Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эколого-биологическое обоснование скрининга грибов рода Trichoderma для получения и использования биопрепаратов на растительных субстратах

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Эколого-биологическое обоснование скрининга грибов рода Trichoderma для получения и использования биопрепаратов на растительных субстратах"

На правах рукописи

Заика Надежда Алексеевна

эколого-биологическое обоснование скрининга грибов рода ттснотямл ДЛЯ получения и использования биопрепаратов на растительных субстратах

03.00.16-экология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Красноярск - 2006

Работа выполнена на кафедре химической технологии древесины и биотехнологии Сибирского государственного технологического университета

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Громовых Татьяна Ильинична

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Гаевский Николай Александрович кандидат биологических наук Пашенова Наталья Вениаминовна

Ведущая организация:

«Новосибирский государственный аграрный университет»

Защита диссертации состоится « 28 » апреля 2006 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета К 212.099.02. при Красноярском государственном университете по адресу: 660041, г. Красноярск, пр. Свободный, 79, Красноярский государственный университет, биологический факультет. Факс (3912)448626, Е-тай radast@lan.krasu.ru

С диссертацией можно ознакомится в научной библиотеке Красноярского государственного университета

Автореферат разослан «¿5» марта 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент Г.Н. Скопцова

аооса ев гь

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Традиционным методом борьбы с возбудителями инфекционных болезней злаков и сеянцев хвойных растений является обработка почвы, семян и растений фунгицидами. Однако химический метод защиты давно критикуется как небезопасный для окружающей среды. Ядохимикаты не обладают избирательным действием: при обработке ими гибнет эпифитная и сапрофитная мшсробиота и микоризообразующие грибы.

В общей системе защитных мероприятий большая роль отводится биологическим средствам защиты растений, в основе которых лежат природные, естественные явления сверхпаразитизма и антагонизма между сапрофитной, паразитной и фитопатогенной микрофлорой. Использование этих регуляторных механизмов направлено, с одной стороны, на создание благоприятных условий для воспроизводства местных микроорганизмов-антагонистов, с другой, - на регуляцию численности возбудителей заболеваний путем интродукции антагонистов-супрессоров. Успех использования биологического метода защиты растений зависит от подбора высокоэффективных штаммов биологических агентов и от возможности получения биопрепаратов на их основе.

В настоящее время в лесной зоне России продолжается накопление отходов лесопромышленного комплекса, что очевидно, ухудшает экологическую обстановку в этих районах страны. Проблема ресурсов доступного и дешевого сырья для промышленной биотехнологии остается весьма актуальной. Расширение сырьевой базы для производства биопрепаратов за счет использования растительных отходов техногенной сферы решает проблему их утилизации и открывает путь создания биотехнологии биологических пестицидов на их основе.

Доминирующее положение в успешном регулировании численности популяций фитопатогенов и получении противогрибных препаратов занимают виды ТИсИос1егта яр., обладающие высокой антагонистической и гиперпаразитической активностью. В связи с широким применением грибов рода ТпсИос1егта накоплен фактический материал, касающийся технологии получения и использования биопрепаратов на основе растительных субстратов. При внесении таких биопрепаратов в сложившийся биоценоз может изменяться структура микробиоты, оказывающая существенное влияние на ход процесса разложения органического субстрата. Остается не изученным вопрос о влиянии растительных субстратов на деятельность фитопатогенов в почве.

Проведенный анализ публикаций по вопросам биологии, культивирования и практического применения грибов рода ТпсИос1егта показал, что исследования по изучению экологических аспектов проблемы интродукции агентов биоконтроля на растительных субстратах в различные биоценозы Сибирского региона отсутсттт#0,с.ч»а цдевд^тря ^¡^вованием для

предпринятого исследования. | библиотека |

Цель работы - повышение э кологической эффективности биологического контроля возбудителей болезней растений путем скрининга перспективных штаммов грибов рода Trichoderma и получения биопестицидов на растительных субстратах.

Задачи исследований:

1. Исследовать биологические свойства и произвести скрининг антагонистически активных и продуктивных штаммов рода Trichoderma.

2. Подобрать растительные субстраты для твердофазной ферментации с целью получения биопрепаратов защиты растений.

3. Испытать опытные партии различных форм биопрепаратов, созданных на оптимально подобранных субстратах, в лесном питомнике.

4. Провести сравнительную оценку действия препаратов на структуру и динамику численности микробных популяций в различных биоценозах.

Защищаемые положения:

1. Основные параметры для скрининга штаммов рода Trichoderma при твердофазной ферментации на растительных субстратах.

2. Внесение растительных субстратов необходимо для создания дополнительной экологической ниши биологически активных штаммов.

3. Способность колонизировать растительные субстраты грибами родов Fusarium я Aliernaria сдерживается при совместном внесении штаммов-антагонистов рода Trichoderma

4. Повышение эффективности биоконгроля достигается путем использования в защите растений от болезней не одного, а нескольких биологических агентов.

5. Действие биологических препаратов на основе грибов рода Trichoderma на микобиоту почвы.

Научная новизна. Показано, что основными критериями скрининга штаммов грибов рода Trichoderma являются высокая биологическая продуктивность при ферментации и длительная сохраняемость на растительных субстратах.

Использование биопрепаратов на растительных субстратах позволяет биологическим агентам более длительный период сохраняться в почвенной микобиоте и повышает эффективность биологического контроля.

Показана более высокая эффективность использования нескольких биологических агентов в защите растений от болезней.

Практическая значимость. Отобраны штаммы МГ-97/6 Trichoderma asperellum Samuels ВКПМ F-765 и М 99/5 Trichoderma harzianum Rifei, перспективные для создания биопестицидов путем твердофазной ферментации

с высоким титром пропагул биологического агента. Предложены регламенты культивирования штаммов на коре пихты с различными методами обработки.

Разработаны рекомендации доз внесения биологических препаратов в почву лесопитомника.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы представлены на Межвузовском научном фестивале студентов, аспирантов и молодых ученых «Молодежь и наука - третье тысячелетие» (Красноярск, 2003); Межрегиональной научно-практической конференции «Эко лого-экономические проблемы региональных товарных рынков» (Красноярск, 2004); Всероссийской научно-практической конференции «Лесной и химический комплексы - проблемы и решения (экологические аспекты)» (Красноярск.2004); Всероссийской научно-практической конференции «Непрерывное экологическое образование и экологические проблемы» (Красноярск, 2004); Юбилейной конференции, посвященной 85-летию кафедры микологии и альгологии МГУ им. М В.Ломоносова «Микология и альгология -2004» (Москва, 2004); Всероссийской научно-практической конференции «Лесной и химический комплексы - проблемы и решения (экологические аспекты)» (КрасноярскД005); Всероссийской научно-практической конференции «Непрерывное экологическое образование и экологические проблемы» (Красноярск, 2005); Международной конференции, посвященной 100-летию начала работы проф. Бондарцева A.C. в ботаническом институте им. Комарова В.Л. РАН «Грибы в природных и антропогенных экосистемах» (Санкт-Петербург, 2005); Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (БарнаулД005); Региональной научно-практической конференции «Аграрная наука на рубеже веков» (Красноярск, 2005).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 14 работ.

Структура и объем диссертация. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, методической части, четырех глав экспериментальной части, выводов, списка использованной литературы и приложения. Материал изложен на 150 страницах и содержит 18 таблиц, 30 рисунков. Список литературы включает 183 наименований, из которых 61 на иностранных языках.

Благодарности. Автор выражает глубокую благодарность научному руководителю д б н., профессору Т.И. Громовых, заведущей отделом оценки селекционного материала Красноярского научно-исследовательского института сельского хозяйства, к.б.н. Н.В. Зобовой, к.т.н., доценту Сибирского государственного технологического института В.М. Ушановой за консультации и обсуждение полученных результатов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность темы исследований, изложены цели и задачи работы, защищаемые положения, показана научная новизна и практическая ценность результатов работы.

Глава 1 Обзор литературы

Глава включает обзор научной информации по характеристике грибов рода Trichoderma, их культивированию и практическому применению. Особое внимание уделено вопросу использования растительных субстратов для производства биопрепаратов. Рассмотрена роль грибов рода Trichoderma в защите растений.

Глава 2

Объекты и методы исследования

Экспериментальная часть работы выполнена автором с 2002 по 2005 год. Для выполнения исследований были использованы 10 штаммов гербарной коллекции и музея культур Центра биотехнологии и микологии Сибирского государственного технологического университета, выделенные из целинных и окультуренных почв лесных питомников Средней Сибири в период с 1997 по 2002 годы: МГ-97/6, О - 97, 01 - 00, К - 12, М 99/5, Th 4, МО, МК, 30, 119-95. Основным критерием отбора штаммов коллекции была их высокая скорость роста и продуктивность спор на агаровых средах.

Идентификацию грибов рода Trichoderma проводили на основании исследования физиолого-морфологических и культуральных особенностей выделенных изолятов методами, предложенными М. Rifai (1969) и J. Bisset! (1991), G. Samuels (1996), а также рекомендаций, разработанных на кафедре микологии и альгологии Московского государственного университета. Наиболее ценный видовой признак - очертание и размеры конидиеспор -выявляли с помощью сканирующего электронного микроскопа в растровом режиме (РЭМ). Изучение гиперпаразигической и антибиотической активности штаммов рода Trichoderma в отношении фитопатогенов проводили в лабораторных условиях, используя метод посева культур на агаризованную среду перпендикулярным штрихом и метод лунок (Егоров, 1994). Экспериментальные исследования микопаразигных свойств осуществляли методом двойных культур (Рудаков, 1981).

Целлюлолитическую активность грибов рода Trichoderma исследовали методом Хагердона-Иенсена (Билай, 1977). Тест на фенолоксидазную активность исследуемых штаммов определяли по реакции Бавендамма на агаризованной среде с танином (Билай, 1982). Для культивирования штаммов растительное сырье измельчали, увлажняли до 70 %, вносили минеральное питание (NH4NO3) из расчета 10 г/кг сухого субстрата, помещали в чашки

Петри и подвергали стерилизации. Далее субстраты инокулировали споровой суспензией грибов из расчета МО5 спор/г субстрата. После культивирования исследуемых штаммов грибов подсчитывали тигр методом разведений в камере Горяева. Полевые испытания биопрепаратов на основе грибов рода Trichoderma проводили в лесном питомнике, расположенном на территории Мининского опытного лесного хозяйства Красноярского края

Экологическую эффективность действия биопестицидов оценивали в динамике по месяцам, для чего образцы почвы ризосферы отбирали по методу Д.Г.Звягинцева (1990) и Й. Сэги (1983). Бактерии, использующие органические формы азота, учитывали на мясопегггонном агаре (МПА), бактерии и актиномицеты, использующие минеральные формы азота - на крахмало-аммиачной среде (КАА), олигонитрофилы и аэробные азотфиксаторы - на среде Эшби. Численность сапротрофных микромицетов выявляли методом посева на среду Чапека и сусло-агар. Динамику численности микроорганизмов, выделяемых на плотных питательных средах, описывали путем подсчета общего числа выросших колоний. Учет действия внесенных агентов биологического контроля проводили, сравнивая динамику численности всех исследуемых физиологических групп микроорганизмов.

Глава 3

Биологические свойства сибирских штаммов грибов рода Trichoderma

На основании проведенных исследований установлено, что изучаемые нами штаммы грибов рода Trichoderma относятся к 4 видам: Trichoderma asperellum Samuels, Trichoderma harzianum Rifei, Trichoderma citrinoviride Bissett, Trichoderma hamatum (Bon.) Bain.

Для отбора антагонистически активных штаммов в качестве тест-объектов использовали 5 штаммов рода Fusarium и 2 штамма из родов Alternaría, Biporalis. Изучение антибиотической и гиперпаразитической активности штаммов грибов рода Trichoderma в отношении фигопатогенных микромицетов позволило установить, что наиболее перспективными штаммами- антагонистами возбудителей инфекционного полегания сеянцев хвойных и корневых гнилей злаковых являются МГ 97/6 Trichoderma asperellum и М 99/5 Trichoderma harzianum. Данные штаммы проявляли высокую гиперпаразитическую, а также максимальную антибиотическую активность (табл. 1).

На основе проведенного сравнительного анализа антибиотической и гиперпаразитической активности различных штаммов была выявлена внутривидовая дифференциация у видов Trichoderma asperellum, Trichoderma harzianum, Trichoderma citrmoviridae.

Для подбора штаммов грибов рода Trichoderma при выращивании на растительных субстратах, где основными компонентами являются клетчатка и

лигнин, наличие целлюлолитической и фенолоксидазной активности является главным физиологическим свойством для получения биопрепаратов.

Исследования показали, что по количеству образовавшейся при гидролизе карбоксиметилцеллюлозы глюкозы, наибольшей целлюлолитической активностью обладают аборигенные штаммы МО ТИс}гос1егта ЬатаШт, 119/85 ТНсИо(1егта зр., М 99/5 Т. Иаг21агшт. Наименьшую целлюлолитическую активность проявили штаммы МК и ТН4 вида Т. аМгкмгМае.

Таблица 1 - Антагонистическая активность метаболитов штаммов вида

ТпсИ<х1егта азрегеИит

Фитопатоген Антагонистическая активность

Антибиотическая активность (диаметр зоны подавления роста, М±щ, мм) Гиперпаразитичсская активность (зона колонизации патогена, баллы (Б,)

Штамм Штамм

МГ97/6 К12 01-00 30 МГ 97/6 К-12 0100 30

Р. МшщкИохрогит 31,43±0,24 20,93±0Д0 18,03±0,1б 15.23±0,12 3 4 2 2

РзрогоМсМоккз 29,53±0,24 23,07±0,07 17,17±0,09 13,53±0,17 3 4 2 2

Р.топИуЬгте 30,77±0,5 18,63±0,31 18,70±0,15 13,27±0,18 3 4 2 2

РзатЬисЬшт 26,57±0,35 18,63±0Д0 1б,83±0,18 14,77±0,15 3 4 2 2

Р. пЫйе 25,10±0,12 2033±0Д6 18^0±0,17 14ДО±ОД7 3 4 2 2

А. аМета/а ЗО.бО±ОДЗ 19,47±0,18 19,13±0,18 15ДЗ±0,18 3 4 2 2

В.аизНггИегЫз 5,17±0,17 22Д)±0,15 19,30±0Д9 15,50±0,23 3 4 2 2

Не менее важным показателем подбора штаммов для ферментации на растительных субстратах является их способность окислять литии и лш шшоподобные вещества. Однако существуют немногочисленные работы, которые доказывают, что ряд штаммов грибов рода Тпс1юс1егта способен окислять фенольные соединения (Садыкова, 2003). В наших исследованиях на основании теста Бавендамма на агаризованной среде с танином установлено наличие фенолоксидазной активности у штаммов М 99/5 ТНсИосЛегта Иатоошт, МГ 97/6 Тпс!гос1егта азрегеИит, ТН4 ТпсИос1егта сИгтстгШае, 0100 ТпсИоЛегта азрегеИит, 30 ТпсИо<Зегта азрегеИит, 119-85 ТггсИо<1егта зр. Штаммы 0-97 ТпсНос1егта Иагг^апит, МК Тг1скос!егта сНг1пттс1ае, К 12 Тпс1гос!егта азрегеИит, МО ТпсИос1егта ИатаШт не растут на питательной среде с танином и не обладают фенолоксидазной активностью.

Глава 4

Биологическая продуктивность грибов рода Trlckoderma при

твердофазном культивировании на растительных субстратах

Для подбора дешевых растительных субстратов в производстве биопрепаратов нами была проведена оценка способности утилизации отходов деревоперерабатывающей и гидролизной промышленности исследуемыми сибирскими штаммами грибов рода Trichoderma. В качестве субстратов использовали: гидролизный лигнин, кору ели, кору пихты, кору лиственницы, древесную зелень пихты, смесь отходов окорки ЦБК, твердый остаток коры ели после углекислотой экстракции, твердый остаток коры ели после водной экстракции, твердый остаток коры ели после спиртовой экстракции, твердый остаток коры ели после ушекислотной и спиртовой экстракции, твердый остаток коры ели после углекислотной и водной экстракции, твердый остаток коры пихты после углекислотой экстракции, твердый остаток коры пихты после водной экстракции, твердый остаток коры пихты после спиртовой экстракции, твердый остаток коры пихты после углекислотной и спиртовой экстракции, твердый остаток коры пихты после углекислотной и водной экстракции, смесь отходов окорки ЦБК после углекислотной экстракции, древесная зелень пихты после углекислотной экстракции, древесную зелень пихты после пихтоварки. Для сравнения продуктивности спорообразования использовали пшено.

Установлено, что все изучаемые штаммы грибов рода Trichoderma способны расти на исследуемых растительных отходах техногенной сферы, однако, их продуктивность на разных субстратах была неодинаковой и варьировала. Самый высокий выход спор при культивировании на исходной коре хвойных пород отмечен у штаммов М 99/5 Trichoderma harzianum и МГ 97/6 Trichoderma aspe re Пит на коре пихты и составил 3,5710я г1 и 3,09 108 г1 соответственно. Анализ продуктивности штаммов при культивировании на растительных отходах после обработок показал, что наибольшее количество спор образуется при росте штаммов М 99/5 Trichoderma harzianum и МГ 97/6 Trichoderma asperellum на твердом остатке коры пихты после углекислотной и спиртовой экстракции, а также твердом остатке коры пихты после углекислотной экстракции. Из приведенных данных исследования видно, что сибирские штаммы грибов рода Trichoderma видов Trichoderma asperellum Samuels, Trichoderma harzianum Rifai, Trichoderma citrmoviride Bissett, Trichoderma hamatum (Boa.) Bain. способны утилизировать отходы, содержащие лигноцеллюлозный комплекс соединений.

Оценка жизнеспособности биопрепарата, полученного путем твердофазной ферментации штаммов М 99/5 Trichoderma harzianum и МГ 97/6 Trichoderma asperellum на коре пихты убедительно показала, что споры на данном растительном субстрате могут сохранять свою жизнеспособность в течение 12 месяцев на 32 и 41% соответственно.

При внесении биопрепаратов, полученных на растительных субстратах, в почву вместе с агентами биозащиты попадают и дополнительные источники углеродного питания для сапротрофов. В то же время отсутствуют данные о том, как влияет внесение растительных субстратов на рост фигопатогенов, и не будут ли дополнительные питательные вещества стимулировать накопление значительного количества пропагул фитопатотенов и способствовать созданию высокого инфекционного фона в почве. Исходя из вышесказанного, представляло интерес изучить способность роста фигопатогенов и их взаимодействие с грибами рода Trichoderma при твердофазной ферментации. Для чего отобранный штамм МГ 97/6 Trichoderma asperellum культивировали на коре пихты совместно со штаммами фитопатогенных микромицетов видов Fusarium chlamydosporum, Fusarium sporotrichioides, Fusartum moniliforme, Alternaría alternata в лабораторных условиях.

Анализ показал, что исследуемые фитопатогены способны расти и продуцировать конидии на коре пихты При совместном культивировании антагонист МГ 97/6 Trichoderma asperellum временно сдерживал рост фигопатогенов, а при дальнейшей твердофазной ферментации на коре пихты совсем подавлял их развитие (рис. 1).

В Trichoderma asperellum □ Alternaría alte mata □ Fusarkjmsporotrichioidee Ш Fusarium chtamydoaponjm Ш Fusarium monMforme

Рис. 1. Численность пропагул штамма МГ 97/6 Trichoderma asperellum и фигопатогенов при культивировании на коре пихты

1 - культивирование в монокультуре; 2- МГ 97/6 Trichoderma asperellum + Alternaría alternata; 3 - МГ 97/6 Trichoderma asperellum + F. sporotrichioides', 4 -МГ 97/6 Trichoderma asperellum + F. chlamydosporum; 5 - МГ 97/6 Trichoderma asperellum + F. moniliforme.

Проведенные исследования дают основание полагать, что внесение штамма-антагониста в растительный субстрат совместно с фитопатогевами препятствует росту последних. Внесение растительных субстратов без штамма МГ97/6 Trichoderma asperellum нецелесообразно, так как это может привести к повышению численности фитопатогенов и вызвать эпифиготии у растений.

Глава 5

Оценка экологической эффективности использования биопрепаратов на основе штаммов грибов рода Trichoderma в лесном питомнике

Опытные партии биопрепаратов, полученных путем твердофазной ферментации штамма МГ 97/6 Trichoderma asperellum на коре пихты и на коре пихты после углекислотой экстракции, а также комплексный препарат на коре пихты в состав которого вошли пггаммы МГ-97/6 Trichoderma asperellum, М 99/5 Trichoderma harziamim, К-12 Trichoderma asperellum, MO Trichoderma hamatum, были испытаны на посевах Picea obovata L. Результаты исследований показали, что при обработке семян и посевов Picea obovata L. биологическими препаратами увеличивается выход здоровых сеянцев (рис. 2).

1 2 3 4 5

Варианты опыта

Рис. 2. Выход сеянцев Picea obovata L. на 1 м погонный в лесном питомнике при обработке посевов биопрепаратами

1 - контроль, 2 - споровый триходермин, 3 - триходермин на коре пихты, 4 -триходермин на коре пихты после угяекислотной экстракции, 5 -комбинированный биопрепарат

Выход здоровых сеянцев Picea obovata L. в сравнении с контролем достоверно увеличился при внесении чистого спорового биопрепарата триходермин-с в 1,6 раза; триходермина, полученного на коре пихты - в 4 раза; триходермина, полученного на коре пихты после углекислотой экстракции - в 3,4 раза. Наибольший выход сеянцев получен в варианте с использованием комплексного препарата на основе 4 штаммов МГ-97/6 Trichoderma asperellum, М 99/5 Trichoderma harzianum, К-12 Trichoderma asperellum, MO Trichoderma hamatum. Выход сеянцев в этом варианте составил 327±20 штук на 1 м погонный, что в 8,5 раза выше, чем в контрольном варианте.

Интродукция в сообщество сильных конкурентов может влиять не только на паразитов растений, но и на сапрофитную биоту и привести к нарушению равновесия в биоценозе. В связи с этим в наших опытах оценивали влияние биопрепаратов, полученных путем твердофазной ферментации грибов рода Trichoderma, на микробиоту ризосферы сеянцев ели сибирской.

Общая тенденция динамики численности почвенных микромицетов, составляющих важную часть микробиоты и являющейся мишенью грибов рода Trichoderma, в контроле сохраняется во всех опытных вариантах. Максимум численности грибов в ризосфере сеянцев как в опытных, так и в контрольном варианте приходится на 60 сутки вегетации. К концу вегетации численность грибов во всех вариантах обработки сопоставима с контролем (рис. 3).

2 е

(В о -Г i.

1|!

х Я- 2

4i

а-|0

О 30 60 90

Время вегетации, суг

-1---2-3--4---5

Рис. 3. Динамика численности микромицетов ризосферы сеянцев Picea obovata L.

1- контроль; 2 - споровый биопрепарат; 3 - биопрепарат, полученный на коре; 4 - биопрепарат, полученный на коре после экстракции сжиженной углекислотой; 5- комплексный биопрепарат.

Внесение всех форм биопрепаратов, как на растительных остатках, так и в чистом виде, приводит к увеличению биологической активности почвы. Антагонистически активные штаммы рода Trichoderma полностью вытесняют грибы рода Altemaria. Численность грибов рода Fusarium снижается в 1,5-4 раза. Однако различия в численности и структуре микробиоты при внесении разных видов биопрепаратов недостоверны.

Согласно полученным результатам, было установлено, что при внесении биопрепаратов происходит изменение численности аммонифицирующих бактерий, актиномицетов и диазотрофов. Численность аммонификаторов во всех опытных вариантах в сравнении с контролем достоверно увеличилась в 1,5-2,8 раза, актиномицетов - в 1,4-1,8 раза, диазотрофов - в 1,3-1,5 раза.

Глава б

Влияние антагонистически активных штаммов грибов рода Trichoderma на рост и развитие злаков в лабораторных условиях

Для оценки возможности использования сибирских штаммов грибов рода Trichoderma в борьбе с возбудителями инфекционных заболеваний зерновых культур были проведены эксперименты по изучению антагонистической активности, на основе которых были отобраны перспективные штаммы МГ 97/6 Trichoderma asperellum и М99/5 Trichoderma harzianum.

Использование микроорганизмов в защите растений предусматривает оценку их фитотоксических свойств. Проверку действия метаболитов штаммов М99/5 Trichoderma harziamim и МГ 97/6 Trichoderma asperellum на энергию прорастания и уровень зараженности семян проводили для сорта ярового ячменя Красноярский 80 и сорта яровой пшеницы Омская 32. Обработка семян ярового ячменя сорта Красноярский 80 метаболитами штамма М99/5 Trichoderma harzianum стимулировала интенсивность их прорастания на 16% больше, чем в контроле, при этом в 6 раз снижался уровень зараженности семян фитопатогенами. При обработке метаболитами данного штамма семян пшеницы сорта Омская 32 наблюдали увеличение интенсивности энергии прорастания семян на 20% и снижение уровня зараженности семян фитопатогенами в 11 раз в сравнении с контрольным вариантом. При обработке семян ярового ячменя и пшеницы метаболитами штамма МГ 97/6 Trichoderma asperellum уровень зараженности семян снижался в 3 раза для сорта пшеницы Омская 3, в 17 раз для семян ячменя сорта Красноярский 80 в сравнении с контролем. Энергия прорастания семян увеличивалась на 21% для сорта яровой пшеницы Омская 32 и на 15% для сорта ярового ячменя Красноярский 80.

Оценка действия предпосевной обработки семян ячменя различных сортов метаболитами штаммов М99/5 Trichoderma harzianum и МГ 97/6 Trichoderma asperellum на ростовые процессы растения, проведенная методом рулонов, показала, что метаболиты пгтамма М99/5 Trichoderma harzianum не оказывали достоверное влияние на длину побега растения. Масса побега

достоверно уменьшалась только у растений сорта Красноярский 80, в остальных опытных вариантах этот параметр не отличался от контрольного. При оценке действия предпосевной обработки семян различных сортов ярового ячменя метаболитами штамма МГ 97/6 ТпсИосИегта азрегеИит на морфометрические показатели растений в условиях светокультуры, установлено, что метаболиты не оказывают ингибирующего действия на такие параметры, как длина надземной части, количество листьев, вес сырой и сухой биомассы. Длина главного корня растения изменялась под влиянием обработки: в опытном варианте наблюдали ее некоторое уменьшение на 12%.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии ингибирующего действия метаболитов штаммов М99/5 ТпсИос1егта Ъагггапит и МГ 97/6 Тпс1юс1егта азрегеИит на ростовые процессы и морфометрические показатели злаковых растений. Одним из позитивных факторов применения метаболитов для обработки семян является снижение уровня их зараженности фитопатогенными микроорганизмами. Проведенные исследования позволили рекомендовать использовать штаммы М99/5 ТпсИос1егта Ъагаагшт и МГ 97/6 ТпсИос1егта азрегеИит для получения опытных партий биологических препаратов защиты злаковых культур от корневых гнилей с последующими полевыми испытаниями на разных сортах ярового ячменя и пшеницы.

Выводы

1. Длительные микологические исследования позволили выявить высокую антибиотическую и гиперпаразитическую активность сибирских штаммов МГ-97/6 ТпсИос1егта азрегеИит в отношении фигопатогенных микромицегов сеянцев хвойных и М 99/5 ТИс/гос/егта Иагггагшт в отношении возбудителей корневых гнилей злаков.

2. Изучено влияние трофических факторов на рост и продуктивность антагонистически активных штаммов рода ТпсИое/егта и показана возможность использования растительных отходов техногенной сферы для их массового размножения. Максимальная продуктивность достигается у штаммов МГ-97/6 ТпсИос!егта азрегеИит и М 99/5 ТгкИос1егта Иагаапит три твердофазной ферментации на твердом остатке коры пихты после углекислотной и спиртовой экстракций и составляет от 4,48-108 до 4,70-108 КОЕ г1.

3. Повышенная целлюлолигическая активность и фенол оксидазная способность позволяют создавать путем твердофазной ферментации биопестициды, содержащие монокультуры штаммов МГ-97/6 ТпсИос1егта азрегеИит и М 99/5 ТпсИос1егта Иапаапит, и ассоциации из штаммов МГ 97/6 ТпсИос1егта азрегеИит, М 99/5 Тг1сИ<х]егта Иагг1апит, МО ТпсИос1егта Ъатсйит, К 12 ТпсНос1егта азрегеИит.

4. Биологическая активность и жизнеспособность отобранных для биоконтроля штаммов МГ-97/6 ТпсИос1егта азрегеИит и М 99/5 ТПсИос1егта Иагггапит

подвержена влиянию биотических и абиотических факторов среды. Экспериментально доказана возможность сохранения жизнеспособных пропагул в течение 12 месяцев на 32-41% при хранении в лабораторных условиях на растительных остатках.

5. Доказано, что основной стратегией подавления численности почвенных фигопатогенных микромицетов сеянцев хвойных является использование как спорового биопестицида, содержащего пропагулы штамма МГ-97/6 Trichoderma asperellum, так и биопестицида, содержащего пропагулы штамма и твердый остаток коры пихты. Максимальный эффект в биологическом контроле фитопатогенов достигается при интродукции биопестицида, содержащего ассоциацию антагонистически активных штаммов рода Trichoderma.

6. Внесение пропагул антагонистически активных штаммов и биопестицидов, содержащих пропагулы и растительные остатки, экологически оправдано и целесообразно, так как приводит к вытеснению почвенных фитопатогенов, изменяет структуру, но те оказывает влияние на общую численность микобиоты и направленность процесса минерализации в почве.

7. Способность фигопатогенных грибов из родов Fusarium, Alternaria и Bipolaris колонизировать растительные остатки в почве сдерживается за счет антагонистической активности внесенных штаммов рода Trichoderma.

Список основных публикаций по материалам диссертации:

1. Gromovykh, Т. I. Ecological aspects of use of active strains Trichoderma asperelbim and Trichoderma harzianum in biological monitoring of conifer seedlings / Gromovykh Т. I., Sadykova V.S, Zaika N.A. Тез. XIV Congress of European Mycologists,Yalta, 2003. - P. 42.

2. Заболоцкий, E.B. Влияние препаратов триходермы и актиномицетов на полевые характеристики ячменя и пшеницы /Заболоцкий Е.В., Заика H.A., Пономарева А., Грекова Е.// Молодежь и наука - третье тысячелетие: Сб. материалов межвузовского научного фестиваля студентов, аспирантов и молодых ученых. -Красноярск, 2003. -С. 101-102.

3. Громовых, Т.И. Распространение, специализация и биологический контроль фигопатогенных микромицетов сеянцев хвойных в лесопитомниках Средней Сибири / Громовых Т.И., Лиговка Ю.А., ТТТишгиня Е.А., Заика Н.А.//Ботанические исследования в азиатской России: Материалы XI съезда Русского ботанического общества (18-22 августа 2003 г., Новосибирск-Барнаул).-Барнаул: Из-во «АзБука», 2003,- Том 1.- С. 21-22

4. Шилкина, Е.В. Влияние химических и биологических фунгицидов на микробиоту ризосферы сеянцев Pinus sylvestris / Шилкина Е.В., Заика H.A. // Микология и альгология - 2004. Материалы юбилейной конференции, посвященной 85-летию кафедры микологии и альгологии МГУ им. М.В.Ломоносова. - МПрометейМПГУ, 2004. - С.153.

5. Тимофеев, М.Ю Изучение роста сибирских штаммов грибов рода Trichoderma на растительных субстратах для получения биопрепаратов / Тимофеев М.Ю., Заика H.A. // Экология и проблемы защиты окружающей среды: Тез. докл. XI Всероссийской студенческой конференции. Красноярск, 22-24 апреля, 2004/Краснояр. Гос. ун-т. - Красноярск, 2004. - С. 52.

6. Громовых, Т И., Перспективы получения биологических препаратов защиты растений для выращивания экологически чистой продукции / Громовых Т.И., Зобова Н.В., Литовка Ю.А. и др. // Эколого-экономические проблемы региональных товарных рынков: Материалы межрегион, научно-практ. конф. (23 апреля, 2004 г., г. Красноярск) КГТЭИ,- Красноярск, 2004. - С.190-193.

7. Заика, H.A.. Перспективы использования растительных субстратов для получения биопрепаратов защиты сеянцев хвойных / Заика H.A., Громовых Т.И., Ушанова В.М. //Лесной и химический комплексы - проблемы и решения (экологические аспекты). Сб. ст. по материалам Всероссийской научно-практической конференции (12-14 мая 2004 г., г. Красноярск) - СибГТУ, 2004. -ТомЗ. -С.34-37

8. Заика, H.A. Скрининг сибирских штаммов грибов рода Trichoderma для получения биопрепаратов защиты сеянцев и злаков от болезней / Заика H.A., Громовых Т.И., Ушанова В.М. // Непрерывное экологическое образование и экологические проблемы. Сб ст. по материалам Всероссийской научно-практической конференции (18-20 октября 2004 г., г. Красноярск). - СибГТУ, 2004.-ТомЗ -С.112-116.

9. Заика, H.A. Твердофазная ферментация грибов рода Trichoderma на растительных субстратах / Заика H.A. //Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья. Сб. ст. по материалам Всероссийской конференции (21-22 апреля 2005 г., г. Барнаул). - БарнаулД005. - С.420-424.

10. Заика, H.A. Скрининг биологически активных штаммов грибов рода Trichoderma / Заика H.A. // Грибы в природных и антропогенных экосистемах. Сборник трудов международной конференции, посвященной 100-летию начала работы проф. Бондарцева A.C. в ботаническом институте им. Комарова В.Л. РАН (Санкт-Петербург, 24-28 апреля 2005г.) - Санкт-Петербург, 2005. - Том 1,-С.203-206.

11. Sharikov, А.М. То the issue of the using of the fungi of Trichoderma kind as the producents of the biologically active substances / Sharikov A.M., Neshumaev D.A., Zaika N.A. and et al. // The XII Symposium of the Russia-Japan Medical Exchange/ Abstracts of Symposium.-Krasnoyarsk: Published by the Krasnoyarsk State Medical Academy, 2005. - P.661-662.

« t

4

í

í >

!

I »

!

i

I j

i

i

i >

!

! í

i

i

ч

г

í

J'

í

i

f

4»

I }

t

jaoocft

6323

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Заика, Надежда Алексеевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Характеристика грибов рода Trichoderma и их практическое применение.

1.2 Культивирование грибов рода Trichoderma.

1.3 Использование растительных субстратов для производства биопрепаратов ^

1.4 Грибы рода Trichoderma в защите растений.

1.5 Отбор перспективных штаммов грибов рода Trichoderma для защиты растений.

ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Идентификация грибов рода Trichoderma.

2.2 Определение антибиотической активности и спектра действия штаммов.

2.3 Определение целлюлолитической активности.

2.4 Определение фенолоксидазной активности.

2.5 Твердофазное культивирование штаммов грибов рода Trichoderma на растительных субстратах.

2.6 Оценка продуктивности спорообразования грибов рода Trichoderma при культивировании на растительных субстратах.

2.7 Методы определения химического состава субстратов до и после биодеструкции.

2.7.1 Определение легко и трудногидролизуемых полисахаридов.

2.7.2 Определение лигнина в модификации Комарова.

2.7.3 Определение влажности весовым методом.

2.8 Оценка взаимодействий грибов родов Trichoderma и Fusarium при твердофазной ферментации в лабораторных условиях.

2.9 Оценка влияния грибов рода Trichoderma на микрофлору ризосферы растений в питомнике.

2.10 Оценка действия метаболитов антагонистически активных штаммов на посевные качества семян.i.

2.11 Оценка влияния метаболитов грибов рода Trichoderma на. уровень зараженности и ростовые показатели злаковых растений.

ГЛАВА 3 БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА СИБИРСКИХ ШТАММОВ ГРИБОВ РОДА TRICHODERMA.

3.1 Морфологические признаки аборигенных штаммов грибов рода Trichoderma.

3.2 Антибиотическая активность штаммов грибов рода Trichoderma в отношении фитопатогенных микромицетов.

3.3 Антибиотическая активность штаммов грибов рода Trichoderma в отношении условно-патогенных микроорганизмов.

3.4 Целлюлолитическая и фенолоксидазная активность.

ГЛАВА 4 БИОЛОГИЧЕСКАЯ ПРОДУКТИВНОСТЬ ГРИБОВ РОДА TRICHODERMA ПРИ ТВЕРДОФАЗНОМ КУЛЬТИВИРОВАНИИ НА РАСТИТЕЛЬНЫХ СУБСТРАТАХ.

4.1 Продуктивность спорообразования грибов рода Trichoderma при культивировании на растительных субстратах.

4.2 Взаимодействие грибов рода Trichoderma и фитопатогенных микромицетов при твердофазной ферментации в лабораторных условиях.

4.3 Жизнеспособность спор грибов рода Trichoderma при хранении биопрепаратов, полученных на растительных остатках.

4.4 Отбор сибирских штаммов рода Trichoderma для получения комбинированного биопрепарата защиты растений.

ГЛАВА 5 ОЦЕНКА ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ШТАММОВ ГРИБОВ РОДА TRICHODERMA В ЛЕСНОМ ПИТОМНИКЕ.

5.1 Эффективность использования биопрепаратов на основе грибов рода

Trichoderma в лесном питомнике.

5.2 Сравнительная оценка действия различных биопрепаратов на основе штаммов грибов рода Trichoderma на микрофлору ризосферы сеянцев в лесном питомнике.

ГЛАВА 6 ВЛИЯНИЕ АНТАГОНИСТИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ШТАММОВ ГРИБОВ РОДА TRICHODERMA НА РОСТ И РАЗВИТИЕ ЗЛАКОВ В

ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эколого-биологическое обоснование скрининга грибов рода Trichoderma для получения и использования биопрепаратов на растительных субстратах"

Традиционным методом борьбы с возбудителями инфекционных болезней злаков и сеянцев хвойных является обработка почвы, семян и растений фунгицидами. Однако химический метод защиты давно критикуется как небезопасный для окружающей среды. Ядохимикаты не обладают избирательным действием: при обработке ими гибнет эпифитная и сапрофитная микробиота и микоризообразующие грибы.

В общей системе защитных мероприятий большое значение придают биологическим средствам защиты растений, в основе которых лежат природные, естественные явления сверхпаразитизма и антагонизма между сапрофитной, паразитной и фитопатогенной микрофлорой. Использование этих регуляторных механизмов направлено, с одной стороны, на создание благоприятных условий для воспроизводства местных микроорганизмов-антагонистов, с другой, - на регуляцию численности возбудителей заболеваний путем интродукции антагонистов-супрессоров. Реализация стратегии оперативного сдерживания численности фитопатогенных микрооганизмов возможна только при наличии эффективных агентов биоконтроля, среди которых часто используют антагонистически активные микромицеты.

Имеющиеся данные показывают значительное снижение объемов использования биологических препаратов в России. Применение биопрепаратов, выпускаемых разными фирмами, носит эмпирический характер, часто без учета биологических особенностей патогенных организмов, их внутривидового разнообразия, почвенно-климатических особенностей региона. При этом упускается из вида необходимость знания свойств вводимого в экосистему биологического активного агента в виде живой культуры или разных форм биопрепаратов.

Доминирующее положение в успешном регулировании численности популяций фитопатогенов и получении противогрибных препаратов занимают виды Trichoderma sp., обладающие высокой антагонистической и гиперпаразитической активностью. На основе различных штаммов этих грибов в нашей стране и за рубежом созданы биопрепараты - триходермины, использующиеся для борьбы с широким спектром фитопатогенов растений. Обширный экспериментальный материал по биосистематике, морфогенезу, продукции метаболитов и спор, механизмам видового и штаммового влияния на микроорганизмы, изложенный в многочисленных публикациях и ряде обзоров, свидетельствует о достаточно высокой эффективности триходермина, содержащего пропагулы грибов рода Trichoderma.

Успех использования биологического метода защиты растений зависит не только от подбора высокоэффективных штаммов биологических агентов, но и в равной мере от возможности получения биопрепаратов на их основе. Проблема ресурсов доступного и дешевого сырья для промышленной биотехнологии остается весьма актуальной, поэтому перспективным является расширение сырьевой базы для производства биопрепаратов за счет использования отходов деревоперерабатывающей промышленности.

В настоящее время в лесной зоне России продолжается накопление отходов лесопромышленного комплекса в виде коры, лигнина, активного ила очистных сооружений целлюлозно-бумажного комбината, что, очевидно, ухудшает экологическую обстановку в этих районах страны. Вместе с тем при использовании биологических и химических агентов эти отходы могут быть j использованы в качестве органического удобрения, для создания биопрепаратов по борьбе с болезнями растений и биологически активных веществ, мелиорантов почв и др. Расширение сырьевой базы для производства биопрепаратов за счет использования растительных отходов техногенной сферы решает проблему их утилизации и открывает путь создания биотехнологии биологических пестицидов на их основе.

В связи с широким применением грибов рода Trichoderma накоплен фактический материал, касающийся технологии получения и использования биопрепаратов на основе растительных субстратов. При внесении таких биопрепаратов в сложившийся биоценоз может изменяться структура микробиоты, оказывающая существенное влияние на ход процесса разложения органического субстрата. Остается не изученным вопрос о влиянии растительных субстратов на деятельность фитопатогенов.

Цель работы — повышение экологической эффективности биологического контроля возбудителей болезней растений путем скрининга перспективных штаммов грибов рода Trichoderma и получения биопестицидов на растительных субстратах.

В задачи работы входило:

1. Исследовать биологические свойства и произвести скрининг антагонистически, активных и продуктивных штаммов рода Trichoderma.

2. Подобрать растительные субстраты для твердофазной ферментации с целью получения биопрепаратов защиты растений.

3. Испытать опытные партии различных форм биопрепаратов, созданных на оптимально подобранных субстратах, в лесном питомнике.

4. Провести сравнительную оценку действия препаратов на структуру и динамику численности микробных популяций в различных биоценозах.

Защищаемые положения:

1. Основные параметры для скрининга штаммов рода Trichoderma при твердофазной ферментации на растительных субстратах.

2. Внесение растительных субстратов необходимо для создания дополнительной экологической ниши биологически активных штаммов.

3. Способность колонизировать растительные субстраты грибами родов Fusarium и Alternaria сдерживается при совместном внесении штаммов-антагонистов рода Trichoderma.

4. Повышение эффективности биоконтроля достигается путем использования в защите растений от болезней не одного, а нескольких биологических агентов.

5. Действие биологических препаратов на основе грибов рода Trichoderma на микобиоту почвы.

Научная новизна. Показано, что основными критериями скрининга штаммов грибов рода Trichoderma являются высокая биологическая продуктивность при ферментации и длительная сохраняемость на растительных субстратах.

Использование биопрепаратов на растительных субстратах позволяет биологическим агентам более длительный период сохраняться в почвенной микобиоте и повышает эффективность биологического контроля.

Показана более высокая эффективность использования нескольких биологических агентов в защите растений от болезней.

Практическая значимость. Отобраны штаммы МГ-97/6 Trichoderma asperellum Samuels ВКПМ F-765 и М 99/5 Trichoderma harzianum Rifai, перспективные для создания биопестицидов путем твердофазной ферментации с высоким титром пропагул биологического агента. Предложены регламенты культивирования штаммов на коре пихты с различными методами обработки.

Разработаны рекомендации доз внесения биологических препаратов в почву лесопитомника.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы представлены на Межвузовском научном фестивале студентов, аспирантов и молодых ученых «Молодежь и наука - третье тысячелетие» (Красноярск, 2003); Межрегиональной научно-практической конференции «Эколого-экономические проблемы региональных товарных рынков» (Красноярск, 2004); Всероссийской научно-практической конференции «Лесной и химический комплексы - проблемы и решения (экологические аспекты)» (Красноярск, 2004); Всероссийской научно-практической конференции «Непрерывное экологическое образование и экологические проблемы» (Красноярск, 2004); Юбилейной конференции, посвященной 85-летию кафедры микологии и альгологии МГУ им. М.В.Ломоносова «Микология и альгология - 2004» (Москва, 2004); Всероссийской научно-практической конференции «Лесной и химический комплексы - проблемы и решения (экологические аспекты)» (Красноярск,2005); Всероссийской научно-практической конференции «Непрерывное экологическое образование и экологические проблемы» (Красноярск, 2005); Международной конференции, посвященной 100-летию начала работы проф. Бондарцева А.С. в ботаническом институте им. Комарова B.JI. РАН «Грибы в природных и антропогенных экосистемах» (Санкт-Петербург, 2005); Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул,2005); Региональной научно-практической конференции «Аграрная наука на рубеже веков» (Красноярск, 2005).

Публикации результатов исследования: по материалам диссертации опубликовано 14 работ.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Заика, Надежда Алексеевна

ВЫВОДЫ

1. Длительные микологические исследования позволили выявить высокую антибиотическую и гиперпаразитическую активность сибирских штаммов МГ-97/6 Trichoderma asperellum в отношении фитопатогенных микромицетов сеянцев хвойных и М 99/5 Trichoderma harzianum в отношении возбудителей корневых гнилей злаков.

2. Изучено влияние трофических факторов на рост и продуктивность антагонистически активных штаммов рода Trichoderma и показана возможность использования растительных отходов техногенной сферы для их массового размножения. Максимальная продуктивность достигается у штаммов МГ-97/6 Trichoderma asperellum и М 99/5 Trichoderma harzianum при твердофазной ферментации на твердом остатке коры пихты после углекислотной и спиртовой экстракций и составляет от 4,48-108 до 4,70-108 КОЕ г'1.

3. Повышенная целлюлолитическая активность и фенол оксид азная способность позволяют создавать путем твердофазной ферментации биопестициды, содержащие монокультуры штаммов МГ-97/6 Trichoderma asperellum и М 99/5 Trichoderma harzianum, и ассоциации из штаммов МГ 97/6 Trichoderma asperellum, М 99/5 Trichoderma harzianum, МО Trichoderma hamatum, К 12 Trichoderma asperellum.

4. Биологическая активность и жизнеспособность отобранных для биоконтроля штаммов МГ-97/6 Trichoderma asperellum и М 99/5 Trichoderma harzianum подвержена влиянию биотических и абиотических факторов среды. Экспериментально доказана возможность сохранения жизнеспособных пропагул в течение 12 месяцев на 32-41% при хранении в лабораторных условиях на растительных остатках.

5. Доказано, что основной стратегией подавления численности почвенных фитопатогенных микромицетов сеянцев хвойных является использование как спорового биопестицида, содержащего пропагулы штамма МГ-97/6 Trichoderma asperellum, так и биопестицида, содержащего пропагулы штамма и твердый остаток коры пихты. Максимальный эффект в биологическом контроле фитопатогенов достигается при интродукции биопестицида, содержащего ассоциацию антагонистически активных штаммов рода Trichoderma.

6. Внесение пропагул антагонистически активных штаммов и биопестицидов, содержащих пропагулы и растительные остатки, экологически оправдано и целесообразно, так как приводит к вытеснению почвенных фитопатогенов, изменяет структуру, но не оказывает влияние на общую численность микобиоты и направленность процесса минерализации в почве.

7. Способность фитопатогенных грибов из родов Fusarium, Alternaria и Bipolaris колонизировать растительные остатки в почве сдерживается за счет антагонистической активности внесенных штаммов рода Trichoderma.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Заика, Надежда Алексеевна, Красноярск

1. Александрова, А.В. Влияние гриба Trichoderma harzianum на почвенные микромицеты /Александрова А.В., Великанов Л.Л. // Микология и фитопатология. 2000.- Т.34.- Вып.З. - С. 68-77.

2. Аппарат для выращивания мицелиальных форм микроорганизмов / Тюльпанов В.Г., Малиновский А.Л., Гольд В.М. и др. // Авт. свид. СССР № 1169359, кл. С 12 М 3/00. 1988.- 4 с.

3. Аспите, А.Ф. Использование триходермина для защиты растений от фитопатогенных микромицетов / Аспите А.Ф., Швинка Ю.Э., Стрикаускас С.В. // Вестник с.-х. науки. 1981. - № 9. - С. 114-118.

4. Афанасьева, М.М. Грибная конверсия зернофуража в белковоуглеводный продукт / Афанасьева М.М., Выслоух В.А. // Микология и фитопатология. 1991.-Т. 25. - Вып.1. - С.39-42.

5. Бабицкая, В.Г. Ферментативная деградация лигнина, содержащегося в растительных субстратах, мицелиальными грибами / Бабицкая, В.Г. // Приют, биохимия и микробиология. 1994. - Т.ЗО. - Вып.6. - С.827-835.

6. Беккер, З.Э. Физиология грибов и их практическое использование / Беккер, З.Э. // М.: МГУ, 1963. С.106-112.

7. Билай, В.И. Методы экспериментальной микологии / Билай В.И // Киев: Наукова думка, 1982. 550 с.

8. Билай, В.И. Определитель токсинообразующих микромицетов / Билай В.И., Курбацкая З.А. // Киев: Наукова думка, 1990. 223 с.

9. Билай, В.И. Фузарии / Билай В. И. // Киев: Наукова думка, 1977. С.15.35.

10. Биодеградация гидролизного лигнина микробной ассоциацией / Медведева С.А., Имранова Е.Л., Волчатова И.М., Тен Хак Мун // Сибирский экологический журнал. Т.11. - Вып. 2. - 2004. - С. 167-172.

11. Биоконверсия обрезков виноградной лозы дереворазрушающими базидиальными грибами / Ганбаров Х.Г., Мурадов П.З., Самедова Р.Ф., Мамедьяров М.А. //Химия древесины. 1987. - №1. - С.61-64.

12. Биологические особенности различных штаммов гриба Trichoderma harzianum / Тюльпанова В.А., Громовых Т.И., Шипилова И.А. и др. // Деп. ВИНИТИ № 2189-В96, 05.07.96. 14с.

13. Биотехнология и применение новых форм биологического препарата триходермин / Тюльпанова В.А., Громовых Т.И., Малиновский А.Л. и др. // Актуальные проблемы биологии: Материалы региональной конф., Красноярск, КГУ, 1994 .- С.45.

14. Биотехнология новых форм грибных фунгицидов для защиты растений / Тюльпанова В.А., Громовых Т.И., Малиновский A.JI. и др. // Сибирский экологический журнал. 1997. - №5. - С.495-500.

15. Бокова, Ю.В. Лабораторная и полевая оценка грибов рода Trichoderma против Botritis cinerea / Бокова Ю.В. // Актуальные вопросы агроэкологии в интегрированных системах защиты растений. Сб.мат. Международ.научно-практич.конфер., Пенза, 1999. С. 29-31.

16. Бондаренко, Н.В. Биологическая защита растений / Бондаренко Н.В. //М.: Агропромиздат, 1986. 278 с.

17. Буга, С.Ф. Защита зерновых культур от болезней в Белоруссии / Буга С.Ф. // Защита и карантин растений. 2005. -Вып. 2. - С. 18-21.

18. Варнайте, Р.Н. Биодеградация растительных отходов микромицетами / Варнайте Р.Н., Раудонене В.З. // Микология и фитопатология. 2003. - Т. 37. -Вып.2. - С. 49-52.

19. Ведерников, Н.М. Интегрированная система выращивания и защиты сеянцев хвойных и лиственных пород от болезней /Ведерников Н.М., Федорова Н.С. // Лесное хозяйство.-1997. №3. - С.35-37.

20. Великанов, Л.Л. Пространственное распространение грибов рода Trichoderma в почвах биологической станции МГУ / Великанов Л.Л., Сидорова И.И. // Микология и фитопатология. 1999. - Т.ЗЗ.- Вып.2. - С. 101106.

21. Великанов, Л.Л. Экологические проблемы защиты растений от болезней / Великанов Л.Л., Сидорова И.И. // Итоги науки и техники. Защита растений. -1988.-Т.6. 141с.

22. Влияние грибов рода Trichoderma на состав одубины коры хвойных пород / Рязанова Т.В., Чупрова Н.А., Ким Н.Ю., Громовых Т.И. // Вестник СибГТУ. 2000.- №1. - С.99-103.

23. Геллер, И.Т. Рост и развитие гриба Trichoderma harzianum на гранулированных питательных средах / Геллер И.Т., Беркутова И.Б.,

24. Переверзева A.JT. // Биотехнология микроорганизмов в сельском хозяйстве. М., 1989.-С. 115-122.

25. Головлев, Е. Л. Твердофазная ферментация растительного сырья / Головлев Е. Л., Головлева Л. А. // Микробиология и биохимия разложения растительных материалов. М.: Наука,1983. - С. 301 - 332.

26. Головлева, Л. А. Биохимия разложения лигнина микроорганизмами. Головлева Л. А., Мальцева О. В. // Проблемы биоконверсии растительного сырья. М.: Наука, 1986. - С.295.

27. Головлева, Л.А. Разложение лигнина грибными культурами /Головлева Л.А., Ганбаров Х.Г., Скрябин Г.К. // Микробиология. 1982. - №51. - С.543-547.

28. Горленко, М.В. Онтогенез грибов рода Trichoderma Fr. в различных условиях культивирования / Горленко М.В., Шарова М.Б., Воронкова Е.Н. // Микология и фитопатология. 1982. - Т. 16. - Вып.4. - С. 305-311.

29. Городний, Н.М. Биоконверсия органических отходов в биодинамическом хозяйстве / Городний Н.М., Мельник И.А., Повхан М.Ф. // Киев: Урожай, 1990. С. 256.

30. Горохов, Г.А. Грибным препаратам промышленное производство / Горохов Г.А., Фатуева Г.Г. // Защита растений. - 1993.- № 2. - С. 14-16.

31. Гринько, Н.Н. Видовой состав возбудителей корневой гнили огурца в защищенном грунте / Гринько Н.Н. // Вестник Российской академии с.-х. наук. -2002. №5. - С.54-57.

32. Гринько, Н.Н. Биотехнологические аспекты культивирования штамма Trichoderma harzianum Rifai ВКМ F-2477 Д / Гринько Н.Н. // Вестник Российской академии с.-х. наук. 2004. - №1. - С.56-60.

33. Гринько, Н.Н. Морфолого-культуральная характеристика и особенности культивирования изолята 3.11/9с1 / Гринько Н.Н., Успенская Г.Д. // Овощеводство в зоне влажн. Субтропиков Краснодаре. Края: Сб.науч.тр.Адлерской ООС. М, 1987. - С.52.

34. Гринько, Н.Н. Экологически безопасная система / Гринько Н.Н., Тарасенко B.C., Стрижак Т.В. // Защита и карантин растений. 1996. - № 1.- С. 42-43.

35. Гринько, Н.Н. Экологические аспекты биологической защиты растений огурца в защищенном грунте / Гринько Н.Н., Успенская Г.Д. // Овощеводство защищенного грунта: Сб. науч.тр. ВНИИО. М., 1992. - С. 161166.

36. Гродницкая, И.Д. Использование микробного антагонизма в защите сеянцев от инфекционных заболеваний / Гродницкая И.Д., Гукасян А.Б. // Лесоведение. 2001. - №1. . С.38-42.

37. Громовых, Т.И. Фитопатогенные микромицеты сеянцев хвойных в Средней Сибири: видовой состав, экология, биологический контроль: Автореф. дис. . докт. биол. Наук / Громовых Т.И. Москва, 2002. - 37 с.

38. Дворина, А.А. Высшие базидиальные грибы- продуценты кормового белка / Дворина А.А. // Превращения древесины при энзиматическом и микробиологическом воздействиях: Тезисы докл. 3-го научного семинара, Рига, 1988. С.203-204.

39. Деградация лигнина соломы ржи и костры льна под воздействием мицелиальных грибов / Бабицкая В.Г., Щерба В.В., Осадчая О.В., Латышева С.Г. // Химия древесины. 1990.- №6.- С.83-88.

40. Егоров, Н.С. Основы учения об антибиотиках / Егоров Н.С. // М.: Изд-во МГУ, 1994.-512с.

41. Естественная изменчивость мутантного штамма Т-889 гриба Trichoderma lignorum антагониста возбудителей корневых гнилей / Тулемисова К.А., Успанов А.К., Бекмаханова Н.Е., Амирханова Л.М. // Сельскохозяйственная биология. - 1987.- № 6.- С. 40-44.

42. Использование микробного антагонизма в борьбе с инфекционным полеганием сеянцев хвойных / Громовых Т.И., Гукасян В.М., Малиновский

43. A.Л. и др. // Сибирский экологический журнал. 1997. - №5. - С.501-504.

44. Использование микроскопических целлюлозолитических грибов для биоконверсии древесных субстратов /Борзаковская B.C., Байкина Г.Р, Леванова

45. B.П. и др. // Превращения древесины при энзиматическом имикробиологическом воздействиях: Тезисы докл. 3-го научного семинара, Рига, 1988.-С. 190-192.

46. Казачкова, Л.Н. Получение коннотирина и триходермина методом глубинно-поверхностного культивирования / Казачкова Л.Н., Дятлов В.А. // Микология и фитопатология. 1992. - Т.26. - Вып.2.- С. 122 - 125.

47. Каневская, И.Г. Микрофлора полимерных материалов и особенности ее формирования / Каневская И.Г., Орлова Е.И. // Микология и фитопатология. 1983. - Вып. 17. -№ з. с. 189-192.

48. Ким, Н.Ю. Безотходная переработка одубины хвойных пород: Автореф. дис. .канд. техн. наук. / Ким Н.Ю. Красноярск, 2001. - 24 с.

49. Коваленко, Н.М. Триходермин: опыт исследования и применения / Коваленко Н.М., Коваленко Т.Д. // Защита растений. 1992. - №9. - С.20-21.

50. Коломбет, Л.В. Грибы рода Trichoderma как продуценты биофунгицидов: прошлое, настоящие, будущее / Коломбет Л.В. // Тез. докл. Первого съезда микологов «Современная микология в России», Москва, 2002. -С.229.

51. Кривич, Н.Я. Гриб Trichoderma lignorum и его роль в увеличении плодородия почвы и повышении количества сельскохозяйственных культур / Кривич Н.Я., Канивец Н.И., Клуген З.А. // Микология и фитопатология. 1981. -Т.15.-Вып. 23а.-С. 117-121.

52. Кузнецова, Е.К. Влияние фосфора на биосонтез целлюлаз гриба Trichoderma longibrachiatum Т-26 / Кузнецова Е.К. Гернен М.В., Замотайлова JI.A. // Тез. докл. конф. молодых ученых "Современные проблемы биотехнологии микроорганизмов".- Рига, 1987.- С. 135.

53. Лиепиныш, Г.К. Сырье и питательные субстраты для промышленной биотехнологии / Лиепиныш Г.К., Дунце М.Э. // АН Латв. ССР. Ин-т микробиологии им. А.Кирхенштейна. Рига: Зинатне, 1986. - 156 с.

54. Лобанок, А.Г. Микробный синтез на основе целлюлозы: Белок и другие ценные продукты // Лобанок А.Г., Бабицкая В.Г., Богдановская Ж.Н. // М: Наука и техника, 1988. С. 261.

55. Лугаускас, А.Ю. Микромицеты на полимерных материалах разной химической природы / Лугаускас А.Ю., Паутените Л.П. // Микология и фитопатология, 1983. Т. 17.- Вып.6.- С. 468-476.

56. Макарова, Е.Н. Биоконверсия стеблей табака в белок / Макарова Е.Н., Пажитнева Е.М., Гаспарян А.В. // Превращения древесины при энзиматическом и микробиологическом воздействиях: Тезисы докл. 3-го научного семинара, Рига, 1988. С. 195-201.

57. Махова, Е.Г. Биодеструкция лиственничной одубины грибами Trichoderma asperellum, Trichoderma koningi / Махова Е.Г., Рязанова Т.В., Чупрова Н.А. // Химия растительного сырья. 2001. - № 4. - С. 69-75.

58. Махова, Е.Г. Культивирование грибов рода Trichoderma на лигноуглеводных субстратах и получение биопрепарата: Автореф. дис. .канд. техн. наук. / Махова Е.Г. Красноярск, 2003. - 21 с.

59. Методические рекомендации по определению зараженности семян зерновых культур грибными патогенами. Ленинград-Пушкин, 1989. - С.13-19.

60. Науменко, З.М. Получение кормовых продуктов из целлюлозосодержащего сырья и оценка эффективности их использования // Науменко З.М., Ладинская С.И. // Химия древесины. 1987. - №3. - С.3-9.

61. Новые аборигенные штаммы грибов рода Trichoderma, распространённые на территории Средней Сибири / Громовых Т.И., Прудникова С.В., Громовых B.C., Могильная О.А. // Микология и фитопатология. 2001. - Т.35. - Вып.1. - С.56-61.

62. Опыт применения различных форм триходермина в лесопитомниках Красноярского края / Громовых Т.И., Солдатов В.В., Шмарловская С.В. и др. // Мониторинг и защита леса: Труды межрегион, семин.- Красноярск, 2000.- С.23-26.

63. Особенности роста и конидиегенеза продуцента триходермина при различных условиях культивирования / Тюльпанова В.А., Громовых Т.И., Козлова Т.Л. // Деп. ВИНИТИ № 34-37 В-94. 1994. - 11 с.

64. Отбор грибных культур для твердофазной ферментации древесных опилок и соломы / Головлев Е.П., Черменский Д.Н., Окунев О.Н. // Микробиология. 1983. - Т. 51. -Вып.1. - С. 25-28.

65. Оценка устойчивости сеянцев хвойных к фузариозному полеганию в лесопитомниках Средней Сибири / Громовых Т.И., Шилкина Е.А., Гукасян В.М. // Методы оценки состояния и устойчивости лесных экосистем: Материалы докл. межд. сов.- Красноярск, 1999,- С.70-71.

66. Панова, О.А. Коррозия металлов, вызываемая микроскопическими грибами / Панова О.А., Великанов Л.Л., Тимонин В.А. // Микология и фитопатология. 1982.- Т. 16.- Вып. 6.- С. 514-518.

67. Петров, Л.Н. Лигнин повышает плодородие солонцовых почв / Петров Л.Н., Годунова Е.И. // Вестник РАСХИ. №2. - 1996. - С.60-61.

68. Подбор, адаптация и генетические аспекты селекции штаммов микроскопических грибов, обогащающих белком древесные субстраты /

69. Нестерова Г.Ф., Соом Я.О., Игнатьева Е.В. и др. // Превращения древесины при энзиматическом и микробиологическом воздействиях: Тезисы докл. 3-го научного семинара, Рига, 1988. С. 153-160.

70. Прудникова, С.В. Эколого-биологическая роль грибов рода Trichoderma в различных биоценозах Средней Сибири: Автореф. дис. канд. биол. наук / Прудникова С.В. Красноярск, 2000. - 19С.

71. Разложение коры хвойных деревьев грибами и бактериями / Свиридова О.В., Михалева Л.В., Воробьев Н.И., Кочетков В.В. // Микология и фитопатология. 2001. - Т. 35. - Вып.6. - С.38-47.

72. Рипачек, В. Биология дереворазрушающих грибов / Рипачек В. // М: Лесная промышленность, 1967. 267 С.

73. Рудаков, О. Л. Микофильные грибы, их биология и практическое значение / Рудаков О. Л. // М.: Наука, 1981. 158 с.

74. Рудаков, И. Л. Проблемы и перспективы использования гиперпаразитов и антагонистов в защите растений от инфекционных заболеваний / Рудаков И. Л. // Микробиологические средства защиты растений. Кишинев: Штиинца, 1986. - С. 29-33.

75. Рязанова, Т.В. Перспективы комплексной переработки коры хвойных пород / Рязанова Т.В. // Переработка растительного сырья и утилизация отходов.: Сб.трудов. Красноярск: СТИ, 1994. - С.177-181.

76. Садыкова, B.C. Изменчивость Trichoderma asperellum и отбор штаммов для создания биопрепаратов на гидролизном лигнине: Автореф. дис. канд. биол. наук / Садыкова B.C. Москва, 2003. - С.9-10.

77. Салина, О.А. Влияние грибов рода Trichoderma на некоторые почвенные микроорганизмы / Салина О.А., Лугаускас А.Ю. // Микробные сообщества и их функционирование в почве. Киев: Наукова думка, 1981. -С.155-158.

78. Сейкетов, Г.Ш. Грибы рода Trichoderma и их использование в практике / Сейкетов Г.Ш. // Алма-Ата: Наука, 1982. 248 с.

79. Симочкина, В.И. Использование гриба триходермы в борьбе с корневой гнилью огурцов в закрытом грунте / Симочкина В.И., Успанов А.К., БекмахановаН.Е. //Изв. АН КазССР. Алма-Ата: Наука, 1988. - №15. - С. 149.

80. Синников, А.С. Рекомендации по использованию древесной коры в качестве тепличного грунта в лесном и сельском хозяйстве / Синников А.С., Калугина З.С. // Архангельск, 1984. 12с.

81. Скрининг штаммов Trichoderma, активных против возбудителей заболеваний капусты / Захарова Н.Г., Илларионова И.А., Алимова Ф.К., Егоров С.Ю. // Вестник Российской академии с.-х. наук. 2002. - №3. - С. 38 - 40.

82. Ташпулатов, Ж.С. Биосинтез целлюлаз и белков при смешанном культьтивировании T.harzianum и Saccharomyces cerevisiae /Ташпулатов Ж.С., Байбаев Б.Н. // Узбекский биологический журнал. 1990. - №4.- С. 10-12.

83. Твердюков, А.П. Триходермин / Твердюков А.П., Никонов П.В., Ющенко Н.П. // Защита растений. 1993,- № 6.- С. 40.

84. Телышева, Г.М. Удобрения на основе лигнина / Телышева Г.М., Панкова Р.Е. // Рига, «Зинатне»,1978. 64 С.

85. Термоустойчивость Trichoderma lignorum Harz при глубинном выращивании / Федоринчик Н.С., Татурина Т.А., Тютюнников М.Г., Радищева Д.Ф. // Микология и фитопатология. -Т.10. Вып.1. - 1976. - С.63-67.

86. Ткаленко, А.Н. Биопрепараты в защите овощных культур /Ткаленко А.Н., Гораль С.В. // Защита и карантин растений. 2005. - Вып. 1. - С.44.

87. Триггер, Е.П. Межмикробное взаимодействие в почве / Тригер Е.П., Полянская Л.М. // Микробиология. 1990. - Вып. 59. - № 4. - С. 688-693.

88. Триходерма как регулятор ростовых процессов / Голованова Т.И., Громовых Т.Н., Гукасян В.М. // Деп. ВИНИТИ № 502 В-96. 1996.- 14 с.

89. Федринчик, Н.С. Глубинный способ выращивания гриба Trichoderma lignorum Harz / Федринчик Н.С., Тарунина Т.А., Рунковская Л.Я. // Тр. ВИЗР, 1975.- №2. С.151-160.

90. Халанская, А.П. Корневые гнили зерновых в Красноярском крае / Халанская А.П., Громовых Т.И., Анисимова О.А. // Плодородие почв и агротехника сельскохозяйственных культур в Восточной Сибири. -Новосибирск.-Изд-во СО РАСХНИЛ, 1992.- С. 132-136.

91. Чулкина, В.А. Борьба с болезнями сельскохозяйственных культур в Сибири // Чулкина В.А., Коняева Н.М., Кузнецова Т.Т. // М.: Россельхозиздат, 1987.-252 с.

92. Шарова, М.Б. Морфолого-цитологическое изучение гриба Trichoderma в связи с производством препарата "триходермин": Автореф. дис. . канд. биол. наук / Шарова М.Б. М.: МГУ, 1983. - 26 с.

93. Шилкина, Е.А. Устойчивость штаммов грибов рода Trichoderma к фунгицидам / Шилкина Е.А., Громовых Т.И. // Защита и карантин растений. -2004. №2. - С.39.

94. Шилкина, Е.А. Эколого-биологическое обоснование использования фунгицидов в защите сеянцев Pinus sylvestris L. от фитопатогенных микромицетов: Автореф. дис. . канд. биол. наук / Шилкина Е.А. Красноярск, 2004.- 18 с.

95. Штейнберг, М.Е. Сравнительная характеристика некоторых изолятов Gliocladium биологических агентов в борьбе с белой гнилью подсолнечника / Штейнберг М.Е., Завелишко И.А. // Микробиологический журнал. - 1988.- Т. 50.- № 6.- С. 63-64.

96. Штерншис, М.В. Биотехнология в защите растений: Учебное пособие / Штерншис М.В., Томилова О.Г., Андреева И.В. // Министерство сел. Хозяйства РФ. Новосибирский гос. Аграр. ун-т. Новосибирск, 2001. - 156 С.

97. Эффективность использования биологических препаратов против корневых гнилей злаков в лесостепной зоне Красноярского края / Громовых

98. Т.И., Тюльпанова В.А.,Гукасян В.М. и др. // Методические аспекты экспериментальной работы в исследованиях агрономического профиля: Матер.региональной научной конф. Красноярск, Крас.ГАУ, 1995. - С. 47-48.

99. Якименко, Е.Е. Влияние грибов рода Trichoderma на почвенные микромицеты, вызывающие инфекционное полегание сеянцев хвойных в лесных питомниках Сибири / Якименко Е.Е., Гродницкая И.Д. // Микробиология. 2000. - Т. 69. - № 6. - С.850-854.

100. Якименко, Е. Е. Микромицеты почв лесных питомников / Якименко Е. Е. // Микология и фитопатология. 1992. - Т. 26. - Вып. 6. - С. 480-485.

101. Trichoderma harzianum Rifai Aggr. как фактор повышения устойчивости томатов к возбудителям корневой гнили / Громовых Т.И., Гукасян В.М., Голованова Т.И., Шмарловская С.В. // Микология и фитопатология. 1998. - Т. 32. - Вып. 2. - С.73-78.

102. Abbott E.V. Taxonomic studies on soil fungi.: Iowa St. Coll. J. Sci. / Abbott E.V.// 1926.- N.I.- P. 15-36.

103. Bawa S. Parasexual analysis in Trichoderma reesei using protoplast fusion / Bawa S., Sandhu., D. K. // Fungal Genetics Newsletter. 1994.- 41.- P. .17-19.

104. Bisby G.R. Trichoderma viride Pers. Ex Fries. And notes on Hypocrea. Transactions of the British Mycological Siciety / Bisby G.R. // 1939. 23. - P. 149168.

105. Chaverri, P. Hypocreaphyllostachydis and its Trichoderma anamorph, a newbambusicolous species from France / Chaverri, P., Candoussau, F., Samuels G.J. // Mycol Progr. 2004. - 3. - P.29-36.

106. Chet I. Trichoderma application, mode of action, and potential as a biocontrol agent of soilborne plant pathogenic fungi / Chet I. // In Innovative Approaches to Plant Disease Control (ed. I. Chet). - 1987. - P. 137-160.

107. Colonisation of phase II compost by biotypes of Trichoderma harzianum and their effect on mushroom yield and quality / Sharma H.S., M.Kilpatrick, F. Ward //Appl Microbiol Biotechnol, 1999.-51: 572-578.

108. Druzhinina I. Species concepts and biodiversity in Trichoderma and HypocreaSvom aggregate species to species clusters? / Druzhinina I. I I J Zhejiang Univ SCI. -2005. 6B(2). - P. 100-112.

109. Elad Y. Scanning electron microscopical observations of early stages of interactions of Trichoderma harzianum and Rhizoctonia solani / Elad Y., Sadowsky Z., Chet. //Transactions of British Mycological Society. 1987.- 88 (2).- P. 259-263.

110. Electrophoretic karyotyping of wild type and mutant Trichoderma longibrachiatum (reesei) strains / Mantyla A.L., Rossi К H., Vanhanen S A. et all // Current Genetics, 1992.- V.21.- P. 471 477.

111. Genetic and metabolic diversityof Trichoderma: a case study on South East Asian isolates / Kubicek, C.P., Bissett, J., Druzhinina, I. et all / Fungal Genet Biol, 2003.-38:310-319.

112. Gete of transformed Trichoderma harzianum in the phylloplane of tomato plants / Migheli O., Herrera-Estrella A., Avataneo M., Gullino M.L. // Molecular Ecology, 1994.- V.3.-P. 153-159.

113. Gilly J. A. Electrophoretic karyotype of Trichoderma reesei / Gilly J. A., Sands J. A. I I Biotechnology Letters. 1991.- No 13.- P. 477-482.

114. Gilman J.C. A manual of soil fungi. 2-nd edition / Gilman J.C. // Ames, Iowa, 1957.-P. 154.

115. Harman С. E. Development tactics for biocontrol fungi in plant pathology. In: New Directions in Biological Control (ed R. R. Baker & P. E. Dunn), 1990. -P.779-792.

116. Howell C.R. Relevance of mycoparasitism in the biological control of Rhizoctonia solani by Glioclaafum virens / Howell C.R. // Phytopathology, 1987.77.- P. 992-994.

117. Hypocreal Trichoderma species with pachybasium-like conidiophores:teleomorphs for T. minutisporum and T.polysporum, and their newly discovered relatives / Lu, B.S., Druzhinina, I., Chaverri, P. et all. // Mycologia, 2004. -96:310-342.

118. Integrated and biocontrol of Botrytis on grape and strawberry (abstract) / Harman С. E., Kovach J., Latone B. et all. // Fifth International Gliocladium and Trichoderma workshop. Beltsville. MD, April 1995.- P.321.

119. Interactions between bacteria an Trichoderma harzianum in suppression of Rhizoctonia damping-off in bark compost media / Kwok O.C.H., Fahy P.C., Hoitink H.A.J., Kuter G.A. // Phytopathology, 1987.- 77.- №8.- P. 1206-1212.

120. Klein D. Ecology of Trichoderma. 7«:Kubicek, C.P., Harman, G.E. (Eds.), Trichoderma andGliocladium / Klein, D., Eveleigh, D.E. // Vol. 1. Basic Biology, Taxonomy and Genetics.Taylor and Francis Ltd., London, 1998. P.57-74.

121. Kohl J. Effect of two Trichoderma spp. on the infection of maize roots by vesicular-arbuscular mycorrhiza / Kohl J., Schlosser E. // Z. Pflanzenkrankh und Pflanzenschutz, 1989.- V.96.- № 4.- P. 439-443.

122. Kokalisburelle N. Changes in population of soil microorganizm, nematodes and enzyme activity associated with application on powdered pine bark /

123. Kubota T. Trichoderma harzianum SK-55 fungus, fungicide containing it, and method of manufacture of the same and its use: Patent 5422107 USA, MKU6 A 01N 63/00, A 01N 1/00 / Kubota T. // Hokkaido Green Kosan, Inc. № 172273; 23.12.1993; №4-359484.

124. Kullnig, C.M. Molecular-identification of Trichoderma species from Russia, Siberiaand the Himalaya / Kullnig, C.M., Szakacs, G., Kubicek, C.P. // Mycol Res, 2000. 104:1117-1125.

125. Lewis J. A. Integrated control of Rhizoctonia fruit rot of cucumber / Lewis J. A., Papavizas С. C. // Phytopathology, 1980.- V.70. P. 85-89.

126. Lifshitz R. Decrease in incidence of Rhizoctonia preemergence damping-off by the use of integrated and chemical controls / Lifshitz R., Lifshitz S., Baker. // Plant Disease, 1985.- V.69.- P. 4341-4344.

127. Lumsden R.D. Biological control of damping-off caused by Pythium ultimum and Rhizoctonia solani in soilless mix / Lumsden R.D., Locke J.C. // Phytopathology, 1989.- 79.- P. 361-366.

128. Lumsden R.D. Managing soilbome plant pathogens with fungal antagonists / Lumsden R.D., Lewis I.A., Locke J.C. // In: Pest Management: Biologically Based Technologies (ed. R.D. Lumsden & J.L.Vaughn), 1993. P. 196203.

129. Molecular characterization and identification of biocontrolisolates of Trichoderma spp / Hermosa, M.R., Grondona, I., Iturriaga, E.A. et all // Appl Environ Microbiol, 2000. 66:1890-1898.

130. Mukhopadhyay A.N. Trichoderma harzianum a potential biocontrol agent for tobacco damping-off / Mukhopadhyay A.N., Brahmbahtt A., Patel G.J. // Tobacco Research, 1986.- 12.-№ 1.- P. 26-35.

131. Nelson E.B. Effects of fungal antagonists and compost age on suppression of Rhizoctonia damping-off in container media amended with composted hardwood bark / Nelson E.B., Hoitink H.A.J. // Phytopathology, 1983.- 73.- P. 14571462.

132. Okuda T. Correlation between species of Trichoderma and production patterns of isonitrile antibiotics / Okuda Т., Fujiwara A., Fujiwara M. // Agricultural and Biological Chemistry, 1982.- V. 46.- P. 1811 -1822.

133. Papavizas G.C. Trichoderma and Gliocladium: biology, ecology, and potential for biocontrot // Annual Review of Phytopathology, 1985.- V.23.- P. 23-54.

134. Pe'er S. Trichoderma protoplast fusion: a tool for improving biocontrol agents / Pe'er S., Chet I. // Canadian Journal of Microbiology, 1990.- 36.- P. 6-9.

135. Prillinger H.J. Taxon pattern andgenetic diversity of Trichoderma in a mid-European,primeval floodplain-forest / Prillinger, H.J., Kubicek, C.P. // Microbiol Res, 2003.- 158:125-134.

136. Processed manure as carrier to introduce Trichoderma harzianum: Population dynamics and biocontrol effect on Rhizoctonia solani / Kok C.J., Hageman P.E.J., Maas P.W. et all // Biocontrol Science and Technology, 1996.- 6.-№2.- P. 147-161.

137. Ricard J.L. Commercialization of a Trichoderma-hased mycofungicide -some problems and solutions / Ricard J.L. // Biocontrol News and Information, 1981.-2.- P. 95-98.

138. Samuels G.J. Trichoderma: A review of biology and systematics of the genus / Samuels G.J. II Mycol Res, 1996. 100:923-935.

139. Seven newtaxa of Trichoderma from Asia / Bissett, J., Szakacs, G., Nolan, C.A. et all // Can JBot. 2003. - 81:570-586.

140. Sinha J. Comparative analysis of optimal endoglucanase production by Trichoderma reesei and intergeneric fusants of Trichoderma reesei Saccharomyces cerevisiae / Sinha J., Panda T. // Bioprocess Engineering, 1998. V.18.- Issue 4.- P. 261-265.

141. Sivan A. Improved rhizosphere competence in a protoplast fusion progeny of Trichoderma harzianum / Sivan A., Harman G.E. // Journal- of General Microbiology, 1991.- 137.- P. 23-29.

142. Sivan A. The possible role of comprtition between Trichoderma harzianum and Fusarium oxysporum on rhizosphere colonization / Sivan A., Chet I. // Phytopathology, 1989.- 79.- № 2.- P. 198-203.

143. Smith V.L. Potential for biological control of Phytophthora root and crown rots of apple by Trichoderma and Gliocladium spp / Smith V.L., Wilcox W.F., Harman G.E. // Phytopathology, 1990.- 80. P. 880-885.

144. Strains of Trichoderma Benefit for Biological Control Seedling Pathogen / Gromovykh T.I.Tulpanova V., Shmarlovskaya S. et all // On Methyl Bromide Alternatives And Emmision Reductions: Ann. Int. Research Conf.- San-Diego, 1999. -P. 38-1-38-5.

145. Szakacs G. Production of cellulase and xylanase with selected filamentous fungi by solid substrate fermentation / Szakacs, G. Tengerdy, R.P. // In: Enzymes for

146. Pulp and Paper Processing (Eds. Jeffries, T.W. and Viikari, L.), ACS Symposium Series 655, American Chemical Society, Washington, D.C., 1996. Chapter 13. - P. 175-182.

147. Tengerdy R.P. Plant protection and growth promotion in Trichoderma harzianum mutants / Tengerdy R.P., Baker., Sary L. // 5th Eur. Congr. on Biotechnology. Copenhagen, Yuly 8-13, 1990.: Proc. Vol. 1. Copenhagen, 1990.- P. 153-156.

148. Transfer of a benornyl resistance marker by heat-inactivated Trichoderma reesei protoplasts / Meza V., Moreno P., Tengerdy R.P., Gutierrez-Correa M. // Biotechnology Letters, 1995.- V. 17. P. 827-832.

149. Trichoderma populations from alkaline agriculturalsoil in the Nile valley, Egypt, consist of only two species / Gherbawy, Y., Druzhinina, I., Shaban, G.M. et all // Mycol Prog,2004. 3:211-218.

150. Tronsmo A. Trichoderma harzianum used in biological control of diseases on apples in Norway / Tronsmo A., Hjeljord L.G. // Fifth International Gliocladium and Trichoderma workshop. Beltsville. MD, April 1995. P.259.

151. Use of different formes of Trichoderma soil fumigant Picea obovata / Gromovykh T.I.Shmarlovskaya S., Koryanova T. Malinovsky // A.On Methyl Bromide Alternatives And Emmision Reductions: Ann. Int. Research Conf.- San-Diego, 1999. P.39-1-39-5.

152. Variability in performance of biological and fungicidal seed treatments in corn, peas, and soybeans / Kommedahl Т., Windels C.E., Sarbini G., Wiley H.B. // Protection Ecology, 1981. V. 3. - P. 55-61.

153. Wardle D.A. Interspecific competitive interactions between pairs of fungal species in natural substrates / Wardle D.A., Parkinson D., Waller J.E. // Ecology, 1993.- V.94.- P. 165-172.

154. Whipps J.M. Effect of media on growth and interactions between a range of soil borne glasshouse pathogens and antagonistic fungi / Whipps J.M. // New Phytol., 1987.- V.107.- № 1.- P. 127-142.