Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биология вирусов (северной) мозаики и закукливания злаков, их переносчика - темной цикадки (Laodelphax striatellus)

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Биология вирусов (северной) мозаики и закукливания злаков, их переносчика - темной цикадки (Laodelphax striatellus)"

/ 1з ШОП да

На правах

МАМАЕВ Павел Юрьевич

БИОЛОГИЯ ВИРУСОВ (СЕВЕРНОЙ) МОЗАИКИ И ЗАКУКЛИВАНИЯ ЗЛАКОВ, ИХ ПЕРЕНОСЧИКА -ТЕМНОЙ ЦИКАДКИ (ЬАООЕЬРНАХ БТШАТЕЬЫ^)

03.00.06 - вирусология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Владивосток -1998

Работа выполнена в лаборатории иммунологии и биологии вирусов растений Биолого-почвенного института ДВО РАН

Научный руководители - доктор биологических наук

Р.В. Гнутова

доктор биологических наук A.B. Крылов

Официальные оппоненты - доктор биологических наук

А.В.Реунов

кандидат биологических наук Н.И.Немилостива

Ведущая организация Московский государственный

университет им. М.В.Ломоносова

Защита диссертации состоится "З?" (-чмар, 1998 г. в (0'' часов на заседании диссертационного совета по вирусологии (К003.97.01) в Биолого-почвенном институте ДВО РАН (690022, Владивосток-22, Биолого-почвенный инстшут проспект 100 лет Владивостоку, 159)

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке ДВО РАН.

Автореферат разослан "Ь " ¿t iCUß_1998 г

Ученый секретарь ^^

диссертационного совета, к.б.н. ^ Л.А.Варфоломеева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Одним из основных способов распространения вирусов растений в природе является передача их разнообразными организмами-переносчиками. Изучение биологии многих фитовирусов невозможно без знания биологии переносчика, взаимоотношений с ним, круга восприимчивых растений-хозяев. Только получив полное представление о связях вируса с окружающей его средой, возможно эффективно вести борьбу с приносимым им ущербом и разорвать цепь возбудитель - переносчик - хозяин. Помимо прикладного значения, изучение данной проблемы имеет и чисто биологический интерес в плане изучения разнообразия и взаимосвязи живых организмов.

Мозаика и закукливание злаков - недостаточно изученные вирусные заболевания, которые наносят значительный ущерб зерновым культурам в азиатской части России. Их возбудители - вирус мозаики злаков (ВМЗ) и вирус закукливания злаков (ВЗЗ) относятся к группе рабдовирусов и переносятся одним и тем же переносчиком. На Дальнем Востоке в начале исследований ВМЗ отождествляли с ВЗЗ. Ареал ВМЗ в России ранее не изучался. В настоящее время появляется все больше данных, свидетельствующих о том, что ВМЗ является штаммом вируса северной мозаики злаков (ВСМЗ), который был описан в Японии, а позднее обнаружен в Корее и Китае. В Италии, Франции, Марокко и Иране распространен схожий с ВСМЗ рабдовирус желтой штрихова-той мозаики ячменя. Сравнение различных характеристик вирусов (в том числе и биологических) дает ценную информацию о степени их родства.

Интерес представляет и сам переносчик вирусов - темная цикадка, которая имеет широкое распространение в Евразии и передает 7 вирусных заболеваний зерновых культур .

Цель и задачи исследований. Цель нашей работы заключалась в исследовании биологии вирусов мозаики и закуклнвання злаков и сравнении их биологических свойств со свойствами других сходных рабдовирусов злаков. Перед нами стояли задачи: 1) изучить симптомы инфекции на растениях, вызываемые ВМЗ и ВЗЗ; 2) установить круг растений-хозяев вирусов; 3) провести электронно-микроскопические исследования вирусов в растении и переносчике; 4) изучить биологию темной цикадки - переносчика ВМЗ и ВЗЗ; 5) исследовать взаимоотношения вирус - переносчик; 6) определить ареал вирусов; 7) оценить степень пораженное™ зерновых мозаикой и закукливанием злаков и установить особенности циркуляции инфекции в различных регионах; 8) сравнить исследуемые вирусы по биологическим свойствам с другими родственными рабдовирусами злаков.

Научная новизна. Впервые изучена биология ВМЗ. Установлен его ареал. Получены новые данные по биологии ВЗЗ. Выявлено значительное сокращение ареала ВЗЗ в сравнении с описанным ранее. Сравнение биологических, иммунохимических и других характеристик позволило предположить, что ВМЗ является штаммом вируса северной мозаики злаков. Обнаружены зрелые вирионы ВМЗ и ВЗЗ в переносчике. Изучена биология переносчика

ВМЗ и ВЗЗ на юге Амурской области - основном зерносеющем районе Дальнего Востока. Установлены тепловые потребности цикадки в данном регионе.

Практическая значимость. Выявлена степень пораженности зерновых ВМЗ и ВЗЗ в различных регионах. Изучена циркуляция ВМЗ в агроценозах. Выявлены основные и возможные источники инфекции.

Получена строго специфическая сыворотка и разработан иммунодиагно-стикум, который может иметь широкое применение для идентификации ВМЗ в соке растений, сухих листьях и переносчике.

Апробация работы. Результаты были доложены на конференции молодых ученых Биолого-почвенного института ДВО РАН (1983, 1986, 1989), 5-ой Европейской конференции по вирусным заболеваниям злаков (Будапешт, 1988), XIII конференции по электронной микроскопии (Звенигород, 1988), конференции "Экологические проблемы охраны живой природы" (Москва, 1990), IV Республиканской конференции "Электронная микроскопия и современная технология" (Кишинев, 1990), конференции "Микробиологические и биотехнологические основы интенсификации растениеводства и кормопроизводства" (Алма-Ата, 1990), 6-ой Европейской конференции по вирусным заболеваниям злаков (Турин, 1991), Всесоюзном съезде по защите растений (С.Петербург, 1995)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 18 печатных

работ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 116 страницах, содержит 12 таблиц и 9 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы (глава 1), экспериментальной части (главы 2 и 3), обсуждения результатов (глава 4), выводов и списка литературы, включающего 193 наименования, в том числе 113 работ иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы. Исходным материалом для исследований явились изоляты ВМЗ из Амурской области, Приморского и Хабаровского краев. Изо-лят ВЗЗ получен нами из Новосибирской области. Стационарные исследования биологии вирусов и их переносчика проводились на базе ВНИИС (Амурская область) и в теплице Биолого-почвенного института ДВО РАН (Владивосток). В экспериментах использовали популяции темной цикадки из Амурской, Новосибирской областей и Приморского края. Маршрутные обследования зерновых проводили в Омской, Новосибирской, Иркутской, Амурской, Читинской, Сахалинской, Камчатской областях, Бурятии, Хабаровском и Приморском краях.

Круг растений - хозяев ВМЗ и ВЗЗ изучали на различных видах злаков и сортах зерновых культур, выращенных из семян. О восприимчивости растений к инфекции судили по развитию на них внешних симптомов заболевания. Если признаки заболевания на растениях не проявлялись, злаки проверялись на

латентную инфекцию с помощью обратной передачи переносчиком, а также элеетронно-микроскопически и методами иммунохимического анализа.

Основным электронно-микроскопическим методом было изучите возбудителя в соке больных растений, описанным Г.М.Развязкиной с соавторами [1968] - метод негативного контрастирования. Обнаружение вирусов в переносчике также проводилось этим способом. В качестве контрасгера использовалась 2% ФВК, рН 7.0-7.2. Стабилизатором вирусных частиц служил глюта-ровый альдегид.

Совместно с сотрудником Института биохимии им. Баха (Москва) - В.А. Штейн-Марголиной были проведены электронно-микроскопические исследования ультратонких срезов растений, пораженных ВМЗ и ВЗЗ. Использовались стандартные методики запивок (в эпон-аралдитовую смесь) и фиксации растительного материала в глютаровом альдегиде и четырехокнси осмия.

Выделение препарата растворимого антигена (РА) вирусов проведено совместно . с сотрудниками Биолого-почвенного института ДВО РАН М.В.Сапоцким и Л.И.Моисеенко. Для выделения РА ВМЗ и ВЗЗ использовали метод изоэлекгрической преципитации [Минская и др., 1985; 1987].

Получение диагностической сыворотки и изучение антигенных свойств РА проводилось совместно с сотрудниками Биолого-почвенного института ДВО РАН Н.Н.Какарека, И.И.Сибиряковой. Полученными препаратами РА ВМЗ в смеси с полным адъювантом Фрейнда иммунизировали кроликов: 1-ый день - внутрикожное введение 0.5 мг антигена; 7-ой день - внутримышечное введение 0.4 мг; 14-ый день - внутрикожное введение 0.5 мг. Первое взятие крови проводилось на 6-ой день после последней иммунизации.

Антигенные взаимоотношения ВМЗ и ВЗЗ по РА и тшр антисыворотки устанавливали в реакции двойной диффузии (РДД) и непрямом методе имму-ноферментного анализа (ИФА). Кроме того, определяли присутствие РА в ви-рофорных цикадках с помощью электрофореза в полиакриламидном геле по методике Лэммли [Ьаетт1у, 1970] и непрямым методом ИФА.

Для изучения времени сохранения антигенных свойств и стабильности РА ВМЗ, сок больных растений овса, в одном случае разведенный 0.01 М ЗФР - (у/у=1/1) в другом - просто водой, выстаивался при комнатной температуре. Часть зараженных листьев, инфицированных ВМЗ, была высушена. Через 1,2 и 3 месяца были проведены реакции непрямого метода ИФА.

В опытах по изучению взаимоотношений вирусов с цикадкон использовались общепринятые приемы и методики работы с насекомыми-переносчиками [Развязкина, 1975; Гиббс, Харрисон, 1978; Мэтыоз, 1973]. Отлов и учет численности цикадок осуществлялся методом кошения энтомологическим сачком [Добровольский, 1969; Кожанчиков, 1961]. Сумма эффективных температур, необходимых для развития переносчика, определялась по формуле [Фасулати, 1971]: У = п(1-х), где п - число дней развития цикадки; I -температура, при которой совершалось развитие; х - температура порога развития; 1-х - эффективная температура.

Возможность передачи ВМЗ и ВЗЗ различными насекомыми проверяли в Амурской области. Насекомых, отловленных на пораженных посевах зерновых, отсаживали на здоровые проростки овса и проводили наблюдение за появлением на них симптомов вирусной инфекции.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Внешнее проявление вирусной инфекции на растениях. Общими признаками проявления ВМЗ и ВЗЗ на овсе являлись: низкорослость растений; карликовость; чрезмерная кустистость (розеточностъ); больные растения имели недоразвитую корневую систему; иногда наблюдалась пролиферация соцветий (израстание завязи); метелки часто были деформированными, сжатые с боков и обернутые флаговым листом. Для пшеницы, ячменя и проса также была характерна низкорослость и карликовость, однако пролиферация соцветий на них не наблюдалась.

Наши исследования подтвердили наличие штриховатой мозаики при поражении растений ВЗЗ. Однако, как оказалось, мозаичные растения в полевых условиях встречались довольно редко и мозаика на них была выражена слабо. Наблюдения в лабораторных условиях показали, что бледная, слаборазличимая мозаичность появлялась (на 7-10 день после заражения) только на одном листе, который формировался в момент инфицирования растения. На всех последующих листьях мозаика обычно не проявлялась. В отличие от ВЗЗ, для ВМЗ мозаичность растений являлась более характерным признаком. Пораженные растения овса почти всегда имели на листьях,-развитие которых происходило после заражения, яркие, хорошо выраженные светло-зеленые штрихи и полосы. На молодых растениях пшеницы и ячменя также наблюдали четкую штриховатую мозаику, как у овса, но со старением растений мозаичность часто маскировалась.

Штрихи на растениях, пораженных ВМЗ, проявлялись на 5-10 день после их инфицирования. Заражение растений ВМЗ и ВЗЗ до начала кущения приводило их к карликовости и в этом случае генеративные органы не образовывались. В засушливое время такие растения обычно погибали. Зараженные во время кущения растения отставали в росте. Если колос формировался, то зерно было щуплым или совсем не вызревало. Инфицирование растений в стадии цветения, как правило, никакого влияния на них не оказывало.

Многолетние злаки в большинстве случаев поражались ВМЗ и ВЗЗ бессимптомно.

Круг растений-хозяев ВМЗ и ВЗЗ. В естественных условиях вирусы мозаики и закукливания злаков поражали овес, ячмень, пшеницу и просо. В полевых условиях ВМЗ был выявлен на овсюге, щетиннике зеленом (Setaria viridis) и щетиннике Фабера (S.faberi).

При искусственном инфицировании с помощью переносчика оба вируса поражали многие сорта зерновых. Среди 16 сортов овса, 10 - пшеницы и 16 -ячменя выявить устойчивых к вирусам не удалось. Вирусы не поражали рис.

Таблица 1.

Восприимчивость растений к ВМЗ и ВЗЗ

1 Вид растения 1 ВМЗ взз 1 1 Вид растения BM3 1 взз 1

Aegilops ovala L. + + E.poacoides Beauv. +

Ae.squarrosa L. + + Festuca pratensis Huds. - -

Ae.triuncialisL. + + F.rubra L. - -

Agropyron caninum (L.) О Hclictotrichon pratense (L.) Bess -

A.cristatum (L.) Beauv. - Hordeum murinum L. + +

A trichophorum (Link) Nevski + H.nutans Schubl. +

Agrostis gigantea Roth О - H.jubatum L. - -

A.stolonifera L. о - H.spontaneum C.Koch. +

Alopecurus myosuroides Huds. + + H. vulgare L. + +

A.pratensis L. о - Leersia oryzoides (L.) Sw. -

Arrhenatherum clatius (L.) Persl - - Lolium multiilorum Lam. + о

Avena barbata Pott et Link + + L. perenne L. О о

A chincnsis Metzg + + L.remotum Schrank. + +

A fatua L. + + L.temulentum L. +

A.ludoviciana Durr. + + Mélica nutans L. - -

A.nuda L. + + Oiyza sativa L. - -

A. sativa L. + + Panicum bulbosum H.B.K. -

Asterilis L. + + P.capillare L. -

A.strigosa Schieb. + + P.miliaceum L. +

Beckmannia syzigachne Fem. (0) Phalaris canariensis L. + -

Briza maxima L. + + Ph.minor Retz. +

B,minor L. + + Phalaroides arundinacca L. -

Bromopsis benekenii Holub - - Phleum alpinum L. +

B.erecta (Huds.) Fourr. - - Ph.pratense L. - (О)

B.inermis (Leys.) Holub (0) Poa angustifolia (L.) Arcng. -

B.pumpclliana Seribn. - P.compressa L. -

B.riparia (Rchm.) Holub - P.glauca Vahl - -

Bromus arvensis L. + + P.nemoralis L. - -

B.commutatus Schrad + + P.palustris L. - -

B.japonicus Thunb. + + P pratensis L. - -

B.mollis L. + + Secale cereale L. + -

B.ramosus Huds. + Setaria faberi Herrm. +

B.secaiinusL. + + S. glauca (L.) Beauv. -

B.squarrosus L. + + S. itálica (L.) Bcauv. +

B.sterilis L. + + S.pumila (L) PB. - -

B.tectorum L. + - S.vcrticillata (L.) Bcauv. - -

Calamagrostis epigeios (L.) Roth (0) - S.viridis (L.) Beauv. + o (О)

C.langsdorffii (Link) Trin. о - Sorghum nervosum Bess.

Chloris inilata Link + S. sudanense (Piper) Starf -

Ch.virgata Sw. + Spodiopogon sibiricus Trin. -

Coix lacryma jobi L. - - Trisetum Ilavescens (L.) Bcauv. +

Dactylis giomerata L. - - Triticum aestivum L. + +

Digitaria saguinalis (L.) Scop. + - T.boeticum Boiss + +

Echinochloa crusgalli (L.)Beauv. - - T.dunim Desf + +

E.frumentacea Link - - T.melanopus AI. + +

Elcusine aegyptica Desf. 0 - T.sphaerococcum Perc. + +

E.caracana (L.) Gaertn. - T.timofecvii Zhuk +

E.indica (L.) Gaertn. о - Triticale rimpaui Müntz. +

Elytrigia repens (L.) Nevski - - Zca mays L. _

Eragrostis cilianensis Uign-Lut. + о Z.mays L. cv.saccharata + -

Примечания: "+" проявляются внешние симптомы поражения; "О" скрытая

(латентная) инфекция; "()' растение поражается редко; "-" растение не поражается; про-

пуск - данных нет.

В отличие от ВМЗ, ВЗЗ не заражал рожь. Из 14 сортов кукурузы ВМЗ поражал только кукурузу сахарную (Zea mays cv.saccharata), ВЗЗ кукурузу не заражал.

На восприимчивость к ВМЗ нами испытано 99 видов дикорастущих, сорных и культурных злаков из 43 родов; на восприимчивость к ВЗЗ - 70 видов из 25 родов. ВМЗ удалось заразить 65 видов из 22 родов, ВЗЗ - 36 из 13 родов (табл.1).

Оба вируса поражали виды из родов Aegilops, Avena, Briza, Bromus, Hordeum, Lolium, Triticum и не поражали Bromopsis, (за исключением B.inermis), Echinochloa, Festuca, Poa. Как показали исследования, ВМЗ оказался более инфекционным по отношению к растениям, чем ВЗЗ. 14 видов растений, поражаемых ВМЗ, были не восприимчивы к ВЗЗ и только Phleurn pratense в редких случаях поражался латентно ВЗЗ, но был иммунным к ВМЗ.

Вирионы ВМЗ и ВЗЗ в растениях и переносчике. С помощью электронной микроскопии в больных растениях овса с признаками закукливания из Омской и Новосибирской областей были обнаружены типичные для рабдови-русов бацилловидные частицы. Размеры неповрежденных вирионов, выделенных из сока, составляли 165-200 х 63-70 нм (рис.1Г), на срезах - 160-180 х 6670 нм (рис.1Д).

В мозаичных растениях овса из Приморского и Хабаровского краев, Амурской и Читинской областей выявлены более длинные бацилловидные частицы: в суспензии растительного сока -'380-450 х 56-70 нм (рис.1Б,В), на срезах - 360-400 х 56-64 нм (рис.1А). В соке растений, пораженных ВМЗ и ВЗЗ, помимо бацилловидных частиц (округлых с двух концов) чаще встречались различной длины пулевидные частицы (округлые с одной стороны и короче, чем бацилловидные). На ультратонких срезах пулевидные частицы не были обнаружены.

Бацилловидные частицы ВМЗ и ВЗЗ наблюдались практически во всех типах клеток листьев. Вирионы поодиночке или группами располагались внутри цистерн агрануяярного ретикулума, реже свободно были распределены в цитоплазме. В ядрах, хлоропластах и митохондриях вирионы не были выявлены.

В суспензии слюнных желез и брюшном отделе цикадок, инфицированных отдельно ВМЗ и ВЗЗ, были выявлены немногочисленные пулевидные частицы с внешней оболочкой (зрелые вирионы). Размеры частиц ВМЗ составляли 215 -250 х 62-65 нм, ВЗЗ - 110-140 х 60-70 нм. Наличие вирусных частиц в слюнных железах темной цикадки свидетельствует о том, что ВМЗ и ВЗЗ цир-кулятивные вирусы и, вероятно, размножаются в переносчике.

Вирус-специфический белок ВМЗ и его антигенные свойства. Используя электрофорез в полиакриламидном геле, мы проанализировали фракции из здоровых и инфицированных ВМЗ и ВЗЗ. растений овса. В растениях, пораженных ВМЗ, был выявлен вирус-специфический белок с молекулярной массой (М.М.) 16.0 кД, который отсутствовал у здоровых и инфицированных ВЗЗ растений. Этот белок не осаждался при высокоскоростном центрифугирова-

нии и, по аналогии с подобными белками, известными при других рабдови-русных инфекциях, был обозначен как растворимый антиген (РА) ВМЗ. Выход очищенного препарата РА ВМЗ определялся спектрофотометрически и составлял до 1 г на 1000 г инфицированных листьев.

; чП^Ч 'г^ "Ч

с *■

V* 1-Т 0' г 15 г"?

1 и.

Ак « г

ч,

"Ч

.Б

„» . V / -Ги* / 1 Г

'.Г. „ V I" 4 1 ■>

г V V -

-

<■ " N

Г"

Щ

Рис. 1. Рабдовирусные частицы: А - ВМЗ в клетке растения (х 50000); Б, В - ВМЗ в соке растения (х 60000, х 90000); Г - ВЗЗ в соке растения (х 90000); Д - ВЗЗ в клетке растения (х 50000)

Изучаемый РА ВМЗ оказался умеренным иммуногеном. Получены строго специфические антисыворотки с титрами в РДД - 1:16-1:32, в непрямом методе ИФА - 1:3200-1:6400. Высокая чувствительность ИФА позволила достоверно выявить до 0.01 нг/мл РА в очищенном препарате и соке инфицированного ВМЗ растения овса при разведениях - Ю-4 - 10"5. Не отмечено перекрест-

пых реакций полученной антисыворотки в РДЦ и ИФА с соком овса, пораженного ВЗЗ.

Была изучена длительность сохранения антигенных свойств РА в соке зараженных растений и его стабильность в разных вариантах (сок, хранящийся при комнатной температуре в течение 1-3 месяцев и в высушенных листья). Во всех случаях удалось получить положительную реакцию на присутствие РА ВМЗ. Антигенность сохранялась свыше 3-х месяцев и интенсивность реакции практически не отличалась, по сравнению с реакцией с соком свежесорванных пораженных листьев. Нами также установлено методом ИФА наличие РА в вирофорных цикадках.

Географическое распространение ВМЗ и ВЗЗ. В результате маршрутных обследований во многих сельскохозяйственных районах Приморского, Хабаровского краев, Амурской и Читинской областей нами были обнаружены растения овса, пшеницы и ячменя с типичными симптомами мозаики злаков. Электронно-микроскопические исследования больных растений из этих регионов показали, что возбудителем инфекции являлся ВМЗ. Выявить ВЗЗ на этой территории нам не удалось. ВМЗ и ВЗЗ не были обнаружены на Камчатке, Сахалине, в Иркутской области и Бурятии. ВЗЗ встречался в Омской и Новосибирской областях - это подтверждено нами электронно-микроскопически.

Таким образом, в результате исследований обозначился ареал ВМЗ (рис.2). Западной границей ВМЗ, вероятно, является долина реки Ингоды (западнее Читы), а восточная граница проходит за Хабаровском по долине Амура. Самая северная точка распространения ВМЗ, зарегистрированная нами - окрестности города Зея (Амурская область), самая южная - долина реки Поймы, южнее пос. Славянка (Приморский край). В отношении закукливания злаков можно лишь совершенно точно сказать, что это заболевание присутствует в Западной Сибири. В Предбайкалье, Забайкалье (где в 20-х - 40-х годах отмечалось закукпивание) и на Дальнем Востоке ВЗЗ нами не обнаружен.

Степень пораженности зерновых ВМЗ и ВЗЗ в различных регионах. Наибольший ущерб ВМЗ наносит зерновым на юге Амурской области (Зейско-Буреинская низменность) - основном зерносеющем районе Дальнего Востока. Пораженностъ растений поздних сроков сева (как правило, посевов овса на зеленый корм) часто носит эпифитотийный характер, иногда достигает 50% и более. Производственные посевы зерновых (срок сева - середина апреля, май) заражались вирусом в меньшей степени и их пораженностъ редко превышала 5%. Зараженность растений на опытных делянках (при том же сроке сева) была выше в 3-4 раза. Посевы пшеницы и ячменя визуально поражались меньше, чем посевы овса, но это связано с тем, что мозаичность на этих растениях часто маскировалась (всходы падалицы этих культур, как и овса, поражались в равной степени сильно). В направлении на север и восток от Зейско-Буреинской низменности зараженность зерновых ВМЗ существенно снижалась. В окрестностях города Зеи даже на поздних посевах овса количество больных растений составляло 2-5% (1986 г.), в Шимановском районе (в 1985 г., когда на юге Амурской области наблюдалась эпифитотия) - около 1-2%. В

Читинской области (обследования проводились в 1989 г. на опытных и производственных полях ЗабНИИТИОМС, долина реки Ингоды западнее Читы) степень пораженности зерновых составляла - 10-15%.

Рис. 2. Карта-схема обнаружения ВМЗ: О - вирус обнаружен; ¡а - вирус не обнаружен.

В Приморском и Хабаровском краях инфицированные ВМЗ растения встречались практически повсеместно, однако пораженность посевов была незначительна (единичные растения) и не превышала 1%.

На посевах овса в окрестностях Омска (1986 г.) нами обнаружены только единичные растения с признаками закукливания. В Новосибирской области (1987 г.) пораженность овса, пшеницы и ячменя составляла в среднем 1-3%. Ущерб урожаю хлебных злаков от ВЗЗ в настоящее время значительно снизился по сравнению с 20 - 40-ми годами.

Биология темной цикадки на юге Амурской области. Как показали исследования, темная цикадка является единственным переносчиком ВМЗ и ВЗЗ, других способов переноса этих вирусов от больного к здоровому растению нами не обнаружено.

В условиях агроценоза цикадка заселяла посевы овса, пшеницы, ячменя и проса (выявить предпочтение какой-либо культуры нам не удалось). Среди дикорастущих и сорных злаков основными кормовыми растениями являлись однолетники: овсюг обыкновенный (Avena fatua), щетинники (Setaria glauca, S.viridis) шерстяк волосистый (Eriochloa villosa), просо куриное (Echinochloa crusgalli). Из многолетников цикадки охотно посещали бекманию восточную (Bekmannia syzigachne), лисохвост луговой (Alopecurus pratensis ), ежу сборную (Dactylis glomerata ). Незначительное количество цикадок отмечалось на пырее ползучем (Eletrigia repens), костреце безостом (Bromopsis inermis), пырейнике

сибирском (Elymus sibiricus), вейниках (Calamagrostis epigeios, C.langsdorffii), овсяницах (Fectuca rubra, F.pratensis), тимофеевке луговой (Phleum pratense). В лабораторных условиях нами было показано, что на вышеназванных многолетниках имаго цикадки не могли жить длительное время, их гибель наблюдалась через 3-10 дней. Однако эти растения были пригодны для питания личинок. Подобную картину наблюдали и на кукурузе. Таким образом, в отличие от имаго, личинки темной цикадки более многоядны, что позволяет им выживать на всходах многолетних злаков в весеннее время, когда еще не началась вегетация однолетников и не появились всходы зерновых.

В условиях эксперимента цикадки успешно питались и размножались на рисе, а также на многих видах из родов Aegilops, Agrostis, Alopecurus, Avena, Briza, Bromus, Chloris, Digitada, Echinochloa, Eleusine, Eragrostis, Hordeum, Leersia, Lolium, Panicum, Phalaris, Secale, Setaria, Sorghum, Trisetum, Triticum.

Наши исследования подтвердили данные ряда авторов о наличии у цикадки двух форм - длиннокрылых и короткокрылых. Обе формы встречались во всех генерациях, однако среди перезимовавших цикадок короткокрылые наблюдались крайне редко. Среди цикадок летних генераций короткокрылых особей было в 5-6 раз меньше, чем длиннокрылых. Короткокрылыми, как правило, являлись самки, самцы этой формы отлавливались значительно реже. Экспериментально мы показали, что чем выше плотность заселения личинками растений, тем реже отрождались короткокрылые формы. Плодовитость короткокрылых форм составляла в среднем 172 яйца, длиннокрылых -118.

В фазе имаго цикадки жили до двух месяцев. На второй - третий день после окрыления происходило спаривание. Через 2-3 дня оплодотворенные самки начинали кладку яиц, которая длилась почти в течение всей их жизни. Яйца откладывались в ткань листа вдоль средней жилки или во влагалище листа группами по 2-5 штук. При среднесуточной температуре (t) 14-18° развитие яиц длилось 12-14 дней, при 19-22° - 9-11 дней, при 23-25° - 8-9 дней.

Личиночная фаза имела пять возрастов, которые различались по размерам и окраске. Продолжительность каждого возраста длилась 2,5- 4 дня. В естественных условиях личинки обычно локализовались на нижних частях растений, часто встречались на земле. Такие особенности поведения личинок снижали точность определения их методом кошения.

В конце августа - начале сентября, при кратковременном понижении минимальной t воздуха ниже 10°-9,5°, развитие личинок резко замедлялось. При устойчивой t ниже 10° их развитие полностью прекращалось, личинки впадали в зимнюю диапаузу. Наблюдения показали, что t 10°, вероятно, является нижним порогом развития цикадки, и эту величину мы использовали для вычисления суммы эффективных температур (СЭТ).

Нами установлено, что на юге Амурской области темная цикадка имела две-три генерации (рис.3) в зависимости от t за весь вегетационный период. Наблюдения за цикадкой показали, что она зимует в фазе личинок 3-4 возрастов под опавшими стеблями и листьями растений. В апреле - начале мая, с на-

ступлением положительных t, личинки заселяли многолетние злаки, которые к этому времени начинали вегетацию. Численность личинок на многолетних злаках в среднем не превышала 30-40 личинок на 100 взмахов сачка. В начале-середине мая при достижении суммы положительных температур (СПТ) 250260° происходил выход имаго (весенняя генерация). Окрылившиеся цикадки этой генерации мигрировали на посевы хлебных злаков, на которых в конце мая - начале июня самки приступали к кладке яиц. Численность имаго этой генерации на зерновых в среднем составляла 15-20 особей на 100 взмахов сачка. С середины июня начиналась массовая гибель имаго, к началу июля цикадки весенней генерации полностью исчезали. В конце июня - начале июля, при достижении СПТ в среднем 1092° или 364° СЭТ (по данным за 5 лет), начиналось окрыление цикадок первой летней генерации. Через несколько дней после окрыления самки откладывали яйца, из которых во второй половине июля отрождались личинки второй генерации. По мере созревания зерновых имаго первой генерации мигрировали на однолетние злаки (в меньшей степени на многолетники) и поздние посевы овса, где продолжалась яйцекладка.

хххххххххххххххххххххххх ооооооооооооооооооооо +-H-I I I I I И I I I I I I I I I++ хххххххххххххххххххххххххххххххххх ооооооооооооооооооооооооооооооооо ++++ II I I I ! I 4-М И I I I I +++ Mill +++

ххххххххххх 00000000000 +++++I I I I 14-Н-ххххххххх

_J-1-1_I_I_I_I_I_I_I_I_I_1_I_I_I_

МАЙ ИЮНЬ ИЮЛЬ АВГУСТ СЕНТЯБРЬ

ххххххххххх

+++II II+++

00000000

хххххххххххххх

-H-+I I I И I I-H-++I и и м++ 000000000000000000000000

ххххххххххххххххххххххххххх

Рис. 3. Время появления различных фаз развития темной цикадки. Примечание: над временной осью - развитие 3-х генераций переносчика за вегетационный период, под осью - 2-х, где х - фаза личинки, + - фаза имаго, о - фаза яйца, х, +, о - особи данных фаз немногочисленны.

При достижении СПТ в среднем 1885° или 789° СЭТ в начале августа происходило окрыление цикадок второй летней генерации, которые полностью переходили на дикорастущие злаки и посевы овса на зеленый корм.

По нашим данным, для развитая от яйца до имаго цикадкам первой летней генерации требовалось СПТ равная 832°, цикадкам второй генерации -793° или 423° СЭТ. В годы, когда развивались две генерации цикадок, летний пик численности имаго (в среднем 300-400 особей на 100 взмахов сачка) наблюдался в конце июля - начале августа (рис. 3,6). Численность личинок второй генерации достигала на отдельных участках 1000-1500 особей. Если развивалось три генерации цикадок, то первый летний пик численности имаго наблюдался в середине июля, второй - в середине августа. В это время на дикорастущих однолетних злаках и поздних посевах овса отлавливались до 1000 имаго на 100 взмахов сачка. Имаго двух летних генераций в августе существовали одновременно.

В августе - сентябре многие цикадки мигрировали на всходы падалицы зерновых. Массовое появление личинок третьей летней генерации наблюдалось с середины августа на дикорастущих злаках (преимущественно однолетних), всходах падалицы и посевах овса на зеленый корм. Численность личинок на отдельных участках достигала до 2000-2500 особей на 100 взмахов сачка.

Большинство личинок осенью концентрировалось на всходах падалицы и жнивье зерновых. Однако основными местами зимовки цикадки являлись дикорастущие злаки, так как агротехнические приемы обработки сельскохозяйственных угодий приводили к гибели личинок. Личинки третьей летней генерации часто не все успевали развиться до 3-4 возраста и погибали. В Амурской и Читинской областях, Приморском и Хабаровском краях нами выявлен на личинках цикадки перепончатокрылый паразит из 'семейства Dryinidea -Haplogonatopus atratus Esaki et Hashimoto. Бескрылые самки этого паразита (самцы крылатые) отлавливали личинок цикадки, в которых откладывали в брюшко или грудь по одному яйцу. На теле личинки цикадки образовывалась бочонкообразная капсула, из которой через 10-14 дней выходила личинка паразита и окукливалась на растении. После выхода личинки паразита из тела цикадки последняя погибала. На имаго паразит не обнаружен. Максимальная пораженность личинок цикадки на юге Амурской области отмечалась в августе и составляла 24%.

На Сахалине, в Приморском и Хабаровском краях, Иркутской области и Бурятии на посевах зерновых и дикорастущих злаков редко отлавливали свыше 30-40 особей на 100 взмахов сачка. Несколько большее количество цикадок наблюдали в Омской, Новосибирской и Читинской областях - от 50 до 100 особей.

Взаимоотношения ВМЗ и ВЗЗ с переносчиком. Заражение цикадок происходило при их питании на больных растениях. Экспериментально нами доказано, что приобретать (инфицироваться) ВМЗ и ВЗЗ на больных растениях овса, пшеницы и ячменя были способны как личинки цикадки, так и имаго, независимо от пола и морфы.

Минимальное время (минимальный период доступа), необходимое для того, чтобы переносчик приобрел вирус с больного растения и стал вирофор-ным, составляло для ВМЗ -6 ч, для ВЗЗ -2 ч. Как показали исследования,

максимальная зараженность цикадок при их питании на больных растениях в течение 20 суг для ВЗЗ была 86.8%, для ВМЗ - 47.4% (рис. 4).

ввмз □ ВЗЗ

2 ч в ч 12 ч 1сут 2 сут 3 сут 7 сут 12 сут 20 сут

Рис. 4. Вирофорность цикадок в зависимости от периода доступа к больным растениям.

В полевых условиях максимальная зараженность вирусом мозаики злаков цикадок природной популяции составлял 34.2% и наблюдалась во время эпифитотий. При длительном содержании цикадок в садках, в которых отрож-далось несколько генераций переносчика, а пораженность растений поддерживали на уровне 100%, вирофорность имаго на растениях, пораженных ВМЗ, составила 43.2%, ВЗЗ - 75.2%. Таким образом, цикадки оказались более восприимчивыми к ВЗЗ, чем к ВМЗ.

Нами установлено, что минимальный инкубационный период ВМЗ в теле цикадки составлял 10 сут, максимальный - 17 сут ; для ВЗЗ минимальный -7 сут, максимальный - 19 сут. Длительность этого периода не зависела от продолжительности питания свободных от вируса цикадок на больном растении.

После завершения инкубационного периода ВМЗ и ВЗЗ в переносчике, инфицировать растения были способны как личинки, так и имаго (независимо от пола и морфы насекомого). Изучение векторных способностей цикадки показало, что в некоторых случаях питание переносчика на здоровых растениях овса в течение 5 мин достаточно для их инфицирования ВМЗ (рис. 5). Наши результаты сходны с данными К.С.Сухова и А.М.Вовка [1940], которые указывали на заражение закукливанием проростков овса темной цикадкой за 5-10 мин. С увеличением времени питания вирофорной цикадки на больном растении возрастала вероятность инфицирования растения, однако в некоторых случаях у отдельных цикадок наблюдалась задержка в передаче на 2-4 суток.

вея

Исследования показали, что цикадка сохраняла вирофорностъ в течение почти всей своей жизни и только за несколько дней до естественной гибели теряла способность заражать растения. Отсаживая вирофорных цикадок (периодически, через каждые сутки) на новые здоровые растения, удалось передать цикадкой ВМЗ на 68 сут после её инфицирования на больном растении. Максимальная, зарегистрированная нами, длительность вирофорности цикадок, зараженных ВЗЗ, составила 42 сут. Длительность периода доступа переносчика к источнику инфекции не влияла на сохранение инфекционности цикадок.

Рис. 5. Вероятность заражения растения ВМЗ вирофорной цикадкой.

Нами была изучена возможность трансовариальной передачи ВМЗ и ВЗЗ темной цикадкой (передача инфекции от самки потомству). Исследования показали, что такой способ передачи вирусов отсутствует.

Таким образом, вирусы мозаики и закукливания злаков эффективно передавались темной цикадкой и входили со своим переносчиком в сложные персистентные взаимоотношения. Наличие длительного инкубационного периода инфекции в переносчике, способность переносчика долгое время сохранять вирофорностъ, отсутствие зависимости длительности инкубационного периода и сохранения вирофорности от периода доступа к источнику инфекции дает основание предполагать, что ВМЗ и ВЗЗ размножаются в цикадке.

Циркуляция ВМЗ наиболее детально изучалась нами на юге Амурской области, где заболевание, вызываемое вирусом, нередко носило эпифитотий-ный характер. Циркуляция закукливания злаков ранее была изучена К.С.Суховым [1941; 1942].

Большое значение в циркуляции вирусной инфекции имеет способность ВМЗ (как и ВЗЗ) сохраняться в зимующих личинках темной цикадки. В начале-середине мая происходит окрыление перезимовавших цикадок и миграция их на всходы зерновых. Численность цикадок в это время небольшая. Посевы зерновых раннего и нормального срока сева поражаются обычно до 5%.

В начале-середине июня отрождаются личинки первой летней генерации. Отродившиеся личинки свободны от вируса. Заражение цикадок происходит при их питании на больных растениях. К началу массового окрыления цикадок первой летней генерации (начало июля) растения в производственных посевах зерновых успевают развиться до стадии колошения - цветения. Вспышка заболевания наблюдается на поздних посевах, которые атакуются многочисленными цикадками летних генераций. Поражешюсть этих зерновых часто носит эпифитотийный характер (табл. 2).

Таблица 2.

Пораженность овса на полях ОПХ ВНИИС (в %)

Время сева 1981 1983 1984 1985

Середина апреля - середина мая * 9.3 7.1 13.2 11.2

** 4.0 1.5 4.6 1.9

Июнь *** 34.9 39.8 91.3 83.3

Июль *** 38.6 50.3 - -

Примечание: * - опытные делянки; ** - производственные посевы; *** - посевы овса на зеленый корм; прочерк - данных нет.

Наши исследования показали не только нарастание численности цикад-ки к концу лета, но и ее вирофорности (табл. 3). Вирофорность перезимовавших цикадок в среднем составляла 4%. Вирофорность на зерновых цикадок летних генераций была свыше 8%, а в отдельные, годы достигала 34.2%, 33.6%. Вирофорность цикадок на сорных и дикорастущих злаках ниже в 3-4 раза чем, на зерновых.

Таблица 3.

Вирофорность цикадок на посевах зерновых ОПХ ВНИИС (в %).

Время учета 1980 1981 1983 1984 1985

Конец мая - начало июня (весенняя генерация цикадки) 3.3 3.1 3.7 5.0 4.3

Середина июля (1-я летняя генерация цикадки) 15.6 4.5* 8.3 14.6 28.2 6.7* 9.2

Середина августа (1-я + 2-я летние генерации цикадки) - - 8.7* 34.2 16.0* 33.6

Примечание: * - вирофорность цикадок на сорных и дикорастущих злаках; прочерк - данных нет.

Агротехническая обработка сельскохозяйственных угодий приводит к массовой гибели цикадок на полях, выживают, в основном, только те, которые зимуют на межах между полей, на посевах многолетних кормовых трав и на участках злакового разнотравья. Изучение круга растений - хозяев выявило, что большинство видов злаков, окружающих поля, иммунны или слабо поражаемы вирусной инфекцией. Поскольку ВМЗ не передается переносчиком трансовариально, то личинки, отродившиеся на иммунных растениях и пи-

тающиеся на них, остаются здоровыми. Таким образом, источником инфекции на будущий год являются немногочисленные личинки, сохранившиеся после обработки почвы на краях полей зерновых. Циркуляция ВМЗ в условиях Амурской области представлена на рис. 6.

Нами была предпринята попытка установить степень зараженности вирусом естественной популяции темной цикадки в Приморском крае. Из 270 цикадок, отловленных на посевах зерновых Дальневосточной опытной станции ВИР и 300 на посевах ПримНИИСХ, не удалось выявить ни одного инфицированного насекомого. Однако, экспериментально эти же цикадки эффективно заражались на больных растениях, взятых в месте отлова переносчика.

Рис. 6. Динамика численности темной цикадки и циркуляция ВМЗ на юге Амурской области. Примечание: тонкая линия - численность имаго при развитии 3-х генераций переносчика за год; толстая линия - при развитии 2-х генераций.

Слабая степень пораженности злаков ВМЗ в Приморском и Хабаровском краях определяется отсутствием в этих регионах больших сплошных посевов зерновых, которые являются наиболее благоприятным местом для размножения вируса и его переносчика. Поля зерновых часто изолированы друг от друга лесными и горными массивами, что препятствует распространению инфекции, севооборот предотвращает ее накопление. Степень сельскохозяйственной освоенности регионов, наличие естественных преград для переносчика

в значительной мере определяют циркуляцшо заболевания. На Зейско-Буреинской низменности, где развито производство зерновых, основным источником инфекции являются зимующие личинки темной цикадки, многолетние злаки в резервации инфекции играют вторичную роль. В Приморском и Хабаровском краях, на фоне низкой плотности популяции переносчика и его слабой вирофорности, сохранение вируса в многолетниках имеет более существенное значение. Нам удалось выявить несколько многолетников, имеющих распространение на Дальнем Востоке, которые редко в латентной форме заражаются ВМЗ - это полевицы (Agrostis gigantea, A.stolonifera), лисохвост луговой (Alopecurus pratensis), бекмания восточная (Beckmannia syzigachne), вей-ники (Calamagrostis langsdorfiii, C.epigeios). Наибольший интерес представляют вейники, поскольку именно они являются одними из основных представителей естественных луговых растительных сообществ. Среди однолетних злаков наибольшее значение в циркуляции ВМЗ и ВЗЗ могут иметь различные виды овсюга, щетинника, плевела, костра (род Bromus).

В циркуляции ВЗЗ, по-видимому может участвовать кострец безостый (Bromopsis inermis). Этот многолетний злак поражался вирусом и инфекция переживала в нем зимнее время. Кострец безостый часто встречается в виде посевов многолетних кормовых трав, а также на межах между полей и залежах. К.С.Сухов и А.М.Вовк [1940] отмечали как возможные резерваты вирусной инфекции пырей ползучий (Elytrigia. repens) и вейник наземный (Calamagrostis epigeios). В наших исследованиях нам не удалось инфицировать эти растения. Вероятно, они поражаются редко.

Таким образом, заболевания, вызываемые вирусами мозаики и закукли-вания злаков, имеют частично сохранившиеся связи с естественными источниками инфекции (многолетние дикорастущие злаки). В условиях агроценоза циркуляция ВМЗ и ВЗЗ может успешно проходить без участия многолетников, сохраняясь в переносчике.

Сравнение ВМЗ и ВЗЗ с вирусами северной мозаики злаков (ВСМЗ) и желтой штриховатой мозаики ячменя (ВЖШМЯ). По кругу растений - хозяев, морфологии, передаче переносчиком (темной цикадкой) ВМЗ проявляет большое сходство с ВСМЗ. Различие удалось выявить только по двум видам злаков - росичке кровяно-красной (Digitaria sanguinalis), восприимчивой к ВМЗ и куриному просу (ЕсЫпосЫоа crusgaili),невосприимчивому к ВМЗ. В отличие от ВЖШМЯ, ВМЗ поражает Digitaria sanguinalis, Eragrostis poacoides и не поражает Dactylis glomerata, Роа pratensis (два последних злака также не поражаются ВСМЗ).

Размеры вирионов у ВМЗ (380-450 х 56-70 нм) несколько больше, чем у ВЖШМЯ (330 х 55-60 нм) и ВСМЗ из Японии (330-380 х 68 нм), но вполне сопоставимы с размерами ВСМЗ из Китая (320-400 х 54-64 нм). Взаимоотношения патогенов с переносчиком во многом сходны, однако есть существенное различие - ВЖШМЯ передается темной цикадкой трансовариально, тогда как ВМЗ и ВСМЗ нет. В пораженных растениях и вирофорных цикадках обнаружен белок с М.М. 16.0 кД, аналогичный белку, выделенному из растений,

инфицированных ВСМЗ. Методами двойной иммунодиффузии и ракетного иммуноэлектрофореза с использованием антисыворотки к ВСМЗ, предоставленной доктором Ширако (У.БЫгако) из Японии, выявлены идентичные эпи-топы капсидных белков, что указывает на родство между ВМЗ и ВСМЗ [Крылов и др., 1989; Гнутова и др., 1989].

Таким образом, исходя из данных отечественных и зарубежных исследователей, а также собственных результатов, можно полагать, что исследуемый нами дальневосточный изолят ВМЗ является штаммом ВСМЗ.

ВЫВОДЫ

1. ВМЗ и ВЗЗ поражают овес, пшеницу, ячмень, просо и не поражают рис. ВМЗ в отличие от ВЗЗ поражает рожь. ВМЗ имеет более широкий круг растений-хозяев, чем ВЗЗ. Яркая штриховатая мозаика на больных растениях -наиболее характерный признак ВМЗ. Мозаичность при инфицировании ВЗЗ менее заметна и наблюдается не всегда.

2. В соке и на ультратонких срезах больных растений из различных районов Дальнего Востока обнаружены частицы ВМЗ, из Омской и Новосибирской областей - ВЗЗ. Зрелые вирусные частицы ВМЗ и ВЗЗ выявлены в суспензии темной цикадки.

3. Из растений и цикадок, инфицированных ВМЗ, выделен вирус-специфический белок с М.М. 16 кД, который оказался умеренным иммуно-геном. К белку получена строгоспецифическая антисыворотка.

4. Темная цикадка (ЬаосЫрЬах 5й1а1е11и8) - единственный переносчик ВМЗ и ВЗЗ. Цикадка способна длительное время сохранять инфекционность и быть резерватом инфекции. Вирусы перезимовывают в цикадке. Особенности взаимоотношений ВМЗ и ВЗЗ с переносчиком указывают на то, что они размножаются в цикадке.

5. На юге Амурской области развивается 2-3 генерации цикадки. Перезимовавшие (в личиночной стадии) цикадки заселяют в мае посевы зерновых, на которых развивается первая летняя генерация. Последующие генерации от-рождаются на зерновых позднего срока сева и дикорастущих злаках (преимущественно однолетних). С середины лета наблюдается резкое увеличение численности цикадок. Температура 10° является нижним температурным порогом развития темной цикадки. Окрыление цикадок первой летней генерации происходит при достижении суммы положительных температур в среднем 1092° или суммы эффективных температур равной 364°. Для второй генерации эти показатели составляют 1885° и 789°. На личинках цикадки паразитирует перепончатокрылое насекомое - Нар^опак>риз а^айк.

6. ВМЗ обнаружен в Приморском и Хабаровском краях, Амурской и Читинской областях. Наибольшая вредоносность ВМЗ наблюдается на юге Амурской области, где заболевание часто носит эпифитотийный характер. Пора-женность зерновых ВЗЗ в Омской и Новосибирской областях незначительна. В Предбайкалье, Забайкалье и на Дальнем Востоке ВЗЗ не выявлен.

7. Мозаика и закукливаиие злаков - заболевания, частично сохранившие связь с природными очагами инфекции (многолетние злаки). В условиях агроце-ноза главным источником инфекции является переносчик. В районах, где под зерновые отведены небольшие площади и где существует естественная изоляция посевов друг от друга, резервация инфекции в многолетниках имеет большое значение для сохранения вирусов.

8. Циркуляция ВМЗ и ВЗЗ непосредственно связана с биологией переносчика, а пораженность посевов зерновых с его численностью и вирофорностью. В Амурской области наиболее сильно (до 50% и более) поражаются поздние посевы зерновых, которые атакуются многочисленными вирофорными (до 33-34%) цикадками летних генераций. Пораженность зерновых, высеянных в апреле-мае, не превышает 5%. Численность цикадок, питающихся на этих растениях, небольшая, а их вирофорность в среднем 4%.

9. Сходство ВМЗ и ВСМЗ по морфологии вирионов, кругу растений-хозяев, их взаимоотношениям с переносчиком, наличие идентичных эпитопов капсид-ных белков указывает на то, что эти два вируса близки и ВМЗ является штаммом ВСМЗ.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Бородина Е.Е., Мамаев П.Ю. Циркуляция вируса мозаики злаков в условиях Амурской области // Взаимоотношения вирусов с клетками растения-хозяина. Владивосток, 1985. С. 94-100.

2. Мамаев П.Ю. Полиморфизм темной цикадки'- Laodelphax striattelus Fall, амурской популяции // Там же. С. 135-137.

3. Мамаев П.Ю. О биологии темной .цикадки Laodelphax striatellus Fall. (Homoptera, Delphacidae) на юге Амурской области // Роль насекомых в биоценозах Дальнего Востока. Владивосток: ДВНЦ АН СССР 1988. С.63-67.

4. Mamaev P.Yu., Krylov A.V. Cereal mosaic virus // Abstr. 5th Conf. On Virus Diseases of Gramineae in Europe. Budapest, 1988. P.66.

5. Штейн-Марголина B.A., Мамаев П.Ю., Крылов A.B. Рабдовирусы в клетках растений // Тез. ХШ конф. по электр. микроскопии. Звенигород, 1988. С. 24.

6. Крылов A.B., Коцарь Т.Ф., Мамаев П.Ю. Мозаика злаков - основное заболевание зерновых в Амурской области // Защита растений на Дальнем Востоке. Владивосток, 1989. С. 12-19.

7. Мамаев П.Ю. Взаимоотношения вируса мозаики злаков с темной ци-кадкой (Laodelphax striatellus Fall.) // Фитовирусологические исследования на Дальнем востоке. Владивосток: ДВНЦ АН СССР 1989. С. 164-171.

8. Мамаев П.Ю. Мозаика злаков - вирусное заболевание, связанное с производством зерновых на Дальнем Востоке // Тез. конф. "Экологические проблемы охраны живой природы". М., 1990. С. 210-211.

9. Штейн-Марголина В.А., Мамаев П.Ю. Диагностика рабдовирусной инфекции методами электронной микроскопии // Тез. IV Республ. конф. "Электронная микроскопия и современная технология". Кишинев, 1990. С. 32.

10. Штейн-Марголина В.А., Мамаев П.Ю., Крылов A.B. Электронно-микроскопические методы идентификации вирусов, поражающих злаки // Тез. конф. "Микробиологические и биотехнологические основы интенсификации растениеводства и кормопроизводства". Алма-Ата, 1990. С. 116.

11. Mamaev P.Yu., Krylov A.V. Cereal mosaic virus // Acta Phytopathologica et Entomológica Hungarica. 1991. Vol. 26. N 1-2. P.227-230.

12. Mamaev P.Yu. Comparison of cereal mosaic virus with rhabdoviruses from China and Japan // Abstr. 6th Conf.on Virus Diseas of Graminea in Europe. Torino, 1991. P. 47.

13. Сапоцкий M.B., Моисеенко Л.И., Какарека H.H., Мамаев П.Ю., Гну-това P.B. Особенности выделения и антигенные свойства белка "растворимого" антигена вируса мозаики злаков // Доклады ВАСХНИЛ, 1992. С. 6-11.

14. Мамаев П.Ю. Распространение и особенности циркуляции вируса мозаики злаков // Фитовирусы Дальнего Востока. Владивосток: ДВНЦ АН СССР, 1993. С.39-57.

15. Пробатова Н.С., Мамаев П.Ю., Крылов A.B. Анализ круга растений-хозяев вируса мозаики злаков // Тез. Конф. Защита растений в условиях реформирования агропромышленного комплекса: Экономика, эффективность, экологичность. С.-Петербург, 1995. С. 236-237.

16. Мамаев П.Ю. Новые данные о вирусе закукливания злаков (ВЗЗ) // Тез. Всероссийского съезда по защите растений. С.-Петербург, 1995. С.61-62.

17. Мамаев П.Ю., Штейн-Марголина В.А. Распространение вируса мозаики злаков в Приморском и Хабаровском краях // Проблемы фитовирусоло-гии на Дальнем Востоке. Владивосток: Дальнаука. 1996. С. 21-26.

18. Коцарь Т.Ф., Мамаев П.Ю. Обнаружение вирусов мозаики и закукливания злаков в переносчике - цикадке Laodelphax striatellus Fallen // Там же. С. 27-32.