Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Комплекс методик экологического контроля токсичных аминосоединений в биологических средах человека

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Комплекс методик экологического контроля токсичных аминосоединений в биологических средах человека"

На правах рукописи

ЗАИНУТДИНОВ ЛЕНАР АГЗАМОВИЧ

КОМПЛЕКС МЕТОДИК ЭКОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ТОКСИЧНЫХ АМИНОСОЕДИНЕНИЙ В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ ЧЕЛОВЕКА

03.00.16 - Экология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Казань 2004

Работа выполнена в Казанском государственном технологическом университете

Научный руководитель: доктор химических наук,

профессор Евгеньев Михаил Иванович

Официальные оппоненты: доктор химических наук,

профессор Гуревич Петр Аронович

Защита состоится " 10 " ноября 2004 г. в 16 часов на заседании диссертационного совета Д 212.080.02 при Казанском государственном технологическом университете по адресу: 420015, Казань, ул. К. Маркса, 68, зал заседаний Ученого совета (А-330).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского государственного технологического университета

Автореферат разослан " & " о уст-а.^ 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор химических наук,

профессор Глебов Александр Николаевич

Ведущая организация:

Казанский государственный университет

ЛП

доктор технических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы: Генетическая предрасположенность является главной и малоизученной причиной индивидуальной чувствительности организма человека при воздействии токсичных химических веществ. При этом в решении комплекса проблем экологии человека важное место занимают методы мониторинга генетически детерминированных процессов биотрансформации ксенобиотиков в организме человека*. Это связано с тем, что значительные различия в экотоксическом действии химических веществ обусловливают полиморфизмы процессов их метаболизма. В экологическом аспекте определение биохимических фенотипов метаболизма токсикантов у производственного персонала и населения необходимо для оценки риска интоксикации, канцерогенеза, индивидуальной химической чувствительности, профессиональной пригодности, а также выявления групп повышенного риска и предупреждения на этой основе проявления неблагоприятных экологических факторов. Влияние экологических факторов приводят к увеличению наследуемых патологий и лежат в основе многочисленных заболеваний, связанных с нарушениями обмена веществ.

Широкое применение ароматических аминов, гидразина и его замещенных в народном хозяйстве способствует как хронической, так и острой производственной интоксикации человека этими веществами. Процессы метаболизма аминосоединений в организме протекают путем ацетилирования аминогрупп токсикантов, причем активность фермента ^ацетилтрансферазы, контролирующего процессы их биотрансформации, генетически детерминирована у разных людей. В связи с этим особую значимость в обеспечении экологической безопасности населения приобретает мониторинг индивидуальных процессов биотрансформации этих токсикантов как меры предрасположенности в развитии экопатологических реакций организма.

Цель работы состояла в разработке комплекса спектрофотометрических и экстракционно-спектрофотометрических методов для мониторинга тест-маркеров генетически детерминированных процессов ацетилирования аминосоединений в биологических жидкостях; установлении закономерностей токсикокинетики и метаболизма гидразина и его замещенных для обеспечения экологической безопасности при их воздействии.

Научная новизна:

• обоснован выбор и условия использования гидразида изоникотиновой кислоты и сульфадимезина в качестве тест-препаратов ацетилирования аминосодержащих соединений;

* Соруководителем диссертационной работы по вопросам мониторинга генетически детерминированных процессов биотрансформации ксенобиотиков являлся доктор химических наук, доцент Гармонов Сергей Юрьевич

• научно обоснованы и установлены условия определения типа ацетилирования путем изучения фармакокинетики гид рази да изоникотиновой кислоты и сульфадимезина в слюне и моче при использовании спектрофотометрического детектирования их динитробенз-2,1,3-оксадиазольных производных;

• разработаны методы оценки скорости генетически детерминированных процессов биотрансформации аминосоединений, обосновано их использование для обеспечения безопасности и оценки риска при воздействии токсикантов;

• впервые установлены условия чувствительного и избирательного экстракционно-спектрофотометрического определения гидразина и 1,1-ди метил гидразина в биологических жидкостях человека;

• установлена токсикокинетика гидразина в моче и слюне производственного персонала при биотрансформации гидразидов кислот и гидразонов, протекающая в результате действия фермента печени К-ацетилтрансферазы. Выявлено влияние активности этого фермента на токсикокинетику. Практическая значимость работы. Результаты работы использованы для

обеспечения экологической безопасности и производственного персонала (ОАО «Казаньоргсинтез», ОАО «Татэнерго», Министерство обороны) и внедрены в клиническую практику (Межрегиональный клинико-диагностический центр, Гастроэнтерологический центр, Казань).

Экспериментальные результаты и выводы на их основе использованы в учебном процессе КГТУ в дисциплинах «Экологический мониторинг» и «Контроль экологической безопасности».

Разработанный в диссертационной работе комплекс методик и полученные данные о скоростях ацетилирования токсичных аминосоединений в организме человека в зависимости от его фенотипа могут быть использованы для оценки интоксикации и канцерогенного риска, обеспечения экологической безопасности производственного персонала химических производств, для дозировки лекарственных веществ и оптимизации их эффективного клинического использования.

На защиту выносятся:

• результаты исследования и подбор оптимальных условий спектрофотометрического определения тест-маркеров ацетилирования в виде их динитробензоксидиазольных производных;

• методики установления фенотипа ацетилирования путем оценки фармакокинетических параметров гидразида изоникотиновой кислоты и сульфадимезина в моче и слюне человека, а также результаты их применения в клинических и производственных условиях;

• результаты изучения условий экстракционного концентрирования гидразина и 1,1-диметилгидразина в биологических жидкостях в виде 5,7-динитробензофуразановых производных с последующим спектрофотометрическим определением;

• результаты изучения токсикокинетики гидразина в моче и слюне при биотрансформации гидразидов кислот и гидразонов в организме человека;

• данные по оценке экологической безопасности населения путем мониторинга фенотипической активности генетически детерминированных процессов ацетилирования в организме человека.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на XII Международной конференции по химии и химической технологии (Москва, 1998); Научной конференции КГТУ «Пищевые технологии» (Казань, 1998); II и III конференциях молодых ученых "Материалы и технологии XXXI века" (Казань, 2002, 2003); XIV и XXVI Всероссийской межвузовской научно-технической конференции «Внутрикамерные процессы в энергетических установках, акустика, диагностика, экология» (Казань 2002, 2004); III Международной научно-практической конференции «Медицинская экология» (Пенза, 2004); II Всероссийской научно-практической конференции «Социальные, медико-биологические и гигиенические аспекты здоровья человека» (Пенза, 2004).

Публикации: по материалам диссертации опубликовано 5 статей и 7 тезисов докладов.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, литерагурного обзора; экспериментальной части и четырех глав, в которых описана аппаратура, объекты, техника эксперимента и изложены результаты с их обсуждением; выводов; заключения; библиографического списка. В приложении представлены акты использования результатов диссертационной работы.

Диссертация изложена на 144 страницах, содержит 27 рисунков, 28 таблиц, библиографический список включает 206 наименований.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Аппаратура, объекты и техника эксперимента

В работе использовали систему высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) HP 1100 (Hewlett-Packard, Waldbronn, FRG). Спектры поглощения соединений регистрировали на спектрофотометре СФ-26. Кислотность растворов контролировали рН-милливольтметром MV-87S. Центрифугирование проводили на центрифуге К-23 (Janetszki).

Для исследований применяли хроматографически чистые ацетонитрил и метанол (Криохром, Санкт-Петербург). Воду хроматографической чистоты получали на установке Simplicity 185 (Millipore, Франция). Экстрагенты (хлороформ, хлористый метилен и изоамиловый спирт) и химические вещества квалификации «х.ч.» и ч.д.а. использовали без дополнительной очистки.

В работе использованы лекарственные препараты в виде таблеток сульфгдимезина, фтивазида, метазида, салюзида (по 0,5 г), изониазида и фос-фабензида (по 0,3 г) фармакопейной чистоты. Фенотип ацетилирования определялся в группе обследуемых, включающей 180 вариабельно отобранных человек без

патологии печени и почек. Токсикокинетические параметры метаболизма замещенных гидразина определялись в группе обследуемых из 50 человек. Возрастная категория группы составила 20-35 лет.

Реагенты 4-хлор-5,7-динитробензофуразан (БФЗ) и 7-хлор-4,6-динитро-бензофуроксан (БФО) синтезированы канд. хим. наук, доцентом Ф.С. Левинсоном.

2. Методы мониторинга генетически детерминированных процессов ацетилирования в организме человека

Скорость биотрансформации соединений, содержащих аминные функциональные группы, генетически детерминирована и определяется активностью фермента К-ацетилтрансферазы печени.

М-ацетилтрансферача

ЯШ2 + СН3-С(0)-8-КоА -К-Ш-С(0)-СН3

ксенобиотик ацетилкоэнзим А метаболит

При этом наблюдается бимодальное распределение людей по скорости метаболических превращений (быстрые и медленные ацетиляторы), для которых токсические эффекты от полученной дозы экспозиции аминосоединений являются различными.

В связи с этим для предотвращения токсических эффектов и проведения оценки профессиональной пригодности персонала при работе с этими ксенобиотиками на производствах важным критерием является выяснение индивидуального фармакогенетического статуса организма. Потенциально массовый характер исследований, направленных на выяснение фенотипических особенностей биотрансформации ксенобиотиков конкретными пациентами, делает актуальной задачу разработки простых в экспериментальном отношении, высокопроизводительных, экономичных и безопасных для обследуемых аналитических методов.

Для оценки и обеспечения экологической безопасности производственного персонала и населения в зоне воздействия азотсодержащих компонентов химических производств разработан комплекс аналитических методов определения фенотипа ацетилирования. Методы основаны на изучении фармакокинетических и фармакогенетических параметров выведения тест-препаратов процесса ацетилирования сульфадимезина и гидразида изоникотиновой кислоты с мочой и слюной обследуемых после однократного перорального приема разовой дозы препарата.

Чувствительное и селективное определение этих аминосоединений в биологических жидкостях является сложной задачей, поскольку анализируемые образцы биосубстратов представляют собой неустойчивые системы, для которых характерен сложный состав, так как в них одновременно содержатся органические и

неорганические соединения различной природы. Дериватизация (получение производных) является основным химическим приемом расширения аналитических возможностей спектрофотометрических определений. Для этой цели в качестве реагентов были использованы БФЗ при проведении реакции с тест-препаратом изониазид и БФО для дериватизации препарата сульфадимезин.

Взаимодействие сульфадимезина с аналитическим реагентом (БФО) в полярных средах приводит к образованию интенсивно окрашенного в красный цвет устойчивого продукта реакции:

Проведение реакции химической модификации изониазида с аналитическим реагентом (БФЗ) также приводит к образованию интенсивно окрашенного продукта красного цвета. При этом продукты аналитических реакций обеспечивают высокую чувствительность спектрофотометрических определений тест-препаратов в сложных по составу биологических образцах.

Метод определения фенотипа ацетилирования основан на сравнительной характеристике фармакокинетических параметров выведения тест-препаратов с мочой и слюной отдельных пациентов, выявлении закономерностей и формировании групп по различной активности ацетилирования биомаркеров.

Кинетические кривые экскреции сульфадимезина с мочой приведены на рис. 1, а со слюной - на рис. 2. По результатам изучения содержания сульфадимезина в моче и слюне 60 пациентов рассчитаны фармакокинетические параметры (табл. 1 и 2).

Как видно, значения этих параметров имеют бимодальное распределение и различаются для групп обследуемых как по периоду полувыведения, так и по количеству выводимого свободного препарата. Это позволяет оценить индивидуальную генетически обусловленную активность ^ацетилтрансферазы отдельных пациентов. Приемлемым параметром, определяющим индивидуальную активность фермента, является количество выводимого препарата в процентах от вводимой дозы биомаркера (фракция дозы).

Рис. 1. Кривые кумулятивного выведения сульфадимезина с мочой: 1- медленный ацетилятор; 2 -быстрый ацетилятор.

т, час

Рис. 2. Уровень содержания сульфадимезина в слюне: 1-медпенные ацетиляторы; 2 - быстрые ацетиляторы.

1 2 3 4 5 6 7

т, час

Таблица 1 - Кинетические параметры выведения сульфадимезина с мочой при пероральном приеме 0,5 г лекарственного вещества (достоверность различия между показателями быстрого и медленного ацетилирования Р < 0,01)

Кинетические параметры (уровень содержания сульфадимезина в слюне) мкг/мл Ацетиляторы

быстрые (33 чел) медленные (27 чел)

через час 2,0±0,5 7,0+2,5

через два часа 2,7±0,3 7,0±2,0

через три часа 2,5±0,5 7,0±2,0

Таблица 2 - Параметры выведения сульфадимезина со слюной при пероральном приеме в дозе 0,5 г (достоверность различий между показателями быстрого и медленного ацетилирования Р < 0,01)

Кинетические параметры (уровень содержания сульфадимезина в слюне) мкг/мл Ацетиляторы

быстрые (33 чел) медленные (27 чел)

через час 2,0±0,5 7,0±2,5

через два часа 2,7±0,3 7,0±2,0

через три часа 2,5±0,5 7,0±2,0

Надежный мониторинг фенотипа ацетилирования возможен путем анализа почасовых проб мочи в течение шести часов после приема тест-препарата, что позволяет проводить достаточно экспрессное обследование пациентов. При этом уровень сульфадимезина, выводимого в неизменном виде для быстрых (менее 5 % выведения свободного лекарства) и медленных (более 5 %) ацетиляторов, различается более чем в два раза. Разница в периоде полувыведения и количестве выводимого препарата для пациентов одной и той же группы объясняется, по-видимому, вариациями функционального состояния желудочно-кишечного тракта и другими факторами среды.

Изменение условий пробоподготовки слюны путем уменьшения её объема и использования для осаждения белков только 20 %-ного раствора сульфата цинка позволило сократить время центрифугирования до 5-10 минут и обеспечить экспрессность аналитических процедур. Параметры экскреции изониазида со слюной при пероральном приеме 0,5 г лекарственного вещества за шесть часов в процентах от дозы составили: для сверхбыстрых ацетиляторов (7 чел) 0,1-2,4%, быстрых (30 чел) до 5%, а для медленных (23 чел) 6,8-14,3%. По параметрам экскреции изониазида видно, что меньшему процентному значению количества выведенного изониазида соответствует низкое содержания его в слюне у быстрых ацетиляторов и, наоборот, большему значению - высокое содержание препарата при первых трёх часах измерения у медленных ацетиляторов (табл. 3).

На рис. 3 представлены кинетических кривые выведения изониазида со слюной испытуемых.

Результаты определения фенотипа ацетилирования были сопоставлены с методом, включающим спектрофотометрическое определение гидразида изоникотиновой кислоты по реакции с ванадатом аммония в слюне человека. По данным о количестве выведенного за шесть часов тест-препарата от полученной дозы лекарственного вещества с использованием в качестве реагента ванадат аммония оказалось, что среди обследуемых от 1 до 4,5% составляет группа быстрых ацетиляторов, а от 4,5% и более - группа медленных ацетиляторов.

Таблица 3 - Уровень содержания изониазида в слюне при пероральном приеме пациентами 0,45 г лекарственного вещества, используя реагент БФЗ (достоверность различий между показателями ацетилирования Р < 0,01)

Кинетические параметры (уровень содержания ГИНК в слюне) мг/мл Ацетиляторы

сверхбыстрые (7 чел) быстрые (30 чел) медленные (23 чел)

через час 1,9±0,5 8,0±2Д 20,5±5,3

через четыре часа 2,8+0,3 7,2±2,6 17,0±4,7

через шесть часов 1,5±0,6 6,1 ±2,3 15,3+2,1

т, час

Рис. 3. Уровень содержания изониазида в слюне после перорапьного приема 0,45 г препарата. Тип ацетилирования: I -«сверхбыстрый»; 2 - быстрый; 3 -медленный (реагент 4-хлор 5,7-динитро-бензофуразан)

Полученные кинетические данные по моче и слюне коррелируют между собой. Экспериментальные данные демонстрируют высокую эффективность селективной реакции дериватизации тест-маркеров ацетилирования, приводящей к улучшению их детекционных свойств методом спектрофотометрии. В результате таких аналитических и клинических исследований можно с высокой вероятностью и экспрессностью проводить мониторинг фенотипа человека.

3. Экстракционно-спектрофотометрическое определение гидразина и его замешенных в биологических жидкостях

Для количественного определения содержания гидразина и 1,1-диметилгидразина (несимметричный диметилгидразин, НДМГ) в сложных по составу биологических объектах нами была изучена возможность использования метода жидкость-жидкостного концентрирования. Эффективное концентрирование следовых количеств гидразина и НДМГ из биологических жидкостей достигается в виде продуктов их конденсации с 4-хлор-5,7-динитробензофуразаном при использовании спектрофотометрического детектирования.

Реакция образования интенсивно окрашенного в зеленый цвет производного гидразина протекает в нейтральных водных и водно-органических средах по схеме:

Для жидкость-жидкостной экстракции были использованы в качестве несмешивающейся органической фазы изоамиловый спирт и метиленхлорид. Изучено влияние кислотности на полноту извлечения производного гидразина неводными фазами разного состава (табл. 4). Практически количественное извлечение гидразина как хлористым метиленом, так изоамиловым спиртом происходит при рН 3 - 4.

Таблица 4 - Влияние рН на степень извлечения 5,7-динитробензофуразанового производного гидразина изоамиловым спиртом и метиленхлоридом из мочи (Спрошв

Кислотность среды (рН) Степень извлечения

Эксграгент

изоамиловый спирт метиленхлорид

3,00 0,82 0,99

4,15 0,77 0,98

5,50 0,72 0,85

6,52 0,44 0,55

7,05 - 0,37

На степень извлечения гидразина также влияет и выбор растворителя. Невысокая степень извлечения наблюдалась при использовании в качестве органической фазы изоамилового спирта. При этом также наблюдается ухудшение условий, обеспечивающее разделения фаз. Экстракция изоамиловым спиртом приводит к переходу биогенных веществ мочи и слюны в органическую фазу и затрудняет ее разделение. Задача разделения фаз упрощалась при использовании в качестве экстрагента метилен хлорида.

Правильность результатов экстракционно-спектрофотометрического определения гидразина в виде 4-хлор 5,7-динитробензофуразанового производного отражает метод «введено-найдено» (табл. 5).

Таблица 5 - Результаты экстракционно-спектрофотометрического определения гидразина в моче и слюне в виде 5,7-динитробензофуразанового производного (рН 3, п = 6, Р = 0,95)

Концентрация гидразина, мкг/мл в,

введено найдено, X ± ДХ

моча слюна моча слюна моча слюна

3,2 3,3 + 0,3 3,1+0,5 0,05 0,07

4,2 4,2 ±0,2 4,1+0,2 0,05 0,05

8,5 9,0 + 0,5 8,2 + 0,6 0,06 0,05

Разработана методика экстракционного концентрирования гидразина в виде 5,7-динитробензофуразанового производного из слюны человека с дальнейшим спектрофотометрическим детектированием. Было изучено влияние рН анализируемой биологической матрицы и выбор экстрагента на количественное извлечение гидразина при жидкость-жидкостной экстракции (табл. 6).

Таблица 6 - Влияние рН на степень извлечения 5,7-динитробензофуразанового производного гидразина изоамиловым спиртом и метиленхлоридом из слюны (Спр0И1В 410'7 моль/л, 10:1, 25°С, п=4)

Экстрагенты Степень извлечения

С(гидоаэи С (гидрант а) 2-10"' С (г идрази «,4-Ю"

рН 6,86 рНЗ,0 рН 6,86 рН 3,0 рН 6,86 рНЗ,0

Изоамиловый спирт - 0,41 0,38 0,54 0,44 0,72

Метиленхлорид 0,35 0,93 0,48 0,95 0,52 0,97

Высокая степень извлечения гидразина из слюны наблюдалась при использовании в качестве экстрагента хлористого метилена и подкислении анализируемой биологической матрицы до рН 3,0.

Возможность проведения и правильность используемого метода экстракционно-спектрофотометрического определения гидразина в виде 5,7-динитробензофуразанового производного в слюне человека отражают данные, приведенные в табл. 5.

Для количественного определения 1,1-диметилгидразина применили реакцию дериватизации 4-хлор-5,7-динитробензофуразаном с последующей жидкость-жидкостной экстракцией из биологических жидкостей человека. Реакция получения производного определяемого вещества в значительной степени определяет как чувствительность детектирования, так и воспроизводимость результатов анализа. В качестве рабочих условий проведения реакции получения производного НДМГ выбраны нейтральные среды (рН 7,0 ± 0,5). Кислотность поддерживали 0,02 М фосфатным буферным раствором. Время завершения

аналитической реакции не превышало 5 минут (25 С), выход производного достигал 95%.

Для жидкость-жидкостной экстракции нами использованы в качестве несмешивающейся органической фазы хлороформ, хлористый метилен и изоамиловый спирт. Для выявления оптимальных условий экстракционного концентрирования НДМГ в виде 5,7-динитробензофуразанового производного изучено равновесное распределение его в системах органическая фаза -биологическая жидкость (моча или слюна) при различных рН среды (табл. 7).

Таблица 7 - Влияние рН на степень извлечения при экстракции 5,7-динитро-бензофуразанового производного 1,1-Диметилщцразина при 25 °С. Концентрация 1,1 -диметилгидразина (5-10"5моль/л, Уорг ф^ы^Ю мл, Убиол жидк=100 мл)

Анализируемая матрица, рН Экстрагент

хлороформ метиленхлорид изоамиловый спирт

Моча 1,99 0,89 0,81 0,63

Слюна 0,88 0,81 0,63

Моча 3,09 0,96 0,79 0,62

Слюна 0,94 0,77 0,60

Моча 4,11 0,98 0,75 0,67

Слюна 0,98 0,71 0,67

Моча 5,21 0,98 0,74 0,54

Слюна 0,97 0,71 0,51

Моча 6,06 0,87 0,61 0,43

Слюна 0,81 0,60 0,40

Моча 6,95 0,65 0,50 0,25

Слюна 0,64 0,47 0,22

Как видно, практически количественное извлечение определяемого токсиканта достигается при однократной экстракции хлороформом из подкисленного до рН 4,0-5,0 образца анализируемой биологической жидкости. Кроме того, применение хлороформа при экстракции облегчает процесс разделения фаз и позволяет проводить отгонку растворителя и его замену на метанол. При этом вакуумная отгонка растворителя или его испарение при нагревании (50° С) не вызывает деструкции производного НДМГ и не влияет на результаты определения содержания вещества.

Данная методика апробирована на примере определения НДМГ в моче и слюне (табл. 8). Для приготовления растворов реагента использован ацетонитрил, обеспечивающий высокую устойчивость 4-хлор-5,7-динитробензофуразана к гидролитическим превращениям.

Таблица 8 - Результаты экстракционно-спектрофотометрического определения 1,1-диметилгидразина в биологических жидкостях в виде 5,7-динитро-бензофуразанового производного методом добавок (экстрагент - хлороформ, п=5, Р=0,95)

Концентрация 1,1-диметилгидразина, мкг/мл 8,

введено найдено, X ± ДХ

Моча Слюна Моча Слюна Моча Слюна

3,1 3,2 ±0,2 3,3±0,5 0,07 0,09

6,0 5,8 + 0,4 ' ' 5,7±0,6 0,08 0,09

15,2 15,0 ±0,7 15,0+1,0 0,05 0,06

85,3 84,0 ±3,0 85,0+4,0 0,05 0,05

4. Оценка экологической безопасности населения путем мониторинга процессов ацстилирования

Для обеспечения экологической безопасности населения, оценки прогноза воздействия токсикантов на организм человека удобно использовать новые аналитические технологии, основанные на получении данных об индивидуальных генетически детерминированных особенностях каждого человека с разной скоростью метаболизировать экотоксиканты. Использование производных гидразина в качестве лекарственных средств, применяемых обычно длительное время, создает условия для проявления в ряде случаев токсического действия соединений этого класса. По этой причине обеспечение экологической безопасности групп людей, подвергающихся воздействию аминосодержащих токсикантов, возможно при использовании аналитических методов оценки генетических полиморфизмов биохимических систем их детоксикации. При этом с экологической точки зрения необходимо выявление и количественное описание зависимостей "экспозиция => доза => эффект" воздействия высокотоксичных веществ на человека.

В качестве биомаркера при проведении химической дозиметрии ароматических аминов и гидразинов в организме человека использовали гидразид изоникотиновой кислоты (изониазид). Мониторинг кинетических параметров кумулятивной экскреции с мочой позволяет использовать предлагаемый подход как и тест для определения фенотипа ацетилирования конкретных обследуемых.

Экстракционное извлечение гидразина из мочи проводили в виде 5,7-динитробензофуразанового производного, при этом детектировали количество выводимого организмом человека метаболита спектрофотометрическим методом.

Экспериментальные данные по изучению токсикокинетики гидразина после однократного приема тест-препарата изониазида показывают, что в зависимости от индивидуальной генетически обусловленной активности ^ацетилтрансферазы изменяется количество выводимого с мочой из организма токсичного метаболита гидразина (рис. 4).

В группе обследуемых, которую составляют люди с медленным фенотипом ацетилирования, разница экскретируемого с мочой токсичного метаболита в 2-3 раза меньше количества экскретируемого гидразина по сравнению с группой быстрых ацетиляторов (табл. 9).

Таблица 9 - Результаты мониторинга гидразина в моче обследуемых в группах быстрых и медленных ацетиляторов при пероральном приеме изониазида в дозе 0,45 г

Кинетические параметры Ацетиляторы

быстрые (31 чел) медленные (19 чел)

Масса экскретируемого за шесть часов гидразина, мкг 23,0±7,0 4,0±3,0

Фракция определяемой дозы, % 5,2±1,5 1,0±0,5

Для изучения токсикокинетики гидразина из организма человека при приеме нового лекарственного препарата транквилизирующего действия фосфабензида (гидразид дифенилфосфенилуксусной кислоты, ГДФУК) были использованы две группы обследуемых с заведомо известными фенотипами ацетилирования ксенобиотиков. При этом токсикокинетические данные коррелируют с результатами, полученными при мониторинге гидразина в случае изониазида. В группах обследуемых определена разница между количеством экскретируемого с мочой токсичного метаболита, которая составляла в группе обследуемых с медленным фенотипом ацетилирования в 2-3 раза меньше, чем количество экскретируемого гидразина в группе бысгрых ацетиляторов (табл. 10).

Таблица 10 - Результата мониторинга гидразина мочи в группах быстрых и медленных ацетиляторов при пероральном приеме фосфабензида в дозе 0,4 г

Кинетические параметры Ацетиляторы

быстрые (12 чел) медленные (8 чел)

Масса экскретируемого за шесть часов гидразина, ми- 12,5±3,0 4,0±1,0

Фракция определяемой дозы, % 3,5±1,0 1,0±0,3

По токсикокинетическим параметрам были построены кумулятивные кривые почасовой экскреции гидразина из организма человека после перорагсьного приема ГДФУК (рис. 5). По кумулятивным кривым видно четкое разделение токсикокинетических параметров между группами обследуемых, которые зависят от индивидуальной генетически детерминированной способности организма ацетилировать ксенобиотики с разной скоростью.

Рис. 5. Кривые кумулятивного выведения гидразина с мочой после приема фосфабензида: 1 - медленный ацетилятор, 2 - быстрый аце-тилятор

С экологической точки зрения использование подхода мониторинга генетически детерминированных процессов биопревращения ксенобиотиков позволяет оценить риск развития неблагоприятного экологического эффекта для здоровья разных людей при мониторинге содержания биомаркеров в их организме для равной экспозиции химических веществ (загрязнители атмосферы или воздуха рабочих помещений, воды и почвы) благодаря межиндивидуальным фенотипическим различиям. Использование разработанных аналитических методов возможно при проведении профессионального отбора при работе с экотоксикантами, а также выявлении среди обследуемых групп повышенного риска и сощании централизованного регистра их генетических полиморфизмов.

Следует отметить, что при диагностике фенотипа ацетилирования с использованием в качестве тест-маркера изониазида было установлено тримодзльное распределение испытуемых. Третий (сверхбыстрый) фенотип ацетилирования наблюдался в случае фенотипирования курсантов военных вузов, поскольку некоторые из них получали интенсивные мышечные нагрузки в режиме спортивной подготовки. Показатель ацетилирования в группе "сверхбыстрых" составил 2,4 %. В

нашем исследовании было установлено наличие группы "сверхбыстрых" ацетиляторов среди курсантов военных вузов, причем они составляют 11,7 % всех испытуемых.

Было изучено токсическое влияние на организм человека аналогов гидразида изоникотиновой кислоты лекарственных препаратов фтивазида, метазида, салюзида. Сходный механизм биотрансформации гидразидов кислот и гидразонов позволяет проводить мониторинг токсикокинетических параметров гидразина из мочи, как токсичного метаболита биотрансформации этих лекарственных веществ (табл.11).

Таблица 11 - Результаты мониторинга гидразина в моче обследуемых в группах быстрых и медленных ацетиляторов при перорапьном приеме фтивазида, метазида и салюзида в дозе 0,5 г

Препарат Кинетические параметры Ацетиляторы

быстрые (12 чел) медленные (8 чел)

Фтивазид Масса зкскретируемого за 6 ч гидразина, мкг 10,5±3,0 3,5±1,0

Фракция определяемой дозы, в % 2,2±0,5 1,0±0,2

Метазид Масса зкскретируемого за 6 ч гидразина, мкг 9,4±3,0 2,5±0,5

Фракция определяемой дозы, в % 2,0±0,4 0,5±0,2

Салюзид Масса зкскретируемого за 6 ч гидразина, мкг б,5±2,0 1,6±0,2

Фракция определяемой дозы, в % 1,5±0,2 0,5±0,2

По токсикокинетическим данным были построены кривые кумулятивного выведения гидразина с мочой из организма в группах быстрых и медленных ацетиляторов (рис. 6).

Доза, получаемая человеком на производстве, в ходе профессиональной деятельности и при использовании ряда лекарственных препаратов имеет существенное значение при определении канцерогенного риска. Проведен расчет дозы и уровня риска для гидразина в моче человека как метаболита биотрансформации гидразидов кислот и гидразонов для быстрых и медленных ацетиляторов (табл. 12).

Таблица 12 - Оценка дозы и канцерогенного риска токсичного метаболита гидразина

Химическое вещество, тип ацетилирования Найдено, мкг/мл Среднесуточная доза препарата мкг/день Уровень риска

Изониазид, быстрые ацетиляторы 30 600 ниже среднего

Изониазид, медленные ацетиляторы 7 600 средний

Фосфабензид, быстрые ацетиляторы 16 500 ниже среднего

Фосфабензид, медленные ацетиляторы 5 500 средний

Фтивазид, быстрые ацетиляторы 13 1500 низкий

Фтивазид, медленные ацетиляторы 5 1500 ниже среднего

Метазид, быстрые ацетиляторы 13 2000 низкий

Метазид, медленные ацетиляторы 3 2000 ниже среднего

Салюзид, быстрые ацетиляторы 9 1500 низкий

Салюзид, медленные ацетиляторы 2 1500 низкий

выводы

1. Методом спектрофотометрии показано, что в качестве тест-маркеров ацетилирования аминосодержащих токсикантов могут служить гидразид изоникотиновой кислоты и сульфадимезин. Предложен спектрофотометрический метод мониторинга типа ацетилирования аминосодержащих экологических токсикантов, основанный на изучении фармакокинетики гидразида изоникотиновой кислоты и сульфадимезина в слюне и моче с детектированием в виде динитробенз-2,1,3-о ксадиазольных производных.

2. Разработаны методы определение скорости генетически детерминированных процессов биотрансформации токсичных аминосоединений, основанные на изучении концентрации свободно выведенных с мочой и слюной человека биомаркеров во времени. Показано, что по генетически обусловленной скорости биотрансформации токсичных аминосоединений организмы испытуемых (п=180) делятся на три группы: медленные (от 7% и выше), быстрые (2-5,5%), «сверхбыстрые» (до 2%) ацетиляторы.

3. Разработаны методы чувствительного и избирательного экстракционно-спектрофотометрического определения аминосоединений в биологических жидкостях человека. Методы апробированы в виде продуктов метаболизма изониазида - гидразина и 1,1-диметилгидразина, обладающих токсичными и канцерогенными свойствами.

4. На примере группы обследуемых (п=50), работающих в условиях загрязнения атмосферы воздуха азотосодержащими ароматическими соединениями, по токсикокинетическим параметрам выведения гидразина мочой подтверждается их ранжирование по скорости ацетилирования. Риск воздействия токсичных и канцерогенных метаболитов повышается при переходе от быстрых к медленным ацетиляторам.

Основное содержание диссертации изложено в публикациях:

1. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Зайнутдинов Л.А. Оценка экологического риска на основе мониторинга генетически детерминированных процессов ацетилирования // Вестник ТО Рос. Эколог. Акад. - 2004. - С. 61-66.

2. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Зайнутдинов Л.А. Спектрофотометрическое определение сульфадимезина в слюне как тест для диагностики фенотипа ацетилирования // Вестник Каз. технол. универ. - 2003. - № 1. -С. 78-83.

3. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Зайнутдинов Л.А. Роль генетически детерминированных процессов ацетилирования в обеспечении экологической безопасности при работе с ароматическими аминами и гидразинами // Вестник Каз. технол. универ. - 2003. - № 2. - С. 102-106.

4. Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Зайнутдинов Л.А. Неинвазивные методы определения биохимического фенотипа при использовании сульфадимезина и изониазида в качестве тест-маркеров ацетилирования / М.И. Евгеньев, СЮ.

Гармонов, Л.А. Зайнутдинов, Т.Г. Маланичева// Каз. мед. журнал. - 2004. - № 5. - С. 388-390.

5. Гармонов С.Ю., Гйсмятов Р.Г., Зайнутдинов Л.А. и др. Методы оценки риска здоровья военнослужащих / СЮ. Гармонов, Р.Г. Гйсмятов, Л.А. Зайнутдинов, В.П. Багнюк, А.В. Кочергин, М.И. Евгеньев // Сб. науч. статей КФВАУ. - 2003. - С. 67-69.

' 6. Зайнутдинов Л.А., Евгеньева И.И., Евгеньев М.И. Экстракционно-спектрофотометрический метод определения гидразина // конференция «Пищевые технологии». Тез. докл.: - Казань, 1998. - С. 9.

7. Исмаилова Р.Н., Зайнутдинов Л.А., Белов П.Е., Евгеньева И.И. Экстракционно-фотометрическое определение гидразина и его замещенных в водных средах// XII междунар. конф. по химии и хим. технол. Тез. докл.: - Москва, 1998. - С.

8. Зайнутдинов Л.А., Гармонов С.Ю., Евгеньев М.И. Оценка активности ферментов, контролирующих генетически детерминированные реакции биотраксформации ксенобиотиков в организме человека // II Научной конф. молодых ученых «Материалы и технологии XXI века». Тез. докл.: - Казань, 2002. - С. 31.

9. Зайнутдинов Э.А., Зайнутдинов Л.А. Решение проблемы охраны окружающей среды в производстве фармпрепаратов // XIV Всерос. межвуз. науч.-техн. конф. «Внутрикамерные процессы в энергетических установках, акустика, диагностика, экология». Тез. докл.: - Казань, 2002. - Т.2. - С. 314-316.

10. Зайнутдинов Л.А., Гармонов С.Ю., Евгеньев М.И. Спектрофотометрическое определение сульфадимезина в слюне как тест для диагностики фенотипа ацетилирования // III Науч. конф. молодых ученых «Материалы и технологии XXI века». Тез. докл.: - Казань, 2003. - С. 36.

И. Зайнутдинов Л.А., Гармонов С.Ю., Евгеньев М.И. Роль генетически детерминированных процессов ацетилирования в обеспечении экологической безопасности при работе с ароматическими аминами и гидразинами // III Междунар. науч.-практ. конф. «Медицинская экология». Тез. докл.: - Пенза, 2004. - С. 37-39.

12. Зайнутдинов Л.А., Гармонов С.Ю., Евгеньев М.И. Влияние генетически детерминированной активности М-ацетилтрансферазы на биотрансформацию гидразина и его производных // II Всерос. науч.-практ. конф. «Социальные медико-биологические и гигиенические аспекты здоровья человека». Тез. докл.: - Пенза, -2004. - С. 43-45. I

55

Заказ №

Тираж 100 экз.

Офсетная лаборатория Казанского государственного технологического университета 420015, г. Казань, ул. К. Маркса, 68

»1827 3

РНБ Русский фонд

2005-4 16531

Содержание диссертации, кандидата химических наук, Зайнутдинов, Ленар Агзамович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 ОБЕСПЕЧЕНИЕ ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ НА ОСНОВЕ ОЦЕНКИ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ГЕНЕТИЧЕСКИ ДЕТЕРМИНИРОВАННЫХ БИОХИМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ (Литературный обзор).

1.1 Индивидуальные генетически детерминированные процессы биотрансформации экологических токсикантов.

1.2 Генетические аспекты экологической безопасности.

1.3 Аналитические методы экологического мониторинга полиморфизма процессов биотрансформации ксенобиотиков

Глава 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Постановка задач исследования.

2.2 Аппаратура, объекты и техника эксперимента.

Глава 3 МЕТОДЫ МОНИТОРИНГА ГЕНЕТИЧЕСКИ ДЕТЕРМИНИРОВАННЫХ ПРОЦЕССОВ АЦЕТИЛИРОВАНИЯ В ОРГАНИЗМЕ ЧЕЛОВЕКА.

3.1 Получение производных тест-маркеров ацетилирования при их спектрофотометрическом детектировании.

3.2 Разработка методов определения фенотипа ацетилирования при выведении тест-препаратов с мочой.

3.3 Разработка методов определения фенотипа ацетилирования на основе оценки содержания тест-препаратов в слюне.

Глава 4 ЭКСТР АКЦИОННО-СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГИДРАЗИНА И ЕГО ЗАМЕЩЕННЫХ В . БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА

4.1 Экстракционное концентрирование гидразина из биологических жидкостей.

4.2 Экстракционное концентрирование 1,1 диметилгидразина из биологических жидкостей.

Глава 5 ОЦЕНКА ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ ПУТЕМ

МОНИТОРИНГА ПРОЦЕССОВ АЦЕТИЛИРОВАНИЯ.

5.1 Изучение токсикокинетики гидразина при метаболизме замещенных гидразина в организме человека.

5.2 Влияние фенотипа ацетилирования на токсикокинетику гидразина и его замещенных.

5.3 Оценка риска при воздействии гидразидов кислот и гидразонов на организм человека.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Комплекс методик экологического контроля токсичных аминосоединений в биологических средах человека"

Актуальность темы. Генетическая предрасположенность является главной и малоизученной причиной индивидуальной чувствительности организма человека при воздействии токсичных химических веществ. При этом в решении комплекса проблем экологии человека важное место занимают методы для мониторинга генетически детерминированных процессов биотрансформации ксенобиотиков в организме человека*. Это связано с тем, что значительные различия в экотоксическом действии химических веществ обусловливают полиморфизмы процессов их метаболизма. В экологическом аспекте определение биохимических фенотипов метаболизма токсикантов у производственного персонала и населения необходимо для оценки риска интоксикации, канцерогенеза, индивидуальной химической чувствительности, профессиональной пригодности, а также выявлении групп повышенного риска и предупреждения на этой основе проявления неблагоприятных экологических факторов. Влияние экологические факторов также приводят к увеличению наследуемых патологий и лежат в основе многочисленных заболеваний, связанных с нарушениями обмена веществ.

Широкое применение ароматических аминов, гидразина и его замещенных в народном хозяйстве способствует как хронической, так и острой производственной интоксикации человека этими веществами. Процессы метаболизма аминосоединений в организме протекают путем ацетилирования аминогрупп токсикантов, причем активность фермента N-ацетилтрансферазы, контролирующего процессы их биотрансформации, генетически детерминирована у разных людей. Соруководителем диссертационной работы по вопросам мониторинга генетически детерминированных процессов биотрансформации ксенобиотиков являлся доктор химических наук, доцент Сергей Юрьевич Гармонов

В связи с этим особую значимость в обеспечении экологической безопасности приобретает мониторинг индивидуальных процессов биотрансформации этих токсикантов как меры предрасположенности в развитии экопатологических реакций организма.

Цель работы состояла в разработке комплекса спектрофото-метрических и экстракционно-спектрофотометрических методов мониторинга тест-маркеров генетически детерминированных процессов ацетилиро-вания аминосоединений в биологических жидкостях, а также установлении закономерностей токсикокинетики, метаболизма гидразина и его замещенных для обеспечения экологической безопасности при их воздействии. Научная новизна:

• обоснован выбор и условия использования гидразида изоникотиновой кислоты и сульфадимезина в качестве тест-препаратов ацетилирования аминосодержащих соединений;

• научно обоснованы и установлены условия определения типа ацетилирования путем изучения фармакокинетики гидразида изоникотиновой кислоты и сульфадимезина в слюне и моче при использовании спектрофотометрического детектирования их динитро-бенз-2,1,3-оксадиазольных производных;

• разработаны методы оценки скорости генетически детерминированных процессов биотрансформации аминосоединений, обосновано их использование для обеспечения безопасности и оценки риска при воздействии токсикантов;

• впервые установлены условия чувствительного и избирательного экстрак-ционно-спектрофотометрического определения гидразина и 1,1-диметилгидразина в биологических жидкостях человека;

• установлена токсикокинетика гидразина в моче и слюне производственного перасонала при биотрансформации гидразидов кислот и гидразонов, протекающая в результате действия фермента печени N-ацетилтрансферазы. Выявлено влияние активности этого фермента на токсикокинетику.

Практическая значимость работы. Результаты работы использованы для обеспечения экологической безопасности производственного персонала (ОАО «Казаньоргсинтез», ОАО «Татэнерго», Министерство обороны) и внедрены в клиническую практику (Межрегиональный клинико-диагностический центр, Гастроэнтерологичский центр, Казань).

Экспериментальные результаты и выводы на их основе использованы в учебном процессе КГТУ в дисциплинах «Экологический мониторинг» и «Контроль экологической безопасности».

Разработанный в диссертационной работе комплекс методик и полученные данные о скоростях ацетилирования токсичных аминосоединений в организме человека в зависимости от его фенотипа могут быть использованы для оценки токсичного и канцерогенного риска, обеспечения экологической безопасности производственного персонала химических производств, для дозировки лекарственных веществ и оптимизации их эффективного клинического использования. На защиту выносятся:

• результаты исследования и подбор оптимальных условий спектрофото-метрического определения тест-маркеров ацетилирования в виде их динитробензоксидиазольных производных;

• методики установления фенотипа ацетилирования путем оценки фармакокинетических параметров гидразида изоникотиновой кислоты и сульфадимезина в моче и слюне человека, а также результаты их применения в клинических и производственных условиях;

• результаты изучения условий экстракционного концентрирования гидразина и 1,1-диметилгидразина в биологических жидкостях в виде 5,7-динитробензофуразановых производных с последующим спектро-фотометрическим определением;

• результаты изучения токсикокинетики гидразина в моче и слюне при биотрансформации гидразидов кислот и гидразонов в организме человека;

• данные по оценке экологической безопасности населения путем мониторинга фенотипической активности генетически детерминированных процессов ацетилирования в организме человека. Апробация работы. Основные результаты работы доложены на XII

Международной конференции по химии и химической технологии (Москва, 1998); Научной конференции КГТУ «Пищевые технологии» (Казань, 1998); II и III конференциях молодых ученых "Материалы и технологии XXI века" (Казань, 2002, 2003); XIV и XVI Всероссийской межвузовской научно-технической конференции «Внутрикамерные процессы в энергетических установках, акустика, диагностика, экология» (Казань 2002, 2004); III Международной научно-практической конференции «Медицинская экология» (Пенза, 2004); II Всероссийской научно-практической конференции «Социальные, медико-биологические и гигиенические аспекты здоровья человека» (Пенза, 2004).

Публикации: по материалам диссертации опубликовано 5 статей и 7 тезисов докладов.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, литературного обзора; экспериментальной части и четырех глав, в которых описана аппаратура, объекты, техника эксперимента и изложены результаты с их обсуждением; выводов; заключения; библиографического списка. В приложении представлены акты использования результатов диссертационной работы.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Зайнутдинов, Ленар Агзамович

ВЫВОДЫ

1. Методом спектрофотометрии показано, что в качестве тест-маркеров ацетилирования аминосодержащих токсикантов могут служить гидразид изоникотиновой кислоты и сульфадимезин. Предложен спектрофотометрический метод мониторинга типа ацетилирования аминосодержащих экологических токсикантов, основанный на изучении фармакокинетики гидразида изоникотиновой кислоты и сульфадимезина в слюне и моче с детектированием в виде динитробенз-2,1,3-оксадиазольных производных.

2. Разработаны методы определения скорости генетически детерминированных процессов биотрансформации токсичных аминосоединений, основанные на изучении концентрации свободно выведенных с мочой и слюной человека биомаркеров во времени. Показано, что по генетически обусловленной скорости биотрансформации токсичных аминосоединений организмы испытуемых (п=180) делятся на три группы: медленные (от 7% и выше), быстрые (2-5,5%), «сверхбыстрые» (до 2%) ацетиляторы.

3. Разработаны методы чувствительного и избирательного экстракционно-спектрофотометрического определения аминосоединений в биологических жидкостях человека. Методы апробированы в виде продуктов метаболизма изониазида - гидразина и 1,1-диметилгидразина, обладающих токсичными и канцерогенными свойствами.

4. На примере группы обследуемых (п=50), работающих в условиях загрязнения атмосферы воздуха азотосодержащими ароматическими соединениями, по токсикокинетическим параметрам выведения гидразина мочой подтверждается их ранжирование по скорости ацетилирования. Риск воздействия токсичных и канцерогенных метаболитов повышается при переходе от быстрых к медленным ацетиляторам.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Полученные экспериментальные данные показывают высокую эффективность селективной реакции дериватизации тест-маркеров ацетилирования и определяемых аминосодержащих экотоксикантов хлординитрозамещенными бенз-2,1,3-оксадиазола, приводящей к улучшению как экстракционных, так и детекционных свойств, с системой спектрофотометрического детектирования. В результате предложенного экстракционно-спектрофотометрического метода и проведенных клинических исследований можно с высокой вероятностью и относительной экспрессностью проводить оценку индивидуальных особенностей генетически детерминированных процессов биотрансформации экотоксикантов. Таким образом, разработанные методы мониторинга генетически детер-мирированных процессов ацетилирования токсичных аминосоединений позволяют устанавливать факторы риска в развитии канцерогенеза и других заболеваний человека, проводить профессиональный отбор работников химических производств, выявлять группы повышенного риска к высокотосичным химическим веществам тем самым, обеспечивая экологическую беопасность.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Зайнутдинов, Ленар Агзамович, Казань

1. Festing M.F.W. Experimental approaches to the determination of genetic variability // Toxicology Letters. - 2001. - V. 120. - P. 293-300.

2. Nebert D.W. Ethnic and genetic differences in metabolism genes and risk of toxicity and cancer / Nebert D.W., Roe A.L. // Sci. Total Environ. 2001. - V. 274. - P. 93-102.

3. Miller C.S. Chemical sensitivity: symptom, syndrome or mechanism for disease? // Toxicology. 1996. - V. 111. - P. 69-86.

4. Pfost D.R. A SNPshot: pharmacogenetics and the future of drug therapy / Pfost D. R., Boyce-Jacino M. Т., Grant D. M. // Trends Biotechnol. 2000. -V. 18. - P. 334-338.

5. Christensen C.B.V. Arrays in biological and chemical analysis // Talanta. -2002. V. 56. - P. 289-299.

6. Calabrese EJ. Role of genetic factors in environmentally induced toxic response: historical consideration, present status and future directions University of Massachusetts / E.J. Calabrese // Amherst, MA. 1997. - P. 3972.

7. Gonzalez F.J. Pharmacogenetic phenotyping and genotyping: present status and future potential / Gonzalez F.J., Idle J.R. // Clin. Pharmacokinet. 1994. -V. 26. - P. 59-70.

8. Nebert D.W. Ecogenetics: from ecology to health / Nebert D.W., Carvan III M.J. // Toxicol. Industr. Health. 1997. - V. 13. - P. 163-192.

9. Nebert D.W. Pharmacogenetics and pharmacogenomics: why is this relevant to the clinical geneticist? // Clin. Genet. 1999. - V. 56. - P. 247-258.

10. Motulsky A. I had a gene test; what would I have and who would I tell? // Lancet. 1999. - №1. - P. 35-37.

11. Park B.K. Toxicogenetics in drug development / Park B.K., Pirmohamed M. // Toxicology Letters. 2001. - V. 120. - P. 281-291.

12. Nebert D.W. Human drug-metabolizing enzyme polymorphisms: effects on risk of toxicity and cancer / Nebert D.W., McKinnon R.A., Puga A. // DNA Cell Biol. 1996. - V. 15. - P. 273-280.

13. Evans D.A.P. Pharmacogenetics of Drug Metabolism // N.Y.: John Wiley and Sons Inc. - 1992. - 34 p.

14. Messina E.S. A major role for CYP2A6 in nicotine C-oxidation by human liver microsomes / Messina E.S., Tyndale R.F., Sellers E.M. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997. - V. 282. - P. 1608-1614.

15. Omiecinski C.J. Human peripheral lymphocytes as indicators of microsomal epoxide hydrolase activity in liver and lung / Omiecinski C.J., Aicher L., Holubkov R., Checkoway H. // Pharmacogenetics. 1993. - V. 3. - P. 150158.

16. Miles J.S. Identification of the human liver citochrome P-450 responsible for coumarin 7-hydroxylase activity / Miles J.S., McLaren A.W., Forrester L.M., Glancey M.J., Lang M.A., Wolf C.R. // Biochem. J. 1990. - V. 267. - P. 365372.

17. Etter H. Rotation and interaction with epoxide hydrolase of P-450 in proteoliposomes / Etter H., Richter C., Ohta Y., Winterhalter K.H., Sasabe H., Kawato S. // J. Biol. Chem. 1991. - V. 266. - P. 18600-18605.

18. Kohut A. Genetic polymorphism of enzymes and changes in the effect of drugs / Kohut A., Kalina I. // Slovakofarma Rev. 1998. - V. 8. - № 4. - P. 141-146.

19. Oesch F. The apparent ubiquity of epoxide hydrolase in rat organs / Oesch F., Glatt H., Schimassmann H. // Biochem. Pharmacol. 1977. - V. 26. - P.603-607.

20. Lancaster J.M. Microsomal epoxide hydrolase polymorphism as a risk factor for ovarian cancer / Lancaster J.M., Browniee H.A., Bell D.A., Futreal A., Marks J.R., Berchuck A., Wiseman R.W., Taylor J.A. // Mol. Carcinogenesis. -1996. -V. 17. -P. 160-162.

21. Schroder K.R. Dissociation of a new glutathione ^-transferase activity in human erythrocytes / Schroder K.R., Hallier E., Peter H., Bolt H.M. // Biochem. Pharmacol. 1992. - V. 43. - P. 1671-1674.

22. Joseph P. NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1 (DT-diaphorase): expression, regulation and role in cancer / Joseph P., Xie Т., Xu Y., Jaiswal A.K. // Oncol. Res. 1994. - V. 6. - P. 525-532.

23. Oesch F. Mammalian epoxide hydrolases: Inducible enzymes catalyzing the inactivation of carcinogenic and cytotoxic metabolites derived from aromatic and olefinic compounds // Xenobiotica. 1973. - V. 3. - P. 305-340.

24. Rosvold E.A. Identification of an NAD(P)H:quinone oxidoreductase polymorphism and its association with lung cancer and smoking / Rosvold E.A., McGlynn K.A., Lustbader E.D., Buetow K.H. // Pharmacogenetics. -1995.-V. 5.-P. 199-206.

25. Yamano S. CYP2A3 gene product catalyes, coumarin 7-hydroxylation in human liver microsomes / Yamano S., Tatsuno J., Gonzales F.J. // Biochemistry. 1990. - V. 29. - P. 1322-1329.

26. Kupfer A. Pharmacogenetics of mephenytoin: a new drug hydroxylation polymorphisms / Kupfer A., Presig R. // Europ. J. Clin. Pharmacol. 1984. -V. 26. - P. 753-677.

27. McCracken N.V. Cotinine formation cDNA-expressed human cytochrome P450 / McCracken N.V., Cholerton S., Idle J.R // Med. Sci. Res. 1992. -V.20. - P. 877-878.

28. Skjelbo E., Brosen K. Inhibitors of imipramine metabolism by human liver microsomes / Skjelbo E., Brosen K. // Brit. J. Clin. Pharmacol. 1992. - V. 34.-P. 556-561.

29. Scott J., Poffenbarger P.L. Pharmacogenetics of tolbutamide metabolism in humans / Scott J., Poffenbarger P.L. // Diabetes. 1978. - V. 28. - P. 41-51.

30. Рудая H. В. Состояние системы ферментов микросомального окисления в зависимости от ацетилтрансферазной активности / Рудая Н. В., Сиваченко О. Е // Укр. биохим. журн. 1993. - Т. 65. - №6. - С. 108.

31. IPCS Environmental Health Criteria 119: Principles and methods for the assessment of nephrotoxicity associated with exposure to chemicals / Geneva, World Health Organization, International Programme on Chemical Safety.1991.-266 pp.

32. Goldstein J.A. Biochemistry and molecular biology of the human CYP2C subfamily / Goldstein J.A., de Morais S.M.F. // Pharmacogenetics. 1994. -V. 4. - P. 285-300.

33. Холодов JI.E. Клиническая фармакокинетика / Холодов JI.E., Яковлев В.П. М.: Медицина, 1985. - 98 с.

34. Grant D.M. Detection of a new polymorphism of human arylamine N-acetyltransferase NAT1 using p-aminosalicylic acid as an in vivo probe / Grant D.M., Vohra P., Avis Y., Ima A. // J. Basic Clin. Physiol. Pharmacol.1992. V. 3. - P. 244.

35. Grant D.M. Monomorphic and polymorphic human arylamine N-acetyltransferases: a comparison of liver isozymes and expressed products of two cloned genes / Grant D.M., Blum M., Beer M., Meyer U.A. // Mol. Pharmacol. 1991. - V. 39. - P. 184-191.

36. Голиков C.H. Общие механизмы токсического действия / С.Н. Голиков, И.В. Саноцкий, Л.А. Тиунов. АМН СССР. Л.: Медицина, 1986. - с. 140.

37. Hein D.W. Acetyltransferases and susceptibility to chemicals / Hein D.W., Rustan T.D., Doll M.A., Bucher K.D., Ferguson R.J., Feng Y., Furman E.J., Gray K. // Toxicol. Lett. 1992. - V. 64/65. - P. 123-130.

38. Lakshmi V.M. N-acetylbenzidine and N,N'-diacetylbenzidine formation by rat and human liver slices exposed to benzidine / Lakshmi V.M., Bell D.A., Watson M., Zenser T.V., Davis B.B. // Carcinogenesis. 1995. - V. 16. - P. 1565-1571.

39. Zenser T.V. Human N-acetylation of benzidine: role of NAT1 and NAT2 / Zenser T.V., Lakshmi V.M., Rustan T.D., Doll M.A., Deitz A.C., Davis B.B., Hein D.W. // Cancer Res. 1996. - V. 56. - P. 3941-3947.

40. Weber W.W. Acetylator pharmacogenetics and aromatic amine-induced cancer. In: Carcinogenic and mutagenic responses to aromatic amines and nitroarenes / Weber W.W., Mattano S.S., Levy G.N. King C.M. (ed.) // New York, Elsevier. 1988. - 214 pp.

41. Perera F. The potential usefulness of biological markers in risk assessment // Environ. Health Perspect. 1987. - V.79. - P. 141 -145.

42. Mashimo M. Molecular genotyping of N-acetylation polymorphism to predict phenotype / Mashimo M., Suzuki Т., Abe M., Deguchi T. // Hum. Genet. -1992.-V. 90.-P. 139-142.

43. Rothman N. Correlation between N-acetyltransferase activity and NAT2 genotype in Chinese males / Rothman N., Hayes R.B., Bi W., Caporaso N., Broly F., Woosley R.L., Yin S., Feng P., You X., Meyer U.A. // Pharmacogenetics. 1993. - V.3. - P. 250-255.

44. Nebert D.W. Pharmacogenetics. / Nebert D.W., Weber W.W. In: Pratt W.B., Taylor P.W., editors. Principles of drug action. The basis of pharmacology, 3rd edition // New York: Churchill Livingstone Inc. 1990. - P. 469.

45. Grant D.M. Human acetyltransferase polymorphisms / Grant D.M., Hughes N.C., Janezic S.A., Goodfellow H.G., Chen J.H., Gaedigk A., Yu V.L., Grewae R. // Mutation Research. 1997. - V. 376. - P. 61-70.

46. Hein D.W. Rodent models of the human acetilation polymorphism: Comparisons of recombinant acetiltransferases / Hein D.W., Doll M.A.,

47. Fretland A.J., Gray К., Deitz A.C., Feng Y., Jiang W., Rustan T.D., Satran S.L., Wilkie T.R. // Mutation Research. 1997. - V. 376. - P. 101-106.

48. Mrozikiewicz P.M. Polymorphic arylamine N-acetyltransferase (NAT2) genes in children with insulin-dependent diabetes mellitus / Mrozikiewicz P.M., Drakoulis N., Roots I. // Clin. Pharm. Ther. 1994. - V. 56. - P. 626-634.

49. Droz P. Pharmacokinetic modelling as a tool for biological monitoring // Int. Arch. Occup. Environ. Health, 1993. - V. 65. - P. 553-559.

50. Doll M.A. Comprehensive human NAT2 genotype method using single nucleotide polymorphinism-specific polimerase chain / Doll M.A., Hein D.W. // Analyt. Biochem. 2001. - V. 288. - № 1. - P. 106-108.

51. Kadlubar F.F. Polymorphisms for aromatic amine metabolism in humans: relevance for human carcinogenesis / Kadlubar F.F., Butler M.A., Kaderlik K.R., Chou H.C., Lang N.P. // Environ. Health Perspect. 1992. - V.98. - P. 69-74.

52. Bell D.A. Polyadenylation polymorphism in the acetyltransferase 1 gene (NAT1) increases risk of colorectal cancer / Bell D.A., Stephens D.A.,

53. Castranio Т., Umbach D.M., Watson M., Deakin M., Elder J., Hendrickse C., Duncan H., Strange R.C. // Cancer Res. 1995. - V. 55. - P. 3537-3542.

54. Bouchardy C. N-acetyltransferase NAT1 and NAT2 genotypes and lung cancer risk / Bouchardy C., Mitrunen K., Wikman H., HusgafVel-Pursiainen K., Dayer P., Benhamou S., Hirvonen A. // Pharmacogenetics. 1998. - V. 8(4).-P. 291-298.

55. Bouchardy C. CYP1A1 genetic polymorphisms, tobacco smoking and lung cancer risk in a French Caucasian population / Bouchardy C., Wikman H., Benhamou S., Hirvonen A., Dayer P., HusgafVel-Pursiainen K. // Biomarkers. 1997.-V. 2.-P. 131-134.

56. Евгеньев М.И. Химическая чувствительность. Полиморфизм генов, генетические основы риска канцерогенеза и интоксикации / Евгеньев М.И., Деггерев Е.В. // Хим. фарм. журн. - 2003. - Т. 37. - №4. - С. 3-7

57. Lewalter J. Blood protein conjugates and acetylation of aromatic amines / Lewalter J, Korallus U. // Int. Arch. Occup. Environ. Health 1985. - V. 56. -P. 179-196.

58. Seidegard J. The role of human glutathione transferases and epoxide hydrolases in the metabolism of xenobiotics / Seidegard J., Ekstrom G. // Environ. Health Perspect. 1997. - V. 105. - P. 791-799.

59. Евгеньев М.И. Определение фенотипа ацетилирования для терапевтического мониторинга лекарственных средств /Евгеньев М.И., Гармонов С.Ю., Погорельцев В.И., Куртбелялова Х.И., Валимухаметова Д.А. // Клинич. лаборат. диагностика. 1996. - № 5. - С. 24-27.

60. Brosen K. First pass metabolism of imipramine and desipramine: impast of the sparteine oxidation phenotype / Brosen K., Gram L.F. // Clin. Pharmacol. Ther. - 1988. - V. 43. - P. 400-406.

61. Daly A.K. The genetic and metabolic criteria for the assignment of debrisoquine hydroxylation (cytochrome P450IID6) / Daly A.K., Armstrong M., Monkman S.C., Idle M.E., Idle J.R. // Pharmacogenetics. 1991. - V. 1. -P. 33-41.

62. Lauwerys R.R. Industrial chemical exposure, guidelines for biological monitoring / Lauwerys R.R. Hoet P. 2nd edition, Boca Raton. // Florida, Lewis Publishers, 1993. - 130 pp.

63. Баранов B.C. «Гены предрасположенности» и генетический паспорт / В.С.Баранов, М.В. Асеев, Е.В. Баранова. // Природа. 1999. - № 3. - С. 57.

64. Баев А.А. Геном человека / А.А. Баев // Природа. 1995. - № 4. - С. 6467.

65. Harding R.M. Human Genome Diversity Project / Harding R.M., Sajantila A. //Nature Genet. 1998. - V.18. - P. 307-308.

66. Brown P.O. Environmental Genome Project / Brown P.O., Hartwell L. // Ibid. P.91-93.

67. Баранов B.C. Геном человека и «гены предрасположенности» / B.C. Баранов, Е.В. Баранова, Т.Э. Иващенко и др. // Спб.: Интермедика, 2000. - 34 с.

68. Quinzii С. Predictive genetic testic — new possibilities in determination of risk of complex diseases / Quinzii C., Belpinati F., Pignatti P.F. // Croat. Med. J.-2001.-V. 42.-P. 458-462.

69. Janetos A.C. Biological variability. In: Variations in susceptibility to inhaled pollutants / Brain J.D., Beck B.D., Warren A.J. Shaikh R.A. (eds). // Baltimore, The John Hopkins University Press. 1988. - P. 9-29.

70. Kempkes M. Glutathione S-transferase GSTM1 and GSTT1 null genotypes as pofential risk factors for urothelial cancer of the bladder / Kempkes M., Golka K., Reich S., Reckwitz Т., Bolt H.M. // Arch. Toxicol. 1996. - V. 71. - P. 123-126.

71. Kempkes M. Comparative genotyping and phenotyping of glutathione S-transferase GSTT1 / Kempkes M., Wiebel F.A., Golka K., Heitmann P., Bolt H.M. // Arch. Toxicol. 1996. - V. 70. - P. 306-309.

72. Muller M. High-performance liquid chromatography/fluorescence detection of S-methylglutatione formed by glutathione-S-transferase T1 in vitro / Muller M., Voss M., Heise C., Schulz Т., Bunger J., Hallier E. // Arch. Toxicol. -2001. -V. 74. P. 760-767.

73. Khripach L. Peroxidative hemolisis value as a predictive parametr for the revealing of human mutagenic risk groups / Khripach L., Ingel F., Tsutsman Т., Krivtsova E., Revazova J. // Mutation Research. 1997. - V. 379. - № 1. -P. 171.

74. Tsutsman T. Comparative toxico genetic monitoring study of Moscow and Yaroslavl oil refinery workers / Tsutsman Т., Ingel F., Khripach L., Yurchenko V., Krivtsova E., Yurtseva N., Revazova J. // Mutation Research. -1997.-V. 379.-№ l.-P. 98.

75. Canis M. Endometriosis: Current understanding and management / Canis M., Lob F.H., Wattier A. // Oxford. 1995. - P. 168-181.

76. Meyer U.A. The general polymorphism of debrisoquine/sparteine metabolism-molecular mechanisms / Meyer U.A., Skoda R.C., Zanger U.M. // Pharmacol. Ther. 1990. - № 46. - P. 297-308.

77. Каракчиев Н.И. Военная токсикология и защита от ядерного и химического оружия / Н.И. Каракчиев. // Ташкент: Медицина, УзбССР. 1988.-73 с.

78. Защита от оружия массового поражения. Справочник. Под ред. В.В. Мясникова. // М.: Военное издательство, 1989. - 398 с.

79. Сильнодействующие ядовитые вещества и защита от них. // МО СССР. -М.: Военное издательство, 1989. 176 с.

80. Gots R.E. Multiple chemical sensitivities: a symposium on the state of the science / Gots R.E., Hamosh T.D., Flamm W.G., Carr C.J. // Regul. Toxicol. Pharmacol. 1993. - V. 18. - P. 61-78.

81. Ashford N.A. Chemical Sensitivity / Ashford N.A. Miller C.S. // A Report to the New Jersey State Department of Health. 1989.

82. Ashford N.A. Chemical Exposures: Low Levels and High Stakes / Ashford N.A., Miller C.S. // Van Nostrand Reinhold. New York. 1991. - 115 pp.

83. Schulte P.A. Genetic screening and monitoring of workers. In: Recent advances in occupational health / Schulte P.A. Halperin W.E // Edinburgh, Churchill Livingstone. 1987. - V.3. - P. 135-154.

84. Ryan C.M. Cacosmia and neurobehavioral dysfunction associated with occupational exposure to mixtures of organic solvents / Ryan C.M., Morrow I.A. Hodgson M.J. Am. J. // Psychiatry. 1988. - V. 145. - P. 1442-1445.

85. Tabershaw I.R. Squealed of acute organic phosphate poisoning / Tabershaw I.R., Cooper С. I. // Occup. Med. 1966. - V. 8. - P. 5-20.

86. Agundez J.A.G. Prevalence of CYP2D6 gene duplication and its repercussion on the oxidative phenotype in white population / Agund6z J.A.G., Ledesma M.C., Ladero J.M., Benitez J. // Clin. Pharmacol. Ther. 1995. - V. 57. - P. 265-269.

87. Hein D.W. N-acetyltransferase genetics and their role in predisposition to aromatic and heterocyclic amine-induced carcinogenesis // Toxicology Letters. 2000. - V. 112-113. - P. 349 - 356.

88. Iyer L. Pharmacogenetics and cancer chemotherapy / Iyer L., Ratain M.J // European J. Cancer. 1998. - V. 34. - № 10. - P. 1493-1499.

89. Rausy J.L. Risk assessment: toxicity from chemical exposure resulting from enhanced expression of CYP2E1 // Toxicology. 1995. - V. 105. - P. 217-223.

90. Risch A. Slow N-acetylation genotype is a susceptibility factor in occupational and smoking related bladder cancer / Risch A., Wallace D.M.A., Bathers S., Sim E. // Hum. Mol. Gen. 1995. - V. 4. - P. 231-236.

91. Kadlubar F.F. Biochemical individuality and its implications in drug and carcinogen metabolism. Recent insights from N-acetyltransferase and cytochrome P450 1A2 phenotyping and genotyping in humans // Drug Metab. Dispos. 1994. - V. 26. - P. 37-46.

92. Weber W.W. Pharmacogenetics // New York-Oxford: Oxford University Press. -1997. 234 pp.

93. Мисийчук Ю.И. Экологическая химия / Ю.И. Мисийчук, Г.Ф. Терещенко, Г.П. Лебедев и др. // Мед. труда и пром. экология. 1998. -№ 7(1). - С.42-47.

94. Autrup Н. Genetic polymorphisms in human xenobiotica metabolizing enzymes as susceptibility factors in toxic response // Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis. 2000. - V. 464. - P. 65-76.

95. Horal Y. Polymorphisms hydralazane in human biotransformation and carcinogen metabolism / Horal Y., Ishizaki Т., Sasaki T. et al. // Br. Clin. Pharm. 1982. - V.13. - P. 361-374.

96. Соблирова Ж.Х. Быстрый тип ацетилирования возможный маркер предрасположенности к заболеваниям органов мочевой системы / Ж.Х. Соблирова, Е.А Харина. // Клин. лаб. диагностика. - 1998. - № 5. - С. 4142.

97. Евгеньев М.И. Диагностика фенотипа ацетилирования при обеспечении безопасности производственного персонала / М.И. Евгеньев, С.Ю. Гармонов, В.П. Багнюк, С.Е. Максудова, А.В. Кочергин. // Медицина труда и промышленная экология. 2002. - № 11. - С. 35-38.

98. Фогель Ф. Генетика человека / Ф. Фогель, А. Мотульски. // М.: Мир, 1990. В 3 т. Т. 1.

99. Я. Тосиюки. Биохимия наследственности / Я. Тосиюки, Ц. Кадзунори, С. Сусуму и др. // М.: Медицина, 1979. - 312 с.

100. Scheepers P.T.J. Assessing health risk of toxic substances by analysis of body fluids and exhaled air / Scheepers P.T.J., Heussen G.A.H. // Trends in Analyt. Chem. -2001.-V. 21.-P. 613.

101. EUROGAPP Project 1999-2000. Genetic Tests Insurance and Employment: Technical, social and ethical issues. Background Document, 2000.

102. Пузырев В.П. Медицинские аспекты экогенетики / В.П. Пузырев. // Соросовский образовательный журнал. 1997. - № 8. - С. 20-26.

103. Lander E.S. Initial sequencing and analysis of the human genome / Lander E.S., Linton L.M., Birren В., Nusbaum C., Zody M.C., Baldwin J., Devon K.,

104. World Health Organization. WHO Reports "Proposed International Guidelines on Ethical Issues in Medical Genetics and Genetic Services. WHO Human Genetics Programme, 1998.

105. Rothman N. Misclassification of genetics susceptibility biomarkers: implications for case-control and cross population comparison / Rothman N., Stewart W.F., Caporaso N.E., Hayes R.B. // Cancer Epid. Biomarkers, Prevention. 1993. - V. 2. - P. 299-303.

106. Wei X. Molecular basis of the human dihydropyrimidine dehydrogenase deficiency and 5-fluorouracil toxicity / Wei X., McLeod H.L., McMurrough J., Gonzalez F.J., Fernandez-Salguero P. // J. Clin. Invest. 1996 - V. 98. - P. 610-615.

107. Бочков Н.П. Клиническая генетика / Н.П. Бочков // М.: Гэотар-Мед, 2001.-448 с.

108. Hirvonen A. Combinations of susceptible genotypes and individual responses to toxicants //Environ. Health Perspect. 1997. - V. 105. - P. 755-758.

109. Ingel F. Tranaport pollutions and their influense to human emotional stress / Ingel F., Tsutsman Т., Krivtsova E., Khripach L., Yurchenko V., Yurtseva N., Revazova J. // Mutation Research. 1997. - V. 379. - № 1. - P. 53.

110. Кузьмина JI.П. Биохимический профиль организма: теоретические и практические аспекты изучения и оценки в медицине труда / Л.П. Кузьмина, Л.А. Тарасова. // Мед. труда и пром. экология. 2000. - № 7. -с. 1-6.

111. Веллинг Е.И. Токсикологическая характеристика гидразин-гидрата / Е.И. Веллинг, А.А. Преображенская. // Гигиена труда и проф. заболевания. 1960. - № 8. - С. 27-32.

112. Греков А.П. Синтез и исследование поли-/1,3,4-окса/ диазолов / А.П. Греков, С.А. Малютенко, К.А. Корнев. // Химия гетероциклических соедин. 1966. - № 3. - С. 352-356.

113. Кулагина Н.К. Токсикология новых промышленных химических веществ / Н.К. Кулагина. // М.: Медгиз, 1962. - С. 65-81

114. Ордит JI. Химия гидразина / Л.Ордит, Б. Огг // М.: Иностр. Лит, 1954. -238 с.

115. Колла В.Э. Фармакология и химия производных гидразина / В.Э. Колла, И.С. Берлинский. // Марийское книжное издательство, 1976. 196 с.

116. World Health Organisation. Updating and revision of the air quality guidelines for Europe. WHO Meeting Report 11-13 January 1993.

117. Schulte P.A. Using molecular epidemiology in assessing exposure for risk assessment / Schulte P.A., Waters M // Ann. NY Acad. Sci. 1999. - V. 895. -P. 101-111.

118. Hooijschuur E.W.J. Trends in Analytical Chemistry / Hooijschuur E.W.J., Hulst A.G., de Jong A.L. et al. // J. Anal. Chem. 2002. - V. 21. - P. 116-130.

119. Краковский М.Э. Методы оценки активности монооксигеназной ферментативной системы / М.Э. Краковский, А.Х. Аширметов. // Лаб. дело. 1990. - № 10. - С. 21-26.

120. Nakamura K. Coumarin substrates for cytochrome P450 2D6 flurescence assays / Nakamura K., Hannal I.H., Cai H., Nishimura Y., Williams K.M., Guengerich F.P. // Analyt. Biochem. 2001. - V. 292. - № 2. - P. 280-286.

121. Zhang Z. Quantitative liquid chromatography /mass spectrometry/mass spectrometry warfarin assay for in vitro cytochrome P450 studies / Zhang Z., King B.M., Wong Y.N. // Analyt. Biochem. 2001. - V. 298. - № 1. - P. 4049.

122. Gonzales F.J. The molecular biology of cytochrome P-450 // Pharmacol. Rev. 1989. - V. 40. - P. 243-288.

123. Gram L.F. Meclobemide, the substrate of CYP2C19 and an inhibitor ofCYP2C19, CYP2D6 and CYP1A2: a panel study / Gram L.F., Guentert T.W., Grange S., Vistesen K., Brosen K. // Clin. Pharmacol. Ther. 1995. - V. 57. - P. 670-677.

124. Peter R. Hydroxylation of chlorzoxazone as a specific probe for human liver cytochrome P-450IIE1 / Peter R., Bocker R., Beaune P.H., Iwasaki M., Guengerich F.P., Yang C.S. // Chem. Res. Toxicol. 1990. - V. 3. - P. 566573.

125. Frenkel K. Quintative high performance liquid chromatography analysis of DNA oxidized in vitro and in vivo / Frenkel K., Zhong Z., Wei H., Karkoszka J., Patel U., Rashid K., Georgesku M., Solomon J.J. // Analyt. Biochem. -1991.-V. 196.-P. 126-136.

126. Yamaguchi M. Simutaneous determination of urinary catecholamines and 5-hydroxyindoleamines by high performance liquid chromatography with fluorescence detection / Yamaguchi M., Ishida J., Yoshimura M. // Analyst. -1998.-V. 123.-P. 307-311.

127. Аширметов A.X. Использование антипирина для оценки активности ферментов монооксигеназной системы печени / А.Х. Аширметов, М.Э. Краковский // Лаб. дело. -1990. № 1. - С. 16-20.

128. Bouchardy С. The effect of tobacco on lung cancer risk depends on CYP2D6 activity / Bouchardy C., Benhamou S., Dayer P. // Cancer Res. 1996. - V. 56.-P. 251-253.

129. Семенюк А.В. Метод оценки активности ферментов / А.В. Семенюк, Л.И. Колесникова, В.Ю. Куликов, С.В. Неделькина, Р.И. Салганик // Лаб. дело. 1982. - № 10.-С. 31-33.

130. Rivas A. Human exposure to endocrine disrupting chemicals: assessing the total estrogenic xenobiotic burden / Rivas A., Olea N., Olea-Serrano F. // Trends in Analyt. Chem. - 1997. - V. 16. - P. 613-625.

131. Ольрих M. Роль изучения метаболизма лидокаина в диагностике патологии печени / М. Ольрих, В.Г. Кукес, А.А. Игонин. // Клин. лаб. диагностика. 2000. - № 7. - С. 8-11.

132. Соради И. Основы и педиатрические аспекты фармакогенетики / И. Соради // Будапешт: изд-во АН Венгрии, 1984. 195 с.

133. Veenstra-VanderWeele J. Pharmacogenetics and the serotonin system: initial studies and future directions. / Veenstra-VanderWeele J., Anderson G.M., Cook E.H. // European J. Pharmacology. 2000. - V. 410. - P. 165-181.

134. Schulte P.A. Use of biological markers in occupational health research and practices // J. Tox. Env. Health. 1993. - V. 40. - P. 359-366.

135. Симонов Е.А. Наркотики. Методы анализа на коже, в ее придатках и выделениях / Е.А. Симонов, Б.Н. Изотов, А.В. Фесенко // М.: Анахарсис, 2000. - 115 с.

136. Абакшина С.А. Определение мочевой кислоты в сыворотке крови и моче вольтамперометрическим методом / С.А. Абакшина, JI.C. Анисимова, Я.А. Белихмаер, Н.Ф. Манвейлер. // Клин. лаб. диагностика. 1994. - № 7. - С. 41-42.

137. Буловская JI.H. Определение фенотипа N-ацетилтрансферазной активности / JI.H. Буловская, Г.Н. Борисенко, О.А. Дробаченко, Г.П. Курбатова, В.В. Иванова // Лаб. дело. 1990. - № 10. - С. 28-30.

138. Джорджеску П. Биохимические методы диагноза и исследования / П. Джорджеску, Е. Пэунеску // Бухарест: Медицинское издательство, 1963. -74 с.

139. Евгеньев М.И. Метод определения фенотипа ацетилирования при использовании сульфадимезина как фармакогенетического маркера / М.И. Евгеньев, С.Ю. Гармонов, Л.Ш. Шакирова, В.И. Погорельцев // Хим.-фарм. журнал. 2000. - Т. 34. - №11. - С. 5-8.

140. Gaitonde Ch. Rapid liquid chromatographic method for the estimation of isoniazid and pyrazinamde in plasma and urine / Gaitonde Ch., Pathak P.V. // J. Chromatogr. Biomed. Appl. 1990. - V. 532. - № 2. - P. 418-423.

141. Cataldi T. R. I. Flow injection with anodic polarographic detection for the determination of allopurinol in pharmaceutical formulations / Cataldi T. R. I., Palmisano F., Zambonin P. G. // Analyst. 1989. - V. 114. - № 11. - P. 14491452.

142. Шарнин Г.П. Способ получения 4-хлор-7-нитробензофуразана / Г.П. Шарнин, Ф.С. Левинсон, С.А. Акимова, Р.Х. Хасанов // А.С. 1004375 (СССР) опубл. БИ № 10. - 1983.

143. Bailey A.S. 4,6-dinitrobenzofuroxan, nitrobenzodifuroxan and benzotrifuroxan: a new series of complex-forming reagent for aromatic hydrocarbons / Bailey A.S., Case J.R. // Tetrahedron. 1958. - V. 3. - P. 113131.

144. Ланкин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Ланкин // М.: Высшая школа, 1973. - 343 с.

145. Макаров В.А. Фармакология сульфаниламидных и сульфамидных препаратов / В.А. Макаров, А.Н. Кудрин, В.П. Черных и др. // Здоров'я Киев. 1982. - 305 с.

146. Gourley D.R. Clinical Pharmacy and Therapeutics / Gourley D.R., Hart L.A. // Baltimore: Williams and Wilkins. 1992. - 1628 p.

147. Gorog S. The changing face of chemical derivatization in pharmaceutical and biomedical analysis // Fresenius J. Anal. Chem. 1998. - V. 362. - P. 4-11.

148. Евгеньев М.И. Определения аминосоединений: реакции дериватизации хлординитрозамещенными бензофуразана и их N-оксидами: Дис. соис. уч. степени д-ра хим. наук. / М.И. Евгеньев; М.: МГУ, - 1997.

149. Climent L. Derivatisation of y-glutamyl semialdehyde residues in oxidized proteins by fluoresceinamine / Climent L., Tsai L., Levine R.L. // Analyt. Biochem. 1989. - V. 182. - P. 226-232.

150. OCT 34-70-953.3-88 Метод определения гидразина.

151. Newsome W.H. HPLC determination of hydrazine as a pentafluorebnzoylbromide derivatives //1. Agric. Food Chem. 1980. - V. 28. -№ 12.-P. 3199-3203.

152. Rutschmann M.A. Use salicylic aldehyde for the hydrazine determination in tobaccon / Rutschmann M.A., Buser H.R. //1. Agric. Food Chem. 1991. - V. 39.-№ 12.-P. 176-179.

153. Collins G.E. Fluorometric determination of hydrazine /Collins G.E., Rose-Pehrsson S. // Analyst. 1994. - V. 119. - № 8. - P. 1907-1912.

154. Евгеньев М.И. Избирательное проточно-инжекционное определение гидразина / М.И. Евгеньев, С.Ю. Гармонов, И.И. Евгеньева, В.В. Угричич-Требинский. // Журн. аналит. химии. 1998. - Т. 53. - № 3. - С. 272-277.

155. Safari A. Flow injection chemiluminescence determination of hydrazine / Safari A., Baezzat M.R. // Anal. Chem. Acta. 1998. - V. 358. - № 2. - P. 121-125.

156. Евгеньев М.И. Избирательные проточно-инжекционные определения 1,1-диметилгидразина в смесях / М.И. Евгеньев, С.Ю. Гармонов, И.И. Евгеньева, С.М. Горюнова, Л.Ш. Газизуллина // Журн. аналит. химии. -1998. Т. 53. - № 6. - С. 650-654.

157. Chemical abstract service // http://www.cas.org

158. Абилеев С.К. Выявление и прогнозирование мутагенной активности химических соединений окружающей среды: Автореф. дис. соиск. уч. степени д-ра биол. наук. М., 2003. - 50 с.

159. Sarich Т.С. Role of hydrazine in the mechanism of isoniazid hepatotoxicity in rabbits / Sarich T.C., Mohammed Youssefi, Ting Zhou, Adams S.P., Wall R.A., Wright J.M. // Arch. Toxicol. 1996, - V. 70. - P. 835-840.

160. Валимухаметова Д.А. Клинико-экспериментальное обоснование терапевтического мониторинга фосфабензида / Д.А. Валимухаметова, В.И. Погорельцев, Г.Г. Трубникова, С.Ю. Гармонов, М.И. Евгеньев // II

161. Система качества сертифицирована на соответствие UNI EN ISO 9002; "DNV", Италия, № CERT-04934-99-AQ-MAIL-SINCERT, ГОСТ Р ИСО 9002-96, ВНИИС, Россия, № РОСС RU.HC 11.К00179 QQgg2JA.1. АКТ1. ОШТ^Ох 200 г.1. ВНЕДРЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ НИР

162. Технический директор // У .В.Н. Кудряшов1. КЭР-ХОЛДИНГ7 U Сй/тК&т6//3Yг

163. Адрес: 420044, Республика Татарстан, г. Казань, ул. Бондаренко, 3 Телефоны: +7 (8432) 44 44 95, +7 (8432) 19 36 15, факс: +7 (8432) 19 36 17

164. ИНН: 1657045289 / КПП: 1657010011. Банковские реквизиты:р/с 40702810600000000396 в АКИБ филиал ОАО «АКИБАНК» г. Казань БИК 049205916 ИНН 1650002455 к/с 30101810300000000916 в ГРКЦ НБ РТ1. АКТ

165. ВНЕДРЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОЙ РАБОТЫ

166. За.мэ^РЧ^^начальника КВАКУ ^чной работе, >вник1. В. Корнилов1. Sfjz 2. oo^f tj^h1. АКТвнедрения научно-исследовательских работ

167. Начальник кафедры № 4 Казанского высшего командного артиллерийского училища, доктор технических наук, профессор, полковник1. А. Кочергин1. АКТ

168. Внедрения результатов научно-исследовательской работы

169. Председатель комиссии Члены комиссиид.м.н. Сафронов В.В. д.м.н Маланичева Т.Г. Шафикова Д.Л.