C.O. 1974. genetics and breeding of 42-chromosome Triticale. I. Evidence for substitutional polyploidy in secondary Triticale population. Crop Sci. 14: 248-251.

145. Guzman M., Arias F.J.Z. 2000. Increasing anther culture efficiency in rice (Oriza sativa L.) using anthers from ratooned plants. Plant Sci. 151:107-114.

146. Hart G.E. genome analysis in the Triticeae using isozymes. In: Methods of plant genome analysis of plants (ed Jauhar PP), New York: CRC, P. 195-204.

147. Hartmann H., Schiele S., Lelley T. 1994. Isoenzyme electrophoresis. A simple way to identify 1B/1R substitutions and translocations in wheat. Plant Breed. 112: 338-341.

148. He D.G., Ouyang .W. 1984. Callus and plantlet formation from cultured wheat anthers at different development stages. Plant Sci. Letters 33: 71-79.

149. He P., Shen L.H., Lu S.F., Chen Y., Zhu L.H. 1998. Analysis for quantitative trait loci which contribute to anther culturability in rice (Oriza sativa L.). Mol. Breed. 4:165-172.

150. Heberle- Bors E. 1989. Isoleted pollen culture in tabacco: plant reproductive development in a nutshell. Sex Plant Reprod. 2:1-10.

151. Henry Y. 1998. Origin of microspose-derived dihaploid and polyhaploid in vitro plants. Plant Tissue Culture and biotechnology 4:127-135.

152. Henry Y., De Buyser J. 1981. Float culture of wheat anthers. Theor. Appl. Genet. 60: 7779.

153. Henry Y., De Buyser J. 1985. Effect of the 1B/1R translocation on anther culture ability in wheat (Triticum aestivum L.). Plant Cell Rep. 4: 307-310.

154. Henry Y., De Buyser J. 1990. Wheat anther culture: Agronomic performance of doubled haploid lines and the realized of a new variety "Florin". In: Biotechnology in agriculture and forestry. Berlin: Springer-Verlag. 13: 285-352.

155. Henry Y., Marcotte J.L., De Byser J. 1994. Chromosomal location of genes controllingshort-term and long term somatic embryogenesis in wheat revealed by immature embryo culture of aneuploid lines. Theor. Appl. Genet. 89: 344-350.

156. Hernandez P., Laurie D.A., Martin A., Snape J.W. 2002. Utility of barley and wheat simple sequence repeat (SSR) markers for genetic analysis of Hordeum chilense and tritordeum. Theor. Appl. Genet. 104: 753-739.

157. Hernandez P., Martin A., Dorado G. 1999. Development of SCARs by direct sequencing of RAPD products: a practical tool for the introgression and marker-assisted selection of wheat. Mol. Breed. 5: 245-253.

158. Hernandez P., Rubio M.J., Martin A. 1996. Development of RAPD markers in tritordeum and addition lines of Hordeum chilense in Triticum aestivum. Plant Breed. 118:52-56

159. Heslop-Harrison J.S., Leich A.R., Schwarzacher T. 1990. Detection and characterization of1B/1R translocation in hexaploid wheat. Heredity 65: 385-392.

160. Heslop-Harrison J.S., Schwarzacher T. 1996. Genomic Southern and In situ hybridization for plant genome analysis. In: Methods of plant genome analysis of plants (ed Jauhar PP), New York: CRC. P: 163-180.

161. He D.G., Ouyang J.W. 1984. Callus and plantlet formation from cultured wheat anther at different development stages. Plant Sci. Letters 33: 71-79.

162. Ho K.M., Jones G.E. 1980. Mingo barley. Canad. J. Plant Sci. 60: 279-280.

163. Hohmann U., Zoller J., Herrmann R.G., Kazmann M.E. 1999. Physical mapping and ^ molecular-cytogenetic analysis of substitutions and translocations involvingchromosome 1D in synthetic hexaploid triticale. Theor. Appl. Genet. 98: 647-656.

164. Holme I.B., Olsen A., Hansen J.P., Andersen S.B. 1999. Anther and isolated microspore culture response of wheat lines from northwestern and eastern Europe. Plant Breed. 118:111-117.

165. Hsam S.L.K., Mohler V., Hartl L., Wenzel G., Zeller F.J. 2000. Mapping of powdery mildew and leaf rust resistance genes on the wheat-rye translocated chromosome t1 BL-1RS using molecular and biochemical markers. Plant Breed. 119: 87-90.

166. Hu D. 1996. A series of Jinghua winter wheat varieties developed by anther culture. In Proc. 8th Assembly Wheat breed. Society of Australia, P.144-147.

167. Hu H., Huang B. 1987. Application of pollen-derived plants to crop improvement Int. Rev. of Cytology 107: 293-313.

168. Hu H.f Tao Y.Z., Wang G. 1986. Creating new types of wheat via anther culture. In Miller T.E., Koebner R.M.D. (eds). Proc. 7th. Int. Wheat Genet. Symp. Insitute of Plant 0 Science Research. Cambridge. P. 1101-1104.

169. Hu H., Xi Z., Ouyang S., Hao S., He M., Xu Z., Zou M.1980. Chromosome variation of pollen mother cell of pollen-derived plants in wheat (Triticum aestivum L.). Sci. Sin. 6: 905.

170. Jacobsen N., Bothmer R. 1992. Supraspecific groups in the Hordeum. Hereditas 116: 2124.

171. Jahne A., Becker D., Brettschneider R., Lorz H. 1994. Regeneration of transgenic microspore-derived, fertile barley. Theor. Appl. Genet. 89: 525-533.

172. Jahne A.P.A, Lazzeri M, Jugger-Gussen, Lorz H. 1991. Plant regeneration from embryogenic cell suspension derived from anther cultures of barley (Hordeum vulgare L.) Theor. Appl. Genet. 82: 74-80.

173. Jauhar P.P., Chibbar R.N. 1999. Chromosome-mediated and direct gene transfers in wheat. Genome 42: 570-583.

174. Jauhar P., Joppa L. 1996. Chromosome pairing as a tool in genome analysis: merits and limitation. In: Jahuar P. P.(Ed.) Method of genome analysis in plants. P. 10-33.

175. Jein S.M., De Klerk G.-J.1998. Somaclonal variation in breeding and propagation of ornamental crops. Plant Tiss. Cult. Biotech. 4: 63-75.

176. Jiang J., Friebe B., Gill B. S. 1994. Nonisotopic in situ hybridization and plant genomemapping: the first 10 years. Genome 37: 717-725.

177. Jiang J., Friebe B., Gill B. S. 1994. Resent advances in alien gene transfer in wheat. Euphytica 73: 199-212.

178. Kaleikau E.K., Sears R.G., Gill B.S. 1989. Monosomic analysis of tissue culture response in wheat (Triticum aestivum L.) Theor. Appl. Genet. 78: 625-632.

179. Karp A., Maddok S.E. 1984. Chromosome variation in wheat plants regenerated from culture immature embryos. Theor. Appl. Genet. 67: 249-255.

180. Karsai I., Bedo Z. 1997. Effect of carbohydrate component on the embryoid and plant production in triticale anther culture. Cereal Res. Comm. 25: 109-133.

181. Kasha K.J., Cho U.-H., Ziauddin A. 1992. Application of microspore cultures. Barleygenetics. 4: 793-803.

182. Kasha K.J., Kao K.A. 1970. High frequency haploid production in barley (Hordeum vulgare L.). Nature 225: 874-876.

183. Kato T., Yamagata H. 1983. Analysis of the action of 3B chromosome on meiotic homologous chromosome pairing in common wheat. Proc VIth Int. Wheat Genet. Symp. P. 321-325.

184. Katsuta J., Hashiguchi Y., Shibaoka H. 1990 . The role of the cytoskeleton in positioning of the nucleus in premitotic tobacco BY-2 cells. J. Cell Sci. 95: 413-42.

185. Khan A., Hassan S., Tarig M., Khan T. 2001. Haploidy breeding and mutagenesis for „ drought tolerance in wheat. Euphytica. 120:109-414.

186. Kiss J., Kondrak M., Torjek O., Kiss E., Gyulai G., Mazik-Tokei K., Henszky L.E. 2001. Morphological and RAPD analysis of poplar trees of anther culture origin. Euphytica 118:213-221.

187. Marciniak K., Banaszak Z., Wedzony M. 1998. Effect of genotype, medium and sugar of triticale (x Triticosecale Wittm.) anther culture response. Cereal Res. Comm. 26: 145150.

188. Mascarenhas JP: 1990. Gene activity during pollen development. Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 41:317-338.

189. Masoj6 P., My§kow B., Milczarski P. 2001. Extending a RFLP-based genetic map of rye using random amplified polymorphic DNA (RAPD) and isozyme markers. Theor. Appl. Genet. 102:1273-1279.

190. Mathes M., Singh R., Cheah S.-C., Karp A. 2001. Variation in oil palm (Elaeis guineensis Jacq.) tissue culture-derived regenerants revealed by AFLPs with methylation-sensitive enzymes. Theor. Appl. Genet. 102: 971-979.

191. McClintock B. 1984.The significance of responses of genome to challenge. Science 226: 792-801.

192. McClintock B. 1997. Mechanisms that rapidly reorganize the genome. Stadler Genet. Symp. 10: 25-48.

193. Mcintosh R.A. 1988. Catalogue of gene symbols in wheat. In: Miller T.E. , Koebner R.M.D. (Ed) Proc. 7th Int. Wheat. Genet. Symp. IPRS Cambridge P. 1225-1323.

194. Mentewab A., Sarrafi A. 1998. Performance of androgenic doubled haploid spring wheat lines for excised-leaf water status and agronomic traits in comparison with their parants. Cereal Res. Comm. 26:137-142.

195. Metz S.G., Sharma H.C., Armstrong T.A., Mascia P.N. 1988. Chromosome doubling and aneuploidy in anther derived plants from two winter wheat lines. Genome 30:177-181.

196. Miah M.A.A., Pathan M.S., Quayum H.A. 1996. Production of salt tolerant rice breeding line via doubled haploid. Euphytica 91: 285-288.

197. Moieni A., Sarrafi A. 1996. The effects of gibberellic acid, phenylethylamine, 2.4-D, and genotype on androgenesis in hexaploid wheat (7". aestivum). Cereal Res. Comm. 24: 139-144.

198. Moieni A., Sarrafi A. 1998. Haploid regeneration by anther culture and its relationship to agronomic traits n the parents and progeny pure lines of a composite cross of hexaploid wheat. Cereal Res. Comm. 26:127-135.

199. Molnar-Lang M., Nagy E.D., Line G., Sutka J. 2003. Production and identification of wheat-barley hybrids and translocations using GISH, FISH and SSR markers. EWAC Newsletter 12. 92 p.

200. Moonen J.H.E., Zeven A.C.1984. SDS-PAGE of the high-molecular-weight subunits of wheat glutenin and the characterization of 1R(1B) substitution and translocation lines. Euhpytica. 33: 3-8.

201. Münzing A. 1939. Studies of the properties and the way of production of wheat- rye amphidiploids. Hereditas 25: 387-430.

202. Murai K. 1995. Development of barley chromosome-specific markers for identification of barley chromosome added to the wheat genome. Bull. RIAR. Ishikawa Agr. Coll. 4: 3137.

203. Murai K., Taketa S.f Islam R., Shepherd K.W. 2000. Barley allele-specific amplicons useful for identifying wheat-barley recombinant chromosomes. Genes Genet.Syst. 75: 131139.

204. Murashige T., Skoog F. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays with u tobacco tissue culture. Plant. Physiol. 15: 473-497.

205. Nagaoka T., Ogihara Y. 1997. Applicability of inter-simple sequence repeat polymorphisms in wheat for use as DNA markers in comparison to RFLP and RAPD markers. Theor. Appl. Genet. 94: 597-602.

206. Naranjo T., Fernandez-Rueda P. 1991. Homoeology of rye chromosome arms to wheat. Theor. Appl. Genet. 82: 577-586.

207. Novotny J., Vagera J.t Ohnoutkova L. 2000. Effect of free chelated iron on in vitro androgenesis in barley and wheat. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 63: 35-40.

208. Orlov P.A., Mavrisheva E.B., Palilova A.N. 1993. Estimation of the response to anther culturing in 60 genotypes of different wheat species. Plant. Breed. 111: 339-342.

209. Ouyang T. 1986. Induction of pollen plants in Triticum aestivum. (Ed. Hu H., Yang H.) in: Haploid in higher plants in vitro. Berlin: Springer. P. 26-38.

210. Ouyang T., Hu H., Chuang C., Tseng C. 1973. Induction of pollen plants from anthers of Tritucum aestivum L. cultured in vitro. Sci. Sin. 16: 79-95.

211. Palombi M.A., Damiano C. 2002. Comparison between RAPD and SSR molecular markers in detecting genetic variation in kiwifruit (Actinidia deliciosa A. Chev). Plant Cell Rep. 20:1061-1066.

212. Pan J.L., Pai S.H., Kuan C.L., Yu H.H. 1975. Certain factor affecting the frequency of induction of wheat pollen plants. Acta bot. Sin. 17: 161-166.

213. Panaud O., Chen X., McCouch S.R. 1996. Development of microsatellite markers and characterization of simple sequence length polymorphism (SSLP) in rice (Oryza sativa L.). Mol. Gen. Genet. 252: 597-607.

214. Pauk J., Kertesz Z., Beke B. 1995. New winter wheat variety: GC Delibab developed via combining conventional breeding and in vitro androgenesis. Cereal Res. Comm. 23: 251-256.

215. Pauk J., Puolimatka M., Toth K.L., Monostori T. 2000. In vitro androgenesis of triticale in isolated microspore culture. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 61: 221-229.

216. Peil A, Korzun V., Schubert., Shumann E., Weber W.E., Röder M.S. 1998. The application of wheat microsatellites to identify disomic Triticum aestivum- Aegilops markgrafii addition lines. Theor. Appl. Genet. 96:138-146.

217. Penner G.A. 1996. RAPD analysis of plant genome. In: Method of genome analysis in plants. (Ed. Jauhar P.P.). P. 252-264.

218. Pershina L.A., Shumny V.K. 2000. Simulating processes of species formation and rise of biodiversity on the base of wide hybridization of cereal. Biodiversity and Dynamics of Ecosystems in North Eurasia 1: 88-91.

219. Pestsova E.f Ganal M.W., Röder M.S. 2000. Isolation and mapping of microsatellite markers specific for the D genome of bread wheat. Genome 43: 689-697.

220. Pestsova E.G., Börner A., Röder M.S. 2002. Development of wheat D-genome introgression lines assisted by microsatellite markers In: Proc. 4th Int. Triticeae Symp., Cordoba, Spain, September 10-12, 2001. P. 207-210.

221. Pestsova E„ Salina E., Börner A., Korzun V., Maystrenko O.I., Röder M.S. 2000. Microsatellites confirm the authenticity of inter-varietal chromosome substitution lines of wheat (Triticum aestivum L). Theor. Appl. Genet. 101: 95-99.

222. Pickering R.A., Hill A.M., Kynast R.G. 1997. Characterization by RFLP analysis and genomic in situ hybridization of a recombinant and a monosomic substitution plant derived from Hordeum vulgare L. x Hordeum bulbosum L. crosses. Genome 40: 195200.

223. Plaschke J., Börner A., Wendehake K., Ganal M.W., Röder M.S. 1996. The use of wheat aneuploids for the assignment of microsatellite loci. Euphytica 89: 33-40.

224. Powell W. 1990. Environmental and genetical aspects of pollen embryogenesis. In: "Biotechnology in agriculture and forestry". (Ed. Bajaj Y.P.S.). Berlin, New York, London, Paris, Tokyo, Hong Kong: Springer-Verlag.12: 45-65.

225. Rabinovich S. V. 1998. Importance of wheat-rye translocations for breeding modern cultivars of Triticum aestivum L. Euhpytica 100: 323-340.

226. Rahman M.H., Rajora O.P. 2001. Microsatellite DNAsomaclonal variation in micropropagated trembling aspen (Populus tremuloides). Plant Cell Rep. 20: 531-536.

227. Raina S., Zapata F.J. 1997. Enhanced anther culture efficiency of indica rice (Oryza sativa L.) through modification of the culture media. Plant Breed. 116: 305-315.

228. Rao P.M.V. 1975. Homoeologous relationship of Imperial rye chromosome C with wheat chromosome 4A. Cereal Res. Comm. 3:103-109.

229. Rakoczy-Trojanowska M., Smiech M., Malepszy S. 1997. The influence of genotype and « medium on rye (Seca/e cereale L.) anther culture. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 48:15-21.

230. Reddy M.P., Sarla N. Srddiq E.A. 2002. Inter simple sequence repeat (ISSR) polymorphism and its application in plant breeding. Euphytica 128: 9-17.

231. Reynolds T.L. 1990. Ultrastructure of pollen embryogenesis. In: Biotechnology in agriculture and forestry. 12. Haploids in crop improvement I. (Ed. Bajaj Y.P.S.) Berlin, Heildelberg, New York, Tokyo: Springer. P. 66-81.

232. Reynolds T.L. 1997. Pollen embryogenesis. Plant Mol. Biol. 33: 1-10.

233. Riley R. 1960. The meiotic behavior, fertility and stability of wheat-rye chromosome addition lines. Heredity 14: 89-40.

234. Riley R., Chapmen V. 1967. The inheritance in wheat of crossability with rye. Genet. Res. 22: 259-267.

235. Rode A., Hartmann C., Benslimane A., Picard E., Quetier F. 1987. Gametoclonal variation detected in the nuclear ribosomal DNA from doubled haploid lines of a spring wheat (Triticum aestivum L., cv. "Cesar"). Theor. Appl. Genet. 74: 31-37.

236. RGder M.S., Korzun V., Wendehake K., Plaschke J., Tixer M-H., Leroy P., Ganal M.W. « 1998. A microsatellite map of wheat. Genetics 149: 2007-2023.

237. Saidi N., Cherkaoui S., Chlyah A., Chlyah H. 1997. Embryo formation and regeneration in

238. Sagi L., Barnabas B. 1989. Evidence for cytoplasmic control of in vitro microspore embryogenesis in the anther culture of wheat (Triticum aestivum L.) Theor. Appl.Genet. 78: 867-872.

239. Salina E.f Korzun., Pestsova EM ROder M., Borner A. 2003. The study of the authenticity of three sets of inter-varietal chromosome substitution lines of wheat (Triticum aestivum L). EWAC Newsletter. 12: 6-11.

240. Salinas J., Figueiras A.M., Gonzales-Jaen M.T., Benito C. 1985. Chromosomal location of isozyme markers in wheat-barley addition lines. Theor. Appl. Genet. 70:192-198.

241. Schachermayr G. M., Siedler H., Gale M.D., Winzeler H., Winzeler M.f Keller B. 1994. Identification and localization of molecular linked to the Lr9 leaf rust resistance gene of wheat. Theor. Appl. Genet. 88:110-115.

242. Schloterrer C. 2000. Evolutionary dynamics of microsatellite DNA. Chromosoma 109: 365371.

243. Seal A.G., Bennett M.D. 1982. Preferential C-banding of wheat or rye chromosomes. Theor. Appl. Genet. 63: 227-233.

244. Sears E.R. 1954. The aneuploids of common wheat. Univ. Mo. Agr. Sta. Res. Bui. 572: 159.

245. Sears E.R. 1956. The transfer of least rust resistance from Aegilops umbellulata to wheat. Brookhaven Symp. Biol. 9: 1-21.

246. Sears E.R., Sears L.M.S. 1978. The telocentric chromosomes of common wheat. Proc. 5th Int. Wheat Genet. Symp. Indian Soc. Genet. Plant Breed, New Delhi, P. 389-407.

247. Sears R.J., Hatchett J.H., Cox T.S., Gill B.S. 1992. Registration of Hamlet, a Hessian fly resistant hard winter wheat germiplasm. Crop Sci. 32: 506.

248. Senft P., Wricke G. 1996. An extended genetic map of rye (Secale cereale L.). Plant Breed. 115: 508-510.

249. Seo Y. W., Jang C.S., Johnson J.W. 2001. Development of AFLP and STS markers for identifying wheat-rye translocations possessing 2RL. Euphytica 121: 279-287.

250. Shan X., Blake T.K., Talbert L.E. 1999. Conversion of AFLP markers to sequence-specific PCR markers in barley and wheat. Theor. Appl. Genet. 98:1072-1078.

251. Sharma H.C., Benlhabib O., Ohm H.W. 2000. Anther culture and chromosome reduction in wheat x Thinopyrun wide crosses. Plant Cell Tiss Org. Cult. 57: 2415-218.

252. Sharp P.J., Chao S., Desai S., Gale M.D. 1989. The isolation, characterization and application in the Triticeae of a set of wheat RFLP probes identifying each homoeologous chromosome arm. Theor. Appl. Genet. 78: 342-348.

253. Shchapova A.I., Kravtsova L.A. 1982. The production of wheat- rye substitution lines by using the Giemsa staining technique. Cereal Res. Comm. 12: 33-39.

254. Sherman J.D., Smith L.Y., Blake T.K., Talbert L.E. 2001. Identification of barley genome segments introgressed into wheat using PCR markers. Genome 44: 38-44.

255. Snape J. W. 1998. Golden calves or white elephants? Biotechnologies for wheat improvement. Euphytica 100: 207-217.

256. Snape J. W., Chapman V., Moss J., C.E. Blanchard, T.E. Miller 1979. The crossability of wheat varieties with Hordeum bulbosum. Heredity 42: 291-298.

257. Snape J. W., De Buyser J.f Henry Y., Simpsom E. A. 1986. Comparison of methods of haploid production in a cross of wheat Triticum aestivum. Z. Pflanzenzucht. 96: 320330.

258. Snape J. W., Simpson E. 1981. Uses of doubled haploid lines for genetical analysis in barley. Barley genetics 4: 704-709.

259. Snape J. W., Sitch L.A., Simpson E., Parker B.B. 1988. Tests for the presence of « gametoclonal variation in barley and wheat doubled haploids produced using the

260. Hordeum Bulbosum system. Theor.Appl.Genet. 75: 509-513.

261. Schlegel R., Weriszko E. 1979. Intergeneric chromosome pairing in different wheat-rye hybrids revealed by the Giemsa banding technique and some implications on karyotype evolutions in the genus Secale. Biol.Zbl. 98: 399-407.

262. Schuman G., Hoffmann B. 1989. Some conditions in using potato extract medium in anther culture of triticale and wheat. Arch. Zucht. 19: 21-27.

263. Schwarzacher T., Anamthasowat -Jonsson K., Harrison G.E. 1992. Genomic in situ hybridization to identify alien chromosome segments in wheat. Theor. Appl. Genet. 84: 778-786.

264. Silkova O.G., Shchapova A.I. 2003. The different transmission of homoeologous univalentchromosomes 5R, 5A and 5D via eggs and pollen in the wheat-rye aneuploids. Cereal Res. Comm. 2003. 31: 57-64.

265. Stephenson P., Bryan G., Kirby J., Collins A. 1998. Fifty new microsatellite loci for the wheat genetic map. Theor. Appl. Genet. 97: 946-949.

266. Stober A., Hess D. 1997. Spike pre-treatment, anther culture condition, and anther culture response of 17 German varieties of spring wheat (Triticum aestivum L.) Plant Breed. 116:443-447.

267. Sun G.L., Saloman B.f Bothmer R. 1997. Analysis of tetraploid Elymus species using A wheat microsatellite markers and RAPD markers. Genome 40: 806-814.

268. Szakacs E., Kovacs G., Pauk J., Barnabas B. 1988. Substitution analysis of callus induction and plant regeneration from anther culture in wheat (Triticum aestivum L.). Plant Cell Rep. 7:127-129.

269. Sybenga J. 1983. Rye chromosome nomenclature and Homoeology relationships. Z. PflanzenzQcht. 90: 297-304.

270. Svitashev S.K., Vershinin A.V., Trunova S.A., Pershina L.A., Shumny V.K. 1991. Molecular analysis of the genomes of wide hybrids in cereals. Hereditas 122: 25-31.

271. Taketa S., Nakazaki T., Schwarzacher T.f Heslop-Harrison J.S. 1997. Detection of a 4DL chromosome segment translocated to rye chromosome 5R in an advanced hexaploid tritticale line Bronco 90. Euphytica 97: 91-96.

272. Tang K., Sun X., He Y., Zhang Z. 1998. Anther culture response of wild Oryza species. Plant Breed. 117:443-446.

273. Tao Y.Z., Snape J.W., Hu H. 1991. The cytological and genetic characterization of doubled haploid lines derived from triticale x wheat hybrids. Theor. Appl. Genet. 81: 369-375.

274. Taramino G.t Tingey S. 1996. Simple sequence repeats for germiplasm analysis and mapping in maize. Genome 39: 277-287.

275. Tautz D. 1989. Hypervariability of simple sequences as a general source of polymorphic DNA markers. Nucl. Acids Res. 17: 6463-6471.

276. Thorn E., Jensen C.J. 1985. Haploid barley embryo induction and the influence of embryo size and development on plant production. Hereditas 3:152-153.

277. Torjek O., Kiss E., Mazik-Tokei K., Hutvagner G., Silhavy D., Banfalvi Zs., Kertesz Z., Pauk J., Heszky L. 2001. Comparative molecular analysis of winter wheat cultivars and their doubled haploid derivatives. Cereal Res. Comm. 29: 41-47.

278. Torp A.M., Hansen A.L., Andersen S.B. 2001. Chromosomal regions associated with plant regeneration in wheat (Triticum aestivum L.) anther culture. Euhpytica 119: 377-387.

279. Torp A.M., Hansen A.L., Holme I.B., Andersen S. B. 1998. Genetic markers for haploid formation in wheat anther culture. Proc. IX Intern. Wheat Genet. Symp., Saskatoon, Canada, 3: 159-161.

280. Touraev A., Indrianto A., Wratshko I., Vicente O., Heberle-Bors E. 1996. Efficient microspore embryogenesis in wheat (Triticum aestivum L.) induced by starvation at high temperatures. Sex. Plant. Reprod. 9: 209-215.

281. Touraev A., Vicente O., Heberle-Bors E. 1997. Initiation of microspore embryogenesis by stress. Trends Plant Sci. 2: 297-302.

282. Tsunewaki K. 1996. Plasmon analysis as the counterpart of genome analysis. In Method of genome analysis in plant. P.P. Jahuar. (Ed.). N.-Y., London, Tokyo, CRC Press, P. 272-299.

283. Tuvesson I.K.D., Pedersen S., Andersen S. B. 1989. Nuclear genes affecting albinism in wheat (Triticum aestivum L.) anther culture. Theor. Appl. Genet. 78: 879-883.

284. Zang Y.L., Li D.S. 1984. Anther culture of monosomies in Triticum aestivum. Hereditas 6: 7-10.

285. Zang X.Q., Wang X.P., Jing J.K., Ross K.f Hu H.t Gustafson J.P. 1998. Characterization of wheat-triticale doubled haploid lines by cytological and biochemical markers. Plant Breed. 117: 7-12.

286. Zeller F.J. 1973. 1B/1R wheat-rye chromosome substitutions and translocations. In. Proc. 4th Inter. Wheat. Genet. Symp., Missouri Agr. Exp. Sta., Columbia. USA. P. 209-222.

287. Zeller F.J., Fischbeck G. 1971. Cytologische Untersuchungen zur Identifizierung des

288. Fremdchromosoms in der Weizensorte Zorba (W 565). Z. Pflanzenzüchtg. 66: 260265.

289. Zeven A.C. 1987. Crossability percentages of some 1400 bread wheat varieties and lines with rye. Euphytica 36: 299-319.

290. Zheng J., Ouyang J. 1980. The early androgenesis in in vitro wheat anthers under ordinary and low temperature. Acta. Genet. Sin. 7:165-175.

291. Zheng M.Y., Konzak C.F. 1999. Effect of 2.4-D on callus induction in anther culture of wheat (T. aestivum L.). Plant Cell Rep. 19: 69-73.

292. Vagera J., Havranec P., Opatrny Z. 1987. Regulation of in vitro androgenesis in tobacco. Bichem. Physiol.Pflanzen. 174: 752-760.

293. Vendrame W.A., Kochert G., Wetzstein H.Y. 1999. AFLP analysis of variation in pecan somatic embryos. Plant Cell Rep. 18: 853-857.

294. Vershinin A.V., Alkhimova E.G., Heslop-Harrison J.S., Potapova T.A. 2002. Terminal regions of individual rye chromosomes vary in DNA organization. Abstract of the 12th1.ternational EWAC Workshop, 1-6 July. 18 p.

295. Vos P., Hogers R., Reijans M.f Van de Lee T„ Homes M., Friters A., Pot J.t Peleman J., Kupier M.p Zabeau M. 1995. AFLP: a new technique for DNA fingerprinting. Nucl. Acids Res. 23: 4407-4414.

296. Yamagishi M. 2002. Heterogeneous plastid genomes in anther culture-derived albino rice plants. Euphytica 123: 67-74.

297. Yang H., Tabei Y., Kamada H., Kayano T., Takaiwa F. 1999. Detection of somaclonal variation in cultured rice cells using digoxigenin-based random amplified polymorphic DNA. Plant Cell Rep. 18: 520-526.

298. Wang Y.B., Hu H. 1985. The chromosome constitution of plants derived from pollen of hexaploid triticale x common wheat Fi hybrids. Theor. Appl. Genet. 70: 92-96.

299. Wang Y.B., Hu H., Snape J.W. 1996. The genetic and molecular characterization of pollen-derived plant lines from octoploid triticale x wheat hybrids. Theor. Appl. Genet. 92:811-816.

300. Weber J.L., May P.E. 1989. Abundant class of human DNA polymorphisms which can be typed using the polymerase chain reaction. Am. J. Hum. Genet. 44: 388-396.

301. Wenzel G., Hoffmann F., Thomas E. 1977. Increase induction and chromosome doubling of androgenetic haploid rye. Theor. Appl. Genet. 51: 81-86.

302. Wenzel G., Thomas E. 1974. Observation of the growth In culture of anthers of Seca/e cereaie L. Z. Pflanzenzuchtg. 72: 89-94.

303. Wetzel J.B., Rayburn A.L. 2000. Use of fluorescence genomic in situ hybridization (GISH) m to detect the presence of alien chromatin in wheat lines differing in nuclear DNAcontent. Cytometry 41: 36-40.

304. Wu C., Chen Y. 1987. The study of genotype differences in the anther culture of rice (Oryza sativa). Acta Genet. Sin. 14:168-174.

Информация о работе

Добровольская, Оксана Борисовна
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2003
ВАК 03.00.15

Диссертация

Характеристика пшенично-ржаных замещенных линий с использованием микросателлитных маркеров и изучение влияния отдельных хромосом ржи на показатели андрогенеза in vitro - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы