Биологическая активность и токсичность почв при нефтяном загрязнении и рекультивации

Тарасенко, Екатерина Михайловна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биологическая активность и токсичность почв при нефтяном загрязнении и рекультивации
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Биологическая активность и токсичность почв при нефтяном загрязнении и рекультивации"

На правах рукописи

ТАРАСЕНКО ЕКАТЕРИНА МИХАЙЛОВНА

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ И ТОКСИЧНОСТЬ ПОЧВ ПРИ НЕФТЯНОМ ЗАГРЯЗНЕНИИ И РЕКУЛЬТИВАЦИИ

Специальность 03.00.23 - Биотехнология 03.00.16 - Экология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

УФА-2006

Работа выполнена на кафедре биохимии и биотехнологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный университет»

Научные руководители:

Доктор биологических наук, профессор Киреева Наиля Ахняфовна кандидат биологических наук, доцент Новоселова Евдокия Ивановна

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор Багаева Татьяна Вадимовна доктор биологических наук, профессор Габбасова Илюся Масгутовна

Ведущая организация: Институт экологии и генетики микроорганизмов Пермского научного центра УрО РАН Защита состоится 4 мая 2006 г. в 1400 часов на заседании Диссертационного Совета КМ 002.136.01 при Институте биологии Уфимского научного центра РАН по адресу: 450054, г.Уфа, Проспект Октября, 69.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Уфимского научного центра РАН по адресу: 450054, г.Уфа, Проспект Октября,

69.

Автореферат разослан: " 3 " апреля 2006 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат биологических наук

Р.В. Уразгильдин

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Загрязнение почв нефтью в процессе ее добычи, транспортировки и хранения остается по-прежнему острой проблемой. Комплексная оценка состояния и биологической активности таких почв, способы их восстановления являются актуальными проблемами современной науки. Следует отметить, что превышение ПДК химических веществ в исследуемых субстратах служит лишь косвенным показателем их токсичности. Токсичное действие одних компонентов может быть нейтрализовано или усилено присутствием других, поэтому токсичность почвы не определяется токсичностью отдельных соединений, содержащихся в ней. Необходимо оценивать интегральную токсичность почвы, отражающую влияние всего комплекса загрязнителей. Наиболее целесообразным методом определения интегральной токсичности почвы является биотестирование. Успешное применение биотестирования для диагностики состояния экосистем во многом зависит от правильного подбора тест-объектов. В федеральном реестре методик для экологических служб предлагаются тест-системы, основанные на применении организмов из разных систематических групп, но представляющие гидробионты (Терехова и др., 2005). Однако полученные данные показали ограниченность гидробионтных тестов при анализе почвенных образцов (Бурдина, Терехова, 2005), что свидетельствует о необходимости разработки и использовании для оценки почв методов с использованием педобионтов.

Большинство исследователей полагает, что применение единственного биологического параметра для целей биотестирования ненадежно из-за разнообразных механизмов отклика тест-организма на различные антропогенные загрязнения (Воробейник и др., 1994; Андреюк и др., 1997; Каби-ров и др., 1997; Селивановская, Латыпова, 1999; Терехова и др., 2005). Полный анализ интегральной токсичности достигается при применении

набора биотестов с использованием ррЩШ^Д^т^ганизмов при конт

БИБЛИОТЕКА С.1

оэ

■«Winui С1ЧЧ

роле их биологических параметров. Наиболее информативный методологический подход при биологической оценке экологического состояния почв — комплексное биотестирование, заключающееся в использовании биологических тест-объектов из разных систематических групп с различным уровнем организации (Капелькина и др., 2004). Подобрать единый универсальный набор биотестов для всех случаев определения токсичности почвы практически невозможно. Причина заключается в объективной необходимости использования различных организмов в зависимости от химической природы загрязнителя и целевых установок каждого конкретного исследования. Таким образом, разработка тестов для комплексной оценки состояния почв, загрязненных нефтью и при проведении рекультивацион-ных мероприятий, еще требуют дальнейшего изучения.

Цель работы. Изучить изменение биологической активности и токсичности почв при загрязнении нефтью, отдельными нефтепродуктами и в процессе биоремедиации.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние нефти и отдельных нефтепродуктов на биологическую активность и токсичность серой лесной почвы и чернозема выщелоченного.

2. Изучить изменение биологической активности и токсичности нефтезаг-рязненных почв при внесении биопрепарата Бациспецин.

3. Изучить влияние люцерны, используемой в качестве фитомелиоранта нефтезагрязненных почв на биологическую активность и токсичность.

4. Выявить показатели, для использования в комплексной оценке состояния нефтезагрязненных и рекультивируемых почв.

роорганизмов и видовая структура комплекса микромицетов). Впервые в регионе исследована активность почвенной липазы и показана корреляционная зависимость между содержанием нефти в почве и ростом ее активности. Было изучено влияние отдельных нефтепродуктов на активность липазы. Предложено ее использование в качестве показателя биодеструкции нефти в нефтезагрязненных и рекультивируемых почвах. Внесенные дополнения и модифицикация методики определения липазной активности почв позволили более объективно определить ее активность. Изучены свойства люцерны, как фитомелиоранта и выявлена эффективность ее использования при концентрациях загрязнения до 5% от массы почвы. Основные положения, выносимые на защиту

1. Нефтяное загрязнение повышает активность уреазы, липазы, вызывает рост численности углеводородокисляющих микроорганизмов и микромицетов, увеличивает фито- и зоотоксичность в серой лесной почве и черноземе выщелоченном.

2. Отдельные нефтепродукты неоднозначно влияют на активность уреазы, липазы и обладают разной фитотоксичностью в серой лесной почве и черноземе выщелоченном.

3.При внесении биопрепарата Бациспецин и применении люцерны в качестве фитомелиоранта снижается зоо- и фитотоксичность, повышается ли-пазная активность, численность углеводородокисляющих микроорганизмов, уменьшается активность уреазы в нефтезагрязненных серой лесной почве и черноземе выщелоченном.

4. Активность липазы, уреазы, рост численности углеводородокисляющих микроорганизмов и микромицетов, фитотоксичность, выживаемость кол-лембол, можно использовать при комплексной оценке состояния нефтезагрязненных и рекультивируемых почв.

Практическая значимость. Подобранные тест-объекты могут быть использованы для диагностики и мониторинга почв при их загрязнении. Дополнения, внесенные в методику определения липазы, позволяют более объективно оценить уровень активности этого фермента в загрязненной почве и использовать его для мониторинга токсичности при биологической рекультивации. Результаты исследований были применены при разработке технологии биорекультивации загрязненного участка на территории ОАО «Уфаоргсинтез» (акт о внедрении прилагается).

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертационной работы доложены на международных конгрессах и симпозиумах "Petroleum Contaminated Soils, Sediments and Water. Analysis, Assessment and Remediation" (London, 2001), «Contaminated Soils, Sediments and Water» (Amherst, 2001), на l0"1 Европейском микробиологическом конгрессе (Ljubljana, 2003), "Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга" (Сыктывкар, 2001), «Почва - как связующее звено функционирования природных и антропогенно-преобразованных экосистем» (Иркутск,

2001), «Освоение Севера и проблемы природовосстановления» (Сыктывкар, 2001), «Видновления порушенных природных екосистем» (Донецк,

2002), "Биогеография почв" (Сыктывкар, 2002), на всероссийских конференциях "Растение, микроорганизмы и среда" (Санкт-Петербург, 2000), "Актуальные проблемы биологии и экологии " (Сыктывкар, 2000, 2002, 2004), "Ломоносов - 2002" (Москва, 2002), "Биология - наука XXI века" (Пущино, 2002, 2003), VI Докучаевских молодежных чтениях (Санкт-Петербург, 1999,2001, 2003, 2004), «Роль науки и образования на пороге третьего тысячелетия» (Москва, 2000), «Актуальные экологические проблемы республики Татарстан» (Казань, 2003), «Молодые ученые Волго-Уральского региона на рубеже веков» (Уфа, 2001), «Актуальные проблемы экологии и охраны окружающей среды» (Уфа, 2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 30 печатных работ, в том числе 8 статей в реферируемых журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, списка литературы, включающего 234 источника, в том числе 157 на иностранных языках. Текст изложен на 140 страницах, иллюстрирован 22 рисунками и 28 таблицами.

Благодарности. Автор выражает глубокую благодарность за неоценимую помощь и поддержку при выполнении работы научным руководителям д.б.н. профессору Киреевой H.A., и к.б.н. доценту Новоселовой Е.И., к.б.н. доценту Ханисламовой Г.М., к.б.н. ст. преподавателю Бакаевой М.Д.. всем коллегам и соавторам научных публикаций.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В главе 1 «Биологическая активность нефтезагрязненных почв и вопросы их рекультивации» (Обзор литературы) рассмотрены вопросы влияния нефтяного загрязнения на компоненты почвенной экосистемы, биодеградации нефти и нефтепродуктов микроорганизмами почвы, рекультивации нефтезагрязненных почв, биодиагностики нефтезагрязненных и рекультивируемых почв, приведен обзор биопрепаратов на основе углево-дородокисляющих микроорганизмов, используемых при рекультивации нефтезагрязненных почв.

В главе 2 «Объекты и методы исследований» дана краткая физико-географическая характеристика района исследования Республики Башкортостан: описание природных условий, рельефа, климата, почвы.

Объектом исследований являлись показатели токсичности нефтезагрязненных (серая лесная, чернозем выщелоченный) и рекультивируемых почв (Бациспецин, фитомелиорант-люцерна Medicago sativa и их сочетание), а именно: активность ферментов уреазы и липазы, численность У ОМ, зоо- и фитотоксичность, комплекс микромицетов. Подбор показателей для оценки последствий нефтяного загрязнения и последующей рекультивации

производили исходя из положения, что биоиндикационные показатели должны отражать влияние загрязнителей на различных уровнях экосистемы. Исследования проводили в полевых и лабораторных условиях. Активность уреазы, протеазы определяли по Хазиеву Ф.Х. (1990). Активность липазы определяли по модифицированному нами методу Козлова К.А. с соавторами (1968). Определение фитотоксичности, подсчет и определение микроорганизмов проводили общепринятыми методами (Методы почвенной. .. 1990), а определение зоотоксичности с использованием ногохвосток по методу Г.М. Ханисламовой (1995). Содержание остаточных нефтепродуктов определяли горячей экстракцией метиленхлоридом (McGill, Rowell, 1980). Статистическая обработка результатов проведена с применением пакета прикладных программ.

В главе 3 «Влияние загрязнения нефтью и нефтепродуктами на показатели биологической активности почв. Подбор биодиагностических показателей» показано, что активность фермента уреазы в нефтезаг-рязненных почвах увеличивается с ростом концентрации нефти в почве, как в полевых, так и в лабораторных опытах. Если в контроле на протяжении лабораторного опыта она составляла 0,38-0,40 мг NH3/r почвы, то при загрязнении серой лесной почвы нефтью в концентрации 10%, активность уреазы увеличилась до 0,92 мг NH3/r почвы. В условиях полевого эксперимента активность уреазы при загрязнении почвы нефтью в концентрации 25 л/м2, уже через 1 мес. превышала значения контроля в 3 раза. Активность этого фермента длительно сохранялась на высоком уровне при загрязнении, как нефтью, так и отдельными нефтепродуктами. Поэтому предлагается использовать ее в качестве одного из диагностических показателей загрязнения почв нефтью.

Почвенные липазы в отличие от других ферментов исследованы значительно в меньшей степени (Покорна, 1964; Cooper, Morgan, 1981; Pan-

сЬо1у, Ьупё, 1972). Проведенные нами исследования показывают, что активность липазы в нефтезагрязненной серой лесной почве возрастает со временем, стабилизируется и сохраняется длительное время на достаточно высоком уровне (табл.1).

Таблица 1

Активность липазы (мл 0,05 N КОН/г почвы) и содержание остаточной нефти (г/100г) в серой лесной нефтезагрязненной почве и при рекультивации (полевой опыт)

Варианты опыта Активность липазы, Остаточная нефть,

мл 0,05 N КОН/г почвы г/100г

1 2 3 4 2 3 4

Контроль(К) 9,7 10,1 9,8 10,8 - - -

К+Бациспецин 9,8 10,2 9,7 12,2 - - -

К+Фитомелиорант 9,8 11,9 11,0 14,2 - - -

Первоначальная доза нефти 5,67 г/100г почвы

НЗП 8,3 11,3 11,9 12,9 4,75 4,12 0,65

НЗП+Бациспецин 9,0 12,1 14,0 14,6 3,70 2,78 следы

НЗП+Фитомелиорант - 12,7 13,1 14,5 3,89 3,32 следы

Первоначальная доза нефти 7,32 г/100г почвы

НЗП 7,9 10,1 12,3 13,5 6,31 5,23 1,82

НЗП+Бациспецин 7,9 10,3 15,2 15,7 4,97 3,95 0,45

НЗП+Фитомелиорант - 10,3 12,7 15,2 5,18 4,29 0,51

Первоначальная доза нефти 9,65г/100г почвы

НЗП 7,2 10,4 11,4 13,3 8,45 7,43 2,63

НЗП+Бациспецин 7,2 10,6 14,6 15,6 6,79 5,21 0,84

НЗП+Фитомелиорант - П,7 13,5 16,2 7,11 6,13 1,02

Первоначальная доза нефти 10,11 г/100г почвы

НЗП 6,4 8,3 8,0 10,6 9,11 8,34 3,42

НЗП+Бациспецин 6,4 10,9 14,5 15,1 8,01 5,69 0,98

НЗП+Фт омелиорант - 10,0 13,0 16,4 8,99 7,32 1,12

Примечание НЭП - нефтезагрязненная почва, 1 - через 3 сут , 2 - чере! 6 мес.; 3 - через 12 мес , 4 - через 24 месяца

Такой интенсивный липолиз коррелирует с увеличением численности УОМ (г=0,8б-0,94, при Р>0,95) и с уменьшением содержания остаточных компонентов нефти в почве (г= - 0,89-(-0,96)), при Р>0,95). В деградации липидов участвуют ферментные системы очень похожие на системы биодеградации нефти. Загрязнение почвы вызывает индукцию активности почвенной липазы. Активность липазы повышается с накоплением не разлагающихся и малоактивных биологических веществ, которые возникают в процессе биодеградации (А11агс1, ИеНзоп, 1997). К таковым можно отнести и остаточные компоненты нефти. Поэтому этот показатель можно применять в качестве 1

одного из диагностических показателей биодеградации нефти и нефтепродуктов.

Параллельно с изучением ферментативной активности в почве определялась численность углеводородокисляющих микроорганизмов (УОМ) и содержание остаточной нефти. Микробиологический контроль в лабораторном эксперименте показал, что в образцах загрязненной почвы изначально присутствует аборигенная микробиота, которая способная окислять углеводороды нефти. Через 12 месяцев в полевых условиях и 3 месяца в лабораторных условиях (рис.1) численность УОМ на несколько порядков

контроль

3 30 60 90 120 180 360 суток

Рис 1 Численность УОМ в лабораторном эксперименте (серая лесная почва) при различных концентрациях нефтяного загрязнения (%) 1 - контроль, дозы нефти (%) 2 - 1, 3 - 2,4 - 5, 5 - 10, 6 - 15.

превосходит уровень фоновой почвы. Это связано, в первую очередь, с адаптацией биогеоценозов к нефтяному загрязнению, и повышению, таким образом, углеводородокисляющей способности почвы. Содержание остаточных компонентов нефти в почве, наоборот, падает (табл.1).

Почвенные микромицеты представляют собой группу микроорганизмов универсальную по своему значению для формирования плодородия почвы (Билай, 1984) и значительно превосходящую по биомассе другие. Использование подходов биологического мониторинга для почвенных микромицетов удобно из-за более простой по сравнению с другими микроорганизмами видовой идентификации и описания видовой структуры сообществ (Бакаева, 2004). При загрязнении чернозема выщелоченного возрастающими концентрациями нефти (0,5- 8%) происходило значительное увеличение численности микромицетов. В лабораторных условиях из чернозема выщелоченного загрязненного возрастающими концентрациями нефти было выделено 56 видов микроскопических грибов, 15 видов грибов были идентифицированы как представители двух родов: Aspergillus и Pénicillium. Меньшим количеством видов оказались представлены роды Fusarium, Trichoderma, Mucor, Paecilomyces и Scopulariopsis. Причем изо-ляты Trichoderma и Scopulariopsis выделялись преимущественно из незагрязненной и слабо загрязненной почвы, а представители рода Fusarium из почв со средней степенью загрязнения. Видовой состав их менялся более чем на половину. Вид Aspergillus fumigatus - типично редкий в фоновой почве доминировал при всех концентрациях поллютанта.

В лабораторных и полевых условиях была опробована методика определения зоотоксичности почвы, загрязненной нефтью с использованием ногохвосток (Collembola). На территориях с интенсивной антропогенной нагрузкой ногохвостки часто остаются единственной группой, по которой можно судить о степени воздействия на почву (Ханисламова, 1995). В

первый период после загрязнения поллютант проявляет к коллемболам острое токсическое действие. В дальнейшем, с увеличением времени инкубации нефти в почве острое токсическое действие на ногохвосток сменяется хроническим, что проявляется в увеличении процента выживаемости и продолжительности жизни (табл.2).

Таблица 2

Выживаемость ногохвосток (%) в нефтезагрязненной и рекультиви-_руемых почвах, при различных концентрациях нефти_

| 5 1 "й « 3 §3? !¿ Нефтезагряз-ненная почва Почва, обработанная Бациспе-цином Почва+ фитомелиорант люцерна

sN g 8. 8 U в 5 •&• § а 1 1 2 1 2 1 2

1 20 7 40 9 - -

3 сут. 2 10 5 35 5 - -

5 0 1 0 1 - -

10 0 0 0 0,5 - -

1 70 8 80 7 75 Более 10

I 2 25 5 45 6 40 Более 10

S 5 0 0,5 0 2 30 8

10 0 0 0 0,5 0 0

Я 1 85 9 95 Более 10 85 Более 10

1 2 30 5 55 8 55 8

3 5 0 3 0 1 10 5

го 10 0 0 0 0,5 0 0

в 1 85 Более 10 100 Более 10 100 Более 10

§ 2 55 5 65 8 85 Более 10

i 5 0 3 40 7 40 6

\о 10 0 0 0 0,5 0 0

Примечание: 1- Выживаемость на 5 день, %; 2- Продолжительность жизни, сут

Фитотоксичность почвы в лабораторных условиях определяли по развитию тест-растений (редис Raphanus sativa, сорт Красный с белым кончиком, кукурузе Zea mays, L, сорт Краснодарская 55). В лабораторных и полевых условиях при изучении влияния нефтяного загрязнения на проростки тест-растений получены сходные результаты (рис.2). В значительной степени уровень фйтотоксичности связан с наиболее токсичными легкими фракциями нефти. В лабораторных условиях через 3 дня после начала опы-

та в наибольшей степени подавлялась всхожесть семян редиса при загрязнении бензином, когда фитотоксичность достигала наивысшего значения (1364 УКЕ, мг/л). С увеличением времени инкубации с бензином фитотоксичность почвы значительно снижалась и через 6 месяцев после постановки опыта лишь в два раза превышала значения контрольного варианта. Тяжелые фракции обладали меньшей токсичностью - токсичность асфальтита в концентрации 10% от массы почвы на третьи сутки составляла 24 УКЕ, мг/л.

концентрации нефти

мес.

Рис.2. Токсичность различных концентраций нефти по отношению к проросткам редиса

В главе 4 «Изменение показателей биологической активности нефтезагрязненных почв при рекультивации» в п. 4.1 рассматривается влияние бакпрепарата Бациспецин на показатели активности нефтезагрязненных почв. Выбранный нами препарат Бациспецин хорошо зарекомендовал себя при проведении рекультивации нефтезагрязненных почв при умеренных концентрациях загрязнителя (Андресон и др., 1994; Патент РФ №2077397, 1997). Внесение биопрепарата, содержащего клетки микроорганизмов штамма Bacillus sp., увеличивало численность УОМ на несколько порядков. Это способствовало интенсификации биодеградации нефти, что подтверждают данные по определению остаточной нефти в почве. Обраща-

ет на себя внимание, что максимальная скорость деградации поллютанта наблюдалась при невысоких и умеренных (2- 5% от массы почвы) концентрациях содержания нефти в почве. Внесение бакпрепарата Бациспецин, первоначально вызывало увеличение активности уреазы, вероятно, за счет содержащихся в препарате биологически активных веществ. В дальнейшем же, как в лабораторном, так и в микрополевом опыте активность фермента в обработанной почве была ниже, чем в загрязненной такими же концентрациями нефти необработанной почве. Литературные (Киреева и др., 2001; Габбасова, 2004; Новоселова, 2004) и наши данные указывают на тесную связь активности фермента с концентрацией нефти в почве. Препарат Бациспецин, способствует ускорению разложения нефти в почве и одновременно, в почвах обработанных Бациспецином, снижается активность уреазы.

Применение бакпрепарата Бациспецин усиливало липолитическую активность серой лесной почвы, загрязненной различными дозами нефти (табл. 1 ).

В опыте с применением Бациспецина как рекультивирующего фактора из почвы как загрязненных, так и контрольных вариантов выделялись, в основном, представители родов Aspergillus и Pénicillium. Микроми-цеты, принадлежащие к другим родам, встречались значительно реже. В общей сложности из всех вариантов опыта было выделено 22 вида микро-мицетов. Наибольшее количество видов (13 видов) микроскопических грибов было обнаружено в серой лесной почве, загрязненных нефтью в концентрациях 5%, 10% после их обработки биологическим препаратом Бациспецин.

Биопрепарат Бациспецин, как показывают полученные нами ранее данные (Киреева, Тарасенко и др., 2003), способствовал ускорению деструкции нефти в почве и снижению ее фитотоксичности за счет изменений в

комплексе микроскопических грибов. Снижение фитотоксичности наиболее интенсивно происходило в первые месяцы после обработки биопрепаратом, как в лабораторном, так и в микрополевом опыте при высоких концентрациях нефти в почвах.

Изучение выживаемости коллембол в рекультивируемых почвах показало, что уже через три дня после постановки опыта при низкой дозе нефти в почве она увеличилась (табл.2). В дальнейшем, через 1; 3 и 6 месяцев после постановки опыта эта величина возрастала и через полгода она стала 100%, тогда как в нерекультивируемой нефтезагрязненной почве она составляла 85%. При компостировании почвы высокими дозами нефти рекультивирующий эффект Бациспецина не сказывался на выживаемости коллембол и лишь через 6 месяцев наблюдалось частичное восстановление этого показателя.

В п.4.2. рассмотрено влияние фитомелиоранта люцерны на показатели биологической активности нефтезагрязненных почв. Как известно, растения семейства бобовых за счет симбиотических азотфиксато-ров способны повышать микробиологическую активность и плодородие почв. Поэтому они часто рекомендуются для проведения работ по восстановлению антропогенно-нарушенных территорий (Lee, Banks, 1993). Устойчивость люцерны к нефтяному загрязнению была изучена при концентрациях от 0,5 до 20% от массы почвы и отмечена возможность применения ее как фитомелиоранта при низких и средних (от 0,5 до 5% от массы почвы) концентрациях загрязнителя.

При использовании люцерны в качестве фитомелиоранта нефтезаг-рязненного чернозема выщелоченного, установлено увеличение липолити-ческой активности, которая стабилизируется и сохраняется на высоком уровне в течение двух лет, при изученных концентрациях нефти (табл.1).

Одновременно с этим под посевами люцерны значительно быстрее уменьшается содержание остаточных компонентов нефти в почве и увеличивается численность УОМ Увеличение популяционной плотности УОМ способствует, в свою очередь, ускорению разложения нефти в почве. Посев люцерны в нефтезагрязненную почву снижал токсичность почвы по отношению к проросткам корней редиса. Наиболее заметные изменения фито-токсичности произошли при концентрации загрязнителя 2 и 5 %.

Через 1 месяц после постановки опыта в нефтезагрязненной почве увеличилась как выживаемость ногохвосток, так и продолжительность их жизни. Особенно наглядно это проявилось при низких концентрациях поллю-танта. И при умеренных концентрациях загрязнения отмечалось увеличение, как процента выживаемости, так и продолжительности их жизни.

В п.4.3. описывается влияние комплексной биоремедиации на биодиагностические показатели нефтезагрязненной почвы. В полевых условиях (вблизи территории АООТ «Уфаоргсинтез») была проведена комплексная биоремедиация чернозема выщелоченного, загрязненного нефтью, с использованием биопрепарата Бациспецин и фитомелиорантов. Содержание нефтепродуктов в исследуемых образцах почв из различных точек вблизи места утечки колебалось от 2,33 % до 10,01 % от массы почвы.

Очистка от остаточных компонентов нефти и восстановление плодородия почв после нефтяного разлива осуществлялись в течение двух вегетационных сезонов. В начале первого вегетационного сезона в разрыхленную землю был внесен биопрепарат Бациспецин. При обработке загрязненных участков Бациспецином и высеве фитомелиоранта наблюдалось более значительное снижение содержания остаточных компонентов нефти, чем в нерекультивируемой почве (рис.3). Ускорение деструкции нефти в обработанной Бациспецином почве связано, скорее всего, с зарегистрированным нами увеличением на один - два порядка содержания УОМ.

первоначальная концентрация 10,01 %

ЕЭ почва без обработки

■ почва после

фиторекультивации люцерной

CS почва с внесением Бациспецина

Змее. бмес 18мес.

Сроки отбора образцов

Рис.3 Содержание остаточных нефтепродуктов в черноземе выщелоченном при комплексной биоремедиации

Отмечено небольшое уменьшение частоты встречаемости микро-мицетов, положительно отзывавшихся на внесение нефти в условиях нашего эксперимента. В целом это можно считать благоприятным признаком, так как микромицеты видов А. niger, A.terreus, Р funiculosum часто являются продуцентами микотоксинов. Под действием биопрепарата снижалась также частота встречаемости фитопатогенного вида Fusarium moniliforme и восстанавливалась численность Т viride, - вида проявляющего антагонистические свойства в отношении целого ряда фитопатогенных грибов. Известно, что комплекс почвенных микромицетов зависит не только от типа почвы, но и от вида фитоценоза. Растения активно влияют на микобиоту почвы с помощью прижизненных корневых выделений и корневого опада. Поэтому посев люцерны на фоне Бациспецина формировал комплексы грибов, имевшие меньше сходства с образцами без биодобавки (65-70% общих видов), чем в почвах с Бациспецином (85% общих видов).

Для отслеживания прогресса в биоремедиации и восстановления плодородия оценивалась степень токсичности остаточных нефтепродуктов на компоненты экосистемы. Внесение Бациспецина снижало фитотоксиче-ский эффект нефти, стимулируя удлинение проростков и приближая значения относительной длины к единице. При фитомелиорации под посевами

люцерны наблюдалась полная детоксикация компонентов нефти, по отношению к проросткам редиса (рис.4.).

первоначальное загрязнение 2,33% масс.

первоначальное загрязнение 5,14% масс.

первоначальное загрязнение 10,01% масс.

- нефтезагрязненная почва

- нефтезагрязненная почва+Бациспецин

'нефтезагрязненная почва+Бацислецин+ Фитомслиорант

I I

6 12 18 мес.

Рис.4. Фитотоксичность чернозема выщелоченного при различных концентрациях нефти в процессе биоремедиации

Внесение Бациспецина и использование посевов люцерны, как фи-торекультивируещего фактора, способствовало снижению зоотоксичности почвы разной степени загрязненности. Особенно наглядно это проявилось через месяц после посева люцерны, и к концу вегетационного сезона неф-тезагрязненные почвы оказались вполне пригодными для обитания коллем-

бол. Таким образом, за один вегетационный сезон наряду со значительным снижением остаточных нефтепродуктов в почве произошло и снижение ее токсичности к проросткам редиса (фитотоксичность) и по отношению к выживаемости коллембол (зоотоксичность).

Урожайность зеленой массы люцерны в почве, обработанной Ба-циспецином, приближалась к уровню контроля, вероятно, как за счет интенсификации биодеградации нефти биопрепаратом, так и за счет использования его компонентов в качестве удобрения. В тоже время люцерна, как бобовая культура, способствовала оптимизации азотного режима в нефте-загрязненной почве, увеличивала популяционную плотность УОМ, что ускоряло разложение нефти и снижало токсическое воздействие последней.

Содержание бенз(а)пирена, одного из представителей ПАУ, в зеленой массе люцерны, выращенной на нефтезагрязненной почве, значительно (10-15 раз) превышало фоновый региональный уровень (13,2 нг/г). В то же время, содержание этого вещества, в зеленой массе люцерны, посеянной на нефтезагрязненной рекультивируемой (Бациспецином) почве было намного меньшим (25 нг/г). Это позволило использовать фитомассу люцерны в качестве сидерата в конце первого вегетационного сезона. Повторная фито-ремедиация для доочистки и полной детоксикации, проведенная на следующий вегетационный сезон путем высева бобово-злаковой смеси (клевер белый: костер безостый), способствовала наиболее полному очищению загрязненного участка. Использованные растения интенсифицировали микробиологические процессы в почве за счет азотфиксации в ризосфере клевера с одной стороны, и за счет залужения мощной корневой системой костра, с другой.

И если в первый вегетационный сезон фито-, зоо- и микотоксиче-ские свойства загрязненной почвы имели ярко выраженный негативный характер, то во второй вегетационный сезон они практически не проявля-

лись. Содержание нефтепродуктов не превышало фоновое (0,1-0,15%) и соответствовало нормативным показателям Такая почва может быть использована в сельскохозяйственных целях.

ВЫВОДЫ

1.С ростом концентрации нефти в почве возрастает активность уреазы, липазы, увеличивается зоо- и фитотоксичность, численность углеводородо-кисляющих микроорганизмов и микромицетов. Между липазной активностью и содержанием остаточных компонентов нефти в почве обнаружена корреляционная зависимость (г= - 0,89 -(-0,96)).

2. Токсическое действие отдельных нефтепродуктов на активность уреазы, липазы и всхожесть семян редиса возрастает в ряду - асфальтит > моторное масло > дизельное топливо > бензин.

3.При внесении биопрепарата Бациспецин снижается зоо- и фитотоксичность, повышается липазная активность, увеличивается численность углеводородокисляющих микроорганизмов, уменьшается активность уреазы в нефтезагрязненной серой лесной почве.

4. Использование в качестве фитомелиоранта нефтезагрязненных почв люцерны эффективно при концентрациях нефти 0,5 - 5% от массы почвы, при этом токсичность почвы снижается на 100 - 40% соответственно.

5. Комплексная ремедиация с использованием биопрепарата Бациспецин и люцерны в качестве фитомелиоранта приводит к полной деструкции нефтепродуктов в черноземе выщелоченном при их исходной концентрации от 2 до 10% в течение двух лет, при этом токсичность почвы снижается на 100%.

6. Активность липазы, уреазы, рост численности углеводородокисляющих микроорганизмов и микромицетов, фитотоксичность, зоотоксичность, можно использовать в качестве показателей комплексной оценки состояния нефтезагрязненных и рекультивируемых почв.

Слисок основных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Киреева H.A., Ямалетдинова Г Ф., Мифтахова А.М , Тарасенко Е.М. Применение многокомпонентной тест-системы для биоиндикации почв, загрязненных нефтью// Науч. конф. по науч.-техн. программам Минобразования России. Сб. статей -Уфа: Изд-во БашГУ. 1999. - 4.2. - С.37-43

2. Тарасенко Е.М. Микробиологический способ восстановления плодородия почв// Роль науки и образования для устойчивого развития на пороге третьего тысячелетия. Тез. докл. IV Межд. экологической конф. М.МГТУ. Смоленск: Ойкумена -2000. - Т. 1,-С. 109-110

3. Киреева H.A., Тарасенко Е. М., Онегова Т.С. Биологическая рекультивация неф-тезагрязненных почв// Итоги биологических исследований 2000г. Вып. 6. Сб. науч

'трудов. - Уфа:Изд-во БашГУ- 2001. - С. 115-118

4. Киреева H.A., Тарасенко Е.М., Онегова Т.С. Подбор биоиндикационных показателей для диагностики нефтезагрязненных и рекультивируемых почв// Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга. Тез. докл XI Межд.симпозиума по биоиндикаторам. - Сыктывкар. 2001. - С.78-79,271

5 Киреева H.A., Новоселова Е.И., Тарасенко Е.М., Онегова Т.С. Микробиологическая рекультивация нефтезагрязненных почв// Видновлення порушених природних екосистем. Мат. Первой межд. науч. конференции - Донецк: TOB «Лебщь». 2002 - С.191-193.

6. Kireeva N.A., Vodopyanov V.V , Tarasenko E. M., Onegova T.S., Novoselova E.I. Assessment of toxicity of oil-contaminated soil by microbial activity indices//Modern problems of bioindication and biomonitoring. Proc. XI Inter. Symp. of bioindicators. -Syktyvkar. 2003. - P. 182-188

7. Киреева H.A., Бакаева М.Д, Тарасенко Е.М, Галимзянова Н.Ф., Новоселова Е.И. Снижение фитотоксичности нефтезагрязненной серой лесной почвы при биорекультивации// Агрохимия. -2003. -№2. - С.50-55

8. Киреева H.A., Тарасенко Е.М., Бакаева М.Д. Валиуллина А А. Токсическое действие нефтяных углеводородов на рост и развитие люцерны (Medicago sativa L.) //Ботанические исследования в Азиатской России. Мат.Х1 съезда РБО. -Барнаул. 2003.-Т.2. - С.230-231

9. Kireeva N.A , Bakaeva M.D., Tarasenko E.M. Changing of microbiological variety in oil-contaminated soils// Iя FEMS Congress of European microbiologists. Abstract Book. -Slovenia. Ljubljana. 2003. - P 185

10. Vodopyanov V.V , Kireeva N.A , Tarasenko E.M. Mathematic model of microbiological process the oil-contaminated soil//!*1 FEMS Congress of European microbiologists. Abstract Book.-Slovenia Ljubljana. 2003. -P.188

11. Киреева H.A., Тарасенко E.M., Онегова T.C. Опыт биотехнологической рекультивации нефтезагрязненных почв// Технологии ликвидации последствий аварийных разливов нефти и нефтепродуктов. Тез. докл. Белорусско-российского на-уч.-техн. семинара - Новополоцк-Минск. 2004. - С.32-33

12. Киреева Н.А., Бакаева М.Д., Тарасенко Е.М. Комплексное биотестирование для оценки загрязнения почв нефтью// Экология и промышленность Россини. <

- 2004. -№2. - С.26-29

13. Киреева Н.А., Тарасенко Е.М, Ханисламова Г.М., Валиуллина А.А. Использование ногохвосток (Collembola) для оценки токсичности нефтезагрязненных почв//Токсикологический вестник. - 2004. - №3.- С 34-37

14. Киреева Н.А., Тарасенко Е.М., Онегова Т.С., Бакаева М.Д. Комплексная био-ремедиация нефтезагрязненных почв для снижения токсичности// Биотехнология.

- 2004,- №6. - С.63-70

15. Водопьянов В.В., Киреева Н.А., Тарасенко Е.М. Фиготоксичность нефтезагрязненных почв (математическое моделирование)// Агрохимия. -2004. -№10. -С.73-77

16. Киреева Н.А., Бакаева М.Д., Тарасенко Е.М. Детоксикация нефтезагрязненных почв под посевами люцерны (Medicago sativa L.)// Агрохимия. -2004. -№10. -С.68-72

17. Киреева Н.А., Ханисламова Г.М., Тарасенко Е.М. О возможности биотестирования нефтезагрязненной и рекультивируемой почвы по выживаемости коллембол (Collembola)// Экология. -2005.- №5.-С. 397-400

18. Киреева Н.А., Тарасенко Е.М., Шамаева А.А, Новоселова Е.И. Влияние загрязнения почв нефтью и нефтепродуктами на активность липазы// Почвоведение-2006. -№ 8. - С. (в печати)

Тарасенко Екатерина Михайловна

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ И ТОКСИЧНОСТЬ ПОЧВ ПРИ НЕФТЯНОМ ЗАГРЯЗНЕНИИ И РЕКУЛЬТИВАЦИИ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Лицензия на издательскую деятельность ЛР№ 021319 от 05.01.99 г.

Подписано в печать 30.03.2006 г. Бумага офсетная. Формат 60x84/16. Гарнитура Times. Отпечатано на ризографе. Усл. печ. л. 1,38. Уч.-изд. л. 1,04. Тираж 100 экз. Заказ 203.

Редакционно-издательский центр Башкирского государственного университета 450074, РБ, г.Уфа, ул.Фрунзе, 32.

Отпечатано на множительном участке Башкирского государственного университета 450074, РБ, г. Уфа, ул. Фрунзе, 32.

АЖ6А

»-7221

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Тарасенко, Екатерина Михайловна

Введение.

ГЛАВА 1. БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ НЕФТЕЗАГРЯЗНЕННЫХ

ПОЧВ И ВОПРОСЫ ИХ РЕКУЛЬТИВАЦИИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) {!

1.1. Влияние нефтяного загрязнения на компоненты почвенной экосистемы.

1.2. Биодеградация нефти и нефтепродуктов микроорганизмами почвы

1.3. Рекультивация нефтезагрязненных почв.

1.4. Биопрепараты на основе углеводородокисляющих микроорганизмов для рекультивации нефтезагрязненных почв.

1.5. Биодиагностика нефтезагрязненных и рекультивируемых почв

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Природные условия.

2.2.Условия проведения опытов.

2.3. Методы исследований.

2.3.1. Методы определения активности ферментов.

2.3.2. Методика определения фитотоксичности нефтезагрязнен- 50 ных почв.

2.3.3. Методика определения зоотоксичности нефтезагрязненных почв.

2.3.4. Посев, выращивание и учет физиологических групп микроорганизмов на питательных средах.

2.3.5. Описание структуры комплекса почвенных микроскопических грибов.

2.3.6. Методика определения токсичности почв с использованием азотобактера.

2.3.7. Статистическая обработка экспериментальных данных

ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ ЗАГРЯЗНЕНИЯ НЕФТЬЮ И НЕФТЕПРОДУКТАМИ НА ПОКАЗАТЕЛИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПОЧВ. ПОДБОР БИОДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ. 3.1.Активность ферментов в почвах, загрязненных нефтью и нефтепродуктами.

3.1.1. Влияние загрязнения почв нефтяными углеводородами на активность уреазы.

3.1.2. Влияние загрязнения почв нефтяными углеводородами на ак- 58 тивность протеазы.

3.1.3. Влияние нефти и нефтепродуктов на активность липазы.

3.2. Численность углеводородокисляющих микроорганизмов и содержа- 65 ф ние остаточных нефтепродуктов в почве.

3.3. Влияние загрязнения почвы нефтью на выживаемость азотобактера

3.4. Влияние загрязнения почвы на численность и видовое разнообразие 69 микромицетов.

3.5. Воздействие загрязнения почв нефтью на выживаемость коллембол

3.6. Влияние загрязнения почв нефтью и нефтепродуктами на рост и развитие проростков растений (фитотоксичность почвы).

ГЛАВА 4. ИЗМЕНЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ БИОЛОГИЧЕСКОЙ

АКТИВНОСТИ НЕФТЕЗАГРЯЗНЕННЫХ ПОЧВ ПРИ РЕКУЛЬТИВАЦИИ

4.1. Влияние бакпрепарата Бациспецин на показатели активности нефтезагрязненных почв.

4.1.1.Влияние Бациспецина на численность углеводородокисляющих микроорганизмов и содержание остаточных нефтепродуктов.

4.1.2. Активность ферментов при обработке нефтезагрязненных почв Бациспецином.

4.1.2.1. Активность уреазы.

4.1.2.2. Активность липазы.

4.1.3. Влияние Бациспецина на численность и видовую структуру комплексов микромицетов нефтезагрязненных почв.

4.1.4. Снижение фитотоксичности при обработке нефтезагрязненных почв Бациспецином.

4.1.5. Снижение зоотоксичности при обработке Бациспецином почв, загрязненных нефтью.

4.2. Влияние фитомелиоранта люцерны на показатели биологической активности нефтезагрязненных почв.

4.2.1. Рост и развитие люцерны посевной на почвах загрязненных нефтью.

4.2.2. Влияние посевов люцерны на численность микроорганизмов в

Ф нефтезагрязненных почвах. Содержание остаточных углеводородов

4.2.3. Влияние фитомелиоранта люцерны на активность липазы в нефтезагрязненной почве.

4.2.4. Влияние посевов люцерны на фитотоксичность нефтезагрязненных почв.

4.2.5. Влияние посевов люцерны на зоотоксичность нефтезагрязненных почв.

4.3. Влияние комплексной биоремедиации на биодиагностические показатели нефтезагрязненной почвы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологическая активность и токсичность почв при нефтяном загрязнении и рекультивации"

Актуальность проблемы. Загрязнение почв нефтью в процессе ее добычи, транспортировки и хранения остается по-прежнему острой проблемой. Комплексная оценка состояния таких почв и способы восстановления их биологических свойств являются актуальными проблемами современной науки

В настоящее время основой мониторинга ядовитых веществ в окружающей среде являются их предельно допустимые концентрации (ПДК) в воде, воздухе, почве и продуктах питания. Однако следует отметить, что превышение ПДК химических веществ в исследуемых субстратах служит лишь косвенным показателем их токсичности. Не всегда удается установить прямую зависимость между содержанием загрязнителя в среде и ее пригодностью для обитания живых организмов. Почва может быть сильнозагрязнен-ной, но нетоксичной или слаботоксичной и, наоборот, слабозагрязненной, но сильнотоксичной. Токсичное действие одних компонентов может быть нейтрализовано или усилено присутствием других, поэтому токсичность почвы не определяется токсичностью отдельных соединений, содержащихся в ней. Необходимо оценивать интегральную токсичность почвы, отражающую влияние всего комплекса загрязнителей.

Наиболее целесообразным методом определения интегральной токсичности почвы является биотестирование. Показателем степени токсичности при биотестировании служит изменение выбранной тест-функции биоиндикаторного организма при его взаимодействии с пробой среды. Успешное применение биотестирования для диагностики состояния экосистем во многом зависит от правильного подбора тест-объектов.

В федеральном реестре методик для экологических служб предлагаются тест-системы, основанные на применении организмов из разных систематических групп, но представляющие гидробионты (Терехова и др., 2005). Однако полученные данные показали ограниченность гидробионтных тестов при анализе почвенных образцов (Бурдина, Терехова, 2005), что свидетельствует о необходимости разработки и использовании для оценки почв методов с использованием педобионтов.

В качестве биоиндикаторов могут быть использованы организмы практически всех таксономических групп: животные, растения, грибы, микроорганизмы. Уровень организации тестируемой биологической системы может варьировать от доклеточного (макромолекулы) до надорганизменного (сообщества). Большинство исследователей полагает, что применение единственного биологического параметра для целей биотестирования ненадежно из-за разнообразных механизмов отклика тест-организма на различные антропогенные загрязнения (Воробейчик и др., 1994; Андреюк и др., 1997; Ка-биров и др., 1997; Селивановская, Латыпова, 1999; Терехова и др., 2005). Полный анализ интегральной токсичности достигается при применении набора биотестов с использованием различных тест-организмов при контроле их биологических параметров. Наиболее информативный методологический подход при биологической оценке экологического состояния почв - комплексное биотестирование, заключающееся в использовании биологических тест-объектов из разных систематических групп с различным уровнем организации (Капелькина и др., 2004)

Подобрать единый универсальный набор биотестов для всех случаев определения токсичности почвы практически невозможно. Причина заключается в объективной необходимости использования различных организмов в зависимости от химической природы загрязнителя и целевых установок каждого конкретного исследования.

Таким образом, разработка тестов для комплексной оценки состояния почв, загрязненных нефтью и рекультивируемых почв, еще требуют дальнейшего изучения.

Задачи исследования:

2. Изучить изменение биологической активности и токсичности нефтезагряз-ненных почв при внесении биопрепарата Бациспецин.

3. Изучить влияние люцерны, используемой в качестве фитомелиоранта неф-тезагрязненных почв на биологическую активность и токсичность.

Научная новизна. Впервые в условиях Башкортостана было рассмотрено влияние загрязнения почвы нефтью и нефтепродуктами на комплекс показателей биологической активности почвы разного уровня организации (активность ферментов, фито- и зоотоксичность, численность микроорганизмов и видовая структура комплекса микромицетов). Впервые в регионе исследована активность почвенной липазы и показана корреляционная зависимость между содержанием нефти в почве и ростом ее активности. Было изучено влияние отдельных нефтепродуктов на активность липазы. Предложено ее использование в качестве показателя биодеструкции нефти в нефтезагрязненных и рекультивируемых почвах. Внесенные дополнения и модифицика-ция методики определения липазной активности почв позволили более объективно определить ее активность. Изучены свойства люцерны, как фитомелиоранта и выявлена эффективность ее использования при концентрациях загрязнения до 5% от массы почвы.

Основные положения, выносимые на защиту 1. Нефтяное загрязнение повышает активность уреазы, липазы, вызывает рост численности углеводородокисляющих микроорганизмов и микромицетов, увеличивает фито- и зоотоксичность в серой лесной почве и черноземе выщелоченном.

3. При внесении биопрепарата Бациспецин и применении люцерны в качестве фитомелиоранта снижается зоо- и фитотоксичность, повышается ли-пазная активность, численность углеводородокисляющих микроорганизмов, уменьшается активность уреазы в нефтезагрязненных серой лесной почве и черноземе выщелоченном.

4. Активность липазы, уреазы, рост численности углеводородокисляющих микроорганизмов и микромицетов, фитотоксичность, выживаемость коллембол, можно использовать при комплексной оценке состояния нефтезагрязненных и рекультивируемых почв.

Практическая значимость. Подобранные тест-объекты могут быть использованы для диагностики и мониторинга почв при их загрязнении. Дополнения, внесенные в методику определения липазы, позволяют более объективно оценить уровень активности этого фермента в загрязненной почве и использовать его для мониторинга токсичности при биологической рекультивации. Результаты исследований были применены при разработке технологии биорекультивации загрязненного участка на территории ОАО «Уфаорг-синтез» (акт о внедрении прилагается).

Апробация работы Основные положения и результаты диссертационной работы доложены на международных конгрессах и симпозиумах "Petroleum Contaminated Soils, Sediments and Water. Analysis, Assessment and Remediation" (London, 2001), «Contaminated Soils, Sediments and Water» (Amherst, 2001), на 10м Европейском микробиологическом конгрессе (Ljubljana, 2003), "Современные проблемы биоиндикации и биомониторинга" (Сыктывкар, 2001), «Почва - как связующее звено функционирования природных и антропогенно-преобразованных экосистем» (Иркутск, 2001), «Освоение Севера и проблемы природовосстановления» (Сыктывкар, 2001), «Видновления порушенных природных екосистем» (Донецк, 2002), "Биогеография почв"

Сыктывкар, 2002), на всероссийских конференциях "Растение, микроорганизмы и среда" (Санкт-Петербург, 2000), "Актуальные проблемы биологии и экологии " (Сыктывкар, 2000, 2002, 2004), "Ломоносов - 2002" (Москва, 2002), "Биология - наука XXI века" (Пущино, 2002, 2003), VI Докучаевских молодежных чтениях (Санкт-Петербург, 1999,2001, 2003, 2004), «Роль науки и образования на пороге третьего тысячелетия» (Москва, 2000), «Актуальные экологические проблемы республики Татарстан» (Казань, 2003), «Молодые ученые Волго-Уральского региона на рубеже веков» (Уфа, 2001), «Актуальные проблемы экологии и охраны окружающей среды» (Уфа, 2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 30 печатных работ, в том числе 8 статей в реферируемых журналах.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Тарасенко, Екатерина Михайловна

ВЫВОДЫ

1. С ростом концентрации нефти в почве возрастает активность уреазы, липазы, увеличивается зоо- и фитотоксичность, численность углеводородокис-ляющих микроорганизмов и микромицетов. Между липазной активностью и содержанием остаточных компонентов нефти в почве обнаружена корреляционная зависимость (г= - 0,89 -{-0,96)).

3. При внесении биопрепарата Бациспецин снижается зоо- и фитотоксичность, повышается липазная активность, увеличивается численность углево-дородокисляющих микроорганизмов, уменьшается активность уреазы в нефтезагрязненной серой лесной почве.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Химическая токсичность нефти по отношению к биологическим объектам не всегда очевидна (Пиковский, 2003). Зачастую восстановление нефте-загрязненных почв часто отслеживается по изменению концентрации загрязнителя в почве, убыль которого иногда не отражает снижение его токсичности для живых организмов. Известно, что почва служит как бы резервуаром, где загрязнения могут накапливаться в большом количестве в силу наличия адсорбирующей поверхности. Почва может быть сильнозагрязненной, но не токсичной и, наоборот, - слабозагрязненной, но сильнотоксичной. Поэтому, целесообразно вести контроль за биоремедиацией не только по содержанию остаточных нефтепродуктов, но и по показателям токсичности. (Knoke et al., 1999; Phillips et al., 2000). С учетом особенностей нефтяного загрязнения была предпринята попытка создания многокомпонентной тест системы с использованием ряда показателей для оценки степени токсичности воздействия различных концентраций нефти на почву.

В результате исследований установлена четкая зависимость между активностью ряда ферментов и степенью загрязнения почвы нефтью (Хазиев и др., 1988; Kiss, 1995; Киреева и др., 1997; Габбасова и др., 2001). Простота, доступность, высокая точность, чувствительность и экспрессивность методов определения активности почвенных ферментов позволяет рекомендовать их наряду с другими показателями биологической активности для использования в качестве биодиагностического показателя нефтяного загрязнения почв. Из большого разнообразия почвенных ферментов была использована активность уреазы и липазы. Прослеживалась четкая зависимость активности этих ферментов от наличия загрязнителя в почве и в процессе рекультивации таких почв.

Многие физиологические группы почвенных микроорганизмов проявляют чувствительность по отношению к нефтяным углеводородам. Численность углеводородокисляющих микроорганизмов, использующие нефтяные углеводороды в качестве источника углерода, сильно отличается в нефтезагрязненных почвах, от чистых почв такого же типа.

Было установлено, что в зависимости от концентрации в почве нефть способна как стимулировать их развитие, так и значительно угнетать. Нефть негативно влияет на численность почвенных микроорганизмов при содержании нефтяных углеводородов более 10% массы почвы. Более низкие дозы загрязнителя способствовали росту численности бактерий и грибов вследствие бурного развития углеводородокисляющей микробио-ты. Динамика численности микроорганизмов в этом случае не была связана напрямую с токсичностью почвы, а момент достижения исходной численности совпадал с завершением процесса разложения легкодоступных для микроорганизмов нефтяных фракций.

На основании данного показателя можно не только судить о степени загрязненности почвы нефтью, но и о ее потенциальной способности к восстановлению, а также о процессах разложения нефти в естественных природных условиях и при рекультивации загрязненных почв.

Микромицеты, которым принадлежит важная роль в поддержании почвенного гомеостаза, чутко реагируют на изменения, происходящие в почве под действием нефти и ее компонентов. Как отечественными, так и зарубежными исследователями показано, что микромицеты также могут быть использованы в качестве биоиндикаторов загрязнения почвы нефтью (Билай, Коваль, 1980; Киреева, Галимзянова, 1995; Киреева и др., 2000; Лебедева и др., 1988; Марфенина, 1994; Arnerbrant et al, 1987).

Почвы, загрязненные нефтью, приобретают токсические свойства и для высших растений (Хазиев, Фатхиев, 1981; Киреева и др., 2001). Наиболее часто для тестирования фитотоксичности нефтезагрязненных почв используются кресс-салат {Lepidium sativum) и овес посевной {Avena sativa)', кроме того, проводятся исследования с использованием семян, проростков и взрослых растений пшеницы (Triticum aestivum), рожь (<Secale cereale), кукуруза {Zea mays), просо {Panicum miliaceum), ячмень {Hordeum distichon), редис

Raphanus sativa), донник (Melilotus officinales) и др. (Гайнутдинов и др., 1988; Киреева и др., 1999; Габбасова и др., 2001; Стом и др., 2003 ).

Значительно слабее изучена возможность использования педофауны для индикации нефтяного загрязнения (Артемьева, 1989). В качестве индикаторов были исследованы разные группы беспозвоночных — почвенные простейшие, нематоды, дождевые черви, энхитреиды, панцирные клещи, личинки и имаго жужелиц, щелкунов и др. (Pirhonen, Hunta, 1984; Neuhauser et al., 1989; Salanitro et al., 1997; Safwat, Weaver, 2002). Большой интерес как индикатор изменений, происходящих при восстановлении нефтезагрязненных почвенных экосистем, представляет комплекс почвенных ногохвосток (Со/-lembola) (Чернова, 1984; Артемьева, 1989; Ханисламова, 1995; Габбасова и др., 2001). Почвенные ногохвостки (коллемболы) очень чувствительны к воздействию органических веществ, поэтому их можно с успехом применять при определении интегральной токсичности нефтезагрязненных почв.

Тест-показателем может служить процент выживших особей коллем-бол, продолжительность их жизни, поведенческие реакции. В ходе исследований были проанализированы первые два показателя, как наиболее удобные для дальнейшей статистической обработки. При содержании нефти 1 — 5 % массы почвы была обнаружена связь между содержанием загрязнителя и величиной тест-показателей. При данных концентрациях выживаемость и продолжительность жизни ногохвосток увеличивались с ростом времени пребывания нефти в почве.

Описанные выше тесты доступны и просты в исполнении, не требуют сложного лабораторного оборудования и могут быть рекомендованы исследователям разных уровней подготовки. Их преимуществом является также то обстоятельство, что работы ведутся с объектами, типичными для почвенной среды обитания в естественных условиях. Набор тест-объектов из семян растений, микроорганизмов, почвенных беспозвоночных и ферментов можно использовать как в полном объеме, так и частично в зависимости от целевого назначения исследований и степени нефтяного загрязнения почвы. Если пробы с почвенными ногохвостками и активность ферментов дают хорошую количественную характеристику токсичности почвы при низкой и средней степени ее загрязнения, то микробиологические тесты удобны для описания состояния сильнозагрязненных высокотоксичных почв.

115

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Тарасенко, Екатерина Михайловна, Уфа

1. Агафарова Я.М. Активность гидролитических ферментов и динамика азотистых соединений в черноземах Предуралья. Автореф. дис. канд. биол. наук. Новосибирск. 1984. - 20с.

2. Алексеева Т.П., Бурмистрова Т.И., Терещенко H.H., Стахина Л.Д., Панова И.И. Перспектива использования торфа для очистки нефтезагрязненных почв // Биотехнология. 2000. - №1. - С.58-65

3. Алиев С.А., Гаджиев Д.А. Влияние загрязнения нефтяным органическим веществом на активность биологических процессов почв// Изв. АН АзССР. Сер.биол. наук. 1977. №2. С.46-49

4. Алтынцева О.В., Плотникова Е.Г., Демаков В.А. Сообщество микробов-деструкторов полиароматических углеводородов из почв с высокой промышленной нагрузкой// Тез. 14 Коми-республиканской молод, науч. конф. Сыктывкар. 2000 - С.7

5. Андреюк Е.И., Иутинская Г.А., Валагурова Е.В., Козырицкая В.Е., Иванова Н.И., ОстапенкоА.Д. Иерархическая система биоиндикации почв, загрязненных тяжелыми металлами// Почвоведение. 1997. - №12. -С. 1492-1496

6. Андерсон Р.К., Хазиев Ф.Х., Дешура B.C., Багаутдинов Ф.Я., Бойко Т.Ф. Новоселова Е.И. Способ рекультивации почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами. Патент РФ №2077397 МКИ В 09 с 1/10. Опубл. 20.04.1997

7. Андресон Р.К., Мукатанов А.Х., Бойко Т.Ф. Экологические последствия загрязнения нефтью// Экология. 1980. - №6. - С.21-25

8. Антоненко A.M., Занина О.В. влияние нефти на ферментативную активность аллювиальных почв Западной Сибири // Почвоведение. 1992. -№ 1.-С. 38-43

9. Аринушкина Е.В. Руководство по химическому анализу почв. М.: Изд-во МГУ. - 1970. -С. 116-119,392.

10. Артемьева Т.И. Комплексы почвенных животных и вопросы рекультивации техногенных территорий. М.: Наука. 1989. - 111с.

11. Архипченко И.А., Загвоздкин В.К., Ерцев Г.Н. Очистка нефтезагрязненных почв с помощью биопрепаратов на основе микробных удобрений // Экология и промышленность России. Спецвыпуск. 2004. -С.6-8

12. Бабьева И.П., Зенова Г.М. Биология почв. М.: Изд-во МГУ. 1983.-248с.

13. Бакаева М.Д. Комплексы микромицетов нефтезагрязненных и рекультивируемых почв. Автореф. дис. канд.наук. Уфа, 2004. - 23с.

14. Барышникова JI.M. Грищенков В.Г., Аринбасаров М.У., Шкидченко

15. A.Н., Воронин A.M. Биодеградация нефтепродуктов штаммами-деструкторами и их ассоциациями в жидкой среде//Прикладная биохимия и микробиология. -2001. Т.37. -С.542-548

16. Белоусова Н.И., Шкидченко А.Н. Деструкция нефтепродуктов различной степени конденсации микроорганизмами при пониженных температурах//Прикладная биохимия и микробиология. 2004. - № 3. - С. 312-316

17. Билай В.И., Коваль Э.З. Рост грибов на углеводородах нефти. Киев: Наукова Думка. 1980. -254 с.

18. Билай В.И. Фузарии. Киев: Наукова думка. 1977. - 442с. Билай В.И., Коваль Э.З. Аспергиллы. Киев:Наукова думка. - 1988. -203 с.

19. Билай В.И., Курбацкая З.А. Определитель токсинообразующих микромицетов. Киев: Наукова думка 1990. -234с.

20. Билай В.И., Элланская И.А., Кириленко Т.С., Бухало A.C., Павленко

21. B.Ф., Коваль Э.З., Жданова H.H., Шеховцев А.Г., Борисова В.Н., Билай Т.И., Василевская А.И. Микромицеты почв. Киев: Наукова думка. 1984. - 264с.

22. Благодатская Е.В., Ананьева Н.Д., Мякшина Т.Н. Характеристика состояния микробного сообщества почв по величине метаболического коэффициента//Почвоведение. 1995. -№2. -С. 205-210.

23. Бельков В.В. Биоремедиация: принципы, проблемы, подходы// Биотехнология. 1995. - №3-4. - С. 20-27.

24. Вельков В.В. Стандартизация формата описаний промышленных технологий биоремедиации // Биотехнология. 2001. - №2. - С. 70-76.

25. Веселовский В. А., Вшивцев В. С. Биотестирование загрязнения среды нефтью по реакции фотосинтетического аппарата растений // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М., 1988. -С. 99-112.

26. Воробейчик E.JL, Садыков О.Ф., Фарафонтов М.Г. Экологическое нормирование техногенных загрязнений наземных экосистем (локальный уровень). Екатеринбург: УИФ «Наука». 1994. - 280 с.

27. Ворошилова A.A., Дианова Е.В. Окисляющие нефть бактерии -показатели интенсивности биологического окисления нефти в природных условиях// Микробиология. -1962. Т.21. Вып.4. С.408-415

28. Габбасова И.М. Деградация и рекультивация почв Башкортостана/ Под ред. Чл.-корр. АН РБ, проф. Ф.Х. Хазиева. Уфа: Гилем. - 2004. -284с.

29. Габбасова И.М., Сулейманов P.P., Бойко Т.Ф., Галимзянова Н.Ф. Использование биогенных добавок совместно с биопрепаратом "Деворойл" для рекультивации нефтезагрязненных почв// Биотехнология. 2002. - №2.- С.57-65

30. Габбасова ИМ., Сулейманов P.P., Хазиев Ф.Х., Бойко Т.Ф., Галимзянова Н.Ф., Фердман В.М., Ханисламова Г.М. Рекультивация серой лесной почвы, загрязненной нефтяным шламом // Нефтяное хозяйство.- 2001. №7. - С.81-84.

31. Габбасова И.М., Абдрахманов Р.Ф., Хабиров И.К., Хазиев Ф.Х. Изменение свойств почв и состава грунтовых вод при загрязнении нефтью инефтепромысловыми сточными водами в Башкирии// Почвоведение. -1997. -№11. С.1362-1372

32. Габбасова И.М., Сулейманов P.P., Хазиев Ф.Х., Бойко Т.Ф., Галимзянова Н.Ф., Фердман В.М., Ханисламова Г.М. Рекультивация серой лесной почвы, загрязненной нефтяным шламом // Нефтяное хозяйство. -2001. -№7. -С.81-84

33. Галстян А.Ш. Ферментативная активность почв Армении. Ереван: Аайастан. 1974. - 260 с.

34. Ганин Г.Н., Рябинин H.A. Куренщиков Д.К. Влияние аэральных выбросов сернокислого завода на почвенных беспозвоночных // Современные проблемы природопользования. Владивосток. 1987. - С. 137-139

35. Гиляров М.С. Зоологический метод диагностики почв. М.: Наука. -1965. -278 с.

36. Гиляров М.С. Почвенные беспозвоночные как индикаторы почвенного режима и его изменений под влиянием антропогенных факторов // Биоиндикация состояния окружающей среды Москвы и Подмосковья. М.: Наука, 1982. -С. 8-12.

37. Гиляров М.С. Почвенные беспозвоночные как показатели почвенного режима и условий среды // Биологические методы оценки природной среды. -М.: Наука, 1978. С. 78-90.

38. Головлев E.J1. Проблемы интродукции микроорганизмов-деструкторов // Тез. докл. 6 Конф. РФ "Новые направления биотехнологии". 24-26 мая, 1994 г. Пущино. 1994. - С. 4

39. Голодяев Г.П., Никитина З.И. Санация нефтезагрязненных почв юга Дальнего Востока // Тез. докл. 2 Съезда Об-ва почвоведов, Санкт-Петербург,27.30 июля, 1996 г.Кн. 1. -М., 1996. -С. 246-247.

40. Градова Н. Б., Горнова И. Б., Эддауди Р., Салина Р. Н. Использование бактерий рода Azotobacter при биоремедиации нефтезагрязненных почв// Прикладная биохимия и микробиология. -2003, Т. 39. -№ 3. С. 318-321

41. Грищенков В.Г., Гаязов Р., Токарев В.Г., Кочетков В.В., Филонов А.Е., Воронин A.M. Бактериальные штаммы-деструкторы топочного мазута: характер деградации в лабораторных условиях // Прикладная биохимия и микробиология. 1997. -№ 4. - С. 423-427

42. Гродзинский A.M. Аллелопатия растений и почвоутомление. Киев: Наукова думка. 1991. - 429 с.

43. Гродзинский A.M. Юрчак Л.Д. Головко Э.А. Панчук М.А. Шроль Т.С. Сравнительная оценка методов изучения аллелопатического почвоутомления/ В кн. Фитотоксические свойства почвенных микроорганизмов. Под ред. A.M. Берестецкого Ленинград.- 1978. С.55

44. Гузев B.C., Левин C.B., Селецкий Г.И. и др. Роль почвенной микробиоты в рекультивации нефтезагрязненных почв// Микроорганизмы и охрана почв. М. 1989. - С. 129 - 150.

45. Давыдова С.Л., Тагасова В.И. Нефть и нефтепродукты в окружающей среде: учеб. пособие. М.: Изд-во РУДН. - 2004. - 163с.

46. Демидиенко А.Я., Демурджан В.М. Пути восстановления нефтезагрязненных почв черноземной зоны Украины // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука. 1988. - С. 222-236

47. Дядечко В. Н., Толстокорова Л. Е., Гашев С. Н., Гашева М.Н., Соромотин A.B., Жданова Е.Б. О биологической рекультивации нефтезагрязненных лесных почв Среднего Приобья // Почвоведение. — 1990. №9. - С. 148-151

48. Жегневская Л. В., Барахнина В. Б. Изучение биодеградации углеводородов нефти // Матер. 47 науч.-техн. конф. студ., аспирантов и мол. ученых УГНТИ. -Уфа. 1996.-Т. 1.-С. 124

49. Жегневская Л.В. Биодеградация компонентов нефти и нефтепродуктовмикроорганизмами. Автореф. дис.канд.тех.наук. Уфа 1999. -21с.

50. Жулидов A.B., Дубова H.A., Покаржевский А.Д., Хачиков Э.А.л

51. Индивидуальные особенности аккумуляции ртути беспозвоночными //

52. Влияние промышленных предприятий на окружающую среду. М.: Наука. -1987. -С. 219-222.

53. Зенова Г. М., Красильников Н. А. Актиномицеты, разлагающие углеводороды парафинового ряда // Микробиология. 1968. - №5. - С. 870875

54. Зенова Г.М., Штина Э.А. Почвенные водоросли. М.: Изд-во МГУ. 1990. -78с.

55. Звягинцев Д.Г., Гузев B.C., Левин С.В., Селецкий Г.И., Оборин A.A. Диагностические признаки различных уровней загрязнения почвы нефтью //

56. Почвоведение. 1989. - № 1. - С. 72-78.

57. Зубайдуллин A.A. К вопросу рекультивации нефтезагрязненных земель на верховых болотах // Биологические ресурсы и природопользование. Сб. науч. трудов. - Нижневартовск: Изд-во Нижневарт. пед. ин-та. - 1998. Вып. 2. -С. 106-116

58. Ившина И. В., Куюкина М. С., Рычкова М. И. Экологические аспекты использования алканотрофных родококков — новых продуцентов биосурфактантов // Тез. докл. сем. «Экол. безопас. зон градопром. агломераций Зап. Урала» Перм.ГУ. Пермь. 1993. - С. 29-30

59. Ившина И.Б., Куюкина М.С., Костарев С.М. Применение экологически т ® безопасной экспресс-технологии очистки нефтезагрязненных почв и грунтовна примере районов нефтедобычи Пермской области) // Нефтяное хозяйство. -2003. №9. - С. 116-118

60. Исмаилов Н.М. Микробиология и ферментативная активность нефтезагрязненных почв // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука. 1988. - С. 42-56

61. Исмаилов Н.И., Пиковский Ю.И. Современное состояние методов рекультивации нефтезагрязненных земель // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука. 1988. - С. 222-236

62. Кабиров P.P., Сагитова А.Р., Суханова Н.В. Разработка и исследование многокомпонентной тест-системы для оценки токсичности почвенного покрова городской территории// Экология. 1997. - №6. - С. 408 - 411

63. Казакова E.H., Оборин A.A. Поиски методов стимуляции биодеградации нефти в почве // Докл. 2-ой Междунар. конф. «Освоение Севера и проблема рекультивации». Сыктывкар. 1994. - С. 214-217

64. Капелькина Л.П., Бакина Л.Г., Бардина Т.В., Чугунова М.В., Маячкина Н.В. Исследование загрязненных почв методами биотестирования // Тез.докл. межд. науч.конф. «Современные проблемы загрязнения почв». -Москва. 2004. С.353-355

65. Квасников Е.И., Ключникова Т.М. Микроорганизмы-деструкторы нефти в водных бассейнах. Киев; Наукова думка. - 1981. — 165 с.

66. Киреева H.A., Бакаева М.Д, Тарасенко Е.М, Галимзянова Н.Ф., Новоселова Е.И. Снижение фитотоксичности нефтезагрязненной серой лесной почвы при биорекультивации// Агрохимия. 2003. - №2. - С.50-55

67. Киреева Н. А., Новоселова Е. И., Онегова Т. С. Активность каталазы и дегидрогеназы в почвах, загрязненных нефтью и нефтепродуктами //Агрохимия. 2002. - № 8. - С. 50 - 55.

68. Киреева H.A., Водопьянов В.В., Мифтахова A.M., Биологическая активность нефтезагрязненных почв. Уфа.: Гилем. 2001. - 376с.

69. Киреева H.A., Галимзянова Н.Ф., Мифтахова A.M. Микромицеты почв, загрязненных нефтью, и их фитотоксичность // Микология и фитопатология. -2000.-№1. -С. 36-41.

70. Киреева H.A., Новоселова Е.И., Хазиев Ф.Х. Изменение свойств серой лесной почвы при загрязнении нефтью и в процессе рекультивации// Башкирский Экологический Вестник. 1998. -№3. - С.3-7.

71. Киреева Н.А, Мифтахова A.M., Галимзянова Н.Ф. Изучение фитотоксичности техногенно-загрязненных почв // Башкирскийэкологический вестник. 1999. - №4(7). - С. 3-6.

72. Киреева H.A. Деструкция нефти в почве культурами углеводородокисляющих микроорганизмов// Экология. 1996. №1. С.51-54.

73. Киреева Н. А., Новоселова Е. И., Хазиев Ф. X. Ферменты азотного обмена в нефтезагрязненных почвах //Известия АН. Серия биологическая. 1997. -№ 6. - С. 755 - 759.

74. Киреева H.A., Новоселова Е. И., Хазиев Ф. X. Фосфогидролазная активность нефтезагрязненных почв//Почвоведение. 1997. - № 6. -С. 723-725

75. Кореньков Д.А. Агрохимия азотных удобрений. М.: Наука. 1972. - 208с.

76. Коронелли Т.В. Поступление углеводородов в клетки микроорганизмов//Успехи микробиологии. 1980.Вып.15. - С.99-111

77. Коронелли Т.В. Принципы и методы интенсификации биологического разрушения углеводородов в окружающей среде (обзор) // Прикладная биохимия и микробиология. 1996. - Т.32, №6. - С. 579-585.

78. Коронелли Т.В., Комарова Т.И., Ильинский В.В., Кузьмин Ю.И., Кирсанов Н.Б., Яненко A.C. Интродукция бактерий рода Rhodococcus в тундровую почву, загрязненную нефтью // Прикладная биохимия и микробиология. 1997. - №2. - С. 198-201.

79. Криволуцкий Д.А. Изменение животного населения почв в рекреационных зонах Москвы // Растительность и животный мир Москвы и Подмосковья. -М.: Изд-во МГУ, 1978. С. 48-49.

80. Криволуцкий Д.А. Почвенная фауна в экологическом контроле. М.: Наука, 1994. -272 с.

81. Криволуцкий Д-А., Викторов А.Г., Филиппова Н.Ф. Радиочувствительность дождевых червей и энхитреид // Тр. Коми Науч. центра УРО АН СССР. 1988. -№97. -С. 52-65.

82. Кузнецов В.Д., Зайцева Т.А., Вакуленко JI.B., Филиппова С.Н. Streptomyces albiaxialis sp. nov.— новый вид термо- и галотолерантногострептомицета, разлагающего углеводороды нефти // Микробиология. — 1992. -№1.-С. 84-91

83. Курочкина Г.Н., Шкидченко А.Н. Амелин A.A. Влияние нового биопрепарата на ремедиацию нефтезагрязненной серой лесной почвы // Почвоведение. 2004. - № 10. - С. 1241 -1249

84. Кузяхметов Г.Г. Способ оценки загрязнения почв по морфологическим показателям популяций водорослей // Почвоведение. 1993. - №8. - С. 114-117

85. Левин C.B., Халимов Э.М., Гусев B.C. Эколого-токсикологическое нормирование содержания нефти в почве с использованием лабораторных моделей//Токсикологический вестник. 1995. -№1. -С. 11-15

86. Лебедева Ж.Д., Волкова И.М., Рубан Е.М. Влияние ионов металлов на липолитическую активность Mycobacterium rubrum и Actinomyces streptomycini// Микробиология. 1976. -№4. - С. 104- 109

87. Литвинов м.А. Определитель микроскопических почвенных грибов. — Л.: Наука 1967.- 302с.

88. Логинов О. Н., Силищев H. Н., Бойко Т. Ф., Галимзянова Н. Ф. Биотехнологические методы очистки окружающей среды от технологических загрязнений / Уфа: Гос. изд. науч.-техн. лит. Реактив. 2000. - 100 с.

89. Логинов О.Н., Нуртдинова Л.А., Бойко Т.Ф., Четвериков С.П., Силищев H.H. Оценка эффективности нового биопрепарата Ленойл для ремедиации нефтезагрязненных почв // Биотехнология. — 2004. №1. - С.77-82.

90. Мац A.A., Мурыгина В.П., Ивашко P.C., Мещерская М.В. Биодеградация углеводородов Rhodococcus sp. (R. ruber) 1418 и Rhodococcus sp. (R. erythropolis) 1715 // Тез. докл. конф. "Интродукция м-ов в окружающую среду". М., 1994. - С. 68-69

91. Марфенина O.E. Микологический мониторинг почв: возможности и перспективы//Почвоведение. 1994. - №1. - С. 75 - 80

92. Марфенина O.E. Реакции микроскопических грибов на загрязнение почв тяжелыми металлами// Биол.науки. 1989. - №9. - С.89-93

93. Мелентьев А.И., Усанов Н.Г., Логинов О.Н. и др. Штамм бактерий Bacillus sp. Для получения препарата против грибных возбудителей болезней злаковых культур. Патент 1743019 РФ, A01N 63/00, C12N1/20, 1989. Заявл. 3.10.89. Опубл.23.03.93

94. Методы почвенной микробиологии и биохимии / Под ред. Д.Г.Звягинцева. М.: Изд-во МГУ, 1991. - 304 с.

95. Миронов О.Г. взаимодействие организмов с нефтяными углеводородами. Л., 1985.- 128с.

96. Мицевич Е.В. Мицевич И.П. Перелыгин В.В. До Нгок Лань, Нгуэн Тху Хоай Микроорганизмы как возможные индикаторы интегральной загрязненности почв диоксинсодержащими дефолиантами// Прикладная биохимия и микробиология. 2000. Т.36. - №6. - С.672-678

97. Мишустин E.H. Почвенные микроорганизмы как компонент биогеоценоза. М.: Наука 1984. - С.5-24

98. Молодова Л. П. Особенности распределения почвенной мезофауны вблизи нефтяной скважины. // Экология. 1980. - №3. - С. 89 - 91

99. Мукатанов А. X., Ривкин П. Р. Влияние нефти на свойства почв. // Нефтяное хозяйство. 1980 .- №4. - С. 53 - 54

100. Муратова А.Ю., Плешакова Е.В. Микробиологическая очистка в защите окружающей среды от нефтяных загрязнений // Тез. докл. Всерос. науч. конф., посвящ. 70-летию выхода в свет "Биосферы" В. И. Вернадского. — 1996. -С. 107-108

101. Муратова А.Ю., Турковская О.В., Хюбнер Т., Кушк П. Использование люцерны и тростника для фиторемедиации загрязненного углеводородами грунта// Прикладная биохимия и микробиология. 2003. том 39. - № 6. -С. 689-696

102. Нетте И.Т., Гречушкина И.Н., Работнова И.Л. Рост некоторых микобактерий на нефтях и нефтепродуктах // Прикладная биохимия и микробиология. 1965. -№ 2. - С. 167-173

103. Новоселова Е.И. Структурно-функциональная трансформациябиогеоценоза при нефтяном загрязнении и пути его восстановления: Монография. Уфа: РИО БашГУ. 2004. - 126с.

104. Оборин A.A., Калачникова И.Г., Масливец Т.А. Самоочищение и рекультивация нефтезагрязненных почв Предуралья и Западной Сибири // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука, 1988. -С. 140-159.

105. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. / Под ред. Дж. Хоулта, Н. ^ Крига, П. Снита, Дж. Стейли, С. Уилльямса. М.: Мир, 1997. Т. 1. - 432 е., -Т. 2. -368 с.

106. Патин С.А. Биотестирование как метод изучения и предотвращения загрязнения водоемов // Биотестирование природных и сточных вод. М.: Наука. 1981. - С. 7-16

107. Пидопличко М.М. Пенициллин. Киев: Наукова думка. 1972. - 150с.

108. Пиковский Ю. И. Трансформация техногенных потоков нефти в почвенных экосистемах // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М. 1988. - С. 7 - 22.

109. Пирог Т.П., Шевчук Т.А., Волошина И.Н., Карпенко Е.В. Образование поверхностно-активных веществ при росте штамма Rhodococcus erythropolis ® ЭК-1 на гидрофильных и гидрофобных субстратах// Прикладная биохимия и микробиология. -2004.Т.40.-№6 .- С.544-550

110. Петухов В.Н., Фомченков В.М., Чугунов В.А., Холоденко В.П. Биотестирование почвы и воды, загрязненных нефтью и нефтепродуктами с помощью растений// Прикладная биохимия и микробиология. 2000. - №6. - С.652-655

111. Покаржевский А.Д., ВанСтраален Н.М., Филимонова Ж.В., Зайцев A.C., Бутовский P.O. Трофическая структура экосистем и экотоксикология ® почвенных микроорганизмов// Экология. 2000. - №3. - С.211-218.

112. Покаржевский А.Д., Ананьев С.А., Есенин A.B. Экологическое обследование почвенной фауны городских парков Москвы // Тез. докл. науч.-практ. конф. «Экологическое обследование почв г. Москвы». М.: Изд. центр Госкомсанэпиднадзора России. 1993. - С. 32-33

113. Покорна В. К методике определения липолитической способности верховых и низинных торфов и грязей// Почвоведение. 1964. - №1. - С. 106 -109

114. Пономарева JI.B., Крунчак В.Г., Торгованова В.А., Цветкова Н.П.,

115. Осипов А.И. Биоремедиация нефтезагрязненной почвы с использованием биопрепарата "Биосэт" и пероксида кальция // Биотехнология. 1998. - №1. -С. 79-84.

116. Прокошева М.А. Охрана и реабилитация почв при загрязнении нефтью и нефтепродуктами// Агрохимический вестник. 2000. - №2. - С.27-29.

117. Пинтус И.Ф., Филонов А.Е., Кошелева И.А., Гаязов P.P., Карпов A.B., Воронин A.M. Выделение и характеристика микроорганизмов-деструкторов „ # полициклических ароматических углеводородов // Микробиология. 1997.- № 2. С. 269-272

118. Саламатова Т.С., Зауралов O.A. Физиология выделения веществ растениями: уч.пособие. JL: Изд-во ЛГУ. 1991. - 152с.

119. Самосова С.М. Фильченкова В.И. Кипрова P.P., Мусина Г.Х. Губайдуллина Т.С., Махмутова Ф.Б. Микрофлора черноземных почв и ееактивность при загрязнении нефтью. Казань. 1983. ВИНИТИ - №6073-83. -Деп. 19с.

120. Селивановская С.Ю., Латыпова В.З., Алимова Ф.К. Природные и антропогенные факторы формирования токсичности осадков сточных вод// Токсикологический вестник. 1999. - №5. - С. 14-17

121. Семенов A.M., Куличевская И.С., Халимов Э.М., Гузев B.C., Паников Н.С. Лабораторные тесты для оптимизации интродукции в почву микроорганизмов деструкторов нефти // Прикладная биохимия и микробиология. - 1998. - Т. 34. - №5. С. 576-582.

122. Сидоров Д.Г., Борзенков И.А., Милехина Е.И., Беляев С.С., Иванов М.В. Микробиологическая деструкция мазута в почве при использовании биопрепарата Деворойл // Прикладная биохимия и микробиология. 1998. Т. 34. -№ 3. - С. 281-286.

123. Солнцева Н.П. Общие закономерности трансформации почв в районах добычи нефти (формы проявления, основные процессы, модели)// Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М., Наука, 1988. - С.23-42

124. Стабникова Е.В., Селезнева М.В., Дульгеров А.Н., Иванов В.Н. Применение биопрепарата "Лестан" для очистки почвы от углеводородов нефти//Прикладная биохимия и микробиология. 1996. -№2. -С. 219-223

125. Стабникова Е.В., Селезнева М.В., Рева О.Н., Иванов В.Н. Выбор активного микроорганизма-деструктора углеводородов для очистки нефтезагрязненных почв // Прикладная биохимия и микробиология. 1995. -№5.-С. 534-539

126. Стом Д.И., Потапов Д.С., Балаян А.Э., Матвеева О.Н. Трансформация нефти в почве микробиологическим препаратом и дождевыми червями // Почвоведение. -2003.-№3. -С. 359-361

127. Сулейманов P.P. Изменение свойств нефтезагрязненных серых лесных почв при биологической рекультивации: Автореф. дис. . канд. с.-х. наук. -Уфа, 1999.- 25 с.

128. Суржко Д.Ф., Финкельштейн З.И., Баскунов Б.П., Янкевич М.И., Яковлев В.И., Головлева JT.A. Утилизация нефти в почве и воде микробными клетками // Микробиология. 1995. Т.64. - № 3. - С. 393-398

129. Таскаев А.И., Архипченко И.А., Боровинских А.П. Опыт биологической рекультивации земель в условиях Крайнего Севера//Экология и промышленность России. Спецвыпуск 2004. - С.27-31

130. Терехова В.А., Рахлеева A.A., Бурдина В.М. Методики биотестирования в экологическом контроле токсичности// Тез.докл. семинар-презентации инновационных науч.-тех. проектов «Биотехнология-2005». -Наукоград. Пущино. 2005 С.86-88

131. Тишкина Е.И. Влияние нефтяного загрязнения на свойства серых лесных почв Предуралья и пути восстановления их плодородия: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Воронеж, 1989. - 23 с.

132. Тропинина О.В. применение некоторых методов биотестирования дляоценки загрязненности почв// Тез. Докл. VIII межд. конф. студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов- 2001». Москва.2001. С.122-123

133. Трофимов С.Я., Розанова М.С. Изменение свойств почв под влияниемнефтяного загрязнения/ Деградация и охрана почв. Под общ. ред. Акад.РАН Г.В. Добровольского. М.: Изд-во МГУ, 2002. - С.359-373

134. Трублаевич Ж.Н., Семенова E.H. Оценка токсичности почв с помощью лабораторной культуры коллембол Folsomia candida// Экология. 1997. -№5. - С.377-381.

135. Угрехелидзе Д.Ш. Метаболизм экзогенных алканов и ароматических углеводородов в растениях. Тбилиси: Мецниереба. - 1976. - 222с.

136. Фахрутдинов А.И. Влияние вариантов рекультивации нефтезагрязненной почвы на рост и развитие растений // Материалы межвузовской конференции молодых ученых. 15-19 апреля 2002 г. СПб.: Российский гос. пед. ун-т им. А.И. Герцена, 2002. - С. 32 - 33.

137. Финкелынтейн З.И., Баскунов Б.П., Алиева P.M., Головлев Е.Л., Головлева Л.А. Микробная деградация нефти и нефтепродуктов// Тез. докл. конф. «Биотехнол. защиты окруж. среды». Пущино, 18-19 окт., 1994 г. -Пущино. 1994. -С. 5-6.

138. Хабибуллин P.A., Коваленко М.В. Состояние исследований по оценке и ликвидации последствий загрязнения почвы нефтью по ее фитотоксичности// ^ Тез. докл Всес. конф. «Рекультивация в СССР». М., 1982. Т. 2. - С. 142 -152

139. Хабибуллина Ф.М., Шубаков A.A., Арчегова И.Б., Романов Г.Г. Исследование способности нефтеокисляющих бактерий утилизировать углеводороды нефти // Биотехнология. 2002. - №6. - С.57-62.

140. Хабиров И.К., Габбасова И.М., Хазиев Ф.Х. Устойчивость почвенных процессов /Под ред. В.Д. Недорезкова . Уфа: БГАУ. - 2001. - 327с.

141. Хабиров И.К. Экология и биохимия азота в почвах Приуралья. Уфа.• УНЦ РАН . 1993. - 224с.

142. Ханисламова Г.М. Использование коллембол для лабораторной оценки токсичности загрязняющих почву соединений // Межвуз. сб. науч. тр. «Проблемы охраны окружающей среды на Урале». Уфа. 1995. - С. 152157.

143. Ханисламова Г.М., Кабиров P.P., Хазипова Р.Х. Поверхностно-активные вещества в наземных экосистемах. Уфа: БНЦ УрО АН СССР, 1988. - 143 с.

144. Хазиев Ф.Х., Кольцова Г.А., Рамазанов Р.Я., Мукатанов А.Х., Габбасова И.М., Хамидуллин М.М., Хабиров И.К. Почвы Башкортостана. Т.2: Воспроизводство плодородия: зонально-экологические аспекты / Под ред. Ф.Х. Хазиева. Уфа: Гилем, 1997. - С.288-299

145. Хазиев Ф.Х., Мукатанов А.Х., Хабиров И.К. Кольцова Г.А., Габбасова И.М., Рамазанов Р.Я.Почвы Башкортостана. Т.:Эколого-генетическая и агропроизводственная характеристика/ Под. Ред. Ф.Х. Хазиева. Уфа: Гилем, 1995. Т.1.-384 с.

146. Хазиев Ф.Х. Методы почвенной энзимологии. М.: Наука, 1990. - 189 с.

147. Хазиев Ф.Х. Системно-экологический анализ ферментативной активности почв. -М.: Наука, 1982. -204 с.

148. Хазиев Ф.Х., Фатхиев Ф.Ф. Изменение биохимических процессов в почвах при нефтяном загрязнении и активация разложения нефти // Агрохимия.-1981. Т.1. -10. -С. 102-111

149. Хотько Э.И., Ветрова С.Н., Матвеенко A.A., Чумаков JI.C. Почвенные беспозвоночные и промышленные загрязнения. — Минск: Наука и техника, 1982.-264 с.

150. Черников В.А. Алексахин P.M., Голубев A.B. и др. Агроэкология. Под ред. В.А. Черникова, А.И. Чекереса. -М.: Колос. 2000. 536с.

151. Чернова Н.М. Принципы количественного анализа коллембол // Фауна и экология ногохвосток. М.: Наука, 1984. - С. 29-43

152. Шилова И.И. Биологическая рекультивация земель в условиях таежной зоны//Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука. 1988. - С. 159- 168.

153. Шуйцев Ю.К. Деградация и восстановление растительных сообществ тайги в сфере влияния нефтедобычи//Почвоведение. 1982. -№12. - С. 1509 - 1514

154. Эйтминавичюте И.С. Закономерности формирования комплекса почвенных беспозвоночных под влиянием антропогенных воздействий в зоне дерново-подзолистых почв: Автореф. дис. д-ра. биол. наук. -М., 1982.-34 с.

155. Юрьева Н.Д. Действие рассредоточенных и массированных рекреативных нагрузок на комплекс микроартропод в ельниках и березняках Подмосковья // Фауна и экология почвенных беспозвоночных Московской области. -М.: Наука, 1983.- С.205-209.

156. Ягафарова Г.Г., Скворцова И.Н. Новый нефтеокисляющий штамм бактерий Rhodococcus erythropolis // Прикладная биохимия и микробиология — 1996. № 2. - С. 224-227

157. Ягафарова Г.Г., Гатауллина Э.М. Испытания биопрепарата "Родотрин" для ликвидации нефтяных загрязнений // Баш. хим. ж. 1995. Вып.2, - № 34. -С. 69-70

158. Яковлев A.C. Биологическая диагностика и мониторинг состояния почв // Почвоведение. 2000. - №1. - С. 70-79

159. Яковлев A.C. Биологическая диагностика городских почв // Почва,город, экология. M.: Фонд "За экологическую грамотность". 1997. - С. 150171

160. Allard A.S., Neilson А.Н. Bioremediation of organic waste sites: a critical review of microbiological aspects // Int. Biodeterioration Biodégradation. 1997. V.39.-P.253 -285

161. Atlas R.M., Bartha R. Hydrocarbon biodégradation and oil spill bioremediation// Adv. Microbial Ecol. 1992. - V. 12. - P. 287 -338

162. Benka-Coker M.O., Ekandayo J.A. Applicability of evaluating the ability of microbes, isolated from an oil spill site to degrade oil // Environ. Monit. and Assess. 1997. -№ 3. - P. 259-272

163. Blaise Ch., Gagné F., Nathalie Chèvre, Manon Harwood, Ken Lee, Juha Lappalainen, Belgis Chial, Guido Persoone, Doe К. Toxicity assessment of oil-contaminated freshwater sediments//Environmental Toxicology. V. 19. Issue 4. 2004. - P. 267-273

164. Boopathy R. Factors limiting bioremediation technologies// Bioresource Technology. 2000. V.74. - P.63-67

165. Bulman T.L., Neuland M., Wester A. In situ bioventing of a diesel fuel spill // Hydrol. Sci. J. 1993. V.38. -№4. -P. 297-308

166. Beyer W.N., Chaney R.L., Mulhern B.M. Heavy metal concentrations in earthworms from soil amended with sewage sludge // J. Environ. Qual. 1982. V.ll.- P. 381-385.

167. Callahan C.A., Menzie C.A., Burmaster D.E., Willborn D.C., Ernst T. On-site methods for assessing chemical impact on the soil environment using earthworms // Environ. Toxicol. Chem. 1991. V. 10. - P. 817-826.

168. Cabezalf C.B., Villa N., Cubitto M.A., Chiarello M.N. Biodégradation of petroleum refinery sludge // 6-th Int. Symp. Microb. Ecol., Barcelona, 6-11 Sept., -1992.-P. 220

169. Castaldi F. Tank-based bioremediation of petroleum waste sludges// Environmental Progress. V. 22. Issue 1. 2003. - P. 25-36

170. Callahan C.A., Shirazi M.A., Neuhauser E.F. Comparative toxicity ofchemicals to earthworms // Environ. Toxicol. Chem. 1994. - № 13. - P. 291298

171. Cooper A.B., Morgan H.W. Improved fluorometric method to assay for soil lipase activity// Soil Biol, and Biochem.- 1981. V.13. -№4. -P.307 -311

172. Doube B.M., Schmidt O. Can the abundance or activity of soil macrofauna be used to indicate the biological health of soils? // Biological Indicators of Soil health. NY, 1997. - P. 265-295

173. Kiss S. Advences in soil enzymology (Part I-II) I I Studia Universitates Bades-Bolyai Biologia. -2001. -№1. .3-48

174. Kiss S., Pasca D., Dragan-Bularda M. Enzymology of Disturbed Soils. Amsterdam: Elsevier, 1998. - P.3 -62

175. Knoke K.L., Marwood T.M., Cassidy M.B., Liu D., Seech A.G., Lee H., Trevors J.T. A comparision of five bioassay to monitor toxity during bioremediation of pentachlorophenol-contaminated soil// Water, Air and Soil Pollution. 1999. V.l 10.- P. 157-169

176. Kramer U., Chardonnens A.N. The use of transgenic plants in the bioremediation of soils contaminated by trace elements// Appl Microbiol Biotechnol. 2001. - №55. - P.661-672

177. Kula H., Larink O. Tests on earthworms Eisenia fetida and Aporrectodea caliginosa // Handbook of Soil Invertebrate Toxicity Tests. -1998. P. 125-127

178. Hamer G., Al-Awadhi N. Biotechnological applications in the oil industry// Acta Biotechnologica.- V. 20, Issue 3-4. 2000. - P. 335-350

179. Nwachukwu S.U. Bioremediation of sterile agricultural soils polluted with crude petroleum by application of the soil bacterium Pseudomonas putida, with inorganic nutrient supplemtntations// Current Microbiology. V. 42. -2001. -P 231-236

180. Margesin R., Zimmerbauer A., Schinner F. Monitoring of bioremediation by . # soil biological activities // Biotechnology Techniques. 1999. V. 13. - P. 859 -863

181. Meers E., Vervaeke P., Tack F. M.G., Lust N., Verloo M., Lesage E. Field trial experiment: Phytoremediation with Salix sp. on a dredged sediment disposal site in Flanders, Belgium//Remediation Journal. V. 13. Issue 3- 2003. - P. 87-97

182. McGill W. B., Rowell M. J. Determination of oil content of oil contaminated soil // Sci. Total Environ. 1980. V.14 №3.- P. 245 - 253

183. Mohn W.W., Radziminski C.Z., Fortin M.-C., Reimer K.J. On site bioremediation of hydrocarbon-contaminated Arctic tundra soils in inoculated biopiles // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2001. V.57. - P. 242-247

184. Moormann H., Kuschk P., Stottmeister U. The Effect of Rhizodeposition from Helophytes on Bacterial Degradation of Phenolic Compounds// Acta Biotechnologica. V. 22. Issue 1-2. - 2002. - P. 107-112

185. Mulder H., Breure A.M., Rulkens W.H. Prediction of complete bioremediation period for PAH soil pollutants in different physical state by mechanistic models// Chemosphere.- V.43. 2001. P.1085-1094

186. Neuhauser E.F., Norton R.A., Loehr R.C., Sillman D.Y. Earthworm and soil microarthropod responses to oily waste application // Soil Biol. Biochem. 1989. №21. -P. 275-281

187. Pancholy S.K. Lynd J.O. Quantitative fluorescence analysis of soil lipase activity // Soil Biol. And Biochem. 1972.V.4. - №2. - P.257-259

188. Pettit N.M., Smith A.R., Freedman R.B. Soil urease: activity, stability and kinetic properties// Soil Biol. Biochem. 1976. -V.8. №6. - P 479-489

189. Rahman K. S. M., Rahman T. J., Lakshmanaperumalsamy P., Marchant R., Banat I. M. The Potential of Bacterial Isolates for Emulsification with a Range of Hydrocarbons // Acta Biotechnologica. V. 23, Issue 4. - 2003. - P. 335-345

190. Reinecke A.J., Reinecke S.A. The use of earthworms in ecotoxicological evaluation and risk assessment // Earthworm ecology. NY, 1998. - P. 273-293

191. Rida A. Biosurveilance de la contamination du sol: apport de l'etude des lombriciens a l'évaluation des risques lies aix elements traces // Univ. Montrellier II: These, 1992.-234 p.

192. Saadoun I. Isolation and characterization of bacteria from crude petroleum oil contaminated soil and their potential to degrade diesel fuel // Journal of Basic Microbiology. V. 42, Issue 6. - 2002. - P. 420-428

193. Safwat H.S., Weaver R.W. Earthworm survival in oil contaminated soil // Plant and soil. 2002. V.240.-P. 127-132

194. Salanitro J.P., Dorn P.B., Huesemann M.H., Moore K.O., Rhodes I.A., Jackson L.M., Vipond T.E., Western M.M., Wisniewski H.L. Crude oil hydrocarbon bioremediation and soil ecotoxicity assessment // Environ. Sci. technol. -1997. №31. p. 1769-1776

195. Savitha V., Subramanian C. V. Composition and enzyme activities in Aspergillus flavipes grown on crude petroleum oil and glucose // Curr. Sci. (India). 1995. -№ 7. - P. 596-600

196. Sylva Traci Y., Charles M. Kinoshita, Rowena T. R. Toma M., Shu Ki Tsang, Chang K. Bioremediation of petroleum-impacted soils from investigation-derived wastes// Remediation Journal. V.13. Issue 4. - 2003. - P. 79-90

197. Sugiura K., Ishihara M., Shimauchi T., Harayama S. Physicochemical properties and biodegradability of crude oil // Environ. Science, and Technol. -1997. -№ l.-P. 45-51

198. Tawfiki Hajji K., Lépine F., Bisaillon J-G., Beaudet R., Hawari J., Guiot S. R. Effects of bioaugmentation strategies in UASB reactors with a methanogenic consortium for removal of phenolic compounds//Biotechnology and

199. Bioengineering. -V. 67. Issue 4. 2000. - P. 417-423

200. Truu J., Kârme L., Talpsep E., Heinaru E., Vedler E., Heinaru A. Phytoremediation of Solid Oil Shale Waste from the Chemical Industry//Acta Biotechnologica V. 23, Issue 2-3. - 2003. - P. 301-307

201. Vanek J. The cenosis of oribatid mites as an aid in bioindication (Acarina: Oribatidae) //Proc. 3 Int. Congress Acarology. -Prague, 1971. P. 125-128.

202. Venkateswaran K., Harayama S. Sequential enrichment of microbial populations exhibiting enhanced biodégradation of crude oil // Can. J. Microbiol. 1995. - № 9. - P. 767-775

203. Verstaeten L.M.G. Interaction between urease activity and soil characteristics// Agrochimi. 1978. V.22. - №5-6. - ?.455-464

204. Watanabe T. Pictorial atlas of soil and seed fungi: morphologes of cultured fungi and key species. Florida.2000. - 44lp.

205. Whyte L. G., Green C. W., Inniss W. E. Assessment of the biodégradation potential of psychrotophic microorganisms // Can. Jour. Microbiol. 1996. - № 2. -P. 99-106

Информация о работе

Тарасенко, Екатерина Михайловна
кандидата биологических наук
Уфа, 2006
ВАК 03.00.23

Диссертация

Биологическая активность и токсичность почв при нефтяном загрязнении и рекультивации - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы