Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Анализ ассоциации полиморфизма генов "сосудистой системы" и "эндотелиальной дисфункции" с развитием преэклампсии
ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология
Автореферат диссертации по теме "Анализ ассоциации полиморфизма генов "сосудистой системы" и "эндотелиальной дисфункции" с развитием преэклампсии"
□□31653 13
На правах рукописи
ДЕМИН Григорий Сергеевич
Ш
АНАЛИЗ АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ «СОСУДИСТОЙ СИСТЕМЫ» И «ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ» С РАЗВИТИЕМ ПРЕЭКЛАМПСИИ
03 00 03 - молекулярная биология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Í1 3 МАР 2008
Санкт-Петербург - 2008
003165313
Работа выполнена в Лаборатории пренатальной диагностики наследственных и врожденных болезней человека ГУ НИИ акушерства и гинекологии им Д О Отта РАМН
Научный руководитель
доктор биологических наук
Иващенко Татьяна Эдуардовна
ГУ НИИ акушерства и гинекологии им Д О Отта РАМН, Санкт-Петербург
Спнвак Ирина Михайловна
Институт цитологии РАН, Санкт-Петербур1
доктор биологических наук, профессор Носиков Валерий Вячеславович
Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов, Москва
Официальные оппоненты
кандидат биологических наук, доцент
Ведущая орюнизация
ГУ НИИ экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург
Защита состоится марта 2008 г в ^ часов на заседании Диссертационного совета
Д 002 230 01 при Институте цитологии РАН по адресу 194064, Санкт-Петербург, Тихорецкий пр ,д 4
Электронный адрес се!1Ью@та11 су1зрЬ кв! ги
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Инстшута цитологии РАН
Автореферат разослан «/% февраля 2008
г
Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук
Каминская Е В
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуа тыюсть проблемы Преэклампсия или гестоз занимает лидирующие позиции в патоло! ии беременности и является одной из наиболее актуальных проблем современного акушерства В настоящее время ее частота колеблется от 7% до 22% (Кулаков, Мурашко, 1998 Pipkin, 1999, Клинические , 2005) В структуре причин материнской смертности в Российской Федерации преэклампсия, стабильно занимая 3-е место, составляет от 11,8% до 14 8% и остается основной причиной заболеваемости и смертности новорожденных (Савельева и др , 1992, Зипьбер и др , 1997, Сидорова, Калюжина, 1998) IIo данным ВОЗ, у каждого пятого ребенка родившегося от матери с преэклампсией, в той или иной степени нарушено физическое и психоэмоциональное развитие, значительно выше уровень заболеваемости в младенческом и раннем детском возрасте (Bussolmo et al 1980, Duley et al, 2004)
Причины развития преэклампсии зависят от многих факторов и до конца не изучены Несмотря на многочисленные исследования, во всем мире до сих пор нет единого мнения о причинах возникновения преэклампсии Несомненно, что заболевание непосредственно связано с беременностью, так как прекращение последней всегда способствует выздоровлению (Кчинические , 2005) Существует несколько взаимодополняющих гипотез развития преэклампсии, к ним относятся неврО!енная, почечная, плацентарная, иммунологическая и генетическая теории (Абрамченко и др, 1995, Зильбер и др, 1997, Серов и др, 1997, Клинические , 2005, Chappell, Morgan, 2006) Наиболее обоснованной считается роль дисфункции эндотсшальных клеток в генезе преэклампсии (Клинические , 2005, Chappell, Morgan, 2006)
Согласно данным исследований последних лет, генетическая компонента заболевания может составлять до 50% всех факторов, влияющих на развитие преэклампсии (Cnatongius et al, 2004)
Поиск молекулярных маркеров, ассоциированных с развитием преэклампсии - важнейшая задача для понимания патогенеза, лечения и профилактики заболевания Однако необходимо отметить, что результаты, полученные разными исследователями при изучении генетической предрасположенности к преэклампсии, зачастую противоречивы Кроме того пока еще не разработан системный подход при исследовании данной патологии Принимая во внимание приоритетность эндотслиальнои дисфункции в генезе преэклампсии, значение артериального давления как основного диагностического признака заболевания и данные предыдущих исследований по генетике данной патологии мы предпотожили, что именно
существование полиморфизма генов «сосудистой системы» и «эндотелиалыюй дисфункции» во многом сможет объяснить очевидные индивидуальные различия в отношении происхождения и течения заболевания
Таким образом, выявление взаимосвязи между дисфункцией эндотелия, полиморфизмом генов, ответственных за его функционирование, у больных с преэклампсии поможет приблизить к пониманию роли генетического полиморфизма в патогенезе заболевания
Работа была поддержана грантами Администрации Санкт-Петербур1а (М02-2 6Д-726, МОЗ-2 6Д-233, М05-2 6К-435), РФФИ (05-04-58595-3), С1ШР (ЭТ-012-0), ШТАБ (05-1095066)
Цель и задачи исследования Оценить роль полиморфизма генов «сосудистой системы» и «эндотелиалыюй дисфункции» в развитии преэклампсии в двух этнически различающихся популяциях
Достижение этой цели предусматривало решение следующих задач
] Разработать систему молекулярных маркеров для анализа полиморфизма генов «сосудистой системы» и «эндотелиалыюй дисфункции»
2 С использованием разработанной системы определить частоты аллельных вариантов генов «сосудистой системы» - АСЕ (1/0) и РАН (4С/5С) и «эндотелиалыюй дисфункции» - N081 (ААТ)„, N082 (ССТТТ)„, АЮ83 (8940Т и 4а/4Ь) и ТИР-а (-3080 А и -2380А) у больных с преэклампсией и в контрольной группе в популяционных выборках из Северо-Западного региона России и Северо-Западного региона Греции
3 Провести сравнительный анализ частот аллельных вариантов генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» в контрольных группах из России и Греции и группах больных с преэклампсией из двух стран и изучить ассоциацию проанализированных молекулярных маркеров со степенью тяжести завоевания, а также с клиническими и биохимическими параметрами у больных с преэклампсией в двух разных популяциях (Россия и Греция)
4 Определить вклад генов «сосудистой системы» и «эндотелиалыюй дисфункции» в развитие преэклампсии с учетом межпопуляционных различий
5 На основе полученных данных разработать молекулярно-биологическую модель развития преэклампсии при наличии молекулярных маркеров риска заболевания
Научная новизна работы. Впервые изучены особенности аллельного полиморфизма генов «сосудистой системы» - АСЕ (1/0) и Р411 (40/5в) и «эндотелиальной дисфункции» - N081 (ААТ)„, N082 (ССТТТ)„ N083 (8940>Т и 4а/4Ь) и ТЫ Г-а (-3080>А и -2380А) при преэклампсии в популяциях России и Греции, а также проанализирована ассоциация
аллельных вариантов изученных генов с тяжестью течения забочевания Разработаны новые варианты идентификации полиморфных аллелей ряда генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» Впервые показаны достоверные отличия, как между контрольными группами, так и между группами больных с преэклампсией из России и Греции по частотам аллельных вариантов ряда изученных генов Впервые выявлены ассоциации между развитием преэклампсии, степенью тяжести заболевания и полиморфизмом генов NOS1 и NOS3 у больных с преэклампсией из Северо-Западного региона России Впервые показана ассоциация развития преэклампсии, степени тяжести заболевания и полиморфизма генов NOS], NOS2, NOS3 и TNF-а у больных с преэклампсией из Северо-Западного региона Греции Впервые показан синергический (аддитивный) эффект различных сочетаний «функционально неблагоприятных» генотипов по генам «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» при развитии и прогрессировании преэклампсии в популяциоиных выборках из России и Греции Впервые продемонстрирована ассоциация некоторых аллельных вариантов генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» с изменчивостью клинически значимых признаков у больных с преэклампсией Впервые предложена молекулярно-биологическая модель развития преэклампсии при наличии молекулярных маркеров риска заболевания
Практическая значимость Анализ аплельного полиморфизма генов «сосудистой системы» - ACE (I/D) и ¡'All (4G/5G) и «эндотелиальной дисфункции» - NOSI (ААТ)„, NOS2 (ССТТТ) n, NOS3 (8940>Т и 4а/4Ь) и TNF-cc (—308G>A и —238G>A) можно рекомендовать в качестве прогностического теста для оценки риска развития преэклампсии с учетом межпопуляционных различий Основные положения, выносимые на защиту
1 Разработана система идентификации молекулярных маркеров риска развития преэклампсии
2 Контрольные группы и группы ботьных с преэклампсией из России и Греции отличаются по частотам ал детей и генотипов по генам «эндотелиальной дисфункции» (гены NOSI, NOS2, NOS3 и TNF-а)
3 Генотипы NOS1 10/15 и NOS3 4a/4b, а также сочетание определенных генотипов по генам «эндотелиальной дисфункции» (NOS1 15/- + NOS3 4а/-) ассоциированы с развитием преэклампсии в популяции Северо-западного региона России
4 Носительство сочетанного генотипа NOS3 4b/4b + РАИ 4G/- увеличивает риск развития преэктампсии в популяции Северо-западного региона Греции
5 Выявлена ассоциация определенных сочетаний генотипов по генам «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» с развитием легкой и тяжелой форм преэклампсии в популяциях из России и Греции
6 Выявленная ассоциация «функционально неблагоприятных» генотипов по генам «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» с преэклампсией подтверждает роль данных метаболических систем (сосудистой и эндотелия) в развитии заболевания
7 Аллельные варианты генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» ассоциированы с рядом клинических и биохимических параметров у больных с преэклампсией
8 Предложена молекулярно-биологическая модель развития преэклампсии при наличии молекулярных маркеров риска заболевания
Апробация работы. Резучьтаты работы были представлены на 12-й и 13-й международных междисциплинарных конференциях молодых ученых (Санкт-Петербург, 2001, 2006), конференции «Молодые биологи Санкт-Петербурга - 300-летию города» (Санкт-Петербург, 2003), Всероссийской конференции Научно-образовательных центров (Казань, 2004), III Международной anti-agemg конференции «Медицина долголетия и качества жизни» (Москва, 2007), 3-й ежегодной встрече Международного общества по фармакогеномике в 2004 году (Санторти, Греция), на Европейском конгрессе по генетике человека в 2005 году (Прага, Чехия)
Диссертация апробирована на научных семинарах Лаборатории прена1альной диагностики наследственных и врожденных болезней человека ГУ научно-исследовательского института акушерства и гинекологии им ДО Отта и Лаборатории репродуктивной генетики человека Университета i Иоаннина (Греция)
Работа была подержана грантами Администрации Санкт-Петербурга (М02-2 6Д-726, М03-2 6Д-233, М05-2 6К-435), РФФИ (05-04-58595-3), CRDF (ST-012-0), INTAS (05-109-5066) Публикации По материалам диссертации опубликовано 22 работы
Объем и структура диссертации Диссертационная работа изложена на 202 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов и обсуждения, выводов, списка литературы и приложений Библширафический указатель включает 259 источников, из них 216 зарубежных Диссертация иллюстрирована 34 таблицами и 51 рисунком, содержит 3 приложения
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Характеристика исследуемых групп В настоящей работе проведено обследование 317 человек В группы больных вошли женщины, проходящие лечение по поводу чистой формы преэклампсии (без coiiyici вующих хронических заболеваний) в стационаре Института Акушерства и Гинекологии им Д О Отта (47 пациентов, Санкт-Петербур!, Россия) или в стационаре Госпиталя при Университете г Иоаннина (66 пациентов, Иоаннина Греция) В контрольные группы (как из России - 102 пациента, так и из Греции - 102 пациента) были включены недавно родившие женщины у которых не было преэклампсии в анамнезе и отсутствовали хронические заболевания После анализа клинической картины заболевания больные были сгруппированы в подаруппы с легкой и тяжелой формами преэклампсии (в зависимости от величины артериального давления, уровня протеинурии, а также дополнительных осложнений)
Экстракция геномной ДНК из лимфоцитов периферической крови. Выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови проводили в соответствии с методикой приведенной в руководстве Сэмбрук и др с некоторыми модификациями (Sambiook et al 1989) Проведение полимеразной цепной реакции Нуклсотидныс последовательности искомых фрагментов генов выбирали из интернет-баз «Nucleotide» и «Ensembl» (США) Праймеры, необходимые для проведения ПЦР этих фрагментов, подбирали с использованием программы «Oligo V 6 31 » (Molecular Biology Insights Inc , США)
Во всех группах изучены особенности генетического полиморфизма 2 генов «сосудистой системы» АСЕ (I/D), PAI1 (4G/5G) и 4 генов «эндотелиальной дисфункции» NOS1 (ААТ)„, NOS2 (ССТП)„, NOS3 (894G>T и 4а/4Ь) и TNF-a (-308G>A и -238G>A) Характеристика исследованных аллельных вариантов i енов приведена в таблице 1
Таблица 1 Характеристика иссчедованных генов и их аллельных вариантов
Ген, локализация Название белкового продукта гена Полиморфизм Эндонуклеаза
-4C£(17q23) Акгиотензин-прсвращаюишй фермент del/ins Alu-повтора 287 п н в 16 интроне (1/D)
Р411 (7q2i-22) Ингибитор активатора плазминогена I -го типа 4 или 5 гуанинов в -675 положении (4G/5G) Bgll (Bsc4I)
NOS1 (12q24) НеГфональнал ЫО-синтаза (N0-синтаза 1-го типа) (ААТ)п-повторы в 13 интроне
raS2(I7qll) Индуцибельная ЫО-синтаза (>Ю-синтаза 2-го типа) (СССТТ)п-повторы в промоторной области
NOS3 (7q35-36) Зндотелиальная ЫО-синтаза (>10-синтаза 3-го типа) 894 G>T (Glu298Asp) Mbol (Kzol)
4 или 5 повторов 27 п н в 4 интроне (4а/4Ь)
TNF-a (6p21 3) Фактор некроза опухоли альфа -238G>A MspI
L308G>A Ncol (Bspl9f)
Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) проводили при помощи программируемых термоциклеров «ДНК-технология» (Москва) и «РТС-100» и «РТС-200>/ (MJ Research, США) с
использованием термофильной ДНК-полимеразы и специфических олигопраймеров Определение аллельных вариантов генов АСЕ NOSI, NOS2 и NOS3 (4а/4Ь полиморфизм) проводили методом ПЦР Определение аллельных вариантов генов РАН, NOS3 (894G>T полиморфизм) и TNF-a проводили методом ПЦР с последующим рестрикционным анализом (табл I)
Гидролиз ДНК эндонуклеазами рестрикции. Гидролиз амплифицированных фрагментов ДНК проводился согласно рекомендациям фирм-изготовителей («Сибэнзим», Новосибирск, «NEB», США)
Электрофорез и визуализация результатов Продукты амплификации и рестрикции разделяли в 6-10% неденатурирующем полиакриламидном (ПААГ) или 2-3% агарозном гелях, приготовленных на трис-боратном буфере, в аппарате для вертикального или горизонтального электрофореза, соответственно ПААГ окрашивали водным раствором бромистого этидия (0,5 мкг/мл), просматривали в ультрафиолетовом свете на трансиллюминаторе «Macrovue» («Pharmacia LKB», Великобритания) с испочьзованием системы видео-гель-документации («Vilber Lourmat») Результаты анализа с использованием агарозного геля фиксировали с помощью трансиллюминатора «Uvitec STX-20 M» системы видео-гель-документации («Kodak EDAS 290») Первичную обработку изображений проводили в программе Kodak ID v 3 6 4 (Scientific Imaging Systems, США) Статистическая обработка данных. Определение достоверности различий между сравниваемыми группами или подгруппами по частотам генотипов и аллелей исследуемых генов производили с помощью критерия Фишера (F) или хи-квадрат (х2) по стандаршой формуле с учетом поправки Йетса для парных сравнений и поправки Бонферрони для множественных сравнений с контрольной группой (Гланц, 1999) Для оценки различий значений биохимических или клинических параметров между носителями разных генотипов по исследуемым генам применялся U-критерий Манна-Уитни или t-критерий Стьюдента для независимых выборок (Реброва 2003) Значение р<0,05 было принято как статистически значимое Статистический анализ полученных результатов проводился с использованием программ Microsoft Excel 2002 SP-2 (Microsoft Corporation. США), STATIST1CA v60 (Statsoft Inc , Tulsa, США) и GraphPad Instat v 3 05 (GraphPad Software Inc , California, США)
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Данные литературы последних лет свидетельствуют о неуклонном росте частоты преэклампсии Несмотря на стремительный прогресс современных медицинских технологий, в мире от преэклампсии ежегодно умирает до 50000 женщин (Khalil, Granger, 2002)
Необходимость разработки новых методик, направленных на раннее, досимптоматическое выявление беременных высокого риска развития преэклампсии с последующей профилактикой и соответствующим ведением беременности признается во всем мире На основе проведенного анализа зарубежной и отечественной литературы в рамках исследования молекулярных маркеров преэклампсии, наибольший интерес представляют аллельные варианты следующих генов АСЕ (I/D), РАН (4G/5G), NOS! ((ААТ)„-повторы), NOS2 ((ССТТТ)п-повторы), NOS3 (894G>T и 4a/4b) TNF-a (-308G>A и -238G>A) (Warpeha et ai, 1999. Mello et al, 2003, Serrano et al, 2004, Saarela et al, 2005, Wiwamtkit, 2006) Для выбора нуклеотицных последовательностей и идентификации аллельных вариантов исследуемых генов были использованы следующие подходы анализ данных литературы и поиск полиморфного участка ДНК в интерне r-базах данных
После идентификации полиморфизма для дальнейшего подбора праймеров мы использовали нуклеотидную последовательность в пределах 500 п н Последовательности праймеров выбирали с учетом того, что полученный ПЦР продукт должен обеспечивать специфичность и оптимальное количество наработки фрагмента Иногда, в случаях однонуклеотидных замен в одном из праймеров создавался искусственный сайт рестрикции для определенной эндонуклеазы Кроме того большое значение имели размеры ПЦР-фрагментов в особенности для полиморфизма генов NOS1 и NOS2, представленного высоко вариабельными микросателлитными повторами
Выбранные олигонуклеотиды не должны содержать высокостабильных вторичных структур типа «шпильки» Как известно, олигонуклеотиды, образующие внутренние вторичные структуры, могут амплифицироваться со значительно меньшей эффективностью и специфичностью Соблюдение указанных принципов достигали путем варьирования длины олигонуклеотида и праймеров
Ген АСЕ Для определения аллелей I и D гена АСЕ использовали праймеры, описанные в статье С J Clark с соавторами (Clark et al, 2000)
Ген PAI1 Идентификацию аллелей 4G и 5G гена РАН проводили с помощью нового модифицированного подхода путем использования набора олигопраймеров, позволяющих создать искусственный сайт рестрикции для фермента Bsc4I (Bgll) В данной методике исиотьзовали прямой праймер с одним неспаренным нуклеотидом (РАН F 5'-CAGAGAGAGTC rGGCCACGT-3 ') и обратный праймер (РАН R 5'-GGCCCAACAGAGGACTCTTG-3') При использовании модифицированного прямого праймера создавался сайт рестрикщш для эндонуклеазы Bsc4I (Bgll) для 5G аллели, но не для 4G аллели гена РАН В отличие от предыдущих исследований данного полиморфизма тепа
РАИ, в которых использовался метод аллель-специфичной ПЦР, данный подход является более простым и удобным (Fabbro et al, 2003)
Ген NOSI Определение количества ААТ-повторов гена NOS1 было упрощено за счет амплификации более коротких фрагментов ДНК с помощью разработки новых олигопраймеров
Ген NOS2 В связи с высокой вариабельностью количества ССТТТ-повторов (на настоящий момент описано около 15 аллелей) полиморфизма гена NOS2 ранее определение числа данных повторов проводилось только с использованием дорогостоящих генетических анализаторов АВ1 Prism 310/3100 (Konno et al 2001) В нашей работе путем использования различных маркеров молекулярного веса и новых праймеров идентификация аллелей (ССТТТ)„-полиморфизма гена NOS2 сгала возможной в 6%-ном ПААГ Ген NOS3 Определение аллелей G и Т (полиморфизм 894G>T), а также 4а и 4Ь (полиморфизм 4а/4Ь) проводили с использованием праймеров, приводящих к амплификации более коротких, по сравнению с ранее описанными, фрагментов ДНК, что упрощало проведение элекгрофоретического разделения продуктов ферментативного гидролиза и ПЦР (Tempfer et al, 2001b, Yoshimura et al, 2001)
Ген TNF-a Для идентификации аллелей -308G, -308А, -238G и -238А гена TNF-a использовали праймеры, описанные в статье С Р Day с соавторами (Day et al, 1998) Оптимизация условий ПЦР проводилась путем варьирования временных и температурных параметров реакции, а также использованием различных концентраций MgCb для обеспечения специфичности реакции Электрофоретическое разделение фрагментов проводилось с использованием различных концентраций агарозного и полиакриламидного геля в зависимости от размеров и разницы в размерах между двумя аллельными вариантами ПЦР продуктов исследуемых участков генов
Работа проводилась на двух этнически различных популяционных выборках - из Северозападного региона России и Северо-западного региона Греции В обеих с фанах были отобраны контротьная группа и группа больных с преэклампсией В связи с возможностью существования генетической неоднородности между разными популяциями нами был проведен сравнительный анализ частот аллельных вариантов исследуемых генов между контрольными группами из России и Греции и между группами больных с преэклампсией из этих стран
Согласно полученным результатам, группы контроля и группы больных разного этнического происхождения (из России и Греции) отличались по частотам определенных генотипов и (или) аллелей генов NOS2, NOS3 (полиморфизм 894G>T) и TNF-a (полиморфизм -308G>A)
Кроме того контрольные группы из двух стран отличались по частотам аллельных вариантов генов NOS1 и TNF-a (полиморфизм -238G>A), а группы больных - по гену NOS3 (полиморфизм 4а/4Ь) При изучении полиморфизма генов «сосудистой системы» (АСЕ и РАН) нами не было выявлено достоверных отличий между двумя выборками из популяций двух стран
Согласно нашим результатам и по данным литературы, при выявлении достоверных различий между выборками из разных стран в частотах аллельных вариантов изучаемых генов не представляется корректным объединять их в общую группу для увеличения статистической значимости результатов
Так как нами были выявлены достоверные различия по частотам аллельных вариантов ряда генов между контрольными группами из России и Греции и группами больных с преэклампсией из двух стран, дальнейший сравнительный анализ между больными и контролем проводили отдепьно в популяциях из России и из Греции
Достоверные отличия по частотам генотипов и аллелей исследуемых генов были показаны только для русской популяции Частота генотипа 4а/4Ь по гену NOS3 была выше у больных с преэклампсией, чем в контроле, а частота аллели (АЛТ)н по гену NOS1 была выше в контрольной группе (рис 1 )
При сравнительном анализе частот генотипов по исследуемым генам между контрольной группой и больными с разной степенью тяжести преэклампсии в русской популяции выявлено, что повышенная частота генотипа 4а/4Ь по гену NOS3 в группе больных с преэклампсией по сравнению с контролем, по-видимому, обусловлена еще более высокой частотой данного генотипа у больных с легкой формой заболевания, тогда как у больных с тяжелой преэклампсией его частота была сравнима с таковой в контрольной группе (рис 2) Данные литературы по изучению ассоциации 4а/4Ь полиморфизма гена NOS3 с различными заболеваниями достаточно противоречивы С одной стороны иосительство аллели 4а считается фактором риска многих сосудистых заболеваний, и в том числе ряда осложнений при беременности (Wang et al, 1996, Ichihara et al, 1998, Tempfer et al, 2001a, Tempfer et al, 2001b) С другой стороны данные по ассоциации другой аллели (4Ь) со сниженным уровнем NO, который является вазодилатирующим агентом, вносят несоответствие в механизм развития патологии (Wang et al, 1997) Кроме того, в некоторых исследованиях указывается на ассоциацию с преэклампсией аллели 4b а не 4а (Mozgovaia et al, 2002, Serrano et al, 2004) Подобное противоречие может быть объяснено, во-первых, межэтническими различиями так как перечисленные работы выполнялись на выборках из разных популяций
Во-вторых, аллель 4а может быть сцеплена с другим генетическим маркером, который в действительности ассоциирован с заболеванием.
Россия
Греция
При сравнении подгрупп больных из Северо-западного региона Греции между собой нами было выявлено достоверное повышение частоты генотипа Сг/Т по гену N083 в подгруппе больных с легкой формой преэклампсии по сравнению с тяжелой (56% и 32%, соответственно). Учитывая отсутствие различий по частотам аллелей и генотипов данного полиморфизма между контрольной группой и больными, можно предположить, что сам по себе он не влиял на развитие заболевания, а лишь определял степень тяжести преэклампсии (рис. 3).
NOS3 4а/4Ь OR=2,18^C
"Коптроль (n -102)
NOS3 С/Т
Рис.
"Контроль (п=!02) N083 О/Г
• Преэютампсия (п=47) _____ Преэювмяия |п=66)
!. Частоты некоторых генотипов и аллелей по изученным генам у больных с
преэклампсией и в контрольной группе в популяциях из России и Греции. * - р<0,05
TNT'A -308А
NOSI 14
TTVFA -308А
NOS 1
TNFA -238А
РА]1 40
TNFA -238A
РАН 4G
4a'4a
Про .камней» (47) Контроль (101) Легкая Гяжвлая a 4a'41i
npe.Kjcbvmcnfi (27) иреэюгампсия (19) в 41У4Ь
Рис. 2. Частоты генотипов по гену NOS3 (4а/4Ь полиморфизм) в подгруппах больных преэклампсией и в контрольной группе в популяции из России. * - р<0,05 по сравнению с контрольной группой
60% 50% 40% 30% 20% 10%
0%: ........- - .
Когггроль (99) Легкая Тяжелая g (;/[
прсэктампсия (27) преэклампсия (25) „
0 ! /I
Рис. 3. Частоты генотипов по гену NOS3 (8940>"Г полиморфизм) в подгруппах больных с преэклампсией и в контрольной группе в популяции из Греции. * - р<0,05
Анализ частот полиморфного микросателлита (ЛАТ),, гена NOSI гена позволил выявить статистически значимые различия между выборками больных с преэклампсией и контролем, как для русской, так и для греческой популяции. Для греческой популяции был показан протективиый эффект аллели (AAT)i6, частота которой была ниже у больных с легкой формой преэклампсии (0,0%), чем в контрольной группе (7,1%). Частота аллели (AAT)i? была выше в группе больных, чем в контроле (16,3% и 9,4%, соответственно), однако различия не были статистически значимы, а частота генотипа (AAT)io'(AAT)i5 была достоверно выше как группе больных (19,6%), так и в подгруппе с легкой формой преэклампсии (22,2%) по сравнению с контролем (6,9%) (Северо-запад России). Таким образом, для одних аллельных вариантов гена NOS1 был выявлен протективный эффект по отношению к преэклампсии, а для других - предрасполагающий к развитию этой формы заболевания. При анализе литературы нами не было найдено данных об изучении полиморфизма гена NOS1 в связи с развитием эндогелиальной дисфункции и сосудистых заболеваний.
При сравнительном анализе частот полиморфного микросателлита (ССТТТ)„ гена NOS2 были показаны статистически значимые различия между подгруппами больных с преэклампсией и контролем только для греческой популяции. Частота генотипа (ССГПУ(ССТТТ)к, по гену NOS2 была достоверно выше в подгруппе больных с легкой формой преэклампсии (7,4%), чем в контрольной группе (0,0%). При этом частота аллели (ССТТТ)ю была достоверно выше у больных с легкой формой заболевания (29,6%), чем с тяжелой (10,0%).
Полиморфизм (ССТТТ)П промоторной области гена NOS2 связан с различным уровнем индукции транскрипции в ответ на действие медиаторов воспаления. При этом
прогрессирующее возрастание активности NOS2 коррелирует с увеличением количества ССТТТ-повторов (Warpeha et al., 1999). Наличие аллели (ССТТТ)!0 гена NOS2, ассоциированное с более низким уровнем фермента NOS2, может приводить к снижению индукции синтеза NO (Murray et ai.. 1991, Snyder, 1993. Cabrera, Bohr, 1995). Можно предположить, что на фоне снижения индукции синтеза оксида азота, обладающего выраженным противовоспалительным и эндотслий-релаксирующим эффектом, происходит развитие дегкой формы презклампсии.
При сравнении частот аллелей гена TNF-a между подгруппами больных с преэклампсией и контрольной группой из греческой популяции показано, что частота аллели -308А в 5 раз выше в подгруппе больных с тяжелой степенью презклампсии (8,0%) по сравнению с контролем (1,7%) (рис. 4).
В исследованиях британских ученых показано, что уровень экспрессии гена выше у индивидуумов гомозиготных по редкой аллели, чем лиц с генотипом G/G, а у гетерозигот наблюдается промежуточный уровень мРНК TNF-a (Wilson et al., 1992).
Ш Аллель G
100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%
92%
* *
4% 8%
2% ш
Контроль {178) Легкая Тяжелая
преэклампсия (54) преэклампсия (50)
Рис. 4. Частоты аллелей гена TNF-a (-308 G>A полиморфизм) в подгруппах больных с преэклампсией и в контрольной группе в популяции из Греции. * - р<0,05
В нашей работе выявлена ассоциация аллели -308А гена TNF-a с развитием, по крайней мере, тяжелых форм презклампсии в популяции Северо-западного региона Греции. Аналогичные результаты были получены для популяции из Великобритании ('Wilson et al.. 1992, Chen et al., 1996). Факт более высокой частоты аллели-308А гена TNF-a у больных с преэклампсией хорошо согласуется с ранее известными представлениями о патогенезе заболевания, в том числе с данными биохимических, генетических и клинических исследований. На генетическом уровне показана ассоциация аллели -308А с повышенной
экспрессией гена TNF-a (Wilson et al, 1992, Chen et al, 1996) На биохимическом уровне выявлено увеличение содержания данного цитокина у матерей и в плацентах с преэклампсией по сравнению с нормальной физиологической беременностью (Wang, Walsh, 1996, Visser et al, 2002) И наконец, на клиническом уровне существует теория о том, что нарушение плацентации при бсрсмснности может приводить к избыточному синтезу TNF-a, вызывающему системное повреждение сосудов материнского эндотелия и развитие преэклампспи (Vince et al, 1995, Kilpatrick, 1999)
Полученные нами результаты свидетельствуют о важной роли определенных аллельных вариантов некоторых генов «эндотелиальной дисфункции» в возникновении и ирогрессировании преэклампспи Однако в популяциях из разных стран (России и Греции) развитие заболевания может быть связано с различными генетическими маркерами 1ак, для Северо-западного региона России нами выявлены ассоциации между развитием преэклампспи, а также ее форм с полиморфизмом генов NOS! и NOS3 В то же время в популяционной выборке Северо-запада Греции помимо указанных двух генов нами обнаружена ассоциация заболевания с полиморфизмом генов NOS2 и TNF-a Суммируя полученные результаты, можно заключить, что развитие нреэклампсии ассоциировано с генетическими маркерами дисфункции эндотелия вне зависимости от этнического происхождения пациента Однако спектр аллельных вариантов генов «эндотелиальной дисфункции», ассоциированных с развитием преэклампсии, отличается в разных популяциях
В результате исследования аллельных вариантов генов «эндотелиальной дисфункции» и «сосудистой системы» выявлены ассоциации «функционально неблагоприятных» генотипов и аллелей с развитием преэклампсии и ее тяжестью Также выявлены некоторые различия в частотах генотипов в группах и подгруппах пациентов, которые, однако не являлись статистически значимыми при анализе отдельных аллельных вариантов Поскольку в развитие мультифакториальных заболеваний вовлечены в большей степени не единичные гены, а целые группы, и, как правило, некоторые аллельные варианты вносят свой вклад лишь в сочетании с другими генами, мы провели сравнительный анализ сочетаний «функционально неблагоприятных» и «протсктивных» генотипов в контрольной группе, в группе и подгруппах больных с преэклампсией
В популяции из Северо-западного региона России частота сочетанного генотипа по двум генам NO-синтаз (NOS1 15/- + NOS3 4а/-) была достоверно выше у больных с преэклампсией по сравнению с контротем (17 4% и 4 0%, соответственно) Рассчитанный коэффициент соотношения шансов показал что риск развития преэклампсии у носителей генотипа NOS1
15/- + N083 4а/- увеличивается в 5 раз ((Ж=5 05 95% (Л 1,79-14,26) Проведенный анализ сочетаний «функционально неблагоприятных» генотипов у больных с преэклампсией и в контрольной группе из Северо-западного региона Греции выявил статистически значимое увеличение частоты сочетанного генотипа ЫОБЗ 4Ь/4Ь + РАИ 40/- в группе больных по сравнению с контролем (56,9% и 40,9%, соответственно) Рассчитанный коэффициент соотношения шансов показал повышение риска развития преэклампсии у носителей генотипа N083 4Ь/4Ъ + РА11 40/- почти в 2 раза (ОК=1,91, 95% С1 1 06-3,45) (табл 2)
Таблица 2 Риск развития преэклампсии у носителей некоторых сочетанных генотипов по исследуемым генам в популяциях России и Греции
I Генотип Россия Греция
OR 95% CI OR 95% CI
1NOS1 15/- + NOS3 4а/- 5,05* 1,79-14,26* 2,08 0,93-5,37
1NOS3 4b/4b + PAI1 4G/- 0,61 0,30-1,22 1,91 1,06-3,45
* - Жирным выделены значения OR и CI полученные для р<0,05
Для ряда сочетаний генотипов была выявтена ассоциация с развитием определенной формы заболевания Частота сочетанного генотипа по двум генам NO-сингаз (NOS! 15/- + NOS3 4а/~) увеличивалась в ряду контроль (4,0%) - легкая преэклампсия (11,1%) - тяжелая преэклампсия (22,2%) Риск развития легкой формы преэклампсии в русской популяции был повышен у носителей генотипа NOS3 4а/- в сочетаниях с определенными генотипами по генам «сосудистой системы», такими как АСЕ D/- или PAI4G/- (табл 3)
Таблица 3 Риск развития легкой формы преэклампсии у носителей некоторых сочетанных генотипов по исследуемым генам в популяциях России и Греции
Генотип Россия Греция 1
OR 95% Cl OR | 95% CI
NOS3 4а/- + ACE D/- 2,31* 1,02-5,57* 0,71 | 0,35-1,43
NOS3 4а/- + РАН 4G/- 3,23 1,47-7,10 0,68 | 0,32-1,45
NOS3 Т/Т + NOS3 4Ь/- 1,23 0,52-2,92 6,27 2,59-15,14
NOS2 9/- + NOS3 4Ь/- 0,91 0,10-8 52 5,22 1,09-24,97
NOS2 9/- + РАН 4G/- 1,72 0,15-19,77 12,00 1,19-120,50
NOS2 10/- + NQS1 <12/<12 091 0,10-8,52 3,41 1,01-11,52
* - Жирным выделены значения OR и Cl, полученные для р<0,05
Частота сочетанного генотипа NOS2 12/12 + PAI1 4G/4G была в 5 раз выше у больных с тяжелой преэклампсиеи по сравнению с контролем (¡6,7% и 3,2% соответственно) В связи с полученными данными следует отметить, что анализ аллельных вариантов генов АСЕ, РАН и NOS2 но отдельности не показал ассоциации между «функционально неблагоприятными» генотипами и развитием преэклампсии или ее форм в русской популяции
При изучении греческой популяции нами показано, что носительство хотя бы одного из следующих генотипов - NOS3 Т/Т + NOS3 4Ь/-, NOS2 9/- + NOS3 4b/-, NOS2 9/- + РАИ 4G/-и NOS2 10/- + NOS1 <12/<12 увеличивает риск развития легкой формы преэклампсии по сравнению с контролем Причем при сочетании Т/Т + 4Ы- по гену NOS3 риск увеличивался более чем в 6 раз (OR=6,27, 95% Cl 2,59-15,14) (табл 3)
При анализе частот генотипов по генам «сосудистой системы» было показано, что риск развития тяжелой формы преэклампсии повышен при сочетании определенных аллельных вариантов (генотип АСЕ D/- + РАН 4G/-), тогда как по отдельности не было показано вклада полиморфизма генов АСЕ и РАН в развитие патологии в греческой популяции (табл 4)
Таблица 4 Риск развития тяжелой формы преэклампсии у носителей некоторых
сочетанных генотипов по исследуемым генам в популяциях России и
Генотип 1 Россия Греция
! 1 OR 95% CI OR 95% CI
| NOS1 15/- + NOS3 4а/- | 6,86* 2,22-21,22* 1,98 0,54-7,20
NOS2 12/12 +PAI1 4G/4G 1 6,13 1,13-33,28 0,41 0,02-7,82
ACE D/- + РАИ 4G/- | 1,35 0,62-2,94 2,75 1,04-7,28
* - Жирным выделены значения OR и CI, полученные для р<0,05
Несмотря на существование межэтнических различий по генетическим маркерам преэклампсии и ее форм, можно предложить механизм аддитивного взаимодействия метаболитов, кодируемых исследуемыми генами при сочетании «функционально неблагоприятных» генотипов по генам «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» с учетом патогенеза данного заболевания
Повышение риска развития эндотелиальной дисфункции при сочетании «функционально неблагоприятных» аллельных вариантов различных генов NO-синтаз можно объяснить следующим образом во-первых, сам механизм синтеза оксида азота одинаков у всех трех изоформ NOS (Forstermann et al, 1994, Журавлева и др, 1997) Соответственно, можно предположить, что снижение уровня экспрессии генов NOS в равной степени может приводить к уменьшению уровня оксида азота и, следовательно, к развитию дисфункции эндотелия Кроме того, показано, что все три гена экспрессируются в эндотелии, и таким образом при увеличении числа «функционально неблагоприятных» генетических вариантов (то есть связанных со снижением уровня NO, пониженной экспрессией гена или ассоциированных с разчичными сосудистыми патологиями) в различных генах NO-синтаз можно прогнозировать усиление эндотелиальной дисфункции, которое впоследствии может выражаться в развитии преэклампсии или ее форм (Bachmann, Mündel, 1994, Forstermann et al, 1994) К сожалению, при анализе литературы нам не удалось обнаружить работ, в которых был проведен анализ сочетаний аллельных вариантов разных генов NOS Вместе с
тем, следует отметить, что полученные нами данные по значительному увеличению риска развития легкой формы преэклампсии у носителей сочетанного генотипа Т/Т + 4Ь/- по ieii) AOS3 полностью согласуются с исследованием испанских ученых, в котором был выявлен ассоциированный с преэклампсией «Т - 4Ь» гаплотип по гену NOS3 (Serrano et al, 2004) Аддитивное взаимодействие аллельных вариантов генов АСЕ (DÍ-) и РАН (40/-), ассоциированное с повышением риска развития тяжелой преэклампсии во многом объясняется функциональными особенностями данных аллельных вариантов и взаимодействием продуктов генов АСЕ и РАН Полиморфизм гена АСЕ, представляющий собой отсутствие (аллель D) или наличие (аллечь I) А1ц-повтора в 16-м интроне гена связан с уровнем ангиотензин-превращающего фермента (продукт гена АСЕ) в сыворотке крови, и, таким образом, является функционально значимым При этом фенотиггачески по отношению к уровню АСЕ, аллели взаимодействуют по принципу неполного доминирования, то есть у индивидуумов, гомозиготных по D аллети, содержание АПФ почти в два раза выше, чем у гомозиготных по I аллели и имеет среднее значение у гетерозиготных - I/D генотип (Rigat et al, 1990, Tiret et al, 1992) При исследовании полиморфизма 4G/5G гена РАН показано, что аллель 5G коррелирует со снижением уровня экспрессии гена Этот факг связан с тем, что при наличии 5 гуанинов помимо сайта связывания активатора (как в стучае аллели 4G) образуется сайт связывания для репрессора транскрипции (Dawson et al, 1993, Eriksson et al, 1995) Показана ассоциация между 4G/4G генотипом и увеличением PAI1 в плазме крови (Margaglione et al, 1997) Таким образом, можно предположить, что именно повышение уровня соответствующих белковых продуктов, ассоциированное с «функционально неблагоприятными» аллельными вариантами генов АСЕ и РАН, приводит к развитию тяжелой преэклампсии Продуцируемый под воздействием АСЕ, ангиотензин II, трансформируясь в ангиотензин IV, взаимодействует с рецепторами эндотелиоцитов и стимулирует продукцию РАН Ридкер с соавторами изучали влияние инфузии различных доз ангиотензина II на плазменный уровень РАН у больных гипертонической болезнью и здоровых добровольцев и обнаружили достоверное дозозависимое повышение РАИ в плазме в ответ на инфузию в обеих группах (Ridker et al 1993) Показано, что блокада АСЕ увеличивает продукцию плазминогена в культуре эндотечиальных клеюк (Bell, 1992) АСЕ может оказывать прогромботическое действие, увеличивая экспрессию РАН и подавляя продукцию тканевого активатора плазминогена (Vaughan, 1997) Таким образом, повышенный риск развития тяжелой преэклампсии при носитечьстве «функционально неблагоприятного» сочетанного генотипа ACE D/- 4 РАН 4G/- по генам «сосудистой системы» обусловлен функциональными особенностями данных аллельных вариантов и
синергичным взаимодействием продуктов генов АСЕ и РАН, приводящих к развитию эндотелиалыгой дисфункции
В популяционной выборке из Северо-запада России сочетания генотипов по ряду исследованных генов ассоциированы с развитием преэклампсии При этом наличие сочетанного генотипа NOS1 15/- + NOS3 4а/- ассоциировано с повышением, а генотипа NOS1 14/- + PAI1 5G/- - со снижением риска развития и прогрессирования данной патологии В то же время, другие сочетания генотипов ассоциированы только с определенной формой преэклампсии (легкой или тяжелой) В популяции из Северозападного региона Греции развитие преэклампсии, по-видимому, обусловлено одними сочетаниями аллельных вариантов исследуемых генов, а прогрессирование заболевания -другими Примечатечьно, что развитие легкой формы заболевания было ассоциировано в основном с различными комбинациями генотипов всех трех генов NO-синтаз, а тяжелая преэклампсия чаще развивалась у лиц с сочетанием «функционально неблагоприятных» аллельных вариантов генов «сосудистой системы»
Наряду с большим количеством исследований, посвященных поиску ассоциации генетических маркеров с развитием преэклампсии, при анализе литературы не найдено работ по изучению ассоциации полиморфизма генов с патогенетически значимыми показателями, отражающими функционирование почек, печени и других органов при этом заболевании В нашей работе выявлена ассоциация определенных аллечьных вариантов генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» с некоторыми клиническими и биохимическими параметрами у больных с преэклампсией
Показано, что для носителей аллели D и/или генотипа D/D по гену АСЕ характерно изменение значений ряда биохимических показателей, связанных с функцией почек и печени Так, об измененной инфильтрации в почках может свидетельствовать повышение уровня мочевины и общего белка в сыворотке крови, а повышение общего билирубина и сахара в крови может отражать нарушение функционирования печени Эти патологические изменения характерны для прогрессирующей преэкпампсии (Ариас, 1989, Серов и др , 1997, Нагнибеда, Павлова, 1998)
Для пациенток с преэклампсией, гетерозиготных или гомозиготных по аллели 4G гена РАН, отмечено повышение уровня биохимических маркеров почечной дисфункции (креатинина и мочевины) Кроме того, у лиц с данными 1енотипами отмечалось повышение скорости оседания эритроцитов и содержания лейкоцитов, что может свидетельствовать о воспалительном процессе при прогрессировании заболевания (Шарабчиев, Дудина, 2004)
В группе больных с преэклампсией у женщин с генотипом 4b/4b по гену NOS3 был повышен уровень белка в моче и снижен тромбокрит в крови, а значения веса, индекса массы тела и шкалы Апгар у детей этих пациенток были ниже, чем у лиц с генотипом 4а/4Ь. У носителей генотипа G/G по гену TNF-a (-238G>A полиморфизм) уровень мочевины и калия в сыворотке крови достоверно выше, чем у лиц с генотипом A/G, что может отражать патогенетические процессы в почках при преэклампсии (Ариас, ¡989, Серов и др., 1997, Нагнибеда, Павлова, 1998).
Таким образом, анализ ассоциации полиморфизма генов «сосудистой системы» и «эндогелиальной дисфункции» с клинически и патогенетически значимыми признаками преэклампсии показал, что определенные аллельные варианты исследуемых генов играют модифицирующую роль в изменчивости комплекса параметров, которые определяют течение и прогрессирование заболевания.
Исходя из полученных результатов, можно предложить гипотетическую схему развития преэклампсии (рис. 5). При нормально протекающей беременности при инвазии цитотробласта в спиральные артерии матери происходит трансформация последних в сравнительно крупные сосуды, обеспечивающие потребности растущего плода. При преэклампсии процессы плацентации нарушены и диаметр спиральных артерий матери слишком узкий для обеспечения адекватного обмена между матерью и плодом.
Рис. 5. Гипотетическая схема развития преэклампсии у носителей «неблагоприятных» аллельных вариантов генов «сосудистой системы» и «эндогелиальной дисфункции».
В норме функционирование эндотелиалыюй системы обеспечивается балансом межд> вазоконстрикторами, к которым относится ангиотензин 2 и вазодилаторами, главным из которых является оксид азота. Кроме того, эндотелиальная дисфункция может развиваться при нарушениях в системе фибринолиза и при гиперпродукции N0 Одними из ключевых звеньев в системах, обеспечивающих синтез и регуляцию содержания данных метаболитов, являются продукты исследуемых в нашей работе генов АСЕ, РАИ, N031, N052, N083 и TNF'a(vш 5)
При носительстве функционально «неблагоприятных» аллельных вариантов по указанным генам, оптимальное состояние системы может быть нарушено Гиперпродукция одних соединений и снижение уровня других может привести к повышению тонуса сосудов вследствие их сокращения и далее к повышению АД, к повреждению эндотелия пероксидными соединениями из-за гиперпродукции N0, к усилению агрегации тромбоцитов и развитию тромбофилических осложнений Указанные нарушения в полной мере могут определять патогенез преэклампсии (рис 5)
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В настоящее время существует две гипотезы, на первый взгляд противоречащие друг другу Согласно первой из них, преэклампсия рассматривается как единый патологический процесс с различной степенью тяжести манифестации Во второй гипотезе предполагается, что преэклампсия - это скорее синдром, объединяющий разные заболевания со сходным клиническим проявлением На основании полученных нами данных как по отдельным аллельным вариантам, так и по сочетаниям определенных генотипов изученных генов, можно предположить, что с одной стороны, существует единая причина развития двух степеней тяжести нреэклампсии, однако впоследствии модифицирующий вкпад определенных генетических детерминант и внешних факторов может приводить к различным формам заболевания
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о наличии зависимости возникновения преэклампсии и ее форм от функционального состояния генов «сосудистой системы» и генов «эндотелиалыюй дисфункции»
При исследовании двух разных популяции (Россия и Греция) показано, что развитие преэклампсии ассоциировано с дисбалансом в одних и тех же системах генов («сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции»), но при этом молекулярные маркеры заболевания в разных странах различные
Дальнейшее изучение факторов предрасположенности к преэклампсии с учетом межпопучяциончых различий, разработка системы молекулярных маркеров, определяющих высокий риск развития патологии, позволит оптимизировать лечение и профилактику этого тяже того заболевания
ВЫВОДЫ
1 Разработана система идентификации ряда молекулярных маркеров преэклампсии
2 Контрольные группы и группы больных с преэклампсией из России и Греции отличаются по частотам аллелей и генотипов по генам NOS1, NOS2, NOSS и TNF-a (гены «эндотелиалъной дисфункции»)
3 Наличие генотипов NOS1 10/15 и NOS3 4а/4Ь и сочетанного генотипа NOS1 15/- + NOS3 4а/- по генам «эндотелиальной дисфункции» увеличивает риск развития преэклампсии в популяции Северо-западного региона России, а носительство сочетанного генотипа NOS3 4b/4b + PAI1 4G/- — в популяции Северо-западного региона Греции
4 В популяциях из России и Греции развитие легкой и тяжелой форм преэклампсии ассоциировано с носительством различных специфических молекулярных маркеров
5 Развитие преэклампсии ассоциировано с дисбалансом в одних и тех же системах генов («сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции»), но при этом молекулярные маркеры заболевания в разных странах различные
6 Аллельные варианты генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» ассоциированы с некоторыми патогенетически значимыми клиническими и биохимическими параметрами у больных с преэклампсией
7 Разработана молекулярно-биологическая модель развития преэклампсии при наличии определенных молекулярных маркеров
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1 Малышева О В , Мозговая Е В, Демин Г.С, Иващенко Т Э Баранов В С Ассоциация полиморфных аллелей генов АСЕ и eNOS с развитием гестозов // Медицинская генетика -2003 -№2 -С 78-82
2 Ковлен Д В , Пономаренко Г H, Тишаков А Ю Глотов О С Москаленко M В , Демин Г С, Братова H И , Иващепко Т Э , Обрезан А Г Роль генных сетей в реализации лечебных эффектов климатотерапии у больных с хронической сердечной недостаточностью // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры - 2006 - №3 - С 5-9
3 Ковлеп Д В Тишаков А Ю , Глотов О С , Москаленко M В , Демин Г С., Бицадзе АН, Чернышев АВ, Братова НИ, Иващенко ТЭ, Обрезан АГ, Пономаренко Г H
Генетические детерминанты эффективности климатотерапии больных с хронической сердечной недостаточностью // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 2007 -Т 143,№1 -С 32-37
4 Козловская М А , Ярмолинская М И , Демин Г С , Иващенко Т Э , Баранов В С Анализ ассоциации полиморфизма генов IL4 и IL4R с эндометриозом // Медицинская генетика-2007 -Т6,№4 - С 48-51
5 Bespalova О N , Ivashchenko Т Е , Tarasenko О А, Deinin G.S., Ajlamazjan Е К, Baranov V S The angiotensm-convertmg enzyme gene polymorphism is associated with pregnancy miscarnage and placentary insufficiency // Balkan Journal of Medical Genetics - 2007 - V 10, N 1 -P 3-9
6 Иващенко T Э , Швед H Ю , Беспалова О H , Тарасенко О А , Малышева О В , Демин Г.С., Баранов В С Генетические основы предрасположенности к акушерской и гинекологической патологии//Молекулярная медицина - 2007 -№3 - С 19-26
7 Демин Г.С. Генетические аспекты предрасположенности к гестозу // Журнал акушерства и женских болезней — 2007 - №4 - С 74-86
8 Патентная заявка №2005131568 Глотов О С , Глотов А С , Демин Г.С , Баранов В С , Иващенко Т Э Способ диагностики сердечно-сосудистых заболеваний и диагностический набор для его осуществления
9 Демин Г.С Анализ ассоциации генов eNOS и АСЕ с развитием гестозов у беременных женщин // Человек Природа Общество Актуальные проблемы / Материалы 12-й международной междисциплинарной конференции молодых ученых 27-30 декабря 2001 г - СПб, 2001 - С 626-627
10 Демин ГС., Малышева OB Анализ ассоциации генов eNOS и АСЕ с развитием 1естозов различной степени тяжести // Пятая Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей - СПб, 2002 - С 69-70
11 Демин Г С Генетическое тестирование наследственной предрасположенности к развитию гестозов // Седьмая Санкт-Петербургская ассамблея молодых ученых и специалистов - СПб, 2002 - С 44
12 Malysheva OV, Mozgovaya EV, Demin G.S ACE and eNOS gene polymorphisms among patients with preeclampsia, healthy pregnant women and population of St Petersburg // 5th Balkan Meeting On Human Genetics, August 29 -September 01, 2002 -2002 -P 57
13 Демин ГС. Ассоциация аллелей генов ангиотензин-конвертирующего фермента и эндотелиальной NO-синтетазы с развитием гестозов // Молодые биологи Санкт-Петербурга -300-летию города Аничковский вестник -2003 -№33 -С 102-103
14 Демин Г.С. Генетическое тестирование наследственной предрасположенности к развитию гестозов // Восьмая Санкт-Петербургская ассамблея молодых ученых и специалистов - СПб, 2003 - С 41
15 Demin G S., Malysheva OV, Mozgovaya EV Ivashchenko TE, Baranov VS Association between polymorphism of microsomal epoxide hydrolase and development of preeclampsia // European Congress of Human Genetic Conference May 3-6, Birmingham, England -2003 -P 235
16 Демин Г С., Малышева О В Изучение роли гена микросомальной эпоксидгидролазы в связи с развитием гестозов у беременных женщин /У Чечовек и его здоровье / Шестая Всероссийская медико-био тогмческая конференция молодых исследователей - СПб, 2003 -С 49-50
17 Демин Г.С. Анализ полиморфизма гена N-ацетил грансферазы 2 в популяции Северозападного региона России // Человек и его здоровье / Седьмая Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей -СПб, 2004 - С 81
18 Demin G S., Malysheva О V , Ivashchenko T E , Baranov V S Polymorphism of PLAT and PAI genes m development of preeclampsia // European Journal of Human Gcnctics - 2004 - V 12, suppl 1 -P 281
19 Demin G S., Malysheva О V , Ivashchenko T E , Baranov V S Polymorphism of vascular system genes (ACE, eNOS, PLAT, PAI-1) in women with preeclampsia Case-control study // Clinical Chemistry and Laboratory Medicine - 2004 - V 42. 4°8 - P A45
20 Dermn G S., Ivashchenko T E , Mozgovaia H V Malysheva О V , Barano\ V S Association of some vascular genetic markers with different forms of preeclampsia // European Journal of Human Genetics -2005 -V 13,suppl 1 -P 331-332
21 Demin G S., Ivashchenko T E , Mozgovaia E V , Baranov V S Genetic polymorphism of HLA-G m severe preeclampsia//European Journal of Human Genetics -2006 -V 14, suppl 1 -P 323
22 Demin G S., Bouba I, Ivashchenko T E, Baranov V S , Georgiou I A Polymorphism of nitric oxide synthases m preeclampsia // European Journal of Human Genetics - 2007 - V 15, suppl 1 -P 272
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1 Абрамченко В В Коспошов Е В Щербина J1А -СПб Logos 1995
2 ЛрнасФ -М Медицина, 1989 - 656 с
3 ГланцС -М Практика 1999 459 с
4 Журавлева И А МетентьевИА Виноградов н А 7 К тин мед - 1997 Т 75 М"! - С 18-2!
5 ЗнльберАП Шифмая Е М Павлов А Г -Петрозаводск 1997 52 с
6 Клинические -М ГЭОТАР Медиа. 2005 512 с
7 Кулаков В И Мурашко Л Е // Акушерство и гинекология -1998 - I 5 С 3-6
8 НапгнбелаАН Павлова Л П СПб Специальная штерапра 1998 76 с
9 РеброваОЮ -M МедиаСфера 2003 312 с
10 СавельеваГМ ШалинаРИ Д-кнвелегова Г Д//Акушерство и гинекология 1992 -Т 3 -С 14 17
11 Серов В Н Стрнжаков А Н Маркин С А -М ООО "Медицинское информационное агитгелю", 1997 424 с
12 СидороваИС КалкгжинаЛС //Акмиерство и гинекология 1998 -I 5 -С го 59
13 Щарабчиев Ю Т ДудннаТВ Минск Книжный Доч 2004 320 с
14 Bachmann S , Mundel Р // Am J Kidney Dis 1994 Vol 24 N I P 112 129
15 Bell J // Hum Mol Genet - 1992 Vol 1 N 3 P 147 148
16 Bussolino F Benedetto С , Massobrio M Camussi G //lancet - 1980 -Vol 2 N 8196 -P 702
17 Cabrera С Bohr D // Biochem Biophys Res Commun - 1995 - Vol 20«, N I P 77 81
18 ChappellS Morgan L //Clin Su (lond) -2006 -Vol 110 N 4 -P 443-458
19 Chen О Wilson R , Wang Ь H Zheng HZ Walker J J McKlllopJH // Clin Exp Immunol - 1996 - Vol 104 N I - P 154 159
20 Clark С J DavicsE Anderson NH Farmer R Fnel E С, Freer R Connell J M //1 lypertensran - 2000 - Vol 36, N 6 P 990 994
21 CnattingiusS Reilly M Pawitan Y Lichtenstein P // Am J Med Genet A 2004 -Vol 130 N 4 -P 365-371
22 Dawson S J Wiman В HamstenA GreenF Humphries S HenneyAM //JBiolChcm - 1993 -Vol 268 N 15 P 10739-10715
23 Day CP Grove 3 Daly А К Siewart M W A\uy P J, Wa'ka M //Diabctologia - 1998 Vol 41 N 4 - P 430434
24 Duleyl Henderson-Smart D J Knight M King J Г // Cochrane Database Syst Rev 2004 -N 1 P CD004659
25 Eriksson P KallinB vantHooftFM Bavmholm P Hamsten A //Proc Nail Acad Sci U S A - 1995 Vol 92 N 6 P 1851 1855
26 FabbroD DElia A V Spizzu R Driul 1 BariMan G DiloreloC Marchesoni D Damante G //Gyneuil Obstet Invest - 2003 - Vol 56 N I -P 1722
27 forstermann U Closs E I Pollock J S Nakane M, Sclmarz P Gath I Klemcrt H //Hjpertension - 1994 - Vol 23 N 6 Pt 2 - P 1121 1131
28 Ichihara S , Yamada Y FupmiiraT NakashimaN Yokota M // Am 1 Cardiol 1998 -Vol 81 N I -P 83-86
29 Khalil R A Granger J P // Am J Physiol Regul Inlegr Comp Physiol 2002 Vol 283 N 1 - P R29-45
30 KlIpatnckDC '/ Hum Rcprod Update 1999 - Vol 5 N 2 P 94-102
31 konnoS HizawaN Yamaguchi E Jimuhi E Nishimura M 111 Allergy Clin Immunol -2001 Vol 108 N 5 -P 810-814
32 Margaelionc M Grandone L Vccchione G Cappueci Ci Giuliani N Colaiuo D Celemano E Panico S Di Minno G II Arterioscler Thromb Vase Biol 1997 Vol 17, N10 P 2082 2087
33 Mello G Parretti I- Gensim F Sticchi E Mecatci F, Scarielli G Genuardi M Abhate R , Fatini С // Hypertension - 2003 - Vol 41 N 4 -P 932 937
34 Mo7govaia E V MalyshevaOV Ivashcbenko T E Baranov V S i/BlMG -2002 - Vol 5 N 3-4 P 19-26
35 Murray J, Du С LedlowA Bates J N Coiiklm J L//Am J Physiol 1991 Vol 261 N 3 Pt 1 - P G40I 406
36 PipkmBF //BiolNeonate - 1999 Vol 76 N 6 P 325 330
37 Ridker PM Gaboury С L , Conlin P R Sedy E W, Williams G H Vaughan D F //( ireulatmn - 1993 Vol 87 N 6 - P 1969 1973
38 Rigat В Hubert С Alhenc-Gelas Г Cambten Г Corvol P SoubncrF U) Clm Invest 1990 Vol 86 N 4 - P 1343 1346
39 SaarilaT Hiltunen M llehsalmi S , Hunonen S LaaksoM // Mol Hum Reprod -2005 -Vol 11 N 6 -P 437440
40 Serrano t-J С Casas J P Diaz I A Paez С Mesa С M, Cifucnlcs R Monterrosa A Bautista A Hawe E Hmgorani A D Vallancc P , Lopez Jaramillo P //Hypertension -2004 - Vol 44 N 5 -P 702-707
41 SnyderSH //Nature 1993 - Vol 364 N 6438 P 577
42 TempferC Unfned G , Zeillingcr R HeflerL Nagelc F lluber J С II Hum Rcprod - 2001a-Vol 16 N 8 - P 1644-1647
43 TempferC В Dortnan К , Deter R L OBrienWE Gregg A R//Hypertens Pregnancy -2001b - Vol 20 N I -P 107-118
44 TiretL Rigat В VisvikisS Breda С Corvol P Cambien 1 SoubnerF //Am J Hum Genet - 1992 - Vol 51 N 1 - P 197-205
45 Vaughan I) Г II Am 1 Cardiol -1997 Vol 79 N 5 A P 12-16
46 VinceGS Starkey P M Austgulen R kwiatkouski D RedmanC VV//BrJObstaCijnaecol - 1995 -\ol 102 N 1 -P 2025
47 Visser W Beckmann I Knook M A Wallenburg H С // Ada Obstet Gynccol Scand 2002 -Vol 81 N 8 -P 713 719
48 Wang X L SimAS BadenhopRF McCredieRM Wiliken О Г//Nat Med 1996 - Vol 2 N I -P 41-45
49 Wang X L Mahaney M С Sim A S Wang J Wang J Blangi.ro 1 Almasv L Badenhop R В Wilcken D E // Artcrioscler Thromb Vase Biol - 1997 Vol 17 N II P 3147 3153
50 Viang Y Walsh SW //J Reprod Immunol - 1996 Vol 32 N 2 P 157-169
51 Warpeha К M Xu W LilL Charles 1G, Patterson С С Ah-Fal F HardmgS lldttPM Ctiakravarthv U Hughes A E//Faseb J - 1999
Vol 13 N 13 P 1825 1832
52 Wilson AG diGiovmcFS BlakemoreAl DuftGW Hunt Mol Genet -1992 - Vol I И S-P 353
53 W luanirkit V // Arch Gynecol Obstet 2006 Vol 273 N 6 - P 322 324
54 Yoslumura T \oshimuraM TabataA Yasue H Okamma H /< Hum Genet 2001 Vol 108 N 3 -P 181 1 S3
Лицензия ЛР №020593 от 07 08 97
Подписано в печать 04 02 2008 Формат 60x84/16 Печать цифровая Уел печ л 1,0 Тираж 100 Заказ 2575Ь
Отпечатано с готового оригинал-макета, предоставленного автором, в Цифровом типографском центре Издательства Политехнического университета 195251, Санкт-Петербург, Политехническая ул, 29 Тел 550-40-14 Тел/факс 297-57-76
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Демин, Григорий Сергеевич
ОГЛАВЛЕНИЕ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Этиология и патогенез преэклампсии.
1.2. Классификация преэклампсии.
1.3. Формирование представлений о генетической природе преэклампсии.
1.4. Генетические факторы, связанные с развитием преэклампсии.
1.4.1. Гены главного комплекса гистосовместимости (HLA).
1.4.2. Гены детоксикации ксенобиотиков (метаболизма).
1.4.3. Гены системы свертывания крови.
1.4.4. Гены, продукты которых участвуют в регуляции артериального давления.
1.4.4.1. Ренин-ангиотензин-альдостероновая и кининоген-калликреиновая системы.
1.4.4.2. Гены ренин-ангиотензин-альдостероновой системы.
1.4.4.3. Ген ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ).
1.4.4.3.1. Функции и локализация ангиотензин-превращающего фермента (АПФ).
1.4.4.3.2. Структура и полиморфизм гена А СЕ.
1.4.4.4. Ген ингибитора активатора плазминогена 1 типа (PAI1).
1.4.4.4.1. Роль ингибитора активатора плазминогена (ИТАП-1) при различных заболеваниях.
1.4.4.4.2. Полиморфизм гена ингибитора активатора плазминогена (РА11).Ъ?>
1.4.5. Гены «эндотелиальной дисфункции».
1.4.5.1. Гены NO-синтетаз (NOS).
1.4.5.1.1. NO-синтетазы и роль оксида азота (NO) в организме.
1.4.5.1.2. Полиморфизм гена нейрональной NO-синтетазы (NOS1).
1.4.5.1.3. Полиморфизм гена индудибельной NO-синтетазы (NOS2).
1.4.5.1.4. Полиморфизм гена эндотелиальной NO-синтетазы (NOS3).
1.4.5.2. Гены цитокинов и ростовых факторов.
1.4.5.2.1. Роль фактора некроза опухолей альфа (TNF-a) в организме.
1.4.5.2.2. Полиморфизм гена TNF-a.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Обследуемые группы.
2.2. Реактивы, ферменты и биопрепараты.
2.3. Экстракция геномной ДНК из лимфоцитов периферической крови.
2.4. Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ-анализ).
2.4.1. Проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР).
2.4.2. Гидролиз ДНК эндонуклеазами рестрикции.
2.4.3. Электрофорез и визуализация результатов.
2.5. Математические методы анализа.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1. Разработка системы молекулярных маркеров для определения риска развития преэклампсии.
3.1.1. Выбор молекулярных маркеров преэклампсии.
3.1.2. Выбор нуклеотидных последовательностей, длин ПЦР продуктов, эндонуклеаз рестрикций и последовательностей праймеров.
3.1.3. Оптимизация условий ПЦР и электрофоретического разделения ПЦР-продуктов.
3.2. Клиническая характеристика исследуемых групп и подгрупп пациентов
3.2.1. Сравнительный анализ клинических параметров у больных с преэклампсией и в контрольной группе в популяционной выборке из СевероЗападного региона России.
3.2.2. Сравнительный анализ клинических параметров у больных с преэклампсией и в контрольной группе в популяционной выборке из СевероЗападного региона Греции.
3.3. Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов исследуемых генов в популяционных выборках из Северо-Западного региона России и СевероЗападного региона Греции.
3.3.1. Анализ соответствия распределений закону Харди-Вайнберга.
3.3.2. Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов исследуемых генов между контрольными группами из Северо-Западного региона России и Северо-Западного региона Греции.:.
3.3.3. Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов исследуемых генов между группами больных с преэклампсией из Северо-Западного региона России и Северо-Западного региона Греции.
3.4. Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов исследуемых генов у больных с преэклампсией и в контрольной группе в* популяционной выборке из Северо-Западного региона России.
3.4.1. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей генов «сосудистой системы».:.
3.4.2. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей генов «эндотелиальной дисфункции».
3.4.3. Анализ сочетаний генотипов по генам «эндотелиальной дисфункции» и «сосудистой системы» у больных с преэклампсией и в контрольной группе
3.4.3.1. Анализ сочетаний «функционально неблагоприятных» и «протективных» генотипов исследуемых генов у больных с преэклампсией и в контроле.
3.4.3.2. Анализ сочетаний «функционально неблагоприятных» и «протективных» генотипов исследуемых генов в подгруппах больных с преэклампсией и в контроле.
3.5. Анализ ассоциации клинических параметров и генотипов по исследуемым генам у больных из Северо-западного региона России.
3.6. Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов исследуемых генов у больных с преэклампсией и в контрольной группе в популяционной выборке из Северо-Западного региона Греции.
3.6.1. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей генов «сосудистой системы».
3.6.2. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей генов «эндотелиальной дисфункции».
3.6.3. Анализ сочетаний генотипов по генам «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» у больных с преэклампсией и в контрольной группе в популяционной выборке из Северо-Западного региона Греции. 130.
3.6.3.1. Анализ сочетаний «функционально неблагоприятных» генотипов исследуемых генов у больных с преэклампсией и в контроле.
3.6.3.2. Анализ сочетаний «функционально неблагоприятных» генотипов исследуемых генов в подгруппах больных с преэклампсией и в контроле. 130 3.7. Анализ ассоциации клинических параметров и генотипов по исследуемым генам у больных из Северо-западного региона Греции.
4. ОБСУЖДЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Анализ ассоциации полиморфизма генов "сосудистой системы" и "эндотелиальной дисфункции" с развитием преэклампсии"
Актуальность проблемы. Исследование преэклампсии или гестоза является одной из наиболее актуальных задач современного акушерства. Преэклампсия занимает лидирующие позиции в патологии беременности. В настоящее время ее частота колеблется от 7% до 22% (Кулаков, Мурашко, 1998, Pipkin, 1999, Клинические., 2005). В структуре причин материнской смертности в Российской Федерации преэклампсия, стабильно занимая 3-е. место, составляет от 11,8% до 14,8% и остается основной причиной заболеваемости и смертности новорожденных (Савельева и др., 1992, Зильбер и др., 1997, Сидорова, Калюжина, 1998). По данным ВОЗ, у каждого пятого ребенка, родившегося от матери с преэклампсией, в той или иной степени нарушено'физическое и психоэмоциональное развитие, значительно, выше уровень заболеваемости в младенческом и раннем детском возрасте (Bussolino et al., 1980, Duley et al., 2004).
Причины развития преэклампсии зависят от многих факторов и до, конца не изучены. Несмотря на многочисленные исследования, во всем мире до сих пор нет единого мнения о причинах возникновения преэклампсии. Несомненно, что заболевание непосредственно связано с беременностью, так как прекращение последней всегда способствует выздоровлению (Клинические., 2005). Существует несколько взаимодополняющих гипотез развития преэклампсии, к ним относятся неврогенная, почечная, плацентарная, иммунологическая и генетическая теории (Абрамченко и др., 1995, Зильбер и др., 1997, Серов и др., 1997, Клинические., 2005, Chappell, Morgan, 2006). Наиболее обоснованной считается роль дисфункции-эндотелиальных клеток в генезе преэклампсии (Клинические., 2005, Chappell, Morgan, 2006).
Согласно данным исследований последних лет, генетическая компонента заболевания может составлять до 50% всех факторов, влияющих на развитие преэклампсии (Cnattingius et al., 2004).
Поиск молекулярных маркеров, ассоциированных с развитием преэклампсии - важнейшая задача для понимания патогенеза, лечения и профилактики заболевания. Однако необходимо отметить, что результаты, полученные разными исследователями при изучении генетической предрасположенности к преэклампсии, зачастую противоречивы. Кроме того, пока еще не разработан системный подход при исследовании данной патологии. Принимая во внимание приоритетность эндотелиальной дисфункции в генезе преэклампсии, значение артериального давления как основного диагностического признака заболевания и данные предыдущих исследований по генетике данной патологии, мы предположили, что именно существование полиморфизма генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» во многом сможет объяснить, очевидные индивидуальные различия в отношении происхождения и течения заболевания.
Таким образом, выявление взаимосвязи *между дисфункцией эндотелия, полиморфизмом генов, ответственных за его функционирование, у больных с преэклампсии поможет приблизить к пониманию роли генетического полиморфизма в патогенезе заболевания.
Цель и задачи исследования. Оценить роль полиморфизма генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» в развитии преэклампсии в двух этнически различающихся популяциях. Достижение этой цели предусматривало решение следующих задач:
1. Разработать систему молекулярных маркеров для анализа полиморфизма генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции».
2. С использованием разработанной системы определить частоты аллельных вариантов генов «сосудистой системы» - АСЕ (I/O) и РАН (4G/5G) и «эндотелиальной дисфункции» - NOS1 (AAT)n, NOS2 (CCTTT)n, NOS3 (894G>T и 4а/4Ь) и TNF-a (-308G>A и -238G>A) у больных с преэклампсией и в контрольной группе в популяционных выборках из Северо-Западного региона России и Северо-Западного региона Греции.
3. Провести сравнительный анализ частот аллельных вариантов генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» в контрольных группах из России и Греции и группах больных с преэклампсией из двух стран и изучить ассоциацию проанализированных молекулярных маркеров со степенью тяжести заболевания, а также с клиническими и биохимическими параметрами у больных с преэклампсией в двух разных популяциях (Россия и Греция).
4. Определить вклад генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» в развитие преэклампсии с учетом межпопуляционных различий.
5. На-основе полученных данных разработать молекулярно-биологическую модель развития преэклампсии при^ наличии- молекулярных маркеров риска заболевания.
Научная новизна работы. Впервые изучены особенности аллельного полиморфизма генов «сосудистой системы» - АСЕ (I/D) и PAI1 (4G/5G) и «эндотелиальной дисфункции» - NOS1 (AAT)n, NOS2 (CCTTT)n, NOS3 (894G>T и 4а/4Ь) и TNF-a (-308G>A и -238G>A) при преэклампсии в популяциях России и Греции, а также проанализирована ассоциация аллельных вариантов изученных генов с тяжестью течения заболевания. Разработаны новые варианты идентификации полиморфных аллелей ряда генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции». Впервые показаны достоверные отличия, как между контрольными группами, так и между группами больных с преэклампсией из России и Греции по частотам аллельных вариантов ряда изученных генов. Впервые выявлены ассоциации между развитием преэклампсии, степенью тяжести заболевания и полиморфизмом генов NOS1 и NOS3 у больных с преэклампсией из СевероЗападного региона России. Впервые показана ассоциация развития преэклампсии, степени тяжести заболевания и полиморфизма генов NOS1, NOS2, NOS3 и TNF-a у больных с преэклампсией из Северо-Западного региона Греции. Впервые показан синергический (аддитивный) эффект различных сочетаний «функционально неблагоприятных» генотипов по генам «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» при развитии и прогрессировании преэклампсии в популяционных выборках из России и Греции. Впервые продемонстрирована ассоциация некоторых аллельных вариантов генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» с изменчивостью клинически значимых признаков у больных с преэклампсией. Впервые предложена молекулярно-биологическая модель развития преэклампсии при наличии молекулярных маркеров риска заболевания. Практическая значимость. Анализ аллельного полиморфизма генов «сосудистой системы» - АСЕ (I/D) и РАН (4G/5G) и «эндотелиальной дисфункции» -NOS1 (AAT)n, NOS2 (ССТТТ)П, NOS3 (894G>T и 4а/4Ь) и TNF-а (-308G>A и -238G>A) можно рекомендовать в качестве прогностического теста для оценки риска развития преэклампсии с учетом межпопуляционных различий.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Разработана система идентификации молекулярных маркеров риска развития преэклампсии.
2. Контрольные группы и группы больных с преэклампсией из России и Греции отличаются по частотам аллелей и генотипов по генам «эндотелиальной дисфункции» (гены NOS1, NOS2, NOS3 и TNF-a).
3. Генотипы NOS1 10/15 и NOS3 4а/4Ь, а также сочетание определенных генотипов по генам «эндотелиальной дисфункции» (NOS1 15/- + NOS3 4а/-) ассоциированы с развитием преэклампсии в популяции Северо-западного региона России.
4. Носительство сочетанного генотипа NOS3 4b/4b + PAI1 4G/- увеличивает риск развития преэклампсии в популяции Северо-западного региона Греции.
5. Выявлена ассоциация определенных сочетаний генотипов по генам «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» с развитием легкой и тяжелой форм преэклампсии в популяциях из России и Греции.
6. Выявленная* ассоциация «функционально неблагоприятных» генотипов по генам1 «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» с преэклампсией подтверждает роль данных метаболических систем (сосудистой и эндотелия) в развитии заболевания:
7. Аллельные варианты генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» ассоциированы с рядом клинических и биохимических параметров у больных с преэклампсией.
8. Предложена молекулярно-биологическая модель развития* преэклампсии. при наличии молекулярных маркеров риска заболевания.
Апробация работы. Результаты работы, были представлены на 12-й и 13-й^ международных междисциплинарных конференциях молодых ученых (Санкт-Петербург, 200 Г, 2006), конференции^ «Молодые биологи Санкт-Петербурга - 300-летию города» (Санкт-Петербург, 2003), Всероссийской конференции Научно-образовательных центров (Казань, 2004), ПГ Международной anti-ageing конференции «Медицина долголетия и качества жизни» (Москва, 2007), 3-й ежегодной встрече Международного общества по фармакогеномике в- 2004 году (Санторини, Греция), на Европейском конгрессе по генетике человека.в 2005 году (Прага, Чехия). Диссертация апробирована на научных 'семинарах Лаборатории пренатальной диагностики наследственных и врожденных болезней человека ГУ научно-исследовательского института акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта и Лаборатории репродуктивной генетики человека Университета г. Иоаннина (Греция).
Работа была подержана грантами Администрации Санкт-Петербурга (М02-2.6Д-726, М03-2.6Д-233, М05-2.6К-435), РФФИ (05-04-58595-з), CRDF (ST-012-0), INTAS (05-109-5066).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 22 работы. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 202 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов и обсуждения, выводов, списка литературы и приложений. Библиографический указатель включает 259 источников, из них 216 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 34 таблицами и 51 рисунком, содержит 3 приложения.
Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Демин, Григорий Сергеевич
выводы
1. Разработана система идентификации ряда молекулярных маркеров преэклампсии.
2. Контрольные группы и группы больных с преэклампсией из России и Греции отличаются по частотам аллелей и генотипов по генам NOSl, NOS2, NOS3 и TNF-a (гены «эндотелиальной дисфункции»).
3. Наличие генотипов NOS1 10/15 и NOS3 4а/4Ь и сочетанного генотипа NOS1 15/- + NOS3 4а/- по генам «эндотелиальной дисфункции» увеличивает риск развития преэклампсии в популяции Северо-западного региона России, а носительство сочетанного генотипа'NOS3 4b/4b + РАИ 4G/— в популяции Северо-западного региона Греции.
4. В популяциях из России и Греции развитие легкой и тяжелой форм преэклампсии ассоциировано с носительством различных специфических молекулярных маркеров.
5. Развитие преэклампсии) ассоциировано с дисбалансом в одних и тех же системах генов («сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции»), но при этом молекулярные маркеры заболевания в разных странах различные.
6. Аллельные варианты генов «сосудистой системы» и «эндотелиальной дисфункции» ассоциированы с некоторыми патогенетически значимыми клиническими и биохимическими параметрами у больных с преэклампсией.
7. Разработана молекулярно-биологическая модель развития преэклампсии при наличии определенных молекулярных маркеров.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Демин, Григорий Сергеевич, Санкт-Петербург
1. Абрамченко В.В., Костюшов Е.В., Щербина JI.A. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве. СПб: Logos, 1995.
2. Ариас Ф. Беременность и роды высокого риска. М.: Медицина, 1989. -656 с.
3. Балуда В.П., Балуда М.В., Деянов И.И. Физиология системы гемостаза. -М.: 1995.-243 с.
4. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1999. -459с.
5. Елисеева Ю.Е. Ангиотензин-превращающий фермент, его физиологическая роль // Вопросы медицинской химии. 2001. - Т. 1. -С.15-21.
6. Животовский JI.A. Популяционная биометрия. М.: Наука, 1991.
7. Журавлева И.А., Мелентьев И.А., Виноградов Н.А. Роль окиси азота в кардиологии и гастроэнтерологии // Клин.мед. 1997. - Т. 75, №4. - С.18-21.
8. Зильбер А.П., Шифман Е.М., Павлов А.Г. Преэклампсия и эклампсия: клинико-физиологические основы и алгоритмы диагностики. Петрозаводск: 1997. 52 с.
9. Клинические рекомендации. Акушерство и гинекология. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 512 с.
10. Кулаков В.И., Мурашко Л.Е. Новые подходы к терминологии, профилактике и лечению гестоза//Акушерство и гинекология. 1998. -Т. 5.-С. 3-6.
11. Мельников В.А., Купаев И.А., Липатов И.С. Противососудистые антитела у женщин с физиологической и осложненной гестозом беременностью // Акушерство и гинекология. 1992. - Т. 3. - С. 19.
12. Нагнибеда А.Н., Павлова Л.П. Неотложные состояния в акушерстве и гинекологии на догоспитальном этапе. СПб: Специальная литература, 1998.-76 с.
13. Насонов E.JI. Противовоспалительная терапия ревматических болезней. М.: М-Сити, 1996. - 345 с.
14. Райе Р.Х., Гуляева Л.Ф. Биологические эффекты токсических соединений / Курс лекций. Новосибирск: 2003. - 203 с.
15. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. М.: МедиаСфера, 2003. -312 с.
16. Савельева Г.М., Шалина Р1И., Дживелегова Г.Д. Принципы профилактики и лечения ОПГ-гестозов // Акушерство и гинекология. -1992.-Т. 3.-С. 14-17.
17. Серов В.Н. Гестоз современная лечебная тактика // Русский Медицинский Журнал. - 2005. - Т. 13, №1. - С. 2-6.
18. Серов В.Н., Стрижаков А.Н., Маркин С.А. Руководство по практическому акушерству. М.: ООО "Медицинское информационное' агентство", 1997. - 424 с.
19. Сидорова И.С., Калюжина JI.C. Профилактика гестоза антиагрегантами и антиоксидантами у беременных с артериальной гипертензией // Акушерство и гинекология. 1998. - Т. 5. - С. 55-59.
20. Фермилен Ж., Ферстрате М. Тромбозы. М.: Медицина, 1986. - 336 с.
21. Худолей B.Bi Канцерогены: характеристики, закономерности, механизмы действия. СПб: НИИ Химии СПбГУ, 1999. - 419 с.
22. Шарабчиев Ю.Т., Дудина Т.В. Показатели здоровья в цифрах и фактах: Справочник. Минск: Книжный Дом, 2004. - 320 с.
23. Akomolafe A., Lunetta K.L., Erlicb P.M., Cupples L.A., Baldwin C.T., Huyck M., Green R.C., Farrer L.A. Genetic association between-endothelial nitric oxide synthase and Alzheimer disease // Clin Genet. 2006. - Vol. 70, N. l.-P. 49-56.
24. Alexander B.T., Miller M.T., Kassab S., Novak J., Reckelhoff J.F., Kruckeberg W.C., Granger J.P. Differential expression of renal nitric oxide synthase isoforms during pregnancy in rats // Hypertension. 1999. - Vol. 33, N. 1, Pt 2. - P. 435-439.
25. Alfirevic Z., Mousa H.A., Martlew V., Briscoe L., Perez-Casal M., Toh C.H. Postnatal screening for thrombophilia in women with severe pregnancy complications // Obstet Gynecol. 2001. - Vol. 97, N. 5, Pt 1. - P. 753-759.
26. Ali M., Khoo S.K., Turner S., Stick S., Le Souef P., Franklin P. NOS1 polymorphism is associated with atopy but not exhaled nitric oxide levels in healthy children // Pediatr Allergy Immunol. 2003. - Vol. 14, N. 4. - P. 261265.
27. Aoki Т., Hirota Т., Tamari M., Ichikawa К., Takeda К., Arinami Т., Shibasaki M., Noguchi E. An association between asthma and TNF-308G/A polymorphism: meta-analysis // J Hum Genet. 2006. - Vol. 51, N. 8. - P.677-685.
28. Arbogast B.W., Leeper S.C., Merrick R.D., Olive K.E., Taylor R.N. Which plasma factors bring about disturbance of endothelial function in preeclampsia? // Lancet. 1994. - Vol. 343, N. 8893. - P. 340-341.
29. Arngrimsson R., Bjornsson S., Geirsson R.T., Bjornsson H., Walker J.J., Snaedal G. Genetic and familial predisposition to eclampsia and preeclampsia in a defined population // Br J Obstet Gynaecol. 1990. - Vol. 97, N. 9. - P. 762-769.
30. Austgulen R., Espevik Т., Mecsei R., Scott H. Expression of receptors for tumor necrosis factor in human placenta at term // Acta Obstet Gynecol Scand. 1992. - Vol. 71, N. 6. - P. 417-424.
31. Bachmann S., Mundel P. Nitric oxide in the kidney: synthesis, localization, and function // Am J Kidney Dis. 1994. - Vol. 24, N. 1. - P. 112-129.
32. Balding J., Kane D., Livingstone W., Mynett-Johnson L., Bresnihan В., Smith O., FitzGerald O. Cytokine gene polymorphisms: association with psoriatic arthritis susceptibility and severity // Arthritis Rheum. 2003. - Vol. 48, N. 5. -P. 1408-1413.
33. Bao S., Rai J., Schreiber J. Expression of nitric oxide synthase isoforms in human pregnant myometrium at term // J Soc Gynecol Investig. 2002. - Vol. 9,N. 6.-P. 351-356.
34. Bazzoni F., Beutler B. The tumor necrosis factor ligand and receptor families // N Engl J Med. 1996. - Vol. 334, N. 26. -P. 1717-1725.
35. Bell J. ACE in the hole // Hum Mol Genet. 1992. - Vol. 1, N. 3. - P. 147148.
36. Benedetto C., Marozio L., Salton L., Maula V., Chieppa G., Massobrio M. Factor V Leiden and factor II G20210A in preeclampsia and' HELLP syndrome // Acta Obstet Gynecol Scand. 2002. - Vol. 81, N. 12. - P. 10951100.
37. Bolis P.F., Martinetti Bianchi M., La Fianza A., Franchi M., Cuccia Belvedere M. Immunogenetic aspects of preeclampsia // Biol Res Pregnancy Perinatol. 1987. - Vol. 8, N. 1, 1st Half. - P. 42-45.
38. Buckova D., Izakovicova Holla L., Vacha J. Polymorphism 4G/5G in the plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) gene is associated with IgE-mediated allergic diseases and asthma in the Czech population // Allergy. -2002. Vol. 57, N. 5. - P. 446-448.
39. Busse R., Mulsch A. Induction of nitric oxide synthase by cytokines in vascular smooth muscle cells // FEBS Lett. 1990. - Vol. 275, N. 1-2. - P. 8790.
40. Bussolino F., Benedetto C., Massobrio M., Camussi G. Maternal vascular prostacyclin activity in pre-eclampsia // Lancet. 1980. - Vol. 2, N. 8196. -P.702.
41. Cabrera C., Bohr D. The role of nitric oxide in the central control of blood pressure //Biochem Biophys Res Commun. 1995. - Vol. 206, N. 1. - P. 7781.t
42. Chappell S., Morgan L. Searching for genetic clues to the causes of preeclampsia // Clin Sci (Lond). 2006. - Vol. 110, N. 4. - P. 443-458.
43. Charbit M., Blazy I., Gogusev J., Pouzet В., Brocart D., Sachs C., Dechaux M. Nitric oxide and the renin angiotensin system: contributions to blood pressure in the young rat // Pediatr Nephrol. 1997. - Vol. 11, N. 5. - P. 617622.
44. Chen G., Wilson R., Wang S.H., Zheng H.Z., Walker J.J., McKillop J.H: Tumour, necrosis factor-alpha (TNF-alpha) gene polymorphism and expression in pre-eclampsia // Clin Exp Immunol. 1996. - Vol. 104, N. 1. -P. 154-159.
45. Chen Y.P., Pfab Т., Slowinski Т., Richter C.M., Godes M., Hocher B. Impacti' of genetic variation of tumor necrosis factor-alpha on gestational hypertension
46. Chin Med J (Engl). 2006. - Vol. 119, N. 9. - P. 719-724.F
47. Chesley L.C., Cooper D.W. Genetics of hypertension in pregnancy: possible single gene control of pre-eclampsia and eclampsia in the descendants of eclamptic women // Br J Obstet Gynaecol. 1986. - Vol. 93, N. 9. - P. 898! 908.
48. Chikosi A.B., Moodley J., Pegoraro R.J., Lanning P.A., Rom L. 5,10f methylenetetrahydrofolate reductase polymorphism in black South African1 women with pre-eclampsia // Br J Obstet Gynaecol. 1999. - Vol. 106, N. 11.f-P. 1219-1220.t
49. Glark C.J., Davies E., Anderson N.H., Farmer R., Friel E.G., Fraser R:, Gonnell J.M. Alpha-adducin and angiotensin I-converting enzyme polymorphisms in essential hypertension // Hypertension. 2000. - Vol. 36, N. 6. - P. 990-994.
50. Daher S., Sass N., Oliveirar E.G., Mattar R. Cytokine genotyping in preeclampsia // Am J Reprod Immunol. 2006. - Vol; 55, N. 2. - P. 130-135.
51. Dahlback B. New molecular insights into the genetics of thrombophilia. Resistance to activated protein С caused by Arg506 to Gin mutation in factor
52. V as a pathogenic risk factor for venous thrombosis // Thromb Haemost. -1995. Vol. 74, N. 1. - P. 139-148.
53. Dalmaz C.A., Santos K.G., Botton M.R., Tedoldi C.L., Roisenberg I. Relationship between polymorphisms in thrombophilic genes and preeclampsia in a Brazilian population // Blood Cells Mol Dis. 2006. - Vol. 37,N. 2.-P. 107-110.
54. Day C.P., Grove J., Daly A.K., Stewart M.W., Avery P.J., Walker M. Tumour necrosis factor-alpha gene promoter polymorphism and decreased insulin resistance // Diabetologia. 1998. - Vol. 41, N. 4. - P. 430-434.
55. Dekker G.A., Sibai B.M. Etiology and pathogenesis of preeclampsia: current concepts // Am J Obstet Gynecol. 1998. - Vol. 179, N. 5. - P. 1359-1375.
56. Demin G.S., Ivashchenko Т.Е., Mozgovaia H.V., Malysheva O.V., Baranov V.S. Association of some vascular genetic markers with different forms of preeclampsia // Eur J Hum Genet. 2005. - Vol. 13, N. 1. - P. 331-332.
57. Diet F., Pratt R.E., Berry G.J., Momose N., Gibbons G.H., Dzau V.J. Increased accumulation of tissue ACE in human atherosclerotic coronary artery disease // Circulation. 1996. - Vol. 94, N.l 1. - P. 2756-2767.
58. Disentangling fetal and maternal susceptibility for pre-eclampsia: a Britishmulticenter candidate-gene study // Am J Hum Genet. 2005. - Vol. 77, N. 1.-P. 127-131.
59. Duley L., Henderson-Smart D.J., Knight M., King J.F. Antiplatelet agents for preventing pre-eclampsia and its complications // Cochrane Database Syst Rev. 2004. - N. 1. - P. CD004659.
60. Ehlers M.R., Riordan J.F. Angiotensin-converting enzyme: new concepts concerning its biological role // Biochemistry. 1989. - Vol. 28, N. 13. -P.5311-5318.
61. Elkins J.S., Douglas V.C., Johnston S.C. Alzheimer disease risk and genetic variation in ACE: a meta-analysis // Neurology. 2004. - Vol. 62, N. 3. -P.363-368.
62. Esplin M.S., Fausett M.B., Fraser A., Kerber R., Mineau G., Carrillo J., Varner M.W. Paternal and maternal components of the predisposition to preeclampsia // N Engl J Med. 2001. - Vol. 344, N. 12. - P. 867-872.
63. Fabbro D., D'Elia A.V., Spizzo R., Driul L., Barillari G., Di Loreto C., Marchesoni D.,' Damante G. Association between plasminogen activator inhibitor 1 gene polymorphisms and preeclampsia // Gynecol Obstet Invest. -2003. Vol. 56, N. 1. - P. 17-22.
64. Forstermann U., Closs E.I., Pollock J.S., Nakane M., Schwarz P., Gath I., Kleinert H. Nitric oxide synthase isozymes. Characterization, purification, molecular cloning, and functions // Hypertension. 1994. - Vol. 23, N. 6, Pt 2. - Р.Л 121-1131.
65. Fox, C.S., Heard-Costa N.L., Vasan R.S., Murabito J.M., D'Agostino R.B., Sr:, Atwood L.D. Genomewide linkage analysis of weight change in the, Framingham Heart Study // J Clin Endocrinol Metab. 2005. - Vol. 90, N. 6. -P. 3197-3201.
66. Freedman B.I., Yu H., Anderson P:J., Roh B.H., Rich S.S., Bowden D.W. Genetic analysis of nitric oxide and endothelin in end-stage renal^"disease // Nephrol Dial Transplant. 2000. - Vol. 15, N. 11. - P. 1794-1800.
67. Friedman S.A., Taylor R.N., Roberts J.M. Pathophysiology of preeclampsia // Clin Perinatal. 1991. - Vol. 18, N. 4. - P. 661-682.
68. Galao A.O., de Souza L.H., da Costa B.E., Scheibe R.M., Poli de Figueiredo C.E. Angiotensin-converting enzyme gene polymorphism in preeclampsia and normal pregnancy // Am J Obstet Gynecol. 2004. - Vol. 191, N. 3. - P. 821824.
69. Giner V., PochE., Bragulat E., Oriola J., Gonzalez D., Coca A., De La Sierra^ A. Renin-angiotensin-system genetic polymorphisms and salt sensitivity in essential hypertension // Hypertension. 2000. - Vol. 35, N. 1, Pt 2. - P. 512517.
70. Goodfellow C.F. Maternal lymphocyte responses during normal and abnormal pregnancies, measured in vitro using composite trophoblast antigens and phytohaemagglutinin // Immunol Rev. 1983. - Vol. 75. - P. 61-85.
71. Grasemann H., Drazen J.M., Deykin A., Israel E., De Sanctis G.T., Pillari A., Yandava C.H. Simple tandem repeat polymorphisms in the neuronal nitricoxide synthase gene in different ethnic populations // Hum Hered. 1999: -Vol. 49, N.3.-P. 139-141.
72. Hassetti C., Aicher L., Sidhu J.S., Omiecinski C.J. Human microsomal epoxide hydrolase: genetic polymorphism and functional expression in vitro ofamino acid variants // Hum Mol Genet. 1994. - Vol. 3, N. 3. - P: 421-428. ,.
73. Hatagima A. Genetic polymorphisms , and! metabolism of endocrine disruptorsi in cancer susceptibility // Cad Saude Publica. 2002. -Vol. 18, N. 2. - P. 357377.
74. Ileiskanen J., Romppanen E.L., Hiltunem M:, Iivonen S., Mannermaa A., Punnonen K., Heinonen S. Polymorphism in- the tumor necrosis factor-alpha gene in women with preeclampsia // J Assist Reprod Genet. 2002. - Vol. 19, N. 5. - P. 220-223.
75. Hofmann G.E., Rao C.V., Brown M.J., Murray L.F., Schultz G.S., Siddiqi T.A. Epidermal growth factor in urine of nonpregnant women and pregnant women throughout pregnancy and at delivery // J Clin Endocrinol Metab. -1988. Vol. 66, N. 1. - P. 119-123.
76. Hooper N.M. Angiotensin converting enzyme: implications from molecular biology for its physiological functions // Int J Biochem. 1991. - Vol; 23, N. 7-8.-P. 641-647.
77. Humphries A.W., Dewolfe V.G., Lafevre F.A., Britton R.C. Arteriosclerotic abdominal aortic aneurysms // Postgrad Med. 1960. - Vol. 28. - P.' 236-241.
78. Hunley Т.Е., Iwasaki S., Homma Т., Коп V. Nitric oxide and endothelin in* pathophysiological settings // Pediatr Nephrol. 1995. - Vol. 9, N. 2. - P. 235244.
79. Hviid T.V., Hylenius S., Rorbye C., Nielsen L.G. HLA-G allelic variants are associated with differences in the HLA-G mRNA isoformjproflle and HLA-G mRNA levels // Immunogenetics. 2003. - Vob. 55, N. 2. - P. 63-79.
80. Hylenius S., Andersen A.M., Melbye M., Hviid T.V. Association between' HLA-G genotype and risk of pre-eclampsia: a case-control study using family triads // Mol Hum Reprod. 2004. - Vol. 10, N. 4. - P. 237-246.
81. Jeng J.R. Association of PAI-1 gene promoter 4G/5G polymorphism with plasma PAI-1 activity in Chinese patients with and without hypertension // Am J Hypertens. 2003. - Vol. 16, N. 4. - P. 290-296.
82. Johannesen J., Tarnow L., Parving H.H., Nerup J., Pociot F. CCTTT-repeat polymorphism in the human NOS2-promoter confers low risk of diabetic nephropathy in type 1 diabetic patients // Diabetes Care. 2000. - Vol. 23, N.4. - P. 560-562.
83. Johnston C.I. Franz Volhard Lecture. Renin-angiotensin system: a dual tissue and hormonal system for cardiovascular control // J Hypertens Suppl. 1992. -Vol. 10, N. 7. - P. SI 3-26.
84. Kaiser Т., Brennecke S.P., Moses E.K. Methylenetetrahydrofolate reductase polymorphisms are not a risk factor for pre-eclampsia/eclampsia in Australian women // Gynecol Obstet Invest. 2000. - Vol. 50, N. 2. - P. 100-102.
85. Kaiser Т., Brennecke S.P., Moses E.K. C677T methylenetetrahydrofolate reductase polymorphism is not a risk factor for pre-eclampsia/eclampsia among Australian women // Hum Hered. 2001. - Vol. 51, N. 1-2. - P. 20-22.
86. Kaiser Т., Grehan M., Brennecke S.P., Moses E.K. Association of the TNF2 allele with eclampsia // Gynecol Obstet Invest. 2004. - Vol. 57, N. 4. -P.204-209.
87. Khalil R.A., Granger J.P. Vascular mechanisms of increased arterial pressure in preeclampsia: lessons from animal models // Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2002. - Vol. 283, N. 1. - P. R29-45.
88. Kilpatrick D.C. Influence of human leukocyte antigen and tumour necrosis factor genes on the development of pre-eclampsia // Hum Reprod Update. -1999.-Vol. 5, N. 2.-P. 94-102.
89. Kilpatrick D.C., Liston W.A., Gibson F., Livingstone J. Association betweenssusceptibility to pre-eclampsia within families and HLA DR4 // Lancet. -1989. Vol. 2, N. 8671. - P. 1063-1065.
90. Knight J.C., Udalova I., Hill A.V., Greenwood B.M., Peshu N., Marsh K., Kwiatkowski D. A* polymorphism that affects OCT-1 binding to the TNF promoter region is associated with severe malaria // Nat Genet. 1999. - Vol. 22,N. 2.-P. 145-150.
91. Kobashi G., Yamada H., Ohta K., Kato E., Ebina Y., Fujimoto S. Endothelial nitric oxide synthase gene (NOS3) variant and hypertension in pregnancy // Am J Med Genet. 2001. - Vol. 103, N. 3. - P. 241-244.
-
Демин, Григорий Сергеевич
-
кандидата биологических наук
-
Санкт-Петербург, 2008
-
ВАК 03.00.03
- Ассоциации генетических полиморфизмов вазоактивных гормонов с развитием преэклампсии
- Генетические факторы развития преэклампсии в популяциях различного этнического происхождения
- Исследование роли генетических полиморфизмов цитокинов в развитии преэклампсии
- Изучение ассоциаций молекулярно-генетических маркеров ренин-ангиотензиновой системы с формированием преэклампсии
- Изучение роли генов-кандидатов фолатного обмена в формировании преэклампсии
