Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологическая эффективность применения минеральных препаратов (на примере вокса) при воспроизводстве осетровых видов рыб

ВАК РФ 03.00.10, Ихтиология

Автореферат диссертации по теме "Биологическая эффективность применения минеральных препаратов (на примере вокса) при воспроизводстве осетровых видов рыб"

На правах рукописи УДК 639.371.2:6393.043.13

САЗОНОВА

Людмила Викторовна

"БИОЛОГИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ МИНЕРАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ ( НА ПРИМЕРЕ ВОКСА) ПРИ ВОСПРОИЗВОДСТВЕ ОСЕТРОВЫХ

ВИДОВ РЫБ"

Специальности: 03.00.10-Ихтиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2006

Работа выполнена в ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного

хозяйства и океанографии» (ВНИРО)

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Мнкоднна Екатерина Викторовна Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии, г. Москва

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Городилов Юрий Николаевич

Биологический научно-исследовательский институт

Санкт- Петербургского Государственного Университета

кандидат биологических наук Смирнов Борис Павлович Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии, г. Москва

Ведущая организация: Ростовский Государственный университет технологий и управления.

Защита состоится 20 октября 2006 г. в 11 часов на заседании диссертационного совета Д 307.004.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте рыбного хозяйства и океанографии (ВНИРО) по адресу: 107140, Москва, ул. Верхняя Красносельская, д.17. Факс (095) 264-91-87, электронная почта sedova@vniro.ru.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИРО

Автореферат разослан «_»_2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук М.А.Седова

jtс&бА

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Зарегулирование стока нерестовых рек Волги, Дона и Кубани, наряду с ухудшением экологического состояния водоемов, привело к катастрофическому снижению уловов осетровых (за последние 25 лет в 60 раз). При этом резко снизились как численность производителей, так и их рыбоводное качество. Искусственное воспроизводство становится во многих случаях единственным источником как восстановления природных популяций осетровых, так и сохранения их видового разнообразия (Лукьяненко,

При воспроизводстве осетровых на рыбоводных заводах приходится сталкиваться с целым рядом негативных факторов, воздействие которых приводит к повышенному отходу икры и личинок, формированию ослабленной некондиционной молоди, с пониженной резистентностью и, соответственно, высокой уязвимостью по отношению к абиотическим и биогенным стрессам. Формирование защитных систем организма, обеспечивающих выживание рыб, происходит в течение ранних периодов онтогенеза, поэтому именно этим периодам развития должно быть уделено особое внимание (Лукьяненко, 1966, 1971; Ко-коза, 1983; Микодина, 1998). Одним из путей решения этой проблемы является использование биологически активных факторов, направленных на улучшение состояния организма рыб, а также качества среды обитания и кормов. К таковым относятся препараты, обогащенные микро- и макроэлементами, которые играют исключительно важную биологическую роль в организме животных и человека. Они успешно применяются в рыбоводстве для увеличения жизнестойкости эмбрионов, личинок и молоди (Ковальский, 1967; Морозов, Петухов, 1986; Воробьев 1990; Лобзакова, 2002 и др.).

Для эффективного выращивания молоди необходимо, помимо витаминных премиксов, добавлять в комбикорма и минеральные вещества, которые улучшают их продукционные свойства. В составе минеральных премиксов чаще всего используют добавки, содержащие химические элементы Са, Р, Fe, Zn, Си, Mn, Со, J, реже Мо и Mg (Цирюльская, Люкшина, 1981), которые принимают активное участие в обмене веществ организмов. Многие из микроэлементов могут адсорбироваться из воды эмбрионами через оболочки икринок, а также непосредственно через жабры и кожу (Аскеров, Кязимов, 1968; Воробьев, 1978, 1980; Орлов, 1982) Применяемые на заводах для стандартной профилактической и лечебной обработки вещества не вполне безопасны для рыб, в

2001).

частности, антибиотики являются иммунодепрессантами (Яндовская, 1966; Микодина, 1998; Болезни рыб, 2000; Скальный, 2004 и др.).

Среди микроэлементных препаратов особый интерес представляет полиминеральный препарат Вокс, который получают из природных минералов. Положительный эффект его действия связан с присутствием в препарате элементов - Бе, 2т\, Б, Си, Ре , и Мп. Многие из них характеризуются антиокси-дантными свойствами, а также участвуют в составе металлоферментов, обеспечивающих поддержание ряда клеточных функций, в том числе тех, которые повышают резистентность живого организма (Воробьев, 1979). Комплексное воздействие микро- и макроэлементов обеспечивает биологическую активность препарата Вокс.

В данной работе мы изучали действие полиминерального препарата Вокс, используя его в процессе воспроизводства рыб на предприятиях индустриального типа, предполагая, что он окажет положительное влияние на этот процесс.

Дель и задачи. Цель работы - повышение эффективности искусственного воспроизводства осетровых видов рыб.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести исследования препарата Вокс для оценки его безопасности.

2. Изучить свойства препарата Вокс в модельных экспериментах (в условиях аквариального выращивания).

3. Установить оптимальные концентрации препарата при использовании его в рыбоводном процессе.

4. Разработать способы применения препарата Вокс на различных этапах онтогенеза рыб (эмбрионы, предличинки, личинки, сеголетки, годовики).

5. Оценить рыбоводно-биологические и физиолого-биохимические результаты использования препарата.

6. Оценить экономическую эффективность использования препарата.

Научная новизна. Впервые получены рыбоводно-биологические и фи-

зиолого-биохимические результаты использования препарата Вокс на ранних этапах онтогенеза осетровых видов рыб. Это легло в основу рекомендаций о целесообразности его применения при искусственном воспроизводстве осетровых видов рыб.

Получены три патента на изобретение в Патентном ведомстве РФ (ФИПС).

Практическое значение работы. По материалам диссертационной работы разработана «Методика применения в рыбоводстве полиминерального препарата Вокс». Часть 1. Осетроводство, которая может использоваться для повышения эффективности воспроизводства осетровых рыб. Данный результат достигается за счет повышения выживаемости эмбрионов, личинок и сеголеток, улучшения их рыбоводно-биологических и физиолого-биохимических характеристик и снижения материальных и трудовых затрат на рыбоводных заводах. Увеличение выпуска физиологически полноценных сеголеток способствует восстановлению запасов и увеличению промвозврата осетровых видов рыб.

Разработаны и утверждены нормативные документы, необходимые для производства и применения препарата Вокс для рыбоводных целей:

- Разрешение на использование препарата от Департамента ветеринарии Минсельхоза России;

- Наставление на применение препарата Вокс для рыбоводных целей;

- ТУ-9296-001-45934125-03 «Добавка Вокс»;

-Сертификат соответствия. Кормовая минеральная добавка Вокс, РОСС RU.EDP15, 5915100;

- Аттестат аккредитации Испытательного центра «Препарат Вокс», №РОСС RU.0001/21ПН40.

Апробация работы. Основные материалы работы докладывались на на-учно-пракгических конференциях и форумах:

- Научно-практическая конференция «Проблемы и перспективы развития аква-культуры в России». 2001 г., Адлер.

- Научно-практическая конференция «Водные биоресурсы России: решение проблем их изучения и рационального использования». Москва, ВНИРО, 2003 г.

- Международный симпозиум «Холодноводная аквакультура: старт в XXI век», С.- Пб. 2003 г.

- "World Aguaculture 2003", Salvador, Brazil.

- Международная научно-практическая конференция «Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития», Астрахань, 2004 г.

Проведены производственные испытания на 7 осетровых заводах России. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 128 страницах и состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов и практических рекомендаций.

з

Список цитируемой литературы включает 202 работы, из которых 45 работ на иностранных языках. Работа иллюстрирована 15 рисунками и 17 таблицами.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В работе приведен анализ литературных данных отечественных и зарубежных авторов по характеристике осетровых видов рыб, а также современного состояния осетроводства. Отмечена необходимость дальнейшего усовершенствования биотехники заводского воспроизводства, нацеленного на сохранение максимально возможного количества икры и молоди.

Приведены данные по влиянию на организмы рыб, теплокровных животных и человека наиболее важных элементов и соединений, входящих в состав препарата Вокс. Анализ литературных данных показал недостаточный уровень исследований эффективности применения микроэлементов на ранних этапах онтогенеза осетровых видов рыб в условиях аквакультуры.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работы по испытанию препарата Вокс нами были проведены в течение 2000-2005 годов. Исследования проводили в аквариальных ВНИРО, ВНИИПР-Ха, КрасНИИРХа и АзНИИРХа, а также в условиях осетровых рыбоводных заводов (ОРЗ): Волгоградского (Нижневолжрыбвод), Донского (Азоврыбвод), Можайского ПЭРЗ (Мосрыбвод), Конаковского завода товарного осетроводства (Мосрыбвод), Кизанского (Севкаспрыбвод), PBX Краснодарской ТЭЦ и ЗАО «Казачка» (Ростовская обл.). В качестве объектов исследования были использованы эмбрионы, предличинки, личинки, сеголетки и годовики осетровых видов рыб: белуга (Huso huso Linnaeus, 1758.), русский осетр (Acipenser gueldenstaed-tii Brandt, 1833), севрюга (Acipenser stellatus Pallas, 1771), стерлядь (Acipenser ruthenus Linnaes, 1758) и межвидовой гибрид (Huso huso x Acipenser ruthenus) бестер (Bester Nikojukin, 1953). Выбор данных видов обусловлен не только их высокой пищевой ценностью, но и перспективностью, как объектов искусственного рыборазведения.

На первом этапе необходимо было оценить безопасность препарата. Для этого анализировался химический состав каждой партии Бокса на соответствие ГОСТам: 26664, 27082, 27207. Определение генотоксичности препарата проводили методами SOS-lux и анафазного теста (Rabbow Elke, 2002). Степень токсичности препарата оценивали с использованием биологического метода (по выживаемости инфузорий и снижению интенсивности размножения дафний).

Тератогенное влияние препарата определяли методом подсчета аномалий строения тела и обонятельного органа (Подушка, Левин, 1988; Краснодембская, 1989), Затем были проведены модельные испытания препарата Вокса на базе аквариальных ВНИРО и ВНИИПРХа, где была отработана предварительная схема применения препарата.

После получения разрешения Департамента ветеринарии Минсельхоза, согласованного с Главрыбводом, на проведение испытаний препарата в производственных условиях, исследования были продолжены на ряде осетровых рыбзаводов России.

Содержание экспериментальных партий рыб проводили в стандартных емкостях, придерживаясь нормативной плотности посадки. Опыты проводились в двух-кратной повторности. Препарат Вокс использовали в виде раствора для кратковременной обработки подопытного живого материала и в условиях длительного содержания, а также в виде добавок в корма.

При выборе сроков обработки икры учитывали литературные данные, а также опыт ихтаопатологической службы, касающийся чувствительности эмбрионов к внешним воздействиям на различных стадиях эмбриогенеза. В результате были выбраны 2 стадии: стадия 1 (оплодотворение) и стадия 16 (по: Детлаф, 1981), как наиболее благоприятные для обработки препаратом. Препарат Вокс использовали также в качестве добавки в сухой гранулированный корм в количестве от 10 и 20 мл/кг.

В процессе исследования в экспериментах было использовано 18 самок разных видов осетровых рыб и межвидового гибрида (Бестер), 1990 тыс. штук икринок, 594 тысячи личинок и сеголеток. Для исследований биохимических и гематологических показателей было взято 780 проб. Для снятия различных физиологических показателей было использовано 1320 рыб. При оценке влияния обработок препаратом Вокс анализировали следующие рыбоводно-биологические и физиолого-биохимические показатели: процент оплодотворения икры; степень поражения сапролегниевыми грибами; стадии развития икры и типичность развития по В.А.Мейену; эффективность выхода предличи-нок; выживаемость и скорость роста (Винберг, 1968); упитанность (по Фульто-ну); гематологические показатели (содержание гемоглобина, величина гематок-рита, интенсивность эритропоэза - по методике Т.И.Ивановой, 1974). Кроме того, анализировали данные химического состава тела, липиды (по методу Фолча) и функциональное состояние внутренних органов (Бауер, Мусселиус, 1977, 1981) . Скорость роста и увеличение массы рыб определяли используя

выборку из 30-50 рыб в каждом варианте опыта. Полученные данные подвергались обработке общепринятым методом вариационной статистики (Лакин, 1990, Плохинский, 1970). Статистические обработки полученных результатов проводили с помощью программы «Excel». Обозначение периодов и стадий развития принято по Т.А. Детлаф (1981), морфометрическая обработка - по И.Ф.Правдину (1966).

В качестве основного критерия определения степени жизнестойкости заводских сеголеток использовали физиологические тесты: метод полифункциональных нагрузок (Лукьяненко, 1966, 1971), реакцию пигментных клеток (ме-ланофоров) и наличие аномалий органа обоняния (Краснодембская, 1989; Подушка, Левин 1988,1999).

Приняты следующие обозначения возрастных групп: «предличинки» - с момента вылупления до начала перехода на смешанное питание; «личинки» - от начала перехода на смешанное питание до полного рассасывания желточного мешка и перехода на активное питание; «сеголетки» - молодь до конца первого года жизни; «годовики» - с января до начала вегетационного периода (апрель -май) второго года жизни.

2.1. Краткая характеристика препарата Бокс

Препарат Вокс получен в Японии путем переработки природного минерала. Он представляет собой жидкость желто-зеленого цвета, без запаха, рН 1,5-1,7, удельный вес 1,02 г/см3, сухой остаток - 20 г/л, нетоксичен, хорошо растворим в воде. В его состав входит до 40 микро- и макроэлементов, из них основных насчитывается до 20.

Концентрации большинства элементов, которые содержатся в рабочем растворе Вокса (I мл/л), существенно ниже ПДК, принятых для рыбохозяйст-венных водоемов. (Перечень рыбохозяйственных нормативов...., 1999). Кроме перечисленных в таблице 1 элементов, в препарате Вокс содержатся также в микроколичествах редкие элементы- Rb (рубидий), В (бор), Sn (олово), Nb (ниобий),Та (тантал), U (уран), Th (торий), Bi (висмут).

Таблица 1

Химический состав препарата Вокс

м Элемент Концентрация, мг/л

ПДК для рыбохо- зяЙственных водоемов в препарате в рабочем растворе

1 Zn 0,01 0,16 0,00016

2 Cr 0,02-0.07 0,99 0,00099

3 Pb 0,01 0,012 0,000012

4 Си 0,001 0,11 0,00021

5 Cd 0,01 0,001 0,000001

6 Fe 0,1 57,93 0,058

7 Mn 0,01 0,87 0,00087

8 Ag <0,05 0,0016 0,0000016

9 Co 0,01 0,03 0,00003

10 Ni 0,01 0,005 0,000005

11 Li 0,08 0,14 0,00014

12 Ca 180,0 37,18 0,037

13 Mg 40,0 434,0 0,434

14 P 0,15 1,96 0.002

15 Na 120,0 5320,0 5,320

16 Se 0,002 0,49 0,0005

17 V 0,001 1,33 0,0013

18 AI 0,04 48,57 0,049

19 К 50,0 62,38 0,062

20 Si 10,0 4,38 0,004

В настоящее время Вокс широко применяют в различных областях сельского хозяйства Японии, в том числе в рыбоводстве, как средство профилактики и лечения различных заболеваний. Установлено, что препарат проявляет бактерицидную активность в отношении бактерий 1руппы кишечной палочки, подавляет рост грибов рода Candida и некоторых возбудителей кожных заболеваний рыб. Запатентован в Японии как «Средство ускорения роста рыб, профилактики и лечения заболеваний» и «Препарат для очистки воды, предназначенной для обитания рыб».

В России первые исследования с использованием препарата были проведены в лабораториях Российского Научного Центра восстановительной медицины и курортологии, в Институте пивоваренной промышленности и НИИ ВОДГЕО. В этих учреждениях были подтверяадены данные японских исследователей о высокой активности препарата для живых организмов, что явилось одной из предпосылок для его испытания в рыбоводстве.

Результаты исследования безопасности препарата Вокс для рыб:

1. Химический анализ препарата Вокс проводился при получении каждой новой партии. Отмечены некоторые незначительные различия по содержанию отдельных элементов, что связано с происхождением (районом добычи) исходного сырья, которое использовали для получения препарата Вокс.

2.Токсикологические исследования препарата, проведенные на инфузориях и дафниях, показали отсутствие токсического эффекта при испытаниях препарата в концентрациях от 0,01 до 10 мл/л.

3. Генотоксичность. Воздействие препарата Вокс на севрюгу в раннем онтогенезе не вызывает генотоксического эффекта, что подтверждено SOS-lux тестированием и исследованием хромосомных аберраций.

4. Тератогенный эффект. Не выявлено различий в количестве аномалий строения тела и обонятельного органа между опытными и контрольными партиями молоди, что свидетельствует об отсутствии тератогенного эффекта.

Полученные данные указывают на отсутствие отрицательного влияния препарата Вокс и его безопасность для организма рыб.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТА ВОКС В МОДЕЛЬНЫХ ЭКСПЕРИМЕНТАХ

Основная задача модельных экспериментов состояла в отработке оптимальной дозировки препарата и оценке его эффективности для молоди стерляди в оптимальных и неблагоприятных условиях содержания. Работы проводили в аквариальной ВНИРО в установках с замкнутым циклом водоснабжения вместимостью 300 л. Температуру воды поддерживали на уровне 23-25°С, содержание кислорода в воде составляло 8-9,5 мл/л, рН 7,45. Для экспериментов отбирали сеголетки стерляди одинаковой массы (в среднем Зг) в возрасте 3-х месяцев. Рыб постоянно содержали в воде с добавлением маточного раствора Бокса, при постоянных рабочих концентрациях препарата 1,0 , 0,1 и 0,05 мл/л. Опыты проводили в двух вариантах. В первом варианте сеголетки содержались в растворе препарата при оптимальных условиях. Во втором - имитировался ряд экстремальных ситуаций: дефицит кислорода, повышенная температура, токсичные корма.

Модельные испытания на сеголетках стерляди, которых содержали в оптимальных условиях в течение 24 суток, выявили низкую эффективность препарата. Анализ полученных данных не обнаружил каких-либо достоверных различий в скорости весового и линейного роста сеголеток стерляди. Сущест-

венных различий в распределении сеголеток по массе и длине внутри каждой группы также не отмечено. Выживаемость рыб в опытном и контрольном вариантах составила 100%.

При оптимальных условиях обитания организм мало чувствителен к внешним воздействиям. Очевидно, по этой причине благоприятное влияние препарата Вокс оказалось незамеченным.

При неблагоприятных условиях, согласно теории генерализованного адаптационного синдрома, восприимчивость организма к различным воздействиям, в том числе и к благоприятным, значительно возрастает (Селье, 1972).

Следующий цикл исследований был связан с изучением влияния препарата Вокс на сеголеток рыб в неблагоприятных условиях содержания, когда действие позитивного фактора может проявиться в максимальной степени.

3.1. Воздействие дефицита кислорода

Исследования влияния препарата на устойчивость сеголеток стерляди к гипоксии (3 мл 02/л) показали, что время появления асфиксии (фиксируемой по повышению частоты дыхания, нарушению координации движений) у сеголеток стерляди в 1 мл/л растворе Вокса увеличилось с 21 мин в контроле до 39 мин в опыте. При меньшей концентрации препарата (0,1 мл/л) эффект менее выражен и асфиксия наступала через 31 минуту (рис.1).

■ 1 мл/л

И 0,1 мл/л

■- контроль

Начало появления Начало

признаков асфиксии восстановления питания

Рис.1. Влияние препарата Вокс на рыбоводные показатели сеголеток стерляди в условиях гипоксии

После нормализации кислородного режима скорость восстановления физиологического состояния (начало питания большинства рыб) сокращалась при концентрации 0,1 мл/л с 25 минут в контроле до 11 минут в опыте (0,1 мл/л), а при концентрации 1 мл/л- до 4 минут.

3.2. Воздействие повышенной температуры

При повышении температуры (свыше 30°С, при одновременном снижении содержания кислорода в воде) в летний период на ОРЗ, расположенных на юге России, отмечается повышение отхода молоди осетровых. Использование препарата Вокс в такой ситуации может его существенно снизить.

Устойчивость сеголеток стерляди к повышенной температуре воды оценивали по выживаемости рыб в течение 7 дней. Сеголеток стерляди содержали при температуре 23-25°С, затем постепенно (в течение двух суток ) температуру повышали до 29-30°С.

В опытном варианте при концентрации препарата 1 мл/л выживаемость стерляди составляла 100%, в растворе с меньшей концентрацией - 91% и наименьшая выживаемость была в контроле - 77%. Отмечено также увеличение прироста массы сеголеток опытной партии в 1,5-2,5 раза по сравнению с контрольной (рис.2).

% 100 т--

Прирост массы тела Выживаемость

Рис. 2. Влияние препарата Вокс на рыбоводные показатели сеголеток стерляди в условиях повышенной температуры

И концентрация 0,1 мл/л ■ концентрация 1 мл/л контроль

33. Воздействие кормов низкого качества

Корма низкого качества являются одним из факторов стресса на осетровых заводах. Около половины всех используемых комбикормов по токсикологическим показателям не соответствует нормативным требованиям. Особенно эта ситуация усугубляется в весенне-летний период в связи с быстрой порчей кормов из-за высокой температуры воздуха.

Кормление сеголеток стерляди кормами низкого качества в течение 5 суток в контрольном варианте привело к гибели 5% рыб, вздутию кишечника и нарушениям поведенческих реакций: потеря ориентации, «кувыркание», снижение подвижности. К концу эксперимента (10 сутки) в контроле общий отход составил 36%. В то же время в опытной партии при концентрации препарата 1 мл/л выживаемость была 100%, поведенческие нарушения отсутствовали. При более низкой концентрации препарата (0,1 мл/л) отход был только среди самых мелких рыб (9%), а из поведенческих нарушений наблюдалась потеря ориентации.

Результаты модельных экспериментов показали, что наибольший эффект препарата достигается при концентрации 1мл/л и только в неблагоприятных условиях содержания. Отмечено повышение устойчивости сеголеток стерляди к повышенной температуре, гипоксии и кормам низкого качества. Полученные данные указывают на антистрессорный механизм действия Вокса, мобилизующего защитные силы организма рыб.

4. ЭФФЕКТЫ ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТА ВОКС НА ОСЕТРОВЫХ РЫБОВОДНЫХ ЗАВОДАХ

4.1. Испытания на эмбрионах и предличинках

Эффективность применения препарата Вокс оценивали по выживаемости эмбрионов, развитию сапролегниевых грибов и выходу предличинок (табл.3).

4.1.1. Икра высокого рыбоводного качества.

Опыты проводились на икре бестера высокого рыбоводного качества, о чем свидетельствует высокий процент развивающихся эмбрионов (98%) на стадии 4-х бластомеров. Процесс инкубации икры проходил в экстремальных условиях (высокий уровень мутности воды, резкие суточные колебания температуры от 15 до 23°С, пониженное содержание кислорода в воде).

и

Наиболее эффективной оказалась двойная обработка икры, первая из которых проходила в период оплодотворения, а вторая - на эмбриональной стадии развития 16. В этом варианте выживаемость предличинок составила 64,5% от количества заложенной икры. Несколько меньше этот показатель оказался в вариантах, когда икру обрабатывали однократно: 52,0% после обработки на стадии 15-16 и 33,5% на стадии оплодотворения. Выживаемость в контроле при этом составила 22%.

Более высокий выход предличинок бестера после двойной обработки исследуемым препаратом скорее всего обусловлен его кумулятивным действием. Учитывая этот результат, данный прием можно рекомендовать в качестве стандартного биотехнологического метода. Действие препарата может быть связано с активацией механизмов резистентности эмбрионов, что прослеживается по снижению количества пораженных сапролегнией икринок с 65% в контроле до 10-22% в опыте (рис. 3).

Аналогичные данные получены для севрюги, осетра и стерляди: во всех опытах прослеживается уменьшение поражения икры сапролегниевыми грибами и 1,5-3- кратное увеличение выхода предличинок (в зависимости от качества икры и условий инкубирования).

% 70

Пораженность Выход

икры предличинок сапролегнией

Рис. 3. Поражение икры сапролегниевыми грибами и выход предличинок бестера

4.1.2. Икра с пониженным уровнем рыбоводного качества Двойная обработка препаратом Вокс икры русского осетра с пониженным уровнем рыбоводного качества (на стадии 4-х бластомеров количество нормально развивающихся эмбрионов не превышает 25-31%) позволила в значи-

тельной степени нивелировать ожидаемый отрицательный эффект от использования самок с низким уровнем качества половых продуктов. Обработки препаратом позволили существенно снизить поражение икры сапролегниевыми грибами, улучшить ее физиологическое состояние и увеличить выход предли-чинок. Так, процент нормального развития икры на стадии 4-х бластомеров увеличился с 31 до 70% (заводская норма составляет 90%). Количество эмбрионов с нормальным развитием возросло в 2,2 раза, выход предличинок - в 3 раза, выживаемость личинок за первую декаду после вылупления - почти в 2 раза.

Таким образом, обработка препаратом Вокс может способствовать увеличению продуктивности производителей, у которых выявляется низкий уровень качества половых продуктов.

4.1.3. Транспортировка развивающейся икры

Экспериментальное моделирование транспортировки икры русского осетра осуществлялось в рыбоводных пакетах объемом 50 л при температуре 13-14°С с добавкой препарата Вокс в концентрациях 0,1 и 0,05 мл/л.

Транспортировка икры осетра на стадии поздней гаструлы в растворе Бокса концентрацией 0,1 мл/л в течение 26 часов и последующая доинкубация практически полностью предотвращали поражение сапролегниевыми грибами (табл.2).

При меньшей концентрации препарата (0,05 мл/л) эффект менее выражен, т.е. на икре русского осетра, так же как при обработке икры бестера, проявляется зависимость доза-эффект.

Таблица 2

Рыбоводно-биологические показатели икры русского осетра в условиях транспортировки в растворе препарата (0,1 мл/л)_

Показатели Опыт, % Контроль, %

Живые эмбрионы в начале эксперимента 88 88

Живые эмбрионы после «перевозки» 86 79

Выход предличинок 75 53

Развитие сапролегнии при перевозке 3 30

Развитие сапролегнии во время доинкубации 5 45

Стимулирующее действие препарата Вокс выражалось не только в подавлении поражения икры сапролегниевыми грибами, но также в повышении жизнестойкости эмбрионов. Так, выживаемость эмбрионов после транспортировки в контроле уменьшилось на 9%, тогда как в опыте на 2%. Соответственно выход предличинок в опыте был на 22 % выше, чем в контроле.

4.2. Испытания на личинках и молоди

Для проверки влияния препарата на выживаемость молоди было испытано два способа воздействия препарата: выдерживание в растворе препарата и добавка его в корм. Эффективность влияния препарата оценивали по рыбовод-но-биологическим и физиолого-биохимическим показателям (табл.3).

4.2.1. Выдерживание личинок и молоди в растворе Бокса (1 мл/л) Рыбоводно-биологические показатели

В опытах с осетром, севрюгой и белугой использовали производителей с низким уровнем качества половых продуктов. С другой стороны, личинки бес-тера были получены из икры высокого качества, но период инкубации проходил в экстремальных условиях. Выживаемость сеголеток в различных вариантах опыта обычно повышалась: у белуги с 93 до 99%, у осетра с 19 до 33%. На более ранних стадиях онтогенеза различия между опытом и контролем были существенно выше. Так, выживаемость предличинок осетра в опытах с обработкой препаратом была в 2-3 раза больше, чем в контроле. Выживаемость опытных личинок максимально возрастала у севрюги (в 2,6 раза).

Минимальное влияние препарата проявилось у белуги, обработанной на стадии личинки. Возможно, это объясняется тем обстоятельством, что икра белуги не подвергалась обработке препаратом.

На важную роль ранних стадий онтогенеза в повышении жизнестойкости развивающихся организмов указывает более высокая выживаемость сеголеток осетра, севрюги и бестера, икра которых проходила обработку в растворе Бокса. Анализ рыбоводных результатов после зимовки молоди бестера показал, что лучшая выживаемость (80%) была у молоди, которая обрабатывалась Боксом в течение 5 месяцев, при этом в контроле выживаемость составила 44%. У всех видов рыб опытной группы отмечено увеличение массы, по сравнению с контролем, однако, достоверное увеличение выявлено только у севрюги и бестера (соответственно, на 18,6 и 5,2%). Такой результат, скорее всего, объясняется применением полноцикловой обработки (икра, личинки и сеголетки) и

продолжительностью воздействия препарата, то есть проявляется зависимость доза-эффект. Различия по массе сеголеток между опытным и контрольным вариантами проявлялись только в конце эксперимента и не были заметны на ранних стадиях онтогенеза. Наиболее заметные различия отмечены на ослабленной, отстающей в росте, стерляди в возрасте 1 месяца. Двукратная обработка препаратом Вокс 2-х групп сеголеток средним весом 180 и 310 мг выразилась в увеличении массы тела, соответственно, в 3,7 и 2,1 раз. Из этого можно сделать вывод, что сеголетки с меньшей массой реагируют на обработку более значительным увеличением массы тела (до нормативных показателей).

Таблица 3

Влияние препарата Вокс на рыбоводно- биологические показатели __рыб осетровых пород___

Виды рыб, Выживаемость, % Средняя Продолжи-

варианты Предличи- Личинки Сеголетки в конце масса тела тельность

опыта нки в первую опыта сеголеток опыта,

(выклев) декаду от количества икры от количества предличинок в конце опыта, г сутки

Осетр * 46

Опыт 58 80 19 33 6,0±0,4

Контроль 19 45 4 19 5,4±0,3

Севрюга** 55

Опыт 53 85 21 39 8.67±0,4

Контроль 25 32 8 30 7,31±_0,3

Белуга*** 35

Опыт - 42 - 99 1,5±0,1

Контроль - 23 - 93 1,4±,1

Бестер**** 150

Опыт 65 85 49 75 101,0±2,2

Контроль 22 45 12 56 9б,0±1,3

Стерлядь***** 9

Опыт - - - 95 17±0,7

Контроль - - - 70 10±0,4

обработка икры; ** обработка икры, предличинок, добавка в корм; *** обработка предличинок, добавка в корм; **** обработка икры, предличинок, личинок и сеголеток; ***** добавка в корм

Распределение сеголеток севрюги (обработка препаратом проводилась на стадии икры и предличинок, сеголетки получали препарат с кормом) по массе свидетельствует о сдвиге модального класса по этому показателю в опытной серии вправо (в сторону больших значений), по сравнению с контролем. Доля

15

обработанных препаратом рыб с массой более 2,6 г составила 27%, тогда как в контрольной группе только 8%, что является показателем улучшения физиологического состояния опытной молоди (рис.4).

пгг20

15 10

5

О т-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1 I

0,3-0,5 0,3-0,9 1,0-1,3 1,4-1,6 1,7-1,9 2,0-2,2 2,3-2,5 2,6-2,8 2,9-3,1 3,2-3,4

Рис.4. Распределение сеголеток севрюги по массе тела

Физиолого-биохимические эффекты

Гематологические показатели являются наиболее объективным индикатором физиологического состояния рыб. Анализ крови показал, что у сеголеток осетра из опытной партии средние показатели крови были лучше, чем у контрольных (табл.4). Среднее значение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) у рыб обработанных препаратом Вокс составило 1,5±0.33 мм/ч, в контроле 1,7±0.3б мм/ч (при норме 1,5-2 мм/ч). Средние показатели концентрации сывороточного белка крови молоди опытных и контрольных партий существенно не различались (соответственно 15,34±1,33 г/л и 14,6±0,92г/л (при норме 15 г/л). Анализ мазков 1фасной крови у опытных рыб показал увеличение интенсивности эритропоэза на 70,4%.

Таблица 4

Гематологические показатели сеголеток русского осетра_

Показатели Опыт Контроль

Гемоглобин, г/л б1,б±1,92 53,2±2,41

Гематокрит, % 53±0,05 52±0,1

Эритробласты, млн. клеток /мкл 0,4±0,08 0,30±0,15

Нормобласты:

Базофильные 2,32±1,01 1,81±0,18

Полихроматофильные 9,84±2,22 5,25±0,77

Ортохромные 87,44±2,96 92,бЗ±0,54

Интенсивность эритропоэза 12,56±2,9б 7,37±0,54

Лейкоцитарная формула в тыс. клеток /мкл:

Лимфоциты 67,98±И,0 67,36±8,04

Эозинофилы 13,14±3,7б 12,03±2,08

Нейтрофилы: 18,88±1,8 20,б1±1,7

В т.ч.: Промиелоциты 0,93±0,38 1,52±0,79

Миелоциты 0,48±0,14 1,53±0,70

Метамиелоциты 0,61±0,14 1,09±0,71

палочкоядерные 13,03±2,27 14,б4±7,58

сегментоядерные 3,83±2,67 1,83±0,5б

Тромбоциты, шт. /500 эритроцитов 4±1,0 7±1,0

Липидный обмен также хорошо характеризует физиологическое состояние рыб, особенно соотношение ®3/со6 жирных кислот, как составляющих липид-ного обмена, протекающего в метаболически активных тканях организма. Большая величина этого соотношения у опытных сеголеток осетра свидетельствует о лучшем физиологическом статусе. В опытном варианте отмечено увеличение баланса соЗ/гоб кислот в общих липидах почти в 1,5 раза и фосфолипи-дах-в 1,3 раза.

Гистологический анализ печени годовиков осетра выявил картины позитивного влияния препарата: на срезах печени у группы рыб после обработки, в отличие от контроля, отсутствовали следы деструктивных нарушений ткани.

Благоприятное влияние препарата сказалось также на физиологическом статусе сеголеток осетра, что проявилось в накоплении резервов жира в гепато-цитах до 20,3%. Этот показатель сближает их с сеголетками, выросшими в естественных водоемах, и свидетельствует о более высокой подготовленности ко времени выпуска в реку, поскольку обеспечивает более высокую выживаемость в условиях возможного недостаточного питания.

Еще одним индикатором физиологической полноценности является реакция пигментных клеток меланофоров. Адаптивные реакции меланофоров, которые были исследованы у опытных и контрольных личинок осетра с использо-

ванием белого и темного фона и при изменениях освещенности, свидетельствуют о хорошем физиологическом состоянии личинок опытной партии и несколько худшем у личинок контрольной партии.

Иммунорезистентность. В первые сутки после выклева бакгерицид-ность тканей предличинок севрюги (обработанной на стадии икры препаратом «Вокс») была очень низкой и тормозила развитие микроорганизмов на 10-12%. Разницы между опытными и контрольными партиями не выявлено. Повторная обработка препаратом предличинок (в возрасте 5 суток) оказала несколько больший эффект, так в контрольной группе бакгерицидность тканей была в пределах 15-17%, в опытной - 16-20 %.

Не выявлено достоверных отличий между бактерицидностыо тканей у опытных и контрольных групп молоди севрюги перед выпуском, рост тест-микроорганизмов подавлялся на 45-50%. Тем не менее, коэффициент вариабельности показателя бакгерицидности в опытной группе был несколько меньшим (12,2%, по сравнению с 15,1% в контроле), что можно расценивать как дополнительный показатель более стабильного иммунологического состояния обработанных рыб. Кроме того, возможно, проявляется отдаленная реакция на препарат за счет увеличения его суммарной дозировки.

4.2.2. Добавка препарата Вокс в кормовые рационы Использование Вокса в качестве кормовой добавки имеет преимущество по сравнению с обработкой рыб его раствором. Такая форма поступления препарата в организм рыб существенно облегчает его применение в производственных условиях; значительно снижаются потери препарата, что делает его использование экономически выгодным. Кроме того, длительное нахождение Вокса в желудочно-кишечном тракте рыб усиливает его влияние за счет более высокой действующей дозировки по сравнению с растворенной формой препарата. Использование препарата в виде добавки в корм обогащает его микро- и макроэлементами и, возможно, улучшает его вкусовые качества, что приводит к повышению пищевой активности.

Рыбоводно-биологические показатели Быстрая позитивная ответная реакция рыб на добавку препарата в корм отчетливо проявляется в опыте на сеголетках стерляди с признаками алиментарного токсикоза (вздутие кишечника, почки некротические с разжиженной

структурой, бактериальная контаминация внутренних органов превышала норму в 6-120 раз). Введение в корм препарата Вокс (10 мл/кг) оказало выраженное положительное влияние. Через трое суток в опытной партии прекратился отход, нормализовалось состояние кишечника и внутренних органов (в том числе отмечено отсутствие повышенной бактериальной контаминации), особенно положительный эффект сказался на состоянии почек и печени. На 9 сутки в опыте выживаемость была на 25% больше, чем в контроле, при этом средняя масса тела опытных сеголеток превышала контрольную (соответственно 17 и Юг).

Годовиков белуги, которых ранее Боксом не обрабатывали, на протяжении 30 суток кормили комбикормом с добавкой Вокса в количестве 20 мл/кг корма. За период эксперимента прирост в опытной партии был на 21 % больше, по сравнению с контрольной. Отход рыб в этом периоде не наблюдался.

Добавка препарата в корм (10 мл/кг) сеголеткам севрюги (выращенным из обработанных препаратом икры, предличинок и личинок), привела к повышению выживаемости сеголеток за 13 суток на 10%. Ко времени выпуска выживаемость сеголеток в опыте также превысила соответствующий показатель в контроле (на 9%), при этом средняя масса сеголеток из опыта была на 12% больше, чем в контрольной партии (рис. 5).

100

80--■-

60--Н-

Й+пЕЕ

0--И——JI—, Шп , ■

■ опыт

□ контроль

Рис. 5. Выживаемость севрюги выращенной на кормах с добавкой Вокса

Фнзнолого-бшшшические показатели

Уровень гемоглобина и гематокрита был ниже в крови годовиков белуги из контрольной партии (76 г/л и 39% соответственно), чем у рыб получавших с кормом препарат Вокс (83 г/л, и 46% соответственно). Концентрация общего сывороточного белка в опыте была выше, чем в контроле, соответственно 37,4 и 36,0 г/л.

В результате аварийного прекращения подачи кислорода (в течение 2 часов) в бассейны в конце опыта, уровень кислорода снизился до 4 мг/л. В результате физиологические показатели в контрольной партии белуги снижались более значительно, чем в опыте. Так, содержание гемоглобина в опытной партии снизилось с 83,0 до 75 г/л, тогда как в контрольной - до 66 г/л. Концентрация общего сывороточного белка в опыте снизилась с 37,4 г/л до 9,5 г/л, в контроле - до 6,0 г/л.

Таким образом, применение препарата Вокс при кормлении годовиков белуги показало его определенную эффективность в плане повышения резистентности организма рыб, особенно в стрессовых ситуациях, что иллюстрируется улучшением физиологических показателей в опытном варианте. Опытные сеголетки имели лучший физиологический статус и были хорошо подготовлены к выпуску в реку и скату в условиях возможного недостаточного питания.

Внесение препарата (10 мл/ кг) в корма приводит к такому же эффекту, как обработка сеголеток раствором (1 мл/л) этого же препарата. С точки зрения экономичности, рационально ограничиться использованием препарата в виде раствора для обработки развивающейся икры и для сеголеток в качестве добавки в корм.

4.3. Оценка эффективности применения препарата методом

полифункциональных нагрузок по В.И. Лукьяненко (1989)

Исследование воздействия препарата проводилось на сеголетках севрюги с пониженным исходным качеством (средняя масса 1,86 г, возраст 50 суток), получавших препарат Вокс с начала кормления. Оценивали содержание в крови гемоглобина, общего сывороточного белка, исследовали мазки крови рыб. Гематологический анализ включал также исследование морфологии крови. Кроме того, для дополнительной характеристики белкового обмена и состояния выделительной системы определяли концентрацию мочевины в сыворотке.

Устойчивость сеголеток к повышенной солености (12 %а) изучали в течение 4 суток. За первые 12 часов эксперимента в контрольной группе произошла

гибель более 50% сеголеток севрюги, тогда как в растворе Вокса все сеголетки выжили. К концу вторых суток погибли все сеголетки контрольного варианта, 100%-ная гибель опытных сеголеток была зафиксирована только на четвертые сутки (рис.6).

Отсутствие отхода опытных сеголеток севрюги свидетельствует о том, что они приобрели более высокую жизнестойкость в результате добавления в корм препарата Вокс, по сравнению с контрольной группой, которая эту кормовую добавку не получала.

Рис. 6. Динамика выживаемости сеголеток севрюги при 12% солености

Выдерживание сеголеток севрюги при температуре 32°С без добавки препарата уже через час приводило к гибели рыбы (отход 3%), через трое суток погибла вся рыба. Опытные сеголетки оказались устойчивее контрольных, их отход начался только через трое суток, а на четвертые-пятые сутки он составил 36,7 % (рис.7).

--—V

контроль опыт

ч

\ ки

\

\

0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 суг

Рис.7. Динамика выживаемости сеголеток севрюги при температуре воды 32°С

Более развернутая картина патологических изменений из-за низкого исходного качества сеголеток севрюги наблюдалась в опыте с голоданием.

Через сутки после начала опыта резко повысилась интенсивность отхода в контроле. Через двое суток содержание сывороточной мочевины у контрольных сеголеток составило 19 ммоль/л, у опытной значительно ниже -13ммоль/л. Через 7 суток у погибших контрольных сеголеток концентрация мочевины в крови достигала 27 ммоль/л, у выживших в опыте рыб - 8,5 ммоль/л. Концентрация гемоглобина в конце эксперимента составляла в опыте 48 г/л, в контроле - 33 г/л. Однако, патологические изменения в опытном варианте, в основном, касались размеров и формы клеток. В контроле же отмечалась инвагинация ядер эритроцитов и кариорексис. Такие патологии, вкупе с резким повышением концентрации мочевины в сыворотке крови контрольных сеголеток, обычно являются несовместимыми с жизнью. Отход сеголеток севрюги за весь период эксперимента (7 суток) составил 55,6% в опыте и 100% в контроле.

Благотворное действие препарата, очевидно, обусловлено активизацией процессов азотистого обмена, нарушение которого, вследствие длительного истощения сопровождается выраженной уремией и интоксикацией с последующим летальным исходом.

выводы

1. Препарат Вокс не оказывает на живые организмы токсических, гено-токсических и тератогенных влияний.

2. Наиболее эффективно действие препарата Вокс проявляется при неблагоприятных условиях содержания (недостаточная концентрация кислорода, повышенная температура воды, некачественные корма и транспортировка).

3. Оптимальные концентрации препарата для обработки икры, личинок и молоди в растворе 1 мл/л и 10 мл/кг в качестве добавки в корма.

4. Наиболее эффективным и экономичным методом применения препарата следует считать обработку икры и добавку в корм сеголеткам.

5. Использование препарата приводит к следующим позитивным рыбо-водно-биологическим и физиолого-биохимическим эффектам:

-значительно улучшается эффективность оплодотворения икры, снижается поражение ее сапролегниевыми грибами и повышается выход предличинок; увеличивается жизнестойкость предличинок, личинок и сеголеток в условиях физиологических нагрузок (высокая температура воды, низкое содержание кислорода, голодание); нормализуются размерно-весовые, патолого-анатомические и физиолого-биохимические показатели личинок, сеголеток и годовиков и, в первую очередь, у ослабленных и отстающих в росте;

-улучшается физиологическое состояние сеголеток в опытах, что подтверждается повышением концентрации в крови гемоглобина, сывороточного белка и эозинофилов, а также отсутствием деструктивных нарушений ткани печени;

- нормализуется жировой обмен: о чем свидетельствует близкие значения накопление жира в гепатоцитах сеголеток опытной партии и из естественных водоемов,

а также увеличение баланса соЗ/саб кислот в общих липидах тканей тела рыб опытной партии в 1,5 раза и в фосфолипидах - в 1,3 раза.

6. Механизм действия препарата связан с наличием в его составе микро-и макроэлементов, обеспечивающих поддержание ряда клеточных функций, в том числе тех, которые повышают резистентность организма рыб. Эффект повышения жизнестойкости икры и рыб подчиняется закономерности доза-эффект.

7. Расчетный экономический эффект (для 4-х ОРЗ Севкаспрыбвода) составил около 6 млн. рублей. Повышение жизнестойкости сеголеток увеличива-

ет их выживаемость как минимум на 10%, что обеспечивает дополнительную численность в количестве 3,88 млн. ппук.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Результаты исследований, изложенные в диссертационной работе, позволяют рекомендовать препарат Вокс использовать в качестве средства повышения эффективности искусственного воспроизводства осетровых видов рыб:

- для обработки раствором препарата (1 мл/л) икры во время оплодотворения и на эмбриональной стадии 16;

- для обработки раствором препарата (1 мл/л) предличинок в день вылу-пления, на третьи сутки после вылупления, а также перед переходом на активное питание;

- в качестве добавки препарата в кормовой рацион сеголеток из расчета 10 мл/кг кормов.

ОСНОВНЫЕ ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Новый биологически активный препарат // Ж. Рыбоводство и рыболовство. М.- 2001, с.35-36 (Соавторы Белоусов А.Н., Дергалева Ж.Т., Цвылев О.П.).

2. Новый препарат для повышения эффективности рыбоводства // Тез. докл. научно-практической конференции «Проблемы и перспективы развития аква-культуры в России» . Адлер, 24-27 сентября 2001.- с. 102-103 (Соавтор Цвылев О.П.).

3. Методы повышения жизнестойкости сеголеток ценных объектов мари-культуры в условиях заводского выращивания // Тез. докл. Международного симпозиума «Холодноводная аквакультура: старт в XXI век». 8-13 сентября 2003 г., Санкт-Петербург, 2003. -с. 97 (Соавторы Дергалева Ж.Т., Цвылев О.П.).

4. Новые методы повышения жизнестойкости ценных видов рыб при искусственном воспроизводстве. // Тез. докл. Научно-практической конференции «Водные биоресурсы России: решение проблем их изучения и рационального использования». М., ВНИРО, 2003. - с.98-99 (Соавторы Дергалева Ж.Т., Цвылев О.П.).

5. The influence of minerai composition of water upon the efficiency of fish farming. // "World Aguaculture 2003", Salvador, Brazil, Mayl9-23, 2003.Book of Abstracts, vol. 1, P. 233 ( Co-authors J. Dergaleva, O. Tsvilev).

6. Эффективность применения полиминерального препарата естественного происхождения при выращивании осетровых. III Международная научно-

практическая конференция, Сб. «Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития», Астрахань , 2004,- с. 206-210 (Соавтор Абросимов С.С.).

7. Результаты обработки природным минеральным препаратом икры и сеголеток осетровых на ОРЗ «Севкаспрыбвода». П1 Международная научно-практическая конференция, Сб. «Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития». Астрахань , 2004.- с. 132-133 (Соавторы Цвылев О.П. Михайлова М.В.).

8. Влияние минерального раствора в различные периоды развития русского осетра. III Международная научно-практическая конференция «Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития». Астрахань , 2004.- с. 67-68 (Соавторы Переверзева Е.В., Нижельская М.А., Пономарев Д.В.).

9. «Методика применения в рыбоводстве полиминерального препарата Вокс Часть 1. Осетроводство. М.: ВНИРО, 2006.- 41 с. (Соавтор Цвылев О.П.).

10. Патент на изобретение № 2005112845/12 (014824), от 28.04.2005 г. «Способ воспроизводства и выращивания осетровых рыб» (Соавтор Цвылев О.П.).

11. Патент на изобретение № 2005112844/12 (014823) от 28.04.2005 г. «Способ повышения жизнестойкости икры, личинок и сеголеток рыб» (Соавтор Цвылев О.П,. Дергалева Ж.Т).

12. Патент на изобретение № 2005112843/12 (014822) от 28.04.05 г. «Способ биологической реабилитации городских водоемов» (Соавтор Цвылев О.П.).

Автор приносит благодарность сотрудникам ВНИРО и коллегам из других организаций за помощь, оказанную при выполнении работы: Микодиной Е.В., Цвылеву О.П., Дергалевой Ж.Т., Смирнову Б.П., Сафронову A.B.(ВНИРО), Абросимовой Н.А (АзНИИРХ), Михайловой М.В. (КрасНИРХ), а также сотрудникам осетровых рыбоводных заводов за содействие в организации и проведении исследовательских работ

Подп. в печать /Lf. /7^Обьем п.л. Тираж /Л^экз. Заказ '-/' ¿> ВНИРО. 107140, Москва, В. Красносельская, 17

»18729

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Сазонова, Людмила Викторовна

Общая характеристика работы.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Характеристика современного состояния осетроводства.

1.2. Повышение эффективности рыбоводного процесса путем применения биологически активных веществ.

1.3. Биологическая роль микро- и макроэлементов.

1.4. Природные минеральные комплексы.

Глава 2. Материалы и методы исследований.

Основное содержание работы.

Глава 3. Влияние препарата Вокс на молодь осетровых рыб в экспериментальных условиях.

3.1. Краткая характеристика препарата Вокса.

3.2. Характеристика биологических эффектов основных элементов, входящих в состав препарата Вокс.

3.3. Биологические эффекты препарата Вокс.

3.3.1. Исследование биологической безопасности препарата Вокс для

3.3.2 Результаты применения препарата Вокс при моделировании различных условий содержания молоди стерляди.

Глава 4. Эффекты Вокса при производственных испытаниях в условиях осетровых рыбоводных заводов.

4.1. Влияние Вокса на осетровых в эмбрионально-личиночном периоде.

4.1.1. Влияние Вокса на икру высокого рыбоводного качества.

4.1.2. Влияние Вокса на икру низкого рыбоводного качества.

4.1.3. Влияние Вокса на развивающуюся икру осетровых при ее транспортировке.

4.2. Влияние Вокса на личинок и молодь осетровых рыб.

4.2.1. Влияние раствора Вокса (1 мл/л) на личинок и молодь осетровых

4.2.2. Изучение влияния Вокса в качестве кормовой добавки на молодь осетровых рыб.

4.3. Оценка качества молоди осетровых после применения Вокса стандартными рыбоводными методами.

4.3.1. Метод полифункциональных нагрузок по В.И. Лукьяненко (1989)

4.3.2. Метод реакции пигментных клеток.

Глава 5. Экономический эффект от внедрения препарата Вокс на осетровых рыбоводных заводах.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологическая эффективность применения минеральных препаратов (на примере вокса) при воспроизводстве осетровых видов рыб"

Актуальность исследования. Зарегулирование стока осетровых нерестовых рек - Волги, Дона и Кубани и ухудшение их экологического состояния привели к катастрофическому снижению уловов (в 60 раз). При этом резко снизились как численность производителей, так и их рыбоводное качество (Баранникова, 1983; Баранникова и др., 2002; Хованский, 1990; Горбунова и др., 2002; Вассель, 2006). Искусственное воспроизводство становится во многих случаях единственным источником как восстановления природных популяций осетровых, так и сохранения их видового разнообразия (Пальгуй, 1992; Власенко и др., 2002; Реков и др., 2002).

На осетровых рыбоводных заводах ряд негативных факторов приводит к повышенной гибели икры и личинок, формированию ослабленной некондиционной молоди и, соответственно, ее высокой уязвимости по отношению к абиотическим и биогенным стрессам. Формирование защитных систем организма происходит в раннем онтогенезе, поэтому именно этому периоду развития должно быть уделено особое внимание (Лукьяненко, 1966, 1971; Кокоза, 1983; Микодина, Глубокое, 1998). Для улучшения состояния рыб и кормов используют биологически активные регуляторы. К таковым относятся и препараты, обогащенные микро- и макроэлементами, которые играют исключительно важную биологическую роль в организме животных и человека. Многие из микроэлементов могут абсорбироваться из воды эмбрионами через оболочки икринок, а молодью - непосредственно через жабры и кожу. Они успешно применяются в рыбоводстве для увеличения жизнестойкости эмбрионов, личинок и молоди (Ковальский и др., 1967; Аскеров, 1968; Морозов и др., 1990; Воробьев, 1979, 1980, 1982, 1990; Лобзакова, 2001; Лобзакова и др., 2002). Для выращивания здоровой заводской молоди используют комбикорма, в которые добавляют витаминные и минеральные премиксы, улучшающие их свойства. В составе минеральных премиксов чаще всего используют кальций, фосфор, железо, цинк, медь, марганец, кобальт, йод, реже молибден и магний (Цирульская, Люкшина, 1981), которые принимают активное участие в регуляции обмена веществ у рыб.

Среди биологически активных препаратов особый интерес представляет полиминеральный комплекс Вокс, который получают из природных слюд. Он запатентован в Японии как средство для профилактики и лечения различных заболеваний, в том числе у рыб. Биологическая активность Вокса связана с присутствием - селена, марганца, железа, кобальта, меди, цинка, серы и магния. Многие из них входят в состав витаминов, металлоферментов и других биологически активных соединений, обеспечивающих поддержание ряда клеточных функций, в том числе тех, которые повышают резистентность живого организма (Воробьев, 1979).

В данной работе изучали влияние Вокса на осетровых рыб в раннем онтогенезе с целью оптимизации их искусственного воспроизводства на осетровых рыбоводных заводах.

Цель и задачи. Цель работы - повышение эффективности искусственного воспроизводства осетровых видов рыб.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести оценку безопасности препарата Вокс.

2. Изучить свойства Вокса в модельных экспериментах.

3. Установить оптимальные концентрации препарата для его использования в рыбоводном процессе.

4. Разработать способы применения препарата Вокс на различных этапах раннего онтогенеза осетровых рыб.

5. Оценить рыбоводно-биологические и физиолого-биохимические эффекты Вокса.

6. Оценить экономическую эффективность использования Вокса.

Научная новизна. Впервые на основании химического анализа Вокса и тестам на его токсичность, генотоксичность и тератогенность установлена биологическая безопасность для рыб этого препарата. Получены данные о положительном влиянии Вокса на осетровых рыб, на ранних этапах их онтогенеза при неблагоприятных условиях. Установлено, что его воздействие в заводских условиях приводит к повышению выживаемости и резистентности осетровых, улучшает их биологические и физиолого-биохимические показатели.

Практическое значение работы. Получены три патента на изобретение. Создана «Методика применения в рыбоводстве полиминерального препарата Вокс. Часть 1. Осетроводство» (2006). Разработаны и утверждены нормативные документы: Разрешение на использование препарата Департамента ветеринарии Минсельхоза России; Наставление на применение препарата Вокс для рыбоводных целей; ТУ-9296-001-45934125-03 «Добавка Вокс»; Сертификат соответствия «Кормовая минеральная добавка Вокс», РОСС RU.nP15, 5915100; Аттестат аккредитации Испытательного центра «Препарат Вокс», № РОСС RU.0001/21ITH40. Проведены производственные испытания на 7 осетровых заводах России. Установлено, что его применение приводит к уменьшению материальных и трудовых затрат на рыбоводных заводах.

Апробация работы. Основные материалы работы доложены на различных научных конференциях: «Проблемы и перспективы развития аквакультуры в России» (Адлер, 2001), «Водные биоресурсы России: решение проблем их изучения и рационального использования» (Москва, 2003), «Холодноводная аквакультура: старт в XXI век» (СПб., 2003), «World Aquaculture 2003» (Salvador, 2003), «Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития» (Астрахань, 2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 138 страницах и состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов и практических рекомендаций. Список цитируемой литературы включает 190

Заключение Диссертация по теме "Ихтиология", Сазонова, Людмила Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Препарат Вокс не оказывает на живые организмы токсического, генотоксического и тератогенного влияния.

2. Положительное действие Вокса проявляется при неблагоприятных условиях содержания, что выражается в повышении устойчивости молоди осетровых к повышенной температуре воды, гипоксии и кормам низкого качества.

3. Оптимальные концентрации препарата составляют: в растворе для обработки икры, личинок и молоди -1 мл/л, в качестве добавки в корм -10 мл/кг.

4. Наибольший эффект Вокса проявляется при обработке раствором икры и (или) добавке в корм сеголеткам.

5. Действие препарата подчиняется закономерности доза-эффект.

6. Вокс приводит к следующим биологическим и физиолого-биохимическим эффектам:

- улучшение эффективности оплодотворения икры, уменьшение сапролегниоза и повышение процента вылупления предличинок;

- нормализация патологоанатомических и физиолого-биохимических показателей в раннем онтогенезе осетровых и, в первую очередь, у ослабленных и отстающих в росте рыб:

• улучшение гематологических показателей;

• снижение деструктивных нарушений в печени;

• улучшение липидного обмена;

• увеличение соотношения озЗ/соб жирных кислот в общих липидах тканей тела рыб.

7. Экономический эффект применения Вокса для 4-х ОРЗ Севкаспрыбвода в 2005 г. составил около 6 млн. рублей. Повышение жизнестойкости сеголеток не менее чем на 10% обеспечивает сохранение 3,88 млн. шт. молоди осетровых.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендовать препарат Вокс в качестве средства для повышения эффективности искусственного воспроизводства осетровых рыб.

2. Для обработки осетровых раствором препарата использовать концентрацию 1 мл/л;

3. В корм для сеголеток добавлять Вокс в количестве 10 мл/кг корма.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Сазонова, Людмила Викторовна, Москва

1. Аверьянова О.В. Влияние низкоинтенсивного излучения гелий-неонового лазера на ранний эмбриогенез вьюна // Калужский межотраслевой территориальный центр научно-технической информации и пропаганды,- Информационный листок. №336. 1989. - 89 с.

2. Авцын А.П. Введение в географическую патологию. М.: Медицина, 1972.-345 с.

3. Авцын А.П. Микроэлементозы человека / Авцын А.П., Жаворонков А.А., Бурлаков А.В., Риш М.А., Строчкова JI.C. М.: Медицина, 1971. - 496 с.

4. Аронович Т.М. Влияние микроэлементов на физиологическое состояние годовиков карпа в период зимовки // Сб. науч.-техн. информ. о достижениях рыбн. пром. М.: ВНИРО, 1968 . - Вып. 7. - С. 47-56.

5. Аскеров М.К., Кязимов К. Г. Комплексное применение микроэлементов и минеральных удобрений в прудах осетровых рыбоводных заводов // Тезисы докл. на отчета сессии ЦНИОРХ. Астрахань: ЦНИОРХ, 1968. - С. 3-4.

6. Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития // Материалы четвертой Межд. науч.- практ. конф. (Астрахань, 13-15 марта 2006 г.). М.: ВНИРО. 2006. - 359 с.

7. Александров С.Н. Прудовое рыбоводство / Александров С.Н., Пожидаев В.В. Донецк: Сталкер, 2006 . - 239 с.

8. Баранникова И.А. Основные пути развития осетроводства в условиях комплексного использования водных ресурсов // Биологические основы осетроводства,- М.: Наука, 1983. С. 8-21.

9. Баранникова И. А. Положение с осетровыми сложное, но не безнадежное / Баранников И.А., Белоусов А.Н., Никоноров С.И., Малютин B.C. // Рыбоводство и рыболовство, 2001. №1. - С. 4-6.

10. Баранов В.Ю. Ихтиопатология. М.: Наука, 2005. 600 с.

11. Бауер О.Н. Ихтиопатология / Бауер О.Н., Мусселиус В.А., Николаева В.М., Стрелков Ю.А. М.: Пищ. пром-ть, 1977. - 431 с.

12. Бауер О.Н. Болезни прудовых рыб / Бауер О.Н., Мусселиус В.А., Стрелков Ю.А. М.: Лёгк. и пищ. пром-ть, 1981. - 319 с.

13. Браунштейн А.С. (ред.). Ферменты. М.: Наука, 1964. - 312 с.

14. Бурцев И.А. Способ получения икры от самок рыб: Описание изобретения к авт. свид. № 244793. М.: ЦНИИПИ Комитета по делам изобр. и откр. при Сов. Мин. СССР, 1969 г.

15. Берман Ш.А. Микроэлементы в рыбах Куйбышевского водохранилища / Берман Ш.А., Соколов В.В. // Экология, 1989.- № 6. С. 81-84.

16. Берман Ш.А., Витиль И.В. Количественная характеристика и физиологическое действие некоторых микроэлементов в организме радужной форели в период раннего онтогенеза // Микроэлементы в организме рыб и птиц. Рига.: Знание, 1968. - С. 19-35.

17. Биологическая роль молибдена. М.: Наука, 1972. 222 с.

18. Богданов Г.А. Пресноводная аквакультура в СССР и за рубежом // ЦНИИТЭИРХ. Обзор, информ. Сер. Рыбохозяйственное использование внутренних водоемов. М., 1999 - Вып. 4. - С. 1-38.

19. Болезни рыб при индустриальном выращивании // ВНИЭРХ. Обзор, информ. Сер. Болезни гидробионтов в аквакультуре. М., 2000.- Вып. 1.-34 с.

20. Бондарев Л.Г. Микроэлементы благо и зло. М.: Знание, 1984. - 144 с.

21. Бурлакова Е.Б. Липиды биологических мембран / Бурлакова Е.Б., Алексеенко А.В., Аристархова С.А., Архипова Г.В Ташкент: Фан, 1982. - 161 с.

22. Бурлакова Е.Б. Исследование роли функциональных групп в действии фосфолипидов как синергистов окисления / Бурлакова Е.Б., Сторожук Н.М., Храпова Н.Г. // Биологические мембраны. 1990. -1.1. - № 6. -С. 612-618.

23. Варшал Г.М. Исследование состояния микроэлементов в поверхностных водах / Варшал Г.М., Кощеева И.Ю., Велюханова Т.К. // Геохимия природных вод. Л.: Наука, 2000. С. 205-215.

24. Вассель С.С. Липидный состав как показатель качества икры при искусственном воспроизводстве осетровых. Автореф. дис. . канд. биол. наук. М.: МГУ ТУ, 2006. 18 с.

25. Васьковский В.Е. Липиды и температурные адаптации морских беспозвоночных // Физиология и биохимия адаптации морских животных.-Владивосток, 1981. С. 196-200.

26. Васьковский В. Е. Липиды // Соросовский образовательный журнал, 1997.-№3-С. 32-37.

27. Ведемейер Г.А. Стресс и болезни рыб / Ведемейер Г.А., Мейер Ф.П., Смит Л. М.: Легк. и пищ. пром-ть, 1981. - 128 с.

28. Венчиков А.И. Биотики. М.: Медгиз, 1962. 320 с.

29. Вернадский В.И. Химический состав животного вещества в связи с химией земной коры. Петроград: Время, 1922. - С. 48-71.

30. Вернадский В.И. Биогеохимические очерки 1922-1932. М.-Л.: Изд-во Акад. наук, 1940. - 249 с.

31. Власенко А.Д. Состояние запасов осетровых в Каспийском бассейне и пути их восстановления / Власенко А.Д., Зыкова Г.Ф., Красиков Е.Ф. // Материалы Межд. конф., посвященой 105-летию КаспНИРХ. -Астрахань: КаспНИРХ, 2002. С. 58-64.

32. Водовозова М.А. Использование различных стимуляторов в товарном осетроводстве при кормлении гибридов шип х белуга // Осетровое хозяйство в водоемах СССР: Тезисы докл. Астрахань: КаспНИИРХ, 1984.-С. 69-71.

33. Восилене З.М. Воздействие хендлинга на физиологические показатели радужной форели // Тр. АН Лит. ССР. 1988., № 1/101. С. 84-88.

34. Войнар А.И. Биологическая роль микроэлементов в организме животных и человека. М.: Высшая школа, 1960. - 491 с.

35. Воробьев В.И. Эколого-биохимические основы применения микроэлементов в рыбоводстве. Автореф. дис. . докт. биол. наук. -М.: МГУ, 1982.-54 с.

36. Воробьев В.В. Микроэлементы и их применение в рыбоводстве. М.: Пищ. пром-ть, 1979. 183 с.

37. Воробьев В.И. Роль микроэлементов в жизни водоемов. М.: Наука, 1980.- 143 с.

38. Воробьев В.И. Применение микроэлементов в рыбоводстве и некоторые методические аспекты изучения этой проблемы // Роль микроэлементов в жизни водоемов. М.: Наука, 1980. - С. 5-23.

39. Воробьев В.И. Биогеохимическая ситуация и применение микроудобрений в нерестово-выростных хозяйствах дельты Волги / Воробьёв В.И., Шкодин Н.В. // Роль микроэлементов в жизни водоемов. М.: Наука, 1980. - С. 75.

40. Воробьев В.И. Биогеохимические основы пресноводной аквакультуры // Вопросы экологии, физиологии рыб, ихтиопатологии. Калининград: КТИРПХ, 1990. - С. 4-8.

41. Воробьев В.И. Микроэлементы и физиологическая оценка производителей осетровых рыб в Волге /Воробьёв В.И., Зайцев В.Ф. // Биотехника товарного рыбоводства: Сб. науч. тр. М.: ВНИИПРХ, 1976.-С. 186-193.

42. Воробьев В.И. О физиологической роли микроэлементов в организме некоторых промысловых рыб дельты Волги // Некоторые проблемы экологии животных Нижнего Поволжья и Северного Кавказа: Сборник,-Волгоград: 1975. С. 186-193.

43. Власов В.А. Рыбоводство. М.: ЭКСМО, 2001. - 240 с.

44. Виноградов А.П. Химический элементарный состав организмов и периодическая система Д.И. Менделеева. Т.З. // Тр. Биогеохим. лаб. АН СССР. М.-Л.: Изд. АН СССР, 1935. - С. 19-24.

45. Виноградов А.П. Биогеохимические провинции и эндемии //Докл. АН СССР. 1938. - Т. 18. - № 4- 5. - С. 283-286.

46. Гершанович А.Д. Экология и физиология молоди осетровых / Гершанович А. Д., Пегасов В. А., Шатуновский М.И. М.: Агропромиздат, 1987. - 215 с.

47. Гербильский Н.Л. Теория биологического прогресса вида и ее использование в рыбном хозяйстве // Теоретические основы рыбоводства. М.: Наука, 1965. - 452 с.

48. Гербильский Н.Л. Научные основы, направления развития и районирования осетрового хозяйства / Гербильский Н.Л., Исаев А.И. Осетровое хозяйство в водоемах СССР. М.: АН СССР, 1963. - 416 с.

49. Горбунова Г.С. Состояние некоторых представителей экосистемы Каспия при действии нефти и газоконденсата / Горбунова Г.С., Костров Б.П., Гаранина С.Н. // Материалы Межд. конф., посвященной 105-летию КаспНИРХ. Астрахань.: КаспНИРХ, 2002. - С. 83-87.

50. Голиков С.И. Общие механизмы токсического действия / Голиков С.И., Саноцкий И.В., Тиунов Л.А. Л.: Медицина, 1986. - 80 с.

51. Глаголева Т.П. Влияние малахитовой зелени на состав крови у молоди балтийского лосося / Глаголева Т.П., Маликова Е.М. // Рыбное хозяйство. 1968. -№ 5. с. 15-18.

52. Детлаф Т.А. Развитие осетровых рыб / Детлаф Т.А., Гинзбург А.С., Шмальгаузен О.И. М.: Наука, 1981.-224 с.

53. Действие лазерного излучения на ранний онтогенез вьюна / Аверьянова О.В., Бурлаков А.Б., Пащенко В.З. и др. // Материалы 8-го Всесоюз. совещ. эмбриологов. М., 1991. - С. 1-12.

54. Доклинические испытания биологического действия «Темарокса» РНЦ ВМ и К. 2000. М.: Медицина. -110 с.

55. Дубровская Н.С. Аномалии органа обоняния у молоди осетровых при выпуске с рыбоводных заводов // Осетровое хозяйство водоёмов СССР: Т.1. //Краткие тез. докл. к предст. Всесоюз. совещ. (ноябрь 1989 г.). Астрахань: КаспНИРХ, 1989. - С.88-89.

56. Евтушенко Н.Ю. Применение макро- и микроэлементов в рыбоводстве // Рыбное хозяйство. 1989. - №5. - С .63-64.

57. Запорожец Г.В. Микроэлементы в теле молоди тихоокеанских лососей и их применение при выращивании рыб рода Oncorhynchus на Камчатке. Автореф. дис. . канд. биол. наук. М.: ВНИИПРХ, 2003. -24 с.

58. Зайцев В.Д. Применение кобальтовых удобрений в регионе с его недостатком // Всес. совещание соверш. биотехн. прудов, рыбовод., 1980. Тез. док., М.: 1980. С. 95-98.

59. Иозепсон У.П. Влияние микроэлементов на физиологическое состояние годовиков карпа в период зимовки / Иозепсон У.П., Глаголева Т.П., Платниеце Р.Ф. // Сб. науч. техн. информ. - М.: ВНИРО, 1968. - Вып.7. - С. 47-57.

60. Иванова Н.Т. Атлас клеток крови рыб. М.: Легкая и пищ. пром-сть, 1983.-76 с.

61. Исследование активности и химического состава препарата Вокс // Годовой отчет Южгеология. Ростов-на-Дону: АзНИИРХ, 2002. - С. 2.

62. Казьмин В.Д. Лечение кислородом и микроэлементами: Селен, кремний, йод, железо. Ростов-на-Дону, 2005. - С. 219.

63. Кокоза А.А. Методы и критерии оценки качества молоди осетровых рыб, выращенной на осетровых рыбоводных заводах // Биологические основы осетроводства. М.: Наука, 1983. - С. 178-190.

64. Коржуев П.А. Эколого-физиологические особенности осетровых рыб / Коржуев П.А., Глазов Т.Н. // Тез. докл. на отчета, сессии ЦНИОРХ (2225 февр. 1966 г.). Астрахань: КаспНИРХ, 1966. - С. 32-33.

65. Ключко Е.В. Макро- и микроэлементы как экологический фактор для гидробионтов // Тезисы II науч. техн. конф. - Мурманск: Изд-во МГТУ, 2001.-638 с.

66. Ковалев Г.К. Пути повышения эффективности рационального использования и охраны осетровых / Ковалев Г.К., Белоусов А.Н., Воробьев С.С. // Рыбоводство и рыболовство, 2001. № 1. - С. 7-9.

67. Ковальский В.В. Физиологическая роль микроэлементов у животных // Микроэлементы в жизни растений и животных. Труды конф. по микроэлементам (15-19 марта 1950 г., Москва). М.: Изд. АН СССР, 1952. - С. 55-70.

68. Ковальский В.В. Искусственное изменение биогенной миграции кобальта в рыбоводных прудах / Ковальский В.В., Крымова Р.В., Летунова С.В. // Изв. АН СССР, 1967. Вып. 6. - С. 869-878.

69. Ковальский В.В. Геохимическая экология. М.: Наука, 1974. - 299 с.

70. Ковальский В.В. Геохимическая среда и жизнь // 21-е чтения имени В.И. Вернадского. М.: Наука, 1982. - 78 с.

71. Кожин Н.И. Осетровые СССР и их воспроизводство // Труды ВНИРО: Осетровые южных морей Советского Союза (Биология, промысел, воспроизводство). Сб.1. М.: Пищ. пром-ть, 1964. - Т. 52. - С. 21-58.

72. Конопатов Ю.В. Основы иммунитета / Конопатов Ю.В., Макева Е.Е. -СПб, 2000. 135 с.

73. Козлов В.И. Товарное осетроводство / Козлов В.И., Абрамович Л.С. -М.: Россельхозиздат, 1986. 116 с.

74. Кузнецов А.Ф. Эффективность использования природных минералов при фузариотоксикозах у птиц / Кузнецов А.Ф., Мухина Н.В. М.: Россельхозиздат, 2001. - 45 с.

75. Кузнецов А.Ф. Если корма заражены микотоксинами / Кузнецов А.Ф., Кузнецова И.А. // Животноводство России. 2001. № 3. - С. 3.

76. Кузнецов А.А. Рыбоводно-биологическая эффективность применения природного цеолита // Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 2002. -22 с.

77. Коробейникова Э.Н. Модификация определения перекисного окисления липидов в реакции с тиобарбитуровой кислотой // Лабораторное дело. 1989. - № 7. - С. 8-10.

78. Краснодембская К.Д. Меланиновая пигментация, пигментные реакции и механизмы их регуляции у рыб в раннем онтогенезе на примере костистых и осетровых // Автореф. дис. . канд. биол. наук. Л.: ЗИН АН СССР, 1978.-22 с.

79. Краснодембская К.Д. Реакции пигментных клеток (меланофоров), как один из критериев оценки физиологического состояния молодиосетровых на рыбоводных заводах // Биологические основы осетроводства. -М.: Наука, 1983. С. 103-113.

80. Лав М.Р. Химическая биология рыб. М.: Пищ. пром-ть, 1976. - 349 с.

81. Лебедева Н.Е. Стресс у рыб, вызываемый биологически активными соединениями, и возможные пути его коррекции / Лебедева Н.Е., Головкина Т.В. // Биологически активные вещества и факторы в аквакультуре. М.: ВНИРО, 1993. - С. 128-139.

82. Лукьяненко В.И. Критерии и методы оценки качества молоди рыб, выращенной на рыбоводных заводах // Некоторые вопросы осетрового хозяйства Каспийского бассейна. -М, 1966.-С. 10-15.

83. Лукьяненко В.И. Полифункциональный принцип оценки качества производителей и заводской молоди, осетровых в связи с определением оптимальных сроков ее выпуска // Тр. Центр. НИИ озер. рыб. хоз-ва. -Астрахань: КаспНИРХ, 1971. Т.З. - С. 207-214.

84. Лукьяненко В.И Антропогенные и экологические стрессы осетровых рыб // Осетровое хозяйство водоемов СССР. Краткие тез. докл. к предст. Всесоюз. совещ. (ноябрь 1989 г.). 4.1. / Носелецкая Ю.Н. (ред.) -Астрахань: КаспНИРХ, 1989. С. 195-198.

85. Лукьяненко В.И. Проблема сохранения осетровых. «Зеленый мир» № 21. Астрахань, 2001 - С. 22.

86. Лукичева В.А. Металлопротеиды сыворотки крови. Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1989. - 16 с.

87. Лутай Г.Ф. Химический состав воды и здоровье населения // Гигиена и санитария, 1992. -№1. С. 15-17.

88. Лобзакова Т.В. Экологические аспекты повышения эффективности искусственного воспроизводства русского осетра // Автореф. дис. . канд. биол. наук. Ростов-на-Дону, 2001, - 24 с.

89. Макаров Э.В. Оценка выживания осетровой молоди, выращиваемой донскими рыбоводными заводами // Осетровые южных морей СССР. Тр. Всеросс. НИИ рыб. хоз-ва и океанограф. М.: Изд-во ВНИРО. - Т. LVI, 1964.-С. 141-171.

90. Макаров Э.В. Живые ископаемые близки к вымиранию / Макаров Э.В., Житенева Л.Д., Абросимова Н.А. Ростов-на-Дону.: Батайское книж. изд - во, 2000. - 143 с.

91. Маликова Е.М. Изменение морфологической картины крови у молоди балтийского лосося под воздействием растворов малахитовой зелени / Маликова Е.М., Глаголева Т.П. // Сб. науч. техн. информ. - М.: ВНИРО, 1967.-Вып. 11.

92. Методические указания по прижизненному получению икры у осетровых рыб. М.: ВНИРО, 1999. - 10 с.

93. Методические указания по применению даларгина для повышения жизнестойкости икры, предличинок, молоди рыб и акселерации ихроста/ Сост.: МикодинаЕ.В., СедоваМ.А., Глубокое А.И., Наволоцкий В.А. -М: Изд-во ВНИРО, 1987. 14 с.

94. Микроэлементы в жизни растений и животных // Труды конф. по микроэлементам (15 марта 1950 г.) М.: Изд-во АН СССР, 1953. - 614 с.

95. Москалев Ю.И. Минеральный обмен. М.: Агропромиздат, 1985. 288 с.

96. Морозов Н.П. Микроэлементы в промысловой ихтиофауне Мирового океана / Морозов Н.П., Петухов С.А. М.: Агропромиздат, 1986. - С. 137-138.

97. Мур Дж. Тяжелые металлы в природных водах: Контроль и оценка влияния / Мур Дж., Рамамурти С. М.: Мир, 1987. - 286 с.

98. Микодина Е.В. Управление физиологическими процессами у рыб биологически активными веществами и факторами / Микодина Е.В., Глубокое А.И. // Биологические основы марикультуры. М.: Изд-во ВНИРО, 1998.-С. 177-205

99. Наумова A.M. Современные экологически безопасные методы борьбы с болезнями рыб // Проблемы иммунологии, паразитологии и охраны здоровья рыб. М., 2004. С. 495 - 502.

100. Незаменимый селен. Сер. Здоровье и долголетие. М.: Медицина, 2001. -50 с.

101. ПО.Ноздрюхина JI.Р. Биологическая роль микроэлементов в организме животных и человека. М.: Наука, 1977. - 184 с.

102. Ноздрюхина Л.Р. Нарушение микроэлементного обмена и пути его коррекции / Ноздрюхина Л.Р., Гринкевич Н.И. М.: Наука, 1980. - 278 с.

103. Орлов Д.С. Науки о земле. Микроэлементы в почвах и живых организмах. М.: МГУ, 1998.

104. Одум Ю. Экология / В 2-х томах. Т.1. / М.: Мир, 1986. - 328 с.

105. Павлов Д.А. Опыт по инкубации икры и выращиванию молоди лососевых в солоноватой воде // Рыбное хозяйство. № 2. - 1978. - С. 21-22.

106. Пальгуй В.А. Состояние и причины сокращения запасов каспийских осетровых по материалам 1983-1991 гг. // Биологические ресурсы Каспийского моря. Тезисы докл. 1 Междунар. конф. (Астрахань, сент., 1992.). -Астрахань: КаспНИРХ, 1992. С. 292-296.

107. Патенты. Торговые марки. Япония, Токио, 2000. - С. 1.

108. Перевозников М.А. Тяжелые металлы в пресноводных экосистемах / Перевозников М.А., Богданов Е.А. СПб.: Изд-во ГосНИОРХ, 1999. -226 с.

109. Перечень рыбохозяйственных нормативов: предельно-допустимых концентраций и ориентировочно безопасных уровней воздействия вредных веществ для воды, водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение. М.: Изд-во ВНИРО, 1999. - 304 с.

110. Правдин И.Ф. Руководство по изучению рыб. М.: Пищевая пром-ть, 1966.-375 с.

111. Покатилов Ю.Г. Биогеохимия биосферы и медико-биологические проблемы. Новосибирск: Наука, 1993. - 207 с.

112. Пироговский М.И. Биология белуги и роль промышленного разведения этого вида в формировании запасов осетровых Каспия: Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1978. - 24 с.

113. Пироговский М.И. К вопросу об эффективности осетроводства в Волго-Каспийском районе // Биологические основы осетроводства. -М.: Наука, 1983.-С. 191-200.

114. Подушка С.Б. Использование аномалий обонятельного органа в качестве маркера выпускаемой рыбоводными заводами молоди осетровых / Подушка С.Б., Левин А.В. // Сб. науч. тр. СПб.: ГосНИОРХ, 1988. -Вып. 281,-С. 132-137.

115. Подушка С.Б. Аномалии обонятельного органа осетровых и использование их в качестве маркера заводской молоди, выпускаемой рыбоводными заводами // Науч.-техн. бюл. лаб. ихтиологии ИНЭНКО. -СПб, 1999.-№1.-С. 33-47.

116. Попова Э.К., Осташков О.А. Влияние излучений гелий-неонового лазера на эмбриогенез рыб // Биологически активные вещества и факторы в аквакультуре. М.: ВНИРО, 1993. - С. 140-147.

117. Проблемы современного товарного осетроводства / Отв. ред. Васильева Л.М. // Тез. докл. 1-ой Науч.-практ. конф. (24-25 марта 1999 г., Астрахань). Астрахань.: КаспНИРХ, 1999. - 156 с.

118. Руководство по определению методом биотестирования токсичности вод, донных отложений, загрязняющих веществ и буровых растворов. -М.: Изд-во РЭФИА, НИА Природа, 2002. - 117 с.

119. Рыбоводные нормативы по выращиванию осетровых рыб. Можайский ОРЗ. М.: Россельхозиздат, 2006. - 6 с.

120. Попова Э.К. Способ мечения гидробионтов / Попова Э.К., Гостев В.А, Осташков В.А., Заличева И.Н. Патент на изобретение. Авт. свид. № 1220155 //Бюл. изобрет. иоткр. -М., 1985. -№ 3. С. 56.

121. Попова Э.К. Способ получения личинок рыб / Попова Э.К. Гостев В.А., Осташков В.А., Ивашов М.Ю. Авт. свид. № 4358959 // Бюл. изобрет. и открыт.-М., 1989.-№5. С. 135.

122. Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб. Ч. 2. М.: АМБ-агро, 1989.-234 с.

123. Сборник инструкций и нормативно-методических указаний по промышленному разведению осетровых рыб в Каспийском и Азовском бассейнах. М.: Изд-во ВНИРО, 1986. - 271 с.

124. Селье Г. На уровне целого организма. М: Наука, 1972. - 123 с.

125. Способ воспроизводства и выращивания осетровых рыб / Сазонова Л.В., Цвылев О.П. Патент № 2290791. А01К61/00, приоритет от 28.04.2005 // Бюл. изобрет. и откр. № 1, 2007, С. 51-52.

126. Способ повышения жизнестойкости икры, личинок и молоди рыб / Цвылев О.П., Дергалева Ж.Т., Сазонова Л.В. Патент № 2290790, А01К61/00, приоритет от 28.04.2005 // Офиц. бюл. «Изобретения. Полезные модели» на электронных носителях. № 1, 2007. С. 50.

127. Способ воспроизводства и выращивания осетровых рыб / Цвылев О.П., Сазонова Л.В., Тертерова Е.М. Патент № 2290791, А01К61/00, приоритет от 28.04.2005 // Офиц. бюл. «Изобретения. Полезные модели» на электронных носителях. № 1, 2007. С. 51.

128. Способ биологической реабилитации городских водоемов / Цвылев О.П., Сазонова Л.В., Тертерова Е.М. Патент № 2290792, А01К61/00, приоритет от 28.04.2005 // Офиц. бюл. «Изобретения. Полезные модели» на электронных носителях. № 1, 2007. С. 51-52.

129. Статистические сведения по рыбной промышленности России, 20032004 / Сост.: Яновская Н.В., Бондаренко Г.А., Васильева М.А., Голубочкина В.М. М.: Изд-во ВНИРО, 2004. - 115 с.

130. Саатов Г.С. Роль липидов в метаболическом эффекте гормонов / Саатов Г.С., Исаев Э.И., Эргашова М.Ж. Ташкент: Фан, 1990. - 194 с.

131. Степанов JI.E. Физиологически активные липиды / Степанов Л.Е., Краснопольский Ю.М., Швец В.И. -М.: Наука, 1991. 195 с.

132. Скальный А.В. Химические элементы в физиологии и экологии человека. М.: Мир, 2004. 216 с.

133. Тарасова В.А. Природные цеолиты, их свойства и использование для очистки воды в рыбоводстве / Тарасова В.А., Лобзакова Т.В., Киянова Е.В. // Вода: экология и технологи. Тезисы докл. Второго Межд. конгр. (АКВАТЭК-96). М„ 1996. - С. 267-268.

134. Ткачева Н.К. Применение металлбелковых соединений в лечении анемий. Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1974. - 24 с.

135. Тренклер И.В. Неоднородность молоди белуги по спектру питания / Гидробиол. журн. Т. 23. - 1987. - №1. - С. 23.

136. Хованский А.Д. Геохимическая оценка состояния речной системы Нижнего Дона / Хованский А.Д., Приваленко В.В. Ростов-на-Дону, 1990.-С. 56.

137. Цирульская З.И. Включение в корма микроэлементов для улучшения роста / Цирульская З.И., Люкшина В.Д. // Сб. науч. тр. М.: Изд-во ЦНИИОРХ, 1981.-№ 176.-С. 151-154.

138. Чернышев В.И. Экология и профилактика свободнорадикальной патологии при физиологических адаптациях рыб // Биоантиоксиданты в регуляции метаболизма в норме и патологии. Труды МОИП, 1982. Т.57-С. 141-150.

139. Чернышев В.И. Эколого-физиологические и физико-химические аспекты адаптивных реакций водных животных // Автореф. дис. . канд. биол. наук. М.: Изд - во МГУ, 1984. - 20 с.

140. Чинарина А.Д. О рефлекторной регуляции приспособительной окраски у рыб // Автореф. дис. . канд. биол. наук. Л., 1963. - 23 с.

141. Щелкунов И.С. Болезни гидробионтов в марикультуре и их профилактика / Щелкунов И.С., Гаевская А.В., Юхименко Л.Н., Бычкова Л.И. // Биологические основы марикультуры. М.: Изд. ВНИРО, 1998. С. 246-287.

142. Шмальгаузен О.И. Осетр Acipenser guldenstadtii colchicus. Развитие предличинок // Объекты биологии развития. М.: Наука, 1975. С. 264277.

143. Шустов В.Я Изменение содержания ряда микроэлементов в крови // Автореф. дис. канд. биол. наук. Саратов, 1961. - 24 с.

144. Шустов В.Я. Микроэлементы в гематологии. М.: Медицина, 1967. -117с.

145. Эмсли Дж. М. Элементы: Справоч. энциклопед. издание (Сведения о химических, и биологических свойствах) - М.: Мир, 1993. - С. 17-64.

146. Яндовская Н.И. Инструкция по биотехнике разведения семги и лечебно-профилактическим мероприятиям при выращивании в бассейнах / Яндовская И.Н., Лейзерович Х.Л., Богданова Е.А. Л.: ГосНИОРХ, 1966.-51 с.

147. Beisel W.R. Nonspecific host factors. A review // Malnutrition and the immune response. N. -Y., 1982. - P. 341-354.

148. Corraze G. Nutrition lipidigue // Nutritionel alimentation des poisons et crustaces//INRA-IFREMER. 1994.-P. 147-170.

149. Cook G.D. The value of C-reactive protein determinations // Lab.- Lore, 1977. -Nl. P. 465-467.

150. Cotzias G.C. Nature, 1964. - V. 201. - P. 12-28.

151. Chevallier R. et Pairain R. Mesyre de la toxicite des pollutions eh milieu aquatigue / Science et peche. 1968. - N 166. - P. 1-10.

152. Duncome W.G. The colorimetric micro determination of long chain fatty acids // J. Biohem. 1999. - V. 235. - N 9. - P .25-72.

153. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups // Arch. Biochem. Biophys. 1959. -Vol. 82.-P. 70-77.

154. Elvehyet C., Hart E. The necessity of copper supplement to iron for hemoglobin in the pig // J. Biol. Chem. 1995. - P. 35.

155. Flercher B.L., Dillard C.J., Tappel A.Y. Measurement of fluorescent lipid peroxidation products in biological systems and tissues // Analyt. Biochem. 1973.-Vol. 52.-P. 1-9.

156. Ellis A.T. Stress and fish. A.D. Pickering (Ed.) / L. - N.Y, 1981. P. 1-29.

157. Folch J., Less M., Sloane K., Stanley Z. A Simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues // J. Biol. Chem. 1957. -Vol. 226.-№1.-P. 497-510.

158. Hudson B.J.F., Mahgoul S.E.O // J. Sci. Food Agric. 1981. - Vol. 32,- P. 208.

159. Isao Sh., Hiroko H., Bunji M. A simplified colorimetry without incineration of phosphorus in phosphatides //Agric. Biol. Chem. 1998. - Vol. 31. -N 1. -P. 111.

160. Keller W.D. Drinking water: a geochemical factor in human health // Geological Sociery of America bulletin. 1978. - Vol. 89. -N. 3.

161. Ketola H.G. Dietary zinc prevents cataract in trout // Fed. Proc. 1978. -Vol. 37.-P. 584.

162. Ketola H.G. Influence of dietary zinc on cataracts in rainbow trout (Salmo gairdneri) // J. Nutr. 1979. - V. 109. - P. 965-969.

163. Kubleck M.,Tiedeman G., Rosmanith J. Die Wirkung von Blei und Camium auf Fishe // Wiss. und Unwelt. 1983. - N 3. - P. 153-159.

164. Kemmn J. Fressa H. Der Einsatz von Kupfersulfat in der Schweinefutterung // Schweinzucht und Schweinemast. 1962. - N 10,- P. 5.

165. Mackenzie et al. // AMA Arch. Industr. Health. 1958. - N 18 . - P. 232.

166. Margoshes V., Vallee B.L., 1957. Amer. Chem. Soc. Vol. 79. - P. 4813

167. Ogino C., Vang G.-Y. Requirement of rainbow trout for dietary zinc // Bull. Jan. Soc. Fish. 1978. - V.44. - P. 1015-1018.

168. Orten J.M. Zinc Metabolism. Springfield, 1966. P. 38.

169. Pickering A.D., Pottinger T.G. Poor water qualtily suppresses the Cortisol response of salmonid fish to handling and confinement // J. Fish Biol. -1987.-Vol. 30.-N3.-P. 363-374.

170. Rabbow E., Rettberg P., Baumstark-Khan C., Horneck G. SOS-LUX- and LAC-FLUORO-TEST for the quantification of genotoxic and/or cytotoxic effects of heavy metal salts // Anal. chim. acta. 2002. - Vol. 456. - N 1. - P. 31-39.

171. Richter C. Lipids // Chem. Phys. 1987. - Vol. 44. - P. 175-188.

172. Robertson L., Thomas P., Arnold C.R., Trant J.M., Plasma Cortisol and secondary stress responses of red drum to handling, transport, rearing density, and a disease outbreak // Progr. Fish-Cult. 1987. - Vol. 49. - N 1. -P. 1-12.

173. Sumpter J.P., Dye H.M., Benfey T.J. The effect of stress on plasma ACTH, a-MSH, and Cortisol levels in salmonid fishes // Gen. and Сотр. Endocrinol. 1986.-Vol. 62.-N3.-P. 377-385.

174. Taylor S.L., Lamden M.P., Tappel A.L. Sensitive Fluorimetric Metod for Tissue Tocopherol analysis // Lipids. 1980. - Vol. 10. -N.6. - P. 407-412.

175. Wacker W., Vallee B. Nucleic acid and metals // J. Biol. Chem. 1971. -Vol. 243. N12.-P. 3257-3262.

176. Watanabe T. Effect on rainbow trout and chum salmon of deletion of trace elements from fish meal diet // Bull. Jan. Soc. Fish. 1980. - V. 46. - N. 12.-P. 1521-1525.

177. Yasuhira K. Generation of Superoxid radical during Antioxidation of Hydroxylamine and assay for SOD // Biochemistry and Biophys. 1983. -Vol. 186. -N6. -P. 119-195.