Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Эколого-биохимические закономерности биологической очистки воды активным илом и иммобилизованными микроорганизмами
ВАК РФ 03.00.16, Экология
Автореферат диссертации по теме "Эколого-биохимические закономерности биологической очистки воды активным илом и иммобилизованными микроорганизмами"
На правах рукописи
ФОМИН Игорь Викторович
ЭКОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЧИСТКИ ВОДЫ АКТИВНЫМ ИЛОМ И ИММОБИЛИЗОВАННЫМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ
03.00.16 - экология 03.00.04 - биохимия
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Самара-2004
Работа выполнена в Самарском государственном медицинском университете
Научные руководители: доктор биологических наук, профессор
Шаталаев Иван Федорович,
доктор биологических наук, доцент Аввакумова Надежда Петровна
Официальные оппоненты:
Заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Попченко Виктор Иванович, доктор медицинских наук, профессор Боринский Юрий Николаевич
Ведущая организация:
Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова
Защита состоится 18 мая 2004 г. в 15:00 часов на заседании диссертационного совета К 212.218.02 при Самарском государственном университете по адресу : 443011, г.Самара, ул. Акад. Павлова, 1.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Самарского государственного университета
Автореферат разослан " __ "
2004 г.
Ученый секретарь диссертационного совета
Ведясова О.А.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. В настоящее время принято считать, что устойчивость природных и модельных гидроэкосистем обеспечивается видовым разнообразием входящих в них сообществ гидробионтов, особенно микроорганизмов. Одним из главных признаков стабилизированной экосистемы является наличие максимальной биомассы на единицу проходящей через систему энергии и максимальное количество симбиотических связей. Однако во многих исследованиях показано, что именно в этот период развития водных экосистем видовое разнообразие в них уменьшается, отмечается выравненность слагающих его видов и их стратификация, особенно это характерно для замкнутых гидроэкосистем.
Многолетние наблюдения за гидроэкосистемами показали, что в результате кратковременного мощного антропогенного воздействия, приводящего зачастую к метаболическому шоку, гидроэкосистемы в течение 24-48 часов по многим параметрам достигают исходного функционального состояния, при этом увеличения видового разнообразия не происходит. Эти данные приводили к мысли о том, что в экстремальных ситуациях устойчивость гидроэкосистем достигается каким-то иным путем, в частности, увеличением разнообразия эндо- и экзометаболитов и, как следствие, структурной реорганизацией ключевых оли-гомерных ферментов метаболизма.
Первое предположение нашло экспериментальное подтверждение, рядом авторов показано существование прямой зависимости жизнеспособности морских и пресноводных сообществ от концентрации внеклеточных органических соединений. Второе же предположение остается практически неизученным и открытым. Бесспорно, что взаимодействие многочисленных факторов при формировании гидроэкосистем связано с огромным числом сложных и разнообразных биохимических метаболических реакций. На каком то этапе дальнейшее развитие биохимической экологии будет лимитировано уровнем знания данного вопроса.
Применяемые в настоящее время традиционные методы определения и контроля функционального состояния модельных и природных гидроэкосистем не дают исчерпывающей информации о молекулярных и субмолекулярных механизмах стабилизации последних. В связи с этим особое значение приобретают исследования, направленные на изучение состава изомерных форм ключевых ферментов метаболизма в сообществах гидроэкосистем, их роли в реанимации при техногенных, особенно экстремальных воздействиях на водные экосистемы, До сих пор неизвестны механизмы выхода гидроэкосистем в относительно короткое время из глубочайших стрессовых ситуаций, достигается ли при этом исходный функциональный статус или экосистемам наносится какой-то «биохимический ущерб».
Модельные экосистемы активного ила функционируют и развиваются по классической схеме развития природных гидроэкосистем. К ним применимы общие положения окислительного обмена и представления о ферментах, как о самонастраивающихся катализаторах. В экспериментах указанные гидроэкосистемы выгодно отличаются тем, что цикл их
ЕИБЛИОТЕКЛ
сколько суток, а также возможностью варьирования факторов внешней среды в любых пределах и на любых уровнях. В то же время для организации непрерывного биомониторинга природных и модельных гидроэкосистем, в частности, процессов биологической очистки воды в аэротенках и биореакторах, требуются надежные, информативные способы оценки функционального состояния водных сообществ, характеризующие процессы метаболизма и окислительную мощность сооружений биологической очистки в целом.
Цель и задачи исследований. Цель работы - исследование эколого-биохимических стратегий ответных реакций микроорганизмов активного ила и иммобилизованной микрофлоры на воздействие техногенных загрязнений в различных технологических режимах и роль в этих процессах олигомерных и про-томерных форм оксидоредуктаз. В задачи исследований входило: 1) Изучение структурно-функциональных особенностей малатдегидрогеназы (МДГ, К.Ф. 1.1.1.37) активного ила и иммобилизованной микрофлоры при различных режимах биологической очистки коммунально-бытовых и техногенных сточных вод; 2) изучение структурно-функциональных особенностей глутаматдегидрогеназы (ГДГ, К.Ф. 1.4.1.2) активного ила и иммобилизованной микрофлоры при различных режимах биологической очистки коммунально-бытовых и техногенных сточных вод. 3) изучение структурно-функциональных особенностей каталазы ( К.Ф. 1.11.1.6 ) активного ила и иммобилизованной микрофлоры при различных режимах биологической очистки коммунально-бытовых и техногенных сточных вод 4) разработка способов биомониторинга очистки сточных вод в аэротенках и биореакторах по составу и динамике активности изоферментов и молекулярных форм исследуемых ферментов, характеризующих функциональное состояние активных илов и иммобилизованных временных сообществ микроорганизмов.
Научная новизна. Впервые получены сведения о структурной организации малатдегидрогеназы, глутаматдегидрогеназы и каталазы активных илов и иммобилизованных на синтетических волокнах временных сообществ микроорганизмов, используемых для биологической очистки промышленных и коммунально-бытовых стоков.
Установлена зависимость набора олигомеров и протомеров исследуемых ферментов от режима процессов биологической очистки.
Определено, что структурная организация и динамика активности изоэн-зимов исследуемых ферментов в процессе очистки бытовых и промышленных сточных вод является результирующим окислительно-восстановительных реакций, характеризующих потребность экосистемы в субстратах.
Впервые установлено увеличение числа изоферментов и молекулярных форм исследуемых ферментов в условиях лимитирования процессов биологической очистки кислородом.
Впервые показана перспективность метода диск-электрофореза в гидробиологии, позволяющего разработать систему экспрессных, высокоинформативных, интегральных способов биомониторинга модельных гидроэкосистем по
динамике изменения активности и состава олигомеров и каталитически активных протомеров некоторых ключевых ферментов окислительного метаболизма.
Практическая значимость работы. Полученные результаты позволяют пересмотреть подходы к практической реализации биологической очистки сточных вод промышленных производств активным илом и иммобилизованными временными сообществами микроорганизмов. Информация о структурной организации и динамике активности изоферментов исследуемых оксидоредуктаз дает возможность оперативно управлять процессами биологической очистки в аэ-ротенках и биореакторах на всех стадиях.
Полученные данные позволяют провести коррекцию технологии очистки воды в биореакторах, функционирующих в режиме анаэробно-аэробного метаболизма. Коррекция технологии очистки, предполагающая преобладание аэробных процессов метаболизма над анаэробными приводит к стабилизации гидроэкосистемы и, в целом, к значительному улучшению показателей работы биореакторов.
Разработаны и предлагаются к практическому использованию способы биомониторинга модельных гидроэкосистем по изменению активности и набора изоферментов малатдегидрогеназы и глутаматдегидрогеназы иммобилизованных микроорганизмов. Способы отличаются экспрессностью (в модифицированном варианте 2 часа), точностью и воспроизводимостью, могут быть использованы в практике охраны окружающей среды службами биомониторинга.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на 2-ой международной научной конференции «Экология и здоровье человека» (Самара, 1995), на конференции биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири (Челябинск, 1999), на международной научно-практической конференции «Экология и жизнь» (Пенза, 1999), на международной научно-практической конференции «Хозяйственно-питьевая и сточные воды: проблемы очистки и использования» (Пенза 2000), на VII Всероссийском конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара,2001), на Всероссийской конференции «Компенсаторно - приспособительные процессы, фундаментальные и клинические аспекты» (Сибирское отделение РАМН, Новосибирск, 2002).
Основные положения, выносимые на защиту.
1. При воздействии загрязнителей различного состава одним из факторов стабилизации временных сообществ активного ила и иммобилизованной микрофлоры в фазе лог-роста и стационарной фазе развития является увеличение количества олигомерных ферментов окислительного метаболизма. Обнаружение каталитически активных протомеров и субъединиц оксидоредуктаз в водной среде обусловлено нарастанием разнообразия экзометаболитов как в моделях активного ила, так и на действующих сооружениях биологической очистки и направлены на усиление гомеостаза и стабилизацию временных сообществ микроорганизмов.
2. Преимущественная роль в механизмах адаптации, реанимации и стабилизации модельных временных сообществ микроорганизмов, функционирующих в нормальном технологическом режиме и в экстремальных условиях, при-
надлежит низкомолекулярным формам ключевых ферментов метаболизма гид-робионтов - каталитически активным протомерам и субъединицам. Следствием залповых сбросов высокотоксичных промышленных стоков является блокирование мембранных систем энергообеспечения клеток активного ила и иммобилизованной микрофлоры. В таких условиях срабатывают механизмы компенсаторной биохимической адаптации, заключающиеся в мобилизации ферментов окислительного метаболизма и экспресс биосинтезе активных субъединиц молекулярных форм ферментов, выполняющих роль «реаниматоров».
3. Активность олигомерных форм исследуемых ферментов в большей мере подвержена ингибированию при нарушениях технологического режима и действии токсичных сточных вод и их компонентов.
Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 178 страницах, состоит из введения, 6 глав, выводов, списка литературы и 3 приложений. Работа содержит 21 таблицу, 27 рисунков, Список литературы включает 317 источников, в том числе 171 на иностранных языках.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
1. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
В лабораторных исследованиях моделей экосистем активного ила использовали регенерированный ил сооружений биологической очистки сточных вод ПО «Нефтеоргсинтез». Фоновые загрязнения удаляли трехкратным отмыванием ила дистиллированной водой. Отмытый ил помещали в аэратор периодического действия объемом 10 л, исходная концентрация ила составляла 0,8-1,0 г/л. В синтетической среде единственным источником углерода служила глюкоза в конечной концентрации 1,0 г/л. Ил постоянно перемешивали, продували воздухом, температуру поддерживали в пределах 23-25°С. Фазы развития активного ила контролировали по показателям оптической плотности на фотоэлектроколори-метре КФК-2 и по сухому остатку биомассы ила. Концентрацию глюкозы в иловой жидкости определяли орто-толуидиновым методом. Общую дегидрогеназ-ную активность устанавливали по разработанному нами методу. Количество микроорганизмов в активном иле определяли путем прямого подсчета по Разу-мову.
На разных фазах развития экосистем активного ила имитировали залповые сбросы сточных вод различных цехов и производств ПО «Нефтеоргсинтез», а также некоторых отдельных компонентов сточных вод и двухкомпонентных смесей. К сточным водам и их компонентам активный ил был адаптирован. Контакт ила со сточными водами и их компонентами проводили в течение 1 часа при 37°С.
В экспериментах на действующих сооружениях биологической очистки образцы ила отбирали в регенераторе, в первой, второй, третьей секциях аэро-тенков и на выходе из аэротенков городской станции аэрации; на входе, в центре, на выходе из аэротенков и во вторичных отстойниках первой ступени, а также в центре аэротенка и во вторичных отстойниках второй ступени биологической очистки сточных вод ПО «Нефтеоргсинтез». Действие на активный ил
залповых сбросов сточных вод отдельных производств и общезаводских сточных вод контролировали сразу после контакта сточных вод с активным илом первой ступени и далее в течение 24-72 ч. Залповые сбросы отслеживали по оперативным данным дежурного технолога. Время между отбором образцов ила и анализом составляло не более 30-50 мин.
Дезинтеграция клеток активного ила и иммобилизованных микроорганизмов грунтов включала следующие процедуры: суспензию биомассы трехкратно отмывали 0,1 М фосфатным буфером (рН 7,2), центрифугировали при 5000 g 5 мин. Осадок дезинтегрировали в механическом дезинтеграторе в течение 5 мин. при 4°С. Дезинтеграт переносили в колбу, добавляли 5 мл фосфатного буфера и тритона Х-100 в конечной концентрации 20,0 мг/мл. Колбу помещали на магнитную мешалку на 2 ч. при 37°С для солюбилизации белка. Далее гомогенат центрифугировали при 8000 g 10 мин.
Супернатант подвергали электрофорезу в плоских блоках полиакриламид-ного геля. В работе использовали материалы и реактивы для диск-электрофореза («Reanal», Венгрия). Анализируемые образцы в объеме 50,0 мкл в смеси с 40% раствором сахарозы наносили на линию старта. В качестве электродного буфера использовали 1,0 М трис-ЭДТА-боратный буфер (рН 9,2). Электрофорез проводили при силе тока 5,0 мА/см в первые 30 мин., затем 10,0 мА/см до его окончания. Выявление изоферментов исследуемых дегидрогеназ проводили феназин-метасульфат-тетразолиевой реакцией в инкубационных средах, оптимизированных применительно к ферментам микросообществ гидроэкосистем. Оптимизацию осуществляли с применением планирования многофакторного эксперимента по Боксу-Уилсону. Установлены следующие оптимальные составы инкубационных сред.
Для МДГ: водные растворы NAD 1,0 мг/мл — 40,0 мл, нитросиний тетра-золиевый 1,0 мг/мл - 25,0 мл, феназинметасульфат 1,0 мг/мл - 4,0 мл, 1,0 М раствор малата натрия (рН 7,0) - 10,0 мл,0,2 М трис-HCl буфер (рН 7,1)- до 100,0 мл. Инкубировали 2 ч. при 37°С. В местах локализации МФ фермента развивается темно-синее окрашивание.
Для ГДГ: водные растворы NAD 1,0 мг/мл - 40,0 мл, нитросиний тетразо-лиевый 1,0 мг/мл - 30,0 мл, феназинметасульфат 1,0 мг/мл - 2,0 мл, 1,0 М раствор L-глутамата натрия (рН 7,0) - 5,0 мл, 0,1 М фосфатный буфер (рН 7,0) - до 100,0 мл. Инкубировали 3 ч. при 37°С. В местах локализации МФ фермента развивается темно-синее окрашивание.
Для выявления изоферментов каталазы блоки геля выдерживали 10 мин. в дистиллированной воде, затем погружали на 10 мин. в 0,03% раствор пероксида водорода, промывали водой и помещали на 8 мин. в смесь, состоящую из равных количеств 10% раствора железа хлорида и 10% раствора феррицианида калия. Зоны, содержащие каталазу, имели вид желтых полос на темно-зеленом фоне берлинской лазури. Хранили гели в темноте и извлекали на свет только для просматривания.
Для выявления фракций неферментного белка гелевые пластинки погружали в 1,0% раствор амидочерного в 7,0% уксусной кислоте на 10 мин. Избыток красителя удаляли вымачиванием гелевых пластинок в 7% уксусной кислоте.
Молекулярную массу фракций белка определяли в градиенте геля. В качестве маркеров использовали альбумин лиофилизированный из сыворотки человека с молекулярной массой 66000-69000 Д («Reanal», Венгрия), пепсин 35000 Д и ин-сулонг SP (Югославия) 6500 Д.
Сканирование электрофореграмм проводили путем прямой денситометрии на автоматическом интегрирующем денситометре ERI-65 m фирмы «Carl Zeiss» (Iena, Германия) и на анализаторе фореграмм АФ-1 ПО «Львовприбор».
Общее содержание белка в образцах активного ила и иммобилизованных микроорганизмов устанавливали с помощью биуретовой-реакции. Общую активность некоторых специфических дегидрогеназ определяли по Асатиани. Общую активность каталазы устанавливали модифицированным методом Баха. Результаты экспериментов подвергали статистической обработке. Расчет коэффициентов уравнений регрессии проводили на ЭВМ.
2. ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ ПРОЦЕССОВ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЧИСТКИ СТОЧНЫХ ВОД ПО ИЗМЕНЕНИЮ АКТИВНОСТИ ИЗОФЕРМЕНТОВ МАЛАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ АКТИВНЫХ ИЛОВ И ИММОБИЛИЗОВАННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ
МДГ в моделях активного ила на всех фазах развития представлена тремя активными зонами. Установлено увеличение числа изоферментоа МДГ ила, максимум которой приходится на фазу лог-роста и начало стационарной фазы в момент перехода экосистемы в наиболее стабильное состояние. Наряду с общепринятым путем стабилизации гидроэкосистем за счет увеличения их видового разнообразия существует альтернативный путь - стабилизация посредством индукции в области МДГ-2 двух изоформ фермента.
Изменения общей активности МДГ ила по фазам развития экосистемы и относительной активности ее изомерных форм представлены в табл.1.
Таблица 1
Относительная активность МДГ-1, МДГ-2 и МДГ-3 _активного ила по фазам развития_
Фазы развития Общая активность, мкМоль/ мин/мг белка Зоны активности, изменения (%)
1 2 3
Адаптации 0,0156±0,0006 20,5±0,8 61,5±2,4 18,0±0,7
Лог-роста 0,0260±0,0013 18,0±0,9 64,5±3,2 17,5±0,9
Стационарная 0,028810,0008 8,0±0,24 71,5±2,1 20,5±0,б
Согласно полученным данным интенсивность окислительных процессов цикла Кребса на участке малат-оксалоацетат возрастает от фазы адаптации к стационарной фазе, причем, это достигается олигомерными формами фермента, а активность МДГ-1 от фазы адаптации к стационарной снижается более, чем в два раза..
В иловой воде модельных экосистем ила в фазе адаптации изоферменты МДГ не обнаружены. В начале фазы лог-роста выявлено до шести фракций с выраженной активностью, причем, по относительной электрофоретической подвижности они соответствуют эндоферментам. Экзогенная МДГ локализуется преимущественно в области МДГ-1 и МДГ-2, не выявлены фракции МДГ-3. Число изоферментов не изменяется до второй половины стационарной фазы, в фазе отмирания они выявлены только в области МДГ-1.
Анализ спектров изоформ МДГ ила в моделях позволяет предположить возможность их индукции уже в начале фазы лог-роста. В роли индукторов, вероятно, выступают спонтанно синтезируемые эндо- и экзометаболиты в клетках ила и во внешней среде. Это могут быть соединения, близкие по конфигурации и химической структуре к субстрату. Выход изоформ МДГ во внешнюю среду в фазе лог-роста можно объяснить быстрым накоплением в иловой жидкости субстратов МДГ. Это вполне согласуется с данными, указывающими на регуляцию синтеза внеклеточных ферментов микроорганизмов внешней средой. Изомерные формы МДГ-1 и МДГ-2 локализуются в цитоплазме клеток ила и относятся к растворимым формам. Именно они обнаруживаются в иловой жидкости, а МДГ-3 погружена в толщу мембран, что объясняет отсутствие МДГ-3 во внешней среде.
Изоферменты МДГ ила регенератора представлены в составе трех активных зон, зона МДГ-2 включает четыре изоформы. По относительной активности МДГ-1 и МДГ-2 преобладают над мембраносвязанной МДГ-3. В иловой жидкости регенератора содержится минимальное количество загрязнителей, поэтому можно предположить, что окислительные процессы протекают преимущественно в цитоплазме клеток ила и на внутренней поверхности цитоплазматической мембраны. По мере прохождения биомассы ила по секциям аэротенка наблюдали трехкратную активацию МДГ-3 и значительное повышение активности МДГ-2, однако снижение таковой у МДГ-1. Следует отметить увеличение числа изоформ фермента ила к центру аэротенка. Такое динамическое состояние изо-ферментов характерно для интенсивных процессов изъятия загрязнителей из сточных вод и их окислением как в толще мембран, так и в цитозоле клеток ила. На выходе из аэротенка активность МДГ-3 достигает уровня таковой в регенераторе. Интенсивность мембранных окислительных процессов снижается, также понижается активность МДГ-2 и МДГ-1. Это соответствует заключительному этапу очистки сточных вод. Динамика активности изоферментов МДГ ила в процессе очистки полностью подтверждается динамикой изъятия загрязнителей по ХПК и фосфат-ионам (табл.2).
Таблица 2
Динамика изъятия загрязнителей в процессе очистки сточных вод городской _канализации _
Показатели, мг/л Секции аэротенка
регенератор первая вторая третья выход
ХПК 61,4±3,6 237,6± 11,9 79,2±3,9 59,4±2,4 39,6±2,3
Фосфат-ионы 66,7±3,3 39,2±1,9 10,4±0,3 10,0±0,3 1,4±0,03
Приведенные данные указывают на поэтапное изъятие загрязнителей из сточных вод с последовательным включением изоферментов МДГ ила в процессы окисления ксенобиотиков. Обнаружена индукция каталитически активных форм МДГ по мере возрастания эндо- и экзометаболитов в экосистеме ила. Состав и динамика активности изоэнзимов МДГ ила в процессе очистки сточных вод НПЗ в целом соответствуют таковым на городских станциях аэрации.
Во вторичных отстойниках и в головных отсеках аэротенков более выражена активность МДГ-1 и изомерных форм МДГ-2. По мере прохождения ила через аэротенки активность МДГ-3 и МДГ-2 увеличивается, значительное снижение таковой отмечено у МДГ-1. МДГ-2 ила включает до шести изоформ.
Залповые сбросы сточных вод НПЗ и их компонентов приводили к различной степени ингибирования изоферментов МДГ ила (табл.3).
Таблица 3
Изменение относительной активности изоферментов МДГ ила _при действии сточных вод НП3_
Название производства, концентрация, мг/г ила, сточная вода: иловая смесь Снижение активности, %
1 2 3
CMC «Прогресс» 75-80 51,32±2,46 34,53±1,21 57,15±2,89
То же 95-100 57,45±1,43 49,50± 1,90 71,16±3,19
То же 145-150 63,46±1,91 66,70±1,73 100,00±2,90
Синтетич. жирные кислоты 1:20 58,20±2,80 67,50±1,50 85,40±4,00
Карбамид 1:20 70,00±2,80 82,70±3,60 94,00±3,50
Алкилсалицилатные присадки 1:20 66,00±2,90 65,20±2,80 78,30*2,30
В большей мере под действием токсикантов ингибируется мембраносвя-занная форма МДГ-3. Инактивация МДГ-2 и МДГ-1 выражена значительно меньше. Заметна деструкция изоформ МДГ, на это указывает изменение относительной электрофоретической подвижности ее фракций. Действие синтетического моющего средства (CMC) «Прогресс» приводит к диссоциации МДГ-1 на два протомера со значительной потерей активности.
Реанимация активного ила после залпового сброса сточных вод НПЗ сопровождалась индукцией множества изоформ фермента с частичным восстановлением активности МДГ-2 и МДГ-3. Аэробная стабилизация ила в течение 72 ч приводила к реактивации МДГ-2 и МДГ-3, в области МДГ-1 и МДГ-2 выявлено до пяти дополнительных активных фракций.
Таким образом, изозимный профиль МДГ и динамика активности ее форм в микросообществах гидроэкосистем указывают на существование тонкой регуляции окислительно-восстановительных реакций метаболизма на уровне одного из ключевых ферментов цикла Кребса.
Увеличение числа изоформ фермента от фазы адаптации к фазе лог-роста, а также от вторичных отстойников и регенераторов к выходу из аэротенков связано с индукцией адаптивных изоформ МДГ в ответ на рост разнообразия экзо-и эндометаболитов в экосистеме и направлено на стабилизацию последней.
МДГ-1 и МДГ-2 локализованы в цитоплазме клеток, они растворимы, а МДГ-3 мембраносвязанная. Направление реакции малат-оксалоацетат зависит от степени насыщения водной среды кислородом и субстратами. В условиях насыщения среды кислородом и субстратами активируется мембраносвязанная МДГ-3. Реакция сдвигается в сторону окисления малата и накопления энергии в NADH. Лимит субстрата и кислорода смещает реакцию в сторону образования малата из оксалоацетата и NADH с преобладанием активности изоформ МДГ-1 и МДГ-2. Транспорт каталитически активных субъединиц МДГ в водную среду, вероятно, обусловлен или повышением проницаемости мембран вследствие накопления субстратов и их аналогов или автолизом клеток ила.
Высокотоксичные сточные воды НПЗ и их компоненты частично или полностью блокируют фрагмент цикла Кребса на участке малат-оксалоацетат. При этом в большей мере подвержена ингибированию мембраносвязанная МДГ-3. Реанимация и стабилизация стрессированных гидроэкосистем осуществляется индукцией в микросообществах множества изомерных форм фермента - «реаниматоров». Данные изоферментного спектра и активности МДГ иммобилизованных на носителях микроорганизмов в процессе очистки сточных вод НПЗ в биореакторах представлены в табл. 4.
Таблица 4
Динамика относительной активности изоформ МДГ иммобилизованных
микроорганизмов
МДГ Относительная активность, в %
Первая ступень Вторая ступень
вход центр выход отстойник центр отстойник
МДГ-1 6,3+0,25 7,4±0,3 9,5+0,4 3,8+0,2 6,7±0,3 1,0+0,02
МДГ-2 62,7+3,1 63±3,1 63,5+1,9 53,4+2,5 70,0+3,2 49,0+2,0
МДГ-3 31,0+1,5 29,6+1,5 27,0+1,1 42,8+1,7 23,3±1,0 50,0+1,0
Биореаторы работают в проточном режиме без аэрации на первой ступени очистки и микроаэрацией на второй ступени.
Изоферментный спектр МДГ иммобилизованных микроорганизмов в целом незначительно отличается от такового активного ила. Относительно низкая-активность МДГ-3 и динамика активности изоформ МДГ-2 и МДГ-1 указывает на преобладание анаэробных процессов метаболизма над аэробными.
Это приводит к снижению эффективности работы биореакторов, что подтверждается низким качеством очистки сточных вод.
Коррекция технологии очистки, предполагающая относительные анаэробные условия на первой ступени и аэрацию во всем объеме второй ступени очистки позволила значительно улучшить качество воды на выходе из биореакторов (рисунок 1) . При этом достигнуто динамическое равновесие процессов окисления-восстановления на участке малат-оксалоацетат, что подтверждается данными активности изоферментов МДГ.
Рис. 1. Показатели работы биореактора до и после коррекции технологии очистки
3. СТРУКТУРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ И ДИНАМИКА АКТИВНОСТИ ИЗОФЕР-МЕНТОВ L-ГЛУТАМАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ АКТИВНОГО ИЛА И ИММОБИЛИЗОВАННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ НА ДЕЙСТВУЮЩИХ СООРУЖЕНИЯХ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЧИСТКИ СТОЧНЫХ ВОД
В моделях экосистем активного ила на всех фазах развития ГДГ представлена пятью изоформами, незначительно отличающимися по электрофоретиче-ской подвижности. Это подтверждает данные о структурной организации бактериальных ГДГ. На электрофореграммах выявлена основная форма ГДГ-5 и четыре конформационных изомера - минорные формы ГДГ-1, ГДГ-2, ГДГ-3 и ГДГ-4. Динамика активности фермента по мере развития экосистемы свидетельствует, что до стационарной фазы катализируется преимущественно реакция окисления глутамата. В фазах лог-роста и замедленного роста экосистема крайне нуждается в энергии, которая образуется при окислении глутамата до 2-оксоглутарата и накапливается в виде NADH, тем самым обеспечивая клетки ила энергией через электронно-транспортную цепь. По мере перехода к стационарной фазе энергетические потребности экосистемы снижаются, активность ГДГ стабилизируется. Именно на этой стадии констатируется преобладание активности минорных форм ГДГ. Завершение стационарной фазы характеризуется резкой активацией ГДГ, причем, основная активность теперь локализуется в области ГДГ-5. Вероятно, при выходе из стабильного стационарного состояния экосистема для рестабилизации вновь интенсивно окисляет глутамат и запасает энергию в форме NADH.
В водной среде модельных экосистем ила активные фракции выявлены в начале фазы лог-роста, в фазах лог-роста и замедленного роста. По относитель-
ной электрофоретической подвижности они отличаются от эндоферментов большей подвижностью. Это указывает на транспорт модифицированных форм ГДГ с сохраненной каталитической активностью в водную среду, что вполне согласуется с данными авторов, установивших явление полуассоциации субъединиц и образование каталитически активных димеров и тримеров ГДГ.
Динамика изменения относительной активности изоформ ГДГ ила в процессе биологической очистки сточных вод НПЗ показана в табл. 5.
Таблица 5
Относительная активность изоформ ГДГ ила в процессе очистки сточных вод НПЗ
изо-формы Относительная активность, изменение в %
Первая ступень Вторая ступень
ГДГ вход центр выход вторичный отстойник центр вторичный отстойник
ГДГ-1 10,0±0,2 8,5±0,15 8,5±0,13 6,0±0,25 9,5±0,4 3,5±0,15
ГДГ-2 16,5±0,7 26,5±1,2 36,5±0,16 8,0±0,13 34,5±1,5 7,5±0,1
гдг-з 15,0±0,7 19,5±0,8 21,0±1,0 10,5±0,4 23,0±1,15 12,5±0,б
ГДГ-4 14,0±0,б 16,5±0,7 14,0±0,6 20,5±0,8 22,5±0,17 28,0±1,2
ГДГ-5 44,5±1,9 29,5±1,4 20,0±0,8 55,012,3 10,5±0,4 48,5±2,1
Максимум общей активности фермента установлен во вторичных отстойниках, далее по мере прохождения ила через аэротенки активность ГДГ значительно снижается и перестраивается соотношение активности основной и минорных форм фермента. Во вторичных отстойниках и в головных отсеках аэро-тенков преобладает реакция окислительного дезаминирования глутамата и обеспечение клеток ила энергией КАОН. Это подтверждается активацией основной формы фермента - ГДГ-5. Ингибирование ГДГ-5 и увеличение относительной активности минорных форм к центрам аэротенков и к выходу из них подтверждает переключение реакции окислительного дезаминирования глутамата на восстановительное аминирование 2-оксоглутарата. Последнее позволяет предположить наличие неконкурентного ингибирования ГДГ-5 аденилатами, поскольку в центре аэротенков происходит изъятие основной массы загрязнителей из сточных вод и их окисление, а соответственно и улавливание энергии в форме ГТФ и АТФ. Снижение же концентрации АТФ в иле вторичных отстойников, а соответственно увеличение АДФ и неорганического фосфата играют роль положительных модуляторов ГДГ-5.
Серии экспериментов по исследованию динамики активности ГДГ и ее изоформ в процессе очистки сточных вод на городских станциях аэрации полностью подтвердили смещение реакции в сторону окислительного дезаминирова-ния глутамата в илах регенераторов и переключение на восстановительное ами-нирование 2-оксоглутарата по мере прохождения биомассы через аэротенк (табл.6).
Таблица 6
Относительная активность изоформ ГДГ в процессе очистки сточных вод на городских станциях аэрации_
изоформы
Относительная активность, изменение (%)
1Д1 регенератор первая секция вторая секция третья секция выход из аэротенка
ГДГ-1 5,та 10,5±0,4 12,0±0,5 12,5±0,5 10,0±0,3
ГДГ-2 8,5±0,4 15,5±0,7 19,5±0,8 17,0±0,8 17,5±0,7
ГДГ-3 12,0±0,5 17,5±0,8 21,0±0,8 20,0±0,9 24,5±1,0
ГДГ-4 19,0±0,8 14,5±0,7 14,0±0,6 16,5±0,8 18,0±0.8
ГДГ-5 55,5±2,3 42,0±2,0 33,5±1,4 34,0±1,4 30,0±1,2
Залповые сбросы сточных вод CMC "Прогресс", свинецсодержащих сточных вод и сточных вод заводского коллектора приводили практически к полному блокированию фермента и, как следствие, к остановке всех процессов метаболизма, функционально связанных с этим ключевым ферментом. Следует обратить особое внимание на инактивацию ГДГ ила сточными водами заводского коллектора, содержащими до 140,0 мг/г ила аммонийного азота, поскольку здесь имеет место субстратное ингибирование, причем, более чувствительна к таковому основная форма ГДГ-5. Реанимация и аэробная стабилизация илов, подвергшихся стрессу, сопровождалась индукцией и выявлением от трех до пяти дополнительных каталитически активных фракций фермента.
Изоферментный спектр ГДГ иммобилизованных микроорганизмов в процессе очистки сточных вод НПЗ в биореакторах не отличается от такового активных илов. В относительно анаэробных условиях основная активность фермента концентрируется в области ГДГ-5, увеличение концентрации кислорода в воде приводит почти к двухкратному уменьшению активности ГДГ-5 и увеличению таковой у минорных форм фермента (табл. 7).
Таблица 7
Динамика относительной активности изоформ ГДГ
иммобилизованных микроорганизмов.
ГДГ Относительная активность, %
первая ступень вторая ступень
вход центр выход отстойник центр отстойник
гдг-1 12,0±0,4 8,2*0,2 6,1 ±0,2 3,8±0,15 8,7±0,4 1,0±0,03
ГДГ-2 18,0±0,7 27,7±1,2 35,8±1,6 7,4±0,3 38,8±1,8 5,5±0,2
ГДГ-3 15,8±0,7 18,5±0,7 20,0±0,8 10,0±0,4 22 2±0,9 ]4,0±0,6
ГДГ-4 14,5±0,6 13,5±0,6 14,0±0,6 19,3±0,8 23,0±0,8 32,0±1,4
ГДГ-5 39,7±1,7 34,Ш,6 24,1±1,1 59,5±2,4 8,1±0,3 47,5±2,1
Таким образом, структурная организация бактериальных ГДГ модельных гидроэкосистем, динамика активности изомерных форм фермента в моделях и на действующих сооружениях биологической очистки свидетельствуют о существовании тонких механизмов регуляции аминокислотного и белкового обменов в клетках активного ила и в йодной среде гидроэкосистем на уровне субстратов и энергетического статуса.
4. АКТИВНОСТЬ КАТАЛАЗЫ И ЕЕ ИЗОМЕРНЫХ ФОРМ В ПРОЦЕССЕ ОЧИСТКИ СТОЧНЫХ ВОД АКТИВНЫМ ИЛОМ И ИММОБИЛИЗОВАННЫМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ
Общая активность каталазы в моделях экосистем ила возрастала от фазы адаптации к стационарной и достигала максимума в конце стационарной фазы (табл.8).
Таблица 8
Активность каталазы в моделях ила по фазам развития_
Фазы развития экосистемы
адаптации лог-роста Стацио нарная окончание стационарной
Каталазный показатель (кат.число/ мг белка) 2,67±0,11 4,03±0,18 7,5010,35 8,91±0,40
Фермент представлен двумя изоформами - К-1 и К-2. Динамика активности изоферментов каталазы полностью подтверждает динамику общей активности фермента в моделях экосистем ила. Основная активность локализуется в области К-2, которая превышает таковую К-1 в 2-2,5 раза. Пика активности изо-ферменты достигают к окончанию стационарной фазы, причем, наблюдается образование в области К-2 двух фракций. Результаты вполне согласуются с данными авторов, установивших рост активности бактериальных каталаз и увеличение числа изоформ к стационарной фазе.
В иловой жидкости моделей экосистем ила в фазе адаптации выявлено две изоформы, причем, более выражена активность К-1. По мере развития экосистемы активность их возрастает и достигает максимума к окончанию стационарной фазы, число изоформ фермента становится равным четырем. По структурной организации изоформы каталазы в водной среде отличаются от эндогенной большим числом , большими значениями относительной электрофоретической подвижности и более выраженной активностью. Как следует из данных Сузиной Н.Е., продукты реакции на каталазу обнаружены на поверхности клеточных стенок метанотрофных бактерий и в периплазме. Вероятно, локализация каталазы в клетках микроорганизмов способствует ее выходу в водную среду еще в фазе адаптации и включению в реакции оксидоредукции. Таким образом, предположения о существовании экзогенной каталазы в чистых и смешанных популяциях микросообществ гидроэкосистем полностью подтвердились.
Динамика общей активности каталазы и ее изоферментов в иле сооружений биологической очистки сточных вод НПЗ представлена в табл. 9.
Таблица 9
Показатели общей активности каталазы и ее изоформ ила сооружений биологической очистки сточных вод НПЗ_
Показа тели Первая ступень Вторая ступень
вход центр выход вторичный отстойник центр вторичный отстойник
Общ.актив -ть (катала зное число /мг белка) 1,83±0,07 3,27±0,03 6,14±0,15 1,05±0,04 5,90±0,23 2,86±0,11
К-1 33,0±1,5 26,011,2 19,0±0,5 41,0±1,5 19,0±0,7 47,012,0
К-2 67,0±1,5 74,0±3,5 81,012,0 59,0±2,0 62,0±1,8 53,012,2
К-3 - - - - 19,0±0,7 -
По ходу биологической очистки сточных вод активность каталазы увеличивается, что является следствием генерирования пероксида водорода и его интенсивного превращения каталазой клеток ила. По мере прохождения биомассы ила к центру аэротенков активность изоформ фермента увеличивалась и достигала максимума на выходе из них, причем, основная активность каталазы локализована в области К-2. Низкая активность фермента во вторичных отстойниках и на входе в аэротенки, вероятно, связана с лимитом кислорода, поскольку в модельных экспериментах прекращение аэрации неизменно приводило к почти двухкратной инактивации каталазы.
Моделирование залповых сбросов сточных вод нефтехимических производств, а также залповые сбросы в производственных условиях показали значительную резистентность каталазы к действию токсикантов. К полному блокированию фермента приводила инкубация ила со свинецсодержащими сточными водами, а действие большинства органических компонентов сточных вод вызывало активацию каталазы (табл.10).
Таблица 10
Общая активность каталазы ила после залповых сбросов сточных вод и их ком-
понентов
Катал азный показатель (каталазное число/мг белка) Сточные воды, компоненты сточных вод
синтетические жирные кислоты аммонийный азот фенол о-крезол диизобу-тилпара крезол
Контроль 2,1810,05 1,7310,06 1,8010,07 2,0510,08 2,0010,07
Опыт 1,0310,04 3,4010,12 2,94Ю,12 3,9910,15 3,4710,13
Реанимация и аэробная стабилизация ила, подвергшегося действию залповых сбросов сточных вод характеризовалась реактивацией фермента и выявлением большего числа изоформ, чем в исходной экосистеме. Это подтверждают предположения об индуцированном синтезе полипептидов, обладающих ката-лазной активностью в ответ на окислительный и иные стрессы.
ВЫВОДЫ
1. Для модельных временных сообществ активного ила и иммобилизованных микроорганизмов очистных сооружений показано наличие изомерных форм малатдегидрогеназы, глутаматдегидрогеназы и каталазы.
2. Изменение набора и активности изомерных форм ферментов сообществ техногенных гидроэкосистем является одним из способов регуляции и коррекции метаболизма.
3. В соответствии со стадиями развития модельных сообществ активного ила установлены изменения в соотношениях между набором изомерных форм и активностью малатдегидрогеназы, глутаматдегидрогеназы и каталазы.
4. Индукция, синтез и выход в водную среду изоферментов каталазы активного ила в моделях и на действующих сооружениях биологической очистки обусловлены нарастанием концентрации перекисных соединений и направлены на достижение гомеостаза и стабилизацию временных сообществ активного ила.
5. Лимитирование временных сообществ микроорганизмов кислородом приводит к изменению активности изомерных форм исследуемых ферментов. В относительно анаэробных условиях наблюдается увеличение активности ГДГ-5 и уменьшение таковой у МДГ-3 и К-2. Аэробные условия характеризуются увеличением активности МДГ-3 и К-2, активность ГДГ-5 уменьшается.
6. При залповых сбросах сточных вод нефтехимических производств и их компонентов мембраносвязанные формы ферментов активного ила подвержены ингибированию в большей мере, чем цитоплазматические.
7. Реанимация и аэробная стабилизация временных сообществ активного ила, подвергшихся действию высокотоксичных сточных вод и их компонентов, сопровождается выявлением в низкомолекулярных областях электрофореграмм множества каталитически активных форм малатдегидрогеназы, глутаматдегидрогеназы и каталазы.
8. Впервые показана перспективность метода диск-электрофореза в гидробиологии, позволяющего разработать систему экспрессных, высокоинформативных, интегральных способов биомониторинга модельных гидроэкосистем по динамике изменения активности и количества изомерных форм некоторых ключевых ферментов окислительного метаболизма.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Шаталаев И.Ф., Либерман А.Д., Фомин И.В. Молекулярные формы глу-таматдегидрогеназы микросообществ гидроэкосистем // Экология и здоровье человека: Тез. 2-й международной научно-практической конференции - Самара, 1995. С. 99 (вклад автора- 1/2).
2. Шаталаев И.Ф., Фомин И.В., Расцветова Н.В. Молекулярные формы некоторых оксидоредуктаз в процессе очистки сточных вод иммобилизованным ценозом // Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии: Ма-
тер. конф. биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири. - Челябинск, 1999. С. 289-291 (1/2).
3. Шаталаев И.Ф., Фомин И.В., Коннов В.И. Наяда мелкозубчатая в системе доочистки сточных вод // Экология и жизнь: Матер, междунар. научно-практ. конф. - Пенза, 1999. С. 112-113 (1/3).
4.Шаталаев И.Ф., Расцветова Н.В., Либерман А.Д., Фомин И.В. Адаптационные возможности живых организмов в условиях антропогенного загрязнения окружающей среды // Экология и жизнь: Матер. 2-й междунар. научно-практ. конф.-Пенза, 1999. С. 120(1/3).
5. Шаталаев И.Ф., Фомин И.В., Коннов В.И. Молекулярные формы некоторых оксидоредуктаз иммобилизованных микроценозов в процессе очистки сточных вод // Матер. Междунар. Научно - практич. конф. - Пенза, 2000. С. 128-129(1/2).
6. Шаталаев И.Ф., Фомин И.В., Коннов В.И. Каталаза и ее молекулярные формы в микросообществах модельных и природных гидроэкосистем // Экология и здоровье человека: Труды VII Всероссийского Конгресса. - Самара, 2001. С. 206-208 (1/2).
7.Шаталаев И.Ф., Фомин И.В., Пурыгин П.П., Зарубин Ю.П. Структурные особенности и активность некоторых оксидоредуктаз в процессе очистки воды иммобилизованным ценозом // Вестник Самарского государственного университета// Самара, 2002, специальный выпуск. С. 150-155 (1/3).
8. Шаталаев И.Ф. Фомин И.В., Мащенко З.Е., Шарипова С.Х. Фракционный состав белков микросообществ активных илов, грунтов водохранилищ и малых рек // Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные и клинические аспекты: Матер. Всероссийской конф.- Новосибирск, 2002. С 364365 (1/3).
Подписано в печать 30 марта 2003 г. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать оперативная. Объем 1 п.л. Тираж 100 экз. Заказ №. 12£ 443011 г. Самара, ул. Академика Павлова, 1 Отпечатано ООО «Универс-групп»
P- 76 7Í
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Фомин, Игорь Викторович
Введение
Часть 1. Обзор литературы
Глава 1. Оценка функционального состояния модельных и природных 12 гидроэкосистем
1.1. Показатели разнообразия и стабильности гидроэкосистем
1.2. Биотестирование токсичности, тест-объекты и биологические 15 показатели
1.3. Методы оценки функционального состояния активных илов 22 и иммобилизованных временных сообществ микроорганизмов в процессе очистки сточных вод
1.4. Перспективы энзимоиндикации в системе биологического контроля
1.5. Иммобилизация микроорганизмов - деструкторов на синтети- 30 ческих носителях. Новые химико-экологические процессы
1.6. Технологические параметры и эффективность работы сооружений 34 биологической очистки сточных вод иммобилизованными микроорганизмами
Часть 2. Собственные исследования
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1. Дезинтеграция клеток активного ила и иммобилизованных микроорганизмов. Подготовка ферментных образцов
2.2. Электрофорез. Оборудование и реактивы
2.3. Методы выявления изомерных форм ферментов. Определение 43 общей активности ферментов и относительной активности изоферментов. Денситометрия.
Глава 3. Технологический контроль процессов биологической очистки сточных вод по изменению активности изоферментов малатдегидрогеназы активных илов и иммобилизованных микроорганизмов
Глава 4. Структурные особенности и динамика активности изофер- 67 ментов L-глутаматдегидрогеназы активного ила и иммобилизованных микроорганизмов на действующих сооружениях биологической очистки сточных вод
Глава 5. Активность каталазы и ее изоферментов в процессе очистки 85 сточных вод активным илом и иммобилизованными микроорганизмами
Глава 6. Биомониторинг активных илов и иммобилизованных микроорганизмов. Функциональная взаимосвязь дегидроге-наз и каталазы микросообществ модельных гидроэкосистем. Обсуждение результатов
ВЫВОДЫ
Введение Диссертация по биологии, на тему "Эколого-биохимические закономерности биологической очистки воды активным илом и иммобилизованными микроорганизмами"
АКТУАЛЬНОСТЬ. Неуклонное увеличение использования водных ресурсов сопровождается возрастающим влиянием антропогенных факторов на режим водоемов и водные экосистемы. Прогнозы интенсивности водопо-требления показывают, что антропогенный пресс на гидроэкосистемы будет продолжаться и в отдаленной перспективе может привести к непредвиденным последствиям. Биологическая очистка городских и промышленных сточных вод практически во всех странах мира на 90% производится в аэро-тенках . Городские станции аэрации и сооружения биологической очистки сточных вод промышленных производств в середине прошлого столетия были единственной преградой глобального загрязнения внешних и внутренних водоемов планеты. Однако уже через 20—30 лет интенсивной эксплуатации аэротенков возникли серьезные проблемы, касающиеся утилизации избыточного активного ила. Огромные площади земли изъяты из оборота в связи с шламированием отработанного активного ила, который зачастую содержит недоокисленные адсорбированные соединения органического и неорганического характера с различной степенью токсичности. Проблема усугубляется проникновением недоокисленных соединений в верхние горизонты подземных вод и угрозой попадания в скважинные воды.
В настоящее время в лабораторных, опытно-промышленных и промышленных испытаниях показана возможность и перспективность биологической очистки городских и промышленных сточных вод иммобилизованной на синтетических волокнах микрофлорой в анаэробно-аэробных условиях [24, 76, 77, 125]. Разработанные методы внедряются в различных регионах России, в том числе и в Поволжье. Перспективность метода заключается в том, что снимается основная проблема биологической очистки в аэротен-ках- отсутствие избыточного активного ила и исключение шламирования илов. Иммобилизованное на синтетических волокнах временное сообщество микроорганизмов в итоге представляет собой смешанную популяцию бактерий, простейших, грибов, коловраток и водорослей, образующих пищевую цепь. Во временном сообществе образуется несколько трофических уровней: первый представлен гетеротрофными бактериями, высокая окислительная способность которых обуславливает их ведущую роль в биодеградации загрязнителей; на втором уровне находятся жгутиконосцы, ресничные инфузории и коловратки; третий уровень представлен сосущими инфузориями. Количество организмов каждого трофического уровня зависит от таких факторов, как состав поступающей сточной воды, температуры , рН , концентрации кислорода и др. В зависимости от технологических параметров образуется замкнутая модельная гидроэкосистема — биореактор.
Опыт эксплуатации биореакторов в ПО " Самаранефтеоргсинтез" показал, что эффективность их работы зависит от многочисленных факторов, из которых следует выделить кислородный режим. Большинство разработанных методов биологической очистки сточных вод иммобилизованным ценозом на синтетических носителях предполагает анаэробно-аэробные условия с преобладанием анаэробных процессов окисления загрязнителей. Эксплуатация биореакторов в названных условиях не привела к успеху, поскольку зачастую вода на выходе из биореактора по многим показателям не соответствовала состоянию очищенной для сброса в водоемы.
В настоящее время принято считать, что устойчивость природных и модельных гидроэкосистем обеспечивается видовым разнообразием входящих в них сообществ гидробионтов, особенно микроорганизмов [80]. Многолетние наблюдения за гидроэкосистемами показали, что в результате кратковременного мощного антропогенного воздействия, приводящего зачастую к метаболическому шоку, гидроэкосистемы в течение 24-48 часов по многим параметрам достигают исходного функционального состояния, при этом увеличения видового разнообразия не происходит. Эти данные приводили к мысли о том, что в экстремальных ситуациях устойчивость гидроэкосистем достигается каким-то иным путем, в частности, увеличением разнообразия эндо- и экзометаболитов и, как следствие, структурной реорганизацией ключевых олигомерных ферментов метаболизма. Первое предположение нашло экспериментальное подтверждение, рядом авторов показано существование прямой зависимости жизнеспособности морских и пресноводных сообществ от концентрации внеклеточных органических соединений [80, 99, 115, 119, 293]. Второе же предположение остается практически неизученным и открытым. Бесспорно, взаимодействие многочисленных факторов при формировании гидроэкосистем связано с огромным числом сложных и разнообразных биохимических метаболических реакций. На каком-то этапе дальнейшее развитие биохимической экологии будет лимитировано уровнем знаний данного вопроса.
Применяемые в настоящее время традиционные методы определения и контроля функционального состояния модельных и природных гидроэкосистем не дают исчерпывающей информации о молекулярных и субмолекулярных механизмах стабилизации последних. В связи с этим особое значение приобретают исследования, направленные на изучение состава олигомерных форм ключевых ферментов метаболизма в сообществах гидроэкосистем, их роли в реанимации при техногенных, особенно экстремальных воздействиях на водные экосистемы. До сих пор неизвестны механизмы выхода гидроэкосистем в относительно короткие промежутки времени из глубочайших стрессовых ситуаций, достигается ли при этом исходный функциональный статус или экосистемам наносится какой-то "биохимический ущерб".
В то же время, для организации непрерывного биомониторинга природных и модельных гидроэкосистем, в частности, процессов биологической очистки воды в аэротенках и биореакторах, требуются надежные, информативные способы оценки функционального состояния водных сообществ, характеризующие процессы метаболизма и окислительную мощность сооружений биологической очистки в целом.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Исследовать эколого-биохимичес кие страте^ гии ответных реакций микроорганизмов активного ила и иммобилизованной микрофлоры на воздействие техногенных загрязнений в различных технологических режимах и* роль в этих процессах молекулярных форм оксидоре-дуктаз.
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Изучить структурно-функциональные особенности малатдегидрогена-зы (МДГ, К.Ф. 1.1.1.37) активного ила и иммобилизованной микрофлоры при различных режимах биологической очистки коммунально-бытовых и техногенных сточных вод.
2. Изучить структурно-функциональные особенности глутаматдегидроге-назы (ГДГ, К.Ф. 1.4.1.2) активного ила и иммобилизованной микрофлоры при различных режимах биологической очистки коммунально-бытовых и техногенных сточных вод.
3. Изучить структурно-функциональные особенности каталазы ( К.Ф. 1.11.1.6) активного ила и иммобилизованной микрофлоры при различных режимах биологической очистки коммунально-бытовых и техногенных сточных вод.
4. Разработать способы биомониторинга очистки сточных вод в аэротен-ках и биореакторах по динамике активности и составу изомерных форм исследуемых ферментов, характеризующих функциональное состояние активных илов и иммобилизованных временных сообществ микроорганизмов.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
1. При воздействии загрязнителей различного состава одним из факторов стабилизации временных сообществ активного ила и иммобилизованной микрофлоры в фазе лог-роста и стационарной фазе развития является увеличение количества олигомерных ферментов окислительного метаболизма. Обнаружение каталитически активных протомеров и субъединиц оксидоредуктаз в водной среде обусловлены нарастанием разнообразия экзометаболитов как в моделях активного ила, так и на действующих сооружениях биологической очистки и направлены на усиление гомеостаза и стабилизацию временных сообществ микроорганизмов.
2. Преимущественная роль в механизмах адаптации,, реанимации и стабилизации модельных временных сообществ микроорганизмов, функционирующих в нормальном технологическом режиме биологической очистки и в экстремальных условиях, принадлежит низкомолекулярным формам ключевых ферментов метаболизма гидробионтов-каталитически активным протомерам и субъединицам. Следствием залповых сбросов высокотоксичных промышленных стоков является блокирование мембранных систем энергообеспечения клеток активного ила и иммобилизованной микрофлоры. В таких условиях срабатывают механизмы компенсаторной биохимической адаптации, заключающиеся в мобилизации ферментов окислительного метаболизма и экспресс биосинтезе активных субъединиц молекулярных форм ферментов, выполняющих роль "реаниматоров".
3. Активность олигомерных форм исследуемых ферментов в большей мере подвержена ингибированию при нарушениях технологического режима и действии токсичных сточных вод и их компонентов
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые получены сведения о структурной организации малатдегидрогеназы, глутаматдегидрогеназы и каталазы активных илов и иммобилизованных на синтетических волокнах временных сообществ микроорганизмов, используемых для биологической очистки промышленных и коммунально-бытовых стоков.
Установлена зависимость набора олигомеров и пртомеров исследуемых ферментов от режима процессов биологической очистки.
Определено, что структурная организация и динамика активности изоэнзимов исследуемых ферментов в процессе очистки бытовых и промышленных сточных вод является результирующим окислительно-восстановительных реакций, характеризующих потребность экосистемы в субстратах.
Впервые установлено увеличение числа изоферментов и молекулярных форм исследуемых ферментов в условиях лимитирования процессов биологической очистки кислородом.
Впервые показана перспективность метода диск-электрофореза в гидробиологии, позволившего разработать систему экспрессных, высокоинформативных, интегральных способов биомониторинга модельных гйдроэкоси-стем по динамике изменения активности и набора изоферментов и каталитически активных протомеров некоторых ключевых ферментов окислительного метаболизма.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Полученные результаты позволяют пересмотреть подходы к практической реализации биологической очистки сточных вод промышленных производств активным илом и иммобилизованными временными сообществами микроорганизмов. Информация о структурной организации и динамике активности изоферментов исследуемых оксидоредуктаз дает возможность оперативно управлять процессами биологической очистки в аэротенках и биореакторах на всех стадиях.
Полученные данные позволяют провести коррекцию технологии очистки воды в биореакторах, функционирующих в режиме анаэробно-аэробного метаболизма. Коррекция технологии очистки, предполагающая преобладание аэробных процессов метаболизма над анаэробными приводит к стабилизации гидроэкосистемы и, в целом, к значительному улучшению показателей работы биореакторов.
Разработаны и предлагаются к практическому использованию способы биомониторинга модельных гидроэкосистем по изменению активности и набора изоферментов малатдегидрогеназы и глутаматдегидрогеназы иммобилизованных микроорганизмов. Способы отличаются экспрессностью (в модифицированном варианте 2 часа), точностью и воспроизводимостью, могут быть использованы в практике охраны окружающей среды службами биомониторинга.
Материалы диссертационного исследования используются в учебном процессе при проведении практических занятий со студентами и клиническими интернами на кафедре общей гигиены, кафедре клинической фармакологии и профессиональной патологии, кафедре химии фармацевтического факультета в курсе токсикологической химии, кафедре общей, бионеорганической и биоорганической химии Самарского государственного медицинского университета; на кафедре водоснабжения и канализации Самарской строительной академии.
Основные положения диссертации доложены на 2-ой международной научной конференции "Экология и здоровье человека" ( Самара, 1995), на конференции биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири ( Челябинск, 1999), на международной научно-практической конференции "Экология и жизнь"( Пенза, 1999), на международной научно-практической конференции " Хозяйственно-питьевая и сточные воды: проблемы очистки и использования" ( Пенза 2000), на VII Всероссийском конгрессе "Экология и здоровье человека (Самара,2001), на Всероссийской конференции "Компенсаторно-приспособительные процессы, фундаментальные и клинические аспекты" ( Сибирское отделение РАМН, Новосибирск, 2002).
По материалам диссертации опубликовано 8 работ.
Заключение Диссертация по теме "Экология", Фомин, Игорь Викторович
выводы
1. Для модельных временных сообществ активного ила и иммобилизованных микроорганизмов очистных сооружений показано наличие изомерных форм малатдегидрогеназы, глутаматдегидрогеназы и каталазы.
2. Изменение набора и активности изомерных форм ферментов сообществ техногенных гидроэкосистем является одним из способов регуляции и коррекции метаболизма.
3. В соответствии со стадиями развития модельных сообществ активного ила установлены изменения в соотношениях между набором изомерных форм и активностью малатдегидрогеназы, глутаматдегидрогеназы и каталазы.
4. Индукция, синтез и выход в водную среду изоферментов каталазы активного ила в моделях и на действующих сооружениях биологической очистки обусловлены нарастанием концентрации перекисных соединений и направлены на достижение гомеостаза и стабилизацию временных сообществ активного ила.
5. Лимитирование временных сообществ микроорганизмов кислородом приводит к изменению активности изомерных форм исследуемых ферментов. В относительно анаэробных условиях наблюдается: увеличение активности ГДГ-5 и уменьшение таковой у МДГ-3 и К-2. Аэробные условия характеризуются увеличением активности МДГ-3 и К-2, активность ГДГ-5 уменьшается.
6. При залповых сбросах сточных вод нефтехимических производств и их компонентов мембраносвязанные формы ферментов активного ила подвержены ингибированию в большей мере, чем цитоплазматические.
7. Реанимация и аэробная стабилизация временных сообществ активного ила, подвергшихся действию высокотоксичных сточных вод и их компонентов, сопровождается выявлением множества каталитически активных форм малатдегидрогеназы, глутаматдегидрогеназы и каталазы .
8. Впервые показана перспективность метода диск-электрофореза в гидробиологии, позволяющего разработать систему экспрессных, высокоинформативных, интегральных способов биомониторинга модельных гидроэкосистем по динамике изменения активности и количества изомерных форм некоторых ключевых ферментов окислительного метаболизма.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Фомин, Игорь Викторович, Самара
1. Абдрашитова С.А. и др. Каталазная активность штамма Pseudomonas putida, окисляющего мышьяк // Микробиология.-1982.- 51, N 1.- С. 34-37.
2. Авилов И.А. и др. АТФазная активность как показатель функционального состояния активного ила// Вестник ЛГУ.- 1983.- N 9.- С. 121-124.
3. Агатова А.И., Андреева Н.М., Владимирский С.С. Определение активности некоторых ферментов в морской взвеси и осадках // Методы исследования органического вещества в океане.- М.:,1980. С. 234-243.
4. Адлер Ю.П., Маркова Е.В., Грановский Ю.В. Планирование эксперимента при поиске оптимальных условий.- М.:Наука, 1976.- 297 с.
5. Аринбасарова А.Ю., Кощеенко К.А. Ковалентное связывание клеток с активированным силикагелем // Прикл. биохимия и микробиология.-1980.-Т.16, вып. 6.- С. 854-961.
6. Арсланова Г.П. Протозойный биоценоз очистных сооружений // Наземные и водные экосистемы.- Горький, 1988.- С. 112-121.
7. Архипченко И.А. Экспресс-метод оценки структуры и активности микробного ценоза в экосистеме очистных сооружений // Лимитирование и ингибирование роста микроорганизмов: Тез. докл. Всес. конф., Пущино, 12-14 дек. 1989 г.- Пущино: Б.и., 1989.-С. 125.
8. Атанесян М.Б. Частичная очистка дезаминирующих изоферментов аланинглутаматдегидрогеназы у дрожжей Candida quilliermonolii ВКМУ-42 // Биол. ж. Армении.- 1989.- 42, N 5.- С. 518.
9. Асатиани B.C. Ферментные методы анализа,- М.: Наука, 1969.- 740 с.
10. Афиногенова А.В., Маркелова Н.Ю. Очистка загрязненных вод иммобилизованными на волокнистом носителе бделловибрионами // Химия и технология воды. 1997. - Т. 19. - № 2. - С. 203-206.
11. Балаян А.Э., Стом Д.И., Казаринова Т.Ф. Способ биоиндикации токсичности сточных вод // А.с. 1578650 СССР,. МКИ G 01 N 33/18. Открытия. Изобретения.- 1990.-N26.
12. Балыкин А.В. Микроорганизмы в загрязненной среде.- Фрунзе: Илим, 1990.- 127 с.
13. Банина Н.Н., Суханова К.М. Саркодовые активного ила // Протозоология.- Л.:, 1983.- N 8.- С. 55-75.
14. Барынин В.В., Гребенко А.И. Т-каталаза негемовая каталаза экстремально-термофильной бактерии Thermus thermophilus НВ 8 //Докл. АН СССР.- 1986.- 286, N 2.- С. 461-464.
15. Береговая Н.М. Изменение биохимических характеристик гидроида Obelia loveni при биоиндикации активного хлора в морской воде // Всесоюз. школа по техническим средствам и методам исследований Мирового океана: Тез. докл.- М., 1991.- С. 144.
16. Бологова Л.В. Развитие икринок морского карася в сточных водах городского коллектора // Актуальные вопросы экологии и охраны природы экосистемы Черноморского побережья: Сб. матер, научн. конфер., Кубанский гос. ун-т.- Краснодар, 1991. С. 138-141.18.
17. Брагинский Л.П. Комплексные критерии устойчивости водных экологических систем // Оценка и классификация качества поверхностных вод для водопользования: Тез. сообщ. Всес. конфер., Харьков, 1979.-Харьков: Б.и., 1979.- С. 7-11.
18. Бресткина М.Д., Данильченко О.П. Hydra attenuate, в качестве тест-объекта при оценке загрязненности сточных и природных вод // Методы биоиндикации и биотестирования природных вод.- Л.:, 1987.- N 1.- С. 71-76.
19. Бузинова Н.С., Данильченко О.П. Использование физиолого-биохимических показателей гидробиоитов. для определения степени токсичности компонентов сточных вод / / Проблемы охраны природы: Тез.докл конф., Байкальск, 1984,- С. 39-41.
20. Волков И.В. Биотическая функциональная нагрузка как тест в водной токсикологии // Проблемы водной токсикологии.- Петрозаводск, 1988.-С. 7-13.
21. Волошенко М.И., Дислер Е.Н., Кощеенко К.А. Иммобилизация культуры Pseudomonas putida, образующей 2-кето-Д-глюконовую кислоту // Биотех-нология.-1985.-№ 5.- С. 43-47.
22. Гааль Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул.- Мл Мир, 1982.- 448 с.
23. Гвоздяк П.И. Микробиология и биотехнология очистки воды: quo vadis ? // Химия и технология воды.- 1989.-Т.11.- № 9.- С. 854-858.
24. Гвоздяк П.И. Перспективы использования электроудерживания для иммобилизации биологически активных частиц // Иммобилизованные клетки микроорганизмов. Пущино: Изд-во Науч. Центра биол. Исследований АН СССР, 1978.- С.80-84.
25. Гвоздяк П.И., Дмитренко Г.Н., Куликов Н.И. Очистка промышленных сточных вод прикрепленными микроорганизмами // Химия и технология воды.-1985.-Т.7.- № 1.- С. 64-68.
26. Гиль Г.А., Шахова Т.В., Балаян А.Э. Биолюминесцентный метод экспрессной оценки токсичности фенолов в промышленных сточных водах // Анализ окружающей природной среды.- Горький, 1987.- С. 5561.
27. Гильмиярова Ф.Н., Радомская В.М. Транспорт восстановленных эквивалентов в миокарде при действии холестерина // Митохондрии. Аккумуляция энергии и регуляция ферментативных процессов.- М.: Наука, 1977.- С. 46-49.
28. Глоба Л.И. Влияние физико-химических свойств микроорганизмов на эффективность их удаления из воды // Химия и технология воды.-1985.-Т.7.1. Л.-СЛЗ-78.
29. Головченко Н.П., и др. Реакции трансдезаминирования у бактерий С/. sporogenes и С/, sticklandii // Микробиология.-1983.- 52, N 2.- С. 181-186.
30. Голубкова Э.Г. Использование функции сократительной вакуоли парамеций для биологического тестирования // Материалы по сравнительной физиологии и адаптации животных к абиотическим факторам внешней среды, Ярославль, 1983. С. 46-50.
31. ГорбаньН.С. ссоавт. (1988)
32. Интенсификация биотехнологии очистки высококонцентрированных сточных вод / Горбань Н.С, Тамарин Г.Л., Бацула Л.И., Поволоцкая В.А. // Экол. и технол. аспекты обезвреживания пром. отходов: Тез. докл. семин., Донецк, дек., 1988.- Черкассы, 1988.-С. 8-9.
33. Горомосова С.А. и др. Некоторые эколого-биохимические показатели устойчивости моллюсков к загрязнению // Гидробиол. ж.-1987.- 23, N 1.-С. 61-66.
34. Гудкова Л.В. и др. Исследование субъединичной структуры каталазы Penicillium vitale // Укр. биохим. ж.- 1985.- 57, N 4.-С. 29-33.
35. Гуревич В.Б., Светлаков А.В., Попова Л.Ю., Шендеров А.Н. Контроль синтеза глутамата у Vibrio harveyi И Микробиология.- 1986.- 55, N 1.- С. 77-80.
36. Гюнтер Л.И. Некоторые микробиологические и биохимические закономерности процесса биологической очистки сточных вод // Ж. ВХО им. Д.И.Менделеева.- 1972.- 17, N2.- С. 150-156.
37. Гюнтер Л.И., Шаталаев И.Ф. К предупреждению загрязнения водоемов сточными водами нефтехимических производств // Водные ресурсы.-1986.- N2.- С. 135-143.
38. Демьяненко Л.И. с соавт. (1999)
39. Получение иммобилизованного селекционированного биоценоза активного ила для биотехнологического процесса очистки воды от несимметричного диметилгидразина / Демьяненко Л.И., Ласкин Б.М., Повеликина Л.Н.,
40. Зуева JI.В. // Журнал прикладной химии. 1999.- Т. 72. - № 12. - С. 20532059.
41. Драбкова В.Г. Проблема устойчивости озерных экосистем в условиях антропогенного воздействия // Антропогенные изменения экосистем малых озер: Матер. Всесоюз. совещ., Ленинград, 27-29 мар. 1990 г.- С-Петербург.- 1991.- С. 13-17.
42. Евтушенко Н.Ю. Оценка физиологического состояния рыб, подверженных влиянию тяжелых металлов // Химические и биологические методы в охране окружающей среды: Тез. докл. Всес. конф., Усть-Каменогорск, 1821 сент. 1990 г.- М.:, 1990.- С. 43.
43. Евтюгин Г. А. и др. Тестирование качества воды с помощью иммобилизованной холинэстеразы // Тр. Гос. НИИ озерного и речного рыбного хозяйства,- 1990.- N 313.- С. 122-135.
44. Емельяненко В.В., Крайнюкова А.Н. Двустворчатые моллюски как индикаторы наличия токсикантов в сточных водах // Проблемы охраны природы: Тез. докл. конф., Байкальск, 1984.- С. 71-73.
45. Емец Г.П., Баздеркина С.А., Зуй Н.В. Ферментативная активность бактериофлоры Запорожского водохранилища. Деп. в ВИНИТИ 26.08.91., N 3570-В 91.-17 С.
46. Емнова Е.Е., Романова А.К., Котелев В.В. Препарат малатдегидрогеназы из термофильной водородной бактерии Pseudomonas thermophilici II Прикладная биохимия и м икробиология.- 1982.- 18, N 2.- С. 221-224.
47. Загорная Н.Б. с соавт. (1990)
48. Микробиологическая очистка надсмольных сточных вод / Загорная Н.Б., Денис А.Д., Гвоздяк П.И., Никоненко В.У., Чеховская Т.П.'// Биотехнология. 1990. 2. - С. 51-53.
49. Золотарев В.А. Токсикологический биотест на уровне сообщества // 5 Всесоюз. конф. по водной токсикологии: Тез. докл., Одесса, 18-22 апр. 1988 г.- М.:, 1988.- 184 с.
50. Иванченко О.Б., Александрова Е.Н., Черепнева. И.Е. Исследование суммарной мутагенной активности воды природных водоемов г. Казани // Эколого-токсикологическая оценка урбанизированных и сопредельных территорий.-Казань, 1990.- С. 125-131.
51. Илялетдинов А.Н. Микробиологические превращения металлов. // Алма-Ата : Наука, 1984.- 268 с.
52. Климагиаускене В.П. Водные растения как тест-организмы на загрязнения тяжелыми металлами.- Вильнюс, 1985.- 18 е.- Рукопись деп. в ВИНИТИ, N4822-85.
53. Колупаев Б.И. Использование метода определения функционального состояния гаммарид для биотестирования вод // Гидрохимические материалы.- 1984.- 89.- С. 8-11.
54. Колупаев Б.И., Карпович Т.А., Маклаков В.В. Биологический метод оценки токсичности промышленных сточных вод // Гидрохимические материалы.- 1984.- 89.- С. 11 -14.
55. Константинова О.Б. с соавт. (1989)
56. Биохимическое окисление сточных вод производства волокна нитрон / Константинова О.Б., Федосова Н.Ф., Потапова Т.В., Макарова В.И. // Тез. докл. 3 Всес. науч.-тех. конф, поев. 70-летию Моск. текст, ин-та, Москва, 14-16 нояб ,1989,-М., 1989.-С.151.
57. Кораблева А.И. К вопросу о связи каталазной активности с процессами-формирования качества воды в водоемах интенсивного комплексного использования // Водные ресурсы. 1989.- N 5.- С. 186-189.
58. Короленко П.И., Гвоздарев А.Ю., Предеина JI.M. К вопросу создания экспресс-методов энзимодиагностики функционального состояния жизнедеятельности организмов природных популяций // Гидрохимические материалы.- J1.:, 1981.- 82,- С. 64-77.
59. Короленко П.И., Дехта В.А. Усовершенствованный прибор для вертикального электрофореза // Гидрохим. материалы.- Л.:, 1981.- 82.- С. 87-99.
60. Корочкин Л.И., Серов О.Л., Пудовкин А.И. Генетика изоферментов.- М.: Наука, 1977.-275 с.
61. Кощеенко К.А. Биосинтез и трансформация органических соединений иммобилизованными клетками // Биотехнология. -1985.- № 2.- С. 113-122.
62. Курганов Б.И., Любарев А.Е. Принципы организации и функционирования микрокомпартмента метаболона // Биохимия.- 1989.- 54, N 5.- С. 716-718.
63. Линевиц С.Н., Бахчевникова И.А., Стрелец Н.Н. Современное состояние и перспективы развития биологических методов очистки промышленных сточных вод // Изв. вузов. Сев.- Кавк. регион. Техн. н. 1998.-№ З.-С. 61-64.
64. Лоскутов Н.Ф., Сычев А.А., Рубец В.И. Исследование токсичности доочищенных городских сточных вод на гидробионтах // Гигиена населенных мест.- 1990.-N29.- С. 10-12.
65. Максимов В.Н., Нагель X., Остроумов С.А. Биотестирование вод, загрязненных сульфонолом//Водные ресурсы.- 1988.-N 1.-С. 165-168.
66. Малыгин А.Г. Регулярность в структуре сети реакций метаболизма // Биохимия.- 1989.- 54, N 6.- С. 883-894.
67. Маслов А.П. и др. Использование экспресс-теста на токсичность при очистке сточых вод производства органического синтеза // Химия и технология воды.- 1987.- 9, N 3.- С. 263-265.
68. Мацкиевский. В.И. Один из методов биотестирования токсичности сточных вод промышленных предприятий // Биол. аспекты изуч. и рацион, использ. животн. и растит, мира: Тез. докл. конф.- Рига, 1981. С. 137.
69. Мацкиевский В.И., Машкевич О.Л., Полевич О.В. Возможности метода рентгеновского флуоресцентного анализа для экологического мониторинга // Проблемы охраны природы: Тез.докл. конф., Байкальск, 1984.-С. 22-24.
70. Микельсаар П.Ч., Вилу P.O., Лакт Т.И. Зависимость синтеза внеклеточных протеаз от фазы роста у Pseudomonas fluorescens // Микробиология.- 1982.- 51, N 2.- С . 212-215.
71. Михайловский Г.Е. Характер связи между сложностью и надежностью климаксных экологических сообществ // Проблемы экологии Прибайкалья: Тез. докл. респ. совещ., Иркутск, 1979.- Иркутск: Б.и., 1979.- С. 156.
72. Михлин Д.М. Биохимия клеточного дыхания. М.: Изд-во Академии наук СССР, 1960 .- 446 с.
73. Монцевичуте-Ерингене. Упрощенные математико-статистические методы в медицинской исследовательской работе // Патологическаяфизиология и экспериментальная терапия.- 1964.- Т.8^- N 4.- С. 71-78.
74. Несынова Л.И., Кофанов В.И., Невинная Л.В. Исследование возможности микробной деструкции гексогена в многосекционном лабораторном биореакторе // Химия и технология воды. 2000. Т.22.- № 1.- С. 96-103.
75. Никовская Г.Н. Адгезионная иммобилизация микроорганизмов в очистке воды // Химия и технология воды. 1989. - Т. 11. - № 2. - С. 158-169.
76. Никовская Г.Н. с соавт. (1990) С Иммобилизация деструктора алкилбензолсульфонатов Pseudomonas alca-ligenes TR на синтетических волокнах / Никовская Г.Н., Гвоздяк П.И., Шамолина И.И., Ставская С.С., Лобова А.Б. // Биотехнология.- 1990. № 2.- С. 53-56.
77. Никовская Г.Н., Гордиенко А.С., Глоба Л.И. Сорбция микроорганизмов волокнистыми материалами в зависимости от заряда клеток и волокон // Микробиология. 1986. - Т.55. - №4.- С. 691-694.
78. Оганесян А.С., Геворкян Ж.С., Бабаян М.А. К механизму регуляции активности глутаматдегидрогеназы // Биол. ж. Армении.- 1989.- 42, N 2.-С. 156-158.
79. Одум Ю. Основы экологии.- М.: Мир, 1975.- 740 с.
80. Опарина Л.А. Значение тиолов в проявлении каталитической активности NADP-малик фермента из листьев кукурузы (Zea Mays) И Биохимия.-1990.-55, N2.- С. 2 32-239.
81. Пастухова Г.В. Гидробионты в биологической очистке сточных вод // Регион, семинар-совещание по проблемам охраны окруж. среды Поволжья и Средней Азии: Тез. докл., Оренбург, 14-15 июня 1990 г.- М.:, 1990.-С. 45-46.
82. Первушкин С.В. Характеристика изоферментных спектров некоторыхдегидрогеназ и аспартатаминотрансферазы мышечной ткани при гиперхолестеринэмии и общем вибрационном воздействии: Автореферат дис. канд.биол. наук.- Куйбышев, 1981.- 24 с.
83. Пиневич А.В., Мамат У. О ферментативных реакциях с участием перекиси водорода в бесклеточных препаратах Anabaena variabilis И Микробиология.- 1982.- 53, N 3.- С. 373-378.
84. Погожев ГТ.И. О стабильности модельных экосистем // Использование и охрана ресурсов флоры и фауны СССР: Докл. МОИП, 1985, Зоол. и ботан.- М.:, 1987. С. 64-67.
85. Пожаров А.В., Шелемотов С.А. Использование экспресс-биотестирования для оценки антропоэкологической ситуации // Дефектоскопия.-1992.- N4.- С. 88-90.
86. Поляновский О.Л. Четвертичная структура ферментов // Успехи биологической химии.- М.: Наука, 1967.- N 8.- С. 34-60.
87. Потапова Н.А., Королевская Т.В. Использование микробиологических тестов для токсикологического контроля загрязненных вод.- Киев, 1986.12 е.- Рукопись деп. в ВИНИТИ, N 2146-86.
88. Предеина Л.М., Федорова Л.С. Активность ферментов сестона в биоиндикации качества природных вод суши // 8 Симп. по пробл. качества воды водоемов: Тез.докл., Таллин, 23-25 окт. 1990 г.- Таллин: Б.и., 1990.- С. 69-71.
89. Родин В.Н., Афанасьева А.Ф., Ловцов А.Е. Биологическая очистка сточных вод в аэротенках с прикрепленной микрофлорой // Водоснабжение и санитарная техн.-1990.- № 5.-С. 26-27.
90. Розанцев Э.Г. с соавт. (1997)
91. Романцев Ф.Е., Прозоровский В.Н., Андриянова Л.Е. Выделение из Micrococcus sp. гомогенных гемсодержащей каталазы и кристаллического белка, обладающего каталазной активностью // Биохимия.- 1983. 48, N 12.- С. 2023-2027.
92. Ротмистров М.Н., Гвоздяк П.И., Ставская С.С. Микробиология очистки воды.- Киев : Наукова думка, 1978. 268 с.
93. Рудик С.М., Валовская Н.А. Активность малатдегидрогеназы мидий разного возраста в связи с антропогенным загрязнением // Экология моря.- 1987.- N 25.- С. 89-91.
94. Рыжкова А.Н., Моисеева В.П., Тикка Г.А. Биотестирование сточных вод сульфат-целлюлозного производства // Изучение и освоение водоемов Прибалтики и Белорусии : Тез. докл. 20-й научн. конф.,Рига, 1979 г.- Рига: Б.и, 1979.-С. 116-118.
95. Рябухин В.П. Простейшие как объекты биотестирования вод, содержащих стоки целлюлозно-бумажной промышленности // Вопросы сравнительной физиологии и разработка теоретических основ биотестирования.- Ярославль, 1986.- С. 36-40.
96. Рязанов А.Г., Спирин А.С. Организация ферментов на внутриклеточных структурах. Эстафета у поверхности // Биохимия.- 1989.- Т.54. N.5.- С. 709-715.
97. Сакевич А.И., Осипов А.Ф. Взаимосвязь между темпами прироста водорослевой массы и концентрации внеклеточных органических соединений // Гидробиологический журнал.- 1983.- Т. 19. N 5.- С. 71-74.
98. Семенчук И.Н. с соавт. (1998)
99. Селективность микробного биосенсора при различных способах иммобилизации бактерий-деструкторов / Семенчук И.Н., Таранова Л.А., Ильясов
100. П.В., Решетилов А.Н. // Химия и техн. воды.-1998.-Т.20.-№ 6.- С. 649-655.
101. Семин В.А., Иголкина Е.Д. Энзимоиндикация загрязнения водных экосистем // Проблемы экологического мониторинга и моделирования экосистем.- Л.:, 1983.- № 6.- С. 137-145.
102. Сидоров B.C. Перспективы использования биохимического тестирования в водной токсикологии // 5 Всес. конф. по вод. токсикологии: Тез. докл., Одесса, 18-22 апр. 1988 г.- М.:, 1988.- С. 72-73.
103. Симаков Ю.Г. Изменения состава микрофауны активного ила при воздействии токсических веществ // Гидробиологический журнал.- 1985.21, N4.-С. 70-78.104.
104. Симаков Ю.Г. Межклеточные взаимодействия в культурах простейших и их значение для биотестирования токсичности водной среды // 5 съезд Всесоюз. гидробиол. об-ва: Тез. докл., Тольятти, 15-19 сент. 1986г.-Куйбышев: Б.и., 1986.- Ч. 2.- С. 216-21 .
105. Симаков Ю.Г., Жукова Н.А. Контроль за содержанием токсикантов в водной среде по чувствительным периодам онтогенеза у гидробионтов.-М.,1983.- 10 е.- Рукопись деп. в ЦНИИТЭИРХ, N 580-84.
106. Смирнов А.Н. Опыт использования биосигнализаторов для контроля токсичности сточных вод // 5 съезд Всес. гидробиол. общества: Тез. докл., Тольятти, 15-19 сент . 1986 г.- Куйбышев: Б.и., 1986.- Ч. 2.- С. 217-218.
107. Смирнова Н.Н. Исследование токсичности дунайских вод на Vallisneria spiralis.- Киев, 1989.- С. 42-47.- Рукопись деп в ВИНИТИ, N 210-В89.
108. Соколова В.А. Изменения зоопланктона Вилюя в условиях антропогенного воздействия // Вопросы регион, гигиены, сан. и эпидемиологии.: Тез. докл. конф. 20-21 ноя б. 1990 г. Якутск: Б.и.,1990.-С. 229-230.
109. Софьин А.В., Диденко Т.Г. Молекулярные формы глутаматдегидро-геназы и глутаминсинтетазы симбиотической азотфиксирующей ассоциации Azolla-Anabaena П Биохимия. 1990.- 55,N 4.- С. 634-644.
110. Ставская С.С. Биологическое разрушение анионных ПАВ.- Киев: Наукова С думка, 1981.- 116 с.
111. Ставская С.С. с соавт. (1991)
112. Иммобилизация бактерий деструкторов на искусственных волокнах для очистки воды от анион-активных ПАВ / Ставская С.С., Шамолина И.И., Никовская Г.Н. // Химия и технология воды.- 1991.- Т.13. № 6.- С. 548554.
113. Стом Д.И., Балаян А.Э., Кобжицкая Н.З., Кожова О.М. Обездвиживание клеток Dunaliella salina как критерий токсического действия // Гидробиологический журнал. 1984.- Т.20. - N 5,- С. 42-45.
114. Сузина Н.Е., Дмитриев В.В., Фихте Б.А. Электронно-цитохимическое обнаружение каталазы у метанотрофных бактерий Methylocystis echinoides II Микробиология.- 1982. -T.51 -N 5. С. 806-808.
115. Сысоев О.В. Динамика молекулярных форм гексокиназы, лактат- и малатдегидрогеназ на разных фазах развития популяции Escherichia coli 11 Факторы развития бактериальных популяций.- Свердловск, 1980. С. 99105.
116. Тамбиев А.Х. Экзометаболиты и внеклеточные продукты водорослей как регулирующий фактор водных экосистем // Разработка и внедрение комплексных фоновых статистических методов биологического мониторинга.- Рига, 1983. С. 152-159.
117. Таможня В.А. Каталазная активность у основных видов обрастателей// Биология моря.- 1983.- N 6.- С. 49-55.
118. Тарасова Р.С. Генетически детерминированные формы НАД-зависимой МДГ и использование их при биохимической паспортизации инбредных линий сахарной свеклы // Генетика,- 1987.- Т.23. N 9.- С. 1630-1636.
119. Тарасова Т.Н., Дубова М.С. Дегидрогеназная активность бактерий, выделенных из сточных вод и активного ила // Наземные и водные экосистемы.- Горький, 1984.- N 4.- С. 29-33.
120. Телитченко М.М., Остроумов С.А. Введение в проблемы биохимической экологии.- М.: Наука, 1990.- 288 с.
121. Тимофеева С.С. Активность окислительных ферментов как биотест для оценки токсичности природных и сточных вод / Методы биоиндикации и биотестирования природных вод.- Л.: 1987.- N 1.- С. 76-84.
122. Тимофеева С.С. Энзимоиндикация качества очистки сточных вод в аэротенках // Химия и технология воды.- 1987. Т.9 - N 5.- С. 445-448.
123. Тимофеева С.С., Кобжицкая Н.З. Окислительно-восстановительные ферменты активных илов предприятий целлюлозно-бумажной промышленности. Иркутск, 1982.- 82 с.
124. Тупик Н.Д. Сравнительная характеристика оксидоредуктаз водорослей // Хемотаксономическое изучение споров растений и грибов: Тез. докл. Всес. совещ., Киев, 16-18 мая 1990 г. Киев, 1990.- С. 98-101.
125. Унгуряну Д.В., Ионец И.Г. Анаэробная обработка сточных вод с помощью С прикрепленной микрофлоры // Биотехнология. 1990.- № 2.- С. 48-50.
126. Федоров А.С., Талипова И.В. Использование иммобилизованных пурпурных бактерий для очистки сточных вод и получения водорода // 2 Откр. гор. науч. конф. мол. ученых г. Пущино, Пущино, 23-25 апр.,1997 :Сб. тр. Пущино, 1997. - с. 145-152.
127. Феофанов Ю.А. Развитие теоретических основ технологии очистки водыиммобилизованными на подвижных носителях биоценозами // Изв. Вузов. Стр-во и архитек. 1997. - № 6.- С. 101-105.
128. Филиппов В.Н. с соавт. (2000)
129. Фихте Б.А., Гуревич Г.А. Дезинтеграторы клеток. М.: Наука, 1988. — 224 с.
130. Фридман В.М., Шапиро С.Г., Лопухин А.С., Сысоев А.А. Контроль биомассы и состояния активного ила по концентрации АТФ // Химия и технология воды.- 1983.- Т.5. N 5.- С. 468-469.
131. Хачкалян Т.К., Симонян А.А. Множественные молекулярные формы NAD-зависимой малатдегидрогеназы в онтогенезе .- Ереван, 1986.- 13 с.-Рукопись деп. в ВИНИТИ, N 8150-В 86.
132. Хоружая Т.А. Перспективы использования биохимических тест-функций в биомониторинге природных вод // Гидробиол. ж. 1989.- Т.25. -N 5. С. 47-52.
133. Хочачка П., Сомеро Д. Стратегия биохимической адаптации.- М.: Мир, 1977.-398 с.
134. Цагарели М.Л., Пруидзе Г.Н. Множественные формы каталазы в листьях чайного растения // Субтропические культуры,- 1990.- N 3.- С. 46-49.
135. Цветанов Методи, Петрова-Трайкова Анетта, Коновски Петър. Электрохимическое определение скорости потребления кислорода активным илом с помощью установки АРК -1.- Тр. водоснабд., канализ. и сан. техн.- 1980.- T.15.-N2.- С. 134-141.
136. Черкасова Т.А. и др. Иммобилизованная уреаза для биотестирования тяжелых металлов // Проблемы взаимодействия человека и биосферы.1. М.: 1989.- С. 76-79.
137. Чернов Ю.И. Биологическое разнообразие: сущность и проблемы // Успехи современой биологии.- 1991.-Т.111. N 4.- С. 499-507.
138. Чернышев М.К., Котова Л.И., Березкина Е.В. Способ биотестирования токсичности сточных вод / А.с. N 1573376 СССР, МКИ G 01 N 33/18 // Открытия. Изобретения.- 1990.- N 23.
139. Шамолина И.И. с соавт. (1990)
140. Швецов В.Н., Морозова К.М., Петрова Л.А. Применение анализа кинетики ферментативных реакций для выбора схемы и параметров процесса биологической очистки сточных вод // Сооружения механической и биологической очистки сточных вод. М.: 1983.- С. 142-152.
141. Шифрин С.М., Мишуков В.Г., Архипченко И.А. ДНК микроорганизмов активного ила для оценки его функционального состояния // Водоснабжение и санитарная техника. 1980. - N 3.- С. 8-9.
142. Юрин В.М. Электроальгологический способ контроля загрязнения природных вод // Методы биоиндикации и биотестирования природных вод.- 1989.-N1.- С. 63-70.
143. Юровская Е.М. Новые критерии оценки действия химических загрязнений на водные микроорганизмы // Оценка и классификация качества поверхностных вод для водопользования: Тез. сообщ. Всесоюз. конф.,
144. Харьков, 1979.- С. 190-193.
145. Яковлев С.В. с соавт. (1985)
146. Биологическая очистка производственных сточных вод / Яковлев С.В., Скирдов И.В., Швецов В.Н. с соавт.- М.: Стройиздат, 1985.- 208 с.
147. Ahn Young-Ho Physiochemical and microbial aspects of anaerobic granular biopellets // J. Environ. Sci. and Health. A.- 2000.- V.35.- No. 9.- P. 1617-1635.
148. AmbramsJ.J.,WebsterD.A. Purification, partial characterization and possible role of catalase in the bacterium Vitreoscilla II Arch. Biochem. and Bio-phys. 1990. - V.279. - N 1.- P. 54-59.
149. Bakterien reinigen Abluft von Formaldehyd. / Galvanotechnik. — 2000. V. 91. -No. 12.-P. 3462.
150. Balogh Katalin V. Comparison of mussels and crustacean plancton to monitor heavy metal polution // Water, Air and Soil Pollut.- 1988.- V.37/ N 3-4. - p. 281-292.
151. Baquene Gilles, Galgani Francois, Truquet Philippe. Characterization and assay conditions for use of AChE activity from several marine species in pollution monitoring // Mar. Environ. Res.- 1990. V.30. - N 2.- p. 75-89.
152. Basaglia Fulvia. Some aspects of isozymes of lactate dehydrogenase, malate dehydrogenase and glucosephosphate isomerase in fish // Сотр. Biochem. and Physiol. В.- 1989.- V.92. N 2. - p. 213-226.
153. Beeckmans Sonia, Kanarek Louis. Clustering of sequential enzymes in the glycolytic and the citric acid cycle pathways // J. Cell. Biochem.- 1989.- Suppl 13E.-p.266.
154. Ben-Shlemo Rachel, Nevo Eviatar. Isozyme polymorphism as monitoring of marine environments: The interactive effect of cadmium and mercury pollution on the hrimp Palaemon elegan //Mar. Pollut. Bull. 1988. - V.19. - N 7.- p. 314-317.
155. Bernie Heele D., Stowers Mark D. Hiperoxide dismutase and catalase in Frankia //Can.J. Microbiol. 1986. - V.32. - N 5 p. 409-413.
156. Beyer Wayne F., Fridovich Irvin. Pseudocatalase from Lactobacillus plantarumi evidence for a homopentameric structure containing two atoms of manganese per subunit // Biochemistry.- 1985.- V.24. N 23.- p. 6460-6467.
157. Bischoff T.W., Garraway M.O. Effects of glucose on NADP and NAD gluta-mate dehydrogenase activities and their relation to ammonium and pH levels in cultures of Bipolar is maydis race T // Mycopatologia.- 1987.- V/98. N 3. - p. 141-148.
158. Biswas R., Shrotri R., Soman S. Activity levels of lactate dehydrogenase and succinic dehydrogenase under thiodan stress in the crab, Scylla serrata (For-skal) // Nat. Acad. Sci. Lett.- 1990.-V.13.-N 3.-p. 101-102.
159. Blackstock J. et al. Environmental and biochemical investigation of some effects of organic pollution in Inner Oslofjord, Norway // Mar. Biol.- 1983. -V.73. N 2.- p. 155-163.
160. Blanc Francois, Kerambrun Pierre, Leveau Michel. L'indicateur biologique aspects autecologiques et synecologiques // Rapp. et pros.- Verb. reun. Com-mis. int. explor. sci. Mer. mediterr. Monaco.- 1979.-V.25-26. N 8.-p. 109113.
161. Bonete Maria Jose, Camacho Monica Z., Cadenas Eduardo. Purification and some properties of NAD dependent glutamate dehydrogenase from Halobacte-rium halobium И Int. J. Biochem.- 1986.- V.18. N 9.- p. 785-789.
162. Buikema Arthur Z., Rutherford Charles Z., Cairns John Ir. Screening sediments for potential toxicity bi in vitro enzyme inhibition // Contam and Sediments. Vol 1. Ann. Arbor, Mich.- 1980.- p. 463-476.
163. Burton G., Allen Ir. Stream impact assessments using sediment microbial activity tests // Chem. and Biol. Charact. Munic. Sludges. Symp., Cincinnati, 2022 May 1986.-Philadelphia, 1988.-p. 300-310.
164. Buschini A.M. et al. Glucose and nitrogen catabolite regulation of NAD-glutamate dehydrogenase and NADP-glutamate dehydrogenase in Kluyveromy-ces lactis И Atti Assoc. genet, ital.- 1988.- 34.- p. 45-46.
165. Chen N., Dojle LP;, Gaafar H.A. Isolation and identification of Neisseria gonorrhoeae catalase // Abstr. Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol.- 1980.- 139.-p.382-391.
166. Consalvi V. et al. Glutamate dehydrogenase from sulfolobus solfataricus: kinetic and physico-chemical properties // Ital. J. Biochem.- 1990.- V.39. N 5.-p. 337-339.
167. Coperland Les, Quinnell Rosanne J., Day David A. Malic enzyme activity in bacteroids from soybean nodules // J. Jen. Microbiol.- 1989.- V.135. N 7.- p. 2005-2011.
168. D'Souza S.F., Melo J.S. Immobilization of yeast cells by adhesion to glass surface using polyelethylenimine / // Biotechnol. Lett. 1986. - V.8. - No. 9. - P. 643-648.171. De Best J.H. etal.(2000)
169. Dichloromethane utilization in a packed-bed reactor in the presence of various electron acceptors / De Best J.H., Ultee J., Hage A. et al. // Water Res.- 2000. -V.34. No. 2.- P. 566-574.
170. Dhandayuthapani S., Ramalingam K. Portial purification and properties of cy-toplasmus malate dehydrogenase from the fish parasite Penetrocerhalus gana-patii (Cestoda: Pscidophyllidea) // Pros. Indian. Nat. Sci. Acad. 1989. - V.55. -N 5-6.-p. 325-334.
171. Din Zubir В., Brooks James M. Use of adenylate enerhy change as a physiological indicator in toxicity experiments // Bull. Environ. Contam. and Toxicol.-1986.- V.36.-N l.-p. 1-8.
172. Dorward Elanne J., Barlsas B. George. Acute toxicity screening of water pollutants using a bacterial electrode // Environ. Sci. and Technol.- 1984. V. 18. - N 12.-p. 967-972.
173. Ehmke Adelheid, Schneid Heinz-Valter, Hartmann Thomas. Glutamate dehydrogenase of Pisum sativum', heat-dependant interconversion of the multiple forms // Z. Naturforch.- 1984.- V.39. N 3-4.- p. 257-260.
174. Eries C.R., Lee R.F. Pollutant effects on the mixed function oxygenase (MFD) and reproductive systems of the marine polychaete Nereis virens // Mar. BioL-1984.- V.79. -N2.-p. 187-193.
175. Falkentoft C.M., Harremoes P., Mosbak H. The significance of zonation in a denitrifying, phosphorus removing biofilm // Water Res.- 1999.- V.33.- No. 15.- P. 3303-3310.
176. Fauris C. Inhibition de la synthese d' ARN de cellules ecaryotes: une mesure extremement sensible de la toxicite des eaux // Oceanis. 1990. — V. 16. - N 4.-p. 267-276.
177. Fiestas J.A., Martin A., Borja R. Influence of immobilization supports on the kinetic constants of anaerobic purification of olive mill waste water // Biol. Wastes. 1990. -V. 33. - No. 2. - P. 131-142.
178. Florencio F.I., Margues S., Candau P. Identification and characterization of a glutamate dehydrogenase in the unicellular cyanobacterium Synechocystis PCC 6803.- FEBS Gett.- 1987.-V. 223. N 1.- p. 37-41.
179. Fok Agnes K., Allen Richard D., Kaneshiro Edna S. Axenic Paramecium cau-datum. Ill Biochemical and physiologial changes with culture age // Eur. J. Cell. Biol.- 1987.-V.25. -N l.-p. 193-201.
180. Fontigny Anne et al. Some kinetic characteristics of exproteolytic activity in coastal seawater // Estuarine, Coast and Shelf Sci.- 1987.- 25, N 1. p. 127-133.
181. Fontvielle D., Viboud S., Fauvet G. Developpements et role des biomasses fixees en eaux courantes // Techn., sei.,meth. -1999. — No. 11. P. 55-60.
182. Friedrich P., Hajdu J. An overview of supramolecular enzyme organization // Biochem. Soc. Trans.- 1987. V.15. - N 5. - p. 973-977.
183. Fritzsche F., Schopp W. Verhalten von Superoxiddismutase und Catalase in • * i
184. Pseudomonas putida bei Wachstum auf n-Alkanen // Abh^ Akad. Wiss. DDR Abt. Math. Naturwiss., Techn.- 1981.- N 3. p. 251-257.
185. Garrood A.C. et al. Elevation of glutatione transferase in molluscs in response to xenobiotics // Mar. Environ. Res.- 1989.- V.28. N 1-4,- p. 147.
186. Gebara F. Activated sludge biofilm waste water treatment system // Water Res. -1999.-V.33.-No. 1. -P. 230-238.
187. Gerdes-Kuhn M., Diekmann R., Hempel D.C. Tragerfixierung von Spezialkul-turen eine wirkungsvolle Methode zum Abbau persistender Abwasserin-haltsstoffe // Korrespond. Abwasser. - 1989. - V.36. - No.7. - P. 776-784.
188. Ghavez S., Candau P. An NAD-specific glutamate dehydrogenase from Cyano-bacteria. Identification and propertits // FEBS Zett.-- 1991.--V.285. N 1.- p. 35-38.
189. Goldberg Iris, Hochman Ayala. Three different types of catalases in Klebsiella pneumoniae H Arch. Biochem. and Biophys.- 1989.- V.268. N 1.- p. 124-128.
190. GoldbergIris,HochmanAyala.Purificationand characterization of a novel type of catalase from the bacterium Klebsialla pneumoniae II Biochem. et biophys. acta. Gen. Subj.- 1989.- V.991. N 2.- p. 330-336.
191. Gonzalez M.P., Maeso M. Effect of nitrate and ammoniuum on NADH-dependent glutamate dehydrogenase activity of detached roots and cotyledons of Citrullus vulgaris L.- 1987.- V.127. N 3-4. - p. 331-337.
192. Gross Wolfgang. Membranebound malate dehydrogenase in mitochondria from the alga Cyanidium caldarium II Phytochemistry.- 1990.- V.29. N 10.- p. 3081-3085.
193. Grossebuten Wilhelm, Hart! Thomas, Gorish Helmut, Stezowski John Y. Purification and properties of malate dehydrogenase from the thermoacidophilic ar-choebacterum Thermoplasta acidophilum I I Biol. Chem. Hoppe- Seyler.- 1986.
194. Microscopic and enzymatic investigations on biofilms of wastewater treatment systems / Gschlobl Т., Michel I., Heiter M., Nerger C., Rehbein V. // Water Sci. and Technol. 1997. - V. 36. -No. 1. - P. 21-30.
195. Gupta Vijay K., Singh Randhir. Properties of NADP -malate dehydrogenase from immature pod wall of Ciler arietinum // Plant Physiol, and Biochem.-1990.- V.28. N 6.- p. 671-678.
196. Hamon Perla, Toure Bakary. Characterisation of traditional yam varieties be-londing to the Dioscorea coyensis-rotundata complex by their isozymic patterns // Euphytica. 1990.- V.46. - N 2.- p. 101-107.
197. Harendranath C.S. et al. (1996)1.mobilization in fixed-film reactors- an ultrastructural approach. / Harendranath C.S., Anuja K., Singh A. et al. // Water Sci. And Technol. 1996.-V.33.-No. 8.- P. 7-15.
198. Hartl Thomas et al. Crystalline NAD/NADP-dependent malate dehydrogenase; the enzyme from the thermoacidophilic archaebacterium Sulfolobus acidocal-darius II J. Biol. Chem. Hoppe-Seyler.- 1987.- V.368. N 3.- p. 259-267.
199. Heimberger A., Eisenstark A. Compartmentalization of catalases in Esherichia coli II Biochem. and Biophys. Res. Commun.- 1988.- V.154. N 1.- p. 392-397.
200. Hemmings Brian A. Purification and properties of the phospho and dephospho forms of yeast NAD-dependent Glutamate dehydrogenase // J. Biol. Chem.-1980.- V.255. N 16.- p. 7925-7932.
201. Henze M., Harremoes P. Anaerobic treatment of waste water in fixed film re-actors.-a literature review // Water Sci. Technol.-1983.-V. 15.- No. 8/9. -P. 1101.
202. HochmanAyala,GoldbergIris.Purificationand characterization of a catalaseperoxidase and a typical catalase from the bacterium Klebsiella И Biochem. et biophys. acta Protein Struct, and Mol. Enzymol.- 1991.- V.1077. N 3.- p. 299-307.
203. Hornby David P., Engel Paul C. Characterization of Peptostreptococcus asac-charolyticus glutamate dehydrogenase purified by dye-ligand chromatography // J. Gen. Microbiol.- 1984.- V.130. N 9. - p. 2385-2394.
204. Hoxha J. et al. Catalase activiti in the plants exposed to contamination with heavy metals // Acta biol. et med. exp.- (SFRJ). 1985. - V.IO. - N 2.- p. 23-26. '
205. Huang C.Y., Rhee S.Y., Chock P.B. Subinit cooperation and enzymatic catalys // Annu Rev. Biochem. Vol. 51. Palo Alto, Calif, 1982. p. 935-971.
206. Iuch Andrew I., Chung Che-Shengi, Lai Iiu-Kay. Purification and molecular properties of malate dehydrogenase from the marine diatom Nitzschia alba II Biochem J.- 1989.- V.258. N 1.- p. 221-228.
207. Jana Sasadhar. Effect of heawy metals on growth population of a fecal coliform bacterium Escherichia coli И Water, Air, and Soil Pollut.- 1988.- V.38. N 34.- p. 251-254.
208. Jeffery D., Goodenouqh P.W., Weitzman P.D. Cytrate synthase and malate dehydrogenase from tomato fruit // Phytochemistry.- 1988.- V.27. N 1.- p. 4144.
209. Jenkins Ronald L. et al. Assocoation-dissotiation studies of boine and rat liver glutamic dehydrogenase by high-performanse liquid chromatography gel filtration // Arch. Biochem. and Biophys.- 1988.- V.266. N 1.- p. 72-82.
210. Joannou C.L., BrownP.R.NAD-dependentglutamate dehydrogenase from Pseudomonas aeruginosa is a membrane-bound enzyme.// FEMS Microbiol. Lett. 1992. - V.90. - N 2.- p. 205-210.214. Jobbagy A. et al. (2000)
211. Jonas Robert B. et al. Comparison of methods to measure acute metal and or-ganometal toxicity to natural aquatic microbial communities // Appl. and Environ. Microbiol.- 1984.-V.47. -N 5.-p. 1005-1011.
212. Jouve H.M., Tessier S., Pelmont J. Purification and properties of the Proteus mirabilis catalase // Can. J. Biochem. and Cell. Biol.- 1983.- 61, N 1.- p. 8-14.
213. Itagaki Tandashi, Dry Ian В., Wiskich Joseph. Purification and proptrties of NAD-glutamate dehydrogenase from turnipm mitochondria // Phytochemis-try.- 1988.- V.27. N 11.- p. 3373-3378.
214. Kienz Walfgang et al. Einsatz eines Biodetektors als "Kanalspion" zum Nach-wies der Schwermetallherkunft in Abwassersielen // Z. Wasser- und Abwasser-Forsch.- 1989.- Y.22. N 6.- p. 239-244.
215. Kince Ch. M., Trelease R.N., Turley Rickie B. Purification and bioshynthesis of cottonseed catalase // Biochem. J. 1988. V.251. - N 1.- p. 147-155.
216. Kirkman Henry N., Gaetani G.F. Catalase: A tetrameric enzyme with four tightly bound molecules of NADPH // Proc. Nat. Acad. Sci. USA Biol. Sci.-1984.-V.8L -N 14. p. 4343-4347.
217. Kono Iasuhisa, Fridovich Irvin. Isolation and characterization of the pseudocatalase of Lactobacillus plantarum. A new manganesecontaining enzyme //J. Biol. Chem.- 1983. V.258,N 10.- p. 6015-6019.
218. Kowalski E., Lewandowski Z. Aktywne chemiczne wypetnienie ztoz nitryfika-cyjnych // Arch. Ochr. Srodow.-1983.- No. 4/4. P. 95-112.
219. Kristjansson Hordur, Ponnamperuta CyriL Purification and properties of malate dehydrogenase from the extreme thermophile Bacillus caldolyticus II Limits Life. Dordrecht et al.- 1980.- p. 47-54.
220. Kuhl-C., Schreck U., Czermak P. Biologische Aufarbeitung von mineralol-haltigen Abwassern aus Kfz-Betrieben // Chem.-Ind.-Techn. 2001.-V.73.- No. 4.- P. 406-411.
221. Kulkarni B.G., Kulkarni P.G. Effect of mercury exposure on enzymes in the clam Katelysia opima (Gmelin) // Indian J. Mar. Sci.- 1987. V. 16. - N 4.- p. 265-266.
222. Laere Andre Y. Van. Purification and properties of NAD-dependent glutamate dehydrogenase from Phycomyces spores I I J. Jen. Microbiol.- 1988.- V.134. N 6.- p. 1597-1601.
223. Laszlo J.A. Regeneration of azo-dye-saturated cellulosic and anion anaerobic dye reduction // J. Environ. Sci. and Technol. 2000. — V. 34. - No. 1. - P. 167-172.
224. Ling L., Lo K.V. Brewery wastewater treatment using suspended and attached grouth sequencing batch reactors // J. Environ. Sci. and Health. A. 1999. - V. 34.-No. 2.-P. 341-355.
225. Livingstone D.R. et al. Molecular, allular and physiologial responses of the common mussel Mytilus edulus to pollution: Uses in environmental monitoring and management // Hum. Toxicol.- 1989,- V.8. N 1.- p. 59.
226. Lockhart W.L., Menter D.A. Oil-sensitive biomarker studies of fish from Arctic Canada // 14th Arct. and Mar. Oilspill Program Techn. Semin., Vancouver, June 12-14, 1991: Proc.- Vancouver., 1991.-p. 169-176.
227. Loewen Peter C., Switala Jacek. Purification and characterization of catalase-1 from Bacillus subtilis II Biochem. and Cell. Biol.- 1987. -V.65, N 11.- p. 939947.
228. Loewen Peter C., Switala Jacek. Multiple catalases in Bacillus subtilis 11 J. Bacterid.- 1987.- V.169. N 8.- p. 3601-3607.
229. Lu Weiping. Purification and characterization of glutamate dehydrogenase from
230. Brevibacterium flavum IIL Fundan. Univ.- 1988.- V.27.- N 4.- p. 395-401.
231. Mahadevan M.M. Sperm bioassay for detecting acute toxicity of chemical pollutants II Experientia.- 1986.- V.42. N 1.- p. 85-86.
232. Mantsala Pekka. Thermophilic NAD dependent glutamate dehydrogenase from Bacillus stearothermophilic II Biochem. Int.- 1985. V.10, N 6.- p. 955-962.
233. Marshall K.C. Bacterial Adhesion to Surfaces. London: Society of Chem. Industry, 1980.-P. 187-196.
234. Martin-Cereceda M., Serrano S., Guinea A. Biofilm communities and operational monitoring of a rotating biological contactor system // Water, Air and Soil. Pollut. 2001. - V. 126. - No. 3-4. - P. 193-201.
235. Maserti B.E., Ferrara R., Paterno P. Posidonia as an indicator of mercury contamination // Mar. Pollut. BulL 1988. - V.19, N 8.- p. 381-382.
236. Masters Colin, Pegg Michael, Crane Denis. On the multiplicity of the enzyme catalase in mammalian liver // Mol. and Cell. Biochem.- 1986,- V.70, N 2.- p.
237. Mather Mihaich Ellen, Di Gulio Richard T. Oxidant mixed-function oxidase and peroxisomal in channel catphish exposed to a bleached kraft mill effluent // Arch. Environ. Contam. and Toxicol.- 1991.- V.20. N 3,- p. 391-399.
238. Matulova Dragica. The Application of algae as test organismus // Arch. Protis-tenk.- 1991.- V.139. -N 1-4.-p. 279-289.
239. Mc Daniel Huly G. Glutamic dehydrogenase from rat heart mitochondria. 1: purification and physical properties including molecular weight determination // J. Mol. and Cell. Cardiol.- 1984.- V.16, N 4.- p. 295-301.
240. Meir Efrat, Iagil Ezra. Further Characterization of the Two Catalases in Escherichia coli // Cull. Microbiol. 1985. - V.12, N 6.- p. 315-320.246. Meraz M. Et al. (1995)
241. Studies on the dynamics of immobilisation of anaerobic-bacteria in a plastic support / Meraz M., Monroy O., Noyola A., Ilangovan К // Water Sci. and Technol.- 1995. V.32. - No. 8. - P. 243-250.
242. Mittler Ron, Tel-Or Elicha. Oxidative stress responses and shock proteins in the113.120.unicellular cyanobacterium Syntchococcus R2 (PCC-7942) // Arch. Microbiol.-1991.- V.155, N 2.- p. 125-130.
243. Miyatake Kazutaka et al. Purification and immunological properties of NAD-linked malate dehydrogenase isozymes from Euglena gracilus // Agr. and Biol. Chem.- 1986.- V.50, N 10.- p. 2651-2653.249. Monroy O. et al. (2000)
244. Anaerobic digection for wastewater treatment in Mexico: state of the technology / Monroy O., Fama G.,. Meraz M., Montoya L., Macarie H. // Water Res. — 2000.-V. 34.-No. 6.-P. 1803-1816.
245. Mozaffar Sabiha et al. Properties of catalase purified from a methanol-grown jeast Kloecera sp. 2201 // Eur. J. Biochem.- 1986.- V. 155, N 3.- p. 527-531.
246. Mozes N., Rouxhet P.G. Metabolic activity of yeast immobilized as support monolayer // Appl. Microbiol. & Biotechnol. 1985. - V.22. - No. 2. - P. 92-97.
247. Munoz Blano Yuan, Moyano Enrigeta, Cardenas Yacobo. Glutamate dehydrogenase isozyme of Chlamydomonas reinhardtii // FEMS Microbiol. Zett. -1989. V.61, N 3.- p. 315-318.
248. Narbonne J.F. et al. Indicateurs biochemique de contamination de I'environne-ment marin: etude comparative en mer Mediterranee // Oceanis. 1991. - V. 17, N3.- p. 257-275.
249. Ni Weiting, Trelease Richard N., Eising Rainer. Two temporally synthesized charge subnits interact to form five isoforms of cottonsttd catalase // Biochem. J.- 1990.- V.269, N 1.- p. 233-238.
250. Nies Dietrich, Schlegel Hans G. Catalase from Comamonas compransoris U J.Gen. and Appl. Microbiol.- 1982.- V.28, N 4.- p. 311-319.
251. Nikolopoulos Dimosthnis, Manetas Yiannis. Compatible solutes and in vitro stability of Salsola soda enzymes: proline ioncompatibility // Phytochemistry. -1991.-V.30-N2.-p. 411-413.
252. Novotny James F., Perry Jerome J. Characterization of the malate dehydrogenase from Thermoleophilum album NM // Arch. Microbiol.- 1990.- V.154. N 3.- p. 304-307.258. O'Reilly К. etal. ( 1987)
253. Degradation of pentachlorophenol in immobilized bacteria bioreactors / O'Reilly K., Steiert J., Kadakia R. et al. // Abtr. Pap., 194th ACS Nat. Meet. (Amer. Chem. Soc.), New Orleans, LA, Aug. 30 - Sept.4, 1987. - Washington D.C.-1987.- P. 442.
254. Obst U., Holzapfel-Pschorn A. Biochemical testing of Groundwater // Water Sci. and Technol.- 1988. V.20, N3. - p. 101-107.
255. Ohshima Toshihisa, Sacuraba Haruhiko. Purification and characterization of malate dehydrogenase from the phototrophic bacterium Rhodopseudomonas capsulata II Biochim. et biophys. acta Protein Struct, and Mol. Enzymol.-1986.- V.869, N 2 .- p. 171- 177.
256. Pekkala C.M., Kooptan B. Effect of toxicants on algal sinking rates // Water, Air and Soil Pollut.- 1987.-V. 36, N 1-2.- p. 155-162.
257. Pellerin-Massicote Jocelyne, Pelletier Emilien, Paquet Mariane. Cellular and biochemical indicators assessing the quallity of a marine environment // Hydro-biologia.- 1989.- V.188-189.- p. 587-589.
258. Prento Poul, Prento Annette. Crystalline catalase from the earthworm Lumbri-cus terrestris (Oligochaeta Annelida): purification and properties I I Cemp. Bio-chem. and Physiol.- 1984.- V.77, N 2.- p. 325-328.
259. Pugh Shirlej I.R., Knovles Christopher J. Synthesis of catalase by Streptococcus faecalis subsp. zymogenes // Arch. Microbiol.- 1983.- V.136, N 1.- p. 60-63.
260. Radi Amal Ali Radeb, Matkovics B. Effects of metal ions on the antioxidant enzyme activities, protein contents and lipid peroxidation of carp tissues // Сотр. Biochem. and Physiol.- 1988.-V.90, N 1.- p. 69-72.
261. Rao P., Rama Mohana. Cytochemistry of the ciliate Euplotes woodruff! Gaw 1938 with a note on the effect of local pollutants on the ciliate // Geobios ( India ).- 1989.-N6.-p. 275-278.
262. Rasmusson Allan G., Moller Ian M. NADP-utilizing enzymes in the matrix of plant mitochondria//Plant Physiol.- 1990.-V.94, N 3.-p. 1012-1018.
263. Ratajczak Z. et al. Glutamate dehydrogenase isoenzymes in yellous lupine rootnodules- I-Wevelopental patterns and coenzyme requirements I I Acta physiol. plant.- 1988.- V. 10, N 1. p. 41-48.
264. Reddy S.Z., Venugopal N.B: In vivo effects of cadmium chloride on certain aspect of protein metabolism in tissues of a frechwater fields crab Barytelphuusa querini II Bull. Environ Contam. and Toxicol.- 1991.-V. 46, N 4.- p.583-590.
265. Rice David W., Hornby David P., Engel Paul C. Crystallization of an NAD -dependent glutamate dehydrogenase from Clostridium cymbiosum II J. Mol. Biol.- 1985.-V.181, N 1.-p. 147-149.
266. Rivere D., Kerambrun P. Impact d'une pollution d'origine urbaine sur les ac-tivites enzymatiques de deux copepodes planctoniques // Mar. Biol.- 1983.-V.75, N 1.- p. 25-35.
267. Rober В., Stolle J., Reuter G. Eigenschaften der Glucose-6-phosphat-dehydrogenase aus der SCP Candida maltosa H // Z. allg. Microbiol.- 1984.-V.24, N 9.- p. 629-636.
268. Rosenberg M. Bacterial adhesion to hydrocarbons: a useful technique for studing cell surface hydrophobicity // Ibid.-1984.-V.22.- No. 3. -P. 289-295.
269. Rosenberg M., Gutnick D., Rosenberg E. Adherence bacteria to hydrocarbons; a simple method for measuring cell surface hydrophobicity // FEMS Microbiol. Lett.-1984.-V.9.- No. 1. -P. 29-33.
270. Rueter John G. Alcaline phosphatase inhibition by copper: Implications to phosphorus nutrition and use as a biochemical marker of toxicity // Limnol. and Oceanogr.- 1983.- V.28, N 4.- p. 743-748.
271. Ruis H. Heme as a regulator of catalase biosynthesis in the yeast Saccharomy-ces cerevisiae И Highlights Mod. Biochem.: Proc. 14th Int. Congr. Biochem., Praque, 10-15 juli 1988. Vol .1- Utrecht, Tokyo, 1989.- p. 339-347.
272. Sallal A.K.G., Nimer N.A. The presence of glutamate dehydrogenase in Сhloro- gloeopsis fritschii. // FEMS Microbiol Lett.- 1990.- V.67, N l-2.-p. 215-219.
273. Sallal A.K.Y., Nimer N.A. The presence of malate dehydrogenase in thylakoids of Anabaena cylindrica, Nostos muscorum and Chlorogloeopsis fritschii I I Z. Naturforsch. C.- 1990.- V.45, N 3-4.- p. 249-252.
274. Sarada K.V. et al. Isolation and characterization of glutamate dehydrogenase from Mycobacterium smegmatis CDC 46 I I Biochim. et biophys. acta.- 1980.-V.615, N 2,- p. 299-308.
275. Scaven Michael D. et al. The rapid purification of 3-hydroxybutyrate dehydrogenase and malate dehydrogenase on triazine dye affinity matricis // Biochem. J.- 1982.- V.203, N 3.- p. 699-705
276. Schinkinder M.F., Rede В., Stoffler G. Purification and properties of an extreme thermostable glutamate dehydrogenase from the Archaebacterium sul-folobus solfataricus II Biochim et biophys. acta. Gen. Subj.- 1991.- Y.1073, N 1.- p. 142- 148.
277. Schroder Yohannes Horst, Peters Karin. Differential courtship activity of competing guppi males as an indicator for low concentrations of aquatic pollutants // Bull. Environ. Contam. and Toxicol.- 1988.- V.40, N 3.- p. 396404.
278. Schwegler Helmut. Stabilitatsbegriffe fur biologische Systeme // Angen. Bot.-1981.- V.55,N3-4.-p. 129-137
279. Shien Wen K., lee Carl J. Microbial toxicity moninor for in situ continuous applications//Biotechnol. andBioeng.- 1985.- V.27,N 10.-p. 1500-1506.
280. Shimizu Hiroshi, Kuratsu Taeko, Hirata Fumio. Purification and some properties of glutamate dehydrogenase from Protes inconstans II J. Ferment. Technol.-1979.-V.57,N 5.-p. 428-433.
281. Sleinert S.A., Pickwell G»V. Miltiple forms of lisozyme in copper stressed mussels ( Mytilus edulus ) II Mar. Environ. Res.- 1985.-V.17, N 2-4.- p. 211-214.
282. Srinivasulu Reddy M., Ramana Rao K.V. Effects of phosphamidon and lindane of the limb regeneration of panaeid prown, penaeus monodon // Bull. Environ. Contam. and Toxicol.- 1989.- V.42, N 1.- p. 154-158.
283. Srivastava D.K. et al. Direct transfer of NADH between 1-glycerol phosphate dehydrogenase and lactate dehydrogenase: fact or misinterpretation? // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.- 1989.- 86, N. 7.- p. 6464-6468.291. Steyer J. et al. (1999)
284. Advanced control of anaerobic digestion procecces through disturbances monitoring / Steyer J., Buffiere P., Rolland D. et al. // Water Res.- 1999. V.33. -No. 9.-P. 2059-2068.
285. Tayeh Mahmoud A., Madigan Michael T. Malate dehydrogenases in photo-trophic purple bacteria: purification, molecular weight and qaternary structure // J. Bacterid.- 1987.- V.169, N 9.- p. 4196-4202.
286. Telitchenko M.M. Self-purifying and full biological value by hydrobios // Fundamental research in homogeneous catalysis. N.I.: Gordon and Breach, 1986.-Vol. 3.- p. 1273-1287.
287. Teller J.K. Kinetic properties of glutamate dehydrogenase purified from the mealworm fat body. The glutamate synthesizing direction // Сотр. Biochem. and Physiol.- 1988V. 90, N 2.- p. 329-333.
288. Terashima Y., Ozaki H. Utilization of microorganisms immobilized with magnetic particles for wastewater treatment // Res. Activ., Civ., Eng. and Relat. Fields Kioto Univ. -1993. P. 117.
289. Toze S. PCR and the detection of microbial pathogens in water and wastewater // Water Res. 1999. -V. 33.-No. 17. - P. 3545-3556.
290. Tramper J., Suwinska-Borowiec G., Klapwijk A. Characterization of nitrifying bacteria immobilized in calcium alginate // Enzyme & Microbial Technology.-1985.-V.7.-No. 5.-P. 155-160.
291. Trindale Helena, Karmali Amin, Pais Maria S. One-step purification and properties of catalase- from leaves of Zantedeschia aethiopica // Biochemie.- 1988.-V.70, N 12.-p. 1759-1764.299. Tsubone T. et al. (1998)
292. Advanced biological water treatment using immobilization technology / Tsubone Т., Baba K., Sawada Т., Yamada H., Takeshi Т., Atsuura H. // NKK Techn.Rev. 1998. - No. 78. -P. 66-73.
293. Valdivia E et al. Control of catalase and peroxidase biosynthesis by carbon source and oxygen in the jeast Saccharomyces cerevisiae // Can. J. Microbiol.-1983.- V.29, N 9.- p. 1200-1204.
294. Vasseur P., Ferard J.F., Vial J., Larbaig G. Comparaison des tests Microtox et Daphnie pour 1'evaluation de la toxicite aique d' effluents industriels // Environ. Pollut.- 1984.- A .34, N 7.- p. 225-235
295. Vienne Dominique. Relation entre la structure et les formes multiples de la glutamate deshydrogenase du pollen de Luzerne // C. r. Acad, sci.- 1981.- D 291, N 11.-p. 885-888.
296. Vircellani P.A., Smiri R.I., Krieg N.R. Catalase activity in Campylobacter jejune: comparison of a wild-tipe strain with an aerotolerant variant // Can. J. Microbiol.- 1990.- V.36, N 6.- p. 449-451.
297. Von den Berg L. Developments in methanogenesis for industrial waste water // Can. J. Microbiol. 1984. - No. 8. - P. 975-990.
298. Vredenbregt L.H.J. etal.(1997)
299. Fluid bed biological nitrification and denitrification in high salinity waste water / Vredenbregt L.H.J., Nielsen K., Potma A.A. et al. // Water Sci. And Technol.-1997.-V.36. No. 1. - P. 93-100.
300. Warwick W.F. Morphological abnormalities in Chironomidae larvae as measures of toxic stress in freshwater ecosystems: indexing antennal deformities in
301. Chironomus Meigen II Caru J. Fish., and Aquat. Sci.- 1985.-V.42,. N 12.- p. 1881-1914.
302. Wedding Randolph T. Malic enzymes of higher plants: Characteristics, regulation and physiological function // Plant. Physiol.- 1989.- V.90, N 2.- p. 367-371.
303. Weil G., Hugen R. Dieselolabbau mit in Polymeren immobilisierten Mikroor-ganismen // Korrespond. Abwasser. -1997. -V. 44. -P. 104-109.310. Werner A. etal.( 1997)
304. Biotechnologisches Verfahren zum mikrobiellen Fettabbau' in Abwassern / Werner A., Boschke E., Enkelmann U., Bley Th. // Chem. — Ing. Techn. — 1997. - V. 69. - No. 9. - P. 1296.
305. West Sh.M., Price N.C. The unfolding and refolding of glutamate dehydrogenases from bovine liver, bakers yeast and Clostridium symbiosum I I Biochtm. J.-1988.- V.251, N 1.- p. 135-139.
306. Willeford Kenneth O., Wedding Randolph T. Evidence for a multiple subunit composition of plant NAD malic enzyme // J. Biol. Chem.- 1987.- V.262, N 17.-p. 8423-8429.
307. Williamson Kenneth J., Johnson Diane G. A bacterial bioassay for assessment of wastewaters toxicity // Water Res.- 1981.- V.15, N 3.- p. 383-390.
308. Zee B.N., Picard A. Occurrence of glutamate dehydrogenase isoenzymes during growth of Oocystis alga // Biotechnol. and Bioeng.- 1983.-V.25, N 7.- p. 18011816.
309. Zesson Andrea, Komuniecki Patricia R., Komuniecki Richard. Catalase activity during the development of the parasitic nematode Ascaris suum II Compan. Biochem. and Physiol. В.- 1990.- V.95, N 4.- p. 811-815.
310. Zoeven P.C., Switala Y. Purification and characterization of catalase РН II from Eschericha coli K12 // Biochem. and Cell Biol.- 1986.-V. 64, N 7.- p. 638-646.
311. Zoeven P.C., Switala Y. Purification and characterization of sporespecific catalase-2 from Bacillus subtilis II Biochem. and Cell Biol.- 1988.- V.66, N 7.-p. 707-714.
- Фомин, Игорь Викторович
- кандидата биологических наук
- Самара, 2004
- ВАК 03.00.16
- Экология сообщества прикрепленных и свободноплавающих микроорганизмов в биотехнологии очистки сточных вод
- Технологическое моделирование управляемого процесса аэробной биологической очистки сточных вод
- Анаэробно-аэробная глубокая очистка сточных вод газохимических комплексов
- Моделирование процессов биологической очистки сточных вод в системах с иммобилизованной микрофлорой
- Сообщество культивируемых аэробных микроорганизмов сточных вод совместного производства стирола с окисью пропилена