Анализ генетической изменчивости белорыбицы и нельмы Stenodus leucichthys (Güldenstädt, 1772) в связи с задачами искусственного воспроизводства

Голованова, Татьяна Сергеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Анализ генетической изменчивости белорыбицы и нельмы Stenodus leucichthys (Güldenstädt, 1772) в связи с задачами искусственного воспроизводства
ВАК РФ 03.00.10, Ихтиология

Автореферат диссертации по теме "Анализ генетической изменчивости белорыбицы и нельмы Stenodus leucichthys (Güldenstädt, 1772) в связи с задачами искусственного воспроизводства"

На правах рукописи

ГОЛОВАНОВА ТАТЬЯНА СЕРГЕЕВНА

АНАЛИЗ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ БЕЛОРЫБИЦЫ И НЕЛЬМЫ ЗТЕЖБтЬЕиаСИТИУЗ (ОСЬБЕШТАЭТ, 1772) В связи с задачами ИСКУССТВЕННОГО ВОСПРОИЗВОДСТВА

03.00.10 - ихтиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва- 2005

Работа выполнена в Межведомственной ихтиологической комиссии

Научный руководитель:

доктор биологических наук профессор

Никоноров Сергей Иванович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук профессор

Решетников Юрий Степанович

доктор биологических наук профессор

Илясов Юрий Иванович

Ведущая организация: Краснодарский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства (КрасЫИЯЮО

Защита диссертации состоится «25» января 2005 г. в 11 часов на заседании диссертационного совета Д 307.003.01 при Федеральном Государственном Унитарном предприятии «Всероссийский научно-исследовательский институт пресноводного рыбного хозяйства» (ВНИИПРХ) по адресу: 141821, Московская обл., Дмитровский район, пос. Рыбное.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт пресноводного рыбного хозяйства».

Автореферат разослан « 25 » декабря 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследований. Сиговые рыбы относятся к наиболее ценным промысловым видам внутренних водоемов и являются одним из основных объектов аквакульуры на большей части территории России.

Белорыбица и нельма относятся к виду Stenodus leucichthys (Guldenstadt, 1772), находящемуся под угрозой уничтожения и занесенному в Красную книгу России (Атлас пресноводных рыб России, 2002). Вместе с тем популяционно-генетические исследования этого вида в России охватывали небольшую часть популяций нельмы (Ермоленко, 1989; 1991; Ermolenko, 1992; Politov et al, 2000; Sendek, 2002), южный ареал вида - Каспийский бассейн, где обитает белорыбица - вообще не был исследован. Генетические исследования рыб сем.Coregonidae, проведенные с использованием различных методических подходов, не позволяют однозначно определить положение нельмы среди других видов семейства (Ermolenko, 1992;Bernatchez et al/., 1991; Lockwood et al, 1993; Saidak, Phillips, 1997; ^mada et al, 1998; Vuorinen et al/., 1998; Reist et al, 1998; Sendek, 2002), поэтому привлечение новых биохимических данных о неисследованных ранее популяциях поможет выяснить некоторые вопросы филогении, а также высказать предположения о путях расселении этого вида.

Так как ввиду зарегулирования стока Волги естественное воспроизводство стада белорыбицы затруднено, оно поддерживается в основном за счет искусственного разведения (Летичевский, 1983; Васильченко, 2002). В связи с этим, в целях правильного планирования и организации рыбоводства, необходимы исследования генетических процессов, сопровождающих формирование искусственно-природного стада белорыбицы в Волжском бассейне. Североевропейские и сибирские стада нельмы являются уникальным резервом природных генофондов и могут стать объектами аквакультуры и пастбишного рыбоводства, в связи с чем необходимо исследование генетических характеристик и особенностей популяционной организации и микроэволюции вида Stenodus leucichthys в целом.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы состоит в том, чтобы с использованием методов изоферментного анализа и амплификации случайных последовательностей полиморфной ДНК (random amplified polymorphic DNA, RAPD -анализ) дать генетическое описание популяций нельмы Севера Евразии и белорыбицы с оценкой уровня внутривидовой дифференциации для организации генетического мониторинга.

Поставленная цель определила решение следующих задач:

• Выявить полиморфные и мономорфные ферментные локусы в популяциях белорыбицы и нельмы с помощью электрофоретического анализа, установить локусы, пригодные для внутривидовых сравнений белорыбицы и нельмы, а также для генетических мониторинговых работ.

• Исследовать молекулярно-генетические RAPD-маркеры, характеризующие ядерный геном у особей из популяций белорыбицы и нельмы. Определить RAPD-маркеры для дальнейшего проведения популяционно-генетического анализа.

• Исследовать генетические характеристики в выборках белорыбицы из нижнего течения и дельты р.Волга в течение длительного промежутка времени с 1987 по 2002 год. Провести генетический анализ выборок белорыбицы, отобранных в разные сроки анадромной миграции. Исследовать половую, возрастную и генерационную изменчивость белорыбицы по параметрам белкового полиморфизма.

• Количественно оценить уровни генетической дивергенции между популяциями в пределах вида и определить основные параметры генетической изменчивости для исследуемых популяций по аллозимным маркерам. Провести сравнительный анализ выборок из различных ареалов белорыбицы и нельмы с использованием RAPD-анализа.

• Провести анализ криоколлекции образцов тканей белорыбицы из Криобанка ВНИИПРХ с помощью аллозимного и RAPD-анализа.

Научная новизна.

Дано описание изменчивости по белковым локусам и молекулярно-генетическим RAPD-маркерам белорыбицы и нельмы из ряда водоемов Севера Евразии и Каспийского моря. Оригинальным является описание полиморфизма в локусе, кодирующем алкогольдегидрогеназу (ЛВИ*) у белорыбицы и нельмы, установление схемы его наследования на основе метода экспериментального гибридологического анализа. Выявлено влияние отбора по локусу алкогольде-гидрогеназы, связанное с переменным преимуществом аллелей в процессе онтогенеза белорыбицы. Показана относительная стабильность генетических характеристик стада белорыбицы в пространственном и временном аспектах в течение периода 1987-2002 г. Предполагается, что гомогенность стада белорыбицы связана с особенностями искусственного воспроизводства. Приведены мультилокусные характеристики (23-25 генов) нескольких крупных локальных стад нельмы и белорыбицы Севера Евразии и Каспийского моря. Вычислены генетические расстояния 1972) и оценены уровни дивергенции между по-пуляционными комплексами нельмы и белорыбицы на основании данных изо-ферментного анализа. Представлено графическое отображение внутривидовой иерархической организации популяционных группировок белорыбицы и нельмы методом кластерного анализа признаков, отображающих полиморфизм ядерной ДНК (RAPD-маркеры). Оценено генетическое разнообразие белорыбицы из материалов Криобанка ВНИИПРХ и начато создание базы данных по мультилокусным генетическим маркерам данного вида.

Теоретическая и практическая значимость.

Полученные данные дополняют представления о внутривидовой генетической структуре сиговых рыб и вносят вклад в решение проблемы сохранения биоразнообразия. Полученные в работе результаты являются важной составной частью генетического мониторинга рыбоводных процессов на заводах по воспроизводству белорыбицы в Каспийском бассейне, необходимого для успешного создания искусственно-природных стад. Характеристика генофонда природных стад нельмы может быть использована для научно-обоснованного осуществления ряда биотехнических мероприятий в аквакультуре и пастбищном ры-

боводстве. Проведен генетический анализ криоколлекции белорыбицы из материалов криобанка ВНИИПРХ, что служит основой для паспортизации базы данных по коллекциям белорыбицы и нельмы.

Апробация работы. Основные результаты выполненных исследований были представлялены на экологической научно-практической молодежной конференции «Проблемы изучения, охраны и рационального использования' природных ресурсов Волго-Ахтубинской поймы реки Волги» (Астрахань, 1989), Первом Конгрессе ихтиологов России (Астрахань, 1997), Всероссийском симпозиуме «Возрастная и экологическая физиология рыб» (Борок, 1998), Международной конференции «Биологические ресурсы окраинных и внутренних морей России и их рациональное использование» (Ростов-на-Дону, 2000), Всероссийской конференции «Ранние этапы развития гидробионтов как основа формирования биопродуктивности и запасов промысловых видов в Мировом океане» (Москва, 2001), Научно-производственном совещании «Биология, биотехника разведения и промышленного выращивания сиговых рыб» (Тюмень, 2001), VIII Международном Симпозиуме по биологии и менеджменту сиговых рыб (Рованиеми, Финляндия, 2002), III(XXVI) Международной конференции «Биологические ресурсы Белого моря и внутренних водоемов Европейского Севера» (Сыктывкар, 2003), Международном Симпозиуме «Холодноводная ак-вакультура - путь в XXI век» (С-Петербург, 2003), Международной конференции «Сохранение генетических ресурсов» (С-Петербург, 2004), XI Европейском Конгрессе ихтиологов (Таллинн, Эстония, 2004).

Благодарности. Автор искренне благодарит А.Абрамову, В.Барминцева, А.Волкова, Н.Варнавскую, В.Ефименко, И.Золина, Е.Зуянова, М.Кириченко, А.Матковского, А.Махрова, А.Новоселова, М.Офицерова, Д.Политова, Е.Пономареву, А.Пшенцова, Д.Сендек, И.Студенова, С.Титова, О.Чудинова, Д.Шабанову за помощь в сборе материалов и проведении исследований. Публикации. По теме диссертации опубликовано 17 работ. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, шести глав, выводов и приложения. Список цитированной литературы содержит ЗСЙисточников, из них235на русском языке. Работа изложена на,2ЭЯстраницах машинописного текста и иллюстрирована рисунками и таблицами.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1. Обзор литературы Белорыбица к нельма относятся к виду Stenodus leucichthys (Guldenstadt, 1772), роду Stenodus (Richardson, 1836), семейству сиговых (Coregonidae), подотряду лососевидных рыб (Salmonoidei) и отряду лососеобразных (Salmoniformes). В бассейне Каспийского моря обитает особый подвид - белорыбица Stenodus leucichthys leucichthys (Guldenstadt, 1772), другой подвид -нельма Stenodus leucichthys nelma (Pallas, 1773) - живет в реках Северного Ледовитого океана (Берг, 1948; Решетников, 1980; Атлас пресноводных рыб России, 2002). В озерах Кубенском и Зайсан (Титенков, 1953, 1955, 1961; Березовский, 1930; Смирнова, 1945), Новосибирском водохранилище и, возможно, реках Иртыш, Обь, Северная Сосьва, Анадырь, Енисей, Катунь, Бия, Тура,

Индигирка, Уса, Колва, Маккензи и др. нельма образовывала жилые формы (Меньшиков, 1935; Ягодников, 1953; Смольянов, 1957; Никонов, 1959; Петрова, 1976; Куклин, Лопатин, 1983; Дмитриенко, 1985; Минеев, 1998; Новоселов, 2000; Туманов, 2000; Черешнев, 1996; Черешнев и др.,2000; Howland et al., 2000, 2001a,b).

В данной главе приведены основные сведения по биологии нельмы и белорыбицы, обсуждены возможные пути расселения вида в прошлом и различные точки зрения о происхождении белорыбицы от северных популяций нельмы. В специальном разделе рассматриваются возможности использования нельмы и белорыбицы при искусственном разведении. Отмечено, что многие популяции нельмы и белорыбицы резко сокращают свою численность и переходят в разряд редких. Для предотвращения полного исчезновения нельма европейской части России внесена в «Красную книгу РФ» (2001). В «Красную книгу РФ» внесена и белорыбица (Уральская популяция). В Красной книге МСОП «IUCN Red List ofthreatened animals» (1996) белорыбица входит в число видов рыб, находящихся под угрозой исчезновения.

Глава 2. Материалы и методы.

Нами исследованы выборки из популяций нельмы рек Обь, Северная Двина и Печора, озера Кубенского и белорыбицы Каспийского моря. Материал собран и обработан в период с 1987 по 2003 гг. Места взятия проб схематически изображены на рисунке 1. В таблицах 1 и 2 представлены данные по объемам выборок, кодам выборок и времени сбора первичного биологического материала.

Материал собирали во время экспедиций и полевых работ у нижнего бьефа плотины Волгоградской ГЭС в 1987, 1989, 1994, 1997 г., на Александровском осетровом рыбоводном заводе - в 1988, 1989, 2000, 2001, 2002, 2003 г., в Вологодской обл. - в 1998 г., в г.Салехард - в 1998 г., обрабатывали в лаборатории Александровского осетрового рыбоводного завода в 1988, 1989 г., в лаборатории Центрального производственно-акклиматизационного Управления - в 1989, 1990 г., в лабораториях Института общей генетики РАН- в 1987-2003, в лаборатории ГосНИОРХ - в 2002 г, в Центре молекулярно-генетической идентификации при Научном Органе СИТЕС (ВНИРО) - в 2000-2001 г. Сбор образцов тканей производителей белорыбицы для Криобанка ВНИИПРХ, с оценкой качества спермы, морфометрическим анализом, определением возраста рыб, осуществляли при проведении работ по криоконсервации спермы белорыбицы в ноябре 1994 и 1997 г. в районе плотины Волгоградской ГЭС.

Для проведения генетических исследований кусочки тканей рыб (печень, мышцы, сердце) фиксировали замораживанием, эти же пробы фиксировали в 94% этаноле для выделения ДНК. При проведении изоферментного анализа электрофорез проводили в полиакриламидных и крахмальных гелях. Для проведения электрофореза пробы тканей гомогенизировали в равном объеме 0.015 М буфера Tris-HCl рН=7.5 или в 0.05М Трис-HCl буфере, pH 8.0. с добавлением 0.2 г/мл сахарозы. Пробы центрифугировали 20 мин. при 12 тыс. об./ мин.

1 - р. Волга (нижнее течение); 2 - дельта р. Волга; 3 - р.Северная Двина; 4-р. Обь; 5 - оз.Кубенское; 6 - р.Северная Двина*; 7-р. Печора

Рис. 1. Места сбора проб белорыбицы и нельмы, включенных в настоящее исследование.

Таблица 1.

Исследованные выборки из популяций нельмы и белорыбицы, коды выборок, объемы выборок и время сбора проб.

Подвид, географическая локальность Код выборки Годы 1 Объем ] выборки

А) Белорыбица Леиог/ш' кискЫкуз 1еискЫку5 (ОШепБйЙ!, 1772)

1) р. Волга, нижнее течение Сазр1 1987 50

1989 72

1994 82

1997 38

1998 10

1999 12

2000 17

2) дельта р. Волга Савр2 2001 31

2002 4

В) Нельма 1еискЫЬ/$ пе1та (РаПаэ,! 773)

3) р.Северная Двина ШБвуЦу 1998 12

2000 17

КС18су.ОУ1 1998-1999* 20 -

4) р. Обь КеЮЬ 1998 32

5) оз.Кубенское №1КиЬ 1998 60

б) р.Печора Ке1Рес11 1987 30

1995-1998* 61

*- по данным Д.Сендек (Зепдек, 2002).

Таблица 2.

Объемы исследованных выборок молоди белорыбицы, время сбора проб, места сбора проб и способы выращивания молоди._

Электрофорез белков в полиакриламидном геле проводили в аппарате конструкции Трувеллера и Нефедова (1974), а также в камерах конструкции Поспелова (Кирпичников, 1979), согласно общим рекомендациям (Davis, 1964; Peacock et al., 1965). Плотность геля задавалась в зависимости от анализируемых локусов и используемой буферной системы (6,0-12,0%). В таблице 3 приведен список проанализированных ферментных локусов, их тканевой экспрессии и использованных для электрофореза буферных систем. Статистическая обработка полученных электрофоретических данных выполнена стандартными способами при помощи компьютерной программы BIOSYS-1 (Swofford, Se-lander, 1981). Гетерогенность выборок по частотам генов оценивалась по (Roff, Bentzen, 1989), с помощью компьютерной программы CHIRXC (Zaykin, Pu-dovkin, 1993). Для построения дендрограмм применен метод UPGMA-кластеризации по величинам генетических расстояний DN (Nei, 1972) с помощью компьютерной программы Статистика 6.0.

Метод полимеразной цепной реакции со случайными праймерами (RAPD-PCR) применяли для выявления мультилокусных маркёров сходства/различия образцов ДНК (в сумме 38) белорыбицы и нельмы (Williams et al, 1990). Для сравнительного анализа использовались образцы ДНК сига-нельмушки (Coregonus lavaretus) оз.Кубенского. RAPD-анализ был выполнен сотрудниками Центра молекулярно-генетической идентификации при Научном Органе СИТЕС (ВНИРО) при поддержке фонда «Региональный благотворительный фонд поддержки и пропаганды отечественного научного наследия».

Для выполнения RAPD-ГЩР использовали коммерческие праймеры фирмы "Орегон" (США): А-02 (5'-TGCCGAGCTG-3'); А-07 (5'-GAAACGGGTG-3); A-09 5'-GGGTAACGCC-3'); А-12 (5'-TCGGCGATAG-3'); A-20 (5'-GTTGCGATCC-3'); B-01 (5'-GTTTCGCTCC-3'); В-02 (5'-TGATCCCTGG-3'); В-05 ( 5'-TGCGCCCTTC-3'); K-20

(5'-GTGTCGCGAG-3')- Реакцию проводили на термоциклере РТС-225 Peltier Thermal Cycler (MJ Research) по программе: первичная денатурация: 94°С - 5 минут однократно; 36 рабочих циклов: 94°С - 30 секунд, 36°С - 30 секунд, 72°С -1 минута; достройка: 72°С - 10 минут однократно. Электрофорез проводили в 6% полиакриламидном геле. В качестве стандарта длин фрагментов ДНК использовали ДНК фага X (MBI Fermentas), рестрицированную эндонук-леазой Pstl (MBI Fermentas). После завершения электрофореза гель окрашивали в водном растворе бромистого этидия (l|Xg/ml). Формирование библиотеки RAPD-профилей ДНК исследуемых образцов, оценку коэффициентов кросс-корреляции и коэффициентов генетических дистанций ДНК-фингерпринтов осуществляли с помощью программного обеспечения Phoretix ID Professionale (Nonlinear Dynamics) и визуально (RAPD-спектры анализировали по наличию (1) или отсутствию (0) полос в геле, соответствующих ампликонам различной длины).

Таблица 3.

Исследованные ферментные белки с числом исследованных локусов, их тканевой экспрессией и использованными буферными системами_

Фермент Код фер-

мента Локус Ткань' Буфер2

Алхогольдегидрогсназа 1.1.1.1 ADH* L A

Аспартагаминотрансфераза 2 6.1.1 sAAT-1,2* M, H A

Креатинкинаэа 2.7.3.2 С К-А 1,2* M A,D

Эстераза Д 3.1.-.- ESTD* M(L) A

Эстераза 3.1.1.. EST2* L A

3.1.1.. ESTi* L A

EST6* L A

Глицерол-3 -фосфатдегидрогеназа 1.1.1.8 G3PDH-I' M A

Глюкозо-б-фосфатизомераза 5.3.1.9 GPi-Al* L A,E

GPI-A2» M(L) A,E

GPI-B1.2* M A,E

L-Идитолдегидрогеназа 1.1.1.14 lDDH-1,2* L B,E

Изоцитратдегидрогеназа 1.1.1.42 sIDHP-1,2* M C,E

slDHP-3,4* L

Лахтатдегидрогеназа 1.1.127 LDH-A1,2* M А,В

LDH-B1.2* M А,В

Малатдегидрогеназа 1.1.1.37 sMDH-Al,2• L A

sMDH-BM* M A

Малик-энзим 1.1.1.40 mMEP-1,2* M A

sMEP-3,4• L A

Фосфоглюкомутаза 5.4.2.2 PGM-3* ЦМ) A,E

PGM-4* L A,E

Фосфоглюконатдегидрогеназа 1.1.144 PGDH* M A,E

Супероксиддисмутаза 1.15.1.1 sSOD* M(L) A.E

I Ткань М = скегетная мышца; L = печень Н- ссрдце

2Буфер: А " трис-ЕБТА-боратный рН 8 3 (ТЕВ, Peacock et al,1965); В = трис-цшрат/трис-боратный, рН=8,0/рН=9,0 (Cross and Ward, 1980); С = трис-цитрат/трис-цитратный, рН=7,1 (Shaw and Prasad, 1970), D = трис-цитрат/ LiOH -боратный, рН 8 5/8 1 (TBCL, Ridgeway et al, 1970); E = амннопрошлморфолин - EDTA - шпратный рН 7 2 (CAME, Aebersold et al, 1987). Жирным шрифтом отмечены локусы, использованные для межпопуляоионных сопоставлений.

Построение дендрограмм генетического сходства выполнялось на основании рассчитанных коэффициентов кросс-корреляции индивидуальных фин-герпринтов анализируемых особей и коэффициентов дистанций (Dice, 1945). На основе визуальных наблюдений были вычислены коэффициенты парного сходства между особями (S), расчет проводился по формуле: S= 2FI} !{Fi +Fj),

где Fy - количество одинаковых фрагментов у особей i и j, F, - количество фрагментов, наблюдаемых у особи i, Fj - количество фрагментов, наблюдаемых у особи j. Для построения дендрогдамм использовали методы: Neighbor-joining (NJ) method (Saitou, Nei, 1987), Unweighted neighbor-joining (UNJ) method (Gascuel et al., 1997) и UPGMA (unweighted pair-group average), программу Program T-REX , версия 2.0al (Makarenkov, 2001) и компьютерный пакет NTSYS (Rohlf,1998).

Глава З. Полиморфизм ферментных систем и молекулярно-генетических RAPD-маркеров у белорыбицы и нельмы.

Нами проанализировано 15 изоферментных систем, кодируемых 36 генетическими локусами. Инвариантны у всех исследованных особей креатинкина-за (СК-А1.2*), эстераза-Д (ESTD*), глицерол-3-фосфатдегидрогеназа (G3PDH-1 *), лактатдегидрогеназа (LDH-A1.2*; LDH-B1.2*), супероксиддисмутаза (SOD), 6-фосфоглюконатдегидрогеназа (PGDH). Не выявлено полиморфизма в отдельных локусах многолокусных изозимных систем (EST-2*; GPI-Al*; GPI-B1.2*; IDHP-1,2*; IDHP-3*; MDH-A1.2*; MDH-B2*; тМЕР-1,2*; PGM-4*). Полиморфизм обнаружен в локусах ADH*, ААТ-1,2*, EST5*, EST6*, GPI-A2*, JDDH-1,2*, sIDHP-4*, sMDH-Bl*, sMEP-3,4*, PGM-3*. По двум локусам была найдена генетическая изменчивость с частотой редких аллелей, не превышающей 0.05 (MDH-Bl*; PGM-3*). Полученные фенотипы в следующих локусах исследуемого вида соответствуют изменчивости обоих локусов AAT-1,2* для белорыбицы и sAAT-1,2*, IDDH-1,2* для нельмы. Аллельные частоты для этих изолокусов были приняты нами равными (Waples, 1988), в остальных случаях изменчивость приписывалась одному из двух локусов. Локусы ADH*, sAAT-1,2* , sIDHP-4* и IDDH-1* в популяции белорыбицы имели уникальные для вида аллели, локус GPI-A2* в популяциях нельмы имел уникальный для вида аллель. У белорыбицы обнаружен полиморфный локус ADH* и установленна схема его наследования на основе метода экспериментального гибридологического анализа, выявлены три аллеля в изолокусах ААТ-1,2*, полиморфизм в локусах МЕР-3,4*, EST-5*, EST-6*. Для локуса ADH*, генетическая вариабельность которого у вида ранее не описывалась, а также для локуса IDDH-1 *, в котором обнаружен уникальный для вида аллель, были предложены собственные обозначения аллелей.

Амплификация тотальной ДНК белорыбицы и нельмы с использованием 9 праймеров позволила выявить спектр амплифицированных фрагментов (ам-пликонов), которые характеризовались различной степенью вариабельности. На рисунке 2 показан RAPD-спектр продуктов амплификации тотальной ДНК белорыбицы и нельмы с одним из праймеров (А-09).

00ЫШШЩ ^МяЙ^ *

р #

9 10 11 12

А-09-2

■»"• * Л

А-09-3

Рис. 2. ЯАРО-спектры продуктов амплификации тотальной ДНК белорыбицы и нельмы с праймером А-09: 1-5- нельма, оз. Кубенское; 6-10- белорыбица, р.Волга, нижнее течение; 11 -12 - нельма, р. Обь. ■

Исследованные нами RAPD-PCR спектры белорыбицы и нельмы состояли как из фрагментов, мономорфных для всех проанализированных выборок, так и полиморфных, имеющих различную частоту встречаемости среди различных популяций. В целом по изученым праймерам наблюдали больше 70% характерных для данного вида ампликонов. Визуально из 187 фрагментов нами выявлено 23 полиморфных ампликона, из которых 13 полиморфны в популяции белорыбицы (57%) и 15 - в популяциях нельмы (65%), из них всего 4 (17%) полиморфны во всех исследованных популяциях. Доля полиморфных фрагментов составляла для популяции белорыбицы - 7%, для популяций нельмы - 8%, из них 2% полиморфны во всех исследованных популяциях. Из популяций нельмы наиболее полиморфна нельма р.Обь: доля полиморфных фрагментов -7.5%, для нельмы р.С.Двина - 5.3%; для нельмы оз.Кубенского - 3.7%. В популяции нельмы р.Обь полиморфны 60.1%, р.С.Двина - 43.5%, оз.Кубенского - 30.4% из всех полиморфных фрагментов.

Выявлен один ампликон, характеризующий популяции нельмы и дифференцирующий их от популяции белорыбицы, выявлены два ампликона, которые характерны для популяции белорыбицы и дифференцируют ее от популяций нельмы.

Глава 4. Генетический мониторинг популяции белорыбицы в бассейне р.Волга.

Производители белорыбицы, использованные в рыбоводном процессе в бассейне р.Волга, были объектами наблюдений за изменениями генетических характеристик (генетический мониторинг). Для мониторинга были выбраны наиболее полиморфные аллозимные локусы с частотой редких аллелей не менее 0.05. Нами исследовались алкогольдегидрогеназа, изоцитратдегидрогеназа, идитолдегидрогеназа печени и аспартатаминотрансфераза мышц (или сердца). В таблице 4 приведены аллельные частоты изученных полиморфных локусов в выборках производителей белорыбицы, собранных в нижнем течении и в дельте Волги (локальности 1 и 2 на рис.1), за период 1987-2002 г. Тест на гетерогенность показал отсутствие достоверных различий в генных частотах по локусам ЛВИ*, ШИР-4*, ¡ШБИ-1 * ААТ-1,2* в выборках материалов от производителей белорыбицы, собранных в разные годы, однако выявлены различия в гетерозиготности (р<0.01). Результаты изоферментного анализа суммарных выборок белорыбицы, различающихся по времени сбора материала (март, ноябрь), сравнивали с использованием теста на гетерогеннность (таблица 4). Полученные оценки свидетельствуют об однородности проанализированных выборок: ни по одному из исследованных локусов не было обнаружено статистически достоверных различий. Эти результаты подтверждают точку зрения МАЛетичевского (1960), что волжская белорыбица образует единое стадо с растянутым на несколько месяцев временем хода на нерест. При проведенном сравнении частот генов и гетерозиготности в выборках самцов и самок белорыбицы не обнаружено достоверных различий, хотя колебания параметров гете-розиготности по отдельным локусам ЛВИ* , ¡ШБИ-1* и ¡ШИР-4* имели значительную величину.

При исследовании выборок, собранных в разные дни нерестового хода в ноябре в нижнем течении Волги, были выявлены достоверные различия ал-лельных частот в локусе ADH*, отмечены колебания почти в 2 раза в значениях гетерозиготности по этому локусу. По локусу ADH* у белорыбицы нами выявлено действие отбора, которое связано с переменным преимуществом аллелей в процессе онтогенеза (Серов и др., 1990; Голованова и др., 1998). По этому же локусу обнаружены значимые (р<0.05) различия между выборками белорыбицы разного возраста. Генетическая неоднородность по времени подхода косяков белорыбицы на нерест в определенный сезон (ноябрь 1994 г.), обусловлена, видимо, неравномерностью подхода разных возрастных групп (Васильченко, 2002). Выявленную генетическую гетерогенность производителей белорыбицы необходимо учитывать при искусственном воспроизводстве. Так как нами не обнаружено статистически значимой гетерогенности по частотам исследуедо-ванных локусов между выборками производителей белорыбицы, собранными в разное время года и в разных локальностях, эти результаты могут свидетельствовать о том, что между локальными группировками белорыбицы в р.Волга существует значительное перемешивание, обусловленное процессом искусственного воспроизводства.

Постоянство генетических характеристик за более чем 15 лет наблюдений говорит о стабильном состоянии искусственно поддерживаемого стада белорыбицы в бассейне Волги.

В таблице 5 представлены частоты исследованных полиморфных локусов, ожидаемая и наблюдаемая гетерозиготность в выборках молоди белорыбицы, собранных в разные годы. Нами обнаружены достоверные различия в частотах аллели между выборками молоди белорыбицы различных генераций, выращенных на Александровском осетровом рыбоводном заводе. По исследованным локусам частоты аллелей в выбороках молоди белорыбицы, собранных в 1988, 1989, 2000, 2001, 2002 и 2003 году, согласно тесту на гетерогенность различались при уровне значимости р < 0.001. Нами также обнаружены достоверные различия в гетерозиготности по исследованным аллозимным локусам между выборками молоди белорыбицы, собранными в разные годы. За последние годы в выборках молоди наблюдается тенденция к понижению одного из основных показателей генетической изменчивости - средней гетерозиготности (рис.

3).

Выявленную гетерогенность выборок молоди белорыбицы разных генераций мы объясняем ограниченным количеством производителей, использованных в производственном процессе в 2000 и 2001. В 2001г. нерестовое стадо белорыбицы формировалась, в основном, крайне малочисленными поколениями 1992 и 1993 гг., когда выпуск молоди составил 2,4 и 7,6 млн.экз. соответственно; в 1994 г. выпуск молоди вообще не производился, т.е. выпуск молоди в 1992-1994 гг. составил всего 10 млн.экз. (данные Севкаспрыбвода). В связи с резким снижением количества молоди, выпущенной в указанные годы, наблюдалось не менее резкое снижение захода производителей в Волгу в 2001г.

Таблица 4. Аллельные частоты полиморфных локусов, ожидаемая и наблюдаемая гетерозиготность и тест на гетерогенность выборок производителей белорыбицы, отловленных для воспроизводства в разные годы.

Локальность, Год slDHP-4* ADH* чААТ-1,2* sIDDH-l*

сезон N ♦100 -а •102 -Ь 108* ■с 84* -/ Н obs Н ехр N •100 -а *134 -Ь н obs H ехр N *100 -а 85* -Ь 110* -с N 100* -а 145* -Ь Н obs Н ехр

Нижнее 1987 50_ 0 860 0 090 0 000 0 010 0 280 0 250 50 0 840 0 160 0 280 0 269 50 0 425 0 490 0 085 50 0610 0 390 0 380 0 476

течение 1989 77 0 825 0 097 0 000 0 078 0351 0 304 78 0 840 0 160 0 244 0 269 72 0 448 0 489 0 063 - - - - -

р Волга, 1994 81 0 827 0 105 оооо 0 068 0 346 0 300 82 0 841 0 159 0 244 0 267 82 0 399 0 537 0 064 82 0 604 0 396 0 573 0 479

ноябрь 1997 38 0 803 0 105 0 053 0 039 0 395 0 340 40 0 850 0 ISO 0 250 0 255 38 0 408 0 494 0 098 22 0 545 0 455 0 364 0 496

1998 10 0 900 0 100 0 000 0 000 0 200 0 180 10 0 85 0 150 0 300 0 255 10 0 450 0 500 0 050 - - - - ■

1999 12 0 875 0 125 0 000 0 000 0 250 0219 12 0 750 0 250 0 500 0 375 12 0 458 0 479 0 063 - - - - -

2000 6 0 917 0 083 0 000 0 000 0 167 0 153 6 0 917 0 083 0 167 0 153 7 0 429 0 536 0 036

Суммарно (Caspl) 1987-2000 274 0 836 0 100 0 007 0 057 0 341 0 299 268 0 834 0 166 0 252 0 267 246 0 429 0 506 0 071 154 0 597 0 403 0 481 0 483

Ifct на 6 14 6 73 4 53 204 851 2 19 2 78 0 58 12 092 0 05

гетеро- DF 12 6 6 6 6 6 12 2 ? 2

генность Суммарно по частотам аллелей Хг = 14 32 (D F =44)

выборок Суммарно по Н obs (без sAA Т-1,2 *) 27 43 (DF =14)

Дельта р Волги, апрель 2001 19 0 842 0 105 0 026 0 026 0316 0 278 21 0.810 0 190 0 381 0 308 21 0 369 0 560 0 071 18 0611 0 389 0 444 0 495

Дельта 2001 10 0 850 0 100 0 000 0 050 0 300 0 265 10 0 800 0 200 0 400 0 320 10 0 400 0 525 0 075 10 0 600 0 400 0 400 0 480

р Волги, март 2002 4 1 000 0 000 0 000 0 000 0 000 0 000 4 0 875 0 125 0 250 0219 4 0 625 0 375 0 000 - - - -

Суммарно (Casp2) 2001-2002 33 0 864 0 091 0015 0 030 0 310 0 274 35 0 814 0 186 0 387 0 31? 35 0 407 0 529 0 064 28 0 607 0 393 0 429 0 486

Teci на 6 10 3 43 3 02 0 22 0 59 0 И 2 47 001 0 И 0 00

гетеро- DF 5 2 2 2 2 2 4 1 1 1

генность Суммарно по частотам аллелей -11 29 (D F = 16)

выборок <Х> Суммарно по И obs (6e3SAAT-l,2*) Л^=4 13 (DF-5)

Сравнение суммарных выборок из дельты и нижнего течения р Волга по часто гам аллелей V* =2 3 (D F =

Примечание '- р<0 05,г- р<0 01, N — количество проанализированных особей, Hobs - наблюдаемая гетерозиготность, Нехр - ожидаемая гетерозигогность

Таблица 5. Аллельные частоты полиморфных локусов, ожидаемая и наблюдаемая гетерозиготность и тест на гетерогенность выборок молоди белорыбицы, выращенной на Александровском осетровом рыбоводном заводе в разные годы.

Год sIDHP-4* ADH* sAAT-1,2* slDDH-1 *

N ♦100 * 102 108* 84* я Н N 400 434 н Н N *Ю0 8S* НО* N ¡00* 145* я Я

-а -Ь -с f obs ехр -а -Ь оЬч ехр -а -Ь -с -а -Ь obs

1488 30 0 867 0 100 0 000 0 033 0 267 0 238 248 0819 0 181 0 306 0 297 23 0 500 0 435 0 065 - - - -

1989 101 0 832 0 099 0 000 0 069 0 337 0 294 174 0813 0 187 0 282 0 304 285 0 424 0 476 0 100 101 0 609 0 391 0 485 0 476

2000 30 0 850 0 100 0 000 0 050 0 300 0 265 35 0 857 0 143 0 286 0 245 24 0 458 0 479 0 063 - - - -

2001 73 0 904 0 075 0 000 0 021 0 192 0 176 90 0 9611 0 039 0 078 0 075 66 0 405 0 530 0 065 - - - - -

2002 25 0 640 0 000 0 360 0 000 0 400 0 461 29 0914 0 086 0 034 0 158 32 0 625 0 375 0 000 25 0 620 0 380 0 440 0 471

2003 60 0 842 0 083 0 025 0 050 0 317 0 282 60 0 850 0 150 0 300 0 255 60 0 458 0 479 0 063 61 0 689 0311 0 361 0 429

Тест на X1 68 88 12 33' 16 452 26 263 54 673 42 193 19 33' 2 15 4 78 0 82

■ро- DF 10 5 5 5 5 5 10 2 2 2

ность С\ ммарно по частотам аллелей X —116 62 (D Ь =27) *

о рок (AJ) Суммарно по Я obs (без sAA Т-1,2*) X г-71 78(DF-12)J

Примечание р<0 05,г- р<0 01,3- р<0 001 N — количество проанонсированных особей Hubs - наблюдаемая гетерозиготность Чехр - ожидаемая гетерозиготность

Г---1

Годы

Рис. 3. Наблюдаемая гетерозиготность по некоторым полиморфным локусам в выборках молоди белорыбицы, выпускаемой с Александровского рыбоводного завода в разные годы.

Снижение генетического разнообразия у молоди белорыбицы выпуска 2001 и 2002 г. не повторилось в 2003 г., когда для искусственного воспроизводства использовалось более 100 производителей, поэтому' мы считаем, что это количество производителей минимально необходимо для искусственного воспроизводства белорыбицы.

Глава 5. Исследование внутри- и межпопуляционной изменчивости белорыбицы и нельмы с использованием изоферментных и ДНК-маркеров 5.1.Генетическая дифференциация популяций и параметры генетической изменчивости белорыбицы и нельмы по данным изоферментного анализа Для внутривидовых сопоставлений природных популяций нельмы и искусственно поддерживаемой популяции белорыбицы нами учитывались частоты генов по результатам биохимической обработки 23 - 25 изоферментных локу-сов (таблица 3). Для исследованных выборок белорыбицы и нельмы были рассчитаны основные параметры генетической изменчивости - величины уровня полиморфизма (Р) и средней ожидаемой гетерозиготности (Я ехр.) (таблица 6).

Уровень полиморфизма (Ро 99= 17.4-18.5), средняя гетерозиготность (Н=0.048-0.076) и среднее число аллелей на локус (1.18-1.26) у нельмы и белорыбицы имели сходные показатели. Рассчитанные по 23 локусам генетические расстояния между исследуемыми популяциями белорыбицы и нельмы (№1,1972) варьировали от 0.0001 до 0.0360, по 25 локусам, с учетом sAAT-1,2*, но для меньшего количества популяций, от 0.0001 до 0.0390. Генетические расстояние между выборками белорыбицы, взятыми в разных географических ло-кальностях, очень мало: DN = 0.0001.

Таблица 6

Уровень полиморфизма, среднее число аллелей на локус и средняя ожидаемая гетерозиготность в популяциях нельмы и белорыбицы (по 23 локусам)

Выявленные уровни генетической дифференциации между популяциями нельмы одного бассейна, а также между популяционными системами разных бассейнов в общем хорошо согласуются с соответствующими оценками, полученными для многих других видов (Осипов, 1984; РоМоу Ы а1., 2000, 8еп(!ек,2002, РоШоу Ы а1, 2002) Низкий уровень генетической дивергенции между популяциями нельмы р Северная Двина, Печора и Обь, оз Кубенского ^N=0 00060 0115) может быть объяснен сравнительно недавним генным обменом, который мог происходить между восточно-европейскими и восточно-сибирскими популяциями Возможно, происходил контакт ихтиофаун из Сибири и Восточной Европы во время последнего оледенения.

Таблица 7.

Генетические расстояния DN (№Ц972) между популяциями белорыбицы и нельмы, рассчитанные по 23 локусам

: с привлечениемданных Д Секдек (8егёек, 2002) Обозначения выборок из таблицы 1

Низкий уровень генетической дивергенции между популяциями нельмы оз.Кубенского и р.Северная Двина (Е^О.ОООб-О.ООЮ) можно объяснить сравнительно недавним разделением этих двух популяций (в 1843 г. на р. Сухоне была построена плотина) и наличием генного обмена между ними. Раньше нельма проходила из р.Северная Двина по р. Сухоне в оз.Кубенское, в притоках которого происходил нерест. Средний уровень гетирозиготности у жилой нельмы оз.Кубенского и нельмы р.С Двина не различаются, что также говорит в пользу совсем недавнего генного обмена между этими двумя популяциями.

N«'8 вепеЬсО^апсе

Рис. 4. Дендрограмма генетических расстояний (№1, 1972) для популяций белорыбицы и нельмы по 23 ферментным локусам. Обозначения выборок из таблицы 1.

Полученные данные показаны на рис.4 в виде дендрограммы генетических расстояний (№1, 1972) для популяций белорыбицы и нельмы по 23 ферментным локусам. Полученная картина в целом логично объясняет различия между популяциями. На дендрограмме мы видим два кластера. Белорыбица образует отдельный кластер, причем две выборки, взятые в разных географических локальностях, находятся рядом ^N = 0.0001). Нельма из оз. Кубенское образует единый кластер с нельмой р.Северная Двина, нельма р.Обь занимает промежуточное положение между нельмой р.Печора и кластером, образованным нельмой оз.Кубенского и нельмой р. Северная Двина. Нельма р.Печора из

всех исследованных популяций нельмы по полученному генетическому расстоянию ближе к белорыбице, что может свидетельствовать в пользу предположения о контактах двух подвидов именно в этой речной системе (Подлесный, 1941,1947).

Показатели генетического разнообразия исследованных выборок белорыбицы и нельмы приведены в таблице 8. Показатели для нельмы и белорыбицы различны. Доля генетического разнообразия, приходящегося на различия между выборками нельмы, выше, чем доля, приходящаяся на различия между выборками белорыбицы, взятыми в разных локальностях и в разное время хода на нерест. Доля генетического разнообразия, приходящегося на различия между выборками нельмы р.Северная Двина и оз.Кубенского (Fst.~0.0032), гораздо ниже, чем доля, приходящаяся на различия между выборками нельмы р.Обь и р.Печора (^г-=0.1294). Средний уровень генетической миграции оцененный на основе стандартизированных генетических варианс по аллозимным ло-кусам (1-10), в среднем соответствует таковым, отмеченным для лососевых и сиговых видов рыб.

Таблица 8.

Показатели генетического разнообразия для белорыбицы и нельмы (по поли-

морфным локусам)

Группа Fst Njn

Все популяции 0.1720 10

Нельма 0 0398 6

Белорыбица 0 0081 !

Нельма р С.-Двина, нельма оз Кубенское 0 0032 1

Нельма р Обь, нельма р Печора 0.1294 8

Fst—доля межпопуляциоьного разнообразия в тотальном

N,m - число мигрантов на поколение

Выделение на дендрограммах белорыбицы в отдельный кластер указывает на большую дивергенцию этого подвида. Белорыбица наиболее генетически удалена от остальных исследованных популяций вида. Эти различия мы относим за счет дивергенции этой популяции в локусах ADH*, sAAT-1,2*, IDDH-1,2*. IDHP-4*.

5.2. Применение метода RAPD-PCR для анализа внутривидовой изменчивости белорыбицы и нельмы

Средние коэффициенты генетического сходства, рассчитанные для групп белорыбицы (I) и нельмы (II) по 187 фрагментам RAPD (А-02, А-07, А-09, А-12, А-20, В-01, В02, В05, К20), достоверно отличаются от среднего коэффициента генетического сходства для всех изученных особей белорыбицы и нельмы (таблица 9).

Частоты встречаемости каждого из исследуемых фрагментов в пределах групп белорыбицы и нельмы были рассчитаны для двух исследуемых регионов (р.Волга и бассейн р.Северная Двина). Среднее генетическое разнообразие Нехр. рассчитано из частот фрагментов RAPD, включая мономорфные.

Среднее генетическое разнообразие Нехр внутри групп белорыбицы (Нехр =0.0267) и нельмы (Нехр =0.0226) по изученным ИАРБ-маркерам оказалось примерно одинаковым, среднее же генетическое разнообразие (Нехр =0.0555) для всех исследованных образцов белорыбицы и нельмы почти в два раза превышает среднее генетическое разнообразие внутри групп.

Таблица 9.

Средние коэффициенты попарного сходства между особями для изученных групп белорыбицы и нельмы, рассчитанные по 187 фрагментам ИАРБ (А-02, А-07, А-09, А-12, А-20, В-01, В02, В05, К20).

Группа S(M±m) Нехр

Группа! 09832 ±0 0013 0 0267

Группа 11 09859+00008 0 0226

Группа I и группа II 0 9670 + 00008 00555

Примечание I — белорыбица 2000 г, р Волга, нижнее течение (образцы 6-10) и белорыбица 2000 г

дельта р Волга (образны 19-23), II —нельма оз Кубенское (образцы 11-15) и нельма р С Двина (образцы 2428)

в - коэффициент попарного сходства между особями

Нехр- ожидаемый уровень гетерозиготное™, является мерой тотального разнообразия

Анализ матрицы средних значений коэффициента попарного сходства между группами образцов белорыбицы и нельмы (праймеры А-12, А-20, В-1, В-2, В-5) и построеная по ним дендрограмма (по 118 фрагментам ИАРБ) показали

также четкое разделение на два кластера - белорыбицы и нельмы (рис.5). Группы

, ,------_—, |

I _____________'

001 003 0 03 0 04 0 05

Генетические различия 1-S

Рис. 5. Дендрограмма сходства/различия (UPGMA) между группами образцов белорыбицы и нельмы по 118 фрагментам RAPD (праймеры А-12, А-20, В-1, В-2, В-5).

1-я группа - образцы 6-10 (белорыбица 2000 г, р Волга, нижнее течение), 2-я группа - образцы 19 23 (белорыбица 2000 г, дельта р Волга), 3-я группа - образцы 11-15 (нельма оз Кубенское), 4-я группа - образцы 24-28 (нельма р С Двина), 5-я группа- образцы 31-35 (нельма р Обь), 6-я группа - образны 41-45 (белорыбица 1994 г, р Волга, нижнее течение), S - коэффициент попарного сходства между особями

Дендрограммы, построенные по результатам RAPD-анализа и изофер-ментного анализа, сходны и демонстрируют генетические различия между изучаемыми подвидами белорыбицы и нельмы.

RAPD-спектры ДНК исследуемых образцов были также проанализированы с помощью программного обеспечения Phoretix ID Advanced (Nonlinear Dynamics). Наиболее информативным оказался праймер В-01. Для межвидовых сравнений с помощью этого праймера, кроме RAPD профилей исследуемых особей из популяций белорыбицы и нельмы, были получены RAPD профили сига-нельмушки оз.Кубенского. Дендрограмма RAPD-профилей с использованием праймера В-01 особей белорыбицы, нельмы и сига-нельмушки, построенная по методу объединения ближайших соседей (UNJ) на основе коэффициентов попарного сходства (Dice, 1945) разделила все исследуемые выборки образцов на отдельные кластеры, выявила различия между группами образцов белорыбицы, собранными в разные периоды хода на нерест (выборки Caspl и Casp2), различия между образцами, собранными в разные годы (выборки Caspl, Casp2 и Casp3), различия между популяциями нельмы р.С.Двина и оз.Кубенское (рис.6). Отметим, что при межвидовом сравнении нельмы, белорыбицы и сига-нельмушки оз.Кубенское средние коэффициенты попарного сходства (Dice, 1945) между особями (0.29-0.61) примерно в два раза меньше, чем при внутривидовом сравнении белорыбицы и нельмы (0.64-0.98).

Выполненный сравнительный молекулярно-генетический анализ образцов из четырех популяций белорыбицы и нельмы показал, что дендрограммы UPGMA и NJ, построенные с использованием разного количества исследованных фрагментов RAPD, дифференцируют особей белорыбицы и нельмы по разным кластерам. Наши данные согласуются с генетическими исследованиями, выполненными методом изоферментного анализа, и не противоречат представлению о белорыбице и нельме как подвидах или географических расах. Образцы нельмы оз.Кубенского объединяются в единый кластер с образцами нельмы из р.Северная Двина, что указывает на сравнительно недавний контакт между этими двумя популяциями, в то же время при кластеризации RAPD -профилей, полученных с использованием праймера В-01, образцы нельмы оз.Кубенского и р.Северная Двина разделяются на разные кластеры, что свидетельствует о генетической подразделенности этих двух популяций. Анализ дендрограммы по 118 фрагментам RAPD обнаруживает близость части образцов нельмы оз.Кубенского и р.С.Двина с образцами нельмы р.Обь, что подтверждает точку зрения о контактах нельмы из разных речных бассейнов. Одновременно на дендрограмме с использованием праймера В-01 образцы нельмы р. Обь образуют обособленный кластер, что можно объяснить более длительной генетической изоляцией этой популяции. По результатам RAPD-анализа выявлены различия между выборками образцов белорыбицы, собранными в разные годы и в разные периоды хода на нерест (праймер В-01). Продемонстрирована высокая эффективность применения RAPD-анализа для исследования структуры популяций белорыбицы и нельмы.

Рис 6. Дендрограмма RAPD-профилей с использованием праймера В-01 особей белорыбицы, нельмы и сига-нельмушки, построенная по методу объединения ближайших соседей (UNJ) на основе коэффициентов попарного сходства (Dice, 1945).

Обозначения выборок: Caspl- белорыбица р. Волга, нижнее течение, ноябрь 2000 (образцы 6-10); Casp2 - белорыбица дельта р. Волга, март 2000 г. (образцы 19-23); Casp3- белорыбица р. Волга, нижнее течение, ноябрь 1994 г. (образцы 41-45); Nel-SDv- нельма р.С.Двина (образцы 24-28); Nel-Kub-нвльма оз.Кубенское (образцы 11-15); Nel-Ob - нельма р.Обь (образцы 31-35), Sig-сиг-нельмушка оз.Кубенское (образцы 36,39,40).

Результаты ИАРБ-анализа показывают достаточно высокую степень близости исследованных образцов белорыбицы и нельмы. Вместе с тем нужно отметить, что средние коэффициенты генетического сходства выше между особями их разных речных бассейнов в Северном регионе, чем между особями Северного и Южного регионов, что может рассматриваться в пользу того, что период генетической изоляции популяции белорыбицы по отношению к северным популяциям нельмы имеет большую продолжительность, чем у северных популяций между собой. Это предположение согласуется с выводами, полученными из результатов изоферментного анализа этих популяций.

Глава 6. Генетический анализ образцов тканей белорыбицы из криоколлекции ВНИИПРХ В 1994 г. методом электрофореза проанализирован 31 ферментный локус, экспрессирующийся в мышцах или печени у производителей белорыбицы, в 1997 г. - 35 ферментных локусов. Четыре полиморфные ферментные системы были выбраны для проведения мониторинговых работ: изоцитратдегидрогеназа (¡ШИР-3,4*), аспартатаминотрансфераза (¡ЛАТ-1,2*), алкогольдегидрогеназа (ЛВИ*) и идитолдегидрогеназа (ЮВИ-1,2*). По выбранным маркерам были исследованы образцы тканей от 61 самца, сперма которых заложена в криобанк в 1994 году, в 1997 г. обработаны образцы тканей от 36 особей.

Данные изоферментного анализа показали, что выборка образцов белорыбицы в криобанке (сбор 1994 г.) отражает основной генотипический состав популяции |(таблкца^)„ содержит образцы с редкими аллелями и генотипами.

При анализе криоколлекции методом ИАРБ-РСК общее число исследованных фрагментов равно 157. Для выборки образцов, хранящихся в криобанке и для выборки образцов тканей белорыбицы, нерестившейся в 2000 году, рассчитанные коэффициенты парного сходства (8) оказались очень близки -0.9829+0.0024 и 0.9760±0.0021, между группами - 0.9798 ±0.0012. При проведении кластерного анализа (иРОМА) образцы разных лет подразделяются на отдельные кластеры с высокой степенью близости исследованных выборок. Дендрограмма (Ц№), на основании ИАРБ-анализа с использованием праймера В-01, выявила различия между группами образцов белорыбицы, собранными в разные периоды хода на нерест. На дендрограммах эти образцы подразделяются на разные кластеры, что означает разнокачественность исследованных выборок. Поэтому при дальнейшем формировании криоколлекции белорыбицы криоконсервация и использование при осеменении икры спермы от самцов белорыбицы, выловленных в разные периоды нерестового хода, а также криокон-сервированных препаратов спермы, заготовленных в предыдущие годы, даст возможность использовать половые продукты от генетически разнокачественных группировок для поддержания генетического разнообразия этого уникального объекта искусственного воспроизводства и аквакультуры.

Полученные результаты пригодны для формирования и обеспечения генетического раздела информационной базы данных в фондах системы низкотемпературных банков и криохранилищ, для решения научных и практических

проблем совершенствования биотехнологий аквакультуры и сохранения биоразнообразия.

На основании изложенного материала можно дать следующие практические рекомендации

При создании на рыбоводных предприятиях маточных стад белорыбицы и нельмы, для получения высококачественного рыбопосадочного материала, как для целей воспроизводства, так и для реализации, необходим постоянный генетический контроль в форме мониторинга. Процесс доместикации белорыбицы и нельмы необходимо корректировать отбором, направленность которого должна определяться целью дальнейшего выращивания производителей (воспроизводство для пополнения природных популяций, товарное выращивание). Выявленные генетические признаки могут применяться в качестве маркеров для исследования особенностей рыбоводного процесса.

Использовать при выращивании молоди нельмы и белорыбицы в индустриальных рыбоводных хозяйствах производителей местных популяций, т.к. товарное выращивание необходимо совмещать с выпуском молоди в естественные водоемы в целях воспроизводства. Генетический мониторинг природных популяций необходим в связи со снижением численности популяций нельмы и важностью определения оптимальных вариантов по стандарту выпускаемой молоди.

Выводы

1. Методом электрофореза в полиакриламидных и крахмальных гелях исследовано 15 ферментных систем у белорыбицы и нельмы и выявлено 36 кодирующих их генов. Полиморфизм обнаружен в локусах ЛБИ*, ЛЛТ-1,2*, Е8Т5*, ЕБТ6*. ОР1-Л2*,1ББИ-1,2*, 81БИР-4*, 8МБИ-В1*¿МЕР-3,4*, РОИ-3*.

2. Анализ признаков, характеризующих ядерную ДНК с использованием 9 праймеров, позволил выявить 187 фрагментов ИАРБ у белорыбицы и нельмы. Показано, что 23 полиморфных фрагмента могут быть использованы для проведения популяционно-генетического анализа. Выявлен один ампликон, характеризующий популяции нельмы и два ампликона, характеризующие популяцию белорыбицы, которые в дальнейшем могут быть использованы для дифференциации популяций.

3. Исследование генетических характеристик в выборках белорыбицы из нижнего течения и дельты Волги за период с 1987 по 2002 год показало отсутствие достоверной гетерогенности в пространственном и временном аспектах. Исключение составляют некоторые выборки, отобранные в разные сроки ана-дромной миграции, которые достоверно отличались по частотам аллозимных локусов. Результаты генетического мониторинга свидетельствуют о стабильном состоянии поддерживаемого искусственно стада белорыбицы в бассейне Волги. Выявлено действие отбора по локусу ЛБИ* у белорыбицы, которое связано с переменным преимуществом аллелей в процессе онтогенеза. Показано, что генетическая неоднородность выборок молоди белорыбицы различных генераций связана с ограниченным количеством производителей, использованных для искусственного воспроизводства.

4. Анализ параметров генетической изменчивости по аллозимным локусам показал, что уровень полиморфизма (Ро,99= 17.4-18.5) и средняя гетерозигот-ность (Н=0.048-0.072) у нельмы и белорыбицы имели сходные показатели. Исследования природных популяционных комплексов нельмы Северной Евразии и белорыбицы показали наличие достоверной гетерогенности как по частотам аллозимных локусов, так и по индексам генетического сходства спектров фрагментов ядерной ДНК. Кластерный анализ генетических расстояний D¡>j(NeÍ, 1972) по частотам аллозимных локусов и генетических различий, вычисленных по спектру фрагментов RAPD (Dice, 1945), показал хорошее соответствие уровня генетической дивергенции географическому положению исследованных популяций. Значения генетической дивергенции между подвидами (1\-=0.032-0.038) по сравнению со значениями генетической дивергенции между популяциями нельмы (Dn=0.000-0.010) указывают на более тесные контакты между популяционными комплексами нельмы. Средний уровень генетической миграции (оцененный по аллозимным локусам) в целом соответствует таковым, отмеченным для лососевых и сиговых видов рыб.

5. Данные аллозимного анализа криоколлекции белорыбицы из Криобанка ВНИИПРХ показали, что выборка образцов в криобанке отражает основной ге-нотипический состав популяции белорыбицы и содержит образцы с редкими аллелями и генотипами. Полученные данные по составу RAPD-спектров образцов белорыбицы, хранящихся в Криобанке, служат основой для паспортизации базы данных по генетическим характеристикам криоколлекции белорыбицы и нельмы.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Голованова Т.С. 1989. Электрофоретический анализ некоторых ферментных систем белорыбицы, воспроизводимой на Александровском осетровом рыбоводном заводе в дельте Волги// Проблемы изучения, охраны и рационального использования природных ресурсов Волго-Ахтубинской поймы реки Волги: Тезисы докладов экологической научно-практической молодежной конференции. Астрахань. С. 107-108.

2. Офицеров М.В., Витвицкая Л.В., Никоноров СИ., Голованова Т.С. 1989. Влияние заводского выращивания на генетическое разнообразие атлантического лосося Salmo Salar // Вопросы ихтиологии. Т.29. Вып 5. С.871-874.

3. Серов Д.В., Голованова Т.С, Никоноров СИ. 1990. Анализ генетического отбора на ранних этапах онтогенеза на примере полиморфной системы АДГ белорыбицы // ДАН СССР. Т. 311. № 2. С. 484-487.

4. Голованова Т.С, Варнавская Н.В., Мальдов Д.Г., Никоноров СИ. 1997а. Изучение генетической изменчивости белорыбицы, воспроизводимой на Александровском осетровом рыбоводном заводе в дельте Волги //Первый Конгресс ихтиологов России. М.: ВНИ-РО.С.351.

5. Голованова Т.С, Варнавская Н.В., Мальдов Д.Г., Никоноров СИ. 19976. Полиморфизм изоцитратдегидрогеназы (ИДГ) и аспартатаминотрансферазы (ААТ) белорыбицы по результатам скрещиваний //Первый Конгресс ихтиологов России. М.: ВНИРО. С. 350.

6. Голованова Т.С, Серов Д.В., Никоноров СИ., Мальдов Д.Г., Витвицкая Л.В. 1997в. Изучение причин отбора по локусу аякогольдегидрогеназы на ранних стадиях онтогенеза у белорыбицы при искусственном воспроизводстзе//Первый Конгресс ихтиологоз России. М: ВНИРО С. 308.

7. Ананьев В.И., Андреев A.A., Голованова Т.С., Петропавлов Н.Н, Цветкова Л.И. 1998. Опыт криоконсервации спермы белорыбицы и белуги // Рыбное хозяйство. Серия Аквакультура, «Проблемы сохранения геномов лососевых и осетровых рыб». Вып 1. С.25-32.

8. Голованова Т.С., Никоноров СИ., Мальдов Д.Г., Городовская СВ. 1998. Различная выживаемость самцов белорыбицы Stenodus leucichthys Guld. с определенными генотипами по локусу алькогольдегидрогеназы на ранних стадиях онтогенеза//Возрастная и экологическая физиология рыб: Тезисы докладов Всероссийского симпозиума. Борок. С 28-29.

9. Голованова Т.С., Мальдов Д.Г., Новоселов А.П., Никоноров СИ. 2000. Аллозимная изменчивость белорыбицы и нельмы Stenodus leucichthys //Вопросы рыболовства. Т.1.№2.С.95-96.

10. Голованова Т.С., Никоноров СИ. 2001. Формирование изменчивости по длине тела у потомства от индивидуальных скрещиваний производителей белорыбицы (Stenodus leucichthys Guld) на ранних стадиях онтогенеза// Вопросы рыболовства. П. 1. С 60-62.

11. Голованова Т.С., Никоноров СИ., Новоселов А.П., Барминцев В.А. 2001. Применение RAPD-PCR-анализа для изучения внутривидовой изменчивости белорыбицы и нельмы (Stenodus leucichthys). II Биология, биотехника разведения и промышленного выращивания сиговых рыб: Материалы научно-производственного совещания. Тюмень. С.37-41.

12. Никокоров СИ., Ананьев В.И., Голованова Т.С. 2001. Проблемы искусственного воспроизводства белорыбицы и сохранения ее генетического разнообразия с применением крио технологий // Биология, биотехника разведения и промышленного выращивания сиговых рыб: Материалы научно-производственного совещания. Тюмень. С. 113-118.

13. Golovanova T.S., Zujanov E.A., Nikonorov S.I. 2002. Intraspecific genetic variation of Caspian inconnu (Stenodus leucichthys Guld.) and nelma (Stenodus leucichthys nelma (Pallas) assessed by allozume analysis// VIII International Symposium on the Biology and Management of Coregonid Fishes. 26-29.8.2002, Finland, Rovaniemi, Poster abstracts. P. 16.

14. Голованова Т.С Никоноров СИ., Чудинов О.С, Абрамова А.Б. 2003. Исследование внутри- и межпопуляционной изменчивости нельмы и белорыбицы (Stenodus leucichthys) методом RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)// Биологические ресурсы Белого моря и внутренних водоемов Европейского Севера: Материалы III(XXVI) Международной конференции. Сыктывкар. С26.

15. Голованова Т.С, Ананьев В.И., Никоноров СИ., Цветкова Л.И., Петропавлов H.H., Барминцев В.А. 2003. Анализ криоколлекции белорыбицы (Stenodus leucichthys leucich-thys Guld.) с помощью изоферментного и RAPD-анализа // Холодноводная аквакультура - путь в XXI век: Материалы Международного симпозиума. С-Петербург. С. 138-139.

16. Голованова Т.С, Никоноров СИ., Ананьев В.И., Цветкова Л.И., Волков A.A., Бар-минцев В.А. 2004. Молекулярно-генетические аспекты формирования криоколлекции белорыбицы (Stenodus leucichthys Guld.)// Цитология.Т.46. № 9. С.782-783.

17. Golovanova T.S., Nikonorov S.I. 2004. The long-term genetic monitoring of allozyme variation in the artificially reproduced Caspian inconnu, Stenodus leucichthys leucichthys (Güldenstadt, 1772) //XI European Congress oflchtyology.September 6-10,2004, Tallin, Estonia. Estonian Marine Institute Report Series. No.12. P.168-169.

Подписано к печати 10.12.2004г. Формат 60x90, объем 1 п.л. Тираж 120 экз. Заказ № 151

, ^ » \_ г:л

• : - \ ч*

' i * - -

t »

, î -\ ¿ / V

С4

16 ce:î;:5

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Голованова, Татьяна Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1Л. Некоторые сведения по биологии и структуре популяций белорыбицы и нельмы.

1.2. Нельма и белорыбица - объекты искусственного воспроизводства

1.3. Возможные пути расселения белорыбицы и нельмы (по данным литературных источников).

1.4. Исследования рыб с привлечением генетических маркирующих

• признаков.

1.5. Использование Криобанков для сохранения генетического разнообразия рыб.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 .Материалы исследования.

2.2. Методы электрофоретического анализа белков.

2.3. Методы ДНК-анализа.

2.3.1. Выделение и очистка ДНК методом фенол-хлороформной экстракции.

2.3.2. Определение концентрации ДНК в препарате, оценка степени чистоты и фрагментации геномной ДНК.

2.3.3. Выполнение полимеразой цепной реакции с использованием 84 RAPD-праймеров (RAPD-PCR).!.

2.3.4. Электрофорез в полиакриламидном геле.

2.3.5. Обработка данных.

ГЛАВА 3. ПОЛИМОРФИЗМ ФЕРМЕНТНЫХ СИСТЕМ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ RAPD-MAPKEPOB У р БЕЛОРЫБИЦЫ И НЕЛЬМЫ.

3.1. Генетическая интерпретация выявляемой методом электрофореза изменчивости ферментных систем.

3.2. Описание полиморфизма ДНК по RAPD- маркерам.

ГЛАВА 4. ГЕНЕТИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ПОПУЛЯЦИИ * БЕЛОРЫБИЦЫ В БАССЕЙНЕ Р.ВОЛГА.

4.1. Динамика генетических показателей у производителей белорыбицы, использованных в рыбоводном процессе в 1987-2002 г.

4.2. Генетические показатели у самцов и самок белорыбицы, использованных в рыбоводном процессе.

4.3. Генетические показатели в выборках молоди белорыбицы различных генераций.

4.4. Анализ воздействия отбора по ферментным локусам в популяции белорыбицы.

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ВНУТРИ- И МЕЖПОПУЛЯЦИОННОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ БЕЛОРЫБИЦЫ И НЕЛЬМЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИЗОФЕРМЕНТНЫХ И ДНК-МАРКЕРОВ.

5.1. Генетическая дифференциация популяций и параметры генетической изменчивости белорыбицы и нельмы по данным изоферментного анализа.

5.2. Применение метода RAPD-PCR для анализа внутривидовой изменчивости белорыбицы и нельмы.

4.3. Использование генетических маркеров для'выяснения взаимоотношений и расселения популяций белорыбицы и нельмы.

ГЛАВА 6. ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ОБРАЗЦОВ ТКАНЕЙ

БЕЛОРЫБИЦЫ ИЗ КРИОКОЛЛЕКЦИИ ВНИИПРХ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Анализ генетической изменчивости белорыбицы и нельмы Stenodus leucichthys (Güldenstädt, 1772) в связи с задачами искусственного воспроизводства"

Актуальность исследований. Сиговые рыбы относятся к наиболее ценным промысловым видам внутренних водоемов и являются одним из основных объектов аквакультуры на большей части территории России.

Белорыбица и нельма относятся к виду Stenodus leucichthys (Guldenstadt, 1772), находящемуся под угрозой уничтожения и занесенному в Красную книгу России (Атлас пресноводных рыб России, 2002). Вместе с тем популяционно-генетические исследования этого вида в России охватывали небольшую часть популяций нельмы (Ермоленко, 1989; 1991; Ermolenko, 1992; Politov et ah, 2000; Sendek, 2002), южный ареал вида - Каспийский бассейн, где обитает белорыбица - вообще не был исследован. Генетические исследования рыб CQM.Coregonidae, проведенные с использованием различных методических подходов, не позволяют однозначно определить положение нельмы среди других видов семейства (Ermolenko, 1992; Bernatchez et ah, 1991; Lockwood et ah, 1993; Saidak , Phillips, 1997; Hamada et al, 1998; Vuorinen et ah, 1998; Reist et ah, 1998; Sendek, 2002), поэтому привлечение новых биохимических данных о неисследованных ранее популяциях поможет выяснить некоторые вопросы филогении, а также высказать предположения о путях расселении этого вида.

Так как ввиду зарегулирования 'стока Волги естественное воспроизводство стада белорыбицы затруднено, оно поддерживается в основном за счет искусственного разведения (Летичевский, 1983; Васильченко, 2002). В связи с этим, в целях правильного планирования и организации рыбоводства, необходимы исследования генетических процессов, сопровождающих формирование искусственно-природного стада белорыбицы в Волжском бассейне. Северо-европейские и сибирские стада нельмы являются уникальным резервом природных генофондов и могут стать объектами аквакультуры и пастбишного рыбоводства, в связи с чем необходимо исследование генетических характеристик и особенностей популяционной организации и микроэволюции вида Stenodus leucichthys в целом.

Поставленная цель определила решение следующих задач:

• Выявить полиморфные и мономорфные ферментные локусы в популяциях белорыбицы и нельмы с помощью электроферетического анализа, установить локусы, пригодные для внутривидовых сравнений белорыбицы и нельмы, а также для генетических мониторинговых работ.

Научная новизна.

Дано описание изменчивости по белковым локусам и молекулярно-генетическим RAPD-маркерам белорыбицы и нельмы из ряда водоемов Севера Евразии и Каспийского моря. Оригинальным является описание полиморфизма в локусе, кодирующем алкогольдегидрогеназу (ADH*) у белорыбицы и нельмы, установление схемы его наследования на основе метода экспериментального гибридологического анализа. Выявлено влияние отбора по локусу алкогольдегидрогеназы, связанное с переменным преимуществом аллелей в процессе онтогенеза белорыбицы. Показана относительная стабильность генетических характеристик стада белорыбицы в пространственном и временном аспектах в течение периода 1987-2002 г. Предполагается, что гомогенность стада белорыбицы связана с особенностями искусственного воспроизводства. Приведены мультилокусные характеристики (23-25 генов) нескольких крупных локальных стад нельмы и белорыбицы Севера Евразии и Каспийского моря. Вычислены генетические расстояния (Nei, 1972) и оценены уровни дивергенции между популяционными комплексами нельмы и белорыбицы на основании данных изоферментного анализа. Представлено графическое отображение внутривидовой иерархической организации популяционных группировок белорыбицы и нельмы методом кластерного анализа признаков, отображающих полиморфизм ядерной ДНК (RAPD-маркеры). Оценено генетическое разнообразие белорыбицы из материалов Криобанка ВНИИПРХ и начато создание базы данных по мультилокусным генетическим маркерам данного вида.

Заключение Диссертация по теме "Ихтиология", Голованова, Татьяна Сергеевна

ВЫВОДЫ

1. Методом электрофореза в полиакриламидных и крахмальных гелях исследовано 15 ферментных систем у белорыбицы и нельмы и выявлено 36 кодирующих их генов. Полиморфизм обнаружен в локусах ADH*, ААТ-1,2* EST5* EST6*, GPI-A2*, IDDH-1,2*, sIDHP-4*, sMDH-Bl *, sMEP-3,4*, PGM-3*.

2. Анализ признаков, характеризующих ядерную ДНК с использованием 9 праймеров, позволил выявить 187 фрагментов RAPD у белорыбицы и нельмы. Показано, что 23 полиморфных фрагмента могут быть использованы для проведения популяционно-генетического анализа. Выявлен один ампликон, характеризующий популяции нельмы и два ампликона, характеризующие популяцию белорыбицы, которые в дальнейшем могут быть использованы для дифференциации популяций.

3. Исследование генетических характеристик в выборках белорыбицы из нижнего течения и дельты Волги за период с 1987 по 2002 год показало отсутствие достоверной гетерогенности в пространственном и временном аспектах. Исключение составляют некоторые выборки, отобранные в разные сроки анадромной миграции, которые достоверно отличались по частотам аллозимных локусов. Результаты генетического мониторинга свидетельствуют о стабильном состоянии поддерживаемого искусственно стада белорыбицы в бассейне Волги. Выявлено действие отбора по локусу ADH* у белорыбицы, которое связано с переменным преимуществом аллелей в процессе онтогенеза. Показано, что генетическая неоднородность выборок молоди белорыбицы различных генераций связана с ограниченным количеством производителей, использованных для искусственного воспроизводства.

4. Анализ параметров генетической изменчивости по аллозимным локусам показал, что уровень полиморфизма (Ро,99= 17.4-18.5) и средняя гетерозиготность (Н=0.048-0.072) у нельмы и белорыбицы имели сходные показатели. Исследования природных популяционных комплексов нельмы Северной Евразии и белорыбицы показали наличие достоверной гетерогенности как по частотам аллозимных локусов, так и по индексам генетического сходства спектров фрагментов ядерной ДНК. Кластерный анализ генетических расстояний DN(Nei, 1972) по частотам аллозимных локусов и генетических различий, вычисленных по спектру фрагментов RAPD (Dice, 1945), показал хорошее соответствие уровня генетической дивергенции географическому положению исследованных популяций. Значения генетической дивергенции между подвидами (DN=0.032-0.038) по сравнению со значениями генетической дивергенции между популяциями нельмы (Dn=0.000-0.010) указывают на более тесные контакты между популяционными комплексами нельмы. Средний уровень генетической миграции (оцененный по аллозимным локусам) в целом соответствует таковым, отмеченным для лососевых и сиговых видов рыб.

5. Данные аллозимного анализа криоколлекции белорыбицы из Криобанка ВНИИПРХ показали, что выборка образцов в криобанке отражает основной генотипический состав популяции белорыбицы и содержит образцы с редкими аллелями и генотипами. Полученные данные по составу RAPD-спектров образцов белорыбицы, хранящихся в Криобанке, служат основой для паспортизации базы данных по генетическим характеристикам криоколлекций белорыбицы и нельмы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Для решения поставленных в работе задач были собраны материалы, позволяющие оценить генетические характеристики некоторых популяций нельмы Северной Евразии и белорыбицы Каспийского моря. Необходимо было организовать популяционно-генетические исследования вида, европейские популяции которого ввиду снижения численности находятся под угрозой исчезновения. Для поиска генных маркеров необходимо было провести работы по унификации методик, разработанных в разных лабораториях и выбрать методы, пригодные для решения задач нашей работы.

Методом электрофореза в полиакриламидном и крахмальном гелях с последующим гистохимическим окрашиванием исследовано 15 ферментных систем. Анализ изоформ, разделяемых по величине заряда и размерам молекул, позволил выявить 36 генов в разных'тканях белорыбицы и нельмы. В среднем около 16-18% из них оказались полиморфными хотя бы в одной из исследованных выборок.

Впервые исследованы частоты 23-25 генов крупных стад белорыбицы и нельмы, описан характер их вариабельности и выполнены оценки достоверности внутри и межпопуляционной пространственной гетерогенности полиморфных генов. Показано, что генетическая гетерогенность популяций белорыбицы и нельмы высоко достоверна.

Выполнено исследование влияния отбора на биохимические гены (на примере локуса ADH* у белорыбицы).

При проведении мониторинга генетического разнообразия нами проанализированы данные по частотам полиморфных генов в популяции белорыбицы за период с 1987 по 2002 год.

По результатам генетического мониторинга популяции белорыбицы за ряд лет выявлены низкие колебания частот полиморфных локусов и средней гетерозиготности, для выборок производителей, собранных в разные годы до 2001 г., различия были недостоверны. Не было выявлено достоверных различий по частотам генов и в значениях средней гетерозиготности между выборками самцов и самок. Не было выявлено различий между суммарными выборками белорыбицы, собранными в разное время хода на нерест (март, ноябрь), однако обнаружились различия между выборками белорыбицы, собранными в разные сроки в определенный сезон (ноябрь 1994 г., р <0.05), также наблюдались колебания в значениях гетерозиготности, которая различалась в выборках в 2-3 раза. Нами также обнаружена гетерогенность (локусы ADH*, IDHP-4*, р <0.05) между выборками молоди белорыбицы, полученными от производителей, выловленных в разное время нерестового хода в 2001 г., наблюдалось также различие в средней гетерозиготности более чем в 2 раза. Нами обнаружены достоверные различия между выборками молоди белорыбицы различных генераций, выращенных на рыбоводных заводах (локусы ADH*, IDHP-4*, sIDDH-1*, р < 0.001).

Выявленную гетерогенность выборок молоди белорыбицы разных генераций мы объясняем ограниченным количеством производителей, использованных в производственном процессе в 2000 и 2001 годах. Снижение генетического разнообразия у молоди выпуска 2001 и 2002 г. не повторилось в 2003 г., когда для искусственного воспроизводства использовалось более 100 производителей белорыбицы, поэтому считаем это количество минимальным, необходимым при искусственном воспроизводстве белорыбицы.

Таким образом, нами выявлено снижение генетической изменчивости выпускаемой рыбоводными заводами молоди белорыбицы в связи с резким сокращением численности используемых в производственном процессе производителей и показано, что использование 100 производителей не приводит к резким изменениям в изученных генетических характеристиках.

Нами показано, что одним из отрицательных последствий, сопровождающих искусственное воспроизводство, являются существенные колебания в состоянии популяционного генофонда белорыбицы. Выявляемое по биохимическим маркерам снижение генного разнообразия популяции белорыбицы связано с уменьшением численности нерестового стада и, соответственно, снижением численности используемых в рыбоводном процессе производителей, что делает необходимым при искусственном воспроизводстве белорыбицы применение новых подходов с привлечением генетических методов для сохранения этого ценного вида рыб и поддержания его численности.

Для решения проблемы сохранения видового разнообразия, возможности восстановления популяций белорыбицы и нельмы и их рационального использования, при создании маточных стад белорыбицы и нельмы, совершенствовании уже существующих маточных стад необходимо использовать генетические характеристики исследуемого объекта.

На основе исследования выявленной в работе генетической изменчивости заложена основа для создания базы данных по динамике частот генов белорыбицы и нельмы. Это обеспечит возможность совершенствования методов прогнозирования численности, рационального использованию запасов, развития методов искусственного воспроизводства и сохранения уникального и чрезвычайно ценных вида рыб.

Важная особенность популяции белорыбицы, способствующая сохранению генетических параметров - значительное перекрывание поколений. Нами выявлены факты, свидетельствующие об отборе, ведущем к возникновению генетических различий между особями белорыбицы разного возраста. Как показывает математическое моделирование (Ellner, Hairston, 1994), в таких условиях стабилизирующий отбор с меняющимся по времени оптимумом способствует поддержанию генетической изменчивости в популяциях.

Искусственно воспроизводимая популяция белорыбицы может быть подвержена генетическим изменениям из-за изменяющихся условий среды и контролируемого размножения, поэтому следует уделить большое внимание генетическим принципам создания маточных стад, а также их поддержания. Генетические взаимодействия между искусственно созданными стадами белорыбицы важны в связи с необходимостью минимизировать разрушение адаптивных генофондов и предотвратить потерю невосполнимых резервов генетической изменчивости.

Нами сформирован генетический банк данных о выпуске молоди белорыбицы в различные годы, что даст возможность получить данные о возврате соответствующих генераций. Именно это является необходимой основой для дальнейших рекомендаций по выпуску молоди.

В результате проведенных исследований, в которых показана потеря генетического разнообразия ввиду использования ограниченного количества производителей, можно сделать вывод, что выпуск молоди белорыбицы, выращенной для товарного выращивания, в естественные водоемы, должен проводиться под генетическим контролем, также под контроль должен быть поставлен процесс генного обмена между рыборазводными предприятиями и предприятиями, занимающимися товарным выращиванием белорыбицы и нельмы.

В связи со снижением численности стад нельмы и необходимостью определения оптимальных вариантов по стандарту выпускаемой рыбоводными заводами молоди и по ее размещению в естественных водоемах, важным направлением является мониторинг популяций тех рек, на которых будут работать рыбоводные заводы. На основании выполненных разработок можно будет сделать заключение о необходимости проведения дифференцированного выпуска молоди, причем на различных реках сроки и объемы выпуска будут различаться в зависимости от условий в водоемах выпуска и на заводах.

Необходимо производить отбор производителей белорыбицы для искусственного воспроизводства с учетом сохранения разнообразия и естественной структуры генофонда вида. Систематический мониторинг за возрастно-весовой структурой стад, за изменениями морфометрических показателей, отражающих генетически детерминированные признаки и позволяющих своевременно заметить генетико-селективные процессы, угрожающие сохранению исторически сложившейся структуры популяций белорыбицы, необходимо дополнить генетическим мониторингом. Для сохранения генетического разнообразия ^ данного вида необходимо контролировать изменения его генетической структуры при искусственном воспроизводстве. В связи с этим необходимо проводить дальнейшее интенсивное исследование генетической структуры популяции белорыбицы, исследовать популяцию белорыбицы р.Урал, а также разработать и использовать такую стратегию, которая давала бы возможность минимизировать негативные аспекты рыбоводной работы.

За счет применения метода генетического мониторинга будет увеличиваться эффективность процессов заводского разведения белорыбицы за счет повышения качества потомства благодаря научно обоснованному подбору родительских пар, а также за счет своевременного применения процедур, повышающих общую гетерогенность эксплуатируемого стада.

Можно также предположить, что в настоящее время в силу резкого сокращения численности популяции белорыбицы может начать снижаться ее генетическая гетерогенность. При искусственном воспроизводстве отлов необходимого количества производителей производился в течение ряда лет только в одном месте —под плотиной Волгоградской ГЭС - и в сжатые сроки, определяемые периодом работы бригады заготовителей. В результате этого значительная часть и без того уже генетически обедненной популяции выпадала из процесса воспроизводства. Часть производителей, мигрировавших в реку с еще незрелыми гонадами, даже будучи отловленными заготовителями, не давали потомства.

Основными причинами негативного явления отсутствия стабильности генетических характеристик выпускаемой в реку молоди белорыбицы можно считать использование малого числа производителей при закладке икры на инкубацию, а также эксплуатация производителей не всех биологических сроков нерестового хода и сбор зрелых половых клеток от производителей, собранных в течение короткой части периода хода на нерест.

На основании выполненного для белорыбицы внутрипопуляционного анализа, который в целом не показал статистически значимых различий между выборками рыб, выловленных на разных участках реки Волги и в разное время года, можно высказать предположение о сравнительной генетической гомогенности популяции белорыбицы в исследованном регионе. Популяция белорыбицы в целом до 2001 года характеризовалась стабильными суммарными частотами аллелей, колебания не изменяют суммарную генетическую характеристику всей популяционной структуры.

Природоохранные меры при искусственном воспроизводстве белорыбицы в условиях зарегулированного стока Волги должны включать поддержание разнокачественности популяции, являющейся необходимым условием увеличения численности воспроизводимого объекта. Особую опасность представляют неконтролируемый лов и хищническое истребление ценных рыб, что приводит к снижению воспроизводственного потенциала и нарушению эффективной численности популяций. Очень опасна потеря генетической изменчивости, вызванная дрейфом генов и при искусственном воспроизводстве. Для того чтобы сохранить природный генофонд белорыбицы, необходимо расширить внутрипопуляционный спектр производителей при промышленном воспроизводстве. Плодовитость белорыбицы высока, и масштабное пополнение запасов могут маскировать общее истощение популяции.

Полученные сведения по внутривидовым генетическим связям белорыбицы и нельмы могут быть полезными при установлении преобладающих эволюционных факторов, способствовавших становлению внутривидового разнообразия для вида Stenodus leucichthys (Guldenstadt, 1772).

Полученные генетические данные могут в дальнейшем использоваться как первичный материал для генетического мониторинга популяций белорыбицы и нельмы, который является основой для разработки мер по охране генофонда этого ценного вида рыб, в последние десятилетия повсеместно испытывающего негативное влияние от хозяйственной деятельности человека.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ.

На основании изложенного материала можно дать практические рекомендации.

Использовать при выращивании молоди нельмы и белорыбицы в индустриальных рыбоводных хозяйствах' производителей местных популяций, т.к. товарное выращивание необходимо совмещать с выпуском молоди в естественные водоемы в целях воспроизводства. Генетический мониторинг природных популяций необходим в связи со снижением численности популяций нельмы и важностью определения оптимальных вариантов по стандарту выпускаемой молоди.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Голованова, Татьяна Сергеевна, Москва

1. Аллендорф Ф.У., Риман Н. Генетическое управление искусственным воспроизводством рыбных стад// Популяционная генетика и управление рыбным хорзяйством.-М.: Агропромиздат, 1991. -С.177-198.

2. Алтухов Ю.П. Локальные стада рыб как генетически стабильные популяционные системы// Биохимическая генетика рыб. -Л., 1973.-С.43-53.

3. Алтухов Ю.П. Популяционная генетика рыб. -М.: Пищевая пром-ть, 1974.-245с.

4. Алтухов Ю.П. Генетические последствия селективного рыболовства.// Генетика. -1994. -Т. 30, №1. С. 5-21.

5. Алтухов Ю.П. Генетика популяций и сохранение биоразнообразия// Соросовский образовательный журнал. -1995. -№1. -С.32-43.

6. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях. 3-е изд перераб. и доп. -М.: ИКЦ «Академкнига», 2003.-431с.

7. Алтухов Ю.П., Абрамова А.Б. Мономорфная видоспецифичная ДНК, выявляемая в полимеразной цепной . реакции со случайными праймерами//Генетика. -2000. -Т.36, № 12. -С. 1674-1681.

8. Алтухов Ю.П., Варнавская Н.В. Адаптивная генетическая структура и ее связь с внутрипопуляционной дифференциацией по полу, возрасту и скорости роста у тихоокеанского лосося нерки Oncorhynchus nerka (Walb) // Генетика. -1983. -Т. 19, N. 5. -С. 796-807.

9. Алтухов Ю.П., Корочкин Л.И., Рычков Ю.Г. Наследственное биохимическое разнообразие в процессах эволюции и индивидуального развития //Генетика. -1996.- Т.32, № 11. -С.1450-1473.

10. Алтухов Ю. П., Салменкова Е. А., Омельченко В. Т. и др. Балансирующий отбор как возможный фактор поддержания единообразия аллельных частот ферментных локусов в популяциях тихоокеанского лосося горбуши // Генетика. -1987. - Т. 23, №10. -С. 1884-1896.

11. П.Алтухов Ю.П., Салменкова Е.А., Омельченко В.Т. Популяционная генетика лососевых рыб. -М.: Наука, 1997. -288 с.

12. Алтухов Ю.П., Салменкова Е.А. Полиморфизм ДНК в популяционной генетике // Генетика. -2002.-Т. 38, № 9. -С. 1173-1195.

13. Ананьев В.И., Андреев А.А., Голованова Т.С., Петропавлов Н.Н, Цветкова Л.И. Опыт криоконсервации спермы белорыбицы и белуги // Рыбное хозяйство. Серия Аквакультура, «Проблемы сохранения геномов лососевых и осетровых рыб». -1998. -Вып.1. -С.25-32.

14. Антонова В.П., Новоселов А.П. К вопросу о необходимости заводского воспроизводства омуля и нельмы в бассейне р. Печоры// Экологические проблемы Севера Европейской территории России.-Апатиты, 1996. -С. 27-28.

15. Атлас пресноводных рыб России: В 2 т. Т.1.// Под ред. Ю.С. Решетникова. М.: Наука, 2002.-379 с.

16. Бабушкин Н.Я. Возможность развития промысла белорыбицы в Северном районе АзербайджанаУ/Рыбное хозяйство.- 1941.-N4.-C. 19-20.

17. Баранникова И.А. Пути решения современных проблем воспроизводства рыбных запасов // Матер. Совещ. в г. Ростов-на Дону, 28 сент.- 2 окт. 1998 г.-М., 2000.-С. 19-22.

18. Барминцев В.А. Молекулярно-генетические аспекты исследования полиморфизма ДНК осетровых с целью их идентификации и сертификации // Осетровые на рубеже XXI века. -Астрахань, 2000.- С. 120-121.

19. Барминцев В.А., Чудинов О.С., АбрамоваА.Б. Молекулярно-биологические методы идентификации и сертификации осетровых и продукции из них // Рыбоводство и рыболовство. -2001.-№1.-С. 70-71.

20. Беляева В.Н., Казанчеев Е.Н., Распопов В.М. Каспийское море: Ихтиофауна и промысловые ресурсы. -М.: Наука, 1989. -236 с.

21. Беляева В.Н., Милынтейн В.В.Выращивание молоди белорыбицы в дельте Волги. -М.: "Рыб. х-во",1959.-20 с.

22. Белоусов А.И., Строганова Н.З., Острогорская Т.А. Проблемы искусственного воспроизводства рыбных ресурсов//Матер. совещ. по воспроизводству рыбных запасов. -М., 2000. -С.23-25.

23. Берг JI.C. Климат и жизнь. «Четвертичная ледниковая эпоха и некоторые проблемы современного распространения организмов» -М.: Госиздат, 1922.-С.112-144.

24. Берг JI.C. О происхождении северных элементов в фауне Каспия// Доклады АН СССР. -1928.-Т.А.-Ж7.-С.107.

25. Берг JI.C. Рыбы пресных вод СССР и сопредельных стран. -М.; Д.: Изд-во АН СССР, 1948 а.-Ч. 1. -466 с.

26. Берг JI.C. Рыбы пресных вод СССР и сопредельных стран. -М.; Д.: Изд-во АН СССР, 1949.-Ч.З.-С. 159-160,614-616, 831-844.

27. Берг Л. С. Система рыбообразных и рыб, ныне живущих и ископаемых// Тр. Зоол. ин-та АН СССР.-1955.-Т. ХХ.-С. 171.

28. Березовский А.И. Организация рыбного хозяйства на оз.Зайсан// Бюлл.рыбн.хоз-ва. -1930. -№11-12. -С.16-18.

29. Богданов В.Д. Морфологические особенности развития и определитель личинок сиговых рыб р.Оби. -Екатеринбург: ИЭРиЖ УрО РАН, 1998. -53 с.

30. Богданова Л.С. Рост и развитие личинок кубенской нельмы Stenodus leucichthys nelma (Pallas) в условиях разных температур и режимов кормления //Вопр. ихтиологии.-1977.-Т.17.-Вып. 4(105).-С.659-667.

31. Бодали Р.А., Вуоринен Д.А., Решетников Ю.С., Рист Д.Д. Генетические связи пяти видов сиговых рыб Сибири // Вопр. ихтиологии.-1994а.-Т. 34. -№2. -С. 195 -203.

32. Большакова С.Г., Пономарев С.В., Белоцерковский Ю.Б. Рост и развитие молоди белорыбицы в раннем онтогенезе при выращивании молоди белорыбицы на искусственных стартовых кормах // Всес. Совещ. По нов.

33. Объектам и нов.технол. рыбовод.на тепл. Водах, пос. Рыбное, окт. 1989: Тез.докл. -М., 1989.-С.87-88.

34. Буланов Д.П. Опыт выдерживания производителей и сбора икры кубенской нельмы Stenodus leucichthys nelma (Pallas) //Сб. «Рыбохозяйственное изучение внутренних водоемов". -М., 1974а. -№12. -С.12-14.

35. Буланов Д.П. Опыт выращивания сеголеток кубенской нельмы в прудах // Тез. докл. конф. «Биологические ресурсы Белого моря и внутренних водоемов Европейского Севера». -Петрозаводск, 1974 B.-C.16.

36. Буланов Д.П. Некоторые результаты экспериментальных работ по искусственному разведению кубенской нельмы// Сб. Рыбохозяйственное изучение внутренних водоемов". -1975. -№15. -С.24-26.

37. Буланов Д.П. Биология развития и биотехника разведения кубенской нельмы. -Автореф. дис. канд.биол.наук. -JL, 1977.- 21.с.

38. Буланов Д.П. Перспективы использования кубенской нельмы в озерном рыбоводстве // Сб.научн.трудов ГосНИОРХ.-1979.-Вып.147.-С. 16-20.

39. Бурмакин Е.В. Рыбы Обской губы //Тр.НИИ полярн. земледелия, животноводства и промысл, хоз-ва. -Сер. «Пром.хоз-во». -1940.-Вып.10.-С.33-47.

40. Варнавская Н.В. Принципы генетической идентификации популяций тихоокеанских лососей рода Oncorinchus spp. в связи задачами рационального промысла. Дисс. на соиск. уч. ст. докт. биол. наук. -М., 2000. -Т. 1,2.-503 с.

41. Варнавская Н.В., Варнавский B.C. О биологии карликовой формы нерки озера Дальнего (Камчатка) // Биология моря. -1988.-N. 2.-С. 16-23.

42. Васильченко О.Н. Биологические основы повышения эффективности воспроизводства белорыбицы в низовьях Волги.-Астрахань:Изд-во КаспНИРХ, 2002. -113 с.

43. Васильченко О.Н., Карпунина Н.В., Шабанова Д.А. . Воспроизводство белорыбицы в Каспийском бассейне // Биология, биотехника разведения и промышл. выращ. сиговых рыб: Матер, научно-произв. совещ. -Тюмень, 2001.-С. 27-30.

44. Васильченко О.Н., Шабанова Д.А., Карпунина Н.В. Структура и воспроизводительная способность нерестовой популяции белорыбицы// Биология, биотехника разведения и промышл. выращ. сиговых рыб: матер, научно-произв. совещ. -Тюмень, 2001. -С.30-33.

45. Вовк Ф.И. Нельма (Stenodus leucicthys nelma Pallas) p. Оби. Биолого-промысловый очерк//Тр.Сибирского отделения ВНИОРХ.-Красноярск,1948.-Т.УП.-Вып.2.-С.З-79.

46. Войнова Н.В., Чистяков В.А., Корниенко И.В., Барминцев В.А. Новые технологии в рыхозяйственных исследованиях. -Ростов- на-Дону: Изд-во «Эверест»,2002.-110с.

47. Войнова Н.В., Чистяков В.А, Вечканов Е.М., Петров А.В., Гребенец Е.В., Барминцев В.А. Выделение ДНК из архивных образцов тканей осетровых рыб //Вопросы рыболовства.-2003 .-Т.4, №4(16). -С.707-714.

48. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой.-М. :Медицина, 19Z2-C. 149-228.

49. Гамыгин Е.А., Пономарев С.В. и др. Инструкция по выращиванию молоди белорыбыцы на стартовом комбикорме РГМ-ЛБ.-М.:ВНИИПРХ, 1990.-11 с.

50. Голованова Т.С., Варнавская Н.В., Мальдов Д.Г., Никоноров С.И. Изучение генетической изменчивости белорыбицы, воспроизводимой на Александровском осетровом рыбоводном заводе в дельте Волги //Первый Конгресс ихтиологов России. М.:ВНИРО, 1997а.- С. 351.

51. Голованова Т.С., Варнавская Н.В., Мальдов Д.Г., Никоноров С.И.I

52. Полиморфизм изоцитратдегидрогеназы (ИДГ) и аспартатаминотрансферазы (ААТ) белорыбицы по результатам скрещиваний //Первый Конгресс ихтиологов России. М.:ВНИРО, 1997в.- С. 350.

53. Голованова Т.С., Никоноров С.И. Формирование изменчивости по длине тела у потомства от индивидуальных скрещиваний производителей белорыбицы (Stenodus leucichthys Guld.) на ранних стадиях онтогенеза // Вопросы рыболовства.-2001.-Т.1.-С. 60-62.

54. Голованова Т.С., Никоноров С.И., Ананьев В.И., Цветкова Л.И., Волков А.А., Барминцев В.А. Молекулярно-генетические аспекты формирования181криоколлекции белорыбицы {Stenodus leucichthys Guld.)// Цитология.- 2004.-T.46.-№ 9.-С.782-783.

55. Голованова Т.С., Мальдов Д.Г., Новоселов А.П., Никоноров С.И. Аллозимная изменчивость белорыбицы и нельмы Stenodus leucichthys Н Вопросы рыболовства. -2000. -Т.1.-С. 95-96.

56. Голубцов А.С. Внутрипопуляционная изменчивость животных и белковый полиморфизм. -М.: Наука, 1988. -166 с.

57. Гросвальд М.Г. Покровные ледники континентальных шельфов. -М.: Наука, 1983.-216 с.

58. Дарвин Ч. О происхождении видов путем естественного отбора или сохранении благоприятствуемых пород в борьбе за жизнь // Ч.Дарвин. Сочинения.- М.:Изд-во АН СССР, 1939.- Т.З.- С. 15-38.

59. День J1.H., Арсенюк Н.Г., Новоженин Н.П. Кисловодское форелевое хозяйство: перспективы развития // Рыбное хозяйство. Сер. «Пресноводная аквакультура».-М., 2001.-С.1-3.

60. Дмитриенко Ю.Ю. Рост, упитанность и питание сеголеток нельмы, выращенной в озерах-питомниках //Тез.докл. респ. конф. по пробл.рыбохоз.исслед.внутр.водоемов Карелии .-Петрозаводск, 1979.-С.83-84.

61. Дмитриенко Ю.Ю. Выращивание обской нельмы в малых озерах Карелии// Рыбн. хозяйство. -1981 .-№3 .-С.31.

62. Дмитриенко Ю.Ю. Акклиматизация нельмы в водоемах Карелии //Сб. научн. трудов «Результаты и перспективы рыбоводно-акклиматизационных работ в Карелии». -Мурманск, 1985.-С.54-59.

63. Долматова И.Ю., Сайтбаталов Т.Ф.,, Тареев Ф.Т. RAPD-анализ генетического полиморфизма уток. Межпородные различия//Генетика.-2000.-№5.-С682-686.

64. Дормидонтов А.С., Иванова В.Е. Закономерности распределения и гаметогенез нельмы в реках Якутии // Экология и систематика лососевидных рыб: мат.1-го совещ. по изучению лососевидн.рыб.-Л.,1976.-С.31-32.

65. Дормидонтов А.С., Иванова В.Е., Колесов Н.С. Закономерности миграций нельмы р.Лены // Экология и систематика лососевидных рыб: мат. 1 -го совещ. по изучению лососевидн.рыб. Л.,1976.-С.33-34.

66. Дрягин П.А. Промысловые рыбы Обь-Иртышского бассейна // Изв.ВНИОРХ. -1949.-Т.28.-С.З-113.

67. Дрягин П.А., Пирожников П.Л., Покровский В.В. Полиморфизм сиговых рыб (Coregonidae) и его биологическое и рыбохозяйственное значение // Вопр. ихтиологии. -1969.-Т.9.-Вып.1.-С.14-25.

68. Дрягин П.А., Пирожников П.Л., Покровский В.В. Вопросы филогении сиговых (Coregonidae) II Тез.докл.на 8 сессии Уч. Совета по проблеме «Биол. Рес. Белого моря и внутр. Водоемов Европейского Снвера». -Петрозаводск, 1969. -С.90-92.

69. Ермоленко Л.Н. Генетическая изменчивость некоторых ферментных и неферментных белков сиговых рыб Северо-Востока Азии. Автореф. дис. канд. биол. наук. -Л.: ЛГУ, 1989а.- 20 с.

70. Ермоленко Л.Н. Генетическая изменчивость и межпопуляционные различия сигов группы Coregonus lavaretus II Генетика.-1989б.-Т.25.-№5.-С.886 893.

71. Ермоленко Л.Н. Генетическая изменчивость и межпопуляционные отличия у сибирской ряпушки // Генетика.-1989в.-Т.25.-№ 6.-С. 1081-1088.

72. Ермоленко Л.Н. Генетическая изменчивость и межпопуляционные генетические различия у чира Coregonus nasus II Генетика. -1991а.-Т.27.-№2.~ С.299-303.

73. Ермоленко Л.Н. Генетическая дивергенция сигов рода Coregonus И Генетика. -1991 б.-Т.27.-№3 .-С.515-522.

74. Ермоленко Л.Н. Генетическая дивергенция трех родов сиговых рыб (Coregonidae)//TeHeTHKa.-1992.-T.28.-№6.-C.122-128.

75. Ермоленко JI.H., Викторовский P.M. Дивергенция изоферментов рыб подсемейства Coregoninae // Биология пресноводных животных Дальнего Востока. -Владивосток, 1982.-С.54-63.

76. Ермоленко J1.H., Викторовский P.M. Электрофоретический анализ гемоглобина сиговых рыб (подсем. Coregoninae) // Экология и систематика пресноводных организмов Дальнего Востока. -Владивосток: ДВНЦ АН СССР, 1983.-С.121-125.

77. Ермоленко J1.H., Рудминтайтис Э.А., Макоедов А.Н. Генетика изоферментов НАДФ-зависимой малатдегидрогеназы у лососевых рыб // Генетика. -1988.-Т.24.-№ 3.- С.528.

78. Жаков JI.A. О выращивании нельмы в экспериментальном пруду лимнологической станции на оз.Красном. //Тез. доел. 10-й прибалтийской конф. -Минск, 1963.-С.21.

79. Животные и растения: Красная книга Оренбургской области / Гос. ком. по охране окруж. среды Оренбург, обл. и др. Оренбург:, 1998. - 175с.

80. Животовский J1.A. Статистические методы анализа частот генов в природных популяциях // Итоги науки и техники. Общая генетика. -М., 1983.-Т. 8.-С.78-79.

81. Животовский Л. А. Интеграция генов в популяциях.-М.,1984.-С.58-59.

82. Животовский JI. А. Популяционная биометрия. -М.:Наука, 1991.-272 с.

83. Животовский JI. А., Афанасьев К. И., Рубцова Г. А. Селективные процессы по ферментным локусам у горбуши, Oncorhynchus gorbuscha (Walbaum) // Генетика. -1987.-Т.23, №10.-С.1876-1883.

84. Жуков JI. И. Пути проникновения понто-каспийской ихтиофауны в реки бассейна Балтийского моря//Зоол. журн.-1968.-Т.47. -Вып. 9. -С.1417-1419.

85. Зайкин Д.В., Пудовкин А.И. Программа мулттест расчет показателей статистической существенности при множественных тестах // Генетика.-1991.-Т. 27, N. 11 .-С.2034-2038.

86. Зверева О.С., Кучина Е.С., Остроумов А.А. Рыбы и рыбный промысел среднего течения Печоры. -Сыктывкар: изд-во Коми фил. АН СССР, 1953.- 229 с.

87. Зверева О.С., Кучина Е.С., Соловкина JI.H. Рыбные богатства Коми АССР и пути их освоения. -Сыктывкар: Изд-во Коми фил. АН СССР, 1955.- С. 103.

88. Злоказов В.Н., Рудаков В.А. Искусственное разведение нельмы бассейна р. Оби //Сб. «Водоемы Сибири и перспективы их рыохозяйственного использовния».-Томск, 1973.-С.80-81.

89. Иванов В.П. Антропогенное воздействие на воспроизводство осетровых рыб. // Осетр, х-во водоемов СССР:тез.науч.докл. всесоюзн. совещ., нояб., 1989. -Астрахань, 1989а.-С.106-109.

90. Иванов В.П. Экология и рыбные ресурсы Волго-Каспийского бассейна. //Рыбное хоз-во. -1989b.-N9.-C.25-29.

91. Иванов В.П., Беляева В.Н., Власенко А.Д. Региональное распределение промысловых ресурсов Каспийского моря.//Рыбное хоз-во.-1995.-N2.-C.18-21.

92. Иванова Н.В. Современное состояние запасов Печорской нельмы // Биологические ресурсы Белого омря и внутр. Вооемов Европ. Севера. 11-я сессия Ученого Совета, ноябрь, 1981. -Петрозаводск, 1981.-С.72-73.

93. Илясов Ю.И. Методические основы формирования коллекций осетровых //Ж. Рыбоводство и рыболовство.-2001.-№1.-С.75-76.

94. Казаков Р.В. Биологические основы разведения атлантического лосося. -М: Легкая и пищевая пром-ть, 1982. 144с.

95. Казаков Р.В. Тенденции развития и биологические основы управляемого рыбного хозяйства //Биология моря. -1986.-№2.-С.4-17.

96. Казаков Р.В. Искусственное формирование популяций проходных лососевых рыб. -М.: Агропромиздат, 1990.-239 с.

97. Казаков Р.В., Титов С.Ф. Популяционно-генетический аспект рыбоводной работы в лососеводстве Европейского Севера СССР // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. -1992.-Вып.304.-С. 109-124.

98. Калнин В.В. Изучение связей компонент изменчивости количественных признаков с гетерозиготностью аллозимных локусов. Автореф. дисс. . канд. биол. наук. -М., 1989.- 22 с.

99. Картавцев Ю.Ф., Мамонтов A.M. Электрофоретическая оценка белковой изменчивости и сходства омуля, двух форм сигов (Coregonidae) и хариуса (.Thymallidae) озера Байкал//Генетика. -1983.-Т. 19.-№ 11.-С. 1895-1902.

100. Картавцев Ю.В., Салменкова Е.А., Рубцова Г.А., Афанасьев К.И. Семейный анализ аллозимной изменчивости и ее взаимосвязь с размером тела и выживаемостью потомства у горбуши Oncorhynchus gorbuscha (Walb.) // Генетика. -1990.-Т.26.-№9.- С. 1610-1620.

101. Катасонов В.Я., Цветкова Л.И., Ананьев В.И. Формирование генетической коллекции спермы рыб в низкотемпературном банке // Рыбн.хозяйство, сер.аквакультура: Информ.пакет. -ВНИЭРХ, 1994.- Вып.1.-С.14-16.

102. Квасов Д.Д Позднечетвертичная история крупных озер и внутренних морей Восточной Европы. -Л.: Наука, 1975.-278 с.

103. Кесслер К. Ф. Труды С-Пб. общ. ест.1.-1870.-С.271 (цитир. по Бергу, 1928).

104. Кесслер К. Ф. Рыбы Арало-каспийско-понтийской ихтиологической области.- С-Пб., 1877.- С.346-347 (цитир. по Бергу, 1928).

105. Кириков С.В. Промысловые животные. Природная среда и человек.- М.: Наука, 1966.-С.270-272.

106. Кирпичников B.C. Генетические основы селекции рыб. Л: Наука, 1979. -392с.

107. Колмыков Е.В. Об отношении молоди белорыбицы к разлчной солености при выращивании в морской воде // Состояние и перспективы научно-практических разработок в области марикультуры России. Мат. совещ. Ростов-на-Дону, август, 1996. -М., 1996.-С.131-135.

108. Конева JI.А. Перспективы рыбохозяйственного использования нельмы Верхней Оби выше плотины Новосибирской ГЭС// Сб. «Водоемы Сибири и перспективы их рыюохозяйственного использовния».-Томск, 1973.-С.34-35.

109. Корнилова В.П. Результаты изучения сиговых рыб в Голодной губе дельты Печоры //Труды Карельского отд.ГосНИОРХ.-1967.-Т.5.-Вып.2. С.102-111.

110. Корочкин Л.И., Серов О.Л., Пудовкин А.И. Генетика изоферментов. -М.: Наука, 1977.-278с.

111. Красикова В.А. Морфологическая характеристика нельмы Stenodus leucichthys nelma (Pallas) Енисея // Зоол. журн.-1960. -Т.39.-Вып.7.-С.1103-1106.

112. Красная книга Архангельской области. -Архангельск, 1995.- 330 с.

113. Красная книга Казахстана.-Алматы:изд-во Конжик, 1996.-Т.1.-Ч. 1.-327 с.

114. Красная книга Карелии. Министерство экологии и природных ресурсов республики Карелия, Кольский научный центр РАН, Петроз.ГУ, науч. ред. Э.В.Ивантер. О.Л.Кузнецов. -Петрозаводск, 1995. -286 с.

115. Красная книга Российской Федерации (животные). -М.: Астрель, 2001.862 с.

116. Краснов И.И. , Янковский В.М. Четвертичные отложения и геоморфологические районы Камско-Печорско-Вычегодского водораздела. ЦНИГРИ. Л., 1937.-С.45-46.

117. Крохалевский В.Р. Рыбные ресурсы Объ-Иртышского бассейна // Рыбное хозяйство. -1999.-№1.-С.10-11.

118. Кудерский Л. А. О происхождении реликтовой фауны в озерах Северо-Запада европейской части СССР//Изв. ГосНИОРХ. -1971.-Т.76.-С.113-123.

119. Кудерский Л. А. О происхождении лососей и форелей (Salmo trutta L.) в бассейнах Аральского, Каспийского и Черного морей //Изв. ГосНИОРХ.- 1974.-Т.97.-С.187-211.

120. Кудерский Л.А. О путях проникновения сибирской ряпушки в водоемы Балтийского и Каспийского бассейнов // Изв. ГосНИОРХ. -1977.-Т.111.-С.54-62.

121. Кудерский Л.А. Пути формирования северных элементов ихтиофауны Севера европейской территории СССР //Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. -1987.-Вып.258.-С.102-121.

122. Кудерский Л.А. Использование сиговых рыб в пресноводной аквакультуре // Биология, биотехника разведения и промышл. выращ. сиговых рыб: Матер, научно-произв. совещ. Тюмень, 19-21 дек.2001 г. -Тюмень, 2001b.-С.84-87.

123. Кудерский Л.А., Строганова Н.З. Воспроизводство рыбных запасов в водоемах России. // Воспроизводство рыбных запасов.Матер. Совещ. в г. Ростов-на Дону, 28 сент.- 2 окт. 1998 г. -М. 2000.-С.З-19.

124. Кудерский Л.А., Шимановская Л.Н. Акклиматизация рыб: уловы в 19961990 гг. // Рыбн.хоз-во. Сер.Аквакультура: Обзорная информация. ВНИЭРХ. М., 1995.-Вып.2.- 52 с.

125. Кузнецов Ю.К. Гаметогенез, стадии зрелости и оплодотворение у костистых и осетровых рыб.- Калининград, 1972. 40 с.

126. Куклин А.А., Лопатин В.В. Структура нерестовой части популяции енисейской нельмы //Биолог, проблемы Севера. Тез. X всес. симп. -Магадан, 1983.- С.187-188.

127. Кычанов В.М. Влияние белкового обмена на оплодотворяемость икры белорыбицы Stenodus leucichthys (Guld) // Вопр. ихтиологии.-1980.-Т.20.-Вып.2. С.362-365.

128. Кычанов В.М., Леонтьев С.А. Солеустойчивость и фракцонная структура гемоглобина у молоди белорыбицы Stenodus leucichthys Guldenstadt // Вопр. ихтиологии.-1981 .-Т.21 .-Вып.6.-С. 1097-1103.

129. Лебедев В. Д. Пресноводная четвертичная ихтиофауна Европейской части СССР. -М.: Изд-во Моск.ун-та., I960.- 402 с.

130. Лебедев В.Г. Происхождение и систематическое положение нельмушки Coregonus lavaretus nelmuschka Pravdin // Сб.ниучн.тр. ГосНИОРХ.-1982.-Вып.183. -С.58-70.

131. Летичевский М.А. Биологические основы воспроизводства белорыбицы в условиях зарегулированного стока Волги. -Астрахань, 1958.-21 с.

132. Летичевский М.А. О созревании производителей белорыбицы осеннего хода в неволе // Вопросы ихтиологии.-1960 а.-Вып.14.-С.101-109.

133. Летичевский М.А. Воспроизводство белорыбицы в условиях зарегулированного стока Волги //Матер. Совещ. по вопросам рыбоводства. М., 1960в. -С.16-19.

134. Летичевский М.А. Воспроизводство белорыбицы в условиях зарегулированного стока Волги- М.:Изд-во "Рыбное хозяйство",1963.-C.3-173.

135. Летичевский М.А. Белорыбица. Проблема сохранения вида//Природа.-1974.-N 11.-С.77-83.

136. Летичевский М.А. Опыт определения численности нерестовых популяций белорыбицы и эффективности заводского разведения ее в условиях дельты и Нижней Волги//Вопр.ихтиологии. -1975.-Т. 15.-С.630-635.

137. Летичевский М.А. Перспективы расширения заводского и естественного воспроизводства белорыбицы Stenodus leucichthys (Guldenstadt) в нижнем течении и дельте Волги //Вопр. ихтиологии.-1981.-Т.21.-Вып.5.-С.924-929.

138. Летичевский М.А. Воспроизводство белорыбицы. -М., Легкая и пищевая промышленность, 1983.-112 с.

139. Летический М.А., Васильченко О.Н., Иванов В.П., Ермолов В.Н., Мещеряков А.И. Воспроизводство белорыбицы в условиях Нижней Волги// «Биология сиговых рыб»-М, 1988.-С.225-230.

140. Летичевский М.А., Дубинин В.И. Современные условия воспроизводства белорыбицы в предплотинной зоне Волгоградской ГЭС//Тр. ВНИРО.-1975. Т.108. С.213-219.

141. Летичевский М.А., Дубинин В.И. Эффективность размножения белорыбицы на Нижней Волге// Рыб. xo3-bo.-1978.-N 7.-С.26-29.

142. Летичевский М.А., Мещеряков А.И. Новое направление в воспроизводстве белорыбицы в дельте Волги //Основные направления и189перспективы рыбоводства в Каспийском и Азовском бассейнах.-М.ВНИРО, 1980.-С.18-33.

143. Лиидберг Г.У. Крупные колебания уровня океана в четвертичный период. -Л.: Наука, 1972.-548 с.

144. Линдберг Г.У. Четвертичный период в свете биогеографических данных.-М.; Л.: Изд-во АН СССР, 1955. 334 с.

145. Локшина А.Б. Сравнительный электрофоретический анализ некоторых белков сиговых рыб // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. -1980.- Вып. 153.- С. 46 57.

146. Локшина А.Б. Сравнительный электрофоретический анализ некоторых белков сиговых рыб // Генетика промысловых рыб и объектов аквакультуры.-М.: Лег. и пищ. пром-ть, 1983.-С. 19-24.

147. Локшина А.Б., Андрияшева М.А. Методы и результаты отбора при селекции пеляди. Сообщение 2. Изменение генетической структуры стада при отборе // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. -1981.-Вып. 174.-С.71-80.

148. Локшина А.Б., Андрияшева М.А. Связь между количественными признаками и полиморфными белковыми системами у пеляди // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. -1986.-Вып.253.-С.99-110.

149. Лузанская Д.И., Савина Н.О. Рыбохозяйственный водный фонд и уловы рыбы во внутренних водоемах СССР (справочник). -Москва-Ленинград: ВНИОРХ, 1956.-514с.

150. Макоедов А.Н., Мясников В.Г., Куманцов М.И., Датский А.В., Смирнов Г.П., Андронов П.Ю, Коротаев Ю.А., В.Г. Чикилев В.Г. Биоресурсы внутреннихводоемов Чукотки и прилегающих вод Берингова моря.- М.:Экономика и информатика, 1999.- С.164-165.

151. Мальцев С.А., Моргунов С.В. Некоторые аспекты воспроизводства белорыбицы // Рыбное хозяйство.-2001.-№2.-С. 12.

152. Мамонтов A.M., Яхненко В.М. О необходимости учета генетической структуры популяций сиговых рыб при рыборазведении на Байкале // Мат. 3-го совещ по сиг. рыбам. -М.,1985. -С.310-312.

153. Мамонтов A.M., Яхненко В.М. Морфологическая и генетико-биохимическая оценка популяционной дифференциации байкальского озерно-речного сига Coregonus lavaretus Pidshian (Coregonidae)//Bonp. ихтиологии.-1995.-T.35.-N2.-C. 175-181

154. Мамонтов Ю.П. Аквакультура России: состояние, приоритеты и перспективы развития.-С.-Пб.:ГосНИОРХ, 1998.-77с.

155. Мамонтов Ю.П. Аквакультура в России // Рыбное хозяйство.-2003.- №3.-С.46-49.

156. Маниатис Т. Фрич Э. Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. -М.: Мир, 1984.- 480с.

157. Махров А.А., Иешко Е.П. Генетическая дифференциация и послеледниковое раселение кумжи (Salmo trutta L) Бассейна Белого моря //191

158. Труды Карельского научного центра РАН. -Биогеография Карелия. Серия Б. Биология. -2001. -Вып. 2. -С. 176-179.

159. Махров А.А., Кузигцин К.В., Алтухов Ю.П. Связь аллозимной гетерозиготности с темпом роста и экологической дифференциацией кумжи (Salmo trutta L.) // Генетика. -1997.-Т. 33.-№. 5.- С. 681-686.

160. Махров А.А., Скоола О., Алтухов Ю.П., Саундерс P.JI. Аллозимный локус ESTD* как маркер генетической дифференциации популяций атлантического лосося (Salmo salar L.) Европы и Северной Америки // Доклады Академии Наук. -1998.-Т. 360.-N. 6.-С. 850-852.

161. Медников Б.М., Ахундов А. Систематика рода Salmo в свете данных по молекулярной гибридизации ДНК // ДАН СССР. -1975. -Т. 222. -№ 3. -С. 744 -746.

162. Медников Б.М., Попов Л.С., Антонов А.С. Характеристика первичной структуры ДНК как критерий для конструирования естественной системы рыб // Журн. общей биологии. -1973. -Т. 34. -№ 4. -С. 516-529.

163. Медников Б.М., Решетников Ю.С., Шубина Е.А. и др. Изучение родственных связей сиговых рыб (Coregonidae) методом молекулярной гибридизации ДНК//Зоол. журн. -1977.- Т. 56.- Вып. 3.- С.333-341.

164. Меньшиков М. И. Материалы по систематике и биологии нельмы (Stenodus leucichthys nelma) низовьев р. Иртыша// Изв. Биол. ин-та Пермск. ун-та.-1935.- Т. X. Вып.1-2.- С.1-26.

165. Мещеряков А.И. Плавучий инкубатор для транспортировки икры белорыбицы на ранних стадиях развития // В кн.: Рыбохозяйственные исследовния КаспНИРХа в 1976 г. -Астрахань: Нижне-волжское книжн. изд-во, 1976. -С.68-69.

166. Мещеряков А.И. Состояние искусственного воспроизводства белорыбицы, пути увеличения объемов разведения и повышения192эффективности рыбоводных мероприятий // Лосовевидные рыбы. Сб научных статей. -Л.: Наука, 1980.- С.234-240.

167. Мещеряков А.И. Пути повышения эффективности использования производителей белорыбицы // Рыбн. Хозяйство. -1982,- №7.-С.39-41.

168. Минеев А.Г. Аборигенные популяции лососеобразных рыб в реках восточного склона Северного Урала // Безопасность биосферы: сб. тез. докл. всерос. молодежи, симпоз / УГТУ; УрГУ; Ин-т электрофизики УрО РАН. -Екатеринбург:, 1998. С.85.

169. Михайлова М.В. Выращивание молоди белорыбицы повышенной навески с целью формирования маточного стада в искусственных условиях//Рыбохозяйственные исследования на Каспии: Результаты НИР за 1999г. Астрахань: Изд-во КаспНИРХ, 2000.- С.256-258.

170. Москаленко Б. К. Биологические основы эксплуатации и воспроизводства сиговых рыб Обского бассейна // Тр. Обь-Тазовского отд. ВНИОРХ. Тюмень:Тюменское книжное изд-во, 1958, Т. 1.- 250 с.

171. Москаленко Б. К. Сиговые рыбы Сибири. -М.: Пищевая пром-ть. -1971.182 с.

172. Мусатов А.П., Кружалина Е.И. Нельма как объект акклиматизации в каспийском море// В кн.: Сборник трудов молодых ученых (ВНИРО).-М. Пищевая пром-ть, 1964.-С.95-98.

173. Нестеренко Н.А. Результаты подращивания молоди сиговых в озерных питомниках и прудах// Тр. IV Всесоюзнлимнолог. совещ. -Листвиничное-на-Байкале, 1977.-С.115-119.

174. Нестеренко Н.А. Биохимическая характеристика нельмы при ее искусственном разведении в озерах Сибири// Морфология, структура популяций и проблемы рац.исп.лососевидных рыб. Тез. коорд. совещ. по лососевидным рыбам. -Ленинград, 1983.- С.141-142.

175. Никонов Г.И. Нельма реки Северной Сосьвы // Научно-технический бюллетень ГосНИОРХ.- 1959.- №9.- С.11-13.

176. Никольский Г.В. О биологической специфике фаунистических комплексов и значении ее анализа для зоогеографии //Зоол. журнал. -1947.-Т. 26. -Вып.3.-С.221-232.

177. Никоноров С.И., Витвицкая JI.B. Эколого-генетические проблемы искусственного воспроизводства осетровых и лососевых рыб.-М.:Наука, 1993.-254с.

178. Новиков Г.Г. Рост и энергетика костистых рыб в раннем онтогенезе.-М.:Эдиториал УРСС, 1999.-296 с.

179. Новоселов А.П. Развитие товарного сиговодства путь повышения продуктивности озер Архангельской области // Рыбное хозяйство. -1991. №3. -С.44-47.

180. Новоселов А.П. Современное состояние рыбной части сообществ в водоемах Европейского Северо-Востока России// Дисс.докт. биол. наук.-Архангельск, 2000.- 392 с.

181. Новоселов А.П. Возможности и перспективы развития сиговодства в водоемах Архангельской области// Искусств, воспроизв. и охрана ценных видов рыб:материалы совещания в г.Южно-Сахалинск 27 августа-1 сентября 2000 г.-М, 2001.-С. 195-209.

182. Образцов А.Н. Методы повышения эффективности рыбоводного использования самцов радужной форели //В кн. Биология и воспроизводство лососевидных рыб. -Сб. науч. тр. ГОСНИОРХ.- Д., 1986.-Вып.253.-С.87-93.

183. Осинов А.Г. Анализ внутривидовой и межвидовой дифференциации у некоторых видов лососей рода Salmo по белковым маркерам генов. Дисс. . канд. биол. наук.-М.:МГУ, 1984а. -140 с.

184. Осинов А.Г. К вопросу о происхождении современного ареала кумжи Salmo trutta L. (salmonidae): данные по биохимическим маркерам генов // Вопр.ихтиологии.-1984Ь.-Т.24.-Вып. 1 .-С. 11 -24.

185. Осинов А.Г. Кумжа (Salmo trutta L., Salmonidae) бассейнов Черного и Каспийского морей: популяционно-генетический анализ // Генетика.- 1988.-Т.24, №. 12. -С.2172-2186.

186. Осинов А.Г. Межвидовая генетическая дивергенция и некоторые вопросы филогении лососей рода Salmo // Генетика в аквакультуре. Тр. 3-го Всес. совещания по генетике, селекции и гибридизации рыб. Тарту, 1986 г. -JI, 1989.-С.97-107.

187. Осинов А.Г. К проблеме происхождения севанской форели Salmo ischchan Kessler: популяционно-генетический подход // Журн. общей биологии. -1990а.-Т. 51, №.6.-С.817-827.

188. Осинов А.Г. Некоторые данные об уровне генетической изменчивости и дифференциации форелей (Salmo trutta L) Таджикистана // Вестник Моск. унта.- 1990b.-Cep.16. Биология,№1.-С.37-41.

189. Осинов А.Г., Берначе JL "Атлантическая" и "дунайская" филогенетические группы кумжи Salmo trutta complex: генетическая дивергенция, эволюция, охрана //Вопр.ихтиологии.-1996.-Т.36,№.6.-С.762-786.

190. Офицеров М.В., Витвицкая Л.В., Никоноров С.И., Голованова Т.С. Влияние заводского выращивания на генетическое разнообразие атлантического лосося Salmo Salar //Вопр.ихтиологии.-1989.-Т.29.-Вып.5.-С.871-874.

191. Офицеров М.В., Мальдов Д.Г. IDHP-3416 аллель как маркер неустойчивости к факторам внешней среды у атлантического лосося// Докл. Росс.АН.-1994.-338 (1).-С. 134-137.

192. Павлов Д.С. Подходы к охране редких и исчезающих видов рыб// Вопр. ихтиологии.-Т.32.-Вып.5.-1992.-С.З-19.

193. Павлов Д.С., Решетников Ю.С., Шатуновский М.И. Охрана рыб и "Красная Книга СССР"//Природа.- 1983. -№11.-С.З-10.

194. Павлов Д.С., Решетников Ю.С., Шатуновский М.И., Шилин Н.И. Редкие и исчезающие виды рыб СССР и принципы их включения в "Красную книгу" // Вопр. ихтиологии.-1985.-Т.25.-Вып. 1 .-С. 16-25.

195. Павлов Д.С., Савваитова К.А., Соколов Л.И., Алексеев С.С. Редкие и исчезающие животные. Рыбы.-М.: Высш. шк., 1994.-334 с.

196. Перелыгин А.А. Сравнительный анализ изменчивости изоферментов европейской и сибирской ряпушек //Цитология. -1986.- Т.28, №10.С.1141 -1142.

197. Перелыгин А.А. Генетическая дифференциация популяций европейской ряпушки Coregonus albula L. из трех больших озер Северо-Запада СССР // Генетика в аквакультуре. Л.: Наука, 1989. С. 113 125.

198. Петрова Н.А. Биология нельмы Stenodus leucichthys nelma (Pallas) бассейна р.Иртыш // Вопр.ихтиологии.-Т.16.-Вып.1 (96).-1976.-С.21-31.

199. Петрова Н.А. Питание нельмы Stenodus leucichthys nelma (Pallas) (Salmonidae) в нижней и средней Оби // Сб. научн. тр. ГосНИОРХ.-1988.-Вып.284.-С.65-71.

200. Пирожников П.Л. К вопросу о происхождении северных элементов в фауне Каспия//Докл.АН СССР.-1937.-Т.15.-№8.-,С.513.

201. Пирожников П. Л. Фаунистические комплексы и экологическая классификация рыб низовий реки Лены//Биологические основы рыбного хозяйства. Томск: Изд-во Томского ун-та, 1959.-С.33-54.

202. Пирожников П.Л. О формообразовании у сиговых рыб (Coregonidae, Pisces) в связи с особенностями их расселения//Проблемы эволюции.-Новосибирск: Наука, 1973.-T.3.-C.132-142.

203. Пирожников П.Л., Дрягин П.А., Покровский В.В. О таксономическом ранге и филогении сиговых (Coregonidae, Pisces) // Изв. ГосНИОРХ.-1975.-Т. 62.-С.100-114.

204. Подлесный А.В. Географическое распространение белорыбицы Stenodus leucichthys (Gtildenstadt) и ее происхождение в бассейне Каспия// Зоол.журнал.-1941.-Т.20.-Вып 3.-С.433-444.

205. Подлесный А. В. Белорыбица Stenodus leucichthys Giild. Биоэкологический очерк //Тр. Сиб. отдел. Всес. н.-и. ин-та озерн. и речи, рыбн. хоз. (ВНИОРХ). -1947.- Т. VII. -Вып. 4.-С.25-29.

206. Полякова Б.Г., Федорова М.И. Перевозка кубенской нельмы в водоемы РСФСР //Сборник по акклиматизации водных организмов.-М,1963.-С.23-24.

207. Пономарев С.В., Гамыгин Е.А., Никоноров С.И., Пономарева Е.Н., Грозеску Ю.Н., Бахарева А.А. Технологии выращивания и кормления объектов аквакультуры юга России.-Астрахань, 2002.-С.34-39.

208. Правдин И.Ф. Сиги водоемов Карельской АССР.-М.,Л.:Изд-во АН СССР, 1954.-324 с.

209. Правдин И.Ф. Руководство по изучению рыб. -М.: Пищепромиздат, 1966. -376 с.

210. Редкие и нуждающиеся в охране животные и растения Коми АССР.-Сыктывкар: Коми кн. изд-во, 1982.-152 с.

211. Решетников Ю.С. О систематическом положении сиговых рыб // Зоол. журн. -1975.-Т.54.-Вып. 11 .-С. 1656-1671.

212. Решетников Ю.С. Сложные вопросы таксономии сиговых рыб и проблемы зоогеографии //Основы классификации и филогении лососевидных рыб. -Л.: Зоол. ин-т АН СССР, 1977.-С.71-78.

213. Решетников Ю. С. О связи сиговых рыб Сибири и Северной Америки // В кн. Изменчивость рыб пресноводных экосистем.-М, 1979.-С.48-72.

214. Решетников Ю.С. Экология и систематика сиговых рыб.-М.:Наука, 1980.301 с.

215. Решетников Ю.С. О числе видов, центрах возникновения и центрах расселения сиговых рыб //Лососевые (Salmonidae) Карелии.-Петрозаводск: Карел, фил. АН СССР, 1983.-С.4-17.

216. Решетников Ю.С. Синэкологический подход к динамике численности рыб // Динамика численности рыб. -М.: Наука, 1986. -С.22-36.

217. Решетников Ю.С. Современный статус сиговых рыб и перспективы использования их запасов // Биология сиговых рыб. -М.:Наука,1988.- С.5-17.

218. Решетников Ю.С. Биологическое разнообразие и изменение экосистем// Биоразнообразие. Степень таксономической изученности.-М.:Наука, 1994.-С.77-85.

219. Решетников Ю.С. Современные проблемы изучения сиговых рыб // Вопр. ихтиологии.-1995. -Т.35, № 2.-С. 156-174.

220. Решетников Ю.С. Состояние биоразнообразия и функционирование водных экосистем // Изучение и охрана разнообразия ауны, флоры и основных систем Евразии. -М: ИПЭЭ РАН, 2000.-С.264-270.

221. Решетников Ю.С., Шатуновский М.И. Теоретические основы и практические аспекты мониторинга пресноводных экосистем. Сб. Мониторинг биоразнообразия.-М.: РАН, 1997.- С.26-32.

222. Риман Н.М., Аттер Ф.М. Популяционная генетика и управление рыбным хозяйством М.: Агропромиздат, 1991.- 480 с.

223. Ромейс С.Б. Микроскопическая техника. М.:Изд.Иностр.лит,1954.-С.23-33.

224. Рысков А. П. Мультилокусный ДНК-фингерпринтинг в генетико-популяционных исследованиях биоразнообразия// Молекулярная биология.1999.-Т.ЗЗ, №6.-С.997-1011.

225. Рябова Г.Д., Офицеров М.В., Шишанова Е.И. Исследования связи между аплозимной изменчивостью и некоторыми компонентами приспособленности у севрюги (Ac. Stellatus.)//Генетика.- 1995.-Т.31,№12.-С.1679-1692.

226. Сабанеев Л.П. Рыбы России.-М., 1911.-С.263-266.

227. Сапрыкин В. Г. Влияние отбора по темпу роста на распределение фенотипических и генотипических частот трансферрина у сеголетков украинского карпа.// В кн.: Проблемы генетики и селекции на Урале-Свердловск.-1977.- С.173-174.

228. Сендек Д.С. О видовой принадлежности ряпушки, обитающей в реке Печоре // Сб. научных трудов ГосНИОРХ.-1998.-Вып.323.- С.191-198.

229. Сендек Д.С. Филогенетический анализ сиговых рыб ceM.Coregonidae методом белкового электрофореза// Дисс. на соискание.уч.ст.к.б.н. С-Пб.2000. С.5-180.

230. Серов Д.В., Никоноров С.И. Механизм и факторы отбора по гену лактатдегидрогеназы у севрюги//Докл.АН СССР.-1987.-№5. -С.1237-1239.

231. Серов Д.В., Никоноров С.И., Голованова Т.С. 1990. Анализ генетического отбора на ранних этапах онтогенеза на примере полиморфной системы АДГ белорыбицы // ДАН СССР. -Т. 311.-№ 2.-С.484-487.

232. Смирнова К.В. Нельма озера Зайсан //Изв.АН Казахской ССР.Серия зоолог. -1945.-Вып 5.-С.73-93.

233. Соколов Л.И., Шилин Н.И. О проекте списка круглоротых и рыб во второе издание "Красной книги РСФСР" //Аннотированные списки животных для "Красной книги". -М.:Центр. н.-и. лаб. Главохоты РСФСР, 1989.-С.77-92.

234. Соловкина Л.Н. Особенности ихтиофауны бассейна р. Усы в связи с его четвертичной историей // Тр. Коми фил. АН СССР.-1960.-Т.9.-С.37-47.

235. Соловкина Л.Н. Рыбные ресурсы Коми АССР.-Сыктывкар, 1975.-168 с.

236. Сонин В.П. Предварительные итоги акклиматизации нельмы в водоемах Карелии//В кн.:Тез.докл.отчетной сессии ученого совета.-Петрозаводск, 1964,-С.16-17.

237. Сонин В.П. Предварительные итоги акклиматизации нельмы в водоемах Карелии//Труды Карельского отд. ГосНИОРХ.- 1967. -Т.5.-В.1.-С.513-516.

238. Сычевская Е.К. Происхождение сиговых рыб в свете исторического развития лососевидных (Salmonoidei) // Биология сиговых рыб.-М.:Наука, 1988.-С.17-28.

239. Титенков И.С. Жилая нельма в Кубенском озере // Рыбн.хоз-во.-1951.-№10.-С.21-22.

240. Титенков И.С. Мероприятия по акклиматизации кубенской нельмы //Рыбн.хоз-во. -1953.-№8.-С.36-37.

241. Титенков И.С. Рыбохозяйственное значение Кубенского озера// Рыболовство на Белом и Кубенском озерах. -Вологда: Областная книжная редакция, 1955.-С.111-140.

242. Титенков И. С. 1956. Кубенская Henbua-Stenodus leucichthys nelma (Pallas) natio cubensis nova//Автореф. дисс.уч.ст.к.б.н.- ВНИОРХ,1956а.-35 с.

243. Титенков И. С. Опыты перевозки кубенской нельмы //Научно-техн. бюлл.ВНИОРХ.- 1956 Ь.-№1-2.-С.58-59.

244. Титенков И.С. Кубенская нельма.-М.: Рыбное хозяйство, 1961. С.52-55.

245. Титов С.Ф. Особенности мониторинга генетической структуры заводских популяций атлантического лосося Salmo Salar L. //Сб.науч. тр. ГосНИОРХ.-1992.-Вып.304.-С. 156-163.

246. Трувеллер Я. А., Нефедов Г. Н. 1974. Многоцелевой прибор для вертикального электрофореза в параллельных пластинах ПААГ//Научи, докл. высш. школы. Биолог. Науки.-1974.-Т.129.-Вып. 9. С. 137-140.

247. Туманов М.Д. Изменчивость морфологических прзнаков туводной нельмы Stenodus leucichthys nelma (Guldenstadt) рек Уса и Колва // Тез. докл. XIV Коми респ.мол.научн. конф. (18-20 апр.2000 г., Сыктывкар) -Сыктывкар, 2000.- Т.2.-С.233.

248. Улезко В.В. Опыты транспортировки и длительного выдерживания производителей белорыбицы// Рыбное хоз-во.-1953.-№11. С.43-44.

249. Фролов С.В. Изменчивость и эволюция кариотипов лососевых рыб.-Владивосток: Дальнаука, 2000.-229 с.

250. Цеханович Ю.Б. Рыбы Урала //Природа Урала.-Свердловск, 1936.-С.48.

251. Чебанов М.С. Формирование генетической коллекции осетровых рыб в южном филиале ФГУП ФСГЦР// Генетика, селекция и воспроизводство рыб:докл. перв. всеросс. конф. С-Пб: ФГУП ФСГЦР, 2002.- С. 73-80.

252. Черешнев И.А. Биологическое разнообразие пресноводной ихтиофауны Северо-Востока России.-Владивосток: Дальнаука, 1996.-198 с.

253. Черешнев И.А., Шестаков А.В., Юсупов P.P. и др. Биология нельмы Stenodus leucicththys nelma (Coregonidae) бассейна р.Анадырь (Северо-Восток России)// Вопр.ихтиологии.-2000.-Т.40.-Вып.4.- С.537-550.

254. Черняев Ж.А. Развитие сигового рыбоводства в нашей стране // лососевидные рыбы. Сб.научн. трудов.-Л.Наука, 1980.-С.290-301.

255. Черняев Ж.А., Коваленко В.И., Кружалина Е.И., Овчинникова Т.И., Дмитриев И.Л. Методические указания по сбору и хранению икры сиговых рыб на временных рыбоводных пунктах, ее транспортировке и инкубации.- М.: Главрыбвод, 1987. -82 с.

256. Чибилев А.А. Редкие виды рыб Оренбургской области и их охрана. Материалы для Красной книги Оренбургской области.-Екатеринбург:УИФ «Наука», 1993.-С.20-21.

257. Шапошникова Г.Х. Сравнительная характеристика нельмы Stenodus leucichthys nelma (Pallas) и белорыбицы S. leucichthys leucichthys (Giildensta'dt) // Bonp. ихтиологии.-1967.-Т.7.-Вып.2.-С.225-239.

258. Шапошникова Г.Х. История расселения сигов рода Coregonus Н Зоогеография и систематика рыб. -Л.: ЗИН АН СССР, 1976.-С.54-67.

259. Шапошникова Г.Х. История расселения сигов полиморфного вида Coregonus lavarems (L.) и некоторые соображения о его внутривидовой дифференциации // Основы классификации и филогении лососевидных рыб.-Л.; ЗИН АН СССР, 1977.-С.78-86.

260. Шишанова Е.И., Рябова Г.Д. Популяционно-генетическая характеристика уральской севрюги//Тез. докл. к всес. совещ. «Осетровое хозяйство водоемов СССР» (Астрахань, ноябрь 1989г.)-Астрахань, 1989.- 4.1- С.349-350.

261. Штундюк Ю.В. Нельма реки Анадырь и состояние ее запасов // Биолог, пробл. Севера: тез. X всес. симп.-Магадан, 1983.-Ч.2.-С.229-230.

262. Штундюк Ю.В., Жарников С.И. Нельма р.Анадырь в период истощения ее ресурсов .//Биология и биотехника разведения сиговых рыб: мат. 5-го всеросс. совещ.-С-Пб., 1994.-С.163-164.

263. Юсупов P.P. Нельма реки Анадырь //Рыбн. хоз-во.-1988.-№3.-С.48-49.

264. Ягодников Н.А. Нельма в р.Туре //Зоол. журнал.-1953.-Т.ХХХН.-Вып.5. С.1025-1026.

265. Яковлев С. А. О связи Балтийского моря с бассейном р. Волги в позднеледниковое время//Докл. АН СССР.-1928.-Т.А, № 3.-С.41-46.

266. Яковлев В. Н. Распространение пресноводных рыб неогена Голарктики и зоогеографическое районирование //Вопр. ихтиологии.-1961.-Т. 1.-Вып.2.-С.209-220.

267. Яндовская Н.И., Тихонова З.П. Разведение кубенской нельмы//Изв. ВНИОРХ.-1961 .-Т.51 .-С.42-43.

268. Яхненко В.М., Осинов А.Г., Мамонтов A.M. Морфологическая и популяционно-генетическая дифференциация байкальского озерного сига Coregonus lavaretus baicalensis Dybowski //Генетика,-1992.-T.28,№ 7.-C.139-150.

269. Aebersold P.B., Winans G.A., Teel D.J. et al. Manual for starch gel electrophoresis: a method for the detection of genetic variation.NOAA Technical Report NMFS 61.-1987.-19 p.

270. Allendorf F.W., Phelps S.R. Loss of genetic variation in hatchery stock of cutthroat trout // Trans. Amer. Fish. Soc.-1980.-V.109.- P. 537-543.

271. Alt K.T. Occurrence of hybrids between inconnu, Stenodus leucichthys nelma (Pallas) and humpback whitefish, Coregonus pidschian (Lunnaeus) in Chatanika River, Alaska // Transactions of American Fisheries Society.-1971.-T.100.-P.362-365.

272. Alt K.T. Inconnu, Stenodus leucichthys, migration studies in Alaska 1961-1974 //J Fish Res Board Can. -1977.-34 (1)-P.129-133.

273. Barus N., Donat P., Trpak P., Zavazal. Zima J. Red Data List of vertebrates of Czechoslovakia //Acta Sc. Nat. Brno.-1988.-V.22.-N3.-P.l-33.

274. Bernatchez L., Dodson J J. Phylogeographic structure in mitochondrial DNA of the lake whiteflsh (Coregonus clupeaformis) and its relation to Pleistocene glaciations // Evolution.-1991.-V.45 .-P. 1016-103 5.

275. Bernatchez L., Chouinard A., lu G. Integrating molecular genetics and eciligy in speciation studies: coregonid fishes as a model system // Biol.J.Linn.Soc.-l999.-V.68.-P.173-197.

276. Bodaly R.A., Vuorinen J., Ward M., Luczynski M., Reist J.D. Genetic comparisons of New and Old World coregonid fishes // J. Fish. Biol.-1991.-V.38.-P.37-51.

277. Bodaly R.A., Clayton J.W., Lindsey C.C., Vuorinen J. Evolution of the lake whitefish (Coregonus clupeaformis) during the Pleistocene: Genetic differentiation between sympatric populations // Can. J. Fish. Aquatic Sci.-1992.-V.49.-P.769- 779.

278. Bagley M.J., Anderson S.L., May B. Choice of methodology for assessing genetic impacts of environmental stressors: polymorphism and reproducibility of RAPD and AFLP fingerprints.// Ecotoxicology.-2001.-V.10.-N.4.-P.293-244.

279. Booke H.E. Cytotaxonomy of the salmonid fish Stenodus leucichthys II J. Fish. Res. Board Can.-1975.-V.32.-P.295-296.

280. Boulenger G. A. Remarks on some Cranial- Characters of the Salmonoida// Proc. Zool. Soc. -1895 -P. 299-302.

281. Cross, T.F., Ward, R.D. Protein variation and duplicate loci in the Atlantic salmon, Salmo salar L. // Genet. Res. -I980.-V.36.-No.2.-P.147-165.

282. Davis, B.J.Disc-electrophoresis. 2. Method and application to the human serum proteins//Ann. N.Y. Acad. Sci.-1964.-No.l21.-P.404-427.

283. Dice, L.R. Measures of the amount of ecologic association between species// Ecology.-1945.-V.26.-P.297-302.

284. Donelly R.F., Johnson K.R., Hershberger W.K. Identification of Kodiak island pink salmon population based on biochemical genetic variation. -Washington: Univ.of Washington, 1979.- 51 p.

285. Dymond J.R. The coregonine fishes of northwestern Canada // Contributions of the Royal Ontario Museum of Zoology.-1943.-V.24.-P. 171-232.

286. Ermolenko L.N. Genetic divergence in the family Coregonidae II Polsk. Arch. Hydrobiol.-1992.-V.39.-P.533-539.

287. Ferguson M.M. Enzyme heterozygosity and growth in rainbow trout: genetic and physiological explanations // Heredity.-1992.-V.68.- P. 115-122.

288. Frolov S.V. Karyotype of Stenodus leucichthys nelma from Anadyr River // Chrom.Inform.Ser.-1992.-No 52.-P.11-12.

289. Grant W.S., Utter F.M. Biochemical population genetics of Pacific herring (Clupea pallasi) // Can. J.of Fisheries and Aquatic Sciences.-1984.-V.41.-P.856-864.

290. Hindar K., Ryman N., Utter F. Genetic effects of cultured fish on natural fish populatoons // Can.J.Fish.Aquat.Sci. -1991.-V.48.-N.5.-P.945-957.

291. Hogbom A. O. Ueber die arktisehen Elemente in der aralokaspischen Fauaa, ein tier-geographiaches Problem. Ball. Geol. Inst. Upsala, XIV, 1917.-P.241-260, с картой (цитир. по Бергу (1928).

292. Howland K.L., Tallman R.F., Tonn W.M. Migration patterns of freshwater and anadromous inconnu in the Mackenzie River system // Trans. Am. Fish. Soc.-2000.-V. 129.-No. 1 .-P.41 -59.

293. Howland K.L., Tonn W.M., Babaluk, J.A., Tallman R.F. Identification of freshwater and anadromous inconnu in the Mackenzie river system by analysis of otolith strontium // Trans. Am. Fish. Soc.-2001 a.-V. 130.-P.725-741.

294. Howland K.L., Tonn W.M., Goss, G. Contrasts in the hypo-osmoregulatory abilities of a freshwater and an anadromous population of inconnu // Journal of fish biology. -2001b.-V.59.- No.4.-P.916-927.

295. Hynes J.D., Brown E.U., Helle J.U., Ryman N., Webster D.A. Guidelines for the culture of fich stocks for resource management//Can. J. Fich. Aquat. Sci. 1981,-V.38.-№ 12.- P.l867-1876.

296. IUCN Red List of threatened animals. USA. Printed by Kelvyn Press. -1996.368 p.

297. Jorde P.E., Ryman N. Demographic genetics of brown trout (Salmo trutta) and estimation of effective population size from temporal change of allele frequencies // Genetics. -1996.-V. 143.-No.3.-P. 1369-1381.

298. Karl S. A., Avise J. C. Balancing selection at allozyme loci in oysters: implications from nuclear RFLP's// Science.-1992.- V.256.- P.100-102.

299. Lockwood S.F., Dillinger R.E. jr., Birt T.P., Green J.M., Snyder T.P. Phylogenetic relationships among members of the Coregoninae inferred from direct sequencing of PCR-amplified mitochondrial DNA // Can. J. Fish. Aquat. Sci.-1993.-V.50.-P.2112-2118.

300. Luczynski M., Falkowski S., Vuorinen J., Jankum M. Genetic identification of European whitefish {Coregonus lavaretus), peled {Coregonus peled) and their hybrids in spawning stocks of ten Polish lakes // Pol. Arch. Hydrobiol.-1992.-V. 39.-P. 571 -577.

301. Makarenkov, V. T-REX reconstructing and visualizing phylogenetic trees and reticulation networks, Bioinformatics.-2001.-P.l-30.

302. May B.P. The salmonid genome: evolutionary restructuring following a tetraploid event. Ph. D. Thesis. -Pennsylvania: Pensylvania State Univ., University Park, 1980.-199 p.

303. Miller R.R. Threatened freshwater fishes of the United States//Trans. Amer. Fish. Soc. -1972.-V.101.-N2.-P.239-252.

304. Nei M. Genetic distance between populations // Am. Nat.-1972.-V.106.-No 946.-P.283-292.

305. Norden C.R. Comparative osteology of representative salmonid fishes with particular reference to the grayling (Thymallus arcticus) and its phylogeny // J. Fish. Res. Board Can. -1961.-V.18.-N.5.-P.679-791.

306. Peacock, A.C., Bunting, S.L., Queen, K.L.// Serum protein electrophoresis in acrylamide gel: patterns normal human subjects.- Science, 1965.-V.147.-No 3664. P. 1451-1452.

307. Politov D. V., Gordon N.Y., Afanasiev K.I., Altukhov Y.P., Bickham J.W. Identification of palearctic coregonid fish species using mtDNA and allozyme genetic markers//J. Fish Biol.-2000.-V.57. Su A.-P.51-71.

308. Politov, D. V., Gordon, N. Yu., Makhrov, A. A. Genetic identification and taxonomic relationships of six Siberian species of Coregonus. IIArch. Hidrobiol. Spec. Issues Advanc.Limnol. -2002.-V.57.-P.21-34.

309. Reist J.D., Vuorinen J., Bodaly R.A. Genetic and morphological identification of coregonid hybrid fishes from Arctic Canada // Pol. Arch. Hydrobiol.-1992.-V. 39.-P.551-561.

310. Roff D.A., Bentzen P. The statistical analysis of mitochondrial DNA polymorphisms: x2 and the problem of small samples //Mol.Biol.Evol.-1989.-V.6.-N.5.-P.539-545.

311. Rohlf F.J. NTSYS-pc: Numerical Taxonomy and multivariate analisis system. N.Y.: Exeter Publ., 1998.

312. Ryman N. Conservation of genetic resources: Experiences from the brown trout (Salmo trutta). In Fish gene Pools, ed N.Ryman // Ecological Bulletins (Stockholm).-1981 .-V.34.-P.61 -74.

313. Ryman N., Stahl G. Genetic changes in hatchery stocks of brown trout (Salmo trutta) // Can. J. Fish. Aquat. Sci.- 1980.-V.37.-№ 1.-P.82-87.

314. Saitou, N., Nei, M. The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees//Moleculai Biology Evolution.-1987.-V.4.-P.406-425.

315. Sajdak, S.L., Phillips, R.P. Phylogenetic relationships among Coregonus species inferred from the DNA sequence of the first internal transcribed spacer (ITSI) of ribosomal DNA //Can J Fish Aquat Sci.-1997.-V.54.-No 7.-P.1494-1503.

316. Sendek D.S. Electrophoretic studies of Coregonid fishes from across Russia// Arch. Hydrobiol. Spec. Issues Advanc. Limnol.-2002.-V.57.- P.35-55.

317. Shaklee, J.B., Allendorf, F.W., Morizot, D.C., Whitt, G.S. Genetic nomenclature for protein-coding loci in fish // Transactions of American Fisheries Society.-1990.-V.l 19.-P.2-15.

318. Shaw, C.R., Prasad, R. Starch gel electrophoresis of enzymes a compilation of recipes // Biochemical Genetics.-1970.-V.4.-No 2.-P.297-320.

319. Smith S.H. Evolution and distribution of the Coregonids // J. Fish. Res. Board Can.-l 957.-V. 14.-No 4.-P.599-604.

320. Smith S.H. Species succession and fishery exploitation in the Great Lakes// J. Fish. Res. Board Can.-l 968.-V.25.-P.667-693.

321. Smith G.R., Todd T.N. Morphological cladistic study of coregonine fishes // Polsk. Arch. Hydrobiol.-1992.-V.38.-P.479-490.

322. Swofford, D.L., Selander, R.B. BIOSYS 1: a FORTRAN program for the comprehensive analysis of electrophoretic data in population genetics and systematics //Journal of Heredity.-1981.-V.72.-P.281-283.

323. Tautz D. Hypervariability of simple sequences as general sourse for polimorphic DNA markers//Nucleic Acids Research. -1989.-V.17. -P.6433-6471.

324. Tautz D. Notes jn the definition and nomenclature of tandemly repetitive DNA sequences. In DNA Fingerprinting: State of the Science (Pena S^ D. J., Chakraborty R., Eppelen J.T. and Jeffreys A. J., eds). Berlin: Birhauser, 1993,- P. 21-28.

325. Vuorinen J. Electrophoretic expression of genetic variation and duplicate gene activity in vendace, Coregonus albula (Salmonidae) // Hereditas.-1984.-V. 101.-No l.-P.85-96.

326. Vuorinen J. Enzyme genes as interspecific hybridization probes in Coregoninae fishes // Finnish Fisheries Research.-1988.-No 9.-P.31-37.

327. Vuorinen J., Piironen J. Inheritance and joint segregation of biochemical loci in european whitefish genus Coregonus II Hereditas.-1984.-V.101.-Nol.-P.97-102.

328. Vuorinen, J.A., Bodaly, R.A., Reist, J.D., Luczynski, M. // Phylogeny of five Prosporium species with comparisons with other Coregonine fishes based on isozyme electrophoresis // J. Fish Biology.-1998.-V.53.-P.917-927.

329. Waples R.S. Estimation of allele frequencies at isoloci // Genetics.-1988.-V. II8.-N0 2.-P.371-384.

330. Weir B.S., Cockerham C.C. Estimating for the analysis in population structure // Evolution.-1984.-V.38.-P. 1358-1370.

331. Williams J.G.K., Kubelik A.R., Livak K.J., Rafalski J.A., Tingey S.V. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers.//Nucleic Acids Research.-1990.-V.I8.-N0 22.-P.6531-6535.

332. Williams J. G. K., Hanafeu M. K., Rafalski J. A. Genetic analysis using Random Amplified Polymorphic DNA markers//Methods in Enzymology.- 1993.-V.218.-P.704-740.

333. Zaykin D.V., Pudovkin A.I. Two programs to estimate Chi-square values using pseudo-probability test//J. Hered.- 1993.-V.84.-P.152.

Информация о работе

Голованова, Татьяна Сергеевна
кандидата биологических наук
Москва, 2005
ВАК 03.00.10

Диссертация

Анализ генетической изменчивости белорыбицы и нельмы Stenodus leucichthys (Güldenstädt, 1772) в связи с задачами искусственного воспроизводства - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы