Использование методов маркер-вспомогательной селекции в молочном скотоводстве Республики Татарстан

Ахметов, Тахир Мунавирович

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Использование методов маркер-вспомогательной селекции в молочном скотоводстве Республики Татарстан
ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Использование методов маркер-вспомогательной селекции в молочном скотоводстве Республики Татарстан"

003481262

На правах рукописи

АХМЕТОВ ТАХИР МУНАВИРОВИЧ

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДОВ МАРКЕР-ВСПОМОГАТЕЛЬНОЙ СЕЛЕКЦИИ В МОЛОЧНОМ СКОТОВОДСТВЕ РЕСПУБЛИКИ ТАТАРСТАН

06.02.01 - Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

_ г ■-"О

9 9 гу;(

Казань-2009

003481262

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор

Кабиров Галимзян Фазылзянович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Пронин Борис Григорьевич

доктор биологических наук, профессор Калашникова Любовь Александровна

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Родионов Геннадий Владимирович

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Московская государственная

академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

Защита диссертации состоится 20 ноября 2009 г. в «_» часов на заседании

диссертационного совета Д.220.034.02 при ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» по адресу: 420074, г. Казань, ул. Сибирский тракт, 35; тел. 273-96-17.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» (420074, г. Казань, ул. Сибирский тракт, 35).

Автореферат разослан «_»_2009 г. -

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Н.Н. Мухаметгалиев

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Одной из основных задач в области молочного скотоводства является получение высокопродуктивных животных, молоко которых обладает оптимальными технологическими качествами. Однако селекционная работа, базирующаяся только на классических подходах, в настоящее время не обеспечивает высокого селекционного эффекта и не удовлетворяет потребностям сегодняшнего дня.

Опыт многих стран свидетельствует о важности селекции коров по белковомолочности, так как это во многом определяет пищевую ценность молока и его технологические свойства. В связи с возрастающими требованиями рынка к качеству молочной продукции, в частности к количеству и составу молочного белка, а также к сыродельным характеристикам молока, возникает насущная необходимость в выявлении и использовании в селекции генетических маркеров, связанных с качественными признаками молочной продуктивности. Одним из таких маркеров считается тестирование животных по локусу гена каппа-казеина.

Многие исследователи, изучавшие влияние аллелей гена каппа-казеина на качество молока, обнаружили устойчивую связь аплеля В каппа-казеина с технологическими свойствами молока, а также обильномолочностью. Так, В-аллельный вариант каппа-казеина связан с наиболее коротким временем коагуляции и затвердения, соответствует лучшей консистенции и композиции сгустка при изготовлении твердых и полутвердых сыров.

Известно, что в сыроделии происходят значительные перебои в выработке сыра, связанные с низким качеством молока в переходный период (весенний), что сказывается на эффективности производства. При производстве того или иного продукта молоко должно отвечать определенным технологическим требованиям. Так, при производстве сыров, особенно твердых его сортов, большое внимание уделяется составу молока. Содержание казеина в этом молоке должно быть не менее 75%, а таких фракций, как (хбСп, (альфа б-казеин), рСп (бета-казеин), кСп (каппа-казеин) 91% от общего его количества. Молоко должно хорошо свертываться под действием сычужного фермента, быть термостабильным, обладать хорошими синергическими свойствами и высоким выходом конечной продукции.

В селекционной работе с крупным рогатым скотом характеристика молока проводится в основном по удою, жиру и общему содержанию белка, однако полиморфизму белков молока пока не уделяется должного внимания.

В связи с возрастающими требованиями к качеству молока и молочной продукции, возникает необходимость использования в селекции генетических маркеров, связанных с признаками молочной продуктивности. В сложившейся ситуации требуется изменение в методах оценки признаков селекции животных. К классическим методам селекции животных необходимо добавить новые подходы, связанные с достижениями генетики и биотехнологии. Одним из современных методов повышения продуктивных качеств животных является маркер-вспомогательная селекция, которая опирается на молекулярно-генетические методы анализа, а именно ПЦР-ПДРФ анализ, который отличается высокой чувствительностью, быстротой, точностью и легкостью в исполнении.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является использование современных методов маркер-вспомогательной селекции ПЦР-ПДРФ и электрофорез в ПААГ для совершенствования молочного скота Республики Татарстан. В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

- разработать современные методы генотипирования крупного рогатого скота по гену каппа-казеина;

- определить частоту встречаемости аллельных вариантов и генотипов каппа-казеина у крупного рогатого скота татарстанского типа с использованием ДНК-диагностики;

- изучить показатели молочной продуктивности (удой, содержание жира и белка, типы лактационных кривых) коров с разными генотипами каппа-казеина;

- изучить качество и технологические свойства молока коров с разными генотипами каппа-казеина;

- изучить качество и технологические свойства молочных продуктов, изготовленных из молока коров с разными генотипами каппа-казеина;

- охарактеризовать воспроизводительные качества коров с разными генотипами каппа-казеина;

- изучить селекционно-генетические параметры молочной продуктивности коров с разными генотипами каппа-казеина;

- определить экономическую эффективность использования коров с разными генотипами каппа-казеина.

Научная новизна. Оптимизирована техника выделения ДНК и техника ПЦР-ПДРФ для генотипирования крупного рогатого скота по гену каппа-казеина.

Разработана методика высокоточной ПЦР («Способ проведения ПЦР» -патент РФ на изобретение № 2299240) и «способ проведения аллель-специфичной ПЦР для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина» (патент РФ на изобретение № 2337141) с оптимизированной техникой 2-х стадийной ПЦР.

Выявлен полиморфизм и определена частота встречаемости аллельных вариантов по гену каппа-казеина у крупного рогатого скота татарстанского типа в Республике Татарстан. Изучена взаимосвязь генотипа каппа-казеина с молочной продуктивностью и технологическими свойствами молока. Установлено влияние генотипа животных по локусу гена каппа-казеина на показатели молочной продуктивности и технологические свойства молока при приготовлении полутвердого сыра, творога и йогурта.

внедрены в производство на примере ООО «Серп и молот», ОАО «Бирюлинский», ГПП «Элита», ОАО «В амин-Татарстан» Высокогорский молочный завод, Высокогорского района, СХПК им. Ленина Атнинского района, Чистопольский молочный комбинат Чистопольского района РТ, что привело к увеличению количества, улучшению качества животноводческой продукции, повышению экономической эффективности, на что имеются акты внедрения. По результатам исследований выпущены методические рекомендации по использованию новейших достижений ДНК-технологий в селекционно-племенной работе, направленной на улучшение технологических свойств молока (Казань, 2007), которые широко используются специалистами селекционных центров, племенных предприятий, а также зоотехниками селекционерами. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:

- республиканских научно-практических конференциях по проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 1994,1995,1996).

- 2-й Республиканской научно-производственной конференции молодых ученых и специалистов (Казань, 1996).

- 2-й Международной конференции по молекулярно-генетическим маркерам животных (Киев, 1996).

- научно-производственной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов агропромышленного факультета посвященной к 80-летию КГСХА (Казань, 2002).

- материалах научных исследований сотрудников КГСХА (Казань, 2003).

- международной конференции «Современные проблемы аграрной науки и пути их решения (Ижевская ГСХА, 2005).

- всероссийской научно-практической конференции, посвященной 85-летию ТатНИИСХ и 1000-летию Казани (Казань, 2005).

- международной научной конференции «Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства (Москва, Дубровицы, 2005).

- международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы совершенствования технологии производства и переработки продукции сельского хозяйства» (Йошкар-Ола, 2007).

- всероссийской научно-практической конференции «Технологические и технические аспекты развития сельского хозяйства» Посвящается 85-летию КГАУ (Казань, 2007).

- конференции молодых ученых РГАУ - МСХА имени К.А. Тимирязева (Москва, 2007).

- годовых отчетах по науке КГАВМ (1992-2000), КГАУ (2001-2007), ГНУ ТатНИИСХ (2005-2007).

- всероссийской научно-практической конференции «Современные подходы развития АПК» посвященной 135-летию КГАВМ им. Н.Э. Баумана (Казань, 2008).

«Генетика», «Ветеринарная практика», «Ученые записки КГАВМ», «Вестник КГАУ», методической рекомендации. Получено два патента на изобретение. Основные положения, выносимые на защиту.

- оптимизация техники выделения ДНК и техники ПЦР-ПДРФ для генотипирования крупного рогатого скота по гену каппа-казеина и разработка новых способов проведения ПЦР.

- влияние генотипа каппа-казеина у коров татарстанского типа на молочную продуктивность, качество и технологические свойства молока.

- влияние генотипа каппа-казеина у коров татарстанского типа на качество и технологические свойства белковомолочных продуктов, изготовленных из молока таких животных.

- экономическая эффективность использования коров с разными генотипами каппа-казеина.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 277 страницах компьютерного текста, содержит 57 таблиц, 25 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, предложений производству, списка литературы и приложений.

Библиографический список использованной литературы включает 528 источников, в том числе 198 на иностранных языках. Прилагаются акты внедрения, патенты на изобретение, методические рекомендации и другие документы, подтверждающие результаты исследований, их научно-практическую ценность.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования по теме диссертации проводились в период с 1990 по 2007 гг. на кафедре генетики и селекции с.-х. животных ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины», на кафедре технология производства и переработки продукции животноводства ФГОУ ВПО «Казанский государственный аграрный университет», в лаборатории молекулярно-генетических исследований ГНУ «Татарский научно-исследовательский институт сельского хозяйства», в отделе генно-молекулярной диагностики ФГУ «Татарская межрегиональная ветеринарная лаборатория», ООО «Серп и Молот», ОАО «Племзавод «Бирюлинский», молочном заводе ОАО «Вамин-Татарстан» Высокогорского района, ОАО «Чистопольский молочный комбинат» Чистопольского района и в СХПК им. Ленина Атнинского района, а также в ГУЛ головном племенном предприятии «Элита» Высокогорского района Республики Татарстан.

Для исследования по принципу аналогов (А.И. Овсянников, 1976) были сформированы 3 группы коров-первотёлок татарстанского типа. В первую группу включены первотёлки с генотипом каппа-казеина А А (контрольная группа), во вторую - генотипом АВ, в третью - генотипом ВВ. Научно-хозяйственные опыты поставлены согласно схеме исследования (рис. 1).

Исследование полиморфизма у коров татарстанского типа гена каппа-

казеина и белков молока с помощью методов ДНК-диагпостнкн и _электрофореза в ПААГ_

Выявление аллельных вариантов, оценка частоты встречаемости аллелей и генотипов, степени гетерозиготности, наличия генного равновесия

быки-производители Ч/П и помесные по голштинской породе

Группы

Генотип каппа-казеина

АА

АВ

ВВ

Оценка быков-производителей по молочной продуктивности (удой и содержание жира) их матерей

коровы татарстанского типа

Группы

Генотип каппа-казеина

АА

АВ

ВВ

Оценка влияния генотипов каппа-казенна на хозяйственно-

полезные признаки коров _татарстанского типа_

Молочная продуктивность коров татарстанского типа с разными _генотипами каппа-казенна_

Удой за первую лактацию, динамика удоя за лактацию. Типы лактационных

кривых, спадаемость и коэффициент постоянства лактационных кривых. _Динамика изменения содержания белка и жира в молоке_

Оценка качества и технологических свойств молока коров _татарстанского типа с разными генотипами каппа-казенна_

Состав, физико-химические показатели, белковые фракции, сыропригодность __и термоустойчивость молока _

Оценка качества и технологических свойств молочных продуктов, изготовленных из молока коров с разными генотипами каппа-казенна

Приготовление сыра, творога и йогурта из молока коров с разными

_генотипами каппа-казеина, определение качества продуктов_

_▼__

Оценка воспроизводительных качеств коров татарстанского типа с _разными генотипами каппа-казенна_

Продолжительность сервис-периода и межотельного периода, коэффициент _воспроизводительной способности, индекс Дохи_

Экономическая эффективность использования коров с разными генотипами каппа-казеина

Рис. 1. Схема исследований

Для проведения исследований и оценки хозяйственно-полезных признаков в зависимости от генотипа каппа-казеина, было отобрано 225; 219 и 164 первотёлки татарстанского типа в ООО «Серп и Молот», СХГЖ им. Ленина и ОАО «Племзавод «Бирюлинский», 70 быков-производителей ГУЛ ГПП «Элита». Объем выполненных исследований представлен в таблице 1.

Таблица 1. Объем выполненных исследовании

Вид исследований Количество проб

Выделение ДНК 1356

Проведение ПЦР-ПДРФ 2034

Проведение высокоточной ПНР 678

Проведение аллель-специфичной ПЦР 678

Определение состава и физико-химических показателей молока общепринятыми методами 608

Анализ белкового состава молока методом гель электрофореза по 15 фракциям 608

Оценка сыродельческих свойств молока по сычужной свертываемости 608

Исследование термоустойчивости молока 608

Приготовление и исследование сыра, творога и йогурта 608

В работе наряду с экспериментальными материалами использовались данные зоотехнического и племенного учета данного хозяйства, то есть племенные карточки коров и быков (формы: 1-МОЛ, 2-МОЛ), а также каталоги и племенные свидетельства быков-производителей.

Исследуемые стада хозяйств ООО «Серп и Молот», ОАО «Племзавод «Бирюлинский» и СХПК им. Ленина представлены молочным скотом татарстанского типа (патент на селекционное достижение № 3037 выдан по заявке № 9463135 с датой приоритета 03.03.2005, свидетельство № 42923), созданного путем скрещивания холмогорской, черно-пестрой и голштинской пород (1/8 X + 1/16 Ч-П+ 13/16 Г).

Все животные в течение проведения опыта находились в одинаковых условиях кормления и содержания, а также были клинически здоровыми. Обслуживающий персонал в период проведения исследований был постоянным, что исключало влияние данного стрессового фактора на хозяйственно-полезные признаки животных.

Коровам скармливали корма по принятым в хозяйстве рационам с учетом норм и рационов кормления сельскохозяйственных животных (А.П. Калашников и др., 2003). Рационы кормления подопытных коров-первотелок были сбалансированы по 23 показателям. Основные корма зимнего периода состояли из сена (разнотравного или лугового), сенажа (люцернового или вико-овсяного), силоса (кукурузного), соломы (пшеничной), которые коровы получали в одинаковом количестве, концентрированные корма и корнеплоды в зависимости от фактического удоя. Кормление коров в летний период обеспечивалось за счёт

зелёного корма на пастбище и в виде зелёной подкормки при содержании в стойлах. Кроме того, давали концентрированные корма. Первотёлкам скармливали концентраты в расчёте 330 - 370 г на 1 кг молока.

В структуре рациона по питательности в зимний период грубые корма составили 19-22%, сочные - 40-45%, концентрированные - 30-33%; в летний период - зелёные корма - 80-85%, концентраты - 15-20%. Затраты кормов составили: на 1 кг молока 0,94-0,99 ЭКЕ, в среднем за лактацию 4868-5061 ЭКЕ. Высокий уровень кормления поддерживается на протяжении многих лет.

Выделение ДНК из крови.

Кровь, полученную из яремной вены животных, вносили в пробирки с имеющимся 100 мМ раствором ЭДТА (рН 8,0), в соотношении 10:1.

ДНК из крови выделяли разработанным нами аммиачным и комбинированным щелочным способом.

Аммиачный способ: 100 мкл крови смешивали с 1000 мкл дистиллированной воды и центрифугировали при 10000 об/мин в течение 10 мин. Супернатант отбрасывали, а к осадку добавляли 100 мкл 10 % раствора аммиака (25 - 37 °С) и тщательно встряхивали смесь на вортексе при комнатной температуре до просветления суспензии. Полученный гомогенат выдерживали в термостате при 95°С в течение 15 мин с открытой пробиркой.

Комбинированный щелочной способ:

100 мкл крови смешивали с 1000 мкл дистиллированной воды и центрифугировали при 10000 об/мин в течение 10 мин. Супернатант отбрасывали, а к осадку добавляли 50 мкл 0,2 М №ОН и тщательно встряхивали смесь на вортексе при комнатной температуре до просветления суспензии. Полученный гомогенат выдерживали в термостате при 60°С в течение 15 мин. К лизату добавляли равный объем (50 мкл) 1М Трис-НС1 (рН 8,0) и тщательно встряхивали смесь на вортексте при комнатной температуре. Затем смешивали с 500 мкл 96% этанола осторожным покачиванием пробирки и выдерживали полученную смесь в морозильнике при -20°С в течение 30 мин. Нуклеопротеидный комплекс осаждали центрифугированием при 12000 об/мин в течение 10 мин. Супернатант отбрасывали, а осадок высушивали при 60°С в течение 10 мин с открытой пробиркой. К высушенному осадку добавляли 100 мкл 10% аммиака, тщательно встряхивали смесь на вортексе при комнатной температуре и выдерживали в термостате при 60°С в течение 15 мин, затем повторно встряхивали на вортексе и повторяли процедуру термостатирования (60°С, 15 мин). Полученный гомогенат инкубировали в термостате при 95°С в течение 15 мин с открытой пробиркой. Препараты ДНК хранили в условиях морозильника. Перед использованием пробы ДНК размораживали в термостате при 37°С в течение 15 минут.

Условия проведения ПЦР-ПДРФ для генотнпирования крупного рогатого скота по гену каппа-казеина. Для оценки качества работы известных протоколов по генотипированию крупного рогатого скота по гену каппа-казеина была протестирована серия олигонуклеотидных праймеров (табл. 2) по оптимизированной нами технике ПЦР-ПДРФ.

Таблица 2. Серия праймеров для генотипирования кр.рог.ск. по гену каппа-казеина, протестированных в данной работе

Праймеры ПЦР продукт (bp) ПД РФ

Hinfl HindIII

AA BB AB AA BB AB

АВ1: 5'-TGTGCTGAGTAGGTATCCTAGTTATGG-3' АВ2: 5-GCGTTGTCTTCTTTGATGTCTCCTTAG-3' A. Barroso et al. (1998) 453 326 100 27 426 27 426 326 100 27 453 351 102 453 351 102

Kl: 5'-GAAATCCCTACCATCAATACC-3' K2: 5'-CCATCTACGCTAGTTTAGATG-3' S. Kaminski (1990) 271 131 91 49 222 49 222 131 91 49 271 182 89 271 182 89

JK5: 5'-TCATTTATGGCCATTCCACCAAAG-3' JK3: 5'-GCCCATTTCGCCTTCTCTGTAACAGA-3' J.F. Medrano and E. Aguilar-Cordova (1990) 350 134 131 85 265 85 265 134 131 85 350 218 132 350 218 132

ПЦР проводили на программируемом термоциклере «Терцик» (Россия) в объеме реакционной смеси 20 мкл, содержащей 60 мМ трис-HCl (рН 8,5), 1,5 мМ MgCl2, 25 мМ KCI, 10 мМ меркаптоэталол; ОД мМ тритон Х-100; 0,2 мМ дНТФ, 1 ед. Taq ДНК полимеразы, по 0,5 мкМ каждого из праймеров АВ1 и АВ2, сконструированных A. Barroso et al. (1998) для амплификации фрагмента гена каппа-казеина длиной 453 Ьр [(по 0,5 мкМ каждого из праймеров К1 и К2, сконструированных S. Kaminski (1990) для амплификации фрагмента гена каппа-казеина длиной 271 Ьр), (по 0,5 мкМ каждого из праймеров JK5 и ЖЗ, сконструированных J.F. Medrano and Е. Aguilar-Cordova (1990) для амплификации фрагмента гена каппа-казеина длиной 350 Ьр)], 1 мкл пробы ДНК в оптимизированных режимах:

х 1: 94 °С - 4 мин; х40: 94 °С - 10 сек, 63 °С - 10 сек, 72 сС - 10 сек;

xl: 72 °С-5 мин; хранение: 4 °С (для праймеров АВ1+АВ2 и JK5+JK3; рис. 2,4).

х 1: 94 °С - 4 мин; х40: 94 °С - 30 сек, 61 °С - 30 сек, 72 °С - 30 сек;

х1: 72 °С - 5 мин; хранение: 4 °С (для праймеров К1+К2; рис. 3).

Для ПДРФ-идентификации генотипов гена каппа-казеина 20 мкл ПЦР-пробы обрабатывали 10 ед. эндонуклеазы рестрикции Hinf I в 1хбуфере «О» фирмы СибЭнзим (Россия) или 10 ед. эндонуклеазы рестрикции HindIII в 1 ^буфере «W» фирмы СибЭнзим (Россия) при 37 °С течение ночи.

Для визуализации фрагментов ДНК пробы вносили в лунки 2,5 % агарозного геля с содержанием этидия бромида (0,5 мкг/мл) и проводили горизонтальный электрофорез при 15 В/см в течение 50 мин в lxTBE буфере.

После электрофореза гель просматривали в УФ-трансиллюминаторе при длине волны 310 нм и фотографировали с использованием оранжевого светофильтра. Идентификацию генотипов определяли по количественным и качественным признакам ПЦР-ПДРФ.

Разработанная методика высокоточной ПЦР протестирована в сравнении с классической ПЦР и ближайшим аналогом на предмет оценки аллельного полиморфизма гена каппа-казеина крупного рогатого скота.

Классическую ПЦР проводили на программируемом термоциклере «Терцик» (Россия) в объеме 20 мкл, содержащей 60 мМ Трис-HCl (рН 8,5), 1,5 мМ

¡^С12, 25 мМ КС1, 10 мМ меркаптоэтанол; 0,1 мМ тритон Х-100; 0,2 мМ дНТФ, 0.5 ед. Тац ДНК полимеразы, 0.5 мкМ праймера Ж5: 5/-АТСАТТ ТАТССССАТТССАССАААО-З' (расчетная Гт=60,8°С), 0,5 мкМ праймера ЖЗ: 5/-ССССАТТТССССТТСТСТСТААСАСА-3/ (расчетная Тт= 66,7°С), сконструированных J.F. Мес1гапо & Е. А£ш1аг-Согс1оуа (1990) для амплификации фрагмента гена каппа-казеина длиной 350 пар нуклеотидов, 1 мкл пробы ДНК, выделенную из лейкоцитов крови крупного рогатого скота в режиме: * 1: 94°С - 4 мин; х40: 94°С - 30 сек, 60°С - 30 сек, 72°С - 30 сек; *1: 72°С - 10 мин (рис. 5, трек 4), а также оптимизированном нами режиме: *1: 94 °С - 4 мин; х40: 94°С -10 сек, 63°С - 10 сек, 72°С - 10 сек; х 1:72°С - 5 мин (рис. 4).

Предлагаемый способ ПЦР проводили на программируемом термоциклере «Терцик» (Россия) в объеме 20 мкл, содержащей 60 мМ Трис-НС1 (рН 8,5), 1,5 мМ МёС12, 25 мМ КС1, 10 мМ меркаптоэтанол; 0,1 мМ тритон Х-100; 0,2 мМ дНТФ, 0.5 ед. Taq ДНК полимеразы, 0.5 мкМ праймера Ж5-Ьз с 5/-некомплементарным участком (п) длиной 5 нуклеотидов и З'-комплементарным участком (А) длиной 25 нуклеотидов: 5 - £Ее§§АТСАТТТАТССССАТТССАССАААа-3/ (расчетная пЫ Тт=70°С; N Т„ =60,8°С), 0,5 мкМ праймера ЖЗ-Ьб с 5/-некомплементарным участком (и) длиной 4 нуклеотида и З'-комплементарным участком (М) длиной 26 нуклеотидов: 5/-ссссОСССАТТТССССТТСТСТСТААСАСА-3/ (расчетная иДг Г„=73,5°С; N Гга=66,7°С) (амплификация специфичного ПЦР продукта размером 359 Ьр), 1 мкл пробы ДНК, выделенную из лейкоцитов крови крупного рогатого скота в следующих режимах: х 1: 94°С - 4 мин; х40: 94°С - 30 сек, 72°С - 30 сек; х1: 72°С- 10 мин (рис. 5, трек 1).

х 1: 94°С - 4 мин; х40: 94°С - 10 сек, 68°С - 20 сек; х 1: 72°С - 5 мин (рис. 6). х 1: 94°С - 4 мин; х40: 94°С - 10 сек, 72°С - 20 сек; х 1: 72°С - 5 мин (рис. 7).

Также проводили ПЦР с использованием 0.5 мкМ праймера 1Ч-Ж5 с 5''-некомплементарным участком (и) длиной 12 нуклеотидов и з'-комплементарным участком (/V) длиной 20 нуклеотидов: 5/-§§£са£а§^аТТАТССССАТТССАССАА Ав-З' (расчетная пИ Гт=72,8°С; N ГОТ=57,4°С), 0,5 мкМ праймера Ы-ЖЗ с 51-некомплементарным участком (и) длиной 12 нуклеотидов и З'-комплементарным участком (АО длиной 20 нуклеотидов: 5/-gggcagaggtgaTTCGCCTTCTCTGTAACA ОА-З' (расчетная пИ Гт=72,4сС; N ГИ=57,2°С) (амплификация специфичного ПЦР продукта размером 363 Ьр) в режиме предлагаемого способа: х 1: 94°С - 4 мин; х40: 94°С - 30 сек, 68°С - 30 сек; х1: 72°С - 10 мин (рис. 5, трек 2), а также в режиме ближайшего аналога: х 1; 94°с - 4 мин; х5; 94 С - 30 сек, 58°С - 30 сек, 72°С - 30 сек. х35: 94°С - 30 сек, 72°С - 30 сек. х1: 72°С - 10 мин (рис. 5, трек 3).

Для анализа аллельного полиморфизма гена каппа-казеина крупного рогатого скота методом ПДРФ, ПЦР-продукты амплификации фрагментов ДНК, инициированные праймерами Ж5-Ьз+Ж3-Ьз (рис. 6-7, трек 2, 5, 8) обрабатывались 5 ед. ЯшД а также 10 ед. НтеИП при 37°С в течение ночи (рис. 67, трек 3, 6, 9).

Детекция результатов ПЦР-ПДРФ проведена методом горизонтального электрофореза в 2,5% агарозном геле в буфере ТВЕ (рН 8,0) содержащем этидий бромид с последующей визуализацией результатов в ультрафиолетовом трансиллюминаторе (ХК310 нм). Размеры фрагментов ДНК оценивали по

подвижности в сравнении со стандартными ДНК маркерами (НПО «СибЭнзим», Россия).

Разработанный способ проведения аллель-специфичной ПЦР для

генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина, проводили на программируемом термоциклере «Терцик» (Россия) в объеме 20 мкл, содержащей 60 мМ Трис-HCl (pH 8,5), 1,5 мМ MgCl2, 25 мМ KCl, 10 мМ меркаптоэтанол; 0,1 мМ тритон Х-100; 0,2 мМ дНТФ, 0.5 ед. Taq ДНК полимеразы, 2 пары аллель-специфичных праймеров: 1-ая пара /?-аллель-специфичных праймеров = 0.5 мкМ праймера «В-F-hs»: 5'-cccccGTGAGCCTACA AGTACACCTACCAT-3', 0,5 мкМ праймера «В-R-hs»: 5'-cCcccGA TGTCTCCTTA GAGTATTTAGACC-З' (ПЦР амплификация Л-аллель-специфичного фрагмента ДНК гена каппа-казеина крупного рогатого скота размером 156 Ьр); 2-ая пара Л-аллель-специфичных праймеров = 0.5 мкМ праймера «А-F-hs»: 5'-gggggCTGTTC ACACACAAAAACAGTAAAG-3', 0,5 мкМ праймера «А-R-hs»: S'-gggGGGTGCCT AACCTTATACAGCCTTTCG-S' (ПЦР амплификация ^-аллель-специфичного фрагмента ДНК гена каппа-казеина крупного рогатого скота размером 242 bp); 1 мкл пробы ДНК, выделенную из лейкоцитов крови крупного рогатого скота в следующем оптимальном режиме амплификации: х 1; 94°С - 4 мин; х40: 94 С - 1 мин, 72°С - 1 мин; х 1; 72°С - 10 мин (рис. 8).

Визуализацию амплифицированной ДНК проводили методом гель-электрофореза. Для этого продукты амплификации смешивали с буфером для нанесения проб (0,25% бромфенолового синего, 40% (вес-объем) сахарозы в !ЬО) в соотношении 6:1. Полученную смесь вносили в лунки 2,5% агарозного геля, приготовленного на ТАЕ буфере (0,04 М трис-ацетат, 0,002 М ЭДТА, pH 8,0) с содержанием бромистого этидия 0,5 мкг/мл и подвергали горизонтальному электрофорезу в ТАЕ буфере при напряжении 15 В/см в течение 1 часа с последующим просматриванием в УФ-трансиллюминаторе (290-330 нм).

Частоту встречаемости генотипов определяли по формуле: п

p = где р - частота определения генотипа, п - количество особей,

имеющих определенный генотип, N-число особей.

Частоту отдельных аллелей определяли по формулам:

РА = (2пАА+пАВ) : 2N и qß = (2пВВ+пАВ) : 2N где РА- частота аллеля А, qB - частота аллеля В, N - общее число аллелей.

По закону Харди-Вайнберга (В.Л. Петухов, А.И. Жигачёв, Г.А. Назарова, 1985) рассчитывали ожидаемые результаты частот генотипов в исследуемой популяции.

Молочную продуктивность определяли ежемесячно путём проведения контрольных доек (3 раза в месяц). На основании контрольных доек рассчитывали общую молочную продуктивность за 305 дней лактации, а также за укороченную лактацию, но не меньше 240 дней. Содержание жира в молоке определяли кислотным методом по Гербергу, а содержание белка методом формольного титрования (П.В. Кугенев, Н.В. Барабанщиков, 1988).

Характер лактационных кривых изучали по методике A.C. Емельянова (1953), коэффициент постоянства лактации (КТО!) - по Furhner (1959) в

переработке A.A. Аксенниковой (1964). Вычисления проводили по следующей формуле:

КПЛ= (удойза 4-бмес. лактации/удой за 1 -Змее, лактации) хЮО;

Определяли плотность молока с помощью ареометра (лактоденсиметра), кислотность молока - методом титрования, сортность (класс) молока по редуктазной пробе с резазурином по цветовой шкале, сухое вещество в молоке и молочных продуктах - методом высушивания в сушильном шкафу до постоянной массы при температуре 105 °С, содержание жира в молоке и молочным продуктах - кислотным методом, содержание белка в молоке и молочных продуктах -методом измерения массовой доли общего азота по Кельдалю и определению массовой доли белка.

Для определения сыропригодности молока использовали сычужную и сычужно-бродильную пробы (ГОСТ 9225-84). В три пробирки отмеряли по 10 мл хорошо перемешанного молока одной и той же пробы. Пробирки с молоком ставили в водяную баню при 35°С, в одну из пробирок помещали термометр, по которому следили за температурой воды. Доводили температуру молока до 35 -36°С и после этого в две пробирки вносили по 1 мл разбавленного сычужного раствора, температура которого была 35°С. Содержимое пробирок быстро перемешивали и ставили их в водяную баню, замечая время. Температуру все время поддерживали на уровне 35°С.

Продолжительность свертывания молока определяли в минутах, учитывая время с момента введения фермента до образования плотного сгустка.

Сыропригодность молока определяли по продолжительности его свертывания сычужным ферментом и делили на три типа:

- молоко первого типа свертывается менее чем за 15 мин;

- молоко второго типа - в течение 15-40 мин;

- молоко третьего типа - более чем за 40 мин, или же совсем не свертывается (Н.В. Барабанщиков, 1990).

Для изготовления сыра больше всего подходит молоко второго типа и по нему отработаны технологические режимы производства. Молоко, медленно свертывающееся сычужным ферментом, считается несыропригодным.

Плотным считали сгусток без выделения сыворотки, пузырьков газа, трещин, пустот. При повороте пробирки на 180° сгусток не выпадал или выпадали лишь отдельные кусочки.

Рыхлым считали сгусток, имеющий немногочисленные глазки пузырьков газа, трещины. При повороте пробирки на 180° сгусток деформировался и выпадало до 50% от общего количества сгустка.

Дряблым считали сгусток, сильно пронизанный пузырьками газа, разорванный на куски, хлопьевидный. При повороте пробирки на 180° сгусток выпадал полностью или выпадало более 50% от общего количества сгустка.

Термоустойчивость молока определяли по тигловой пробе. В пробирки из молибденового стекла отмеряли по 2 мл молока. Затем пробирки с молоком ставили в ультратермостат и нагревали до температуры + 135 °С, замечая время. Если в течение 5 мин консистенция молока не изменялась, то оно считалось термоустойчивым. Определяли также термостабильность, т.е. промежуток

времени от момента помещения пробирок в ультратермостат до появления первых признаков коагуляции белков.

У коров на 3 - 4 месяцах лактации методом электрофореза в полиакриламидном геле определяли абсолютное и относительное содержание 15 белковых фракций: as'-, as0-, as,-, as2-, ß-, к-, y-, s - казеинов (Cn), F-фракции сыворотки, ß - лактоглобулина (Lg), a - лактоальбумина (La), альбумина сыворотки крови (Al), протеозо-пептонной фракции (Рр), иммуноглобулина (Ig), и минорных фракций сыворотки.

Пробы молока для электрофоретического анализа и сычужной пробы брали из суточного удоя коров в стеклянные баночки объемом 100 мл. Для электрофореза отобранные пробы отделяли в пенициллиновые флаконы объемом 30 мл и консервировали 20%-м раствором тиамерсала, конечная концентрация, которого в молоке составляла 0,003%. Пробы молока нумеровали соответственно инвентарным номерам коров и хранили в холодильнике при + 4 °С. Для электрофореза пробы были пригодны в течение 10-15 суток. Для постановки сычужной и тигловой пробы использовали не консервированное молоко. Его исследовали не позднее 3 дней после отбора проб и хранили также в холодильнике при + 4 °С.

Для электрофоретического анализа использовали обезжиренное молоко. В пробирки наливали по 10 мл молока и центрифугировали их в течение 5 мин при 1000 об/мин. Затем шприцем отбирали обезжиренное молоко и переливали его во флаконы на 20 мл.

Получение казеинов и сыворотки осуществляли по P.A. Хаертдинову (1989), для этого в пробирки наливали 5 мл обезжиренного молока и в них осаждали казенны путём добавления 0,25 мл ацетатного буферного раствора (25 мл уксусной кислоты, 35 г трехводного уксуснокислого натрия, 100 мл воды, pH 4,6). Смесь перемешали и оставили в водяной бане при 38 - 40 °С на 30 мин до полного осаждения казеинов, а затем центрифугировали 20 мин при 8000 об/мин. Сыворотку сливали в другую посуду, а осажденные казенны, растворяли в буфере, состоящем из 86 мл уксусной и 25 мл муравьиной кислот, 4,5 М мочевины и 1 л воды, pH 3,0. Буфер доливали до прежнего объема молока. В таком же растворе готовили стандартный образец из казеинов по Гаммерстену в концентрации 2,5 г на 100 мл. Его перемешивали до полного растворения казеинов.

Для электрофореза казеинов использовали систему 7,5%-го полиакриламидного геля № 1 по Г. Мауреру (1971) с модификацией P.A. Хаертдинова (1989) применительно к белкам молока.

После электрофореза окрашенные амидо-черным 10В полосы казеинов идентифицировали по P.A. Хаертдинову (1989). Электрофорез белков молочной сыворотки проводили в той же системе геля № 1, что и казеинов, но без мочевины и 2-меркаптоэтанола. Идентификацию белков сыворотки молока проводили согласно сообщению E.H. Reimerdes, H.A. Mehrens (1978).

Содержание белков в исследуемых образцах молока определяли методом денситометрирования полученных фореграмм на микрофотометре ИФО - 451 (Хаертдинов P.A., 1989). Количество белка во фракциях определяли путем

сравнения со стандартными образцами (казеинами по Гаммерстену). По стандартным образцам вычисляли коэффициенты перевода условных единиц (мг бумаги под пиками соответствующих фракций). Для этого содержание белков в стандартном образце делили на массу бумаги под пиками всех фракций белка этого же образца. Далее массу бумаги под пиками соответствующей фракции белка в исследуемых образцах умножали на переводной коэффициент и получали содержание белка в г/100мл. Суммируя содержание белка во фракциях, находили общее количество казеинов, белков сыворотки и общего белка в исследуемой пробе молока.

Высокогорский молочный завод ОАО «Вамин-Татарстан» производит полутвердый сыр «Костромской «ИТ», при производстве которого используют бакпрепарат БП-Углич-5А. Препарат обладает направленным антагонистическим действием на бактерии группы кишечных палочек. После внесения бакпрепарата БП-Углич-5А в количестве 0,8 - 1,0% от объема молока вносили еще один вид закваски - мезофильные молочнокислые бактерии вида Lb. plantarum - 0,1-0,3%. Оптимальная кислотность смеси перед свертыванием - 18-19 °Т, максимальная -не более 24 СТ. Температура свертывания молока для сыра «Костромской «ИТ» составляет + 30-34°С. В качестве молокосвертывающего препарата использовали сычужный порошок в виде раствора в количестве 2,5% от объема молока. После внесения сычужного препарата молоко тщательно перемешивали и оставляли в покое до образования сгустка.

Продолжительность свертывания при выработке сыра «Костромской «ИТ» составляет 35±5 мин. Разрезку сгустка и постановку зерна проводят в течение 20±5 мин. Основная часть зерен после постановки имела округлую форму и размер 8±1 мм. До 30% сыворотки сливали, зерно вымешивали.

Сыр «Костромской «ИТ» относится к группе полутвердых сыров с низкой температурой второго нагревания + 38-40 °С. Продолжительность второго нагревания составляла 10 - 20 мин. Второе нагревание проводили медленно со скоростью 1 °С в минуту. Кислотность сыворотки после второго нагревания и добавления воды должна составлять не более 13 °Т. Кислотность сыворотки с момента втогоро нагревания до конца обработки должна нарасти от 1,0 до 1,5 °Т и составлять к концу обработки зерна не более 14 °Т. Прессовку пласта проводили в течении 20±5 мин. при давлении 1,0 - 1,5 кПа (0,01 - 0,015 кгс/см2', самопрессование - в течение 30±5 мин. Окончание этапа определяли по прекращению выделения сыворотки. Прессовку сыра «Костромской «ИТ» проводили в течение 2,0±0,5 часа при постепенном повышении давлении 10 - 50 кПа (0,1 - 0,5 кгс/см2). Продолжительность посолки сыра составляла 42±6 часа. Время созревания сыра «Костромской «ИТ» - 30 суток

Для приготовления творога в заводских условиях ОАО «Чистопольский молочный комбинат», брали от каждой опытной группы коров 10 кг молока. Количество закваски на 10 кг молока составляло 0,5 кг. Температура нагревания -58 - 60°С.

Для приготовления молочно-сливочного йогурта брали 4 кг молока жирностью 3,2% и 1 кг сливок жирностью 20% в соотношении 4:1 (общий объем 5 кг). Полученную смесь жирностью 6,2% нагревали до 98°С, добавляли сахар

(1:20) - 250 г, выдерживали при 98°С в течение 20 минут, охлаждали до 42°С и добавляли закваску - 3,5% от объема смеси (180 мл). Молочно-сливочный йогурт приготавливали резервуарным способом, время выдержки при сквашивании длилось 4 часа при 42°С. Кислотность составляла 85°Т. Для приготовления закваски для йогурта к обрату добавляли маточный раствор закваски (сухая болгарская палочка + 2 кг молока).

Воспроизводительные качества первотёлок изучены по показателям, которые определяют и характеризуют плодовитость, это возраст первого отёла, коэффициент воспроизводительной способности (КВС), индекс плодовитости (И. Дохи, 1961). Использовали следующие формулы:

КВС = 365 /МОП, где МОП - межотельный период, дн.

Индекс плодовитости = 100 ~(К + 2 xl), где

К - возраст первого отёла, мес.; I - межотельный период, мес.

Генетические параметры продуктивности определены по общепризнанным формулам: коэффициенту изменчивости (Cv) и сопряжённости признаков (г).

Полученные результаты в ходе научных исследований обработаны биометрическим методом по Е.К. Меркурьевой (1970) с использованием ЭВМ и программного приложения Microsoft Excel. Уровень достоверности полученных результатов определяли по критерию Стьюдента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Оптимизация техники выделения ДНК из лейкоцитов крупного рогатого скота для молекулярно-генетических исследований

Разработанный нами аммиачный способ выделения ДНК из лейкоцитов крупного рогатого скота является экспрессивной техникой пробоподготовки нуклеиновых кислот для ДНК-анализа и полученные препараты ДНК целесообразно использовать в ближайшие 30 минут после выпаривания аммиака.

Нами оптимизирована техника выделения ДНК из лейкоцитов крупного рогатого скота для молекулярно-генетических исследований, где 10% раствор аммиака использовался в качестве растворителя осажденного нуклеопротеидного комплекса, предварительно экстрагированного 0,2М NaOH (см. «2. Материалы и методы исследований»). Полученные препараты ДНК показали эффективность своего применения в ПЦР-ПДРФ для генотипирования крупного рогатого скота по гену каппа-казеина.

Комбинированный щелочной способ выделения ядерной ДНК из лейкоцитов крупного рогатого скота позволяет сохранить экстрагированные нуклеиновые кислоты для ДНК-диагностики по гену каппа-казеина в течение 6 месяцев с более чем 20 кратной заморозкой-разморозкой.

3.2. Оптимизация техники ПЦР-ПДРФ для генотипирования крупного рогатого скота по гену каппа-казеина

Для оценки качества работы известных протоколов по генотипированию крупного рогатого скота по гену каппа-казеина нами была протестирована серия олигонуклеотидных праймеров: АВ1: S'-TGTGCTGAGTAGGTATCCTAGTT Ales' и АВ2: S'-GCGTTGTCTTCTTTGATGTCTCCTTAG-S', сконструированных

Angel Barroso (1998); K1: 5'-GAAATCCCTACCATCAATACC-3' и К2: S'-CCATC TACGCTAGTTTAGATG-y, сконструированных Kaminski S. (1993); JK5: 5''-ATCA TTTATGGCCATTCCACCAAAG-3' и J КЗ; S'-GCCCATTTCGCCTTCTCTGTAACA GA-3, сконструированных J.F. Medrano and E. Aguilar-Cordova (1990) no оптимизированной нами технике ПЦР-ПДРФ (см. «2. Материалы и методы исследований»).

Праймеры АВ1+АВ2 инициируют амплификацию фрагмента гена-каппа-казеина крупного рогатого скота длиной 453 bp, а ПДРФ-ЯшД профиль (АА=326/100/27, ВВ=426/27 и АВ=426/326/100/27) и ПДРФ-ЯшаН/ профиль (АА=453, ВВ=351/102 и АВ=453/351/102) идентифицируют его генотипы (рис. 2).

М 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Рис. 2. Электрофореграмма результата ПЦР-ПДРФ гена каппа-казеина крупного рогатого скота с праймерами АВ1+АВ2 и последующего эндонуклеазного расщепления ферментом ШпД или ШпЛШ Обозначения: М) ДНК-маркеры 1500-100 Ьр (СибЭнзим); 1) цельный ПЦР-фрагмент генотипа ВВ гена каппа-казеина (453 Ьр); 2) генотип ВВ (426/27 Ьр (Шф)); 3) генотип ВВ (351/102 Ьр (ШтШ1))\ 4) цельный ПЦР-фрагмент генотипа АА гена каппа-казеина (453 Ьр); 5) генотип АА (326/100/27 Ьр (Шф))\ 6) генотип АА (453 Ьр (НЫ111)); 7) цельный ПЦР-фрагмент генотипа АВ гена каппа-казеина (453 Ьр); 8) генотип АВ (426/326/100/27 Ьр (///«//)); 9) генотип АВ (453/351/102 Ьр (НШ1Щ).

1500 bp-» 1000 bp —

500 bp — 400 bp — 300 bp —

200 bp — 100 bp —

351/326 bp

102/100 bp 27 bp

Полученные результаты ПЦР-ПДРФ гена каппа-казеика крупного рогатого скота с праймерами АВ1+АВ2 являются удовлетворительными в плане воспроизводимости и идентификации генотипов. Слабый «фон неспецифики» по сравнению с сильным ПЦР-сигналом (453 Ьр) существенно не влияет на информативность интерпретации генотипов.

Праймеры К1+К2 инициируют амплификацию фрагмента гена-каппа-казеина крупного рогатого скота длиной 271 Ьр, а ПДРФ-Я/и/7 профиль (АА=131/91/49, ВВ=222/49 и АВ=222/131/91/49) и 1ЩРФ-НЫШ профиль (АА=271, ВВ=182/89 и АВ=271/182/89) идентифицируют его генотипы (рис. 3).

Полученные результаты ПЦР-ПДРФ гена каппа-казеина крупного рогатого скота с праймерами Ю+К2 являются удовлетворительными в плане воспроизводимости и идентификации генотипов; а наличие димерности на одной длине с неинформативным фрагментом Шп/1 рестрикции (49 Ьр) не снижает эффективности генотипирования с данным протоколом реакции.

Рис. 3. Электрофореграмма результата ПЦР-ПДРФ гена каппа-казеина крупного рогатого скота с праймерами К1+К2 и последующего эндонуклеазного расщепления ферментом Шп/1 или НтШ1 Обозначения: 1) цельный ПЦР-фрагмент генотипа ВВ гена каппа-казеина (271 Ьр); 2) генотип ВВ (222/49 Ьр (///и/7); 3) генотип ВВ (182/89 Ьр (НМН1); 4) цельный ПЦР-фрагмент генотипа АА гена каппа-казеина (271 Ьр); 5) генотип АА (131/91/49 Ьр (Я/я/Т)); 6) генотип АА (271 Ьр (НтсШГ); 7) цельный ПЦР-фрагмент генотипа АВ гена каппа-казеина (271 Ьр); 8) генотип АВ (222/131/91/49 Ьр (Нт/Г)); 9) генотип АВ (271/182/89 Ьр (НМШ); М) ДНК-маркеры 1500-100 Ьр (СибЭнзим).

271 Ьр 222 Ьр 182 Ьр 13.1 Ьр 91/89 Ьр

49 Ьр

Праймеры Ж5+Ж.З инициируют амплификацию фрагмента гена-каппа-казеина крупного рогатого скота длиной 350 Ьр, а ПДРФ-Яги/Г профиль идентифицирует его генотипы (АА=134/131/85, ВВ=265/85 и АВ=265/134/131/84) (рис. 4).

123456789М

1000 Ьр

350 Ьр-265 Ьр-

134/131 Ьр-85 Ър-

Рис. 4. Электрофореграмма результата ПЦР-ПДРФ гена каппа-казеина крупного рогатого скота с праймерами Ж5+.1КЗ и последующего эндонуклеазного расщепления ферментом НЫД Обозначения: 1-4) генотип ВВ (265/85 Ьр (Яш/7); 5-6) генотип АА (134/131/85 Ьр (Яш/Г); 7-8) генотип АВ (265/134/131/84 Ьр (Яш/7); 9) цельный ПЦР-фрагмент генотипа АВ гена каппа-казеина (350 Ьр); М) ДНК-маркеры 1000-100 Ьр (СибЭнзим).

Полученные результаты ПЦР-ПДРФ гена каппа-казеина крупного рогатого скота с праймерами JK5+JK3 являются удовлетворительными в плане воспроизводимости и идентификации генотипов. Для базисной интерпретации генотипов следует ориентироваться на мажорные идентифицирующие ПДРФ-Hinfl фрагменты: для генотипа ВВ = 265 Ьр, для АА = 134/131 Ьр, для АВ = 265 и 134/131 Ьр, соответственно.

3.3. Разработка методики высокоточной ПЦР

Целью данного раздела исследований являлась разработка эффективной методики высокоточной ПЦР для индикации и идентификации биологических объектов.

Нами разработан способ проведения ПЦР, схожий с разновидностями «touch up» ПЦР тем, что в качестве праймеров используют олигонуклеотиды, которые состоят из З'-участка, комплементарного последовательности-мишени, и 5'-участка, не комплементарного последовательности-мишени, отличающийся тем, что в качестве праймеров используют олигонуклеотиды с потенциальной температурой гибридизации по всей длине, превышающей температуру отжига их З'-комплементарного участка на 5-10°С, а при проведении ПЦР отжиг ведут при температуре, соответствующей указанной потенциальной температуре гибридизации.

Стратегия выбранного подхода заключается в том, что, используя фиксированную температуру потенциального оптимума отжига праймеров по всей длине, связывание З'-комплементарного участка олигонуклеотида с нуклеиновой кислотой исследуемого биологического объекта затруднительно в виду несоответствия температур гибридизации на 5-10°С, однако неспецифичное праймирование находится в значительно более угнетенном состоянии, чем достигается более эффективная наработка только специфичных ампликонов, которые в дальнейшем являются мишенями для праймеров в системе 100% комплементарности.

Условия проведения реакции представлены в разделе «2. Материалы и методы исследований».

Разработанный способ проведения ПЦР протестирован в сравнении с классической ПЦР и ближайшим аналогом на предмет оценки аллельного полиморфизма гена каппа-казеина крупного рогатого скота.

При проведении классической ПЦР для амплификации фрагмента гена каппа-казеина крупного рогатого скота с праймерами JK5+JK3 (J.F. Medrano, Е. Aguilar-Cordova, 1990) нами получен наряду со специфичным ПЦР продуктом размером 350 Ьр также неспецифичный фрагмент амплификации размером приблизительно 600-700 Ьр (рис. 5, трек 4).

При проведении ПЦР в режиме ближайшего аналога (F. Weighardt, G. Biamonti, S. Riva, 1993) для амплификации фрагмента гена каппа-казеина крупного рогатого скота с модифицированными праймерами N-JK5+N-JK3 нами выявлены наряду со специфичным ПЦР продуктом размером 363 Ьр также слабые кеспецифичные фрагменты амплификации размером приблизительно 600-700 Ьр (рис. 5, трек 3).

При проведении ПЦР в режиме разработанного способа для амплификации фрагмента гена каппа-казеина крупного рогатого скота с модифицированными праймерами >}-Ж5+Ы-ЖЗ и Ж5-118+ЖЗ-118 амплифицировались только специфичные ПЦР продукты размером 363 Ьр (рис. 5, трек 2) и 359 Ьр (рис. 5, трек 1), соответственно.

1 2 3 4 М

специфичный ПЦР продукт

1) 359 Ьр

2)363 Ьр

3) 363 Ьр 4> 350 Ьр

•

нЦ

-1000 Ьр

- 700 Ьр

- 600 Ьр

- 500 Ьр

- 400 Ьр

- 300 Ьр

- 200 Ьр

- 100 Ьр

Рис. 5. Электрофореграмма результата тестирования способов ПЦР на предмет индикации гена каппа-казеина кр.рог.ск. Обозначения:

1) разработанный способ проведения ПЦР с праймерами Жб-Ь.ч и ЖЗ-Ьэ;

2) разработанный способ проведения ПЦР с праймерами Ы-Ж5 и М-ЖЗ;

3) способ проведения ПЦР с праймерами М-Ж5 и Ы-ЖЗ в режиме ближайшего аналога;

4) классическая ПЦР с праймерами Ж5 и ЖЗ;

5) ДНК-маркеры 1000-100 Ьр (СибЭнзим).

Следует отметить, что праймеры Ж5 и ЖЗ (1Р. Мескапо, Е. Aguilar-Cordova, 1990) эффективно инициируют амплификацию фрагмента гена каппа-казеина крупного рогатого скота длиной 350 Ьр в оптимизированном нами режиме амплификации (><1: 94 °С - 4 мин; *40: 94 °С - 10 сек, 63 °С - 10 сек, 72 °С - 10 сек; х1: 72 °С - 5 мин), а ПДФР-Я/и/7 профиль идентифицирует его генотипы (^=134/131/85 Ьр, ВВ=265/85 Ьр и Л£=265/134/131/84 Ьр).

Таким образом, исключение амплификации неспецифичных продуктов достигалось также, за счет уменьшения времени синтеза до 10 сек и повышения температуры отжига до 62-63°С.

На основании положительного результата по исключению неспецифичной амплификации при использовании предлагаемого способа проведения ПЦР с модифицированными праймерами Ж5-Ьэ и ЖЗ-Ьв (рис. 5, трек 1) нами были предприняты дальнейшие действия по оптимизации режима 2-х стадийной ПЦР с температурным совмещением стадий отжига и синтеза при 68/72°С (рис. 6 и 7).

В режиме 2-х стадийной ПЦР модифицированные праймеры Ж5-11б и ЖЗ-Ив эффективно инициируют амплификацию фрагмента гена каппа-казеина крупного рогатого скота длиной 359 Ьр, а ПДФР-ЯшД профиль (АА=139/131/89 Ьр, ВВ=270/89 Ьр и АВ=270/139/131/89 Ьр) и ПДФР-НШШ профиль (АА=359 Ьр, ВВ=222/137 Ьр и АВ=359/222/137 Ьр) идентифицируют его генотипы (рис. 6 и 7).

Полученные результаты ПЦР-ПДРФ гена каппа-казеина крупного рогатого скота с праймерами ЖЗ-Ьэ +Ж3-Ьз являются удовлетворительными в плане воспроизводимости и идентификации генотипов.

М1 23456789

700 Ьр

500 400

359 Ьр 270 Ьр 222 Ьр

зоо Ьо-*- ■ . :

щрзр „ * ^ ] Щ<

I , ... - 89ьр

Рис. 6. ПЦР-ПДРФ-///«/7 (.ШпЛП') профиль гена каппа-казеина крупного рогатого скота, инициированный праймерами Ж5-Ьв и ЖЗ-118 при температуре 68°С на стадии «отжиг-синтез» Обозначения: М) ДНК-маркеры 1500-100 Ьр (СибЭнзим); 1) цельный ПЦР-фрагмент генотипа ВВ гена каппа-казеина (359 Ьр); 2) генотип ВВ (270/89 Ьр (Яг'я/7)); 3) генотип ВВ (222/137 Ьр (НШШ)); 4) цельный ПЦР-фрагмент генотипа АА гена каппа-казеина (359 Ьр); 5) генотип АА (139/131/89 Ьр (НтД)); 6) генотип АА (359 Ьр (НШШ)); 7) цельный ПЦР-фрагмент генотипа АВ гена каппа-казеина (359 Ьр); 8) генотип АВ (270/139/131/89 Ьр (НтД)); 9) генотип АВ (359/222/137 Ьр (НШШ)).

1500 Ьр

700 Ьр-^

400 Ьр ^оьп

зоо Ьр^ Г 1Ть1

200 Ьр -»-Е _ ^ 222 Ьр

?§*' ^-139/137/131 Ьр

Рис. 7. ПЦРПДРФ-Яш/7 (ШпйШ) профиль гена каппа-казеина крупного рогатого скота, инициированный праймерами ,1К5-1^ и Ж3-Ь8 при температуре 72°С на стадии «отжиг-синтез» Обозначения: М) ДНК-маркеры 1500-100 Ьр (СибЭнзим); 1) цельный ПЦР-фрагмент генотипа ВВ гена каппа-казеина (359 Ьр); 2) генотип ВВ (270/89 Ьр (Hin.fi)); 3) генотип ВВ (222/137 Ьр (НШШ)); 4) цельный ПЦР-фрагмент генотипа АА гена каппа-казеина (359 Ьр); 5) генотип АА (139/131/89 Ьр (Яш/7)); 6) генотип АА (359 Ьр (НШШ)); 7) цельный ПЦР-фрагмент генотипа АВ гена каппа-казеина (359 Ьр); 8) генотип АВ (270/139/131/89 Ьр (Яш/7)); 9) генотип АВ (359/222/137 Ьр (НШШ)).

Таким образом, разработанный нами способ проведения ПЦР («методика высокоточной ПЦР») с оптимизированным протоколом 2-х стадийной ПЦР (температурное совмещение стадий отжига и синтеза при 68-72°С) является действенным инструментарием генотипирования.

3.4. Разработка способа проведения аллель-специфичной ПЦР для генотипирования кр.рог.ск. по аллелям А и В гена каппа-казеина

Существуют различные способы ДНК-анализа аллельного полиморфизма гена каппа-казеина крупного рогатого скота (J. F. Medrano, Е. Aguilar-Cordova, 1990; S, Kaminski, 1993; G. Rincón and J. F. Medrano, 2003), среди которых, является способ проведения аллель-специфичной ПЦР для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина.

В способе проведения аллель-специфичной ПЦР для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина, предложенном G. Rincón and J. F. Medrano (2003) используется принцип тетра-праймерной ARMS-PCR, где в реакции применяют 4 олигонуклеотида, два из которых являются внешними (общие праймеры «JK5» и «ЖЗ»), инициирующие при совместном фланкировании амплификацию фрагмента ДНК гена каппа-казеина любого из его аллелей, а остальные два - внутренними (аллель-специфичные праймеры I «INNERKCAS FORWARD» и «INNERKCAS REVERSE»), каждый из которых j при совместном фланкировании только с одним из внешних праймеров I инициирует амплификацию соответствующего аллель-специфичного фрагмента I ДНК. Следует отметить, что каждый внутренний праймер помимо рефрактерного 3 -терминального «mismatch-нуклеотида» имеет дополнительный некомплементарный ни к одному из аллелей гена каппа-казеина «mismatch-нуклеотид» в позиции -2 от З'-терминального нуклеотида (- 0 +) праймера. i

Нами разработан способ проведения аллель-специфичной ПЦР для i генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина, схожий со способом, предложенным G. Rincón and J. F. Medrano, (2003), включающим подготовку пробы нуклеиновой кислоты, внесение указанной пробы в реакционную смесь для ПЦР, состоящую из дНТФ, буферной системы, , Taq ДНК полимеразы, 4-х праймеров; проведение ПЦР; детекцию | амплифицированных фрагментов ДНК методом гель-электрофореза; I отличающийся тем, что, используются другие последова-тельности праймеров, ¡ все из которых являются аллель-специфичными, не имеющие дополнительных некомплементарных ни к одному из аллелей гена каппа-казеина крупного рогатого скота «mismatch-нуклеотидов» в позиции -2 от З'-терминальных ^ нуклеотидов праймеров, но имеющие 5;-некомплементарные участки (п) длиной ¿ 5-3 нуклеотидов: В-аллель-специфичные праймеры «В-F-hs»: S'-cccccGTGAGCCTACA í AGTACACCTACCAT-3' и «В-R-hs»: S-cCcccGATGTCTCCTTAGAGTATTTAGACC-S', I которые инициируют амплификацию 5-аллель-специфичного фрагмента ДНК гена i каппа-казеина крупного рогатого скота размером 156 bp; Л-аллель-специфичные праймеры A-F-hs: 5'-gggggCTGTTCACACACAAAAACAGTAAAG-3/ и A-R-hs: I 5 -gggGGGTGCCTAACCTTATACAGCCTTTCG-S', которые инициируют ¡ амплификацию ^-аллель-специфичного фрагмента ДНК гена каппа-казеина крупного рогатого скота размером 242 bp; проводят 2-х стадийную ПЦР с совмещением температуры отжига и синтеза при 72°С.

Предлагаемый способ проводили на термоциклере «Терцик» (Россия) в | объеме 20 мкл, содержащей 60 мМ Трис-HCl (рН 8,5), 1,5 мМ MgCl2, 25 мМ К.С1, | 10 мМ меркаптоэтанол; 0,1 мМ тритон Х-100; 0,2 мМ дНТФ; 0,5 ед. Taq ДНК

полимеразы, 2 пары аллель-специфичных праймеров: 1-ая пара 5-аллель-специфичных праймеров: 0,5 мкМ праймера «В-Р-Ьб», 0,5 мкМ праймера «В-Я-Ьв» (ПЦР амплификация В-аллель-специфичного фрагмента ДНК гена каппа-казеина крупного рогатого скота размером 156 Ьр); 2-ая пара А-аллель-специфичных праймеров 0,5 мкМ праймера «А-Р-Ьб», 0,5 мкМ праймера «А-Л-Ьв» (ПЦР амплификация ^-аллель-специфичного фрагмента ДНК гена каппа-казеина крупного рогатого скота размером 242 Ьр); 1 мкл пробы ДНК, выделенную из лейкоцитов крови крупного рогатого скота в следующем оптимальном режиме амплификации: *1: 94°С - 4 мин; *40: 94°С - 1 мин, 72°С - 1 мин; х1: 72°С - 10 мин (рис. 8).

1000 Ьр-700 Ьр-

500 Ьр-400 Ьр-

300 Ьр-200 Ьр-

-242 Ьр -156 Ьр

100 Ьр-

Рис. 8. Электрофореграмма технического результата предложенного способа аллель-специфичной ПЦР для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А а В гена каппа-казеина с праймерами «В-Р-Ьх>>+«В-Я-11.$>>+<<А-17-1ш>+<<А-Н-Ь8>> Обозначения:

М) ДНК-маркеры 100-1000 Ьр (СибЭнзим); 1)генотипЛ4 гена каппа-казеина кр.рог.ск (242 Ьр); 2) генотип В В гена каппа-казеина кр.рог.ск (156 Ьр); 3) генотип АВ гена каппа-казеина кр.рог.ск. (242/156 Ьр)

Разработанный нами способ проведения аллель-специфичной ПЦР для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина с оптимизированным протоколом 2-х стадийной ПЦР, является более эффективным способом генотипирования гена каппа-казеина в сравнении с ПЦР-ПДРФ-анализом, в связи с тем, что не требует проведения обработки ПЦР-продукта эндонуклеазами рестрикции, таким образом, сокращая время анализа, более чем на 3-8 часов.

3.5. Оценка полиморфизма локуса гена каппа-казеина у животных

3.5.1. Полиморфизм гена каппа-казеина у коров

Из 225 первотелок ООО «Серп и молот» Высокогорского района РТ 156 коров имели генотип АА (ответственный за синтез белка А каппа-казеина), 63 коровы - генотип АВ (данный генотип имеет неполное доминирование, при этом синтезируется каппа-казеиновый белок, характеризующийся промежуточными свойствами и сочетающий свойства вариантов А и В белков каппа-казеина), 6 коров - генотип ВВ (ответственный за экспрессию белка В каппа-казеина). Частота гомозиготного генотипа АА составляла 69,3%, гетерозиготного генотипа АВ - 28,0%, гомозиготного генотипа ВВ - 2,7%. Частота аллеля А достигла 0,83, аллеля В - 0,17 (табл. 3).

Тогда как из 219 первотелок СХПК им. Ленина Атнинского района РТ 111 коров имели генотип АА, 99 коров - генотип АВ, 9 коров - генотип ВВ. Частота гомозиготного генотипа АА составила 50,7%, гетерозиготный генотип АВ -45,2%, гомозиготный генотип ВВ - 4,1%. Частота аллеля А достигла 0,73, аллеля В-0,27.

Из 164 первотелок ОАО «Племзавод «Бирюлинский» Высокогорского района РТ 109 коров имели генотип АА, 52 коров - генотип АВ, 3 коров - генотип ВВ. Частота гомозиготного генотипа АА составила 66,5%, гетерозиготный генотип АВ - 31,7%, гомозиготный генотип ВВ - 1,8%. Частота аллеля А достигла 0,82, аллеля В-0,18.

Таблица 3. Полиморфизм гена каппа-казеина коров-первотелок

Хозяйство п АА АВ ВВ Частота аллелей Х2

п % п % п % А В

ООО «Серп Н 225 156 69,3 63 28,0 6 2,7 0,83 0,17 0,15

и молот» О 155 68,9 63 28,0 7 зд

СХПК Н 219 111 50,7 99 45,2 9 4,1 0,73 0,27 5,34*

им.Ленина О 117 53,4 86 39,3 16 7,3

ОАО «П/з «Бирюлинский» Н 164 109 66,5 52 31,7 3 1,8 0,82 0,18 1,17

О 111 67,8 48 29,1 5 3,1

Н - наблюдаемое распределение генотипов, О - ожидаемое распределение генотипов, * - Р<0,05

Использование статистического метода Харди-Вайнберга и метода у2 для выявления отклонений эмпирического распределения частот генотипов от теоретического позволили установить, что в популяциях крупного рогатого скота ООО «Серп и молот» и ОАО «Племзавод «Бирюлинский» нет статистически достоверного сдвига генетического равновесия ни по одному из трех генотипов локуса гена каппа-казеина, тогда как в СХПК им. Ленина идёт некоторое смещение в сторону генотипа АВ (у2 = 5,34, Р<0,05). Эти данные в популяциях

коров татарстанского типа показывают, что в них не проводился искусственный отбор, затрагивающий генотипы животных по локусу гена каппа-казеина.

3.5.2. Полиморфизм гена каппа-казеина у быков-производителей

В нашем исследовании использовались чистопородные и помесные по голштинской породе быки-производители, находящиеся в ГУЛ ГПП «Элита». Все быки имели комплексный класс элита-рекорд.

В результате ДНК-диагностики по локусу гена каппа-казеина быков-производителей нами было исследовано 70 голов, из них 48 (68,6%) имели генотип А А; 18 (25,7%) - АВ и лишь 4 (5,7%) - ВВ. При этом частота аллеля А составила 0,81, а аллеля В - 0,19 (табл. 4).

Таблица 4. Полиморфизм гена каппа-казенна быков-производителей

Хозяйство п ' АА АВ ВВ Частота аллелей Х2

п % п % п % А В

ГУПГПП «Элита» Н 70 48 68,6 18 25,7 4 5,7 0,81 0,19 0,85

О 46 65,7 21 30,0 3 4,3

Н - наблюдаемое распределение генотипов, О - ожидаемое распределение генотипов

Статистический метод Харди-Вайнберга и метод у2 для выявления отклонений эмпирического распределения частот генотипов от теоретического показал, что в данной популяции быков-производителей не имеется статистически достоверного сдвига генетического равновесия ни по одному из трех генотипов локуса гена каппа-казеина. Следовательно, в данной популяции быков-производителей не проводился искусственный отбор, затрагивающий генотипы животных по локусу гена каппа-казеина.

3.6. Молочная продуктивность коров и факторы её обуславливающие

3.6.1. Молочная продуктивность коров с разными генотипами каппа-казеина

Из таблицы 5, 6 и 7 видно, что разница между группами по продолжительности лактации незначительная и составила 2-7 дней. При этом первотёлки, имеющие в своём генотипе В аллель в большей части превосходили аналогов с генотипом АА. Тогда как в ОАО «Племзавод «Бирюлинский» животные с генотипом АА превосходили сверстниц других групп на 6 - 7 дней, причем достоверная разница выявлена между коровами с генотипом АА и АВ и составила 7 дней (Р<0,05).

Таблица 5. Молочная продуктивность коров с разными генотипами _ каппа-казеина в ООО «Серп и Молот»_

Показатели Генотипы

АА АВ ВВ АА1АВ АА1ВВ

п 156 63 6 - -

дойных дней 286±1,7 292±2,2 29017,6 +6* +4

удой, кг 5068+163,1 5246+128,4 5384+96,3 +178 +316

жир, % 3,81+0,01 3,84±0,02 3,8210,03 +0,03 +0,01

молочный жир, кг 193,1±1,19 201,4±1,93 205,715,66 +8,3*** +12,6*

белок, % 3,19+0,02 3,28±0,03 3,4910,01 +0,09* +0,30***

молочный белок, кг 161,2+5,97 172,0+4,23 187,913,84 +10,8 +26,7***

интенсивность молокоотдачи, кг/мин. 1,86+0,01 1,94+0,02 2,0310,08 +0,08*** +0,17*

удой на 1 день лактации, кг 17,7+0,13 18,010,23 18,610,36 +0,3 +0,9*

* - Р<0,05, *** - Р<0,001 Таблица 6. Молочная продуктивность коров с разными генотипами каппа-казеина в СХПК им. Ленина

Показатели Генотипы

АА АВ ВВ АА1АВ АА+ВВ

п 111 99 9 - -

дойных дней 291+1,4 289±1,6 29516,3 -2 +4

удой,кг 5456±145,3 5631±163,2 58431134,3 +175 +387*

жир, % 3,91±0,02 3,90±0,02 3,92+0,04 -0,01 +0,01

молочный жир, кг 213,3+2,41 219,612,10 229,016,48 +6,3* +15,7*

белок, % 3,21±0,02 3,3210,01 3,41+0,02 +0,11*** +0,20***

молочный белок, кг 175,1 ±4,31 186,615,67 199,812,96 +11,5 +24,7***

интенсивность молокоотдачи, кг/мин. 1,99±0,02 2,1810,02 2,2510,09 +0,19*** +0,26**

удой на 1 день лактации, кг 18,7+0,19 19,510,20 19,8+0,33 +0,8** +1,1**

КИЩКЦ, IV!

* - Р<0,05, *** - Р<0,001

Таблица 7. Молочная продуктивность коров с разными генотипами _каппа-казенна в ОАО «Племзавод «Бирюлинский»_

Показатели Генотипы

АА АВ ВВ АА1АВ АА1ВВ

п 109 52 3 - -

дойных дней 288±1,7 28112,5 282110,1 -7* -6

удой, кг 4917±71,0 51081101,8 50231197,7 +191 +106

жир, % 3,8610,03 3,8810,03 3,8710,07 +0,02 +0,01

молочный жир, кг 189,8±2,89 198,2+3,96 194,417,20 +8,4 +4,6

белок, % 3,22±0,01 3,3410,02 3,4510,04 +0,12*** +0,23***

молочный белок, кг 158,3+2,32 170,613,56 173,318,73 +12,3** 15,0

интенсивность молокоотдачи, кг/мин. 1,82±0,02 1,9310,03 1,9510,14 +0,11** +0,13

удой на 1 день лактации, кг 17,110,17 18,210,31 17,810,24 +1,1** +0,7*

* - Р<0,05, ** - Р<0,01, *** - Р<0,001

В среднем удой коров за лактацию в группе с генотипом каппа-казеина АА составил 4917-5456 кг, АВ - 5108-5631 кг, ВВ - 5023-5843 кг. Первотелки с генотипом каппа-казеина АА уступали сверстницам на 106-387 кг молока, причём достоверная разница выявлена между группами животными с генотипами АА и ВВ (387 кг, Р<0,05) в СХПК им. Ленина.

По содержанию жира в молоке коровы с гомозиготным генотипом каппа-казеина АА уступали сверстницам, имеющим в геноме аллельный вариант В в гетерозиготной или гомозиготной форме на 0,01 - 0,03%. Более высокое содержание жира в молоке в сочетании с более высоким удоем было у коров, имеющих аллель В каппа-казеина. При этом от них получено в среднем за лактацию на 6,3 - 15,7 кг (Р<0,05 и 0,001) молочного жира больше, чем от коров с генотипом АА. В ОАО «Племзавод «Бирюлинский» разница между группами животных была недостоверной и составила 4,6 - 8,4 кг молочного жира.

Полученные данные также показали, что первотелки, имеющие в своем геноме аллельный вариант В гена каппа-казеина, превосходили по содержанию белка в молоке животных с гомозиготным генотипом каппа-казеина АА на 0,09 -0,30% (Р<0,05 и 0,001). От коров с генотипом АА в ООО «Серп и Молот» и СХПК им. Ленина было получено за лактацию на 24,7 - 26,7 (Р<0,001) кг молочного белка меньше, чем от коров с генотипом каппа-казеина ВВ, при этом наименьшая разница была в ОАО «Племзавод «Бирюлинский» (15,0 кг). Животные с гетерозиготным генотипом АВ по содержанию белка и по выходу молочного белка за лактацию занимали промежуточное положение.

Достоверная разница (Р<0,05 - 0,001) получена между животными с генотипом каппа-казеина АА и первотёлками других генотипов по следующим показателям: удою на 1 день лактации и по интенсивности молокоотдачи почти во всех хозяйствах.

Из всего выше сказанного можно сделать вывод, что более высокая молочная продуктивность у коров-первотёлок татарстанского типа с генотипом каппа-казеина АВ и ВВ. А более низкие показатели были получены от животных с генотипом АА, в целом первотёлки, имеющие в своем геноме аллельный вариант В гена каппа-казеина выгоднее отличались от сверстниц.

3.6.2. Лактационные кривые коров с разными генотипами каппа-казеина

У коров татарстанского типа в ООО «Серп и Молот» и ОАО «Племзавод «Бирюлинский», имеющих генотип каппа-казеина АА и ВВ, пик наивысшей продуктивности (626 - 629 кг и 630 - 673 кг молока соответственно) приходится на 3-й месяц лактации. У коров с генотипом АВ наибольшая продуктивность отмечалась на 2-м месяце лактации и составила 620 - 659 кг молока. У животных СХПК им. Ленина наибольшие удои 662 - 704 кг были на 3-м месяце лактации. Превышение среднемесячных удоев молока коров с генотипом ВВ над генотипом АА наблюдалось на протяжении почт всей лактации.

Коэффициент спадаемости лактационной кривой со II по V месяц лактации у коров этих групп составил соответственно 4,59 и 5,31% (ООО «Серп и Молот»), 4,33 и 6,32% (СХПК им. Ленина) и 5,04 и 7,60% (ОАО «Племзавод «Бирюлинский»), в то время как у коров с генотипом АВ он был выше на 7,1 -0,06% (табл. 8).

Таблица 8. Характеристика лактационных кривых коров _с разными генотипами каппа-казеина _

Генотип п Коэффициент Коэффициент

Хозяйство каппа- спадаемости лактаци- постоянства

казеина онной кривой, % лактации

ООО «Серп и Молот» АА 156 4,59 93,4

АВ 63 11,69 91,9

ВВ 6 5,31 92,5

СХПК им. Ленина АА 111 4,33 96,5

АВ 99 6,38 95,3

ВВ 9 6,32 96,1

ОАО «П/з «Бирюлинский» АА 109 5,04 92,3

АВ 52 10,7 91,4

ВВ 3 7,60 91,8

Для всех групп животных характерны высокие коэффициенты постоянства лактации (91,4 - 96,5%).

Таким образом, проведённые исследования показали, что анализируемые животные, имеющие разные генотипы каппа-казеина, относятся к I и 2 типу лактационной деятельности, характеризующиеся высокой устойчивой и плавно спадающей лактационной кривой.

3.7. Качество и технологические свойства молока коров с разными генотипами каппа-казсина

3.7.1. Состав молока и его физико-химические показатели у коров с разными генотипами каппа-казеина

Молоко от коров с разными генотипами каппа-казеина было 100% пригодное для производства сыра, то есть по качеству I - сорта, с механической загрязненностью I - группы и бактериальной обсемененностью I - класса. Молоко, производимое в перечисленных хозяйствах, по качеству и содержанию основных компонентов значительно превосходило требования ГОСТа 13264-70.

Анализ физико-химического состава молока сравниваемых групп животных позволил выявить определенные различия по некоторым показателям. Так из данных таблиц 9, 10 и 11 видно, что первотелки с генотипом АВ и ВВ имели более высокие показатели содержания сухого вещества в молоке (12,31 - 12,55% и 12,39 - 12,52%) и содержания COMO (8,47 - 8,65% и 8,57 - 8,62%). При этом животные с генотипом АВ и ВВ превосходили коров с генотипом АА по содержанию сухих веществ в молоке и COMO на 0,07 - 0,23% и 0,06 - 0,23% соответственно.

Наибольшим содержанием основных компонентов в молоке характеризовались коровы, имеющие в своем генотипе В аллель каппа-казеина, при этом у таких животных содержание компонентов в молоке составило: жира (3,82 - 3,92%), белка (3,28 - 3,49%) и лакгозы (4,41 - 4,55%). Наименьшее значение этих показателей наблюдалось у первотелок с генотипом АА: жира (3,81 - 3,91%), белка (3,19 - 3,22%) и лактозы (4,34 - 4,46%). Группа животных с генотипом АА уступала аналогам других групп по жиру - на 0,01 - 0,03%, по белку - 0,09 - 0,30% (Р<0,05 и 0,001) и по лактозе - 0,01 - 0,12%.

Первотелки имеющие в своем геноме аллельный вариант В гена каппа-казеина незначительно превосходили по показателям плотности молока коров с генотипом АА на 0,3 - 0,9 °А.

В молоке коров-первотелок с гомозиготным генотипом каппа-казеина АА наблюдался более высокий показатель титруемой кислотности (18,10 - 18,38 °Т). Животные с генотипом АА превосходили по этому показателю сверстниц с генотипом АВ и ВВ на 0,04 - 0,14 °Т.

Таблица 9. Состав молока, его физико-химические показатели у коров с разными генотипами каппа-казеина в ООО «Серп и Молот»

Показатели Генотипы

АА АВ ВВ АА+АВ АА1ВВ

п 156 63 6 - -

сухое вещество, % 12,16+0,03 12,31±0,05 12,39+0,17 +0,15** +0,23

COMO, % 8,34+0,03 8,47+0,04 8,5710,15 +0,13** +0,23

содержание жира, % 3,81+0,01 3,84±0,02 3,8210,03 +0,03 +0,01

содержание белка, % 3,19±0,02 3,28±0,03 3,49+0,01 +0,09* +0,30***

содержание лактозы, % 4,34+0,01 4,41+0,02 4,46+0,08 +0,07** +0,12

плотность, °А 27,9±0,10 28,410,17 28,810,60 +0,5* +0,9

титруемая кислотность, °Т 18,38+0,05 18,31±0,10 18,2410,31 -0,07 -0,14

* - Р<0,05, ** - Р<0,01, *** - Р<0,001

Таблица 10. Состав молока, его физико-химические показатели у коров с разными генотипами каппа-казеина в СХПК им. Ленина

Показатели Генотипы

АА АВ ВВ АА+АВ АА+ВВ

п 111 99 9 - -

сухое вещество, % 12,45+0,04 12,55+0,04 12,5210,12 +0,10 +0,07

COMO, % 8,54+0,03 8,6510,03 8,6010,11 +0,11** +0,06

содержание жира, % 3,91±0,02 3,9010,02 3,92+0,04 -0,01 +0,01

содержание белка, % 3,21±0,02 3,3210,01 3,4110,02 +0,11*** +0,20***

содержание лактозы, % 4,44±0,01 4,50+0,02 4,47+0,06 +0,06** +0,03

плотность, °А 28,6±0,10 29,110,14 28,910,45 +0,5** +0,3

титруемая кислотность, °Т 18,10+0,07 18,06+0,09 18,0210,21 -0,04 -0,08

** - Р<0,01, *** - Р<0,001

Таблица 11. Состав молока, его физико-химические показатели у коров с разными генотипами каппа-казеина в ОАО «Племзавод «Бирюлинский»

Показатели Генотипы

АА АВ ВВ АА±АВ АА1ВВ

п 109 52 3 - -

сухое вещество, % 12,ЗОЮ,02 12,5110,04 12,4910,35 +0,21*** +0,19

COMO, % 8,4410,03 8,63+0,04 8,62+0,41 +0,19*** +0,18

содержание жира, % 3,86±0,03 3,8810,03 3,87+0,07 +0,02 +0,01

содержание белка, % 3,22±0,01 3,3410,02 3,4510,04 +0,12*** +0,23***

содержание лактозы, % 4,46±0,02 4,55+0,03 4,47+0,13 +0,09* +0,01

плотность, °А 28,110,06 28,7+0,19 29,010,58 +0,6** +0,9

титруемая кислотность, °Т 18,17+0,04 18,0910,12 18,11+0,47 -0,08 -0,06

* - Р<0,05, ** - Р<0,01, *** - Р<0,001

Таким образом, общий анализ качества и состава товарного молока от коров-первотёлок с разными генотипами каппа-казеина показал, что молоко из представленных хозяйств высокого качества с содержанием основных компонентов, значительно превышающим требования ГОСТа 13264-70. При этом молоко наилучшего качества у животных несущим в своём геноме аллельный вариант В гена каппа-казеина.

3.7.2. Белковый состав молока коров с разными генотипами каппа-казеина

У коров татарстанского типа в молоке определяли абсолютное и относительное содержание 15 белковых фракций: as'-, as0-, as,-, as2-, P-, к-, y-, s-казеинов (Cn), F-фракции сыворотки, p - лактоглобулина (Lg), a - лактоальбумина (La), альбумина сыворотки крови (Al), протеозо-пептонной фракции (Рр), иммуноглобулина (Ig), и минорных фракций сыворотки.

Коровы имеющие в своем геноме аллельный вариант В гена каппа-казеина превосходили по содержанию белка в молоке животных с гомозиготным генотипом каппа-казеина АА на 0,089 - 0,301 г/100 мл (Р<0,01 - 0,001).

Аналогичную тенденцию наблюдали по содержанию казеинов: повышенное содержание выявлено в молоке коров с генотипом ВВ (2,681 - 2,787 г/100 мл), пониженное (2,510 - 2,525 г/100 мл) - у коров с генотипом АА, а животные с генотипом АВ имели промежуточное значение (2,611 - 2,653 г/100 мл). Животные

с генотипом АА уступали животным с другими генотипами на 0,092 - 0,277 г/100 мл (Р<0,001). Однако следует отметить, что коровы с генотипом АВ и ВВ имели наибольшее относительное содержание казеинов (78,60 - 79,90%).

as1- Казеин относится к минорным фракциям молочного белка и не оказывает сильного влияния на выход белковомолочных продуктов. Содержание этой фракции в молоке коров составило 0,028 - 0,128 г/100 мл, т.е. 0,80 - 3,99% от общего белка. Изменение этой фракции оказалось противоположно тому, что наблюдалось по общему белку и казеину, при этом животные с генотипом АА превосходили по данному показателю аналогов других групп на 0,018 - 0,074 г/100 мл (Р<0,01-0,001).

as0- Казеин относится к фракциям белков молока, имеющих средний уровень. Более высокое содержание as0- казеина выявлено у помесей с генотипом АВ и ВВ (соответственно 0,197 - 0,245% и 0,227 - 0,253 г/100 мл), а животные с генотипом АА имели пониженное содержание этой фракции (0,182 - 0,202 г/100 мл; Р<0,001). Относительное содержание as0- казеина в молоке исследованных животных составило 5,68 - 7,33% от общего белка.

asr Казеин - является главной белковой фракцией в молоке коров. Наибольшую долю (25,33 - 26,13%) от общего белка и его количество (0,847 -0,909 г/100 мл) было у коров, имеющих в своём генотипе В аллель. При этом у помесей с генотипом АА имелось более низкое содержание asi- казеина, как в абсолютных, так и в относительных величинах 0,811 - 0,832 г/100мл и 25,20 -25,94% соответственно.

as2- Казеин по уровню белка уступает лишь asr и Р - фракциям. Содержание as2- казеина в молоке исследованных коров составило 0,294 - 0,369 г/100 мл (8,88 - 10,69%). Следует отметить лишь несколько пониженное содержание as2-казеина в молоке помесных коров с генотипом АА (соответственно 0,294 - 0,323 г/100 мл).

В - Казеин по уровню белка занимает второе место после as г фракции. В образцах молока доля р- казеина составила 19,61 - 21,72% общего белка, а его абсолютное содержание 0,631 - 0,758 г/100 мл. Между исследованными группами животных с генотипом АА и АВ наблюдались слабые различия по этому белку. Повышенным содержанием этой фракции (0,685 - 758 г/100 мл, Р<0,01 - 0,001) в молоке отличались коровы с генотипом ВВ.

к - Казеин - имеет большое значение при производстве белково-молочных продуктов, так как имеет технологическую ценность. Его содержание в молоке исследованных коров было 0,234 - 0,283 г/100 мл (7,30 - 8,25% от общего белка). Повышенное содержание к - казеина (0,264 - 0,283 г/100 мл) было характерно для молока коров с генотипом ВВ и пониженное содержание этой фракции (0,234 -0,252 г/100 мл) для коров с генотипом А А, разница между этими группами составила 0,026 - 0,043 г/100 мл (Р<0,001).

Y и S - Казенны относятся к минорным фракциям молочного белка и не оказывают сильного влияния на выход белково-молочных продуктов. Содержание этих фракций казеина оказалось на уровне 5,33 - 6,47% от общего белка. Межгрупповые различия животных с генотипом АА и ВВ по у-казеину составили

0,002 - 0,013 г/100 мл и по s-казеину 0,002 - 0,011. Влияние генотипа каппа-казеина на содержание у- и s-казеинов в молоке помесных коров было слабым.

В молоке исследованных коров сывороточные белки составили 0,660 - 0,727 г/100 мл, т.е. 20,10 - 21,54% от общего белка. Наибольшее количество этих белков (0,694 - 0,727 г/100 мл) выявлено в молоке коров с генотипом ВВ, но при этом с низким их относительным содержанием (20,10 - 21,33%). Животные с генотипом ВВ по данному показателю превосходили аналогов с генотипом АА на 0,001 - 0,039 г/100 мл и в тоже время уступали по относительному содержанию на 0,12 - 1,44%. Таким образом, снижение общего белка в молоке у помесных коров связано с уменьшением количества казеинов, при этом напротив происходит увеличение доли сывороточных белков.

Содержание F - фракции в молоке коров очень незначительное и составило 0,66 - 1,47%, а его количество 0,023 - 0,050 г/100 мл. Животные с генотипом ВВ уступали аналогам с генотипом АА на 0,008 г/100 мл (Р<0,001) в ООО «Серп и Молот», тогда как в других хозяйствах они наоборот превосходили на 0,005 -0,018 г/100 мл (Р<0,05 и 0,001).

ß - Лактоглобулин - представляет собой очень ценный компонент молока, необходимый, прежде всего для роста молодняка, поэтому и является главным белком молочной сыворотки. Помесные животные с генотипом АА и ВВ обладали повышенным содержанием ß - лактоглобулина (соответственно 0,329 и 0,329 - 0,352 г/100 мл, что в относительном содержании составило 10,26% и 9,53 - 10,09% от общего белка). Разница между этими группами составила 0,012 -0,027 г/100 мл. Коровы с гетерозиготным генотипом (AB) имели более низкий или промежуточный показатель этой фракции белка.

Схожая картина наблюдалась и по содержанию а - лактоальбумина, так наибольшее количество этого белка было у коров с генотипом АА 0,112 - 0,117 г/100 мл (3,48 - 3,65%) и ВВ 0,112 - 0,113 г/100 мл (3,24%). Разница между группой коров с генотипом АА и ВВ составила 0,008 - 0,015 г/100 мл (Р<0,01 -0,001), тогда как в ОАО «Племзавод «Бирюлинский» разница по этому показателю отсутствовала.

Выявлено превосходство по содержанию альбумина крови коров с генотипом АА над аналогами с генотипом ВВ в ООО «Серп и Молот» и ОАО «Племзавод «Бирюлинский». Так, содержание этого белка у животных с генотипом ВВ 0,048 -0,052г/100 мл, а с генотипом АА 0,056 - 0,054 г/100 мл, разница при этом составила 0,004 - 0,006 г/100 мл (Р<0,01 - 0,001). В СХПК им. Ленина наоборот животные с генотипом ВВ (0,069 г/100 мл) превосходили по этому показателю сверстниц с генотипом АА (0,055 г/100 мл) на 0,014 г/100 мл (Р<0,001).

Содержание протеозо-пептонов и других белков сыворотки в молоке коров исследуемых групп составило соответственно 0,039 - 0,051 и 0,039 - 0,056 г/100 мл (1,22 - 1,68% и 1,13 - 2,18% от общего белка). Межгрупповые различия по этим фракциям были выражены слабо, т.е. коровы с разными генотипами каппа-казеина имели примерно одинаковый уровень белка в этих фракциях.

В молоке коров с разными генотипами каппа-казеина уровень иммуноглобулина был в пределах 0,070 - 0,087 г/100 мл (1,43 - 2,99%). Следует

отметить, что животные с генотипом ВВ по абсолютному содержанию этого белка превосходили аналогов с генотипом АА на 0,002 - 0,017 г/100 мл.

Таким образом, коровы, обладающие генотипом АВ и ВВ по гену каппа-казеина имели более высокие показатели белковости молока и содержания казеина, чем животные с генотипом АА.

3.7.3. Сыропригодность молока коров с разными генотипами каппа-казеина

Во всех группах коров выявлена отрицательная зависимость технологических свойств молока от генотипа АА каппа-казеина. От молока 46,8 -48,6% коров с таким генотипом получен казеиновый сгусток рыхлого и дряблого состояния (табл. 12).

Таблица 12. Технологические свойства молока в зависимости от их генотипа по каппа-казеину

Я Состояние казеи- Распределение коров В том числе с генотипом по

5 н нового сгустка и каппа-казеину

га 9 продолжитель- АА АВ ВВ

к а ность свертывания п % п % п % п %

молока

ООО «Серп и Молот»

плотное 141 62,7 82 52,6 53 84,1 6 100

п=225 рыхлое 73 32,4 66 42,3 7 11,1 - -

дряблое 11 4,9 8 5,1 3 4,8 - -

время, мин 28,5 ±0,84 30,6 ±0,99 24,6*** ±1,32 18,2*** ±3,40

СХПК им. Ленина

плотное 147 67,1 57 51,4 81 81,8 9 100

п=219 рыхлое 56 25,6 43 38,7 13 13,1 - -

дряблое 16 7,3 11 9,9 5 5,1 - -

время, мин 27,2 ±0,34 31,3 ±0,46 23,6*** ±0,93 16 ±3,10

ОАО «Племзавод «Бирюлинский»

плотное 104 63,4 58 53,2 43 82,7 3 100

п=164 рыхлое 50 30,5 44 40,4 6 11,5 - -

дряблое 10 6Д 7 6,4 3 5,8 - -

время, мин 27,8 ±0,59 30,4 ±0,68 23,1*** ±0,76 17,3*** ±2,52

1 | | У |

Разность между ВВ, АВ и АА: ***- Р<0,001

Присутствие В аллеля каппа-казеина в генотипе животных значительно улучшило состояние казеинового сгустка. Доля молока с плотным состоянием сгустка у гомозиготных коров ВВ составила 100%, гетерозиготых (АВ) - 81,8-84,1%.

В сыроделии наиболее желательным считается молоко, у которого время свёртывания под действием сычужного фермента длится не более 15-40 мин. Если свёртывание длится более 40 минут, это приводит к большой потере сырья и низкому выходу сыра, так как нарушаются технологические процессы его производства. Лучшими показателями по продолжительности свёртывания характеризовались коровы с генотипом каппа-казеина ВВ, у них свёртывание молока происходило за наименьшее время - 16,9 - 18,2 минут. У животных с генотипом А А эти показатели оказались несколько хуже и составили 30,4-31,3 минут (Р<0,001).

Таким образом, среди исследованных коров татарстанского типа наилучшими сыродельческими свойствами молока обладали животные с генотипом АВ и ВВ каппа-казеина, у них наибольший выход желательного плотного сычужного сгустка и наименьшая продолжительность свёртывания молока. Они по этим показателям значительно превосходят коров с генотипом АА.

3.7.4. Термоустойчивость молока коров с разными генотипами каппа-казеина

Исследованиями установлено, что молоко коров татарстанского типа с генотипом ВВ каппа-казеина характеризовалось пониженной термостабильностью - 33,1 - 35,2 мин., с генотипом АА - повышенной - 60,1 -65,8 мин., а с генотипом АВ она составляла 57,5 - 62,9 мин. (табл. 13).

Таблица 13. Термостабнльность молока коров с разными генотнпами каппа-казеина

Хозяйство Термостабильность молока, мин.

Генотип каппа-казеина

АА АВ ВВ

п 156 63 6

ООО «Серп и Молот» 65,8+0,72 62,9+1,27* 33,1±2,22***

п 111 99 9

СХПК им. Ленина 63,7±1,10 60,3+1,25* 35,2±2,14***

п 109 52 3

ОАО «Племзавод «Бирюлинский» 60,1+1,82 57,5±2,86 34,8±3,35***

Разность между ВВ, АВ и АА: *- Р<0,05, ***- Р<0,001

Сравнение изменений белковости и термоустойчивости молока у коров с разными генотипами каппа-казеина показывает наличие определенной связи между этими признаками. Нами установлено (табл. 5, 6 и 7), что животные с генотипом ВВ имели более высокую белковость молока (3,408 - 3,490 г/100 мл), а с генотипом АА - более низкую (3,189 - 3,207 г/100 мл). При этом коровы, несущие в своем геноме аллельный вариант В гена каппа-казеина превосходили по содержанию белка в молоке животных с гомозиготным генотипом каппа-

казеина АА на 0,089 - 0,301 г/100 мл (Р<0,01 - 0,001). Термоустойчивость молока у коров с разными генотипами каппа-казеина находилась в обратной зависимости - соответственно 33,1 - 35,2 мин. и 60,1 - 65,8 мин. Следовательно, снижение содержания белка в молоке приводит к повышению его термоустойчивости.

Таким образом, коровы, имеющие в своём геноме аллельный вариант А гена каппа-казеина превосходили аналогов с гомозиготным генотипом каппа-казеина ВВ по термостабильности молока и по доле (%) животных с данными характеристиками молока. По-видимому, это связано с качественным и количественным содержанием белка в молоке животных с разными генотипами каппа-казеина.

3.8. Качество и технологические свойства молочных продуктов, изготовленных из молока коров с разными генотипами каппа-казеина

3.8.1. Качество и технологические свойства сыра, изготовленного из молока коров с разными генотипами каппа-казеина

Товарное молоко от коров татарстанского типа по содержанию общего белка и его технологически ценных фракций превышало требования, предъявляемых к молочной продукции для выработки сыров. В молоке содержалось повышенное содержание общего белка 3,189 - 3,490 г/100 мл, казеина 2,510 - 2,787 г/100 мл. По требованиям ГОСТа 13264-70 эти показатели значительно ниже и составляли 3,0 и 2,5 г/100 мл.

Из молока каждой подопытной группы коров с разными генотипами каппа-казеина был изготовлен сыр «Костромской «ИТ», согласно существующей технологии в ОАО «В амин-Татарстан» Высокогорский молочный завод Республики Татарстан, в соответствии с требованиями ТУ-9225-041-04610209-2002.

Из таблицы 14 видно, что масса сыра после прессования, полученного из 30 кг молока коров-первотелок с генотипом ВВ и АВ, составляла 4,021 кг и 3,947 кг, что было выше по сравнению с генотипом АА на 0,182 - 0,256 кг (0,6 - 0,8%). Соответственно количество сыра после созревания также было выше у коров с генотипом ВВ и АВ (3,482 и 3,397 кг). Превосходство по массе готового сыра из молока животных с генотипом ВВ и АВ составляло по сравнению с генотипом АА - 0,069 - 0,154 кг (0,2 - 0,5%).

На получение 1 кг сыра из молока коров с генотипом ВВ потребовалось меньшее количество молока - 8,6 кг, в то время как для изготовления такого же количества сыра от животных, имеющих генотипы АВ и АА, было израсходовано соответственно 8,8 - 9,0 кг молока.

Содержание сухого вещества в сыре, приготовленном из молока коров с генотипом ВВ, составляло 57,6%, что выше по сравнению с генотипами АВ и А А соответственно на 1,1 - 1,5%. Более высокое содержание белка в сухом веществе было отмечено в сыре у коров с генотипом АВ и ВВ (53,3% и 53,8%). Тогда как более высокое содержание жира в сухом веществе имелось в сыре, полученного из молока коров с генотипом АА (44,9%).

Таблица 14. Показатели качества сыра из молока коров _с разными генотипами капиа-казеииа_

Показатели Генотип каппа-казеина

АА АВ ВВ

п 376 214 18

количество молока, кг 30 30 30

масса сыра после прессования, кг 3,765 3,947 4,021

выход сыра после прессования, % 12,6 13,2 13,4

масса сыра после созревания, кг 3,328 3,397 3,482

выход сыра после созревания, % 11,1 11,3 11,6

расход молока на приготовление 1 кг сыра, кг 9,0 8,8 8,6

состав сыра: массовая доля влаги, % содержание сухого вещества (СВ), % массовая доля жира в СВ, % массовая доля белка в СВ, % 43,9 56,1 44,9 52,6 43,5 56,5 44.2 53.3 42,4 57.6 43.7 53.8

Нами также изучены органолептические свойства (внешний вид, вкус и запах, консистенция, цвет теста, рисунок) зрелого сыра, полученного из молока коров-первотелок с разными аллельными вариантами гена каппа-казеина.

Поверхность сыра, полученного из молока коров с генотипами каппа-казеина ВВ и АВ была ровная, тонкая, без повреждений и трещин. Корка сыра, полученного из молока коров с генотипом АА, была тонкая, неравномерная, также без видимых повреждений и трещин.

Более выраженным сырным вкусом и запахом обладал сыр, полученный из молока коров с генотипом ВВ. Сыр, изготовленный, из молока коров с генотипом АА отличался несколько слабовыраженным сырным вкусом и запахом.

Наиболее оптимальной консистенцией и рисунком, присущими для данных видов сыров, обладал сыр, приготовленный из молока коров с генотипом ВВ. Тесто сыра отличалось нежностью, пластичностью, слегка плотное, однородное по всей массе. На разрезе сыр имел рисунок, состоящий из глазков круглой, слегка приплюснутой и неправильной формы, равномерно расположенных по всей массе. Сыр, приготовленный из молока коров с АА генотипом, имел пластичное и однородное тесто, но несколько ломкое на изгибе. На разрезе сыра рисунок был неравномерный, состоял из часто расположенных глазков неправильной и угловатой формы разного диаметра.

Цвет теста сыра, изготовленного из молока всех групп животных с разными генотипами каппа-казеина был слабо-желтый, однородный по всей массе сыра.

Таким образом, молоко коров, несущих в своем геноме аллель В гена каппа-казеина, является более пригодным к изготовлению полутвердого сыра «Костромской «ИТ», из такого молока можно приготовить больше на 0,2 - 0,5% сыра лучшего качества. Сыр из молока коров с генотипом каппа-казеина АВ и ВВ обладает более лучшими органолептическими свойствами и более благоприятной композицией.

3.8.2. Качество и технологические свойства творога, изготовленного из молока коров с разными генотипами каппа-казеина

Количество творога, полученного из молока коров с генотипом ВВ и АВ превышало количество творога, полученного из молока сверстниц с генотипом АА на 0,052 - 0,162 кг (5,8 - 17,6%). При этом наибольшее количество сыворотки отделилось при производстве творога из молока животных с генотипом АА (9,0 -9,4 кг), данная группа превосходила аналогов других групп на 0,2 - 0,7 кг (2,2 -7,7%) сыворотки (табл. 15,16,17).

Зерно, полученное из молока коров с генотипом АА было очень мелким, мягким, местами хлопьевидным. Наличие хлопьев отмечалось в твороге, полученном из молока коров с генотипом АВ. Лишь из молока коров с генотипом ВВ было получено нормальное, упругое, крупное зерно и высококачественный творог. Изучение качества полученного зерна при створаживании молока показало значительные преимущества продукта, полученного из молока коров с желательным генотипом ВВ.

Таблица 15. Приготовление и оценка качества творога из молока коров с разными генотипами каппа-казеина в ООО «Серп и Молот»

Показатели Генотип каппа-казеина

АА АВ ВВ

п 156 63 6

количество молока, кг 10 10 10

содержание жира, % 3,81 3,84 3,82

содержание белка, % 3,19 3,28 3,49

количество творога, кг 0,743 0,805 0,872

количество сыворотки, кг 9,4 8,9 8,8

жирность сыворотки, % 2,29 2,31 2,38

белок сыворотки, % 1,24 0,79 0,99

Таблица 16. Приготовление и оценка качества творога из молока коров _с разными генотипами каппа-казеина в СХПК им. Ленина_

Показатели Генотип каппа-казеина

АА АВ ВВ

п 111 99 9

количество молока, кг 10 10 10

содержание жира, % 3,91 3,90 3,92

содержание белка, % 3,21 3,32 3,41

количество творога, кг 0,771 0,823 0,904

количество сыворотки, кг 9,0 8,8 8,5

жирность сыворотки, % 2,37 2,41 2,49

белок сыворотки, % 1,06 0,82 0,91

Таблица 17. Приготовление и оценка качества творога из молока коров с разными генотипами каппа-казеина в ОАО «Племзавод «Бирюлннскнй»

Показатели Генотип каппа-казеина

АА АВ ВВ

п 109 52 3

количество молока, кг 10 10 10

содержание жира, % 3,86 3,88 3,87

содержание белка, % 3,22 3,34 3,45

количество творога, кг 0,759 0,846 0,921

количество сыворотки, кг 9,1 8,7 8,4

жирность сыворотки, % 2,33 2,39 2,44

белок сыворотки, % 1,03 0,85 0,89

В связи с тем, что творог готовили из ненормализованного молока с различным содержанием жира и белка, мы также провели оценку процесса приготовления творога из молока коров с разными генотипами на основе показателей использования молочного жира и белка исходного продукта.

Исследования показали, что при приготовлении творога степень использования жира и белка выше из молока коров, имеющих в своем геноме аллельный вариант В гена каппа-казеина. Так степень использования жира из молока коров с генотипом АВ и ВВ была выше на 0,2 - 3,0%, чем из молока коров с генотипом АА. Степень использования белка из молока коров с генотипом АВ и ВВ была выше на 7,0 -15,1%, чем из молока коров с генотипом АА.

Таким образом, анализ процесса приготовления творога из молока коров с разными генотипами показал преимущества использования молока коров, содержащих в своем геноме аллель В гена каппа-казеина.

3.8.3. Качество и технологические свойства йогурта, изготовленного из молока коров с разными генотипами каппа-казенна

Исследования йогурта позволили выявить различие качества продукта, полученного из молока коров с генотипами каппа-казеина АА, АВ и ВВ.

В йогурте, полученном из молока коров с генотипом каппа-казеина АА, отмечалось отслаивание большого количества сыворотки. Отслаивание или малое количество сыворотки наблюдалось в продукте, полученном из молока коров с генотипом каппа-казеина АВ. В йогурте, полученном из молока коров с генотипом каппа-казеина ВВ, сгусток был однородный и густой, отслаивание сыворотки не наблюдалось.

Таким образом, наиболее высокую оценку по густоте и вкусу имел молочно-сливочный йогурт, приготовленный из молока коров с генотипом каппа-казеина АВиВВ.

3.9. Воспроизводительная способность коров с разными генотипами каппа-казеина

Результаты исследований показывают, что гомозиготные первотелки с генотипом ВВ имеют больший возраст при первом отеле, чем первотелки с генотипами АА и АВ на 1,0 - 1,8 и 0,5 - 1,2 месяца, соответственно. Животные с генотипами АА и АВ имели почти одинаковый возраст первого отела. Различия между возрастом первого отела у животных в СХПК им. Ленина с генотипами АА и АВ, ВВ по локусу гена каппа-казеина составили 0,6 - 1,8 месяцев (Р<0,05 и 0,001) (табл. 18, 19,20).

Коровы с разными генотипами каппа-казеина имели незначительные различия по продолжительности сервис-периода (96 - 114 дней). Наиболее коротким он был у гомозиготных животных с генотипом АА (96-112 дней).

Сервис-период имеет тесную связь с интервалом между отелами, который является одним из важных факторов, определяющих экономическую эффективность использования молочного стада. Межотельный период включает в себя два признака плодовитости - длительность сервис-периода и продолжительность стельности. В идеале он должен быть равен одному календарному году. Так как продолжительность стельности - стабильный признак, имеющий низкую изменчивость (2 - 4%), то изменчивость межотельного периода в основном обусловлена вариацией сервис периода.

Как и по продолжительности сервис-периода, так и по продолжительности межотельного периода животные всех исследованных групп имели примерно одинаковые показатели (381 - 398 дней).

Интегральным показателем плодовитости коров является коэффициент воспроизводительной способности, который определяется отношением количества дней календарного года к длительности межотельного периода. Оптимальным считается коэффициент воспроизводительной способности равный единице.

Таблица 18. Воспроизводительная способность коров с разными генотипами каппа-казеина в ООО «Серп и Молот»

Генотип Признаки плодовитости

Возраст 1-го отела, мес. Сервис-период, дн. МОП, дн. КВС Индекс Дохи

АА (п=156) 27,2±0,14 109±3,32 394±3,32 0,94±0,01 46,5±0,36

АВ (п=63) 27,5+0,23 110±4,57 395±4,51 0,93+0,01 46,2±0,51

ВВ (п=6) 28,3+0,89 112±21,83 398±21,49 0,93+0,05 45,2+2,23

АВ к АА +0,3 +1 +1 -0,01 -0,3

ВВ к АА +1,1 +3 +4 -0,01 -1,3

Таблица 19. Воспроизводительная способность коров с разными генотипами каппа-казеина в СХПК им. Ленина

Генотип Признаки плодовитости

Возраст 1-го отела, мес. Сервис-период, дн. МОП, дн. КВС Индекс Дохи

АА (п=111) 27,4+0,19 112±4,72 398±4,72 0,93±0,01 46,110,49

АВ (п=99) 28,0+0,18 114+6,17 398±6,14 0,9410,01 45,510,58

ВВ (п=9) 29,2+0,40 111±9,29 397±9,29 0,9210,02 44,3+1,01

АВ к АА +0,6* +2 0 +0,01 -0,6

ВВ к АА +1,8*** -1 -1 -0,01 -1,8

* - Р<0,05, ***-Р<0,001

Таблица 20. Воспроизводительная способность коров с разными генотипами каппа-казеина в ОАО «Племзавод «Бирюлннскнп»

Генотип Признаки плодовитости

Возраст 1-го отела, мес. Сервис-период, дн. МОП, дн. КВС Индекс Дохи

АА (п=109) 26,9+0,16 9614,28 38114,28 0,97+0,01 47,710,32

АВ (п=52) 27,410,29 110+5,21 39615,20 0,93+0,01 46,2+0,48

ВВ (п=3) 27,9+1,28 107112,50 394112,81 0,9310,03 45,912,14

АВ к АА +0,05 +14* +15* -0,04** -1,5**

ВВ к АА +1,0 +11 +13 -0,04 -1,8

* - Р<0,05, *** - Р£0,01

По нашим данным, коровы всех опытных групп, имели коэффициент воспроизводительной способности в пределах 0,92 - 0,97. В связи с тем, что полученные значения коэффициента воспроизводительной способности ниже 0,95, всех опытных животных следует отнести к проблемным в плане организации воспроизводства, за исключением коров с генотипом АА в ОАО «Племзавод «Бирюлинский», у которых этот показатель составил 0,97.

Для оценки воспроизводительной способности коров Дохи (1961) ввел формулу, которая объединяет возраст первого отела и продолжительность межотельного периода. Согласно индексу Дохи, плодовитость коров считается хорошей, если значение индекса более 48, средней - от 41 до 48, ниже 41 - плохой показатель плодовитости.

По результатам сравнительного изучения показателя Дохи, коровы всех групп имеют значение индекса от 44,3 до 47,7, что свидетельствует о среднем уровне плодовитости. Наименьшее значение индекса Дохи имели коровы с генотипом каппа-казеина ВВ (44,3 - 45,9). Наибольшее значение индекса Дохи

было выявлено у коров с генотипом АА (46,1 - 47,7). Промежуточное значение индекса Дохи получено нами у животных с генотипом каппа-казеина АВ (45,5 - 46,2).

Таким образом, проведенные исследования воспроизводительной способности коров с разными генотипами каппа-казеина не выявили достоверных различий между опытными группами животных. Все животные имели среднее значение индекса Дохи.

3.10. Селекционно-генетические параметры продуктивности в группах коров с разными генотипами каппа-казеина

3.10.1. Изменчивость признаков молочной продуктивности

Разница между группами животных с разными генотипами каппа-казеина по коэффициенту изменчивости продолжительности лактации незначительная и составляет 0,14 - 1,51%. В ООО «Серп и Молот» наибольший коэффициент был у коров с генотипом АА - 7,41%, а наименьший с генотипом АВ - 5,90%, тогда как в СХПК им. Ленина и ОАО «Племзавод «Бирюлинский» наибольший коэффициент имелся у животных с генотипом АВ и ВВ (6,37 - 6,40%), а наименьший с генотипом АА (5,13 - 6,07%).

Степень вариабельности удоя была довольно низкой во всех группах. Первотёлки с генотипом АА превосходили животных с другими генотипами на 0,49 - 8,25%. Причём наибольшая разница отмечена в ОАО «Племзавод «Бирюлинский» между коровами с генотипом АА и ВВ (8,25%, Р<0,01).

Изменчивость содержания жира в молоке колебалась в пределах от 2,04% у помесных первотёлок с генотипом ВВ до 7,36% с генотипом АА. При этом животные с генотипом ВВ уступали аналогам, имеющие генотип АА на 0,85% и 2,06 - 4,23% (Р<0,01). Коэффициент вариабельности выхода молочного жира у коров с генотипом АА был выше, чем у сверстниц с генотипом АВ на 0,20 -1,47% и 3,02% (Р<0,01) и ВВ на 0,97 - 4,05% и 9,50% (Р=0,001).

Характер изменчивости содержания белка у первотёлок с разными генотипами каппа-казеина находился на уровне от 1,17% до 3,61%. Животные ООО «Серп и Молот» и СХПК им. Ленина с генотипом АА превосходили по этому показателю сверстниц с генотипом ВВ на 0,77 - 1,05% (Р<0,05 и Р=0,01), тогда как в ОАО «Племзавод «Бирюлинский» наименьший коэффициент изменчивости был у коров с генотипом А А - 1,82%, а наибольший с генотипом АВ - 3,61%. Коэффициент изменчивости молочного белка коров с генотипом АА превосходил животных с другими генотипами на 0,27 - 6,60%, но уступал аналогам в ОАО «Племзавод «Бирюлинский» с генотипом АВ на 0,46%.

Более высокая разнородность по интенсивности молокоотдачи выявлена у животных с генотипом ВВ (10,02 - 12,45%). Они превосходили по данному показателю первотёлок с генотипом АА на 0,35 - 1,35%.

Коэффициент вариации по удою на один день лактации был в пределах от 2,35% до 12,50%. Наименьшая вариабельность по данному признаку была у первотёлок с генотипом ВВ (2,35 - 4,97%), при этом они уступали по этому признаку животным с генотипом АА на 4,53 - 8,29% (Р<0,01 - 0,001).

Таким образом, по всем признакам молочной продуктивности у помесных коров наибольшие коэффициенты изменчивости характерны для первотёлок, имеющие в своём геноме аплельный вариант А гена каппа-казеина.

3.10.2. Сопряженность признаков молочной продуктивности

Корреляционная связь между удоем и содержанием жиром в молоке была в пределах от -0,36 до 0,05). Животные всех групп показали отрицательно направленную связь, за исключением первотёлок с генотипом АВ в СХПК им. Ленина. У них корреляция была на уровне - г = 0,05.

Наибольшие коэффициенты корреляции между удоем и содержанием белка были у коров с генотипом ВВ (0,31 - 0,56), а наименьшие - с генотипом АА (0,09

- 0,11). Животные с генотипом АВ имели промежуточные значения (0,25 - 0,30).

Установлено, что коэффициенты корреляции между такими показателями, как удой-молочный жир, удой-молочный белок и жир-белок оказались положительными. Данные коэффициенты колебались в пределах от 0,57 до 0,99. Причем связь этих показателей у всех групп животных была достоверной (Р<0,05

- 0,001), исключение составляет сопряженность между признаками молочной продуктивности у коров с генотипом ВВ в ОАО «Племзавод «Бирюлинский»,

Таким образом, полученные данные показали, что величина и направленность корреляции между удоем-жиром и удоем-белком нестабильная, меняется в процессе селекции под влиянием отбора и факторов внешней среды. Относительно хорошие показатели коэффициентов корреляции, то есть высокие и положительно направленные показали первотёлки, имеющие в своём геноме аллельный вариант В гена каппа-казеина.

3.11. Экономическая эффективность использования коров с разными генотипами каппа-казеина

Эффективность производства продукции в основном определяется уровнем продуктивности молочных коров, то есть чем выше продуктивность, тем ниже затраты на единицу продукции и выше выручка и прибыль от реализации.

Экономическая эффективность использования помесных животных с разными генотипами каппа-казеина определялась согласно «Методическим рекомендациям по определению экономической эффективности от внедрения результатов научно-исследовательских работ в животноводстве» (Ю.И. Шмаков, А.В. Черекаев, 1984) с учётом ГОСТа (2003 г.) молока по базисной общероссийской норме массовой доле жира (3,4%) и белка (3,0%).

От коров-первотёлок с генотипами каппа-казеина АА, АВ и ВВ получено молока базисной жирности и белковости в количестве 5992 - 6714 кг, 6478 - 7148 кг и 6575 - 7037 кг соответственно (табл. 21, 22 и 23).

В результате этого группы коров с генотипом АВ и ВВ по сравнению со сверстницами (генотип АА) выдали дополнительное количество молока в пределах 434 - 998 кг (6,5 - 16,5%).

Стоимость дополнительной продукции в расчёте на 1 голову по группам животных с генотипом АВ и ВВ составила 4860,52 - 5818,83 руб. и 6800,32 -11658,29 руб. соответственно.

Таблица 21. Эффективность производства молока от первотелок с разными генотипами каппа-казеина в ООО «Серп и Молот»

Показатели Генотипы

АА (базовый вариант) АВ ВВ

Молоко базисной жирности и белковости на 1 голову, кг 6039 6478 7037

Прибавка основной продукции кг - 439 998

% - 7,3 16,5

Цена реализации 1 кг молока, руб. 15,60 15,60 15,60

Стоимость дополнительной продукции в расчёте на 1 голову, руб. - 5157,91 11658,29

Таблица 22. Эффективность производства молока от первотелок

с разными генотипами каппа-казеина в СХПК им. Ленина

Показатели Генотипы

АА (базовый вариант) АВ ВВ

Молоко базисной жирности и белковости на 1 голову, кг 6714 7148 7657

Прибавка основной продукции кг - 434 943

% - 6,5 14,0

Цена реализации 1 кг молока, руб. 14,85 14,85 14,85

Стоимость дополнительной продукции в расчёте на 1 голову, руб. - 4860,52 10468,80

Таблица 23. Эффективность производства молока от первотелок с разными _генотипами каппа-казеина в ОАО «Племзавод «Бирюлинский»_

Показатели Генотипы

АА (базовый вариант) АВ ВВ

Молоко базисной жирности и белковости на 1 голову, кг 5992 6490 6575

Прибавка основной продукции кг - 498 583

% - 8,3 9,7

Цена реализации 1 кг молока, руб. 15,60 15,60 15,60

Стоимость дополнительной продукции в расчёте на 1 голову, руб. - 5818,83 6800,32

Расчёт экономической эффективности использования животных с разными генотипами каппа-казеина убедительно показал, что от первотёлок с генотипом АВ и ВВ получена прибыль (в расчете на 1 голову) на 4860,52 - 11658,29 руб. больше, чем от сверстниц с генотипом АА.

ВЫВОДЫ

1. Аммиачный и комбинированный щелочной способ выделения нуклеиновых кислот, оптимизированные для экстракции ядерной ДНК из лейкоцитов крупного рогатого скота, являются эффективными инструментариями пробоподготовки.

2. Оптимизированный протокол ПЦР-ПДРФ для генотипирования крупного рогатого скота по гену каппа-казеина на основе праймеров АВ1+АВ2, К1+К2 и Ж5+ЖЗ является эффективным средством ДНК-анализа.

3. Разработанная методика высокоточной ПЦР и способ проведения аллель-специфичной ПЦР для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина с оптимизированной техникой 2-х стадийной ПЦР являются надежными способами эффективной наработки специфичных ампликонов

4. Методом ДНК-диагностики у коров татарстанского типа выявлено три генотипа по локусу гена каппа-казеина - АА, АВ и ВВ. Частота встречаемости наиболее распространенного гомозиготного генотипа АА составила 50,7 - 69,3%, частота генотипа АВ достигла 28 - 45,2%, генотипа ВВ - только 1,8 - 2,7%. Частота встречаемости аллеля А составила 0,73 - 0,83%, аллеля В - 0,17 - 0,27%. У чистопородных и помесных по голштинской породе быков-производителей породы частота генотипа АА, АВ и ВВ каппа-казеина составила 68,6%; 25,7% и 5,8% соответственно. При этом частота аллеля А и В гена каппа-казеина составила 0,81 и 0,19.

5. Уровень удоя первотелок с генотипом ВВ и АВ за 305 дней лактации был выше, чем удой первотелок с генотипом АА на 106 - 387 кг. Содержание жира в молоке у первотелок с генотипом ВВ и АВ каппа-казеина было незначительно выше, чем у первотелок с генотипом АА на 0,01 - 0,03%. Выход молочного жира животных с генотипом ВВ и АВ составил 194,4 - 229,0 кг, что превышает выход молочного жира первотелок с генотипом АА на 4,6 — 15,7 кг. У первотелок имеющих в своем генотипе В аллель каппа-казеина содержание белка в молоке составило 3,28 - 3,49%, что выше, чем у первотелок с гомозиготным генотипом каппа-казеина АА на 0,09 - 0,30% (Р<0,05 и 0,001). По выходу молочного белка животные с генотипом ВВ и АВ превосходили сверстниц с генотипом АА на 10,8 - 12,3 кг и 15,0 - 26,7 кг соответственно.

6. Проведенные исследования удоя по лактационным кривым и их характеристикам показали, что первотелки опытных групп с разными генотипами каппа-казеина характеризовались высокими коэффициентами постоянства лактации (91,4 - 96,5%) и низкими коэффициентами спадаемости лактационной кривой (4,33 - 11,69%). При этом наибольшие коэффициенты спадаемости лактационной кривой имели животные с генотипом АВ (6,38 - 11,69%).

7. Результаты оценки животных по качеству и технологическим свойствам молока показали, что наличие в геноме животных аллеля В гена каппа-казеина оказало положительное влияние на содержание в пробах молока сухих веществ на 0,07 - 0,23%, COMO на 0,06 - 0,23% и лактозы на 0,01 - 0,12%.

Наибольшее содержание казеина и его фракций в молоке, оказывающих влияние на выход и качество белково-молочных продуктов имели коровы с

генотипом АВ и ВВ каппа-казеина, они превосходили сверстниц с генотипом АА по содержанию казеина на 0,092 - 0,277 г/100 мл (Р<0,001), с^г казеин на 0,030 -0,086 г/100 мл, В - казеин на 0,019 - 0,119 г/100 мл и к - казеина на 0,022 - 0,043 г/100 мл (Р<0,05 и 0,001).

Результаты сычужной пробы показали, что молоко первотелок с генотипом АВ и ВВ по сравнению с молоком животных с генотипом АА имело наибольший выход желательного плотного сычужного сгустка (81,8 - 100%) и наименьшую продолжительность свёртывания (16,9 - 24,6 мин., Р<0,001).

Уровень белка в молоке оказывает существенное влияние на термоустойчивость молока. При этом снижение содержания белков в молоке сопровождается повышением термоустойчивости, что подтверждается тем, что животные с генотипом ВВ каппа-казеина обладали более высокой белковостью молока (3,408-3,490 г/100 мл) и в тоже время более низкой термоустойчивостью молока (33,1 - 35,2 мин.). И наоборот, первотелки с генотипом АА имели более низкое содержание белка в молоке (3,189-3,207 г/100 мл) и более высокую термоустойчивость молока (60,1 - 65,8 мин., Р<0,001).

8. Наибольшее количество сыра после созревания было получено из молока коров с генотипом АВ и ВВ (3,397 и 3,482 кг). Превосходство по массе сыра по сравнению с генотипом АА составило 0,069 - 0,154 кг (0,2 - 0,5%). На получение 1 кг сыра из молок коров с генотипом АВ и ВВ было израсходовано меньше молока по сравнению с генотипом АА на 0,2 - 0,4 кг. По данным органолептической оценки консистенция, структура, запах, вкус и цвет сыра, полученного из молока коров с генотипом АВ и ВВ, были наилучшими.

Выход творога из молока коров с генотипом АВ и ВВ превышал количество творога, полученного от животных с генотипом АА. Из молока коров с генотипом АВ и ВВ было получено на 5,8 - 17,6% больше творога, чем из молока коров с генотипом АА. Степень использования жира и белка из молока коров, имеющих в своем геноме аллельный вариант В гена каппа-казеина, была выше. Из молока коров с генотипом ВВ было получено упругое, крупное зерно и творог наилучшего качества.

При изготовлении йогурта из молока животных, имеющих в своем геноме аллельный вариант В гена каппа-казеина отмечался плотный сгусток. Отслаивание сыворотки не наблюдалось, и был получен густой однородный продукт наилучшего качества.

9. Изучение воспроизводительных качеств коров татарстанского типа с разными генотипами каппа-казеина по продолжительности сервис-периода и межотельного периода не выявили достоверных различий между опытными группами животных. При этом все коровы имели средние значения индекса плодовитости, что говорит о том, что генотип животных не оказал большого влияния на воспроизводительную способность стада.

10. Более высокие коэффициенты вариабельности по признакам молочной продуктивности отмечены у первотелок, несущие в своем геноме аллельный вариант А гена каппа-казеина. У этих животных коэффициенты изменчивости составили: по удою (7,12 - 15,07%), содержанию жира и белка (2,89 - 7,36% и

1,94 - 3,61%), выходу молочного жира и белка (7,52 - 15,92% и 7,81 - 15,31%) и удою на 1 день лактации (9,27 - 12,50%).

В группах коров с разными генотипами каппа-казеина установлена отрицательная по направлению связь между удоем-жиром, тогда как между удоем-белком наоборот - положительная. Наибольшие коэффициенты корреляции между удоем-белком имели животные с генотипом ВВ (0,31 - 0,56) и AB (0,09-0,11).

11. Использование коров татарстанского типа, имеющих в своем геноме аллельный вариант В гена каппа-казеина в сравнении с аналогами (генотип АА) позволило дополнительно получить за лактацию 6,5 - 16,5% молока, что составляет в денежном выражении 4860,52 - 11658,29 рублей на 1 голову.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

1. Для объективной оценки генетической ситуации в стаде, популяции, породе использовать молекулярно-генетические маркеры, выявляемые методами ДНК-диагностики.

2. Так как аллельные варианты гена каппа-казеина оказывают значительное влияние на белковомолочность и технологические свойствами молока, специалистам племенных хозяйств и предприятий следует использовать генотип по каппа-казеину в качестве селекционных критериев при разработке программ по разведению и совершенствованию крупного рогатого скота татарстанского типа.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

В рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК:

1. Ахметов, Т.М. Генетическая структура венгерского голштино - фризского скота по белкам молока. / P.A. Хаертдинов, Э.С. Губайдуллин, Т.М. Ахметов, М.П. Афанасьев // Тезисы доклада 1 съезда ВОГиС. Генетика.- 1994. -Т. 30. - С. 168-169.

2. Ахметов, Т.М. Генетическая структура и технологические свойства молока у холмогорской, венгерской голштино-фризской пород и их помесей. / P.A. Хаертдинов, М.П. Афанасьев, Т.М. Ахметов, В.Ф. Верещагин II Зоотехния. 1996. №5.-С. 3-6.

3. Ахметов, Т.М. Генетическая изменчивость молочных белков у помесей холмогорская х венгерская голштинская. / P.A. Хаертдинов, М.П. Афанасьев, Т.М. Ахметов // Зоотехния. - 1998. - .№ 3. - С. 5-6.

4. Ахметов, Т.М. Разработка методики высокоточной ПЦР. / P.P. Вафин, Р.Х. Равилов, P.P. Вафин, И.Х. Бакиров, Т.М. Ахметов, и др. // Ветеринарная практика № 4 (35), 2006/2007. Санкт-Петербург. - С. 43-51.

5. Ахметов, Т.М. Оптимизация способов генотипирования крупного рогатого скота по гену каппа-казеина. / P.P. Вафин, Т.М. Ахметов, О.Г. Зарипов, и др. // Ветеринарная практика № 2 (37), 2007. Санкт-Петербург. - С. 54-60.

6. Ахметов, Т.М. Характеристика быков производителей с различными комбинациями генотипов каппа-казеина, бета-лактоглобулина по молочной продуктивности их матерей. / Э.Ф. Валиуллина, О.Г. Зарипов, C.B. Тюлькин, Т.М. Ахметов, Р.Р. Вафин // Ветеринарная практика № 4 (39), 2007. Санкт-Петербург. -С. 59-64.

7. Ахметов, Т.М. Молочная продуктивность и воспроизводительная способность голштинизированных коров в зависимости от генотипа каппа-казеина. / Т.М. Ахметов, C.B. Тюлькин, Э.Ф. Валиуллина // Ветеринарный врач. -№4.-2007.-С. 58-61.

8. Ахметов, Т.М. Технологические свойства сыра, произведенного из молока коров с разными генотипами каппа-казеина. / Т.М. Ахметов, C.B. Тюлькин, О.Г. Зарипов, Э.Ф. Валиуллина // Ученые записки КГАВМ. - Казань. - 2009. Том. 196. -С. 8-12.

9. Ахметов, Т.М. Полиморфизм каппа-казеина в стадах крупного рогатого скота. / Т.М. Ахметов, C.B. Тюлькин, С.Ф. Шайдуллин, P.P. Муллахметов // Ученые записки КГАВМ. - Казань. - 2009. Том. 196. - С. 12-18.

Патенты Российской Федерации:

10. Патент РФ на изобретение № 2299240 Способ проведение ПЦР / Рамиль Р. Вафин, Раиф Р. Вафин, Т.М. Ахметов, Ш.К. Шакиров, Ф.Ф. Замалиева, И.В. Пикалова И.В., Р.Х. Равилов, И.Х. Бакиров. - Приоритет изобретения 21.02.2005. - Зарегистр. в Гос. реестре изобретений РФ 20.05.2007. - Бюл. № 14.

11. Патент РФ на изобретение № 2337141 Способ проведение аллель-специфичной ПЦР для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина / Рамиль Р. Вафин, Т.М. Ахметов, Э.Ф. Валиуллина, О.Г. Зарипов, Раиф Р. Вафин. - Приоритет изобретения 25.09.2006. - Зарегистр. в Гос. реестре изобретений РФ 27.10.2008. - Бюл. № 30.

В материалах региональных и международных конференций и совещаний:

12. Ахметов, Т.М. Генетическая структура венгерского голштино -фризского скота по белкам молока./ P.A. Хаертдинов, Э.С. Губайдуллин, Т.М. Ахметов, М.П. Афанасьев // Тезисы докладов республиканской научно-производственной конференции по проблемам ветеринарии и животноводства.Казань. 1994.- С. 164165.

13. Ахметов, Т.М. Генетическая структура венгерского голштино-фризского скота и помесей холмогорская х венгерская голштино -фризская по белкам молока. / P.A. Хаертдинов, Э.С. Губайдуллин, М.П. Афанасьев, Т.М. Ахметов // Межвузовский сборник научных трудов. - Казань. 1995. - С. 39-43.

14. Ахметов, Т.М. Изменение генетической структуры холмогорского скота по белкам молока в результате скрещивания с голштинской породой. / P.A. Хаертдинов, М.П. Афанасьев, Т.М. Ахметов // Тезисы докладов научно-производственной конференции по проблемам ветеринарии и зоотехнии. -Казань, 1996. - С. 275.

15. Ахметов, Т.М. Сыродельческие качества молока коров холмогорской и голштино фризской пород в зависимости от их генотипа по белкам молока. / М.П.

Афанасьев, Т.М. Ахметов // Тезисы докладов 2-й Республиканской научной конференции молодых ученых и специалистов. - Казань, 1996. Книга 1. - С. 86.

16. Ахметов, Т.М. Изменение генетической структуры и технологических свойств молока холмогорского скота в результате скрещивания с венгерской гоштино-фризской породой. P.A. Хаертдинов, М.П. Афанасьев, Т.М. Ахметов // Тезисы докладов 2-й международной конференции по молекулярно генетическим

маркерам. Киев. 1996. С. 4243.

17. Ахметов, Т.М. Изменение генетической структуры и технологических

свойств молока коров различных пород и их помесей. / P.A. Хаертдинов, М.П. Афанасьев, Т.М. Ахметов // Тезисы докладов производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии, Казань, 1996, С. 202.

18. Ахметов, Т.М. Изменение генетической структуры белков молока у холмогор голштинских помесей. / Т.М. Ахметов, Р.З. Хамизуллин // Материалы научных исследований сотрудников агрофака КГСХА. Казань. - 2003. С. 115-117.

19. Ахметов, Т.М. Селекционное улучшение молочного стада холмогорской породы и холмогор — голштинсих помесей. / Т.М. Ахметов // Научная конференция профессорско-преподавательского состава и аспирантов агрономического факультета посвященной 80-летию КГСХА. Казань. 2002.- С. 84.

20. Ахметов, Т.М. Продуктивные признаки помесных холмогор х голштинских первотелок с разными генотипами по локусу гена каппа - казеина. / Т.М. Ахметов, P.P. Вафин, Ш.К. Шакиров // Селекция, кормление, содержание сельскохозяйственных животных и технология производства продуктов животноводства. Московская обл., Лесные поляны, ВНИИплем.,2005. - С. 45-46.

21. Ахметов, Т.М. Разработка эффективной методики высокоспецифичной ГЩР. / Т.М. Ахметов, P.P. Вафин, Ш.К. Шакиров, и др. // Материалы Всероссийской научно - практической конференции, посвященной 85 - летию ТатНИИСХ и 1000 - летию Казани. Казань. 2005. - С. 467 - 470.

22. Ахметов, Т.М. Использование методов маркер вспомогательной селекции для повышения продуктивности сельскохозяйственных животных. / Т.М. Ахметов, P.P. Вафин, Ш.К. Шакиров // Материалы Всероссийской научно — практической конференции, посвященной 85 - летию ТатНИИСХ и 1000 - летию Казани. Казань. 2005. С. 471 -475.

23. Ахметов, Т.М. Изучение хозяйственно полезных признаков продуктивности коров с разными генотипами по локусу гена каппа-казеина. / Т.М. Ахметов // Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России. - Дубровицы. - 2005. - С. 174-177.

24. Ахметов, Т.М. Освоение современных методов селекции для повышения белковомолочности и улучшения технологических свойств молока с использованием ДНК технологий. / Т.М. Ахметов, P.P. Вафин, Ш.К. Шакиров, H.H. Мухаметгалиев // Научно-производственный и публицистический журнал Нива Татарстана. Казань. - 2005. - С. 34-36.

25. Ахметов, Т.М. Использование метода полимеразной цепной реакции для генотипирования крупного рогатого скота по каппа-казеину. / Т.М. Ахметов // Современные проблемы аграрной науки и пути их решения. - Ижевская ГСХА. 2005.-С. 228-231.

26. Ахметов, Т.М. Разработка способа высокоспецифичной ПЦР. / Т.М. Ахметов, Э.Ф. Валиуллина, О.Г. Зарипов, Р.Р. Вафин // Вестник КГАУ № 3. 2006. С. 33-37.

27. Ахметов, Т.М. Проблема повышения качества молока. / Т.М. Ахметов, P.P. Шайдуллин // Вестник КГАУ № 4. - 2006. - С. 45-48.

28. Ахметов Т.М. Хозяйственно полезные признаки коров с различными генотипами каппа-казеина. / Т.М. Ахметов // Селекция, кормление, содержание сельскохозяйственных животных и технология производства продуктов животноводства. Выпуск 20. Московская обл., Лесные поляны. ВНИИплем. 2007. С. 12-18.

29. Ахметов, Т.М. Методы улучшения сыродельческих свойств молока. / Т.М. Ахметов // Материалы Международной научно-практической коференции «Актуальные вопросы совершенствования технологии производства и переработки продукции сельского хозяйства». Мосоловские чтения. Выпуск 9. -Йошкар-Ола. Map. Гос. Ун-т. 2007. Книга 2. - С. 187-193.

30. Ахметов, Т.М. Частота встречаемости генотипов каппа-казеина у разных пород крупного рогатого скота. / Т.М. Ахметов // Материалы всероссийской научно-практической конференции «Технологические и технические аспекты развития сельского хозяйства». Посвящается 85-летию КГАУ. Той 74, ЧастьЗ-4. Казань. 2007. - С. 5-7.

31. Ахметов, Т.М. Характеристика быков производителей с различными генотипами бета лактоглобулина по молочной продуктивности их матерей. / Т.М. Ахметов, О.Г. Зарипов, C.B. Тюлькин, Э.Ф. Валиуллина // Материалы всероссийской научно-практической конференции «Технологические и технические аспекты развития сельского хозяйства». Посвящается 85-летию КГАУ. Той 74, Часть 3-4. Казань, 2007. - С. 7-10.

32. Ахметов, Т.М. Термоустойчивость молока коров с разными генотипами каппа-казеина. / Т.М. Ахметов C.B. Тюлькин, О.Г. Зарипов // Ученые записки КГАВМ. - Казань. - 2008. Том. 193. - С. 31-34.

33. Ахметов, Т.М. Белковый состав молока коров с разными генотипами каппа-казеина. / Т.М. Ахметов C.B. Тюлькин, О.Г. Зарипов // Ученые записки КГАВМ. -Казань.-2008. Том. 193,- С. 31-34.

34. Ахметов, Т.М. Высокоточный вариант ПЦР. / P.P. Вафин, Т.М. Ахметов, Р.Х. Равилов, И.Х. Бакиров // Ветеринарная медицина домашних животных. Сборник статей. - Выпуск. - 5. Казань. - 2008. - С. 61-67.

35. Ахметов, Т.М. Факторы влияющие на качество молока. / Т.М. Ахметов, P.P. Муллагалеев II Ученые записки КГАВМ. - Казань. - 2008. Том. 192. - С. 28-31.

В методических рекомендациях:

36. Ахметов, Т.М. Методические рекомендации по использованию новейших достижений ДНК-технологии в селекционно-племенной работе, направленной на улучшение технологических свойств молока / Т.М. Ахметов, И.Р. Закиров, М.Г. Нургалиев, и др. / Главное гос. с.-х. управление племенным делом в животноводстве МСХ и продовольствия РТ. - Казань, 2007. - 27 с.

Отпечатано в ООО «Астория» 420021, г. Казань, ул. Сайдашева, д. 12 тел. 260-44-40

Заказ № 165 от 18.09.2009 г. Формат 60x84 1/16. Усл. печ. л. 3. Бумага 80 г. Печать ризографическая. Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Ахметов, Тахир Мунавирович

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Молочная продуктивность голштинской, холмогорской пород и их помесей

1.2. Молекулярно-биохимический полиморфизм белков молока

1.2.1. Казеиновая фракция

1.2.2. Сывороточные белки

1.3. Метод ПЦР как основной метод определения генетического полиморфизма белков молока

1.4. Селекция с использованием генетических маркеров

1.5. Полиморфизм гена каппа-казеина и его связь с хозяйственно-полезными признаками у крупного рогатого скота

1.6. Технологические свойства молока и их значение при производства молочных продуктов

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.2. Оптимизация техники ПЦР-ПДРФ для генотипирования крупного рогатого скота по гену каппа-казеина

3.3. Разработка методики высокоточной ПЦР 104 3.4 Разработка способа проведения аллель-специфичной ПНР для генотипирования кр.рог.ск. по аллелям Aw. В гена каппа-казеина

3.5. Оценка полиморфизма локуса гена каппа-казеина у животных

3.5.1. Полиморфизм гена каппа-казеина у коров

3.5.2. Полиморфизм гена каппа-казеина у быков-производителей

3.6. Молочная продуктивность коров и факторы её обуславливающие

3.6.1. Молочная продуктивность коров с разными генотипами капп-казеина

3.6.2. Динамика содержания жира в молоке коров с разными генотипами каппа-казеина

3.6.3. Динамика содержания белка в молоке коров с разными генотипами каппа-казеина

3.6.4. Лактационные кривые коров с разными генотипами каппаказеина

3.7. Качество и технологические свойства молока коров с разными генотипами каппа-казеина

3.7.1. Состав молока и его физико-химические показатели у коров с разными генотипами каппа-казеина

3.7.2. Белковый состав молока коров с разными генотипами каппа-казеина

3.7.3. Сыропригодность молока коров с разными генотипами каппа-казеина

3.7.4. Термоустойчивость молока коров с разными генотипами каппа-казеина

3.8.3. Качество и технологические свойства йогурта, изготовленного из молока коров с разными генотипами каппа-казеина

3.9. Воспроизводительная способность коров с разными генотипами каппа-казеина

3.10. Селекционно-генетические параметры продуктивности в группах коров с разными генотипами каппа-казеина

3.10.1. Изменчивость признаков молочной продуктивности

3.10.2. Сопряженность признаков молочной продуктивности

3.11. Характеристика быков-производителей с разными генотипами каппа-казеина по молочной продуктивности их матерей

3.12. Экономическая эффективность использования коров с разными генотипами каппа-казеина 179 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ 182 ВЫВОДЫ 203 ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ 207 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 208 ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ДТТ - дитиотрейтол (dithiotreitol)

ПДРФ — полиморфизм длины рестрикционных фрагментов п.о. - пары оснований (bp - base pair)

ПЦР (PCR)- полимеразная цепная реакция (Polymerase Chain Reaction)

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота электрофорез в ПААГ — электрофорез в полиакриламидном геле

А - adenosine (аденозин)

А1 - альбумин крови a-La, - альфа-лактоальбумин asCn, - альфа s-казеин

AS-PCR - Allele-Specific-Polymerase Chain Reaction (аллель-специфичная полимеразная цепная реакция)

ЗСп, - бета-казеин

З-Lg, - бета-лактоглобулин dNTPs - deoxynucleosidtriphosphates (дНТФ - дезоксинуклеозидтрифосфаты) G - guanosine (гуанозин) Ig - иммуноглобулин кСп -каппа-казеин Рр - протеозо-пептоны

RFLP - Restriction Fragment Length Polymorphism (полиморфизм длины амплификационных фрагментов)

SSCP - Single Strand Conformation Polymorphism (конформационный полиморфизм однонитевых фрагментов ДНК) Т - thymidine (тимидин)

TULIPS-PCR - Touch-Up and Loop Incorporated PrimerS-PCR — разновидность « Touch-Up» ПЦР с инвертированными праймерами

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Использование методов маркер-вспомогательной селекции в молочном скотоводстве Республики Татарстан"

Многие исследователи, изучавшие влияние аллелей гена каппа-казеина на качество молока, обнаружили устойчивую связь аллеля В каппа-казеина с технологическими свойствами молока, а также обильномолочностью. Так, В-аллельный вариант каппа-казеина связан с наиболее коротким временем коагуляции и затвердения, соответствует лучшей консистенции и композиции сгустка при изготовлении твердых и полутвердых сыров.

Известно, что в сыроделии происходят значительные перебои в выработке сыра, связанные с низким качеством молока в переходный период (весенний), что сказывается на эффективности производства. При производстве того или иного продукта молоко должно отвечать определенным технологическим требованиям. Так, при производстве сыров, особенно твердых его сортов, большое внимание уделяется составу молока. Содержание казеина в этом молоке должно быть не менее 75%, а таких фракций, как asCn, (альфа s-казеин), рСп (бета-казеин), кСп (каппа-казеин) 91% от общего его количества. Молоко должно хорошо свертываться под действием сычужного фермента, быть термостабильным, обладать хорошими синергическими свойствами и высоким выходом конечной продукции.

В связи с возрастающими требованиями к качеству молока и молочной продукции, возникает необходимость использования в селекции генетических маркеров, связанных с признаками молочной продуктивности. В сложившейся ситуации требуется изменение в методах оценки признаков селекции животных. К классическим методам селекции животных необходимо добавить новые подходы, связанные с достижениями генетики и биотехнологии. Одним из современных методов повышения продуктивных качеств животных является маркер-вспомогательная селекция, которая опирается на молекулярно-генетические методы анализа, а именно ПЦР-ГТДРФ анализ, который отличается высокой чувствительностью, быстротой, точностью и легкостью в исполнении.

- изучить качество и технологические свойства молока коров с разными генотипами каппа-казеина;

- охарактеризовать воспроизводительные качества коров с разными генотипами каппа-казеина;

- определить экономическую эффективность использования коров с разными генотипами каппа-казеина.

Научная новизна.

Оптимизирована техника выделения ДНК и техники ПЦР-ПДРФ для генотипирования крупного рогатого скота по гену каппа-казеина.

Разработана методика высокоточной ПЦР («Способ проведения ПЦР» - патент РФ на изобретение № 2299240) и «способ проведения аллель-специфичной ПЦР для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина» (патент РФ на изобретение № 2337141) с оптимизированной техникой 2-х стадийной ПЦР.

Практическая значимость. Полученные данные о наличии взаимосвязи генотипа животных по локусу гена каппа-казеина с составом молока коров и его технологическими свойствами, которые открывают возможность для совершенствования крупного рогатого скота татарстанского типа по качеству получаемой от них молочной продукции. Увеличение численности животных, несущих в геноме желательные аллельные варианты гена каппа-казеина, приведет к увеличению производства белковомолочной продукции с оптимальными технологическими свойствами. Результаты научных исследований успешно внедрены в производство на примере ООО «Серп и молот», ОАО «Бирюлинский», ГПП «Элита», ОАО «Вамин-Татарстан» Высокогорский молочный завод, Высокогорского района, СХПК им. Ленина Атнинского района, Чистопольский молочный комбинат Чистопольского района РТ, что привело к увеличению количества, улучшению качества животноводческой продукции, повышению экономической эффективности, на что имеются акты внедрения. По результатам исследований выпущены методические рекомендации по использованию новейших достижений ДНК-технологий в селекционно-племенной работе, направленной на улучшение технологических свойств молока (Казань, 2007), которые широко используются специалистами селекционных центров, племенных предприятий, а также зоотехниками селекционерами.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:

- республиканских научно-практических конференциях по проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 1994, 1995, 1996).

- 2-й Республиканской научно-производственной конференции молодых ученых и специалистов (Казань, 1996).

- 2-й Международной конференции по молекулярно-генетическим маркерам животных (Киев, 1996).

- материалах научных исследований сотрудников КГСХА (Казань, 2003).

- международной конференции «Современные проблемы аграрной науки и пути их решения (Ижевская ГСХА, 2005).

- всероссийской научно-практической конференции, посвященной 85-летию ТатНИИСХ и 1000-летию Казани (Казань, 2005).

- конференции молодых ученых РГАУ - МСХА имени К.А. Тимирязева (Москва, 2007).

- годовых отчетах по науке КГАВМ (1992-2000), КГАУ (2001-2007), ГНУ ТатНИИСХ (2005-2007).

Публикация результатов исследований. Основные результаты исследований, выполненные по теме диссертации, опубликованы в 36 печатных работах, в том числе в 9 изданиях, рекомендованных ВАК, таких как «Зоотехния», «Генетика», «Ветеринарный врач», «Ветеринарная практика», «Ученые записки КГАВМ», «Вестник КГАУ», методической рекомендации. Получено два патента на изобретение. Основные положения, выносимые на защиту. - оптимизация техники выделения ДНК и техники ПЦР-ПДРФ для генотипирования крупного рогатого скота по гену каппа-казеина и разработка новых способов проведения ПЦР.

- экономическая эффективность использования коров с разными генотипами каппа-казеина.

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Ахметов, Тахир Мунавирович

203 ВЫВОДЫ

2. Оптимизированный протокол ПЦР-ПДРФ для генотипирования крупного рогатого скота по гену каппа-казеина на основе праймеров АВ1+АВ2, К1+К2 и JK5+JK3 является эффективным средством ДНК-анализа.

4. Методом ДНК-диагностики у коров татарстанского типа выявлено три генотипа по локусу гена каппа-казеина — АА, АВ и ВВ. Частота встречаемости наиболее распространенного гомозиготного генотипа АА составила 50,7 - 69,3%, частота генотипа АВ достигла 28 — 45,2%, генотипа ВВ - только 1,8 - 2,7%. Частота встречаемости аллеля А составила 0,73 -0,83%, аллеля В - 0,17 - 0,27%. У чистопородных и помесных по голштинской породе быков-производителей породы частота генотипа АА, АВ и ВВ каппа-казеина составила 68,6%; 25,7% и 5,8% соответственно. При этом частота аллеля А и В гена каппа-казеина составила 0,81 и 0,19.

5. Уровень удоя первотелок с генотипом ВВ и АВ за 305 дней лактации был выше, чем удой первотелок с генотипом АА на 106 - 387 кг. Содержание жира в молоке у первотелок с генотипом ВВ и АВ каппа-казеина было незначительно выше, чем у первотелок с генотипом АА на 0,01 — 0,03%. Выход молочного жира животных с генотипом ВВ и АВ составил 194,4 - 229,0 кг, что превышает выход молочного жира первотелок с генотипом АА на 4,6 — 15,7 кг. У первотелок имеющих в своем генотипе В аллель каппа-казеина содержание белка в молоке составило 3,28 — 3,49%, что выше, чем у первотелок с гомозиготным генотипом каппа-казеина АА на 0,09 - 0,30% (Р<0,05 и 0,001). По выходу молочного белка животные с генотипом ВВ и АВ превосходили сверстниц с генотипом АА на 10,8 — 12,3 кг и 15,0 — 26,7 кг соответственно.

6. Проведенные исследования удоя по лактационным кривым и их характеристикам показали, что первотелки опытных групп с разными генотипами каппа-казеина характеризовались высокими коэффициентами постоянства лактации (91,4 — 96,5%) и низкими коэффициентами спадаемости лактационной кривой (4,33 - 11,69%). При этом наибольшие коэффициенты спадаемости лактационной кривой имели животные с генотипом АВ (6,38 - 11,69%).

7. Результаты оценки животных по качеству и технологическим свойствам молока показали, что наличие в геноме животных аллеля В гена каппа-казеина оказало положительное влияние на содержание в пробах молока сухих веществ на 0,07 - 0,23%, СОМО на 0,06 - 0,23% и лактозы на 0,01-0,12%.

Наибольшее содержание казеина и его фракций в молоке, оказывающих влияние на выход и качество белково-молочных продуктов имели коровы с генотипом АВ и ВВ каппа-казеина, они превосходили сверстниц с генотипом АА по содержанию казеина на 0,092 - 0,277 г/100 мл (Р<0,001), asr казеин на 0,030 - 0,086 г/100 мл, В - казеин на 0,019 - 0,119 г/100 мл и к - казеина на 0,022 - 0,043 г/100 мл (Р<0,05 и 0,001).

Результаты сычужной пробы показали, что молоко первотелок с генотипом АВ и ВВ по сравнению с молоком животных с генотипом АА имело наибольший выход желательного плотного сычужного сгустка (81,8 — 100%) и наименьшую продолжительность свёртывания (16,9 - 24,6 мин., Р<0,001).

Уровень белка в молоке оказывает существенное влияние на термоустойчивость молока. При этом снижение содержания белков в молоке сопровождается повышением термоустойчивости, что подтверждается тем, что животные с генотипом ВВ каппа-казеина обладали более высокой белковостью молока (3,408-3,490 г/100 мл) и в тоже время более низкой термоустойчивостью молока (33,1 — 35,2 мин.). И наоборот, первотелки с генотипом АА имели более низкое содержание белка в молоке (3,189-3,207 г/100 мл) и более высокую термоустойчивость молока (60,1 - 65,8 мин., Р<0,001).

9. Изучение воспроизводительных качеств коров татарстанского типа с разными генотипами каппа-казеина по продолжительности сервиспериода и межотельного периода не выявили достоверных различий между опытными группами животных. При этом все коровы имели средние значения индекса плодовитости, что говорит о том, что генотип животных не оказал большого влияния на воспроизводительную способность стада.

В группах коров с разными генотипами каппа-казеина установлена отрицательная по направлению связь между удоем-жиром, тогда как между удоем-белком наоборот — положительная. Наибольшие коэффициенты корреляции между удоем-белком имели животные с генотипом ВВ (0,31 — 0,56) и АВ (0,09-0,11).

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора биологических наук, Ахметов, Тахир Мунавирович, Казань

1. Алексеева, Е. И. Продуктивность коров черно-пестрой породы в зависимости от возраста происхождения / Е. И. Алексеева // Животноводство. 1986. №10. - С.25-27.

2. Алексеева, Н. Ю. Новые данные о казеиновом комплексе молока / Н.Ю. Алекасеева, П. Ф. Дьяченко.- М.: Центральный институт информации пищевой промышленности государственного комитета по пищевой промышленности при Госплане СССР. -1965.-56 с.

3. Алексеева, Н. Ю. Состав и свойства молока как сырья для молочной промышленности / Н. Ю. Алексеева и др. // Справочник.- М.: Агропромиздат, 1989-311с.

4. Алексееева, Н. Ю. Состав и свойства молока, как сырья для молочной промышленности /Н.Ю. Алексеева и др..-М.:Агропромиздат, 1986.-238 с.

5. Алиев, А. А. Обмен веществ у жвачных животных /А. А. Алиев -М.: НИЦ.Инженер. -1997.- 420 с.

6. Алипанах, М. Влияние полиморфизма гена каппа-казеина на признаки продуктивности коров / М. Алипанах, Г. В. Родионов// Практик.-2006.-№4.-С.59-61.

7. Алипанах, М. Хозяйственно-полезные признаки коров с различными генотипами каппа-казеина и пролактина : автореф. дисс.канд.биол.наук : 06.02.01 / Алипанах Манхур.- М. 2006. - 21с.

8. Аманжолова, К. С. Белковые фракции молока коров холмогорской породы в зависимости от возраста / К. С. Аманджолова // Физиологические аспекты ветеринарии и зоотехнии.- Казань. 1994.-С.23-26.

9. Анализ генома / Под ред. К. М. Дейвиса, пер. с англ. М.: Мир, 1990.-246 с.

10. Антал, JI. Венгерский опыт голштинизации /Л.Антал // Молочное мясное скотоводство.-1996, №1. — С.25-30.

11. Аразуманян, Е. А. Скотоводство / Е. А. Аразуманян. — М.: Колос. — 1978.-399 с.

12. Артемьев, А. М. Молочная продуктивность и технологические свойства молока коров черно-пестрой породы с различными генотипами каппа-казеина и сезонами отела : автореф. дис. канд. с.-х. наук : 06.02.04 / Артемьев Александр Михайлович. М. - 2006. - 21 с.

13. Афанасьев, М. П. Химический состав и технологические свойства молока коров различных пород. / М. П. Афанасьев, И. П. Ардатовская // Тезисы докл. Респ. научн. производ. конф. Казань, 1996.- С.202.

14. Ахметов, Т. М. Использование метода полимеразно цепной реакции для генотипирования крупного рогатого скота по каппа-казеину / Т. М. Ахметов и др. // Современные проблемы аграрной науки и пути их решения. Ижевская ГСХА. 2005.- С. 228-231.

15. Ахметов, Т. М. Использование методов маркер-вспомогательной секлекции для повышения продуктивности сельскохозяйственных животных

16. Т. М. Ахметов и др. // Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 85-летию ТатНИИСХ и 1000-летию Казани. Казань. 2005. С.467-470.

17. Ахметов, Т. М. Разработка способа высокоспецифичной ПЦР / Т. М. Ахметов и др. // Вестник КГАУ. №3. - 2006. - С.33-37.

18. Бабушкина, В. Ф. Молокоотдача у коров разных линий / В. Ф. Бабушкина, А. И. Любимов// Труды ижевского СХИ.- 1981. Вып.32.- С.82-85

19. Багрий, Б. А. Научный потенциал селекции интенсивному животноводству / Б. А.Багрий // Вестник с.-х. науки. - 1987. - №1. С.72-82.

20. Бадагуева, Ю. Н. Сравнительный анализ полиморфизма гена каппа-казеина у представителей подсемейства Bovinae // автореф. дисс. канд. биол. наук : 06.02.01 / Бадагуева Юлия Николаевна.-Институт общей генетики им.Н.И.Вавилова.-М.-1995.-22с.

21. Балаш, А. Содержание, кормление и важнейшие ветеринарные вопросы при разведении голштино-фризской породы скота / А. Балаш, Г. Батиз, Г. Бредл.- Будапешт: фирма «Агрота», 1994. — 238 с.

22. Барабанщиков, Н. В. Качества молока и молочных продуктов / Н. В. Барабанщиков. — М.: Колос, 1980. — С. 255.

23. Барабанщиков, Н. В. Контроль качества молока на ферме / Н. В. Барабанщиков. — М.: Агропромиздат, 1986. — С. 160 .

24. Барабанщиков, Н. В. Молочное дело / Н. В. Барабанщиков: Москва: Колос, 1983.- 414 с.

25. Барабанщиков, Н. В. Молочное дело. / Н. В.Барабанщиков: Москва: ВО «Агропромиздат», 1990. 351с.

26. Баранова, В. С. Фракционный состав белков молока разных пород. /

27. B. С. Баранова // вест. Вопросы биологии, 1988. С. 17-18.

28. Баршинова, А. В. Полиморфизм гена каппа-казеина и его связь с хозяйственно-полезными признаками скота красно-пестрой породы // автореф. дис. канд. биол. наук : 06.02.01 / Баршинова Анна Вячеславовна. -Лесные Поляны, 2005. 19 с.

29. Белова, Г. А. Технология сыра / Г. А. Белова и др. М.: Изд. "Легкая и пищевая промышленность", 1984. - 312с.

30. Бережная, А. В. Сыроделие в отдельных странах мира / А. В. Бережная // Сыроделие и маслоделие, 2001.-№4.-С.З-5.

31. Бич, А. И. Акклиматизация импортного голштино-фризского скота в СССР / А. И. Бич, Е. И. Сакса, В. И. Еременкова //Повышение генетического потенциала молочного скота. -М.: Агропромиздат. 1986 —1. C.117-125.

32. Бич, А. И. Использование голштино-фризов в племзаводе «Заря коммунизма» /А. И. Бич, Е. И. Сакса, В. И. Еременкова // Молочное и мясное скотоводство. 1983. - №10. - С.40-42.

33. Бич, А. И. Создание новых высокопродуктивных типов черно-пестрого скота / А. И. Бич, Е. И. Сакса. Создание новых пород с.-х. животных. М. - ВИЖ. - 1987. - 22с.

34. Богатноу, Н. П. Переваримость корма холмогор-голштинскими коровами / Н. П. Богатноу // М.: Лесные поляны. 1991. - 6 с.

35. Бойланд, Г. Технология производства молочных продуктов./ Г. Бойланд. -М.: ТетраПол АО, 2003.-440 с.

36. Бороздина. Н. И. Изменение уровня биохимических показателей крови холмогорского скота адаптированного к условиям Таймырского автономного округа / Н. И. Бороздина, Г. М. Привалихин // Труды ВНИИплем. дела. 1985. - С. 102-109.

37. Брем, Г. Экспериментальная генетика в животноводстве / Г. Брем, X, Кройслих, Г. Штрансингер. //М.-РАСХН.-1995. -326 с.

38. Брусиловский, Л. П. Приборы контроля термоустойчивости и других показателей качества молока / Л. П. Брусиловский и др. // Молочная промышленность. 1999. - №3. - С.21 35.

39. Варсанова, Г. А. Потенциал холмогорской породы / Г. А. Варсанова, Е. С. Ваганова // Земля сибирская , дальневосточная.- 1985 -№1. С.28-29.

40. Вартапетян, А. П. Полимеразная цепная реакция / А. П. Вартапетян // Молекулярная биология.- М.: 1991.-Том 25.-№4.- С.926-936.

41. Васькович, В. Я. Потенциал холмогорской породы скота / В. Я. Васькович.- Архангельск.- 1983.- 84с.

42. Васютина, К. В. Рост, развитие и молочная продуктивность животных холмогорской породы в зависимости от интенсивности выращивания : автореф. дисс. канд. с.-х. наук. : 06.02.04. / Васютина Клавдия Владимировна. Дубровицы. - 1987. — 25 с.

43. Вафин, Р. Р. Разработка методики высокоточной ПЦР / Р. Р. Вафин и др. // Ветеринарная практика. №4 (35). - 2007. - С.41-46.

44. Гарькватый, Ф. Л. Селекция коров и машинное доение / Ф. Л. Гарькватый // М.: Колос. 1974. 160 с.

45. Генетика полиморфных белков животных: Сб. науч. тр./ Куйбыш. госуд. пед. ин-т. им. В.В. Куйбышева. Куйбышев.: КГПИ. -1977.-56 с.

46. Георгиевский, В. И. Физиология сельскохозяйственных животных / В. И. Георгиевский.- М.: Агропромиздат.-1990.-510 с.

47. Гладырь, Е. А. . ДНК-диагностика вариантов генов каппа-казеина и беталактоглобулина у крупного рогатого скота : автореф. дис.канд.биол.наук : 03.00.23. / Гладырь Елена Андреевна . Дубровицы. -2001. - 20 с.

48. Гладырь, Е. А. Диагностика полиморфизма гена альфа-лактоальбумина крупного рогатого скота / Е, А. Гладырь, О. В. Костюнина, Н. А. Зиновьева //Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных. — Дубровицы. -2002. — С. 34-35.

49. Глазко В.И. Полиморфизм каппа-казеина у пород крупного рогатого скота / В. И. Глазко, Е. В. Журавель // Вестник аграрной науки. 1997. - №5. -С.78.

50. Глазко, В. И. Проблемы использования ДНК-технологий у животных / В. И. Глазко // Сельскохозяйственная биология . 1998. №4. - -С.33-41.

51. Гоголев, В. Н. Конституциональные особенности холмогорского скота ГПЗ «Лесные поляны» / В. Н. Гоголев. М. А. Халимбеков //Использование высокоценных племенных с.-х. животных. 1988. - Т.1. — С. 19-26.

52. Голиков, А. Н. Физиология сельскохозяйственных животных / А. Н. Голиков, Н.У.Баранова, 3. К. Кожебеков.- М.: Агропромиздат. 1991. -432 с.

53. Горбатова, К. К Физико-химические и биохимические основы производства молочных продуктов. / К. К. Горбатова.: Санкт-Петербург, ГИОРД, 2004.-346 с.

54. Горбатова, К. К Химия и физика молока. / К. К. Горбатова.: Санкт-Петербург, ГИОРД, 2004. 280 с.

55. Горбатова, К. К. Биохимия молока и молочных продуктов. / К. К. Горбатова.: Санкт-Петербург, ГИОРД, 2004. 312 с.

56. Горбатова, К.К. Контроль термоустойчивости молока по содержанию ионов кальция. / К. К. Горбатова, П. И. Гунькова // Молоч. Промышленность, 1998. №3. - С. 22.

57. Горбатова, К. К. Химия и физика белков молока / К. К. Горбатова. — М.: Колос. -1993. -192 с

58. Гордин, А. Ф. Хозяйственно-биологические особенности перспективных родственных групп холмогорской породы : автореф. дис.канд. с.-х. наук: 06.02.01 / Гордин Андрей Федорович. -ВНИИплем. 1993. -16 с.

59. ГОСТ 13277-79 «Молоко пастеризованное».

60. ГОСТ 26809-86 «Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка к их испытанию».

61. ГОСТ 3622-68 «Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка к их испытанию».

62. ГОСТ 37-91 «Масло коровье. ТУ».

63. ГОСТ Р52054-2003 «Молоко натуральное коровье сырое»

64. Грачев, И. И. Физиология лактации сельскохозяйственных животных / И. И. Грачев, В. П. Голедов // М. Колос. - 1974. - 279с.

65. Григорян, В. Ш. Влияние сезона года на продуктивные качества голштинских помесных первотелок в условиях Волгоградской области / В. Ш. Григорян и др. // Сб. Научных трудов ВНИИплем «Эффективность использования голштинского скота». -М. 1985. — С. 17-23.

66. Григорян, В. Ш. Продуктивные качества создаваемых генотипов животных / В. Ш. Григорян и др. // Сб. Научных трудов ВНИИплем «Совершенствование племенных и продуктивных качеств отечественных пород скота». М. - 1993. - С.38-57.

67. Грокфолд, Ф. Полиморфизм белков молока, некоторые биохимические и генетические аспекты / Ф. Грокфолд. // Материалы XX 1 Международной конференции по группам крови и биохимическому полиморфизму животных. —JT. 1979. - Т.1 - С.55-94.

68. Губайдуллин, Э. С. Совершенствование племенного дела и системы разведения молочного скота в Татарстане.: автореф. дисс. докт. с.-х. наук: : 06.02.01 /Губайдуллин Экзам Саматович. Москва, 1997.- 79 с.

69. Губайдуллин, Э. С. Голштинсий скот в Татарстане / Э. С. Губайдуллин, Р. А. Хаертдинов. Казань. - 1995.- 112 с.

70. Губайдуллин, Э. С. Программа совершенствования поррд молочного скота в Татарстане / Э. С. Губайдуллин и др.. Казань, 1995. -158 с.

71. Гулин, Ю. В. Морфологические и функциональные свойства вымени холмогор х голштинских и холмогор х британо-фризских первотелок / Ю. В. Гулин // Сб. науч. трудовВНИИплем. 1983. - С 61-64.

72. Гулин, Ю. В. Сравнительная оценка роста и рзвития холмогорских, холмогор х британо-фризских телок / Ю. В. Гулин // Сб. науч. трудовВНИИплем. 1993. - С. 172-175.

73. Данкверт, А. .Г. История племенного животноводства России / А. Г. Данкверт, С. А. Данкверт. -М.: Арбат-информ.-2004. -327с.

74. Данкверт, С. А. Производство и мировой рынок молока в начале XXI-века / С. А. Данкверт, И. М. Дунин // ВНИИплеи. — Лесные поляны. -2002.-71.С

75. Денисенко, Е. А. Влияние генотипа каппа-казеина на технологические качества молока коров черно-пестрой породы / / Е. И. Денисенко, Л. А. Калашникова //В сб.: «Селекция, ветеринария, генетика и экология», г. Новосибирск. -2003. С.256-257.

76. Денисенко, Е. А. Влияние генотипа каппа-казеина на технолгические качества молока коров черно-пестрой породы / Е.А. Денисенко, Л. А.Калашникова // В сб. «Селекция, ветеринария, генетика и экология», Новосибирск. 2005. — С. 103-105

77. Диланян, 3. X. Молочное дело / Диланян З.Х. -Сельхозгиз, 1958.423 с.

78. Дмитриев, Н. Г. Селекционно-генетические методы модернизации скота в СССР / Н. Г. Дмитриев // ВНИИРГж.- Л.-1986.- С. 18-20.

79. Дубровцева, Л. А. Морфологические признаки коров черно-пестрой и холмогорской пород / Л. А. Дубровцева, Е. А. Цепелев // Труды НИИСХ Севеоро-Востока.- 1976.- С.30-31.

80. Дунин, И. М. Использование голштино-фризских производителей для улучшения холмогорского скота в РСФСР / И. М. Дунин // Совершенствование холмогорского скота в РСФСР. / Бюлл. Научных работ ВНИИплем. М. - 1984.- С.24-26.

81. Дунин, И. М. Использование голштинской породы для повышения продуктивности молочного скота России.: дисс. докт. с.-х. наук.: 06.02.01 / Дунин Иван Михайлович М.: 1994.-61с.

82. Дунин, И. М. Проведение научных исследований в скотоводстве /И. М. Дунин. Д. Б. Переверзев, А. Г. Козанков // М.- 2000.- 80 с.

83. Дунин, И. М. Совершенствование бестужевского скота / И. М. Дунин, С. В. Карамаев, Г. Я. Зимин.: М.-1998.-198 с.

84. Дунин, И. М. Современное состояние и перспектива разведения и совершенствования холмогорской породы скота / И. М. Дунин, Д. Б. Переверзев, В. М. Высоцкая // Племенная работа с холмогорской породой скота. ВНИИплем. М.-1994.-С.З-5.

85. Дунин, И. М. Рекомендации «Основные линии и типы родственных групп крупного рогатого скота холмогорской породы» /И. М. Дунин и др. // М. 1989. - 22 с

86. Дьяченко, П. Ф. Исследование белков молока. Сб. науч. тр. / П.Ф. Дьяченко и др..- М.:Пищепромиздат, 1959.- 85 с.

87. Дьяченко, П. Ф. Технология молока и молочных продуктов / П. Ф. Дьяченко. М.: Изд. "Пищевая промышленность", 1974. - 447с.

88. Ежегодник по племенной работе в молочном скотоводстве в хояйствах Росийской Федерации (2002 год). М.: ГНУ ВНИИплем. - 2003. -300 с.

89. Елецкая, Ж. Я. Сравнительная оценка молочных пород скота в Ростовской области / Ж. Я. Елецкая.// Животноводство.-1979.-№ 7.-С. 41-42.

90. Емельянов, А. С. Биологические и хозяйственные особенности Холмогорской породы / А. С. Емельянов и.др. // Животноводство.- 1971.-№4.- С.39-45.

91. Емельянов, А.С. Холмогорский скот в РСФСР / А. С. Емельянов, М. А. Никитина, Р. И. Огинская // Петрозаводск.: Изд-во Карелия. 1975. - 168 с.

92. Жебровский, JL С. Генетические показатели белковомолочности черно-пестрой породы. Препотентность и вероятная ценность быков производителей по данному признаку. / JI. С. Жебровский, А. А. Снопова // Сб. науч. тр.-Л., 1989.-вып. 15. т.2. С.8-11.

93. Жебровский, Л. С. Генетические, селекционные, биохимические и физиологические основы изучения белков молока и крови крупного рогатого скота: Библиограф, указ./ Л.С. Жебровский и др..- Л.: ЛГУ. -1975.-С.203.

94. Жебровский, Л. С. Методические указания по селекции, оценке и исследованию содержания белка в молоке коров/ Л. С. Жебровский, А. А. Снопова //(В метод указаниях "Селекция крупного рогатого скота по белковомолочности"). Ленинград, 1972.-161 с.-С 43-51.

95. Жебровский, Л. С. Связь полиморфизма белков с продуктивностью черно-пестрого скота / Л. С. Жебровский, А. В. Бабуков, В. Е. Митюков // Животноводство. 1979. - №7. - С. 25-27.

96. Жебровский, Л. С. Селекционно-генетические основы белкового состава молока коров / Л. С. Жебровский. — М.: Колос, 1973.- 248 с.

97. Жебровский, Jl. С. Селекционные показатели содержания белка в молоке коров черно-пестрой породы. / Л. С. Жебровский, М. А. Иванова // Труды конф.: Плем. Дело, генетика и новые методы селекции молочного скота. -М.: 1970. С.32-35.

98. Журавель, Е. В. Изучение полиморфизма гена каппа-казеина у некоторых пород крупного рогатого скота /Е. В. Журавель и др. // Молекуляр.-генет.маркеры животных.-Киев. -1996.-С.8.

99. Журавель, Е. В. Исследование полиморфизма генов каппа-казеина и соматотропина локальных и коммерческих пород крупного рогатого скота / Е. В. Журавель, И. Л. Лисовский // Доклады РАСХН. 1997. -№1. - С .12-14.

100. Журавель, Е. В. О полиморфизме по локусу к-казеина молока у различных пород крупного рогатого скота / Е. В. Журавель, В. И. Глазко. //Сельскохозяйственная биология.-1999.- №2.-С. 120-124.

101. Закирова, Г. М. Белковый состав и технологические свойства молока у помесных коров холмогорская х голштинская разного генотипа.: автореф. дисс. канд. биол. наук : 06.02.01 : / Закирова Галима Мухтаровна — Казань, 2002. 20с.

102. Захаров, В. А. Совершенствование черно-пестрого скота с использованием отечественного и импортного генофонда / В. А. Захаров // Рязань. Русское слово. - С.25-35.

103. Зборовский, Л. В. Эффективность использования быков с различной долей голштинской крови / Л. В. Зборовский, В. И. Шаркаев // Исполь. миров, генет. ресурсов для соверш. отечеств, пород скота.-М.: ВНИИплем., 1990.- С. 77-79.

104. Зиновьев, Н. А. Методические рекомендации по использованию метода полимеразно цепной реакции в животноводстве / Н. А. Зиновьев и др.. Дубровицы: ВИЖ, 1998. - 36с.

105. Зиновьева, Л. В. Диагностика различных аллельных вариантов ДНК «singl tube» методом аллелспецифической полимеразно цепной реакции / Л. В. Зиновьева и др. // Биотехнология. 1996. - №6. - С.45-49.

106. Зиновьева, Н. А. Применение ДНК-диагностики для анализа генов — кандидатов локусов количественных признаков с.-х. животных / Н. А. Зиновьева и др. // Научные труды ВИЖ.-Дубровицы. 2001. Вып.61-С. 218224.

107. Зиновьева, Н. А. Подготовка проб, выделение ДНК и оптимизация ПЦР/ Н.А.Зиновьева. // Методы исследований в биотехнологии с.-х. животных. -ВИЖ.-2002.- С.33-45.

108. Зубарев, Р.А. Продуктивные качества голштинизированного скота разных линий / Р. А. Зубарев, А. В. Игонькин, М. В. Захарова // Прогрессивные технологии производства молока, мяса шерсти в Поволжье. Саратов. 1992.-С.25-32.

109. Игонькин, А. В. Молочная продуктивность коров разных генотипов / А. В. Игонькин, JI. А. Зубарев, Л. В. Королёва // Прогресс, технолог, производ. молока, мяса, шерсти в Поволжье.- Саратов: Поволж. НИИЖК, 1992.- С.8-13.

110. Игонькин, А. В. Продуктивность помесных коров полученных от быков голштинской породы разных линий / А. В. Игонькин, Л. В. Королёва, В. А. Дудина // В сб. "Повыш. продуктов, круп. рог. скота в Поволжье.-Саратов, ПНИИЖК, 1990.- С.15-17.

111. Инихов, Г. С. Биохимия молока и молочных продуктов/ Г. С. Иннихов. М.: Пищевая пром-ть, 1970. - 317 с.

112. Инихов, Г. С. Химия и физика белков молока / Г.С.Инихов. -М.: Пищепромиздат. -1941.-300 с.

113. Иолчиев, Б. С. Взаимосвязь системы каппа-казеина с молочной продуктивностью коров / Б. С. Иолчиев, В. И. Сельцов // Зоотехния.- 1999.-№б.-С.4-5.

114. Иолчиев, Б. С. Использование полимерфных систем белков молока в селекции. / Б. С. Иолчиев, М. А. Еремина // Молочное и мясное скотоводство. 1996. - №2. - С.20-22.

115. Иолчиев, Б. С. Использование полиморфных систем белков молока в селекции / Б. С. Иолчиев, М. А. Еремина //Молочное и мясное скотоводство.-1996.-N2.-C.20-22.

116. Иолчиев, Б. С. К методике качественного и количественного определения фракций белков / Б. С. Иолчиев // Новое в селекции сельскохозяйственных животных: Сб. научн.Трудов / ВИЖ. Вып.56.-Дубровицы, 1993. - С.122-128.

117. Иолчиев, Б. С. Популяционно-генетический анализ белков молока у различных видов сельскохозяйственных животных / Б. С. Иолчиев и др.. — Методические рекомендации, ВИЖ. 2001. - С.28.

118. Исламов, Р. Р. Белковый состав молозива у коров молочных пород и его влияние на рост новорожденных телят.: автрреф. дисс. канд биол. наук.: 06.02.01 / Исламов Руслан Рустамович. Казань. - 2007. - 19 с.

119. Калашникова, JI. А. Селекция XXI века: использование ДНК-технологий / JI. А. Калашникова, И. М. Дунин, В. И. Глазко // Изд. ВНИИплем.-2000.- С. 14.

120. Калашникова,. JI. А. Селекция XXI-века: использование ДНК-технолгий / Л. А. Калашникова и др. ВНИИплем. Лесные поляны. 1999. -148с.

121. Калашникова, Л. А. Влияние генотипа каппа-казеина на молочную продуктивность и технологические свойства молока коров холмогорской породы / Л. А. Калашникова, В. Г. Труфанов // Доклады РАСХН.-2006.-№4.-с.43-44.

122. Калашникова, Л. А. Влияние генотипа каппа-казеина на молочную продуктивность и технологические свойства молока коров холмогорской породы / Л. А. Калашникова, В. Г. Труфанов // Доклады РАСХН.-2006.-№4.-С.43-44.

123. Карамчакова, О. Н. Молекулярно-генетический анализ вариантов гена каппа-казеина у коров красной горбатовской породы / О. Н. Карамчакова // Вестник Рос. университета дружбы народов.-Животноводство.-2001 .-№6.-С.22-23.

124. Карликов, Д. Е. Селекция молочного скота в США / Д. Е. Карликов // Молочное мясное скотоводство. 1998. - №4. - С.29-30.

125. Карпов, П. А. Характеристика бестужевской породы по каппа-казеину и устойчивости животных к маститу / П. А. Карапов, А. А. Талманов // Природа Симбирского Поволжья.-Ульяновск.-2005.-Вып.6.-С.208-211.

126. Кириленко, С. Д. Идентификация генотипов по каппа-казеину и BLAD-мутации с использованием ПЦР у крупного рогатого скота / С. Д. Кириленко, В. И. Глазко // Цитология и генетика.-1995.-Т.29.-№6.-С.60-63.

127. Костюнина, О. В. Молекулярная диагностика генетического полиморфизма основных молочных белков и их связь с технологическимисвойствами молока : автореф. дисс. канд. биол. наук : 03.00.23 /Костюнина Ольга Васильевна. Дубровицы. - 2005. - 21с.

128. Кравченко, Н. А. Разведение сельскохозяйственных животных / Н. А. Кравченко. -М.: Колос, 1973. -486с.

129. Красота, В. Ф. Разведение сельско-хозяйственных животных / В. Ф. Красота, Т. Г. Джапаридзе // 4. изд, перераб. и доп.-М.: Изд. ВНИИплем.-1999.-386 с.

130. Кривенцов, Ю. М. Молочная продуктивность, физико-химический состав и технологическое свойство молока черно-пестрого скота различных генотипов / Ю. М. Кривенцов, Г. В. Щербакова // Вестник сельскохозяйственной науки, 1991. - С. 100-104.

131. Кривенцов, Ю. М. Полиморфизм (3-лактоглобулина холмогорского скота / Ю. М. Кривенцов, А. А. Прозоров //Доклады ВАСХНИЛ.- 1975. №6.-С.32-34.

132. Крусь, Г. Н. Методы исследования молока и молочных продуктов / Г. Н. Крусь, А. М. Шалыгина, 3. В. Волокитина.- М.: Колос, 2000.-368с.

133. Крусь, Г. Н. Технология сыра и других молочных продуктов / Г. Н. Крусь, И. М. Кулешова, Н. И. .Дунченко.- М; Колос, 1992.- 320с.

134. Крыканова, Л. Н. Использование голштино-фризского скота в Европейских странах / Л. Н. Крыканова // Достижения с.-х. науки и практики. -1980.-№6.-С.14-26.

135. Крыканова, Л. Н. Об использовании генетического потенциала американских голштинов для улучшения молочного скота в Венгрии / Л. Н. Крыканова// С—х. экспрессинформация, 1984. № 5. - С. 34-35.

136. Крыканова, JI. Н. Повышение продуктивного доолголетия коров / Л. В. Крыканова //Зоотехния. 1988. - №1. - С.60-63.

137. Крыканова, Л. Н. Эффективность исползования голштинской породы в зарубежных странах / Л. Н. Крыканова // М., ВНИИТЭИагропром. -1988.-С.1-11.

138. Крыканова, Л. Н. Эффективность использования голштинской породы крупного рогатого скота в Европейских странах / Л. Н. Крыканова. — М.-Обзор. 1989.-66 с.

139. Кугенев, П. В. Молочное дело / П. В Кугенев. Москва, Колос. -1983.-303 с.

140. Кугенев, П. В. Практикум по молочному делу / П. В. Кугенев, Н. В. Барабанщиков.-М.:Агропромиздат.-1998.-223 с.

141. Кузнецов В. М. Модификационный метод оценки быков по качествупотомства / В. М. Кузнецов // Бюл. Науч. Тр. ВНИИРГЖ. 1982 Вып. 58. -С. 11-13.

142. Кузнецова, 3. А. Характеристика холмогорской породы в условиях молочного комплекса /3. А. Кузнецова и.др. //Разведение крупного рогатого скота в условиях промышленной технологии.- Омск. — 1983. С. 15-17

143. Кушнер, X. Ф. Полиморфизм белков и его значение в генетике и селекции животных / X. Ф. Кушнер и др.. — М.: Агропомиздат, 1968. — 128с.

144. Кэмпбелл, Д.Р. Производство молока / Д. Р. Кэмпбел, Д. Р. Маршалл.-М.: Колос, 1980, 670 с

145. Лебедев, И. А. Влияние уровня кормления на рост и развитие телок холмогорской породы и их последующую продуктивность / И. А. Лебедев // Сб.научн.трудов. М. - 1988.-С. 27 - 31.

146. Лебенгарц, Я. 3. Некоторые особенности обмена веществ молодняка крупного рогатого скота в зависимости от генотипа и характера кормления. / Я. 3. Лебенгарц // Проблемы доместификации животных. 1989.- С.14-16.

147. Левантин, Д. Л. Развитие животноводства в странах мира / Д. Л. Левантин // Зоотехния. 1990. - №10. - С.66-69.

148. Лисенков, А. А. Совершенствование холмогорского скота в Московской области. / А. А. Лисенков, Д. Р. Казарбин // Проблемы совершенствования и селекции скота холмогорской породы в РСФСР. Труды ВНИИПлем. дела.-1988.-С.4-8.

149. Лисенков, А. А. Целесообразность скрещивания холмогорского скота с голштинским / А. А. Лисенков // Зоотехния. 1991.-№ З.-С. 9—11.

150. Лисенков. А. А. Скрещивание холмогорских коров с бычками голштино-фризской породы в хозяйствах Московской и Архангельской областей. / А. А. Лисенков. А. Д. Шиловский // Совершенствование холмогорского скота в РСФСР. /Бюл. ВНИИплем.-М.- 1984.-е. 26-27.

151. Максименко, В. Ф. Новые системы молекулярно-генетического маркирования генома ярославской породы скота / В. Ф Максименко // Селекционные и технологические основы повышения продуктивности с.-х. животных.-Ярославль.-2005.-Ч.2.-С.29-33.

152. Малина Л.К. Воспроизводительная функция и молочная продуктивность холмогор х голштино-фризских первотелок / Л. К. Малина,

153. A. Е. Рогачев // Повышение генетического потенциала животных холмогорской породы в РСФСР.- Бюл. ВНИИплем. М. - 1986. - С.43-45.

154. Малина, Л. К. Рост и развитие чистопородных и помесных (голштино-фризами) телят в условиях Мурманской области / Л. К. Малина,

155. B. Г. Быкова //Пути повышения племенных и продуктивных качеств холмогорского скота./ 1982.-С. 126-132.

156. Маниатис, Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук, пер. с англ. // М.: Мир, 1984.-399 с.

157. Марданова, Г. В. Скрещивание холмогорских коров с быками голштино-фризской породы в племзаводе «Мухинский». / Г.В. Марданова,

158. А.Б. Ружевский // Повышение генетического потенциала подуктивности животных холмогорской породы в РСФСР.- М., ВНИИплем.- 1986.- С.25-27.

159. Маринчук, Г. Е. Влияние отбора по молочной продуктивности на распределение типов бета-лактоглобулина в популяциях коров красной степной породы / Г. Е. Маринчук // Генетика, разведение и содержание с.-х. животных Киев.- 1978,- С.59-81.

160. Маркин, Ю. В. Физиологическое обоснование методов повышения энергетической и протеиновой обеспеченности лактирующих коров и молодняка крупного рогатого скота // Автореф. дис. докт. биол. наук. 06.02.01 / Маркин Юрий Владимирович.-1997. -38с.

161. Маркова, К. В. Характеристика белковомолочности основных пород скота СССР / К. В. Маркова // Генетика и новые методы селекции молочных пород скота. М. Колос. - 1970.-С.23 8-246.

162. Матюков, В. С. Внутрипопуляционная дифференциация чистопородного холмогорского скота по генным частотам локуса каппа-казеина / В. С. Матюков // Цитология и генетика.-2004.-Т.38.-№2.-С.46-50.

163. Мауер, Г. Диск-электрофорез: Теория и практика электрофореза в полиакриламидном геле / Г. Мауер. -Москва, Мир. 1971.-247с.

164. Машуров, А. М. Генетические маркеры в селекции животных. / А. М. Машуров. Москва, Наука. 1980. - 315 с.

165. Меркурьева, Е. К. Генетика / Е.К.Меркурьева и др.. М.: Агропромиздат. -1991.-444 с.

166. Меркурьева, Е. К. Генетические основы селекции в животноводстве / Е. К. Меркурьева. Москва, Колос. - 1977. - 239 с.

167. Мещеров, Р. К. Продуктивность холмогор-голштинских коров различной кровности / Р. К. Мещеров // Сб.науч. тр. ВНИИплем. 1997. -Вып. 2.-С. 18-21.

168. Милюков, А. К. Скрещивание в молочном скотоводстве / А. К. Милюков Москва, В О Агропромиздат. 1989. - 119 с.

169. Миносян, Т. Метод ДНК-диагностики для маркирования животных по локусу каппа-казеина / Т. Миносян , В. Кондрахин // Молочное и мясное скотоводство.-№3.-2003 .-с.З 8-40.

170. Митюков, А. С. Генетическая обусловленность внутрипородых качественных вариаций полиморфных систем белков молока.: автореф дисс. канд. биол. наук:06.02.01 /Митюков Александр Сергеевич. — JI. Пушкин, 1974.-15 с.

171. Молекулярная клиническая диагностика. Методы / Под ред. С. Херрингтона, Дж. Макги, пер. с англ. М.: Мир, 1999. - 558 с.

172. Молекулярно-генетические маркеры животных. Тезисы докладов третьей международной конференции. Киев Нора-принт., 1999. - 127с.

173. Мухаметгалиев Н. Н. Совершенствование прибора для вертикального электрофореза / Н. Н. Мухаметгалиев, Р. А. Хаертдинов // Ученые записки КГАВМ. Казань, 2005. - т. 180.-С.283-289.

174. Немцов, А. А. Полиморфизм по гену каппа-казеина быков различных пород на головном племпредприятии Башкортостана / А. А. Немцов и др. // С/х биология.-2006.-№4.-с.65-67.

175. Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных. Справочное пособие. Москва, 2003. - 455 с.

176. Нуртдинов, М. Г. Развитие племенного молочного скотоводства в Татарстане / М. Г. Нуртдинов и др.. Казань: Центр инновационных технологий, 2006 - 130 с. - ISBN 5-93962-194 -5.

177. Овчинников, А. И. Биохимия молока и молочных продуктов / А. И. Овчинников, К. К. Горбатова. — JL: 1974. - 259 с.

178. Павлюченко, Т. А. Изменчивость и наследственность содержания белковых фракций в молоке / Т. А. Павлюченко, JI. С. Жербовский // Сб. научн. тр. Л., 1969.-вып.15.- т.2.-С. 14-15.

179. Парамонова, Р. В. Модификационный метод электрофореза белков молока в полиакриламидном геле / Р. В. Парамонова // Молоч. и мяс. промыш.-1991.-№5.-С.39-41.

180. Переверзев, Д .Б. Холмогорка-лучшая отечественная порода по молочности при разведении в общественных и фермерских хозяйствах./Д,.Б.Переверзев, И. М. Дунин, А. С. Родионов // М.-ВНИИплем.-1997.- С.26-36.

181. Переверзев, Д. Б Совершенствование холмогорского скота в России. / Д. Б. Переверзев. .И. М. Дунин., Г. М. Привалихин // М.:Россельхозиздат.-1990.-208 с.

182. Переверзев, Д. Б Создание высокоудойного молочного стада холмогорской породы. / Д. Б. Переверзев.,А. С. Родионов, Р. М. Матвеев. // Зоотехния.-1988. С. 27-30.

183. Переверзев, Д. Б. Апробация нового молочного типа скота холмогорской породы, для Центральной Нечерноземной зоны Российской Федерации./ Д. Б. Переверзев // М.: Аграрная Россия.-1999.-№2(3).-С. 15-22.

184. Переверзев, Д. Б. Взаимосвязь живой массы и возраста первотелок с их продуктивными качествами. / Д. Б. Переверзев, И. М. Дунин // Сб.тр. Архангельского НИИСХ. Архангельск.- 1993. - С.43-47.

185. Переверзев, Д. Б. Основы повышения эффекта селекции при разведении холмогорского скота (методические рекомендации) /Д. Б. Переверзев, И. М. Дунин, А. Г. Козанков.: М. 2000. - 44 с.

186. Переверзев, Д. Б. Племенная работа с холмогорской породой скота ./ Д. Б. Переверзев, И. М. Дунин, Н. С. Никулин.: М.-1997.-Вып.14.-34 с.

187. Переверзев, Д. Б. Программа совершенствования холмогорской породы скота в РСФСР на период 1991-2000 гг./ Д. Б. Переверзев.,А. С. Родионов., Н. С. Никулин // ВНИИплем.-1991 .-31 с.

188. Переверзев, Д. Б. Результаты селекционной племенной работы с холмогорской породой скота за 1997 год./ Д. Б. Переверзев, Р. К. Мещеров// Сб.научн.тр.ВИИИплем.-М.- Вып.l.-l998.-С. 19-21.

189. Переверзев, Д. Б. Сохранить и улучшить холмогорскую породу / Д.Б. Переверзев и.др. //Зоотехния.- 1994.- №11. С.5-6.

190. Переверзев, Д. Б. Хозяйственно-биологические ососбенности холмогорских, голмогор х голштинских и холмогор х британо-фризских первотелок при разном уровне кормления./ Д. Б. Переверзев, Ю. В. Гулин // Сб. научн. тр. ВНИИплем. М.-1993.-С. 175-178.

191. Петухов, В. Л. Ветеринария генетика с основами вариационной статистики / В. Л. Петухов, А. И. Жигачев, Г. А. Назаров. Москва, Агропромиздат. 1996. - 243 с.

192. Плохинский, Н. Л. Биометрия / Н. Л. Плохинский. М.: Изд. Мое. Университета, 1970.-3 62с.

193. Погожина, М. А. Удой и функциональные свойства вымени помесных коров / Погожина М.А., Белова А.В.// Зоотехния.- 1986.-№ 9.- С. 36-37.

194. Полипенко, В. П. Динамика белкового состава молока коров разного возраста в течение лактации / В. П. Полипенко // Сб. "Полноцен.корм. жвач. живот, в условиях их интенсив, использования."- М., 1990.-С. 105112.

195. Полосухин, А. И. Некоторые гематологические показатели у коров в зависимости от стадии лактации / А. И. Полосухин // Вопросы интенсификации с.-х. производства. — Материалы коференции. М. — 1975. -№164.-75с.

196. Попов, Н. А. Полиморфизм белков, технологические и диетические качества молока коров черно-пестрой породы / Н. А. Попов и др. // Материалы научно-практической конференции. — Быково. РАМЖ, 2003. С.64-66.

197. Попов, Ю. М. Долголетие холмогорского скота в совхозе «40 лет УАССР» / Ю. М. Попов //Обобщение опыта работы по совершенствованию скота холмогорской породы.- Ижевск.- 1973,- с.89-100.

198. Потокин, В. П. Основные хозяйственно-полезные признаки холмогорских и помесных коров./ В. П. Потокин// Проблемы совершенствования и селекции скота холмогорской породы с РСФСР. Труды ВНИИПлем. дела.- 1988. С. 37- 40.

199. Потокин, В.П Основные хозяйственно полезные признаки холмогорских и помесных коров / В.П. Потокин, О. В. Бурцева // Проблемы совершенствования и селекции скота холмогорской породы в РСФСР. Труды ВНИИПлем. дела. 1988. - С37-55.

200. Привалихин, Г. М. Методы селекции холмогорского скота в Московской области / Г. М. Привалихин // В сб.: Совершенствование холмогорского скота в РСФСР.- М.,ВНИИплем.- 1987.- С. 12-15.

201. Привалихин, Г. М. Проблемы совершенствования и селекции скота холмогорской породы в РСФСР / Г. М. Привалихин, Т. Ф. Борисова., Н. Я. Нальвадаев // Труды ВНИИПлем.дела.-М.-1988.-С.51-55.

202. Привалихин, Г. М. Совершенствование холмогорского скота на Енисейском Севере / Г. М. Привалихин, Ю. Е. Макушев., О. А. Антонова. // Науч.-техн. Бюл.-ВАСХНИЛ.-Сибирское отделение.- 1983.- Т.39.-С. 8-14.

203. Программа использования голштинской породы для улучшения молочных стад холмогорского скота в различных регионах Российской Федерации.//М.-1987.-30 с.

204. Программа совершенствования холмогорской породы скота в РСФСР на период 1991-2000 гг.//М.-1991.-30с.

205. Прожерин, В. П. Формирование и использование внутрипородных типов холмогорского скота / В. П. Прожерин // Племенная работа с холмогорской породой скота. ВНИИплем. - М. - 1994. - С. 15-17.

206. Прозоров, А. А. Совершенствование холмогорского скота на основе крупномасштабной селекции.: автореф. дис. докт. с.-х. наук.: 06.02.01 / Прозоров Алексей Александрович. Л.-Пушкин.- 1987.- 45 с.

207. Прокин, В. Г. Молочная продуктивность и технологические свойства молока симментал х голштинских помесей, полученных от разведения "в себе".: автореф. дис. канд. с.-х. наук.06.02.04 / Прокин Владимир Григорьеич.- Дубовицы. -1990. 21с.

208. Прохоренко, П. Н. Голштино-фризкая порода скота / П. Н. Прохоренко, Ж. Г. Логинов.: Л.:Агропромиздат. Ленингр. отд-ние, 1986. -238с.

209. Прохоренко, П. Н. Голштино-фризская порода скота РСФСР на период 1991-2000 гг. / П. Н. Прохоренко, Ж. Г. Логинов / М. 1991. - 163 с.

210. Прохоренко, П. Н. Межпородное скрещивание в молочном скотоводстве / П. Н. Прохоренко, Ж. Г. Логинов. -М.: Россельхозиздат, 1986.191 с.

211. Прохоренко, П. Н. Методы создания высокопродуктивных молочных стад / П. Н. Прохоренко // Зоотехния.-2001.-№11.-С.2-6.

212. Прудов, А. И. Использование голштинской породы для интенсификациии селекции молочного скота / А. И. Прудов, И. М. Дунин. -М.: Нива Росиии. 1992. - 191 с. ISBN 5-260-00331-4.

213. Прудов, А. И. Использование голштинской породы для интенсификации селекции молочного скота / А. И. Прудов, И. М. Дунин // М. 1993. Вып.2. С.5-12

214. Прудов, А. И. Племенные, продуктивные качества холмогорской породы скома в РСФСР и их совершенствование / А. И. Прудов, Д. Б. Переверзев // Научн. тр. ВАСХНИЛ. М. Агропромиздат. - 1986. - С.88-95.

215. Прудов, А. И. Рост и развитие телок различной кровности / А. И. Прудов и.др. // Племенная работа с холмогорской породой скота. ВНИИплем. М. - 1993. Вып.2. - С.5-12.

216. Прудов, А. И. Темпы роста и некоторые экстерьерные показатели холмогорского и помесного молодняка / А. И. Прудов и.др. // М.: ВНИИплем. 1982. - С. 142-148.

217. Регнер, П. Влияние скармливания свежей сыворотки на молочную продуктивность и состав молока / П. Регнер, X. Клостермайер //Крат, сообщения XXI Международ, молоч. конгресса. М.: 1982. - т.1.- кн.1. - С.72.

218. Рекомендации по направленному выращиванию телок и созданию высокопродуктивных коров. Казань: Изд. Дом печати. - 2003. - 83с. - ISBN 5-94259-104-0

219. Рой, Д. X. Выращивание телят / Д. X. Рой // Пер. с англ. Г.Н. Жидкоблиновой, Д.В. Карликова.-М.: Колос, 1982 470 с.

220. Рокицкий, П. Ф. Введение в статистическую генетику / П. Ф. Рокицкий.- Минск, 1974.-287 с.

221. Рузский, С. А. Отбор коров для машинного доения / С. А. Рузский, С. А. Сергеев.- М.: "Колос", 1969. С.11.

222. Рябова, Л. А. Голштинизация холмогорского скота / Л. А. Рябова, К. М. Маркова // Зоотехния.-1997.-№12.-С.7.

223. Рябова, Л. А. Продуктивность голштинских помесей / Л. А. Рябова // Зоотехния.-2001.-№7.-С.8-9.

224. Сажин, С. И. Продуктивность, физико-химический состав и технологические свойства молока коров разных генотипов / С. И. Сажин, П. С. Катмаков //Доклады РАСХН.-1998.-№1.-С.З9-41.

225. Сажин, С. И. Продуктивность, химический состав и технологические свойства молока черно-пестрых голштинско-фризских помесей / С. И. Сажин, Д. П. Хайсанов, Н. М. Топтыгина //Сб.науч.тр. Ульяновского СХИ.-Ульяновск,-1987.-С.25-27.

226. Сажин, С. И. Белковый состав молока коров разных пород / С. И. Сажин, П. С. Катмаков //Вестник РАСХН.-1993.-№2.- С.33-35.

227. Сайфутдинов, К. Ф. Наследственная изменчивость относительного содержания молочных белков и ее влияние на технологические свойства молока коров:: автореф. дис. канд. биол. наук.:06.02.01 / Сайфутдинов Камиль Флюсович. Казань, 1998.-21 с.

228. Сакс, Е. И. Эффективность использования голштино-фризских производителей для совершенствования черно-пестрого скота / И. И. Сакс, А. И. Бич, В. И. Еременко // Селекция, гибридизация и акклиматизация с.-х. животных. 1983. - №2. - С131-139.

229. Сакс, Е. И. Эффективность использования голштинских быков./ Е. И. Сакс //Бюлл.ВНИИГРЖ.-Л.-1990- С. 17 -23.

230. Салахов, И. Б. Адаптационная способность и использование генофонда венгерского голштино-фризского скота в условиях Татарстана : автореф. дисс. канд. биол. наук : 06.02.01. / Салахов Ильдар Бадрутдинович. — Казань. 2002. - 24с.

231. Сивкин, Н. В. Генетическе варианты белков молока и его технологические свойства у коров черно-пестрой и швицкой пород / Н. В. Сивкин // Новое в селекции с.-х. животных. — Дубровицы. — 1993. — Вып.56. — С.122-129.

232. Снопова, А. А. Пути повышения белковости молока / А. А. Снопова.- М.: Сельхозиздат. — 1980. 84 с.

233. Солдатов, А .П. Влияние генотипа коров на качество молока. / А. П Солдатов, и др. // Молочное и мясное скотоводство. 1991. - № 5. - С. 3840.

234. Солдатов, А. Н. Влияние генотипа коров на качество молока / А. Н. Солдатов и др. // Молочн. и мяс. скотоводство. 1991. - №5 - С.38-40.

235. Сорокин, Д. А. Некоторые хозяйственно-полезные признаки животных холмогорской породы в ОПХ «Подвязье» / Д. А. Сорокин // Сб. тр.РГСХА.- 1998.- С. 81-82.

236. Сорокин, Д. А. Некоторыеъозяйственно-полезные признаки животных холмогорской породы в ОПХ «Подвязье» / Д. А. Сорокин, В. А. Захаров // Сб. тр. -РГСХА. 1998. - С.81-82.

237. Стародубцев, В. М. Сравнительное изучение молочной и мясной продуктивности, качества молока, сыра и масла коров основных пород

238. Рязанской области./М.В.Стародубцев// дисс. докт. с.-х. наук.: 06.02.01. /Стародубцев Виктор Михайлович -М., 1974.- 367 с.

239. Стрекозов, Н. И. Белковый состав молока и биохимический полиморфизм его фракций / Н. И. Стрекозов, Н. В. Сивкин, Б. С. Иолчиев // Вестник РАСХН. 1997. - №1. С. 52-53.

240. Стрекозов, Н. И. Сертификация и требования к качеству продукции агропромышленного комплекса России / С. И. Стрекозов и др..- Дубровицы: ВИЖ, 1998.-3 57с.

241. Стрекозов, Н. И.Интенсификация молочного скотоводства России / Н. И. Стрекозов, В. К. Чернушенко, В. И. Цысь // Смоленск. 1997.- С. 50-53.

242. Сулимова, Г. Е. Анализ полиморфизма ДНК кластерных генов у крупного рогатого скота: геныказеинов и гены главного комплекса гистосовместимости (BOLA) / Г. Е. Сулимова и др. //Цитология и генетика. -1992. -№5. -С. 18-26.

243. Сулимова, Г. Е. Анализ полиморфизма ДНК кластерных генов у крупного рогатого скота: гены казеинов и гены главного комплекса гистосовместимости (BOLA) / Г. Е. Сулимова и др. // Цитология и генетика.- 1992.-Т. 26. № 5. - С. 18-26.

244. Сулимова, Г. Е. Генотипирование локуса каппа-казеина у крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции / Г. Е. Сулимова, Г. О. Шайхаев, Э. М. Берберов // Генетика.-1991.-Т.27, 12. С. 2053-2062.

245. Сулимова, Г. Е. К вопросу о номенклатуре аллелей каппа-казеина у представителей подсемейства Bovinae / Г. Е. Сулимова // Генетика.-1998.-Т.34.-№4.-с.574-576.

246. Сулимова, Г. Е. Лолиморфизм длин рестрикционныхфрагментов гена (3—казеина Bos Taurus / Г. Е. Сулимова, С. И. Городецкий // Сельскохозяйственная биология .-1988.- N3.-C. 31-34.

247. Сулимова, Г. Е. Полиморфизм гена каппа-казеина в популяциях подсемейства Bovinae / Г. Е. Сулимова, Ю. Н. Бадагуева, И. Г. Удина // Генетика, 1996.-Т.32.-№ 11.- С. 1576-1582.

248. Сунцова, О. В. Основы молочного дела / О. В. Сунцова // М.,-Агропромиздат.- 1986.

249. Суяркулов, Ш. Р. Белковомолочность черно-пестрого голандизированного скота и ее связь с технологическими свойствами молока: Автореф. Дис. . канд. с.-х. наук. -М., 1987.-12 с.

250. Тараненко, А. Г. Регуляция молокообразования / А. Г. Тараненко.-JL: Агропромиздат. Ленинград, отд-ние. 1987. - 237с.

251. Тараненко, А. Г. Физиологические основы повышения молочной продуктивности / А. Г. Тараненк.- М.: Россельхозиздат, 1986. 204 с.

252. Твердохлеб, Г. В. Технология молока и молочных продуктов / Г. В. Твердохлеб.: Агропомиздат, 1991.-463 с.

253. Твердохлеб, Г. В.Технология молока и молочных продуктов / Г. В. Твердохлеб // М., Де Ли принт, 2006. - 267 с.

254. Теоретические основы разведения генетики и селекции сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр.// Всесоюзный нучн.-исследов. ин-т разведения и генетики сельскохоз. ж-х. Л.:ВНИИРГ; 1976. — 129с.

255. Тепел, А. Химия и физика молока / А. Тепел.: Пищевая промышленность, 1972. — С.159-206.

256. Тепел, А. Химия pi физика молока. / А. Тепел. -М.: «Пищевая промышленность». -1979. -624с.

257. Технологическая инструкция по приготовлению масла коровьего сладкосливочного. -1999. ГУ ВНИМИ.

258. Технологическая инструкция по производству творога из пастеризованного молока. -1999. -ГУ ВНИМИ.

259. Тинаев, А. Ш. Хозяйственно полезные признаки продуктивности первотелок черно-пестрой породы с разными генотипами по локусу гена каппа-казеина : автореф. дисс. канд. с.-х. наук : 06.02.01. / Тинаев Ашабуддин Шабан Оглы. Лесные поляны. - 2003. - 18с.

260. Томме. А. А. Генетический полиморфизм (3-LG и к- казеинов и возможности его использования в селекции пород крупного рогатого скота в Эстонской ССР: автореф., дис. биол.канд. наук.:06.02.01 /Томме Арвидас Ахинатис. -Тарту. -1972. -27с.

261. Труфанов. В. Г. Использование методов ДНК-диагностики в селекции коров холмогорской породы / В. Г. Труфанов, Г. И. Глотова // Зоотехния.-2006.-№9.- С.10-11.

262. ТУ 9222-180-00419785-99 «Творог»

263. Усенбеков, Е. С. Генотипирование крупного рогатого скота по локусам каппа-казеина бета-лактоглобулина и мутации BLAD : автореф. дисс. канд. биол. наук : 03.00.15./ Усенбеков Есенгали Серикович. Пушкин. — 1995.-24с.

264. Устинников, Б. А. Метод дискового электрофореза в полиакриламидном геле для фракционирования и изучения белков (обзор) / Устинников Б.А., Г. А. Ермолин.-М. ЦНИИТЭИ, пищепром.-123 с.

265. Хаердинов, Р. А. Холмогорский скот и его совершенствование в Татарстане / Р. А. Хаертдинов и др.. Казань: Издательство «Матбугат йорты», 2000 - 120 с. - ISBN 5-89120-117-8

266. Хаертдинов, Р. А. Влияние генетических факторов на содержание белков в молоке коров / Р. А. Хаертдинов // Тезисы докл. респуб. науч.-произ. конф.-Казань.-1988.- С. 64.

267. Хаертдинов, Р. А. Использование генофонда белков молока в селекции крупного рогатого скота : автореф. дис докт. биол. наук : 06.02.01. / Хаертдинов Равиль Анварович. С.-П.: Пушкин. - 1992. 43с.

268. Хаертдинов, Р. А. Методические рекомендации по проведению качественного и количественного анализа белков молока методом электрофореза в полиакриламидном геле / Р. А. Хаертдинов:-М., 1989.-35 с.

269. Хаертдинов, Р. А. Селекция на повышение белковости и улучшение технологических свойств молока / Р. А. Хаертдинов, А. М. Гатауллин:-Казань, 2000. 132с.

270. Хаертдинов, Р. А. Содержание белков в молоке коров в зависимости от их породной принадлежности /Р. А. Хаертдинов // Доклады ВАСХНИЛ. -1990.-№5.-С.52-55.

271. Хаертдинов, Р. А. Содержание белковых фракций и влияние их уровня на технологические свойства молока / Р. А. Хаертдинов, М. П.

272. Афанасьев, Э. С. Губайдуллин // Молоч. и мяс. скотоводство, 1997. №5. -С. 17.'

273. Хаертдинов, Р. А. Технологические свойства молока помесных коров бестужевская х айрширская и бестужевская х айрширская х голштинская разных поколений / Р. А. Хаертдинов и др. // Тезисы докл. респ. научно-произв. конф.-Казань, 1999 -С. 245-246.

274. Хаертдинов, Р. А. Холмогорский скот и его совершенствование в Татарстане / Р. А. Хаертдинов и др.:- Казань, 2000. 120 с. - ISBN 5-89120117-8.

275. Хаертдинов, Р. А., Азимова Р.А. Задания к практическим занятиям по генетике с.-х. животных (с метод, указаниями) / Р. А. Хаертдинов, Р. А. Азимова:- Казань. 1990. - 52с.

276. Хаертдинов, Р. Р. Влияние породности молочных стад на качество товарного молока и белковый состав молочных продуктов.: автореф. дисс. канд. биол. наук.: 06.02.01 / Хаертдинов Рамиль Равилевич. — Казань. 2005. -21 с.

277. Хаертдинов, Р. Р. Новый метод видовой характеристики сыров и улучшения их качества / Р. Р. Хаертдинов // Материалы Международ.научно-прак.конф.посвящ.75-летию зооинженер. факультета. Казань, КГАВМ, 2005.-С.116-118.

278. Хамидуллин, Т. Н. Улучшение молочного скота в Татарстане / Т. Н. Хамидуллин // Зоотехния. 1994. - №8. - С.6-7.

279. Храмцов, А. Г. Переработка и использование молочной сыворотки: Технологическая тетрадь / А. Г. Храмцов и др. // Москва, Росагропромиздат. 1989. 271 с.

280. Цедилина, Г. В. Совершенствование холмогорского скота / Г. В. Цедилина, А. П. Весенин // Земля родная. 1977. - №3. — с.32-35.

281. Цедилина, Г. В. Совершенствование холмогорского скота в Рязанской области / Г. В. Цедилина // М.: ВНИИплем. 1984. - С.14-15.

282. Шарафутдинов, Г. С. Зависимость сроков хозяйственного исползования животных разной кровности от возраста первого отела / Г. С. Шарафутдинов // Актуальные проблемы животноводства и ветеринарии. — Казань. 1999. - С.249-250.

283. Шарафутдинов, Г. С. Мясная продуктивность выбракованных холмогор х голштинских коров /Г.С. Шарафутдинов // Молочное и мясное скотоводство. 2000. - №3 - С32-24.

284. Шарафутдинов, Г. С. Об использовании холмогорскими телками питательных веществ рациона / Г. С. Шарафутдинов // Молочное и мясное скотоводство. 2000. - №4. - С.22-24

285. Шарафутдинов, Г. С. Откормочные качества и мясная продуктивность холмогор х голштинских бычков / Г.С. Шарафутдинов // Молочное и мясное скотоводство. — 2000. №5. — С22-24.

286. Шарафутдинов, Г. С. Прогнозирование молочной продуктивности по родословной / Г. С. Шарафутдинов // Проблемы реформирования и эффективности АПК. Казань. - 1999. - С.154-156.

287. Шарафутдинов, Г. С. Продуктивное долголетие коров холмогорской породы и их помесей с голштинами / Г. С. Шарафутдинов и.др. // Журнал «Нива Татарстана». №5. - 2001. С. 17-24

288. Шарафутдинов, Г. С. Совершенствование холмогорского скота в Татарстане / Г. С. Шарафутдинов, Ф. С. Сибагатуллин . М.:: Аграрная Россия. - 2001. - 239 с. ISBN 5-87958-154-3

289. Шарафутдинов,Г. С. Улучшение экстерьера животных холомогорской и датской черно-пестрых пород методом скрещивания их с голштинским скотом / Г. С. Шарафутдинов, Р. А. Хаертдинов, С. Ф. Шайдуллин // Информационный листок Казанской ЦНТИ. — 1992. №.6.

290. Шашков, М. С. Сравнительная характеристика чёрно-пёстрых чистопородных и голштинизированных коров / М. С. Шашков, В. В.Ковалёв , А. И. Портной // Интенсив, технолог, производ. молока и говядины.- Горки: Бел. СХА, 1992.- С.83-86.

291. Шергина И.А. Новое в технологиях рассольных сыров и сыров с чеддеризацией pi плавлением сырной массы / И. А. Шергина, И. Н. Делицкая //Молоч. Промышленность.- 1997.- №4. С.24-24.

292. Шибата, Д. К. Полимеразная цепная реакция и молекулярно-генетический анализ биоптатов. / Д. К. Шибата // Методы. Молекулярная клиническаядиагностика. -М.: Мир.- 1999.-С.395-428.

293. Шиловский, А. Д. История формирования холмогорской породы крупного рогатого скота / А. Д. Шиловский, A. JI. Лосева, В. Л. Помыл ев // Сб. научных статей. Разведение и селекция холмогорского скота. — Архангельск. 1993. - С.3-7.

294. Ширкаев, В. И. Генотипические особенности обмена веществ у телок холмогорской породы./ В. И. Ширкаев и.др. // Использование высокоценных племенных с.-х. животных.- 1988.- Т. 1. С. 62-66.

295. Эйсвер, Ф. Ф Племенная работа с молочным скотом / Ф. Ф. Эйсвер. -М.: Агропромиздат, 1986. С. 132-146.

296. Эрнст, Л. Н. Совершенствование животных в хозяйствах крупных регионов / Л. Н. Эрнст, Ю. Н. Григорьев // Создание новых пород животных. М. - 1987. — С.3-8.

297. Эрнст, Л. Н. Современные методы совершенствования молочного скота / Л. Н. Эрнст, В. Р. Чемм // М.- Колос.- 1972. С. 115-116.

298. Эрнст, Л. Н. Использование голштинской породы при совершенствовании отечественного скота / Л. Н. Эрнст, Г. И. Белостоцкая // Тез. Докл. Киев, 1987. - С.3-4.

299. Эрнст, Л. Н. Стратегия совершенствования крупного рогатого скота России / Л. Н. Эрнст и др. // Зоотехния.-1997.- № 11.- С. 2-5.

300. Юхманова, Н.А. Молочная продуктивность и технологические свойства молока коров красно-пестрой породы с различными генотипами каппа-казеина.: автореф. дисс. канд. биол. наук.: 06.02.01 / Юхманова Наталья Александровна. Лесные поляны. - 2004. - 18 с.

301. Яппаров, А. X. Переработка продукции животноводства / А. X. Яппаров и др.. Казань, 2001. - 280с.

302. Aaltonen, M. Milk rennet properties and the genetic variants of proteins / M. Aaltonen, V. Antila//Milchwissenchaft-1987.-V.42-8.-P.490-492.

303. Ailenberg, M. Controlled hot start and improved specificity in carrying out PCR utilizing touch-up and loop incorporated primers (TULIPS) / M. Ailenberg, M. Silverman // J. Biotechniques. 2000. V. 29. N 5. P. 1018-1020.

304. Aleandri, R. The effects of milk protein polymorphisms on milk components / R. Aleandri, L. Buttazoni // J. Dairy Sci.-1990.-V.73.-P.241-255.

305. Alexander, L. J. Isolation and characterization of the bovine kappa-casein gene / L. J. Alexander et al. // Molec. Reprod. Develop. 1993 - V.36 -P.291-296.

306. Alexander, L. J. Isolation and characterization of the bovine k-casein gene / L. J. Alexander, A. F. Steward // Eur. J.Biochem.-1988.-V.178.-p.395-401.

307. Archibald, A. L. High-level expression of biologically active human alpha 1-antitripsin in the milk of transgenic mise / A. L. Archibald et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. -P.5178-5182.

308. Aschaffenburg, R. Genetic variants of milk proteins: their breed distribution / R. Aschaffenburg // J. Dairy. Res. 1968. V.35 P.447-460.

309. Banyko, J. Detection of kappa-casein genotypes in bulls of cattle breeds by restriction fragment lengch polymorphism (relp) / J. Banyko, Zc. Bosze // Vet. Med. 1995. 40 N 6. P. 165-169.

310. Baranyi, M. Genetic Polymorphism of Milk Protein in Hungarian Spotted and Hungarian Grey Cattle: A Possible New Genetic Variants of lactoglobulin / M. Baranyi et al. // J. Daily Sci.- 1993.-№. 76.-P. 630-636.

311. Barnes, M.A. Effects of milking freqwensy and selection for milk yield onproductive effisiency of holstein cows / M. A. Barnes, R. E. Pearson, A. J. Lukes-Wilson//J. Dairy Sc. 1990. -T.73. P. 1609-1611.

312. Barroso, A. Detection of Bovine kappa-casein variants А, В, С and E by means of polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism(PCR-SSCP) / A. Barroso, S. Dunner, J. Canon // J. Anim. Sci. 1998. V. 76. №. 6. P. 1535-1538.

313. Bech, A. M. Milk protein polymorphism in Danish dairy cattle and the influence of genetic variants on milk yield / A. M. Bech, K. R. Rristiansen // J. Dairy Research.-1990.-V. 57.-P.53-62.

314. Beckmann, J. S. Restriction fragment length polymorphisms in genetic improvement:/ J. S. Beckmann, M. Soller // Methodologies mapping and costs. -1983. -P.35-43.

315. Beld, M. Fractionation of nucleic acids into single-stranded and double-stranded forms / M. Beld, C. Sol, J. Goudsmit, R. Boom // Nucl. Acids Res. -1996. -V. 24. -№ 13. P. 2618-2619.

316. Berg, G. Genetic polymorphism к-lactoglobulin in relation of milk composition and cheese-making properties / G. Berg, H. Bevenhuis, P. J. De Koning // Brussels, Belgium; Inter. Dairy Federet. 1990. - P.123-133.

317. Berg, G. Genetic variants of milk proteins (II) / G. Berg et al. // Processing properties of bulk milk. In XXIII Int. Dairy Congress, Montreal, Posters and Brief Communications // Brussels, Belgium; Inter. Dairy Federat.-1990.-V.1.-P. 79.

318. Bleck, G. Т. Correlation of the alpha-lactalbumin polymorphism to milk production and milk composition of Holstein / G. T. Bleck, R. D. Bremel // J. Dairy Science. 1993. - V.76. - P.2292-2298.

319. Bleck, G. T. Sequense and single-base polymorphism of the bovine alpha-lactalbumin 5'flanking region / G. T. Bleck, R. D. Bremel // Gene. 1993. -P.126-213.

320. Boom, R. Rapid and Simple Method for Purification of Nucleic Acids / R. Boom, C. J. Sol, M. M. Salimans, C. L. Jansen et al. // J.Clin.Microbiol. 1990. - V. 28.-№3.-P. 495-503.

321. Bovenhuis, H. Associations between milk protein polymorphysms and milk productions traits / H. Bovenhuis, J. A. M. Van Arendock, S. Korver // J. Dairy Sci. 1992. - 75. - P. 2549.

322. Boye, J. I. Factors affecting molecular characteristics of whey protein gelation / J. I. Boye et al. // International Dairy Journal.- 1995.- №. 5.-P. 337353.

323. Braunschweig, M. PCR-RFLP test for the bovine p-lactoglobulin D allele / M. Braunschweig, G. Stranzinger, Z. Puhan //Animall Genetics. 1999. -V.30. -P.76.

324. Brew, K. The complete amino acid sequence of bovine a-lactoalbumin / K. Brew et al. // J. Biol. Chem. 1970. - V.245. - №17.- P.4570-4582.

325. Brignon, G. Complete amino acid sequence of bovine as2-casein / G. Brignon et al. // FEBS Lett.- 1977. V.274-279.

326. Bringe, N. A. Forces involved in the enzimatic and acidic coagulation of casein micelles / N. A. Bringe, J. E. Kissela // Development in Food Proteins. 5 -London, Appl. Sc. Publish., - 1987. - P.159-173.

327. Buchberger, J. Beeinflubt di Zuchtung den technjlogiscen Wert der Milch / J. Buchberger // Dtsch. Milchwirt. 1990. V.5 - No.42.- S.1420-1423.

328. Bucherger, J. Einfluss der Rassen Fleckvich und Pinzgauer, der Kreuzunden Fleckvich x Pinzgauer und Fleckvich x Red Holstein sowie pleiotrope Wirkungen von Milchproteingehotypen anf Milcheistungseigenshaffen /

329. J. Bucherger, R. Graml, H. Klostermeyer // Bayer. Land w. jb.-1986.-V.63.- №7.-S.817-831.

330. Chamba, J. F. A comprehensive approach to cheese characterisation: the example of Beaufort cheese / J. F. Chamba et al. // Science des Aliments.- 1994.-№. 14.- P.581-590.

331. Chiba, H. Opioid antagonist peptides derived from к-casein / H. Chiba, F. Tani, M. Yoshikawa // J. Dairy Res. 1989. V.56. - P.363-366.

332. Chikuni, K. Identification of bovine kappa-casein genotypes using polimerase chain reaction metod / K. Chikini et al. // J. Zootechn. Sci. 1991. № 7. P. 654-659.

333. Chrenek, J. Uplyy ctrven ostranateho plemena na mlikov u Zitkovotveho krizeniek so slovenskym strakatym dab ytkom / J. Chrenek, J. Plesnik // J. Ved. Pract Vysk. Ustawu Zivosnej Viroby Nitre. 1981, V.19. P.105-112.

334. Corradini C. Influenza di alcune variant! genetiche sul comportamento della caseina in prozessi enzimatici / Corradini C. & Bergamaschi E // Scienza e tecnica Lattiero-Casearia.- 1974.-Ж 25.-P. 187-201.

335. Damiani, G. RFLP analysis of the к-casein locus in cattle / G. Damiani et al. // Anim. Genet. 1990. - V.21. - P. 107-114.

336. Davies, D.T. The content and composition of protein in creamery milk in south-west Scotland / D. T. Davies, A. J. Law // J. Dairy Res. 1980. V.47 - P.83-90.

337. Denicourt, D. Detection of bovine k-casein genomic variants by the polymerase chain reaction method / D. Denicount, M. P. Sabour, A. J. Mc.Allister // Animal Genetics. 1990. - V.21. - P. 215-216.

338. Don, R. H. "Touchdown" PCR to circumvent spurious priming during gene amplification / R. H. Don et al. // Nucl. Acids. Res. 1991. V. 19. N 14. P. 4008.

339. Eigel, W. N. Nomenclature of protein's of cow's milk fifth revision / W. N. Eigel // Journal of Dairy Science.- 1984.- №. 67.-P. 1599-1631.

340. El-Negoumy A.M. Effect of polymorphic composition of calcium caseinate sols on their stability to rennin / A. M. El-Negoumy // J. Dairy Res.-1972.-№. 39.-P. 373-379.

341. Erhard, G. Allele frequencies of milk proteins in German cattle breeds and demonstration of as2-casein variants by isoelectric focusing / G. Erhard // Arch. Tierz., Dummerstorf 36.- 1993.-№.- 2.-P. 145-152.

342. Erhardt, G. A new as 1-casein allele in bovine milk and its occurence in different breeds / G. Erhardt // Animal Genetics. 1993 - Y.24 - P.65-66.

343. Erhardt, G. Detection of a new к-casein variant in milk of Pinzgauer cattle / G. Erhardt // Animal Genetics. 1996 - V.27 - P. 105-107.

344. Erhardt, G. Kappa kasein in bovine milk. Evidence of a further allele (kappa-casein E) in different breeds / G. Erhardt // J. Animal Breeding and Genetics.-1989 - V. 106.- P. 225-231.

345. Esmail Salah. Factors affecting colostral Ig utilization by calves / Esmail Salah // Feed Mix (Neth.). 2001. - 9. № 3 - P. 32-34.

346. Farrel, M. Biological significance of milk protein polymorphism / M. Farrel, P. Thompson // Dairy Sci. 1971. - V.54. - P.1219-1228.

347. Feagan, J. T. Coagulation of milk proteins. I. Effect of genetic variants of milk proteins on rennet coagulation and heat stability of normal milk / J. T. Feagan et al. // Aus. J. Dairy Technol.- 1972.-№. 27.-P. 129-134.

348. Fiat, A. M. Caseins of various origins and biologically active casein peptides: and oligosacharides: structural and physiological aspects / A. M. Fiat, P. Jolles // Mol. Biochem. 1989. V.87. - P.5-30.

349. Forster, M. Die Milchproteingene des Rindes und ihre biotechnologischen Nutzungsmoglichkeiten / M. Forser, R. Graml // Bauer Landwirt. Jahrb. 1991 - V.68. - Р.255-265/

350. Fox, F. R. Heat induced coagulation of milk / F. R. Fox // In Developments in Dairy Chemistry. London.-1982.-V. l.-P. 189-228.

351. Fox, P. Milk proteines: molecular, colloid and functional properties / P. Fox, D. M. Mullvichil // J. Dairy Res. 1982 - V. 49.-P. 678-693.

352. Frank, G. On the primary structure of p-Lg / G. Frank, G. Braunitzer // Hoppe-Seiler's L. Phisiol. Chem.-1967.-P. 348.

353. Fraser, D. L. The efficiency of casein in utilization in dairy cows / D. L. Fraser et al. // Livestock Prod. Sci. 1990. - V.25. - P.67-78.

354. Freeman, A. Developmentt and potential of holstein breeding around the world / A. Freeman // Holstein Sc. Rep. Brattleboro. 1984. - Р.4-5/

355. Geoffrey, R. P. Influence of к-casein and P-lactoglobulin phenotype on the heat stability of milk / R. P. Geoffrey, К. H. Alastair, P. H. Jeremy // International Dairy Journal. 1999. - №9. - P375-376.

356. Godovae, S. J. A novel wild-type p-lactoglobulin W and its primary sequece / S. J. Godovae et al. // Biol. Chem. / Hoppe-Seyler. 1990. - V.371. -№3. -P.255-260.

357. Graml, R. Zuchtung auf Kasereitauglichtkeit der milch / R. Graml // Zuchtungskunde.-1988.-V.60.-P. 11-23.

358. Gravert, H. O. Genomanalyse und Michgualitat / H. O. Gravent // Schriftenr. D. Agrarwiss. Fakultat der Univ. Kiel. 1990. - B.72. - S. 147-154.

359. Gravert, H. O. The relevance of к-casein for genetic differences in cheese-making properties / H. O. Gravert, H. Schulte-Coerno, K. Oloffs //Swiss Federal Institute of Tech.-Switzerland, 1991.

360. Grones, M. L. TS A2, TS - D, R - and S - caseins: their isolation, composition and relationship to the в - and г - casein polymorph A2 and В / M. L. Grones et al. // J. Daiiy Sci. - 1973. - V.56. - P.558-568.

361. Grosclaude, F. Deterministe genetique des caseines kappa du lait de vasche; etroite liaison du locus kappa-casein avec les loci alfa SI-casein et beta-casein / F. Grosclaude, et al. // Comptes rendus de I academic des Sciences. -1965.-P.5299.

362. Grosclaude, F. Localisation des substitutions d'acides amines differenciant les variants A er В de la caseeine к bovine / F. Grosclaude et al. // Ann. Genet. Sel. Anim.-1972.-№ 4.-P. 515-521.

363. Grosclaude, F. Polymorphism of milk proteins: some biochemical and genetical aspects / F. Grosclaud // Proc. of the 18 th International Conference on animal blood groups (Leningrad). 1979. - V. 1. - P. 54-62.

364. Grosclaude, F. The role of casein polymorphisms. An example of QTL: the 6s 1-casein of the goat / F. Grosclaude, P. Martin // JSAG Conf. Inter. 1992/ -P. 187-200.

365. Hansen, H. The advantages of using Brown Swiss bloodlines / H. Hansen // The Cow International.- 1990 -№ 9.- P. 31.

366. Hartley, J. C. PCR detection and molecular identification of Chlamydiaceae species / J. C. Hartley et al. // J. Clin. Microbiol. 2001. - V.39. -P.3072-3079.

367. Hill, R. J. The major genetic variant macropeptides of к-casein. A comparison of their amino acid contents and trytic peptides / R. L. Hill, M. A. Naughton, R. G. Wake // Biophys. Acta. 1970. V.200. - P.267-274.

368. Hippell, P. Casein: monomers and polymers / P. Hippell, D. Waugh // Amer. Schem. Soc. 1955. - V.77.-P.4311

369. Hold, C. Primary and predicted secondary structures of the caseins in relation to their biological function / C. Hold, L. Sawver // Protein Engineer. -1988.-V.2.-P.251-259.

370. Holstein World. 1996. - V.12. P.29-31.

371. Home, D. S. Genetic polymorphism of к-casein and rennet coagulation time. Effect of serum phase components / D. S. Home; D. D. Muir // Milchwissenschaft.- 1994.-№. 49.- P.446-449.

372. Jakob, E. Genetic polymorphism of milk proteins / E. Jakob // Mlejelarstvo. 1994. - N.44. - P.197-217.

373. Jakob, E. Genetic polymorphism of milk proteins/ 2/ Allele and haplotype frequencies in Swiss cattle breeds / E. Jacob, Z. Puhan, R. Fries // Schweizerische Milchwirtschaftliche Forschung. 1994. - V.23. - P. 12-19.

374. Jakob, E. Technological properties of milk as influenced by genetic polymorphism of milk protein / E. Jakob, Z. Puhan // A review. International Dairy Journal. 1992. - V. 2. - P. 157-178.

375. Jennes, R. Development of Dairy Chemistry / R. Jennes // V.l (ed. by. P.F.Fox)., Applied Science Publishers, London-1982.-P. 83-114.

376. Jennes, R. Nomenclature of the proteins of bovine milk / R. Jennes, et al. //J. Dairy Sci. 1956. - V.39. - P.536.

377. Jing, L. Genetic polymorphism of milk protein and correlation with production traits / L. Jing L., L Manzhu // Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica.-1992.-№. 23.-P. 112-117.

378. Kaminski, S. Identification of SDUI polymorphism within 5 flanking region of bovine alpha-lactalbumin gene / S. Kaminski // Animal Science Papers and reports. 1999. - №17. - P.23-27.

379. Kaminski, S. Identyficacja genotupu beta-lactoglbuliny u buhajov przy pomocy metod genetyki molekularnej / S. Kaminski // Pr. I. mater. Zootechn. 1994. V. № 3. P. 103-104.

380. Kaminski, S. Kappa-casein genotyping of Polish Black-and-White x Holstein-Friesian bulls by polymerase chain reaction / S. Kaminski // Genet. Pol. 1993. V. 34. P. 65-72.

381. Kaminski, S. Use of the results of DNA restriction fragment lenght polymorphism analysis to determine the к-casein genotype in bulls / S. Kaminski //Prace i Materialy Zootechniczne, Zeszyt Specjalny.- 1994.- No. 3, P.99-101.

382. Kehrly, M. E. Leucocyte adhesion deficiency among Holstein cattle / M. E. Kehrly, D. E. Shuster, M. R. Ackermann // Cornelll Vet. 1992. - V.82. -P.103-109.

383. Kiddy, C. A. Gel electrophoresis in vertical polyacrylamide beds. Procedure II / C. A. Kiddy // Methods of gel electrophoresis of milk proteins / Eds. Swaisgood H. Dep. Of Food Sci. Norh Carolina Stste Univ. Raleigh. 1973. -P.16-17.

384. Kiddy, C. A. Gene frequencies in milk protein polymorphism in dairy cattle /С. A. Kiddy, R. E. Me Cann, W. W. Thatche // Imiminogenet. Lett., 1968. -5. P.150-152.

385. Kristiansen, K. R. Influence of genetic variants on milk composition and tehnological properties / K. R. Kristiansen // Brussels, Belgium; Inter. Dairy Federat.- 1990.- Vol. l.-P. 59.

386. Krzyzewski, J. Zwiazek miedzy genetycznym polimorfizmem bialek a wydajnoscia skladem chemicznym I parametrami technologicznymi melka / J. Krzyzewski, N. Strzalkowska, Z. Ryniewicz // Pr. i. Mat. Zootech. 1998. V.52. P. 7-36.

387. Langholz, H. J. High yielding cattle populations-concurring and compatible traits with special reference to reproductive efficiency / H. J. Langholz //Reprod. Domest. Anim.-1990.-V.25.-№5.-P.206-214.

388. Laurent, B. Le colostrum: A quoi sert-il, comment le prelever, comment l'utiliser / B. Laurent, C. Fabien, L. Celine // Bull. GTV. 2002. - № 17. - C. 3741.

389. Levesiel, H. Identification of the two common alleles of the bovine k-casein locus by the RFLP technique, using the enzyme Hindlll / H. Levesiel, L. Metenier//Genet. Sel. Evol.-1988.~V.20.-№2.-P.247-253.

390. Liberatori, J. Piedmontese cow milk: protein composition and clotting aptitude evaluation / J. Liberatori et al.// Brussels, Belgium; Inter. Dairy Federat.-1990.-Vol. l.-P. 61.

391. Liever, R. Characteristics and genetic impact of U.S. Holsteins / R. Liever // Holsteins Science Report. 1978. — P. 1-4.

392. Lin, C. Relationships of milk protein types to lifetime performance / C. Lin et al.// J. Dairy Sci.-1989.-V.72.-P.3085-3090.

393. Ma, C.-Y. Effect of genetic variants of (3-lactoglobulin and к-casein on thermostability of P-lactoglobulin in model system / C.-Y. Ma et al. // Brussels, Belgium; Inter. Dairy Federat.-1990.-V. 2.- P. 359.

394. Маска, I. Genetuicka anal za kappa-kazeinu v mlece skotu / I. Maska // Zivo e Vyroba.-1992.-37.-№8.-P.645-651.

395. Manson, W. Bovine asO-casein; a phosphorylated homologue of asl-casein / W. Manson, T. Carolan, W. D. Annan // Eur. J. Biochem. 1977. - V.78. -P.411-417.

396. Mariani, P. II tempo di coagulazone del latte in rapporto alle varianti genetiche delle caseine (3 et к / P. Mariani, M. Leoni // Annali della facolta di Medicina Veterinaria, Uneversita di Parma.-1985.- №. 5.-P. 185-195.

397. Mariani, P. La costistenza del coagulo in latti caratterizzati dalle varianti A e В della beta-lattoglobulina / Mariani P et al. // L'industria del Latte.- 1982.-№ 22.- P. 9-12.

398. Mariani, P. Rennet coagulation properties of cow milk in relation to asi-casein genotypes / P. Mariani, P. Bonatti, M. Pecorari // Scienza e Tecnica Lattiero-Casearia.-1988.- №. 39.-P. 431-438.

399. Mariani, P. Varianti genetiche delle proteine gel cattle nella razza Rendena / P. Mariani, O. Russo // Rivists di Zoot. Eveter. 1975. - No 4. - P.345-348.

400. Matthes, W. Flitteraufhaufnahme Lind Wachstum vor SMR und Fleischrindbullen in Abhangigkein vom Futterungsniveau / W. Matthes // Tierzucht. 1990. - №2. - Bd.44. - S.51-53.

401. Mc Kenzie, H. A. Milk proteins / H. A. Mc Kenzie // Chem. Mollicular Biology. Acad. Press, New York - London, 1971. - №2. - P.257.

402. Mc Lean, D. M. Effect of milk protein genetic variants and composition on heat stability of milk / D. M. Mc Lean et al. // J. Dairy Res.- 1987.-№. 54.-P. 219-235.

403. Mc Lean, D. M. Effect of milk protein genetic variants on milk yield and composition / D. M. Mc Lean, E. R. Graham, R. W. Ponzoni // J. Dairy Res. -1984.-№51.-P.531-546.

404. Mc. Allister, A. Are to days dairy cattle breeding programs suitable for tomorrow production requirement / A. Mc. Allister // Canad. J. Anim. Sc. — 1980. V.60. №2. -P.253-264.

405. McKenzie, G. H. Heat-induced interaction of P-lactoglobulin and к-casein / G. H. McKenzie, R. S. Norton, W. H. Sawyer // J. Dairy Res.- 1971.- №. 38.- P. 343-351.

406. Medrano, J. F. Genotyping of bovine kappa-casein loci following DNA sequence amplification / J. F. Medrano, E. Aguilar-Cordova // Bio. Technology. -1990. -V.8. P.144-145.

407. Mellender, O. Elektrophoretishe untersuchungen von casein / O. Mellender // Biochem. L. 1939. V.300. - S.240.

408. Mercier, J.C. Structure primaire de la caseine asl bovine / J. C. Mercier, F. Grosclaude, B. Ribadeau-Dumas // Sequence Complete. Eur. J. Biochem. -1971. V.23. P.41-45.

409. Michalak, W. Genetyczne zroznicowanie bialek mleka-przyszlosc selekeji bydlla / W. Michalak Bazyli // Prs. Hod. 1994. - 62. N 6. - C. 1-2/ - Пол.

410. Michalak, W. Polimorfizm bialek mleka w aspckcic pracy hodowlancj nad bydlcm czarao-bialym / W. Michalak, H. Siuda // Prace i Matcrialy Zootechniczne.-1978.-V. 15. P. 75-87.

411. Morini, D. Properties of ripered cheese in cheesemaking experiments with milk characterised by k-kasein variants A and В / D. Morini, G. Losi, G. Cactacweti // Sciera e Technica Zattiero-Casearia. 1979. № 30. P. 243-262.

412. Nebola, M. The distribution of kappa Cn alleles А, В and E in cattle / M. Nebola, J. Dvorac, Z. Havillek// Anim. Genet. 1994. 25. Suppl. N 2 P. 15.

413. Neelin, J. M. Variants of к-casein revealed by improved starch gel electrophoresis / J. M. Neelin // Journal of Dairy Science. 1964. - V.47. - P. 506510.

414. Neimann-Sorenson, A. Milk protein as breeding objective in Danish cattle breeding /А. Neimann-Sorenson, J. Pederson, L. S. Christensen // Tierzucht und Zuchtungsbiol. 1987. -No 1-2. - S.74-81.

415. Newton, C. R. Factors affecting molecular characteristics of whey protein gelation / C. R. Newton et al.// Nucl. Acid Res. 1989. 17. 2503-2516.

416. Ng.-Kwai-Hang, K. F. Relationships between milk protein polymorphisms and major milk constituents in Holstein-Fresian cows / K. F. Ng.-Kwai-Hang et al. // J. Dairy Sci.-1986.-V.69.-P. 22-26.

417. Ng-Kwai Hang, K.F. Genetic variants of milk proteins and cheese yield / K. F. Ng-Kwai Hang // IDF Seminar Cheese yield and factors affecting its control. -Cork.-1993.-P. 160-166.

418. Ng-Kwai-Hang, K. F. Effect of genetic variants of к-casein and (3-casein on stability of calcium-caseinate model systems / K. F. Ng-Kwai-Hang, G. L. Imafidon //Brussels, Belgium; Inter. Dairy Federat.- 1990 P. 359.

419. Ng-Kwai-Hang, K. F. Genetic polymorphism of milk proteins:Relationships with production traits, milk cjmposition and technological properties / K. F. Ng-Kwai-Hang // Animal Science. 1998. - V.78. - P.131-145

420. Ng-Kwai-Hang, K. F. Genetic variants of milk proteins and cheese yield / K. F. Ng-Kwai-Hang // Brussels, Belgium; Inter. Dairy Federat.- 1994.-P. 160166.

421. Ng-Kwai-Hang, K. F. Rapid separation and quantification of major caseins and whey proteins of bovine milk by polyacrylamide gel electrophoresis /

422. К. F. Ng-Kwai-Hang, E. M. Kroeker // J. Dairy Sci. 1984. - V.67. - No 12. -P.3052-3056.

423. Ng-Kwai-Hang, K.F. Association of genetic variants of casein and milk serum proteins with milk, fat and protein production by dairy cattle / K. F. Ng-Kwai et al. // Journal of Dairy Science. 1984. - V.67. - P.835-840.

424. Nuyts, V. Comparison of 3 more frequent casein haplotypes occuring in Normande breed for cheesemaking / V. Nuyts, A.Delacroix-Buchet // Swiss Federal Institute of Technology, Zurich, Switzerland.-1991. — P. 197-203.

425. Pabst K. Effects of milk composition and genetic polymorphism on cheese composition / K. Pabst // J. Dairy Sci. 1992. - V. 69: P. 2533-2542.

426. Pagnacco, G. Effect of casein and P-lactoglobulin genetic variants on renneting properties of milk / G. Pagnacco, A. Caroli // J. Dairy Res.-1987.-№. 54.- P. 479-485.

427. Palmer, A. The preparation of crystalline globulin from the albumin fraction of cow's milk / A. Palmer // J. Biol. Chem. 1934. - V.104. - P359.

428. Parnell-Clunies, E. Heat-induced changes in milk processed dy vat and continuous heating systems / E. Parnell-Clunies, Y. Kakuda, D. Irvine // J. Dairy Sci.- 1988.-№. 71.-P. 1472-1483.

429. Perry, B.N. Restriction fragment length polymorphisms in bovine milk protein genes / B. N. Perry et al. // Animal Production. 1989. - V.48. - P.661.

430. Peterson, R. F. Detection of new types of P-casein by polyacrylamide gel electrophoresis at acid pH: A proposed nomenclature / R. F. Peterson, F. C. Kopfler // Biochem. And Biophis. Res. Commun. 1966. - V.22. - No 4. - P.388-392.

431. Peterson, R.F. Detection of new types of в-casein by polyacrylamide gel electrophoresis at acid pH: A proposed nomenclature / R. F. Peterson, F. S. Kopler // Biochem. And Biophis. Res. Commun. 1966. - V.22. - No 4. - P.388-392.

432. Pinder, S.J. Analysis of polymorphism in the bovine caseine genes by use of the polymerase chain reaction / S. J. Pinder et al. // Animal Genetics. -1991.-V.22. P. 11-20.

433. Poulitiek M.D. Starch gel electrophoresis in a discontinuous system of buffers /М. D. Poulitiek//Nature. 1957. - V.180. -N. 4600. - P. 1477-1479.

434. Prinzenberg, E. M. Molecular genetic characterization of new bovine kappa-casein alleles CSN3F and CSN3G and genotyping by PCR-RFLP / E. M. Prinzenberg et al. // Animal Genetics. 1996. - V.27. - P.347-349.

435. Puhan, Z. Genetic variants of milk proteins and cheese yield. In Cheese yield and factors affecting its control / Z. Puhan, E. Jacob // Brussels, Belgium; Inter. Dairy Federat.-1994.-P. 111-122.

436. Rahali, V. Influence des variants genetiques de la P-lactodlobuline et la к-caseine sur la composition du lait et son aptitude fromagere / V. Rahali, J. L/ Menard // Le lait.- 1991.- №. 71.- P. 275-297.

437. Rampilli, M. Relazioni tra genotipi lattoproteici, composizione del latte nel corso della lattazione / V. Rampilli et al. // Sci. Tecnica Lattiero-Casearia. -1988. V.39. - №4. - P.262-279.

438. Rando, A., DiGregorio P., Masina P. Identification of bovine k-casein genotypes on the DNA level / A. Rando, P. Di.Gregoroni, P. Masina // Animal Genetics. 1988. - V.19. - P.51-54.

439. Recio, I. Capillary electroforetic analysis of genetic variants of milk proteins from different species / I. Recio et all. // Journal of Chromotography.-1997.-№ 768.-P. 47-56.

440. Reimerdes, E. H. Die quantitative Bestimmug der genetischen Varianten von в-lactoglobulin in Milch / E. H. Reimerdes, H. A. Mehrens // Milchwissenschaft. 1978. - M.33. - H.6. - S.345-348.

441. Rincon, G. Single nucleotide polymorphism genotyping of bovine milk protein genes using the tetra-primer ARMS-PCR / G. Rincon, J. F. Medrano // J. Anim. Breed. Genet. 2003. -V. 120 - P. 331-337.

442. Rogne S. A method for к-casein qeenotyping of bulls / S. Rogne et al. // Animal Genetics. 1989. - V.20. - P.317-321.

443. Ron, M. Effect of sire's milk protein genotype on daughter performance for production traits of Israel Holsteins / M. Ron et al. // ISAG Conf. Inter. 1992.

444. Sabour, M. Association between milk protein genetic variants and genetic values of Canadian Holstein bulls for milk yield traits / M.P. Sabour, C.Y. Lin, A.J. Lee, AJ. McAllister // J Dairy Science.- 1996.- V.79.- № .6,- P. 1050-1056.

445. Sabour, M. Effects of selection practiced on the frequencies of k-casein and b-lactoglobulin genotypes in Canadian artificial insemination bulls / M. Sabour et al. // J. Dairy Sci.-1993.-V.76.-P.274-280.

446. Sadler, A. M. Acid production and curd toughness in milks of different asi-casein types / Sadler A.M et al. // J. Dairy Sci. 1968. - V.51. - P.28-30.

447. Saiki, R. K. Enzymatic amplification of B-globin genomic sequences and restriction site anaiysis for diagnosis of sickle cell anemia / R. K. Saiki et al. // Ibid. 1985. Vol. 230. P. 1350-1354.

448. Saiki, R. K. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase / R. K. Saiki et al. // Science. 1988.- V.239. -P.487-491.

449. Samarzija D. Polymorphism of milk protein in cheese production / D. Samarzija et al. // Mluekarstvo. 1992. - V.41. - P.319-327.

450. Samarzija, D. Polymorphism of milk protein in cheese production / D. Samarzija et al. // Mluekarstvo. 1992. 41. - P.319-327.

451. Sawyer, W. H. Complecs between (3-lactoglobulin and к-casein. A review / W. H. Sawyer // J. Dairy Sci.- 1969.- №. 52.-P. 1347-1353.

452. Schaar, J. Effects of genetic variants of k-casein and P-laktoglobulin on cheesmaking / J. Schaar, B. Hansson, H. Pettersson // Journal of Dairy Research. -1985.-V.52.-P.429-437.

453. Schaar, J. Effects of k-casein genetic variants and lactation number on the renneting properties of individual milks / J. Schaar // Journal of Dairy Research. 1984. -V.51. - P.397- 406.

454. Schaar, J. Studies of k-casein and p lactoglobulin polymorphism and on milk plasma: Thesis / J. Shaar // Swedish Uneversity of Agricultural Sciences. — Uppsala. 1986.-71p.

455. Schlieben, S. Genotyping of bovine k-casein (k-Cn A, k-Cn В, k-Cn C, k-Cn E) following DNA sequence amplification and direct sequencing of k-Cn E PCR product / S. Schlieben, G. Erhardt, B. Senft // Anim. Genet.-1991.-V/22.-P.333-342.

456. Schmidt D.G. Starch -del electrophoresis of к-casein / D. G. Schmidt // Biochem. Biophys. Acta (Amst).- 1964.- V.90.-P.411-414.

457. Schmidt, D. G. Starch gel electrophoresis of k-casein / D. G Schmidt // Biochemica et Biophysica Acta. 1964. - V.90. - P.411-414.

458. Seibert, B. Procedure for simultaneous phenotyping of genetic variants in cow's milk by isoelectric focusing / B. Seibert, G. Erhardt. B. Senft // Animal Blood Groups and Biochemical Genetics.- 1985.-№. 16.-P. 183-191.

459. Seibert, B. Detection of a new k-casein variant in cow's milk / B. Seibert, G. Erhardt, B. Senft // Animal Genetics. 1987.- V.18. - P.269-272.

460. Shuster, D. E. Identification and prevalence of a genetic defect that causes leukocyte adhesion deficiency in Holstein cattle / D. E. Shuster et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. - V.89. -P.9225-9229.

461. Stasio, L. Di. Studies on protein polymorphism in pig, horses and cattle Blood groups of animals / L. Di. Stasio. P. Merlin // Proceedings 9 European animal blood group conference. Prague. - 1979. - Р.279-285/

462. Steger, A. Zuchterreisc durch Aiiierika / A. Steger // Osterreichisches Braunviech. 1992. - №68. - P. 14-15.

463. Taha, F. Milk protein polymorphism in swiss dairy cattle / F. Taha, Z. Puhan // Agr. Sci. Finl. 1993. - V.2. - № 5. - P. 423-429.

464. Tashev, D. Hygroscopicity of casein from different genotypes of Holstein Friesian cow / D. Tashev // Brussels, Belgium; Inter. Dairy Federat.-1990.-V. l.-P. 226.

465. Tejedor, T. Estimacion del efecto de arrastre en loci de proteinas lacteas studio en genado Holstein-fresian explotado en Espana / T. Tejedor, I. Alfarriba // Arch Zootech.-1987.-V.3 6-№ 135.-P.121-136.

466. Tervala, H. L. Factors affecting renneting properties of milk / H. L. Tervala, V. Antila, J. Syvajarvi // Meijeritieteellinen Aikakauskirja.- 1985.-№ 43.-P. 16-25.

467. Thompson, M. P. Genetic polymorphism in casein of cow s milk. III. Isolation and properties of asl -caseins A,B, and С / M. P. Tompson, C. A. Kiddy // J. Dairy Sci. 1964. - V.47. - P.626.

468. Thompson, M. P. Genetic variants of the milk proteins / M. P. Thompson, N. M. Farell // In: Lactation. N. Y.: Acad. Press, 1974.-V. 3-P. 109132.

469. Thompson, M. P. Nomenclature of the proteins of bovine milk fist revision / M. P. Thompson et al. // J. Dairy Sci. - 1965. - V.48 - P. 159.

470. Thompson, M.P. Variation on the asl-casein fraction of individual cow's milk / Thompson M.P et al. Nature. - 1969. - V. 195. - P. 1001.

471. Tong, P.S. Effect of genetic variants of milk proteins on the yield of Cheddar cheese / P. S. Tong, N. V. Farkye, J. F. Medrano // Brussels , Belgium; Inter. Dairy Federal. 1994. - P.179-187.

472. Vagerud, G.E. Cow milk protein genotypes and technological properties / G. E. Vagerud et al.// Materials of International Seminar on "milk proteinvariants, molecular biology, technological properties, animal breeding". 1992. Hanko. 2-4 September.

473. Vagerud, G.E. Cow milk protein genotypes: quality and stability of raw milk, pasteurized and fermented milk / G. E. Vagerud, et al. //International Dairy Journal. 1999. - V.9. - P.399-400.

474. Van Eenennaam, A. Differences in allelic protein expression in the milk of heterozygous k-casein cows / A. Van Eenennaam, J. F. Medrano // J. Dairy Sci. 1991. V. 74. P. 1491-1496.

475. Van Eenennaam, A. Milk protein polymorphisms in California dairy cattle / A. Van Eentnnaam // J. Dairy Science.- 1991.- V. 74.- P. 1730-1742.

476. Vandenberg, G. Genetic polymorphism к-lactoglobulin in relation of milk composition and cheese-making properties / G. Vandenberg, H. Bevenhuis, P. J. De Koning // Brussels, Belgium; Inter. Dairy Federet. 1990. - P. 123-133.

477. Varindra, S. S. Physicochemical properties of native and reassembled casein micelles from buffalo (Bubalis bubalis) milk / S.S.Varindra, S. M. Sood // Australian Journal of Dairy Technology.-1994.-№ 49.-P. 79-81.

478. Vasicek D. Genotyping of k-casein in different cattle breeds in Slovakia / D. Vasicek et al. // Zivocisna vyroba. 1995. - V. 40.- № 6. - P.241-244.

479. Vegarud, R. Genetic variants of the influence on quality of milk and cultured milk protein / R. Vegarud R. et al // Inter. Dairy Cong.-Montreal, 1990, V.l -P.91

480. Velmala, R. Molecular geneic polymorphism at the k-casein and B-lactoblobulin loci in Finish diary bulls / R. Velmala, E. A. Mantysaari, A. Maki-Tanila // Ari.Sci.Finl. 1993. V. 2. P. 431-435.

481. Vidonie, V. Fromene u proizvodnji mleka i nekim svojstvima prodnosti holstajn goveda/V. Vidonie // Stocarstvo.-1990.-V. 44.-№ 5-6.-S. 149-160.

482. Voglino, G. F. Association between asl-, в- and к-casein loci in two Italian cattle breeds / G. F. Voglino, I. Carignano // Anim. Blood Grps Biochem. Genet. 1975. - V.6. - P.175-183.

483. Wake, R. G. Analysis of casein fractions by zone electrophoresis in concentrated urea / R. G. Wake, R. L.Baldwin // Biochem. Biophys. Acta. 1961. -V.47. - P225

484. Walawski, K. Beta-lactoglobulin and kappa-casein polymorphism in relation to production traits and technological properties of milk in the herd of Polish Black and White cows / K. Walawski // Genet. Pol. -1994. - V.35. - P.93-108.

485. Waugh, D. Formation and structure of casein / D. Waugh //In: Milk protein chemistry and molecular biology.-Acad. Press. NY.-1971/ -Р.З-85/

486. Waugh, D. The interactions of asl-, в-, к-casein in micelle formation / D. Waugh // Disc. Faraday Soc. 1958. - V.25. - P.186.

487. Weighardt, F. A simple procedure for enhancing PCR specificity / F. Weighardt, G. Biamorti, S. Riva// PCR Methods Appl. 1993. V. 3. N 1. P. 77-80.

488. Widmer, Sh. The future genetics / Sh. Widmer // Dairy herd management. 1981. - №187. -P.31-36.

489. Woychik, J. H. Chromatography isolation and particle. Characterization of reduced к-casein components / J. Н/ Woychik, E. B. Kalan, M. E. Noelken // Biochemistry/ 1966. - V.5 - P.2276-2282.

490. Woychik, J. H. Phenotyping k-caseins / J. H. Woychik // Journal of Dairy Science. 1965.- V. 48.- P.496-497.

491. Zadworny, D. The identification of the kappa-casein genotype in the Holstein dairy cattle using the polymerase chain reaction / D. Zadworny, U. Kuhlein // Theor. And Appl. Genet.- 1990.-V. 80.- P. 631 634.

492. Zwierzchowski, L. Metody RFLP do badan nad polimorfizmem genetiycznym kazein u bydla / L. Zwierzchowski, S. Zastosowane // Pr. I mater. Zootechn. 1994. Zesz. Spec. 3. P. 95-97.

Информация о работе

Ахметов, Тахир Мунавирович
доктора биологических наук
Казань, 2009
ВАК 06.02.01

Диссертация

Использование методов маркер-вспомогательной селекции в молочном скотоводстве Республики Татарстан - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы