Поиск генетических и экспрессионных маркеров риска развития болезни Паркинсона в российской популяции

Филатова, Елена Владиславовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Поиск генетических и экспрессионных маркеров риска развития болезни Паркинсона в российской популяции
ВАК РФ 03.01.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Поиск генетических и экспрессионных маркеров риска развития болезни Паркинсона в российской популяции"

~ У 4845ВОО

Филатова Елена Владиславовна

ПОИСК ГЕНЕТИЧЕСКИХ И ЭКСПРЕССИОННЫХ МАРКЕРОВ РИСКА РАЗВИТИЯ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА В РОССИЙСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ

03.01.03 - Молекулярная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА - 2011

1 2 МАЙ 2011

4845888

Работа выполнена б Отделе молекулярных основ генетики человека Учреждения Российской академии наук Института молекулярной генетики РАН (зав. отделом доктор биологических наук, профессор С. А. Лимборская).

Научный руководитель:

кандидат биологических наук Мария Игоревна Шадрина

ИМГРАН

Официальные оппоненты:

доктор биол. наук, профессор Валерий Вячеславович Носиков

ФГУП «ГосНИИ генетика»

доктор биол. наук, профессор Александр Васильевич Карпухин

Медико-генетический научный центр РАМН

Ведущая организация:

Учреждение Российской академии наук Институт биологии гена РАН

. Защита диссертации состоится 2011 г. в 14 часов

на заседании Диссертационного совета Д.217.013.01 при ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов» по адресу: 117545, Россия, Москва, 1-ый Дорожный проезд д. 1. Тел: (495)315-3747.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов»

Автореферат разослан 2011 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат химических наук

Т. Л. Воюшина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Стремительный прогресс в области технологий и накопление большого объема данных о строении и работе как отдельной клетки, так и всего организма в целом в последние десятилетия привели к активному развитию новых дисциплин в области молекулярной генетики, таких как геномика и протеомика. Одним из важнейших направлений геномики является медицинская геномика, которая занимается определением remibix дефектов при наследственных и других болезнях, изучением экспрессии мутантных генов и разработкой новых методов диагностики, лечения и профилактики. Особый интерес в этом направлении представляет изучение молекулярно-генетических основ нейродегенеративных заболеваний. Это связано с тем, что изучение этой группы болезней позволяет выявить и охарактеризовать новые экспрессирующиеся в нервной системе гены, что существешю расширит генетическую базу, закладывающую основы изучения молекулярных принципов функционирования нервной системы.

К числу тяжелых неврологических патологий относится болезнь Паркинсона (БП), которая является вторым по распространенности (после болезни Альцгеймера) нейродегенеративным заболеванием человека. Это мультисистемное хроническое медленно прогрессирующее нейродегенеративное заболевание, связанное с нарушением деятельности базальных ганглиев головного мозга. В настоящее время полагают, что в основе БП лежит дегенерация или дисфункция дофаминергических нейронов в черной субстанции. Отличительной особенностью болезни Паркинсона является то, что характерные для заболевания клинические признаки проявляются при гибели приблизительно 60% дофаминергических нейронов компактной части черной субстанции и 80%-ном снижения уровня дофамина в полосатом теле.

С генетической точки зрения БП является гетерогенным заболеванием. В 1015% случаев заболевание может наследоваться по моногенному аутосомному типу, но в большинстве случаев носит спорадический идиопатический характер и обусловлено сложным взаимодействием между генетическим строением организма и факторами окружающей среды. Активное изучение молекулярных основ развития моногенных форм БП позволил идентифицировать семь генов (PARK2, SNCA, PINK1, PARK7, LRRK2, UCHL1, АТР13А2), вовлеченных в их патогенез. Это позволило расширить представления об этиопатогенезе заболевания и начать более целенаправленную работу по изучению генетических факторов более частой спорадической формы БП. Так в настоящее время показано, что мутации в гене PARK2 вносят существенный вклад в развитие спорадической формы этого заболевания оообенно с ранним началом его развития. Полученные данные говорят о

необходимости продолжения такого рода работ и изучения мутаций и полиморфизмов генов моногеиных форм заболевания у больных со спорадической формой болезни Паркинсона. Кроме того, выявлен ряд потенциальных кандидатных. генов (SLC6A3, МАРТ, ST13, GSK3B, GBA к др.), которые могут быть вовлечены вовлеченных в патогенез БП и влиять на риск его развития. Однако вклад этих генов, а также мутаций и полиморфизмов в них в патогенез спорадической формы БП изучен не до конца. В последнее годы также начаты работы по изучению транскриптома при БП в post mortem тканях мозга на поздних стадиях заболевания. Однако дм выявления всех патогенетических процессов, протекающих при БП необходимо изучать изменения экспрессии генов-кандидатов на разных стадиях заболевания и в первую очередь на самых ранних (доклинических). Основная проблема при проведении таких исследований - недоступность тканей головного мозга человека на ранних стадиях заболевания. В то же время оценку относительных уровней мРНК исследуемых генов можно проводить в периферической крови, самой доступной ткани человека.

Проведение работ по анализу полиморфизмов и мутаций генов, вовлечённых в патогенез БП, а также изменения экспрессии генов-кандидатов позволит с одной стороны лучше понять причины и механизмы развития этого заболевания, а с другой стороны разработать молекулярно-генетические тесты для определения риска развития БП и её ранней диагностики. Возможность проведения доклинической диагностики этого заболевания позволит начать разработку принципов и подходов профилактического лечения в тот момент, когда дегенерация дофаминэргических нейронов находится на ранней стадии и затронула лишь ограниченное число нейронов этого типа. Осуществление этой работа позволит разработать в дальнейшем новые методы терапии, которые могли бы замедлить (если не остановить) развитие патологических процессов в нервной ткани и тем самым сдвинуть возраст клинического дебюта заболевания на более поздний срок и снизить его клиническую тяжесть.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы являлись поиск и анализ генетических и экспрессионных маркеров риска развития болезни Паркинсона в российской популяции.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Анализ точковых мутаций в генах, вовлеченных в патогенез БП, у пациентов с семейной и спорадической формами БП с ранним и поздним началом развития заболевания из России.

2. Анализ одноцуклеотидных полиморфизмов (ОНП) в генах, вовлечённых в патогенез БП, у пациентов с семейной и спорадической формами БП с ранним и поздним началом развития заболевания из России.

3. Анализ относительных уровней мРНК генов GSK3B, SLC6A3, МАРТ, PARK2, SNCA, ST13 в периферической крови пациентов с БП из России, находящихся на ранних стадиях заболевания, подвергавшихся и не подвергавшихся лечению, и в группах сравнения.

Научная новизна ч практическая значимость работы

Впервые при анализе 68 известных точковых мутаций в генах моногенных форм БП было выявлено только три известных точковых мутаций (MIL, A82G и C253Y) в гетерозиготном состоянии в гене PARK2 у трёх различных пациентов со спорадической формой БП с ранним началом развития, что свидетельствует о малом вкладе известных мутаций в патогенез спорадической формы БП в России.

Впервые была показана ассоциация полиморфизма rs2736990 (С/Т) в гене SNCA с риском развития спорадической формы болезни Паркинсона в российской популяции. Показано, что носительство аллеля С в ОНП rs2736990 в гене SNCA повышает риск развития болезни Паркинсона в 1,70 раза.

Впервые в России был проведён анализ относительных уровней экспрессии генов GSK3B, SLC6A3, МАРТ, PARK2, SNCA, ST13, вовлечённых в патогенез БП, в периферической крови у пациентов, находящихся на ранних стадиях развития БП. Было показано, что уровень мРНК генов SLC6A3, МАРТ, PARK2 крайне низок - это усложняет их использование для анализа транскриптома при БП в периферической крови. Обнаружено, что уровни мРНК генов GSK3B и ST13 в периферической крови пациентов с болезнью Паркинсона на ранних стадиях не отличаются от таковых у здоровых добровольцев. Впервые было выявлено значительное увеличение уровня мРНК гена SNCA в периферической крови у пациентов с болезнью Паркинсона на ранних стадиях заболевания более чем в 5 раз, у больных церебральным атеросклерозом более чем в 2 раза и у пациентов с различными неврологическими заболеваниями в 3 раза.

Установлено, что полиморфизм rs2736990 в гене SNCA ассоциирован с риском развития болезни Паркинсона и в дальнейшем может быть включён в панель маркеров для определения индивидуального риска развития БП. В будущем,

результаты данного исследования могут быть использованы для создания единого комплексного генетического теста, выявляющего риск развития БП.

Установлен разный спектр направлений изменения экспрессии генов GSK3B, SNCA, STJ3 у пациентов с БП и в группах сравнения. В дальнейшем эти гены могут быть включены в панель экспрессионных маркеров для диагностики БП и в первую очередь на ранних её стадиях.

Показано, что при изучении транскриптома при БП в периферической крови необходимо использовать в качестве групп сравнения больных с другими неврологическими заболеваниями и в первую очередь с церебральным атеросклерозом.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ, из них 3 статьи и 3 материала симпозиумов и конференций.

Апробация диссертации

Результаты, полученные в данной работе, были представлены на Втором всемирном конгрессе по болезни Паркинсона (The Second World Parkinson Congress, Глазго, Шотландия), 2010 г., VI Съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону), 2010 г., XII научной конференции молодых учёных по физиологии высшей нервной деятельности и нейрофизиологии (Москва), 2008 г. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседании Ученого совета ИМГ РАН 21 марта 2011 г. и на заседании секции «Молекулярная биология» Ученого совета ФГУП «ГосНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов» 21 марта 2011 г.

Структура и объем диссертации

Диссертация включает введение; обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования и их обсуждение; выводы; библиографический указатель. Список литературы состоит из 288-х источников, среди которых 6 источников отечественной и 282 источников зарубежной литературы. Материалы диссертации изложены на 155 страницах машинописного текста, содержат 10 таблиц и 8 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

В настоящей работе исследовали четыре группы пациентов с БП: 1) 346 пациентов со спорадической формой БП с ранним и поздним началом развития заболевания, 2) 21 пациент с гавеинлыюй формой БП из семей с аутосомно-доминантпым типом наследования, 3) 13 пациентов с недавно поставленным диагнозом БП и ещё не подвергавшихся лечению (1-2 стадия БП по шкале Хен и Яра), 4) 29 пациентов с недавно поставленным диагнозом БП, подвергавшихся лечению, (12 стадия БП по шкале Хен и Яра).

В качестве групп сравнения в настоящей работе исследовали следующих пациентов и здоровых добровольцев: 1) 18 больных с разными неврологическими заболеваниями (болезнь Вильсона-Коновалова, эссенциаяькый тремор, мозжечковая атаксия), 2) 59 пациентов с церебральным атеросклерозом, 3) в качестве контроля для анализа ТМ и ОНП была сформирована популяционная выборка в количестве 224 человек, для которых отбирались лица русского происхождения из Архангельской, Тверской и Ивановской областей, 4) в качестве контроля для анализа экспрессии генов были отобраны 56 неврологически здоровых добровольцев.

В группы пациентов с различными неврологическими патологиями и группы контроля отбирались лица обоих полов русского происхождения в возрасте от 30 до 70 лет. Все пациенты и неврологически здоровые добровольцы были отобраны в Научном центре неврологии Российской академии медицинских наук, г. Москва.

Все пациенты с БП для постановки диагноза были исследованы по международной унифицированной оценочной шкале болезни Паркинсона (Unified Parkinson's Disease Rating Scale, UPDRS) и шкале Хен и Яра (Hoehn and Yahr scores) в Научном центре неврологии Российской академии медицинских наук, г. Москва. Все образцы крови были взяты с информированного согласия исследуемых лиц. Дня анализа брали периферическую кровь, из которой геномную ДНК выделяли стандартным методом, а тотальную РНК - с помощью набора ZR Whole-Blood Total RNA Kit™ «Zymo Research Corp.» (Orange, USA).

Анализ точковых мутаций и 01Ш в генах, вовлечённых в патогенез БП, у пациентов с семейной и спорадической формами БП с ранним и поздним началом развития заболевания из России проводили с помощью микрочиповой технологии удлинения праймера APEX (Arrayed primer extension), полимеразной цепной реакции в реальном времени и полиморфизма длин рестрикционных фрагментов. В работе использовали ДНК-чипы Genorama microarray slides (Sal-01, 30211) производства

фирмы «Asper Biotech Ltd.» (Tartu, Estonia), а также реактивы фирм «Fermentas» (Vilnius, Lithuania), «BioAtlas» (Tartu, Estonia), «Genomed GmbH» (Lohne, Germany), «Invitrogen» (Carlsbad, USA), «Синтол» (Москва, Россия). Праймеры, зонды и рестрикционную зндодезоксирибонуклеазу подбирали с помощью программ Vector NTT Advance 10.0.1 «Invitrogen» (Carisbad, USA), Beacon designer 7.0 «Premier Biosoft International» (Palo Alto, USA) и нуклеотидных последовательностей генов LRRK.2, SNCA, PARK2, WNT3 (ссылки на последовательности в базе данных NCBI (Reference Sequence): NT_029419.12, NT_016354.19, NT_007422.13, NT_010783.15). Последовательности праймеров и зондов приведены в таблице 1.

Таблица 1. нуклеотидные последовательности праймеров и зондов для анализа ОНП в генах LRRK2, SNCA, PARK2, WNT3. FAM, ROX - флуоресцентные красители, RTQ-1, RTQ-2 - тушители флуоресценции. Ген, ОНП Нуклеотидные последовательности LRRK2, Lrs79-f 5'-CCTATTAAAATTTCATGGTTCCTTCC rs7966550 Lrs79-r S'-CATTAGGTAAATATATATGAAGATTATGTAAGATG SNCA, 273-SN-f S'-GATAATGGCTTACAAGTTAATCTCCTC rs2736990, 273-SN-r 5'-GACTAGCAGATGATGAGCAGGC

273SN-C-probe 5'-FAM-TGTTACACACATATACACCTTCTTCCTAAACAGC-RTQ-l 273SN-T-probe 5'-ROX-TGTTACACACATATACATCTTCTTCCTAAACAGC-RTQ-2 PARK2, P-V380L-f 5 '-GGGAATGTAAAGAAGCGTACC rsl801582 P-V380L-' 5'-TGCTTGGAGGAATGAGTAGG

V3S0L-C-probe 5 '-ROX-AGTGCAGTGCCCTATTTGAAGCCTC-RTQ-2 V380L-G-pfobe 5'-FAM-AGTGCAGTGCCGTATTTGAAGCCTC-RTQ-l WNT3, MAPT-snp-f5'-AGGAAGAGGGAATTAGACTAGACC rs415430 MAPT-snp-r 5'-AAGGAGGGATGGTGCTTGC

MWsnpT-probe 5'-FAM-CAGCCTTCAACTTTGCACCTAGAGCCC-RTQ- i MWsnpC-probe 5'-ROX-CAGCCTTCAACTTCGCACCTAGAGCCC-RTQ-2

Для анализа полученных изображений после АРЕХ-реакции использовали пакет программ GENORAMA Genotyping Software: Genorama BaseCaller и Genorama PicDB «Asper Biotech» (Tartu, Estonia).

