Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Про- и антиоксидантная системы при дисфункции плаценты

ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Про- и антиоксидантная системы при дисфункции плаценты"

На правах рукописи

ПРОКОПЕНКО ВАЛЕНТИНА МИХАЙЛОВНА

ПРО- И АНТИОКСИДАНТНАЯ СИСТЕМЫ ПРИ ДИСФУНКЦИИ ПЛАЦЕНТЫ

03. 01. 04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

11 1 АВГ 2011

Санкт-Петербург 2011

4852018

Работа выполнена в Научно- исследовательском институте акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта Северо-Западного отделения

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор Ещенко Наталья Дмитриевна Доктор биологических наук, профессор Зыбина Наталья Николаевна Доктор медицинских наук, профессор Галебская Людвига Вячеславовна

Ведущая организация: Российский университет дружбы народов

Диссертационного совета Д 001. 022. 03 при НИИ экспериментальной медицины РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН

Российской академии медицинских наук

Научные консультанты: доктор биологических наук, профессор Арутюнян А.В.

доктор медицинских наук, профессор Павлова Н.Г.

Защита диссертации состоится

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор

Пучкова Л. В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Плацента представляет собой орган, который играет динамичную роль в процессах взаимодействия двух организмов - матери и плода. Высокий темп развития плаценты, растущие потребности плода сопровождаются особыми требованиями к метаболическим процессам, лежащим в основе функциональной деятельности плаценты. Исследование особенностей метаболических процессов в развивающейся при физиологической беременности плаценте дает представление о путях их координации в функциональной системе мать-плацента-плод. Один из таких фундаментальных механизмов биохимической адаптации, который обеспечивает регуляцию метаболических процессов в плаценте как в физиологических условиях так и при акушерской патологии, связан с системами генерации активных форм кислорода и функциональным состоянием многокомпонентной антиоксидантной защиты (М.В Федорова, 1986; R. F.Del Maestro, 1980; C.V. Smithl, 1992; A. Van der Vliet, A. Bast, 1992).

Физиологическая беременность характеризуется развитием окислительного стресса, являющегося одним из центральных механизмов общей системы адаптации к новым условиям организма женщины, при котором наблюдается сбалансированное состояние на более высоком уровне прооксидантной и антиоксидантной систем. При физиологически протекающей беременности состояние окислительного стресса возникает в период формирования артериальной циркуляции и увеличения напряжения кислорода в плаценте. Окислительный стресс выполняет в этой ситуации важные физиологические функции, участвуя в запуске механизмов дифференцировки клеток (Ю.Э. Доброхотова и соавт., 2008). В кратковременный период относительного дисбаланса между генерацией и элиминированием активных форм кислорода (АФК) происходит адаптация механизмов системы антиоксидантной защиты к нарушению физиологического равновесия. Неспособность системы антиоксидантной защиты (АОЗ) противостоять усилению процессов свободнорадикального окисления приводит к значительному ослаблению метаболической и детоксицирующей функций плаценты.

В последнее время постоянно растет количество работ, посвященных роли систем генерации активных форм кислорода и антиоксидантной системы в формировании метаболических и детоксицирующих функций плаценты (Т.Н. Погорелова и соавт., 1998, 1999; И.И. Крукиер, 2003; A.B. Шестопалов, 2002; A.B. Арутюнян и соавт., 2010). Наиболее полно представлены в литературе данные о соотношении антиоксидантной и прооксидантной систем в плаценте женщин, беременность которых осложнена гестозом (A.C. Staff et al.,1999; R. Madazli et al., 2002; K.A. Boggess et al., 2003; M.T. Raijmakers et al., 2004). Тем не менее, многие вопросы, связанные с развитием дисфункции плаценты в

условиях окислительного стресса на протяжении беременности, еще весьма далеки от разрешения.

В литературе практически отсутствуют сведения о соотношении систем образования АФК и их элиминации на этапах беременности в разных участках (центральный и периферический) плаценты при акушерских и экстрагенитальных заболеваниях беременных. Центральная зона плаценты, по данным J.Hempstock et al. (2003), лучше оксигенирована, чем периферия, благодаря направлению потока материнской крови. Однако, по мнению авторов, центральные ворсины по сравнению с периферическими характеризуются большей морфологической незрелостью, что может свидетельствовать о функциональных особенностях и значимости центрального и периферического участков плаценты при ее дисфункции.

Антиоксидантную систему организма рассматривают как многокомпонентную систему, проявляющую специфическую и неспецифическую активность (Н.К.Зенков, 2001), а также как единую, интегрируемую и регулируемую стругауру, находящуюся под генетическим контролем (В.В. Соколовский, 1988; Е.Е. Дубинина, 2006; Е.М Bcrry, R. Kohen, 1999; X.L. Wang et al., 2001). Наиболее важным и эффективным звеном антиоксидантной защиты является система антиоксидантных ферментов: супероксиддисмутаза, каталаза, глутатионпероксидаза, глутатионредуктаза, глутатион-S-трансфераза.

Глутатионзависимое звено антиоксидантной системы осуществляет разрушение перекиси водорода, восстановление нестойких органических гидропероксидов в стабильные соединения - окси-кислоты, а также защищает клетки от продуктов перекисного окисления липидов посредством их восстановления. К этому звену относят глутатионпероксидазу (КФ 1.11.1.12), глутатионредуктазу (КФ 1.6.4.2), глутатион-S-трансферазу (КФ 2.5.1.18) и систему глутатиона. Глутатионзависимое звено антиоксидантной системы является частью системы ферментов детоксикации ксенобиотиков. Гены суперсемейства глутатион-Б-трансфераз (Ml, Т1 и Р1) контролируют синтез ферментов второй фазы детоксикации и характеризуются значительным популяционным полиморфизмом.

Сведений об активности глутатионзависимой антиоксидантной системы и вкладе генетически детерминируемой составляющей в изменение буферной емкости глутатионзависимого звена антиоксидантной системы в плаценте при невынашивании беременности малочисленны и неоднозначны. Оценок генетической вариабельности полиморфных локусов генов, вовлеченных в формирование глутатионзависимого звена

АОС при самопроизвольном прерывании беременности, явно недостаточно (О.Н.Беспалова, 2001, 2009; A. Hirvonen et al., 1996).

Каскад нарушений метаболизма в плаценте при самопроизвольном преждевременном прерывании беременности может служить моделью для изучения универсальных механизмов, представляющих собой срыв адаптационно-гомеостатических реакций, необходимых для поддержания адекватного обмена между организмами матери и плода (Т.И. Погорелова и соавт., 1997; В.Е. Радзинский, П.ЯСмалько, 2001).

Целью исследования явилась комплексная оценка состояния про- и антиоксидантной систем плаценты при физиологической беременности и акушерской патологии, сопровождающейся дисфункцией плаценты, приводящей к невынашиванию беременности, для выявления значения генерации активных кислородных метаболитов и ферментативного звена антиоксидантной защиты в развитии плацентарной недостаточности.

Задачи исследованиях

1. Провести сравнительную оценку интенсивности свободнорадикального окисления и ферментативного звена антиоксидантной защиты в митохондриях плаценты при физиологически протекающей беременности и невынашивании беременности.

2. Исследовать механизм генерации активных форм кислорода в постмитохондриальной фракции плаценты.

3. Провести сравнительную оценку интенсивности хемилюминесценции, содержания продуктов перекисного окисления липидов и окислительной модификации белков в постмитохондриальной фракции плаценты при физиологической беременности и невынашивании.

4. Исследовать активность NO-синтазы и миелопероксидазы в центральной и периферической областях плаценты на протяжении физиологической беременности и при невынашивании.

5. Сопоставить величины общей антиокислительной активности, активности ферментативного звена антиоксидантной системы в центральной и периферической областях плаценты при физиологическом течении беременности и невынашивании.

6. Исследовать состояние глутатионзависимой антиоксидантной системы в центральной и периферической областях плаценты на протяжении физиологической беременности и при невынашивании.

7. Выявить частоту встречаемости функционально ослабленных сочетаний генов семейства GST (GST PI, GST М, GST Т) в плаценте женщин при невынашивании и

выяснить зависимость между вариантами генотипа GST Р1 и уровнем активности ферментов глутатионзависимой антиоксидантной системы.

8. Выявить значение системных нарушений глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты плаценты в патогенезе невынашивания беременности.

9. Оценить вклад прооксидантной и антиоксидантной систем плаценты в механизм патогенеза ее дисфункции, приводящего к акушерской патологии (невынашиванию беременности).

Научная новизна.

Установлены системные нарушения в функционировании антиоксидантной и прооксидантной систем плаценты при ее дисфункции.

Впервые проведено комплексное исследование состояния прооксидантной и антиоксидантной систем плаценты у женщин при физиологическом течении беременности и при невынашивании. Показано, что спонтанное преждевременное прерывание беременности происходит в условиях развития окислительного стресса в митохондриях и постмитохондриальной фракции периферийного участка плаценты, где на фоне повышения уровня интенсивности процессов пероксидации наблюдается недостаточное увеличение общей емкости антиоксидантной защиты и ослабление вне зависимости от локализации ее глутатионзависимого звена.

Впервые установлено, что возникновение люминолзависимой хемилюминесценции в плацентах женщин связано с участием одновременно двух механизмов: СОД-зависимого (присутствие Ог и ОН' радикалов) и СОД-независимого (наличие гипохлоритного анион радикала). При самопроизвольном прерывании беременности отмечается существенное уменьшение реакций, протекающих по СОД-независимому механизму, связанное с ограничением вовлеченности гипохлоритного анионрадикала в процессы свободнорадикального окисления в плаценте.

Впервые выявлено изменение содержания миелопероксидазы, катализирующей реакцию образования гипохлорита, в плацентах при физиологически протекающей беременности и при невынашивании, возникшем на разных сроках беременности.

Показано, что снижение активности NO-синтазы в периферической части плацент женщин определяет снижение уровня защитно-приспособительных реакций, обеспечивающих течение беременности.

Проведено комплексное исследование глутатионзависиной антиоксидантной системы при физиологическом течении беременности и при невынашивании. Впервые на основании определения активности ферментов глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты в плацентах и хорионах установлен индекс преждевременного

прерывания беременности, абсолютное значение которого обратно пропорционально риску развития прерывания беременности.

Изучена встречаемость различных вариантов аллелей генов GST, кодирующих синтез глутатионзависимых ферментов в плацентах беременных женщин с самопроизвольным преждевременным прерыванием беременности, и впервые обнаружено, что невынашивание беременности связано с высокой частотой встречаемости функционально ослабленных сочетаний аллелей этих генов.

Впервые показано, что на уровень активности глутатионпероксидазы в плаценте оказывает влияние наличие аллеля В в гене GST Р1, а активность глутатион-S-трансферазы плаценты имеет прямую зависимость с наличием аллеля А и отсутствием аллеля С в гене GST Р1.

Научно-теоретическая и практическая значимость

Работа вносит существенный вклад в понимание патогенетических механизмов развития дисфункции плаценты и дает углубленное представление о роли про - и антиоксидантных систем в особенностях ее формирования при невынашивании беременности. Проведенные исследования позволяют оценить роль индивидуальных звеньев исследуемых систем в развитии дисфункции плаценты, сопровождающейся усилением окислительного стресса и спонтанным преждевременным прерыванием беременности разных сроков.

Представленная модель спонтанного преждевременного прерывания беременности позволяет оценить возможность исхода беременности от активности ферментов глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты в центральной части плаценты: глутатионпероксидазы и глутатион-8-трансферазы.

Полученные данные о снижении емкости глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты при невынашивании беременности являются основанием для научно обоснованной коррекции метаболических и функциональных нарушений плаценты, что позволит целенаправленно осуществлять профилактику осложнений у беременных.

Выявленные зависимости активности глутатионзависимых ферментов от вариантов генотипа по гену GST Р1 предполагают дифференцированный подход при назначении лечебных препаратов антиоксидантной терапии у женщин с угрозой прерывания беременности.

Впервые предложено использование быстрого, методически несложного метода хемилюминометрического анализа сыворотки крови для оценки эффективности лечения при угрозе прерывания беременности. Показана диагностическая возможность

использования показателей хемилюминометрии в качестве дополнительных критериев для экспресс-диагностики дисфункции плаценты и контроля за эффективностью проводимого лечения при угрозе прерывания беременности.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В митохондриях плаценты при самопроизвольном преждевременном прерывании беременности наблюдается развитие окислительного стресса, который сопровождается усилением интенсивности прооксидантной системы и ослаблением функционирования глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты.

2. В постмитохондриальной фракции плаценты при неосложненном течении беременности и самопроизвольном досрочном ее прерывании наблюдается разная степень вовлеченности активных форм кислорода в процессы свободнорадикального окисления. При невынашивании беременности снижено участие гипохлоритного анионрадикала и оксида азота в процессах СРО в плаценте.

3. Интенсификация процессов липидной пероксидации в постмитохондриальной фракции периферического участка плаценты приводит к преждевременным родам.

4. Уровень миелопероксидазы и активности NO-синтазы в плаценте на протяжении беременности тесно связан с ослаблением защитной функции плаценты.

5. Развитие окислительного стресса в постмитохондриальной фракции плаценты при самопроизвольном преждевременном прерывании беременности связано с изменением уровня активности глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты и нарушением сбалансированности про- и антиоксидантной систем.

6. Низкая активность глутатион-8-трансферазы в плаценте при невынашивании беременности обусловлена сочетанием функционально ослабленных аллелей генотипа GSTP1.

Апробация работы и личный вклад автора. Основные положения работы доложены и обсуждены на следующих научных форумах:

• Научной сессии НИИ АИГ им. Д.О.Отта «Актуальные вопросы физиологии и патологии репродуктивной функции женщин (Санкт-Петербург, 1993, 1994, 1999).

• Первом Северо-кавказском съезде акушеров-гинекологов (Ростов, 1994).

• Международной конференции «Clinical Chemiluminescence» (Берлин, 1994).

• 5-th Annual mitting of the oxygen society (Сан-Франциско, 1994).

• 7-ом конгрессе «Акушерство и гинекология» стран Балтийского моря (Санкт-Петербург, 1999).

• Российском форуме «Мать и дитя» (Москва, 2000; Казань,2007, Москва, 2010).

• Конференции с международным участием «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека» (Смоленск, 2001, 2003).

• Научно-практической конференции «Невынашивание беременности и недоношенный ребенок» (Петрозаводск, 2002).

• Третьем съезде Биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002).

• Международном экологическом форуме «Environment and human health» (Санкт-Петербург,2003).

• Конференции «Механизмы типовых патологических процессов» (Санкт-Петербург, 2003,2006).

Клинические наблюдения проводились в отделении патологии беременности НИИАГ им. Д.О. Отта СЗО РАМН (руководитель - проф., д.м.н. О.Н. Аржанова). Генетические исследования проводили в лаборатории пренатальной диагностики наследственных болезней НИИАГ им. Д.О. Отта СЗО РАМН с участием автора (руководитель - член-кор. РАМН, проф. д.м.н. B.C. Баранов). Биохимические исследования были выполнены автором лично в лаборатории биохимии с клинико-диагностическим отделением НИИАГ им. Д.О. Отта СЗО РАМН (руководитель - проф., д.б.н. A.B. Арутюнян). Определение миелопероксидазы проводилось самостоятельно на базе лаборатории общей патологии НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН (руководитель - проф., д.б.н. В.Н. Кокряков). Обработка, анализ и интерпретация полученных данных выполнены автором лично.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 40 работ, в том числе 15 статей -в изданиях, включенных в перечень ВАК Минобрнауки РФ.

Объем и структура диссертации. Текст диссертации изложен на 229 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 422 источника, в том числе 134 отечественных и 288 зарубежных. Работа иллюстрирована 24 таблицами и 30 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В проспективное исследование были включены 192 беременные женщины. Группу сравнения составили 97 относительно здоровых женщин, имевших физиологическую беременность. У 10-ти из них беременность была прервана в I триместре беременности (до 13 недель) путем искусственного аборта по желанию женщины (1-я подгруппа), у 15 женщин - во 11-ом триместре (до 28-ой недели) по

социальным показаниям методом интраамниального введения энзапроста (PG Ег) (II -я подгруппа) и у 72 женщин беременность закончилась срочными родами в 37-40 недель (Ш-я подгруппа).

Основную группу составили 95 женщин, беременность которых прервалась самопроизвольно и преждевременно в сопоставимые сроки: 12 женщин - 1-я подгруппа; 14 женщин - II -я подгруппа и 69 женщин - Ш-я подгрупп (28 - 36 недель).

Средний возраст женщин основной группы составил 29,2±0,8 лет, группы сравнения -26,9± 1,2 лет.

Все пациентки с урогенитальными инфекциями до наступления беременности получали специфическую антибактериальную терапию.

С угрозой прерывания беременности поздних сроков обследовано 95 пациенток в возрасте от 18 до 40 лет со сроком беременности от 24 до 36 недель и 12 небеременных женщин, которые составили 1-ую группу. Во 2-ю группу вошли 25 женщин с неосложненным течением беременности, 3-ью группу составили 20 женщин с угрозой прерывания беременности, получавших инфузии бриканила, 4-ую группу - 23 женщины, прошедшие курс лечения магне-Вб и 5-ую группу - 27 женщин, которым проводилось лечение электросном.

Материалом для комплекса биохимических исследований служили гомогенаты хорионов (на ранних сроках беременности) и центрального и периферического участков плацент женщин выше представленных групп. В исследованиях оценки степени риска невынашивания при угрозе прерывания беременности поздних сроков использовали сыворотку крови.

Митохондриальная фракция плаценты была получена методом дифференциального центрифугирования. Гомогенат ткани центрифугировали 15 минут при 750 g при 4°С. Для осаждения митохондрий надосадочную жидкость центрифугировали при 10800 g в условиях соблюдения холодового режима. В качестве среды выделения использовали 0.25 М раствор сахарозы, содержащий 1 мМ ЭДТА (pH 7,4) (Johnson D., Lardy Н, 1967).

Содержащая микросомы цитозольная фракция плаценты (постмитохондриальная фракция) была получена после последовательного центрифугирования гомогенезированной в ледяном буфере, содержащем бОмМ КН2РО и 105 мМ KCl (pH 7,4), ткани при 750 g и полученного супернатанта при 10800 g в условиях соблюдения холодового режима.

Интенсивность ПОЛ оценивали по количеству ТБК-активных продуктов (малонового диальдегида - МДА), диеновых конъюгатов (ДК) и по показателям Н2О2 - индуцируемой люминолзависимой хемилюминесценции (JI-XJI), измеряемой на хемилюминометре

Emilitte-1105 (Россия). В хемилюминометрических исследованиях регистрировали светосумму (СС) и высоту вспышки XJl (MB), величины которых характеризуют интенсивность свободнорадикальных реакций и расходования свободных радикалов при их взаимодействии с эндогенными антиоксидантами биосубстрата (Арутюнян A.B. и соавт., 2000). МДА определяли спектрофотометрически по интенсивности окраски комплекса, образующегося в результате взаимодействия малонового диальдегида с двумя молекулами тиобарбитуровой кислоты с максимум поглощения при 535 нм (Андреева Л.И. и соавт., 1988). Концентрацию ДК определяли в экстракте гептановой фазы спектрофотометрически при длине волны 232 нм (Путилина Ф.Е. и др., 2006).

Уровень окислительной модификации белков оценивали по содержанию карбонильных производных аминокислот в белках. Метод основан на реакции взаимодействия окисленных аминокислотных остатков белков со специфическим реагентом на карбонильные группы - 2,4-динитрофенилгидразином - с образованием 2,4-динитрофенилгидразонов, которые регистрировали спектрофотометрически при длине волны 363 нм. Интенсивность окислительной модификации белков рассчитывали, используя коэффициент молярной экстинции 22 " 103 х М"'см "'(Levine R.L. et al., 1994, Дубинина Е.Е. и соавт., 1995).

Активность NO-синтазы (КФ 1.14.13.39) определяли по количеству нитрита с помощью классической реакции Грисса (Schmidt H.W., Keim М., 1996). В качестве стандарта для калибровочной кривой использовался NaNOj.

Содержание миелопероксидазы (МПО) определяли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа. Калибровочная кривая строилась с использованием стандартного раствора МПО (Арутюнян A.B. и др., 2000; Mullane K.M. et al., 1985).

Определение активности пероксидаз основано на измерении Н2О2 - зависимого окисления тетраметилбензидина. За единицу ферментативной активности (Е) принимали количество фермента, которое изменяет величину экстинции на 1.0 в мин. (Кокряков В.Н. и соавт., 1982).

Активность системы антиоксидантной защиты оценивали, определяя уровень антиоксидантной активности (АОА), содержание небелковых тиоловых групп и антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы (СОД), каталазы, глутатионпероксидазы (ГП), глутатионредуктазы (ГР) и глутатион-Э-трансферазы (Г Т). Для определения АОА использовали хемилюминесцентную реакцию рибофлавина в присутствии перекиси водорода и ионов двухвалентного железа. Измерение свечения осуществляли при 37° С в течение 2 мин. АОА выражали в относительных единицах (1 отн.ед. соответствует 1 mV) и рассчитывали по формуле AOA=1-Si/S2,

где S - средняя величина светосуммы опытного (Si) или контрольного (S2) образцов в относительных единицах (Путилина Ф.Е. и соавт, 2006). Определение небелковых тиоловых групп осуществляли с помощью реактива Эллмана (Sedlak J., Lindsay R.H.,1968). . Активность Си,2п-супероксиддисмутазы определяли с использованием системы, обеспечивающей восстановление нитросинего тетразолия (Чевари С. с соавт, 1985). Активность каталазы определяли по методу, основанному на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена окрашенный комплекс (Королюк М.А. и соавт.,1988). Активность глутатионпероксидазы определяли по методу Моина В.М. (1986), основанному на определении скорости окисления глутатиона в присутствии гидроперекиси третичного бутила, активность глутатионредуктазы определяли по убыли НАДФН в реакции с окисленным глутатионом (Horn H.D., 1965). Определение активности глутатион-Э-трансферазы основано на оценке скорости ферментативного образования 08-2,4-динитробензола в реакции восстановленного глутатиона с 1 -хлор-2,4-динитробензолом (Арутюнян A.B. и соавт., 2000).

