Эпидемиология, цитогенетические эффекты и фенотипические особенности у больных со злокачественными лимфомами

Трубникова, Елена Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Эпидемиология, цитогенетические эффекты и фенотипические особенности у больных со злокачественными лимфомами
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Эпидемиология, цитогенетические эффекты и фенотипические особенности у больных со злокачественными лимфомами"

На правах рукописи

ТРУБНИКОВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА

ЭПИДЕМИОЛОГИЯ, ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ И ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ У БОЛЬНЫХ СО ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ЛИМФОМАМИ

03.00.15-генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2006

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный университет» и Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор Иванов Владимир Петрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Спицин Виктор Алексеевич

доктор медицинских наук,

профессор Петрин Александр Николаевич

Ведущее учреждение:

Российский государственный медицинский университет

Защита состоится «22» февраля 2006 г. в 15 часов

на заседании диссертационного совета Д 212.203.05 в Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, дом 8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, дом 6.

Автореферат разослан «_0» января 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук,

доцент /

Гигани О.Б.

гоо£А

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Важным патогенетическим звеном онкологических заболеваний являются повреждения генетического аппарата клеток, в результате которых происходят изменения в регуляции клеточного цикла, апоптоза, дифференцировки, морфо-генетических реакций клеток, систем контроля целостности генома и противоопухолевого иммунитета. Согласно современным представлениям ключевую роль в процессе злокачественной трансформации клетки играют нарушения, вызывающие модификацию ДНК с последующей активацией онкогенов, а также приводящие к потере функции генов-супрессоров опухолевого роста. Открытия функциональной геномики позволяют дополнить классическую двух-ударную модель канцерогенеза Кнудсона представлениями о том, что наряду со структурными перестройками различного характера (точечными мутациями, хромосомными аберрациями, геномными мутациями и др.) в становлении и поддержании атипичной экспрессии генов участвуют и функциональные мутации, а именно метилирование ДНК.

В этой связи в новом свете встает вопрос о функционировании рибосом-ных генов (РГ) (Алешин ВБ. и соавт., 1995; Морозов, 1994; Kunz W., 1981; Long Е.О., 1980,). К настоящему времени достаточно подробно описана структурная организация рибосомных генов у различных видов растений и животных, сформировано полное представление о нуклеотидной организации рибо-сомного повтора (Вейко H.H. и соавт., 2000, 2001,). Изучены индивидуальные особенности варьирования числа копий функционально активных рибосомных генов в пределах генома в зависимости от принадлежности к той или иной клеточной популяции или талу ткани (Прокофьева-Бельговская A.A., 1986). Работами целого ряда авторов показана изменчивость функционального состояния рибосомных генов как в ходе клеточных дифференцировок, так и при смене клеточных циклов (Газарян К.Г., 1983; Архипчук В.В., 1993). Обнаружены изменения показателя функциональной активности рибосомных генов (ФАРГ) при различных физиологических состояниях организма: голодании, охлаждении, действии на клетки ингибиторов ферментов и при патологии человека различного генеза и локализации (Zahradka P., Larson D., 1991). Исследованиями последних лет доказано увеличение функциональной активности РГ на примере опухолей пищевода, желудка, легкого, молочной железы, простаты (Мамаев H.H., Мамаева С.Е., Нейштадт Э.Л., 1992; Челидзе, П.В., 1991; Derenzini М., Тгеге D., 1991). Установлены изменения ФАРГ в клетках пораженных лимфатических узлов при злокачественных лимфомах (3JI) (Букаева И.А., Райхлин, 1997; КощфазъеваТ.Т., Королева JLC., 1993).

В то же самое время в литературе не получили должного освещения вопросы, связанные с оценкой состояния генетического аппарата при неоплазиях лимфоидной ткани на субклеточном уровне, а именно изучение хромосомных аберраций, ассоциаций хромосом, функциональной активности рибосомных генов в лимфоцитах периферическс" " злокачественными

лимфомами.

Крайне недостаточно освещены проблемы взаимосвязей патогенетических эффектов с особенностями фенотипических проявлений у больных. Актуальной остается проблема изменчивости количества активных копий рибосом-ных генов при прохождении больными курсов полихимиотерапии.

Изложенное выше, а также необходимость в дальнейшем расширении представлений о состоянии генетического материала на фоне развития и течения злокачественного процесса в лимфоидной ткани определили проведение настоящего исследования.

Цель исследования

Изучить распространенность хтокачественных лимфом в курской популяции, их генетическую детерминированность и цитогенетические эффекты в лимфоцитах периферической крови во взаимосвязи с фенотипическими особенностями больных.

Задачи исследования

1. Изучить заболеваемость злокачественными лимфомами в Курской области за 12 лет, её распространенность среди районов области и генетическую детерминированность.

2. Оценить особенности фенотапического проявления признаков у больных со злокачественными лимфомами.

3. Исследовать цитогенетические показатели (уровень спонтанного мутагенеза, количество активных рибосомных генов, ассоциативную активность акроцентрических хромосом) и их взаимосвязи с фенотипическими особенностями у больных.

4. Рассмотреть состояние цитогенетических показателей в лимфоцитах периферической крови больных при различных курсах лечения и используемых схемах полихимиотерапии (ПХТ).

Научная новизна работы

Впервые проведена оценка количества активных рибосомных генов у больных со злокачественными лимфомами.

Установлено, что количество активных копий РГ у больных ЗЛ достоверно ниже, чем в общей популяции. Уровень спонтанного мутагенеза среди больных ЗЛ в 6,5 раза превышает популяционный показатель по Курской области. Выявлены достоверные различия в социально-биологическом статусе, особенностях клинического проявления и течения заболевания среди больных с ход-жкинскими и неходжкинскими лимфомами. Впервые проведен многомерный анализ вариабельности фенотипических признаков и цитогенетических характеристик лимфоцитов периферической крови больных со ЗЛ. Установлены особенности их взаимосвязей по структуре и выраженности в пределах каждой из рассмотренных нозологических форм. Доказано, что при лечении больных ЗЛ имеет место увеличение количества активных РГ в популяциях лимфоцитов периферической крови в зависимости от курса лечения.

Практическая значимость

Полученные новые знания о генетической детерминированности ЗЛ создают основу для проведения медико-генетического консультирования населения Курской области и прогнозирования заболеваемости до 2012 года. Выявленные различия в особенностях клинического проявления лимфом Ходжкина (ЛХ) и неходаскинских лимфом (НХЛ) на основе линейно-дискриминантного анализа отрывают возможности проведения их первичной вероятностной дифференциальной диагностики на уровне районного звена практического здравоохранения без проведения специальных цитологических исследований.

Впервые полученные данные об изменениях количества активных рибо-сомных генов в зависимости от проведенных курсов полихимиотерапии ставят новые проблемы в изучении конкретных механизмов ответных реакций лимфо-цитарных популяций больных на воздействие ксенобиотиков.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Злокачественные лимфомы представляют собой заболевания муль-тифакгориальной природы, решающий вклад в детерминацию которых вносит генетическая компонента (<3а=66,46) и факторы среды (Е\¥=20,86). За 12 лет заболеваемость ЗЛ в курской популяции составила 5,7 на 100000 населения и является наименьшей по Центрально-Черноземному региону РФ.

2. Уровень спонтанного мутагенеза у больных со злокачественными лимфомами превышает фоновые значения в 6,5 раза. Количество активных ри-босомных генов в лимфоцитах периферической крови у больных злокачественными лимфомами достоверно ниже, чем у здоровых лиц в популяции (^=2,93, при р<0,05).

3. Больные с ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами различаются между собой по ряду фенотипических и клинических проявлений, формируя при этом две статистически разные совокупности, что позволяет осуществлять предварительную дифференциальную диагностику с вероятностью 80% без проведения специальных цитологических исследований.

4. При злокачественных лимфомах имеют место корреляционные взаимосвязи между вариабельностью ряда цитогенетических показателей, фе-нотипическими особенностями и клиническими проявлениями заболеваний.

5. В лимфоцитарных популяциях больных злокачественными лимфомами в результате проводимых курсов полихимиотерапии наблюдается статистически значимое увеличение количества активных рибосомных генов с 18,35 усл. ед. до 19,06 усл. ед. (1=2,73, при р<0,05). Достоверно усиливается ассоциативная активность акроцентрических хромосом. Ответные реакции на воздействие ксенобиотиков проявляют и другие клеточные популяции.

Внедрение в практику

Результаты исследования внедрены в работу областной медико-генетической консультации, областного онкологического диспансера, кафедры общей биологии КГУ, кафедры медицинской биологии, генетики и экологии КГМУ, кафедры онкологии КГМУ.

Апробация и публикации

Результаты работы доложены на конференциях студентов и молодых ученых КГМУ (Курск, 2003, 2005), итоговых научных сессиях КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН (Курск, 2002, 2004, 2005), межвузовской научной конференции «Проблемы экологии в науке и образовании» (Курск, 2004), ТХ Всероссийском Конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2004), Российской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2004), IV международной научно-практической конференции «Динамика научных достижений -2005» (Днепропетровск, 2005), VIII Международаой научно-практической конференции «Наука и освгта 2005» (Днепропетровск, 2005), X Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2005), V Съезде Российского общества медицинских генетиков (Уфа, 2005), юбилейной научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН «Университетская наука: Взгляд в будущее» (Курск, 2005), Международном научном форуме «Ломоносов - 2005» (Москва, 2005), межкафедральном заседании сотрудников КГМУ (Курск, 2005). По материалам диссертации опубликовано 20 печатных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, пяти глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, библиографического списка и приложения. Работа изложена на 128 страницах машинописного текста, иллюстрирована 52 таблицами, 10 рисунками. Список используемой литературы включает 227 источников, 94 из которых зарубежные.

Материал исследования

Материалом для эпидемиологических исследований послужили данные по заболеваемости 3JI в Курской области (КО) за период с 1991 по 2003 гг. Стандартизация абсолютных величин проводилась из расчета для области на 100000 населения, для районов - на 10000.

Материалом для исследования фенотипических особенностей (социально-биологического статуса, клинических характеристик, клинико-лабораторных показателей) послужили данные о 117 больных 3J1 (ЛХ и НХЛ), обратившихся в Курский областной онкологический диспансер (КООД) в 2003-2005 гт.

Цитогенетический анализ проведен на лимфоцитах периферической крови. Всего рассмотрено 145 случаев взятия материала у этих же больных, из них 89 - при первичном поступлении, 36 - при поступлении на второй курс ПХТ и 20 случаев - при четвертой диспансеризации.

Контрольная выборка составляла 51 человек.

Всего проанализировано 9144 метафазных пластинок, из них на мутагенез - 3900, на апивность РГ - 5244 (4223 - в выборке больных и 1021 - в контрольной группе).

Методы исследования

Клинико-генеалогический метод. Для изучения генетической детерминированности ЗЛ проводили сбор генетического анамнеза, а также составление и анализ родословных. Полученный материал обрабатывали с использованием сегрегационного и корреляционного анализа, а также компонентного разложения общей фенотипической дисперсии. Рекуррентный риск рассчитывали по сегрегационным частотам (Лильин Е.Т. и соавт., 1984).

Статистические методы. Статистический анализ сформированного банка данных проводили на ПК с использованием пакета прикладных программ STATIST1CA фирмы StatSoft Inc. (США), версия 6.0, и программы «GEN 1», составленной д.б.н. В.И. Трубниковым.

Обработку данных осуществляли по стандартным методикам вариационной статистики (Фогель Ф., 1989). При описании количественных признаков использовали параметры нормального распределения: среднее значение, стандартную ошибку среднего значения, минимальные и максимальные значения признака, несмещенную дисперсию (Гланц С., 1998, Реброва О.Ю., 2003). При обработке качественных показателей вычисляли: размер выборочной доли в процентах и ошибку выборочной доли. Для проверки достоверности различий между совокупностями использовали параметрические критерии Стьюдента и Фишера (Лакин Г.Ф., 1990). Уровень значимости принимали равным 0,05. С целью определения прогноза общей заболеваемости использовали метод анализа временных рядов путем сглаживания линии тренда с помощью скользящего среднего. В работе использовали корреляционный, кластерный, дискриминант-ный анализы. Для проверки соответствия типа наследования ЗЛ простым генетическим (менделевским) гипотезам использовали сегрегационный анализ (Трубников В.И., 1992).

Цитогенетические методы. При постановке культуры клеток лимфоцитов периферической крови использовали полумикрометод (Захаров А.Ф., 1982). Фиксацию клеток и приготовление цитогенетических препаратов метафазных хромосом лимфоцитов периферической крови проводили на 72 часу после стимуляции ФГА строго по методике. После высушивания препараты маркировали и до окраски хранили при комнатной температуре (Карпишенко А.И., 1997).

Для учета хромосомных аберраций препараты окрашивали по Романовскому - Гимзе. Для каждого индивида оценивали 100 клеток. Учитывали все аберрации, распознаваемые без кариотипирования.

Для специфического выявления районов ядрышковых организаторов использовали метод дифференциальной окраски хромосом нитратом серебра, предложенный Howell и Black с некоторыми модификациями. Для каждого случая средний показатель суммарной активности 10 ЯОР рассчитывали без кариотипирования хромосом в 20-40 клетках. Количество активных РГ лимфоцитов периферической крови оценивали визуально по размерам преципитатов

восстановленного серебра и выражали по пятибалльной шкале в условных единицах (усл.ед.) (Ляпунова Н.А. и соавт., 2001).

Ассоциативную активность учитывали как дополнительный цитогенети-ческий критерий при анализе препаратов, окрашенных нитратом серебра. Для индивида подсчитывали число хромосом в каждой ассоциации, число ассоциаций акроцентрических хромосом и ассоциативный индекс (АИ).

Общеклинические методы. Диагностику и верификацию злокачественных лимфом проводили на базе КООД специалисты-онкологи с использованием комплекса клинико-лабораторных методов обследования (рентгенологического, метода УЗИ-диагностики, цитологического исследования пунктата костного мозга). В каждом случае для определения вида и характера патологического процесса, лимфогенеза опухоли и степени ее злокачественности проводили обязательную биопсию лимфатических узлов.

Основные лабораторные исследования крови и мочи выполняли согласно унифицированным методикам.

Оценку общесоматаческого статуса больных проводили по шкале Кар-новского в модификации Восточной Кооперативной Онкологической Группы (ЕСОв, 1989 г.).

Результаты и обсуждение собственных исследований

1. Генетико-эпидемиологические исследования злокачественных лимфом в курской популяции

В рамках выполняемой работы изучена распространенность ЗЛ в Курском регионе. Полученные данные представлены на рис. 1.

1991 1992 1893 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002

Рисунок 1. Заболеваемость злокачественными лимфомами населения КО

Из графиков, видно, что заболеваемость ЗЛ за 12 лет варьировала незначительно, составляя в среднем 5,7±0,2 (1,79% от всех нозологических форм). Повышение заболеваемости наблюдалось в 1995, 1998, 2000гг. Наименьшее значение имело место в 2001 году - 4,83. Стандартизированный показатель заболеваемости ЛХ и НЛХ колебался незначительно и составлял в среднем 3,1 и 2,5 на 100000 населения соответственно. Вариабельность заболеваемости ЛХ и НЛХ имела свои особенности. Средняя частота НЛХ стабильно превышала таковую при ЛХ (t=4,55, при р<0,05).

4.0

3.5 3,0 2,5

1991 1993 1995 1997 1999 2001

1992 1994 1996 1998 2000 2002

- ЗЛ,заболеваемость у мужчин

- ЗЛ, заболеваемость уженщин

Рисунок 2. Динамика заболеваний ЗЛ среди мужского и женского населения КО за период с 1991 по 2002 гг.

Мужское население болело чаще женского (Рис.2): показатель Стьюдента при ЗЛ достигал 3,64, при НЛХ -1=3,35, при ЛХ различия не достигали статистически значимого уровня -1=1,45. Вместе с этим, вариабельность заболеваемости во времени была более выражена среди женского населения (¥=2,09, Р=1,01 и Р=1,56 соответственно).

Составленный прогноз на 10 лет показал, что частота встречаемости ге-мобластозов на территории КО будет неуклонно расти и в 2012 г. составит 6,21 случай на 100000 населения.

Весьма важными с точки зрения определения приоритетных векторов, связанных с проведением профилактических мероприятий, являются данные о распространенности злокачественных лимфом в районах области. Среднее значение показателей заболеваемости по 28 районам КО составило 0,84±0,05 на 10000 населения. Наибольший уровень заболеваемости наблюдался в Железно-горском районе - 1,22 на 10000 населения, наименьший - в Золотухинском районе - 0,52 на 10000 населения. Ранжирование районов по принципу групп риска представлено на рис. 3.

- районы с высоким показателем заболеваемости ЗЛ (>Х±о),

- районы со средним показателем заболеваемости ЗЛ (Х±о);

- районы с низким показателем заболеваемости ЗЛ (<Хко).

Проведенный клинико-генеалогический анализ дал основания принять мультифакториальную модель наследования ЗЛ. Полученные результаты выявили более выраженный вклад генетической компоненты (Оа=66,5%) за счет эффектов аддитивного взаимодействия генов. Вклад средовых факторов достигал 21%. Достаточно выраженным был материнский эффект - 12,7%.

2. Фенотипические особенности больных со 3JI

Соотношение по полу в общей выборке больных было фактически одинаково (50% мужчин, 50% женщин). Средний возраст на момент постановки диагноза достигал 46 лет. Проведенное обследование позволило поставить в качестве окончательного клинического диагноза наличие ЛХ 52 больным (47%) и НЛХ - 59 (53%). При обращении наблюдались все 4 стадии заболевания, при этом наибольший процент (41,35%) составили больные со II стадией злокачественного процесса, 37,5% - больные с III стадией, 19,23% - с IV стадией. При анализе жалоб при поступлении у 38% больных наблюдались симптомы интоксикации. Среди обследуемых диагноз ЗЛ, поставленный впервые, отмечался у 76 больных (68%), 36 больных поступили с рецидивом заболевания, (32%).

Проведён сравнительный анализ между различными формами злокачественных лимфом по всем рассматриваемым характеристикам. Обобщенный многомерный анализ социально-биологических, клинических и клинико-лабораторных показателей позволил в итоге из 101 параметра выделить 9, обладающих наиболее высокой ценностью (Табл. 1).

Полученная модель дискриминации открывает возможность выполнения предварительной дифференциальной диагностики ЛХ и НЛХ с вероятностью 80% только по фенотипическим показателям без проведения специальных цитологических исследований. Это представляется наиболее важным в условиях сельских районов, не имеющих соответствующей лабораторной базы.

Таблица 1

Наиболее приоритетные социально-биологические, клинические и клинико-лабораторные характеристики больных со ЗЛ при 1 поступлении по результатам дискриминантного анализа

при сегрегации на ЛХ и НЛХ _ (F(9,101)=8,49, р<0,0001)

№ Црнзвак Ценность признака Коэффнцнент

1 Продолжительность учебы и работы, годы 9,66 0,01

2 Лимфоциты, % 6,78 0,01

3 Вес, кг 4,75 0,01

4 Размеры паховых ЛУ, см 3,54 0,05

5 Фибриноген, г/л 4,19 -0,06

6 R-графия органов грудной клетки** 2,41 -0,04

7 Длительность проживания вблизи экологиче- 1,97 -0,09

/ ски неблагоприятных объектов, годы

8 Природа профессиональных вредностей*** 2,08 -0,10

9 Продолжительность курения, годы 1,87 0,01

10 Constanta 1,12

* ошибка классификации 20%

**1 - нет поражения легочной ткани и средостения; 2 - поражение легочной ткани; 3 - поражение легочной ткани и средостения; 4 - поражение легочной ткани, средостения и перикарда; 5 - поражение средостения

* 1 - физическая; 2 - химическая; 3 - физико-химическая; 4 - биологическая

3. Цитогенетические эффекты при ЗЛ и их связь с особенностями фенотипа

Как показали результаты исследования, средняя частота клеток с хромосомными аберрациями у больных со ЗЛ составила 3,49±0,36%, а число аберраций на клетку достигало 0,046. Среднее число поврежденных хромосом 4,95±0,75. Среди выявленных нарушений кариотипа 41,6% было представлено аберрациями хроматидного типа и 58,4% приходилось на аберрации хромосомного типа (простых и обменных). При этом около 73% случаев составляли ацентрические фрагменты (одиночные и парные). Межхромосомные обмены имели место в 24% случаях. Количество хроматидных обменов достигало 3%.

Распределение больных по частоте встречаемости у них патогенетических эффектов было следующим: 36% (14 больных) имели от 1 до 3 аберраций, 31% (12 больных) - от 4 до 6 и 21% (8 больных) - от 7 и выше и в 13% случаях (5 человек) хромосомных аномалий выявлено не было.

Сравнительный анализ полученных данных с контрольными значениями по курской популяции свидетельствует, что уровень спонтанного мутагенеза у больных гемобластозами достоверно превышает по большинству показателей фоновых значений по Курской области (Табл. 2).

Таблица 2

Сравнительная характеристика частоты аберраций в контрольной ________группе и группе больных ЗЛ

№ Признак Контроль, N=89 ЗЛ, N=39 1

Х±Бх

1 Количество аберраций 0,71±0,15 4,56±0,68 5,53*

2 Количество одиночных фрагментов 0,31±0,10 1,77±0,24 5,62*

3 Количество хроматвдшх обменов 0,03±0,03 0,13±0,08 1,17

4 Количество парных фрагментов 0Д6±0,07 1,56±0,35 3,64*

5 Количество хромосомных обменов 0,03±0,03 1,1±0,36 2,96*

* - различия статистически достоверны (р<0,05)

Другой группой цитогенетических эффектов являлось изучение количества активных рибосомных генов в лимфоцитах периферической крови в норме и у больных со ЗЛ (Табл. 3).

Таблица 3

Сравнительная характеристика КАРГ в норме и при ЗЛ

№ Признак Контроль, N=51 ЗЛ, N=89 1 Р

Х4£х Х±вх в

1 Активность РГ по 10 хромосомам 19,24±0Д4 2,90 18,42±0,16 2,23 2,93* 1,30

2 Активность РГ по И хромосомам 11,47±0,17 1,51 10,89±0,13 1,59 2,65* 1,05

3 Активность РГ по в хромосомам 7,77±0,20 2,01 7,54±0,15 1,97 0,93 1,02

* - различия статистически достоверны при р<0,05

Установлено, что средний показатель количества активных РГ в контрольной выборке региона составляет 19,24*0,24 усл.ед., что находится в пределах описанной в литературе вариабельности признака (Воронина В.Н., 2001, Ляпунова H.A., 2000). У больных со ЗЛ среднее КАРГ по 10 хромосомам составило 18,42±0,1б усл.ед. и было статистически достоверно ниже (t=2,93, при р<0,05) этого показателя в контроле.

Среднее число хромосом в ассоциациях у больных составило 2,49±0,08, среднее число ассоциаций было равно 1,10±0,03. Ассоциативный индекс в рассматриваемой выборке больных со ЗЛ составил 72,26% (Табл. 4).

Сравнительный анализ цитогенетических показателей больных с ЛХ и НЛХ статистически значимых различий ни по одному параметру не выявил.

Таблица 4

Xi Признак X±Sx о2

1 Число хромосом в ассоциациях 2,49±0,08 0,5

2 Число ассоциаций хромосом 1,10±0,03 0,09

3 Ассоциативный индекс, % 72Д6±1,46 190,25

В результате проведенного исследования в общей группе больных ЗЛ без дифференциации по полу были выявлены статистически значимые корреляционные взаимосвязи различного уровня и различной направленности между ци-тогенетическими эффектами и некоторыми характеристиками больных. Из социально-биологического блока необходимо выделить связи с возможными факторами эпиопатогенеза. Прежде всего это касалось количества выкуриваемых в день сигарет и показателей КАРГ хромосом группы ЭиО (11=0,67 иЯ= - 0,44 соответственно), показателя КАРГ О хромосом и наличием профессиональных вредностей в период трудовой деятельности (11=0,40). Установлена связь между длительностью проживания больных вблизи экологически неблагополучных объектов и показателем КАРГ хромосом группы О (11=0,36). Наблюдались корреляционные взаимосвязи между показателем, отражающим наличие хронических заболеваний органов дыхания у больных со ЗЛ, и количеством хромосомных обменов (11=0,62). Из неуправляемых факторов развития ЗЛ необходимо отметить корреляционные взаимосвязи между цитогенетическими эффектами и возрастом больных со ЗЛ.

Из клинических характеристик в общей выборке больных со ЗЛ корреляционные взаимосвязи наблюдались с большинством показателей спонтанного мутагенеза. Продолжительность течения заболевания формировала достаточно выраженные связи с количеством аберрантных клеток (11=0,52), количеством аберраций хроматидного типа (11=0,46), количеством одиночных фрагментов (11=0,41), с частотой встречаемости хромосомных аберраций (11=0,54). Важный клинический показатель, отражающий как течение процесса, так и эффективность применения предшествующих курсов ПХТ, - количество рецидивов по счету в общей выборке больных коррелировало с количеством аберраций (11=0,78), с числом поврежденных хромосом (11=0,79), с количеством аберраций

хромосомного типа (11=0,85), с числом парных фрагментов (11=0,80) и с количеством хромосомных обменов (11=0,82). Среди больных с рецидивами установлены взаимосвязи между общей продолжительностью заболевания и количеством аберрантных клеток, количеством аберраций, числом поврежденных хромосом и количеством хромосомных обменов, коэффициенты корреляции варьировали от 11=0,71 до К=0,73.

Корреляционный анализ цитогенетических эффектов и некоторых клини-ко-лабораторных показателей в пределах рассматриваемых нозологических форм продемонстрировал их относительную независимость.

Таким образом, различные формы ЗЛ по цитогенетическим показателям характеризуются заметным единообразием и должны рассматриваться как единая статистическая совокупность. В тоже время, многомерный анализ феноти-пических проявлений и онтогенетических эффектов требуют, как показали вышеизложенные результаты, рассматривать каждую из форм злокачественных лимфом (ЛХ и НЛХ) как отдельные статистические совокупности.

4. Цитогенетические эффекты при лечении злокачественных лимфом

В целях изучения влияния средовых факторов на функционирование бе-локсинтезирующего аппарата был проведен анализ количества активных рибо-сомных генов у больных со злокачественными лимфомами в динамике при проведении курсов полихимиотерапии. Рассмотрены цитогенетические показатели после первого и третьего курса ПХТ (при второй и четвертой госпитализации). Оценка показателей проводилась на двух уровнях - организменном (за единицу наблюдения принимался организм больного) и клеточном (единицей наблюдения служила метафазная пластинка). Полученные результаты свидетельствуют, что в обоих случаях с увеличением числа проведенных курсов ПХТ наблюдалось увеличение количества активных рибосомных генов, хотя при анализе средних значений на организменном уровне речь идет о тенденциях к увеличению КАРГ, в то время как на уровне популяций лимфоцитов этот рост достигает статистически значимого уровня.

Также статистически значимые различия были выявлены только в популяциях лимфоцитов и при анализе показателей числа хромосом в ассоциациях и числа ассоциаций акроцентрических хромосом при поступлении в онкодиспан-сер и после третьего курса ПХТ. Коэффициенты Стьюдента по обоим показателям и составляли 1=2,71 и 1=2,47 соответственно.

Статистически значимые различия наблюдались и в дисперсиях исследуемых показателей (Табл. 5).

Факт изменения количества активных РГ у больных ЗЛ при проведении адекватной ПХТ наглядно подтверждается сравнением с показателями здоровой популяции КО: после проведения третьего курса ПХТ статистические различия нивелировались (Табл. 6).

Таблица 5

>1 Признак I поступление (I), N=2612 2 поступление (II), N=989 4 поступление (IV), N=622 1 К

Х±Бх [ V* Х±Бх о* Х±Эх III 1-1У II.IV 1-11 1-1У Н-ГУ

1 Активность РГ по 10 хромосомам 18,35±0,04 5,20 18,58±0,07 5,53 19,06±0,10 5,62 2,73* 6,99* 3,99* 1,06* 1,08* 1,02*

2 Активность РГ по О хромосомам 10,88±0,04 3,36 10,84±0,06 3,62 11,55±0,08 3,76 0,58 8,20* 7,32* 1,08* 1,12* 1,04*

3 Активность РГ по О хромосомам 7,47±0,04 3,23 7,75±0,06 3,29 7,51±0,07 2,91 4,05* 0,42 2,63* 1,02* 1.11* 1,13*

4 Число хромосом в ассоциации 2,42±0,04 4,01 2,53±0,07 4,20 2,67±0,08 4,48 1,35 2,71* 1,35 1,05* 1,12* 1,07*

5 Число ассоциаций хромосом 1,08±0,02 0,77 1,12±0,03 10,81 | 1,18±0,04 0,85 1,14 2,47* 1,29 1,05* 1,11* 1,06*

Таблица 6

№ ^ Признак Контроль (К), N=1021 1 поступление (1), N=2612 2 поступление (II), N=989 4 поступление (IV), N=622 1 Г

Х±вх о' Х±Ях о2 Х±вх в1 К-1 к-п К-1У К-1 К-Н К-ГУ

1 Активность РГ по 10 хромосомам 19,23±0,07 4,70 18,35±0,04 5,20 18,58±0,07 5,53 19,06±0,10 5,62 10,63* 6,42* 1,45 1,11* 1,17* 1,19*

2 Активность РГ по О хромосомам 11,46±0,05 2,60 10,88±0,04 3,36 10,84±0,06 3,62 11,55±0,08 3,76 8,97* 7,98* 1,02 1,29* 1,39* 1,44*

3 Активность РГ по в хромосомам 7,76±0,05 2,79 7,47±0,04 3,23 7,75±0,06 3,29 7,51±0,07 2,91 4,53* 0,29 3,05* 1,15* 1,18* 1,04*

* - различия статистически достоверны при р < 0,05

Проведенный многомерный анализ подтвердил, что показатели КАРГ в выборке одних и тех же больных со ЗЛ при поступлении их в клинику, после прохождения первого и третьего курсов ПХТ представляют собой отдельные кластеры и по сути своей являются независимыми статистическими совокупностями. Другие цитогенетические показатели: число хромосом в ассоциациях, число ассоциаций хромосом, а также «дельты» цитогенетических характеристик также демонстрировали свою независимость при каждом из проведённых курсов лечения (Рис. 4).

AG1 D1 G1 AG2 D2 G2 AG3 D3 G3 ASM ASS3 ASX1 AS61 ASX2 ASS2

1 0,8 0,6 0,4 Oí 0

R=0,04

Рисунок 4. Дендрограмма матрицы корреляций цитогенетических показателей в популяции лимфоцитов периферической крови больных со ЗЛ в динамике.

AGI - активность РГ по 10 хр. при 1 пост ; D1 - активность РГ по D хр. при 1 пост ; Gl -активность РГ по G хр. при 1 пост ; AS_X1 - число хромосом в ассоциации при 1 пост.; ASS1 - число ассоциаций хромосом при 1 пост.; AG2 - активность РГ по 10 хр. при 2 пост ; D2 - активность РГ по D хр при 2 пост, G2 - активность РГ по G хр при 2 пост ; ASX2 - число хромосом в ассоциации при 2 пост.; ASS2 - число ассоциаций хромосом при 2 пост.; AG3 - активность РГ по 10 хр. при 4 пост.; D3 - активность РГ по D хр. при 4 пост.; G3 - активность РГ по G хр при 4 пост.; ASX3 - число хромосом в ассоциации при 4 пост.; ASS3 - число ассоциаций хромосом при 4 пост.

Наблюдаемые характерные изменения в количестве активных рибо-сомных генов, полученные при анализе влияния различных схем ПХТ, отражают особенности ответной реакции на различие не только в выраженности экзогенных воздействий, но и в качественном влиянии ксенобиотиков на лимфоцитарные популяции (Табл. 7).

По-нашему мнению эти результаты доказывают, что лимфоцитарные популяции периферической крови больных ЗЛ отвечают на воздействие ксенобиотиков увеличением общего количества активных РГ. При этом механизмы полученного эффекта могут бьггь различными. В первом приближении можно рассмотреть как минимум два из них. Первый - элими-

нация из популяции в ответ на лечение лимфоцитов с низким количеством РГ и сохранение лимфоцитов со средними и высокими показателями. И второй - это влияние вводимых в организм больных весьма мощных ксенобиотиков, которые, воздействуя на геном клеток, способствуют повышению количества активных рибосомных генов. Вероятнее всего, имеет место кумулятивный механизм, основанный на элиминации одних клеточных популяций и формировании других - с индуцированным изменением уровня экспрессии генов.

Таблица 7

Сравнительная характеристика цито генетических показателей лимфоцитарных популяций у больных ЗЛ, получавших лечение

Цнтогенети- Варианты 1 поступление 2 поступление 4 поступление

№ ческий показатель сравнения схем ПХТ 1 Р t Р 1 Р

Ы1 531* 1,05 139 1,68* 232* 1,19*

Активность РГ по 10 хромосомам 1-Ш 1,97* 1,10 0,72 2,01* 2,73* 135*

1 ЫУ 2,76* 1,03 4,46* 1,29* 236* 1,93*

П-Ш 4,03* 1,15 1,85 1,19* 037 1,14

П-1У 3,93* 1,08 2Д9* 130* 335* 1,62*

Ш-1У 0,56 1,07 4,09* 1,56* 432* 1,42*

III 1,89 1,09 0,49 132* 730* 130*

Активность РГ по О хромосомам 1-Ш 132 135* М7 137* 132 137*

2 ЫУ 0,86 136* 4,03* 1,94* 1,08 1,29*

П-Ш 3,47* 1,24* 2,09* 1,42* , 5,19* 235*

П-1У ^ 1,61 1,25* 3,71* 1,47* 5,67* 1,93*

НЫУ 2,84* 1,01 633* 1,04 0,18 1,22*

1-П 4,76* 1,75* 136 1,75* 3,95* 137*

Активность РГ по С хромосомам 1-Ш 4,46* 1,11 0,79 1,16* 1,76 1,17

3 НУ 2,70* 1,13 0,46 2,26* 4,40* 138*

г П-1П 132 1,94* 039 2,03* 533* 139*

1Ы\ 3,23* 134* 1,09 130* 032 135*

Ш-1У 2,13* 1,26* 0,45 2,63* 6,16* 1,18*

1-П 1,15 1,11 131 1,15* 3,07* 1,27

Число хромосом в ассоциации МП 035 1,03 1,22 1,10 0,10 1,08

4 ЫУ 2,00* 1,00 озо 136* 0,21 1,16*

П-Ш 1,67 1,14 озз 1,05 2,97* 1,17*

П-1У 0,20 1,11 135 1,18* 3,12* 1,48*

Ш-1У 2,45* 1,02 0,77 1,23* 0,11 1,26*

1-П 137 1,04 130 1,01 236* 1,06

Число ассоциаций хромосом 1-Ш 0,27 1,11 1,27 1,02 0,61 1,04

5 ЫУ 234* 1,06 0,67 138* 1,11 1,41*

П-Ш 139 1,15* 0,18 1,03 2,76* 1,10

П-1У 0,10 1,10 038 137* 330* 130*

ПЫУ 2,23* 1,05 0,67 1,41* 031 136*

- различия статистически достоверны при р < 0,05

В силу особенности заболевания и используемого методологического подхода для анализа изначально важно было исключить возможное влияние хирургического и лучевого лечения. Наблюдаемые эффекты получены только при использовании комбинации химиопрепаратов. В качестве основных механизмов воздействия противоопухолевых веществ на функциональную активность отдельных локусов ДНК мы предполагаем следующие. Препараты алкилирующего ряда могут непосредственно взаимодействовать или с нуклеиновой кислотой, нарушая ее способность нормально функционировать, или с ферментами, ответственными за биосинтез нуклеиновых кислот и их функциональную полноценность. Возможна ин-теркаляция препаратов между азотистыми основаниями в цепи ДНК или РНК, препятствующая нормальным процессам репликации и транскрипции. Некоторые противоопухолевые антибиотики и алкалоиды могут блокировать ДНК-матрицу за счет ковалентного связывания, что приводит к снижению активности полимераз. Функционирование нуклеиновых кислот может нарушаться также в том случае, если в цепи ДНК или РНК природные компоненты будут заменены модифицированными. Механизм анти-бластического действия препаратов группы антиметаболитов основан на взаимодействии с различными ферментами или группой ферментов, осуществляющих биосинтез компонентов ДНК и РНК и их катаболическое превращение. Для такого взаимодействия с ферментными системами вещество должно иметь структурную аналогию. Это далеко не полный перечень возможных механизмов действия препаратов, однако, следует отметить интересную особенность ядрышкообразукнцих районов акроцентри-ческих хромосом. В течение всего жизненного цикла клетки эти участки находятся в деспирализованном состоянии. Таким образом, и в период интерфазы, и в период митотического деления клетки возможность индуцированного влияния на эти области выше, чем в целом по геному.

Вероятны и другие механизмы наблюдаемого эффекта. В любом случае факт увеличения количества активных РГ в лимфоцитарных популяциях у больных в результате лечения является очевидным и требует своего дальнейшего изучения.

ВЫВОДЫ

1. Заболеваемость злокачественными лимфомами в курской популяции за 12 лет остается относительно стабильной и составляет 5,7 на 100000 населения. Среди 28 районов области она варьирует от 0,52 до 1,22 на 10000 населения. Ранжирование территории области по заболеваемости выявило 7 районов группы риска.

2. Наследование злокачественных лимфом соответствует муль-тифакториальной модели. Вклад генетических факторов обусловлен аддитивной компонентой (Оа=66,4б%). Случайные средовые факторы (Ему) и материнский эффект (Ме) составляют соответственно 20,86% и 12,69%

всей дисперсии. Рассчитаны таблицы рекуррентного риска для осуществления медико-генетического консультирования в регионе и получен прогноз заболеваемости по области до 2012 года.

3. Больные ЛХ и НХЛ отличаются мезвду собой по целому ряду фенотипических особенностей и клиническим проявлениям заболевания. Показано, что по структуре и выраженности корреляционных взаимосвязей фенотипических показателей каждая из нозологических форм представляет собой отдельную статистическую совокупность. Получено уравнение регрессии, позволяющее на уровне районного звена с вероятностью 80% выполнять первичную дифференциальную диагностику лимфом без проведения специальных цитологических исследований.

4. У больных злокачественными лимфомами уровень спонтанного мутагенеза (Х=4,59%) в 6,5 раза превышает фоновые значения в популяции (Х=0,71%), а количество активных рибосомных генов (Х=18,42 усл.ед.) достоверно ниже среднепопуляционного показателя (Х=19,24 усл.ед.) (1=2,93, при р<0,05). Установлены статистически значимые взаимосвязи между особенностями фенотипических проявлений у больных и вариабельностью ряда цитогенетических характеристик.

5. Лимфоцитарные популяции больных со ЗЛ характеризуются изменением количества активных рибосомных генов в зависимости от количества курсов ПХТ. Среднее значение при постановке больных на учет составляло 18,35 усл.ед., после третьего курса лечения оно увеличилось до 19,06 усл.ед. Наблюдаемые различия статистически достоверны (Ъ=6,99, при р<0,05). Полихимиотерапия оказывает влияние и на дисперсии показателей количества активных рибосомных генов в лимфоцитарных популяциях, которые увеличивались с курсом лечения (Р=1,37).

6. Проведенный многомерный анализ количества активных рибосомных генов в лимфоцитах больных со ЗЛ при поступлении, после 1-го и 3-го курсов полихимиотерапии не выявил статистически значимых взаимосвязей между ними, что свидетельствует о независимости влияния каждого из курсов на состояние показателей в популяции.

7. Изменение количества активных рибосомных генов наблюдается при использовании различных схем лечения, однако, цитогенетические эффекты по каждой из них проявляли свои особенности в зависимости от курса лечения и в большинстве своем достигали статистически значимого уровня.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИСЕРТАЦИИ

1. Трубникова, Е.В. Рибосомные гены и их активность у позвоночных животных / Е.В. Трубникова // Сб. работ 68-й итог. науч. сес. КГМУ и отд-ния мед.-биолог. наук Центр.-Чернозем. науч. центра РАМН. - Ч. 1. -Курск, 2002.-С. 207-208.

2. Гаркавцева, Е.К. Особенности фенотипического проявления активных рибосомных генов на субклеточном уровне. Теоретические пути регуляции активности рибосомных генов / Е.К. Гаркавцева, Е.В. Трубникова // Материалы 68-й межвуз. науч. конф. студентов и молодых ученых. - Ч. 1. - Курск, 2003. - С. 73-74.

3. Трубникова, Е.В. Регуляция активности рибосомных генов в условиях культивирования лимфоцитов периферической крови человека / Е.В. Трубникова // Сб. работ 69-й итог. науч. сес. КГМУ и отд-ния мед,-биол. наук Центр.-Чернозем. науч. центра РАМН. - Курск, 2004. - С. 172173.

4. Влияние популяционно-демогафических показателей на формирование онкозаболеваемоста у мужчин в возрасте 70 лет и старше в Курской области / В.П. Иванов, Г.В. Куденцова, Е.В. Трубникова и др. // Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии: материалы Рос. науч.-практ. конф., посвящ. 25-летию НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН (24-25 июня 2004г.). В 2-х чч. Ч. И. / НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН. - Томск, 2004. - С 27.

5. Эпидемиология злокачественных лимфом в Курской области / В.П. Иванов, Г.В. Куденцова, Е.В. Трубникова и др // Современное состояние и перспективы развитая экспериментальной и клинической онкологии: Материалы Рос. науч.-практ. конф., посвященной 25-летию НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН (24-25 июня 2004г.). В 2-х чч. Ч. II. / НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН. - Томск, 2004. - С. 25.

6. Сравнительный анализ активности рибосомных генов у больных злокачественными лимфомами / В.П. Иванов, Е.В. Трубникова, Г.В. Куденцова, // Естествознание и гуманизм: сб. науч. работ - Томск, 2004. - Т 1,№2.-С. 9.

7. Влияние пестицидной нагрузки на формирование заболеваемости злокачественными лимфомами в Курской области / В.П. Иванов, Г.В. Куденцова, Е.В. Трубникова и др // Экология и здоровье человека: тр. IX Все-рос. Конгр. (5-7 октября 2004г). - Самара, 2004. - С. 117-119.

8. К вопросу об эпидемиологии злокачественных лимфом в Курской области / Е.В. Трубникова, В.П. Иванов, Г.В. Куденцова и др. // Проблемы экологии в науке и образовании: материалы межвуз. науч. конф. (Курск, 18 ноября 2004 г.). - Курск, 2004. - С. 41-42.

9. Уровень спонтанного мутагенеза у больных злокачественными лимфомами в Курской области / Е.В. Трубникова, В.П. Иванов, Г.В. Ку-

денцова и др. /7 Проблемы экологии в науке и образовании: материалы межвуз. науч. конф. (Курск, 18 ноября 2004 г.). - Курск, 2004. - С. 42-44.

10. Состояние функциональной активности рибосомных генов и ее изменчивость при полихимиотерапии у больных со злокачественными лимфомами / Е.В. Трубникова, В.П. Иванов, В.Н. Рыжаева и др. // Материалы IV междунар. науч.-практ. конф. «Динамика научных достижений -2005» (20-30 июня 2005 года) - Т. 1. Биология. - Днепропетровск, 2005. -С. 69-70.

11. Возраст, параметры популяционно-демографической структуры и распространенность злокачественных новообразований лимфатической ткани у женщин Курской области / Г.В. Куденцова, В.П. Иванов, Е.В. Трубникова и др. // Материалы VIII Междунар. науч.-практ. конф. «Наука и освгга 2005». - Т. 27. Медицина. -Днепропетровск, 2005. - С. 40-42.

12. Трубникова, Е.В. Фенотипическое проявление функциональной активности рибосомных генов у больных с различными формами злокачественных лимфом / Е.В. Трубникова, В.П. Иванов, В.Н. Рыжаева // X Все-рос. науч.-практ. конф. «Молодые ученые в медицине» посвящ. 1000-летию Казани и 60-летию Победы в Великой Отечественной войне (26-27 апреля 2005 г.) - Казань, 2005. - С. 236.

13. Трубникова, Е.В. Влияние возраста на взаимосвязь функциональной активности рибосомных генов и некоторых клинических проявлений злокачественных лимфом / Е.В. Трубникова, В.П. Иванов, Г.В. Куденцова // X Всерос. науч.-практ. конф. «Молодые ученые в медицине» посвящ. 1000-летию Казани и 60-летию Победы в Великой Отечественной войне (26-27 апреля 2005 г.) - Казань, 2005. - С. 236.

14. Трубникова, Е.В. Функциональная активность рибосомных генов у первичных больных злокачественными лимфомами / Е.В. Трубникова, В.Н. Рыжаева // Юбилейная межвуз. науч. конф. студентов и молодых ученых, посвящ. 70-летию КГМУ «Молодежная наука и современность». - Ч. 1.-Курск, 2005.-С. 77-78.

15. Маркин, Д.О. Изучение активности рибосомных генов у больных злокачественными лимфомами / Д.О. Маркин, Е.В. Трубникова, В.Н. Рыжаева // Юбилейная межвуз. науч. конф. студентов и молодых ученых, посвящ. 70-летию КГМУ «Молодежная наука и современность». - Ч. 1. — Курск, 2005. - С. 66-67.

16. Рыжаева, В.Н. Изменчивость функциональной активности рибосомных генов при химиотерапии больных злокачественными лимфомами / В.Н. Рыжаева, Е.В. Трубникова, В.П. Иванов и др. // Мед. генетика - 2005. - Т.4, №6. - С. 261.

17. Трубникова, Е.В. Состояние функциональной активности рибосомных генов и ее связь с эффективностью и токсичностью полихимиотерапии у больных злокачественными лимфомами / Е.В. Трубникова, В.П. Иванов, Г.В. Куденцова и др. // Мед. генетика. - 2005. - Т.4, №6. - С 277.

18. Трубникова, Е.В. Активность рибосомных генов у больных гемо-бластозами / Е.В. Трубникова, Г.В. Куденцова, И.Л. Киселев // Университетская наука: Взгляд в будущее: сб. тр. юбил. науч. конф. КГМУ и сес. Центр.-Чернозем. науч. центра РАМН, посвящ. 70-летию КГМУ. В 2-х тт.

- Курск, 2005. - Т. 1. - С. 187-188.

19. Трубникова, Е.В. Функциональная активность рибосомных генов и клинико-лабораторные показатели у больных со злокачественными лим-фомами / Е.В. Трубникова // Сб. тез. Муждунар. науч. форума «Ломоносов

- 2005». - М, 2005.- Т. 2. - С. 486-487.

20. Трубникова, Е.В. Клинико-генеалогический анализ злокачественных лимфом в Курской области / Е.В. Трубникова, В.П. Иванов // Курские тетради. Курск и куряне глазами ученых. - Тетрадь седьмая: Прошлое и настоящее региональной культуры Курского края (по проектам Российского 1уманитарного научного фонда 2005 года). - Курск: Изд-во Курск, гос. мед. ун-та, 2005. - С. 42-47.

Трубникова Елена Владимировна Эпидемиология, онтогенетические эффекты и фенотипические особенности у больных со злокачественными лимфомами

В работе представлены многолетние исследования по эпидемиологии злокачественных лимфом, включая лимфому Ходжкина и неходжкин-скую лимфому, на территории Курской области. Показана мультифактори-альная природа заболевания. Рассмотрены цитогенетические эффекты лимфоцитов периферической крови во взаимосвязи с фенотипическими особенностями больных. Установлено, что при злокачественных лимфомах уровень спонтанного мутагенеза превышает среднепопуляционные значения, а количество активных рибосомных генов достоверно ниже фонового уровня. Выявлены статистически значимые взаимосвязи между особенностями фенотипических проявлений у больных и вариабельностью ряда ци-тогенетических характеристик. Доказано влияние полихимиотерапии на количество и на дисперсию показателей активных рибосомных генов. Рассмотрен характер воздействия в зависимости от курсов лечения и полихимиотерапии. Результаты исследования могут использоваться в научных исследованиях, а также в практической медицине.

Trubnikova Elena Vladimirovna Epidemiology, Cytogenetics Effects and Phenotypical Features at Patients with Malignant Lymphomas

The studies include the long-term researches on epidemiology of the malignant lymphomas, including Hodgkin's and non-Hodgkin's lymphomas, in Kursk region. The multifactorial nature of this disease is shown. The cytogenetic effects of lymphocytes of peripheral blood are studied in the correlation with phenotypical characteristics of patients. It is established that the level of spontaneous mutagenesis at malignant lymphomas exceeds the average population level, and the amount of active ribosomal genes is authentically less than the background level. The statistically significant interconnections are detected between the features of phenotypical manifestations at patients and the variability of the set of cytogenetic characteristics. It is proved that the polychemotherapy influences on the amount and dispersion of the rates of active ribosomal genes. The character of the influence is reviewed depending on the courses of treatment and polychemotherapy. The results of the research can be used in scientific researches as well as in practical medicine.

ТРУБНИКОВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА

АВТОРЕФЕРАТ

Лицензия на издательскую деятельность ИД№06248от 12.11 2001 г. Подписано в печать 16.01 2006 г. Формат 60x84/16 Печать офсетная. Бумага офсетная. Уч.-изд. л. 1,0. Тираж 120 экз. Заказ №211.

Изд-во Курского государственного университета 305000, г. Курск, ул. Радищева, 33

Отпечатано: ПБОЮЛ Киселева О.В. (ОГРН 304463202600213)

XQQGÍV

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Трубникова, Елена Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Структура и локализация рибосомных генов на хромосомах.

1.2. Изменение функциональной активности рибосомных генов при адаптации организма к внешним условиям.

1.3. Распространенность, этиология и патогенез 3JI.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Клинико-генеалогический метод.

Статистические методы.

Цитогенетические методы.

Клинико-лабораторные методы.

Глава 3. ГЕНЕТИКО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЛИМФОМ В КУРСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ.

3.1. Эпидемиология злокачественных лимфом в Курской области.

3.2. Клинико-генеалогический анализ.

3.3. Медико-генетическое консультирование.

Обсуждение.

Глава 4. ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ БОЛЬНЫХ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ЛИМФОМАМИ.

4.1. Общая характеристика выборки.

4.2. Клиническая характеристика.

4.3. Результаты клинико-лабораторных исследований.

Обсуждение.

Глава 5. ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ.

5.1. Цитогенетические эффекты в норме и при злокачественных лимфомах.

5.2. Цитогенетические эффекты и их взаимосвязь с фенотипическими проявлениями.

Обсуждение.

Глава 6. ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЛИМФОМ.

6.1. Сравнительный анализ цитогенетических характеристик больных при лечении.

6.2. Цитогенетические эффекты в лимфоцитарных популяциях больных при лечении.

6.3. Активность рибосомных генов в популяциях лимфоцитов у больных со злокачественными лимфомами при различных схемах полихимиотерапии.

6.4. Многомерный анализ показателей КАРГ в популяциях лимфоцитов больных 3JI при различных курсах и схемах лечения.

6.5. Анализ количества активных рибосомных генов у одних и тех же больных при лечении.

Обсуждение.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эпидемиология, цитогенетические эффекты и фенотипические особенности у больных со злокачественными лимфомами"

Важным патогенетическим звеном онкологических заболеваний являются повреждения генетического аппарата клеток, в результате которых происходят изменения в регуляции клеточного цикла, апоптоза, дифференци-ровки, морфогенетических реакций клеток, систем контроля целостности генома и противоопухолевого иммунитета. Согласно современным представлениям ключевую роль в процессе злокачественной трансформации клетки играют нарушения, вызывающие модификацию ДНК с последующей активацией онкогенов, а также приводящие к потере функции генов-супрессоров опухолевого роста. Развитие функциональной геномики позволяют дополнить классическую двухударную модель канцерогенеза Кнудсона представлениями о том, что наряду со структурными перестройками различного характера (точечными мутациями, хромосомными аберрациями, геномными мутациями и др.) в становлении и поддержании атипичной экспрессии генов участвуют и функциональные мутации, а именно метилирование ДНК.

В этой связи в новом свете встает вопрос о функционировании рибо-сомных генов (РГ) [64, 83, 91, 121]. К настоящему времени достаточно подробно описана структурная организация рибосомных генов у различных видов растений и животных, сформировано четкое представление о нуклеотид-ной организации рибосомного повтора [128, 212, 220]. Изучены индивидуальные особенности варьирования числа копий функционально активных рибосомных генов в пределах генома в зависимости от принадлежности к той или иной клеточной популяции или типу ткани [6, 67]. Работами целого ряда авторов показана изменчивость функционального состояния рибосомных генов как в ходе клеточных дифференцировок, так и при смене клеточных циклов [17, 26, 114]. Обнаружены изменения показателя функциональной активности рибосомных генов (ФАРГ) при различных физиологических состояниях организма: голодании, охлаждении, действии на клетки ингибиторов ферментов и при патологии человека различного генеза и локализации [59, 169]. Исследованиями последних лет доказано увеличение функциональной активности РГ на примере опухолей пищевода, желудка, легкого, молочной железы, простаты [57, 59, 109, 154,]. Установлены изменения ФАРГ в клетках пораженных лимфатических узлов при злокачественных лимфомах (3JI) [33, 76].

В то же самое время в литературе не получили должного освещения вопросы, связанные с оценкой состояния генетического аппарата при неопла-зиях лимфоидной ткани на субклеточном уровне, а именно изучение на субклеточном уровне хромосомных аберраций, ассоциаций хромосом, функциональной активности рибосомных генов в лимфоцитах периферической крови у больных со злокачественными лимфомами.

Крайне недостаточно освещены проблемы взаимосвязей цитогенетиче-ских эффектов с особенностями фенотипических проявлений у больных. Актуальной остается проблема изменчивости количества активных копий рибосомных генов при прохождении больными курсов полихимиотерапии.

Цель исследования

Изучить распространенность злокачественных лимфом в курской популяции, их генетическую детерминированность и цитогенетические эффекты в лимфоцитах периферической крови во взаимосвязи с фенотипическими особенностями больных.

Задачи исследования

2. Оценить особенности фенотипического проявления признаков у больных со злокачественными лимфомами.

Научная новизна работы

Впервые проведена оценка количества активных рибосомных генов у больных со злокачественными лимфомами.

Установлено, что количество активных копий РГ у больных 3JI достоверно ниже, чем в общей популяции. Уровень спонтанного мутагенеза среди больных 3JI в 6,5 раза превышает популяционный показатель по Курской области. Выявлены достоверные различия в социально-биологическом статусе, особенностях клинического проявления и течения заболевания среди больных с ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами. Впервые проведен многомерный анализ вариабельности фенотипических признаков и цитогенетических характеристик лимфоцитов периферической крови больных со 3JL Установлены особенности их взаимосвязей по структуре и выраженности в пределах каждой из рассмотренных нозологических форм. Доказано, что при лечении больных 3JI имеет место увеличение количества активных РГ в популяциях лимфоцитов периферической крови в зависимости от курса лечения.

Практическая значимость

Полученные новые знания о генетической детерминированности 3JI создают основу для проведения медико-генетического консультирования населения Курской области и прогнозирования заболеваемости до 2012 года. Выявленные различия в особенностях клинического проявления лимфом Ходжкина (JIX) и неходжкинских лимфом (HXJI) на основе линейно-дискриминантного анализа отрывают возможности проведения их первичной вероятностной дифференциальной диагностики на уровне районного звена практического здравоохранения без проведения специальных цитологических исследований.

Впервые полученные данные об изменениях количества активных рибосомных генов в зависимости от проведенных курсов полихимиотерапии ставят новые проблемы в изучении конкретных механизмов ответных реакций лимфоцитарных популяций больных на воздействие ксенобиотиков.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Злокачественные лимфомы представляют собой заболевания муль-тифакториальной природы, решающий вклад в детерминацию которых вносит генетическая компонента (Ga=66,46) и факторы среды (Ew=20,86). За 12 лет заболеваемость 3JI в курской популяции составила 5,7 на 100000 населения и является наименьшей по Центрально-Черноземному региону РФ.

2. Уровень спонтанного мутагенеза у больных со злокачественными лимфомами превышает фоновые значения в 6,5 раза. Количество активных рибосомных генов в лимфоцитах периферической крови у больных злокачественными лимфомами достоверно ниже, чем у здоровых лиц в популяции (t=2,93, при р<0,05).

4. При злокачественных лимфомах имеют место корреляционные взаимосвязи между вариабельностью ряда цитогенетических показателей, фено-типическими особенностями и клиническими проявлениями заболеваний.

5. В лимфоцитарных популяциях больных злокачественными лимфомами в результате проводимых курсов полихимиотерапии наблюдается статистически значимое увеличение количества активных рибосомных генов с 18,35 усл. ед. до 19,06 усл. ед. (t=2,73, при р<0,05). Достоверно усиливается ассоциативная активность акроцентрических хромосом. Ответные реакции на воздействие ксенобиотиков проявляют и другие клеточные популяции.

Внедрение в практику

Апробация и публикации

Результаты работы доложены на конференциях студентов и молодых ученых КГМУ (Курск, 2003, 2005), итоговых научных сессиях КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН (Курск, 2002, 2004, 2005), межвузовской научной конференции «Проблемы экологии в науке и образовании» (Курск, 2004), IX Всероссийском Конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2004), Российской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2004), IV международной научно-практической конференции «Динамика научных достижений - 2005» (Днепропетровск, 2005), VIII Международной научно-практической конференции «Наука и ocBiTa 2005» (Днепропетровск, 2005), X Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2005), V Съезде Российского общества медицинских генетиков (Уфа, 2005), юбилейной научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН «Университетская наука: Взгляд в будущее» (Курск, 2005), Международном научном форуме «Ломоносов - 2005» (Москва, 2005), межкафедральном заседании сотрудников КГМУ (Курск, 2005). По материалам диссертации опубликовано 20 печатных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, пяти глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, библиографического списка и приложения. Работа изложена на 128 страницах машинописного текста, содержит 52 таблицы и 10 рисунков. Библиографический список используемой литературы включает 227 источников, 94 из которых зарубежные.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Трубникова, Елена Владимировна

ВЫВОДЫ

2. Наследование злокачественных лимфом соответствует мультифакториальной модели. Вклад генетических факторов обусловлен аддитивной компонентой (Ga=66,46%). Случайные средовые факторы (Ew) и материнский эффект (Me) составляют соответственно 20,86% и 12,69% всей дисперсии. Рассчитаны таблицы рекуррентного риска для осуществления медико-генетического консультирования в регионе и получен прогноз заболеваемости по области до 2012 года.

3. Больные JIX и HXJI отличаются между собой по целому ряду фенотипических особенностей и клиническим проявлениям заболевания. Показано, что по структуре и выраженности корреляционных взаимосвязей фенотипических показателей каждая из нозологических форм представляет собой отдельную статистическую совокупность. Получено уравнение регрессии, позволяющее на уровне районного звена с вероятностью 80% выполнять первичную дифференциальную диагностику лимфом без проведения специальных цитологических исследований.

4. У больных злокачественными лимфомами уровень спонтанного мутагенеза (Х=4,59%) в 6,5 раза превышает фоновые значения в популяции (Х=0,71%), а количество активных рибосомных генов (Х=18,42 усл.ед.) достоверно ниже среднепопуляционного показателя (Х= 19,24 усл.ед.) (t=2,93, при р<0,05). Установлены статистически значимые взаимосвязи между особенностями фенотипических проявлений у больных и вариабельностью ряда цитогенетических характеристик.

5. Лимфоцитарные популяции больных со злокачественными лимфомами характеризуются изменением количества активных рибосомных генов в зависимости от количества курсов полихимиотерапии. Среднее значение при постановке больных на учет составляло 18,35 усл.ед., после третьего курса лечения оно увеличилось до 19,06 усл.ед. Наблюдаемые различия статистически достоверны (t=6,99, при р<0,05). Полихимиотерапия оказывает влияние и на дисперсии показателей количества активных рибосомных генов в лимфоцитарных популяциях, которые увеличивались с курсом лечения (F=l,37).

6. Проведенный многомерный анализ количества активных рибосомных генов в лимфоцитах больных со злокачественными лимфомами при поступлении, после 1-го и 3-го курсов полихимиотерапии не выявил статистически значимых взаимосвязей между ними, что свидетельствует о независимости влияния каждого из курсов на состояние признаков в популяции.

7. Изменение количества активных рибосомных генов наблюдается при использовании различных схем лечения, однако, цитогенетические эффекты по каждой из них проявляли свои особенности в зависимости от курса лечения и в большинстве случаев достигали статистически значимого уровня.

129

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема злокачественных новообразований является одной из актуальных в современной медицине. За последние годы достигнуты определенные успехи в изучении этиологии и патогенеза злокачественных новообразований, однако окончательного решения этой проблемы пока нет. По-прежнему мало изученными остаются механизмы восстановления организмом внутреннего постоянства после химиотерапевтического лечения и поддержания его при ремиссии.

Злокачественные лимфомы - это заболевания лимфатической системы с определенной клинической, морфологической и иммунологической характеристикой. За более чем 150-летнюю историю с момента описания первых случаев заболеваемости до настоящего времени, учеными был пройден сложный путь от констатации абсолютной фатальности болезни до признания его потенциальной излечимости. Все эти годы успехи в лечении больных ЗЛ намного опережали понимание процессов патогенеза и биологии опухоли. Только последние два десятилетия благодаря внедрению фундаментальных методов исследования была определена природа опухолевых клеток и описаны некоторые механизмы развития заболевания. Стало понятно, что при лимфомах имеет место моноклональная пролиферация опухолевых клеток. Вместе с тем, каждый вид лимфом имеет присущую только ей особенную морфоиммуноло-гичесюо характеристику.

Настоящее исследование является первой работой, посвященной комплексному изучению распространенности, генетической детерминированности и анализу цитогенетических эффектов лимфоцитов периферической крови во взаимосвязи с фенотипическими особенностями больных при злокачественных лимфомах. Его научная ценность определяется целью и задачами исследования.

Для изучения частоты встречаемости ЗЛ на территории Курской области использовали популяционно-статистический метод. Был проведен анализ общей заболеваемости ЗЛ за двенадцатилетний период среди мужского и среди женского населения, а также анализ заболеваемости отдельно по двум нозологическим формам. Установлено, что частота встречаемости ЗЛ по Курской области в целом соответствует таковой по России. Рассмотрение вариабельности показателей заболеваемости в динамике свидетельствуют о наличии стойкой её тенденции к росту. Причем это касается не только ЗЛ, но и отдельно лимфом Ходжкина и неходжкинских лимфом. На это же указывают и полученные результаты вероятностного прогнозирования до 2012 года.

Популяционные данные региона использовались для проведения клини-ко-генеалогического анализа. В результате сегрегационного анализа была принята мультифакториальная модель наследования злокачественных лимфом. Полученные данные указывают на выраженный вклад генетической детерминанты (Ga=66,5) за счет эффекта аддитивной компоненты в формировании рассматриваемой патологии. Вклад средовых факторов достигал 21%. Достаточно выраженным был материнский эффект - 12,7%. Проведенный генетический анализ позволил составить таблицы рекуррентных рисков проявления злокачественных лимфом, которая представляет определенный интерес для проведения медико-генетического консультирования по этой патологии в Курском регионе.

Во второй части работы представлены данные о 112 больных ЗЛ. Проведенный анализ этой группы отражает в целом особенности фенотипическо-го проявления злокачественного процесса при данной онкопатологии, особенности цитогенетических эффектов лимфоцитов периферической крови больных, как до начала химиотерапевтического лечения, так и в его динамике.

Наше исследование подтвердило значительную гетерогенность ЗЛ. На фенотипическом уровне это нашло проявление в выраженном континиуме проявлений, в полиморфности (различия в клинической картине заболевания), в вариабельности возраста манифеста ЗЛ, а также в различных ответных реакциях организма на лечение.

В этой связи целесообразно и перспективно было провести анализ не только всего заболевания в целом, но и его нозологических форм с выявлением как их отличительных особенностей, так и возможных общностей, учитывая многочисленные данные о наличии общих механизмов реализации данной патологии. По этой причине все больные были разделены на 2 группы: I -больные с лимфомой Ходжкина и II - больные с неходжкинской лимфомой.

Сравнительный анализ социально-биологического статуса и клинических характеристик больных при ЛХ и НХЛ показал проявление значительных различий между ними. Наиболее ценные из них вошли в модель дискриминации. Полученное уравнение линейно-дискриминантной функции открывает возможность выполнения предварительной дифференциальной диагностики ЛХ и НЛХ с вероятностью 80% только по фенотипическим показателям без проведения специальных цитологических исследований. Это представляется наиболее важным в условиях сельских районов, не имеющих пока соответствующих лабораторных баз.

Поскольку клинический полиморфизм рассматриваемого заболевания в значительной мере обусловлен генетической гетерогенностью, нами был предпринят анализ некоторых факторов, лежащих в её основе.

В первую очередь нами был рассмотрен уровень спонтанного мутагенеза у нелеченых по данному случаю обращения больных, а также прослежена его взаимосвязь с фенотипическими характеристиками как при ЗЛ, так и отдельно при ЛХ и НХЛ. Полученные данные согласуются с представлениями о мутационной основе происхождения злокачественных новообразований и вместе с этим формируют новые представления о взаимосвязях цитогенетических нарушений с клинической картиной в зависимости от нозологической формы.

В результате исследования впервые удалось установить, что цитогене-тический показатель — количество активных рибосомных генов, у больных ЗЛ статистически достоверно ниже этого же показателя у здоровых людей. Также выявлен ряд статистических взаимосвязей количества активных рибосомных генов и различных фенотипических признаков, характеризующих биологический статус, их клинические особенности и некоторые клинико-лабораторные (цитологические и биохимические) показатели при поступлении как в общей выборке, так и отдельно для ЛХ и НХЛ.

Вместе с этим, статистически значимых различий при рассмотрении только цитогенетических характеристик у больных с ЛХ и НХЛ не установлено.

Из этого вытекает, что различные формы ЗЛ при оценке цитогенетических показателей проявляют заметное единообразие и могут рассматриваться в пределах единой статистической совокупности. В то же время, многомерный анализ фенотипических проявлений и цитогенетических эффектов между собой требует рассматривать каждую из форм (ЛХ и НЛХ) как отдельные подразделенности.

С целью изучения возможных последствий экзогенного влияния на функционирование белоксинтезирующего аппарата нами была проведена оценка количества активных рибосомных генов в динамике проведения курсовой полихимиотерапии больным со злокачественными лимфомами. Рассмотрены цитогенетические показатели после первого и третьего курса ПХТ, т.е. при второй и четвертой госпитализации. При этом изучение одних и тех же параметров проводилось на двух уровнях организации: первом — организ-менном (за единицу наблюдения принимался организм больного) и втором — клеточном (единицей наблюдения служила метафазная пластинка). Полученные достаточно близкие результаты. В обоих случаях с увеличением числа проведенных курсов ПХТ наблюдается увеличение количества активных рибосомных генов, хотя при анализе средних значений на уровне организма больного можно говорить лишь о тенденции к увеличению, в то время как на уровне популяций лимфоцитов повышение функциональной активности рибосомных генов доказано статистически. Статистически значимые изменения наблюдались и в дисперсиях признаков.

Многомерный анализ подтвердил, что показатели количества активных рибосомных генов в выборке одних и тех же больных со 3JI при поступлении их в клинику, после прохождения первого и третьего курсов ПХТ представляют собой отдельные группы сопряженности и по сути своей являются независимыми статистическими совокупностями. Другие цитогенетические показатели: число хромосом в ассоциациях, число ассоциаций хромосом, а также «дельты» цитогенетических характеристик также демонстрировали свою независимость при каждом из проведённых курсов лечения.

Наблюдаемые характерные изменения в количестве активных рибосомных генов, полученные при анализе влияния различных схем ПХТ, отражают особенности ответной реакции на различие не только в выраженности экзогенных воздействий, но и их качественном влиянии ксенобиотиков на лимфо-цитарные популяции.

Факт изменения функциональной активности РГ у больных 3JI после проведения адекватной ПХТ наглядно подтверждается сближением показателей больных с популяционными значениями в Курской области: после проведения третьего курса ПХТ статистические различия в показателях исчезали.

Таким образом, можно полагать, что человеческий организм, как впрочем, и любая живая система, постоянно находящаяся под воздействием факторов внешней и внутренней среды, реагирует на эти воздействия тем или иным способом и стремится к сохранению относительного динамического постоянства собственных функциональных подсистем. В случае же злокачественного процесса вполне обоснованно говорить о неких целенаправленных изменениях по достижению жизненно необходимого гомеостаза. Вместе с тем, совершенно очевидно, что поддержание динамического равновесия следует рассматривать исключительно, как процесс, то есть как изменение функциональных характеристик во времени.

127

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Трубникова, Елена Владимировна, Курск

1. Аксель, Е.М. Статистика злокачественных новообразований (заболеваемость, смертность, тенденции, социально-экономический ущерб, продолжительность жизни) / Е.М. Аксель, В.В. Двойрин. - М., 1992. - 308 с.

2. Аксель, Е.М. Статистика злокачественных новообразований в России и некоторых других странах СНГ. 1980-1991 гг. / Е.М. Аксель, В.В, Двойрин, Н.Н. Трапезников. М., 1993. - 229 с.

3. Активация транскрипции рибосомных генов при цитомегаловирус-ной инфекции фибробластов эмбриона человека in vitro / О.О. Жарская, А.С. Барсукова, А.А. Меджидова и др. // Цитология. 2003. - Т. 45, №7. - С. 690701.

4. Активность ядрышкообразующих районов нормальных и лейкозных клеток костного мозга человека / Н.Н. Мамаев, С.Е. Мамаева, И.Л. Либуркина и др. // Цитология. 1984. - Т. 26, № 1. - С. 46-51.

5. Аминева, Д.Д. Оценка качества полихимиотерапии у больных злокачественными лимфомами: автореф. дис. канд. мед. наук. / Д.Д. Аминева — Уфа, 2000. 22 с.

6. Анализ вариабельности структур кластера РГ в пределах класса INSECTA / Д.В. Муха, А.П. Сидоренко, И.В. Лазебная, И.А. Захаров // Генетика. 1995. - Т.31, №9. - С. 1249-1253.

7. Анализ распределения генов рРНК на хромосомах домашних лошадей с помощью флуоресцентной in situ гибридизации / С.Е. Дерюшева, Д.А. Логинова, О.Т. Чиряева и др. // Генетика. 1997. - Т.ЗЗ, №9. - С. 1281-1286.

8. Архипчук, В.В. Закономерности изменений ядрышкообразующих функций в онтогенезе карповых рыб / В.В. Архипчук, В.Д. Романенко, Т.А. Макарова // Успехи соврем, биологии. 1993. - № 5. - С. 626-636.

9. Белохвостов, А.С. Онкомаркеры: молекулярно-генетические, имму-нохимические, биологические анализы: пособие для врачей / А.С. Белохвостов, А.Г. Гуляев. 2-е изд., перераб. и дополн. - М.:МАКС ПРЕСС. — 2003. -92 с.

10. Биологический энциклопедический словарь. М.: Сов. энциклопедия, 1986.

11. Болгова, JI.C. Ядрышковые организаторы и процессе малигнизации бронхиального эпителия / JI.C. Болгова, В.И. Лобода, Т.Н. Туганова // Цитология и генетика. 1998. - Т.32, №1. - С. 79-82.

12. Бочков, Н.П. Генетика человека: наследственность и патология / Н.П. Бочков. М.: Медицина, 1978. - 377 с.

13. Бочков, Н.П. Генетические подходы к изучению хронических заболеваний человека / Н.П. Бочков, Е.К. Гинтер // Терапевт, арх. 1981 .-№11. -С. 3-6.

14. Бочков, Н.П. Клиническая генетика: учебник / Н.П. Бочков. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. - 448 е.: ил.

15. Бочков, Н.П. Клиническая генетика: учебник / Н.П. Бочков. 3-е изд., исп. и доп. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004. - 480 е.: ил.

16. Бродский, В.Я. Возможность цитофотометрии ядрышковых белков. Перспективы исследований состояния ядрышкового аппарата / В.Я. Бродский, Т.Л. Маршак, М.Ш. Аврущенко, Р.Е. Дунгенова // Цитология. 1991. - Т.ЗЗ, №8. -С.65-73.

17. Бучинская, Л.Г. Изучение структурно-функциональных особенностей ядрышка при гиперпластических процессах и раке эндометрия: автореф. дис. . канд. биол. наук / Л.Г. Бучинская; Ин-т проблем онкологии и радиологии.-Киев, 1989.-17 с.

18. Бушуева, О.Ю. Функциональная активность рибосомных генов и ее связь с особенностями клинического проявления и течения миомы матки: автореф. дис. канд. мед. наук / О.Ю. Бушуева. М., - 2005. — 32 с.

19. Вальтер, Фридрих. Близнецы: / пер. с нем. Г.С.Черновой; общ. ред. и предисловие д-ра. философ, наук Б.Н. Лисина, д-ра мед. наук Д.Н.Крылова. — М.: Прогресс, 1985.-С. 156.

20. Вейко, Н.Н. Особенности организации метилированных копий рибосомных генов в ядрах лимфоцитов человека / Н.Н. Вейко, Н.А. Ляпунова, Д.М. Спитковский // Цитология. 2000. - Т. 42, №3. - С. 271.

21. Волкова, М.А. Клиническая онкогематология: рук-во для врачей. -М.: Медицина, 2001. С. 92-114.

22. Волчков, А.В. Лимфогранулематоз: методич. указания для студентов, ординаторов и врачей практического здравоохранения / А.В. Волчков. Курск: КГМУ, 1997. С. 4-8.

23. Воронина, В.Н. Фенотипическое проявление дозы активных рибосомных генов в развитии детей первого года жизни: дис. канд. биол. наук / В.Н. Воронина; РАМН. Медико-генетич. науч. центр. -М., 2001. 148 с.

24. Воронкова, Л.Н. Кинетика роста и локализации ядрышек в клеточном цикле клеток СПЭВ в монослойной культуре / Л.Н. Воронкова, В.Н. Сахаров // Цитология. 1993. - Т. 35, №10. - С. 62.

25. Газарян, К.Г. Геном эукариот. Молекулярная организация и экспрессия / К.Г. Газарян, В.З. Тарантул. М.: Изд-во Москов. ун-та, 1983. - 272 с.

26. Геномика медицине: науч. изд-е / под ред. акад. РАМН В.И. Иванова, акад. РАН Л.Л. Киселева. - М.: ИКЦ «Академкнига», 2005. - 392 с.

27. Гланц, С. Медико-биологическая статистика: пер. с анлг./С. Гланц -М.: Практика, 1998. 459 с.

28. Грин, Н. Биология: пер. с англ. / Н. Грин, X. Стаут, Д. Тейлор. В 3-х тт. - М.: Мир, 1996. - 465 с.

29. Дзембак, Т.М. Иммунотипирование и дифференциальной диагностике неходжкинских злокачественных лимфом / Т.М. Дзембак, В.К. Гуркало, М.Л. Гершанович // Вопр. онкологии. 1996. - Т. 42, №2. - С. 63-66.

30. Диагностика злокачественных опухолей при диспансеризации населения / под ред. Н.Н.Блинова, А.Г.Весника, Ю.Г.Пучкова. СПб.: Гиппократ, 1994.-С. 181-197.

31. Дифференциально-диагностическое и прогностическое значение активности области ядрышковых организаторов при неходжкинских злокачественных лимфомах / И.А. Букаева, Н.Т. Райхлин, Н.А. Пробатова и др. // Кли-нич. лаб. диагностика. 1997. - №10. - С. 37-38.

32. Дубровский, А.Ч. Зоны организаторов ядрышка и митотическая активность неходжкинских лимфом / А.Ч. Дубровский, Л.Б. Клюкина // Арх. патологии.-1997. Т. 59, №1. - С. 25-30.

33. Заболеваемость и распространенность болезни Ходжкина в Республике Карелия / Е.Н. Зябина, А.А. Мясников, Ю.Н. Полежаев и др.// Материалы междунар. науч.-практ. конф. (6-8 сентября 1999 г. Республиканская больница МЗ РК). Петрозаводск, 1999. - С. 60-63.

34. Зайцева, Г.Н. Транскрипция генов рибосомной РНК эукариот / Г.Н. Зайцева, Е.В. Клещенко // Молекуляр. биология. 1994. - №5. - С. 965.

35. Зацепина, О.В. Иммунолокализация фактора инициации транскрипции РГ UBF в интерфазе и митозе / О.В.Зацепина, А.Н.Прусов, М.В. Семенов. // Цитология. 1995. - Т.37, №1/2. - С. 137-139.

36. Зацепина, О.В. Трехмерная организация и транскрипция РГ в ядрышке / О.В. Зацепина // Цитология. 1997. - №1. - С. 60-61.

37. Злокачественные новообразования в России в 2002г. (заболеваемость и смертность) / под ред. В.И. Чиссова. М.: МНИОИ им. П.А. Герцена, 2004.-256 с.

38. Изменчивость ядерной рДНК в лабораторных линиях рыжего таракана Blattella germanica L. (Blattellidae) // И.В. Лазебная, С.К. Семенова, О.Е. Лазебный и др. // Генетика. 2005. - Т.41, №5. - С. 590-594.

39. Исследование ломкости хромосом в лимфоцитах периферической крови у больных лимфомами. / О.В. Михайловская, Н.А. Викторова, О.Р. Краснова и др. // Цитология. 2005. - Т.47, №1. - С. 88.

40. Канцерогенные вещества в окружающей среде / под ред. Л.М. Ша-бада, А.П. Ильицкого. Будапешт, 1997. - 500 с.

41. Карпишенко, А.И. Медицинская лабораторная диагностика: программы и алгоритмы: справочник / под ред. А.И. Карпишенко. СПб.: Интермедика, 1997. - 304 е.: ил.

42. Клиническая онкогематология: рук-во для врачей / под ред. М.А. Волковой. -М.: Медицина, 2001. 576 с.

43. Колчанова, И.О. Функциональная активность рибосомных генов и ее модифицирующее влияние на особенности клинического проявления, течение и эффекты лечения язвенной болезни: дис. . канд. мед: наук. / И.О. Колчанова.-М., 2005.-167 с.

44. Кондратьева, Т.Т. Цитологические аспекты в современной диагностике злокачественных лимфом / Т.Т. Кондратьева, Л.С. Королева // Клинич. лаб. диагностика. 1996. - №4. - С. 12-13.

45. Конюхов, Б.В. // Успехи соврем, биологии. 1978. - Т. 71. - С. 107.

46. Костоморова, А.А. Клеточное ядро и его ультраструктура / А.А. Костоморова, Н.Н. Ротт. М.: Наука. - С. 258.

47. Купреянова, Н.С., М.Я. Тимофеева // Итоги науки и техники. Сер. молекуляр. биология. М.: ВИНИТИ, 1989. - С. 81-221.

48. Лазарев, А.Ф. Злокачественные лимфомы в Алтайском крае / А.Ф. Лазарев, Я.Н. Шойхет, Е.И. Россоха; Алтайский гос. мед. ун-т. Барнаул: АГМУРИО, 2005.-136 с.

49. Лакин, Г.Ф. Биометрия: учеб. пособие для биолог, специальностей вузов / Г.Ф. Лакин. 4-е изд., перераб. и доп. - М.: Высш. Школа, 1990. - 352 с.

50. Лапин, Б.А. Роль вирусов в новообразованиях кроветворной системы / Б.А. Лапин // Вестн. Рос. АМН. 1995. - № 8. - С. 59-63.

51. Леемон, Е.Е. О роли вируса Эпштейна-Барр в патогенезе лимфогранулематоза. Иммуногистохимическое и молекулярнобиологическое (гибридизация in situ) исследование /Е.Е.Леемон, Б.В. Афанасьев, К.М. Пожарисский // Арх. патологии. 1999. - №1. - С.15-22.

52. Лимфоретикулярные болезни. / Я. Карр, Б.Х. Хенкок, Л. Хенри и др.; пер. с англ. Ю.И. Зимина, Л.Я. Харламовой. М.: Медицина, 1980. - 279 с.

53. Ляпунова, Н.А. Рибосомные гены в геноме человека: вклад в генетическую индивидуальность и фенотипическое проявление дозы гена / Н.А. Ляпунова, Н.А. Еголина, Т.Г. Цветкова // Вестн. Рос. АМН. 2000. - №5. - С. 1923

54. Ляпунова, Н.А. Ядрышкообразующие районы хромосом и рибосомные гены в геноме человека: от научных поисков к практике / Н.А. Ляпунова // Современные методы диагностики наследственных болезней. М. - 2001. -С. 12-22.

55. Мамаев, Н.Н., С.Е. Мамаева, Э.Л. Нейштадт // Цитология. 1992. -№9.-С. 82-83.

56. Мамаев, Н.Н. Структура и функция ядрышкообразующих районов хромосом: молекулярные, цитологические и клинические аспекты / Н.Н. Мамаев, С.Е. Мамаева // Цитология. 1992. - Т.34, №10. - С. 3-25.

57. Мамаев, Н.Н. Структурная организация и экспрессия рибосомных генов в физиологических и патологических условиях / Н.Н. Мамаев // Цитология. 1997. - №1.-С.80.

58. Ментейфель, В.М. Изменение тонкой организации неактивных кольцевидных ядрышек зрелых лимфоцитов крыс на ранних этапах бласттранс-формации / В.М. Ментейфель, П.В. Челидзе // Молекуляр. биология. 1986. -№20.-С. 564-72.

59. Микельсаар, А.-В. Н. Структурный полиморфизм хромосом человека: дис. д-ра биолог, наук / А.-В. Н. Микельсаар; Тарт. ун-т. Тарту, 1979. -401с.

60. Минимальные клинические рекомендации Европейского Общества Медицинской Онкологии (ESMO) / ред. С.А. Тюляндин, Н.И. Перевозчикова, Д.А.Носов. М.: Издат. группа РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, 2004. - 112 с.

61. Молекулярная биология: структура и биосинтез нуклеиновых кислот / под ред. Н.С. Спирина. М.: Высш. школа, 1990. - 352 с.

62. Молекулярная химическая диагностика. Методы: пер. с англ./ под ред. С. Херрингтона, Дж. Макги. М.: Мир, 1999. - С. 264-265.

63. Морозов, А.В. Динамика темпов эволюции белков малой субъединицы рибосомы / А.В. Морозов // Генетика. 1994. - №1. - С. 37-44.

64. Муха, Д.В. Анализ различной структуры ДНК двух видов-близнецов Drosophila melanogaster и Drosophila simulams // Д.В. Муха, О.Е. Лазебный, И.В. Лазебная//Генетика. 1999.-Т.35, №12.-С. 1622-1625.

65. Муха, Д.В. Внутривидовой полиморфизм структурной организации кластера рибосомных генов у Blattella germanica // Д.В. Муха, И.В. Лазебная, А.П. Сидоренко // Генетика. 2000. - Т.36, №1. - С. 17-22.

66. Мушкамбаров, Н.Н. Молекулярная биология: учеб. пособие для студентов мед. вузов / Н.Н. Мушкамбаров, С.Л. Кузнецов. М.: ООО «Медицинское информационное агентство». - 2003. - 544 е.: ил.

67. Новиков, А.А. Классификация злокачественных лимфом / А.А. Новиков. СПб.: ЭЛБИ, 2000.

68. Общая и медицинская генетика: лекции и задачи / Г.Р. Заяц, В.Э. Бутвиловский, И.В. Рачковская, В.В. Давыдов. Ростов н/Д: Феникс, 2002. — 320 с.

69. Онкология / Н.Н. Блохин, JI.M. Шобад и др. М.: Медицина, 1981.400 с.

70. Организация кластера генов 5S рибосомных РНК в геноме человека / М.Я. Тимофеева, М.В. Кост, Г.П. Тихомирова и др. // Молекуляр. биология. — 1993.-№4.- С. 861-868.

71. Основные показатели состояния специализированной онкологической помощи населению России в 1997 / под ред. В.И. Чиссова, В.В. Старин-ского, JI.B. Ременника. М., 1998.

72. Особенности кариотипа лимфосаркомы человека / Г.В. Ильинская, Е.В. Флейшман, E.JI. Пригожина и др. // Хромосомы человека в норме и патологии. М.: Наука, 1989. - С. 82-88.

73. Оценка радиационного воздействия на состояние иммунной системы жителей Алтайского края / В.А.Козлов, В.И. Коненков, B.C. Ширинский и др. // Вестн. науч. программы. «Семипалатинский полигон-Алтай». Новосибирск. - 1994. - №3.- С. 63-75.

74. Пендина, А.А. Полиморфизм ядрышкообразующих районов хромосом у эмбрионов человека / А.А. Пендина, Т.В, Кузнецова, B.C. Баранов // Цитология. 2000. - Т.42, №6. - С. 587-592.

75. Переводчикова, Н.И. Онкология / Н.И. Переводчикова. М., 1996.

76. Поддубная, И.В. // Соврем, онкология 2002. - Т.4., № 1. - С. 3-7.

77. Поддубная, И.В. Клиническая онкогематология / И.В. Поддубная. -М.: Медицина, 2001. С. 336-375.

78. Полянская, Г.Г. Закономерности кариотипической изменчивости / Г.Г. Полянская // Успехи соврем, биологии. 2000. - № 6. - С. 529-539.

79. Прокофьева-Бельговская, А.А. Гетерохроматические районы хромосом / А.А. Прокофьева-Бельговская. М.: Наука, 1986. - 431 с.

80. Прокофьева-Бельговская, А.А. Основы цитогенетики человека / А.А. Прокофьева-Бельговская.-М.: Медицина, 1969.-С. 13-17.

81. Путина, Е.О. Карты хромосом растений семейства Triliceceae. Нук-леотидный состав гетерохроматина и локализация 18S-, 26S-reHOB париса четырехлистного / Е.О. Путина, Ю.А. Мякотина, A.M. Ефимов, А.В. Родионов // Генетика. 2000. - Т.36, №5. - С. 637-677.

82. Рак в крупных городах стран СЭВ / под ред. А.В. Чаклина, Э.Э.Штраус, И. Плененко. - Прага: изд-во Освета, 1986.-228 с.

83. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва. М.: Ме-диаСфера, 2003. -312с.

84. Руководство по гематологии / под ред. А.И. Воробьева, Ю.И. Лорие. М.: Медицина. 1979. - 584 с.

85. Сабанеева, Е.В. Специфичность окрашивания ядрышковых организаторов азотнокислым серебром / Е.В. Сабанеева // Цитология. 1989. - Т. 31, №1. - С. 5-14.

86. Серебров, А.И. Профессиональные новообразования / Ф.И.Серебров, О.Л. Датецкая. — Л.:Медицина. Ленинградское отд-ние,1976. 103с.

87. Середенин, С.Б. Лекции по фармакогенетике / С.Б. Середенин. М.: Медицинское информационное агентство. - 2004. - С.87-94.

88. Сингер, М. Гены и геномы: пер. с англ. / М. Сингер, П. Берг -В 2-х тт.-М.: Мир, 1998.-535с.

89. Смирнова, О.Ю. Особенности организации функционирования ядрышка в условиях полного пространственного разобщения его основных структур in situ / О.Ю. Смирнова, О.А. Дудник, О.В. Зацепина // Цитология. -2002 Т.44, №1. С.5.

90. Современные методы хромосомного анализа в клинико-цитогенетических исследованиях/ Т.А. Залетаева, Н.П. Кулешов, Д.В. Залета-ев, О.Б. Барцева; Рос. мед. акад. последип. образования. -М.: Медицина, 1994. -68с.

91. Созанский, О.А. Межклеточная вариабельность состояния ядрышко-образующих районов хромосом человека: автореф. дис.канд. мед. наук / О.А. Созанский. М., 1983. - 26 с.

92. Справочник по онкологии / под ред. акад. РАМН Н.Н. Трапезникова, проф. И.В. Поддубной; ОНЦ РАМН:. Вып. 4 - М.: КАППА, 1996. - 620 с. -Сер. «Справочная библиотека врача».

93. Справочник по онкологии / под ред. Н.Н. Трапезникова. М.: Каппа,1996.

94. Справочник по онкологии / под ред. С.А. Шалимова, Ю.А. Гриневи-ча, Д.В. Мясоедова. Киев: Здоровье, 2000. - С. 152.

95. Сравнение генов 18S рибосомной РНК в филогении беспозвоночных / В.В. Алешин, Н.С. Владыченская, О.С. Кедрова и др. // Молекуляр. биология. 1995. - Т.29, №6. - С. 1408-1426.

96. Сравнение количества активных рибосомных генов у новорожденных и взрослых пациентов с синдромом Дауна / Т.Г. Цветкова, Н.А. Еголина, И.А. Кравец-Мандрон. // III съезд мед. генетиков Украины. Львов.

97. Старинский, В.В. Основные показатели онкологической помощи населению России в 2000 году /В.В. Старинский // Новые информационные технологии в онкологической статистике / под. ред. В.М. Мерабишвили. -СПб., 2001.-С. 8-9.

98. Статистическая оценка особенностей распространения и динамика заболеваемости злокачественными новообразованиями: метод, рекомендации. -М., 1990.-30 с.

99. Стрелков, Л.А., К.А. Кафиани // Онтогенез. 1975. -№6. - 88 с.

100. Стрелков, Л.А. Транскрипция рибосомных генов в зародышах различной полидности / Л.А. Стрелков, Л.Н. Гаузе, К.А. Кафиани // Молекуляр. биология. 1976. - №1. - С. 99-107.

101. Татосян, А.Г. Онкогены. Канцерогенез / А.Г. Татосян. М.: Медицина, 2004. - С. 103-124.

102. Тимофеева, М.Я., Т.Л. Тихомирова, Н.С. Куприянова и др. // Вторая Всесоюз. конф. «Геном человека». — Переяславль-Залесский, 1991. — С. 25.

103. Тимофеева, М.Я. Организация кластера РНК в геноме человека / М.Я. Тимофеева // Молекуляр. биология. 1993. - Т.27, №4. - С. 861-868.

104. Транскрипционная активность ядрышек и содержание в них ар-гентофильных белков / Т.Л. Маршак, Р.Е. Дунгенова, В.Я. Бродский // Цитология.-1993.-Т. 35, №10.-С. 83-84.

105. Трапезников, Н.Н. Заболеваемость злокачественными новообразованиями и смертность от них населения стран СНГ в 1997 г. / Н.Н. Трапезников, Е.М. Аксель. М., 1999. - 281 с.

106. Трехмерная организация ядрышек доброкачественных и злокачественных опухолевых клеток различных органов человека / П.В. Челидзе, Т.В. Тория, А.Г. Агладзе и др. // Цитология 1991. - Т. 33, № 5. - С. 10-17.

107. Трубников, В.И. Многомерный статистический анализ антропометрических показателей. Сообщ. 1. Генетическая корреляция между признаками / В.И.Трубников, В.М. Гиндилис // Вопр. антропологии. Вып. 64. - М.: Медицина, 1980. - С. 94-106.

108. Трубников, В.И. Прикладная генетика психических болезней: дис. д-ра биолог, наук / В.И.Трубников. М., 1992. - 389с.

109. Трубников, В.И. Проблема материнского эффекта в генетике мультифакториальных заболеваний: тез. 1 Всесоюз. Съезда мед. генетиков /

110. B.И. Трубников, В.Д. Москаленко. М, 1983. - С. 337 - 338.

111. Ультраструктура и аргентофильные свойства ядрышкообразующих и центромерных районов хромосом в раннем эмбриогенезе мыши / О.В. Зацепина, Е.Л.Северова, А.П. Дыбан, Ю.С. Ченцов // Цитология. 1989. -Т.31, №6. - С. 626-631.

112. Ультраструктура интерфазных ядрышек клеток СПЭВ при их компенсаторной гипертрофии и деградации, вызываемых локальным УФ микрооблучением / О.В. Зацепина, Л.Н. Воронкова, В.Н. Сахаров, Ю.С. Ченцов //Цитология. 1988. -№7. - С. 787-794.

113. Урбах, В.Ю. Статистический анализ в биохимических и медицинских исследованиях / В.Ю. Урбах. М.: Медицина, 1975. - 296 с.

114. Факторы и механизмы, способствующие развитию состояния генетического неблагополучия у жителей Алтайского края / Н.Н. Ильинских,

115. C.Ю. Ильиных, И.Н. Ильиных и др. // Вестн. науч. программы «Семипалатинский полигон-Алтай». Новосибирск, 1994. - №3. - С. 34-47.

116. Фаллер, Д.М. Молекулярная биология клетки: рук-во для врачей: пер. с англ. / Д.М. Фаллер, Д. Шилдс. — М.: Бином-Пресс. 2003. - С. 61.

117. Фогель, Ф. Генетика человека: пер. с англ. / Ф. Фогель, А. Моту-ски. В 3-х т.- М.: Мир, 1989. - С. 13-14.

118. Фролов, А.К. Частота ассоциаций акроцентрических хромосом в лимфоцитах крови человека при разных способах ее оценки / А.К. Фролов // Генетика. 1985. - №7. - С. 1229-1235.

119. Фролов, А.К. Частота ассоциаций акроцентрических хромосом и их окрашивание серебром в лимфоцитах крови человека при иммунных реакциях. / А.К. Фролов // Цитология. 1981. - Т.23, №29. - С. 1047.

120. Хансон, К.П. Эпидемиология и биология неходжкинских лимфом / К.П. Хансон, Е.Н. Имянитов // Практич. онкология. 2004. - Т.5, №3. -2004.-С. 163-168.

121. Характеристика окрашенных серебром ядрышек в бластных элементах разного диаметра больных острым лейкозом / Н.Н. Мамаев, У. Марти-нес, Е.О. Морозов, Н.А. Иванова // Цитология. 1988. - Т. 30, №12. - С. 14781482.

122. Хромосомы человека: атлас / А.Ф. Захаров, В.А. Бенюш, Н.П. Кулешов, Л.И. Барановская; АМН СССР. М.: Медицина, 1982. - 264 с. с ил.

123. Челомина, Г.Н. Генетическая дифференциация лесных мышей Кавказа: сравнение изозимной, хромосомной и молекулярной дивергенции / Г.Н. Челомина, М.В. Картавцева // Генетика. 1998. - Т.34, №2. - С. 213-225.

124. Черенков, В.Г. Клиническая онкология: рук-во для студентов и врачей / В.Г. Черенков. М.: ВУНМЦ МЗ РФ, 1999. - 384 с.

125. Элементы структурной организации транскрибируемой области рибосомного повтора (рДНК) в лимфоцитах периферической крови человека / Н.Н. Вейко, Н.А. Ляпунова, Н.В. Косякова, Д.М. Спитковский // Молекуляр. биология. 2001. - Т.35,№1. - С. 52-64.

126. Ядрышковый организатор как маркер степени злокачественности прогноза неходжкинских злокачественных лимфом / Н.Т. Райхлин, И.А. Бу-каева, Н.А. Пробатова и др. // Арх. патологии. 1996. — Т.58, №4. - С. 22-27.

127. Ядрышкообразующие районы (ЯОР) хромосом человека: опыт количественного цитологического и молекулярного анализа / Н.А. Ляпунова, Н.А. Еголина, Н.Н. Вейко и др. // Биологич. мембраны. 2001. - Т. 18, №3. -С.189-199.

128. Ядрышкообразующие районы и В-хромосомы лесных мышей (Mammalia, Rodentia, Apodemus) / Г.Г. Боескоров, И.В. Картавцева, И.В, Заго-роднюк и др. // Генетика. 1995. -Т.31, № 2. - С. 185-192

129. Якубовская, М.Г. Выявление точечных мутаций при онкологических заболеваниях: фундаментальные и прикладные аспекты: дис.д-ра мед. наук / М.Г. Якубовская. М., 2005. - 254 с.

130. A revise European-american classification lymphoid neoplasms — REAL // Blood. 1994. - Vol. 84, N 5. - P. 1361-1392.

131. Armitage, J. Lymphomas / J. Armitage; ed. G. Canellos, T.A. Lister, J.L. Sklar. lsted. - W.B. Saunders Company, 1998: - P. 439-449.

132. Bateman, E. Regulation of Eukaryotic Ribosomal RNA Transcription by RNA Polymerase Modification / E. Bateman, M.R. Paule // Cell. 1986. - Vol. 45, P. 445-450.

133. Beral, V. / V. Beral, T. Peterman, R. Berkelmanl // Lancet. -1991. -Vol. 337. P. 805.

134. Bishop, J.M. Cancer: the rise of the genetic paradigm / J.M. Bishop // Genes and Development. 1995.-N9.-P. 1309-1315.

135. Brown, D.D./ D.D. Brown, E.J. Littna // Mol. Biol. 1966. - Vol. 20.1. P. 81.

136. Brown, D.D./ D.D. Brown, J.B. Gurdoa // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. -1964.-Vol. 51.-P. 139.

137. Brown, L.M. / L.M. Brown, R. Gibson, L.F. Burmeister // Leuk Res. -1992.-Vol. 16.-P.979.

138. Buttgereit, D. Growth-dependent regulation of RNA synthesis is mediated by transcription initiation factor (TIF-IA) / D. Buttgereit, G. Pflugfelder, I. Grummt // Nucl. Acids Res. 1985.-Vol. 13.-P. 8165-8180.

139. Cancer incidence in five continents / ed. J. Waterhouse J. Lyon: I ARC Sci. Pabl. - 1982. - Vol. 4, N42. - 240 p.

140. Cancer Statistics, 2000 / R.T. Greenlee, T. Murray, S. Bolden, P.A. Wingo // CA Cancer J. Clin. 2000. - Vol. 50. - P. 7-33.

141. Cheson, В. International working group of standardize response criteria in NHL/В. Cheson. 1999.

142. Choe, S.Y. In vitro definition of the yeast RNA polymerase I promoter / S.Y. Choe, M.C. Schultz, R.H. Reeder // Nucl. Acids Res. 1992. - Vol. 20. - P. 279-285.

143. Clarke, C.A. Changing Lymphoma Incidence in the U.S. / C.A. Clarke, S.L. Glaser // Cancer. 2002. - Vol. 94, N7.

144. Coiffier, В. // Соврем, онкология. 2002. - T.4, N1. - С. 8-12.

145. Comparison of metaphase and interphase Nucleolar activity in HeLa-CCI 2 cells and PHA-stimulated human lymphocytes / J. Van Der Elst, A. Deleener, L. Verschaeve et al. // Cancer Genet. Cytogenet. 1984. - Vol. 13. - P. 209-223.

146. Cridley, G., J.K. McLaghlin, K. Ekbom // J. Nat. Cancer Inst. 1993. -Vol. 85. - P. 307.

147. Crinovich, U.J., K.A. Leopold, R.T. Hoppe // J. Clin. Oncol. 1987. -Vol. 6.-P. 1041-1046.

148. Davis, S. // Cancer Res. 1992. - Vol. 52. - S. 5492.

149. De Pinho, R.A. The age of cancer / R.A. De Pinho // Nature. 2000. --Vol. 408.-P. 248-254.

150. Derenzini, M. Importance of interfase nucleolar organize regions in tumor pathology / M. Derenzini, D. Trere // Virchows Arch. 1991. - Vol. 61. - P. 1-8.

151. Diebold, J. World Health organization Classification of Malignant Limphomas/J. Diebold//Experimental Oncology.-2001.-Vol. 23.-P. 101-103.

152. Differences in rRNA metabolism of primary and SV40- transformed human fibroblasts / S.A. Liebhaber, S. Wolf, D. Schlessinger et al. // Cell. 1978. -Vol. 13.-P. 121-127.

153. Distribution of human chromosomes on the metaphase plate using banding techniques / B. Sele, P. Jalbent, B. Van Cutsem et al. // Human Genetics. -1977.-Vol. 39, Nl.-P. 39.

154. Distribution of spacer length classes and the intervening sequence among different nucleolus organizers in Drosophila hydei / W. Kunz, G. Petersen, R. Renkawitz-Pohl et al. // Chromosoma. 1981. - Vol. 83. - P. 145-158.

155. Epidemiology of Hodgkin's disease from the pathophysiologic viewpoint-review / M. Plat, U. Plat, J. Fleischer et al. // Z Ges. Inn. Med. 1987. - Vol. 42, N14.-P. 382-386.

156. Evolution of Eukaryotic rRNA: Constraints Imposed by RNA Interactions / S.A. Gerbi, C. Jeppesen, B. Stebbins-Boaz, M. Ares // Biology. 1987. -Vol. 52.-P. 709-719.

157. Field, D. Nucleolar silver staining patterns related to cell cycle phase and cell generation of PHA-stimulated lymphocytes / D. Field // Cytobios. 1984. -Vol. 41.-P. 23-33.

158. Frequency of satellite association of human chromosomes in correlated with amount of Ag-staining of the nucleolus organizer regions / D.A. Miller, R. Tantravahi, G. Dev, O.J. Miller // Human Genetics. 1977. - Vol. 29, N5. - P. 490.

159. Galperin-Lemaitre, H. Comparison of acrocentric associations in male and female cells. Relationship to the active nucleolar organizers / H. Galperin-Lemaitre, L. Hens, B. Sele // Hum. Genet. 1980. - Vol. 54, №3. - P. 349-353.

160. Gokal, P.K. Hormonal Regulation of Transcription of rDNA. Formation of initiated complex by RNA polymerase I in vitro / P.K. Gokal, P.B. Mahajan, E.A. Thompson // J. Biol. Chem. 1990. - Vol. 265. - P. 16234-16243.

161. Gridley G, J.H. Klippel, R.N. Hoover // Ann. Intern. Med. 1994. -Vol. 120.-P.35.

162. Hanry-Amar, M. Dietrich // Dietrich Oncology Clin. North Amer. -1993.-Vol. 7.-P. 369-387.

163. Hardy, R.E. Cancer and the minority community: Epidemiology Sta-dies. / R.E. Hardy, G.R. Newell // Cancer Bull. 1998. - Vol. 85, N2. - P. 71-74.

164. Harget, Ph. Multipele primaire tumoren. Studies over 159 patients en literature overricht / Ph. Huget, J.M. Debois // Tijdschr. Genesk. 1989. - Vol. 45. -P. 1129-1130.

165. Hartwell, L. Introduction to cell cycle controls / L. Hartwell // Cell cle Control / ed. C. Hutchison, D.M. Glover. L.: Oxford University Press, 1995. - P. 1-15.

166. Hens, L. Relationship between measure chromosomes distribution parameters and Ag-staining of the nucleolus organizer regions / L. Hens, M. Kirsh-Volders, F.E. Arright, C. Susunne // Human Genetics. 1980. - Vol. 51, N3. - P. 349.

167. High Resolution Studies of the Xenopus laevis Ribosomal Gene Pro-motor in Vivo and in Vitro / C. Read, A.M. Larose, B. Leblank at al. // J. Biochem. 1992.-Vol. 267.-P. 10961-10967.

168. Hodgkin's disease / ed. P.V. Mauch et al. Philadelphia, 1999.

169. Hunacer, M.M. Alpha radiation risk coefficients for eiver cancer, bone sarcomas und leukemia / M.M. Hunacer, R.L Kathren // Health. Phys. 1995. .Vol. 68, N1.-P. 44-49.

170. In vivo somatic mutation in the lymphocytes of Hodgkin's patients / M. Caggana, H.L. Liber, P.M. Mauch et al. // Environ. Mol. Mutagen. 1991. - Vol. 18. — P. 6-13.

171. Ingeritance of ribosomal genes activity and level of DNA methylation of individual gene clusters in a three generation family / A. De Capoa, C. Aleixan-dre, M.P. Felli et al.//Hum. Genet. 1991.-Vol. 88, N2.-P. 146-152.

172. Jackson, A.L. The mutation rate and cancer / A.L. Jackson, L.A. Loeb //Genetics.-1998.-Vol. 148.-P. 1483-1490.

173. Jordan, G. At the heart of the nucleolus / G. Jordan // Nature. 1987. — Vol. 329.-P. 489-490.

174. Katiani, C.A., M. Timofeeva, N.L. Melnikova, A.A. Neytakh // Bio-chim. Diophys. Acta. 1968. - Vol. 169. - P. 274.

175. Kinlen, L. // Cancer Pes. 1992. - Vol. 52. - S. 5474.

176. Kuhn, A The nucleolar transcription activator UBF relieves Ku antigen mediated repression of mouse ribosomal gene transcription / A. Kuhn, V. Ste-fanovsky, I. Grummt // Nucl. Acids Res. 1993. - Vol. 21. - P. 2057.

177. Kuhn, A. Dual role of the nuclear transcription factor UBF: transactiva-tor and antirepressor / A. Kuhn, I. Grummt // Proc. Natl. Acad. Sci. 1992. - Vol. 89.-P. 7340-7344.

178. Larson, D.E. Control points in eukaryotic ribosome biogenesis / D.E. Larson, P. Zahradka, B.H. Sells // Biochem. Cell. Biol. 1991. - Vol. 69. - P. 5-22.

179. LeBeau, M.M. Chromosomal abnormalities in non-Hodgkin's lymphomas / M.M. LeBeau // Semin. Oncol. 1990. - Vol. 1. - P. 20-29.

180. Levine, A.M., D. Shibata, N. Sullivan // Cancer Res. -1992. Vol. 52. -P. 5482.

181. Lin, A.Y. Lymphomas.- 1-st. ed. / A.Y. Lin, M.A. Tucker; ed. G. Ca-nellos, T.A. Lister, J.L. Sklar. Philadelphia-London: WB. Saunders Сотр., 1998.-P. 43.

182. Long, E.O. Repeatad genes in eukaryotes / E.O. Long, L.B. Dawid // Annu. Rev. Biochem. 1980. - Vol. 49. - P. 727-764.

183. Mack, T.M., W. Cozen, D.K. Shibata. // New Engl. J. Med. 1995. -Vol. 332.-P. 413-418.

184. MacPhee, D.G. Mismatch repair, somatic mutations, and the origins of cancer / D.G. MacPhee // Cancer Res. 1995. - Vol. 55, N23. - P. 5482-5492.

185. Mahajan, P.B. Hormonal Regulation of Transcription of rRNA. Purification and characterization of the Hormone-Regulated Transcription Factor 1С. / P.B. Mahajan, E.A. Thompson // J. Biol. Chem. 1990. - Vol. 265. - P. 1622516233.

186. Mahajan, P.B. Hormonal Regulation of Transcription of rRNA. The role of TFIC in Formation of Initiation Complexes / P.B. Mahajan, P.K. Gokal, E.A. Thompson // J. Biol. Chem. 1990. - Vol. 265. - P. 16244-16247.

187. Monson, R.R. Occupational Epidemiology 2-nd: / R.R. Monson // Boca Raton: CRC Press Inc. 1990. - 94 p.

188. Moss, T.A. Promotion and regulation of ribosomal transcription in Eukaryotes by RNA polymerase 1 / T.A. Moss, V.Y. Stefanovsky // Nucl. Acid Res. and Mol. Biol. 1995. - Vol. 50. - P. 25-66.

189. Moss, T.A. Transcriptional function of the repetitive ribosomal spacer in Xenopus laevis / T.A. Moss // Nature. 1983. - Vol.302. - P. 223.

190. Pagano, J.S. Epstcin-Barr virus: the first humantumor virus and its role in cancer proc ASSOC / J.S. Pagano // Am. Phys. 1999. - Vol. 111, N6. - P. 573580.

191. Parkin, DM J D.M. Parkin, C.S. Muir, S.L. Whelan // Scientific Publications. -N120. Lyon: International Agency for Reslanch on cancer, 1992.

192. Paule, M.R. In vitro evidence that eukaryotic ribosomal RNA transcription is regulated by modification of RNA polymerase I. / M.R. Paule, C.T. Iida, P J. Peina // Nucl. Acids Res. 1984. - Vol. 12. - P. 8161 -8181.

193. Penn, I./ I. Penn // Surg. Clin. North. Amer. 1994. - Vol. 75. - P.1247.

194. Pluda, J.M., D.J. Venzon, G. Tosado et al. // Clin. Oncol. -1993. Vol. 11.-P. 1099.

195. Poiesz, B.J., F.W. Ruscetti, A.F. Gardar et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1980. - Vol. 77. - P. 7415.

196. Reeder, R.H. Enhancers and Ribosomal Gene Spacers / R.H. Reeder // Cell.- 1984.-Vol.38.-P. 349-351.

197. Reerce, D.E., J.M. Connors, J.J. Spinelli // Blood. 1994. Vol. 83. - P.1161.

198. Ries, L.A.G., B.A. Miller, B.F. Hankey // SEEP Cancer Institute. NIH Publication. 1994. - Vol. 94. - P. 2789.

199. Rooney, D.E. Human Cytogenetics: a practical approach / D.E. Rooney, B.H. Czepulkowski. // IRL Press, Oxford.

200. Shaw, P.J. 1995. The nucleolus / P.J. Shaw, E.G. Jordan // Cell Develop. Biol. Vol. 11. - P. 93-91.

201. Shigematsu, I. The radiation effects research foundation of Hiroshima and Nagasaki: past, present and future /1. Shigematsu, M.L Mendelsohn // IAMA.-1995.-Vol. 274, N5. P. 425-426.

202. Sorensen, P.D., B. Lomholt, S. Frederiksen, N. Tommergrup // Cyto-genet. Cell Genet. 1991. - Vol. 1. - P. 26-29.

203. Sorokin, E. Third International Symposium on Hodgkin's lymphoma / E. Sorokin Koln. - 1995. - Abstr. 110.

204. Srivastava, A.K., D. Schlessinger // Biochimie. 1991. - Vol. 73. - P. 631-638.

205. Steffensen, D.M., P. Duffey, W. Prensky // Nature. 1974. - Vol. 252. -P. 741-743.

206. Stevenson, G.T., M.S. Cragg // Sem. Cancer Biol. 1999. - Vol. 9, N2. -P. 139-147.

207. Sylvester, I.E. The human ribosomal RNA genes: structure and organization of the complete repeating unit / I.E. Sylvester, D.A. Whiteman, R. Podolsky // Hum. Genet. 1986. - Vol. 73, N 3. - P. 193-198.

208. The Lymphomas. Hodgkin's disease / ed. P.V. Mauch et al. Philadelphia, 1999.

209. The Treacher Collins syndrome (TCOF1) gene product is involved in pre-rRNA methylation / B. Gonzales, D. Henning, R.B. So, J. Dixon et al. // Human Molecular Genetics. 2005. - Vol. 14, N14. - P. 2035-2043

210. Tower, J. Transcription of mouse rDNA is regulated by an Activated Subform of RNA Polymerase I / J. Tower, B. Sollner-Webb // Cell. 1987. - Vol. 50.-P. 873-883.

211. Tucker, M. Risk of second cancer after treatment for Hodgkin's Disease / M. Tucker, C. Goleman, R. Cox et al. //New Engl. J. Med. 1988. - Vol. 318. -P. 76-81.

212. Van Leeuwen, F.F., W.J. Klokman, A. Hagenbeek // Clin. Oncol. -1994.-Vol. 12.-P. 312.

213. Walker, A.M. Reporting results of epidemiologic studies / A.M. Walker // Am. J. Public. Health. 1996. - Vol. 76. - P. 556-558.

214. Wellaver, P.K Isolation and sequence organization of human ribosomal DNA / P.K. Wellaver, I.B. Dawid // Mol. Biol. 1979. - Vol. 128. - P. 289-303.

215. World health organization classification of tumors. Pathology and genetics of tumors of heamatopoietic and lymphoid tissues / ed. by E.S. Jaffe. Lyon, 2001.

216. Xie, W.Q. Domains of the rat promoter must be alighted stereospecifi-cally / W.Q. Xie, L.I. Rothblum // Mol. Cell. Biol. 1992. - N12. - P. 1266-1275.

217. Yin, S.Y., Yin, H.A. Ming, N. Jahan et al // Arch. Path. Cab. Med. -1993.-Vol. 117.-P.502.

218. Zahm, S.H., D.D. Weisenburger, P.A. Babbit // Amer. J. Publ. Hlth. -1992.-Vol. 82.-P. 990.

219. Zahradka, P. Regulation of ribosome biogenesis in differentiated rat myotubes / P. Zahradka, D.E. Larson, B.H. Sells // Mol. Cell. Biochem. 1991. -Vol. 104.-P. 189-194.

220. Zankl, H. Association frequency and silver staining of nucleolus organizing regions in thyroid patients / H. Zankl, C. Mayer, K.D. Zang // Hum. Genet. 1980.-Vol. 54.-P. 111-114.

221. Zellweger, H. Satellite associations and translocation nongolism / H. Zellweger, G. Abbo, K. Guanty. // J. Med. Genet. 1966. - N3. - P. 186.

Информация о работе

Трубникова, Елена Владимировна
кандидата биологических наук
Курск, 2006
ВАК 03.00.15

Диссертация

Эпидемиология, цитогенетические эффекты и фенотипические особенности у больных со злокачественными лимфомами - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы