Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Анализ функции альфа 2-адренергических рецепторов головного мозга крыс в раннем онтогенезе

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Анализ функции альфа 2-адренергических рецепторов головного мозга крыс в раннем онтогенезе"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирский государственный университет

На правах рукописи

Маснавиева Людмила Борисовна

АНАЛИЗ ФУНКЦИИ АЛЬФА 2-АДРЕНЕРГИЧЕСКИХ РЕЦЕПТОРОВ ГОЛОВНОГО МОЗГА КРЫС В РАННЕМ ОНТОГЕНЕЗЕ

03.00.13 - физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск - 2005

Работа выполнена в лаборатории функциональной нейрогеномики Института цитологии и генетики и кафедре физиологии Новосибирского государственного университета

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор Николай Николаевич Дыгало

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

Валентин Андреевич Вавилин

доктор биологических наук Михаил Абрамович Гилинский

Ведущая организация: Институт клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, Новосибирск

Защита диссертации состоится «._£_)> "c/f fcS-W-C-- 2005 г. на заседании диссертационного совета Д 001.014.01 в Институте физиологии СО РАМН в конференц-зале института по адресу: 630117, г. Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 4, тел. (3833)34-89-61, факс (3833)32-42-54, e-mail: A.G.Yeliseyeva@iph.ma.nsc.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН.

Автореферат разослан _ 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

AT. Елисеева

Актуальность проблемы. Норадренергическая система головного мозга участвует в регуляции многих функций, таких как кардиоваскулярная и эндокринная, различных форм поведения, а также психоэмоциональных состояний, например, депрессии и тревожности (Nunes, 1995; Lu, Ordway, 1997; Wang X.M. et.al., 2002; Maestroni, 2004). Норадреналин осуществляет свое действие через адренергические рецепторы, присутствующие во многих тканях, периферических органах и в центральной нервной системе (ЦНС) (Шишкина, Дыгало, 1997; Lacey etal., 1996; Lu, Ordway, 1997). Формирование этой нейрохимической системы мозга млекопитающих и ее рецепторного звена начинается во второй половине эмбрионального развития, а созревание завершается уже после рождения, у крыс - к 1,5-месячному возрасту. Раннее появление в онтогенезе, а также проявляющиеся в течение жизни функциональные и поведенческие нарушения после повреждающего воздействия на эту нейрохимическую систему в период ее развития, позволяют предполагать влияние системы на формирование ЦНС - нейротропное действие (Culmsee et.al., 1999). Однако само такое действие медиатора и тип рецепторов, через который оно может осуществляться, остаются неясными.

Альфа2А-адренорецепторы экспрессируются в головном

мозге млекопитающих в ядрах ствола, содержащих тела норадренергических нейронов, а также во всех отделах, где располагаются терминали этих нейронов (Шишкина, Дыгало, 2002; Lu, Ordway, 1997). Наибольший пиковый уровень экспрессии в стволе головного

мозга приходится на перинатальный период развития крыс (Юшкова, Дыгало, 1995). Возможно, что именно эти рецепторы в критические сроки онтогенеза могут осуществлять «программирующую» функцию, определяя функцию ЦНС и поведение животных в последующие периоды жизни. Однако исследование функции сдерживалось отсутствием

подтип-специфичных лигандов. Реальная возможность выяснения их функции возникла после разработки антисенс-технологии, основанной на применении специфичных к мРНК антисмысловых олигодиоксинуклеотидов (антисенса), способных избирательно снижать экспрессию отдельного гена (Gonzalez-Cabrera et al., 1998). Если рецепторы этого подтипа действительно влияют на формирование ЦНС, то можно ожидать, что изменение их экспрессии в раннем онтогенезе проявится изменениями в дальнейшем развитии животных, поскольку эти рецепторы прямо или косвенно участвуют в регуляции норадреналин-зависимых процессов. Поэтому планируемое в работе изучение функций в регуляции физиологических систем развивающегося организма и формировании его последующих свойств (программирующая функция) в

критические сроки онтогенеза путем подавления их экспрессии антисмысловым олигонуклеотидом является актуальным.

Цель и задачи исследования. Основная цель работы состояла в исследовании регуляторной и «программирующей» функции а2А-АР головного мозга крыс в раннем онтогенезе. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1) определить эффект воздействия антисмысловым олигонуклеотидом к мРНК а2А-АР на экспрессию этих рецепторов и нейрохимические показатели норадренергической системы головного мозга неонатальных крысят;

2) оценить развитие, рефлекторно-моторные характеристики поведения и гипногенную функцию в осуществлении холодовой анестезии у новорожденных животных после блокады экспрессии головного мозга;

3) изучить отсроченные эффекты подавления экспрессии а2А-АР в неонатальный период на норадренергическую систему и регулируемое этой системой поведение препубертатных животных.

Научная новизна работы. Впервые продемонстрирована возможность подавления экспрессии гена на уровне его мРНК и кодируемого

им белка в формирующемся головном мозге млекопитающих антисмысловым олигодиоксинуклеотидом, комплементарным к транскрипту гена-мишени.

Установлено, что подавление экспрессии гена а2А-АР приводит к повышению уровня норадреналина в стволовой части мозга неонатальных крысят и снижению плотности бета-адренорецепторов в их коре.

Впервые установлено, что, не оказывая существенного влияния на формирование моторных рефлексов, головного мозга угнетают

двигательную активность и повышают склонность новорожденных крысят к гипногенному состоянию при холодовой анестезии.

Снижение экспрессии а2А-АР в неонатальном мозге изменяет функциональное состояние норадренергической системы в последующие периоды жизни, что проявляется совместным повышением как уровня норадреналина в стволовой части мозга, содержащей клеточные тела норадренергических нейронов, так и плотности в коре головного

мозга, содержащей терминали этих нейронов. Эти нейрохимические эффекты сопровождались изменением поведения полуторамесячных животных: у них наблюдалось ускоренное снижение амплитуды реакции вздрагивания в ответ на повторяющийся акустический стимул.

Положения, выносимые на защиту

1) И2А-АР влияют на нейрохимию мозга, поведение и гипногенное состояние неонатальных крысят. Их участие в регуляции перечисленных функций проявляется ростом уровня НА в стволе, понижением плотности

Р"АР в коре, повышением двигательной активности и увеличением времени, необходимого для впадения в холодовой наркоз после снижения экспрессии а2А-АР олигодиоксинуклеотидом, комплементарным к их мРНК.

2) Уровень экспрессии а2А-АР в неонатальном мозге имеет программирующее значение для нейрохимических характеристик и поведения животных в последующие периоды жизни. Программирующая функция этих рецепторов проявлялась повышением их экспрессии в коре и уровня НА в стволе мозга 40-дневных крыс, а также быстрым снижением амплитуды рефлекторного вздрагивания при повторных предъявлениях звуковых стимулов после снижения экспрессии в головном мозге

в критический период его формирования.

Практическая значимость работы. Полученные данные вносят существенный вклад в понимание нейрохимических и поведенческих изменений, связанных с нарушением экспрессии в раннем

онтогенезе. Кроме того, полученные результаты могут быть полезны для разработки новых препаратов для осуществления анестезии, лечения состояний, связанных с психо-эмоциональными нарушениями. Результаты данной работы используются в лекционном курсе «Гормоны в фило- и онтогенезе» и на практических занятиях студентов биологов Новосибирского государственного университета.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены и обсуждены на Международной научной студенческой конференции (Новосибирск, 2000); XVIII Съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова (Казань, 2001); IV Съезде Физиологов Сибири (Новосибирск, 2002); конференции «Эндокринная регуляция физиологических функций в норме и в патологии» (Новосибирск, 2002); International symposium «Genetic and Developmental Psychoneuroendocrinology» (Novosibirsk, 1999); Seventh Symposium on catecholamines and other neurotransmitters in Srtess (Slovakia, 1999); International Conferensce "RNA as Therapeutic and genomics Target" (Novosibirsk, 2001); The 5-th International Congress of Neuroendocrinology (Bristol, 2002).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 работ, из них 4 статьи - в ведущих российских журналах, 1 глава в книге зарубежного издательства, 9- тезисы докладов.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка цитированной литературы. Работа изложена на 106 страницах машинописного текста и включает в себя 18 рисунков и 2 таблицы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В опытах использовали крыс линии Вистар. Для получения потомства самок ссаживали с самцами. День обнаружения сперматозоидов во влагалищном мазке считался первым днем беременности, а первым днем жизни крысят - день родов.

Введение препаратов в мозг неонатальных крысят осуществлялось под Холодовым наркозом (Danneman, Manderell, 1997) в область голубого пятна ствола головного мозга крысят на 2, 3 и 4 дни жизни с использованием модифицированного стереотаксиса. Экспериментальной группе животных вводили антисенс в дозе 0.05 нмоль/5мкл физиологического раствора. Антисенс - это антисмысловой тиофосфат олигодиоксинуклеотид, состоящий из 18 нуклеотидов, комплементарных участку, перекрывающему ATG-кодон мРНК а2А-АР (от -11 до +7; 5'-agcccatgggcgcaaagc-З'). Контрольным группам животных вводили эквивалентный объем физиологического раствора или рэндома -контрольного олигонуклеотида, состоящего из тех же оснований, что и антисмысловой, но его последовательность выбрана таким образом, что он не связывается ни с одной из известных последовательностей мРНК млекопитающих (5'-gacgacccagtgagcacg-3').

Холодова* анестезия являлась также одним из тестов на функциональную активность Для этого после помещения крысят

на лед фиксировали время до полного исчезновения у них вокализации и движений.

Развитие животных оценивали по весу их тела и возрасту, в котором у крысят открывались глаза. Для этого в 2 - 5, 10,20, 24, 34 и 40-дневном возрасте животных взвешивали и в период с 15 по 18 дни жизни ежедневно в утренние часы подсчитывали число крысят, у которых открыты оба глаза.

Формирование рефлекторно -моторных реакций 2-5 дневных животных определяли по их способности принимать исходное положение при перевороте их на спину (тест "Righting reflex"). В эти же дни жизни оценивали спонтанную двигательную активность крысят по числу квадратов, границы которых они пересекали правой передней лапой в течение минуты, после помещения их в центр площадки размером 10x15 см, расчерченной на квадраты площадью 1 см .

Спонтанную двигательную активность 20-дневных крыс оценивали в актометре (пол: 20x20 см, высота: 30 см), снабженном инфракрасными излучателями и фотодиодами, разбивающими лучами горизонтальное сечение на квадраты 5x5 см. Во время тестирования автоматически фиксировалось ежеминутное, а также суммарное (за 10 минут) число пересечений лучей.

Реакцию вздрагивания в ответ на звуковые стимулы (Startle reflex)

оценивали у животных в возрасте 22 и 34 дня в установке SR-Pilot (San Diego Instruments, San Diego, CA). Крыс помещали на 3 минуты для адаптации в тестовую камеру (14 х 21 х 23 см), имеющую в полу пьезо-чувствительные датчики и озвучиваемую "белым шумом" 65 дБ. Затем с интервалами в 15 секунд подавались 4 звуковых сигнала громкостью 115 дБ и длительностью 40 мс, вызывающих испуг и реакцию вздрагивания. После каждого сигнала автоматически в цифровой форме регистрировалась амплитуда реакции вздрагивания животного.

Содержание норадреналина (НА) и дофамина (ДА) в ткани мозга определяли флюориметриметрическим методом (Jacobowitz, Richardson, 1978).

Радиолигандное определение количества рецепторов проводили в

препаратах клеточных мембран ткани мозга, содержащих 0,3-0,4мг белка. Их инкубировали в объеме 0.5 мл с антагонистом а2-АР - [3H]RX821002 (2 нМ) или антагонистом ß-AP - [3Н]ДГА (1,6 нМ), в 50мМ Tris-HCl буфере с 1мМ MgCl2 (pH 7.5) в отсутствии (общее связывание) и в присутствии

(неспецифическое связывание) 100 мкМ адреналина (Shishkina et al., 2001; Dygalo et al., 2004). Число мест специфического связывания лигандов выражали в фмоль/мг белка в пробе, концентрацию белка в пробе определяли по методу Лоури.

ОпределениемРНКальфа2А- адренорецепторов проводили методом полуколичественной РТ-ГЩР в. суммарной РНК, выделенной одностадийным гуанидин-изоцианатным методом (Калинина и др., 1998). Праймеры олигонуклеотидов были выбраны на основании известных нуклеотидных последовательностей и Размер

амплифицируемого фрагмента для а2А-АР был 560 пар оснований, а для ß-актина - 255 пар оснований. Уровень мРНК альфа2А-адренорецепторов рассчитывали относительно бета-актина после сканирования и денситометририи электрофореграмм с помощью Biodoc II video documentation system ("Biometra GmbH", Готтинген, Германия) (Shishkina etal.2001).

Статистический анализ результатов проводили с использовании

пакета статистических программ "Statgraf" и "Statistica". Влияние неонатального воздействия выявляли однофакторным дисперсионным анализом (ANOVA). Достоверность различий между группами оценивали по LSD критерию Фишера. Влияние введения препаратов на сроки открытия глаз определяли при помощи критерия ^2 (Бейли, 1963).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 1. Влияние антисенса кмРНК а2А-АР на экспрессию рецепторов а2А-подтипа в формирующемся мозге крыс.

Введение антисенса к в область голубого пятна ствола

головного мозга на 2-4 дни жизни крысят привело к достоверному снижению уровня их мРНК в стволе головного мозга в 5 дневном возрасте по сравнению с рэндомом и имел

тенденцию к снижению по сравнению с физиологическим раствором (Рис. 1.). Во фронтальной коре уровень экспрессии в группе антисенса также имел тенденцию к понижению по сравнению с обеими контрольными группами (F 2.9=3,69, р<0,1) и, особенно, с рэндомом (t=2,45, p<0,05). Известно, что фосфоротиоатные олигонуклеотиды и их метаболиты могут оказывать токсические эффекты (Paster, Standifer, 1995; Abraham et al., 1997; Akhtar, Agrawal, 1997). Поэтому в качестве контроля использовали контрольный олигонуклеотид, поскольку биологический эффект антисенса, возможно, включает как специфический эффект на мРНК мишени так и неспецифический токсический эффект тиофосфатов (Но, et al., 1996). Полученные результаты свидетельствуют, что воздействие антисенсом к мРНК эффективно подавляет экспрессию этих

рецепторов в формирующемся мозге.

Физиол. р-р Рэндом Антисенс

Рис. 1 Электрофореграмма продуктов РТ-ПЦР а2А-АР И р-акгина в стволе головного мозга 5-дневных крысят

Известно, что рецепторов играет важную роль в регуляции

активности норадренергических нейронов в зрелом мозге, температуры тела (Lavand'homme, Eisenach 2003), различных видов поведения (Aston-Jones et al., 1999; Robinson et al., 1999; Robinson et al., 2000) взрослых животных. Возможно, что в ранний постнатальный период эти рецепторы выполняют похожие функции.

2. Острые эффекты подавления экспрессии мРНК а2А-АР головного мозга неонатальных крысят.

Нейрохимические эффекты. Количество мест специфического связывания лиганда в стволе и коре головного мозга

5-дневных крысят после введения антисенса достоверно снизилось (Рис. 2. А). Снижение количества ауторецепторов в стволе мозга ослабило их иигибирующее действие на синтез НА и привело к повышению его уровня (Р 2,н = 10,696, р<0,05) в этом отделе мозга. Воздействие антисенсом к а2А-АР существенно не изменяло плотность (З-АР в стволе мозга по сравнению с рэндомом (Рис.2. Б). Концентрация ДА в этом отделе мозга после введения антисенса достоверно не изменилась (Р 2,14 = 0,88 р>0,05). В коре головного мозга 5-дневных крысят достоверных изменений уровня НА после введения препаратов не обнаружено (Р 2,13 = 2,49, р>0,05).

Введение антисенса привело к достоверному понижению плотности Р-АР (Рис. 2.Б) и концентрации ДА в коре головного мозга (Р 2,13 = 5,45, р<0,05), по сравнению с рэндомом.

Рис.2. Специфическое связывание [3Н]ЯХ821002 (А) И [3Н]ДГА (Б)

лигандов соответственно, в стволе и коре головного мозга

5-дневных крысят после неонатального воздействия антисенсом к *-различия достоверны по сравнению с рэндомом, р<0,05, #-различия достоверны по сравнению с физиологическим раствором, р<0,05.

Последствия введения рэндома, очевидно, обусловлены неспецифическим, свойственным тиофосфатам влиянием на пролиферацию, дифференцировку и функционирование клеток (Wagner, 1994). Его введение, по-видимому, вызвало токсическое ингибирование

прорастания аксонов в кору, что и могло привести к снижению концентрации ДА и снижению количества ß-AP в этом отделе мозга.

Специфические эффекты подавления экспрессии а2А-АР в первые дни жизни, выявляемые при сравнении антисенса и рэндома, свидетельствуют-об активации норадренергической системы. Повышение содержания НА в стволе головного мозга приводит к снижению плотности в коре,

благодаря понижающей регуляции . количества рецепторов нейромедиатором.

Поскольку рецепторов регулирует синтез и

высвобождение норадреналина и опосредованно влияет на плотность адренорецепторов в зрелом мозге, можно предположить, что снижение их экспрессии в раннем онтогенезе повлекут изменения в норадренергической системе, а также в функциях, регулируемых ими.

Рост и развитие крысят. Межгрупповых различий показателей общего развития животных - массы тела в период введения препаратов со 2 по 5 дни жизни (Рис. 3) и возраста, в котором они открывали глаза от 4,48 до 5,06), не обнаружено. Эти результаты свидетельствуют, что способ и доза введения фосфоротиоатов не оказали на животных заметного токсического эффекта. В период с 5 по 10 дни жизни животных отмечено достоверное замедление роста группы антисенса по

сравнению с рэндомом (t=3,61, p<0,05) (Рис.3). Задержка роста в 10-дневном возрасте может быть связана с временным снижением плотности постсинаптических а2-АР гипоталамуса. Которые, как известно, позитивно регулируют секрецию гипоталамического рилизинг фактора гормона роста, а, следовательно, и секрецию гормона роста (Cella et al.,1990; Cella et al., 1990; Scheinin et al., 1994; Talley et al., 1996; Tavares et al., 1996). Этот эффект также может быть связан и с подавлением пищевого поведения, центр которого локализован в паравентрикулярных ядрах гипоталамуса и позитивно регулируется а2-АР (Capuano et al., 1992). К 24 дню жизни различия в весе, вызванные препаратом, нивелировались.

Рефлекторно-моторное поведение крысят. Животные всех трех групп не различались по времени, необходимому для принятия исходной позы при перевороте на спину из положения на животе (Рис. 4).

Спонтанная двигательная активность крысят на 2 и 3 дни постнатального развития не различалась во всех трех группах животных. Однако в период с 4-го по 5-ый дни жизни введение антисенса привело к достоверному увеличению гребковых движений лапой по сравнению с предшествующим днем жизни, чего не наблюдалось у животных контрольных групп, а также по сравнению с 5-дневными крысятами, получавшими рэндом (Рис. 5).

Рис. 3. Масса животных после неонатального введения антисенса к СС2А-АР, *-различия достоверны по сравнению с рэндомом, р<0,05.

Рис. 4. Время, необходимое крысятам для принятия исходной позы, после переворота их на спину.

Полученные нами результаты свидетельствуют, что неонатальное подавление экспрессии мРНК а2А-АР не влияет на общее развитие животных, но оказывает специфическое воздействие на их двигательную активность.

Время, необходимое для впадения в холодовой наркоз. Время

впадения в холодовой наркоз нормировали относительно массы тела крысят, поскольку между этими параметрами, начиная с 3-го дня жизни, выявлялась отчетливая положительная корреляция (ее коэффициенты - от +0.28 до +0.46). Гипотермия вызывает у новорожденных грызунов анестезию и обездвиживание (Danneman, Mandrell, 1997). Ct2A-AP, участвуя в регуляции гипногенного состояния, могут, очевидно, осуществлять и холодовую анестезию. Подтверждением этому служит увеличение латентного периода впадения в холодовой наркоз 4-дневных крысят, которым вводили антисенс к по сравнению с

контрольными группами. (Рис. 6).

Таким образом, неонатальное подавление экспрессии мРНК а2А-АР антисенсом, вызывающее активацию норадренергической системы, приводит к увеличению двигательной активности 5-дневных крысят и времени, необходимого им для впадения в холодовой наркоз.

Рис. 5. Двигательная активность Рис. 6. Время, необходимое

2-5-дневных крысят после неонатального воздействия антисенсом к а2-АР, *-различия достоверны по сравнению с рэндомом, р<0,05.

крысятам для впадения в холодовой наркоз после неонатального введения антисенса к различия достоверны по сравнению с контрольными группами, р<0,05.

Поскольку а2А-АР участвуют прямо или опосредованно в регуляции пролиферации, дифференцировки (Uchida-Oka, Sugimoto, 2001) и жизнеспособности (Dygalo et а1., 2004) клеток развивающегося мозга, можно ожидать, что нейрохимические изменения в критические сроки онтогенеза, вызванные подавлением экспрессии этих рецепторов, окажут влияние не только на регуляцию физиологических систем организма, но и на формирование его последующих свойств.

3. Отсроченные эффекты неонатального подавления экспрессии мРНК а2А-АР головного мозга крысят. Нейрохимические изменения в головном мозге взрослых крыс К 24-

дневному возрасту крыс число мест специфического связывания лиганда а2-АР [3Н]ЯХ821002, а также уровень мРНК а2А-АР (И 2,9 = 0,01, р>0,05)

в стволе головного мозга достоверно не различались у всех трех групп. Во фронтальной коре крыс этого же возраста отмечено понижение содержания мРНК а2А-АР у группы с введением антисенса (Р 2,9 р<0,05), при этом межгрупповых различий числа мест специфического связывания антагониста а2—АР не обнаружено (Табл.1). В стволе и коре мозга не обнаружено достоверных различий как содержания НА (Р 2,21 =

0,71, р>0,05 и F 2,46 _ 0,94, р>0,05, соответственно), так и ДА (F 2,20= 1,00 р>0,05 и F 2,47 = 0.6, р>0,05 соответственно). Полученные данные свидетельствуют о восстановлении функционального пула а2-АР и

уровня нейромедиатора регулируемого ими.

Таким образом, в период, когда норадренергическая система еще не достигла функциональной зрелости, последствия неонатального воздействия антисенсом не проявляются изменениями нейрохимии мозга и поведения животных, однако не исключено, что снижение экспрессии альфа2-адренорецепторов в первые дни жизни проявится функциональными нарушениями к моменту завершения формирования норадренергической системы.

В стволе головного мозга 40-дневных животных, которым неонатально вводили антисенс, уровень мРНК был достоверно выше по сравнению с контролем (F 2,9 = 12,1, р<0,05). Число сайтов связывания лиганда а2-АР достоверно не различалось в этом отделе мозга (Табл.1). Уровень НА в стволе головного мозга крыс был достоверно выше у животных, которым вводили антисенс (F 2,34 = 5,23, р<0,05), по сравнению с обеими контрольными группами. Содержание ДА у животных экспериментальной и контрольных групп достоверно не различалось как в стволе (F 2,эб = 0,89, р>0,05), так и в коре мозга (F 2,33 = 0,22, р>0,05). Во фронтальной коре уровень мРНК а2А-АР у животных группы антисенса было достоверно ниже по сравнению с рэндомом (t=3.64, р<0,05), однако число белковых молекул у животных, которым вводили антисенс достоверно выше

(Табл.1).

Табл. 1. Специфическое связывание лиганда а2-АР ['HJRX821002 фмоль/мг белка) в стволе и коре головного мозга 24- и 40-дневных крысят после неонатального воздействия антисенсом к

Возра ст, дни Отдел мозга Неонатально введенные вещества

Физ. р-р Рэндом Антисенс

24 Ствол 92,3±5,1 134,8±б,2 70,1 ±3,5 105,1±2,9 102,8±5,4 131,5±5,2 65,9±5,3 109,4±3,7 106,3±4,5 122,0±4,0 77,6±3,3 121,4±4,2*

кора

40 Ствол

кора

* - различия достоверны по сравнению с обеими контрольными группами, р<0,05.

Этот результат, так же как и отсутствие различий в плотности рецепторов при сниженном уровне их мРНК в коре 24-дневных крысят, у которых при сниженном уровне мРНК не было различий в

плотности рецепторов, свидетельствует о транспорте белковых молекул рецепторов из ствола мозга, где расположены тела нейронов. Действительно, повышенный уровень мРНК а2А-АР в нейронах ствола мог обеспечить высокий уровень синтеза и последующего транспорта белковых молекул рецепторов во фронтальную кору по аксонам (Dygalo et al., 2002). Межгрупповых различий по содержанию НА в коре у 40-дневных крыс не обнаружено (F 2,34 = 0.02, р>0,05).

Таким образом, неонатальное подавление экспрессии мРНК а2А—АР не проявляется в период формирования норадренергической системы, но приводит к нарушению регуляции уровня НА в стволе головного мозга в период достижения системой ее морфологической и функциональной зрелости. Повышение плотности а2-АР во фронтальной коре совместно с повышенным уровнем НА в месте его синтеза - в стволе мозга свидетельствует о глубоких функциональных преобразованиях в норадренергической системе. Увеличенное высвобождение норадреналина в коре вследствие его увеличенного синтеза должно было по механизму down-регуляции снизить число а2А—АР рецепторов, поскольку они находятся под тонической понижающей регуляцией медиатора (Калинина и др., 2000), хотя и относительно устойчивы к действию этого механизма (Heck, Bylund, 1998)

Очевидно, что нейрохимические изменения, которые наблюдаются у животных с неонатальным подавлением экспрессии головного

мозга, могут оказать влияние на реализацию норадреналин-зависимых процессов и поведения.

Рефлекторно-моторное поведение животных. При оценке спонтанной локомоторной активности 20-дневных крыс в двулучевом актометре различий между экспериментальной и контрольными группами животных не выявлено (F^i = 1.38, р>0,05) (Рис. 7).

о г « в в ю

МИНУТУ ТЕСТА

Рис. 7. Двигательная активность 20-дневных животных в двулучевом актометре после введения антисенса к а2А-АР на 2-4 дни жизни.

У крыс этого же возраста величина рефлекторной реакции вздрагивания в ответ на звуковые сигналы после неонатального введения антисенса к а2А-АР головного мозга достоверно не различалась у контрольных и экспериментальной групп (F2.187 = 0-49, р>0,05). Амплитуда ответа животных в возрасте 20 дней каждой из групп достоверно не изменялась и в ответ на повторные звуковые сигналы, хотя в целом по всем группам отмечено ее снижение (F 2,187 = 5.01, р<0,01). Таким образом, при отсутствии изменений нейрохимии мозга нет и видимых эффектов на поведение.

- В 34 дневном возрасте выявлено достоверное снижение амплитуды ответа на повторные предъявления звуковых стимулов в группе антисенса, по сравнению с контрольными группами (Рис. 8). Поскольку активация а2-АР агонистами приводит к снижению амплитуды ответа животных на звуковые стимулы (Kumari et al., 1996; Abduljwad et al., 1997) и облегчает кратковременное привыкание к ним (Davis et al., 1977; Leaton, Cssell, 1984), то повышение плотности этих рецепторов и эндогенного лиганда, активирующего их, имеет аналогичный эффект.

АМПЛИТУДА . фи] Р-Р

ОТВЕТА * _ .-РЭНДОМ

— *— АНТ И С Е Н С

12 3 4

ПОРЯДКОВЫЙ НОМЕР ЗВУКОВОГО СТИМУЛА

Рис. 8. Реакция вздрагивании 34-дневных крыс в ответ на звуковые стимулы после неонатального введения антисенса к а2А-АР. Примечание: Амплитуда ответа каждого животного выражалась в виде процентного соотношения его реакции на повторные предъявления стимулов к первому ответу; *, # -различия достоверны по сравнению с обеими контрольными группами, р<0,05 и р<0,1, соответственно.

В целом, в работе впервые показано, что неонатальное воздействие антисмысловым олигонуклеотидом к а2А-АР эффективно подавляет их экспрессию, и позволило выявить функции в регуляции

нейрохимии мозга, поведения и гипногенного состояния.

Важным фактором, способным влиять на последующие свойства организма, оказался уровень экспрессии специфического гена в критические сроки формирования мозга. Ранее такая функция не была описана ни для одного из известных генов. Нами установлено, что уровень экспрессии гена в неонатальном мозге имеет программирующее

значение для его нейрохимических характеристик и поведения животных в последующие периоды жизни. Программирующая функция этих рецепторов проявлялась повышением их экспрессии в коре и уровня НА в стволе мозга 40-дневных крыс, а также быстрым снижением амплитуды рефлекторного вздрагивания при повторных предъявлениях звуковых стимулов после снижения экспрессии в головном мозге в

критический период его формирования.

ВЫВОДЫ.

1. Антисмысловой олигонуклеотид к -адренорецептору, введенный в ствол головного мозга 2-4 дневных крысят специфично снижает экспрессию мРНК этого подтипа адренорецепторов. Эффект антисенса проявляется как уменьшением количества молекул мРНК, кодирующей рецепторный белок, так и количества собственно молекул рецептора.

2. Воздействие антисмысловым олигонуклеотидом к мРНК адренорецептора, введенным в головной мозг 2-4 дневных крысят, приводит к временному замедлению роста животных в период с 5 по 10 дни постнатального развития, но не влияет на их последующие развитие.

3. Показано участие а2А-адренорецепторов в модуляции гипногенного состояния и двигательной активности новорожденных животных. Снижение экспрессии этого подтипа адренорецепторов в головном мозге новорожденных крысят антисенсом привело к увеличению времени, необходимого для впадения в холодовой наркоз и вызвало повышение их двигательной активности.

4. Воздействие на экспрессию -адренорецепторов мозга неонатальных крысят вызывает в нем немедленный и отсроченный эффекты на уровень норадреналина. Введение антисенса к адренорецептору в область синего пятна продолговатого мозга крысят приводит к повышению уровня норадреналина в стволе головного мозга 5-и 40-дневных крыс.

5. Подавление экспрессии а2А-адренорецепторов в мозге неонатальных крысят индуцирует функциональные преобразования в норадренергической системе в период достижения этой системой зрелости. Об этом свидетельствует происходящее после неонатального воздействия антисенсом в мозге 40-дневных крыс совместное повышение уровня норадреналина и плотности -адренорецепторов вопреки

известному реципрокному соотношению между рецепторами и нейромедиатором, обусловливаемом механизмом понижающей регуляции.

6. Снижение экспрессии а2А-адренорецеигоров в головном мозге в критический период онтогенеза приводит к формированию свойств ЦНС, обеспечивающих ускоренное привыкание полуторамесячных крыс к звуковым стимулам, что проявляется быстрым снижением амплитуды рефлекторного вздрагивания при повторных предъявлениях звуковых стимулов.

7. Установлено, что уровень экспрессии гена а2А-адренорецепторов в неонатальном головном мозге важен как для обеспечения текущих функций организма, так и имеет программирующее значение для его нейрохимических характеристик и поведения в последующие периоды жизни.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1) Дыгало Н.Н., Юшкова АА., Калинина Т.С., Сурнина Н. Ю., Мельникова (Маснавиева) Л.Б., Шишкина Г.Т. Онтогенетические корреляции уровня норадреналина и плотности адренергических рецепторов в головном мозгу крыс. // Онтогенез. - 2000. - т. 31. - N. 1. -с. 53-56.

2) Калинина Т.С., Сурнина Н.Ю., Мельникова (Маснавиева) Л.Б., Дыгало Н.Н Экспрессия альфа2-адренорецепторов в коре головного мозга зависит от уровня норадреналина. // Докл. Акад. Наук. -2000.- Т. 373, N.4.-C. 559-560.

3) Шишкина Г. Т., Калинина Т.С., Маснавиева Л.Б. Альфа2А-адренорецепторы головного мозга угнетают двигательную активность новорожденных крысят // Журн. Высш. Нервн. Деят. -2003.-T.53,N.5.-C.646-650.

4) Шишкина Г. Т., Дыгало Н.Н., Калинина Т.С., Маснавиева Л.Б. Ген альфа2А-адренергического рецептора влияет на устойчивость крысят к холодовому наркозу // Докл. Ак. Наук.- 2003. - Т. 388. - С.571-573.

5) Dygalo N.N., Kalinina T.S., Sournina N.Y., Melnikova (Masnavieva) L.B. Effects of neonatal treatment with antisense oligodeoxynucleotide to a!pha2A-adrenergic receptor on noradrenergic system ofthe brain// Stress: Neural, Endocrine and Molecular Studies, Edited by: R.McCarty, G.Agulera, E.Sabban and R.Kvetnansky, Taylor & Francis Group, London, New York, Philadelphia, Singapore. - 2002. - P. 205-209.

6) Мельникова (Маснавиева) Л.Б. Длительные эффекты снижения экспрессии альфа2-адренорецепторов мозга неонатальных крыс //

Материалы XXXVIII Междунар. научн. Студ. Конф. «Студент и научно-технический прогресс». - Новосибирск, 2000. - С. 30.

7) Носова А.В., Мельникова (Маснавиева) Л.Б. Регуляция альфа2-адренорецепторов головного мозга крыс уровнем норадреналина в раннем онтогенезе // Материалы XXXVII Международной научной Студенческой Конференции «Студент и научно-технический прогресс». - Новосибирск.-1999. - с. 79-80.

8) Дыгало Н.Н., Маснавиева Л.Б., Калинина Т.С Формирование в онтогенезе мозга регуляторных соотношений альфа2А адренорецепторов с норадреналином: последствия временного выключения гена рецепторов. // Тезисы докладов XVIII Съезда Физиологического общества им. И.П. Павлова. - Казань, 2001. - С.81.

9) Шишкина Г.Т., Маснавиева Л.Б., Калинина Т.С. Вовлечение альфа2А-адренорецепторов мозга в развитие холодового наркоза у неонатальных крысят // IV Съезд Физиологов Сибири. -Новосибирск. -2002.- N. 553. - С. 305.

10) Шишкина Г.Т., Сахаров Д.Г., Маснавиева Л.Б., Дыгало Н.Н. Влияние снижения уровня экспрессии альфа2А-адренорецепторов в мозге в неонатальный период на последующую функциональную активность адренокортикальной системы крыс. // Тезисы конф. «Эндокринная регуляция физиологических функций в норме и в патологии».-Новосибирск, 2002. - С. 183.

11) Dygalo N.N, Kalinina T.S., SouminaN.Y., Melnikova (Masnavieva) L.B Attenuation of alpha2-adreneigic receptors expression affects noradrenergic system in neonatal rat brain // Abstr. Int. Symp. Genetic and Developmental Psychoneuroendocrinology. -Novosibirsk, 1999. -P. 27.

12) Dygalo N.N, Sournina N.Y., Melnikova (Masnavieva) L.B Effects of neonatal treatment with antisense oligodeoxynucleotide to alpha2A-adrenergic receptor on noradrenergic system of the brain // Abstr. Seventh Symp. on Catecholamines and other Neurotransmitters in Srtess. -Slovakia, 1999.-P.I 1. .

13) Dygalo N.N., Kalinina T.S., Masnavieva L.B., Shishkina G.T. Selective inhibihion of alpha 2A-adrenoceptor expression in the brain stem by oligodeoxynucleotide induces behavioral alteration in neonatal and adalt rats //Abstr. Int. Conferensce "RNA as Therapeutic and Genomics Target". - Novosibirsk, 2001. - P. 23.

14) Dygalo N.N., Shishkina G.T., Masnavieva L.B., Kalinina T.S Brain alpha2A-adrenoreceptors are involved in early life programming of forthcoming adrenocortical activity // Abstr. of the 5-th International Congress ofNeuroendocrinology.- Bristol. -2002. -FC8.

Подписано в печать 15.06.2005 Уч.-изд.л.1 Офсетная печать. Формат 60x84 1/16 Заказ № 331 Тираж 100 экз.

Лицензия ЛР № 021285 от 6 мая 1998 г.

Издательский центр НГУ; 630090, Новосибирск-90, ул. Пирогова, 2

ы

t '^СЛтичмм^

15 ИЮЛ 2005 ; S

\-> »-Л« Wiyprr í

681

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Маснавиева, Людмила Борисовна

ОГЛАВЛЕНИЕ.

ВВЕДЕНИЕ.

1 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Адренергические рецепторы головного мозга. Их функция в раннем онтогенезе.g

1.1. Структура норадренергической системы головного мозга.

1.2. Строение, классификация и механизм действия адренергических рецепторов.

1.3. Регуляция функции и числа адренорецепторов.

1.4. а2-Адренорецепторы и поведение.

1.5. Онтогенез норадренергической системы.

1.6. Функция норадреналина и его рецепторов а.2-типа в онтогенезе.

1.7 Антисмысловые олигодеоксинуклеотиды и механизм их действия.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Животные.

2.2. Введение препаратов в мозг неонатальных крысят.

2.3. Холодовая анестезия неонатальных крысят.

2.4. Оценка общего развития животных.

2.5. Исследование рефлекторно-моторного развития и поведения животных.

2.5.1. Рефлекс возвращение в позу на 4-х лапах - Righting reflex.

2.5.2. Двигательная активность неонатальных крысят.

2.5.3. Спонтанная двигательная активность.^.

2.5.4. Рефлекс вздрагивания в ответ на звуковой стимул.

2.6. Определение содержания норадреналина и дофамина.

2.7. Определение адренергического связывания.

2.8. Определение экспрессии мРНК альфа2А-адренорецепторов.

2.9. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Острые эффекты воздействия антисенсом к мРНК а2Аадренорецептору головного мозга неонатальных крысят.

3.1.1. Нейрохимические изменения норадренергической системы

3.1.2.Рост и развитие крысят в первые дни жизни.

3.1.3. Рефлекторно-моторное поведение крысят.

3.1.4. Время, необходимое для впадения в холодовой наркоз.

3.2. Отсроченные эффекты неонатального подавления экспрессии мРНК ^ а2А-адренорецептора головного мозга крысят.

3.2.1. Нейрохимические изменения в головном мозге взрослых крыс.

3.2.3. Рефлекторно-моторное поведение животных.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Анализ функции альфа 2-адренергических рецепторов головного мозга крыс в раннем онтогенезе"

Актуальность проблемы. Норадренергическая система головного мозга участвует в регуляции многих функций, таких как кардиоваскулярная и эндокринная, различных форм поведения, а также психоэмоциональных состояний среди которых депрессия н тревожность (Nunes, 1995; Lu, Ordvvay, 1997; Wang X.M. et.al., 2002; Maestroni, 2004). Норадреналин осуществляет свое действие через адренергические рецепторы, присутствующие во многих тканях, периферических органах и в центральной нервной системе (ЦНС) (Шишкина, Дыгало, 1997; Lacey et.al., 1996; Lu, Ordway, 1997). Формирование этой нейрохимической системы мозга млекопитающих и ее рецепторного звена начинается во второй половине эмбрионального развития, а созревание завершается уже после рождения, у крыс к 1,5-месячному возрасту. Раннее появление в онтогенезе, а также проявляющиеся в течение жизни функциональные и поведенческие нарушения после воздействия нейротоксинами на эту нейрохимическую систему в период ее развития, позволяют предполагать влияние системы на формирование ЦНС. (Lorton et al., 1988; Culmsee et.al., 1999). Однако, такое нейротропное действие медиатора и тип рецепторов, через которые оно может осуществляться, остаются неясными.

Альфа2А-адренорецепторы (а2А-АР) экспрессируются в головном мозге млекопитающих в ядрах ствола, содержащих тела норадренергических нейронов, а так же во всех отделах, где располагаются терминали этих нейронов (Шишкина, Дыгало, 2002; Lu, Ordvvay, 1997). Наибольший пиковый уровень экспрессии а2А-АР в стволе головного мозга приходится на перинатальный период развития крыс (Юшкова, Дыгало, 1995). Возможно, что именно эти рецепторы в критические сроки онтогенеза могут осуществлять «программирующую» функцию, определяя функцию ЦНС и поведение животных в последующие периоды жизни. Однако исследование функции а2А-АР сдерживалось отсутствием подтип-специфичных лигандов. Реальная возможность выяснения их функции возникла после разработки антисенс технологии, основанной на применении специфичных к мРНК антисмысловых олигодиоксинуклеотидов (антисенсов), способных избирательно снижать экспрессию отдельного гена (Gonzalez-Cabrera et al., 1998). Если рецепторы этого подтипа действительно влияют на формирование ЦНС, то можно ожидать, что изменение их экспрессии в раннем онтогенезе проявится изменениями в дальнейшем развитии животных, поскольку эти рецепторы прямо или косвенно участвуют в регуляции норадреналин-зависимых процессов. Поэтому планируемое в работе изучение функций а2А-АР в регуляции физиологических систем развивающегося организма и формировании его последующих свойств (программирующая функция) в критические сроки онтогенеза путем подавления их экспрессии антисмысловым олигоиуклеотидом является актуальным.

Цель и задачи исследования. Основная цель работы состояла в исследовании регуляторной и «программирующей» функции а2А-АР головного мозга крыс в раннем онтогенезе. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1) определить эффект воздействия антисмысловым олигоиуклеотидом к мРНК а2А-АР, на экспрессию этих рецепторов и нейрохимические показатели норадренергической системы головного мозга неонатальных крысят;

2) оценить развитие, рефлекторно-моторные характеристики поведения и гипногенную функцию а2А-АР в. осуществлении холодовой анестезии у новорожденных животных после блокады экспрессии а2А-АР головного мозга;

3) изучить отсроченные эффекты подавления экспрессии а2А-АР в неонатальный период на норадренергическую систему и регулируемое этой системой поведение взрослых животных.

Научная новизна работы. Впервые продемонстрирована возможность подавления экспрессии гена а2А-АР на уровне его мРНК и кодируемого им белка в формирующемся головном мозге млекопитающих антисмысловым олигодеоксинуклеотидом, комплементарным к транскрипту гена-мишени.

Установлено, что подавление экспрессии гена а2А-АР приводит к повышению уровня норадреналина в стволовой части мозга неонатальных крысят и снижению плотности бета-адренорецепторов в их коре.

Впервые установлено, что, не оказывая существенного влияния на формирование моторных рефлексов, а2А-АР головного мозга угнетают двигательную активность и повышают склонность новорожденных крысят к гшшогенному состоянию при холодовой анестезии.

Снижение экспрессии а2А-АР в нсонаталыюм мозге изменяет функциональное состояние норадренергической системы в последующие периоды жизни, что проявляется совместным повышением как уровня норадреналина в стволовой части мозга, содержащей клеточные тела норадренергических нейронов, так и плотности а2А-АР в коре головного мозга, содержащей терминапи этих нейронов. Эти нейрохимические эффекты сопровождались изменением поведения полуторамесячных животных: у них наблюдалось ускоренное снижение амплитуды реакции вздрагивания в ответ на повторяющийся акустический стимул.

Положении, выносимые на защиту

1) а 2А-АР влияют на нейрохимию мозга, поведение и гшшогенное состояние неонатальных крысят. Их участие в регуляции перечисленных функций проявляется ростом уровня норадреналина (НА) в стволе, понижением плотности p-адренорецепторов (Р-АР) в коре, повышением двигательной активности и увеличением времени, необходимого для впадения в холодовой наркоз после снижения экспрессии а2А-АР олигодеоксинуклеотидом, комплементарным к их мРНК.

2) Уровень экспрессии а2А-АР в неонатальном мозге имеет программирующее значение для нейрохимических характеристик и поведения животных в последующие периоды жизни. Программирующая функция этих рецепторов проявлялась повышением их экспрессии в коре и уровня НА в стволе мозга 40-дневных крыс, а также быстрым снижением амплитуды рефлекторного вздрагивания при повторных предъявлениях звуковых стимулов после снижения экспрессии а2А-АР в головном мозге в критический период его формирования.

Практическая значимость работы. Полученные данные вносят существенный вклад в понимание нейрохимических и поведенческих изменений, связанных с нарушением экспрессии а2А-АР в раннем онтогенезе. Кроме того, полученные результаты могут быть полезны для разработки новых препаратов для осуществления анестезии, лечения состояний, связанных с психо-эмоциональными нарушениями. Результаты данной работы используются в лекционном курсе «Гормоны в фило- и онтогенезе» и на практических занятиях студентов биологов Новосибирского государственного университета.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены и обсуждены на Международной научной студенческой конференции (Новосибирск, 2000); XVIII Съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова (Казань, 2001); IV Съезде Физиологов Сибири (Новосибирск, 2002); конференции «Эндокринная регуляция физиологических функций в норме и патологии» (Новосибирск, 2002); International symposium Genetic and Developmental Psychoneuroendocrinology (Novosibirsk, 1999); Seventh symposium on catecholamines and ather neurotransmitters in srtess (Slovakia, 1999); International Conferens "RNA as Therapeutic and genomics Target" (Novosibirsk, 2001); The 5-th International congress of Neuroendocrinology (Bristol, 2002).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ, из них 4 статьи -в ведущих российских и зарубежных журналах, 8- тезисы докладов.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Маснавиева, Людмила Борисовна

выводы.

1. Антисмысловой олигонуклеотид к а2А-адренорецептору, введенный в ствол головного мозга 2-4 дневных крысят специфично снижает экспрессию мРНК этого подтипа адренорецепторов. Эффект антисенса проявляется как уменьшением количества молекул мРНК, кодирующей рецепторный белок, так и количества собственно молекул рецептора.

2. Воздействие антисмысловым олигонуклеотидом к мРНК а2А-адренорецептора, введенным в головной мозг 2-4 дневных крысят, приводит к временному замедлению роста животных в период с 5 по 10 дни постнатального развития, но не влияет на их последующие развитие.

3. Показано участие а2А-адренорецепторов в модуляции гипногенного состояния и двигательной активности новорожденных животных. Снижение экспрессии этого подтипа адренорецепторов в головном мозге новорожденных крысят антисенсом привело к увеличению времени, необходимого для впадения в холодовой наркоз и вызвало повышение их двигательной активности.

4. Воздействие на экспрессию а2А-адренорецепторов мозга неонатальных крысят вызывает в нем немедленный и отсроченный эффекты на уровень норадреналина. Введение антисенса к а2А-адренорецептору в область синего пятна продолговатого мозга крысят приводит к повышению уровня норадреналина в стволе головного мозга 5- и 40-дневных крыс.

5. Подавление экспрессии а2А-адренорецепторов в мозге неонатальных крысят индуцирует функциональные преобразования в норадренергической системе в период достижения этой системой зрелости. Об этом свидетельствует происходящее после неонатального воздействия антисенсом в мозге 40-дневных крыс совместное повышение уровня норадреналина и плотности а2-адренорецепторов вопреки известному реципрокному соотношению между рецепторами и нейромедиатором, обусловливаемом механизмом понижающей регуляции.

6. Снижение экспрессии а2А-адренорецепторов в головном мозге в критический период онтогенеза приводит к формированию свойств ЦНС, обеспечивающих ускоренное привыкание полуторамесячных крыс к звуковым стимулам, что проявляется быстрым снижением амплитуды рефлекторного вздрагивания при повторных предъявлениях звуковых стимулов.

7. Установлено, что уровень экспрессии гена а2А-адренорецепторов в неонатальном головном мозге важен как для обеспечения текущих функций организма, так и имеет программирующее значение для его нейрохимических характеристик и поведения в последующие периоды жизни.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Маснавиева, Людмила Борисовна, Новосибирск

1. Бейли Н. Статистические методы в биологию М: Мир, 1963. - 271 стр.

2. Дыгало Н.Н., Калинина Т.С., Носова А.В. Регуляция экспрессии адренергических рецепторов стероидными гормонами. // Физиол. жури. им. И.М.Сеченова.- 1998.-т. 84.- N. 10.-С. 1115-1120.

3. Дыгало H.IL, Калинина Т.С., Шишкина Г.Т. Анализ поведенческих эффектов рецептора нейромедиатора путем антисенс-нокдауна экспрессии его гена. // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2000. - Т. 86. - N. 10.-С. 1115-1120.

4. Дыгало Н.Н., Милова А.А., Шишкина Г.Т. Онтогенез альфа2- и бета-адренорецепторов мозга после воздействия кортекостероном в период внутриутробного развития. // Онтогенез. -1991. Т. 22. -N. 6. - С. 606-611.

5. Дыгало Н.Н., Юшкова А.А., Калинина Т.С., Сурнина Н.Ю., Мельникова Л.Б., Шишкина Г.Т. Онтогенетичские корреляции уровня норадреналина и плотности адренергических рецепторов в головном мозгу крыс. // Онтогенез. -2000.-т. 31.-N. 1.-С. 53-56.

6. Калинина Т.С., Сурнина Н.Ю., Шишкина Г.Т., Дыгало. Применение метода ОТ-ПЦР для анализа экспрессии а2А-адренергических рецепторов в головном мозге крыс. // Молекулярная биология. 1998. - Т. 32. -N. 2. - С. 367.

7. Кичигина В.Ф., Кутырева Е.С., Судницын В.В. Сенсорные реакции нейронов медиальной септальной области при модуляции тета-активности агонистом альфа2-адренорецепторов клоиидином. // Журн. высшей нервн. деят. 2003. - т. 53. - N. 6. - С.754-765.

8. Раевский В.В. Онтогенез медиаторных систем мозга М: Наука, 1991. - С. 3-51.

9. Сергеев П.В., Шимановский Н.Л. Рецепторы М: Медицина, 1987. - С. 112-132.

10. Ю.Шишкина Г.Т., Дыгало Н.Н. Молекулярная физиология адренергическихрецепторов. //Успехи физиологических наук.- 1997. т. 28. - N. 1. - С. 61-69.

11. П.Шишкина Г.Т., Дыгало Н.Н. Подтип-специфические клинически важные эффекты альфа2-адренорецепторов. // Успехи физиологических наук. 2002. -т.ЗЗ.-N. 2.-С. 30-40.

12. Юшкова А.А., Дыгало Н.Н. Изменения числа а- и p-адренорецепторов ствола и коры мозга в онтогенезе. // Физиол. Журн. им. И.М. Сеченова. 1995. - Т. 81. -N.2.-C. 7-11.

13. Abduljawad К.А, Langley R.W., Bradshaw С.М., Szabadi Е. Effect of clonidine and diazepam on coustic startle response and on its inhibition by 'prepulses' in man. // J. Psychopharmacol.- 1997.- Vol. 11. N. 1.- P. 29-34.

14. Adolfo Garsia-Siinz J., Gottfrird-Blackmore A., Vazguez-Prado J., Romero-Avila Ma. T. Protein kinase C-mediated phosphorylation and desensitization of human alb-adrenoceptors. // Eur. J. Pharmacol. 1999. - Vol. 358. - N. 2-3. - P. 263-271.

15. Ahlquist R. A study of the adrenotrophic receptors. // Am. J. Physiol. 1948.- Vol. 153.- P. 586-600.

16. Agmo A., Villalpando A., Picker Z., Fernander H. Lesion of the medial prefrontal cortex and sexual bexaviour in the male rat. // Brain Res. 1995. - Vol. 696. - N. 12. — P. 177-186.

17. Agrawal S., Zhao Q. Antisense theuraputics. // Current Opinion in Chim. Biol. -1998.-Vol. 2.-P. 519-528.

18. Akhtar S., Agrawal S. In vivo studies with antisense oligonucleotides. // TiPS.- 1997.-Vol. 18.-P.12-18.

19. Aston-Jones G., Rajkowski J., Cohen J. Role of locus coeruleus in attention and behavioral flexibility. // Biol. Psychiatry. 1999. - Vol. 46. - N. 9. - P. 1309-1320.

20. Baertschi A.J. Antisense oligonucleotide strategies in physiology. // Moll, and cell, endocrinol. 1994. - Vol. 101. - P. 15-24.

21. Barfield R.J., Wilson C., McDonald P.G. Sexual behaviour: Extreme reduction of postejaculatory refractory period by midbrain lesion in male rats. // Science. 1975. -Vol. 189.-N. 4197.-P. 147-149.

22. Birnbaumer L. Receptor-to-Effector Signaling through G Proteins: Role for Py Dimers as well as a Subunits. // Cell. 1992. - Vol. 71. - P. 1069-1072.

23. Boyd R.E. Alpha2-adrenergic receptor agonists as analgesics. // Curr. Top. Med. Chem. 2001. - Vol.1. - N. 3. - P. 193-197.

24. Bruinink A., Lichtensteiger W. Beta-adrenergic binding sites in fetal rat brain. // J. Neurochem. 1984. - Vol. 43. - N. 2. - P. 578-581.

25. Buerkle H., Yaksh T.L. Pharmacological evidence for different alpha 2-adrenergic receptor sites mediating analgesia and sedation in the rat. // Br. J. Anesth. 1998. -Vol. 81.-N. 2.-P. 208-215.

26. Cantor E.H., Clare M.B., Weiss B. Effect of sympathetic input on ontogeny of beta-adrenergic receptors in rat pineal gland. // Brain. Res. Bull. 1981. - Vol. 7, N. 3. - P. 243-247.

27. Capuano C.A., Leibowitz S.F., Barr G.A. The phrmco-ontogeny of the paraventticular alpha2-noradrenergic receptor sstem mediating norepinephrine-induccd feeding in the rat. // Brain Res. Dev. Brain Res. 1992. - Vol. 68. - N. 1. - P. 67-74.

28. Chomczynski P., Sacchi N. Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate phenol - chloroform exstraction. // Nuc. Acid Res. -1978. - Vol. 11.— P. 1759 - 1771.

29. Clark J.T., Smith E.R., Davidson J.M. Enhancement of sexual motivation in male rats by yohimbine. // Science. 1984. - Vol. 225. - P. 847-849.

30. Clark J.T. Smith E,R., Davidson J.M. Testosterone is not required for the enhancement of sexual motivation by yohimbine. // Physiology and behavior. 1985. -Vol. 35.-P. 517-522.

31. Clark Т.К. Sexual inhibition is reduced by rostral midbrain lesion in the male rat. // Science.- 1975.-Vol. 190.-N.4210.-P. 169-171.

32. Clark Т.К. Male rat sexual behavior compared after 6-OHDA and electrolytic lesion in the dorsal NA bundle region of the midbrain. // Brain Res. 1980. - Vol. 202. - N. 2.-P. 429-443.

33. Claro F., Segovia S., Guilamon A., Del Abril A. Lesions in the medial posterior region of the BST impair sexual behaviour in sexually experienced and inexperienced male rats. // Brain Res Bull. 1995. - Vol. 36. - N. 1. - P. 1-10.

34. Collucci W.S. The effects of norepinephrine on myocardial biology: implication for the therapy of heart failure. // Clin. Cardiol. 1998. - Vol. 21. - N. 12. - P. 120-124.

35. Culmsee C., Semkova I., Kriegisten J. NGF mediates the neuroprotective effect of beta2-adrenoceptor agonist clenbuterol in vitro and in vivo: evidence from an NGF-antisense study. //Neurochem Int. 1999. - Vol. 35. - N. 1. - P. 47-57.

36. Danneman P.J., Mandrell T.D. Evalustion of five agents/methods fir anesthesia rats. // Lab. Anim. Sci. 1997. - Vol. 47. - N. 4. - P. 386-395.

37. Dausse J.P., Le Quan-Bui K.H., Meyer P. Alpha 1- and Alpha 2- adrenoceptors in rat cerebral cortex: effect of neonatal treatment with 6-hydroxydopamine. // Eur. J. Pharmacol. 1982. -Vol. 78. -N. 1. - P. 15-20.

38. Davis M., Cedarbaum J.M., Aghajanian G.K., Gendelman D.S. Effects of clonidine on habituation and sensitization of acoustic startle in normal, decerebrate nd locus coeruleus lesioned rats. // J. Psychopharmacol. 1977. - Vol. 51. - N. 3. - P. 243-253.

39. Devoto P., Flore G., Pira L., Longu G., Gessa G.L. Alpha2-adrenoceptor mediated co-realese of dopamine and noradrenaline from noradrenergic neurons in the cerebral cortex. // J. Neurochem. 2004. - Vol. 88. - N. 4. -P. 1003-1009.

40. Duflo F., Li X., Bantel C., Pancaro C., Vincler M., Eisenach J.C. Peripheral nerve injury alters the alpha2 adrenoceptor subtype activated by clonidine for analgesia. // Anesthesiology. 2002. - Vol. 97. - N. 3. - P. 636-641.

41. Duman R.S., Saito N., Tallman J.F. Development of beta-adrenergic receptor and G-protein messenger RNA in rat brain. //Mol. Brain Res. 1989. - Vol. 5. - P. 289-296.

42. East J.M., Dutton Development of beta-adrenergic receptors in normal and mutant mouse cerebellum. // Dev. Neurosci. 1982. - Vol. 5. - N. 2-3. - P. 117-124.

43. Eisuke N., Yasuhiro W. The regulation of mitogenesise and apoptosis in response to the persistent stimulation of a 1-adrenoceptors: A possible role of 15-lipoxigenase. // Brit. J. Pharmacol. -1997. Vol. 122. - N. 7. - P. 1516-1522.

44. Erdtsieck-Ernste B.H., Feenstra M.G., Boer G.J. Pre- and postnatal developmental changes of adreneceptor subtypes in rat brain. // J. Neurochem. 1991. - Vol. 57. - N. 3.-P. 897-903.

45. Ferguson S.G, Barak L.S., Zhang J., Caron M.G. G-protein-coupled receptor regulation: role of G-protein-coupled receptor Kinases and arrestins. // Canad. J. Physiol. Pharmacol. 1996.-Vol. 74.-P. 1095-1110.

46. File S.E. Diasepam and caffeine administration during the first week of life: changes in neonatal and adolescent behavior. // Neurotoxicol. Teratol. 1987. - Vol. 9. - N. 1.- P. 9-16.

47. Flugge G., Fuchs E., Kretz R. Postnatal development of 3H-rauwolsine binding sites in the dorsal lateral geniculate nucleus and the striate cortex of the tree shrew (Tupaia belangeri). // Anat. Embriol. (Berl). 1993. - Vol. 187. - N. 1. - P. 99-106.

48. Gallagher M., Burwell R.D. Relationship of age-related decline across several behavioral domains. // Neurobiol. Aging. 1989. - Vol. 10. - N. 6. - P. 691-708.

49. Galeotti N, Ghelardini C, Bartolini A. The role of potassium channels in antihistamine analgesia.//Neuropharmacology. 1999.-Vol. 38.-N. 12.-P. 1893-1901.

50. Garcia-Siinz, Adolfo J., Gottfried-Blackmore A., Vazguez-Prado J., Romero-Avila M.T. Protein kinase С mediated phosphorylation and desensitizaion of human alb-adrenoceptors. // Eur. J. Pharmacol. 1999. - Vol. 385. - N. 2-3. - P. 263-271.

51. Gewirtz AM, Sokol DL, Ratajczak MZ. Nucleic acid therapeutics: state of the art and future prospects. // Blood. 1998. - Vol. 92. -N. 3. - P. 712-736.

52. Goffinet A.M., Hemmendinger L.M., Caviness Ys.Jr. Autoradiographic study of beta 1-adrenergic receptor development in the mouse forebrain. // Brain Res. 1986. -Vol. 389.-N. 1-2.-P. 187-191.

53. Graham R.M., Neubig R., Lynch K.R. a2-Adrenoceptors take central stage at nashvill meeting. // TiPS. 1996. - Vol. 17. - P. 90-94.

54. Guthrie K.M., Leon M. Induction of tyrosine hydrohylase expretion in rat forebrain neurons.//Brain Res. 1989. -Vol.497. -P. 117-131.

55. Guyer C.A, Horstman D.A., Wilson A.L., Clark J.D., Cragoe E.J., Limbird L.E. Cloning, Sequencing, and Expression of the Gene Encoding the Porcine a2-Adrenergic Receptor. // The J. of Biol. Chem. 1990. - Vol.256. - N. 28. - P. 1730717317.

56. Harden Т.К., Wolte B.B., Sporn J.R., Perkins J.P., Molinoff P.B. Ontogeny of beta-adrenergic receptors in rat cortex. // Brain Res. 1977. - Vol. 125. - N. 1. - P. 99-108.

57. Hayashi Y., Guo T.Z., Maze M. Desensitisation to the behavioral effects of alpha2-adrenergic agonists in rats. //Anesthesiology. 1995. - Vol. 82. - N.4. - P. 954-962.

58. Hayashi Y., Guo T.Z., Maze M. Hypnotic and analgesic effects of the alpha2-adrenergic agonist dexmedetomidine in morphine-tolerant rats. // Anesth. Analg. -1996. Vol. - N. 3. - P. 606-610.

59. Heck R.A., Bylund D.B. Mechanism of down-regulation of alpha2-adrenergic receptor subtypes. // The J. of Pharmacol, and Experim. Therap. 1997. -Vol. 282. -N.3.-P. 1219-1227.

60. Helene C. Rational desing of sequence-specific oncogene inhibitors based on antisense and antigene oligonucleotides. // Eur. J. Cancer. 1991. - Vol. 27. - N. 11.-P. 1466-1471.

61. Hensen S., Ross S.B. Role of descending monoaminergic neurons in the control of sexual behavior: effects of intrathecal infusion of 6-hydroxydopamine and 5,7-dihydroxytryptamine. // Brain Res. 1983. - Vol. 268. - N. 2. - P. 285-290.

62. Hepler J.R., Gilman G proteins A.G. // TiBS. 1992. - Vol. 17. - P. 383-387.

63. Herkenham M. Mismatches between neurotransmitter and receptor localizations in brain: observations and implications. //Neurosci. 1987. - Vol. 23. -N. 1. - P. 11-12.

64. Inoue M., McHugh H.M., Pappius M. The effect of alpha-adrenergic receptor blockers prazosin and yohimbine on cerebral metabolism and biogenic amine contentof traumatized brain. 11 J. Cereb. Blood Flow Metab. 1991. - Vol. 11. - N. 2. - P. 242-252.

65. Iwai-Kanai E., Hasegawa K., Araki M., Kakita Т., Morimoto Т., Sasayama S. Alpha-and beta- adrenergic pathways differentially regulate cell type-specific apoptosis in rat cardiac myocytes. // Circulation. 1999. - Vol. 100. - N. 3. - P. 305-311.

66. Jacobowitz D.M., Rihardson J.S. Method for the rapid determination of norepinephrine, dopamine and serotonin in the same brain region. // Pharmacol. Biochem. Behav. 1978. - Vol. 8. - N. 4. - P.515-519.

67. Jia W.W., Liu , Lepore F., Ptito M., Cynader M. Development and regulation of alpha adrenoceptors in kitten visual cortex. // Neuroscience. 1994. - Vol. 63. - N. 1. -P. 179-190.

68. Kable J.W., Murrin L.C., Bylund D.B. In vivo gene modification elucidates subtype-specific functions of alpha(2)-adrenergic receptors. // J Pharmacol Exp Ther. 2000. -Vol. 293.-N. 1. - P. 1-7.

69. Kandimalla E.R., Manning A., Lathan C., Byrn R.A., Agrawal Desing S., biochemical, biophysical and biological propeties of cooperative antisense oligonucleotides. // Nucleic Acids Res. 1995. - Vol. 23. - N.l 7. - P. 3578-3584.

70. Kinksuiashvili E., Gavras I., Johns C., Gavras II.Effects of antisense oligodeoxynucleotide targeting of the alpha(2B)-adrenergic receptor messenger RNA in the central nervous system. // Hypertention. 2001. - Vol. 38. - N. 5. - P. 10751080.

71. Kobilka B.K., Matsui H., Kobilka T.S. Cloning, sequencing and expression of the gene coding for the human platelet alpha2-adrenergic receptor. // Science. 1987. -Vol. 238.-P. 650-656.

72. Kumari V., Cotter P., Corr P.J., Gray J.A., Checkley S.A. Effect of clonidine on the humn acoustic startle reflex. // J. Psychopharmacol. 1996. - Vol. 123. - P. 353-360.

73. K\vong L.L., Davidson J.M. Smith E.R., Peroutka S.J. Differential interaction of "prosexual" drugs with 5-hydroxytryptamine 1A and alpha 2-adrenergic receptors. // Behav. Neurosci. 1986. - Vol. 100. - N. 5. - P. 664-668.

74. Lacey R.J., Chan S.L., Cable H.C., James D.F., Perrett C.W., Scarpello J.H., Morgan N.G. Expression of alpha2- and beta-adrenoceptor subtypes in human islets of Langerhans. // J. Endocrinol.- 1996.- Vol. 148.- N. 3.- P. 531-543.

75. Lahdesmaki J., Sallinen J., MacDonald E., Scheinin M. Alpha2A-adrenoceptors are important modulators of the effects of D-amphetamine on startle reactivity and brain monoamines. //Neuropsychopharmacology. -2004. Vol. 29. - N.7. - P. 1282-1293.

76. Laura V, Rossi B, Paladino R, Gori A, Lugani P, Sanguineti G, Di Ciolo L, Falchero E. Carcinoid of Vater's papilla. The authors' own experience. // Minerva Chir. 1997. -Vol. 52.-N. 10.-P. 1215-1222.

77. Leaton R.N., Cassella J.V. The effects of clonidine, prazosin, and propranolol on short-term and long-term habituation of the acoustic startle response in rats. // Pharmacol. Biochem. Behav. 1984. - Vol. 20. - N. 6. - P. 935-943.

78. Li X., Zhao Z., Pan H.L., Eisenach J.C., Paqueron X. Norepinephrine release from synaptosomes: auto-alpha2-adrenergic receptor modulation. // Anesthesiology. -2000. Vol. 93. - N. 1. - P. 164-172.

79. Lidow M.S., Rakic P. Unique profiles of the alphal-, alpha2- and beta-adrenergic receptors in the developing cortical plate and transisent embrionic zones of the rhesus monkey. // J. Neurosci. 1994. - Vol. 14. - N. 7. - P. 4064-4078.

80. Liedtke C.M., Cole Т. Antisense oligodeoxynucleotide to PKC-delta blocks alpha 1 adrenergic activation of Na-K-2C1 cotransport. // Am. J. Physiol. 1997. - Vol. 273. -N. 5. -Pt. l.-P. 1632-1640.

81. Limbird L.E., Sweatt J.D. a2-adrenergic receptorts: apperent nterection with Multiple effector Sstem. // Receptors. 1985. - Vol. 2. - P. 281-305.

82. Lindquist J.M., Renhmark S. Ambient temperature regulation of apoptosis in brown adipose tissue. Erkl/2 promotes norepinephrine-dependent cell survival. // J. Biol. Chem. 1998. - Vol. 273. - N. 46. - P. 30147-30156.

83. Lorton D., Bartolome J., Slotkin T.A., Davis J.N. Development of brain beta-adrenergic receptors after neonatal 6-hydroxydophamine treatment. // Brain Res. Bull. 1988.-N. l.-P. 591-600.

84. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L. et al. Protein measurement with the Folin phenol reagent. // J. Biol. Chem. 1951. - Vol. 193. - P. 265-275.

85. Lu L., Ordway GA. Reduced expression of alpha2C-adrenoceptors in rat striatum following antisense oligodeoxynucleotide infusion. // Brain Res. Mol. Brain Res. -1997. Vol. 47. - N. 1-2. - P. 267-274.

86. Lu L., Ordway GA.Alpha2C- adrenoceptors mediated of forscolin-stimulated cAMP production in rat striatum. // Brain Res. Mol. Brain Res. 1997, - Vol. 52. - N. 2. - P. 228-234.

87. Machida C.A., Bunzow J.R., Searles R.P., Tol H.V., Tester В., Neve K.A., Teal P., Nipper V., Civelli O. Molecular Cloning and Expression of Rat pi-Adrenergic Receptor Gene. // The J. of Biol. Chem. 1990. - Vol. 256. - N. 22. - P. 12960-12965.

88. Maestroni G.J. Modulation of skin norepinephrine turnover by allergen sensitisation: impact on contact hypersensitivity and T helper priming. // J. Invest. Dermatol. 2004. - Vol. 122.-N. l.-P. 119-124.

89. Mao L., Abdel-Rahman A.A. Synergistic behavioral interaction between ethanol and clonidine in rats: role of alpha-2 adrenoceptors. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1996. -Vol.279. - N. 2. - P. 443-449.

90. Masserano J.M., Gong L., Kulaga H., Baker I., Wyatt R.J. Dopamine induces apoptotic cell line derived from the central nervous system. // Mol. Pharmacol. -1996.-Vol. 50.-N. 5.-P. 1309-1315.

91. Matteucci M.D., Wagner R.W. In pursuit of antisense. // Nature.- 1996. Vol. 384. -N. 6604. - P. 20-22.

92. McCune S.K., Hill J.M. Ontogenic expression of two alphal -adrenergic subtypes in the rat brain. // J. Mol. Neurosci. 1995. - Vol. 6. - N. 1. - P. 51-62.

93. UO.McCune S.K., Voigt M.M. Regional brain distribution and tissue ontogenetic expression of a family of alpha-adrenergic receptor mRNAs in the rat. // J. Mol. Neurosci. 1991. - Vol. 3. - N. 1. - P. 29-37.

94. Middleton H.C. Behavioural pharmacolog of a2-adrenoceptors. // J.of Psychopharmacol. 1996. - Vol. 10. - N. 3. - P. 19-25.

95. MilIigan G., Svoboda S., Brown C.M. Why are there so many adrenoceptor subtypes? // Biochem. Pharmacol. 1994. Vol. 48. - N 6. - P. 1059-1071.

96. Minneman K.P. Beta-adrenergic Receptor Subtypes. // Atlas of Science : Pharmacology. 1988. - P. 334-338.

97. Mitchell V.A., Christie M.J., Vaughan C.W. Developmental changes in the alpha-adrenergic responses of rat periaqueductal gray neurons. // Neuroreport. 2003. -Vol. 14.-N. 12.-P. 1637-1639.

98. Morien A., Cassone V.M., Wellman P.J. Diurnal changes in paraventricular hypothalamic alpha 1 and alpha2-adrenoceptors and food intake in rats. // Pharmacol Biochem Behav. 1999. - Vol. 63. - N. 1. - P. 33-38.

99. Morgan C.A., Southwick S.M., Grillon C., Davis M., Krystal J.H., Charney D.S. Yohimbine: facilitated startle reflex in humans. // Psychopharmacol.- 1993. Vol. 110.-P. 342-346.

100. Muller A.R., Gerstberger R. Ontogenesis of the alpha2-adrenergic receptor system of the Pekin duck. // Cell Tissue Res. 1997. - Vol. 287. - N. 1. -P. 61-68.

101. Nachkebia N., Chkhartishili E., Oniani Т., Bull G. Influenca of p-adrenoceptors inactivation on the general behabiour and sleep-wakefulness cycle of cats. // Acad. Sci. 2000. - Vol. 162. - N. 2. - P.344-347.

102. Nakamura S., Sakaguchi Т., Kimura F., Aoki F. The role of alpha 1-adrenoreceptor-mediated collateral excitation in the regulation of the electrical activity of locus coeruleus neurons. //Neurocience. 1988. - Vol. 27. - N. 3. - P. 921-927.

103. Naqui S.Z., Harris B.S., Thomaidou D., Parnavelas J.G. The noradrenergic system influence the fate of Cajal-Retzius cell in the developing cerebral cortex. // Brain Res. Dev. Brain Res. 1999. - Vol. 113. - N. 1-2. - P. 75-82.

104. Nicholas A.P., Pieribone V., Hokfelt T. Distribution of mRNAs for alpha-2 adrenergic receptor subtypes in rat brain: an in situ hybridisation study. Hi. Сотр. Neurol. 1993.-Vol. 328.-N. 4.-P. 575-1.

105. Nijkamp F.P., Engels F. Henricks,. Paul A.J, VanOosterhout Antoon J.M. Mechanisms of Beta-adrenergic receptor Regulation in Lungs and Its implications for Physiological responses. // Physiol, reviews. 1992. - Vol. 72. - N. 2. - P. 323-367.

106. Nishiyama Т., Hanaoka K. The synergistic interaction between midazolam and clonidine in spinally-mediated analgesia in two different pain of rats. // Anasth. Analg. 2002. - Vol. 94. - N. 2. - P. 254.

107. Nudel U., Zakut R., Shani M., Neuman S., Levy Z., Yaffe D. The nucleotide sequence of the rat cytoplasmatic P-actin gene. // Nucl. Acid Res. 1983. - Vol. 11.— P. 1759-1771.

108. Nunes ML, da Costa JC, Severini MH. Early onset bilateral calcifications and epilepsy.//PediatrNeurol.- 1995.-Vol. 13. N. l.-P. 80-82.

109. Parades R.G., Highland L., Karam P. Socio-sexual behavior in male rats after lesions of the medial preoptic area: evidence for reduced sexual motivation. // Brain Res. -1993. Vol. 618. - N. 2. - P. 271-276.

110. Parades R.G, Bna A.L., Bermuder-Rattoni F. Hypothalamic but not cortical grafts induce recovery of sexual behavior and connectivity in medial preoptic area -lesioned rats. // Brain Res. 1993. - Vol. 620. - N. 2. - P. 351-355.

111. Paster G.W., Standifer K.M. Mappin of opioid receptors using antisense oligodeoxynucleotides: correlating thier molecular biology and pharmacology. // TiPS. -1995. Vol. 16. - P. 344-350.

112. Pittman R.N., Minneman K.P., Molinoff P.B. Ontogeny of betal- and beta2-adrenergic receptors in rat cerebellum and cerebral cortex. // Brain Res. 1980. - Vol. 188.-N. 2.-P. 357-368.

113. Porsio U.D., Zuddas A., Cosenza-Mutphy D.B. Earlyappearence of tyrosine hydroxylase immunoreaetive cells in the mesencephalon of mouse embryos. // Int. J. Dev. Neurosci. 1990. - Vol. 8. - N. 5. - P. 523-532.

114. Rabin B.C., Guo T.Z., Gregg K., Maze M. Role of serotonergic neurotransmission in the hypnotic response to dexmedetomidine, an alpha2-adrenoceptor agonist. // Eur. J. Pharmacol. 1996. - Vol. 306. - N. 1-3. - P. 51-59.

115. Raffa R.B., Connelly C.D., Chambers J.R., Stone D.J. Alpha-subunit G-protein antisense oligodeoxynucleotide effects on supraspinal (i.c.v.) alpha2-adrenoceptor antinociception in mice.//Life Sci. 1996.- Vol.58. - N. 5.- P. 77-80.

116. MO.Ramesh V., Kumar V.M. The role of alpa-2 receptors in the medial preoptic area in the regulation of sleep-wake fulness and body temperature. // Neuroscience. 1998. -Vol. 85. - N. 3. - P. 807-817.

117. Hl.Rampin O. Pharmacology of alpha-adrenoceptors in male sexual function // Eur. Urol.- 1999.-Vol. 36.-N. l.-P. 103-106.

118. Richman J.G.,. Regan J.W Alpha-2 adrenergic receptors increase cell migration and decrease F-actin labeling in rat aortic smooth muscle cell. // Am. J. Physiol. -1998. -Vol. 274. N. 3. - P. 654-662.

119. Robbins T.W. Arousal system and attentional processes. // Biol. Psychol. 1997. -Vol. 45.-N. 1-3.-P. 57-71.

120. Robbins T.W., Granon S., Muir J.L., Durantou F., Harrison A., Everitt B.J. Neural systems underlying arousal and attention. Implications for drug abuse. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1998. - Vol. 846. - P. 222-237.

121. Robinson E.S., Nutt D.J., Jackson H.C., Hudson A.L. Antisense oligonucleotides in psychopharmacology and behaviour: promises and pitfalls. // J. Psyphopharmacol. -1997.-Vol. 11.-N. 3. -P. 259-269.

122. Robinson E.S., Nutt D.J., Hall L., Jackson H.C., Hudson A.L. Autoradiographical and behavioral effects of a chronic infusion of antisense to alpha(2D)-adrenoceptors in the rat. // Brit. J. Pharmacol. 1999. - Vol. 128. - N. 3. - P. 515-522.

123. Robinson ES, Hudson AL. In vitro and in vivo effects of antisense on alpha 2-adrenoceptor expression. // Methods Enzymol. 2000. - Vol. 314. P. 61-76.

124. Robinson E.S., Nutt D.J., Jackson H.C., Hudson A.L. Behavioral and physiological effects induced by an infusion of antisense to alpha(2D)-adrenoceptors in the rat. // Br. J. Pharmacol. 2000. - Vol. 130.-P. 153-159.

125. Rodrigues M., Castro R., Hernandez G., Mas M. Different roles of catecholaminergic and serotoninergic neurons of the medial forebrain bundle on male rat sexual behavior. // Physiol. Behav. 1984. - Vol. 33. - N. 1. -P. 5-11.

126. Roth CM, Yarmush ML. Nucleic acid biotechnology. // Annu Rev Biomed Eng. -1999.-Vol. 1.Р. 265-297.

127. Rowe S.J., Messenger N.J., Warner A.E.The role of noradrenaline in the differentiation of amphibian embrionic neurons. // Development. 1993. - Vol. 119. -N.4.-P. 1343-1357.

128. Sallinen J., Haapalinna A., Viitamaa Т., Kobilka B.K., Scheinin M. Adrenergic a2C receptors modulate the acoustic startle reflex, prepulse inhibition, and aggtetion in mice. //The J. ofNeurosc. - 1998. - Vol. 18. - N. 8. - P. 3035-3042.

129. Sara S.J., Dyon-Laurent C., Herve A. Novelt seeking behavior in the rat is dependent upon the integrity of the noradrenergic system. // Braine Res. Cogn. Brain Res. -1995.-Vol.2.-N.3.-P. 181-187.

130. Schreiber S., Backer M.M., Pick C.G. The antinociceptive effect of venlafaxine in mice through opioid and adrenergic mechanisms. // Neurosci. Lrtt. 1999. - Vol. 273.-N.2.-P. 85-88.

131. Sibley D.R. New insights into dopaminergic receptor function using antisense and genetically altered animals. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1999. -Vol. 39. - P. 313-341.

132. Sigal I.S., Dixon R.A.F., Strader K.D. Molecular biology of adrenergic receptors. // Atlas of Science : Pharmacology. 1988. - P. 387-391.

133. Sirvio J., Mazurkiewicz M., Haapalinna A., Riekkinen P.Jr., Riekkinen Pj.Sr The effects of selective alpha2-adrenergic agents on the performance of rat in a 5-choice serial reaction time task. // Brain. Res. Bull. 1994. - Vol. 37. - N. 1. - P. 109.

134. SkIair-Tavron L., Nestler E.J., Segal M. Locus coeruleus (LC) target interection and cAMP in control of LC development. // Brain Res Bull. - 1994. - Vol. 35. - N. 5-6.-P. 397-402.

135. Smith D.A., Gallager D.W. Electrophysiological and biochemical characterization of the development of alpha 1-adrenergic and 5-HT1 receptors associated with dorsal raphe neurons. // Brain Res. Dev. Brain Res. 1989. - Vol. 46. - N. 2. - P. 173-186.

136. Smythe J.W., Pappas B.A. Noradrenergic and serotonergic mediation of the locomotor and antinociceptive effects of clonidine in infant and adalt rats. // Pharmacol, biochem. and behav. 1989. - Vol. 34. - P. 413-418.

137. Starke K., Docherty J. Alphal- and a!pha2-adrenoceptors pharmacology and clinical implication. // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1981. -Vol. 3. - P. 14-23.

138. Stein C.A., Subasinghe C., Shinozuka K., Cohen J.S. Physicochemical propetis of phosphorothioate oligodeoxynucleotides. // Nucleic Acids Res. 1988. - Vol. 16. - N. 8.-P. 3209-3221.

139. Stein CA. The experimental use of antisense oligonucleotides: a guide for the perplexed. // J Clin Invest. 2001. - Vol. 108. - N. 5. - P. 641-644.

140. Stone E.A., McEwen B.S., Herrera A.S., Carr K.D. Regulation of alpha and beta components of noradrenergic cyclic AMP response in cortical slices. // Eur. J. Pharmacol. 1987. - Vol. 141. - N. 3. - P. 347-356.

141. Strader C.D., Fong T.M., Tota M.R., Underwood D. Strucrure and function of G-protein-coupled receptors. // Annu.Rev.Biochem. 1994. - Vol. 63. - P. 101-132.

142. Subhash M.N. Nagaraja M.R. Sharada S., Vinod K.Y. Cortical alpha-adrenoceptor downrcgulation by tricyclic antidepressants in the rat brain. // Neurochem. Int 2003.- Vol. 43.-N. 7.-P. 603-609.

143. Szklarczyk A., Kaczmarck L. Antisense oligodeoxyribonucleotides: stability and distribution after intracerebral injection into rat brain. // J. Neurosci. Methods. 1995.- Vol. 60.-N. 1-2.-P. 181-187.

144. Talley E.M., Rosin D.L., Lee P.G., Lynch K.R. Distribution of alpha2A-adrenergic receptor-like immunoreactivity in the rat central nervous system. // J. Сотр. Neurol. -1996. Vol. 372. - N. l.-P. 111-134.

145. Tanii H., Hayashi M., Hashimoto K. Effects of neurotropic agents with a selectivity for alpha-adrenoaeptors on nitrile-induced dyskinetic syndrome in mice. // Pharmacol. Biochem. Behav. 1990. - Vol. 36. - N. 2. - P. 317-320.

146. Tavares A., Handy D.E., Bogdanova N.N., Rosene D.L., Gavras H. Localization of alpha2A- and alpha2A-adrenergic receptor subtypes in brain. // Hypertention. 1996.- Vol. 27. N. 3. - Pt. 1. - P. 449-455.

147. Thiel R., Chahoud I. Postnatal development and behaviour of Wistar rats after prenatal touene exposure. //Arch. Toxicol. 1997. - Vol. 71. - N. 4. - P. 258-265.

148. Trendelenburg A.U., Phillipp M., Meyer A., Klebroff W., Hein 1., Starke K. All three alpha2-adrenoceptor types serve as autoreceptors in postganglionic sympathetic neurons. И Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 2003. - Vol. 368. - N. 6 - P. 504-512.

149. Uchida-Oka N., Sugimoto M. Norepinefhrine induces apoptosis in skin melanophores by attenuating cAMP-PKA signals via a2-adrenoceptors in medaka, Oryzias Latipes.//Pigment Cell Res. -2001.- Vol. 14. Is. 5.-P. 356.

150. U'Prichard DC, Reisine TD, Mason ST, Fibiger HC, Yamamura HI. Modulation of rat brain alpha- and beta-adrenergic receptor populations by lesion of the dorsal noradrenergic bundle. // Brain Res. 1980. - Vol. 187. - N. 1. - P. 143-154.

151. Van Gaalen M., Kawahara Y., Westerink B.H. The locus coeruleus noradrenergic system in rat brain studied by dual-prob microdialysis. // Brain Res. 1997. - Vol. 736.-N. l.-P. 56-62.

152. Wahlestedt С. Antisense oligonucleotide strategies in neuropharmacology. // TiPS. -1994.-Vol. 15.-P. 42-46.

153. Wagner R.W. Gene inhibition using antisense oligodeoxynucleotides. // Nature. -1994.-N. 372.-P. 333-335.

154. Wanaka A., Kiyama H., Murakami Т., Matsumoto M., Kamada Т., Malbon C.C., Tohyama M. Immunocytochemical localization of p-adrenergic receptors in the rat brain. // Brain Res. 1989. - Vol. 485. - P. 125-140.

155. Wang F., Lidow M.S. Alpha 2A-adrenergic receptors are expressed by diverse cell types in the fetal primate cerebral wall. // J. Сотр. Neurol. 1997. - Vol. 378. - N. 4. -P. 493-507.

156. Wang M., Zhahg Z.J., Bains R., Mokha S.S. Effect of antisense knock-down of alpha(2a)- and alpha(2c)-adrenoceptors on the antinociceptive action of clonidine nociception in the rat. // Pain. 2002. - Vol. 98. - N. 1-2. - P. 27-35.

157. Wang R.X., Limbird L.E. Distribution of mRNA encoding three alpha2-adrenergic receptor subtypes in the developing mouse embryo suggests a role for the alpha2A subtype in apoptosis. // Mol. Pharmacol. 1997. - Vol. 52. - N. 2. - P. 1071-1080.

158. Watanaba Y., Itoh Т., Yoshida H. Developmental change of beta-adrenergic receptors in rat brain. // Lpn. J. Pharmacol. 1980. - Vol. 30. - N. 3. - P. 287-291.

159. Weiner N., Molinoff P.B. Catecholamines Basic Neurochemistry: Molecular, Cellular and Medical Aspects. // 4-th Fd. 1989. - P. 233-251.

160. Wendlandt S., Crow T.J., Stirling R.V. The involment of the noradrenergic system arising from the locus coeruleus in the postnatal development of the cortex in rat brain.//BrainRes. 1977,-Vol. 125.-N. l.-P. 1-9.

161. Winzer-Serchan U.H., Leslie F.M. Alpha2B adrenoceptor mRNA expression during rat brain development. // Brain Res. Dev. Brain Res. 1997. - Vol. 100. - N. l.-P. 90-100.

162. Winzer-Serhan U.H., Raymon H.K., Broide R.S., Chen Y., Leslie F.M. Expression of alpha2 adrenoceptors during rat brain development I. Alpha2A messenger RNA expression. //Neuroscience. -1997. - Vol. 76. - N. 1. - P. 241-260.

163. Woo C.C., Leon M. Distribution and development of beta-adrenergic receptors in the rat olfactory bulb. // J.Comp. Neurol. 1995. - Vol. 352. - N. 1. - P. 1-10.

164. Yoshikawa M., Oka T. Specific regulation of gene expression in brain by antisense oligodeoxynucleotides. // Nippon Yakurigaku Zasshi.- 1997. Vol. 109. - N. 4. - P. 187-191.

165. Zamecnik P.S., Stephenson M.L. Inhibition of Rouse sarcoma virus replication and cell transformation by a specific oligodeoxy nucleotide. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1978.-N. 75.-P. 280-284.

166. Zimenez A.E., Meyer D.C., Murphy P.J. Developmental patterns of tyrozine hydroxylase activity in discrete central nervous system regions and serum LH and rolactin in the prepubertal rat. // Neuroendocrinol. 1984. - Vol. 38. - P. 134-138.4