Уровень эндогенной интоксикации в плаценте оценивали по методу Малаховой М.Я. (1995), определяя уровень веществ средней молекулярной массы (СММ) и содержание олигопептидов (ОП). Числовую величину веществ СММ представлял интегральный показатель оптической плотности, который рассчитывался как сумма экстинций на измеряемом отрезке длин волн и равен площади под спектрограммой. Олигопептиды определяли в разбавленном центрифугате плаценты, используя метод Lowry et al., 1951. Индекс интоксикации плаценты рассчитывали как произведение концентраций веществ СММ и ОП и выражали в относительных единицах.

Для характеристики генов глутатион-8-трансферазы выделение ДНК проводили по стандартной методике Sambrook J. et al. (1989). Определение аллельных вариантов генов GSTT1 и GSTM1 проводили методом ПЦР. Определение аллельных вариантов генов GSTP1 проводили методом ПЦР с последующим рестрикционным анализом, используя специфические эндонуклеазы Bso MAI (праймеры GST р IF и GST р 2R) и BstFNl (праймеры GST р 3F и праймеры GST р 4R) согласно рекомендациям фирмы изготовителя эндонуклеаз («Сибэнзим», г.Новосибирск, «Ферментас», Латвия). Продукты реакции после амплификации и рестрикции разделяли в 7% полиакриламидном геле с последующей окраской этидиумбромидом и анализировали в проходящем УФ свете на трансиллюминаторе «Macrovue» (фирма «Pharmacia LKB») с фиксацией посредством видео системы гель документации «Gel Imager 2».

Статистическая обработка результатов исследования выполнялась с использованием стандартных пакетов программ прикладного статистического анализа

(Statistica v.6.0, Microsoft Excel-2002). Для оценки статистической значимости различий между исследуемыми группами использовали критерий Стьюдента (t-критерий) после проверки характера распределения с помощью теста Фишера, U-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни и Н-критерий Крускала-Уоллиса. Результаты оценивали как статистически значимые при р<0,05. Корреляционный анализ выполнен методом Спирмэна с расчетом коэффициента ранговой корреляции. Использовались также методы факторного дисперсионного анализа (ANOVA) и множественного регрессионного анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Уровень процессов свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в митохондриях плацент женщин при физиологической беременности и преждевременных родах

В последние десятилетия одним из подходов для изучения изменений в процессах свободнорадикального окисления (СРО) биологических объектов, в частности митохондрий, является измерение уровня интенсивности хемилюминесценции. Кинетика люминолзависимой ХЛ отражает кинетику образования и расходования АФК. Изменение интенсивности люминолзависимой ХЛ в митохондриях плаценты мы оценивали по интегральному показателю - светосумме вспышки.

Результаты собственных исследований показали, что в митохондриях, выделенных из плацент женщин при поздних сроках невынашивания (преждевременные роды), уровень интенсивности процессов свободнорадикального окисления в периферической части плаценты был выше на 24% (р<0,05), чем в митохондриях плацент женщин при физиологическом течении беременности, завершившейся родами в срок. Величина общей антиоксидантной активности (ОАА) в митохондриях плацент центрального и периферического участков женщин при преждевременных родах превышала таковую в митохондриях плацент женщин с физиологически протекающей беременностью в 1,5 и 1,8 раз соответственно (табл. 1).

Вместе с тем, нами установлено, что уровень активности ГП в митохондриях плацент женщин при преждевременных родах был ниже, чем таковой у пациенток с неосложненным течением беременности, завершившейся родами в срок (Рис. 1) Не выявлено изменений в уровнях активности СОД в митохондриях плацент у женщин обследованных групп.

Таблица 1

Интенсивность хемилюминесценции и общей антиоксидантной активности в митохондриях плацент женщин при физиологической беременности, завершившейся _ родами в срок, и при преждевременных родах_

Подгруппы женщин Интенсивность хемилюминесценции (отн. ед/мг белка) Общая антиоксидантная активность (отн. ед)

Центральный участок плаценты Периферический участок плаценты Центральный участок плаценты Периферический участок плаценты

Преждевременные роды (п=8) 3500.1±182.6ЛЛ 4514.8±290.9* 1,695±0,046* 2,164 ± 0,114* Л

Физиологическая беременность, завершившаяся родами в срок (п=8) 3429,6±250,8 3652.2±309.4 1,14 ±0,04 1,19±0,062

Примечание: * р<0,05 по отношению к периферическому участку плацент женщин с

физиологической беременностью, завершившейся родами в срок; ллр<0,01 по отношению к периферическому участку плацент женщин с преждевременными родами;

* р<0,05 по отношению к группе женщин с физиологической

беременностью; А р<0.05 - по отношению к центральной части плаценты

-г- * т *

и

< Физиологическая беременность Преждевременные роды

ш центр в периферия

Рис.1. Активность глутатионпероксидазы в митохондриях плацент женщин с физиологической беременностью, завершившейся родами в срок, и при преждевременных родах

Примечание: *р<0,05 дано по отношению к плаценте женщин с физиологическим течением беременности

Полученные данные свидетельствуют о том, что в митохондриях плаценты при преждевременных родах наблюдается развитие окислительного стресса, протекающее на фоне подъема активности прооксидантной системы митохондрий, выделенных из

периферической части плаценты, и ослабления функционирования в них глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты.

Оценка интенсивности процессов свободиорадикального окисления в постмитохондриальиой фракции плацент женщин при физиологической беременности и преждевременных родах Механизмы появления АФК в клетке связаны не только с нарушениями функционирования электронно-транспортных цепей в митохондриях. Генерация АФК происходит при окислительно-восстановительных реакциях, протекающих с участием кислорода в различных субклеточных структурах клетки (Меныцикова Е.Б. и соавт., 2006; Октябрьский О.Н., 2007). В микросомах наблюдается генерация АФК как результат функционирования гидроксилазной ферментативной системы с участием цитохрома Р-450 (Арчаков А.И., 1975, 1998).

Наши исследования показали, что величина Л-ХЛ в постмитохондриальиой фракции периферической части плацент у женщин с самопроизвольным преждевременным прерыванием беременности на 42% превышает интенсивность Л-ХЛ в плацентах женщин с неоеложненным течением беременности, завершившейся родами в срок. В центральной части плацент женщин обследованных подгрупп различий в интенсивности Л-ХЛ не наблюдалось (табл.2).

Таблица 2.

Интенсивность люминолзависимой хемилюминесценции в постмитохондриальиой фракции плацент женщин с физиологическим течением беременности и

преждевременными родами

Подгруппы женщин Область плаценты

Центральная Периферическая

СС (отн. ед/мг белка) МВ (отн.ед) СС (отн. ед/мг белка) МВ (отн.ед)

Преждевременные роды (п=20) 257.35±25.84 3.5±0.5 102.20±14.01** 3.0±0.4

Физиологическая беременность, завершившаяся родами в срок (п=16) 228.98±37.12*** 4.2±0.5* 59.71±4.09 2.6±0.4

Примечание: *р<0,05 по отношению к периферической части плаценты;

** р<0,01 по сравнению с физиологической беременностью ***р<0,001 по отношению к периферической части плаценты СС - светосумма, МВ - максимальная вспышка.

Интенсивность ХЛ, по данным ряда исследователей (Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., 1989; Федорова Т.Н и соавт., 1991; Болдырев А.А., 2001), тесно связана с процессами развития перекисного окисления липидов (ПОЛ) и окислительной модификацией белков (ОМБ).

Как показали наши исследования при преждевременных родах в периферической области плацент отмечалось увеличение на 62% (р<0.05) ТБК-активных компонентов (малонового диапьдегида - МДА), представляющих промежуточные продукты процесса пероксидации липидов, по сравнению с таковыми в периферической области плацент женщин с неосложненной беременностью. Интенсивность окислительной модификации плацентарных белков в постмитохондриапьной фракции, определенная нами по уровню содержания карбонильных производных, не отличалась как по периферии, так и по центру в плацентах женщин обследованных групп (табл.3).

Таблица 3.

Содержание продуктов перекисного окисления липидов и карбонильных производных белков в постмитохондриальной фракции плацент женщин с физиологическим течением беременности и при преждевременных родах

Подгруппы женщин Участок плаценты Содержание МДА (нмоль/мг белка) Содержание карбонильных производных (мкмоль/мг белка)

Преждевременные роды (п=20) центр 4.18±0.52 1.96±0.34

периферия 4.28±0.65* 2.22±0.28

Физиологическая беременность, завершившаяся родами (п=16) центр 3.95±0.64 1.85±0.20

периферия 2.64±0.3 1.74±0.13

Примечание: *р<0.05 дано по отношению к физиологической беременности

Полученные нами результаты позволяют полагать, что усиление процессов СРО в плацентах женщин при преждевременных родах в 28-36 недель связан преимущественно с активацией процессов ПОЛ.

Механизм люминолзависимой хемилюминесценции в тканях плацент женщин при преждевременных родах и физиологической беременности, завершившейся родами в

срок

Как известно, люминолзависимая хемшноминесценция (JI-XJI) связана с образованием супероксидного и гидроксильного и/или гипохлоритного радикалов (Владимиров Ю.А., 1989; 1998). Для того чтобы выяснить степень вовлеченности различных радикалов в процессы СРО в плацентах женщин, исследуемые с помощью ХЛ анализа, было изучено влияние на интенсивность Л-ХЛ специфических ловушек АФК в экспериментах in vitro: азида натрия, метионина, супероксиддисмутазы. Об участии в развитии Л-ХЛ гипохлорита - продукта окисления хлорида под влиянием миелопероксидазы (МПО) при взаимодействии с перекисью водорода, свидетельствует факт тушения ХЛ азидом натрия, который ингибирует активность МПО, и метионина, являющегося перехватчиком гипохлоритного анионрадикала (СОД - независимый механизм). Развитие Л-ХЛ в присутствии О2' и ОН'радикалов ингибируется СОД (СОД-зависимый механизм) (табл. 4).

Таблица 4

Влияние тушителей на люминолзависимую хемилюминесценцию в постмитохондриальной фракции плацент женщин при физиологической беременности и преждевременных родах

Подгруппы женщин Участок плаценты Ингибирующий эффект на Л-ХЛ, %

СОД (250 мкг/мл) Азид натрия (0.025 мМ) Метионин (0,4 мкМ)

Преждевременные роды (п=8) центр 52.5±4.5 15.6±1.9*** 31.6±4.9*

периферия 53.7±6.3 28.0±1.8*** 33.6±3.2*

Физиологическая беременность, завершившаяся родами в срок (п=8) центр 49.4±4.6 59.5±8.2 50.2 ±3.4

периферия 69.6±8.1 58.4±7.2 54.0±8.0

Примечание: *р<0.05, ***р<0.001 даны по сравнению с соответствующим показателем в группе женщин с физиологической беременностью.

Введение СОД практически одинаково ингибировало интенсивность Л-ХЛ как в центральной, так и периферической частях плаценты женщин обследованных групп.

Азид натрия ингибировал интенсивность Л-ХЛ в центральной и периферической частях плацент женщин с физиологическим течением беременности почти на 60%. У женщин, беременность которых окончилась преждевременными родами, азид натрия ингибировал интенсивность ХЛ на 44 % (р<0.001) в центральной части плаценты и на 30% (р<0.001) в периферическом участке слабее, чем в плацентах пациенток с неосложненной беременностью. Ингибирующий эффект метионина был выражен на 20% слабее в центральной и периферической областях плацент женщин при невынашивании.

Для более полного представления о вкладе различных радикалов в процессы СРО в плацентах женщин, определяемые с помощью ХЛ анализа, исследовали влияние на интенсивность Л-ХЛ в плацентах женщин обследованных групп различных соединений, которые отличаются между собой по структуре и эффективности инактивации свободных радикалов (табл.5)

Таблица 5

Величина 150 для низкомолекулярных ингибиторов люминолзависимой хемилюминесцеиции в постмитохондриальной фракции плацент женщин при физиологической беременности и преждевременных родах

Соединение Величина Ьо (нмоль/мл)

Физиологическая беременность, завершившаяся родами в срок (п=8) Преждевременные роды (п=8)

Цистеин 290.0±91.0 340.0±75.0

Аскорбиновая кислота 300.0±65.0 250.0±60.0

НАДН 3.0±0.85 1.7±0.41

Таурин 23100.0±930.0 18600±721.0**

Мочевая кислота 0.071±0.01 0.028±0.009**

Глутатион восстановленный 1.0±0.3 1.0±0.5

Примечание: ** р<0.01 дано по отношению к физиологической беременности

Ьо - концентрация, при которой происходит 50%-ное тушение Л-ХЛ

Исследуемые соединения тушили Л-ХЛ в постмитохондриальной фракции плацент женщин обеих групп. Степень ингибирования интенсивности хемилюминесцеиции зависела от концентрации соединений. Эффективность исследуемых веществ варьировала в пределах нескольких порядков. Цистеин, аскорбиновая кислота, НАДН, глутатион восстановленный оказывали равнозначный ингибирующий эффект на Л-ХЛ постмитохондриальной фракции плацент женщин обследованных групп. Величина 150

мочевой кислоты, способной инактивировать пероксинитрит, образующийся в реакции взаимодействия оксида азота с супероксидным анионрадикалом (Зенков Н.К.и соавт., 2001), была выше в 2,5 раза в постмитохондриальной фракции плацент женщин с неосложненной беременностью. Концентрация 1зо таурина, инактивирующего гипохлоритный анион радикал с образованием аминосоединений (Говорова Н.Ю. и соавт, 1988), в плацентах женщин с физиологической беременностью превышала в 1,2 раза таковую при преждевременных родах.

Полученные данные позволяют говорить об участии одновременно двух механизмов возникновения Л-ХЛ в постмитохондриальной фракции плацент: СОД-зависимого, характеризующегося присутствием в среде радикалов СЬ" и ОН', и СОД-независимого, когда свечение возникает в присутствии радикалов СЮ'. Причем относительный вклад последнего механизма в возникновение Л-ХЛ был существенно ниже в плацентах женщин при преждевременных родах.

В организме человека гипохлоритный анионрадикал образуется в результате реакции взаимодействия перекиси водорода с ионами хлора. Реакцию катализирует фермент миелопероксидаза (МПО).

Как показали собственные исследования, максимальное содержание МПО наблюдалось в первом триместре беременности. На протяжении беременности содержание фермента снижалось в плацентах женщин обследованных групп. При невынашивании беременности содержание фермента в первом триместре беременности в 4,5 раза превышало уровень МПО в плацентах женщин с физиологическим течением беременности, во втором триместре - в 3 раза как в центральном участке плацент, так и по периферии. В третьем триместре беременности содержание МПО было ниже в 3 и 2,2 раза соответственно в центральном и периферическом участках плацент женщин при преждевременных родах по сравнению с плацентами женщин с физиологической беременностью, завершившейся родами в срок (рис.2 а, б). Более низкое содержание МПО в плацентах женщин в третьем триместре при самопроизвольном преждевременном прерывании беременности приводит к ослаблению микробицидной функции плаценты.

I триместр I! триместр III триместр

□ Невынашивание в Физиологическая беременность

а

В Невынашивание Ш Физиологическая беоеменноеть_

б

Рис.2 а, б. Содержание миелопероксидазы в постмитохондриальной фракции плацент женщин при невынашивании и физиологической беременности на протяжении беременности.

Примечание: **р<0,01, ***р<0,001 по отношению к соответствующим

показателям группы женщин при физиологической беременности

Наряду с МПО в литературе уделяется особое внимание антимикробным свойствам оксида азота (МеИдта Т., Т81еЬап М., 1995). Цитотоксическое действие оксида азота во многом зависит от интенсивности образования N0 и продуктов его метаболизма: нитрита, нитрата, пероксинитрита (Огаг^ешюг М.А., 1996; Мопуа Я. й а1, 2000). В плаценте обнаружено два изофермента ТТО-синтазы: эндотелиальная (III тип) (Е1э Е.Ь. е1 а1., 1995) и индуцибельная (II тип) (МуаН е1 а!., 1997).

Определение динамики активности ЫО-синтазы позволило установить, что на ранних сроках беременности отличий в уровне активности фермента в плацентах женщин

обследованных групп не наблюдалось. На протяжении беременности активность N0-синтазы в плацентах женщин при невынашивании не менялась по центру, уменьшалась по периферии и в третьем триместре была ниже в периферическом участке, чем у женщин с физиологическим течением беременности (рис.3 а, б), что говорит о снижении образования оксида азота.

ЦЕНТР

2-,

I триместр II триместр III триместр

Ш Невынашивание Ш Физиологическая беременность

а

В Невынашивание в Физиологическая беременность

б

Рис.За, б. Уровень активности 1ЧО-синтазы в постмитохондриальиой фракции плацент женщин при невынашивании и физиологическом течении на протяжении

беременности

Примечание: *р<0.05, * *р<0.01 - по отношению к центральному участку плаценты женщин с невынашиванием; Анализ представленных результатов исследований свидетельствует о том, что дисфункция плаценты характеризуется изменением вклада различных АФК в процессы СРО, что приводит к ослаблению ее защитных свойств.

Изучение антиокеидантной системы в постмитохоцдриальной фракции плацент женщин с физиологическим течением беременности и при невынашивании

Содержание эндогенных АФК, образующихся в клетках плаценты, поддерживается на определенном уровне для обеспечения основных метаболических функций плаценты. Это осуществляется за счет функционирования многокомпонентной АОС, разнообразной по механизмам действия и химической структуре. Вклад отдельных компонентов в общий антиокислительный потенциал плаценты различен, в связи с чем важным является исследование резервов антиокислительной защиты в плаценте при физиологической беременности, завершившейся родами в срок и при самопроизвольном прерывании беременности в 28 - 36 недель (преждевременные роды).

Нами не выявлено различий в величине общей антиокислительной активности, в уровнях активностей СОД и каталазы в постмитохондриальных фракциях плацент женщин обследованных групп. Между тем, содержание небелковых SH-групп в центральных и периферических участках плацент женщин с преждевременными родами было меньше по сравнению с уровнем SH-групп в плацентах женщин с физиологической беременностью (рис.4). Основным низкомолекулярным SH-соединением в организме является глутатион, клеточный пул которого формируется в результате динамического равновесия процессов его биосинтеза и деградации.

Уровень активности глутатионпероксидазы (ГП) в плаценте женщин при самопроизвольном прерывании беременности был выше более чем в 2 раза уже в 1 триместре беременности и оставался высоким во II и III триместрах. На протяжении всего срока беременности активность фермента в плаценте женщин при невынашивании превышала более чем в 1,5 раза величину активности фермента в плацентах женщин при физиологическом течении беременности. Активность ГП не зависела от локализации (центр - периферия) фермента в плацентах женщин обследованных групп. Более высокую активность фермента во II триместре при физиологическом течении беременности мы связываем с применением интраамниального введения энзапроста (простагландин Ег а) при прерывании беременности по социальным показаниям (рис. 5).

0 Преждевременные роды я Физиологическая беременность

Периферия

Центр

Рис.4. Содержание небелковых 8Н-групп в постмитохондриальной фракции плацент женщин при физиологической беременности и преждевременных родах.

Примечание: **р<0.01 по отношению к физиологической беременности

ЕЗ Невынашивание в Физиологическая беременность

I триместр II триместр III триместр

I триместр II триместр III триместр

□ Невынашивание В Физиологическая беременность

б

Рис.5 а,б. Активность глутатионпероксидазы в постмитохондриальной фракции плацент женщин с физиологическим течением беременности и при невынашивании на протяжении беременности

Примечание: *** р< 0,001 по отношению к физиологической беременности.

Различий в уровне активности ГР в плацентах женщин с невынашиванием и физиологическим течением не было выявлено на протяжении всей беременности.

Таким образом, в плацентах женщин при невынашивании преобладает более интенсивное использование пула восстановленного глутатиона, чем его пополнение.

В тканях млекопитающих восстановленный глутатион используется, кроме ГП, семейством многофункциональных белков глутатион - Б -трансфераз (Г- Б -Т), основной функцией которых является защита клеток от ксенобиотиков или их микросомальных метаболитов путем трансформации, нековалентного связывания и ковалентного присоединения.

Активность Г- Б -Т в плацентах женщин при физиологической беременности увеличивалась в динамике развития беременности, а при невынашивании оставалась на уровне первого триместра в центральной и периферической областях (рис 6 а,б).

В Физиологическая беременность В Невынашивание

Физиологическая беременность В Невынашивание |

I триместр [I триместр III триместр

ЦЕНТР

I триместр II триместр III триместр

а б

Рис 6 а,б. Активность глутатион-Б-трансферазы в постмитохондриальной фракции плацент женщин с физиологическим течением беременности и при невынашивании на протяжении беременности

Примечание: *р<0.05 по отношению к группе женщин с физиологической беременностью;

** р<0.05 по отношению к значениям 1-го и П-го триместров

Полученные данные позволяют заключить, что при невынашивании в постмитохондриальной фракции плаценты наблюдается дефицит активности глутатионзависимого звена антиокислительной системы.

Следовательно, при самопроизвольном преждевременном прерывании беременности в постмитохондриальной фракции плаценты происходит развитие окислительного стресса, связанное, как и в митохондриях плаценты, с нарушением сбалансированности

между интенсивностью образования АФК и активностью глутатионзависимого звена антиокислительной системы.

Для определения значимости активности ферментов глутатионзависимого звена АОЗ в плацентах обследованных женщин при выявлении риска преждевременного прерывания беременности был проведен на основании ретроспективных данных многофакторный линейный дискриминантный анализ. При многофакторном линейном дискриминантом анализе в качестве переменных были использованы уровни активности ферментов глутатионзависимого звена АОЗ в плаценте, а в качестве зависимой характеристики - факт спонтанного преждевременного прерывания беременности. На основании этого анализа разработана модель расчета индекса возможного преждевременного прерывания беременности (ИППБ), в которой ключевая роль принадлежит функциональному состоянию ГП и Г- S -Т центрального участка плаценты:

ИППБ=0,093 r-S-T(u) - 0,028 ГП(ц) где: ИППБ - индекс возможного преждевременного прерывания беременности r-S-T(u) - значение активности Г-S-T в центральной части плаценты ГП(ц) - значение активности ГП в центральной части плаценты Пороговое значение индекса преждевременного прерывания беременности (ИППБ) равно 1,06. Значения индекса обратно пропорциональны риску развития прерывания беременности, т.е. чем меньше величина индекса, тем выше риск прерывания беременности. Метод расчета риска преждевременного прерывания беременности имеет чувствительность 73,7%, специфичность - 64,7% и точность 70,9% (х2 = 5,80; р = 0,016; ТМФ : р<0,015), что свидетельствует о важной роли уровня активности ГП и Г- S - Т для физиологического течения беременности.

Изучение полиморфизма генов глутатион-8-трансфераз в плацентах женщин при невынашивании и физиологической беременности.

В настоящее время считается, что разный уровень ферментативной активности Г-S-T в организме может быть связан с генетическим полиморфизмом соответствующих генов (Беспалова О.Н., 2001, 2009). Плацентарная Г-S-T детерминирована геном GST Р1.

Известно, что полиморфизм гена GST Р1, обусловленный заменой нуклеотидов в 313 или 341 положениях ДНК последовательности, связан с наличием в плацентах и хорионах трех функционально значимых аллельных вариантов. Аллели В и С кодируют ферменты с пониженной активностью, причем у гомозигот (В/В и С/С) активность фермента ниже, чем у соответствующих гетерозигот (А/В и А/С) (Беспалова О.Н. и соавт., 2001). Вариант

A/A GST PI гена кодирует синтез глутатион - S - трансферазы с нормальной активностью (Lo Hui-Wen, F. Ali-Osman, 1997).

Частота встречаемости генотипов по гену GST Р1 в плацентах женщин при невынашивании не отличалась от таковых в плацентах группы женщин с физиологическим течением беременности. Сочетание генотипов GSTT1 0/0+GSTM1 0/0 у женщин с преждевременным прерыванием беременности встречалось примерно в 4 - 5 раз чаще, чем у женщин с физиологическим течением беременности. Частота встречаемости сочетаний генотипов GST PI D + GSTT1 0/0 и GST PI D + GST Ml 0/0 (D - ослабленная аллель В и/или С) была у женщин с невынашиванием в5-9разив2 раза соответственно чаще, чем у женщин с неосложненным течением беременности. Следует отметить, что сочетание всех трех функционально ослабленных генотипов GSTT1 0/0+ GST Ml 0/0 + GST PI D выявлено в 19% образцов плацент женщин с невынашиванием, тогда как в плацентах женщин с физиологическим течением беременности оно не превышало 4% (рис.7)

Рис.7. Сочетание трех функционально ослабленных генотипов GSTT1 0/0+ GST Ml 0/0 + GST PI D в плаценте женщин при невынашивании и при физиологическом

течении беременности.

Зависимость активности ферментов глутатионзависимого звена от вариантов генотипа по гену GST Р1 в плацентах женщин при невынашивании.

При невынашивании беременности активность Г- S -Т при генотипе по гену GSTP1,

несущем аллели А/С, была в 1,5 раза ниже, чем активность фермента при генотипе по гену

GST Р1, несущем аллели А/А и А/В (рис.8).

Рис.8 Зависимость активности глутатион-8-трансферазы от генотипа по гену GST PI в плацентах женщин с невынашиванием

Примечание: * р < 0,05 по отношению к генотипу АА

Проведенные исследования показали, что во II и III триместрах беременности

величина активности фермента в плацентах женщин при невынашивании была выше при

наличии аллелей АА (рис.9).

I триместр t триместр III триместр

□ GSTP1 (А/А) ген в GSTP1(AB)+GSTP1(AC)

Рис. 9. Активность глутатион-в-трансферазы в плацентах женщин с невынашиванием при различных генотипах по гену GST Р1 на протяжении

беременности.

Примечание: * р < 0,05 по отношению к генотипу по гену GSTPl(AA) Анализ возможной связи глутатионпероксидазной активности в плацентах женщин и вариантами генотипа по гену GST Р1 показал, что ГП в плацентах женщин с невынашиванием зависела от наличия в гене GSTP1 аллеля В (рис.10).

Рис. 10. Зависимость ГП активности от генотипа по гену GST Р1 в плацентах женщин с невынашиванием

Примечание: ** р <0,01 по отношению к А/В генотипу GST Р1 гена.

С целью выявления количественно выраженной зависимости между активностью

ферментов глутатионзависимой системы плаценты и различных вариантов генотипа по

гену GST PL, был использован множественный регрессионный анализ.

Разработанная математическая модель, отражающая зависимость уровня активности Г-S-T от вариантов генотипа по гену GST Р1 (наличие аллелей А, В, или С) может быть представлена следующим уравнением:

Активность Г-S-T = 3,89 + 9,66 (GST PI А) - 8,16 (GST PI С)

R2=0.10 F=3.89 p<0.027

где: GST PI A - наличие аллеля А в генотипе GST PI гена GST PI С - наличие аллеля С в генотипе GST Р1 гена Т.е. величина активности Г-S-T в плаценте непосредственно зависит от наличия аллеля А и отсутствия аллеля С в генотипе GST Р1.

Зависимость уровня активности ГП от вариантов генотипа по гену GST Р1 может быть представлена следующей математической моделью:

Активность ГП =76,88+23,03 • (GST Р1 В) - 0,725 • (срок беременности) R2 = 0.26 F=9,72 р<0.0003

где: GST Р1 В - наличие или отсутствие аллеля В в генотипе по гену GST Р1 срок беременности - в неделях Согласно разработанной модели, активность ГП снижается с увеличением срока беременности и на каждом сроке беременности активность фермента выше при наличии аллеля В в генотипе по гену GST Р1.

Исходя из выше представленных результатов, мы полагаем, что дисфункция плаценты, связанная с уровнем активности ферментов глутатионзависимого звена АОЗ, может быть в ряде случаев генетически детерминирована.

Использование метода хемилюминомстрии для оценки риска невынашивания при угрозе прерывания беременности поздних сроков.

В нашей работе объектом для изучения механизма невынашивания служила плацента, исследование которой возможно лишь после завершения беременности. Для оценки степени риска невынашивания в динамике прогрессирующей беременности целесообразно было использовать регистрацию интенсивности процессов СРО в доступном материале и быстрым, простым методом. Мы попытались оценить возможность использования показателей хемилюминесцентного (ХЛ) анализа для контроля за эффективностью проводимой терапии у женщин с угрозой прерывания беременности.

Как показали результаты проведенного нами исследования, при несложненном течении беременности наблюдалось увеличение уровня интенсивности перекисной ХЛ в сыворотке крови женщин в среднем на 40% по сравнению с величиной ХЛ в сыворотке крови небеременных женщин, что согласуется с данными литературы (Кошелева Н.Г. и соавт.,1980). При угрозе прерывания беременности величина ХЛ в сыворотке крови пациенток достоверно превышала таковую сыворотки крови женщин с неосложненным течением беременности. Инфузии Р-миметика бриканила, сеансы электросна привели к снижению величины хемилюминесценции в сыворотке крови женщин с угрозой прерывания беременности до уровня женщин с физиологической беременностью (рис. 11).

Использование показателей ХЛ анализа позволило выявить нормализацию процессов свободнорадикального окисления при терапии с использованием разных подходов и

препаратов у 50 - 80% обследованных женщин с угрозой прерывания беременности.

На основании полученных данных, можно заключить, что интегральные показатели метода перекисной ХЛ целесообразно использовать в акушерской практике для скрининговой экспресс-диагностики дисфункции плаценты и контроля за эффективностью проводимого лечения наряду с существующими подходами.

Рис.11. Изменение интенсивности ХЛ при лечении угрозы прерывания беременности

Примечание: **р<0,02 по отношению к группе женщин с неосложненной беременностью

Заключение

Результаты наших исследований позволяют обобщить совокупность основных процессов свободнорадикального окисления, приводящих к дисфункции плаценты. Мы полагаем, что окислительный стресс, обусловленный, главным образом, снижением буферной емкости глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты в плаценте на фоне интенсификации процессов ПОЛ играет ключевую роль в качестве патогенетического фактора дисфункции плаценты. Он вызывает метаболические и регуляторные нарушения в плаценте, что в конечном итоге приводит к невынашиванию беременности и неблагоприятным перинатальным исходам.

Окислительный стресс способствует также ослаблению защитной функции плаценты, где главная роль принадлежит комплексу изменений, связанных с низким уровнем содержания МПО, недостаточной активностью МО-синтазы и уровнем активности ГТ, детерминируемой функционально ослабленным генотипом С5ТР1.

Итоги исследований представлены нами в виде схемы (рис.12), которая наглядно отражает роль глутатионзависимого звена антиоксидантной системы плаценты в системном характере метаболических нарушениий, развивающихся в плаценте и приводящих к ее дисфункции и невынашиванию.

Рис.12. Взаимосвязь метаболических и функциональных нарушений в плаценте при невынашивании беременности.

В связи с вышеизложенным очевидно, что одним из ключевых моментов комплексной консервативной терапии и профилактики невынашивания беременности является коррекция окислительного стресса и поддержка глутатионзависимого звена АОЗ в плаценте женщин. При развитии невынашивания беременности для профилактики и терапии данного осложнения беременности вполне оправданным является длительное применение витаминно-минеральных комплексов с антиоксидантным действием.

Для контроля за эффективностью применения антиоксидантных препаратов в акушерской практике целесообразно использовать показатели ХЛ анализа. Применение хемилюминесцентного анализа в акушерской практике может быть ценным в качестве неспецифического, простого и быстрого метода для выявления нарушений и степени их тяжести на протяжении беременности и для оценки эффективности лечения при угрозе прерывания беременности поздних сроков наряду с другими диагностическими приемами.

ВЫВОДЫ

I. Дисфункция плаценты, приводящая к невынашиванию беременности, сопровождается нарушением в ней равновесного состояния про- и антиоксидантных систем, развитием окислительного стресса и эндогенной интоксикацией от периферической части к центральной.

2. В митохондриях плаценты при невынашивании развитие окислительного стресса сопровождается усилением интенсивности прооксидантной системы и ослаблением функционирования глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты.

3. В постмитохондриальной фракции плаценты при физиологической беременности и невынашивании наблюдается разная степень вовлеченности активных кислородных радикалов в процессы свободнорадикального окисления. В патогенезе преждевременных родов процессы СРО связаны с усилением липидной пероксидации в периферическом участке плаценты.

4. При невынашивании беременности регистрируется снижение участия гипохлоритного анионрадикала в процессах свободнорадикального окисления плаценты.

5. Максимальное содержание миелопероксидазы в постмитохондриальной фракции плаценты в динамике физиологической беременности наблюдается в I триместре беременности. Центральная часть плаценты обладает более высоким содержанием фермента по сравнению с периферией на протяжении всей беременности. При самопроизвольном прерывании беременности содержание миелопероксидазы в плаценте в первом триместре в 4.5 раза, во втором - в 3 раза выше, чем при физиологически протекающей беременности. В третьем триместре содержание фермента ниже по центру и по периферии плаценты в 3 и 2,2 раза соответственно по сравнению с таковым при физиологической беременности.

6. Уровень активности NO-синтазы центрального участка плаценты выше уровня активности фермента по периферии плаценты как при физиологической беременности так и при невынашивании. Активность фермента периферического участка плаценты при преждевременных родах ниже на 40% по сравнению с активностью фермента при физиологической беременности.

7. При невынашивании беременности развитие окислительного стресса в постмитохондриальной фракции плаценты связано с изменением активности ферментов глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты. Активность глутатионпероксидазы при невынашивании в 1,5-2 раза выше, а активность глутатион-8-трансферазы в 2,3 раза ниже по сравнению с физиологически протекающей беременностью.

8. Выявлена значимость определения активностей глутатионпероксидазы и глутатион-8-трансферазы в плацентах женщин и рассчитан индекс преждевременного прерывания беременности, пороговое значение которого равно 1,06.

9. Уровень активности глутатион-8-трансферазы в плаценте, согласно разработанной математической модели, характеризуется прямой корреляцией с наличием аллеля А и обратной с наличием аллеля С гена GST Р1. Активность

глутатионпероксидазы на каждом сроке беременности выше при наличии аллеля В в генотипе по гену GST Р1.

10. Метод хемилюминесцентного анализа целесообразно использовать в акушерской практике для скрининговой экспресс-диагностики дисфункции плаценты и контроля за эффективностью проводимого лечения, наряду с существующими диагностическими приемами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью оценки эффективности терапии и прогноза течения осложненной беременности спектр общепринятых обследований рекомендуется дополнить показателями состояния про- и антиоксидантной систем, используя информативный, простой и быстрый метод хемилюминесцентного анализа.

2. Величины активности глутатионпероксидазы и глутатион-8-трансферазы в плаценте женщин имеют важное значение для прогноза невынашивания. Информацию о состоянии глутатионзависимого звена плаценты может дать разработанная математическая модель зависимости активности этих ферментов от наличия аллелей С и В в генотипе по гену GSTP1 беременных женщин.

3. Для коррекции окислительного стресса и поддержки глутатионзависимого звена АОЗ в плаценте женщин при профилактике невынашивания беременности рекомендуется использование в комплексной консервативной терапии тиолсодержащих антиоксидантов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в журналах по перечню ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации

1. Генотипический и биохимический анализ плацент у женщин с самопроизвольным досрочным прерыванием беременности. /Т.Э. Иващенко, Г.К. Парцалис, В.М. Прокопенко, Н.Г. Павлова, A.B. Арутюнян, В.С.Баранов //Журнал акушерства и женских болезней. - 2006. - T.LV, в.2. - С.58 - 63.

2. Глутатионзависимая система антиоксидантной защиты плаценты при преждевременных родах. / В.М.Прокопенко, Г.К.Парцалис, Н.Г.Павлова, С.О.Бурмистров, А.В.Арутюнян //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2002. - №5. - С. 511 - 513.

3. Миелопероксидаза в плаценте при преждевременных родах. /В.М. Прокопенко, Г.М.Алешина, Е.В.Фролова, В.В.Ананьева, В.Н.Кокряков, А.В.Арутюнян.// Вопросы медицинской химии. - 2002. - Т. 48, вып. 4. - С. 378 - 380.

4. Павлова Н.Г. Прокопенко В.М., Парцалие Г.К. Значение ферментов глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты для прогноза невынашивания беременности. /Н.Г. Павлова, В.М. Прокопенко, Г.К. Парцалие // Журнал акушерства и женских болезней. - 2010. - T.LIX, вып 2 - С. 65 - 68.

5. Применение хемилюминометрии при угрозе прерывания беременности поздних сроков. /В.М. Прокопенко, Н.Г. Кошелева, Т.П. Вошева., Е.В. Фролова, Т.М. Кроль, П.С. Бузурукова // Акушерство и гинекология. - 1999. - №4. - С. 44 - 45.

6. Прокопенко В.М. Глутатионзависимая система антиоксидантной защиты в плаценте при невынашивании беременности./В.М. Прокопенко, Г.К. Парцалие, С.О. Бурмистров // Физиология человека. - 2006. - Т.32, №2. - С. 197 - 200.

7. Прокопенко В.М. Миелопероксидаза в плаценте человека при невынашивании беременности / В.М. Прокопенко, Г.М. Алешина // Физиология человека. - 2006. -Т.32,№4.-С. 486-488.

8. Прокопенко В.М. Роль окислительного стресса в патогенезе гестоза. /В.М. Прокопенко // Журналъ акушерства и женскихъ болезней. - 2007. - Т. .LVI, вып 4. - С. 31 - 36.

9. Прокопенко В.М. Селеносодержащие белки и беременность /В.М.Прокопенко //Акушерство и женские болезни. - 2002. - вып.4. - С. 73 - 76.

10. Прокопенко В.М. Эндогенная интоксикация в плаценте при преждевременных родах. /В.М. Прокопенко // Журнал акушерства и женских болезней. - 2011. - T.LX, вып.1. -С. 53 - 56.

П.Прокопенко В.М.. Прооксидантная и антиоксидантная системы в митохондриях плаценты при ее дисфункции. /В.М. Прокопенко, Н.Г. Павлова, A.B. Арутюнян // Журнал акушерства и женских болезней. - 2010. - T.LIX, вып.5. - С.56 - 63.

12. Прокопенко В.М.. Свободнорадикальные процессы в плаценте при преждевременных родах. /В.М. Прокопенко // Журнал акушерства и женских болезней. - 2000. - №2. - С. 37 - 40.

13. Свободнорадикальное окисление в тканях последа при недоношенной беременности. /В.М. Прокопенко, A.B. Арутюнян, Т.У. Кузьминых, Е.Е. Говорова, Е.В. Фролова //Вопросы медицинской химии. - 1995. - Т. 41, № 3. - С. 53 - 56.

14. Свободнорадикальное окисление и антиокислительная активность в тканях плаценты при преждевременных родах. /В.М. Прокопенко, A.B. Арутюнян, Е.В. Фролова, Т.У. Кузьминых, Э.К. Айламазян // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1997. - Т. 124, № 12. - С. 632 - 634.

15. Уровень перекисной хемилюминесценции в сыворотке крови у здоровых и больных сахарным диабетом типа 1 женщин вне и в динамике беременности. /С.И. Назарова,

В.М. Прокопенко, Н.Г. Кошелева, A.B. Арутюнян // Журнал акушерства и женских болезней. - 2006. - T.LV, в.2. - С.14 - 19.

Статьи, изданные в других журналах, сборниках трудов конференций, симпозиумов

и конгрессов

16. Арутюнян A.B. Нарушение свободнорадикальных процессов при невынашивании беременности. /A.B. Арутюнян, В.М. Прокопенко, Н.Г. Павлова //Российская н.-п. конференция «Невынашивание беременности и недоношенный ребенок». -Петрозаводск. - 2002. - С. 23 - 24.

П.Кузьминых Т.У. Новые подходы к лечению женщин с угрозой преждевременного прерывания беременности. /Т.У. Кузьминых, A.B. Арутюнян, В.М. Прокопенко // Вестник Российской Ассоциации акушеров-гинекологов. - 1997. - №3.-С.49-51.

18. Кузьминых Т.У. Свободнорадикальное окисление и иммуноморфология тканей после при недонашивании беременности. /Т.У. Кузьминых, В.М. Прокопенко, A.B. Арутюнян // «Актуальные вопросы физиологии и патологии репродуктивной функции женщин». Мат. 22-ой научной сессии НИИ АИГ им. Д.О.Отта РАМН, 1993. - С.120 -123.

19. Павлова Н.Г. Особенности антиоксидантного статуса в плаценте при невынашивании беременности. Материалы научной конференции. «Механизмы типовых паталогических процессов». /Н.Г. Павлова, Г.К.Парцалис, В.М. Прокопенко // Медицинский Академический журнал. - 2003. - С. 165 -166.

20. Парцалис Г.К. Глутатионзависимая система антиоксидантной защиты при физиологической беременности и преждевременных родах. /Т.К. Парцалис, Н.Г. Павлова, В.М. Прокопенко // Российская н.-п. конференция «Невынашивание беременности и недоношенный ребенок». - Петрозаводск. - 2002. - С.88.

21. Прокопенко В.М. Антиоксидантная активность в тканях плаценты женщин при невынашивании беременности. /В.М. Прокопенко, Г.К. Парцалис, A.B. Арутюнян //Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 2004. - Т. 90, №8. - С. 449.

22. Прокопенко В.М. Влияние низкомолекулярных соединений на люминолзависимую хемилюминесценцию, обусловленную действием продуктов миелопероксидазной реакции в ткани плаценты./В.М. Прокопенко, Е.В. Фролова, Т.У. Кузьминых // Сб. трудов «Актуальные вопросы физиологии и патологии репродуктивной функции женщины» Санкт-Петербург. - 1999. - С. 362 - 364.

23. Прокопенко В.М. О механизме люминолзависимой хемилюминесценции в тканях плаценты./В.М. Прокопенко, Е.В. Фролова, A.B. Арутюнян // «Актуальные вопросы

физиологии и патологии репродуктивной функции женщин.» Мат. 23 научной сессии НИИ АИГ им. Д.О. Отта РАМН. - 1994. - С. 182.

24. Прокопенко В.М. Процессы свободнорадикального окисления в плаценте при преждевременных родах./В.М. Прокопенко, A.B. Арутюнян // Материалы 2 Российского Форума "Мать и дитя". М. - 2000. - С. 126 - 127.

25. Прокопенко В.М. Свободнорадикальные процессы в плаценте при преждевременных родах. /В.М. Прокопенко, A.B. Арутюнян // Национальная, научно-практическая конференция с международным участием «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека». - Смоленск, Россия. - 2001. - С. 253 - 254.

26. Прокопенко В.М. Содержание миелопероксидазы в плаценте человека при патологии беременности. /В.М. Прокопенко, Алешина Г.М. // Тезисы научного форума «Мать и дитя». - Казань. - 2007. - С. 130.

27. Прокопенко В.М. Хемилюминесцентное исследование процессов свободнорадикального окисления в плаценте и в плацентарных оболочах при преждевременном прерывании беременности./В.М. Прокопенко, Т.И. Кузьминых, A.B. Арутюнян // «Современные проблемы диагностики и лечения нарушений репродуктивного здоровья женщин». Сб. трудов 1 Северо-Кавказского съезда акушеров-гинекологов, г. Ростов. - 1994. - С.168.

28. Прокопенко В.М.. Значение активности ферментов глутатионзависимой антиоксидантной системы плаценты для прогноза невынашивания беременности. /В.М. Прокопенко, Н.Г. Павлова, Г.К. Парцалис // Тезисы научного форума «Мать и дитя». - Казань. - 2007. - С. 130 - 131.

29. Свободнорадикальные процессы и антиоксидантная система в плаценте при невынашивании беременности./В.М. Прокопенко, А.В.Арутюнян, Г.К. Парцалис, С.О. Бурмистров, Н.Г. Павлова //3-ий съезд Биохимического общества. - СПб. - 2002. - С. 206.

30. Сравнение различных методов определения антиоксидантной активности сыворотки крови беременных и небеременных женщин./ С.О. Бурмистров, Т.И. Опарина, В.М. Прокопенко, A.B. Арутюнян // Клиническая лабораторная диагностика. - 1997. - № 11. - С.14- 17.

31. Участие миелопероксидазы и NO-синтетазы в процессах свободнорадикального окисления в плаценте человека./ A.B. Арутюнян, В.М. Прокопенко, Т.И. Опарина, Е.В. Фролова //Сборник «Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии», Спб МУ им. И.П.Павлова. - 1998. - Т. 2. - С. 439-443.

32. Хемилюминесценция сыворотки крови у здоровых беременных при лечении угрозы прерывания беременности электросном. /Т.П. Вошева, В.М. Прокопенко В.М., А.В. Арутюнян, Т.М. Кроль, Е.Е.Смагина // Сб. трудов 24 научной сессии НИИ АИГ им. Д.О. Отта РАМН. - 1995. - С. 55 - 56.

33. Arutjunyan A. On the mechanism of free redical oxidation in human placenta. /А. Arutjunyan, V. Prokopenko, E. Frolova // 23 -rd Metting of FEBS, Basel, Switzerland. -1995.-P.102.

34. Chemiluminescent stady of free radicals oxidation in human placenta at preterm termination of pregnancy./A. Arutjunyan, V. Prokopenko, T. Kuzminikh , E. Frolova // International Conf. on Clinical Chemiluminescence, Berlin. - 1994. - P.105.

35. Kuzminikh T.U Free-radical oxidation in placental tissues in preterm delivery./T.U. Kuzminikh., V.M. Prokopenko // Baltic International Conf. of Obstetrics and Gynecology Turku, Finland. - 1993. - P.50.

36. Prokopenko V. Free radical oxidation and antioxidant activity in placenta at premature delivery. N. Prokopenko, A. Arutjunyan // 5 -th Annual Meeting of the Oxygen Society, San-Francisco. - 1998. - P.54.

37. Prokopenko V.M Processes of free redical oxidation in placenta at premature labor. /V.M. Prokopenko, E.V. Frolova, V.V. Ananieva, S.O. Burmistrov // The 7-th Baltic Sea Congress on Obstetrics and Gynecology, Saint-Petersburg, 12-15 May. - 1999. - P.127.

38. Prokopenko V.M. Effects of low molecular compounds on the intensity of luminol-dependent chemiluminescence in placenta at premature delivery ./V.M. Prokopenko, E.V. Frolova, A.V. Arutjunyan // Международная конференция "Свободнорадикальные процессы",- 1999.-С. 776.

39. Prokopenko V.M. Placental gluthatione S-transferase in prengnancy miscarriage. /V.M. Prokopenko, G.K. Partsalis, N.G. Pavlova // International Conf. «Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health», Smolensk, Russia. - 2003. - P. 436 - 437.

40. Prokopenko V.M. Placental Gluthatione-dependent system of antioxidant defence in recurrent abortion. /V.M. Prokopenko, G.K. Partsalis, S.O. Burmistrov, A.V. Arutjunyan, N.G. Pavlova // International Conf. «Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health», Smolensk, Russia. - 2003. - P. 140 - 141.

Список сокращений, используемых в автореферате

АОС - антиоксидантная система

АФК - активные формы кислорода

Г - Б - Т - глутатион - Э - трансфераза

ГП - глутатиопероксидаза

ГР - глутатионредуктаза

ИППБ - индекс преждевременного прерывания беременности

Л-ХЛ - люминолзависимая хемилюминесценция

МВ - максимальная вспышка

МДА - малоновый альдегид

МПО - миелопероксидаза

Н2О2 - перекись водорода

ОАА - общая антиоксидантная активность

ОН" - гидроксильный радикал

ПОЛ - перекисное окисление липидов

СЮ" - гипохлоритный анионрадикал

СОД - супероксиддисмутаза

СРО - свободнорадикальное окисление

СС - светосумма

ХЛ - хемилюминесценция

Подписано в печать 02.06.11 Формат 60х841/]б Цифровая Печ. л. 2.5 Уч.-изд.л. 2.5 Тираж 100 Заказ 01/06 печать

Отпечатано в типографии «Фалкон Принт» (197101, г. Санкт-Петербург, ул. Большая Пушкарская, д. 54, офис 8)

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Прокопенко, Валентина Михайловна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Активные формы кислорода и пути их образования в организме.

1.2. Повреждающее действие активных форм кислорода на молекулярные компоненты клетки.

1.3. Биологическая роль активных форм кислорода.

1.4. Антиоксидантная защита организма.

1.5. Окислительный стресс как один из патогенетических механизмов дисфункции плаценты.

1.6. Генетические факторы как одна из возможных причин усиления окислительного стресса при невынашивании беременности.

1.7. Хемилюминесцентный анализ как быстрый метод регистрации процессов свободнорадикального окисления в акушерской практике.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.

2.1. Получение постмитохондриальной фракции плаценты.

2.1.1. Выделение митохондриальной фракции плаценты.

2.1.2.0пределение интенсивности процессов свободнорадикального окисления в ткани.

2.1.3. Измерение интенсивности перекисной хемилюминесценции в сыворотке крови.

2.1.4. Метод количественного определения диеновых конъюгатов.

2.1.5. Определение вторичных продуктов ПОЛ, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-тест).

2.1.6. Метод определения окислительной модификации белков по уровню карбонильных производных.

2.1.7. Определение содержания миелопероксидазы иммуноферментным методом.

2.1.8. Определение активности М)-синтазы.

2.1.9. .Определение активности пероксидаз.

2.2. Определение общей антиоксидантной активности.

2.2.1. Определение небелковых тиоловых групп с помощью реактива Эллмана.

2.2.2. Определение активности каталазы.

2.2.3. Метод определения активности супероксиддисмутазы.

2.2.4. Определение активности глутатионпероксидазы.

2.2.5. Определение активности глутатионредуктазы.

2.2.6. Определение активности глутатион-8-трансферазы.

2.2.7. Определение показателей эндогенной интоксикации.

2.2.8. Определение белка.

2.2.9. Выделение ДНК.

2.3. Постановка полимеразной цепной реакции (ПЦР).

2.3.1. Электрофорез в полиакриламидном геле.

2.3.2. Идентификация полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ-анализ).

2.3.3. Методы статистической обработки.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Структура невынашивания беременности в анамнезе женщин основной группы и группы сравнения.

3.2. Изучение процессов свободнорадикального окисления и уровня антиоксидантной защиты в митохондриях плацент женщин основной группы и группы сравнения.

3.3. Оценка интенсивности процессов свободнорадикального окисления в постмитохондриальной фракции плацент женщин основной группы и группы сравнения.

3.3.1. Механизм люминолзависимой хемилюминесценции в тканях плацент женщин основной группы и группы сравнения.

3.3.2 Изучение миелопероксидазы постмитохондриальной фракции плацент у женщин основной группы и группы сравнения на протяжении беременности.

3.3.3 Изучение NO-синтазной активности в постмитохондриальной фракции плацент женщин основной группы и группы сравнения на протяжении беременности.

3.4. Изучение антиоксидантной системы в постмитохондриальной фракции плацент женщин основной группы и группы сравнения.

3.4.1. Активность глутатионзависимой системы антиокислительной защиты в постмитохондриальной фракции плацент женщин основной группы и группы сравнения на протяженииб еременности.

3.4.2. Определение показателей эндогенной интоксикации в постмитохондриальной фракции плацент женщин основной группы и группы сравнения.

3.4.3. Значение определения активности ферментов глутатионзависимого звена антиоксидантной системы плаценты для прогноза риска прерывания беременности.

3.5. Анализ показателей про- антиоксидантной систем в плацентах женщин при преждевременных родах и беременности, осложненной гестозом, по сравнению с физиологическими показателями.

3.6. Изучение полиморфизма генов глутатион-Б-трансфераз в плацентах женщин основной группы и группы сравнения.

3.6.1. Зависимость активности глутатион-Б-трансферазы от вариантов генотипа по гену GST Р1 в плацентах женщин основной группы.

3.6.2. Зависимость активности глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы от вариантов генотипа по гену GST Р1 в плацентах женщин основной группы.

3.7. Математические модели взаимосвязи активности ферментов глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты системы и вариантов генотипа по гену GST Р1 плаценты у женщин.

3.8. Использование метода хемилюминометрии для оценки риска невынашивания при угрозе прерывания беременности поздних сроков.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Про- и антиоксидантная системы при дисфункции плаценты"

Актуальность темы. Плацента представляет собой орган, который играет динамичную роль в процессах взаимодействия двух организмов - матери и плода. Высокий темп развития плаценты, растущие потребности плода сопровождаются особыми требованиями к метаболическим процессам, лежащим в основе функциональной деятельности плаценты. Исследование особенностей метаболических процессов в развивающейся при физиологической беременности плаценте дает представление о путях их координации в функциональной системе мать-плацента-плод. Один из таких фундаментальных механизмов биохимической адаптации, который обеспечивает регуляцию метаболических процессов в плаценте как в физиологических условиях так и при акушерской патологии, связан с системами генерации активных форм кислорода и функциональным состоянием многокомпонентной антиоксидантной защиты [119, 182, 373, 404].

Дисфункция плаценты, являясь универсальным механизмом акушерской патологии, нередко обуславливает развитие плода в условиях хронической гипоксии и/или сопровождается его гипотрофией с последующим спонтанным или индуцированным преждевременным прерыванием беременности.

Каскад нарушений метаболизма в плаценте при самопроизвольном преждевременном прерывании беременности может служить моделью для изучения универсальных механизмов, представляющих собой срыв адаптационно-гомеостатических реакций поддержания адекватного обмена между организмами матери и плода [76, 95].

Физиологическая беременность характеризуется развитием окислительного стресса, являющегося одним из центральных механизмов общей системы адаптации к новым условиям организма женщины, при котором наблюдается сбалансированное состояние на более высоком уровне прооксидантной и антиоксидантной систем. При физиологически протекающей беременности состояние окислительного стресса возникает в период формирования артериальной циркуляции и увеличения напряжения кислорода в плаценте. Окислительный стресс выполняет в этой ситуации важные физиологические функции, участвуя в запуске механизмов дифференцировки клеток [82]. В кратковременный период относительного дисбаланса между генерацией и элиминированием активных форм кислорода (АФК) происходит адаптация механизмов системы антиоксидантной защиты к нарушению физиологического равновесия. При этом эффективность антиоксидантной системы зависит не столько от абсолютных величин отдельных компонентов системы, сколько от соотношения между ними. Неспособность системы антиоксидантной защиты (АОЗ) противостоять усилению процессов свободнорадикального окисления приводит к значительному ослаблению метаболической и детоксицирующей функций плаценты.

В последнее время постоянно растет количество работ, посвященных роли систем генерации активных форм кислорода и антиоксидантной системы в формировании метаболических и детоксицирующих функций плаценты. Эти исследования проводятся как при физиологической беременности, так и при акушерской патологии, в том числе, невынашивании. Наиболее полно представлены в литературе данные о соотношении антиоксидантной и прооксидантной систем в плаценте женщин, беременность которых осложнена гестозом [246, 289, 310, 390]. Тем не менее, многие вопросы, связанные с развитием дисфункции плаценты в условиях окислительного стресса на протяжении беременности, еще весьма далеки от разрешения.

В литературе практически отсутствуют сведения о соотношении систем образования АФК и их элиминации на этапах беременности в разных зонах плаценты (центральные и периферические участки) при акушерских и экстрагенитальных заболеваниях беременных. Центральная зона плаценты, по данным .ШетрзШск и соавт. (2003), лучше оксигенирована, чем периферия, благодаря направлению потока материнской крови. Однако, по мнению авторов, центральные ворсины по сравнению с периферическими характеризуются большей морфологической незрелостью, что может свидетельствовать о функциональных особенностях и значимости центральной и периферической зон плаценты при ее дисфункции [254].

Антиоксидантную систему, компоненты которой защищают организм от' избыточного образования АФК, ряд авторов рассматривает как единую, интегрируемую и регулируемую структуру, находящуюся под генетическим контролем [106, 152, 206]. Антиоксидантную защиту организма рассматривают как многокомпонентную систему, проявляющую специфическую и неспецифическую активность [45]. Наиболее важным и эффективным звеном антиоксидантной защиты является система антиоксид антных ферментов: супероксиддисмутаза, катал аза, глутатионпероксидаза, глутатионредуктаза, глутатион-Б-трансфераза.

Глутатионзависимое звено антиоксидантной системы осуществляет разрушение перекиси водорода, восстановление нестойких органических гидропероксидов в стабильные соединения - окси-кислоты, а также защищает клетки от продуктов перекисного окисления липидов посредством их восстановления. К этому звену относят глутатионпероксидазу (КФ 1.11.1.12), глутатионредуктазу (КФ 1.6.4.2), глутатион-8-трансферазу (КФ 2.5.1.18) и окислительно-восстановительную систему глутатиона. Глутатионзависимое звено антиоксидантной системы является частью системы ферментов детоксикации ксенобиотиков. Гены суперсемейства глутатион-8-трансфераз (МІ, Т1 и Р1) контролируют синтез ферментов второй фазы детоксикации и характеризуются значительным популяционным полиморфизмом.

Сведений об активности глутатионзависимой антиоксидантной системы и вкладе генетически детерминированной составляющей в изменение буферной емкости глутатионзависимого звена антиоксидантной системы в плаценте при невынашивании беременности малочисленны и неоднозначны. Оценок генетической вариабельности полиморфных локусов генов, вовлеченных в формирование глутатионзависимого звена АОС при самопроизвольном прерывании беременности, явно недостаточно [14, 15, 419].

Исходя из выше сказанного, актуальным представляется выяснение роли про- и антиоксидантной систем плаценты в патогенезе метаболических и функциональных нарушений, развивающихся в плаценте человека при наиболее распространенном в акушерской практике осложнении - синдроме плацентарной недостаточности, что открывает реальные возможности для осуществления рациональной, ранней профилактики и научно-обоснованной терапии данной патологии. Цель исследования.

Комплексная оценка состояния про- и антиоксидантной систем плаценты при физиологической беременности и акушерской патологии, сопровождающейся дисфункцией плаценты и приводящей к невынашиванию беременности, для выявления значения генерации активных кислородных метаболитов и ферментативного звена антиоксидантной защиты в развитии плацентарной недостаточности.

Для достижения цели работы были поставлены следующие задачи исследования:

1. Провести сравнительную оценку интенсивности свободнорадикального окисления и ферментативного звена антиоксидантной защиты в митохондриях плаценты при физиологически протекающей беременности и невынашивании беременности.

2. Исследовать механизм генерации активных форм кислорода в постмитохондриальной фракции плаценты.

3. Провести сравнительную оценку интенсивности хемилюминесценции, содержания продуктов перекисного окисления липидов и окислительной модификации белков в постмитохондриальной фракции плаценты при физиологической беременности и невынашивании.

4. Исследовать активность NO-синтазы и миелопероксидазы в центральной и периферической областях плаценты на протяжении физиологической беременности и при невынашивании.

5. Сопоставить величины общей антиокислительной активности, активности ферментативного звена антиоксидантной системы в центральной и периферической областях плаценты при физиологическом течении беременности и невынашивании.

6. Исследовать состояние глутатионзависимой антиоксидантной системы в центральной и периферической областях плаценты на протяжении физиологической беременности и при невынашивании.

7. Выявить частоту встречаемости функционально ослабленных сочетаний генов семейства GST (GST PI, GST М, GST Т) в плаценте женщин при невынашивании и выяснить зависимость между вариантами генотипа GST Р1 и уровнем активности ферментов глутатионзависимой антиоксидантной системы.

8. Выявить значение системных нарушений глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты плаценты в патогенезе невынашивания беременности.

9. Оценить вклад прооксидантной и антиоксидантной систем плаценты в механизм патогенеза ее дисфункции, приводящего к акушерской патологии (невынашиванию беременности).

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Установлены системные нарушения в функционировании антиоксидантной и прооксидантной систем плаценты при ее дисфункции.

Впервые проведено комплексное исследование состояния прооксидантной и антиоксидантной систем плаценты у женщин при физиологическом течении беременности и при невынашивании. Показано, что спонтанное преждевременное прерывание беременности происходит в условиях развития окислительного стресса в митохондриях и постмитохондриальной фракции периферийного участка плаценты, где на фоне повышения уровня интенсивности процессов пероксидации наблюдается недостаточное увеличение общей емкости антиоксидантной защиты и ослабление вне зависимости от локализации ее глутатионзависимого звена.

Впервые установлено, что возникновение люминолзависимой хемилюминесценции в плацентах женщин связано с участием одновременно двух механизмов: СОД-зависимого (присутствие Ог и ОН' радикалов) и СОД-независимого (наличие гипохлоритного анион радикала). При самопроизвольном прерывании беременности отмечается существенное уменьшение реакций, протекающих по СОД-независимому механизму, связанное с ограничением вовлеченности гипохлоритного анионрадикала в процессы свободнорадикального окисления в плаценте.

Впервые выявлено изменение содержания миелопероксидазы, катализирующей реакцию образования гипохлорита, в плацентах при физиологически протекающей беременности и при невынашивании, возникшем на разных сроках беременности.

Показано, что снижение активности ЫО-синтазы в периферической части плацент женщин определяет снижение уровня защитно-приспособительных реакций, обеспечивающих течение беременности.

Проведено комплексное исследование глутатионзависиной антиоксидантной системы при физиологическом течении беременности и при невынашивании. Впервые на основании определения активности ферментов глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты в плацентах и хороионах установлен индекс преждевременного прерывания беременности, абсолютное значение которого обратно пропорционально риску развития прерывания беременности.

Изучена встречаемость различных вариантов аллелей генов GST, кодирующих синтез глутатионзависимых ферментов в плацентах беременных женщин с самопроизвольным преждевременным прерыванием беременности, и впервые обнаружено, что невынашивание беременности сочетается с высокой частотой встречаемости функционально ослабленных сочетаний аллелей этих генов.

Впервые показано, что активность глутатионпероксидазы зависит от наличия аллеля В в генотипе GST Р1, а активность глутатион-8-трансферазы плаценты имеет прямую зависимость с наличием аллеля А и отсутствием аллеля С в генотипе GST Р1.

НАУЧНО-ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

РАБОТЫ.

Работа вносит существенный вклад в понимание патогенетических механизмов развития дисфункции плаценты и дает углубленное представление о роли про - и антиоксидантных систем в особенностях ее формирования при невынашивании беременности. Проведенные исследования позволяют оценить роль индивидуальных звеньев исследуемых систем в развитии дисфункции плаценты, сопровождающейся усилением окислительного стресса и спонтанным преждевременным прерыванием беременности разных сроков.

Представленная модель прогноза спонтанного преждевременного прерывания беременности позволяет оценить возможность исхода беременности от активности ферментов глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты в центральной части плаценты: глутатионпероксидазы и глутатион-8-трансферазы.

Полученные данные о снижении емкости глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты при невынашивании беременности являются основанием для научно обоснованной коррекции метаболических и функциональных нарушений плаценты, что позволит целенаправленно осуществлять профилактику осложнений у беременных.

Выявленные зависимости уровней активности глутатионзависимых ферментов от вариантов генотипа по гену GST Р1 предполагают дифференцированный подход при назначении лечебных препаратов антиоксидантной терапии у женщин с угрозой прерывания беременности.

Впервые проведено использование быстрого, методически несложного метода хемилюминометрического анализа сыворотки крови для оценки эффективности лечения при угрозе прерывания беременности. Показана диагностическая возможность использования хемилюминометрии в качестве дополнительного метода для экспресс-диагностики дисфункции плаценты и контроля за эффективностью проводимого лечения при угрозе прерывания беременности.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. В митохондриях плаценты при самопроизвольном преждевременном прерывании беременности наблюдается развитие окислительного стресса, который сопровождается усилением интенсивности прооксидантной системы и ослаблением функционирования глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты.

2. В постмитохондриальной фракции плаценты при неосложненном течении беременности и самопроизвольном досрочном ее прерывании наблюдается разная степень вовлеченности активных радикалов в процессы свободнорадикального окисления. При невынашивании беременности снижено участие гипохлоритного анионрадикала и оксида азота в процессах СРО в плаценте.

3. Интенсификация процессов липидной пероксидации в постмитохондриальной фракции периферического участка плаценты приводит к преждевременным родам.

4. Уровень миелопероксидазы и активности NO-синтазы в плаценте на протяжении беременности тесно связан с ослаблением защитной функции плаценты.

5. Развитие окислительного стресса в постмитохондриальной фракции плаценты при самопроизвольном преждевременном прерывании беременности связано с изменением уровня активности глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты и нарушением сбалансированности про- и антиоксидантной систем.

6. Низкая активность глутатион-8-трансферазы в плаценте при невынашивании беременности обусловлена сочетанием функционально ослабленных аллелей генотипа GST Р1.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ И ПУБЛИКАЦИИ

Основные положения диссертации представлены на следующих научных форумах:

Научной сессии НИИ АИГ им. Д.О.Отта «Актуальные вопросы физиологии и патологии репродуктивной функции женщин (Санкт-Петербург, 1993, 1994, 1999).

1-ом Северо-кавказском съезде акушеров-гинекологов (Ростов, 1994).

Международной конференции «Clinical Chemiluminescence» (Берлин,

1994).

5-th Annual mitting of the oxygen society (Сан-Франциско, 1994).

7-ом конгрессе «Акушерство и гинекология» стран Балтийского моря (Санкт-Петербург, 1999).

Российском форуме «Мать и дитя» (Москва, 2000; Казань,2007, Москва, 2010).

Конференции с международным участием «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека» (Смоленск, 2001, 2003).

Научно-практической конференции «Невынашивание беременности и недоношенный ребенок» (Петрозаводск, 2002).

3-ем съезде Биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002).

Международном экологическом форуме «Environment and human health» (Санкт-Петербург,2003).

Конференции «Механизмы типовых патологических процессов» (Санкт-Петербург, 2003, 2006)

Клинические наблюдения проводились в отделении патологии беременности НИИАГ им. Д.О. Отта СЗО РАМН (руководитель - проф., д.м.н. О.Н. Аржанова). Генетические исследования проводили в лаборатории пренатальной диагностики наследственных болезней НИИАГ им. Д.О. Отта СЗО РАМН с участием автора (руководитель - член-кор. РАМН, проф. д.м.н. B.C. Баранов). Биохимические исследования были выполнены автором лично в лаборатории биохимии с клинико-диагностическим отделением НИИАГ им. Д.О. Отта СЗО РАМН (руководитель - проф., д.б.н. A.B. Арутюнян). Определение миелопероксидазы проводилось самостоятельно на базе лаборатории общей патологии НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН (руководитель - проф., д.б.н. В.Н. Кокряков). Обработка, анализ и интерпретация полученных данных выполнены автором лично.

По теме диссертации вышло 40 публикаций, в том числе 15 статей - в изданиях, рекомендованных ВАК.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертация изложена на 229 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 24 таблицами и 30 рисунками. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 422 источника, в том числе 134 отечественных и 288 зарубежных.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Прокопенко, Валентина Михайловна

ВЫВОДЫ.

1. Дисфункция плаценты, приводящая к невынашиванию беременности, сопровождается нарушением в ней равновесного состояния про- и антиоксидантных систем, развитием оксилительного стресса и эндогенной интоксикацией от периферической части к центральной.

2. В митохондриях плаценты при невынашивании развитие окислительного стресса сопровождается усилением интенсивности прооксидантной системы и ослаблением функционирования глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты.

3. В постмитохондриальной фракции плаценты при физиологической беременности и невынашивании наблюдается разная степень вовлеченности активных кислородных радикалов в процессы свободнорадикального окисления. В патогенезе преждевременных родов процессы СРО связаны с усилением липидной пероксидации в периферическом участке плаценты.

4. При невынашивании беременности регистрируется снижение участия гипохлоритного анионрадикала в процессах свободнорадикального окисления плаценты.

5. Максимальное содержание миелопероксидазы в постмитохондриальной фракции плаценты в динамике физиологической беременности наблюдается в I триместре беременности. Центральная часть плаценты обладает более высоким содержанием фермента по сравнению с периферией на протяжении всей беременности. При самопроизвольном прерывании беременности содержание миелопероксидазы в плаценте выше в первом триместре в 4.5 раза, во втором - в 3 раза, чем таковое при физиологически протекающей беременности. В третьем триместре содержание фермента ниже по центру и по периферии плаценты в 3 и

2,2 раза соответственно по сравнению с таковым при физиологической беременности.

Уровень активности NO-синтазы центрального участка плаценты выше уровня активности фермента по периферии плаценты как при физиологической беременности так и при невынашивании. Активность фермента периферического участка плаценты при преждевременных родах ниже на 40% по сравнению с активностью фермента при физиологической беременности.

При невынашивании беременности развитие окислительного стресса в постмитохондриальной фракции плаценты связано с изменением активности ферментов глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты. Активность глутатионпероксидазы при невынашивании беременности выше в 1,5-2 раза, а активность глутатион- S-трансферазы ниже в 2,3 раза таковых в плацентах женщин при физиологически протекающей беременности.

Выявлена значимость определения активности глутатионпероксидазы и глутатион-8-трансферазы в плацентах женщин и рассчитан индекс преждевременного прерывания беременности, пороговое значение которого равно 1,06. Уровень активности глутатион-8-трансферазы в плаценте, согласно разработанной математической модели, характеризуется прямой корреляцией с наличием аллеля А и обратной с наличием аллеля С гена GST Р1. Активность глутатионпероксидазы на каждом сроке беременности выше при наличии аллеля В в генотипе по гену GST Р1.

Метод хемилюминесцентного анализа целесообразно использовать в акушерской практике для скрининговой экспресс-диагностики дисфункции плаценты и контроля за эффективностью проводимого лечения, наряду с существующими диагностическими приемами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

С целью оценки эффективности терапии и прогноза течения осложненной беременности спектр общепринятых обследований рекомендуется дополнить показателями состояния про- и антиоксидантной систем, используя информативный, простой и быстрый метод хемилюминесцентного анализа.

Величины активности глутатионпероксидазы и глутатион-S-трансферазы в плаценте женщин имеют важное значение для прогноза невынашивания. Информацию о состоянии глутатионзависимого звена плаценты может дать разработанная математическая модель зависимости активности этих ферментов от наличия аллелей С и В в генотипе по гену GST Р1 беременных женщин.

Для коррекции окислительного стресса, поддержки глутатионзависимого звена АОЗ в плаценте женщин и для профилактики невынашивания беременности рекомендуется использование в комплексной консервативной терапии тиолсодержащих антиоксидантов.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Прокопенко, Валентина Михайловна, Санкт-Петербург

1. Айламазян Э.К. Акушерство / Э.К.Айламазян. С.-Пб. ¡Специальная литература, 1997 - 496 с.

2. Аксенова В.М. Биохимические методы диагностики эндогенной интоксикации: методические рекомендации / В.М. Аксенова; ред. И.П. Корюкова. Пермь. - 2005. - С. 15-25.

3. Аксенова В.М. Диагностическая ценность определения уровня веществ средней молекулярной массы в плазме новорожденных детей, перенесших внутриутробную гипоксию / В.М. Аксенова, A.B. Старкова // Перм. мед. журнал 1998. - Т. 15, № 1 - С. 25 - 28.

4. Андреев A.A. Метаболизм активных форм кислорода в митохондриях. /A.A. Андреев, В.И. Картавенко // Биохимия. 2005. - Т. 70 ,№2. - С. 246 -264.

5. Андреева Л.И. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой. / Л.И. Андреев, Л.А. Кожемякин, A.A. Кишкун//Лабор. дело.- 1988. № 11.-С. 41-43.

6. Андросов Д.А. Молекулярный дизайн конденсированных гетероциклов на основе 4-(2-замещенных арил)-1,2,3-тиа и селенадиазолов: автореф. дис. канд. хим. наук. М., 2005. - 189 с.

7. Арутюнян A.B. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма. Методические рекомендации / A.B. Арутюнян, Е.Е.Дубинина, Н.Н.Зыбина.- СПб.: ИКФ «Фолиант». 2000. -104 с.

8. Арчаков А.И. Микросомальное окисление. /А.И. Арчаков. М.: Наука, 1975.-327 с.

9. Арчаков А.И. Окислительная модификация цитохрома Р450 и других макромолекул в процессе их обновления. / А.И. Арчаков, В.Г. Згода, И.И.Карузина // Вопр. мед. химии. 1997. - Т.43. - С. 3 - 27.

10. Арчаков А.И. Оксигеназы биологических мембран /А.И. Арчаков М.:, 1983.-56 с.

11. Атанаев Т.Б. Две фазы в развитии хемилюминесценции при перекисном окислении липидов, инициированных ионами Fe / Т.Б. Атанаев, М.П. Шерстнев, Ю.А. Владимиров//Биофизика. 1990. - Т.35. - С. 610-613.

12. Афанасьев И.Б. Анион-радикал кислорода 02 " в химических и биологических процессах. / И.Б. Афанасьев //Успехи химии. 1979. - Т. 48. -С. 8-21.

13. Барашнев Ю.И. Перинатальная медицина и инвалидность с детства. /Ю.И. Барашнев. // Акушерство и гинек. 1991. - №1. - С. 12 - 18.

14. Беспалова О.Н. Генетические факторы риска невынашивания беременности: автореф. дисс.докт. мед. наук., СПб., 2009. 40 с.

15. Беспалова О.Н. Оценка роли генетических факторов в привычномневынашивании беременности ранних сроков: автореф.канд. мед. наук. 1. СПб., -2001.-25 с.

16. Биохимические механизмы формирования плаценты при физиологической и осложненной беременности. /A.B. Арутюнян и др. -Санкт-Петербург: ООО «Литография», 2010. 188 с.

17. Болдырев A.A. Окислительный стресс и мозг. / A.A. Болдырев // Соросовский образовательный журнал. 2001. - Т. 7. - №4. - С. 21 - 28.

18. Бондарь Т.Н. Восстановление органических гидроперекисей глутатионпероксидазой и глутатион-8-трансферазой: влияние структуры субстрата. /Т.Н. Бондарь, В.З. Ланкин, В.Л.Антоновский. // Доклады АН СССР. 1989. - Т. 304. - С. 217 - 220.

19. Булиенко С.Д. Недонашивание и перенашивание беременности. /С.Д. Булиенко, Г.К. Степановская, П.И.Фогель Киев: Здоровья., 1982. - 174 с.

20. Бурлев В.А. Ангиогенез и ангиогенные факторы роста в регуляции репродуктивной природы у женщин. / В.А. Бурлев, C.B. Павлович // Проблемы репродукции. 1999. - Т.5. - С.6 - 13.

21. Бурлев В.А. Свободнорадикальное окисление в системе мать-плацентаплод при акушерской патологии: автореф. дисс. докт. мед. наук. М.,1992.-50 с.

22. Введение в клиническую морфологию плаценты человека. / С.А. Степанов и др.. Саратов: изд-во Саратовского ун-та, 1991. - 168 с.

23. Взаимодействие миелопероксидазы и дефензинов с монослоями липидов./ J1.B. Часовникова J1.B и др. // Биохимия. 1992. - Т. 57. - С. 97 -102.

24. Виноградов А.Д. Генерация супероксид-радикала НАДН:убихинон оксидоредуктазой митохондрий сердца. / А.Д. Виноградов, В.Г. Гривенникова //Биохимия. 2005. - Т. 70, №2. - С. 150 - 159.

25. Владимиров Ю.А. Нарушение барьерных свойств внутренней и наружной мембран митохондрий, некроз и апоптоз. / Ю.А. Владимиров //Биологические мембраны. 2002. - Т. 19. - С. 356 - 377.

26. Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. /Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков М.: Наука, 1972. - 252 с.

27. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран. / Ю.А. Владимиров //Биофизика. 1987. - Т. 32. - С. 830 - 844.

28. Владимиров Ю.А. Структурная организация мембран. Биологические мембраны / Ю.А.Владимиров, А.Ф. Поглазов. М., 1973. - С. 7 - 47.

29. Владимиров Ю.А. Хемилюминесценция клеток животных. /Ю.А. Владимиров, М.П. Шерстнев // Итоги науки и техники. сер.Биофизика. -1989.-Т.24,- 176 с.

30. Владимиров ЮА. Свободные радикалы и антиоксиданты. /Ю.А.Владимиров // Вестник РАМН. 1998. - №7. - С. 43 - 51.

31. Возможности хемилюминесцентного анализа в диагностике инфицированного панкреонекроза /Ю.С. Винник и др. //Фундаментальные исследования. 2007. - №2. - С .84.

32. Генетическая изменчивость антиоксидантной активности плазмы крови в выборке населения г. Северска Томской области / A.B. Марусин и др. //Бюллетень сибирской медицины. -2002. Т. 3.-С. 24-30.

33. Генетические факторы предрасположенности к превычному невынашиванию беременности ранних сроков /О.Н.Беспалова и др. //Журнал акушерства и женских болезней. 2001. - Т. 2. - С. 8 - 13.

34. Геном человека и гены предрасположенности (Введение в предиктивную медицину). /В.С.Баранов и др. СПб.: Интермедика, 2000. - 271 с.

35. Гукасов В.М. Влияние гормонов на процесс ПОЛ биологических мембран. / В.М.Гукасов, В.К.Федоров // Роль изменений структуры мембран в клеточной патологии: Труды 2 Моск. мед. ин-та им. Н.И.Пирогова М., 1977. - С.8 - 52.

36. Давтян Т. К. Апоптоз и его модуляция вирусами. / Т. К. Давтян, Ж. К. Искандарян, А. А. Галоян. // Нейрохимия. 2004. - Т.21. - С. 165 - 182.

37. Действие лазерного излучения на перекисную хемилюминесценцию раневого экссудата. /А.Р.Ромм и др. // Бюл. эксперим. биологии и мед. -1986.-Т. 102, №Ю.-С. 426 428.

38. Диагностическое и прогностическое значение комплексного ультразвукового исследования при фетоплацентарной недостаточности /C.B. Новикова и др. // Росс. Вестник акушера-гинеколога 2005. - № 5. - С. 985 -992.

39. Дубинина Е.Е Антиоксидантная система плазмы крови. / Е.Е. Дубинина // Украинск. биохим. журнал. 1992. - Т.64. - С. 3 - 14.

40. Дубинина Е.Е. Продукты метаболизма кислорода в функциональной активности клеток /Е.Е Дубинина Санкт-Петербург: Медицинская пресса., -2006. - 694 с.

41. Евсюкова И.И. Новый подход к оценке у новорожденных детей последствий неблагоприятных воздействий в период внутриутробного развития. /И.И. Евсюкова. // Матер. XXII науч.сессии НИИАГ им. Д.О.Отта РАМН.-СПб., 1993.-С. 58.

42. Зенков Н.К. Механизмы активации макрофагов / Н.К. Зенков, Е.Б. Менщикова, В.А. Шкурупий //Успехи современной биологии. 2007. - Т. 127, №3,-С. 243 -256.

43. Зенков Н.К. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты. /Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Менщикова. -М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001. 343 с.

44. Значение определения средних молекул в моче при нормальной и осложненной беременности у новорожденных с гипоксией. / С.О. Бурмистров и др. //Клиническая лаб. диагностика. 2001. - № 6. - С. 10-12.

45. Значение оценки показателей свободнорадикального окисления для дифференциального подхода к применению средств антиоксидантной защиты у доношенных новорожденных детей. /И.И.Евсюкова и др. //Педиатрия. -1996. №1. - С. 13-19.

46. Измайлов Д.Ю. Математическое моделирование кинетики перекисногоокисления липидов по данным хемилюминесцентного анализа: автореф.канд. биол. наук. М., 2003. - 24 с.

47. Калинина Е.В. Участие тио-, перокси- и глутаредоксинов в клеточных редокс-зависимых процессах. /Е.В. Калинина, Н.Н.Чернов, А.Н.Саприн // Успехи биологической химии. -2008. Т. 48. - С. 319 - 358.

48. Клюбин И.В. НАДФН-оксидаза специализированный ферментативный комплекс для образования активных метаболитов кислорода. /И.В. Клюбин, И.А. Гамалей //Цитология. - 1997. - Т. 39. - С. 320 - 340.

49. Кожевников Ю.Н. О перекисном окислении липидов в норме и патологии. /Ю.Н. Кожевников // Вопр. мед. химии. 1985. - Т. 31. - С. 2 - 7.

50. Колесников С.И. Свободнорадикальные реакции при физиологической и патологической беременности у человека. /С.П.Колесников, В.Ю.Куликов, Л.И. Колесникова. Свободнорадикальное окисление в норме и патологии. - М.:, 1976.- С. 83 -85.

51. Колесниченко Л.С. . Глутатионтрансферазы. / Л.С. Колесниченко, В.И. Кулинский. //Успехи соврем, биологии. 1989. - Т. 107. - С. 179 - 194.

52. Кольман Я. Наглядная биохимия. / Я. Кольман, К. Г. Рем., 2000. 469 с.

53. Комплексное лечение и профилактика угрожающих преждевременных родов. /Н.Г.Кошелева и др. Л. 1980. - 25 с.

54. Концепция антиоксидантной недостаточности патогенеза позднего токсикоза беременности. /В.И.Алипов и др. //Состояние и пути совершенствования специализированной акушерско-гинекологической помощи: тез. докл. Л., 1983. - С. 7 - 9.

55. Кошелева Н.Г. Новые подходы к профилактике и лечению угрозы преждевременных родов. / Н.Г. Кошелева Н.Г. //Актуальн. вопросы, физиол. и патол. репрод. функции женщины: Матер. XXIV науч. сессии НИИАГ им. Д.О.Отта РАМН СПб., 1995. - С. 121 - 123.

56. Кошелева Н.Г. Профилактика перинатальной заболеваемости и смертности. / Н.Г.Кошелева. М.: Медицина, 1979. - 109 с.

57. Кошелева Н.Г. Современные представления о причинах недонашивания беременности. / Н.Г. Кошелева // Вопросы охр. мат и дет 1979. - №1. С. 64 -68.

58. Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита / В.И. Кулинский //Соросовский образовательный журнал 1999. - № 1. - С. 2 - 7.

59. Кулинский В.И. Глутатион митохондрий / В.И. Кулинский, JI.C. Колесниченко// Биохимия. 2007. - Т. 72, вып. 7. - С. 856 - 859.

60. Кулинский В.И. Структура, свойства, биологическая роль и регуляция глутатионпероксидазы. /В.И.Кулинский, Л.С.Колесниченко //Успехи соврем, биологии. 1993. -Т. 113. - С. 107 - 122.

61. Курышева К.А. Особенности липидного состава сыворотки крови матери, новорожденного и плаценты при физиологическом течении беременности и родов. / К.А. Курышева, И.И. Стольникова //Акуш. и гинек.- 1983. -№3.-С. 6-9.

62. Лебеденко B.C. Перекисное окисление липидов при плацентарной недостаточности и гипотрофии плода. / B.C. Лебеденко. IX съезд акуш.-гинек. УССР: тез. докл. - Киев, 1991. - С. 67.

63. Лызлова С.Н. Лизосомальные белки нейтрофилов факторы антимикробной защиты клеток /С.Н.Лызлова // Вопросы медицинской химии.- 1987. №5.-С. 43-48.

64. Лю. Б.Н. Роль митохондрий в развитии и регуляции уровня окислительного стресса в норме, при клеточных патологиях и реверсии опухолевых клеток /Б.Н. Лю, Б.И. Исмаилов // Успехи современной биологии. 2006. - Т. 126, № 4. - С. 388 - 399.

65. Малахова М.Я. Методы регистрации эндогенной интоксикации: методические рекомендации /М. Я. Малахова. СПб: Медицина - 1995. - 33 с.

66. Мембраны субклеточных органелл как источник супероксидных радикалов при ишемии печени. / J1.C. Вартанян и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины.-1990.-№6.-С.550-552.

67. Менщикова Е.Б. Оксид азота и N0- синтазы в организме млекопитающих при различных функциональных состояниях. / Е.Б. Менщикова, Н. К. Зенков, В.П. Реутов. //Биохимия. 2000. - Т. 65. - С. 485 -503.

68. Метод определения каталазы. / М.А.Королюк и др. // Лаб. дело. 1988.- № 1.-С. 16-19.

69. Микашинович З.И. Состояние антиоксидантного статуса крови женщин при физиологическом и осложненном течении беременности. /З.И Микашинович, Е.В. Олемпиева // Бюллетень сибирской медицины. 2008. -№2.-С. 101 - 104.

70. Милованов А.П. Патология системы мать-плацента-плод. / А.П. Милованов. М. Медицина, 1999. - 446 с

71. Моин И.М. Простой и чувствительный метод определения глутатионпероксидазы в эритроцитах. / И.М. Моин // Лаб. дело 1986 - №12.- С. 724 727.

72. Молекулы средней массы у больных наружным генитальным эндометритом. /А.М. Герасимов и др. // Клиническая лаб. диагностика. -2003. -№ 12.-С. 16-19.

73. Молекулярные аспекты плацентарной недостаточности. /Т.И. Погорелова. и др. Ростов на Дону.: РГУ. - 1997. - 176 с.

74. Муравьев P.A. Пероксидазосомы эозинофильных лейкоцитов. / P.A. Муравьев, В.А. Фомина, В.В.Роговин // Известия АН. Сер. Биол. 1992,№6. -С. 835 - 843.

75. Невынашивание беременности: этиопатогенез, диагностика. Клиника и лечение. / Н.Г. Кошелева Н. Г. и др. СПб.: ООО «Издательство Н-Л», 2002. - 59 с.

76. Образование свободных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа (II) /Э.Ш.Якутова и др. // Биофизика. 1994. - Т. 39. - С. 275 - 279.

77. Образование супероксидных радикалов в мембранах субклеточных органелл регенерирующей печени. / JI.C. Вартанян и др. //Биохимия. 1992. -Т.57.-С. 671 -678.

78. Окислительный стресс в патологии плацентации /А.В.Шестопалов и др. // Журнал Акушерства и Женских болезней. 2009. - Т. 58, вып. 1. - С. 93 -100.

79. Окислительный стресс в плаценте при физиологической и патологически протекающей беременности /Доброхотова Ю.Э. и др. //Росс. Вестник акушера-гинеколога 2008. -Т.8,№6. -С. 33 - 35.

80. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты / Е.Б. Меныцикова Е.Б. и др. М.: Фирма «Слово», 2006. - 448 с.

81. Октябрьский О.Н. Редокс-регуляция клеточных функций /О.Н. Октябрьский, Г.В. Смирнова // Биохимия. 2007. - Т. 72. - С. 158 - 174.

82. Осипов А.Н. Активные формы кислорода и их роль в организме. / А.Н. Осипов, О.А. Азизова, Ю.А. Владимиров //Успехи биол. химии. 1990. - Т. 31.-С. 180 - 208.

83. Осипов А.Н. Образование гидроксильных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа. / А.Н. Осипов, Э.Ш. Якутова, Ю.А. Владимиров // Биофизика. 1993. -Т. 38. - С. 390 - 396.

84. Панасенко О.М. Гипохлорит, окислительная модификация липопротеинов крови и атеросклероз /О.М. Панасенко, Сергиенко В.И. // Бюлл. экспер. биологии и мед. 2001. - Т. 131. - С. 484 - 494.

85. Парцалис Г.К. Комплексная оценка гемодинамической и детоксицирующей функции плаценты при невынашивании беременности: автореф. дисс.канд. мед. наук. Санкт-Петербург, 2007. - 24 с.

86. Пестрикова Т.Ю. Диагностика невынашивания беременности путем определения антиокислительной активности сыворотки крови. / Т.Ю. Пестрикова, В.Ф. Григорьев //Акуш. и гинек. 1990. - №3. - С.37 - 39.

87. Плацентарная недостаточность и полиморфизм генов глутатион-S-трансфераз Ml, Т1 и PI /О.Н.Беспалова и др. //Журнал Акушерства и Женских болезней. 2006. - Т. 55. - С. 25 - 31.

88. Побежимова Т.П. Биохимические и физиологические аспекты функционирования убихинона. / Т.П Побежимива., В.К. Войников //Биологические мембраны. 1999. - Т. 16 .- В.К. С. 485 - 490.

89. Поберезкина Н.Б. Биологическая роль супероксиддисмутазы. / Н.Б. Поберезкина, Л.Ф. Осинская //Украинский биохимический журнал. 1989. -Т. 61.-С. 14-27.

90. Поллард ДЖ. Справочник по вычислительным методам статистики / ДЖ Поллард. М.: Финансы и статистика, 1982. - 344 с.

91. Практикум по свободнорадикальному окислению. Учебно-методическое пособие. / Ф.Е.Путилина и др. СПб.: С.- Петерб. Гос. ун-т., 2006. - 108 с.

92. Радзинский В.Е. Биохимия плацентарной недостаточности. /В.Е. Радзинский, П.Я. Смалько. М.: Рос. Университет дружбы народов. - 2001. -273 с.

93. Роль кислорода и его метаболитов в развитии плаценты /А.В.Арутюнян и др. // Журнал Акушерства и Женских болезней. 2008. - Т. 57. - С. 115 -121.

94. Рулева Н.Ю. Миелопероксидаза: биологические функции и клиническое значение. / Н.Ю. Рулева, М.А. Звягинцева, С.Ф. Дугин //Современные наукоемкие технологии. 2007. - №8. - С. 653 - 657.

95. Рунион Р. Справочник по непараметрической статистике: современный подход / Р. Рунион М.: Финансы и статистика, 1982. - 198 с.

96. Сала А. Лейкотриены: липидные биоэффекторы воспалительных реакций. / А.Сала, С. Зарини, М. Бола // Биохимия. 1998. - Т. 63. - С. 101 -110.

97. Свободные радикалы в живых системах /Ю.А.Владимиров и др. // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. 1991. - Т. 29. - 250 е.

98. Сельков С.А. Плацентарные макрофаги. / С.А. Сельков, О.В. Павлов. М: Товар, науч. изд. КМК, 2007. 185 с.

99. Сельков С.А. Цитокиновая сеть и макрофаги поаценты в регуляции родовой деятельности. / С.А. Сельков, О.В. Павлов, А.В. Селютин // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 2000. - Т. 129, № 6. - С. 604 - 609.

100. Сидельникова В.М. Невынашивание беременности /В.М.Сидельникова -М.¡Медицина, 1986. 175 с.

101. Ситникова О.Г. Состояние липидного обмена при невынашивании беременности // Автореф. дисс.канд.мед.наук. Челябинск, 1989. - 23 с.

102. Скулачев В.П. Снижение внутриклеточной концентрации О2 как особая функция дыхательных систем клетки. / В.П. Скулачев //Биохимия. 1994. - Т. 59. - С. 1910 - 1912.

103. Соколовский В.В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярных механизмах неспецифической реакции организма на экстремальное воздействие. /Соколовский В.В. // Вопросы медицинской химии. 1988. - Т. 34. - С. 2 - 11.

104. Сотникова Н.Ю. Иммунологические аспекты невынашивания. /Н.Ю.Сотникова //Невынашивание и недонашивание. М., 1984. - С.37 - 42.

105. Сравнение функциональной активности лимфоцитов и уровня перекисного окисления у беременных с привычным невынашиванием на фоне терапии. / В.А.Бурлев и др. // Вопросы, охраны, материнства и детства. -1987. -№8.-С.49-51.

106. Сравнительное исследование некоторых физико-химических свойств миелопероксидазы свиньи и коровы. / В.Н. Кокряков и др. А. // Биохимия. -1982.-T. 47.-С. 100- 107.

107. Стехиометрия взаимодействия гипохлорита с ненасыщенными связями фосфатидил холина и свободных жирных кислот в составе липосом. /О.М.Панасенко и др. //Биологические мембраны. 1996. - Т. 13. - С. 271 -281.

108. Тарусов Б.Н. Основы биологического действия радиоактивных излучений. / Б.Н. Тарусов М.: Медгиз, 1954. - 130 с.

109. Товстановская В.А. Клиническое значение обмена фосфолипидов и состояние фетоплацентарного комплекса при угрозе прерываниябеременности и преждевременных родах: Автореф.дисс.канд.мед.наук. 1. Киев, 1986.-20 с.

110. Трехмерное ультразвуковое исследование для функциональной оценки внутриплацентарной сосудистой сети /Л.И. Титченко и др. // SonoAce-Ultrasound. 2007. - N16. - С. 836 - 839.

111. Турков М.Н. Супероксиддисмутаза: свойства и функции. / М.Н. Турков // Успехи современной биологии. 1976. - Т. 81. - С. 341 - 354.

112. Турпалев К.Т. Активные формы кислорода и регуляция экспрессии генов. / К.Т. Турпалев. // Биохимия. 2002. - Т.67. - С.339 - 352.

113. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. / В.Ю.Урбах. М. Медицина, 1975. - 295 с.

114. Уровень перекисной хемилюминесценции в цельной крови у больных сиалозами и хроническими силаденитами. /У.А. Саидакимова и др. // Вопросы хемилюминесценции. 1991. - Т. 2.,№1. - С. 11 - 13.

115. Фархутдинов P.P. Клинические аспекты применения метода регистрации хемилюминесценции крови. /P.P. Фархутдинов. // Терапевтический архив.-1984. -Т. 56, №8. С. 150 - 153.

116. Федорова М.В. Плацента и ее роль при беременности. /М.В. Федорова, Е.П. Калашникова. М.: Медицина, 1986. - 252 с.

117. Федорова Т.Н. Микромодификация метода определения активности процессов свободнорадикального окисления. /Т.Н. Федорова, О.Ю. Реброва, Э.Г. Ларский. // Лаб. дело. 1991. - №3. - С. 33 - 37.

118. Фиксированные иммунные комплексы и NO-синтазная активность плаценты при гестозе. / К.А.Габелова и др. //Вестник Росс, ассоциации акушеров и гинекологов. 2000. - № 1. - С. 22 - 24

119. Фильченков A.A. Каспазы: регуляторы апоптоза и других клеточных функций. / А. А.Фильченков. //Биохимия. 2003. - Т.68. - С.453 - 466.

120. Хегай М.Д. Перекисное окисление липидов и гликозилирование белков в аорте кроликов с аллоксановым диабетом при инсулинокоррекции /М.Д. Хегай, С.Е.Зайчик. //Патол. физиология и эксперим. терапия. 1995. -№4. - С. 6-7.

121. Цедрих Н.И. Окислительный гомеостаз при различных формах острого панкреатита: особенности диагностики и пути коррекции. / Н.И. Цедрих и др. // Успехи современного естествознания. 2008. - №9. - С. 55 - 58.

122. Чевари, С. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах. / С.Чевари, И.Чаба., Й.Секей. // Лаб дело. 1985. - №11. - С. 678 - 681.

123. Чернуха С.А. Особенности липидной пероксидации и антиокислительной активности амниотической жидкости при родоразрешении женщин с маловесными плодами. / С.А.Чернуха, Л.М.Комиссарова, В.А.Бурлев // Акушерство и гинек. 1986. - №12. — С. 31 — 33.

124. Шаронов Б.П. Окислительная модификация и инактивация супероксиддисмутазы гипохлоритом. / Б.П. Шаронов, И.В. Чурилова. //Биохимия,- 1992. -Т. 57. С. 719-727.

125. Шерстнев М.П. Значение хемилюминесцентных исследований в клинической медицине / М.П. Шерстнев //Вопросы хемилюминесценции. -1991. Т.2, №1. - С. 5- 10.

126. Шерстнев М.П. Методика регистрации перекисной хемилюминесценции плазмы и сыворотки крови. /М.П. Шерстнев //Вопросы хемилюминесценции. 1991. - Т.2,№1. - С. 16-18.

127. Шестаков В.А. Хемилюминесценция плазмы крови в присутствии перекиси водорода. /В.А. Шестаков, Н.О. Бойчевская, М.П. Шерстнев //Вопросы медицинской химии. 1979. - №2. - С. 132 - 137.

128. Шестаков В.А. Острая ишемия органов и ранние постишемические расстройства. /В.А. Шестаков, В.В. Киликовский, М.П. Шерстнев. 1978. — С. 222-223.

129. Шестаков В.А. Применение биохемилюминесценции в медицине. /В.А.Шестаков, М.П.Шерстнев. М.,1977. - 122 с.

130. Шестопалов А.В. Метаболическая активность плацентарных макрофагов и молекулярные механизмы формирования плаценты при различных вариантах течения беременности: автореф. дис.д-ра мед. наук. Ростов н/Д., 2007.-38 с.

131. Шинкаренко Н.В. Химические свойства синглетного молекулярного кислорода и значение его в биологических системах. /Н.В. Шинкаренко, В.Б. Алесковский // Успехи химии. 1982. - Т. 51. - С. 713 - 735.

132. Activation of NADP oxidase involves the dissociation of p21rac from its inhibitory GDP/GTP exchange protein (rhoGDI) followed by its translocation to the plasma membrane. / B. Abo et al. // Biochem. J. 1994. -Vol. 298. - P. 585 -591.

133. Alternativy activated macrophages actively inhibit proliferation of peripheral blood lymphocytes and CD4+ T cells in vitro. /Schebesch C. et al. // Immunology. 1997. - Vol. 92, N4. - P.478 - 486.

134. An NADPH oxidase superoxide-generating system in the rabbit aorta. / P.J Pagano. et al. // Amer. J. Physiol. 1995. - Vol. 37. - P. H2274 - H2280.

135. Antioxidants: ther role in pregnancy and miscarriage. /C. Jenkins et al. //Antioxid. Redox Signal. 2000. -Vol. 2, N 3. - P.623 - 628.

136. Apoptotic VS. Nonapoptotic cytotoxicity induced by hydrogen peroxide. / A.M. Gardner et al. // Free Radic. Biol. Med. 1997. - Vol. 22. - P. 73 - 83.

137. Arrigo A.P. Gene expression and the thiol redox state. /A.P. Arrigo // Free Radic. Biol. Med. 1999. - Vol. 27. - P. 936 - 944.

138. Association of reduced selenium status in the aetiology of recurrent miscarriage. /A.E. Nicoll et al. // Br. J. Obstet. Gynaecol. 1999. -Vol. 106. -P.l 188 - 1191.

139. ATI receptor agonistic antibodies from preeclamptic patients stimulate NADPH oxidase / Dechend R. et al. // Circulation. 2003. - Vol. 107. - P. 16321639.

140. Babior B.M. Biological defens mechanism. The prodaction by leukocytes of superoxide, a potential bactericidal agent. / B.M Babior, R.S Kipnes, J.T. Carnutte // J. Clin. Invest. 1973. - Vol. 52. - P. 741 - 744.

141. Baeuerle P.A. lkB: A specific inhibitor of the NF-kB transcription factor. / P.A. Baeuerle, D. Baltimore //Science. 1988. - Vol. 242. -P. 540 - 546.

142. Barja G. Oxidative damage to mitochondrial DNA is inversely related to maximum life span in the heart and brain of mammals. /G. Barja, A. Herrero //FASEB J. 2000. - Vol. 14. - P. 312 - 318.

143. Baughman J.M. Buffering mitochondrial DNA variation. /J.M. Baughman, V. K. Mootha //Nat. Genet. 2006. -Vol. 38. - P. 1232 - 1233.

144. Beckman J.S. Nitric oxide, superoxide, and peroxynitrite: The good, the bad, and the ugly. / J.S. Beckman, W.H. Koppel // Am. J. Physiol. 1996. -Vol. 271. -P. 1424- 1437.

145. Behne D. Selenium content and glutathione peroxidase activity in the plasma and erythrocytes of non-pregnant and pregnant woman. /D. Behne, W.Wolters // J.Clin.Chem. Clin. Biochem. 1979. -Vol. 17. - P. 133 - 135.

146. Berlett B.S. Protein oxidation in aging, disease, and oxidative stress. / B.S. Berlett, E.R. Stadtman // J. Biol. Chem. 1997. - Vol. 272. - P. 20313 - 20316.

147. Berry E.M. Is the biological antioxidant system integrated and regulated? / E.M. Berry, R. Kohen //Med. Hypotheses. 1999. - Vol. 53. - P. 397 - 401.

148. Bidirectional cytokine interactions in the maternal-fetal relationship: is successful pregnancy a TH2 phenomenon? / T. G. Wegmann et al. // Immunol. Today. 1993. - Vol. 14, N.7. - P. 353 - 356.

149. Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation. /R.T. Dean et al. //Biochem. J. 1997. -Vol. 324. - P. 1 - 18.

150. Biosynthetic incorporation of oxidized amino acids into proteins and their cellular proteolysis. /K.J. Rodgers et al. // Free Radic. Biol. Med. 2002. - Vol. 32.-P. 766-775.

151. Bitrrum O.W. Human neutrophil structure and function with special reference to cytochrome b559 and (2-microglobulin). / O.W. Bitrrum // Danish Med. Bull. -1993.-Vol. 40.-P. 163- 189.

152. Bokoch G.M. The role of small GTP-binding proteins in leukocyte function. / G.M. Bokoch, U.G. Knaus // Curr. Opin. Immunol. 1994. - Vol. 6. - P. 98 - 105.

153. Breath ethane e specific indicator of free-radical mediated lipid peroxidation following reperfusion of the ischemic liver. / M.Kazui et al. //Free Radical Biol, and Med. - 1992. - Vol. 13. - P. 509 - 515.

154. Brigelius-Flore R. Tissue-specific function of individual glutation peroxidases. / R. Brigelius-Flore // Free Radic. Biol. Med. 1999. - Vol. 27. - P. 951 -965.

155. Chen Qun. Prodaction of Reactive Oxygen Species by Mitochondria: Central Role of Complex III / Chen Qun, E. J. Vazquez, S. Maghaddas // J. Biol. Chem. -2003. Vol. 278. - P. 36027 - 36031.

156. Chandra J. Triggering and modulation of apoptosis by oxidative stress. / J. Chandra, A. Samali, S.Orrenius // Free Radic. Biol. Med. 2000. - Vol. 29. - P. 323 -333.

157. Characterization of superoxide-producing sites in isolated brain mitochondria. /A.P. Kudin et al. //J.Biol.Chem. 2004. - Vol. 279. - P. 4127 - 4135.

158. Cloned human brain nitric oxide synthase is highly expressed in skeletal muscle / S. Moncada et al. // FEBS Lett. 1993. - Vol. 316. - P. 175 - 180.

159. Cramer D.W. The epidemiology of recurrent pregnancy loss. /D. W. Cramer, L. A. Wise // Semin. Reprod. Med. 2000. - Vol.18. - P. 331 - 339.

160. Cramer D.W. The epidemiology of recurrent pregnancy loss. /D. W. Cramer, L. A. Wise // Semin. Reprod. Med. 2000. - Vol.18. - P. 331 - 339.

161. Cross J.V. Thiol oxidation of cell signaling proteins: Controlling an apoptotic equilibrium. /J.V. Cross, D. Templetion // J. Cell Biochem. 2004. - Vol. 93. -P. 104 - 111.

162. Cui X.L. Expression of NADPH oxidase isoform 1 (Nox 1) in human placenta: involvement in preeclampsia / X.L. Cui //Placenta. 2006. - Vol. 27. -P. 422-431.

163. Cys25-nitrosylation inactivates papain. / G. Venturini et al. //Biochem. Mol. Biol. Int. 1998. - Vol. 46. - P. 425 - 428.

164. Cytokine-induced expression of nitric oxide synthase in C2C12 skeletal muscle myocytes / G.Williams et al.// Amer. J. Physiol. 1994. - Vol. 36. - P. 1020- 1025.

165. Davies K.J. Protein modification by oxidants and the role of proteolytic enzymes. /K.J. Davies //Biochem. Soc. Trans. 1993. - Vol. 21. - P. 346 - 353.

166. Davies K.J.A. Degradation of oxidatively denatured proteins in Escherichia coli. /K.J.A. Davies, S.W. Lin // Free Radic. Biol. Med. 1988. - Vol. 5. - P. 215 -223.

167. Davies K.J.A. Oxidativaly denatured proteins are degraded by an ATP-independent proteolytic pathway in Escherichia coli. // K.J.A. Davies, S.W. Lin // Free Radic. Biol. Med. 1988. - Vol. 5. - P. 225 - 236.

168. Davies K.J.A. Oxygen radicals stimulate intracellular proteolysis and lipid peroxidation by independent mechanisms in erytrocytes. / K.J.A. Davies, A.L. Goldberg //J. Biol. Chem. 1987. - Vol. 262. - P. 8227 - 8234.

169. Davies K.J.A. Protein damage and degradation by oxygen radicals. III. Modification of secondary and tertiary structure. / K.J.A. Davies, M.E. Delsignore // J. Biol. Chem. 1987. - Vol. 262. - P. 9908 - 9913.

170. De Cesare D. Transcriptional regulation by cyclic AMP-responsive factors. / D.de Cesare, P. Sassone-Corsi // Prog. Nucl. Acid Res. Mol. Biol. 2000. - Vol. 64.-P. 343 -369.

171. Dean R.T. Free-redical-medifted fragmentation of monoamine oxidase in the mitochondrial membrane. Pole for lipid radicals. /R.T. Dean, S.M. Thomas, A. Garner // Biochem. J. 1986. - Vol. 240. - P. 489 - 494.

172. Decrease in cytochrome c oxidase activity detected cytochemically in the placental trophoblast of patients with pre-eclampsia. / S. Matsubara et al. // Placenta. 1997. - Vol. 18. - P. 255 - 259.

173. Degradation of hypochlorite-damaged glucose-6-phosphate dehydrogenase by the 20S proteasome. / O. Ullrich et al. // Free Radic. Biol. Med. -1999. Vol. 27. -P. 487-492.

174. Del Maestro R.F. An approach to free radicals in medicine and biology. / R.F. Del Maestro // Acta Physiol. Scand suppl. -1980. -Vol. 492. P. 153 -168.

175. Differences in reactive oxygen species production explain the phenotypes associated with common mouse mitochondrial DNA variants. / R. Moreno-Loshuertos et al. //Nat. Genet. 2006. -Vol. 38. - P. 1261 - 1268.

176. Differential localization of superoxide dismutase isoforms in placental villous tissue of normotensive, pre-eclamptic, and intrauterine growth-restricted pregnancies. /L. Myatt et al. //J. Histochem. Cytochem. 1997. - Vol. 45. - P. 1433 - 1438.

177. Distinct roles of thioredoxin in the cytoplasm and in the nucleus. A two-step mechanism of redox regulation of transcription factor NF-kappaB. / K. Hirota et al. // J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274. - P. 27891 - 27897.

178. Dityrosine, a specific marker of oxidation, is synthesized by the myeloperoxidase-hydrogen peroxide system of human neutrophils and macrophages /J.W. Heinecke et al. // J.Biol. Chem. 1993. - Vol. 268. - P. 4069 - 4077.

179. Dong Q.Y. Urinary 8-hydroxydeoxyguanosine levels in diabetic retinopathy patients. /Q.Y. Dong, Y. Cui, L. Chen. // EUR. J. Ophthalmol. 2008. -Vol. 18. -P.94-98.

180. Dunlop R.A. Recent developments in the intracellular degradation of oxidized proteins. / R.A. Dunlop, K.T. Rodgers, R.T. Dean // Free Radic. Biol. Med. -2002. Vol. 33. - P. 894 - 906.

181. Dusi S. Mechanisms of NADPH oxidase activation in human neurophils: p67phox is required for the translocation of rac 1 but not rac 2 from cytosol to the membrane. / S. Dusi, M. Donini, F. Rossi // Biochem. J. 1995. -Vol. 308. - P. 991 - 994.

182. Effect of exogenous fatty acids with greater than 22 carbon atoms (very long chain fatty acids) on superoxide production by human neutrophils. / S.J. Hardy et al.//J. Immunol.-1994.-Vol. 153.-P. 1754- 1761.

183. Eisenberg W.C. Cytogenic effects of singlet oxygen. / W.C. Eisenberg, K.Taylor, R.R. Guerrero // J. Photochem and Photobiol. 1992. - Vol. 16. - P. 381 -384.

184. Elevated level of free 8-iso-prostaglandin F2alpha in the deciduas basalis of woman with preeclampsia. /A.C. Staff et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. 1999. -Vol. 181.- P.1211 - 1215.

185. Enhancement of mitochondrial oxidative stress and up-regulation of antioxidant protein peroxiredoxin III/SP-22 in the mitochondria of human preeclamptic placentae. /E. Shibata et al. // Placenta. 2003. - Vol.24, N6. - P.698 -705.

186. Enzymatic reduction of phospholipids and cholesterol hydroperoxides in artificial bilayers and lipoproteins. / J.P. Thomas J.P. et al. // Biochem. Biophys. Acta. 1990. - Vol. 1045. - P. 252 - 260.

187. Erythrocyte defense against hydrogen peroxide: preeminent importance of catalase. / M.D. Scott M.D. et al. //J. Lab. And Clin. Med. 1991. - Vol. 118. - P. 7-16.

188. Fagan J.M. Red blood cells contain a pathway for the degradation of oxidant-damaged hemoglobin that does not require ATP or ubiquitin. /J.M. Fagan, L. Waxman, A.L. Goldberg // J. Biol. Chem. 1986. - Vol. 261. - P. 5705 - 5713.

189. Farooqui A.A. Biochemical aspect of neurodegeneratin in human brain: involvement of neural membrane phospholipids and phospholipases A2 . /A.A.

190. Farooqui, W.- Y. Ong, L.A. Horrocks //Neurochem. Res. 2004. - Vol. 29. - P. 1961 - 1977.

191. Fasting serum triglycerides, free fatty acids, and malondialdehyde are increased in preeclampsia, are positively correlated, and decrease within 48 hours postpartum. / CA Hubel et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. 1996. -Vol. 174. - P. 975 - 982.

192. Faulk W.P. Immunological studies on human placenta. / W.P. Faulk, A.Carfonara, M. Jeannet //Immunology of Reproduction: Proceed, of the 2 Int. Symp. Varna, Bulgaria, 1973. P. 405 - 409.

193. Fetal umbilical artery flow velocity waveforms and placental resistance: clinical significance / Trudinger B.J. et al. // Br. J. Obstet. Gynaecol. 1985. -Vol. 92. - P. 23 - 30.

194. Finkel T. Signal transduction by reactive oxygen species in non-phagocytic cells. / T. Finkel // J. Leukoc. Biol. 1999. - Vol. 65. - P. 337 - 340.

195. Foster M.W. Study of lipids in human amnion and chorion. / M.W. Foster // Amer. J. Obstetr. Gynecol. 1984. -Vol. 149, N 6. - P. 670 - 673.

196. Free radicals and phagocytic cells. // G.M Rosen et al. //FASEB J. 1995. -Vol. 9.-P. 200-209.

197. Free radicals in toxicology. / S.D. Aust. et al. // Toxicol. Appl. Pharmacol. -1993.-Vol. 120.-P. 168- 178.

198. Genetic contributions to total plasma antioxidant activity/ X.L. Wang et al. // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2001. -Vol. 21, N 7 - P.l 102 - 1103.

199. Geng Z. S-allyl cysteine inhibits activation of nuclear factor kappa B in human T cells. / Z. Geng, Y. Rong, B.H.S. Lau // Free Radic. Biol. Med. 1997. -Vol. 23.-P. 345-350.

200. Ginbary I. Cellular chemiluminescence. /I.Ginbary, R.Boriski CRS press. - 1987.

201. Glutathione and glutathione-related enzymes in deciduas and placenta of controls and women with preeclampsia. /M.F. Knapen et al. // Placenta 1999. -Vol. 20.-P. 541 -546.

202. Glutathione peroxidase activity in normal and preeclamptic placentas. / H.Wictor et al. // Ginecol. Pol. 2000. - Vol. 71. - P. 799 - 803.

203. Glutathione S-Transferase GSTM3 and GSTP1 Genotypes and Larynx Cancer Riskl / N. Jourenkova-Mironova et al. // Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention 1999.-Vol.8.-P.185 - 188.

204. Glutathione S-transferase isoenzymes in decidua and placenta of preeclamptic pregnancies. / P. L. Zusterzeel et al. // Obstet. Gynecol. 1999. - Vol. 94, N 6. -P. 1033- 1038.

205. Glutathionylation of the p50 subunit of NF-kappaB: a mechanism for redox-induced inhibition of DNA binding. / E. Pineda-Molina et al. //Biochemistry. -2001.-Vol. 40.-P. 14134-14142.

206. Glutatione peroxidase protects against peroxynitrite mediated oxidation. A new function for selenoproteins as peroxynitrite reductase. / H. Sies et al. // J. Biol. Chem. - 1997. - Vol. 272, N 44. - P. 27812 - 27817.

207. Gp91(phox) is the heme binding subunit of the superoxide-generating NADPH oxidase. / L. Yu et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1998. - Vol. 95. -P. 7993 - 7998.

208. Griendling K.K. NAD(P)H oxidase: role in cardiovascular biology and disease. / K.K. Griendling, D. Sorescu, M. Ushio-Fukai // Circ. Res. 2000. - Vol. 86.-P. 494-501.

209. Gutteridge J.M.C. Copper-phenanthroline-induced site-specific oxygen-redical damage to DNA. Detection of loosely bound trace copper in biological fluids. / J.M.C. Gutteridge // Biochem. J. 1984. - Vol. 218. - P. 983 - 985.

210. Habeeb A. Reaction of protein sulfhydryl groups with Ellman's reagent. / A. Habeeb // Methods in Enzymol. 1972. - Vol. 25. - Part B. - P. 457 - 463.

211. Hadley C.B. Risk factors for preterm premature rupture of the fetal membranes /C.B. Hadley, D.M.Main, S.G.Gabble //Amer. J. Perinatal. 1990. -Vol. 7.-P. 346-350.

212. Hallett M.B. Direct measurement of intracellular free Ca2+ in rat peritoneal macrophages: correlation with oxygen-radical production /M.B. Hallett, A.K. Campbell / Biochem. J. 1983. - Vol. 216. - P.459 - 464.

213. Halliwell B. Oxygen toxicity, oxygen radicals, transition metals and disease. / B. Halliwell, J.M.C. Gutteridge // Biochem. J. 1984. - Vol. 219. - P. 1 - 14.

214. Hancock J.T. Role of reactive oxygen species in cell signaling pathways. / J. T. Hancock , R. Desikan, S.J.Neil //Biochem. Soc. Trans. 2001. -Vol. 29. (Pt 2). -P. 345-350.

215. Hawkins C.L. Generation and propagation of radical reactions on proteins. /C.L. Hawkins, M.J. Davies // Biochim. Biophys. Acta. 2001. - Vol. 1504. - P. 196-219.

216. Heliobacter pyroli infection is associated with oxidatively damaged DNA in human leukocytes and decreased level of urinary 8-oxo-7,8-dihydroguanine. /A. Siomek et al. //Carcinogenesis. 2006. - Vol. 27. - P. 405 - 408.

217. Herrero A. 8-oxo-deoxyguanosine levels in heart and brain mitochondrial and nuclear DNA of two mammals and three birds in relation to their different rates ofaging. / A. Herrero, G.Barja //Aging (Milano). 1999. -Vol. 11. - P. 294 - 300 Midline.

218. Hoffman M.E. Correlation between cytotoxic effect of hydrogen peroxide and the yield of DNA strand breaks in cells of different species. / M.E. Hoffman, A.C. Mello-Filho, R. Meneghini. //Biochim. Biophys. Acta. 1984. - Vol. 781. - P. 234 -238.

219. Hormonal regulation of superoxide dismutase, catalase, and glutathione peroxidase activities in rat macrophages. /B. Pereira et al. // Biochem. Pharmacol. 1995. -Vol .50. - P. 2093 - 2098.

220. Horn H.D. TPNH-glutatione reductaza. / H.D. Horn // Methods Ensym. Anal., Ed. J.Bergmeyer. N.Y.; Acad. Press. 1965. - P. 875 - 879.

221. Huang J. Stoichiometry of p22-phox and gp91-phox in phagocyte cytochrome b558. / J.Huang, N.D.Hitt, N.D. Kleinberg M.E. // Biochemistry. 1995. - Vol. 34. -P. 16753- 16757.

222. Hubel C.A. Oxidative stress in the pathogenesis of preeclampsia. /C.A. Hubel. //Proc. Soc. Biol. Med. 1999. - Vol. 222. - P. 222 - 235.

223. Hubel C.A. Dislipidemia, iron, and oxidative stress in preeclampsia: Assessment of material and feto-placental interactions. / C.A. Hubel. //Sem. Reprod. Endocrinol. 1998. - Vol.16. - P.75 - 92.

224. Human fibroblasts release reactive oxygen species in response to interleukin-1 or tumor necrosis factor-alpha. / B. Meier et al. // Biochemical J. 1989. -Vol. 263.-P. 539-545.

225. Human placental syncytiotrophoblast microvillous membranes impair maternal vascular endothelial function. / A.P. Cockell et al. // Br. J. Obstet. Gynaecol. -1997. Vol. 104. - P. 235 - 240.

226. Hurd T.R. Glutathionation of mitochondrial protens /T.R. Hurd et al. //Antioxid. Redox Signaling. 2005. - Vol. 7. - P. 999 - 1010.

227. Hydrogen peroxide-induced structural alteration of RNase A. /P. Lasch P.et al. // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276. - P. 9492 - 9502.

228. Identification of a functional Leukocyte-type NADPH oxidase in human endothelial cells: A potential atherogenic source of reactive oxygen species. / J.W. Meyer, et al. //Endothelium. 1999. -Vol. 7. - P. 11 - 22.

229. Identification of placental cytokine-producing cells in term and preterm labor. / A. Steinborn et al. // Obstet. Gynecol. 1998. - Vol. 91. - P. 329 - 335.

230. Imai H. Biologican significance of phospholipids hydroperoxide glutathione peroxidase (PHGPx, GPx 4) in mammalian cells. / H. Imai, Y. Nakagava // Free Radic. Biol. Med. 2003. - Vol. 34. - P. 145 - 169.

231. Immunohistochemical localization of endothelial nitric oxide synthase in human villous and extravillous trophoblast populations and expression during syncytiotrophoblast formation in vitro. /A.L. Eis et al. //Placenta. 1995. - Vol. 16. - P.l 13 - 126.

232. Immunohistochemical localizaton of lipoperoxidation products in normal human placenta. / A. Casasco et al. //Placenta. 1997. - Vol. 18. - P. 249 - 253.

233. Increased biological oxidation and reduced anti-oxidant enzyme activity in pre-eclamptic placentae. /J. Vanderlelie et al. // Placenta. 2005. - Vol. 26. - P.l -10.

234. Increased contents of phospholipids, cholesterol, and lipid peroxides in deciduas basalis in women with preeclampsia. / A.C. Staff et al. //Am. J. Obstet. Gynecol. 1999.-Vol. 180.-P. 587-592.

235. Increased nitrotyrosine in the diabetic placenta: Evidence for oxidative stress. / F. Lyall et al. . // Diabetes Care. 1998. - Vol. 21. - P. 1753 - 1758.

236. Inducible (type II) nitric oxide synthase in human placental villous tissue of normotensive, pre-eclampic and intrauterine growth-restricted pregnancies /L.Myatt et al. // Placenta. 1997 - Vol. 18. - P. 261 - 268.

237. Inducible L-arginine-dependent nitric oxide synthase activity in bovine bone marrow-derived macrophages. / H. Adler et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun.- 1994.-Vol. 198.-P. 510-515.

238. Inducidle nitric oxide synthase mediates gut ischemia/reperfusion-induced ileus only after severe insults. /Hassoun H.T. et al. // J. Surg. Res. 2001. - Vol. 97, N2.-P. 150- 154.

239. Inhibition of cytochrome c oxidase activity during prolonged hypoxia. /N. Chandel et al. // Am. J. Physiol. 1995. - Vol. 268. - P. L918 - L925.

240. Inhibition of NF-kappaB DNA binding by nitric oxide. / J.R. Matthews et al. //Nucl. Acids Res. 1996. - Vol. 24. - P. 2236 - 2242.

241. Interleukin-5 (IL-5) augments the progression of liver fibrosis by regulating by regulating / R.M Reiman. et al. //Infect. Immun. 2006. -V. 74. - P. 1471 -1479.

242. Intralobular differences in antioxidant enzyme expression and activity reflect the pattern of maternal arterial bloodflow within the human placenta /J. Hempstock et al. // Placenta. 2003. - Vol. 24. - P. 517 - 523.

243. Investigation of free radical scavenging enzyme activities and lipid peroxidation in human placental tissues with miscarriage. /A. Biri et al. // J. Soc. Gynecol. Investig. 2006. -Vol. 13, N 5. - P.384 - 388.

244. Jendryczko A. regional variations in the activities of antioxidant enzymes in the term human placenta. /A. Jendryczko, M. Drozdz, A. Wojcik //Zentralbl Gynakol.-1991. Vol. 113.-P. 1059- 1066.

245. Jones O.T.G. Mechanisms of superoxide formation by ntutrophils and other cell types. / O.T.G. Jones, J.T. Hancock, S.A. Jones //Biol. Chem. 1992. - Vol. 373.-P. 737-741.

246. Jun B forms the majority of the AP-1 complex and is a target for redox regulation by receptor tyrosine kinase and G protein-coupled receptor agonists in smooth muscle cells /G.N. Rao et al. //J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 274. - P. 6003-6010.

247. Kanofsky J.R. Singlet oxygen production by lactoperoxygenase. Evidence from 1270 nm chemiluminescence. / J.R. Kanofsky // J. Biol. Chem. 1983. - Vol. 258.-P. 5991 -5993.

248. Kanofsky J.R. Singlet oxygen production by soybean lipoxygenase isozymes. / J.R Kanofsky, B. Axelrod//J. Biol. Chem. 1986. - Vol. 261. - P. 1099- 1104.

249. Kato Y. Oxidative fragmentation of collagen and prolyl peptide by Cu(II) H202. Conversion of praline residue to 2-pyrrolidone. / Y. Kato, K. Uchida, S. Kawakishi // J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 267. - P. 23646 - 23651.

250. Kehrer J.P. Free radicals as mediators of tissue injury and disease. / J.P. Kehrer //Crit. Rev. Toxicol. 1993. - Vol. 23. - P. 21 - 48.

251. Kinetic study of the activation of the neutrophil NADFH oxidase by arachidonic acid. Antagonistic effects of arachidonic acid and phenylarsin pxide. / J. Doussiere et al. // Biochemistry. 1999. - Vol. 38. - P. 16394 - 16406.

252. Kinnula V.L. Superoxide dismutases in malignant cells and human tumors. / V.L. Kinnula, J.D. Crapo // Free Radic. Biol. Med. 2004. - Vol. 36. - P. 718 -744.

253. Klatt P. Regulation of protein function by S-glutathiolation in response to oxidative and nitrosative stress. /P. Klatt, S. Lamas // Eur. J. Biochem. 2000. -Vol. 267. - P. 4928 - 4944.

254. Klebanoff J. Inflammantion: Basic principles and clinical correlates. /J.

255. Klebanoff. Raven Press. N.Y., 1992. - P. 541 - 588.

256. Klebanoff S.J. Myeloperoxidase: friend and foe /S.J. Klebanoff //J. Leukoc. Biol. .-2005. Vol. 77 - P. 598 -625.

257. Klebanoff S.J. Myeloperoxidase. / S.J. Klebanoff //Proc. Assoc. Am. Physicians.- 1999.-Vol. 111.- P. 382 389.

258. Klebanoff, J. Myeloperoxidase: Role in Neutrophil-mediated Toxicity in Molecular Biology and Infection Diseases / J Klebanoff. Paris: Elsevier., 1988. -283 p.

259. Kneepkens C.M.F. The potential of the hydrocarbon breath test as a measure of lipid peroxidation. / C.M.F. Kneepkens, G. Lepage, C.C. Roy // Free Radical Biol, and Med. 1994. - Vol. 17. - P. 127 - 160.

260. Knowles R.G. Nitric oxide synthases in mammals. / R.G. Knowles, S. Moncada // Biochem. J. 1994. - Vol. 298. - P. 249 - 258.

261. Kowaltowski A.J. Mitochondrial damage induced by conditions of Oxidative Stress. / A.J. Kowaltowski, A.E. Vercesi // Free Redical Biology & Medicine. -1999,- Vol. 191,-P. 463-471.

262. Kuhn H. Regulation of enzymatic lipid peroxidation: the interplay of peroxidizing and peroxide reducing enzymes. /H. Kuhn, A. Borcheri // Free Radic. Biol. Med. 2002. - Vol. 33. - P. 154 - 172.

263. Kupffer cell cytotoxity against hepatoma cells is related to nitric oxide. / K. Aono et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1994. - Vol. 201. - P. 1175-1181.

264. Kuppusamy P. Characterization of free radical generation by xanthine oxidase. Evidence for hydroxyl radical generation. / P. Kuppusamy, J.L. Zweier // J. Biol. Chem. 1989. - Vol. 264. - P. 9880 - 9884.

265. Kyle D.K. Membrane-protein damage and repair-selective loss of a quinine-protein function in chloroplast membranes. / D.K. Kyle, I. Ohad, C.J. Arntzen // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. - Vol. 81. - P. 4070-4074.

266. Linnane A.W. Cellular redox regulation and prooxidant signaling systems: a new perspective on the free radical theory of aging. /A.W. Linnane, H. Eastwood // Ann N. Y. Acad. Sci. 2006. - Vol. 1067. - P. 47 - 55.

267. Lipid peroxidation and antioxidants in normal and preeclamptic pregnances. /A.K. Poranen et al. // Placenta. 1996. - Vol. 17. - P. 401 - 405.

268. Lipid peroxide and copper are required for the toxicity of oxidized low-density lipoprotein to cultured endothelial cells. / M. Kuzuya et al. // Biochim. Biophys. Acta.-1991,-Vol. 1096. P. 155 - 166.

269. Lipoproteins in normal and atherosclerotic aorta. / S. Yla-Herttuala et al. // Eur. Heart J. 1990. - Vol. 11 (Suppl.E). - P. 88 - 99.

270. Loft S. Cancer risk and oxidative DNA damage in man. /S. Loft, H.E. Poulsen // J. Mol. Med. 1996. - Vol. 74. - P. 297 - 312.

271. Lovaas E. Free radical generation and coupled thiol oxidation by lactoperoxidase/SCN7H202. / E. Lovaas // Free Radic. Biol. Med. 1992. - Vol. 13.-P. 187- 195.

272. Low-density lipoprotein particle size decreases during normal pregnancy in association with triglyceride increases. / C.A. Hubel et al. //J. Soc. Gynecol. Invest. 1998. - Vol. 5. - P. 244 - 250.

273. Macrophage oxidation of L-arginine to nitrite and nitrate: Nitric oxide is an intermediate. / M.A. Marietta et al. //Biochemistry. 1988. - Vol. 27. - P. 8706 -8711.

274. Marklund S.L. Extracellular superoxide dismutase in human tissues and numan cell lines / S.L. Marklund //J. Clin. Invest. 1984. -Vol. 74. - P. 1398 -1403.

275. Marklund S.L. Superoxide dismutase in extracellular fluids. / S.L. Marklund, E. Holme, L. Hellner // Clin. Chim. Acta. 1982. -Vol. 126. - P. 41 - 51.

276. Marshall Y.E. Nitrosation and oxidation in the regulation of gene expression. /Y.E. Marshall, R. Merchant, J.S. Stamler // FASEB J. 2000. - Vol. 14. - P. 1889- 1900.

277. Maternal periodontal disease is associated with an increased risk for preeclampsia /K.A. Boggess et al. //Obstet. Gynecol. 2003. -Vol. 101. - P. 227 -231.

278. Mattana J. Oxidation of extracellular matrix modulates susceptibility to degradation by the mesangial matrix metalloproteinase-2. /J. Mattana, L. Margiloff, P.C. Singnal // Free Radic. Biol. Med. -1999. Vol. 27. - P. 315 - 321.

279. McCord J.M. Superoxide dismutase. An enzymatic function for erythrocuprein (hemocuprein). /J.M. McCord, I. Fridovich //J. Biol. Chem. 1969. -Vol. 244, N 22. - P. 6049 - 6055.

280. Meister A. Glutathione /A. Meister, M.E. Anderson // Ann. Rev. Biochem. -1983.-Vol. 52.-P. 711 -760.

281. Meister A. Mitochondrial changes associated with glutathione deficiency. / A. Meister //Biochim. Biohys. Acta. 1995. - Vol. 1271. - P. 35 - 42.

282. Metabolism of very low density lipoprotein triglyceride by human placental cells: The role of lipoprotein lipase. / B.Bonet et al. //Metabolism. -1992. -Vol.41.-P. 596-603.

283. Mills G.C. Hemoglobin catabolism. I. Glutathione peroxidase, an erythrocyte enzyme which protects hemoglobin from oxidative breakdown. /G.C. Mills // J. Biol. Chem. 1957. - Vol. 229. - P. 189 - 197.

284. Mitochndria contain a proteolytic system which can recognice and degrade oxidatively denatured proteins. / O. Marcillat et al. //Biochem. J. 1988. - Vol. 254.-P. 677-683.

285. Mitochondria, oxidative stress and aging. /J. Sastre et al. //Free Radic. Res. 2000. -Vol. 32. - P. 189 - 198.

286. Mitochondrial reactive oxygen production is dependent on the aromatic hydrocarbon receptor. / A.P. Senft et al. // Free Radical Biol. Med. 2002. - Vol. 33., N9.-P. 1268- 1278.

287. Mitochondrial superoxide: production, biological effect, and activation of uncoupling proteins. / M.D.Brand et al. //Free Radical Biol. Med. 2004. - Vol. 37., N6. - P. 755 - 767.

288. Moncada S. The L-argenine: nitric oxide pathway. / S. Moncada // Acta Physiol. Scand. 1992. - Vol. 145. - P. 201 - 227

289. Monteiro H.P. Signal transduction by protein tyrosine nitration: competition or cooperation with tyrosine phosphorylation-dependent signaling events? /H.P. Monteiro // Free Radic. Biol. Med. 2002. - Vol. 33. - P. 765 - 773.

290. Morel Y. Repression of gene expression by oxidative stress. /Y. Morel, R. Barouki // Biochem. J. 1999. -Vol. 342. - P. 481 - 496.

291. Mosmann T. The expanding universe of T-cell subsets: Th 1, Th 2 and more. /T.Mosmann, S.Sad //Immunol. Today. 1996. - Vol.17. - P.138 - 146.

292. Mues B. Phenotypic characterization of macrophages in human term placenta / Mues B. et al. // Immonology. 1989. - V. 67. - P. 303 - 307.

293. Mullane K.M. Myeloperoxidase activity as a guantitative assessment of neutrophil infiltration into ischemic myocardium. / K.M. Mullane, R. Kraemer, B. Smith // J. Pharmacol. Methods. -1985. Vol. 14. - P. 157.

294. Murai J.T. Maternal and fetal modulators of lipid metabolism correlate with the development of preeclampsia. / J.T. Murai, E. Muzykanskiy, R.N. Taylor // Metabolism. 1997. - Vol.46. - P. 963 - 967.

295. Myatt L. Oxidative stress in the placenta. / L. Myatt, X. Cui // Histochem Cell Biol. 2004. - Vol. 122. - P. 369 - 382.

296. Myatt L. The action of nitric oxide in the perfused human fetal-placental circulation./L. Myatt, A.Brewer, D. E. Brockman //Am. J. Obstet. Gynecol. -1991.-Vol. 164.-P. 687-692.

297. Myeloperoxidase enhances nitric oxide catabolism during myocardial ischemia and reperfusion./ Baldus S. et al. //Free Radic. Biol. Med. 2004. - Vol. 37. - P. 902-911.

298. NAD(P)H oxidase associated superoxide production in human placenta from normotensive and pre-eclamptic women./ M.T. Raijmakers et al.. //Placenta.-2004. Vol. 25, Suppl A. - P. 85 - 89.

299. Nauseef W.M. Mieloperoxidase deficiency. / W.M. Nauseef //Hematol. Pathol. 1990. - Vol. 4. - P. 165 - 178.

300. Nauseef W.M. Biosynthesis and processing of myeloperoxidase a marker for myeloid cell differentiation. /W.M. Nauseef, I.Olsson, K. Arnljots //Eur. J. Haematol. - 1988. - Vol. 40. - P. 97 - 100.

301. Negoescu A. Impotance of DNA fragmentation in apoptosis with regard to TUNEL specificity. /A. Negoescu, C. Guillermet, P. Lorimier // Biomed-Pharmacother. 1998. - Vol. 52, N6. - P. 252 - 258.

302. Neta P. Rate constants for reactions of peroxyl radicals in fluid solutions. /P. Neta, R.E. Huie, A.B. Ross //J. Phys. Chem. Ref. Data. 1990. - Vol. 19. - P. 413 -513.

303. Nitric oxide inhibits caspase-3 by s-nitrosation in vivo. /L. Rössing et al. //J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274. -P. 6823 - 6826.

304. Nitrotyrosine residues in placenta: Evidence of peroxynitrite formation and action. / L Myatt et al. . // Hypertension. 1996. - Vol. 28. - P. 488 - 493.

305. Non-enzymic glycation of human extracellular superoxide dismutase. / T. Adachi et al. //Biochem. J. 1991. - Vol. 279. (Pt 1). - P. 263-267.

306. Onset of maternal arterial blood flow and placental oxidative stress: a possible factor in human early pregnancy failure / Jauniaux E. et al. //Am. J. Pathol. 2000 -Vol. 157.-P. 2111 -2122.

307. Oxidant status in maternal and cord plasma and placental tissue in gestational diabetes. /A. Biri et al. // Placenta. 2006. - Vol.27. - P.327 - 332.

308. Oxidants in mitochondria: from physiology to diseases / Ch. Richter et al. // Biochem. Biophys. Acta 1995. - Vol. 1271. - P. 67 - 74.

309. Oxidative damange to DNA in diabetes mellitus. /P. Dandona et al. //Lancet. 1996. - N 8999. - P. 444 - 445.

310. Oxidative stress markers and antioxidant levels in normal pregnancy and preeclampsia. /J.B. Sharma et al. // Int. J. Gynaecol. Obstet. 2006. - Vol. 94, N1. -P. 23-27.

311. Oxidative stress-induced phospholipase c-gamma activation enhances cell survival. / X.T. Wang X.T. et al. //J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276. - P. 28364 -28371.

312. Pacifici R.E. Macroxyproteinase (M. О. P.): A 670 kDa proteinase complex that degrades oxidatively denatured proteins in red blood cells. /R.E. Pacifici, D.C. Salo, K.J.A. Davies // Free Radic. Biol. Med. 1989. - Vol. 7. - P. 521 - 536.

313. Page EW. The relation between hydatid moles, relative ischemia of the gravid uterus, and the placental origin of preeclampsia. / E.W.Page //Am. J. Obstet. Gynaecol. 1939. - Vol. 37. - P. 291 - 293.

314. Panasenko O.M. The mechanism of the hypochlorite-induced lipid peroxidation. /О.М. Panasenko // Biofactors. 1997. - Vol.6. - P. 181 - 190.

315. Peroxynitrite modification of low-density lipoprotein leads to recognition by the macrophage scavenger receptor. / A. Graham et al. //FEBS Lett. 1993. -Vol. 330.-P. 181 - 185.

316. Peroxynitrite: an endogenous oxidizing and nitrating agent. / Ducrocq C. et al. //Cell Mol. Life Sci. 1999. - Vol. 55. - P. 1068 - 1077.

317. Piatt J. Singlet oxygen formation by a peroxidase, H202 and halide system. / J. Piatt, P.J. O'Brien // J. Biochem. 1979. - Vol. 93. - P. 323 - 332.

318. Polymorphisms in biotransformation enzymes and the risk for recurrent early pregnancy loss /Р. L. Zusterzeel et al. //Mol. Hum. Reprod. 2000. -Vol. 6, N 5. P. 474-478

319. Preterm birth and infection: pathogenic possibilitis. / J.A. McGregor et al. //Amer. J. Repr. Immunol. 1988. - Vol. 33. - P.123 - 132.

320. Prodaction of Superoxide radicals and hydrogen peroxide by NADH-ubiquinol- cytochrome с reductase from Beaf-Heart Mitochondria. / E.Cadenas et al. // Arch. Biochem. Biophys. 1977. - Vol. 180. - P. 248 -257.

321. Production of hydroxyl radicals from the simultaneous generation of superoxide and nitric oxide. / N.Hogg et al. // Biochem. J. 1992. -Vol. 281. - P. 419-424.

322. Protein carbonyls in deciduas and placenta of preeclamptic women as markers for oxidative stress /P.L. Zusterzee et al. //Placenta. 2001. -Vol. 22. - P .213 -219.

323. Potter J.M. The hyperlipidemia of pregnancy in normal and complicated pregnancies / J.M. Potter, P. J. Nastel // Am. J. Obstet. Gynecol. 1979. - Vol. 133. -P. 165- 170.

324. Protein measurement with the Folin phenol reagent. / O.H.Lowry et al. // J. Biol. Chem. -1951. Vol. 193. - P. 265-275.

325. Qanungo S. Ontogenic profile of some antioxidants and lipid peroxidation in humen placental and fetal tissues. / S. Qanungo, M. Mukherjea // Mol. Cell. Biochem.-2000.-Vol. 215.-P. 11-19.

326. Radiolysis-induced oxidation of bovine a-crystallin. / E.L Finley et al. //Photochem. Photobiol. 1998. - Vol. 68. - P. 9 - 15.

327. Raghupathy R.Thl- type immunity is incompatible with successful pregnancy / R. Raghupathy //Immunol. Today. 1997. - V. 18. - P. 479 - 482.

328. Rakita R.M. Myeloperoxidase mediated inhibition of microbial respiration: damage to Escherichia coli ubiquinol oxidase. / R.M. Rakita, B.R. Michel, H. Rosen //Biochemistry. 1989. - Vol. 28. -P. 3031 - 3036.

329. Ran Q. Transgenic mice overexpressing glutation peroxidase 4 are protected against jxidative stress-induced apoptosis /Q. Ran et al. //J. Biol. Chem. 2004. -Vol. 279.-P. 55137-55146.

330. Redman C.W. Placental debris, oxidative stress and pre-eclampsia. /C.W. Redman, I.L .Sargent // Placenta. 2000. - Vol. 21. - P. 597 - 602.

331. Redman C.W. Placental stress and pre-eclampsia: a revised view /C.W. Redman, I.L. Sargent // Placenta. 2009. - Vol.30, Suppl A:S38 - 42.

332. Redman C.W.G. Pre-eclampsia, the placenta and the maternal systemic inflammatory response a review /C.W.G. Redman, I.L. Sargent // Placenta. -2003. - Vol. 24, suppl. - P. S21 - S27.

333. Redman CW. Preeclampsia and the placenta / C.W.Redman // Placenta. -1991.-Vol. 12.-P. 301 -308.

334. Relationship between plasma fatty acid profile and antioxidant vitqamins during normal pregnancy. / E.Herrera et al. // Eur. J. Clin. Nutr. 2004. - Vol. 58.-P. 1231 - 1238.

335. Rembish S.J. Futher evidence that lucigenin-derived chemiluminescence monitors mithochondrial superoxide generation in rat alveolar macrophages. / S.J. Rembish, M.A. Trush //Free Radical Biol. Med. 1994. - Vol. 17. - P. 117 - 126.

336. Remick D.G. Regulation of cytokine gene expression by reactive oxygen and reactive nitrogen intermediates. /D.G. Remick, L. Villarete //J. Leukoc. Biol. -1996.-Vol. 59.-P. 471 -475.

337. Reversible inactivation of caplain isoforms by nitric oxide. / M. Michetti et al. //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. -Vol. 207. - P. 1009 - 1014

338. Richards D.M.S. Membrane proteins are critical targets in free radical mediated cytolysis. / D.M.S. Richards, R.T. Dean, W. Jessup // Biochim. Biophys. Acta. 1988. - Vol. 946. - P. 281 - 288.

339. Rivett A.J. Metal-catalyzed oxidation of Escherichia coli glutamine synthetase: correlation of structural and functional changes. / A.J. Rivett, R.L. Levine // Arch. Biochem. Biophys. 1990. - Vol. 278. - P. 26 - 34.

340. Roberts J.M. Is oxidative stress the link in the two-stage model of preeclampsia. /J.M. Roberts, C.A. Hubel //Lancet 1999. -Vol. 354. - P.788 - 789.

341. Role of red cell selenium in recurrent pregnancy loss. /K.S. Kumar et al. // J. Obstet. Gynaecol. 2002. - Vol. 22, N 2. - P. 181 - 183.

342. Salin M.L. Isolation and characterization of an iro-containing superoxide dismutase from a eukaryote, Brassica campestris./ M.L. Salin M.L., S.M. Bridges //Arch. Biochem. Biophys. 1980. - Vol. 201. - P. 369 - 374.

343. Sambrook J. Molecular cloning. A laboratory manual. /J. Sambrook, E.F. Fritsch, T. Maniatis. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.

344. Schmidt H.W. Determination of nitrite and nitrate by the Gries reaction. / H.W.Schmidt, M. Kelm // Methods in nitric oxide research. 1996. - P. 491 - 498.

345. Scholl T.O. Oxidant damage to DNA and pregnancy outcome. / T.O. Scholl, T.P. Stein // J. Matern. Fetal Med. 2001. -Vol.10, N3. - P. 182 - 185.

346. Sedlak J. Estimaition of total, protein-bound fnd nonprotein sulfhydryl groups in nissue with Ellman's reagent. / J. Sedlak, R.H. Lindsay // Anal. Biochem. -1968.-Vol. 25. -P.192-205.

347. Sekiba K. Changes of lipid peroxidation and superoxide dismutase activity in the human placenta. / K. Sekiba, T. Yoshioka //Am. J. Obstet. Gynecol. 1979. -Vol. 135.-P. 368-371.

348. Sekkat C. Oxidative phenomena are implicated in human T-cell stimulation. / C. Sekkat, J. Dornand , M. Gerber // Immunology. 1988. - Vol. 63. - P. 431 -437.

349. Selective degradation of oxidized calmodulin by the 20S proteasome. /D.A. Ferrington et al. // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276. - P. 937 - 943.

350. Selenium and malodialdehyde content and glutathione peroxidase activity in material and umbilical cord blood and amniotic fluid. /M. Mihailovic et al . // Biol. Trace Elem. Res. 2000. - Vol. 215. - P. 11 - 19.

351. Selenium and malondialdehyde content and glutathione peroxidase activity in maternal and umbilical cord blood and amniotic fluid. /M. Mihailovic et al. //Biol. Trace Elem. Res. 2000. - Vol. 73. - P. 47 - 54.

352. Selenium and reproduction. / M. Mariorino et al. //Biofactors. 1999. -Vol. 10.-P. 251 -256.

353. Sequence of the gene encoding the mitochondrial cahsule selenoprotein of mouse sperm: identification of three in phase TGA selenocysteine codons. /1. Karimpour et al. //DNA Cell Biol. 1992. - N 11. - P. 693 - 699.

354. Serder Z. Serum iron and copper status and oxidative stress in severe and midl preeclampsia. /Z. Serder, E.Gur, O.Develioglu //Cell Biochem. Funkt. 2006. -Vol.24, N3. - P.209 - 215.

355. Serum lipoperoxides in induced and spontaneous abortions. / A.S. Sane et al. //Gynecol. Obstet. Invest. 1991. -Vol. 31, N 3. - P. 172 - 175.

356. Shigenaga M.K. Assays for 8-hydroxy-2' -deoxyguanosine: a biomarker of in vivo oxidative DNA damage. /M.K. Shigenaga, B.N. Ames // Free Radic. Biol. Med. 1991.-Vol. 10.-P. 211 -216.

357. Shult P.A. Comparison of superoxide generation and luminal dependent chemiluminescence with eosinophils and neutrophils from normal individuals. / P.A. Shult, F.M. Graziano, I.H. Wallow //J. Lab. And Clin. Med. 1985. - Vol. 106.-P. 638-645.

358. Small low-density lipoproteins and vascular cell adhesion molecule-1 are increased in association with hyperlipidemia in preeclampsia. /C.A Hubel et al. // Metabolism. 1998. - Vol. 47. - P. 1281 - 1288.

359. Smith C.V. Correlations and apparent contradictions in assessment of oxidant stress status in vivo. /C.V. Smith // Free Radic Biol. Med. 1992. - Vol. 10, N 3/4 -P. 217-224.

360. Souza-Pinto N.C. DNA repair and aging in mouse liver: 8-oxodG glycosylase activity increase in mitochondrial but not in nuclear extracts. / N.C. de Souza-Pinto, B.A. Hogue, V.A. Bohr // Free Radic. Biol. Med. 2001. - Vol. 30. - P. 916 - 923.

361. Squadrio G.L. Oxidative chemistry of nitric oxide: the roles of superoxide, peroxynitrite and carbon dioxide. / G.L. Squadrio, W. A. Pryor // Free Radic. Biol. Med. 1998. - Vol. 25, N 4/5. - P. 392 - 403.

362. Stamler J.S. Biochemistry of nitric oxide and its redox-activated forms. /J.S. Stamler, D.J. Singel, J.Loscalzo //Science. 1992. - Vol. 258. - P. 1898 - 1902.

363. Steller H. Mechanisms and genes of cellular suicide. /H. Steller // Science. -1995. -Vol. 267. P. 1445 - 1449.

364. Sudha K. Oxidative stress and antioxidant in epilepsy. /K. Sudha, A.V. Rao, A. Rao //Clin. Chim. Acta 2001. - Vol. 303. - P. 19 - 24.

365. Sulfhydryl oxidase-catalysed conversion of xanthine dehydrogenase to xanthine oxidase. / D.A.Clare et al. // Arch. Biochem. And Biophys. 1981. -Vol. 211.-P. 44-47.

366. Sun Y. Free radicals, antioxidant enzymes, and carcinogenesis. / Y. Sun //Free Radic. Biol. Med. 1990. - Vol. 8. - P. 583 - 599.

367. Swain JA. Peroxynitrite releases copper from caeruloplasmin: implications for atherosclerosis. / J.A. Swain, V. Darley-Usmar, J.M.C. Gutteridge //FEBS Lett. 1994. - Vol. 342. - P. 49 - 52.

368. Takahashi K. Purification and characterization of human plasma glutathione peroxidase; a selenoglycoprotein distinct from the known cellular enzyme. /K. Takahashi, N. Fvissar, J. Whitin //Arch. Biochem. Biophys. 1987. - Vol. 256. - P. 677 - 686.

369. Takehara Y. Changes in the levels of lipoperoxide and antioxidant factors in human placenta during gestation. / Y. Takehara, T. Yoshika., J. Sasaki // Acta Med. Okayama. 1990. - Vol. 44 .- P. 103 - 111.

370. Taurine chloramines, a product of activated neutrophils, inhibits in vitro the generation of nitric oxide and other macrophage inflammatory mediators /J. Marcinkiewcz et al. // J. Leucocyte Biol. 1995. - Vol. 58. - P. 667 - 671.

371. Testosterone mediates expression of the selenoprotein PHGPX by indaction of spermatogenesis and not by direct transcriptional gene activation. /M. Mariorino et al. //FASEB J. 1998. - Vol. 12. - P. 1359 - 1370.

372. Thannickal V.J. Reactive oxygen species in cell signaling. / V.J. Thannickal, B.L. Fanburg //Am. J. Physiol. 2000. - Vol. 279. - P. LI 005 - LI028.

373. The chemokine system in diverse forms of macrophage activation and polarization. /Mantovani A. et al. // Trends Immunol. 2004. - Vol. 25, N 12. -P. 677 - 689.

374. The IL-21 receptor augments effector function and alternative macrophage activation / J. Pesce et al. //J.Clin. Invest. 2006. - V. 116. - P. 2044 - 2047.

375. The plasma and placental levels of malondialdehyde, glutathione and superoxide dismutase in pre-eclampsisa./ R. Madazli et. al. //J. Obstet. Gynaecol.- 2002. Vol. 22. - P .477 - 480.

376. The role of oxidative stress in spontaneous abortion and recurrent pregnancy loss: a systematic review. /S. Gupta et al. // Obstet. Gynecol. Surv. 2007. - Vol. 62.-P. 335-347.

377. The role of trophoblast in the physiological change of decidual spiral arteries. /E.P. Kam et al. // Hum. Reprod. 1999. - Vol.14. - P.2431 - 2438.

378. The selenium status of woman with a history of recurrent miscarriage. /A.S. Al-Kunani etal.//BLOG.-2001.-Vol. 108, N 10.-P. 1094- 1097.

379. The superoxide generating system of B cell lines. Structural homology with the phagocytic oxidase and triggering via surface Ig. / F.E. Maly et al. // J. Immunol. 1988. - Vol. 140. -P. 2334 - 2339.

380. Threading of a glycosylated protein loop through a protein hole: implications for combination of human chorionic gonadotropin subunits / Xing Y. et al. // Protein Sci. 2001. - Vol. 10. - P. 226 - 235.

381. Todorova K. Selenium and glutation peroxidase enzyme levels in diabetic patients with early spontaneous abortions. /K. Todorova, S.Ivanov, M.Genova //Akush. Ginekol. (Sofiia). 2006. - Vol. 45. - P. 3 - 9.

382. Total antioxidant capacity as a tool to assess redox status: critical view and experimental data. /A. Ghiselli A. et al. // Free Radic. Biol. Med. 2000. - Vol. 29.-P. 1106-1114.

383. Transgenic mice overexpressing glutation peroxidase 4 are protected against jxidative stress-induced apoptosis. / Q. Ran et al. // J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279.-P. 55137-55146.

384. Trophoblastic oxidative stress in relation to temporal and regional differences in maternal placental blood flow in normal and abnormal early pregnancies /Jauniaux E. et al. // Fm. J. Pathol. 2003. - Vol. 2. - P. 423 - 427.

385. Turnover of bacterial glutamine synthetase: oxidative inactivation precedes proteolysis. /R.L. Levine et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. - Vol. 78. -P. 2120-2124.

386. Turrens J.F. Generation of superoxide anion by the NADH dehydrogenase of bovine heart mitochondria / J.F. Turrens, A. Boveris // Biochem. J. 1980. - Vol. 180. - P. 421 -427.

387. Turrens J.F. Superjxide prodaction by the mitochondrial respiratory chain. / J.F.Turrens // Biosci. Rep. 1997. - Vol. 17. - P. 3 - 8.

388. Use of percoll gradients for isolation of human placenta mitochondria suitable for investigating outer membrane proteins. / F. Gasnier et al. //Analytical Biochemistry. 1993. - Vol. 212. - P. 173 - 178.

389. Van der Vliet A. Effect of oxidative stress on receptors and signal transmission / A.Van der Vliet, A. Bast //Chem. Diol. Interact. 1992. - Vol. 85 -N2/3.-P. 95-116.

390. Van Resburg C.E. Inactivation of poly (ADP-ribose) polymerase by hypochlorous acid /C.E. Van Rensburg, A.M. Van Staden, R. Anderson //Free Radic. Biol. Med. 1991. - Vol. 11,- P.285 - 291.

391. Vanhaesebroeck B. The PI3K-PDK1 connection: more than just a road to PKB / B.Vanhaesebroeck, D.R. Alessi // Biochem. J. 2000. -Vol. 346. - P. 561 -576.

392. Vogt W. Oxidants generated by the myeloperoxidase halide system activate the fifth component of human complement C5. / W. Vogt, D. Hesse //Immunobiology. 1994. - Vol. 192. - P. 1 - 9.

393. Walsh S.W. Deficient glutathione peroxidase activity in preeclampsia is associated with increased placental production of thromboxane and lipid peroxides. / S.W. Walsh, Y. Wang // Am. J. Obstet. Gynecol. 1993. - Vol. 169. - P. 1456 -1461.

394. Walsh SC. Lipid peroxidation in pregnancy. / SC. Walsh. //Hypertension Pregnancy. 1994. - Vol. 13. - P. 1 - 25.

395. Walsh SC. Placental prodaction of 8-isoprostane is significantly increased in preeclampsia./ S.C. Walsh, Y. Wang, J. E. Vaughan //J. Soc. Gynecol. Invest. -1997.-Vol. 4.-P. 96A.

396. Walsh SW. Trophoblast and placental villous core production of lipid peroxides, thromboxane, and prostacyclin in preeclampsia /S.W. Walsh, Y. Wang // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1995. - Vol.80. - P. 1888 - 1893.

397. Wanders R.J.A. Identification of superoxide dismutase in rat liver peroxisomes. / R.J.A. Wanders, S. Denis // Biochim. Biophys. Acta. 1992 -Vol. 1115,N3. - P. 259-262.

398. Wang Y. Placental mitochondria as a source of oxidative stress in preeclampsia. /Y. Wang, S.W. Walsh // Placenta. 1998. - Vol. 19. - P. 581 - 586.

399. Wang Y. Antioxidant activities and mRNK expression of superoxide dismutase, catalase, and glutathione peroxidase in normal and preeclamptic placentes. / Y.Wang, S.W.Walsh // J. Soc. Gynecol. Investig. 2000. - Vol. 3. -P. 179- 184.

400. Wang Y. Placental mitochondria as a source of oxidative stress in preeclampsia. /Y. Wang, S.W. Walsh // Placenta. 1998. - Vol.19. - P.581 - 586.

401. Weiss S.J. The interplay of oxidants and proteinases in neutrophil-mediated tissue damage. / S.J. Weiss // J. Cell. Biochem. 1991, Suppl. - P. 210.

402. Wolff S.P. Fragmentation of proteins by free radicals and its effect on ther susceptibility to enzymic hydrolysis. / S.P. Wolff, R.T. Dean //Biochem. J. 1986. -Vol. 234.-P. 399-403.

403. Wu W. Eosinophil peroxidase nitrates protein tyrosyl residues. Implications for oxidative damage by nitrating intermediates in eosinophilic inflammatory disorders. / W. Wu, Y.Chen, S.L Hazen. // J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274. -P. 25933-25944.

404. Xenobiotic metabolism genes and the risk of recurrent spontaneous abortions. /A. Hirvonen et al . // Epideimiology. 1996. - Vol. 7. - P. 206 - 208.

405. X-ray crystal structure of a recombinant human myoglobin mutant at 2.8A resolution. / S.R Hubbard et al. //J. Mol. Biol. 1990. - Vol. 213. - P. 215 -218.

406. Yu V.X. Prematurity /V.X. Yu, E.K.Wood. Edinburgh. - 1987. - 292 p.

407. Zhang R. Myeloperoxidase functions as a major enzymatic catalyst for initiation of lipid peroxidation at sites of inflammation / R.Zhang et al. // J. Biol.Chem. 2002. - Vol. 277. - P. 46116 - 46122.