Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль ГАМК-шунта в метаболической компенсации в головном мозге при некоторых экстремальных состояниях и экспериментальной терапии

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Роль ГАМК-шунта в метаболической компенсации в головном мозге при некоторых экстремальных состояниях и экспериментальной терапии"

государственный коштет ссср по народюну образовало л-'*' ордена дружш народов университет друиш народов км.п.лшмш .л/

На правах рукописи

розанов всеволод анатольевич

Уда 616.831:547.466-018-085]:(»1.6

роль гамк-шунта в метаболической шпенсацш

в голошоа мозге при ншгогах зисгршашш состояниях и экспешешшюя терапии

03.00.04 - Еяохшшя

Автореферат диссертации на соисканиэ ученой стспегш доктора медицинских наук

Москва - I?©

^(ги МСШ фьЛ д/

Работа выполнена на кафедре биохимии Одесского медицинского института 1ш. И,И.Г1ирого&а ЫЗ УССР.

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор В.З.Горюш Доктор кздицлнских наук, профессор Л.П.Хохлов Доктор биологических наук, ст.н.с. Л.В.Молчанова.

Ведущая организация:

Институт питания АЗД СССР.

Запета диссертации состоится "_я _ 1990 г,

в_часов на заседании специализированного совота Д 053.22.0

при Университете Друаби Народов щд.П.Луыумбы по адресу: 117198, ГСП, Москва, ул.Микяухо-иаклад, д.8. Медицинский факультет.

С диссертацией мскно сэнакошться в библиотеке Университета Дружбы Народов ны. П.Лумуыбы по адресу: Москва, ул.Уиклухо-Макла; д.6. •

Авгсрефора? разослан " , " . 1989 г.

УчзныП севротарь

специализированного совета •• • ■ А / Торбек В,

доичор ыэдацшшких »щуа

ОБЩАЯ Й1РАКТЕРШЖ\ РАБШ

Актуальность проблемы. В совремзшюй кздицкнской биохимия проблема гипоксии и коррекции гипоксичзских н&рунвяий яплязтсл одной из ведущих. Особый интерес в связи с этим представляй1 «зя называемый экстрзмалыкгз (Горизонтов П.Д., 1973) и крктнчоскот (Рябоэ Г»Л., 1988) состояния, при которых гипоксия» ка- »госпзцафчпескоэ пропмэ-нио патологии, тетушки на пзрвдй штя. Пшсксия при этих состояниях, как правило, икевт сметэнный характер и адекватно моделируется только при условии воссоздания реальней пагслогичосгсй ситуации. В последняя десятилетня актуальность коднко-бигл сглчаских исследований 0 области 6пожш':л экстремальных состояний всэрослл в связи с неухлошан рсстш травулг/зма, охоговых и яучеш:-: нерзкэ-ний. При этой перед медициной помяло задач» создяиеняя казни путец неотложных иер иктснсненой терапии стоит не ызнее важная сверхга-дача восстановления утраченных мозговых функций и социальной реабилитации пострадагиск. Для реагания' этих задач необходимо биохизгкче-сдоз обоенсваквд внтигипояеичесхях мероприятий, оценка зффзхтагно-ста различных сочетаний фарлаксяогнчоегмх к метаболических средств защит органов и тканей с? гипоксии.

При обсуждении вероятных метаболических мехаиагиоз устойчиво--сти к гипоксии на первгЯ план пкходят компенсаторны» пут метаболизма: глюхонеоггиез, пентезофос^а'кщй хунт, рахсции яарбсхсияирсга-ния, перз&чикировакия (Хочз-чка П., Сс?:эро Дз., 19С8; Бсбиов В.Г. и соавт., 1984; Ксндропова ПЛ., 1988). В нэрвней ткани особ со в/ггд-ние привлекает ГАШ-шуит, прэдетавляа^й собой обходной дуть по отношению к лиштирукцзй ЦШ регулируемой г^-кетоглутаратдагадроге-назней реакции (Бунятян Г.Х., 1566; Ситакстай Н.А., 1972;1и>Ьег*в в., 1974; Тр.р1о Я., 1983; Раевский К.С., Георгиев В.П., 1986), и определяющий содержание и быстроту оборота ва&нейпзго центрального, гэйремедиатсра ГАШ (Сытинский И.А., 1977, к.,. 1970;

ооппагс! р., 1980). йдэктся экспериментальные подтвврздеггад уча-:тия систеиы ГАКК в сгратгании повреждений| внзванках строссси Иеерсон 0.3., 1981; 1986), одгеало о спрос о количественном склада ?етаболизма ГАШ в нормализацию наруазнного цатаболнзка мозга при кстреналькых сестоягшях практически не рептен.' Не? ясности а пред-.тавлениях о мзхеиизмах метаболического контроля, упраалтщх ра-отой ГАМК-шунта, особенно при гипоксии. В то га врэшх реиэнио , тих вопросов открывает горспеятяш разработки методов керргкцин ункцрй ГАНК-шунта, в частности, с псасдьо ношх ГАШС-пронззсд'пс:

на основа естественных метаболитов (Копзлевич В.М. и соавт., 1981) и витаминно-коферментно-метаболитных комплексных препаратов (Розанов А.Я., 1986). На этой основе возможна разработка конкретных рекомендаций по антигипсксической терапии при экстремальных состояниях организма. Вышеизложенное определявг актуальность предпринятого исследования.

Цель и задачи исследования. Цель исследования состояла в разработке рациональной экспериментальной фармако-метаболической защиты мозга от гипоксии при экстремальных состояниях организма на основе представлений о ГАМК-шунте как о компенсаторном метаболическом пути в нервной ткани.

Для достижения данной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Оценить количественный вклад ГАЫК-шунта в поток субстратов на стадии «¿-кетоглутарат (о£-КГ)—«-сукцинат в различных отделах мозга я сопоставить полученные данные со сведениями об устойчиво« этщс отделов мозга к гипоксии.

2. Расширить представления о механизмах метаболического контроля ГАМК-шунта и сопряженных с ним биохимических процессов в нар вной ткани путем сравнения.скоростей потоков, активности и компар! менталиэации ферыентов, содержания субстратов и их катаболизма до ^СОз в норме и при гипоксии.

3. Изучить возможности направленной регуляции функции ГАМК-шунта о помощью новых ГАМК-коныогатов на витаминной основе, витаминов, коферментоп и их сочетаний с субстратами ГАМК-шунта. Сопоставить метаболические эффекты исследуемых ГАМК-коныогатов и комплексов с их защитным действием при гипоксии.

4. Исследовать функцию ГАМК-шунта и оценить его роль ъ механи змах метаболической компенсации при таких экстремальных состоянии организма как тяжелая черепно-мозговая травма (ТЧМТ), ранняя постлучевая реакция ЦНС (синдром ранней преходящей недееспособности ил НИ!) геморрагический ток, острая печеночная энцефалопатия (гепатогенный шок).

Б. Оценить по клиническим, патофизиологическим и биохимически параметрам эффективность фармак»-метаболической защиты мозга от гипоксии при этих состояниях при помощи сочетания ГАМК-ергических препаратов к комплекса витаминов, к оферентов и метаболитов (КБКМ) на основании полученных данных разработать практические рекомендации по ааиите мозга от гипоксии при ТЧМТ и купированию ранней пост лучевой реакции.

6. С помощью методов математической статистики на основе.системного подхода оценить взаимосвязи и взаимовлияния между системой метаболизма ГАМК и сопряженными с ней процессами (окислительное де-карбоксидирование «¿-кетокислот, трансамширование) при экстремальных состояниях и экспериментальной терапии и обосновать стратегию антигипоксической защиты мозга при экстрепльных состояниях орга- ' низна.

Научная новизна диссертационной работы. На основании измерения максимальных активностзП ферментов ГАМК-шунта и оС-кет оглута--ратдегидрогеназного комплекса в гдасгенатах и субклеточных фраки?{-ях головного мозга крыс впервые показано, что в мозжечка интенсивность потока по пути ГАМК-шунта ыокет достигать 1/4 суммарного потока на стадии сЛ -КГ—-сукцинат, а в корз - 1/8 - 1/10. Выявлена корреляции между интенсивностью метаболизма ГАМК, ее ксашартмен-тализацией и транспорта* в различных отделах мозга, свидетельствующие о существенной роли транспорта в регуляшш метаболизма ГШ. На основании измерения катаболизма меченых 1-*4с|ГАМК и ¡¿-КГ

показаны рэципрокныэ рэгуляторше взаимоотношения ыевду КГДК-реак-цией и ГАЖ-зависишм трансомикировашем о£-КГ и рассмотрена вероятная роль структурного единства КГДК и ГАЫН-Т как причины этих взаимоотношений. В частности, подтверждена роль КГДК как прочно фиксированной на митохсндриальной мембрана матрицы - основы метабол она и установлено, что при щадящей деструкции митохондрии до 76 % внутримитохондриальной ГАМК-Т-активноста асссцяировано о КГДК.

На основе уточненных представлений о роли субстратов и к©ферментов в регуляции ГАЫК-шунта и о^-кетоглутаратдегидрсгеназного комплекса апробированы подходы направленной регуляции этих путей метаболизма с помощью парентерального введения витаминно-кофермент-ного комплекса Пентапирувит и сочетания pep + оС-КГ + ГЛ +■ ГАМК.' • При этой показано, что при многократном введении одного лишь рц> проявляются преимущественно некоферментныа метаболические эффекты, которые могут быть скорригированы одновременным введением метаболитов ГАМК-шунта. Впервые исследовано влияние новых ГАШ-коньюга-гов на витаминной основа (никотинсил-ГАМК, оротоил-ГАМК, биотанил- • ГАМК) на функционирование ГАМК-шунта в нервной ткани, выявлены специфические черты их эффектов в различных отделах головного мозга. Установлено, что активация ГАМК-шунта в нервной ткани эаконб-«ерно сопутствует проявлению аятигипохсичэского эф|екта иеследув-шх соединений и комплексов.

Впервыэ количественно оценена компенсаторная роль ГАМК-аунта

в ыетабояизме головного мозга в дянашке после экспериментальной ТЧ11Т и в первые 24 часа после абсолютного летального лучевого лора-аения в дозе 30 Гр (синдрсы Н1Н). Показано усиление функции ГАМК-шунта при Т'ШТ э ответ на тормокенио окислительного декарбоксидирования с^-КГ» На основании полученных данных развиты представления о ГАШ-щунте 1£ак о механизме метаболической компенсации при гипоксии экстреьальнйх состояний, разработан способ защиты головного моэга от гипоксии при ТЧМТ, основанный на еочеташоы применении тиодедаалового наркоза и'КЕКМ, стимулирующего функцию ГАЖ-щунта и ключевые звенья цикла Кребса. Экспериментально обоснована возыог.-несть применения КВКМ как систегшо,' так и местно, путем аппликации (га лоарозденную поверхность мозга. Установлено, что одним из механизмов действия использованной комбинации фармакоагентов и препаратов ыатабояитной терапии является ограничение перекисного окислешя липидов и поддержание высокой активности глутатионовой противо-перекясной систеш в нервной ткани.

Апробирован способ купирования ранней постлучевой реакции, основанный на сочетанием применении ГАМК-ергического ноотропного препарата пантогам (пантоил-ГАМК) и КВКЫ. Эффективность экспериментальной терапия оценена по общабиологическкм, физиологическим, морфологический и биохимическим показателям в сравнении с традицион-ныш ыатодаш лечения.

На основании анализа полученных данных с применением методов математического моделирования с элементами системного подхода развиты представления о механизмах метаболического контроля ГАМК-шун-та в условиях гипоксии экстремальных состояний и сформулированы теоретические основы фаршко-метаб одической защиты мозга от гипоксии в виде принципа "экдаеймн энергетической компоненты", включающего такие цементы, как общее снижение энергетических затрат, преимущественное использование компенсаторных источников энергии и поддержание функции ключевых звеньев энергетического обмена.

Практическая значимость работы. Разработаны и внедрены практические рекомендации по антигипоксической терапии у больных с ТЧЬЯ ("Способ лечения гипоксии мозга", заявка на изобретение № 4293370/ 14 о- 3.08.87 г., подучено положительное решение от 07.09.89). В результате применения разработанного способа лечения, состоящего в сочетании (ка фоне базового реанимационного пособия) пролонгированного наркоза тиопелталом На и КВКМ, включающего тиаминпирофос-фпт, липоат, пантотенат-Са, никотинамид, рибофлавинмононуклеотид, [сиря, сксадьфосфат, глутакпт и оминал он (ГАМК) в определенных моляр-

пых соотношениях, достигнуто значительное снижение смертности в остром периоде ТЧМТ и улучшение отдаленных результатов лечения. Разработаны конкретнее рекомендации по применению аппликационной терапии витаминно-кофермеятно-метаболиткши композициями при открытой ТЧМТ и нейрохирургических вмешательствах и лекарственного электрофореза с подведением метаболитных препаратов к диэицефальной области козга.

Продемонстрирована возможность коррекции ранней постдучеЕой реакции с помощью ГАМК-ергических иоотропных препаратов (Г0'й{, панго-гам) и КВКМ и обоснована целесообразность дальнейших исследований по модификации лучевого синдрома посредством улучшения функций .и метаболического состояния ЦНС с помощью ноотропных препаратов.

Выработаны критерии применимости математических моделей, отражающих связи между биохимическими процессами в нервной ткани-, для анализа ее метаболического состояния и оценки тяжести гипоксии.Разработано 12 методических усовершенствований.

Основные положения, выдвигаемые на оапиту.О ГАУК-оунтз как о ае-гпецифическои механизме компенсации метаболических расстройств при гипоксии экстремальных состояний. Уточненные представления о механизмах метаболического контроля ГАЫК-щунта и их приложимость к прадти-¡есяой разработке способов его направленной регуляции. "Принцип эко-юмин энергетической компоненты" как основа рациональной фармадо-ме-габолической защиты мозга от гипоксии при экстремальных состояниях.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертации *олояены на Украинских я Всесоюзных съездах биохимиков, физиологов, Ьармакологов, одиннадцати Всесоюзных и трех Республиканских б;юхнми-:ес::их конференциях и симпозиумах в 1982-1989 гг.; на международных :окференциях "Хроматография в биологии и медицине"Шосква, 1986) к Молекулярная организация биологических структур"(Москва,- 1989); на -Я Всесоюзной конференции по фармакологической коррекции гилокск- , эсккх состояний (Москва, 1988); на сессии научного совета по нейро-кмии "Нейрохимические механизмы регуляции метаболизма"(Ереван,1988); а Всесоюзном совещании "Субстраты окисления кол адапгогепы"(Пукяно, 589); По тема диссертации опубликовано 19 статей, о тон число 4 сборные, 25 тезисов докладов, I методнческио релоиендацкк, 4 рукоаи- . и депонировано ВИНИТИ и УкрНИИНТИ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 5зора литературы (3 главы), экспериментальной часта (собствегавм ¡¡следования, 7 глаз), обсукдекгш получешагх розульгагоа, выводов, эакткчесяих рсяоггсидигцпЯ, списка пепожьзопошоЯ аитор-иура (621 :тсчик*» в тон числа 300 отечественных н 321 инострогеагх аяторов) придокения (результаты статистической обработай и «гатоааточеезо-1061

го моделирования). Работа наложена на страницах иашнотюнот текста, включая страницы списка литературы, страницы прял женкя, страницу иллюстративного материала (текст диссертации иллюстрирован таблицами и рисунками). -

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальные модели исследований. Эксперименты поставле с использованиш крыс линии Вистар, массой 180-240 г и мышеи линии BALB и гибридов У .¡(СБА х с57В1/6), массой 17-21 г, обоего поле Тяжелую компрессионную черепно-мозговую травму у крыс вызывали щ тем удара свободно падающим грузом (Промыслов М.Ш., 1984) в правую темпоро-париегальную область (сила удара 0,46 Дж, площадь бо£ ковой части 0,45 см2). Животное в момент удара фиксировали в ста> ке под кратковременным (1,5-2 мин) фторотановым наркозом. Контрох ных животных подвергали "мнимому травмированию" (помещение в ста-ноя под наркозом без удара). Синдром РПН получали как результат общего внешнего У"-облучения крыс в дозе 30 Гр от источника 60Со при мощности дозы 1*0,1 Гр«мин""* и расстоянии источник-поверхяосп 0,6 м. В отдельных сериях экспериментов животньг (мь-шй) подверг« ли общему облучению в дозах 11,15,30 и 60 Гр. Острую кровопотерга (2,5-3,5 % от массы тела) вызывали под эфирным наркозом поэтапным взятием крови из задней полой вены. Острый гепатогенный шок моделировали паревязыванием под эфирным наркозом сосудов ворот те чек.! на 60 мин с последующим восстановлением кровотока.

Способы экспериментальной терапии. В первые трое суток после ТЧМТ использовали следующие схемы лечения:

1. Длительный наркоз тиопенталш На (40-50 мг-кг~* массы, внутрибршшнно), дважды в сутки через равные промежутки времени.

2. Введение ШШ, включающего (в ыг-кг-^ массы): тиаминпиро-фосфат - 0,7-1,0; липоат - 4,6-5,0; 4-фосфопантотенат Ra-ц,0-1 ьикотинат - 7,4-7,5; рибофлавинмононуклеотид - 3,5-3,7; пиридо-ксальфосфат - 3,0-3,1; «¿-кетоглутарат На- 15,0-16,0; глутамат -.'а - 20,0-22,0; ГАЫК - 50,0-60,0. Компоненты, комплекса вводили группами (первые 5 и последующие 4 компонента) в виде забуферент

ИаКСО, растворов (рН=7,4), внутрибрюшинно, 2 раза в сутки.

с. Сочетание инъекций тиопентала На и КВЙЫ.

3 отдельных экспериментах раствор КВКМ, включающий все 9 koí пг+юнтоь, использовали для орошения поверхности травмированного ио'»га. Доза веществ, контактирующих с мозгом в течение I часа npi ;iTb\i соответствовала однократной дозе дня внугрибрюшиннопо BBCi,.et

С целью коррекции РПН применяли сочетание тиолентала На (2030 мг.кг"* массы, внутрибрюшикно, однократно непосредственно после облучения), КЫШ указанного состава (трижды в сутки) и сочетание пантогама (40 мг-кг""* массы, внутрибршинно) с КЗКМ.

При изучении нейромзтаболических эффектов новых ГАМК-прсиз-есдных и витаминно-коферментно-метаболитных комплексов исследуемые' соединения вводили внутрибршинио, курсами (5 инъекций в течение 2-х суток), животных забивали через I час после последней инъекции.

При проведении "гипсксичвской пробы" животных помещали-в герметичные камеры индивидуально и группами, исследуемые соединения вводили непосредственно перед опытом. Во всех случаях контрольные животные получали инъекции растворителя, опыты ставились в одно и ' то же время суток.

Биохимические методы исследований. Животных забивали дэкапи-тацией, головной мозг быстро извлекали и разделяли на мозкечсг-с, кору и стволовую часть и использовали для приготовления грубых концентрированных гсмогенатов (1:4; 1:5 или 1:10), субфракций или срезов толщиной 0,3 ш. Митохондриальнута фракции получали, пользуясь методическими рекомендациями Прохоровой М.й. и соавт. (1582). Для получения фракции "шсинаптических" штсхоадрнй использовали метод Clark J.B. & llloklas W.J. (1970). Фракции "грубых" синап-тосом выделяли по методу Wheeler D.D. (I960). Срезы коры голодного мозга получали в герметичной камере со 100 %-нсй влажностью в срзде 95 % Oj и 5 % СО2 с помощью приспособления, работандэго по принципу микротока Мак-Ильвейна (Mclllwain Н., Buddle Н., 1953). Фрахцио "синаптических мембран" получали, сочетая методические приемы, описанные Ogawa н. et al. (1982) и Кузнецовым З.'М. и соавт. (1982). '

При определении КГДК-активности в лизированной синаптосомно-штохондриальной фракции мозга использовали методику йценко Н.Д. (1982) с нашими модификациями (Розанов В.А., Пархоменко В.М.,1987). При работе с гсиогекатами определяли гаруват-(ДДК), сб-кетоглута-рат (КГДК) и с^чщинат-феррщианид-редуктазную (СДГ) активность по методу Cubler c.J. (I960). Определение ешнотрансфераэнсй активности (ACT и АЛТ) проводили по методике Осадчей Л.И. (1982). Из-1'эро1п?8 активности глутаматдекарбсксилазы (ГДК) и ГАЫК-траясанит-зы (ГАЖ-Т) осуществляли по приросту соответственно ГАМК и глутама-та (ГЛ), используя ыэтедаки Сытинского И.А. и соавт. (1967) и Про-шелова М.Ш. и соавт. (1968) в вашей модификации (Розанов В.А.,

1980). Количество ГЛ и ГАЫК определяли с помощью хроматографии на бумаге (Сытинский И.А. и соавт., 1967). В отдельных эксперимен тах помимо суммарного содержания ГАМК и ГЛ определяли содержанио :tx свободных и связанных форм по методу Elliott к.а. (1965). Диеновую конъюгацию ненасыщенных кирних кислот оценивали по методике И.Д.Стальной (1977), содержание калонового диальдогида - с помощью тиобарбитуровой кислоты (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г.,1977! содержание SH -групп и. 3-3 -связей с пшадью реактива Зллмана (Be-ревкина И.В. и соавт., 1977), активность глутати омредуктаэы по методике Путилиной Ф.Е. (1982), активность глутатиснпероксидазы как описано у Ланкина В.З. и соавт. (1976).

При проведении изотопных исследований использовали следующие меченые субстраты: I- ^Cj-ГАМК Л Institute of isotopes, ВНР) уд. активность438,1 МЕк'Ммоль"! &ц4с|-оС-КГ (Araerohem, GB), уд. актш ность 562,4 МБк'ММоль'!^. IV ^JАдегаЬая, ОВ), уд. активност! 2,10 ГЕк.ммоль"*, 1янтарная.кислота (Ameraham, 0В),уд. активность 4,11 ГБК'Ммоль-*, Ь-4-(^с|аШ (диегвЬаш, ав), уд. активность 2 ГБк-ммоль"^. При исследовании фарыакодинаыики меченых соединений определяли относительную активность тканей организма после обычной процедуры гомогенизации образцов в 0,01 н растворе BaOi с последующим высушиванием на мишенях и подсчетом радиоактивности. Катаболизм меченых субстратов до *4C0g оценивали по методике Gub-lur с. et al. (1974) с нашими модификациями (Розанов В.А., Рейта-рога Т.Е., 1989). Включение метки меченых субстратов в интермедиа-ты цикла Кребсал аминокислоты определяли по Qaitonde м.к. ( 1965]

Поглощение [^Cj-ГАШ срезами коры головного мозга крыс исследовали, пользуясь методическими рекомендациями Arbilla 3. et а1., (1979). На-зависимое поглощение j^^cj-ГАМК синаптоссшми оценивали но ИЬевХег D.D. (I960). Специфическое Ва+-независимое связыва-fте [%|ГЛЫК препаратами синаптических мембран определяли по методике Ogawa Н. (1982).

Радиоактивность проб измеряли при помощи газопроточного счетчика 2I54-I-IU "Протока" и сцинтилляционного счетчика "Бета". Белок определяли по методу bowry D.H. et al. (1951).

Вспомогательные методы исследований.

Для оценки тяжести экспериментальной патологии и эффективности терапевтических мероприятий использовали общебиологические (клинические), физиологические и морфологические критерии. Двигатель ну» активность животных оценивали по стандартной методике "открытого пояя", условно-рефлекторную деятельность - но скорости фор-

афования условного оборонительного рефлекса в челночной кшгере '.Вальдшн A.B., Попивал оа В.П., 1984). Электрохортикографшз ссу-;вствляяи при псмаци злектроэнцефапографа ЭЗИ1-4~СЙ. Морфсяошче-•лше исследования включали общее описание гистологической картины, ¡ценку плотности нейронов и подсчет нормо-, гипо- и гипархршных ¡ейрональных компонентов (Ярштш Н.Е., Ярыган В.Н., 1973) .

Статистическая обработка данных осуществлялась непараиетрк-¡оскида методами и на основе закона нормального распределения. В [оследнем случае использован вариационный, коррелкциогшый а регрессионный анализ с последующим построением моделей, их графическим отображением, шализом и экспериментальной проверкой (Сепзт-иев Д., 1963; Советов В.Й., Яковлев С.А., 1985).

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛВДОВАШЙ

I. Оценка количественного вклада ГАМК-иунта в цикл Кребса в различных отделах головного мозга крыс и уточнение механизмов метаболического контроля ГАШ-шунта

Исходя из классических представлений, развитых А.В.Палладинш его школой о связи между морфо-функцяональной и биохимической опографиой ЦНС (Палладии A.B., 1972, 1975), изучение количественна различий в метаболизме различных отделов мозга является важ-ьгм путем познания в нейрскимии. На первом этапе наш предпринято опоставление максимальных активностей ряда ферментов, катализкру-цих взаимосвязанные реакции метаболизма в различных отделах го-овного мозга крыс (табл.1). Как видно из представленных данных, ггивность дегидрогеназ оС-кет оки слот наиболее высока а коре и т-шальна в мозжечке, СДГ-активность в коре и мозжечке практически Ушакова, а активность ферментов азотистого метаболизма (ГДК, 1Ш-Т, ACT и АЛТ) в мозжечке достоверно выше, чем в коре. Отнсае-ta максимальных активностей КГДК: ГАМК-Т в мозжечке приближается 2,6:1, а в коре составляет 10:1. Если па суммировать КГДК и iÜK-T-актиЕНость, инея в виду, что эти ферментные системы по су~ 1 регулируют интенсивность альтернативных путей превращения ef-KT сукцинат, то выясняется, что суммарная пропускная способность •их путей в коре н мозжечке примерно одинакова и приближается к кси!!альноЙ СДГ-активности. Однако в мозжечке, как свидетельот-' тот расчеты, потенциальные возможности образования сукцината за ют ГАМК-шунта значительно выше (1/4 суммарного потока), чем в ко-I (1/10 суммарного noToica). Это обстоятельство, а также бояее ш-

Таблица X

Максимальные активности ферментов ГАЫК-пгунта и некоторых сопряженных процессов в отделах головного мозга крыс (М&са, а»ю-12, ыкыоли субстрата или продукта реакции ткани «мин-*, к - Р < 0,05; ш» - Р <0,01, сравнение между отделами мозга)

М орфо-функциональные отделы мозга

Исследуемый показатель и единицы измерения

ВДК-активность

с*Г-КГДК-активность СДГ-активность ГДК-активность ГАМК-Т-активность АСТ-ективность АЖ-активность

Мозжечок :

Ко]» : Стволовая час

0,149*0,025 1,085*0,039 1,634*0,070 О,149*0,010й 0,252*0,011" 5,833*0,167 2,360*0,133

0,150*0,009 0,200*0,019* 0,950*0,045 1,242*0,055** 1,783*0,069 1,779*0,063 0,144*0,007* 0,122*0,005 0,364*0,026кх0,180*0,013 6,269*0,102й 5,775*0,162 3,125*0,157**2,160*0,144

сокая активность других реакций азотистого метаболизма указывает на своеобразие метаболического статуса мозжечка по сравнению с кс рой. Оно проявляется и в сравнительно низком уровне суммарной ГЛ и ГАЫК в мозжечке по сравнению с корой (12,63*0,76 против 14,69*

*0,48 и 3,34*0,36 против 3,63*0,30 мкмоль«г~* ткани соответственно). В мозжечко также отмечено достоверно более низкое, чем в коре, содержание эндогенной связанной ГАЫК (0,73*0,12 против 1,07* 0,10 мкмоль*г~* ткани, Р < 0,05), связывание экзогенной представлено в этом отделе мозга значительно слабее, чем в коре, в то время как десорбция метки происходит интенсивнее.

Таким образом, выявлены существенные количественные различия между ыоэяечксм и корой в интенсивности метаболизма, содержания и связывания ГАЫК, вероятнее всего, обусловленные различиями в кле-точнсы составе этих мозговых структур. Имеются и другие данные, свидетельствующие о количественных особенностях метаболизма мозке чка: в этом отделе мозга наблюдается наиболее высокая пиридоксаль киназвая активность (Тигвку I. еъ &1., 1976) и активность редук-т&зы янтарного полуальдегида, регулирующего уровень важного побоч ного продукта ГАМКчлунта - ГСМК (тш!^ J.p. е» а1., 1981). Эти данные,'в сочетании о представленными выше, дают основание считат что большая устойчивость ыозкечка к повреждениям при экстремальны оостекниях, таких как гипоксия, гипогликемия,, интоксикации по сравнению с серым веществом коры (ВаШвип I., ь&п м., 19Ь5) я

ляется следствием повышенных потенциальных возможностей ГАМК-шун-та.

Следует отметить, что стволовая часть мозга по большинству исследуемых параметров занимает промежуточное аохоз&иие по рравне-нию с мозжечзшл и корой больших полуиарий. Вероятнее всего это связано со значительной морфо-функциогальк-гй неоднородностью стволовой части, включающей небольшие по массе, но исключительно богатые ГАМК подкорковые образования (Сытинский И.А., 1977). В связи с этим все внимание в дальнейшем »ет сконцентрировали ка сспостав-лении ткани мозжечка и коры больших полушарий капе относительно однородных и филогенетически знаодтельно различающихся отделов мозга.

Наблюдаеше количественные мзтабслитасщге особенности ттюг мозжечка находят подтверждение при изучении этих же фернентнкх систем на субклеточном уровне. В частности, распределение ЕСГД1С- и ГАЫК-Т-активности в грубых ¿мтохендраях из коры ц мозжечка совпадает с их распределением в гемогенатах, причем сохраняются примерно такие же соотношения КГДК:ГАМК-Т (3,2:1 в мозжечке и 7:1 в коре). При этом были обнаружены существенные различия в отнесении ГЛ/ГАМК в митохондриях и в поетмитохендриольнен сутарнатанте: з митохондриях оно приближалось к I, а вне их составляло 2,6-3,4, в зависимости от отдела мозга. Поскольку ГЛ является продукта! ГАМК-Т-реакции, ГАМК ее субстрата!, а ГАМК-Т-ревгцая обратима С/ап Вешие1еп РЛ. оЪ а1., 1985), ысяно полагать, что екэ «этохондтий равновесие в этой реакции смещено влево, в сторону образования ГАМК из янтарного полуальдегида (ЯЛА), в то время как внутри ш-тохондрий равновесие сдвинуто вправо, в сторону образования ГЛ и быстро утилизируемого ЯПА. Эти данные хордао согласуются с представлением о наличии в митохондриях мозга системы переносчика, осуществляющей антипорт ГАМК (внутрь) - ГЛ (наружу) (РавоагвИа 8. еъ а1., 1984). Таким образом, мсено предполагать, что обход </-ке-тоглутаратдегидрогеназной стадии цикла Кребса возмокеи вследствие утечки оС-КГ из митохондрий с использованием взамен ГАМК в качестве источника сукцината. Эти представления тесно смыкаются с разви-вато^икися взглядами о существовали! так называемого быстрого транс-аминазного окисления субстратов цикла Кребса, осуществляемого благодаря сопряжению функции трансаминаз, ГАМК-шунта, быстрой Стадий цикла Кребса от сукцината до оксалоацетатй и ключевых начальных' стадий глюконеогенеза (Кондратасва М.Н., 1986, 1987, 1988). Эта сха-ма предусматривает увеличение роли аминокислот ИРЬР в регуляции

скорости промежуточных реакций энергетического метаболизма.

В наших экспериментах мы попытались уточнить эти представле ния, для чего были использованы ряд меченых аминокислот и субстр тов цикла Кребса. Сравнение интенсивности их катаболизма при доб( влении в эквшлолярных количествах х гомогенатам различных отделoï мезга показало (рис.1), что из всех субстратов наиболее быстро kî

240-1

ISO

ео

и W

8

о а

х

|зо-

*20

40-

• 2 1 л мозчечок

• кора

■ ствол

-0,1 мЫ ■—1,0 ы34

4

см

ВЮ

х «

о

I .про?*//,/

--5 мМ

---50ыМ

l{I4c]rAMK

10 30 бОмин 10 30 60 мин

Рио.1. Катаболизм меченых АСП, ГАЫК, сС -кетоглутарата и сукцината

. до *4С0£ при добавлении их к гсыогенатам различных отделов

мозга хрые. Ы-моежечок, К-кора, С-стволовая часть.

габолкзируется сукцинат и медленнее всего - ГАЫК. При добавлении наследуемых субстратов а возрастающих концентрациях видно, что в случае Ц14с]^-КГ, .1,4{14с|сукц;и1ата и 4-[14с[АСП вюсод,14^ нара став почти линейно, в то время как при добавлении 1-[^4С^ГАЫК эначи гельадй выход ^СО^ наблюдался только при больших концентрациях

[50 Ц-1). При этш катаболизм практически всех субстратов, включая [{144ГЛЫК, был наиболее интенсивен в коре, т.е. в тш отделе ноз-^а, где активнее всего протекают реакции ци^ла Кребса (табл.1). 0ц-1ако а отдельных экспериментах было показано, что если концентрация 1-{^с|ГАШС достигает 50 мМ и инкубация продолжается достаточно ;олго (60 шш), степень катаболизма меченой ГАМК в мозжечке превк- • тет токовую в коре. Зги факта подтверждают нас.« прздстаЕдеш*.я о :см, что количественные различия между мозжечком и корой з интен-:ивнести работы ГАШС-щунта отражают максимальные потенцдалысге ион-юднсети соотсзтствующих г$зр»энтов, что может иметь значекю. прп 1кстре!/лльных ситуациях, сопровождающихся повышением уровня ГЛ и 'АМН.

Анализ катаболизма меченых субстратов при длительных сроках ¡нкубации позволил выявить ккташешй факт: скорость выхода ^СО^ [ри добавлении Х-^ с|ГАШ и 5-[*чу-в£-КГ била нэпостоянной, прлчем йнаруяешше флуктуации шели противофазный характер в зависимости (Т того, какой субстрат был добавлен - ГАМК или о£-КГ (рас.2). При' чииой этого явления может быть наличке реципрокной регуляция на уровне КГДК и ГАШ-Т, что обусловливает периодическое усиленно потека по основному (кетоглутаратдзигдрогеназншу) или альтернативному пути СГАМК— шунт). Одам из факторов подобной регуляции мояот быть доступность субстратов или к оферентов. С целью установления роли доступности субстратов к р®о=- • гонатам нервней ткани добавляли 1-[14с)-ГАШ{ (I кМ) и избыток ненэчекого еС-квтоглутарата (10 1%), или 414С}^-КГ (I иИ) и избыто:: деывчоиой ГАМК (10 кЮ . Виясюиось (рпс.З), ото исбыте» с&1Т гораози? кагаботоэн эченой ГАМК, в то время как избыток ГАМК заметно стимулирует ка-аболизм ,^-КГ, причем намболээ вырашига. э?о в мозгеочюэ. В то ко ремя стимулирущео влияние ГАКК из распространюсь на катаболизм ,4 |^4С^сукцшсата, но проявлялось при использовании ■ТП6Т

ис.2. Колебания скорости выдолбил ^4С02 .пго^ добаьчении к гено-внатам 1-[14С}ШЯ( и 5{14{4^-КГ I мУ).

Рис.3. Влияние избытка ГАМК на катаболизм кетоглутарат*

■ и избытка of-кетоглутарата на катаболизм I-p^CjTAMK в ра: личных отделах головного мозга крыс.

что подтверждает наличие регуляторного механизма на уровне c¿-ki глутаратдегидрогеназного комплекса. Вероятной основой этого perj лигорного механизма монет быть структурные пространственные вза! коотношения между ГАМК-Т и КГДК. В последнее время развиты представления о КГДК'как о заякоренной матрице, сорбирующей на себе (функционально связанные ферменты цикла Кребса и сопряженных процессов, структурной основе метаболона (Любарев А.Е., Курганов Б. 1987). В наших экспериментах с использованием лизированных грубь митохондрий из различных отделов головного мозга крыс (Розанов £ Пархоменко D.M., 1987) показано, что КГДК значительно прочнее, \ ПДК фиксирована на митохондриальной мембране, что подтверждает е роль заякоренной матрицы. В экспериментах с использованием жеста деструкции (троекратное замораживание-оттаивание) "нееинаптиче-ских" митохондрий было показано, что по меньшей мере 1/5 часть i тримитоховдриальной ГАМК-Т соосаадается с КГДК. В условиях щадящей деструкции (15-тисекучдНое воздействие ультразвука), приводя .щей,- по данным Robinson J.B., Srere P.A. (1985, 1987), к частичнс разрушению митохондрий с сохранением целостности иетаболонов, с дегидрогеназаад oí-кетокислот и сукцинатдегидрогеназой было ассс жировано около 76 % и сходной ГАШ-Т-активности. Таким образом, предположение о структур!»! взаимодействии ГАМК-Т и ферментов ци кла Кребса, в частности сС-КГДК, находит подтверждение.

Вторым важнш механизмом регуляции ГАМН-шунта является дост НОПТЪ. кофэрмонта PH1 (luroky Т.' et al., 1976; Tapia R. , 1983).

1ВПМХ экспериментах подтверждена роль ры> как активатора яминс~ грансфераэ in vitro, подобраны оптимальные условия для определо-{ия ACT- и АЛТ-активнссш в присутствии и отсутствии рц> (Розанов В.А. и соавт., 198?) и наследована регуляторная роль рц> в ГДК-реакции в различных отделах головного 1озга крыс (рис.4), Кал

Мозжечок Кора Стволовая часть

>ис.4. Роль РЬР и субстрата (ГЛ) как активаторов ГДК-реакции. I -субстрат-активируемая ГДК-активнссть; 2 - кофаятор-актишру-ешя» 3 - максимальная; 4 - содержание ГАЖ; 5-содерзаниа ГЛ.

i сказали эксперименты, активирующее влияние PIP и ГЛ на ГДК носит сарахтор нэ простои сумгаарш, а потенцирования, прячем п мозжечке спя исходная, так и субстрат- и кофзктор-активируемая ГДГС-антивиость )ька достигнута иызе, чт в коре. Таиш образом, пэрвая стадия ГАМК-. зунта существенно зависит от Однако в связи с развиваемы?.«

1рэдставленияки о быстрсд траксагдшазиш окислении субстратов ЩК !щэ больший интерес прздставляэт влияние рьр на катаболизм мзчз-гнх интчрмздиатов ЦТК и ГАМК-шунта до ^^СО^. В этих экспериментах [pic.5) эффект РЬР сраБ'.ивзди с влиянием комплекса ксфер^антов . . ЩК и КГДК. Как выяснилось. VIS оказывает активирующее влияние на гатаболиэы 5|I4Cj c£-KT, I^jCjoi-Kr и 4414ШСН, а »сгнпвкс .кофер-жнтоэ стшдулируэт распял S^cJ-dC -КГ, Г-[*4С]-ГАМК к 4-[14с|-ЛСП. Ско-)ссть катабмизна 1,4|Цз]-суед«ната (нашшалышд по сравнения о ïpynnst субстраизш) на возрастаот Ш1 а m в другом служит. 1олучэнныэ данныо нэ прогиворэча? представление о существовании »ыстрого траисатгазного окисления и a гэ время свидетельствуют > юкдастЕэнности и нзодногначнестн ?iзхгшиййов активирующаго .ели-. гния PLP и кешлвкса пофэрггаитов гл мэтаболичэсиие цутк, ctfecner . si Бающие патаболизи иеслпдуоишс субстратов.

Прсмэвэденныз исслодовшшя свидетельству»? о тем» что ксмларт-

Рис.5. Влияние 40 мкМ PIP и комплекса функционально связанных ко-фермзнтов (тиоминпирофосфат, липо&т, кознзим a, pad и had'1 в н1ируватдегидрогенадиш:и соотношениях in vitro на катабс лкзм до меченых <¿-111' и сукцкн&га (0,1 мМ) и ГАЫК и ДСП (I Ш),

шнтализация в нервной ткани, структурно-функциональные взаимоотнс •шения в составе мультиферментных кластеров, субстратное и кофер-мемтмоё обеспечение играют важную роль в метаболическом контроле ГАШ-пгунта. Полученные данные, особенно касающиеся активирующего действия субстратов и кофермента,являются основанием для разработки подходов направленной регуляции ГАШ-шунта в головном мозге с помощью естественных метаболитов, витаминов, коферентов и их комплексов.

2. Метаболические эффекты и защитное действие при гипоксии новых ГАЫК-коньюгатов на основе витаминов и витаминно-ксферментно-метаболитных композиций

При переносе результатов исследований in vitro на уровень целостного организма появляются новые трактовки результатов в связи < шо.г.ественностью механизмов действия вводимых парентерально естественных метаболитов и витаминов, что особенно хорошо видно на примере никотината (Виноградов В.В., 1987). Мы стремились исследовать пофициальные лекарства и сочетания витаминов, коферментов и естественных метаболитов в условиях, близких к клиническим. С этой цель«} использовали маль& дозы соединений (с учетом видовых особенностей мэтабояишва у лабораторных грызунов), применяли многократное их введение (куре инъекций). Через I час после последней инъекции в jкаки мозжечка и коры больших полушарий головного мозга исследован! изменения обмена веществ, индуцированные исследуемыми препара-

тада и их комплексами и сопоставляли с их защитным действие*, п^и гипоксии замкнутого пространства. ,

Эксперименты показали (табл.2), что повторные инъекции ГАИ? I

Таблица 2

Метаболические эффекта и антигипоксическая активность иошю нентов ГАМК-шунта, новых ГАМК-конъюптов на витаминной оснон и Пентапирувита (я Р <0,05)

Условия опыта (в: Изменения активности фешеятов и скобках - доза в: содержания субстратов {% от конт-мг»кг-1 массы и : роля, верхняя строка - ыозяечок,

молярные соотно-: нижняя - кора)___

шения)

КГДК:АСТ :АЛТ :Щ:ГАМК-Т: ГЛ :ГАШ:

Антигипоксическая активность (из, некие средней продол аите л {. ностк жизни I .

119* "97"

104 131* 120* 13Р

86

ГАМК (5-80)

М* (3-ю)

РМЧГАМК (5, 10; 1:1)

Р^Р+ГАМН+сг-КГ (Ю,40,15;1:Ю:2^1оо

РЬР+ГАМК+ оС-КГ+ГЛ 173*

ШШ»'1,3: ш

Тиаминпирофосфат, линоат, 4-фоефо-понтотенат На, никотинат, фла- 187" винаденинмоно- тс^х нуклеотид (1.5, 12.8,4? 0,2:5:

ГШК (100) Оротоил-ГАМК (20) Биотинил-ГАМК (26)

Ник^тиноил-ГАМК

93 119м

123 ШГ

83я 151х 89 94 80* 112 72,7 "69* 70 _96_ 80 95 43х 76й 44* "67*

82 74

87 57

61*110 ЯИ135

76х 76й 78 104 83 _92 102 94 104 104 106 105 82 ИЗ 98 148й

Ш Ш.

70 143й

66* 90

Щ-

98 80 104 99 78^ 96 101 103 109 85 Па5 75 НО 102 92

123* 109 39х 95 162й 109 127*

156^ 135 89 128*161* 97 88

92 98 331* 95 76й 78 75*

88 122 393я 76 82 90 95

, 53* 79х 65 80 118* 97

112 83* 62 98 И5* 76,2

V — 134*111* 148* 79*

108 99 119 74 119* 105 70*

55 "ЗГ

от 0 до +11%

69*

82к 96

¡-25%

+32%* +Ж*

- 4%

- 3%

+33%*

малых, близких к кчиническим, дозах (5 мг-кг"* :-асс") вызывают р . головном мозге изменения,'свидетельствующие о тормокечки прсдуяции

ъ

эндогенной ГАМК в "ДК-реакции и ускорении ее утилизации в ГАМК-Т-реакции. изменения наиболее выражены в коре, в то вреця как в . мозжечке более отчетливо проявляется повышение КГДК-ежтивности. В то ко время в этих дозах ГАМК ко оказывала антигипоксического дай ствия, которое появлялось при однократной введении ГАМК в дозе , 40-60 ыГ'КГ~* массы.-

Неожиданными были метаболические эффекты РЬР. При парентераль кс« многократном введении он вызывал в нервной скани изменения, пряыо противоположные тем, которые можно било ояидать, исходя из представлений о РЬР как о коферменте, обеспечивающем процессы де-карбсксшшрованик аминокислот и трансаминирования. В частности, ' (табл.2) после его введзния наблюдалось торможение АСТ-активности и е&тивнооти ферлентов ГАЫК-шунта и отсутствовало достоверное защитнее действие при гипоксии. Изменение соотношения КГДК/ГАМК-Т 1 свидетельствовало об уменьшении пропускной способности ГАМК-щунта. г. перераспределении потока ¿/-КГ преимущественно по дегидрогеназ-нсму Цуги. Мы попытались скорригировать эти сдвиги едновременнш введением эквшлолярных количеств ГАМК, которая стимулирует ГАМК-юуит. С этой целью был применен РЬР -ГШ1 (Шиффово основание), сб-ладшщяй самостоятельной, отличной от VIS фарикологической характеристикой (Ковлор И.А. и соавт., 1968), однако, как свидетельствуют наш данныэ, быстро разрушающийся в организма с освобойденной HJ? и ГАМК (Розанов В.А. и соавт., I9B7). Как показали экспе-рдазкта, оКЕШояярныо количества ГАМК практически не влияют ка зф-, факты ГЬР (табл.2). Если се увеличить количество ГАМК в 10 раз и сдиоврзаенно ввести в состав комплекса «¿-КГ, некофориентныэ эф., фоста ГЬР шЕслируатся, й коишекс, включающий ГЬ? , ГАМК, еб-КГ и ГЛ обладал ужа отчзтлиеыь; сящулирувдш влиянием на ГАЫК-гаунт и щда-активдссть. Аналогичный наблюдается при введении комп-

лекса. Даятаппрувит, одлаио при его пркмонзгеш активация КГД(-ак-TKBHocw достигав! наибольшего уровня. В сбсгас случаях происходит с;гшгсю уровня свободных ГЛ н ГА1Ш в отделах ыоэга (более сырааен-коз npii огсдакш кешкокса Пзадапнрувит), т*о в сочетании с измот-шлш шеглЕПост фэрааш'ов ысано расценивать как проявление быстрой укгл^зйцнк их как субстратов окисления. Эти штабояичаскне . сдвига в корвнсЯ теани сочетаются с выражение защитный действие« обеих комплексов прг гипоксии з&шщутого пространства (табл.2).

Таким образец, певьшннш капали«!адские возможности фор&зкг-них систем, ответственных sa образо&шяо зццегеннего сукцнната, обу-

слоздешшз применением Еиташшо-кофермантно-мвтаболитных н:":п ен-сов, являются фактором повшзния устойчивости оргенизма к гипоксии. В то время следует учитывать множественность вероятных механизмов действия подобных комплексов, в частности, общее активирующее влияние ка переашнирование аминокислот, катаболизм субстратен ЩК и кногие другие реам^ии обмена веществ.

Вторым путем направлонного воздействия на метаболизм ГАМК является использование многочисленных ГАМК-прсизводннх, ингибиторе"' метаболизма ГАМК, лигавдов ГАМК-рецептороэ (Сытинский H.A., 1977; Раевский К.С., Георгиев В.П., 1986). Среда этих соединений отдельную группу составляют ГАМК-кскьягаты т основе витаминов - пан? г, ил-ГАМК (пантогам), никотиноил-ГАМК (гопешгллен), фссфопарид&ксил-ГАМК, оротоил-ГАМК, биотанил-ГАМК (Копелевич В.М. и соаат., 1981). В наших экспериментах осуществлялось сопоставлешю нейремзтабояи™ чоских эффектов и антигипоксической активности этих соединений в сравнении с ГОЖ ( у'-оксимасляной кислотой), защитное действие которой при гипоксии хорошо изучено (Островская Р.У., 1981; Хвато-ва Е.М. и соавт.,1987). Как видно из представленных данных (табл.2) в'ряду этих соединений проявлялась та же закономерность, что и ¡р.' изучении виташнно-нофериентных препаратов: стииулнруюцее дейс. -вие на утилизацию ©¿-КГ по КЩК-пути и особенно по цути ГАМК-шуп-та сочеталось с антигипоксической активностью (пантогам, пиками-лен, ГШЮ, а отсутствие такого стимулирующего действии сопровождалось отсутствием защитного действия при гипоксии (оротсил-, биотанил-ГАМК) .

В результате сравнения эффектов Г.ШС, виташшмх компонентов (никотинат, оротат), а такта бикемпонентшое ГАШС-ьтяьюгагов можно прийти к заключении, что во всех случаях, за исключение^ фосфопи-ридоксил-ГАМК, нэйротропное действие новых соединений обусловлено . влиянием всей молекулы и не связано с освобождением ГАМК в нервной ткани. В отношении пантогама этот вывод подкреплен прямыми эк-спершентами по катаболизму меченого препарата (Розанов В.А.,1979). В связи с конформационней и структурной близость« к ГАМК возникает вопрос о возможности конкуренции новых ГАМК-коньюгатов за места связывания ГАМК в рецепторных и транспортных структурах. Наш рассмотрен этот вопрос на примера пантогама. Как показали эксперименты, пантогам проявляат свойства ингибитора как высокоаф^инногс На+-независимого рецепторого связывания ГАМК, так и ца+-зависимого поглощения ГАМК целостными клеточными и субклеточными струге-г турами (Рейтарова Т.Е., Розанов ьЛ. и соавт., 1988; Розано« В.А.

'ь

и соавг., 1987); в то же время, пантогам даст отчетливый ГАШ-миме-тичаский эффакт (Ковлер И.А. и др., I960), что можно расценивать как результат модуляции им ГАМК-рэцептороз, а при многократно« введении стимулирует образование новых ГАМК-рецепторов в нераной ткани (Ogawa к. ot nl., 1932). Показанное в наших экспериментах резней ослабление ингибирущего влияния пантогама на фоне введения бикукуллина, специфического ингибитора ГАЫКд-рецепторов, свидетельствует в пользу того, что точкой приложения действия пантогаш являются классические постсинаптичзские рецепторы типа ГАМКд. Эти данные дают основание отнести пантогам к ГАМК-ергическим веществам и являзтея косвенным подтверждением единства рецепции, транспорта и метаболизма ГАЫК в нервной ткани.

В целой эха часть исследований спо<" обствовала закреплению концепции сб активизации иеааболизт энергетических субстратов по пу-' ' ти ГАШС-щунта б нзрвией ткани в обеспечении повышенной устойчивости организма к гипоксии. Практическим результатом этих исследо-вашй явился подбор рациональных сочетаний витамикно-кофзрментно-метабплитных компонентов и создание новых композиций, обладающих зшцишш действием при гипоксии.

3. Метаболизм ГАЫК и некоторые показатели функциональной активности головного мозга при экстремальных состояниях организма и экспериментальной терапии

При изучении биохимических сдвигов в ЦНС при экстремальных . состояниях исследовали такие показатели, как ПДК- и КГДК-актнв-ность, ACT-, АЯГ-, и ГАМК-Т-едтишость, а также содержание ГЛ я FAUK, Основные результаты экспериментов (pic.6) свидетельствуют, что тяжелая черепно-мозговая травма у крыс сопровождается резким угнзтешюм активности дегидрогоназ еб-кетокислот и компенсаторной активацией акинотрансфераз, в таз числе, ГАМК-трансашназы, в ткани травшрешиого полушарш. Наибольшее угнетение функций дегид-рогзиаз об-кетокксяот наблюдалось на 3-й сутки посла траьыы, к 7-м сутках их активность нормализовалась. Активность ГАМК-Т была повышена уже г: концу 1-х суток после ТЩТ и сохранялась на этом уровне до конца пери ада наблюдения (7 сут.). Уровень ГЛ и ГАЫК изменялся незначительно, отмечена лишь тенденция к повышению уровня ГЛ и снижении уровня ГАМК. Сосшсшенио между ГАМК-шунтом и КГДК-реакцией заметно изменялось в пользу ГАЫК-шунта (по пути ГАМК-аунта преходит до 44 % суктрюго потока на стадии «О-КГ—«-сукцитт при общем снижении интенсивности суммарного потока кп 12 %).

7сут.

'/ су'Г.

.гамк-т

I 3 7аут. 13 7 сут.

Рис.б. Состояние ГАМК-шунта и сопряженных с ним процесса (окислительное декарбоксидирование о£-кетокислот, лереашниров&ние) в головном мозге в первые 7 суток после ТЧМТ.

С целью экспериментальной терапии наш использованы длительный (до 3-х суток) тиопенталовый наркоз, введение разработанного нами КВКМ и сочетание тиопентала натрия и КВКМ. Применение тиопен-тала натрия при ТЧМТ обосновывается необходимостью купирования ги-пврактивности гипофиз-адреналовой системы (УсенкоЛ.В., Клигунен-ко E.H., 1987), благоприятными гемодинамическими сдвигами в очаге ушиба мозга (Миротворская Г.Н., Кирсанова А.К., 1983), торможением метаболизма и потребления Og и ограничением продукции лактата ( sieejo B.K., 1982). Калгпоказали наши исследования,(|жс.7) длительное введение тиопентала натрия не устраняет угнетения активности дегидрогеназ ^-кетокислот i нервней ткани, щиведит к изме-

TAlfli

-100% -+m

гш-t

□ -3-n сутки после ТЧУГ

О - * TnNa

gg - ♦ ТпЫа ♦ КВКМ

Рис.7. Метаболические параметр ткани травмированного полушария головного мозга крыс при использовании различных вариантов фариако-мзтаболической защиты от гипоксии.

иеюш раакцци со стороны акинотрансфераз (повышение ACT- и снижение АЛТ-активнести) и способствует поддержанию высокой ГАМК-Т-ак-1явности, при этш происходит снижение содержания эндогенной ГАМК. Суодарный поток на стадии «г-КГ—— сукцинат в ото: условиях ещэ больше ослабевает и ГАШ-шунт по интенсивности уравнивается с КГДК-реакцией, обеспечивая тем самым 50 % суммарного потока субстратов. Одноврокенноэ введение КВКМ указанного состава существенно модифицировало эффекты тиопентала натрия. В частности, наблюдалась активация КГДК, повышение ACT- и АЛТ-активнести, поддержание высокой интенсивности метаболизма ГАШ, причем с активацией про-лукции ГАЖ в ГДК-реакции. Результатом этих изменений явилось отчетливое и достоверное снижение содержания ГЛ г.ГАМК в нервной ткани на фоне нормализации суммарного потока превращения оС-КГ в f,у кцинат и сохранения сдвига в пользу ГАМК-шунта. Ли благоприятнее с точки зрения биохимической логики сдвиги, свидетельствующие с j!r;i.<Hi,;rHji:i устойчивости нервной ткани к гипоксии, сочетались с

сбщеби©логическими и физиологическими признаками эффективности применяемся терапии: снижением смертности, ускорением рэдукции неврологического дефицита, улучшением показателей двигательной активности и условно-рефлекторной деятельности животных.

В то же время механизмы терапевтического действия примененного сочетания препаратов, по-видимому, многообразны. Так, при оценке некоторых показателей интенсивности перекисного окисления липидов (диеновая вдгьюгация и уровень малонового диальдегида) в нервной ткани при ТЯМТ выяснилось, что характерное усиление пороксидации при травме (Воробьев Ю.В., Промыслов il.il]., 1985) заметно ослабей'..-ет при использовании тиопентала Ra и КВКМ. Одновременно отмечено ограничение посттраЕматического стшения sn-групп и поддержание более высокой активности глутатиснредактачн и глутатионьероксидязи. Таким образом, экспериментальная терапия способствует защите липи-дов биомембран от пероксидации, что также является существенным компоненте?.! положительного эффекта..

В отдельной серии экспериментов эффективность КВКМ была подтверждена при его аппликации на поверхность травмированного мозга. В этих исследованиях было показано, что уже непосредственно пос.-э травмы метаболические нарушения в мозге уклалыя^тся в картину (Гелой тканевой гипоксии: наблюдалось резкое снижение активности д< гидрогеназ cí-кетскислот, повышение активности ГДК (но не ГАМК-Т) и значительное увеличение содержания ГЛ и ГАМК, уровня лмиака и всего фонда свободных аминокислот. Аппликационнг-з применение КВКМ на фоне тиобарбитурового наркоза в этих условиях способствовало нормализации ДДК- и КГ|ДК-активностп, повышению ГАМК-Т-активности, нормализации уровня ГЛ и достоверному снижению содержании ГАМК, что можно расцеш!вать как активизацию шунтирующей функции метаболизма ГАМН. Эти сдвиги сопровождались нормализацией электрокортикогра-фической картины (уменьшением амплитуды волн, блокированием эпи-лептиформных разрядов и диэнцефальных трехфазных группировок), а также тенденцией к снижению суммарного фонда свободных аминокислот.

Полученные данные подтвердили целесообразность снижения функциональной активности ЦНС в ранний посттравматичоский период, что в сочетании с одновременной витаминно-ксферментно-метабояитной коррекцией дает хорошие результаты восстановления мозговых функций. Зта мера является особенно необходимой при диэнцефально-катабодическом варианте течения тяжелой травматической болезни мозга, когда повышенный уровень окисления, обусловленный усилением активирующего влияния катэходаминов (Ку.'.лнский В.И. и соагт., 1987^ ста-

новится фактором, ;сугублянцин гипоксию из-за несоответствия мок-ду кислородными запросаш июней и возможностями поставок Og. В то ке время при определенных типах течения посттравматического процесса, когда на первый план выступают явления апаяического синдрома, целесообразно поддерживать активное функциональное состояние ЦНС, что отражается на протекании метаболических процессов и корригирует ряд нарушений обмена (Промыслов Ы.Ш., 1984).

Исследование системы ГАМК в ранние сроки после летального лучевого поражения представляет интерес для выяснения механизмов синдрома ранних постлучевых нарушений ЦНС. С другой стороны, поскольку метаболические нарушения в головном мозге после действия больших доз ионизирующих излучений во многом напоминают гипоксические изменения'{Давыдов Б.И., Ушанов И.В., "987), возникает вопрос об участии РАМК-иунта в компенсации метаболических расстройств. В связи с этим в ходе исследования изменения метаболизма и содержания ГАМК сопоставляли с показателями функциональней активности ЦНС. lia» показали эксперименты, изменения активности ГАШ-Т и содержания ГЛ и ГАШС позволяют говорить о фазовой динамике сдвигов в системе ГАМК (pic.8). Так, выявляется фаза ранних изменений (1-3 часа) , характеризующаяся снижением уровня ГАМК и ГЛ и незначительными изменениями ГАМК-Т-активности, фаза нарастающего угнетения активности ГАМК-Т (3-6 час.) фаза компенсации (24 часа) и вторичной декомпенсации (48 час.). В отдельных экспериментах показано, что снижение содержания ГАМК и ГЛ в первые 6 часов после облучения происходит в основной за счет связанных форм аминокислот, что свидетельствует о нарушении юс кекпартаентолизации, вероятно, в / силу нарушения функционирования транспортных процессов ( Roza-nonr 7.a. et al., 1986). Сопоставление нейрохимических кзменешй с двигательной активностью и условно-рефлекторной деятельностью облученных иивотшлс показало, что выраженные изменения спонтанной псисково-ксслвдовательскоЗ активности развиваются только к 24-м часам поело воздействия, в то время как в условиях наличия мотивации (болевое раздражение) нарушения условно-рефлекторной деятельности отмечаются уже чорзз I час после лучевой нагрузки. Полученные данные свидетельствуют о преобладании непосредственно после облучения процессов возбуждения, в то гэеыя как в последующие часы нарастает тормсвение ЦНС. Этот вывод совпадает с данными литературы (Григорьев Ю.Г. и др., 1984) и является основанием для фараако-метаболш.яской коррекции, заключающейся в раннем применении средств с седативным компонентой в фармакологическом профиле с по-

140 120

A'lK-'J

ДА УГД

□ ьо Гр 24 час

TnHa + IfflKM ¿¿j пантогам + КБ!CM

ACT Рис.В. Изменения ТАМК-Т-активности, содеркания ГЛ и ГАМК, условно-рефлекторная деятельность(УРД) двигательная антивность(ДА) животных fi оанние ".роки после общего j'-cOлучения в до1ч- ЗС Г р.

. следующим подключением средств, стимулирующих функцию ЦНС. Исходя из этого с целью коррекции состояния ЦНС применяли однократное введение тиопонтала натрия сразу после облучения с последулцим многократным введеш1ем разраоотанного нами КВКЫ и попеременные иш екции ГАМК-ергического противосудорокного и ноотропного препарата пантсгам и КВКУ. Выяснилось, что применение фарыако~метаболическо£ онтнгипоксической терапии с использованием лантогама и КВКМ улучшает показатели двигательной активности и условно-рефлекторной деятельности животных, по метаболическим параметрам при этом происходил сдвиг в сторону усиления шунтирующей функции ГАМК и аыино-трелсфераз (рис.8). Эксперименты по изучению окислительного декар-боксилирпэтшя «¡¿-КГ в нервной ткани облученных животных под влиянием комплекса коферментов in vitro н фоне фармако-метаболиче-ской защиты позволяют считать, что одним из механизмов защитного действия применяемых соединений может быть их стабилизирующее влия то на бисагамбраны. Об этом свидетельствует более выраженная реакция повшения КГДК-актиБНости мозга защищенных животных на комплекс кофоркентоп in vitro и приведенные ранее данные об ограничении пероксидации липвдов под влиянием КЕШ. Проведенные исследования показали также эффективность примененных фармако-метабодических комплексов и ряда ГАМК-ергических ноотролных препаратов (ГШН палтогам) при лучевом синдроме по общебиологическим критериям (время наступления гибели, выживаемость, картина крови), что свидетельствует о важной роли коррекции состояния ЦНС в модификации лучевого синдрома.

Таким образом, по биохимическим и патофизиологическим критериям сочетание фаршкологической антигипоксичзской терапии (тао-барбитураты) и витаминно-коферментно-ыетаболитной коррекции (КВКШ было весьма эффективным. КВКЫ указанного состава проявлял активность и при таких экстремальных -состояниях, как острый геморрагический шок и состояние после длительной ишемии печени. В основе биохимических механизмов положительного эффекта и в этом случав лежала нормализация активности дегидрогеназ об-кетохислог и активирующее влияние на компенсаторные реакции азотистого метаболизма - тронсошназы и ГАМК-ыунт. В то ко время биохимические иехани-ркы действия предложенного и испытанного нагл: -сочетания препаратов множественны. Они включают прямой и косвенный противоперекисной эффект .:, по-видимому, иные многочисленны« метаболические и фар-щи с оди fifu^j' fi с 1 о i с; злиянэд, в тс« числе на другио, крско головного мозга, органы и ткани.

Поскольку в тай ой «южней системе, кале клеточный метаболи.-'ч действует очень большое количество регуляторных фактор^в, тлоог.ь-шее значение имеют взаимовлияния (связи) между компонентами систе-ш (Фридрих П., 1986). Мы оценивали эта взаимовлияния при пенса; методов множественной корреляции. Это позволило на только выявить взаимосвязанные параметры, но и оценить их долевое участие в общей картине взаимодействий на разных, стадиях развития патологического процесса и при экспериментальной терапии. В сочетании с анализом абсолютных изменений и времени возникновения биохимических сдвигов эти данные позволили уточнить ^представления о механизмах регуляции активности ГАМК-шунта при экстремальных состояниях: одной из причин активации метаболизма ГАМК является индуцирухг<зе влияние повышенного уровня глутамата и ГАЖ, что, в своя очерздь, вызвано торможением утилизации сб-кетокис.пот и аминированием . Экспериментальная проверка полученных математических моделей подтвердила их адекватность и продемонстрировала сходство поведения системы взаимосвязанных реакций метаболизма (цикл Кребс-а, ГАМК-шуш и трансаминазы) при различных экстремальных состояниях, что подчеркивает неспецифический характер метаболических нарушений в нервной ткани.

Заключс-№'е

Проведенное исследование, в сочетании с анализда литературы, дает основание оценить вклад системы ГАЖ в защиту мозга от гипоксии при экстремальных состояниях организма (риг.9).

--ШтамГЩТ]-

,_I ____

-¡Нейрофизиологическая функция

Обеспечение механизмов пре-и постсинаптического центрального торложения_

Ограничение нейроиальной гиперактивности_

Нейрометаболичеекая функция]

Шунтирование КГДгС-реакции и субстратнсю обеспечение системы быстрого окисле. з»я сукцината____________

Сброс избытка ГЛ в буферную систему ГАМК___

Накопление эндогенной ГШК

Перераспределение ГАЖ между клетками за счет! механизмов транспорта и циторецепции

Ограничение функциональной активности и кислородаых запросов нейроцитов_

"Ц

Компенсация метаб оличе ских нарушений и создание благоприятных условий для восста-новлония нейроцитов_

Поддержание жизнеспособности нервных клеток]»-

Рис.9. Вклад сг^темы ГМК в защиту нервной ткани от гипоксии при экстремальных состояниях о, аниона.

г.

Исходя из принципа повышения адаптационных возможностей оргг низма ¿¡осрадствш усладшя естественных компенсаторных процессов мы использовали такие направленные воздействия, как "остановка ыс Тайслкзма" (НосЬаокв Р.Щ., 1982) в сочетании с метаболической коррекцией (витшшшо-кофзршнтно-метаболитщй комплекс). Получен ные цаашыа подтверждают целесообразность коьшлексного патогенетического подхода (Крыжановский Г.Н., 1980) в заците мозга от гипоксии при экстремальных состоящих, открывает перспективы подбор нозых рациональных сочетаний фарыакоагентов и средств метаболит-ноП терапии. Проведенный недавно анализ (Альплдовский В.К. и со&в' 1989) показывает, что в мировой ыедацинской практике широко представлены ампулированше композиции витаминов, коферментов и мэта-болитов, ориентированные на широкий спектр патологии. Разработаи-кш и апробированные наш; композиции могут составить основу дкя создания аналогичное отечественных кемплекешх препаратов для паразита сального пришнзшя. Проведенное исследование и его клшича-сиоо приложение (результаты лечения 124 больных с ТЧМТ, острой кровопотерай, системной остановкой кровообращения) показали, что р<ыдас применение биохгсдичесю« обоснованных наборов витаминных, кофзрме1га&« и мотабслитных препаратов дает отчетливый терапевтический эффокт, прелвлотцнйся преимущественно при восстаноадегсш ыозгоьых функций в отдаленном постгипоксичосксм перл оде. Это по-ов&чтт рассматривать их как необходимый компонент лечения острого периода экстремальных состоян;:!! в противовес трададаокньй! взгля^ дам на подобнш про парами кги: на средства отдалешюЛ восстановительной тзрапли.

ВЫВОДЫ

1. Разрсботшы представления о ГАНК-шунте кга: о кэспецифнчэ-скш пахшизуо компенсации метаболических нарушений приела трлкар-боношх кислот в норшой тлели при экстремальных состояниях (тя-голая чзропно-мозгоЕ&я травма, геморрагический шок, ииемия печешь летальное; ¡Г-оЗлученчэ)» роль которого состоит в образовании допсл1ыт>зльных кояичосхс энергично окпсядацегося и способного накапливаться сукциката. Эта. кскаоисаториш реакция является мета-боличзским ответом на пшексичзскез угнзтош^ окислительного де-карбспсилиромшия «^кетоглутарата и тренасычеиие фонда аминокислот глутойиновой группы.

2. 1?;гксима.;ы1чя активность форконтов ШК-шуита неодинакова различных отделен голодного мозга, как следствие этого ц мозже-

псо по цути ГАМК-пунта может мзтабопизироваться примерло 1/4 час :ь уктрного потока субстратен на стадии е£-кетоглутарат—-сукцинят, п корз - I/8-I/I0. Мевду КГДК и ГАЫК-Т существует вьаиморегуля-ия, определяющая реципрокннЯ их од ,/-кетсглутарата в альтернатиа-кго реакции его биодеградации и обусловленная структурными взаи-освязяда между этими ферментами, Важнуз роль в механизмах тата-одического контроля ГАМК-шунта играет доступность кофармента (ш-;1дсксаль-5*ч$осфата) и субстрата (ГАМК).

3. Пиридс'ссаль~5~<$осфат in vitro проявляет свойства зффектнг-ого стимулятора активности ферментов ГАЖ-шунта и транезминаз и зкоряет катаболизм до ^СО^ цечетве субстратов ЦТК, однако in vl > ?о стшзулирующее действие на метаболизм ГАМК и транеаминироелкие нервной TKaint сменяется иекофэриентными п-^фвкташ угнс!с!п«л;

го явление компенсируется при одновременном применении субстратов 1МК-иунта (глутаыат, ГАМК, <£-кетоглутарат), что обеспечивает зиление функционирования ГАМК-шунта и активизацию ^-кетоглута-1Тдеп!дрогсгазы в мозге и приво,цит к появлению антигипотсического ¡йствия по тесту гипоксии замкнутого пространства.

4. Изменения активности ферментов ГАШ-шунта и сопряженных р>-здЛЙ окислительного декарбоксидирования об-кетеглутарата и трЕШ -инированил в нервной ткани после серии инъекций ряда новых ГАЬл-«ъюгатоп на основе виташнов (никотинсил-ГАЬ!Н, пантоил-ГАМК, оро-ия-ГАМК, биотинил-ГАМН) и витами нн о к офе рме нтн о-не таб с-, и vkjx мплексов (Пентапирувит и PIP + ¿¿-кетоглутарат+ГЛ+ГАМК) при со-ставлеш!и с их антигйпоксической активностью свидетельствуют о

!.(, что повышенные возможности утилизации ^-кетоглутарата как основному (дегидрогеназнсму) пути, так и по пути ГАМК-и^нта в рвной ткани сочетается с повышенной устойчивостью организма к гсоксии.

5. Направленная активация основного ( Х-кетотлутаратдвгадро~ тзного) и альтернативного (ГАМК-шунт) путей превращения сС-ке-^лутарата в сукцинат в нервной ткани при тяжелой черепно-мозго-

\ травме с помощью витаминно-коферментно-метаболитных комплек-з Пентапирувит и рц? + оС-кетоглутарат+ГЛ+ГАКК сама по сябо и в ¡етании с зэдитой моега от гипоксии с пемещью тиопентала натрия ¡спечивает терапевтический эффект, отчетливо проявляющийся в ран! сроки после травмы по .общебиологическим показателям и в пост-^вматическом переде по динамике восстановления мозговых функ-I, поведенческим проявлением и морфологическим критериям. Одшм механизмов терапевтического деЙ1 .лил разработанного сочетания

препаратов является ограничение перэкисного окисления липидов и поддержание функций глутатионовой системы противоперекисной защиты в нервной ткани.

6. Эффективность виташнно-коферыентно-метаболитной терапии проявляется как при системном, так и при аппликационном применении кошпекса, в последнем случае это подтверждается нормализацией электроэнцефалографических показателей активности трамвированного мозга и благоприятными метаболическими изменениями (нормализация окислительного декарбоксилирования ^б-кетокислот, активация ГАМК-шунга, снижение уровня глутамата и ГАЫК). В первые часы после тра-ш характер биохимических и функциональных нарушений б травмированном и в контрлатеральном полушарии свидетельствует о вовлечении в патологический процесс всего мозга целом.

7. Состояние ГАШ-шунта в нервной ткани в период развития ран ней поотлучевой реакции после общего равномерного ^-облучения в дозе 30 Гр характеризуется фазой ранних изменений (I час), фазой максимальных сдвигов (3-6 часов), фазой компенсации (24 часа) и фазой вторичной декомпенсации (48 часов). &ги изменения сочетаются с нарушениями ксмпартментализации ГАУК (снижением содержания ее связанных форм), особенно в первые 3 часа после воздействия. Характер поведенческой активности животных, изменения их условно-рефлекторной деятельности указывают на преобладание процессов возбу-вдения ЦНС с первые часы с последующим нарастанием тормозных процессов.

8. йарыако-ыетаболичаские воздействия (сочетание однократного введения тиопентала натрия сразу после облучения с последующим многократным применением КВКЫ или сочетание пантогама с КЫШ) обеспечивает к концу первых суток после облучения усиление компенсаторной функции ГАЫКчгунта в нервной ткани и улучшегше условно-рефлекторной деятельности животных. ГАМК-ергические ноотропные и ан-тигипоксические препараты (ГОШ, пантогам) и КВКЫ (Пентапирувит в сочетании с комплексе« гьр + ^¿-кетоглутарат+ГАШ+ГЛ) проявляют эффективность при лочении лучевого синдрома (удлинение средней продолжительности жизни животных, улучшение состояния кроветворения и снижение смертности). Это подчеркивает роль гипоксии мозга

в патогенезе ранней постлучевой реакции и уг пнвает на необходимость коррекции состояния ЦНС с целью улучшения течения лучевого синдрома п целсм.

9. '•¡аз с полученных дашшх с учет ал результатов математического моделирования наблюппомых биохимических процессов разработа-

ны рекомендации по рациональной фармако-метабодической защите :ч -ловного мозга от гипоксии при экстремальных состояниях оргашишя -принцип "экономии энергетической компоненты", предусматриваот'^й сочетание трех целенаправленных воздействий: а) общего снижения энергетических затрат посредства« угнетения функциональной активности ЦНС; б) активации компенсаторных путей метаболизма, способных восполнить подачу быстро и устойчиво окисляющихся субстратов; в) поддержания функщи ключевых звеньев энергетического обмене..

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Розанов В.А. Метаболизм и физиологические функции ГАМК-ког югатов и ГАШ-производных в ЦНС млекопитающих // Нейрохимия. -

1982. - T.I, № 4. - С.406-419.

2. Розанов В.А., Рейтарова Т.Е. Влияние Вувитаминоактивинх соединений на содержание свободных и связанных гамма-ами ндаасля-ной и глутаминовой кислот в головном мозгу мышей // Укр. биохим. журн. - 198Г - Т.55, » 6. - С.671-673.

3. Савицкий И.В., Розанов В.А., Цибульский В.В., Гривцев Б.А„ Обмен некоторых нейромедиаторов в головнсм мозгу животных при ра-диационн«! поражении организма // Девятая Всес. конф. по биохими . нервн. системы: Тез. научн. сообщ., Ереван: Изд-во АН Арм.ССР,

1983. - С.229-230.

4. Сайицкий И.В., Розанов В.А., Цыбульский В.В. Некоторые итоги изучения системы ГАШ и сопряженных реакций в головном мозгу при действии ионизирующих излучений. - Москва, 1984. - 14 с. -Рук. представлена ред. ж. Нейрохимия. Деа. в ВИНИТИ К» 5800-84.

5. Розанов В.А., Карпович Г.А. Ранние изменения ypoBirr ГАМК, глутамата и аминотрансферазной активности в отделах головного мозга крыс после общего У'-облучения в абсолютно летальной дозе // , Радиобиология. - 1985. - Т.25, № 3. - С.384-388.

6. Розанов В.А. Соотношение и взаиморегуляция путей метаболизма ¿¿-кетоглутарата в митохондриях различных отделов головного мозга крыс // Молекулярн. механизмы и регуляция энергетич. обмена: Тез. Всес. симп., Пущино, 1986. - C.I7-I8.

7. Розанов В.А., Рейтарова Т.Е. Использование хроматографии на бумаге для серийных исследований компонентов системы ГАМК в образцах нервной ткани // Хроматография в биологии и медицине: Тез. докл. меясдунар. сими., Москва, 1986. - С.44-45.

8. Itozanov r.A., Hfiitnrova Т.Е., Karpovltch O.A. rteuroohmi-echs Abweichungen im Verlauf d^o f : Rfn rftilo^ineu Syndrome bei

Rattao und Ihre bdctnflustmng duroh Vitamine // Radiobiol. Ra-diother. - 1986. - B.27, H.5. - S.537-547.

9. Розанов В.Л., Пархоменко Ю.Ы. Активность пируват и кето глутаратдегндрогеназного комплексов в различгшх отделах гол овна; мозга крыс // Укр. Сисхим. жури. - 198?. - Т.59, tf I. - С.29-34,

10. Розанов В.А., Беэамаута С. Интенсивность процесса утилизации (¿-кетоглутарата и содержание некоторых связанных с ним субстратов в различных отделах головного мозга крыс // ИеЙрохимк - 1986. - Т.5, #4. - С.377-383.

11. Погорзлсв , Розанов В.А., Цзпколотго В.А., Аряев В.Х Петров А.П., Щербань A.M. Коррекция ГАМК-систеш клеток мозга пр черепно-мозговой травме и гепатогенном шоке // Совр. пробл, го-меостаза; Научи. труда ЦОЛИУВ, 1967. - Т.266. - С.70-71.

12. Рейтарова Т.Е., Розанов В.А., Тоцкий В.И. Поглощенно 14С ГДЫК срезами коры головного мозга крыс: влияние // Укр. био хим. курн. - 1987. - Т.99, Ii 2. - С.87-90.

13. Розанов В.А., Карпович Г.А., Мулюкииа H.A. Об исподьзо-шши ш1рвдо:<саяь-5-фосф&та. при определении ашнотронсфоразной ахтитости в ткани головного мозга // Вопр. кед. химии. - 1987. ■ Т.ЗЗ, К' 3. - C.I29-I32.

14. Розанов В.А. Некоторые особенности глутаматдекарбоксклаз-iic'i реакции в гомогенатах различных отделов головного мозга крыс Укр. биохим. курн. - 1987. - Т.59, $ 5, - C.4I-45.

15. Розанов В.А., Цеакопенко В.А., Савицкий И.В., Петров А.П. Нсйрохимичоскис обосновшшя принципа экономии энергетической компоненты в коррекции ызтаболизма при травматических повреждениях ЦНС // Оундеазнтальныз достижения нэйрохимии - медицине: Теэ. дач десятой Всес. кснф. по биохимии нервн. сист., Горький, 1987. -

С.53-54.

16. Розанов В.А., Копелевич В.М., Рейтарова Т.Е., Розанов А.Я, Гунар В.И. Анализ влиядая новых ГАМК-кояызгатов на систему ГАМК

г слоеного иозга с учетам возможности их биотрансфоршщии // Поиск новых лекарств: Тез. докл. конф. Тарту, 'ГГУ, 1987. - С.97-99.

17. Коаяер М.А., Караев А.Л., Копелевич В.М., Буланова Л.Н., Розанов Б.А., Авакушш H.H., Гунар В.И. Синтез и не'Лрофармакалогическая активность шиффова основания £--\миномасляной ¡atслоты

и пиридоксольфосфата // Хим. фарм. курн. - 1У87. -89,- C.I05I-105-4.

1Ь. Рг»занс;' В.А., Карпович Г.А., Сергеева О.Н., Копелевич В.М. Гунар В.И, Влияние многодетных инъекций ГАМК на ГАМК-шунт и не-

которые связанные о ним рзазш;ш s головном мозге крыс // Boi j: мед. химии. - 1988. - Т.31, I. - С.29-33.

19. Рейтарска Т.З., Розанов В.А., Ковлер H.A., Копелевич В.М., Тсцкий В.И., tyrap В.Л. Влияние патотената и гоуодалтотената кальция на псглсденио ^С-ГАШ срезами коры головного мозга крыс // Фармакология и токсикология. - 1908. - T.5I, J5 4. - С.25-29.

20. Розанов В.А., Цопколенко В.А., Левицкий Ü.B., Галич И.Ц., Промыслов Н,Ш. О компенсаторной функция ГАНК-шунта а энергетической мзтабслизне мозга при дозированной черепно-мозговой травме у крыс // Вспр. нейрохирургии им. H.H.Бурденко. - I98Q. - Ш 5. -G.II-I5.

21. Король А.П., Цепколенно В.А., Розанов В.А., Хсгдацкад Т.Б. Биохимическое обоснование интенсивной терапии при синдрома сдавле-ния мозга // Нейрохирургия: иежводсмств. сборник, Киев, 19Ш, $ 21. - С.38-41.

22. Розанов В.А. Механизмы регуляции ГАШ-щунта в головном мозге // Нейрохишя. - 1988. - Т.?, $ 4. - 0.611-628.

23. Розанов В.А., Рейтарова Т.Е. Соотношение между связыванием, метаболизме?! гашз-ашнсмаслянсй шюлоты и некоторыми peasm -яш цикла Кребса в головном нозго крыс // Укр, оиохшд. иурн. -1989. - T.6I, J? I. - С.42-48.

24. Розанов В.А., Коталевич В.И., Савицкий И.В. Изменения в системе ГА!ЛС головного мозга при многократно» шгьецировании nnpi-доксаль-5-фосфата и его шиффова основашя с ГАМК // Вопр. мед. химии. - 1989. - Т.35, » 2. - С.42-46.

25.-Розанов В.А. Роль системы ГАЫН в механизмах фаргако-нета-болической защиты мозга от гипоксии // Анестезиол, и реашшатол. -1989. - » 2. - С.68-78.

26. Rozanov V.A. Some data oonfiraing structural unity of 2-oxaglutarate dehydrogenase осирlex and GABA-2-оя glutcrate aai-notransferase // lloleoular organization at biological Htruoturesj Abstr. Int. Зувр. (June, Moscow, 1989). - Иоаосга, 1989» p.145. '

27. Розанов В.А. Метаболическая роль ГАМК-иунта в центральной нервной системе при экстремальных состояниях // Успехи современной биологии. - 1989. - T.I07, » 3. - С.376-390.