Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Саркоцистоз овец

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Саркоцистоз овец"

госкомиссия по закупкам и продовольствию

при совете министров ссср ленинградский ветеринарный институт

На правах рукописи

ШЕМАРОВА Ирина Владимировна

удк: 619:616.993.193:632.2.(470.2)

САРКОЦИСТОЗ ОВЕЦ

(распространение, диагностика, профилактика) 03.00.19. — паразитология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

ГОСКОМИССИЯ по ЗАКУПКАМ И ПРОДОВОЛЬСТВИЮ ПРИ СОВЕТЕ МИНИСТРОВ СССР ЛЕНИНГРАДСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

ШЕМАРОВА Ирина Владимировна

УДК: 619:616.993.193:632.2. (470.2)

САРКОЦИСТОЗ ОВЕЦ

(распространение, диагностика, профилактика) 03.00.19. — паразитология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Работа выполнена в Проблемной научно-исследовательской лаборатории протозоологии Ленинградского ветеринарного института.

Научный руководитель — доктор биологических наук, профессор Шибалова Т. А.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РСФСР Дьяконов Л. П.,

доктор ветеринарных наук, профессор Тимофеев Ь. А.

Ведущее учреждение — Московская ордена Трудового Красного Знамени ветеринарная академия им. К. И. Скрябина.

Защита диссертации состоится « X/- » июля 1991 г. в 13 часов па заседании специализированного совета Д 120.20.02. при Ленинградском ветеринарном институте по адресу: 196084, г. Ленинград, Московский пр., 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ленинградского ветеринарного института.

Автореферат разослан » июня 1991 г.

Ученый секретарь специализированного совета

Киндрас Т. М.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Саркоцисты — внутриклеточные паразиты, развитие которых в организме животных приводит к патологии инвазированных клеток и тканей, в том числе таких жизненно важных, как проводящая система сердца, мышечная п нервная ткани (Rimalla-Rarnenen R., Cajadhar A. A. et al., 1987; Dubey J. P., 1988; Kozar M., 1989).

Саркоцистоз — заболевание животных и человека, широко распространенное на территории Советского Союза, однако имеются лишь отдельные публикации по эпизоотологии и распространению "этой инвазии в Северо-Западном регионе РСФСР (Якимов В. Л., 1929; Никольский С. Н., 1931; Расстегаева М. Ф., 1932; Колаб-скии Н. А. н др., 1964).

К нерешенным аспектам проблемы саркоцистоза относятся также вопросы патогенеза, диагностики и профилактики (Степанова Н. И., 1980; Бочкарев В. Н., 1987, Dubey J. P., Fayer R„ 1989).

На сегодняшний день наиболее актуальной и трудоемкой является проблема иммунодиагностики заболевания у сельскохозяйственных животных и, в частности, у овец. Из иммунологических методов диагностики саркоцистоза овец для ветеринарной практики наибольшее значение имеет РСК, достоверность которой зависит от качества саркоцистозного антигена. В литературе имеются сведения о приготовлении антигенов из инвазированных саркоцис-тами мышц овец (Никольский С. Н., Позов С. А., 1984; Хан Н. Г., 1986), однако в препарат, приготовленный по данным методикам, попадают не только специфические компоненты саркоцист, но также сывороточные и мышечные белки хозяина, которые существенно снижают качество антигена.

Недостаточно внимания уделяется разработке химиопрофилак-тическнх мероприятий при саркоцистозе овец. Использование известных паразптостатических препаратов не приводит к выздоровлению больных животных (Должпков М. В., 1982; Тимофеев Б. А. и др., 1983; Попов Ю. А., Хван М. В., 1986;; Позов С. А., 1988; и

др.). Отсутствие эффективной химиотерапии саркоцпстоза определяет актуальность исследований в области профилактики.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы являлось изучение распространения и степени зараженности саркоцис-тозом сельскохозяйственных животных в хозяйствах Северо-Западной зоны РСФСР; усовершенствование методов диагностики и химиопрофилактики саркоцистоза овец.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

— изучить распространение саркоцистоза среди крупного рогатого скота, свиней и овец в хозяйствах Северо-Западной зоны РСФСР;

— установить индексы зкстенс- и интенспораженности; дать оценку зараженности сельскохозяйственных животных саркоцсюто-зом;

— определить виды саркоцист, паразитирующие у овец в данном регионе;

— усовершенствовать методы прижизненной и посмертной диагностики саркоцистоза овец;

— разработать эффективную лабораторную модель для изучения саркоцистоза — симптомокомплекса, патогенеза, патоморфо^о-пш болезни; диагностики и химиопрофилактики; ' '

— изыскать профилактические и терапевтические средства при саркоцнстозе овец.

Научная новизна.

— Изучена эпизоотологическая ситуация по саркоцистозу сельскохозяйственных животных в Северо-Западном регионе РСФСР; установлено широкое распространение этого заболевания среди овец в хозяйствах Ленинградской, Псковской и Новгородской областей; подтверждена его негативная роль в экономике овцеводства;

— установлена экстенсивность и интенсивность заражения сар-коцистозом крупного рогатого скота, овец и свиней; определены виды саркоцист, паразитирующие у овец на территории Ленинградской, Псковской и Новгородской областей; изучены факторы, оказывающие влияние на зараженность овец саркоцистозом;

— установлена степень пораженности саркоцистами Б. 1епе11а различных групп мышц;

— разработаны способы получения саркоцистозных антигенов и диагностических сывороток для РСК и ИФА;

— разработан критерий оценки интенсивности саркоцистозной инвазии у сельскохозяйственных животных;

— разработана методика определения эффективности химиоте-рапевтических препаратов при саркоцистозе';

— определена антисаркоцистозная эффективность некоторых химиопрепаратов н иммуностимуляторов (стенорола, химкокцида, химкокцида-7, аллопуринола, лактолена, астазилита).

Практическая ценность. Изучена эпизоотологическая ситуация по сзркоцистозу сельскохозяйственных животных в хозяйствах Ленинградской, Псковской и Новгородской областей.

Отработаны средства и методы диагностики саркоцистоза животных; доказана этиологическая причастность возбудителя саркоцистоза к патологическим процессам и гибели животных; предложен критерий оценки интенсивности саркоцистозной ннвазии; впервые для химиопрофнлактикн саркоцистоза установлена эффективность сочетанного применения хнмиотерапевтнческих препаратов с иммуномодуляторамп.

Для ветеринарной практики предложены: «Методические рекомендации по лабораторной диагностике саркоспоридиозов домашних животных». — Л., 1989; «Методические рекомендации по химиотерапии и профилактике саркоспоридиоза овец». — Л., 1990; утверждены ГУВ при Государственной комиссии Совета Министров СССР по продовольствию и закупкам — приказ №044-3 от 19.02.1991 г. Рационализаторское предложение «Способ оценки интенсивности саркоцистозной инвазии у сельскохозяйственных животных». — Удостов. на рац. предлож. № 18 от 25.05.87. —■ ЛВИ.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

— Материалы сравнительного анализа эпизоотологической ситуации по саркоцистозу сельскохозяйственных животных в Северо-Западной зоне РСФСР: распространение, видовой состав, экстенсивность и интенсивность инвазии, пораженность саркоцистами различных групп мышц.

— Усовершенствование методов диагностики саркоцистоза: получение саркоцистозного иммунодиагностикума, изучение серологических и иммунохнмнческпх свойств саркоцистозных антигенов в РСК и ИФА.

— Результаты исследования по химиопрофилактике саркоцистоза: экспресс-оценка эффективности препаратов ин витро; химио-тсрапевтическая эффективность химкокцида, химкокцида-7, аллопуринола, стенорола и иммуномодуляторов — астазилита и лактолена при экспериментальном саркоцистозе белых мышей; хи-мпопрофилактнка саркоцистоза у овец.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на V Всесоюзной конференции молодых ученых и специалистов (Л.,

)98fi), на научных конференциях молодых ученых Ленинградского ветеринарного института (Л., 1987, 1988), на научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов Ленинградского ветеринарного института (Л., 1986, 1987, 1988, 1989), на научно-практической , конференции врачей санэгшдемслужбы г. Ленинграда (Л., 1988), на I Межвузовской научно-практической, конференции (Л., 1990).

Публикации результатов исследований.

Материалы диссертации опубликованы в 9 работах.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 184 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, характеристику объекта исследовании, 4 главы собственных исследований, обсуждение результатов исследования, заключение, выводы, практические предложения. Список использованной литературы включает 249 источников, из них . 155 — иностранных. Материал диссертации иллюстрирован 16 таблицами и 39 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы.

Диссертационная работа выполнена в течение 1985-1990 гг. на базе Проблемной научно-исследовательской лаборатории протозо-' ологпи Ленинградского ветеринарного института по плану научных' исследований.

Для решения поставленных задач были исследованы пробы мышц от 670 овец, 538 голов крупного рогатого скота, 360 свиней; пробы крови от 160 овец, 230 белых мышей, 22 кроликов; патоло-гоанатомический материал от 158 белых мышей, 14 котят, 6 ягнят, 3 щенков; 178 проб фекалий от подопытных щенков и котят.

Для моделирования саркоцистоза в лабораторных условиях' был использован штамм S. mûris, любезно предоставленный Лабо-' раторией цитологии одноклеточных организмов Института цитоло-' гни АН СССР.

В работе были применены методы: прижизненной и посмертной диагностики саркоцистоза (Awad F. T., 1958, Erber H., 1976; и др.); патоморфологического обследования животных-саркоцнсто-носителей (Mundey В. L., 1979, Dubey J. P. et al., 1982), световой л электронной микроскопии (Mehlhorn H., Sholtyseck E., 1974, Уикли Б., 1975).

Экстенсивность инвазии оценивали в процентах к общему количеству обследованных животных. Интенсивность инвазии определяли путем подсчета количества паразитов в 1 г мышечной ткани.

Оценку химиотерапевтического действия препаратов на вегетативную стадию развития саркоцист производили на белых мышах,

f>

■экспериментально зараженных спороцнстами S. mûris. Заражение мышей производили перорально в дозе. 300—500 сп/животное. ■Препараты вводили по схеме: мышам подгрупп «а» — за один день до заражения и на следующий день после заражения (на стадии премерогонии возбудителя); мышам подгрупп «б» — на 4, 5, 6 и на 27, 28, 29 дни —в период мерогонии возбудителя; мышам подгрупп «в» — на 35, 36, 37 дни — в период образования мышечных 'цкст.

Об эффективности препаратов судили по клинике заболевания, динам;же антителообразования, паразитарной реакции и летальности животных.

Химиотерапевтическое действие химкокцида на половую стадию .развития S. tenella изучали в опыте на полуторамесячных щенках, зараженных S. tenella.

Паразитов щенкам скармливали однократно в составе мясного фарша в дозе 8 млн. зонтов/кг. После заражения щепки были разделены на 3 опытные и 1 контрольную группы по 3 животных в каждой. Срок наблюдения составил 45 дней. На протяжении все-' го опытного периода с перерывами в 3—5 дней производили коп-рологическое обследование животных. Выделение спороцпст осуществляли флотационным способом с насыщенным раствором поваренной соли по общепринятой методике.

Хпмкокцид щенкам вводили перорально с фаршем, двукратно з дозе 25 н 50 мг/кг м. т. на стадии выхода мерозоитов из цисты, га-мо- и спорогонии.

О результативности лечения судили по следующим показателям: длительности препатентного и патентного периодов, летальности и степени зараженности животных на пике инвазии.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Эпизоотологические данные.

Распространение саркоцистоза. В литературе имеются сведения о широком распространении саркоцистоза среди сельскохозяйственных животных Северо-Западной зоны РСФСР, однако представленные в этих работах сведения, безусловно, устарели (Якимов В. Л., 1931; Лубянецкин С. А., 1956; Колабский Н. А. и др., 1964). ,

Проведенное нами обследование сельскохозяйственных животных из хозяйств Ленинградской, Псковской и Новгородской областей на спонтанную зараженность саркоцистозом показало, что крупный рогатый скот ннвазнрован на 63—98%, овцы на 76— 100%, свиньи —на 27—58%.

На примере овец было изучено влияние возраста, пола, упи-

танпости, времени года на динамику зараженности животных сар-коцистозом. Показано, что с возрастом зараженность овец увеличивается. Ягнята 1—4-х месячного возраста были свободны от инвазии, у 6—10-ти месячных ягнят саркоцисты обнаруживались, в единичных случаях— (2,6%), у овец старше 1 года — в 42—!00%. У овец средней упитанности отмечена более низкая степень инвазии, чем у истощенных животных; при этом наиболее часто были поражены мышцы сердца, пищевода и головы.

Летом экстенсивность инвазии у взрослых овец была максимальной — 100%, осенью — 89—100%, зимой — 42—60% и весной — 63—65%. Разницы в зараженности овец в зависимости от пола выявлено не было.

У крупного рогатого скота выявлена зависимость между интенсивностью инвазии и половозрастным!! факторами. Так, при обследовании 108 проб жевательных мышц телят 4—6-ти месячного возраста мерозоиты саркоцнст были, обнаружены только в 6% случаев, в то время как зараженность взрослых животных составляла в среднем — 77,6%. По данным осенне-зимнего обследования экстенсивность инвазии быков составляла в среднем 65%, кооов — 73,5%.

Зараженность саркоцпстозом свиней на промышленных свинооткормочных комплексах «Новый Свет», «Восточный», «Спутник» Ленинградской области была невысокой: у подсвинков до 1 года она составляла 0—3,4%, у свиней старших возрастов — 26—50%.

Установлено, что на степень зараженности животных саркоцпстозом влияют условия содержания животных. В специализированных хозяйствах, промышленных комплексах, в племхозах со стонло-во-лагерным содержанием животных зараженность поголовья была незначительной и составляла 9—36%. У сельскохозяйственных животных из мелких товарных хозяйств экстенсивность инвазии была значительно выше и достигала 51 —100%.

Проведена дифференциальная диагностика видов саркоц'чет у овец на территории Северо-Западной зоны РСФСР.

Критерием идентификации видов Sarcocystis служили такие показатели, как форма и величина мышечных цист, толщина первичной цистной стенки, ее тонкая структура (Cerna Z., Merhanto-va V., 1981).

Правильность дифференциальной диагностики видов саркоцнст подтверждали путем экспериментального заражения окончательных хозяев.

В опыте было использовано 4 щенка и 14 котят. Заражение производили путем трехкратного скармливания подопытным ж:шот-

ным мясного фарша, приготовленного из миокарда и гладкой мускулатуры пищеводов овец, интенсивно инвазированных саркоцис-тами.

На 9-й день после заражения в фекалиях котят, которым скармливали фарш, содержащий макроцисты саркоцист, стали обнаруживаться единичные спороцисты размером 13,2—17,8X8,8— 11,2 мкм. Спороцисты S. tenella в фекалиях щенков, которым скармливали фарш, содержащий микроцисты саркоцист, впервые были выявлены на 11 день после заражения. Размеры спороцист— 14,9—15,2X9,4—10,4 мкм. В дальнейшем, диссиминация спороцист имела место на протяжении всего срока наблюдения (до 30 дня после заражения): у котят — от 7 до 40 спороцист в 1 поле зрения микроскопа (7X20), у щенков — от 2 до 10 спороцист в 1 поле микроскопа (7X20).

Установлено, что в хозяйствах Ленинградской, Псковской к Новгородской областей наиболее распространенным является вид S. tenella.

В ряде случаев имеет место смешанная саркоцистозная • Инвазия. Об этом свидетельствуют результаты послеубойного осмйтра 3066 туш овец: из них у 46 овец в гладкой мускулатуре пищеводов были обнаружены макроцисты S. gigantea, а в пробах миокарда от этих же овец — микроцисты S. tenella.

Пораженность саркоцистами различных групп мышц.

Из данных литературы и наших собственных исследований известно, что в одном животном могут одновременно паразитировать несколько видов Sarcocystis, отличающихся степенью патогечнос-ти для промежуточных хозяев, поэтому большой интерес представляют исследования, направленные на выявление мест преимущественной локализации возбудителей саркоцистоза определенного вида. В связи с этим было проведено обследование различных групп мышц от ягнят, экспериментально зараженных S. tenella. Установлено, что наибольшее число саркоцист этого вида локализуется' в сердце—(41,3±13,7), несколько меньше — в диафрагме (40.7± ±13,7), в ягодичной мышце—(38,3+10,8), языка — (28,8± i,0), четырехглавой мышце плеча—(22,3± 12,4), подлопаточной — (18.2±9,8).

У овец, зараженных S. gigantea, максимально инвазироваи пищевод— (5,3±0,2 цист/г тк.).

Иммунодиагностика саркоцистоза.

.Получение саркоцистозного иммунодиагностикума.

Исходным материалом для получения саркоцистозного антигена служили макроцисты S. gigantea. Паразитов отпрепаровыв'зли из инваЗированной ткани и промывали фосфатно-солевым буфер-

п

ным раствором, содержащим консервант. Затем цисты измельчали в гомогенизаторе до получения однородной серо-белой массы. Ин-< градиенты использовали в следующем соотношении: ■>';.

! г паразитарной массы;

50 мл 0,01 М натрий-фосфатного буферного раствора;

0,5 мл 0,001% раствора мертиолата.

С нелыо разрушения клеточных структур к полученному гомо-. генату добавляли 0,2% раствор Triton Х-100 и в течение 18— 20 час. проводили экстракцию белков, входящих в состав цист, Так как полного разрушения мерозоитов при механической и химической обработке не наступало, на следующем этапе паразитарную суспензию озвучивали на аппарате УЗДН-2Т в течение 15 сек,' после, чего клеточный гомогенат центрифугировали при'* 19000" об/мин. Затем пробу декантировали, в супернатанте определяли концентрацию белка. Полученный npenapáT с концентрацией белка 10 мг/мл разливали по ампулам, лпофильно высушивали и использовали в качестве антигена в РСК.

.Диагностические протнвосаркоцистозные сыворотки получали' ¡иммунизацией кроликов формализированными мерозоитами S. gigantea.

Иммунизацию проводили по следующей схеме. .;

В первый день антиген с концентрацией белка 1,4 мг/мл вводили внутривенно в бустер-дозе. На 3-й и 5-й дни от начала иммунизации. антиген в половинной дозе инъецировали подкожно в три точки спины в смеси с полным адъювантом Фрейнда в соотношении .5:1.

Через 7 дней проводили аналогичный курс иммунизации.

Для определения активности саркоцистозного антигена использовали сыворотку крови кроликов, полученную па 14 день после 2-й иммунизации. ,

Специфичность антигена проверяли путем постановки РСК с. ссролознтнвными и серонегатпвнымп саркоцнстозными сыворотками. - -

Диагностика спонтанного саркоцистоза у овец. Оценку эффективности саркоцистозного антигена проводили в эксперименте с: использованием 60 проб сывороток крови овец, спонтанно зараженных саркоцистозом. После убоя мышцы от этих животных обследовались на иаличие'мерозоитов саркоцист.

Комплементсвязывающие антитела были обнаружены в 52 пробах, или у 86,6% обследованных овец. У 8 жнвотных-саркоцисто-; носителей и у плодов овец специфических антител не выявили. Максимальный титр противосаркоцистозных антител (1:160) обна-. ружпли у животных со средней степенью заражения, у овец .с бо-

тее высокой интенсивностью инвазии были установлены титры ' 1:40—1:80.

Корреляционной зависимости между интенсивностью инвазии и уровнем специфических антител нами не обнаружено. :

Использование ИФА для диагностики саркоцистоза.

Изучена возможность использования в качестве саркоцнстозно-" ю антигена неразрушенных мерозоитов S. gigantea. Суспензию мерозоитов вносили в лупки полистироловых планшетов в концентрации 105 зоитов/лунку. Иммобилизацию антигена проводили при -¡-4° в течение суток. После фиксации антигена 96° спиртом прово-. ],илн реакцию общепринятым методом (Ngo Т. Т., Lchoff Н. М.," '.988).

Для ИФЛ в качестве диагностических использовали сыворотки' срови мышей, иммунизированных зонтами Sarcocystis и Eimeria в 1 ■ юзе 106зоитов/мышь. Иммунизацию мышей проводили дважды с-штервалом в 14 дней. Уровень антител определяли на 10 день пос--те 2-й. иммунизации.

В результате проведенных исследований было установлено, что : корпускулярным саркоцистозным антигеном реагируют как анти-■■ ела к Sarcocystis, так и к Eimeria. . .

При этом титр противосаркоцистозных и протнвоэймериозных ¡птител (по 50%-ному снижению оптической плотности) составил :20480 и 1:5120, соответственно. Обнаруженный сравнительно высокий титр протнвоэймериозных антител, специфически реагирую-' i их с корпускулярным саркоцистозным антигеном, указывает на: наличие общих антигенных детерминант на поверхности зоитоз iarcocystis п Eimeria.

, Полученные результаты являются убедительным аргументом в-ользу того, что для иммунодиагностики саркоцистоза необходимо •■ спользовать специфические антигены, полученные после предвари-ельной биохимической очистки исходного антигенного материала.

Химиопрофилактика саркоцистоза.

Изучение цитотоксического действия препаратов на мерозоиты iarcocystis в опытах in vitro.

Величину цитотокснчностн химиопрепарата определяли по юрмуле:

X = (100 — — ) X 100 — (100— —) X 100> гДе

Oí К,

X — индекс цитотоксичности химиопрепарата;

О) — усредненное количество жизнеспособных мерозоитов в ка-ере Горяева в опытной пробе на начало опыта;

02 — усредненное количество жизнеспособных мерозоитов в ка-ере Горяева в опытной пробе на конец опыта;

Ki — усредненное количество жизнеспособных Мерозоитов в камере Горяева в контрольной пробе на начало опыта;

Кг — усредненное количество жизнеспособных мерозоитов в камере Горяева на конец опыта;

Проведенный нами скрининг 22 химнопрепаратов, из них S вновь синтезированных, показал, что цитотоксическим действием в Отношении мерозоитов Sarcocystis обладают азиДин, стенорол и хИмкокцид.

Методом трансмиссионной электронной микроскопии установлено, что 18—24 часовая инкубация цистных мерозоитов с химкок-цйдом приводит к ультраструктурной патологии клетки: разрыву пелликулы, клазматозу, кариолизнсу.

Химиотерапевтическая эффективность химкокцида при садко-Цистозе была подтверждена в опытах in vivo. С этой целью càpko-цистоз был воспроизведен на 145 белых мышах, являющихся удббной лабораторной моделью для изучения саркоцистоза.

Изучение химиотерапевтической эффективности лекарственных препаратов в опытах in vivo. По воспроизведению саркоцистоза было проведено 7 экспериментов на белых мышах, результаты которых позволили расширить имеющиеся представления о симпто-мокомплексс, патогенезе, патологоанатомическом и патологомор-фологическом проявлении этой инвазии у животных, разработать схемы ее терапии и химиопрофилактики.

Инвазионным материалом для заражения мышей служил ileum и фекальная суспензия, содержащая спороцнсты S. mûris.

Установлено, что наиболее остро заболевание протекает в первый месяц после заражения. Гибель, мышей отмечали на 18, 20, 26 день после заражения (ДПЗ). При электронномикроскопическом исследовании органов убитых на этой стадии болезни животных ультраструктурну.ю патологию наблюдали в кровеносных сосудах. Начиная с 15-го ДПЗ отмечалась гипертрофия эндотелиалг.пых клеток, обусловленная развитием шизонтов 2-й генерации.

В дальнейшем на 45—60 ДПЗ ультраструктурная патология отмечалась, в основном, в скелетной мускулатуре. В этот период в ■.¡мышцах наблюдали образование цист S. mûris; формирование цист сопровождалось массовым разрушением митохондрий в саркоплазме ннвазированных миоцитов. Начиная с 90-го дня после заражения, в пораженных мышцах отмечали ценкеровский некроз, многочисленные лейкоцитарные инфильтраты, большое количестве разрушенных цист S. mûris. , •

Изучение химиотерапевтического действия химкокцнда, алло-пуринола и стенорола при экспериментальном саркоцистозе мышей.

Результаты исследования показали, что наиболее эффективен из испытанных препаратов — химкокцид при его применении через 3 часа после заражения. Интенсивность инвазии на 115 ДПЗ у мышеь группы 1 «а», получавших химкокцид в дозе 3 мг/кг м.т. в указанный срок составила в среднем 1,1ХЮ5 з/г, у мышей кон-тролг;/оп нелеченной группы — 3,8Х'03, у мышей, получавших химкокцид в более поздние сроки, — группа 1«б» — 2,IX X >0« " группа 1 «в» —5,4X108 з/г.

Применение стенорола оказалось менее эффективным: зараженность мышей группы 2«а» составила 1,9ХЮ4, группы 2«б» — 2,1X5О6, группы 2«в» — 5,4Х Ю8 з/г.

Использование аллопуринола как в инкубационный, так и в клинический периоды течения саркоцистоза было не эффективным.

Хкчиопрофилактика саркоцистоза с использованием иммуномо-дулятсфов. В опыте были Использованы следующие препараты; хцш-.окцнд, хи.мкокцид-7, лактолен и астезилит (1 и 2, соответственно). Химкокцид в дозе 50 мг/кг м. т. вводили перорально, иммуномодуляторы Лр2 1 и № 2 в дозе 5 и 50 мг/кг м. т., соответственно,— парентерально по схеме, учитывающей стадию развития возбудителя.

Установлено, что ни одни из применявшихся препаратов в отношении вегетативной стадии БагсосуэиБ не обладает стерилизующим паразитоцидпым действием. Однако химкокцнд-7 и химкокцид. при их применении на стадии премерогонни возбудителя имеют выраженное паразитостатнческое действие, которое усиливается при сочстанном использовании химкокцида-7 с иммуномодуляторами, в особенности, с лактоленом. Интенсивность инвазии на 60 ДПЗ у опытлых мышей, обработанных химкокцидом-7 в сочетании с лактоленом, была 2,2—2,5ХЮ3, в то время как в контроле—1,2— 1,ЪО О7 з/г.

Усиление эффективности препарата мы связываем со стимулЧ!-руюшдш действием лактолена на иммунную систему животных. Об -том свидетельствует статистически достоверное повышение титров антител у мышей опытной группы. Методом твердофазного иммукоферментного анализа было показано, что у мышей, обработанных лактоленом, уровень противосаркоцистозных антител возрастает к 15-му ДПЗ и достигает максимального значения (1: -.5120) к 42 ДПЗ; в зараженном контроле— 1:320.

Изучение химиотерапевтической эффективности химкокцида при экспериментальном саркоцистозе овец. Саркоцистоз воспроизводила на семидневных ягнятах путем перорального введения спо-роцист Б. 1:епе11а в дозе 50000 спороцист/животное.

Спороцисты были получены от собаки-донора, которой предва-

,рительно скармливали инвазированную саркоцистамн баранину.

Ягнятам 1 группы одновременно с инвазионным материалом и через 3 часа после заражения алиментарным путем задавали хим-кокцнд в дозе 50 мг/кг м. т. Ягнята 2-й группы лечению не подвергались н служили в качестве зараженного контроля. Ягнята 3-ей группы заражению ц лечению не подвергались.

За зараженными животными велись клинические наблюдения на протяжении всего опытного периода. Срок наблюдения соста-.-вил 120 дней. По окончании опыта ягнята были убиты, туши взвешены и обследованы на наличие саркоцист.

Цисты Б. 1епеПа были обнаружены у всех зараженных ягнят (группы 1, 2). Установлено, что в среднем по группе у нелеченных ■ягнят внутримышечных цист было в несколько раз больше, чем у , леченных химкокцидом. Наибольшее количество цист у животных ."обеих групп было выявлено в сердце. Среднее количество саркоцист в сердце ягнят группы № 1 составило 1,24±0,75, группы № 2 — 41,3± 13,7 цист/г мышц. В сердце и скелетных мышцах ягнят, не подвергавшихся г.г~?-—*"«о (групп;: "Г !•-■<•■- 8.

, Л.епеИа обнаружено не было.

Полученные результаты показали, что химкокцпд является эффективным саркоцистостатическим препаратом и может использоваться для химиопрофплактики саркоцистоза овец.

Химиопрофилактика кишечного саркоспоридиоза у собак.

Результаты исследований показали, что для химиопрофплактики кишечного саркоспоридиоза наиболее эффективно двукратное ; применение химкокцида в нервыечасы после заражения. Прнэтом у подопытных щенков 1-й группы, которым химкокцид вводили в дозе 25 мг/кг м. т. в момент заражения и через 3 часа после заражс-

• ■ ция, клинические признаки инвазии отсутствовали, а диссимина-

ции снороцист не наблюдалось. Трехкратное применение химкокци-, да в дозе 50 мг/кг м. т. в период гамогонни возбудителя (группа

• № 2) также имело положительный эффект, который проявился в следующем. Из трех зараженных щенков саркоспориднозом заболел

ч.только один. У больного щенка заболевание протекало субклини-.чески, препатентный период по сравнению с контролем увеличился в два раза, а количество выделенных спороцист на 15 ДПЗ уменьшилось более, чем в сто раз. Использование химкокцида, накипая с 5-го ДПЗ, на стадии спорогонии возбудителя (группа №3) . оказалось не эффективным. Заболевание у таких животных в патент: ный период протекало остро с повышением температуры тела дс 39°. При этом интенсивность инвазии на пике болезни (на 15 ДПЗ) составила в среднем 2,ЗХЮ4 спороцнст/г фекалий. Препатентный период — 9 дней; патентный —- 34 дня.

, Таким образом, проведенные исследования показали, что .хммг-кокцид в дозе 25 мг/кг м. т. является эффективным химпопрофи-лактнческнм препаратом в отношении зонтов и рашшх половых стадий развития Sarcocystis.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что саркоцистозы широко распространены среди сельскохозяйственных животных в хозяйствах Северо-Западной зоны РСФСР. Зараженность саркоцистозом овец составляет 7(5— 100%, крупного рогатого скота — 63—98%, свиней — 27—58%.

2. У овец из хозяйств Ленинградской, Псковской и Новгород-ско.! областей обнаружены два вида саркоцист: S. gigantea и $• tenelín. ....

,. 3. Установлено, что экстенсивность и интенсивность саркоцис-тозной инвазии у животных зависит от возраста, упитанности, времени года.

Ягнята 1—4-х месячного возраста были свободны от инвазии,

.. 10-ти месячных животных саркоцнеты обнаруживались в единичны., случаях—(2,6%), у овец старше I года — в 42—100%.

У овец средней упитанности отмечена более низкая степень ии~ вазнн, чем у истощенных животных; при этом наиболее часто были поражены саркоцистами мышцы сердца, пищевода и головы.

Летом экстенсивность инвазии у взрослых овец была максимальной — 100%, осенью —89—100%, зимой — 42—60% и вес-поп—63—65%.

Разницы в зараженности овец саркоцистозом в зависимости от пола выявлено не было.

4. Выделенные из макроцнет S. gigantea мерозоиты могут быть использованы в качестве корпускулярного саркоцистозного антигена, активного в ИФА.

Впервые методом твердофазного ИФА обнаружены общие поверхностные антигены у Sarcocystis и Eimeria, обусловливающие перекрестные иммунологические реакции.

Растворимый саркоцнстозный антиген, полученный ультразвуковой дезинтеграцией и высокоскоростным центрифугированием мерозоитов S. gigantea характеризуется высокой специфичностью и чувствительностью в РСК.

5. Выраженным цнтотоксическим действием in vitro в отношении мерозоитов S. tenella обладают азидин, стенорол, химкокцид.

, Выявлены ультраструктурные изменения в мерозоитах саркоцист, подвергнутых контакту с химкокцидом—■нарушение целостности пелликулы, деструкция клеточных органелл, клазматоз.

6. Экспериментально показано, что белые мыши являются

удобяой лабораторной моделью для изучения.саркоцистоза — клинического проявления инвазии, патогенеза, химиопрофилактики.

Б экспериментах па мышах подтверждено, что патологоморфо-логические изменения при саркоцистозе зависят от дозы заражения я стадии течения болезни.

7. Химиотерапевтической эффективностью в отношении половых стадий развития БагсосувИз обладает химкокцид. Его дв)г-кратное применение собакам в дозе 25 мг/кг в первые сутки после заражения предупреждает развитие инвазии.

8. Химкокцид в. дозе 50 мг/кг эффективен для химиопрофилактики саркоцистоза овец. Паразитостатический эффект препарата состоит в предупреждении развития симптомокомплекса болезни и снижении интенсивности инвазии.

практические предложения

Материалы исследований позволяют предложить:

1. «Методические рекомендации по лабораторной диагностике саркаспорпдиозов домашних животных». — Л., 1989. (Рекомендации рассмотрены и рекомендованы для использования в ветеринарии ГУВ при Госкомиссии Совета Министров СССР по продовольствию и закупкам. — Приказ № 044-3 от 19 февраля 1991 г.).

2. «Методические рекомендации по химиотерапии и профилактике саркоспорндиоза овец». —I Л., 1990. (Рекомендации рассмотрены и рекомендованы для использования в ветеринарии ГУВ при Гос^смиссии Совета Министров СССР по продовольствию и закупкам. — Приказ № 044-3 от 19 февраля 1991 г.).

3. Рационализаторское предложение «Способ оценки интенсивности саркоцистозпой инвазии у сельскохозяйственных животных». — Ленинградский ветеринарный институт. — Удостов. на рац. предложение № 18 от 25. 05.87.

4. Полученные данные могут быть использованы в научно.-ис-следонательской работе, в курсе лекций и практических занятий для студентов и слушателей факультетов повышения квалификации на кафедрах паразитологии ветеринарных вузов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1; Пахомов А. Н., Мельникова О. Ю., Шемарова И. В., Лаковникова Е. В. Оценка фракционного состава стандартного и саркоцнстозного антигенов// Проблемы профилактики и терапии заразных заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц/ Сб. тр. Лен. вет. шита. — Л., 1986. — В. 88. — С. 63—67.

2. Шемарова И. В., Лаковникова Е. В. Распространение саркоцистоза среди овец и крупного рогатого скота// Инвазионные болезни сельскохозяйственных животных и птиц/ Сб. тр. Лен. вет. нн-та. —Л., 1987. —В. 91. —С. 61—64.

3. Шемарова И. В. Диагностика и профилактика саркоспорндиоза у овец// Инвазионные болезни сельскохозяйственных животных и птиц/ Сб. тр. Лен. вет. нн-та. — Л., 1988. — В. 94. — С. 89—94.

4. Шемарова И. В. Модифицированный сарпоцистоскопнческий метод диагностики саркоцистоза сельскохозяйственных животных// Инвазионные болезни сельскохозяйственных животных/ Сб. тр. Лен. вет. ин-та. Л., 1989. —В. 104.— С. 211—212.

5. Белостоцкая Г. Б., Чепурко Е. В., Шемарова И. В. Сравнительное исследование антигенных свойств эймерий и саркоспоридий// I Межвузовская научно-практическая конференция «Новые фармакологические средства в ветеринарии». — Ленинград. — Тезисы докладов. — Л., 1989. — С. 10—И.

6. Шемарова И. В. Лабораторная диагностика саркоспоридиозов домашних животных// Методические рекомендации/ — Ленинградский ветеринарный институт. — Л., 1989. — 39 с.

7. Шемарова И. В. Химиотерапия и профилактика саркоспоридиоза овец// Методические рекомендации. — Л., 1990. — 9 с.

. 8. Шемарова И. В. Химиопрофплактика и терапия саркоспоридиоза у собак// Фармакология и токсикология новых лекарственных средств и кормовых добавок в ветеринарии/ Сб. тр. Лен. вет. ин-та. — Л., 1990. — С. 59—64.

9. Шемарова И. В. Изучение химиотерапевтической эффективности химко*-цпда при экспериментальном саркоспоридиозе животных// Ветеринария. — 1991. — № 2. — С. 43—45.

Пропзводстзенно-полпграфическое объединение ЛЬ 1 Ленупрполиграфиздата. Пушкинское производство "Заказ 805. Тираж 100. 22.05.91 г.