Анализ относительной экспрессии генов SLC6A3, GSK3B, МАРТ, PARK2, SNCA, ST13 проводили с помощью реакции обратной транскрипции и ПЦР в ре&чьном времени. В работе использовали набор RevertAid™ Н Minus Reverse Transcriptase kit «Fermentas» (Vilnius, Lithuania) и реактивы фирмы «Синтол» (Москва, Россия). Праймеры и зонды подбирали с помощью программы Beacon designer 7.0 «Premier Biosoft International» (Palo Alto, USA) и нуклеотидных последовательностей генов SLC6A3, GSK3B, МАРТ, PARK2, SNCA (инвентарные номера в базе данных GenBank (Accession numbers): NM_001044.2, NM_002093.2, NM_001123066.2, NM_004562.1, NM_000345.2), кроме гена ST 13 - последовательности праймеров и зонда были

опубликованы ранее (Dong и др., 2005). В качестве внутренних генов сравнения мы использовали гены POLR2F и PSMB6 (инвентарные номера в базе данных GenBank (Accession numbers): NM_021974.3, NM 002798.1). Последовательности праймеров и зондов приведены в таблице 2.

Таблица 2. Нуклеотидные последовательности праймеров и зондов для анализа относительной экспрессии генов SLC6A3, GSK3B, МАРТ, PARK2, SNCA, STJ3. Ген Нуклеотидные последовательности

SLC6A3 DAT-probe 5'-ROX-AGCAGCACGATGACCAGCACC-RTQ-2 DAT-for 5'-TTTTGGGACCACACCTGCTG DAT-rev 5'- GTCTTCACGCCCTTCCAGAG GSK3B GSOb-probc5'-ROX-CCGGAAACAGTATACAGAGTTGCCAGACAC-RTQ-2 GSK3b-f 5'-GTCTATCTTAATCTGGTGCTGGAC GSK3b-r5'-AGCTGATACATATACAACTTGACATAAATC МАРТ MAPT-probe 5'-ROX-CCTCCAAGTGTGGCTCATTAGGCAACATCC-RTQ2 MAPT-f 5'-TCTACAAACCAGTTGACCTGAGC MAPT-r 5'-CCAGGGACGTGGGTGATATTG PARK2 PARK2-probe 5'-ROX-TTCACGACCCTCAACTTGGCTACTCCCTG-RTQ2 PARK2-For 5'-CTGTGTGACAAGACTCAATGATCG PARK2-Rev 5 '-CCGGTTGTACTG CTCTTCTCC POLR2F PolR2F-probe 5'-FAM-CTTCATCCTCCTCCACATCATCAAAGTCGTCG-RTQ-1 PolR2F-f 5'-ATGTCAGACAACGAGGACAATTTTG PolR2F-r 5 '-TCTTCGG CATTCTCCAAGTCATC PSMB6 PSMB6-probe 5 '-FAM-AGCCGAGAAGTTTCCACTGGGACCACTATC-RTQ-1 PSMB6-f 5'-CGGAGGCGTTCACTCCAG PSMB6-r 5'-TCGATTGGCGATGTAGGACC SNCA NACPprobe 5 '-ROX-TGTTCTCTATGTAGGCTCCAA-RTQ2 NACP-f5'-AGCAGGAAAGACAAAAGAGG NACP-r 5'-TTGCTCTTTGGTCTTCTCAG ST13 ST13probe 5'-ROX-CCAAGAGGGCCAGTGTCTTCGTCAAA-RTQ2 ST13-f 5'-CCTCGCTTGGCCATTTTGT ST13-r 5'-TGGCAGCATTTGGCTTCTG

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием пакета программ "Statistica for Windows 8.0" (StatSoft, Inc. (2007). STATISTICA (data analysis software system), version 8.0. www.statsoft.com) и программного обеспечения MS Excel 2007 (Microsoft). Для расчета относительных шансов применяли программное обеспечение GraphPad InStat v3.06 (GraphPad Software, Inc.). Для расчёта соответствия распределения генотипов в популяционной выборке закону Харди-Вайнберга использовали программное обеспечение Hardy-Weinberg equilibrium calculator (http://www.oege.org/software/hwe-mr-calc.shtml).

Для оценки относительных уровней экспрессии генов использовали метод сравнения пороговых уровней амплификации. Данные анализировали с применением непараметрических тестов (U-тест Манна-Уитни, тест Колмогорова-Смирнова).

Результаты исследования.

Анализ точковых мутаций и одионуклеотыдных полиморфизмов в генах при болезни Паркинсона.

ДНК-чиповые технологии являются весьма перспективным подходом для поиска и определения генетических маркеров риска развития самых разнообразных заболеваний, в том числе и БП. Основная задача, которую ставят перед собой учёные в таких исследованиях, как полногеномный анализ ассоциаций или более детальный анализ генов, основанных на ДНК-чиповых технологиях, заключается в поиске генетических маркеров, которые бы показали чёткую связь маркера и развития спорадической формы БП. Это позволило бы быстро, надёжно и с малыми затратами выявлять лиц с предрасположенностью к БП го всей популяции. В рамках поиска и анализа генетических маркеров БП мы также решили изучить распределение частот генотипов некоторых ТМ и ОНП в генах, так или иначе вовлечённых в патогенез БП.

Анализ ТМ и ОНП в настоящей работе проводили с помощью, так называемой, реакции удлинения праймера, Arrayed Primer Extension - APEX.

При создании этого чипа были выбраны наиболее часто (более чем в двух семьях) встречающиеся ТМ в генах моногенных форм БП и целый ряд ОНП, расположенных в генах, вовлечённых в патогенез данного заболевания. Таким образом, мы проанализйровала 68 точковых мутаций и 31 ОНП в генах PARK2, PARK7, LRRK2, РШ1, STH/Tau hapíotype, МАРТ, UCHL1, NR4A2 (NURR1), PSEN1, SNCB, WFS!, POMC. Необходимо отметить, что большинство ТМ и ОНП, представленных на чипе, располагается в генах PARK2 и LRRK2, что составляет соответственно более 58% и 19% от всех ТМ и ОНП на чипе.

Данная часть работы проводилась на двух выборках пациентов с БП с ранним началом развития, поскольку считается, что именно у этой группы пациентов генетический фактор в развитии заболевания выражен сильнее. Именно поэтому в первую выборку вошёл 21 пациент с ювенильной формой БП, наследуемой по аутосомно-рецессивному типу. Выбор именно этих пациентов для анализа ТМ и ОНП объясняется большой представленностью на чипе ТМ в гене PÂRK2, которые приводят к развитию семейных форм БП с ранним началом развития и быстрым прогрессированием. Во вторую выборку вошёл 41 пациент со спорадической формой БП также с ранним началом развития, поскольку считают, что к данной форме БП могут приводить мутации в гене PARK2.

Из 68 изученных нами ТМ мы обнаружили только три различных ТМ в гетерозиготном состоянии в гене PARK2 у трёх различных пациентов со спорадической БП с ранним началом развития. Ранее было показано, что эти три ТМ (MIL, A82G и C253Y) в гене PARK2 приводят в гомозиготном состоянии к развитию БП с наследованием по аутосомно-рецессивному тину. Частоты генотипов по выявленным нами ТМ представлены в таблице 3. Частота встречаемости ТМ в гене PARK2 у пациентов с БП из российской популяции составила 0,05.

Таблица 3. Частоты генотипов выявленных точковых мутаций.

Геи, ТМ Впервые обнаружена Пациенты со спорадической формой БН

PARK2

MIL (АА/АТ/ТТ) (RawalHflp., 2003) 0,976/0,024/0

A82G (СС/СА/АА) (Hedrich и др., 2001) 0,976/0,024/0

С253Т (GG/GA/AA) (Oliveira и др., 2003) 0,976/0,024/0

Согласно литературным данным, различные ТМ в гене PARK2 в разных популяциях (Польша, Италия, Турция, Бразилия, Куба, Северо-Западная Индия, Северная Америка, Австралия) приводят к развитию БП с ранним началом развития реже, чем делеции и дупликации экзонов в этом гене. К тому же, авторы подчёркивают, что существует большое разнообразие ТМ в гене PARK2, каждая из которых сама по себе встречается довольно редко (Abbas и др., 1999, Bertoli-Avella и др., 2005, Koziorowski и др., 2010, Sun и др., 2006, Vinish и др., 2010). Таким образом, можно предположить, что для российской популяции также характерна крайне высокая микрогетерогенность исследованных нами ТМ.

Нам также удалось выявить 12 ОНП (из 31 представленного на чипе) в генах PARK2, NR4A2, LRRK2 и PARK7. Частоты генотипов выявленных ОНП отражены в таблице 4. Для оценки возможного вклада выявленных нами ОНП в развитие БП мы провели сравнительный анализ распределения генотипов по этим ОНП в центральной европейской популяции (данные по популяции CEU, central Europe, из проекта по картированию гаплотипов НарМар) (http://www.nchi.nlm.tiih.gov/snp/) с полученными нами результатами, что также отражено в таблице 4. Как видно из таблицы 4, частоты как аллелей, так и генотипов большинства выявленных нами ОНП для российских пациентов почти равны или совпадают с таковыми в центральной Европе (CEU).

Таблица 4. Частоты генотипов и аллелей выявленных ОНП.

Ген, ОНП Европейская популяция (численность) Пациенты с ювенильной формой БП Пациенты со спорадической формой БП

PARK2

S167N(rs 1801474) (GG/GA/AA) 0,967/0,033/0 (120) 0,952/0,048/0 0,951/0,049/0

V380L (rsl801582) (CC/CG/GG) 0,683/0,300/0,017 (90) 0,81/0,19/0 0,927/0,073/0

D394N (rsl801334) (CC/CT/TT) 0,883/0,117/0(90) 1/0/0 0,902/0,098/0

NR4A2 (NURR1)

N16PinsG (AA/AG/GG) Нет данных 0,524/0,476/0 0,634/0,366/0

LRRK2

N551K (rs7308720) (CC/CG/GG) 0,883/0,117/0(174) 0,952/0,048/0 0,927/0,073/0

P1542S (rs33958906) (CC/CT/TT) Нет данных 0,762/0,238/0 0,805/0,195/0

L153L (rsl0878245) (CC/CT/TT) ■ 0,367/0,467/0,167 (174) 0,667/0,333/0 0,366/0,341/0,293

1723V (rsl 0878307) (AA/AG/GG) 0,833/0,150/0,017 (174) 1/0/0 0,927/0,073/0

rs7966550 (TT/TC/CC) 0,750/0,200/0,050 (174) 0,952/0,048/0 0,951/0,049/0

R1514Q (rs35507033) (GG/GA/AA) С = 0,980; Т = 0,020 (24) С = 0; Т = 0 С = 0,976; Т = 0,024

S461S (rs35847451) (TT/TC/CC) Нет данных 0,952/0,048/0 0,976/0,024/0

PASK7 (DJ-1)

R98Q(rs71653619) (GG/GA/AA) G = 0,980; А = 0,020 (24) G = 0,976; А = 0,024 G = 0,988; А = 0,012

Однако необходимо отметить, что для двух ОНП в генах LKRK2 и PARK2 у пациентов с БП из России характерна большая встречаемость частых аллелей именно в гомозиготном состоянии. Так встречаемость генотипа TT ОНП rs7966550 в гене LRRK2 и генотипа СС ОНП rsl801582 (V380L) в гене PARK2 у российских пациентов была больше, чем в европейской выборке (см. таблицу 4).

Таким образом, на основе первых результатов, полученных в ходе APEX, можно было сделать предположение, что два ОНП в генах LRRK2 и PARK2 (rs7966550 и rsl801582 (V380L), соответственно) могут влиять на риск развития БП в российской

популяции. Поэтому мы решили исследовать распределения генотипов по этим ОНП на более представительной выборке пациентов со спорадической формой БП и контрольной выборке из российской популяции. Анализ ОНП в гене PARK2 мы проводили с помощью ПЦР в реальном времени. Для этого нами была разработана система «праймеры-зонды» (с помощью программы Beacon designer 7.0) и подобраны условия амплификации. Для анализа ОНП в гене LRRK2 мы применили метод полиморфизма длин рестрикционных фрагментов.

Результаты более детального анализа ОНП rsl801582 и rs7966550 в генах LRRK2 и PARK2 с помощью ПЦР в реальном времени и анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов представлены в таблице 5. Как видно из представленных данных, частоты и аллелей, и генотипов по обоим ОНП rsl801582 (PARK2) и rs7966550 (LRRK2) у пациентов со спорадической формой БП совпадают с таковыми в контрольной выборке. Таким образом, проведённый нами более детальный анализ не подтвердил наличие ассоциаций ОНП rsl801582 и rs7966550 в генах PARK2 и LRRK2 с БП.

Таблица 5. Частоты аллелей и генотипов ОНП в генах LRRK2 и PARK2.

Аллели, N(f) Генотипы, N(f) Отношение рисков (95% доверительный интервал (CI)) Р value

ЬЯЛК2 «7966550 Т С ТТ ТС СС

Пациенты со спорадической формой БП 596 (0,89) 72 (0,11) 266 (0,80) 64 (0,19) 4 (0,01) 1,16(0,80-1,69) 0,44

Контроль 386 (0,88) 54 (0,12) 169 (0,77) 48 (0,22) 2 (0,01)

РАКК2 гв 1801582 G С GG GC СС

Пациенты со спорадической формой БП 578 (0,84) 114 (0,16) 238 (0,69) 102 (0,29) 6 (0,02) 1,16(0,85-1,58) 0,38

Контроль 363 (0,81) 83 (0,19) 148 (0,66) 67 (0,30) 8 (0,04)

N - количество

f-частота

Анализ дополнительных однонуклеотидных полиморфизмов в генах SNCA п МАРТ.

Согласно последним данным полногеномиых исследований ассоциаций, далеко не последнюю роль в развитии БП могут играть ОНИ в генах SNCA н МАРТ (Gandhi and Wood, 2010). Так неоднократно была показана ассоциация некоторых ОНП в гене SNCA и локусе МАРТ с риском развития данного заболевания, тем более, что эти гены вовлечены в патогенез БП. Поэтому на основе анализа работ по полногеномному исследованию ассоциаций (Edwards и др., 2010, Simon-Sanchcz и др., 2009, Simón-Sánchez и др., 2009) мы выбрали ещё два ОНП в генах SNCA и WNT3, расположенном рядом с МАРТ, - rs2736990 и is415430 соответственно. Полиморфизм rs2736990 расположен в самом длинном интроне гена SNCA, и, вероятно, может влиять на регуляцию экспрессии этого гена. Функция гена WNT3 пока неизвестна, но белок, кодируемый этим геном, относят к семейству секретируемых сигнальных белков, принимающих участие в некоторых процессах при эмбриогенезе (Liu и др., 1999). Однако, несмотря на это, полиморфизм rs415430 ассоциируют с локусом гена МАРТ.

ОНП rs2736990 и rs415430 были проанализированы на тех же выборках, что и предыдущие два в генах PARK2 и LRRK2, с помощью ПЦР в реальном Бремени. Результаты, полученные нами в ходе этого этапа работы, представлены в таблице 6.

Таблица 6. Частоты аллелей и генотипов ОНП в генах SNCA и MAPT/WNT3.

