Эволюция клещевого энцефалита в Центральном федеральном округе России. Моделирование смены подтипов возбудителя в эксперименте.

Герасимов, Сергей Геннадьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Эволюция клещевого энцефалита в Центральном федеральном округе России. Моделирование смены подтипов возбудителя в эксперименте.
ВАК РФ 03.02.02, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Эволюция клещевого энцефалита в Центральном федеральном округе России. Моделирование смены подтипов возбудителя в эксперименте."

На правах рукописи й--"

Герасимов Сергей Геннадьевич

Эволюция клещевого энцефалита в Центральном федеральном округе России. Моделирование смены подтипов возбудителя в эксперименте

03.02.02 - Вирусология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

6 ЛЕН 2012

Москва - 2012

005056687

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П.Чумакова» Российской академии медицинских наук

Научные руководители:

Доктор медицинских наук, профессор Ванда Вацлавовна Погодина Доктор медицинских наук Татьяна Александровна Дружинина

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Дерябин Петр Григорьевич Доктор медицинских наук, профессор Воробьева Мая Сергеевна

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, г. Владивосток

диссертационного совета Д 001.026.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П.Чумакова» Российской академии медицинских наук по адресу 142782, г. Москва, поселение Московский, нос. Институт полиомиелита.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П.Чумакова» Российской академии медицинских наук.

Защита состоится

2012 г. в

часов на заседании

Автореферат разослан _ ноября 2012 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат биологических наук

О.А. Медведкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

На большей части Российской Федерации (РФ) проблема клещевого энцефалита (КЭ) остается актуальной на современном этапе, несмотря на общую тенденцию к снижению заболеваемости и совершенствование методов лечения и профилактики данной инфекции (Онищенко Г.Г., 2007).

В ряде регионов РФ отмечаются признаки эволюции заболевания -расширение нозоареала инфекции (Злобин В.И. и др., 2007, Коротков Ю.С. и ДР., 2006, 2008, Погодина В.В. и др., 2005), изменение групп высокого риска заболевания (Жукова Н.Г. и др., 2002; Злобин В.И. и др., 2007; Погодина В.В. и др., 2005), патоморфоз (Волкова Л.И. и др., 2003).

Эволюционные преобразования происходят и в структуре популяции

возбудителя, смена подтипов ВКЭ - дальневосточного на сибирский в ряде

регионов РФ (Колясникова Н.М., 2008; Погодина В.В. и др., 2006, 2007).

Последний доминирует на большей части территории РФ (Адельшин Р.В. и

ДР., 2006, Верхозина М.М. и др., 2006; Погодина В.В., 2005), за исключением

Дальнего Востока - Хабаровский и Приморский края (Леонова Г.Н., Беликов

С.И. и др., 2007), где преобладает дальневосточный подтип ВКЭ. В некоторых

регионах РФ имеет место коциркуляция двух и всех трех подтипов

возбудителя - дальневосточного, сибирского и европейского - в Иркутской,

Читинской обл., Бурятии (Вотяков В.И. и др., 2002; Злобин В.И. и др., 2003;

Погодина В.В. и др., 2004; Андаев Е.И. и др., 2007; Верхозина М.М. и др.!

2007). На этих территориях из клещей bodes persulcatus, от больных и

погибших людей были выделены так называемые политиповые штаммы,

содержащие последовательности геномов двух и трех подтипов ВКЭ (Андаев

Е.И. и др., 2007; Карань Л.С. и др., 2007; Колясникова Н.М., 2008; Погодина

В.В. и др. 2007). Политиповые штаммы 178-79 и 886-84 и подобные им

(Андаев Е.И. и др., 2007; Верхозина М.М., Злобин В.И. и др., 2007;, Карань

Л.С., Маленко Г.В. и др., 2007, Верхозина М.М., Козлова И.В. и др., 2009;

Хаснатинов М.А. и др., 2010) отличаются уникальной генетической структурой.

Признаки эволюции заболевания, а также изменения структуры популяции возбудителя мало изучены на эндемичных территориях Центрального Федерального округа (ЦФО) РФ, в частности, в Ярославской области. На территории другого эндемичного по КЭ региона ЦФО -Костромской области - структура популяции ВКЭ не исследовалась.

Каким образом сибирский подтип стал доминирующим компонентом природных популяций ВКЭ, а также механизм формирования политиповых штаммов, их свойства и влияние на клиническую картину заболевания в настоящее время остаются неизученными.

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось изучение эволюции КЭ на территории ЦФО РФ (Ярославская область) за 30-летний период - оценка изменений эпидситуации по КЭ и структуры популяции возбудителя; экспериментальное изучение особенностей течения смешанной инфекции дальневосточного и сибирского подтипов ВКЭ для выяснения условий, способствующих смене подтипов ВКЭ, и образованию политиповых штаммов.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Мониторинг популяции ВКЭ на основе генотипирования хронологических рядов штаммов ВКЭ и изолятов РНК, выделенных на территории Ярославской области за 30-летний период. Выявление тенденций эволюции популяции ВКЭ;

2. Оценка эпидемиологической ситуации по КЭ в Ярославской области на современном этапе (1992-2012 гг.). Выявление признаков эволюции заболевания;

3. Изучение этиологии очаговых форм КЭ с летальным исходом на территории региона;

4. Изучение нейровирулентности, нейроинвазивности и нейротропности ярославских штаммов ВКЭ сибирского подтипа и политиповых штаммов, содержащих последовательности генома двух подтипов;

5. Оценка структуры популяции ВКЭ на территории Костромской области;

6. Изучение взаимодействия дальневосточного и сибирского подтипов ВКЭ при экспериментальной смешанной инфекции. Выявление условий, способствующих проявлению селективных преимуществ одного из подтипов. Моделирование образования микст-вариантов двух подтипов ВКЭ в эксперименте.

Научная новизна

Впервые проведен мониторинг популяций ВКЭ, распространенных на территории ЦФО (Ярославская область) в течение 1983-2012 гг. с использованием молекулярно-биологических методов. В ранний период исследований наблюдалась симпатрия двух подтипов ВКЭ - дальневосточного и сибирского, с конца 90-х годов XX века доминирующим стал сибирский подтип ВКЭ.

Впервые выявлены признаки эволюции КЭ на территории ЦФО (Ярославская обл.): смена доминирующего подтипа возбудителя, снижение активности очагов в северных районах, показано ведущее эпидемиологическое значение антропогенно трансформированных природных и антропургических очагов с локализацией в городах Ярославль, Рыбинск и прилегающих районах. Отмечена довольно высокая летальность при КЭ - 4,25%, высокая частота алиментарного заражения КЭ - 7,8%, с летальностью 10,8%;

Показана роль сибирского подтипа в этиологии тяжелых очаговых форм инфекции с летальным исходом как при трансмиссивном, так и при алиментарном путях передачи возбудителя.

Показаны генотипическая и фенотипическая гетерогенность штаммов ВКЭ, распространенных в Ярославской области. Штаммы сибирского подтипа относятся к европейскому топоварианту, часть из них входит в кластеры вологодских штаммов, часть - близка к штаммам, выделенным в Прибалтике и Финляндии, а также на Урале. Установлены различия в степени нейровирулентности и нейроинвазивности ярославских штаммов ВКЭ;

Впервые на территории Костромской области обнаружен сибирский подтип ВКЭ.

Впервые в экспериментах in vivo изучено взаимодействие сибирского и дальневосточного подтипов ВКЭ. Установлено, что при смешанной инфекции возможно развитие эффектов синергизма и подавления инфекции. Выявлены факторы, влияющие на течение и исход взаимодействия: вид животного, способ и последовательность заражения, свойства штаммов-партнеров, органы-мишени. Впервые установлено, что между вирусными популяциями двух подтипов ВКЭ (как и между разными видами вирусов) могут иметь место независимая репродукция и конкурентное исключение; выявлены условия, при которых тот или иной подтип получает селективные преимущества, сибирский подтип приобретает их при латентной инфекции. Впервые в экспериментах моделировано образование микст-вариантов ВКЭ. Изучены свойства политиповых штаммов, изолированных из клещей, от больных и погибших людей.

Практическая значимость работы

На основании изучения особенностей эпидемиологической ситуации в Ярославской области и исследования клещей из очагов КЭ и от населения были изданы нормативные документы: Постановление № 3 от 30.03.2010 г. "Об усилении мероприятий по профилактике клещевых трансмиссивных инфекций в 2010 году", Приказы к региональному календарю прививок №984 (от. 10.08.2010) и №4119 (от 18.08.2010) Об утверждении Рекомендуемого перечня профилактических прививок и перечня прививок по эпидемическим показаниям Ярославской области, ПРИКАЗ № 314/851 от 17.05.2012 г. «Об обеспечении организации отдыха, оздоровления и занятости детей и подростков в 2012 г.» Материалы о смене подтипов ВКЭ оценены службой Роспотребнадзора РФ как значимый факт, способный оказывать влияние на проводимые профилактические мероприятия, что было отражено в Постановлении Главного санитарного врача РФ от 12 мая 2011 г. №53 «Об

усовершенствовании эпидемиологического надзора и профилактических мероприятий в отношении клещевого вирусного энцефалита».

8 штаммов ВКЭ, изученных в данной работе, депонированы в международный компьютерный банк данных СепВапк. ОШр:/Лу\у\у.псМ. 111т, тк. еоу/СепНапк): А.Ш3854, АЛ63857, АЛ63859, Р.Ш4144, ^214145, Р1214146, ¥ПЫЫ1, ^845440.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Впервые на территории ЦФО (Ярославская область) проведен мониторинг структуры популяции ВКЭ на основе генотипирования хронологических рядов штаммов и изолятов РНК ВКЭ. Показано изменение структуры вирусной популяции с тенденцией замены дальневосточного подтипа сибирским подтипом ВКЭ.

2. Изучение особенностей эпидемиологической ситуации по КЭ в Ярославской области за многолетний период выявило проявления эволюции КЭ: перераспределение мест массового заражения, изменение распространенности КЭ среди отдельных групп населения, территорий области и ландшафтных зон.

3. Показано, что штаммы сибирского подтипа ВКЭ, относящиеся к европейскому топоварианту, вызывают очаговые формы КЭ с тяжелым течением и летальным исходом.

4. Установлено, что в период симпатрии сибирского и дальневосточного подтипов ВКЭ изолируются политиповые штаммы, которые содержат генетический материал двух подтипов и составляют значительную часть генофонда ВКЭ (17%);

5. Впервые в экспериментах на лабораторных животных моделированы феномены смены подтипов ВКЭ и формирования микст-вариантов. Селективные преимущества сибирского подтипа проявляются при латентном течении инфекции.

Апробация работы

Основные результаты работы представлены на конференциях молодых ученых в ФГБУ «ИПВЭ им.М.П.Чумакова» РАМН (2010 и 2011 гг.), на заседании общества микробиологов и эпидемиологов на базе ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Министерства здравоохранения и социального развития РФ, посвященном актуальным проблемам клещевого энцефалита на современном этапе (2011 г.), на Научной конференции, посвященной 120-й годовщине открытия вирусов великим русским ученым Д.И. Ивановским «Рождение и развитие вирусологии - история изучения новых и возвращающихся вирусных инфекций» (2012 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, i том числе 5 - в изданиях, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит и введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы. В работе, использованы эпидемиологические вирусологические и статистические методы исследования. Для анализ; эпидситуации по КЭ в Ярославской области и выявления признаков эволюци] заболевания использованы отчетные материалы Управлени Роспотребнадзора в Ярославской области, данные лабораторных исследовани] по КЭ лаборатории особо опасных инфекций ФБУЗ «Центр гигиены i эпидемиологии в Ярославской области»; медицинские карты стационарног больного Ф. № 003-у и экспедиционные отчеты лаборатории иммунологи] энцефалитов (в настоящее время лаб. клещевого энцефалита и други вирусных энцефалитов) ИПВЭ им. М.П. Чумакова.

Для изучения молекулярной эпидемиологии КЭ на территории регион исследовали клещей I. persulcatus и Dermacentor reticulatus, собранных природных очагах КЭ Ярославской области, а также трупный материа (участки ЦНС погибших больных). Для изучения структуры популяци возбудителя КЭ в Ярославской области исследована коллекция штаммов BKS

созданная в ИПВЭ им. М.П. Чумакова, а также штаммы ВКЭ, выделенные в период исследований. Изоляция современных штаммов ВКЭ, изучение их свойств проводились на базе ФГБУ «ИПВЭ им.М.П.Чумакова» РАМН. Суспензии клещей готовили преимущественно из индивидуальных особей имаго и нимф клещей, а также из пулов по 10 особей и суспендировали в 1 мл среды 199 на растворе Эрла. В работе использованы 2 вида животных -рандомбрендные мыши массой 5-7 г. и сирийские хомяки массой 35-40 и 60-65 г. Работу на животных выполняли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» с разрешения этического комитета ФГБУ «ИПВЭ им.М.П.Чумакова» РАМН.

Мышей заражали в мозг, вводя 0,03 мл вируссодержащей суспензии, и под кожу - 0,25 мл. Хомяком вводили по 0,05 мл вируссодержащей суспензии при заражении в мозг и 0,25 мл - при подкожном заражении. Срок наблюдения за мышами составлял 14 дней, за хомяками - 30 дней (взрослые) и 45-50 дней (подростки).

Нейровирулентность штаммов для животных оценивалась путем интрацеребрального введения вируссодержащей суспензии. В опытах титрования на мышах и культуре ткани СПЭВ по цитопатическому действию титры вируса определяли по методу полных кумулятивов Рида и Менча и выражали в 18ЛД5о/мл и 1ёТЦЦ5о/мл. Нейровирулентность штаммов для сирийских хомяков оценивалась путем интрацеребрального введения в мозг массивной дозы вируса - 105-10б ЛДзо/мл. Критериями оценки служили процент гибели животных и средняя продолжительность жизни (СПЖ).

Нейроинвазивность оценивали по индексу инвазивности (ИИ), который отражает разность между титрами вируса при церебральном и подкожном заражении мышей (1в ЛД5о/мл). Значения ИИ в пределах 1-2,5 ' свидетельствовало о выраженных инвазивных свойствах штамма и способности преодолевать гематоэнцефалический барьер, проникать и размножаться в ЦНС. Значения ИИ более 3 указывали на сниженную инвазивную способность штамма.

Молекулярно-генетические исследования проводились на базе ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора РФ, лаборатория эпидемиологии природно-очаговых инфекций под руководством Л.С. Карань. Для детекции и генотипирования ВКЭ клещах и тканях лабораторных животных использован метод ОТ-ПЦР в режиме реального времени с гибридизационно-флуоресцентной детекцией с генотипспецифическими зондами. В работе использованы разные методики подготовки проб, в зависимости от вида материала. Выделение РНК вируса из клеща осуществляли с помощью набора реагентов «РИБО-преп»; выделение РНК из 10% мозговой суспензии - набор; «РИБОЗОЛЬ-В». Обратную транскрипцию проводили при помощи набор, реагентов «РЕВЕРТА-Ь-ЮО» (ЦНИИЭ Роспотребнадзора РФ, Москва). РНК ВКЭ детектировали в одноступенчатой ОТ-ПЦР в режиме реального времени.

Для количественной ПЦР с определением концентрации сибирского I дальневосточного подтипов ВКЭ при смешанной инфекции использовалас: методика подсчета копий РНК/мл. (Карань Л.С. и др., 2007).

Для проведения ИФА использовался набор реагентов «ВектоВКЭ антиген» (0-1154), ЗАО «Вектор-Бест». Исследования проводились на баз* ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Ярославской области».

Статистическая обработка полученных результатов проводилас: стандартными методами вариационной статистики (вычисление значенш средних величин, среднеквадратического отклонения, доверительноп интервала). Показатель достоверности различий между сравниваемым] величинами определяли по ^критерию Стьюдента, критерию Фишера 1 Вилкоксона-Манна-Уитни.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Особенности эпидемиологии КЭ в Ярославской области в перио 1992-2012 гг. Проявления эволюции заболевания.

Рост заболеваемости КЭ в Ярославской области, начавшийся в 1992 г соответствовал ее росту в целом по РФ. С начала 2000-х годов при тенденци к снижению заболеваемости в РФ, в Ярославской области он

стабилизировалась на среднемноголетнем уровне около 1,6 на 100 тыс. населения (рис. 1).

В возрастной структуре заболевших КЭ за 1996-2012 гг. преобладали взрослые - 90% и более, доля детей (до 17 лет) составляла около 10%.

В регионе преимущественно наблюдаются лихорадочные и менингеальные формы заболевания (62,2 и 16,3%), при которых прогноз благоприятен. 14% составляют очаговые формы инфекции (мениноэнцефалитическая и полиомиелитическая).

1,00

0,00

^ ^ / ^ ^ ^ ^ ^/ / ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^

Рис.1. Динамнка заболеваемости КЭ в Ярославской области в сравнении с динамикой по РФ за период 1992-2012 гг. (на 100 тыс. населения).

В 2001-2010 гг. были привиты против КЭ 6,7% населения области, из них 45% - дети, в 2011-2012 г. - привиты около 8% населения, привитость детского населения, проживающего на высокоэндемичных территориях, достигла 6883%. Для вакцинации использовались 4 сертифицированные в РФ вакцины. Вакцину «Энцевир» (г. Томск) не применяли с апреля 2010 г - после случаев массовых аллергических реакций у детей. Заболевание у вакцинированного

отмечено в одном случае - у девочки 4 лет, привитой трехкратно по схеме вакциной ФСМЕ-Джуниор (Австрия). Перенесла лихорадочную форму заболевания с полным выздоровлением.

В Ярославской области выявлены признаки эволюции заболевания. За последние годы более 80% заболевших составляют невакцинированные городские жители, что отмечено и в других регионах РФ (Жукова Н.Г. и др. 2002; Злобин В.И. и др., 2007; Погодина В.В. и др., 2005). Имеет место перераспределение доли отдельных районов в общей структуре заболеваний КЭ. По сравнению с ранним периодом изучения КЭ (с 1947 г. по начало 80-х годов XX века), наблюдается снижение числа заболеваний КЭ в северных районах - Пошехонском и Даниловском. Растет число заболевших КЭ в г. Ярославль, Рыбинск и прилегающим к ним районах, а также в Некрасовском районе, их удельный вес достиг 32%, 45%, и 10%, соответственно. Наибольшее количество заражений было в Рыбинском р-не - 33%, в Некрасовском и Ярославском р-нах - 16% и 10%. Заражения КЭ регистрируются в городах Ярославль, Рыбинск (9 и 10%). Увеличивается эпидемиологическая значимость антропогенно трансформированных природных и антропургических очагов КЭ. Основной ландшафтной зоной, где регистрируются заражения КЭ, остается лесная зона, растет число заболеваний в поименно-болотной зоне.

В Ярославской области отмечена довольно высокая летальность за изучаемый период - 4,25%. В 2008 г летальность достигла 15,8%, что явилось самым высоким значением за весь период наблюдения за КЭ в регионе. Заслуживают внимания 4 летальных случая КЭ при использовании в лечебных целях противоклещевого иммуноглобулина. Его введение на фоне поражения ЦНС приводило к утяжелению течения заболевания с развитием отека мозга и смерти больных. Выявлена высокая частота случаев алиментарного заражения (7,8%), что нехарактерно для иных регионов РФ. Данный механизм заражения КЭ связан с употреблением некипяченого козьего молока. Наблюдался значительный удельный вес тяжелых форм КЭ с летальными исходами (10,8%) при данном механизме заражения КЭ в регионе (табл.1).

Таблица 1. Случаи КЭ с алиментарным механизмом передачи возбудителя.

Годы Район Кол-во случаев заболеваний Особенности случаев

1992 Любимский 1 С летальным исходом

1994 Рыбинский 1

1997 Даниловский 1

1998 Любимский 1 С летальным исходом

2000 Даниловский 3 Семейный очаг

2003 Рыбинский 1

2007 Рыбинский 26 Крупная вспышка КЭ с алиментарным заражением

2009 Рыбинский 2 Оба - с летальным исходом

2011 Ярославский 1

Всего 37(7,8%), летальность-10,8%

Факторами, утяжеляющими течение инфекции, могли послужить пожилой возраст заболевших, наличие сопутствующих заболеваний и множественные укусы клещей. Факт утяжеления клинического течения КЭ при использовании противоклещевого иммуноглобулина ставит вопрос о целесообразности его назначения с лечебной целью у больных с тяжелыми очаговыми формами инфекции.

К проявлениям эволюции инфекции также относят частоту микстинфекций, переносимых иксодовыми клещами. Микстинфекция КЭ + иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) на территории Ярославской области за 2000-2012 гг. была выявлена в 11,7% случаев заражения КЭ.

Результаты исследования иксодовых клещей из Ярославской и Костромской областей на зараженность ВКЭ и другими патогенами.

При исследовании в ИФА на антиген ВКЭ клещей из Ярославской области, преимущественно снятых с людей, отмечена их довольно низкая вирусофорность в 2009-2011 гг.- 1,5-3,8%.

В клещах I. регтйсаПи, собранных в природных стациях на территории Ярославской области за 2009-2011 гг. в ОТ-ПЦР ВКЭ не был выявлен, обнаружены возбудители таких клещевых патогенов, как боррелии, эрлихии, анаплазмы. Негативные результаты ПЦР на ВКЭ могут быть связаны с небольшим количеством исследованных клещей. Микстинфекцию в клещах обнаружить также не удалось. В одной пробе клеща Д гейсиШт выявлены анаплазмы.

При исследовании клещей из Костромской области в ОТ-ПЦР был выявлен ВКЭ. В 2009 г. впервые установлена циркуляция сибирского подтипа вируса на данной территории (табл.2).

Таблица 2. Зараженность индивидуальных клешей I. ретйсаНм, Б.

гейсШаШ из Костромской области 4 группами клещевых патогенов.

Год Вид клеща, количество экземпляров ТВЕУ, кол-во/% В.Ъ..?./. кол-во/% А. phagocytoph. кол-во/% Е. тиш/Е. С11а//еет'1$ кол-во/%

2009 I. рсгии1ссПт, 373 5/1,3% - - -

2011 I. рет/каШ, 129 0 24/19% 0 4/3,1%

й. гейсикит, 8 0 0 1 0

2012 /. рекикШия, 189 3/1,6% 53/28% 0 0

Всего I. регвиксйт (одиночные особи), 691 8/1,16% 77/11% 0 4/0,6%

Установлена циркуляция других патогенов - боррелии (В.Ь.бЛ), эрлихии, анаплазмы. Последние выявлены в одной из проб клеща Д гейси1аШ. В 2012 г. в клещах I. регзикаш также обнаружен ВКЭ и выявлен сибирский подтип возбудителя. Средняя вирусофорность клещей за годы наблюдений по данным ПЦР оказалась довольно низкой - 1,16%.

Полученные данные позволяют расширить представления о распространении сибирского подтипа ВКЭ на территории ЦФО.

Моннторинг структуры популяции ВКЭ на территории Ярославской области за 30-летний период.

На территории Ярославской области впервые проведен мониторинг структуры популяции ВКЭ за 1983-2012 гг. Осуществлен анализ хронологических рядов штаммов, выделенных на территории региона из клещей и от больных людей. Генотипированы 35 штаммов и изолятов РНК ВКЭ (табл.3).

Таблица 3. Генотипирование хронологических рядов изолятов РНК и штаммов ВКЭ, выделенных в Ярославской области из I. репи/саШ-ч и

от погибших больных.

Годы Генотипированных образцов Подтипы

Сиб д/в сиб+д/в

1988 1 - 1 -

1989 1 - 1 -

1990 3 1 - 2

1992 2 - - 2

1993 3 1 - 2

1998 10 10 - -

1999 3 3 - -

2000 1 1 - -

2001 2 2 - -

2002 2 2 - -

2003 2 2 - -

2008 2 2 - -

2009 2 2

2012 1 1

Всего 35 27 2 6

В ранний период наблюдений в вирусной популяции присутствовал дальневосточный подтип (табл.3) - штаммы Яр-62, Яр-82, Яр-10, Яр-90 -типированы в РДПА Н.Г. Бочковой (1992 г). Яр-10 и Яр-90 генотипированы методом ОТ-ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией с генотипспецифическими зондами. Секвенирован полный ген белка Е штамма Яр-10 (ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора). По результатам исследований, оба штамма отнесены к дальневосточному подтипу ВКЭ.

Более поздний период 1990-1993 гг. характеризовался выделением политиповых штаммов ВКЭ. За этот относительно короткий временной отрезок были изолированы 6 политиповых штаммов (табл.4).

В период с 1983 г до конца 90-х годов наблюдалась так называемая симпатрия двух подтипов ВКЭ.

Начиная с 1998 г. из клещей, а также от больных и умерших людей выделялись штаммы и изоляты РНК только сибирского подтипа ВКЭ.

Таким образом, за 30-летний период на территории региона, по-видимому, произошло изменение генетической структуры популяции ВКЭ -исключение дальневосточного подтипа и абсолютное доминирование сибирского подтипа.

Таблица 4. Политиповые штаммы ВКЭ, изолированные на территории Ярославской области.

Наименование штамма Год изоляции Источник изоляции Подтипы ВКЭ

Яр-193 1990 1 самка ГрегяикаШ Сиб+д/в

Яр-240 1990 Пул имаго /\persulcatus Сиб+д/в

Яр-12 1992 Кровь больной, стертая форма КЭ Сиб+д/в

Яр-13 1992 Мозг пациента, очаговая форма КЭ Сиб+д/в

Яр-29 1993 1 самка 1.регзи1саШ Сиб+д/в

Яр-83 1993 1 самка 1.репи1саи^ Сиб+д/в

Сибирский подтип выделен от 9 из 12 умерших больных на территории области за период 2001-2012 гг. (4 штамма и 16 изолятов РНК ВКЭ). РНК ВКЭ выявлена в различных участках головного и в шейном отделе спинного мозга. Подтверждено, что сибирский подтип ВКЭ так же, как и дальневосточный, способен вызывать весь спектр клинических форм КЭ, в том числе очаговые формы с тяжелым течением и летальным исходом.

Исследование штаммов ВКЭ, изолированных в Ярославской области, показало их генотипическую и фенотипическую гетерогенность (табл.5), что подтверждает данные о существовании гетерогенное-™ внутри различных

подтипов ВКЭ (Злобин В.И. и др., 1996; Погодина В.В., Бочкова Н.Г., 1992; Погодина В.В. и др., 2004).

Таблица 5. Характеристика инвазионных свойств и

нейровирулентности ярославских штаммов ВКЭ

№ п/п Штамм Подтип ИИ Патогенность для хомяков

%% гибели СПЖ в днях

1 Яр-2-1980 Сиб 3,1 20 27,4

2 Яр-62-1984 Сиб 2,9 20 60

3 Яр-11* Сиб 0,9 10 >30

4 Яр-82* Дв 2,2 100 4

5 Яр-193 Микст 3,2 40 23,6

6 Яр-13 Микст 2,9 60 20,8

7 Аверичкин Сиб 0,9 90 13,0

8 Белозеров Сиб 0,9 12,5 30,5

Софьин Дв 3,4 100 5,9

Примечание: * результаты иммунотипирования в РДПА (Н.Г. Бочкова)

Доля политиповых штаммов в регионе достигла 17%, что превысило этот показатель в других регионах в период симпатрии двух подтипов ВКЭ (Кемеровская, Свердловская, Иркутская обл., Забайкальский край - 4-13,1%).

Изученные политиповые штаммы диссоциировали с разной степенью устойчивости при пассировании на мышах. Вероятно, они представляют собой механическую смесь, оба составляющих компонента могут играть роль в этиологии тяжелых форм заболевания.

Развитие тяжелых форм КЭ со смертельным исходом описано у 3-х больных, от которых были изолированы политиповые штаммы ВКЭ, содержащими РНК сибирского и дальневосточного подтипа (штаммы Байдар, Казахстан, Чита-29 и Яр-13). В случае умершей больной из Ярославской области (С-ва, 1992 г.), от которой выделен штамм Яр-13, имеет место особая ситуация: вероятно наличие микстинфекции КЭ+ИКБ, что могло повлиять на исход заболевания.

Экспериментальная смешанная инфекция дальневосточного и сибирского подтипов ВКЭ.

Для понимания механизмов смены подтипов ВКЭ и формирования политиповых штаммов впервые изучена смешанная инфекция дальневосточного и сибирского подтипов in vivo. При одновременном заражении двумя подтипами ВКЭ наблюдался клинический эффект синергизма, проявляющийся увеличением числа погибших мышей, сокращением продолжительности жизни мышей и хомяков по сравнению с моноинфекцией (табл.б).

Таблица 6. Эффект синергизма при смешанной инфекции Ек-42 н Ек-35

штаммами

Модель

Белые мыши

Штамм, подтип*

д/в сиб

Тип инфекции, инокулят

Ек-42

Ек-42 Ек-42

Ек-42

Ек-35 Ек-35 Ек-35

Ек-35

Моноинфекция Моноинфекция Микстинфекция Микстинфекция, мозг больных мышей Микстинфекция,

селезенка больных мышей

№№ пассажа в опыте

Гибель животных, %%

СПЖ (сутки)

60,7 80 93,3

100

8,07±0,58 7,8±0,37 5,2±0,23

4,4±0,07

4,8±0,08

Сирийские хомяки

Ек-42

Ек-35 Ек-35

Ек-35

Моноинфекция Моноинфекция Микстинфекция

Микстинфекция, мозг больных хомяков

100 80 100

7,2±0,44 11,9±1,83 4,8±0,34

8,0±0,72

^ - Дальневосточный подтип! сиб - сибирский под^-

Различия по проценту гибели животных были достоверны во всех вариантах опытов, за исключением Ек-35 / Ек-42+Ек-35 у белых мышей (%

(2 пассаж)0 ПР°Д°™ЬН0С™ ~ - за исключением Ек-35 / Ек"-35

Выявлены два типа взаимодействия вирусных популяций дальневосточного и сибирского подтипов ВКЭ: независимая репродукция и конкурентное исключение.

Независимая репродукция дает формирование смешанного потомства двух подтипов. При заражении мышей штаммами Ек-42 (д/в) и Ек-35 (сиб) в мозге она наблюдалась на уровне 1-го пассажа и сменялась конкурентными отношениями во 2-м пассаже, в ЦНС размножался только дальневосточный подтип ВКЭ (табл.7). У хомяков, зараженных той же парой штаммов, период независимой репродукции отсутствовал, размножался только дальневосточный подтип возбудителя уже в 1-м пассаже. В селезенке мышей диссоциация микстинфекции происходила медленнее, чем в мозге (табл.7). У хомяков взаимодействие двух подтипов в селезенке протекало по типу быстрого конкурентного исключения сибирского подтипа, так же, как и в мозге. Таким образом, течение смешанной инфекции и генетический состав потомства неодинаковы в ЦНС и органах иммунной системы белых мышей и

сирийских хомяков.

Сочетанная репликация двух подтипов ВКЭ в мозге хомяков зависит от штаммовых особенностей сибирского подтипа. При заражении штаммами Ек-42 и Курган-265 (сиб) микстинфекция размножалась не менее 6 суток в мозге 83% хомяков, в отличие от быстрой диссоциации в предыдущем опыте. Селективными преимуществами обладал штамм Ек-42 (д/в) в связи с ускоренным развитием патологического процесса у хомяков, присущим этому подтипу (Погодина В.В. и др., 1986). Механизм конкурентного исключения штаммов сибирского подтипа связан с их замедленной репродукцией (Погодина В.В. и др., 1986), а также, по-видимому, с феноменом интерференции. При этом сибирский и дальневосточный подтипы одного возбудителя - ВКЭ взаимодействовали так же, как самостоятельные виды вирусов (Урываев Л.В. и др., 1997; Хозинская Г.А., 1986).

При последовательном введении хомякам сибирского, а затем дальневосточного подтипа ВКЭ с интервалом 2-4 суток (штаммы Авер. и Фатеев), в отличие одновременного их введения, наблюдалось подавление

инфекции - снижалась доля манифестных форм, уменьшалась ча выявления РНК в ПЦР от 70-88,8% при моноинфекции до 50% микстинфекции.

Таблица 7. Сроки диссоциации микстинфекции в зависимости от В1 теплокровных животных и органа-мишени (штаммы Ек-42, Ек-35).

Модель №№ пассажа Ткань Число проб в ПЦР Подтип потомства

Д/в* сиб* Микст, д/в+сиб

Белые мыши 1 Мозг Селезенка 4 5 0 0 0 0 4 5

2 Мозг Селезенка 15 15 14 9 0 1 1 5

Сирийские хомяки | 1 Мозг Селезенка 7 6 6 5 0 0 1 1

Впервые в эксперименте удалось воспроизвести феномен конкурентного исключения из смешанной популяции дальневосточного подтипа ВКЭ. Селективные преимущества сибирского подтипа проявились при бессимптомном течении инфекции у хомяков старшего возраста (заражение в мозг и подкожно) и при подкожном заражении хомяков-подростков. Когда хомяков-подростков заражали в мозг, селективными преимуществами обладал дальневосточный подтип (табл.8).

Срок наблюдения в наших исследованиях составлял 50 дней. В условиях микстинфекции РНК дальневосточного подтипа определена в 1 биопробе мозга на 47 день, хотя ранее не выявлялась - пантропный ВКЭ мог сохраниться в разных органах и тканях. Взаимодействие между двумя подтипами ВКЭ соответствует феномену несовершенной конкуренции по терминологии Оёит Е.Р. (1971).

Таким образом, по результатам проведенных экспериментов было установлено, что течение смешанной инфекции зависит от штаммов-партнеров ВКЭ, вида животных, органов-мишеней, к которым тропен ВКЭ,

способа и последовательности заражения хомяков двумя подтипами ВКЭ, формы инфекции (острая или латентная);

Таблица 8. Селективные преимущества дальневосточного и сибирского подтипов ВКЭ, в зависимости от возраста лабораторных

животных и формы инфекции (штаммы Авер+Фатеев).

Вес хомяков и способ заражения Тип инфекции Число проб (мозг, селезенка), ПЦР Генотип

дв сиб дв+сиб

38-40 г., в мозг острая 23 17 (73,9%) 1 (4,35%) 5 (21,7%)

38-40 г., под кожу подострая и латентная 13 2(15,4%) 10 (77%) 1 (7,7%)

60-65., в мозг латентная 4 0 4 0

60-65 г, под кожу латентная 6 1 4 1

Всего 10 1 8 1

При конкуренции проявляются преимущества одного или другого подтипа ВКЭ. Селективные преимущества сибирского подтипа проявлялись при латентной инфекции. Важно отметить, что в естественных условиях большинство мелких млекопитающих - прокормителей клещей переносят бессимптомную инфекцию (Коренберг Э.И., 1979).

Полученные нами экспериментальные данные о подавлении репликации в частности дальневосточного подтипа ВКЭ и вытеснению его из смешанной популяции имеют особое значение в аспекте выявленных и описанных ранее однотипных изменений генетической структуры природных популяций ВКЭ в Свердловской, Кемеровской и Курганской обл. (Колясникова Н.М., 2008; Погодина В.В. и др., 2006, 2007).

Выводы:

Впервые проведен мониторинг популяций ВКЭ в ЦФО России (Ярославская область) за 1983-2012 гг. 77% штаммов и изолятов РНК ВКЭ относятся к сибирскому подтипу, 6% - к дальневосточному подтипу и 17% определены как политиповые штаммы, сочетающие генетические структуры двух подтипов возбудителя. В ранний период исследований наблюдалась симпатрия сибирского и дальневосточного подтипов, с конца 90-х годов XX века доминирующим стал сибирский подтип ВКЭ. Политиповые штаммы были изолированы в 1990-1993 гг.; Выявлены особенности эволюции КЭ в ЦФО (Ярославская обл.): смена подтипов ВКЭ; отсутствие тенденции к снижению заболеваемости; снижение активности очагов КЭ в северных районах; ведущее значение антропогенно трансформированных и антропургических очагов с основной локализацией в г. Ярославль, Рыбинск и прилегающих районах; микстинфекции КЭ+ИКБ - 11,7%. Отмечена довольно высокая летальность - 4,25%, высокая частота алиментарного механизма заражения КЭ - 7,8%, с летальностью 10,8%;

Установлена этиология 9 летальных случаев КЭ в Ярославской области за 2001-2012 гг. Все случаи вызваны сибирским подтипом возбудителя; Выявлена гетерогенность ярославских штаммов ВКЭ по уровню нейровирулентности и нейроинвазивности. Штаммы сибирского подтипа относятся к европейскому топоварианту;

Впервые установлена циркуляция сибирского подтипа ВКЭ на территории Костромской области (ЦФО);

Впервые изучена экспериментальная смешанная инфекция дальневосточного и сибирского подтипов ВКЭ на белых мышах и сирийских хомяках. Моделированы феномены образования микст-вариантов и смены подтипов ВКЭ. Между популяциями двух подтипов ВКЭ развиваются независимая репродукция и конкуренция. Определены факторы, влияющие на тип взаимодействия: штаммы-партнеры, вид и возраст животных, органы-мишени, последовательность инфицирования;

7. Впервые установлено, что селективные преимущества сибирского подтипа проявляются при латентном течении смешанной инфекции; при остром ее течении доминирует дальневосточный подтип. Двойная остро текущая инфекция сопровождается эффектом синергизма.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1) Герасимов С.Г., Погодина В.В., Колясникова Н.М., Карань JI.C., Маленко Г.В., Левина J1.C. Взаимодействие сибирского и дальневосточного подтипов вируса клещевого энцефалита при микстинфекции в организме млекопитающих. I. Факторы, влияющие на тип взаимодействия // Вопр. вирусол., 2011 №2. - С.19-22;

2) Герасимов С.Г., Погодина В.В., Колясникова Н.М., Карань JI.C., Маленко Г.В., Левина Л.С. Взаимодействие сибирского и дальневосточного подтипов вируса клещевого энцефалита при микстинфекции в организме млекопитающих. Взаимодействие сибирского и дальневосточного подтипов вируса клещевого энцефалита при микстинфекции в организме млекопитающих. II. Конкуренция подтипов при острой и латентной инфекции // Вопр. вирусол., 2011 №3. - С.41-44;

3) Дружинина Т.А., Шишкина Л.А., Баранова Н.С., Герасимов С.Г. Клещевой энцефалит в Ярославской области // Пест-менеджмент РЭТ-инфо№1,2011.-С.19-22;

4) Погодина В.В., Карань Л.С., Колясникова Н.М., Герасимов С.Г., Левина Л.С., Бочкова Н.Г., Андаев Е.И., Трухина А.Г., Борисова Т.Н., Сидорова Е.А., Нагибина O.A., Маленко Г.В., Безрукова Е.Г. Политиповые штаммы в генофонде вируса клещевого энцефалита // Вопр. вирусол., 2012, №3. - С.30-36.

5) Погодина В.В., Карань Л.С., Левина Л.С., Колясникова Н.М., Герасимов С.Г., Маленко Г.В. 75-летие открытия вируса клещевого энцефалита. Сравнение ранних (1937-1945) и современных штаммов //

Вопр. вирусол., 2012. Спец. выпуск, посвященный 120-й годовщине со дня открытия вирусов русским ученым Д.И. Ивановским. - С. 66-75.

6) Колясникова Н.М., Федорова М.В., Герасимов С.Г., Регембердиева P.A., Верхозина М.М., Погодина В.В., Василенко Н.Ф., Смирнова С.А., Сиротина Е.П., Травина Н.С., Скрынник С.М., Карань Л.С. Молекулярно-генетические исследования распространенности клещевых инфекций среди иксодовых клещей, собранных на различных территориях Российской Федерации // Сборник трудов VII научно-практической конференции с ме>вдународным участием «Молекулярная диагностика-2010», том II - М., 2010. - С. 232-234;

7) Дружинина Т.А., Зайцева Л.Л., Шалепо Е.В., Баранова Н.С., Хрящева Н.Э., Бочкова Н.Г., Герасимов С.Г., Погодина В.В. Клещевые трансмиссивные инфекции на территории Ярославской области -эпидемиология, лабораторная диагностика, совершенствование профилактики // Медицинская вирусология, т. XIV, 2009 г. - С. 75-788) Погодина В.В., Левина Л.С., Карань Л.С., Безрукова Е.Г., Колясникова

Н.М., Герасимов С.Г., Маленко Г.В., Бочкова Н.Г. Развитие идей М.П. Чумакова в области этиологии клещевого энцефалита, нозогеографии и изменчивости возбудителя // Медицинская вирусология, т. XIV, 2009 г. -С. 123-126;

9) Погодина В.В., Левина Л.С., Карань Л.С., Колясникова Н.М., Безрукова Е.Г., Дружинина Т.А., Лесникова М.В., Килячина A.C., Волкова Л.И., Бочкова Н.Г., Герасимов С.Г. Летальные исходы клещевого энцефалита, вызванного сибирским подтипом возбудителя на Европейской территории России и на Урале // Медицинская вирусология, т. XIV, 2009 г. - С. 121-122;

Результаты работы изложены в тезисах следующих конференций: 1. Г.В. Маленко, Н.М. Колясникова, Л.С. Левина, Л.С. Карань, С.Г. Герасимов, В.В. Погодина. Взаимодействие двух подтипов вируса клещевого энцефалита в организме животных при экспериментальной

смешанной инфекции // Медицинская вирусология, т. XIV, 2009. - С. 116-117;

2. В.В. Погодина, Е.Г. Безрукова, JI.C. Левина, Л.С. Карань, Н.М. Колясникова, Е.И. Андаев, А.Г. Трухина, Н.Г. Борисова, Н.Г. Бочкова, С.Г. Герасимов, Г.В. Маленко. Сибирский подтип вируса клещевого энцефалита - этиологический агент очаговых форм заболевания с летальным исходом // Журнал инфекционной патологии, Иркутск, 2009, т.16, №3. - С.175-176;

3. Погодина В.В., Герасимов С.Г., Левина Л.С., Маленко Г.В., Колясникова Н.М. К проблеме генетического несоответствия вакцинных штаммов и природных вариантов вируса клещевого энцефалита: практические аспекты. // Материалы X съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов «Итоги и перспективы обеспечения эпидемиологического благополучия населения РФ», М., 2012, том 2, №1-2. С. 181;

4. О вирусофорности иксодовых клещей в Ярославской области. Дружинина Т.А., Герасимов С.Г., Погодина В.В., Зайцева Л.Л., Шалепо Е.В. // Материалы X съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов «Итоги и перспективы обеспечения эпидемиологического благополучия населения РФ», М., 2012, том 2, №1-2. - С.140-141;

5. Pogodina V.V., Skrynnik S.M., Travina N.S., Gerasimov S.G. Vaccinal prevention of TBE in the areas with domination of Siberian TBE subtype // Международная научная конференция «Клещевой энцефалит и другие инфекции, переносимые клещами», посвященная 75-летию открытия вируса, 2012;

6. Malenko G.V., Gerasimov S.G., Levina L.S., Karmysheva V. Ya., Kolyasnikova N.M., Pogodina V.V. About therapy for mixed-infections, transmissed by ixodidae // Международная научная конференция «Клещевой энцефалит и другие инфекции, переносимые клещами», посвященная 75-летию открытия вируса, 2012;

Выражаю огромную благодарность моему научному руководителю доктору медицинских наук, профессору, заведующей лабораторией клещевого энцефалита и других вирусных энцефалитов В.В. Погодиной за неоценимую помощь в проведении исследований, внимание, а также полученные знания и умения, которые способствовали моему развитию как специалиста и в других аспектах.

Особую благодарность выражаю моему второму научному руководителю заместителю начальника Управления Федеральной службы Роспотребнадзора по Ярославской области, доктору медицинских наук Т.А. Дружининой за помощь и содействие в проведении полевых работ и эпидемиологических исследований на территории Ярославской области, а также за полученные ценные знания и внимание.

Отдельную благодарность выражаю ученому секретарю ФБГУ «ИПВЭ им.М.П.Чумакова» РАМН кандидату биологических наук O.A. Медведкиной за помощь, внимание и понимание на протяжении выполнения работы.

Благодарю всех сотрудников лаборатории клещевого энцефалита и других вирусных энцефалитов ФГБУ «ИПВЭ им.М.П.Чумакова» РАМН -ведущих научных сотрудников, кандидатов биологических наук Г.В. Маленко и Л.С. Левину, а также кандидатов медицинских наук Н.М. Колясникову и Н.Г. Бочкову, оказывающих помощь в проведении вирусологических и молекулярно-биологических исследований и полученные навыки, а также за внимание и поддержку.

Благодарю также коллектив старших лаборантов (М.П. Романову, H.H. Трофимову и З.Н. Румянцеву) за высококвалифицированную научно-техническую помощь в проведении исследований и внимание.

Автор благодарен руководству ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора РФ, руководителю и сотрудникам лаборатории природно-очаговых инфекций А.Е. Платонову, Л.С. Карань и М.В. Федоровой за предоставление возможности и помощь в проведении молекулярно-биологических исследований на данной базе.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Герасимов, Сергей Геннадьевич

Список условных сокращений.

Введение.

Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Эпидемиология клещевого энцефалита (КЭ). Эволюция заболевания и его особенности на современном этапе.

1.1. Нозоареал КЭ, заболеваемость КЭ в России и отдельных регионах.

1.2. Вопросы экологии ВКЭ.

1.3. Пути передачи ВКЭ.

1.4. Клинические формы КЭ.

1.5. Эволюция КЭ.

1.6. Изучение эпидемиологии КЭ в Ярославской области (ЦФО РФ).

Глава 2. Молекулярная эпидемиология клещевого энцефалита.

2.1. Строение вириона и организация генома ВКЭ.

2.2. Классификация ВКЭ по серотипам и методы их дифференцирования.

2.3. Классификация ВКЭ по генотипам и методы типирования (генотипирования) ВКЭ.

2.4. Распределение подтипов ВКЭ в разных частях ареала.

2.5. Мониторинг популяции ВКЭ на основе типирования хронологических рядов штаммов.

2.6. Влияние экологических и климатических факторов на эволюцию возбудителей и переносчиков КЭ (гипотезы).

2.7. Дифференциация природных очагов КЭ в зависимости от структуры вирусных популяций.

Глава 3. Смешанные инфекции в природе и эксперименте.

3.1. Микстинфекции, переносимые иксодовыми клещами.

3.2. Политиповые штаммы ВКЭ.

3.3. Основные типы взаимодействия между вирусами.

3.3.1. Негенетические взаимодействия арбовирусов при экспериментальной смешанной инфекции.

3.3.2. Генетические взаимодействия у арбовирусов.

Часть II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 4. Материал и методы.

4.1. Анализ особенностей эпидемиологии КЭ в Ярославской области за период 1992-2012 гг.

4.2. Штаммы и изоляты РНК ВКЭ, выделенные из клещей, от больных и умерших пациентов в Ярославской области (1983-2012 гг.).

4.3. Моделирование смешанной инфекции сибирского и дальневосточного подтипов ВКЭ в экспериментах на животных.

4.4. Применение метода ПЦР для детекции РНК/ДНК ВКЭ,

В. burgdorferi sensu lato, A. phagocytophillum, Е. chaffeensis/E muris.

4.4.1. Этапы проведения ПЦР. Методики скрининговых исследований.

4.4.2. Генотипирование штаммов и изолятов РНК ВКЭ и определение концентрации РНК ВКЭ в тканях лабораторных животных, полученных при смешанной инфекции.

4.5. Описание методики иммуноферментного анализа (ИФА) на определение антигена ВКЭ в клещах.

4.6. Статистическая обработка результатов исследований.

Глава 5. Особенности эпидемиологии КЭ в Ярославской области в период 1992-2012 гг. Проявления эволюции заболевания.

5.1. Ландшафтная, климатическая и эпизоотологическая характеристика

Ярославской области.

5.2.Особенности эпидемиологии КЭ в Ярославской области за период 1992-2012 гг.

5.3. Механизмы передачи КЭ.

5.4. Клиническая картина КЭ у больных в Ярославской области (1996-2012 гг.).

5.5. Основные методы профилактики КЭ в Ярославской области.

Глава 6. Результаты исследования клещей из Ярославской и Костромской областей методами ИФА на антиген ВКЭ и ПЦР на зараженность 4 группами клещевых патогенов.

6.1. Исследование клещей из Ярославской области методами ИФА и

6.2. Исследование клещей из природных стаций Костромской области в 2009 и 2011-2012 гг. методом ПЦР.

Глава 7. Мониторинг структуры популяции ВКЭ в Ярославской области за 30-летний период.

7.1. Ретроспективный анализ вирусологических и иммунологических исследований периода 1974-1998 гг.

7.2. Характеристика генетической структуры популяций ВКЭ на основе анализа хронологических рядов штаммов и изолятов РНК.

7.3. Нейровирулентность и нейроинвазивность ярославских штаммов

7.4. Локализация РНК ВКЭ сибирского подтипа в структурах мозга умерших пациентов.

7.5. Политиповые штаммы ВКЭ; результаты изучения их свойств и стабильности.

Глава 8. Экспериментальная смешанная инфекция дальневосточного и сибирского подтипов ВКЭ.

8.1. Изучение взаимодействия двух подтипов ВКЭ в экспериментах на животных, определение факторов, влияющих на характер взаимодействия.

8.2. Особенности взаимодействия двух подтипов ВКЭ при острой и латентной инфекции.

Обсуждение.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эволюция клещевого энцефалита в Центральном федеральном округе России. Моделирование смены подтипов возбудителя в эксперименте."

Клещевой энцефалит (КЭ) - природно-очаговая нейроинфекция, нередко приводящая к инвалидизации человека и летальному исходу, в настоящее время остается актуальной для России и ряда стран Европы и Азии, несмотря на проводимые профилактические мероприятия. В РФ 46 из 83 субъектов являются эндемичными по КЭ [108]. В некоторых регионах отмечается циркуляция двух или трех подтипов вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) -дальневосточного, европейского и сибирского [3,20].

После резкого подъема заболеваемости КЭ в РФ на рубеже веков (1996, 1999 гг.) наблюдалось ее снижение и увеличение доли относительно благоприятных, легких форм инфекции (лихорадочная и менингеальная). Это могло послужить причиной снижения настороженности в отношении данной инфекции и в частности малого охвата вакцинопрофилактикой населения.

Причины недостаточного эффективного контроля за КЭ могут быть связаны с изменениями в популяции возбудителя, переносчиков ВКЭ, а также влиянием возможных дополнительных факторов, определяющих уровень заболеваемости КЭ.

В ряде регионов нашей страны авторы отмечают явление смены доминирующего подтипа ВКЭ - дальневосточного на сибирский [72,111,116]. Это явление описано в Курганской, Свердловской и Кемеровской областях, но причины и механизмы его формирования неизвестны. Возможно, развитию данного феномена способствовали антропогенная трансформация природных ландшафтов в ходе деятельности человека, глобальные изменения климата и др. Кроме того, изменения климата на конкретной территории ведут за собой изменение численности переносчиков. Так, на примере некоторых регионов показана корреляция между увеличением численности переносчиков и определенными сочетаниями температуры и влажности воздуха [81]. Возможно, изменения климата привели к расширению нозоареала инфекции на север на некоторых территориях [56, 81, 107].

Вследствие урбанизации и антропогенной трансформации естественных ландшафтов на эндемичных территориях сформировались антропургические очаги инфекции. Переносчики ВКЭ приблизились к человеку - сейчас их можно встретить на дачных участках, в лесопарковых зонах, городских парках и др. [25,42,56,115]. Среди заболевших КЭ удельный вес городских жителей увеличился до 75-80%, хотя еще в 50-60 гг. XX века КЭ преимущественно заболевали лица, профессионально связанные с пребыванием в лесных массивах (лесники, геологоразведчики, военные и др., охотники). Таким образом, группы высокого риска по заболеванию КЭ теперь значительно расширились, что, безусловно, требует пересмотра сформированных ранее представлений о профилактике КЭ.

Следует принимать во внимание, что снижению заболеваемости КЭ во многом способствовали массовые акарицидные обработки лесных массивов на территории многих эндемичных регионов РФ, которые начали активно проводить с конца 50-х - начала 60-х годов XX столетия. Однако данные обработки были прекращены в конце 80-х гг., что привело к увеличению количества клещей-переносчиков ВКЭ и тем самым способствовало увеличению заболеваемости КЭ на рубеже ХХ-ХХ1 вв. [95,107].

Выявлены изменения переносчиков ВКЭ - так называемые клещи-мутанты (Калининградская, Ленинградская, Иркутская, Ярославская, Вологодская области) [106,156]. Их формированию могли способствовать загрязнение окружающей среды солями тяжелых металлов [156] и, вероятно, тератогенные эффекты акарицидов.

Все вышеуказанные изменения трактуются рядом авторов, как эволюция КЭ [56,116].

С точки зрения эволюционного учения, эволюция внутри популяции возбудителя обусловлена изменениями в ее генофонде, нарушением его равновесия в результате мутаций, дифференциального воспроизведения, миграций и иммиграций генов из соседних популяций, дрейфа генов и др. Элементарным эволюционным изменениям способствуют любые природные барьеры [27]. Эволюция популяции возбудителя инфекции в свою очередь неуклонно ведет к изменениям ее эпидемиологии, клиники, профилактики и др.

В свете эволюционных изменений КЭ на некоторых территориях РФ, возникает необходимость их изучения в других эндемичных регионах. Так, большой интерес представляет современная ситуация по КЭ в Центральном федеральном округе (ЦФО) РФ. ЦФО включает 18 субъектов - Белгородская, Брянская, Владимирская, Воронежская, Ивановская, Калужская, Костромская, Курская, Липецкая, г. Москва, Московская, Орловская, Рязанская, Смоленская, Тамбовская, Тверская, Тульская и Ярославская области. Из них наиболее значительными по уровню заболеваемости КЭ регионами являются Ярославская, Тверская, Костромская, Ивановская области [108,109]. Население ЦФО на 2012 г. составляет 38,5 млн, округ характеризуется самой высокой плотностью населения в РФ - 59,2 чел на 1 км2.) [221].

На территории ЦФО не изучена структура популяции возбудителя КЭ и направления эволюции данной инфекции.

Ярославская область наряду с Костромской ежегодно дает наибольшие показатели заболеваемости КЭ по ЦФО [108,109].

В Ярославской области при низкой заболеваемости КЭ нередко встречаются очаговые формы КЭ с тяжелым течением, в том числе при алиментарном заражении. На данной территории сотрудниками лаборатории клещевого энцефалита ИПВЭ АМН СССР (позже ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН) проводились экспедиции, вирусологические и иммунологические исследования с начала 80-х и до начала 90-х гг. На основе этих методов было установлено, что на территории циркулируют два серотипа ВКЭ - сибирский и дальневосточный с доминированием последнего (см. ниже) [112,114,115].

Таким образом, регион представляет удобный плацдарм для изучения процессов эволюции КЭ и мониторинга вирусной популяции с использованием современных молекулярно-биологических методов.

При изучении региональных популяций ВКЭ, как правило, даются суммарные характеристики распределения подтипов (генотипов) ВКЭ по штаммам, выделенным в разные годы. Такой подход не отражает возможную динамику изменения структуры вирусных популяций. В.В. Погодиной и соавт. был введен метод изучения хронологических рядов штаммов ВКЭ [111,116]. Мониторинг за 50-60-летний период позволил выявить преобразования структуры популяций ВКЭ - смену подтипов - в Свердловской, Кемеровской, Курганской областях [72,84,95,111,116]. Насколько широко распространено явление смены подтипов ВКЭ остается неизвестным. В ЦФО исследования в этом направлении не проводились.

Большой интерес также представляет собой проблема микстинфекции различных подтипов ВКЭ. Ранее говорилось о существовании регионов, где имеет место сочетанная циркуляция двух и даже трех подтипов ВКЭ. На этих территориях в разные годы были обнаружены и описаны так называемые политиповые штаммы (микст-штаммы), сочетающие фрагменты геномов сибирского и дальневосточного подтипов [20,21,34,53,64,116]. Описаны также своеобразные политиповые, сочетающие признаки трех генотипов ВКЭ. При этом недостаточно изучено, что они представляют собой морфологически, каковы их свойства и как они изменяют течение заболевания по сравнению с инфекцией, вызываемой обычными штаммами ВКЭ. Данная проблема требует экспериментального изучения.

В последние годы актуальность приобрела и другая проблема -микстинфекции ВКЭ с другими клещевыми патогенами (боррелии, анаплазмы, эрлихии). Последние два возбудителя являются относительно новыми для нашей страны и, как следствие, мало изученными. Недостаточно изученными также являются распространенность этих патогенов и их микстинфекций на территории ЦФО (Ярославская, Костромская области), Такие микстинфекции представляют интерес с точки зрения особенностей их клиники, лечения и других аспектов.

Цель работы

Целью наших исследований являлось изучение эволюции КЭ на территории ЦФО РФ (Ярославская область) за 30-летний период - оценка изменений эпидситуации по КЭ и структуры популяции возбудителя; экспериментальное изучение особенностей течения смешанной инфекции дальневосточного и сибирского подтипов ВКЭ для выяснения условий, способствующих смене подтипов ВКЭ, и образования политиповых штаммов.

Основные задачи исследования

3. Изучение этиологии очаговых форм КЭ с летальным исходом на территории региона;

5. Оценка структуры популяции ВКЭ на территории Костромской области;

В ходе работы были проведены следующие виды исследований: полевые, вирусологические, иммунологические, молекулярно-биологические.

Штаммы ВКЭ были взяты из коллекции лаборатории клещевого энцефалита и других вирусных энцефалитов ФГБУ «ИПВЭ им. М.П. Чумакова» РАМН. Некоторые штаммы были выделены из клещей и от людей непосредственно в ходе диссертационных исследований. Подготовка клещей для дальнейших исследований, а также вирусологические исследования проводились на базе лаборатории клещевого энцефалита и других вирусных энцефалитов ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН. Иммунологические исследования проводились при участии диссертанта на базе лаборатории ФБУЗ «Центра гигиены и эпидемиологии в Ярославской области».

Сбор клещей для исследований осуществлялся непосредственно диссертантом, а также местными специалистами на территории Ярославской и Костромской областей.

Работа по детекции клещевых патогенов и генотипированию штаммов и изолятов РНК ВКЭ проводилась диссертантом на базе ФБУН Центрального научно-исследовательского института Эпидемиологии Роспотребнадзора РФ под руководством Л.С. Карань (лаборатория природно-очаговых инфекций). Для детекции ВКЭ и других клещевых патогенов была использована ОТ-ПЦР и ПЦР, соответственно, в режиме реального времени с использованием разных методик и наборов реагентов; для генотипирования кДНК ВКЭ применен метод ОТ-ПЦР в режиме реального времени с гибридизационно-флуоресцентной детекцией с генотипспецифическими зондами.

Научная новизна

• Впервые проведен мониторинг популяций ВКЭ, распространенных на территории ЦФО (Ярославская область) в течение 1983-2012 гг. с использованием молекулярно-биологических методов. Показано, что в ранний период исследований наблюдалась симпатрия двух подтипов ВКЭ -дальневосточного и сибирского, с конца 90-х годов XX века доминирующим стал сибирский подтип ВКЭ.

• Впервые выявлены признаки эволюции КЭ на территории ЦФО (Ярославская обл.): смена доминирующего подтипа возбудителя, снижение активности очагов в северных районах, показано ведущее эпидемиологическое значение антропогенно трансформированных природных и антропургических очагов с локализацией в городах Ярославль, Рыбинск и прилегающих районах. Отмечена высокая летальность при КЭ - 4,25%, высокая частота алиментарного заражения КЭ - 7,8%, с летальностью 10,8%;

• Показана роль сибирского подтипа в этиологии тяжелых очаговых форм инфекции с летальными исходами как при трансмиссивном, так и при алиментарном механизмах передачи возбудителя;

• Показаны генотипическая и фенотипическая гетерогенность штаммов ВКЭ, распространенных в Ярославской области. Штаммы сибирского подтипа относятся к европейскому топоварианту, часть из них входит в кластеры вологодских штаммов, часть - близка к штаммам, выделенным в Прибалтике и Финляндии, а также на Урале. Установлены различия в степени нейровирулентности и нейроинвазивности ярославских штаммов ВКЭ;

• Впервые на территории Костромской области обнаружен сибирский подтип ВКЭ;

• Впервые в экспериментах in vivo изучено взаимодействие сибирского и дальневосточного подтипов ВКЭ. Установлено, что при смешанной инфекции возможно развитие клинических эффектов синергизма и подавления инфекции. Выявлены факторы, влияющие на течение и исход взаимодействия: вид лабораторного животного, способ и последовательность заражения, свойства штаммов-партнеров, органы-мишени.

• Впервые установлено, что между вирусными популяциями дальневосточного и сибирского подтипов ВКЭ (как и между разными видами вирусов) могут иметь место независимая репродукция и конкурентное исключение, в зависимости от условий экспериментов;

• Выявлены условия, при которых тот или иной подтип получает селективные преимущества. Впервые удалось моделировать ситуацию, когда преимущества получает сибирский подтип - при латентной инфекции, что является важной основой для дальнейшего изучения феномена смены подтипов в природных условиях.

• Впервые в экспериментах было моделировано образование микст-вариантов ВКЭ. Изучены свойства политиповых штаммов, изолированных из клещей, от больных и погибших людей.

Практическая значимость работы

На основании изучения особенностей эпидемиологической ситуации в Ярославской области и работы по исследованию клещей из очагов КЭ и от населения на территории Ярославской области были изданы нормативные документы: Постановление № 3 от 30.03.2010 г. "Об усилении мероприятий по профилактике клещевых трансмиссивных инфекций в 2010 году", Приказы к региональному календарю прививок №984 (от.10.08.2010) и №4119 (от 18.08.2010) «Об утверждении Рекомендуемого перечня профилактических прививок и перечня прививок по эпидемическим показаниям Ярославской области», ПРИКАЗ № 314/851 от 17.05.2012 г. «Об обеспечении организации отдыха, оздоровления и занятости детей и подростков в 2012 г.» Материалы о смене подтипов ВКЭ оценены службой Роспотребнадзора РФ как значимый факт, способный оказывать влияние на проводимые профилактические мероприятия, что было отражено в Постановлении Главного санитарного врача РФ от 12 мая 2001 г. №53 «Об усовершенствовании эпидемиологического надзора и профилактических мероприятий в отношении клещевого вирусного энцефалита».

Данные о геномах 8 штаммов ВКЭ, изучаемых в данной работе, депонированы в международный компьютерный банк данных GenBank. (http://www.ncbi. nlm. nih.gov/).

1. AJ363855 - Yaroslavl-2 - FJ214144

2. AJ363857 - Yaroslavl-102-202

2. AJ363859 - Yaroslavl-97

3. AJ363854 - Yaroslavl-142

4. JQ845440 - Yaroslavl-Aver-08

5. FJ214144 - Yaroslavl-80

6. FJ214145 - Yaroslavl-115-01

7. FJ214146 - Yaroslavl-140-98

8. FJ214147 - Yaroslavl-10

Основные положения, выносимые на защиту:

5. Впервые в экспериментах на лабораторных животных моделированы феномены смены подтипов ВКЭ и формирования микст-вариантов. Селективные преимущества сибирского подтитипа проявляются при латентном течении инфекции.

Апробация работы

Основные результаты работы представлены на конференциях молодых ученых в ФГБУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН (2010, 2011 гг.), на заседании общества микробиологов и эпидемиологов на базе ФГБУ «Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И. Ивановского» Министерства здравоохранения и социального развития РФ, посвященном актуальным проблемам клещевого энцефалита на современном этапе (2011 г.)., на Научной конференции, посвященной 120-й годовщине открытия вирусов великим русским ученым Д.И. Ивановский «Рождение и развитие вирусологии - история изучения новых и возвращающихся вирусных инфекций» (2012 г.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе 5 статей в издания, рекомендованные ВАК.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования - 5 глав, обсуждение полученных результатов, выводы и список литературы, состоящий из 223 работ (из них -155 публикации на русском языке и 68 - на иностранном языке). Диссертация изложена на 212 страницах машинописного текста, иллюстрирована 26 таблицами и 13 рисунками.

Выражаю признательность руководству ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН за предоставленную возможность выполнения работы на научной базе одной из самых лучших в России и авторитетных во всем мире школ вирусологов.

Особую благодарность выражаю заместителю начальника Управления Федеральной службы Роспотребнадзора по Ярославской области, доктору медицинских наук Т.А. Дружининой за помощь и содействие в проведении полевых работ и эпидемиологических исследований на территории Ярославской области, а также за полученные ценные знания и внимание.

Отдельную благодарность выражаю ученому секретарю ИПВЭ им. М.П. Чумакова кандидату биологических наук O.A. Медведкиной за помощь, внимание и понимание на протяжении выполнения работы.

Благодарю всех сотрудников лаборатории клещевого энцефалита и других вирусных энцефалитов ИПВЭ им. М.П. Чумакова - ведущих научных сотрудников, кандидатов биологических наук Г.В. Маленко и JI.C. Левину, а также кандидатов медицинских наук Н.М. Колясникову и Н.Г. Бочкову, оказывающих помощь в проведении вирусологических и молекулярно-биологических исследований и полученные навыки, а также за внимание и поддержку.

Благодарю также коллектив старших лаборантов за высококвалифицированную научно-техническую помощь в проведении исследований и внимание.

Автор благодарен руководству ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, руководителю и сотрудникам лаборатории природно-очаговых инфекций А.Е. Платонову, Л.С. Карань и М.В. Федоровой за предоставление возможности и помощь в проведении молекулярно-биологических исследований на данной базе.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава 1. Эпидемиология клещевого энцефалита (КЭ). Эволюция заболевания и его особенности на современном этапе.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Герасимов, Сергей Геннадьевич

Выводы:

1. Впервые проведен мониторинг популяций ВКЭ в ЦФО России (Ярославская область) за 1983-2012 гг. Показано, что 77% штаммов и изолятов РНК ВКЭ относятся к сибирскому подтипу, 6% - к дальневосточному подтипу и 17% представляют политиповые штаммы, сочетающие генетические структуры двух подтипов возбудителя. В ранний период исследований наблюдалась симпатрия сибирского и дальневосточного подтипов, с конца 90-х годов XX века доминирующим стал сибирский подтип ВКЭ. Политиповые штаммы были изолированы в 1990-1993 гг.;

2. Выявлены особенности эволюции КЭ в ЦФО (Ярославская обл.): смена подтипов ВКЭ; отсутствие тенденции к снижению заболеваемости; снижение активности очагов КЭ в северных районах; ведущее значение антропогенно-трансформированных и антропургических очагов с основной локализацией в г. Ярославль, Рыбинск и прилегающих районах; микстинфекции КЭ+ИКБ -11,7%. Отмечена довольно высокая летальность - 4,25%, высокая частота алиментарного механизма заражения КЭ - 7,8%, с летальностью 10,8%;

3. Установлена этиология 9 летальных случаев КЭ в Ярославской области за период 2001-2012 гг. Все случаи вызваны сибирским подтипом возбудителя;

4. Выявлена гетерогенность ярославских штаммов ВКЭ по уровню нейровирулентности и нейроинвазивности. Штаммы сибирского подтипа относятся к европейскому топоварианту;

5. Впервые установлена циркуляция сибирского подтипа ВКЭ на территории Костромской области (ЦФО);

6. Впервые изучена экспериментальная смешанная инфекция дальневосточного и сибирского подтипов ВКЭ на белых мышах и сирийских хомяках. Моделированы феномены образования микствариантов и смены подтипов ВКЭ. Между популяциями двух подтипов ВКЭ развиваются независимая репродукция и конкуренция. Определены факторы, влияющие на тип взаимодействия: штаммы-партнеры, вид и возраст животных, органы-мишени, последовательность инфицирования;

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Герасимов, Сергей Геннадьевич, Москва

1. Аделыиин Р.В. Генетическая вариабельность вируса клещевого энцефалита на территории Европейской части Российской Федерации и Некоторых стран Восточной и Юго-восточной Европы // Автореф. дисс. канд. биол. наук. -М., 2006. с. 3-17;

2. Аделынин Р.В., Злобин В.И., Беликов С.И. и др. Молекулярная эпидемиология клещевого энцефалита в европейской части России и некоторых странах Балтии, Восточной и Юго-восточной Европы // Эпидемиол. и вакцинопрофилактика. 2006. - №2. - с. 27-34;

3. Андаев Е.И., Трухина А.Г., Карань J1.C., Погодина В.В., Гамова Е.Г. и др. Клещевой энцефалит в Читинской области и этиология очаговых форм с летальным исходом. Бюлл. СО РАМН, №4 (126), 2007, с.60-65;

4. Бахвалова В.Н. Эпизоотическое состояние природного очага клещевого энцефалита и особенности вирусной популяции в лесостепном Приобье (Западная Сибирь): Автореф. дис. . канд. биол. наук. -Кольцово, 1994. -24 е.;

5. Бахвалова В.Н., Панов В.В., Потапова О.Ф., Морозова О.В. Персистенция вируса клещевого энцефалита в организме диких мелких млекопитающих и культуре пермиссивных клеток // Дальневост. Журнал инфекционной патологии, 2007, №11, с.79-86;

6. Безрукова Е.Г. Роль сибирского подтипа вируса клещевого энцефалита в этиологии острых и хронических форм заболевания (сопоставление с дальневосточным подтипом) /

7. Дисс. канд. мед. наук, 2009;

8. Адельшин Р.В. Генетическая вариабельность вируса клещевого энцефалита на территории Европейской части Российской Федерации и Некоторых стран Восточной и Юго-восточной Европы // Автореф. дисс. канд. биол. наук. -М., 2006. с. 3-17;

9. Адельшин Р.В., Злобин В.И., Беликов С.И. и др. Молекулярная эпидемиология клещевого энцефалита в европейской части России и некоторых странах Балтии, Восточной и Юго-восточной Европы // Эпидемиол. и вакцинопрофилактика. 2006. - №2. - с. 27-34;

10. Андаев Е.И., Трухина А.Г., Карань Л.С., Погодина В.В., Гамова Е.Г. и др. Клещевой энцефалит в Читинской области и этиология очаговых форм с летальным исходом. Бюлл. СО РАМН, №4 (126), 2007, с.60-65;

11. Бахвалова В.Н. Эпизоотическое состояние природного очага клещевого энцефалита и особенности вирусной популяции в лесостепном Приобье (Западная Сибирь): Автореф. дис. . канд. биол. наук. Кольцове, 1994. -24 е.;

12. Бахвалова В.Н., Панов В.В., Потапова О.Ф., Морозова О.В. Персистенция вируса клещевого энцефалита в организме диких мелких млекопитающих и культуре пермиссивных клеток // Дальневост. Журнал инфекционной патологии, 2007, №11, с.79-86;

13. Безрукова Е.Г. Роль сибирского подтипа вируса клещевого энцефалита в этиологии острых и хронических форм заболевания (сопоставление с дальневосточным подтипом) /

14. Дисс. канд. мед. наук, 2009;

15. Беликов С.И., Леонова Г.Н., Кондратов И.Г. и др. Анализ полногеномных последовательностей штаммов дальневосточного субтипа вируса клещевого энцефалита, обладающих различной нейровирулентностью для человека. Бюлл. СО РАМН, №4 (126), 2007, с.22-28;

16. Богачек М.В., Протопопова Е.В., Терновой В.А. и др. Иммунохимические свойства рекомбинантных полипептидов, моделирующих домены I и II белка Е вируса Западного Нила // Молекул. Биол. 2005. - Т.39. - с. 813-822;

17. Борисов В.А. Клинико-эпидемиологические и некоторые патогенетические аспекты клещевого энцефалита в Приангарье // Автореф. на соиск. уч. степ.канд. мед. наук.-М.-1997- с. 17;

18. Борисов В.А., Аитов К.А., Злобин В.И.и др. Клинические особенности и патоморфоз клещевого энцефалита в Иркутской области. // Эпидемиологическая обстановка и стратегия борьбы с клещевым энцефалитом на современном этапе.- М. 2003. - с.41 - 42;

19. Борисов В.А. Ющук Н.Д., Малов И.В., и др. Особенности клещевого энцефалита в различных регионах // Эпидемиология и инфекционные болезни,- 2000.- №2.- с.43-47;

20. Борисова О.Н., Горковенко JI.E. Ситуация по заболеваемости клещевым энцефалитом в Приморском крае // Мед. паразитология и паразитарные болезни.-2000.-№3 .-с. 18-21;

21. И.Бочкова Н.Г., Корешкова Г.В., Погодина В.В. Изучение сочетанных очагов арбовирусных инфекций, передающихся комарами. Вопросы вирусологии, 1981 №5, с. 611-616;

22. Буренкова Л.А., Видилина P.A. Изучение антигенной структуры штаммов вируса клещевого энцефалита с помощью реакции преципитации в агаре // Материалы научной конференции «Клещевой энцефалит и вирусные геморрагические лихорадки». Омск, 1963. - с. 35-37;

23. Валицкая A.B., Рязанцева Г.А., Катин A.A., Пустовалова В.Я. Сравнительная характеристика риска заражения клещевым энцефалитом в очагах с различной ландшафтной приуроченностью / //Мед. паразитология и паразитарн. болезни.-2002.-№4.- с. 11-14;

24. Васерин Ю.И. Некоторые особенности реакции диффузной преципитации с вирусом клещевого энцефалита // Материалы научной конференции «Клещевой энцефалит и вирусные геморрагические лихорадки». Омск, 1963. - с. 39-41;

25. Васильев В.В., Злобин В.И., Дживанян Т.И. и др. Изучение электрофоретической подвижности вирусспецифических белков штаммов вируса клещевого энцефалита, выделенных в разных географических зонах СНГ // Вопр. вирусол. 1993. - №1. - с. 11-16;

26. Верета Л.А. Экспериментальное обоснование алиментарной передачи вируса клещевого энцефалита. Вопр. вирусол, 1963, №2, с. 245-246;

27. Верхозина М.М., Злобин В.И., Демина Т.В. и др. Генентическая вариабельность ВКЭ в азиатской части ареала // Тезисы докладов: Современные научные и прикладные аспекты клещевого энцефалита. -М., 15-16 ноября, 2007, с. 23-24;

28. Верхозина М.М., Злобин В.И., Козлова И.В., Демина Т.В. и др. Эколого-генетический анализ региональной популяции вируса клещевого энцефалита в Восточной Сибири. Бюлл. СО РАМН, №4 (126), 2007, с. 53-59;

29. Волкова Л.И., Образцова Р.Г. Клиническая картина острого клещевого энцефалита на Среднем Урале // Клещевой энцефалит. Владивосток,2002, с.88-98;

30. Волкова Л.И. Образцова Р.Г. Патоморфоз клиники острого клещевого энцефалита в Свердловской области //Эпидемиологическая обстановка и стратегия борьбы с клещевым энцефалитом на современном этапе.- М.2003. с.47-48;

31. Волкова Л.И., Образцова Р.Г. Эпидемиологические особенности клещевого энцефалита в Свердловской области //Эпидемиологическая обстановка и стратегия борьбы с клещевым энцефалитом на современном этапе.- М. 2003. - с.31-32;

32. Волкова Л.И., Романенко В.В., Струнин Н.Л. и др. Эпидемиология, этиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика клещевого энцефалита: Метод. Указания / Екатеринбург, 2004;

33. Воронкова Г.М, Захарычева Т.А. Состояние проблемы клещевых инфекций в Хабаровском крае. Бюлл. СО РАМН, 2007, №4, с. 82-88;

34. Вотяков В.И., Злобин В.И., Мишаева Н.П. Клещевые энцефалиты Евразии. Новосибирск, 2002, с.437;

35. Вотяков В.И., Протас И.И, Жданов В.М. Западный клещевой энцефалит //Минск.- 1978.- с.256;

36. Гольдфарб Л.Г. Изучение эпидемиологического процесса при клещевом энцефалите в связи с задачами профилактики // Дисс. докт мед. наук. -М., 1973;

37. Деконенко Е.П. Особенности клинических проявлений клещевого энцефалита в России и проблемы лечения //Эпидемиологическая обстановка и стратегия борьбы с клещевым энцефалитом на современном этапе.- М. 2003. - с.38-39;

38. Деконенко Е.П. Инфекционные заболевания, передающиеся клещами. Медицинская вирусол., 2009, т. XXVI, с.262-276;

39. Демина Т.В., Джиоев Ю.П., Верхозина М.М. и др. Генетическая вариабельность и генотипирование вируса клещевого энцефалита с помощью дезоксиолигонуклеотидных зондов. Вопр. вирусол. 2009 -№3, - с. 33-42;

40. Добрикова Е.Ю., Плетнев А.Г., Шаманин В.А. Обнаружение вируса клещевого энцефалита в крови людей и в индивидуальных клещах методом молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот // Вопр. вирусол. 1986 - №6. - с. 739-742;

41. Дробышевская А.И. О восприимчивости грызунов Приморья к вирусу клещевого энцефалита. ЖМЭИ, М., 1943, 10-11, с. 48;

42. Дроздов С.Г. О природе молочной двухволновой лихорадки (материалы изучения очага в Европейской части СССР). Сообщение 1. Выделение штаммов вируса возбудителя и его характеристика // Вопр. вирусол, 1959, №2, с. 204-208;

43. Дружинина Т.А. «Эколого-эпидемиологическая характеристика и профилактика трансмиссивных клещевых инфекций» (по материалам Ярославской области) // Дисс. докт. мед. наук, М., 2005;

44. Дружинина Т.А., Погодина В.В., Бочкова Н.Г. и др. Клещевой энцефалит в Ярославской области // Эпидемиол. и вакцинопрофилактика. 2002. №1 - с.39-41;

45. Дружинина Т.А., Погодина В.В., Бочкова Н.Г., Кретова Е.В., Башкирцев В.Н. О случаях клещевого энцефалита с алиментарным путем передачи в Ярославской области // Мед. вирусол., т. XXIV, М., 2007, с. 39-43;

46. Дубов В.А. Эпидемиологические особенности клещевого энцефалита в Западной Сибири в связи с биологическими свойствами возбудителя //Автореф. дисс. на соиск. уч. степ. д. м. н. Ленинград.- 1966.- с.7-29;

47. Жанков А.И. Сравнительное изучение белков флавивирусов: Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 1983. - с. 24;

48. Жанков А.И., Жданов В.М., Ляпустин В.Н. и др. Сравнительное изучение олигопептидных карт вирусспецифических белков вирусов комплекса клещевого энцефалита // Вопр. вирусол. 1985. - №1. - с. 8689;

49. Жданов В.М., Лашкевич В.А., Дживанян Т.П. Олигопептидное картирование вирусов комплекса клещевого энцефалита // Вопр. вирусол, 1981.- №1.- с. 20-33;

50. Жукова Н.Г., Команденко Н.И, Подоплекина Л.Е. Клещевой энцефалит в Томской области. Томск, 2002, с. 254;

51. Иерусалимский А.П. Клещевой энцефалит Новосибирск, 2001;

52. Ильенко В.И. Экспериментальные данные к механизму алиментарного заражения двухволновым вирусным менингоэнцефалитом. Acta virologica, 1957, т.1, в.1, с. 46-56;

53. Инфекционные заболевания в России. Статистический справочник // М., 1992 с.45-47;

54. Каверин Н.В. Генетические взаимодействия вирусов. В кн. «Медицинская вирусология», руководство под. ред. Д.К. Львова, 2008, М., с. 68-74;

55. Калишер Ч.Х (Calisher С.Н.). Антигенная классификация и таксономия флавивирусов (семейство Flaviviridae). Создание универсальной системы для таксономии вирусов, вызывающих клещевой энцефалит // Acta virol. 1988. - Т.32. - с.464-473;

56. Караванов A.C., Матвеев Л.Э., Рубин С.Г. и др. Идентификация отдельных антигенных эпитопов белка оболочки вируса клещевого энцефалита с применением моноклональных антител // Вопр. вирусол. -1990,-№2.-с. 140-143;

57. Карань Л.С., Браславская С.И., Мязин А.Е. Развитие методов детекции и генотипирования вируса клещевого энцефалита на основе амплификационных технологий //Вопр. вирусол., 2007, №6, с. 17-22;

58. Карань Л.С., Колясникова Н.М., Махнева H.A. и др. Применение ПЦР в режиме реального времени для диагностики различных клещевых инфекций. ЖМЭИ, М., 2010, №3, 72-77;

59. Карань Л.С., Маленко Г.В., Бочкова Н.Г. и др. Применение молекулярно-генетических методик для изучения структуры штаммов вируса клещевого энцефалита. Бюлл. СО РАМН, 2007, 4, с. 34-40;

60. Карпов С.П., Попов В.М. В кн.: Тез. Докл. 7-й выездной сессии ин-та им. Д.И. Ивановского АМН СССР в г. Томске. М., 1954, 15-17;

61. Ключиков В.Н. Прогредиентные формы клещевого энцефалита //Автореферат диссертации на соиск. ученой степени д.м.н. М. -1965.-с.2-3.

62. Кокорев B.C., Закирова С.Ф., Соломин H.H. В кн.: Матер. XI сессии инта полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР. М., 1964, 114;

63. Колясникова Н.М. Мониторинг структуры популяции вируса клещевого эцефалита в Уральском, Западно-Сибирском и Северо-западном регионах России (вирусологические и молекулярно-биологические исследования). Дисс. канд. мед. наук, 2008;

64. Колясникова Н.М., Махнева H.A., Топоркова М.Г. и др. Генодиагностика спектра инфекций, передающихся иксодовыми клещами. Тезисы доклада. Екатеринбург, Вестник УГМА, №21, 2010, с. 187-188;

65. Коренберг Э.И. Мелкие млекопитающие и проблема природной очаговости клещевого энцефалита // Биологич. Журнал, 1979, т.58, в.4, с.242-252;

66. Коренберг Э.И. Клещевой энцефалит // Эволюция инфекционных болезней в России в XX веке.-М.-2003. Медицина. - с. 400 - 403;

67. Коренберг Э.И. Природная очаговость инфекций: современные проблемы и перспективы исследования // Зоологич. Журнал, 2010, т. 89, №1, с. 5-17;

68. Коренберг Э.И., Лихачева Т.В. Ретроспективный анализ многолетней динамики заболеваемости клещевым энцефалитом в России //Эпидемиологическая обстановка и стратегия борьбы с клещевым энцефалитом на современном этапе.- М. 2003 - с.9-10;

69. Корешкова Г.В. Изучение взаимодействия вирусов японского энцефалита и Западного Нила при экспериментальной смешанной инфекции. Дисс. Канд.биол. наук., 1979, М;

70. Корзан А.И., Протас И.И. Отдельные вопросы эпидемиологии клиники Центрально-Европейского (Западного) клещевого энцефалита в Брестской области республики Беларусь.// Мед. паразитология и паразитарн.болезни.-2004.- №2.- с. 19;

71. Короткое Ю.С. Анализ частотного спектра межсезонной динамики заболеваемости клещевым энцефалитом как основа статистического описания и прогнозирования эпидемиологического процесса // Мед. вирусол., М. 2007, т.ХХ1У, с.45-51;

72. Короткое Ю.С., Поутонен А.В., Иешко Е.П. и др. Изменение эпидемиологической и эпизоотологической обстановки в очагах клещевого энцефалита Республики Карелия на рубеже XX и XXI веков // Мед. вирусология, 2006, т. XXIII, с. 95-102;

73. Короткое Ю.С., Шеланова Г.Н., Богданова Н.Г. Динамика заболеваемости клещевым энцефалитом в Удмуртии на протяжении полувека (1957-2007 гг.). Мед. вирусол., т.ХХУ, 2008, с.80-89;

74. Кучкова Е.В. Случаи трансплацентарного заражения ВКЭ / Кучкова Е.В., Внуковская Е.А., Уфимцева Л.А. Сб. материалов VI Российского съезда врачей-инфекционистов, 29-31 октября. Спб. 2003. - с.201;

75. Левина Л.С., Бочкова Н.Г., Маленко Г.В., Карань Л.С., Колясникова Н.М., Скрынник С.М., Башкирцев В.Н., Погодина В.В. Изменение структуры популяции вируса клещевого энцефалита в Курганской области. Медицинская вирусология, 2009, т. XXIV, с. 103;

76. Левкин В.П., Пургаев Е.И., Садовникова В.Н. Заболеваемость населения Российской Федерации клещевым энцефалитом в 1998-2000 годах // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов.-М.-2002.-с.352-353;

77. Левкович E.H. Вирусологические и иммунологические исследования вспышки энцефалита в Ленинградской области // Весенне-летний энцефалит в Ленинградской области. Л., 1945. - с. 82-93;

78. Левкович E.H., Погодина В.В., Засухина Г.Д., Карпович Л.Г. Вирусы комплекса клещевого энцефалита, Медицина, Ленинградское отделение, 1967, с. 153;

79. Леонова Г.Н. Клещевой энцефалит в Приморском крае // Владивосток.-1997.-е. 15-179;

80. Леонова Г.Н. Механизм формирования гетерогенной популяции вируса клещевого энцефалита на юге Дальнего Востока // Тихоокеан. медиц. Журн. 1998. - №1. с.83-87;

81. Леонова Г.Н., Кожемяко В.Б., Исаева М.И., Майстровская О.С. Молекулярная характеристика популяции вируса клещевого энцефалита Южно-Сихотэ-Алиньского очагового региона // Вопр. вирусол. 1996. -№4-с. 154-158;

82. Лесникова М.В., Лесников И.Р., Филоненко И.В. и др. Особенности клещевого энцефалита на территории Вологодской области. Мед. вирусол., 2007, т. XXIV, с. 53-58;

83. Львов Д.К. // Иммунопрофилактика клещевого энцефалита. Дисс. докт мед. наук. - М., 1965;

84. Львов Д.К., Шелканов М.Ю. Буньявирусы (Bunyaviridae). В кн. «Медицинская вирусология» руководство под ред. Д.К. Львова, 2008, М., 138-164;

85. Маленко Г.В., Погодина В.В., Карань Л.С., Колясникова Н.М. и др. Мониторинг популяции вируса клещевого энцефалита в Кемеровскойобласти и особенности современной эпидситуации. Мед. вирусол, 2006; т. XXIII, с. 103-109;

86. Маленко Г.В., Погодина В.В., Фролова М.П. и др. Стратегия выбора антибиотиков для терапии бактериальных инфекций, ассоциирующихся с хроническим клещевым энцефалитом. Вопросы вирусологии, 1996, 3 с.138-141;

87. Медведева Г.С. Дифференциация вирусов Гета и Синдбис и особенности взаимодействия их популяций при смешанной инфекции. Дисс канд. мед. наук, 1978, М;

88. Меркушев Н.В., Груздова В.И., Литвинова В.А. Клещевой энцефалит в Псковской области //Эпидемиологическая обстановка и стратегия борьбы с клещевым энцефалитом на современном этапе.- М. 2003. - с. 35-36;

89. Мефодьев В.В., Кашуба Э.А., Козлов Л.Б., Огурцов А.А. Эколого-эпидемиологические аспекты клещевого энцефалита на сопряженных территориях Урала и Сибири // Екатеринбург.-2002.-с.93;

90. Мишаева Н.П., Ефремова Т.А., Володкович О.И. и др. Клещевые нейроинфекции в Беларуси // Медицина в Кузбассе. Актуальные проблемы клещевых нейроинфекций. Кемерово, 2008, №5, с. 109-111;

91. Монастырская Г.С., Костина М.Б., Филюкова О.Б. и др. Активация гена ЫЮ-1, кодирующего ОехЕ1/Е)-белок, при инфекции клеток ЯН вирусом клещевого энцефалита // Биоорган, химия. 2004. - Т.30 - с. 146-150;

92. Морозов Ю.В. О видовом составе животных, участвующих в процессе циркуляции вируса клещевого энцефалита. Бюлл. МОИП, отд. биол. 1961, 3, 5, 19;

93. Найдич Г.Н., Чигирик Е.Д., Чумак Н.Ф. и др. // Методы профилактики и оздоровления местности от клещевого энцефалита в районах Кемеровской области // IX совещание по паразитарным проблемам. Л., 1959 -1 с. 69-70;

94. Нафеев A.A., Меркулов A.B. Эпизоотолого-эпидемиологический надзор в сочетанных очагах иксодовых клещевых боррелиозов и клещевого энцефалита //Мед. паразитология и паразитарные болезни.-2000.-№3.-с.54-55;

95. Никитин А.Я., Козлова Ю.А., Прадедова Е.В. и др. Фенотипическое и генотипическое разнообразие таежного клеща на территории Иркутской области // Ж. инфекционной патологии, 2009, т. 16, №3, с. 156-160, Иркутск;

96. Письмо Федеральной службы Роспотребнадзора №01/15412-9-32 от 16.10.09;

97. Погодина В.В. Алиментарное заражение клещевым энцефалитом (эпидемиологические и экспериментальные обоснования). Дисс. канд. мед. наук, М., 1958;

98. Погодина. В.В. Мониторинг популяций вируса клещевого энцефалита и этиологической структуры заболеваемости за 60-летний период. Вопр. вирусол., 2005, 3, с.7-13;

99. Погодина В.В., Бочкова Н.Г., Дживанян Т.И. и др. Явление антигенной дефектности у циркулирующих в природе штаммов вирусаклещевого энцефалита и его возможная связь с серонегативными формами заболевания // Вопр. вирусол, 1992, №2, с. 103-107;

100. Погодина В.В., Бочкова Н.Г., Злобин В.И. и др. Генетическая характеристика серотипа Вергина вируса клещевого энцефалита и особенности его патогенности // Вопр. вирусол. 1993. - №4 - с. 158162;

101. Погодина В.В., Бочкова Н.Г., Злобин В.И. и др. Вергинаподобные штаммы вируса клещевого энцефалита в России// Вопр. вирусол. 1995. - №6 - с. 260-264;

102. Погодина В.В., Бочкова Н.Г., Карань JI.C. и др. Сибирский и дальневосточный подтипы вируса клещевого энцефалита в европейских и азиатских регионах России: генетическая и антигенная характеристика штаммов // Вопр. вирусол. 2004. - №4 - с. 20-25;

103. Погодина В.В., Карань JI.C., Колясникова Н.М., Левина Л.С., Маленко Г.В. и др. Эволюция клещевого энцефалита и проблема эволюции возбудителя // Вопр. вирусол. 2007. - №5 - с. 16-20;

104. Погодина В.В., Романенко В.В., Карань Л.С., Есюнина М.С. и др. Структура популяции вируса клещевого энцефалита в Свердловской области на современном этапе и вопросы вакцинопрофилактики. Мед. вирусол, 2006; т. XXIII, с. 110-115;

105. Погодина В.В., Трухина А.Г., Шаманин В.А. и др. Дезоксиолигонуклеотидные зонды, дифференцирующие антигенные и патогенетические варианты вируса клещевого энцефалита // Вопр. Вирусол. 1992. - №1. - с.53-56;

106. Погодина В.В., Фролова М.П., Ерман Б.А. Хронический клещевой энцефалит, 1986, Новосибирск, Наука;

107. Пономарев Д.Н. Нозогеография краевой инфекционной и паразитарной патологии Среднего Урала. Свердловск, 1974;

108. Пуховская Н.М. Изучение природных популяций вируса клещевого энцефалита методом молекулярной гибридизациинуклеиновых кислот: Автореферат дис. . .канд. мед. наук. Москва. -1994. - 24 с;

109. Романенко В.В., Анкудинова A.B., Килячина A.C. Эффективность программы массовой вакцинопрофилактики клещевого энцефалита в Свердловской области // Вестник УГМА, 2010, в.21, с. 125-132, Екатеринбург;

110. Романенко В.В., Есюнина Е.С., Килячина A.C., Пименова Т.А. Массовая иммунизация населения Свердловской области против клещевого энцефалита, ее эпидемиологическая, клиническая иммунологическая эффективность. Мед. вирусол., т. XXIII, Москва, 2006;

111. Самаров М.Н., Воробьева H.H., Мерзлова Н.Б. Микст-инфекции, передающиеся иксодовыми клещами у детей Пермского края // Медицина в Кузбассе. Актуальные проблемы клещевых нейроинфекций. Кемерово, 2008, №5, с. 138-139;

112. СП 3.1.3.2352-08. Профилактика клещевого вирусного энцефалита, 2008;

113. Сарманова Е.С. Клещевой энцефалит (этиология, иммунология, лабораторная диагностика, клинико-эпидемиологические особенности и профилактика по материалам Кемеровской области) // Дисс. докт мед. наук.-М., 1968-с. 441;

114. Селютина H.A. Материалы по клинической и эпидемиологической иммунологии клещевого энцефалита // Дисс. докт мед. наук. М., 1971;

115. Семенов В.А., Субботин A.B. К вопросу об этиологии клещевого энцефалита с двухволновым течением. //Эпидемиологическая обстановка и стратегия борьбы с клещевым энцефалитом на современном этапе.- М. 2003. - с.20-21;

116. Скрынник С.М., Карань J1.C. Оценка зараженности клещей I. persulcatus вирусом клещевого энцефалита, боррелиями комплекса

117. B.burgdorferi s.L, A. phagocytophillum и E. mûris в северо-западной части Курганской области. // Мед. вирусол., 2009, т. XVI, с. 129-131;

118. Смородинцев A.A., Алексеев Б.П., Чумакова В.П. и др. Эпидемиологические особенности двухволнового вирусного менингоэнцефалита. ЖМЭИ, 1953, 5, с.54-59;

119. Смородинцев A.A., Неустроев В.Д., Дробышевская А.И. О восприимчивости грызунов к искусственному заражению вирусом весенне-летнего (клещевого) и летнего (японского) энцефалита. Арх. биол. наук, 1939, т. 56, в. 2, №11;

120. Современная ситуация по клещевому энцефалиту в Монголии. // Эпидемиологическая обстановка и стратегия борьбы с клещевым энцефалитом на современном этапе.- М.,- 2003-с. 38-39;

121. Соловьев В.Д. Серологические особенности крови животных в эндемическом очаге весенне-летнего энцефалита. Арх. биол. наук, 1939, т. 56, в. 2, в. 11, 147;

122. Сомова С.М., Гуляева С.Е., Леонова Г.Н. Патоморфоз клещевого энцефалита в Приморском крае. // Эпидемиологическая обстановка и стратегия борьбы с клещевым энцефална совр. этапе.-М.,- 2003 с. 3940;

123. Трухина А.Г. Особенности циркуляции возбудителя КЭ в зоне распространения двух серотипов вируса на территории Прибайкалья: Дисс. канд. мед. наук. Иркутск, 1989 - 176 е.;

124. Туваков М.К., Борисов В.А., Аитов К.А. и др. Эпидемиология микст-форм природно-очаговых трансмиссивных иксодовыхзаболеваний в Прибайкалье // Вестник УГМА, 2010, в.21, с.207-208, Екатеринбург;

125. Тюшнякова М.К. Характеристика антигена из аттенуированного вируса клещевого энцефалита для реакции связывания комплемента Сб. «Клещ энцеф., лептоспирозы, листериоз, токсоплазмоз», Томск. Томск. Универс., 1963,17;

126. Урываев J1.B., Соколова Т.М., Лебедев А.Ю. и др. Рекомбинантные арбовирусы в природе и эксперименте. // Журнал инфекционной патологии, 1997, Иркутск, т.4, №2/3, с. 1-9;

127. Фролова Т.В., Фролова М.П., Погодина В.В. и др. Патогенез персистентной и хронической форм клещевого энцефалита (экспериментальные исследования) // Журн. Невропатологии и психиатрии им. Корсакова, 1987, t.LXXXVII в.2., с. 170-178;

128. Хаснатинов М.А., Данчинова Г.А., Кулакова Н.В. и др. Генетическая характеристика возбудителя клещевого энцефалита в Монголии. Вопр. вирусол, 2010, 3, с. 27-32;

129. Хозинская Г.А. Изучение экологических аспектов смешанной инфекции вирусами Повассан и клещевого энцефалита иксодовых клещей, позвоночных животных и культур клеток // автореферат дисс. канд. биол. наук, 1986, М.;

130. Чумаков М.П., Горчаковская Н.Н., Найдич Г.Н. и др. Возможность ликвидации заболеваемости клещевым энцефалитом путем истребления переносчика стойким акарицидом. // В кн.: Эндемичные вирусные инфекции. М., 1968 -12 - с.229;

131. Чумаков М.П., Львов Д.К., Найдич Г.Н. Данные по эффективности специфической профилактики клещевого энцефалита // Клещевой энцефалит и вирусные геморрагические лихорадки. Омск, 1963.с.275;

132. Чумаков М.П., Рубин С.Г., Линев М.Б. Три антигенных типа вируса клещевого энцефалита, их зависимость от основных видов клещей-переносчиков и географическое распространение // Вопр. мед. вирусол. М., 1975. - с.371-372;

133. Чунихин С.П., Леонова Г.Н. Экология и географическое распространение арбовирусов. АМН СССР. М: Медицина, 1985;

134. Шаповал А.Н. Клещевой энцефаломиелит. Л.: Медицина, 1980. — с.15;

135. Шаповал А.Н. «Страницы воспоминаний о друге» в кн. Воспоминания о Михаиле Петровиче Чумакове, М., 1999, с. 13-19;

136. Шетекаури С.А., Марьина Н.М., Солохина Д.В. Патоморфоз клещевого энцефалита в Красноярском крае за 5 0-летний период //Эпидемиологическая обстановка и стратегия борьбы с клещевым энцефалитом на современном этапе.- М. 2003. - с.44-45;

137. Ястребов В.К. Изменения нозоареала клещевого энцефалита в Сибири и на Дальнем Востоке //Эпидемиологическая обстановка и стратегия борьбы с клещ, энцефалитом на совр. этапе.- М. 2003 - с.12-13;

138. Ястребов В.К., Хазов Т.Г. Многолетний опыт анализа мест заражения населения трансмиссивными природноочаговыми инфекциями в Красноярском крае //Эпидемиол. и инфекц. бол. -1997.-№3. с.17-18;

139. Alekseev A.N., Dubinina N.N. Abnormalities in Ixodes ticks (Ixodidae Ixodinae) // Acarina, 1993, v 1, №1, p.73-78;

140. Allison S.L., Schalich J., Stiasny K. et al. Mutational evidence for an internal fusion peptide in flavivirus envelope protein E // J. Virol. 2001. -Vol.75,-p. 4268-4275;

141. Bakhvalova V.N. Dobrovolsky A.K., Panov V.V. et al. Natural tickborne encephalitis virus infection among wild small mammals in the SouthEastern part of Western Siberia, Russia // Vector-borne and zoonotic diseases -2006., vol.6, №l,p/32-41;

142. Blaskovic D. Epidemic encephalitidy v roznavskom prirodnom ohni sku nakaz. SAV, Bratislava, 1954;

143. Block J. Genetic relationships of Dengue virus serocomplex // J. Gen Virol. 1985.-Vol.66.-p. 1323-1325;

144. Casals J., Brown L. Haemagglutination on with anthropoid borne viruses // J. Exper. Medicine. 1954. - Vol.99 - p. 429;

145. Casati S., Gern L., Pifaretti J.C. Diversity of the population of Tickborne encephalitis virus infecting Ixodes ricinus ticks in an endemic area of central Switzerland (Canton Bern) // J. Gen. Virol. 2006. - Vol. 87 - p.2235-2241;

146. Chambers T.J., Hahn C.S., Galler R., Rice C.M. Flavivirus genome organization, expression and replication // Annu. Rev. Microbiol. 1990. -Vol.44 - p.649-668;

147. Clarke D.H. Bull. World Health Organization (Geneva), 1964, 31, 1, 45;

148. Ecker M., Allison, S., Meixner, Т., Heinz, F. Sequence analysis and genetic classification of tick-borne encephalitis viruses from Europe and Asia // J. Gen. Virol. 1999. - Vol. 80 - p. 179-185;

149. Fenner F., Mc Auslan B.R., Mims C.A. et al. The biology of animal viruses, 1974, Acad. Press (Феннер Ф., Мак-Ослен Б., Миме С. И др. -Биология вирусов животных, том I, М., 1977. Под ред. В.И. Агола, гл. 7 «Генетика вирусов», с. 361-418);

150. Flamand М., Megret F., Mathieu М. et al. Denge virus type 1 nonstructural glycoprotein NS1 is secreted from mammalian cells as a soluble hexamer in a glycosilation-dependent fashion // J. Virol. 1999. - Vol.73 -p.6104-6110;

151. Floris R., Altoibrli A., Boemo B. et al. First detection of TBE virus sequences in Ixodes ricinus from Friuli Venezia Giulia (Italy) // New Microbiol. 2006. - Vol.29, - p. 147-150;

152. Fokina G.I., Malenko G.V., Levina L.S. et al. Persistence of tick-borne encephalitis virus in monkeys. V. Virus localization after subcutaneous inoculation. // Acta Virol, 1982, 26, p.369-375;

153. Golovljova I., Vene S., Sjolander K.B. et al. Characterization of tickborne encephalitis virus from Estonia // J. Med. Virol. 2004. - Vol.74. -p.580-588;

154. Gorbaleva A.E., Donchenko A.P., Koonin E.V., Blinov V.M. N-terminal domains of putative helicases of flavi- and pestiviruses may be serine proteases // Nucl. Asids Res. 1989. - Vol.17 - p.3889-3897;

155. Gorbaleva A.E., Koonin E.V., Donchenko A.P., Blinov V.M. Two related superfamilies of putative helicases involved in replication, recombination, repair and expression of DNA and RNA genomes // Nucl. Asids Res. 1989. - Vol.17 - p.4713-4729;

156. Gritsun T.S., Venugopal K., Zanotto P.M. et al. Complete sequence of two tick-borne flavivirus isolated fron Siberia and UK: analysis and significance of the 5' and 3' UTRs // Virus Res. - 1997. - Vol.49. - p.27-39;

157. Hall R.A., Khromykh A.A., Mackenzie J.M. et al. Loss of dimerisation of the nonstructural protein NS1 of Kunjin virus delays viral replication and reduces virulence in mice, but still allows secretion of NS1 // Virology . -1999.-Vol. 264,-p. 66-75;

158. Hayasaka D., Suzuki Y., Kariva H. et al. Phylogenic and virulence analysis of tick-borne encephalitis viruses from Japan and far-eastern Russia // J. Gen. Virol. 1999. - Vol.80. - p.3127-3135;

159. Hayasaka D., Ivanov L., Leonova G.N. et al. Distribution and characterization of tick-borne encephalitis viruses from Siberia and far-eastern Asia // J. Gen. Virol. 2001. - Vol.82. - p. 1319-1328;

160. Heinz F.X., Berger M., Tuma W., Kunz Ch. A topological and functional model of epitopes on the structural glycoprotein of tick-borne encephalitis virus defined by monoclonal antibodies // Virology. 1983. -Vol. 126-p. 525-537;

161. Heinz F.X., Collett M.S., Purcell R.H. et al., 2000. Family Flaviviridae// Virus taxonomy: classification and nomenclature of viruses. 7 report of the Internation. Committee of Taxonomy of Viruses. San Diego, 2000;

162. Heinz F.X., Kunz Ch. Homogenity of structural glycoprotein from European isolates of tick-borne encephalitis virus: comparison with other flaviviruses // J. Gen. Virol. 1981. - Vol. 57 - p. 263-274;

163. Heinz F.X., Kunz Ch. Molecular epidemiology of tick-borne encephalitis virus: peptide mapping of large nonstructural protein of European isolates comparison with other flaviviruses // J. Gen. Virol. 1982. - Vol. 62 -p. 271-283;

164. Heinz F.X., Tuma W., Kunz Ch. Antigenic and immunogenic properties of defined physical forms of tick-borne encephalitis virus structural proteins // Infect, and immun. 1981. - Vol. 33. - №2. - p. 250-257;

165. Hoglung M., Vene S., Forsgren M. et al. Characterization of human tick-borne encephalitis virus from Sweden // J. Med. Virol. 2003. - Vol.71, -p. 610-621;

166. Holzmann H., Mandl C.W., Guirakhoo F. Et al. Molecular epidemiology of tick-borne encephalitis (TBE) virus // 2nd Intern. Symposium on Tick-Borne Encephalitis, 6-7 June, 1991. Baden near Vienna, Austria, 1991.-p.66;

167. Iddskeldinen A.E., Tikkakoski T., Uzcotegui N.Y. et al. Siberian subtype tick-borne encephalitis virus, Finland // Emerg. Infect. Dis. 2006. -Vol. 12-p. 1568-1571;

168. Jervis G.A., Huggins G.H. Russian Spring-Summer Encephalitis (clinico-pathologic report of a case in the human). J. Neuropath and exp. Neurol., 1953, 12, 1;

169. Jones L.D., Davies C.R., Steele G.M., Nuttall P.A. A novel mode of arbovirus transmission involving anonviremic host. Science. 1987, Aug 14; 237(4816):775-7;

170. Kaarinen L., Solderlund H. Structure and replication of alphaviruses // Curr. Trop. Microbiol. Immunol. 1978. - Vol.82 - p. 15-69;

171. Karan L.S., Yakimenko A.E., Platonov A.E., et al. Phylogeny of Omskthhemorrhagic fever virus // Abstr. of 4 Internat. Conferences of Emerging

172. Zoonos. Ames. USA, 2003, p.94;

173. Koonin E.V. Computer-assisted identification of putative methyltransferase domain in NS5 protein of flaviviruses and lambda 2 protein of reovirus // J. Gen. Virol. 1993/ - Vol.74 -p.733-740;

174. Lin Y.L., Chen L.K., Liao C.L. et al. DNA immunization with Japanese encephalitis virus nonstructural protein NS1 elicit protective immunity in mice//J. Virol. 1998.-Vol.72-p.191-200;

175. Lundkvist A., Vene S., Golovljova J. Et al. Characterization of the tickborne encephalitis virus from Latvia: evidence for cocirculation on the distinct subtypes // J. Med. Virol. 2001. - Vol.65. - 730-735;

176. Mackenzie J.M., Khromykh A.A., Jones M.K., Westaway E.G. Subcellular localization and some biochemical properties of the flavivirus Kunjin nonstructural proteins NS2A and NS4A // Virology . 1998. - Vol. 245,-p. 203-215;

177. Malet H., Egloff M.P., Selisko B. et al. Crystal structure of the RNA polymerase domain of the West Nile virus no-structural protein 5 // J. Biol.

178. Chem. 2007 - Manuscript M607273200, http://www.ibc.Org/cgi/doi/10.1074/ibc.M.607273200;

179. Mandl C.W., Heinz F.X., Stockl E., Kunz C. Genome sequency of tickborne encephalitis virus (Western Subtype) and comparative analysis of nonstructural proteins with others flaviviruses // Virology. 1989. - Vol.173 -p. 291-301;

180. Nowak T., Wenger G. Analysis of disulfides present in the membrane proteins of West Nile flavivirus //Virology . 1987. - Vol.156, - p. 127-137;

181. Odum E.P. Fundamentals of Ecology, 1971, K.B. Saunders Company, Philadelphia-London-Toronto;

182. Pletnev A.G., Yamshikov V.F., Blinov V.M. Nucleotide sequence of the genome and complete amino sequence of the polyprotein of tick-borne encephalitis virus // Virology. 1990. - Vol.174. - p. 250-263;

183. Pogodina V.V., Frolova T.V., Frolova M.P. et al. Molecular hybridization with cloned fragments of tick-borne encephalitis (TBE) virus cDNA in acute and chronic TBE infection // Acta Virol, 1991, 35, p.71-80;

184. Pogodina V.V., Frolova M.P., Malenko G.V. et al. Persistence of tickborne encephalitis virus in monkeys. I. Features of experimental infection // Acta Virol, 1981, 25, p.337-343;

185. Pogodina V.V., Koreshkova G.V. Interspecies interaction of arboviruses. I. Competition phenomenon in mixed population of Japanese encephalitis and West Nile viruses. Acta virologica, 1976, v.20, №4, p. 313319;

186. Pogodina V.V., Medvedeva G.S. Interspecies interaction of arboviruses. III. Competition for virus envelope antigens in mixed Getah and Sindbis virus population. Acta virologica, 1978, v.22, №4, p. 270-277;

187. Reed L.J., Muench H.A., A simple method of estimating fifty percent endpoints // Amer. J. Hyg. 1938. - No27. - p. 493-497

188. Rey F.A., Heinz F.X., Mandl C. et al. The envelope glycoprotein from tick-borne encephalitis virus at 2A resolution // Nature. 1995. - Vol.375. -p. 291-298;

189. Rice C.M., Lenches E.M., Eddy S.R. et al. Nucleotide sequence of yellow fever virus: implication for flavivirus gene expressions // Science. -1985.-Vol.229-p. 726-733;

190. Rubin S.G., Chumakov M.P. New data on the antigenic types of tickborne encephalitis (TBE) virus. In: Arboviruses in the Mediterranean countries. Stuttgart-New York. - 1980. - p. 231-236;

191. Shamanin V.A., Pletnev A.G., Rubin S.G., Zlobin V.l. Differentiation of strains of tick-borne encephalitis virus by means of RNA-DNA hybridization//J. Gen Virol. 1990 - Vol.71 - p.1505-1515;

192. Skarpaas T., Golovljova I., Vene S. et al. Tick-borne encephalitis virus in Norway and Denmark // Emerg. Infect. Dis. 2006. Vol. 12. - p. 411-415;

193. Suss J., Schräder C., Abel U. et al. Characterization of tick-borne encephalitis (TBE) foci in Germany and Latvia (1997-2000) // Int. J. Med. Microbiol. 2002. - Suppl. 33. - p. 22-29;

194. Svitkin Y.V., Ugarova T.Y., Chernovskaya T.V. et al. Translation of tick-borne EV genome, in vitro synthesis of two structural polypeptides // Virology. 1981 - Vol.110-p.26-34;

195. Ternovoy V.A., Kurzhukov G.P., Sokolov Y.V. et al. Tick-borne encephalitis virus with Haemorrhagic syndrome, Novosibirsk Region, Russia, 1999 // Emerg. Inf. Dis., 2003, vol.9, p.743-746;

196. Weidmann M., Schmid P., Hufert F.T. et al. Tick-borne encephalitis virus in Clethrionomys glareolus in Czech Republic // Vector Borne Zoonotic Dis. 2006. Vol. 6. - p. 379-381;

197. Wengler G., Beato M., Wengler G. In vitro translation of 42S virus specific RNA from cells infected with flavivirus West Nile virus // Virology. 1979. - Vol. 96. - p. 516-529;

198. Westawey E.G., Khromykh A.A., Kenney M.T., et al. Proteins C and NS4B of the flavivirus Kunjin translocate independently into the nucleus // Virology. 1997. Vol. 234. - p. 31-41;

199. Work T.H. On the Japanese B West Nile virus complex or an arbovirus problem of six continents. Amer. Jour. Tropic med. hig. 1971, 20, 2, p. 169186;

200. Wu J., Bera A.K., Kuhn R.G., Smith J.L. Structure of the flavivrus helicase: Implications for catalytic activity, protein interactions, and proteolytic processing // J. Virol. 2005. - Vol/79 - p. 10268-10277;

Информация о работе

Герасимов, Сергей Геннадьевич
кандидата медицинских наук
Москва, 2012
ВАК 03.02.02

Диссертация

Эволюция клещевого энцефалита в Центральном федеральном округе России. Моделирование смены подтипов возбудителя в эксперименте. - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Эволюция клещевого энцефалита в Центральном федеральном округе России. Моделирование смены подтипов возбудителя в эксперименте. - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы