Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ВОЗДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕКСОВ ПОЧВЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ НА СИЛИКАТЫ

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "ВОЗДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕКСОВ ПОЧВЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ НА СИЛИКАТЫ"

Л-гяъзг

МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА, ОРДЕНА ОКТЯБРЬСКОЙ РЕВОЛЮЦИИ И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. М.В.ЛОМОНОСОВА

Факультет Почвоведенив

На правах рукописи

КОЛЬМУГИНА ТАТЬЯНА ПАВЛОВНА

УДК 579.64: 631.484

ВОЗДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕКСОВ' ПОЧИННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ НА СИЛИКАТЫ

Специальность: 03.00.07 - микробиология

~ "Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1985

МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА; ОРДЕНА ОКТЯБРЬСКОЙ РЕВОЛЮЦИИ И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ : .УНИВЕРСИТЕТ ИМ; Н.В.ЛОМОНОСОВА

Факультет Почвоведения

На правах рукописи

■ г

КОЙЬЧУГИНА ТАТЬЯНА ПАВЛОВНА

■ ■ УДК 579.64: 631.484

ВООДВНСТ№& КОМПЛЕКСОВ ПОЧВЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ ' НА СИЛИКАТЫ

. -й . , . / "

Специальность: ОЗ.00;07 - микробиология

ь Автореферат диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Мойкаа - 1985'[1"~

I.. А

; Работа вшюлненл на кафедре биологии почв, факультета почвоведения Московского Государственного Университета, имоии М,В,Ломоносова.' О/ '7 '.. г" '

Научные руководители -доктор биологических наук, У профессор Звягинцев Л,Г.'

- ". ; !.* " . - ' акадеиик, доктор геолого- V ■

. • ., ■ г!' ' минералогических наук, . . '. : '

> ; : . •' !•'• • ' V '> ." ■ профессор Соргсзои Е.И. .'':-

л ' Официальные оппоиет'и-доктор биологических наук:

;: ■■ ■ КараваШсо Г.И., ; -1 . ■■ - К-'."

' ..' :' кандидат биологических наук ; -7 ■ "

, . Перцооскал А .5. ? •* ' '

г' / . - Ведущая организация - Музей Почвоведения 'имени В Л, Докучаева .

:■ Зашита состоится' ** 'ЛЬВф г. в 4 .

на заседании споцигшиэщхнштого совета.К 053.0Г>.&г в МГУ имени М.В.Ломоносова по адресу: ПЭ89Э, Москва, ГСП, Лен гори, ЛГУ, ••'<.' факультет почвоведения, Учений совет,'.у-:*. ' ' 1 ( ' '■' ■ -."■>■;:':-■■.

. !г С'диссертацией, можно о о паи опиться в библиотеке факультета: ; V почвоведения МГУ,' ' " ■ '

у Автореферат!разослан■У'^яДл.' 1936г. -■¿"■у-^-

|• •''' " ' '' У'' > ' ''

'^'.Л'Ученый секретарь" Совета -'.'.Ц^'Г^->-; -¡{П .-г."

' ■'"■'¡■■".'»л., доцент -^^/^¿«р '-Ч; Бабьева И1П.Ч';

Актуальность проблемы. Однш.чз важнейших факторов, определяющих" свойства грунтов, и частности иочп,' является их минеральний состав. Большое внииание уделяется микробиологическому воздействию на минсрачм. Подавляющее большинство исследователей изучало проблема микробиологического выветривания минералов на примере отдал ь ннхвцдови групп микроорганизмов, применял* о основном классические методы изучения процессов микробиологического выветривания: , стационарнмо чистые культура. Гетерогенность почвы обеспечивает *; наличие разнообразных типов местообитания,: где одним из основных ■ Лакторов; определящих развитие.микроорганизмов» является поступление питательных веществ., D почее функционируют различные по ■ составу комплексы микроорганизмов, лиэнедеятольность которых не- 1 редко протешет: в условиях непрерывного или периодического поступ лсшш.сволих плтатсльнмх. иоцсстц-и удаления продуктов метаболизма. Допрос о (юли комплексов микроорганизмов в,выветривании мине-палоз п условиях, приближениях к:природным, слабо освещен.

Поль работы. Полыз работы являлось сравнительное изучение воздействия естествен них микробных сообществ почвы на отдельные мине-'-' : рал и и их смесь в.проточных и с тат ичоски хусл овил х. : " .

Осиоринс омами исследования. I) Разработка методов моделирования процессов j.m кроби ол ; гиче с ко го 'выве три в ания в -проточных условиях. ■ 2) Изучение численности и качественного состава микробных сооб- ; яеств, развивающихся на минералах и их сноси,. о проточных и статических условиях. 3) Сравнительное изучение интенсивности выноса состаатшлг.их минералу элементов при развитии микроорганизмов в проточных и статических условиях, изменения строений кристален-

|Ческих решеток минералon, агрегирующей способности микроорганнаймов, мор;>Ологии поверхности-минерал ьних. частиц, рЦрастооров. Î4Ï Оценка стенени ноздоЯствия микробных сообцесги, исиользукщих различимо источники углевода, на мин ерши в протО'Гних и статичес-" них условиях. ■

Научная иоеизна. Dncpouo на примере некоторих силикатов и их см^ои изучена роль' ни крой к их сообцоетп, развивающихся на различных ис-

■ точниках углерода, в npeupai'iomin минералои. Дана с|кшнительная оценка степени воздействия микробимл сообцоств на минорат в условиях протока и стационарных культур, отмечена роль микробных со, ойцостп л новообразовании минералов и их агрегирующал способность.

Практическая ценность. Выполненная работа дает возможность оценить 'значение комплекса почиенных микроорганизмов в разрушении минералов и обогащении почпи зольнши элементами, Работа представляет интерес для решения вопросов, связанных с плодородием почв, а также некоторых проблем инженерной геологии. 1 ' ■'.'." 1

'Апробация работн. Основные положения диссертации били доложены /V' на IX конференции молодых ученых и аспирантов геологического факультета WIT7 (Москва, 1962), на Всесоюзной конференции "Современ-. .. ныо методы исследования почв" (Москва, 1033), на XI конференции ^ молодых ученых и аспирантов геологического факультета МГУ (Москва,

■ I984K \ i..-'[^ " ,'

• Публикация. По материалам диссертации опубликовано.^статеП^,--.'.*'..*,

-Объем' паботы. Диссертация состоит из.введения;- #"глав, обсуждения

^ результатов,'заключения, выводов.; Материалы диссертации изложены

. • ' '■ ■ > ■'- ■■■:■'*■-■ t.- '■ < ' ■ " ' ; ■ : на. гВД.¡.страницах машинописного текста,; содержат -; €т ,рисунковi.

\. ZÔ-таблиц. список литературы из названий (из них 43& эару-;:

; божныв).1.""'

Автор выраяаёт искреннюю признательность-профессору кафедрн ■ ; химии почв факультета^почвоведения МГУ Т.А,Соколовой за постоянные консультации при выполнении работы. ■ ■

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ : •

; Для изучения'воздействия комплекса почвенник микроорганизмов на минералы при Фильтрации питательной:среды ив статических условиях? отобраны следующие силикаты: но гит, биотит;' роговая обманка,, кварцевый песок (размер частиц 0,5-0,001 мм), иллит и каолинит. Об . раэца иллитп: и каолийита были пре^тпвлены ниироагрегатями размером более 0,001 мм; . ; .■.'

При-моделировании процессов микробиологического выветривания; протекающих в проточных-условиях, использовгли■установку, иэобра-женнуи «а рис. Г. ■■• 1 ' .

Л l-UHH.ii ал, й-статуитий йпльтр, 'З-^унат;- ' ншТ фтльтр. 4-сто1сло!5олокт, 5-^МКОСТЬ

. со сгедоЯ,. 6-рвзгпошП млянг, 7-мяр;мЯ рд-. эорпуар,' О-тспшиишр, 9-эатлм, 10-т>лпн-11.1.1 КОЛОЛ, 11~Р03ЛН0КШ пробил, I2-1.1T- ' шш пробки

I. Устапоетсл дли проточного кудьтипиро^-шпя мстрооргаюзпов

Псе ре зи но г; ыэ и стеклянные части прибора обрабатывали силиконом. Дчя улучшения фильтрационных свойств образцов иллита И каоли-

■ л- - *

нита эти минералы перед помещением в колонки сменивал и со стеклят ным, обработанным силиконом песксм, размер частиц которого состав, лял 1,5-2 мм. Через образцы постоянно пропускали раствор <*»)4)г1гяй (0,3 г/л). II качество ксточникауглерода использовали цел л п.юзу

MX от веса образцов), которую смешивали с минералами. При изучении воздействия микроорганизмов на минералы в статических: условиях аналогичные навески минералов и целлюлозу помечали в стеклянные, обработанные силиконом сосуды, емкость» 0,5 л. Образцы заливали вышеуказанным раствором. В контрольные колонки и колбы для подавления развития микроорганизмов добавляли мертиолят натрия (0,3 г/л).

Изучение воздействия микробных сообществ, использующих разные источники углерода.проводили на смеси минералов, состоящей из авгита,; биотита, роговой обманки, кварцевого песка, иллита и каолинита (2:2:2:2:1:1)*. Источником углерода и энергии служила целлюлоза и глюкоза <0,1 г/л}. Для подавления развития микроорганизмов применяли мертиолят натрия,' .. -7.V- .■'■'. . . Перед заражением минералов микроорганизмами колонки и колбы ' с минералами, все части аппарата и емкости с питательными средами стерилизовали в автоклаве при- i атм. Колбы с минералами стерилиэо-; вали отдельно от питательной среды. Для инокуляции минералов исполь эовали суспензию микроорганизмов из иллювиального горизонта дерно- . во-сильноподзолистоЯ почвы, содержащую по данным прямого счета > ' •10 млн клеток в I мл. " . • .■ Численность и качественный состав микробных сообществ иссле-. довали прямым методом по Звягинцеву и Кожевину и посевом на твер-дно питательные среды (Звягинцев, 1980), Численность аэробных бак-ГтериЯ учитывали напочвенном агаре (ПА),1' крах мал о-аммиачном агаре . (КЛА) и разбатенной среде Аристовской (СА>; численность целлюлоэо-: разрушающих бактерий - на среде Итапла-Бортельса (СИБ)¡-количество анаэробных бактерий учитывали на среде Ютаппа-Бортельса и почвен- , ;ном агаре;после инкубации ча»ек в анаоростате; количество грийоа "■определяли ¿¡а'среде с карбокс им ет ил целлюлоз ой (1МЦ), численность ■

акт ином ицетов'- на крахмал о-аммиачном агаре. бпоровые бактерии v\

'■ ..1. Г.;-.;... I .„.у. / . •• . ■ .••',..:• " i i " i ...v.,;,

определяли высевом,прогретой до;бО°С суспензии,микроорганизмов на .■

.; >..-;.- ;.. . \ „"> - О V •. • 'V - . \ '

мясо-пептонни8 агар с суслом ! 1:1). Учет численности грибов и ' " их определение проводили на среде Чапека (СЧ)*Л

В растворах! находившихся в контакте « минералами, определяли . содержание кремния желатиновым методом (Кауричев, i960), алюминия -- алюминоновым методом((Гельман, Старобина, 1976), железа, кальция. - , И МаГНШГ - аТОИНО-абСОрбЦИОННЫИ МеТОДОМ На Прибор« Percin-£l»et-40J. рН растворов определяли потенцио;«втрически. Растворы,, пропедпие ' колонки, предварительно отделяли от случайных примесей центрифуги* рованием при 8000 об/мин в течение 18 минут и концентрировали упариванием на водяной банэ^ Такой но обработке подвергались и раствори статических вариантов,. Исследовали валовой химический состав

■ ?/ ' образцов минералов до и после эксперимента* . Изменение строения ;

кристаллических реаеток минералов изучали рентгенографическим ме-'' тодом (Орлов, 1378), исследование небазальных отражения -методом съемки на просвет <Кринари, 1975). Агрегируюцую способность микробных сообществ изучали методом микроагрегатного анализа по Качинс-кому(Кауричев,: 1980). Морфологию поверхности минеральных частиц исследовали при помощи сканирующего электронного микроскопа (Оси- -1 пов, Соколов, 1976).

Продолжительность опыта в проточных условиях-300 суток, в статических - 150. За 150 суток через колонки с авгитом, биотитом, роговой обманкоИ и кварцевыя песком прошло примерно 2700 мл питательной среды, а через колонки с иллитом, каолинитом и смесью ми-, нералоа - 1300 мл. Объем'питательной среда в.статических условиях

I/ Определите грибов проволплл младиш; туяш'Ч сотр^игш га^ед-рг. бттоглп пеив-£акультота Псчпоб^д-зивд ЮТ О.Е.Мгр^ешип, эа что гчц^гас;! f>3 ncirporairra благодарность,- '

Z? Спредглешю проведали в crteirrpoxitwtecKioft лаборатории [^алогического факультета 1.17 и в Центральной лаборатории Упровлем-ш ЛЛр^летгеодогия" ММ ИГР;

составлял 100 мл. Все расчеты: велись на I г., образцов.

Результаты исследований обрабатывали традиционными статистическими методами (Дмитриев, 1072).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ ■ . Развитие микроорганизмов на минералах и их снеси. \ .. В проточных и статических'условия* на минералах'развивались ; близкие по составу и численности комплексы микроорганизмов,; пред-' ставленные бактериями, актиномицетани и грибами (табл.1). иикроор- . ганизмц в значительно большем количеств обнаружены-на илдите, и

.'—' . 'Г': " . _ Г1'.-' т*-*у*"тУ Т -""-*

Ч-(сменность мрктооргянт'зчов» 1 л-з^игашлхсл на-штИсрллдх и кх снгсв в П]ОТО'»и;Х п статлчосккх услогпях (в колонкам пя глу- • : бнпа 1и См) .

Бм> ант с гт та я- Ц Л Л?го£кпе йактсгпи, Анаэгоб- Актя-.. . : , - ' »шее с-лк-но'к-: '."■* 1 пчн/г " террл» цчта, ! " . МЛН/Г ШГН/Г : Грябы, тнс/г* Обчля чяс.чвн» пооть блкте- -Л-.рд/Г -г

СТА КДА пл С11П ПА ; с:з> и; сч

1" I ■ а 4.9 4,4 4,7 11,5 2,5 0,3^ 0,-1 - 0,6 145

б ■■ -- ' 7.0 12,0 4.6 8.6 9,8 0.6 0.7 - 0.7 92

а ■ ■ 5,7 • 5.7 11,7 8,8 7,6 0,9 - ' 0,8 135

И. б ■ *— • 26,7 " 24.6 25,2 17.7 6,1 0.5 0.4 - 1.1 39

а 3,3 ' 4,7 4,7 1,3 4,6 0.4*-> 1,3 - 0,6 . 197

4,0 10.0 4.5. 1.9 1,9 0,1 1.2 - 0.8 V 200

1У 1 - 1,0 3,1 3,9 5,5 2,5 0,2*> 3,2 - 0,9 479

б —. 5.Р 10,7 4.9 3.5 6,6 0,2 2.7 - 0.6 162

'"7 Л ■ — ■ .ч 31,4 62,7 -15,2 41,8 20,5 0,7 7,3 - 0,8 26

б- 115,2 591.4 20,4 43,2 15,7 6,3 81,0 - 0.7 ■ 6

71 ч г /—. ( V : 10,3 39,7 23,4 37.4 12,3 0,5 6,1 - 0,6 15

б 217.3 147,4 64.7 76.7 13.2 3,4 30.3 - 0,7 " 3

'т я 26, 8 35.4 31,8 ег,а 4,8 7,2 0,2 40,0 35 ,01,1 : . 40

6 за,6 66,7 163,8 50,0 9,7 10,1 ' 0,5 12.0 19.С1.0 '

7ПТ а ' Ь7,4 47,0. 49,6 ,23,1 .7,1 10,5, 0.2 16,0 .10,00,9 ' ю.

б 135,8 ХЗЯ.З 121 .Я 10,5 в, 4 7,1 1,2 т,о кз.оо.в 6

' -Л. ? г ^;

> *

■ 1 *

Л

' I

каолините, особенно в статичвсчих условиях. Общее число бактерий -Г (по данным прямого микроскопического иетода) практически не различалось по вариантам опыта. Отношение общего числа бактерий к числу бактерий, учтенных на КАЛ.(коэффициент К>,.было существенно ниже в обрасцахйллита и каолинита, что свидетельствует, о более однородном составе развивающихся здесь микробных сообществ, И в проточных и в статических условиях на минералах обнаружены неспоровые палочковидные и кокковидные бактерии, а также коринеподобное формы^

Споровые бактерии встречалисъ ливь иаредяа. ■ ■ На минералах развивались грибы Аярпгдпь» niqor, д. psrvuiena, ciio-Cledium roseu", TrictrocteriM viride, a ТаКИв грибы' рода Penicllllum. .

Изучение распределения микробных клеток по глубине колонок показало, что численность преобладающей группы микроорганизмов -бактерий - бша примерно одинакова на различных уровнях колонок. Отмечено незначительное варьирование в численности актиномицетов и грибов. На протяжении опыта численность микроорганизмов в колонках менялась мезнАчичельио. К концу опыта отмечено некоторое увеличение численности анаэробных бактерий и грибов и уменьве::««» коэффициента К.

По обцему содержанию микроорганизмов смеси минералов мало отличались от образцов иллита и каолинита, но были богаче микроорганизмами, чем aBr.ir,-биотит; роговая обманка и кварцевый песок «икровные сообщества, утилизирующие различные источники углерода, различались по своей структуре:, в варинпах с глюкозой бактериэль иое сообщество было представлено преимущественно бактериями вида PaeutJtwionsa fluorescene , по сравнению с вариантами, где использовали целлюлозу; больве выявлено и аэроб шЛ бактерий.. На среде с глюкозой развивалось меньиее количество родов грибов, чем на среде с Це.1ЛЮЛОЗОЙ: обнаружены грибы родов АзрвгдШиэ и Pénicillium в ТО время; как в вариантах с-целлюлозой.развивались кроме того грибы

родов Trichodeme и Giiociedium. Величина отношения общего числа бактерий к числу бактерия, учтенных посевом на СА (К), была ниже в вариантах с глюкозой, что свидетельствует о развитии более однородного сообщества иикроорганиамоп. О проточных и статических условиях численность микроорганизмов различалась незначительно; отмечено превышение количества аэробных бактерий в статических условиях в варианте с глюкозой над аналогичным показателем в проточных условиях, -" '■ ;.;■■'. '

, -' Изменение г" растворов

При развитии микроорганизмов на целлюлозе отмечена тенденция к подкисленню растворов и в проточных, и в статических условиях,; При развитии микроорганизмов на глюкозе рн растворов и целом за -время опыта был более высоким, чем в контрольных вариантах. *

■ ■'-.■ Влияние кизнсдеятельности микроорганизмов на освобождение ; " элементов из минералов и их смеси ■•'.■.

Кремний. Микроорганизмы, развивающиеся на целлюлозе, не оказывали, существенного влияния на выкос кремния из минералов и их смеси. На протяжении зкеперимента вынос кремния носил более или менее равномерней характер. 0 варианте, с минералами в случае, если развивались микроорганизмы, концентрация' фильтратов составила в среднем за 150 суток 2,6*г0'4 - 5,5-ю"3 мр/мл 5юг, а в контролях - З.О'Ю"'1 -' 5,9'10'° мг/мл; Si02. [) статических условиях также не было обнаружено различий между опытом и контролем. Содержание кремния в несме-" няемых растворах лишь незначительно превышало эту величину в фильтратах» ■'**-'■'-.■' ;.' ■ i' ' '' ■'.''-■:■■' i ' ■- \ За 150 суток опыта во всех случаях а проточных условиях вынес-, лось больше кремния; чем в статических'. По'интенсивности освобож- Д. дения кремния в.проточных условиях минералы расположились 'следую-,:

щим образом - иллит (9,3-Ю"4 К/мл S102),' каолинит (9,1 * 10"*) > ■

> биотит (2,4-I0"4) > авгит (8,5*10"5), роговая обманка (3,1-Ю~5)>

-■5

> кварцевый песок (4,0-10 ). В статических уелрвиях отот ряд сохранялся. При развитии.цоллюлозораэрушакщих микроорганизмов на смеси минералов концентрация кремния в растворе на выходе из колонки составила в среднем за 150 суток 2,3-10" мг/мл Si02, а п контроле -2,8*10"? мг/мл- siOj, в статических условиях эти показатели состав-

1 Л " "

ляли соответственно 4,9 и 4,3-10" мг/мл siOj, в статических условиях, концентрация кремния.в растворе варианта с микроорганизмами; превышала таковую в проточных условиях примерно в 2 раза. -

Сообщество микроорганизмов, утилизирующее глюкозу, способствовало выносу из смеси минералов кремния; содержание его в растворе на выходе из колонки было наибольшим в начале эксперимента. В опытном варианте средняя концентрация кремния в растворе за.первые 150 суток была примерно в 3 раза выше; чем в контрольном, и составляла 5.S-I0*3 мг/мл SiOz. В статических условиях содеряание кремния в\ опытном растворе"было примерно в 4 раза выае, чем в контроле, В результате янзнедеятелькости микроорганизмов в статические услови-. ях высвобождалось в I ил раствора в 4 раза больше кремния,.чем в, проточных (рис.Я). За одинаковое время (150 суток) из смеси-мине-• ралов вынеслось 5,1 iirsio2 в проточных условиях и 1,4 мг - в ста-' тических; '

Алюминий. Алюминий мохно было обнаружить только после обработки упаренных растворов концентрированной ссляной кислотой, что свидетельствует о связанном состоянии этого элемента. В проточных условиях вынос алюминия из опытных образцов наиболее интенсивно происходил в начале эксперимента (W суток). Через 150 суток.содержание алшиния в фильтратах снизилось в 3-7 раз. Существенно

ценыпе алюминия освобождалось из контрольных образцов. Средняя

5 R

концентрация алюминия за 150 суток составила 3,1-9,4-10"° мг/мл

- is - 'л ...;; .*"

*4f/*tik.

■ S;o¡ b«;

i „ ; to

h'

*/óx

\ï

CÍO

лА n Л

/¿i-

/¿t *

ni í

a>0

лt,o,

1

P»Q.г.Котоеятрадм в рдо-:Т'::0. З.Кдщдцтталил в тщрял элементов.. BUHectH— (ТёТГюв, r.t'i.jcíiut'ü: из itttieixvioc в re-

vs'

глот го pax ate-

rux КЗ СИ*СХ ндн* рядов в i р«зу*ьт*т« хиэп«д»ЯТвЛЬНО-отх мжкроорганжэиов( в ва-pIAHT&X О ыххрооргинхэм!-мх з» вичвтом контрод*й); I-прм копользвванжд целлюлозы,2-ПрХ МСПОДЬЗОВЖИЕ* ГДЕКОЗИ. .

11 - Tí

il utl> í..u/. ./слог ú,:.:,о-р ста-T/.чоских услотгллх.

СлО

эультатс л :лзн б деятельности :г:чгоорга— ш:п'.:оь ( n гдр:ш!тах с мяк1>ооггзнлз:а-. :t¡i за штатом контроле.*); 1-апглт, 2-б:юткт, 3-|огопак обманка, '4-кьарцв-шй песок, 5-клллт, 6-гслолли:я:,

■Pic.4, Ьшоо элементов хз кия «радов Ьгвремя опыт» (в nxpxaHtxi с млкро-опганхзмамх за вачвтои контролен)! . Т-двг*т,2-б*отщт, 3-рогомя обманк*. ■ 4-kb*pU«etti tit СО к, 5—жлджт , 6-хж0д1к«т.

м-

loî'uUtHL ряяекхо)

МЛН» M/« ftlôi^

•Ч.Ч» MHW

ОГРХММИ [HSre--.

СЪ*ЮСА Hi от- ■

А1г°з а в контрольных вариантах - в 2-7 раз меньше. В статических . условиях в опытных растворах содержалось 6,2*10*^-2,З'Ю*4 мг/мл

а в контрольных образцах - в 3-10 раз меньше. В статических условиях в единицу объема растворов выносилось при участии микроорганизмов в 4-40 раз больше алюминия,, чем в проточных условиях (ркс.З), За 150 суток из минералов под влиянием развития микроорганизмов вынеслось в проточных и статических условиях примерно одинаковое количество алюминия (рис.4). Ло интенсивности освобождения алюминия в проточных условиях относительно валового содержания элемента в исходных минералах, последние можно расположить в следую-■ пий ряд: авгит {3,8'Ю*^ Х/мл.Л1гО) ) > роговая обманка <3,3*Ю"б)>

> биотит (г.МО*®) > каолинит (1,бЮ*6>, «ллит (1,3*10*еК В статических условиях этот ряд выглядел следующим образом: авгит , ^ (1,2-Ю-3) > биотит (?,9'10"5) > роговая обманка (5,1-Ю~5) >'

^ С "

> иллит (2,9*10"°), каолинит (2,0-10 В опыте со смесью минера- . лов максимальное содержание алюминия в фильтрате из колонки, где

. развивались микроорганизмы на целлюлозе, также отмечено в начале' эксперимента..За первые 150 суток средняя концентрация алюминия в этом случае была в 4 раза выше, чем в контроле, 8 статических условиях концентрация алюминия в опытном растворе составляла 2,0'Ю-^ мг/мл А)и примерно в 3 раза превышала, контрольный показатель. В результате жизнедеятельности микроорганизмов в единицу объема -несменяемых растворов переходило в 2 раза больяа алюминия, чем в ; проточных условиях (рис.2).- '.,.-,; , ". ■

.' ,( При развитии микроорганизмов на глюкозе вынос алюминия из 1 ■ • . смеси минералов был наибольшим В: начале опыта. В среднем за первые' ' 150 суток концентрация алюминия в. контрольном растворе была пример-,, но.в 6 раз ниже, чем в опытов В'статических,условиях-средняя кон-;''1 .центрация.алюминия в варианте о микроорганизмами составляла 4;2'10"4 ¡■-мг/мл а в,стерильном>растворе в'мраэа меньше".* За счет;.

жизнедеятельности микроорганизмов из смеси минералов освобождалось-в единицу обьема несменяемого раствора в 2 раза больше алюминия; чем в фильтрат (рис.2).

За 150 суток в результате жизнедеятельности <деллюлозораэлага~ юпих микроорганизмов. иэ смеси минералов в протсхих условиях вынеслось 7,8'Ю"3 мг Ai2oj, а в статических - 1,3-J0"® мг; В случае применения глюкозы эти показатели составляли соответственно 4,8-Ю"2 и 3,3-I0"2 мг At2o3.

Железо. Максимальное содержание железа в растворе на выходе из колонок с минералами отмечено в начале эксперимента (75 суток): оно составляло 9,7- Ю'^-Й ,3 • Ю"* иг/мл-'*огоу Средняя концентрация железа в растворах за первые 150 суток при развитии микроорганизмов во dcsx вариантах, кроме биотита, била в 1,3-Г,9 раза больше, чем п контроля::. В статических.условиях в растворы опытных вариантов переходило в 1,4-4 раза больше железа, чем в растворы контрольных вариантов. В проточных условиях жизнедеятельность микроорганизмов способствовала выносу железа иэ минералов в меньшей степени, чем п статических (в 6-100 раз) (рис.3), В результате жизнедеятельности микроорганизмов за 150 суток эксперимента в проточных условиях из авгита вынеслось болыае железа,.чем в статических; из кварцевого песка больно железа освободилось в статических условиях; вынос железа из роговоП обманки, иллита и каолинита не зависел от условий опыта (рис.4). По интенсивности освобождения железа в проточных условиях минера.™ можно расположить в следующий ряд: иллит 11 -IO-i* %/т f^jOj) > каолинит (4,5-Ю*5) > кварцевый песок (2,7-I0"s > an гит (7.5-Ю*6) > роговая обманка (1,4 • tO"6); в статических условиях: кварцепий песок (2,8-I0"3) > иллит (I,M0-,i) > каолинит (2,7-10"1) > ппгит (4,3'Ю"5) > роговая обманка (3,210"5). В вариантах с биотитом и его спесью с другими минералами при развитии микрппргащпмоп п пае л юр.IX обнаружено мсиьмо железа, чем в копт-

рольных определениях.'За первые 150 суток средняя концентрация яелеза d опыте била в 2 раза ниже; чем в контроле. В вариантах со смесью минералов при развитии микроорганизмов содержание яелеза в Фильтратах падало на.протяжении опыта. В проточных условиях' средняя концентрация железа.в опмтных растворах била в 3.раза меньше. Чем в контроле, в случае целлюлозы, в 2 раза - в случае глюкозы и составляла соответственно в,4 и ЭИ-10"6 мг/мл re20j. в статических условиях.в растворах вариантов с глюкозой и целлюлозой при развитии микроорганизмов в средней содержалось в 2 и 1,3 раза соответственно меньше железа, чем в контрольных вариантах t1,4-10'^ ' мг/мл fe2Oj в том и другом случае).

Кальций, В начале опыта (75 суток) концентрация кальция в раство-' pax из колонок с минералами, где развивались микроорганизмы,. была 'наибольшей:и составляла 3,0-10"Ь-2,3-10"^ мг/мл СоО. в среднем за первые 150 суток концентрация кальция в опытных фильтратах была пъше, чем в контрольных вариантах,в 2-5 раз. Несменяемые растворы

Л л

при развитии микроорганизмов содержали 1,8*10" -2,1-10" мг/мл СдО, стерильные же были беднее кальцием в 5-31 раз. Развитие микроорганизмов в статических условиях способствовало более интенсивному : возрастанию концентрации кальция в растворах (в 10-59 раз) (рис.3). 0 общем, за 150 суток из всех минералов в различных условиях вынеслось приблизительно одинаковое количество кальция (рис.4). По ин- ... тенсивности Освобождения кальция в проточных условиях минералы

о

можно расположить в следухгоиИ ряд; иллит (9,3-10 Х/мл Сво), каолинит (6,3-Ю*3) > кварцевый песок <в,9-10"4) > биотит (3,6,I0"'i) > > авгит (2,1-10 )> роговая обманка (6,9-10* ); В статических условиях этот_порядок сохранялся.. При развитии целлплозоразлагающих микроорганизмов на смеси минералов содержание кальция в фильтрате ■ также снижалось .с. течением времени'. За первые 150 суток опыта сред-: няя концентрация элемента в опытном Фильтрате была выве, чем в конт-'

рольной примерно в 2 раза и составляла 1,5"10"^ мгЛ-i СяО. в статических условиях этот показатель был равен 7,МО"3 мг/мл СаО, а в контроле - примерно в 2 раза ниже. Концентрации кальция, вынесенного из-смеси минералов в результате жизнедеятельности целлюлозе--разлагающих микроорганизмов, была выше в несме; leMOi.: растворе, чем в фильтрате в 41 раз (рис,2), ,

При протоке питательной среды с глюкозой вынос кальция из . опытного образца также был максимальным в начало эксперимента (75 суток). За первые 150 суток средняя концентрация кальция в варианте с микроорганизма)«) составила 2,7-10"^ мг/мл СпО, т,е. примерно в 3-4 раза больше, чем в контроле, В статических условиях этот показатель был в 3 раза выше, чем в контроле, в результате «.изнедеятельное г и микроорганизмов в единицу объема несменяемого раствора переходило в 30 раз больае кальция, чем в фильтрат.(рис.2). За 150 суток микроорганизмы, использувдие целлюлозу, способствовали выносу из смеси минералов проточными растворами I-I0"1, мг caOi в статических условиях освободилось 3,2-10"* мг. За этот срок в вариантах с глюкозой высвободилось соответственно 2,6-10"* и 5,3-10"* мг СаО.

Магний, В начале эксперимента (75 суток) содержание магния в раст-

»

ворах, прояедших колонки с минералами, при,развитии микроорганизмов составляло 9,3*10"^-3,2'10~4 мг/мл "вР и было максимальным за все время опита.: За первые 150 суток.средняя концентрация магния s растворах опытных вариантов составляла 1,0-Ю'^-й,4*10"^ мг/мл rigo - в 3-31 раз больше этого показателя в контрелях. В статических условиях в растворах вариантов, где развивались микроорганизмы, содержалось 1,9-Ю"^-9,0;10-3 мг/мл.ИдО, а в контрольных вариантах -в 2-0 раз меиьяе. В результат^ жизнедеятельности микроорганизмов из мннпралов й I мл растворов в проточных условиях переходило в 25-GI раз mciim-jc магния, чем в статических (рис.3). Всего магния из пиноралоо вынеслось приблизительно одинаковое количество з различ-

них, условиях опита (рис.4К По степени выноса магния в проточны* условиях минералы'можно расположить в следующий ряд:. пялит (7,3* Ю"4 Х/мл> > каолинит-(5,4*10т4) > биотит (I *10~5> > роговая обман- ка (5,6*10"°) 5> авгит - (4 ,8*I0~4); такое жо распределение минералов при более высоких показателях выноса отмечено и для статически* -условий. 8 варианте с кварцевым песком, несмотря на невысокое со-/ держание магния в'растворах, следует говорить об интенсивном вино-се отого элемента, поскольку, в исходном.обрлэце песка были обнаружены лиоь следи магния;. ■ ' .

В опыта* со смесью минералов максимальное содержание магния!-в растворах ка выходе из колонок в вариантах как с целлюлозотак и с глюкозой, отмечено в начале эксперимента (соответственно 7,7. ' 10"^ и 7,М0"5 мг/мл .. С течением времени концентрация магния в растворах падала. Средняя.концентрация магния в фильтрате из колонки, где микроорганизмы развивались на целлюлозе, за первую половину опыта составляла 4,7'W® мг/мл;КдО, а в контроле - в 3 раза-', меньше. В статических условиях в растворе аналогического варианта содержалось 6,5*Ю*4 мг/мл"qfl, что в 5 раз больае, чем в контрольном варианте.' Средняя концентрация магния в Фильтрате из колонки, • " где микроорганизмы.развивались.на глюкозе, за первые 150 суток опита составляла 5^5*Ю"5 мг/мл в контроле эта величина бкла в V П раз ниже. В статических условиях в опытном.варианте концентра-1, ция:раствора была равна 9.8-I0"4 мг/мл "gfl, что в 4 раза больне й' ; этого показателя в контрольном варианте. При участии микрооргашз-•иов, развивающихся на целлюлозе,"1 освобождение магния в статических _ условиях протекало в 4 раза интенсивнее, чем в проточных (рис,2) *. -Шкроорганизш, - пепребляащй глюкозу, способствовали в 15 pas более интенсивная

.,освобождение магния из смеси в статических.условиях,чем в ripotwt*«; Всего из

f ■'■.- - ■. ■■-.>.■■ ■■si , ■• ■ -L*;, v- ■ ■. :: ■.-. *■---.-. •. •■,"■. ^

смеси минералов за 150 суток каи в вариантах с шштахй; 'гак к с глмкоэсД, ш-

I ■:}.■' у-"-;' ■■•'"- -г1 <-"'" -

неслось rç» мерно <здинажзвое количество адакэнтаЧ в вариантах с шиилозоЯ; : •

-18в проточных условиях 4,3-Ю"2 мг идО, в статических - 5,1-Ю"2 мг; в вариантах .С глюкозой соответственно 6,5*10"^ и 7,4-10"*" мг Mgd).

Влия i! и разви вающп х с я микроорганизмов на строение . кристаллических решеток минералов

Рентгенографическое изучение образцов авгита, , биотита, кварцевого песка, иллита и каолинита не'выявило существенных изменений в строении кристаллических решеток этих минералов, подвергшихся воздействию микроорганизмов. В образце роговой Обманки, на которой в течение 300 суток развивались микроорганизмы в проточных условиях, выявлено новообразование окенита - водного кальциевого силиката с формулой C8jSifi0ls^Hj0, о чем свидетельствует новий пик на рактогранив этого образца (рис.5). Исчезновение этого.пика на диф-paitTorpai.twe образца, прогретого при 550°С, подтверждает наличие в составе новообразования кристализационной воды. .

. В варианте со смесью изменений в строении кристаллических решеток минералов не отмечено.,

' Агрегирующая способность микроорганизмов,. * используэдих целлюлозу

При развитии на минералах микроорганизмов происходило агрегирование минеральных частиц. Так, в образце авгита в случае развития микроорганизмов в различных условиях опыта возросло содержание частиц размером 0,25-0,1 мм за счет агрегирования частиц размером 0,1-0,05 им (рис.б). Раэнитие микроорганизмов на биотите как в проточных, так и в статических условиях.способствовало увеличению сод^т.пнип частиц размером 0,5-0,1 мм, при этом снизилось количество члетиц размером менее .0,1 мм,' 8 .контрольных образцах эта тенденция внрзиена слабее. В варианте с роговой обманкой агрегирующая сиоcol i юсть микроорганизмов проявилась наименее «штко. В кварцевом пеекч укрупнение частиц при участии микроорганизмов отмечено только

/геиж

ЧИ-Ч' С,i-0.il ¿¿1-УЛ 0,1-ЦС1 5Л-Л ¿й*.

6. состл» ' 1-и.н01'ллов"~ ■

=-:.*йяЯн!:Л образец, 2-п проточных зг&логклх, 3-в с?ат:1чйс:::1х ¡гс-логпях.и -пгл рлаввткя м:1крооршш:зтв,д -я.с-ге^ыьних условиях.

в статических условиях, где по сравнению с.контроле« существенно . возросло содердание частиц размером 0,5-0,25 мм, при этом количество частиц размером 0,25-0,1 мм уменьшилось.' ,

■ Обсуждение - • .. ;. • '• \:

Во всех случаях микроорганизмы усиливали вынос из минералов^ и из их смеси алюминия, кальция, магния и железа. Исключение сос-' тавил только вынос железа из биотита: при развитии'микроорганиз-' , мов в растворе содержалось меньае хелеза, чем в-стерильных вариантах, В процессе развития микроорганизмы могли окислять закисное ■ : железо, входящее в состав биотита, и отлагать его на поверхности . -, минеральных частиц.' • V. "■ .■■'.'.,-у'"

Развивавшиеся на целлюлозе микроорганизмы практически не ока-' зыэали влияния на вынос кремния иэ минералов и их смеси, тогда как микроорганизмы, утилнзкруициа глюкозу, способствовали выносу этого1 элемента из минералов. Известно," что растворимость кремнезема су- : . У мственно зависит 6т реакции среды (Келлер,' 1963), Поскольку при \ ; [ развитии микроорганизмов на целлюлозе отмечалась тенденция/к под-.-; ■ ч кислению растворов,'-то растворимость кремния могла уменьшаться. , ;"

Развитие микроорганизмов .на .'глюкозе .'.приводило к некоторому.'под- ;'ч; V- оплачиванию,растворов',-что увеличивало растворимость' кремния., ■■...■■ •'

В статических условиях^ в единице объема культурс-льной-жидкости содержалось бельме элементов; .чем ;в проточных,, что связано с накоплением микробных метаболитов. При этом разница;данных показателей в проточных и статических условиях была наименьшей.для крем- ; ния. В общем, за одинаковое время из смеси мш1с1>алоВ'.1 результате; жизнедеятельности микроорганизмов ^''использующих глюкозу, в проточных условиях-вынеслось больив'кремния, чем .в статических. На.вмноо из минералов и их смеси алюминиякальция и магния: изученные условия культивирования микроорганизмов влияния практически не окаэы-: вали* Закономерности , выкоса железа имели сложный.характер и зависели от вида минерала и условий культивирования,

Вынос алюминия, железа,,калышя;« маг н и я бшг наибол ыним в ■ начале эксперимента; вынос кремния.косил относительно равномерный характер, В процессе микробиологического выветривания на минералах могли образоваться защитные органо-тминеральные корки. Методом ска- ', нирующей электронной микроскопии на поверхности частиц авгита;. биотита и роговой обманки в вариантах, где развивались микроорганизмы', обнаружены корковидные образования. В вариантах с иллитом и каолинитом не найдено-раэличий в характере поверхностей частиц1 В начале и конце эксперимента, В случае.кварцевого песка в начале опмта из образца могли вымыться легко растворимые примеси,и в дальнейшем растворение кварца происходило с трудом*

Сопоставляя близкие по объектам результаты исследования (Суш-киня, Цюрупа, 1073) с полученными результатами, следует сказать, что чистые культуры .коринеформных бактерий гораздо интенсивнее разрушают минералы, чем изученные в настоящей работе-сообмества ■ микроорганизмов (табл.2). Кроме того, результаты исследований свидетельствуют, что более однородное по сотаву микробное сообщество ока;»тает на смесь минералов более сильное воздействие, чем сооб-щестпо микроорганизмов, представленное болытем разнообразием ви-

дов>(рис.2). ' '

■ С; пгпанле ■ результатов паздсЯстгдя на млке^шы -тот)а ху.'ь- , тур кор::не ;орм:и.*х ОагстернЛ и кошлоксов микроорганизмов Чстати-4001-м ус.-.огяя) . ./., " ' .'

—а-'.й.'цнти-" Шне- ¿0, МЛ с*0

Гпл ■ЯЛи,

Бкстлт. , 1 2 4-ю-4 Мег5 ■4'ГСП* 6*10"° 3-1-Г4

БеПТОКИТ: 1 2 7Г-г 9'10Й*\." 3-1СГ5 1'ХО"3*' З'ХСГ5 г-юЧ 1'ЮГ3 ЯП: irrr.tr 7 2'10 1 .■г'тшы' 2 *10 гл. г.—пяэульта—

ЩГЧШучоТйшэ в »ютолпеп 'лиспе ргалшя-е (и опита за итетоа контроля); . х)-в олито, .'■■■"■."..■

В связи с незначительным обчим выносом элементов из минералов

непропорциональное высвобождение элементовна привело к заметным изменениям строения кристалличесних реисток исследованных минералов. Новообразование минерала - окенита -отмечена лишь в образце роговой обманки.-Данные электронно-микроскопических исследований свидетельствуют об образовании на поверхности частиц роговой обманки, подвергшейся воздействию микроорганизмов, корки,'состоящей из двух слоев: гладкого верхнего м волокнистого нижнего.

Мизнедеятельность микроорганизмов способствовала агрегированию минеральных частиц. В образцах авгита, биотита, роговой обман-' кк и кварцевого песка увеличилось содержание частиц размером 0,6-•0,1 мм на Э-ИХ по сравнению с контрольными вариантами. В вариантах с авгитом, биотитом, и роговой обманкой агрегация частиц наб- .•' лсдалась и в проточных, и в статических условиях, & в варианте с ,, кварцевым песком - только в статических; Агрегация минеральных г частиц могла происходить по следующим'причинам. Во-первых, в ре- , зультате выноса из минералов (авгита, биотита, роговой обманки) химических элементов на поверхности минеральных частиц могли образоваться иескомпенсироданные заряды (Осипов, 1900),, что приводило \ 'к действии сил электростатического притяжения. Во-вторых, развитие :.■■

микроорганизмов на минеральных частицах при-использовании в качестве источника углерода целлюлоз« могло/сопровождаться/обраэованием поверхноетно-активных веществ типа полисахаридов, оказывающих це-; монтирующее действие на минеральные частицы (Еабьева и др.; 1976; Ряу1я пь •]., 1964 и др.),, в-третьих, агретрующей спосг'ностью обла-' дают окислы.некоторых^металлов,.например,.железа и каль-;,'

: ция (Сергеев, 1983)¿В вариантах с авгитом и.роговой обманкой агрегация частиц происходила, вероятно, вследствие действия первого и второго Факторов, В варианте с;биотитом,,возможно, действовали все три причины; В кварцевом песке могли оказывать'влияние два последних Фактора. При развитии микроорганизмов в проточных условиях значительно возросло содержание частиц размеромО,I-0,05 мм. Ото могло явиться следствием усиленного.выноса из кварцевого песка при участии микроорганизмов, примесей.железа,: кальция и магния. В статических условиях ати примеси выносились из образца, но оставались в системе "минерал-раствор*. Х помощью скаиирующего электронного микроскопа между частицами авгита, биотита, роговой обманки И кварцевого песка в вариантах с микроорганизмами били выявлены связующие новообразования некристалличвской.природы»

ВЫВОДЫ

1. Микробные сообщества усиливали освобождение-из всех минералов и их смеси алюгиния, кальция и магния, а из авгита, роговой обманки, кварцевого песка, иллита и каолинита— железа. Интенсивность освобождения этих элементов зависела от вида минерала. Микроорганизмы препятствовали высвобождению железа из биотита и его смеси с другими минералами..

2. На вынос кремния оказыиала влияние специфика развивающихся микробных сообществ: микроорганизмы, потребляющие глюкозу, усиливали ринос кремния, а микроорганизмы; используддио целлюлозу,:

. ' . л . . 23 ■

иа вынос этого элемента)влияния не оказывали..:'

3. В проточных условиях выносилось больше кремния; чем в ста-' тических; Вынос алюминия, кальция и магнияне зависел от условий культивирования;; закономерности выноса.,железа имели сложный харак-

..• тер и зависели от вида минерала и условия культивирования;

4. В статических условиях в единице.объема к'ультуральной : : жидкости накапливалось болы»е элементов, чем в проточных,

; 5. Алюминий, железо, кальций и магний интенсивное выносились

в начальный период эксперимента;-вынос кремния носил относительно равномерный характер, : - . ■' ■

6. Установлена, что микробные ценозы освобождают меньое эле- ' ' ■ ментов из минералов, чем чистые культуры.

7.-Микроорганизмы, развивающиеся в проточных условиях, слособ-■ ' . ствовали новообразованию охенита по роговой обманке, ' , 1

8. Развивающиесяна авгите* биотите, роговой обманке и кварцевом песке микроорганизмы вызывали агрегирование-частиц этих ми* * нералов, В вариантах с авгитом, биотитом и роговой обманкой острук-

туриваючее действие микроорганизмовпроявлялось и в проточных^ и в статических условиях, а в варианте.с кварцевым песком - только ...,'. в статичоских. ■.'" ' ■ '■■ -/Ч':- ■;;".

1' Материалы диссертации .опубликованы в работах:- •

; ' Численность и роль микроорганизмов в грунтах (в соавторстве с ' ; '...■■'-П.О.Роотом, Г. М.Хлебниковой, И,Н,Болотиной, Е.А.Воробье- ;

• ,. вой,. С.Е.Гориным!.'.Инженерная геология,, 1982, № 6, с,72-78 2Участие микроорганизмов в процессах преобразования;:некоторых ' ^минералов и покровного суглинка (в ^соавторстве с.Е.А'.Во- :"

-■ " робьевой и Г.М.Хлебниковой), Материалы Всесоюзного-сим-1'.-

г л ■■■;:" ."> -'V Г'. •-■:■■ ■ '-.^Т1^ '.-..".'-■ < 7.У-* ■ - - -5 ;

,' . . позиума--"Микроорганизмы как компонент биогеоценоза"',■

27-29 сентября, Алма-Ата; 1982, с.185. , 3. Разрушение микроорганизмами некоторых минералов в условиях'

непрерывной фильтрации питательныхвецэств. Материалы; IX конференции молодых ученых и аспирантов геологического факультета ИГУ, м;,,1982: Рукопись депонирована В ВИНИТИ № ' ■■

4; Методы непрерывного культивирования в; почвенно-микробиологичес-* ких исследованиях (в соавторстве^ Б. А; Воробье пой и А.Г.Дорофеевым); Тезисы всесоюзной конференции "Современные методы исследования почв", МГУ, И., 1983, с.74. Микробиологическое выветривание некоторых минералов (в соавторстве с И.Н.Болотиной). Материалы XI конференции молодых учекых и аспирантов геологического Факультета МГУ, М., 1984. Рукопись депонирована в ВИНИТИ

6. Влияние комплекса почвенных микроорганизмов на вынос алюминия

и кремния из некоторых минералов в условиях Фильтрируе-мой и несменяемой питательной среды.(в соавторстве с Б.А.Воробьевой и Г.М.Хлебниковой); Вестник МГУ, сер. почвоведение, 1985. 13 I, е. '

7. Микроорганизмы в процессах разложения силикатов (в соавторстве

с Е.А.Воробьевой); Тезисы VII Съезда Всесоюзного микробиологического общества 24-28 июня, Алма-Ата, 1985. Изд. "НаукаГКаз.ССР, т.б, с.90'

Подписано в печать 22.07.85 А- 53137 Формат 60x84/16 ;

Объем I уч.-изд.л. Тира» Х00 вкэ. Бесплатно. /Лб )

Л)IX при Совете Министров СССР, Москва, проспект Вернадского, 82 ;