Аллели, N (f) Генотипы, N (f) Отношение рисков (95% доверители! ый интервал (СО) Р valué

SNCA «2736990 С Т СС СТ ТТ (СС+СТ)/ТТ

Пациенты со спорадическо й формой БП 354 (0,52) 332 (0,48) 88 (0,26) 178 (0,52) 77 (0,22) 1,70 (1,17-2,48) 0,01

Контроль 198 (0,44) 250 (0,56) 48 (0.21) 102 (0,46) 74 (0,33)

MAPT/WW73 rs415430 А G АА AG GG (AA+AG)/G G

Пациенты со спорадическо й формой БП 611 (0,88) 83 (0,12) 268 (0,77) 75 (0,22) 4 (0,01) 0.17 (0,01-3,18) 0,16

Контроль 402 (0,90) 46 (0,10) 178 (0,79) 46 (0,21) 0

N - количество

f- частота

Как видно из таблицы 6, присутствие аллеля С в ОНП rs2736990 в гене SNCA достоверно повышает риск развития БП. Таким образом, нам удалось показать чёткую ассоциацию полиморфизма rs2736990 в гене SNCA с риском развития спорадической формы БП в российской популяции. Мы получили соотношение шансов OR= 1,70 при доверительном интервале (95% CI) 1,17-2,48 и достоверности р = 0,01, что отражает повышение риска развития БП у носителей аллеля С почти в два раза. Распределение генотипов в популяционкой выборке соответствует закону Харди-Вайнберга при Х2=1,32 и р ~ 0,25. Кроме того, наши данные также сопоставимы с результатами полногеномных исследований Simón-Sánchez и др. и Edwards и др. (OR= 1,29 при р = 0,01, OR = 1,27 при р = 6,17*10"13 и OR = 1,23 при p = 2,24xl0"16), полученных на больших выборках пациентов с БП (более 2000 и 1700 человек соответственно) (Edwards и др., 2010, Simon-Sanchez и др., 2009, Simón-Sánchez и др., 2009), что свидетельствует о действительном влиянии данного ОНП на риск развития БП в российской популяции.

Разные группы исследователей сообщают, что различные полиморфизмы в локусе МАРТ влияют на риск развития БП. Так в одной из недавних работ Simon-Sanchez и др. было показано, что ОНП rs4¡5430 в гене WNT3, расположенном в локусе МАРТ, может влиять на риск развития БП (отношение шансов 1,34 при р = 4,5 х Ю"8) (Simon-Sanchez и др., 2009). Поэтому мы также решили сравнить распределение генотипов этого полиморфизма у русских пациентов со спорадической формой БП и в популяционном контроле. Тем не менее, несмотря на обнадёживающие результаты Simon-Sanchez и др. (Simon-Sanchez и др., 2009), нам не удалось показать ассоциации полиморфизма rs415430 в гене WNT3 с риском развития БП в российской популяции.

Анализ изменения экспрессии генов GSK3B, SLC6A3, МАРТ, PARK2, SNCA,

ST13.

Первые клинические симптомы БП появляются после гибели 60-80% ДА нейронов компактной части чёрной субстанции головного мозга и 80%-ого уменьшения содержания ДА в скорлупе (Bernlieimer и др., 1973, Cookson и др., 2008). Однако даже в настоящее время большинство современных методов диагностики БП на ранних стадиях, особенно на доклинической, не дают возможности однозначно поставить диагноз. В связи с этим, поиск и разработка новых доступных методов диагностики пресимптоматических стадий БП, в том числе биомаркеров в крови, позволят выявлять людей, находящихся в группе риска развитая БП. Далее уже в этой

группе будет возможно проводить более дорогостоящие уточняющие исследования. В частности, такими маркерами БП могут быть относительные уровни экспрессии генов-кандидатов в клетках периферической крови. Поэтому нами был проведён анализ относительной экспрессии генов-кандидатов GSK3B, SLC6A3, МАРТ, PARK2, SNCA, STI3 в периферической крови в двух группах пациентов с БП на ранних стадиях, получавших лечение и не получавших его, и в трёх группах сравнения (пациенты с церебральным атеросклерозом, с различными неврологическими заболеваниями и контрольная группа здоровых добровольцев). Подбор групп сравнения осуществлялся таким образом, чтобы патогенез заболевания у пациентов из группы сравнения принципиально отличался от такового при БП, но затрагивал в основном ЦНС.

Для анализа экспрессии выбранных генов-кандидатов с помощью программы Beacon designer 7.0 нами были подобраны системы «праймеры-зоцд» (кроме гена ST13 (Dong и др., 2005)) и условия амплификации, где в качестве матрицы использовали РНК, выделенную из мозжечка и гиппокампа мозга человека. Также для каждой пары «ген-кандидат - ген сравнения» были проведены эксперименты по проверке систем «праймеры-зонд» согласно руководству Applied Biosystems (Applied Biosystems, 2001).

Анализ изменения экспрессии генов SLC6A3, МАРТп PARK2.

Нам ие удалось выявить стабильной и выраженной экспрессии генов SLC6A3, МАРТ, PARK2 в крови, несмотря на то, что разные исследователи находят транскрипты генов SLC6A3 и PARK2 в крови (Frankhauser и др., 2006, Tan и др., 2005с). В некоторых образцах мы наблюдали экспрессию этих генов, хотя пороговые циклы амплификации были больше 35, что свидетельствует об очень малом количестве кДНК и, соответственно, РНК в образце.

В ходе предварительных экспериментов по подбору условий работы и проверке систем «праймеры-зоцд» с помощью ПЦР в реальном времени с использованием тотальной РНК из мозжечка и гиппокампа человека было показано, что системы для всех трёх генов (SLC6A3, МАРТ, PARK2) оказались рабочими. На рисунке 1 на примере анализа экспрессии гена PARK2 в головном мозге (мозжечке) человека (тёмная кривая) показана работоспособность этих систем. Для сравнения на рисунке 1 также представлена кинетическая кривая, полученная в ходе ПЦР в реальном времени, где матрицей служила РНК, выделенная из периферической крови одного из пациентов с БП (светлая кривая).

Рисунок 1. Кинетические кривые, полученные в ходе ПЦР с кДНК гена PARK2.

Тёмная кривая - в качестве матрицы использовали РНК из мозга человека

Светлая кривая - в качестве матрицы использовали РНК из периферической

крови

И - относительная интенсивность флуоресценции

Ц - циклы амплификации

Таким образом, можно предположить, что гены SLC6A3, МАРТ и PARK2 экспрессируются в крови незначительно, а количество их транскрштов находится ниже порога чувствительности используемого нами метода.

Анализ изменения экспрессии генов GSK3B, SNCA и ST13.

Как уже было сказано ранее, ген GSK3B может быть вовлечён в патогенез БП и, следовательно, отражать ход её развития. Поэтому мы провели анализ изменения экспрессии гена GSK3B в периферической крови. Результаты исследования относительной экспрессии этого гена представлены на рисунке 2.

Из представленных данных видно, что в крови пациентов с БП как получавших, так и не получавших лечение, практически не наблюдается изменения количества трансхриптов гена GSK3B (медианы 1,03 и 0,91 соответственно) по сравнению с группой здоровых добровольцев.

СтБКЗЬ

с*

2,2 2,0 1,8 1,6 1,4 1,2 1,0 0,8 0,6 0,4 0.2 0,0

ЦА

НК БПне леч БПлеч

БП

° Медиана

□ 25%-75%

Рисунок 2. Относительные уровни экспрессии гена С8КЗВ у пациентов с БП, НК и ЦА но сравнению с контрольной группой.

ДА - пациенты с церебральным атеросклерозом;

НК - пациенты с различными неврологическими заболеваниями (неврологический контроль)

БП(не леч) - пациенты с БП, не получавшие лечения;

БП(леч) - пациенты с БП, получавшие лечение;

БП - все пациенты с БП;

К - относительный уровень экспрессии гена СЗКЗВ

За единицу принят уровень экспрессии гена ОБКЗВ в группе неврологически здоровых добровольцев.

В тоже время в крови пациентов с ЦА было выявлено значительное снижение относительной экспрессии гена С8КЗВ (рисунок 2). При этом у данных больных наблюдалось статистически значимое уменьшение уровня мРНК гена СБКЗВ в три раза, и полученные результаты являются статистически значимыми (0,33, р < 0,001).

Уровень экспрессии этого гена в крови пациентов с различными неврологическими заболеваниями также оказался сниженным, однако, это изменение количества транскриптов гена йЗКЗВ не было статистически значимым (0,61, р = 0,24).

Более того, изменения уровней экспрессии гена ОЗКЗВ могут носить неспецифический характер, так как мы обнаружили снижение экспрессии гена ОБКЗВ у пациентов с церебральным атеросклерозом (рисунок 2). Эти изменения можно объяснить повреждением и гибелью нейронов вследствие нарушения

кровообращения в головном мозге. Выбор именно этой группы сравнения объясняется тем, что патогенез церебрального атеросклероза принципиально отличается от такового при БП, но затрагивает в основном ЦНС.

Таким образом, на основании наших данных можно сделать вывод о том, что уровни экспрессии гена ОЯКЗВ не могут служить биомаркером пресимптоматической или ранних стадий БП.

Сейчас уже ни у кого не вызывает сомнения тот факт, что альфа-синукленн вовлечён з патогенез БП. В связи с этим, изменение экспрессии гена БМСА может служить маркером данного заболевания. Поэтому мы исследовали количества транскриптов гена БА'СА в периферической крови пациентов с БП и пациентов и здоровых добровольцев из групп сравнения.

Результаты исследования относительной экспрессии гена ЗЛ'СЛ представлены на рисунке 3. Из представленных данных видно, что в крови всех пациентов с БП как подвергавшихся лечению, так и не подвергавшихся, наблюдается статистически значимое увеличение количества транскриптов гена SNCA почти в три и более раз. Для объединённой группы пациентов с БП медиана составила 5,57, для групп пациентов с БП, не подвергавшихся и подвергавшихся лечению, медианы составили 2,85 и 7,32 (р < 0,0005), соответственно, по сравнению с группой здоровых добровольцев.

В тоже время в крови пациентов с ЦА и НК также было выявлено статистически значимое увеличение относительной экспрессии гена 5ЫСА пс сравнению с контрольной группой (рисунок 3). При этом у данных больных наблюдалось увеличение уровня мРНК гена 5ЫСА более чем в два раза (2,34 и 2,86 соответственно, р< 0,0001). Однако такое увеличение количества транскриптов в группах пациентов с неврологическими заболеваниями оказалось меньше, чем в группе пациентов с БП, особенно подвергавшихся лечению.

Мы также показали статистически значимое увеличение экспрессии гена альфа-синуклеина более чем в три раза в крови пациентов с БП, подвергавшихся и не подвергавшихся лечению (рисунок 3). Однако эти изменения не являются специфичными для БП. Количество транскриптов гена 5Л'СЛ также увеличивалось и в группах пациентов с церебральным атеросклерозом и различными неврологическими заболеваниями (рисунок 3). Не исключено, что повышение экспрессии этого гена является реакцией на стресс и связано с шаперонной функцией альфа-синуклеина или какой-либо до сих пор неизвестной функцией этого белка.

8Ж:А

р<0,«001

р<0.0«01

^ 15 Р<вдам

р«ШЮ5

СК0,(Ю«1

□

0 Медиана

□ 25%-75%

ЦА НК БПне леч БПлеч БП

Рисунок 3. Относительные уровни экспрессии гена ЗЫСА у пациентов с БП, НК и ЦА по сравнению с контрольной группой.

ЦА - пациенты с церебральным атеросклерозом;

НК - пациенты с различными неврологическими заболеваниями (неврологический контроль)

БП(не леч) - пациенты с БП, не получавшие лечения;

БП(леч) - пациенты с БП, получавшие лечение;

БП - все пациенты с БП;

Я - относительный уровень экспрессии гена БЫСА

За единицу принят уровень экспрессии гена БМСА в группе неврологически здоровых добровольцев.

Таким образом, можно заключить, что уровень экспрессии этого гена не может служить биомаркером ранних стадий БП.

Ген 5773 и, следовательно, белок БТ13 также может играть роль в патогенезе БП, так как было показано его косвенное участие в сборке альфа-синуклеина (ЗсЬекег и др., 2007). Более того, ранее также было показано уменьшение экспрессии гена 5773. В связи с этим, мы также исследовали изменения экспрессии гена 5773 в периферической крови пациентов с БП и с другими заболеваниями и здоровых добровольцев. Результаты исследования относительной экспрессии гена £773 представлены на рисунке 4. Из представленных данных видно, что в крови пациентов с БП как получавших, так и не получавших лечение, не наблюдается статистически

значимых изменений количества транскриптов гена 5773 (медианы 1,02 и 1,44 соответственно) по сравнению с группой здоровых добровольцев.

Однако в крови пациентов с ЦА было выявлено статистически значимое изменение относительной экспрессии гена 5Т13 (рисунок 4). При этом у данных больных наблюдалось уменьшение уровня мРНК гена БТ13 в 2,63 раза (0,38, р< 0,0001). Количество транскриптов гена 5Т/3 в группе пациентов с различными неврологическими заболеваниями также оказалось сниженным почти в 2 раза (0,60, р < 0,05).

«ТВ

3,0

Ы.

2,5 2.0 1,5 1.0 0.5 0,0 -0.5

ЦА

НК ЕПн: лсч ЕПич

БП

° Медиана □ 250-о-75°-о

Рисунок 4. Относительные уровни экспрессии гена 5773 у пациентов с БП, НК и ЦА по сравнешю с контрольной группой.

ЦА - пациенты с церебральным атеросклерозом;

НК - пациенты с различными неврологическими заболеваниями (неврологический контроль)

БП(не леч) - пациенты с БП, не получавшие лечения;

БП(леч) - пациенты с БП, получавшие лечение;

БП - все пациенты с БП;

И - относительный уровень экспрессии гена 5773

За единицу принят уровень экспрессии гена БТ13 в группе неврологически здоровых добровольцев.

Как уже было сказано, ранее БсЬеггег и др. показали, что уровень транскриптов этого гена уменьшается у пациентов с БП (БсЬеггег и др., 2007). Однако з отличие от предыдущих исследователей мы не обнаружили значимых изменений в экспрессии этого гена у наших пациентов с БП, как подвергавшихся лечению, так и не

подвергавшихся. Это можно объяснить тем фактом, что мы исследовали кровь пациентов, находящихся на более ранних стадиях заболевания. Большинству наших пациентов, не подвергавшихся лечению, диагноз БП был поставлен в то же время, когда производили забор крови. У всех наших de novo пациентов была первая или вторая стадия БП по шкале Хен и Яра. Более того, у русских пациентов с БП, подвергавшихся лечению, уровень экспрессии гена ST13 также не отличался от контроля (рисунок 4). Однако даже пациенты, подвергавшиеся лечению, находились не более чем на 2-й стадии болезни. Изменения же в экспрессии этого гена, наблюдаемые Scherzer и др., вероятно возникают на более поздних стадиях заболевания: 2,3 по шкале Хен и Яра (Scherzer и др., 2007).

К тому же, изменения количества транскриптов геиа ST13 могут быть неспецифичными, так как мы обнаружили статистически значимое снижение экспрессии гена в группах пациентов с церебральным атеросклерозом и различными неврологическими заболеваниями (рисунок 4). Эти изменения можно объяснить повреждением и смертью нейронов вследствие нарушения микроциркуляции.

К сожалению, в мировой литературе практически нет никаких данных о том, влияет ли лечение на экспрессию гена ST13 или нет. Также нет и данных по изменению экспрессии этого гена при цереброваскулярной патологии.

Таким образом, на основании наших данных можно заключить, что уровни экспрессии гена STI3 также не могут служить биомаркером на досимптоматической и ранних стадиях БП.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Болезнь Паркинсона - второе по распространённости нейродегенеративное заболевание после болезни Альцгеймера. В настоящее время БП неизлечима, однако сейчас разработаны методы коррекции симптомов БП, позволяющие существенно облегчать протекание заболевания и продлевать жизнь. Эффект такого лечения тем лучше, чем раньше начата терапия. В связи с этим актуальным становится вопрос о возможности ранней (доклинической) ДНК-диагностики этого заболевания с целью проведения профилактического лечения. Поэтому особенно актуальными являются задачи поиска и разработки биомаркеров для раннего и доклинического выявления данной патологии. Такого рода биомаркеры позволят выявлять лиц, находящихся в группе риска развития БП. Одним из возможных способов выявления групп риска является поиск и анализ генетических маркеров БП, например, ТМ и ОНИ в генах, вовлечённых в патогенез данного заболевания. Также выявлять людей, находящихся в группе риска развития БП, возможно позволят и такие биомаркеры в периферической крови, как относительные уровни экспрессии генов, вовлечённых в патогенез БП.

В настоящей работе мы проанализировали распределение ТМ к различных генотипов ОНП в генах, связанных с развитием БП, в группе пациентов с БП и контрольной группе из российской популяции. Нам удалось выявить только три ТМ в гетерозиготном состоянии у трёх различных пациентов со спорадической формой БП, что свидетельствует о высокой микрогетерогенности ТМ в российской популяции и необходимости ресиквенса экзонов ключевых генов, принимающих участие в патогенезе БП. Кроме того, нам удалось показать ассоциацию ОНП «2736990 в гене БЫСА с риском развития спорадической формы БП в российской популяции: у носителей аллеля С риск развития БП повышен в 1,70 раза (95% С1: 1,17-2,48 при р = 0,01). В дальнейшем данный ОНП гэ2736990 в гене БЫСА может быть включён в панель маркеров для определения индивидуального риска развития БП.

В ходе анализа относительных уровней экспрессии генов ОЗКЗВ, 51С6АЗ, МАРТ, РАИК2, БЫСА, 8Т13 было показано, что только транскрипты генов ОЗКЗВ, ЯЖА, БТ13 присутствуют в крови в достаточном для анализа количестве. Изучение экспрессии этих генов позволило выявить разные паттерны уровней их мРНК у пациентов с БП и в группах сравнения, что отражено в таблице 10.

И хотя с одной стороны полученные нами данные по изменению экспрессии генов ОЗКЗВ, БЫСА, ЗТ13 не могут по отдельности служить биомаркерами БП, однако, с другой стороны эти данные позволяют предположить, что совместный

анализ количества транскриптов генов О Б КЗ В, БМСЛ, 8Т13, а также других генов, вовлечённых в патогенез БП, в дальнейшем послужит основой для создания панели маркеров для диагностики этого заболевания.

Таблица 10. Направления изменения экспрессии генов 08КЗВ, ЗМСА и БТ13 у пациентов с БП и в группах сравнения._

Изменение экспрессии гена

Заболевание вЕКЗВ БЫСА 5773

Болезнь — П —

Паркинсона

Церебральный 11 т 11

атеросклероз

Неврологические заболевания ~1 т 1

| - увеличение количества мРНК по сравнению с уровнем мРНК у здоровых добровольцев.

| - уменьшение количества мРНК по сравнению с уровнем мРНК у здоровых добровольцев.

--отсутствие изменения количества мРНК по сравнению с уровнем мРНК у

здоровых добровольцев.

Также анализ относительных уровней экспрессии генов йБКЗВ, ЯМСА, БТ13 позволил высказать рекомендацию использовать в экспериментах по анализу экспрессии генов в периферической крови у пациентов с БП в качестве групп сравнения больных с церебральным атеросклерозом и другими неврологическими заболеваниями.

выводы

1. Анализ 68 известных точковых мутаций в генах моногенных форм болезни Паркинсона выявил в гене PARK2 три мутации (MIL, A82G и C253Y) в гетерозиготном состоянии у трёх различных пациентов со спорадической болезнью Паркинсона с ранним началом развития. Это свидетельствует о малом вкладе известных мутаций в патогенез спорадической формы болезни Паркинсона в России.

2. Выявлена ассоциация полиморфизма rs2736990 (С/Т) в гене SNCA с риском развития спорадической формы болезни Паркинсона в российской популяции. Показано, что носительство аллеля С по данному полиморфизму повышает риск развития болезни Паркинсона (OR=1,70 при доверительном интервале (95% CI) 1,17-2,48, р=0,01).

3. Обнаружено, что уровни мРНК гена ST13 в периферической крови пациентов с болезнью Паркинсона на ранних стадиях и здоровых добровольцев не отличаются. Установлено снижение уровня мРНК данного гена в 2,63 раза (р<0,0001) в периферической крови больных церебральным атеросклерозом.

4. Выявлен одинаковый уровень мРНК гена GSK3b в периферической крови пациентов с болезнью Паркинсона на ранних стадиях и здоровых добровольцев. Показано снижение уровня мРНК данного гена в 3 раза (р<0,001) в периферической крови больных церебральным атеросклерозом.

5. Обнаружено значительное увеличение уровня мРНК гена SNCA в периферической крови у пациентов с болезнью Паркинсона на ранних стадиях заболевания в 5,57 раза (р<0,0005), у больных церебральным атеросклерозом в 2,34 раза (р<0,0001) и у пациентов с различными неврологическими заболеваниями в 2,86 раза (р<0,0001).

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Shadrina Maria I., Filatova Elena V., Karabanov Aleksey V., Slominsky Peter A., Illarioshkin Sergey N., Ivanova-Smolenskaya Irina A., Limborska Svetlana A., «Expression analysis of Suppression of Tumorigenicity 13 gene in patients with Parkinson Disease». Neuroscience Letters, 473,2010, pp. 257-259, doi:10.1016/j.neulet.2010.02.061.

2. E. В. Филатова, M. И. Шадрина, А. В. Карабанов, П. А. Сломинский, С. И. Иллариошкин, И. А. Иванова-Смоленская, С. А. Лимборская, «Экспрессия гена GSK3B в периферической крови пациентов с болезнью Паркинсона». Молекулярная биология, 45 (3), 2011, с. 461-465.

3. Е.В. Филатова, М.И. Шадрина, Е.Ю. Федотова, П.А. Сломинский, С.Н. Иллариошкин, И.А. Иванова-Смоленская, С.А. Лимборская, Анализ однонуклеотидного полиморфизма rs415430 в гене WNT3 в российской популяции при болезни Паркинсона. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, №2,2011, с. 3-4.

4. E.V. Filatova, M.I. Shadrina, A.V. Karabanov, P.A. Slominsky, S.N. Illarioshkin, S.A. Limborska, «Analysis of point mutations and single nucleotide polymorphisms effects on risk of development of Parkinson's disease in Russia». Abstracts of The Second World Parkinson Congress, Movement Disorders, 25(3), 2010, pp. S616.

5. Филатова E.B., Шадрина М.И., Карабанов A.B., Сломинский П.А., Иллариошкин С.Н., Лимборская С.А. «Анализ изменения экспрессии кандидатных генов в крови пациентов с болезнью Паркинсона». Материалы VI Съезда Российского общества медицинских генетиков, Медицинская генетика, 2010, стр. 185.

6. Филатова Е.В., Шадрина М.И., Карабанов А.В., Сломинский П.А. «Анализ изменения экспрессии генов NACP и ST13 при болезни Паркинсона)). Материалы XII научной конференции молодых учёных по физиологии высшей нервной деятельности и нейрофизиологии, 2008 год, стр. 58.

Подписано в печать: 12.04.2011

Заказ № 5317 Тираж -100 экз. Печагь трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш„ 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ra

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Филатова, Елена Владиславовна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Общая характеристика болезни Паркинсона.

1.1.1. Клиническая картина болезни Паркинсона.

1.1.2. Классификация болезни Паркинсона.

1.1.3. Нейропатология и течение болезни Паркинсона.

1.2. Генетические причины развития болезни Паркинсона.

1.2.1. Гены моногенных форм болезни Паркинсона.

1.2.1.1. Ген альфа-синуклеина (SNCA).

1.2.1.2. Ген паркина (PARK2).

1.2.1.3. Ген PTEN-индуцируемой протеин киназы (PINK1).

1.2.1.4. Ген белка DJ-1 {PARK7).

1.2.1.5. Ген дардарина (.LRRK2).

1.2.1.6. Ген С-концевой убиквитин-гидролазы 1 (UCHL1).

1.2.1.7. Ген АТФазы 13А2 (.АТР13А2).

1.2.2. Генетический анализ болезни Паркинсона как ключ к этиопатогенезу заболевания.

1.3. Использование ДНК микрочипов при изучении болезни Паркинсона.

1.4. Анализ изменения транскриптома при болезни Паркинсона.

1.4.1. Анализ экспрессии генов в тканях головного мозга.

1.4.2. Анализ экспрессии генов в периферической крови.

1.5. Современные подходы к диагностике ранних стадий болезни Паркинсона.

1.5.1. Нейровизуализационные методы исследования.

1.5.2. Идентификация нарушений обоняния.

1.5.3. Парадоксальный сон без мышечной атонии.

1.5.4. Обстипация как маркер ранних стадий болезни Паркинсона.

1.5.5. Биохимические маркеры в гуморальных средах.

1.5.6. Молекулярно-генетические подходы к клинической и доклинической диагностике болезни Паркинсона.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Общая характеристика анализируемых выборок.

2.2. Молекулярно-генетические методы анализа.

2.2.1. Выделение геномной ДНК и тотальной РНК из цельной крови человека.

2.2.2. Анализ экспрессии генов SLC6A3, GSK3B, МАРТ, PARK2, SNCA, ST13.

2.2.2.1. Полимеразная цепная реакция обратной транскрипции.

2.2.2.2. Полимеразная цепная реакция в реальном времени.

2.2.3. Анализ ДНК-микрочипов с использованием технологии APEX.

2.2.3.1. Полимеразная цепная реакция.

2.2.3.2. Очистка и концентрирование продуктов ПЦР.

2.2.3.3. Фрагментация продуктов ПЦР.

2.2.3.4. Полимеразная реакция удлинения праймера на микрочипе.

2.2.4. Анализ однонуклеотидных полиморфизмов в гене LRRK2.

2.2.4.1. Полимеразная цепная реакция и гидролиз продуктов ПЦР специфическими рестрикционными эндодезоксирибонуклеазами.

2.2.4.2. Анализ продуктов ПЦР и продуктов гидролиза ампликонов методом электрофореза в агарозном геле.

2.2.5. Анализ однонуклеотидных полиморфизмов в генах PARK2, SNCA, WNT3.

2.2.5.1. Полимеразная цепная реакция в реальном времени.

2.3. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Анализ точковых мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов в генах при болезни Паркинсона.

3.1.1. Анализ точковых мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов с помощью ДНК-микрочипа.

3.1.2. Анализ отобранных однонуклеотидных полиморфизмов в генах LRRK2 и PARK2.

3.1.3. Анализ дополнительных однонуклеотидных полиморфизмов в генах SNCA и МАРТ.

3.2. Анализ изменения экспрессии генов GSK3B, SLC6A3, МАРТ, PARK2, SNCA, ST13.

3.2.1. Анализ изменения экспрессии генов SLC6A3, МАРТ к PARK2.

3.2.2. Анализ изменения экспрессии генов GSK3B, SNCA и ST13.

3.2.2.1. Анализ изменения экспрессии гена GSK3B.

3/2.2.2. Анализ изменения экспрессии гена SNCA.

3.2.2.3. Анализ изменения экспрессии гена ST13.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Поиск генетических и экспрессионных маркеров риска развития болезни Паркинсона в российской популяции"

Стремительный прогресс в области технологий и накопление большого объема данных о строении и работе как отдельной клетки, так и всего организма в целом в последние десятилетия привели к активному развитию новых дисциплин в области молекулярной генетики, таких как геномика и протеомика. Одним из важнейших направлений геномики является медицинская геномика, которая занимается определением генных дефектов при наследственных и других болезнях, изучением экспрессии мутантных генов и разработкой новых методов диагностики, лечения и профилактики. Особый интерес в этом направлении представляет изучение молекулярно-генетических основ нейродегенеративных заболеваний. Это связано с тем, что изучение этой группы болезней позволяет выявить и охарактеризовать новые экспрессирующиеся в нервной системе гены, что существенно расширит генетическую базу, закладывающую основы изучения молекулярных принципов функционирования нервной системы.

С генетической точки зрения БП является гетерогенным заболеванием. В 10-15% случаев заболевание может наследоваться по моногенному аутосомному типу, но в большинстве случаев носит спорадический идиопатический характер и обусловлено сложным взаимодействием между генетическим строением организма и факторами окружающей среды. Активное изучение молекулярных основ развития моногенных форм БП позволил идентифицировать семь генов (PARK2, SNCA, PINK1, PARK7, LRRK2, UCHL1, АТР13А2), вовлеченных в их патогенез. Это позволило расширить представления об этиопатогенезе заболевания и начать более целенаправленную работу по изучению генетических факторов более частой спорадической формы БП. Так в настоящее время показано, что мутации в гене PARK2 вносят существенный вклад в развитие спорадической формы этого заболевания особенно с ранним началом его развития. Полученные данные' говорят о необходимости продолжения такого рода работ и изучения мутаций и полиморфизмов генов моногенных форм заболевания у больных со спорадической формой болезни Паркинсона. Кроме того, выявлен ряд потенциальных кандидатных генов (SLC6A3, МАРТ, ST13, GSK3B, GBA и др.), которые могут быть вовлечены вовлеченных в патогенез БП и влиять на риск его развития. Однако вклад этих генов, а также мутаций и полиморфизмов в них в патогенез спорадической формы БП изучен не до конца. В последнее годы также начаты работы по изучению транскриптома при БП в post mortem тканях мозга на поздних стадиях заболевания. Однако для выявления всех патогенетических процессов, протекающих при БП необходимо изучать изменения экспрессии генов-кандидатов на разных стадиях заболевания и в первую очередь на самых ранних (доклинических). Основная проблема при проведении таких исследований - недоступность тканей головного мозга человека на ранних стадиях заболевания. В то же время оценку относительных уровней мРНК исследуемых генов можно проводить в периферической крови, самой доступной ткани человека.

Проведение работ по анализу полиморфизмов и мутаций генов, вовлечённых в патогенез БП, а также изменения экспрессии генов-кандидатов позволит с одной стороны лучше понять причины и механизмы развития этого заболевания, а с другой стороны разработать молекулярно-генетические тесты для определения риска развития БП и её ранней диагностики. Возможность проведения доклинической диагностики этого заболевания позволит начать разработку принципов и подходов профилактического лечения в тот момент, когда дегенерация дофаминэргических нейронов находится на ранней стадии и затронула лишь ограниченное число нейронов этого типа. Осуществление этой работы позволит разработать в дальнейшем новые методы терапии, которые могли бы замедлить (если не остановить) развитие патологических процессов в нервной ткани и тем самым сдвинуть возраст клинического дебюта, заболевания на более поздний срок и снизить его клиническую тяжесть.

Цели и задачи работы.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Анализ точковых мутаций в генах, вовлечённых в патогенез БП, у пациентов с семейной и спорадической формами БП с ранним и поздним началом развития заболевания из России.

2. Анализ однонуклеотидных полиморфизмов (ОНП) в генах, вовлечённых в патогенез БП, у пациентов с семейной и спорадической формами БП с ранним и поздним началом развития заболевания из России.

3. Анализ относительных уровней мРНК генов (7ЖЗД БЬСбАЗ, МАРТ, РАШС2, БИСА, БТ13 в периферической крови пациентов с БП из

России, находящихся на ранних стадиях заболевания, подвергавшихся и не подвергавшихся лечению, и в группах сравнения.

Научная новизна.

Практическая значимость работы.

Установлено, что полиморфизм гб2736990 в гене БЫСА ассоциирован с риском развития болезни Паркинсона и в дальнейшем может быть включён в панель маркеров для определения индивидуального риска развития БП. В будущем, результаты данного исследования могут быть использованы для создания единого комплексного генетического теста, выявляющего риск развития БП.

Установлен разный спектр направлений изменения экспрессии генов (?ЖЗД БЫ С А, £773 у пациентов с БП и в группах сравнения. В дальнейшем эти гены могут быть включены в панель экспрессионных маркеров для диагностики БП и в первую очередь на ранних её стадиях.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Филатова, Елена Владиславовна

выводы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Болезнь Паркинсона - второе по распространённости нейродегенеративное заболевание после болезни Альцгеймера. В настоящее время БП неизлечима, однако сейчас разработаны методы коррекции симптомов БП, позволяющие существенно облегчать протекание заболевания и продлевать жизнь. Эффект такого лечения тем лучше, чем раньше начата терапия. В связи с этим актуальным становится вопрос о возможности ранней (доклинической) ДНК-диагностики этого заболевания с целью проведения профилактического лечения. Поэтому особенно актуальными являются задачи поиска и разработки биомаркеров для раннего и доклинического выявления данной патологии. Такого рода биомаркеры позволят выявлять лиц, находящихся в группе риска развития БП. Одним из-возможных способов выявления групп риска является поиск и анализ генетических маркеров БП, например, ТМ и ОНП в генах, вовлечённых в. патогенез данного заболевания. Также выявлять людей, находящихся в группе риска развития БП, возможно позволят и такие биомаркеры в периферической крови, как относительные уровни экспрессии генов, вовлечённых в патогенез БП.

В настоящей работе мы проанализировали распределение ТМ и различных генотипов ОНП в генах, связанных с развитием БП, в группе пациентов с БП и контрольной группе из российской популяции. Нам удалось выявить только три ТМ в гетерозиготном состоянии у трёх различных пациентов со спорадической формой БП, что свидетельствует о высокой микрогетерогенности ТМ в российской популяции и необходимости ресиквенса экзонов ключевых генов, принимающих участие в патогенезе БП. Кроме того, нам удалось показать ассоциацию ОНП rs2736990 в гене SNCA с риском развития спорадической формы БП в российской популяции: у носителей аллеля С риск развития БП повышен в 1,70 раза (95% CI: 1,17-2,48 при р = 0,01). В дальнейшем данный ОНП rs2736990 в гене SNCA может быть включён в панель маркеров для определения индивидуального риска развития БП.

В ходе анализа относительных уровней экспрессии генов GSK3B, SLC6A3, МАРТ, PARK2, SNCA, ST13 было показано, что только транскрипты генов GSK3B, SNCA, ST13 присутствуют в крови в достаточном для анализа количестве. Изучение экспрессии этих генов позволило выявить разные паттерны уровней их мРНК у пациентов с БП и в группах сравнения, что отражено в таблице 10.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Филатова, Елена Владиславовна, Москва

1. Aarsland, D., Andersen, K., Larsen, J.P. et al. Prevalence and characteristics of dementia in Parkinson disease: an 8-year prospective study // Arch Neurol. 2003. V. 60(3). P. 387-392.

2. Abbas, N., Lücking, C.B., Ricard, S. et al. A wide variety of mutations in the parkin gene are responsible for autosomal recessive parkinsonism in Europe // Human Molecular Genetics. 1999. V. 8(4). P. 567-574.

3. Abbott, R.D., Petrovitch, H., White, L.R. et al. Frequency of bowel movements and the future risk of Parkinson's disease // Neurology. 2001. V. 57(3). P. 456-462.

4. Abe, T., Isobe, C., Murata, T. et al. Alteration of 8-hydroxyguanosine concentrations in the cerebrospinal fluid and serum from patients with Parkinson's disease //Neurosci Lett. 2003. V. 336(2). P. 105-108.

5. Abou-Sleiman, P.M., Muqit, M.M., McDonald, N.Q. et al. A heterozygous effect for PINK1 mutations in Parkinson's disease? // Ann Neurol. 2006. V. 60(4). P. 414-419.

6. Aguiar, P.d.C., Lessa, P.S., Godeiro, C.J. et al. Genetic and environmental findings in early-onset Parkinson's disease Brazilian patients // Mov Disord. 2008. V. 23(9). P. 1228-1233.

7. Ahmed, S.S., Santosh, W., Kumar, S. et al. Metabolic profiling of Parkinson's disease: evidence of biomarker from gene expression analysis and rapid neural network detection // J Biomed Sei. 2009. V. 16. P. 63.

8. Allen, A.S. and Satten, G.A. Novel Haplotype-Sharing Approach for Genome-Wide Case-Control Association Studies Implicates the Calpastatin Gene in Parkinson's Disease // Genetic Epidemiology. 2009. V. 33 P. 657667.

9. Ansari, K.A. and Johnson, A. Olfactory function in patients with Parkinson's disease // J Chronic Dis. 1975. V. 28(9). P. 493-497.

10. Applied Biosystems, (2001).

11. Armentero, M.T., Sinforiani, E., Ghezzi, C. et al. Peripheral expression of key regulatory kinases in Alzheimer's disease and Parkinson's disease // Neurobiology of Aging. 2010. P.

12. Au, W.L., Adams, J.R., Troiano, A.R. et al. Parkinson's disease: In vivo assessment of disease progression using positron emission tomography // Brain Res Mol Brain Res. 2005. V. 134(1). P. 24-33.

13. Bailey, P. Biological markers in Alzheimer's disease // Can J Neurol Sci. 2007. V. 34(Suppl 1). P. S72-76.

14. Baker, M., Litvan, I., Houlden, H. et al. Association of an extended haplotype in the tau gene with progressive supranuclear palsy // Hum Mol Genet. 1999. V. 8(4). P. 711-715.

15. Bandopadhyay, R., Kingsbury, A.E., Cookson, M.R. et al. The expression of DJ-1 (PARK7) in normal human CNS and idiopathic Parkinson's disease // Brain. 2004. V. 127(Pt 2). P. 420-430.

16. Barbanti, P., Fabbrini, G., Ricci, A. et al. Increased expression of dopamine receptors on lymphocytes in Parkinson's disease // Mov Disord. 1999. V. 14. P. 764-771.

17. Barbour, R., Kling, K., Anderson, J.P. et al. Red blood cells are the major source of alpha-synuclein in blood // Neurodegener Dis. 2008. V. 5(2). P. 55-59.

18. Bellomo, G., Santambrogio, L., Fiacconi, M. et al. Plasma profiles of adrenocorticotropic hormone, Cortisol, growth hormone and prolactin in patients with untreated Parkinson's disease // J Neurol. 1991. V. 238. P. 1922.

19. Bender, A., Krishnan, K.J., Morris, C.M. et al. High levels of mitochondrial DNA deletions in substantia nigra neurons in aging and Parkinson disease // Nat Genet. 2006. V. 38(5). P. 515-517.

20. Berendse, H.W., Booij, J., Francot, C.M. et al. Subclinical dopaminergic dysfunction in asymptomatic Parkinson's disease patients' relatives with a decreased sense of smell // Ann Neurol. 2001. V. 50(1). P. 34-41.

21. Berg, D. Transcranial sonography in the early and differential diagnosis of Parkinson's disease // J Neural Transm. 2006. V. 70(Suppl.). P. 249-254.

22. Berg, D., Schweitzer, K.J., Leitner, P. et al. Type and frequency of mutations in the LRRK2 gene in familial and sporadic Parkinson's disease // Brain. 2005. V. 128. P. 3000-3011.

23. Bergman, O., Hakansson, A., Westberg, L. et al. PITX3 polymorphism is associated with early onset Parkinson's disease // Neurobiol Aging. 2008. V. 31(1). P. 554-565.

24. Bernheimer, H., Birkmayer, W., Homykiewicz, O. et al. Brain dopamine and the syndromes of Parkinson and Huntington. Clinical, morphological and neurochemical correlations // J Neurol Sei. 1973. V. 20. P. 415-455.

25. Bertoli-Avella, A.M., Giroud-Benitez, J.L., Akyol, A. et al. Novel parkin mutations detected in patients with early-onset Parkinson's disease // Mov Disord. 2005. V. 20(4). P. 424-431.

26. Betarbet, R., Sherer, T.B., MacKenzie, G. et al. Chronic systemic pesticide exposure reproduces features of Parkinson's disease // Nat Neurosci. 2000. V.3.P. 1301-1306.

27. Beyer, K., Domingo-Sa'bat, M. and Ariza, A. Molecular pathology of Lewy body diseases // Int J Mol Sei. 2009. V. 10. P. 724-745.

28. Biskup, S., Moore, D.J., Celsi, F. et al. Localization of LRRK2 to membranous and vesicular structures in mammalian brain // Ann Neurol. 2006. V. 60. P. 557-569.

29. Biskup, S., Gerlach, M., Kupsch, A. et al. Genes associated with Parkinson syndrome // J Neurol. 2008. V. 255(Suppl 5). P. 8-17.

30. Blackinton, J., Ahmad, R., Miller, D.W. et al. Effects of DJ-1 mutations and polymorphisms on protein stability and subcellular localization // Brain Res Mol Brain Res. 2005. V. 134(1). P. 76-83.

31. Boeve, B.F., Silber, M.H. and Ferman, T.J. REM sleep behavior disorder in Parkinson's disease and dementia with Lewy bodies // J Ger Psychiat Neurol. 2004. V. 17. P. 146-157.

32. Boeve, B.F., Silber, M.H., Ferman, T.J. et al. Association of REM sleep behavior disorder and neurodegenerative disease may reflect an underlying synucleinopathy // Mov Disord. 2001. V. 16(4). P. 622-630.

33. Boeve, B.F., Silber, M.H., Saper, C.B. et al. Pathophysiology of REM sleep behaviour disorder and relevance to neurodegenerative disease // Brain. 2007. V. 130(Pt 11). P. 2770-2788.

34. Bonifati, V., Rizzu, P., Van Baren, M.J. et al. Mutations in the DJ-1 gene associated with autosomal recessive early-onset parkinsonism // Science. 2003. V. 299. P. 256-259.

35. Bönsch, D., Reulbach, U., Bayerlein, K. et al. Elevated alpha synuclein mRNA levels are associated with craving in patients with alcoholism // Biol Psychiatry. 2004. V. 56(12). P. 984-986.

36. Bossers, K., Meerhoff, G., Balesar, R. et al. Analysis of Gene Expression in Parkinson's Disease: Possible Involvement of Neurotrophic Support and Axon Guidance in Dopaminergic Cell Death // Brain Pathology. 2009. V. 19. P. 91-107.

37. Braak, H., Ghebremedhin, E., Rüb, U. et al. Stages in the development of Parkinson's disease-related pathology // Cell Tissue Res. 2004. V. 318(1). P. 121-134.

38. Braak, H., Del Tredici, K., Rüb, U. et al. Staging of brain pathology related to sporadic Parkinson's disease // Neurobiol Aging. 2003. V. 24(2). P. 197211.

39. Brighina, L., Frigerio, R., Schneider, N.K. et al. Alpha-synuclein, pesticides, and Parkinson disease: a case-control study // Neurology. 2008. V. 70(16 Pt 2). P. 1461-1469.

40. Buhmann, C., Arlt, S., Kontush, A. et al. Plasma and CSF markers of oxidative stress are increased in Parkinson's disease and influenced by antiparkinsonian medication //.Neurobiol Dis. 2004. V. 15(1). P. 160-170.

41. Burn, D.J. Depression in Parkinson's disease // Europ J Neurol. 2002. V. 9(suppl. 3). P. 44-54.

42. Buttarelli, F.R., Capriotti, G., Pellicano, C. et al. Central and peripheral dopamine transporter reduction in Parkinson's disease // Neurol Res. 2008. Y. 31(7). P. 687-691.

43. Buttarelli, F.R., Capriotti, G., Pellicano, C. et al. Central and peripheral dopamine transporter reduction in Parkinson's disease // Neurol Res. 2009. V. 31(7). P. 687-691.

44. Buttrick, G.J. and Wakefield, J.G. PI3-K and GSK-3: Akt-ing together with microtubules // Cell Cycle. 2008. V. 7(17). P. 2621-2625.

45. Caffrey, T.M., Joachim, C., Paracchini, S. et al. Haplotype-specific expression of exon 10 at the human MAPT locus // Human Molecular Genetics 2006. V. 15(24). P. 3529-3537.

46. Caronti, B., Antonini, G., Calderaro, C. et al. Dopamine transporter immunoreactivity in peripheral blood lymphocytes in Parkinson's disease // J Neural Transm. 2001. V. 108(7). P. 803-807.

47. Chartier-Harlin, M.C., Kachergus, J., Roumier, C. et al. Alpha-synuclein locus duplication as a cause of familial Parkinson's disease // Lancet. 2004. V. 364. P. 1167-1169.

48. Chinta, S.I. and Andrersen, J.K. Dopaminergic neurons // Intern J Biochem Cell Biol. 2005. V. 37. P. 942-946.

49. Clark, L.N., Afridi, S., Mejia-Santana, H. et al. Analysis of an early-onset Parkinson's disease cohort for DJ-1 mutations // Mov Disord. 2004. V. 19(7). P. 796-800.

50. Clark, L.N., Haamer, E., Mejia-Santana, H. et al. Construction and validation of a Parkinson's disease mutation genotyping array for the Parkin gene // Movement Disorders. 2007. V. 22. P. 932-937.

51. Cookson, M.R. The biochemistry of Parkinson's disease // Annu Rev Biochem. 2005. V. 74. P. 29-52.

52. Cookson, M.R., Hardy, J. and Lewis, P.A. Genetic Neuropathology of Parkinson's Disease // Int J Clin Exp Pathol. 2008. V. 1. P. 217-231.

53. Dachsei, J.C., Lincoln, S.J., Gonzalez, J. et al. The Ups and Downs of alpha-Synuclein mRNA Expression // Movement Disorders. 2007. V. 22(2). P. 293-295.

54. Defebvre, L., Lecouffe, P., Destee, A. et al. Tomographic measurements of regional cerebral blood flow in progressive supranuclear palsy and Parkinson's disease // Acta Neurol Scand. 1995. V. 92(3). P. 235-241.

55. DeKosky, S.T. and Marek, K. Looking Backward to Move Forward: Early Detection of Neurodegenerative Disorders // Science. 2003. V. 302(5646). P. 830 834.

56. Devi, L., Raghavendran, V., Prabhu, B.M. et al. Mitochondrial import and accumulation of alpha-synuclein impair complex I in human dopaminergic neuronal cultures and Parkinson disease brain // J Biol Chem. 2008. V. 283. P. 9089-9100.

57. Ding, Q. and Keller, J.N. Proteasomes and proteasome inhibition in the central nervous system // Free Radic Biol Med. 2001. V. 31. P. 574-584.

58. Dong, Q.-h., Zheng, S., Hu, Y. et al. Evaluation of ST 13 gene expression in colorectal cancer patients // Journal of Zhejiang University SCIENCE B. 2005. V. 6(12). P. 1170-1175.

59. Drgon, Т., Lin, Z., Wang, G.-J. et al. Common Human 5 Dopamine Transporter (SLC6A3) Haplotypes Yield Varying Expression Levels In Vivo // Cellular and Molecular Neurobiology. 2006. V. 26. P. 4-6.

60. Dudbridge, F. and Gusnanto, A. Estimation of significance thresholds for genomewide association scans // Genetic epidemiology. 2008. V. 32(3). P. 227-234.

61. Duke, D.C., Moran, L.B., Pearce, R.K.B. et al. The medial and lateral substantia nigra in Parkinson's disease: mRNA profiles associated with higher brain tissue vulnerability //Neurogenetics 2007. V. 8. P. 83-94.

62. Duronio, V. The life of a cell: apoptosis regulation by the PI3K/PKB pathway //Biochemical Journal. 2008. V. 415(3). P. 333-344.

63. Edwards, T.L., Scott, W.K., Almonte, C. et al. Genome-wide association study confirms SNPs in SNCA and the МАРТ region as common risk factors for Parkinson disease // Ann Hum Genet. 2010. V. 74(2). P. 97-109.

64. Ekstrand, M.I., Terzioglu, M., Gaiter, D. et al. Progressive parkinsonism in mice with respiratorychaindeficient dopamine neurons // Proc Nat Acad Sci USA. 2007. V. 104. P. 1325-1330.

65. El-Agnaf, O.M., Salem, S.A., Paleologou, K.E. et al. Detection of oligomeric forms of alpha-synuclein protein in human plasma as a potential biomarker for Parkinson's disease // FASEB J. 2006. V. 20(3). P. 419-425.

66. El-Agnaf, O.M., Salem, S.A., Paleologou, K.E. et al. Alpha-synuclein implicated in Parkinson's disease is present in extracellular biological fluids, including human plasma // FASEB J. 2003. V. 17(13). P. 1945-1947.

67. Elbaz, A., Grigoletto, F., Baldereschi, M. et al. Familial aggregation of Parkinson's disease: A population-based case-control study in Europe. EUROPARKINSON Study Group //Neurology. 1999. V. 52. P. 1876-1882.

68. Eller, M. and Williams, D.R. Biological fluid biomarkers in neurodegenerative parkinsonism // Nat Rev Neurol. 2009. V. 5(10). P. 561570.

69. Elstner, M., Morris, C.M., Heim, K. et al. Single-Cell Expression Profiling of Dopaminergic Neurons Combined with Association Analysis Identifies Pyridoxal Kinase as Parkinson's Disease Gene // Ann Neurol. 2009. V. 66. P. 792-798.

70. Farrer, M., Wavrant-De Vrieze, F., Crook, R. et al. Low frequency of alpha-synuclein mutations in familial Parkinson's disease // Ibid. 1998. V. 43. P. 394-397.

71. Farrer, M., Kachergus, J., Forno, L. et al. Comparison of kindreds with parkinsonism and alphasynuclein genomic multiplications // Ann Neurol. 2004. V. 55. P. 153-156.

72. Ferrari, C., Rampini, P., Benco, R. et al. Functional characterization of hypothalamic hyperprolactinemia // J Clin Endocrinol Metab. 1982. V. 55. P. 897-901.

73. Fiala, O., Pospisilova, L., Prochazkova, J. et al. Parkin mutations and phenotypic features in Czech patients with early-onset Parkinson's disease // Neuro Endocrinol Lett. 2010. V. 31(2). P. 187-192.

74. Fidani, L., Kalinderi, K., Bostantjopoulou, S. et al. Association of the Tau haplotype with Parkinson's disease in the Greek population // Mov Disord. 2006. V. 21(7). P. 1036-1039.

75. Formichi, P., Battisti, C., Radi, E. et al. Cerebrospinal fluid tau, A beta, and phosphorylated tau protein for the diagnosis of Alzheimer's disease // J Cell Physiol. 2006. V. 208(1). P. 39-46.

76. Fortin, D.L., Troyer, M.D., Nakamura, K. et al. Lipid rafts mediate the synaptic localization of alphasynuclein // J Neurosci. 2004. V. 24. P. 67156723.

77. Frankhauser, P., Grimmer, Y., Bugert, P. et al. Characterization of the neuronal dopamine transporter DAT in human blood platelets // Neuroscience Letters. 2006. V. 399. P. 197-201.

78. Fuller, P.M., Saper, C.B. and Lu, J. The pontine REM switch: past and present // J Physiol. 2007. V. 584(pt 3). P. 735-741.

79. Funayama, M., Hasegawa, K., Kowa, H. et al. A new locus for Parkinson's disease (PARK8) maps to chromosome 12pll.2-ql3.1 // Ann Neurol. 2002. V. 51. P. 296-301.

80. Fung, H.-C., Scholz, S., Matarin, M. et al. Genome-wide genotyping in Parkinson's disease and neurologically normal controls: first stage analysis and public release of data // Lancet Neurol. 2006a. V. 5. P. 911-916.

81. Fung, H.C., Xiromerisiou, G., Gibbs, J.R. et al. Association of tau haplotype-tagging polymorphisms with Parkinson's disease in diverse ethnic Parkinson's disease cohorts // Neurodegener Dis. 2006b. V. 3(6). P. 327-333.

82. Gagnon, J.F., Bédard, M.A., Fantini, M.L. et al. REM sleep behavior disorder and REM sleep without atonia in Parkinson's disease // Neurology. 2002. V. 59(4). P. 585-589.

83. Galpern, W.R. and Lang, A.E. Interface between tauopathies and synucleinopathies: a tale of two proteins // Ann Neurol. 2006. V. 59(3). P. 449-458.

84. Gandhi, S. and Wood, N.W. Genome-wide association studies: the key to unlocking neurodegeneration? //Nature Neuroscience. 2010. V. 13(7). P.

85. Gandhi, S., Muqit, M.M., Stanyer, L. et al. PINK1 protein in normal human brain and Parkinson's disease // Brain. 2006. V. 129. P. 1720-1731.

86. Gao, X., Martin, E.R., Liu, Y. et al. Genome-wide Linkage Screen in Familial Parkinson Disease Identifies Loci on Chromosomes 3 and 18// The American Journal of Human Genetics. 2009. V. 84. P. 499-504.

87. Goetz, C.G., Poewe, W., Rascol, O. et al. Movement Disorder Society Task Force Report on the Hoehn and Yahr Staging Scale: Status and Recommendations // Movement Disorders. 2004. V. 19,(9). P. 1020-1028.

88. Goldstein, D.S., Holmes, C., Bentho, O. et al. Biomarkers to detect central dopamine deficiency and distinguish Parkinson disease from multiple system atrophy // Parkinsonism Relat Disord. 2008. V. 14(8). P. 600-607.

89. González-Pérez, A., Gayán, J., Marín, J. et al. Whole-genome conditional two-locus analysis identifies novel candidate genes for late-onset Parkinson's disease //Neurogenetics. 2009. V. 10. P. 173-181.

90. Grimes, D.A., Han, F., Panisset, M. et al. Translated mutation in the Nurrl gene as a cause for Parkinson's disease // Mov Disord. 2006. V. 21(7). P. 906-909.

91. Hague, S.M., Rogaeva, E., Hernandez, D. et al. Early-onset Parkinson's disease caused by a compound heterozygous DJ-1 mutation // Ann Neurol. 2003. V. 54(2). P. 271-274.

92. Hákansson, A., Melke, J., Westberg, L. et al. Lack of association between the BDNF Vall66Met polymorphism and Parkinson's disease in Swedish population // Ann Neurol. 2003. V. 53(6). P. 823.

93. Hatano, T., Kubo, S., Imai, S. et al. Leucine-rich repeat kinase 2 associates with lipid rafts // Hum Mol Genet. 2007. V. 16. P. 678-690.

94. Hatano, Y., Li, Y.J., Sato, K. et al. Novel PINK1 mutations in early-onset parkinsonism // Ann Neurol. 2004. Y. 56. P. 424-427.

95. Hattori, N., Tanaka, M., Ozawa, T. et al. Immunohistochemical studies on complexes I, II, III, and IV of mitochondria in Parkinson's disease // Ibid. 1991. V. 30. P. 563-571.

96. Hauser, M.A., Li, Y.J., Takeuchi, S. et al. Genomic convergence: identifying candidate genes for Parkinson's disease by combining serial analysis of gene expression and genetic linkage // Hum Mol Genet. 2003. V. 12(6). P. 671677.

97. Hauser, M.A., Li, Y.-J., Xu, H. et al. Expression Profiling of Substantia Nigra in Parkinson Disease, Progressive Supranuclear Palsy, and Frontotemporal Dementia With Parkinsonism // Arch Neurol. 2005. V. 62. P. 917-921.

98. Hawkes, C.H., Shephard, B.C. and Daniel, S.E. Olfactory dysfunction in Parkinson's disease // J Neuronal Neurosurg Psychiat. 1997. V. 62. P. 436446.

99. Hawkes, C.H., Shephard, B.C. and Daniel, S.E. Is Parkinson's disease a primary olfactory disorder? // QJM. 1999. V. 92(8). P. 473-480.

100. Hawkes, C.H., Del Tredici, K. and Braak, H. Parkinson's disease: A dual-hit hypothesis //Neuropathol Appl Neurobiol. 2007. V. 33(6). P. 599-614.

101. Hawkes, C.H., Del Tredici, K. and Braak, H. A timeline for Parkinson's disease // Parkinsonism and Related Disorders. 2009. V. 16(2). P. 79-84.

102. Hayesmoore, J.B., Bray, N.J., Cross, W.C. et al. The effect of age and the Hlc MAPT haplotype on MAPT expression in human brain // Neurobiol Aging. 2009. V. 30(10). P. 1652-1656.

103. Healy, D.G., Abou-Sleiman, P.M., Ahmadi, K.R. et al. NR4A2 Genetic Variation in Sporadic Parkinson's Disease: A Genewide Approach // Movement Disorders. 2006. V. 21(11). P. 1960-2025.

104. Hedrich, K., Marder, K., Harris, J. et al. Evaluation of 50 probands with early-onset Parkinson's disease for parkin mutations // Neurology. 2002. V. 58. P. 1239-1246.

105. Hedrich, K., Kann, M., Lanthaler, A J. et al. The importance of gene dosage studies: mutational analysis of the parkin gene in early-onset parkinsonism // Human Molecular Genetics. 2001. V. 10(16). P. 1649-1656.

106. Hedrich, K., Schäfer, N., Hering, R. et al. The R98Q variation in DJ-1 represents a rare polymorphism // Ann Neurol. 2004a. V. 55(1). P. 145-146.

107. Hedrich, K., Djarmati, A., Schäfer, N. et al. DJ-1 (PARK7) mutations are less frequent than Parkin (PARK2) mutations in early-onset Parkinson disease //Neurology. 2004b. V. 62(3). P. 389-394.

108. Herrera, F.E., Zucchelli, S., Jezierska, A. et al. On the oligomeric state of DJ-1 protein and its mutants associated with Parkinson Disease. A combined computational and in vitro study // J Biol Chem. 2007. V. 282(34). P. 2490524914.

109. Herting, B., Bietenbeck, S., Scholz, K. et al. Olfactory dysfunction in Parkinson's disease: its role as a new cardinal sign in early and differential diagnosis // Nervenarzt. 2008. V. 79(2). P. 175-184.

110. Hilker, R., Klein, C., Ghaemi, M. et al. Positron emission tomographic analysis of the nigrostriatal dopaminergic system in familial parkinsonism associated with mutations in the parkin gene // Ann Neurol. 2001. V. 49(3). P. 367-376.

111. Hoglinger, G.U., Carrard, G., Michel, P.P. et al. Dysfunction of mitochondrial complex I and the proteasome: Interactions between two biochemical de. cits in a cellular model of Parkinson's disease // J Neurochem. 2003. V. 86. P. 1297-1307.

112. Horan, M.P. Application of serial analysis of gene expression to the study of human genetic disease // Hum Genet. 2009. V. 126. P. 605-614.

113. Hoshi, M., Takashima, A., Noguchi, K. et al. Regulation of mitochondrial pyruvate dehydrogenase activity by tau protein kinase I/glycogen synthasekinase 3beta in brain // Proc Natl Acad Sei USA. 1996. V. 93(7). P. 27192723.

114. Hughes, A.J., Daniel, S.E., Kilford, L. et al. Accuracy of clinical diagnosis of idiopathic Parkinson's disease: a clinico-pathological study of 100 cases // J Neurol Neurosurg Psychiatry. 1992. V. 55. P. 181-184.

115. Ilic, T.V., Jovanovic, M., Jovicic, A. et al. Oxidative stress indicators are elevated in de novo Parkinson's disease patients // Funct Neurol. 1999. V. 14(3). P. 141-147.

116. Illarioshkin, S.N., Ivanova-Smolenskaya, I.A., Markova, E.D. et al. Lack of alpha-synuclein gene mutations in families with autosomal dominant Parkinson's disease in Russia // J Neurol. 2000. V. 247. P. 968-969.

117. Illarioshkin, S.N., Periquet, M., Rawal, N. et al. Mutation analysis of the parkin gene in Russian families with autosomal recessive juvenile parkinsonism // Mov Disord. 2003. V. 18. P. 914-919.

118. Illarioshkin, S.N., Shadrina, M.I., Slominsky, P.A. et al. A common leucine-rich repeat kinase 2 gene mutation in familial and sporadic Parkinson's disease in Russia // Europ J Neurol. 2007. V. 14. P. 413-417.

119. Jope, R.S. and Johnson, G.V.W. The glamour and gloom of glycogen synthase kinase-3 // Trends in Biochemical Sciences. 2003. V. 29(2). P. 95102.

120. Kaasinen, V., Nurmi, E., Brück, A. et al. Increased frontal (18)F.fluorodopa uptake in early Parkinson's disease: sex differences in the prefrontal cortex // Brain. 2001. V. 124(Pt 6). P. 1125-1130.

121. Kalinderi, K., Fidani, L., Katsarou, Z. et al. GSK3beta polymorphisms, MAPT HI haplotype and Parkinson's disease in a Greek cohort // Neurobiol Aging. 2009. P.

122. Kann, M., Jacobs, H., Mohrmann, K. et al. Role of parkin mutations in 111 community-based patients with early-onset parkinsonism // Ann Neurol. 2002. V. 51. P. 621-625.

123. Kay, D.M., Kramer, P.L., Higgins, D.S. et al. Escaping Parkinson's disease: a neurologically healthy octogenarian with the LRRK2 G2019S mutation // Mov Disord. 2005. V. 20. P. 1077-1078.

124. Kelada, S.N., Checkoway, H., Kardia, S.L. et al. 5' and 3' region variability in the dopamine transporter gene (SLC6A3), pesticide exposure and Parkinson's disease risk: a hypothesis-generating study // Hum Mol Genet. 2006. V. 15(20). P. 3055-3062.

125. Kester, M., van der Vlies, A.E. and Blankenstein, M.A. CSF biomarkers predict rate of cognitive decline in Alzheimer disease // Neurology. 2009. V. 73(17). P. 1353-1358.

126. Kikuchi, A., Takeda, A., Onodera, H. et al. Systemic increase of oxidative nucleic acid damage in Parkinson's disease and multiple system atrophy // Neurobiol Dis. 2002. V. 9(2). P. 244-248.

127. Kim, J.W., Kim, D.H., Kim, S.H. et al. Association of the dopamine transporter gene with Parkinson's disease in Korean patients // J Korean Med Sei. 2000. V. 15(4). P. 449-451.

128. Kim, S., eon, B.S.J., Heo, C. et al. a-Synuclein induces apoptosis by altered expression in human peripheral lymphocytes in Parkinson's disease // The FASEB Journal. 2004. P.

129. Kitada, T., Asakawa, S., Hattori, N. et al. Mutations in the parkin gene cause autosomal recessive juvenile parkinsonism //Nature. 1998. V. 392. P. 605608.

130. Klein, C-, Grünewald, A. and Hedrich, K. Early-onset parkinsonism associated with PINK1 mutations: frequency, genotypes, and phenotypes // Neurology. 2006. V. 66(7). P. 1129-1130.

131. Klivenyi, P., Siwek, D., Gardian, G. et al. Mice lacking alpha-synuclein are resistant to mitochondrial toxins // Neurobiol Dis. 2006. V. 21(3). P. 541548.

132. Koziorowski, D., Hoffman-Zacharska, D., Slawek, J. et al. Low frequency of the PARK2 gene mutations in Polish patients with the early-onset form of Parkinson disease // Parkinsonism Relat Disord. 2010. V. 16(2). P. 136-138.

133. Kruger, R., Kuhn, W., Muller, T. et al. Ala30Pro mutation in the gene encoding alpha-synuclein in Parkinson's disease // Nat Genet. 1998. V. 18. P. 106-108.

134. Kuroda, Y., Mitsui, T., Kunishige, M. et al. Parkin enhances mitochondrial biogenesis in proliferating cells // Hum Mol Genet. 2006. V. 15. P. 883-895.

135. Kwok, J.B.J., Teber, E.T., Loy, C. et al. Tau Haplotypes Regulate Transcription and Are Associated with Parkinson's Disease // Ann Neurol. 2004. V. 55. P. 329-334.

136. Lai, Y.Y., Hsieh, K.C., Nguyen, D. et al. Neurotoxic lesions at the ventral mesopontine junction change sleep time and muscle activity during sleep: an animal model of motor disorders in sleep // Neuroscience. 2008. V. 154(2). P. 431-443.

137. Latourelle, J.C., Pankratz, N., Dumitriu, A. et al. Genomewide association study for onset age in Parkinson disease // BMC Medical Genetics. 2009. V. 10. P. 98

138. Le, W.D., Xu, P., Jankovic, J. et al. Mutations in NR4A2 associated with familial Parkinson disease //Nat Genet. 2003. V. 33. P. 85-89.

139. Lee, D.W., Andersen, J.K. and Kaur, D. Iron dysregulation and neurodegeneration: The molecular connection // Mol Interventions. 2006. V. 6. P. 89-97.

140. Lee, J.M. and Johnson, J.A. An important role of Nrf2-ARE pathway in the cellular defense mechanism // J Biochem Mol Biol. 2004. V. 37. P. 139-143.

141. Leroy, E., Boyer, R., Auburger, G. et al. The ubiquitin pathway in Parkinson's disease //Nature. 1998. V. 395. P. 451-452.

142. Lesage, S. and Brice, A. Parkinson's disease: from monogenic forms to genetic susceptibility factors // Hum Mol Genet. 2009. V. 18(R1). P. R48-59.

143. Lesage, S.5 Durr, A., Tazir, M. et al. LRRK2 G2019S as a cause of Parkinson's disease in North African Arabs // New Engl J Med. 2006. V. 354. P. 422-423.

144. Lesnick, T.G., Papapetropoulos, S., Mash, D.C. et al. A genomic pathway approach to a complex disease: axon guidance and Parkinson disease // PLoS Genet. 2007. V. 3(6). P. e98.

145. Lincoln, S., Vaughan, J., Wood, N. et al. Low frequency of pathogenic mutations in the ubiquitin carboxy-terminal hydrolase gene in familial Parkinson's disease //Neuroreport 1999. V. 10. P. 427-429.

146. Lincoln, S.J., Maraganore, D.M., Lesnick, T.G. et al. Parkin variants in North American Parkinson's disease: cases and controls // Mov Disord. 2003. V. 18(11). P. 1306-1311.

147. Liu, P., Wakamiya, M., Shea, M.J. et al. Requirement for Wnt3 in vertebrate axis formation //Nat Genet 1999. V. 22(4). P. 361-365.

148. Lu, J., Sherman, D., Devor, M. et al. A putative flip-flop switch for control of REM sleep //Nature. 2006. V. 441. P. 589-594.

149. Lu, J., Bjorkum, A.A., Xu, M. et al. Selective activation of the extended ventrolateral preoptic nucleus during rapid eye movement sleep // J Neurosci. 2002. V. 22(11). P. 4568-4576.

150. Lücking, C.B., Chesneau, V., Lohmann, E. et al. Coding polymorphisms in the parkin gene and susceptibility to Parkinson disease // Arch Neurol. 2003. V. 60(9). P. 1253-1256.

151. Luoma, P.T., Eerola, J., Ahola, S. et al. Mitochondrial DNA polymerase gamma variants in idiopathic sporadic Parkinson disease // Neurology. 2007. V. 69(11). P. 1152-1159.

152. MacLeod, D., Dowman, J., Hammond, R. et al. The familial parkinsonism gene LRRK2 regulates neurite process morphology // Neuron. 2006. V. 52. P. 587-593.

153. Magerkurth, C., Schnitzer, R. and Braune, S. Symptoms of autonomic failure in Parkinson's disease: prevalence and impact on daily life // Clin Auton Res. 2005. V. 15(2). P. 76-82.

154. Mandemakers, W., Moráis, V.A. and Strooper, D. A cell biological perspective on mitochondrial dysfunction in Parkinson disease and other neurodegenerative diseases // J Cell Sei. 2007. V. 120(Pt 10). P. 1707-1716.

155. Maraganore, D.M., de Andrade, M., Lesnick, T.G. et al. High-Resolution Whole-Genome Association Study of Parkinson Disease // Am J Hum Genet. 2005. V. 77. P. 685-693.

156. Markopoulou, K., Larsen, K.W., Wszolek, E.K. et al. Olfactory dysfunction in familial parkinsonism//Neurology. 1997. V. 49(5). P. 1262-1267.

157. Marras, C., Goldman, S., Smith, A. et al. Smell identification ability in twin pairs discordant for Parkinson's disease // Mov Disord. 2005. V. 20(6). P. 687-693.

158. Martínez, H.R., González-González, H., Cantú-Martínez, L. et al. PARKIN-coding polymorphisms are not associated with Parkinson's disease in a population from northeastern Mexico // Neurosci Lett. 2010. V. 468(3). P. 264-266.

159. Mata, I.F., Alvarez, V., García-Moreira, V. et al. Single-nucleotide polymorphisms in the promoter region of the PARKIN gene and Parkinson's disease // Neurosci Lett. 2002. V. 329(2). P. 149-152.

160. Mayeux, R., Chen, J., Mirabello, E. et al. An estimate of the incidence of dementia in idiopathic Parkinson's disease // Neurology. 1990. V. 40(10). P. 1513-1517.

161. McNaught, K.S., Shashidharan, P., Perl, D.P. et al. Aggresome-related biogenesis of Lewy bodies // Europ J Neurosci. 2002. V. 16. P. 2136-2148.

162. McNaught, K.S., Belizaire, R., Isacson, O. et al. Altered proteasomal function in sporadic Parkinson's disease // Exp Neurol. 2003. V. 179(1). P. 38-46.

163. Michell, A.W., Luheshi, L.M. and Barker, R.A. Skin and platelet alpha-synuclein as peripheral biomarkers of Parkinson's disease // Neuroscience Letters 2005. V. 381. P. 294-298.

164. Michell, A.W., Lewis, S.J.G., Foltynie, T. et al. Biomarkers and Parkinson's disease //Brain. 2004. V. 127. P. 1693-1705.

165. Miller, D.W., Hague, S.M., Clarimon, J. et al. Alpha-synuclein in blood and brain from familial Parkinson disease with SNCA locus triplication // Neurology. 2004. Y. 62. P. 1835-1838.

166. Mizuno, Y., Hattori, N. and Mochizuki, H., in Movement Disorders. Neurological Principals & Practice, edited by Watts, R.L. and Koller, W.C. (McGraw-Hill, New York, 2004), pp. 209-231.

167. Moran, L.B., Duke, D.C., Deprez, M. et al. Whole genome expression profiling of the medial and lateral substantia nigra in Parkinson's disease // Neurogenetics. 2006. V. 7. P. 1-11.

168. Morfini, G., Szebenyi, G., Elluru, R. et al. Glycogen synthase kinase 3 phosphorylates kinesin light chains and negatively regulates kinesin-based motility // The EMBO Journal. 2002. V. 21(3). P. 281-293.

169. Muller, A., Müngersdorf, M., Reichmann, H. et al. Olfactory function in Parkinsonian syndromes // J Clin Neurosci. 2002. V. 9(5). P. 521-524.

170. Nagai, Y., Ueno, S., Saeki, Y. et al. Decrease of the D3 dopamine receptor mRNA expression in lymphocytes from patients with Parkinson's disease // Neurology 1996. V. 46. P. 791-795.

171. Nagao, M. and Hayashi, H. Glycogen synthase kinase-3beta is associated with Parkinson's disease // Neuroscience Letters. 2009. V. 449(2). P. 103107.

172. Naoi, M., Maruyama, W., Dosiert, P. et al. N-methyl-(R)salsolinol as a dopaminergic neurotoxin: from an animal model to an early marker of Parkinson's disease // J Neural Transnv Suppl. 1997. V. 50. P. 89-105.

173. Nichols, W.C., Marek, D.K., Pauciulo, M.W. et al. R1514Q substitution in Lrrk2 is not a pathogenic Parkinson's disease mutation // Mov Disord. 2007. V. 22(2). P. 254-257.

174. Nichols, W.C., Uniacke, S.K., Pankratz, N. et al. Evaluation of the role of Nurrl in a large sample of familial Parkinson's disease // Mov Disord. 2004. V. 19(6). P. 649-655.

175. Nishioka, K., Hayashi, S., Farrer, M.J. et al. Clinical heterogeneity of alpha-synuclein gene duplication in Parkinson's disease // Ann Neurol. 2006. V. 59. P. 298-309.

176. Noureddine, M.A., Li, Y.J., van der Walt, J.M. et al. Genomic convergence to identify candidate genes for Parkinson disease: SAGE analysis of the substantia nigra // Mov Disord. 2005. V. 20(10). P. 1299-1309.

177. Oliveira, S.A., Scott, W.K., Martin, E.R. et al. Parkin Mutations and Susceptibility Alleles in Late-Onset Parkinson's Disease // Ann Neurol. 2003. V. 53. P. 624-629.

178. Olson, E., Boeve, B. and Silber, M. Rapid eye movement sleep behavior disorder: demographic, clinical, and laboratory findings in 93 cases // Brain. 2000. V. 123. P. 331-339.

179. Orr, C.F., Rowe, D.B. and Halliday, G.M. An inflammatory review of Parkinson's disease // Progr Neurobiol. 2002. V. 68. P. 325-340.

180. Ozelius, L.J., Senthil, G., Suanders-Pullman, R. et al. LRRK2 G2019S as a cause of Parkinson's disease in Ashkenazi Jewish // New Engl J Med. 2006. V. 354. P. 424-425.

181. Paisan-Ruiz, C., Jain, S., Evans, E.W. et al. Cloning of the gene containing mutations that cause PARK8-linked Parkinson's disease // Neuron. 2004. V. 44. P. 595-600.

182. Pankratz, N., Pauciulo, M.W., Elsaesser, V.E. et al. Mutations in DJ-1 are rare in familial Parkinson disease // Neurosci Lett. 2006. V. 408(3). P. 209213.

183. Pankratz, N., Wilk, J.B., Latourelle, J.C. et al. Genomewide association study for susceptibility genes contributing to familial Parkinson disease // Hum Genet. 2009. V. 124. P. 593-605.

184. Pastinen, T., Raitio, M., Lindroos, K. et al. A System for Specific, High-throughput Genotyping by Allele-specific Primer Extension on Microarrays // Genome Research. 2000. V. 10. P. 1031-1042.

185. Pastor, P., Munoz, E., Ezquerra, M. et al. Analysis of the coding and the 5'-flanking regions of the alpha-synuclein gene in patients with Parkinson's disease // Mov Disord. 2001. V. 16. P. 1115-1119.

186. Pe'er, I., Yelensky, R., Altshuler, D. et al. Estimation of the multiple testing burden for genomewide association studies of nearly all common variants // Genetic epidemiology. 2008. V. 32(4). P. 381-385.

187. Peng, R., Gou, Y., Yuan, Q. et al. Mutation screening and association analysis of the parkin gene in Parkinson's disease patients from South-West China//Eur Neurol. 2003. V. 49(2). P. 85-89.

188. Periquet, M., Latouche, M., Lohmann, E. et al. Parkin mutations are frequent in patients with isolated early-onset parkinsonism // Brain. 2003. V. 126. P. 1271-1278.

189. Pigino, G., Morfini, G., Pelsman, A. et al. Alzheimer's Presenilin 1 Mutations Impair Kinesin-Based Axonal Transport // The Journal of Neuroscience. 2003. V. 23(11). P. 4499-4508.

190. Pirkevi, C., Lesage, S., Brice, A. et al. From genes to proteins in mendelian Parkinson's disease: an overview // Anat Ree (Hoboken). 2009. V. 292(12). P. 1893-1901.

191. Plazzi, G., Cortelli, P., Montagna, P. et al. REM sleep behaviour disorder differentiates pure autonomic failure from multiple system atrophy with autonomic failure // J Neurol Neurosurg Psychiatry. 1998. V. 64(5). P. 683685.

192. Polymeropoulos, M.H., Higgins, J.J., Golbe, L.I. et al. Mapping of a gene for Parkinson's disease to chromosome 4q21 q23 // Science. 1996. V. 274. P. 1197-1199.

193. Polymeropoulos, M.H., Lavedan, C., Leroy, E. et al. Mutation in the alpha-synuclein gene identified in families with Parkinson's disease // Science. 1997. V. 276. P. 2045-2047.

194. Ponsen, M.M., Stoffers, D., Wolters, E.C. et al. Olfactory testing combined with dopamine transporter imaging as a method to detect prodromal Parkinson's disease // J Neurol Neurosurg Psychiatry. 2010. V. 81. P. 396399.

195. Ponsen, M.M., Stoffers, D., Booij, J. et al. Idiopathic hyposmia as a preclinical sign of Parkinson's disease // Ann Neurol. 2004. V. 56(2). P. 173181.

196. Pridgeon, J.W., Olzmann, J.A., Chin, L.S. et al. PINK1 protects against oxidative stress by phosphorylating mitochondrial chaperone TRAP1 // PLoS Biol. 2007. V. 5(7). P. el72.

197. Ramirez, A., Heimbach, A., Grundemann, J. et al. Hereditary parkinsonism with dementia is caused by mutations in ATP13A2, encoding a lysosomal type 5 P-type ATPase // Nat Genet. 2006. V. 38. P. 1184-1191.

198. Rashmi, S., Racette, B., Perlmutter, J.S. et al. Prevalence of parkin gene mutations and variations in idiopathic Parkinson's disease // Parkinsonism Relat Disord. 2005. V. 11. P. 341-347.

199. Rawal, N., Periquet, M., Lohmann, E. et al. New parkin mutations and atypical phenotypes in families with autosomal recessive parkinsonism // Neurology. 2003. V. 60(8). P. 1378-1381.

200. Reale, M., Iarlori, C., Thomas, A. et al. Peripheral cytokines profile in Parkinson's disease // Brain Behav Immun. 2009. V. 23(1). P. 55-63.

201. Refenes, N., Bolbrinker, J., Tagaris, G. et al. Role of the HI haplotype of microtubule-associated protein tau (MAPT) gene in Greek patients with Parkinson's disease // BMC Neurology. 2009. V. 9. P. 26.

202. Rodriguez, S., Gaunt, T.R. and Day, I.N.M. Hardy-Weinberg Equilibrium Testing of Biological Ascertainment for Mendelian Randomization Studies // American Journal of Epidemiology. 2009. P.

203. Ross, C.A. and Poirier, M.A. Protein aggregation and neurodegenerative disease //Nature Medicine. 2004. V. 10. P. S10-S17.

204. Ross, G.W., Petrovitch, H., Abbott, R.D. et al. Association of olfactory dysfunction with risk for future Parkinson's disease // Ann Neurol. 2008. V. 63(2). P. 167-173.

205. Ryoo, H.L., Pierrotti, D. and Joyce, J.N. Dopamine D3 receptor is decreased and D2 receptor is elevated in the striatum of Parkinson's disease // 13. 1998. V. Mov Disord. P. 788-797.

206. Sabatini, U., Boulanouar, K., Fabre, N. et al. Cortical motor reorganization in akinetic patients with Parkinson's disease: a functional MRI study // Brain. 2000. V. 123(Pt 2). P. 394-403.

207. Samaranch, L., Lorenzo-Betancor, O., Arbelo, J.M. et al. PINKl-linked parkinsonism is associated with Lewy body pathology // Brain. 2010. V. 133(Pt 4). P. 1128-1142.

208. Sandyk, R., lacono, R.P. and Bamford, C.R. The hypothalamus in Parkinson disease // Ital J Neurol. 1987. V. 8(3). P. 227-234.

209. Satake, W., Nakabayashi, Y., Mizuta, I. et al. Genome-wide association study identifies common variants at four loci as genetic risk factors for Parkinson's disease //Nature Genetics. 2009. V. 41(12). P. 1305-1308.

210. Satoh, J. and Kuroda, Y. Association of codon 167 Ser/Asn heterozygosity in the parkin gene with sporadic Parkinson's disease // Neuroreport. 1999. V. 10(13). P. 2735-2739.

211. Schenck, C. and Mahowald, M. REM sleep behavior disorder: Clinical, developmental, and neuroscience perspectives 16 years after its formal identification in sleep // Ibid. 2002. V. 25. P. 120-138.

212. Scherzer, C.R., Eklund, A.C., Morse, L.J. et al. Molecular markers of early Parkinson's disease based on gene expression in blood // Proc Natl Acad Sci USA. 2007. V. 104 (3). P. 955-960.

213. Serri, O., Chik, C.L., Ur, E. et al. Diagnosis and management of hyperprolactinemia // Cmaj. 2003. V. 169. P. 575-581.

214. Sharma, M., Lichtner, P., Kruger, R. et al. Further delineation of the association signal on chromosome 5 from the first whole genome association study in Parkinson's disease // Neurobiology of Aging. 2009. V. 30. P. 1706-1709.

215. Shendelman, S., Jonason, A., Martinat, C. et al. DJ-1 is a redox-dependent molecular chaperone that inhibits alpha-synuclein aggregate formation // PLoS Biol. 2004. V. 2(11). P. e362.

216. Shi, Z.-z., Zhang, J.-w. and Zheng, S. What we know about ST13, a co-factor of heat shock protein, or a tumor suppressor? // Journal of Zhejiang University SCIENCE B. 2007. V. 8(3). P. 170-176.

217. Shimura, H., Hattori, N., Kubo, S. et al. Familial Parkinson disease gene product, parkin, is a ubiquitinprotein ligase // Nat Genet. 2000. V. 25. P. 302-305.

218. Simon-Sanchez, J., Paisan-Ruiz, C., Bras, J. et al., in European human genetics conference (nature publishing group, Vienna, Austria, 2009), Vol. 17 (Supplement 2), pp. 39.

219. Simón-Sánchez, J., Schulte, С., Bras, J.M. et al. Genome-wide association study reveals genetic risk underlying Parkinson's disease // Nature Genetics. 2009. V. 41(12). P. 1308-1314.

220. Simunovic, F., Yi, M., Wang, Y. et al. Evidence for Gender-Specific Transcriptional Profiles of Nigral Dopamine Neurons in Parkinson Disease //PLoS ONE. 2010. V. 5(1). P. e8856.

221. Simunovic, F., Yi, M., Wang, Y. et al. Gene expression profiling of substantia nigra dopamine neurons: further insights into Parkinson's disease pathology //Brain. 2009. V. 132(Pt 7). P. 1795-1809.

222. Singleton, A.B., Farrer, M., Johnson, J. et al. Alpha-synuclein locus triplication causes Parkinson's disease // Science. 2003. V. 302. P. 841.

223. Skipper, L., Wilkes, K., Toft, M. et al. Linkage Disequilibrium and Association of МАРТ Hl in Parkinson Disease // Am J Hum Genet. 2004. V. 75. P. 669-677.

224. Srinivasan, B.S., Doostzadeh, J., Absalan, F. et al. Whole Genome Survey of Coding SNPs Reveals a Reproducible Pathway Determinant of Parkinson Disease // Human Mutation. 2009. V. 30(2). P. 228-238.

225. Sun, M., Latourelle, J.C., Wooten, G.F. et al. Influence of Heterozygosity for Parkin Mutation on Onset Age in Familial Parkinson Disease The GenePD Study // Arch Neurol. 2006. V. 63. P. 826-832.

226. Sunada, Y., Saito, F., Matsumura, K. et al. Differential expression of the parkin gene in the human brain and peripheral leukocytes // Neurosci Lett. 1998. V. 254. P. 180-182.

227. Suslov, O. and Steindler, D.A. PCR inhibition by reverse transcriptase leads to an overestimation of amplification efficiency // Nucleic Acids Research. 2005. V. 33(20). P. el81.

228. Swerdlow, R.H., Parks, J.K., Miller, S.W. et al. Origin and functional consequences of the complex I defect in Parkinson's disease // Ann Neurol. 1996. V. 40. P. 663-671.

229. Tan, E. and Skipper, L.M. Pathogenic mutations in Parkinson disease // Human Mutatation. 2007. V. 28. P. 641-653.

230. Tan, E.K., Shen, H., Tan, L.C. et al. The G2019S LRRK2 mutation is uncommon in an Asian cohort of Parkinson's disease patients // Neurosci Lett. 2005a. V. 384. P. 327-329.

231. Tan, E.K., Cheah, S.Y., Fook-Chong, S. et al. Functional COMT variant predicts response to high dose pyridoxine in Parkinson's disease // Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet. 2005b. V. 137B(1). P. 1-4.

232. Tan, E.K., Shen, H., Tan, J.M.M. et al. Differential expression of splice variant and wild-type parkin in sporadic Parkinson's disease // Neurogenetics. 2005c. V. 6. P. 179-184.

233. Tan, E.K., Peng, R., Teo, Y.Y. et al. Multiple LRRK2 variants modulate risk of Parkinson disease: a Chinese multicenter study // Hum Mutat. 2010. V. 31(5). P. 561-568.

234. Tanji, K., Mori, F., Imaizumi, T. et al. Upregulation of a-synuclein by lipopolysaccharide and interleukin-1 in human macrophages // Pathology International. 2002. V. 52. P. 572-577.

235. Tippmann-Peikert, M., Boeve, B.F. and Keegan, B.M. REM sleep behavior disorder initiated by acute brainstem multiple sclerosis // Neurology. 2006. V. 66(8). P. 1277-1279.

236. Tobin, J.E., Latourelle, J.C., Lew, M.F. et al. Haplotypes and gene expression implicate the MAPT region for Parkinson disease: The GenePD Study //Neurology. 2008. V. 71(1). P. 28-34.

237. Toda, T., Momose, Y., Murata, M. et al. Toward identification of susceptibility genes for sporadic Parkinson's disease // J Neurol. 2003. V. 250(Suppl 3). P. 11140-44.

238. Toft, M., Mata, I.F., Ross, O.A. et al. Pathogenicity of the Lrrk2 R1514Q substitution in Parkinson's disease // Mov Disord. 2007. V. 22(3). P. 389392.

239. Tokuda, T., Salem, S.A., Allsop, D. et al. Decreased a-synuclein in cerebrospinal fluid of aged individuals and subjects with Parkinson's disease // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2006. V. 349(1). P. 162-166.

240. Ugrumov, M.V., in Handbook of Neurochemistry and Molecular Neurobiology, Neurotransmitter Systems, edited by Lajtha, A. and Vizi, S. (Springer, Heidelberg, 2008), pp. 21-73.

241. Valente, E.M., Bentivoglio, A.R., Dixon, P.H. et al. Localization of a novel locus for autosomal recessive early-onset parkinsonism, PARK6, on human chromosome Ip35-p36 // Amer J Hum Genet. 2001. V. 68. P. 895-900.

242. Valente, E.M., Abou-Sleiman, P.M., Caputo, V. et al. Hereditary early-onset Parkinson's disease caused by mutations in PINK1 // Science. 2004a. V. 304. P. 1158-1160.

243. Van Duijn, C.M., Dekker, M.C., Bonifati, V. et al. Park7, a novel locus for autosomal recessive early onset parkinsonism, on chromosome lp36 // Ibid. 2001. V. 69. P. 629-634.

244. Vemuri, P., Wiste, H.J., Weigand, S.D. et al. MRI and CSF biomarkers in normal, MCI, and AD subjects: diagnostic discrimination and cognitive correlations//Neurology. 2009. V.-73(4). P. 287-293.

245. Vinish, M., Prabhakar, S., Khullar, M. et al. Genetic screening reveals high frequency of PARK2 mutations and reduced Parkin expression conferring risk for Parkinsonism in North West India // J Neurol Neurosurg Psychiatry. 2010. V. 81(2). P. 166-170.

246. Vlaar, A.M., van Kroonenburgh, M.J., Kessels, A.G. et al. Meta-analysis of the literature on diagnostic accuracy of SPECT in parkinsonian syndromes // BMC Neurol. 2007. V. 7. P. 27.

247. Wang, M., Hattori, N., Matsumine, H. et al. Polymorphism in the parkin gene in sporadic Parkinson's disease // Ann Neurol. 1999. V. 45(5). P. 655658.

248. Warrington, J.A., Nair, A., Mahadevappa, M. et al. Comparison of human adult and fetal expression and identification of 535 housekeeping/maintenance genes // Physiol Genomics. 2000. V. 2. P. 143147.

249. West, A., Periquet, M., Lincoln, S. et al. Complex relationship between Parkin mutations and Parkinson disease // Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet. 2002. V. 114(5). P. 584-591.

250. West, A.B., Moore, D.J., Biskup, S. et al. Parkinson's disease-associated mutations in leucinerich repeat kinase 2 augment kinase activity // Proc Natl Acad Sei USA. 2005. V. 102. P. 16842-16847.

251. Westerlund, M., Hoffer, B. and Olson, L. Parkinson's disease: Exit toxins, enter genetics // Progress in Neurobiology. 2010. V. 90 P. 146-156.

252. Wolters, E.C. and Braak, H. Parkinson's disease: premotor clinico-pathological correlations // J Neural Transm Suppl 2006. (70). P. 309-319.

253. Wolters, E.C., Francot, C., Bergmans, P. et al. Preclinical (premotor) Parkinson's disease // J Neurol. 2000. V. 247 (Suppl 2). P. IV\03-11/109.

254. Wooten, G.F., Currie, L.J., Bennett, J.P. et al. Maternal inheritance in Parkinson's disease // Ann Neurol. 1997. V. 41. P. 265-268.

255. Xiromerisiou, G., Dardiotis, E., Tsimourtou, V. et al. Genetic basis of Parkinson disease //Neurosurg Focus. 2010. V. 28(1). P. E7.

256. Xiromerisiou, G., Hadjigeorgiou, G.M., Eerola, J. et al. BDNF tagging polymorphisms and haplotype analysis in sporadic Parkinson's disease in diverse ethnic groups //Neurosci Lett. 2007. V. 415(1). P. 59-63.

257. Xu, P.Y., Liang, R., Jankovic, J. et al. Association of homozygous 7048G7049 variant in the intron six of Nurrl gene with Parkinson's disease //Neurology. 2002. V. 26. P. 881- 884.

258. Yavich, L., Tanila, H., Vepsalainen, S. et al. Role of alpha-synuclein in presynaptic dopamine recruitment // J Neurosci. 2004. V. 24. P. Ill 65— 11170.

259. Zabetian, C.P., Hutter, C.M., Factor, S.A. et al. Association Analysis of MAPT HI Haplotype and Subhaplotypes in Parkinson's Disease // Ann Neurol. 2007. V. 62(2). P. 137-144.

260. Zarranz, J.J., Alegre, J., Gomez-Esteban, J.C. et al. The new mutation, E46K, of alpha-synuclein causes Parkinson and Lewy body dementia // Ann Neurol. 2004. V. 55. P. 164-173.

261. Zhang, L., Shimoji, M., Thomas, B. et al. Mitochondrial localization of the Parkinson's disease related protein DJ-1: Implications for pathogenesis // Hum Mol Genet. 2005a. V. 14. P. 2063-2073.

262. Zhang, L., Shao, M., Xu, Q. et al. Association between dopamine transporter gene polymorphism and Parkinson's disease // Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi. 2001. V. 18(6). P. 431-434.

263. Zhu, X., Siedlak, S.L., Smith, M.A. et al. LRRK2 protein is a component of Lewy bodies//Ann Neurol. 2006. V. 60. P. 617-618.

264. Zimprich, A., Biskup, S., Leitner, P. et al. Mutations in LRRK2 cause autosomal-dominant parkinsonism with pleomorphic pathology // Neuron. 2004. V. 44. P. 601-607.

265. Zlokovic, B.V. Neurovascular vechanisms of Alzheimer's neurodegeneration // Trends Neurosci. 2005. V. 28. P. 202-208.

266. Зиязетдинова, Г.З., Сапронова, А.Я., Киясова, B.A. и др. Компенсаторная реакция при дегенерации дофаминергических нейронов аркуатного ядра у крыс // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. 2008. Т. 44(1). С. 72-77.

267. Маниатис, Т., Фрич, Э. и Сэмбрук, Д. Молекулярное клонирование. Москва: "Мир". 1984. Р.

268. Сломинский, П.А., Шадрина, М.И., Иллариошкин, С.Н. и др., в Нейродегенеративные заболевания: фундаментальные и прикладные аспекты под ред. Угрюмова, М.В. (Наука, М., 2010), Гл. 5, сс. 138-163.

269. Шадрина, М.И. and Сломинский, П.А. Молекулярная генетика болезни Паркинсона//Генетика. 2006. Т. 42(8). С. 1045-1059.

270. Шадрина, М.И., Семенова, Е.В., Сломинский, П.А., и др. Метод определения делеций и дупликаций в гене паркина с использованием полимеразной цепной реакции в реальном времени // Мед. генетика.2006. Т. 5(2). С. 52-54.

271. Шадрина, М.И., Иллариошкин, С.Н., Багыева, Г.Х. и др. РАШС8-форма болезни Паркинсона: мутационный анализ гена ЫЩК2 в российской популяции // Журн. невропатологии и психиатрии им. С.С. Корсакова.2007. Т. 3. С. 46-50.

272. ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

273. E.B. Филатова, М.И. Шадрина, A.B. Карабанов, П.А. Сломинский, С.Н. Иллариошкин, И.А. Иванова-Смоленская, С.А. Лимборская, «Экспрессия гена GSK3B в периферической крови пациентов с болезнью Паркинсона». Молекулярная биология, 45(3), 2011, с. 461-465.

Информация о работе

Филатова, Елена Владиславовна
кандидата биологических наук
Москва, 2011
ВАК 03.01.03

Диссертация

Поиск генетических и экспрессионных маркеров риска развития болезни Паркинсона в российской популяции - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы