Микромицеты Бурятии и их биологическая активность

Дарханова, Татьяна Андреевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Микромицеты Бурятии и их биологическая активность
ВАК РФ 03.02.12, Микология

Автореферат диссертации по теме "Микромицеты Бурятии и их биологическая активность"

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М.В. ЛОМОНОСОВ А БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

На правах рукописи

00461539

ДАРХАНОВА Татьяна Андреевна

МИКРОМИЦЕТЫ БУРЯТИИ И ИХ БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ

Специальности: 03.02.12 - микология, 14.03.07 - химиотерапия и антибиотики

Автореферат на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2010

~ 2 ЛЕН 2010

004615391

Работа выполнена на кафедре микологии. и альгологии биологического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоносова и в секторе коллекции культур Государственного научного центра по антибиотикам

Научные руководители доктор биологических наук

Бибикова Маргарита Васильевна кандидат биологических наук Александровна Алина Витальевна

Официальные оппоненты доктор биологических наук

Терехова Вера Александровна кандидат биологических наук Тренин Алексей Сергеевич

Ведущая организация

Институт микробиологии имени С.Н. Виноградского РАН

Защита диссертации состоится 10 декабря 2010 года в 15:30 на заседании диссертационного совета Д 501.001.46 при Биологическом факультете МГУ имени М.ВЛомоносова по адресу: 119991, Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 12, МГУ, Биологический факультет (аудитория М-1).

Тел./факс: (495)939-39-70

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биологического факультета МГУ имени М.В.Ломоносова

Автореферат разослан 10 ноября 2010 года

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

-----

М.А. Гусаковская

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Изучение биоразнообразия - одно из приоритетных направлений современной биологии. Сообщества почвообитающих грибов являются относительно мало изученным компонентом биоценозов (Hawksworth, Rossman, 1997; Gams 2007), всестороннее исследование которого имеет важное теоретическое и практическое значение (Zak, Visser, 1996; Hawksworth, 2004). В настоящее время грибы рассматриваются как наиболее перспективные продуценты соединений с разнообразной биологической активностью (Bérdy, 2005).

Проблемой медикаментозного лечения инфекционных заболеваний является постоянный рост устойчивости патогенных микроорганизмов к применяемым в медицинской практике антибиотикам (Bérdy, 2005). В связи с этим ведется интенсивный поиск и создание новых препаратов, активных, прежде всего, в отношении клинических резистентных штаммов. В настоящее время проводятся исследования возможности создания препаратов с новыми механизмами действия, оказывающие влияние на системы кворум-сенсинг (QS) и вирулентность патогенных микроорганизмов (Hentzer et al., 2003). Развитие биотехнологии, основанной на использовании потенциала микроорганизмов в получении лекарственных препаратов, является стратегическим направлением современной мировой фармакологии (Newman, 2003).

При проведении поисковых исследований особое внимание уделяют микроорганизмам, выделенным из экстремальных местообитаний и из экологически чистых районов, мало исследованных к настоящему времени (Bérdy, 2005; Пивкин, 2010). Республика Бурятия является регионом, почвенная микобиота которого на сегодняшний день крайне слабо изучена.

Цель и задачи исследования. Цель работы - изучение разнообразия почвообитающих микроскопических грибов Республики Бурятия и оценка их потенциала как продуцентов биологически активных веществ для фармакологии. Для ее достижения были поставлены следующие задачи:

1) изучение видового состава и создание коллекции сапротрофных и нематофаговых микромицетов, выделяемых из почвы и смежных с нею субстратов;

2) определение спектра антимикробной активности соединений, продуцируемых изучаемыми штаммами грибов;

3) поиск продуцентов ингибиторов системы кворум-сенсинг, регулирующей факторы вирулентности бактерий;

4) оценка физико-химических и биологических свойств отобранных соединений.

Научная новизна. Полученные данные о видовом разнообразии сапротрофных и нематофаговых микромицетов имеют фундаментальное значение для дальнейших исследований микобиоты Бурятии. В результате проведенных исследований выявлено 88 видов почвенных микромицетов, принадлежащих к 33 родам. Показано, что 38 штаммов из 57 исследуемых (66%) являются продуцентами биологически активных соединений. Обнаружены продуценты антибиотиков, активных в отношении клинически важных возбудителей инфекционных заболеваний. Был получен продуцент циклоспорина с необычным соотношением компонентного состава. Выявлены 12 штаммов, продуцирующих ингибиторы сигнальной системы кворум-сенсинг грамотрицательных бактерий, среди которых штаммы Aspergillus ustus №21, Pénicillium chermesinum № 26 проявили наибольшую активность. Показана их способность к подавлению факторов вирулентности клинического штамма Pseudomonas aeruginosall. Отобраны нематофаговые гифомицеты, продуцирующие соединения с фибринолитической и плазминоген-активаторной активностями.

Научно-практическая значимость. Отобраны штаммы, образующие антибиотики, соединения с фибринолитической и плазминоген-активаторной активностями, ингибиторы факторов вирулентности патогенных грамотрицательных бактерий. Полученные культуры представляют интерес для биотехнологии как продуценты биологически активных соединений. Редкие и практически значимые штаммы переданы в коллекцию Государственного Научного Центра по антибиотикам (ГНЦ по антибиотикам, г. Москва), во Всесоюзную Коллекцию Микроорганизмов при Институте Биохимии и Физиологии Микроорганизмов имени Г.К. Скрябина РАН (ИБФМ РАН, г. Пущино) и в коллекцию Государственного Научного Центра Прикладной Микробиологии и Биотехнологии (ФГУН ГНЦ ПМБ, г. Оболенск).

Апробация работы. Результаты исследования были доложены на Всероссийской конференции «Биоразнообразие экосистем внутренней Азии» (Улан-Удэ, 2006), на международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (Москва, 2008, 2010). Материалы

работы были представлены на втором международном съезде микологов (Москва, 2005), на международной научно-практической конференции «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2005), на междисциплинарном микологическом форуме (Москва, 2009, 2010), на научном молодежном семинаре «Smithy of Ideas, 2010» (Вильнюс, Литва, 2010).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на//^страницах, состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, списка цитируемой литературы и ¿"приложений, содержит ¿Таблиц и/^рисунка. Список литературы включает/^*/источника, из них/0на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1. Обзор литературы.

В данной главе приведены литературные сведения об экологии, физиологии почвенных сапротрофных и нематофаговых микромицетов, об изучении их на территории Бурятии. Представлены литературные данные по скринингу новых антибиотиков и фармакологически активных соединений. Рассмотрены литературные источники, посвященные изучению системы кворум-сенсинг микроорганизмов.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

Регион исследования. Республика Бурятия расположена в центре евроазиатского континента, в южной части Восточной Сибири, занимает значительную часть водосборного бассейна оз. Байкал. Территория Бурятии характеризуется значительной приподнятостью над уровнем моря и преимущественно горным рельефом (Бурятия..., 1997). Климат резкоконтинентальный. Среднегодовая температура воздуха колеблется в пределах от 0 °С до минус 3 °С. Средняя температура летом составляет плюс 18.5 °С, зимой-минус 22 СС. Среднегодовое количество осадков варьирует от 265 до 416 мм в год (Цыбжитов, Цыбжитов, 2000).

Изучение видового разнообразия грибов. Материал был собран в августе-сентябре 2005 и 2006 гг в лесной зоне на территории Заиграевского и Прибайкальского районов Бурятии. Территория, где проводился сбор почвенных образцов, характеризуется дерновыми лесными почвами (Цыбжитов, Цыбжитов, 2000). Было собрано 110 образцов почвы и связанных с ней субстратов. В 2005

году было собрано 70 образцов: подстилка - 10, мох - 10, трухлявая древесина (осина, ель) - 30, старая трава - 10, копромы - 10. В 2006 году - 40 образцов по 10 образцов четырех типов субстрата: верхний горизонт почвы, мох, древесина и подстилка.

Выделение нематофаговых гифомицетов проводили на голодный агар в присутствии нематод Caenorabditis elegans, Panagrellus redivivus (Мехтиева, 1979). Выделение сапротрофных микромицетов проводили методом серийных почвенных разведений С. Ваксмана в модификации Д.Г. Звягинцева (Методы..., 1991) на среду Чапека и агаризованное пивное сусло. Для количественной характеристики микобиоты использовали показатели численности колониеобразующих единиц (КОЕ) на 1 грамм сухого материала. Представленность видов оценивали по показателям пространственной частоты встречаемости и относительного обилия видов, по которым рассчитывали индексы разнообразия Шеннона (Н') и доминирования Симпсона (1/D), выравненность (Е).

Идентификацию проводили на питательных средах, рекомендуемых для конкретных групп грибов, с использованием определителей (Raper, Fennel, 1965; Thom, Raper, 1968; Ellis, 1971, 1976; Pitt, 1979; Arx 1981; Ramírez 1982; Hoog etal. 2000; Domsch et al. 2007, и др.). Наименования видов унифицированы по базе данных CABI Bioscience Databases (http://www.indexfungorum.org).

Исследование биологической активности штаммов грибов.

Объектами исследования служили 57 штаммов грибов, относящихся к 52 видам из 23 родов.

Погруженное культивирование грибных культур проводили в колбах Эрленмейера объемом 750 мл со средой А-9 (Бибикова и др., 1991) на круговой качалке с частотой вращения от 3,3 с"' до 4,3 с'1 при 24 °С, в течение 7, 14 суток.

Выделение комплексов биологически активных веществ осуществляли из культуральной жидкости и биомассы мицелия, их отделяли центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 минут. Биологически активные вещества извлекали из мицелиальной массы ацетоном и из культуральной жидкости - этилацетатом. Концентрировали на вакуум-выпарной установке (ИР - 1).

Определение антимикробной активности осуществляли методом диффузии

в агар (Нетрусов, 2005) в отношении тест-культур: Staphylococcus aureus АТСС

29213, S. aureus 43300 (метициллинрезистентный штамм, MRSA), Bacillus subtilis

АТСС 6633, В. cereus var. mycoides 537, Escherichia coli АТСС 25922,

Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Aspergillus niger 137a, Candida albicans CBS 8836 и клинические изоляты С. albicans 616, С. krusei 600 М, С. krusei 32/1.

Изучение антигрибного комплекса штамма Tolvpocladium inflatum № 2. Идентификацию антибиотика проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинах Sylufol 254 UV (Kavalier, Чехия), в системе растворителей бензол - ацетон (2:1). Контролем служил комплекс циклоспоринов А, В, С штамма Т. inflatum 106 (Бибикова и др., 1989). Применяли проявление в УФ-свете при длине волны 254 нм, парах йода и перманганате калия. Проводили биопроявление активных фракций, путем наложения пластинок на агаризованную среду, содержащую тест-культуру A. niger 137а. Работа выполнена совместно со с.н.с. И.А. Спиридоновой (ГНЦ по антибиотикам).

Качественный и количественный анализ комплекса циклоспоринов определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Исследование выполнено совместно со с.н.с. А.Н. Даниленко (Институт биохимической физики им. Н.М. Эммануэля РАН).

Ингибирование системы кворум-сенсинг и факторов вирулентности бактерий. Кворум-сенсинг система грамотрицательной бактерии Chromobacterium violaceum регулирует образование фиолетового пигмента виолацеина. Для постановки эксперимента использовали природный штамм С. violacium 7 и мутантный штамм С. violacium CV026, неспособный синтезировать N-ацилгомосеринлактоны (AHL, сигнальные молекулы, аутоиндукторы). Ингибирование системы кворум-сенсинг анализировали по отсутствию пигментации тест-культур вокруг лунок с экстрактами исследуемых штаммов.

В дальнейшем исследовали способность отобранных штаммов (Aspergillus ustus N°21, Penicillium chermesinum №26) ингибировать факторы вирулентности клинического изолята Pseudomonas aeruginosall. Ингибирование оценивали по способности тестируемых культур подавлять стафилолитическую активность протеазы Las А и образование пигмента пиоцианина. Использовали ацетоновые экстракты из мицелия.

Ингибирование стафилолитической активности Pseudomonas aeruginosa 71.

Суспензию клеточных стенок S. aureus ATCC 29213 смешивали с супернатантом Р. aeruginosall. К полученной смеси добавляли испытуемые экстракты, контролем служила смесь без экстрактов. Измеряли оптическую плотность с помощью автоматизированной системы Bioscreen («Labsystems»,

Финляндия) при длине волны 600 нм. Степень стафилолитической активности протеазы Las А оценивали по снижению оптической плотности в контроле, ингибирование - по стабильности оптической плотности относительно контроля.

Способность исследуемых штаммов ингибировать стафилолитическую активность P. aeruginosa 1\ оценивали также на твердой среде Мюллер-Хинтон агар (МХА). В питательную среду вносили исследуемые экстракты и суспензию клеточных стенок S. aureus АТСС 29213, затем на агаризованную среду наносили штрихом тест-культуру P. aeruginosa 71. Стафилолитическую активность оценивали по диаметру просветления агара вокруг тест-культуры, а ее ингибирование - по отсутствию зоны просветления (Kessler et al., 1997; Schaber et al., 2004).

Ингибирование образования пигмента пиоцианина Pseudomonas aeruginosa 71. Тест-культуру инкубировали в присутствии исследуемых экстрактов в жидкой среде Кинг А при 37°С в течение 20-24 ч. В контроле тест-культуру растили без добавления экстрактов. После инкубации P. aeruginosa 71 пигмент, содержащийся в супернатанте, последовательно экстрагировали в хлороформ и соляную кислоту. Интенсивность окраски экстрагента (оптическую плотность) измеряли при длине волны 540 нм с помощью анализатора Bioscreen. Уровень образования пиоцианина в экстрактах оценивали по изменению оптической плотности к контролю, принятому за 100 % (Schaber et al., 2004). Работа проведена совместно с к.б.н. Н.Э. Грамматиковой (ГНЦ по антибиотикам).

Метод оценки подавления образования биопленок Pseudomonas aeruginosa 71. Тест-культуру инкубировали в жидкой среде Мюллер-Хинтон в течение 24 часов при температуре 37°С, затем вносили исследуемые экстракты и инкубировали тест-культуру в присутствии экстрактов последующие 24 ч. Образовавшиеся биопленки промывали буфером и окрашивали красителем кристаллвиолетом. Извлечение красителя из биопленок осуществляли смесью ацетон-этанол (1:4). Интенсивность окраски экстрагента (оптическую плотность) определяли при длине волны 540 нм с помощью спектрофотометра Graphicord UV-240 («Shimadzu», Япония). Плотность биопленок, полученных в присутствии исследуемых веществ, оценивали по отношению к контролю (интактной биопленке), принятому за 100% (Ни et al., 2006).

Изучение биологически активных компонентов штаммов Aspergillus uslus №21 и Penicillium chermesinum №26. Исследовали этилацетатный и ацетоновый

экстракты отобранных штаммов. Разделение фракций проводили методом ТСХ на пластинах Silufol 254 UV, в системе петролейный эфир-ацетон (1:1). В среду Мюллер-Хинтон агар вносили аутоиндукторы и суспензию С. violaceum CV026. Биопроявление компонентов фракций осуществляли наложением пластин на агаризованную среду. Присутствие активных фракций определяли по зоне отсутствия пигментации выросшей тест-культуры. Проводили определение УФ спектра активных фракций на спектрофотометре Graphicord UV-240.

Метод оценки гемолитической активности биологически активных соединений. Гемолитическую активность исследовали на 5% кровяном агаре. Ацетоновые экстракты из мицелия вносили по 100 мкл в лунки. Инкубировали в термостате в течение 1 часа при 37 °С. Активность оценивали по диаметру зон гемолиза вокруг лунки.

Метод оценки фибринолитической и активаторной активности соединений. Нематофаговые гифомицеты растили в колбах Эрленмейера объемом 250 мл, содержащих 100 мл жидкости, на качалке со скоростью вращения 200 об/мин. и температуре 23-27 °С в течение 14 суток. Способность лизировать фибрин и активировать плазминоген определяли в культуральной жидкости на искусственно созданной основе тромба (фибриновая пластина), с использованием тромбина и фибриногена бычьей крови (Astrup, Mullertz, 1952 цит. по: Шаркова, Максимов, 1999). Работа выполнена совместно со с.н.с. Т.С. Шарковой (МГУ имени М.В.Ломоносова).

Глава 3. Результаты и обсуждение

1. Биоразнообразие саиротрофных и нематофаговых мнкромицетов

При анализе 110 образцов почвы и связанных с ней субстратов, отобранных в лесной зоне республики Бурятия, обнаружено 88 видов микроскопических грибов, принадлежащих к 33 родам. К отделу Zygomycota относятся б видов: Absidia coerulea Bainier, Mortierella alpina Peyronel, M. elongata Linnem, Mucor plumbeus Bonord., Mucor sp., Rhizopus stolonifer (Ehrenb.) Vuill. Представители отдела Ascomvcota. формирующие плодовые тела, представлены двумя видами: Chaetomium perlucidum Sergeeva и С. cochlioides Palliser. Основное разнообразие видов представлено анаморфными аскомицетами (80 видов): светлоокрашенные гифомицеты - Aspergillus cervinus Massee, A. fumigatus Fresen., A. nidulans (Eidam) G.Winter, A.ustus (Bainier) Thorn,Church, A.versicolor (Vuill.) Tirab, Arthrobotiys

cladodes Drechsler, A. oligospora Fresenius, A. oviformis Soprunov, A. superba Corda, Beauveria bassiana (Bals.-Criv.) Vuill., Epicoccum nigrum Link, Fusarium sambucinum Fuckel, Gamsylelia gephyropaga (Drechsler) M. Scholler, Hagedorn, A. Rubner, Geomyces panrtorum (Link) Sigler, Carmich., Clonostachys rosea f. catenulata (J.C. Gilman et E.V. Abbott) Schroers, Gonatobotryum parasiticum (Thaxt.) Jane Walker et Minter, Paecilomyces marquandii (Massee) Hughes, Pénicillium aculeatum Râper, Fennell, P. albidum Sopp, P. aurantiogriseum Westling, P. aurantiogriseum var. viridicatum, P. brevicompactum Dierckx, P. canescens Sopp, P. chermesinum Biourge, P. citrinum Sopp, P. glabrum (Wehmer) Westling, P.funiculosum Thom, P. nalgiovense Laxa, P. janczewskii Zalessky, P. paxilli Bainier, P. pinetorum Chr., Backus, P. purpurogenum Stoll, P. raistrickii Sm., P. restrictum Gilman, Abbott, P. roseopurpureum Dierckx, P. roqueforti Thom, P. rubrum Grassberger, P. simplicissimum (Oudem.) Thom., P. spinulosum Thom, P. thomii Maire, P. variabile Mey, P.velutinum Beyma, P.waksmanii Zalessky, Tofypocladium geodes W. Gams; T. inflatum W. Gams, T. microsporum (Jaap) Bissett, Trichoderma asperellum Samuels, Lieckf., Nirenberg, T. atroviride Karst., T. hamatum (Bonord.) Bainier, T. harzianum Rifai, T. koningii Oudem., T. spirale Bissett, T. viride Pers; темноокрашенные гифомицеты - Alternaria altemata (Fr.) Keissl., Cladasporium cladosporioides (Fresen.) Vries, C. herbarum (Pers.) Link, C. macrocarpum Preuss, Gilmaniella humicola Barron, Humicola grisea Traaen, Myrothecium roridum Tode, Thysanophora penicillioides (Roum.) Kendr., Ulocladium atrum Preuss, U. chartarum (Preuss) Simmons; целомицеты - Phoma eupyrena Sacc., P. glomerata (Corda) Wollenw., Hochapfel, P. leveillei Boerema, Bollen, P. medicaginis Malbr., Roum, P. putaminum Hollös, Truncatella angustata (Pers.) Hughes. Ряд культур по морфологическим признакам удалось идентифицировать только до уровня рода: Acremonium sp. Arthrobotrys sp. 1, Cladosporium sp., Coniothyrium sp., Dactylella sp., Dactylaria sp.l, Dactylaria sp.2, Oidiodendron sp., Phialophora sp., Phoma sp. 1, Phoma sp.2, Ulocladium sp. Также были выделены неспорулирующие культуры 13 морфологических типов.

Наиболее богат видами род Pénicillium (25 видов из 88, 28%), хотя его относительная доля несколько ниже, чем характерно для почв умеренных широт, доля рода Aspergillus (5 видов, что составляет 6%), напротив, более значительна (Сизова, 1953; Мишустин, Пушкинская i960; Мирчинк, 1988; Christensen et al., 2000; Klich, 2002). Среди видов рода Pénicillium наиболее часто и обильно встречались P. janczewskii, P. aurantiogriseum, P. fimiculosum, Р. rubrum,

CD Pénicillium H Phoma 0 Trichoderma E Aspergillus И Arthrobotrys

□ Cladosporium ffiJ Tolypocfadium BUlocladium BMortierella

H Mucor EB Chaetomium ЙЗ Dactylaria

□ 21 род по 1 виду

P. aculeatum. Высоким видовым разнообразием отличались роды Phoma и Trichoderma, представленные каждый 7 видами. Остальные, обнаруженные нами рода включали четыре и менее видов (рис. 1).

Хотя большинство

обнаруженных почвенных микромицетов являются

убиквистами - космополитами, микобиота изученных

местообитаний имеет ряд особенностей. Относительно высокое разнообразие и представленность рода

Aspergillus при сниженной доле рода Pénicillium сближает _ . _

г Рис.]. Соотношение количества видов в родах

этот регион с более южными почвенных микромицетов, обнаруженных в образцах, областями. Выявление собранных на территории Республики Бурятия,

характерного для тундровых

и таежных местообитаний рода Tolypocladium, представленного тремя видами, и сравнительно низкое видовое богатство в целом, напротив, придает микобиоте северные черты (Bissett, 1983; Кирцидели, 1996). Это может объясняться климатическими условиями исследуемого региона, для которого характерны низкий уровень выпадения осадков и глубокое промерзание почвы. Интересной особенностью является обнаружение в лесной подстилке хозяйственно значимого вида Pénicillium roquefortii, крайне редко встречаемого в европейской части России и микопаразитического гриба Gonatobotrys parasiticum.

Нематофаговые гифомицеты, требующие специальных методов выделения, обнаружены во всех исследованных видах субстрата с частотой встречаемости от 10 до 70 % и представлены 9 видами: Arthrobotrys cladodes, A. oligospora, A. oviform is, A. superba, Arthrobotrys sp.l, Dactylaria sp. 1, Dactylaria sp.2, Dactylella sp., Gamsylella gephyropaga. Наибольшая частота встречаемости отмечена для штаммов A. oligospora (30-70%) и A. cladodes (30-60%).

На площадке, заложенной в 2006 г. на территории Заиграевского района в елово-березовом лесу, были отобраны образцы из верхнего горизонта почвы, подстилки, мха и разлагающейся древесины с целью сравнения видового разнообразия. При анализе этих субстратов было выявлено 58 видов

сапротрофных микромицетов. Наибольшие значения индекса видового разнообразия Шеннона (Н) и обратной формы индекса доминирования Симпсона (1/D) получены нами для древесины (Н = 2.97; 1/D = 16.04) и почвы (Н = 2.78; 1/D = 12.13). Наименьшие значения отмечены для подстилки (Н = 2.42; 1/D = 5.86) и мха (Н = 2.32; 1/D = 8.18) (табл. 1).

В почве наиболее частыми видами были: Acremonium sp., Aspergillus ustus, Pénicillium aurantiogriseum, Trichoderma spirale, равно часто в подстилке и почве встречался Geomyces раппогит. Для подстилки были характерны виды Beauveria bassiana, P. funiculosum, P. janczewskii, P. simplicissimum, для древесины обычны Arthrobotrys cladodes, Clonostachys rosea, P. aculeatum, T. atroviride, T. harzianum, в образцах мха характерных видов не было обнаружено, чаще других выделялись В. bassiana и T. harzianum.

Таблица 1

Количественные данные и показатели разнообразия комплекса микромицетов в разных субстратах на экспериментальной площадке

Тип субстрата: Почва Подстилка Древесина Мох

Количество образцов 10 10 10 10

Количество обнаруженных видов 24 31 31 20

Среднее количество видов в образце 6.9±2.4 8.1±3.5 6.8±3.5 3.6±1.6

Количество пропагул на 1 г воздушно сухой почвы (тыс.) 15.2±10.4 37.8±16.1 30.9±16.1 109.7±80.7

Индекс разнообразия Шеннона (Н') 2.78 2.42 2.97 2.32

Выравненность (Е) 0.86 0.70 0.86 0.77

Обратная форма индекса доминирования Симпсона 1/0 12.13 5.86 16.04 8.18

2. Биологическая активность исследуемых микромицетов

Исследование биологической активности проводили у 57 штаммов, относящихся к 52 видам из 23 родов: Absidia coerulea №4, Allernaria allernata №14, Arthrobotrys cladodes №48, A.oligospora №45, A.oviformis №44, A. superba №32a, A.superba №46, Aspergillus cervinus №19, A.nidulans №20, A.versicolor №22, A. ustus №21, A. versicolor №22, Beauveria bassiana №37, Chaetomium perlucidum №12, Cladosporium cladosporioides №15, C.herbarum №16, Clonostachys rosea f.

catenulata №1, Dactylella sp. №38a, Fusarium sambucinum №10, Gamsylella gephyropaga №47, Geomyces pannorum №13, Gonatobotryum parasiticum №7, Humicola grisea №17, Paecilomyces marquandii №3, Pénicillium aculeatum №23, P. albidum №24, P. aurantiogriseum №28, P. aurantiogriseum var. viridicatum №24a, P. canescens №25, P. chermesinutn №26, P. chrysogenum №25a, P. chrysogenum №28a, P. citrinum №16a, P. citrinum №27, P. citrinum №49, P.funiculosum №30, P. glabrum №29, P. nalgiovense №31, P. spinulosum №33, P.paxilli №32, P. raistrickii №34, P. restrictum №50, P. roqueforti №36, P. roseopurpureum №35, P. rubrum №38, P. simplicissimum №39, P. spinulosum №40, P. thomii №42, P. variabile №11, P. waksmanii №43, Phialophora sp. №41, Phoma eupyrena №9, Tolypocladium inflatum №2, T.microsporum №5, Thysanophora penicillioides №8, Truncatella angustata №6, Ulocladium atrum №18.

2.1. Спектр антибиотической активности исследуемых грибов

Антибиотическая активность была выявлена у 34 культур, что составляет 60% от общего числа исследуемых штаммов. Из которых 20 культур, продуцируют соединения, подавляющие рост только бактерий, 7 - грибов и 7 образуют соединения с антибактериальной и антигрибной активностями.

Наибольшее число штаммов (22) подавляло рост грамположительных бактерий, 11 штаммов подавляли рост грамотрицательных бактерий (табл. 2). Среди исследованных культур наибольший интерес представляют штаммы, подавляющие рост S. aureus 43300 (MRSA), резистентного к метициллину и другим бета-лактамным антибиотикам: Pénicillium restrictum №50, Gamsylella gephyropaga №47, Arthrobotrys superba №32a, P. chrysogenum №28a, Humicola grisea №17 и Ulocladium atrum № 18. Интересны штаммы, обладающие избирательной активностью в отношении грамотрицательных бактерий: P. simplicissimum №40, P. glabrum №29, Beauveria bassiana №37, P. waksmanii №43, A. cladodes №48 (табл. 3).

Антигрибная активность была обнаружена у 14 штаммов (табл. 4). Культуры Pénicillium variabile №11, P. aculeatum №23, P. albidum №24, Phoma eupyrena №9 представляют интерес для дальнейшего исследования как продуценты антибиотиков с избирательной активностью в отношении A. niger.

В качестве тест-культур нами были использованы клинические изоляты Candida albicans 616 и С. krusei 32/1, С. krusei 600М. Показано, что штаммы Tolypocladium inflatum 2 и T.microsporum 5 подавляют рост С. krusei 600М.

Отмечено, что дрожжи С. кпие1 часто отличаются природной резистентностью к широко применяемым средствам лечения кандидозов (Батагапауаке, 1997).

В результате исследования были выявлены продуценты антибиотиков, активных в отношении большинства исследуемых тест-организмов, при этом антибиотические соединения были обнаружены преимущественно в культуральной жидкости.

Таблица 2

Штаммы грибов, активные в отношении грамположительных бактерий

Штамм Диаметр зоны подавления роста для культуральной жидкости / экстракта из мицелия (мм)

Bacillus subtilis АТСС 6633 B.cereus var. myco ides Staphylococcus aureus АТСС 29213 S. aureus АТСС 43300 (MRSA)

7 сутки 14 сутки 1 сутки 14 сутки 7 сутки 14 сутки 7 сутки 14 сутки

Absidia caerulea №4 0/11 22/0

A. superba №32а 12/0 12/0

Aspergillus nidulans №20 12/0 0/18

A. uslus №21 22/0

A. versicolor №22 19/0 18/0

Clonostachys rosea f. catenulata №1 12/12

Chaetomium perlucidum №12 19/0

Cladosporium cladosporioides №15 17/0

Gamsylella gephyropaga №47 27/0 13/0

Paecilomyces marquandii №3 11/13 13/15

P. chrysogenum №25 0/19 23/0

P. citrinum №27 0/12

P. aurantiogriseum №28 0/16 10/0

P. chrysogenum №28a 0/16 0/20

P. roqveforii №36 13/22 14/28

P. citrinum №49 14/10

P. reslrictum №50 14/0 13/0

Phialophora sp. №41 25/0 28.5/0

Totypocladium inflatum №2 19/15 13/10 22/0

T.microsporum №5 18/0

Humicola grísea № 17 12/12 10/14 0/18.5 25/20 16/0 17/20

Ulodadium atrum №18 13.5/13 10/0 0/12 23/15 17/0 18/20

Примечание. Диаметр лунки - 9 мм.

Таблица 3

Штаммы грибов, активные в отношении грамотрицательных бактерий

Штамм Диаметр зоны подавления роста для культуралыюй жидкости / экстракта из мицелия (мм)

Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 Escherichia coli АТСС 25922

7 сутки 14 сутки 7 сутки 14 сутки

Arthrobotrys cladodes №48 0/12

Beauveria bassiana №37 12/0

Chaetomium perlucidum №12 18/0

Gamsylella gephyropaga №47 0/12

P. glabrum №29 15/0

Penicillium chtysogenum №28a 0/10 0/20

P. citrinum №49 20/0

P. restriction №50 0/13

P. spinulosum №40 10/0 22/0 ¡4/0

P. waksmanii №43 11.5/0

Tolypocladium inflatum №2 11/0

Примечание. Диаметр лунки -9 мм.

Таблица 4

Штаммы микромицетов, активные в отношении грибов

Диаметр зоны подавления роста для культуральной жидкости /

экстракта из мицелия (мм)

Штамм Candida albicans Candida krusei Aspergillus

CBS 8836 600М nigerlila

7 сутки 14 сутки 7 сутки 14 сутки 7 сутки 14 сутки

Clonostachys rosea f. catenulata №1 0/26

Fusarium sambucinum №10 28/0

Gamsylella gephyropaga №47 0/11

Humicola grisea №17 0/15 13/0 16/17

P. aculeatum №23 0/13

P. albidum №24 0/14

P. nalgiovense №31 18/0

P. roquefortii №36 24/18 13/18

P. variabile №11 13/0

Phoma eupvrena №9 12/0

Tolypocladium inflatum №2 14/0 13/0 31/28 26/16

T.microsporum №5 12/0 12/0 20/0 0/10

Truncatella angustata №6 0/10

Ulocladium atrum №18 12/0 11.5/0

Примечание. Диаметр лунки - 9 мм.

Рис. 2. Конидиальное

Tolypocladium inßatum N2 2

спороношение

2.2. Идентификация антигрибного антибиотика, продуцируемого штаммом Tolypocladium inflatum № 2

Штамм Tolypocladium inflatum № 2 обладает хорошо выраженной антигрибной активностью в отношении тест-культуры Aspergillus niger 137а (зона подавления роста составила 16 -31 мм), подавляет рост эталонного штамма Candida albicans CBS 8836 (14 мм) и клинического изолята С. krusei 600 М (13 мм).

Обнаружена антибактериальная активность у штамма Т. inflatum № 2 в отношении грамположительных

бактерий Bacillus subtilis АТСС 6633 (13-19 мм), В. cereus var. mycoides (22 мм) и грамотрицательной бактерии Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 (11 мм).

Подробное описание морфологии Т. inflatum № 2 было проведено с использованием световой и сканирующей электронной микроскопии («Hitachi» S-405 А) (рис. 2).

Высокоактивный антигрибной антибиотик извлекали из культуральной жидкости гриба этилацетатом и из биомассы - ацетоном. Полученные экстракты анализировали методом ТСХ в сравнении с контролем циклоспоринов А, В и С штамма Т. inflatum 106 (Бибикова и др., 1989).

Биологически активные компоненты фракции А подавляли рост А. niger 137а. Показано, что эта фракция имела хроматографическую подвижность, аналогичную циклоспоринам в данной системе растворителей (рис. 3).

Компоненты фракций В1-3 подавляли рост грамположительных бактерий, но не обладали антигрибной активностью. Компоненты фракции С не обладали ни антигрибной, ни антибактериальной активностями.

Анализ комплекса циклоспоринов, проведенный методом ВЭЖХ, показал, что содержание циклоспорина А в мицелии и культуральной жидкости составляет 54 и 67%, циклоспорина В - 39.7 и 10%, С - 3.2 и 23%, (Leu4) - 3.1% в биомассе.

Рис. 3. Схема хроматографической подвижности биологически активных компонентов штамма То!урос1асИшп ¡п/1шит № 2 в системе растворителей бензол:ацетон.

1. контроль - циклоспорины А.В.С и жиры штамма Т. ¡пАа!ит 106;

2. экстракт из мицелия Т. 1пАаШт №2;

3. экстракт из культуральной жидкости Т. ¡п/1а1ит №2.

Полученные данные показывают, что исследуемый штамм Т. inflatum №2 продуцирует комплекс циклоспоринов, однако, соотношение компонентов в комплексе значительно отличается от описанных в литературе. Большинство описанных в литературе продуцентов циклоспоринов образуют комплексы, в которых циклоспорины А, В и С составляют 40-70%; 10-15%; 20-30%) соответственно. Остальные циклоспорины находятся в следовых количествах (Von Wartburg, Traber, 1986; Бибикова и др., 1989, Buchta et al., 1998).

Содержание циклоспорина А штамма Т. inflatum №2 соответствует большинству описанных продуцентов, однако содержание в биомассе продуцента циклоспорина В является значительно более высоким, а содержание циклоспорина С очень низким. Отличает этот штамм и заметное количество циклоспорина (Leu 4)Cs.

2.3. Анализ ингибирования системы кворум-сенсинг и факторов вирулентности бактерий

Кворум-сенсинг (QS) - это способность микроорганизмов регулировать экспрессию тех или иных генов в зависимости от плотности популяции. Передача информации между клетками микроорганизмов осуществляется сигнальными веществами различной природы. У грамотрицательных бактерий это аутоиндукторы N-ацилгомосеринлактоны (AHL). Система QS регулирует синтез факторов вирулентности патогенных бактерий (Hentzer et al, 2003) и формирование биопленок (Davies et al., 1998).

- Фракция С Фракции В 1-3

- Фракция А

2.3.1. Анализ ингибирования образования пигмента виолацеина у природного штамма Chromobacterium violaceum 7 и мутантиого штамма С. violaceum CV026

Природный штамм Chromobacterium violaceum 7 образует фиолетовый пигмент виолацеин. Синтез пигмента регулируется системой QS, которая включает AHL, белок регулятор LasR и ген синтазы AHL, последний регулирует синтез аутоиндукторов. Сигнальные молекулы продуцируются бактерией и свободно диффундируют из клетки в окружающую среду. При достижении определенной концентрации в среде аутоиндукторы проникают в бактериальные клетки, связываются с LasR и активируют ген синтазы AHL, что приводит к их массовой продукции. Дальнейшее увеличение концентрации AHL приводит к ингибированию их образования. Механизм действия ингибиторов на систему QS бактерий может определяться деградацией молекулы AHL ингибитором, конкурентным связыванием ингибитора с белком регулятором LasR, либо способностью ингибитора инактивировать ген синтазы AHL (Rasmussen, Givskov, 2006). Мутантный штамм С. violaceum CV026 имеет инактивированный ген синтазы AHL, что приводит к неспособности синтезировать AHL и образовать пигмент (McClean et al., 1997). Образование виолацеина индуцировали внося в среду культивирования химически синтезированные AHL.

11 штаммов грибов проявили способность подавлять образование пигмента виолацеина у природного штамма С. violaceum 7: Aspergillus ustus №21, Beauveria bassiana №37, Cladosporium cladosporioides №15, Humicola grísea №17, Pénicillium chermesinum № 26, P. chrysogenum №28, P. rubrum №38, P. spinulosum №40, P. steckii №49, Phialophora №41, Tolypocladium microsporum №5. Способность подавлять образование пигмента у мутантного штамма С. violaceum CV026 в присутствии экзогенно внесенных аутоиндукторов обнаружена только у культур Aspergillus ustus №21, P. chermesinum №26 и Arthrobotrys oviformis №44. Исследуемые экстракты образовывали вокруг лунок зоны подавления пигментации: A. oviformis №44 - 15 мм, P. chermesinum №26 - 20 мм и A. ustus №21 -25 мм.

Для дальнейшей работы нами были отобраны штаммы Aspergillus ustus №21 и P. chermesinum №26, проявившие способность подавлять образование пигмента виолацеина у обеих тест-культур. Возможно, что отобранные штаммы образуют соединения, которые либо инактивируют сигнальные молекулы, либо взаимодействуют с белком - мишенью LasR.

2.3.2. Ингнбнрование стафилолитнческой активности Pseudomonas aeruginosa 71

Протеаза LasA относится к внеклеточным протеазам, является одним из факторов патогенности Pseudomonas aeruginosa 71, способствует инвазии в эпителиальные клетки. Штаммы с инактивированным геном протеазы LasA теряют способность к инвазии, а также способность образовывать биопленки.

Экспериментально было показано, что протеаза LasA расщепляет пептидогликановые мостики клеточной стенки Staphylococcus aureus. Это является методической основой для оценки активности протеазы LasA (Kessler et al., 1997). В основе эксперимента лежит возможность определить стафилолитическую активность протеазы по степени разрушения клеточных стенок стафилококка.

Использовали ацетоновые экстракты из мицелия штаммов Aspergillus ustus №21, Pénicillium chermesinum №26.

При постановке

эксперимента в жидкой среде, количество разрушенных нротеазой клеточных стенок составило 26 % от исходной величины и со временем достигло 37 %. В присутствии исследуемых экстрактов разрушения

клеточных стенок S. aureus АТСС 29213 не наблюдалось (рис. 4).

На агаризованной питательной среде тест-культура Р. aeruginosa 71 лизировала клеточные стенки S. aureus АТСС 29213, содержащиеся в среде. Зона просветления питательного агара составила 35 мм. В присутствии исследуемых экстрактов наблюдали уменьшение зоны просветления.

В присутствии экстракта №21 в концентрации 25 мкг/мл зона просветления составила 15 мм, при внесении 50 мкг/мл и выше экстракт продуцента A. ustus №21 полностью подавлял разрушение клеточных стенок. В присутствии

Содержание клеточных стенок Staphylococcus aureus 29213 АТСС

S 400 % 350 S 300 S 250 » 200 t 150 t 100 " 50 = „

-BS-^-e-D-n~

без образцов -»-№21 -is-№26

4-♦

о 0 0:15:00 0:30:00 0:45:00 1:00:00 1:15:00 Время итмерения в мин

Рис. 4. Стафилолитическая активность Pseudomonas aeruginosa 71 и ее ингибирование в присутствии экстрактов из мицелия штаммов Aspergillus ustus №21, Pénicillium chermesinum №26 (330 мкг/мл).

экстракта №26 зона просветления составила 20 мм, при внесении 50 и 100 мкг/мл зона просветления составила 10 мм.

Полученные данные показывают, что исследуемые штаммы Aspergillus ustus №21 и Penicillium chermesinum №26 способны ингибировать стафилолитическую активность клинического изолята P. aeruginosa 71.

2.3.3. Ингибирование пиоцианазной активности Pseudomortas aeruginosa №71

Пигмент пиоцианин, является фактором вирулентности P. aeruginosa, вызывает воспаление тканей макроорганизма (Gallagher et al., 2002), обладает антибиотической активностью.

Экстракт из мицелия штамма A.ustus №21 в концентрации 100 - 200 мкг/мл ингибировал образование пиоцианина на 39 - 57 %, однако при снижении концентрации экстракта до 50 мкг/мл подавление роста не было отмечено, а при концентрации экстракта 12.5 мкг/мл уровень образования пиацианина был выше контроля и достигал 144%. Экстракт штамма P. chermesinum №26 оказывал ингибирующее действие в меньшей степени (табл. 5).

Представляет несомненный интерес дальнейшее изучение активного начала экстракта №21. Интересен тот факт, что наряду с ингибированием компоненты экстракта штамма A. ustus №21 обладали и обратным свойством, они активировали образование пиоцианина P. aeruginosa 71.

Из литературных данных известно, что фураноновые соединения обладают способностью в разных концентрациях как ингибировать, так и активировать проявление факторов вирулентности (Hentzer et al, 2003).

Таблица 5

Образование пиоцианина в присутствии экстрактов грибных культур

Концентрация экстракта в мкг/мл Уровень образования пиоцианина по отношению к контролю в %

Aspergillus ustus №21 Penicillium chermesinum №26

12.5 144 88

25 117 73

50 100 91

100 61 77

200 43 77

Контроль 100 100

2.3.4. Оценка способности отобранных экстрактов подавлять образование бнопленок у штамма Pseudomonas aeruginosa 71

Экстракты из мицелия культур Aspergillus ustus №21 и Pénicillium chermesinum №26 были исследованы на способность подавлять образование биопленок клинического изолятаР. aeruginosa! I.

Исследуемые экстракты в концентрациях 50 и 100 мкг/мл подавляли образование биопленок. Внесение экстракта №21 приводило к снижению плотности биопленок относительно контроля на 26 и 33% соответственно. В присутствие экстракта №26 плотность биопленок снижалась на 34 и 42% (рис. 5).

Интересен тот факт, что при снижении концентрации экстрактов (25 мкг/мл) наблюдалась некоторая стимуляция образования биопленки.

2.3.5. Анализ комплексов биологически активных веществ Aspergillus ustus № 21 и Pénicillium chermesinum № 26

Методом ТСХ были проанализированы экстракты из мицелия штаммов №21 и №26. Значения показателя подвижности компонентов Rf фракции штамма A. ustus №21 составили: А-0.19, В-0.23, С-0.3, D-0.44, Е-0.77. Значения Rf для фракций штамма P. chermesinum №26 составили: А-0.19, В-0.6, С-0.88 (рис. 6).

Было показано, что компоненты фракций A,B,C,D штамма A. ustus №21 и фракций А,В P. chermesinum №26 подавляли рост С. violaceum CV026. Фракции Е и С не оказывали какой либо активности на тест-культуру.

Было обнаружено, что образование пигментации у С. violaceum CV026 подавляют компоненты, находящиеся на линии старта хроматограммы и не обладающие подвижностью в данной системе растворителей, что свидетельствует о их гидрофильности.

Антибиотик патулин, образующийся многими культурами рода Pénicillium spp., известен как ингибитор кворум-сенсинг бактерий (Rasmussen et

Концентрация экстрактов в мкг/мл

Рис. 5. Ингибирующее действие экстрактов штаммов Aspergillus ustus №21 и Pénicillium chermesinum №26 на формирование биоплёнки штаммом Pseudomonas aeivginosa 71.

О Ос

D О в

g С В 0 л

• штамм №21 • штамм №26

al., 2005), имеет максимум поглощения УФ-света при 276 нм и восстанавливает перманганат калия (Korzybski et al., 1969).

Исследуемые компоненты

экстрактов №21 и №26 не восстанавливали перманганат калия и имели иные УФ спектры поглощения.

Нами показано, что активные компоненты экстракта из мицелия штамма A. ustus №21 имеют максимум поглощения при длинах волн 260-265 нм и экстракта из культуральной жидкости - 285 нм. Активные компоненты экстракта из мицелия штамма P. chermesinum №26 имеют максимум поглощения при длине волны 205 нм и при 265 нм в экстракте из культуральной жидкости.

В результате полученных данных можно сказать, что штаммы A. ustus №21, P. chermesinum №26 образуют различные

соединения, обладающие способностью ингибировать QS и данные соединения не являются патулином.

2.4. Оценка гемолитической активности экстрактов

Нами были исследованы экстракты из мицелия 57 культур. Гемолитическая активность была обнаружена у штаммов Pénicillium restrictum №50 и P. aurantiogriseum var. viridicatum №24а. Диаметр зоны гемолиза вокруг лунки составил 23 и 17 мм соответственно. Штаммы A. ustus №21 и P. chermesinum №26 не проявляли гемолитической активности.

Таким образом, культуры A. ustus №21 и P. chermesinum №26, способные ингибировать кворум-сенсинг бактерий, не вызывают гемолиз эритроцитов.

2.5. Оценка фибринолитической активности нематофаговых гифомицетов

Нематофаговый гифомицет Arthrobotrys longa Mecht. продуцирует протеиназный комплекс, обладающий фибринолитической и активаторной

Рис. 6. Схема хроматографической подвижности биологически активных компонентов штаммов А. ш1их №21, Р. сЫгтЫпит N226 в системе растворителей петролейный эфир: ацетон.

активностями (активирует плазминоген крови) (Шаркова и др., 1988; Шаркова, Максимов, 1999).

Нами обнаружена способность лизировать тромбы крови экстрактами штаммов A. oligospora №45 и A. cladodes №48. Зоны фибринолитической и активаторной активностей для A. oligospora №45 составили 25 и 16 мм2, их отношение составило 64%, для штамма A. cladodes №48 - 30 и 21 мм2, 70% соответственно. Таким образом, показано, что исследуемые штаммы продуцируют соединения, способные лизировать фибрин крови, а также образуют вещества, которые способствуют превращению плазминогена в плазмин и растворению фибрина.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При анализе видового состава микроскопических грибов, выделенных из образцов почвы и смежных с нею субстратов, собранных на территории Республики Бурятии выделено 88 видов из 33 родов. Первичный поиск, проведенный среди 57 штаммов, относящихся к 52 видам из 23 родов, показал, что 66% (38 штаммов) микромицетов являются продуцентами антибиотических соединений различного спектра действия, комплекса циклоспоринов, ингибиторов системы кворум-сенсинг. Отмечены культуры, высокоактивные в отношении метициллинрезистентного стафилококка, культуры, обладающие избирательной активностью в отношении грамотрицательных бактерий, в отношении Aspergillus niger, Candida spp., в том числе клинического изолята. Обнаружены штаммы, обладающие широким спектром действия. Выделенный нами штамм Tolypocladium inflatum № 2 продуцирует комплекс циклоспоринов с неописанным ранее соотношением компонентного состава. Культура представляет интерес как для изучения свойств отдельных циклоспоринов, так и может быть использована для разработки аналогов циклоспорина А. Представленные в работе данные подтверждают, что образование комплекса циклоспоринов является дополнительным признаком при идентификации грибов рода Tolypocladium. Способность культуры продуцировать те или иные соединения позволяет четко дифференцировать грибы родов Tolypocladium и Beauveria и является таксономическим признаком (Kadlec et al., 1994). Выявлены культуры нематофаговых гифомицетов, продуцирующие соединения, с фибринолитической и активаторной активностями.

Широкий пул биологически активных веществ, образуемый грибами способствует успеху микроскопических грибов в конкурентной борьбе за

субстрат и определяет их ведущую роль в формировании микробных комплексов. Одной из таких особенностей является ингибирование системы кворум-сенсинг бактерий, которая выявлена у 12 штаммов из 57 исследованных. Штаммы Aspergillus ustus № 21 и Pénicillium chermesinum № 26 проявили наибольшую активность в ингибировании системы кворум-сенсинг и способность подавлять факторы вирулентности клинического изолята Pseudomonas aeruginosa 71.

Таким образом, изучение микроскопических грибов Бурятии позволило выявить широкое разнообразие грибов-продуцентов различных биологически активных соединений.

ВЫВОДЫ

1. На территории Республики Бурятия выявлено 88 видов, принадлежащих к 33 родам из отделов Zygomycota, Ascomycota и группы анаморфных грибов. Наиболее богат видами род Pénicillium. Из них наиболее обильны P. janczewskii, P. aurantiogriseum, P. funiculosum, P. rubrum, P. aculeatum. Широко представлены виды родов Trichoderma и Phoma. Обнаружено 9 видов нематофаговых гифомицетов, из которых часто встречались Arthrobotrys oligospora и A. cladodes.

2. Отобраны штаммы, продуцирующие антибактериальные вещества широкого и узкого спектра действия, а также антигрибные антибиотики. 6 штаммов обладали антибиотической активностью в отношении метициллинрезистентного Staphylococcus aureus 43300 (MRSA) и S. aureus АТСС 29213. Отобрано 5 штаммов, активных в отношении грамотрицательных бактерий. Установлена антигрибная активность у 14 штаммов, из которых, отобрано 2 штамма, подавляющие рост клинического изолята Candida krusei 600М.

3. Отобран штамм Tolypocladium inflatum №2, продуцирующий комплекс циклоспоринов с необычным соотношением компонентного состава. Содержание циклоспоринов А,В и С Г. inflatum №2 составляет 54-67%, 1039.7% и 3.2-23% соответственно, установлено заметное количество циклоспорина (Leu 4) Cs (3.1%).

4. Показана способность 12 штаммов ингибировать систему кворум-сенсинг у бактерии Chromobacterium violaceum.

5. Показана способность штаммов Aspergillus ustus №21, Pénicillium chermesinum № 26 образовывать соединения, ингибирующие систему кворум-сенсинг и факторы вирулентности грамотрицательных бактерий:

• подавляют синтез виолацеина штаммов Chromobacterium violaceum 7 и С. violaceum CV026;

• ингибируют образование фактора вирулентности пигмента пиоцианина клинического изолята Pseudomonas aerugonosa 71 ;

• подавляют активность протеазы LasA, определяющей высокую вирулентность Pseudomonas aeruginosa 71;

• подавляют образование биопленок Pseudomonas aeruginosa 71.

6. Показана способность Arthrobotrys oligospora № 45 и A. cladodes №48 продуцировать соединения, осуществляющие фибринолиз тромбов крови, то есть проявляющие фибринолитическую и плазминогеи-активаторную активности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в журналах, рекомендуемых ВАК

1. Бибикова М.В., Дарханова Т.А., Спиридонова И.А., Даниленко А.Н., Катлинский А.В. Комплекс циклоспоринов продуцируемый штаммом Tolypocladium inflatum Gams, выделенным из почвы Бурятии // Антибиотики и химиотерапия. 2009. Т. 54. № 9-10. С. 6 -9.

2. Дарханова Т.А., Грамматикова Н.Э., Александрова А.В., Бибикова М.В. Микромицеты Бурятии как продуценты биологически активных веществ // Микология и фитопатология. 2010. Т. 44. Вып. 3. С. 217-224.

3. Дарханова Т.А., Александрова А.В. Почвенные микромицеты лесных местообитаний Республики Бурятия // Микология и фитопатология. 2010. Т. 44. Вып. 6. С. 507-515.

4. Грамматикова Н.Э., Дарханова Т.А., Бибикова М.В. Образование мицелиальными грибами Бурятии ингибиторов - факторов вирулентности бактерий // Микология и фитопатология. 2011. Т. 45. Вып. 1. (в печати).

Материалы и тезисы конференций

5. Дарханова Т.А., Александрова А.В. Нематофаговые гифомицеты и их некоторые биологические особенности // Биоразнообразие экосистем

внутренней Азии. Материалы международной конференции. Улан-Удэ, 2006. С. 116.

6. Дарханова Т.А. Видовое богатство почвенных микромицетов Республики Бурятия // Ломоносов-2008. Тезисы международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых. Москва, 2008. С. 119-120.

7. Дарханова Т.А., Александрова А.В. Нематофаговые гифомицеты, их взаимодействие с почвенной микрофлорой // Современная микология в России. Тезисы докладов второго съезда микологов России. Москва, 2008. С. 62-63.

8. Бибикова М.В., Спиридонова И.А., Даниленко А.Н., Дарханова Т.А., Катлинский А.В. Сравнение компонентного состава комплексов циклоспорина, продуцируемых различными штаммами Tolypocladium // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2009. № 2. Труды I междисциплинарного микологического форума. Т. 2. Москва, 2009. С. 162163.

9. Бибикова М.В., Дарханова Т.А. Pénicillium roqueforti 36, выделенный из почвы Бурятии // Биотехнология: состояние и перспективы развития. Материалы Московского международного конгресс. Москва, 2008. С. 51.

10. Дарханова Т.А., Бибикова М.В., Грамматикова Н.Э. Микромицеты Бурятии как продуценты биологически активных соединений // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2010. № 1. Труды II междисциплинарного микологического форума. Москва, 2010. С. 246-247.

11. Дарханова Т.А. Спектр антимикробной активности микромицетов Бурятии // Ломоносов-2010. Тезисы международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых. Москва, 2010. С. 150-151.

Благодарность. Я выражаю искреннюю благодарность научным руководителям Маргарите Васильевне Бибиковой и Алине Витальевне Александровой за неоценимую помощь и всестороннюю поддержку при выполнении работы. Большое спасибо Ирине Ивановне Сидоровой, Марине Леонидовне Георгиевой за полезные советы, Тамаре Сергеевне Шарковой, Ольге Владимировне Камзолкиной, Наталии Эдуардовне Грамматиковой и Инне Анатольевне Спиридоновой за помощь при постановке некоторых экспериментов. Я искренне признательна всему коллективу кафедры микологии и альгологии Биологического факультета МГУ и коллективу сектора коллекции культур ГНЦА по антибиотикам.

Подписано в печать:

01.11.2010

Заказ № 4478 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Дарханова, Татьяна Андреевна

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1. Почвенные сапротрофные микромицеты лесной зоны.

1.1. Сапротрофные микромицеты.

1.1.1. Распространение сапротрофных микромицетов.

1.1.2. Сообщества сапротрофных микромицетов.

1.1.3. Антропогенное влияние на микобиоту наземных экосистем.

1.2. Нематофаговые гифомицеты.

1.2.1. Распространение и среда обитания.

1.2.2. Особенности питания.

1.3. Изучение почвенных микромицетов в Республике Бурятия.

2. Микромицеты как продуценты новых биологически активных соединений.

2.1.Продуценты новых антибактериальных антибиотиков.

2.2. Продуценты новых антигрибных антибиотиков.

2.3. Продуценты новых антивирусных соединений.

2.4. Продуценты фармакологически активных соединений.

2.4.1. Соединения с иммуносупрессивной активностью.

2.4.2. Соединения с другими фармакологическими свойствами.

2.5. Поиск ингибиторов системы кворум сенсинг бактерий.

2.5.1. Кворум - сенсинг и регуляция факторов вирулентности патогенных бактерий.

2.5.1.1. "LuxI-LuxR''-зависимая регуляция биолюминесценции Vibrio fischeri.

2.5.1.2 Регуляция факторов вирулентности системой кворум-сенсинг у грамотрицательных бактерий.

2.5.1.3. Регуляции факторов вирулентности системой-кворум сенсинг у грамположительных бактерий.

2.5.1.4. Кворум - сенсинг эукариотических организмов.

2.5.1.5. Кворум-сенсинг в многоклеточных образованиях. Биопленки.

2.5.2. Живые организмы как продуценты ингибиторов системы кворум-сенсинг

Глава II. Материалы и методы.

1. Регион исследования.

2. Сбор материала.

3. Методы изучения видового разнообразия грибов.

3.1. Выделение нематофаговых гифомицетов.

3.2 Выделение сапротрофных микромицетов.

3.3 Количественная характеристика микобиоты.

4. Исследование биологической активности штаммов грибов.

4.1. Определение антимикробной активности.

4.1.1. Определение антибактериальной активности.

4.1.2. Определение антигрибной активности.

4.2. Изучение антигрибного антибиотика штамма Tolypocladium inflation 2.

4.2.1.Морфологическое описание продуцента.

4.2.2. Биосинтез и получение биологически активного комплекса.

4.2.3. Определение антибиотической активности.

4.2.4. Изучение антигрибного антибиотика методами ТСХ, ВЭЖХ.

4.3. Ингибирование системы кворум-сенсинг и факторов вирулентности бактерий

4.3.1. Биосинтез и выделение биологически активных комплексов.

4.3.2. Ингибирование образования пигмента виолацеина.

4.3.3. Ингибирование стафилолитической активности.

4.3.4. Ингибирование образования пигмента — антибиотика пиоцианина .:.

4.3.5. Метод оценки подавления образования биоплёнок у штамма Pseudomonas aeruginosa

4.3.6. Изучение биологически активных компонентов штаммов Aspergillus ustus 21 и Pénicillium chermesinum 26.

4.4. Метод оценки гемолитической активности биологически активных соединений

4.5. Метод оценки фибринолитической и активаторской активностей.

5. Питательные среды.

Глава III. Результаты и обсуждение.

1. Биоразнообразие нематофаговых и сапротрофных микромицетов.

1.1. Общее число видов микромицетов, обнаруженных за весь период работы.

1.2. Анализ видового состава микромицетов, выделенных из образцов, собранных с площадки.

1.3. Нематофаговые гифомицеты.

2. Биологическая активность исследуемых грибов.

2.1 Спектр антибиотической активности исследуемых грибов.

2.2. Идентификация грибного антибиотика штамма Tolypocladium inßatum 2.

2.3. Анализ ингибирования системы кворум-сенсинг и факторов вирулентности бактерий.

2.3.1. Оценка активности экстрактов, ингибирующих пигментацию природного штамма Chromobacterium violaceum 1.

2.3.2. Оценка активности экстрактов, ингибирующих пигментацию мутантного штамма Chromobacterium violaceum CV

2.3.3. Ингибирование пиацианазной активности Pseudomonas aeruginosa

2.3.4. Ингибирование стафилолитической активности Pseudomonas aeruginosa 71.

2.3.5. Оценка способности отобранных экстрактов подавлять образование биопленок у Pseudomonas aeruginosa 71.

2.3.6. Анализ биологически активных комплексов штаммов Aspergillus ustus 21 и Pénicillium chermesinum 26.

2.4. Оценка гемолитической активности исследуемых грибов.

2.5. Оценка фибринолитической активности нематофаговых гифомицетов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Микромицеты Бурятии и их биологическая активность"

Актуальность темы исследования. Изучение биоразнообразия — одно из приоритетных направлений современной биологии. Сообщества почвообитающих грибов являются относительно мало изученным компонентом биоценозов (Ilawksworth, Rossman, 1997; Gams 2007), всестороннее исследование которого имеет важное теоретическое и практическое значение (Zak, Visser, 1996; Hawksworth, 2004). В настоящее время грибы рассматриваются как наиболее перспективные продуценты соединений с разнообразной биологической активностью (Bérdy, 2005).

Цель и задачи исследования

Цель работы - изучение разнообразия почвообитающих микроскопических грибов Республики Бурятия и оценка их потенциала как продуцентов биологически активных веществ для фармакологии.

Для ее достижения были поставлены следующие задачи: 1) изучение видового состава и создание коллекции сапротрофных и нематофаговых микромицетов, выделяемых из почвы и смежных с нею субстратов;

2) определение спектра антимикробной активности соединений, продуцируемых изучаемыми штаммами грибов;

3) поиск продуцентов ингибиторов системы кворум-сенсинг, регулирующей факторы вирулентности бактерий;

4) оценка физико-химических и биологических свойств отобранных соединений.

Научная новизна. Полученные данные о видовом разнообразии сапротрофных и нематофаговых микромицетов имеют фундаментальное значение для дальнейших исследований микобиоты Бурятии. В результате проведенных исследований выявлено 88 видов почвенных микромицетов, принадлежащих к 33 родам. Показано, что 38 штаммов из 57 исследуемых (66%) являются продуцентами биологически активных соединений. Обнаружены продуценты антибиотиков, активных в отношении клинически важных возбудителей инфекционных заболеваний. Был получен продуцент циклоспорина с необычным соотношением компонентного состава. Выявлены 12 штаммов, продуцирующих ингибиторы сигнальной системы кворум-сенсинг грамотрицательных бактерий, среди которых штаммы Aspergillus ustus №21, Pénicillium chermesinum №26 проявили наибольшую активность. Показана их способность к подавлению факторов вирулентности клинического штамма Pseudomonas aeruginosa 71. Отобраны нематофаговые гифомицеты, продуцирующие соединения с фибринолитической и плазминоген-активаторной активностями.

Заключение Диссертация по теме "Микология", Дарханова, Татьяна Андреевна

выводы

2. Отобраны штаммы, продуцирующие антибактериальные вещества широкого и узкого спектра действия, а также антигрибные антибиотики. 6 штаммов обладали антибиотической активностью в отношении метициллинрезистентного Staphylococcus aureus 43300 (MRSА) и S. aureus АТСС 29213. Отобрано 5 штаммов, активных в отношении грамотрицательных бактерий. Установлена антигрибная активность у 14 штаммов, из которых, отобрано 2 штамма, подавляющие рост клинического изолята Candida krusei 60ОМ.

3. Отобран штамм Tolypocladium inflatum № 2, продуцирующий комплекс циклоспоринов с необычным соотношением компонентного состава. Содержание циклоспоринов А,В и С Т. inflatum №2 составляет 54-67%, 10-39.7% и 3.2-23% соответственно, установлено заметное количество циклоспорина (Leu 4) Cs (3.1%).

4. Показана способность 12 штаммов ингибировать систему кворум-сенсинг у бактерии Chromobacterium violaceum.

• подавляют синтез виолацеина штаммов Chromobacterium violaceum 7 и С. violaceum CV026;

• ингибируют образование фактора вирулентности пигмента пиоцианина клинического изолята Pseudomonas aerugonosa 71;

• подавляют активность протеазы LasA, определяющей высокую вирулентность Pseudomonas aeruginosa 71;

• подавляют образование биопленок Pseudomonas aeruginosa 71.

6. Показана способность АпкгоЪо^ух о1що$рога № 45 и А. с1айос1е$ № 48 продуцировать соединения, осуществляющие фибринолиз тромбов крови, то есть проявляющие фибринолитическую и плазминоген-активаторную активности.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При анализе видового состава микроскопических грибов, выделенных из образцов почвы и смежных с нею субстратов, собранных на территории Республики Бурятии выделено 88 видов из 33 родов. Первичный поиск, проведенный среди 57 штаммов, относящихся к 52 видам из 23 родов, показал, что 66% (38 штаммов) микромицетов являются продуцентами антибиотических соединений различного спектра действия, комплекса циклоспоринов, ингибиторов системы кворум-сенсинг. Отмечены культуры, высокоактивные в отношении метициллинрезистентного стафилококка, культуры, обладающие избирательной активностью в отношении грамотрицательных бактерий, в отношении Aspergillus niger, Candida spp., в том числе клинического изолята. Обнаружены штаммы, обладающие широким спектром, действия. Выделенный нами штамм Tolypocladium injlatum № 2 продуцирует комплекс циклоспоринов с неописанным ранее соотношением компонентного состава. Культура представляет интерес как для изучения свойств отдельных циклоспоринов, так и может быть использована для разработки аналогов циклоспорина А. Представленные в работе данные подтверждают, что образование комплекса циклоспоринов является дополнительным признаком при I идентификации грибов рода Tolypocladium. Способность культуры продуцировать те или иные соединения позволяет четко дифференцировать грибы родов Tolypocladium и Beauveria и является таксономическим признаком (Kadlec et al., 1994). Выявлены культуры нематофаговых гифомицетов, продуцирующие соединения, с фибринолитической и активаторной активностями.

Широкий пул биологически активных веществ, образуемый грибами способствует успеху микроскопических грибов в конкурентной борьбе за субстрат и определяет их ведущую роль в формировании микробных комплексов. Одной из таких особенностей является ингибирование системы кворум-сенсинг бактерий, которая выявлена у 12 штаммов из 57 исследованных. Штаммы Aspergillus ustus № 21 и Penicillium chermesinum № 26 проявили наибольшую активность в ингибировании системы кворум-сенсинг и способность подавлять факторы вирулентности клинического изолята Pseudomonas aeruginosa 71.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Дарханова, Татьяна Андреевна, Москва

1. Александрова A.B. Грибы рода Trichoderma Pers.: Fr. Таксономия, географическое распространение и экологические особенности. Автореф. . к.б.н. М.: МГУ. 2000. 20 с.

2. Бабьева E.H., Сизова Т.П. Микромицеты в почвах арктотундровой экосистемы // Почвоведение. 1983. № 19. С. 98-101.

3. Бабьева И.П., Чернов И.Ю. Биология дрожжей. М.: Товарищество научных изданий КМК. 2004. 221 с.

4. Б аз ар ж ап о в Б. Б. Эколого — биохимическая характеристика микроорганизмов термальных источников Баргузинской долины (Северное Прибайкалье). Дис. . к.б.н. Улан-Удэ: БГУ. 2005. 113 с.

5. Бибикова М. В., Спиридонова И. А. и др. Способ выделения циклоспорина А. Патент № 1655115 от 7.07.1989.

6. Бибикова М.В., Бондарева Н.С. Препараты микробного происхождения для лечения атеросклероза. Антибиотики и химиотерапия. 1998. №8. С. 34-39.

7. Билай В.И. Фузарии. Киев: Наукова думка. 1977. 442 с.

8. Биоразнообразие Байкальской Сибири. Под ред. И.Ю. Коропачинского, В.М. Корсунова. Новосибирск: Наука. 1999. 350 с.

9. Ю.Борисова В. Н. Гифомицеты лесной подстилки в различных экосистемах. Киев: наукова думка. 1988. 252 с.

10. Бубнова E.H. Изменение комплексов почвообитающих грибов при переходе от зональных почв к морским экотопам (на примере побережья Кандалакшского залива Белого моря). Дис. к.б.н., М.: МГУ. 2005. 160 с.

11. Бурятия: Природные ресурсы. Под ред. К.Ш. Шагжиева, Б.Б. Ральдина, Б.Л. Раднаева. Улан-Удэ: БГУ. 1997. 176 с.

12. Великанов Л.Л., Сидорова И.И., Успенская Г.Д. Полевая практика по экологии грибов и лишайников. М.: Изд-во МГУ. 1980. 112 с.

13. Великанов Л. Л. Роль грибов в формировании мико- и микробиоты почв естественных и нарушенных биоценозов и агросистем: Дис. д.б.н. М., 1997. 547 с.

14. Великанов JI. Л., Сидорова И.И. Роль грибов в формировании мико и микробиоты почв естественных биоценозов // Труды биологической Звенигородской биологической станции. Т.З. 2001. С. 61-71.1

15. Власов Д.Ю., Зеленская М.С., Франк-Каменецкая О.В. Микромицеты на мраморных памятниках музейных некрополей Александро-Невской лавры (Санкт-Петербург) // Микология и фитопатология. Т. 36. Вып. 3. 2002. С. 7-10.

16. Гаранкина В.П., Дагурова О.П., Дамбаев В.Б., Бурюхаев С.П. Распространение и активность микроорганизмов в заливе провал озера Байкал // Вестник Бурятского госуниверситета. 2009. Вып. 4. С. 84-88.

17. Георгиева M.JI. Микромицеты щелочных засоленных почв. Дис. . к.б.н. М.: МГУ. 2006. 167 с.

18. Головченко А.В., Добровольская Т.Г., Семенова Т.А., Богданова О.Ю., Кухаренко О.С. Влияние температуры на структуру микробных сообществ верхового торфяника (модельный опыт) // Вестник ТГПУ. 2010. Вып. 3. №93. С. 92 100.

19. Грузина В.Д. Коммуникативные сигналы бактерий // Антибиотики и химиотерапия. 2003. Т. 48. № 10. Р. 32-39.

20. Гущин Ф.Л. Получение биопрепарата хищных грибов для борьбы с фитогельминтами. Автореферат дис. к.б.н. М.: 1986. С. 1-15.

21. Егорова Л.Н. Почвенные грибы Дальнего Востока. Гифомицеты. Л.: Наука. 1986. 185 с.

22. Егоров II.C. Основы учения об антибиотиках. М.: МГУ. 2004. 528 с.

23. Завильгельский Г Б., Манухов И.В. "Quorum sensing" или как бактерии "разговаривают" друг с другом // Молекуляр. биология. 2001. Т. 35. С. 268-277.

24. Звягинцев Д. Г, Бабьева И. П., Зенова Г. М. Биология почв. М.: МГУ. 2005. 439 с.

25. Кириленко Т.С. Определитель почвенных сумчатых грибов. Киев: Наукова думка. 1978.263 с.

26. Кирцидели И. Ю., Воробьев Н. И. Терешенков О. М. Сообщества микромицетов из почв подзоны типичных тундр в районе северного побережья Таймырского озера // Микология и фитопатология. 1996. Т. 30. Вып. 2. С. 9-13

27. Козловский А. Г., Марфенина О. Е., Винокурова Н. Г., Желифонова В. П., Аданиш В.М. Микотоксины микроскопических грибов рода Pénicillium, выделенных изпочв естественно и антропогенно нарушенных экосистем // Микробиология. 1997. Т. 66. № 2. С. 206-210.

28. Кондратюк Т.А., Жданова H.H. Развитие микромицетов на произведениях станковой живописи // Микология и фитопатология. 2002. Т. 36. Вып. 2. С. 53-58.

29. Лаврентьева Е.В., Раднагуруева A.A., Намсараев Б.Б., Дунаевский Я.Е. Биохимические характеристики микроорганизмов щелочных гидротерм Прибайкалья // Вестник Бурятского госуниверситета. 2009. Вып. 3. С. 11 14.

30. Липасова В.А., Атамова Э.Э., Веселова М.А., Тарасова H.H., Хмель И.А. Экспрессия гена N-ацилгомосеринлактоназы aiiA влияет на свойства ризосферного штамма Pseudomonas chlor or aphis 449 II Генетика. 2009. Т. 45. № 1. С. 38-42.

31. Максимов В.В., Щетинина Е.В., Крайкивская О.В., Максимова Э.А. Реакция микробных сообществ Байкала на воздействие экстремальных температур // Микробиология. 2006. Т. 75. № 6. С. 752-757.

32. Марфенина O.E. Антропогенная экология почвенных грибов / О. Е. Марфенина. — М.: Медицина для всех. 2005. 195 с.

33. Методы почвенной микробиологии и биохимии. Под ред. Звягинцева Д.Г. М.: Изд. МГУ. 1991.294 с.

34. Мехтиева H.A. Хищные нематофаговые грибы-гифомицеты. Баку: Изд. Элм. 1979. 243 с.

35. Мигунова В.Д. Выбор трофической стратегии хищным нематофаговым грибом Arthrobotrys oligospora Fresenius. Автореф. . к.б.н. М.: МГУ. 2002. 24с.

36. Милько А. А. Определитель мукоральных грибов. Киев: Наукова думка. 1974. 306 с.

37. Мирчинк Т. Г. Почвенная микология. М.: МГУ. 1988. 220 с.

38. Мишустин E.H., Пушкинская О.И. Эколого-географические закономерности в распространении почвенных микроскопических грибов. Известия АН СССР. сер. Биология. 1960. 5: 641-660.

39. Мовчан Д. Д., Великанов Л. Л., Александрова А. В. Влияние сплошной санитарной вырубки хвойного леса на комплекс почвенных микроорганизмов // микология и фитопатология. 2005. Т. 39. Вып. 2. С. 27-33.

40. Мэг г ар ан Э. Экологическое разнообразие и его измерение. М.: Мир. 1992. 184 с.

41. Мюллер Э., Леффлер В. Микология. М.: Мир. 1995. 343 с.

42. Нетрусов А.И., Егорова М.А., Захарчук Л.М. Практикум по микробиологии. М.: Академия. 2005. 608 с.

43. Нюкша Ю. П. Образование сообществ грибов, развивающихся на бумаге // Микология и фитопатология. 1974. Т. 8. вып. 6. С. 478-482.

44. Олескин А.В., Ботвинко И.В., Цавкелова Е.А. Колониальная организация и межклеточная коммуникация у микроорганизмов // Микробиология 2000. Т. 69. № 3. С. 309-327.

45. Определитель растений Бурятии. Под ред. Аненхонова О.А. Улан-удэ: Изд-во Респ. типография. 2001. 670 с.

46. Петрова-Никитина А.Д., Мокеева Л.В., Желтикова Т.М., Чекунова Л.Н., Антропова А.Б., Мокроносова М.А., Биланенко Е.Н., Сизова Т.П. Микобиота домашней пыли г. Москвы // Микология и фитопатология. 2000. Т. 34. Вып. 3. С. 25-33.

47. Пивкин М.В., Зверева Л.В. Грибы родов Alternaría и Ulocladium в акватории залива Петра Великого (Японское море) // Микология и фитопатология. 2000. Т. 34. Вып. 6. С. 38-43.

48. Пивкин М. В. Вторичные морские грибы Японского и Охотского морей. Автореф. . д.б.н. М.: ТИБ ОХ ДВО РАН. 2010. 40 с.

49. Потапова З.М., Намсараев Б.Б. Экофизиология накопительной культуры, выделенной из термального источника УРО (Прибайкалье, Республика Бурятия). Вестник Бурятского госуниверситета. 2009. Вып 4. С 95-97.

50. Пужевская Т. О. Скрининг микромицетов, продуцирующих соединения гиполипидемического, антибактериального и антиоксидантного действия. Дис. . к.б.н. М.: НИИ вакцин и сывороток РАМН. 140 с.

51. Раднагуруева А.А., Лаврентьева Е.В., Дунаевский Я.Е. Протелитическая активность алкалофильных микроорганизмов водных систем Забайкалья // Вестник Бурятского госуниверситета. 2009. Вып. 4. С. 98 101.

52. Санданова И.Б. Микробиологическая деструкция растительного опада степных экосистем юго-восточного Забайкалья. Автореф. . к.б.н. Улан — Удэ: БГУ. 2007. 20 с.

53. Сизова Т. П. Географическая зональность в распространении пенициллов и эволюция в пределах этого рода. Бюллетень МОИП. Отд. Биологии. 1953. 58: 7175.

54. Смоляницкая О. Л. Микромицеты как потенциальные агенты биоповреждения культурных ценностей и стратегия защиты от них в Государственном Эрмитаже. Автореф. к.б.н. СПб. 2007. 26 с.

55. Сопрунов Ф. Ф. Хищные грибы-гифомицеты и их применение в борьбе с патогенными нематодами. Ашхабад: АН Туркменской СССР. 1958. 367 с.

56. Теплякова.Т. В. Биологические аспекты изучения и использования хищных грибов-гифомицетов. Новосибирск. 1999. Стр. 252.

57. Терехова В. А., Трофимов С.Я. Влияние перекрестной интродукции микромицетов на минерализацию подстилки ненарушенных южнотаежных ельников // микология и фитопатология № 35. Том 4. 2001 г. С 53-58.

58. Терехова В. А. Значение микологических исследований для контроля качества почв // Почвоведение. 2007. № 5. С. 643-648.

59. Тертов В. В., Бибикова М. В., Спиридонова И. А., Катлинский А. В., Чмель Я. В. Скрининг природных соединений с- гиполипидемической активностью //Антибиотики и химиотерапия. 2004. N 8. С.8-12

60. Тренин A.C. Резистентность к гликопептидным антибиотикам. //Антибиотики и химиотерапия. 1996. Т.41. №5. с.49-60.

61. Тренин А. С., Олсуфьева Е. Н. Механизм резистентности к гликопептидным антибиотикам как основа создания новых производных, способных к преодолению резистентности (обзорная статья) // Биоорг. химия.1997. Т. 23. №11. Р. 851-867

62. Туркова З.А., Титкова O.A. Влияние кислотообразования на антогонистические свойства грибов, применяемые при испытаниях изделий медицинской техники // Микология и фитопатология. 1979. Т. 3. Вып. 4. С. 305-308.

63. Хо-ван-кыу. Биологически активные вещества хищных грибов. Автореф. к.б.н. М.: МГУ. 1968. 13 с.

64. Цыбжитов Ц. X., Убугунова В. И. Генезис и география таежных почв бассейна озера Байкал. Улан-Удэ.: Бурятское кн. изд-во. 1992. 240 с.

65. Цыбжитов Ц. X., Цыбикдоржиев Ц. Ц., Цыбжитов А. Ц. Почвы Бассейна озера Байкал: Генезис, география и классификация каштановых почв. Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ие. 1999. Т. 1. 128 с.

66. Цыбжитов Ц. X., Цыбжитов А. Ц. Почвы Бассейна озера Байкал: Генезис, география и классификация степных и лесостепных почв. Улан-Удэ. Изд.: БНЦ СО РАН. 2000 а. Т.2. 165 с.

67. Цыбжитов Ц. X., Цыбжитов А. Ц. Почвы Бассейна озера Байкал: Генезис,география и классификация таежных почв. Улан-Удэ. Изд.: БНЦ СО РАН. 2000 б. Т.З. 173 с.

68. Цыренова Д. Д., Намсараев Б. Б., Брянская А. В. Анализ таксономического спектра цианобактерий солоноватых и соленых озер южного Забайкалья // Вестник бурятского госуниверситета. 2009. Вып. 4. С. 105-108.

69. Чигинева Н. И., Александрова А. В., Сидорова И. И., Тиунов А. В. // Влияние легкодоступного углерода на состав сообщества микромицетов и скорость деструкции растительного опада в почве // Микология и фитопатология. 2007. Т. 40. Вып. 5. С. 428 435.

70. Чигинева Н. И., Александрова А. В., Сидорова И. И., Тиунов А. В. // Таксономическая структура сообществ, микромицетов на растительном опаде при разных уровнях доступности углерода // Микология и фитопатология. Т. 42. Вып. 6. 2008. С. 541-551.

71. Шагинян И. А., Чернуха М. Ю. Неферментирующие грамотрицательные бактерии в этиологии внутрибольничных нфекций: клинические, микробиологические и эпидемилогические особенности // Клин. Микробиол. Антимикроб. Химиотер. 2005. Т. 7. №3.

72. Шаркова Т.С., Максимова Р.А., Теплякова Т.В. Физиологические особенности Arthrobotrys longa Mecht. в связи с образованием фибринолитических ферментов // Микология и фитопатология. 1988. Т. 22. С. 149-152.

73. Шаркова Т.С., Максимов В.Н. Изучение физиологии хищного гриба Arthrobotrys longa продуцента лонголитина в связи с длительным хранением культуры в лабораторных условиях // Микология и фитопатология. 1999. Т. 33. С. 338-339.

74. AleS Husek. High-performance liquid chromatographic analysis of cyclosporin A and its oral solutions Journal of Chromatography A. 1997. V. 759. № 1-2. P. 217-224.

75. Ames L.M. A Monograph of the Chaetomiaceae. Arme research offise. 1961. 135 p.

76. Arai M, Tomoda H, Okuda T, et al. Funicone-related compounds, potentiators of antifungal miconazole activity, prodused byTalaromyces flavus FKI-0067. // J Antibiot. 2002. V.55. 172-180.

77. Awazu N., Ikai K., Yamamoto J., Nishimura K., Mizutani S., Takesako K., Kato I. Structures and antifungal activities of new aureobasidins // Journal of Antibiotics. 1995. V. 48. P. 525-527.

78. Barnett H.L. Illustrated genera of Imperfect Fungi. Burgess Publ. Compani. 1972. 218p.

79. Barron G.L. The nematode-destroing fungi. Canadian Biological Publications. Ontario. 1977. 140 p.

80. Barron G.L., Dierkes Y. Nematophagous fungi Hohenbuehelia, the perfect state of Nematoctonus. CanJ.Bot. 1979. Vol. 55. P.3054-3062.

81. Barron G.L. Lignolytic and cellulolytic fungi as predators and parasites // In the fungal community, its organization and role in the ecosystem. Marcel Dekker wc. New York. 1992. P.311-326.

82. Beedholm-Ebsen R, van de Wetering K, Hardlei T, Nexo E, Borst P, Moestrup S.K. Identification of multidrug resistance protein 1 (MRP1/ABCC1) as a molecular gate for cellular export of cobalamin// Blood. 2010. V. 115. № 8. P. 1632-1639.

83. B er dy J. Bioactive Microbial Metabolites // J. Antibiot. 2005. V. 58. P. 1-26.

84. Booth C. The genera Fusarium. Klw, Surrey, England: Commonvealth Mycological Inst. 1971.237 p.

85. Bradley E. P., Rath A., Deber C. M. The Assembly Motif of a Bacterial Small Multidrug Resistance Protein // The Journal of biological chemistry. 2009. V. 284. P. 9870-9875.

86. Breinbauer R., Manger M., Scheck M., Waldmann H. Natural product guided compound library// Curr. Med. Chem. 2002 a. V.9. P. 2129-2145.

87. Breinbauer R., Vetter I.R., Waldmann H. From protein domains to drug //Chem. Int. Ed. 2002 b. V.41.P. 2878-2890.

88. Buchta M., Jegorov A.L. Cvak. L., Havlic ek V., Sinsky M. B., SedmeraP. A cyclosporin from Mycelium sterilae // Phytochemistry. 1998. №7. V.48. P. 1195-1198.

89. Bugni T.S., Bernan V.S., Greenstein M. et al. Brocaenols AC: Novel polyketides from a marine-derived Penicillium brocae //J. Org. Chem. 2003. V.68. P. 2014-2017 .

90. Byers J.T., Lucas C., Salmond G.P., Welch M. Nonenzymatic turnover of an Erwinia carotovora quorum-sensing signaling molecule // J. Bacteriol. 2002. V.84. №4. P.1163-1171.

91. Chen H., Fujita M., Feng Q., Clardy J., Fink G. R. Tyrosol is a quorum-sensing molecule in Candida albicans//PNAS. 2004. V. 101. № 14. P. 5048-5052.

92. Christensen M. A view of fungal ecology. Mycologia. 1989. V. 81. №1. P. 1-19.

93. Cooke R.C. The predaceous activity of nematode-trapping fungi added to soil // Ann. appl. Biol. 1963. P. 295-299.

94. Cooke R.C., Godfrey B.E.S. A key to the Nematode-destroying fungi // Trans. Brit. Mycol. Soc. 1964. V. 47. №1. P. 61-74.

95. Davies J.E. Origins, acquisition and dissemination of antibiotic resistance determinants. In: Chadwick D.J. editor. Antibiotic resistance: origins, evolution, selection and spread. Chinester (UK): John Wiley and Sons Ltd. 1997. P. 15-35.

96. Davies D.G., Parsek M.R., Pearson J.P., Iglewski B.H., Costerton J.W., Greenberg E.P. The involvement of cell-to-cell signals in the development of bacterial biofilm // Science 1998. V. 280. P. 295-298.

97. Davies D. Understanding biofilm resistance to antibacterial agents // Nature Reviews drug discovery. 2003. 2. P. 114-122.

98. Domsch K.H., Gams W., Anderson T. Compendium of soil fungi. London: Academic Press. 2007. V. 672 p.

99. Dong Y-H., Xu J-L., Li X-Z., Zhang L-H. AiiA, an enzyme that inactivates the acylhomoserine lactone quorum-sensing signal and attenuates the virulence of Erwinia carotovora // PNAS. 2000. V. 97. № 7.

100. Dong Yi-Hu, Wang Lian-Hui, Xu Jin-Ling, Zhang Hai-Bao, Zhang Xi-Fen, Zhang Lian-Hui. Quenching quorum-sensing-dependent bacterial infection by an yV-acyl homoserine lactonase//Nature. 2001. 411. P.813-817.

101. Dong Yi-Hu, Zhang Xi-Fen, Xu Jin-Ling, Zhang Lian-Hui. Insecticidal Bacillus thuringiensis silences Erwinia carotovora virulence by a new form of microbial antagonism, signal interference// J. Biol. Chem. 2004. 2;279(14): 13645-51.

102. Drechsler C. New zoopagaceae destructive to soil rhizopods // Mycologia. 1937a. V. 29. P. 229-249.

103. Drechsler C. Some Hyphomycetes that pray on free-living terricolous nematodes // Mycol. 1937b. V. 29. №4. P. 447-552.

104. Drenkard E., Ausubel F.M. Pseudomonas biofilm formation and antibiotic resistance are linked to phenotypic variation //Nature. 2002. 416:740-743.

105. Dreyfuss M., Ha'rri E., Hofmann H., Kobel H., Pache W., Tscherter H. Cyclosporin A and C. New metabolites from Trichoderma polysporum (Link ex Pers.) Rifai. Eur. J. Appl. Microbiol. 1976. 3:125-133.

106. Dreyfuss M.M. Neue Erkenntnisse aus einem pharmakologischen Pilz-screening. Sydowia. 1986. 39:22-36.

107. Duddington C.L. Further records of British predacious fungi I // Trans. Brit. Mycol. Soc. 1950. V. 33. № 3-4. P. 209-214.

108. Eberl L. N-acyl homoserinelactone-mediated gene regulation in gram-negative bacteria II Syst. Appl. Microbiol. 1999. V. 22. №4. P. 493-506.

109. Ellis M. B. Dematiaceous Hyphomycetes. Commonwealth Myco logical institute Kew. Kew: Surrey. 1971. 608 p.

110. Endo A., Kuroda M., Tsujita Y. et al. ML-236A, ML-236B and ML-236C, new inhibitors of cholesterogenesis produced by Penicillium citrinum II J. Antibiot. 1976. V. 29. №.12. P. 1346-1348.

111. Endo A., Hasumi K., Negishi S. et al. Monacolins J and L, new inhibitors of cholesterol biosynthesis produced by Monascus ruber II J. Antibiot. 1985. V. 38. №3. P. 420-422.

112. Endo A., Hasumi K., Yamada A. et al. The synthesis of compactin (ML-236B) and monacolin K in fungi //J. Antibiot. 1986. V. 39. №11. P. 1609-1610.

113. Evidente A., Conti L., Altomare C. et al. Fusapyrone and deoxyfusapyrone, two antifungal a -pyrones from Fusarium semitectum. //Nat.Toxins.1994. V.2. P. 4—13.

114. Fugua C., Winans S.C., Greenberg E.P. Census and consensus in bacterial ecosystems the LuxR Luxl family of quorum-sensing transcriptional regulators // Ann. Rev. Microbiol. 1996. 10:727.

115. Fukuda T., Sakabe Y., Tomoda H., omura S. Fungal citridone D having a novel phenylfuropyridine skeleton// Chem. Pharm. Bull. 2006a. 54: 1659-1661.

116. Fukuda T, Hasegawa Y, Hagimori K, Yamaguchi Y, Masuma R, Tomoda H, o mura S. Tensidols, new potentiators of antifungal miconazole activity, produced by Aspergillus niger FKI-2342. J. Antibiot. 2006b. 59: 480-485.

117. Fukuda T., Hasegawa Y., Sakabe Y., Tomoda H., Omura S. Citrinamides, new potentiators of antifungal miconazole activity, produced by Penicillium sp. // J. Antibiot. 2008. V. 61. P. 550-555.

118. Gallagher L.A., McKnight S.L., Kuznetsova M.S., Pesci E.C., Manoil C. Functions required for extracellular quinolone signaling by Pseudomonas aeruginosa. II J. Bacteriol. 2002. V. 184. № 23. P. 6472-6480.

119. Gams W. Cephalosporium-artige Schimmelpilse (Hyphomycetes). Stuttgart: Fischer. 1971 b. 262 p.,

120. Gams W. Tolypocladium. Eine Hyphomycetengattung mit geschwollenen Phialiden // Persoonia. 1971 a. V. 6. P. 185-191.

121. Gams W. «Biodiversity of soil-inhabiting fungi» // Biodiversity and Conservation 2007. V. 16 P. 69-72.

122. Gibbons J.J., Abraham R.T., Yu K. Mammalian target of rapamycin: discovery of rapamycin reveals a signaling pathway important for normal and cancer cell growth // Semin. Oncol. 2009. V. 36. № 3. P. 3-17.

123. Gilson L., Kuo A., Dunlap P.V. AinS and a new family of autoinducer synthesis proteins// J. Bacteriol. 1995. V. 177. №23. P. 6946T6951.

124. Gray N.F. Ecology of nematophagous fungi: distribution and habitat // Ann. Appl. Biol., 1983. V. 102. №3. P. 501-508.

125. Gray N.F. Nematophagous fungi with particular reference to their ccology // Biol. Rev. 1987. V. 62. P. 245-304.

126. Greenspan M. D., Yudkovitz J. B. Mevinolinic acid biosynthesis by Aspergillus terreas and its relationship to fatty acid biosynthesis // J. Bacteriol. 1985. V. 162. №2. P. 704-707.

127. Harjai K, Kumar R, Singh S. Garlic blocks quorum sensing and attenuates the virulence of Pseudomonas aeruginosa // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2010. V. 58. №2. P. 161-168.

128. Hawksworth D.L. Fungal diversity and its implications for genetic resource collections // Studies in Mycology. 2004. 50: 9-18.

129. Hawksworth D.L., Rossman A.Y. Where are all the undescribed fungi? // Phytopathology. 1997. V. 87. P. 888-891.

130. Hibbett D.S., Thorn R.G. Nematode-trapping in Pleurotus tuberregium// Mycol. 1994. V. 86. №5. P. 696-699.146. Hogan 2006

131. Hoog G.S. Taxonomy of the Dactylaria complex, IV. Dactylaria, Neta, Subulispora and Scoleobasidium // Studies in Mycology. 1985. № 26. 122 p.

132. Hu J-F., Garo E., Goering M. G. Pasmore M., Hye-Dong Yoo, Esser T., Sestrich J., Cremin P. A., Hough G. W., Perrone P., Yin-Shi L. Lee, Ngoc-Tram Le, Mark

133. O'Neil-Johnson,. Costerton J. W., Eldridge G. R. Bacterial biofilm inhibitors from diospyros dendo 11 J. Nat. Prod. 2006. V.69. № 1. P. 118-120.

134. Huang J.J., Han J.I., Zhang L.H., Leadbetter J.R. Utilization of acyl-homoserine lactone quorum signals for growth by a soil pseudomonad and Pseudomonas aeruginosa PAOl // Appl. Environ. Microbiol. 2003. V. 69. №10. P. 5941-5949.

135. Hueck C.J. Type III secretion systems in bacterial pathogens of animals and plants. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. 62: 379-433.

136. Inoue H., Someno T., Kato T., Kumagai H., Kawada M., Ikeda D. Ceramidastin, a novel bacterial ceramidase inhibitor, produced by Penicillium sp. Mer-f17067 // J. Antibiot. 2009. V. 62. P. 63-67.

137. Isaac C.E., Jones A., Pickard M.A. Production of Cyclosporins by Tolypocladium niveum Strains// Antimicrobial agents and chemotherapy. 19901 V. 34. №.1. P. 121-127.

138. Jiao P., Swenson D.C., Gloer J.B., Wicklow D.T. Chloriolide, a 12-membered macrolide from Chloridium virescens var. chlamydosporum (NRRL 37636) // J. Nat. Prod. 2006. 69(4):636-639.

139. Kadlec Z., Simek P., Heydova A, Jegorov A., Mafha V. Landa Z., Eyal J. et al. Chemotaxonomic discrimination among the fungal genera Tolypocladium, Beauveria and Paecilomyces // Biochemical Systematics and Ecology. 1994. V. 22. P. 803-806.

140. Katz M.L., Mueller L.V., Polyakov M„ Weinstock S. F. Where have all the antibiotic patents gone?//Nat. Biotechnol. 2006. V. 24. P. 1529-1531.

141. Kendrick B. All about fungi. Fungi exploiting microscopic animals // Mycologue publications. 2003. P.

142. Kessler E., Safrin M., Abrams W. R., Rosenbloom J., Ohman D,E. Inhibitors and Specificity of Pseudomonas aeruginosa LasA // JBC. 1997. V. 272: №15. P.9884-9889.

143. Kirby WMM. Extraction of a highly potent penicillin inactivator from penicillin resistant staphylococci // Science. 1944. 99:452-455.

144. Klich M.A. Biogeography of Aspergillus species in soil and litter. Mycologia. 2002. 94:21-27.

145. Kontani M., Sakagami Y., Marumo S. First P-l,6-glucan biosynthesis inhibitor, bisvertinolone isolated from fungus, Acremonium strictum and its absolute stereochemistry // Tetrahedron lett. 1994. V. 35. P. 2577-2580.

146. Korzybski T., Kowszyk-cindifer Z., Kurilowicz W. Antybiotiky. Pochodzenie, rodzaje i wlasciwosci. 1969. T. 2. 1100 c.

147. Kuhnt M., Bitsch F., France J. Et al. Microbial biotransformation products of Cyclosporin A. J. Antibiotics. 1996. 49: 781 -787.

148. Kuo A., Sean M., Callahan, Dunlao P.V. Modulation of luminescence operon expression by JV-octanoyl-L-homoserine lactone in ainS mutants of Vibrio fischeri II J. of bacteriology. 1996. V. 178. № 4. P. 971-976.

149. Lin Y.H., Xu J.L., Hu J., Wang L.H., Ong S.L., Leadbetter J.R., Zhang L.H. Acyl-homoserine lactone acylase from Ralstonia sp. strain XJ12B represents a novel and potent class of quorum-quenching enzymes// Mol. Microbiol. 2003.47: 849-860.

150. Manefield M., Rasmussen T. B., Henzter M., Andersen J. B., Steinberg P., Kjelleberg S., Givskov M. Halogenated furanones inhibit quorum sensing through accelerated LuxR turnover//Microbiology. 2002. 148: 1119-1127.

151. Martinelli D., Grossmann G., Sequin U., Brandl. H., Bachofen R. Effects of natural and chemically synthesized furanones on quorum sensing in Chromobacterium violacium // BMC Microbiol. 2004. 4:25.

152. McClean K. H., Winson M. K., Fish L. et al. Quorum sensing and Chromobacterium violaceum: exploitation of violacein production and inhibition for the detection of jV-acylhomoserine lactones // Microbiology. 1997. Vol. 9, No. 143. P. 3703 -3711.

153. Miller M.B., Bassler B.L. Quorum sensing in bacteria // Annual review of microbiology. 2001. V. 55. P. 165-199.

154. Moreira M. A. S., Chartone de Souza E., Alencar de Moraes C. Multidrug efflux systems in Gram-negative bacteria // Braz. J. Microbiol. 2004. V.35. N.l-2. P. 19-28.

155. Morino T., Masuda A., Yamada M., Nishimoto M., Nishikiori T., Saito S., Shimada N. Stevastelins, novel immunosuppressants produced by Penicillium II J. Antibiot. 1994. V. 47. P. 1341-1343.

156. Moussaif M., Jacques P., Schaarwachter P. Cyclosporin C is the main antifungal compound produced by Acremonium luzulae // Applied and environmental microbiology. 1997. V. 63. P. 1739-1743.

157. Namatame I., Tomoda Hi, Ishibashi S., Omura S. Antiatherogenic activity of fungal beauveriolides, inhibitors of lipid droplet accumulation in macrophages // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004! V. 101. P. 737 742.

158. Newman D., Cragg G. Natural products as sources of new drugs over the period 1981-2002 //J. Nat. Prod. 2003. V.66. P. 1022 1037.

159. Nickerson K., Atkin A. L., Hornby J. M. Quorum Sensing in Dimorphic Fungi: Farnesol and Beyond // Applied environmental microbiology. 2006. V. 72. №6. P.3805-3813.

160. Nisha G., Kuppusamy M., Balaraman K. Optimization of high-performance liquid chromatographic conditions for the determination of cyclosporins A, B and C in fermentation samples. J. Chromatography. 1992. V. 604. P. 285-289.

161. Nordbring Hertz B., Hans-Bo"rje J., Tunlid A. Nematophagous fungi. In: Encyclopedia of life sciences. John Wiley & Sons, Ltd: Chichester. 2006. http://www.els.net.

162. Pechere J. C. Azithromycin reduces the production of virulence factors in Pseudomonas aeruginosa by inhibiting quorum sensing. // J. Antibiot. 2001. V.54. P.87-89.

163. Persmark L., Banck A., Jansson H-B. Population dynamics of nematofagous fungi and nematodes in an arable soil: vertical and seasonal fluctuations // Soil. Biology and biochemistry. 28:1005-1014.

164. Pitt G. I. A laboratory guide to common Penicillium species (sec. ed.). North Ryde, U.S.W., Australia: CSIRO, Division of Food Processing. 1991. 188 p.

165. Poole K. Efflux-mediated antimicrobial resistance // J. Antimicrobial Chemotherapy. 2005. V. 56. P. 20-51.

166. Pramer D., Kuyama S. Nemin and the nematode-traping fungi // Bacteriol Rev. 1963. Vol.27. P.282-292.

167. Pramer D., Stoll. N.R. Nemin a morphogenetic Causing Trap Formation by Predaceous Fungi // Scince. 1959. V. 129. №3354. P. 966-967.

168. Putman M., van Veen H. W., Konings Wil N. Molecular Properties of Bacterial Multidrug Transporters // Microbiology and Molecular Biology. 2000. V. 64. № 4. P. 672-693.

169. Ramirez C. Manual and Atlas of the Penicillia. Oxford: Elsiveier Biomedical Press. 1982. 874 p.

170. Raper K.B., Fennel D.I. The genus Aspergillus. Baltimore: Williams, Wilkins. 1965.686 p.

171. Rasmussen T. B4., Givskov M. Quorum sensing inhibitors: a bargain of effects // Microbiology. 2006. V. 152. P. 895-904.

172. Rubner A. Revision of predaceous hyphomycetes in the Dactylella-Monacrosporium complex // Studies in Mycology. V.39. 1996. P. 1-134.

173. Samaranayake L.P. Candida krusei infections and fluconazole therapy // HKMJ. 1997. V.3. №3. P.312-314.

174. Sawai K., Okuno T., Terada Y. et al. 1981. Isolation and properties of two antifungal substances from Fusarium solani // Agric. Biol. Chem. 45:1223-1228.

175. Shadaba A., Opal S. M. Bench-to-bedside review: Quorum sensing and the role of cell-to-cell communication during invasive bacterial infection // Critical Care. 2008. 12:23.

176. Schaber A.J. Carty N.L., McDonald N. A., Graham E. D., Cheluvappa R., Griswold J. A., Hamood A.N. Analysis of quorum sensing-deficient clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa II Med Microbiol. 2004. V. 53. P. 841-853.

177. Shaw L.M., Kaplan B., DeNofrio D., Korecka M., Brayman K.L. Pharmacokinetics and concentration-control investigations of mycophenolic acid in adults after transplantation // Ther drug monit. 2000. V. 22. №1. P. 14-19.

178. Shiomi K., Ryosuke M., Miki I., Chiba H., Sugai T., Yamaguchi Y., Masuma R., Tomoda H., Chiba T., Yan H., Kitamura Y., Sugiura W., Omura S., Tanaka H. Fungal Phenalenones Inhibit HIV-1 Integrase // J. Antibiot. 2005. V.58. P. 65-68.

179. Shiono Y., Murayama T. New eremophilane-type sesquiterpenoids, eremoxylarins A and B from xylariaceous endophytic fungus YTJA-026 // Z. Naturforsch. 2005. V.60. P.885-890 .

180. Shiono Y. Anthracobic acids A and B, two polyketides,produced by an endophytic fungus Anthracobia sp. // Chem Biodivers. 2006. V.3. P. 217-223.

181. Simmons E.G. Typification of Alternaria, Stemphylium and Ulocladium // Mycologia. 1967. Vol. 59. P. 67 92.

182. Sofer D, Gilboa-Garber N., Belz. A., Garber N.C. 'Subinhibitory' erythromycin represses production of Pseudomonas aeruginosa lectins, autoinducer and virulence factors // Chemotherapy. 1999. V.45. P.335-341.

183. Stalpers J.A. Identification of wood-inhabitating fungi in pure culture// Studies in mycology. 1978. № 16. P. 12-14.

184. Sunder A., Lysek G. Quantitative investigations on nematode-traping hyphomycetes from woodland soils // Microbiology Ecology. 1988.V. 53. P. 285-290.

185. Takesako K., Ikai K., Haruna F., Endo M., Shimanaka K.,Sono E., Nakamura T., Kato I., Yamaguchi H. Aureobasidins, new antifungal antibiotics. Taxonomy, fermentation, isolation, and properties // Journal of Antibiotics. 1991. V. 44. P. 919-924.

186. Teitzel G. M., Parsck M. R. Heavy Metal Resistance of Biofilm and Planktonic Pseudomonas aeruginosa II Microbiology. 2003. V. 69. № 4. P. 2313-2320.

187. Thorn C.A., Raper K.B. Manual of the Penicilla, N.Y.: Hefner Publishing Co. 1968. 875 p.

188. Tomoda H., Huang X.H., Cao J., Nishida H., Nagao R., Okuda S., Tanaka H., Omura S., Arai H., Inoue K. Inhibition of acyl-CoA: cholesterol acyltransferase activity by cyclodepsipeptide antibiotics // J. Antibiot. 1992. V. 45. 1626-1632.

189. Tomoda H., Tabata N., Masuma R., Si S.Y., Omura S. Erabulenols, inhibitors of cholesteryl ester transfer protein produced by Penicillium sp. FO-5637. I. Production, isolation and biological properties. J. Antibiot. 1998. V.51. №7. P. 618-623.

190. Tomoda H., Ömura S. Potential therapeutics for obesity and atherosclerosis: Inhibitors of neutral lipid metabolism from microorganisms // Pharmacol. Therapeut. 2007. V. 115. P. 375-389.

191. Tzean S.S., Estey R.H. Nematode-trapping Fungi as Mycopathogens // Phytopathology. 1978. V. 68. P 1266-1270.

192. Van Delden C, Iglewski В H. Cell-to-cell signaling and Pseudomonas aeruginosa infections // Emerg infect dis. 1998. 4:551-560.

193. Vincent J. L. Nosocomial infections in adult intensive-care units // Lancet. 2003. V. 361 P. 2068-2077.

194. Von Arx J. A. Tolypocladium, a synonym of Beauveria II Mycotaxon 1986. 25:153-158.

195. Von Wartburg A., Traber R. Cyclosporins, fungal metabolites with immunosuppressive activities // Progress in medicinal chemistry. 1998. 25:1-33.

196. Von Wartburg, A., R. Traber. Chemistry of the natural cyclosporine metabolites // Prog. Allergy. 1986. 38:28-45.

197. Wagner V. E., Bushneil D., Passador L., Brooks A. I., Iglewski В. H. Microarray analysis of Pseudomonas aeruginosa quorum-sensing regulons: effects of growth phase and environment // J. Bacteriol. 2003. №185. P. 2080 -2095.

198. Walker I.C., Mint er D.W. Taxonomy of Nematogonum, Gonatobotrys, Gonatobotryum and Gonatorrhodiella // Trans. Br. Mycol. Soc. 1981. V. 77. №2. P. 299 -319.

199. Wang L.II., Weng L.X., Dong Y.H., Zhang L.H. Specificity and enzyme kinetics of the quorum-quenching N-Acyl homoserine lactone lactonase (AHL-lactonase) // J. boil. Chem. 2004. 279:13645-13651.

200. Weizhong Liu, Qianqun Gu, Cul C., Fan G. Dihydrotrichodimerol and tetrahydrotrichodimerol, two new disorbicillinoids, from a marine-derived Penicillium terrestre//}. Antibiot. 2005. V. 58. P. 621-624.

201. Welch M., Mikkelsen H., Swatton J.E., Smith D., Gemma L.T., Freija G.G., David R.S. Cell-cell communication in Gram-negative bacteria // OverMol. BioSyst. 2005 V.l.P. 196-202.

202. Winzer K., Williams P. Quorum sensing and the regulation of virulence gene expression in pathogenic bacteria // International Journal of Medical Microbiology. 2001. V. 291. №2. P. 131-143.

203. Xaio J.Z., Kumazawa S., Yoshikawa N., et al. Dactylfiingins, novel antifungal antibiotics produced by Dactylariaparvispora II J. Antibiot. 1993. V.46. P. 48-55.

204. Yamada T., Minoura K., Tanaka R., Numata A. J. Cell-adhesion Inhibitors Produced by a Sea Hare-derived Periconia sp. II Absolute Stereostructures of Peribysins H and I // Antibiot. 2006. V. 59. №6. P. 345-350.

205. Yamazaki H., Omura S., Tomoda H. 6'-Hydroxy-3'-methoxy-mitorubrin, a New potentiator of antifungal miconazole activity, produced by Penicillium radicum FKI-3765-2 // Chemical and pharmaceutical bulletin. 2010. V. 58. №6. 820 p.

206. Yang Shu-Wei, Tze-Ming Chan, Terracciano J., Loebenberg D., Patel* M., Min Chu. Structure Elucidation of Sch 725674 from Aspergillus sp. // J. Antibiot., 2005. V. 58. P. 535-538.

207. Yoshikawa Y., Ikai K., Umeda Y., Ogawa A., Takesako K.,Kato I., Naganawa H. Isolation, structures, and antifungal activities of new aureobasidins // J. Antibiot. 1993. V.46. P. 347-1354.

208. Zak J.C., Visser S. An appraisal of soil fungal biodiversity: the crossroads between taxonomic and functional biodiversity. Biodiversity and Conservation. 1996. 5: 169-183.

209. Zheng Chang-Ji, Park Soo-Hee et al. Verticillin-G a New Antibacterial Compound from Bionectra byssicola // J. Antibiot. 2007. V.60. P. 61 — 64.

210. Zheng Chang-Ji, Yu Hyung-Eun, Eun-Hee Kim, Won-Gon Kim. Viridicatumtoxin B, a new anti-MRSA agent from Pénicillium sp. FR11 // J. Antibiot. 2009. V. 61.P.633-637.виды d(%) а (тыс.) I I (%)

211. Acremonium sp. 50 6.45 6.1

212. Aspergillus cervinus Massee 20 6.667 2.7

213. Aspergillus fumigatus Fresen. 30 5 0.2

214. A. nidulans (Eidam) G. Winter 10 10 2.7

215. A. ustus (Bainier) Thorn et Church 60 6.875 7.4

216. A. versicolor (Vuill.) Tirab. 30 7 4.7

217. Beauveria bassiana (Bals.-Criv.) Vuill. 30 8.75 4.7

218. Geomyces pannorum (Link) Sigler, Carmich. 50 12.308 21.6

219. Mortierella alpina Peyronel 20 5 2.0

220. Pénicillium citrinum Sopp. 30 5 1.4

221. P. aurcmtiogrise urn We stling 60 5.9 8.8

222. P. janczewskiiZalessky 40 13 8.8

223. P. purpurogenum Stoll 10 5 0.7

224. P. spinulosum Thorn 10 5 0.7

225. P. restrictum Gilman, Abbott 10 5 0.7

226. P. thomii Maire 10 7.5 0.2

227. P. variabile Mey. 10 5 0.7

228. Rhizopus stoloniferum Thorn 10 5 0.7

229. Tolypocladium inflatum Gams 20 13.75 7.4

230. T. microsporum (Jaap) Bissett 10 10 2.7

231. Trichoderma spirale Bissett 40 7.5 4.1

232. Trichoderma viride Pers. 20 5 1.4

233. Ulocladium sp. 30 6.25 3.4

234. Светлоокрашенный стерильный мицелий 20 7.5 2.0

235. Где <1-частота встречаемости (%), а количество грибных зародышей на 1 г почвы (в тыс.), И-обилие видов.

Информация о работе

Дарханова, Татьяна Андреевна
кандидата биологических наук
Москва, 2010
ВАК 03.02.12

Диссертация

Микромицеты Бурятии и их биологическая активность - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы