Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Факторы, определяющие процесс адсорбции высокомолекулярных белков плазмы крови на мембранах эритроцитов при мышечных нагрузках

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Чирикова, Ольга Александровна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Биохимические и гематологические показатели крови у спортсменов после тренировки

3.2 Биохимические и гематологические показатели крови у спортсменов на финише полумарафонского забега

3.3 Биохимические и гематологические показатели крови у спортсменов на финише марафона и через сутки после марафонского забега

3.4 Изменение осмотической резистентности популяции эритроцитов при разных функциональных состояниях спортсменов

3.5 Изучение роли пассивных ионных каналов в регуляции осмотической стойкости клеток

3.6 Влияние; мембранных белков и связанных с ними сиаловых кислот на процессы адсорбции макромолекул на эритроцитарных мембранах

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Факторы, определяющие процесс адсорбции высокомолекулярных белков плазмы крови на мембранах эритроцитов при мышечных нагрузках"

Среди множества актуальных вопросов современной биологии и медицины микроциркуляция занимает одно из ведущих мест. Повышенный интерес к изучению различных аспектов этой проблемы не случаен, поскольку определяется той фундаментальной ролью, которую играют процессы транспорта и обмена биологических жидкостей и растворенных в них веществ для жизнедеятельности организма [86, 301].

В области микроциркуляторного русла реализуются все основные функции сердечно-сосудистой системы. Состояние микроциркуляции во многом определяет функциональные возможности сердечно-сосудистой системы, а, следовательно, и физическую работоспособность организма [71].

В настоящее время имеет место пристальный интерес ученых к процессам адаптации системы кровообращения и реологии крови при занятиях спортом [31, 32, 33, 110, 111]. Изучение приспособления организма к мышечным нагрузкам является удобной моделью для понимания адаптации в целом, помогает выявить потенциальные резервы различных органов и систем, устойчивость объективных критериев адаптивности организма и наметить пути управления данным процессом.

Систематические физические нагрузки разной интенсивности и длительности вызывают изменения, касающиеся как состояния сосудистой системы, так и самой крови [30, 31, 32, 136, 163].

В области микроциркуляторного русла реология крови определяется двумя основными процессами - агрегацией и деформацией клеточных элементов [64]. На данный момент существуют две модели агрегации эритроцитов (мостиковая модель и модель истощения) [40, 189, 224, 268, 269, 289, 317]. В обоих случаях процесс образования агрегатов связывают с наличием или отсутствием на поверхности мембран эритроцитов адсорбирован 4 ч ных белков. Согласно мостиковой модели высокомолекулярные белки плазмы, такие как фибриноген и макроглобулины, обеспечивают образование молекулярных мостиков между клетками, способствуя преодолению сил электростатического отталкивания между клетками [86, 320]. В то же время, низкомолекулярные белки, не перекрывающие критическое расстояние взаимного отталкивания, адсорбируясь на мембранах, препятствуют агрегации красных клеток крови. Адсорбция белков на поверхности клеток в свою очередь приводит к изменению вязко-эластических свойств мембран и, следовательно, оказывает непосредственное влияние на деформируемость клеток [276].

Помимо плазменных белков большое влияние на процессы агрегации оказывает состояние клеточного фактора [64, 275, 276]. При циркуляции в сосудистой системе клетки подвергаются различным воздействиям и, поэтому, с возрастом у эритроцитов происходят изменения в биохимическом составе, структуре мембран и гликокаликса, электроповерхностных свойств и др.

Повышенное агрегатообразование ведет к возникновению нарушений периферического кровотока и тем самым оказывает отрицательное влияние на тканевой метаболизм. С другой стороны, у спортсменов в состоянии относительного покоя выявлено снижение агрегационной способности, что является приспособительной реакцией к мышечным нагрузкам [239].

Анализ данных литературы показал, что, несмотря на важность данных процессов, до сих пор нет точного представления о том, какие структурные субстраты на поверхности клетки ответственны за адсорбцию биополимеров, а, следовательно, и за агрегацию эритроцитов.

Вопрос о взаимодействии плазменных макромолекул с мембранами эритроцитов представляет значительный интерес. Образованная мембранами наружная поверхность клеток представляет собой универсальный многоточечный гетерофункциональный сорбент. Полярные «головки» ли-пидов, образующие внешнюю поверхность двойного липидного слоя, содержат анионогенные и катионогенные группировки, а также группировки, способные образовывать водородные связи. Если рассматривать адсорбцию на поверхности липидного бислоя, то она не будет ограничена количеством мест адсорбции, что, в свою очередь, противоречит конкурентному характеру адсорбции биополимеров [118].

Участки макромолекулярных соединений могут сорбироваться на выступающих мембранных белках, которые составляют заметную долю от общей поверхности мембраны эритроцита. В структуру клеточных мембран входят и углеводы, несущие ионизируемые группировки, которые потенциально также могут быть центрами адсорбции.

Таким образом, исследование структур, ответственных за адсорбцию полимеров, позволит уточнить представления о процессах агрегации эритроцитов.

Цель исследования

Целью данной работы было изучение факторов, влияющих на процессы адсорбции белков плазмы на поверхности красных клеток крови у спортсменов при мышечных нагрузках.

Задачи:

1. Исследовать адсорбцию высокомолекулярных белков плазмы на эритроцитах у спортсменов в различных функциональных состояниях.

2. Выявить влияние концентраций отдельных фракций белков плазмы на процессы адсорбции.

3. Изучить влияние возрастного спектра популяции эритроцитов на процессы адсорбции

4. Исследовать влияние сиаловых кислот, связанных с белковыми структурами, на процессы адсорбции макромолекул на эритроцитарных мембранах.

Научная новизна исследования

Впервые с использованием метода импедансной спектроскопии исследовано изменение адсорбционных свойств эритроцитарных мембран у спортсменов при разных функциональных состояниях организма. Выявлены закономерные изменения степени адсорбции высокомолекулярных белков плазмы на эритроцитах при выполнении мышечных нагрузок различной продолжительности в диапазоне от 60 до 180 минут.

Изучено влияние концентрации отдельных фракций белков плазмы на степень их адсорбции на клеточных мембранах.

В модельных экспериментах со встраиванием грамицидиновых ионных каналов показана важная роль ионных каналов в мембранах эритроцитов в обеспечении их осмотической стойкости.

Выявлено ;влияние сиаловых кислот связанных с мембранными белками эритроцитов на степень адсорбции белков плазмы.

Показана важная роль состояния структурных компонентов мембраны в детерминации процесса адсорбции высокомолекулярных белков плазмы на эритроцитах.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные в процессе исследования данные позволяют расширить имеющееся представление о факторах, обеспечивающих адсорбцию биополимеров на клеточных мембранах. В свою очередь, соотношение между адсорбирующимися высоко- и низкомолекулярными фракциями белков влияет на агрегационную способность красных клеток крови.

Выявленное снижение показателя адсорбции при выполнении экстремальных нагрузок позволяет определять переносимость тренировочных нагрузок при воспитании выносливости.

Результаты работы могут быть использованы для оценки функционального состояния спортсменов и соответствующей корректировки тренировочных планов, а в медицинской практике для коррекции агрегацион-ной активности эритроцитов.

Материалы диссертации могут быть использованы для преподавания частных разделов физиологии, таких как система крови и система кровообращения, при написании соответствующих учебников и руководств. Полученные материалы и примененные методы исследования могут быть использованы для проведения дальнейших исследований в гемореологии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Качественные характеристики процесса адсорбции макромолекул на эритроцитарных мембранах определяются концентрационными соотношениями белков плазмы.

2. У спортсменов при выполнении больших нагрузок дополнительным фактором, детерминирующим адсорбцию, является изменение возрастного спектра эритроцитов и обусловленное им наличие сиаловых кислот, связанных с мембранными белками.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Чирикова, Ольга Александровна

Выводы

1. Выполнение больших, но не предельных по длительности нагрузок (не более 1,5 часов) приводит к повышению степени адсорбции белков на эритроцитарных мембранах вследствие повышения концентраций а.2 и /3 глобулинов плазмы крови.

2. При высокоинтенсивных и околопредельных по длительности нагрузках (более 2 часов) степень адсорбции на мембранах эритроцитов снижается, несмотря на высокие концентрации высокомолекулярных фракций белков плазмы.

3. Одним из факторов, препятствующих адсорбции макромолекул к мембранным белкам, является наличие сиаловых кислот, связанных с указанными белками.

4. Важную роль в обеспечении осмотической стойкости эритроцитов играет количество канальных структур, отвечающих за пассивный транспорт ионов из эритроцитов. Увеличение содержания подобных канальных структур в мембранах повышает осмотическую стойкость клеток.

5. При не предельных по времени нагрузках ведущая роль принадлежит концентрационным соотношениям белков, а при длительных субпредельных - наличие сиаловых кислот, связанных со структурными мембранными белками.

6. При различном характере нагрузок решающую роль в обеспечении адсорбции играют разные факторы. В случаях с неизменённым возрастным спектром циркулирующих эритроцитов основным фактором является концентрационные соотношения белков плазмы. При изменениях возрастного спектра эритроцитов ведущим фактором становится наличие связанных с мембранными белками сиаловых кислот.

Заключение

Таким образом, анализ литературы показал, что в настоящее время имеет место значительный интерес ученых к процессам ответственным за агрегацию красных клеток крови. Согласно мостиковой модели агрегации объединение эритроцитов осуществляется вследствие адсорбции макромолекул на эритроцитарных мембранах. Однако, несмотря на важность данных процессов, до сих пор нет точного представления о том, какие факторы определяют качественные и количественные характеристики адсорбции, включая и структурные субстраты на поверхности клетки ответственные за адсорбцию биополимеров, а, следовательно, и за агрегацию красных клеток крови.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общий план исследования

Согласно данным литературы [9, 31, 32, 60, 63, 79, 183, 249], физическая нагрузка разной интенсивности и длительности влияет на реологические свойства крови. Поэтому в качестве экспериментальной модели мы i использовали группу спортсменов мужчин (в возрасте 18-30 лет), занимающихся циклическими видами спорта с преимущественной направленностью тренировочного процесса на выносливость и аэробным режимом энергообеспечения: легкоатлеты-стайеры и лыжники-гонщики с достаточно высоким уровнем подготовки (первый спортивный разряд - мастера спорта международного класса).

Обследование выполнено в следующих состояниях:

1 - относительного покоя. Регистрация выбранных параметров проводилась в состоянии относительного покоя, т.е. не менее чем через 42 чаi са после последней тренировочной нагрузки (п=33). Данная группа была использована в качестве контроля.

2 - Влияние интенсивных, но не предельных по длительности нагрузок (70 - 80 мин) изучали на финише легкоатлетического полумарафона 21 км, (п=8).

3 - Влияние высокоинтенсивных и длительных нагрузок (150 - 180 мин.) изучали на финише лыжного марафона 50км, (п=10).

Отсроченное влияние мышечной изучали нагрузки через 18-20 часов:

4 -после тренировок (п=27).

5 -после марафона, (п=10).

Во всех случаях кровь для анализа брали из локтевой вены в объеме 25 мл. 20 мл стабилизировали гепарином (0,05мл гепарина с концентрацией 25000ед). Для определения содержания фибриногена 5 мл крови стабилизировали 0,5 мл цитратом натрия (3,8%). Забор осуществлялся в асептических условиях квалифицированным медперсоналом.

2.2. Приготовление концентрированных суспензий эритроцитов в различных средах

Концентрированные суспензии нативных клеток получали центрифугированием крови в течение 15 минут при 1000§, затем тщательно отдеI ляли от плазмы. Сравнительно малая величина ускорения использовалась с целью минимизаций гравитационных воздействия на клеточные мембраны.

Для трехкратных отмывок эритроцитов применялся К+-№+-фосфатный буферный раствор с осмолярностью 300 мосм/л (рН - 7,4). При первых двух отмывках время центрифугирования составило 5 минут, при третьей - 15 минут.

При ресуспендировании клетки, предварительно отмытые в фосфатном буферном растворе, инкубировали в аутологичной плазме в течение 15 минут, затем центрифугировали 15 минут при 1000§ и готовили концентрированную суспензию.

Во всех случаях для измерений использовались клетки из нижней части образца, где достигалась наиболее плотная упаковка.

2.3. Определение показателя гематокрита

Определение гематокритного показателя нативной крови и приготовленных суспензий в различных средах производили в 100 мм капилляре I центрифугированием в течение 30 минут при 1000§. 30-минутная продолжительность центрифугирования позволила получать величину гематок-ритного показателя такую же, как и при стандартных условиях (7 минут при 12000g).

2.4. Определение концентрации белков в плазме крови

Определение общей концентрации белков плазмы крови осуществляли рефрактометрически и по биуретовой реакции [74, 156].

2.5. Определение белковых фракций

Определение белковых фракций проводили методом электрофореза на бумаге [74, 156].

2.6. Определение содержания фибриногена в плазме крови

Для оценки содержания фибриногена в плазме использовали классический сухо-воздушный метод Рутберга [128, 140]. После центрифугирования крови, стабилизированной цитратом натрия, отбирали 2 мл плазмы (больший объём использовался с целью повышения точности при взвешивании) и смешивали с 0,2 мл 5-ти % раствора хлорида кальция. Образовавшийся сгусток высушивали сначала фильтровальной прессованной бумагой «Filtrak», а затем на воздухе в течение 4 часов, и взвешивали на аналитических весах BJ1P-200 с дискретностью 0,05 мг.

Для пересчёта концентрации фибриногена в г/л вес сгустка в граммах умножали на коэффициент 111.

2.7. Определение количества эритроцитов

Число эритроцитов в объеме крови оценивали с использованием подсчёта клеток в камере Горяева в млн/мкл [140].

2.8. Определение концентрации гемоглобина в крови

Определение концентрации гемоглобина в крови проводили с использованием цианметгемоглобинового метода на фотоэлектроколоримет-ре при длине волны 540 нм [140].

2.9. Методика вискозиметрии

Вискозиметрия концентрированных суспензий красных клеток крови проводилась на юригинальном капиллярном полуавтоматическом вискозиметре, разработанном на кафедре медико-биологических основ спорта ЯГПУ на основе принципа измерения, предложенного М. Litt et al. [257].

Работа прибора основана на создании в системе градиента давления, передающегося исследуемой жидкости через гибкую мембрану и постепенно снижающуюся по мере истечения жидкости из капилляра. Измеряемая жидкость вытекает из замкнутой камеры через калиброванный капилляр. При этом давление в камере снижается. Скорость снижения давления пропорциональна вязкости вытекающей жидкости. Принципиальное отличие от традиционных методов заключается в изменении напряжения сдвига в процессе измерения, что позволяет за один измерительный цикл получать информацию о вязкости при напряжениях сдвига в достаточно широком диапазоне [137].

В приборе использовался капилляр длиной 120 мм и диаметром 500 мкм. На обоих концах капилляра имеются расширения длиной 25 мм и диаметром 4 мм для исследуемых образцов. Капилляр находится в термо-статируемом боксе, заполненном трансформаторным маслом. Постоянная температура 37°С поддерживается электронным регулятором с плавной регулировкой. Точность поддержания температуры ± 0,1 °С.

Измерение вязкости исследуемой жидкости производилось автоматически при значении напряжения сдвига - 0,5 Па. Автоматическое измерение скорости ладения давления осуществляется с изменяемой дискретностью 0,01 либо 1 мПа'с. При желании, прибор позволяет производить непрерывную запись скорости падения давления в измерительной камере на пишущее устройство.

Измерение давления производится электронной схемой на основе конденсаторного датчика и преобразователя емкость конденсатора - постоянное напряжение. Для уменьшения необходимого объема измеряемого образца, измерительная камера, соединительные трубки и калибровочная трубка заполнены водой. Исследуемый образец отделяется от воды прослойкой вазелинового масла.

В нашем исследовании при измерениях вязкости концентрированных суспензий эритроцитов мы использовали напряжение сдвига 0,5 Па.

Калибровка измерителя давлений осуществляется по водному столбу, подключаемому к измерительной части посредством крана при калибровке. Контрольными точками являются давления равные 0 и 60 мм водного столба.

Калибровка прибора по вязкости осуществляется с применением 40% раствора сахарозы, имеющего при 37 °С вязкость 3,5 мПах.

2.10. Методика импедансметрии

При проведении измерений импеданса нами использовалась камера с электродами из медицинской нержавеющей стали. Электроды были выполнены в виде трубок, расположенных на краях цилиндрической ячейки. Подобная конструкция камеры позволяла решить несколько вопросов. При достаточно большой площади электродов (по 260 мм ) и величине постоянной камеры 52 см"1, объем образца составлял не более 0,5 мл. Сравнительно большая величина постоянной измерительной ячейки была выбрана после экспериментальной работы с ячейками, имеющими величину постоянной от 0,05 до 600 см"1. Применяемая в исследовании ячейка с постоянной 52 см"1 явилась компромиссным вариантом, позволяющим снизить влияние поляризационных эффектов и, в то же время, допускающим работу измерителя импеданса на сравнительно высоких частотах с погрешностью не более 3%. Величину постоянной камеры определяли по 0ДМ раствору KCl, значение электропроводности которого известно с большой точностью [90].

Измерительная ячейка расположена в корпусе из прозрачной пластмассы заполненном трансформаторным маслом. В корпусе так же расположены нагревательный элемент, полупроводниковый датчик температуры и мешалка. Все измерения выполнены при температуре 37°С. Контроль температуры осуществлялся электронным регулятором с точностью ± 0.1 °С. Подключение измерительного бокса к импедансметру осуществлялось посредством штыревых разъемов, непосредственно к плате преобразователя импеданс-напряжение. Это позволило практически полностью исключить влияние соединительных проводов.

Измерения импеданса на фиксированных частотах 1, 100, 300 кГц проводились на специально изготовленном измерителе импеданса, имеющем основную погрешность не более 1%. В его структурную схему входили: переключаемый генератор синусоидальных сигналов на частоты 1, 100, 300 кГц с высокостабильным выходным напряжением, преобразователь импеданс-напряжение и цифровой измеритель переменных напряжений с 4.5 разрядной индикацией. Напряжение на электродах измерительной ячейки не превышало 125мВ. Величина этого напряжения была пропорциональна импедансу образца и в каждом конкретном случае была индивидуальной. Ток, протекающий через камеру, был всегда одинаковым и составлял единицы нА, что определялось конструкцией преобразователя импеданс-напряжение. Малая величина тока через камеру и его постоянная величина позволяют нам предполагать стабильность поляризационных эффектов, если таковые проявляли себя, при всех проведенных измерениях.

Процесс измерения импеданса исследуемого образца состоял из следующих операций. Прогретую, чистую и сухую ячейку при помощи шприца на 1 мл заполняли образцом. На импедансметре устанавливали необходимую частоту измерения и после стабилизации показаний регистрировали величину импеданса. Следует отметить сильную зависимость результатов измерений от температуры. Именно этот факт потребовал наличия в тер-мостатируемом боксе мешалки, которая существенно ускоряла процесс термостатирования образца. Измерение импеданса образца на трех частотах, как правило, занимало не более 5 минут. При исследовании частотной зависимости импеданса клеточных суспензий было выявлено выраженное дисперсионное -поведение, отсутствующее у растворов электролитов и плазмы и связанное с наличием мембранных структур.

Для исследований нами были использованы частоты: 100 кГц (частота с минимальным проявлением /3-дисперсии и отсутствием поляризации на электродах) и 300 кГц (частота в области выраженной /3-дисперсии, но влияние на результат измерений проводимости внутреннего содержимого клетки еще незначительно).

Абсолютные величины импеданса на частоте 100 кГц определяются, главным образом, свойствами проводящей среды и объемной долей клеточных элементов. При использовании концентрированных суспензий существенное влияние на результат импедансметрии будут оказывать особенности поверхности эритроцитов. Адсорбированные на мембране плазменные макромолекулы увеличивают эффективный объем клетки, ограничивают подвижность ионов в межклеточных промежутках, следствием чего является повышение импеданса.

На частоте 300 кГц сохраняется влияние проводящих свойств среды, не проявляющей дисперсионного поведения, и гематокритного показателя. Влияние же увеличенного эффективного объема клеток, возросшего за счет адсорбированных макромолекул, нивелируется в результате параллельного включения проводимости клеток, что аналогично увеличению объема проводящей среды. Вычисление коэффициента дисперсии (К), как отношения импеданса на частоте 100 кГц к импедансу на частоте 300 кГц, позволяет удалить влияние гематокритного показателя и разброса проводимости суспензионной среды. В основе этого заложен довольно широко используемый принцип: если два сопротивления измеряются на разных частотах при одних и тех же условиях, то отношение между ними должно оставаться постоянным [12].

Показатель (или коэффициент) адсорбции вычисляется как разница коэффициентов дисперсии до и после отмывки, по которому можно судить о степени влияния адсорбированных белков на изменение эффективного объема клетки [51, 52].

2.11. Измерение осмолярности плазмы

Осмолярность плазмы рассчитывали по данным электропроводности плазмы, фосфатного буферного раствора с осмолярностью 300 мосм/кг и общей концентрации белков плазмы. Расчет производили по формуле

3» - 250 osmol = 300 - 300 - ^ + 250

250 Zp

С + 250 где Zp - импеданс измеряемой плазмы, 300 - величина осмолярности стандартного раствора, 250 коэффициент влияния белка на импеданс, С - концентрация белка в г/л. Переменными величинами являются имепе-данс раствора и концентрация белка. Концентрацию белков в плазме мы определяли рефрактометрически. Для расчета использовали величину импеданса на частоте 1 кГц [138].

2.12. Определение сиаловых кислот удаленных с поверхности эритроцитов протеолизом

Для определения сиаловых кислот использовали кровь, стабилизированную цитратом натрия. 5,5 мл крови центрифугировали в течение 15 мин. Плазму использовали для определения фибриногена, а полученную суспензию однократно отмывали фосфатно-буферным раствором. Затем 2мл клеток инкубировали 15 мин. в растворе трипсина, (10мг трипсина в Змл Ыа-К буферного раствора) и снова центрифугировали 15 мин.

Затем пипеткой отбирали Змл надосадочной жидкости и смешивали с 2мл 7,5% раствора хлорной кислоты; тщательно перемешивали и помещали в водяную баню на 5 мин. После охлаждения центрифугировали 10 мин. для осаждения белков. К 4мл полученного раствора добавляли 1мл реактива Эрлиха и снова помещали в водяную баню на 15 мин. Полученный раствор имел слабую окраску, интенсивность которой определялась концентрацией кислот.

Измеряли оптическую плотность полученного раствора при длине волны 540 нм. I

Концентрацию сиаловых кислот можно рассчитать по формуле, предложенной [77]:

Сиал к-т] = Е» 4,102

Применение данной формулы корректно при измерениях на фотометрах, поскольку пересчетный коэффициент определен для длины волны 540 нм. Фотоколориметры не обеспечивают монохроматичность света, и поэтому в расчетах будет дополнительная погрешность. Поскольку в формуле используются одна переменная, умноженная на коэффициент, мы использовали при анализе непосредственно величину оптической плотности, отражающую концентрацию сиаловых кислот в растворе.

2.13. Обработка суспензий клеток протеолитическим ферментом

Суспензии отмытых клеток ресуспендировали в растворе трипсина в течение 15 минут. Затем производили повторную отмывку в стандартном фосфатном буферном растворе и готовили концентрированную суспензию клеток путем центрифугирования 15мин.

Трипсин - фермент класса гидролаз, относится к эндопептидазам. Молекулярная масса бычьего трипсина равна 23 800, р1 = 10,5-10,8, оптимальная каталитическая активность при рН = 7,8-8,0. Данный фермент катализирует гидролиз пептидных связей, образованных карбоксильной группой лизина или аргинина, т.е. основных аминокислот, а также сложные эфиры и амиды. Выбор данного фермента обусловлен наличием его в крови в естественных условиях [78].

2.14. Определение осмотической резистентности эритроцитов

Измерения осмотической резистентности эритроцитов мы проводили на двухканальном дифференциальном фотоэлектроколориметре. Особенность данной методики заключается в том, что значения оптической плотности снимаются не последовательно, а одновременно по отношению к контрольному образцу.

Приготовление рабочих растворов производили следующим образом: в 4 мл стандартного фосфатного буферного раствора пипеткой вносили 0,02 мл крови. Приготовленный раствор делили пополам на две кюветы. В одну кювету (левую) добавляли 2 мл буферного раствора, а в другую (правую) - дистиллированную воду. Подобные разведения (в 400 раз) позволяют удалить влияние концентрации эритроцитов, что немаловажно для стандартизации измерений. Оба образца помещали в ФЭК. Затем одновременно добавляли в левую кювету - буферный раствор, в правую - дистиллированную воду.

В образце, содержащем дистиллированную воду, происходит гемолиз красных клеток крови, поскольку среда при разбавлении становится гипотоничной. Снижение оптической плотности в данном образце будет пропорционально количеству гемолизированных клеток. Различия в оптической плотности образцов фиксировали по показаниям милливольтметра. По заранее определенной функциональной зависимости показаний вольтметра от различий оптической плотности результаты измерения переводили в величину оптической плотности. Для каждого образца 100% разрушение клеток в опытной кювете соответствовало различным величинам оптической плотности. Поэтому производили пересчет значений оптической плотности после каждого разведения в %. Рассчитывали % эритроцитов гемолизированных при каждом дискретном значении осмолярности среды.

При анализе результатов обследования спортсменов эритроциты разделяли на 3 группы - низкостойкие (разрушающиеся при снижении осмолярности до 120 мосм/л), высокостойкие (выдерживающие снижение осмолярности ниже 97 мосм/л) и среднестойкие (гемолизирующиеся при осмолярности 120-97 мосм/л). Представленные границы 120 и 97 мосм/л выбраны нами на основании анализа распределения эритроцитов по осмотической стойкости в группе спортсменов в состоянии относительного покоя. В указанный диапазон входило 67% от общего числа эритроцитов (М±<т).

2.15. Обработка суспензий клеток грамицидином С

Грамицидин С - это низкомолекулярный полипептид циклического строения, который повышает проницаемость мембран клеток для неорганических катионов за счет формирования сети каналов в липидном бислое мембраны.

3 мг грамицидина растворяли в 20 мл буферного раствора. Полученный раствор отфильтровывали и в нем инкубировали на 15 мин. суспензию отмытых эритроцитов. После осаждения клеток на центрифуге и удаления супернатанта их использовали для приготовления концентрированной суспензии.

Обработку суспензий клеток грамицидином разной концентрации осуществляли инкубированием в фосфатных буферных растворах с примерной концентрацией грамицидина 0,150 или 0,075 мг/мл в течение 15 мин с последующим приготовлением концентрированной суспензии.

2.16. Статистическая обработка результатов

Цифровые данные в таблицах представлены средней арифметической (М) и средним квадратичным отклонением (±ст). В главе «Обсуждение результатов'» во всех рисунках результаты представлены в формате -«медиана (16 и 84 процентили).

Статистическая обработка результатов выполнена с применением пакета программ «Statistica».

Первым этапом статистического анализа данных стал анализ вида их распределения. В нашем исследовании использован критерий Шапиро-Уилка, который применяется при исходно неизвестных М и а. По мнению Ребровой О.Ю., данный критерий предпочтителен, т.к. является наиболее мощным и универсальным и при этом наиболее «строгим» из всех имеющихся [44].

По результатам проведенного анализа установлено, что многие исследуемые параметры имеют распределение не соответствующее закону нормального гауссова распределения. Поэтому в дальнейшем анализе во многих случаях использовали непараметрические методы, при том, что они обладают несколько меньшей статистической мощностью (чувствительностью) по сравнению с параметрическими. Если исследуемые параметры имели нормальное распределение, использовали параметрические методы (корреляцию Пирсона - коэффициент корреляции г).

Точные значения вероятности ошибки р в таблицах указаны только в случае, если они меньше 0,05. При р>0,05 статистическая достоверность не рассматривалась.

Для множественного сравнения использовали ранговый дисперсионный анализ по Фридмену. При подтверждении статистической достоверности при множественном сравнении, проводили попарное сравнение. ПоI

50 парное сравнение выполняли по критерию Вилкоксона или критерию и -Манна - Уитни.

Корреляционный анализ экспериментально полученных результатов и расчетных характеристик производили с использованием коэффициента корреляции Пирсона и ранговой корреляции Спирмена (коэффициент корреляции г8) [44, 122].

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Согласно имеющимся в литературе данным при физических нагрузках изменяется общая концентрация белков плазмы и концентрационные соотношения между отдельными электрофоретическими фракциями. На основании этого мы использовали образцы крови, полученные от спортсменов, находящихся в различных функциональных состояниях для выяснения влияния фракционного состава белков плазмы на коэффициент адсорбции. Концентрацию отдельных фракций рассчитывали на основании измерений общей концентрации белков и процентного соотношения между фракциями, полученного по данным электрофоретического разделения.

Поскольку изучали процесс адсорбции макромолекул на эритроцитах, была исследована динамика содержания данных клеток в крови при различных состояниях. Изменения содержания клеток в единице объёма может быть связано с изменениями соотношения между плазмой и количеством красных клеток крови. Для оценки возможных изменений водно-электролитного баланса плазмы было выполнено определение ее осмоляр-ности. На основании этих данных проводили дифференцирование изменений содержания эритроцитов в крови как следствия их разрушения или вследствие изменений содержания объема плазмы.

Результаты измерений группы гематологических параметров, общей концентрации белка и фракционного состава белков плазмы представлены в таблицах 1-2.

Гематологические показатели крови у спортсменов в покое

Измеряемый параметр Покой (п = 32)

Кол-во эритроцитов, млн/мкл 4,84±0,51

Концентрация гемоглобина, г/л 152±12,39

Гематокритный показатель 0,440±0,034

Осмолярность плазмы, мосм/л 299±10

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Чирикова, Ольга Александровна, Ярославль

1. Александрова H.A., Петухов Е.Б. Нарушение реологических свойств # крови у хирургических больных // Хирургия. - 1979. - № 8. - с. 108.

2. Алексеев В.М. Транспорт кислорода кровью как функция ее реологических свойств / Механизмы регуляции в системе крови. -Красноярск. — 1978. 222 с.

3. Алексеенко Л.П., Орехович В.Н. Пептидазы эритроцитов человека // Гематол. и трансфузиол. 1986. - № 3. - с. 42-47.

4. Антонов В.Ф. Липидные мембраны при фазовых превращениях М.: Наука, 1992.- 135с.

5. Ф 5. Антонов В.Ф. Структура биомембран. Липидные поры // Соросовскийобразов, журн. 1998. - № 10. - с 13.

6. Артюхов В.Г., Наквасина М.А. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами Воронеж: ВГУ, 2000. - 296 с.

7. Балабанова P.M., Лоскутова Т.Т., Сайсковская Т.В. Реологические нарушения при ревматоидном артрите с системными проявлениями // Ревматология. 1999. - № 1.-е. 36-40.

8. Балмуханов Б.С. и др. Влияние холестерина в мембранах эритроцитов на скорость оседания, ЭФП и скорость восстановленияферрицианида калия // Биофизика. 1990. - Т. 35. - Вып. 2. - с. 293-296.

9. Барбашова З.И., Брейдо Г.Я. Об изменении осмотической резистентности эритроцитов при мышечной тренировке // Физиол. ж. СССР. 1967. - № 7. - с. 809-812.

10. Барбашова З.И., Григорьева Г.И. и др. Сопоставление изменений осмотической резистентности с активностью гликолиза и другими свойствами эритроцитов в процессе адаптации к гипоксии // Физиол. ж. СССР. 1968. - № 11. - с. 1342-1347.

11. Бергельсон Jl.Д. Мембраны, молекулы, клетки М.: Наука. - 1982. -182 с.

12. Биофизика / Под ред. Тарусова Б.Н., Кольса О.Р. М.: Высш. шк. — 1968.-467 с.

13. Биохимическое исследование мембран / Под ред. Э. Мэдди. М.: Мир, - 1979.-460 с.

14. Биохимия человека / Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. -М.: Мир, 1993.-т.2-414 с.

15. Биоэлектричество / Плонси, Роберт, Барр, Роджер. М.: Мир, 1992. -366 с.

16. Блохина Т.А., Назаров С.Б., Чемоданов В.В. Роль плазменных факторов в регуляции реологических свойств эритроцитов человека // Матер, междунар. конф. по гемореологии. Ярославль. - 2001. - с. 60.

17. Болдина В.И. Динамика водного баланса крови при срочной и долговременной адаптации к мышечным нагрузкам. Автореф. дисс. . канд. биол. наук. -М., 1993. 16 с.

18. Болдырев A.A. Введение в биохимию мембран. М.: Высш. шк., 1986.- 112 с.

19. Болдырев A.A. Структура и функции биологических мембран. М.: Знание, 1987.- 125с.

20. Бондарь О.П., Холодова Ю.Д., Смирнова И.П., Возиян П.А. Поверхностный заряд мембран эритроцитов при нарушении липидного обмена по данным микроэлектрофореза Н+ титрования и флуоресцентного исследований // Укр. биохим. ж. - 1988. - Т. 6. - с. 77-84.

21. Борзова Л.В., Залецкий Л.Л. Морфофункциональные свойства клеток крови и реологические параметры крови после плазмафореза у больных с нестабильной стенокардией // Гематол. и трансфузиол. 1991. - № 9. - с. 11-15.

22. Борзова JI.B., Сукиасова Т.Г. Фракционирование эритроцитов периферической крови // Гематол. и трансфузиол. Т. 28. - 1983. - № 9. -с. 50-54.

23. Борисюк М.В. Системный анализ механизмов регуляции сродства крови к кислороду // Успехи физиол. наук. 1984. - Т. 15. - № 2. - с. 3-26.

24. Бурыкина И.А., Хватов В.Б. и др. Агрегационная активность эритроцитов с различной кислотной устойчивостью // Гематол. и трансфузиол. 1988. - Т. 33. - № 6. - с. 31-36.

25. Ваньков Д.Е. Физические свойства эритроцитов при травматическом шоке // Патол. физиол. 1978. - № 5. - с. 34-36.

26. Вапцаров И., Иомтов М., Савов С., Дюкмеджиев И., Эшкенази М. Диспротеинемии. София: Медицина и физкультура, 1978. - 335 с.

27. Варламова C.B., Черствова Л.Г., Островская Е.Э. Сепарация лечебных доз фракций молодых эритроцитов // Гематол. и трансфузиол. -1989.-Т. 34.-№5.-с. 52-54.

28. Василевская H.J1. Методика определения резистентности эритроцитов // Бюл. Эксперимент, биол. 1955. - №12. - С. 68-72.

29. Введение в биомембранологию / Под.ред. A.A. Болдырева. М.: Изд-воМГУ, 1990.-206 с.

30. Вельтищев Ю.Е. Клинические аспекты наследственных нарушений структуры и функций биологических мембран // Клин, медицина. 1982. -№9.-с. 32-38.

31. Викулов А.Д. Кровообращение у спортсменов-пловцов. Ярославль, 2001.- 115 с.

32. Викулов А.Д. Основы изменений реологических свойств крови у человека и животных при долговременной адаптации к мышечным нагрузкам. Автореф. дисс. . докт. биол. наук. М., 1997.

33. Вильев П.С., Петрова М.П. Роль белково-липидных комплексов и осмотического равновесия в сохранности физико-химической структуры эритроцитов // Вопр. биофиз., биохим. и патол. эритроцитов. 1960. -Вып.1.-с. 302-309.

34. Витебский Е.М., Стефани Д.В., Жебеленко О.В., Садовская A.M. Современное состояние клеточного электрофореза и пути его дальнейшего развития // Лаб. дело. 1983. - № 3. - с. 3-7.

35. Владимиров Ю.П. Биомембраны. М.: Наука, 1982.

36. Волкова A.A. и др. Коррекция функциональных нарушений цитомембран в процессе лечения хронического гепатита у детей // Мед. ж. 1993. - № 3. - с. 15-17.

37. Вопросы биофизики, биохимии и патологии эритроцитов // Сборник статей. М.: Наука, 1967.-351с.

38. Воробьев А.И. Изучение возраста и продолжительности жизни эритроцитов методом определения их кислотоустойчивости // Пробл. гематол. и перелив, крови. 1960. - № 5. - с. 18-20.

39. Вышлова М.А. Вискозиметрические и агрегационные корреляции в гемореологии. Автореф. дисс. . канд. биол. наук. М., 2002.

40. Галенок В.А., Гостинская C.B., Диккер В.Е. Гемореология при нарушениях углеводного обмена. Новосибирск: Наука, 1987. - с. 261, 267.

41. Геннис Р. Биомембраны. Молекулярная структура и функции. М.: Мир, 1997.-624 с.

42. Гительзон И.И., Терсков И. А. Эритрограммы как метод клинического исследования крови. Красноярск, 1959. - 270 с.

43. Гланц С.А. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1999. -460 с.

44. Голованов М.В. Анализ строения двойного электрического слоя живой клетки // Биофизика. 1995. - Т. 40. - Вып. 2. - с. 372-376.

45. Гончарова Е.П., Пинаев Г.Б. Белки цитоскелета эритроцитов // Цитология. 1988.-Т. 30. - № 1. - с. 5-18.

46. Григорян С.С., Соколова И.А., Шахназаров A.A. Влияние полиэтиленоксида Polyox WSR-301 на параметры системной гемодинамики и микроциркуляции крыс в норме и патологии // Совр. пробл. биомеханики. М. - 1994. - Вып. 9. - с. 54-62.

47. Громов П.С., Захаров С.Ф., Шишкин С.С., Ильинский Р.В. Двумерная карта мембранных белков эритроцитов человека // Биохимия. -1988. Т. 53. - Вып. 8. - с. 1316-1326.

48. Громов П.С., Шандала A.M. и др. Изучение белков мембран эритроцитов человека методом двумерного электрофореза // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1986. - № 7. - с. 28-30.

49. Ефименко A.M., Ширяев В.В., Куприенко В.Н. Изменения крови при адаптации к физическим нагрузкам большого объема // Физиол. чел. -1980.-№6.-с. 1117-1120.

50. Здюмаева Н.П. Адсорбционные и реологические свойства эритроцитов при разных функциональных состояниях организма. Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Ярославль, 2001.

51. Здюмаева Н.П. Исследование адсорбции протеинов на клеточных мембранах // Вестник КГУ им. H.A. Некрасова. 2001. - № 1.-е. 97-100.

52. Зимкина A.M., Меницкий Д.Н., Антомонов Ю.Г. и др. Механизмы саморегуляции функций и функциональных состояний // Адаптивная саморегуляция функций. М.: Медицина. - 1977. - с. 317-327.

53. Иванов К.П. Успехи и спорные вопросы в изучении микроциркуляции // Физиол. ж. им. И.М. Сеченова. Т. 81. - 1995. - № 6. -с. 1-18.

54. Ивенс И., Скейтлак Р. Механика и термодинамика биологических мембран М.: Мир. - 1982. - 257 с.

55. Ивков В.Г., Берестовский Г.Н. Липидный бислой биологических мембран М.: Наука, 1982.

56. Кагава Я. Биомембраны. М.: Высш. шк, 1985. - 302 с.

57. Казенков A.M., Маслова М.Н. Структурно-биохимические свойства мембран безъядерных эритроцитов // Физиол. ж. им. И.М. Сеченова. -1987.-Т. 73.-№ 12.-с. 1587-1599.

58. Казимирко H.H., Дурнев В.Н., Андреева З.С. Изменение кислотной резистентности эритроцитов у бегунов на средние дистанции // Теор. и практ. физич. культ. 1978. - № 5. - с. 37-40.

59. Карабанов Г.Н. Деформируемость эритроцитов // Анест. и реаниматол. 1984. - 1984. - № 1. - с. 71-73.

60. Каро К., Педли Т., Шротер Р., Сид У. Механика кровообращения / Пер. с англ. под ред. С.А. Регирера, В.М. Хаютина. М.: Мир, 1981.-е. 624.

61. Карпман В. Д., Любина Б.Г. Динамика кровообращения у спортсменов. -М.: ФиС, 1982.-е. 135.

62. Катюхин JI.H. Реологические свойства эритроцитов. Современные методы исследования // Физиол. ж. им. И.М. Сеченова. 1995. - Т. 81. - № 6.-е. 122-129.

63. Кинетика форменных элементов крови. М.: Медицина, 1976. - 272 с.

64. Клиорин А.И., Тиунов JI.A. Функциональная неравнозначность эритроцитов. Л.: Наука, 1974. - 148 с.

65. Козинец Г.И., Борзова Л.В. и др. Исследование эритроцитов крови методом препаративного электрофореза // Лаб. дело. 1981. - № 9. - с. 529532.

66. Козинец Г.И., Зоделава М.М., Борзова Л.В. Электрофорез клеток гемопоэтической ткани. Тбилиси: «Сабчота Сакартвело», 1986. - 150 с.

67. Козинец Г.И. и др. Препаративное разделение эритроцитов крови больных пароксизмальной ночной гемоглобинурией и гипопластической анемией//Лаб. дело. 1981. - № 10.-е. 595-598.

68. Козинец Г.И., Макарова В.А. Исследование системы крови в клинической практике. М.: Триада-Х, 1997. - 480 с.

69. Козлов В.И., Тупицын И.О. Микроциркуляция при мышечной деятельности. М.: Физкультура и спорт, 1982. - с. 4.

70. Козлов М.М., Маркин B.C. Мембранный скелет эритроцита // Биол. мембраны. 1986. - Т. 3. - № 4. - с. 404-417.

71. Колосова М.В., Кудряшов A.M., Титова Н.М. Изменение активности глутатион-8-трансферазы эритроцитов, продуцированных в условиях напряженного эритропоэза // Сборник научных работ: Актуальные проблемы биологии. Томск, 2004. - с. 81-82.

72. Комаров Ф.И., Коровин Б.Ф., Мельников В.В. Биохимические исследования в клинике. JL: Медицина, 1976. - 386 с.

73. Котык А., Яначек К. Мембранный транспорт. М.: Мир, 1980. - 144 с.

74. Крылов A.A. Клинико-экспериментальные материалы к вопросу об изменениях электрокинетического потенциала эритроцитов в норме и патологических условиях // Пат. физиол. 1962. - № 2. - с. 46-50.

75. Кузьменко Д.И., Зарипова Т.Н., Смирнова И.Н. и др. Определение сиаловых кислот в смывах со слизистой оболочки полости носа // Клин, лаб. диагностика. -2003. № 5. - с. 19-21.

76. Кухта В.К. Белки плазмы крови: патохимия и клиническое значение. Минск: Беларусь, 1986. - 80 с.

77. Лайзан JI.K., Гусев И.И. Кооперативная резистентность эритроцитов как источник информации о состоянии организма спортсмена // Теор. и практ. физич. культ. 1978. - № 8. - с. 30-32.

78. Лакомая Ю.А., Титова Н.М. Изучение активности и кинетических свойств глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы эритроцитов, продуцированных после стресс-воздействия // Сборник научных работ: Актуальные проблемы биологии. Томск, 2004. - Т. 3. - № 1.-е. 84-85.

79. Лапишина Е.А., Заводник И.Б. Микрокалориметрические и флуоресцентные исследования рН-индуцируемых переходов в эритроцитарных мембранах // Биол. мембраны. 1993. - Т. 10. - № 2.

80. Левин Г.Я., Левина Д.А. Влияние криопреципитации на агрегационные свойства плазмы ожоговых больных // Матер, междунар. конф. по гемореологии и микроциркуляции. Ярославль. - 2003. - с. 66

81. Левин Г.Я., Шереметьев Ю.А. Роль ацетилнейраминовой кислоты и отрицательного заряда эритроцитов и их агрегации // Пробл. гематол. и перелив, крови. 1981. - № 6. - с. 6-8.

82. Левтов В.А., Потапова И.В. Фотометрическое определение агрегации эритроцитов в клинической практике // Метод, рекоменд. JL, 1979. - с. 12.

83. Левтов В.А., Регирер С.А., Шадрина Н.Х. Агрегация и диффузия эритроцитов // Сб.: Совр. пробл. биомеханики. Вып. 9. - 1994. - с. 5-33.

84. Левтов В.А., Регирер С.А., Шадрина Н.Х. Реология крови. М.: Медицина, 1982. - с. 270.

85. Леонова В.Г. Анализ эритроцитарных популяций в онтогенезе человека. Новосибирск: Наука, 1987.-е. 127-131.

86. Ли B.C., Халилов Э.М., Сабурова В.И. и др. Липидный состав и структурно-функциональные свойства мембран эритроцитов различного возраста // Вопр. мед. химии. 1982. - Т. 28. - № 6. - с. 66-70.

87. Липунова Е.А., Скоркина М.Ю. Оценка функционального состояния эритроцитарных мембран у птиц в условиях напряженного эритропоэза // Сборник научных работ: Актуальные проблемы биологии. Томск, 2004. -Т.З.-№ 1.-е. 142-143.

88. Лопатин Б.А. Кондуктометрия. Новосибирск, 1964. - 280 с.

89. Лопухин Ю.М. и др. Холестериноз. М.: Медицина, 1983. - 352 с.

90. Лоскутова Т.Т., Корешков Г.Г., Насонов Е.Л., Захарченко В.Н., Ларионов С.М. Гемореологические нарушения у больных ревматическими заболеваниями // Тер. Архив. 1989. - № 5. - с. 51-55.

91. Луганова И.С., Николаева Л.К., Блинов М.Н. Возрастной состав и некоторые биохимические характеристики эритроцитарной популяции у доноров крови и костного мозга // Пробл. гематол. и перелив, крови. -1980.-№ 1.-е. 26-29.

92. Мажуль В.М. Межклеточные взаимодействия и структурная лабильность биологических мембран. Автореф. дисс. . докт. биол. наук. -Минск, 1985.

93. Мазурин A.B., Плакута Г.Г., Спиридонова B.JL, Цымбал И.Н., Галаева С.С. Особенности липидного и фосфолипидного состава плазмы крови и мембран эритроцитов при геморрагическом васкулите у детей // Гематол. и трансфузиол. 1994. - № 2. - с. 37-39.

94. Макарова Г.А., Локтев С.А. Картина крови и функциональное состояние организма спортсменов. Краснодар, 1990. - 125 с.

95. Максимова Н.В. Кальцийзависимые различия в гистохимическом выявлении гликопротеидов мембраны эритроцитов у крыс со спонтанной гипертензией // Кардиология. 1995. - Т. 35. - № 10. - с. 38-41.

96. Марачев А.Г. и др. Биоэнергетика эритроцитов у жителей Севера // Физиол. чел. 1982.-Т. 8.-№3.-с. 407-415.

97. Маркин B.C., Козлов М.М. Механические свойства мембранного скелета эритроцита. Анализ осесимметричных деформаций // Биолог, мембраны. 1986.-Т. 3. -№ 5.-е. 519-537.

98. Маркосян A.A., Лисовская И.Л., Маркосян P.A. Электрокинетические характеристики и межклеточные взаимодействия форменных элементов крови // Успехи физиол. наук. 1977. - Т. 18. - № 1. -с. 91-99.

99. Маслова М.Н. Активность мембранных ферментов эритроцитов при различных стрессовых воздействиях // Физиол. ж. им. И.П. Сеченова. -1994.-Т. 80. -№7.-с. 76-79.

100. Маслова М.Н., Казеннов A.M., Катюхин Л.Н. и др. Реологические характеристики эритроцитов и активность транспортных АТФаз мембран эритроцитов при стрессе // XVII съезд физиологов России. Ростов-на-Дону, 1998.-е. 165.

101. Матвеев A.B., Акоев В.Р., Тараховский Ю.С. и др. Сравнительное исследование структурных переходов в эритроцитарных мембранахдоноров и новорожденных // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1997. - Т. 123. -№2.-с. 196-200.

102. Медведев М.А., Нестерова Т.П., Голосов О.С. Морфофункциональная характеристика перераспределения эритроцитов в различных сосудистых регионах // Физиол. ж. им. И.М. Сеченова. 1989. -Т. 75.-№ 1.-с. 38-43.

103. Мельников A.A., Викулов А.Д. Возрастной состав эритроцитов и реологические свойства крови у спортсменов // Физиол. чел. 2002. - Т. 28. - № 2. - с. 83-88.

104. Мембраны и их функции в клетке / Под ред. Д. Бергельсона. М.: Мир, 1977.- 199 с.

105. Мирошников А.И., Фомченков В.М., Иванов А.Ю. Электрофизический анализ и разделение клеток. М.: Наука, 1986. - 184 с.

106. Моисеева О.И. Транспорт кислорода кровью // Физиол. ж. им. И.М. Сеченова. 1986. - Т.72. - № 1. - с. 93-103.

107. Молекулярная биология клетки / Б. Альберте, Д. Брей, Дж. Льюис и др.-М.: Мир, 1994.- 517 с.

108. Муравьев A.B., Симаков М.И., Зайцев Л.Г. Некоторые гемореологические механизмы адаптации организма спортсменов к мышечным нагрузкам // Физиол. чел. 1990. - Т. 16. - № 5. - с. 63-68.

109. Муравьев A.B., Зайцев Л.Г., Симаков М.И. Макро- и микрореологические свойства крови у лиц с разным уровнем тренированности // Физиол. чел. 1995. - Т. 21. - № 4. - с. 137-142.

110. Мчедлишвили Г.И. Микроциркуляция крови: Общие закономерности регулирования и нарушения. Л.: Наука, 1984. - 296с.

111. Накагаки Масаюки. Физическая химия мембран. М.: Мир, 1991. -253 с.

112. Ненашев В.А. Слияние клеточных и модельных мембран // Биофизика мембран. -М., 1984. № 3. - с. 87-118.

113. Овчаренко Ф.Д., Ульберг З.Р., Духин A.C. и др. Особенности электроповерхностных явлений в клеточных суспензиях // Усп. совр. биол. 1991. - Т. 3. - Вып. 2. - с. 276-281.

114. Осетров И.А. Реологические свойства крови и параметры сосудисто-тромбоцитарного гемостаза у физически активных лиц. Автореф. дисс. .канд. биол. наук. Ярославль, 1999.

115. Павлов А.Д., Моршакова Е.Ф. Регуляция эритропоэза: физиологические и клинические аспекты. М.: Медицина, 1987. - 272 с.

116. Покидышева E.H., Немец Е.А., Тремсина Ю.С., Севастьянов В.И. Конкурентная адсорбция фибриногена человека на поверхности аморфного кварца // Биофизика. 2000. - Т. 45. - вып. 5. - с. 809-815.

117. Постнов Ю.В. К патогенезу первичной гипертензии: ресетинг на клеточном, органном и системном уровнях // Кардиология. 1995. - № 10. -с. 7-15.

118. Прокопенко Л.Г., Сипливая JT.E. Эритроциты как модуляторы иммунологических реакций // Успехи физиол. наук. 1992. - Т. 23. - № 4. -с. 89-106.

119. Раевская А.К., Савицкий Г.Г. Клиническая оценка микроциркуляции. -Томск, 1983.-238 с.

120. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ Statistica. М.: Медиа-сфера, 2002. - 305 с.

121. Резван С.Г., Попова И.Е., Артюхов H.A. и др. Исследование структурного состава эритроцитов крови при нефропатиях у детей // Бюлл. экспер. биол. и медиц. 2002. - Т. 134. - № 8. - с. 205-208.

122. Ремизов А.Н. Медицинская и биологическая физика. М.: Высшая школа, 1996.-608 с.

123. Ройтман Е.В., Дементьева И.И., Леонова С.Ф., Коломиец В.Я. Осмотическая резистентность эритроцитов при операции в условиях искусственного кровообращения // Гематол. и трансфузиол. 1999. - № 1. -с. 18-21.

124. Романова В.Я., Гительзон И.И., Гомзакова Н.В. Цитохимические эритрограммы в норме // Вопр. биофиз., биохим. и патол. эритроцитов. -М.: Наука. 1967. - с. 107-110.

125. Рудаев Я.А. Закономерности микроциркуляции и реологические свойства крови // Пробл. гематол. и перелив, крови. 1974. - № 9. - с. 4548.

126. Рутберг Г.А. Простой и быстрый метод определения скорости рекальцификации и фибрина крови // Лаб. дело. 1961. - № 6. - с. 6-7.

127. Савельева Г.М., Дживелегова Г.Д., Шалина Р.И., Фирсов H.H. Гемореология в акушерстве. М.: Медицина, 1986. - с. 224.

128. Селезнев С.А., Назаренко Г.И., Зайцев B.C. Клинические аспекты микрогемоциркуляции. Л.: Медицина, 1985. - с. 206.

129. Селезнев A.B., Ненашев A.A., Кондурцев В.А. Методы определения механической резистентности эритроцитов и характеризующие ее показатели у здоровых людей // Клин. лаб. диагн. 2002. - № 5. - с. 41-45.

130. Сигал В.Л., Корнеева Л.Н. Структура гликокаликса эритроцитарной мембраны как фактор, определяющий электрокинетические свойства клетки / Электрофорез клетки. Уфа, 1989. - с. 25-26.

131. Сизова H.A., Шпагина Л.А., Каменская В.В. Динамика гемодинамической резистентности эритроцитов, фракционированных в температурном градиенте //Лаб. дело. 1986. - № 1.-е. 10-13.

132. Сим Э. Биохимия мембран. М.: Мир, 1985. - 110 с.

133. Смирнов И.Ю., Левин В.Н. Влияние адсорбированных протеинов на реологические характеристики эритроцитов // Физиол. чел. 2004. - Т.30. -№2. - с.145-149.

134. Смирнов И.Ю., Левин В.Н., Здюмаева Н.П. Адсорбция белков на эритроцитарных мембранах у спортсменов при выполнении соревновательных нагрузок и её влияние на реологические параметры клеток // Физиол. чел. 2004. - Т. 30. - №3. - с. 148-154.

135. Смирнов И.Ю., Левин В.Н., Позин A.A. Модель полуавтоматического капиллярного вискозиметра // Матер, междунар. конф. по микроциркуляции. М.-Ярославль, 1997. - с. 201.

136. Смирнов И.Ю., Чирикова O.A. Измерение осмолярности растворов электролитов по их электропроводности // Вестник КГУ им. H.A. Некрасова, 2003. № 1. - с. 39-42.

137. Сороковой В.И., Моченова H.H., Никитина Г.М. Ультраструктура эритроцитов при кальций активируемом старении in vitro // Бюл. экспер. биол. и мед. 1994. - № 5. - с. 555-558.

138. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования / Сост. Бокуняева Н.И., Золотницкая Р.П. М.: Медицина, 1975. 382с.

139. Степаненко Б.Н. Химия и биохимия углеводов. М.: Высш. шк., 1978.-255 с.

140. Степовая Е.А., Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., Гольдберг В.Е. и др. Хронический бронхит: участие эритроцитов в патологическом процессе II Клин, мед-на. 2004. - № 1. - с. 53-56.

141. Степовая Е.А., Новицкий В.В., Рязанцева Н.В. и др. Белковый состав мембран эритроцитов у больных раком желудка, толстой и прямой кишки // Клин. лаб. диагн. 2004. - № 5. - с. 50-53.

142. Сторожок С.А., Санников А.Г., Захаров Ю.М. Молекулярная > структура мембран эритроцитов и их механические свойства. Тюмень: ф Изд-во ТюмГУ, 1997. - 140 с.

143. Сторожок С.А., Соловьев C.B. Структурные и функциональные особенности цитоскелета мембраны эритроцита // Вопр. мед. химии. -1992. Т. 38. - Вып. 2. - с. 14-17.

144. Структура и функции биологических мембран / Под ред. A.C. Трошина. М.: Наука, 1975. - 347 с.

145. Сунгуров А.Ю. Электрофорез клеток // Цитология. 1984. - Т. 26. -№9.-с. 983-996.

146. Терсков И.А., Гительзон И.И. Биофизика. 1957. - Вып. 2. - с. 12.

147. Терсков И.А., Гительзон И.И. Значение дисперсионных методов анализа эритроцитов в норме и патологии // Вопр. биофиз., биохим. иг*патол. эритроцитов. М.: Наука, 1967. - с. 41-47. w 150. Трещинский А.И., Мищук И.И. Электрокинетические свойства крови

148. Анест. и реаниматол. 1981. - № 9. - с. 17-20.

149. Трошин A.C., Трошина В.П. Физиология клетки. М.: Просвещение, 1979.- 118с.

150. Тулупов А.Н., Татулян С.А. и др. О роли плазменных и клеточных факторов в процессах агрегации эритроцитов // Гематол. и трансфузиол.ф 1986.-№ 6.-с. 12-15.

151. Ужанский Я.Г. Стресс и гемолиз // Пробл. гематол. и перелив, крови. 1973.-№ 11.-с. 13-15.

152. Ульберг З.Р., Духин A.C., Карамушка В.И. Биоспецефический механизм формирования двойного электрического слоя // Коллоид, ж. -1989.-Т. 50.-№ 1. — с. 204-205.f»

153. Физиология человека / Под. ред. Тевс Г., Шмидт Р. М.: Мир, 1996. -Т. 2-313 с.

154. Филиппович Ю.Б., Егорова Т.А., Севастьянова Г.А. Практикум по общей биохимии. М.: Просвещение, 1975. - 318 с.

155. Фирсов H.H. Агрегация и дезагрегация эритроцитов: исследование нефелометрическими методами // Совр. пробл. биомеханики. М. - 1994. -Вып. 9. - с. 85-97.

156. Фирсов H.H. Макро- и микрореология крови в норме и при патологии. Автореф. дис. . докт. биол. наук. Купавна, 1983. - 34 с.

157. Франк Р. Вопросы биофизики, биохимии и патологии эритроцитов. -М.: Наука, 1976.

158. Фридрих П. Ферменты. М.: Мир, 1986. - 373 с.

159. Харамоненко С.С., Ракитянская A.A. Электрофорез клеток крови в норме и при патологии. Минск: Беларусь, 1974. - с. 141.

160. Хисманов Э.Н., Безруков Ю.Н. О регенерации в системе крови у спортсменов // Теор. и практ. физич. культ. 1991. - № 5. - с. 35-36.

161. Холодова Ю.Д., Чаяло П.П. Липопротеины крови. Киев: Наукова думка, 1990.-205с.

162. Черницкий Е.А., Воробей A.B. Структура и функции эритроцитарных мембран. Минск: Наука и техника, 1981. - 215с.

163. Чернух A.M., Александров П.Н., Алексеев О.В. Микроциркуляция. -М.: Медицина, 1984. с. 429.

164. Чернышов В.Н., Сависько A.A., Милютина Н.П., Внуков В.В. Структурно-функциональные изменения мембран эритроцитов при нейроциркуляторной дистонии у детей // Кардиология. 1994. - № 5. - с. 61.

165. Чижевский А.Л. Биофизические механизмы реакции оседания эритроцитов. Новосибирск, 1980. - 178 с.

166. Чижевский А.Л. Электрические и магнитные свойства эритроцитов. -Киев: Наукова думка, 1973. 96 с.

167. Шадрина Н.Х., Стрельникова JI.A., Левкович Ю.И. и др. Исследование агрегации эритроцитов текущей крови методом микрофотосъемки // Физиол. ж. СССР. 1974. - № 10. - с. 1548.

168. Шандала А.М, Захаров С.Ф., Громов П.С., Шишкин С.С. Белковый состав мембран эритроцитов человека, фракционированных в ступенчатом градиенте декстрана // Гематол. и трансфузиол. 1987. - №10. - с. 28-31.

169. Шашкин A.B., Терсков И.А. Продукция и деструкция эритроцитов в организме. Новосибирск: Наука, 1986. - 89 с.

170. Шеверева Ю.В., Иванов В.П., Снегирева Л.В. Сравнительный анализ количественной представительности белков клеточных мембран эритроцитов разного возраста // Сборник научных работ: Акт. пробл. биол. -Томск, 2004. Т. 3. - № 1.-е. 158-159.

171. Шевченко О.П. Фибриноген: биологическая роль и клиническое значение // Клин. лаб. диагн. М.:Медицина, 1997. - №5. - с. 50.

172. Шепотиновский В.И. Обменные процессы в эритроцитах при стрессе и экстремальных воздействиях // Пат. физиол. и экспер. терапия. 1984. -№ 2. - с. 700-704.

173. Шестаков В.А. Система гемостаза при тромбозе магистральных вен. Автореф. дис. . докт. биол. наук. М., 1979.

174. Ширяев В.В., Ширяев Н.В. Изменения эритроцитов при физической нагрузке // Физиол. чел. 1994. - Т. 20. - № 4. - с. 168-170.

175. Шишкин С.С. Проблема построения каталога мембранных белков эритроцитов человека // Вопр. мед. химии. 1989. - Т. 35. - Вып. 6. - с. 213.

176. Шляхто Е.В., Моисеева О.М., Лясникова Е.А. и др. Реологические свойства крови и функция эндотелия у больных гипертонической болезнью // Кардиология. 2004. - № 4. - Т. 44. - с. 20-23.

177. Шмидт-Неельсон К. Физиология животных. Приспособление и среда. М.: Мир, 1982. Кн. 1. -416 с.

178. Шуваева В.Н. Реологические свойства крови при стрессорных сдвигах гемодинамики. Автореф. дис. . канд.биол.наук. С-Пб. - Инст. физиол. им. И.П. Павлова, 1994. - 20 с.

179. Шуваева В.Н., Чуткин А.Е., Шустова Н.Я., Матчанов А.Т. Влияние высокомолекулярных кровезаменителей на реологические свойства крови // Совр. пробл. биомеханики. М., 1994. - Вып. 9. - с. 42-53.

180. Шульц Г., Ширмер Р. Принципы структурной организации белков. -М.: Мир, 1991.

181. Ajmani R.S.,Rifkind J.M. Plasma viscosity, fibrinogen and hematocrit profile with progression age // Intern. J. of Microcirc. 1996. - № 16. - p. 142.

182. Anderson R.A. et al. Glucophorin is linked by band 4.1 protein to the human erythrocyte skeleton // Nature. 1984. - V. 307. - № 5952. - p. 655-658.

183. Armstrong J.K., Meiselman H.J. and Fisher T.C. Red blood cell aggregation: The effect of nonionic polymers and the role of hydrodynamic root mean square radius of gyration // Biorheology. Turkey, 2002. - 696c.

184. Avery R.A., Bettger W.J. The oligomeric state of spectrin in the rat erythrocyte membrane skeleton // Biochem. 1990. - V. 68. - p. 936-943.

185. Baker L.W., Clark L.G. Assay of red cell membrane deformability with some applications // Biomed. Biochem. Acta. 1983. - V. 42. - № 11-12. - p. 91-96.

186. Barshtein G., Wajnblum D., Yedgar S. Kinetics of linear rouleaux formation studied by visual monitoring of red cell dynamic organization // Biophys. J. 2000. - V. 78. - p. 2470-2474.

187. Baskurt O.K. Basic mechanisms of red blood cell aggregation: depletion vs bridging // Int. Conf. of Hemorheol. 2001. - p. 4.

188. Becker P.S., Schwartz M.A., Morrow J.S. et al. Radiolabel-transfer cross-demonstrates that protein 4.1 bind to the N-terminal region of beta spectrin and to actin in binary interactions // Eur. J. Biochem. 1990. V. 193. - № 3. - p. 827-836.

189. Bennett V., Daris I., Fowler W.E. Brain spectrin: a membrane-associated protein related in structure and function to erythrocyte spectrin // Nature. 1982. -V. 299.-p. 126-131.

190. Bennett V. The spectrin-actin junction of erythrocyte membrane skeletons //Biochim. et Biophys. Acta. 1989. - № 1.-p. 107-121.

191. Bessis M., Mohandes N. Deformability of normal, shape altered and pathological red cells // Blood Cells. 1975. - V. 1. - № 2. - p. 315.

192. Boodhoo A., Reithmeier R. Characterization of matrix-bound band 3 the anion transport protein from human erythrocyte membranes // J. Biol. Chem. -1984. V. 259. - № 2. - p. 785-790.

193. Branton D., Cohen C., Tyler J. Interaction of cytoskeletal proteins on human erythrocyte membrane // Cell. 1981. - V. 24. - № 1. - p. 24-32.

194. Branton D. Membrane cytoskeletal interaction in the human erythrocytes // Symp. of Biol. 1982. - V. 46. - p. 1-5.

195. Brooks D., Greig R.G., Janzen J. Mechanisms of erythrocyte aggregation // In: Cokelet G., et al eds. Erythrocyte mechanisms and blood flow. N.-Y.: Liss inc. Publ, 1980.-p. 119.

196. Chabanel A., Glacet-Bernard A., Leolong F. et al. Increased red blood cell aggregation in retinal vien occlusion // Brit. J. Haematol. 1990. - V. 75. - № 1. -p. 127-131.

197. Chien S. Determinants of blood viscosity and red cell deformability // Scand. J. Clin, and Lab. Invest. 1981. - V. 41. - p. 7-12.

198. Chien S. Electrochemical and ultrastructural aspects of red cell aggregation // 7th European Conference of Microcirc. Part 1. - Biblioteca Anatómica. - 1973. - № 11. - p. 244-250.L

199. Chien S. Force balances at the surface of aggregating cells // 7 European Conference of Microcirc. Part 1. - Biblioteca Anatómica. - 1973. - № 11. - p. 303-309.

200. Chien S. Interaction between red cell membranes // Bioelectrochemistry and Bioenergetics. 1978.- V. 5. - № 2.-p.317.

201. Chien S., Jan K.M. Ultrastructural basis of the mechanism of rouleaux formation // Microvasc. Res. 1973. -V. 5. - № 2. - p. 155-163.

202. Chien S., Lung L. Physicochemical basis and clinical implications of red cell aggregation // Clin. Hemorheol. 1987. - V. 7. - p. 71-91.

203. Chien S. Rheology of sickle cells and erythrocyte content // Blood Cells. -1977. V. 3. - № 2. - p. 283-303.

204. Choen N.S., Ekholm T.E., Luthra M.G. et al. Biochemical characterization of density separated human erythrocytes // Biochim. et Biophys. Acta. - 1976. - V. 419. - p. 229-242.

205. Clark L.J., Chan L.S., Powars D.R., Baker R.F. Negative charge distribution and density on the surface of oxygenated normal and sickle red cell // Blood. 1981. - V. 57. - № 4. p. 675-678.

206. Cohen C.M., Foley S.F. Biochemical characterization of complex formation by human erythrocyte spectrin, protein 4.1 and actin // Biochem. -1984. V. 23. - № 25. - p. 6091-6098.

207. Cook G., Heard D., Seaman G. Sialic acids and the electrophoretic charge of the human erythrocytes // Nature. 1961. - V. 190. - p. 44-47.

208. Curtis A.S. The cell surface: its molecular role in morphogenesis // The cell surface. 1981.-V. 4.-p. 151-187.

209. Dhermy D., Simeon J., Wautier M-P et al. Role of membrane sialic acid content in the adhesiveness of aged erythrocytes to human cultured endothelial cells//Biochim. etBiophys. Acta. 1987. -V. 904. - p. 201-206.

210. Dintenfass L. Aggregation of red cells // Clin. Hemorheol. 1985. - № 5. -p. 917-921.

211. Dodge G.T., Mitchtell C., Hanahan D.J. The preparation and chemical characteristics of hemoglobin free ghosts of human erythrocytes // Arch. Biochem. Biophys. 1963. - V. 100. - p. 119-130.

212. Donath E., Lerche D. Electrostatic and structural properties of the surface of human erythrocytes; cell electrophoretical studies following addition of lanthanum chloride // Stud. Biophys. 1980. - V. 78. - p. 143-150.

213. Dormandy J.A. Blood viscosity and cell deformability // Methods in Angiology. 1980. - p. 214-266.

214. Dormandy J.A. Medical and engineering problems of blood viscosity // Biomed. Eng. 1974. - V. 9. - № 7. - p. 284-291.

215. Dotimas E. et al. Structural domain mapping and phosphorylation of human erythrocyte pallidin (band 4.2) // Biochim. Biophys. Acta. 1993. - V. 1148. - № l.-p. 19-29.

216. Driessen G., Heidtman H., Schmid-Schonbein H. Reaction of erythrocyte velocity in capillaries upon reduction of hematocrit value // Biorheology. -1979. V. 16. - № 1-2. - p. 125-126.

217. Dunlop M.J., Lee M.M., Canham P.B., Taylor C.P. Kinetics of adhesive interaction in vitro of human erythrocytes in plasma // Microvasc. Res. 1984. -V. 28.-№ l.-p. 62-74.

218. Dupont P.A., Sirs J.A. The relationship of plasma fibrinogen, erythrocyte flexibility and blood viscosity // Tromb. Haemostas. 1977. - V. 38. - p. 660667.

219. Elbaum D., Mimms L.T., Branton D. Modulation of actin polymerization by the spectrin band 4.1 complex // Biochem. 1984. - V. 20. p. 4813-4816.

220. Evans E.A., Hochmuth R.M. A solid-liquid composite model of the red cell membrane //Membr. Biol. 1974. -V. 30. - p. 351-358.

221. Eylar E.H., Madoff H.A., Brody O.K., Oncley J.L. The contribution of sialic acid to the surface charge of the erythrocyte // J. Biol. Chem. 1962. - V. 237.-p. 1992-2000.

222. Fabri T.L. Mechanism of erythrocyte aggregation and sedimentation // Blood. 1987. - V. 70. - p. 1571-1576.

223. Fahraeus R. The suspension stability of blood // Physiological Reviews. -1929.-V. 9.-p. 241-247.

224. Fairbancs G., Steck T.L., Wallach D.F. Electrophoretic analysis of the major polypeptides of the human erythrocyte membrane // Biochem. 1971. -V. 10.-p. 2607-2617.

225. Faroqui S.M., Wali R.K., Baker R.F., Kalra V.K. Effect of cell shape, membrane deformability and phospholipid organization on phosphate-calcium-induced fusion of erythrocytes // Biochem. et Biophys. Acta. 1987. - V. 904. -№2.-p. 239-250.

226. Fossat C., Rousset B., Buonocore M., Vague P., Juhan-Vague J. Analysis of red blood cell aggregation in diabetes // Biorheology. 1989. - V. 26. - № 3. -p. 584.

227. Fowler V., Ttaylor D.L. Spectrin plus band 4.1 cross-link actin // J. Cell. Biol. 1980. - V. 85. - p. 361-376.

228. Friederichs E., Germs J., Lakomek M. et al. Increased erythrocyte aggregation in infectious diseases: influence of "acute phase proteins" // Clin. Hemorheol. 1984. - V. 4. - № 2-3. - p. 237-244.

229. Friederichs E., Winkler H., Tillmann W. Influence of the red blood cell Ca ion concentration on the erythrocyte aggregation in stasis // Biochem. med. and metabol. biol. 1989. - V. 41. № 2. - p. 85-92.

230. Gardner K., Bennett V. Recently identification erythrocyte membrane skeletal proteins and interactions: implications for structure and function // Hematology. 1989. - V. 11. - p. 1-3.

231. Gascard P., Sauvage M., Sulpice J.C. et al. Characterization of structural and functional phosphoinositide domains in human erythrocyte membranes // Biochem. 1993. - V. 32. - №23. - p. 5941-5948.

232. Geyer G., Linss W., Stibenz D. Adsorbt proteins mask negatively charged sites of the erythrocytes glycocalyx // Acta Histochim. 1977. - V. 60. - p. 312316.

233. Goldstone J., Schmid-Schonbein H., Wells R. The rheology of red blood cell aggregates // Microvasc. Res. 1970. - V. 2. - № 3. - p. 273-286.

234. Gratez W.B. The red cell membrane and its cytoskeleton // Biochem. J. -1981.-V. 198.-p. 1-8.

235. Greenhalt T., Steane E. Quantitative haemagglutination. IV. Effects of neuraminidase treatment on agglutination by blood group antibodies // Brit. J. Haematol. 1973. - V. 25. - p. 207-215.

236. Hanahan D.G. The erythrocyte membrane variability and membrane enzyme activity // Biochim. Biophys. Acta. 1973. -V. 300. - p. 319.

237. Hardeman M.R., Peters H.P.F., Goldhart P.T. Low hematocrit and plasma fibrinogen in trained athletes increase hemorheological tolerance for physical stress // Clin. Hemorheol. 1995. - V. 15. - № 3. - p. 507.

238. Hashimoto N. et al. Cell electrophoretic mobility and glycerol lysis of human erythrocytes in various deseases // Electrophoresis. 1998. - V. 19. - № 7.-p. 1227-1230.

239. Hemming N.J., Anstee D.J., Mawby W.J. et al. Localization of protein 4.1-bending site on human erythrocyte glycophorins C and D // Biochem. J. -1994. V. 299. - № 1. - p. 191-196.

240. Husain-Chishti A., Levin A., Branton D. Absolutions of actin-binding by phosphorylation of human erythrocyte protein 4.9 // Nature. 1988. - V. 344. -№6184.-p. 718-721.

241. Inaba M., Gupta K., Kuwabara M. et al. Deamidation of human erythrocyte protein 4.1: possible role in aging // Blood. 1992. - V. 79. - № 12. -p. 3355-3361.

242. Jan K.M., Chien S. Role of surface electric charge in red blood cell interactions // Physiol. J. 1973. - V. 61. - p. 638-654.

243. Janzen J., Elliott T.G., Carter C.J., Brooks D.E. Detection of red cell aggregation by low shear rate viscose in whole blood with elevated plasma viscosity // Biorheology. 2000. - V. 37. - № 3. - p. 225-237.

244. Kikuchi Y., Koyama M. Role of protein absorbtion in micropore passability of red blood cells // Physiol. J. 1981. - V. 31. - № 6. - p. 903-915.

245. Klonk S., Deuticke B. Involvement of cytoskeletal proteins in the barrier function of the human erythrocyte membrane // Biochim. et Biophys. Acta. -1992.-V. 1106.-№ l.-p. 126-136.

246. Knisely M.H. Intravascular erythrocyte aggregation (blood sludge) // Handbook of physiology. 1965. - V. 3. - p. 2249-2292.

247. Kon K., Maeda N., Shiga T. The relationship between deoxigenation rate erythrocytes and deformation by shear stress // Biorheology. 1983. - V. 20. -№ l.-p. 92-100.

248. Lagdon R.G., Holman V.P. Immunological evidence that band 3 is the major glucose transporter of the human erythrocyte membrane // Biochim. et Biophys. Acta. 1988. - V. 945. - № 1. - p. 23-32.

249. Lerche D. Electrostatic fixed charge distribution in the RBC-glycocalyx and their influence upon the total free interaction energy // Biorheology. 1984. -V. 21. №4.-p. 477-492.

250. Lerche D. et al Scanning electron microscopical characterization of La3+ and concavalin A induced aggregation of untreatment and neyraminidase treatment human erythrocytes // Stud. Biophys. 1980. - V. 20. - p. 156-162.

251. Lerche D., Glaser S. Investigations of artificial aggregation of washed human erythrocytes caused by decreased pH and reduced tonic strength // Acta. Biol. 1980. - V. 39. - p. 973-978.

252. Lerche D., Hessel E. Aggregation studies of human erythrocytes after modification of their membrane surface // Stud. Biophys. 1978. - V. 74. - p. 37-38.

253. Lerche D., Klaus H., Kunter U. Steady of aggregation of human red blood cells // Stud. Biophys. 1976. - V. 56. - p. 21-25.

254. Linde T., Sandhagen B., Backman U., Fellstrom B. Altered flow properties of blood and increased plasma fibrinogen in cyclosporin-treated renal allograft recipients // Nephrol. Dial. Transplant. 1999. - V. 14. - № 6. - p. 1525-1529.

255. Litt M., Korn R.E., Litt S.E. Theory and design of disposable clinical blood viscometer // Biorheology. 1988. - V. 25. - p. 697-712.

256. Lowe G. Blood rheology in vitro and in vivo // Clin. Haematol. 1987. -V. l.-№3.-p. 597-636.

257. Luner S.J., Szklarek D. et. al. Red cell charge is not a function of cell age // Nature. 1977. - V. 269. - p. 719-721.

258. Lu P.W., Soong C.J., Tao M. Phosphorilation of ankyrin decreases its affinity for spectrin tetramer // J. Biol. Chem. 1985. - V. 260. - № 28. - p. 14958-14964.

259. Maeda N., Seike M., Nakajama I. et al. Contribution of glycoproteins to fibrinogen-induced aggregation of erythrocytes // Biochem. et Biophys. Acta. -1989.-V. 102.-p. 72-78.

260. Maeda N., Seike M., Shiga T. Effect of temperature on the velocity of erythrocyte aggregation // Biochem. et Biophys. Acta. 1987. - V. 904. - № 2. -p. 319-329.

261. Maeda N., Shiga T. Opposite effect of albumin on erythrocyte aggregation induced by immunoglobulin G and fibrinogen // Biochim. Biophys. Acta. -1986.-V. 855.-p. 127-135.

262. Malik S., Sami M., Watts A. A role for band 4.2 in human erythrocyte band 3 mediated anion transport // Biochemistry. 1993. - V. 32. - № 38. - p. 10078-10084.

263. Manner M.J., Martin P.G., High S. The complete amino acid sequence of the human erythrocyte membrane anion transport protein deduced from the cDNA sequence // Biochem. J. 1988. - V. 256. - № 3. - p. 703-712.

264. Martin D., Jesty J. Calcium stimulation of procoagulant activity in human erythrocytes//J. Biol. Chem. 1995. - V. 270. - № 18.-p. 10468-10474.

265. McMillan D.E. Insulin. Diabetes and the cell membrane: a hypotesis // Diabetologia. 1983. - V. 24. - № 5. - p. 308-309.

266. Meiselman H.J., Armstrong J.K., Fisher T.C., Neu B. Current developments in red blood cell aggregation // Int. Conf. of Hemorheol. 2001. -p. 11.

267. Meiselman H.J. Red Blood Cell Aggregation. Current Status and Future Directions // Микроциркуляция и гемореология, материалы второй международной конференции. Ярославль - Москва, 1999.

268. Merrill E.W., Cheng C.S., Pelletier G.A. Yield stress of normal human blood as a function of the endogenous fibrinogen // J. of Applied. Physiol. -1969.-V. 26.-p. 1-3.

269. Merrill E., Cokelet G., Britten A., Wells R. Non-newtonian rheology of human blood-effect of fibrinogen deducted by "subtraction" // Circ. Res. 1963. -V. 13.-№ l.-p. 48-55.

270. Merrill E., Gilliland E.,Lee T., Salzman E. Blood rheology: effect of fibrinogen deduced addition // Circ. Res. 1966. - V. 18. - p. 437-446.

271. Micrevova L., Viktora L., Kodicek M. The role of spectrin-dependent ATPase in erythrocyte shape maintence //Biochim. Acta. 1983. - V. 42. - № 11.-p. 67-71.

272. Nacajima M. Association between glycophorin A and spectrin // Biol. Chem. 1979. - V. 260. - p. 3676-3708.

273. Nash G.B., Meiselman H. Effect of dehydratation on the viscoelastic behavior of red cells // Blood cells. 1991. - V. 17. - p. 517-522.

274. Nash G.B., Meiselman H. Red cell ageing: changes in deformability and other possible determinants of in vivo survival // Microcirc. 1981. - V. 1. - p. 255-284.

275. Nash G.B., Meiselman H. Red cell and ghost viscoelasticity; effect of hemoglobin concentration and in vivo ageing // Biophys. J. 1983. - V. 43. - p. 63-67.

276. Neu B. Modeling depletion-mediated red blood cell aggregation in polymer solutions // Biorheology. 2002. - V. 39. - № 5. - p. 696.

277. Neumann F.J., Schmid-Schonbein H., Malotta H. Effect of temperature dependent changes in mechanical stability of red cell aggregates on relative apparent whole blood viscosity // Biorheology. 1987. - V. 24. - p. 463-427.

278. Nordt F.G., Knox R.J., Seaman G.V. Anomalous electrophoretic properties of neyraminidase treated human erythrocytes // Cellular physiol. -1978.-V. 97.-p. 209-220.

279. Norton J., Barker N., Rand P. Effect of cell geometry? Internal viscosity and pH on erythrocyte filterability // Exp. Biol. And Med. 1981. - V. 166. - № 3. - p. 449-456.

280. Othmane A., Bitbol M., Snabre P., Mills P. Influence of altered phospholipid composition of the membrane outer layer on red blood cell aggregation: relation shape changes and glycocalyx structure // Eur. Biophys. J. 1990. - V. 18. - № 2. - p. 93-99.

281. Owens J., Mueller I., Morrison M. A minor sialoglycoprotein of human erythrocytes membrane // Biochem. biophys. 1980. - V. 204. - p. 247-254.

282. Palmer A.A. The influence of rouleaux on the resistance to flow through capillary channels at various shear rates // Biorheology. 1975. - V. 12. - p. 265-270.

283. Pape L., Kristensen B., Bengtson O. Sialic acid electrophoretic mobility and transmembrane potentials of the amphiuma red cells // Biochim. et Biophys. Acta. 1975. - V. 406. - p. 516-525.

284. Pauly H., Schwan H. Dielectric Properties and Ion Mobility in Erythrocytes // Biophys. J. 1966 - V.6. - p. 621-639.

285. Pething R. Dielectric Properties of Biological Materials: Biophysical and Medical Applications // Biol. V. 19. - № 5. - 1984. - p. 453 - 474.

286. Picart C., Carpentier P., Galliard H., Piau J. Blood yield stress in systemic sclerosis // Am. J. Physiol. 1999. - V. 276. - p. 771-777.

287. Rampling M.W. An investigation of the aggregating potential of various red cell aggregating agents and the correlations between them // Int. Conf. of Hemorheol. Yaroslavl. - 2001. - p. 57.

288. Rampling M.W., Flexman C. The binding of fibrinogen to erythrocytes // Microvasc. Res. 1979. - V. 18. - p. 282.

289. Rampling M.W., Martin G. Albumin and rouleaux formations // Clin. Hemorheol. 1992. - V. 12. - p. 761-765.

290. Rampling M.W. Plasma protein induced aggregation erythrocytes: its causes, estimation effects on blood flow // Stud. Biophys. 1989. - V. 134. - № 1-2.-p. 91-94.

291. Red blood cell membranes. Structure, function, clinical implications / Ed. by Peter Agre et al. N.-Y. - 1989. -733 p.

292. Red cell shape / Ed. by Bessis M. et al. № 4. - 1973. - p. 189.

293. Reinhart W.H., Chien S. Roles of cell geometry and cellular viscosity in red cell passage through narrow pores // Amer. J. Physiol. 1985. - V. 248. - № 5.-p. 473-479.

294. Remien I. et al. Effect of grey inducted membrane disturbances on physical properties of red cells and revealed ghots // Microvasc. Res. 1979. -V. 17. -№3.-p. 43.

295. Ross P.D., Minton A.P. Hard quasispherical model for the viscosity of hemoglobin solutions // Biochem. and Biophys. Res. 1977. - V. 76. - № 4. - p. 971-976.

296. Sakuta S., Takamats S. Deformation index of the red blood cells // Microvasc. Res. 1982. - V. 24. - № 2. - p. 215-219.

297. Saxton M.J. The membrane skeleton of erythrocytes. A percolation model // Biophys. J. V. 57. - № 6. - p. 1167-1177.

298. Scherer R. et al. The significance of plasma lipoproteins on erythrocyte aggregation and sedimentation // Brit. J. Haemat. 1976. - V. 32. - № 2. - p. 235-241.

299. Schmid-Schônbein H. Erythrocyte rheology and optimization of mass transport in the microcirculation // Blood Cells. 1975. - V. 1. - № 7. - p. 285306.

300. Schmid-Schônbein H., Rieger H., Gallach G. Pathological red cell aggregation (clamp aggregation) // Rec. Adv. Clin. Microcirc. Res. Part 2. -1977.- № 16.-p. 484-489.

301. Seaman G.V. et al. Surface alterations of erythrocytes with cell age // Biochim. and Biophys. Res. 1980. - V. 97. - p. 107-113.

302. Seaman G.V., Knox R.J., Nordt F.J., Regan D.H. Surface charge density and sialic acid content of density-fractionated human erythrocytes // Blood. -1977.-p. 1001-1011.

303. Sheetr M., Sasely J. 2-3 DPG and ATP dissociate erythrocytes membrane // J. Biol. Chem. 1980. - V. 225. - № 26. - p. 9925-9960.

304. Seifige D., Behr S. Passage time of red blood cells in the SER; their distribution and influences of various extrinsic and intrinsic factors // Clin. Hemorheol. 1986. - V. 6. - № 2. - p. 151 -164.

305. Sheetz M.P. Membrane skeletal dynamics: role in modulation of red cell deformability, mobility of transmembrane proteins, and shape // Sem. Hematol. 1989.-№2.-p. 175-188.

306. Shen B.W., Josephs R., Steck T.L. Ultrastructure of unit fragment of the skeleton of the human erythrocyte membrane // Cell Biol. 1984. - V. 99. - № 3. - p. 810-821.

307. Sherman W. Membrane structure and function of malaria parasites and infected erythrocytes // Parasitology. 1985. - V. 91. - p. 609-645.

308. Shiga Т., Maeda N. Kinetic studies of red blood cells // Biorheology. -1989.-V. 26.-№3.p. 492.

309. Shohet S.B., Mohandas N. Red cell membranes. N.-Y., 1988.-328 p.

310. Singer S.J., Nicolson G.D. The fluid mosaic model of the structure of cell membranes // Science. 1972. - V. 175. p. 720-724.

311. Skalak R., Zarda P., Jan K., Chien S. Mechanics of rouleaux formation // Biophys. J.-1981.-p. 771-781.

312. Snabre P., Baumler H., Mills P. Aggregation of human red blood cell after moderate heat treatment // Biorheology. 1986. - V. 22. - № 3. - p. 185-195.

313. Snyder L.M., Fortler N.L., Trainor J. et al. Effect of hydrogen peroxide exposure on normal human erythrocyte deformability, morphology, surface characteristics and spectrin hemoglobin cross-linking // J. Clin. Invest. 1985. -V. 76.-№5.-p. 1971-1977.

314. Somer T. Rheology of paraproteinaemias and the plasma typerviscosity syndrome // Clin. Haematol. 1987. - V. 1. - № 3. - p. 695-723.

315. Sowemimo-Coker S.D. et al. Effect of cellular factors on aggregation behaviour of human, rat and bovine erythrocyte // Clin. Hemorheol. 1989. - V. 9.-p. 715-721.

316. Steck I.L. Organization of proteins in human red blood cell membrane // J. Cell. Biol. 1974. - V. 62. - p. 1-19.

317. Stiberz D. Structure of the erythrocyte membrane // Acta Histochem. Suppl. 1986. - № 33. - p. 99-106.

318. Stoltz J., Donner M. Erythrocyte aggregation: experimental approach and clinical implications // Inter. Angiol. 1987. - V. 6. - p. 193-201.

319. Stoltz J., Donner M., Larcan A. Introduction to hemorheology: theoretical aspects and hyperviscosity syndromes // Inter. Angiol. 1987. - V. 6. - № 2. -p. 119-132.

320. Suzuki Y., Tateishi N., Maeda N. Electrostatic repulsion among erythrocytes in tube flow demonstrated by the thikness of marginal cell free layer // Biorheology. 1998. - V. 35. - № 2. - p. 155-170.

321. Thurston G.B. Rheological parameters for the viscosity, viscoelasticity and thixotropy of blood // Biorheology. 1979. - V. 17. - p. 149-162.

322. Tikhomirova I.A., Muravyov A.V., Borisov D.V. The effect of ionized calcium and acid-base balance on erythrocyte aggregability // Biorheology. -2002.-V. 39.-№5.-696 p.

323. Urssiti J.A., Fowler V.M. Immunolocalization of tropomodulin, tropomyosin and actin in spread human erythrocyte skeletons // J. Cell Sci. -1994. V. 107. - № 6. - p. 1633-1639.

324. Vassar P.S., Hards J.M., Seaman C.V. Surface properties of human lymphocytes // Biochim. etBiophis. Acta. 1973.-V. 291.-p. 107-115.

325. Vaya A., Martinez M., Dalman J. Does hypercholesterolemia alone influence blood rheology? // Clin. Hemorheol. 1995. - V. 15. - № 3. - p. 506.

326. Volger E., Schmid-Schonbein H.} Gosen J.V., Klose H.J. Microrheology and light transmission of blood. The velocity of red cell aggregate formation // Pflugers. Arch. 1972. - V. 354. - p. 299-313.

327. Weaver J., Evans A., Walder D. The effect of increased fibrinogen content on the viscosity of blood // Clin. Sc. 1969.-V. 36. № 1. p. 1-10.

328. White P.H., Plishker G.A. Calcium-dependent association of glutation S - transferase with the human erythrocyte membrane // Biochem. et Biophys. Acta. - 1983. - V. 114. - № 2. - p. 488-492.

329. Whittingstall P. et al. Cellular factors in red blood cell aggregation: effects of autologous plasma and various polymers // Hemorheol. et aggreg. erythrocytaire. 1994. - V. 4. - p. 21-30.

330. Wickrema A., Koury S.T., Dai C.H. et al. Changes in cytoskeletal proteins and their mRNAs during maturation of human erythroid progenitor cells // Cell. Physiol. 1994. - V. 160. - № 3. - p. 417-426.

331. Williams A.R., Morris D.R. The internal viscosity of the human erythrocyte may determine its lifespan in vivo // Scand. J. Haematol. 1980. -V. 24.-p. 57-62.

332. Williamson J.R., Kito C., Sutera S.P. et al. Shear induced deformation of red cells: decreased elongation and membrane rotation in diabetes mellitus // Horm. Metabol. Res. 1981. - V. 11.-p. 103-104.