Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экстрагенетическая информация как одна из причин эмбриональной смертности у свиней

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Экстрагенетическая информация как одна из причин эмбриональной смертности у свиней"

На правах рукописи

ОНДАР Азиймаа Аяк-Хээевна

Экстрагенетическая информация как одна из причин эмбриональной смертности у свиней

Специальность 03.00.13 - Физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровицы, Московской области 2005 г.

Работа выполнена на кафедре воспроизведения, искусственного осеменения и трансплантации эмбрионов с.-х. животных Российской академии менеджмента в животноводстве и в лаборатории биотехнологии и генетики ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института свино-водства(ВНИИС).

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение:

кандидат биологических наук Зыкунов Николай Петрович доктор биологических наук Субботин Александр Данилович доктор биологических наук Радченков Виктор Петрович ГНУ Всероссийский НИИ племенного дела в животноводстве

Защита состоится " 2005 г. в 10 часов, на заседа-

нии диссертационного совета Д 006.013.01 во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142132, Московская область, Подольский район, пос. Дубровицы, ВИЖ

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан » /Р" 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

В.П. Губанова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

Проблема повышения уровня воспроизведения в свиноводстве до последнего времени остается исключительно актуальной. Среди факторов, обусловливающих эффективность репродуктивного процесса, особое место занимают эмбриональные потери, которые могут достигать почти половины всех оплодотворенных ооцитов. Гибель зародышей в период утробного развития является одной из причин расхождения между потенциальным и фактическим многоплодием (Милованов В .К., 1966).

Для успеха в решении этой проблемы, прежде всего, необходимо основательное знание причин прерывания раннего эмбриогенеза. Более глубокие и точные данные относительно этого явления определят реальные пути решения проблемы. Среди множества причин эмбриональной смертности особое место отводится генетическим и микробиологическим факторам (Соколовская H.H., 1968). Однако до сих пор нет достаточной ясности в механизмах действия этих факторов. В частности, неизвестно, в какой мере эмбриональная выживаемость связана с числом предшествующих опоросов у маток.

Исследования последних лет, подтвердившие реальность переноса в ооциты экзогенных нуклеиновых кислот сперматозоидами (Lavitrano M. et. al.,1989; Gondolfi F. et. al.; Arezzo F., 1989; Hochi S., et. al., 1990; Perez A. et. al., 1991; Кузнецов A.B., 1992; Кузнецова И.В. и др. 1993; Багиров В.А. 1996), навели на мысль, что одной из причин эмбриональной смертности у животных может быть экспрессия в зиготах чужеродной генетической (экстрагенетической) информации, занесенной сперматозоидами в процессе оплодотворения, что было показано в опытах с кроликами (Кононов В.П., Багиров В.А., 1996).

В процессе технологической обработки семени (разбавление, охлаждение, сохранение in vitro), целостность плазматических мембран сперма-

тозоидов может нарушаться полностью или частично с последующим восстановлением. Вместе с этим, в семя нередко вносится чужеродная генетическая информация с микрофлорой, из отмирающих эпителиальных клеток и других источников. Антимикробные факторы, естественные или искусственно вносимые в виде антибиотиков, сульфаниламидных препаратов и др., губительно действуя на микрофлору семени, освобождают огромное количество нуклеиновых кислот микрофлоры. Возможно, высокая активность нуклеаз в семени (Polakovski КЬ, Kopta М., 1982) - эволюционно выработана как средство устранения этих факторов и соответственно причин эмбриональной смертности.

Цель и задачи исследования.

Целью наших исследований было изыскание резервов в реализации приемов повышения уровня воспроизведения путем сокращения эмбриональных потерь. Для достижения этой цели предстояло решить следующие задачи:

1. Изучить динамику проявления репродуктивной функции свиноматок и результативность осеменения, в частности уровень эмбриональной выживаемости, качество приплода в связи с возрастом и особенностями технологического цикла.

2. Определить естественную активность нуклеаз в нативном и разбавленном семени.

3. Выяснить действие разбавления семени различными средами на сохранение в нем нуклеаз, на абсолютный показатель выживаемости живчиков вне организма.

4. Провести экспериментальные исследования эффективности искусственного осеменения свиней семенем, разбавленным средами, обеспечивающими различную нуклеазную активность и эмбриональную выживаемость.

5. Изучить возможность сохранения естественной активности нуклеаз в семени хряка, как средства устранения чужеродной генетической информации.

Научная новизна. Впервые выяснено, что в условиях крупных промышленных свиноводческих комплексов более половины перегулов в стаде (52%) происходит вследствие эмбриональных потерь. Сохранение нук-леазной активности в жидкой части семени при его разбавлении средами, не связывающими ионы щелочноземельных металлов (Са++, Mg+4), способствует не только сокращению эмбриональных потерь, но и повышению постэмбриональной выживаемости поросят, а также скорости их роста.

Практическая значимость работы. Использование естественной плазмы в качестве разбавителя позволяет улучшить эффективность воспроизведения за счет повышения оплодотворяемости на 9%, и сохранности поросят на 7%, а также снизить затраты на проведение искусственного осеменения за счет использования в качестве разбавителя натуральной плазмы семени, исключающего закупку синтетической среды.

Апробация работы. Основные результаты работы были доложены на ежегодных отчетах лаборатории биотехнологии и генетики ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института свиноводства (ВНИИС), на УП-ой Международной научно-практической конференции «Перспективы развития свиноводства в XXI веке» (2001 г., п. Быково), на Международной научно-практической конференции «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения» (2002 г., п. Быково).

Основные положения, выносимые на защиту.

Материалы исследований по динамике проявления репродуктивной функции свиней в течение технологического цикла.

Экспериментальные данные по результативности искусственного осеменения свиней разбавленным семенем хряков с различной нуклеазной активностью.

Публикация результатов исследований.

По материалам диссертации опубликовано 5 работ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 101 странице, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты исследований, обсуждение, выводы и практические предложения, список литературы, который включает 213 источников. Работа включает 21 таблицу и 12 рисунков.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в Лаборатории биотехнологии и генетики ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института свиноводства (ВНИИС) Российской академии сельскохозяйственных наук (РАСХН), на кафедре воспроизведения, искусственного осеменения и трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных, Российской академии менеджмента в животноводстве (РАМЖ), в ЗАО "Кузнецовский комбинат" в условиях промышленного производства свинины.

Для проведения экспериментов группы животных формировали по принципу аналогов с учетом породности (крупная белая, СМ - специализированная мясная) возраста, живой массы, числа опоросов, предыдущей продуктивности свиноматок: оплодотворяемости, многоплодия, длительности подсосного и непроизводительного периодов, энергии роста и сохранности поросят.

Условия содержания и ухода за подопытными животными в процессе всего экспериментального периода соответствовали технологическим требованиям производства свинины на крупных промышленных комплексах, а сами животные находились в общем технологическом потоке.

Исследование проводили по схеме, представленной на рисунке 1.

Рис. 1. Общая схема проведения исследований

Для выяснения средней оплодотворяемости маток и величины пре-натальных потерь был проведен биометрический анализ по 11489 опоросам в связи со сроками перегулов после осеменения.

Осеменение маток проводили по технологии, описанной в Инструкции по искусственному осеменению свиней. М., 1976.

Семя хряка после органолептической оценки исследовали по трем показателям: объем эякулята, подвижность и концентрация сперматозои-

дов. К дальнейшей обработке и использованию допускались эякуляты объемом не менее 100 мл.

Концентрацию сперматозоидов в семени определяли по оптической плотности при помощи фотоэлектроколориметра (ФЭК-57) по общепринятой методике.

Для разбавления спермы были использованы разбавители, различающиеся по степени подавления активности нуклеаз в семени. Стандартная среда ГХЦС, блокирующая активность нуклеаз путем связывания ионов Са и Mg. 1% раствор химически чистого хлористого натрия, понижающий активность нуклеаз лишь путем снижения их концентрации в семени соответственно степени разбавления. Натуральная плазма семени, полученная от хряков, содержащихся в этом же хозяйстве, сохраняющая активность нуклеаз на уровне неразбавленного семени.

Эякуляты одного или нескольких хряков разделяли на три равные части. Каждая часть исходного семени была разбавлена в соотношении 1:2 средами:

1) средой ГХЦС, где нуклеазная активность была подавлена компонентами среды (ЭДТА, цитрат натрия), связывающими ионы Са и Mg;

2) изотоническим раствором хлористого натрия, где разбавлением концентрация нуклеаз была снижена в 3 раза;

3) естественной плазмой семени, сохраняющей естественную нуклеазную активность в семени.

В лабораторном опыте определяли содержание ДНК в нативных сперматозоидах до и после инкубации разбавленного семени. При этом использовали разные разбавители семени с рН=7: 1) среда, включающая анионы ЭДТА и цитрат натрия, которые, связывая Са+ и Mg+, ингибиру-ют нуклеазы и 2) изотонический раствор гликокола, сохраняющий нуклеа-зы активными.

Для выяснения ДНК-азной активности плазмы семени хряков применяли методику, где в качестве субстрата использовали убитых сперматозоидов. Для этого сперматозоиды отделяли от плазмы центрифугированием семени, убивали их обработкой 96° этанолом, трижды отмывали 1% раствором хлорида натрия. Затем сперматозоиды инкубировали при 37°С в течение 4 часов, как в присутствии плазмы, так и без нее, альтернативно в двух буферах: трис-хлоридном при рН=7 и ацетатном при рН=5,6. Во всех образцах определяли концентрацию ДНК до и после инкубации. Для определения ДНК использовали методику Шмидта-Тангаузера в модификации Цанева Р.Г. и Маркова Г.Г. (1960). Особенность этой методики состоит в том, что она выявляет ДНК сколь угодно малой полимерности, исключая лишь отдельные нуклеотиды.

Оценку выживаемости сперматозоидов вне организма проводили после соответствующего разбавления спермы в соотношении 1:2 испытываемыми средами ГХЦС, изотоническим раствором NaCl и плазмой семени. Образцы разбавленной таким образом спермы хранили при 16-18°С в специальном термостате. Активность сперматозоидов оценивали под микроскопом по общепринятой методике ежедневно в одно и то же время. Вычисляли абсолютный показатель выживаемости сперматозоидов и сравнивали его по группам.

Семенем разбавленным испытуемыми средами, осеменяли свиноматок, выбранных в состоянии охоты. Спустя 7 дней после осеменения маток постоянно проверяли на проявление охоты и не повторивших ее переводили в цех глубокосупоросных. Перегулы учитывали на протяжении 4 месяцев после осеменения.

Статистическую обработку данных проводили по стандартным методикам (Меркурьева и др., 1991). Расчет средних значений (X) и стандартных отклонений (ст) в выборках вели с использованием программы Microsoft Excel. Стандартное отклонение для признаков, выраженных в про-

центах находили по формуле ст=>/(р*с}), где р И q - частоты встречаемости признаков, выраженные в процентах. Ошибку средней находили по формуле Мх=с^п, где п - число значений признака. Достоверность разницы между признаками определяли на основании сравнения коэффициента достоверности (Та) с коэффициентами по таблице Стьюдента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Оценка результативности осеменения свиноматок разного возраста

В порядке поиска решений проблемы повышения эффективности воспроизводства, целесообразно было выяснить результативность осеменения в стаде свиноводческого комплекса «Кузнецовский комбинат» в связи с возрастом маток. Анализ выявил (табл.1) четкую закономерность -оплодотворяемость маток неуклонно повышается с нарастанием числа предшествующих опоросов. Самая низкая результативность (17,8+0,7% перегулов) была у ремонтных свинок, а самая высокая у маток, имевших наибольшее число предшествующих опоросов, от 7 до 14, (всего 8,6+0,7% перегулов) - разница статистически высоко достоверна (9,2+0,99; Кг=9,3; РХ),999).

Таблица 1

Зависимостьрезультативности осеменения от возраста маток

Число предшествующих опоросов Осеменено маток Супоросных Перегулов во все сроки

число О. % число О, %

0 3207 2636 82,2±0,7 571 17,8+0,7

1 2125 1808 85,1+1,3 317 14,9+1,3

2 1398 1232 88,1±0,9 166 11,9+0,9

3 1004 909 90,5+0,9 95 9,5+0,9

4-6 2198 1980 90,1+0,4 218 9,9+04

7-14 1557 1423 91,4+0,7 134 8,6+0,7

Всего 11489 9988 86,9+0,3 1501 13,1±0,3

Традиционная методика определения величины эмбриональной смертности включает убой определенного количества осемененных маток, вымывание из половых путей оплодотворенных и неоплодотворенных ооцитов и сопоставление их числа с количеством родившихся поросят в альтернативной группе маток. Однако, опыт показывает, что при использовании этой методики трудно получить однозначный ответ, поскольку сравнение числа оплодотворенных ооцитов сопоставляется с числом рожденных поросят на разных группах животных, порой существенно отличающихся по воспроизводительным способностям. Усреднить значения за счет увеличения выборки при этом не представляется возможным в подавляющем большинстве случаев, поскольку по хозяйственным соображениям убой осемененных маток - действие экономически чрезмерно убыточное.

В связи с этим мы решили использовать метод, основанный на сроках перегулов маток после осеменения. Предварительно был проведен анализ по этому показателю на большом поголовье - 11489 осемененных маток, всех и в разрезе возрастных групп.

№1

9 ао м ю №6 12а

с^яитянммимр^мм!

Рис. 2. Распределение маток всех возрастов по срокам перегулов (п=1501)

Как видно из данных рисунка 2 и таблицы 2, наибольшее число маток перегуляли в сроки 20-30 дней после осеменения. Причем в этот период выявляются два четких пика: первый в пределах 17-22 дня, 31% маток, второй - 23-33 дня, 34,8% маток. Первый пик отражает количество маток, перегулявших спустя натуральный половой цикл, второй - удлиненный цикл. Совершенно очевидно, что в первом случае были матки, не имевшие оплодотворенных овоцитов, во втором - имевшие зачатие, но развитие зародышей прервалось на самых ранних стадиях.

Кроме того, небольшая часть маток перегуляла вскоре после осеменения - спустя 7-16 дней. Очевидно, это были животные, которые имели явное нарушение воспроизводительной функции. Вероятнее всего у этих маток имело место перерождение фолликулов в яичниках в фолликулярные кисты.

Пик, отражающий сроки перегулов 34-44 дня, т.е. 2 нормальных цикла, трудно отнести к животным, потерявшим эмбрионов в результате эмбриональной смертности. Поскольку на такой стадии эмбрионального развития гибель эмрионов - редкое явление. Тогда как в нашем случае таких маток было довольно много -16,1%. Очевидно этих животных следует отнести к трудно оплодотворяющимся, у которых первый перегул был попросту не замечен, но после второго бесплодного цикла они были выявлены в состоянии охоты.

И, наконец, перегулы в более поздние сроки, после 44 дней, скорее всего, отражают маток с плодной смертностью. Это могли быть прерывания супоросности вследствие травм и заболеваний. Таких животных было 17,4%.

Суммируя животных, не имевших оплодотворений, 31 + 16,1 = 47,1% и потерявших супоросность, 34,8 + 17,4 = 52,2%, можно сделать заключение, что среди перегулявших маток примерно половина не имела оплодотворений, а у второй половины оплодотворение было, но супорос-

ность прервалась из-за пренатальной смертности, произошедшей на разных стадиях эмбрионального развития.

Заметно явное смещение сроков перегулов в связи с возрастом свиноматок. Если у ремонтных наибольшее число перегулов было в срок 17-22 дня после осеменения, то есть в основном в результате отсутствия оплодотворений, то по мере увеличения числа опоросов большинство перегулов все больше смещалось на более поздние сроки, чем один цикл. Это значит, что с возрастом маток потеря результативности все больше зависит от эмбриональной смертности.

Таблица 2

Распределение свиней по срокам перегулов после осеменения

Показатели Число предшествующих опоросов Всего Сроки после осеменения дней

7-16 17-22 23-33 34-44 45 и >

Число перегулов 0 571 4 200 164 104 99

% от общего 100 0,7 35 29 18 17

Число перегулов 1 317 2 102 108 51 54

% от общего 100 0,6 32 34 17

Число перегулов 2 166 1 47 65 26 27

% от общего 100 0,1 28 39 16 16

Число перегулов 3 95 1 31 37 12 14

% от общего 100 1 33 39 13 15

Число перегулов 4-6 218 1 55 87 28 47

% от общего 100 0,5 25 40 13 22

Число перегулов 7-14 134 0 31 62 21 20

% от общего 100 0 23 46 16 15

Число перегулов Все возрасты 1501 9 466 523 242 261

% от общего 100 0,6 31,0 34,8 16,1 17,4

3.2. Нуклеазная активность плазмы семени

В свете исследований последних лет, проведенных на различных видах млекопитающих (Lavitrano М., et. al., 1989; Gondolfi F., et. al.; Arezzo F., 1989; Hochi S., et. al., 1990; Perez A., et. al., 1991; Кузнецов A.B., 1992) чужеродная генетическая информация в виде генных конструкций может за-

носиться сперматозоидами в процессе оплодотворения в ооциты и даже включаться в пронуклеусы. Попавшая в зиготы чужеродная генетическая информация может экспрессировать и вызывать нарушения в развитии эмбрионов вплоть до полной их гибели, что показали специальные опыты с кроликами (Кононов В.П., Багиров В.А., 1996).

Для ответа на поставленный нами вопрос: предотвращают ли нук-леазы плазмы семени возможный занос чужеродной генетической информации в сперматозоиды хряков и соответственно раннюю эмбриональную смертность, обусловленную ее экспрессией в зиготах, прежде всего, необходимо было убедиться в активности этих ферментов в плазме семени этого вида животных. Результаты исследований нуклеазной активности плазмы семени приведены в таблице 3.

Таблица 3

Изменение содержания ДНКубитьх сперматозоидов при инкубации в условиях активности нейтральной и кислой ДНК-аз

Иссле дуемый фермент pH инкубационной среды Содержание Содержание ДНК в навеске после инкубации (мг)

ДНКв с плазмой семени без плазмы

навеске до инкубации (мг) мг/ сперма-тозоидов в %% к исходному мг/ сперма-тозои-дов в%%к-исходному

ДНК- аза 1 7,0 3,4 2,5 74 3,4 100

ДНК- аза 2 5,6 3,2 . 3,1 97 3,2 100

Результаты, приведенные в таблице 4 показывают, что инкубация мертвых сперматозоидов в присутствии плазмы семени вызывает существенное снижение содержания ДНК при нейтральной реакции среды. Это означает, что наша гипотеза о возможности деполимеризации ДНК до отдельных нуклеотидов в присутствии плазмы семени подтвердилась.

Таблица 4

Сохранность ДНК в нашивных сперматозоидах в связи сусловиями инкубации в присутствии естественной плазмы семени

Среда инкубации Содержание ДНК в сперматозоидах(мг/109 клеток) после инкубации при 37 С в течение, (часов)

0 3 6

Среда, содержащая ЭДТА и цитрат 3,04±0,03 3,06±0,04 3,00±0,12

2,5% раствор гли-кокола 3,07±0,05 2,85±0,06 2,85±0,08

Как показывают данные таблицы 4, инкубация живых сперматозоидов в среде, содержащей компоненты, деионизирующие Са++ и Mg++, не привела к потере ДНК в них. Вместе с тем, если инкубацию проводили в среде, где Са++ и Mg++ не были связаны, наблюдалось заметное снижение содержания ДНК уже через 3 часа инкубации, очевидно вследствие деполимери-зующего действия нуклеаз плазмы семени. Следовательно, среды, содержащие компоненты, связывающие активные центры нуклеаз (Са++ и Mg++ ) предотвращают деполимеризацию ДНК.

В процессе технологической обработки семени - разбавлении, охлаждении, сохранении in vitro целостность плазматических мембран сперматозоидов может нарушаться полностью или частично с последующим восстановлением. Вместе с тем, в семя нередко вносится чужеродная генетическая информация, вышедшая в окружающую среду из разных источников. Естественные и искусственно вносимые антимикробные факторы в виде антибиотиков, сульфаниламидных и других препаратов, губительно действуя на микрофлору семени, освобождают большое количество нуклеиновых кислот из погибших микробов. В определенных условиях появляется возможность проникновения этой чужеродной информации в сперматозоиды и последующего заноса ее в ооциты при оплодотворении.

Однако разбавление семени уменьшает концентрацию нуклеаз пропорционально степени разбавления и снижает их активность в связи с ингиби-

рующим действием компонентов сред, связывающих ионы кальция и магния -активные центры этих ферментов. Все это вместе взятое может обуславливать присутствие в семени и на сперматозоидах чужеродной генетической информации и последующий занос ее в ооциты при оплодотворении, что может стать причиной эмбриональной смертности.

3.3. Влияние ннгибирования нуклеаз в семени на биологическую полноценность сперматозоидов

Дня ответа на поставленный выше вопрос мы сравнили действие на биологическую полноценность сперматозоидов разбавителей семени полностью или частично подавляющих нуклеазную активность плазмы семени.

33.1. Выживаемость сперматозоидов в разных разбавителях

Оценку выживаемости сперматозоидов вне организма проводили после соответствующего разбавления расщепленных на три части эякулятов в соотношении 1:2 испытываемыми разбавителями. Вычисляли абсолютный показатель выживаемости сперматозоидов и сравнивали его по группам.

Анализ лабораторных исследований, полученных в ходе проведения эксперимента, показывает, что подвижность сперматозоидов в нативном и разбавленном той или иной средой семени сразу после разбавления была совершенно аналогичной.

Таблица 5

Выживаемость сперматозоидов вне организма в различных рразбавителях семени

Среда разбавитель Степень разбав- Подвижность Абсолютный по-

ления свежевзятого се- казатель выжи-

семя: среда мени (балл.) ваемости S

ГХЦС 1:2 8 696

1% 1:2 8 348

Плазма семени 1:2 8 288

Нативное семя - 8 264

Характеризуя выживаемость сперматозоидов вне организма при 16 -18°С в использованных разбавителях следует отметить, что по этому показателю все они сильно различаются между собой (табл.5). Так нативное семя и разбавленное плазмой семени, имеют примерно одинаковый и относительно низкий абсолютный показатель выживаемости 264 - 288. Семя хряка, разбавленное ГХЦС - средой, обладает наибольшей выживаемостью, в 3 раза более высокой: абсолютный показатель выживаемости составляет 696. Промежуточное положение по этому тесту занимает семя, разбавленное изотоническим раствором хлористого натрия, при этом его абсолютный показатель в два раза ниже аналогичного показателя семени, разбавленного ГХЦС - средой.

Однако выживаемость - недостаточный показатель биологической полноценности сперматозоидов, поскольку отражает лишь энергетическую и моторную функции, без которых сперматозоиды не могут произвести оплодотворение и эмбриональное развитие. Для осуществления главных последних функций сперматозоидам необходимы другие нормальные характеристики, не отражаемые подвижностью или выживаемостью. Это и целостность акросомы и содержащегося в ней фермента - гиалуронидазы, необходимой для рассеивания лучистого венца на первом этапе оплодотворения, и сохранность фермента второго этапа оплодотворения - прохождения прозрачной оболочки ооцита, и сохранность факторов капацитации и акросомной реакции и других факторов для осуществления множества функций. В связи с этим окончательное суждение о биологической полноценности сперматозоидов можно сделать лишь по конечным результатам осеменения - получению полноценного потомства.

3.2.2. Влияние разбавителей на результаты осеменения

Таблица 6

Действие сред на результаты осеменения свиноматок свежевзятым

семенем

Разбави тель Осе-мене-но маток Перегулов, позднее, чем через 21 день после осеменения Опоросив шихся маток Получено живых поросят

число % всего на 1 опорос на осемененную матку

число %

ГХЦС 40 7* 18±6 32 80±6 343 10,7±0,4 8,6

1%№С1 36 2 6±4 28 78±6 287 10,3±0,5 7,9

Плазма семени 36 1* 3±3 32 89±5 319 10,0±0,5 8,9

*Р=0,92

Анализ результатов осеменения (табл. 6) показывает, что процент опоросов от числа осемененных в первых двух вариантах был практически одинаков. Однако в третьей группе маток, где осеменение проводили семенем, разбавленным нативной плазмой, видна явная тенденция повышения результативности - процент опоросившихся от числа осемененных был на 9 и 11% выше, чем в 1 и 2 группах.

Более показательным оказался анализ сроков перегулов после осеменения. Известно, что длительность межтечкового периода у свиней находится в пределах 18-21 день. Более продолжительный период означает, что имело место оплодотворение, закончившееся ранней эмбриональной смертностью. Наши результаты в этом плане показывают, что очень высокий процент удлиненных межтечковых интервалов, то есть наибольшая эмбриональная смертность, были в том случае, когда для разбавления семени использовали ГХЦС среду, связывающую Са++ и М^++ и, соответственно, ингибирующую нуклеазы. Это поддерживает нашу гипотезу о возможной причине эмбриональной смертности у млекопитающих - заносе

чужеродной генетической информации сперматозоидами в ооцит в процессе оплодотворения. Вероятно, присутствие нуклеаз в семени - эволю-ционно выработанное средство защиты от чужеродной генетической информации.

При использовании в качестве разбавителя естественной плазмы семени проявляется тенденция повышения сохранности поросят в течение 35-дневного подсосного периода как в абсолютном (83 поросенка на осемененную матку), так и в процентном (93,0%) отношениях: в группе, где маток осеменяли семенем, разбавленным семенной плазмой эти значения в сравнении с контролем, были 7,4 и 86% соответственно (табл. 7). При этом, в третьей группе в расчете на одну осемененную матку отнято на 0,9 и 1,5 поросенка больше, чем, соответственно, в 1 и 2 группах. От семени, разбавленного плазмой, были более тяжеловесные новорожденные поросята и масса гнезда в целом (1,43 и 14,6 кг против 1,35 и 14,4 кг), а также масса гнезда, масса одного поросенка при отъеме, и среднесуточный привес поросят: 67,5 кг, 7,3 кг и 169г против 66,4; 7,2 и 166, соответственно в контроле (табл. 8). Вероятно, защита сперматозоидов от чужеродной генетической информации путем сохранения в семени нуклеазной активности положительно отражается не только на эмбриональном, но и на постна-тальном развитии поросят.

Таким образом, анализ результатов проведенного эксперимента показал, что лучший результат (по поздним перегулам, проценту супоросных и опоросившихся маток и особенно сохранности и массе поросят в период подсоса) получен в группе, где маток осеменяли семенем, разбавленным нативной плазмой семени.

Таблица 7

Сохранность поросят в связи с используемыми средами для осемененияматок

Среда Родилось поросят Из них жизнеспособных Отнято поросят Сохранность

всего на1 опорос всего на1 опорос % всего на1осе-менненную матку

ГХЦС 373 11,7 343 10,7 91,9 296 7,4* 86±2

1%№С1 315 11,25 287 10,25 91,1 245 6,8 85±5

Плазма семени 352 11,0 319 10,0 90,6 298 8,3* 93±2

*Р>0,95

Таблица 8

Рост подсосныгх поросят в связи с применяемыми средами для осеменения их матерей

Среда Многоплодие, поросят Вес при рождении, кг. Подсо сный период (дни) Отнято от матки Вес при отъеме, кг. Среднесуточный привес, г.

гнез да поросенка гнезда поросенка

ПХЦС 10,7 14,4 1,35 35,3 9,25 66,4 7,2 166

1%№С 1 10,25 14,1 1,38 34,9 8,75 62,1 7,1 164

Плазма семени 10,0 14,6 1,43 34,7 9,3 67,5 7,3 169

Использование в качестве разбавителя свежевзятого семени изотонического раствора №С1 несколько снижает результативность искусственного осеменения свиноматок в условиях промышленного воспроизводства.

Эксперимент также показал отсутствие прямой зависимости между абсолютной выживаемостью сперматозоидов в испытанных средах и результативностью искусственного осеменения свиноматок свежевзятым семенем, разбавленным этими средами.

Положительный эффект от использования нативной плазмы семени

для его разбавления невольно приводит к мысли о возможности использования такого рода разбавителя в практике искусственного осеменения. Это можно достигнуть, если каждый раз осеменять маток свежевзятым семенем, разбавленным свежеполученной плазмой семени. Эффект от использования в качестве разбавителя естественной плазмы семени складывается главным образом из лучшей сохранности поросят в процессе подсоса на (0,7 поросенка или 7% больше, чем в контрольной группе, Р>0,95).

Плазму семени всегда можно получить на месте от молодых хрячков, которых приучат к садкам на чучело. Известно, что для ремонта стада на каждого хряка-производителя готовят ежегодно трех молодых хрячков а полученные эякуляты в этом случае выбрасывают.. Использование плазмы семени от приучаемых хрячков позволит получить больше поросят при одних и тех же затратах.

Для вычисления экономического эффекта от большего количества поросят за счет большей сохранности в подсосный период, необходимо знать себестоимость одного поросенка. Она складывается из затрат на содержание матки в холостой период (в среднем 20 дней), периода супорос-ности - 114 дней, и периода подсоса (в нашем случае 35 дней). Итого 169 дней. Затраты корма на весь этот период составляют Зкгх 169 дней=507 кг.

Таблица 9

, Экономическая эффективность использования для осеменения маток

Разбавление семени Разница в пользу 2-го варианта

Источники затрат 1-й вариант средой 2-й вариант семенной

ГХЦС плазмой

1. Получено поросят к отъему 1000 маток 7400 8300 900

2. Стоимость одного поросенка, руб. 587 587 -

3. Стоимость всех поросят, тыс. руб. 4343,8 4872,1 528,3

Современная рыночная цена свиного комбикорма в среднем 6 руб./кг. Соответственно затраты в рублях будут 507х6=3042 руб. Затраты на корма составляют примерно 70% от всех затрат на содержание маток, следовательно общие затраты будут 3042 руб.:0,7=4346 руб. В среднем от маток к отъему получено 7,4 поросенка, значит стоимость 1 поросенка 4346 руб.:7,4=587 руб. (табл. 9).

Итак, используя разбавление семени натуральной семенной плазмой, можно сэкономить за один опорос 528,3 тыс. руб. на каждой тысяче маток. Если учесть, что от каждой матки в год получают два опроса, при вычислении годового эффекта эту цифру надо удвоить, т.е. годовая эффективность составляет 528,3x2=1056,6 тыс. руб. на каждую тысячу опоросов.

4. Вы воды

1. Результативность осеменения: процент опоросов от числа осемененных, выход поросят на осемененную и опоросившуюся матку (многоплодие) повышаются с возрастом, соответственно с 82,2; 7,4 и 9,02 у первоопоросок до 91,4; 10,1 и 11,2 у маток, имевших 6 и более опоросов.

2. С увеличением возраста у маток, начиная с четвертого опороса, повышается процент мертворожденных поросят.

3. Судя по длительности межтечкового интервала, более половины перегулов маток в стаде (52,2%) происходит вследствие эмбриональной смертности.

4. Инкубация мертвых сперматозоидов хряка в семенной плазме, содержащей нативные нуклеазы, обеспечивает существенное снижение в них концентрации ДНК.

5. ГХЦС-среда для разбавления семени хряка, содержащая компоненты, деионизирующие активные центры нуклеаз, (Са++ и Mg++), в противоположность изотоническому раствору гликоксла ингибирует

тивоположность изотоническому раствору гликокола ингибирует нуклеазную активность семени.

6. Использование для разбавления семени хряка сред, обеспечивающих разную выживаемость сперматозоидов вне организма (264....696) не вызывает соответствующего различия в оплодотворяющей способности спермы при осеменении маток свежевзятым семенем (89 ±5 -80±6%). Абсолютный показатель выживаемости спермы хряка, неадекватно отражает ее биологическую полноценность.

7. Естественная семенная плазма хряков, используемая для разбавления семени, обусловливает тенденцию повышения оплодотворяемости, снижения эмбриональной смертности и увеличивает выживаемость полученного потомства в подсосный период.

5. Практические предложения

Для повышения результативности искусственного осеменения свиней предлагаем проводить осеменение маток свежевзятым семенем, разбавленным естественной семенной плазмой. Для получения семенной плазмы рекомендуем использовать семя проверяемых хряков или специально содержащихся для этих целей.

Список опубликованных работ

1. Кононов В.П., Зыкунов Н.П., Багиров Б.А., Ондар A.A. Экстрагенетическая информация как одна из причин эмбриональной смертности у свиней. //Перспективы развития свиноводства в XXI веке. Тез. докл. Меж-дунар. науч.-прак. конф., посвящ. 5-летию созд. ВНИИС. Быково-Москва -2001.-С. 131-137.

2. Зыкунов Н.П., Ондар A.A. Взаимосвязь подвижности и выживаемости семени с результативностью осеменения свиноматок. //Перспективы

развития свиноводства в XXI веке. Тез. докл. Междунар. науч.-прак. конф., посвящ. 5-летию созд. ВНИИС. Быково-Москва - 2001. - С. 204-208.

3. Ондар A.A., Зыкунов Н.П. Выживаемость сперматозоидов хряка в различных разбавителях спермы. //Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения Тез. науч.-прак. конф. РАМЖ. Быково. Москов. обл. - 2002. - С. 135-138.

4. Зыкунов Н.П., Кононов В.П., Ондар A.A. Чужеродная ДНК как возможная причина эмбриональной смертности. //Свиноводство. - 2003. - №2. -С. 22-23.

5. Кононов В.П., Зыкунов Н.П., Ондар A.A. Чужеродная генетическая информация как одна из причин эмбриональной смертности свиней. //Сельскохозяйственная биология - 2003. - №6. - С. 55-57.

Отпечатано в ООО «Компания Спугаик+» ПД № 1-00007 от 25.06.2000 г. Подписано в печать 13.01.2005 Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 1,5

Печать авторефератов 730-47-74,778-45-60

СО/

V /i i /1 '

V

i. »

/

1666

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ондар, Азиймаа Аяк-Хээевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Потенциальное и фактическое многоплодие.

1.2. Проблема эмбриональной смертности.

1.3. Размеры пренатальных потерь у разных видов животных.

1.4. Критические периоды эмбриогенеза и типы питания зародышей.

1.5. Основные причины эмбриональной смертности.

1.5.1. Генетические причины.

1.5.2. Микробная загрязненность.

1.5.3. Неблагоприятные условия кормления.

1.5.4. Влияние сезона года.

1.5.5. Стрессовые воздействия.

1.5.6. Иммунодефицитные состояния животных.

1.5.7. Влияние технологических факторов при искусственном осеменении.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Оценка результативности осеменения свиноматок разного возраста.

3.2. Нуклеазная активность плазмы семени.1.

3.3. Влияние ингибирования нуклеаз в семени на биологическую полноценность сперматозоидов.

3.3.1. Выживаемость сперматозоидов в разных разбавителях.

3.3.2. Влияние разбавителей на результаты осеменения.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экстрагенетическая информация как одна из причин эмбриональной смертности у свиней"

Актуальность темы.

Проблема повышения уровня воспроизведения в свиноводстве до последнего времени остается исключительно актуальной. Среди факторов, ответственных за это, особое место занимают эмбриональные потери, которые могут достигать почти половины всех оплодотворенных ооцитов. Гибель зародышей в период утробного развития является одной из причин расхождения между потенциальным и фактическим многоплодием (Милованов В.К., 1966).

Для успеха в решении этой проблемы, прежде всего, необходимо основательное знание причин прерывания раннего эмбриогенеза. Более глубокие и точные данные относительно этого явления определят реальные пути решения проблемы. Среди множества причин эмбриональной смертности особое место отводится генетическим и микробиологическим факторам (Соколовская И.И., 1968). Однако до сих пор нет достаточной ясности в механизмах действия этих факторов.

В частности, неизвестно в какой мере эмбриональная выживаемость связана с числом предшествующих опоросов у маток.

Для изучения эмбриональной смертности у млекопитающих применяют метод убоя осемененных животных в разные сроки после осеменения и сопоставления числа желтых тел яичников с числом выживших эмбрионов. Однако возможности использования этой методики весьма ограничены за счет небольшого числа выборки и по хозяйственно -экономическим соображениям. Об эмбриональной смертности можно судить также по срокам перегулов, превышающих длительность нормального полового цикла после осеменения самок (Соколовская И.И., 1964, 1967).

В процессе технологической обработки семени (разбавление, охлаждение, сохранение in vitro), целостность плазматических и других мембран сперматозоидов может нарушаться полностью или частично с последующим восстановлением. Вместе с этим, в семя нередко вносится чужеродная генетическая информация с микрофлорой, из отмирающих эпителиальных клеток и других источников. Антимикробные факторы, естественные или искусственно вносимые в виде антибиотиков, сульфаниламидных препаратов и др., губительно действуя на микрофлору семени, освобождают огромное количество нуклеиновых кислот микрофлоры.

В определенных условиях появляется возможность проникновения этой чужеродной информации в сперматозоиды и последующего заноса её в ооциты при оплодотворении. Возможная экспрессия чужеродной ДНК в цитоплазме способна привести к синтезу белков, неадекватных последующему развитию и к эмбриональной смертности.

Возможно нуклеазы в семени животных, деполимеризующие нуклеиновые кислоты, (Polakovski K.L., Kopta М., 1982) являются эволюционно выработанным средством устранения этих факторов и соответственно эмбриональной смертности.

Однако разбавление семени уменьшает концентрацию нуклеаз пропорционально степени разбавления и снижает их активность в связи с ингибирующим действием компонентов сред, связывающих ионы кальция и магния - активные центры этих ферментов. Все это вместе взятое может обуславливать присутствие в семени и на сперматозоидах чужеродной генетической информации и последующий занос ее в ооциты при оплодотворении, что может стать причиной эмбриональной смертности.

В свете исследований последних лет, проведенных на различных видах млекопитающих (Lavitrano М., et. al.; Gondolfi F., et. al.; Arezzo F., 1989; Hochi S., et. al., 1990; Perez A., et. al., 1991; Кузнецов A.B., и др. 1992; Кузнецова И.В., и др. 1993; Багиров В.А. 1996) чужеродная генетическая информация в виде генных конструкций может заноситься сперматозоидами в процессе оплодотворения в ооциты и даже включаться в пронуклеусы. Последняя, проникнув в зиготы, может экспрессировать и вызывать нарушение в развитии эмбрионов вплоть до полной гибели, что показали специальные опыты с кроликами (Кононов В.П., Багиров В.А., 1996).

В связи с этим возникает вопрос, ответ на который имеет как теоретическое, так и практическое значение: в какой мере это явление присуще другим видам животных, в частности свиньям. Предотвращают ли нуклеазы плазмы семени возможный занос чужеродной генетической информации в сперматозоиды хряков, находящихся в искусственных средах, и соответственно эмбриональную смертность.

Происходит ли деполимеризация ДНК сперматозоидов до отдельных нуклеотидов в присутствии плазмы семени и разбавителях.

В какой степени компоненты, входящие в состав синтетических сред, влияют на нуклеазную активность разбавленного семени.

Влияют ли эти условия на эмбриональную выживаемость и качество потомства.

Цель и задачи исследования. Исходя из вышеизложенного целью наших исследований было изыскание резервов в реализации приемов повышения уровня воспроизведения путем сокращения эмбриональных потерь. Для достижения этой цели предстояло решить следующие задачи:

1. Изучить динамику проявления репродуктивной функции свиноматок и результативность осеменения, в частности уровень эмбриональной выживаемости, качество приплода в связи с возрастом и особенностями технологического цикла.

2. Определить естественную активность нуклеаз в нативном и разбавленном семени.

3. Выяснить действие разбавления семени различными средами на сохранение в нем нуклеаз, на абсолютный показатель выживаемости живчиков вне организма.

4. Провести экспериментальные исследования эффективности искусственного осеменения свиней семенем, разбавленным средами, обеспечивающими различную нуклеазную активность и эмбриональную выживаемости.

5. Изучить возможность сохранения естественной активности нуклеаз в семени хряка, как средства устранения чужеродной генетической информации.

Научная новизна. Впервые выяснено, что в условиях крупных промышленных свиноводческих комплексов более половины перегулов в стаде (52%) происходит вследствие эмбриональных потерь. Сохранение нуклеазной активности в жидкой части семени при его разбавлении средами, не связывающими ионы щелочноземельных металлов (Са++, Mg++), способствует не только сокращению эмбриональных потерь, но и повышению постэмбриональной выживаемости поросят, а также скорости их роста.

Практическая значимость.

Использование естественной плазмы в качестве разбавителя позволяет улучшить эффективность воспроизведения за счет повышения оплодотворяемости на 9%, и сохранности поросят на 7%, а также снизить затраты на проведение искусственного осеменения за счет использования в качестве разбавителя натуральной плазмы семени, исключающего закупку синтетической среды.

Апробация работы.

Основные результаты работы были доложены на ежегодных отчетах лаборатории биотехнологии и генетики ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института свиноводства (ВНИИС), 1999-2002 г.; на VIII-ой Международной научно-практической конференции «Перспективы развития свиноводства в XXI веке» ВНИИС, п. Быково, 2001 г.; на Международной научно-практической конференции «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения» РАМЖ, п. Быково, 2002 г.

Основные положения, выносимые на защиту.

Материалы исследований по динамике проявления репродуктивной функции свиней в течение технологического цикла.

Экспериментальные данные по результативности искусственного осеменения свиней, разбавленным семенем хряков с различной нуклеазной активностью.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 5 работ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 101 страницах, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материал и методика исследований, результаты исследований, обсуждение, выводы и практические предложения, список литературы, который включает 213 источников. Работа включает 21 таблицу и 12 рисунков.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Ондар, Азиймаа Аяк-Хээевна

ВЫВОДЫ

1. Результативность осеменения: процент опоросов от числа осемененных, выход поросят на осемененную и опоросившуюся матку (многоплодие) повышаются с возрастом, соответственно, с 82,2; 7,4 и 9,02 у первоопоросок до 91,4; 10,1 и 11,2 у маток, имевших 6 и более опоросов.

2. С увеличением возраста у маток, начиная с четвертого опороса, повышается процент мертворожденных поросят.

3. Судя по длительности межтечкового интервала, более половины перегулов маток в стаде (52,2%) происходит вследствие эмбриональной смертности.

4. Инкубация мертвых сперматозоидов хряка в семенной плазме, содержащей нативные нуклеазы, обеспечивает существенное снижение в них концентрации ДНК.

5. ГХЦС-среда для разбавления семени хряка, содержащая компоненты деионизирующие активные центры нуклеаз (Са++ и Mgff), в противоположность изотоническому раствору гликокола ингибирует нуклеазную активность семени.

6. Использование для разбавления семени хряка сред, обеспечивающих разную выживаемость сперматозоидов вне организма (264.696) не вызывает соответствующего различия в оплодотворяющей способности спермы при осеменении маток свежевзятым семенем (89±5 - 80±6%). Абсолютный показатель выживаемости спермы хряка, неадекватно отражает ее биологическую полноценность.

7. Естественная семенная плазма хряков, используемая для разбавления семени, обусловливает тенденцию повышения оплодотворяемости, снижения эмбриональной смертности и увеличивает выживаемость полученного потомства в подсосный период.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для повышения результативности искусственного осеменения свиней предлагаем проводить осеменение маток свежевзятым семенем, разбавленным естественной семенной плазмой. Для получения семенной плазмы рекомендуем использовать семя проверяемых хряков или специально содержащихся для этих целей.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ондар, Азиймаа Аяк-Хээевна, п. Быково, Московской обл.

1. Авцын А.П., Жаворонков А.А., Строчкова JT.C. Нарушение репродуктивной функции при некоторых микроэлементозах.// Вестник АМН СССР 1986 № 1, с. 9.15.

2. Амерханов Х.А., Марзанов Н.С. Генетики работают на будущее.// Племенное дело, 1999, № 10, с.7-9.

3. Аршавский И.А. Механизмы осуществления функции питания во внутриутробном периоде и в период новорожденное™.// Ж. Общая биология. М. 1959, т.ХХ, №2, с. 104-114.

4. Аршавский И.А. Адаптация и резистентность в связи с периодичностью онтогенеза и критическими периодами.// Тезисы доклада IV совещания эмбриологов 19-27 июня 1963. JI. Из-во Ленинградского ун-та, 1963, с. 1112.

5. Аршавский И.А. Особенности осуществления функции питания в течение внутриутробного развития.// М. 1964, с. 399-405.

6. Афонский С.И. Биохимия животных.// М. 1970, с. 229-274.

7. Багиров В.А. Влияние чужеродных нуклеиновых кислот в семени животных на оплодотворение и эмбриогенез.// Канд. дисс., Дубровицы, 1996, с. 4, 23,33-40.

8. Баранчук А.Т. Влияние особенностей материнского организма на качество потомства.// Автореферат канд. дисс., Киев, 1972.

9. Безруков Н.И. Повышение плодовитости сельскохозяйственных животных.// Алма-Ата, Из-во Кайнар 1973, с. 18-21.

10. Бернштейн А.Д. О сезонном бесплодии и малоплодии животных.// Бюлл. Эксперимент биологии и медицины. 1938. t.V, b.I, с. 14-16.

11. Беце Й. Отмирание эмбрионов у свиней.// Ж. Животноводство, 1969, №9, с. 87-89.

12. Беце Й. Кн.: Теория и практика воспроизведения животных.// М. 1984,с.179.

13. Богданова Н.В. Иммунотрофическая функция в регуляции нормального эмбриогенеза у крупного рогатого скота.// Канд. дисс., Дубровицы, 2000, с.14, 16, 20.

14. Бодяжина В.И. Очерки о физиологии плода и новорожденного. М. 1966, с. 31-53.

15. Бондаренко А.Д. Сезонные колебания содержания витамина Е (токоферола) в организме разных видов грызунов и растениях, служащих им пищей.// Материалы к III Всесоюзному совещанию по экологической физиологии и морфологии. Новосибирск, 1967, с. 86-87.

16. Ваганова Г.В. Влияние жирорастворимых витаминов на оплодотворяемость ооцитов и выживаемость зародышей у свиноматок.// Канд. дисс., Бишкуль, 1979, с. 5, 7, 9, 14.

17. Вальданова Э.А. Каротин и витамин С в кормах, витамины А и С в органах и крови северных оленей по сезонам года и при разных условиях кормления.// Автореф. канд. дисс. Ленинград-Пушкин. 1971.

18. Варнавский А.Н. Микробное загрязнение семени сельскохозяйственных животных и меры его устранения.// Животноводство, 1963. №10.

19. Васютенькова Н. Влияние на качество свинины витамина А и количество травяной муки в рационах.// Ж. Мясная индустрия СССР. 1973, № 1, с. 37.

20. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах.// М. 1972, с. 207-215.

21. Воробьев Б.Л., Петухова В.В. Гибель зародыша у голубых песцов.// Каракулеводство и звероводство. 1954. №4.

22. Горбунов В.И., Субботин А.Д., Тервинский П.Н., Губанова В.Н. Действие витамина А на маточные структуры и воспроизведение у коров. Сборник науч. тр. ВИЖа, 1977, с. 50-53.

23. Григоров В.В., Малышева Л.Ф., Орехова Т.Н., Бурдюгова В.А. Использование микробиологического каротина в составе премиксов для свиней в Краснодарском крае.// Тезисы докл. II Всесоюзного конф. Черновцы 1976, с.34-35.

24. Губанова В.П. Иммунные ответы организма коров на экзогенные антигены и витамин А.// Кн.: Направления и новые результаты исследований по биологии воспроизведения животных, Дубровицы 1977 вып.З, часть 2 с. 54 60.

25. Дыбан А.П., Баранов B.C. Оогенез млекопитающих.// В кн.: Современные проблемы оогенеза. М. Наука, 1977 с. 200-233.

26. Ефремов В.В. Витамины питания и профилактика витаминной недостаточности. Из-во Медицина 1963.

27. Жаркин В.В. Изменение физико-химических свойств цервикального секрета коров в период течки и охоты и связь их с овуляцией и оплодотворяемостью.// Сб. научных трудов ВИЖа, 1966, в. 3, с. 107-144.

28. Жеребилов А.С., Пивняк И.Г. Использование витамина А и каротина микробиологического синтеза при доращивании и откорме свиней.// Тезисы II Всесоюзной конф. (15-18 сен.) Черновцы 1976, с.58-59.

29. Забутько А. Эффективность разных источников витамина А.// Ж. Свиноводство 1973, №2, с. 19-20.

30. Злочевская К.В. Изменение эмбрионального развития птиц в связи с качеством яиц.// Тезисы докл. 4-го совещания эмбриологов 19-27 июня 1963 г. Л. 1963, с. 62.

31. Зусмановский А.Г. Обмен витамина А и каротина у стельных коров.// Ж. Животноводство 1964, №11, с. 76-77.

32. Квасницкий А.В., Борц И.Л., Конюхова В.А. О генеративной функции яичников и плодовитости свиноматок.// Тр. НИИ свиноводства, 1958, в.Х, с. 231-246.

33. Квасницкий А.В., Конюхова В.А., Конюхова Л.А. В кн.: Искусственноеосеменение свиней.// Киев, 1961, с. 227.

34. Коваленко В.Ф. Биохимический состав эмбриотрофа у свиноматок разного возраста. Ж. Вестник с-х. науки. М. 1971,№1, с. 135-136.

35. Коваленко В.Ф. Изучение состава эмбриотрофа у свиноматок.// Автореф. канд. дисс. 1968.

36. Кононов В.П., Голышев Н.А., Нарижный А.Г. Выход трансаминаз из живчиков как показатель оплодотворяющей способности.// С.-х. биология. 1978, Т. 13. №1. с. 104-108.

37. Кононов В.П. Криопротективное действие плазмы на сперматозоидов хряков.// Доклады ВАСХНИЛ. 1984. - N6. -с. 29-31.

38. Кононов В.П. Багиров В.А. О некоторых причинах эмбриональной смертности у животных.// Доклады РАСХН. М. 1996 №6.

39. Кузнецова Л.В. Определение лютеинизирующего гормона методом Parlors в разные сезоны года. Ж. Лабораторное дело. 1971, №3, с. 137-141.

40. Кузнецова И.В., Кузнецов А.В., Сигаева В.А., Щит И.Ю. Использование сперматозоидов кролика в качестве вектора для чужеродной ДНК.// Биотехнология. 1993, т. 11-12, с. 2-5.

41. Кузнецова И.В. Методика лабораторной обработки сперматозоидов кролика с целью передачи экзогенной генетической информации в ооцитискусственной трансформации). MJ1. 15,347-93. ГосНИИ ПМ. Оболенск. 1993.

42. Курносов К.М. Действие плацентарных факторов на плод и новорожденное животное. Ж. Вестник сельскохозяйственной науки. М. 1965, №9 с. 65-72.

43. Курносов К.М. Морфологические этапы развития плаценты и чувствительные фазы развития эмбриогенеза овцы.// Кн. Органогенез сельскохозяйственных животных. М. 1971, с. 127-139.

44. Ладан П.Е. Скрытые аборты у свиней и некоторые элементы их патогеннеза и профилактики.// Труды Новочеркасского зооветеринарного ин-та им. 1-ой конной Армии, Ростов-на-Дону, 1949, в. 8, с. 27-76.

45. Лакин Б.Г. Биометрия. М. Высшая школа, изд. 4, 1990. 352 с.

46. Лепский Е.М., Лепская Р.И. Бывает ли у человека авитаминоз Е.// Сб. Введение в клинику авитаминоз и гиповитаминоз. Казань 1948, с. 161-166.

47. Лучко М.А., Тенькова О.В. Патогенность и вирулентность Actinomyces pyogenes для белых мышей.// Тез. докл. IV Всесоюзной конференции "Научные основы технологий промышленного производства ветеринарных биологических препаратов". М., 1991, с. 88 -89.

48. Магакян Ю.А. Некоторые вопросы управления эмбриональным развитием свиней. Тр. Армянского НИИЖа и ветеринарии, 1956, т.2, в.6, с. 117-121.

49. Маймоне Б. Питание и воспроизводство.// VI Международный конгресс по животноводству. М. 1957, с. 151-155.

50. Майоров Б.М., Лазарев В.М. А витаминный обмен у племенных быков в зависимости от сезона года, уровня кормления и применяемых добавок. Сб. науч. тр. Саратовского с-х. института. 1975, в.50, с. 24-32.

51. Мартыненко Н.А. Переживаемость фолликулярных яйцеклеток сельскохозяственных животных как показатель биологической разнокачественности гамет.// Сб. Физиология и биохимия сельскохозяйственных животных. 1967, в.6, с. 104-107.

52. Мартыненко Н.А. Эмбриональная смертность у сельскохозяйственных животных и ее предупреждение.// Киев. Урожай, 1971, с. 298, 300.

53. Мартыненко Н.А. Вариабельность содержания РНК в зигот свиней как возможная причина эмбриональной смертности.// Седьмой международный конгресс по размножению и искусственное осеменения животных. Мюнхен. 1972. т.2, с. 1131-1184.

54. Мартыненко Н.А. О некоторых причинах эмбриональной смертности сельскохозяйственных животных.// Тезисы докл. научно-производственной конф.: Теория и практика воспроизводства сельскохозяйственных животных. Харьков, 1972, с. 49-51.

55. Мережинский М.Ф., Кильчевская М.А. Место приложения действия жирорастворимых витаминов в клетке. Ж. Вопросы питания, 1968, №4, с. 20-25.

56. Милованов В.К., Соколовская И.И. Племенное дело и искусственное осеменение СХГИЗ, 1943.

57. Милованов В.К. Методы повышения оплодотворяемости и жизненности сельскохозяйственных животных. Ж. Животноводство, 1954, №5, с. 54-64.

58. Милованов В.К., Сергеев Н.И. Симультанное введение окситоцина -новый метод повышения эффективности искусственного осеменения свиней.// Животноводство, 1961, №11.

59. Милованов В.К. Проблема биологии воспроизведения и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных.// Труды ВИЖа, 1966, t.XXIX, с.288-303.

60. Милованов В.К. Интенсификация воспроизводства в молочном скотоводстве.//Животноводство 1982, с. 50-53.

61. Милованов В.К., Соколовская И.И. Биологические особенности эмбрионального питания и практика воспроизводства крупного рогатогоскота.// Ж. Животноводство 1975, №6, с. 45-54.

62. Милованов В.К., Соколовская И.И., Кононов В.П., Субботин А.Д., Бронская А.В. Связь биологии воспроизведения, селекции и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных.// Проблемы интенсификации животноводства, 1989 с. 73-81.

63. Мингазов Т.А. Обеспеченность овец каротином одно из важнейших условий предотвращения гибели зародышей.// Ж. Овцеводство, 1974,№3, с.33-34.

64. Мингазов Т.А. Значение витамина Е в предупреждении эмбриональной смертности животных. Труды Сев. НИИЖа, 1974, т.З, с. 180-192.

65. Мингазов Т.А. Профилактика эмбриональной смертности крупного рогатого скота тривитамином.// Ж. Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана, 1976, №3, стр. 79-82.

66. Мингазов Т.А. Влияние микробного каротина на репродуктивную функцию коров. Ж. Животноводство 1977, №4, с. 59-60.

67. Мингазов Т.А., Елисеев Н.П. Влияние витамина А на оплодотворяемость овец и коров в период синхронизованной охоты. Ж. Химия в сельском хозяйстве. 1978, t.XVI, №12, с. 39-41.

68. Мингазов Т.А. Пути повышения эмбриональной выживаемости у животных. Алма-Ата: Кайнар, 1989. с. 2.

69. Михайлов Н.Н. Профилактика малоплодия свиноматок. Ж. Ветеринария, 1966, с. 73.

70. Натансон А.О. Витамин А и А витаминная недостаточность.// Из-во Медгиз 1961, с. 277.

71. Оуэн Б. Эмбриональное и постэмбриональное питание поросят.// Ж. Сельское хозяйство за рубежом. Колос. 1970, №6, с. 13-16.

72. Павлов. Е.Ф. Резорбция эмбрионов в условиях многоплодной беременности. Автореферат канд. дисс., Л .,1948.

73. Павлов Е.Ф. Внутриутробная гибель зародышей у свиней.// Тр. ин-таживотноводства, Ереван, 1953,т.4,с. 103-122.

74. Пенионжкевич Э.Э. Изменение эмбриональной смертности кур в разных географических широтах.// Докл. АН. СССР. 1941, т.32, №8, с. 594595.

75. Петухова Е.А. Д — витаминное питание животных и птицы. Кн. Витамины в кормлении сельскохозяйственных животных и птиц. М. 1970, с. 80-123.

76. Покровский А.А., Коль И .Я., Натансон А.Д., Доронин П.П., Кравченко J1.B. Влияние жирорастворимых витаминов (ретинола и эргокальцеферола) на активность митохондрий. Кн. Современные проблемы биохимии дыхания и клиника. Иванова 1972, с. 60-67.

77. Попехина П.С., Левина Л.Н. Влияние витамина Е на рост и воспроизводительную функцию свиноматок.// Ж. Животноводство 1974,№10, с. 67-68.

78. Пыжов А.П., Литвинов Н.С., Сергеев И.И. Влияние генотипа производителей на жизнеспособность эмбрионов крупного рогатого скота.// Генетика, селекция и воспроизводство сельскохозяйственных животных. Сборник научных трудов. ВНИСГИЖ. М. 1994, с. 175-180.

79. Радченков В.П. Иммунорегуляция эмбрионального развития. Экспериментальное моделирование. // Докт. дисс., Дубровицы, 1993, с. 2133.

80. Радченков В.П. Разработка методов раннего определение беременности и повышение эмбриональной выживаемости у сельскохозяйственных животных.// Автореферат канд. дисс., Дубровицы, 1984, с. 19.

81. Радченков В.П. Роль антигенов плазмы спермы в нормальном и нарушенном пренатальном развитии.// Доклады ВАСХНИЛ, 1991, № 10, с. 49-50.

82. Рось И.Ф. Биологические основы витаминного кормления свиней. Киев 1969, с. 33-47.

83. Рысс С.М. Витамины.// JI. 1963, с. 376.

84. Савченко П.Е. Влияние условий кормления на генеративную функцию яичников и плодовитость свиноматок. Тр. НИИ свиноводства, 1958, в.20, с. 209-220.

85. Сааков B.C. Сезонная динамика и внутренняя взаимосвязь пигментов системы каротиноидов.// Доклад АН СССР. 1966, т. 171, с. 218-221.

86. Самборский П.Ф. К методике изучения плодовитости у свиней.// Тр. НИИ свиноводство. 1932, в.8, с. 111-123.

87. Сарычева М.М. Влияние витамина А на воспроизводительную функцию свиноматок. Ж. Животноводство 1968, №1, с. 39.

88. Светлов П.Г. Значение повреждений эмбрионов на ранних стадиях развития в патогенезе внутриутробных заболеваний.// Кн. Патофизиология внутриутробного развития. Медгиз, 1959, с. 114-123.

89. Светлов П.Г. Теория критических периодов развития и ее значение для понимания принципов действия среды на онтогенез.// Сб. Вопросы цитологии и общей физиологии. М.-Л., 1960, с. 360-369.

90. Свечин К.Б. Особенности эмбрионального роста и развития свиней, крупного рогатого скота и кроликов при разном типе и уровне кормления.// Тр. ин-та морфологии животных им. Северцова. 1957, в22, с. 74-92.

91. Сидоренко В.Д., Левентуль Л.Х. Исследования иммунологических свойств крови в практику животноводства. Сб. научн. тр., Омск, 1963, №8, с. 115-118.

92. Солсбери Г.У., Ван-Демарк Н.Л. Кн. Теория и практика искусственного осеменения коров в США. Под ред. В.К. Милованова. М. Колос, 1966.

93. Соколовская И.И. Некоторые причины и меры предотвращения эмбриональной смертности.// В кн.: Доклады совет, ученых к 5 Межд. конг. по биологии воспроизведения и искусственному осеменению с.-х. животных. М. 1964 с. 122 124.

94. Соколовская И.И., Бондаревская Л.Ф. Действие возраста гамет на выживаемость эмбрионов.// Доклады ВАСХНИЛ 1965 N1 с. 22-27.

95. Соколовская И.И., Бабичева Л.Я. Наступление стельности у коров и выживаемость эмбрионов в связи со сроками осеменения в период охоты. Сб. Науч. тр. ВИЖа, 1966, в. 3, стр. 137-144.

96. Соколовская И.И., Рымарь М.А., Бондаревская Л.Ф., Бабичева Л.Я., Островский Ф.М. Методы снижения эмбриональной смертности у свиней. Сб. трудов ВИЖа, т. XXIX, 1966, стр. 304-307.

97. Соколовская И.И. Некоторые причины и меры предотвращения эмбриональной смертности.// Сб. тр. Достижения науки и передового опыта по искусственному осеменению с/х. животных. Киев, 1966, с. 111— 125.

98. Соколовская И.И., Рымарь М.А., Бондаревская Л.Ф., Островский Ф.М. Метод снижения эмбриональной смертности у свиней.//Разведение и биология размножения животных.//М. 1968,с. 304-307.

99. Соколовская И.И. Иммунные реакции в воспроизведении сельскохозяйственных животных и результаты новых экспериментов. Сб. науч. тр. ВИЖа, 1977, ч.2, в.З, с. 3-16.

100. Соколовская И.И., Горбунова В.И., Субботин А.Д. Эндометрий коров как важнейшая структура гематогенитального бартера. Сб. науч. тр. ВИЖа, 1977, в.З, с. 85-93.

101. Солун А.С. А витаминозы и гиповитаминозы сельскохозяйственных животных и их профилактика.// Тр. Всесоюзной конф. по витаминам. М. — Л., 1940, с.253-256.

102. Спиричев В.Б. Витамин Д. Книга Витамины. 1974, с. 89-124.

103. Стефанюк П.С. Возрастная и сезонная изменчивость многоплодия свиней крупной белой английской породы.// Тр. Ворошиловского зооветеринарного ин-та. 1940, в.1, с. 30-60.

104. Струк М.И., Мельников М.Т. Обмен каротина у растущих свиней.// Сб. науч. тр. Донского с-х. института, 1974, т.1Х, в.2, с. 147-149.

105. Таутерис В.Р. Истинная оплодотворяемость коров и эмбриональная смертность в ранние периоды стельности.// Сб. науч. тр. ВИЖа, 1966, в. 3, с. 145-148.I

106. Трифонова А.Н. Критические периоды морфогенеза.// Ж. Успехи современной биологии. М. 1963, т.51, в.З (6), с. 381-402.

107. Труфанов А.Б. Биохимия витаминов и антивитаминов. 1972.

108. Хантер Р.Х.Ф. Физиология и технология воспроизводства домашних животных. М. Колос. 1984, с. 120.

109. Хабибулова М.А. Облучение маток с поросятами.// Ж. Свиноводство 1968, №11, с. 16.

110. Хоффман И. Синтетические витамины и оксикаротиноиды в кормлении животных. Ж. Сельское хозяйство за рубежом 1970, №10, с. 815.

111. Цыбулько В. Кормление и содержание супоросных и подсосных маток.// Ж. Свиноводство. 1974, №5, с. 45-46.

112. Черкес Л.А. Проблема гиповитаминозов.// Тр. Всесоюзной конф. по витаминам. М.-Л. 1940, с. 181-191.

113. Шавкун В.Е., Зинченко Л.Г., Скварук А.Г. Эмбриональная смертность у свиней.// Ж. Свиноводство, 1968, №11, с. 36.

114. Шварц С.С., Смирнов B.C., Кротова Л.Г. Некоторые закономерности накопления витамина А у ондатры в природных условиях.// Известия АН СССР, серия биологическая. 1957, в.З, с. 343-352.

115. Югина А.Д. Кормовая добавка АД2.// Ж. Животноводство 1967, №9, с. 33-34.

116. Яновский И.И, Ляхов В.В., Биккулов А.С. Снижение эмбриональной смертности. Ж. Животноводство, 1970, №5 с. 28.

117. Adams С.Е. Studies on prenatal mortality in the rabbit, Oryctolagus cuniculis: The amount and distribution of loss before and after implantation. J. Endocrinol., 1959, 19 №4, 325-344.

118. Adams C.E. Early embryonic mortality in the rabbit.- J. Reprod. Fertil., 1960. N 1, pp. 315-316.

119. Anderson L.L. Factors affecting ovulation rate pig. Pig Prodution., D.A. Cole et. al., 1972, pp. 325-365.

120. Arezzo F. Sea urchin sperm as a vector of foreign genetic information.// Cell Biol. Int. Rep. 1989. V. 13 (4). pp. 391-404.

121. Aylon A. A review of embryonic mortality in cattle // J. Reprod. Fertil. 1978 -v.54 p.483-491.

122. Baker G.N., Chapman A.B., Grummer R.H., Casida G.E., Some factors affecting litter size and fetus weight in purebred and reciprocal cross matings of Chester white and Poland China swine. J. Anim. Sci., 1958, 17, 612.

123. Baker G.N., Self H.G., Chapman A.B., Grummer R.H., Casida G.E., Interrelationships of factors affecting litter size and fetus weight and develop, emt in swine. J. Anim. Sci., 1956, 15, 1227.

124. Barrett G.R. Time of insemination and conception rates in dairy cows. Thesis, Univer. sity of Wisconsin. 1948.

125. Blandau R.J., Young W.C. The effects of delayed fertilization on thedevelopment of the guinea-pig. Num. Amer ,J. Anat. 64, 303. 1939.

126. Beer A.E., Billingham R.E. Histocompatibility gene polymorphism and maternal-fetal interaction // Transplant. Proc. 1977 - v.9 - N 2 - pp. 13931401.

127. Biancardi J., Belletti J.L. Aborto bovino associato a Corynobacterium pyogenes // Atti Societa Statiana della Scienze Veterinarie — 1982 v.35 - pp. 57-69.

128. Biolotti B. Aspetti della sindrome "aborto-mortalita neonatal" del bovino particolarmente legati alia scarsa igiene ambiental // Atti. Soc. Stal. Veter. Facuza 1985 - v.39 - pp.227-235.

129. Casida G.E. Fertilization Failure and Embryonic Death in Domectic Animals. Pregnancy Wastage. Charles C. Thomas, Spring-field, III, 1953.

130. Chang M.C. Development of bovine blastocyst with a note on implantation. Anat. Rec., 1952, pp. 113 143.

131. Day F.T. The veterinary clinician's approach to breeding problems in mares. 1957, Vet Rec. 69, p. 1258.

132. Day B.N., Anderson G.G., Emmerson M.A., Hazel G.N., Melampy R.M. Effect of estrogen and progesterone on early embryonic mortality in ovariectomized gilts. J. Anim. Sci., 18, 1959, pp. 607.

133. Descarpentis R. La srerile de la genisse: etude clinique et etio-pathogenique. // Bui. Soc. VeT. Prat. Fr. 1986. - v. 70. N. 2. - pp. 105-113.

134. Dutt R.H., Simpson E.C. Environmental temperature and fertility of Southdown rams in the breeding season. J. Anim. 1957, pp. 16, 136.

135. Dziuk P.I., Henshaw G. Fertility of boar semen-artificially inseminated following in vitro stroage. J. Anim. Sci., 1958, pp. 17, 554.

136. El-Sheikh A.S., Hulet C.V., Pope A.G., Casida G.E. The effect of level of feeding on the reproductive capacity of the ewe. J. Anim. Sci., 1955, pp. 16, 136.

137. Bigger B.G., Geizert F.D., Wettemann R.P., e.a. // J. Anim. Sci. 1987. - v. 64. -pp. 1512-11518.

138. Faulk W.P. Idiotypic spontaneous abortion. //AJRI. 1983. - v. 3. -N. 1 -pp. 48-49.

139. Foote W.D., Pope A.G., Chapman A.B., Casida G.E. Reproduction in the yearling ewe as affected by breed and sequence of feeding levels. I. Effects on ovulation rate and embryo survival. J. Anim. Sci., 1959, 18, pp. 453.

140. Fosgate O.T., Smith V.R. Prenatal mortality in the bovine between pregnancy diagnosis at 34-50 days: post insemination and parturition. J. Dairy Sci., 1954,37, pp. 1071.

141. Flach G., Jhonson M.H., Brande P.K. The tranmsition from matermal to embryonic control in the 2-cell mouse embryos. // EMBO J. 1982. v. 1. - pp. 681-686.

142. Gandolfi F., Lavitrano M., Camaioni A., Spadafora C., Si- racusa G., Lauria A.The use of sperm-mediated gene transfer for the generation of transgenic pigs // J. Rep- rod. Fert. Abstr. 1989, V. 4, pp. 21.

143. Gatenby P.A., Moore H., Cameron K. Treatment of recurrent spontaneous abortion by immunization with paternal lymphocytes: Correlates with outcome. //AJRI. 1989.-v. 19.-N. 1.-pp. 21-27.

144. Gooda G., Warnick A.C., Wallace H.D. Effect of energy level on reproductive performance of gilts. J. Anim. Sci., 1960, 19, pp. 643.

145. Gossett J.W., Sorensen A.M. The effect two levels of energy and seasons on reproductive phenomena in gilts. J.Anim. Sci., 1959, 18, pp. 40, 48.

146. Haines C.E., Warnick A.C., Wallace H.D. The effect of two levels of energy intake on reproductive phenomena in Duroa Jersey gilts. J. Anim Sci. 1959, 18, pp. 347.

147. Haines C.E., Warnick A.C., Wallace H.D. The effect of two levels of energy intake in gilts on puberty, ovulation, fertilization, embryonic survival and pigs born. J. Anim. Sci., 1955,14, pp. 1246.

148. Hammond J. On the same factor controlling fertility in domestic animals. // J.Agric. Sci. 1914. - N. 6 - pp.263-277.

149. Hansen P.J., Early A.D. Effect of heat stress on the establishment and maintenance of pregnancy in cattle. // Revista Brasil. Reprod. Anim. 1991. v. 9.-pp. 108-119.

150. Hawk H.W., Tyler W.J., Casida G.E. Effect of size and system of mating on estimated embryonic loss. J. Dairy Sci., 1955, 38, 420.

151. Hawk H.W., Wiltbank J.N., Kidder H.E., Casida G.E. Embryonic mortality between and 34 days post-breeding in cows of low fertility. J. Dairy Sci., 1955, 38, pp. 673.

152. Homb Т., Astrup H. Neues uber vitamin E in ernahrung des schweines., J. Schweiz Landwirtschaftliche Monatshefte., 1968, pp. 439-450.

153. Hochi S.-I., Ninomiya Т., Mizuno A., Honma M., Yuki A. Rate of exogenous DNA carried into mouse eggs by spermatozoa // Animal Biotech. 1990. V. 1(1). pp. 21-31.

154. Hulet C.V., Voigtlander H.P., Pope A.G., Casida G.E. The nature of early-season infertility in sheep. J. Anim. Sci., 1956, 15, pp. 607.

155. King J.W. Young G.B. Maternal influences on litter size in pigs. J.agric. Sci., 1957, 48, pp. 457.

156. Herrmann U., Morgenthum R. Zum Energieversorgungsnive- an tragender sauch. // Tierzucht.- 1982-v. 36. N. 2 - ss. 193-195.

157. Hulet C.V., Voigtlander H.P., Pope A.L. The nature of early season infertility in sheep.//J. Anim Sci. 1956. -V. 15. -N. 5. -pp. 607-616.

158. Hull P. Maternal-foetal incompatibility associated with the H-3 locus in the mouse. // Heredity. 1969. v. 24. -N 2. - pp. 59-61.

159. Hunter R.H.F. Chronological and cytological details of fertilization and early embryonic development in domestic pig. // Ins Scrof. Anat. Rev. 1974. -v. 12.-pp. 178-186.

160. Nucleoli and nucleolus organizer in early goat embryos. / Chartain I., Niara

161. J., King W.A. e.a. // Theriogenology 1986. - v. 25, - pp. 145-153.

162. Immunological consequences of vaccination against abortion in mice. / Chaouat G., Kolb J.P., Kiger N. et.al. // J. Immunol. 1985. - v. 143. N. 3. - pp. 1594-1598.

163. Jerrett J.V., McOrist S., Waddington J. Diagnostic studies of the fetus placenta and maternal blood 265 bovine abortions. // Cornell. Veterin. 1984. -v. 74. -N. 1. — pp.8-20.

164. King W.A. Nair A. Nucleolus organizer region and nucleoli in pre-attachment bovine embryos. // J. Reprod. Fert. 1988. - v. 82. - pp. 87-95.

165. Kuka A. Kerkime per faktored bakterore te deshtimeve ne gjedhe. // Bui. Shken. Zootek. Vet. 1986. - v. 4. - N. 2. - pp. 77-81.

166. Kovacevic K., Perkucin R., Jevecovic N. Pobolisanje reproductivinih sposobnosti krawa primenom dodatnih kolicina bakra. // Vet. Glas. 1992. — v. 36.-N. З.-рр. 201-205.

167. Laing S.A. Infertility in cattle associated with death at early stages after fertilization. J. сотр. Path. 59, 97. 1949.

168. Lavitrano M., Camaioni A., Fazio V.M., Dolci S., Farace M.G., Spadafora C. Sperm cells as vectors for introducing foreign DNA into eggs: genetic transformation of mice // Cell. 1989. V. 57. pp. 717-723.

169. Lerner E.H., Mayer D.T., Lasley J.F. Early embryonic mortality in strain crossed gilts. Rec Bull. Mo agric. Exp. Sta, 1957, No. 629.

170. Looke G.W. Immunology and immunopathology of human foetal-maternal interaction. // Elsevier (North-Holland). 1978. - p. 328.

171. Lottammer K.-H. Futterungsbedingte ursachen von fruchbarneitsstorungen bei milehrindern und gegenmabnahnen. // Muhl. Mischfut. 1982. - v. 119.— N. 20. - ss. 282-285.

172. Mares S.E., Menge A.C., Tyler W.J., Casida G.E. Some sources of variation in conception rate and pregnancy loss in porous Holstein cows. J.Anim. Sci., 1958, 17, 1217.

173. Melton A.A., Berry R.O., Butler O.D. The interval between the time of ovulation and attachment of the bovine embryo. J.Anim Sci., 1951, 10, 993.

174. Mclntyre J.A., Coulam C.B., Faulk W.P. Reccurent spontaneous abortion. //AJRI- 1989. V.21.-N. 3/4.-pp. 100-104.

175. Momclilov В., Oghyana R.J. Immunological investigation of serum proteins in relation to normal and pathological pregnancy. // J. Immunol., Immunopharmacol. 1992. - v. 12. N. 2. - p. 119.

176. Palm J. Maternal-foetal histocompatibility in rats. // Lancer Res. 1974. — v. 34. - N. 8. - pp. 2061-2065.

177. Paternal leucocyte immunization in habitual abortions. // Carp H.J.A., Toder V., Gazit E. e.a. // Immunol Reprod. Colloq. INSERM, Paris. 1987. -pp.454.

178. Perry I.S. Fecundity and embryonic mortality in pigs. J. Embryol. Exp. Morph., 1954, N2, pp. 308.

179. Perry I.S. The incidence of embryonic mortality as a characteristic of the individual sow. J/ Reprod. Fertil., 1960,1, 71.

180. Perry I.S. Observations on reproduction in a pedigree herd of Garge White pigs. J. agric. Sci., 1956. 47, 332.

181. Perry I.S. Ovulation and embryonic mortality in the pigs. Int. J. Fertil. 1959, 4, 142.

182. Perez A., Solano R., Castro F.O., Lleonart R., de Armas R., Martinez R., Aquilar A., Herrera L., de la Fuente J. Sperm cells mediated gene transfer in cattle // Biotecno- logia Aplicada. 1991. V. 8(1). pp. 90-94.

183. Polakovski K.L., Kopta M. Seminal plasma In: Biochemistry of Mammalian Reproduction. /Egs Zanefeld L.J.D., Chatterton R.T., N.-Y. :J.Wiley and Sons, 1982. pp. 89-117.

184. Plagemann O., Kruender R. Untersuchung uber nieht virusbedingte Abortusunsachen beim Schafin Nordbauern. // Praktische Tierarzt. 1984. - v. 65.-N. 10.-pp. 848-856.

185. Pomeroy R.W. Prenatal mortality in an inbred strain of Large White pigs., Rep. 2 int. Congr. Physiol. Patal. Anim. Reprod. Artif. Insem, 1952.

186. Putnye D.J., McLayer J.R. Heat stress-induced alteration in the synthesis and secretion of proteins and prostaglandins by cultured bovine conceptuses and uterine endometrium.//Biol. Reprod. 1988. - v. 39. -N. 3. - pp. 717-728.

187. Putney D.J., Drost M., Thatcher W.W. Embryonic development in superovulated dairy cattle exposed to elevated ambient temperature between day 1 to 7 post insenimation. // Theriogenol. 1988. - v. 30. - pp. 195-200.

188. King J.W.B., Young G.B. Maternal influences on litter size in pigs., L. Agric. Sci., 1957, 48, 4, pp. 457-463.

189. Robertson C.G., Grummer R.H., Casida G.E., Chapman A.B. Age of puberty and related phenomena in outbred Chester White and Poland China gilts. J.Anim. Sci. 1951, 10, 647.

190. Roche J.F. Early embryo loss in cattle. // In: Current therapy in theriogenology (Marrow D.A., Sannder W.B. eds.). Company 1986. pp.200202.

191. Roberts R.M. A novel groop of interferon associated with the early ovine and bovine embryo. // J. Interferon Res. 1989. - v. 9. -N. 3. - pp.373-378.

192. Robinson J.J. Nutrition and embryo loss in farm animals. // In: Embryonic mortality in farm animals (Sreeman J.M., Diskin M.J. eds.). Gent. - Belgium. - 1986.-pp. 235-248.

193. Ronal D.C., Fulvico Z.C. Efito de diferents niveis de proteina edo intervalo entre partos, sobre a produtival de coelhas eriadeiras. // Rev. Soc. Brasil. Zootechn.- 1981,-v. 10.-N. 2.-pp. 351-360.

194. Self H.G., Grummer R.H., Casida G.E. The effects of various sequences of full and limited feeding on the reproductive phenomena in Chester White and Poland China gilts. J. Anim. Sci., 1955, 14,573.

195. Sibbald J.R. The Relationship between the blood plasma vitamin A levels of cows and their pigs, J. Anim. Sci, 1956, 15, 2, pp. 400-407.

196. Scott J. Immunologic aspects of recurrent spontaneous abortion. // Fertil. Steriol. 1982. - v. 38. N. 3-4. - pp. 301-302.

197. Spencer M.J., Chery J. D. Antibody responses following rubella immunization analyzed by HLA and ABO types. // Immunogen. 1977. -v. 4. -pp. 365-372.

198. Sungi Т., Makino Т., Maruyama T. A possible mechanism of immunotherapy for patients with recurrent spontaneous abortions. /AJRI. -1991, V. 25, N. 4, pp. 186-189.

199. Tanabe T.V., Casida G.E. The Nature of Reproductive Tailures in Cows of low Fertility. J. Dairy Sci., 1949, pp. 32, 237.

200. Tanabe T.V., Almcuist J.O., Some causes of infertility in dairy heifers. J. Dairy Sci., 1953, pp. 36, 586.

201. Thaler C.J., Mclntyre J.A. Fetal wastage and nonrecognition in human pregnancy. // In: Reproductive Immunology (Sannders W.B. ed.). Company. -1989.-pp. 79-102.

202. Thompson S.W. Role of carotenes and Vitamin A in Animal Feeding Worid Review of Nutrition and Dietetics., 1975, pp. 21.

203. Umbayashi Y. Significance of blocking factors in immunotherapy for patient with habitual abortion of unknown etiology. // Nagaya Med. 1988. — v.32. - N. 2.-pp. 127-135.

204. Watson E.D., Carroll J., Chaykin S. Reproduction in mice. The fate of spermatozoa involved in fertization. // Gamete Res. 1983. - v.7. — N. 1. — pp. 75-84.

205. Waldorf D.P. The relationship of certain factors in the maternal environment to fetal growth in swine. Diss. Abstr. Univ. Wis., 1957, 17, pp. 2366.

206. Wegmann T.G. Maternal T-cell promote placental growth and prevent spontaneous abortion. // Immunol. Lett. 1988. - v. 17. N. 4. - pp. 297-302.

207. Wolfeason D., Blum O. Embryonic development, conception rate, ovarianfunction and structure in pregnant rabbits heat-stressed before or during implantation. // Anim. Reprod. Sci. 1988. - v. 17. - N. 3-4. - pp.259-270.

208. Wilson R.F., Nalbandov A.V., Krider I.G. Impaired fertility in female swine. J. Anim. Sci., 1949, 8, 558.

209. Winters G.M., Green W.W., Comstock R.E. Prenatal Development of the Bovine. Minn. Agr. Expt. Sta., Technical Bull., 1942.