Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экспериментальный трихинеллез животных, вызванный Trichinella pseudospiralis (Garkavi, 1972) и Trichintlla spiralis (Owen, 1835)

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Экспериментальный трихинеллез животных, вызванный Trichinella pseudospiralis (Garkavi, 1972) и Trichintlla spiralis (Owen, 1835)"

L ä гл Ь

На правах рукописи

МИТНИКОВА Оксана Анатольевна

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ ТРИХИНЕЛЛЕЗ ЖИВОТНЫХ, ВЫЗВАННЫЙ TRICHINELLA PSEUDOSPIRALIS (GARKAVI, 1972)И TRICHINELLA SPIRALIS (OWEN, 1835)

03.00.19 - ПАРАЗИТОЛОГИЯ И ГЕЛЬМИНТОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук -

Ставрополь - 1998

Работа выполнена в Краснодарской научно-исследовательской ветеринарной станции

Научные руководители:

к.вет.н. Сапунов А.Я.

д.вет.н.,проф.Колесников В.И.

Официальные оппоненты:

д.вет.н.,проф.Водянов А.А. (СГСХА)

к.вет.н. Оробец В.А.(СНИВС)

Ведущая организация - Кубанский государственный аграрный университет

Защита диссертации состоится декабря 1998 г.. в 71/

часов на заседании диссертационного совета Д.120.53.02 при Ставропольской государственной сельскохозяйственной академии по адресу: 355017, г.Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

Автореферат разослан 1998 рода

Ученый секретарь диссертационного совета доцент

Боголюбова А.п.

1.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Трихинеллез является опасным зооан-тропонозным заболеванием, широко распространенным во всем мире, включая Австралию, которая до конца 80-х годов считалась благополучной по этому гельминтозу. За последние 15 лет уровень три-хинеллезной инвазии у свиней, убитых на крупных мясокомбинатах страны возрос в 7,4 раза. Наряду со снижением числа убиваемых на мясо свиней общественного сектора, существенно возрастает количество ежегодно убиваемых частновладельческих свиней, зараженность которых Т.spiralis значительно выше. Заболеваемость людей трихинеллезом в России значительна и имеет тенденцию к дальнейшему увеличению. Так, в 1992 году в стране зарегистрировано 673 случая трихинеллеза у людей, в 1994 -1043 случая (А.С.Бессонов, 1996). После открытия в 1972 году В.Л.Гаркави нового вила трихинелл Г.pseudospiralis и признанием Всемирной организацией здравоохранения его валидности стали проводиться исследования по изучению роли бескапсульных трихинелл в эпизоотологии и эпидемиологии трихинеллеза. Кроме енота-.юлоскуня с 1981 года спонтанное инвазирование бескапсульными формами трихинелл было выявлено более чем у восьми видов млекопитающих и 11 видов птиц. Эпизоото-логической особенностью трихинеллеза, вызываемого

Т.pseudospiralis, является включение птиц в качестве облигатных хозяев в жизненный цикл паразита. В 1994 году в Новой Зеландии зарегистрировано естественное заражение Т.pseudospiralis человека (J.R.Andrews et al., 1994). Важное значение в эпидемиологии трихинеллеза- бескапсульный вид трихинелл приобрел после выявления ряда случаев спонтанного инвазирования домашних свиней Т.pseudospiralis в Тульской области (Р.А.Пенькова, 1988) и в Краснодарском крае (А.Я.Сапунов, О.А.Митникова и др., 1996), мясо которых может явиться источником заражения людей этими гельминтам]'!. За последние четыре года в Краснодарском крае зарегистрировано две вспышки заболевания людей трихинеллезом от источника, не характерного для данного региона - мяса собак (А.Я.Сапунов, Н.Е.Мурашов, 1996).

Таким образом, трихинеллез, по-прежноиу является острейшей проблемой медицины и ветеринарии практически во всех странах мира и его актуальность в значительной сг —>?1Ш возросла с открытием бескапсульных трихинелл, бколотая которых, а также, клиника и диагностик^ заболевания, ими вызываемого недостаточно изучена.

Цель я задачи исследован**. Исходя из вышеизложенного, перед нами стояла цель: изучить степень распространения T.pseudospiralis в синантропном биоценозе; выявить и изучить морфобиологические и патогенетические особенности

T.pseudospiralis, выделенных нами от спонтанно зараженных домашних СЕиней в сравнительном аспекте с Т.spiralis, изолированных также от домашних свиней и T.pseudospiralis, .выделенных от енота-полоскуна на экспериментально инвазированных свиньях, собаках и мелких лабораторных животных.

Для реализации указанной цели были сформулированы следующие задачи:

♦ провести трихинеллоскопические исследования по изучению степени распространения трихинеллеза, вызванного T.pseudospiralis среди домашних животных;

♦ изучить характер изменений морфометрических показателей личинок, половозрелых трихинелл и капсул при пассировании их на различных видах животных;

♦ установить длительность паразитирования трихинелл в кишечнике разных животных, интенсивность, локализацию их в различных отделах желудочно-кишечного тракта и соотношение полов;

♦ определить возможность внутриутробного и лактогенного путей передачи Зескапсульных трихинелл потомству;

♦ провести исследования по выявлению мигрирующих 'личинок трихинелл в кроЕи;

♦ изучить динамику расселения личинок трихинелл в мышцах;

♦ определить влияние различных физических факторов на жизнеспособность личинок трихинелл;

♦ выявить и изучить особенности клинического проявления трихинеллеза и определить' динамику прироста массы тела у домашних свиней и собак;

♦ изучить динамику морфологических, биохимических и иммунологических показателей крови и эффективность иммуноферментной реакции (ИФР) в зависимости от стадии развития инвазионного процесса;

♦ разработать и утвердить методические указания' по послеубойной (посмертной) диагностике трихинеллеза животных.

Научная новизна. В результате проведенных исследований

впервые:

♦ в стране и за рубежом выявлены случаи спонтанного заражения домашней кошки бескапс'ульным видом трихинелл и домашней собаки личинками T.pseudospiralis и Т.spiralis в ассоциации;

♦ на территории Краснодарского края в двух товарных свИноводче-

ских хозяйствах зарегистрированы случаи естественного инвазиро-вания свиней бескапсульными формами трихинелл;

♦ установлена длительность паразитирования трихинелл капсулооб-разугацего и бескапсульного видов в кишечнике свиней, интенсивность, локализация их в различных отделах желудочно-кишечного тракта и соотношение полов у данных гельминтов;

♦ выявлены мигрирующие личинки Г.рзеи<1озр1га11з в крови у экспериментально зараженных свиней;

♦ проведены в динамике морфологические я биохимические исследования крови у свиней, искусственно инвазированных /бескапсульным и капсулообразугацим видами (штаммами) трихинелл в сравнительном аспекте;

♦ получены новые данные при проведении иммунологических исследований крови относительно роли системы нейтрофильных гранулоцитов • в формировании иммунного статуса свиней, экспериментально зараженных разными видами (штаммами) трихинелл;

♦ осуществлена постановка ИФР с антигеном из капсулообразующих мышечных личинок трихинелл на свиньях, заведомо зараженных бес-капсульной фермой трихинелл.

Получены дополнительные экспериментальные данные относительно влияния вида хозяина на размеры личиночных и половозрелых форм трихинелл; об устойчивости личинок трихинелл разных видов в мышцах различных животных к низким температурам; об особенностях расселения Т.рзеисЬзрхгаИз. в мышцах свиней и собак; о характере клинического проявления трихинеллеза, вызванного Т-рэеисЗоэрл-гаНз у домашних свиней и собак; некоторых особенностях послеубойной (посмертной) диагностики трихинеллеза, вызванного Т.рзеис1озр1.га11з.

Прахтжчесхля.цавяоегя. Разработаны и утверждены:

♦ Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России "Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза - животных" от 28 октября 1998 г., » 13-7-2/1428;

♦ Управлением ветеринарии администрации Краснодарского края "Методические указания по послеубойной (посмертной) диагностики трихинеллеза животных" от 21 июля 1998 г.,:

♦ совместно с сотрудниками КрайСЭС, управления ветеринарии и го-сохотинспекции Краснодарского края инструктивно-методические предложения "О заболеваемости, мерах борьбы и профилактики трихинеллеза в Краснодарском крае" от 6 мая 1996 г., № 04-2-41.

Материалы наших экспериментальных иссг^дований используются при проведении лекционных, лабораторно-практических занятий со студентами факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ, на

курсах повышения квалификации Краснодарского института агробизнеса, а также при проведении тематических семинаров-совещаний с целью повышения уровня квалификации ветспециалистов учреждений госветсети, колхозов, совхозов и акционерных предприятий, ответственных за ветсанэкспертизу мяса л мясопродуктов, в том числе и трихинеллоскопию.

Апробация работа. Результаты исследований доложены и обсуждены на 7-й научной конференции по трихинеллезу человека и животных (Москва, 1996), 1 региональной конференции: "Актуальные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных на Северном Кавказе" (пос. Персиановский, 1998), заседаниях Ученого Совета Краснодарской НИВС (1996-1998). >

Основные положения, атосхша на аашнту:

1 .Распространение трихинеллеза, вызванного Т.рзеис1озрл.га11з среди домашних животных; особенности биологии трихинелл бескапсульного и капсулообразующего видов.

2.Клинические и патологоанатомические изменения у домашних животных при экспериментальном заражении их разными видами (штаммами) трихинелл.

3.Иммунобиологический статус, динамика гематологических и биохимических показателей у экспериментально инвазированных разными видами (штаммами) трихинелл домашних свиней и собак.

4.Усовершенствование метода послеубойной (по-смертной) диагностики трихинеллеза у животных.

Публикация. По материалам диссертационной работы опубликовано 8 научных работ.

Обпей и структура диссертации. Диссертация изложена на 217 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Работа включает 27 таблиц и 13 рисунков. Список использованной литературы состоит из 133 отечественных и 63 зарубежных источников.

2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Данная работа выполнялась нами в период с 1995 по 1998 год в хозяйствах края, лаборатории гельминтологии Краснодарской НИВС, краевой ветеринарной лаборатории и Кубанской государствен-■ ной медицинской академии. В опытах использовали следующие виды "и штаммы трихинелл: Т.рзеис1озр1га11з, выделенные • нами от свиньи из

ТОО "Победа" Северского района Краснодарского края (06.09.95 г.), Т.spiralis, изолированные в 1995 году от свиньи из колхоза "Звезда" Абинского района Краснодарского ' края и Т.pseudospiralis, выделенные в 1972 году от енота-полоскуна и полученные 17.0ё.96 г. из ИМПИТМ.

Для опыта было подобрано 11 поросят трехмесячного возраста средним весом около 20 кг. Проведены копрологические исследования до дегельминтизации и двукратно после нее. По принципу аналогов было сформировано 4 группы подопытных животных. Животных 1 группы заражали • личинками Т.spiralis, 2 - Т.pseudospiralis от свиньи и 3 - Т. pseudospiralis от енота-полоскуна в дозе 2 экз/г массы тела перорально "переваром", содержащим личинки трихинелл" 2-3 месячного возраста. Убой зараженных свиней производили через 30, 60 и 90 дней после инвазирования по одному из каждой опытной • группы.

Аналогичный по схеме опыт был проведен на 11 беспородных, бесхозных собаках, отловленных в черте города Краснодара. Примерный возраст подопытных животных составлял 5-7 месяцев, средняя живая масса 6,6 кг. Собаки были обработаны против круглых и ленточных гельминтов и спустя два дня - антирабической вакциной. Заражение собак произвели через 13 дней после вакцинации частично мясом, полученным после убоя свиней на 60 день инвазии и частично декапсулированными личинками трихинелл из этого же материала в общей дозе 5 экз/г массы тела. Опыт на собаках длился более 3 месяцев. Все подопытные животные(свиньи и собаки) были . пронумерованы индивидуальными ушными бирками и_содержались в виварии НИВС.

Определение. морфометрических показателей личинок трихинелл, их капсул, половозрелых форм, паразитирующих у различных видов животных, проводили на микроскопе МБС-10 по измерительной шкале и сетке с ценой деления 0,1 и 1,0 мм соответственно при увеличении 8x7 и 8x4. Личинками трихинелл, выделенными от лабораторных мышей, заражали свиней, а после их убоя инвазированным мясом и "переваром" - собак. Промеры личинок осуществляли на 30 день инвазии, а половозрелых трихинелл у мышей - на 8 сутки после заражения, у свиней - на 30, у собак - на 5, 16 и 17 сутки.

Наличие половозрелых трихинелл устанавливали, осуществляя полное гельминтологическое исследование желудка и кишечника методами последовательных' лромываний у свиней через 30, 60 и 90 дней после заражения; у собак - на 5, 16, 17 и 32 дни инвазии.

При изучении возможности внутриутробного и лактогенного путей передачи трихинеллезной инвазии использовали личинок

T.pseudospiralis, выделенных от 'домашних свиней. Собак заражали на' 45 день беременности, лабораторных мышей и крыс - в первый день лактации. Полученное потомство исследовали в 30-42 дневном возрасте.

Исследования по выявлению личинок трихинелл в крови у экспериментально зараженных свиней и собак проводили по методике Staubli (1905а), усовершенствованной Т.И.Поповой (1938), пяти-• кратко в течении первого месяца инвазии.

Динамику и интенсивность расселения личинок трихинелл в мышцах у экспериментально зараженных животных изучали методами 'компрессорной трихинеллоскопии и переваривания проб мышц в искусственном желудочном соке(ИЖС) по методике П.А.Владимировой (1965) .

Устойчивость личинок трихинелл к высыханию в мышцах свиней и собак изучали по методу И.Я.Зиморой (19636). Жизнеспособность и инвазионность личинок трихинелл определяли путем постановки биопробы на лабораторных животных.

Для морфологических и биохимических исследований взятие крови проводили у свиней- до начала эксперимента и через 7, .12, 20, 30, 60 и 90 дней после заражения; у собак - до начала инва-зирования и на 7, 14, 30, 60 и 75 дни после" него. Определение количества гемоглобина, эритроцитов, скорости оседания эритроцитов, лейкоцитов, лейкограммы, аспартат- и аланинаминотрансфе-раз, щелочной фосфатазы, общего белка и его фракций проводили по общепринятым методикам.

Для оценки иммунного статуса у подопытных животных были исследованы следующие показатели: количественное определение Т-лимфоцитов, ранних и поздних Е-розеткообразующих нейтрофильных гранулоцитов (Е-РОНр и Е-РОНп) в крови методом спонтанного ро-зеткообразования с эритроцитами барана по M.Joncial (1972) в-модификации И.О.Дзержинской (1982); реакция бактериального фагоцитоза нейтрофилов по методике, предложенной И.В.Нестеровой (1996) на предметных стеклах с тест-культурой Staph, aureus №209; спонтанный и стимулированный'- NBT-тест (средний цитохимический индекс, процент фармазан-позитивных клеток и коэффициент мобилизации) также по методике И.В.Нестеровой.

Постановку иммуноферментной реакции (ИФР) проводили, используя набор для диагностики трихинеллеза, . предоставленный сотрудниками ВИГИС.

