Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологическое обоснование разработки и применения липосомальных форм инсектицидных средств для подавления численности насекомых, имеющих медико-санитарное значение

ВАК РФ 03.00.09, Энтомология

Автореферат диссертации по теме "Биологическое обоснование разработки и применения липосомальных форм инсектицидных средств для подавления численности насекомых, имеющих медико-санитарное значение"

На правах рукописи

Шестаков Константин Алексеевич

Биологическое обоснование разработки и применения липосомальных форм инсектицидных средств для подавления численности насекомых, имеющих медико-санитарное значение

03.00.09- Энтомология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2007

Работа выполнена в Испытательном лабораторном центре Московского городского центра дезинфекции (ГУП МГЦД) Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

Научные руководители:

Доктор химических наук, профессор ¡Крейнгольд Самуил Ушерович Доктор биологических наук, с.н.с. Расницын Сергей Павлович

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук Ганушкина Людмила Алимпиевна Доктор биологических наук Шашина Наталья Игоревна

Ведущая организация: Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова.

Защита состоится <<?/»__¿У 200J года в /2, час. на заседании

Диссертационного совета Д 208.040.12 в Московской Медицинской Академии им. И.М. Сеченова по адресу: 119992, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке

ММА им. И.М. Сеченова по адресу: 117998, Москва, Нахимовский

проспект, д. 49.

Автореферат разослан « » [2- 200/ года.

Ученый секретарь диссертационного совета, Кандидат медицинских наук,

старший научный сотрудник Фролова Александра Александровна

Введение

Актуальность темы

Среди разнообразных групп животных членистоногие являются одной из наиболее многочисленных, как по количеству видов, так и по распространенности Многие виды членистоногих имеют санитарно-гигиеническое и эпидемиологическое значение Многовековой опыт показал необходимость постоянного совершенствования средств и методов борьбы с этими вредителями

Одной из распространенных групп, вызывающей у людей дискомфорт, являются синантропные тараканы, особенно рыжие - В1айе11а §егташса Ь Тараканы являются механическими переносчиками значительного числа патогенов У людей, контактирующих с тараканами, возникают аллергические реакции, вплоть до астмы Разработка эффективных средств борьбы с ними актуальна Сходство в строении, физиологии и биохимии насекомых достаточно велико Поэтому средства, пригодные для истребления тараканов, могут найти применение в борьбе и с другими группами вредоносных организмов В этом аспекте тараканы выступают как модельный объект разработки средств борьбы с вредными членистоногими

Важным направлением совершенствования способов борьбы с вредными насекомыми является разработка новых или улучшенных препаративных форм соответствующих средств

Микрокапсулированные формы применения инсектицидных средств являются перспективными, так как не пылят, в отличие от дустов, практически не содержат токсичных органических растворителей, как эмульгирующиеся концентраты, и, следовательно, являются более безопасными для человека и теплокровных животных

В настоящее время широко применяют инсектицидные гели и сухие смеси, содержащие агграктанты Эти методы имеют ряд преимуществ перед бесприманочными меньший расход препарата на единицу обрабатываемой площади, отсутствуют органические растворители, ограничивающие применение эмульгирующихся концентратов в медицинских учреждениях

Цель и задачи исследований

Цель данной работы - повышение эффективности борьбы с вредными насекомыми путем расширения ассортимента инсектицидных средств создания новой, эффективной препаративной формы средств, предназначенных для борьбы с насекомыми Такой формой были выбраны липосомальные микрокапсулы, в которые включены действующие вещества

• Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи

1 Разработать способы получения микрокапсулированных в липосомы инсектицидов

2 Провести исследование биологической эффективности разработанных микрокапсулированных препаратов

3 Разработать способы применения микрокапсулированных в липосомы средств

4 Разработать простые и надежные методы анализа полученных средств Научная новизна

Разработаны эффективные способы получения микрокапсулированных в липосомы инсектицидов различных классов пиретроидные, фосфор-органические и фенилпиразолонового ряда (фипронил), а так же родентицид дифенацин Разработан ряд препаративных форм инсектицидных средств, показана их высокая биологическая эффективность и предложены способы их применения Выявлено явление синергизма липосомальных форм средств, содержащих пиретроидные и фосфорорганические инсектициды Установлено, что липосомальные препараты подавляют репеллентные свойства пиретровдных инсектицидов Показано снижение риска аллергизации людей при контакте с липосомальными формами инсектицидных средств. Приоритетность проведенных исследований подтверждена 4 патентами РФ Практическое значение

Представлены результаты оценки биологической эффективности, способы применения и получения липосомальных пестицидных средств Создание липосомальных микрокапсулированных препаратов ввело в практику

дезинфекционной службы средства, позволяющие повысить эффективность борьбы с вредными животными. На основе проведенных исследований разработано и внедрено в производство 7 липосомальных инсектицидных средств, применяющихся в практике медицинской дезинфекции

Положения, выносимые на защиту

1. Способы получения липосомальных форм инсектицидных средств.

2. Показана высокая биологическая эффективность разработанных

микрокапсулированных средств.

3. Разработаны способы применения липосомальных форм инсектицидных

средств и методы их химического анализа.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 6 статей, из них 5 в реферируемом журнале, тезисы доклада на научной конференции, получено 4 патента на изобретения.

Апробация работы

Результаты доложены на конференции «Современные направления развития биотехнологии» (Москва, 1991), заседании секции общества дезинфекционистов Московского отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002)

Диссертация апробирована на заседании Специализированной комиссии по предварительной экспертизе диссертаций в Институте медицинской паразитологии и тропической медицины им Е.И. Марциновского ГОУ ММА им. И.М. Сеченова (протокол № 94 от 13 ноября 2007 г.).

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 115 страницах, состоит из введения, 5 глав, выводов и списка литературы, включающего 97 отечественных и 82 зарубежных источника, иллюстрирована 5 рисунками и 19 таблицами.

Автор выражает благодарность за помощь и поддержку руководству и коллегам по Испытательному лабораторному центру ГУЛ МГЦД, где была выполнена данная работа, моим научным руководителям С.У. Крейнгольду и

СП Расницыну, ВП Дремовой и ЮВ Ермишеву (ИМПИТМ), В M Лубошниковой (НИИД) за конструктивную критику и ценные замечания Содержание работы

Введение. Дано обоснование темы, сформулированы цели исследования и положения, выносимые на защиту, отмечены его новизна и практическая значимость

Глава 1. Обзор литературы.

Приведены сведения о применяемых для борьбы с насекомыми инсектицидах и формах их применения Показано, что липосомы позволяют получить препараты, обладающие меньшей токсичностью для людей и нецелевых животных в сочетании с повышением их эффективности Глава 2. Материалы и методы исследований. Цри проведении биологических испытаний использовали рыжих тараканов Blattella germanica L, как инсектарных, так и выловленных на обрабатываемых объектах г Москвы, крыс Rattus norvegicus Berk белых беспородных и серых, мышей Mus musculus L„ серых и белых, линии (CBAxC57B16)F В опытах использовали сытых самок и самцов тараканов 3-10 дневного возраста, а так же личинок разных возрастов Всего в опытах было использовано более 8000 рыжих тараканов, 77 крыс, 36 белых мышей

В работе использовали следующие инсектицидные и родентицидные препараты стандартные образцы циперметрина, ГСО 7736-99, хлорпирифоса, ГСО 7418-97, дифенацина, ГСО 7704-99, фипронил техн. (имп), перметрин техн (имп ) циперметрин тех, импорт, хлорпирифос техн., импорт, дифенацин техн, ТУ 9392-001-47627203-2000, овальбумин, Serva

Использовали хлороформ, ГОСТ 20015-88, четыреххлористый углерод, ГОСТ 20288-74, этиловый спирт, ГОСТ 18300-87, лецитин-стандарт, ФС 42150 ВС-88, липиды яичные, ТУ 10 5850616 005-91, агар, ФС 42-3520-98; желатин пищевой, ГОСТ 11293-89, корицу, ГОСТ 29049-91

Инсектицидную активность средств по отношению к В germanica L в лабораторных условиях исследовали при температуре 20°С и относительной влажности воздуха 65%

Для определения эффективности липосомальных инсектицидных средств применяли методы принудительного контакта, свободного выбора и топикального нанесения водных эмульсий микрокапсул При исследованиях методом принудительного контакта средства наносили на обрабатываемые поверхности в дозе 50 мл/м2. Применяемые концентрации: 0,01-0,64% При исследованиях методом топикального нанесения средства наносили на среднегрудь насекомых в дозе 10 мкл При исследованиях методом свободного выбора средства наносили в виде капли на невпитывающую подложку в количестве 0,25 г в полигоне площадью 0,15 м2 при наличии корма и воды

Математическую обработку результатов исследований проводили стандартными статистическими методами Коэффициенты синергизма рассчитывали по методу ПВ Попова

Глава 3. Результаты и их обсуждение. 1.1. Получение липосомальных микрокапсулированных инсектицидных средств.

111 Получение жидкофазных микрокапсулированных инсектицидных средств.

Разработанный способ получения микрокапсулированных в липосомы инсектицидов основан на диспергировании в водной фазе раствора смеси природных липидов и ДВ в водорастворимом органическом растворителе Полученные при этом микрокапсулы имели следующие размеры диаметр -5-10 мкм, толщину стенки - 4*5 нм. Препарат не образовывал осадка как в концентрированном (9,7 % инсектицида), так и в разбавленном (0,1 % инсектицида) виде

В полученных нами средствах не отмечалось микробного прорастания на протяжении двух лет хранения

Поскольку липиды обладают антиоксидаятными свойствами, липосомальные препараты обеспечивают длительное сохранение действующего вещества и, следовательно, эффективности препарата

1.1.2. Получение гелеобразных микрокапсулированных инсектицидных средств.

Для получения гелеобразных микрокапсулированных инсектицидных средств использовали методологический подход, аналогичный описанному для получения жидкофазных, микрокапсулированных в липосомы инсектицидных средств. При этом в композицию вводили гелеобразующие компоненты. | Основным требованием к консистенции геля является его стабильность. Первоначально в качестве гелеобразующего компонента был выбран агар. Оказалось, что вследствии сннерезиса гель на основе агара при хранении расслаивается, а при практическом применении образует потеки, портящие поверхности, производящие негативное впечатление на потребителя и препятствующие подходу насекомых к гелеобразной массе, содержащей инсектицид. С целью устранения указанного недостатка в рецептуру был введен желатин. На рис. 1 показана зависимость между содержанием желатина в рецептуре и эффективностью геля. При этом содержание агара оставалось постоянным.

1.2. Эффективность микрокапсулированных в липосомы инсектицидных средств по отношению к рыжим тараканам Blattella germanica L. 1.2.1. Щенка эффективности инсектицидных средств методом принудительного контакта насекомых.

Первоначально эксперименты проводили на микрокапсулированном в липосомы пиретроидном инсектициде перметрине. Микрокапсулы состояли из I яичного лецитина (16,6 %) и пермегрина в концентрации 7,5 %. Эффективность указанного средства была изучена в лабораторных условиях. В опытах использовали рыжих тараканов как инсектарной (чувствительной) линии, так и природные популяции рыжих тараканов, собранные в объектах г. Москвы, обладающие резистентностью к перметрину среднего з'ровня: 0,5-^4-кратный коэффициент устойчивости.

Параллельно проводили опыты с препаратом «Кьюдоз» (микрокапсулированный в полиуретановые микрокапсулы перметрин, производства «ICI», Англия) при тех же концентрациях перметрина (0,5%), что и исследуемый препарат. Контролем служили насекомые, контактировавшие с необработанными поверхностями. В ряде опытов для сравнения использовали спиртовые растворы перметрина. Испытания проводили на стекле, обработанном препаратом, Сравнение эффективности липосомальной формы перметрина и препарата «Кьюдоз» не выявило значительных различий в инсектицидной эффективности исследованных средств по отношению к инсектарным линиям насекомых (рис. 2). Было установлено, что воздействие капсулированных средств на инсектарных тараканов оказалось более эффективным, чем некапсулированного перметрина. Еще более резкие отличия отмечены для рыжих тараканов, выловленных на объектах города. Из данных, приведенных в

Концентрация перметрина. %

-Перметрин

микрокапсулированный -Кьюдоз

А Перметрин (спиртовой раствор]

Рис. 2.

таблице 1, видно, что микрокапсулированный перметрин гораздо более

эффективен по сравнению с некапсулированным.

Таблица 1. Эффективность микрокапсулированного в липосомы перметрина и спиртового раствора перметрина на тараканах, собранных на различных объектах г. Москвы (метод принудительного контакта). Норма

.с с £ Концентрация перметрина, % Время наблюдения, сут. % гибели насекомых за время наблюдения

Объект А Объект Б Объект В

Спиртовой раствор Микрокапсулы Спиртовой раствор S с s 1 Спиртовой раствор Микрокапсулы

1 0,02 3 50 50 0 0 20 20

2 0,04 3 30 60 0 20 - -

3 0,08 3 50 80 40 80 20 20

4 0,16 3 50 100 50 90 - -

5 0,32 3 - - 60 100 30 50

6 0,64 3 - - 100 100 40 90

Резистентность проявлялась и при воздействии капсулированного в липосомы препарата, но в меньшей степени (в 1,5-2 раза), чем при использовании некапсулированного инсектицида.

Результаты последующих исследований эффективности средств, содержащих микрокапсулированные в липосомы цнперметрин или хлорпирифос, приведены в таблице 2 Опыты проводили на инсектарных культурах рыжих тараканов В депнашса методом принудительного контакта Средства наносили на некрашеную фанеру Плотность липосом на обработанной поверхности при 0,1% содержании циперметрина составила (65-70)* 103 шт/см2 При хранении обработанных пластин в течение 5 недель остаточное действие сохранялось на значительном уровне 74±2,6% в случае применения хлорпирифоса и 95±3,5% при применении циперметрина

Таблица 2. Эффективность микрокапсулированных в липосомы хлорпирифоса и циперметрина по отношению к рыжим тараканам при

№ п/п Наименование показателя Микрокапсулированный инсектицид

1 Действующее вещество (ДВ) Хлорпирифос Циперметрин

2 Ы>50, мкг/г 40,8 0,71

3 Концентрация ДВ, % 0,25 0,1

4 Экспозиция, минут 15 15

5 Время наблюдения за насекомыми, час 48 48

6 Гибель, % 100 100

Средства, полученные по разработанному способу, обеспечивают высокую биологическую эффективность (табл 2) Достигается 100 % гибель насекомых в условиях опыта, в сочетании со значительным сроком остаточного действия, особенно в случае применения пиретроидного инсектицида

В связи с возможным наличием резистентности у целевых насекомых, было проведено дополнительное исследование эффективности смесей микрокапсулированных в липосомы циперметрина и хлорпирифоса в различных соотношениях

Полученные данные показывают, что по уровню чувствительности к фосфорорганическому инсектициду хлорпирифосу обе линии практически не отличаются, а по чувствительности к пиретроиду (циперметрину) разница между ними в 11 раз (табл 3)

Действие смеси обоих действующих веществ для чувствительной линии тараканов превышала действие одного хлорпирифоса, но несколько уступала действию одного циперметрина

В отношении резистентной линии картина иная Смесь инсектицидов (1 1) действует так же, как один хлорпирифос и вдвое эффективнее одного циперметрина А смесь 1 9 уступает и тому и другому инсектициду по отдельности

Таблица 3. Эффективность для В §егташса микрокапсулированных в липосомы циперметрина, хлорпирифоса и их смесей при топикальном нанесении (ЬС50,%)__

Инсектицидный Линия насекомых

состав чувствительная резистентная

Циперметрин 0,0040±0,0003 0,046±0,005

Хлорпирифос 0,0370±0,0031 0,024±0,002

Смесь хлорпирифос + циперметрин 1 1 0,0065±0,0006 (0,0072) 0,024±0,003 (0,032)

Смесь хлорпирифос + циперметрин 1 9 - 0,089±0,009 (0,042)

Примечание В скобках приведены расчетные значения ЬС$о для смеси инсектицидов

Коэффициенты синергизма смесей микрокапсулированных действующих веществ приведены в таблице 4 Полученные данные показывают, что в сочетании 1 9 хлорпирифос и циперметрин выступают как антагонисты, а в сочетании 11- как слабые синергисты.

Таблица 4. Коэффициенты синергизма в действии на тараканов смесей микрокапсулированных в липосомы циперметрина и хлорпирифоса

Инсектицидный состав Линия насекомых

чувствительная резистентная

Смесь хлорпирифос + циперметрин 1 1 1,11 1,3

Смесь хлорпирифос + циперметрин 1 9 - 0,47

Поскольку смесь хлорпирифос + циперметрин 1 1 высоко эффективна против рыжих тараканов как чувствительных, так и резистентных к пиретроидам, на практике ее можно использовать в более широких масштабах, чем препараты, содержащие только одно действующее вещество

Полученные результаты позволяют сделать вывод, что предлагаемые средства обладают высокой эффективностью и длительным остаточным действием Композиции на основе смесей инсектицидов различных классов обладают синергетическим эффектом

12 2 Оценка эффективности инсектицидных средств методом свободного выбора с альтернативным питанием

Исследования воздействия жидкофазной, предназначенной для обработки поверхностей, формы микрокапсулированного в липосомы перметрина на рыжих тараканах показали, что гибель наступает на 5 сутки при концентрации перметрина 1,25 % Это свидетельствует о том, что разработанные средства обладают атграктантными свойствами

В случае применения микрокапсулированного в липосомы более активного инсектицида циперметрина гибель тараканов наступала при концентрациях более высоких (рис 3 ), чем в случае применения перметрина Полученные результаты свидетельствуют о репелленгных свойствах циперметрина Однако то, что при высоких концентрациях препарата, получаемых также и при практическом применении микрокапсулированных средств, вследствие их высыхания на обработанных поверхностях,

репеллентная активность подавляется, указывает на целесообразность применения липидов в качестве материала микрокапсул

Результаты испытаний

гелеобразных (приманочных) средств различного состава, содержащих включенные в липидные микрокапсулы инсектициды, приведены в таблице 5

гибель тараканов %

0,625 1,25 2,5 5 10

Содержание циперметрина, %

-■^-Циперметрин (спиртовой

Цнперметрш микрокапсулироввнныи

Рис 3

Их анализ позволил выявить композицию, обеспечивающую 100% гибель насекомых. Остаточное действие этого средства сохраняется в течение 5 месяцев (табл. 6).

Таблица 5. Эффективность гелеобразных средств, содержащих микрокапсулированные в липосомы инсектициды, по отношению к В йешштеа,____

№ Действующее вещество Содержание действующего вещества, % % гибели насекомых Пищевой привпекатель

1 Циперметрин 0,4 80 нет

2 Хлорпирифос 0,5 70 нет

3 Циперметрин 0,4 100 корица и растительное масло

4 Хлорпирифос 0,5 100 корица и растительное масло

5 Фипронил 0,01 100 корица и растительное масло

6 Циперметрин (не микрокапсулирован) 0,4 35 нет

7 Нет инсектицида - 0 корица и растительное масло

Сравнение эффективности композиций № 1 и № 6 (табл. 5), отличающихся тем, что в состав композиции № 1 входит микрокапсулированный в липосомы циперметрин, а в составе композиции № 9 - циперметрин не капсулнрован, свидетельствует о наличии аттрактантных свойств у лнпосомапьных микрокапсул, вероятно в сочетании с их способностью подавлять репедлентные свойства циперметрина Как видно из таблицы 6, гибель насекомых при применении композиции № 1 составила 80%, а при применении композиции №6-35%.

Химический анализ содержания инсектицидов в предложенном средстве показал, что при хранении в течение 26 месяцев при 20 °С снижение содержания действующих веществ составляет не более 5% от исходного

Таблица б. Остаточное действие отложений гелеобразных средств, содержащих микрокапсулированные в липосомы инсектициды

№ Действующее Содержание % гибели насекомых при контакте с

п/п вещество действующего обработанными пластинами

вещества, %

Срок хранения обработанных 1 60 90 120 150

пластин, сут

1 Циперметрин 0,4 100 100 100 100 94±2,5

2 Хлорпирифос 0,5 100 100 90 85±3,0 75±ЗД

Проведеное испытание эффективности разработанного инсектицидного геля «Лигель Ф» в сравнении с 10 промышленно производимыми инсектицидными гелеобразными средствами показало, что «Лигель Ф» обладает высокой эффективностью в отношении рыжих тараканов, обеспечивая 100% гибель насекомых за 6 дней наблюдения

Разработанный метод позволяет получать эффективные гелеобразные инсектицидные препараты, что расширяет арсенал технических средств получения гелеобразных инсектицидных средств, обеспечивает высокую эффективность инсектицидных средств и инсектицидных обработок

Предлагаемая микрокапсулированная форма промышленно применима и используется в целях бытовой и медицинской дезинсекции Микрокапсулированные препараты приняты с 1997 г к производству в Экспериментально-производственной лаборатории Московского городского центра дезинфекции Объем производства составляет около 4 тонн в год Методические указания на применение этих средств утверждены в департаменте Госсанэпиднадзора МЗ РФ Изучение эффективности полученных средств были проведены независимыми экспертами (ОАО «НИЦБЫТХИМ», Т А Перегуда) Средства «Микроцин», «Микрофос», «Микрон» и «Микрос» рекомендованы к применению для борьбы с большим числом видов насекомых (черные и рыжие тараканы, постельные клопы, крысиные блохи, рыжие домовые муравьи, мухи) Подтверждено отсутствие репелленгаых свойств у данных средств в отношении рыжих и черных тараканов В приведенной ниже таблице 7 даны характеристики

липосомальных форм инсектицидных средств, указанные в соответствующих методических указаниях

Таблица 7. Характеристики разработанных микрокапсулированных липосомальных инсектицидных средств__

Наименование средства Действующее вещество и его содержание, % Класс опасности для теплокровных, 1Л>50, мг/кг Рекомендованный режим применения

Микрофос Хлорпирифос, 10 IV 6200 0,25-0,5% водная эмульсия микрокапсул

Микрос Хлорпирифос, 0,25 IV >5000 Готовая к применению эмульсия

Микроцин Циперметрин, 10 Ш 3200 0,1-0,2% водная эмульсия микрокапсул

Микрон Ципермегрин, 0,1 IV >5000 Готовая к применению эмульсия

Лигель П Циперметрин, 0,4 IV >5000 Гель готовый к применению

Лигель Ф Хлорпирифос, 0,5 IV >5000 Гель готовый к применению

Лигель Ф+ Хлорпирифос, 0,5 IV >5000 Гель готовый к применению

1.3. Токсикологические характеристики липосомальных форм инсектицидных средств.

Одним из критериев токсичности средств является аллергенность (сенсибилизирующее действие) Известно, что инсектициды в ряде случаев вызывают у людей аллергические заболевания Несомненный интерес представляет оценка влияния липосом на аллергенность (аллергизирующее действие) микрокапсулированных средств Исследования проводились с применением модельного аллергена - овальбумина (ОА), включенного в липосомы В качестве критерия аллергенносги контролировали индукцию иммуноглобулинов классов и Выявлено, что антителообразование ответственных за проявление симптомов аллергии анти-овальбуминовых иммуноглобулинов при введении лшюсомальной формы овальбумина было резко угнетено на всех сроках наблюдения по сравнению с введением чистого

овальбумина При этом уровень специфичных к овальбумину иммуноглобулинов ^О был значительно выше, чем при иммунизации только овальбумином Полученные данные позволяют считать, что включение аллергена в липосомы приводит к снижению его способности индуцировать антителообразование иммуноглобулинов 1§Е при усилении его иммуногенносш в отношении синтеза Это является важным свойством липосомальных средств, обеспечивающим не только снижение риска аллергизации при контакте с таким препаратом, но и последующее снижение симптомов аллергии, за счет связывания аллергена с иммуноглобулинами

Изучение токсикологических характеристик (среднесмертельной дозы и эффекта резорбции) полученных липосомальных инсектицидных средств были проведены независимыми экспертами (ОАО «НИЦБЫТХИМ», Л А Тимофеевская) На основании полученных данных Ы>50 средства на основе хлорпирифоса составила 3600 (4220-3000) мг/кг, эффект резорбции рабочих растворов в условиях повторного опыта выявлен не был. Препарат отнесен к умеренно опасным (III класс опасности) Проведенные исследования токсикологических характеристик гелеобразной микрокапсулированной формы на основе хлорпирифоса показали, что при введении в желудок 1Л>5о препарата составила > 5,0 г/кг для крыс Резорбция через кожу в опытах на мышах отсутствует, сенсибилизирующего действия не выявлено Предлагаемая композиция отнесена к малоопасным веществам (IV класс опасности)

2. Дополнительные возможности использования фосфолипидных микрокапсул.

Разработка методов включения и изучение биологической эффективности действующих веществ в липидные микрокапсулы позволила использовать полученные результаты и для других целей дезинфекции Мы предприняли попытку получения и разработки способа применения липосомальной формы родентицидных средств

2.1. Получение микрокапсулированных родентицидных средств.

К началу данной работы в литературе не было описано методов получения микрокапсулированных родентицидных средств

Для получения микрокапсулированного препарата смесь навесок дифенацина и фосфолипидов диспергировали в водной фазе путем механического перемешивания Был проведен рад опытов с различными соотношениями фосфолипида и дифенацина. Было найдено, что весовое соотношение липид/дифенацин 21 является оптимальным, т к с одной стороны, обеспечивает получение стабильного и гомогенного препарата, с другой - требуется минимально необходимое количество липидов Полученные концентраты содержали 3,5 % дифенацина и 7% яичного лецитина При проведении дальнейших исследований концентрат разводили дистиллированной водой до необходимых концентраций Микрокапсулированный препарат наносили на внутреннюю поверхность трубок в дозе 2 г на 1 трубку

2.2. Эффективность родентицидных средств.

2 2 1. Определение эффективности микрокапсулированного дифенацина.

Для оценки эффективности использован метод контакта грызунов с обработанной препаратом поверхностью Проведено 6 опытов, в которых использовали 3 белых крысы и 3 белых мыши Гибель мышей отмечена на 1-9 сутки, крысы погибли на 5-6 сутки

Было показано, что при контакте зверьков с обработанной поверхностью происходит их отравление, приводящее к 100 % гибели подопытных животных Следовательно, препаратом можно обрабатывать поверхности, по которым перемещаются зверьки

Для предотвращения загрязнения обработанных поверхностей, что приводит к снижению эффективности средства, исключения вероятности отравления человека и домашних животных, а также снижения до минимума риска загрязнения окружающей среды наиболее удобной формой применения микрокапсулированного родентицидного препарата является нанесение его на

внутреннюю поверхность стенки жестяных или полимерных трубок, в которые закладывается привлекатель Зверек, залезая в трубку за приманкой, контактирует с обработанной препаратом поверхностью трубки

2 2 2 Определение минимально эффективных концентраций микрокяпсулированного дифенщина для крыс

Для определения минимально допустимых концентраций дифенацина препарат наносили на внутреннюю поверхность жестяных трубок в количестве 2 мл с различными концентрациями - от 0,2 до 2,0 % дифенацина В опытах использованы беспородные белые и дикие серые крысы, отловленные на объектах города и прошедшие двухнедельный карантин в виварии Опыты с белыми крысами проводили в контейнерах площадью 0,7 м2, в каждый из которых помещали по одному зверьку Воду в течении всего опыта давали в избытке Тот же корм, который закладывали в трубки, размещали рядом с трубкой Было проведено 4 опыта на 42 белых крысах

Установлено, что при концентрации дифенацина ОД % погибло 50 % белых крыс, при концентрации дифенацина 0,5 % погибло 78 % животных, а при концентрации дифенацина 1 % и 2 % пали все крысы

Опыты с дикими серыми крысами проводили в специально оборудованном полигоне Удельное содержание дифенацина составляло от 0,0053 до 0,0092 г/м2 Было проведено 2 опыта на 22 диких серых крысах

Как видно из табл 8, при концентрации дифенацина в препарате 2 % погибло 60 % подопытных серых крыс, а при концентрации дифенацина 3,5 % гибель составила 100 %

Таблица 8. Эффективность микрокапсулированного дифенацина против

Содержание дифенацина в препарате, % Удельное содержание дифенацина в полигоне, г/м2 Количество животных, шт Эффективность, %

В опыте Погибло

2,0 0,0053 10 6 60

3,5 0,0092 12 12 100

Рекомендуемое удельное содержание дифенацина на 1 м2 обрабатываемой площади помещений составляет для отравленных приманок до 0,015 г/м2 Микрокапсулированный родентицидный препарат в предложенной форме применения обеспечивает 100% гибель крыс при содержании дифенацина в препарате 3,5% при удельном содержании на обрабатываемой площади 0,0092 г/м2. Преимуществом перед зерновыми отравленными приманками является безопасность применения, которая обеспечивается низким удельным содержанием действующего вещества на единицу обрабатываемой площади и изоляция действующего вещества от окружающего пространства стенкой трубки.

3. Методы анализа липосомальных инсектицидных средств.

Поскольку липосомы легко растворяются в этиловом спирте, а их поглощение в области 280 нм сравнительно невелико (рис, 4) для анализа микрокапсулированных в липосомы инсектицидных средств был предложен спектрофотометрический метод. Приведенные на рисунке концентрации соответствуют применяемым при проведении анализа по разработанной методике. Это позволило применить метод прямого спектрофотометрического определения содержания действующих веществ в липосомальных инсектицидных препаратах.

Разработанные методы обеспечивают относительную погрешность анализа в пределах 5%, что позволяет применять спектрофотометрические методы для анализа содержания действующих веществ, микрокапсулированных в липосомы.

При определении содержания действующих веществ в инсектицидных гелях применимы методы анализа действующих веществ в жидкофазных липосомальных препаратах. Особенность инсектицидных гелей заключается в присутствии

е

о в

о о

§

и о <и 6Г

100 90 80 70 60 50 40 30 20

Е ю

° о

^ # ^

Длина волны, нм циперметрин, 1,5*10"4М(Ф) хлорпирифос, 1,8*10"4 М(и) липиды, 0,02% раствор (ж) Рис. 4.

' т

4 \

л ч

г?

Щ л -'V \ I

гелеобразующих компонентов, не растворимых в органических растворителях

Специфика инсектицидной композиции, входящей в состав гелеобразных инсектицидных средств в том, что примененный нами инсектицид фипронил содержится в низких концентрациях (0,01 - 0,05%) При этом гель может содержать второй инсектицид - циперметрин или хлорпирифос

В связи с этим были разработаны методы анализа действующих веществ в гелеобразных инсектицидных препаратах, содержащих циперметрин, хлорпирифос или их смеси с фипронилом

При анализе геля к образцу приливали дистиллированную воду и встряхивали до получения равномерной суспензии Затем экстрагировали инсектициды хлороформом Полученный экстракт инсектицида или смеси инсектицидов использовали для дальнейшего анализа содержания действующих веществ в инсектицидных препаратах Циперметрин и хлорпирифос, входящие в состав геля, можно определять методом газожидкостной хроматографии по стандартным методикам Однако, при применении тонкослойной хроматографии возможен анализ всех действующих веществ методом спекгрофотометрии.

Изучение хроматографической подвижности фипронила в условиях тонкослойной хроматографии на пластинках «Силуфол» с применением в качестве элюэнта смеси хлороформ четыреххлористый углерод показало, что данных условиях ^ фипронила равно 0,1 При этом, ^ различных инсектицидов увеличиваются от 0,08 до 0,85 в ряду диазинон<фипронил< фенитротион< фенвалерат< циперметрин < хлорпирифос, что позволяет проводить анализ смесей данных веществ При определении фипронила спектрофотометрическим методом, после хроматографии образца на пластине «Силуфол» участки, содержащие фипронил, вырезали и экстрагировали этанолом Полученный раствор фотометрировали

Правильность определения фипронила фотометрическим методом сравнивали с методом газовой хроматографии Расхождение в результатах определения фипронила двумя этими методами в модельных гелях,

содержащих кроме фипронила, хлорпирифос или циперметрин, не превышают 10-15% относительных

Заключение,

С целью расширения ассортимента инсектицидных средств нами были разработаны способы получения микрокапсулированных в липосомы дезинфекционных средств, предназначенных для борьбы с вредными животными, в частности с насекомыми и грызунами Разработанные способы получения инсектицидных средств имеют промышленную применимость, т к все стадии, их составляющие, технологичны и достаточно просто оформлены в аппаратурном отношении Кроме того, используемые для получения микрокапсул материалы нетоксичны, биодеградируемы и не приводят к загрязнению окружающей среды

С целью биологического обоснования дальнейшей разработки и применения липосомальных форм дезинфекционных средств были проведены исследования их эффективности против насекомых, имеющих медико-санитарное значение

Показана высокая эффективность полученных препаратов как в опытах с острым инсектицидным действием, так и при исследовании длительности их остаточного действия Выявлено явление синергизма липосомальных форм средств, содержащих пиретроидные и фосфорорганические инсектициды

Выявлено, что лштосомальные формы инсектицидных средств не только подавляют репеллентные свойства пиретроидных инсектицидов, но проявляют атграктантные свойства

Предложены методы анализа действующих веществ в различных формах микрокапсулированных инсектицидных препаратов

Разработанные инсектицидные средства нашли применение в практике медицинской дезинсекции Методические указания на применение этих средств утверждены в департаменте Госсанэпиднадзора МЗ РФ Средства «Микроцин», «Микрофос», «Микрон» и «Микрос» рекомендованы к применению для борьбы с большим числом видов насекомых (черные и рыжие тараканы, постельные

клопы, крысиные блохи, рыжие домовые муравьи, мухи) (ОАО «НИЦБЫТХИМ», ТА. Перегуда).

Разработанные технические условия и регламенты переданы в Экспериментально-производственную лабораторию Московского городского центра дезинфекции. Микрокапсулированные в липосомы инсектицидные средства зарегистрированы в Государственном реестре дезинфекционных средств и внедрены в производство.

Практические рекомендации.

На основании представленных материалов были разработаны и внедрены в практику 7 инсектицидных средств- «Микроцин», «Микрофос», «Микрон», «Микрос», «Лигель-П», «Лигель-Ф», «Лигель-Ф+». Данные средства рекомендованы для борьбы с 6 видами бытовых насекомых. Результаты исследований вошли в 7 методических указаний и инструкций по применению вышеуказанных инсектицидных средств.

6. Выводы.

1 Разработан способ микрокапсулирования в липосомы веществ различных химических классов, используемых в качестве инсектицидов и родентицидов, предложено 7 препаративных форм инсектицидных средств Разработанные инсектицидные гелеобразные композиции, содержащие инсектициды циперметрин, хлорпирифос и фипронил в липосомальной форме, обладают высокой эффективностью, длительным остаточным действием и стабильностью

Обнаружено, что липосомальные микрокапсулы не только подавляют репеллентные свойства пиретроидных инсектицидов, но и обладают атграктантными свойствами

Микрокапсулированные средства «Микроцин» и «Микрофос», содержащие 10% циперметрина и хлорпирифоса соответственно, а так же их готовые к применению формы «Микрон» (0,1% циперметрина) и «Микрос» (0,25% хлорпирифоса) применяются в области медицинской дезинсекции Установлена высокая инсектицидная эффективность и длительное остаточное действие разработанных средств на обработанных поверхностях Показана высокая эффективность смеси липосомальных форм пиретроидных и фосфорорганических инсектицидов против резистентной к пиретроидам культуре рыжих тараканов Найдено, что соотношение циперметрин/хлорпирифос 1/1 в липосомальной форме обеспечивает синергизм действующих веществ

Показано снижение риска аллергизации людей при контакте с липосомальными формами инсектицид ных средств

Разработаны простые и надежные способы анализа действующих веществ в микрокапсулированных в липосомы инсектицидных средствах, применяемые в практике анализа химических лабораторий дезинфекционной службы

Список работ, опубликованных по теме диссертации. 1 Бабахин А А, Музя Г И., Шестаков К А Йммуногенность аллергена, включенного в липосомы // Современные направления развития биотехнологии Тезисы докладов -М1991 -С 7

2. Леви М.И., Богданова Е.Н., Шестаков К. А. Эффективность «Микроприма» (микрокапсулированный перметрин) по отношению к насекомым, имеющим медицинское значение // Дезинфекционное дело. - 1993. - № 2-3. - С. 52-54.

3. Леви М.И., Сизова Г.И., Шестаков К.А., Андреева Л.И., Ратина МА. Средство для борьбы с серыми крысами «Микрорат» // Рэт-инфо. - 1993. - № 5. -С. 10-12.

4. Леви М.И., Сизова Г.И., Шестаков К А., Андреева Л.И. Способ борьбы с серыми крысами препаратом «Микрорат» //Пат. РФ № 2013955. - 1994. -Приоритет от 20.11.1991 г.

5. Крейнгольд С.У., Шестаков К.А. Оптические характеристики некоторых инсектицидов и методы их определения в дезинфекционных средствах // Дезинфекционное дело. -1998. - № 1. - С. 58-61.

6. Шестаков К А., Леви М.И., Крейнгольд С.У., Сизова Г.И., Богданова ЕЛ. Способ получения микрокапсулированных средств, содержащих пиретроидные инсектициды // Пат. РФ № 2134967. -1999. - Приоритет от 30.05.1997 г.

7. Крейнгольд С.У., Шестаков К .А. Фотометрические и титриметрические методы анализа концентратов некоторых ратицидов и инсектицидов после разделения тонкослойной хроматографией // Дезинфекционное дело. —1999. -№4.-С. 22-24.

8. Шестаков К.А., Леви МЛ., Крейнгольд С.У, Сизова Г.И. Способ получения микрокапсулированных инсектицидных препаратов // Пат. РФ № 2165700 -2001. -Приоритет от 26.01.1999 г.

9. Крейнгольд С.У., Шестаков К.А. Определение 0,02-0,1% фипронила в инсектицидных гелях методами газовой, тонкослойной хроматографии и спекторофотометрии // Дезинфекционное дело. - 2002. - № 3. - С. 47-48.

10. Шестаков К А., Леви М.И., Крейнгольд С.У., Расяицын СЛ., Авруцкий

М М. Инсектицидная гелеобразная композиция // Пат. РФ № 2245036. - 2004. -Приоритет от 02.11.2001 г.

11 Шестаков К.А., Расницын СЛ. Эффективность композиции циперметрина и хлорпирифоса, микрокапсулированных в липосомы, против рыжих тараканов // Дезинфекционное дело. - 2005. - № 4. - С. 51-52.

Заказ № 547. Объем 1 п.л. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ООО «Петроруш». г. Москва, ул. Палиха-2а, тел. 250-92-06 www.postator.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шестаков, Константин Алексеевич

Введение.

1. Развитие химических средств и тактика борьбы с синантропными тараканами (обзор литературы)

1.1. Биологическое обоснование и тактика борьбы с тараканами

1.2. Эволюция действующих веществ

1.3. Эволюция препаративных форм дезинсекционных средств

1.4. Механизмы резистентности рыжих тараканов к инсектицидам

1.5. Применение в медицине липосомальных препаратов

2. Материалы и методы 48 2.1. Материалы 48 2.1. Методы исследований 48 2.1.1. Методы оценки эффективности средств 48 2.3. Способы получения микрокапсулированных инсектицидных средств

2.3.1. Способ получения жидких микрокапсулированных средств

2.3.2. Способ получения гелеобразных инсектицидных средств

2.3.3. Способ получения микрокапсулированного родентицидного препарата

2.3.4. Методы анализа содержания действующих веществ в липосомальных микрокапсулированных инсектицидных средствах

2.3.4.1. Метод анализа жидкофазных липосомальных инсектицидных средств

2.3.4.2. Метод анализа гелеобразных инсектицидных средств, содержащих микрокапсулированные в липосомы инсектициды

3. Результаты исследований и их обсуждение 57 3.1. Получение липосомальных микрокапсулированных инсектицидных средств

3.1.1. Получение жидкофазных микрокапсулированных инсектицидных средств 57 3.1.2. Получение гелеобразных микрокапсулированных инсектицидных средств

3.2. Эффективность микрокапсулированных в липосомы инсектицидных средств по отношению к рыжим тараканам Blattella germanica L.

3.2.1. Оценка эффективности инсектицидных средств при обработке поверхностей (метод принудительного контакта)

3.2.2. Оценка эффективности инсектицидных средств методом свободного выбора с альтернативным питанием

3.3. Токсикологические характеристики липосомальных форм инсектицидных средств

4. Дополнительные возможности использования фосфолипидных микрокапсул

4.1. Получение микрокапсулированных родентицидных препаратов

4.2. Эффективность родентицидных препаратов 81 4.2.1 Определение эффективности микрокапсулированного дифенацина 81 4.2.2. Определение минимально эффективных концентраций микрокапсулированного дифенацина для крыс

5. Методы химического анализа микрокапсулированных в липосомы инсектицидных препаратов

5.1. Анализ жидкофазных липосомальных инсектицидных препаратов

5.2. Анализ гелеобразных инсектицидных препаратов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологическое обоснование разработки и применения липосомальных форм инсектицидных средств для подавления численности насекомых, имеющих медико-санитарное значение"

Актуальность темы. Среди разнообразных групп животных членистоногие являются одной из наиболее многочисленных, как по количеству видов, так и по распространенности.

Значительное количество видов членистоногих, обитающих в ближайшем окружении человека, имеют санитарно-гигиеническое и эпидемиологическое значение. В первую очередь это те, кто вызывают болезни людей, являются хранителями и переносчиками возбудителей инфекций. Огромный ущерб наносят вредители сельского хозяйства, лесного хозяйства и других отраслей деятельности человека. Многовековой опыт показал необходимость постоянного совершенствования средств и методов борьбы с этими вредителями.

Важнейшим направлением медицинской энтомологии является разработка средств и методов борьбы с членистоногими, вредящими здоровью людей [73]. В настоящее время имеется набор разнообразных средств, предназначенных для указанной цели. И всё же он не полностью обеспечивает успех в борьбе с вредными членистоногими.

Согласно концепции медицинской энтомологии [74] членистоногие могут вредить здоровью людей не только в качестве переносчиков и возбудителей болезней, но и как факторы дискомфорта. Одной из распространённых групп, вызывающей у людей дискомфорт, являются синантропные тараканы, особенно рыжие - Blattella germanica L. Тараканы являются механическими переносчиками значительного числа патогенов. Известно, что в кишечнике рыжих тараканов обнаружены яйца власоглава, острицы и лентеца широкого, что имеет важное санитарно-эпидемиологическое значение [31]. На поверхности тела тараканов, в их кишечнике и экскрементах длительное время сохраняются такие патогенны, как кишечная палочка, сальмонеллы, шигеллы, стрептококки и др. [23]. У людей, контактирующих с тараканами, возникают аллергические реакции, вплоть до астмы.

Борьба с этой группой насекомых ведётся уже давно, но успех до сих пор не достигнут. Поэтому разработка эффективных средств борьбы с ними остаётся актуальной.

Сходство в строении, физиологии и биохимии отдельных групп насекомых достаточно велико. Поэтому средства, пригодные для истребления тараканов, могут найти применение в борьбе и с другими группами вредоносных членистоногих. В этом аспекте тараканы могут выступать как модельный объект при разработке средств борьбы с членистоногими, вредящими не только здоровью людей, но и сельскому хозяйству, лесному хозяйству и другим видам хозяйственной деятельности человека.

Поскольку химический метод в настоящее время широко используют для контроля численности членистоногих, важным направлением совершенствования способов борьбы с вредными насекомыми является разработка новых или улучшенных препаративных форм инсектицидных средств.

Химические способы медицинской дезинсекции можно разделить на две основные группы: бесприманочные и приманочные. Среди бесприманочных способов получили широкое распространение методы, основанные на применении препаратов контактного действия: порошковых форм (дустов, смачивающихся порошков, мелков), эмульгирующихся концентратов, концентратов суспензий и микрокапсулированных препаратов, инсектицидных гелей и тд.

Основным недостатком дустов является пыление, загрязнение обрабатываемых пространств, отсутствие фиксации на вертикальных поверхностях.

Эмульгирующиеся концентраты содержат органические растворители (например, о-ксилол, ПДК 50 мг/м3), которые отличаются повышенной токсичностью для людей.

Микрокапсулированные формы применения инсектицидов являются более перспективными, так как не пылят, практически не содержат токсичных органических растворителей и, следовательно, являются более безопасными для человека и теплокровных животных. В настоящее время эти препаративные формы считаются наиболее эффективными и безопасными.

Приманочный способ борьбы с вредными насекомыми основан на применении отравленных приманок, имеющих пищевую привлекательность. Для борьбы с тараканами в настоящее время широко применяют инсектицидные гели и сухие смеси, содержащие пищевые атграктанты. Этот метод имеет ряд преимуществ перед бесприманочными:

• меньший расход препарата на единицу обрабатываемой площади;

• как правило отсутствуют органические растворители, ограничивающие применение эмульгирующихся концентратов в ряде объектов (ЛПУ, детские и оздоровительные учреждения и др.). Цель и задачи исследований. Цель данной работы - создание новой, более эффективной препаративной формы средств, предназначенных для борьбы с вредными насекомыми, на модельном объекте - рыжих тараканах. Такой препаративной формой были выбраны липосомальные микрокапсулы, в которые включены действующие вещества.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать способы получения микрокапсулированных в липосомы инсектицидных препаратов.

2. Провести определение биологической эффективности разработанных микрокапсулированных препаратов.

3. Разработать способы применения микрокапсулированных в липосомы препаратов.

4. Разработать простые и надежные методы анализа полученных препаратов.

Научная новизна работы. Впервые разработаны эффективные способы получения микрокапсулированных в липосомы препаратов, содержащих инсектициды различных классов химических соединений: пиретроидные, фосфорорганические и фенилпиразолонового ряда (фипронил), а так же родентицид дифенацин.

Разработаны различные препаративные формы пестицидных средств (жидкие, гелеобразные) и способы их применения. Впервые показана высокая биологическая эффективность разработанных препаратов.

Выявлено явление синергизма липосомальных форм средств, содержащих пиретроидные и фосфорорганические инсектициды.

Показана возможность создания и применения липосомальных микрокапсулированных препаратов в медицинской дезинсекции. Установлено, что липосомальные препараты подавляют репеллентные свойства пиретроидных инсектицидов.

На модельном объекте (овальбумине) показано снижение риска аллергизации людей при контакте с липосомальной формой инсектицидных препаратов.

Приоритетность проведенных исследований подтверждена 4 патентами РФ: 2013955 от 15.06.1994 г. «Способ борьбы с серыми крысами препаратом "Микрорат"», 2134967 от 27.08.1999 г. «Способ получения микрокапсулированных препаратов, содержащих пиретроидные инсектициды», № 2165700 от 27.04.2001 г. «Способ получения микрокапсулированных инсектицидных препаратов», 2245036 от 27.01.2005 г. «Инсектицидная гелеобразная композиция».

Практическая значимость работы. В рамках работы представлены результаты оценки биологической эффективности, способы применения и получения липосомальных пестицидных препаратов.

Создание липосомальных микрокапсулированных препаратов ввело в практику дезинфекционной службы средства, позволяющие повысить эффективность борьбы с вредными животными. На основе проведенных исследований разработано и внедрено в производство 7 липосомальных инсектицидных средств:

Микроцин» (ТУ 9392-018-01934182-02), «Микрофос» (ТУ 9392-008-01934182-97), «Микрон» (ТУ 9392-009-01934182-98), «Микрос» (ТУ 9392-010-01934182-98), «Лигель-Ф» (ТУ 9392-014-01934182-01), «Лигель-Ф+» (ТУ 9392-020-01934182-03), «Лигель-П» (ТУ 9392-013-01934182-02).

Эти препараты зарегистрированы в МЗ РФ (№№ госрегистрации 601-59/75-2002, 77.99.18.939.Р.000146.06.03, 0040-98-40, 0040-98-41, 0500-57/85-2002, 77.99.18.939.Р.000200.06.03, 0056-01-31, соответственно) и широко применяются в практике дезинфектологии. Положения, выносимые на защиту.

1. Способы получения липосомальных форм инсектицидных средств.

2. Показана высокая биологическая эффективность разработанных микрокапсулированных средств.

3. Разработаны способы применения липосомальных форм инсектицидных средств и методы их химического анализа.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 статей, тезисы доклада на научной конференции, получено 4 патента на изобретения.

Апробация работы. Результаты работы доложены на конференции «Современные направления развития биотехнологии» (Москва, 1991); заседании секции общества дезинфекционистов Московского отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002).

Диссертация апробирована на заседании Специализированной комиссии по предварительной экспертизе диссертаций в Институте медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е. И. Марциновского ГОУ ММА им. И. М. Сеченова (протокол № 94 от 13 ноября 2007 г.).

Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 115 страницах, состоит из введения, 5 глав, выводов и списка литературы, иллюстрирована 5 рисунками и 19 таблицами. Библиографический указатель включает 97 отечественных и 82 зарубежных источника.

Заключение Диссертация по теме "Энтомология", Шестаков, Константин Алексеевич

6. Выводы.

1 Разработан способ микрокапсулирования в липосомы веществ различных химических классов, используемых в качестве инсектицидов и родентицидов, предложено 7 препаративных форм инсектицидных средств.

2 Разработанные инсектицидные гелеобразные композиции, содержащие инсектициды циперметрин, хлорпирифос и фипронил в липосомальной форме, обладают высокой эффективностью, длительным остаточным действием и стабильностью.

3 Обнаружено, что липосомальные микрокапсулы не только подавляют репеллентные свойства пиретроидных инсектицидов, но и обладают аттрактантными свойствами.

4 Микрокапсулированные средства «Микроцин» и «Микрофос», содержащие 10% циперметрина и хлорпирифоса соответственно, а так же их готовые к применению формы «Микрон» (0,1% циперметрина) и «Микрос» (0,25% хлорпирифоса) применяются в области медицинской дезинсекции.

5 Установлена высокая инсектицидная эффективность и длительное остаточное действие разработанных средств на обработанных поверхностях. Показана высокая эффективность смеси липосомальных форм пиретроидных и фосфорорганических инсектицидов против резистентной к пиретроидам культуре рыжих тараканов. Найдено, что соотношение циперметрин/хлорпирифос 1/1 в липосомальной форме обеспечивает синергизм действующих веществ.

6 Показано снижение риска аллергизации людей при контакте с липосомальными формами инсектицидных средств.

7 Разработаны простые и надежные способы аштиза действующих веществ в микрокапсулированных в липосомы инсектицидных средствах, применяемые в практике анализа химических лабораторий дезинфекционной службы.

Заключение.

Из обзора литературы следует, что разработка новых препаративных форм инсектицидных средств сохраняет свою актуальность в связи с недостаточным успехом борьбы с насекомыми, имеющими медико-санитарное значение. Самыми перспективными формами применения инсектицидов являются микрокапсулированные и приманочные отравленные композиции. Наиболее широко применяемыми в настоящее время являются пиретроидные и фосфорорганические инсектициды. Отмечается, что фосфорорганические соединения способны необратимо инактивировать гидролитические ферменты, являющиеся одним из факторов резистентности насекомых к инсектицидам.

Одним из методов микрокапсулирования различных веществ является включение их в липосомы. Использование липосом в медицине позволяет получать препараты, обладающие более высокой эффективностью, при снижении токсичности, с пролонгированным действием, по сравнению с аналогичными некапсулированными формами. Описанные в литературе методы получения инсектицидных липосомальных препаратов технологически несовершенны, многостадийны, а результаты биологических испытаний эффективности данных препаратов не приведены.

С целью расширения ассортимента инсектицидных средств, применяемых для уменьшения численности тараканов, нами были разработаны способы получения микрокапсулированных в липосомы дезинфекционных средств, предназначенных для борьбы с вредными животными, в частности с насекомыми и грызунами. Разработанные способы получения инсектицидных средств имеют промышленную применимость, т.к. все стадии, их составляющие, технологичны и достаточно просто оформлены в аппаратурном отношении. Кроме того, используемые для получения микрокапсул материалы нетоксичны, биодеградируемы и не приводят к загрязнению окружающей среды.

С целью биологического обоснования дальнейшей разработки и применения липосомальных форм дезинфекционных средств были проведены исследования их эффективности против насекомых, имеющих медико-санитарное значение.

Показана высокая эффективность полученных препаратов как в опытах с острым инсектицидным действием, так и при исследовании длительности их остаточного действия. Выявлено явление синергизма липосомальных форм средств, содержащих пиретроидные и фосфорорганические инсектициды.

Выявлено, что липосомальные формы инсектицидных средств не только подавляют репеллентные свойства пиретроидных инсектицидов, но проявляют атграктантные свойства.

Предложены методы анализа действующих веществ в различных формах микрокапсулированных инсектицидных препаратов.

Разработанные инсектицидные средства нашли применение в практике медицинской дезинсекции. Методические указания на применение этих средств утверждены в департаменте Госсанэпиднадзора МЗ РФ (приложение 2). Средства «Микроцин», «Микрофос», «Микрон» и «Микрос» рекомендованы к применению для борьбы с большим числом видов насекомых (черные и рыжие тараканы, постельные клопы, крысиные блохи, рыжие домовые муравьи, мухи).

Разработанные технические условия (приложение 3) и регламенты (приложение 4) переданы в Экспериментально-производственную лабораторию Московского городского центра дезинфекции. Микрокапсулированные в липосомы инсектицидные средства зарегистрированы в Государственном реестре дезинфекционных средств (приложение 5) и внедрены в производство (приложение 6). При практическом применении эти средства получили положительные отзывы (приложение 7).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шестаков, Константин Алексеевич, Москва

1.А. Пищевые токсические приманки как способ регуляции численности синантропных тараканов // РЭТ-инфо. - 1996. -№ 3.- С. 12-16.

2. Алешо Н.А., Костина М.Н. Пищевая токсическая приманка для синантропных тараканов // Пат. РФ № 2077199 от 24.04.1997 г.

3. Афанасьева А.И., Груздев Г.С., Дмитриев Л.Б. Практикум по химической защите растений. М.: Колос, 1992. - 271 с.

4. Бабахин А.А., Музя Г.И., Шестаков К.А. Иммуногенность аллергена, включенного в липосомы // Современные направления развития биотехнологии. Тезисы докладов. М., 1991. - С. 7.

5. Бажутин Н.Б., Золин В.В., Колокольцов А.А., Таргонский С.Н. Липосомы на фармацевтическом рынке // Terra Medica. 2003. - №3. -С. 37-39.

6. Баканова Е.И. Современные препаративные формы инсекто-акарицидов и некоторые аспекты их использования // Дезинфекционное дело. -2004. № 4. - С. 60.

7. Баканова Е.И, Баканова Н.Ю. Прогнозирование изменений в способах применения пестицидов // РЭТ-инфо. 2000. - № 2. - С. 9-10.

8. Барышников А.Ю., Оборотов Н.А. Иммунолипосомы новое средство доставки лекарственных препаратов // Современная онкология. -2001. - т. 3. -№ 2. - С. 56-57.

9. Безобразов Ю.Н., Молчанов А.В., Гар К.А. Гексахлоран. М.: ГОСХИМИЗДАТ, 1958. - 315 с.

10. Белан С.Р., Грапов А.Ф., Мельникова Г.М. Новые пестициды. Справочник. М.: Изд. Дом «Грааль», 2002. - 196 с.

11. Браун А. Распространение устойчивости к инсектицидам среди вредных насекомых // Успехи в области борьбы с вредителями растений.-М.: ИЛ, 1960. С. 587-654.

12. Булатов М.И., Калинкин И.П. Практическое руководство по фотометрическим методам анализа. Ленинград.: «Химия», 1986. - с. 256.

13. Вашков В.И., Волков Ю.П., Волкова А.П. и др. Новые направления в изыскании химических средств для борьбы с членистоногими, имеющими медицинское значение // Материалы Всесоюзнойконференции по вопросам дезинфекции и стерилизации. М., 1969. - С. 93-96.

14. Вашков В.И., Кузнецова Р.А. Эффективность севина в борьбе с вредными членистоногими, имеющими медицинское значение // Материалы Всесоюзной конференции по вопросам дезинфекции и стерилизации. М., 1969. - С. 102-103.

15. Вашков В.И., Сидорова М.В. Некоторые данные в отношении инсектицидных свойств дикрезила // Материалы Всесоюзной конференции по вопросам дезинфекции и стерилизации. М., 1969. - С. 103-104.

16. Вашков В.И., Шнайдер Е.В. Хлорофос. М.: Медгиз, 1962. - 182 с.

17. Гранкина А.В. Опыт применения вофатокса в борьбе с клопами, тараканами, мухами и блохами в г. Куйбышеве // Тезисы докладов научной конференции ЦНИДИ. М. - 1963. - С. 143-144.

18. Грязнов А.И. Инсектициды, применяемые в медицинской дезинсекции, и молекулярно-клеточный механизм их действия // РЭТ-инфо.- 1998.- № 4.- С. 29-34.

19. Дремова В.П. Городская энтомология. Екатеринбург.: ИздатНаукаСервис, 2005. - С. 243.

20. Дремова В.П., Алешо Н.А. Синантропные тараканы. Биология, экология, контроль численности. М.: ЗАО «НКФ «РЭТ», 2003.- 272 с.

21. Дремова В.П., Ганушкина JI.A. Интегрированная система медицинской дезинсекции в условиях урбанизации // РЭТ-инфо.- 2003.-№ 1.- С. 18-21.

22. Дремова В.П., Ганушкина JI.A, Семенов В.Б. и др. Результаты изучения инсектицидной активности смачивающихся порошков, разработанных ЗАО «НКФ «РЭТ» // РЭТ-инфо. 2004. - № 3. - С. 54-57.

23. Дремова В.П., Путинцева JI.C., Котова Н.А., Терехова З.А. Инсектицидная активность и уровень токсичности препаратов Талкорд и Фендона // Вопросы дезинфекции и стерилизации. Сборник научных трудов МНИИВС им. И.И. Мечникова. М., 1986. - С. 77-81.

24. Дремова В.П., Путинцева JI.C., Ходаков П.Е. Медицинская дезинсекция. Екатеринбург.: Витар-Путиведъ, 1999. - 200 с.

25. Дриняев В.А., Кругляк Е.Б. и др. Аверсектин С: физико-химические и биологические свойства // Прикладная биохимия и микробиология. 1999. - т. 35. - № 2. - С. 199-205.

26. Еремина О.Ю, Серегин В.В., Усанкина И.А. Микрокапсулированные препараты перспективная форма инсектицидных средств // Дезинфекционное дело. - 2004. - № 2. - С. 5055.

27. Жизнь животных / Под ред. Зенкевича JI.A. М.: Просвещение, 1969. - Т. 3.-С. 203.

28. Жминько П.Г. Нарушение функции системы иммунитета под воздействием пестицидов и некоторые задачи иммунотоксикологии на современном этапе // Современные проблемы токсикологии. 1998.2.-С. 58-65.

29. Заявка на изобретение ФРГ 3225943. Кл. Ф 01 N 25/26. - 1984 г.

30. Заявка на изобретение ФРГ 3226147. Кл. Ф 01 N 25/26. - 1984 г.

31. Изобретения в СССР и за рубежом. 1984. - Вып. 1. - № 14. - С. 45.

32. Каплун А.П., Жигальцев И.В., Швец В.И. Конструирование лекарств для лечения болезни Паркинсона // Природа. 2000. - № 6. - С. 16-19.

33. Кирюханцева В.Н. Применение борной кислоты для борьбы с тараканами // Актуальные вопросы совершенствованиядезинфекционных и стерилизационных мероприятий. Материалы Всесоюзной конференции. 1990 г. - Ч. 3. - С. 159-162.

34. Кирюханцева В.Н., Бессонова И.В. Сравнение методов и критерии оценки результатов при определении чувствительности рыжих тараканов к перметрину // Вопросы дезинфекции и стерилизации. Сборник научных трудов МНИИВС им. И.И. Мечникова. М., 1986. - С. 86.

35. Кирюханцева ВН., Лопатина Ю.В. Влияние гидропрена на метаморфоз крысиной блохи и рыжего таракана // Актуальные вопросы совершенствования дезинфекционных и стерилизационных мероприятий. Материалы Всесоюзной конференции. М., 1990. - ч. 3. -С. 149-154.

36. Костина М.Н. «Ультра-гель» инсектицидное средство для профессионального контингента и населения // Дезинфекционное дело. -2001.-№ 2.-С. 36-38.

37. Костина М.Н. Некоторые аспекты современных направлений медицинской дезинсекции; методы, средства // Дезинфекционное дело. -1997.-№1.-С. 26-34.

38. Костина М.Н. Пищевая инсектицидная приманка -многокомпонентная система кишечного или кишечно-контактного действия // Дезинфекционное дело. 2002. - № 2. - С. 54-60.

39. Костина М.Н., Мальцева М.М., Новикова Э.А., Лопатина Ю.В. Перспективы создания препаративных форм для профессиональных обработок на основе новых зарегистрированных субстанций // Дезинфекционное дело. 2005. - № 3. - С. 45.

40. Костина М.Н., Мальцева М.М., Новикова Э.А., и др. Новое инсектицидное средство на основе бинарной смеси ингибитора синтеза хитина с пиретроидом // Дезинфекционное дело. 2001. - № 4. - С. 44-46.

41. Крейнгольд С.У. Источники информации о дезинфекционных средствах // Дезинфекционное дело. 2003. - № 3. - С. 27.

42. Крейнгольд С.У. Практическое руководство по химическому анализу дезинфекционных препаратов. М.: Экспресспринт, 2002. - С. 9.

43. Крейнгольд С.У., Шестаков К.А. Оптические характеристики некоторых инсектицидов и методы их определения в дезинфекционных средствах // Дезинфекционное дело. 1998. - № 1. - С. 58-61.

44. Крейнгольд С.У., Шестаков К.А. Фотометрические и титриметрические методы анализа концентратов некоторых ратицидов и инсектицидов после разделения тонкослойной хроматографией // Дезинфекционное дело. 1999. - № 4. - С. 22-24.

45. Крейнгольд С.У., Шестаков К.А. Определение 0,02-0,1% фипронила в инсектицидных гелях методами газовой, тонкослойной хроматографии и спекторофотометрии // Дезинфекционное дело. 2002.- № 3. С. 47-48.

46. Леви М.И., Богданова Е.Н., Шестаков К.А. Эффективность «Микроприма» (микрокапсулированный перметрин) по отношению к насекомым, имеющим медицинское значение // Дезинфекционное дело.- 1993.-№2-3.-С. 52-54.

47. Леви М.И., Горохова Т.С., Беклемешева Л.Н. Упрощенный метод определения чувствительности рыжих тараканов диких популяций к различным инсектицидам. Дезинфекционное дело. - 1992. - № 1. - С. 26-32.

48. Леви М.И., Сизова Г.И., Шестаков К.А., Андреева Л.И., Ратина М.А. Средство для борьбы с серыми крысами «Микрорат» // Рэт-инфо. -1993.-№5.-С. 10-12.

49. Леви М.И., Сизова Г.И., Шестаков К.А., Андреева Л.И. Способ борьбы с серыми крысами препаратом «Микрорат» // Пат. РФ № 2013955.- 1994.-Приоритетот20.11.1991 г.

50. Легин Г.Я. О рецептурах инсектицидных средств контактного и кишечного действия // Дезинфекционное дело. 2000. - № 4. - С. 46-49.

51. Липосомы в биологических системах / Под ред. Г. Грегориадиса, А. Аллисона. М.: Медицина, 1983. - 384 с.

52. Марголис Л.Б., Бергельсон Л.Д. Липосомы и их взаимодействие с клетками. М.: Наука, 1986. - 240 с.

53. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Харьков,: «Торсинг», 1997. - Т. 2. - 592 с.

54. Мельников Н.Н., Новожилов К.В., Белан С.Р. Пестициды и регуляторы роста растений. Справочник.- М.: Химия, 1995. 575 с.

55. Методы определения эффективности инсектицидов, акарицидов, регуляторов развития и репеллентов, используемых в медицинской дезинсекции. МУ 3.5.2.1759-03. М., 2003. - Ч. 3.5.2. - С. 41,47.

56. Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. Справочник. В 2 томах. М.: Колос, 1992.-Т. 1,2.-583 с.

57. Набоков В. А. Контактные инсектициды, их свойства и применение в медицинской дезинсекцию- М.: Медгиз, 1958.- 258 с.

58. Набоков В.А. Современные методы и способы борьбы с гнусом // ЖМЭИ. 1955. -№ 4. - стр. 81-86.

59. Никитин П.И., Химкова В.К., Лазовская И.А. Новые растворители, не обладающие неприятным запахом, для инсектицидов // Тезисы докладов научной конференции ЦНИДИ. М., 1963. - С. 156-157.

60. Нормативные показатели безопасности и эффективности дезинфекционных, дезинсекционных и дератизационных средств, подлежащих контролю при проведении обязательной сертификации № 01-12/75 от 05.02.96 г. М. - 1998. - ч. 3. - С. 22.

61. Нудельман З.Н. Синтетические инсектициды // Природа. 1955. -№ 7. - с. 83-86.

62. Одинец А.А. Действие карбофоса на постельных клопов и рыжих тараканов // Проблемы дезинфекции и стерилизации. Труды ВНИИДиС, 1971. - выпуск 21. - Т. 2. - С. 94-101.

63. Окуневский Н.П. Практическое руководство по дезинсекции. М., 1936.-С. 361-362.

64. Пат. Англия N 2187957. Кл. А 01 N 25/28. - 1987 г.

65. Пат. Англия N 2214080 Кл. А 01 N 25/28. - 1989 г.

66. Попов Н.А. Бородько П.Ф., Пономаренко В.Ф. К вопросу применения ДДВФ с эмульгаторами в медицинской дезинсекции // Материалы Всесоюзной конференции по вопросам дезинфекции и стерилизации. М., 1969. - С. 104-105.

67. Попов П.В. Справочник по ядохимикатам. М.: ГНТИХЛ, 1956.-С. 174-181.

68. Расницын С.П. Использование ловушек и отравленных приманок в борьбе с синантропными тараканами // Дезинфекционное дело. 2001. -№4.-С. 39-43.

69. Расницын С.П. Концепция медицинской энтомологии: определение влияния членистоногих на здоровье людей // Известия АН России. Сер. Биологическая. 1996. - № 4. - С. 437-445.

70. Расницын С.П. Концепция медицинской энтомологии: Управление влиянием членистоногих на здоровье людей // Известия АН России. Сер. биологическая. 1997. - № 2. - С. 196-203.

71. Расницын С.П. Методы борьбы с членистоногими, вредящими здоровью людей. М., 2004. - С. 60.

72. Рославцева С.А. Микрокапсулированные инсектициды для борьбы с вредными насекомыми // Рэт-инфо. 1993. - № 6. - С. 2-5.

73. Рославцева С.А. Современные инсектицидные средства в виде приманок для уничтожения комнатных мух // Дезинфекционное дело. -2002.-№4.-С. 56-58.

74. Рославцева С.А., Баканова Е.И. Некоторые вопросы совершенствования дезинсекционных средств и повышения эффективности дезинсекционных мероприятий // Дезинфекционное дело.-2001,-№4.-С. 34-38.

75. Рославцева С.А., Баканова Е.И., Еремина О.Ю. и др. Микрокапсулированное средство «Эмпайр 20» высоко эффективный представитель современных инсектицидов // РЭТ-инфо. - 1999. - № 1. -С. 31-34.

76. Рославцева С.А., Еремина О.Ю., Баканова Е.И. и др. Чувствительность лабораторной расы рыжих тараканов Blattella germanica L. к инсектицидам // Дезинфекционное дело. 2005. - № 3. - С. 58-62.

77. Рынок родентицидов в России. Книга 1. Сборник информационных, нормативных и методических материалов. М.: Проект, 2003. - 328 с.

78. Терехова З.А. Микрокапсулированный препарат «Кьюдоз» новая форма применения перметрина // Актуальные вопросы совершенствования дезинфекционных и стерилизационных мероприятий. Материалы Всесоюзной конференции. М., 1990. - Ч. 3. -С.154-158.

79. Тютюнников Б.Н. Химия жиров. М.: Пищевая промышленность, 1974.-С. 373.

80. Уничтожение насекомых: тараканов, клопов, муравьев, блох, ос, мух. Режим доступа: www.http://gett.m/work.html. Послед, корректировка : 26/05/07.

81. Уолф Д., Лесивич Д. и др. Паг. РФ № 2110175. - 1998 г.

82. Фрир Д. Химия инсектицидов и фунгицидов. М., И.Л., 1948. - 258 с.

83. Фукуто Т. Химия органических инсектицидов / В кн.: Новые пестициды.- М.: Мир, 1964. С. 175.

84. Ханеня Ф.С., Журавлев С.В., Сернистые органические соединения как инсектициды // Сборник работ НИЛЭХТ. 1948. - В. 1.

85. Химическая энциклопедия / Под ред. Кнунянц И.Л. М.: Советская энциклопедия, 1990. - Т. 2. - Ст. «Инсектициды». - С. 239.

86. Шестаков К.А., Леви М.И., Крейнгольд С. У., Расницын С.П., Авруцкий М.М. Инсектицидная гелеобразная композиция // Пат. РФ № 2245036. 2004. - Приоритет от 02.11.2001 г.

87. Шестаков К.А., Леви М.И., Крейнгольд С.У., Сизова Г.И., Богданова Е.Н. Способ получения микрокапсулированных препаратов, содержащих пиретроидные инсектициды // Пат. РФ № 2134967. 1999. -Приоритет от 30.05.1997 г.

88. Шестаков К.А., Леви М.И., Крейнгольд С.У., Сизова Г.И. Способ получения микрокапсулированных инсектицидных препаратов // Пат. РФ № 2165700. 2001. - Приоритет от 26.01.1999 г.

89. Шестаков К.А., Расницын С.П. Эффективность композиции циперметрина и хлорпирифоса, микрокапсулированных в липосомы, против рыжих тараканов // Дезинфекционное дело. 2005. - № 4. - С. 5152.

90. Шура-Бура Б.Л., Глазунова А.Я. Применение хлорофоса в виде отравленных приманок против тараканов // Тезисы докладов научной конференции ЦНИДИ. М., 1963. - С. 129-130.

91. Ahn Y-J., Lee S-B„ Lee H-S., Kim G-H. Insecticidal and acaricidal activity of carvacrol and -hujaplicine derived from Thujopsis dolabrata var. hondai sawdust//J. Chem. Ecology. 1998. - V. 24. - № 1. - P. 81-90.

92. Anspaugh D. D,, Rose R. L., Koehler P. G. et al. Multiple mechanisms of pyrethroid resistance in the German cockroach, Blattella germanica (L.) // Pesticide Biochemistry and Physiology. 1994. - V. 50. - № 2. - P. 138-148.

93. Apel A.G., Tanley M.J. Laboratory and field performance of a imidacloprid gel bait against German cockroaches // J. Econ Entomology. -2000. V. 93. - № 1. - P. 112-118.

94. Apel A. G. Contamination affects the performance of insecticidal Baits against German cockroaches (Dictyoptera: Blattellidae) // J. Econ. Entomology. 2004. - V. 97. - № 6. - P. 2035-2042.

95. Assil К. K., Weinreb R. N. Multivesicular liposomes. Sustained release of the antimetabolite cytarabine in the eye // Arch. Ophthalmol. 1987. - V. 105.-No 3.-P. 400-403.

96. Berman J.D. Antileishmanial activity of liposome-encapsulated amphotericin В in hamsters and monkeys // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 1986. - V. 30. - № 6. - P. 847-851.

97. Bessette S.M., Beigler M.A. Non-hazardous pest control // Pat. US № 6183767. Приоритет от 06.02.2001.

98. Bilbic I., Giura I.B. et al. The larvicide effect on Culicidae of microencapsulated malation // Arch. Roum. Pathrol. Exp. Et microbiol. -1984.-V. 43.-№2.-P. 185-191.

99. Blok M. C., van Deenen L. L. M., Gier J. de. Effect of the gel to liquid crystalline phase transition on the osmotic behaviour of phosphatidycholine liposomes // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) Biomembranes. - 1976. - V.433.-№l.-P. 1-12.

100. Bonamonte D., Foti C., Cassano N. et al. Contact dermatitis from organophosphorus pesticides // Contact Dermatitis. 2001. - V. 44. - № 3. -P. 179-180.

101. Borchani L., Stankiewicz M., Kopeyan C. et al. Purification, structure and activity of three insect toxins from buthus occitanus tunetanus venom // Toxicon.- 1997. V. 35. - № 3. - P. 365-382.

102. Cestele S., Kopeyan C., Oughideni R. et al. Biochemical and pharmacological characterization of a depressant insect toxin from the venom of the scorpion Buthacus arenicola // Europ. J. of Biochemistry.- 1997.- V. 243. -№ 1-2.-P. 93-99.

103. Chang K-S., Ahn Y-J. Fumigant activity of (E)-anethole identified in Illicium verum fruit against Blattella germanica // Pest Management Science. 2002. - V. 58. - № 2. - P. 161-166.

104. Connor J., Huang L. pH-sensitive immunoliposomes as an efficient and target-specific carrier for antitumor drugs // Cancer Res. 1986. - V. 46. - № 7.-p. 3431-3435.

105. Cordarelli N. Controlled release pesticides formulations // CRP Press inc. -Cleveland, Ohio. 1976. - P. 132.

106. Daoud S. S., Juliano R. L. Reduced toxicity and enhanced antitumor effects in mice of the ionophoric drug valinomycin when incorporated in liposomes // Cancer Res. 1986. - V. 46. -№ 11. - P. 5518-5523.

107. Das K.G., Sukumar K., Tungiker V.B., Sharma R.N. Controlled release pesticides // Int. J. Pest. Cont. 1983. - V. 25. - № 6. - P. 475.

108. Durier V., Rivault C. Comparisons of toxic baits for controlling the cockroach, Blattella germanica: attractiveness and feeding stimulation // Medical & veterinary Entomology. 2000. - V. 14. - № 4. - P. 410-418.

109. Durier V., Rivault C. Improvement of German cockroach (Dictyoptera: Blattellidae) population control by fragmented distribution of gel baits // J. Econ Entomology. 2003. - V. 96. - № 4. - P. 1254-1258.

110. Durier V., Rivault C. Secondary transmission of toxic baits in German cockroach (Dictyoptera: Blattellidae) // J. Econ Entomology. 2000. - V. 93. -№ 2. - P. 434-440.

111. Ebeling W., Reiersson D.A., Wagner R.E Influence of repellency on the efficacy of blatticides. II. Laboratory experiments with German cockroaches // J. Econ Entomology. 1967. - V. 20. - P. 1375-1390.

112. Enan E. Insecticidal activity of essential oils: octopaminergic sites of action // Comparative Biochemistry and Physiology. 2001. - Part С. - V. 130. - № 3. - P. 325-337.

113. Escoubas P., Romi-Lebrun R., Wu F.Q. tn al. Two novel short insectotoxins from the Asian scorpions Buthus martensi and Buthus tamulus // Toxicon. 1997.- V. 35.- № 4. - P. 490-490.

114. Forssen E. A., Tokes Z. A. Improved therapeutic benefits of doxorubicin by entrapment in anionic liposomes // Cancer Res. 1983. - V. 43. -№2-P. 546-550.

115. Gore i.C., Schal C. Laboratory Evaluation of Boric Acid-Sugar Solutions as Baits for Management of German Cockroach Infestations // J. Econ Entomology. 2004. - V. 97. - № 2. - P. 581-587.

116. Hassani O., Loew D., van Dorsselaer A. et al. A novel, N-glycosylated anti-insect toxin from Androctonus australis hector scorpion venom: isolation, characterisation, and glycan structure determination // FEBS Letters. 1999. -V. 443.-№2.-P. 175-180.

117. Hoesel Q. G. van Reduced cardiotoxicity and nephrotoxicity with preservation of antitumor activity of doxorubicin entrapped in stable liposomes in the LOU/M Wsl rat // Cancer Res. 1984. - V. 44. - № 9. - P. 3698-3705.

118. Holbrook G.L., Roebuck J., Moore C.B. et al. Origin and extent of resistance to fipronil in the German cockroach, Blattella germanica (L.) (Dictyoptera: Blattellidae) // J. Econ Entomology. 2003. - V. 96. - № 5. - P. 1548-1558.

119. Isman M.B., Jeffs L.B., Elliger C.A. et al. Natural insecticides from Petunia parodii, are antagonists of GAB A receptors // Pesticide Biochemistry and Physiology. 1997. - V. 58. - № 2.- P. 103-107.

120. Jonah M. M., Cerny E. A., Rahman Y. E. Tissue distribution of EDTA encapsulated within liposomes of varying surface properties // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) Biomembranes. - 1975. - V. 401. - № 3. - P. 336348.

121. Juliano R.L., Grant C.W., Barber K.R., Kalp M. A. Mechanism of the selective toxicity of amphotericin В incorporated into liposomes // Molecular Pharmacol. 1987. - V. 31. - № I. - P. MI.

122. Kaakeh W., Reid B.L., Bennett G.W. Toxicity of fipronil to German and American cockroaches // Entomologia Experimental et Aplicata. V. 84. -№3.- 1997.-P. 229-237.

123. Kristensen M., Hansen К. K., Jensen K. Cross-resistance between dieldrin and fipronil in German cockroach (Dictyoptera: Blattellidae) // J. Econ Entomology. 2005. - V. 98. - № 4. - P. 1305-1310.

124. Lee S., Peterson C. J., Coats J. R. Fumigation toxicity of monoterpenoids to several stored product insects // J. Stored Products Research. 2003. - V. 39. - P. 77-85.

125. Mayhew E., Papahadjopoulos D., Rustum Y. M., Dave C. Use of liposomes for the enhancement of the cytotoxic effects of cytosine arabinoside //Ann. NY Acad. Sci. 1978. - V. 308. - P. 371-386.

126. Michael M., Vijeyalakshmi G. Liposomes a selective drug delivery system for the topical route of administration I. Lotion dosage form // Life Sciences. - 1980. - V. 26. -№ 18. - P. 1473-1477.

127. Miller D. Pest control editorial // Pest control. 1970. - V. 38. - № 9. -P. 6.

128. Miller D.M., Koehler P.G. Novel extraction of german cockroach (Dictyoptera: Blattellidae) fecal pellets enhances efficacy of spray formulation insecticides // J. Econ Entomology. 2000. - V. 93. - № 1. - P. 107-111.

129. Murphy D., Peet C. // J. Econ Entomology. 1932. - № 25. - P. 123.

130. Nayar R., Schroit A. J., Fidler I.J. Liposome encapsulation of muramyl peptides for activation of macrophage cytotoxic properties // Methods in Enzymology. 1986. - V. 132. - P. 594-603.

131. Negus T.F., Ross M.H. The response of German cockroaches to toxic baits: strain differences and the effects of selection pressure // Entomologia Experimentalis et Aplicata. V. 82. - № 3. - 1997. - P. 247-253.

132. Octigen W., Hueper U., Deichmann-Gruebler W. The farmacological action and pathological effect of alkoxyrhodanates in relation to their chemical constitution and physical-chemical properties // J. Ind. Hyg. Toxicol. 1936.-№ 18. -C. 5-7.no

133. Ohtsubo Т., Tsuda S. Formulation factors of the fenitrothions microcapsule influencing the resudial efficacy against the German cockroach //J. Pestic. Science. 1987. - V. 12. -Jfel.-P. 43-47.

134. Olson F., Mayhew E., Maslow D. et al. Characterization, toxicity and therapeutic efficacy of adriamycin encapsulated in liposomes II Europ. J. Cancer and Clinical Oncology. 1982. - V. 18. - № 2. - P. 167-169.

135. Phillips N.C., Chedid L. Anti-infectious activity of liposomal muramyl dipeptides in immunodeficient CBA/N mice // Infect Immun. 1987. - V. 55. -№ 6. - P. 1426-1430.

136. Pridgeon J.W., Zhang L., Liu N. Overexpression of CYP4G19 associated with a pyrethroid-resistant strain of the German cockroach, Blattella germanica (L.) // Gene. 2003. - V. 314. - № 18. - P. 157-163.

137. Ramirez M.A. Pyrethrum: an aetiologic factor in vasomotor rhinitis and asthma. //J. Allergy. 1930. - № 1. - P. 149-155.

138. Ruijgrok E.J. Nebulized amphotericin В combined with intravenous amphotericin В in rats with severe invasive pulmonary aspergillosis // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2006. - V. 50. - № 5. - P. 18521854.

139. Rutman R.J., Ritter CA, Avadhani NG, Hansel J. Liposomal potentiation of the antitumor activity of alkylating drugs // Cancer Treat Rep. 1976.-V. 60.-№5.-P. 617-618.

140. Sasaki H. Characterization of alkylcarbamoyl derivatives of 5-fluorouracil and their application to liposome // Int. J. Pharmaceutics. 1987. -V.36.- №2-3.- P. 147-156.

141. Scharf M.E., Lee C-Y., Neal J.J., Bennett G.W. Cytochrome P-450 MA expression in insecticide-resistant German cockroaches (Dictyoptera: Blattellidae) // J. Econ Entomology. 1999. - V. 92. - № 4. - P. 788-793.

142. Scott J.G., Matsumura F. Characteristics of a DDT-induced case of cross-resistance to permethrin in Blattella germanica // Pest. Biochemistry and Physiology. -1981. V. 16. -№ J. p. 21-27.

143. Scott J.G., Matsumura F. Evidence for two types of toxic actions of pyrethroids on susceptible and DDT-resistant german cockroaches // Pest. Biochemistry and Physiology. 1983. - V. 19. - № 2. - P. 141-150.

144. Siegfried B.D., Scott J.G. Properties and inhibition of acetylcholinesterase in resistant and susceptible German cockroaches (Blattella germanica L.) // Pest. Biochemistry and Physiology. 1990. - V. 38. - № 2. - P. 122-129.

145. Siegfried B.D., Scott J.G., Roush R.T., Zeichner B.C. Biochemistry and genetics of chlorpyrifos resistance in the German cockroach, Blattellagermanica (L) I I Pest. Biochemistry and Physiology. 1990. - V. 38. - № 2. -P. 110-121.

146. Silverman J., Liang D. Effect of fipronil on bait formulation-based aversion in the German cockroach (Dictyoptera: Blattellidae) // J. Econ Entomology. 1999. - V. 92. - N 4. - P. 886-889.

147. Skuta G.L., Assil K., Parrish R.K. 2nd et al. Filtering surgery in owl monkeys treated with the antimetabolite 5-fluorouridine 5'-monophosphate entrapped in multivesicular liposomes //Am. J. Ophthalmol. 1987. - V. 103. -№5.-P. 714-716.

148. Sone S., Fidler I. J. In vitro activation of tumoricidal properties in rat alveolar macrophages by synthetic muramyl dipeptide encapsulated in liposomes // Cellular Immunology. 1981. - V. 57. - № 1. - P. 42-50.

149. Staudinger H., Ruzichka L., Insektentotenden Stoffe. X. Uber die Synthese von Pyrethrinen // Helv. Chim. Acta. 1924. - № 7.- S. 448-458.

150. Storm G. Influence of lipid composition on the antitumor activity exerted by doxorubicin-containing liposomes in a rat solid tumor model // Cancer Res. 1987. - V. 47. - № 13. - P. 3366-3372.

151. Sultana I., Ikeda I., Ozoe Y. Structure-activity relationships of benzylidene anabaseines in nicotinic acetylcholine receptors of cockroach nerve cords // Bioorganic and Medicinal Chemistry. V. 10. - № 9. - 2002. -P. 2963-2971.

152. Szumlas D.E. Behavioral responses and mortality in German cockroaches (Blattodea: Blattellidae) after exposure to dishwashing liquid // J. Econ Entomology. V. 95. - № 2. - 2002. - P. 390-398.

153. Tadakuma T. Treatment of experimental salmonellosis in mice with streptomycin entrapped in liposomes // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 1985. - V. 28. - № 1. - P. 28-32.

154. Tan J., Liu Z., Tsai T.-D., et al. Novel sodium channel gene mutations in Blattella germanica reduce the sensitivity of expressed channels to deltamethrin // Insect Biochemistry and Molecular Biology. 2002. - V. 32. -№4.-P. 445-454.

155. Valles S.M., Dong K., Brenner R.J. Mechanisms responsible for cypermethrin resistance in a strain of German cockroach, Blattella germanica // Pest. Biochemistry and Physiology. 2000. - V. 66. - № 3. - P. 195-205.

156. Valles S.M., Strong C.A. A microsomal esterase involved in cypermethrin resistance in the German cockroach, Blattella germanica // Pest. Biochemistry and Physiology. 2001. - V. 71. - № 1. - P. 56-67.

157. Vandenplas O., Delwiche J.P., Auverdin J. et al. Asthma to tetramethrin //Allergy. V. 55. - № 4. - P. 417-418.

158. Wagner S.L. Fatal asthma in a child after use of an animal shampoo containing containing pyrethrin // West. J. Med. 2001. - V. 174. - № 3. - P. 169-172.

159. Wang C., Scharf M. E., Bennett G. W. Behavioral and physiological resistance of the German cockroach to gel baits (Blattodea: Blattellidae) II J. Econ Entomology. 2004. - V. 97. - N 6. - P. 2067-2072.

160. Wax P.M., Hoffman R.S. Fatality associated with inhalation of a pyrethrin shampoo // Clin. Toxicol. 1994. - V. 32. - № 3. - P. 457-460.

161. Wei Y., Appel A.G., Moar W.J., Liu N. Pyrethroid resistance and cross-resistance in the German cockroach, Blattella germanica (L) // Pest Management Science. 2001. - V. 57. - № 11. - P. 1055-1059.

162. Wohlrab W., Lasch J. Penetration kinetics of liposomal hydrocortisone in human skin // Dermatologica. 1987. - V. 174. - № 1. - P.18-22.

163. Wu D., Scharf M.E., Neal J.J. et al. Mechanisms of fenvalerate resistance in the German cockroach, Blattella germanica(L.) // Pest. Biochemistry and Physiology. 1998. - V. 61. - № 1. - P. 53-62.

164. Zurek L., Gore J.C., Stringham S.M. et al. Boric acid dust as a component of an integrated cockroach management program in confined swine production // J. Econ Entomology. V. 96, - № 4. - 2003. - P. 13621366.

165. Классификация инсектицидов.