Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Карбонатно-харовый сапропель

ВАК РФ 03.00.18, Гидробиология

Автореферат диссертации по теме "Карбонатно-харовый сапропель"

Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова Биологический факультет

На правах рукописи

НИКОЛАЕВ Дмитрий Сергеевич

I

КАРБОНАТНО-ХАРОВЫЙ САПРОПЕЛЬ: ХИМИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА И БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ

Специальность: 03.00.18 - Гидробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2003

Работа выполнена в Международном биотехнологическом центре Московского Государственного Университета им. М.В. Ломоносова

Научный руководитель:

доктор биологических наук В.Н. Безносое

Официальные оппоненты:

доктор физико-математических наук Е.В. Веницианов кандидат биологических наук В.М. Хромов

Ведущее учреждение:

Институт физико-химических и биологических проблем РАН. г. Пущино.

Зашита состоится «//.>■>. .^£/£6^2003 г. в .0?. ч. мин. на заседании Диссертационного совета Д 501.001.55 в Московском Государственном Университете им. М.В. Ломоносова по адресу: 119992 Москва, Ленинские горы, Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова, Биологический факультет, 389 ауд.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биологического факультета Московского Государственного Университета им. М.В. Ломоносова

Автореферат разослан г.

Ученый секретарь -, л

Диссертационного совета, K/isL/

кандидат биологических наук Н.В. Карташева

17285

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования сапропелей обусловлена перспективой еж использования в качестве мелиорантов и кормовых добавок в сельском хозяйстве, сырья для химической промышленности; в бальнеологии и для получения биологически активных препаратов.

Сапропеля карбонатного типа особенно интересны в связи с исследованиями, показавшими важную роль ионов кальция в образовании органоминеральных комплексов гумуса, ингибировании денатурации растворенных органических веществ и обогащении сапропелей продуктами полураспада. Генезис, химические и физиологические свойства карбонатных сапропелей менее изучены, а их анализ более сложен в методическом плане, по сравнению с сапропелями других типов. Это делает их исследования актуальными в теоретическом и практическом аспектах.

В изучении сапропелей важной проблемой является поиск корреляций их свойств с химической структурой сапропелеобразователей. Биохимическое разнообразие организмов-образователей сапропелей огромно и это является объективной причиной усложнения исследований путей формирования тех или иных качеств донных отложений полигенного происхождения. Объект наших исследований - карбонатно-харовый сапропель, происхождение которого связано с безусловным доминированием одного образователя -харовых водорослей и в этом плане он является наиболее удобным модельным объектом.

Эффективность применения сапропелей при лечении некоторых заболеваний не вызывает сомнения, однако вопрос о действующих началах -до настоящего времени остается открытым и его разрешение является актуальной фундаментальной задачей.

Цель работы; изучение химических свойств карбонатно-харового сапропеля, химической структуры и биологической активности его экстрактов.

РОС НАЦИОНАЛЬНА БИБЛИОТЕКА {¡.Петербург

Задачи исследования:

1. Выявить характер происхождения исследуемого сапропеля, установить групповой состав его минеральной и органической компонент и фракционный состав гуминовой фракции.

2. Изучить химические свойства и функциональную структуру экстрактов сапропеля.

3. Провести исследование органического вещества харовых водорослей.

4. Изучить физиологическую, бактерицидную и фунпщидную активность водного, гуминовых, битумных экстрактов сапропеля и экстрактов харовых водорослей органическими растворителями.

Научная новизна. Методами экстракции, ТС-хроматографии, элементного, количественного функционального, дифференциально-термического и дифференциально-термогравиметрического анализов, ИК-, УФ/ВИС-спектроскопии, 'Н-ЯМР-спектроскопии и биологического тестирования впервые выполнено подробное комплексное исследование химического состава и биологической активности карбонатно-харового сапропеля оз. Бездонка Тульской области и его доминирующего образователя -харовых водорослей.

Впервые с помощью 'Н-ЯМР спектроскопии высокого разрешения количественно изучен состав функциональных групп гуминовых и битумных экстрактов карбонатного сапропеля, структура их углеводородных радикалов и выведена среднестатистическая формула углеводородов сапропеля.

Впервые в составе углеводного комплекса харовых водорослей идентифицирован гетерополиаминосахарид типа гиалуроновой кислоты -вещества перспективного в качестве антитоксиканта и лечебного препарата.

Впервые построена гипотетическая структура полисахаридного остова харовых водорослей, теоретическое содержание функциональных групп которой оказалось близким спектрально установленному.

Впервые показана разнонаправленная гормональная активность битумных фракций сапропеля, разнокачественная бактерицидность и ростовая активность его гуминовых экстрактов.

Научно-практическая значимость. Результаты исследования углубляют имеющиеся сведения о сапропелях карбонатного типа и могут служить одной из экспериментальных основ для дальнейшего изучения химических, физиологических и фармакологических свойств карбонатно-харового и других сапропелей и их отдельных фракций.

Особая практическая значимость проведенных исследований состоит: в показе возможности фракционирования органического вещества сапропеля с целью получения препаратов направленной биологической активности; в подтверждении необходимости предварительной оценки гормональной активности сапропелей или их отдельных фракций, что позволит значительно уменьшить риск грязелечения и осознанно применять, например гормоностимулирующие аппликации в случае гипофункционирования, а гормоноугнетающие — в случае гиперфункционирования эндокринных желез.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы докладывались на: - 1-ой Международной конференции «Современные проблемы органической химии, экологии и биотехнологии» г. Луга Ленинградской области, июль 2001г; - Всероссийской научно-практической конференции по экологической безопасности. Министерство природных ресурсов РФ, Москва, июнь 2002 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 статьи и тезисы 2 докладов.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 1к1. страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, выводов и списка литературы, включающего -??^.источников, из которых '/^отечественных и ^..иностранных; содержит/.?, таблиц,/^, рисунков.

ГЛАВА I. КЛАССИФИКАЦИЯ САПРОПЕЛЕЙ, ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ САПРОПЕЛЕЙ И САПРОПЕЛЕОБРАЗОВАТЕЛЕЙ, БИОЛОГИЧЕСКАЯ

АКТИВНОСТЬ (ОБЗОР)

Существующие различные по времени появления и сложности классификации сапропелей исходят из генетических особенностей формирования отложений, соотношения органического (ОВ) и минеральной части, а также практического использования сапропелей (Лопотко, 1986; Курзо ,1989).

Во всех классификационных системах «известковые» или «карбонатные» сапропели выделяются в отдельный тип, однако без учета полигенности происхождения карбонатного материала.

С учетом последнего, в рамках существующих классификаций, среди сапропелей известкового типа можно выделить «терригенно-карбонатные» и «биогенно-карбонатные» сапропели, а в биогенных - группы сапропелей «карбонатно-харовые», «ракушковые» и «карбонатно-макрофитные». «Харовые сапропелита» ранее выделены только в классификационной схеме Потонье (1920), что может свидетельствовать о малой изученности харовых сапропелей, значительные отложения которых разведаны в озерах Иссык-Куль, Валдайское, Балхаш и др.

Исследование сапропелей имеет несколько направлений: изучение химико-технологических и физико-химических характеристик сапропелей конкретных месторождений на интегральном уровне; определение группового состава минеральной части и ОВ; исследование химической структуры и физиологической активности отдельных фракций ОВ и их компонентов.

Изучение сапропелей карбонатного типа в методическом плане наиболее сложно, в связи с необходимостью разрушения комплексных соединений кальция с органическими компонентами, что часто приводит к значительному изменению органических структур. В связи с этим, в изучении химической структуры биолитов и их компонентов большое значение придается методам,

минимально разрушающим естественное состояние препаратов, дающим наиболее объективные, надежно интерпретируемые результаты.

Одним из таких методов является 'Н-ЯМР - спектроскопия, позволяющая в препаратах нативного биолита и его экстрактах идентифицировать функциональные группы и фрагменты макромолекул. К настоящему времени с помощью 'Н-ЯМР спектроскопии накоплена значительная информация о строении органического вещества бурых углей, горючих сланцев, торфов и донных отложений. Однако, исследования фрагментарного строения органического вещества сапропелей единичны и посвящены только гуминовым кислотам (ГК), а по харовым сапропелям подобные исследования отсутствуют.

В целом, применяемые способы выделения отдельных фракций биолитов и химические методы их изучения, могут быть применены к, практически не изученным - сапропелям карбонатно-харового типа, что позволит получить их химическую характеристику, сопоставимую с данными по другим типам сапропелей.

Большое практическое и теоретическое значение имеют исследования взаимосвязи химического состава сапропелей с их образователями. Однако число таких работ ограничено. При этом, достаточно полно, изучен биохимических состав таких сапропелеобразователей как диатомовые, сине-зеленые, желто-зеленые и зеленые водоросли, а так же зоопланктона и бентоса пресноводных водоемов.

Литературных данных о химическом составе харовых водорослей -доминирующего сапропелеобразователя объекта наших исследований, явно недостаточно.

Большинство исследователей связывают физиологическую активность сапропелей со способностью ингибировать свободно протекающие радикальные реакции патологического процесса. Ведется поиск отдельных фракций органического вещества биолитов, обладающих ингибиторными свойствами и специфически направленной физиологической активностью. Из групповых компонентов сапропелей в этом отношении наименее всего изучены

битумы. Информация по физиологической активности экстрактов сапропелей различными органическими растворителями и, в частности, сапропелей харового типа в литературе отсутствует.

Особое место в изучении биологической активности (БА) компонентов биолитов занимают исследования бактерицидной и антигрибковой активности гуминовых веществ. Однако сапропели какрбонатно-харового типа и харовые водоросли в этом отношении не изучены.

ГЛАВА II. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И АППАРАТУРА

При исследовании водоема - месторождения карбонатно-харового сапропеля применяли общепринятые гидробиологические методы (Заика 1972; Белавская, 1975; Макрушин 1979; Николаев 1980). Исследование гуминовых веществ сапропеля проводили по методикам (Орлов, Гришина, 1981), водного экстракта и фульвокислот методом тонкослойной хроматографии (ТСХ).

Для исследования элементного состава препаратов сапропеля и харовых водорослей использовали автоматический C,H,N анализатор «Карло-Эрбо 1100». Дифференциально-термический анализ препаратов проводили на дериватографе Q-I500. Эмиссионно - спектральный анализ минеральной части сапропеля проводили на спектрографе ИСП-30. ИК-спектры получали на спектрофотометре NICOLET 400-D, УФ/ ВИС спектры - на спектрофотометре «Спекорд М 40». 'Н-ЯМР снимали на импульсном Фурье-спектрометре ЯМР типа WP -80 SY.

Гормональную активность препаратов сапропелей и харовых водорослей определяли по методу Голиченкова (1979, 1981); бактерицидную, антигрибковую и фитостимулирующую активность препаратов определяли по методикам (Лабинская, 1968; Метод, указания, 1983; Метод указания МСХ РФ, 1998).

ГЛАВА Ш. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

3.1. Биотические и абиотические условия формирования карбонатно-харового

сапропеля

Месторождение изучаемого карбонатно-харового сапропеля олиготрофное карстовое озеро Бездонна (Тульская область). Озеро сточное, водообеспечение за счет разгрузки артезианских вод, растворяющих органогенные карбонатные породы верхнедевонского водоносногр комплекса. Вода озера относится к слабоминерализованным карбонатно-кальциевым водам с высоким содержанием кальция (около 400 мг/л), низкой окисляемостью - 1.41.8 мг 02/л и нейтральным значением pH - 7.0-7.4. Поступление аллохтонного вещества с водосбора минимально.

Основными первичными продуцентами озерной экосистемы являются харовые водоросли - Chara contraria. Их заросли продуцируют 96.6% органического и аккумулируют 96.5% минерального вещества экосистемы. Высокая зольность сапропеля (75%) обусловлена накоплением и сохранением, при нейтральной реакции среды (pH 7.4), кристаллической формы кальцита -продукта инкрустации таллома харовых водорослей.

Озеру присуще слабое развитие зоо- и фитопланктона. Доля массовых видов макрозообентоса (бокоплавы и гастроподы) в годовой продукции органического вещества экосистемы составляет около 4%.

3.2.Исследование химического состава сапропеля и харовых водорослей

Основной компонент прокаленной части сапропеля - СаО (52.5%). Минералогической формой Ca в изучаемом сапропеле является кристаллический кальцит (более 90% кристаллической части), образующийся за счет жизнедеятельности харовых водорослей.

Отношение ЗЮг/А^Оз в золе равно 1, что свидетельствует о минимальном влиянии терригенного стока. Сумма 8Ю2 и Ре203 не превышает содержания остальных компонентов золы, что характерно для сапропелей с высоким содержанием карбонатов ( Жуковицкая, 1986).

Отношение 5Ю2/СаО, равное 0.05, находится в пределах значений 0.20.02, характерных для карбонатных сапропелей разных месторождений, в то время как для органических сапропелей это отношение достигает 8.6 и 9-20 -для кремнеземистых.

Эмиссионным спектральным анализом в составе минеральной части идентифицированы следующие элементы: основа золы Са, Мц, Ре; в значительном количестве обнаружены А1, Си; в небольшом Сг, Бг , 2г,Т1, Мл, в следовых количествах присутствуют - Бп, Со, V, Ве, Бс, РЬ, Р.

Содержание С, Н и N органического вещества карбонатно-харового сапропеля (табл.) находится в довольно широких пределах, характерных для разных типов сапропелей ( Курзо,1989; Кирейчева, 1998).

Таблица

Элементный состав карбонатно-харового сапропеля (1) и харовых

водорослей (2)

Элементы, атомные % Элементные отношения

С Н N 0+8 С/Н С/И Н/С

1 26.8 59.1 1.4 12.0 0.4 19.0 2.2

2 38.8 50.7 1.5 8.9 0.8 26.0 1.3

При сопоставлении с литературными данными, оказалось, что органическое вещество (ОВ) изучаемого сапропеля в два раза менее гидрировано, чем ОВ карбонатно-макрофитного и кремнеземистого сапропелей и близко по этому показателю к низинному осоковому торфу. По насыщенности азотом (С/Ы) исследуемый сапропель в 2-3 раза превосходит сравниваемые сапропели и близок к осоковому торфу (Платонов и др, 2001).

Методами фракционирования установлено, что в групповом составе сапропеля гумусовые кислоты составляют 9.1% сухого вещества (СВ) , битумы - 1.4% СВ, углеводы - 4.5%, негидролизуемый остаток -10 % СВ. По групповому составу ОВ изучаемый сапропель проявляет сходство с сапропелями карбонатного, органического и кремнеземистого типов озер Белоруссии, отличаясь от них большим содержанием негидролизуемого остатка и углеводов (Лопотко,198б).

Исходя из результатов фракционного анализа гуминового вещества (ТВ), по аналогии с показателями гумусного состояния почв (Орлов, 1990), установлены следующие качества изучаемого сапропеля:

-очень высокая степень преобразования органических остатков в гуминовые вещества (43.4%);

-гуматный тип ОВ (>2), для которого характерно преобладание трудногидролизуемых, высоко конденсированных (с высокой степенью развития сопряженных двойных связей) гумусовых кислот; -низкое содержание «свободных» гумусовых кислот; -низкое содержание гумусовых кислот связанных с кальцием (в интервале 10-30%) и высокое - прочно связанных глинистой частью минеральной составляющей сапропеля (> 20%).

По типу гумуса и значительному содержанию гуминовых кислот связанных с кальцием сапропель проявляет сходство с оподзоленными и выщелоченными черноземами (Орлов 1990,1999).

3.3. Исследование химического состава экстрактов сапропеля и харовых

водорослей

Экстракты сапропеля отличаются большей гидрированностью и обедненностью атомами азота по сравнению с исходным сапропелем и его гуминовой фракцией.

В водном экстракте карбонатно-харового сапропеля методом ТСХ установлены: аминокислоты, моносахариды, водорастворимые органические кислоты. Количественно преобладают глутаминовая кислота, глутамин, лейцин и изолейцин, фенилаланин, аланин и аспарагин. Значительно меньший вклад вносят валин, аспарагиновая кислота, серии, тирозин, треонин, цистеин и оксипролин. Сахара представлены в основном галактозой, глюкозой и рамнозой. Из водорастворимых органических кислот преобладают янтарная, яблочная, щавелевая и глутаровая кислоты. В составе водного экстракта установлены вещества, используемые в медицине как самостоятельные лекарственные препараты: бензойная кислота, салициловая, глутаминовая кислота и аминокислота цистеин.

Экстракты сапропеля органическими растворителями представляют собой мазеподобные вещества различной окраски (от оранжевой до темно-зеленой) с характерным запахом.

В гексановом экстракте идентифицированы алкановые и циклоалкановые структуры; установлены карбоксилы алифатических и сложноэфирньтх групп; примесь соединений с сопряженными и несопряженными двойными связями; ЫН-грушш пиррольных циклов (в т.ч., возможно, в тетрапиррольных , пигментах). Экстракт содержит минимальное количество хлорофиллов «а», «в» и каротиноидов, по сравнению с другими экстрактами.

Бензольный экстракт отличается от гексанового менее длинными цепями алкановых и цшслоалкановых фрагментов. Среди ароматических циклов преобладают циклы неконденсированного характера и с 1,2- ; 1,2,3- и 1,2,4-замещенными бензольными кольцами. Установлено наличие спиртовых групп, не исключено и стероидных, а также карбонильных групп алифатических кетонов. УФ/ВИС спектр показал присутствие производных бензойной кислоты (285 нм); 415, 510 нм - каротиноидов; производных порфиринов (670,700 нм). Экстракт характеризуется значительным содержанием хлорофиллов «а» (0,85 мг/л), «в» (0,31 мг/л) и каратиноидов (0,56 мг/л).

Хлороформный экстракт. В ИК-спектре идентифицированы : п.п. СН2, СН3 - групп алканов и циклоалканов; малоинтенсивные п.п. ароматических циклов с преобладанием 1,2- ; 1,2,3-; 1,2,4- замещенных колец; карбонильные групп карбоновых кислот и кетонов, возможно и хинонов; спиртовые и фенольные гидроксильные группы, в значительной степени стероидного ряда.

Ацетоновый экстракт. В ИК-спектре идентифицированы: интенсивные п.п. алканов и циклоалканов; малоинтенсивные п.п. ароматических циклов с преобладанием тетразамещенных бензольных колец; карбонильные группы карбоновых кислот и кетонов, возможно и хинонов (пл. 1647 см"1); п.п. спиртов (главным образом стероидных); п.п. двойных связей; возможно каротиноидов; интенсивные п.п. в области 3200-3400 см".1 обусловлены валентными колебаниями ОН- и NH- групп; широкая п.п. 950 -1150 см"1 , наряду с 920; 840; 770; 930 см*1, свидетельствует о присутствии углеводов. УФ/ВИС-спектр подтвердил присутствие стероидных и порфириновых структур.

Этанольный экстракт. В ИК - спектре идентифицированы: интенсивные п.п. спиртовых и фенольных гидроксильных групп, в значительной степени стероидных; интенсивные п.п. СН2, СНз - групп алифатических цепей; малоинтенсивные п.п. ароматических циклов и флавоноидов; хиноидных групп или сопряженных с непредельными связями карбонильных групп; NH- групп пиррольных циклов полосы поглощения сложных эфиров; широкая расщепляющаяся полоса 520-600 см"1, отвечающая солям карбоновых кислот; п.п. валентных колебаний вторичных аминов. УФ/ВИС-спектр показал присутствие моно- и да- о-замещенных кумаринов и производных порфиринов.

Бензольно-этанольный экстракт. В ИК - спектре наиболее интенсивны п.п. СН2, СНз - групп длинноцепочечных алканов; установлены карбонильне группы карбоновых кислот и кетонов, возможно и хинонов; слабое поглощение ароматических циклов, п.п. спиртов и простых эфиров; NH- групп пирольных циклов; флавоноидов; п.п. солей вторичных аминов. УФ/ВИС-спектр показал присутствие производных кумаринов, каротиноидов и порфиринов.

Гексановый экстракт харовых водорослей.

Представляет собой мазеподобное прозрачное вещество желтого цвета с характерным запахом харовых водорослей.

В ИК-спектре экстракта идентифицированы следующие полосы поглощения:

- широкая п.п. 3700 - 3100 см"1 с максимумом при 340 см"1 обусловлена валентными колебаниями спиртовых гидроксильных и NH-групп;

- сильные п.п. алифатических цепей в области 2800 - 2900 см"1 ; полосу 2930 см'1 можно отнести к валентным колебаниям -СН3 групп, что подтверждается умеренным поглощением 1382.2 см"1 - деформационное колебание - СН3 ; полосы 2854.2; 1468.8 сильная и 1412.8 средней интенсивности см'1 - поглощение -СН2 групп;

- интенсивная п.п. 1713.3 см'1 соответствует валентным колебаниям -С=0 группы, это эфиры карбоновых кислот, кетоны и альдегиды;

- пл. 1254.9 см"1 - валентные колебания С-0 или частично, деформационные -ОН в карбоксильных группах;

- п.п. спиртов: 1178.5; 1117,4; 1081.7 см"1;

- малоинтенсивные пл. с максимумом при 2655.2 см"1 обусловлены валентными колебаниями NH групп вторичных аминов;

-соединения с сопряженными и несопряженными двойными связями: пл. 979.9; 725.2; 600 см"1.

Этанолъный экстракт харовых водорослей.

Представляет собой вещество темно-зеленого цвета с характерным запахом.

В>ИК- спектре экстракта идентифицированы следующие п.п.:

- п.п. спиртовых гидроксильных и NH групп 3000 - 3700 см"1 , спирты в значительной степени стероидные (1417.9,934.0 см'1);

-поглощение -СН2 (2925.5, 1458,6 см"1 ) и -СН3 групп (2854.2, 1387 см'1) в алкановых и циклоалкановых фрагментах;

-п.п. 2720, 2700, 2680 см"1 обусловлены валентными колебаниями связанной - ОН группы карбоксила в карбоновых кислотах;

-п.п. 1718 см"' - валентное колебание -СЮ в ненасыщенных карбоновых кислотах;

-п.п. 1642, 620 см"1 - колебание С=С олефинов. Полоса 1642 см"1 интенсивная, поэтому можно предположить несимметричное строение олефинов;

-1056,1265.1 см"1 п.п. NH групп пирольных циклов;

-широкая п.п. 920 -1180 см'1 говорит о присутствии углеводов.

3.4. 'Н -ЯМР спектроскопия фракций сапропеля и харовых водорослей

Методом 'Н -ЯМР-спектроскопии установлено, что спектры гуминовых препаратов (ГП) харового сапропеля представляют собой набор уширенных мультиплетных сигналов протонов в области 0.5-8.0 м. д. и синглет протона муравьиной кислоты при 8 = 8.6 м. д..

Исключением является спектр фульвокислот (ФК), где в области спектра, характерной для протонов полиолов, сигналы не имеют явно выраженного полисахаридного характера, присущего остальным ГП. Кроме того, в спектре ФК на фоне уширенных мультиплетных сигналов наблюдается проявление узких синглетов в области 6 = 2.52 и 3.31 м.д., идентифицированных как сигналы протонов метальных групп остатков ацетата и N-ацила, соответственно.

В спектре ЯМР препарата гумина (Г) после его кипячения в концентрированной щелочи в течение 8 ч, на фоне уширенных мультиплетных сигналов появляется узкий синглет при S 2.08 м.д., идентифицированный как сигнал протонов метальной группы ацетата.

Появление ацетата после жесткой щелочной обработки может означать, что в образце содержится N-ацетилглюкозамин, основной мономерный блок полиаминосахаридов хитиновой природы. Данное предположение

подтверждается появлением в спектре 'Н-ЯМР препарата гумина после его жесткой щелочной обработки, узкого синглета при 5 3.32 м.д., идентифицированного как сигнал протонов И-ацильной группы. Это наблюдалось также и в случае препарата ФК. Из этого следует, что харовый сапропель содержит полиаминосахариды хитиновой природы.

Соотнесение интенсивностей сигналов протонов метальных и метиленовых групп показало, что алкильные радикалы ФК, ГК и гумина представлены алифатическими цепочками СН3(СН2)4, в СвГВ - цепочками -СНз(СН2)з. Гексановый экстракт харовых водорослей, по результатам анализа его протонного спектра, состоит, в основном, из свободного непредельного углеводорода типа гексадецена. По-видимому, его источником является хлорофилл, расщепляющийся в кислой или щелочной среде до спирта фитола, хлорофиллинов и порфиринового ядра (Карер, 1962).

Гексановый экстракт сапропеля по данным 'Н-ЯМР анализа состоит также из свободного углеводорода, как и в случае хары. Однако наблюдающийся в области 1.8-2.3 м.д. относительно слабый уширенный мультиплетаый сигнал можно охарактеризовать как метиленовые группы карбонила, а структура алкила в целом, наиболее вероятно, соответствует остатку гексиловой кислоты. Это позволяет полагать, что процесс утилизации хары до харового сапропеля сопровождается деструкцией свободных непредельных углеводородов (в частности гексадецена) до предельных углеводородов низшего порядка.

Полярный (этанольный) экстракт харовых водорослей по результатам анализа протонного спектра состоит из углеводов и связанных углеводородов. Наличие дублетного сигнала (8 5.4 м.д) 1-а-протон сахарида и синглета в области 8 3.31 м.д., характерного для протонов 1Ч-ацил-группы, позволяет предположить, что углеводная часть полярного экстракта хары представляет собой полиаминосахарид типа гиалуроновой кислоты на основе глюкуроновой кислоты и И-ацетилтлюкозамина.

В литературе сведения об идентификации полиаминосахаридов у харовых водорослей отсутствуют. Как следует из анализа протонных спектров, в полисахариде хары аминогруппа глюкозамина ацилирована, а карбоксильная или гидроксильная группа глюкуроновой кислоты, по-видимому, алкилирована, что вытекает из структуры алкильного радикала полярного экстракта хары. На основании этого построена гипотетическая структура полисахаридного остова хары:

И = Н; СН3-; СО-СНз

Теоретическое содержание функциональных групп выведенной структуры: алкилы - 42%; полиолы (сахара) 46% и М-ацил -12%. Спектрально установленное содержание функциональных групп полярного экстракта хары, оказалось достаточно близким, за исключением содержания М-ацил фрагмента, что обусловлено, вероятно, щелочным гидролитическим отщеплением его в процессе подготовки препаратов харовых водорослей.

Этанольный экстракт сапропеля по данным 'Н-ЯМР, как и в случае хары, состоит в основном из полисахарида и связанных углеводородов. Наличие дублетного сигнала (5.4 м. д.) и синглета (3.2 м. д.) указывает на аналогию структуры полисахаридов в харе и сапропеле.

Из этого следует, что при утилизации харовых водорослей структура, первично ими продуцируемого, полисахарида не претерпевает значительных изменений. Биотестирование показало (ГЛАВА IV), что полярные экстракты харовых водорослей и сапропеля проявляют одинаковый характер биологической активности, определяемый наличием М-ацил групп

полиаминосахарида, которые, благодаря устойчивости к биохимическому расщеплению, сохраняются в сапропеле.

Исходя из интенсивности сигналов алифатических групп препаратов, среднестатистическая структура углеводородов сапропеля может быть выражена формулой:

СН3(СН2)«(СН)8 - [СН2-СО-СН2]п - [-С-]т- [-НС=СН-]В - (СН2)4.8 СН3

II

сн2

Кроме связанных углеводородов и полисахаридного фрагмента этанольный экстракт сапропеля содержит молочную кислоту, незначительное количество ароматических групп, формиат и пришитую к полимерной матрице силановую группу. Отсутствие лактатов и ароматики в этанольном экстракте хары позволяет сделать вывод, что эти компоненты харового сапропеля имеют вторичную природу, т.е. являются экзометаболитами микроорганизмов, утилизирующих хару. При этом лактаты - продукт бактериального расщепления первичных углеводов, а ароматические соединения фснольного ряда - продукт гумификации органических веществ.

ГЛАВА IV. ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЭКСТРАКТОВ САПРОПЕЛЯ И ХАРОВЫХ ВОДОРОСЛЕЙ

Впервые в экспериментальных условиях проведено изучение биологической активности препаратов гуминовой, водной и липидных фракций карбонатно-харового сапропеля.

Результаты физиологического тестирования подтверждают выводы многих исследований о наличии в составе пелоидов гормоноподобных веществ.

На примере меланоцитотропной системы шпорцевой лшушки впервые показана разнонаправленная гормональная активность отдельных препаратов карбонатно-харового сапропеля. Установлено присутствие гормоноподобных меланоцито-стимулирующих веществ в водном экстракте сапропеля, в растворах гумата натрия, этанольного, хлороформного и бензольно-этанольного экстрактов сапропеля.

Выявлено гормоноингибирующее проявление физиологической активности растворами фульвокислот, гексановым, бензольным, ацетоновым экстрактами сапропеля, а также отсутствие гормональной активности у растворов комплекса свободных гуминовых веществ.

Таким образом, экспериментально показана возможность фракционирования ОВ сапропеля с целью получения препаратов направленного физиологического действия.

Данные исследования могут служить одной из экспериментальных основ для дальнейшего изучения химических, физиологических и фармакологических свойств экстрактов органического вещества харового сапропеля и других пелоидов.

Биотестирование гуминовых препаратов харового сапропеля выявило их разнонаправленную бактериальную и антигрибковую активность, что может иметь большое практическое значение в экспериментальной микробиологии, санитарии и бальнеологии.

Установлено, что ФК и водный экстракт - бактериостатичны для условно патогенных бактерий золотистого стафилококка и кишечной палочки. ПС и гумат натрия поддерживают рост патогенных бактерий дифтерийной палочки и листерии как источники их азотного и углеродного питания и могут использоваться в качестве наполнителя питательных сред для диагностики инфекционных заболеваний.

ГК поддерживают рост культуры гриба-кандида. Гумат натрия оказывает противоположное действие - антигрибковое и может служить основой для изготовления антигрибковых медицинских препаратов.

Эксперименты на прорастающих семенах пшеницы показали высокую, стимулирующую рост проростков, активность и антигрибковые свойства гумата натрия, а также противоположный характер активности ФК. Сделан вывод, что для внесения под сельскохозяйственные культуры лучше вносить сапропель, сохранивший коллоидную структуру органического вещества, биологическая активность которого значительно снижается при высушивании.

ВЫВОДЫ

1. Автохтонный характер формирования сапропеля, обусловлен жизнедеятельностью харовых водорослей, абсолютно доминирующих в первичном продуцировании, аккумуляции минеральных веществ озерной экосистемы и накоплении сапропелевых отложений.

2. Сапропель отличается высокой степенью преобразованное™ органических остатков в гуминовые вещества и может быть отнесен к гуматному типу, для которого характерно преобладание трудногидролизуемых, высоко конденсированных (с высокой степенью развития сопряженных двойных связей) гумусовых кислот.

3. В формировании химической структуры гуминовых фракций сапропеля значительная роль принадлежит алифатическим, карбонильным, полиольным и ароматическим фенольного ряда структурам, меньшая - группам Ы-ацила, формиата и силанов. Их присутствие (кроме силанов) установлено и в битумных экстрактах сапропеля.

4. В составе углеводного комплекса харовых водорослей впервые идентифицирован гетерополиаминосахарид типа гиалуроновой кислоты на основе глюкуроновой кислоты и Ы-ацетилглюкозамина.

5. При утилизации харовых водорослей до харового сапропеля структура, продуцируемого ими, полисахарида не претерпевает значительных изменений и благодаря устойчивости к биохимическому расщеплению за счет Ы-ацил -

групп, сохраняется в сапропеле, сообщая ему аналогичный характер химической и биологической активности.

6. Продуцируемые водорослями свободные непредельные углеводороды (в частности, гексадецен) биохимически расщепляются до предельных углеводородов низшего порядка.

7. Лактаты, ароматические углеводороды и их производные харового сапропеля имеют вторичную природу, т.е. являются экзометаболитами микроорганизмов - деструкторов органического вещества харовых водорослей. При этом лакгаты являются продуктом бактериального расщепления углеводов, а ароматические соединения фенольного ряда - продуктом гумификации органических веществ.

8. Экстракты карбонатио-харового сапропеля и харовых водорослей проявляют разнонаправленную гормональную активность. Гуминовые фракции сапропеля проявляют разнокачественные бактерицидность, фунгицидность и фитостимулирующую активность.

9. Экспериментально показана возможность фракционирования сапропелей с целью получения препаратов направленного физиологического действия, что имеет большое практическое значение в бальнеологии, экспериментальной микробиологии и санитарии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Платонов В.В., Пономарева М.А, Николаев Д.С., Линяева Т.В. Предварительная диагностика химического состава сапропеля оз. Глубокое республики Татарстан //Сб. материалов I Международной конференции «Современные проблемы орг. химии, экологии и биотехнологии». - июнь 2001 г. - Луга. - Ленинградская обл.С. 42-43.

2. Платонов В.В., Галкина И.С., Шавырина O.A., Проскуряков В.А., Пономарева М.А., Николаев Д.С., Шарендо О.В. Гуминовый комплекс сапропелей: структура и биологическая активность //Сб. материалов I

Международной конференции «Современные проблемы орг. химии, экологии и биотехнологии». - июнь 2001 г. - Луга. - Ленинградская обл. С. 44-45.

3. Платонов В.В., Николаев Д.С., Проскуряков В.А., Николаев С.Г., Швыкин А.Ю., Подшибякин С.И.. Характеристика карбонагно-харового сапропеля, биотические и абиотические условия его формирования //Геологический вестник центральных районов России. - 2002. - № 1(18). С. 2126.

4. Николаев Д.С., Сахаровский В.Г., Половецкая О.С., Николаев С.Г. Исследование структуры органического вещества харовых водорослей и образуемого ими сапропеля методом Н-ЯМР спектроскопии высокого разрешения //Естественные и технические науки. - 2003. - № 1(4). С. 42-48.

5. Николаев Д.С., Половецкая О.С.. Меланоцитотропная активность экстрактов органического вещества карбонатно-харового сапропеля //Естественные и технические науки. - 2003. - №1(4).С. 35-41.

6. Платонов В.В., Николаев Д.С., Сахаровский В.Г., Проскуряков В.А., Николаев С.Г., Швыкин А.Ю. 'Н-ЯМР спектроскопия высокого разрешения органического вещества карбонатно-харового сапропеля //ЖПХ (находится в печати).

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 23.06.2000 г. Подписано в печать 31.10.2003 Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 1,38

Печать авторефератов 730-47-74

£00 M 172.^5

¡1 17 285

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Николаев, Дмитрий Сергеевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР. Классификация и химическая структура сапропелей, сапропелеобразователи, биологическая активность и применение сапропелей.

1.1.Классификация сапропелей.

1.2.Химический состав органической части сапропеля.

1.3.Химический состав минеральной части сапропеля.

1.4. Массовые виды сапропелеобразователей, их химический состав.

1.5. Вопросы физиологической активности сапропелей.

1.6. Применение сапропелей.

Выводы к литературному обзору.

ГЛАВА 2. АППАРАТУРА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Технический анализ.

2.2. Элементный анализ.

2.3. Эмиссионный спектральный анализ.

2.4. Рентгено-флуоресцентный анализ.

2.5. ИК-спектроскопия.

2.6. Спектроскопия УФ- и видимой области.

2.7. !Н-ЯМР-спектроскопия высокого разрешения.

2.8. Дифференциально-термический анализ.

2.9. Экстракция органической массы сапропеля.

2.9.1. Выделение водорастворимых веществ.

2.9.2. Выделение битумов.

2.9.3. Определние группового состава гуминовых веществ.

2.9.4. Выделение гуминовых кислот.

2.9.5. Выделение фульвокислот.

2.10. Определение органических пигментов.

2.11. Тонкослойная хроматография водного экстракта и фульвокислот.

• 2.11.1. ТСХ аминокислот.

2.11.2. ТСХ углеводов.

2.11.3. ТСХ водорастворимых карбоновых кислот.

2.12. Определние биологической активности.

2.12.1. Определение биологической активности на проростках пшеницы.

2.12.2. Определние физиологической актвиности.

2.12.3. Бактерицидная и антигрибковая активность гуминовых препаратов.

ГЛАВА 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1.Биотические и абиотические условия формирования карбонатно-харового сапропеля.

3.2. Исследование химического состава сапропеля и харовых водорослей.

3.2.1 .Изучение минеральной части сапропеля.

3.2.2. Элементный состав и термический анализ сапропеля и харовых водорослей.

3.2.3.Групповой состав органического вещества сапропеля.

3.3.Исследование химического состава экстрактов сапропеля и харовых водорослей.

3.3.1.Водный экстракт.

3.3.2.Гексановый экстракт.

3.3.3 .Бензольный экстракт.

3.3.4.Хпороформный экстракт.

3.3.5.Ацетоновый экстракт.

З.З.б.Этанольный экстракт.

3.3.7. Бензольно-этанольный экстракт.

3.3.8. Разнополярные экстракты харовых водорослей.

3.3.9.Исследование гумусовых веществ сапропеля.

3.4. 'Н-ЯМР спектроскопия фракций сапропеля и харовых

• водорослей.

Выводы к главе 3.

ГЛАВА 4. Исследование биологической активности экстрактов сапропеля и харовых водорослей.

4.1. Физиологическая активность.

4.2. Бактерицидная и антигрибковая активность гуминовых препаратов.

4.3 Изучение влияния препаратов фульвокислот, гумата натрия и сухого сапропеля на проростание, всхожесть, силу роста и устойчивость к грибковым заболеваниям семян пшеницы.

Выводы к главе 4.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Карбонатно-харовый сапропель"

Возрастающий интерес к изучению сапропелей обусловлен перспективой прямого использования в качестве сырья для химической промышленности, в сельском хозяйстве, в бальнеологии и для получения на их основе биологически активных препаратов.

Сапропели карбонатного типа интересны в связи с исследованиями, показавшими особую ролью ионов кальция в ингибировании денатурации растворенных органических веществ, образующихся после отмирания сапропелеобразователей. Это способствует обогащению сапропеля продуктами полураспада и влияет на химическую и физиологическую активность, как сапропеля в целом, так и его отдельных компонентов.

В изучении сапропелей важной проблемой является поиск корреляций химической структуры сапропелеобразователей с химическими свойствами и биологической активностью донных отложений. Видовое и, следовательно, биохимическое разнообразие сапропелеобразователей внутренних водоемов огромно, что является объективной причиной усложнения исследований формирования тех или иных качеств сапропелей полигенного происхождения.

Объект наших исследований - карбонатно-харовый сапропель, происхождение которого связано с безусловным доминированием одного сапропелеобразователя - харовых водорослей, являются удобным модельным объектом для прояснения некоторых сторон формирования химических и биологических свойств биолита.

Если эффективность применения сапропелей и их экстрактов при лечении некоторых заболеваниях не вызывает сомнения, то вопрос о действующих началах - до настоящего времени остается открытым. В связи с этим в задачу наших исследований, наряду с изучением химических свойств сапропеля, входило выделение различных фракций органического вещества, исследование их химической структуры и оценка биологической активности.

Заключение Диссертация по теме "Гидробиология", Николаев, Дмитрий Сергеевич

ВЫВОДЫ

1. Автохтонный характер формирования сапропеля, обусловлен жизнедеятельностью харовых водорослей, абсолютно доминирующих в первичном продуцировании, аккумуляции минеральных веществ озерной экосистемы и накоплении сапропелевых отложений.

2. Сапропель отличается высокой степенью преобразованности органических остатков в гуминовые вещества и может быть отнесен к гуматному типу, для которого характерно преобладание трудногидролизуемых, высоко конденсированных (с высокой степенью развития сопряженных двойных связей) гумусовых кислот.

3. В формировании химической структуры гуминовых фракций сапропеля значительная роль принадлежит алифатическим, карбонильным, полиольным и ароматическим фенольного ряда структурам, меньшая — группам N-ацила, формиата и силанов. Их присутствие (кроме силанов) установлено и в битумных экстрактах сапропеля.

4. В составе углеводного комплекса харовых водорослей впервые идентифицирован гетерополиаминосахарид типа гиалуроновой кислоты на основе глюкуроновой кислоты и N-ацетилглюкозамина.

5. При утилизации харовых водорослей до харового сапропеля структура, продуцируемого ими, полисахарида не претерпевает значительных изменений и благодаря устойчивости к биохимическому расщеплению за счет N-ацил — групп, сохраняется в сапропеле, сообщая ему аналогичный характер химической и биологической активности.

6. Продуцируемые водорослями свободные непредельные углеводороды (в частности, гексадецен) биохимически расщепляются до предельных углеводородов низшего порядка.

7. Лактаты, ароматические углеводороды и их производные харового сапропеля имеют вторичную природу, т.е. являются экзометаболитами микроорганизмов - деструкторов органического вещества харовых водорослей. При этом лактаты являются продуктом бактериального расщепления углеводов, а ароматические соединения фенольного ряда — продуктом гумификации органических веществ.

8. Экстракты карбонатно-харового сапропеля и харовых водорослей проявляют разнонаправленную гормональную активность. Гуминовые фракции сапропеля проявляют разнокачественные бактерицидность, фунгицидность и фитостимулирующую активность.

9. Экспериментально показана возможность фракционирования сапропелей с целью получения препаратов направленного физиологического действия, что имеет большое практическое значение в бальнеологии, экспериментальной микробиологии и санитарии.

142

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Николаев, Дмитрий Сергеевич, Москва

1. Кордэ Н.В. Биостратификация и типология русских сапропелей. - М.: Изд-во АН СССР,1960, 220с.

2. Курзо Б. В. // Каустобиолиты и экология.- Деп. в ЦБНТИ Минтоппрома РСФСР. Торф, пром-ть: Экспресс-информ., 1989, №2, с. 120-126.

3. Потонье Г. Сапропелиты.- М.: Изд-во журн. нефт. и сланц. хоз.-1920, 45с.

4. Кордэ Н.В. О номенклатуре и типологии сапропелевых отложений // Тр. лаб. сапропелевых отложений АН СССР.- М.: Изд-во АН СССР,1956.Вып. VI.- С. 5-33.

5. Lundqnist G. Bodenablagerungen und Entwicklungstypen der Seen.- Die Binnengewasser.- Band II, 1927,119s.

6. Пидопличко А. П., Грищук P. И. Некоторые итоги изучения сапропелевых отложений Белорусской ССР // Химия и генезис торфа и сапропелей.- Минск: Изд-во АН БССР, 1962, с 258-274.

7. Пидопличко А. П. Озерные отложения Белорусской ССР. Минск: Наука и техника, 1975, 120с.

8. Лопотко М.З. Сапропели БССР их добыча и использование. Минск.: Наука и техника, 1974, 208 с.

9. Лопотко М.З., Евдокимова Г.А. Сапропели и продукты на их основе. Институт торфа, АН БССР, Минск, 1986, 190 с.

10. Ю.Степанова Е.М. Химические свойства и строение гуминовых кислот сапропелей. Дисс. к.б.н. М. МГУ, 1996, 102 с.

11. И.Александрова Л.Н. Органическое вещество почвы и пути его трансформации. Л., 198012,Орлов Д.С., Бирюкова О.Н., Суханова Н.И. Органическое вещество почв Российской Федерации. М.: Наука, 1996, с. 6-12.

12. Кирейчева JI.B., О.Б.Хохлова. Сапропели состав, свойства, применение. ВНИИГиМ, М.,1998, 120 с.

13. Евдокимова Г.А., Пунтус С.Ф., Лопотко М.З. и др. Характеристика группового и элементного состава органического вещества сапропелей БССР // Новые процессы и продукты переработки торфа. Минск, 1982, с. 48-53

14. Евдокимова Г.А., Букач О.М., Тышкович А.В. и др. Агрохимическое значение минеральных компонентов сапропелей // Весщ АН БССР. Серия е.- г. навук, 1980, №4., с.38-42

15. Лопотко М.З., Евдокимова Г.А., Букач О.М. и др. Кадастр сапропелевых отложений БССР в 6-ти томах.- Минск: Наука и техника, 1983, сЛ 18

16. Flaig. V., Organic Compound in Soil, 1971, vol. 3

17. Курмышева H.A. Влияние сапропелевых удобрений на гумусовое состояние дерново-гелевых и дерново- подзолистых почв, Автореф.канд. диссер., М., 1988.

18. Филиппов Ю.Н., Тараскина Д.В., Журавлев А.И. Вопросы курортологии, 1970, №1, с. 17-19

19. Шинкаренко А.А., Миленина Н.Г. Органические вещества лечебных грязей и их роль в механизме действия на организм. Метод. Рекомендации. Пятигорск, 1973.

20. Казаков Е.И. Химико- технологическая характеристика сапропелей СССР.// Труды лаборатории генезиса сапропелей, АН СССР, 1941, с. 71-85

21. Shinkarev A.A.,Lyutakhina N.B. Eurasion Soil Science. V.33, №3, 2000,p.p.709-712.

22. Кирейчева Л.В., Хохлова О.Б. Почвоведение, 2000, №9, с. 1083-1085.

23. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации. МГУ, М.,1990, 325 с.

24. Пунтус.Ф.А. Химическая природа гумусовых веществ сапропелей.// Гуминовые удобрения: Теория и практика их применения. Минск, 1983, т.8, с. 151- 155.

25. Ponizovskii A.A., Studenikina Т.A., Mironenko E.V. Eurasion Soil Science. V.32, №7, 1997, p.p.766-775.

26. Титов E.M. О пигментах уральских сапропелей. Труды лаборатории сапропелевых отложений, вып. 4 . М- Л., 1950.

27. Андерсон П.П., Вимба Б.Я. Содержание и биологическая ценность каротина в Латвийских сапропелях. Труды Свердловского с-х. института, т 17, 1968.

28. Солдатенков П.Ф. Сапропель в животноводстве и ветеринарии. Свердловск, 1970, 116 с.

29. Летунова С.В. Образование витамина В12 различными видами актиномицетов и бактерий, выделенных из илов кобальтовых биохимических провинций. Микробиология , Т.27, вып.4, 1958.

30. Куцева Л.С. Букин В.Н. Морские водоросли и сапропели как источник витамина В12 И Докл. АН СССР, 1957, т. 115, №4, с. 20-24.

31. Пакарските К.Ю., Канопкайте С.И., Дачюлите Я.Д. О закономерностях распределения витамина В12 и наличии рибофлавина, фолиевой кислоты и тиамина в сапропелевых отложениях озер Литвы // Тр. Свердл. с-х института, 1962, вып. 10, с. 193-200.

32. Канопкайте С. И., Пакарските К. Ю., Гедиминас А. А. Об устойчивости витамина В12 в сапропеле // Тр. Свердл. с-х института, 1962, вып. 10, с. 201-208.

33. Масленникова Е. Н. Витамины сапропеля и их действие на организм // Действие сапропеля на физиологические процессы в животном организме. Л.: Наука, 1976,130 с.

34. Рекомендации по использованию сапропеля в животноводстве. М., 1966.

35. Верзилин А.В. Общие закономерности возникновения и развития озер. Методы изучения истории озер. Л.: Наука, 1986, серия: История озер СССР, с.57-63.

36. Федотов В.А., Микроэлементный состав сапропелей// Проблемы использования сапропелей в народном хозяйстве./ Минск.: Наука и техника, 1976, с.97-104.

37. Лопотко М.З. Озера и сапропель. Минск, 1978.

38. Евдокимова Г.А., Прузан В.В., Касперович Л.К. и др. К характеристике использования органического вещества сапропелей // Проблемы использования сапропелей в н. х. Тезисы доклада 3- й Респ. конф. Минск ,1981. С.39-40.

39. Школьник М.Я. Микроэлементы в жизни растений // Л.: Наука , 1974.

40. Кирейчева Л.В. Хохлова О.Б. Исследования химических и биологических свойств сапропелей основных лимно- биологических зон РФ // Состояния водоемов и способы их улучшения.: Тез. докл. Межд. Конф. Каунас, 1997, с. 66-69.

41. Хохлов Б.Н. Использование сапропеля на удобрения. Ярославль: Верх.-Волж.кн. изд-во, 1988, с. 112-171.

42. Кирейчева Л.В., Глазунова И.В. Методы детоксикации почв, загрязненных тяжелыми металлами // Почвоведение, 1995, №7

43. Вимба Б.Я., Лапса Э.Я., Шкеле В.А. и др. Агрохимическая классификация сапропелевых отложений и технические требования для их использования в сельском хозяйстве.// Труды Лат. СХА., Елгава, 1978, В.141, с. 64-67.

44. Давыдова Н.Н., Якушко О.Ф. Донные отложения озер как показатель антропогенного воздействия. Общие закономерности возникновения и развития озер. Методы изучения истории озер. Л.: Наука, 1986, с. 205-213.

45. Кузнецов С.И. Микрофлора озер и ее геохимическая деятельность. Л., 1970.

46. Штурм Л.Д., Капульникова З.А. Распределение микроорганизмов в пресноводных иловых отложениях. Микробиология. Т. 14, вып.4,1945.

47. Марченко Л.О., Гуринович Е.С. Микробиологические исследования сапропелей белорусских озер // Проблемы использования сапропеля в народном хозяйстве. Минск.: Наука и техника, 1976, с. 74-81.

48. Бронштейн З.С. Ostrecoda пресных вод.// Фауна СССР, нов. Серия, № 31. Ракообразные, 1941, 2 вып.

49. Ласточкин Д.А. Очерки по палеолимнологии Среднего Урала. Тр. Лаб. сапропелевых отложений, 1949, т.З, с.101-135.

50. Макрушин А.В. Продукция пресноводных амфипод. Сб. Общие основы изучения водных экосистем. ЗИН АН СССР, Л., 1979, с. 172176.

51. Николаев С.Г. Продукция севанского Gammarus lacustris Sars (Ampfipoda, Gamшaridae).Гидpoбиoлoгичecкий ж.,т.16, вып.4, 1980, с.51-56.

52. Казаков Е.И. Пронина М.В. Химический состав различных форм планктона и бентоса// Труды лаборатории генезиса сапропелей, АН СССР, 1941, с. 49-52.

53. Биргер Т.И., Маляревская А .Я. и др. Резистентность зоопланктонных организмов при воздействии метаболитов сине-зеленых водорослей. Гидробиологический ж., т. 15, №4,1979, с. 96-100.

54. Конойко М. А. Особенности формирования сапропелей в некоторых озерах Белоруссии в зависимости от географических условий //

55. Проблемы использования сапропелей в народном хозяйстве. Минск: Наука и техника, 1976, с. 26-35.

56. Конойко М. А. Об условиях образования озер и болот Белоруссии. История озер. Труды Всесоюзного симпозиума по основным проблемам пресноводных озер. Т. 2, Вильнюс, 1970, с. 56-67.

57. Манская С.М., Кодина JI.A. Геохимия лигнина. М.:Наука, 1975, 323 с.

58. Ларгин И.Ф., Шадрина Н. И. Геология сапропелевых отложений (Основы сапропелеведения): Учебн. пособие.- Калинин: Изд-во КПИ,1989, 72 с.

59. Пидопличко А. П., Барсукова Р. И. Некоторые особенности генезиса малозольных сапропелевых отложений.- Тр. Свердл. с-х института. Свердловск, 1968, вып. 17, с. 101.

60. Винберг Г. Г. Первичная продукция водоемов. Минск, 1960, 329с.

61. Солдатенков П.Ф. Действие сапропеля на физиологические процессы в животном организме. Л: Наука, 1976, 170с.

62. Сапропелевые месторождения СССР: Справочно-инструктивные материалы /Под ред. М. И. Нейштадта.- М.: Изд-во АН СССР, 364 с.

63. Кордэ Н. В. Сине-зеленые водоросли как образователи сапропелевых отложений. Тр. лаборатории сапропелевых отложений. 1950. Вып. 4, с. 68-90.

64. Пахомова М.В. Бюлл. МОИП. Отд. биол., т. 69, №3, 1964, 110 с.

65. Виноградова З.А. Экология и физиология сине-зеленых водорослей. М.-Л., Наука, 1965,187 с.

66. Ратушна М. Я., Косенко Л.В. и др. Микробиологический ж. 1967. Т.29, №1,30.

67. Quillet М . 1967.С.Г. Acad. Sci. D264, N 13, 1718.

68. Tsusue Y., Yamakawa Т. 1965. J. Biochem. 58, N 6, 587.

69. Fogg G.E. 1956., Ann.Bot. 20, N 78,265.

70. Fogg G.E. 1956., Bacteriol. Revs, 20, N 3, 148.

71. Houg L., Jones J. 1952. J. Chem. Soc. 3393.

72. Kylin H. 1943. Forn. Kgl. Fysiografiska Sallsk. Lund, 13, N 13, 1.

73. Payen J. 1938. Rev. algol. 2, 1.

74. Payen J. 1953. C.r. Acad. Sci., 236, N 18, 1811.

75. Butschli O. 1906. Arch. Protistenk., 7, 197.

76. Hegler R. 1901. Jahr. Wiss. Botan. 36, 229.

77. Drews G., Gollwitzer W. 1965. Arch. Mikrobiol. 51, N 2, 179.

78. Fowden L. 1951. nature, 167, N4260, 1030.

79. Ржанова Г.Н. Изв. АН СССР. Сер. биол. № 1, 1968, 143.

80. Punnett Т., Derrenbacker Е.С. 1966. J. Gen. Microbiol. 44, N 1, 105.

81. Goedheer J. С., Birnie F. 1965. Biochim. et biophys. acta, 94, N 2, 579.

82. Guerin Dumartrait E. 1960. Anntt boil. 36, N 3-4, 171. 87.0h. Eocha C. 1958. Arch. Biochem. biophys. 73, N 1, 207. 88.Nultsch W. 1962. Biochim. et biophys. Acta, 59, N 2, 213.

83. Susor W.A., Krogmann D.W. 1964. Biochim. et biophys. acta, 88,N1,11.

84. Holm Hansen O., Prasad R., Lewin R.A. 1965. Phycologia,5, N1,1.

85. Richter G., Senger H. 1964. Ber. Dtsch. Bot. Ges. 77, SondN, 174.

86. Goodwin T.W., TahaM.M. 1951. Biochem. J. 48, 513.

87. Проценко Д.Ф., Сиренко Jl.А., Богданова Т.Л., Батрак А.П.

88. Ботанический журнал, 1966. Т.51, № 6, 820 с.

89. Агре А.Л., Райко А.П. Физиология растений, 1964. T.l 1, № 1, 135 с.

90. Виноградов А.П. Труды ВНИРО. Т.7., 1983, 97 с.

91. Clarke Н.Т., Mazur А. 1941. J. Biol. Chem. 141, N 1, 283.

92. Саут Р., Уиттик А. Основы альгологии. М.:Мир, 1990, 597 с.

93. Арнольди В.М. Введение в изучение низших организмов. М.-Л., 1925.

94. Biattie A.M., Percival E.N., 1961-1962. Proc. Roy. Soc. Edinburgh, 68,• N3,171.

95. Matterne M.B. 1969. Kiel. Meeresforch. 25, N 2, 290.

96. Miwa Т., Iryki Y., Suzuki T. 1961. Collog. Internst. Centre nat. rech. Sci.N 103, 135.

97. Клячко-Гурвич Г.JI. Физиология растений. Т. 11, № 6, 1964, 978 с.

98. Пахомова М.В., Серенков Г.П. Биохимия, 1963. Т 28, № 5, 808 с.

99. Заленский О.В., Глаголева Т.А., Мамушина Н.С. Физиология растений, 1965. Т. 12, № 6,1081 с.

100. Ricketts T.R. 1966. Phytochemistry, N1,67.

101. Iwata I., Saicurai Y. 1963. Agric. and Biol. Chem. 27, N 4, 253.

102. Пиневич B.B., Берс Э.П., Васильева В.Г., Верзилин Н.Н., Маслов Ю.И. Изучение интенсивной культуры водорослей. (Докл. 3 координац. совещ. по проблеме сотрудничества СЭВ). Прага, 1965, 152 с.

103. Величко И.М. Пигментный комплекс зеленых нитчатых водорослей. Гидробиологический ж. Т. 16. № 1, 1980, с. 46-51.

104. Джелилева П.Д. Труды Карадаг. Биостанции. Т. 12. 1952,101 с.

105. Кизеветтер И.В. Вестн. Д.-В. ФАН СССР, 1936. Т.20, 57 с.

106. Richter G. 1956. Flora, 143,N1,161.

107. Трифонова И.С. Определение содержания растительных пигментов. Общие закономерности возникновения и развития озер. Методы изучения истории озер.(Серия: История озер СССР). Л.: Наука,1986, с. 101-104.

108. Кенсе-Ромашкина Н.П. Харовые водоросли. Общие закономерности возникновения и развития озер. Методы изучения истории озер.(Серия: История озер СССР). Л.: Наука, 1986, с.143-146.

109. Anderson D.M., King N.J. 1961. Biochim. et Biophys. acta, 52, N 3,449.

110. Романов В.И., Евстигнеева З.Г., Кретович B.JI. Прикладная биохимия и микробиология, 1965. Т. 1, № 5, 494 с.

111. Green Р.В. 1960. Byophys. and Biochem. Cytology, 7, N 2, 289.

112. Jacob K.M., Venkataraman G.S. 1962, Phykos, 1, N 2, 105.

113. Walter L.L., Strauss R. 1969. C. r. Acad. Sci. D269, N 24, 2453.

114. Сакалаускене Е.П. Содержание витаминов в харовых водорослях водоемов Литвы, 1973.

115. Smith F.A. 1967. J. Exptl. Bot. 18, N 55, 348.

116. ТелитченкоМ.М., Остроумов С.А. Введение в проблемы биохимической экологии: Биотехнология, сельское хозяйство, охрана среды. М.: Наука, 1990, 288 с. (с. 30-31.)

117. Юдина Н.В.,Писарева С.Н., и др. Химия растительного сырья, 1998, №4,с. 33-38.

118. Филиппов Ю.Н. О механизме биостимулирующего действия лечебных грязей. Вопросы курортол. 1971, №3, с.230-236.

119. Филиппов Ю.Н., Тараскина Д.В., Журавлев А.И. Об антиокислительном механизме действия органических фракций некоторых лечебных пелоидов. Вопр. курортологии ., 1969, №1, с. 17-21.

120. Журавлев А.И. Труды московского общества испытателей природы, 1963, Т. 7, с. 93.

121. Кеель Э.И. Труды по курортологии. Инс-т. экспер. клин. медицины.АН ЭССР. Таллин, 1963, вып.1, с. 19.

122. Кудряшов Б.А. Учен. Записки Моск. ун-та. Биологии, 1940, вып.32.

123. Краевский Н.А., Лиознер Л.Д. Сб. Очерки по проблеме регенерации. М., 1966.

124. Шустов Л.П. Экстракты сульфидной грязи и обоснования их применения в клинической практике. Вопросы курортолог. 1999, №6, с. 35-37.

125. Волкова Н.А., Дацун Л.Б. и др. О некоторых биологически активных компонентах сапропелей. Вопросы курортолог. . 1978, №3, с.71-74.

126. Соловьева В.П. Основные направления работ по изучению физиологически активных веществ торфа в медицине.// Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. МСХ СССР. Днепропетровск, 1983, Т.9, с. 138-142.

127. Сотникова Е.П., Лотош Б.Н. Влияние предварительного введения комплекса гуминовых кислот на экспериментальную язву желудка.// Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. МСХ СССР. Днепропетровск, 1983, Т.9, с. 153-156

128. Юбицкая Н.С., Иванов Е.М. Гумат натрия в лечении больных остеоартрозом. Вопросы курортолог. . 1999, №5, С.22-24.

129. Колотенко В.П., Грановкий Н.М. Адаптативные эффекты торфобиолита у экспериментальных животных. // Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. МСХ СССР. Днепропетровск, 1983, т.9, с.130-131.

130. Шарипкина А.Я., Колотенко В.П. Профилактическое действие гумата натрия при интоксикации организма крыс четыреххлористым углеродом.// Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. МСХ СССР. Днепропетровск, 1983, т.9, с.131-134.

131. Агапов А.И., Аввакумова Н.П., Баталова Е.К. Способ получения пелоидопрепаратов гуминового ряда. //Вопросы курортологии.,1999, №2, с. 33-35.

132. Иощенко С.Е. О влиянии гуминовых и фульвовых кислот сапропеля на над-Н-оксидазную активность митохондрий печени. Вопросы курортологии., 1986, №5, с.29-32.

133. Карбышев А.В. Химико-фармацевтическое изучение гумата Na из сапропеля. Автореф. диссер. Пермь, 1999.

134. Пиекалните И.Я. Применение гуминовых кислот в комплексном лечении заболеваний пародонта. Диссерт. к.м.н. JL, 1995.

135. Левицкий Е.Ф. и др. Оценка состояния сапропелей по их ферментативной активности. Вопросы курортологии .,1995, №6, с.36-38.

136. Фролова З.К. Возможность получения противогрибкового средства на основе лечебных грязей. Вестник дерматологии и венерологии, 1997, №2, с. 14-15.

137. Мессинова М.А. Активные ферменты в иловых отложениях озер Залучья. Труды лаборатории генезиса сапропеля, вып.2. М., 1945.

138. Мессинова М.А. Ферментативные свойства пресноводных илов. Бюллетень московского общества испытателей природы, т. 10, вып. 5-6, 1940.

139. Куприевич В.Ф., Щербакова Т.А. Почвенная энзимология. Минск, 1966.

140. Сукачев В.Н., Барышников И.А., Бородина Т.П. Сапропель и его значение в сельском хозяйстве. М.; Л., 1943. 56 с.

141. Солдатенков П.Ф. Сапропель в животноводстве и ветеринарии. Свердловск, 1970, 116 с.

142. Бамберг К. К., Вимба Б. Я. Некоторые виды сапропелевых удобрений и способы их производства // Тр. Свердл. с-х института. Свердловск, 1968, с. 153-159.

143. Бузмаков В. В. Сапропелевые удобрения // Химизация сельского хозяйства. 1989, №5, с 34-37.

144. Валюнас В.Ю. Запасы и использование сапропелей, залегающих под торфом // Торф, пром-ть. 1989, №5, с. 18-19.

145. Величко А. А., Кирдун Е. А. Применение сапропелей для удобрения сельскохозяйственных культур: Информационный листок №332, Минск, 1979, Зс.

146. Топливо твердое минеральное. Метод определения зольности.М. ГОСТ 11022-90 (ИСО 1171-81, СТ СЭВ 493-89, СТ СЭВ 1461-78).

147. Торф. Методы определения зольности. ГОСТ 11306-83. М.: Изд-во стандартов. 1984.

148. Торф. Методы определения влаги. ГОСТ 11305-83. М.: Изд-во стандартов. 1983.

149. Торф и продукты его переработки для сельского хозяйства. Методы определения обменной и активной кислотности. ГОСТ 11623-89. М.: Изд-во стандартов. 1990.

150. Соколов Д. Ф. Определение неорганических компонентов в сапропелях // Методика изучения сапропелевых отложений. М.: Изд-во АН СССР, 1953, с. 87-121.

151. Казаков Е. И. Методика компонентного анализа органического вещества сапропелей // Тр. лаб. сапропелевых отложений. М.: Изд-во АН СССР, 1953, вып. 1, с. 30-48.

152. Пунтус Ф. А. Исследование углеводного и аминокислотного состава гидролизатов гуминовых кислот сапропелей // Проблемы использования сапропелей в народном хозяйстве. Минск: Наука и техника. 1976, с. 122-128.

153. Пунтус Ф.А., Бамбалов Н.Н., Смычкин Т.П. Исследование периферической части гуминовых кислот торфа и сапропелей // Проблемы использования сапропелей в народном хозяйстве. Минск: Наука и техника. 1976, с. 115-122.

154. Лиштван И. И., Стригуцкий В. П., Евдокимова Г. А ИК-спектроскопическое исследование сапропелей // ХТТ, 1985, №3, с. 915.

155. Глебовская Е. А. Применение ИК-спектроскопии в нефтяной геохимии. Л., 1971, 286 с.

156. Smidt J. Ph. D. Thesis.- Amsterdam: Delft.- 1960.- 74p.

157. Oelert H. H. Untersuchungen zum chemischen Aufbau von Steinkohle und Maceralen // Brennstoff Chemic.- 1967.- Bd. 48.- №11.-S. 331-339.

158. Karr C., Ester P. A., Chang Т. C. L., Comberiatty J. K. Identification of distillabic paraffins, aromatic hydrocarbons and neutral heterocycles from low-temperature bituminous coal tar // Bu Mines Bull. 1967.- V. 637.- 198p.

159. Wang C. Determination of aromaticity indices of coal liguids by infrared spectroscopy // Fuel.- 1987.- V. 66.- №6.- P. 840-843.

160. Pretsch E. Tables para la elucidation estructural de compuestos organicos par methods opticos // Alhambra.- Madrid.- 1980.- 120p.

161. Brown J. K., Lander W. R., Sheppard N. A study of the hydrogen distribution in coal-like materials by high-resolution nuclear magnetic resonance spectroscopy. The measurement and interpretation of the spectra // Fuel.- I960.- V. 39.- №1.- P. 79-86.

162. Ларина Н. К., Миессерова О. К., Скрипченко Г. Б. Применение ИК-спектроскопии для расчета структурных параметров бурых углей и продуктов их термообработки // ХТТ. 1978, №2, с. 42-50.

163. Lillard J. G., Jones С. J., Anderson J. A. Molecular structure and properies of lubricating oil components // Ind. Eng.- 1962.- V. 44.- №11.-P. 2623-2631.

164. Ruiter E., Tschamler H. Bestimmung der Aromatizitat und der mittleren Ringzahl der Benzolextrakten eines Vitrinits aus Absorptionsmessungen im UV-sichtbaren und nahen Ultrarotbereich // Brennstoff. Chemic.- 1961.- Bd. 242.- №3.- S.74-77.

165. Осипов A. M. Исследование молекулярной структуры углей методами ИК- и ЯМР-спектроскопии //Тр. ин-та физ.-орг. химии и углехимии. Киев, 1986, 144 с.

166. Пушкина Р. А., Куклинский А. Я. Определение метиленовых групп в цепях насыщенных углеводородов по инфракрасным спектрам поглощения // Химия и технология топлив и масел. 1975, №5, с. 55-56.

167. Куклинский А.Я., Филиппова Н.А., Зимина К.И. Количественное определение углеродных атомов в нафтеновых кольцах по ИК-спектрам поглощения // Химия и технология топлив и масел. 1968, №8, с. 52-54.

168. Boyd М. L., Montgomery D. S. Structural group analysis of the Athabasca bitumes asphaltene and tar components // Fuel.- 1962.- V. 62.-№3.- P. 335-350.

169. Kershaw J. R. Ultraviolet and luminiscence spectroscopy // Spectrosc. Anal. Coal Liguids.- Amsterdam.- 1989.- P. 155-194.

170. Сирюк Л.Г. Спектральные методы исследования ароматических углеводородов в нефтях и нефтепродуктах. М.,1968, 93 с.

171. Казицына Jl. А., Куплетская Н. Б. Применение УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопии в органической химии. М., 1968, 221 с.

172. Сильверстрейн Р., Басслер Г., Моррил Т. Спектрометрическая идентификация органических соединений М., 1977, 308 с.

173. Craver С. D. Dask-book of Infrared Spektra. Coblentz Socicty.-POB 9952.- Kirkwood.- 1974.- 183s.

174. Платонов В. В., Проскуряков В. А., Никишина М. Б., Новикова И. Л. Химический состав гуминовых кислот бурого угля Подмосковного бассейна // ЖПХ, 1996, т. 60, вып. 12, с. 2059-2061.

175. Базыльчик В.В. Установление структуры органических соединений физико-химическими методами. М., 1967, с. 531-532.

176. Fridel R. A., Orchin М. Ultraviolet spectra of aromatic compounds.- 1957.- 322p.

177. Быстрое В.Ф., Сахаровский В.Г. Исследование динамической пространственной структуры ферментов и фермент-ингибиторных комплексов методом ЯМР. //Журнал Всесоюзного химического общества им .Д. И. Менделеева. 1971, т. XVI(4), с. 381-391.

178. Орлов Д.С., Л.А. Гришина. Практикум по химии гумуса. М. МГУ, 1981,271 с.

179. Методы биохимического исследования растений./ Под ред. В. И. Покровского. Л., 1987, 430 с.

180. Оценка посевных качеств семян при проращивании их в рулонах. Метод, указания Министерства с/х.РФ.М., 1998, 30 с.

181. Голиченков В.А., Л.А. Захарова, М.Б. Корнилова. Суточное движение пигмента земноводных и биологический прогноз. В сб.: Хронобиология и хронопатология. Тезисы докладов на Всесоюзной конференции. М.,1981,с.76.

182. Детлаф Т.А., Руднева Т.Б. Шпорцевая лягушка Xenopus laevis Daudin. Объекты биологии развития. М.:Наука,1975. с.392-442.

183. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических методов исследования. М.: Медицина, 1968, 467 с.

184. Отчет. Тултеркомвод // Гидрогеология, 1998, 92 с.

185. Платонов В.В., Д.С.Николаев, В.А.Проскуряков и др.Характеристика карбонатно-харового сапропеля, биотические и абиотические условия его формирования. Геологический вестник центральных регионов России.2002, №1, с.21-26.

186. Свириденко Б.Ф. Харовые водоросли — индикаторы урановых вод. Ботанический ж., 1993, т. 78, № 7, с.29-37.

187. Курзо Б.В., Богданов С.В.- Генезис и ресурсы сапропелей Белоруссии. Минск: Наука и Техника, 1989, 190 с.

188. Мережко А.И., Шиян П.Н. Источники углерода для фотосинтеза погруженных водных растений// Гидробиологический журнал. 1974, т.Ю, №1, с.103-114.

189. Жуковицкая А.А. Геохимические исследования. Основные химические компоненты. Общие закономерности возникновения и развития озер. Методы изучения озер. Л.: Наука, 1986, с. 94-101.

190. Малама А.А., Хаменко Г.Б. и др. Элементный состав и инфракрасные спектры меланиновых пигментов некоторых микроорганизмов.// Известия АН СССР, сер. Биол., 1975, №5, 766 с.

191. Гамаюрова B.C., Котляр М.Н. и др. Синтез эфиров хитин-глюканового комплекса. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 1999, № 3, с. 38-40.

192. Платонов В.В., Галкина И.С. и др. Гуминовый комплекс сапропелей: структура и биологическая активность// Сб. Современные проблемы органической химии, экологии и биотехнологии. Материалы 1-й международной научной конференции. Луга, 2001, с. 44-45.

193. Платонов В.В., Лебедева Г.Ф. и др. Химический состав гуминовых кислот торфа// Сб. Современные проблемы органической химии, экологии и биотехнологии. Материалы 1-й международной научной конференции. Луга, 2001, с. 49.

194. Дубинин В.Н. Термовесовые характеристики и кинетические параметры термодеструкции гумусовых кислот основных типов почв. Почвоведение, 1970, №9, с. 70-86.

195. Кречетова Е.В. Гуминовые кислоты горючих сланцев, их свойства и строение. Дисс. к.б.н. МГУ. М., 1994, 170 с.

196. Орлов Д.С., Дубинин В.П., Елькина А.И. Пиролиз и дифференциальный термоанализ гумусовых веществ почвы. Агрохимия. 1968, №1, с. 68-77

197. Багаутдинов Ф.Я., Хазиев Ф.Х., Щербухин В. Д. Полисахаридная фракция гумусовых веществ типичного чернозема и серой лесной почвы. Почвоведение. 1984, №11, с 28-32

198. Черников В.А., Кончиц В.Л. Исследование структуры гумусовых кислот почв методом дериватографии. Биологические науки. 1979, №2, с70-75

199. Джабарова Н.К., Килина Е.С. и др. Использование комплекса биологических показателей в бальнеологической оценке пелоидов. Вопросы курортологии., 1999, №4, с. 41-43

200. Шурухина С.И., Виноградов М.В. Энергитическая характеристика гумусовых препаратов. Почвоведение. 1974, №7, с 56-60.

201. Справочник лекарственных препаратов, рекомендованных для применения в СССР, выпускаемых отечественной промышленностью и закупаемых по импорту. Под ред. Клюева М.А. М.: Медицина, 1970, 183 с.

202. Александрова JI.H. Органическое вещество почвы и пути его трансформации. Л., 1980, 76 с.

203. Косьянова З.Ф., Орлов Д.С., Аммосова Я.М. Гуминовые кислоты пелоидов. Сб.: Гуминовые вещества в биосфере. М. Наука, 1993, с 74-79.

204. Степанов А. А., Жаркова JL В., Степанова Е. Применение !Н-ЯМР спектроскопии для характеристики гуминовых веществ. //Почвоведение. 1997, №2, с. 173-177.

205. Каррер П. Курс органической химии. Л.:ГНТ Изд-во хим. литературы. 1962,с. 459.

206. Феофилова Е.П., Немцев Д.В., Терешина В.М., Козлов В.П. Полисахариды мицелиальных грибов: новые биотехнологии и перспективы практического использования. Обзор.//Прикладная биохимия и микробиология. 1996,т. 32, № 5, с. 483-492.

207. Сенечкин B.H., Сахаровский В.Г., Ильченко В.Я., Акименко В.К. Электролиз отходов гидролизного производства этанола.//Химия древесины. 1986, № 5, с. 77-82.

208. Беседнова Н.Н., Иванушко Л.А., Звягинцева Т.Н., Елякова Л.А. Иммуннотропные свойства 1-3; 1-6-р-0-глюканов.//Антибиотики и химиотерапия. 2000, т.45, № 2, с. 37-43.

209. Николаев Д.С., Половецкая О.С. Меланоцитотропная активность экстрактов органического вещества карбонатно-харовогосаппропеля. //Естественные и технические науки. 2003, № 1(4), с. 3541.

210. Матис Е.Я. и др. Получение липидного концентрата из пелоидов.//Вопросы курортологии. 1985, № 2, с.63-65.

211. Улащик B.C. //Вопросы курортологии. 1990, № 2,с.8-15.

212. Зольникова А.И. Изменение катехоламинов в тканях животных под влиянием различных по химическому составу грязевых аппликаций. //Вопросы курортологии. 1967, № 5, с. 439 — 442.

213. Карпович О.А. //Тр.Омского мед. ин-та. 1963, №40, с.45.

214. Деменева Л.А. О роли простагландинов в механизме действия лечебных грязей.//Вопросы курортологии. 1986, № 2, с. 31-34.

215. Голиченков В.А. Биология меланофоров амфибий. //Успехи современной биологии. 1979, т.87, № 3, с. 442-458.

216. Шредер Э., К.Любке. Пептиды. Т.2. М.:Мир, 1969, 723 с.

217. Hogben L.,T.Slome. The pigmrnt effector system.//Proc.Roy. Soc. -1931.-V.108.- P.10-53.

218. Николаев Д.С., В.Г.Сахаровский. Исследование структуры органического вещества харовых водорослей и образуемого ими сапропеля методом !Н-ЯМР спектроскопии высокого разрешения.// Естественные и технические науки. 2003, № 1(4), с. 42-48.

219. Russell D.W., M.E.Brown. Biochim. Biophys. //Acta. 1960. - № 38.-S. 382.

220. Krivoy W.A., R.Guillemin.//Experientia. 1962. - №18. - S. 20.

221. Guillemin R. Pathol. Biol. Semaine Hop. -1961. -№ 9. P. 2143.

222. Мальцева Н.Н. Использование гуминовых кислот олигонитрофильными микроорганизмами.//Почвоведение. 1974, № 2, с. 84-89.

223. Карбышев А.В., Дмитрук С.Е. Биологически активные вещества и антигрибковые свойства сфагновых мхов, торфа и сапропелей. //Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений. 1998, с. 78-82.