Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эффекты экологического регулятора гетероауксина на биологические системы разных уровней организации

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Эффекты экологического регулятора гетероауксина на биологические системы разных уровней организации"

На правах рукописи

Забродина Зоя Александровна

ЭФФЕКТЫ ЭКОЛОГИЧЕСКОГО РЕГУЛЯТОРА ГЕТЕРОАУКСИНА НА БИОЛОГИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ РАЗНЫХ УРОВНЕЙ ОРГАНИЗАЦИИ

03.00.16-экология 03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Саратов-2005

Работа выполнена на кафедре биохимии и биофизики ГОУ ВПО«Саратовский государственный университет им.Н.Г.Чернышевского»

Научные руководители: доктор химических наук, профессор

Кузнецов Павел Евгеньевич

кандидат биологических наук, с.н.с. Рогачёва Светлана Михайловна

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор химических наук, профессор Губина Тамара Ивановна

кандидат биологических наук, ассистент Белоногова Юлия Владимировна

Государственный научно-исследовательский институт промышленной экологии Министерства природных ресурсов Российской Федерации

Защита состоится " 20 " января 2006 года в 13.00 часов на заседании диссертационного совета Д.212.243.13 при государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный университет им.Н.Г.Чернышевского» по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Астраханская, 83. E-mail: biosovet@mail.ru

С диссертацией можно ознакомиться в Зональной научной библиотеке ГОУ ВПО «Саратовский государственный университет им. Н.Г.Чернышевского».

Автореферат разослан " 20 " декабря 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

Невский С.А.

' г ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Экологические взаимодействия (внутривидовые и межвидовые) осуществляются с помощью химических веществ-посредников — экорегуляторов и хемомедиаторов (Шустов, 1994). Химические экорегуляторы действуют в широком диапазоне концентраций и выполняют разнообразные функции. Среди них токсины и противоядия, депрессоры, су-прессоры, индукторы, феромоны, криопротекторы, фитогормоны, вещества, предупреждающие об опасности и другие. Многие из них проявляют свою активность в сверхнизких концентрациях (Ю'^-Ю'13 М). Например, действующая концентрация полового феромона тутового шелкопряда составляет порядка 10-2ОМ (Чибисова, 1998), т.е.

менее 10 молекул/см3. Установление молекулярных механизмов указанных взаимодействий позволяет на практике решать экологические проблемы, к которым относится, в частности, оценка устойчивости организмов к внешним воздействиям и направленное конструирование новых экорегуляторов.

Одним из экорегуляторов является индолил-3-уксусная кислота (ИУК), или гетероауксин. ИУК продуцируют высшие растения, грибы, водоросли, бактерии. Она регулирует рост растений, выполняя функцию фитогормона, стимулирует образование цепочек диатомовых водорослей в концентрациях порядка участвует в симбиотических отношениях между бактериями и растениями. Общепризнанно действие гетероауксина как сигнальной молекулы в высших растениях (Магиг, 2001). ИУК образуется также в животном организме, увеличение ее содержания в тканях наблюдается при росте раковых опухолей (Лозвкег, 2002). Для эукариотических микроорганизмов описано отрицательное действие гетероауксина на рост и размножение инфузорий, присутствие следовых количеств данного соединения (<10"9М) в экстрактах микроводорослей рода 5сеией/е5/им5. Функции ИУК в межвидовых, внутривидовых и межклеточных взаимодействиях разнообразны, но недостаточно изучены. Кроме того, ИУК и ее аналоги активно используются в сельском хозяйстве в качестве пестицидов, стимуляторов роста растений. Это способствует увеличению антропогенной нагрузки данных соединений на экосистемы.

Большой интерес представляет установление механизма биологического действия ИУК на молекулярном уровне. Многочисленные исследования фито-гормональной активности гетероауксина не позволяют окончательно определить характер этого действия: является ли оно рецепторным, мембранотропным или имеет более сложную природу. Не определена причина немонотонной зависимости биоотклика от концентрации ИУК.

С другой стороны, хорошо известно, что различные виды внешних воздействий оказывают влияние на живые системы посредством воды и водных сред. Установлено, что некоторые физиологически активные вещества - высокоэффективные лиганды разных рецепторов - в микро-, наномолярных и более низких концентрациях изменяют подвижность и структуру воды у поверхности субклеточных структур и их моделей. Это позволяет предположить, что в эффектах ИУК на биосистемы разных уровней организации вэвда^шде^ркнад-

Ы |

лежит воде, связанной на поверхности белков и мембран.

Для моделирования действия ИУК на популяцию, организм, клетку можно использовать одноклеточные гидробионты - микроводоросли и инфузории, которые сочетают в себе свойства организма и клетки. Жизнедеятельность этих организмов во многом определяется состоянием водной среды и известны методики экстраполяции результатов, полученных с их помощью, на многоклеточные организмы. Изучение влияния ИУК на гидратное окружение субклеточных и макромолекулярных структур целесообразно проводить на макромолекулах, не обладающих сродством к гетероауксину, и на экспериментальных моделях с гидратной оболочкой, имитирующей поверхность клетки.

Таким образом, изучение концентрационных эффектов гетероауксина -активного участника экологических взаимодействий - на биосисгемы разных уровней организации представляет весьма важную и актуальную проблему экологии и биохимии.

Цель и задачи исследования. Выявление концентрационных эффектов ИУК на биосистемы популяционного, организменного, клеточного, субклеточного и молекулярного уровней организации. В ходе реализации основной цели решались следующие задачи:

• изучить влияние ИУК на численность популяции микроводорослей Scenedesmus quadricauda;

• определить воздействие ИУК на экологические показатели одноклеточных гидробионтов:

а) интенсивность фотосинтеза и дыхания зелёных микроводорослей Scenedesmus quadricauda;

б) подвижность инфузорий Paramecium caudatum;

• определить характер действия ИУК на активность фермента ацетилхоли-нэстеразы и на фолдинг белка лизоцима;

• исследовать воздействие ИУК на подвижность и структуру приповерхностной воды с помощью экспериментальных моделей биомембран и белков;

• изучить возможность создания сенсорной системы для определения ИУК в водных средах;

• изучить влияние биологически активных веществ, в частности, ИУК, на состояние сетки водородных связей воды с помощью методов компьютерного моделирования.

Научная новизна. Определены концентрационные зависимости эффектов ИУК на биосистемы разных уровней организации. Показано, что она в низких концентрациях влияет на динамику численности популяции микроводорослей Scenedesmus quadricauda. Установлено, что зависимость экологических показателей микроорганизмов - интенсивности фотосинтеза и дыхания микроводорослей S. quadricauda, а также подвижности простейших Paramecium caudatum от концентрации ИУК имеет немонотонный характер. Обнаружено уменьшение активности ацетилхолинэстеразы и увеличение скорости фолдинга белка в присутствии низких концентраций гетероауксина. Экспериментально и методами

компьютерного моделирования показано, что в основе перечисленных эффектов ИУК лежит её способность вызывать изменения в структуре сетки водородных связей приповерхностной воды.

Научно-практическая значимость работы. Большое значение полученные результаты могут иметь для понимания механизма биологического действия ИУК на молекулярном уровне и её роли в экологических взаимодействиях. Обнаружено изменение формы клеток Scenedesmus quadricauda под влиянием ге-тероауксина, что свидетельствует об отрицательном воздействии ИУК и ее аналогов на водные экосистемы. Показана возможность создания сенсорной системы для определения низких концентраций (до 10~12 М) ИУК в водных средах. Ее действие основано на способности ИУК изменять структуру сетки водородных связей приповерхностной воды. Предложено применять математические модели, описывающие обнаруженные эффекты, для направленного конструирования структурно-функциональных аналогов ИУК с целью их использования в качестве экорегуляторов. Полученные результаты использованы в методических рекомендациях «Фолдинг белка и изучение влияния на него веществ, снижающих диффузионную подвижность воды» (СГУ, 2005г.), а также применяются в курсе лекций "Молекулярная биология" и в практикуме по молекулярной биологии на биологическом факультете Саратовского государственного университета.

Апробация работы. Основные результаты и положения работы представлены на конференциях: первой и второй Российской школе-конференции "Молекулярное моделирование в химии, биологии и медицине" (Саратов, 2002, 2004), студенческих научных конференциях биологического факультета Саратовского государственного университета "Студенческие исследования в биологии" (Саратов, 2003, 2004), втором Всероссийском симпозиуме "Тест-методы химического анализа" (Саратов, 2004), международных конференциях "Saratov Fall Meeting'04" и "Saratov Fall Meeting'05" (Саратов, 2004, 2005), конференции студентов и аспирантов биологического факультета Саратовского государственного университета "Студенческие и аспирантские исследования в биологии" (Саратов, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Личный вклад автора. Диссертантом выполнен весь объем экспериментальных работ, проведены расчеты, обработка и анализ результатов, сформулированы положения, выносимые на защиту и выводы. В совместных работах доля участия автора составила 50 - 80 %.

Объём и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 3 глав, выводов и приложения. Работа изложена на 146 страницах, иллюстрирована 36 рисунками, содержит 3 таблицы, 2 схемы и список литературы, включающий 241 источник, из которых 106 на иностранных языках.

Положения, выносимые на защиту:

1. Экологические показатели одноклеточных гидробионтов - численность популяции, интенсивность фотосинтеза и дыхания микроводорослей Scenedesmus quadricauda и подвижность простейших Paramecium caudatum -немонотонно зависят от концентрации ИУК в водных средах.

2. Активность фермента ацетилхолинэстеразы и характерное время фол-динга белка лизоцима уменьшаются под действием ИУК. Подвижность и структура воды у поверхности систем, моделирующих свойства биомембран и белков, изменяются в присутствии ИУК.

3. В приповерхностной воде в присутствии ИУК выполняются необходимые условия фазового Х-перехода (порядок-беспорядок).

4. С помощью растворов поли-К-винилкапролактама и 4-диметиламинохалкона определяются низкие концентрации гетероауксина в водных средах, что служит основой для создания сенсорных систем на ИУК.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обосновывается актуальность исследования, его практическая и теоретическая значимость; сформулированы основная цель и задачи.

Глава 1. ШЩОЛ1Ш-3-УКСУСНАЯ КИСЛОТА КАК ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ РЕГУЛЯТОР - СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ (обзор литературы)

Обсуждено широкое распространение ИУК в природе, ее участие в качестве экорегулятора в межвидовых и внутривидовых взаимодействиях; механизм ее фитогормональной активности. Отмечено, что многие экорегуляторы действуют в сверхмалых концентрациях (10'23-10"1Э М), но эффекты низких концентраций ИУК на экосистемы мало изучены, механизм действия на молекулярном уровне не установлен. Обоснована возможность использования одноклеточных гидробионтов для изучения действия ИУК на биосистемы популя-ционного, организменного и клеточного уровней. Рассмотрена роль структуры воды в функционировании биологических систем и в механизме действия низких концентраций химических веществ на биообъекты.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использовались культуры простейших Paramecium caudatum и протококковых зелёных водорослей Scenedesmus quadricauda (Тигр.) Breb. из коллекции ГосНИИОРХ. Культуру P. caudatum выращивали 2-3 суток на стандартной среде Лозина-Лозинского. Исходная концентрация клеток при посеве -около 1000 клеток/л. Альгологически чистую культуру S. quadricauda выращивали на питательной среде Успенской. Использовали водоросли в логарифмической фазе роста.

Эксперименты проводились с ферментами ацетилхолинэстеразой (КФ 3.1.1.7.) и лизоцимом куриного яйца (КФ 3.2.1.17) фирмы Fluka. Моделями биоструктур являлись ультрадисперсные алмазы (размер 4 нм), предоставленные Красноярским НЦ СО РАН; наночастицы оксида кремния (размер 7 нм) фирмы Sigma.

Сверхчистая вода была получена пропусканием дистиллированной води через систему высокой очистки «Водолей» (фирма «Аквилон», Россия). В экспериментах использовалась индолил-3-уксусную кислота (ИУК) фирмы Aldrich, 98 % чистоты. Исходный раствор ИУК (1,0 г/л) готовили трехкратным ультразвуковым дезинтегрированием по 30 с при максимальной мощности на ультразвуковом дезинтеграторе «UD-11-automatic» (Германия), остальные растворы с концентрациями 5,7х10"5 - 5,7* 10"19 М готовили методом последовательного разведения.

Численность клеток культуры S. quadricauda измеряли по стандартной методике (Владимирова, 1962). Фотосинтетическая активность и дыхание микроводорослей определяли по изменению концентрации кислорода в среде (метод Винклера), на свету и в темноте, соответственно. Подвижность P. caudatum анализировали на импульсном фотометре «Биотестер-2».

Активность ацетилхолинэстеразы в присутствии ИУК (5,7х10'5 -5,7x10"19 М) определяли колориметрически методом, Эллмана. За фолдингом лизоцима в присутствии ИУК (5,7x10"s - 5,7x10"19 М) следили по изменению интенсивности флуоресценции растворов белка во времени. В работе использовали раствор лизоцима куриного яйца с концентрацией 1 г/л, в качестве денатурирующего агента - б М раствор мочевины (Fluka). Измерения проводили на спектрофлуориметре «Флюорат- 02-Панорама».

Для установления влияния ИУК на структуру и подвижность приповерхностной воды изучали интенсивность рассеяния света растворами гетероаукси-на. Были проведены две независимые серии экспериментов. В первом случае измерения осуществляли на спектрофлуориметре «Флюорат-02-Панорама» во флуориметрическом режиме работы прибора при длине волны возбуждения 560 нм, с регистрацией рассеянного света под углом 90°. Во втором случае аналогичные измерения проводили на спектрофлуориметре «Shimadzu» модель RF-540 (Япония). Растворы ИУК перед анализом выдерживали в герметичных бкжсах в суховоздушном термостате ТС-80 (Россия) 24 ч при температуре 30°С.

Подвижность приповерхностной воды определяли методом флуоресцентного зондирования 4-диметиламинохалконом. В качестве экспериментальных моделей клеточной поверхности использовали наночастицы оксида кремния и ультрадисперсных алмазов, гидрозоли которых, с концентрацией частиц 0,1 г/л и 0,05 г/л, соответственно, получали трехкратным озвучиванием по 30 с при максимальной мощности на ультразвуковом дезинтеграторе «UD-11-automatic» (Германия). Гидрозоли, содержащие ИУК (5,7*10"5 - 5,7* 10"'9 М) и флуоресцентный зонд (10"5 М), выдерживали в герметичных бкжсах в термостате ТС-80 (Россия) при температуре 30°С в течение 1 ч. Интенсивность флуоресценции измеряли при длине волны возбуждения 422 нм, спектральный диапазон сканирования эмиссии 518 - 522 нм.

Для изучения поверхностных свойств ИУК использовался метод определения изотерм адсорбции по поверхностному натяжению водных растворов. Поверхностное натяжение измеряли методом отрыва кольца через 6 ч, 1 сутки, 2 суток при температуре 25°С с помощью торсионных весов ВТ-500.

Для создания сенсорных систем на низкие концентрации ИУК использовались две модели: поли-Ы-винилкапролактам (молекулярный вес 1,3-103), синтезированный из К-винилкапролактама (Р1ика), и 4-диметиламинохалкон.

В бюксы, содержащие разные концентрации ИУК (5,7* 10'5 - 5,7x10"19 М) вносили водный раствор поли-№винилкапролактама, с концентрацией 100 г/л в соотношении 1:1. Пробы помещали в термостат ТС-80 (Россия) при температуре 27°С . Далее температуру повышали до 33°С и затем с шагом 0,1°С, за 5 мин, - до 35°С. Изменение окраски растворов определяли визуально и регистрировали как при нагревании, так и при охлаждении.

Во втором случае, в бюксы, содержащие водно-ацетоновый раствор 4-диметиламинохалкона в объёме 2,7 мл, добавляли по 300 мкл раствора ИУК до конечной концентрации 5,7х10"5 - 5,7* 10"19 М. Перед измерением пробы выдерживали в вакуумной сушилке БРЯ (Ногугог^, Польша) в течение 15 мин под давлением 9,1 * 104 Н/м2 при температуре 29°С. Определяли оптическую плотность суспензий в максимуме поглощения спектрального диапазона сканирования 410-440 нм.

Глава 3. ВЛИЯНИЕ ГЕТЕРОАУКСИНА НА БИОЛОГИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ И ИХ МОДЕЛИ

Проведены исследования воздействия ИУК в диапазоне концентраций от до 5,7*10'19М на биосистемы разных уровней организации. Для моделирования действия ИУК на популяцию использовалась культура зелёных протококковых водорослей Бсепейеятт циайпсаийа. Известно, что водоросли этого рода продуцируют ИУК и накапливают её в культуральной среде (Магиг, 2001). Показателем воздействия химического вещества на популяцию является изменение ее численности. Наблюдали за изменением количества клеток микроводорослей в водных средах с ИУК на свету и в темноте по сравнению с контролем (водой без ИУК).

На свету гетероауксин вызывал некоторое снижение численности клеток. Достоверно значимые результаты получены для концентраций 5,7x10"13 М, 5,7*10 М, 5,7x10"

М. (рис.1а), В темноте количество микроводорослей в растворах ИУК по сравнению с контролем не менялось (рис. 16). Исключение составил 5,7x10'7 М раствор гетероауксина, в котором происходило значительное увеличение количества клеток. Установлено, что в темноте ИУК в концентрации, стимулирующей рост высших растений (10"6 - 10"8 М), оказывает аналогичное действие на микроводоросли.

Применение оптической микроскопии позволило выявить изменение формы клеток микроводорослей & quadriccшda под влиянием ИУК в концентрации 5,7x1 О*5 М. Клетки приобретают более округлую форму по сравнению с контролем, нехарактерную для представителей данного рода (рис. 2).

s 1-4

§ 1.2 X g 1

I 0.8

0 0,6 4 0.4

1 0.2

^ ^^ ' *

-10 -15

ig (с, щ

-20

Рис. 1. Индекс численности Б. диас!псаис}а в зависимости от молярной концентрации ИУК (С,М) на свету (а) и в темноте (б). Единице соответствует численность в отсутствии ИУК (контроль)

-Ч ■ л 'Г.

if

'^-ja**^ ♦ -v 'Уу ' ' г

v , '':'f^ffit "г

■ 1 ' - - С'

Рис. 2. Фотографии клеток S. quadricauda, инкубированных в водных средах: (а)-без ИУК; (б)-с 5,7x10" МИУК. Фотографии получены при помощи цифровой камеры-окуляра для микроскопа SCOPETEK, модель DCM 35

Возможно, разрушаются внутриклеточные структуры микроводорослей, поскольку они не видны под микроскопом. Обнаруженное явление, вероятно, обуславливает большой разброс численности клеток в среде с ИУК в данной концентрации. Известно, что любое химическое повреждение клетки вызывает плазмолиз - резкое увеличение проницаемости протопласта, в результате чего он теряет упругость, сокращается и отстаёт от клеточной стенки (Галактионов, 1980). Таким образом, нами обнаружен плазмолиз клеток микроводорослей S. quadricauda под действием гетероауксина в концентрациях порядка 10"s М.

Для исследования эффектов ИУК на биосистемы организменного и клеточного уровней использовались микроводоросли S. quadricauda и инфузории Paramecium caudatum. Эти одноклеточные представители растительного и животного мира сочетают в себе признаки клетки и организма.

Уровень химического воздействия, в том числе ИУК, на клетки 5. quadricauda можно проследить по изменению интенсивности их фотосинтеза и дыхания. Установлен немонотонный дозо-зависимый характер воздействия ИУК на указанные экологические показатели гидробионтов (рис. 3), положи-

тельные и отрицательные значения на графиках свидетельствуют о стимулирующем и ингибирующем эффектах ИУК, соответственно.

а б

Рис. 3. Изменение интенсивности фотосинтеза (а), дыхания (б) микроводорослей S. quadricauda в зависимости от концентрации ИУК (С,М).

Значению 0 соответствует отсутствие ИУК

Показано, что в определенных низких концентрациях ИУК оказывает прямо противоположное действие на фотосинтез и дыхание микроводорослей. Например, в концентрации 5,7x10"11 М гетероауксин стимулирует фотосинтез и ингибирует дыхание; в концентрациях 5,7* 10"7 М и 5,7x10" М действует наоборот. Причина немонотонности и разнонаправленности эффектов гетероаук-сина не установлена.

Отмечено отрицательное влияние ИУК в концентрации 5,7 х10*5 М не только на форму клеток S. quadricauda, но и на их физиологические свойства, что указывает на токсическое действие гетероауксина в концентрациях выше 10"5 М на микроводоросли. Полученные результаты свидетельствуют об отрицательном антропогенном воздействии ИУК и ее аналогов на водные экосистемы.

В качестве экологического показателя воздействия ИУК на организм простейших была выбрана подвижность инфузорий Paramecium caudatum. Был выявлен немонотонный концентрационный эффект гетероауксина (рис. 4). В большинстве концентраций ИУК оказывала отрицательное воздействие на подвижность парамеций, но в концентрациях 5,7х10'12 М, 5,7x10'17 М, соответственно, не изменяла и увеличивала подвижность клеток.

В 1938 г. Эллиотт (Elliott, 1938) показал, что гетероауксин тормозит рост и размножение инфузорий. Дальнейших исследований в этом направлении не проводилось. Поскольку изменение подвижности парамеций является показателем токсичности водной среды, мы считаем, что нами зафиксировано отрицательное воздействие гетероауксина на организм простейших. Из литературных данных известно, что микроводоросли подавляют функционирование простейших в водных экосистемах. Полученные результаты позволяют предположить, что химическим посредником в таком межвидовом взаимодействии может выступать гетероауксин.

Концентрация ИУК: 1 - 5,7х10"6 М; 2 - 5,7хЮ'10 М; 3 - 5,7хКГ12 М;

4 - 5,7х10'15 М; 5 - 5,7х10'17 М; б - 5,7х1<)-19 М.

Рис. 4. Кинетические кривые подвижности P.caudatum в зависимости от концентрации ИУК

Не ясна причина немонотонного дозо-зависимого воздействия ИУК на клетки парамеций. Управление двигательной активностью парамеций осуществляется кальций-зависимым образом (Гапеев, 1993; Оахш, 2003), любое отклонение концентрации ионов кальция приводит к изменению двигательной активности парамеций. В то же время известно, что гетероауксин активирует Са2+-АТФ-азу плазмалеммы растительной клетки, в результате чего увеличивается концентрация Са2+ (Шишова, 1999). По аналогии с растительной клеткой можно предположить, что гетероауксин изменяет активность мембраносвязан-ных белков парамеций, ответственных за транспорт ионов Са2+ в клетку, тем самым, оказывая влияние на их подвижность. Активность ферментов и функционирование ионных каналов зависит от конформационного состояния белковых молекул, на которое огромное влияние оказывает диффузионная подвижность воды. Следовательно, немонотонность биологического отклика парамеций на ИУК может быть связана с изменением структуры сетки водородных связей воды вблизи клеточных мембран и белков.

С целью определить роль структурированной воды в механизме воздействия ИУК на клетки, на следующем этапе изучалось влияние гетероауксина на биомакромолекулы, не обладающие к нему сродством.

В экспериментах использовали ацетилхолинэстеразу (АХЭ). В интервале концентраций 5,7x10'15 М - 5,7х10'13 М наблюдалось снижение активности АХЭ по сравнению с контролем (р<0,05) (рис. 5). Характер зависимости указывает на то, что ИУК не является для АХЭ субстратом или ингибитором. Поэтому можно предположить, что изменение активности АХЭ под действием гетероауксина обусловлено изменением его конформации в результате воздействия ИУК на структуру и динамику связанной на поверхности белка воды.

Рис. 5. Относительная активность АХЭ в зависимости от концентрации ПУК (С,М). Единице соответствует активность АХЭ в отсутствии ИУК

Для проверки влияния ИУК на процесс сворачивания полипептидной цепи, связанного с перестройкой сетки водородных связей воды в присутствии этого соединения, изучали фолдинг лизоцима куриного. За фолдингом лизоци-ма следили по изменению интенсивности флуоресценции растворов белка во времени. Оказалось, что зависимость времени фолдинга от концентрации ИУК имеет немонотонный характер. Причем некоторые концентрации этого соединения, даже очень низкие, способны значительно увеличивать скорость процесса (рис. 6).

Рис. 6. Изменение времени фолдинга лизоцима в зависимости от концентрации ИУК (С,М). Жирная линия соответствует времени фолдинга в

отсутствии ИУК

Характер воздействия ИУК на фолдинг лизоцима может быть обусловлен влиянием соединения на состояние сетки водородных связей воды, окружающей белок. Гетероауксин в определенных концентрациях вызывает перестройку сетки водородных связей приповерхностной воды, что приводит к изменению конформации, и, следовательно, к изменению свойств макромолекул клетки.

На следующем этапе работы изучалось действие ИУК на структуру и подвижность приповерхностной воды. Первоначально исследовалось рассеяние света водными растворами гетероауксина.

Были проведены две серии экспериментов, которые отличались измерительными приборами. В результате были получены две похожие немонотонные зависимости, имеющие один пик светорассеяния в области относительно высоких концентраций и один плохо разрешенный пик в области низких концентраций (рис. 7).

-7 -9 -11 -13 -15 -17 19 (С, М)

а б

Рис. 7. Относительная интенсивность рассеяния света (10тн %) растворами ИУК в зависимости от концентрации (С,М) и условий проведения анализа: а) спектрофлуориметр «БЫтас!^» модель КР-540 (Япония), б) спектрофлуори-метр «Флюорат-02-Панорама» (Россия). 100% соответствует интенсивности рассеяния чистой воды

Показательно, что концентрации ИУК, увеличивающие интенсивность светорассеяния, вызывали наибольшее увеличение скорости фолдинга лизоци-ма. Увеличение интенсивности светорассеяния можно объяснить образованием сравнительно устойчивых динамических «конструкций» из молекул воды, и, следовательно, снижением ее подвижности. Этот процесс имеет место при фазовом ^.-переходе ("порядок-беспорядок"), связанном с перестройкой сетки водородных связей воды вблизи молекулы растворенного вещества.

Для оценки изменения диффузионной подвижности приповерхностной воды использовался метод флуоресцентного зондирования. Изучалось влияние ИУК на состояние воды вблизи твердых поверхностей. В качестве флуоресцентного зонда был выбран 4-диметиламинохалкон (ДМХ), интенсивность флуоресценции которого снижается при увеличении подвижности молекул воды. Для моделирования гидрофобной и гидрофильной поверхности макромолекул использовались наночастицы ультрадисперсных алмазов (УДА), и оксида кремния, соответственно.

ИУК в концентрациях до 10"1оМ значимо снижал флуоресценцию ДМХ в гидрозолях оксида кремния, и увеличивал ее в гидрозолях УДА (рис. 8). Полученные результаты свидетельствуют о способности ИУК изменять подвижность приповерхностной воды в зависимости от полярности поверхности.

а б

Рис. 8. Относительная интенсивность флуоресценции ДМХ (1отн %) в зависимости от концентрации ИУК (С,М) в гидрозоле наночастиц оксида кремния с концентрацией 0,1 г/л (а) и в гидрозоле наночастиц УДА с концентрацией 0,1 г/л (б). 100% соответствует флуоресценции ДМХ в отсутствии ИУК

Поскольку гетероауксин в малых концентрациях вызывал значимое изменение подвижности воды, было предположено, что он концентрируется в приповерхностной области наночастиц. На основе анализа поверхностного натяжения растворов ИУК разных концентраций на границе раздела фаз вода-воздух с использованием теории Гиббса определись значения накопления молекул ИУК на границе раздела фаз. При инкубации в течение 2 суток наблюдались значимые отклонения удельной адсорбции (Г) от значений для чистой воды. Характер зависимости (рис. 9) свидетельствует о том, что при определенных концентрациях ИУК вытесняется с границы раздела фаз, при других - накапливается на границе раздела, то есть наблюдается волнообразная зависимость способности ИУК растворяться в приповерхностной воде. Все эти результаты подтверждают гипотезу о способности ИУК вызывать фазовый X-переход в структуре сетки водородных связей приповерхностной воды. Немонотонность зависимости подвижности воды от концентрации ИУК в водной фазе может являться причиной немонотонности биоэффектов ИУК.

Г,106м2 15' 10.50-•0.5-

г

л у

/

т т

•23 ■ и 9 ■ 7 5 - 3 -11 -9 .71дад

Рис. 9. Изменение удельной адсорбции (Г) ИУК на границе раздела фаз вода-воздух в зависимости от концентрации вещества (С,М). Жирная линия соответствует аппроксимации Шишковского

Способность ИУК структурировать приповерхностную воду должна привести к улучшению кинетических параметров транспорта этого соединения к активному центру рецептора, что увеличивает вероятность комплексообразова-ния и проявления биологической активности.

Выявленная способность ИУК изменять структуру воды предлагается использовать для создания сенсорных систем на низкие концентрации этого вещества. В качестве возможных сенсоров были проанализированы две модели. В первой использовался водный раствор поли-№винилкапролактама (ПВКЛ). Этот полимер в воде образует полимер-гидратный комплекс, фазовый переход которого "растворение-осаждение" зависит от температуры раствора и фиксируется визуально. Температура фазового перехода комплекса зависит от структуры всей водной системы, которая изменяется под влиянием растворенных веществ. Таким образом, ПВКЛ, присутствующий в водном растворе в небольших количествах, проявляет себя как сенсор соединения, изменяющего структуру водной среды.

Изучение зависимости температуры фазового перехода раствора ПВКЛ от концентрации ИУК (рис. 10) позволило предложить данный метод для определения гетероауксина в водных средах в концентрациях не ниже 5.7х10'12 М.

ЫСМ)

Рис. 10. Изменение температуры перехода ПВКЛ (ДСС) в водном растворе в зависимости от концентрации ИУК (С, М)

Во второй модели в качестве сенсора использовался плохо растворимый в воде краситель - 4-диметиламинохалкон (ДМХ). В пробу, содержащую растворенную в воде ИУК, вносили раствор ДМХ в ацетоне. Быстро образовывалась коллоидная система из мелкодисперсных частиц красителя, взвешенных в воде. В результате перестройки сетки водородных связей воды под действием ИУК изменялись коагуляционные и седиментационные свойства суспензий, что регистрировали с помощью спектрофотометра. Установлена практически прямолинейная логарифмическая зависимость оптической плотности проб от содержания в них ИУК в диапазоне концентраций от 5,7*10'5 М до 5,7*10'12 М (рис. 11).

Таким образом, предлагаемые подходы могут быть реализованы в сенсорной системе для анализа водных растворов ИУК.

■чт/14

И"1"

-7 -10 -13 -16 -19

ig(c,M)

Рис. 11. Изменение оптической плотности (D) водно-ацетоновых растворов ДМХ в зависимости от концентрации ИУК (С,М)

Далее было выполнено теоретическое описание обнаруженных эффектов. В основу была положена теория Боголюбова, которая позволяет описать взаимодействие в растворе молекул растворенного вещества с молекулами растворителя. Для визуализации результатов математических расчетов П.Е.Кузнецовым с соавт. была разработана компьютерная- программа, использующая метод Монте-Карло. Автором настоящей работы была сконструирована модель молекулы, которая вызывала немонотонную зависимость радиуса корреляции приповерхностной воды.

На рис. 12 представлены мгновенные равновесные конфигурации воды в отсутствии (б) и в присутствии (а) молекулы растворенного вещества. Модель молекулы растворенного вещества выделена пунктиром (в центре рис. 12а).

а б

Рис. 12. Мгновенные равновесные конфигурации воды в отсутствии (б) и в присутствии (а) молекулы растворенного вещества. Модель молекулы растворенного вещества выделена пунктиром (в центре рисунка (а)). Белые квадратики соответствуют средней плотности, черные - отрицательным, а серые - положительным отклонениям от нее Видно, что в первом случае области отклонения плотности от среднего значения довольно хаотичны как по размеру, так и по положению на плоскости.

Во втором случае эти области сливаются вблизи центральной молекулы.

Таким образом, общая картина действительно напоминает состояние, предшествующее фазовому ^.-переходу. Возможно, что переход происходит не во всем объеме системы, а в некой микрообласти, примыкающей к центральной молекуле. Однако это не меняет существа сделанных выводов о влиянии молекулы, в частности ИУК, на структуру и подвижность приповерхностной воды, что может определять биоэффекты гетероауксина.

Применение более совершенных трехмерных математических моделей, использующих предложенные здесь подходы, целесообразно применять не только для описания обнаруженных эффектов влияния ИУК и ее аналогов на состояние приповерхностной воды, но и для направленного конструирования структурно-функциональных аналогов ИУК с целью их использования в качестве экорегуляторов.

ВЫВОДЫ

1. В лабораторных условиях установлены концентрационно-зависимые эффекты ИУК на биосистемы разных уровней организации (популяционного, ор-ганизменного, клеточного, субклеточного, молекулярного).

2. Показано, что ИУК является экорегулятором, в низких концентрациях влияющим на динамику численности популяции Scenedesmus quadricauda. Установлено немонотонное дозо-зависимое воздействие ИУК на интенсивность фотосинтеза и дыхания микроводорослей: в концентрации 5,7x10'" М гетероауксин стимулирует фотосинтез и ингибирует дыхание; в концентрациях 5,7х10"7 М, и 5,7x10"' М действует наоборот. Отмечено токсическое действие ИУК в концентрациях выше 10"5 М на микроводоросли. Это свидетельствует о значительном её антропогенном действии на водные экосистемы.

3. Показано, что в зависимости от концентрации в водной среде ИУК является атграктантом или репеллентом для Paramecium caudatum, вызывая дозо-зависимое изменение их подвижности. Приведены значимые доказательства в пользу того, что модулирование гетероауксином подвижности Paramecium caudatum и физиологических показателей Scenedesmus quadricauda обусловлено изменением структуры и динамики воды вблизи плазматических мембран и макромолекул.

4. Установлен неспецифический характер снижения активности ацетилхолинэ-стеразы под действием ИУК. Определено активирующее действие ИУК на фолдинг лизоцима. Максимальное увеличение скорости фолдинга (до 3 раз) соответствует концентрациям ИУК 5,7^10"5М - 5,7x10'7М и 5,7x10'17 -5,7x10",9М.

5. С помощью флуоресцентного зондирования на моделях макромолекул и мембран (гидрозолей наночастиц оксида кремния и алмаза) установлено воздействие ИУК на подвижность и структуру приповерхностной воды. Экспериментально и методами компьютерного моделирования показано, что в приповерхностной воде в присутствии ИУК выполняются необходимые

условия фазового ^.-перехода (порядок-беспорядок). Это приводит к изменению конформации и свойств макромолекул и биомембран.

6. Показана возможность использования способности ИУК изменять структуру сетки водородных связей приповерхностной воды для создания сенсорной системы на ее низкие концентрации. Чувствительность определения ИУК в

. сенсорах с поли-К-винилкапролакгамом и водно-ацетоновым раствором ди-метиламинохалкона составила 5,7x10'12 М.

7. Полученные дынные показывают целесообразность применения разработанных математических моделей для направленного конструирования структурно-функциональных аналогов ИУК с целью их использования в качестве экорегуляторов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Применение поли-Ы-винилкапролактама для анализа водных сред на содержание некоторых лекарственных соединений // Химико-фармацевтический журнал. - 2003. - Т. 37. - № 9. - С. 49-50. (в соавт. с Кузнецовым П.Е., Апаркиным A.M., Злобиным В.А., Назаровым Г.В., Рогачёвой С.М., Грачёвой A.A.)

2. Экспериментальные модели для исследования влияние гетероауксина на состояние приповерхностной воды белков и мембран // Вестник Саратовского государственного аграрного университета. - 2005. - № 5. - С. 3-6. (в соавт. с Кузнецовым П.Е., Грековой Е.В., Рогачёвой С.М., Баюновой А.А, Мухачевой Е.С,.)

3. Влияние гетероауксина на состояние гидратной оболочки наночастиц алмаза как моделей биомембран и макромолекул // Известия Саратовского университета. Новая версия. Серия Химия. Биология. Экология. - 2005. - Т. 5. -Вып. 2 .- С. 7 -10. (в соавт. с Кузнецовым П.Е.)

4. Computer simulation of structure and mobility of water hydrogen bonds net in aqueous solutions of some chemical compounds // Proc. SPIE. - 2005. - Vol. 5773. - P. 188-194. (в соавт. с Кузнецовым П.Е., Рогачёвой С.М., Попыховой Э.Б., Пылаевым Т.Е.)

5. Возможная роль изменения сетки водородных связей воды под влиянием ауксина в проявлении его биологического действия // Студенческие исследования в биологии: Сб. науч. тр. - Саратов: Изд-во СГУ, 2003. - Вып. 1. -С. 57. (в соавт. с Горяевым A.A.)

