Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Генетико-гигиенические аспекты воздействий тяжелых металлов (Cd, Co, Mo) на организм человека и животных

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Генетико-гигиенические аспекты воздействий тяжелых металлов (Cd, Co, Mo) на организм человека и животных"

_РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК_

ИНСТИТУТ ОБЩЕЙ Г2НЕТЖ1 им. Н.И.ЗАВЮ10ВА

Ла яравэ-х рукоплсл

ЧОПШСАШШ Лидия Васильевна

УДК 575.224.6.

ГгНЕТЖО-ГИгаЖЯЕСКЙЕ АСПЕКТЫ ВОЗДЕЙСТВИЙ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ (Сй, Со, Мо) НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА.

"" и животных.

Специальность 03.00.15 - генегяка

А в'т ореферат

диссертации на соискание ученой степеии доктора биологических наук

Москва - 1993

Работа выполнена на базе лаборатории экологической генетики Северо-Осетинского государственного университета им.К.Л.Хетагурова

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Г.Д.ЗАСУХИНА

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Ю.Г.РЫЧКОЗ доктор биологических наук, профессор А.П.АКИФЬЕВ доктор биолотическкх наук Ю.А.РЕЗАЗОБА

Ведущая организация:

. Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н.Сысина РАМН

Защита состоится " " _ 1993 г.

в часов на заседании специализированного совета

Д 002.49.01 при Институте общей генетики им.Н.И.Вавилова РАН (117809 ГСП-1 Москва В-333, ул.Губкина, д.З)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Институте общей генетики им.Н.И.Вавилова РАН

Автореферат разослан " ._1993 г.

Ученый секретарь специализированного.совета кандидат биологических■наук

Г.Н.Полухина

_____J^A£JCAEAmEíC3vIKA-PAB<ffií—--

Актуальность тгооблек-ц. Одним из отрицательных последствий [аучно-техяического прогресса является проблема возрастающего (агрязнения окруяагацей среды факторами, физическую, хи~

яическую я биологическую природу. Особую опасность представляют re факторы, которые обладают мутагенным я канцерогенными свойствами, т.к. они могут быть причиной возникновения наследственна патологий и онкозаболеваний.

В условиях Северо-Кавказского региона в последние годы Зыстро повышается уровень загрязнения продуктами и отходами про-шменкого производства, особую опасность представляют предприятия металлургической к химической промышленности, являюскеся источником тяяелых металлов (та) в окружающей человека среде: Cd -кадмия, Со - кобальта, Uo - молибдена.

В г.Владикавказ9 (Северная Осетия) данные металлы широко распространены в окружающей среде (воздух, почва, вода) в связи с развитой металлургической промышленностью. Высокие концентра--ции всех химических элементов в почве, в основном, находятся около заводов "Злектроцинк" и "Победит". Содержание Мо, Со превышает фоновые в 10-30 раз, а содержание са, з?ъ, Zn в пределах промышленной зоны превышает фоновые в 100 раз (Тимошкин, 1988).

Зоны умеренно опасной и чрезвычайно опасной категории загрязнения почв охватывают 6Ъ% всей площади города, а проживающая на этой площади и подверженная воздействию И численность населения составляет около 90%.

■ Изложенные материалы свидетельствуют о сложной экологической ситуации, которая характеризуется крайней напряженностью в условиях исследуемого региона. Изучение генетических эффектов, индуцированных ТМ, является крайне актуальным.

Люди, занятые в металлургическом Производстве, испытывают отрицательное влияние ТМ, которые вызывают различные заболевания и приводят к патологии наследственных структур. Данные факты являются основанием'для проведения мониторинга в группах рабочих Cd-, Mo-, Со-цехов с целью выяснения генетического риска от контакта рабочих с соединениями ТМ. Это тем более ваяно, что

- г -

генетические эффекты могут лежать в основе проявления таких отдг ленных и опасных последствий, как канцерогенез.

Не менее ванной в настоящее время является проблема предотвращения генетической угрозы профессионального контакта с тяжелI ми металлами, один из путей решения которой - разработка методы снижения их мутагенного действия при помощи аятимутагенных преш ратов. Наиболее перспективными, с точки зрения безвредности для организма и эффективности, среди известных антимутагенов являются витаминк, в том числе аскорбиновая кислота (АК), ретинол (витамин А), обладающие высокой биологической активностью (Рычков у Др., 1385; ?гапзЮ, 1989; СЬазкайЫ ег а1., 1989).

Вышеизложенное определяет актуальность исследования модифицирующего действия АК и ретинола на генетические эффекты соедине ний ТМ в экспериментальных и производственных условиях, что пред ставляет реальный путь защити наследственного аппарата человека от действия вредных факторов среды.

Цель к задачи исследования. Целью настоящей работы явилось исследование геяетико-гигиенических аспектов воздействия тякелыз металлов (са. Со, иа) на животных в эксперименте и на человека в производственных условиях, разработка подходов к снияешш мутагенного действия соединений Т.Ч при помощи АК и ретинола на основе молекулярно-генетических механизмов их действия.

Поставленная цель определяла необходимость решения следующих задач.

1. Исследование мутагенности соединений ТМ (Сй, Со, Ыо) не дрозофиле и млекопитающих в эксперименте.

2. Выявление генотоксических эффектов соединений И в лимфе цитах рабочих кадмиевого, молибденового и кобальтового производств путем оценки патогенетических повреждений: хромосомных аберраций (ХА) и сестринских хроматвдных обменов (СХО), и состой ния репарационных механизмов (по показателям уровня образования разрывов ДНК, их ресинтеза, реактивации и мутабильности вируса' осповакцинн).

3. Изучение молекулярно-генетических механизмов антимутагег ного действия АК и ретинола при воздействии ТМ.

4. Изучение модификации АК и ретинолом процессов формирования структурных перестроек хромосом, индуцированных ТМ, при остром и хроническом воздействии на дрозофиле и млекопитающих.

5. Разработка подходов к зажито генома рабочих, контактирующих с соединениями ТМ, от их мутагенного дейсткет^^^сполмо^ вании-АК-к-ретинола:-' "

6. Проведение эпидемиологических исследований:

а) оценка генетических последствий воздействия ТТЛ и других ксенобиотиков на генеративную функцию кителей г.Владикавказа;

б) разработка методологии и региональных принципов организации генетического мониторинга для целей медико-генетической профилактики врожденной и наследственной патологии в г.Владикавказе.

Научная новизна, практическая ценность работе и внедрение ее разработок.

- Впервые на модельном объекте ОгозорйНа пв1апоЕаз*ег установлено гаметотскопческое действие ТЛ ка различные стадии сперматогенеза в зависимости от времени, и дозы воздействия.

- В экспериментах на млекопитающих изучены степень и характер патогенетических повреждений тяжелыми металлами (с<1, Со, Мо).

- Впервые проведен генетический мониторинг в группах рабочих, контактирующих с соединениями ТМ. Выявлено повышение уровня цитогенетических повреждений (по тестам ХА и СХО) и ингибирова-ние репарации ДНК (по показателям образования разрывов ДНК и их ресинтэза, по реактивации и стабильности вируса осповакцкны).

- Выявлена широкая вариабельность индивидуальности генотипов при действии ТМ, являющаяся основой дои формирования "групп' повышенного риска" среди рабочих металлургического производства.

- Разработан и апробирован подход к снижению уровней формирования структурных перестроек хромосом и стимуляции репарации ДНК в клетках рабочих кадмиевого, молибденового,-кобальтового производств, при использовании аскорбиновой кислоты и ретинола. #

- Впервые произведена оценка частоты врожденных пороков развития; и определена структура наследственной отягощенности жителей г.Владикавказа в зависимости от степени контакта с тяжелыми металлами.

Положения, выносимые на защиту.

- Результаты комплексной оценки генетических эффектов'тяжелых металлов (са, Со, Ио) на различных тест-системах (дрозофила, клетки костного мозга млекопитающих, лимфоциты человека).

- Цитогенетический анализ - как главный критерий профессионального отбора рабочих для предприятий металлургической промышленности.

- Подход»; к заздте рабочих от мутагенного действия ТМ при использовала:« аскорбиновой кислоты (АК) и ретинола.

- Материала по молекулярно-генетическим мехшшзк&ч антпму-тагенного дс^отвая АК е ретинола.

- Материалы по генетическим последствиям воздействия антропогенных факторов на геквракжную функцию жителей г.Эладккавка-за.

Дт?г?обац1'л табот^ч М&тераахы диссертации представлены на Всеесшцок совешаккк, цосвяаекдсм цсподьзозгша» моделей патоло-гачоеких состояв при поиске биоактивных препаратов (Москва, Ш3>, ка XI/ екагеовоа конференции Европейского общества по му-тагекаа окружающей с,рс*ды Москва, 1984), на Международной конференции по прос.-ету ^ 12 Программы "Человек и биосфера" Т&пкект, 1984), на заседаниях Секции генетических аспектов проблему "Человек я биосфера" при ШГГ СССР (Орджоникидзе, 1986; Ереван, 198?; Ккеэ» 1988), на ХУШ ежегодной конференции Европейского общества до мутагенам среды (НРБ, Варна, 1988), на Международном сакаозауие по вопросил репарации ДНК, хромосомным ано-маски а структуре хроматина в связи с проблемой загрязнения округаякей среды (Москва, 1988), на XIX ежегодной конференции Европейского общества по мутагенам среды (Греция, 1989), на Всесоюзном координационном совещании "Генетические последствия загрязнения окружающей среды ьутагенными факторами" (Москва-Самарканд, 1930), на Международном симпозиуме "Биоиндикацкя и биомониторинг" (Загорск, 1991), на I Мендународяой конференции "Экологические проблемы горных территорий" (Владикавказ, 1992).

Публикации -результатов. По материалам диссертации опубликовано 45 научных работ.

Структупа и объем габотн. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов работы, 7-ми глав изложения результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, который включает 281 наименование, в том числе отечественных III.

Материалы диссертации изложены на 400 страницах, содержат 43 рисунка и 63 таблицы, приложение - 138 страниц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЩВАШЯ

1. Оценка гаметотоксическдх эффектов та (са, Со, Мо) проводилась йа НЯЗКОМутабШГЫЮЙ ЛИНИИ дрозофилы - - агозорЫ1а па1апокавког с использованием метода индивидуального культивирования виргинных трехдневного возраста салщов и самок. Исследу- * еше металлы (са, Со, Мо) з виде солей добавлялись в корм дрозофилы . Корм готовили по общепринятой методике. Учет доминантных летальных мутаций (№0 осуществляли с помощь» использования массовой культуры дрозофилы (100 § X 1000"^ ) (Шварцман, 1984). Согласно указ&чной методике, имаго дрозофилы (£ о"*") кормили растрором 1% сахарозы с добавлением различных доз солей мо-' таллов.

2. В опытах на шеяопптяз« учитывался уровень хромое ом-пых аберраций (ХА), индуцированный ТМ. Приготовление метафазных пластинок аз клеток костного мозга млекопитающих проводили согласно МЭТ0ДИК9 Оордй-Хймэртоиа (Рога, НапегЪоп, 1965).

3. Учот ХА в лик^оцитах периферической крови человека осу-щзствлялся согласно методика Р.З.ИоогоЬойа (МоогсИеаа о« а1., 1950).

4. Учёт сестринских хрематадных обменов (СХО) й скорости прохождения генерации (СПГ) лкмфоцктов периферической крови человека проводили в соответствии с методикой, предложенной Л'.ь. IV««, (14-041:, Е1ов, 1982) а Ю.Лазутка» Р.Лешшчуоом-(1984).

5. Опрэделзние репараткваой активности клеток проводили методом хроматографии клеточных лизатов на колонках с гвдрокенап-патитом (пыъзгв, 1975).

6. Определение репаративной активности методом реактивации я индуцированного мутагенеза вируса оопоаакцйны проводила на зараженных вирусом (шташ Листер) лшфоцитах, находящихся а моко-слое (Засухина, 1987).

Металлы и их соли,, йегкувзоваущд а работа. В экспериментах на дрозофила использовашмь раотворишв соли иооладуешх мз~ таллов ^ нерастворшыо!-металлы а их оксиды:

1. Кадмий (04) - С4(КОэ)2, 0«к0й^с00)2.

2. Молибдэй (Мо) - яераотаортшй поройся томного цвота, мо-

либдекозыл огарок (i.'oDg) - порошок серого цвета, молибдат аммония - (:;а4)-ко07-024-4Я20 - водорастворимый порошок белого цвета.

3. Ксбзльт (Со) кспсльзован в в;где растворимой соли CoSO^.

3 качестве положительных контролей использовали мутагены с известки:.:;: механизмами поьревдавдего действия, ивдуцируюцие различные Try:;; репарация: 4-КХО, гамма-облучение и б-'ЛОП (8-шгок-сипсорален), активированный У(5-светом.

Е качество антхмутагека Gtuta использована аскорбиновая кис-лета САК) - Еитамия С - CgiïgOg: для экспериментальннх «квотных в дозе 0,5 кг/кг, для культуры лимфоцитов человека -- Рабо-

чие металлургического производства ежедневно в течение месяца приникала по 500 мг АК - I группа; П группа - рабочие принимали , ретинол (¿ита\пм ъ дозе 33.000 Й.Е.; Ш группа - рабочие одновременно принимали витгилшы АтС.

В эксперименте нспользсЕано более 2.000 аивкопитвящих (крысы л;пп:;: "ïietar", кышк линии "OBAxC^Blg"). Цятогенетичэски обследовано более 70 рабочих металлургического производства.

С?атистическая обработка получеяннх результатов. Расчеты выполнены на ПЭЬЫ ША РС/386 операционная система HS DOS, оперативная память 4 МБ, тактовая частота 33 МГЦ, емкость жесткого диска 40 ИБ, программа написана па языке Т^рбо-БеЯсик.

Достоверность псухученных результатов оценивалась по критерии Стьвденте (Лахкк, ISbû).

Коэффициент зациты при действии антэдутагена на формирова- . нке структурных перестроек хромосом вычисляли по формуле (stooe-donov, 1S90). j _ -j ) /л „

И- -Il н IX г(гн+с " He ) </p[)%

u Рм ~ Pk

где ,y{— коэффициенты,prf - частота структурных перестроек хромосом после обработки сокыо мэтадла,/^ - частота структурных ' перестроек хромосом в контрольных вариантах, /-¿/у ^ - частота структурных перестроек хромосом поста одновременной обработки клеток металлом л АК, Д. - часгота структурных перестроек хромосом после обработки клеток АК.

Работа выполнена на базе лаборатории экологической генетики кафедры зоологии Саверо-Осетгаского государственного у низ ер-

ситета им.К.Л.Хотагурова.

Один кз активнос-

ти клеток - выполнен на базо лаборатории генетических механизмов репарации Института сбхей генетики им.Н.'*.Вавилова РАИ. За постоянную помощь в выполнении работы автор выражао? большую благодарность проф. Г.Д.Засухиной и всем сотрудникам ез лаборатории.

РЕЗУЛЬТАТЫ 2 ОБСЩЕшЕ

I. Изучение действия солей тяколых металлов на модельном генетическом объекте ОгозорЬИа см'Хапое&вЪаг

1,1, Оценка г&'.;етотоксичностк тяжелых металлов на низкомутабальной линии дрозофилы 232

Объектом исследования явились дрозофилы низ.чемутабяльной линии 0^2* Оценку стерилизующего эффекта солей тязелых металлов на дрозофиле проводили по критерию плодовитости самцов при их индивидуальном культивировании. Обработку еащоэ проводили при со-дернаюш их на обычном корме с добавлением различных концентраций о алей тяжелых металлов, исхода из величины ранее выявленной полулетальйой дозы для дрозофилы с экспозицией 24-72 часа.

Для изучения генотоксических эффектов тяжелых металлов (С<1, Со, Мо) были, использованы, в основной, растворимые соли соответствующих металлов: ссЮ12, с<ы2, Со304, (кНд)2Мо03.

Анализ полученных результатов производился с учетом коэффициента плодовитости (<*), коэффициента соотношения полоз (1) и коэффициента снижения плодовитости (я. ).

Примечание: х - средняя плодовитость самцов;

X

ст - коэффкцавв? плодоаигосш » — ;

хяонгр.

1- коэффициент соотношения полов - •

самок

q1 - коэффициент сшисеши плодовитости = •

а ЛРШШ Р круп). г, . юо% .

ксл-по щх в сгиге

- 8 -

Б нагих экспериментах кадмий проявляет выраженный гамето-токс::ческ::Л эффект - он вызывает высокую гибель потомства, причем опыты показага, что cdCi2 вызывает самый высокий коэффициент снижения плодовитости - 251,552, а с<и2 - 53,8$.

Анализируя результаты по коэффициенту соотношения полов (i), отмечено, что концентрацая 0,005 г caci^ вызывает гибель самцов в средне.«.: на 50* болыле, чем гибель самок. Это, видимо, можно объяснить тем, что в 2С-половой хромосоме чаще происходят мутации доминантные и рецессивные, а последние проявляются в гемизигот-ном состоянии у сауцов, что приводит к их элиминации на разных этапах эмбриогенеза.

Коэффициент снижения плодовитости потомства при действии солей молибдена колеблется в пределах от 69,7% до 83,45?, а у кобальта - от 10,7,? до 72,8%.

Наиболее высокую чувствительность к воздействию тяжелых металлов во всех вариантах эксперимента проявляют премейотические стадии сперматогенеза, снижение численности потомства при утилизации! премейотических клеток q^ колеблется в иироких пределах от 127,85$ до 251,5/2 для Сас12. Потомство, полученное при утили- ■ зации постмейотическкх клеток несколько выше: q - 56,0^-116,6^ для CdCl/j, qn для CdJ2 = 43,4^-29,4«. Этот факт, видимо, можно' объяснить тем, что воздействие тякелых металлов на постмейоти-ческие клетки, в которых хромосомный комплекс ухе сформировался, проявляет стабильность и, если происходит снижение выхода имаго,, то, вероятно, только за счет, в основном, токсического действия, а не генетических нарушений. Нами выявлена зависимость "доза-эффект" с исследуемыми металлами: кадмием, кобальтом и молибденом: • с повышением дозы'металла гибель потомства увеличивается.

Таким образом, в результате проведенных экспериментов установлен повышенный гаметотоксический эффект кадмия, молибдена и кобальта, который выражен в понижении плодовитости потомства, родители которых содержались на корме с добавлением тяжелых металлов. Выявлена повышенная чувствительность самцов к высокий процент их гибели, а также установлена повышенная чувствительность к действию тяяелых металлов половых клеток, находящихся на ранних этапах сперматогенеза - т.е. премейотнческая стадия сперма- • тогенеза является более ранимой при действии Cd, Со, Мо, чем . постмейоткческая стадия.

1.2. Оценка мутагенной активности тяхехих металлов______

методом учета ДЛМ у дрозофллы

Для оценки частоты ДЛМ на различных стадиях сперматогенеза получали последовательные кладки на агаровых пластинках. Длительность кладок варьировала от 12 до 24 часов.

Воздействия тяяелш® металлам (cd, Со, Мо) осуществляли путем вскармливания самцов 3-5-дневного возраста с последующим спариванием с виргинными самками (ICO £ х 100 сг7).

¡Мутагенный эффект С dig изучался нами в 3-х концентрациях (0,001 г, 0,002 г, 0,007 г на 100 г питательной среды - 5% раствор сиропа).

Если проанализировать ДЛ по кладкам, то следует отметить, что в первых трех кладках (результат утилизации постмзйотичес-ких клеток - сперматозоиды и сперматиды) в двух концентрациях наблюдали приблизительно одинаковую картину мутационных событий - 13-15,"? JUL. В материалах 17-71 кладок (утилизация премейо-тических клеток - сперматогонии, сперматсциты) отмечали повышенную мутабильность клеток, ДЛ возрастали до 29,09+1,7$. Настоящий взрыв мутационных событий наблюдали при действии высокой концентрации Cd - 0,007 г. Здесь мы отмечали высокую гибель пост-мейотических зслеток (ДЛ - 39,9+1,53$ - 47,5+1,58$). Особую чувствительность также проявила премэйотическая стадия сперматогенеза. Здесь уровень ДЛ увеличился почти в 2 раза п колебался а преде. лах от 77,5+1,3% до 82,7+1,22$.

Цутагенная активность Со (CoSO^) также изучалась в 3-х : концентрациях: I - 0,03 г, П - 0,05 г, Ш - 0,07 г. Из полученных материалов следует, что первые две концентрации Coso^ дают приблизительно родственную картину с Cd низких д"оз и Ш кояцек-■'трация Coso^, по сравнении с cd, тояе продуцирует ниже уровень Ш (в среднем 36,7+1,81/5). Самый высокий уровень ДЯ отмечали в ¡ иейоткческях клетках, он составил 45,8+1,955. ( Мутагенная активность Мо изучена в форме соли молибдата ам-! мониа (Ki^^oOj. Использованы две концентраций: I- 0,2 г, П -, 0,4 г. Первая концентрация на постмейотические клетки особ.ого ; воздействия не оказала, уровень ДШ находился почти на уровне ; контроля (в среднем JUE - 9,9+0,89?), в контроле - 8,7+0,75$. Рашше этапы сперматогенеза во всех концентрациях проявили внсо-

кую чувствительность к Мо. М варьировали в пределах 21,7+1,37$ (для I концентрации) и 35,9+1,70$ при действии П концентрации.

Анализируя действия трех металлов по тесту ДЛМ, можно сделать вывод, что самый высокий генетический эффект отмечается при действии кадмия, более умеренный эффект дал молибден. При действии трех металлов общим является тот факт, что постмейотические клетки и особенно сперматозоиды дают более низкий уровень эмбриональной смертности, а премейотические клетки проявляют повышенную чувствительность, которая выражается в высоком проценте ДЛ, особенно при действии высоких доз кадмия.

Зрелые сперматозоиды проявляют некоторую устойчивость к действию тяжелых металлов, видимо, потому, что представляют собой клетки с особой упаковкой хромосом, которая связана с суперконденсацией хроиатина. Зрелые сперматозоида являются пассивными клеткамп-м-.шенями, лишенными собственного метаболизма и автономной репарации хромосомных нарушений. Гибель сперматозоидов, в основном, идет за счет нарушений митохондриальяого аппарата, определяющего их подвижность.

Премейотическая и мейотическая фазы сперматогенеза, как мы убедились, обладают более высокой чувствительностью к действию кобальта и молибдена, но самый высокий эффект показал кадмий в 'большой концентрации (0,007 г).

Высокий процент поражения премейотических и мейотических клеток при сперматогенезе мозяо объяснить поражением таких вал-, ных процессов в клетке, как редупликация, транскрипция, которые активно идут на ранних этапах сперматогенеза. Повышенную мута-бильность клеток ранних этапов сперматогенеза можно объяснить также блокированием системы репарации ДНК тяжелыми металлами.

1.3. Изучение плодовитости дрозофилы при комбинированном

действии металлов

Известно, что ионы 1М принимают активное участие в процессах жизнедеятельности организмов (Со, Мо, Ее и др.).

В ряде исследований показано, что в отдельных случаях одни и те же металлы могут быть как мутагенами, так и аитимутагенами..

В отдельных исследованиях (оьпа в* а1., 1978; Кайа, Капв-пи^аи, 1978) показано антимутагенное действие СоС12 на мутагенную активность к-метил-и-китро-н-нитрозогуанидина. Авторы

считают, что прямое подавление мутагенеза является едким ;:з механизмов протекторного действия Со.

_В то же время Николаев Е.Б. и тгр. ("г -

результате взаимодействия Рз, Си, гп, Ag продукты окисления тирозина приобретают мутагенную активность.

Таким образом, под влиянием ТТЛ в клетках живых организмов могут возникать новые мутагенные вещества или, напротив, применяемые мутагены теряют свою активность или усиливают ее.

Однако научно обоснованных данных о модифицирующем действии ионов металлов на мутагенную актхюность химических веаэств в настоящее время недостаточно, порой ош: противоречивы, в связи с чем мы попытались провести исследования с целью изучения генетических эффектов при комбинированном действии ряда металлов на плодовитость и выживаемость дрозофилы.

Б специальных опытах с использованием методики "перебросок", при индивидуальном культивировании са-лдов, которых вскармливали в течение трех суток комплексом металлов, внесенных б питательную среду, через 43 часов подсаживали виргинных самок и утатызали отдельно потомство каждого самца.

Указанная методика "перебросок" позволяла учесть плодовитость самцов на премейотических и постмейотических фазах сперма-, тогенеза.

Анализ полученных материалов свидетельствует о модифицирующем действии Мо, который в комбинации с са(ко^)2 дает широкий спектр различных эффектов, оцениваемых по критерию выживаемости имаго дрозофилы.

Следует отметить явный модифицирующий эффект Мо. В первых двух вариантах эксперимента при одной и той не дозе кадмия (0,03 г), время действия - 72 часа, доза Мо в' I варианте - 0,1 г, во П - 0,2 г, получены достоверно отличимые результаты: доза Мо -0,2 г проявила аятлмутагенноз действие, что выразилось в падении плодовитости, особенно при анализе премейотических стадий сперматогенеза. Бо П-ом варианте эксперимента составил 3,9^, в то время как в 1-м варианте эксперимента в.премейотической фазе - Дальнейшее повышение концентрации С4 (0,0,5 г) при тех ке количествах Мо (0,1 г и 0,2 г) вызвало увеличение процента сняаешш плодовитости: возросло до 21,0% в премейотических фазах в Ш варианте, в ГУ варианте (доза Мо 0,2 г) также вы-

явлен защитный эффект.

В целом, вариации q1 премейотических фаз сперматогенеза варьируют п пределах от 3,9$ до 38,5,», что свидетельствует о выраженном антикутагеннсм эффекте Мо, в то ке время в диапазоне исследуемых концентраций наиболее оптимальной в этом отношении оказалась концентрация 'ло - 0,2 г к более выраженный защитный эффект проявился на премейотических фазах сперматогенеза.

Диапазон концентрации металлов I и П вариантов эксперимента выявил тенденцию к увеличению выхода самцов, т.е. наблюдается сдвиг по полу 1= 1,01, в остальных вариантах 1 = 0,9 и меньше.

Таким образом, эксперименты по комбинированному действию ТМ показали, что в отдельных вариантах они проявляют протекторное действие, например, Мо; в других вариантах - наблюдается эффект синергизма, гатетотоксический эффект усиливается и выражается в понижении плодовитости имаго дрозофил, подвергшихся воздействию

та.

2. Анализ цитогенотической активности металлов в клетках костного мозга млекопитающих при остром воздействии

С целью выявления мутагенных эффектов ТМ мы проанализировали ХА клеток костного мозга крыс линии Вкстар. В работе были использованы соли П.! (СЙС12, СоЗО^, ш^ЫоО^У в различных концентрациях (от 0,3-Ю-3^ до 4,6-Ю-3'//.)• Эксперимент был поставлен таким образом, чтобы выяснить одновременно зависимости "доза-эф- • фект* и "время-эффект". На каждую точку эксперимента использовали по 15 животных, их подвергали одновременно обработке кадмием (вводили по I гол указанных концентраций при весе животных в среднем 200 г) и через 24, 48, 72 часа забивали и готовили препараты. Из полученных материалов следует, что Са дает широкий спектр ХА: одиночные и парные фрагменты, реке транслокации, дицентричес-кое слияние хромосом, кольца. Встречаются полиплоидные клетки; с<1 индуцирует аберрации как хромосомного, так и хроматидного типа, но первые - доминирухуг.

Показана прямая зависимость "доза-эффект": с увеличением дозы са возрастает уровень ХА от 2,03? до 12,06$. Во всех вариантах эксперимента максимальный выход ХА обнаружен на 48 часу после воздействия Сй.

- 13 -

Анализируя экспериментальные материалы по действию Со на клетки костного мозга крьге, также выявили зависимость "доза-эфа максимальный - вдвое больше. Проявление зависимости "зремя-эф-фект" носит Б -образный характер: минимум ХА приходится на 24 час действия, максимум - на 48, а к 72 часу уровень ХА снижается почти в 2 раза.

Эффекты Мо более выражены, чем в огатах с Со. Максимум цито-генетической активности ГЛо проявил на 48 часу (В,66% ХА) при низкой дозе, а 11,3355 ХА при действии высокой дозы металла.

Таким образом, в диапазоне исследуемых концентраций ТТЛ проявили мутагенную активность; более выраженный цятогеиетзческий эффект - у соединений са.

3. Сенсибилизирующий эффект при сочетанном действия тяжелых металлов п антибактериального препарата дяоксидана

В эксперименте использован дцокевдин в дозах 140, 80, 30 кг/кг перорально. Металлы: са, "о; с<и2 в дозах 50, 10, 0 . мг/кг; Сс1СХ2 - 10 мг/кг; молибдат амкоккя - 7,5, 1,2 да/кг; молибденовый огарок - 15 мг/кг. Антибактериальное средство - диок-сидин (Д) использован в дозах, близких к терапевтическим дозам для данного вида млекопитающих (80 мг/кг).

Диоксидин в самоЛ высокой дозе (140 мг/кг) является опас-' яым мутагеном, индуцирует 9,24+1,86^ ХА (в 9 раз больше контроля), вторая дозировка (80 мг/кг) дает умеренно повышенный фон мутирования (почти в 3 раза превышает контроль), третья доза (30 мг/кг) индуцирует количество ХА на уровне контроля.

СйС12 в.диапазоне исследуемых концентраций,' в 50,0 мг/кг, увеличивает фон ХА почта в 3 раза, з м&чой дозе 10 мг/кг - увеличивает количество ХА в 2 раза,-

При комбинированном воздействии кадмия и диокевдина в вариантах с высокой дозой. (Д а 140 мг/кг) обе исследуемые дозы' с<и2 и С£С12 индуцируют самый высокий уровень ХА (12,6+1,4$).

Следует отметить, что при одинаковых дозах сыг и сас12 ! первый имеет более выраженный цитогенетаческий эффект, который проявляется при действии пониженных доз диоксидана. Например, в варианте (Д + си2) (80 + 50) индуцирует 10,4+1,3$ XА к в та-

ком ад сочетании, но вместо CdJ2 взят CdCig процент ХА составил 5,8+1,1^ и в поел едущих вариантах (CdJ2 + Д) продуцировал ХА в 2 раза больше, чем с CdCl2.

На основе анализа материалов исследований можно констатировать, что диокекгин - опасны«! мутаген и его мутагенная активность возрастает даже на фане мин&чаляшх доз кадмия.

Аналогичную ситуадкю кц наблюдали крк комбинированном действии (£ + Mo).

Нами была проведена сорил экспериментов по действию диокси-дина на комплекс металлов: Со + й» Ко + ïi, Здесь следует отметить, что сами по себе комолоксы металле» не продуцировали повышенного количества ХА, а на фоне дкоксадкна уровень ХА возрастал в 12-14 раз.

Таким образом, в результате прозаедешшх исследований установлено:

1. Соли кадмия отличаются по влияний на прэцосси цитирования клеток костного мозга мышей: CdJg имеет бадее вкражонную цитогенетическую активность, чем Cdci2.

2. Соли кадмия, молибдена, кобальта модифицируй? цэтогенети-ческий эффект антибактериального средства - диокеазкка (Д) 'д метках костного мозга млекопитающих, усиливают едтагэффект диокекдина при использовании препарата в дозах, йкизкпх к терапевтическим для данного вида млзкопитатаих (80 мг/кг)»

3. Зарегистрированный эффект может сдуяить основанием ддя рекомендаций рабочим, контактирующим с тяжелыми металлами, воз- ., держиваться от использования лекарственного препарата диоксидина.

4. Мониторинг цитогенетических изменений в группе рабочих, контактирующих с тяжелыми металлами

Изучение аберраций хромосом остается одним из важнейших критериев -оценки загрязнения окружающей среды мутагенами. Хромосомы лимфоцитов периферической крови человека доступны для непосредственного анализа после воздействия многих мутагенов, в частности, ТМ. wesiergaard <1957) отмечает, что ионы металлов обладает мутагенной активностью за счет разрушения или связывания естественных антимутагенов клетки. Снижение стабильности ДНК за счет частичной денатурации может быть одной из причин усиления мута-

генной активности химических веществ (Салганик и др., 1973; —tirVi±-¡—19stf;—¡íohu металлов могут воздействовать на ЛИК не только при непосредственном контакте, но и в результате изменения репарационных процессов в клетке (Patón, 1973, 1992; RoMson, 1982), чале металлы подавляют репаративный синтез ДНК.

Действие ионов ТМ на хромосому происходит, по-видимому, следующим образом: ионы металлов могут атаковать хромосому по всей ее длине, однако наиболее доступные для них слабые места - с менее устойчивыми белками или с меньшим количеством какого-либо белка. Еце более сильное действие мутагена моасет проявляться в местах, лишенных белка, - ^репрессированных локусах, Восстановление мутационных поражений в дерепрессированных локусах но происходят (Тарасов, 1976, 1382).

Цитогенетическая активность кадоил изучена у рабочих кадмиевого производства. Стаж обследуемых колебался в широких пределах - от 5 месяцев до 22 лет. В общей сложности было проанализировано 6683 метафазных пластинки лимфоцитов периферической крови 20 человек из двух групп обследуемых: а) в I группу воали работники управления завода, не имеющие непосредственного контакта с ТМ, - 5 человек; б) во П группу вошли рабочие кадмиевого цеха - 15 человек. В кадмиевом цехе занято всего 40-50 человек.

В результате цитогенеткческого обследования установлена широкая вариабельность в уровне цитогенетическях повреждений рабочих. Уровень ХА колебался в пределах от 5,3+1,5$ до 29,77+ • 6,6$; в контрольной группа уровень ХА варьировал от 0,95+0,95$ до 3,0+1,2$. Патогенетический анализ позволил выявить характер хромосомных нарушений, Обнаружены как хромосомные, так п хрома-твдные аберрация. В основном отмечено повреждение хромосом группы В, С - субмзтацбнтркческие хромосомы. Распределение аберраций по типу нарушений • показало существенное преобладание аберраций хромосомного типа, их в 2 раза больше по сравнению о хроматидными.

j Анализируя вшпеуказаннш материалы, мы полагаем, что кад-' ашй мокет вызывать аберрация на всех стадиях платочного цикла, = но наибольшую активность ои проявляет в фазах о1 > В, вызывая

аберрации хромосошюго типа, а его дойстам п фазе 02 шшуцпру-¡ от аберрация хрепатидного типа. По нашим материалам следует о читать , что. Od болоо активен в орэ&штетичвсясз рзо ютоза.

Анализируя данные контрольной группы, мы видим, что количество аберраций хромосомного типа и хроиатидного типа одинаковое (1:1).

Анализ метафазных пластинок рабочих Cd -производства позволил выявить особое состояние некоторых хромосом - "опушенных". Мы их ко включили в общий спектр ХА, но считаем необходимым этот факт отметить. Видимо, природа их появления связана с нарушением целостности структуры ДНИ, вызванным дестабилизацией хромосом, и нарушением биосинтеза белка в клетке. 1"а полагаем, что причиной дестабилизации хромосом является их деепкралкзация. Ряд £2тороз (George, 1978) считают, что деепкрализация хромосом, вызванная химическими агентами, связана с удалением белков матрккса в специфических участках хромосом. В случае подавления ионами металлов синтеза белков одни и те ке участки хромосом остаются депрессироваюшма в течение продолжительного времени, а другие репрессированными. Дерепресскрованные участки хромосом 'являются более доступным и уязвимыми для Cd. По этой причине в дерепрессированных локусах чаще происходит поражение хромосом как на стадия G1f так и в стадиях s. Gg. Как мы отмечали ранее, у отдельных индивидов, контактирующих с Cd, уровень ХА превышает контрольные показатели в 10 раз (донор )Ь 5). Особый •интерес вызывает появление фрагментации хромосом в отдельных ме-тафазах в количестве до 1,5$.

. Цитогенетический анализ рабочих кадмиевого цеха позволил выявить прямую корреляцию между уровнем ХА и профессией, степенью и характером контакта с Cd. У аппаратчиков и катодчгсков уровень ХА - свыше 15$, у отдельных индивидов доходит до 26,2$ и 31,8$; представители других профессий имели уровень ХА ниже 15$ (от 10$ до 12$). Анализ полученных материалов позволил выявить зависимость "время-эффект": чем больше стаж работы, тем выше уровень ХА. Особенно ярко это проявлялось у. аппаратчиков.

Все образцы крови рабочих, контактирующих с та, и лиц контрольной группы помимо обычного цитогенетического анализа подвергались дополнительному воздействию солей соответствующих металлов ин витро. Эксперименты по индукции ХА соответствующими солями та однозначно у всех индивидов показали повышение ХА. Полученные данные свидетельствуют о том, что дополнительное введение солей ТМ способствует переходу предмутационных событий, об-

разевавшихся в хромосомах рабочих в производственных услспиях,

в истинные мутации, что согласуется с литературными данным;! (Дубинин, 1970, 1978,. 1979).

Особая роль в жизнедеятельности организмов принадлежит ыо-

• либдену (Мо), в малых дозах он включается в метаболизм клетки. Молибден входит в состав многих ферментов и коферментов. Дефицит молибдена в организме приводит к торможению физиологических процессов, увеличение его количества в клетке также приводит к нарушению физико-химических реакций. Установлено, что чрезмерные дозы молибдена могут увеличивать активность молибден-энзима ксантиноксидазы (staith. et al., 19BJ), что приводит к увеличенному образован™ мочевой кислоты.

В задачу работы входило патогенетическое обследование группы рабочих молибденового цеха с учетом стала, возраста и профессии. Со стажем до I года обследовано 5 человек, со стажем свыше 5 лет - 7 человек. Анализ цитогенетических эффектов, выявленных 'в группе рабочих со стажем до I года, показывает сирокую вариабельность уровня ХА в зависимости от индивидуальной чувствительности и профессии (от 9,3+2,0$ до 23,4+3,1$). Прямой корреляции от возраста и продолжительности контакта с Мо яе обнаружено. В спектре хромосомных аберраций у рабочих молибденового производства доминируют аберрации хроматидного типа по отношению к хро-мссомнкм.

Цитогенеткчесгсий анализ группы рабочих со стажем сзысэ 5 • лет показывает, что в этой группе кет четких зависимостей меяду возрастом, стажем работы и уровнем ХА. На первый план выступает индивидуальность генс?,;а.

Данные уровня ХА у рабочих молибденового цеха дпют возможность выделить группу "повышенного риска" и определить лиц, для которых контакт с Мо не представляет особой генетической опасности.

Кобальт относится к макроэлементам, он в микродогах активи-

• рует деятельность ферментов, регулирует' внутритканевое дыхание. В ряда работ показано, что под действием Со точность ДНК репликации значительно уменьшалась (Miyaki ot al., 1979),. увеличя-

! валось ошибочное включение шкошлемелтарпше нуклеотидоз ДЖ-по-: лимеразой.

В задачу исследований входило изучение гзеотокепчеегшх'эффектов у рабочих кобальтового производства.

- 18 -

Цктогенетически обследовали 18 рабочих (из 70 работающих в Co-цехе) в возрасте от 27 лет до 61 года со стажем работы от I месяца до 24 лет (в контроле - 12 человек).

Проанализировано 2130 метафазных пластинок рабочих Со-цеха, 1631 метафазная пластинка - у лиц контрольной группы. Из полученных материалов следует, что Со индуцирует так же, как и Cd, широкий спектр ХА, причем в равных количествах представлены аберрации хромосомного и хроматкдного типа. Можно полагать, что Со в равной степени действует в стадии о.,, S, 02 митогического цикла клетки. Следует отметить, что у рабочих Со-производства мы отмечаем белее узкий предел различий ХА (2,3+0,48$ - 6,0+2,37$). В рамках обследованной популяции рабочих необходимо отметить широкую вариабельность чувствительности генотипов, фиксированную по тесту ХА. Анализируя спектр ХА, индуцированный Cd, Со, Mo, необходимо отметить отсутствие хроматидных и хромосомных обменов» что подтверждает наше предположение о блокаде процессов образования сложных хромосомных перестроек та. Зто событие можно объяснить тем, что T.V! реагируют со свободными концами молекулы ДНК и тем самым препятствуют образованию обменов (Бала и др., 1979; Leonard, 1975» 1982, 1984). Это генетическое явление аргументируется данными о наличии в теломерцых участках хромосом сверхизменчивых нуклеотидных последовательностей (Рогаев, 1987). Видимо, существованием таких гипервариабельных миниповторов объясняется доминирование делеций в спектре ХА, индуцированных ТМ.

Обобщая все цктогенетические данные, необходимо отметить, что у рабочих металлургического производства в большей степени проявляется индивидуальность и специфичность, а в некоторых случаях особая устойчивость генотипа к воздействиям ТМ.

5. Закономерности формирования ХА, СХО и характеристика СПГ в лимфоцитах рабочих в зависимости от продолжительности контакта ста

Следующим- этапом исследований явилось сравнение чувствительности методов ХА и СХО для выявления генетических повреждений при воздействиях на человека ТМ. Выполнены исследования на лимфоцитах периферической крови здоровых доноров (7 человек), не имеющих контакта с та, и рабочих металлургических предприятий: рабочие Мо-цеха - II человек, Со-цеха - 18 человек, Cd -це-

ха - 18 человек. Материал .для анализа по тесту ХА и СУ.О получали одновременно. Кроме того, учитывали изменения показателей средней продолжительности генерации лейкоцитов (СНГ), которые отражают кинетику меточного цикла. В качестве мутагенов для обработки культуры клеток рабочих in vitro брали соли та в следующих концентрациях: СоС12.бН20 - 1СГ5 М; (Ш4)2М003'4Н20 - Ю-5 М; CdClg - Ю-'"' М. Соли металлов вводили в культуру одновременно с ФГА. На 24-м часу инкубации клетки двукратно отмывали от среды, содержащей мутаген, и вводили свежую культуральную среду. Стандартный мутаген - 4-кктрсхолин-I-оксид (4НХ0) - использовали в дозе 2,5-Ю-7 М при экспозиции I час через 22-24 часа после введения ФГА.

На р::с.'1 обобщены данные по исследования спонтанного уровня CXQ и ХА, а такке скорости прохождения генерации (СНГ) лейкоцитов рабочих, кроме того, приведены данные формирования СХО в культивируемых in vitro лимфоцитах рабочих и здоровых доноров при воздействии соответствующих солей ТМ и стандартного i^-таге-на 4IK0. Из данных следует, что спонтанный уровень СХО был повышен во всех 3-х группах рабочих по сравнению с контрольной. На фоне спонтанного уровень СХО, индуцируемый солями металлов in vitro, значительно возрастал.

Чувствительность к 4НХ0 по показателю СХО была несколько повышена в клетках рабочих кобальтового цеха и особенно у рабочих кадмиевого производства, у рабочих молибденового цеха такой закономерности обнаружено на было. Эти данные в определенной степени коррелируют с результатами по относительной устойчивости ДНК к 4НХ0: так, почти у половины обследованных рабочих кобальтового цеха (6 из 13) и почти у всех рабочих молибденового цеха (5 из 6) количество возникающих однонитевых разрывов ДНК. было меньше или равно количеству таких разрывов в клетках нормальных доноров, образующихся при воздействии 4НХ0. Возможно, это сввдетольствует о тем, что восстановление повревдений ДШС, индуцируемых 4НХ0 и молибденом, осуществляется неодинаковыми путями, тогда как кобальтиядуцируемьга повреждения репарируются подобно повреждениям ДНК, индуцируемым 4НХ0.. i Необходимо отметить, что формирование СХО в клетках рабо-; чих во всех случаях при индукции мутагенами и без них происходило на фоне значительного сни&эяия уровня СНГ лимфоцитов (рисЛ).

Рисйнпы ^ 4

фпРпиРпвдииЕ СХ0(А1ЕПГ(Б)и ХД (В) в

пнпфацитях РАБОЧИХ, КОНТАКТИРУЮЩИХ 0 ПОЛЯМИ ТЯЩЕЛЫХ МЕТАППОВ ПРИ воздействии мутдгЕН0В:а)-«0нтрпль; £)-4НХО}

в)-СвЬг)-Сш

схо

22 20

¿5 /4 1а /о 8 6 4

о. О

КОНТРОЛЬ СЙ-ЦЕХ Са-ЦЕХ МО-ЦЕХ

б

т

I

4

в2 в

т

тр£1

й

I

1

I

I

I

I

1

_______*-

"-•г.- Б

в

I

^Ддннъшпа СХО. :

X А ~СРЕДН£ПОПУЛЯЦН0ННЫЕ.

ЕЕЗ-Ш Cd.Co.no.

СИЗ-КОНТРОЛЬ.

Проведено изучение спонтанного и индуцированного уровня ХА

_И-СХО, СПГ в Л1^;сц1'.тах-рабоч;1Хт-4сак-та1ч?:грую:^.1^с--С;11—Со-,—.Мо-,-

в зависимости от стажа работы. Показано, что у рабочих со стажем до I года (!Ло-цех) показатель ХА и СХО значительно превышает соответствующий уровень ХА и СХО длительно работающие рабочих (стаж больше 10 лет).

Кобальт из всех исследованных металлов оказался наиболее "мягким". Повышение в 1,5 раза отмечаем лишь в тесте СХО в варианте со станем более 1С лет.

Исключительно высокая стабильность была выявлена у рабо-

• чих Cd-цеха. Среднепопуляционный спонтанный уровень составил 15,52+1,10/» ХА, а индуцированный - 18,58+1,05$ у рабочих со станем до 10 лет, а у рабочих со стажем более 10 лет спонтанный и индуцированный характеризуются одним показателем уровня ХА -22,50+1,49$; такая же аналогичная картина наблюдается по тесту СХО со стажем до 10 лет и более; СХО спонтанный и индуцированный - близкий, соответственно равен 17,85 и 22,6 обменов на клетку. Можно предположить, что в процессе хронического воздействия

. та наблюдается некоторая стабилизация спонтанного уровня и определенная активизация восстановительных процессов, приводящая к ' , репарации части первичных повреждений, реализующихся в ХА и СХО. Эти данные характеризуют процесс некоторой адаптации рабочих как результат длительного контакта с мутагеном. Вместе с тем, была выявлена широкая вариабельность в индивидуальной чувствительности по исследуемым параметрам. Так, у рабочих Мо-цеха со стажем до I года уровень ХА колебался в пределах от 4,4$ до 23,9$. Уровень СХО находился з пределах 8,2-9,3 обменов на клетку. Б груп-. по с 10-лоткш1 стажем работы показатели СХО и ХА были более монотонными и варьировали в пределах среднего уровня: от 1,5$ до 8,6$ в тоста ХА и от 8,9 до 14,5 обменов на клетку в тесте СХО. Резкие индивидуальные отличия у рабочих со станем I год наблюда-

• лись также по показателям СПГ.

Анализ индивидуальной чувствительности рабочих кобальтового производства характеризуется относительной "монотонностью". Закономерностей в уровнях ХА в зависимости от стажа работы не обнаружено. Со стажем от I до 38 лет у рабочих различных специальностей спонтанный уровень ХА был сравнительно низкий, не превышая в среднем 3,7$, по тесту СХО данный показатель находился

на уровне контроля. Одновременно у всех рабочих наблвдали снижение СНГ с 1.5 до 1,2.

Тегам образом, обнаружена мутагенная активность Сй, Со, Мо. Важным является факт определенной генетически детерминированной резистентности отдельных индивидов к исследуемым загрязнителя.",'. Резкие кздивидуальнне отдлчкя по чувствительности к мутагенам могут быть использованы при профессиональном отборе лиц для работа на металлургических предприятиях. Это позволит исключить из штата лиц, характеризующихся повывенным риском неблагоприятных генетических последствий.

При сравнении двух критериев цитогекетическсй оценки - теста ХА и СХО следует отметить, что тест ХА оказался более чувствительным, чем СХО. Так, число ХА при спонтанном п индуцированном уровнях (в случае с Мо и са) на фоне контроля соответственно увеличивалось в 4-5 раз, а по тесту СХО это увеличение но превышало 1,5-кратного уровня.

6. Оценка сепаративных процессов в лимфоцитах рабочие, контактирующих с тяжелыми металлами

Оценку репаративных процессов проводили по трем показателям (Засухина, 1987):

I. Ресинтез разрывов ЛПК, индуцированных солями соответст- : вукдих ТМ и стандартным мутагеном 4НХ0. • 2. Реактивация вируса осповакцшш.

3. Ивдуцированный мутагенез вируса под действием тех же мутагенов.

Результаты этих исследований могут являться показателем чувствительности'ДНК, формируемых в процесса длительного контакта с мутагенами, интенсивности репаративща процессов в целом или отдельных их этапов, а также характеризовать состояние гл». чевых систем клеточного гомеостаза в условиях такого контента.

В экспериментах использовали культуру, клеток человечоехпх ! лимфоцитов, полученных из периферической крови доноров, прпчаа в случае здоровых доноров использовали ТМ в концентрациях, практически не вызывающих индукции разрывов ДНК. Поскольку исследуемые концентрации солей Со и Мо не вызывали разрывов ДНК, уровень рескнтеза, регистрируемый хроматографаческим методом, протекал без изменений.

- 23 -

ДНК лимфоцитов работах оказалась у больпилстза сбсдадовая-1шх (10 из 13 - т> опытах с кобальтом, 5 из б - в опытах с молибденом) высокочувствительной по -доследуемому критерии: в ней возникало значительно большее чхсдо разрывов, чем в ДКК здорозых доноров (рио.2, 3).

Ресинтез разрывов ДНК у больпинстза обследованным рабочих в опытах с кобальтом был значительно подавлен; только в 2-х случаях из 13 происходило восстановление структуры ДНК до уровня контроля; у 4 рабочих из 13 наблвдзлось полное подавление процесса рескнтеза; в ряде случаев приводило к дальнейшей деградации ДНК. У отдельных рабочих ДНК клеток характеризовалась некоторой устойчивостью к действия мутагена; так, почти у половины обследованных рабочих кобальтового поха (6 из 13) и почти у всех обследованных рабочих молибденового цеха (5 из 6) количество возникающих однонктевых разрывов ДНК было меаьае или равно количеству тгоенг разрмюв ДНК в клетках нормальных доноров, образующихся при воздействии 4БХ0.

Нами таюхе бшл обследована 15 рабочих; контактировавших с са от I года до 23 лет. При исследования реактивации и стабильности вируса оспозакцины (ОВ), помещенного а кровь этих рабочих, под воздействием сас10 (10~4 И, 20 час. экспозиции),

сг с

4НХ0 (10 М, I час экспозиции) и стандартного мутагена УФ-типа било заявлено, что в лимфоцитах 13 из 15 обследованных рабочих наблюдалось сиигенио реактивации вируса под влиянием 0<1С12 в срагпзнии. с 4НХ0. Позкзался в 3-4 раза показатель индуцированных металлом мутаций вируса (в отличие от вируса, культивируемого в лимфоцитах здоровых доноров). У 2-х рабочих со стажем ме-. ше 1,5 года наилпя&гась высокие показатели как реактивации вируса, трк а уровня дедуцированного мутагенеза^

Та*иШ образом, результаты исследований свидотельстг-уот об пнгибирсвшш репарации ДЕС в ¿згифоцатах рабо^тх са -производства.

На рпс.4 предстаьяеш: дашие по реактивации а цутабильяое-тз г»руса ОВ, обработанного солями Со, Мо, а также 4НХ0 з мал-фещьтах рабочих, коцтактиругпдас с соответствующими ТТЛ. Из полу-ч-зшшх давних следует, что в лимфоцитах рабочих кобальтового цеха аа&гаалось следушео: I) повшасшгй уровень спонтанных мутаций вируса; 2) повышенный показатель пндуцпровашшх металлом му-

Рисунок н

возникновение и pechhte3 иидупировлиных 4,-ИХО и QaUfz разрывов ДНИ в лимтаиитях РАБОЧИХ (/-&),КОНТАКТИРУЮЩИХ С OaCh В ПРОЦЕСсе ПРОИЗВОДСТВА. Т-НПЛНЧЕОТВа АВУИИТЕВОИ АНИ (% от контроля) в

лнмфацнгях при воздействии 4-НХО (а,Я) и С о Oh (6, г); а - сразу после

д.енствня мутагена, 6- через r4 ч. инкубации в среде роста; lh/ibpo-лютные значения увеличения или убыли количептрп двунишои АНН У тех же доноров после получения ими в течешщ меряна вит-С

к

g&îsaqmg

Авуннтевая дни, с/эогнантр. Sä* Я Г* fe ® to <ö

I SS

5

™rinmVmimTmirvnr

i

ww'swrn

^ . 1

Q

! f _

x*»x-xi

Wii

г Со СО

IS3I1

¿HS £ ь ^ ^ t7i 5:

SI«

' I

§

i£ x О

a:

N

ç £

РЕПНТИВПиия И ИНАУЦИРОВПНИЫН мУТЯГЕРЕЗ

вируса оипптншшы после вашиптвня ролей

МОАНБЛЕНЯ ЫДБПЛЬТЯ И4г~НХ 13-

т-тглфацнты здоровых лонарав П-ПИМ фон НТЬI РАБОЧИХ, НПНТШЛНРУШЩИX С СОЛЬЮ кОБЛПЬТЯ.

Ш~пимфпиигы рпвачнху ывцтпитнртщих е солью МОЛИБДЕНА.

1-Внруп, обрд&атдниын салью ипбяпьтя * О,-виру с, озрАБатмньщ 4-ИКО

3-ВИРУС, ОйРДБПТДННЫИ СОЛЬЮ МОЛИБДЕНА.

4-ОПОНТДННЫИ ВИРУС .

здоровых доноров); 3) в лимфоцитах 4 из ¡3 рабочих была снижена реактивация вируса; 4) в лимфоцитах большинства обследованных рабочих (у 9 из 13) развивалась некоторая устойчивость к действию 4НХ0, что выражалось в более высоком уровне репродукции вируса по сравнению с клетками здоровых доноров; 5) показатели мутагенеза вируса, индуцированного 4НХ0, в лимфоцитах рабочих практически не отличались от показателей спонтанного мутагенеза вируса.

Таким образом, было обнаружено ингибкрованне репарации ДНК в лимфоцитах рабочих Со-цеха.

У рабочих молибденового цеха (рис.4) в большинстве случаев (5 из 6) реактивация вируса при воздействии соли этого металла была снияена, при этом обработка культивируемых лимфоцитов рабочих этого цеха 4НХ0 не приводила к снижению в них выживаемости вируса. В лимфоцитах рабочих и молибденового, и кобальтового цехов наблюдался повышенный уровень спонтанных и индуцированных мутаций вируса. При воздействии 4НХ0 уровень мутаций вируса был •повышен при отсутствии изменений показателя реактивации вируса, что, как и в опытах с солями Со, свидетельствует о неспособности клеток восстанавливать предмутационные повреждения ДНК.

„ Исходя из вышеизложенного, мокло заключить, что в группе обследованию рабочих, контактирующих с солями Со, "о, са, наблюдалось повышение чувствительности ДНК лимфоцитов к действию содей . соответствующее металлов и снижение способности к восстановлению разрывов ДНК. Эти данные коррелируют с показателем реактивации вируса.

Данные по повышении реактивации вируса в сочетании с показателями повышенного мутагенеза могут свидетельствовать о наличии в клетках человека пндуцибельяой, протекающей с 'ошибками, репарации ДНК. Гакам образом, в процессе длительного контакта с солями та у некоторых рабочих не развивались адаптационные механизмы к та, что выражалось в повышении чувствительности ДНК к этим соединениям и снижении репарационной активности, а в ряде случаев формировалась устойчивость к действию других мутагенов и, в частности, к 4НХ0.

7. Использование аскорбиновой кислоты и ретинола, как антицутагенов в эксперименте на животных при воздействии тяжелых металлов

7.1. Эксперименты на дрозофиле

Результаты опытов по изучению антимутагенного действия витаминов А,'С, (А+С) представлены в табл.I.

Из данных таблицы следует, что коэффициент защиты зависит от: I) срока введения витаминов: превитаминизация во всех случаях более эффективна, чем поствитаминнзацкя; 2) концентрации мутагена: антиг^утагешое действие витаминов более ярко выражено при действии низких доз солей ТЫ, кроме того, следует отметить, что комбинированное действие комплекса витаминов (А+С) обладает более сильным антимугагенным действием, чем индивидуальные вещества.

7.2. Эксперименты на животных

Антимутагенное действие витаминов А, С и их комплекса (А+С) изучали в тесте на индукцию ХА в клетках костного мозга крыс линии Бистар, производя фиксацию через 24, 48, 72 и 96 часов. В результате проведенных экспериментов можно сделать следующие выводы:

1. Индивидуальное действие витаминов, равно как и их комплексное воздействие, в большей степени проявлялось в вариантах превитаминизации.

2. Коэффициент защиты был вьше при индукции мутаций малыш дозами солей ТМ и снижался при увеличении их дозы.

3. Мшссимальная защита наблюдалась при фиксации на 48-72 часах для всех ТМ.

4. По уровню защиты исследуете ТМ могло выстроить в следующий ряд - ел 7 Мо г Со, соответствие которому сохраняется при действии как индивидуальных витаминов, так к их комплексов.

Таким образом, исследуемые витамины как при индивидуальной, так и при совместном (А+С) их действии проявляют антимутагешшв свойства, предотвращая возникновение спонтанных и индуцированных мутаций в половых и соматических клетках аивых организмов, находящихся на различных филогенетических уровнях развития.

Таблица 1. Антиьутагеншй ©Щек? штодяоэ /А, С, (А+С)/ в тесто ДЛМ у дрозофила

Соль С(Ы2 Со304 (НИ4)2Ыо03

Обработка витамином превит. постввт» прсеит. поствит. превит. поствит •

Дозы та 6/Д и/л б/д и/д б/д м/д б/я м/д б/д м/д б/д

Кд+вит.С Кд+ВИТ.А Кд+вит.(А+С) 55,6 62,74 70,55 63,29 70,1 84,26 34,43 46,98 59,85 36,65 45,34 70,03 44,95 47,52 62,99 48,45 54,51 61,71 28,44 35,14 48,31 35,65 44,22 56,57 55,4 56.2 64.3 79,8 79,2 61,1 26,5 30,1 45,8 39,6 46,5 52,8

Примечания:

превит. - превитаминизация, поствит. - поствитаминизация; Кд - коэффициент залиты (в %)', б/д - большие дозы.

с<и2

СоЗО^ -(Ш4)2Но03 -

0,007 Г 0,07 Г 0,04 г

ц/д - малые дозы

- 0,002 г

- 0,03 г

- 0,02 г

г» \о

- зо -

8. Разработка подходов к заште гелома человеке от мутационных воздействий тетслых металлов с помощью аскорбиновой кислоты и ретинола

8.1. Анализ патогенетических эффектов тяжелых металлов к их модификация АК и ретинолом у. рабочих, контактирующих с ТМ .

Представляется крайне ватным разработать подходы к сниже- . кшо 1Аутагенных эффектов ТМ. Реиению этой задачи была посвящена серия наблюдений, в которых исследовали индукцию ХА и СХО в лимфоцитах рабочих до и после приема АК, ретинола к одновременного приема двух витаминов (А+С); причем АК рабочие принимали ежедневно в течение месяца по 500 «г, ретинола - екеднеы;о по 33.000 М.Е, Исследовали рабочих со стажем от 5 месяцев до 23 лет. Оценка протекторного действия витаминов проводилась по критерию ХА я СХО у рабочих до приема витаминов и после. Уровень ХА у рабочих молибденового цеха после приема витаминов уменьшился в 1,52 раза. В эксперименте аддукция молибденом резко повышает уровень ХА за счет возрастания аберраций хроматидяого типа. Индуцированный уровень ХА в лимфоцитах крови группы рабочих до воздействия АК составил 27,65+1,39$, в то время как .спонтанный уровень ХА был равен 12,24+0,97$; введение АК саизидо вддуцирозанкай уровень ХА до 17,04+1,0652, а спонтанный - до 6,0+0,725?. Коэффициент защиты состарил в первом случае а 1а чхуо коэффициент за-

щиты был значительно гшзе - 50,Раткнол 1о г±-го дает коъЩа-циент защиты несколько ниже - ?2,б£.

Б результате анализе с/гдзлькых после яриеш АК и ретинола отмечен*! Шигвядуалъйкэ равлк^чя: у 4 яз . 5 рабочих коэффициент защиты э среднем сост^вкд 505?, а у I из 0 прием А!' не дал никакого гзфсжта« Авалогзздыр н2«1*!эдэни ксслэ

ыа ретинола. ?/:* -¿ыделляи группу ¿глочих Мо~цеха (§ ч^га^). со ста&ш от 0 кесяцеь дс 1,5 Посде приема АК быта 1>3яйруь<<~ и-- модификация пр^цоссов образована.! спонтанного, так п зш-дутдаровянного уровней ХА. Б 3-х стучала наблюдалась етггьожч&о-ки достоверно сякзешэ сяонганной чиекма» ХА £ 2-3 Б фоцита< 4-х рабо~VI 0- гя возросла устоь -»хосгь и задуггрт®«-щ 1а - деаижгз мо&- «дага еммог^я в 2- '.,5 с

ентом защити от 27,6$ до 55,05, а в лимфоцитах одного рабочего вообще не б^стггбната'дено-аначимого-актиздкагенног_о__э ФФс;:та АК. Очевидно, это свидетельствует о существовании индивидуальной генетической реакции организма человека на действие АК. Следует отметить, что снижение спонтанного и индуцированного уровней структурных перестроек хромосом происходило без изменения их спектра. Этот факт подтверждает предположение о снижении АК количества первичных повреждений ДНК вследствие снижения проницаемости клеточных мембран или интенсификации репарационных процессов, а, возможно, и того, и другого одновременно.

Коррекция цитогенетических эффектов кобальта аскорбиновой кислотой и ретинолом проведена у 13 рабочих кобальтового цеха а 12 человек в контроле. В спонтанном варианте уровень ХА в среднем равен 3,344-0,58% до приема АК а ретинола, после приема витаминов частота хромосомных перестроек падает. Защитный эффект АК и ретинола колебался в пределах от 12,до 48,8$, причем при комплексном воздействии витаминов (А+С) защитный эффект мики-калышй - 12,6%, а защитный эффект одного ретинола был значительно вшэ - 48,8*. Интересно заметить, что комплекс витаминов (А+С) у рабочих кобальтового цеха показал минимальный защитный эффект, в контрольной группе он в 3 раза был выше.

В варианте индуцированного цутагеиеза протекторное действие Бнтамивов было значительно вше, оно колебачось в пределах 40,9^-63$, иаксимадьясе защитное свойство (коэффициент защиты 74,5%) было обнаруэено в контрольной группе при одновременном Еспольэованшг даух витаминов.

Коррекция цитогенетических эффектов са аскорбиновой кисло-то! и ретинолом проведена у рабочих са -цеха (12 человек) а контрольной группы (9 человек). После приема Битагляов частота ХА сетзалась в 2-3 раза. Самый высокий коэффициент защити показал ратаяоя - 65,3£ л значительное протекторное действие показал нотгекс витаминов (А+С) - 44,6#, что превышает данные в вариад-таг с Ио, Со,

Из представленных материалов следует, что витамины достоверно сшааэт как "спонтанный" для данных условий производства, так и экспериментально индуцированный ионами та в культивированных 1а 7±*го а 1п лимфоцитах уровень ХА.

Оцепка в тесте СХО антимутагенной активности АК и ретинола показала, что АК достоверно сшааэт как спонтанный, так и инду-

цированный уровень ХА и СХО. Критерий оценки СХО оказался менее чувствительным для выявления защитного действия АХ, чем тест ХА. Спонтанный уровень СХО был снижен на 16$ (а по тесту ХА коэффициент защиты составил 62,7$), индуцированный - 6,5/1, в то время как по тесту ХА коэффициент защиты составил 46,5$.

Нами также проведены исследования оценки в тесте СХО антимутагенной активности АК, ретинола и их комплекса (А+С) в культивируемых 1а у1уо, 1п у1Лго лимфоцитах рабочих кадмиевого цеха.

Из экспериментальных материалов следует, что протекторные свойства витаминов А, С, (А+С) убедительно фиксируются по тесту СХО. Коэффициент защиты находится в спонтанном варианте в пределах 21,5$-45,3$, он более выражен, чем в индуцированном - последний продемонстрировал защитный эффект 38,9$, причем'наиболее выраженный занятный. эффект приходился на комплекс витаминов (А+С). Этот факт характерен также и для спонтанного варианта, здесь комплекс витаминов (А+С) дает коэффициент защиты 45,3$. АК приблизительно при спонтанном и индуцированном варианте имеет одинаковый защитный эффект: соответственно, он равен 30,9$ и 28,0$. Ретинол в спонтанном варианте показал занятный эффект 21,5$, а в индуцированном - более выраженный, 31,7$. В контроле АК и ретинол дают одинаковый эффект: коэффициент защиты, соответственно, составил 16,4$ и 17,7$, а комплекс (А+С) достигает . максимума в контроле - 48,9$ В целом, если сравнить коэффициент защиты, выявленный по тесту ХА у рабочих, то он более высокий, чем по тесту СХО. В опытах по индуцированному мутагенезу во всех вариантах выявление коэффициента защиты по тесту ХА также оказалось более эффективным, чем по тесту СХО.

Из всех приведенных материалов можно заключить, что тест ХА по выявлению протекторного свойства витаминов более показательный, чем СХО. Исследуемые витамины проявили высокие прэтекторнко свойства, но уровень защиты индивидуален и заззент от особенностей генотипа..

8.2. Стимуляция репарации ДНК аскорбиновой кислотой -

у рабочих, контактирующих с Мо

Нами была исследована способность клеток к восстановлению . повреждений ДНК, индуцируемых солями Мо, с которыми рабочие коя-

тактировали ежедневно.

-Мы-изучалн-влидние^АК__на__один из этапов репарации ДНК - процесс формирования разрывов ДНК и их ресинтез в лимфоцитах рабсь-чих до и после приема АХ.

Разрыва ДНК, возникающие при действии молибдена, как и разрывы ДНК, индуцированные другими ТТ.!, например, кадмием, не восстанавливались ни у тех, ни у других. После приема АК устойчивость ДНК клеток рабочих к действию мутагенов существенно возросла. Кроме того, наблюдался процесс стимуляции ресинтеза разрывов ДНК: 4НХ0-индуцлров&чкые повреждения восстанавливались практически до уровня контроля и наблюдалась четкая тенденция к восстановлению повреждений, индуцированных солью молибдена. Следовательно, произошла определенная стимуляция процессов репарации ДНК.

На рис.3 демонстрируются индивидуальные различия в чувствительности ДНК лимфоцитов рабочих при воздействии 4НХ0 (а) и соли Мо (б). Аналогичные закономерности нормализации вредных эффектов солей Мо были выявлены такая методом реактивации и стабильности вируса осповакцины (ОБ), который дает оценку состояния репарацио-онной активности клеток. Представлены средние данные по реактивации и мутабильностц вируса ОВ в лимфоцитах рабочих, контактирующих с солями lío, и влиянии на эти показатели АК (рис.5).

На рис.5 приведены данные по спонтанному и индуцированному уровням мутагенеза вируса ОВ, из которых видно, что как спонтанный, так и индуцированный обоими мутагенами уровни стабильности вируса в лимфоцитах, контактирующих с солями Мо, были повышенными. АК вызывала снижение процессов накопления мутаций, что говорит об эффективности восстановления предмутационных поврездений ДНК.

Таким образом, АК обладает высоким протекторным свойством, хоторое мы регистрировали по критериям формирования спонтанного и индуцированного уровней ХА и СХО, по стимуляции репаративной активности клеток, а также по показателям реактивации вируса ОВ.

8.3. Стимуляция репарации ДНК аскорбиновой кислотой

у рабочих, контактирующих с Со

На рис.б представлены данные по реактивации и мутабильнос-ти вируса осповакцины в лимфоцитах рабочих, контактирующих с Со,

3: a з: 31

CJ

■V

aJ

•o

^ й _ <3 Л Çj

^ % à ^<0

|p|§5

Sobs r

9

-3V-

S $$ rt!9a

% 'VüÁdtW

тишая mHhzmtivgoxw/

КГ, О 1Л О to Сз Lo Ï3 10 t\í CM »¿ ví ^

S- ^

Сад

mv/зод ß-] 'mmwveouao

VëÂdh'8 ÇlûtïW3l/WW/49

Л

а s о.

> Js

a^L^ i

vu"

öQ ¿CCj >>

W uí ^

SaÜi

api? fe §

b- CJ Uj

5 5: s

£9 i? te S

< > ¿ I

ígggisi

J • f t*

TJ'.'.W

CN

•i •

S

1

1 5

18

I I». I .1 и Ii nil ill 'l.iilrJl I Vi luí. LUJ.

^ & s o S

°/o4tí0AdHd ¡ятмщн/309 B-¡ 'vosöhs я/яннзгпи\гзанЩ\/\ чхиатмвюмяд

к влиянию на эти показатели витамина С. Результаты исследований показали, что в лимфоцитах 7 обследованных рабочих, которые контактировали с этим металлом не менее 10 лет, выживаемость вируса, обработанного 4КХ0 и СоС12, в ряде случаев была снижена по сравнению с выживаемостью вируса в клетках здоровых доноров. Важно отметить, что в лимфоцитах 3 из 7 рабочих (рис. б ) отмечал:: более высокие уровни выживаемости вируса, обработанного 4НХ0. Ото, с одной стороны, говорит о повышенном репаративном потенциале этих клеток, с другой, - об оптимизации условий для ви-рускоГ: репродукции.

Haiti удалось модифицировать процесс реактивации и индуцированного мутагенеза вируса. Это было достигнуто следующим образом. Ежедневно все обследованные рабочие принимали АК в дозе 500 мг в сутга. Спустя 3-5 дней после окончания курса витаминизации, повторно определяли показатели реактивации и мутабильнос-ти вируса. Из полученных данных (рис. 6 ) следует, что в исследуемых лимфоцитах показатели выживаемости возрастали или оставались на уровне здоровых доноров, а спонтанный и индуцированный мутагенез снижался: спонтанный мутагенез с 20-25$ до 11-14$, индуцированный с 40-45$ до 25-30$ у всех обследованных рабочих.

Показатели выживаемости и индуцированных мутаций вируса отражает общую способность клеток-хозяина к репарации повреждений вирусных ДНК, восстановление которых происходит за счет ферментативного аппарата клетки. Эти данные служат интегральным показателе.« способности клетки к восстановлению структуры ДНК, тогда как ресинтез индуцированных разрывов клеточной ДНК является одним из этапов многоступенчатого процесса восстановления повреждений, возникающих при действии различных мутагенов.

На рис." 2 представлены результаты, полученные при исследовании лимфоцитов после получения рабочими 500 мг АК в сутки в течение месяца. Гистограммы, отложенные вверх по оси абсцисс, показывают увеличение, отложенные вниз - снижение абсолютного • количества двунить^ой ДНК (в $) в лимфоцитах каждого донора после приема витамина С при тех же мутагенных воздействиях (4НХ0, СоС12).

Введение витамина С,у больпинсгва рабочих (у. 5 из 6 пра действии 4НХ0 и у 4 из 6 пра действии СоС12) окгзывадо полозитмь-. кое влияние на окин из этапов процесса репарации, повышая устой-

~члш>ить ДНК-и-акттаадию-ггршасда "ресинтеза. Вместо с том» эти данные отражают один из этапов репарации ДНК, тогда как результаты по реактивации и индуцированному мутагенезу вирусов указывают на оптимизацию репарации ДНК в целом после введения АК.

8.4. Стимуляция репарации ДНК аскорбиновой кислотой

и ретинолом у рабочих, контактирупцих с кадмием

Повреждения ДНК, индуцированные солями кадмия, относятся к труднорепарируеиым повреждениям. Било установлено, что при постинкубации клеток восстановление повреждений ДНК, вызываемых Cobi2, происходит не полностью, однако в ДНК образуется меньше индуцированных разрывов, если клетки предварительно обработай АК.

В связи с этим представляется важным изучение эффекта антимутагенного соединения АК, ретинола на процесс репарации ДНК в лимфоцитах рабочих, контактирующих с солями кадмия на производстве.

В качестве оценки 'репарации ДНК был использован показатель реактивации и индуцированного мутагенеза вируса осповакцины, а также степень разрывов ДНК и их ресинтез при воздействии на культивируемые in vitro лимфоциты рабочих хлористым кадмием и 4НХ0, У всех 5 обследованных рабочих, которые принимали АК по 0,5 г в течение месяца, была выявлена стимуляция показателя реактивации вируса в лимфоцитах по критерии выживаемости и индуцированного мутагенеза. При воздействии 4КХ0 такой зависимости не было обнаружено.

В лимфоцитах всех рабочих после приема АК при воздействии 4НХ0 наблюдалась некоторая стимуляция процесса ресинтеза ДЕК. При обработке клеток хлористым кадмием этого но наблюдалось.

Таким образом, прием АК оказывает стимулирующее влияние на репарацию повреждений ДНК, индуцированных хлористым кадмием, однако этот эффект не проявляется на этапе восстановления разрывов ДНК.

9. Генетические последствия загрязнения , окружающей среды г.Владикавказа

Острая экологическая ситуация в г.Владикавказе определяется, в основном, неблагоприятным состоянием воздушной среды как

на рабочих местах (завода), так и в целом по городу. В 1991 г. выбросы вредшх веществ в атмосферу от предприятий и автотранспорта по городу составили более 75 ООО тонн в год.

Неблагоприятные воздействия на окружающую среду города оказывают вредные выброси 230 промышленных предприятий, расположенных в г.Владикавказе, площадь которого 220 км' , Tai;ой плотности' промышленных предприятий нет ни в одном городе страны.

На рабочих местах концентрация кадмия в плавильном цехе превышает ДДК в 37 раз, в молибденовом и кобальтовом цехах концентрации соответствующих элементов превыиают допустимые дозы в 1520 раз.

Геохимическим картированием выявлены и прослежены ареалы загрязнений почв различными элементами (загрязнителями являются более 70$ элементов таблицы Менделеева). Центры высоких концентраций всех химических элементов в почве находятся вблизи территорий заводов "Электроцинк" и "Победит".

Генетические последствия воздействия мутагенов (ТМ), как км отмечали ранее, оценивались ДЛМ, уровнем ХА в клетках костного мозга млекопитающих и в лимфоцитах человека, учитывалось количество СХО. При всей своей точности эти методы не всегда могут учесть индивидуальную чувствительность человека, связанную с уникальностью метаболизма веществ у конкретного индивида к действию ксенобиотиков. В связи с тем, что показана мутагенная активность Т!Л в эксперименте в наблюдениях на рабочих металлургического производства, .представляется вашш оценить эпидемиологические характеристики заболеваемости в г.Владикавказе.

9.1. Учет вроадешшх пороков развития в системе генетического мониторинга в популяции кителей г .Владикавказа

Оценка частота врожденных пороков развития (ВНР) осуществлена ретроспектива vi методом на основе анализа архивного материала родильных домов за период с 1981 по 1991 г. (для сравнения взяты данные роддомов за 1963 г.).

В анализ включали все пороки развития, обнаруженные у мертворожденных, киворовдфнных. Все пороки развития, впервые диагностированные у детей в семьях, отягощении* патологической наследственностью, и рождения дот-ей с синдромом Дауна у. ношщщ в возрасто старше 35 лет.учитывали отдельно.

- 39 -

3 соответствии с основными принципами эпидемиологического исследования нами изучено в родильных домах г.Владикавказа (!r3 J,

2, 3) за II-летний период (iáol-i^r-!^—и-тля-еравионая-взяти-

данные за 1963 г.) 72381 рождение, из них 3328 завершились рождением детей с ВГГР. Частота ВНР за этот период колебалась ь пределах от 31,1 до 49,3 на ГСССповорсяденних. Следует обратить внима-нио на показателе! 1953 г., где на 1000 рождений било зарегистрировано 73,07 розденай с ЕГР. Данные следующих лет по сравиеш:ю с 1963 г. снизились значительно, в определенной/степени более или менее стабилизировались. Возможно, это? факт/следует объяснить тем, что в 60-70-ые годы била проведена частичная реконструкция металлургических предприятий города, количество выбросов вредных веществ уменьшилось с 20\раз, но в последукрщие годы технология металлургического производства существенно¡не менялась. За указанный период средний показатель частоты ВлР составил 46 на ICCO рождений. Частота и структура ЮТ нами изучена за период с 1981 .1С 1985 г. на материалах роддома^1гт-3а ''пятилетний период по роддо?ду И I зарегистрировано II754 рездения, из них 694 ребенка о ВП?» в среднем на 1000 рождений 59,0 детей с ВИР. 'Лз всех форм пороков развития пороки опорно-двигательного аппарата доминируют - 21,2 на 1000 новорожденных. На втором месте по частоте встречаемости 'пороки сердечно-сосудистой системы - 8,08 на 1000 новорожденных. ВЛР центральной нервной системы встречаются с частотой 2,3 на 1000 новороадоняых, МВПР новорожденных - с частотой 3,4 на 1000.

Нами проведен анализ по частоте и формам ВПР среди, новорожденных у лиц, связанных и не связанных с вредным производством (контакт мужа и/или яены с тяжелыми металлами или с веществом органической природы - толуол, дихлорэтан, терефталиевая кислота и т.д.). Анализируя полученные материалы, отмечена тенденция роста новорожденных со всеми формами ВПР у лиц, связанных с вредным производством. Во все указанные годы, за исключением 1982 г., наблюдается достоверное увеличение количества ВПР опорно-двигательного аппарата у новорожденных, родители которых заняты на вредном производстве.

Частота ВПР среди мертворожденных в группе лиц, не связанных с вредным производством, варьирует от 2,3 до 5,9%, а в группе лиц, связанных с вредным производством, от 3,1 до 6,0$. Ca-

мая высокая перинатальная смертность у детей, родителя которых связана с Ередпым производством, была в 1983 г. - 14,3$, минимальная в I2S2 г. - 11,5$ и повысилась в группе лиц, не связанных с вредным производством, с 7,2$ в 1981 г. до 11,1$ в 1985 г.

Количество неонатально умерших с ВЛР достоверно возросло к 1985 г., с 10$ до 15$, по обеим группам.

Нарушение репродуктивной функции проявляется разнообразными формами патологии - от первичного бесплодия до разных случаев яе-вынащнваняя беременности. Анализируя материалы, ш видим доминирующее количество внутриутробных потерь у лиц, связанных с ТМ и другими вредными производствами, в среднем это количество потерь за 5 лет составляет 44,4$, тогда как во второй группе - лишь 34,04$. Причем, в течение 5 лет эта показатели стабильны. Количество самопроизвольных абортов и преждевременных родов у лиц, свя-зашшх с вредным производством, в 1,5 раза больше, чем у лиц, не контактирующих с вредными веществами. Таким образом, проведенные исследования показываот существенное нарушение репродуктивной функции жителей г.Владикавказа, фиксируемое в повышении спонтанных абортов, мертворожденных и новорожденных с ВПР.

9.2. Оценка онкологического риска в популяциях

жителей Северной Осетии

Структура смертности в развитых странах, включая нашу страну, характеризуется в последнее время постоянным ростом вклада онкологических заболеваний. Общая доля смертности от злокачественных новообразований в Северной Осетии составляет в среднем 15$.

Специально проведенные расчеты показали, что заболеваемость некоторыми формами оякопатологии в г.Владикавказе тлеет четкую положительную корреляцию с техногенными загрязнениями. Доказательством могут служить материалы обследования рабочих кадмиевого цеха. Цигогенет. .еское обследование рабочих кадмиевого цеха показало высокий уровень хромосомных аберраций (в среднем 1518$), причем отмечен широкий спектр аберраций хромосомного и хро-матидного типа, а также полиплоидия, эндоредупликация, что является типичной картиной для клеток при онкологических заболеваниях. Ретроспективный анализ онкопатологий рабочих кадмиевого цеха за период с 1983 по 1990 г. показал высокий уровень заболезаемос-

та и смертности от онкозаболевания. Из 45 рабочих клеевого цеха за 10 лет умерло 8 человек в возрасте 50-5-". лот. Причинам/.

смертности била рак лигге^^а^печек^ргаем троп нэ умг^-

ших в 1988-1990 гг. нами били цлтогснетнчески обслодовглы ранее (в 1584-1985 гг.). Ми обнаружили у них уровень хромосомных аберраций в среднем 153. .Можно предположить, что онкопатологаи предшествуют хромосомные нарушения, индуцированные в данном случае кадмием.

Ретроспективный анализ онкозаболеваний за период с по

1991 г., по сравнению с данными за 1555 г., показал резкий рост онкопатологии. Если в 1955 г. на ЮСО жителей республики прихо- ■ дулось 4,3 больных, то в 1978 г. их количество увеличилось в 2 раза (8,78 на 1000). а в последующе годы численность больных увеличилась до 15,2 на ЮСО отелей и стабильно деркнтся з течение 5 лет. По навям материалам, мужчины в 2 раза чага белеют, чем женщины.

Таким образом, неблагоприятное влияние вредных факторов окружающей среды на здоровье человека, в индивидуальном и в по-пуледионном аспектах, подтверждено нами цитогснетпчески и в эпидемиологических исследованиях.

ЗАКЛОТЕШЕ

В результате выполненных исследований наш проведена коип-лексная оценка цитогенетическях эффектов ТМ (са, Со, Мо) на различных тест-систем. Выявлена генетическая активность Со и !Ло, показана выраженная мутагенность конов кадмия как в экспериментах на животных, так и в лимфоцитах рабочих металлургического производства.

Показано, что мутагенная активность та зависит не только от их свойств, ко во многом определяется генетическими особенностями организма. Определение индивидуальной чувствительности человека к действию ТМ позволяет разработать критерии отбора рабочих для предприятий металлургического производства. Кроме того, многостадийность мутагенеза, индуцированного та, открывает принципиальную возмонность воздействия на различные его этапы с тем. чтобы ослабить или полностью снять мутагенный эффект с помогал антимутагеяов.

- 42 -

На втором этапе наших исследований разработан подход к снижению мутагенного потенциала Т.М в экспериментах на животных и у ( людей при помощи природных антимугагенов: аскорбиновой кислоты и ретинола.

Б опытах на животных нами показан значительно более выраженный актимутагешшй эффект исследуемых витаминов в вариантах пре-зитаминизации. Этот факт позволяет нам реализовать специальную подготовку лиц для работы с ТЫ, т.е. проводить предварительное "антимутагенное закаливание". Одним из путей такого "закалива- . ния" может быть активация ферментов репарации ДНК и усиление эндогенного синтеза интерферона с помощью АК и ретинола.

На основании проведенных исследований мы предлагаем схему генетического мониторинга для оценки возможных генотических последствий комплексного воздействия факторов внешней среды на организм кителей г.Владикавказа. Реализация элементов атой системы осуществлена путем изучения медико-статистических и популя-ционно-генетических показателей, включивших распространенность, эпидемиологическую структуру и дашатаху BIP, ЭДЗПР в течение . 10-летнего периода, учета частоты самопроизвольных выкидышей и мертворожденнссти за указанный период, а также проведения комплексной оценки генетических эффектов ТМ с использованием различных тест-систем в экспериментах на ¡кивотных и в натурных исследованиях на лимфоцитах рабочих металлургического производства.

ВЫВОДЫ

I. Проведены исследования по выявлению генетических эффектов ТЫ (Cd, Со,- Mo) на различных тест-системах.

1.2. На дрозофила установлен тгетотоксический сффект Cd, Со, Mo, наиболее выраженный у солей Cd, который проявился в значительном снижении плодовитости.

■ 2.2. Выявлена более высокая чувствительность к действию 515 прзкейотичешге стадий спэрматохенеза.

1.3. Изучены гшйзтотоксическиз аффекты комбинированного действия Ш. Установлено, что ионы ТЭД одновременно могут являться цутагенамп и модификаторами ьутацпонпого процесса.

2.4. Выявлены зависимости "доза-аффект" и "премя-еффект": с повышением дозы металлов и с ^сличенном времени их действия

- 43 -

возрастал уровень ДЛМ у дрозофилы.

ках костного мозга млекопитающих при остром и хроническом воздействии.

2.1. Выявлены прямые дозовые и непрямые временные зависимости. При повышении дозы металла увеличивается уровень ХА. Для Cd

и Мо цитогенетический эффект более выраженный и уровень ХА колебался в пределах от 4,66+1,72/5 до 12,66+2,71$, для Со - меньше.

2.2. Для всех металлов отмечено максимальное проявление ци-. тогенетяческой активности на 48 часу действия.

2.3. Установлено, что тест на индукцию внепланового синтеза . мокет служить дополнительным тестом для выявления генотоксичнос-

ти ТТЛ и оценки их действия на половые клетки млекопитающих.

2.4. Установлен модифицирующий эффект Т1Л степени мутагенности антибактериального препарата днонсадина: при этом уровень ХА возрастал более, чем в 2 раза. Зарегистрированный эффект служит основанием для рекомендаций рабочим, контактирующим с ТМ, воздерживаться от использования лекарственного препарата диоксидина, а также может быть основанием для формирования нового направления

в химическом мутагенезе: "Сенсибилизирующий эффект при комбинированном действии тяжелых металлов и лекарственных препаратов".

3. Проведен цитогенетический мониторинг у рабочих, контактирующих с ТМ.

3.1. Выявлен широкий диапазон уровня ХА у различных групп рабочих Cd-, Со-, Мо-цехоа, отличавшихся по стажу и профессии. Количество ХА колеблется в пределах от 5,3+1,5$ до 29,8+6,6$ для рабочих Cd- и Мо-цехов, а у рабочих Co-цеха уровень ХА в 2-3 раза ниже.

3.2. По спектру ХА у рабочих Cd-цеха преобладали аберрации хромосомного типа - их в 1,6 раза больше, чем аберраций хроматид-ного типа; у рабочих Mo-цеха доминируют аберрации хроматидного ■ типа, а у рабочих Co-цеха в равной степени представлены ХА хромосомного и хроматидного типов. В целом, эти материалы свидетельствуют о том, что на геном человека так же, как и на геном млекопитающих, та действуют на всех стадиях митотического цикла клетки.

3.3. Интенсивность индуцированных цитогенетических измене-•ний характеризуется индивидуальной вариабельность», но во всех

случаях дозовые зависимости ia vivo и la vitro совпадают. Соотношение типов хромосомных аберраций одинаково при индукции их in

vivo и in vitro.

3.4. Прямая корреляция между стажем работы и уровнем ХА прослеживается у рабочих Cd -цеха, менее выражена она у рабочих Со-, Мо-цехов, где в большей степени отмечена индивидуальная чувствительность к действию мутагенов. Цитогенетический анализ позволил выделить группу "повышенного риска" из числа работающих в металлургическом производстве, а также выявлены индивиды, цитогенети-чески устойчивые к действию та.

3.5. У всех обследованных рабочих ингибирована репарация ДНК, определяемая по трем показателям: I) ресинтез разрывов ДНК, . индуцированных солями ТТЛ и стандартным мутагеном 4НХ0; 2) реакти- -вация вируса ОБ; 3) индуцированный мутагенез вируса ОБ под действием тех же мутагенов.

3.6. При обработке культивируемых in vitro лимфоцитов рабочих била обнаружена гиперчувствмтельность клеток к мутагену, что выражалось в повышении числа структурных перестроек хромосом (ХА, СХО) и увеличений числа разрывов ДНК по сравнений с клетками здоровых доноров.

4. Разработаны подхода к защите генома человека от мутационных воздействий П с помощью аскорбиновой кислоты и ретинола.

4.1. Протекторное действие АК, ретинола показано в эксперименте: в тесте ДМ у дрозофилы, в клетках костного мозга млекопитающих. Указанные витамины снижали ДЛМ у дрозофилы с 36,7+1,81? до 7,6+0,82$ для Со, с 61,2+1,55$ до 5,13+0,68$ для Cd, в вариантах с молибденом ДЛМ уменьшились в 2 раза. Коэффициент защиты исследованных витаминов на мтекопитающих в среднем составил 6070$.

4.2. Во всех вариантах экспериментов предобработка витаминами дала более выравенннй защитный эффект, чем постобработка. Самое высокое протекторное свойство проявили комплексы вит&'ашов (А+С) в вариантах презитаминизацш.

4.3. Аналогичные защитные эффекты выявлены у рабочих Cd-, Со-, Мо-цехов. Ежедневный прием 500 мг АК или ретинола в дозе 33000 М.Е. или прием одновременно (А+С) в течение месяца вызвал снижение спонтанного и индуцированного уровней ХА, СХО у рабочих и сттулкцшэ процессов репарации ДКК, причем комплекс витаминов (А+С) активизировал систему репарации у рабочих 04 -производства, в то вреда как в литературе имеются утверждения, что

- 45 -

повреждения ДНК кадмием не реПаряруптся.

._Полученные материалы могут служить основанием для специального антимутагенного "закаливания" лиц, работок:«, с—'йЬ-с— помощью витаминов А, С, (А+С), которые способствуют активации ферментов репарации ДНК и усилению эндогенного синтеза интерферона.

5. Высокая генетическая активность та, выявленная на различных тест-системах, дает основание характеризовать экологическую обстановку в г.Владикавказе как особо напряженную. Подтверждением этого обстоятельства являются эпидемиологические дачные по ВПР, СА, онкозаболеваниям.

5.1. Выявлен высокий уровень рождения детей с ВПР (46 на 1000) и значительный процент СА (35,5$).

5.2. Отмечен значительный рост онкозаболеваний (их количество за последние 10 лет увеличилось более, чем в 3 раза)-, что свидетельствует о накоплении мутаций в соматических клетках жителей города и республики.

5.3. Предложена и апробирована система генетического мониторинга для Северо-Кавказского региона п для г.Владикавказа.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Хромосомные аберрации под действием даоксидина на фоне молибденового огарка / Тез. докл. конф, "Использование моделей патологических состояний при поиске биоактивных препаратов" // М. 1533 (Совм. с Перчюиной Г.И.).

2. Предварительные данные по действию молибдена на хромосомы че-: ловека // Деп. ВИНИТИ Л 6133-84 от 10.09.84 (Совм. с Бобылевой Л.А. и др.).

3. Цитогенетический эффект молибдена и его солей в условиях производства и в эксперименте / Тез. докл. Х1У ежегод. конф. Ев-роп. общ. по мутагенам внеш. среды // М. 1984. С.102 (Совм.

с Бобылевой Л.А., Черниковой Г.А. и др.).

4. Особенности цитогенетического действия химиотерапевтического препарата диоксидина на млекопитающих на фоне повышенного содержания солей молибдена / Тез. докл. Меадунар. кояф. по проекту \Ь 12 Программы "Человек и биосфера" // М. 1984. С.131 (Совм. с Перчихиной Г.И.).

5. Предварительные данные по действию молибдена и вольфрама на наследственный аппарат человека и мушки дрозофилы / Сборник научн. трудов "Человек и природа: пути оптимизации отношений" // Ордг.они1'лдзе.-1984 (Совм. с Бобылевой JI.A. и др.).

6. Оценка цитогенетической активности вольфрама в тест-системе Dr. malanogastor // Деп. ВИНИТИ it 8334-В85 от 4.12.85 (Собм. с Розе Л.А. и др.).

7. Исследование »мутагенной активности кадмия в тест-системе Dv. melanogaater // Деп.'ВИНИТИ № 8333-85В от 4.12.85 (Совм. с Малышевой H.H. и др.).

8. Влияние иодвда кадмия на сперматогенез дрозофилы // Деп. ВИНИТИ Ä 265-Е66 от 10.01.86 (Соьм. с Гавриловой Ю.В.).

9. Генетический эффект кадмия в тест-системе Dr. melnnogaster // Сборник тез., деп. ВИНИТИ Je 3297-В86 от 7.05.86 (Совм, о Бага-евой З.А. и др.).

10. Модификация химиогерапевтичесюш препаратом диокслдинсм мутагенных факторов молибденового огарка в клетках костного мозга мышей / Тез. докл. заседания Секции генетических аспектов проблемы "Человек и биосфера" // М.: ШТС ГКНТ. I9S6. (Совм.

с Бобылевой Л.А. к др.).

11. Изучение мутагенной активности при комбинированном воздействии металлов кадмия и молибдена в тест-системе Dr.melaaogaa-tor/ Тез. докл. заседания Секции генетических аспектов проблемы "Человек и биосфера" // М.: МЕГГС ГКНТ. 1986 (Совм. с Малышевой H.H.).

12. Оценка мутагенной активности при комбинированном воздействии металлов (Co+yn-Hq) в эксперимента и в условиях производства / Тез. дскл. заседания Секции генетических аспектов проблемы "Человек и биосфера" ff И,: ШТС ГКНТ. 1986. (Совм. с Бобылевой I.A.).

13. Условия труда и состояние здоровья рабочая кадмиевого цеха завода "Электрон ш" / Тег. докл. заседания Секции р./ ssqc-ких аспектов проблему "Человек и бкосфара" // M«: ШГС ГКНТ, 1986. (Совм. с ТезЕезсй С.Ч. и др.).

14. Влияние вольфрама, и зго производных на фоя спонтанного газирования в клетках костного ^озга мышеЗ и в лшфоцк'гэх крова чакоьска / Тез. докл. заседания Секции гэЕ^гическпх аспектов проблемы "Человек к бкос$эрав // М.: ШТС Ш'Т. ISSS (Совм.

с Золотаревой Г.Н. и др.).

15. Генетический эффект при воздействии металлов кобгшла, мо~ -.rr-rfrfqinJCQ,- ?ЛгЛ w тсст-^истемо Br.c<>l<«K-g;mter / Сб. тез.

У Зсесопз. съезда генетиксл л селекционеров // 1.1. 1907. С.299 (Совм. с Бобылевой Л. А. :> др.).

16. Генетические эффекты тяжелых металлов на фоне мутирования дкоксвдикоя л клетках жсстногс мозга млекопатахвдх / Тез. докл. заседания Секции генетических аспектов проблемы "Человек и биосфера" // Ереван. 1987. С,113 (Совм. с Бобылевой

Л.А. и др.).

17. Генетические эффокты тяжелых металлов (кобальт, молибден, вольфрам) в тест-систэме Dr.nelanogastar / Тез. докл. засо-дш1кя Секции генетических аспектов проблот "Человек и биосфера" // Ереван. 1987. С.1£4 (Сев:.:, с Бобылевой Л.А., Най-фонозой И.А. и др.).

18. Генетические эффекты тяжелых металлов и их солей в эксперименте на дрозофиле и млекопитающих // Цитология и генетика. 1989. Т.24, JS 3. С.35-38 (Созм. с Бобылевой Л.А. к др.).

IS. Сценка мутагенного эффекта вольфрама к его производных / Матер, заседания Секции генетических аспектов проблемы "Человек ъ бпосфэра" // Кемерово. 1988. С.70 (Созм. с Еекузаро-вой О.'!'., Георгкади Г.А. и др.).

20. Генетический эффект химиотерапевтического препарата АБ в клетках костного мозга млекопитающих в условиях повышенного содержания тяжелых металлов / Матер. ХУШ екегод. конф. Ев-роп, общ. по мутагенам окруж. среды // Варна. I960 (Совм. с Бобылевой Л.А. и др.).

21. Цитогеизтическиз последствия длительного контакта млекопитающих с молибденом и его производными / Тез. докл. заседания Секции генетических аспектов проблемы "Человек и биосфера" // Киев. 1988. С. 132 (Совм. с Дроздиной Г.И. и др.)-.

2Z, lAaphooyioa оt people occupatinoly axpoaod to heavy aotalo poaess radubed repair activity / Abstr. of tha Intormt. Syap. organised in Koaoow, July 4-7, 1988 // ¡.Ълоои. 1983. ?«5S {With Vusil»va X.H.), 23. "bo Chessother-apeufcic AB Preparation Genetic Effect in tho i£anssalr Уагго» Cells with Heightened Content of Heavy iio-., tal4 / ЕЕШ X71II Annual «easing // Bulgaria, Varna. 1988. P.155 (With Solotaryova G.H., ЗоЪу1ут L.A.).

24. Sho estimation oí Genetic activity of H» and its derivatives in the number of test-eyetema / XIX Annual Meeting 2SM3 // Oreóla. 1989. ?.32 (With Georgtadi G.A., Balyuk E.V.).

25. Геиотоксические* эффекты тяжелых металлов и их солей в эксперименте на дрозофиле и млекопитающих // Цитология и генетика. 1989. Т.24, Я 3. С.35-38 (Совм. с Бобылевой Л.А. и др.).

26. Снижение репаративных процессов в лимфоцитах рабочих, контактирующих с тяжелыми металлами // Генетика. 1989. Т.25, J6 12. С.2247-2250 (Совм. с Васильевой И.М., Львовой Г.Н. и др.).

27. Цитогенетический эффект диоксидана на фоне тяжелых металлов / Тез. докл. Всесоюзн. иаучн. конф. "Актуальные проблемы лекарственной токсикологии" // М. 1990. 4.1. С.341.

28. Оценка мутагенной активности тяяелых металлов / Тез. докл. Мевдунар. хим. симп. // М. 1990. C.I87 (Совм. с Катаевым В.А. и др.).

. 29. Защитное действие аскорбиновой кислоты в клетках лвдей, контактирующих с хлоридом кобальта // Генетика. 1990. Т.26, № 7. СЛ315- 1320 (Совм. с Засухияой Г.Д.).

30. Снижение мутационного давления у рабочих, контактирующих с тяжелыми металлами, с помощью аскорбиновой кислоты / Тез, докл. Всесоазн. координ. совещания // Москва-Самарканд. 1990. С.51 (Совм. с Алехиной Н.И., Васильевой И.И. и др.).

31. Аскорбиновая кислота модифицирует репарацию повреждений ДНК, индуцированных 4НХ0 и хлористым кадмием в лжлфоцитах рабочих, контактирующих с сошли кадмия / Тез. докл. Всеоо-юзн. координ. совещания // Москва-Самарканд, 1990. С. 110 (Совм. с Кусаииовой К.А., Васильевой И.М. и др.).

32. Эколого-генетический мониторинг в популяции рабочих, контактирующих с солями кадмия / Тез. докл. Всесоюзн. координ» совещания // Москва-Самарканд. 1990. C.II7 (Совм. с Львовой Г.Н., Чекоь-2 В.В. и др.).

33. Оценка генотоксического действия молибдена и его модификация витамином С в тест-система Dr.EalejiasaBter / Матер, заседания Секции генетических аспектов проблемы "Человек и биосфера" // Карагандй. 1990. С.30 (Совм. с Бобылевой Л.А. и др.).

34. Мутагенная активность кадмия в тест-систоме РгозорЬИа ве-1апоеаз1аг и его кодификация витамином С / '¿атер. заседания Секции генетических аспектов проблемы "Человек и биосфера" // Караганда. 1550. С.126 (Совм. с Бобылевой Л.А. и др.).

35. Выявление групп попиленного риска среди рабочих, контактирующих с гяжелыха металлами, иа основе анализа хромосомных аберраций н сестринских хроматидных обменов // Цитология и генетика. 1991. Г.25, & 3. С.18-23 (Совм. с Бобылевой Л.А., Алехиной Н.И. и др.).

36. Изучение генетического действия молибдата аммония; хлористого и йодистого кадмия // Цитология и генетика. 1991. Т.25, Л 4. С.63-67 (Совм. с Бобылевой Л.А. и др.).

37. Аскорбиновая кислота снижает мутационные преобразования у рабочих, контактирующих с тяжелыми металлами // ДАН СССР. 1991. Т.316, Л 3. С.739-743 (Совм. с Засухиной Г.Д., Васильевой II.*!. и др.).

38. Генотокспческие эффекты молибдена и его производных в эксперименте на дрозофиле и млекопитающих // Цитология и генетика. 1991. Т.25, И 5. С.45-49 (Совм. с Бобылевой Л.А. и Др.).

39. Оценка генетической активности свинца в эксперименте и в производстве / Тез. докл. Мехдунар. конф. "Биоиндикаторы и биомониторинг" // Загорск. 1991. С.302.

40. Генетический мониторинг в популяциях людей, контактирующих с тяжелыми металлами / Тез. докл. Междунар. конф. "Биоиндикаторы и биомониторинг" // Загорск. 1991. С.303.

41. Мониторинг в популяциях рабочих, контактирующих с кобальтом / Тез. докл. I Междунар. конф. "Экологические проблемы горных территорий" // Владикавказ. 1992. С.144 (Совм. с Зи-даровой М.А.).

42. Генетические последствия загрязнения окружающей среды в г.Владккавказе / Тез.. докл. I Ыевдуяар. конф. "Экологические проблемы горных территорий" // Владикавказ. 1992. С.145-148 (Совм. с Тезиевой СЛ.).

43. Антимутагенные эффекты витаминов А, С, (А+С) / Тез. докл. I Междунар. конф. "Экологические проблемы горных территорий" //Владикавказ. 1992. С.323 (Совм. с Бобылевой Л.А.).

44. О генетическом мониторинге загрязнения окружающей среды тяжелыми металлами в условиях производства и эксперимента / Тез. докл. I Мевдунар. конф. "Экологические проблемы горных территорий" // Владикавказ. 1992. С.323 (Совм. с Кенкадзе Е.Г.).

45. Модификация аскорбиновой кислотой спонтанного и индуцированного уровня ХА и СХО в лимфоцитах рабочих, контактирующих с солями молибдена // Генетика. 1993. Т.29, й 3. С.62-65 (Совм* с Бобылевой Л.А, и др.).