Полученные цифровые данные экспериментальных исследований обработаны с помощью методов • вариационной статистики (А.Т.Усович, П.Т.Лебедев, 1970) с определением степени достовер-

ности по таблице Стыодента.

Всего на предмет спонтанного инвазирования домашних животных трихинеллами разных видов было посмертно-исследовано 980 голов свиней, 45 кошек, 124 собаки и 4 4 серые крысы. Экспериментальному заражению было подвергнуто 274 лабораторные мыши, 15 морских свинок, 13 белых крыс, три домашних голубя, 14 собак и" 11 свиней.

В процессе выполнения работы на экспериментально зараженных свиньях и собаках было проведено исследований: копрологических -70; клинико-диагностических - 1290; морфоыетрических - 750; морфологических - 1062; биохимических - 944; иммунологических -680; серологических ■- 62; трихинеллоскопических - 2500 (компрессорным методом - 300, методом переваривания мышц в ИЖС -600 и на наличие личинок в крови - 1600). Осуществлено шесть-восемь пассажей личинок капсулообразующего и бескапсульного видов ' трихинелл и восемь их вариететов, изолированных от домашних свиней, бурых медведей, енота-полоскуна, домашних собак и кошек на семи видах домашних, лабораторных животных и птицы.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1.Распространение T.pseudospiralis с синантропном биоценозе

Изучение степени распространения T.pseudospiralis среди домашних животных, проводимое на территории ряда неблагополучных хозяйств края и г. Краснодара показало, что из всего обследованного поголовья свиней 5,6% оказались зараженными трихинеллами, в том.числе в 0,4% случаев - Оескапсульным видом. У собак эти показатели составили' 2,4 и 0,8%, у кошек - 13,3 и 2,2% у крыс -9,1 и 0% соответственно. Кошки в большей степени, чем другие виды животных оказались инвазированы личинками Т.spiralis и T.pseudospiralis, что подтверждает их роль своеобразных "индикаторов", характеризующих состояние сложившейся не данной территории эпизоотической ситуации по трихинеллезу.■При проведении клинических, морфологических и биохимических исследований у собаки, отловленной в г.Краснодаре отмечали существенные отклонения от физиологической нормы. После эутанззии у нее была установлена смешанная трихинеллезная инвазия; вызванная личинками T.pseudospiralis и Т.spiralis в ассоциации, подтвержденная биопробами на белых мышах и птице.

3.2. Морфобмологические отличия разных штаммов • трихинелл в эксперименте

Длина личинок и половозрелых трихинелл бескапсульных штаммов в организме белых мышей, домашних свиней и собак.на 25-27% меньше длины капсулооОразующих трихинелл. При последовательных пассажах изменения длины личинок и половозрелых форм трихинелл, а также длины и ширины капсул, как в сторону увеличения' , так и в сторону уменьшения размеров в 45% случаев были достоверными.

Длительность паразитирования трихинелл капсулообразующего и беска'псульного видов в кишечнике у свиней составила более 60 дней, у собак -более 17 дней. Количество кишечных трихинелл бес-капсульного вида (штаммы от енота и свиньи) через 30 дней после заражения свиней составила 0,41 и 1,21%, трихинелл капсулообразующего вида - 0,22% от общего числа заданных каждому животному гельминтов. Через 60 дней после инвазирования в кишечнике свиней обнаружено всего 0,003% половозрелых T.pseudospiralis и 0,15% Т.spiralis от числа введенных личинок.Через месяц после заражения свиней от 83,5 до 98,9% половозрелых трихинелл локализовались в тощей кишке, остальные - в двенадцатиперстной, У собак- на 16-17 дни инвазии в желудке обнаруживали в среднем,7,4% от общего количества выделенных из желудочно-кишечного тракта трихинелл, в тонком отделе - 56,1 и в толстом 36,5%. Соотношение самцов и самок трихинелл в эти периоды исследований составило 1:16 у свиней и 1:18 у собак.

При высокой степени инвазии самок домашних и лабораторных животных личинками T.pseudospiralis, полученное от .них потомство в количестве 32 голов оказалось незараженными.

Обнаруженные в крови' у подопытных свиней на 22 день и собак на 14 день после заражения бескапсульные личинки трихинелл имели размеры тела, соответствующие взрослым инвазионным мышечным личинкам. Вероятному T.pseudospiralis возможна обратная миграция личинок из мышц в кровь.

Для изучения динамики и интенсивности расселения личинок трихинелл в мышцах у подоЪытных свиней на 30,60 и 90 день инвазии исследовали пробы от 12 групп поперечно-полосатых мышц, а на 90 день после заражения от каждого'из трех убитых животных дополнительно по 51 мышце. Существенного различия в расселении личинок трихинелл капсулообразующего и бескапсульного видов установлено не было. У свиней наиболее интенсивно поражаются личинками трихинелл мышцы корня языка, ножек диафрагмы,---'диафрагмы (реберная часть) и массетеров.Трихинеллоскопия биопсированных

и

полуперепончатых мышц, проводимая на 15, 20, 23, 45 и 75 дни после заражения позволила выявить личинок у свиней, инвазирован-ных трихинеллами капсулообразуюшего вида на 15 день'после заражения, а у зараженных бескапсульными трихинеллами - на 20 день и в обоих•случаях только методом ферментативного "переваривания". Этот метод оказался в 1,2-5 раз эффективнее метода компрессорной - трихинеллоскопии при выделении личинок Т.spiralis на ранней стадии развития трихинеллезного процесса, а при выделении личинок Т.pseudospiralls - на протяжении всего опыта.

Подопытные собаки на всех этапах исследования были в большей степени заражены личинками Т.spiralis. Из исследуемых 12 групп поперечно-полосатых мышц наибольшее количество бескапсуль-ных личинок трихинелл обнаруживали в мышцах корня языка, дифраг-мы (реберная часть), ножек диафрагмы, гортани и глотки; капсуло-образующих - в межреберных, диафрагме, ножках диафрагмы, подлопаточных, мышцах гортани и глотки, У собак, инвазированных Т.pseudospiralis, через 60-75 дней наступало "самовыздоровление" и личинок в мышцах при исследовании не обнаруживали. При биопси-ровании мышц длинных разгибателей пальцев у собак личинок капсу-лообразующего вида обнаруживали компресс. pt-.jM методом на 15, 33, 46 и 60 дни после заражения, а бескапсульного - только на 15 и 33 дни.

Результаты исследований по изучению устойчивости мышечных личинок трихинелл -к высыханию показали, что несмотря на некоторую разницу в количестве погибших личинок на различных этапах исследований (через 24, 48, 72 и 96 ч), 100%-ная гибель личинок Т.spiralis и Т.pseudospiralis от свиней произошла через 96 ч при уменьшении массы проб мышц в 3,6-4,5 раза. Личинки Т.pseudospiralis от енота ь мышцах свиней погибали через 72 часа при снижении массы проб в 2,8 раза. При температуре +4°С личинки бескапсульного вида в мышцах собак погибали через 90 дней, в мышцах свиней - через " 50. Личинки капсулооСразуюдего вида трихинелл при таких же условиях сохраняют свою жизнеспособность на 95 и 85% соответственно. В физиологическом растворе 30-дневные личинки Т.pseudospiralis от свиньи погибали на 7 сутки, Т.pseudospiralis от енота - на 6 сутки, а Т.spiralis - на 10 сутки. 60-дневные личинки погибали на 9, 7 и 15 дни соответственно. Бескапсульные личинки от енота полоскуна по сравнению с двумя другими видами (изолятами) трихинелл обладают меньшей резистентностью к низким температурам, быстрее погибают в физрастворе и менее подвижны в "переваре".

3.3. Клинические, лабораторные и патологоанатомические исследования при экспериментальном трихинеллезе свиней и собак

Общее физиологическое состояние подопытных свиней на протяжении всего эксперимента в целом было удовлетворительным. Достоверное повышение температуры- тела регистрировали у животных, зараженных личинками Т.spiralis на 11 день инвазии , у свиней зараженных T.pseudospiralis, выделенных от свиньи на 6, 9, и 11 и у животных , инвазированных T.pseudospiralis от енота - на 7 и il дни т.е. в конце кишечной - начале миграционной фазы развития инвазионного процесса. Повышение пульса и дыхания во всех случаях было связано с повышением температуры. Между 20 и 30 днями после заражения у поросят,, инвазированных бескапсульным видом трихинелл неоднократно наблюдали судороги задних конечностей и признаки миалгии. Достоверное снижение среднесуточного прироста массы тела отмечали у всех зараженных животных также преимущественно в конце кишечной - начале миграционной фазы.,

У собак проявление клинических признаков заболевания было выражено более четко: отказ со второго по пятый день от корма, повышенная жажда, угнетение, со второго по 11-й дни понос со слизью и примесью крови. На 5, 16 и 17 дни после заражения погибли три собаки, по одной из каждой группы. У животных, инвазированных калсулообразующим видом трихинелл, достоверное повышение температуры регистрировали периодически на всех стадиях развития инвазионного процесса (кишечной, миграционной, и мышечной), а у собак, зараженных бескапсульными личинками - только в кишечную фазу. За первый мёсяц инвазии среднесуточный прирост массы тела в первой группе собак был в 4,7 раза ниже, чем в контроле, а в третьей группе - в 2 раза. Судя по совокупности клинических признаков можно заключить, что на свиней большее патогенное влияние оказывают бескапсульные личинки трихинелл,, а на организм собак - капсулообразующие.

При морфологических й биохимических исследованиях крови было установлено, что количество эритроцитов, гемоглобина, палоч-коядерных нейтрофилов и альбуминов у всех подопытных животных на протяжении эксперимента находились в пределах физиологической нормы. Повышение на 25-881 скорости оседания эритроцитов, относительно контроля отмечали' только .в группе свиней, инвазированных личинками T.pseudospiralis от свиней. Эозинофи^ию регистрировали

на всех стадиях трихинеллезного процесса у свиней до 60 дня, у собак - до 30 и наиболее высокую отмечали среди животных, зараженных личинками Т.рчеийозр1гаНз от свиней (рис.1, 2).

Рис. 1. Количество эозинофилов у подопытных и контрольных свиней

Пик эозинофилии (относительно контроля) приходился на 7 сутки у собак и свиней, инвазированных бескапсульными формами трихинелл и на 12-14 у животных, зараженных капсулообразующими трихинеллами. В среднем за первый месяц инвазии уровень эозинофилов у обоих видов родопытных животных, зараженных Т.pseudospiralis в два раза превышал таковой у животных, инвазированных Т.spiralis. У свиней уровень эозинофилии в течении 30 дней после заражения был на 30% выше, чем у собак за. аналогичный период времени. Весьма показательным признаком на 7 день инвазии

явилось снижение активности аспартатаминотрансферазы (АсАТ) у свиней в 6-9 раз относительно контроля, у собак - в 1,2 раза, аланинаминотрансферазы (АлАТ), лимфоцитов, а у свиней еще и лейкоцитов и гамма-глобулинов. Наблюдалось повышение количества сегменто-ядерных нейтрофилов (СЯН) у свиней и.альфа-глобулинов у собак. Через 12-14 дней после заражения в крови свиней отмечали снижение активности щелочной фосфатазы (ЩФ) и количества лимфоцитов, увеличение числа СЯН. У собак стала повышаться активность всех исследуемых ферментов и альфа-глобулиновой фракции белков. Период с 20 по 30 день характеризовался понижением количества лейкоцитов у всех животных, у свиней кроме того наблюдали снижение уровня ШФ и гамма-глобулинов; у собак - лимфоцитов, происходило дальнейшее увеличение уровня активности ферментов. Через 60 дней с момента инвазирования у свиней вновь уменьшалось количество лимфоцитов, незначительно понизилось содержание в крови^ШФ; у собак - гамма-глобулинов. У обоих видов животных повышалась активность АлАТ, а у- свиней наблюдалось еще и повышение числа СЯН и активности АсАТ. На последнем этапе исследования (75-90 дни) у свиней регистрировали увеличение в два раза уровня активности АлАТ, в два-три раза количества СЯН и снижение в два раза числа лимфоцитов. У собак все показатели, кроме ШФ и АлАТ во второй группе находились в пределах физиологической нормы. В целом изменения в крови соответствовали фазам развития трихинел-лезного процесса.

Для иммунологических исследований кровь от подоптных свиней отбирали и исследовали до- заражения, на 7, 12, 20, 30, 60 и 90 дни после него. Изучение количества Т-лимфоцитов показало, что на 7 день инвазии в первой и второй группах регистрируется достоверное снижение числа данной популяции, лимфоцитов, а в третьей группе тенденция к снижению отмечается на- 12 и 30 дни опыта. Через 20 дней после заражения количество Т-лимфоцитов во всех опытных- группах' соответствовало контрольному уровню. В остальные сроки эксперимента у опытных животных выявлена стимуляция Т-лимфоцитов (рис.3).

Количество Е-РОН ранних на 7 день после заражения у свиней первой и третьей опытных групп было достоверно выше, чем в контроле, а во второй опытной группе наблюдалась тенденция к снижению данного показателя. Такая же тенденция к снижению, но уже у всех животных отмечалась на 12 день инвазии. На 90 день инвазии наблюдали тенденцию к активизации рецепторной функции НГ в первой и второй группах и тенденцию к снижению в. третьей группе (рис.4).

Уровень Е-г'ЭН поздних был также достоверно изменен, что выражалось в подавлении способности клеток к Е-розеткообразованию с 7 по 20 день скеперимента во всех исследуемых группах. При этом наибольшее подавление уровня поздних ■ Е-РОН отмечалось в группе животных, зараженных бескалсульными личинками от свиньи (рис.5).

Рис.4. Количество Е-РОН ранних

Изучение фагоцитарной активности НГ показало, что максимальный уровень активнооргоцитирующих клеток (относительно контроля) у животных, зараженных бескапсульным видом трихинелл отмечали на 7 день, а у инвазированных капсулообразующими трихинеллами - н? 20 день после заражения. К 30 дню показатели в первой группе оставались на высоком уровне, а в остальных приближа-

лись к контролю. В отдаленные сроки исследования была выявлена тенденция к снижению фагоцитарной активности (рис.6).

Рис. 6. Количество активных фагоцитов (% ФАН)

Исследование среднего цитохимического индекса (СЦИ) в спонтанном ШТ-тесте позволило выявить достоверную активацию данного показателя спустя 20 дней после заражения животных Сескапсульны-ми личинками от свиньи, однако в последующем наблюдалось истощение микробицидных кислород зависимых систем НГ. Между тем в первой и особенно в третьей опытных гуруппах незначительное повышение СЦИ спонтанного контрольных данных через 20-60 дней после заражения заключалось выраженной активацией показателя на по-

следних этапах эксперимента.

Антигенная нагрузка позволила выявить достоверную активацию на 7 день после заражения уровня фармазан-позитивных НГ в стимулированном NBT-тесте по сравнению со спонтанными в первой и второй опытных группах.

Постановка иммуноферментной реакции с антигеном из мышечных личинок капсулообразующего вида трихинелл показала, что и сыворотки крови от животных, инвазированных бескапсульным видом трихинелл дают положительный ответ, но его появление регистрировали в более поздние сроки исследования.Первые случаи появления положительных ответов в диагностическом титре 1:100 были отмечены у свиней, инвазированных личинками Т.spiralis на 7 день, а у зараженных T.pseudospiralis - на 12 день после заражения. Максимальный уровень интенсивности реакции зарегистрирован с 12 по 60 дни. Сыворотка от свиней, зараженных. T.pseudospiralis от енота давали больший процент слабоположительных реакций, чем сыворотки от свиней, сенсибилизированных другими видами (штаммами) трихинелл.

При патологоанатомическом исследовании у свиней через месяц после заражения отмечали серозно-катаральное воспаление слизистой оболочки дна желудка и толстого отдела кишечника с наличием немногочисленных изьявлений; через два месяца - острый катаральный гастроэнтероколит. Через три месяца после заражения изменения воспалительного характера в виде набухания и гиперемии слизистой оболочки на отдельных участках наблюдали только в тонком отделе 'кишечника. В печени на всех этапах исследования отмечали дистрофические изменения, выражающиеся в чередовании участков обычного коричнево-крдсйого цвета с более светлыми серыми. На 30 день инвазии выявляли серозную лобулярную пневмонию, на 90 день - катаральную лобарную бронхопневманию с отдельными участками ателектаза и эмфиземы легких.

У собаки, зараженной Т.spiralis и погибшей через 5 дней после заражения отмечали катаральный гастроэнтерит с обширными кровоизлияниями на слизистой оболочке и отек легких. При патологоанатомическом вскрытии собак, инвазированных бескапсульными трихинеллами и погибших на 16 и 17 дни инвазии регестрировали гастроэнтероколит с наличием кровоизлияний преимущественно в тонком отделе кишечника и ателектаз - легких. У собак, инвазированных Т.spiralis в последующие сроки исследований видимых нарушений слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта не выявляли, а у зараженных T.pseudospiralis - на 30 день гастроэнтерит, , на 60 и 75 - серознокатаральное воспаление тонкого отдела кишечни-

ка. У всех зараженных собак, убитых в различные периоды инвазии отмечали дегенеративные изменения печени с застойными явлениями, на легких точечные кровоизлияния, на 75 день - множественные очаги некроза на поверхности почек. Кроме того у собаки, зараженной личинками T.pseudospiralis от свиньи,, при последнем убое обнаруживали обширные полосчатые геморрагические инфаркты и точечные кровоизлияния на капсуле и в паренхиме селезенки.

У подопытных свиней и собак кровеносные сосуды головного мозга на протяжении всего эксперимента были в слабой или более значительной степени кровенаполнены.

| Все выявленные изменения во внутренних органах характерны дт.|а лэдострого токсикоза на фоне аллергических реакций.

При изучении особенностей послеубойной диагностики трихи-неллиза, вызванного T.pseudospiralis по результатам компрессорной трихинеллоскопии установлено, что наибольшее число Оескап-сульных личинок выходит в тканевую жидкость из мышц лабораторной белой мыши(46%) и голубя (34%), в значительно меньшей степени из мышц собаки (28%) и свиньи (15%). У капсулообразующих личинок во-всех случая-: этот показатель был равен 2%. В мышцах мыши при компрессорном исследовании мы наблюдали активное передвижение личинок бескгпсульного вида из центра среза вдоль мышечных волокон в тканевую жидкость-.. В целях дифференциальной диагностики были проведены исследования проб мышц лабораторных мышей, инва-зироаанных разными видами трихинелл методом Бермана-Орлова.. Установлено, что в течении 1-го часа личинок T.pseudospiralis выделяется 14,0%, '2-го - 5,6%, 3-го - 2,0% и через 22 часа -2,2% относительно общего количества содержащихся в исследуемой пробе гельминтов; личинок Т.spiralis в течении 1-го часа выделяется 0,7%, 2-го -.0,5%, 3-го - 0,5% и через 22 часа - 0,7%. Соотношение выделившихся бескапсульных личинок к капсулообразую-ггш составило 28:1, 22,5:1, 8:1 и. 5,7:1. Общая интенсивность заражения исследуемых материалов была примерно одинаковой.

ВЫВОДЫ

1. Из общего числа исследованных животных в 0,4% случаях у

0,8% у собак и 2,2% кошек были выявлены трихинеллы бес* ""чсульного вида,

2. При пассировании трихинелл в организме разных видов жи-ь^гних происходит существенное изменение длины личинок и полово-•ролых трихинелл, а также размеров и формы капсул. В 45% случаев •м изменения Оыли достоверными.

3. Длительность паразитирования трихинелл капсулообразующего и бескапсульного видов в кишечнике у свн.ъи составила более 60 дней, у собак - более 17 дней. Через месяц после заражения сеи-ней от 83,5 до 98,9% половозрелых трихинелл'локализовались в тощей кишке, остальные - в двенадцатиперстной. У собак на 16 - 17 дни инвазии в желудке обнаруживали в среднем 7,4% от общего количества выделенных из желудочно-кишечного тракта трихинелл, в тонком отделе - 56,1 и в толстом 36,5%. Соотношение самцов и самок трихинелл в эти периоды исследований составляло 1:16 у свиней и 1:18 у собак.

4. На мелких лабораторных животных и собаках нами в эксперименте не установлена возможность внутриутробного и лактогенного заражения потомства личинками T.pseudospiralis.

5. При экспериментальном инвазировании животных капсулообра-зующкм и бескапсульным видами трихинелл, в крови были выявлены только личинки T.pseudospiralis у свиней на 22 день, у собак -на 14 день после заражени". Размеры обнаруженных трихинелл составляли 0,675x0,028 и 0,868x0,028 мм соответственно.

6. При одинаковой дозе заражения свиней разными видами (штаммами) трихинелл, подопытные животные на всех этапах исследования (30, 60 и 90 дней) оказались в большей степени инвазиро-ваны личинками T.pseudospiralis от свиньи и в меньшей степени Т.spiral is. У свиней за 90 дней эксперимента выявлено снижение уровня трихинеллезной инвазии в 3,4-4,6 раза. У собак при инвазировании бескапсульным видом трихинелл через 2-2,5 месяца личинок в кшшцах не обнаруживали. У свиней наиболее интенсивно поражаются личинками трихинелл бескапсульного и капсулооОразующего видов мышцы, корня языка, ножек диафрагмы, диафрагмы (реберная часть) и массетеров; у собак - корня языка, дизфрагмы (реберная часть), ножек диафрагмы, гортани и глотки; у птиц (бескапсульный вид) - икроножные, шейные и грудные.

7. Установлено, что личинки T.pseudospiralis от свиньи теряют инвазионные свойства и жизнеспособность в свинине при минус 10-Д2 °С через 60 часов; T.pseudospiralis от енота - через 36 часов, а Т.spiralis - через 85 часов. В мышцах собак при аналогичных условиях замораживания бескапсульные личинки сохраняют жизнеспособность в течении 25 дней, но при этом утрачивают инвази-онность, а капсулообразующие трихинеллы остаются инвазионными и на 51 день. Наиболее уувстзительны к длительному .хранению при температуре +4 °С личинки трихинелл в мышцах морских свинок, затем в мйшцах голубей, свиней и собак.

8. Заражение в дозе 2 лич/г массы тела вызвало у свиней не-

значительные и кратковременные клинические проявления заболевания, более четко они были выражены у животных, инвазированных бескапсульными личинками от свиньи. У зараженных животных за весь" период эксперимента регистрировали меньший среднесуточный прирост живой массы по сравнению с контрольными в 2,6-3 раза.

9. Морфологические и биохимические исследования показали, что в крови у экспериментально зараженных свиней и собак изменения в целом носили аналогичный характер. Основные изменения в крови регистрировали в период энтеральной фазы инвазии. Достоверные изменения морфологии и биохимии крови на всех стадиях (кишечной, миграционной и мышечной) развития инвазионного процесса чаще регистрировали у животных, зараженных личинками T.pseudospiralis от свиньи.

10. Иммунологическими исследованиями установлена выраженная стимуляция функциональной активности системы нейтрофильных гра-нулоцитов именно в те сроки, когда имела место депрессия Т- и В-звеньев иммунитета (в основном в период энтеральной фазы инвазии) . Из числа'изучаемых видов (штаммов) трихинелл в наибольшей, степени состояние напряженности иммунитета у свиней вызывали личинки T.pseudospiralis и Т.spiralis, выделенные от этого же вида животных.

11. Первые случаи появления положительных ответов по ИФР были отмечены у свиней, инвазированных калсулообразующим видом трихинелл на 7 день после заражения, а у зараженных бескапсульными трихинеллами - на 12 день. Максимальный уровень интенсивности реакции зарегистрирован с 12 по 60 дни.

практические предложения

1. Отбор проб для проведения исследований методами компрессорной 'трихинеллоскопии и переваривания в. искусственном желудочном соке проводить, учитывая особенности расселения бескап-сульных личинок трихинелл от следующих групп мышц:

а) у свиней - корня языка, ножек диафрагмы, диафрагмы (реберная часть) и массетеров;

б) у собак - корня языка, диафрагмы (реберная часть), ножек диафрагмы,. гортани и глотки;

в) у птиц - икроножных, шейных и грудных.

В отдельных случаях для прижизненной диагностики трихинеллеза биопсию осуществлять у свиней из мышц разгибателей запястного сустава, у собак - длинных разгибателей пальцев.

2. Для выявления бескапсуль ных личинок трихинели методом

компрессорной трихинеллоскопии использовать световой микроскоп с увеличением 7x8, обращая особое внимание на наличие личинок по краям срезов и в тканевой жидкости, окружающей среды.'

3. С целью дифференциальной диагностики бескапсульных и капсулообразующих трихинелл проводить биопробу на мелких лабораторных животных и птице.

4. Для изучения ситуации в свиноводческих хозяйствах по трихинеллезу, вызванному как капсулообразуияим, так и бескап-сульным видами трихинелл, ' применять иммуноферментную реакцию (ИФР). 1 *

5. При проведении комплексных гематологических исследований у свиней на трихинеллез учитывать выраженную стимуляцию функциональной активности системы нейтрофильных гранулоцитов в качестве дополнительного диагностического теста.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Сапунов А.Я., Сапунов В.А., Боровая Н.В., Митникова O.A. К морфобиологической характеристике бескапсульных трихинелл (T.pseudospiralis . Garkavi, 1972), выделенных спонтанно зараженных домашних свиней и прифермской кошки // Мат.докл. седьмой науч. конф. по трихинеллезу человека и животных.-М.-1996.-С.82-8,5.

2.Сапунов А.Я., Митникова Q.A. Гельминтоза собак в Краснодарском крае // Тез. 1-й регион.конф.:Актуал. пробл.вет.медицины мелких дом.животных на Северном Кавказе.-п.Персиановский.-1998.-С.29-31. • "

3.Митникова O.A., Сапунов А.Я. Искусственное заражение собак ( разными видами трихинелл II ' Тез. 1-й регион, конф. :Актуал. пробл.вет. медицины мелких дом. животных на Северном Кавказе.-п.Персиановский.-1998.-С.45-46, ■

4.Сапунов А.Я., Мурашов Н.Е., Митникова O.A., Сапунов- В.А. .Распространение трихинеллеза в Западной части Кавказа и Предкавказья и комплекс противотрихинеллезных мероприятий // Вестник ветеринарии.-Ставрополь.-1998.-С.30-35.

5.Митникова O.A., Сапунов А.Я.- О клинических признаках экспериментального трихинеллёза // Мат.на-уч,-произ.конф.:Актуал.вопросы профилактики и лечения заболеваний

)

с/х л лом.животных.-Калининград.-1Э98.-С.

6.Митникова O.A., Сапунов А.Я. Эффективность метода выявления в крови у животных мигрирующих личинок трихинелл в эксаери-менте // Мат.науч.-произв.конф.: Актуал.вопросы профилактики и лечения заболеваний с/х и дом.животных.-Калининград.-1998.-С.

7.Успенский A.B., Герасимов A.C., Сапунов А.Я., Гаркави Б.Л., Митникова O.A. Методические указания по лабораторной диагностики трихинеллеза животных.-М.-1998.

Сапунов А.Я., Митникова O.A. Методические указания по послеубой-ной (посмертной) диагностике трихинеллеза.-Краснодар.-1998.

'За*. ИЦ 7 Поап. i теч./g. //. ^ Tsp.ГО0 эм.

FürfenpsaT ВННИОК. Ставрополь, свр.Зооте1сшгаеаша, 15

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Митникова, Оксана Анатольевна, Краснодар

¿г

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ

НАУК

КРАСНОДАРСКАЯ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ ВЕТЕРИНАРНАЯ СТАНЦИЯ

На правах рукописи

МИТНИКОВА ОКСАНА АНАТОЛЬЕВНА

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ ТРИХИНЕЛЛЕЗ ЖИВОТНЫХ, ВЫЗВАННЫЙ TRICHINELLA PSEUDOSPIRALIS (GARKAVI, 1972) И TRICHINELLA SPIRALIS

(OWEN, 1835).

03.00.19 - Паразитология и гельминтология

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научные руководители: кандидат ветеринарных наук,

/ у старший научный сотрудник

и /

А.Я.Сапунов

доктор ветеринарных наук, профессор Колесников В.И.

Краснодар - 1998

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ................................. 4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распространение трихинеллеза, вызванного Т.рзеиёоБркаНз..................... 12

1.2. Морфобиологическая характеристика нематод рода ТпсЫпе11а ЯаИПе!, 1895 ......... 16

1.3. Клиника, диагностика и патанатомия экспериментального трихинеллеза............ 37

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ...... 49

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Распространение Т.рзеис1о8р1гаПБ в синан-

тропном биоценозе ................... 57

3.2. Морфологические отличия разных штаммов трихинелл в эксперименте

3.2.1. Изменения морфометрических показателей личинок, половозрелых трихинелл и капсул при пассировании их

на различных видах животных..... 64

3.2.2. Длительность паразитирования трихинелл в кишечнике разных животных, локализация их в отделах желудочно-кишечного тракта, соот-

ношение полов и инвазионность .... 68

3.2.3. Изучение возможности внутриутробного и лактогенного путей передачи Т.рзеиёозркаНз................ 72

3.2.4. Выявление в крови мигрирующих личинок трихинелл............... 73

3.2.5. Динамика расселения личинок трихинелл в мышцах............... 74

3.2.6. Влияние различных физических факторов на жизнеспособность личинок трихинелл.................... 91

3.3. Клинические, лабораторные и патологоана-

томические исследования при экспериментальном трихинеллезе свиней и собак ..... 100

3.3.1. Особенности клинического проявления заболевания и динамика прироста живой массы ................ 101

3.3.2. Динамика морфологических и биохимических показателей крови....... 112

3.3.3. Результаты иммунологического исследования крови............... 131

3.3.4. Эффективность иммуноферментной реакции (ИФР) в зависимости от стадии развития инвазионного процесса 142

3.3.5. Динамика патологоанатомических изменений.................... 147

3.3.6. Особенности послеубойной диагностики трихинеллеза, вызванного T.pseudospiralis................ 153

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ . . 157

ВЫВОДЫ................................... 172

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ................ 176

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ....................... . 178

ПРИЛОЖЕНИЯ............................... 201

ВВЕДЕНИЕ

Трихинеллез является опасным зооантропозным заболеванием, широко распространенным во всем мире, включая Австралию, которая до конца 80-х годов считалась благополучной по этому гельминтозу.

Наносимые трихинеллезом ущерб состоянию здоровья людей, а также ощутимые материальные убытки во многих странах мира вызвали необходимость организации в 1958 году Международной комиссии по трихинеллезу, которая провела девять Международных Конгрессов по данной проблеме. Национальным комитетом по трихинеллезу организовано и проведено в нашей стране семь Всесоюзных и международных конференций по проблеме трихинеллеза людей и животных.

Данные государственной ветеринарной статистической отчетности свидетельствуют о том, что за последние 15 лет (1980-1994) уровень инвазии у свиней, вызываемой Т.spiralis непрерывно возрастает. Так, в 1994 году на каждый миллион убитых на крупных мясокомбинатах страны свиней приходилось 8,9 животных, зараженных Т.spiralis. По сравнению с 1980 года эта цифра возросла в 7,4 раза. Наряду со снижением числа убиваемых на мясо свиней общественного сектора существенно возрастает количество ежегодно убиваемых частновладельческих свиней, зараженность которых Т.spiralis значительно выше.

Заболеваемость трихинеллезом населения России достаточно высокая и продолжает увеличиваться. В 1992 году в стране зарегистрировано 673 случая трихинеллеза у людей, в 1993 - 671 случай, в 1994 - 1043 случая (А.С.Бессонов).

После открытия Б.Л.Гаркави в 1972 году нового вида три-

хйнелл T.pseudospiralis (Б.Л.Гаркави, 1972) и признанием Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) его валидности, подтверждением Международным кодексом Зоологической номенклатуры, исследователями многих стран мира стала проводиться работа по изучению роли T.pseudospiralis в эпизотоло-гии и эпидемиологии трихинеллеза. Кроме енота-полоскуна с 1981 года спонтанное инвазирование бескапсульными формами трихинелл было выявлено более чем у восьми видов млекопитающих и 11-ти видов птиц. В 1994 году в Новой Зеландии зарегистрировано естественное заражение T.pseudospiralis человека (J.R.Andrews et al.,1994). Хотя пока эти данные и немногочисленны, однако они свидетельствуют о глобальном распространении T.pseudospiralis в природе.

Важной эпизотологической особенностью трихинеллеза, вызываемого T.pseudospiralis, является включение птиц в качестве облигатных хозяев в жизненный цикл паразита.

Важное значение в эпидемиологии трихинеллеза бескап-сульный вид трихинелл приобретает после выявления ряда случаев спонтанного инвазирования домашних свиней T.pseudospiralis в Тульской области (Р.А.Пенькова, 1988), в Краснодарском крае (А.Я.Сапунов, О.А.Митникова и др.,1996), мясо которых может явиться источником заражения людей этими гельминтами. Нами в одном из хозяйств Краснодарского края установлен возможный источник инвазирования свиней личинками T.pseudospiralis - прифермская домашняя кошка (А.Я.Сапунов, О.А.Митникова и др.,1996).

За последние четыре года в Краснодарском крае зарегистрировано три вспышки заболевания людей трихинеллезом от источника, не характерного для данного региона - мяса собак (А.Я.Сапунов, Н.Е.Мурашов, 1996).

Некоторые исследователи предполагают, что в природе T.pseudospiralis существует преимущественно в смешанных с Т.spiralis популяциях (Б.Л.Гаркави, 1978). Подтверждение этим тёоретическим предположениям было получено нами при обнаружении в 1998 году у собаки, отловленной в черте города Краснодара спонтанного заражения трихинеллами T.pseudospiralis и Т.spiralis в ассоциации.

Приведенные выше фактические данные ученых разных стран мира свидетельствуют о немаловажной роли T.pseudospiralis в эпизотологии и эпидемиологии трихинеллеза.

Изучение изолятов трихинелл от разных хозяев из разных ландшафтно-географических, почвенно-климатических и хозяйственно-экономических зон показало их полиморфность по ряду биологических признаков (В.А.Бритов, 1972; Cabaj Wtady-Staw, 1987; T.Garate, 1987; A.Leiby Pavid,1987; C.Armas-Serra, 1987,1988; F.F.Bolas et al.,1989; A.Dick Terry,1990; E.Po-zio et al., 1992; Я.Сенутайте, 1989; А.Я.Сапунов, 1995). Поэтому было принято решение создать в 1988 году референс-центр по систематике и криопрезервации трихинелл в Италии, на базе института санитарии в Риме. Для дальнейшего и более полного изучения было собрано свыше 140 изоляторов из 25 стран мира (E.Pozio et al.,1895).

Таким образом, трихинеллез, по-прежнему, остается ост-реишеи проблемой медицины и ветеринарии практически во всех странах мира и его актуальность возросла в значительной степени с открытием и идентификацией бескапсульных видов трихинелл. Поэтому, необходимость детального изучения всех по возможности аспектов данной проблемы с целью разработки общих принципов тактики и стратегии борьбы с трихинеллезом

и, в частности, трихинеллезом, вызываемом T.pseudospiralis, очевидна.

Цель и задачи исследований. Исходя из вышеизложенного, перед нами стояла цель - изучить степень распространения T.pseudospiralis в синантропном биоценозе; выявить и изучить морфобиологические особенности T.pseudospiralis, выделенных нами от спонтанно инвазированных домашних свиней и при-фермской кошки в сравнительном аспекте с Т.spiralis, изолированных от домашних свиней и T.pseudospiralis, выделенных от енота-полоскуна на экспериментально зараженных свиньях, собаках и мелких лабораторных животных.

Для реализации указанной цели были сформулированы следующие задачи:

провести трихинеллоскопические исследования по изучению степени распространенности трихинеллеза, вызванного T.pseudospiralis среди домашних животных; изучить характер изменений морфометрических показателей личинок, половозрелых трихинелл и капсул при пассировании их на различных видах животных;

установить длительность пребывания половозрелых трихинелл в кишечнике, локализацию и соотношение полов, определить их инвазионность;

провести исследования по выявлению мигрирующих личинок трихинелл в крови;

определить возможность внутриутробного и лактогенного путей передачи бескапсульных трихинелл;

определить влияние различных физических факторов на жизнеспособность личинок трихинелл;

изучить динамику расселения личинок трихинелл в мышцах; выявить и изучить особенности клинического проявления

трихинеллеза и определить динамику показателей прироста массы тела у домашних свиней и собак;

изучить динамику морфологических, биохимических и иммунологических показателей крови и эффективность иммуно-ферментной реакции (ИФР) в зависимости от стадии развития инвазионного процесса;

разработать и утвердить методические указания по после-убойной диагностике трихинеллеза животных. Научная новизна. В результате проведенных исследований впервые:

в стране и за рубежом выявлены случаи спонтанного заражения домашней кошки бескапсульным видом трихинелл и домашней собаки личинками T.pseudospiralis и Т.spiralis в ассоциации;

на территории Краснодарского края в двух товарных свиноводческих хозяйствах зарегистрированы случаи естественного инвазирования свиней бескапсульными формами трихинелл;

установлена длительность паразитирования трихинелл кап-сулообразующего и бескапсульного видов в кишечнике свиней, локализация в различных отделах желудочно-кишечного тракта и соотношение полов;

выявлены мигрирующие личинки T.pseudospiralis в крови экспериментально зараженных свиней;

проведены в динамике морфологические и биохимические исследования крови у свиней, искусственно инвазированных бескапсульным и капсулообразующим видами (штаммами) трихинелл в сравнительном аспекте;

получены новые данные при проведении иммунологических исследований крови относительно роли системы нейтро-

фильных гранулоцитов в формировании иммунного статуса у экспериментально зараженных разными видами (штаммами) трихинелл свиней;

осуществлена постановка ИФР с антигеном из капсулообра-зующих мышечных личинок трихинелл на свиньях, заведомо зараженных бескапсульной формой трихинелл.

Получены дополнительные экспериментальные данные относительно влияния вида хозяина на размеры личиночных и половозрелых форм трихинелл; об устойчивости личинок трихинелл разных видов (штаммом) в мышцах у различных видов животных к низким температурам; об особенностях расселения Т.рзеис1о8р1гаП8 в мышцах свиней, собак и птиц; о характере клинического проявления трихинеллеза, вызванного Т.рзеиёозркаНз у домашних свиней и собак; о некоторых особенностях послеубойной диагностики трихинеллеза, вызванного Т.рзеиёозркаПз.

Практическая ценность. Разработаны и утверждены: Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России «Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных» от 28 октября 1998 г № 13-7-2/1428; Управлением ветеринарии администрации Краснодарского края «Методические указания по послеубойной (посмертной) диагностике трихинеллеза животных» от 21 июля 1998; совместно с сотрудниками КрайСЭС, управления ветеринарии и госохотинспекции Краснодарского края инструктивно-методические предложения «О заболеваемости, мерах борьбы и профилактики трихинеллеза в Краснодарском крае» от 06.1996 г.

Материалы исследований используются при проведении лекционных, лабораторно-практических занятий со студентами

факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ, на курсах повышения квалификации Краснодарского института агробизнеса, а также при проведении тематических семинаров-совещаний с целью повышения квалификации ветспециалистов учреждений госветсети, колхозов, совхозов и акционерных предприятий, ответственных за ветсанэкспертизу мяса и мясопродуктов, в том числе и трихинеллоскопию.

Апробация работы. Результаты исследований доложены и обсуждены на:

- 7-й научной конференции по трихинеллезу человека и животных (Москва, 1996);

- 1-й региональной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных на Северном Кавказе» (пос. Персиановский, 1998);

- заседаниях Ученого Совета Краснодарской НИВС (1997, 1998).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Распространение трихинеллеза, вызванного Т.рБеиёозркаПз; особенности биологии возбудителей трихинеллеза капсуло-образующего и бескапсульного видов.

2. Клинические и патологоанатомические изменения у домашних животных при экспериментальном заражении их разными видами трихинелл.

3. Иммунобиологический статус, динамика гематологических и биохимических показателей у экспериментально инвазиро-ванных разными видами трихинелл домашних свиней и собак.

4. Усовершенствование метода послеубойной (посмертной) диагностики трихинеллеза у животных.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных статей.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 217 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 3-х глав собственных исследований, обсуждения выводов и практических предложений. Работа включает 27 таблиц и 13 рисунков. Список использованной литературы состоит из 133 отечественных и 63 зарубежных источников.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распространение трихинеллеза, вызванного T.pseudospiralis

Трихинеллез - болезнь, естественно передающаяся между теплокровными животными и человеком (зооноз), вызываемая нематодами Trichinella spiralis и T.pseudospiralis. Впервые Т.spiralis по результатам вскрытия трупа человека в 1835 году описал R.Owen, a T.pseudospiralis - в 1972 году при исследовании мышц енота-полоскуна из Дагестана Б.Л.Гаркави (1972).

В настоящее время расширился список хозяев T.pseudospiralis среди млекопитающих. Кроме енота-полоскуна (Ргосуоп lotor), установили естественное заражение корсака (Vulpes сог-sak) в Джамбульской области Казахстана (Б.Ш.Шайкенов, Л.А.Соколова,1981) и грызуна (Bandicota bengalenzis) в Индии (Б.Ш.Шайкенов, S.W.Boev, 1983). В Тасмании W.Henry (1989) выявил этих нематод у 25-30 % аборигенных хищных. Там же, в национальном парке Тасмании T.pseudospiralis были обнаружены у сумчатых плотоядных - тасманийского дьявола (Sarcophilis harrisii) и пятнистой сумчатой куницы (Dasyurus viverrinus) (D.L.Obendorf, K.R.Clark, 1992; D.L.Obendorf, A.L.Forman, 1993). Р.А.Пенькова и В.А.Ошевская выявили T.pseudospiralis в Тульской области у домашней свиньи в личном хозяйстве гр. Радян-ского. Видовая специфичность выделенных трихинелл была подтверждена двумя пассажами на мышцах, в мышцах которых личинки трихинелл не образовывали капсул. Н.М.Городович и др.(1991) сообщают, что в Петропавловске-Камчатском в 19871989 годах было выявлено 17 свиней, зараженных трихинеллами. Личинки трихинелл в мышечных волокнах были свернуты в

вйде эллипса. Капсулы вокруг личинок отсутствовали, на этом основании они были отнесены к виду T.pseudospiralis.

А.Я.Сапунов, О.А.Митникова и др.1996) в 1995 году в колхозе «Звезда» Абинского района Краснодарского края у 1,1 % от числа исследованных свиней выделили бескапсульные трихинеллы. На СТФ этого же хозяйства в том же году у при-фермской кошки установлен трихинеллез, вызванный T.pseudospiralis. Кроме того, в ТОО «Победа» Северского района Краснодарского края при убое 07.09.95 г. хряка нами были обнаружены в мышцах личинки бескапсульного вида трихинелл. Принадлежность к T.pseudospiralis во всех случаях была подтверждена биопробами. В 1997 году Б.Л.Гаркави и соавт. (устное сообщение) в станице Львовской Северского района у одной свиньи из 11 больных трихинеллезом выделили бескап-сульных трихинелл.

T.pseudospiralis на сегодняшний день изучен недостаточно. Главные отличия его от Т.spiralis и выриететов последнего состоят в том, что его личинки не инкапсулируются в мышцах хозяина, а полный биологический цикл развития совершается в организме птиц.

Среди естественно инвазированных T.pseudospiralis птиц в Испании выявлен канюк (Buteo Buteo), в предгорьях Тянь-Шаня - грачи (Corvus frugilegus), в США - ястреб Купера (Asipiter cooperi), филин (Bubo virginianus), черный ястреб (Corugyps atratus), на Аляске - поморник (Storcorarius pomari-nus), в Армении - черные дрозды (Turdus merula), на острове Тасмания в Австралии - совы (Tuto novaehollandiae) и болотный лунь (Circus aeroginosus), в Казахстане - сокол (Falco peregri-nus) и ястреб-тетеревятник (Assipter gentilis) (R.Calero, F.Martinez, S.Hernandez, J.Acosta,1978; Б.Ш.Шайкенов, Л.A.Co-

колова,1981 ; E.B.Wheeldon, T.A.Dick, T.A.Schultz,1983; А.М.Асатрян, С.О.Мовсесян,1985; D.S.Lidsay, D.S.Zarlenga, H.R.Gambie et al.,1995; y А.С.Бессонова, 1996; Б.Ш.Шайкенов, 1992).

На сегодняшний день эти данные немногочисленны, однако и они свидетельствуют о глобальном распространении T.pseudospiralis среди птиц.

Экспериментально на курах полный цикл развития T.pseudospiralis воспроизвела О.Томашовичева и Я.Говорка (1976), а на курах и японских перепелах - Б.Л.Гаркави (19766). Подобный результат сразу на 12 вида