6. Влияние индолил-3-уксусной кислоты на скорость фолдинга лизоцима // Исследования молодых учёных и студентов в биологии: Сб. науч. тр. - Саратов: Изд-во СГУ, 2005.- Вып. 3. - С. 84.

7. Поли^-винилкапролактам - индикатор низких концентраций физиологически активных веществ // Тест-методы химического анализа: Тез. докл. П Всерос. симп., Саратов, 21 - 25 июня, 2004 г. - Саратов, 2004. - С. 50. (в соавт. с Кузнецовым П.Е., Рогачёвой С.М., Апаркиным A.M., Злобиным В.А., Назаровым Г.В.)

S. Полуконтинуальный метод клатратных оболочек для оценок распределения химических соединений в системе «вода - липофильная среда» // Молекулярное моделирование в химии, биологии и медицине: Тез. докл. I Рос. школы -конф., 18-20 сентября, 2002 г.- Саратов: Изд-во СГУ, 2002. - С. 66- 67. (в соавт. с Попыховой Э.Б., Согуренко И.А.)

9. Структура и динамика гидратного окружения индолил-3-уксусной кислоты // Молекулярное моделирование в химии, биологии и медицине: Тез. докл. II Рос. школы - конф., 13-16 октября, 2004 г. - Саратов: Изд-во СГУ, 2004. - С. 40. (в соавт. с Кузнецовым П.Е., Горяевым A.A., Баюновой A.A.)

10. Дескрипторы микроокружения в задачах QSAR // Там же - С. 41. (в соавт. с Кузнецовым П.Е., Рогачёвой С.М.)

11.Анализ гидратной оболочки индолил-3-уксусной кислоты // Там же -С. 39. (в соавт. с Пылаевым Т.Е., Кузнецовым П.Е., Злобиным В.А., Назаровым Г.В., Рогачёвой С.М)

12.Фолдинг белка и изучение влияния на него веществ, снижающих диффузионную подвижность воды. Методические рекомендации для студентов старших курсов и аспирантов, специализирующихся в области биохимии и молекулярной биологии.- Саратов: Изд-во СГУ, 2005.- С.12. (в соавт. с Кузнецовым П.Е., Попыховой Э.Б.)

Выражаю глубокую признательность д.х.н. Злобину В.А., к.х.н. Бурмист-ровой H.A., к.х.н. Алексенко С.С., к.х.н. Назарову Г.В. за плодотворное обсуждение работы и проведение ряда независимых экспериментов для контроля воспроизводимости результатов работы.

Подписано в печать 17.12.2005 Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Гарнитура Times. Печать RISO. Объем 1,0 печ. л. Тираж 100 экз. Заказ № 536.

Отпечатано с готового оригинал-макета Центр полиграфических и копировальных услуг Предприниматель Серман Ю.Б. Свидетельство № 304645506500043 410600, Саратов, ул. Московская, д.152, офис 19

РНБ Русский фонд

2007-4 11795

' ."«С. \

■ . /

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Забродина, Зоя Александровна

Перечень сокращений.

Введение.

1 Индолил-3-уксусная кислота как экологический регулятор: современное состояние проблемы.

1.1 Индолил-3-уксусная кислота в системе межвидовых и внутривидовых взаимодействий.

1.1.1 Химические экорегуляторы.

1.1.1 Распространение гетероауксина в природе.

1.1.2 ИУК в системе взаимодействия ассоциативных микроорганизмов и растений.

1.1.3 ИУК и злокачественные опухоли.

1.1.4 Фитогормональное действие гетероауксина.

1.1.5 Участие ИУК во взаимодействиях биосистем разных уровней организации.

1.2 Одноклеточные гидробионты в экологических исследованиях.

1.2.1 Оценка влияния хемосферы на состояние экосистем.

1.2.3 Paramecium caudatum для исследования биологической активности химических веществ.

1.3. Роль воды в функционировании биологических систем.

1.3.1 Молекулярное строение воды.

1.3.2 Участие воды в формировании пространственных структур биосистем.

1.3.3 Механизм действия низких концентраций биологически активных веществ.'.

2 Материалы и методы исследования.

2.1 Материалы исследования.

2.2 Методы исследования.

2.2.1 Приготовление чистой воды.

2.2.2 Приготовление растворов ИУК.

2.2.3 Определение численности культуры зелёных микроводорослей Scenedesmus quadricauda.

2.2.4 Определение интенсивности фотосинтеза и дыхания зелёных микроводорослей Scenedesmus quadricauda.

2.2.5 Определение подвижности Paraamecium caudatum в присутствии ИУК

2.2.6 Изучение влияния ИУК на активность ацетилхолинэстеразы.

2.2.7 Исследование фолдинга лизоцима куринрго яйца.

2.2.8 Измерение светорассеяния водных растворов ИУК.

2.2.9 Приготовление гидрозолей наночастиц с поверхностями различной полярности.

2.2.10 Флуоресцентное зондирование гидрозолей наночастиц.

2.2.11 Определение поверхностного натяжения водных растворов ИУК.

2.2.12 Синтез поли-М-винилкапролактама.

2.2.13 Определение ИУК с помощью водных растворов поли-N-винилкапролактама.

2.2.14 Определение ИУК с помощью водно-ацетоновых растворов

4-диметиламинохалкона.

3 Влияние гетероауксина на биологические системы и их модели.

3.1 Иерархическая схема исследования ИУК как экорегулятора.

3.2 Влияние ИУК на численность популяции и физиологические свойства микроводорослей Scenedesmus quadricauda.'.

3.3 Влияние ИУК на подвижность Paramecium caudatum.

3.4 Изучение влияния ИУК на свойства биомакромолекул.

3.4.1 Влияние ИУК на активность ацетилхолинэстеразы.

3.4.2 Влияние ИУК на фолдинг белка.

3.5 Воздействие ИУК на структуру и подвижность приповерхностной воды

3.5.1 Молекулярное упругое рассеяние света водными растворами ИУК.

3.5.2 Флуоресцентное зондирование поверхности наночастиц как моделей биомолекул и мембран.

3.5.3 Влияние полярности поверхности наночастиц в гидрозолях на подвижность приповерхностной воды, структурированной ИУК.

3.5.4 Поверхностные свойства водных растворов ИУК.

3.5.5 Участие воды, структурированной , ИУК, в процессе лиганд-рецепторного взаимодействия.

3.6 Подходы к разработке сенсорной системы для определения низких концентраций ИУК.

3.7 Математическое моделирование влияния химических соединений на структуру сетки водородных связей воды.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эффекты экологического регулятора гетероауксина на биологические системы разных уровней организации"

Актуальность проблемы Экологические взаимодействия (внутривидовые и межвидовые) осуществляются с помощью химических веществ-посредников - экорегуляторов, хемомедиаторов (Шустов, 1994). Химические экорегуляторы действуют в широком диапазоне концентраций и выполняют разнообразные функции. Среди них токсины и противоядия, депрессоры, супрессоры, индукторы, вещества, предупреждающие об опасности, феромоны, криопротекторы, фитогормоны и другие. Многие из них проявляют свою активность в сверхнизких концентрациях (10' -10' М). Например, действующая концентрация пололл вого феромона тутового шелкопряда составляет порядка 10" М (Чиби-сова, 1998), т.е. менее 10 молекул/см .

Установление молекулярных механизмов указанных взаимодействий позволяет на практике решать экологические проблемы, к которым относится, в частности, оценка устойчивости организмов к внешним воздействиям и направленное конструирование новых экорегуляторов.

Одним из экорегуляторов является индолил-3-уксусная кислота (ИУК), или гетероауксин. ИУК продуцируют высшие растения, грибы, водоросли, бактерии. Она регулирует рост растений, выполняя функцию фитогормона, стимулирует образование цепочек диатомовых водорослей (БкеШопета соБ(аШт) в концентрациях порядка 10"П-10"12М (Магиг, 2001), участвует в симбиотических отношениях между бактериями и растениями. Общепризнанно действие гетероауксина как сигнальной молекулы в высших растениях (Магиг, 2001). ИУК образуется также в животном организме, увеличение ее содержания в тканях наблюдается при росте раковых опухолей. Для эука-риотических микроорганизмов описано отрицательное действие гетероауксина на рост и размножение инфузорий, присутствие следовых количеств данного соединения (<10"9М) в экстрактах микроводорослей рода

Бсепейехтт. Функции ИУК в межвидовых, внутривидовых и межклеточных взаимодействиях разнообразны, но недостаточно изучены. Кроме того, ИУК и ее аналоги активно используются в сельском хозяйстве в качестве стимуляторов роста растений и пестицидов. Это способствует увеличению антропогенной нагрузки данных соединений на экосистемы.

Большой интерес представляет установление механизма биологического действия ИУК на молекулярном уровне. Многочисленные исследования фитогормональной активности гетероауксина не позволяют окончательно определить характер этого действия: является ли оно рецепторным, мембра-нотропным или имеет более сложную природу. Не определена причина немонотонной зависимости биоотклика от концентрации ИУК.

С другой стороны, хорошо известно, что различные виды внешних воздействий оказывают влияние на живые системы посредством воды и водных сред. Установлено, что некоторые физиологически активные вещества - высокоэффективные лиганды разных рецепторов - в микро-, наномолярных и более низких концентрациях изменяют подвижность и структуру воды у поверхности субклеточных структур и их моделей. Это позволяет предположить, что в эффектах ИУК на биосистемы различных уровней организации важная роль принадлежит воде, связанной на поверхности белков и мембран.

Для моделирования действия ИУК на популяцию, организм, клетку можно использовать одноклеточные гидробионты — микроводоросли и инфузории, которые сочетают в себе свойства организма и клетки. Их жизнедеятельность во многом определяется состоянием водной среды и известны методики экстраполяции результатов, полученных с их помощью, на многоклеточные организмы. Изучение влияния ИУК на гидратное окружение субклеточных и макромолекулярных структур целесообразно проводить на макромолекулах, не обладающих сродством к гетероауксину, и на экспериментальных моделях с гидратной оболочкой, имитирующей поверхность клетки.

Таким образом, изучение концентрационных эффектов гетероауксина -активного участника экологических взаимодействий - на биосистемы разных уровней организации представляет весьма важную и актуальную проблему экологии и биохимии.

Вышеизложенное позволило определить цель и задачи исследований. Цель и задачи исследования Целью работы явилось выявление концентрационных эффектов индолил-3-уксусной кислоты на биосистемы популя-ционного, организменного, клеточного, субклеточного и молекулярного уровней организации.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние ИУК на численность популяции микроводорослей Scenedesmus quadricauda.

2. Определить воздействие гетероауксина на экологические показатели одноклеточных гидробионтов: а) фотосинтетическую активность, дыхание зелёных микроводорослей Scenedesmus quadricauda. б) подвижность инфузорий Paramecium caudatum.

3. Определить характер действия ИУК на активность фермента ацетилхо-линэстеразы и на фолдинг белка лизоцима.

4. Исследовать воздействие ИУК на подвижность и структуру приповерхностной воды с помощью экспериментальных моделей биомембран и белков.

5. Изучить возможность создания сенсорной системы для определения ИУК в водных средах.

6. Изучить влияние биологически активных веществ, в частности, ИУК, на состояние сетки водородных связей воды с помощью методов компьютерного моделирования.

Научная новизна Определены концентрационные зависимости эффектов ИУК на биосистемы разных уровней организации. Показано, что она в низких концентрациях влияет на динамику численности популяции микроводорослей Scenedesmus quadricauda. Установлено, что зависимость экологических показателей микроорганизмов - интенсивности фотосинтеза и дыхания микроводорослей S. quadricauda, а также подвижности простейших Paramecium caudatum от концентрации ИУК имеет немонотонный характер. Обнаружено уменьшение активности ацетилхолинэстеразы и увеличение скорости фолдинга белка в присутствии низких концентраций гетероауксина. Экспериментально и методами компьютерного моделирования показано, что в основе перечисленных эффектов ИУК лежит её способность вызывать изменения в структуре сетки водородных связей приповерхностной воды.

Научно-практическая значимость работы Большое значение полученные результаты могут иметь для понимания механизма биологического действия ИУК на молекулярном уровне и её роли в экологических взаимодействиях. Обнаружено изменение формы клеток Scenedesmus quadricauda под влиянием гетероауксина, что свидетельствует об отрицательном воздействии ИУК и ее аналогов на водные экосистемы. Показана возможность создания сенсорной системы для определения низких концентраций (до 1СГ12 М) ИУК в водных средах. Ее действие основано на способности ИУК изменять структуру сетки водородных связей приповерхностной воды. Предложено применять математические модели, описывающие обнаруженные эффекты, для направленного конструирования структурно-функциональных аналогов ИУК с целью их использования в качестве экорегуляторов. Полученные результаты использованы в ме-тодических рекомендациях «Фолдинг белка и изучение влияния на него ве-ществ, снижающих диффузионную подвижность воды» (СГУ, 2005г.), а также применяются в курсе лекций "Молекулярная биология" и в практикуме по молекулярной биологии на биологическом факультете Саратовского государственного университета.

Работа выполнена на кафедре биохимии и биофизики биологического факультета Саратовского государственного университета им. Н.Г.Чернышевского.

Апробация работы Основные результаты и положения работы представлены на конференциях: первой и второй Российской школе-конференции

Молекулярное моделирование в химии, биологии и медицине" (Саратов, 2002, 2004), студенческих научных конференциях биологического факультета Саратовского государственного университета "Студенческие исследования в биологии" (Саратов, 2003, 2004), втором Всероссийском симпозиуме "Тест-методы химического анализа" (Саратов, 2004), международных конференциях "Saratov Fall Meeting'04" и "Saratov Fall Meeting'05" (Саратов, 2004, 2005), конференции студентов и аспирантов биологического факультета Саратовского государственного университета "Студенческие и аспирантские исследования в биологии" (Саратов, 2005).

Публикации По теме диссертации опубликовано 12 работ. Личный вклад автора Диссертантом выполнен весь объем экспериментальных работ, проведены расчеты, обработка и анализ результатов, сформулированы положения, выносимые на защиту и выводы. В совместных работах доля участия автора составила 50 - 80 %.

Структура и объём работы Диссертация состоит из введения, 3 глав, выводов и приложения. Работа изложена на 146 страницах, иллюстрирована 36 рисунками, содержит 3 таблицы, 2 схемы и список литературы, включающий 241 источник, из которых 106 на иностранных языках. Положения, выносимые на защиту

Заключение Диссертация по теме "Экология", Забродина, Зоя Александровна

Выводы

1. В лабораторных условиях установлены концентрационно-зависимые эффекты ИУК на биосистемы разных уровней организации (популяционно-го, организменного, клеточного, субклеточного, молекулярного).

2. Показано, что ИУК является экорегулятором, в низких концентрациях влияющим на динамику численности популяции Scenedesmus quadricauda. Установлено немонотонное дозо-зависимо'е воздействие ИУК на интенсивность фотосинтеза и дыхания микроводорослей: в концентрации

5,7x10"" М гетероауксин стимулирует фотосинтез и ингибирует дыхание;

7 17 в концентрациях 5,7x10" М, и

5,7x10"" М действует наоборот. Отмечено токсическое действие ИУК в концентрациях выше 10"5 М на микроводоросли. Это свидетельствует о значительном её антропогенном действии на водные экосистемы.

3. Показано, что в зависимости от концентрации в водной среде ИУК является аттрактантом или репеллентом для Paramecium caudatum, вызывая дозо-зависимое изменение их подвижности1. Приведены значимые доказательства в пользу того, что модулирование гетероауксином подвижности Paramecium caudatum и физиологических показателей Scenedesmus quadricauda обусловлено изменением структуры и динамики воды вблизи плазматических мембран и макромолекул.

4. Установлен неспецифический характер снижения активности ацетилхоли-нэстеразы под действием ИУК. Определено активирующее действие ИУК на фолдинг лизоцима. Максимальное увеличение скорости фолдинга (до 3 раз) соответствует концентрациям ИУК 5,7хЮ'5М - 5,7х10"7М и 5,7x10"17-5,7x10"19М.

5. С помощью флуоресцентного зондирования на моделях макромолекул и мембран (гидрозолей наночастиц оксида кремния и алмаза) установлено воздействие ИУК на подвижность и структуру приповерхностной воды. Экспериментально и методами компьютерного моделирования показано, что в приповерхностной воде в присутствии ИУК выполняются необходимые условия фазового ^-перехода (порядок-беспорядок). Это приводит к изменению конформации и свойств макромолекул и биомембран.

6. Показана возможность использования способности ИУК изменять структуру сетки водородных связей приповерхностной воды для создания сенсорной системы на ее низкие концентрации. Чувствительность определения ИУК в сенсорах с поли-Ы-винилкапролактамом и водно-ацетоновым раствором диметиламинохалкона составила 5,7х10"12 М.

7. Полученные данные показывают целесообразность применения разработанных математических моделей для направленного конструирования структурно-функциональных аналогов ИУК с целью их использования в качестве экорегуляторов.

Выражаю глубокую признательность д.х.н. Злобину В.А., к.х.н. Бурми-стровой H.A., к.х.н. Алексенко С.С., к.х.н. Назарову Г.В. за плодотворное обсуждение работы и проведение ряда независимых экспериментов для контроля воспроизводимости результатов работы. т

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Забродина, Зоя Александровна, Саратов

1. Айвазов Б.В. Практикум по химии поверхностных явлений и адсорбции. Учебное пособие для институтов. — М.: «Высшая школа», 1973. -208 с.

2. Аксёнов С.И. Вода и её роль в регуляции биологических процессов. — М.: Наука, 1990. — 117 с.

3. Антонченко В.Я. Физика воды. Киев: Наукова думка, 1986. - 127с.

4. Антонов В.Ф., Черныш A.M., Пасечник В.И. Биофизика. Учебник для студентов высших учебных заведений. М.: ВЛАДОС, 2003. - 288 с.

5. Артюхов В. Г., Наквасина М. А. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами. Учебное пособие Воронеж: Издательство Воронежского государственного университета, 2000. - 296 с.

6. Байдербек Р. Опухоли растений. М.: Колос, 1981.- 303 с.

7. Бакаева E.H. Обоснование использования одноклеточных в биотестировании / Тез. докл. международ, заоч. науч.-практич. конф. «Инфузории в биотестировании». — Санкт-Петербург: Архив ветеринарных наук, 1998.-С.26-27.

8. Балакирева С.Ю., Миронова И.К., Киреев P.A. Методическое пособие к малому пратикуму по биофизике. Саратов: Изд-во Сарат.ун-та, 2003. -44 с.

9. Безуглова О.С. Удобрения и стимуляторы роста. Серия «Подворье».-Ростов-на-Дону: Феникс, 2002 320 с.

10. Ю.Бернал Дж. Роль воды в кристаллических веществах // Успехи химии. -1956. -Т. 25, вып. 5. С.643-661.

11. Богатыренко Т.Н., Редкозубова Г.П., Конрадов A.A. Влияние органических пероксидов на рост культивируемых клеток высших растений // Биофизика. 1989. - Т. 34. - N 26. - С. 327 - 329.

12. Богданова Н.Г., Лелекова Т.В., Пальмина Н.П. Действие сверх малых доз тиролиберииа на микровязкость липидного компонента биологических мембран // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2000. - Т. 129. -N1. - С. 38 -40.

13. П.Боголюбов H.H. Избранные труды по статистической физике. М.: Наука, 1979.-556 с.

14. Болдырев A.A. №+/К+-АТФаза свойства и биологическая роль // Со-росовский образовательный журнал. Биология. - 1998 — т.4. - №5 -С.12-17.

15. Бонавида Б. Иммунологические эффекты веществ в сверхмалых дозах: новые механизмы и синергетические воздействия // Российский химический журнал. — 1999. — Т. XLIII. № 5. — С. 100-107.

16. Брагинский Л.П. Методологические аспекты токсикологического биотестирования на Daphnia magna Str. и других ветвистоусых ракообразных // Гидробиологический журнал. 2000. - Т. 36. - № 5. - С. 50-70.

17. Брагинский Л.П., Сиренко Л.А. Методика токсикологического эксперимента на синезеленых водорослях // Методики биологических исследований по водной токсикологии. М.: Наука, 1971. - С. 191-205.

18. Букин В. А., Сарвазян А. П., Харакоз Д.П. Вода вблизи биологических молекул. В кн: Вода в дисперсных системах.- М.: Мир, 1989. С. 45-63.

19. Бульенков Н. А. О возможной роли гидратации как ведущего интеграционного фактора в организации биосистем на различных уровнях их иерархии //Биофизика. -1991. -Т. 36, вып. 2. С.199-242.

20. Бурлакова Е.Б. Сверхмалые дозы большая загадка природы // Экология и жизнь. - 2002. - № 2. - С.73 - 79.

21. Бурлакова Е.Б., Конрадов A.A., Мальцева E.JI. Действие сверхмалых доз биологически активных веществ и низкоинтенсивных физических факторов // Химическая физика. — 2003. — Т. 22. № 2. - С. 106 - 114.

22. Вайнштейн Б.К. Современная кристаллография. В 2-х т. Т.2. М.: Наука, 1979. - 354 с.

23. Вайсберг A.B. Физические методы в органической химии. В 3-х т. Т.1. -М.:Ин.лит.,1950.- 547 с.

24. Веселовский В.А. Изучение природы парадоксальной биологической реакции у растительных организмов // Информационный бюллетень РФФИ. 1995. - Т.З. - № 4. - С.437.

25. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.: Наука, 1980. - 316 с.

26. Владимирова М.Г., Семененко В.В. Интенсивная культура одноклеточных водорослей. М.: Изд-во АН СССР, 1962. - 59 с.

27. Влияние дисульфидных связей на динамику лизоцима / Шайтан К.В., Михайлюк М.Г., Леонтьев K.M. и др. // Биофизика. 2003. - Т.48. - №2. - С.210-216.

28. Влияние некоторых лекарственных веществ на подвижность граничных слоев воды / Кунцевич А.Д., Назаров Г.В., Апаркин A.M. и др. // Докл. РАН.- 1999.-Т. 367.-№ 1.-С. 120-121.

29. Влияние некоторых опиатов на стабильность искусственных бислой-ных липидных мембран // Кунцевич А.Д., Горбунов Ю.А., Панфилов A.B. и др. / Докл РАН. 1998. - Т. 358. -№ 1.-С. 125-126.

30. Волькенштейн М.В. Биофизика. М.: Наука, 1988. - 592 с.

31. Вукс М.Ф. Рассеяние света и фазовые переходы в водных растворах простых спиртов // Оптика и спектроскопия. 1976. -Т. 40. - №1.- С. 154-159.

32. Галактионов С.Г., Юрин В.М. Водоросль сигнализирует об опасности. -Минск, 1980. 144 с.

33. Галачьян P.M., Давтян А.Р. Бактерии возбудители патологических новообразований у растений как продуценты биологически активных веществ. В кн.: Проблемы онкологии и тератологии растений / Под ред. Слепяна Э.И. - Л.: «Наука», 1975. - С.42.

34. Гамбург К.З. Биохимия ауксина и его действие на клетки растений. -Новосибирск: «Наука», 1976. 272 с.

35. Гамбург К.З., Рекославская Н.И. Ауксины в культурах тканей и клеток растений. Новосибирск: Наука, 1990.- 185 с.

36. Гудвин Т., Мерсер Э. Введение в биохимию растений. В 2-х т. Т.2. М.: Мир, 1986.-335 с.

37. Гуларян С.К., Добрецов Г.Е., Светличный В.Ю. Флуоресцентный зонд 4-диметиламинохалкон: механизм тушения флуоресценции в неполярных средах // Биофизика. 2003. - Т.48. - №5. - С.873-879.

38. Дайсон Ф., Монтролл Э., Фишер М. Устойчивость и фазовые переходы. М.: Мир, 1973. - 373 с.

39. Де Гроот С.П. Термодинамика необратимых процессов. М.:Техн-теор. лит., 1956. - 542 с.

40. Дёрфлинг К. Гормоны растений. Системный подход / Пер. с англ. -М.: Мир, 1985.-304 с.

41. Догель В.А. Зоология беспозвоночных. Учебник для университетов. -М.: «Высшая школа», 1975. — 560 с.

42. Догель В.А., Полянский Ю.И., Хейсин Е.М. Общая протозоология. -М.: «Высшая школа», 1962. 592 с.

43. Драбкина Т. М., Кривой И. И. От разнообразия молекулярных форм к функциональной специализации олигомерных белков. Никотиновый холинорецептор, ацетилхолинэстераза и №+,К+-АТФаза // Цитология. 2004. - Т.46. - №2. - С.89-104.

44. Дятлов С.Е. Роль и место биотестирования в комплексном мониторинге морской среды // Экология моря. 2000. - Вып.51. - С. 83-87.

45. Евгеньев М.И. Тест-методы и экология // Соросовский образовательный журнал. 1999. - Т.5. -№11.- С.29-34.

46. Евграфова E.H., Каган-В.Л. Руководство к лабораторным работам по физике. М.:Высш.школа,1970. - 383 с.

47. Елизаров Ю. А. Хеморецепция насекомых. М.: МГУ, 1978. - 232 с.

48. Г.Еропкин М.Ю. Модели, альтернативные использованию лабораторных животных в токсикологии. Достижения и проблемы // Токсикологический вестник. 1999. - №5. - G.7—13.

49. Жизнь растений. В 6-ти т. Т.З. / Под ред. Голлербаха М.М. М.: «Просвещение», 1977.-487 с.

50. Иванова А.Б., Анцыгина JI.JI., Ярин А.Ю. Современные аспекты изучения фитогормонов // Цитология. 1999 - Т.41. - №10 - С.835-847.

51. Изменение уровня фитогормонов в сортах и мутантах гороха при инфицировании Rhizobium /Акимова Г.П., Соколова М.Г., Нечаева JI.B. и др. //Вестник Башкирского университета. 2001. - № 2.- С. 47-49.

52. Исследование реакции оборонительного ускорения Paramecium cauda-tum /Давыдов Д.А., Ефстифеев А.И., Наумова О.С. и др.// Структура и динамика молекулярных систем. 2003. - 4.2. — Вып. X. - С.254 - 257.

53. Использование ВЭЖХ в анализе опиатов с применением косвенного спектрофотометрического детектирования 7 Кунцевич А.Д., Назаров Г.В., Кузнецов П.Е. и др. // Химико-фармацевтический журнал. 2000.- Т.34. №5. - С.55-56.

54. Кантор Ч., Шиммел П. Биофизическая химия. Т.2. М.: Мир, 1984. -493 с.

55. Кефели В.И. Регуляция роста высших растений и гормональные системы у микроорганизмов общее и специфичное в связи с явлениями патологического роста. В кн.: Проблемы онкологии и тератологии растений / Под ред. Слепяна Э.И. - Д.: «Наука», 1975. - С. 17.

56. Кирш Ю.Э., Калниньш К.К. Особенности ассоциации молекул в водно-солевых и водно-органических растворах // Журнал прикладной химии. -1999.- Т. 72, Вып. 8.- С.1233-1246."

57. Количественный подход к определению понятия «сверхмалые дозы лекарственных веществ и ядов» / Духович Ф.С., Горбатова Е.Н., Куроч-кин В.К. и др.// Российский химический журнал. — 1999. — Т. XLIII. -№5. —С. 12-14.

58. Коновалихин С.В., Бойков П.Я., Бурлакова К.Б. Корреляция структура- физиологическая активность у производных пиколиновой кислоты поданным квантово-химических расчётов // Изв. АН. Сер. биол. 2000. -N2.-С. 153- 157.

59. Кришталик Л.И. Влияние пограничного слоя воды с пониженной диэлектрической проницаемостью на энергию активации ферментативных реакций с переносом заряда // Биофизика. 1988. - Т. 33, вып. 4. -С. 562-571.

60. Кузнецов П.Е., Грибов Л.А. Введение в молекулярное моделирование. -Саратов: СГУ, 2003. 52 с.

61. Кузьмич В.Н., Соколова С.А., Крайнюкова А.Н. Руководство по определению методом биотестирования токсичности вод, донных отложений, загрязняющих веществ и буровых растворов. М.: РЭФИЯ, НИА-Природа, 2002. - 358 с.

62. Кулаева О.Н., Прокопцева О.С. Новейшие достижения в изучении механизма действия фитогормонов // Биохимия. 2004. - Т.69. - №3. -С.293-310.

63. Курс низших растений: Учебник для студентов университетов / Великанов Л.Л., Гарибова Л.В., Горбунова Н.П. и др. — М.: Высшая школа, 1981.-504 с.

64. Леопольд А. Рост и развитие растений / Пер.с англ. Бундель A.A. М.:1. Мир», 1968. 496с.t

65. Лук В. Влияние электролитов на структуру водных растворов. В кн.:

66. Вода в полимерах / Пер. с англ. Под ред. С. Роуленда. М.: Мир, 1984. -С. 50-80.

67. Мазин В.В., Проценко Е.П. Возбудитель килы крестоцветных Plas-modiophora brassicae Woron. M.: «Наука», 1976. - 230 с.

68. Маркосян К.А., Курганов Б.И. Фолдинг, неправильный фолдинг и агрегация белков.Образование телец включения и агресом // Биохимия.-2004. Т.69, в.9. - С.1196-1212.

69. Меркис А.И. Ауксин и рост растений.- М.: Просвещение, 1982. 280 с.

70. Методы биоиндикации и биотестирования природных вод. Сб.трудов / Под ред. Брызгало В.А., Хоружая Т.А. JL: Гидрометеоиздат, 1987. -Вып.1. - 160 с.

71. Методы биоиндикации и биотестирования природных вод. Сб.трудов / Под ред. Брызгало В.А., Хоружая Т.А. JL: Гидрометеоиздат, 1989. -Вып.2. - 280 с.

72. Методы биохимических исследований / Под ред. Прохоровой М.И.-Л.: ЛГУ, 1982.-272 с.

73. Методы Монте-Карло в статистической физике / Под ред. Биндер К., 1982. -400 с.

74. Михалевская О.Б. Патологический рост у проростков кукурузы при заражении их возбудителем пузырчатой головни. В кн.: Проблемы онкологии и тератологии растений / Под ред. Слепяна Э.И. Л.: «Наука», 1975. -С.434- 494.

75. Молочкина Е.М., Озерова И.Б., Бурлакова Е.Б. Действие фенозана и экзогенного ацетилхолина на ацетилхолинэстеразу и систему липидной пероксидации в мембранах клеток головного мозга II Росс. Хим. Журнал. 1999. - Т. 18. -N 5. - С.63 - 72.

76. Наберухин Ю.И. Загадки воды // СО Ж. -1996. -№ 5. С. 41-48.

77. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. М.:Просвещение, 1987. -815 с.

78. Определение параметров роста тест-модели Paramecium caudatum для стандартизации исследований по изучению биологической активности химических веществ / Ершов Ю.А., Плетенева Т.В., Синюк Т.Ф. и др.//

79. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1999. - Т. 127. -№ 6.-С. 197- 198.

80. Пастон C.B., Сушко M.JL, Мельник Б.С. Сравнение влияния соединений, стабилизирующих и разрушающих структуру воды, на конформа-ционные изменения молекулы ДНК при у-облучении её растворов // Биофизика. 2002. - Т. 47, вып. 3. - С. 453-458.

81. Пеккель В. А., Киркель А. 3. Необычное ингибирование ак-тивности моноаминоксидазы, индуцируемое хлоргилином // Биохимия. — 1988.

82. Т. 53; вып. 7. —С. 1224-1229.

83. ПНД Ф Т 14.1:2:3:4.8-02 16.1:2:3:3.5-02 «Методика определения токсичности вод, водных вытяжек из почв, осадков сточных вод, отходов ? по изменению уровня флуоресценции хлорофилла и численности клеток водорослей»

84. Поляк Э.А. О реальности влияния гелиогеофизических и химических факторов на структурные особенности жидкой воды // Биофизика. — 1991. — Т. 36; вып. 4. — С. 565-568.

85. Попов Е.М. Структура и функции белка. Серия «Проблема Белка». Т.4- М.: Наука, 2000. 482 с.

86. Приказ МПР России от 15.06.01 г. №511 «Об утверждении критериевIотнесения опасных отходов к классу опасности для окружающей природной среды»

87. Применение метода спин-решеточной релаксации для детектирования опиатов в жидкостях организма и их моделях / Апаркин A.M., Злобин В.А., Назаров Г.В. и др. // Химико-фармацевтический журнал. 2002.-Т.36. - № 6. - с. 47-54.

88. Применение поли-1ч-винилкапролактама для анализа водных сред на содержание некоторых лекарственных соединений / Кузнецов П.Е., Апаркин A.M., Злобин В.А. и др. // Химико-фармацевтический журнал. 2003.- Т. 37. - №9. - С.49-50.

89. Рогожин В.В., Рогожина Т.В. Роль индолил-3-уксусной кислоты в реакциях пероксидазного окисления аскорбиновой кислоты, катализируемого пероксидазой хрена // Известия АН. Серия биологическая. -2004. №4. -С.416-420.

90. Роль приповерхностной воды в проявлении биологического действия опиатов / Кунцевич А.Д, Кузнецов П.Е., Назаров Г.В. и др. // Докл. РАН. 1998. - Т. 363. - № 4. - С. 552-553.

91. Романов Г.А. Гормон-связывающие белки растений и проблема рецепIции фитогормонов // Физиология растений. 1989. - Т.36. -№ 2. -С. 166-177.

92. Романов Г.А. Рецепторы фитогормонов // Физиология растений.- 2002.-Т.49. №4.- С.615-625.

93. Романов Г.А., Обручева Н.В., Новикова Г.В., Мошков И.Е. 17-я Международная конференция по ростовым веществам растений (хроника) // Физиология растений, 2002 Т.49. - №2 - С.330-336.

94. Рубин А.Б. Биофизика М.: Изд-во Московского университета, 2004. -917 с.

95. Ю2.Рункова JI.B., Талиева М.Н. О роли и взаимосвязи индольных и фе-нольных соединений в физиологии здорового и больного растения. В кн.: Фитогормоны и рост растений. М.: «Наука», 1978. - С.95-117.

96. ЮЗ.Свидовый В.И. Прямое воздействие низкочастотных акустических колебаний на мембранные структуры клеток // Медицина труда и промышленная экология. 1996.- №9.- С.29-32.

97. Севастьянов В.Д. О распространении и роли стимуляторов роста растений в животном организме // Успехи современной биологии. -1958. Т.66, Вып.2. - С.194-207.

98. Серегина О.Б., Леонидов Н.Б. Простейшие как альтернативный биологический тест-объект в фармации // Фармация. 2003. - №4. -С.55-62.

99. Синтез и спектральные свойства винилогов халкона / Яновская JI.A., Умирзаков Б., Яковлев И.П и др. // Известия АН СССР. Серия химическая. -1971. -№11. С.24-27.

100. Система экспресс-методов интегральной оценки биологической активности индивидуальных веществ и комплексных препаратов на биологических объектах / Кудрин А.Н., Ананин В.В., Балабаньян

101. B.Ю. и др. // Российский химический журнал. 1997. - Т.41. - №5.1. C.114—123.

102. Собственная УФ-флуоресценция лизоцима и особенности микроокружения его триптофановых остатков / Туроверов К.К., Бушмарина H.A., Малова JI.H. и др. // Биофизика. 2001. - Т.46. - №6. - С.978-987.

103. Степанов В.М. Молекулярная бирология. Структура и функция белков / Под ред. Спирина A.C. М.:Высшая школа, 1996. - 335 с.

104. Сухоруков К.Т., Семовских Д. О действии ауксинов на клетки растения // Доклады АН .СССР. 1946. - Т.54. - №1. - С.85.

105. Стадницкий Г.В., Родионов А.И. Экология. -С.-П.:Химия, 1995.-239с.

106. Сухоруков К.Т., Строганов Б.П. О действии гетероауксина на клетки в связи с заболеваниями растений // Доклады АН СССР. 1945. -Т.48. - №3. - С.224

107. ПЗ.Танкелюн О.В., Полевой В.В. Индуцируемое ауксином повышение протеинкиназной активности микросомальной фракции клеток коле-оптилей кукурузы // Физиология растений. 1996. - Т.43. -№ 2. -С.201 -207.

108. Таутс М.И., Семененко В.Е. Выделение и идентификация физиологически активных веществ индольной природы во внеклеточных метаболитах хлореллы // Докл. АН СССР. 1971. - Т. 198. - №4. - С.970-973.

109. Третьякова И.Н. Опухолеобразование у растений и его проявление у хвойных // Успехи современной биологии. 1992. - Т.112, Вып.5-6. -С.736-744.

110. Трикуленко A.B. Роль гидрофобных взаимодействий в процессе сворачивания белковой цепи при её биосинтезе // Биохимия. 1998. -Т.63. - №5. - С.667-671.

111. Туманов A.A. Биологические методы анализа // Журнал аналитической химии. 1988. - Т.43. - № 1. - С.20 - 35.

112. Туманов А.А, Постнов И.Е. Водные беспозвоночные как аналитические индикаторы // Общая гидробиология. 1983. - Т. 5. - С. 3-16.

113. Туманова Н.Б., Попова Н.В., Ямскова В.П. Влияние макромолекуляр-ных адгезионных факторов на пролиферацию в органных культурах эмбриональной печени мышей // Изв. АН. Сер. Биол. 1996. - N 6. -С.653 - 658.

114. Уоттерсон Д. Г. Роль воды в функции клетки // Молекулярная биофизика. 1991. -Т. 36, вып. 1. - С. 5-30.

115. Успенская В.И. Экология и физиология питания пресноводных водорослей. М., МГУ, 1966. - 123 с.

116. Федоров В.Д., Капков В.Н. Руководство по гидробиологическому контролю качества природных вод. М.: Христианское изд-во, 2000. -120 с.

117. Хан Р.Г., Хан Ф. Модели фолдинга белков и выболр белков в качестве катализаторов в живой природе // Биохимия.- 2002. Т.67, в.5. -С.624-630.

118. Хоботьев В.Г. Вопросы стандартизации методик при проведении токсикологических исследований // Методики биологических исследований по водной токсикологии. М.: Наука, 1971. - С. 7-13.

119. Чанг Р. Физическая химия с приложениями к биологическим системам. М.: Мир, 1980. - 662 с.

120. Чибисова Н.В., Долгань Е.К. Экологическая химия. Калининград: ЮТ, 1998.-113 с.

121. Чиганова Г.А. Агрегирование частиц в гидрозолях ультрадисперсных алмазов // Коллоидный журнал. 2000. - Т.62. - №2. - С.272-277.

122. Чиганова Г.А. Влияние гидратации частиц на агрегативную устойчивость гидрозолей ультрадисперсных алмазов // Коллоидный журнал. -1997. Т.59. - №1. - С.93 - 96.

123. Шаланки Я. Биомониторинг природной среды // Журнал общей биологии. 1985. -Т.46. - № 6. - С. 743-752.

124. Шангин-Березовский Г.Н., Молоскин С.А., Рыхлецкая О.С. Химический мутагенез в созда-нии сортов с цовыми свойствами / Под ред. Рапопорта И.А. М.: Наука, 1986. - 243 с.

125. Шеховцова Т.Н. Биологические методы анализа // СОЖ. 2000. - Т.6. -№11. —с.17-21.

126. Шилов И.А. Экология. М.: «Высшая школа», 2003. - 512 с.

127. Шишова М.Ф., Линдберг С., Полевой В.В. Активация ауксином транспорта Са2+ через плазмалемму растительных клеток // Физиология растений. 1999. - Т.46. - №5. - С.718-727.

128. Шустов C.B., Шустова Л.В. Химические основы экологии. М.: Просвещение, 1994. - 239 с.

129. Экспериментальные доказательства роли физико-химических факторов в механизме биологического действия сверхмалых доз / Ямсков И.А., Ямскова В.П., Даниленко А.Н. и др. // Российский химический журнал. 1999. -T. XLIII. - № 5. - С. 35-39.

130. Эткинс П. Физическая химия. В 2-х т. Т.1. М:Мир, 1980.-346 с.

131. Ямскова В.П., Резникова М.М Низкомолекулярный полипептид сыворотки крови теплокровных: влияние на клеточную адгезию и пролиферацию // Журнал общей биологии. 1991. - Т. 52. - N2. - С. 181 -191.

132. A calcium-dependent protein kinase regulated by phytochrome action in oat cell / In K.T., Kyeong K.H., Ju C.T. et al. // Plant. Physiol. 1993. -V.102. -No.l.-P. 147-153.

133. Abel S., Theologis A. Early genes and auxin action // Plant Physiology. -1996. V.l 11. - No.1. - P.9-17.

134. Armus H. L., Montgomery A. R. Aversive and attractive properties of electrical stimulation for Paramecium caudatum II Psychological Reports. 2001.-V.89. -No.2.-P.342-344.

135. Ashen J.B., Cohen J.D., Goff L.J. GC-MS detection and quantification of free indole-3-acetic acid in bacterial galls on the marine alga Prionitis lanceolata (Rhodophyta) II J.Phycol. 1999. - V.35. - P.493-500.

136. Auxin biosynthesis and metabolism Plant Hormones / Bundurski R.S., Cohen J.D., Slovin J.P. et al. // Physiology, Biochemistry and Molecular Biology /Ed. Davies P.J. Dordrecht: Kluwer Acad.Publ., 1995. - P. 3965

137. Auxin distribution and transport during embryonic pattern formation in wheat / Fischer-Iglesias C., Sundberg В., Neuhaus G. et al. // The Plant Journal. 2001. - V.26. - No.2. - P.l 15-129.

138. Auxin-dependent cell expansion mediated by overexpressed auxin-binding protein 1 / Jones A.M., Im K.-H., Savka M.A. et al. // Science. 1998. -V.282.-P.l 114-1117.

139. Barazani O., Friedman J. Is IAA the major root growth factor secreted from plant-growth-mediating bacteria? // Journal of chemical ecology. -1999. V.25. - No. 10. - P.2397-2406.

140. Barazani O., Friedman J. Is IAA the major root growth factor secreted from plant-growth-mediating bacteria? // Journal of chemical ecology. -1999. V.25. - No.10. - P.2397-2406.

141. Berridge M.J. Inositol Trisphosphate and Calcium Signalling // Nature. -1993. V.361. - P.315-325.

142. Bonkowski M. Protozoa and plant growth: the microbial loop in soil revisited// New Phytologist. 2004. - V.162. - No.3. - P.617-631.

143. Bundurski R.S., Cohen J.D., Slovin J.P. Auxin biosynthesis and metabolism Plant Hormones Physiology, Biochemistry and Molecular Biology /Ed. Davies P.J. - Dordrecht: Kluwer Acad.Publ., 1995. - P. 39-65

144. Cairns J., Cruber D. A Camparison of methods and instrumentation of biological early warning systems // Water res. bull. 1980. - Vol.16. - No.2. -P.261-266.

145. Candeias L.P., Folkes L.K., Wardman P. Amplification of oxidative stress by decarboxylation: a new strategy in anti-tumour drug synthesis // Bio-chem Soc Trans. 1995. - V.23. - P.262-269.

146. Candeias L.P., Folkes L.K., Wardman P. Enhancement of peroxidase-induced lipid peroxidation by indole-3-acetic acid: effect of antioxidants // Redox Rep. 1996. - V.2. - P.141-147.

147. Cell cycle activation by plant parasitic nematodes / Goverse A., Engler J.A., Verhees J. et al. // Plant Molecular Biology. 2000. - V.43. -No.5/6. - P.747-761.

148. Chaplin, M. F. A proposal for the structuring of water // Biophys. Chem.2000.-V.83.-No.3. P.211-221.

149. Chaplin, M. F. Water; its importance to life // Biochem. Mol. Biol. Educ.2001.- V. 29. No.2. -P.54-59.

150. Characterization of an AUX/1AA cDNA upregulated in Pinus pinaster roots in response to colonization by the ectomycorrhizal fungus hebeloma

151. Cylindrosporum / Charvet-Candela V., Hitchin S., Ernst D. et al.//New Phytologist. 2002. - V.154. - No.3. - P.769-777.

152. Chen Y.C. Immobilized microaiga Scenedesmus quadricauda (Chloro-phyta, Chlorococcales) for long-term storage and for application for water quality control in fish culture // Aquaculture. 2001. - V.195. - No.1-2. -P.71-80.

153. Complexing properties and structural characteristics of thermally sensitive copolymers of n-vinylpyrrolidone and n-vinylcaprolactam / Kirsh Y.E., Yanul N.A., Anufrieva E.V. et al. // European Polymer Journal. 2001. -T.37. - №2. - C.323-328.

154. Davenas E., Beauvais F., Arnara J. Human basophil degranu-lation triggered by very dilute antiserum against IgE // Nature. — 1988. — Vol. 333. -No. 6176. —P. 816-818.

155. Elliott M.A. The influence of certain plant hormones on growth of protozoa // Physiol.zool. 1938. - V.l 1. - JVbl. -P.31 - 35.

156. Endogenous indole-3-acetic acid and ethylene evolution in tilted metase-quoia glyptostroboides stems in relation to compression-wood formation / Du S., Sugano M., Tsushima M. et al. // Journal of Plant Research. 2004. - V.l 17. - No.2. -P.171-174.

157. Enhancement of lipid peroxidation by indole-3-acetic acid and derivatives: substituent effects / Candeias L.P., Folkes L.K., Porssa M. et al. // Free Radic Res. 1995. V.23. -P.403-418.

158. Fernandez A. Desolvation shell of hydrogen bonds in folded proteins,protein complexes and folding pathways // FEBS Letters. 2002. -No. 527. - P.166-170.

159. Fish bioassay monitoring of waste effluents / Van der Schalie W.H., Dickson K.L., Westlake G.F. et al. //Environmental management. 1979. - Vol 3. -No.3. - P.217-235.

160. Folkes L.K., Candeias L.P., Wardman P. Toward targeted "oxidation therapy" of cancer: peroxidase-catalysed cytotoxicity of indole-3-acetic acids // International journal of radiation oncplogy-biology-physics. 1998. -V.42.-No.4.-P.917-920.

161. Folkes L.K., Wardman P. Oxidative activation of indole-3-acetic acids to cytotoxic species a potential new role for plant auxins in cancer therapy // Biochemical Pharmacology. - 2001. - V.61. - P.129-136.

162. Free-radical intermediates and stable products in the oxidation of indole-3-acetic acid / Candeias L.P., Folkes L.K., Dennis M.F. et al. // J.Phys. Chem.- 1994.-V.98.- No.10.-P.131-137.

163. Friml J., Palme K. Polar auxin transport old questions and new concepts? // Plant Molecular Biology. - 2002. - V.4?. - No.3/4. - P.273-284.

164. Functional role of cysteine residues in the Na,K-ATPase a subunit / Shi H.G., Mikhaylova L., Zichittella A.E. et al. // Biochimica et Biophysica Acta (BBA).Biomembranes. 2000. - V.1464. - No.2. - P. 177-187.

165. Gonzalez L.F., Perez F., Rojas M.C. Indole-3-acetic acid control on acidic oat cell wall peroxidases // Journal of Plant Growth Regulation. 1999. -V. 18. - No. 1. - P.25-31.

166. Grabski S., Schindler M. Auxins and cytokinins as antipodal modulators of elasticity within the actin network of plant cells // Plant Physiology. -1996. — V. 110. P.965-970.

167. Griffiths J.R. Are cancer cells acidic? // Br J Cancer. 1991. - V.64. -P.425-427.

168. Gunther F.E. Secondary messengers and phospholipase A2 in auxin signal transduction // Plant Molecular Biology. 2002. - V.49. - No.3/4. - P.357-372.

169. Holmes L.A., Reid D.M. The interaction of ethylene and auxin in gravitro-pism of light-grown Helianthus annuus epicotyls // Plant Physiology.-1997. V. 114. - No.3. - P. 171-177.i

170. Hormones in the grains in relation to sink strength and postanthesis development of spikelets in rice /Yang J., Zhang J., Wang Z. et al. // Plant Growth Regulation. 2003. - V.41. - No.3. - P.185-195.

171. Ilic N., Ostin A., Cohen J.D. Tryptophan-independent indole-3-acetic acid byosynthesis in maize // Plant Physiology. 1997. - V.114. - No.3. -P.157-161.

172. Indole derivatives produced by the fungus Colletotrichum acutatum causing lime anthracnose and postbloom fruit drop of citrus / Chung K.-R., Shilts T., Erturk U. et al. // FEMS Microbiology Letters. 2003. - V.226.- No.l. -P.23-30.

173. Indole-3-acetic acid biosynthesis in Aciculosporium take, a causal agent of witches' broom of bamboo / Tanaka E., Tanaka C., Ishihara A. et al. // Journal of General Plant Pathology. 2003. - V.69. - No.l. - P. 1-6.

174. Isolation of indoleacetic asid from immature corn kernels / Haagen-Smith A.J., Dandliker W.B., Wittwer S.H. et al. // American Journal Botany. -1946.- V.33.- №2.- P.118-119.

175. Jones A.M., Herman E.M. KDEL-containing auxin-binding protein is secreted to the plasma membrane and cell wall'// Plant Physiology.- 1993. -V.101. -P.595-606.

176. Kawano T. Roles of the reactive oxygen species-generating peroxidase reactions in plant defense and growth induction // Plant Cell Reports. 2003.- V.21. No.9. — P.829-837.

177. Keller C.P., Van Volkenburgh E. The electrical response of Avena coleop-tile cortex to auxins. Evidence in vivo for activation of a CI" conductance // Planta. 1996.- V. 198.- P.404-412.

178. Khalid A., Arshad M., Zahir Z.A. Screening plant growth-promoting rhizobacteria for improving growth and yield of wheat // Journal of Applied Microbiology. 2004. - V.96. - No.l - P.473-480.

179. Kirsh Y.E., Yanul N.A., Popkov Y.M. Temperature behavior of thermo-responsive poly-n-vinylcaprolactam and poly-n-isopropylmethacrylamide in aqueous solutions involving organic solutes // European Polymer Journal. 2002. - V.38. -No.2. - P.403-406.

180. Kitamura S., Mizuno A., Katou K. Adaptive growth responses to osmotic stress of hypocotyls sections of Vigna unguiculata: roles of the xylem proton pump and IAA // Plant and Cell Physiology. 1997. - V.38. - No.l. -P.44-50.

181. Kiyohide K., Eriko O., Zheyuan Y. Distribution and transport of IAA in tomato plants // Plant Growth Regulation. 2002. - V.37. - No.3. - P.249-254.

182. Kögl F., Haagen Smit A J. Über die Chemie des Wuchsstoffs // Proc.kon. ned. Akad. Wet. 1931. -№ 34. -P.1411-1416.

183. Kojima K. Changes of ABA, IAA and Gas levels in reproductive organs of citrus // Jap.Agr.Res.Quart. 1997. - V.31. -P.271-280.

184. Koukourikou-Petridou M.A. The relation between the levels of extractable and diffusible IAA in almond fruits and their "june drop" // Plant Growth Regulation. 2003. - V.39. - No.2. - P. 107-112.

185. Kowalczyk S., Jakubowska A., Zielinska E. Bifunctional indole-3-acetyl transferase catalyses synthesis and hydrolysis of indole-3-acetyl-myo -inositol in immature endosperm of Zea mays // Physiologia Plantarum. -2003. V.l 19. - No.2. - P.165-174.

186. Lemienux R.U. How water provides the impetus for molecular recognition in aqueous solution // Account. Chem.Res. 1996.- V. 29. - N8.- P.373-380.

187. Liscum E., Reed J.W. Genetics of aux/iaa and arf action in plant growth and development // Plant Molecular Biology. 2002. - V.49. - No.3/4. -P.387-400.

188. Ma J., LinF., WangS., Xu L. Toxicity of 21 herbicides to the green alga Scenedesmus quadricauda II Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 2003. - V.71. - No.3. - P.594 - 601.

189. Macdonald H. Auxin perception and signal transduction // Physiologia plantarum. 1997. - V.100. - P.423-430.

190. Malinina J. A. Use of Paramecium caudatUm as a test-object for determination of water quality // Abstracts of Inter. Scien. and Pract. Correspondence Confer. "Infusoria in Bioassays". Saint-Petersburg, 1998. - P.131-132.

191. Masuda Y. Auxin-induced cell elongation and cell well changes // Bot. Mag. (Tokio). 1990. - V.103. - P.345-370.

192. Matingly M.W., Mulkey T.G. Further characterization of putative auxin binding proteins in crude membrane extracts of the elongation zone of primary roots of maize // Plant Physiology. 1993. - V.102. - No.l. -P.150-152.

193. Mazur H., Konop A., Synak R. Indole-3-acetic acid in the culture medium of two axenic green microalgae // Journal of Applied Phycology. 2001. -V.13. - No.l. -P.35-42.

194. Mazur H., Konop A., Synak R. Indole-3-acetic acid in the culture medium of two axenic green microalgae // Journal of Applied Phycology, 2001 -V.13, No.l-pp.35-42

195. Molecular analysis of three maize 22 kDa Auxin-binding protein genes -transient promoter expression and regulatory regions / Schwöb E., Choi S.Y., Simmons C. et al. // Plant J. 1993. - V.4. - P.423-432.

196. Molecular characterization and spatial expression of the sunflower ABP1 gene / Thomas C., Meyer D., Wolff M. et al. // Plant Molecular Biology. -2003. — V.52. No.5. - p.1025-1036.

197. Molecular modeling and enzymatic studies of the interaction of a choline analogue and acetylcholinesterase / Alearo S., Scipione L., Ortuso F. et al. // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 2002. - V.12. - No.20. -P.2899-2905.

198. New bioactive metabolites produced by Colletotrichum span endophytic fungus in Artemisia annua / Lu H., Zou W.X., Meng J.C. et al. // Plant Science. 2000. - V. 151. - No. 1. - P.67-73.

199. Nicolas J.I.L., Acosta M., Sanchez-Bravo J. Role of basipetal auxin transport and lateral auxin movement in rooting and growth of etiolated lupin hypocotyls // Physiologia Plantarum. 2004. - V.121. - No.2. - P.294-304.

200. Oami K., Takahashi M. Identification of the Ca2+ conductance responsible for K+-induced backward swimming in Paramecium caudatum I I Journal of Membrane Biology. 2002. - V.190. - No.2. - P. 159 - 165.

201. Oami K., Takahashi M. K+-induced Ca2+- conductance responsible for the prolonged backward swimming in K+-agitated mutant of Paramecium caudatum II Journal of Membrane Biology. 2003. - V.195. - No.2. - P.85 -92.

202. Omar H.H. Adsorption of zinc ions by Scenedesmus obliquus and S. quad-ricauda and its effect on growth and metabolism // Biologia Plantarum. -2002. V. 45. - No.2. - P.261 - 266.

203. Optical properties of aqueous morphine solutions / Kuznetsov P.E., Gracheva A.A., Zlobin V.A. et al. // SPIE Proceedings. 2003. - V.5068. -No. 4. - P.396 - 404.

204. Peroxidase activity may play a role in the cytotoxic effect of indole acetic acid / Pires de Melo M., Curi TCP., Curi R. Et al. // Photochem Photobiol. 1997. — V.65. -P.338-341.

205. Peroxidase-catalysed effects of indole-3-acetic acid and analogues on lipid membranes, DNA and mammalian cells in vitro / Folkes L.K., Dennis M.F., Stratford MRL et al. // Biochemical Pharmacology. 1995. - V.57. -P.375-382.

206. Pietrowicz-Kosmynska D. The influence of definite ionic medium on the negative chemotaxic in Stentor coeruleus // Acta protozool. 1971. -V.15. — No.9. - P. 305-322.

207. Pinto G., Pollio A., Previtera L., Temussi F. Biodégradation of phenols by microalgae // Biotechnology Letters. 2002. - V.24. - No.24. - P.2047 -2051.

208. Prinsen E., Van Onckelen H. Phytohormones in plant-bacterium interactions // Biotechnol. And Biotechnol. Equip. 1994. - V.8. - No. 1. - P. 3-9.

209. Protein retention in the endoplasmic reticulum of insect cells is not compromised by baculovirus infection / Henderson J., Macdonald H., Lazarus C.M. et al.//Cell.Biol.Int. 1996. - V.20.-P.413-422.

210. Purification and properties of hydrophilic dimers of acetylcholinesterase from mouse erythrocytes / Gomez J.L., Nieto-Ceron S., Campoy F.J. et al. // The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 2003. -V.35. -No.7.-P.l 109-1118.

211. Quinn D.M. Acetylcholinesterase: enzyme structure, reaction dynamics, and virtual transition states // Chem.Rev. 1987. - V. 87. - No. 5. - P.955-979.

212. Reinecke D.M., Ozga J.A., Magnus V. Effect of halogen substitution of indole-3-acetic acid on biological activity in pea fruit // Phytochemistry. -1995. V.40. - No.5. - P.1361-1366.

213. Reinvastigation of auxin and fusicoccin stimulation of the plasma membrane H+ -ATPase activity / Jahn T., Johansson F., Luthen H. et al. // Planta. 1996. - V.199. - P.359-365.

214. Rhizobium, Bradyrhizobium and Agrobacterium strains isolated from cultivated legumes / Hameed S., Yasmin S., Malik K.A. et al. // Biol Fertil Soils. 2004. - V.39. - No.2. - P. 179-185.

215. Rojickova-Padrtova R., Marsalek B. Selection and sensitivity comparisons of algal species for toxicity testing // Chemosphere. 1999. - V.38. -No.14.-P.3329-3338.

216. Rossiter S., Folkes L.K., Wardman P. Halogenated Indole-3-acetic acids as oxidatively activated prodrugs with potential for targeted cancer therapy // Bioorganic & medicinal chemistry letters. 2002. - V.12. - P.2523-2526.

217. Seibold B. Optimal Prediction in Molecular Dynamics // Monte Carlo Methods and Applications. 2004. - V. 10. - No. 1. - P.25-51.

218. Shimomura S., Watanabe S., Ichikawa H. Characterization of auxin-binding protein 1 from tobacco: content, localization and auxin-binding activity // Planta. 1999. - V.209. - No.2. - P.l 18-125.

219. Srivastava B.J., Shaw M. The biosynthesis of indoleacetic acid in Melamp-sora lini (Pers.) Lev. II Canad.J.Bot. 1962. - V.40. - P.63 - 67.

220. Stable expression of maize auxin-binding protein in insect cell lines / Henderson J., Atkinson A.E., Lazarus C.M. et al. // FEBS Lett. -1995. V.371. - P.293-296.

221. Steck T.R. Ti-plasmid type affects t-dna processing in agrobacterium tu-mefaciens // FEMS Microbiology Letters.-1997-V. 147.-№ 1. P. 121-125

222. Synthesis of n-vinylcaprolactam polymers in water-containing media / Khokhlov A.R., Mattiasson B., Lozinsky V.I. et al. // Polymer. 2000. -V.41. No.17. -P.6507-6518.

223. The diageotropica mutation of tomato disrupts a signalling chain using extracellular auxin binding protein 1 as a receptor / Christian M., Steffens B., Schenck D. et al. // Planta. 2003. - V.218. - No.2. - P. 309-314.

224. The relative importance of tryptophan-dependent and tryptophan-independent biosynthesis of indole-3-acetic acid in tobacco during vegetative growth / Sitbon F., Astot C., Edlund A. et al. // Planta. 2000. -V.211. -No.5.-P. 715-721.

225. The relative importance of tryptophan-dependent and tryptophan-independent biosynthesis of indole-3-acetic acid in tobacco during vegetative growth / Sitbon F., Astot C., Edlund A et al. // Planta. 2000. - V.211. - No.5. -P.715-721

226. Tretyn A., Wagner G., Felle H.H. Signal transduction in Sinapis alba root hairs: auxins as external messengers // J.Plant.Physiol. 1991. - V.139. -P.187-193.

227. Venis M.A. Auxin Binding Protein 1 is a red herring? Oh no it isn'tU// J.Exp.Bot. 1995. - V.46. - P.463-465.

228. Venis M.A., Napier R.M. Auxin Receptors: Recent developments // Plant Growth Regul. 1991. - V.10. - P.329-340.

229. Wardman P. Indole-3-acetic acids and horseradish peroxidase: a new prod-rug/enzyme combination for targeted cancer therapy // Current pharmaceutical design. 2002. - V.8. - No.15. - P.1363-1374.

230. Warwicker J. Modelling of auxin-binding protein 1 suggests that its C-terminus and auxin could compete for a binding site that incorporates a metal ion and tryptophan residue 44 // Planta. 2001. - V.212. - P.343-347.

231. Yurekli F., Geckil H., Topcuoglu F. The synthesis of indole-3-acetic acid by the industrially important white-rot fungus Lentinus sajor-caju under different culture conditions // Mycological Research. 2003. - V.107. -No.3. — P.305-309.

232. Zazimalova E., Napier R.M. Points of regulation for auxin action // Plant Cell Reports. 2003. - V.21. - No.7. - P.625-634.

233. Zelena E. The effect of light on IAA metabolism in different parts of maize seedlings in correlation with their growth // Plant Growth Regulation. -2000. V.32. - No.2/3. - P.239-243.

234. Zhang W., Yamane H., Chapman D.G. The phytohormone profile of the red alga Porphyra perforata // Bot.mar. 1993. - V.36 - P.257-266.