Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Выявление новых новых нематодоцидов и цестодоцидов методами первичного отбора ангельминтиков

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Выявление новых новых нематодоцидов и цестодоцидов методами первичного отбора ангельминтиков"

РГ6 од

. „ ^^нидарство СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА / О ыАЛ »^РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОСКОВСКАЯ ВЕТЕРИНАРНАЯ АКАДЕМИЯ имени К. И. СКРЯБИНА

На правах рукописи

АБА НИАНКОЕЖЕРЕМИ

ВЫЯВЛЕНИЕ НОВЫХ НЕМАТОДОЦИДОВ И ЦЕСТОДОЦИДОВ МЕТОДАМИ ПЕРВИЧНОГО ОТБОРА АНТГЕЛЬМИНТИКОВ

03.00.19 — паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1993

Работа выполнена в Московской ордена Трудового Крас -но-го 'Знамени ветеринарной академии имени К. И. Скря бина.

Научный руководитель — доктор биологических наук профессор Тараканов. В. И.

Официальные оппоненты: член-корреспондент Российско! Академии медицинских наук, доктор биологических наук профессор Богоявленский 10. К., кандидат ветеринарных на ук Волкова Г. Н.

Ведущая организация — Московский ордена Трудовогс Красного Знамени институт медицинской паразитологии I тропической медицины имени Е. И. Марциновского.

'Защита" состоится «24» 1993 г. в 2.'О ча

сов на заседании специализированного совета К-120.36.05 пс защите диссертаций на соискание ученой степени кандидате наук в Московской ветеринарной академии им. К. И. Скря бина (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23, тел 377-93-83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке акаде мии.

Автореферат разослан Ж

Ученый секретарь специализированного совета

Федосеева Т. Н

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Гельминтозы животных, несмотря на значительные успехи в гельминтологии, до сих пор еще широко распространены на всех континентах земного шара й вызывают ощутимые потери мяса, молока, шерсти, 'лиц и другой продукции животноводства. Одним . из важнейших, средств борьбы с гельминтозамив системе противогельмин-тозных мероприятий является дегельминтизация. К. И. (Скрябин считает, что дегельминтизацию. следует рассматривать не только как терапевтическое вмешательство, но и как ме.-: роприятие, несущее в себе элементы, профилактики. Следовательно, эффективность борьбы с гельминтозами животных и человека в значительной мере зависит от наличия достаточного количества, ассортимента и качества антгельминт-ных препаратов (Н! В. Демидов, 1982).

Применяемые в настоящее время антгельминтики, за небольшим исключением, еще далеки от совершенства. Поэтому потребность в ант.гельминтиках, .которые удовлетворяли бы широкие запросы практики, с одной стороны, и наличие большого количества новых химических соединений, синтезируемых промышленностью и научно-исследовательскими учреждениями, среди которых могут быть выявлены препараты,; обладающие антгельминтной активностью, с другой стороны, делают очевидной целесообразность поиска новых высокоэффективных антгельминтных средств.

Выявление и создание высокоэффективного лекарственного препарата.является сложным, многоэтапным "процессом, который осуществляется ¡коллективным друдом , химиков, биохимиков, фармакологов и терапевтов.

Отбор препаратов с антгёльминтнымк свойствами на ■ сельскохозяйственных животных очень- длителен,; дорог, нерентабелен, требует-'большого расхода вновь синтезированных веществ,-наработка которых первоначально-ведётся химиками; в очень малых количествах.- ^Поэтому-чрезвычайно актуально испытывать синтезированные'препараты ■ в минимальных количествах на первичных моделях, которые, бы объективно подсказали- смысл и целесообразность производства вещества,* полезного-для излечения- больных^ экологически безвредного, для живой природы.-В-свете оказанного, проведенные нами исследования-по-выявлению новых- нема-тодоцидов и цестодоцидов методами 'первичного отбора- ант-гельминтиков - являются - весьма ■ актуальными- и своевременными..*-----

Диссертационная работа выполнена в соответствии с лла-hqm НИР (Московской! ветеринарной академии им. К. И. Скрябина.

Цель и задачи исследований. Цель нашей работы состояла в изучении существующих методов первичного отбора, химических соединений для определения их антгелыминтной активности, отборе среди них наиболее эффективных и опре-' делении их действия на организм лабораторного животного.

iB связи с целью были поставлены следующие задачи:

1. Освоить методы первичного отбора препаратов с ант-гельминтными свойствами (на культуре инвазионных личинок нематоды Nippostrongylus brasilíensis in vitro и на зараженных ниппостронгилезам лабораторных животных in vivó, а также на культуре протооколежсов эхинококковых пузырей in vitro).

2. Испытать '100 новых ¡препаратов из группы гетероциклических и других групп химических соединений для определения их нематодоцидных и цестодоцидных свойств в сравнительном аспекте с уже известными, используемъими в ветеринарии.

<3. (Провести сравнительный анализ антгелыминтного воздействия испытанных препаратов и отобрать из них наиболее эффективные.

4. Изучить влияние отобранных препаратов на организм лабораторного животного гематологическими, патологогисто-логичеокнми и токсикологическими методами.

6. Проанализировать результаты проведенных исследований для обоснования дальнейших испытаний йтобранных веществ на "продуктивных животных.

Новизна работы. Впервые различными методами скрининга проверены на антгельминтную активность 106 новы* химических соединений направленного синтеза в основном из гетероциклических соединений, в том числе ilO производных изохинолина,|10 производных бензоизохинолина, 'lünpo-изводньцх бензодиазепинонов, 27 производных имидазола, И ¡производных тиазолидинона, 14 — тиазолидина, 12 — пиримидина, 2 диалжилтиофосфиновой кислоты и сухие экстракты лекарственных растений.

¡Впервые проанализировали результаты параллельно проведенных опытов по скринингу антгельминтиков in vitro на культуре инвазионных личинок Nippostrongylus brasiliensis при разных температурных режимах (комнатной и 30°С). Дано обоснование и объяснение в пользу большей эффективности поиска искомых препаратов при температуре ¡30° С. Определили, что из 1Й1 химического соединения, испытанного на этой модели, 157 представляют интерес для дальнейшего 2

исследования in vivo в качестве нематодоцидов. При культивировании in vitro личинок нематоды N. brasiliensÜs установлено, что они хорошо растут и развиваются на древесном угле и почве.

Впервые методами первичного окриникга на инвазионных личинках N. brasiliensis определили высокую нематодоцид-ную активность производных пиримидина (М.ОП-29/76 ¡МОП-77А) и имидазола (1Б-З6), выявили их оптимальные терапевтические дозы на лабораторных животных, а гематологическими, патологогистологическими и токсикологическими методами ¡установили их безвредность для организма животного.

(Впервые из 64 химических соединений, испытанных in vitro на протосколексах эхинококка б рекомендуем для испытания на экспериментально зараженных лабораторных животных в (качестве цестодоцидов.

Практическая значимость работы. Экспериментально показана перспективность комплексного использования методов первичного отбора ¡препаратов-антгельминтиков против нематод и .цестод in vitro на культуре инвазионных личинок iN. ¡brasiliiensis и протосколексах Echinococcus granulosus. Первичный отбор высокоэффективных препаратов in vitro с помощью моделей позволяет в течение 2.4 ч, используя очень (малые количества испытываемых веществ, выбрать среди них соединения, обладающие антгельминтной активностью и выяснить целесообразность их дальнейшей наработки для последующих испытаний на экспериментально зараженных лабораторных и сельскохозяйственных животных.

(Для дальнейшего изучения при гельминтозах сельскохозяйственных животных предлагаем 3 новых химических со-ёдинения, обладающих нематодоцидной активностью и рекомендуем испытать на зараженных лабораторных животных б новых препаратов, обладающих цестодоцидным действием in vitro.

Результаты работы внедрены в .учебный процесс ученым советом ветеринарного факультета MiBA (протокол № 2 от 24ЛИ.92).

Апробация работы. Результаты научных исследований доложены и одобрены на: 1. Всесоюзной конференции по гельминтологии (г . Ереван, ;199il); 2. Научной конференции по подготоке /кадров для сельского хозяйства зарубежных стран MlBlA, 1991.

Публикация. По теме диссертации опубликованы трн статьи.

S

На защиту выносятся: Результаты работы .по выявлению новых нематодоцидов и цестодоцидов методами первичного отбора антгельминтиков. ' ,

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 142 страницах ¡машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, общих выводов, практических" рекомендаций, списка литературы, приложения. 'Работа иллюстрирована 13 таблицами, 20 рисунками. Список литературы включает 168 источников, в том числе 89 иностранных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследований. Работа выполнена в 1990—1992 гг. в условиях вивария ц лаборатории кафедры паразитологии и инвазионных болезней сельскохозяйственных животных с курсам биологии и патологии пчел и рыб МВА, а также в лаборатории экспериментальной терапии Всероссийского института гельминтологии им.jK. И. Скрябина и в лаборатории мясокомбината в городе Черкесске.

iB работе , использовали методические разработай. Л. С. |Кра9юковой. (1987), описанные в диссертации . на тему: «Культивирование клеток ларвоцист эхинококка и использование его . протосколексов для отбора антгельминтных препаратов in, vitro»; методические подходы, опубликованные в .монографии .профессора А. И. Кротова (¡1973) «Основы акс-периментальнрй терапии гельминтозов» и его статье «Методы моделирования экспериментальной терапии гельминто-зов» (1984). ,. - v г

Лабораторные .модели культуры паразитов состояли .из инвазионных личинок нематоды 'Wppostrongylus brasiiliiensjs и протосколексов эхинококковых ¡,пузырей.от, :зара>кенных овец, убитых.-на мясокомбинате в .городе Черкесске. ■. ,.„.„ *, . Опыты на экспериментально зараженных лабораторных животных проводили.на крысах массой 40,-50.г, которых заражали подкожно в.области,онеи^инвазионньши личинками ниппостронгилюсов в 0,7%-ном растворе натрия •?;лори-9Tpro..; .J^a i6tr^7-qii сдень после заражения , крысята начинали выделят^, яйца нематод.,;Макси1мальное;,-выд.еление яиц. ниц,-рос^ронгилюсов ,в.,феиалиях: наблюдали с 8-го по15>.ый дни после. заражения (2—7 яиц в поле - зрения, микроскопа, np\i увеличении 7Х'8). Культивирование личинок,,;,ниппостронгилюсов, производили по методу,Дорнвелла, ,(Cor'tiwell),; модифицированному в лаборатории проф. А. И. Кротова (1984)

и в нашей модификации. Наше усовершенствование методики состояло в том, что взамен активированного угля мы использовали древесный уголь и почву, а для быстрого выделения живых личинок нематоды вместо аппарата Бермана использовали аппаратов. И. Тараканова (авт. св. № 530489)г на дне которого предварительно укладывали молочный фильтр.

Действие химических препаратов из группы гетероциклических и других соединений на личинок ниплостронгилюса п их влияние на подвижность и продолжительность жизни личинок изучили в пластиковых плашках под бинокулярным микроскопом МБС-1 при двух температурных режимах: 22° С и 30°С. Препараты, показавшие высокую антгельминт-ную активность in vitro, испытали на крысах, зараженных ниппостронгилезом. До заражения, в процессе болезни и после лечения исследовали клинические, гематологические и патологогистологические показатели, а также провели токсикологическую оценку действия препаратов на организм животных. Гематологические исследования проводили по методикам, описанным А. А. Кудрявцевым и Л. А. Кудрявцевой (1978) в руководстве: «Гематология животных и рыб». Патологогистологические изменения изучали под руководством ассистента В. Д. Илиеша и младшего научного сотрудника лаборатории по изучению лейкоза П. М. Мусиенко по методикам, рекомендованным кафедрой патологической анатомии МВА. Опыты по изучению параметров острой токсичности препаратов выполняли по методу «лробитанализ», предложенному Литчфильдом и Уилкоксоном в модификации 3. Рота и М. Л. Беленький (1963) на здоровых белых мышах массой 18—22 г.

Испытание препаратов с целью определения цестодоцид-ного действия на протосколексах эхинококка проводили при комнатной температуре по методике, предложенной Л. С. Красюковой (,1987).

Экспериментальные данные обрабатывали с использованием программируемого "микрокалькулятора МК-61 в соответствии с методическими указаниями Ю. К. Баюна «Применение программируемых микрокалькуляторов для биометрических расчетов» (1989). При этом мы определяли среднюю арифметическую, статистическую ошибку средней арифметической, достоверность разницы между средними арифметическими двух вариационных рядов по критерию достоверности (Р) и таблице Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты первичного отбора препаратов с антгельминтными свойствами на модели культуры } инвазионных личинок нематоды Nippostrongylus brasillensis in vitro

Мы испытали Ii5 известных препаратов, в том числе 12 антгельминтиков и 106 новых химических соединений гетероциклического ряда направленного синтеза и сухих экстрактов 'лекарственных растений. Эти соединения получены из Вильнюса от доктора ветеринарных наук, профессора А. Ю. (Вишняуокаса и два ¡препарата (МОП-29/76 и ¡МОП-77А) были синтезированы М. А. Игнатенко, ст. научным сотрудником, канд. химических наук НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи. Каждое химическое соединение 'было зашифровано.

Наибольшую активность против личинок ншшостронгилю-сов при комнатной температуре показали 34 препарата: ЛМ-31, ЛМ-32, З-С, 31-¡С-2, <66чБ, Л|13С, Б-36, Б-264, 571-Л, 3-бромбензо (б)тиофек 2-сульфамид, КМ-318, КМ-381, КМ-461, КМ-462, З-ЛВИ, УМ-1, УМ-4, Д-Ю, M-il-0, МША, М-4Н(М), МР-1, МОП-29/76, МОЛ-77А, флубенол, оксид, ло-патол, БМ'К, сульфен, нилверм, biaverm, Vermox, rintai и ascatene. Эти же препараты, а также 23 нижеперечисленные: ЛМ-6, ЛМ-7, ЛМ-17, ЛМ-4:1, Ш-3, 52-С, Б-28, Б-58, Б-251, Б-326, ИД-2Ш, 1Ш-391, 120-Л, 555-Л, 569-Л, ST-7, 87-ВМ, КМ-12, КМ-12, ЮМ-350, 8-ЛВИ, УМ-2, Д-ß, оказались активными при 30° С. Они вызывали гибель 70% личинок и больше в концентрации 10 мкг/мл через 24 ч. Оксид и КМ-318 вызывали соответственно гибель 78% и 76,4% личинок при комнатной температуре, а в термостате лишь 68,0%, 59,6%.

50—70% личинок гибли in vitro при комнатной температуре от '21 .препарата, а в термостате — от 26 препаратов в концентрации 10 мкг/мл через 24 ч. Остальные испытанные вещества оказались неэффективными. Некоторые из них не растворялись, они образовывали хлопьевидные структуры, закрывая поле просмотра ;под микроокопам и слабо действовали на личиногк in vitro. Такими соединениями оказались: 1456-Л, 2425-Л, ЛМ-iM, Б-,170, Б-43, 6,11-Л, 2-ЛВИ и др. В то же время такие известные препараты, как фена-сал, stromiten, 4-брам-З-гидрокси 5 карбоилизотиазол, 1,3 ди-оксо-1Н-бензо (d, е) изохинолин-2(ЗН)1масляная кислота и другие, были мало эффективными в дозе 10 мкг/мл через 24 ч. 6

(Высокоэффективные препараты в концентрации 10 мкг/мл уже через 24 ч вызывали у личинок судорожное движение, свертывание их в плотную спираль и неподвижность. Через 48 ч отмечали гибель большинства личинок, особенно в концентрации 100 мкг/мл при 30° С. Большую эффективность препаратов ;при температуре 30°С мы объясняем хорошей их растворимостью и усилением всасывания препарата в результате активизации обмена веществ у личинок.

Результаты испытания химических соединений на цестодоцидную активность на модели протосколексов эхинококкового пузыря in vitro

Анализ результатов испытания химических соединений, направленного синтеза, свидетельствует о том, что из 64 ¡препаратов 5 оказались высокоэффективными и в концентрации 10 мкг/,мл вызывали гибель 70% личинок и 'больше через 24 ч: УМ-11 — 71,3%; ИЗ-С — 71,0%; iB-264 — 76,7%; 571-Л — 70,-6%; 'КМ-461 — 72,3%. Эти же препараты подтвердили свои околецидные свойства и в концентрации 100 мкг/мл через 24 и 48 ч соответственно в большей степени. Через 48 ч 15 препаратов в ¡концентрации 10 ¡мкг/мл вызвали гибель более 70% ¡протосколексов эхинококкового пузыря. На 50—70% гибель протосколексов наступала от десяти через 24 ч и от 21 препарата через 48 ч в концентрации 10 -мкг/мл.

*При контакте с ¡препаратами в концентрации 100 мкг/мл картина несколько изменилась. Через 24 ч гибель -более 70 %' протосколексов наступала под действием ,12 препаратов, а через 48 ч такую же эффективность показали уже 29 препаратов. Это говорит о то,м, что увеличение концентрации препарата и продление срока его контакта с личинками паразита резко увеличивает гибель последних. Мы предлагаем отбирать для дальнейшего изучения препараты, показавшие 70'%-ную и большую эффективность в концентрации Юмкг/ /мл через ¡24 ч ¡после контакта их с .паразитом.

В результате проведенных исследований мы отдали предпочтение 5 препаратам, показавшим наибольшую -эффективность при вышеназванных условиях. Эти -препараты обездвиживали протосжолексы, вызывали их разбухание, разрушение внутренней структуры, отторжение распадающейся ткани паразита. Макроструктура выживших протосколексов не отличалась от контрольных и не прокрашивалась эозином. Живые протосколексы -были подвижны, ¡постоянно сокращались, приобретали причудливые формы. В контрольных рас-

творах (физраствор и ДМСО) протосколексы оставались живыми в течение всего опыта.

Скрининг препаратов in vivo на крысах, инвазированных ниппостронгшпосами

Из 121 химического соединения, испытанного на инвазионных личинках ниппостронгилюсов in vitro, мы отобрали 10 наиболее эффективных препаратов из числа вновь синтезированных и один известный антгелвминтик флубенол для проверки их действия на лабораторных животных, зараженных ниппостронгилезом. В результате проведенных испытаний 4 препарата (1МОП-29/76, МОП-77А, КМ.-462, Б-36) подтвердили данные in vitro. ,В дозе 300 мг/кг они показали эффективность более, чем на 70%. Антгельминтик флубенол служил сравнительным контролем. (Соответственно применяемым дозам он дал следующую интенсэффектиность: 30 мг/ /кг — 90,76%; >15 мг/кг — 85,71%; й мг/кг — 50,48%. Препараты ИД-211 в дозе 300 мг/кг и 57il-JI в дозах 300, 200, 100, 75, 50 ,мг/кг оказались токсичными. После дачи этих препаратов отмечали паралич задних конечностей, судорожные движения, и смерть животных наступала через несколько минут. iB ¡более низких дозах эти препараты не оказывали действия на паразитов.

> При дальнейшем испытании установили, что наибольшую интенсэффективность МОП-29/76 показал в дозах 200 мг/ /кг — 74,42% и 300 мг/кг — 88,90%. При этом у контрольных животных обнаружили соответственно 208,0±2,84 и 220,0±г2,2 экземпляров ниппостронгилюсов в среднем по группе. Препарат 1МСЩ-77А в дозах 200 и 300 мг/кг живой массы обладал высокой интенсзффективностью, которая составляла соответственно 71,62 и 71,21%. У контрольных животных обнаружили 254,¡5±3,14 и 205,0±9,74 экземпляров ниппостронгилюсов в среднем по группе. В дозе 300 мг/кг живой массы препарат JK.M-462 снизил инвазию на 88,62%. При этом в контрольной группе обнаружили в среднем по 175,0±3,24 экземпляров ниппостронгилюсов. Высокая интенсэффективность Б-36 против нематод получена от дозы 200 и 100 мг/кг живой массы и составила соответственно 83,43 и 66,53%. При этом у животных контрольных групп находили в среднем соответственно по 201,0±2,47 и )175,2±4,i87 нематод ниппостронгилюсов.

У всех подопытных животных после применения этих препаратов (МОП-29/76, МОП-77А, iKM-462 и Б-36) токсических .явлений не отмечали. Под действием препаратов КМ-462 в дозе 300 мг/кг и Б-36 в дозе 200 мг/кг живой массы

у животных наблюдали снижение количества эритроцитов и содержания гемоглобина. В лейкоцитарной формуле отмечали увеличение числа эозинофилов в контрольной группе, а также незначительное увеличение числа моноцитов. После применения препаратов МОП-29/76 и МОП-77А в дозе 300 мг/кг живой массы в лейкоцитарной формуле животных на 5-й день отмечали незначительное увеличение содержания базофилов и сегментоядерных нейтрофилов. Эти изменения были временными, и они нормализовались к 15-му дню после дачи препарата.

Результаты патологогистологических исследований органов и тканей подопытных животных при испытании каждого из четырех препаратов показали, что они вызывали незначительные обратимые патологические изменения, которые характеризовались слабо выраженной застойной гиперемией печени, зернистой и жировой дистрофией гепатоцитов, зернистой дистрофией эпителия извитых канальцев почек, незначительным полнокровием красной пульпы селезенки, скоплением лимфоидных и эозинофильных клеток в собственном слое слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта через 5 дней после дачи препаратов. Препарат КМ-462 в дозе 300 (мг/жг вызывал острый гломерулонефрит, в клубочках обнаруживали скопление серозно-фибринозного экссудата. При этом следует отметить, что вышеуказанные патологические изменения были обратимы. Морфология и функция органов быстро нормализовались, что подтверждали исследования на 15-ый день лосле лечения. Они 'показали, что структуры органов и тканей восстанавливались полностью.

Параметры острой токсичности МОП-29/76, МОП-77А, КМ-462, Б-36 и флубенола на белых мышах

Важнейший критерий в оценке антгешьминтиков для внедрения их в практику борьбы с гельминтозами животных — их токсическое влияние на организм. В связи с этим мы решили изучить острую токсичность этих препаратов, определяемую ее показателями: ЛД0, ЛДш, ЛД50, ЛДз4, ЛДюо. Следует отметить, что в современной литературе используется понятие «верхние параметры токсичности», которыми являются все дозы, вызывающие гибель от 0 до 100% животных (М. Л. Беленький, 1963; В. Н. Елизарова, 1962). Причем в качестве главных критериев токсичности эти же исследователи считают три верхних параметра: 1 — максимально переносимая толерантная доза (ЛДо), которая не смертельна для

подопытных животных; 2 — среднесмертельная доза (ЛД50),

&

вызывает гибель 50% подопытных животных и 3 — абсолютно смертельная доза (ЛДюо), 100%-ная гибель подопытных животных. Из перечисленных доз наибольшее значение имеет среднесмертельная доза (ЛД50), которая нивелирует односторонние отклонения в индивидуальной чувствительности, даже у особо чувствительных и резистентных животных. Результаты наших исследований показали, что ЛД50 для изучаемых препаратов являются: 1МОЛ-Й9/76 — 3450 (3245— 4-3667) мг/кг при Р = 0,05; МОП-77А — 1980 (1800-2178); КМ-462 — 600 (522-690); Б-36 — 1100 (956-1265) и флубе-нол — 5500 (5329-5676) мг/кг при Р = 0,05.

1П0 классификации опасности веществ по степени воздействия на организм (Н. Ф. Измеров, И. В. Саноцкий, К. К. Сидоров, 1977) при пероральном введении препараты МОП-29/76, МОП-77А, КМ-462 и Б-36 относятся к третьему классу опасности (умеренно опасным веществам), так как ЛД50 этих препаратов находится в пределах 151—5000 мг/кг. Ант-гельминтик флубенол служил сравнительным контролем. Он в нашем опыте относится к классу малотоксичных соединений. Следует отметить, что препарат КМ-462 не целесообразно использовать для дальнейшего исследования, так как его ЛД50 почти равна терапевтической (315 и 300 мг/кг).

ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты проведенных исследований показали, что поиск новых препаратов, особенно в ряду гетероциклических, обладающих широким спектром антгельминтного действия и не обладающих побочными явлениями, представляет как теоретический, так и практический интерес. Успех изыскания новых препаратов и разработка новых методов терапии гель-минтозов в значительной мере зависят от наличия удачных лабораторных моделей гельминтозов. В нашей работе было подтверждено, что инвазионные личинки нематоды Nippost-rongylus brasil'ensis и протосколексы эхинококкового пузыря являются удобной моделью для предварительного отбора препаратов с антгельминтной активностью. Культивирование нематоды Nippostrongylus brasiliensis показало, что они лучше растут «а древесном угле и на почве. Использование молочного фильтра для их выделения позволяет получить только живые личинки нематоды, необходимые для скрининга in vitro. Более эффективное действие перепаратов при 30° С мы объясняем лучшей их растворимостью и усилением всасывания препарата в результате активизации обмена веществ у личинок под действием более высокой температуры. Из 121 J 0

химического соединения, испытанного на этой модели, 57 оказались высокоэффективными при 30° С и только 34 препарата при 22° С вызывали полную неподвижность и гибель 70 и более процентов личинок через 24 ч в концентрации 10 мкг/мл.

Отбор препаратов на зараженных лабораторных живот-пых после отбора in vitro очень важен и необходим для объективной оценки препарата. Из 10 препаратов, прошедших скрининг in vitro и показавших эффективность 70% и выше, четыре препарата подтвердили свое антгельминтное действие, освободив крыс от ииппостронгилюсов на 70 и более процентов в дозах 200—300 мг/кг живой массы. Специальными опытами мы выявили их оптимальные терапевтические дозы на лабораторных животных, а гематологическими, патологогис-тологическими и токсикологическими методами установили их безвредность для организма животных. На основании проведенной работы, мы рекомендуем препараты МОП-29/76, МОП-77А и Б-36 для дальнейших исследований на лабораторных и продуктивных животных.

Мы согласны с мнением О. D. Standen (1963), который писал, что выбор того или иного вида гельминта для первичного скрининга антгельминтика in vitro должен основываться на возможности получения подобного химиотерапевтнческого эффекта in vivo.

Исходя из того, что до настоящего времени почти не имеется эффективных препаратов для лечения ларвальных цес-тодозов и учитывая литературные данные о попытках найти лабораторную модель для скрининга цестодоцидов, мы в соответствии с рабочей программой провели такую работу. Сравнительный анализ результатов наших исследований и данных опубликованных работ (Н. П. Лукашенко, Ф. П. Коваленко, 1969, 1971; Ф. П. Коваленко, 1971, 1979; Л. С. Кра-сюкова, 1987, 1988; Т. Sakamoto, 1973, 1979; Т. Sakamoto, М. A. Gemmell, 1974, 1979 и др.) свидетельствует о том, что личиночные стадии цестоды Echinococcus granulosus являются устойчивыми к воздействию препаратов и их следует шире применять в научно-исследовательской работе по отбору эффективных антгельминтиков. Тем 'более, что протооколек-сы из одного пузыря представляют собой в генетическом отношении однородные клоны, развившиеся от одной онкосфе-ры. Наши данные трудно сравнивать с фактическим материалом предшественников, так как мы испытывали препараты под номерами (зашифрованные) с неизвестной нам химической структурой. Согласно договору мы только испытывали и информировали химиков-разработчиков о результатах

П

проведенной работы. Мы весьма благодарны им за предоставленную возможность первыми испытать предложенные препараты на биологическую активность против нематод и цестод.

Анализируя собственные результаты по скринингу химических препаратов на протосколексах эхинококковых пузырей, мы пришли к выводу, что из 64 препаратов заслуживают внимания для дальнейшего изучения 5 веществ: УМ-1, 113-С,. Б-264, 571-Л, КМ-461. Отчет о проведенной работе и предложения, вытекающие из нее, переданы разработчикам, предоставившим нам свои препараты для испытания.

ВЫВОДЫ

]. Из существующих моделей для первичного скрининга препаратов, обладающих антгельминтной активностью, инвазионные личинки Nippostrongylus brasiliensis и протосколек-сы Echinococcus granulosus для предварительного отбора in vitro нематодоцидов и дестодоцидов соответственно являются более удобными и доступными моделями.

2. Усовершенствованные нами методики культивирования личинок N. brasiliensis (использование в качестве субстрата древесного угля и почвы вместо активированного угля) и выделения чистой культуры живых личинок с применением молочного фильтра упрощают и ускоряют процесс подготовки модели для скрининга.

3. Из 121 химического соединения гетероциклического ряда, испытанных на модели инвазионных личинок N. brasiliensis, 34 вызывали полную неподвижность и гибель 70% личинок и более при концентрации препарата 10 мкг/мл и экспозиции 24 ч при 22° С, а при 30° С такую же активность показали уже 57 препаратов.

4. Из 64 препаратов, проверенных на цестодоцидную активность, пять (Б-264 и 571-Л — производные имидазола, УМ-1 — производное тиазолидина, КМ-461 — производное тиазолидинона и 113-С —производное бензодиазепинонов)' показали эффективность 70 и более процентов и могут быть рекомендованы для дальнейших испытаний.

5. Три щрепарата МОП-29/76, МО.П-77А (производные пиримидина) и Б-36 (производное имидазола), показавшие высокую нематоцидную активность in vitro и in vivo в терапевтических дозах (200 и 300 мг/кг) вызывали незначительные обратимые морфологические и гематологические изменения у лабораторных животных (белых крыс) с возвращением к норме через 10—15 дней.

6. Препараты МОП-29/76, МОП-77А и Б-36 относятся к умеренно токсичным веществам, обладают высокой немато-цидной активностью и рекомендованы для дальнейших исследований на животных с целью поиска путей снижения их токсичности и усиления антгельминтной активности.

7. Комплексное использование методов первичного отбора высокоэффективных антгельминтиков повышает производительность труда, экономит время и уменьшает затраты на изыскание безвредных, нетоксичных для хозяина и специфически действующих только на паразита новых химических соединений.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Результаты научных выводов рекомендуются для использования в научно-исследовательской работе по изысканию и отбору новых антгельминтиков.

2. Рекомендовано три новых высокоэффективных немато-доцида и пять цестодоцидов для дальнейшего всестороннего изучения на лабораторных п продуктивных животных.

3. Чтении лекций и проведении семинаров слушателям ФПК и студентам ветеринарных и биологических факультетов.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Аба Нианкое Жереми. Оценка методик первичного отбора ант-гсльминтиков//Тезисы докладов научной конференции «Эколого-биологи-ческне и фаунистнческие аспекты' гельминтозов». — Ереван, 1991. — С. -18—49.

2. Тараканов В. И., Аба Нианкое Жереми. Отбор химических соединений с антгельминтными свойствами на культуре инвазионных личинок нематоды ниппосгронгилус брализиензис и на лабораторных животных, зараженных ниппостронгилезом//Инв. болезни с.-х. животных. — Иваново. — 1991. — С. 79—80.

3. Аба Нианкое Жереми. Отбор химических соединений с антгельминтными свойствами на культуре инвазионных личинок нематоды// Актуальные вопросы инфекционных "и инвазионных болезнен животных. — Сборник трудов МВА, 1993. — С. 10.