Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Фармакологическое обоснование применения тетраголда при колибактериозе поросят

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармакологическое обоснование применения тетраголда при колибактериозе поросят"

На правах рукописи

г

/

005043243

КАЗИМИРОВ ОЛЕГ ВИКТОРОВИЧ

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ТЕТРАГОЛДА ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ ПОРОСЯТ

06.02.03 - ветеринарная фармакология и токсикология

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 7 мам 2012

Воронеж-2012

005043243

Работа выполнена в отделах фармакологии и микробиологии, вирусологии и иммунологии ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии

Научные руководители: доктор биологических наук

Востроилова Галина Анатольевна доктор ветеринарных наук, профессор, чл.-корр. РАСХН, заслуженный деятель науки РФ Шахов Алексей Гаврилович

Официальные оппоненты: Жуков Иван Васильевич

доктор ветеринарних наук, ОГБУ Липецкая областная ветеринарная лаборатория, директор

Скогорева Анна Михайловна

кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры паразитологии и эпизоотологии ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. Императора Петра I»

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова»

Защита состоится «29» мая 2012 г. в 1300 часов на заседании диссертационного совета ДМ 006.004.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии (ГНУ ВНИВИПФиТ РАСХН) по адресу: 394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии

Автореферат разослан «28» апреля 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, к.б.н., доцент

& / Ермакова Т.И.

(ок^

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Антимикробные лекарственные средства занимают одно из ведущих мест в фармакотерапии, как по номенклатуре препаратов, так и по частоте их применения. Это связано с тем, что бактериальные возбудители инфекционных заболеваний отличаются большим разнообразием и разной чувствительностью к антимикробным препаратам. Однако многие из них оказывают и негативный эффект. В отдельных случаях проявляют побочное действие на макроорганизм, затрудняют диагностику инфекций, оказывают селекционно-генетическое влияние на микроорганизм по формированию у последних устойчивости к антибактериальным средствам. Проблема резистентности микроорганизмов к различным антимикробным препаратам проявилась вскоре после начала их широкого применения в клинической практике. Поэтому актуален поиск высокоэффективных, малотоксичных антибактериальных препаратов, к которым длительное время не формируется резистентность у патогенной микрофлоры (Ефанова ЛИ., 1997; Шахов А.Г., 1999).

В литературе все чаще появляются сообщения о так называемой множественной устойчивости микроорганизмов, когда у возбудителя наблюдается резистентность одновременно к 3-5 и более препаратам. Развитие устойчивости микроорганизмов к антибактериальным средствам является одним из основных факторов, ограничивающих эффективность их применения (Шахов А.Г., 2003).

Для предупреждения развития и борьбы с уже сформировавшейся ан-тибиотикорезистентностью штаммов микроорганизмов предложены различные пути: одновременное использование двух и более антибиотиков (Толя-ронок Г.Е., 2006; Гулий О.И. и др., 2007); оптимизация применения препаратов уже имеющихся на вооружении (Воробейчиков Е.В. и др., 2006; Шабу-нин C.B., 2008., Bottner A. et al., 2000); поиск препаратов, отличающихся по механизму действия от антибиотиков (Шкиль H.A. и др., 2006).

Актуальность проблемы терапии инфекционных болезней, вызванных полирезистентными штаммами бактерий, не вызывает сомнения. Возможными путями её решения может явиться либо синтез новых антибактериальных средств, либо оптимизация применения имеющихся на вооружении препаратов (Шабунин C.B., 1999).

Комбинированная антибиотикотерагшя в последние десятилетия является преобладающей при многих бактериальных инфекциях. В связи с широким распространением в крупных животноводческих хозяйствах желудочно-кишечных и респираторных болезней, вызываемых ассоциацией бактериальных возбудителей, целесообразно для лечения больных животных применять комплексные химиотерапевтические препараты, обладающие широким спектром антимикробного действия за счет того, что каждый компонент активен в отношении определенного возбудителя микробной ассоциации, нередко устойчивого к одному из входящих в комбинацию веществ (Ролинсон Г.Н., 1971; Шабунин C.B., 1999). Терапевтическая широта таких препаратов дос-

тигается многокомпонентностью, а выраженная антимикробная активность -синергическим или аддитивным эффектом (Шуклин В.П., 1997; Шабунин С.В., 1999).

Цель и задачи исследований. Целью диссертационной работы является фармакологическое обоснование применения тетраголда при колибакге-риозе свиней и внедрение его в клиническую практику. Для её выполнения были поставлены следующие задачи:

1. Изучить антимикробную активность Тетраголда в опытах in vitro и in vivo.

2. Изучить влияние препарата на ультраструктуру эшерихий.

3. Изучить влияние тетраголда на организм клинически здоровых поросят.

4. Изучить фармакокинетику и остаточные количества тетраголда в организме поросят.

5. Определить оптимальную терапевтическую дозу и схему применения тетраголда при колибактериозе поросят.

6. Изучить фармакодинамику тетраголда у больных колибактериозом поросят.

7. Провести клинические испытания тетраголда при колибактериозе поросят в производственных условиях.

Научная новизна. Впервые в опытах in vitro и in vivo изучена антимикробная активность Тетраголда в отношении возбудителя колибактериоза свиней; влияние его на ультраструктуру эшерихий; терапевтическая эффективность при колибактериозе поросят и дана фармако-токсикологическая характеристика препарата. Научная новизна подтверждена патентом на изобретение РФ «Препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных» № 2008127112 от 03.07.2008 г.

Практическая значимость работы. Разработан новый комплексный антибактериальный препарат, технология его промышленного производства и контроль качества, которые вошли в нормативно-техническую документацию на препарат (Инструкция по применению Тетраголда от 17.11.2008 г. и ТУ по изготовлению и контролю опытной партии Тетраголда 10590965-00342008 от 17.11.2008 г.), согласованную с Главным государственным ветеринарным инспектором по Воронежской области. Материалы исследований вошли в «Практическое руководство по обеспечению продуктивного здоровья свиней» (2012).

Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в десяти печатных работах, в том числе три статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ, одном патенте и одном практическом руководстве.

Апробация работы. Материалы диссертации апробированы и получили положительную оценку на Международной научно-практической конференции, посвящённой 65-летию Ульяновской ГСХА «Актуальные вопросы аграрной науки и образования» (Ульяновск, 2008); Международной научно-практической конференции, посвящённой 125-летию ветеринарии Курской области «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Курск, 2008); Международной научно-практической конференции «Молодость, талант,

знания - ветеринарной медицине и животноводству» (Троицк, 2010); Международной научно-практической конференции, посвященной 40-летию ГНУ ВНИВИПФиТ «Актуальные проблемы болезней обмена веществ у сельскохозяйственных животных в современных условиях» (Воронеж, 2010); Международной научно-практической конференции «От теории - к практике: вопросы современной ветеринарии, биотехнологии и медицины» (Саратов, 2011).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 135 страницах, иллюстрирована 19 таблицами, 10 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Список литературы состоит из 253 источников, в том числе 90 иностранных авторов.

Основные положения, выносимые на защиту:

> научное обоснование состава нового комплексного антибактериального препарата тетраголд;

> антимикробная активность препарата и влияние его на ультраструктуру эшерихий;

> влияние препарата на организм клинически здоровых поросят;

> оптимальная схема и терапевтическая доза тетраголда при колибак-териозе поросят;

> влияние тетраголда на клинические, морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови больных колибактериозом поросят;

> лечебная эффективность тетраголда при колибактериозе поросят;

> экономическая эффективность применения тетраголда при колибактериозе поросят.

2. МАТЕРИАЛ, ОБЪЕМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Диссертация выполнена в 2007-2011 г.г. в отделах фармакологии и микробиологии, вирусологии и иммунологии ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии в соответствии с планом научно-исследовательских работ по заданиям 08.04.01. «Разработать методы ранней диагностики, эффективные средства и способы профилактики и лечения массовых незаразных и вызываемых условно-патогенными микроорганизмами заболеваний у молодняка высокопродуктивных животных» (№ гос. per. 15070.3666026906.06.8.001.2) программ фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации Россельхозакадемии на 2006-2010 г.г.

Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период проведе-

5

ния работы и учета результатов (Фролов И.Т., 1965). Перед экспериментом лабораторных животных выдерживали в течение 2 недель в карантинных условиях на стандартном пищевом рационе (Западнюк И.П. с соавт., 1983). Животных брали в эксперимент после внутригрупповой адаптации. Доступ их к воде и корму был свободным, световой режим естественным.

Этиологическую структуру желудочно-кишечных заболеваний изучали на основании эпизоотологического обследования хозяйств, результатов бактериологических, серологических и молекулярно-генетических исследований патологического материала от павших и вынужденно убитых с диагностической целью больных животных.

Бактериологические исследования проводили общепринятыми классическими методами согласно утвержденным наставлениям. При бактериологических исследованиях использовали фекалии, тонкий отдел кишечника, брыжеечные лимфатические узлы, кровь из сердца, селезенку, почки, печень, трубчатую кость, головной мозг. Патологический материал исследовали не позднее 2 часов после его взятия. Посевы патологического материала проводили на мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), МПА с 5% крови барана, среду Эндо. Посевы инкубировали при температуре 37°С в течение 24 часов, после чего учитывали характер роста микроорганизмов. У выделенных чистых культур изучали тинкториальные, морфологические и культурально-биохимические свойства. Чувствительность выделенных штаммов микроорганизмов к антибиотикам определяли методом индикаторных бумажных дисков. Оценку результатов проводили путем измерения величины зоны задержки роста культур (ЗЗР). Патоген-ность выделенных штаммов микроорганизмов определяли биопробой на белых мышах.

Изучение антимикробной активности и оптимального соотношения компонентов в препарате тетраголд проводили методом серийных разведений в опытах in vitro (Антонов В.И., 1986; Сидоров М.А. с соавт., 1995) совместно с аспирантом отдела фармакологии ВНИВИПФиТ В.В. Черновым и ведущим научным сотрудником отдела микробиологии, вирусологии и иммунологии, кандидатом ветеринарных наук Л.Ю. Сашниной, которым автор выражает искреннюю признательность за оказанную помощь и плодотворное сотрудничество.

В качестве тест-культур использовали референтные и полевые (патогенные) штаммы Е. coli разных серовариантов - возбудителей желудочно-кишечных болезней поросят, типированных по морфологическим, тинктори-альным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам.

Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) изучаемых препаратов определяли методом серийных разведений в мясопептонном бульоне (МПБ); минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК) - путем высева из пробирок с прозрачной средой на плотные питательные среды (МПА), не содержащие препарат.

Индекс специфической защиты тетраголда определен на модели эше-рихиозной инфекции белых мышей (п=160) массой 18-20 г.

Группы формировали по принципу аналогов по 10 животных, при этом учитывали массу тела, развитие и клиническое состояние. Животные контрольных групп лечению не подвергались. За подопытными животными вели клиническое наблюдение в течение 15 дней, учитывали заболеваемость, гибель, сроки выздоровления. Специфичность гибели определяли бактериологическим методом путем выделения исходных культур микроорганизмов.

Заражение животных проводили внутрибрюшинно смывом суточной агаровой культуры возбудителя. Разведение культуры делали на стерильном физиологическом растворе. Концентрацию микробных клеток определяли по стандарту мутности. В предварительных опытах была определена DLM культуры эшерихий, которая составила - 4,0 млн м.к.

С профилактической целью препарат вводили однократно одновременно с заражением в дозе 200,0 мг/кг. С терапевтической целью лечение мышей начинали через 6 часов после заражения. Препарат вводили один раз в сутки внутрижелудочно в той же дозе в течение 5 дней.

О терапевтической эффективности препарата судили по количеству выживших мышей после окончания лечения и числу мыше-дней для каждой группы через 15 дней после инфицирования.

Изучение влияния Тетраголда на ультраструктуру эшерихий проводили в лаборатории биофизики ГНУ ВНИИЭВ им. Я.Р. Коваленко (зав. лабораторией - кандидат биологических наук Надточей Г.А.). В исследованиях использовали культуру Escherichia coli 866 в фазе логарифмического роста, выращенную на МПБ из расчета 500 тыс. микробных клеток на 1 мл среды в условиях усиленной аэрации. Препарат добавляли к 5-ти часовой культуре в минимальной бактерицидной концентрации (6,25 мкг/мл) и в концентрации в 4 раза ее превышающую - 25,0 мкг/мл. Время инкубации составляло 3 часа.

Контролем служила культура эшерихий без препарата. Для приготовления электронно-микроскопических препаратов опытные и контрольные культуры центрифугировали 20 минут при 3000 оборотов/мин. Осадок 3 раза отмывали физиологическим раствором. Затем бактериальные клетки помещали в 2,5% глутаровый альдегид на S-коллидиновом буфере, после чего проводили постфиксацию и заливку в эпоновые смолы.

Срезы получали на ультратоме LKB III - 8802А, контрастировали 2%-ным водным раствором уранил ацетата и цитратом свинца в течение 10 минут и просматривали в электронном микроскопе марки JEM-100 СХII фирмы JEOL при ускоряющем напряжении 80 кВольт и разрешающей способности 3 ангстрема. При этом применяли инструментальное увеличение 1000019000.

Изучение влияния тетраголда на организм клинически здоровых животных проведено на 18 поросятах 30-35-дневного возраста, которые были разделены на три группы. Контрольным животным препарат не применяли (1-я группа). Поросятам опытных групп тетраголд применяли перорально в

дозах 200,0 (терапевтическая доза) и 600,0 мг/кг массы тела (3-х кратная терапевтическая доза) в течение 14 дней с интервалом между введениями 24 часа.

Изучение фармакокинетики и остаточных количеств тетраголда в организме поросят проведено в направлении определения в биоматериале содержания сульфадимезина, триметоприма и колистина.

Определение сульфадимезина проводили спектрофотометрически. Метод основан на цветной реакции диазотированной сульфаниловой кислоты с а-нафтолом в сильнощелочной среде. Реакция специфична для сульфаниламидов. Гепаринизированную кровь, плазму или сыворотку крови в количестве 0,2-1 мл в зависимости от предполагаемого содержания препарата доводили дистиллированной водой до 3 мл. Пробы выдерживали до полного гемолиза, после чего осаждали белки трихлоруксусной кислотой. После осаждения белков пробы центрифугировали.

Мочу разводили водой в 20-100 раз в зависимости от предполагаемого содержания препарата и фильтровали. Навеску органов и тканей в количестве 0,1-0,5 г в зависимости от предполагаемого содержания препарата тщательно растирали в фарфоровой ступке с кварцевым песком, добавляя небольшое количество дистиллированной воды, после чего всю массу количественно переносили в мерную центрифужную пробирку и объем дистиллированной водой доводили до 3 мл. Белки осаждали трихлоруксусной кислотой, перемешивали содержимое стеклянной палочкой, а затем пробы центрифугировали. Содержание сульфадимезина определяли в надосадочной жидкости спектрофотометрически.

Определение триметоприма в биоматериале проводили микробиологическим методом диффузии в агар с тест-культурой Bacillus pumillus 8241 (стандарт ВГНКИ) с добавлением в среду ингибитора активности сульфаниламидов - пара-аминобензойной кислоты до концентрации 150,0 мкг/мл.

Определение колистина в биоматериале проводили микробиологическим методом диффузии в агар с тест-культурой Bordetella bronchiseptica АТСС 4617 (стандарт ВГНКИ) аналогично выполнению методики определения триметоприма в биоматериале.

При проведении исследований руководствовались «Методическими указаниями по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства» № 3049-84 от 29.06.84 г.

Клинические опыты по изучению химиотерапевтической эффективности тетраголда проводили на поросятах 5-15 дневного возраста (п=198 гол.) в двух хозяйствах, стационарно неблагополучных по колибактериозу: ООО «Племенное» Воловского района Липецкой области и ООО «Бекон» Манту-ровского района Курской области.

Диагноз на заболевание колибактериозом устанавливали комплексно на основании данных клинического обследования животных, бактериологического исследования патологического материала, патологоанатомического вскрытия павших поросят, с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве.

При определении клинического статуса больных поросят проводили измерение ректальной температуры, устанавливали частоту и характер пульсовой волны. Методами осмотра, бимануальной пальпации и перкуссии оценивали состояние печени, тонкого и толстого отделов кишечника, а также проводили макроскопическое исследование фекалий (учитывали частоту дефекации; количество фекалий, выделяемое за одну дефекацию и за сутки; консистенцию и форму фекалий; цвет, запах и наличие примесей крови, слизи, гноя).

Общее состояние животных оценивали общепринятыми методами (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1982; И.П. Кондрахин с соавт., 2004). Морфологический анализ крови проводили на гематологическом анализаторе «АВХ Micros 60», биохимические исследования - на анализаторе «Hitachi-902» в соответствии с «Методическими рекомендациями по применению биохимических методов исследований крови животных» (2005).

Для характеристики неспецифической иммунологической резистентности организма определяли показатели гуморального звена: бактерицидную активность (%); лизоцимную (мкг/мл); комплементарную (% гемолиза) активность сыворотки крови и клеточного звена: фагоцитарную активность лейкоцитов, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке и коррекции неспецифической резистентности животных» (2005).

Экономическую эффективность применения препарата определяли согласно «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (1997).

Статистическая обработка результатов проведена с пользованием пакетов прикладных программ «Microsoft Excel», «Statistica 5,0» на PC «Pentium III». Достоверность отличий оценивали методом парных сравнений, используя t-критерий Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990).

За помощь при проведении комплексных исследований выражаем искреннюю признательность сотрудникам отдела физико-химических методов исследования (зав. отделом - кандидат биологических наук Шушлебин В.И.), лаборатории биофизики ГНУ ВНИИЭВ им. Я.Р. Коваленко (зав. лабораторией - кандидат биологических наук Надточей Г.А.) и специалистам свиноводческих хозяйств, в которых проводились производственные опыты.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ , 3.1. Изучение антимикробной активности тетраголда и оптимального соотношения компонентов в препарате

Было изучено 5 композиций препарата в сравнении с сульфадимезином, колистином и триметопримом. Соотношение компонентов в препарате было следующим (в вес. %): К1 - 15,0:2,5:3,0; К2 - 12,0:3,0:2,4; КЗ -12,0:3,0:3,0; К4 - 18,0:2,0:3,6 и К5 -15,0:3,0:3,0. В качестве тест культуры использовали референтный штамм Е. coli 26.

Как видно из данных таблицы 1, в опытах in vitro был выявлен устойчивый эффект усиления антимикробного действия сульфадимезина, колисти-на и триметоприма при комбинированном применении. Установлено, что одновременное воздействие их на эшерихии в опытах in vitro приводит к снижению МБсК каждого компонента в пяти композициях: колистина с 1,56 мкг/мл до 0,09-1,0 мкг/мл, триметоприма с 50,0 до 0,075-1,8 мкг/мл и сульфадимезина - с 50,0 до 0,37-9,0 мкг/мл. Следовательно, сочетанное применение трех компонентов позволяет снизить дозы этих препаратов в несколько раз, сохранив при этом их высокую активность.

Таблица 1

Антимикробная активность (МБсК) колистина, сульфадимезина,

триметоприма и различных композиций препарата, мкг/мл

Композиция К С Т Композиция В пересчете на

С К Т

К1 12,5 1,88 0,31 0,38

К2 3,12 0,37 0,094 0,075

КЗ 1,56 50,0 50,0 12,5 1,50 0,38 0,38

К4 50,0 9,00 1,00 1,80

К5 3,12 0,47 0,094 0,094

Обозначения: К - колистин; С - сульфадимезин; Т - триметоприм; К1 - композиция 1; К2 - композиция 2; КЗ - композиция 3; К4 - композиция 4; К5 - композиция 5_

Таким образом, изучение антимикробной активности различных композиций препарата и отдельных компонентов показало наличие взаимоуси-ливающего (синергадного) действия в отношении Е. coli 26. В опытах in vitro установлено, что наиболее активными являются композиции 1,2 и 5.

С учетом полученных результатов в опытах in vitro в дальнейшей работе в опытах in vivo были испытаны 3 композиции (Kl, К2 и К5). Определение их эффективности проводили в модельных опытах при экспериментальном заражении белых мышей Escherichia coli.

В контрольной группе животных, не подвергавшихся обработке тетра-голдом, была зафиксирована 100%-ная гибель мышей.

Наибольшую активность при эшерихиозной инфекции проявили композиции К2 и К5. Применение данных композиций через 6 часов после заражения сдерживало развитие инфекции в 80,0% случаев. При применении композиции 1 индекс защиты составил 60,0%.

Следует отметить, что гибель мышей во всех опытных группах по сравнению с контролем была зафиксирована в более отдаленные сроки.

Профилактическая эффективность композиций 1 и 2 при эшерихиозной инфекций была ниже соответственно на 20,0% и 10,0%, чем при применении композиции 5. Сохранность животных составила 30,0, 40,0 и 50,0% соответственно, при 100,0% гибели животных контрольной группы.

Также отмечено увеличение суммарной продолжительности жизни белых мышей в зависимости от применяемой композиции. При эшерихиозной инфекции этот показатель соответственно был на уровне 72 дней (компози-

ция 1), 87 дней (композиция 2) и 98 дней (композиция 5). Суммарная продолжительность жизни мышей в контрольной группе составила 27 дней.

Таким образом, наиболее высокий индекс защиты белых мышей обеспечило применение композиции 5, в связи с этим более детально была изучена ее антимикробная активность.

Согласно данным, представленным в таблице 2, тетраголд обладает выраженными антимикробными свойствами. Активность препарата в отношении музейных штаммов эшерихий составила 1,56 - 6,25 мкг/мл, полевых -6,25-25,0 мкг/мл. Бактерицидное действие препарата в отношении изученных культур превышало бактериостатическое соответственно в 2 раза.

Таблица 2

Антимикробная активность тетраголда (мкг/мл)_

Культура МБсК МБцК

микроорганизмов

Escherichia coli 57/853 3,12 6,25

Escherichia coli 26 1,56 3,12

Escherichia coli 04 6,25 12,5

Escherichia coli 866 3,12 6,25

Escherichia coli O(III) (n) 25,0 50,0

Escherichia coli 078 (n) 6,25 12,5

Escherichia coli K88 (n) 12,5 25,0

Escherichia coli K99 (n) 25,0 50,0

3.2. Влияние Тетраголда на ультраструктуру E.coli

Исходные клетки Е.соИ имели морфологию, типичную для этого вида микроорганизмов (рис. 1 а, б). Клеточная стенка эшерихий имела трехслойную волнистую структуру, обусловленную наружным бимолекулярным ли-пидо-протеиновым слоем. Цитоплазматическая мембрана плотно прилегала к цитоплазме по всей поверхности клетки, имела хорошую очерченность. Слои наружной оболочки, периплазматического пространства и цитоплазматиче-ской мембраны четко видны и дифференцированы. У делящихся клеток так же на всем протяжении клеточной стенки хорошо заметна типичная трех-

Рис. 1 а, б. Клетки кишечной палочки (контроль). КС - клеточная стенка; Н - нуклеоид; МС - мезосомальные структуры; Ц - цитоплазма; Р - рибосомы; ЦПМ - цитоплазматическая мембрана; П - перетяжка деления. Ув. 19000.

Внутри клеток цитоплазма гомогенна, нуклеоид хорошо просматривался и занимал большую часть цитоплазмы, вокруг него обнаруживали электронно-плотный слой рибосомального аппарата и мембранные структуры клетки.

При действии на культуру Е.соН тетраголда в минимальной бактерицидной концентрации (6,25 мкг/мл) в течение 3-х часов морфологическим изменениям подвергалось около 68% клеток (рис. 2а), проявляющимся утолщением микробной клетки и ее стенки, образованием на наружном слое многочисленных выростов, частичным или полным лизисом отдельных участков с выходом составляющих компонентов за пределы клетки, отслоением мембраны от цитоплазмы, приобретающей мелкозернистую структуру меньшей электронной плотности с обширными зонами лизиса, нарушением процесса деления клеток.

191 гьм

Li......'.

Г" кНЯвп f'.t' - М ЩЩ

If г.- ; Ж,; т * " v . i "к

л ' ; 5 ^ < * У

V ■ -rj и

* ' lit ," - - \

ч \ ЛЦ р^ • " \ ? t u

'ТЩ'- г : \ 7,, "'•-**.

Рис. 2 а, б. Клетки E.coli под воздействием тетраголда (МБцК). КС - клеточная стенка; РКС - участки частичного и полного расплавления клеточной стенки; Ц - цитоплазма; ЛЦ - зоны цитоплазмы меньшей электронной плотности в местах, прилегающих к лизирован-ной клеточной стенке; ЛН - лизированный нуклеоид; П - перетяжка между дочерними

клетками. Ув. 19000.

к- ЛИ™ ■

Рис. 3 а, б. Клетки Е.соН под воздействием тетраголда (4 МБцК). ЛК - лизированные клетки; КС - клеточная стенка; ЛДК - лизированная делящаяся клетка; Ц - цитоплазма, локализованная по периферии клетки; ЛКС - участок расплавления клеточной стенки; ЛН -электронно-прозрачный участок лизированного нуклеоида; ПК - погибшая клетка. Ув.

19000.

Воздействие 4МБцК (25,0 мкг/мл) тетраголда приводило к более существенным структурным изменениям 95% клеток, проявляющимся уменыне-

нием размера клеток, их утолщением, потерей клеточной стенкой волнистой трехслойной структуры, наличием на всей ее поверхности рыхлого материала и расплавлением у отдельных клеток стенки с выходом содержимого цитоплазмы, лизисом цитоплазматической мембраны и цитоплазмы с образованием на месте последних обширных электронно-разряженных областей, заполненных остатками мембранных структур, лизисом нуклеоида и выявлением на его месте электронно-прозрачного слоя.

Обнаруженные изменения клеток эшерихий под влиянием тетраголда обусловлены комбинацией колистина, триметоприма и сульфаниламида, входящих в состав препарата.

3.3. Влияние тетраголда на организм клинически здоровых поросят

В опыте по изучению влияния тетраголда на организм клинически здоровых поросят было установлено, что препарат в терапевтической и в три раза превышающей ее дозах не оказывал существенного влияния на клинический статус, скорость роста, поведение и аппетит поросят. Показатели клинического состояния поросят всех групп в течение всего опыта находились в пределах нормы.

В период всего опыта поросята контрольной и опытных групп были подвижны, аппетит выражен, рефлексы сохранены. Нарушений функций пищеварения и мочеотделения не установлено. Препарат в указанных дозах не снижал скорости роста поросят.

Многократное применение его в терапевтической (200,0 мг/кг) и в 3 раза превышающей ее (600,0 мг/кг) дозах существенно не влияло на морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови поросят.

Моча животных опытных и контрольной групп во все периоды исследования соответствовала норме: прозрачная, светло-желтого цвета, рН 6,27,0, удельный вес - 1,018-1,022, белок, углеводы, билирубин, уробилин, ин-дикан и кетоновые тела не регистрировали, что свидетельствует о том, что тетраголд в испытанных дозах не проявляет нефротоксического действия.

3.4. Фармакокинетика и остаточные количества препарата тетраголд в организме поросят

Фармакокинетические исследования показали, что уже через 30 минут после введения препарата активнодействующие вещества (сульфадимезин, триметоприм и колистин) обнаруживаются в крови поросят. Как видно из данных, представленных на рисунке 4, максимальная концентрация сульфадимезина в сыворотке крови достигает максимума через 3 часа (26,84±0,21 мкг/мл), после чего она начинает плавно снижаться, но при этом продолжает оставаться до 24 часов на уровне минимальной подавляющей концентрации для эшерихий.

ыкг/мл -в.

/

р \ .......^ . ...

/ / ......

вчас

-МБсК по сульфадимезину — -В — сульфадимезин -МБсК по триметоприму —X—триметоприм

Максимальная концентрация триметоприма в сыворотке крови также достигает максимума через 3 часа (10,57±0,27 мкг/мл), после чего она начинает плавно снижаться, продолжая оставаться до 24 часов на уровне минимальной бак-териостатической концентрации для эшерихий. Максимальная концентрация коли-стина (2,17±0,07 мкг/мл) в плазме крови достигает максимума через 2 часа и превы-

1,5 -

Рис. 4. Содержание сульфадимезина и триметоприма в крови поросят после однократного перо-рольного введения тетраголда в дозе 0,2 г/кг шает МБсК по колистину в 4 раза, хотя и составляет 2-3% от введенной дозы (рис. 5). Затем его концентрация начинает снижаться и к 6 часам становится равной МБсК по колистину. К 9 часам колистин отсутствует в крови поросят.

В тоже время изучение антимикробной активности тетраголда показало наличие синер-гидного эффекта у данного препарата, т.е. в данном случае колистин способствует снижению МБсК сульфадимезина и триметоприма для изученных культур микроорганизмов. Эти данные позволяют назначать тетраголд один раз в

0,5

4— —ф— —ф— —ф— \ \ * ^ «

\ час

N

-,- г-т—

0,5

- МБсК по колистину

— ■■ — Колистин

Рис. 5. Содержание колистина в крови поросят после однократного пероралъного введения тетраголда в дозе 0,2 г/кг

сутки, так как при курсовом применении препарата, концентрации сульфадимезина и триметоприма превышает МБсК для эшерихий (соответственно 2,51 и 0,5 мкг/мл).

Таким образом, однократное введение тетраголда в дозе 0,2 г/кг обеспечивает терапевтическую концентрацию активнодействующих веществ в организме поросят в течение 24 часов.

Определение остаточных количеств тетраголда в органах, тканях и биологических жидкостях поросят через 7 суток после последнего применения препарата показало, что сульфадимезин, триметоприм и колистин отсутствовали во всех объектах исследования.

Таким образом, срок возможного убоя животных на мясо после применения тетраголда должен быть не менее 7 суток.

3.5. Отработка оптимальной дозы и схемы применения тетраголда поросятам-сосунам при колибактериозе

Опыты по отработке оптимальной терапевтической дозы и схемы применения тетраголда при колибактериозе поросят проведены в условиях ООО «Агрофирма Ливенское мясо» Ливенского района Орловской области.

Животные первой группы (п=19) служили контролем. Для их лечения применяли байтрил 10% согласно инструкции по его применению. Животным второй (опытная, п=17) группы применяли тетраголд внутрь ежедневно два раза в сутки индивидуально в течение 5 дней в дозе 0,1 г/кг массы тела. Животным третьей (опытная, п=17) группы применяли тетраголд внутрь ежедневно один раз в сутки индивидуально в течение 5 дней в дозе 0,2 г/кг массы тела. За животными проводили ежедневное клиническое наблюдение, при этом учитывали общее состояние, падеж, сроки выздоровления.

Проведенные исследования показали, что тетраголд обладает высокой терапевтической эффективностью при лечении колибактериоза поросят-сосунов. По сравнению с контролем при применении тетраголда уменьшился срок выздоровления в первой опытной группе на 39,4%, во второй - на 43,9%. Среднесуточные приросты массы тела поросят опытных групп за семидневный период опыта были выше, чем в контроле соответственно на 5,4 и 20,5%. Наиболее эффективной оказалась доза 0,2 г/кг массы тела с интервалом введения 24 часа. При сравнении с контролем (байтрил 10%) и опытной группой, получавшей тетраголд два раза в сутки в дозе 0,1 г/кг, терапевтическая эффективность была выше соответственно на 42,1 и 11,8% с более быстрым выздоровлением поросят.

3.6. Лечебная эффективность тетраголда при колибактериозе поросят

Лечебную эффективность тетраголда изучали в сравнении с сульф гра-нулятом и спектам-пастой (базовые варианты) в опыте на поросятах 3-7 дневного возраста в свиноводческих хозяйствах ООО «Бекон» Мантуровско-го района Курской области (базовый вариант сульф гранулят) и ООО «Племенное» Воловского района Липецкой области (базовый вариант - спектам-паста).

Указанные хозяйства стационарно неблагополучны по колибактериозу. Заболевание возникало в период массовых опоросов и протекало со значительным охватом восприимчивого поголовья. Наиболее высокие заболеваемость и летальность регистрировали среди поросят 3-7 дневного возраста, которые, как правило, заболевали погнёздно.

В первом опыте по изучению терапевтической эффективности тетраголда было сформировано две группы животных с выраженными клиническими признаками колибактериоза. Поросятам первой группы (п=72) тетраголд применяли в дозе 0,2 г/кг в течение 5 дней с интервалом 24 часа. Лечение животных второй группы (п=67) проводили сульф гранулятом в соответствии с инструкцией по его применению. Во второй опыт было взято 59 больных колибактериозом животных. Поросятам опытной группы (п=29)

применяли тетраголд по той же схеме и в тех же дозах, что и в первом опыте, а животным (п=30) базового варианта - спектан-пасту в соответствии с инструкцией по применению.

Химиотерапевтические средства вводили перорально в виде взвеси в воде, индивидуально, в объёме 4 мл на животное.

В период лечения, а также после него в течение 15 дней за поросятами вели клиническое наблюдение за общим состоянием, учитывали температурную реакцию, длительность и течение болезни, сроки наступления выздоровления, а также падёж и среднесуточный прирост массы тела (на 1-й и 15-й дни эксперимента). Результаты клинических испытаний представлены в таблице 3.

Таблица 3

Сравнительная терапевтическая эффективность тетраголда

при колибактериозе поросят

Группы животных

Показатели ООО «Бекон» ООО «Племенное»

Тетра- Сульф Тетра- Спектам-

голд гранулят голд паста

Количество животных, под-

вергнутых обработке, гол. 72 67 29 30

Продолжительность примене-

ния препарата, дн. 5 5 5 5

Количество выздоровевших

животных, гол. 65 58 27 27

% 90,3 86,6 93,1 90,0

Количество павших живот-

ных, гол. - 1 - 1

% - 1,5 - з,з

Осталось больных животных,

гол. 7 8 2 2

% 9,7 11,9 6,9 6,7

Средняя масса тела одного

животного, кг: в начале 2,07 2,0 1,70 1,30

в конце опыта 3,91 3,63 3,97 3,15

Среднесуточный прирост массы тела, г 122,7 108,7 151,3 123,3

При использовании тетраголда уже на 2-3 день у большинства поросят значительно улучшилось общее состояние, практически полностью восстановился аппетит, нормализовалась температура тела, полностью прекращалась диарея, исчезли признаки обезвоживания, восстановилась двигательная активность (купировались явления угнетения, атаксии, дисметрии и другие признаки поражения центральной и периферической нервной системы). В базовом варианте лечебный эффект регистрировали на 3 - 4 день. У 45% поросят к этому сроку, а у остальных животных на 5 - 6 день лечения прекрати-

лась диарея при общем удовлетворительном состоянии, а также практически полностью восстановились аппетит и двигательная активность.

Во втором опыте наблюдения показали, что уже после второй дачи тет-раголда у 50% поросят улучшилось клиническое состояние, на третий день полностью прекратился диарейный синдром, у 90% поросят восстановилась двигательная активность и нормализовался аппетит, исчезли признаки поражения нервной системы. В базовом варианте лечебный эффект регистрировали на 4 - 5 день.

По результатам двух опытов было установлено, что тетраголд является эффективным терапевтическим средством при колибактериозе поросят. Применение его обеспечивает выздоровление 90,3-93,1% животных. По лечебной эффективности препарат превосходит базовые варианты (сульф гра-нулят и спектам-пасту) в среднем на 3,4% . Среднесуточный прирост массы тела в опытной группе был больше, чем в базовых вариантах на 12,9 и 22,7%.

3.7. Изучение влияния тетраголда на морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови больных колибактериозом поросят

В сыворотке крови больных поросят-сосунов значительно была снижена концентрация альбуминов до 31,4% (при норме 40-50%), а содержание 0-глобулинов и у-глобулинов повышено, что свидетельствует о перераспределении фракций белка в ответ на воздействие возбудителя инфекции.

Энергетическая обеспеченность их была значительно ниже, чем клинически здоровых поросят, об этом свидетельствует более низкий уровень глюкозы, общих липидов и, наоборот, повышенное содержание холестерина.

При изучении иммунного статуса у поросят с диарейным синдромом в крови отмечено повышение количества лейкоцитов и снижение содержания лимфоцитов по сравнению с аналогичными показателями у здоровых поросят.

При изучении гуморальных факторов естественной резистентности установлено увеличение у больных поросят бактерицидной, комплементарной и лизоцимной активности сыворотки крови, вероятно, обусловленное с одной стороны повышением уровня белков системы комплемента в острую стадию заболевания, а с другой - обезвоживанием организма. При этом отмечено значительное угнетение фагоцитарной активности лейкоцитов, снижение фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса.

В конце терапевтического курса произошло, хотя и не значительное, увеличение количества эритроцитов (на 10,5%) и гемоглобина (8,8%), снижение содержания лейкоцитов на 21,1%. Выздоровление поросят характеризовалось нормализацией лейкограммы - снижалось количество палочкоядер-ных и сешентоядерных нейтрофилов соответственно в 2,5 раза и на 32,0%, эо-зинофилов - на 53,1%, увеличивалось количество моноцитов в 1,9 раза и лимфоцитов - на 45,3%, что свидетельствовало об уменьшении воспалительного процесса в организме. Происходила нормализация обменных процессов: увели-

чение уровня глюкозы - на 30,7%, липидов - на 11,9%, снижение содержания холестерина - на 35,2%.

Повышение количества общего белка сыворотки крови по сравнению с нормой (69,8±1,08 г/л) произошло за счет глобулиновых фракций при одновременном уменьшении концентрации альбуминов, что, по всей видимости, связано с нарушением водного баланса организма, вызванного диареей при колибактериозе. Поэтому снижение этого показателя практически до нормы, а также повышение содержания альбуминов на 21,6% с одновременным снижением количества а-, Р- и у- глобулинов свидетельствовало о косвенном положительном влиянии тетраголда, направленном на устранение диспротеинемии и, следовательно, на угасание инфекционного процесса.

Препарат способствовал нормализации общей неспецифической резистентности организма, проявляющейся снижением комплементарной - на 17,3 %, бактерицидной - на 13,8 % и лизоцимной активности сыворотки крови практически в 3 раза. В то же время под действием препарата происходило повышение фагоцитарной активности лейкоцитов - на 9,4%, фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса в 2,2 раза.

Также происходила нормализация обменных процессов: увеличение уровня глюкозы - на 30,7%, липидов - на 11,9%, снижение содержания холестерина - на 35,2%.

3.8. Экономическая эффективность применения препарата тетраголд при колибактериозе поросят

Экономическую эффективность лечебных мероприятий с использованием антибактериального препарата Тетраголд проводили в свиноводческом хозяйстве ООО «Племенное» Воловского района Липецкой области на 156 больных животных 5-15-дневного возраста. Препарат назначали в дозе 0,2 г/кг массы тела 1 раз в сутки в течение 5 дней. В период проведения опыта за животными вели клиническое наблюдение, учитывали сроки выздоровления. В начале опыта и после лечения проводили взвешивание поросят.

Фактический ущерб, нанесенный заболеванием, составил 4180,8 руб., затраты на проведение ветеринарных мероприятий - 1337,2 руб. Предотвращенный экономический ущерб из расчета на общее поголовье восприимчивых животных был равен 9422,88 руб. Экономический эффект, полученный в результате осуществления лечебных мероприятий с применением тетраголда составил 8085,68 рубля, на один рубль затрат - 6,05 рубля.

4. ВЫВОДЫ

1. Новый комплексный антибактериальный препарат тетраголд, действующими веществами которого являются сульфадимезин, триметоприм и ко-листин, обладает достаточно высокой активностью в отношении возбудителя колибактериоза. Минимальная бактериостатическая и бактерицидная концентрации препарата в отношении эшерихий составили соответственно 1,5625,0 и 3,12-50,0 мкг/мл.

2. Использование комбинации сульфадимезина, триметоприма и коли-стина в препарате дает выраженный синергидный эффект, проявляющийся снижением МБсК колистина с 1,56 мкг/мл до 0,09-0,3 мкг/мл, триметоприма с 50,0 до 0,075-1,8 мкг/мл и сульфадимезина - с 50,0 до 0,37-9,0 мкг/мл.

3. Тетраголд обладает профилактической и терапевтической эффективностью при экспериментальной эшерихиозной инфекции белых мышей. Индекс защиты при профилактике инфекции составил 50,0%, при терапии -80,0% при 100,0% гибели животных контрольной группы.

4. Выявленные изменения в ультраструктуре эшерихий под действием тетраголда обусловлены синергидным эффектом составляющих его компонентов. Воздействие минимальной бактерицидной концентрации препарата (6,25 мкг/мл) на эшерихии проявляется утолщением микробной клетки и ее стенки, образованием на наружном слое многочисленных выростов, частичным или полным лизисом отдельных участков с выходом составляющих компонентов за пределы клетки, отслоением мембраны от цитоплазмы, приобретающей мелкозернистую структуру меньшей электронной плотности с обширными зонами лизиса, нарушением процесса деления клеток.

Воздействие четырехкратной бактерицидной концентрации тетраголда (25,0 мкг/мл) вызывает более выраженные изменения, проявляющиеся уменьшением размера клеток, их утолщением, потерей клеточной стенкой волнистой трехслойной структуры, наличием на всей ее поверхности рыхлого материала и расплавлением у отдельных клеток стенки с выходом содержимого цитоплазмы, лизисом цитоплазматической мембраны и цитоплазмы с образованием на месте последних обширных электронно-разряженных областей, заполненных остатками мембранных структур, лизисом нуклеоида и выявлением на его месте электронно-прозрачного слоя.

5. При пероральном введении тетраголда в дозах 200,0 и 600,0 мг/кг в течение 14 дней клинически здоровым поросятам он не оказывает существенного влияния на их клинический статус, скорость роста, поведение и аппетит, на морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови.

6. При пероральном введении тетраголда составляющие его компоненты сульфадимезин и триметоприм быстро всасываются в кровь и проникают во многие органы и ткани. Максимальное содержание их в сыворотке крови поросят наблюдается через 3 часа в концентрациях 26,84 и 10,57 мкг/мл соответственно. Концентрация сульфадимезина и триметоприма при курсовом применении тетраголда поддерживается на уровне МБсК для эшерихий. Ко-листин практически не всасывается из желудочно-кишечного тракта и его концентрация в сыворотке крови поросят достигает максимума (2,17 мкг/мл) через 2 часа.

7. Тетраголд обладает высокой терапевтической эффективностью при колибактериозе поросят. Применение его в дозе 200,0 мг/кг один раз в сутки в течение 5 дней обеспечивает выздоровление животных в 90,3-93,1% случаев.

8. Применение тетраголда при колибактериозе поросят способствует нормализации морфологических и биохимических показателей крови, характеризующейся увеличением содержания эритроцитов (на 10,5%) и гемоглобина (на 8,8%), количества моноцитов и лимфоцитов - в 1,9 и 1,5 раза, уровня глюкозы, липидов, альбуминов соответственно - на 30,7, 11,9 и 21,6%, снижением количества лейкоцитов и эозинофилов на 21,1 и 53,1%, палочкоядер-ных и сегментоядерных нейтрофилов - в 2,5 и 1,5 раза, холестерина - на 35,2%, а также общей неспецифической резистентности организма, проявляющейся снижением комплементарной, бактерицидной соответственно - на 17,3 и 13,8% и лизоцимной активности сыворотки крови практически в 3 раза, повышением фагоцитарной активности лейкоцитов - на 9,4%, фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса в 2,2 раза.

9. Применение тетраголда при лечении больных колибактериозом поросят является экономически выгодным. Эффективность лечебных мероприятий составляет 6,05 рубля на один рубль затрат.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для лечения больных колибактериозом поросят рекомендуется применять тетраголд в дозе 200,0 мг/кг один раз в сутки в течение 5 дней.

2. Основные научные положения работы и ее практические результаты рекомендуется использовать в производственных условиях ветеринарными специалистами, а также в учебном процессе студентами, аспирантами и научными работниками ветеринарного профиля.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Востроилова Г.А. Фармако-токсикологические свойства тетраголда / Г.А. Востроилова, В.В. Чернов, О.В. Казимиров // Актуальные вопросы аграрной науки и образования: матер, междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 65-летию Ульяновской ГСХА. - Ульяновск, 2008. - Т.З. - С. 24-27.

2. Чернов В.В. Общее действие препарата тетраголд и его влияние на качество мяса / В.В. Чернов, О.В. Казимиров // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: матер, междунар. науч.-практ. конф. посвященной 125-летию ветеринарии Курской области. - Курск, 2008. - С. 412-413.

3. Казимиров О.В. Лечебная эффективность тетраголда при колибактериозе поросят в условиях производства / О.В. Казимиров // Актуальные проблемы болезней обмена веществ у сельскохозяйственных животных в современных условиях: матер, междунар. науч.-практ. конф., посвященной 40-летию ГНУ ВНИВИПФиТ. - Воронеж: «Истоки», 2010. - С. 122-125.

4. Казимиров О.В. Лечение желудочно-кишечных болезней бактериальной этиологии у молодняка свиней тетраголдом / О.В. Казимиров, В.В. Чернов // Труды Всероссийского совета молодых ученых и специалистов аграрных образовательных и научных учреждений. Том 3: «Молодость, талант, знания - ветеринарной медицине и животноводству»: матер, междунар. науч.-практ. конф. - Троицк: УГАВМ, 2010. - С. 54-56.

5. Казимиров O.B. Вияние тетрагодца на организм поросят в субхроническом опыте / О.В. Казимиров // Основные проблемы и перспективы развития ветеринарной медицины в обеспечении животноводства Прикаспийского региона Российской Федерации. - Махачкала: ГНУ ПЗНИВИ, 2010. — С. 31-33.

*6. Казимиров О.В. Сравнительная теапевтическая эффективность тетраголда при колибакериозе поросят / О.В. Казимиров, Ю.Н. Бригадиров, Е.В. Михайлов // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2011. - Т. 205. -С. 94-98.

7. Казимиров О.В. Экономическая эффективность применения Тетраголда при колибактериозе поросят / О.В. Казимиров // От теории - к практике: вопросы современной ветеринарии, биотехнологии и медицины: матер, междунар. науч.-практ. конф., посвященной 121 годовщине создания ГНУ Саратовский научно-исследовательский ветеринарный институт РАСХН 2021 сентября 2011 г. - Саратов: СНИВИ, 2011. - С. 98-102.

*8. Бригадиров, Ю.Н. Комплексная система мероприятий по профилактике и борьбе с респираторными и желудочно-кишечными болезнями свиней в современных условиях производства // Ю.Н. Бригадиров, О.В. Казимиров, C.B. Борисенко, M.JI. Бердников, Е.В. Михайлов, А.Н. Модин, H.A. Борисенко, O.A. Манжурина, В.В. Давыдова // Ветеринарная патология. -2011.-№4.-С. 40-45.

*9. Казимиров, О.В. Лечебная эффективность новых комплексных антимикробных препаратов при желудочно-кишечных заболеваниях поросят бактериальной этиологии / О.В. Казимиров, Ю.Н. Бригадиров, М.Л. Бердников, C.B. Борисенко, Е.В. Михайлов, А.Н. Модин // Достижения науки и техники АПК журнал. -2012. -№ 1.-С. 33-34.

10. Патент №2366414 РФ, Cl. Препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных / C.B. Шабунин, Г.А. Вострои-лова, Т.Е. Рогачёва, В.В. Чернов, О.В. Казимиров № 2008127112/15., заявлено 03.07.2008., опубликовано 10.09.2009, Бюлл. № 25.

* - публикации в научных изданиях, рекомендованных перечнем ВАК РФ

Подписано в печать 27.04.2012. Формат 60 х 84/16. Бумага офсетная. Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100 экз. Заказ №1055

Отпечатано в типографии Воронежского ЦНТИ - филиала ФГБУ «РЭА» Минэнерго России 394036, г. Воронеж, пр. Революции, 30.

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Казимиров, Олег Викторович

Список сокращений.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Колибактериоз поросяи и его распространение.

2.2. Устойчивость возбудителя к антибиотикам.

2.3. Средства фармакотерапии и профилактики желудочно-кишечных болезней в свиноводческих хозяйствах.

2.4. Применение комплексных препаратов.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Фармакологическое обоснование применения тетраголда при колибактериозе поросят"

Актуальность темы. Антимикробные лекарственные средства занимают одно из ведущих мест в фармакотерапии, как по номенклатуре препаратов, так и по частоте их применения. Это связано с тем, что бактериальные возбудители инфекционных заболеваний отличаются большим разнообразием и разной чувствительностью к антимикробным препаратам. Однако многие из них оказывают и негативный эффект, проявляя в отдельных случаях побочное действие на макроорганизм, затрудняют диагностику инфекций, а также оказывают селекционно-генетическое влияние на микроорганизм по формированию у последних устойчивости к антибактериальным средствам. Проблема резистентности микроорганизмов к различным антимикробным препаратам проявилась вскоре после начала их широкого применения в клинической практике. Например, стафилококки, эшерихии, шигеллы крайне быстро приобретают лекарственную устойчивость, как в эксперименте, так и в производственных условиях. Аналогичное свойство выявлено у сальмонелл и стрептококков. Поэтому актуален поиск высокоэффективных, малотоксичных антибактериальных препаратов, к которым длительное время не формируется резистентность у патогенной микрофлоры (Ефанова Л.И., 1997; Шахов А.Г., 1999).

В литературе все чаще появляются сообщения о так называемой множественной устойчивости микроорганизмов, когда у возбудителя наблюдается резистентность одновременно к 3 - 5 и более препаратам. Развитие устойчивости микроорганизмов к антибактериальным препаратам является одним из основных факторов, ограничивающих эффективность их применения (Шахов А.Г., 2003).

В последние годы в результате бессистемного применения химиопре-паратов для терапии и профилактики заболеваний инфекционной этиологии все большую опасность стали приобретать антибиотикорезистентные штаммы микроорганизмов (ЯовеШ М.е1 а1., 2005).

Установлено снижение эффективности химиотерапии и химиопрофи-лактики при инфекционной патологии животных также в результате селекции лекарственно-устойчивых, полирезистентных форм бактериальных возбудителей, обусловленной не только длительным, часто необоснованным применением антибиотиков, но и нарастающими явлениями иммуносупрес-сии и иммунодефицитов у восприимчивых макроорганизмов (Шахов А.Г. и др., 2007; Шабунин C.B., 2008).

Нерациональное применение средств антибактериальной терапии, им-мунодепрессантов, влияние ряда экологических факторов обусловили изменение традиционной клиники моноинфекций и привели к увеличению ассоциированной патологии. Эшерихиоз поросят как моноинфекция встречается относительно редко, чаще всего при массовых желудочно-кишечных болезнях поросят наряду с эшерихиями выделяют сальмонеллы, цитробактерии, протеи, клостридии, клебсиеллы, стафилококки, стрептококки и др. В этиологии диарей участвуют 2 - 3 и более инфекционных агента, которые обычно способствуют усилению патогенности каждого ассоциата. Для предупреждения развития и борьбы с уже сформировавшейся антибиотикорезистентно-стью штаммов микроорганизмов предложены различные пути: одновременное использование двух и более антибиотиков (Толяронок Г.Е., 2006; Гулий О.И. и др., 2007); оптимизация применения препаратов уже имеющихся на вооружении (Воробейчиков Е.В. и др., 2006; Шабунин C.B., 2008., Bottner А. et al., 2000); поиск препаратов, отличающихся по механизму действия от антибиотиков (Шкиль H.A. и др., 2006).

Актуальность проблемы терапии инфекционных болезней, вызванных полирезистентными штаммами бактерий, не вызывает сомнения. Возможными путями её решения может явиться либо синтез новых антибактериальных средств, либо оптимизация применения имеющихся на вооружении препаратов (Шабунин C.B., 1999).

Для этиотропной терапии больных животных рекомендованы антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны и другие препараты (Вечеркин A.C., 2004; Татарчук О.П., 2006; Кузьминова Е.В., Трошина H.A., 2008; Пат-ласова Н.В., Воронкова В.В. 2010).

Однако поиск, разработка и внедрение новых химиопрепаратов связаны со значительными затратами средств и времени (Воробейчиков Е.В. и др., 2006).

Для борьбы с полирезистентными бактериями рекомендуются комбинации антимикробных препаратов. Комбинированная антибиотикотерапия в последние десятилетия является преобладающей при многих бактериальных инфекциях. В связи с широким распространением в крупных животноводческих хозяйствах желудочно-кишечных и респираторных болезней, вызываемых ассоциацией бактериальных возбудителей, целесообразно для лечения больных животных применять комплексные химиотерапевтические препараты, обладающие широким спектром антимикробного действия за счет того, что каждый компонент активен в отношении определенного возбудителя микробной ассоциации, нередко устойчивого к одному из входящих в комбинацию веществ (Шабунин C.B. 1999). Терапевтическая широта таких препаратов достигается многокомпонентностью, а выраженная антимикробная активность - синергическим или аддитивным эффектом (Шабунин C.B., 1999). При этом особое внимание должно быть обращено на то, что входящие в состав комплексного препарата ингредиенты не должны взаимодействовать друг с другом в разработанной лекарственной форме и сохранять стабильность в период всего срока хранения препарата.

Цель и задачи исследований. Целью диссертационной работы является фармакологическое обоснование применения тетраголда при колибакте-риозе свиней и внедрение его в клиническую практику. Для её выполнения были поставлены следующие задачи:

1. Изучить антимикробную активность Тетраголда в опытах in vitro и in vivo.

2. Изучить влияние препарата на ультраструктуру эшерихий.

3. Изучить влияние тетраголда на организм клинически здоровых поросят.

4. Изучить фармакокинетику и остаточные количества тетраголда в организме поросят.

5. Определить оптимальную терапевтическую дозу и схему применения тетраголда при колибактериозе поросят.

6. Изучить фармакодинамику тетраголда у больных колибактериозом поросят.

7. Провести клинические испытания тетраголда при колибактериозе поросят в производственных условиях.

Научная новизна. Впервые в опытах in vitro и in vivo изучена антимикробная активность Тетраголда в отношении возбудителя колибактериоза свиней; влияние его на ультраструктуру эшерихий; терапевтическая эффективность при колибактериозе поросят и дана фармако - токсикологическая характеристика препарата. Научная новизна подтверждена патентом на изобретение РФ «Препарат для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных» № 2008127112 от 03.07.2008 г.

Практическая значимость работы. Разработаны новый комплексный антибактериальный препарат, технология его промышленного производства и контроль качества, которые вошли в нормативно-техническую документацию на препарат (Инструкция по применению Тетраголда от 27.11.2009 г. и ТУ по изготовлению и контролю опытной партии Тетраголда 10590965-00342009 от 27.11.2009 г.), согласованную с Главным государственным ветеринарным инспектором по Воронежской области. Материалы исследований вошли в «Практическое руководство по обеспечению продуктивного здоровья свиней» (2012).

Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в 10-ти печатных работах, в том числе три статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ, одном патенте и одном Практическом руководстве.

Апробация работы. Материалы диссертации апробированы и получили положительную оценку на Международной научно практической конференции, посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА «Актуальные вопросы аграрной науки и образования» Ульяновск, 2008; Международной научно-практической конференции, посвященной 125-летию ветеринарии Курской области «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» Курск, 2008; Международной научно-практической конференции «Молодость, талант, знания - ветеринарной медицине и животноводству» Троицк, 2010; Международной научно-практической конференции, посвященной 40-летию ГНУ ВНИВИП-ФиТ «Актуальные проблемы болезней обмена веществ у сельскохозяйственных животных в современных условиях» Воронеж, 2010; Международной научно практической конференции «От теории - к практике: вопросы современной ветеринарии, биотехнологии и медицины» Саратов, 2011.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 135 страницах, иллюстрирована 19 таблицами, 10 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Список литературы состоит из 253 источников, в том числе 90 иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Звероводство и охотоведение", Казимиров, Олег Викторович

6. ВЫВОДЫ

1. Новый комплексный антибактериальный препарат тетраголд, действующими веществами которого являются сульфадимезин, триметоприм и ко-листин, обладает достаточно высокой активностью в отношении возбудителя колибактериоза. Минимальная бактериостатическая и бактерицидная концентрации препарата в отношении эшерихий составили соответственно 1,5625,0 и 3,12-50,0 мкг/мл.

2. Использование комбинации сульфадимезина, триметоприма и коли-стина в препарате дает выраженный синергидный эффект, проявляющийся снижением МБсК колистина с 1,56 мкг/мл до 0,09-0,3 мкг/мл, триметоприма с 50,0 до 0,075-1,8 мкг/мл и сульфадимезина - с 50,0 до 0,37-9,0 мкг/мл.

3. Тетраголд обладает профилактической и терапевтической эффективностью при экспериментальной эшерихиозной инфекции белых мышей. Индекс защиты при профилактике инфекции составил 50,0%, при терапии -80,0% при 100,0% гибели животных контрольной группы.

4. Выявленные изменения в ультраструктуре эшерихий под действием тетраголда обусловлены синергидным эффектом составляющих его компонентов. Воздействие минимальной бактерицидной концентрации препарата (6,25 мкг/мл) на эшерихии проявляется утолщением микробной клетки и ее стенки, образованием на наружном слое многочисленных выростов, частичным или полным лизисом отдельных участков с выходом составляющих компонентов за пределы клетки, отслоением мембраны от цитоплазмы, приобретающей мелкозернистую структуру меньшей электронной плотности с обширными зонами лизиса, нарушением процесса деления клеток.

Воздействие четырехкратной бактерицидной концентрации тетраголда (25,0 мкг/мл) вызывает более выраженные изменения, проявляющиеся уменьшением размера клеток, их утолщением, потерей клеточной стенкой волнистой трехслойной структуры, наличием на всей ее поверхности рыхлого материала и расплавлением у отдельных клеток стенки с выходом содержимого цитоплазмы, лизисом цитоплазматической мембраны и цитоплазмы с образованием на месте последних обширных электронно-разряженных областей, заполненных остатками мембранных структур, лизисом нуклеоида и выявлением на его месте электронно-прозрачного слоя.

5. При пероральном введении тетраголда в дозах 200,0 и 600,0 мг/кг в течение 14 дней клинически здоровым поросятам он не оказывает существенного влияния на их клинический статус, скорость роста, поведение и аппетит, на морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови.

6. При пероральном введении тетраголда составляющие его компоненты сульфадимезин и триметоприм быстро всасываются в кровь и проникают во многие органы и ткани. Максимальное содержание их в сыворотке крови поросят наблюдается через 3 часа в концентрациях 26,84 и 10,57 мкг/мл соответственно. Концентрация сульфадимезина и триметоприма при курсовом применении тетраголда поддерживается на уровне МБсК для эшерихий. Колистин практически не всасывается из желудочно-кишечного тракта и его концентрация в сыворотке крови поросят достигает максимума (2,17 мкг/мл) через 2 часа.

7. Тетраголд обладает высокой терапевтической эффективностью при колибактериозе поросят. Применение его в дозе 200,0 мг/кг один раз в сутки в течение 5 дней обеспечивает выздоровление животных в 90,3-93,1% случаев.

8. Применение тетраголда при колибактериозе поросят способствует нормализации морфологических и биохимических показателей крови, характеризующейся увеличением содержания эритроцитов (на 10,5%) и гемоглобина (на 8,8%), количества моноцитов и лимфоцитов - в 1,9 и 1,5 раза, уровня глюкозы, липидов, альбуминов соответственно - на 30,7, 11,9 и 21,6%, снижением количества лейкоцитов и эозинофилов на 21,1 и 53,1%, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов - в 2,5 и 1,5 раза, холестерина - на 35,2%, а также общей неспецифической резистентности организма, проявляющейся снижением комплементарной, бактерицидной соответственно - на 17,3 и 13,8% и лизоцимной активности сыворотки крови практически в 3 раза, повышением фагоцитарной активности лейкоцитов - на 9,4%, фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса в 2,2 раза.

9. Применение тетраголда при лечении больных колибактериозом поросят является экономически выгодным. Эффективность лечебных мероприятий составляет 6,05 рубля на один рубль затрат.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для лечения больных колибактериозом поросят рекомендуется применять тетраголд в дозе 200,0 мг/кг один раз в сутки в течение 5 дней.

2. Основные научные положения работы и ее практические результаты рекомендуется использовать в производственных условиях ветеринарными специалистами, а также в учебном процессе студентами, аспирантами и научными работниками ветеринарного профиля.

2.5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ

Колибактериоз поросят широко распространён практически во всех свиноводческих хозяйствах России, странах ближнего и дальнего зарубежья. Этому способствуют неблагоприятные условия зоогигиены кормления и содержания животных.

Анализ данных литературы позволяет заключить, что на современном этапе развития ветеринарной науки разработано и внедрено в практику большое количество антибактериальных препаратов. Однако нерациональное использование средств антибактериальной терапии обусловливает возникновение антибиотикоустойчивых и даже антибиотикозависимых популяций микроорганизмов, которые зачастую полирезистентны. Это является одной из основных проблем ветеринарной и медицинской инфектологии. Проблема устойчивости потенциальных возбудителей инфекционных болезней к антибиотикам касается, в том числе, и колибактериоза. Известно также, что вакцинация животных против названной болезни полностью не решает вопроса оздоровления неблагополучных хозяйств. Поэтому весьма актуален поиск высокоэффективных антимикробных средств защиты животных. В связи с этим нами была определена цель: изучить антибактериальную активность тетраголда и разработать показания к его применению при колибактериозе свиней.

3. МАТЕРИАЛ, ОБЪЕМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Диссертация выполнена в 2007-2011 г.г. в отделах фармакологии и микробиологии, вирусологии и иммунологии ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии в соответствии с планом научно-исследовательских работ по заданиям 08.04.01. «Разработать методы ранней диагностики, эффективные средства и способы профилактики и лечения массовых незаразных и вызываемых условно-патогенными микроорганизмами заболеваний у молодняка высокопродуктивных животных» (№ гос. per. 15070.3666026906.06.8.001.2) программ фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации Россельхозакадемии на 2006-2010 г.г.

Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период проведения работы и учета результатов (Фролов И.Т., 1965). Перед экспериментом лабораторных животных выдерживали в течение 2 недель в карантинных условиях на стандартном пищевом рационе (Западнюк И.П. с соавт., 1983). Животных брали в эксперимент после внутригрупповой адаптации. Доступ их к воде и корму был свободным, световой режим естественным.

Этиологическую структуру желудочно-кишечных заболеваний изучали на основании эпизоотологического обследования хозяйств, результатов бактериологических, серологических и молекулярно-генетических исследований патологического материала от павших и вынужденно убитых с диагностической целью больных животных.

Бактериологические исследования проводили общепринятыми классическими методами согласно утвержденным наставлениям. При бактериологических исследованиях использовали фекалии, петлю кишечника с брыжеечными лимфатическими узлами, кровь из сердца, селезенку, почки, печень, трубчатую кость, головной мозг. Патологический материал исследовали не позднее 2 часов после его взятия. Посевы патологического материала проводили на мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), МПА с 5% крови барана, среду Эндо. Посевы инкубировали при температуре 37°С в течение 24 часов, после чего учитывали характер роста микроорганизмов. У выделенных чистых культур изучали тинкториальные, морфологические и культурально-биохимические свойства. Чувствительность выделенных штаммов микроорганизмов к антибиотикам определяли методом индикаторных бумажных дисков. Оценку результатов проводили путем измерения величины зоны задержки роста (ЗЗР) культур. Патоген-ность выделенных штаммов микроорганизмов определяли биопробой на белых мышах.

Изучение антимикробной активности и оптимального соотношения компонентов в препарате тетраголд проводили методом серийных разведений в опытах in vitro (Антонов В.И., 1986; Сидоров М.А. с соавт., 1995) совместно с аспирантом отдела фармакологии ВНИВИПФиТ В.В. Черновым и ведущим научным сотрудником отдела микробиологии, вирусологии и иммунологии, кандидатом ветеринарных наук Л.Ю. Сашниной, которым автор выражает искреннюю признательность за оказанную помощь и плодотворное сотрудничество.

В качестве тест-культур использовали референтные и полевые (патогенные) штаммы Е. coli разных серотипов - возбудителей желудочно-кишечных болезней поросят, типированных по морфологическим, тинктори-альным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам.

МБсК изучаемых препаратов определяли методом серийных разведений в мясопептонном бульоне (МПБ); МБцК - путем высева из пробирок с прозрачной средой на плотные питательные среды (МПА), не содержащие препарат.

Индекс специфической защиты тетраголда определен на модели эше-рихиозной инфекции белых мышей (п=160) массой 18-20 г.

Группы формировали по принципу аналогов по 10 животных, при этом учитывали массу тела, развитие и клиническое состояние. Животные контрольных групп лечению не подвергались. За подопытными животными вели клиническое наблюдение в течение 15 дней, учитывали заболеваемость, гибель, сроки выздоровления. Специфичность гибели определяли бактериологическим методом путем выделения исходных культур микроорганизмов.

Заражение животных проводили внутрибрюшинно смывом суточной агаровой культуры возбудителя. Разведение культуры делали на стерильном физиологическом растворе. Концентрацию микробных клеток определяли по стандарту мутности. В предварительных опытах была определена DLM культуры, которая составила - 4,0 млн. м.к.

С профилактической целью препарат вводили однократно одновременно с заражением в дозе 200,0 мг/кг. С терапевтической целью лечение мышей начинали через 6 часов после заражения. Препарат вводили один раз в сутки внутриже луд очно в той же дозе в течение 5 дней.

О терапевтической эффективности препарата судили по количеству выживших мышей после окончания лечения и числу мыше-дней для каждой группы через 15 дней после инфицирования.

Изучение влияния Тетраголда на ультраструктуру эшерихий проводили в лаборатории биофизики ГНУ ВНИИЭВ им. Я.Р. Коваленко (зав. лабораторией - кандидат биологических наук Надточей Г.А.). В исследованиях использовали культуру Escherichia coli 866 в фазе логарифмического роста, выращенную на МПБ из расчета 500 тыс. микробных клеток на 1 мл среды в условиях усиленной аэрации. Препарат добавляли к 5-ти часовой культуре в минимальной бактерицидной концентрации (6,25 мкг/мл) и в концентрации в 4 раза ее превышающую - 25,0 мкг/мл. Время инкубации составляло 3 часа.

Контролем служила культура эшерихий без препарата. Для приготовления электронно-микроскопических препаратов опытные и контрольные культуры центрифугировали 20 минут при 3000 оборотов/мин. Осадок 3 раза отмывали физиологическим раствором. Затем бактериальные клетки помещали в 2,5% глутаровый альдегид на 8-коллидиновом буфере, после чего проводили постфиксацию и заливку в эпоновые смолы.

Срезы получали на ультратоме ЬКВ III - 8802А, контрастировали 2%-ным водным раствором уранил ацетата и цитратом свинца в течение 10 минут и просматривали в электронном микроскопе марки ДЕМ-ЮО СХII фирмы ХЕОЬ при ускоряющем напряжении 80 кВольт и разрешающей способности 3 ангстрема. При этом применяли инструментальное увеличение 1000019000.

Изучение влияния тетраголда на организм клинически здоровых животных проведено на 18 поросятах 30-35-дневного возраста, которые были разделены на три группы. Контрольным животным препарат не применяли (1-я группа). Поросятам опытных групп тетраголд применяли перорально в дозах 200,0 (терапевтическая доза) и 600,0 мг/кг массы тела (3-х кратная терапевтическая доза) в течение 14 дней с интервалом между введениями 24 часа.

Изучение фармакокинетики и остаточных количеств тетраголда в организме поросят проведено в направлении определения в биоматериале содержания сульфадимезина, триметоприма и колистина.

Определение сульфадимезина проводили спектрофотометрически. Метод основан на цветной реакции диазотированной сульфаниловой кислоты с а-нафтолом в сильнощелочной среде. Реакция специфична для сульфаниламидов. Гепаринизированную кровь, плазму или сыворотку крови в количестве 0,2-1 мл в зависимости от предполагаемого содержания препарата доводили дистиллированной водой до 3 мл. Пробы выдерживали до полного гемолиза, после чего осаждали белки трихлоруксусной кислотой. После осаждения белков пробы центрифугировали.

Мочу разводили водой в 20-100 раз в зависимости от предполагаемого содержания препарата и фильтровали. Навеску органов и тканей в количестве 0,1-0,5 г в зависимости от предполагаемого содержания препарата тщательно растирали в фарфоровой ступке с кварцевым песком, добавляя небольшое количество дистиллированной воды, после чего всю массу количественно переносили в мерную центрифужную пробирку и объем дистиллированной водой доводили до 3 мл. Белки осаждали трихлоруксусной кислотой, перемешивали содержимое стеклянной палочкой, а затем пробы центрифугировали. Содержание сульфадимезина определяли в надосадочной жидкости спектрофотометрически.

Определение триметоприма в биоматериале проводили микробиологическим методом диффузии в агар с тест-культурой Bacillus pumillus 8241 (стандарт ВГНКИ) с добавлением в среду ингибитора активности сульфаниламидов - пара-аминобензойной кислоты до концентрации 150,0 мкг/мл.

Определение колистина в биоматериале проводили микробиологическим методом диффузии в агар с тест-культурой Bordetella bronchiseptica АТСС 4617 (стандарт ВГНКИ) аналогично выполнению методики определения триметоприма в биоматериале.

При проведении исследований руководствовались «Методическими указаниями по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства» № 3049-84 от 29.06.84 г.

Клинические опыты по изучению химиотерапевтической эффективности тетраголда проводили на поросятах 5-15 дневного возраста (п=198 гол.) в двух хозяйствах, стационарно неблагополучных по колибактериозу: ООО

Племенное» Воловского района Липецкой области и ООО «Бекон» Ман-туровского района Курской области.

Диагноз на заболевание колибактериозом устанавливали комплексно на основании данных клинического обследования животных, бактериологического исследования, патологоанатомического вскрытия, с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве.

При определении клинического статуса больных поросят проводили измерение ректальной температуры, устанавливали частоту и характер пульсовой волны. Методами осмотра, бимануальной пальпации и перкуссии оценивали состояние печени, тонкого и толстого отделов кишечника, а также проводили макроскопическое исследование фекалий (учитывали частоту дефекации; количество фекалий, выделяемое за одну дефекацию и за сутки; консистенцию и форму фекалий; цвет, запах и наличие примесей крови, слизи, гноя).

Общее состояние животных оценивали общепринятыми методами (Колб В.Г., Камышников B.C., 1982; Кондрахин И.П. с соавт., 2004). Морфологический анализ крови проводили на гематологическом анализаторе «АВХ Micros 60», биохимические исследования - на анализаторе «Hitachi-902» в соответствии с «Методическими рекомендациями по применению биохимических методов исследований крови животных» (2005).

Для характеристики неспецифической иммунологической резистентности организма определяли показатели гуморального звена: бактерицидную активность (%) сыворотки крови; лизоцимную (мкг/мл); комплементарную активность сыворотки крови (% гемолиза) и клеточного звена: фагоцитарную активность лейкоцитов, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке и коррекции неспецифической резистентности животных» (2005).

Экономическую эффективность применения препарата определяли согласно «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (1997).

Статистическая обработка результатов проведена с пользованием пакетов прикладных программ «Microsoft Excel», «Statistica 5,0» на PC «Pentium III». Достоверность отличий оценивали методом парных сравнений, используя t-критерий Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990).

За помощь при проведении комплексных исследований выражаем искреннюю признательность сотрудникам отдела физико-химических методов исследования (зав. отделом - кандидат биологических наук Шушлебин В.И.), лаборатории биофизики ГНУ ВНИИЭВ им. Я.Р. Коваленко (зав. лабораторией - кандидат биологических наук Надточей Г.А.) и специалистам свиноводческих хозяйств, в которых проводились производственные опыты.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1. Изучение антимикробной активности тетраголда и оптимального соотношения компонентов в препарате 4.1.1. Обоснование состава препарата в опытах in vitro

Изучение антимикробной активности препарата тетраголд и составляющих его компонентов (колистин, триметоприм и сульфадимезин) проводили методом серийных разведений. В качестве тест культуры использовали референтный штамм Е. coli 26. Микробная загруженность составляла 250 тыс. м.к. в 1 мл среды.

Для выявления оптимального соотношения компонентов в препарате минимальную бактериостатическую концентрацию различных комбинаций (п=5) сравнивали с активностью исходных действующих веществ - колисти-ном, сульфадимезином и триметопримом (табл. 1).

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Казимиров, Олег Викторович, Воронеж

1. Абдыраманов, Т.М. Лечебная эффективность настоек горечавки туркестанской и календулы при диспепсии телят / Т.М. Абдыраманов // Патология и терапия кетоза овец и ягнят: Сб. трудов Самаркандского с.-х. инта.- 1989.-С. 41-43.

2. Абрамов, С.С. Профилактика незаразных болезней молодняка / С.С. Абрамов, И.Г. Арестов, И.М. Карпуть. М.: Колос, 1991. - 175 с.

3. Авакаяц, Б.М. Лекарственные растения при диарее новорожденных телят / Б.М. Авакаяц, A.B. Коробов, A.M. Шабанов // Ветеринария. 1992. - № 7-8.-С. 44-45.

4. Авылов, Ч. Влияние стресс-факторов на резистентность организма свиней / Ч. Авылов // Свиноводство. 2001. - № 1. - С. 21-22.

5. Алтухов, Н. Пути профилактики желудочно-кишечных болезней поросят в период их отъема / Н. Алтухов, Ю. Бригадиров, А. Шамардина // Свиноводство. 2005. - № 6. - С. 21-22.

6. Ануфриев, А.И. Фармакология и персистентные инфекции / А.И. Ануфриев, П.А. Ануфриев, А.Г. Шахов // Первый съезд ветеринарных фармакологов России. Воронеж 21-23 июня 2007года: Материалы съезда. Воронеж, 2007. - С. 685-689.

7. Ануфриев, П.А. Факторные болезни свиней / П.А. Ануфриев // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных: между-нар. науч.-производст. конференция, 22-23 июня 2006 года. Воронеж: Научная книга, 2006. - С. 252-257.

8. Архангельский, И.И. Заразные болезни телят / И.И. Архангельский, И.И. Баданин. М.: Сельхозгиз, i960.

9. Афонюшкин, В.Н. Антибиотикорезистентность сальмонелл в Сибири / В.Н. Афонюшкин, Е.К. Дударева, Л.И. Малахеева, М.Л. Филиппенко // Ветеринария. 2008. - № 1. - С. 7-9.

10. Ащеулов, В.В. Антимикробная активность хинолевоксида /В.В. Аще-улов // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: матер, международной науч.-практ. конф. Воронеж: ВГУ, 2002. - С. 117118.

11. Беляев, В.И. Эффективность цидисепта-о при колибактериозе поросят и влияние его на репродуктивные функции свиноматок / В.И. Беляев, A.JI. Индюков // Ветеринарная патология. 2008. - № 2. - С. 19-21.

12. Билокур, М.В. К этиологии болезней телят / М.В. Билокур, В.В. Палу-нина // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: матер, междунар. науч.-практ. конф. Воронеж: Издательство «Истоки», 2008.-С. 37-38.

13. Бриан, JI.E. Бактериальная резистентность и чувствительность к хими-опрепаратам / J1.E. Бриан. М.: Медицина, 1984. - 270 с.

14. Бригадиров, Ю.Н. Ассоциированные желудочно-кишечные инфекции свиней / Ю.Н. Бригадиров, С.В. Борисенко, И.В. Брюхова // АгроРынок. -2011.-№ 1.-С. 19-20.

15. Брода, П. Плазмиды / П. Брода. М.: Мир, 1982. - 224 с.

16. Брюсова, М.Б. Идентификация и дифференциация энтерогеморрагиче-ских Е. coli методом ПЦР / М.Б. Брюсова, И.Л. Обухов, O.A. Тугаринов и др. // Ветеринария. 2008. - № 12. - С. 45-^8.

17. Бурлаков, В.А. Иммунологические аспекты возникновения заболеваний желудочно-кишечного тракта у молодняка крупного рогатого скота / В.А.

18. Бурлаков, Д.А. Рябов, Г.В. Чувило // Современные аспекты диагостики, профилактики и лечения инфекционых и инвазионных болезней животных. -М.: , 1998.-С. 22-28.

19. Великанов, В.И. Эколого-биологические факторы, обуславливающие острые растройства пищеварения у телят / В.И. Великанов, А.И. Молев, О.В. Вавина // Ветеринарный консультант. 2006. - № 10. - С. 12-13.

20. Ветеринарные препараты: Справоник / Под ред. А.Д. Третьякова. М.: Аг-ропромиздат, 1985. -319 с.

21. Вечеркин, A.C. Применение амоксиклава и развитие резистентных штаммов бактерий / A.C. Вечеркин // Ветеринария. 2004. - № 7. - С. 16-17.

22. Волынец, Л.К. Колибактериоз в свиноводческих хозяйствах / Л.К. Во-лынец, К.Г. Балицкип// Ветеринария. 1991. -№ 1. - С. 41-43.

23. Воробейчиков, Е.В. Пути повышения эффективности схем экстренной профилактики и лечения инфекционных заболеваний / Е.В. Воробейчиков,

24. М.Ю. Волков, А.В. Синица, А.Ж. Василенко // Антибиотики и химиотерапия. 2006. - № 3-4. - С. 3-6.

25. Гафаров, Х.З. Специфическая профилактика инфекционной диареи новорожденных / Х.З. Гафаров, Г.Н. Спиридонов, М.А. Ефимова //Ветеринарный консультант. 2003. - № 23-24. - С. 11.

26. Гнатенко, Г.В. Опыт борьбы с колибактериозом телят / Г.В. Гнатенко, Л.Г. Тупииа, Д.Т. Ракицкий // Ветеринария, Киев: «Урожай», 1983. Вып. 57. -С. 15-17.

27. Гоби, Л. Комбинирование антибиотиков / Л. Гоби // Животноводство России. 2009. - № 12. - С. 32-33.

28. Голубева, И.В. Род FniePHxna / И.В. Голубева // Эптепобактерни (руководство). М.: Медицина, 1985. - С. 57-85.

29. Голышенков, П.П. Дубовый экстракт при диареи телят / П.П. Голышен-ков, Н.М. Киселев // Ветеринария. 1992. - № 9. - С. 39-40.

30. Горбенко, А.В. Антибиотикорезистентность (3-гемолитических штаммов Е. coli возбудителя колиэнтеротоксемии поросят / А.В. Горбенко // Ветеринарная медицина. - 2004. - № 83. - С. 59-62.

31. Гусев, В.В. Мониторинг бактериальных инфекций в промышленном свиноводстве / В.В. Гусев, С.М. Приходько, С.И. Павлов, М.Г. Теймуразов // Ветеринария. 2004. - № 2. - С. 7-8.

32. Джупина, С.И. Факторные инфекционные болезни животных / С.И. Джупина // Ветеринария. 2001. - № 3. - С. 6-9.

33. Ерошов, А.И. Вирусно-бактериальная этиология инфекционных заболеваний животных / А.И. Ерошов // Учёные записки Витебской государственной академии ветеринарной медицины. 2004. - Т. 40. - ч. 1. - С. 203204.

34. Ефанова, Л.И. Некоторые экологические аспекты применения антибиотиков в ветеринарной практике / Л.И. Ефанова // Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных. Воронеж: «Фаворит», 1997. -С. 307-308.

35. Ефанова, Л.И. Чувствительность микроорганизмов к антибактериальным препаратам при смешанных инфекциях животных / Л.И. Ефанова, A.C. Транькова, В.В. Давыдова и др. // Первый съезд ветеринарных фармакологов

36. России. Воронеж 21-23 июня 2007года: Материалы съезда. Воронеж, 2007.-С. 280-285.

37. Жукова, Е.В. Эффективность применения пролонгированного антибиотика «Тиакат-И» и иммуномодулятора гликопина при желудочно-кишечных заболеваниях / Е.В. Жукова, Г.И. Устинова, В.И. Кис // Ветеринарная патология. 2009. - № 2. - С. 65-68.

38. Зароза, В.Г. Эшерихиоз телят / В.Г. Зароза. М., 1991. - 240 с.

39. Золотухин, С.Н. Разработка оптимального метода выделения диагностического препарата / С.Н. Золотухин, Н.И. Молофеева, Д.А. Васильев // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. Сер. Ветеринария. 2002. - № 8. - С. 32-35.

40. Зуев, Н.П. Получение и разработка антимикробных композиций на основе тилозинсодержащих препаратов / Н.П. Зуев // Ветеринарная патология. 2008. -№ 3. - С. 97-100.

41. Кебец, Н. Новые лекарственные препараты в лечении диареи у поросят / Н. Кебец, А. Кебец, И. Самсонов // Свиноводство. 2003. - № 3. - С. 21-22.

42. Кирьянов, Е. А. Колибактериоз животных и его профилактика / Е. А. Кирьянов, А. Т. Больных. Уссурийск: Приморский СХИ, 1986. - 46 с.

43. Кленова, И.Ф. Ветеринарные препараты в России / И.Ф. Кленова М.: Сельхозиздат, 2004. - т 1. - С. 182.

44. Клоуз, В. Этот трудный послеотъемный период / В. Клоуз // Животноводство России. 2007. - № 12. - С. 29-32.

45. Ковалёв, В.Ф. Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны в ветеринарии / В.Ф. Ковалёв. М.: Агропромиздат, 1988. - 223 с.

46. Колотова, Е.В. Эпизоотология, диагностика, методы лечения и профилактика отечной болезни поросят / Е.В. Колотова, JI.A. Малышева // Ветеринарная патология. 2008. -№ 1. - С. 163-166.

47. Кондрахин, И.П. Постнатальная токсическая диспепсия телят / И.П. Кондрахин // Ветеринарный консультант. 2003. - № 23-24. - С. 15.

48. Косенко, В.И. Колибактериоз поросят. Профилактика инфекционных болезней / В.И. Косенко. М.: Колос, 1983. - С. 19-29.

49. Красочко, П.А. Иммунотропное действие препарата из пчелиной перги «апистимулина-а» на организм телят и поросят / П.А. Красочко, И.А. Красочко, В.М. Мосин // Ветеринарная патология. 2007. - № 3. - С. 213-220.

50. Кудимов, В. Первый среди равных / В. Кудимов // Свиноводство. -2003.-№ 1.-С. 30.

51. Кузнецов А.Ф. Свиньи: содержание, кормление и болезни / А.Ф. Кузнецов, И.Д. Алешайкин, Г.М. Андреев и др.; под редакцией А.Ф. Кузнецова. -Спб.: издательство «Лань», 2007. 544 с.

52. Лагуткин, H.A. Химиотерапия при инфекционных болезнях / H.A. Ла-гуткин // Ветеринария. 2006. - № 2. - С. 24-28.

53. Левицкий, А.П. Применение лигнина кормового для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят / А.П. Левицкий, Л.В. Орлов, В.В. Шерстобитов, Б.А. Гоголь // BicH. Аграр. Науки. 1995. -№ 12.-С. 87-90.

54. Ленькова, В.А. и др. Колибактериоз поросят в промышленном свиноводстве Белорусской ССР / В.А. Ленькова // Тезисы докл. научн. конф., Новочеркасск, 1978.

55. Лизунов, М.С. Использование ТН4 и делтасека в животноводстве / М.С. Лизунов // Ветеринария. 2008. - № 5. - С. 10-11.

56. Макаров В.А. Фармакология сульфаниламидных и сульфамидных препаратов / В.А. Макаров и др. Киев: Здоровье, 1988.

57. Макаров, В.В. Факторные болезни /В.В. Макаров // Ветеринарная патология. 2005. - № 3. - С. 4-12.

58. Макаров, В.В. Эпизоотологические проблемы основной патологии продуктивных животных / В.В. Макаров, В.Н. Афонин, А.Г. Шахов, А.И. Ануфриев // Ветеринарная патология. 2005. - № 3. - С. 13-22.

59. Малахов, Ю.А. Специфическая профилактика и диагностика бактериальных болезней животных / Ю.А. Малахов, Р.В. Душук // Ветеринария. -2001.-№ 1. С.35-38.

60. Машковский М.Д. Лекарственные средства. 15-е издание/ М.Д. Маш-ковский. - М.: РИА «Новая волна»: Издатель Умеренков, 2008. - 1206с.

61. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. -М.: Медгиз, 1999. 336 с.

62. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. М.: РИА «Новая Волна», 2007. - 1206 с.

63. Мищенко, В.А. Меры борьбы с диареями новорожденных телят / В.А. Мищенко, Н.А. Яременко, Д.К. Павлов и др. // Ветеринария. 2002. - № 4. -С. 16-19.

64. Мищенко, В.А. Особенности диарейных болезней крупного рогатого скота / В.А. Мищенко, Н.А. Яременко, О.И. Гетманской и др. // Ветеринария. -2001.-№5.-С. 5-7.

65. Моргунова В.И. Профилактика колибактериоза у новорожденных поросят / В.И. Моргунова, Н.М. Алтухов, В.И. Моргунов, О.Н. Мистюкова // Ветеринария. 2003. - № 1. - С. 18-21.

66. Навашин С.М. Рациональная антибиотикотерапия (справочник)/ С.М. Навашин, И.П. Фомина. М.: Медицина, 1982. - 496 с.

67. Навашин С.М. Современное состояние и перспективы применения антибиотиков в сельском хозяйстве.Разработка и применение антибиотиков не медицинского назначения/ С.М. Навашин, Л.П. Иваницкая, Т.П. Коробкова. -М.: Медицина, 1987. с. 3-4.

68. Нестерова, И.С. Распространение Esherichia coli 0157:Н7 среди мелких домашних животных / И.С. Нестерова, В.Ю. Коптев, Н.А. Шкиль, // Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние и дикие животные. 2005. -№ 3. - С. 33-34.

69. Овчинникова JI.K. Школа фармаколога: сульфаниламиды / JI.K. Овчинникова, Е.А. Овчинникова// Ж. «Российские аптеки». 2009. - №3.

70. Орешкин, A.C. Профилактика и терапия при пневмогастроэнтеритах / A.C. Орешкин, В.В. Пономарев // Ветеринария. 2001. - № 2. - С. 12-14.

71. Панов, А.Н. Природные сорбенты в лечении полиэтиологической диспепсии телят молочного периода / А.Н. Панов // Ассоциативные инфекции селькохозяйственных животных и новые подходы к их ликвидации и профилактике: тез. докл. Барнаул, 1997. - С. 81-82.

72. Патласова, Н.В. Доксициклин в ветеринарии / Н.В. Патласова, В.В. Во-ронкова // Ветеринария. 2010. - № 2. - С. 55-56.

73. Пименов, Н.В. Антибиотикорезистентность сальмонелл, выделенных у домашних голубей / Н.В. Пименов, Н.В. Данилевская // Ветеринария. 2006. -№ 9. - С. 20-24.

74. Проданов, В.И. Новый растительный препарат чистотел при желудочно-кишечных болезнях телят / В.И. Проданов // Лечение и профилактика болезней в промышленном животноводстве: Сб. науч. тр. КСХИ. 1987. -Вып. 262(290). - С. 54-59.

75. Прудников, С.И. Пролонгированный вестин для профилактики и терапии при инфекционных болезнях поросят / С.И. Прудников, A.A. Духовский, Т.М. Прудникова и др. // Ветеринария. 2008. - № 6. - С. 18-19.

76. Русалеев, В. Сальмонеллёз свиней и меры борьбы с ним / В. Русалеев, А. Потехин, А. Бородина // Свиноводство. 2008. - № 1. - С. 25-27.

77. Русалеев, B.C. Бактериальные инфекции животных / B.C. Русалеев // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. Материалы междунар. науч. конфер. «Инфекционная патология животных», посвященной 50-летию ФГУ «ВНИИЗЖ». 2008. - Т. 6. - С. 113-120.

78. Русалеев, B.C. Иммуногенность экспериментальной вакцины против пастереллеза свиней / B.C. Русалеев, В.В. Селиверстов, О.В. Прунтова и др. // Ветеринария. 2005. - № 6. - С. 23-25.

79. Рябкова, Е.Л. Современные аспекты и перспективы применения лево-флоксацина для терапии нозокомиальной пневмонии / Е.Л. Рябкова, P.C. Козлов / Антибиотики и химиотерапия. 2008. - № 9-10. - С. 6-11.

80. Ряднов, A.A. Влияние лигфола на естественную резистентность поро-сят-отъемышей / A.A. Ряднов, Т.А. Ряднова, Е.В. Петухова, В.В. Саломатин // Ветеринария. 2007. -№.12 - С. 17-19.

81. Самохин, В.Т. Профилактика нарушений обмена микроэлементов у животных / В.Т. Самохин. Воронеж: ВГАУ, 2003. - 135 с.

82. Самохин, В.Т. Стратегия борьбы с болезнями новорожденного молодняка / В.Т. Самохин // Профилактика и лечение болезней молодняка с./х животных: Тез. докл. Всесоюзн. Научн.-техн. конф. 9-10 октября 1991. -М., 1991.-С. 78-79.

83. Сатоскар Р. С., Бандаркар С. Д. Фармакология и фармакотерапия в 2-х томах, пер. с англ., Москва, 1986.

84. Сидоров, М.А. Иммунный статус и инфекционные болезни новорожденных телят и поросят / М.А. Сидоров, Ю.Н.Федоров, О.М. Савич // Ветеринария. 2006. - № 11. - С. 3-5.

85. Смирнов, A.M. Действие лизомикса на популяции бактерий / A.M. Смирнов, М.А. Симецкий, И.Б. Павлова и др. // Ветеринария. 2003. - № 6. -С. 42-44.

86. Соколов В.Д. Ветеринарная фармакология. Учебник для вузов / В.Д. Соколов.- М., 1997. 148 с.

87. Сосницкий, А.И. Чувствительность лабораторных животных к эпизоотическим культурам P. multocida // А.И. Сосницкий, В.П. Заболотная // Ве-теринарна медицина. 2004. - № 84. - С. 636-641.

88. Стегний, Б.Т. Ранняя диагностика и профилактика некоторых инфекционных заболеваний / Б.Т. Стегний, A.M. Коваленко, И.И. Белоконов и др. // Ветеринарна медицина. 2002. - № 80. - С. 569-571.

89. Стегний, Б.Т. Современные проблемы использования антибиотиков в ветеринарии и животноводстве / Б.Т. Стегний, Г.А. Красников // Ветеринарна медицина.-2001.-№ 79.-Т. 1.-С. 3-15.

90. Страчунский, JI.C. Клиническая фармакология и терапия / JI.C. Стра-чунский, P.C. Козлов // Фармакология и терапия. 1997. - Т. 6. - № 2. - С. 27-31.

91. Стрельцов, А.Г. Профилактическая эффективность колипротектана из клеточных антигенов компонентов эшерихий при колибактериозе поросят-сосунов: автореф. дисс. канд. наук/ А.Г. Стрельцов. Алма-Ата, 1988.

92. Татарчук, О.П. Новые тенденции антибиотикотерапии / О.П. Татарчук // Ветеринария. 2004. - № 12. - С. 12-14.

93. Татарчук, О.П. Тилозин тартрат: рациональная антибиотикотерапия / О.П. Татарчук // Ветеринария. 2004. - № 3. - С. 11-12.

94. Татарчук, О.П. Апрамицин в борьбе с отечной болезнью поросят / О.П. Татарчук // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. 2005. - № 4. - С. 28 - 29.

95. Татарчук, О.П. Эффективность и экономичность: микрогранулят тило-зина в комбикормах / О.П. Татарчук // Ветеринария. 2006. - № 2. - С. 1618.

96. Татарчук, О.П. Апрамицин и проблема плазмидной резистентности бактерий / О.П. Татарчук // Ветеринария. 2006. - № 4. - С. 10-11.

97. Терехов, В.И. Пути решения проблемы острых кишечных болезней молодняка / В.И. Терехов // Ветеринарный консультант. 2003. - № 23-24. -С. 12-13.

98. Толяронок, Г.Е. Эффективность и ошибки антибиотикотерапии при бактериальных инфекциях животных / Г.Е. Толяронок // Учёные записки Витебской государственной академии ветеринарной медицины. 2004. - Т. 40. -ч. 1. - С. 316-317.

99. Толяронок, Г.Е. Чувствительность возбудителей бактериальных инфекций животных к антибиотикам и обоснованность их комбинированного применения / Г.Е. Толяронок // Практик. 2006. - № 2. - С. 64-68.

100. Ушкалов, В.О. Фактори патогенност1 та ix значения при лабораторшй Д1агностищ захворувань, спричинених умовно-патогенними бактер!ями / В.О. Ушкалов // Ветеринарна медицина. 2001. - № 79. - Т. 2. - С. 160-168.

101. Фельдман, И.И. Особенности эпизоотологии и профилактики диареи у телят / И.И. Фельдман // Ветеринария. 1993. - № 7 - С. 31-33.

102. Филимонов, А.Е. Стабильность и динамика р-плазмид в популяциях Е. coli в условиях непрерывного культивирования / А.Е. Филимонов, И.Н. Рублевская, А.М Воронин // Микробиология. 1985. - Т. 54. - Вып. 2. - С. 227231.

103. Финогенов, А.Ю. Антибиотико-ассоциированные колиты. Лечениеи профилактика / А.Ю. Финогенов // Учёные записки Витебской государственной академии ветеринарной медицины. 2002. - Т. 38. - ч. 1. - С. 120— 122.

104. Шабунин, C.B. Антимикробное действие фармакологических композиций / C.B. Шабунин // Ветеринария. 1999. - № 9. - С. 47-48.

105. Шахов, А.Г. Влияние состояния иммунного статуса на возникновение на возникновение и развитие респираторных болезней свиней / А.Г. Шахов, М.И. Рецкий, Ю.Н. Масьянов и др. // Доклады РАСХН. 2009. - № 4. - С. 55-58.

106. Шахов, А.Г. Достижения и основные направления исследований по изучению болезней молодняка сельскохозяйственных животных / А.Г. Шахов // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях.

107. Международная научно-практическая конференция. Воронеж, 17-19 сентября 2008года. / Материалы конференции. Воронеж: Издательство «Истоки», 2008.-С. 3-12.

108. Шахов, А.Г. Роль процессов свободнорадикального окисления в патогенезе инфекционных заболеваний / А.Г. Шахов // Свободные радикалы, ан-тиоксиданты и здоровье животных. Материалы конференции. Воронеж: ВГУ. - 2004. - С. 3-9.

109. Шахов, А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят // Ветеринарный консультант. 2003. -№ 1.-С. 11-13.

110. Шахов, А.Г. Антимикробная активность диоксинора / А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, А.И. Никулин и др. // Первый съезд ветеринарных фармакологов России. Воронеж 21-23 июня 2007года: Материалы съезда. Воронеж, 2007.-С. 661-663.

111. Шахов, А.Г. Антимикробная активность комплексного препарата диок-сиген / А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, Г.А. Востроилова и др. // Первый съезд ветеринарных фармакологов России. Воронеж 21-23 июня 2007года: Материалы съезда. Воронеж, 2007. - С. 658-660.

112. Шахов, А.Г. Антимикробная активность диоксинора / А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, А.И. Никулин и др. // Первый съезд ветеринарных фармакологов России. Воронеж 21-23 июня 2007года: Материалы съезда. Воронеж, 2007.-С. 661-663.

113. Шахов, А.Г. Сохранение поросят при их доращивании / А.Г. Шахов // Свиноводство. 2004. - № 2. - С. 27-29.

114. Шахов, А.Г. Фрадизин-50 при пневмонии поросят (профилактика, лечение) / А.Г. Шахов, В.А. Антипов, Н.П. Зуев и др. // Ветеринария. 1991. -№ 11. - С. 54-56.

115. Шахов, А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят / А.Г. Шахов // Ветеринарный консультант. 2003. - № 1. - С. 4-5.

116. Шахов, А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят / А.Г. Шахов // Актуальные проблемыболезней молодняка в современных условиях: матер, междунар. науч.-практ. конф. Воронеж: ВГУ, 2002. - С. 3-8.

117. Шахов, А.Г. Этиология респираторных болезней поросят в промышленных свиноводческих хозяйствах и меры их профилактики / А. Шахов, JI. Сашнина, М. Лебедев и др. // Свиноводство. 2008. - № 5. - С. 26-28.

118. Шахов, А.Г. Этиология факторных инфекций животных и меры их профилактики / А.Г. Шахов // Ветеринарная патология. 2005. - № 3. - С. 22-24.

119. Шахов, А.Г. Роль кокков в этиологии и патогенезе бронхопневмоний у поросят и новые средства терапии / А.Г. Шахов, В.В. Палунина // Ветеринария. 1991. - № 8. - С. 29-32.

120. Шкиль, H.A. Антимикробная активность препарата арговит / H.A. Шкиль, М.Ю. Соколов, H.H. Шкиль, В.А. Бурмистров // Вестник РАСХН. -2006.-№4.-С. 89-90.

121. Шпанько, Ю.Б. Профилактика и терапия диарей телят и поросят в краснодарском крае: дис. . канд. вет. наук / Ю.Б. Шпанько. Краснодар, 2007. - 160 с.

122. Шпонько, Ю.Б. Совершенствование методов лечения и профилактики эшерихиоза поросят / Ю.Б. Шпонько // Ветеринарная патология. 2007. - № 2. -С.191-192.

123. Щербаков, П. Профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят / П. Щербаков, Л. Малявкина, Т. Щербакова, Е. Наговици-на // Свиноводство. 2002. - № 5. - С. 25-26.

124. Щетинин, Н.В. Полимиксины новый взгляд на известные антибиотики / Н.В. Щетинин // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2000. - Т. 2. - № 3. - С. 68-73.

125. Aarestrup, F.M. Emergence of resistance to fluoroquinolones among bacteria causing infections in food animals in Denmark / F.M. Aarestrup, N.E. Jensen, S.E. Jor-sal, Т.К. Nielsen // Veter. Rec. 2000. - Vol. 146. - № 3. - P. 76-78.

126. Aarestrup, F.M. Antimicrobial susceptibility testing of Mycoplasma hyo-synoviae isolated from pigs during 1965 to 1971 and during 1995 and 1996 / F.M. Aarestrup, N.F. Friis // Veter. Microbiol. 1998. - Vol. 61. - № 1/2. - P. 33-39.

127. Aarestrup, F.M. Emergence of resistance to fluoroquinolones among bacteria causing infections in food animals in Denmark / F.M. Aarestrup, N.E. Jensen, S.E. Jorsal, Т.К. Nielsen // Veter. Rec. 2000. - Vol. 146. - № 3. - P. 76-78.

128. Ahmed, A.M. Genetic analysis of antimicrobial resistance in Escherichia coli isolated from diarrheic neonatal calves / A.M. Ahmed, E.E.A. Younis, S.A. Osman et al. // Veterinary Microbiology. 2009. - Vol. 36 № 3/4. - P. 397-402.

129. Aktan, I. Characterisation of attaching-effacing Escherichia coli isolated from animals at slaughter in England and Wales / I. Aktan, K.A. Sprigings, R.M. La Ragione et al. // Veterinary Microbiology. 2004. - Vol. 102. - № 1/2. - P. 43-53.

130. Amir, S. Polymyxin B is an inhibitor of insulin-induced hypoglycemia in the whole animal model: Studies on the mode of inhibitory action / S. Amir, S. Sasson, N. Kaiser // J Biol Chem. 1987. - № 262. - P. 6663.

131. Awad-Masalmeb, M. Zum Vorkommen des K88-Antigens bei enterophato-genen E. coli / M. Awad-Masalmeb // Wien. tier. Mschr. 1983. - Vol. 70. - № 4. -C. 122-128.

132. Beringer, P. The clinical use of Colistin in patients with cystic fibrosis / P. Beringer // Curr Opin Pulm Med. 2001. - № 7. - S. 434-440.

133. Bertschinger, H.U. Active oral immunization of suckling piglets to prevent colonization after weaning by enterotoxigenic Escherichia coli with fimbriae Fl8 / H.U.

134. Bertschinger, V. Nief, H. Tschape // Veter. Microbioi. 2000. -Vol. 1. - № 3/4. -P. 255-267.

135. Beskow, P. Relationships between selected climatic factors in fattening units and their influence on the development of respiratory diseases in swine / P. Beskow, M. Norqvist, P. Wallgren // Acta veter. scand. 1998. - Vol. 39. - № 1. - P. 49-60.

136. Bilic, V. Osjetljivost bakterija izdvojenih iz svinja / V. Bilic, B. Habrun, A. Humski // Praxis veter. 1999. - Vol. 47. - № 1/2. - P. 39^16.

137. Booher, S.L. Persistence of Escherichia coli 0157:H7 in experimentally infected swine / S.L. Booher, N.A. Cornick, H.W. Moon // Veter. Microbiol. 2002. -Vol. 89. - № 1. - P. 69-81.

138. Bushby S.R.M. Trimetoprim, a sulphonamide potentiator / S.R.M. Bushby, G.H. Hitchings //Br. J. Pharmacol., 1968, 33, 72-90.

139. Bujnakova, D. Aggregation of lactobacilli and bifidobacteria with Escherichia coli 0157 / D. Bujnakova, E. Vlkova, V. Rada, V. Kmet // Folia microbioi. 2004. - Vol. 49. - № 2. - P. 143-146.

140. Brogden, R.N. Piroxicam. A reappraisal of its pharmacology and therapeutic efficacy / R.N. Brogden, R.C. Heel, T.M. Speight, G.S. Avery // Drugs. 1984. -Oct. 28(4). -S. 292-323.

141. Catchpole, C.R. A reassessment of the in vitro activity of Colistin sulphomethate sodium / C.R. Catchpole, J.M. Andrews, N. Brenwald, et al. // J Antimicrob Chemother. 1997. - № 39. s. 255 -260.

142. Chao-Fu Chang, Antimicrobial susceptibility and plasmid analysis of Acti-nobacillus pleuropneumoniae isolated in Taiwan / Chao-Fu Chang, Tung-Mao Yen, Chin-Cheng Chou et al. // Veter. Microbiol. 2002. - Vol. 84. - № 1/2. - P. 169-177.

143. Collins, M.S. Inhibition of Coccidiodes immitis in vitro and enhancement of amphotericin B by polymyxin B / M.S. Collins, D. Pappagagiorus // An-timicrob Agents Chemother. 1975. - № 7. - P. 419.

144. Da Silva, A.S. Investigation of putative CDT gene in Escherichia coli isolates from pigs with diarrhea / A.S. Da Silva, S. Leite D.da // Veter. Microbiol. 2002. -Vol.89. - № 2/3. - P. 195-199.

145. Fekety, J. The treatment of gram-negative bacillary infections with Colistin / J. Fekety, P.S. Norman, L.E. Cluff // Ann Intern Med. 1962. - № 57. - P. 214.

146. Gales, A.C. Conteporary assessment of susceptibility testing methods for polymyxin B and Colistin: review of available interpretative criteria and quality control guidelines / Gales A.C. // J Clin Microbiol. 2001. - № 39. - P. 183-190.

147. Go, E.S. Clinical and molecular epidemiology of Acinetobacter infections sensitive only to polymyxin B and sulbactam / E.S. Go, C. Urban, J. Burns // Lancet. 1994. -№344.-P. 1329-1332.

148. Hoeruegel, K. Undersuchungen zur Klinik und Therapie desSaugferkel-fruhdurchfalles / K. Hoeruegel, J. Zabke // Mh. Veter.-Med. 1985. - Vol. 40. - № 5. -S. 155-159.

149. Hofmann, W. Prophylaxe infektiöser Diarrhoen bei der Kalbermast und -aufzucht / W. Hofinann // Bericht / Dt. Vet. Ges. Kongr. 1987. - Vol. 17. - P. 137150.

150. Hogardt, M. Pitfalls of polymyxin antimicrobial susceptibility testing of Pseu-domonss aeruginosa isolated from cystic fibrosis patients / M. Hogardt // J. Antimicrob Chemother. 2004. - № 54. - P. 1057-1061.

151. Huovinen, P. Trimethoprim and Sulfonamide Resistance / P. Huovinen et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 1995. - № 39. - P. 279-281.

152. Jay, C.M. Enterotoxigenic K99⁺ Escherichia coli attachment to host cell receptors inhibited by recombinant pili proteinal / C.M. Jay, S. Bhaskaran, K.S. Rathore, S.D. Wagnela // Veterinary Microbiology. 2004. - Vol. 101.-№3.-P. 153-160.

153. Johann, C.D. Genetic management of infectious diseases: a heterogeneous epi-demio-genetic model illustrated with S. aureus mastitis / C.D. Johann // Genet. Sel. Evol. 2005. - Vol. 37. - P. 437-453.

154. Kang, S.J. Occurrence and characteristics of enterohemorrhagic Escherichia coli 0157 in calves associated with diarrhea / SJ. Kang, S.J. Ryu, J.S. Chae et al. // Veterinary Microbiology. 2004. - Vol. 98. - № 3/4. - P. 323-328.

155. Karakulska, J. Resistance to tetracyclines of pathogenic Escherichia coli strains / J. Karakulska // Advances in agr. sciences I Agr. univ. of Szczecin.-Szczecin. 2006. -№10.-P. 51-58.

156. Kim, J. Prevalence of eaeA+ Escherichia coli isolated from pigs with diarrhea / J. Kim, C. Choi, C. Chae // veter, diagnostic Investig. 2001. - Vol. 13. - № 4. - P. 355356.

157. Ko, K.Y. Ethylenediaminetetraacetate and lysozyme improves antimicrobial activities of ovotransferrin against Escherichia coli 0157:H7 / K.Y. Ko, A.F. Mendon-cam, H. Ismail, D.U. Ann // Poultry Sc. 2009. - Vol. 88. - № 2. - P. 406-414.

158. Kofer, J. Aufbau eines Resistenzmonitoringprogrammes in der steirischen Fleischproduktion / J. Kofer, P. Pless, K. Fuchs // Fleischwirtschaft. 2002. - Jg. 82. -№ 1. - P. 94-97.

159. Kottferova, J. Welfare from the viewpoint of the early weaning of piglets / J. Kottferova, O. Ondrasovicova, M. Ondrasovic et al. // Folia veterinaria. 2005. -Vol. 49. -№ 3, suppl. - P. 51-53.

160. Li, J. Colistin: the re-emerging antibiotic for multidrug-resistant Gram-negative bacterial infections / J. Li, R.L. Nation, J.D. Tunridge et al. // Lancet Infect Dis. 2006. - № 8. - P. 589-601.

161. Li, J. Pharmacokinetics of Colistin methanesulphonate and Colistin inrats following an intravenous dose of Colistin methanesulphonate / J. Li, R.W. Milne, R.L. Nation et al. // J Antimicrob Chemoter. 2004. - № 53. - S. 837-840.

162. Li, J. Use of high perfomance liquid chomotography to stady the farmacoki-netics of Colistin sulfare in rats following intravenous administration / J. Li, R.W. Milne, R.L. Nation et al. // Antimicrob Agents Chemother. 2003. - № 47. - P. 176-670.

163. Li, J. Steady-state pharmacokinetics of intravenous colistin methane sul-phonate in patients with cystic fibrosis / J. Li, R.W. Milne, R.L. Nation et al. // An-timicrob Chemoter. 2003. - № 52. - P. 987-992.

164. Mainil, J.G. Virulence plasmids of enterotoxigenic Escherichia coli isolates fron piglets / J.G. Mainil, C. Daube, E. Jacquemin et al. // Veter. Microbiol. -1998.-Vol. 62.-№4.-P. 291-301.

165. Malik, A. Serotypes and intimin types of intestinal and faecal strains of eae+ Escherichia coli from weaned pigs / A. Malik, I. Toth, L. Beutin et al. // Veterinary Microbiology. 2006. - Vol. 114. - № 1/2. - P. 82-93.

166. Martel, J-L. New trends in regulatory rules and surveillance of antimicrobial resistance in bacteria of animal origin / J-L. Martel, F. Tardy, P. Sanders, J. Boisseau // Vet. Res. 2001. - Vol. 32. - № 3-4. - P. 381-392.

167. Melin, L. Aspects on feed related prophylactic measures aiming to prevent post weaning diarrhea in pigs / L. Melin, P. Waligren // Acta veter. scand. 2002. - Vol. 43. - № 4. - P. 231-245.

168. Meyers, B.R. Polymyxin B. Colistin. In: Gorbach S.L., Bartlett J.G., Blacklow N.R., editors / B.R. Meyers, A.C. Gurtman // Infect Dis. 1998. -P.2594.

169. Moore, R.A. Involvement of outer membrane of Pseudomonas cepacia in aminoglycoside and polymyxin resistance / R.A. Moore, R.E. Hancock // Antim-icrob Agents Chemother. 1986. - № 30. - P. 923.

170. Noa, M. Antimicrobial resistance of pathogenic microorganisms: overview and role of veterinary medicine / M. Noa // Rev. Salud anim. 2004. - Vol. 26. - № 1. - P. 7-11.

171. Noa, M. Antimicrobial resistance of pathogenic microorganisms: overview and role of veterinary medicine / M. Noa // Rev. Salud anim. 2004. - Vol. 26. - № 1. -P. 7-11.

172. Oporto, B. Escherichia coli 0157:H7 and Non-0157 Shiga Toxin-producing E. coli in Healthy Cattle, Sheep and Swine Herds in Northern Spain / B. Oporto, J.I. Esteban, G.Aduriz et al. // Zoonoses & Public Health. 2008. - Vol. 55. -№ 2. -P. 73-81.

173. Orden, J.A. Quinolone risistence in Escherichia coll strins isolated from di-arrhoeic lambs in Spain / J.A. Orden, J.A. Ruiz-Santa-Quiteria, S. Grcia et al. // Veter. Rec. 2000. - Vol. 147. - № 20. - P. 576-578.

174. Osek, J. Multiplex polymerase chain reaction assay for identification of enterotoxigenic Escherichia coli strains / J. Osek // Veter. diagnostic Investig. 2001. -Vol. 13. -№ 4. - P. 308-311.

175. Osek, J. Metoda real-time PCR (r-PCR) w diagnostyce raolekularnej shiga-toksycznych Escherichia coli / J. Osek, M. Weiner // Med. weter. 2004. - Vol. 60. -№ 7. - S. 687-691.

176. Osek, J. Detection of cytolethal distending toxin genes in shiga toxin-producing Escherichia coli isolated from different sources / J. Osek // Bull. Veter. Inst, in Ptt/ajvy. 2005. - Vol. 49. -№ 2. - P. 153-156.

177. Osek, J. Identification of the subtilase cytotoxin gene among shigatoxigenic Escherichia coli isolated from different sources / J. Osek // Bull. Veter. Inst, in Pu/awy. 2006. - Vol. 50. - № 1. - P. 29-33.

178. Peterson, A.A. Decreased binding of antibiotics to lipopolysaccharides from polymyxin-resistant strains of Escherichia coli and Salmonella typhimurium / A.A. Peterson, S.W. Fesik, E.J. McGroarty // Antimicrob Agents Chemother. -1987.-№31.-P. 230.

179. Pirro, F. In-vitro-Aktivitat von Enroiloxacin und anderen Fluorochinolonen bei Krankheitserregerr: von Klein- uni Nutztieren / F. Pirro // Tierarztl, Umsch. -2000. -Jg. 55. № 7. - S. 389-397.

180. Polacek, M.L. Effective Salmonella eradication in a large growing finishing pig unit / M.L. Polacek, G. Bilkei // Folia veterinaria, 2006. P. 186-188.

181. Rigobelo, E.C Virulence factors of Escherichia coli isolated from diarrheic calves / E.C. Rigobelo, H.J. Gamez, J.M. Marin et al. // Arq. brasil. Med. veter. Zootecn. 2006. - Vol. 58. - № 3. - P. 305-310.

182. Ruzauskas, M. Survey of antimicrobial susceptibility among some pathogenic and commensal bacteria isolated from pigs / M. Ruzauskas, I. Klimiene, D. Senius Z. // Med-weter. 2006. - Vol. 62. - № 4. - P. 397-400.

183. Rose, N. Occurrence of respiratory disease outbreaks in fattening pigs: relation with the features of a densely and a sparsely populated pig area in France / N. Rose, F. Madec // Veter. Res. 2002. - Vol. 33. - № 2. - P. 179-190.

184. Rosenblatt, J.E. Combined activity of sulfamethoxazole, trimethoprim and polymyxin B against gram-negative bacilli / J.E. Rosenblatt, P.R. Stewart // Antimicrob Agents Chemother. 1974. - № 6. - P. 84.

185. Schwarz, S. Use of antimicrobials in veterinary medicine and mechanisms of resistance / S. Schwarz, E. Chaslus-Dancla // Vet. Res. 2001. - Vol. 32. - № 3-4.-P. 201-225.

186. Schwarz, S. Nachweismoglichkeiten, Vorkommen und Ausbreitung an-tibioticher Resistenzgene bei Staphylokokken / S. Schwarz, C. Werckenthin // Tierarztl. Umsch. 1998. - Jg. 53. - № 6. - S. 314-318.

187. Skold, O. Resistance to trimethoprim and sulfonamides / O. Skold // Vet. Res. 2001. - Vol. 32. - №3-4. - P. 261-273.

188. Sorum, H. Resistance to antibiotics in the normal flora of animals / H. Sorum, M. Sunde // Vet. Res. 2001. - Vol. 32. - №3-4. - P. 227-241.

189. Stordeur, P. Examination of Escherichia coli from poultry for selected adhe-sin genes important in disease caused by mammalian pathogenic E. coli / P. Stordeur, D. Marlier, J. Blanco et al. // Veter. Microbiol. 2002. - Vol. 84. - P. 231241.

190. Tattini, A. Malattia degliedem, controllo din caso / A.Tattini // Riv. Suinic. 1988. t. 29. #2. P. 29-33.

191. Uemura, R. Protracted mass occurrences of sudden death among piglets with Escherichia coli enterotoxaemia / R. Uemura, M. Sueyoshi, Y. Taura, H. Na-gatomo // Japan Veter. Med. Assn. 2004. - Vol. 57. - № 4. - P. 231-234.

192. Wasyl, D. Antimicrobial resistance of Salmonella isolated from animals and feed in Poland / D. Wasyl, A. Hoszowski // Bull. Veter. Inst, in Pulawi. 2004. -Vol. 48. -№ 3. - P. 233-240.

193. Weiner, M. Identification of shiga toxin producing Escherichia coli 0157:H7 in beef samples stored at different temperatures using multiplex PCR / M. Weiner // Bull. Veter. Inst, in Pulawy. 2007. - Vol. 51. - № 4. - P. 591-594.

194. Weiner, M. Identification and characterization of Shiga toxin-producing Escherichia coli strains originating from raw beef by the use of a molecular probe and multiplex PCR / M. Weiner // Med. wefer. 2008. - Vol. 64. -№ 5. - P. 668-672.

195. Werner, M. Development of multiplex PCR assays for identifying and defining the characteristics of Shiga toxin-producing Escherichia coli / M. Werner // Med. weter. 2008. - Vol. 64. - № 3. - P. 310-313.

196. Yao, G. Effect of Escherichia coli heat-labile enterotoxin on the myoelectric activity of the duodenum in weaned pigs / G. Yao, J. Wolinski, R. Zabielski // Journal of Veterinary Medicine Series A. 2004. - Vol. 51. - № 3. - P. 106-112.

197. Zurek, L. Evaluation of the German cockroach (Blattella germanica) as a vector for erotoxigenic Escherichia coli Fl8 in confined swine production / L. Zurek, C. Schal // Veterinary Microbiology. 2004. - Vol. 6. - № 4. - P. 263-267.

198. Vasserman, Y. Pitcovski J. Genetic detoxification and adjuvant-activity retention of Escherichia coli enterotoxin LT / Vasserman, Y. Pitcovski J // Avian Patholagy.-2006.-Vol.35, N 2.-P. 134-140.